KR100227598B1

KR100227598B1 - 신규의α-글리코실나린진을함유시킨화장품

Info

Publication number: KR100227598B1
Application number: KR1019990003921A
Authority: KR
Inventors: 요네야마마사루; 미야께도시오
Original assignee: 도시오 미야께; 가부시끼가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조
Priority date: 1990-04-29
Filing date: 1999-02-05
Publication date: 2000-03-15

Abstract

나린진의 등몰의 D-글루코오스 잔기가 α 결합하여 있는 신규의 나린진 유도체인 α-글리코실 나린진을 나린진과 α-글루코실 당화합물을 함유하는 용액에 당전이효소를 작용시켜 생성시킨다.

α-글리코실 나린진은 반응액을 다공성 합성 흡착제에 접촉시켜 반응액으로부터 쉽사리 회수할 수 있다.

나린진 고유의 쓴맛을 가진 α-글리코실 나린진은 수용성이 우수하고 독성이 없으며 생체내에서 쉽사리 가수분해되어 나린진과 D-글루코오스를 생성하여 나린진에 고유한 생리활성을 발휘한다.

따라서 α-글리코실 나린진을 화장품, 비타민 P 강화제, 음식물, 기호물, 사료, 이료, 항감수성 질환제 및 플라스틱 제품에 유리하게 이용할 수 있다.

Description

신규의 α-글리코실 나린진을 함유시킨 화장품{A COSMETIC CONTAINING A NOVEL ALPHA-GLYCOSYL NARINGIN}

본 발명은 신규의 α-글리코실 나린진(α-glycosyl naringin)을 함유시킨 화장품에 관한 것이다.

더욱 상세하게는 본 발명은 나린진에 등몰이상의 D-글루코오스 잔기가 α 결합하여 있는 α-글리코실 나린진에 관한 것이며 또한 나린진과 α-글루코실 당화합물을 함유한 용액에 당전이 효소를 작용시켜 신규의 α-글리코실 나린진을 생성시킨후 이것을 회수함을 특징으로 하는 α-글리코실 나린진의 제조방법으로 수득되는 α-글리코실 나린진을 함유시킴을 특징으로 하는 피부 청정제, 피부 색백제(色白劑)등의 화장품 등에 관한 것이다.

아래에 나온 바와 같은 화학구조를 가진 나린진은 모세혈관의 강화, 출혈예방, 혈압조정 등의 생리작용을 가진 비타민 P로서, 알려져 있고 또한 음식물 의약 및 화장품 등에 옛날부터 이용되고 있다.

비타민 P는 생체내에서 비타민 C의 생리활성, 예를 들자면 생체결합조직의 주성분인 콜라겐의 합성에 필요한 프롤린이나 리신의 히드록실화 반응에 관여하고, 또한 시토크롬 C의 Fe⁺⁺⁺를 환원하여 Fe⁺⁺로 하는 등의 산화환원 반응에 관여하며, 그리고 백혈구 증가에 의한 면역증강 작용에 관여한다고 알려져 있다. 따라서, 비타민 P는 생체의 건강유지와 증진에 중요한 역할을 하고 있다.

나린진의 용도는 단순히 영양소로서의 비타민 P 강화제에만 한정된 것이 아니고 여러가지 분야에 널리 적용되고 있다. 더욱 구체적으로는 화학구조와 생리활성으로 인해 나린진은 단독 또는 다른 한가지 이상의 비타민과 병용하여 영양 비타민 P 강화제로 사용되는데, 예를 들자면 화장품에 있어서는 안정제, 산화 방지제, 자외선(UV) 흡수제 및 멜라닌 생성억제제 등과 같은 피부 청정제 및 피부 색백제 등으로 사용되고, 음식물 등에 있어서는 고미제(苦味劑), 산화 방지제, 안정제, 품질 개량제 및 자외선(UV) 흡수제 등으로 사용되고, 또한 바이러스성 질환, 세균성 질환, 순환기 질환 및 악성 종양 등과 같은 감수성 질환에 있어서는 예방제 및 치료제, 즉 항감수성 질환제로 사용된다. 그러나, 나린진은 물에 거의 용해하기 어렵고 25℃에서 1ℓ의 물에 약 1g 정도, 즉 약 0.1w/v% 정도만 용해하므로 실제적으로 사용하기가 극히 어렵다.

따라서, 종래의 나린진 및 그 유도체가 가진 결점을 해소하고, 특히 수용성이 우수하며, 나린진에 고유한 쓴맛을 유지하고 독성의 우려가 없는 외에도 생체내에서 소요의 생리활성을 충분히 발휘할 수 있는 나린진 유도체의 실현이 강력히 요망되고 있다.

본 발명은 위와 같은 종래의 결점을 해소하기 위하여 완성된 것으로서, 생화학적 방법을 이용하여 신규의 나린진 유도체를 목표로 하여 예의 연구를 하였다.

그 결과 나린진과 α-글루코실 당 화합물을 함유한 용액에 당전이 효소를 작용시켜 수용성이 우수하고 쓴맛을 유지하며 독성이 없고 생체내에 쉽사리 가수분해되어 나린진 본래의 생리활성을 발휘하는 신규의 α-글리코실 나린진을 생성시킬수 있음을 발견하여 그 제조방법 및 음식물, 감수성 질환의 예방제 및 치료제, 화장품 등에 대한 용도를 확립하여 본 발명을 완성하였다.

또한, 이 당전이 반응에 의해 생성된 α-글리코실 나린진을 정제함에있어서는 그 반응용액과 다공성 합성 흡착제를 접촉시켜 그 흡착성의 차이를 이용함으로써 용이하게 정제할 수 있다는 것도 발견하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 α-글리코실 나린진의 제조방법은 종래기술의 결점을 한꺼번에 해소하여 그 공업화의 실현을 극히 용이하게 한 것이다.

도 1은 본 발명의 한가지 예로서 α-글리코실 나린진 시료 [II]의 적외선 흡수 스펙트럼.

도 2는 대조물인 나린진의 적외선 흡수 스펙트럼.

이하 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명에 사용되는 나린진은 고도로 정제된 나린진에 한정될 필요는 없고 나린진과, 예컨데 시트로닌, 헤스페리딘, 루틴 등과 같은 플라보노이드 배당체(flavonoid glycoside)와의 혼합물, 그리고 나린진을 함유하고 있는 각종 식물조직에서 얻은 추출물 또는 그 부분 정제 추출물 등을 적절히 사용 할 수 있다.

식물조직으로서는 예컨데 감귤류의 과실, 과피, 미숙 과실 등을 유리하게 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 α-글루코실 당화합물은 동시에 사용되는 당전이 효소에 의하여 나린진으로부터 α-글리코실 나린진을 생성할 수 있는 것이면 좋은데, 예를 들자면 아밀로오스, 덱스트린, 시클로덱스트린, 말토올리고당 등과 같은 전분 부분 가수분해물과 액화 전분 및 호화(糊化) 전분 등을 적절히 선택한다.

따라서 α-글리코실 나린진의 생성을 용이하게 하자면 당전이 효소에 적절한 감수성을 가진 α-글루코실 당화합물을 선택한다.

예를 들자면 당전이 효소로서 α-글루코시다아제(EC 3.2.1.20)를 사용할 경우에 있어서는 말토오스, 말토트리오스, 말토테트라오스 등과 같은 말토올리고당이나 DE(dextrose equivalent : 텍스트로오스 당량)가 약 10∼70인 전분 부분 가수분해물이 적합하다. 시클로말토덱스트린 글루카노트란스퍼라아제(EC 2.4.1.19)를 당전이 효소로 사용할 경우에는 시클로덱스트린 또는 DE가 1 이하인 호화 전분에서부터 DE가 약 60인 전분 부분 가수분해물이 적합하다. α-아밀라아제(EC 3.2.1.1.)를 당전이 효소로 사용할 경우에는 DE가 1 이하인 호화 전분에서부터 DE가 약 30인 덱스트린과 전분 부분 가수 분해물이 적합하다.

또한 반응시의 α-글루코실 당화합물의 농도는 나린진에 대하여 약 0.5∼100배, 바람직하게는 약 2∼20배인 범위가 바람직하다.

반응시의 나린진 함유액은 나린진을 될 수 있는 한 고농도로 함유하는 것이 바람직한데, 예를 들자면 나린진을 현탁액 상태 또는 고온에서 용해시키거나 pH 7.0을 초과하는 알칼리쪽 pH에서 용해시킨 용액상태로 하여 고농도로 함유하는 용액이 적합하며, 그 농도는 나린진 함량이 약 1w/v% 이상인 고농도, 바람직하게는 약 2∼20.0w/v%인 것이 바람직하다.

본 발명에 사용하는 당전이 효소는 나린진 및 이 효소에 적합한 성질을 가진 α-글루코실 당화합물을 함유한 용액에 작용시켰을 때 나린진을 분해하는 일이 없이 α-글리코실 나린진을 생성하는 것이면 된다.

이러한 당전이 효소의 예를 들자면 돼지간, 메밀종자 등과 같은 동식물 조직과, 무코르(Mucor)속(屬), 페니실리움(Penicillium)속, 사카로 미세스 (Saccharomyces)속 등에 속하는 곰팡이나 효모 등을 비롯한 미생물을 영양배지에서 배양하여 얻어지는 배양물로 부터 유도된 α-글루코시다아제 ; 바실루스(Bacillus)속과 클렙시엘라(Klebsiella)속 등에 속하는 세균 배양물로부터 유도된 시클로말토덱스트린 글루카노 트란스퍼라아제 ; 및 바실루스속과 아스페르길루스 (Aspergillus)속에 속하는 세균과 진균 배양물로부터 유도된 α-아밀라아제 등이 있다.

이러한 당전이 효소는 위에 나온 조건을 만족하는 한 반드시 정제하여 사용할 필요는 없고, 일반적으로는 조효소(粗酵素)로서 본 발명의 목적을 달성 할 수 있다.

필요하다면 종래의 방법으로 당전이 효소를 정제하여 사용해도 되고 시판되고 있는 당전이 효소를 사용해도 된다.

당전이 효소 사용량과 반응시간은 서로 밀접한 관계가 있는데, 경제성의 관점에서 약 5∼80 시간내에 반응을 종료할 수 있도록 당전이 효소 사용량을 선택한다.

또한 고정화(immobilized) 당전이 효소를 배치식(batchwise)으로 반복하거나 연속식으로 반응에 이용하는 것도 적절히 선택할 수 있다. 그리고, 반응 용액중에서의 나린진의 분해를 방지하기 위해 효소반응을 될 수 있는 한 광차단, 혐기(嫌氣), 약알칼리성 등의 조건하에서 실시하는 것이 바람직하다.

이와 같이 하여 수득한 α-글리코실 나린진을 함유한 반응 혼합물을 그 이상 더 특수한 처리를 하지 않고 그대로 최종제품으로 할 수 도 있다.

통상적으로는 반응 혼합물을 여과하고 농축하여 시럽상태로 하여 제품으로 하거나 필요에 따라서는 건조시켜 분말화 하여 분말상 제품으로 한다.

이들 제품은 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라 안정성이 큰 천연형의 고미제, 산화 방지제, 안정제, 품질 개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서 음식물, 기호물, 사료, 이료(餌料), 항감수성 질환제, 화장품, 플라스틱 제품 등의 용도에 유리하게 이용할 수 있다.

그리고 정제된 α-글리코실 나린진 제품을 제조하는 경우에는 다공성 합성 수지로 된 흡착제에 대한 흡착성의 차이를 이용하여 α-글루코실 당화합물을 비롯한 협잡물과 α-글리코실 나린진을 분리하여 정제하면 좋다.

본 발명에서 말하는 '다공성 합성수지'란 것은 다공성이며 흡착표면적이 크고, 또한 비이온성인 스티렌-디비닐벤젠 공중합체, 페놀-포름알데히드수지, 아크릴수지, 메타크릴레이트 수지 등의 합성수지인데, 그 예로서는 시판되고 있는 미합중국의 Rohm & Haas 사 제조의 상품명 Amberlite XAD-1, Amberlite XAD-2, Amberlite XAD-4, Amberlite XAD-7, Amberlite XAD-8, Amberlite XAD-11 및 Amberlite XAD-12와, 일본국의 三菱化成 공업주식회사제조의 상품명 Diaion HP-10, Diaion HP-20, Diaion HP-30, Diaion HP-40, Diaion HP-50 및 네델란드의 IMACTI 사 제조의 상품명 Imac Syn-42, Imac Syn-44, Imac Syn-46 등이 있다.

본 발명의 α-글리코실 나린진을 생성시킨 반응액의 정제방법은 α-글리코실 나린진을 함유한 반응액을, 예컨데 다공성 합성 흡착제를 충전한 칼럼속을 통해 주어 α-글리코실 나린진 및 비교적 소량의 미반응 나린진을 다공성 합성 흡착제에 흡착시키는 반면 다량으로 공존하는 α-글루코실 당화합물과 수용성 당류를 흡착시킴이 없이 그대로 유출시키는 단계로 되어 있다.

필요하다면 당전이 효소반응 종료후 다공성 합성 흡착제와 접촉시키기까지의 사이에 예컨데 반응액을 가열하여 생기는 불용물(不溶物)을 여과하여 제거한다거나 마그네슘 알루미노 실리케이트 수화물 또는 마그네슘 알루미네이트 등으로 처리하여 반응액중의 단백질 물질 등을 흡착제거한다거나 이온교환 수지(H형 및 OH형)등으로 처리하여 탈염하는 등의 정제방법을 조합하여 반응 혼합물을 처리할 수 있다.

위와 같이 해서 다공성 합성 흡착제 칼럼에 선택적으로 흡착시킨 α-글리코실 나린진과 비교적 소량의 미반응 나린진을 묽은 알칼리 또는 물로 세척한후 비교적 소량의 유기용매 또는 유기용매와 물의 혼합액, 예컨데 메탄올-물, 에탄올-물을 통해주면 먼저 α-글리코실 나린진이 용출하고, 계속해서 통해 주던지 유기용매를 농도를 증가시켜 주면 미반응 나린진이 용출한다.

α-글리코실 나린진 고함유 용출액을 증류처리하여 우선 유기용매를 제거한 후 적당한 농도까지 농축하면 α-글리코실 나린진을 주성분으로 하는 시럽상 제품을 얻는다. 그리고 이것을 건조하여 분말화 함으로써 α-글리코실 나린진을 주성분으로 하는 분말상 제품을 얻는다.

용기용매에 의한 α-글리코실 나린진과 미반응 나린진의 용출조작은 동시에 다공성 합성 흡착제의 재생조작이 되기도 하므로 이 다공성 합성 흡착제를 반복해서 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 다공성 합성 흡착제에 의한 정제방법의 특징은 α-글루코실 당화합물과 수용성 당류만이 아니고 수용성 염류 등의 협잡물도 동시에 제거할 수 있다는데 있다.

이와 같이 하여 수득한 α-글리코실 나린진은 다음과 같은 특징을 가지고 있다.

(1) 나린진과 비교하여 α-글리코실 나린진은 수용성이 극히 크다.

(2) 나린진과 비교하여 α-글리코실 나린진은 내광성과 안정성이 크다.

(3) α-글리코실 나린진은 나린진과 실질적으로 동일한 쓴맛을 가진다.

(4) α-글리코실 나린진은 체내의 효소에 의하여 나린진과 글루코오스로 가수 분해되어 나린진 본래의 생리활성, 특히 비타민 P 활성을 나타낸다.

또한 비타민 C와 병용함으로써 이들이 가진 생리활성을 증강시킬 수 있다.

(5) α-글루코실 당화합물을 추가로 함유하는 α-글리코실 나린진 제품의 경우에는 α-글리코실 나린진은 그 본래의 효과를 발휘할 뿐만 아니라, α-글루코실 당화합물의 부형(賦形)효과, 증량효과 및 감미효과를 발휘할 수가 있고, 또한 α-글루코실 당화합물을 제거한 정제제품인 경우에는 거의 부형효과와 증량효과를 나타냄이 없이 α-글리코실 나린진 효과를 발휘 할 수 있다.

이러한 특징으로부터 α-글리코실 나린진은 안정성이 큰 천연형의 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라 고미제, 산화방지제, 안정제, 품질 개량제, 바이러스성 질환, 세균성 질환, 순환기 질환, 악성 종양등 감수성 질환의 예방제와 치료제, 자외선 흡수제 등으로서 음식물, 기호물, 사료, 이료, 항감수성 질환제, 피부 청정제, 피부 색백제 등 화장품과 플라스틱 제품 등에 유리하게 이용할 수가 있다.

또한, α-글리코실 나린진은 내열성과 내산성이 극히 크고 신맛, 짠맛, 단맛, 떫은맛 등이 있는 각종 물질과 조화가 잘 되기 때문에 보통 일반적으로 음식물, 기호물, 예컨데 조미료, 일본식 과자, 양과자, 빙과, 음료, 스프레드(spread), 페이스트, 피클, 병조림, 통조림, 육가공품, 어육·수산가공품, 우유·란 가공품, 야채 가공품, 과실 가공품, 곡류 가공품 등에 광범위하게 이용할 수가 있다.

특히, α-글리코실 나린진의 쓴맛을 감귤류, 코코아, 커피, 쵸콜렛, 차류, 생약류에 또는 이들의 향미제에 부여하여 각종 음식물의 맛과 풍미개선을 하는데 아주 적합하다. 또한 α-글리코실 나린진을 스테비오시드, α-글리코실 스테비오시드, 레바우디오시드 A, 글리시리진, α-글리코실 글리시리진 및 디히드로 칼콘류 등과 같은 식물에서 유도된 감미료 ; 글리신, 알라닌 및 L-아스파르틸페닐알라닌 메틸 에스테르 등의 아미노산계 감미료 ; 수크로오스, 전분시럽, 글리코실 수크로오스, 글루코오스, 이성화당, 푸룩토오스, 꿀, 말토오스, 소르비톨, 말티톨 및 락토오스 등과 같은 당류 감미료 등으로부터 선택되는 감미료 한가지 또는 두가지 이상과 병용하여 맛과 풍미를 개선향상시킬 수 있다. 그리고 α-글리코실 나린진은 과즙중의 플라보노이드 화합물의 결정화와 침전을 방지하기 때문에 과즙음료, 과즙으로 된 젤리 등의 식품에 사용하면 식품이 혼탁해지는 일이 없어진다. 더욱이 α-글리코실 나린진을 가축, 가금, 꿀벌, 누에, 물고기 등 사육동물의 사료와 이료에 비타민 P 강화제, 기호성 향상 등의 목적으로 배합하여 이용할 수도 있다.

기타 담배, 트로치, 간유 드롭, 복합 비타민제, 구중 청량제, 구중 향정, 가아글, 경관(經管) 영양제, 생약, 내복약, 주사제, 치약, 립스틱, 립크립(lip cream), 햇빛 그을음 방지 등 각종 고상, 페이스트상, 액상 기호물, 감수성 질환 예방제 및 치료제, 즉 항감수성 질환제, 피부 청정제, 피부 색백제 등의 화장품 등에 배합하여 이용하여도 유리하게 실시할 수 있고, 더욱이 자외선 흡수제, 열화(劣化) 방지제 등으로서 플라스틱 제품 등에 배합하여 이용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다.

본 발명에서 말하는 감수성 질환이란 α-글리코실 나린진에 의하여 예방되거나 치료되는 질환인데, 그 예로서는 바이러스성 질환, 세균성질환, 외상성 질환, 면역질환, 루마티스, 당뇨병, 순환기 질환, 악성 종양 등이 있다. α-글리코실 나린진의 감수성 질환 예방제 및 치료제는 그 목적에 따라 그 형상을 자유로 선택할 수 있다. 예를 들자면 분무제, 점안제, 점비제, 함수제, 주사제 등의 액제 ; 연고, 습포, 크리임 등과 같은 페이스트제 ; 분제, 과립, 캡슐제, 정제 등의 고제(固劑) 등이 있다. 제제에 있어서는 필요에 따라 다른 성분, 예컨대 치료제, 생리활성 물질, 항생 물질, 보조제, 증량제, 안정제, 착색제, 착향제 등의 중에서 한가지 또는 두가지 이상과 병용할 수도 있다.

투여량은 함량, 투여경로, 투여 빈도 등에 따라 적절히 조절할 수 있는데, 통상 α-글리코실 나린진으로서 성인 하루당 약 0.001∼10.0g의 범위가 바람직하다.

그리고 화장품의 경우도 대체로 전술한 예방제와 치료제에 준하여 이용할 수가 있다.

α-글리코실 나린진을 이용하는 방법으로서는 이들 제품이 완성되기까지의 공정에서 예컨데 혼화, 반죽, 용해, 침지, 침투, 산포, 도포, 분무, 주입 등 공지방법을 적절히 선택한다.

이하, 본 발명의 α-글리코실 나린진의 일예를 실험으로 설명한다.

실험 1

α-글리코실 나린진 제조

실험 1 (1) 당전이 반응

나린진 1 중량부와 덱스트린(DE 20) 6 중량부에 물 50 중량부를 가하고 가열 용해한 후 여기에 바실루스 스테아로더어모필루스(Bacillus stearothermophilus) 유래의 시클로말토덱스트린 글루카노트란스퍼라아제(일본국의주식회사林原生物化學硏究所 판매)를 덱스트린 1g당 20 단위 가하고 pH 6.0, 70℃로 유지하면서 18 시간 반응시킨 다음 가열하여 효소를 실활함으로써 α-글리코실 나린진 함유액을 얻었다.

실험 2 (2) 정제

실험 1 (1)의 방법으로 얻은 반응액을 여과하고, 여액을 다공성 합성 흡착제(일본국 三菱化成 공업주식회사판매의 상품명 'Diaion HP-10')를 충전한 칼럼에 SV 2의 유속으로 통과시켰다. 이 칼럼을 물로 세척한 후 50v/v% 에탄올 수용액을 통과시킨 다음 용출액을 감압하에 농축하여 용매를 제거하고 분말화해서 담황색의 α-글리코실 나린진 시료 [I]를 원료인 나린진 중량에 대하여 건조 고형물 기준(d.s.b.)으로 약 130%의 수율로 얻었다.

실험 1 (3) 아밀라아제에 의한 가수분해

실험 1 (2)의 방법으로 제조한 α-글리코실 나린진 시료 [I]를 물에 1w/v% 되게 용해하고 여기에 글루코아밀라아제(EC 3.2.1.3)(일본국 生化學 공업주식회사판매)를 이 시료 1g당 100 단위 가하고 pH 5.0, 55℃로 유지하면서 5 시간 반응시켰다. 반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 실활하고 여과한 후 여액을 다공성 합성 흡착제(일본국 三菱化成 공업주식회사판매의 상품명 'Diaion HP-10')의 칼럼에 SV 2의 유속으로 통과시켰다. 그 결과, 용액중의 α-글리코실 나린진과 미반응 나린진이 다공성 합성 흡착제에 흡착되었고 글루코오스, 염류 등은 흡착되지 않고 유출되었다. 이어서 칼럼에 물을 통과시켜 세척한 후 에탄올 수용액의 농도를 단계적으로 증가시켜 가면서 통과시켜 α-글리코실 나린진 고함유 분획물을 채취하여 감압 농축한 다음, 분말화하여 담황색의 α-글리코실 나린진 시료 [II]를 원료인 나린진 중량에 대하여 건조고형물 기준으로 약 70% 수율로 얻었다. 그리고 글루코아밀라아제 대신 β-아밀라아제(EC 3.2.1.2)(일본국 生化學 공업주식회사판매)를 사용하여 전술한 방법에 따라 α-글리코실 나린진 시료 [I]를 가수분해한 후 정제, 농축, 분말화하여 담황색의 α-글리코실나린진 시료 [III]을 원료인 나린진 중량에 대해 건조 고형물 기준으로 약 70% 수율로 얻었다.

실험 2

α-글리코실 나린진의 특성화

실험 2 (1) 수용성의 향상

실험 1 (1)의 방법에서 당전이 반응을 이용하여 제조한 α-글리코실 나린진 함유액과, 이 방법에 사용되는 효소를 미리 가열하여 실활시켜 실험1 (1)의 방법에 따라 처리한 대조액을 4℃에서 2일간 방치한 결과 대조액에서는 나린진이 석출하여 백탁화 한데 대하여 α-글리코실 나린진 함유액은 투명한 그대로 있었다. 따라서 당전이 반응에 의하여 생성된 α-글리코실 나린진은 수용성이 현저하게 향상되었다.

실험 2 (2) 용제에 대한 용해도

α-글리코실 나린진 시료는 물, 0.1N NaOH 및 0.1N HCl에 쉽사리 용해하였고 메탄올과 에탄올에는 약간 용해 하였으며 에테르, 벤젠 및 클로로포름에는 용해하지 않았다.

실험 2 (3) 맛의 질

원료 나린진과 α-글리코실 나린진 시료 [I], [II] 및 [III]을 각각 1mM 수용액으로 하여 그 맛의 질을 비교한 결과 시료 [I], [II] 및 [III]은 어느 것이나 원료 나린진의 쓴맛을 잘 유지하고 있었고 원료 나린진의 경우와 거의 동등한 쓴맛을 나타내었음이 판명되었다.

실험 2 (4) 자외선 흡수 스펙트럼

α-글리코실 나린진 시료의 수용액(pH 6.0)을 각각 사용하여 자외선 흡수 스펙트럼을 조사한 결과, 시료 [I], [II] 및 [III]중 어느 것이나 원료 나린진의 경우와 마찬가지로 흡수 강도순으로 211nm, 282nm 및 329nm 부근에서 흡수 극대를 나타내었다.

실험 2 (5) 적외선 흡수 스펙트럼

KBr 정제법(錠劑法)에 따라 α-글리코실 나린진 시료의 적외선 흡수 스펙트럼을 조사했다. α-글리코실 나린진 시료 [II]의 결과를 도 1에, 그리고 대조로서 원료 나린진의 결과를 도 2에 나타내었다.

실험 2 (6) 가수분해에 대한 안정성

(가) α-글리코실 나린진 시료는 돼지 간장 유래의 α-글루코시다아제(EC 3.2.1.20)에 의해 가수분해되어 나린진과 D-글루코오스를 생성하였다.

(나) β-글루코시다아제에 의해서는 가수분해되지 않았다.

실험 2 (7) 박층 크로마토그래피

(가) 분석 방법

박층 플레이트 : 미합중국 Merck 사제의 상품명 'Kieselgel 60 F254'

전개용매 : 에틸 아세테이트 : 포름산 : 물 = 11 : 2 : 3

발색제 : 10w/w% 황산 수용액

(나) 분석결과

α-글리코실 나린진 시료를 분석한 결과 시료 [I]의 경우에는 Rf 0.79에서의 스포트(spot) 외에도 새로이 Rf 0.68, 0.49, 0.38 0.21에서의 스포트와 더불어 원점까지 수개의 스포트가 나타났고, 시료 [II]의 경우에는 Rf 0.68에서의 스포트가, 그리고 시료 [III]의 경우에는 Rf 0.68 및 0.49에서의 스포트가 나타났다.

위에 나온 물리화학적 성질로 부터 시료 [I],[II], 및 [III]에 포함되는 Rf 0.68을 나타내는 물질은 나린진 1몰에 D-글루코오스 잔기 1몰이 α결합한 α-글루코실 나린진으로 판단되고, 시료 [I], 및 [III]에 포함되는 Rf 0.49를 나타내는 물질은 나린진 1몰에 D-글루코오스 2몰이 α결합한 α-말토실 나린진으로 판단되며, 마찬가지로 시료 [I]에 포함되는 Rf 0.38 이하의 여러개의 스포트를 나타내는 물질은 나린진 1몰에 D-글루코오스 잔기 3몰 이상이 α-결합한 α-말토올리고실 나린진이라고 판단된다.

이상과 같이 본 발명의 α-글리코실 나린진은 D-글루코오스 잔기가 등몰 이상 α 결합한 수용성이 극히 큰 신규의 나린진 당 유도체로서 생체내에서 섭취되면 α-글루코시다아제에 의하여 쉽사리 가수분해되어 나린진 본래의 생리 활성을 발휘한다.

실험 3 급성 독성

7 주령 되는 dd계 마우스를 사용하여 실험 1 (2)의 방법으로 제조한 α-글리코실 나린진 시료 [I]를 경구투여하여 급성 독성 시험을 한 결과 5g까지 사망한 예는 보이지 않았고 그 이상 투여는 곤란하였다.

따라서 본 물질의 독성은 극히 작다. 그런데 실험 1 (3)의 방법으로조제한 α-글리코실 나린진 시료 [II]를 사용하여 시험을 한 결과 마찬가지 결과를 나타내었는데 독성이 극히 적음이 판명되었다.

이하 본 발명을 α-글리코실 나린진의 제조방법을 실시예 A로 하고,α-글리코실 나린진의 용도예를 실시예 B로 하여 설명한다.

실시예 A-1

α-글리코실 나린진

나린진 1 중량부와 덱스트린(DE 10) 4 중량부를 물 10 중량부에 가열용해하고 75℃로 냉각한 즉시 바실루스 스테아로더어모필루스 유래의 시클로말토덱스트린 글루카노트란스퍼라아제(일본국주식회사林原生物化學硏究所 판매)를 덱스트린 1g당 20 단위 가하고 pH 5.5, 75℃로 유지하면서 교반하에 24 시간 반응시켰다. 반응액을 박층 크로마토그래피로 분석한 결과나린진의 약 65%가 α-글루코실 나린진, α-말토실 나린진, α-말토트리오실 나린진 및 α-말토테트라오실 나린진 등의 α-글리코실 나린진으로 전환하였다.

반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 실활하고 여과하여 여액을 통상적인 방법에 따라 이온교환수지(H형 및 OH형)로 탈염정제하고 농축하여 α-글루코실 당화합물을 함유하는 시럽상 α-글리코실 나린진 제품을 원료 물질의 중량에 대하여 건조 고형물당 약 85%의 수율로 얻었다.

이 제품은 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라 안정성이 큰 천연형의 고미제, 산화방지제, 안정제, 품질개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서 음식물, 기호물, 사료, 이료, 항감수성 질환제, 화장품, 플라스틱 제품 등의 용도에 유리하게 이용할 수 있다.

실시예 A-2 α-글루코실 나린진

실시예 A-1의 방법을 약간 변경하여 제조한 α-글루코실 당화합물을 함유하는 시럽상 α-글리코실 나린진 제품 1 중량부를 물 4 중량부에 용해하고 여기에 글루코아밀라아제(EC 3.2.1.3)(일본국 生化學 공업주식회사판매)를 α-글리코실 나린진 제품 고형물 1g당 100 단위 가하여 50℃에서 5 시간 반응시켰다. 반응액을 박층 크로마토그래피로 분석한 결과 α-글리코실 나린진은 α-글루코실 나린진으로 전환하여 있었다.

반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 실활하고 여과하여 여액을 다공성 합성 흡착제(일본국 三菱化成 공업주식회사판매의 상품명 'Daion HP-10')의 칼럼에 SV 2의 유속으로 통과시켰다.

그 결과, 용액중의 α-글루코실 나린진과 미반응 나린진이 다공성 합성 흡착제에 흡착되었고 글루코오스, 염류 등은 흡착되지 않은체 유출되었다. 이어서 칼럼에 물을 통해주어 칼럼을 세척한 후 에탄올 수용액의 농도를 단계적으로 증가시키면서 통과시켜 α-글루코실 나린진 고함유 분획물을 채취하여 감압농축한 후 분말화하여 분말상 α-글루코실 나린진을 원료인 나린진 중량에 대해 건조 고형물당 약 55%의 수율로 얻었다.

α-글루코실 나린진을 산으로 가수분해한 결과 나린게닌(naringenin) 1몰에 대하여 L-람노오스 1몰, D-글루코오스 2몰을 생성한 반면, 돼지 간장으로부터 추출하여 부분 정제한 α-글루코시다아제를 α-글루코실 나린진에 작용시켰을 경우 α-글루코실 나린진을 가수분해시켜 나린진과 D-글루코오스를 생성하였음을 확인하였다. 이 α-글루코실 나린진은 고도로 정제된 수용성이 큰 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라 고미제, 산화 방지제, 안정제, 품질 개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서 음식물, 기호물, 항감수성 질환제, 화장품에 유리하게 이용할 수 있다.

실시예 A-3 α-글리코실 나린진

나린진 1 중량부와 덱스트린(DE 8) 10 중량부를 물 20 중량부에 가열 용해하고 70℃로 냉각한 후 여기에 시클로말토덱스트린 글루카노트란 스퍼라아제를 덱스트린 1g당 30 단위 가하고 pH 6.0, 65℃로 유지하면서 교반하에 40 시간 반응시켰다.

반응액을 박층 크로마토 그래피로 분석한 결과 나린진의 약 75%가 α-글리코실 나린진으로 전환하였다.

반응액을 가열하여 잔존하는 효소를 실활하고 여과하여 여액을 다공성 합성 흡착제(미합중국 Rohm & Haas 사 제조의 상품명 'XAD-7')의 칼럼에 SV 1.5의 유속으로 통과시켰다.

그 결과, 용액중의 α-글리코실 나린진과 미반응 나린진이 다공성 합성 흡착제에 흡착되었고, 덱스트린, 올리고당, 염류 등은 흡착되지 않고 유출되었다.

이 칼럼을 물을 통해 주어 세척한 후 50v/v% 메탄올 수용액을 통과시켜 α-글리코실 나린진과 나린진을 용출하고 이것을 농축하여 분말화함으로써 분말상 α-글리코실 나린진 제품을 원료인 나린진 중량에대하여 고형물 기준으로 약 110%의 수율로 얻었다.

이 제품은 수용성이 큰 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라 안전성이 큰 천연형의 고미제, 산화 방지제, 안정제, 품질 개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서 음식물, 기호물, 사료, 이료, 항감수성 질환제, 화장품, 플라스틱, 제품 등의 용도에 유리하게 이용할 수 있다.

실시예 A-4 α-글리코실 나린진

실시예 A-4 (1) α-글루코시다아제 제조

말토오스 4w/v%, 인산 1 칼륨 0.1w/v%, 질산 암모늄 0.1w/v% , 황산 마그네슘 0.05w/v%, 염화 칼륨 0.05w/v%, 폴리펩톤 0.2w/v%, 탄산 칼슘 1w/v%〔별도로 건열(乾熱) 멸균하여 식균(植菌)시에 무균적으로 첨가〕및 물로 된 액체 배지 500 중량부 중에서 뮤코르 자바니커스(Mucor javanicus) IFO 4570을 온도 30℃에서 44 시간 진탕배양 하였다. 배양이 끝난후 균사체를 채취하여 그 습(濕) 균사체 48 중량부에 대하여 0.5 M 아세테이트 완충액(pH 5.3)에 용해한 4M 우레아액 500 중량부를 가하고 30℃에서 40 시간 정치한 후 원심분리하였다.

그 상청액을 흐르는 물속에서 하룻밤 투석한 후 황산 암모늄으로 0.9 포화 도로 포화시킨후 4℃에서 하룻밤 방치하여 생성된 염석물을 여과하여 취하고 0.01M 아세테이트 완충액(pH 5.3) 50 중량부에 현탁용해한 후 원심분리하여 상청액을 채취함으로써 α-글루코시다아제 시료로 하였다.

실시예 A-4 (2) α-글리코실 나린진 제조

나린진 3 중량부와 덱스트린(DE 30) 20 중량부를 물 50 중량부에 가열 용해하고 55℃로 냉각한 후 즉시 실시예 A-4 (1)의 방법으로 제조한 α-글루코시다아제 시료 10 중량부를 가하고 pH 6.0로 유지하면서 교반하에 55℃에서 40 시간 반응시켰다.

반응액을 박층 크로마토그래피로 분석한 결과 나린진의 약 50%가 α-글리코실 나린진으로 전환하였다. 이어서 반응액을 실시예 A-3와 마찬가지로 정제하고 농축, 분말화하여 분말상 α-글리코실 나린진 제품을 원료인 나린진 중량에 대하여 건조 고형물 기준으로 약 95%의 수율로 얻었다.

이 제품은 실시예 A-3의 경우와 마찬가지로 수용성이 큰 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라 안정성이 큰 천연형의 고미제, 산화 방지제, 안정제, 품질 개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제 등으로서 각종 용도에 이용할 수 있다.

실시예 B-1 욕용제

DL-락트산 나트륨 21 중량부, 피부르산 나트륨 8 중량부, 실시예 A-1의 방법으로 제조한 α-글리코실 나린진 5 중량부 및 에탄올 40 중량부를 정제수 26 중량부와 적당량의 착색료 및 향료를 혼합하여 욕용제(bath liquid)를 제조하였다.

이 제품은 피부청정제, 피부색백제 등으로서 적당하여 사용시에는 목욕물에 100∼10000배로 희석하여 사용하면 좋다. 이 제품은 목욕물 대신 세안용수(洗顔用水), 화장수 등에 희석하여 이용할 수도 있다.

실시예 B-2 밀크 로우션

폴리옥시에틸렌 베헤닐 에테르 0.5 중량부, 폴리옥시 에틸렌 소르비톨 테트라올레에이트 1 중량부, 유용성(油溶性) 글리세릴 모노스테아레이트 1 중량부, 피루브산 0.5 중량부, 베헤닐 알코올 0.5 중량부, 아보카도유(avocado oil) 1 중량부, 실시예 A-3의 방법으로 제조한 α-글리코실 나린진 1 중량부, 비타민 E 및 방부제 적당량을 통상의 방법에 따라 가열용해하고, 여기에 L-락트산 나트륨 1 중량부, 1,3-부틸렌 글리콜 5 중량부, 카르복시 비닐 폴리머 0.1 중량부 및 정제수 85.3 중량부를 가하여 균질화기로 유화하고 향료를 적당량 가하여 교반혼합해서 밀크 로우션을 제조하였다.

이 제품은 햇빛 그을음 방지, 피부 청정제, 피부 색백제 등으로서 유리하게 이용할 수 있다.

실시예 B-3 화장용 크리임

폴리옥시에틸렌 글리콜 모노스테아레이트 2 중량부, 자기 유화형 글리세린 모노스테아레이트 5 중량부, 실시예 A-2의 방법으로 제조한 α-글루코실 나린진 2 중량부, 유동 파라핀 1 중량부, 글리세릴 트리옥타네이트 10 중량부 및 방부제 적당량을 통상의 방법에 따라 가열용해하고, 여기에 L-락트산 2 중량부, 1,3-부틸렌 글리콜 5 중량부 및 정제수 66 중량부를 가하여 균질화기로 유화하고 향료 적당량을 가하여 교반혼합하여 표제의 크리임을 제조하였다.

실시예 B-4 하아드 캔디

환원 맥아당 물엿(일본국 林原 상사주식회사판매, 등록상표 'MABIT^R') 1500 중량부를 가열하여 감압하에 수분 약 2% 이하가 되기까지 농축한 후 여기에 실시예 A-3의 방법으로 제조한 분말상 α-글리코실 나린진 1 중량부와 적당량의 카라멜 및 커피 향료를 혼합한 다음 통상의 방법에 따라 성형하고 포장해서 하아드 캔디(hard candy)를 얻었다.

이 제품은 비타민 P와 쓴맛을 강화한 커피 캔디로서 낮은 충치유발성과 저칼로리의 것이다.

실시예 B-5 끓인 머위

머위의 껍질을 벗기고 적당한 길이로 절단하여 묽은 식염수에 수시간 침지한 다음, α-글리코실 루틴과 색소인 청색 1호를 배합해서 조제한 녹색 착색 조성물 및 실시예 A-1의 방법으로 제조한 시럽상 α-글리코실 나린진을 함유하는 액중에서 끓여 녹색의 신선한 끓인 머위를 얻었다.

이 제품은 만족스런 천연적인 쓴맛이 풍부하여 전통적인 일본 요리재료로 유리하게 사용 할 수 있다.

실시예 B-6 규히(Gyuhi : 전분 페이스트)

찹쌀 전분 1 중량부에 물 1.2 중량부를 혼합하고 가열, 호화(糊化) 하면서 여기에다 설탕 1.5 중량부, 결정성 β-말토오스(일본국 林原주식회사제조, 등록상표 'SUNMALT^R') 0.7 중량부, 물엿 0.3 중량부 및 실시예 A-1의 방법으로 제조한 시럽상 α-글리코실 나린진 0.02 중량부를 혼화한 후 통상의 방법에 따라 성형하고 포장해서 규히를 제조하였다.

이 제품은 만족스런 천연적인 쓴맛이 풍부한 전통적인 일본식 수수과자 처럼 보이는 맛있는 과자이다.

실시예 B-7 혼합 감미료

꿀 100 중량부, 이성화당 50 중량부, α-글리코실 스테비오시드(일본국 東洋精糖株式會社 제조, 상품명 'α-G sweet') 1 중량부 및 실시예 A-4의 방법으로 제조한 분말상 α-글리코실 나린진 0.02 중량부를 혼합하여 혼합 감미료를 제조하였다.

이 제품은 비타민 P를 강화한 감미료로서 그 감미도는 설탕의 약 2배이므로 건강식품으로서 적당하다.

실시예 B-8 크리임 필링(Cream-filling)

결정성 α-말토오스(일본국 林原주식회사제조, 등록상표 'FINETOSE^R') 1200 중량부, 쇼오트닝 1000 중량부, 카카오 매스(cacao mass) 50 중량부, 실시예 A-3의 방법으로 제조한 분말상 α-글리코실 나린진 3 중량부 및 레시틴 1 중량부를 통상의 방법에 따라 혼화하여 크리임 필링을 제조하였다.

이 제품은 비타민 P를 강화하고 쓴맛을 풍부하게 한 쵸코렛 풍미의 크리임 필링으로서 맛, 풍미, 용융 특성, 씹기 등이 우수한 것이다.

실시예 B-9 정제

L-아스코르브산 20 중량부에 결정성 β-말토오스 13 중량부, 옥수수전분 4 중량부 및 실시예 A-2의 방법으로 제조한 분말상 α-글루코실 나린진 3 중량부를 균일히 혼합한후 직경 12mm, 20R의 펀치를 사용하여 타정해서 정제를 제조하였다.

이 제품은 L-아스코르브산과 α-글루코실 나린진과의 복합 비타민 제로서 L-아스코르브산의 안정성도 좋고 먹기 쉬운 정제이다.

실시예 B-10 캡슐제

아세트산 칼슘 1 수화물 10 중량부, L-락트산 마그네슘 3 수화물 50 중량부, 말토오스 57 중량부, 실시예 A-2의 방법으로 제조한 α-글루코실 나린진 20 중량부 및 에이코사펜타엔산 20% 함유 γ-시클로 덱스트린 포접(包接) 화합물 12 중량부를 균일히 혼합하여 과립 성형기에서 과립화 한 후 통상의 방법에 따라 젤라틴 캡슐에 봉입하여 1 캡슐당 150mg 용량의 캡슐제를 제조하였다.

이 제품은 혈중 콜레스테롤 저하제, 면역 상승제, 피부 청정제 등으로서 감수성 질환의 예방제, 치료제, 건강증진용 식품 등에 유리하게 이용할 수 있다.

실시예 B-11 연고

아세트산 나트륨 3 수화물 1 중량부, DL-락트산 칼슘 4 중량부를 글리세린 10 중량부와 균일히 혼합한 것을 와세린 50 중량부, 식물성 왁스 10 중량부, 라놀린 10 중량부, 참기름 14.5 중량부, 실시예 A-4의 방법으로 제조한 α-글리코실 나린진 1 중량부 및 페페민트유 0.5 중량부로된 혼합물에 가하고 균일히 혼화하여 연고를 제조하였다.

이 제품은 햇빛 그을음 방지, 피부 청정제, 피부 색백제등으로서, 그리고 외상, 화상 치료촉진제 등으로서 유리하게 이용할 수 있다.

실시예 B-12 주사제

실시예 A-2의 방법으로 제조한 α-글루코실 나린진을 물에 용해하고 통상의 방법에 따라 정제, 여과하여 발열물질이 함유되지 아니한 용액으로 한 후 이 용액을 20ml 유리 바이알에 α-글루코실 나린진 50mg이 함유되도록 나누어 넣고 이것을 감압건조하여 봉입해서 주사제를 제조하였다.

이 주사제는 단독 또는 기타 비타민, 미네랄 등과 혼합하여 근육내 또는 정맥내에 투여할 수 있다. 그리고 이 제품은 저온저장할 필요도 없고, 사용할 때 생리식염수 등에 대한 용해성은 극히 양호하다.

실시예 B-13 주사제

염화 나트륨 6 중량부, 염화 칼륨 0.3 중량부, 염화 칼슘 0.2 중량부, 락트산 나트륨 3.1 중량부, 말토오스 45 중량부 및 실시예 A-2의 방법으로 제조한 α-글루코실 나린진 1 중량부를 물 1000 중량부에 용해하고 통상의 방법에 따라 정제, 여과하여 발열물질이 함유되지 아니한 용액으로 한 후 이 용액을 멸균된 플라스틱 용기에 250ml씩 충전하여 주사제를 제조하였다.

이 제품은 비타민 P 보충으로서 뿐만 아니라 칼로리 보충, 미네랄 보충 등을 위한 주사제로서 병중이나 병후의 치료촉진, 회복촉진 등에 유리하게 이용할 수 있다.

실시예 B-14 경관 영양제

결정성 α-말토오스 20 중량부, 글리신 1.1 중량부, 글루탐산 나트륨 0.18 중량부, 식염 1.2 중량부, 시트르산 1 중량부, 락트산 칼슘 0.4 중량부, 탄산 마그네슘 0.1 중량부, 실시예 A-3의 방법으로 제조한 α-글리코실 나린진 0.01 중량부, 티아민 0.01 중량부 및 리보플라빈 0.01 중량부로 된배합물을 조제했다. 이 배합물 24g씩을 적층 알루미늄제 소형백(bag)에 충전하고 히이트 시일링(heat-sealing)해서 경관(經管) 영양제를 조제하였다.

이 경관 영양제는 백 하나를 약 300∼500ml의 물에 용해하여 경관 방법으로 비강(nasal cavity), 위, 장 등에 경구적 또는 비경구적 영양 보급액으로 하여 유리하게 이용할 수 있다.

이상 설명한 바와 같이 나린진에 D-글루코오스 잔기가 등몰이상 α 결합해 있는 본 발명의 신규물질인 α-글리코실 나린진은 수용성이 우수하고 쓴맛을 가지며 독성의 우려도 없고 생체내에서 쉽사리 나린진과 D-글루코오스로 가수 분해되어 나린진 본래의 생리활성을 발휘한다.

그리고 이 나린진과 α-글루코실 당화합물을 함유하는 용액에 당전이 효소를 작용시키는 생화학적 방법으로 α-글리코실 나린진을 쉽사리 생성시킬 수 있으므로 경제성이 우수하고 그 공업적 실시도 용이하다.

또한 나린진의 초기농도를 크게하여 반응시킬 수가 있으므로 α-글리코실 나린진을 용이하게 고농도로 생성시킬 수 있음을 발견함과 아울러 이 반응액의 정제에 있어서, 반응액을 다공성 합성 흡착제와 접촉시켜 α-글리코실 나린진을 정제할 수 있다는 것도 발견함에 따라 α-글리코실 나린진의 대량 제조를 극히 용이하게 할 수 있는 것이다.

또한 이와 같이 하여 제조되는 α-글리코실 나린진은 수용성 양호, 내광성과 안정성 양호, 충분한 생리활성 발휘 등의 특징을 가지고 있고 안전성이 큰 천연형의 비타민 P 강화제로서 뿐만 아니라 고미제, 산화 방지제, 안정제, 품질 개량제, 예방제, 치료제, 자외선 흡수제, 열화 방지제 등으로서 음식물, 기호물, 사료, 이료, 항감수성 질환제, 피부 청정제, 피부 색백제 등 화장품 그리고 플라스틱 제품 등에 유리하게 이용할 수 있다.

따라서 본 발명에 의한 α-글리코실 나린진의 공업적 제조방법과 그 용도의 확립은 음식품, 화장품, 의약품, 플라스틱 산업에 있어서, 공업적 의의가 극히 크다.

Claims

유효성분으로서 α-글리코실 나린진을 함유시킨 화장품.
제1항에 있어서, α-글리코실 나린진이 α-글루코실 나린진인 화장품.
제1항에 있어서, α-글리코실 나린진은, 나린진과 α-글루코실 당화합물을 함유하는 액체에 당전이 효소를 작용시켜 α-글리코실 나린진을 생성시키고, 이 α-글리코실 나린진을 회수함을 특징으로 하는 α-글리코실 나린진의 제조방법으로 제조되는 것인 화장품.
제1항에 있어서, 추가로 비타민 C를 함유하는 화장품.