JP2838809B2 - ２―Ｏ―α―Ｄ―グルコピラノシル―Ｌ―アスコルビン酸高含有物の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有物の工業的製造方法に関する。

「従来の技術」 Ｌ−アスコルビン酸は、 式［Ｉ］： で示される化学構造を有しており、ヒト、サル、モルモ
ットにとっては、生体内で合成できず、必須栄養素、ビ
タミンＣとなっている。

Ｌ−アスコルビン酸は、生体内で、例えば、生体結合
組織の主成分であるコラーゲンの合成に必要なプロリン
やリジンのヒドロキシル化反応に関与し、また、例え
ば、チトクロームＣのFe⁺⁺⁺を還元してFe⁺⁺にするなど
の酸化還元反応に関与し、更には、白血球増加による免
疫増強作用に関与するなどが知られており、生体の健康
維持、増進に重要な役割をなしている。壊血病は、Ｌ−
アスコルビン酸の欠乏症として古くから知られ、皮膚の
虚弱化、点状出血、斑状出血、歯肉や骨髄下出血などを
呈する。これを予防し、健康を維持するために、Ｌ−ア
スコルビン酸の推奨１日所要量（RDA）が定められ、そ
れにそれば、我国では成人男子60mg、成人女子50mgとさ
れている。

Ｌ−アスコルビン酸の用途は、単に必須栄養素として
のビタミンＣ強化剤にとどまらず、その理化学的性質、
生理作用から、例えば、酸味剤、還元剤、酸化防止剤、
漂白剤、安定剤などとして各種化学反応基材、飲食物な
どに、また、ウイルス性疾患、細菌性疾患、悪性腫瘍な
ど感受性疾患の予防剤、治療剤すなわち抗感受性疾患剤
に、更には、還元剤、紫外線吸収剤、メラニン生成抑制
剤などの美肌剤、色白剤などとして化粧品にまで及び、
その範囲は極めて広い。

Ｌ−アスコルビン酸の最大の欠点は、それが直接還元
性を示すため、極めて不安定で、酸化分解を受け易く、
容易にその生理活性を失うことである。

Ｌ−アスコルビン酸を安定化させる方法として、Ｌ−
アスコルビン酸の糖誘導体が提案されている。

例えば、先に本発明者等が、「ビタミン」第43巻、第
205乃至209頁（1971年）、「ビタミン」第47巻、第259
乃至267頁（1973年）および特公昭48−38158号公報で、
生化学的手法によるＬ−アスコルビン酸グルコシドの合
成法を開示している。

しかしながら、これらに開示されているアスコルビン
酸グルコシドは、いずれも同様の方法で調製され、得ら
れたアスコルビン酸については、例えば、該公報第２欄
第14乃至16行で、「得た誘導体はアスコルビン酸の６番
の炭素の第１アルコール基がエーテル結合によりグルコ
シドを形成したもの」と記載され、また、その生成がマ
ルトースからα−グルコシル基の糖転移反応であるこ
と、更には、直接還元性を示す性質を有するなどから、
その化学構造が、 式［II］： で示されるものであると考えられ、その安定化の程度に
ついても、該公報実施例１の表の結果から明らかなよう
に、Ｌ−アスコルビン酸よりは優れているものの、なお
不安定であり、未だ実用化されるに至っていない。

また、石戸等が特公昭58−5920号公報で、有機化学的
手法によるＬ−アスコルビン酸糖誘導体の合成法を開示
している。

しかしながら、このアスコルビン酸糖誘導体は、該公
報第７欄第６行乃至第８欄第11行で、2,3−ジ−Ｏ−
（β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸な
ど21種類ものβ−Ｄ−グルコピラノシル型のＬ−アスコ
ルビン酸糖誘導体を掲げて説明していることからも明ら
かなように、すべてのＤ−グルコースがβ結合している
Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体である。

また、政本等が特開昭58−198498号公報で有機化学的
手法によるＬ−アスコルビン酸糖誘導体の合成法を開示
しているが、これもβ−グルコシル型のＬ−アスコルビ
ン酸糖誘導体である。

また、これらβ−Ｄ−グルコピラノシル型のＬ−アス
コルビン酸糖誘導体について、本発明者等が検討したと
ころ、生体、とりわけ、ヒトにおいて、生理活性を充分
発揮させることの困難なことが判明した。更に、その有
機化学的手法による合成法は、反応が複雑で収率も低
く、それ故に、経済性が劣り、加えて、その誘導体の無
毒性、安全性を確保する上において、相当の困難が伴う
欠点のあることも判明した。

叙上のように、従来知られているＬ−アスコルビン酸
糖誘導体の提案は、安定性、安全性、生理活性、経済性
などの点で、いずれも不充分であり、その実現を見るに
至っていない。

そこで、本発明者等は、従来のＬ−アスコルビン酸糖
誘導体の欠点を解消するために生化学的手法による糖転
移反応を利用し、新しいＬ−アスコルビン酸糖誘導体を
目指して鋭意研究を続けてきた。

その結果、先に特許出願した特願平１−127072号明細
書に記載したように、直接還元性を示さず、安定性に優
れ、しかも生体内で容易に加水分解され、生理活性の点
でも申し分のない新規物質、α−グルコシル−Ｌ−アス
コルビン酸、とりわけ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸を見出し、更に、その製造方
法並びに飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などへの用途
を確立した。

併せて、この２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸は、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコ
シル糖化合物とを経口摂取することにより、生体内で生
成され、代謝される物質であって、本来、生体物質であ
って、安全性の上からも理想的なＬ−アスコルビン酸の
新規糖誘導体であることも見い出した。

しかしながら、糖転移反応を利用して得られた反応水
溶液には、目的とする安定な２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の含有率が低く、通常、
純度40％（固形物当りW/W％）未満であり、他に夾雑物
として、例えば、Ｌ−アスコルビン酸、Ｄ−グルコー
ス、α−グルコシル糖化合物などを60％以上も含有して
いる。

このような水溶液をそのまま濃縮した濃縮液は、比較
的褐変、変質しやすく、その保存、取扱いの困難なこと
が判明した。また、その水溶液を、そのまま濃縮、粉末
化して得られる粉末は、吸湿性の強い非晶質粉末であっ
て、大気中で容易に吸湿し、潮解、固結を起こし易い欠
点を有していることが判明した。

［発明が解決しようとする課題］ 糖転移反応により得られた２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸低含有物の欠点を解消す
るためのものであって、とりわけ、その低含有物から安
定な２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸を分離精製し、その高含有物を工業的に大量生産
する方法の確立が望まれている。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、糖転移反応により得られた２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸低含有物
の欠点を解消し、安定な２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の工業的製造方法の
確立を目指して鋭意研究した。

その結果、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化
合物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素と
グルコアミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそ
れ以外の夾雑物を含有する溶液を、原料溶液として、こ
れを強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムかけ、次
いで水で溶出し、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取する
ことにより、安定な２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸高含有物が容易に高収率で得ら
れ、それの工業的製造方法として好適であることを見い
出し、加えて、その２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸高含有物が流動性良好で安定な無
水型の結晶を析出することを見い出し、その工業的大量
生産も容易であることを見出して本発明を完成した。

本発明において、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸は、Ｌ−アスコルビン酸とα−グ
ルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵素または
糖転移酵素とグルコアミラーゼとを作用させて生成させ
ればよい。

本明細書でいう直接完全性を示さないとは、Ｌ−アス
コルビン酸の場合とは違って、そのままで、2,6−ジク
ロルフェノールインドフェノールを還元脱色しないこと
を意味する。

本明細書でいうＬ−アスコルビン酸とは、特に不都合
が生じない限り、遊離のＬ−アスコルビン酸のみなら
ず、Ｌ−アスコルビン酸のアルカリ金属塩若しくはアル
カリ土類金属塩などのＬ−アスコルビン酸塩、または、
それらの混合物を意味する。従って、本発明の糖転移反
応に用いるＬ−アスコルビン酸としては、通常、遊離の
Ｌ−アスコルビン酸だけでなく、必要に応じて、Ｌ−ア
スコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウ
ムなどが適宜用いられる。

また、同様に、本明細書でいうα−グルコシル−Ｌ−
アスコルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸などについても、特に不都合が生じ
ない限り、遊離の酸のみならず、それらの塩をも意味す
る。

本発明で用いるα−グルコシル糖化合物は、同時に用
いる糖転移酵素によってＬ−アスコルビン酸にα−Ｄ−
グルコシル残基を等モル以上結合したα−グルコシル−
Ｌ−アスコルビン酸を生成できるものであれば、例え
ば、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルト
ヘプタオース、マルトオクタオースなどのマルトオリゴ
糖、デキストリン、シクロデキストリン、アミロースな
どの澱粉部分加水分解物、更には、液化澱粉、糊化澱
粉、溶性澱粉などが適宜選択できる。

従って、α−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸の生成
を容易にするためには、糖転移酵素に好適なα−グルコ
シル糖化合物が選ばれる。

例えば、糖転移酵素として、α−グルコシダーゼ（EC
3.2.1.20）を用いる際には、マルトース、マルトトリ
オース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マ
ルトヘキサオース、マルトペプタオース、マルトオクタ
オースなどのマルトオリゴ糖、または、DE約５乃至60の
デキストリン、澱粉部分加水分解物などが好適であり、
シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラー
ゼ（EC 2.4.1.19）を用いる際には、シクロデキストリ
ンまたはDE1未満の澱粉糊化物からDE約60のデキストリ
ンまでの澱粉部分加水分解物などが好適であり、α−ア
ミラーゼ（EC 3.2.1.1）を用いる際には、DE1未満の糊
化澱粉からDE約30のデキストリンまでの澱粉部分加水分
解物などが好適である。

反応時のＬ−アスコルビン酸の濃度は、通常、1w/v％
以上、望ましくは、約２乃至30w/v％含有しておればよ
く、α−グルコシル糖化合物の濃度は、Ｌ−アスコルビ
ン酸に対して、通常、約0.5乃至30倍の範囲が好適であ
る。

本発明に用いる糖転移酵素は、Ｌ−アスコルビン酸と
この酸素に好適なα−グルコシル糖化合物とを含有する
溶液に作用させる時、Ｌ−アスコルビン酸を分解せず
に、Ｌ−アスコルビン酸の２位の炭素のアルコール基に
α−グルコシル基を１乃至数個転移してα−グルコシル
−Ｌ−アスコルビン酸を生成するものであればよい。

例えば、α−グルコシダーゼは、マウスの腎臓、ラッ
トの腸粘膜、イヌ、ブタの小腸など動物由来の酵素、イ
ネ種子、トウモロコシ種子など植物由来の酵素、更に
は、ムコール（Mucor）属、ペニシリウム（Penicilliu
m）属などに属するカビ、またはサッカロミセス（Sacch
aromyces）属などに属する酵母などの微生物を栄養培地
で培養多し得られる培養物由来の酵素が、シクロマルト
デキストリン・グルカノトランスフェラーゼは、バチル
ス（Bacillus）属、クレブシーラ（Klebsiella）属など
に属する細菌培養物由来の酵素が、α−アミラーゼは、
バチルス属などに属する細菌培養物由来の酵素などが適
宜選択できる。

これらの糖転移酵素は、前記の条件を満足しさえすれ
ば、必ずしも精製して使用する必要はなく、通常は、粗
酵素で本発明の目的を達成することができる。必要なら
ば、公知の各種方法で精製して使用してもよい。また、
市販の糖転移酵素を利用することもできる。反応時のpH
と温度は、糖転移酵素が作用してα−グルコシル−Ｌ−
アスコルビン酸が生成すればよく、通常、pH3乃至９、
温度約20乃至80℃から選ばれる。使用酵素量と反応時間
は、密接な関係があり、通常は、経済性の点から約３乃
至80時間で反応を終了するように酵素量が選ばれる。

また、固定化された糖転移酵素をバッチ式で繰り返
し、または連続式で反応に利用することも有利に実施で
きる。

また、反応中にＬ−アスコルビン酸が酸化分解を受け
易いので、できるだけ嫌気または還元状態で遮光下に維
持するのが望ましく、必要ならば、チオ尿素、亜硫酸塩
などを共存させて反応させることも有利に実施できる。

また、必要ならば、糖転移反応能を有する微生物の増
殖中に、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物
とを共存させて、その目的物質を生成させることも有利
に実施できる。

２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を生成させるに際して、糖転移酵素とグルコアミラ
ーゼとを同時に作用させることもできる。一般的には、
糖転移反応の効率を高めるため、予め、糖転移酵素を作
用させて、Ｌ−アスコルビン酸にグルコシル残基を等モ
ル以上転移させたα−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸
を生成せしめ、次いでグルコアミラーゼを作用させて２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
を蓄積生成させるのが望ましい。

グルコアミラーゼとしては、微生物、植物など各種起
源のものが利用できる。通常、アスペルギルス（Asperg
illus）属、リゾープス（Rhizopus）属に属する微生物
起源の市販のグルコアミラーゼが有利に利用できる。ま
た、グルコアミラーゼとともにβ−アミラーゼ（EC 3.
2.1.2）を併用することも随意である。

糖転移酵素の作用により生成するα−グルコシル−Ｌ
−アスコルビン酸について述べると、Ｌ−アスコルビン
酸の２位の炭素のアルコール基にα−Ｄ−グルコシル基
が結合し、その結合数は、１乃至７個程度のグルコシル
基がα−1,4結合しており、その個々の物質としては、
例えば、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトトリオシル−Ｌ−ア
スコルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトテトラオシル−
Ｌ−アスコルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトペンタオ
シル−Ｌ−アスコルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトヘ
キサオシル−Ｌ−アスコルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マ
ルトヘプタオシル−Ｌ−アスコルビン酸などである。α
−グルコシダーゼによって生成させる場合には、通常、
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸だけを生成させることができるし、必要により、２−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
に、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトシル−Ｌ−アスコルビン
酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトトリオシル−Ｌ−アスコル
ビン酸などを混在して生成させることもできる。

シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラ
ーゼやα−アミラーゼによって生成させる場合には、一
般に、α−グルコシダーゼの場合よりもα−Ｄ−グルコ
シル基の結合数の大きいものまで混在生成させることが
でき、使用するα−グルコシル糖化合物によっても変動
するが、一般的には、シクロマルトデキストリン・グル
カノトランスフェラーゼの場合には、α−Ｄ−グルコシ
ル基の数が１乃至７程度まで分布し、α−アミラーゼの
場合には、これよりその分布がやや狭い程度である。

このようにして糖転移酵素により生成せしめたα−グ
ルコシル−Ｌ−アスコルビン酸の混合物から２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物
を採取するためには、これをそのまま分離精製すること
もできるが、一般的には、糖転移酵素により生成せしめ
たα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の混合物に、更
に、グルコアミラーゼ（EC 3.2.1.3）を作用させ、２
−Ｏ−α−Ｄ−マルトシル−Ｌ−アスコルビン酸以上の
高分子物を加水分解し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸を蓄積生成させた後、それを
分離精製するのが望ましい。

以上述べたように、各種方法により生成せしめた２−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸含
有溶液は、通常、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸のみならず、未反応のＬ−アスコル
ビン酸、Ｄ−グルコース、α−グルコシル糖化合物など
を含有している。

これから、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有物を製造する場合には、２−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と反応
のＬ−アスコルビン酸、Ｄ−グルコース、α−グルコシ
ル糖化合物など夾雑物との分子量、親和性などの違いを
利用する分離手段、例えば、膜分離、カラムクロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー、ゲル濾過クロ
マトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどの
方法で分離精製することもできるが、とりわけ、本発明
者等が特開昭58−23799号公報、特公昭62−50477号公報
で開示した強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロ
マトグラフィーの採用は、高速液体クロマトグラフィ
ー、ゲル濾過クロマトグラフィーなどと比較して、目的
の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸高含有物を高濃度、高収率に大量採取でき、その工
業実施の実現も容易であることが判明した。この際、分
離されるＬ−アスコルビン酸、α−グルコシル糖化合物
などを、再度、糖転移反応の原料として用いることも有
利に実施できる。また、糖転移反応終了後、クロマトグ
ラフィーにかけるまでの間に、必要ならば、例えば、反
応液を加熱して生じる不溶物を濾過して除去したり、活
性炭などで処理して反応液中の蛋白性物質、着色物質な
どを吸着除去したり、陽イオン交換樹脂（H⁺型）で脱ミ
ネラルしたり、陰イオン交換樹脂（OH^-型）に吸着させ
て水洗し、Ｄ−グルコース、α−グルコシル糖化合物な
どを除去後、アニオン若しくは塩類溶液などで脱着処理
するなどの精製方法を組合せて利用することも随意であ
る。

以下、本発明で採用される強酸性カチオン交換樹脂を
用いるカラムクロマトグラフィーについて、より具合的
に説明する。強酸性カチオン交換樹脂は、公知の、例え
ば、スルホン基を結合したスチレン−ジビニルベンゼン
架橋共重合体樹脂のNa⁺型、K⁺型などのアルカリ金属塩
型、または、Ca⁺⁺型、Mg⁺⁺型などのアルカリ土類金属塩
型、またはH⁺型などが適宜使用され、市販品としては、
例えば、ダウケミカル社製造の商品名ダウェックス50WX
8、ローム＆ハース社製造の商品名アンバーライトCG−1
20、東京有機化学工業社製造の商品名XT−1022E、三菱
化成工業社製造の商品名ダイオイオンSK104などがあ
る。

これら樹脂は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の分画に優れているだけ
でなく、耐熱性、耐摩耗性にも優れ、２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の工業
的大量生産に極めて有利である。

原料溶液として、例えば、目的とする２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにＬ−
アスコルビン酸、Ｄ−グルコースなどの夾雑物を含有す
る溶液を用いる場合には、強酸性カチオン交換樹脂を充
填したカラムに原料溶液を流し、次いで水を溶出し、２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸・Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、Ｌ−
アスコルビン酸高含有画分、Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−
グルコース高含有画分、Ｄ−グルコース高含有画分など
の順に複数の画分に分画して、この２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコース高含有画分を採取することにより、容易に２−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高
含有物が製造される。

また、原料溶液をカラムに流して分画するに際し、既
に得られている２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸・Ｌ−アスコルビン酸高含有画分など
の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸含有画分を原料溶液の前後に、または原料溶液とと
もに流すことにより、分画に要する水の使用量を減少さ
せ、原料溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸高含有物を高濃度、高収率で採取す
ることも有利に実施できる。

本発明で使用される分画方式は固定床方式、移動床方
式、擬似移動床方式のいずれであってもよい。

このようにして得られた本発明の２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物、望まし
くは、純度65％以上の高含有物は、溶液状であっても、
また濃縮してシラップ状にあっても、はるかに安定であ
り、その取扱いは、容易でもある。

次に、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸高含有物とそれの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方法について
述べる。本発明で使用する晶出用２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物は、２−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の過
飽和溶液であって、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸が析出すればよく、通常、過
飽和度が、1.05乃至1.5程度で、具体的に述べれば、純
度65％以上の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有物を、望ましくは、濃度約65乃至
95W/W％水溶液とし、その溶液温度は、溶液が凍結せ
ず、また、製造工程上熱損失の比較的少ない０乃至95℃
の範囲が望ましい。溶液の過飽和度、粘度を調整するた
めに、例えば、メタノール、エタノール、アセトンなど
を共存させることも随意である。また、晶出方法は、通
常20乃至60℃の比較的高温の過飽和２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を助晶缶にとり、
これに種晶を望ましくは、0.1乃至10W/W％共存せしめ
て、ゆっくり撹拌しつつ徐冷し、晶出を促してマスキッ
トにすればよい。このように、本発明の結晶２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、過飽
和２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸溶液に結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸を種晶として加えることにより容易に
晶出させることができる。晶出したマスキットから結晶
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸を製造する方法は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸が採取できればよく、例え
ば、分蜜方法、ブロックの粉砕方法、流動造粒方法、噴
霧乾燥方法などの公知方法を利用すればよい。

例えば分蜜方法は、通常、マスキットをバスケット型
遠心分離機にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸と母液（蜜）とを分離する方
法で、必要により、該結晶に少量の冷水をスプレーして
洗浄することも容易であり、より高純度の非吸湿性結晶
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸を製造するのに好適である。また、母液を精製、濃縮
して、同様にマスキットとし、２番晶、更には３番晶な
どを採取して結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸と増収を図ることも有利に実施でき
る。

他の３つの方法は、蜜を分離しないので、得られる結
晶粉末に２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸純度の向上は見られないが、製品収量の多い
特長を有している。従って、本製品の場合には、通常、
結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸とともに、蜜成分として、例えば、Ｌ−アスコル
ビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−マルトシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸以上の高分子α−グルコシル−Ｌ−アスコルビン
酸、グルコース、α−グルコシル糖化物などが含まれ
る。

噴霧乾燥の場合には、通常、濃度70乃至85W/W％晶出
率25乃至60W/W％程度のマスキットを高圧ポンプでノズ
ルから噴霧し、結晶粉末が溶融しない温度、例えば、60
乃至100℃の熱風で乾燥し、次いで30乃至60℃の温風で
約１乃至20時間熟成すれば非吸湿性または難吸湿性の結
晶粉末が容易に製造できる。また、ブロック粉砕方法
は、通常、水分５乃至15W/W％、晶出率10乃至60W/W％程
度のマスキットを0.5乃至５日間静置して全体をブロッ
ク状に晶出固化させ、これを粉砕または切削などの方法
によって破砕し乾燥すれば、非吸湿性または難吸湿性の
結晶粉末が容易に製造できる。また、２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物溶液
を、水分5W/W％未満に加熱、濃縮して溶融様状態とした
過飽和２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸溶液とし、この過飽和溶液に種晶を結晶２−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の融
点以下の温度で混油し、これを各種形状、例えば粉体、
顆粒、棒状、板状、立方体などに成形して、非吸湿性ま
たは難吸湿性の結晶固体を得ることも随意である。この
ようにして得られる結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸は、その純度、晶出率によっ
て多少変動するものの、実質的に非吸湿性また難吸湿性
であり、流動性であり、固着の懸念もなく、その優れた
特長は次の通りである。

（１）直接還元性を示さず、きわめて安定である。Ｌ−
アスコルビン酸とは違って、メイラード反応を起こしに
くい。従って、アミノ酸、プペチド、蛋白質、脂質、糖
質、生理活性物質などと共存しても無用の反応を起さ
ず、むしろ、これら物質を安定化する。

（２）加水分解を受けてＬ−アスコルビン酸を生成し、
Ｌ−アスコルビン酸と同様の還元作用、抗酸化作用を示
す。

（３）体内の酵素により、Ｌ−アスコルビン酸とＤ−グ
ルコースとに容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸
本来の生理活性を示す。また、ビタミンＥ、ビタミンＰ
などとの併用により、その生理活性を増強することがで
きる。

（４）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物な
どとを経口摂取することにより、生体内で生成され、代
謝される物質であることから、その安全性は極めて高
い。

（５）実質的に非吸湿性、難吸湿性であるにもかかわら
ず、水に対して大きな溶解速度、溶解度を有しており、
粉末、顆粒、錠剤などのビタミン剤、サンドクリーム、
チョコレート、チューイングガム、即席ジュース、即席
調味料などの飲食物のビタミンＣ強化剤、呈味改善剤、
酸化剤、安定剤などとして有利に利用できる。

（６）実質的に非吸湿性または難吸湿性であり、固結し
ないことから流動性であり、その取扱いは容易で非晶質
の場合と比較して、その包装、輸送、貯蔵に要する物
的、人的経費が大幅に削減できる。

これらの特長から、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸は安全性の高いビタミンＣ
強化剤としてばかりでなく、単独で、または他の１種若
しくは２種以上の成分と併用して、呈味改善剤、酸味
剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、ウイルス性疾患、
細菌性疾患、循環器疾患、悪性腫瘍など感受性疾患の予
防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物、嗜好
物、飼料、餌料、抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤など
化粧品、更には、プラスチック製品などに配合して、望
ましくは0.001W/W％以上配合して、有利に利用すること
ができる。この際、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸とともに、Ｌ−アスコルビン
酸、ビタミンＥ、ルチン、α−グリコシル ルチン、ヘ
スペリジンなどのビタミンＰなどから選ばれる１種若し
くは２種以上と併用することも有利に実施できる。

また結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味な
どの呈味を有する各種物質ともよく調和し、耐酸性、耐
熱性も大きいので、普通一般の飲食物、嗜好物、例え
ば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひし
お、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯
酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、
ケチャップ、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、
スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みり
ん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなどの各種調
味料、せんべい、あられ、おこし、カリントウ、求肥、
餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羹、水羊羹、
錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、パ
ン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリ
ン、シュークリーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドー
ナツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、キ
ャンデーなどの各種洋菓子、アイスクリーム、シャーベ
ットなどの氷菓、果実のシロップ漬、氷蜜などのシロッ
プ類、バタークリーム、カスタードクリーム、フラワー
ペースト、ピーナッツペースト、フルーツペーストなど
のスプレッド、ペースト類、ジャム、マーマレード、シ
ロップ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、パン
類、麺類、米飯類、人造肉などの穀類加工食品類、サラ
ダオイル、マーガリンなどの油脂食品類、福神漬、べっ
たら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、たくあん
漬の素、白菜漬の素などの漬物の素類、ハム、ソーセー
ジなどの蓄肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマ
ボコ、チクワ、ハンペンなどの魚肉製品、ウニ、イカの
塩辛、酢コンブ、さきするめ、ふぐのみりん干しなどの
各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで製造
されるつだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、コンブ巻、天ぷ
らなどのそう菜食品、錦糸卵、乳飲料、バター、チーズ
などの卵、乳製品、魚肉、蓄肉、果実、野菜などのビン
詰、缶詰類、合成酒、増醸酒、果実酒、洋酒などの酒
類、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲
料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリンミックス、ホ
ットケーキミックス、即席ジュース、即席コーヒー、即
席しるこ、即席スープなど即席飲食品などに、ビタミン
Ｃ強化剤、呈味改善剤、酸味剤、品質改良剤、安定剤、
抗酸化剤などの目的で有利に利用することができる。ま
た、家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のための
飼料、餌料などにビタミンＣ強化剤、呈味改善剤、抗酸
化剤、嗜好性向上などの目的で配合して利用することも
好都合である。

その他、タバコ、トローチ、肝油ドロップ、複合ビタ
ミン剤、口中清涼剤、口中香錠、うがい薬、経管栄養
剤、内服薬、注射剤、練歯みがき、口紅、アイシャド
ウ、乳液、化粧水、クリーム、ファウンデーション、日
焼け止め、洗顔石鹸、シャンプー、リンスなど各種固
状、ペースト状、液状の嗜好物、感受性疾患の予防剤、
治療剤すなわち抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤などの
化粧品などに配合して利用することも有利に実施でき、
更には、紫外線吸収剤、劣化防止剤などとしてプラスチ
ック製品などに配合して利用することも、α−グリコシ
ド加水分解酵素の測定用基質、細胞培養用培地成分など
に利用することも有利に実施できる。

また、本発明でいう感受性疾患とは、結晶２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはそ
の溶解溶液によって予防され、若しくは治療される疾患
であり、それが、例えばウイルス性疾患、細菌性疾患、
外傷性疾患、リューマチ、免疫疾患、アレルギー疾患、
糖尿病、白内障、循環器疾患、悪性腫瘍などであっても
よい。２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸の感受性疾患予防剤、治療剤は、その目的に応
じてその形状を自由に選択できる。例えば、噴霧剤、点
眼剤、点鼻剤、うがい剤、注射剤などの液剤、軟膏、は
っぷ剤、クリームのようなペースト剤、粉末、顆粒、カ
プセル剤、錠剤などの固剤などである。製剤に当たって
は、必要に応じて、他の成分、例えば、治療剤、生理活
性物質、抗生物質、補助剤、増量剤、安定剤、着色剤、
着香剤などの１種若しくは２種以上と併用することも随
意である。

投与量は、含量、投与経路、投与頻度などによって適
宜調節することができる。通常、２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸として、成人１日当
り、約0.001乃至100gの範囲が好適である。

また、化粧品の場合も、本体、前述の予防剤、治療剤
に準じて利用することができる。

本発明の結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸を含有せしめる方法としては、それら
の製品が完成するまでの工程で、例えば、混和、混捏、
溶解、溶融、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注
入、晶出、固化など公知の方法が適宜選ばれる。

また、本発明の結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸は、実質的に無水であり、ま
た、完全無水にすることも軽く熱風乾燥するだけで達成
できるので、非水系での化学反応原料としても好都合で
ある。従って、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸から非水系での公知の反応によ
り、極めて容易に、例えば、エーテル誘導体、エステル
誘導体などが製造できる。これら誘導体は、その特性に
応じて、例えば、界面活性剤、乳化剤、安定剤または親
油性ビタミンＣなどとして有利に利用できる。

また、本発明の結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸が、遊離の酸の場合には、必要
により、これを水酸化金属、炭酸金属などの水溶液と反
応させて、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸の塩、例えば、ナトリウム塩、カルシウム
塩、マグネシウム塩、鉄塩、銅塩、亜鉛塩などにして、
pH調整するとともにビタミンＣ作用とミネラルとを併せ
持つ物質を調製し、これを栄養強化剤、化学薬品などと
して利用することも有利に実施できる。

以下、本発明の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸高含有物とそれの結晶の代表例を実
験を用いて詳細に説明する。

実 験 １ ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有物とそれの結晶の調製 デキストリン（DE約６）９重量部を水15重量部に加熱
溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸３重量部
を加え、pH5.5、60℃に維持しつつ、これにシクロマル
トデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式会
社林原生物化学研究所販売）をデキストリングラム当り
400単位加えて24時間反応させた。反応液を高速液体ク
ロマトグラフィー（島津製作所製、LC−6A;カラム,YMC
AQ 303 ODS;溶離液,0.1M KH₂PO₄−H₃PO₄（pH2.0）；流
速,0.5mL/min;検出，日本分光工業（株）MULT−340）で
分析したところ、Ｌ−アスコルビン酸が9.5分の位置に
現れたのに対し、新たに生成したα−Ｄ−グルコシル−
Ｌ−アスコルビン酸が11.2分、α−Ｄ−マルトシル−Ｌ
−アスコルビン酸が15.7分、α−Ｄ−マルトトリオシル
−Ｌ−アスコルビン酸が20.6分、α−Ｄ−マルトテトラ
オシル−Ｌ−アスコルビン酸が24.9分、α−Ｄ−マルト
ペンタオシル−Ｌ−アスコルビン酸が28.1分、α−Ｄ−
マルトヘキサオシル−Ｌ−アスコルビン酸が32.1分およ
びα−Ｄ−マルトヘプタオシル−Ｌ−アスコルビン酸が
38.6分の位置に現れた。Ｌ−アスコルビン酸の約60％が
これらα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸へ変換して
いた。本反応液をUF膜で濾過して酵素を回収、除去した
後、55℃、pH5.0に調整し、これにグルコアミラーゼ（E
C 3.2.1.3、生化学工業株式会社販売）をデキストリン
グラム当り10単位加えて、24時間反応させた。反応液を
高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、α−Ｄ
−マルトシル−Ｌ−アスコルビン酸以上の高分子α−グ
リコシル−Ｌ−アスコルビン酸は加水分解され、２−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸に変
換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾
過し、濾液を約50W/W％に濃縮した。

この濃縮液を原料溶液として、特開昭58−23799号広
報に開示されているカラムクロマトグラフィーの方法に
準じて、強酸性カチオン交換樹脂（東京有機化学工業製
造、商品名XT−1016、Na⁺型）を充填したカラムを用い
てカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
高含有画分を（純度約94％）を採取し、２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を得
た。次いで、これをカチオン交換樹脂（H⁺型）で脱ミネ
ラルして精製し、濃度約80W/W％に濃縮し、ガラス製容
器に入れ、20乃至35℃に約１カ月間保ったところ、結晶
が析出した。この結晶を種晶として、前記２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分
の精製、濃縮液に加え、ゆっくり撹拌しながら助晶し、
得られるマスキットを分蜜し、結晶に少量の冷水をスプ
レーして、洗浄し、高純度の結晶を得、この結晶を水に
溶解し、再結晶化させ、より高純度（純度99.9％以上）
の結晶を採取した。

実 験 ２ ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸の理化学的性質 実験１の方法で再結晶させて得た結晶の理化学的性質
を調べたところ、従来全く知られていない無水型の結晶
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸であることを見出した。

以下、本発明の結晶の諸性質について述べる。

（１）元素分析 C₁₂H₁₈O₁₁として 理論値 Ｃ＝42.6％ Ｈ＝5.36％ 実測値 Ｃ＝42.4％ Ｈ＝5.37％ Ｎ＜0.01％ （２）分子量 質量分析装置（日立製作所製、Ｍ−80B）を用いてFD
マススペクトルを測定した結果、（Ｍ＋Ｈ）^＋（C₁₂H₁₈
O₁₁MW＝338）として339が観測された。

（３）融点 158.5乃至159.5℃ （４）融解熱 ｇ当り27.2kcalの吸熱を示す。

（５）比旋光度 ▲［α］²⁰ _D▼＝＋189.6゜（H₂O、pH1.98） ▲［α］²⁰ _D▼＝＋246.3゜（H₂O、pH7.10） （６）紫外線吸収スペクトル 濃度50μＭに溶解した溶液の紫外線吸収スペクトルを
測定した。pH2.0でのスペクトルを第１図に、pH7.0での
スペクトルを第２図に示す。

λmax＝238nm、ε＝0.93×10⁴（pH2.0） λmax＝260nm、ε＝1.50×10⁴（pH7.0） （７）赤外線吸収スペクトル KBr錠剤法で測定した。結晶の赤外線吸収スペクトル
を、第３図に示し、非晶質物の赤外線吸収スペクトルを
第４図に示す。

（８）溶解度 25℃で水100gに125g溶ける。

（９）溶剤に対する溶解性 水、0.1N−カセイソーダ、0.1N−酢酸に易溶。メタノ
ール、エタノールに微溶。エーテル、ベンゼン、クロロ
ホルム、酢酸エチルに不溶。

（10）解離定数 pKa＝3.0 この値を、ゼイ・ゼルノウ（J.Jernow）等、テトラヘ
ドロン（Tetrahedron）第35巻、第1483乃至1486頁（197
9年）の第１表およびパオーウェン・ルー（Pao−Wen L
u）等、ジャーナル・アグリカルチュラル・フード・ケ
ミストリー（Journal of Agricultural Food Chemistr
y）第32巻、第21乃至28頁（1984年）の第２表に示され
る各種アスコルビン酸誘導体の解離定数（pKa）を参照
すると、本結晶の場合には、そのアスコルビン酸部分の
２位のアルコール基がα−Ｄ−グルコシル結合に関与
し、３位のアルコール基は遊離のままであると判断され
る。

（11）メチル化分析 前述のパオー・ウェン・ルー（Pao−Wen Lu）等の文
献に記載されているＬ−アスコルビン酸をジアゾメタン
によりメチル化して主に３−Ｏ−メチル−Ｌ−アスコル
ビン酸を生成するメチル化反応の方法により、本結晶物
質をメチル化し、次いで、得られるメチル化物を加水分
解して分析したところ、主として、３−Ｏ−メチル−Ｌ
−アスコルビン酸とＤ−グルコースとを生成した。

（12）物性、物質の色 無色透明な結晶。微結晶は白色粉末で酸味を有し、臭
はない。吸湿性はなく、潮解しない。また、130℃、２
時間の条件で乾燥減量を測定すると0.5W/W％未満であ
る。

過飽和水溶液から晶出中の結晶例を顕微鏡写真で第５
図に示す。

（13）呈色反応 直接還元性を示さず、2,6−ジクロルフェノールイン
ドフェノールを還元脱色しない。

2,4−ジニトロフェニルヒドロラジン反応を示さな
い。

アントロン硫酸反応で緑色を呈する。

（14）構成成分 α−グルコシダーゼ作用または1N−塩酸、100℃、５
分間処理により加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸とＤ
−グルコースとをモル比で1:1生成する。

（15）粉末Ｘ線回折 結晶粉末の粉末Ｘ線回折装置（理学電機株式会社製
造、商品名ガイガーフレックスRAD−II B、CuKα線使
用）による主な回折角（２θ）は、10.3゜、14.8゜、1
6.2゜、18.4゜、24.5゜である。

（16）単結晶Ｘ線解析 過飽和水溶液から晶出した単結晶をＸ線回折法で解折
したところ、本結晶は斜方晶系で、空間群がP2₁2₁2₁で
あり、格子定数がａ＝11.929A、ｂ＝24.351A、ｃ＝4.86
4Aで、α＝β＝γ＝90゜であった。

これらの結果から、本結晶の化学構造は、Ｌ−アスコ
ルビン酸の２位のアルコール基がＤ−グルコースの１位
のアルコール基との間でα−グルコシル結合しているこ
とが明らかである。

本結晶のORTEP図を第６図に示す。

以上の事実から、本結晶は、 式III: で示される新規な結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸である。

従って、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、 式IV: で示される化学構造でＬ−アルコスビン酸にα−Ｄ−グ
ルコース残基が等モル以上結合しているものと判断され
る。

実 験 ３ 結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸の溶解溶液の安定性 実験１の方法で調製した結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と、特公昭48−38158
号公報で開示されている６−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−
Ｌ−アスコルビン酸およびＬ−アスコルビン酸との水溶
液中での安定性を比較した。すなわち、それぞれの試料
を濃度70μＭ、pH7.0またはpH2.0に調整して吸光光度計
用セルに採り、これを45℃に維持して経時的に吸光光度
計によりpH7.0の場合260nmで、pH2.0の場合245nmで吸光
度を測定し、その残存率（％）を測定し比較した。

結果は表に示す。

表の結果からも明らかなように、結晶２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の溶解溶液
は、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン
酸、Ｌ−アスコルビン酸のいずれの場合とも違って、極
めて安定である。

実 験 ４ 急性毒性テスト ７週齢のdd系マウスを使用して、実験１の方法で調製
した結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸標品を経口投与して急性毒性テストをしたと
ころ、マウス体重1Kg当り5gまで死亡例は見られず、こ
れ以上の投与は困難であった。

従って、本物質の毒性は極めて低い。

以下、本発明の実施例として、２−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物とその結晶
の製造例を述べる。

実施例 １ α−シクロデキストリン９重量部を水20重量部に加熱
溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸３重量部
を加え、pH5.5、65℃に維持しつつ、これに、シクロマ
ルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式
会社林原生物化学研究所販売）をα−シクロデキストリ
ングラム当り100単位加えて40時間反応させた。反応液
を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、Ｌ−
アスコルビン酸の約50％が実験１の場合と同様にα−グ
リコシル−Ｌ−アスコルビン酸へ変換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させた後、55℃、pH4.
5に調整し、これにグルコアミラーゼをα−シクロデキ
ストリングラム当り50単位加えて、24時間反応させた。
反応液を高速液体クロマトグラフィーで分析したとこ
ろ、α−マルトシル−Ｌ−アスコルビン酸以上の高分子
α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、加水分解さ
れ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸に変換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾
過し、濾液をカチオン交換樹脂（H⁺型）のカラムにかけ
脱ミネラルし、次いで、アニオン交換樹脂（OH^-型）の
カラムにかけアニオンを樹脂に吸着させ、水洗してＤ−
グルコースなどを除去後、0.5N−塩酸溶液で溶出、濃縮
し、この濃縮液を原料溶液として、実験１に示すカラム
クロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチオン交
換樹脂（H⁺型）を充填したカラムを用いてカラムクロマ
トグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルピン酸高含有画分を採
取した。

次いで、これを濃度約76％に減圧濃縮して助晶缶にと
り、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸を種晶して1W/W％加えて40℃とし、ゆっくり
撹拌しつつ徐冷して２日間を要して25℃まで下げ、バス
ケット型遠心分離機で分蜜し、結晶を少量のエタノール
水でスプレーし洗浄して結晶を採取した。純度約99％の
結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸を原料のＬ−アスコルビン酸に対して収率約42W/
W％で得た。

本品の理化学的性質は、融点、比旋光度などの点で若
干異なるものの、本質的に実験１の方法で得た再結晶と
同一である。

本品は、実質的に吸湿性を示さず、取扱い容易であ
り、また、直接還元性を示さず、安定性、生理活性も充
分で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、呈味改善
剤、酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性
剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとして飲食
物、抗感受性疾患剤、化粧品、試薬などに遊離に利用で
きる。

実施例 ２ デキストリン（DE約６）30重量部を水40重量部に加熱
溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸７重量部
を加え、pH5.6、60℃に維持しつつ、これに、シクロマ
ルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼをデキ
ストリングラム当り250単位加えて、40時間反応させ
た。反応液を、高速液体クロマトグラフィーで分析した
ところ、Ｌ−アスコルビン酸の約65％が、実験１と同様
に、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸に変換してい
た。

本反応液をUF膜で濾過して酵素を回収除去した後、50
℃、pH5.0に調整し、これにグルコアミラーゼをデキス
トリングラム当り100単位加えて６時間反応させた。反
応液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、
α−Ｄ−マルトシル−Ｌ−アスコルビン酸以上の高分子
α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、加水分解さ
れ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸に変換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾
過し、濾液を濃縮し、次いで、この濃縮液を原料溶液と
して、実験１に示すカラムクロマトグラフィーの方法に
準じて、強酸性カチオン交換樹脂（ダウケミカル社製
造、商品名ダウェックス50WX4、Ca⁺⁺型）を充填したカ
ラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この
溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸高含有画分を採取した。

次いで、これをカチオン交換樹脂（H⁺型）で脱ミネラ
ルして精製し、濃度約77W/W％に減圧濃縮して助晶缶に
とり、種晶2W/W％加えて、45℃とし、ゆっくり撹拌しつ
つ、徐冷して２日間を要して28℃まで下げ、以下、実施
例１と同様に分蜜して、純度約98％の結晶２−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を原料のＬ
−アスコルビン酸に対して収率約45W/W％で得た。

本品は、実施例１の場合と同様に、実質的に吸湿性を
示さず、取扱い容易であり、また、直接還元性を示さ
ず、安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤とし
てばかりでなく、呈味改善剤、酸味剤、保湿剤、安定
剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収
剤、医薬原料、化学品などとして、飲食物、抗感受性疾
患剤、化粧品などに有利に利用できる。

実施例 ３ 実施例２の方法に従って、シクロマルトデキストリン
・グルカノトランスフェラーゼとグルコアミラーゼとを
作用させて２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸含有反応溶液を調製し、これを加熱して酵
素を失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾過をカチオン交
換樹脂（H⁺型）で脱ミネラルし、次いで、実験１に示す
カラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチ
オン交換樹脂（H⁺型）を充填したカラムを用いてカラム
クロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の高含有
画分を採取した。

次いで、これを濃度約90W/W％に濃縮して助晶缶にと
り、種晶約2W/W％加えて50℃とし、ゆっくり撹拌しなが
ら30分間保った後、バットにとり、25℃で３日間静置し
て晶出固化させ、次いでバットから取り出し切削型粉砕
機で粉砕し、乾燥して純度約95％の結晶２−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を原料のＬ−
アスコルビン酸に対して収率約70W/W％で得た。

本品は、実施例１の場合と同様に、実質的に吸湿性を
示さず、取扱い容易であり、また、直接還元性を示さ
ず、安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤とし
てばかりでなく、呈味改善剤、酸味剤、安定剤、品質改
良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原
料、化学品などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧
品、試薬などに有利に利用できる。

実施例 ４ 実施例３の方法で調製した２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を濃度約80W/W
％に濃縮して助晶缶にとり、種晶約2W/W％を加えて50℃
からゆっくり撹拌しつつ徐冷し、晶出率約35％のマスキ
ットを得、これを高圧ポンプにて150kg/cm²の圧にて1.5
mm口径ノズルより乾燥塔上より噴霧した。

これと同時に85℃の熱風を乾燥塔の上部より送風して
底部に設けた移送金網コンベア上に捕集し、コンベアの
下より40℃の温風を送りつつ移動金網コンベア上に捕集
した結晶粉末を乾燥塔外に徐々に移動させ、約30分を要
して取り出した。

この取り出した結晶粉末を熱成塔に充填して10時間熟
成させ、結晶化と乾燥を完了させ、純度約95％の結晶２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
を原料のｌ−アスコルビン酸に対して収率約70W/W％で
得た。

本品は、実施例１の場合と同様に、実質的に吸湿性を
示さず、取扱い容易であり、また、直接還元性を示さ
ず、安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤とし
てばかりでなく、呈味改善剤、酸味剤、安定剤、品質改
良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原
料、化学品などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧
品などに有利に利用できる。

実施例 ５ （１）α−グリコシターゼ標品 マルトース4W/V％、リン酸１カリウム0.1W/V％、硝酸
アンモニウム0.1W/V％、硫酸マグネシウム0.05W/V％、
塩化カリウム0.05W/V％、ポリペプトン0.2W/V％、炭酸
カルシウム1W/V％（別に乾熱減菌として植菌時に無菌的
に添加）および水からなる液体培地にムコール ジャパ
ニカス（Muocr javanicus）IFO 4570を温度30℃で44時
間震盪培養した。培養終了後、菌糸体を採取し、固定化
α−グルコシダーゼ標品とした。

（２）２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸高含有物とその結晶 マルトース（林原株式会社 登録商標サンマルト）40
重量部を水70重量部に加熱溶解し、還元下に保って、こ
れにＬ−アスコルビン酸10重量部と（１）の方法で調製
した固定化α−グルコシダーゼ標品をマルトースグラム
当り10単位加え、遮光下、pH5.5、50℃で３時間反応さ
せた。

ここでいう活性１単位とは、1.35mM EDTAを含む0.1M
酢酸塩緩衝液（pH6.0）750μＬと4W/V％マルトース250
μＬの混液に、適当に希釈した酵素液100μＬを加え、3
7℃で30分間反応させた後、沸騰水に３分間保って反応
を停止させ、これを遠心分離し、その上清20μＬを採
り、これに発色試薬（グルコースオキシダーゼ法、和光
純薬社製、商品名グルコースＢテスト）1mLを加えて、3
7℃に20分間保って発色させ、次いで505nmにおける吸光
度を測定する条件で、37℃、１分間に１μmoleのグルコ
ースを遊離する酵素量をいう。

この反応液を濾過し、固定化α−グルコシダーゼを回
収し、再利用に回した。得られる濾液を実施例２の方法
に従って、活性炭で脱色、強酸性カチオン交換樹脂を充
填したカラムによるカラムクロマトグラフィーを行ない
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸高含有画分を採取した。

次いで、これをカチオン交換樹脂（H⁺型）で脱ミネラ
ルで精製し、以後、実施例３の方法に従って、濃度約90
W/W％に減圧濃縮して助晶缶にとり、種晶を加えて助晶
し、バットで晶出固化させ、これを切削型粉砕機で粉砕
し、乾燥して純度約88％の結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を原料のＬ−アスコル
ビン酸に対して収率約20W/W％で得た。

本品は、実施例１の場合と比較すると、その性質はや
や劣るものの実質的に吸湿性を示さず、取扱い容易であ
り、また、直接還元性を示さず、安定性、生理活性も充
分でビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、呈味改善
剤、酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性
剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとして飲食
物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。

［発明の効果］ 本文で延べたごとく、本発明において、Ｌ−アスコル
ビン酸とα−グリコシル糖化合物とを含有する溶液に糖
転移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼとを作用
させて得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する
溶液の分離精製に際し、その溶液を原料溶液とし、強酸
性カチオン交換樹脂を使用するカラムクロマトグラフィ
ーを採用して、その溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取するこ
とにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸高含有物が高収率で製造でき、加えて、こ
の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸高含有物を過飽和溶液にして安定な無水型結晶が容
易に製造できることより、本発明の２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方
法は、経済性に優れ、その工業実施も容易である。

この製造方法で得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物は、安定で取扱い
容易であり、とりわけ、それを晶出させた結晶２−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、実
質的に吸湿性を示さず、潮解、固着もなく取扱い容易
で、また、直接還元性を示さず、安定性に優れている。
しかも、生体内で容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビ
ン酸本来の抗酸化性、生理活性を発揮する。その上、２
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
が、生体内で生成され、代謝される物質でもあることが
判明したことより、その安全性も極めて高い物質であ
る。

更に、この実質的に吸湿性を示さず、取扱い容易な結
晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸は、安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤
としてばかりでなく、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、
生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとし
て、飲料、加工食品、嗜好物などの飲食物、感受性疾患
の予防剤、治療剤、更には美肌剤、色白剤など化粧品な
どに含有せしめて有利に利用できる。従って、本発明の
２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸高含有物は広範な用途を有し、これら産業界に与える
工業的意義は極めて大きい。

【図面の簡単な説明】

第１図は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸をpH2.0に溶解したものの紫外線吸収
スペクトル図を示す。 第２図は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸をpH7.0に溶解したものの紫外線吸収
スペクトル図を示す。 第３図は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸の赤外線吸収スペクトル図を示す。 第４図は、非晶質２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸の赤外線吸収スペクトル図を示す。 第５図は、過飽和水溶液から晶出中である結晶の構造の
一例を示す写真（40倍に拡大）である。 第６図は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸のORTEP図を示す。

Claims (4)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化
   合物とを含有する溶液に、糖転移酵素または糖転移酵素
   とグルコアミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α
   −Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに
   それ以外の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、強
   酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィ
   ーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
   ノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取すること
   を特徴とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
   アスコルビン酸高含有物の製造方法。
2. 【請求項２】Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化
   合物とを含有する溶液に、糖転移酵素または糖転移酵素
   とグルコアミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α
   −Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに
   それ以外の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、強
   酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィ
   ーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
   ノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これ
   を濃縮、過飽和にし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
   ノシル−Ｌ−アスコルビン酸を析出せしめることを特徴
   とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
   ルビン酸高含有物の製造方法。
3. 【請求項３】Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化
   合物とを含有する溶液に、糖転移酵素または糖転移酵素
   とグルコアミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α
   −Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに
   それ以外の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、こ
   れをカチオン交換樹脂を充填したカラムにかけて脱ミネ
   ラルし、次いで、アニオン交換樹脂を充填したカラムに
   かけた後、水洗して夾雑糖類を除去し、酸で溶出し、得
   られた溶出液を強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラム
   クロマトグラフィーにかけ、この溶出液の２−Ｏ−α−
   Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分
   を採取することを特徴とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
   ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
4. 【請求項４】Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化
   合物とを含有する溶液に、糖転移酵素または糖転移酵素
   とグルコアミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α
   −Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに
   それ以外の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、こ
   れをカチオン交換樹脂を充填したカラムにかけて脱ミネ
   ラルし、次いで、アニオン交換樹脂を充填したカラムに
   かけた後、水洗して夾雑糖類を除去し、酸で溶出し、得
   られた溶出液を強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラム
   クロマトグラフィーにかけ、この溶出液の２−Ｏ−α−
   Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分
   を採取し、これを濃縮、過飽和にし、結晶２−Ｏ−α−
   Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を析出せし
   めることを特徴とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
   ル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。