DK166460B1 - Blandinger af alfa-amylaser og deres anvendelse til stivelsesforflydning - Google Patents

Blandinger af alfa-amylaser og deres anvendelse til stivelsesforflydning Download PDF

Info

Publication number
DK166460B1
DK166460B1 DK351387A DK351387A DK166460B1 DK 166460 B1 DK166460 B1 DK 166460B1 DK 351387 A DK351387 A DK 351387A DK 351387 A DK351387 A DK 351387A DK 166460 B1 DK166460 B1 DK 166460B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
amylase
starch
termamyl
sediment
enzyme
Prior art date
Application number
DK351387A
Other languages
English (en)
Other versions
DK351387A (da
DK351387D0 (da
Inventor
Timothy R Swanson
Philip C Trackman
John O Carroll
Original Assignee
Novo Nordisk As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novo Nordisk As filed Critical Novo Nordisk As
Publication of DK351387D0 publication Critical patent/DK351387D0/da
Publication of DK351387A publication Critical patent/DK351387A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK166460B1 publication Critical patent/DK166460B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

i DK 166460 B1
Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte blandinger af stivelseshydrolyserende enzymer. Mere specifikt angår nærværende opfindelse nye α-amylasepræparater, som er ejendommelige ved det i den kendetegnende del af krav 1 5 angivne og deres anvendelse til forflydning af stivelse.
Høj-fructose sirup fremstilles udfra sirupper med højt DX, idet udtrykket DX betyder vægtprocent dextrose (D-glucose) beregnet på basis af siruppens tørstofindhold (DS).
Den totalt enzymatiske proces, der almindeligvis anvendes til 10 omdannelse af stivelse til sirup med højt DX, er en to-trins proces. Det første trin er forflydningen, dvs. hydrolysen af stivelse til en blanding af oligosaccharider, såkaldt malto-dextrin. Denne proces katalyseres af a-amylaser ved en temperatur på mindst 75°C, fortrinsvis ved omkring 90°C eller ved 15 en jetkogningsproces, hvori opslæmningen af stivelse opvarmes mindst i nogle minutter til 105 - 110°C, sædvanligvis med en enkelt dosis α-amylase, og derefter holdes ved omkring 90°C i mindst en time. I forflydningsprocessens primære trin undergår stivelsesopslæmningen en gelatinisering og bliver mere tyndt-20 flydende. Yderligere nedbrydning. (dextrinisering) finder sted i processens sekundære trin. Angående jetkogningsprocessen henvises til U.S. patentskrift nr. 3.912.590.
Til forflydningsprocessen er et udvalg af mikrobielle, især bakterielle, α-amylaser kommercielt tilgængelige,
TM
25 f.eks. BAN (fra Bacillus amyloliquefaciens) og TERMAMYL®
(fra Bacillus licheniformis), som begge fremstilles af NOVO
NORDISK A/S, Danmark, α-amylaser fra Bacillus stearothermo- philus er beskrevet i U.S. patentskrifterne nr. 2.695.863 og 4.284.722. En Bacillus stearothermophilus α-amylase (THERMO-TM o 30 LASE ) kan fas fra Enzyme Development Corporation, NY, USA.
TM
Medens BAN α-amylase kun er stabil op til omkring 85°C og derfor næppe egnet til jetkogningsprocessen, er både TERMAMYL® og Bacillus stearothermophilus α-amylaserne velegnede til denne næsten globalt foretrukne metode til 35 stivelsesforflydning, fordi de er varmestabile. Det efterfølgende forsukringstrin, hvori maltodextrinet omdannes til dextrose, katalyseres sædvanligvis med et glucoamylase- 2 DK 166460 B1 enzym. Kommercielle glucoamylasepræparater, sædvanligvis stammende fra Aspergillus eller Rhizopus arter, kan fås hos en række fabrikanter. Således er AMG 200 L, et produkt, der fås fra Aspergillus niger og fremstilles af NOVO NORDISK A/S, 5 Danmark.
Bacillus stearothermophilus a-amylasen har visse fordele fremfor Bacillus licheniformis enzymet, især en højere specifik aktivitet, et lavere pH-optimum og en moderat øget DX-værdi af den som slutprodukt opnåede dextrosesirup ved 10 efterfølgende forsukring med glucomaylase.
Der er fra Krishnan, T. and Chandra, A.K.
"Purification and Characterization of a-amylase from Bacillus licheniformis CUMC 305", Applied and Environmental Microbiology, vel. 46, no. 2 (Aug 1983) s. 430-437, kendt en 15 termostabil α-amylase fra Bacillus licheniformis stamme CUMC 305, som lettere hydrolyserer amylose end amylopectin, pga. større aktivitet mod a-1,4 bindinger end mod a-1,6 bindinger.
Og der er fra Manning, Gilbert B. and Campbell, L.
Leon, "Thermostable α-amylase of Bacillus stearothermophilus", . 20 Journal of Biological Chemistry, Vol. 236, no. 11 (Nov. 1961), s. 2952-2957, kendt en termostabil α-amylase fra Bacillus stearothermophilos stamme 503-4, som lettere hydrolyserer amylopectin end amylose.
De nedenfor i tabelform angivne resultater er fra 25 sammenlignende forsøg i laboratorieskala, hvori forflydnings-betingelserne er sammenlignelige med de industrielt anvendte.
Det er velkendt, at medens TERMAMYL® α-amylase under jetkogningsbetingelser hurtigt inaktiveres ved pH-værdier lavere end 6, selv i nærværelse af en forhøjet koncentration af Ca++, 30 så bevarer på den anden side THERMOLASE α-amylasen en betragtelig aktivitet ved en med TERMAMYL® enzymet ækvipotent dosering ned til pH 5,5 eller lavere.
Imidlertid viser resultaterne også, at forflydning TM
med THERMOLASE i en TERMAMYL® ækvipotent dosering medfører 35 en betragtelig stigning i sedimentdannelsen, målt efter at forsukringstrinnet er tilendebragt. Sedimentdannelsen er 3 DK 166460 B1 uønsket, fordi den, bortset fra at den medfører et tab af glucose, også i høj grad kan vanskeliggøre den efterfølgende filtrering af glucosesiruppen.
Åbenbart kan problemet med uønsket sedimentdannelse
TM
5 ved forflydning med THERMOLASE anvendt i det normale dosis-område for a-amylase undgås ved at fordoble THERMOLASE
doseringen. Imidlertid er sådanne excessive dosisniveauer for J
α-amylase uønskede af økonomiske grunde, idet det normale dosisniveau ligger i området fra 40-80 NU/g DS.
10 Sedimentvolumen efter forsukring (% volumen/volumen)
Enzym_ _pH ved forflydning_ 5,0 5,5 5,8 6,0 TERMAMYL® 2,5*,** 2,0* 1,5
15 85 NU/g DS
THERMOLASE™ 50 10 7/5*** 25
50 NU/g DS
THERMOLASE™ 2
100 NU/g DS
20 (Øvrige forflydnings- og forsukringsbetingelser som i eksempel 1) * Ledsaget af dårlige forflydningsresultater ** Ved pH 5,5 fordobledes Ca koncentrationen med henblik på at stabilisere TERMAMYL® 25 *** forsøg gentaget
Vi har nu overraskende fundet, at man ved kombineret brug af α-amylase fra B. licheniformis og α-amylase fra B. stearothermophilus opnår bedre resultater end med hver a-amylase for sig. Således viser resultaterne fra de efter-30 følgende eksempler, at man ved forskellige udførelsesformer ifølge opfindelsen kan få højere DX og/eller lavere slamvolume og/eller lavere pH end ved den kendte teknik.
4 DK 166460 B1
Formålet med den foreliggende opfindelse er at anvise et α-amylasepræparat, som under jetkogningsbetingelser bevarer sin aktivitet i pH-området fra 5 til 6 uden at forårsage uønsket sedimentdannelse. Ifølge nærværende opfindelse kan dette 5 formål opnås ved at udføre forflydningsprocessen med egnede blandinger af B. licheniformis og B. stearothermophilus a-amy-laser.
Endvidere iagttages en mindre, men signifikant, øgning i DX for den resulterende sirup ved anvendelse af nærvæ-10 rende opfindelses amylaseblandinger sammenlignet med de DX-værdier, der opnås med de indgående enzymer hver for sig, hvilket indikerer opnåelsen af en overraskende synergistisk effekt ved at kombinere de to amylaser.
Det er fra fransk patentansøgning nr. 1024371 og US 15 patent nr. 2891869 kendt at anvende blandinger af amylaser til hydrolyse af stivelse i et enkelt enzymatisk trin, hvorved man udnytter α-amylasernes forskellige spaltningsmønstre til at opnå stivelseshydrolysater med bestemte fysiske og kemiske egenskaber.
20 Den foreliggende opfindelse tilvejebringer ifølge sit første aspekt et α-amylasepræparat, der er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 1 angivne.
En foretrukken udføre'lsesform for præparatet ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af 25 krav 2 angivne.
Ansøgningen angår også en fremgangsmåde til forflydning af en opslemning af stivelse eler stivelsesholdige gryn, der er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 3 angivne.
30 En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 4 angivne.
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende 35 del af krav 5 angivne.
5 DK 166460 B1
En mere foretrukken udførelsesform for fremgangmsåden j ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 6 angivne.
Som allerede nævnt ovenfor kan Bacillus licheniformis 5 ot-amylasen i præparatet ifølge opfindelsen være TERMAMYL® , eller en hvilken som helst dermed ækvivalent, fra Bacillus licheniformis hidhørende a-amylase. En a-amylase fra Bacillus
stearothermophilus er kommercielt tilgængelig som TM
THERMOLASE . En anden a-amylase hidhørende fra den samme art
TM
10 og anset for ikke at adskille sig fra THERMOLASE frembringes af en mikroorganisme identificeret som ATCC rir. 7954, jfr.
U.S. patentskrift nr. 2.695.863. Yderligere en a-amylase fremstilledes af nærværende opfindere ved dyrkning af en Bacillus stearothermophilus stamme med den interne designering 15 BPS-3. Med hensyn til enzymkemiske egenskaber og immunokemisk karakteristik har BPS-3 a-amylasen vist sig at være identisk med THERMOLASE . Prøver af .denne α-amylase har kunnet fås ved henvendelse til NOVO NORDISK A/S, Danmark i mere end et år forud for indgivelsen af denne ansøgning, og vil fortsat være 20 tilgængelig på denne måde.
TM
DEXTROZYME blev rutinemæssigt anvendt til forsukringsforsøgene. Det er en blanding af glucoamylase og en acidofil, varmestabil a-1,β-glucosidase (pullulanase), som forhandles af NOVO NORDISK A/S, Danmark. Enzymblandingen be-25 skrives mere detaljeret‘i en brochure (B 320a-GB), som kan fås ved henvendelse til fremstilleren. !
Bestemmelse af a-amylaseaktivitet
Aktivitetsenheden NU, som er en forkortelse for NOVO
a-amylaseenhed, er den mængde enzym, som hydrolyserer 5,26 mg 30 opløst stivelse pr. time ved 37°C, pH 5,6 og 0,0043 M Ca++ i en periode på fra 7 til 20 minutter efter reaktionens start.
En folder AF9, som beskriver den analytiske metode kan fås ved henvendelse til NOVO NORDISK A/S, Danmark. I det operative
temperaturområde på fra 90 til 110°C for stivelsesforflyd-. TM
35 ningen har THERMOLASE enzymet vist sig at være mere aktivt DK 166460 B1 6 end TERMAMYL® med en faktor på omkring 1,7. De i tabellen
ovenfor anførte sammenligningsforsøg med TERMAMYL® og TM
THERMOLASE udførtes ved samme aktivitetsniveau, dvs.
TM
THERMOLASE , 50 NU/g tørstof, er ligeså effektivt som 5 TERMAMYL®, 85 Νϋ/g tørstof, under de anvendte betingelser.
Et problem, som altid har været uløseligt forbundet med enzymatisk stivelseshydrolyse er pH-niveauet for forflydningsprocessen. En stivelsesopslæmning som sådan til forflydningsprocessen har et pH på 3,0-5,0. De fleste opslæmninger af 10 gryn, som forflydes direkte (til brug for brygning, destillation eller fuelalkoholprocesser) har et naturligt pH på 5,0-6,0, men har en betydelig pufferkapacitet. Bacillus licheni-formis α-amylasen (TERMAMYL®) anvendes bedst ved et pH på 6,0-6,5. Hvis dette enzym anvendes alene ved et pH lavere end 15 6,0, bliver forflydningsresultaterne hurtigt dårlige. Ydermere produceres uønskede mængder af biprodukter, i det væsentlige maltulose, når dette enzym a'nvendes ved en pH-værdi højere end 6,2.
I højfructosesirupsindustrien justeres pH for sti-20 velsesopslæmningen derfor opad til 6,0-6,5 før forflydning med Bacillus licheniformis a-amylase, hvilket uundgåeligt medfører en øgning siruppens saltindhold og derfor udgifter i forbindelse med afsaltningen af den færdige sirup, f.eks. ved ionbytning .
TM
25 Bacillus stearothermophilus a-amylasen (THERMOLASE
har god virkning ved pH 5,5-6,0. Når stivelsesforflydningen udføres i dette pH-område, er dannelsen af maltulose i det væsentlige elimineret, og farvedannelse og dannelsen af organisk syre er nedsat. Anvendelsen af denne a-amylase 30 medfører andre fordele, f.eks. en moderat forbedring i det endelige udbytte af dextrose. Som allerede omtalt indeholder glucosesirupper fremstillet fra stivelse, forflydet med 40-80 NU/g tør stivelse Bacillus stearothermophilus a-amylase imidlertid et højt niveau af sediment, og filtrering er derfor 35 vanskeligt.
7 DK 166460 B1
Uden at være bundet til nogen teori for eller forklaring på sedimentdannelse menes det dog, at det overraskende fald, som iagttages i denne ved brugen af a-amylasepræparatet ifølge denne opfindelse, kan skyldes forskelle i de respektive 5 enzymers specificitet og virkningsmønster.
Stivelse dannes af store, komplekse molekyler (mol-vægt omkring 1000 kD). Man kan forestille sig, at forskellige α-amylaser fortrinsvis angriber forskellige dele af stivelsesmolekylet, idet hver angriber hurtigst på steder, der i mindre 10 grad foretrækkes og/eller angribes langsommere af den anden, og hvert enzym derved hurtigt frigør fragmenter, der er mere påvirkelige til øjeblikkeligt angreb af det andet enzym. Det vides, at stivelsesmolekylet indeholder både amorfe regioner og regioner, der er i høj grad krystallinske. Det krystal-15 linske regioner er mere modstandsdygtige mod hydrolyse end de amorfe regioner, men bliver forholdsvis mere tilgængelige for angreb, når først nedbrydning har fundet sted i de nabostillede amorfe regioner. Flere hydrolyserbare steder bliver så tilgængelige, efterhånden som krystallinske regioner bliver 20 nedbrudt.
Forflydning er i det væsentlige et endo-angreb af en a-amylase på a-1,4-bindingerne i den polymere glucosekæde, hvilket signifikant nedsætter viskositeten af den forklistrede stivelse.
25 Ved pH 6,5 (nær optimum for Bacillus licheniformis enzymet) resterer omkring 85% af den oprindelige aktivitet efter den sekundære forflydning (primær forflydning ved 105°C i 5 minutter, sekundær forflydning ved 95°C i 90 minutter). Ved pH-optimum for Bacillus stearothermophilus enzymet på ca. 5,8 30 er restaktiviteten ved slutningen af den sekundære forflydning 95-100%.
8 DK 166460 B1
Sekundær forflydning
Enzymtype pH % restaktivitet_ TERMAMYL® 6,5 85 85 NU/g tørstof 6,0 72 5 5,75 63 5.5 43 THERMOLASE™ 6,0 74 50 NU/g tørstof 5,75 100 5.5 83 10 De høje sedimentniveauer, som fremkommer ved stivel sesforflydningen med Bacillus stearothermophilus a-amylase, iagttages ikke i det umiddelbart opnåede produkt af den primære forflydning. Muligvis fremkommer sedimentet i dextrinop-løsningen i dextriniseringstrinnet. Øjensynligt omdannes nogle 15 af de stivelsesfragmenter, der er dannet ved forflydningen med Bacillus stearothermophilus enzymet, til et upoløseligt produkt .
Analyse af sedimentet indikerer tilstedeværelsen af bestanddele hidhørende fra kulhydrater og fedtstoffer. Når 20 Bacillus licheniformis α-amylase anvendes ved et pH lavere end 6,0, dannes der også mere den sædvanlige mængde sediment i siruppen. Imidlertid er polysacchariderne i sedimentet fremstillet fra stivelse med hver sit af de to enzymer ved pH 5,5-6,0 ikke de samme.
25 Da stivelsesforflydning med enzymdoser, der er højere end de normale, af Bacillus stearothermophilus α-amylase reducerer sedimentdannelsen, og forflydning med Bacillus licheni-formis enzymet ved pH 6,0-6,5 frembringer et lavt sedimentniveau, menes det, at den manglende evne til at bryde enzymatisk 30 hydrolyserbare bindinger (eller sæt af bindinger) i stivelsesmolekylet er årsagen til fremkomsten af sediment.
De efterfølgende specifikke eksempler anføres med henblik på en nærmere forståelse af nærværende opfindelse.
Eksempel 1 9 DK 166460 B1
Forflydning ved pH 5,8 med et α-amylasepræparat indeholdende 25¾ TERMAMYL® a-amylaseaktivitet målt i NU_
Forflydningsprocessen udførtes med en stivelsesop-5 slæmning indeholdende 35% tørstof. Stivelsen var majsstivelse, leveret af Staley. I alle forsøg anvendtes CaCl7,2H70 til at indstille koncentrationen af Ca på 40 ppm. I forsøg med BPS-3 a-amylase tilsattes NaCl med henblik på at opveje saltindholdet i TERMAMYL® (den resulterende ledningsevne af 10 opslæmningen var 200 pS).
Jetkogningsbetingelserne var 5 minutters ophold ved 105°C efterfulgt af lynafkøling til 95°C, ved hvilken temperatur der udførtes parallelforsøg med sekundær forflydning i henholdsvis 60 og 90 minutter. Den resulterende maltodextrin
- TM
15 blev forsukret med DEXTROZYME 150/50 L ved 60°C og pH 4,3.
Doseringen var 0,18 amyloglucosidase enheder og 0,062 pullula-nase enheder, begge beregnet pr. g tørstof af maltodextrin.
Rumfanget af sediment og DX for glucosesiruppen bestemtes efter forsukring i 48 timer. Resultaterne, omfattende sammen-20 ligningsforsøg'udført med THERMAMYL® og BPS-3 α-amylase alene, er vist i følgende tabel: i
Tabel I
10 DK 166460 B1
Varighed af Forsukring sekundær (48 timer)
Dosering forflydning (sediment
5 a-amylase_(NU/g)_pH minutter_volumen- %) DX
TERMAM YL® 75 5,8 60 4,5 95,7 90 3,5 95,4 BPS-3 amylase 75 5,8 60' 11,5 95,7 90 11,5 95,7 10 BPS-3 amylase/ 56,25/ 5,8 60 8 96,2 TERMAMYL® 18,75 90 8 96,1
Tallene i tabel I viser, at DX-værdierne for forsøg med amylaseblandingen er signifikant højere end dem, der opnås ’i forsøg udført med enzymerne hver for sig. Mængden af sedi-15 ment i sirup fremstillet ved forflydning med enzymblandingen er signifikant lavere end mængden af sediment ved forflydning BPS-3.
Eksempel 2
Forflydning ved pH 5,8 med et α-amylasepræparat indeholdende 20 50¾ TERMAMYL® g-amylaseaktivitet målt i NU_
De i Eksempel 1 for forflydning og forsukring angivne betingelser benyttedes med 50/50 blandingen og med hvert af enzymerne for sig. De nedenfor angivne resultater viser uacceptabelt store mængder af sediment med THERMOLASE alene.
25 En sammenligning af DX værdierne for de resulterende sirupper afspejler igen den synergistiske effekt af amylaseblandingen.
• 11 DK 166460 B1
Tabel II
Varighed af Forsukring sekundær (48 timer)
Dosering forflydning (sediment, 5 g-amylase_(NU/g) pH minutter_volumen-%) dx TERMAMYL® 75 5,8 60 5 95,7 90 4,5 95,4
TM
THERMOLASE 75 5,8 60 15 96,1 90 15 96,1 10 BPS-3 amylase/ 37,5/ 5,8 60 5 96,0 TERMAMYL® 37,5 90 4 95,8 • TM .
THERMOLASE / 37,5/5,8 60 4,5 96,2 TERMAMYL® 37,5 90 4,5 96,1
Eksempel 3 15 Glucosesiruppernes filtrerbarhed
Eksempel 2 blev gentaget med 90 minutters opholdstid i det sekundære forflydningstrin. Forsukringsresultaterne (ikke angivet) var overensstemmende med de i eksempel 2 angivne .
20 Filtreringshastighederne for sirupperne efter forsukringen blev målt på et til dette formål konstrueret apparat (Rotary Precoat Filter Test Leaf, leveret af Grefco Inc. Dicalite Division/International Division, Los Angeles, CA), idet resultaterne angives som gennemsnit af ca. 20 25 målinger i m3, pr. måling. Den relative mængde af sirupsbundfaid blev målt som vægtprocent af tørstof.
Resultaterne er angivet i den efterfølgende tabel.
Tabel III
12 DK 166460 B1
Filtrerings-
Sediment i hastighed i Bundfald volumenprocent ml pr. måling % af tørstof 5 TERMAMYL® 4 110 1,2 TERMAMYL® 5 94 1,2 BPS-3 amylase 12 70 3,4 TERMAMYL®/ 4 99 1,5 BPS-3 amylase 10 Eksempel 4
Forflydning ved pH 5,5 med et a-amylase-præparat indeholdende 50% TERMAMYL® a-amylaseaktivitet målt i NU.
Nogle af forsøgene i eksempel 2 blev gentaget ved pH
5,5 i stedet for 5,8. Resultaterne fremgår af nedenstående 15 tabel.
14 DK 166460 B1
PATENTKRAV
1. a-amylase præparat, kendetegnet ved, at det indeholder en blanding af a-amylaser hidhørende fra Bacillus licheniformis og Bacillus stearothermophilus, hvilken blanding 5 indeholder fra 10 til 90% a-amylaseaktivitet fra Bacillus licheniformis α-amylase målt i NU, baseret på en total a-amylaseaktivitet i blandingen på 100% målt i NU.
2. α-amylase præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved at blandingen indeholder fra 25 til 50% α-amylaseaktivitet fra 10 Bacillus licheniformis α-amylase målt i NU.
3. Fremgangsmåde til forflydning af en opslæmning af stivelse eller stivelsesholdige gryn, kendetegnet ved at forflydningsprocessen udføres med et α-amylase præparat ifølge krav 1 ved jetkogning ved en temperatur i området fra 100- 15 115°C i 1-60 minutter, efterfulgt af en sænkning af temperaturen til 90-100CC, ved hvilken reaktionsblandingen holdes i 30-120 minutter, hvorefter den således forflydede stivelse er modstandsdygtig mod retrogradering, idet pH holdes på 5,5-6,0 i hele procesforløbet.
20 4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved at forflydningsprocessen udføres med α-amylase præparatet ifølge krav 2.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 3-4, kendetegnet ved at doseringen af α-amylasepræparatet ikke overstiger 100 NU pr. g 25 tørstof i stivelsesopslæmningen.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved at doseringen af α-amylasepræparatet ligger i området fra 40-80 NU pr. g tørstof.

Claims (2)

13 Tabel IV DK 166460 B1 Dosering 2. forflydning Sediment g-amylase NU/g pH minutter % DX
5 THERMOLASE™ 75 5,5 60 9 96,2 90 7,5 96,3 TM THERMOLASE u/ 37,5/ 5 5 60 4,5 96,2 TERMAMYL® 37,5 90 4,0 96,2 Ved forsøg med TERMAMYL® alene ved pH 5.5 opnås ikke 10 fuldstændig forflydning (dvs. viskositeten var så høj, at substratet ikke i praksis var egnet, til videre behandling). Ca. den halve mængde sediment blev iagttaget med blandingen ved begge sekundære forflydningstider.
DK351387A 1986-07-09 1987-07-08 Blandinger af alfa-amylaser og deres anvendelse til stivelsesforflydning DK166460B1 (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US88356686A 1986-07-09 1986-07-09
US88356686 1986-07-09

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK351387D0 DK351387D0 (da) 1987-07-08
DK351387A DK351387A (da) 1988-01-10
DK166460B1 true DK166460B1 (da) 1993-05-24

Family

ID=25382856

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK351387A DK166460B1 (da) 1986-07-09 1987-07-08 Blandinger af alfa-amylaser og deres anvendelse til stivelsesforflydning

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP0252730B1 (da)
JP (1) JP2509233B2 (da)
KR (1) KR960006119B1 (da)
AT (1) ATE80657T1 (da)
CA (1) CA1283376C (da)
DE (1) DE3781732T2 (da)
DK (1) DK166460B1 (da)
ES (1) ES2052565T3 (da)
FI (1) FI89076C (da)

Families Citing this family (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU3033289A (en) * 1988-05-02 1989-11-29 George E. Inglett Enzymatic production of maltohexaose-rich compositions
US5266467A (en) * 1988-05-02 1993-11-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Enzymatic production of maltohexaose-rich compositions
DE3909096A1 (de) * 1989-03-20 1990-09-27 Garabed Antranikian Alpha-amylase
NZ250048A (en) * 1992-10-28 1994-10-26 Enzyme Bio Systems Ltd Production of maltodextrins by selective hydrolysation of starches by enzymatic methods
DE69534464T2 (de) 1994-03-29 2006-09-28 Novozymes A/S Alkalische amylase aus bacellus
AU4278896A (en) * 1994-10-27 1996-05-23 Genencor International, Inc. A method for increasing monosaccharide levels in the saccharification of starch and enzymes useful therefor
AR000862A1 (es) 1995-02-03 1997-08-06 Novozymes As Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del
CN1246455C (zh) 1996-04-30 2006-03-22 诺沃奇梅兹有限公司 α－淀粉酶变体
MX9809587A (en) * 1996-05-15 1999-03-01 Procter & Gamble Detergent compositions comprising a combination of alpha-amylases for malodor stripping
ATE423192T1 (de) 1997-10-13 2009-03-15 Novozymes As Mutanten der alpha-amylase
WO1999023211A1 (en) 1997-10-30 1999-05-14 Novo Nordisk A/S α-AMYLASE MUTANTS
EP2316929B1 (en) 1998-02-27 2016-04-27 Novozymes A/S Maltogenic alpha-amylase variants
KR20010041617A (ko) * 1998-03-09 2001-05-25 피아 스타르 전분으로부터 글루코스 시럽의 효소성 제조
EP2290060B1 (en) 1999-03-30 2016-12-07 Novozymes A/S Alpha-amylase variants
WO2000060060A2 (en) 1999-03-31 2000-10-12 Novozymes A/S Polypeptides having alkaline alpha-amylase activity and nucleic acids encoding same
ES2322426T3 (es) 1999-03-31 2009-06-22 Novozymes A/S Polipeptidos con actividad alfa-amilasa y acidos nucleicos que codifican a los mismos.
EP3594334A3 (en) 2000-03-08 2020-03-18 Novozymes A/S Variants with altered properties
EP2180035A1 (en) 2000-08-01 2010-04-28 Novozymes A/S Alpha-amylase mutants with altered properties
US20040091994A1 (en) 2000-10-13 2004-05-13 Carsten Andersen Alpha-amylase variant with altered properties
EP2159279A3 (en) 2001-05-15 2010-05-12 Novozymes A/S Alpha-amylase variant with altered properties
US6926917B2 (en) 2002-10-16 2005-08-09 Nestec Ltd. Dry pet food with increased palatability and method of production
AU2004252572B2 (en) 2003-06-25 2011-09-08 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-amylase activity and polypeptides encoding same
CN1260252C (zh) 2004-01-15 2006-06-21 华南理工大学 一种控制淀粉糖分子量分布的方法
CN1273610C (zh) 2004-01-15 2006-09-06 华南理工大学 一种祛除低聚糖中单糖成分的方法
WO2006002643A2 (en) 2004-07-05 2006-01-12 Novozymes A/S Alpha-amylase variants with altered properties
CA2592083C (en) 2004-12-22 2017-02-21 Novozymes A/S Hybrid enzymes consisting of an endo-amylase first amino acid sequence and a carbohydrate-binding module as second amino acid sequence
US20080280328A1 (en) 2005-11-18 2008-11-13 Novozymes A/S Glucoamylase Variants
MX2010004668A (es) 2007-11-05 2010-05-20 Danisco Us Inc Variantes de alfa-amilasa de bacillus licheniformis con termoestabilidad incrementada y/o dependencia de calcio disminuida.
DK2215202T3 (da) 2007-11-05 2017-11-27 Danisco Us Inc VARIANTER AF BACILLUS sp. TS-23 ALPHA-AMYLASE MED ÆNDREDE EGENSKABER
BRPI0819184B1 (pt) 2007-11-05 2022-05-10 Danisco Us Inc Variantes de alfa-amilase com propriedades alteradas, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, composição, kit, bem como métodos para tratamento de um caldo de amido, para produção de um substrato fermentável, e para tratamento de um material contendo amido
US10526627B2 (en) * 2007-11-30 2020-01-07 Corn Products Development, Inc Method for producing high molecular weight reduced viscosity starch pastes
WO2009100102A2 (en) 2008-02-04 2009-08-13 Danisco Us Inc., Genencor Division Ts23 alpha-amylase variants with altered properties
EP2300605A2 (en) 2008-06-06 2011-03-30 Danisco US Inc. Geobacillus stearothermophilus alpha-amylase (amys) variants with improved properties
CN102224234B (zh) * 2008-09-25 2014-04-16 丹尼斯科美国公司 α-淀粉酶混合物和使用所述混合物的方法
CA2757343A1 (en) 2009-04-01 2010-10-07 Danisco Us Inc. Compositions and methods comprising alpha-amylase variants with altered properties
AU2011203460B2 (en) 2010-01-04 2014-09-18 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
EP2534236B1 (en) 2010-02-10 2018-05-30 Novozymes A/S Variants and compositions comprising variants with high stability in presence of a chelating agent
EP2357220A1 (en) 2010-02-10 2011-08-17 The Procter & Gamble Company Cleaning composition comprising amylase variants with high stability in the presence of a chelating agent
CN109097347A (zh) 2011-06-30 2018-12-28 诺维信公司 α-淀粉酶变体
EP3495479A1 (en) 2011-10-17 2019-06-12 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
WO2013057141A2 (en) 2011-10-17 2013-04-25 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
GB2499463B (en) * 2012-01-31 2014-04-02 Verenium Corp Reduced sugar syrups and methods of making reduced sugar syrups
US9951323B2 (en) 2013-07-17 2018-04-24 Novozymes A/S Pullulanase chimeras and polynucleotides encoding same
DK3097192T3 (da) 2014-01-22 2018-11-19 Novozymes As Pullulanasevarianter og polynukleotider, som koder for dem
WO2015143144A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Novozymes A/S Method for enhancing activity of an x143 polypeptide
US11072786B2 (en) 2014-04-10 2021-07-27 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
CN106795505A (zh) 2014-10-23 2017-05-31 诺维信公司 葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸
WO2016087327A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 Novozymes A/S Polypeptides having pullulanase activity comprising the x25, x45 and cbm41 domains
DK3362574T3 (da) 2015-10-14 2021-10-11 Novozymes As Glucoamylasevarianter og polynukleotider, der koder for dem
CN108603185B (zh) 2015-12-30 2022-05-17 诺维信公司 酶变体以及编码它们的多核苷酸
EP3452497B1 (en) 2016-05-03 2021-02-17 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding the same
EP3455352A1 (en) 2016-05-09 2019-03-20 Novozymes A/S Variant polypeptides with improved performance and use of the same
WO2018017105A1 (en) 2016-07-21 2018-01-25 Fornia Biosolutions, Inc. G24 glucoamylase compositions and methods
MX2019000743A (es) 2016-07-21 2019-05-20 Novozymes As Variantes de serinproteasa y polinucleotidos que las codifican.
ES2981748T3 (es) 2016-07-21 2024-10-10 Novozymes As Variantes de serina proteasa y polinucleótidos que las codifican
EP3272767B1 (en) 2016-07-21 2020-11-25 Fornia BioSolutions, Inc. G24 glucoamylase compositions and methods
US9598680B1 (en) 2016-08-05 2017-03-21 Fornia Biosolutions, Inc. G16 glucoamylase compositions and methods
WO2018102348A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
CN110651048A (zh) 2017-04-11 2020-01-03 诺维信公司 葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸
EP3676386A1 (en) 2017-08-30 2020-07-08 Novozymes A/S Combined use of an endo-protease of the m35 family and an exo-protease of the s53 family in the fermentation of starch
WO2019113413A1 (en) 2017-12-08 2019-06-13 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
CN111492054A (zh) 2017-12-08 2020-08-04 诺维信公司 α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
US11377648B2 (en) 2018-04-09 2022-07-05 Novozymes A/S Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same
US10808234B2 (en) 2018-05-04 2020-10-20 Fornia Biosolutions, Inc. Variant amylase enzyme compositions and methods
WO2020131252A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Fornia Biosolutions, Inc. Variant g6p g7p glucoamylase compositions and methods
WO2020188095A1 (en) 2019-03-21 2020-09-24 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
WO2021163011A2 (en) 2020-02-10 2021-08-19 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
CA3202322A1 (en) 2020-12-14 2022-06-23 Anthony Newton Method of starch processing

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1024371A (fr) * 1949-09-17 1953-04-01 Procédé pour l'amélioration des propriétés enzymatiques des amylases
US4284722A (en) * 1978-08-16 1981-08-18 Cpc International Inc. Heat and acid-stable alpha-amylase enzymes and processes for producing the same

Also Published As

Publication number Publication date
FI89076B (fi) 1993-04-30
KR960006119B1 (ko) 1996-05-09
FI89076C (fi) 1993-08-10
DE3781732T2 (de) 1993-03-25
CA1283376C (en) 1991-04-23
ES2052565T3 (es) 1994-07-16
DK351387A (da) 1988-01-10
DK351387D0 (da) 1987-07-08
JPS63102694A (ja) 1988-05-07
DE3781732D1 (de) 1992-10-22
ATE80657T1 (de) 1992-10-15
KR880001811A (ko) 1988-04-27
EP0252730A2 (en) 1988-01-13
FI873027A (fi) 1988-01-10
EP0252730B1 (en) 1992-09-16
EP0252730A3 (en) 1988-11-09
JP2509233B2 (ja) 1996-06-19
FI873027A0 (fi) 1987-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK166460B1 (da) Blandinger af alfa-amylaser og deres anvendelse til stivelsesforflydning
US4933279A (en) Starch liquefaction with alpha amylase mixtures
Aiyer Amylases and their applications
DK167029B2 (da) Enzymprodukt og dets anvendelse ved saccharificering af stivelse
Haki et al. Developments in industrially important thermostable enzymes: a review
JP2589941B2 (ja) グルコアミラーゼ酵素分画
EP0688872B1 (en) Process for preparing starchy products
WO1999029876A2 (en) Mutant bacillus licheniformis alpha-amylase
BR112012011106B1 (pt) Método de mosturação
CN105189773A (zh) 低聚麦芽糖的制备
JP2001226409A (ja) キシロオリゴ糖組成物
JP4200537B2 (ja) 高いＣａ可溶化活性を有するリン酸結合澱粉とそのオリゴ糖組成物及びそれらの製造方法
US4650757A (en) Process of enzymatic conversion of polysaccharides
JPS6318480B2 (da)
JP2018075010A (ja) デンプン液化のための方法
JP2886950B2 (ja) 水溶性食物繊維の製造法
US20150152458A1 (en) Low temperature method for making high glucose syrup
FR2504360A1 (fr) Procede pour preparer des sirops de glucose/fructose a partir d'hydrolysats d'amidon non raffines
EP3864148A2 (en) Alpha-amylases with mutations that improve stability in the presence of chelants
EP3830231A1 (en) Variant alpha-amylases having amino acid substitutions that lower the pka of the general acid
CN108823264A (zh) 一种以大米为原料制取高纯度麦芽糖浆的方法
MacGregor Limit dextrinase/pullulanase
WO2022146107A1 (ko) 백탁이 개선된 덱스트린 및 이의 제조 방법
JPS643480B2 (da)
US20210071219A1 (en) Simplified Process For Producing Maltodextrin and Specialty Syrups

Legal Events

Date Code Title Description
B1 Patent granted (law 1993)
PUP Patent expired