JP6959259B2 - 洗剤組成物およびその使用 - Google Patents

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    • C12Y302/01052—Beta-N-acetylhexosaminidase (3.2.1.52)
    • C11D2111/12—

Description

配列表の参照
本出願は、コンピュータ読み取り可能な形態の配列表を含んでおり、これは本明細書において参照により援用される。
本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、そのポリペプチドおよびグリコシドヒドロラーゼファミリー２０（ＧＨ２０、ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ）に属する触媒ドメインをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明はさらに、かかるポリペプチドを含む組成物、詳細にはクリーニング組成物、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドのクリーニング作業におけるおよび／またはディープクリーニングへの使用、ディープクリーニング方法に関する。本発明はさらに、本ポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクター、および宿主細胞ならびに本ポリペプチドおよび触媒ドメインの作製および使用方法に関する。
ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドには、グリコシドヒドロラーゼ２０ファミリーに属するβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）として記載されているジスペルシン類、例えばジスペルシンＢ（ＤｓｐＢ）が含まれる。国際公開第０４０６１１１７ Ａ２号パンフレット（Ｋａｎｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＩＮＣ）は、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン産生細菌によって生じるバイオフィルムを低減および予防するためのＤｓｐＢを含む組成物の使用について記載しており、Ｋａｎｅ ｅｔ ａｌ．は、医療機器（ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｓｅｓ）のバイオフィルムの低減および創傷ケアへのジスペルシン類を含む組成物の使用について記載している。バイオフィルムはまた、布地などの洗濯物、他の硬質表面、例えば、食器洗い用品、食器洗浄機および洗濯機にも存在してそこに悪臭を発生させることがあり、この悪臭は洗浄後も取り除くのが困難である。国際公開第９８５０５１２号パンフレット（Ｐｒｏｃｔｅｒ ａｎｄ Ｇａｍｂｌｅ）の出願は、１つ以上のヘキソサミニダーゼ酵素を含む洗濯またはクリーニング製品を開示している。本発明は、洗剤中への使用および洗濯およびクリーニング作業などの物品のディープクリーニングに好適な酵素を提供する。
本発明は、グリコシドヒドロラーゼ２０ファミリーのヘキソサミニダーゼのテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属するポリペプチドを提供する。テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードは図１および図３に示す。本発明のポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。本発明はさらに、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗剤組成物およびヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドのクリーニング作業への使用を提供する。ヘキソサミニダーゼ活性を有する本発明のポリペプチドは、洗濯および食器洗浄を含めたクリーニング作業におけるＥＰＳおよび／またはＰＮＡＧなどのバイオフィルム関連成分の除去および／または低減などの有益な特性を有する。本発明のポリペプチドはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属し、これはグリコシドヒドロラーゼ２０ファミリーの特定のクレードの相同配列である。従って、本発明は、
（ａ）配列番号２、４、６、１３または１５の成熟型ポリペプチドと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｂ）１つ以上（例えば数個）の位置に置換、欠失、および／または挿入を含む、配列番号２、４、６、１３または１５の成熟型ポリペプチドの変異体；および
（ｃ）ヘキソサミニダーゼ活性を有する（ａ）または（ｂ）のポリペプチドの断片
からなる群から選択されるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに関する。
本発明はまた、グリコシドヒドロラーゼファミリー２０（ＧＨ２０、ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ）に属し、かつ配列番号２のアミノ酸１〜３２４と少なくとも６０％の配列同一性；配列番号４のアミノ酸１〜３２４と少なくとも６０％の配列同一性、配列番号６のアミノ酸１〜３２４と少なくとも６０％の配列同一性、配列番号１３のアミノ酸１〜３２４と少なくとも６０％の配列同一性または配列番号１５のアミノ酸１〜３２４と少なくとも６０％の配列同一性を有する触媒ドメインを含むポリペプチドにも関する。本発明はまた、本発明のポリペプチドを使用したクリーニング方法およびクリーニング作業における使用にも関する。本発明はさらに、物品のクリーニングまたは洗濯方法に関し、この方法は、
ａ．配列番号７、８、９、１０および１１のポリペプチドまたはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択されるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗浄液またはこのポリペプチドを含む洗剤組成物に物品を曝露するステップ；
ｂ．少なくとも１つの洗浄サイクルを完了するステップ；および
ｃ．任意選択で物品をすすぐステップ
を含み、
ここで物品は生地である。
加えて、配列番号７、８、９、１０、１１のポリペプチドまたは少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択されるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドの、物品のディープクリーニングへの使用が特許請求される。
本発明はさらに、配列番号７、８、９、１０および１１に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有する少なくとも０．００１ｐｐｍのポリペプチドと；少なくとも１つの補助成分とを含む組成物に関する。本発明はさらに、物品のディープクリーニングへの本発明の組成物の使用に関し、ここで物品は生地である。
本発明はさらに、物品の洗濯方法に関し、この方法は、ａ）配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に示されるポリペプチドまたはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含む洗浄液に物品を曝露すること、または本発明に係る洗剤組成物に物品を曝露すること；ｂ）少なくとも１つの洗浄サイクルを完了すること；および任意選択で物品をすすぐことを含み、ここで物品は生地である。
本発明はさらに、
（ｉ）物品の粘着性を防止、低減または除去するため；
（ｉｉ）物品の染みを前処理するため；
（ｉｉｉ）洗浄サイクル中の汚れの再沈着を防止、低減または除去するため；
（ｉｖ）物品への汚れの付着を防止、低減または除去するため；
（ｖ）物品の白色度を維持または改善するため；
（ｖｉ）物品の悪臭を防止、低減または除去するための
本発明（ｉｎｖｅｔｉｏｎ）のポリペプチドまたは組成物の使用に関し、
ここで物品は生地である。
テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードを示す系統樹 本発明のポリペプチドのアラインメント 本発明のポリペプチドの系統樹
テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードの配列の概要
配列番号１は、テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）の完全長ポリペプチドをコードするＤＮＡである
配列番号２は、配列番号１に由来するポリペプチドである
配列番号３は、テルリバチルス・ゴリエンシス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）の完全長ポリペプチドをコードするＤＮＡである
配列番号４は、配列番号３に由来するポリペプチドである
配列番号５は、テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）の完全長ポリペプチドをコードするＤＮＡである
配列番号６は、配列番号５に由来するポリペプチドである
配列番号７は、配列番号２の成熟型ポリペプチドである
配列番号８は、配列番号４の成熟型ポリペプチドである
配列番号９は、配列番号６の成熟型ポリペプチドである
配列番号１０は、配列番号１３の成熟型ポリペプチドである
配列番号１１は、配列番号１５の成熟型ポリペプチドである
配列番号１２は、テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）の完全長ポリペプチドをコードするＤＮＡである
配列番号１３は、配列番号１２に由来するポリペプチドである
配列番号１４は、テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）の完全長ポリペプチドをコードするＤＮＡである
配列番号１５は、配列番号１４に由来するポリペプチドである
配列番号１６は、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）分泌シグナルである
配列番号１７は、Ｈｉｓタグ配列である
配列番号１８は、ポリペプチドモチーフＧＸＤＥである
配列番号１９は、ポリペプチドモチーフ［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］である
配列番号２０は、ポリペプチドモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］である
配列番号２１は、ポリペプチドモチーフＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］である
配列番号２２は、ポリペプチドモチーフＱＳＴＬである
配列番号２３は、ポリペプチドモチーフＮＫＦＦＹである
配列番号２４は、ポリペプチドモチーフＮＬＤ［ＤＲ］Ｓである
定義
ジスペルシン：用語「ジスペルシン」および略称「Ｄｓｐ」は、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、ＥＣ３．２．１．−例えばバイオフィルムに見られるＮ−アセチルグルコサミンポリマー（ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン）のβ−１，６−グリコシド結合の加水分解を触媒する−を意味する。
ヘキソサミニダーゼ：用語「ヘキソサミニダーゼ」は、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド（ヘキソサミニダーゼ）を意味し、例えばバイオフィルムに見られるＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンポリマーの加水分解を触媒するＥＣ３．２．１．を例えば含む。この用語はジスペルシン類を含み、およびＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性およびβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性を有するポリペプチドを含む。用語「ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド」は用語ヘキソサミニダーゼと同義的に使用されてもよく、同様に用語「β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ活性を有するポリペプチド」は、用語β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）と同義的に使用されてもよい。本発明の目的上、ヘキソサミニダーゼ活性は、アッセイ１または２に記載される手順に従い決定される。一態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号２の成熟型ポリペプチドのヘキソサミニダーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％を有する。一態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号４の成熟型ポリペプチドのヘキソサミニダーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％を有する。一態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号６の成熟型ポリペプチドのヘキソサミニダーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％を有する。一態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号１３の成熟型ポリペプチドのヘキソサミニダーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％を有する。一態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号１５の成熟型ポリペプチドのヘキソサミニダーゼ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％を有する。
対立遺伝子変異体：「対立遺伝子変異体」という用語は、同一の染色体座を占有する遺伝子の２つ以上の代替的な形態のいずれかを意味する。対立遺伝子変異は、突然変異を介して自然に生じ、また、個体群に多型性をもたらし得る。遺伝子突然変異は、サイレント（コードされるポリペプチドにおける変化なし）であってもよいし、または、改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするものでもよい。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子変異体によってコードされたポリペプチドである。
バイオフィルム：バイオフィルムは、細胞が互いに付着しているか、あるいは生地、食器類または硬質表面または他の種類の表面などの表面上に付着している、いずれかの微生物群である。こうした付着細胞は、多くの場合、細胞外高分子物質（ＥＰＳ）の自己生成マトリックス内に包埋されている。バイオフィルムＥＰＳは、一般に、細胞外ＤＮＡ、タンパク質、および多糖から構成された高分子凝集塊である。バイオフィルムは、生存または非生存表面上に形成し得る。バイオフィルム内で増殖する微生物細胞は、同じ生物の浮遊細胞とは生理学的に異なり、浮遊細胞は、対照的に、液体媒体中に浮遊または泳動し得る単細胞である。
バイオフィルム内に生存する細菌は、通常フィルムの高密且つ保護された環境によって、これらの細菌が多様な方法で協同および相互作用することが可能になるため、同じ種の微生物細菌とは極めて異なる特性を有する。このような微生物のための環境の１つの利点は、高密度の細胞外マトリックスおよび細胞の外層が集団の内部を保護するために、洗剤および抗生物質に対する耐性が増大することである。洗濯物および硬質表面上には、とりわけ以下の種のバイオフィルム産生細菌：アシネトバクター属種（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、アエロミクロビウム属種（Ａｅｒｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ ｓｐ．）、ブレブンディモナス属種（Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ ｓｐ．）、ミクロバクテリウム属種（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ）、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、ストレプトコッカス属種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）、ストレプトコッカス・ディスガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・ニューモニエ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ステノトロホモナス属種（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、エンテロバクター属種（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、キサントモナス属種（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、エルシニア属種（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｓｐ．）、クレブシエラ属種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐ．）、バークホルデリア属種（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｓｐ．）、ステノトロホモナス属種（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、バリオボラックス属種（Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ ｓｐ．）、大腸菌属種（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｓｐ．）、ラルストニア属種（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｐ．）、アクロモバクター属種（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、ルテイバクター属種（Ｌｕｔｅｉｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、シトロバクター属種（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、キサントモナス科種（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ ｓｐ．）、ハロモナス属種（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、ボルデテラ属種（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｓｐ．）、リソバクター属種（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、セラチア属種（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｓｐ．）、大腸菌属種（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｓｐ．）、アグリゲイティバクター属種（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、マイコバクテリウム属種（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）およびエンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）ならびに真菌類カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、黄色コウジ菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、フザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）、およびクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）が存在し得る。一態様において、バイオフィルム成分、例えばポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンを含む株は、ブレブンディモナス属種（Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ ｓｐ．）である。一態様において、バイオフィルム成分、例えばポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンを含む株は、シュードモナス・アルカリフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｌｃａｌｉｐｈｉｌａ）または蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）である。一態様において、バイオフィルム成分、例えばポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンを含む株は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）である。
触媒ドメイン：用語「触媒ドメイン」は、ある酵素の中で、その酵素の触媒機構を含む領域を意味する。
ｃＤＮＡ：「ｃＤＮＡ」という用語は、真核もしくは原核細胞から得られる成熟型のスプライシングされたｍＲＮＡ分子からの逆転写によって調製することができるＤＮＡ分子である。ｃＤＮＡは、対応するゲノムＤＮＡに存在し得るイントロン配列が欠失している。初期の一次ＲＮＡ転写物は、ｍＲＮＡの前駆体であり、これは、スプライシングを含む一連のステップで処理された後、成熟型スプライシングｍＲＮＡとして出現する。
クレード：共通の祖先に遡る相同な特徴に基づき共にクラスター化される一群のポリペプチド。ポリペプチドクレードは系統樹として視覚化することができ、クレードは、共通の祖先とその全ての直系子孫からなる一群のポリペプチドである（図１）。例えば本発明のポリペプチドは、全てがテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属する（図１および図３に系統樹として図示する）。テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードまたはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）のクレードは、全てが同じ祖先と血縁関係にあり、かつ共通の特性を共有する一群の酵素である。系統樹のクレード内で一群を形成するポリペプチド（サブクレード）もまた共通の特性を共有することができ、そのクレードにおける他のポリペプチドよりも近縁の関係にある。
コード配列：「コード配列」という用語は、ポリペプチドのアミノ酸配列を直接規定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は、一般に、オープンリーディングフレームによって決定されるが、これは、ＡＴＧ、ＧＴＧ、またはＴＴＧなどの開始コドンで開始し、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡなどの終止コドンで終了する。コード配列は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはこれらの組み合わせのいずれであってもよい。
制御配列：「制御配列」という用語は、本発明の成熟型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現に必要な核酸配列を意味する。各制御配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して在来（すなわち、同じ遺伝子に由来する）もしくは外来の（すなわち、異なる遺伝子に由来する）ものであっても、または、相互に在来もしくは外来のものであってもよい。このような制御配列としては、これらに限定されないが、リーダ、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナルペプチド配列、および転写ターミネータが挙げられる。少なくとも、制御配列は、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止シグナルを含む。制御配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコード領域と制御配列の連結を促進させる特定の制限部位を導入する目的で、リンカーを備えていてもよい。
ディープクリーニング：「ディープクリーニング」という用語は、バイオフィルム内に存在するＥＳＰまたはその一部、多糖、ＰＮＡＧ（ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン）タンパク質、ＤＮＡ、汚れもしくは他の成分などのバイオフィルムの成分の減少または除去を意味する。
洗剤補助成分：洗剤補助成分は、本発明のヘキソサミニダーゼとは異なる。こうした追加的補助成分の厳密な性質、ならびにその含有レベルは、組成物の物理的形態およびそれを用いようとする作業の種類に応じて変動し得る。好適な補助成分としては、限定されないが、後述する成分、例えば、界面活性剤、ビルダー、凝集助剤、キレート化剤、移染防止剤、酵素、酵素安定剤、酵素阻害剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素供給源、事前形成された過酸（ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ ｐｅｒａｃｉｄ）、ポリマー剤、泥汚れ除去／再付着防止剤、増白剤、石鹸泡抑制剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、キャリア、ヒドロトロープ、ビルターおよびコビルダー、布地色相剤、消泡剤、分散剤、加工助剤、および／または顔料が挙げられる。
洗剤組成物：「洗剤組成物」という用語は、生地などの洗浄しようとする品目から不要な化合物を除去する上で有用な組成物を指す。洗剤組成物は、家庭用クリーニングおよび業務用クリーニングの両方の用途で、例えば、生地をクリーニングするために用いることができる。この用語は、所望のクリーニング組成物および製品の形態（例えば、液体、ゲル、粉末、顆粒、ペースト、またはスプレー組成物）のために選択されるあらゆる材料／化合物を包含し、限定されないが、洗剤組成物（例えば、液体および／または固体洗濯洗剤ならびにデリケート用洗剤；布地フレッシュナ；布地柔軟剤；ならびに生地および洗濯プレスポッター／前処理剤）を包含する。本発明のポリペプチドを含有する以外に、この組成物は、１種または複数種の別の酵素（例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼおよびマンナナーゼ、もしくはこれらの任意の混合物）、ならびに／または洗剤補助成分、例えば、界面活性剤、ビルダー、キレート剤もしくはキレート化剤、漂白剤系もしくは漂白剤成分、ポリマー、布地コンディショナ、起泡増進剤、石鹸泡抑制剤、染料、香料、色あせ防止剤、光学増白剤、殺菌剤、殺カビ剤、汚染物懸濁剤、腐食防止剤、酵素抑制剤もしくは安定化剤、酵素活性化剤、トランスフェラーゼ、加水分解酵素、酸化還元酵素、青み付け剤および蛍光性染料、酸化防止剤、および溶解剤を含有してもよい。
酵素洗浄力有益性：本明細書において、「酵素洗浄力有益性」という用語は、酵素を伴わない同一の洗剤と比して、酵素が洗剤に追加し得る有利な効果として定義される。酵素によりもたらされることが可能である重要な洗浄力有益性は、洗浄および／またはクリーニング後に視認可能な汚染物がないかほとんどない染み除去（再付着防止とも呼ばれる効果である）、洗浄プロセスで遊離した汚染物の再付着の防止または低減（白色化とも呼ばれる効果である）、元々は白色であったが反復的な使用および洗浄の後に灰色がかったもしくは黄色がかった外観となってしまった生地の白色度の完全なまたは部分的な回復である。触媒による染み除去もしくは汚染物の再付着防止に直接関係はしない、生地の取り扱いによる有益性（ｔｅｘｔｉｌｅ ｃａｒｅ ｂｅｎｅｆｉｔ）もまた酵素洗浄力有益性に重要である。このような生地の取り扱いによる有益性の例は、一の布地から他の布地へ、もしくは、同一の布地の他の部分への移染の防止もしくは低減（移染防止または逆汚染防止とも呼ばれる効果である）；ピル性を低減するための布地表面からの突出繊維もしくは破断繊維の除去、または、既に存在しているピルもしくは毛羽の除去（抗ピルとも呼ばれる効果である）；布地柔軟性の向上；布地の色の清澄化；および、布地もしくは衣服の繊維中に詰まった粒状の汚染物の除去である。酵素漂白はさらなる酵素洗浄力有益性であり、ここで、触媒活性は、一般に、過酸化水素もしくは他の過酸化物などの漂白成分の形成を触媒するために用いられる。
発現：「発現」という用語は、限定するものではないが、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾および分泌物を含むポリペプチドの生成に関与するいずれかのステップを含む。
発現ベクター：「発現ベクター」という用語は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、また、その発現をもたらす制御配列に作動可能にリンクされている直鎖または環状ＤＮＡ分子を含む。
断片：用語「断片」は、成熟型ポリペプチドまたはドメインのアミノ末端および／またはカルボキシル末端に１つ以上（例えば数個）のアミノ酸が存在しないポリペプチドまたは触媒ドメインを意味する；断片はヘキソサミニダーゼ活性を有する。一態様において、断片は少なくとも３００アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸１〜３００）、少なくとも３０５アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸１〜３０５）、少なくとも３１０アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸１〜３１０）、少なくとも３１５アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸１〜３１５）、または少なくとも３２０アミノ酸残基（例えば、配列番号２のアミノ酸１〜３２０）を含む。一態様において、断片は少なくとも３００アミノ酸残基（例えば、配列番号４のアミノ酸１〜３００）、少なくとも３０５アミノ酸残基（例えば、配列番号４のアミノ酸１〜３０５）、少なくとも３１０アミノ酸残基（例えば、配列番号４のアミノ酸１〜３１０）、少なくとも３１５アミノ酸残基（例えば、配列番号４のアミノ酸１〜３１５）、または少なくとも３２０アミノ酸残基（例えば、配列番号４のアミノ酸１〜３２０）を含む。一態様において、断片は少なくとも３００アミノ酸残基（例えば、配列番号６のアミノ酸１〜３００）、少なくとも３０５アミノ酸残基（例えば、配列番号６のアミノ酸１〜３０５）、少なくとも３１０アミノ酸残基（例えば、配列番号６のアミノ酸１〜３１０）、少なくとも３１５アミノ酸残基（例えば、配列番号６のアミノ酸１〜３１５）、または少なくとも３２０アミノ酸残基（例えば、配列番号６のアミノ酸１〜３２０）を含む。一態様において、断片は少なくとも３００アミノ酸残基（例えば、配列番号１３のアミノ酸１〜３００）、少なくとも３０５アミノ酸残基（例えば、配列番号１３のアミノ酸１〜３０５）、少なくとも３１０アミノ酸残基（例えば、配列番号１３のアミノ酸１〜３１０）、少なくとも３１５アミノ酸残基（例えば、配列番号１３のアミノ酸１〜３１５）、または少なくとも３２０アミノ酸残基（例えば、配列番号１３のアミノ酸１〜３２０）を含む。一態様において、断片は少なくとも３００アミノ酸残基（例えば、配列番号１５のアミノ酸１〜３００）、少なくとも３０５アミノ酸残基（例えば、配列番号１５のアミノ酸１〜３０５）、少なくとも３１０アミノ酸残基（例えば、配列番号１５のアミノ酸１〜３１０）、少なくとも３１５アミノ酸残基（例えば、配列番号１５のアミノ酸１〜３１５）、または少なくとも３２０アミノ酸残基（例えば、配列番号１５のアミノ酸１〜３２０）を含む。
宿主細胞：「宿主細胞」という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物または発現ベクターによる形質転換、形質移入、形質導入等などに対する感受性を有するあらゆる細胞型を意味する。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異のために、親細胞と同じではない親細胞のあらゆる子孫を包含する。
単離された：「単離された」という用語は、自然界においては生じない形態または環境にある物質を意味する。単離された物質の非限定的な例としては、（１）いずれかの非天然物質、（２）限定されないが、自然界において関連している天然構成成分の１種または複数種もしくは全てから少なくとも部分的に取り出されたいずれかの酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチドもしくは補因子を含むいずれかの物質；（３）自然界に見出される物質に対して人為的に修飾されたいずれかの物質；または（４）自然界で関連する他の成分に対して物質量の増加により修飾されたいずれかの物質（例えば、宿主細胞における組換え産生；物質をコードする遺伝子の複数のコピー；ならびに、物質をコードする遺伝子と自然界で関連するプロモータよりも強力なプロモータの使用）が挙げられる。単離された物質は、発酵ブロスサンプル中に存在してもよく；例えば、本発明のポリペプチドを発現するように、宿主細胞を遺伝子改変してもよい。宿主細胞からの発酵ブロスは、単離されたポリペプチドを含み得る。
洗浄性能の向上：用語「洗浄性能の向上」は、本明細書では、ある酵素が洗剤組成物中で、その酵素を含まない同じ洗剤組成物の洗浄性能と比べて、例えば高い染み抜き性または低い再沈着性によって高い洗浄性能を呈するものとして定義される。用語「洗浄性能の向上」には、洗濯における洗浄性能が含まれる。
洗濯する：「洗濯する」という用語は、家庭での洗濯および業務用洗濯の両方に関し、本発明のクリーニングまたは洗剤組成物を含む溶液で生地を処理する工程を意味する。洗濯工程は、例えば、家庭用または業務用洗浄機を用いて実施することもできるし、または手で実施することもできる。
悪臭：「悪臭」という用語は、清浄な品目に対して望ましくない臭いを意味する。洗浄された品目は、その品目に付着する悪臭がなく、新鮮かつ清浄な臭いがすべきである。悪臭の一例として、微生物によって発生され得る不快な臭いを有する化合物がある。別の例は、ヒトまたは動物と接触していた品目に付着した汗または体臭であり得る不快な臭いである。悪臭の別の例は、品目に付着する香辛料からの臭いである場合もあり、例えば、カレーや、強烈な臭いがする他の外来香辛料がある。
成熟型ポリペプチド：「成熟型ポリペプチド」という用語は、Ｎ末端プロセシング、Ｃ末端切断、グリコシル化、リン酸化等などの翻訳およびいずれかの翻訳後修飾の後に、その最終形態にあるポリペプチドを意味する。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは配列番号２のアミノ酸１〜３２４であり、配列番号２のアミノ酸−４１〜−１がシグナルペプチドである。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは、配列番号７を有するアミノ酸配列である。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは配列番号４のアミノ酸１〜３２４であり、配列番号４のアミノ酸−２５〜−１がシグナルペプチドである。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは、配列番号８を有するアミノ酸配列である。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは配列番号６のアミノ酸１〜３２４であり、配列番号６のアミノ酸−２５〜−１がシグナルペプチドである。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは、配列番号９を有するアミノ酸配列である。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは配列番号１３のアミノ酸１〜３２４であり、配列番号１３のアミノ酸−２４〜−１がシグナルペプチドである。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは、配列番号１０を有するアミノ酸配列である。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは配列番号１５のアミノ酸１〜３２４であり、配列番号１５のアミノ酸−２４〜−１がシグナルペプチドである。一部の態様において、成熟型ポリペプチドは、配列番号１１を有するアミノ酸配列である。
同じポリヌクレオチドによって発現された宿主細胞が、２つのさらに異なる成熟型ポリペプチド（すなわち、異なるＣ末端および／またはＮ末端アミノ酸を含む）の混合物を産生しうることは当分野において公知である。さらに、異なる宿主細胞は、ポリペプチドを異なる様式でプロセシングするため、あるポリヌクレオチドを発現する１宿主細胞は、同じポリヌクレオチドを発現する別の宿主細胞と比較して、異なる成熟型ポリペプチド（例えば、異なるＣ末端および／またはＮ末端アミノ酸を有する）を産生し得ることも当分野において公知である。
成熟型ポリペプチドコード配列：用語「成熟型ポリペプチドコード配列」は、ヘキソサミニダーゼ活性を有する成熟型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。一態様において、成熟型ポリペプチドコード配列は配列番号１のヌクレオチド１２４〜１０９５であり、配列番号１のヌクレオチド１〜１２３がシグナルペプチドをコードする。一態様において、成熟型ポリペプチドコード配列は配列番号３のヌクレオチド７６〜１０４７であり、配列番号３のヌクレオチド１〜７５がシグナルペプチドをコードする。一態様において、成熟型ポリペプチドコード配列は配列番号５のヌクレオチド７６〜１０４７であり、配列番号５のヌクレオチド１〜７５がシグナルペプチドをコードする。一態様において、成熟型ポリペプチドコード配列は配列番号１２のヌクレオチド７３〜１０４４であり、配列番号１２のヌクレオチド１〜７２がシグナルペプチドをコードする。一態様において、成熟型ポリペプチドコード配列は配列番号１４のヌクレオチド７３〜１０４４であり、配列番号１４のヌクレオチド１〜７２がシグナルペプチドをコードする。
核酸構築物：「核酸構築物」という用語は、一本鎖または二本鎖いずれかの核酸分子を意味し、これは、天然の遺伝子から単離されるか、もしくは、そうでなければ自然に存在しないであろう様式で核酸のセグメントを含有するよう修飾されるか、または、合成物であり、これは、１つまたは複数の制御配列を含む。
作動可能にリンクされた：「作動可能にリンクされた」という用語は、制御配列がコード配列の発現を指令するように、ポリヌクレオチドのコード配列に対して適切な位置に制御配列が配置される構造を意味する。
配列同一性：２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間の関連性は、「配列同一性」というパラメータによって表される。
本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度は、好ましくはバージョン５．０．０以降のＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムにおいて実装されている、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて判定される。用いられるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップエクステンションペナルティおよびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。Ｎｅｅｄｌｅ標識された「最長の同一性」（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）の出力が同一性割合として用いられ、以下のように算出される：
（同等の残基×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）
緊縮条件：「極めて低度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブに関して、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、４２℃、５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片処理および修飾済みのサケ精子ＤＮＡ、ならびに、２５％ホルムアミドでのプレハイブリーダイゼーションおよびハイブリーダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて、４５℃で１５分間ずつ３回洗浄される。
「低度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブに関して、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、４２℃、５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片処理および修飾済みのサケ精子ＤＮＡ、ならびに、２５％ホルムアミドでのプレハイブリーダイゼーションおよびハイブリーダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて、５０℃で１５分間ずつ３回洗浄される。
「中度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブに関して、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、４２℃、５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片処理および修飾済みのサケ精子ＤＮＡ、ならびに、３５％ホルムアミドでのプレハイブリーダイゼーションおよびハイブリーダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて、５５℃で１５分間ずつ３回洗浄される。
「中度−高度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブに関して、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、４２℃、５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片処理および修飾済みのサケ精子ＤＮＡ、ならびに、３５％ホルムアミドでのプレハイブリーダイゼーションおよびハイブリーダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて、６０℃で１５分間ずつ３回洗浄される。
「高度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブに関して、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、４２℃、５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片処理および修飾済みのサケ精子ＤＮＡ、ならびに、５０％ホルムアミドでのプレハイブリーダイゼーションおよびハイブリーダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて、６５℃で１５分間ずつ３回洗浄される。
「極めて高度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも１００ヌクレオチドのプローブに関して、１２〜２４時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、４２℃、５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００マイクログラム／ｍｌ断片処理および修飾済みのサケ精子ＤＮＡ、ならびに、５０％ホルムアミドでのプレハイブリーダイゼーションおよびハイブリーダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的に、２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて、７０℃で１５分間ずつ３回洗浄される。
変異体：「変異体」という用語は、１つまたは複数（例えば、数個）の位置に改変（すなわち、置換、挿入および／または欠失）を含む、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。置換とは、ある位置のアミノ酸の異なるアミノ酸による置き換えを意味し；欠失とは、ある位置のアミノ酸の除去を意味し；また、挿入とは、ある位置のアミノ酸に隣接し、この直後に続く１アミノ酸を付加することを意味する。
表記法
本発明の目的上、表記法［ＩＶ］または［Ｉ／Ｖ］は、当該の位置のアミノ酸がイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）またはバリン（Ｖａｌ、Ｖ）であり得ることを意味する。同様に、表記法［ＬＶＩ］および［Ｌ／Ｖ／Ｉ］は、当該の位置のアミノ酸がロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、バリン（Ｖａｌ、Ｖ）またはイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）であり得ることを意味し、本明細書に記載されるとおりの他の組み合わせについても同様である。特にさらに限定されない限り、アミノ酸Ｘは、それが天然２０アミノ酸のうちのいずれであってもよいものと定義される。
発明の詳細な説明
洗濯には種々の酵素が用いられており、その多くが悪臭の除去に関係する。国際公開第２０１４／０８７０１１号パンフレットは、洗濯物および／または生地からの悪臭を低減するためのデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）の使用について記載し、国際公開第９９０９１４３号パンフレットは、悪臭を低減するための媒介物と組み合わせた１つ以上のオキシドレダクターゼの使用について記載し、および国際公開第２０１２／１１２７１８号パンフレットは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の様々な株を使用することにより細菌が引き起こす洗濯の悪臭の発生を抑制する方法について記載している。本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有するＧＨ２０ポリペプチドファミリーのテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドおよびポリペプチドを含むクリーニング組成物、例えば洗剤組成物に関する。また、洗濯方法およびヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドの使用も特許請求される。ヘキソサミニダーゼ活性を有するＧＨ２０ファミリーのテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドは、洗浄する物品の染みの低減および防止において有用である。本発明者らは、意外にも、ヘキソサミニダーゼ活性を有するＧＨ２０ファミリーのテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドが、洗濯に関連する有機物、例えばＥＰＳおよび／またはＰＮＡＧの低減に有用であることを見出した。国際公開第２００４０６１１７号パンフレットは、ジスペルシン類、例えばＤｓｐＢを含む組成物について記載している。この組成物は、アニオン性、カチオン性、またはノニオン性であってもよい洗剤を含み得る。国際公開第９８５０５１２号パンフレットは、ヘキソサミニダーゼ活性を有する酵素について記載している。本発明のポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有するが、これらはＤｓｐＢクレードに属さず、または国際公開第９８５０５１２号パンフレットに記載される酵素のいずれかに関する。本発明のポリペプチドはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属し、従ってＤｓｐＢおよび国際公開第９８５０５１２号パンフレットに記載されるものとは異なる。従って、硬質表面上ならびに洗濯のバイオフィルム成分、例えば多糖類、例えばＰＮＡＧ（ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン）などの有機物の防止、低減および／または除去に本発明のポリペプチドを使用し得ることは意外であった。当該技術分野において、洗濯などのクリーニング作業における、または例えばビルダーおよび／または漂白剤を含む洗剤組成物中におけるヘキソサミニダーゼの使用は指摘されていない。酵素がクリーニング作業において有用であるためには、界面活性剤、ビルダーおよび漂白剤成分などの洗剤成分の存在下における安定性を含め、洗濯などのクリーニング作業の条件下で洗剤中においてその作用を発揮する必要がある。洗剤の成分は、ヘキソサミニダーゼなどの酵素の性能に大きい効果を及ぼし得る。本願は、意外にも、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属するポリペプチドが、洗剤中の極めて一般的な界面活性剤である界面活性剤直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩類（ＬＡＳ）の存在下で特に安定していることを示す。従ってテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）に属するポリペプチドは、例えば生地または洗濯機のディープクリーニング（ｄｅｅｐ ｃｌｅａｉｎｇ）に特に有用である。
テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードの概要を図１に提供する。テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードは相同配列を含む。成熟アミノ酸配列である配列番号７、８および９を有する本発明のヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドは、ニードルマン−ブンシュアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いてペアワイズアライメントすることができる。かかるアライメントから得られるパーセント同一性を以下の表１に示す。
Figure 0006959259
表１は、本発明のポリペプチドが近い配列関連性を共有していることを示す。配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、ジスペルシンクレードのサブクレードに属する。これらのポリペプチドは９０％を上回るペアワイズ配列同一性を共有し、例えばさらに遠くにあるＤｓｐＢポリペプチド（図示せず）と比較して、互いにより近縁の関係にある。
本発明の一態様は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに関し、またはそれと少なくとも９９．８％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに関し、またはそれと少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに関し、またはそれと少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに関し、またはそれと少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに関し、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明のポリペプチドは全て同じクレード、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレード内にあり、全てが、洗剤の存在下におけるディープクリーニング特性を含め、共通の機能的特徴を有する。本発明者らは、意外にも、配列番号７、８、９、１０、１１の成熟型ポリペプチドを含むテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドまたはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドが特定の特性を共有し、より正確には、このクレードに含まれるポリペプチドが全て、ＬＡＳなどの幅広い界面活性剤と共に良好なディープクリーニング効果を有し、従って、アニオン性、ノニオン性、カチオン性および／または両性界面活性剤を含む洗剤中など、界面活性剤を有する洗剤中で特に有用であることを見出した。
既述のとおり、本発明のヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドはＧｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０の構造ドメイン、例えばＧＨ２０を含み得る。ＧＨ２０ドメインを含むポリペプチドは数個のモチーフを含むことができ、一例は、テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）（配列番号９）の１５８〜１６１位に対応する位置にあるＧＸＤＥ（配列番号１８）である。残基ＤおよびＥがＧＨ２０の主要な触媒残基である（配列番号９の１６０および１６１位）。ＧＨ２０ポリペプチドは複数の異なるサブクラスター、すなわちクレードに分けることができ、具体的なドメインの例は以下に挙げる。さらなるドメイン、好ましくは本発明のポリペプチドによって共有されるドメインが同定された。このドメインはこれまで記載されたことがなく、このドメインはＩＡＳと称され、およびこのドメインのポリペプチドは、ヘキソサミニダーゼ活性、例えばＰＮＡＧ活性を有することに加え、特定のモチーフ、例えば、配列番号９の４４〜５０位にあるＥＳＹＡＩＡＳに対応する［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）のうちの１つ以上を含むことによって特徴付けられる。別のドメイン、好ましくは本発明のポリペプチドによって共有されるドメインが同定された。このドメインはこれまで記載がない。このドメインはＷＮＤと称され、およびこのドメインのポリペプチドはＧＨ２０ドメインを含み、細菌由来であり、およびＰＮＡＧ活性を有することに加え、特定のモチーフを含むことによって特徴付けられる。このドメインのポリペプチドは、配列番号９の１５６〜１６３位に対応するモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）を含むことができ、ここでＧ（配列番号９の１５８位に対応する）はテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードにおいて完全に保存されており、残基ＤおよびＥがＧＨ２０の主要な触媒残基である（配列番号９の１６０および１６１位）。本発明のポリペプチドに含まれ得る別のモチーフは、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、配列番号９の１９３〜１９８であり、ここでＷ（配列番号９の１９３位）は活性部位ポケットの一部であり、ＰＮＡＧ基質のＮ−アセチル基の結合に関与していると推定される。テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドは、ＰＮＡＧ活性を有する細菌由来のＷＮＤドメインポリペプチドを含むＱＳＴＬと呼ばれるクレードにさらに細分することができる。このクレードのポリペプチドは、モチーフの例、配列番号９の２１６〜２１９位に対応するＱＳＴＬ（配列番号２２）を含み、ここで４つのアミノは全てがＱＳＴＬクレードにおいて完全に保存されており、基質結合に関与していると推定される。ＱＳＴＬクレードのポリペプチドに含まれ得る別のモチーフは、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、配列番号９の２７３〜２７７である。ＱＳＴＬクレードのポリペプチドに含まれ得るさらなるモチーフは、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）、配列番号９の２０４〜２０８である。一態様において、本発明のポリペプチドはＧＸＤＥ（配列番号１８）モチーフを含む。一態様において、本発明のポリペプチドは［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）モチーフを含む。一態様において、本発明のポリペプチドはモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）を含む。一態様において、本発明のポリペプチドはモチーフＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）を含む。一態様において、本発明のポリペプチドはモチーフＱＳＴＬ（配列番号２２）を含む。一態様において、本発明のポリペプチドはモチーフＮＫＦＦＹ（配列番号２３）を含む。一態様において、本発明のポリペプチドはモチーフＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）を含む。ＱＳＴＬクレードに含まれる本発明のポリペプチドのアラインメントを図２に示す。
本発明の一部の態様は、ＧＸＤＥ（配列番号１８）または［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）の一方または両方のモチーフを含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号７、８、９、１０および１１に示されるポリペプチドまたはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドから選択されるアミノ酸配列を含む。
本発明の一部の態様は、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）またはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）の一方または両方のモチーフを含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号７、８、９、１０および１１に示されるポリペプチドまたはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドから選択されるアミノ酸配列を含む。
本発明の一部の態様は、モチーフＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号７、８、９、１０および１１に示されるポリペプチドまたはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドから選択されるアミノ酸配列を含む。
本発明の一態様は、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）またはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）の一方または両方のモチーフを含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、一方または両方のモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）またはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、一方または両方のモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）またはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、一方または両方のモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）またはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、一方または両方のモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）またはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、モチーフＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、モチーフＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、モチーフＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、モチーフＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
本発明の一態様は、モチーフＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチドに関し、ここでポリペプチドは、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。
一態様は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドのクリーニング作業における使用に関し、またはそれと少なくとも８４％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドであり、ここでポリペプチドはヘキソサミニダーゼ活性を有する。本発明の一部の態様は、ａ）ヘキソサミニダーゼ活性を有する、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１からなる群から選択される１つ以上のポリペプチドと、ｂ）少なくとも１つの界面活性剤、好ましくは、アニオン性、ノニオン性および／またはカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１つの界面活性剤とを含むクリーニング組成物、例えば洗剤組成物に関する。
本発明の一態様は、配列番号７、８、９、１０および１１に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有する少なくとも０．００１ｐｐｍのポリペプチドと；少なくとも１つの補助成分とを含む組成物に関する。
ポリペプチドの量は、０．００００４〜１００ｐｐｍの範囲、例えば０．００００８〜５０ｐｐｍの範囲、０．００００１〜２０の範囲、０．０００２〜２０ｐｐｍの範囲、０．０００１〜５０ｐｐｍの範囲、０．０００２〜５０の範囲、０．０００４〜５０の範囲、０．０００８〜５０の範囲、０．００１〜５０ｐｐｍ、０．０１〜５０ｐｐｍ、好ましくは０．０００１〜５０ｐｐｍ、より好ましくは０．０００２〜２０ｐｐｍ、より好ましくは０．０００２〜１０ｐｐｍ、より好ましくは０．００１〜１０ｐｐｍ、および最も好ましくは０．００２〜１０ｐｐｍの範囲であってもよい。本発明のヘキソサミニダーゼは、少なくとも０．００００１ｐｐｍ、例えば少なくとも０．００００２ｐｐｍ、少なくとも０．０００１ｐｐｍ、少なくとも０．０００２ｐｐｍ、少なくとも０．０００５ｐｐｍ、少なくとも０．００１ｐｐｍ、少なくとも０．００２ｍｇｐｐｍ、少なくとも０．００５ｐｐｍ、少なくとも０．０１ｐｐｍまたは少なくとも０．０２ｐｐｍに対応する量であってもよい。組成物は、少なくとも０．００００８％、好ましくは少なくとも０．００００．１％、０．００００２％、０．０００．１％、０．０００２％、０．００１％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００８％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％または１．０％のヘキソサミニダーゼを含んでもよい。
好ましくは、ポリペプチドはＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性および／またはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性、例えばＰＮＡＧに対する活性を有する。一態様において、ポリペプチドは、モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含む。一態様において、ポリペプチドはＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性および／またはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性、例えばＰＮＡＧに対する活性を有し、かつモチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含む。一態様において、ポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に示されるポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。
一態様において、ポリペプチドはＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性および／またはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性、例えばＰＮＡＧに対する活性を有し、かつモチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含み、ここでポリペプチドは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に示されるポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。
一態様において、配列番号７または配列番号２の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる、配列番号８または配列番号４の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる、配列番号９または配列番号６の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる、配列番号１０または配列番号１３の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる、または配列番号１１または配列番号１５の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなるポリペプチド。
本組成物は、好ましくはクリーニング組成物、好ましくは洗濯用または食器洗浄用組成物である。本発明の一部の態様は、本発明のポリペプチドと補助成分とを含む組成物に関し、ここで補助成分は、
ａ）少なくとも１つのビルダー、
ｂ）少なくとも１つの界面活性剤、および
少なくとも１つの漂白剤成分
から選択される。
本発明の一部の態様は、ａ）ヘキソサミニダーゼ活性を有する、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１からなる群から選択される１つ以上のポリペプチドまたはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドと、ｂ）少なくとも１つの界面活性剤、好ましくは、アニオン性、ノニオン性および／またはカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１つの界面活性剤とを含むクリーニング組成物、例えば洗剤組成物に関する。
本発明の一部の態様は、
ａ）少なくとも０．０１ｐｐｍの活性酵素ポリペプチドであって、酵素ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８または配列番号９またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、および
ｂ）約２ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の界面活性剤または約５ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の界面活性剤
を含む洗剤組成物に関する。
本発明の一部の態様は、
ａ）少なくとも０．０００１ｐｐｍの活性酵素ポリペプチドであって、酵素ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１またはそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、および
ｂ）約２ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の界面活性剤または約５ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の界面活性剤、約５ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の界面活性剤
を含む洗剤組成物に関する。
本組成物は、好ましくは、約２ｗｔ％〜約６０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約４０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約３０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約２０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％のアニオン性界面活性剤および／またはノニオン性界面活性剤を含む。界面活性剤は、上記に記載したとおりのノニオン性、アニオン性および／または両性界面活性剤の中から選択されてもよく、好ましくはアニオン性またはノニオン性界面活性剤が使用され、しかしまた両性界面活性剤が使用されてもよい。一般に、耐漂白剤性界面活性剤が好ましい。好ましいアニオン性界面活性剤は硫酸塩界面活性剤、詳細にはアルキルエーテル硫酸塩類、特にＣ９〜Ｃ１５アルコールエーテル硫酸塩類、Ｃ１２〜Ｃ１５第一級アルコールエトキシレート、Ｃ８〜Ｃ１６硫酸エステルおよびＣ１０〜Ｃ１４硫酸エステル類、例えば硫酸モノドデシルエステル類である。アニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、硫酸塩類およびスルホン酸塩類、詳細には、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩類（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、分枝状アルキルベンゼンスルホン酸塩類（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホン酸塩類、α−オレフィンスルホン酸塩類（ＡＯＳ）、オレフィンスルホン酸塩類、アルケンスルホン酸塩類、アルカン−２，３−ジイルビス（硫酸塩類）、ヒドロキシアルカンスルホン酸塩類およびジスルホン酸塩類、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などのアルキル硫酸塩類（ＡＳ）、脂肪アルコール硫酸塩類（ＦＡＳ）、第一級アルコール硫酸塩類（ＰＡＳ）、アルコールエーテル硫酸塩類（ＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ、アルコールエトキシ硫酸塩類または脂肪アルコールエーテル硫酸塩類としても知られる）、第二級アルカンスルホン酸塩類（ＳＡＳ）、パラフィンスルホン酸塩類（ＰＳ）、エステルスルホン酸塩類、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル類、メチルエステルスルホン酸塩（ＭＥＳ）を含めたα−スルホ脂肪酸メチルエステル類（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキルまたはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸のジエステル類およびモノエステル類または脂肪酸塩（石鹸）、およびこれらの組み合わせが挙げられる。アニオン性界面活性剤は、好ましくは塩の形態で洗剤に加えられる。これらの塩における好適なカチオンは、ナトリウム塩、カリウム塩およびリチウム塩およびアンモニウム塩、例えば、（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム塩、ビス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム塩およびトリス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム塩などのアルカリ金属イオンである。ノニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルコールエトキシレート類（ＡＥまたはＡＥＯ）、アルコールプロポキシレート類、プロポキシ化脂肪アルコール類（ＰＦＡ）、エトキシ化および／またはプロポキシ化脂肪酸アルキルエステル類などのアルコキシ化脂肪酸アルキルエステル類、アルキルフェノールエトキシレート類（ＡＰＥ）、ノニルフェノールエトキシレート類（ＮＰＥ）、アルキルポリグリコシド類（ＡＰＧ）、アルコキシ化アミン類、脂肪酸モノエタノールアミド類（ＦＡＭ）、脂肪酸ジエタノールアミド類（ＦＡＤＡ）、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド類（ＥＦＡＭ）、プロポキシ化脂肪酸モノエタノールアミド類（ＰＦＡＭ）、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド類、またはグルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（グルカミド類、ＧＡ、または脂肪酸グルカミド類、ＦＡＧＡ）、ならびに商標名ＳＰＡＮおよびＴＷＥＥＮで入手可能な製品、およびこれらの組み合わせが挙げられる。市販のノニオン性界面活性剤としては、ＢＡＳＦのＰｌｕｒａｆａｃ（商標）、Ｌｕｔｅｎｓｏｌ（商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（商標）系列、ＣｏｇｎｉｓのＤｅｈｙｐｏｎ（商標）シリーズおよびＣｌａｒｉａｎｔのＧｅｎａｐｏｌ（商標）シリーズが挙げられる。
本発明の一部の態様において、本発明の洗剤組成物は、
ａ）少なくとも０．０１ｐｐｍの活性酵素ポリペプチドであって、酵素ポリペプチドがテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属し、かつ配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１またはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、
ｂ）約２ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の少なくとも１つの界面活性剤
を含む。
本発明の好ましい態様において、アニオン性／ノニオン性界面活性剤の比は１を上回り、すなわちアニオン性界面活性剤の含有量がノニオン性界面活性剤の量よりも多い。従って、本発明の一態様は、
ａ）少なくとも０．０１ｐｐｍの活性酵素ポリペプチドであって、酵素ポリペプチドがテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属し、かつ配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１またはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、
ｂ）約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％のアニオン性界面活性剤、および
ｃ）約１ｗｔ％〜約８ｗｔ％のノニオン性界面活性剤
を含む洗剤組成物に関する。
本発明のポリペプチドはまた、組成物中、例えば任意選択でビルダーを含む液体洗濯用組成物中、例えば、
ａ）少なくとも０．０００１ｐｐｍ、例えば０．０１ｐｐｍの活性酵素ポリペプチドであって、酵素ポリペプチドがテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属し、かつ配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１またはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、
ｂ）約２ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の少なくとも１つの界面活性剤、および任意選択で
ｃ）約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の少なくとも１つのビルダー、例えば、炭酸塩類、ゼオライト類、リン酸塩ビルダー、カルシウム封鎖ビルダーまたは錯化剤
を含む液体洗濯用組成物中に配合されてもよい。
本組成物は少なくとも１つのビルダーを含み、ここでビルダーは、約０〜約６５％ｗｔ％、約４０ｗｔ％〜約６５ｗｔ％、約２０ｗｔ％〜約６５ｗｔ％、約１０ｗｔ％〜約５０ｗｔ％または約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％重量の量で添加され、ここでビルダーは、リン酸塩類、クエン酸ナトリウムビルダー、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、ナトリウムおよびゼオライト類の中から選択される。
本発明の一態様は、
ａ）少なくとも０．０００１ｐｐｍのポリペプチドであって、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属し、一方または両方のモチーフ［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）またはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）を含む、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１およびそれと少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、およびヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、および任意選択で
ｂ）約２ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の少なくとも１つの界面活性剤、および任意選択で
ｃ）約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の少なくとも１つのビルダー、および任意選択で
ｄ）約１ｗｔ％〜約１５ｗｔ％の少なくとも１つの漂白剤成分
を含むクリーニング組成物に関する。
界面活性剤は上記に記載されるもののいずれであってもよい。
ビルダーは、好ましくは、リン酸塩類、クエン酸ナトリウムビルダー、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム（ゼオライト）の中から選択される。好適なビルダーは、アルカリ金属またはリン酸アンモニウム類、ポリリン酸塩類、ホスホン酸塩類、ポリホスホン酸塩類、炭酸塩類、重炭酸塩類、ホウ酸塩類、クエン酸塩類、およびポリカルボン酸塩類である。クエン酸塩ビルダー、例えばクエン酸およびその可溶性塩（特にナトリウム塩）はポリカルボン酸塩ビルダーである。クエン酸塩類は、ゼオライト、ＢＲＩＴＥＳＩＬタイプのようなケイ酸塩類、および／または積層ケイ酸塩ビルダーと組み合わせて使用することができる。ビルダーは、好ましくは約０〜６５重量％、例えば約５重量％〜約５０重量％の量で添加される。組成物中では、ビルダーのレベルは典型的には約４０〜６５重量％、特に約５０〜６５重量％、特に２０重量％〜５０重量％である。ビルダーおよび／またはコビルダーは、特に、ＣａおよびＭｇと水溶性錯体を形成するキレート剤であってもよい。クリーニング洗剤に用いられる当該技術分野において公知の任意のビルダーおよび／またはコビルダーを利用し得る。ビルダーの非限定的な例としては、ゼオライト類、二リン酸塩類（ピロリン酸塩類）、三リン酸ナトリウム（ＳＴＰまたはＳＴＰＰ）などの三リン酸塩類、炭酸ナトリウムなどの炭酸塩類、メタケイ酸ナトリウムなどの可溶性ケイ酸塩類、積層ケイ酸塩類（例えば、ＨｏｅｃｈｓｔのＳＫＳ−６）、および（カルボキシメチル）イヌリン（ＣＭＩ）、およびこれらの組み合わせが挙げられる。ビルダーのさらなる非限定的な例としては、クエン酸塩、キレーター、例えば、アミノカルボン酸塩類、アミノポリカルボン酸塩類およびホスホン酸塩類、およびアルキルまたはアルケニルコハク酸が挙げられる。さらなる具体的な例としては、２，２’，２”−ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、イミノジコハク酸（ＩＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸（ＥＤＤＳ）、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）、グルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（ＥＤＧ）、アスパラギン酸−Ｎ−一酢酸（ＡＳＭＡ）、アスパラギン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＳＤＡ）、アスパラギン酸−Ｎ−モノプロピオン酸（ＡＳＭＰ）、イミノジコハク酸（ＩＤＡ）、Ｎ−（スルホメチル）アスパラギン酸（ＳＭＡＳ）、Ｎ−（２−スルホエチル）−アスパラギン酸（ＳＥＡＳ）、Ｎ−（スルホメチルグルタミン酸（ＳＭＧＬ）、Ｎ−（２−スルホエチル）−グルタミン酸（ＳＥＧＬ）、Ｎ−メチルイミノ二酢酸（ＭＩＤＡ）、セリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＥＤＡ）、イソセリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＩＳＤＡ）、フェニルアラニン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＰＨＤＡ）、アントラニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＡＮＤＡ）、スルファニル酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＳＬＤＡ）、タウリン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＴＵＤＡ）およびＮ’−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’−三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエタノールグリシン（ＤＥＧ）、ならびにこれらの組み合わせおよび塩が挙げられる。
本明細書における使用に好適なホスホン酸塩類としては、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸（ＨＥＤＰ）、エチレンジアミンテトラキス（メチレンホスホン酸）（ＥＤＴＭＰＡ）、ジエチレントリアミンペンタキス（メチレンホスホン酸）（ＤＴＭＰＡまたはＤＴＰＭＰＡまたはＤＴＰＭＰ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）（ＡＴＭＰまたはＮＴＭＰ）、２−ホスホノブタン−１，２，４−トリカルボン酸（ＰＢＴＣ）、ヘキサメチレンジアミンテトラキス（メチレンホスホン酸）（ＨＤＴＭＰ）が挙げられる。
本組成物はまた、０〜５０重量％、例えば約５％〜約３０％の洗剤コビルダーも含有し得る。
本組成物はコビルダーを単独で、またはビルダー、例えばゼオライトビルダーと組み合わせて含み得る。コビルダーの非限定的な例としては、ポリアクリレート類のホモポリマーまたはそのコポリマー、例えばポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）またはコポリ（アクリル酸／マレイン酸）（ＰＡＡ／ＰＭＡ）またはポリアスパラギン酸が挙げられる。
さらなる例示的ビルダーおよび／またはコビルダーが、例えば、国際公開第０９／１０２８５４号パンフレット、米国特許第５９７７０５３号明細書に記載されている。
好ましい一実施形態において、ビルダーは、クエン酸および／またはメチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）および／またはその塩などの非リン系ビルダーである。
本発明の一部の態様は、少なくとも１つの酵素ポリペプチドであって、酵素が、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１を有するポリペプチドまたはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドと、クエン酸、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）およびこれらの混合物から選択される非リン酸塩ビルダーとを含む組成物に関する。
一態様において、本組成物は、
ａ）少なくとも０．０００１ｐｐｍ、例えば０．０１ｐｐｍの活性酵素ポリペプチドであって、酵素ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１またはそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、および
ｂ）クエン酸、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）およびこれらの混合物から選択される１０〜５０ｗｔ％のビルダー、および任意選択で
ｃ）少なくとも１つの漂白剤成分
を含む、洗濯用組成物、自動食器洗浄用組成物（ＡＤＷ）などの洗剤組成物である。
組成物は、重量基準で０〜３０％、例えば重量基準（ｗｔ％）で約１％〜約２０％、例えば約１％〜約１０％、例えば約１％〜約５％、例えば約１０％〜約３０％、例えば約５％〜約１０％または例えば約１０％〜約２０％の漂白系を含有し得る。クリーニング洗剤での使用が当該技術分野において公知の成分を含む任意の漂白系を利用し得る。好適な漂白系成分としては、過酸化水素供給源；過酸類供給源；および漂白触媒または増進剤が挙げられる。
過酸化水素供給源
好適な過酸化水素供給源は、過炭酸ナトリウム類および過ホウ酸ナトリウム類などのアルカリ金属塩類（通常は一水和物または四水和物）、および過酸化水素−尿素（１／１）を含め、無機過酸基塩類である。
過酸類供給源
過酸類は、（ａ）予め形成された過酸類として直接添合されてもよく、または（ｂ）過酸化水素および漂白活性化剤から洗浄液中においてインサイチューで形成されてもよく（過加水分解）、または（ｃ）過酸化水素ならびにペルヒドロラーゼおよび後者に好適な基質、例えばエステルから洗浄液中においてインサイチューで形成されてもよい。
ａ）好適な予め形成された過酸類としては、限定はされないが、ペルオキシカルボン酸、例えばペルオキシ安息香酸およびその環置換誘導体、ペルオキシ−α−ナフトエ酸、ペルオキシフタル酸、ペルオキシラウリン酸、ペルオキシステアリン酸、ε−フタルイミドペルオキシカプロン酸［フタルイミドペルオキシヘキサン酸（ＰＡＰ）］、およびｏ−カルボキシベンズアミドペルオキシカプロン酸；脂肪族および芳香族ジペルオキシジカルボン酸、例えば、ジペルオキシドデカン二酸、ジペルオキシアゼライン酸、ジペルオキシセバシン酸、ジペルオキシブラシル酸、２−デシルジペルオキシブタン二酸、およびジペルオキシフタル酸、ジペルオキシイソフタル酸およびジペルオキシテレフタル酸；ペルイミド酸；ペルオキシ一硫酸；ペルオキシ二硫酸；ペルオキシリン酸；ペルオキシケイ酸；および前記化合物の混合物が挙げられる。挙げられる過酸類は、場合によっては、アルカリ金属塩（例えばＯｘｏｎｅ（登録商標））またはアルカリ土類金属塩など、好適な塩として添加するのが最良であり得ることが理解される。
ｂ）好適な漂白活性化剤としては、エステル類、アミド類、イミド類、ニトリル類または無水物類のクラスに属するもの、および適切な場合にはその塩が挙げられる。好適な例は、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）、４−［（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）オキシ］ベンゼン−１−スルホン酸ナトリウム（ＩＳＯＮＯＢＳ）、４−（ドデカノイルオキシ）ベンゼン−１−スルホン酸ナトリウム（ＬＯＢＳ）、４−（デカノイルオキシ）ベンゼン−１−スルホン酸ナトリウム、４−（デカノイルオキシ）安息香酸（ＤＯＢＡ）、４−（ノナノイルオキシ）ベンゼン−１−スルホン酸ナトリウム（ＮＯＢＳ）、および／または国際公開第９８／１７７６７号パンフレットに開示されるものである。目的の漂白活性化剤のファミリーが欧州特許第６２４１５４号明細書に開示されており、当該のファミリーの中では特に、アセチルクエン酸トリエチル（ＡＴＣ）が好ましい。ＡＴＣまたはトリアセチンなどの短鎖トリグリセリドは、環境に優しいという利点がある。さらには、アセチルクエン酸トリエチルおよびトリアセチンは、保管時に製品中で良好な加水分解安定性を有し、効率的な漂白活性化剤である。最後に、ＡＴＣは過加水分解反応で放出されるクエン酸塩がビルダーとして機能し得るため、多機能性である。
漂白触媒および増進剤
漂白系はまた、漂白触媒または増進剤も含み得る。
本発明の組成物に使用し得る漂白触媒の一部の非限定的な例としては、シュウ酸マンガン、酢酸マンガン、マンガン−コラーゲン、コバルト−アミン触媒およびマンガントリアザシクロノナン（ＭｎＴＡＣＮ）触媒が挙げられ；特に、１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン（Ｍｅ３−ＴＡＣＮ）または１，２，４，７−テトラメチル−１，４，７−トリアザシクロノナン（Ｍｅ４−ＴＡＣＮ）、特にＭｅ３−ＴＡＣＮとのマンガン錯体、例えば複核マンガン錯体［（Ｍｅ３−ＴＡＣＮ）Ｍｎ（Ｏ）３Ｍｎ（Ｍｅ３−ＴＡＣＮ）］（ＰＦ６）２、および［２，２’，２”−ニトリロトリス（エタン−１，２−ジイルアザニリリデン−κＮ−メタニリリデン）トリフェノラト−κ３Ｏ］マンガン（ＩＩＩ）が好ましい。漂白触媒はまた、鉄またはコバルト錯体など、他の金属化合物であってもよい。
一部の実施形態において、過酸供給源が含まれる場合、以下の式のうちの１つを有する有機漂白触媒または漂白増進剤が使用されてもよい：
Figure 0006959259
 （ｉｉｉ）およびこれらの混合物；式中、各Ｒ１は、独立に、９〜２４個の炭素を含む分枝状アルキル基または１１〜２４個の炭素を含む直鎖状アルキル基であり、好ましくは各Ｒ１は、独立に、９〜１８個の炭素を含む分枝状アルキル基または１１〜１８個の炭素を含む直鎖状アルキル基であり、より好ましくは各Ｒ１は、独立に、２−プロピルヘプチル、２−ブチルオクチル、２−ペンチルノニル、２−ヘキシルデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、イソノニル、イソデシル、イソトリデシルおよびイソペンタデシルからなる群から選択される。他の例示的漂白系が、例えば国際公開第２００７／０８７２５８号パンフレット、国際公開第２００７／０８７２４４号パンフレット、国際公開第２００７／０８７２５９号パンフレット、欧州特許第１８６７７０８号明細書（ビタミンＫ）および国際公開第２００７／０８７２４２号パンフレットに記載されている。好適な光漂白剤は、例えばスルホン化亜鉛またはアルミニウムフタロシアニンであり得る。
本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチド、そのポリペプチドを含む組成物、例えば洗剤組成物、および生地などの物品のディープクリーニングへの本発明のポリペプチドを含む洗剤組成物の使用に関する。
従って、本発明の一部の態様は、
ａ）ＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）からなる群から選択される１つ以上のモチーフを任意選択で含む、少なくとも０．０００１ｐｐｍ、例えば０．００１ｐｐｍのテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドであって、酵素ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１およびそれと少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％または例えば少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、および任意選択で
ｂ）クエン酸、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）およびこれらの混合物から好ましくは選択される約１０ｗｔ％〜約５０ｗｔ％のビルダー、および任意選択で
ｃ）ＬＡＳ、ＡＯＳ、ＡＥＯＳなどのアニオン性界面活性剤および／またはＡＥまたはＡＥＯなどのノニオン性界面活性剤から好ましくは選択される、約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の界面活性剤、および任意選択で
ｄ）過炭酸塩類、過硫酸塩類および過酸類から好ましくは選択される、少なくとも１つの漂白剤成分
を含むクリーニング組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｏｎ）、例えば洗剤組成物に関する。
従って、本発明の一部の態様は、
ａ）ＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）からなる群から選択される１つ以上のモチーフを任意選択で含む、少なくとも０．０００１ｐｐｍ、例えば０．００１ｐｐｍのテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドであって、酵素ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１およびそれと少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％または例えば少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、および任意選択で
ｂ）クエン酸、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）およびこれらの混合物から好ましくは選択される約１０ｗｔ％〜約５０ｗｔ％のビルダー、および任意選択で
ｃ）ＬＡＳ、ＡＯＳ、ＡＥＯＳなどのアニオン性界面活性剤および／またはＡＥまたはＡＥＯなどのノニオン性界面活性剤から好ましくは選択される、約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の界面活性剤、および任意選択で
ｄ）過炭酸塩類、過硫酸塩類および過酸類から好ましくは選択される、少なくとも１つの漂白剤成分
を含む洗剤組成物に関する。
従って、本発明の一部の態様は、
ａ）ＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）からなる群から選択される１つ以上のモチーフを任意選択で含む、少なくとも０．０００１ｐｐｍ、例えば０．００１ｐｐｍのテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドであって、酵素ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１およびそれと少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％または例えば少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、および任意選択で
ｂ）クエン酸、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）およびこれらの混合物から好ましくは選択される約１０ｗｔ％〜約５０ｗｔ％のビルダー、および任意選択で
ｃ）ＬＡＳ、ＡＯＳ、ＡＥＯＳなどのアニオン性界面活性剤および／またはＡＥまたはＡＥＯなどのノニオン性界面活性剤から好ましくは選択される、約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の界面活性剤、および任意選択で
ｄ）少なくとも１つの漂白剤成分であって、漂白剤が過酸化物であり、および漂白触媒がマンガン化合物であり、ここで酸素漂白剤が好ましくは過炭酸塩であり、およびマンガン触媒が好ましくは１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンまたは酢酸マンガン（ＩＩＩ）四水和物（ＭｎＴＡＣＮ）である、漂白剤成分
を含む洗剤組成物に関する。
一態様は、上記に記載したとおりの組成物の、生地などの物品のディープクリーニングへの使用に関する。
ヘキソサミニダーゼ活性を有する本発明のポリペプチドは、硬質表面、生地および／または布地などの物品のディープクリーニングに用いられ得る。本発明の一部の態様において、本発明のポリペプチド、例えば、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号１３および配列番号１５の成熟型ポリペプチドまたは配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１を有する成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％または例えば少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性を有し、一部の態様においてヘキソサミニダーゼ活性はβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性であり、および本発明のポリペプチドはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）である。
本発明の一態様は、ヘキソサミニダーゼ活性、好ましくはＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性および／またはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性を有する、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの、洗濯および／または食器洗浄などのクリーニング作業における使用に関する。
本発明の一態様は、モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチドの使用に関する。
本発明の一態様は、ヘキソサミニダーゼ活性、好ましくはＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性および／またはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性を有する、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの、洗濯および／または食器洗浄などのクリーニング作業における使用に関し、ここでポリペプチドは、モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含む。
本発明の一態様は、モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）の一方または両方を例えば含む、ヘキソサミニダーゼ活性を有する、および配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％または９５％の配列同一性を有するポリペプチドである、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの、物品のディープクリーニングへの使用に関し、ここで物品は生地である。本発明の一態様において、ヘキソサミニダーゼ活性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドは、物品の粘着性を防止、低減または除去するために使用される。本発明の一態様において、ヘキソサミニダーゼ活性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドはさらに、生地などの生地の染みの前処理に使用することができる。
本発明の一態様は、洗浄サイクルの間の汚れの再沈着を防止、低減または除去するための、ヘキソサミニダーゼ活性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの使用に関する。
さらに、本発明の一態様は、物品への汚れの付着を防止、低減または除去するための、ヘキソサミニダーゼ活性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの使用に関する。一実施形態において、物品は生地である。物品に汚れが付着しないとき、物品はより清潔に見える。従って、本発明はさらに、物品の白色度を維持または改善するための、ヘキソサミニダーゼ活性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの使用に関する。
Ｔシャツまたはスポーツウエアなどの品目を使用する場合、これらの品目は、使用者の身体や、それらが用いられるその他の環境からの細菌に曝露される。これによって、品目を洗浄した後も、その品目の悪臭が生じ得る。従って、本発明は、生地に付いた悪臭の除去または低減にも関する。この悪臭は、不快な臭いを有する化合物を生成する細菌に起因し得る。こうした不快な臭いがする化合物の一例は、Ｅ−２−ノネナールである。悪臭は、まだ濡れている新しく洗浄した生地に存在し得る。あるいは、悪臭は、新しく洗浄し、後に乾燥させた生地にも存在し得る。また、悪臭は、洗浄後しばらく溜めておいた生地にも存在し得る。本発明は、濡れた、または乾いた生地からのＥ−２−ノネナールなどの悪臭の低減または除去にも関する。
本発明の一態様は、１つ以上のモチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）を例えば含む、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドであって、ヘキソサミニダーゼ活性、好ましくはＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性および／またはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性を有する、および配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１に示される成熟型ポリペプチドと６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドである、ポリペプチドの、
（ｉ）物品の粘着性を防止、低減または除去するため；
（ｉｉ）物品の染みを前処理するため；
（ｉｉｉ）洗浄サイクル中の汚れの再沈着を防止、低減または除去するため；
（ｉｖ）物品への汚れの付着を防止、低減または除去するため；
（ｖ）物品の白色度を維持または改善するため；
（ｖｉ）物品の悪臭を防止、低減または除去するため
の使用に関し、ここで物品は生地である。
本発明に記載のクリーニング組成物、例えば洗剤組成物は、少なくとも１つの補助成分、例えば洗剤補助剤を含んでもよく、洗剤補助成分は、上記に記載したような界面活性剤およびビルダーおよび／またはキレーターであってもよい。補助成分はまた、以下の凝集助剤、移染防止剤、酵素、酵素安定剤、酵素阻害剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素供給源、予め形成された過酸類、ポリマー分散剤、泥汚れ除去／再沈着防止剤、増白剤、制泡剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、キャリア、ヒドロトロープ、ビルダーおよびコビルダー、布地色相調整剤、消泡剤、分散剤、加工助剤、および／または顔料のうちのいずれかであってもよい。
一実施形態において、洗剤補助成分はビルダーまたは泥汚れ除去／再沈着防止剤である。
一実施形態において、洗剤補助成分は酵素である。１つ以上の酵素は、プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼおよびオキシダーゼからなる群から選択されてもよい。
配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１のポリペプチドを含むヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドまたはヘキソサミニダーゼ活性を有する、かつそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドに加えて、本発明のクリーニング組成物はセルラーゼをさらに含み得る。好適なセルラーゼとしては、細菌または真菌由来のものが挙げられる。化学的に修飾された、またはプロテインエンジニアリングを受けた突然変異体が含まれる。好適なセルラーゼとしては、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）のセルラーゼ、例えば、米国特許第４，４３５，３０７号明細書、米国特許第５，６４８，２６３号明細書、米国特許第５，６９１，１７８号明細書、米国特許第５，７７６，７５７号明細書および国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されるフミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、ミセリオフトラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）およびフザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）から産生される真菌セルラーゼが挙げられる。特に好適なセルラーゼは、色のケア上の利益があるアルカリ性または中性セルラーゼである。かかるセルラーゼの例は、欧州特許第０ ４９５ ２５７号明細書、欧州特許第０ ５３１ ３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載されるセルラーゼである。他の例は、国際公開第９４／０７９９８号パンフレット、欧州特許第０ ５３１ ３１５号明細書、米国特許第５，４５７，０４６号明細書、米国特許第５，６８６，５９３号明細書、米国特許第５，７６３，２５４号明細書、国際公開第９５／２４４７１号パンフレット、国際公開第９８／１２３０７号パンフレットおよびＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号明細書に記載されるものなどのセルラーゼポリペプチドである。エンド−β−１，４−グルカナーゼ活性（ＥＣ３．２．１．４）を呈するセルラーゼの例は、国際公開第０２／０９９０９１号パンフレットに記載されたものである。セルラーゼの他の例としては、国際公開第９６／２９３９７号パンフレットに記載されるファミリー４５セルラーゼ、および特に、国際公開第０２／０９９０９１号パンフレットの配列番号８において以下の位置：２、４、７、８、１０、１３、１５、１９、２０、２１、２５、２６、２９、３２、３３、３４、３５、３７、４０、４２、４２ａ、４３、４４、４８、５３、５４、５５、５８、５９、６３、６４、６５、６６、６７、７０、７２、７６、７９、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９１、９３、９５、９５ｄ、９５ｈ、９５ｊ、９７、１００、１０１、１０２、１０３、１１３、１１４、１１７、１１９、１２１、１３３、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０ａ、１４１、１４３ａ、１４５、１４６、１４７、１５０ｅ、１５０ｊ、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０ｃ、１６０ｅ、１６０ｋ、１６１、１６２、１６４、１６５、１６８、１７０、１７１、１７２、１７３、１７５、１７６、１７８、１８１、１８３、１８４、１８５、１８６、１８８、１９１、１９２、１９５、１９６、２００、および／または２０に対応する位置のうちの１つ以上に、好ましくはＰ１９Ａ、Ｇ２０Ｋ、Ｑ４４Ｋ、Ｎ４８Ｅ、Ｑ１１９ＨまたはＱ１４６Ｒの中から選択される置換、挿入および／または欠失を有するそのポリペプチドが挙げられる。市販のセルラーゼとしては、Ｃｅｌｌｕｚｙｍｅ（商標）、ＣｅｌｌｕｃｌｅａｎおよびＣａｒｅｚｙｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、Ｃｌａｚｉｎａｓｅ（商標）、およびＰｕｒａｄａｘ ＨＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）、およびＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（Ｋａｏ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が挙げられる。
配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１を含むヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドまたはヘキソサミニダーゼ活性を有する、かつそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドに加えて、本発明のクリーニング組成物はプロテアーゼをさらに含み得る。好適なプロテアーゼとしては、細菌、真菌、植物、ウイルスまたは動物由来、例えば野菜または微生物由来のものが挙げられる。微生物由来が好ましい。化学的に修飾された、またはプロテインエンジニアリングを受けた突然変異体が含まれる。それは、セリンプロテアーゼなどのアルカリプロテアーゼまたはメタロプロテアーゼであってもよい。セリンプロテアーゼは、例えばトリプシンなど、Ｓ１ファミリーのもの、またはスブチリシンなど、Ｓ８ファミリーのものであってもよい。メタロプロテアーゼ類のプロテアーゼは例えば、例えばファミリーＭ４のサーモリシンまたはＭ５、Ｍ７またはＭ８ファミリーのものなど、他のメタロプロテアーゼであってもよい。用語「スブチラーゼ」は、Ｓｉｅｚｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｎｇ．４（１９９１）７１９−７３７およびＳｉｅｚｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６（１９９７）５０１−５２３に記載のセリンプロテアーゼのサブグループを指す。セリンプロテアーゼは、活性部位にセリンを有することによって特徴付けられるプロテアーゼのサブグループであり、これは基質と共有結合性付加物を形成する。スブチラーゼは６つの細区分、すなわち、スブチリシンファミリー、テルミターゼファミリー、プロテイナーゼＫファミリー、ランチビオティックペプチダーゼファミリー、ケキシンファミリーおよびピロリシン（Ｐｙｒｏｌｙｓｉｎ）ファミリーに分けることができる。スブチラーゼの例は、米国特許第７２６２０４２号明細書および国際公開第０９／０２１８６７号パンフレットに記載される、バチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）、Ｂ．アルカロフィルス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）およびバチルス・ギブソニイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）などのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に由来するもの、ならびに国際公開第８９／０６２７９号パンフレットに記載されるスブチリシンレンタス、スブチリシンＮｏｖｏ、スブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、スブチリシンＢＰＮ’、スブチリシン３０９、スブチリシン１４７およびスブチリシン１６８および（国際公開第９３／１８１４０号パンフレット）に記載されるプロテアーゼＰＤ１３８である。他の有用なプロテアーゼは、国際公開第９２／１７５１７７号パンフレット、国際公開第０１／０１６２８５号パンフレット、国際公開第０２／０２６０２４号パンフレットおよび国際公開第０２／０１６５４７号パンフレットに記載されるものであり得る。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン（例えばブタまたはウシ由来）ならびに国際公開第８９／０６２７０号パンフレット、国際公開第９４／２５５８３号パンフレットおよび国際公開第０５／０４０３７２号パンフレットに記載されるフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）プロテアーゼ、ならびに国際公開第０５／０５２１６１号パンフレットおよび国際公開第０５／０５２１４６号パンフレットに記載されるセルロモナス属（Ｃｅｌｌｕｍｏｎａｓ）に由来するキモトリプシンプロテアーゼである。さらなる好ましいプロテアーゼは、例えば国際公開第９５／２３２２１号パンフレットに記載されるとおりのバチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）ＤＳＭ ５４８３のアルカリプロテアーゼ、ならびに国際公開第９２／２１７６０号パンフレット、国際公開第９５／２３２２１号パンフレット、欧州特許第１９２１１４７号明細書および欧州特許第１９２１１４８号明細書に記載されるその変異体である。メタロプロテアーゼの例は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）に由来するものなど、国際公開第０７／０４４９９３号パンフレット（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔ．）に記載されるとおりの中性メタロプロテアーゼである。
有用なプロテアーゼの例は、国際公開第９２／１９７２９号パンフレット、国際公開第９６／０３４９４６号パンフレット、国際公開第９８／２０１１５号パンフレット、国際公開第９８／２０１１６号パンフレット、国際公開第９９／０１１７６８号パンフレット、国際公開第０１／４４４５２号パンフレット、国際公開第０３／００６６０２号パンフレット、国際公開第０４／０３１８６号パンフレット、国際公開第０４／０４１９７９号パンフレット、国際公開第０７／００６３０５号パンフレット、国際公開第１１／０３６２６３号パンフレット、国際公開第１１／０３６２６４号パンフレットに記載される変異体、特に、国際公開第２０１６／００１４４９号パンフレットの配列番号１と比較して以下の位置：３、４、９、１５、２４、２７、４２、５５、５９、６０、６６、７４、８５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０４、１１６、１１８、１２１、１２６、１２７、１２８、１５４、１５６、１５７、１５８、１６１、１６４、１７６、１７９、１８２、１８５、１８８、１８９、１９３、１９８、１９９、２００、２０３、２０６、２１１、２１２、２１６、２１８、２２６、２２９、２３０、２３９、２４６、２５５、２５６、２６８および２６９のうちの１つ以上に置換を有する変異体（これらの位置は国際公開第２０１６／００１４４９号パンフレットの配列番号１に示されるバチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）プロテアーゼの位置に対応する）である。より好ましいスブチラーゼ変異体は、突然変異：Ｓ３Ｔ、Ｖ４Ｉ、Ｓ９Ｒ、Ｓ９Ｅ、Ａ１５Ｔ、Ｓ２４Ｇ、Ｓ２４Ｒ、Ｋ２７Ｒ、Ｎ４２Ｒ、Ｓ５５Ｐ、Ｇ５９Ｅ、Ｇ５９Ｄ、Ｎ６０Ｄ、Ｎ６０Ｅ、Ｖ６６Ａ、Ｎ７４Ｄ、Ｎ８５Ｓ、Ｎ８５Ｒ，Ｇ９６Ｓ、Ｇ９６Ａ、Ｓ９７Ｇ、Ｓ９７Ｄ、Ｓ９７Ａ、Ｓ９７ＳＤ、Ｓ９９Ｅ、Ｓ９９Ｄ、Ｓ９９Ｇ、Ｓ９９Ｍ、Ｓ９９Ｎ、Ｓ９９Ｒ、Ｓ９９Ｈ、Ｓ１０１Ａ、Ｖ１０２Ｉ、Ｖ１０２Ｙ、Ｖ１０２Ｎ、Ｓ１０４Ａ、Ｇ１１６Ｖ、Ｇ１１６Ｒ、Ｈ１１８Ｄ、Ｈ１１８Ｎ、Ｎ１２０Ｓ、Ｓ１２６Ｌ、Ｐ１２７Ｑ、Ｓ１２８Ａ、Ｓ１５４Ｄ、Ａ１５６Ｅ、Ｇ１５７Ｄ、Ｇ１５７Ｐ、Ｓ１５８Ｅ、Ｙ１６１Ａ、Ｒ１６４Ｓ、Ｑ１７６Ｅ、Ｎ１７９Ｅ、Ｓ１８２Ｅ、Ｑ１８５Ｎ、Ａ１８８Ｐ、Ｇ１８９Ｅ、Ｖ１９３Ｍ、Ｎ１９８Ｄ、Ｖ１９９Ｉ、Ｙ２０３Ｗ、Ｓ２０６Ｇ、Ｌ２１１Ｑ、Ｌ２１１Ｄ、Ｎ２１２Ｄ、Ｎ２１２Ｓ、Ｍ２１６Ｓ、Ａ２２６Ｖ、Ｋ２２９Ｌ、Ｑ２３０Ｈ、Ｑ２３９Ｒ、Ｎ２４６Ｋ、Ｎ２５５Ｗ、Ｎ２５５Ｄ、Ｎ２５５Ｅ、Ｌ２５６Ｅ、Ｌ２５６Ｄ Ｔ２６８ＡまたはＲ２６９Ｈのいずれかを含み得る。プロテアーゼ変異体は、好ましくは、国際公開第２０１６／００１４４９号パンフレットの配列番号１に示されるバチルス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）プロテアーゼの変異体（Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標））または国際公開第２０１６／００１４４９号パンフレットの配列番号２に示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｃｈｅｎｉｆａｃｉｅｎｓ）プロテアーゼ（ＢＰＮ’）である。プロテアーゼ変異体は、好ましくは、国際公開第２０１６／００１４４９号パンフレットの配列番号１または配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する。
国際公開第２００４／０６７７３７号パンフレットの配列番号１の１７１、１７３、１７５、１７９、または１８０位に対応する１つ以上の位置に置換を含むプロテアーゼ変異体、ここで前記プロテアーゼ変異体は、国際公開第２００４／０６７７３７号パンフレットの配列番号１と７５％以上１００％未満の配列同一性を有する。
好適な市販のプロテアーゼ酵素としては、商標名Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（商標）、Ｒｅｌａｓｅ（登録商標）、Ｒｅｌａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｐｒｉｍａｓｅ（登録商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｏｖｏｚｙｍｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ、Ｂｌａｚｅ（登録商標）、Ｂｌａｚｅ Ｅｖｉｔｙ（登録商標）１００Ｔ、Ｂｌａｚｅ Ｅｖｉｔｙ（登録商標）１２５Ｔ、Ｂｌａｚｅ Ｅｖｉｔｙ（登録商標）１５０Ｔ、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）およびＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）で販売されているもの、商標名Ｍａｘａｔａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｃａｌ（登録商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ Ｏｘ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ ＯｘＰ（登録商標）、Ｐｕｒａｍａｘ（登録商標）、ＦＮ２（登録商標）、ＦＮ３（登録商標）、ＦＮ４（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（登録商標）、Ｅｘｃｅｌｌｅｎｚ Ｐ１０００（商標）、Ｅｘｃｅｌｌｅｎｚ Ｐ１２５０（商標）、Ｅｒａｓｅｒ（登録商標）、Ｐｒｅｆｅｒｅｎｚ Ｐ１００（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ Ｐｒｉｍｅ（登録商標）、Ｐｒｅｆｅｒｅｎｚ Ｐ１１０（商標）、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｚ Ｐ１０００（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）（商標）、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｚ Ｐ１０５０（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ Ｏｘ（登録商標）（商標）、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｚ Ｐ２０００（商標）、Ｐｕｒａｆａｓｔ（登録商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（登録商標）およびＯｐｔｉｍａｓｅ（登録商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ／ＤｕＰｏｎｔ）、Ａｘａｐｅｍ（商標）（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｓｅｓ Ｎ．Ｖ．）で販売されているもの、ＢＬＡＰ（米国特許第５３５２６０４号明細書の図２９に示される配列）およびその変異体（Ｈｅｎｋｅｌ ＡＧ）およびＫａｏのＫＡＰ（バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）スブチリシン）が挙げられる。
配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１のポリペプチドを含むヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドまたはヘキソサミニダーゼ活性を有する、かつそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドに加えて、本発明のクリーニング組成物は、細菌または真菌由来のものを含めたリパーゼおよびクチナーゼをさらに含み得る。化学的に修飾された、またはプロテインエンジニアリングを受けた突然変異酵素が含まれる。例としては、欧州特許第２５８０６８号明細書および欧州特許第３０５２１６号明細書に記載されるとおりのサーモミセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）、例えばＴ．ラヌギノスス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）（旧称フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ））のリパーゼ、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、例えばＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）のクチナーゼ（国際公開第９６／１３５８０号パンフレット）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（その一部は現在バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）に改名されている）、例えばＰ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）またはＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）（欧州特許第２１８２７２号明細書）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（欧州特許第３３１３７６号明細書）、Ｐ．ｓｐ．株ＳＤ７０５（国際公開第９５／０６７２０号パンフレットおよび国際公開第９６／２７００２号パンフレット）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（国際公開第９６／１２０１２号パンフレット）の株のリパーゼ、ＧＤＳＬ型ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）リパーゼ（国際公開第１０／０６５４５５号パンフレット）、マグナポルテ・グリセア（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ）のクチナーゼ（国際公開第１０／１０７５６０号パンフレット）、シュードモナス・メンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）のクチナーゼ（米国特許第５，３８９，５３６号明細書）、サーモビフィダ・フスカ（Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉｄａ ｆｕｓｃａ）のリパーゼ（国際公開第１１／０８４４１２号パンフレット）、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）リパーゼ（国際公開第１１／０８４４１７号パンフレット）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のリパーゼ（国際公開第１１／０８４５９９号パンフレット）、およびストレプトミセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）（国際公開第１１／１５０１５７号パンフレット）およびＳ．プリスチネスピラリス（Ｓ．ｐｒｉｓｔｉｎａｅｓｐｉｒａｌｉｓ）（国際公開第１２／１３７１４７号パンフレット）のリパーゼが挙げられる。他の例は、欧州特許第４０７２２５号明細書、国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、国際公開第９４／０１５４１号パンフレット、国際公開第９４／２５５７８号パンフレット、国際公開第９５／１４７８３号パンフレット、国際公開第９５／３０７４４号パンフレット、国際公開第９５／３５３８１号パンフレット、国際公開第９５／２２６１５号パンフレット、国際公開第９６／００２９２号パンフレット、国際公開第９７／０４０７９号パンフレット、国際公開第９７／０７２０２号パンフレット、国際公開第００／３４４５０号パンフレット、国際公開第００／６００６３号パンフレット、国際公開第０１／９２５０２号パンフレット、国際公開第０７／８７５０８号パンフレットおよび国際公開第０９／１０９５００号パンフレットに記載されるものなどのリパーゼポリペプチドである。好ましい市販のリパーゼ製品としては、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｅｘ（商標）；Ｌｉｐｏｌｅｘ（商標）およびＬｉｐｏｃｌｅａｎ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、Ｌｕｍａｆａｓｔ（当初はＧｅｎｅｎｃｏｒから）およびＬｉｐｏｍａｘ（当初はＧｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓから）が挙げられる。さらに他の例は、アシルトランスフェラーゼまたはペルヒドロラーゼと称されることもあるリパーゼ、例えばカンジダ・アンタルクティカ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）リパーゼＡと相同性を有するアシルトランスフェラーゼ（国際公開第１０／１１１１４３号パンフレット）、マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）のアシルトランスフェラーゼ（国際公開第０５／５６７８２号パンフレット）、ＣＥ ７ファミリーのペルヒドロラーゼ（国際公開第０９／６７２７９号パンフレット）、およびＭ．スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）ペルヒドロラーゼのポリペプチド、詳細にはＨｕｎｔｓｍａｎ Ｔｅｘｔｉｌｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ Ｐｔｅ Ｌｔｄからの市販品Ｇｅｎｔｌｅ Ｐｏｗｅｒ Ｂｌｅａｃｈに使用されているＳ５４Ｖ変異体（国際公開第１０／１０００２８号パンフレット）である。
配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１を含むヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドまたはヘキソサミニダーゼ活性を有する、かつそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドに加えて、本発明のクリーニング組成物は、本発明のポリペプチドと共に使用し得るアミラーゼをさらに含み得る。アミラーゼはα−アミラーゼまたはグルコアミラーゼであってもよく、細菌または真菌由来であってもよい。化学的に修飾された、またはプロテインエンジニアリングを受けた突然変異体が含まれる。アミラーゼとしては、例えば、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、例えば、英国特許第１，２９６，８３９号明細書にさらに詳細に記載されるバチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の特殊な株から得られるα−アミラーゼが挙げられる。好適なアミラーゼとしては、国際公開第９５／１０６０３号パンフレットの配列番号３を有するアミラーゼまたはその配列番号３と９０％の配列同一性を有するポリペプチドが挙げられる。好ましいポリペプチドは、国際公開第９４／０２５９７号パンフレット、国際公開第９４／１８３１４号パンフレット、国際公開第９７／４３４２４号パンフレットおよび国際公開第９９／０１９４６７号パンフレットの配列番号４（例えば、以下の位置：１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１７８、１７９、１８１、１８８、１９０、１９７、２０１、２０２、２０７、２０８、２０９、２１１、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８、および４４４のうちの１つ以上に置換を有するポリペプチド）に記載される。別の好適なアミラーゼとしては、国際公開第０２／０１０３５５号パンフレットの配列番号６を有するアミラーゼまたは配列番号６と９０％の配列同一性を有するそのポリペプチドが挙げられる。配列番号６の好ましいポリペプチドは、１８１および１８２位に欠失を有し、かつ１９３位に置換を有するものである。好適な他のアミラーゼは、国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットの配列番号６に示されるＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）に由来するα−アミラーゼの残基１〜３３と、国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットの配列番号４に示されるＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼの残基３６〜４８３とを含むハイブリッドα−アミラーゼ、またはその９０％の配列同一性を有するポリペプチドである。このハイブリッドα−アミラーゼの好ましいポリペプチドは、以下の位置：Ｇ４８、Ｔ４９、Ｇ１０７、Ｈ１５６、Ａ１８１、Ｎ１９０、Ｍ１９７、Ｉ２０１、Ａ２０９およびＱ２６４のうちの１つ以上に置換、欠失または挿入を有するものである。国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットの配列番号６に示されるＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）に由来するα−アミラーゼの残基１〜３３と、配列番号４の残基３６〜４８３とを含むハイブリッドα−アミラーゼの最も好ましいポリペプチドは、置換：
Ｍ１９７Ｔ；
Ｈ１５６Ｙ＋Ａ１８１Ｔ＋Ｎ１９０Ｆ＋Ａ２０９Ｖ＋Ｑ２６４Ｓ；または
Ｇ４８Ａ＋Ｔ４９Ｉ＋Ｇ１０７Ａ＋Ｈ１５６Ｙ＋Ａ１８１Ｔ＋Ｎ１９０Ｆ＋Ｉ２０１Ｆ＋Ａ２０９Ｖ＋Ｑ２６４Ｓ
を有するものである。
好適なさらなるアミラーゼは、国際公開第９９／０１９４６７号パンフレットの配列番号６を有するアミラーゼまたは配列番号６と９０％の配列同一性を有するそのポリペプチドである。配列番号６の好ましいポリペプチドは、以下の位置：Ｒ１８１、Ｇ１８２、Ｈ１８３、Ｇ１８４、Ｎ１９５、Ｉ２０６、Ｅ２１２、Ｅ２１６およびＫ２６９のうちの１つ以上に置換、欠失または挿入を有するものである。特に好ましいアミラーゼは、位置Ｒ１８１およびＧ１８２、または位置Ｈ１８３およびＧ１８４に欠失を有するものである。使用し得るさらなるアミラーゼは、国際公開第９６／０２３８７３号パンフレットの配列番号１、配列番号３、配列番号２または配列番号７を有するもの、または配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号７と９０％の配列同一性を有するそのポリペプチドである。配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号７の好ましいポリペプチドは、以下の位置：１４０、１８１、１８２、１８３、１８４、１９５、２０６、２１２、２４３、２６０、２６９、３０４および４７６のうちの１つ以上に置換、欠失または挿入を有するものである。より好ましいポリペプチドは、位置１８１および１８２または位置１８３および１８４に欠失を有するものである。配列番号１、配列番号２または配列番号７の最も好ましいアミラーゼポリペプチドは、位置１８３および１８４に欠失を有し、かつ位置１４０、１９５、２０６、２４３、２６０、３０４および４７６のうちの１つ以上に置換を有するものである。使用し得る他のアミラーゼは、国際公開第０８／１５３８１５号パンフレットの配列番号２、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１０を有するアミラーゼ、または国際公開第０８／１５３８１５号パンフレットの配列番号２と９０％の配列同一性または国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１０と９０％の配列同一性を有するそのポリペプチドである。国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１０の好ましいポリペプチドは、以下の位置：１７６、１７７、１７８、１７９、１９０、２０１、２０７、２１１および２６４のうちの１つ以上に置換、欠失または挿入を有するものである。
さらなる好適なアミラーゼは、国際公開第０９／０６１３８０号パンフレットの配列番号２を有するアミラーゼまたはその配列番号２と９０％の配列同一性を有するポリペプチドである。配列番号２の好ましいポリペプチドは、Ｃ末端のトランケーションおよび／または以下の位置：Ｑ８７、Ｑ９８、Ｓ１２５、Ｎ１２８、Ｔ１３１、Ｔ１６５、Ｋ１７８、Ｒ１８０、Ｓ１８１、Ｔ１８２、Ｇ１８３、Ｍ２０１、Ｆ２０２、Ｎ２２５、Ｓ２４３、Ｎ２７２、Ｎ２８２、Ｙ３０５、Ｒ３０９、Ｄ３１９、Ｑ３２０、Ｑ３５９、Ｋ４４４およびＧ４７５のうちの１つ以上に置換、欠失または挿入を有するものである。配列番号２のより好ましいポリペプチドは、以下の位置のうちの１つ以上における置換：Ｑ８７Ｅ、Ｒ、Ｑ９８Ｒ、Ｓ１２５Ａ、Ｎ１２８Ｃ、Ｔ１３１Ｉ、Ｔ１６５Ｉ、Ｋ１７８Ｌ、Ｔ１８２Ｇ、Ｍ２０１Ｌ、Ｆ２０２Ｙ、Ｎ２２５Ｅ、Ｒ、Ｎ２７２Ｅ、Ｒ、Ｓ２４３Ｑ、Ａ、Ｅ、Ｄ、Ｙ３０５Ｒ、Ｒ３０９Ａ、Ｑ３２０Ｒ、Ｑ３５９Ｅ、Ｋ４４４ＥおよびＧ４７５Ｋおよび／または位置Ｒ１８０および／またはＳ１８１における、またはＴ１８２および／またはＧ１８３の欠失を有するものである。配列番号２の最も好ましいアミラーゼポリペプチドは、置換：
Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ；
Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｆ２０２Ｙ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｄ３１９Ｔ＋Ｇ４７５Ｋ；
Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ；または
Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｔ１３１Ｉ＋Ｔ１６５Ｉ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ
を有するものであり、ここでポリペプチドはＣ末端がトランケートされており、および任意選択で位置２４３に置換および／または位置１８０および／または位置１８１に欠失をさらに含む。
他の好適なアミラーゼは、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１２を有するα−アミラーゼまたは配列番号１２と少なくとも９０％の配列同一性を有する変異体である。好ましいアミラーゼポリペプチドは、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１２の以下の位置：Ｒ２８、Ｒ１１８、Ｎ１７４；Ｒ１８１、Ｇ１８２、Ｄ１８３、Ｇ１８４、Ｇ１８６、Ｗ１８９、Ｎ１９５、Ｍ２０２、Ｙ２９８、Ｎ２９９、Ｋ３０２、Ｓ３０３、Ｎ３０６、Ｒ３１０、Ｎ３１４；Ｒ３２０、Ｈ３２４、Ｅ３４５、Ｙ３９６、Ｒ４００、Ｗ４３９、Ｒ４４４、Ｎ４４５、Ｋ４４６、Ｑ４４９、Ｒ４５８、Ｎ４７１、Ｎ４８４のうちの１つ以上に置換、欠失または挿入を有するものである。特に好ましいアミラーゼとしては、Ｄ１８３およびＧ１８４の欠失を有し、かつ置換Ｒ１１８Ｋ、Ｎ１９５Ｆ、Ｒ３２０ＫおよびＲ４５８Ｋを有するポリペプチド、および群：Ｍ９、Ｇ１４９、Ｇ１８２、Ｇ１８６、Ｍ２０２、Ｔ２５７、Ｙ２９５、Ｎ２９９、Ｍ３２３、Ｅ３４５およびＡ３３９から選択される１つ以上の位置に置換をさらに有する変異体、最も好ましくはこれらの位置の全てに置換をさらに有する変異体が挙げられる。
他の例は、国際公開第２０１１／０９８５３１号パンフレット、国際公開第２０１３／００１０７８号パンフレットおよび国際公開第２０１３／００１０８７号パンフレットに記載されるものなどのアミラーゼポリペプチドである。
市販のアミラーゼは、Ｄｕｒａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ（商標）、Ｆｕｎｇａｍｙｌ（商標）、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ（商標）、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ Ｐｌｕｓ（商標）、Ｎａｔａｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｑｕｏｚｙｍｅ ＸおよびＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓから）、およびＲａｐｉｄａｓｅ（商標）、Ｐｕｒａｓｔａｒ（商標）／Ｅｆｆｅｃｔｅｎｚ（商標）、ＰｏｗｅｒａｓｅおよびＰｒｅｆｅｒｅｎｚ Ｓ１００（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．／ＤｕＰｏｎｔから）である。
配列番号７、配列番号８、配列番号９のポリペプチドを含むヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド、またはヘキソサミニダーゼ活性を有する、かつそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドに加えて、本発明のクリーニング組成物は、植物、細菌または真菌由来のものを含めたペルオキシダーゼ／オキシダーゼをさらに含み得る。化学的に修飾された、またはプロテインエンジニアリングを受けた突然変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、コプリナス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）、例えば、Ｃ．シネレウス（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ）のペルオキシダーゼ、および国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、国際公開第９５／１０６０２号パンフレット、および国際公開第９８／１５２５７号パンフレットに記載されるものなどのそのポリペプチドが挙げられる。市販のペルオキシダーゼとしては、Ｇｕａｒｄｚｙｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
クリーニング組成物酵素は、例えば、１つ以上の酵素を含有する別個の添加剤を添加することによるか、またはこれらの酵素を含む混合添加剤を添加することにより洗剤組成物中に含まれてもよい。本発明の洗剤添加剤、すなわち別個の添加剤または混合添加剤は、例えば、顆粒、液体、スラリー等として配合することができる。好ましい洗剤添加剤配合物は顆粒、詳細には無粉塵性顆粒、液体、詳細には安定化液体、またはスラリーである。
無粉塵性顆粒は、例えば米国特許第４，１０６，９９１号明細書および同第４，６６１，４５２号明細書に開示されるとおり作製されてもよく、および任意選択で、当該技術分野において公知の方法によりコーティングされてもよい。ワックス状コーティング材の例は、平均モル重量が１０００〜２００００のポリ（エチレンオキシド）生成物（ポリエチレングリコール、ＰＥＧ）；１６〜５０エチレンオキシド単位を有するエトキシ化ノニルフェノール類；アルコールが１２〜２０個の炭素原子を含有し、かつ１５〜８０エチレンオキシド単位があるエトキシ化脂肪アルコール類；脂肪アルコール類；脂肪酸類；ならびに脂肪酸のモノおよびジおよびトリグリセリド類である。流動床技術による塗布に好適な皮膜形成コーティング材の例が、英国特許第１４８３５９１号明細書に提供される。液体酵素調製物は、例えば、確立された方法に従いプロピレングリコールなどのポリオール、糖または糖アルコール、乳酸またはホウ酸を添加することにより安定化させてもよい。欧州特許第２３８，２１６号明細書に記載される方法に従い保護酵素が調製されてもよい。
本発明の洗剤組成物はまた、０〜１０重量％、例えば０．５〜５％、２〜５％、０．５〜２％または０．２〜１％のポリマーも含有し得る。洗剤への使用が当該技術分野において公知の任意のポリマーを利用し得る。ポリマーは、上述のとおりのコビルダーとして機能してもよく、または再沈着の防止、繊維の保護、汚れ落ち性、移染防止、油脂分除去および／または消泡特性を提供してもよい。一部のポリマーは、上述の特性のうちの２つ以上および／または以下に挙げるモチーフのうちの２つ以上を有し得る。例示的ポリマーとしては、（カルボキシメチル）セルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（エチレングリコール）またはポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＧ）、エトキシ化ポリ（エチレンイミン）、（カルボキシメチル）イヌリン（ＣＭＩ）、およびポリカルボン酸塩類、例えば、ＰＡＡ、ＰＡＡ／ＰＭＡ、ポリアスパラギン酸、およびメタクリル酸ラウリル／アクリル酸共重合体、疎水的に改質されたＣＭＣ（ＨＭ−ＣＭＣ）およびシリコーン類、テレフタル酸とオリゴマーグリコール類との共重合体、ポリ（エチレンテレフタレート）とポリ（オキシエテンテレフタレート）（ｐｏｌｙ（ｏｘｙｅｔｈｅｎｅ ｔｅｒｅｐｈｔｈａｌａｔｅ））との共重合体（ＰＥＴ−ＰＯＥＴ）、ＰＶＰ、ポリ（ビニルイミダゾール）（ＰＶＩ）、ポリ（ビニルピリジン−Ｎ−酸化物）（ＰＶＰＯまたはＰＶＰＮＯ）およびポリビニルピロリドン−ビニルイミダゾール（ＰＶＰＶＩ）が挙げられる。さらなる例示的ポリマーとしては、スルホン化ポリカルボン酸塩類、ポリエチレンオキシドおよびポリプロピレンオキシド（ＰＥＯ−ＰＰＯ）およびジクオタニウムエトキシ硫酸塩が挙げられる。他の例示的ポリマーが、例えば国際公開第２００６／１３０５７５号パンフレットに開示されている。上述のポリマーの塩もまた企図される。
本発明のクリーニング組成物はまた、染料または顔料などの布地色相調整剤を含んでもよく、これは洗剤組成物に配合されると、前記洗剤組成物を含む洗浄液に布地が接触したときに前記布地に染着し、ひいては可視光の吸収／反射を用いて前記布地の色合いを変えることができる。蛍光増白剤は、紫外線に曝されると少なくとも一部の可視光を放つ。対照的に、布地色相調整剤は可視光スペクトルの少なくとも一部を吸収することに伴い表面の色合いを変える。好適な布地色相調整剤としては染料および染料−粘土複合体が挙げられ、また顔料も含み得る。好適な染料としては、小分子染料およびポリマー染料が挙げられる。好適な小分子染料としては、例えば、国際公開第２００５／０３２７４号パンフレット、国際公開第２００５／０３２７５号パンフレット、国際公開第２００５／０３２７６号パンフレットおよび欧州特許第１８７６２２６号明細書（本明細書によって参照により援用される）に記載されるとおりの、ダイレクトブルー、ダイレクトレッド、ダイレクトバイオレット、アシッドブルー、アシッドレッド、アシッドバイオレット、ベーシックブルー、ベーシックバイオレットおよびベーシックレッドのカラーインデックス（Ｃ．Ｉ．）分類に入る染料、またはこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。本洗剤組成物は、好ましくは、約０．００００３ｗｔ％〜約０．２ｗｔ％、約０．００００８ｗｔ％〜約０．０５ｗｔ％、またはさらには約０．０００１ｗｔ％〜約０．０４ｗｔ％の布地色相調整剤を含む。本組成物は０．０００１ｗｔ％〜０．２ｗｔ％の布地色相調整剤を含んでもよく、これは特に、組成物が単位用量パウチの形態であるとき好ましいものであり得る。好適な色相調整剤はまた、例えば国際公開第２００７／０８７２５７号パンフレットおよび国際公開第２００７／０８７２４３号パンフレットにも開示されている。
本組成物はさらに、重量基準で０〜１０％、例えば重量基準で０〜５％、例えば約０．５〜約５％、または約３％〜約５％のヒドロトロープも含有し得る。洗剤への使用が当該技術分野において公知の任意のヒドロトロープを利用し得る。ヒドロトロープの非限定的な例としては、ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｐ−トルエンスルホン酸ナトリウム（ＳＴＳ）、キシレンスルホン酸ナトリウム（ＳＸＳ）、クメンスルホン酸ナトリウム（ＳＣＳ）、シメンスルホン酸ナトリウム、アミンオキシド類、アルコール類およびポリグリコールエーテル類、ヒドロキシナフトエ酸ナトリウム、ヒドロキシナフタレンスルホン酸ナトリウム、エチルヘキシル硫酸ナトリウム、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
本発明のクリーニング組成物はまた、分散剤も含有することができる。詳細には、粉末洗剤が分散剤を含み得る。好適な水溶性有機材料としては、ホモポリマー酸またはコポリマー酸またはこれらの塩が挙げられ、ここではポリカルボン酸が、互いに２個以下の炭素原子によって分離された少なくとも２個のカルボキシルラジカルを含む。好適な分散剤は、例えば、Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｓｃｉｅｎｃｅ ｓｅｒｉｅｓ ｖｏｌｕｍｅ ７１，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．に記載されている。
クリーニング組成物はまた、１つ以上の移染防止剤も含み得る。好適なポリマー移染防止剤としては、限定はされないが、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミン−Ｎ−酸化物ポリマー、Ｎ−ビニルピロリドンとＮ−ビニルイミダゾールとの共重合体、ポリビニルオキサゾリドン類（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｏｘａｚｏｌｉｄｏｎｅｓ）およびポリビニルイミダゾール類またはこれらの混合物が挙げられる。主題の組成物中に存在するとき、移染防止剤は、組成物の重量基準で約０．０００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％またはさらには約０．１％〜約３％のレベルで存在し得る。
クリーニング組成物は、好ましくはまた、蛍光増白剤または光学的明色化剤など、クリーニング下の物品の色合いを調整し得るさらなる成分も含有し得る。存在する場合、明色化剤は好ましくは約０．０１％〜約０．５％のレベルである。洗濯用組成物中には、洗濯洗剤組成物への使用に好適な任意の蛍光増白剤を使用することができる。最も一般的に用いられる蛍光増白剤は、ジアミノスチルベンスルホン酸誘導体、ジアリールピラゾリン誘導体およびビフェニルジスチリル誘導体のクラスに属するものである。ジアミノスチルベンスルホン酸誘導体タイプの蛍光増白剤の例としては、４，４’−ビス［（４−アニリノ−６−ジエタノールアミノ−ｓ−トリアジン−２−イル）アミノ］スチルベン−２，２’−ジスルホン酸、４，４’−ビス［（４，６−ジアニリノ−ｓ−トリアジン−２−イル）アミノ］スチルベン−２，２’−ジスルホン酸、４，４’−ビス｛４−アニリノ−６−［メチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−ｓ−トリアジン−２−イルアミノ｝スチルベン−２，２’−ジスルホン酸、４，４’−ビス（４−フェニル−１，２，３−トリアゾール−２−イル）スチルベン−２，２’−ジスルホン酸のナトリウム塩および５−（２Ｈ−ナフト［１，２−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−２−イル）−２−［（Ｅ）−２−フェニルビニル］ベンゼンスルホン酸ナトリウムが挙げられる。好ましい蛍光増白剤は、ＢＡＳＦから入手可能なＴｉｎｏｐａｌ ＤＭＳおよびＴｉｎｏｐａｌ ＣＢＳである。Ｔｉｎｏｐａｌ ＤＭＳは、４，４’−ビス［（４−アニリノ−６−モルホリノ−ｓ−トリアジン−２−イル）アミノ］スチルベン−２，２’−スルホン酸のジナトリウム塩である。Ｔｉｎｏｐａｌ ＣＢＳは、２，２’−［ビフェニル−４，４’−ジ（２，１−エテンジイル）］ジベンゼン−１−スルホン酸のジナトリウム塩である。また、Ｐａｒａｍｏｕｎｔ Ｍｉｎｅｒａｌｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｍｕｍｂａｉ、インドが供給する市販のＰａｒａｗｈｉｔｅ ＫＸも好ましい。使用に好適な他の蛍光剤としては、１−３−ジアリールピラゾリン類および７−アルキルアミノクマリン類が挙げられる。
好適な蛍光明色化剤レベルとしては、約０．０１、０．０５、約０．１またはさらには約０．２％の低レベルから０．５またはさらには０．７５ｗｔ％に至るまでの高レベルが挙げられる。
クリーニング組成物はまた、綿およびポリエステル系の布地など、布地から汚れを除去する、詳細にはポリエステル系の布地から疎水性の汚れを除去する助けとなる１つ以上の汚れ遊離ポリマーも含み得る。汚れ遊離ポリマーは、例えばノニオン性またはアニオン性テレフタル酸系ポリマー、ポリビニルカプロラクタムおよび関連する共重合体、ビニルグラフト共重合体またはポリエステルポリアミド類であってもよい；例えば、Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｓｃｉｅｎｃｅ ｓｅｒｉｅｓ ｖｏｌｕｍｅ ７１，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．のＣｈａｐｔｅｒ ７を参照のこと。別のタイプの汚れ遊離ポリマーは、コア構造と、当該のコア構造に付加された複数のアルコキシレート基とを含む両親媒性アルコキシ化油脂分除去ポリマーである。コア構造は、国際公開第２００９／０８７５２３号パンフレット（本明細書によって参照により援用される）に詳細に記載されるとおり、ポリアルキレンイミン構造またはポリアルカノールアミン構造を含み得る。さらには、ランダムグラフト共重合体が好適な汚れ遊離ポリマーである。好適なグラフト共重合体が、国際公開第２００７／１３８０５４号パンフレット、国際公開第２００６／１０８８５６号パンフレットおよび国際公開第２００６／１１３３１４号パンフレット（本明細書によって参照により援用される）にさらに詳細に記載されている。他の汚れ遊離ポリマーは、置換多糖構造、特に変性セルロース誘導体などの置換セルロース系構造、例えば、欧州特許第１８６７８０８号明細書または国際公開第２００３／０４０２７９号パンフレット（両方ともに本明細書によって参照により援用される）に記載されるものなどである。好適なセルロース系ポリマーとしては、セルロース、セルロースエーテル類、セルロースエステル類、セルロースアミド類およびこれらの混合物が挙げられる。好適なセルロース系ポリマーとしては、アニオン変性セルロース、ノニオン変性セルロース、カチオン変性セルロース、両性イオン変性セルロース、およびこれらの混合物が挙げられる。
クリーニング組成物はまた、（カルボキシメチル）セルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、アクリル酸のホモポリマー、アクリル酸とマレイン酸との共重合体、およびエトキシ化ポリエチレンイミン類などの１つ以上の再沈着防止剤も含み得る。上記の汚れ遊離ポリマーについて記載したセルロース系ポリマーもまた、再沈着防止剤として機能し得る。
クリーニング組成物はまた、１つ以上の補助材料も含有し得る。好適な補助材料としては、限定はされないが、防縮剤、しわ防止剤、殺菌剤、結合剤、キャリア、染料、酵素安定剤、布地柔軟剤、充填剤、泡調整剤、ヒドロトロープ、香料、顔料、制泡剤（ｓｏｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ）、溶媒、および液体洗剤用の構造化剤および／または構造弾性化剤が挙げられる。
クリーニング組成物は任意の好都合な形態、例えば、バー、均一錠剤、２層以上を有する錠剤、１つ以上の区画を有するパウチ、普通の、または圧縮した粉末、顆粒、ペースト、ゲル、または普通の、圧縮した、または濃縮した溶液であってもよい。
パウチは単区画または多区画として構成することができる。パウチは、例えば水との接触前に組成物がパウチから放出されるのを許容しない、組成物の保持に好適な任意の形態、形状および材料であってもよい。パウチは、内部容積を囲い込む水溶性フィルムで作られる。前記内部容積はパウチの区画に分割することができる。好ましいフィルムはポリマー材料、好ましくはフィルム状またはシート状に形成されるポリマーである。好ましいポリマー、そのコポリマーまたは誘導体は、ポリアクリレート類、および水溶性アクリレートコポリマー類、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムデキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレート類、最も好ましくはポリビニルアルコールコポリマー類、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）が選択される。好ましくは、フィルム中のポリマー、例えばＰＶＡのレベルは少なくとも約６０％である。好ましい平均分子量は典型的には約２０，０００〜約１５０，０００となり得る。フィルムはまた、ポリラクチドおよびポリビニルアルコールなどの加水分解で分解可能な水溶性ポリマーブレンド（ＭｏｎｏＳｏｌ ＬＬＣ、Ｉｎｄｉａｎａ、ＵＳＡによって販売されているとおりの商品名Ｍ８６３０で知られる）＋グリセロール、エチレングリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールおよびこれらの混合物などの可塑剤などを含むブレンド組成物であってもよい。パウチは、水溶性フィルムで隔てられた固体の洗濯クリーニング組成物または一部の成分および／または液体のクリーニング組成物または一部の成分を含むことができる。液体成分用の区画は固体を入れる区画と組成が異なり得る：米国特許出願公開第２００９／００１１９７０ Ａ１号明細書。
洗剤原料は、水に溶解可能なパウチ内の区画によって、または錠剤の種々の層に互いに物理的に隔てられてもよい。それにより成分間における保管時の負の相互作用を回避することができる。区画の各々の溶解プロファイルを異ならせることによってもまた、洗浄溶液中の選択の成分の溶解に遅延を生じさせることができる。
単位用量に分かれていない液体またはゲル洗剤は、水性であって、典型的には２０重量％以上９５％以下の水、例えば約７０％以下の水、約６５％以下の水、約５５％以下の水、約４５％の水、約３５％以下の水を含有してもよい。水性液体またはゲル中には、限定なしに、アルカノール類、アミン類、ジオール類、エーテル類およびポリオール類を含めた他のタイプの液体が含まれてもよい。水性液体またはゲル洗剤は０〜３０％の有機溶媒を含有し得る。
本発明はまた、家庭での洗濯洗浄および工業的洗濯洗浄など、生地および布地の洗濯における、本発明に係るポリペプチドまたはその組成物の使用方法にも関する。
本発明の一態様は、
ａ）配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に示されるポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含む洗浄液に物品を曝露する、または請求項１〜１４のいずれか一項に記載の洗剤組成物に物品を曝露する；
ｂ）少なくとも１つの洗浄サイクルを完了すること；および
任意選択で物品をすすぐこと
を含む物品の洗濯方法に関し、ここで物品は生地である。
本発明はまた、床、机、壁、屋根等の硬質表面ならびに車（洗車）および食器（食器洗浄）など、硬質物体の表面のクリーニングにおける、本発明に係るポリペプチドまたはその組成物の使用方法にも関する。
本発明のポリペプチドはクリーニング組成物に添加され、ひいてはその一成分になり得る。本発明の一態様は、ＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）からなる群から選択される１つ以上のモチーフを任意選択で含む、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドであって、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１およびそれと少なくとも６０％の配列同一性を有するヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドの、洗濯および／または硬質表面クリーニングなどのクリーニング作業における使用に関する。
従って、本発明の一態様は、ＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）からなる群から選択される１つ以上のモチーフを任意選択で含む、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドであって、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１および少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドの、洗濯および／または硬質表面クリーニングなどのクリーニング作業における使用に関し、およびこのポリペプチドは、参照酵素と比べてディープクリーニング特性が向上している。
クリーニング作業または生地の手入れ作業は、例えば、洗濯作業、食器洗い作業、または浴室のタイル、床、机の天板、排水管、流し台および洗面台などの硬質表面のクリーニングであり得る。洗濯作業は、例えば家庭での洗濯であり得るが、しかしまた工業的洗濯であってもよい。さらに、本発明は布地および／または衣類の洗濯方法に関し、ここでこの方法は、クリーニング組成物と、少なくとも１つの本発明のポリペプチドとを含有する洗浄溶液で布地を処理することを含む。クリーニング作業または生地の手入れ作業は、例えば機械洗い作業で、または手洗い作業で行われ得る。洗浄溶液は、例えば、洗剤組成物を含有する水性洗浄溶液であり得る。
従って、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに含まれるポリペプチドは、洗剤組成物などの界面活性剤を含む組成物中において特に有用であり、および本発明のポリペプチドは、好ましくは洗濯および食器洗浄などのクリーニング作業において用いられ得る。
一部の態様において、本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号２の成熟型ポリペプチドとの配列同一性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドに関する。一態様において、本ポリペプチドは、配列番号７に示される成熟型ポリペプチドと１０個以下のアミノ酸、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個だけ異なる。
一部の態様において、本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号４の成熟型ポリペプチドとの配列同一性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドに関する。一態様において、本ポリペプチドは、配列番号８に示される成熟型ポリペプチドと１０個以下のアミノ酸、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個だけ異なる。
一部の態様において、本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号６の成熟型ポリペプチドとの配列同一性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドに関する。一態様において、本ポリペプチドは、配列番号９に示される成熟型ポリペプチドと１０個以下のアミノ酸、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個だけ異なる。
一部の態様において、本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号１３の成熟型ポリペプチドとの配列同一性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドに関する。一態様において、本ポリペプチドは、配列番号１０に示される成熟型ポリペプチドと１０個以下のアミノ酸、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個だけ異なる。
一部の態様において、本発明は、ヘキソサミニダーゼ活性を有する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号１４の成熟型ポリペプチドとの配列同一性を有するテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドに関する。一態様において、本ポリペプチドは、配列番号１１に示される成熟型ポリペプチドと１０個以下のアミノ酸、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個だけ異なる。
一実施形態において、ポリペプチドは、単離されている。本発明のポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列もしくはその対立遺伝子変異体を含むか、または、これから構成されることが好ましく；あるいは、ヘキソサミニダーゼ活性を有するその断片である。別の態様では、ポリペプチドは、配列番号２の成熟型ポリペプチドを含むか、または、これから構成される。他の態様において、ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸１〜３２４を含むか、または、これから構成される。
ある実施形態において、ポリペプチドは単離されている。本発明のポリペプチドは、好ましくは、配列番号８のアミノ酸配列またはその対立遺伝子変異体を含む、またはそれからなるか；またはヘキソサミニダーゼ活性を有するその断片である。別の態様において、ポリペプチドは配列番号４の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる。別の態様において、ポリペプチドは配列番号４のアミノ酸１〜３２４を含む、またはそれからなる。
ある実施形態において、ポリペプチドは単離されている。本発明のポリペプチドは、好ましくは、配列番号９のアミノ酸配列またはその対立遺伝子変異体を含む、またはそれからなるか；またはヘキソサミニダーゼ活性を有するその断片である。別の態様において、ポリペプチドは配列番号６の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる。別の態様において、ポリペプチドは配列番号６のアミノ酸１〜３２４を含む、またはそれからなる。
ある実施形態において、ポリペプチドは単離されている。本発明のポリペプチドは、好ましくは、配列番号１０のアミノ酸配列またはその対立遺伝子変異体を含む、またはそれからなるか；またはヘキソサミニダーゼ活性を有するその断片である。別の態様において、ポリペプチドは配列番号１３の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる。別の態様において、ポリペプチドは配列番号１３のアミノ酸１〜３２４を含む、またはそれからなる。
ある実施形態において、ポリペプチドは単離されている。本発明のポリペプチドは、好ましくは、配列番号１１のアミノ酸配列またはその対立遺伝子変異体を含む、またはそれからなるか；またはヘキソサミニダーゼ活性を有するその断片である。別の態様において、ポリペプチドは配列番号１５の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる。別の態様において、ポリペプチドは配列番号１５のアミノ酸１〜３２４を含む、またはそれからなる。
別の実施形態において、本発明は、極めて低いストリンジェンシー条件下、低いストリンジェンシー条件下、中程度のストリンジェンシー条件下、中程度〜高いストリンジェンシー条件下、高いストリンジェンシー条件下、または極めて高いストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号１、３、５、１２または１４の成熟型ポリペプチドコード配列または（ｉｉ）（ｉ）の完全長相補体とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに関する（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。ある実施形態において、ポリペプチドは単離されている。
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号１２もしくは配列番号１４のポリヌクレオチドまたはそのサブ配列、ならびに、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号１３、配列番号１５の成熟型ポリペプチドもしくはその断片は、技術分野において周知である方法に従って、異なる属もしくは種の系統からヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡを同定およびクローン化するために核酸プローブの設計に用いられ得る。このようなプローブは、標準的なサザンブロッティング法の後に、含まれる対応する遺伝子を同定および単離するために、対象の細胞のゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡとのハイブリーダイゼーションに用いられることが可能である。このようなプローブは配列全体よりもかなり短いことが可能であるが、例えば、長さが少なくとも２５、少なくとも３５または少なくとも７０ヌクレオチドと少なくとも１５ヌクレオチドであるべきである。好ましくは、核酸プローブは、例えば、少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも３００ヌクレオチド、少なくとも４００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも６００ヌクレオチド、少なくとも７００ヌクレオチド、少なくとも８００ヌクレオチドまたは少なくとも９００ヌクレオチドの長さといった、少なくとも１００ヌクレオチドの長さである。ＤＮＡおよびＲＮＡプローブの両方が用いられることが可能である。プローブは、典型的には、対応する遺伝子を検出するために標識化される（例えば、３２Ｐ、３Ｈ、３５Ｓ、ビオチンまたはアビジンで）。このようなプローブは本発明によって包含される。
このような他の系統から調製したゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡライブラリは、上記のプローブとハイブリダイズし、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡについてスクリーニングされ得る。このような他の系統由来のゲノムまたは他のＤＮＡは、アガロースもしくはポリアクリルアミドゲル電気泳動、または、他の分離技術によって分離され得る。これらのライブラリからのＤＮＡまたは分離されたＤＮＡが、ニトロセルロースもしくは他の好適なキャリア材料に移され固定化され得る。配列番号１、３、４、１２もしくは１４またはそのサブ配列とハイブリダイズするクローンもしくはＤＮＡを同定するために、キャリア材料がサザンブロッティングに用いられる。
本発明の目的上、ハイブリダイゼーションとは、ポリヌクレオチドが（ｉ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号１２または配列番号１４；（ｉｉ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号１２または配列番号１４の成熟型ポリペプチドコード配列；（ｉｉｉ）その完全長相補体；または（ｉｖ）その部分配列に対応する標識核酸プローブに；極めて低い〜極めて高いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることを指す。これらの条件下で核酸プローブがハイブリダイズする分子は、例えばＸ線フィルムまたは当該技術分野において公知の任意の他の検出手段を用いて検出することができる。
別の実施形態において、本発明は、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号１の成熟型ポリペプチドコード配列との配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに関する。さらなる実施形態において、ポリペプチドは単離されている。
別の実施形態において、本発明は、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号３の成熟型ポリペプチドコード配列との配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに関する。さらなる実施形態において、ポリペプチドは単離されている。
別の実施形態において、本発明は、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号５の成熟型ポリペプチドコード配列との配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに関する。さらなる実施形態において、ポリペプチドは単離されている。
別の実施形態において、本発明は、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号１２の成熟型ポリペプチドコード配列との配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに関する。さらなる実施形態において、ポリペプチドは単離されている。
別の実施形態において、本発明は、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列番号１４の成熟型ポリペプチドコード配列との配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに関する。さらなる実施形態において、ポリペプチドは単離されている。
別の実施形態では、本発明は、１つまたは複数（例えば、数個）の位置に置換、欠失および／または挿入を含む、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号１３または配列番号１５の成熟型ポリペプチドの変異体に関する。一実施形態では、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１の成熟型ポリペプチドに導入されるアミノ酸置換、欠失および／または挿入の数は、１０以下、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。アミノ酸変異は、副次的な性質のものであってもよく、すなわち、タンパク質の折り畳みおよび／もしくは活性に顕著に影響しない保存的アミノ酸置換もしくは挿入；典型的には１〜３０アミノ酸の小さな欠失；アミノ−末端メチオニン残基などの小さなアミノ−もしくはカルボキシル−末端伸長；２０〜２５個以下の残基の小さなリンカーペプチド；あるいは、正味電荷、またはポリ−ヒスチジン配列、抗原性エピトープもしくは結合性ドメインなどの他の機能を変化させることによって精製を促進させる小さな伸長であってもよい。保存的置換の例は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リシンおよびヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）、および、小さいアミノ酸（グリシン、アラニン、セリン、スレオニンおよびメチオニン）の群の範囲内である。特異活性を一般に改変しないアミノ酸置換は技術分野において公知であり、例えば、Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ ａｎｄ Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，１９７９，Ｉｎ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。頻繁に生じる置換は、Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／ＧｌｕおよびＡｓｐ／Ｇｌｙである。
あるいは、アミノ酸変異は、ポリペプチドの物理化学的特性が改変されるような性質のものである。例えば、アミノ酸変異は、ポリペプチドの熱安定性を向上させ、基質特異性を改変し、至適ｐＨを変化させることであり得る。ポリペプチドにおける必須アミノ酸は、部位特異的突然変異誘発またはアラニン走査突然変異誘発（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５）などの技術分野において公知である手法に従って同定することが可能である。後者の技術においては、単一のアラニン突然変異が分子中の全ての残基に導入され、得られた分子が、分子の活性に重要であるアミノ酸残基を同定するためにヘキソサミニダーゼ活性についてテストされる。また、Ｈｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４６９９−４７０８を参照のこと。酵素の活性部位または他の生物学的相互作用は、推定上の接触部位アミノ酸の突然変異が併用される、核磁気共嗚、結晶構造解析、電子回折または光親和性標識などの技術によって判定される、構造の物理的分析によって判定されることも可能である。例えば、ｄｅ Ｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４；Ｗｌｏｄａｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３０９：５９−６４を参照のこと。必須アミノ酸のアイデンティティは、関連ポリペプチドとのアラインメントから推測することもできる。本発明のポリペプチドは、ヘキソサミニダーゼ、例えばテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属するジスペルシン類である。テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）ジスペルシン類は、例えばバイオフィルムに見られるＮ−アセチルグルコサミンポリマーのβ−１，６−グリコシド結合を特異的に加水分解するβ−ヘキソサミニダーゼである。本発明のポリペプチド（ヘキソサミニダーゼ）と異なるクレードに属するジスペルシンＢは、３つの高度に保存された酸性残基：残基１８３におけるアスパラギン酸（Ｄ１８３）、残基１８４におけるグルタミン酸（Ｅ１８４）、および残基３３２におけるグルタミン酸（Ｅ３３２）を含有する。単一もしくは複数のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入は、Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ ａｎｄ Ｓａｕｅｒ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：５３−５７；Ｂｏｗｉｅ ａｎｄ Ｓａｕｅｒ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：２１５２−２１５６；国際公開第９５／１７４１３号パンフレット；または、国際公開第９５／２２６２５号パンフレットにより開示されているものなどの公知の突然変異誘発方法、組換え法、および／または、シャッフリング法、これに続く関連するスクリーニング法を用いて行い、テストすることが可能である。用いられることが可能である他の方法としては、エラープローンＰＣＲ、ファージディスプレイ（例えば、Ｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１０８３２−１０８３７；米国特許第５，２２３，４０９号明細書；国際公開第９２／０６２０４号パンフレット）、および、領域特異的突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ ４６：１４５；Ｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，ＤＮＡ ７：１２７）が挙げられる。突然変異誘発／シャッフリング法は、宿主細胞によって発現されたクローン化突然変異誘発ポリペプチドの活性を検出するために、高スループット自動スクリーニング法と組み合わせることが可能である（Ｎｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １７：８９３−８９６）。活性ポリペプチドをコードする突然変異誘発ＤＮＡ分子は、宿主細胞から回収可能であり、技術分野における標準的な方法を用いて直ぐに配列決定されることが可能である。これらの方法では、ポリペプチドにおける個別のアミノ酸残基の重要性を直ぐに判定することが可能である。ポリペプチドは、一のポリペプチドの一領域が、他のポリペプチドの一領域のＮ−末端またはＣ−末端で融合したハイブリッドポリペプチドであり得る。
ポリペプチドは、他のポリペプチドが本発明のポリペプチドのＮ−末端またはＣ−末端で融合した融合ポリペプチドまたは切断可能な融合ポリペプチドであり得る。融合ポリペプチドは、他のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを本発明のポリヌクレオチドに融合させることにより生成される。融合ポリペプチドを生成する技術は、技術分野において公知であると共に、フレーム中に収まり、融合ポリペプチドの発現が同一のプロモータおよびターミネータによる制御下にあるよう、ポリペプチドをコードするコード配列を連結するステップを含む。融合ポリペプチドはまた、翻訳後に融合ポリペプチドが形成されるインテインテクノロジーを用いて構築されてもよい（Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ Ｊ．１２：２５７５−２５８３；Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：７７６−７７９）。融合ポリペプチドは、２つのポリペプチド間に切断部位をさらに含み得る。融合タンパク質が分泌されると、その部位が切断され、２つのポリペプチドが遊離する。切断部位の例としては、限定はされないが、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：５６８−５７６；Ｓｖｅｔｉｎａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７６：２４５−２５１；Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ−Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６３：３４８８−３４９３；Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：４９８−５０３；およびＣｏｎｔｒｅｒａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：３７８−３８１；Ｅａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２５：５０５−５１２；Ｃｏｌｌｉｎｓ−Ｒａｃｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：９８２−９８７；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ６：２４０−２４８；およびＳｔｅｖｅｎｓ，２００３，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｗｏｒｌｄ ４：３５−４８に開示される部位が挙げられる。
ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドの供給源
本発明のヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドは、いかなる属の微生物から得られてもよい。本発明の目的上、用語「〜から得られる」は、本明細書において所与の供給源との関連で使用されるとき、ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドがその供給源によって産生される、またはその供給源からのポリヌクレオチドが挿入されている株によって産生されることを意味するものとする。一態様において、所与の供給源から得られるポリペプチドは細胞外に分泌される。
別の態様において、ポリペプチドはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）ポリペプチド、例えばテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られるポリペプチドである。好ましい態様において、ポリペプチドは配列番号７と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドであり、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）、好ましくはテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られる。
別の態様において、ポリペプチドはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）ポリペプチド、例えばテルリバチルス・ゴリエンシス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）から得られるポリペプチドである。好ましい態様において、ポリペプチドは配列番号８と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドであり、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）、好ましくはテルリバチルス・ゴリエンシス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）から得られる。
別の態様において、ポリペプチドはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）ポリペプチド、例えばテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られるポリペプチドである。好ましい態様において、ポリペプチドは配列番号９と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドであり、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）、好ましくはテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られる。
別の態様において、ポリペプチドはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）ポリペプチド、例えばテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られるポリペプチドである。好ましい態様において、ポリペプチドは配列番号１０と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドであり、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）、好ましくはテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られる。
別の態様において、ポリペプチドはテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）ポリペプチド、例えばテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られるポリペプチドである。好ましい態様において、ポリペプチドは配列番号１１と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドであり、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）、好ましくはテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）から得られる。
前述の種について、本発明は、それが知られる種名とは無関係に、完全な状態および不完全な状態の両方、および他の分類学的等価物、例えばアナモルフを包含することは理解されるであろう。当業者は適切な等価物のアイデンティティを容易に認識するであろう。
これらの種の株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）、Ｃｅｎｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ Ｖｏｏｒ Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＢＳ）、およびＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｐａｔｅｎｔ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（ＮＲＲＬ）など、幾つものカルチャーコレクションにおいて一般に容易に入手可能である。
ポリペプチドは、上述のプローブを使用して自然（例えば、土、堆肥、水等）から単離された微生物または天然材料（例えば、土、堆肥、水等）から直接得られたＤＮＡ試料を含め、他の供給源から同定され、得られてもよい。自然生息地から微生物およびＤＮＡを直接単離する技法は、当該技術分野において周知である。次に、別の微生物もしくは混合ＤＮＡ試料のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリを同様にスクリーニングすることにより、そのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが得られてもよい。ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドがプローブによって検出されると、当業者に公知の技法（例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９、前掲を参照のこと）を利用することにより、そのポリヌクレオチドを単離またはクローニングすることができる。
核酸構築物
本発明はまた、制御配列に適合する条件下で好適な宿主細胞中にコード配列を発現させる１つまたは複数の制御配列に作動可能にリンクした本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。
ポリヌクレオチドは、多様な方法で処置されてポリペプチドの発現がもたらされ得る。ベクターへ挿入される前のポリヌクレオチドの処置が、発現ベクターに応じて、望ましいか、または、必要であり得る。組換えＤＮＡ法を利用するポリヌクレオチドを修飾するための技術は技術分野において周知である。
制御配列は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現のための宿主細胞によって認識されるポリヌクレオチドであるプロモータであり得る。プロモータは、ポリペプチドの発現を媒介する転写制御配列を含有する。プロモータは、変異体、切断およびハイブリッドプロモータを含む宿主細胞において転写活性を示すいずれかのポリヌクレオチドであり得、ならびに、宿主細胞に対して相同性または非相同性である細胞外または細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得られ得る。
細菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写を指令する好適なプロモータの例としては、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＱ）、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＬ）、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ペニシリナーゼ遺伝子（ｐｅｎＰ）、バチルス・ステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）マルトジェニックアミラーゼ遺伝子（ａｍｙＭ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）レバンスクラーゼ遺伝子（ｓａｃＢ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｘｙｌＡおよびｘｙｌＢ遺伝子、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ｃｒｙＩＩＩＡ遺伝子（ＡｇａｉｓｓｅおよびＬｅｒｅｃｌｕｓ、１９９４、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １３：９７−１０７）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｌａｃオペロン、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｔｒｃプロモータ（Ｅｇｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５）、ストレプトマイセス・コエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）アガラーゼ遺伝子（ｄａｇＡ）および原核β−ラクタマーゼ遺伝子（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７−３７３１）、ならびに、ｔａｃプロモータ（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１−２５）から得られるプロモータがある。さらなるプロモータが、「Ｕｓｅｆｕｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ」，Ｇｉｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ ２４２：７４−９４；および、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９に記載されている。タンデムプロモータの例が、国際公開第９９／４３８３５号パンフレットに開示されている。
糸状真菌宿主細胞において本発明の核酸構築物の転写を指令する好適なプロモータの例としては、以下：アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）アセトアミダーゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中性α−アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）酸安定α−アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）またはアスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）アルカリ性タンパク分解酵素、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン様プロテアーゼ（国際公開第９６／００７８７号パンフレット）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）アミログルコシダーゼ（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウム・ベネナツム・ダリア（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ Ｄａｒｉａ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、フザリウム・ベネナツム・クイン（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ Ｑｕｉｎｎ）（国際公開第００／５６９００号パンフレット）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）リパーゼ、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）β−グルコシダーゼ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＶ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）β−キシロシダーゼ、およびトリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）翻訳延長因子、ならびに、ＮＡ２−ｔｐｉプロモータ（非翻訳リーダが、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダで置換された、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）中性α−アミラーゼ遺伝子由来の修飾プロモータ；非限定的例としては、非翻訳リーダがアスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダで置換された、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中性α−アミラーゼ遺伝子由来の修飾プロモータが挙げられる）の遺伝子から得られるプロモータ；ならびに、その変異体、切断およびハイブリッドプロモータがある。他のプロモータは、米国特許第６，０１１，１４７号明細書に記載されている。
イースト菌宿主において、有用なプロモータは、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ガラクトキナーゼ（ＧＡＬ１）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコール脱水素酵素／グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２／ＧＡＰ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）メタロチオネイン（ＣＵＰ１）およびサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼの遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞に対する他の有用なプロモータは、Ｒｏｍａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｙｅａｓｔ ８：４２３−４８８により記載されている。
制御配列はまた、宿主細胞によって認識されて転写を終結させる転写ターミネータであり得る。ターミネータは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの３’−末端に作動可能にリンクする。本発明においては、宿主細胞において機能するいずれかのターミネータが用いられ得る。
細菌宿主細胞の好ましいターミネータは、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）アルカリ性プロテアーゼ（ａｐｒＨ）、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＬ）、および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）リボソームＲＮＡ（ｒｒｎＢ）の遺伝子から得られる。
糸状真菌宿主細胞の好ましいターミネータは、アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）アセトアミダーゼ、アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼ、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン−様プロテアーゼ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）β−グルコシダーゼ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＩＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）エンドグルカナーゼＶ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）キシラナーゼＩＩＩ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）β−キシロシダーゼ、およびトリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）翻訳延長因子の遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞の好ましいターミネータは、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）チトクロムＣ（ＣＹＣ１）およびサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素の遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞の他の有用なターミネータが、前述のＲｏｍａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２に記載されている。制御配列は、プロモータの下流で、かつ遺伝子のコード配列の上流のｍＲＮＡ安定化領域であってもよく、これは、遺伝子の発現を増大させる。好適なｍＲＮＡ安定化領域の例は、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ｃｒｙＩＩＩＡ遺伝子（国際公開９４／２５６１２号パンフレット）および枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＳＰ８２遺伝子（Ｈｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １７７：３４６５−３４７１）から得られる。制御配列はまた、リーダ、すなわち、ｍＲＮＡの非翻訳領域であってもよく、これは、宿主細胞による翻訳にとって重要である。リーダは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’−末端に作動可能にリンクさせる。宿主細胞において機能性であれば、どんなリーダを用いてもよい。糸状真菌宿主細胞の好ましいリーダは、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼおよびアスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）トリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞の好適なリーダは、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）エノラーゼ（ＥＮＯ−１）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子およびサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）アルコール脱水素酵素／グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＡＤＨ２／ＧＡＰ）の遺伝子から得られる。制御配列はまた、ポリヌクレオチドの３’−末端に作動可能にリンクし、転写された場合に、ポリアデノシン残基を転写ｍＲＮＡに負荷するシグナルとして宿主細胞により認識される配列であるポリアデニル化配列であり得る。宿主細胞において機能するポリアデニル化配列のいずれかが用いられ得る。糸状真菌宿主細胞の好ましいポリアデニル化配列は、アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）アントラニル酸シンターゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）α−グルコシダーゼ、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、およびフザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）トリプシン様プロテアーゼの遺伝子から得られる。イースト菌宿主細胞の有用なポリアデニル化配列が、Ｇｕｏ ａｎｄ Ｓｈｅｒｍａｎ，１９９５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．１５：５９８３−５９９０に記載されている。
制御配列はまた、ポリペプチドのＮ−末端にリンクしたシグナルペプチドをコードし、および、ポリペプチドを細胞の分泌経路に送るシグナルペプチドコード領域であり得る。ポリヌクレオチドのコード配列の５’−末端は、ポリペプチドをコードするコード配列のセグメントと共に、翻訳読み枠に元々リンクしたシグナルペプチドコード配列を本質的に含有し得る。または、コード配列の５’−末端は、コード配列に対して外来性のシグナルペプチドコード配列を含有し得る。コード配列がシグナルペプチドコード配列を元々含有していない場合には、外来性のシグナルペプチドコード配列が必要とされる場合がある。または、外来性のシグナルペプチドコード配列は単に、ポリペプチドの分泌を増強するために天然シグナルペプチドコード配列を置き換えてもよい。しかしながら、発現ポリペプチドを宿主細胞の分泌経路に送るいずれかのシグナルペプチドコード配列が用いられてもよい。
細菌宿主細胞の効果的なシグナルペプチドコード配列は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＮＣＩＢ１１８３７マルトジェニックアミラーゼ、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）サブチリシン、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）β−ラクタマーゼ、バチルス・ステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）α−アミラーゼ、バチルス・ステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）中性プロテアーゼ（ｎｐｒＴ、ｎｐｒＳ、ｎｐｒＭ）および古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｐｒｓＡの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。さらなるシグナルペプチドが、Ｓｉｍｏｎｅｎ ａｎｄ Ｐａｌｖａ，１９９３，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５７：１０９−１３７に記載されている。糸状真菌宿主細胞の効果的なシグナルペプチドコード配列は、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中性アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼ、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡアミラーゼ、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）セルラーゼ、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）エンドグルカナーゼＶ、フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼおよびリゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。イースト菌宿主細胞の有用なシグナルペプチドは、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子およびサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）インベルターゼの遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード配列が、前述のＲｏｍａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２により記載されている。
制御配列はまた、ポリペプチドのＮ−末端でプロペプチド位置をコードするプロペプチドコード配列であり得る。得られたポリペプチドは、酵素原またはプロポリペプチド（または、いくつかの場合においてチモーゲン）として公知である。プロポリペプチドは、一般に非活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒または自己触媒切断によって活性ポリペプチドに転換されることが可能である。プロペプチドコード配列は、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）アルカリ性タンパク分解酵素（ａｐｒＥ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中性タンパク分解酵素（ｎｐｒＴ）、ミセリオフトラ・テルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）ラッカーゼ（国際公開第９５／３３８３６号パンフレット）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）アスパラギン酸プロテイナーゼおよびサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α−因子の遺伝子から得られ得る。
シグナルペプチドおよびプロペプチド配列の両方が存在する場合、プロペプチド配列はポリペプチドのＮ−末端に隣接して位置されており、また、シグナルペプチド配列は、プロペプチド配列のＮ−末端に隣接して位置されている。
宿主細胞の増殖に関してポリペプチドの発現を調節する調節配列を付加することが望ましい場合もある。調節配列の例は、調節化合物の存在を含む化学的または物理的刺激に応じて、遺伝子の発現をオンまたはオフさせるものである。原核系における調節配列としては、ｌａｃ、ｔａｃ、およびｔｒｐオペレータ系が挙げられる。酵母においては、ＡＤＨ２系またはＧＡＬ１系が用いられ得る。糸状真菌においては、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）グルコアミラーゼプロモータ、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ＴＡＫＡα−アミラーゼプロモータ、およびアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）グルコアミラーゼプロモータ、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩプロモータ、およびトリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セロビオヒドロラーゼＩＩプロモータが用いられ得る。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能とするものである。真核系において、これらの調節配列は、メトトレキセートの存在下で増幅されるジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、および、重金属を伴って増幅されるメタロチオネイン遺伝子を含む。これらの事例において、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、調節配列と作動可能にリンクしているであろう。
発現ベクター
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド、プロモータ、ならびに、転写および翻訳終止シグナルを含む組換え発現ベクターに関する。種々のヌクレオチドおよび制御配列が一緒になって、このような部位でポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの挿入または置換を可能とするために１つまたは複数の好都合な制限部位を含み得る組換え発現ベクターが生成される。あるいは、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む核酸構築物を、発現のための適切なベクターに挿入することにより発現され得る。発現ベクターの形成に際し、コード配列は、コード配列が、発現のための適切な制御配列と作動可能にリンクするようにベクター中に配置されている。
組換え発現ベクターは、組換えＤＮＡ法に簡便に供されることが可能であり、ポリヌクレオチドの発現をもたらすことができるいずれかのベクター（例えば、プラスミドまたはウイルス）であってよい。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞に対するベクターの適合性に左右されることになる。ベクターは、直鎖プラスミドまたは閉じた環状プラスミドであってもよい。
ベクターは、例えばプラスミド、染色体外要素、微小染色体または人工染色体といった、自己複製ベクター（すなわち、染色体外のエンティティとして存在し、その複製が染色体複製とは無関係なベクター）であってもよい。ベクターは、自己複製を確実にするための何らかの手段を含有し得る。あるいは、ベクターは、宿主細胞に導入された際に、ゲノム中に統合され、および、中に統合された染色体と一緒に複製されるものであってもよい。さらに、単一のベクターもしくはプラスミド、または、一緒になって、宿主細胞のゲノムに導入される全ＤＮＡを含有する２つ以上のベクターもしくはプラスミド、または、トランスポゾンを用いてもよい。
ベクターは、形質転換、形質移入、形質導入などを受けた細胞の容易な選択を可能にする１つまたは複数の選択マーカを含有することが好ましい。選択マーカは、その産物が、殺生剤またはウイルス耐性、重金属に対する耐性、栄養要求体に対する原栄養性等などをもたらす遺伝子である。
細菌性選択マーカの例としては、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）もしくは枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｄａｌ遺伝子、または、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、もしくはテトラサイクリン耐性などの抗生物質耐性を賦与するマーカである。酵母宿主細胞の好適なマーカとしては、限定されないが、ＡＤＥ２、ＨＩＳ３、ＬＥＵ２、ＬＹＳ２、ＭＥＴ３、ＴＲＰ１、およびＵＲＡ３が挙げられる。糸状真菌宿主細胞に使用する選択マーカとしては、限定されないが、ａｄｅＡ（ホスホリボシルアミノイミダゾール−スクシノカルボキサミドシンターゼ）、ａｄｅＢ（ホスホリボシルアミノイミダゾールシンターゼ）、ａｍｄＳ（アセトアミダーゼ）、ａｒｇＢ（オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ）、ｂａｒ（ホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ）、ｈｐｈ（ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ）、ｎｉａＤ（硝酸レダクターゼ）、ｐｙｒＧ（オロチジン−５’−リン酸デカルボキシラーゼ）、ｓＣ（硫酸アデニルトランスフェラーゼ）、およびｔｒｐＣ（アントラニル酸シンターゼ）、ならびにこれらの同等物が挙げられる。アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）またはアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）ａｍｄＳおよびｐｙｒＧ遺伝子、ならびに、ストレプトマイセス・ハイグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ｂａｒ遺伝子が、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）細胞での使用に好ましい。ａｄｅＡ、ａｄｅＢ、ａｍｄＳ、ｈｐｈ、およびｐｙｒＧ遺伝子が、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）細胞での使用に好ましい。
選択マーカは、国際公開第２０１０／０３９８８９号パンフレットに記載されている二重選択マーカ系であってもよい。一態様では、二重選択マーカは、ｈｐｈ−ｔｋ二重選択マーカ系である。
ベクターは、宿主細胞のゲノムへのベクターの統合、または、ゲノムとは無関係の細胞中のベクターの自律複製を許容する要素を含有することが好ましい。
宿主細胞ゲノムへの統合に関して、ベクターは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列、または、相同的もしくは非相同的組換えによるゲノムへの統合に係るベクターのいずれかの他の要素に依存し得る。または、ベクターは、染色体における正確な位置での宿主細胞のゲノムへの相同的組換えによる統合をもたらす追加のポリヌクレオチドを含有していてもよい。正確な位置で統合される可能性を高めるために、統合要素は、相同的組換えの確率を高めるために対応する標的配列に対して高度の配列同一性を有する、１００〜１０，０００塩基対、４００〜１０，０００塩基対および８００〜１０，０００塩基対などの十分な数の核酸を含有しているべきである。統合要素は、宿主細胞のゲノム中の標的配列と相同的であるいずれかの配列であり得る。さらに、統合要素は、非コーディングまたはコーディングポリヌクレオチドであり得る。他方で、ベクターは、非相同的組換えにより宿主細胞のゲノムに統合され得る。
自律複製に関して、ベクターは、対象の宿主細胞におけるベクターの自律的な複製を可能とする複製起点をさらに含んでいてもよい。複製起点は、細胞において機能する自律複製を媒介するいずれかのプラスミドレプリケータであり得る。「複製起点」または「プラスミドレプリケータ」という用語は、インビボでのプラスミドまたはベクターの複製を可能とするポリヌクレオチドを意味する。
細菌性複製起点の例は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）における複製を許容するプラスミドｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９、ｐＡＣＹＣ１７７およびｐＡＣＹＣ１８４の複製起点、ならびに、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）における複製を許容するｐＵＢ１１０、ｐＥ１９４、ｐＴＡ１０６０およびｐＡＭβ１の複製起点である。
イースト菌宿主細胞において用いられる複製起点の例は、２ミクロン複製起点、ＡＲＳ１、ＡＲＳ４、ＡＲＳ１とＣＥＮ３との組み合わせ、および、ＡＲＳ４とＣＥＮ６との組み合わせである。
糸状真菌細胞において有用な複製起点の例は、ＡＭＡ１およびＡＮＳ１（Ｇｅｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｇｅｎｅ ９８：６１−６７；Ｃｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：９１６３−９１７５；国際公開第００／２４８８３号パンフレット）である。ＡＭＡ１遺伝子の単離およびＡＭＡ１遺伝子を含むプラスミドまたはベクターの構築は、国際公開第００／２４８８３号パンフレットに開示されている方法に従って達成可能である。
本発明のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーが宿主細胞に挿入されて、ポリペプチドの生成が高められてもよい。ポリヌクレオチドのコピーの数は、配列の少なくとも１つの追加のコピーを宿主細胞ゲノムに統合することにより、または、増幅可能な選択マーカ遺伝子をポリヌクレオチドに含めることにより増加させることが可能であり、ここで、選択マーカ遺伝子の増幅されたコピー、従って、ポリヌクレオチドの追加のコピーを含有する細胞は、適切な選択可能な薬剤中で細胞を培養することにより選択可能である。
上記の要素を連結して本発明の組換え発現ベクターを構築するために用いられる手法は、当業者に周知である（例えば、前述のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９を参照のこと）。
宿主細胞
本発明はまた、本発明のポリペプチドの生成をもたらす１つまたは複数の制御配列に作動可能にリンクした本発明のポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞に関する。ポリヌクレオチドを含む構築物もしくはベクターは、構築物もしくはベクターが染色体性組み込み体として、もしくは、既述の自己複製余剰−染色体性ベクターとして維持されるよう宿主細胞に導入される。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異により親細胞と同等ではない親細胞のいずれかの子孫を包含する。宿主細胞の選択は、ポリペプチドをコードする遺伝子およびそのソースに大きく依存することとなる。
宿主細胞は、例えば、原核生物または真核生物といった、本発明のポリペプチドの組換え生成において有用ないずれかの細胞であり得る。
原核宿主細胞は、グラム陽性またはグラム陰性バクテリアのいずれかであり得る。グラム陽性バクテリアとしては、これらに限定されないが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オセアノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）およびストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられる。グラム陰性バクテリアとしては、これらに限定されないが、カムピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、イリオバクター属（Ｉｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、ネイッセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）およびウレアプラズマ属（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ）が挙げられる。
細菌宿主細胞は、特にこれらに限定されないが、バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・アルチツジニス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｔｉｔｕｄｉｎｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、Ｂ．アミロリケファシエンス亜種プランタルム（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ｓｕｂｓｐ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・シルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・ラウツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｕｔｕｓ）、バチルス・レンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・メチロトロフィカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・サフェンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｆｅｎｓｉｓ）、バチルス・ステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、古草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、およびバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）細胞を含むいずれかのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞であり得る。
細菌宿主細胞はまた、特にこれらに限定されないが、ストレプトコッカス・エクイシミリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｕｂｅｒｉｓ）、およびストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．Ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）細胞のいずれかのストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞を含むいずれかのストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞であり得る。
細菌宿主細胞はまた、特にこれらに限定されないが、ストレプトマイセス・アウロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトマイセス・アベルミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセス・コエリコロル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、ストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）、およびストレプトマイセス・リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ）細胞を含むいずれかのストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞であり得る。
バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｃｈａｎｇ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ，１９７９，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６８：１１１−１１５を参照のこと）、コンピテント細胞転換（例えば、Ｙｏｕｎｇ ａｎｄ Ｓｐｉｚｉｚｅｎ，１９６１，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．８１：８２３−８２９、またはＤｕｂｎａｕ ａｎｄ Ｄａｖｉｄｏｆｆ−Ａｂｅｌｓｏｎ，１９７１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５６：２０９−２２１を参照のこと）、電気穿孔法（例えば、Ｓｈｉｇｅｋａｗａ ａｎｄ Ｄｏｗｅｒ，１９８８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：７４２−７５１を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｅ，１９８７，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：５２７１−５２７８を参照のこと）行われ得る。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換により（例えば、Ｈａｎａｈａｎ，１９８３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６６：５５７−５８０を参照のこと）または電気穿孔法により（例えば、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：６１２７−６１４５を参照のこと）行われ得る。ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、プロトプラスト形質転換電気穿孔法（例えば、Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｆｏｌｉａ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（Ｐｒａｈａ）４９：３９９−４０５を参照のこと）、接合（例えば、Ｍａｚｏｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７１：３５８３−３５８５を参照のこと）、または、形質導入により（例えば、Ｂｕｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：６２８９−６２９４を参照のこと）行われ得る。シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、電気穿孔法（例えば、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ６４：３９１−３９７を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｐｉｎｅｄｏ ａｎｄ Ｓｍｅｔｓ，２００５，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７１：５１−５７を参照のこと）行われ得る。ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）細胞へのＤＮＡの導入は、天然コンピテンス（例えば、Ｐｅｒｒｙ ａｎｄ Ｋｕｒａｍｉｔｓｕ，１９８１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３２：１２９５−１２９７を参照のこと）、プロトプラスト形質転換（例えば、Ｃａｔｔ ａｎｄ Ｊｏｌｌｉｃｋ，１９９１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｓ ６８：１８９−２０７を参照のこと）、電気穿孔法（例えば、Ｂｕｃｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６５：３８００−３８０４を参照のこと）、または、接合により（例えば、Ｃｌｅｗｅｌｌ，１９８１，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．４５：４０９−４３６を参照のこと）行われ得る。しかしながら、ＤＮＡを宿主細胞に導入するための技術分野において公知である方法のいずれかを用いることが可能である。
宿主細胞はまた、哺乳類、昆虫、植物または真菌細胞などの真核生物であり得る。
宿主細胞は真菌細胞であってもよい。本明細書において用いられる「真菌」は、子嚢菌門（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）、担子菌門（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）、ツボカビ門（Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）および接合菌門（Ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａ）、ならびに、卵菌門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）および全ての栄養胞子形成真菌を含む（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ，Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ ａｎｄ Ｂｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ，８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，ＣＡＢ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫに定義されているとおり）。
真菌宿主細胞はイースト菌細胞であり得る。本明細書において用いられるところ、「イースト菌」は、子嚢菌酵母（エンドミセス目（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ））、担子菌イースト菌を含み、イースト菌は、不完全菌類（不完全酵母菌類（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｔｅｓ））に属する。イースト菌の分類は将来において変更される可能性があるため、本発明の目的について、イースト菌は、Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｙｅａｓｔ（Ｓｋｉｎｎｅｒ，ＰａｓｓｍｏｒｅおよびＤａｖｅｎｐｏｒｔ編，Ｓｏｃ．Ａｐｐ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ Ｎｏ．９，１９８０）に記載されているとおりに定義されるものとする。
イースト菌宿主細胞は、クルイベロマイセスラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）、サッカロマイセスカルスベルゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス・ジアスタチクス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）、サッカロマイセス・ドウグラシイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）、サッカロマイセス・クルイベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、サッカロマイセス・ノルベンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス・オビホルミス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｏｖｉｆｏｒｍｉｓ）またはヤロウイア・リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）細胞などのカンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、クルイベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）またはヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）細胞であり得る。
真菌宿主細胞は糸状真菌細胞であり得る。「糸状菌」は、真菌植物門（Ｅｕｍｙｃｏｔａ）および卵菌門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）亜門（前述のＨａｗｋｓｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９５で定義されているとおり）の全てのフィラメント形を含む。糸状菌は、一般に、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナンおよび他の複雑な多糖類から組成される菌糸体壁によって特徴付けられる。栄養成長は菌糸の伸展によるものであり、および、炭素異化は絶対好気性である。対照的に、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などのイースト菌による栄養成長は単細胞葉状体の出芽によるものであり、および、炭素異化は発酵性であり得る。
糸状真菌宿主細胞は、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、アウレオバシジウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ブエルカンデラ属（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、コプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）、コリオルス属（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスチクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、パエシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロケーテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、フレビア属（Ｐｈｌｅｂｉａ）、ピロマイセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、プレウロツス属（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）、シゾフィルム属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、テルモアスクス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、トラメテス属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）またはトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）細胞であり得る。
例えば、糸状真菌宿主細胞は、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・フォエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・ジャポニクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、ヤケイロタケ（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ ａｄｕｓｔａ）、セリポリオプシス・アネイリナ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ａｎｅｉｒｉｎａ）、セリポリオプシス・カレギエア（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｃａｒｅｇｉｅａ）、セリポリオプシス・ギルベスセンス（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｇｉｌｖｅｓｃｅｎｓ）、セリポリオプシス・パンノシンタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｐａｎｎｏｃｉｎｔａ）、セリポリオプシス・リブロサ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｒｉｖｕｌｏｓａ）、セリポリオプシス・スブルファ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｓｕｂｒｕｆａ）、セリポリオプシス・スブベルミスポラ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｓｕｂｖｅｒｍｉｓｐｏｒａ）、クリソスポリウム・イノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウム・ケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウム・ルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウム・メルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウム・パンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウム・クイーンスランジクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・トロピクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・ゾナツム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｚｏｎａｔｕｍ）、コプリヌス・シネレウス（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ ｃｉｎｅｒｅｕｓ）、クリオルス・ヒルスツス（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ ｈｉｒｓｕｔｕｓ）、フザリウム・バクテリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・セレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウム・クロークウェレンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム・グラミネアルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウム・グラミヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウム・ヘテロスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・ネグンディ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・レチクランツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム・ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウム・サムブシヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウム・サルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウム・スポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・スルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウム・トルロスム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウム・トリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、ムコール・ミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトラ・テルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウム・プルプロゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロケーテ・クリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、フレビア・ラジアタ（Ｐｈｌｅｂｉａ ｒａｄｉａｔａ）、プレウロツス・エリンギイ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、チエラビア・テルレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トラメテス・ビロサ（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｉｌｌｏｓａ）、トラメテス・ベルシコロル（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、トリコデルマ・ハルジアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマ・コニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・ロンギブラキアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）またはトリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）細胞であり得る。
真菌細胞は、それ自体公知の様式でのプロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、および、細胞壁の再生を含むプロセスにより形質転換され得る。アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）およびトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）宿主細胞の形質転換に好適な手法は、欧州特許第２３８０２３号明細書、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：１４７０−１４７４、ならびにＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１４１９−１４２２に記載されている。フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種の形質転換に好適な方法は、Ｍａｌａｒｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ ７８：１４７−１５６および国際公開第９６／００７８７号パンフレットに記載されている。イースト菌は、Ｂｅｃｋｅｒ ａｎｄ Ｇｕａｒｅｎｔｅ，Ｉｎ Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．ａｎｄ Ｓｉｍｏｎ，Ｍ．Ｉ．，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ １９４，ｐｐ １８２−１８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３；および、Ｈｉｎｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：１９２０に記載の手法を用いて形質転換され得る。
生成方法
本発明はまた：（ａ）ポリペプチドの生成を実施可能な条件下で、野生型形態でポリペプチドを生成する細胞を培養するステップ；および、任意選択で（ｂ）ポリペプチドを回収するステップを含む本発明のポリペプチドを生成する方法に関する。一態様において、細胞は、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞である。他の態様において、細胞は、テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）細胞である。一態様において、細胞は、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞である。一態様において、細胞はテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）細胞である。一態様において、細胞は、テルリバチルス・ゴリエンシス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）細胞である。
本発明はまた：（ａ）ポリペプチドの生成を実施可能な条件下で本発明の組換え宿主細胞を培養するステップ；および、任意選択で（ｂ）ポリペプチドを回収するステップを含む本発明のポリペプチドを生成する方法に関する。
宿主細胞は、技術分野において既知である方法を用いてポリペプチドの生成に好適な栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、好適な培地中ならびにポリペプチドの発現および／または単離が許容される条件下で、振盪フラスコ培養により、および、実験用もしくは産業用発酵槽における小規模もしくは大規模発酵（連続式、バッチ式、フェドバッチ式または固体状発酵を含む）により培養され得る。培養は、炭素および窒素源および無機塩を含む好適な栄養培地において、技術分野において公知である手法を用いて行われる。好適な媒体は、商業的な供給者から入手可能であるか、または、公開された組成に従って調製され得る（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログ）。ポリペプチドが栄養培地に分泌される場合、ポリペプチドは培地から直接回収可能である。ポリペプチドが分泌されない場合、細胞ライセートから回収可能である。
ポリペプチドは、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドに特異的な技術分野において公知である方法を用いて検出され得る。これらの検出方法として、限定するものではないが、特定の抗体の使用、酵素産物の形成、または、酵素基質の消失などが挙げられる。例えば、酵素アッセイを用いてポリペプチドの活性を判定してもよい。
ポリペプチドは技術分野において公知である方法を用いて回収され得る。例えば、ポリペプチドは、特にこれらに限定されないが、収集、遠心分離、ろ過、抽出、噴霧乾燥、蒸発または沈殿を含む従来の手法により栄養培地から回収され得る。一態様において、ポリペプチドを含む発酵ブロスが回収される。
ポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドを得るために、特にこれらに限定されないが、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、親和性、疎水性、クロマトフォーカシングおよびサイズ排除）、電気泳動的手法（例えば、分取等電点電気泳動）、較差溶解度（例えば、硫酸アンモニウム沈殿）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、または、抽出（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＪａｎｓｏｎおよびＲｙｄｅｎ編，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと）を含む技術分野において公知である多様な手法によって精製され得る。
代替的な態様においては、ポリペプチドは回収されず、ポリペプチドを発現する本発明の宿主細胞がポリペプチドのソースとして用いられ得る。
洗剤生成物の配合
クリーニング組成物は任意の好都合な形態、例えば、バー、均一錠剤、２層以上を有する錠剤、１つ以上の区画を有するパウチ、普通の、または圧縮した粉末、顆粒、ペースト、ゲル、または普通の、圧縮した、または濃縮した溶液であってもよい。パウチは単区画または多区画として構成することができる。パウチは、例えば水との接触前に組成物がパウチから放出されるのを許容しない、組成物の保持に好適な任意の形態、形状および材料であってもよい。パウチは、内部容積を囲い込む水溶性フィルムで作られる。前記内部容積はパウチの区画に分割することができる。好ましいフィルムはポリマー材料、好ましくはフィルム状またはシート状に形成されるポリマーである。好ましいポリマー、そのコポリマーまたは誘導体は、ポリアクリレート類、および水溶性アクリレートコポリマー類、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムデキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレート類、最も好ましくはポリビニルアルコールコポリマー類、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）が選択される。好ましくは、フィルム中のポリマー、例えばＰＶＡのレベルは少なくとも約６０％である。好ましい平均分子量は典型的には約２０，０００〜約１５０，０００となり得る。フィルムはまた、ポリラクチドおよびポリビニルアルコールなどの加水分解で分解可能な水溶性ポリマーブレンド（ＭｏｎｏＳｏｌ ＬＬＣ、Ｉｎｄｉａｎａ、ＵＳＡによって販売されているとおりの商品名Ｍ８６３０で知られる）＋グリセロール、エチレングリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールおよびこれらの混合物などの可塑剤などを含むブレンド組成物であってもよい。パウチは、水溶性フィルムで隔てられた固体の洗濯クリーニング組成物または一部の成分および／または液体のクリーニング組成物または一部の成分を含むことができる。液体成分用の区画は固体を入れる区画と組成が異なり得る：米国特許出願公開第２００９／００１１９７０ Ａ１号明細書。
洗剤原料は、水に溶解可能なパウチ内の区画によって、または錠剤の種々の層に互いに物理的に隔てられてもよい。それにより成分間における保管時の負の相互作用を回避することができる。区画の各々の溶解プロファイルを異ならせることによってもまた、洗浄溶液中の選択の成分の溶解に遅延を生じさせることができる。
単位用量に分かれていない液体またはゲル洗剤は、水性であって、典型的には２０重量％以上９５％以下の水、例えば約７０％以下の水、約６５％以下の水、約５５％以下の水、約４５％の水、約３５％以下の水を含有してもよい。水性液体またはゲル中には、限定なしに、アルカノール類、アミン類、ジオール類、エーテル類およびポリオール類を含めた他のタイプの液体が含まれてもよい。水性液体またはゲル洗剤は０〜３０％の有機溶媒を含有し得る。
液体またはゲル洗剤は非水性であってもよい。
固形洗濯石鹸
本発明のポリペプチドは、固形洗濯石鹸に添加して、洗濯物、布地および／または生地の手洗いに使用し得る。用語の固形洗濯石鹸には、洗濯石鹸、固形石鹸、複合化粧石鹸、合成化粧石鹸および洗剤石鹸が含まれる。固形石鹸の種類は、通常、それが含有する界面活性剤の種類が異なり、用語の固形洗濯石鹸には、脂肪酸由来の石鹸および／または合成石鹸を含有するものが含まれる。固形洗濯石鹸は、室温で固体であって液体、ゲルまたは粉末でない物理的形態を有する。用語の固形とは、時間が経っても大きく変化することのない物理的形態として定義され、すなわち、固形物体（例えば固形洗濯石鹸）が容器内に置かれた場合に、その固形物体が変化して、それが置かれている容器に充満することがない。固形石鹸は、典型的には棒型の固体であるが、丸または楕円などの他の固体形状であってもよい。固形洗濯石鹸は、１つ以上のさらなる酵素、ペプチドアルデヒド類（またはハイドロサルファイト付加物またはヘミアセタール付加物）などのプロテアーゼ阻害剤、ホウ酸、ホウ酸塩、ホウ砂および／または４−ホルミルフェニルボロン酸などのフェニルボロン酸誘導体、１つ以上の石鹸または合成界面活性剤、グリセリンなどのポリオール類、脂肪酸、クエン酸、酢酸および／またはギ酸などのｐＨ調整化合物、および／または一価カチオンおよび有機アニオンの塩を含有することができ、ここで一価カチオンは、例えばＮａ＋、Ｋ＋またはＮＨ４ ＋であってもよく、および有機アニオンは、例えばギ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩または乳酸塩であってもよく、従って一価カチオンおよび有機アニオンの塩は、例えばギ酸ナトリウムであってもよい。固形洗濯石鹸はまた、ＥＤＴＡおよびＨＥＤＰなどの錯化剤、香料および／または各種充填剤、界面活性剤、例えばアニオン性合成界面活性剤、ビルダー、ポリマー汚れ遊離剤、洗剤キレート剤、安定化剤、充填剤、染料、着色料、移染防止剤、アルコキシ化ポリカーボネート類、制泡剤、構造化剤、結合剤、浸出剤、漂白活性化剤、泥汚れ除去剤、再沈着防止剤、ポリマー分散剤、明色化剤、布地柔軟剤、香料および／または当該技術分野において公知の他の化合物も含有し得る。固形洗濯石鹸は、限定はされないが：ミキサー、プロッダー、例えば二段式真空プロッダー、押出機、カッター、ロゴスタンパー、冷却トンネルおよび包装機などの従来の固形洗濯石鹸製造設備で加工され得る。本発明は、いかなる単一の方法による固形洗濯石鹸の調製にも限定されない。加工の様々な段階で石鹸にプレミックスが添加されてもよい。例えば、石鹸、ヘキソサミニダーゼ、任意選択で１つ以上のさらなる酵素、プロテアーゼ阻害剤、ならびに一価カチオンおよび有機アニオンの塩を含有するプレミックスを調製し、次にその混合物をプロッダー混練する。ヘキソサミニダーゼおよび任意選択のさらなる酵素は、例えば液体形態でプロテアーゼ阻害剤と同時に添加してもよい。混合ステップおよびプロッダー混練ステップに加え、加工には、粉砕、押出、切断、スタンピング、冷却および／または包装ステップがさらに含まれ得る。
複合顆粒（ｃｏ−ｇｒａｎｕｌｅ）中における酵素の配合
本発明のポリペプチドは、顆粒、例えば１つ以上の酵素を組み合わせる複合顆粒として配合されてもよい。このとき各酵素がより多くの顆粒に存在することになり、洗剤中でより一様な酵素分布が確保される。これはまた、粒径が異なることに起因する異なる酵素の物理的な分離も低減する。洗剤工業用の多酵素複合顆粒状物質の作製方法が、ＩＰ．ｃｏｍ開示ＩＰＣＯＭ０００２００７３９Ｄに開示される。複合顆粒状物質を用いた酵素配合の別の例が国際公開第２０１３／１８８３３１号パンフレットに開示され、これは、（ａ）多酵素複合顆粒；（ｂ）１０ｗｔ未満のゼオライト（無水基準）；および（ｃ）１０ｗｔ未満のリン酸塩（無水基準）を含む洗剤組成物に関し、ここで前記酵素複合顆粒は１０〜９８ｗｔ％の吸湿成分を含み、および組成物は、２０〜８０ｗｔ％の洗剤吸湿成分をさらに含む。多酵素複合顆粒は、ヘキソサミニダーゼと、リパーゼ、セルラーゼ、キシログルカナーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペルオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、ラッカーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、セロビオースデヒドロゲナーゼ、キシラナーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、リケナーゼ、グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、アミラーゼ、およびこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の酵素とを含み得る。
本発明はさらに、以下のパラグラフに要約される：
１．モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を好ましくは含むヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドの、物品のディープクリーニングへの使用であって、物品が生地である、使用。
２．物品の粘着性を防止、低減または除去するための、パラグラフ１に記載の使用。
３．物品の染みを前処理するための、パラグラフ１または２のいずれかに記載の使用。
４．洗浄サイクル中の汚れの再沈着を防止、低減または除去するための、パラグラフ１〜３のいずれかに記載の使用。
５．物品への汚れの付着を防止、低減または除去するための、パラグラフ１〜４のいずれかに記載の使用。
６．物品の白色度を維持または改善するための、先行するパラグラフのいずれかに記載の使用。
７．物品から悪臭が低減または除去される、先行するパラグラフのいずれかに記載の使用。
８．表面が生地表面である、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の使用。
９．生地が、綿、綿／ポリエステル、ポリエステル、ポリアミド、ポリアクリルおよび／または絹で作られている、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の使用。
１０．ポリペプチドがパラグラフ４７〜６１のポリペプチドである、先行するパラグラフのいずれかに記載の使用。
１１．モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を好ましくは含む、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドと、補助成分とを含む組成物。
１２．ポリペプチドがパラグラフ４７〜６１のポリペプチドである、パラグラフ１１に記載の組成物。
１３．洗剤補助成分が、界面活性剤、ビルダー、凝集助剤、キレート剤、移染防止剤、酵素、酵素安定剤、酵素阻害剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素供給源、予め形成された過酸類、ポリマー分散剤、泥汚れ除去／再沈着防止剤、明色化剤、制泡剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、キャリア、ヒドロトロープ、ビルダーおよびコビルダー、布地色相調整剤（ｆａｂｒｉｃ ｈｕｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、消泡剤、分散剤、加工助剤、および／または顔料からなる群から選択される、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
１４．直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩類（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、分枝状アルキルベンゼンスルホン酸塩類（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホン酸塩類、α−オレフィンスルホン酸塩類（ＡＯＳ）、オレフィンスルホン酸塩類、アルケンスルホン酸塩類、アルカン−２，３−ジイルビス（硫酸塩類）、ヒドロキシアルカンスルホン酸塩類およびジスルホン酸塩類、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などのアルキル硫酸塩類（ＡＳ）、脂肪アルコール硫酸塩類（ＦＡＳ）、第一級アルコール硫酸塩類（ＰＡＳ）、アルコールエーテル硫酸塩類（ＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ）、第二級アルカンスルホン酸塩類（ＳＡＳ）、パラフィンスルホン酸塩類（ＰＳ）、エステルスルホン酸塩類、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル類、メチルエステルスルホン酸塩（ＭＥＳ）を含めたα−スルホ脂肪酸メチルエステル類（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキルまたはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸のジエステル類およびモノエステル類または脂肪酸塩（石鹸）、およびこれらの組み合わせから好ましくは選択される、約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約４０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約３０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約２０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％のアニオン性界面活性剤を含む、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
１５．クエン酸、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）およびこれらの混合物から好ましくは選択される、約１０ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の少なくとも１つのビルダーを含む、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
１６．ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびそれと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
１７．ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号７のアミノ酸配列またはそれと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するポリペプチドである、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
１８．ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸配列またはそれと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するポリペプチドである、パラグラフ１１〜１６のいずれかに記載の組成物。
１９．ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列またはそれと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するポリペプチドである、パラグラフ１１〜１６のいずれかに記載の組成物。
２０．ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列またはそれと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するポリペプチドである、パラグラフ１１〜１６のいずれかに記載の組成物。
２１．ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列またはそれと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するポリペプチドである、パラグラフ１１〜１６のいずれかに記載の組成物。
２２．約５ｗｔ％〜約４０ｗｔ％のノニオン性界面活性剤、および約０ｗｔ％〜約５ｗｔ％のアニオン性界面活性剤を含む、先行するパラグラフのいずれかに記載の組成物。
２３．ノニオン性界面活性剤が、アルコールエトキシレート類（ＡＥまたはＡＥＯ）、アルコールプロポキシレート類、プロポキシ化脂肪アルコール類（ＰＦＡ）、エトキシ化および／またはプロポキシ化脂肪酸アルキルエステル類などのアルコキシ化脂肪酸アルキルエステル類、アルキルフェノールエトキシレート類（ＡＰＥ）、ノニルフェノールエトキシレート類（ＮＰＥ）、アルキルポリグリコシド類（ＡＰＧ）、アルコキシ化アミン類、脂肪酸モノエタノールアミド類（ＦＡＭ）、脂肪酸ジエタノールアミド類（ＦＡＤＡ）、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド類（ＥＦＡＭ）、プロポキシ化脂肪酸モノエタノールアミド類（ＰＦＡＭ）、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド類、またはグルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（グルカミド類、ＧＡ、または脂肪酸グルカミド類、ＦＡＧＡ）およびこれらの組み合わせから選択される、パラグラフ２２に記載の組成物。
２４．プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼおよびオキシダーゼからなる群から選択される１つ以上の酵素をさらに含む、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
２５．酵素がプロテアーゼであり、プロテアーゼが動物、植物または微生物由来である、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
２６．プロテアーゼが化学的に修飾されている、またはプロテインエンジニアリングを受けている、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
２７．プロテアーゼがセリンプロテアーゼまたはメタロプロテアーゼ、好ましくはアルカリ微生物プロテアーゼまたはトリプシン様プロテアーゼである、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
２８．プロテアーゼが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、例えば、スブチリシンＮｏｖｏ、スブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、スブチリシン３０９、スブチリシン１４７、スブチリシン１６８、ウシ由来のトリプシン、ブタ由来のトリプシンおよびフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）プロテアーゼからなる群から選択される、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
２９．アシネトバクター属種（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）、アエロミクロビウム属種（Ａｅｒｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ ｓｐ．）、ブレブンディモナス属種（Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ ｓｐ．）、ミクロバクテリウム属種（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ）．、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）およびステノトロホモナス属種（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）からなる群から選択される細菌からのＥＰＳが表面上に付着するのを低減する能力、または細菌が付着している表面から細菌を遊離させる能力を有する、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
３０．バー、均一錠剤、２層以上の錠剤、１つ以上の区画を有するパウチ、普通の、または圧縮された粉末、顆粒、ペースト、ゲル、または普通の、圧縮された、または濃縮された液体である、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
３１．液体洗剤、粉末洗剤および顆粒洗剤組成物から選択されるクリーニング組成物である、先行する組成物パラグラフのいずれかに記載の組成物。
３２．ａ．パラグラフ４６〜５６のポリペプチドまたはパラグラフ１１〜３１のいずれかに記載の組成物を含む洗浄液に物品を曝露するステップ；
ｂ．少なくとも１つの洗浄サイクルを完了するステップ；および
ｃ．任意選択で物品をすすぐステップ
を含む、物品の洗濯方法であって、
ここで物品は生地である、方法。
３３．物品のディープクリーニング方法であって、物品が好ましくは生地であり、前記方法が、モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）またはＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を好ましくは含むポリペプチドを含む洗浄液に物品を曝露することを含み、ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に示されるポリペプチドと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、方法。
３４．洗浄液のｐＨが１〜１１の範囲である、パラグラフ３２または３３に記載の方法。
３５．洗浄液のｐＨが５．５〜１１の範囲、例えば７〜９の範囲、７〜８の範囲または７〜８．５の範囲である、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
３６．洗浄液の温度が５℃〜９５℃の範囲、または１０℃〜８０℃の範囲、１０℃〜７０℃の範囲、１０℃〜６０℃の範囲、１０℃〜５０℃の範囲、１５℃〜４０℃の範囲、２０℃〜４０℃の範囲、１５℃〜３０℃の範囲または２０℃〜３０℃の範囲である、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
３７．洗浄液の温度が約２０℃〜約４０℃である、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
３８．洗浄液の温度が約１５℃〜約３０℃である、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
３９．物品に存在する染みがパラグラフ４６〜６０のポリペプチドまたはパラグラフ１１〜３１のいずれかに記載の洗剤組成物で前処理される、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
４０．物品の粘着性が低減される、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
４１．汚れの再沈着が低減される、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
４２．物品への汚れの付着が低減または除去される、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
４３．物品の白色度が維持または改善される、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
４４．物品から悪臭が低減または除去される、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
４５．洗浄液中のヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドの濃度が洗浄液１リットル当たり少なくとも０．００１ｍｇのポリペプチド、例えば少なくとも０．０５ｍｇのタンパク質、または少なくとも１．０ｍｇのタンパク質、または少なくとも１．５ｍｇのタンパク質であり、任意選択で洗浄液中のポリペプチドの濃度が洗浄液１リットル当たり０．０００２ｍｇ／Ｌ〜２ｍｇ／Ｌ、例えば０．００２ｍｇ／Ｌ〜２ｍｇ／Ｌ、例えば０．２ｍｇ／Ｌ〜２ｍｇ／Ｌの範囲または０．００００１ｍｇ／Ｌ〜１０ｍｇ／Ｌの範囲または０．０００１ｍｇ／Ｌ〜１０ｍｇ／Ｌの範囲、または０．００１ｍｇ／Ｌ〜１０ｍｇ／Ｌの範囲、または０．０１ｍｇ／Ｌ〜１０ｍｇ／Ｌの範囲であり、任意選択で本発明のポリペプチドの濃度が総洗剤濃度の０．００００１％〜２ｗｔ％、例えば０．０００１〜０．１ｗｔ％、例えば０．０００５〜０．１ｗｔ％、例えば０．００１〜０．１ｗｔ％、例えば０．００１〜０．５ｗｔ％、例えば０．００２〜０．５ｗｔ％または０．０００２〜０．０９である、先行する方法パラグラフのいずれかに記載の方法。
４６．ａ．配列番号７、８、９、１０または１１に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリペプチド；
ｂ．低ストリンジェンシー条件下で、
ｉ．配列番号１、３、５、１２または１４の成熟型ポリペプチドコード配列、
ｉｉ．そのｃＤＮＡ配列、または
ｉｉｉ．（ｉ）または（ｉｉ）の完全長相補体
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド；
ｃ．配列番号１、３、５、１２または１４の成熟型ポリペプチドコード配列またはそのｃＤＮＡ配列と少なくとも６０％、例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド；
ｄ．１つ以上の位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１の成熟型ポリペプチドの変異体；および
ｅ．ヘキソサミニダーゼ活性を有する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）のポリペプチドの断片；および
ｆ．モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、ＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含むポリペプチド
からなる群から選択される、ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド。
４７．配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号１３または配列番号１５の成熟型ポリペプチド、または配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１に示されるポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ４６のポリペプチド。
４８．配列番号２の成熟型ポリペプチドまたは配列番号７に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ４６または４７のポリペプチド。
４９．配列番号４の成熟型ポリペプチドまたは配列番号８に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ４６または４７のポリペプチド。
５０．配列番号６の成熟型ポリペプチドまたは配列番号９に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ４６または４７のポリペプチド。
５１．配列番号１３の成熟型ポリペプチドまたは配列番号１０に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ４６または４７のポリペプチド。
５２．配列番号１５の成熟型ポリペプチドまたは配列番号１１に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ４６または４７のポリペプチド。
５３．低いストリンジェンシー条件下、低い〜中程度のストリンジェンシー条件下、中程度のストリンジェンシー条件下、中程度〜高いストリンジェンシー条件下、高いストリンジェンシー条件下、または極めて高いストリンジェンシー条件下で、
ｉ．配列番号１、３、５、１２または１４の成熟型ポリペプチドコード配列、
ｉｉ．そのｃＤＮＡ配列、または
ｉｉｉ．（ｉ）または（ｉｉ）の完全長相補体
とハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされる、パラグラフ４６〜５２に記載のポリペプチド。
５４．配列番号１、３、５、１２、１４の成熟型ポリペプチドコード配列またはそのｃＤＮＡ配列と少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる、パラグラフ４６〜５３のいずれかに記載のポリペプチド。
５５．配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１に示されるアミノ酸配列、または配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号１３または配列番号１５の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる、パラグラフ４６〜５４のいずれかに記載のポリペプチド。
５６．１つ以上の位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０または配列番号１１の変異体である、パラグラフ４６〜５５のいずれかに記載のポリペプチド。
５７．パラグラフ４６〜５６のいずれかに記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
５８．発現宿主におけるポリペプチドの産生を誘導する１つ以上の制御配列に作動可能に連結されたパラグラフ５７のポリヌクレオチドを含む核酸構築物または発現ベクター。
５９．ポリペプチドの産生を誘導する１つ以上の制御配列に作動可能に連結されたパラグラフ５７のポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞。
６０．その野生型形態でポリペプチドを産生する細胞をポリペプチドの産生につながる条件下で培養することを含む、パラグラフ４６〜５６のいずれかのポリペプチドの作製方法。
６１．ポリペプチドを回収することをさらに含む、パラグラフ６０の方法。
６２．パラグラフ５９の宿主細胞をポリペプチドの産生につながる条件下で培養することを含む、パラグラフ４６〜５６のいずれかに記載のポリペプチドの作製方法。
６３．ポリペプチドを回収することをさらに含む、パラグラフ６２の方法。
６４．パラグラフ５７のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたタンパク質をコードする遺伝子であって、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドにとって外来性である遺伝子を含む核酸構築物または発現ベクター。
６５．パラグラフ５７のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたタンパク質をコードする遺伝子であって、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドにとって外来性である遺伝子を含む組換え宿主細胞。
６６．パラグラフ６２のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたタンパク質をコードする遺伝子であって、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドにとって外来性である遺伝子を含む組換え宿主細胞をタンパク質の産生につながる条件下で培養することを含む、タンパク質の作製方法。
６７．タンパク質を回収することをさらに含む、パラグラフ６６の方法。
６８．第２の目的ポリペプチド；好ましくは目的酵素；より好ましくは目的分泌酵素；さらにより好ましくは、ヒドロラーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ、リアーゼ、オキシドレダクターゼ、またはトランスフェラーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含み；および最も好ましくは分泌酵素が、α−ガラクトシダーゼ、α−グルコシダーゼ、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、アスパラギナーゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、β−キシロシダーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドロラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エンドグルカナーゼ、エステラーゼ、緑色蛍光タンパク質、グルカノトランスフェラーゼ、グルコアミラーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、ムタナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、またはキシラナーゼである、パラグラフ６５の組換え宿主細胞。
６９．第２の目的ポリペプチドが宿主細胞にとって異種または同種である、パラグラフ６５の組換え宿主細胞。
７０．真菌宿主細胞；好ましくは、糸状真菌宿主細胞；より好ましくは、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、アウレオバシジウム属（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）、ブエルカンデラ属（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ）、セリポリオプシス属（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）、クリソスポリウム属（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、コプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）、コリオルス属（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、フィリバシジウム属（Ｆｉｌｉｂａｓｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、マグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、ミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、ネオカリマスチクス属（Ｎｅｏｃａｌｌｉｍａｓｔｉｘ）、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、パエシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ファネロケーテ属（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ）、フレビア属（Ｐｈｌｅｂｉａ）、ピロマイセス属（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）、プレウロツス属（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）、シゾフィルム属（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、テルモアスクス属（Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、トラメテス属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）、またはトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）細胞；最も好ましくは、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・フォエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｏｅｔｉｄｕｓ）、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・ジャポニクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、アスペルギルス・ニズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、ヤケイロタケ（Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ ａｄｕｓｔａ）、セリポリオプシス・アネイリナ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ａｎｅｉｒｉｎａ）、セリポリオプシス・カレギエア（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｃａｒｅｇｉｅａ）、セリポリオプシス・ギルベスセンス（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｇｉｌｖｅｓｃｅｎｓ）、セリポリオプシス・パンノシンタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｐａｎｎｏｃｉｎｔａ）、セリポリオプシス・リブロサ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｒｉｖｕｌｏｓａ）、セリポリオプシス・スブルファ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｓｕｂｒｕｆａ）、セリポリオプシス・スブベルミスポラ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉｏｐｓｉｓ ｓｕｂｖｅｒｍｉｓｐｏｒａ）、クリソスポリウム・イノプス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｉｎｏｐｓ）、クリソスポリウム・ケラチノフィルム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｋｅｒａｔｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、クリソスポリウム・ルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、クリソスポリウム・メルダリウム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｅｒｄａｒｉｕｍ）、クリソスポリウム・パンニコラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐａｎｎｉｃｏｌａ）、クリソスポリウム・クイーンスランジクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・トロピクム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｕｍ）、クリソスポリウム・ゾナツム（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｚｏｎａｔｕｍ）、コプリヌス・シネレウス（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ ｃｉｎｅｒｅｕｓ）、クリオルス・ヒルスツス（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ ｈｉｒｓｕｔｕｓ）、フザリウム・バクテリジオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｂａｃｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・セレアリス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｅｒｅａｌｉｓ）、フザリウム・クロークウェレンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ）、フザリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム・グラミネアルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウム・グラミヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｕｍ）、フザリウム・ヘテロスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・ネグンディ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｎｅｇｕｎｄｉ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・レチクラツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ）、フザリウム・ロゼウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｏｓｅｕｍ）、フザリウム・サムブシヌム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ）、フザリウム・サルコクロウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｒｃｏｃｈｒｏｕｍ）、フザリウム・スポロトリキオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・スルフレウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ）、フザリウム・トルロスム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ）、フザリウム・トリコテシオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、ムコール・ミエヘイ（Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）、ミセリオフトラ・テルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）、ペニシリウム・プルプロゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ）、ファネロケーテ・クリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）、フレビア・ラジアタ（Ｐｈｌｅｂｉａ ｒａｄｉａｔａ）、プレウロツス・エリンギイ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ）、チエラビア・テルレストリス（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）、トラメテス・ビロサ（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｉｌｌｏｓａ）、トラメテス・ベルシコロル（Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、トリコデルマ・ハルジアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、トリコデルマ・コニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、トリコデルマ・ロンギブラキアツム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、トリコデルマ・レエセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、またはトリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）細胞である、パラグラフ６５または６８に記載の組換え宿主細胞。
７１．細菌宿主細胞；好ましくは、原核宿主細胞；より好ましくは、グラム陽性宿主細胞；さらに好ましくは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ゲオバチルス属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、オセアノバチルス属（Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、またはストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）；ならびに最も好ましくは、バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、バチルス・シルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）、バチルス・ラウツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｕｔｕｓ）、バチルス・レンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルス・ステアロテルモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、およびバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）宿主細胞である、パラグラフ６５または６８に記載の組換え宿主細胞。
７２．パラグラフ３２〜４５のいずれかの方法に記載の洗濯される物品。
一部の好ましい実施形態は、以下のパラグラフに要約される：
１．ヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号２、４および６の成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択される、組成物１グラム当たり少なくとも０．０１ｍｇの活性酵素と、少なくとも１つの補助成分とを含む組成物。
２．ポリペプチドが、配列番号２、４および６の成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ１の組成物。
３．配列番号７もしくは配列番号２の成熟型ポリペプチドまたは配列番号８もしくは配列番号４の成熟型ポリペプチドまたは配列番号９もしくは配列番号６の成熟型ポリペプチドを含む、またはそれからなる、パラグラフ１または２のいずれかの組成物。
４．洗濯用または食器洗浄用組成物などのクリーニング組成物である、パラグラフ１〜３のいずれかに記載の組成物。
５．補助成分が、
ａ．少なくとも１つのビルダー、
ｂ．少なくとも１つの界面活性剤、および
ｃ．少なくとも１つの漂白剤成分
から選択される、パラグラフ４に記載の組成物。
６．組成物が少なくとも１つのビルダーを含み、ビルダーが、約０〜６５重量％、好ましくは約４０〜６５重量％、特に約２０〜６５重量％、特に１０重量％〜５０重量％の量で添加され、およびビルダーが、リン酸塩類、クエン酸ナトリウムビルダー、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、ナトリウムおよびゼオライト類の中から選択される、パラグラフ５に記載の組成物。
７．ビルダーが、クエン酸、メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＭＧＤＡ）および／またはグルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸（ＧＬＤＡ）およびこれらの混合物から選択される、パラグラフ６に記載の組成物。
８．１〜４０ｗｔ％、好ましくは０．５〜３０ｗｔ％の少なくとも１つの漂白剤成分を含み、漂白剤成分が過炭酸塩および漂白触媒、好ましくはマンガン化合物を含む、先行するパラグラフのいずれかに記載の組成物。
９．少なくとも１つの漂白剤成分が過酸化物、好ましくは過炭酸塩（ｐｅｒｃａｂｏｎａｔｅ）および触媒、好ましくは１，４，７−トリメチル−１，４，７−トリアザシクロノナンまたは酢酸マンガン（ＩＩ）四水和物（ＭｎＴＡＣＮ）などの金属含有漂白触媒である、パラグラフ８に記載の組成物。
１０．組成物が少なくとも１つの界面活性剤を含み、界面活性剤がアニオン性および／またはノニオン性である、先行するパラグラフのいずれかに記載の組成物。
１１．約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約４０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約３０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約２０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％のアニオン性界面活性剤を含む、パラグラフ１０に記載の組成物。
１２．約５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約４０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約３０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約２０ｗｔ％、約５ｗｔ％〜約１０ｗｔ％のノニオン性界面活性剤を含む、パラグラフ１０または１１に記載の組成物。
１３．アニオン性界面活性剤が、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩類（ＬＡＳ）、ＬＡＳの異性体、アルコールエーテル硫酸塩（ＡＥＯ、ＡＥＯＳ）およびラウリルエーテル硫酸ナトリウムおよびラウレス硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）から選択される、パラグラフ１０〜１２のいずれかに記載の組成物。
１４．ノニオン性界面活性剤が、アルコールエトキシレート類（ＡＥまたはＡＥＯ）、アルコールプロポキシレート類、アルコールプロポキシレート類、プロポキシ化脂肪アルコール類（ＰＦＡ）、エトキシ化および／またはプロポキシ化脂肪酸アルキルエステル類などのアルコキシ化脂肪酸アルキルエステル類、アルキルフェノールエトキシレート類（ＡＰＥ）、ノニルフェノールエトキシレート類（ＮＰＥ）、アルキルポリグリコシド類（ＡＰＧ）、アルコキシ化アミン類、脂肪酸モノエタノールアミド類（ＦＡＭ）、脂肪酸ジエタノールアミド類（ＦＡＤＡ）、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド類（ＥＦＡＭ）、プロポキシ化脂肪酸モノエタノールアミド類（ＰＦＡＭ）、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド類、グルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（グルカミド類、ＧＡ、または脂肪酸グルカミド類、ＦＡＧＡ）およびこれらの組み合わせから選択される、パラグラフ１０〜１３のいずれかに記載の組成物。
１５．パラグラフ１〜１４のいずれかの組成物の、物品のディープクリーニングへの使用であって、物品が生地である、使用。
１６．配列番号２、４および６の成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含む洗浄液またはパラグラフ１〜１４のいずれかに記載の洗剤組成物に物品を曝露するステップ；
少なくとも１つの洗浄サイクルを完了するステップ；および
任意選択で物品をすすぐステップ
を含む、物品を洗濯するための洗濯方法であって、
物品が生地である、方法。
１７．テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの使用であって、ポリペプチドが洗濯および／または食器洗浄などのクリーニング作業においてヘキソサミニダーゼ活性を有する、使用。
１８．テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの使用であって、ポリペプチドが物品のディープクリーニングへのヘキソサミニダーゼ活性を有し、物品が生地である、使用。
１９．物品の粘着性を防止、低減または除去するための、パラグラフ１７に記載の使用。
２０．洗浄サイクル中の汚れの再沈着を防止、低減または除去するための、パラグラフ１７または１８のいずれかに記載の使用。
２１．ポリペプチドが、配列番号２、４および６の成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドおよび少なくとも１つの補助成分からなる群から選択される、先行するパラグラフのいずれかに記載の使用。
２２．ポリペプチドが、配列番号２、４および６の成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、パラグラフ２１の使用。
本明細書全体を通じて提供されるいずれの上限数値も、それより低い限界数値が本明細書に明示的に記載されたものとして、かかるより低い限界数値を全て包含することが理解されなければならない。本明細書全体を通じて提供されるいずれの下限数値も、それより高い限界数値が本明細書に明示的に記載されたものとして、かかるより高い限界数値を全て包含するものとする。本明細書全体を通じて提供されるいずれの数値範囲も、かかるより広い数値範囲内にあるより狭い数値の範囲が全て本明細書に明示的に記載されたものとして、かかるより狭い数値範囲を全て包含するものとする。
アッセイおよび洗剤組成物
洗剤組成物
以下に挙げる洗剤組成物を本発明の酵素と組み合わせて使用することができる。
Ｂｉｏｔｅｘ ｂｌａｃｋ（液体）
５〜１５％アニオン性界面活性剤、＜５％ノニオン性界面活性剤、香料、酵素、ＤＭＤＭおよびヒダントイン。
Ａｒｉｅｌ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｗｈｉｔｅ ＆ Ｃｏｌｏｒの組成物（液体洗剤組成物）
水、アルコールエトキシ硫酸塩、アルコールエトキシレート、アミノオキシド、クエン酸、Ｃ１２〜１８抜頭（ｔｏｐｐｅｄ）パーム核脂肪酸、プロテアーゼ、グリコシダーゼ、アミラーゼ、エタノール、１，２−プロパンジオール、ギ酸ナトリウム、塩化カルシウム、水酸化ナトリウム、シリコーン乳剤、トランス−硫酸化ＥＨＤＱ（成分は、降順で記載する）。
ＷＦＫ ＩＥＣ−Ａモデル洗剤の組成物（粉末）
成分：直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム８．８％、エトキシル化脂肪族アルコールＣ１２〜１８（７ ＥＯ）４．７％、ナトリウム石鹸３．２％、消泡ＤＣ２−４２４８Ｓ３．９％、ケイ酸アルミニウムナトリウムゼオライト４Ａ ２８．３％、炭酸ナトリウム１１．６％、アクリル酸およびマレイン酸からのコポリマーのナトリウム塩（Ｓｏｋａｌａｎ ＣＰ５）２．４％、ケイ酸ナトリウム３．０％、カルボキシメチルセルロース１．２％、Ｄｅｑｕｅｓｔ ２０６６ ２．８％、光学増白剤０．２％、硫酸ナトリウム６．５％、プロテアーゼ０．４％。
モデル洗剤Ａの組成物（液体）
成分：１２％ＬＡＳ、１１％ＡＥＯ Ｂｉｏｓｏｆｔ Ｎ２５−７（ＮＩ）、５％ＡＥＯＳ（ＳＬＥＳ）、６％ＭＰＧ（モノプロピレングリコール）、３％エタノール、３％ＴＥＡ、２．７５％ココナッツソープ、２．７５％ダイズソープ、２％グリセロール、２％水酸化ナトリウム、２％クエン酸ナトリウム、１％ギ酸ナトリウム、０．２％ＤＴＭＰＡおよび０．２％ＰＣＡ（パーセンテージは全てｗ／ｗである）
モデル洗剤Ｎ（液体）の組成
成分：ＮａＯＨ ０．８７％、ＭＰＧ（モノプロピレングリコール（ｍｏｎｏｐｒｏｐｙｌｅｎｇｌｙｃｏｌ））６％、グリセロール２％、ダイズソープ２．７５％、ココナッツソープ２．７５％、ＰＣＡ（Ｓｏｋａｌｏｎ ＣＰ−５）０．２％、ＡＥＯ Ｂｉｏｓｏｆｔ Ｎ２５−７（ＮＩ）１６％、ギ酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｆｏｒｍｉａｔｅ）１％、クエン酸ナトリウム２％、ＤＴＭＰＡ０．２％、エタノール（９６％）３％、ＮａＯＨまたはクエン酸でｐＨ調整、水を加えて１００％にする（全てのパーセンテージはｗ／ｗ（重量体積）である。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｇｅｌの組成
成分：１５〜３０％アニオン性界面活性剤、５〜１５％ノニオン性界面活性剤、＜５％ホスホン酸塩、石鹸、アミルシンナム、ブチルフェニルメチルプロピオナール、リモネン、ゲラニオール（ｇｅｒｎａｉｏｌ）、光学的明色化剤、酵素。
Ａｒｉｅｌ Ａｃｔｉｌｉｆｔの組成物（液体）
成分：５〜１５％アニオン性界面活性剤；＜５％ノニオン性界面活性剤、ホスホン酸塩、石鹸；酵素、光学増白剤、ベンズイソチアゾリノン、メチルイソチアゾリノン、香料、α−イソメチルイオノン、シトロネロール、ゲラニオール、リナロール。
Ａｒｉｅｌ Ａｃｔｉｌｉｆｔ Ｃｏｌｏｕｒ＆Ｓｔｙｌｅの組成物（液体）
成分：５〜１５％アニオン性界面活性剤；＜５％ノニオン性界面活性剤、ホスホン酸塩、石鹸；酵素、香料、ベンズイソチアゾリノン、メチルイソチアゾリノン、α−イソメチルイオノン、ブチルフェニルメチルプロピオナール、シトロネロール、ゲラニオール、リナロール。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｓｍａｌｌ ＆ Ｍｉｇｈｔｙの組成物（液体）
成分：１５〜３０％のアニオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、５〜１５％の石鹸、＜５％のポリカルボキシレート、香料、ホスホン酸塩、光学増白剤。
Ｐｅｒｓｉｌ ２ ｉｎ １ ｗｉｔｈ Ｃｏｍｆｏｒｔ Ｐａｓｓｉｏｎ Ｆｌｏｗｅｒ Ｐｏｗｄｅｒ
硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ベントナイト、炭酸ナトリウム過酸化水素化物、ケイ酸ナトリウム、ゼオライト、水、クエン酸、ＴＡＥＤ、Ｃ１２〜１５パレス（Ｐａｒｅｔｈ）−７、ステアリン酸、香料、ナトリウムアクリル酸／ＭＡコポリマー、セルロースゴム、加工トウモロコシデンプン、塩化ナトリウム、エチドロン酸四ナトリウム、カルシウムナトリウムＥＤＴＭＰ、アニリノモルホリノトリアジニルアミノスチルベンゼンスルホン酸二ナトリウム、重炭酸ナトリウム、フェニルプロピルエチルメチコン、ブチルフェニルメチルプロピオナール、ステアリン酸グリセリル、炭酸カルシウム、ポリアクリル酸ナトリウム、α−イソメチルイオノン、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、セルロース、プロテアーゼ、リモネン、ＰＥＧ−７５、二酸化チタン、デキストリン、スクロース、ポリアリールスルホン酸ナトリウム、ＣＩ１２４９０、ＣＩ４５１００、ＣＩ４２０９０、チオ硫酸ナトリウム、ＣＩ６１５８５。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｏｗｄｅｒ
スクロース、ソルビトール、ケイ酸アルミニウム、ポリオキシメチレンメラミン、ポリアリールスルホン酸ナトリウム、ＣＩ６１５８５、ＣＩ４５１００、リパーゼ、アミラーゼ、キサンタンゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ＣＩ１２４９０、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ＣＩ４２０９０、マンナナーゼ、ＣＩ１１６８０、エチドロン酸、四ナトリウムＥＤＴＡ。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔａｂｌｅｔｓ
炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム過酸化水素化物、重炭酸ナトリウム、ゼオライト、水、ケイ酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、セルロース、ＴＡＥＤ、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ヘミセルロース、リグニン、ラウリルグルコシド、ナトリウムアクリル酸／ＭＡコポリマー、ベントナイト、塩化ナトリウム、香料、エチドロン酸四ナトリウム、硫酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ジメチコン、アニリノモルホリノトリアジニルアミノスチルベンゼンスルホン酸二ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸、トリメチルシロキシケイ酸、炭酸カルシウム、セルロース、ＰＥＧ−７５、二酸化チタン、デキストリン、プロテアーゼ、加工トウモロコシデンプン、スクロース、ＣＩ１２４９０、ポリアリールスルホン酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アミラーゼ、カオリン。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｃｏｌｏｕｒ Ｃａｒｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｏｗｄｅｒ
スブチリシン、イミダゾリジノン、ヘキシルシンナマル、スクロース、ソルビトール、ケイ酸アルミニウム、ポリオキシメチレンメラミン、ＣＩ６１５８５、ＣＩ４５１００、リパーゼ、アミラーゼ、キサンタンゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ＣＩ１２４９０、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ＣＩ４２０９０、マンナナーゼ、ＣＩ１１６８０、エチドロン酸、四ナトリウムＥＤＴＡ。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｃｏｌｏｕｒ Ｃａｒｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔａｂｌｅｔｓ
重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ゼオライト、水、ケイ酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、セルロースゴム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ラウリルグルコシド、塩化ナトリウム、ナトリウムアクリル酸／ＭＡコポリマー、香料、チオグリコール酸ナトリウム、ＰＶＰ、硫酸ナトリウム、エチドロン酸四ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ジメチコン、ベントナイト、ドデシルベンゼンスルホン酸、トリメチルシロキシケイ酸、炭酸カルシウム、セルロース、ＰＥＧ−７５、二酸化チタン、デキストリン、プロテアーゼ、加工トウモロコシデンプン、スクロース、チオ硫酸ナトリウム、アミラーゼ、ＣＩ７４１６０、カオリン。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｏｎ Ｃａｐｓｕｌｅｓ Ｂｉｏ
ＭＥＡ−ドデシルベンゼンスルホン酸塩、ＭＥＡ−水添ヤシ脂肪酸塩、Ｃ１２〜１５パレス−７、ジプロピレングリコール、水、エチドロン酸四ナトリウム、ポリビニルアルコール、グリセリン、アジリジン、エトキシル化ホモポリマー、プロピレングリコール、香料、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸ナトリウム、ソルビトール、ＭＥＡ−硫酸塩、エタノールアミン、スブチリシン、グリコール、ブチルフェニルメチルプロピオナール、ボロン酸、（４−ホルミルフェニル）、ヘキシルシンナマル、リモネン、リナルール、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、α−イソメチルイオノン、ゲラニオール、アミラーゼ、ポリマーブルー着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｂｌｕｅ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）、ポリマーイエロー着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）、タルク、塩化ナトリウム、ベンズイソチアゾリノン、マンナナーゼ、安息香酸デナトニウム。
Ｐｅｒｓｉｌ ２ ｉｎ １ ｗｉｔｈ Ｃｏｍｆｏｒｔ Ｓｕｎｓｈｉｎｙ Ｄａｙｓ Ｐｏｗｄｅｒ
硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ベントナイト、炭酸ナトリウム過酸化水素化物、ケイ酸ナトリウム、ゼオライト、水、クエン酸、ＴＡＥＤ、Ｃ１２〜１５パレス−７、香料、ステアリン酸、ナトリウムアクリル酸／ＭＡコポリマー、セルロースゴム、加工トウモロコシデンプン、塩化ナトリウム、エチドロン酸四ナトリウム、カルシウムナトリウムＥＤＴＭＰ、アニリノモルホリノトリアジニルアミノスチルベンゼンスルホン酸二ナトリウム、重炭酸ナトリウム、フェニルプロピルエチルメチコン、ブチルフェニルメチルプロピオナール、ステアリン酸グリセリル、炭酸カルシウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ゲラニオール、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、セルロース、プロテアーゼ、ＰＥＧ−７５、二酸化チタン、デキストリン、スクロース、ポリアリールスルホン酸ナトリウム、ＣＩ１２４９０、ＣＩ４５１００、ＣＩ４２０９０、チオ硫酸ナトリウム、ＣＩ６１５８５。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｓｍａｌｌ ＆ Ｍｉｇｈｔｙ ２ ｉｎ １ ｗｉｔｈ Ｃｏｍｆｏｒｔ Ｓｕｎｓｈｉｎｙ Ｄａｙｓ
水、Ｃ１２〜１５パレス−７、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、プロピレングリコール、水添ヤシ脂肪酸ナトリウム、トリエタノールアミン、グリセリン、ＴＥＡ−水添ヤシ脂肪酸ナトリウム、香料、塩化ナトリウム、ポリクオタニウム−１０、ＰＶＰ、ポリマーピンク着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｐｉｎｋ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）、硫酸ナトリウム、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、ブチルフェニルメチルプロピオナール、スチレン／アクリレートコポリマー、ヘキシルシンナマル、シトロネロール、オイゲノール、ポリビニルアルコール、酢酸ナトリウム、イソプロピルアルコール、ポリマーイエロー着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）、ラウリル硫酸ナトリウム。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｓｍａｌｌ ＆ Ｍｉｇｈｔｙ Ｂｉｏ
水、ＭＥＡ−ドデシルベンゼンスルホン酸塩、プロピレングリコール、ラウレス硫酸ナトリウム、Ｃ１２〜１５パレス−７、ＴＥＡ−水添ヤシ脂肪酸塩、ＭＥＡ−クエン酸塩、エトキシル化アジリジンホモポリマー、ＭＥＡ−エチドロン酸塩、トリエタノールアミン、香料、アクリレートコポリマー、ソルビトール、ＭＥＡ−硫酸塩、亜硫酸ナトリウム、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、ブチルフェニルメチルプロピオナール、スチレン／アクリレートコポリマー、シトロネロール、硫酸ナトリウム、ペプチド、塩、発酵（工程）からの糖、スブチリシン、グリセリン、ボロン酸、（４−ホルミルフェニル）、ゲラニオール、ペクチン酸リアーゼ、アミラーゼ、ラウリル硫酸ナトリウム、マンナナーゼ、ＣＩ４２０５１。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｓｍａｌｌ ＆ Ｍｉｇｈｔｙ Ｃａｐｓｕｌｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ＭＥＡ−ドデシルベンゼンスルホン酸塩、ＭＥＡ−水添ヤシ脂肪酸塩、Ｃ１２〜１５パレス−７、ジプロピレングリコール、水、グリセリン、ポリビニルアルコール、香料、エトキシル化アジリジンホモポリマー、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸ナトリウム、プロピレングリコール、ソルビトール、ＭＥＡ−硫酸塩、エタノールアミン、スブチリシン、グリオール、ブチルフェニルメチルプロピオナール、ヘキシルシンナマル、デンプン、ボロン酸、（４−ホルミルフェニル）、リモネン、リナルール、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、α−イソメチルイオノン、ゲラニオール、アミラーゼ、タルク、ポリマーブルー着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｂｌｕｅ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）、塩化ナトリウム、ベンズイソチアゾリノン、安息香酸デナトニウム、ポリマーイエロー着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）、マンナナーゼ。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｓｍａｌｌ ＆ Ｍｉｇｈｔｙ Ｃａｐｓｕｌｅｓ Ｃｏｌｏｕｒ Ｃａｒｅ
ＭＥＡ−ドデシルベンゼンスルホン酸塩、ＭＥＡ−水添ヤシ脂肪酸塩、Ｃ１２〜１５パレス−７、ジプロピレングリコール、水、グリセリン、ポリビニルアルコール、香料、エトキシル化アジリジンホモポリマー、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸ナトリウム、プロピレングリコール、ＭＥＡ−硫酸塩、エタノールアミン、ＰＶＰ、ソルビトール、ブチルフェニルメチルプロピオナール、スブチリシン、ヘキシルシンナマル、デンプン、リモネン、リナルール、ボロン酸、（４−ホルミルフェニル）、α−イソメチルイオノン、ゲラニオール、タルク、ポリマーブルー着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｂｌｕｅ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）、安息香酸デナトニウム、ポリマーイエロー着色剤（Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｙｅｌｌｏｗ Ｃｏｌｏｕｒａｎｔ）。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｓｍａｌｌ ＆ Ｍｉｇｈｔｙ Ｃｏｌｏｕｒ Ｃａｒｅ
水、ＭＥＡ−ドデシルベンゼンスルホン酸塩、プロピレングリコール、ラウレス硫酸ナトリウム、Ｃ１２〜１５パレス−７、ＴＥＡ−水添ヤシ脂肪酸塩、ＭＥＡ−クエン酸塩、エトキシル化アジリジンホモポリマー、ＭＥＡ−エチドロン酸塩、トリエタノールアミン、香料、アクリレートコポリマー、ソルビトール、ＭＥＡ−硫酸塩、亜硫酸ナトリウム、グリセリン、ブチルフェニルメチルプロピオナール、シトロネロール、硫酸ナトリウム、ペプチド、塩、発酵（工程）からの糖、スチレン／アクリレートコポリマー、スブチリシン、ボロン酸、（４−ホルミルフェニル）、ゲラニオール、ペクチン酸リアーゼ、アミラーゼ、ラウリル硫酸ナトリウム、マンナナーゼ、ＣＩ６１５８５、ＣＩ４５１００。
Ｆａｉｒｙ Ｎｏｎ Ｂｉｏの組成物（液体）
成分：１５〜３０％アニオン性界面活性剤、５〜１５％ノニオン性界面活性剤、石鹸、ベンズイソチアゾリノン、メチルイソチアゾリノン、香料。
モデル洗剤Ｔの組成物（粉末）
成分：１１％ＬＡＳ、２％ＡＳ／ＡＥＯＳ、２％石鹸、３％ＡＥＯ、１５．１５％炭酸ナトリウム、３％ケイ酸ナトリウム、１８．７５％ゼオライト、０．１５％キレート剤、２％クエン酸ナトリウム、１．６５％ＡＡ／ＭＡコポリマー、２．５％ＣＭＣおよび０．５％ＳＲＰ（パーセンテージは全てｗ／ｗである）。
モデル洗剤Ｘの組成物（粉末）
成分：１６．５％のＬＡＳ、１５％のゼオライト、１２％の二ケイ酸ナトリウム、２０％の炭酸ナトリウム、１％のソカラン、３５．５％の硫酸ナトリウム（パーセンテージは全てｗ／ｗである）。
Ａｒｉｅｌ Ａｃｔｉｌｉｆｔ Ｃｏｌｏｕｒ＆Ｓｔｙｌｅの組成物（粉末）
成分：５〜３０％アニオン性界面活性剤、＜５％ノニオン性界面活性剤、ホスホン酸塩、ポリカルボキシレート、ゼオライト；酵素、香料、ヘキシルシンナマル。
Ａｒｉｅｌ Ａｃｔｉｌｉｆｔの組成物（粉末）
成分：５〜１５％アニオン性界面活性剤、酸素系漂白剤、＜５％ノニオン性界面活性剤、ホスホン酸塩、ポリカルボキシレート、ゼオライト、光学増白剤、酵素、香料、ブチルフェニルメチルプロピオナール、クーマリン、ヘキシルシンナマル。
Ｐｅｒｓｉｌ Ｍｅｇａｐｅｒｌｓの組成物（粉末）
成分：１５〜３０％の下記成分：アニオン性界面活性剤、酸素系漂白剤およびゼオライト、５％未満の下記成分：ノニオン性界面活性剤、ホスホン酸塩、ポリカルボキシレート、石鹸、その他の成分：香料、ヘキシルシンナマル、サリチル酸ベンジル、リナロール、光学増白剤、酵素およびシトロネロール。
Ｇｒａｉｎ Ｌｉｑｕｉｄ，Ｏｒｉｇｉｎａｌ：
成分：水、アルコールエトキシ硫酸塩、ジエチレングリコール、アルコールエトキシレート、エタノールアミン、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ナトリウム脂肪酸、ポリエチレンイミンエトキシレート、クエン酸、ボラックス（Ｂｏｒａｘ）、ナトリウムクメンスルホン酸塩、プロピレングリコール、ＤＴＰＡ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ジプロピルエチルテトラミン、水酸化ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、ジメチコン、アミラーゼ、プロテアーゼ、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）、水添ヒマシ油、芳香剤。
Ｔｉｄｅ Ｌｉｑｕｉｄ，Ｏｒｉｇｉｎａｌ：
成分：直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、プロピレングリコール、クエン酸、水酸化ナトリウム、ボラックス、エタノールアミン、エタノール、アルコール硫酸塩、ポリエチレンイミンエトキシレート、ナトリウム脂肪酸、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、プロテアーゼ、ジエチレングリコール、ラウレス−９、アルキルジメチルアミンオキシド、芳香剤、アミラーゼ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ＤＴＰＡ、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、ポリエチレングリコール４０００、マンナナーゼ、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、ジメチコン。
Ｌｉｑｕｉｄ Ｔｉｄｅ、Ｆｒｅｅ ａｎｄ Ｇｅｎｔｌｅ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、プロピレングリコール、ボラックス、エタノール、直鎖アルキルベンゼンスルホンナトリウム、塩、ポリエチレンイミンエトキシレート、ジエチレングリコール、トランス硫酸化およびエトキシル化ヘキサメチレンジアミン、アルコールエトキシレート、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ＭＥＡ塩、ギ酸ナトリウム、アルキル硫酸ナトリウム、ＤＴＰＡ、アミンオキシド、ギ酸カルシウム、二ナトリウムジアミノスチルベン、ジスルホン酸塩、アミラーゼ、プロテアーゼ、ジメチコン、ベンズイソチアゾリノン。
Ｔｉｄｅ Ｃｏｌｄｗａｔｅｒ Ｌｉｑｕｉｄ、Ｆｒｅｓｈ Ｓｃｅｎｔ：
水、アルコールエトキシ硫酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノールアミン、クエン酸、ボラックス（Ｂｏｒａｘ）、硫酸アルコール、水酸化ナトリウム、ポリエチレンイミン、エトキシレート、ナトリウム脂肪酸、エタノール、プロテアーゼ、ラウレス−９、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、ラウラミンオキシド、ナトリウムクメン、スルホン酸塩、芳香剤、ＤＴＰＡ、アミラーゼ、二ナトリウム、ジアミノスチルベン、ジスルホン酸塩、ギ酸ナトリウム、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、ギ酸カルシウム、ポリエチレングリコール４０００、マンナナーゼ、ペクチナーゼ、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、ジメチコン。
Ｔｉｄｅ ＴＯＴＡＬＣＡＲＥ（商標）Ｌｉｑｕｉｄ，Ｃｏｏｌ Ｃｏｔｔｏｎ：
水、アルコールエトキシ硫酸塩、プロピレングリコール、ナトリウム脂肪酸、塩化ラウトリモニウム、エタノール、水酸化ナトリウム、クメンスルホン酸ナトリウム、クエン酸、エタノールアミン、ジエチレングリコール、シリコーンポリエーテル、ボラックス、芳香剤、ポリエチレンイミンエトキシレート、プロテアーゼ、ラウレス−９、ＤＴＰＡ、ポリアクリルアミドクオタニウム塩化物、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ギ酸ナトリウム、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｏｒａｎｇｅ、ジプロピルエチレンテトラアミン、ジメチコン、セルラーゼ。
Ｌｉｑｕｉｄ Ｔｉｄｅ Ｐｌｕｓ Ｂｌｅａｃｈ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ（商標），Ｖｉｖｉｄ Ｗｈｉｔｅ ａｎｄ Ｂｒｉｇｈｔ，Ｏｒｉｇｉｎａｌ ａｎｄ Ｃｌｅａｎ Ｂｒｅｅｚｅ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、アルキル硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ＭＥＡ塩、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミン エトキシレート、エタノール、ナトリウム脂肪酸、エタノールアミン、ラウラミンオキシド、ボラックス、ラウレス−９、ＤＴＰＡ、クメンスルホン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ナトリウム塩、硫酸アルコール、水酸化ナトリウム、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、芳香剤、アミラーゼ、プロテアーゼ、マンナナーゼ、ペクチナーゼ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ベンズイソチアゾリノン、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、ジメチコン、ジプロピルエチルテトラアミン。
Ｌｉｑｕｉｄ Ｔｉｄｅ ＨＥ，Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ｓｃｅｎｔ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、アルキル硫酸ナトリウム、アルコールエトキシレート、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ＭＥＡ塩、ナトリウム脂肪酸、ポリエチレンイミンエトキシレート、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、ボラックス、ポリエチレンイミン、エトキシレートプロポキシレート、エタノール、クメンスルホン酸ナトリウム、芳香剤、ＤＴＰＡ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、マンナナーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、ラウラミンオキシド、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、ジメチコン／ポリジメチルシリコーン。
Ｔｉｄｅ ＴＯＴＡＬＣＡＲＥ ＨＥ Ｌｉｑｕｉｄ，ｒｅｎｅｗｉｎｇ Ｒａｉｎ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルコールエトキシレート、クエン酸、エタノールアミン、ナトリウム脂肪酸、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、ボラックス、ポチエチレンイミンエトキシレート、シリコーンポリエーテル、エタノール、プロテアーゼ、クメンスルホン酸ナトリウム、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、ラウレス−９、芳香剤、アミラーゼ、ＤＴＰＡ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、マンナナーゼ、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｏｒａｎｇｅ、ジメチコン、ポリアクリルアミドクオタニウム塩化物、セルラーゼ、ジプロピルエチルテトラアミン。
Ｔｉｄｅ Ｌｉｑｕｉｄ ＨＥ Ｆｒｅｅ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ジエチレングリコール、クエン酸モノエタノールアミン、ギ酸ナトリウム、プロピレングリコール、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、エタノールアミン、エタノール、ポリエチレンイミンエトキシレート、アミラーゼ、ベンズイソチアゾリン、ボラックス、ギ酸カルシウム、クエン酸、ジエチレントリアミン五酢酸ナトリウム、ジメチコン、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ラウレス−９、マンナナーゼ、プロテアーゼ、クメンスルホン酸ナトリウム、ナトリウム脂肪酸。
Ｔｉｄｅ Ｃｏｌｄｗａｔｅｒ ＨＥ Ｌｉｑｕｉｄ，Ｆｒｅｓｈ Ｓｃｅｎｔ：
水、アルコールエトキシ硫酸塩、ＭＥＡクエン酸塩、硫酸アルコール、アルコールエトキシレート、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩ＭＥＡ、ナトリウム脂肪酸、ポリエチレンイミンエトキシレート、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、ボラックス、ポリエチレンイミンエトキシレートプロポキシレート、エタノール、クメンスルホン酸ナトリウム、芳香剤、ＤＴＰＡ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、プロテアーゼ、マンナナーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、ラウラミンオキシド、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、ジメチコン。
Ｔｉｄｅ ｆｏｒ Ｃｏｌｄｗａｔｅｒ ＨＥ Ｆｒｅｅ Ｌｉｑｕｉｄ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ナトリウム塩、アルコールエトキシレート、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ＭＥＡ塩、ナトリウム脂肪酸、ポリエチレンイミンエトキシレート、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、ボラックス、プロテアーゼ、ポリエチレンイミンエトキシレートプロポキシレート、エタノール、クメンスルホン酸ナトリウム、アミラーゼ、クエン酸、ＤＴＰＡ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、ジメチコン。
Ｔｉｄｅ Ｓｉｍｐｌｙ Ｃｌｅａｎ ＆ Ｆｒｅｓｈ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩ナトリウム／ＭＥＡ塩、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、ギ酸ナトリウム、エタノール、ボラックス、ナトリウム脂肪酸、芳香剤、ラウラミンオキシド、ＤＴＰＡ、ポリエチレンアミンエトキシレート、ギ酸カルシウム、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ジメチコン、テトラミン、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ。
Ｔｉｄｅ Ｐｏｄｓ，Ｏｃｅａｎ Ｍｉｓｔ，Ｍｙｓｔｉｃ Ｆｏｒｅｓｔ，Ｓｐｒｉｎｇ Ｍｅａｄｏｗ：
直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、Ｃ１２〜１６パレス−９、プロピレングリコール、アルコールエトキシ硫酸塩、水、ポリエチレンイミンエトキシレート、グリセリン、脂肪酸塩、ＰＥＧ−１３６ポリ酢酸ビニル、エチレンジアミンジコハク酸塩、モノエタノールアミンクエン酸塩、亜硫酸水素ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸ナトリウム、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、ギ酸カルシウム、マンナナーゼ、エキシログルカナーゼ、ギ酸ナトリウム、水添ヒマシ油、ナタラーゼ、色素、テルマミル、スブチリシン、ベンズイソチアゾリン、香料。
Ｔｉｄｅ ｔｏ Ｇｏ：
脱イオン水、ジプロピレングリコールブチルエーテル、アルキル硫酸ナトリウム、過酸化水素、エタノール、硫酸マグネシウム、アルキルジメチルアミンオキシド、クエン酸、水酸化ナトリウム、トリメトキシ安息香酸、芳香剤。
Ｔｉｄｅ Ｓｔｒａｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｌｉｑｕｉｄ：
水、アルキルエトキシレート、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、過酸化水素、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、エタノールアミン、ジスチリルビフェニルジスルホン酸二ナトリウム、テトラブチルエチリジンビスフェノール、Ｆ＆ＤＣ Ｙｅｌｌｏｗ ３、芳香剤。
Ｔｉｄｅ Ｓｔｒａｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｐｏｗｄｅｒ：
過炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、ポリアクリル酸ナトリウム、水、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ＤＴＰＡ、ポリエチレングリコール、パルミチン酸ナトリウム、アミラーゼ、プロテアーゼ、加工デンプン、Ｆ＆ＤＣ Ｂｌｕｅ １、芳香剤。
Ｔｉｄｅ Ｓｔｒａｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｐｒｅ Ｔｒｅａｔｅｒ Ｓｐｒａｙ：
水、アルキルエトキシレート、ＭＥＡホウ酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、プロピレングリコール、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、塩化カルシウム酵素、プロテアーゼ、エタノールアミン、ベンズイソチアゾリノン、アミラーゼ、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、芳香剤。
Ｔｉｄｅ ｔｏ Ｇｏ Ｓｔａｉｎ Ｅｒａｓｅｒ：
水、アルキルアミンオキシド、ジプロピレングリコールフェニルエーテル、過酸化水素、クエン酸、エチレンジアミンジコハク酸ナトリウム塩、アルキル硫酸ナトリウム、芳香剤。
Ｔｉｄｅ ｂｏｏｓｔ ｗｉｔｈ Ｏｘｉ：
重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、アルコールエトキシレート、塩化ナトリウム、マレイン酸／アクリリル酸コポリマー、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、硫酸ナトリウム、着色剤、ジエチレントリアミン五酢酸ナトリウム塩、水和アルミノケイ酸塩（ゼオライト）、ポリエチレングリコール、アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、デンプン、水、芳香剤。
Ｔｉｄｅ Ｓｔｒａｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ ｂｏｏｓｔ Ｄｕｏ Ｐａｃ：
液体部分と粉末部分が充填されている、ポリビニルアルコールポーチフィルム：
液体成分：ジプロピレングリコール、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、水、グリセリン、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｏｒａｎｇｅ、粉末成分：過炭酸ナトリウム、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、アミノケイ酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、水、アミラーゼ、ポリエチレングリコール、パルミチン酸ナトリウム、加工デンプン、プロテアーゼ、グリセリン、ＤＴＰＡ、芳香剤。
Ｔｉｄｅ Ｕｌｔｒａ Ｓｔａｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ナトリウム／ＭＥＡ塩、ＭＥＡクエン酸塩、プロピレングリコール、ポリエチレンイミンエトキシレート、エタノール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミンプロポキシエトキシレート、ナトリウム脂肪酸、プロテアーゼ、ボラックス、クメンスルホン酸ナトリウム、ＤＴＰＡ、芳香剤、アミラーゼ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ギ酸カルシウム、ギ酸ナトリウム、グルコナーゼ、ジメチコン、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、マンナナーゼ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ａ Ｔｏｕｃｈ ｏｆ Ｄｏｗｎｙ（登録商標）Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ，Ａｐｒｉｌ Ｆｒｅｓｈ／Ｃｌｅａｎ Ｂｒｅｅｚｅ／Ａｐｒｉｌ Ｅｓｓｅｎｃｅ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ベントナイト、水、過炭酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ケイ酸塩、アルキル硫酸塩、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、ＤＴＰＡ、ポリエチレングリコール４０００、シリコーン、エトキシレート、芳香剤、ポリエチレンオキシド、パルミチン酸、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、プロテアーゼ、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｒｅｄ、ＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ １、セルラーゼ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ａ Ｔｏｕｃｈ ｏｆ Ｄｏｗｎｙ Ｃｌｅａｎ Ｂｒｅｅｚｅ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ナトリウム／ＭＥＡ塩、プロピレングリコール、ポリエチレンイミンエトキシレート、エタノール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミン、プロポキシエトキシレート、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、硫酸アルコール、ジメチコン、芳香剤、ボラックス、ナトリウム脂肪酸、ＤＴＰＡ、プロテアーゼ、亜硫酸水素ナトリウム、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、アミラーゼ、グルコナーゼ、ヒマシ油、ギ酸カルシウム、ＭＥＡ、スチレンアクリレートコポリマー、ギ酸ナトリウム、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｄｏｗｎｙ Ｓｕｎ Ｂｌｏｓｓｏｍ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ナトリウム／ＭＥＡ塩、プロピレングリコール、エタノール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミンプロポキシエトキシレート、ポリエチレンイミンエトキシレート、硫酸アルコール、ジメチコン、芳香剤、ボラックス、ナトリウム脂肪酸、ＤＴＰＡ、プロテアーゼ、亜硫酸水素ナトリウム、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、アミラーゼ、ヒマシ油、ギ酸カルシウム、ＭＥＡ、スチレンアクリレートコポリマー、プロパンアンミウムプロパンアミド、グルコナーゼ、ギ酸ナトリウム、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｄｏｗｎｙ Ａｐｒｉｌ Ｆｒｅｓｈ／Ｓｗｅｅｔ Ｄｒｅａｍ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ナトリウム／ＭＥＡ塩、プロピレングリコール、ポリエチレンイミンエトキシレート、エタノール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミンプロポキシエトキシレート、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、硫酸アルコール、ジメチコン、芳香剤、ボラックス、ナトリウム脂肪酸、ＤＴＰＡ、プロテアーゼ、亜硫酸水素ナトリウム、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、アミラーゼ、グルコナーゼ、ヒマシ油、ギ酸カルシウム、ＭＥＡ、スチレンアクリレートコポリマー、プロパンアミニウムプロパンアミド、ギ酸ナトリウム、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ Ｆｒｅｅ Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、アルキル硫酸塩、硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、水、ポリアクリル酸ナトリウム、ケイ酸塩、エトキシレート、過炭酸ナトリウム、ポリエチレングリコール４０００、プロテアーゼ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、シリコーン、セルラーゼ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ，Ｃｌｅａｎ Ｂｒｅｅｚｅ／Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｖｅｎｄｅｒ／ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｓｐｒｉｎｇ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、硫酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、水、ポリアクリル酸ナトリウム、ケイ酸塩、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、エトキシレート、ポリエチレングリコール４０００、芳香剤、ＤＴＰＡ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、パルミチン酸、プロテアーゼ、シリコーン、セルラーゼ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ ＨＥ（ｈｉｇｈ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ） Ｐｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ，Ｃｌｅａｎ Ｂｒｅｅｚｅ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、水、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、ポリアルキル硫酸ナトリウム、ケイ酸塩、過炭酸ナトリウム、エトキシレート、ポリエチレングリコール４０００、芳香剤、ＤＴＰＡ、パルミチン酸、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、プロテアーゼ、シリコーン、セルラーゼ。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ Ｃｏｌｄｗａｔｅｒ Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ，Ｆｒｅｓｈ Ｓｃｅｎｔ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、アルキル硫酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、水、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、ポリアクリル酸ナトリウム、ケイ酸塩、エトキシレート、ポリエチレングリコール４０００、ＤＴＰＡ、芳香剤、ナタラーゼ、パルミチン酸、プロテアーゼ、二ナトリウム、ジアミノスチルベンジスルホン酸塩、ＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ １、シリコーン、セルラーゼ、アルキルエーテル硫酸塩。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ｂｌｅａｃｈ Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ，Ｃｌｅａｎ Ｂｒｅｅｚｅ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、過炭酸ナトリウム、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、水、ケイ酸塩、ポリアクリル酸ナトリウム、エトキシレート、ポリエチレングリコール４０００、芳香剤、ＤＴＰＡ、パルミチン酸、プロテアーゼ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、シリコーン、ＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ １、セルラーゼ、アルキルエーテル硫酸塩。
Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｆｅｂｒｅｅｚｅ Ｆｒｅｓｈｎｅｓｓ（商標）Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ，Ｓｐｒｉｎｇ Ｒｅｎｅｗａｌ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、過炭酸ナトリウム、アルキル硫酸塩、水、ポリアクリル酸ナトリウム、ケイ酸塩、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、エトキシレート、ポリエチレングリコール４０００、ＤＴＰＡ、芳香剤、セルラーゼ、プロテアーゼ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、シリコーン、ＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ １。
Ｌｉｑｕｉｄ Ｔｉｄｅ Ｐｌｕｓ ｗｉｔｈ Ｆｅｂｒｅｅｚｅ Ｆｒｅｓｈｎｅｓｓ−Ｓｐｏｒｔ ＨＥ Ａｃｔｉｖｅ Ｆｒｅｓｈ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ナトリウム塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ＭＥＡ塩、アルコールエトキシレート、ナトリウム脂肪酸、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミンエトキシレートプロポキシレート、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、エタノール、クメンスルホン酸ナトリウム、ボラックス、芳香剤、ＤＴＰＡ、亜硫酸水素ナトリウム、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、マンナナーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、ラウラミンオキシド、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、ジメチコン／ポリジメチルシリコーン。
Ｔｉｄｅ Ｐｌｕｓ Ｆｅｂｒｅｅｚｅ Ｆｒｅｓｈｎｅｓｓ Ｓｐｒｉｎｇ ＆ Ｒｅｎｅｗａｌ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ナトリウム／ＭＥＡ塩、ＭＥＡクエン酸塩、プロピレングリコール、ポリエチレンイミンエトキシレート、芳香剤、エタノール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミンプロポキシエトキシレート、プロテアーゼ、硫酸アルコール、ボラックス、ナトリウム脂肪酸、ＤＴＰＡ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、ＭＥＡ、マンナナーゼ、グルコナーゼ、ギ酸ナトリウム、ジメチコン、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、テトラミン。
Ｌｉｑｕｉｄ Ｔｉｄｅ Ｐｌｕｓ ｗｉｔｈ Ｆｅｂｒｅｅｚｅ Ｆｒｅｓｈｎｅｓｓ，Ｓｐｏｒｔ ＨＥ Ａｃｔｉｖｅ Ｖｉｃｔｏｒｙ Ｆｒｅｓｈ：
水、アルコールエトキシ硫酸ナトリウム、ＭＥＡクエン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、ナトリウム塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩：ＭＥＡ塩、アルコールエトキシレート、ナトリウム脂肪酸、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレンイミンエトキシレートプロポキシレート、ジクオタニウムエトキシ硫酸塩、エタノール、クメンスルホン酸ナトリウム、ボラックス、芳香剤、ＤＴＰＡ、亜硫酸水素ナトリウム、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、マンナナーゼ、セルラーゼ、ギ酸ナトリウム、ギ酸カルシウム、ラウラミンオキシド、Ｌｉｑｕｉｔｉｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ、ジメチコン／ポリジメチルシリコーン。
Ｔｉｄｅ Ｖｉｖｉｄ Ｗｈｉｔｅ ＋ Ｂｒｉｇｈｔ Ｐｏｗｄｅｒ，Ｏｒｉｇｉｎａｌ：
炭酸ナトリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、過炭酸ナトリウム、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、水、ケイ酸塩、ポリアクリル酸ナトリウムエトキシレート、ポリエチレングリコール４０００、芳香剤、ＤＴＰＡ、パルミチン酸、プロテアーゼ、ジアミノスチルベンジスルホン酸二ナトリウム、シリコーン、ＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ １、セルラーゼ、アルキルエーテル硫酸塩。
洗浄アッセイ
Ｍｉｎｉ Ｌａｕｎｄｅｒ−Ｏ−Ｍｅｔｅｒ（ＭｉｎｉＬＯＭ）モデル洗浄システム
ＭｉｎｉＬＯＭは小型洗浄システムであり、Ｓｔｕａｒｔローテータに置かれた５０ｍｌ試験チューブ内で洗浄が行われる。各チューブが１つの小さい洗濯機を模擬し、実験時は各々に、特定の供試洗剤／酵素系の溶液が、その試験台となる汚れた、および汚れていない布地と共に入れられる。回転（典型的には２０ｒｐｍ）によって機械的応力がもたらされ、加熱箱／加熱室にローテータを置くことによって温度が制御される。
Ｔｅｒｇ−Ｏ−ｔｏＭｅｔｅｒ（ＴＯＭ）洗浄アッセイ
Ｔｅｒｇ−Ｏ−ｔｏＭｅｔｅｒ（ＴＯＭ）は、１２以下の異なる洗浄条件を同時にテストするために適用することができる中規模モデル洗浄システムである。ＴＯＭは、基本的に、大きな温度制御ウォーターバスであり、その中に浸漬させた１２個以下の開放金属ビーカを備える。各ビーカは、１つの小さなトップローダ式洗浄機を構成し、実験の間、それらの各々は、特定の洗剤／酵素系の溶液と、その性能をテストする対象の汚れた布地および汚れていない布地を含有する。機械的ストレスは、回転攪拌アームによって達成され、このアームは、各ビーカ内の液体を攪拌する。ＴＯＭビーカには蓋がないので、洗浄中のオンライン情報のためにＴＯＭ実験およびアッセイ中にサンプルを抜き取ることが可能である。
ＴＯＭモデル洗浄システムは、主に、米国またはＬＡ／ＡＰ洗浄条件での洗剤および酵素の中規模テストに使用されている。ＴＯＭ実験において、汚れに対するバラストの比や洗浄液に対する布地の比などの係数は、変動し得る。このように、ＴＯＭは、ＡＭＳＡおよびミニ洗浄などの小規模実験と、トップローダ式洗浄機を用い、より多くの時間がかかる実物実験とをつなげる役割を果たす。
設備：１２個のスチール製ビーカと、５００または１２００ｍＬの洗剤溶液容量を有するビーカにつき１つの回転アームとを備えるウォーターバス。温度範囲は、５〜８０℃である。ウォーターバスには、脱イオン水を充填しなければならない。回転速度は、７０〜１２０ｒｐｍ／分以下に設定することができる。Ｔｅｒｇ−Ｏ−ＴｏＭｅｔｅｒの温度を設定し、ウォーターバス内の回転を開始する。温度が調節される（誤差は、＋／−０．５℃）のを待つ。ビーカは全て清浄であり、微量の以前のテスト材料を含まないものとする。所望の量の洗剤、温度および水硬度を有する洗浄溶液をバケツ中に調製する。１０分間の磁気攪拌の間に洗剤を溶解させる。洗浄溶液は、調製後３０〜６０分以内に使用すべきである。８００ｍｌの洗浄溶液をＴＯＭビーカに添加する。洗浄溶液を１２０ｒｐｍで攪拌した後、任意選択で、１種または複数種の酵素をビーカに添加する。布切れ、続いてバラスト負荷をビーカに導入する。布切れとバラストをビーカに添加したとき、時間測定を開始する。布切れを２０分間洗浄した後、攪拌を停止する。続いて、洗浄負荷をＴＯＭビーカから篩に移して、常温の水道水ですすぐ。汚れた布切れをバラスト負荷から分ける。汚れた布切れは、５分間水を流しながら、常温の水道水を含む５Ｌビーカに移す。バラスト負荷は、次の不活性化のために、分けたままにしておく。布切れを手で穏やかに絞って排水し、紙で覆ったトレイの上に置く。もう１枚の布を布切れの上に置く。布切れを一晩乾燥させた後、本明細書に記載するＣｏｌｏｒ Ｅｙｅを用いた色の強度の計測などの分析に付す。
本発明は以下の例によってさらに説明されるが、それらの例が本発明の範囲を限定するものと解釈されてはならない。
アッセイ
アッセイ１：ヘキソサミニダーゼ活性
４−ニトロフェニルＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を基質として使用して、配列番号７、配列番号８、および配列番号９の成熟型ポリペプチドのヘキソサミニダーゼ活性を決定した。酵素反応は９６ウェル平底ポリスチレンマイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において以下の条件によりトリプリケートで実施した：１００μｌの総反応容積中、５０ｍＭ ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ｐＨ６緩衝液、１．５ｍｇ／ｍｌ ４−ニトロフェニルＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニドおよび２０μｇ／ｍｌ精製酵素サンプル。並行して、酵素を含まないブランクサンプルを実行した。反応はＴｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ ｃｏｍｆｏｒｔ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）において３７℃で行った。１０分間インキュベートした後、各反応混合物に５μｌ １Ｍ ＮａＯＨを添加して酵素反応を停止させた。ＰＯＬＡＲｓｔａｒ Ｏｍｅｇａプレートリーダー（ＢＭＧ ＬＡＢＴＥＣＨ）を用いて吸光度を４０５ｎｍで読み取り、４−ニトロフェニルＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド基質の酵素加水分解に起因して遊離した４−ニトロフェノレートイオンの形成を推定した。結果は以下の表に要約する。この表は、トリプリケートで実施した各反応についての４０５ｎｍで測定した平均吸光度を示す。配列番号７、配列番号８、配列番号９で行った反応について、酵素を含まないブランクと比較して吸光度がより高いことが分かり、これは配列番号７、配列番号８、配列番号９がヘキソサミニダーゼ活性を呈することを実証している。
Figure 0006959259
アッセイ２：ヘキソサミニダーゼ活性
４−メチルウンベリフェリルＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を基質として使用して、配列番号７、配列番号８、配列番号９、および配列番号１０の成熟型ポリペプチドのヘキソサミニダーゼ活性を決定した。酵素反応は９６ウェル平底ポリスチレンマイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において以下の条件によりトリプリケートで実施した：２００μｌの総反応容積中、２０ｍＭ ３−モルフォリノプロパン−１−スルホン酸ｐＨ７緩衝液、５ｍＭ ４−メチルウンベリフェリルＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニドおよび２０ｎＭ精製酵素サンプル。並行して、酵素を含まないブランクサンプルを実行した。反応は周囲温度２０〜２５℃で行った。酵素と基質とを混合した後、直ちにＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２ｅプレートリーダーを用いて反応速度を追跡した。励起波長は３６８ｎｍに設定し、蛍光発光読み取りは４４８ｎｍで行った。反応は６０秒間隔で３０分間追跡した。蛍光シグナルの増加を用いて、４−メチルウンベリフェリルＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド基質の酵素加水分解に起因して遊離した４−メチルウンベリフェリルイオンの形成を推定した。結果は以下の表に要約する。この表は、トリプリケートで実施した各反応についての３６８ｎｍの励起および４４８ｎｍの蛍光発光を用いて毎分相対蛍光単位（ＲＦＵ／ｍｉｎ）として測定した平均反応初速度を示す。配列番号７、配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で行った反応について、酵素を含まないブランクと比較して反応初速度がより高いことが分かり、これは配列番号７、配列番号８、配列番号９、および配列番号１０がヘキソサミニダーゼ活性を呈することを実証している。
Figure 0006959259
実施例１ ヘキソサミニダーゼの発現およびクローニング
配列番号２に含まれるポリペプチドを有するヘキソサミニダーゼをコードするＤＮＡは、１９６９年にＡＴＣＣから入手されたテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）株（ＡＴＣＣ１２３２７）から単離した。配列番号４および６に含まれるポリペプチドを有するヘキソサミニダーゼをコードするＤＮＡは、米国で収集された環境土壌試料から単離された、それぞれテルリバチルス・ゴリエンシス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）およびテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）細菌株から単離した。配列番号１３および１５に含まれるポリペプチドを有するヘキソサミニダーゼをコードするＤＮＡは、米国で収集された環境試料から単離された、２つのテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）株から後に単離した。これらの４つのテルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）株およびテルリバチルス・ゴリエンシス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）株からＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｈｉｌｄｅｎ、ドイツ）によって染色体ＤＮＡを単離し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ技術を用いた全ゲノムシーケンシングに供した。グリコシルヒドロラーゼドメインを有するタンパク質配列に関してゲノム配列を分析した（ＧＨ２０、ｗｗｗ．ｃａｚｙ．ｏｒｇ）。テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）およびテルリバチルス・ゴリエンシス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｏｒｉｅｎｓｉｓ）株から３つのＧＨ２０遺伝子および対応する配列、配列番号１、３、５、１２および１４が同定された。Ｇｅｎｅａｒｔ社に、ヘキソサミニダーゼの成熟ペプチド配列をコードするコドン最適化合成ＤＮＡを注文した。成熟型ポリペプチドは配列番号７、８、９、１０および１１に示される。
Figure 0006959259
実施例２：ヘキソサミニダーゼのクローニングおよび発現
ヘキソサミニダーゼまたはヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチドの成熟ペプチド配列をコードするコドン最適化合成遺伝子は、配列番号７、８、９、１０および１１に示される。国際公開第１２／０２５５７７号パンフレットに記載されるとおりバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）発現ベクターにこれらの配列を挿入した。簡潔に言えば、ヘキソサミニダーゼ遺伝子の成熟ペプチドをコードするＤＮＡをバチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）分泌シグナル（ＢｃＳＰ；以下のアミノ酸配列を有する：ＭＫＫＰＬＧＫＩＶＡＳＴＡＬＬＩＳＶＡＦＳＳＳＩＡＳＡ（配列番号１６）とインフレームでクローニングした。この遺伝子の天然分泌シグナルをＢｃＳＰに置き換えた。ＢｃＳＰ配列の下流にアフィニティータグ配列を導入して精製プロセスを容易にした（Ｈｉｓタグ；以下のアミノ酸配列を有する：ＨＨＨＨＨＨＰＲ（配列番号１７）。従って発現した遺伝子は、ＢｃＳＰ配列と、続くＨｉｓタグ配列と、続く成熟野生型ＧＨ２０配列、すなわち配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１のポリペプチドを含んだ。最終的な発現プラスミド（ＢｃＳＰ−Ｈｉｓタグ−ＧＨ２０）をバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現宿主に形質転換した。ＧＨ２０ ＢｃＳＰ融合遺伝子は形質転換時に相同組換えによってバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主細胞ゲノムに組み込まれた。
三重プロモータ系（国際公開第９９／４３８３５号パンフレットに記載されるとおり）の制御下で遺伝子構築物を発現させた。クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子をマーカ（ｍａｋｅｒ）として使用した（（Ｄｉｄｅｒｉｃｈｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｌａｓｍｉｄ ３０：３１２−３１５）に記載されるとおり）。６マイクログラムのクロラムフェニコール／ｍｌを補足したＬＢ培地寒天上で形質転換体を選択した。ＧＨ２０発現構築物を含有する１つの組換えバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）クローンが選択され、これを各々１００ｍｌ酵母エキス系培地が入った５００ｍｌバッフル付き三角フラスコ内においてロータリー振盪台上で培養した。３０℃〜３７℃で３〜５日の培養時間後、酵素が含まれる上清を遠心によって回収し、酵素をＨｉｓタグ精製によって精製した。
実施例３：Ｈｉｓタグ精製方法
５ｍＬ ＨｉｓＴｒａｐ Ｅｘｃｅｌカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によるＮｉ２＋を金属イオンとして使用した固定化金属クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により、Ｈｉｓタグ付加ＧＨ２０ヘキソサミニダーゼ酵素を精製した。この精製はｐＨ７で行い、結合したタンパク質はイミダゾールで溶出させた。５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．０で緩衝液交換した後、精製酵素の純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって調べ、酵素の濃度を吸光度２８０ｎｍによって決定した。
実施例４：バイオフィルムアッセイ
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）はＩｎｙｉｇｏ Ｌａｓａ（Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００３ Ｍａｙ；４８（４）：１０７５−８７）より供与いただいた。この株をトリプチケースソイ寒天（ＴＳＡ）上３７℃で一晩成長させた。翌日、単一コロニーを１５ｍｌのトリプチケースソイブロス（ＴＳＢ）に移し、振盪下３７℃で５時間インキュベートした。この培養物をＴＳＢ＋１％グルコースで１：１００希釈し、１００μＬの細菌懸濁液を９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｎｕｎｃｌｏｎ Ｄｅｌｔａ Ｓｕｒｆａｃｅ、カタログ番号１６７００８）の各ウェルに移し、振盪なしに３７℃で２４時間インキュベートした。上清を吸引し、ウェルを１００μＬの０．９％塩化ナトリウムで洗浄して、１００μＬの硬水か、または０（対照）もしくは２０、１０、５、２．５、１．２５、０．６２、０．３１、０．１６、０．０８、０．０４、０．０２および０．０１μｇ／ｍＬの酵素（配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１を有する成熟型ポリペプチド）を含有する３．３ｇｒ／Ｌモデル洗剤Ａかのいずれかを充填した。３７℃で１時間インキュベートした後、ウェルを水で洗浄し、１００μＬの０．０９５％クリスタルバイオレット溶液（ＳＩＧＭＡ Ｖ５２６５）で１５分間染色した。次にウェルを１００μＬの水で２回リンスし、乾燥させて、プレートをスキャンした。
洗剤の存在下および非存在下で１時間のインキュベーション後に目視し得る黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）バイオフィルムの形成を低減することができた各酵素の最低濃度を決定した（表５を参照のこと）。酵素は全てデュプリケートでアッセイし、同様の結果が得られた。
Figure 0006959259
実施例５：液体モデル洗剤中におけるヘキソサミニダーゼのディープクリーニング
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）１５９８１（Ｉｎｙｉｇｏ Ｌａｓａ（Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００３ Ｍａｙ；４８（４）：１０７５−８７）より供与いただいた）を本実施例のモデル微生物として使用した。黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）をトリプトンソーヤ寒天（ＴＳＡ）（ｐＨ７．３）（ＣＭ０１３１；Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）上にリストリークし、３７℃で１日インキュベートした。１０ｍＬのＴＳＢに単一コロニーを接種し、この培養物を振盪（２００ｒｐｍ）しながら３７℃で１６時間インキュベートした。増殖後、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）培養物を新鮮なＴＳＢ＋１％グルコース（２４５６３；Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ）中に希釈（１：１００）し、２ｍＬアリコートを滅菌ポリエステル（ＷＦＫ３０Ａ）の丸い布切れ（直径２ｃｍ）が入った１２ウェルポリスチレン平底マイクロプレート（３５１２；Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、ＵＳＡ）のウェルに加えた。対照ウェルには滅菌ＴＳＢ＋１％グルコースを加えた。３７℃で４８時間後（静的インキュベーション）、布切れを１５°ｄＨ水で２回すすいだ。５片のすすいだ布切れ（滅菌または黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）付き）を５０ｍＬ試験チューブに入れ、各チューブに１０ｍＬの洗浄液（１５°ｄＨ水＋０．２ｇ／Ｌ酸化鉄（ＩＩＩ）ナノ粉末（５４４８８４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）＋３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤）および０．２ｐｐｍ酵素（配列番号７、８および９の成熟型ポリペプチド）を加えた。酵素なしの洗浄を対照として含めた。試験チューブをＳｔｕａｒｔローテータに置き、２０ｒｐｍ、３７℃で１時間インキュベートした。次に洗浄液を除去し、布切れを１５°ｄＨ水で２回すすぎ、ろ紙上で一晩乾燥させた。
Ｈａｎｄｈｅｌｄ Ｍｉｎｏｌｔａ ＣＲ−３００を使用して色差（Ｌ）値を測定した。これを表６に示す。デルタ値（Ｌ（酵素入りで洗浄した布切れ）−Ｌ（酵素なしで洗浄した布切れ））もまた示す。
Figure 0006959259
これらの結果は、ヘキソサミニダーゼがモデル洗剤Ａ中でディープクリーニング特性を呈することを示している。
実施例６：液体モデル洗剤中におけるヘキソサミニダーゼのディープクリーニング効果
実施例５に記載したとおり生地布切れ（ｗｆｋ３０Ａ）上に黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）バイオフィルムを成長させた。滅菌培地でインキュベートした布切れを対照として含めた。ヘキソサミニダーゼのディープクリーニング特性を試験するため、５片のすすいだ布切れ（滅菌または黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）付き）を５０ｍＬコニカル遠心チューブに入れ、各チューブに１０ｍＬの洗浄液（１５°ｄＨ水＋０．２ｇ／Ｌ酸化鉄（ＩＩＩ）ナノ粉末（５４４８８４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）＋３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤）および０．２ｐｐｍ（または２ｐｐｍ）酵素を加えた。対照には酵素は加えなかった。試験チューブをＳｔｕａｒｔローテータに置き、２０ｒｐｍ、３７℃で１時間インキュベートした。次に洗浄液を除去し、布切れを１５°ｄＨ水で２回すすぎ、ろ紙上で一晩乾燥させた。
Ｈａｎｄｈｅｌｄ Ｍｉｎｏｌｔａ ＣＲ−３００を使用して色差（Ｌ）値を測定し、相対洗浄効率を計算した（（Ｌ酵素入り−Ｌ酵素なし）／（Ｌ滅菌布切れ−Ｌ酵素なし）×１００）。これを表７に示す。
Figure 0006959259
前出の実施例と合わせると、これらの結果は、本発明のポリペプチドが全て、酵素を含まない試料と比較したときディープクリーニング特性を有することを示している。
実施例７：蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）バイオフィルム布切れに対するヘキソサミニダーゼのディープクリーニング効果
アイスランドから単離された蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）を本実施例のモデル微生物として使用した。蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）をトリプトンソーヤ寒天（ＴＳＡ）（ｐＨ７．３）（ＣＭ０１３１；Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）上にリストリークし、周囲温度で３日間インキュベートした。１０ｍＬのＴＳＢに単一コロニーを接種し、この培養物を振盪しながら（Ｔｅｔｒａｍａｘ １０００、４６０ｒｐｍ）周囲温度で１６時間インキュベートした。増殖後、培養物を新鮮ＴＳＢ中に希釈（１：１００）し、滅菌生地（ＷＦＫ２０Ａ）の丸い布切れ（直径２ｃｍ）が入った１２ウェルポリスチレン平底マイクロプレート（３５１２；Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、ＵＳＡ）のウェルに１．６５ｍＬアリコートを加えた。対照ウェルには滅菌ＴＳＢを加えた。周囲温度で（静的に）４８時間インキュベートした後、布切れを０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌで２回すすいだ。５片のすすいだ布切れ（滅菌または蛍光菌（Ｐ．ｆｌｕｏｕｒｅｓｃｅｎｓ）バイオフィルム付き）を５０ｍＬ試験チューブに入れ、各チューブに１０ｍＬの洗浄液（１５°ｄＨ水＋０．２ｇ／Ｌ酸化鉄（ＩＩＩ）ナノ粉末（５４４８８４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）＋３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤）および０．２ｐｐｍまたは２ｐｐｍ酵素を加えた。酵素なしの洗浄を対照として含めた。試験チューブをＳｔｕａｒｔローテータに置き、２０ｒｐｍ、３０℃で１時間インキュベートした。次に洗浄液を除去し、布切れを１５°ｄＨ水で２回すすぎ、ろ紙上で一晩乾燥させた。
Ｎｉｋｏｎ Ｄ９０デジタルカメラを備えたＤｉｇｉＥＹＥ測色および画像化システム（ＶｅｒｉＶｉｄｅ）を使用して三刺激光強度（Ｙ）値を測定した。これを表８に示す。デルタ値（Ｙ（酵素入りで洗浄した布切れ）−Ｙ（酵素なしで洗浄した布切れ））もまた示す。
Figure 0006959259
実施例８ 種々の微生物のＥＰＳに対する液体モデル洗剤中のヘキソサミニダーゼのディープクリーニング効果
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）１５９８１（Ｉｎｙｉｇｏ Ｌａｓａ（Ｖａｌｌｅ，Ｊ．，Ａ．Ｔｏｌｅｄｏ−Ａｒａｎａ，Ｃ．Ｂｅｒａｓａｉｎ，Ｊ．Ｍ．Ｇｈｉｇｏ，Ｂ．Ａｍｏｒｅｎａ，Ｊ．Ｒ．Ｐｅｎａｄｅｓ、およびＩ．Ｌａｓａ．２００３，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４８：１０７５−１０８７）より供与いただいた）、スタフィロコッカス・コーニイ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃｏｈｎｉｉ）（生地分離株、デンマーク、Ｏ４３７Ｆ４）、蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（アイスランドからの分離株）およびアシネトバクター・ルオフィイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｉｗｏｆｆｉ）（デンマークからの生地分離株）からバイオフィルム細胞外高分子物質（ＥＰＳ）の粗抽出物を調製した。黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）については、抽出物は以下のとおり作製した：株をトリプトンソーヤ寒天（ＴＳＡ）（ｐＨ７．３）（ＣＭ０１３１；Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）上にリストリークし、３７℃で３日間インキュベートした。次に５００ｍＬのＴＳＢ＋１％グルコース（２４５６３；Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ）を接種し、５０ｍｌコニカル遠心チューブ（３３９６５２；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｎｕｎｃ）にアリコートに分け（各３３ｍｌ）、振盪（２００ｒｐｍ）しながら３７℃で２４時間インキュベートした。続いて細胞を遠心（１０分、６０００ｇ、２５℃）によってペレット化し、プールし、合計５ｍｌ ３Ｍ ＮａＣｌ中に再懸濁した。この懸濁液を激しくボルテックスし、周囲温度で１５分間インキュベートして、表面会合ＥＰＳを抽出した。次に細胞を再ペレット化し（１０分、５０００ｇ、２５℃）、ＥＰＳ含有上清を回収した。上清を２回滅菌ろ過し（０．４５μｍ、続いて０．２μｍ）、無菌性について試験し、後の使用時まで−２０℃で保存した。
Ｓ．コーニイ（Ｓ．ｃｏｈｎｉｉ）分離株をＴＳＡ上にリストリークし、３７℃で３日間インキュベートして、一晩培養物の接種に使用した（１０ｍｌ ＴＳＢ＋１％グルコース、３７℃、２００ｒｐｍでインキュベートした）。次にこの培養物をベントキャップ付きＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｅｌｌＢＩＮＤ（登録商標）２２５ｃｍ2カントネック細胞培養フラスコ（製品番号３２９３）内の２５０ｍｌ新鮮培地（ＴＳＢ＋１％グルコース）中に希釈（１：１００）し、フラスコを３７℃で２日間インキュベートした。バイオフィルム培養物を遠心（１０分、８０００、２５℃）によってペレット化し、２．５ｍｌ ３Ｍ ＮａＣｌに再懸濁して、室温で３０分間インキュベートした。次に細胞を再ペレット化し（１０分、５０００ｇ、２５℃）、ＥＰＳ含有上清を回収し、滅菌ろ過し（０．２０μｍ、１６５３４−Ｋ、Ｍｉｎｉｓａｒｔ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ）、使用時まで−２０℃で保存した。
蛍光菌（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）をＴＳＡ上にリストリークし、２０℃で１日間インキュベートした。この株を１０ｍＬのＴＳＢに接種し、培養物を２０℃で１６時間静的にインキュベートした。増殖後、培養物を４００ｍｌ Ｍ６３補足培地（１５ｍＭ（ＮＨ４）２ＳＯ４、１００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１．８μＭ ＦｅＳＯ４、１ｍＭ ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ、０．４％（ｗ／ｖ）グリセロール、０．２％（ｗ／ｖ）カザミノ酸および０．０００１％（ｗ／ｖ）チアミン）中に希釈（１：１００）し、ベントキャップ付きＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｅｌｌＢＩＮＤ（登録商標）２２５ｃｍ2カントネック細胞培養フラスコに加えて、２０℃で３日間静的にインキュベートした。続いてバイオフィルム培養物を遠心（１０分、８０００ｇ、２５℃）によってペレット化し、細胞を４ｍｌ ３Ｍ ＮａＣｌに再懸濁し、３０℃で３０分間インキュベートして表面会合ＥＰＳを抽出した。次に、遠心（１０分、５０００ｇ、２５℃）後に得られたＥＰＳ含有上清を滅菌ろ過し、後の時点まで−２０℃で保存した。
Ａ．ルオフィイ（Ａ．ｉｗｏｆｆｉ）からの粗ＥＰＳ抽出物は、以下のとおり調製した：株をＴＳＡプレート上にリストリークし、３０℃で３日間インキュベートした。次に１０ｍｌ ＬＢ培地（Ｌ３１５２、Ｆｌｕｋａ）に単一コロニーを接種し、３０℃、２００ｒｐｍで４８時間インキュベートした。培養物を３００ｍｌ新鮮ＬＢ中に希釈（１：１００）し、ベントキャップ付きＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｅｌｌＢＩＮＤ（登録商標）２２５ｃｍ2カントネック細胞培養フラスコに加え、３０℃で４日間静的にインキュベートした。続いてバイオフィルム培養物を遠心（１０分、８０００ｇ、２５℃）によってペレット化し、このペレットを合計３ｍｌ ３Ｍ ＮａＣｌに再懸濁し、室温で３０分間インキュベートした。遠心（１０分、５０００ｇ、２５℃）後に得られたＥＰＳ含有上清を滅菌ろ過し（０．２０μｍ、１６５３４−Ｋ、Ｍｉｎｉｓａｒｔ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ）、使用時まで−２０℃で保存した。
洗浄性能試験のため、種々の粗ＥＰＳ抽出物の５０ｕｌアリコートを滅菌生地布切れ（ＷＦＫ２０Ａ）に染み付けし、周囲温度で１５分間インキュベートした。布切れ（滅菌またはＥＰＳ付き）を５０ｍＬ試験チューブに入れ、各チューブに１０ｍＬの洗浄液（１５°ｄＨ水＋０．２ｇ／Ｌ酸化鉄（ＩＩＩ）ナノ粉末（５４４８８４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）＋３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤）および０．２μｇ／ｍｌまたは２μｇ／ｍｌ酵素を加えた。酵素なしの洗浄を対照として含めた。試験チューブをＳｔｕａｒｔローテータに置き、２０ｒｐｍ、３７℃で１時間インキュベートした。次に洗浄液を除去し、布切れを１５°ｄＨ水で２回すすぎ、ろ紙上で一晩乾燥させた。Ｎｉｋｏｎ Ｄ９０デジタルカメラを備えたＤｉｇｉＥＹＥ測色・画像化システム（ＶｅｒｉＶｉｄｅ）を使用して三刺激光強度（Ｙ）値を測定した。これを表９に示す。
デルタ値（Ｙ（酵素入りで洗浄した布切れ）−Ｙ（酵素なしで洗浄した布切れ））および相対洗浄効率値（（Ｌ酵素入り−Ｌ酵素なし）／（Ｌ滅菌布切れ−Ｌ酵素なし）×１００））もまた示す。
Figure 0006959259
データは、ヘキソサミニダーゼが、グラム陽性菌およびグラム陰性菌の両方を含めた様々な微生物のバイオフィルムＥＰＳに対してディープクリーニング特性を示すことを明確に示している。
実施例９：液体モデル洗剤中におけるヘキソサミニダーゼの悪臭低減
ＥＰＳを例えば実施例８に記載されるとおり精製した。精製後、ＥＰＳの５０μＬアリコートを滅菌ポリエステル（ＷＦＫ３０Ａ）の丸い布切れ（直径２ｃｍ）が入った１２ウェルポリスチレン平底マイクロプレート（３５１２；Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、ＵＳＡ）のウェルに加えた。続行する前に布切れを１５分間インキュベート（静的インキュベーション）した。６片の布切れを５０ｍＬ試験チューブに入れ、各チューブに１０ｍＬの洗浄液（１５°ｄＨ水＋３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤）および０．２ｐｐｍ、２．０ｐｐｍまたは２０．０ｐｐｍ酵素（配列番号９）を加えた。酵素なしの洗浄を対照として含めた。試験チューブをＳｔｕａｒｔローテータに置き、２０ｒｐｍ、３７℃で１時間インキュベートした。次に洗浄液を除去し、布切れを２０ｍＬ １５°ｄＨ水で２回すすぎ、ろ紙上で一晩乾燥させた。
臭気チャンバのセットアップおよびエレクトロニックノーズを使用した生地上の揮発性物質の分析
気体の揮発性物質の結合に関して試験するため、全ての乾燥した布切れを四角形のプラスチック箱（３０．７ｃｍ×２１．９ｃｍ×６．０ｃｍ−内寸）に無作為に分配した。１０ｍＬガラスビーカの中央に置き、様々なアルデヒド類の５ｍＬの混合物（ペンタナール１６０ｍＭ、ヘキサナール４０ｍＭ、ヘプタナール８０ｍＭ、（Ｅ）−２−ヘプテナール２０ｍＭ、オクタナール３０ｍＭ、ノナナール１０ｍＭ、デカナール８ｍＭ、（Ｅ）−２−デセナール１０ｍＭおよび（Ｅ，Ｅ）−２−デカジエナール１２ｍＭ−化学物質は全てＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した）を加えた。臭気チャンバの蓋を閉め、Ｐａｒａｆｉｌｍ（登録商標）で包んだ。布切れを室温で１６時間インキュベートした後、個々に２０ｍＬ ＧＣ−ＭＳバイアル（Ｍｉｋｒｏｌａｂ Ａａｒｈｕｓ Ａ／Ｓ、Ａａｒｈｕｓ、デンマーク）の底に置き、シリコーン製のねじ蓋（Ｍｉｋｒｏｌａｂ Ａａｒｈｕｓ Ａ／Ｓ、Ａａｒｈｕｓ、デンマーク）を被せた。４０℃で２０分間インキュベートした後、各サンプルから５ｍＬヘッドスペースを
・Ａｌｐｈａ Ｍ．Ｏ．Ｓ．、フランスのＨｅｒａｃｌｅｓ ＩＩエレクトロニックノーズ（２つのＦＩＤを備えた二重カラムガスクロマトグラフ、カラム１：Ｒｅｓｔｅｋ ＭＸＴ−５ １０ｍ×０．１８ｍｍ×０．２μｍおよびカラム２：Ｒｅｓｔｅｋ ＭＸＴ−１７０１ １０ｍ×０．１８ｍｍ×０．２μｍ）で分析した。サンプルは無作為な順序で実行した。
Figure 0006959259
これらの結果は、ヘキソサミニダーゼがモデル洗剤Ａ中で悪臭低減特性を呈することを示している。
実施例１０：種々の洗剤中におけるヘキソサミニダーゼのディープクリーニング
実施例８に記載されるとおり蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（アイスランドからの分離株）から粗ＥＰＳ（細胞外高分子物質）抽出物を調製した。洗浄性能を試験するため、この抽出物の５０ｕｌアリコートを滅菌生地布切れ（ＷＦＫ２０Ａ）に染み付けし、周囲温度で１５分間浸しておいた。布切れ（滅菌またはＥＰＳ付き）を５０ｍＬコニカル遠心チューブに入れ、１０ｍＬの洗浄液（１５°ｄＨ水＋０．２ｇ／Ｌ酸化鉄（ＩＩＩ）ナノ粉末（５４４８８４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）および洗剤（３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤、２．０ｇ／ＬモデルＮまたは４．６ｇ／Ｌ Ｐｅｒｓｉｌ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｇｅｌ（登録商標））を加えた。酵素を０．２μｇ／ｍｌの最終濃度になるように加えた。酵素を含まないチューブを対照として含めた。試験チューブをＳｔｕａｒｔローテータに置き、２０ｒｐｍ、３７℃で１時間インキュベートした。次に洗浄液を除去し、布切れを１５°ｄＨ水で２回すすぎ、ろ紙上で一晩乾燥させた。Ｎｉｋｏｎ Ｄ９０デジタルカメラを備えたＤｉｇｉＥＹＥ測色・画像化システム（ＶｅｒｉＶｉｄｅ）を使用して三刺激光強度（Ｙ）値を測定した。これを表１１に示す。
デルタ値（Ｙ（酵素入りで洗浄した布切れ）−Ｙ（酵素なしで洗浄した布切れ））もまた示す。
Figure 0006959259
実施例１１：ＴＯＭにおける洗浄性能
実施例８に記載されるとおり蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（アイスランドからの分離株）から粗ＥＰＳ抽出物を調製した。使用前に抽出物を滅菌ろ過し、生地布切れ（ｗｆｋ２０Ａ（ポリエステル／綿混合（６５％／３５％））、５０ｍｍ×５０ｍｍ）に１００μｌアリコートを染み付けして、室温で１０分間インキュベートした。Ｔｅｒｇ−ｏ−ｔｏｍｅｔｅｒ洗浄を以下で実施した；０．４ｇ／Ｌ酸化鉄（ＩＩＩ）ナノ粉末（５４４８８４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）および３．３３ｇ／Ｌ液体モデル洗剤Ａを秤り取り、１時間浸しておいた後、洗浄した。次にその汚い洗剤をＴＯＭビーカ内の１０００ｍｌの予め温めた水、硬度（１５°ｄＨ）に加え、１０分間溶解させた（最大限撹拌）。次に撹拌レベルを９０ｒｐｍに下げ、生地布切れ（２片のＥＰＳ布切れならびに合計１０ｇ生地／ビーカに達するようなバラスト材料（ｗｆｋ１０Ａ、ｗｆｋ３０Ａ））を加え、酵素（０．２ｐｐｍ）入りまたは酵素なしで３０℃で３５分間洗浄した。洗浄後、全ての布切れを水道水で２回すすぎ、ろ紙上で一晩乾燥させた。Ｍａｃｂｅｔｈ Ｃｏｌｏｒ−Ｅｙｅ ７０００（ＣＥ７０００）を使用してレミッション（ＲＥＭ４６０ｎｍ）値を測定した。これを表１２に示す。
デルタ値（ＲＥＭ４６０ｎｍ （酵素入りで洗浄した布切れ）−ＲＥＭ４６０ｎｍ （酵素なしで洗浄した布切れ））もまた示す。
Figure 0006959259
実施例１２：実規模洗浄における洗浄性能
実施例８に記載されるとおり蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（アイスランドからの分離株）から粗ＥＰＳ抽出物を調製した。中央で切断した洗浄済みのＴシャツ（ＡｎｖｉｌサステイナブルＴシャツ（５０％ポリエステル／５０％綿））に抽出物を染み付けし（２００μｌアリコート）、それらの染みを室温に３０分間放置して乾燥させた後、洗浄した。Ｍｉｅｌｅ洗濯機（Ｍｉｅｌｅ Ｓｏｆｔｔｒｏｎｉｃ、Ｗ２２４５）で水道水および３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤中０．１６ｇ／Ｌ酸化鉄（ＩＩＩ）ナノ粉末（５４４８８４；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して２つの半分のＴシャツを独立に洗浄した。４０℃色物洗い（Ｃｏｌｏｒ）プログラムを使用した（運転時間１時間２６分）。洗浄後、これらの２つの半分のＴシャツを干して室温で一晩乾燥させた。Ｍａｃｂｅｔｈ Ｃｏｌｏｒ−Ｅｙｅ ７０００（ＣＥ７０００）を使用してレミッション（ＲＥＭ４６０ｎｍ）値を測定した。これを表１３に示す。デルタ値（ＲＥＭ４６０ｎｍ （酵素入りで洗浄した布切れ）−ＲＥＭ４６０ｎｍ （酵素なしで洗浄した布切れ））もまた示す。
Figure 0006959259
実施例１３：蛍光ＷＧＡ−Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ４８８アッセイを用いたＥＰＳ加水分解測定
アイスランドから分離された蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）株を本実施例のモデル微生物として使用した。蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）株をトリプトンソーヤ寒天（ＴＳＡ）（ｐＨ７．３）（ＣＭ０１３１；Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）上にリストリークし、２３℃で１日間インキュベートした。この株を１０ｍＬのＴＳＢに接種し、培養物を振盪しながら２３℃で１６時間インキュベートした。一晩培養物を２００ｍｌ Ｍ６３補足培地（１５ｍＭ（ＮＨ４）２ＳＯ４、１００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１．８μＭ ＦｅＳＯ４、１ｍＭ ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ、０．４％（ｗ／ｖ）グリセロール、０．２％（ｗ／ｖ）カザミノ酸および０．０００１％（ｗ／ｖ）チアミン）中に希釈（１：１００）し、ベントキャップ付きＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｅｌｌＢＩＮＤ（登録商標）２２５ｃｍ2カントネック細胞培養フラスコ（製品番号３２９３）に加えて、２３℃で５日間静的にインキュベートした。続いて各バイオフィルム培養物を４本の５０ｍｌファルコンチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＃４３０８２０）に移し、遠心（１０分、８０００ｇ、２５℃）によってペレット化し、上清を完全に廃棄した。４本のファルコンの各々からの残渣ペレットを０．４５０ｍｌ ３Ｍ ＮａＣｌに再懸濁して表面会合ＥＰＳ（細胞外高分子物質）を抽出し、１つの試験チューブ（５ｍｌ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＃００３０１１９４０１）にプールした。懸濁液を５０００ｇ、２５℃で１０分間遠心し、１．８ｍｌの上清をＥＰＳ画分として新しい試験チューブに移し、後の使用時まで−２０℃で保存した（粗ＥＰＳと呼ばれる）。粗ＥＰＳの１５０ｕｌアリコートを３本のエッペンドルフ試験チューブに分注し、８０ｐｐｍの配列番号９または５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ １００ｍＭ ＮａＣｌ緩衝液単独のいずれかを含有する１５０ｕｌの酵素溶液と混合して、室温で１時間インキュベートした。各チューブから５０ｕｌアリコートサンプルを回収し、次に洗浄済みの滅菌布切れ（ｗｆｋ ２０Ａ、ポリエステル／綿６５％／３５％）の丸い布切れが入ったｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ黒色マイクロタイタープレート（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃４３７１１１）のウェルに加えた。プレートを室温で１５分間インキュベートした。次に各ウェルから上清を除去し、１００ｕｌの水で布切れを洗浄した。次に、各ウェルに５０ｕｌのＷＧＡ−Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ４８８色素（１０ｕｇ／ｍｌ；励起／発光極大約４９５／５１９ｎｍ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃Ｗ１１２６１）を加えた。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ ＷＧＡはシアル酸およびＮ−アセチルグルコサミニル残基に結合する。プレートを室温で１５分間インキュベートした。最後にサンプルを１００ｕｌの水で洗浄し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ３機器で測定した。酵素溶液および緩衝液対照と混合した粗ＥＰＳに対応する３つのサンプルの各々を、８つのウェルに入れた８つの布切れで試験した。標準偏差を含め、得られた測定値を以下の表１４に掲載する。
Figure 0006959259
蛍光測定の結果は、蛍光菌（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）株からのＥＰＳ抽出物がＷＧＡ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８で標識されることを示しており、ＥＰＳがＮ−アセチルグルコサミニル残基を含み、かつヘキソサミニダーゼ（配列番号９）加水分解に感受性があることが示唆される。
実施例１４：洗浄済みのＥＰＳ布切れのコムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）染色
実施例８に記載されるとおり、但し以下のように少し改変を加えて、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）１５９８１（Ｉｎｙｉｇｏ Ｌａｓａ（Ｖａｌｌｅ，Ｊ．，Ａ．Ｔｏｌｅｄｏ−Ａｒａｎａ，Ｃ．Ｂｅｒａｓａｉｎ，Ｊ．Ｍ．Ｇｈｉｇｏ，Ｂ．Ａｍｏｒｅｎａ，Ｊ．Ｒ．Ｐｅｎａｄｅｓ、およびＩ．Ｌａｓａ．２００３，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４８：１０７５−１０８７）より供与いただいた）から粗ＥＰＳ抽出物を調製した：培養物をＴＳＢ＋１％グルコース中３７℃で２４時間インキュベートした後、ＥＰＳを抽出した。洗浄のため、滅菌生地布切れ（洗浄済みｗｆｋ２０Ａ生地、６５％ポリエステル／３５％綿）にＥＰＳの１００ｕｌアリコートを染み付けし、周囲温度で２０分間インキュベートした。布切れ（滅菌またはＥＰＳ付き）を５０ｍＬ試験チューブに入れ、各チューブに１０ｍＬの洗浄液（１５°ｄＨ水＋３．３３ｇ／Ｌ液体モデルＡ洗剤）および２０μｇ／ｍｌ酵素を加えた。酵素なしの洗浄を対照として含めた。試験チューブをＳｔｕａｒｔローテータに置き、２０ｒｐｍ、３７℃で１時間インキュベートした。次に洗浄液を除去し、布切れを１５°ｄＨ水で２回すすぎ、１２ウェルポリスチレン平底マイクロプレート（３５１２；Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、ＵＳＡ）に入れた。次に布切れをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８コンジュゲートコムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）（１×ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ）によって室温で３０分間染色し、１×ＰＢＳで２回リンスし、ＢＭＧ ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒマイクロプレートリーダー（励起４８８ｎｍ、発光５２５ｎｍ）でウェルスキャニングによって測定した。蛍光強度値を表１５に示す。
対照と比較した相対基質除去率（ＦＩＵ酵素入り−ＦＩＵ酵素なし）もまた示す。
Figure 0006959259
ＷＧＡレクチンがＮ−アセチルグルコサミニル残基に親和性を有するとき、それらの結果は、ヘキソサミニダーゼ処理が洗浄中における生地からの基質除去を改善することを示している。
実施例１５：クレードおよび系統樹の構築
Ｇｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０ドメインは、ヘキソサミニダーゼ活性、例えばＰＮＡＧ活性を有する本発明のポリペプチドを含み、ＷＮＤドメインならびにクレードなどのクラスターを含む。ＰＦＡＭ（ＰＦ００７２８、Ｐｆａｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ３１．０ Ｆｉｎｎ（２０１６）．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄａｔａｂａｓｅ Ｉｓｓｕｅ ４４：Ｄ２７９−Ｄ２８５）に定義されるとおりの、Ｇｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０ドメインを含有するポリペプチド配列の系統樹を構築した。少なくとも１つのＧｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０ドメインを含む成熟ポリペプチド配列の多重アラインメントから、系統樹を構築した。これらの配列は、ＭＵＳＣＬＥアルゴリズム バージョン３．８．３１（Ｅｄｇａｒ，２００４．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２−１７９７）を使用してアライメントし、樹はＦａｓｔＴｒｅｅ バージョン２．１．８（Ｐｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０，ＰｌｏＳ ｏｎｅ ５（３））を使用して構築し、ｉＴＯＬ（Ｌｅｔｕｎｉｃ ＆ Ｂｏｒｋ，２００７．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３（１）：１２７−１２８）を使用して視覚化した。Ｇｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０ドメインを含むポリペプチド配列は数個のモチーフを含み；一例はＧＸＤＥ（配列番号１８）であり、テルリバチルス・サッカロフィルス（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｓ）（配列番号９）の位置１５８〜１６１に位置する。残基ＤおよびＥがＧｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０酵素の主要な触媒残基である（配列番号９の位置１６０〜１６１）。
Ｇｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０のポリペプチドは、以下に挙げるとおりの複数の個別的なサブクラスター、またはクレードに分けることができる。各クレードの個別的なモチーフについて、以下に詳細に説明する。
ＩＡＳドメインの作成
ドメイン、好ましくは本発明のポリペプチドによって共有されるドメインが同定された。このドメインはこれまで記載がない。このドメインはＩＥＳと称され、このドメインのポリペプチドは細菌起源のＧｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０ドメインポリペプチドを含み、ＰＮＡＧ活性を有することに加え、特定のモチーフを含むことによって特徴付けられる。このドメインのポリペプチドは、配列番号９の位置４４〜５０にあるＥＳＹＡＩＡＳに対応するモチーフ例［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）を含む。
ＷＮＤドメインの作成
ドメイン、好ましくは本発明のポリペプチドによって共有されるドメインが同定された。このドメインはこれまで記載がない。このドメインはＷＮＤと称され、このドメインのポリペプチドは細菌起源のＧｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０ドメインポリペプチドを含み、ＰＮＡＧ活性を有することに加え、特定のモチーフを含むことによって特徴付けられる。このドメインのポリペプチドは、配列番号９の位置１５６〜１６３に対応するモチーフ例［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）を含み、ここでＧおよびＤＥ（配列番号９の位置１５８および１６０〜１６１に対応する）はＤＳＰ３クレードにおいて完全に保存されており、活性部位の一部である。残基ＤおよびＥがＧｌｙｃｏ＿ｈｙｄｒｏ＿２０酵素の主要な触媒残基である（配列番号９の位置１６０〜１６１）。ＷＮＤドメインのポリペプチドに包含され得る別のモチーフはＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、配列番号９の１９３〜１９８であり、ここでＷ（配列番号９の位置１９３）は活性部位ポケットの一部であり、ＰＮＡＧ基質のＮ−アセチル基の結合に関与するものと推定される。
ＱＳＴＬクレードの作成
ＱＳＴＬクレードは、ヘキソサミニダーゼ活性、例えばＰＮＡＧ活性を有する細菌起源のＷＮＤドメインポリペプチドを含む。このクレードのポリペプチドは、配列番号９の位置２１６〜２１９に対応するモチーフ例ＱＳＴＬ（配列番号２２）を含み、ここでＱＳＴＬクレードにおいては４つのアミノ全てが完全に保存されている。このモチーフは、酵素のＴＩＭバレル構造の推定上の「蓋」の一部であり、基質結合に関与しているものと推定される。ＱＳＴＬクレードのポリペプチドに包含され得る別のモチーフは、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、配列番号９の２７３〜２７７である。ＱＳＴＬクレードのポリペプチドに含まれ得るさらなるモチーフは、配列番号９のアミノ酸２０４〜２０８に対応するＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）である。
本発明のポリペプチドのアラインメントを図２に示す。本発明のポリペプチドの系統樹を図３に示す。

Claims (16)

  1. ヘキソサミニダーゼ活性を有する少なくとも０．００１ｐｐｍのポリペプチドであって、テルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードに属し、配列番号７、８、９、１０および１１に示される成熟型ポリペプチドと少なくとも６０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチド、および
    少なくとも１つの補助成分であって、
    （ａ）少なくとも１つのビルダー、
    （ｂ）少なくとも１つの界面活性剤、および
    （ｃ）少なくとも１つの漂白成分
    から選択される補助成分を含む、組成物。
  2. 前記ポリペプチドがＮ−アセチルグルコサミニダーゼ活性および／またはβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｎｉｄａｓｅ）活性を有する、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記ポリペプチドが、モチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、およびＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含む、請求項１または２に記載の組成物。
  4. 前記ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１に示されるポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 配列番号７または配列番号２の成熟型ポリペプチドを含むか、またはそれからなる、配列番号８または配列番号４の成熟型ポリペプチドを含むか、またはそれからなる、配列番号９または配列番号６の成熟型ポリペプチドを含むか、またはそれからなる、配列番号１０または配列番号１３の成熟型ポリペプチドを含むか、またはそれからなる、または配列番号１１または配列番号１５の成熟型ポリペプチドを含むか、またはそれからなる前記ポリペプチド、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. クリーニング組成物である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記ビルダーが、０〜６５％ｗｔ％、４０ｗｔ％〜６５ｗｔ％、２０ｗｔ％〜６５ｗｔ％、１０ｗｔ％〜５０ｗｔ％または５ｗｔ％〜５０ｗｔ％重量の量で添加され、前記ビルダーが、リン酸塩類、クエン酸ナトリウムビルダー、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、ナトリウムおよびゼオライト類の中から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記組成物が約１ｗｔ％〜約４０ｗｔ％の少なくとも１つの漂白剤成分を含み、前記漂白剤成分が過炭酸塩および漂白触媒を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
  9. ２ｗｔ％〜６０ｗｔ％、５ｗｔ％〜５０ｗｔ％、５ｗｔ％〜４０ｗｔ％、５ｗｔ％〜３０ｗｔ％、５ｗｔ％〜２０ｗｔ％、または５ｗｔ％〜１０ｗｔ％のアニオン性界面活性剤および／またはノニオン性界面活性剤を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 物品のディープクリーニングへの請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物の使用であって、前記物品が生地である、使用。
  11. ａ）配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１に示されるポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含む洗浄液に物品を曝露すること、または請求項１〜９のいずれか一項に記載の洗剤組成物に物品を曝露すること；
    ｂ）少なくとも１つの洗浄サイクルを完了すること；および
    ｃ）任意選択で物品をすすぐこと
    を含む、物品の洗濯方法であって、前記物品が生地である、方法。
  12. クリーニング作業におけるテルリバチルス属（Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）クレードのポリペプチドの使用であって、前記ポリペプチドがヘキソサミニダーゼ活性を有する、使用。
  13. 前記ポリペプチドがモチーフＧＸＤＥ（配列番号１８）、［ＥＱ］［ＮＲＳＨＡ］［ＹＶＦＬ］［ＡＧＳＴＣ］［ＩＶＬＦ］［ＥＡＱＹＮ］［ＳＮ］（配列番号１９）、［ＶＩＭ］［ＬＩＶ］Ｇ［ＧＡＶ］ＤＥ［ＶＩ］［ＰＳＡ］（配列番号２０）、ＷＮＤ［ＳＱＲ］［ＩＶＬ］［ＴＬＶＭ］（配列番号２１）、ＱＳＴＬ（配列番号２２）、ＮＫＦＦＹ（配列番号２３）、およびＮＬＤ［ＤＲ］Ｓ（配列番号２４）のうちの１つ以上を含む、請求項１２に記載の使用。
  14. 物品のディープクリーニングへの請求項１２または１３に記載の使用であって、前記物品が生地である、使用。
  15. （ｉ）前記物品の粘着性を防止、低減または除去するため；
    （ｉｉ）前記物品の染みを前処理するため；
    （ｉｉｉ）洗浄サイクル中の汚れの再沈着を防止、低減または除去するため；
    （ｉｖ）前記物品への汚れの付着を防止、低減または除去するため；
    （ｖ）前記物品の白色度を維持または改善するため；または
    （ｖｉ）前記物品の悪臭を防止、低減または除去するための、
    請求項１４に記載の使用であって、前記物品が生地である、使用。
  16. 前記ポリペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１に示されるポリペプチドと少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の使用。
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