JP2022064924A - 抗ｐｄ－１抗体、活性化可能抗ｐｄ－１抗体、およびその使用方法 - Google Patents

抗ｐｄ－１抗体、活性化可能抗ｐｄ－１抗体、およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

【課題】全身免疫を調節解除することなく抗腫瘍活性を提供する新しいアプローチを提供する。【解決手段】哺乳動物ＰＤ－１に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、該ＡＢが、以下からなる群より選択される特徴のうちの１つまたは複数を有する、前記抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）：（ａ）ＡＢは、５ｎＭ未満のＥＣ５０値で哺乳動物ＰＤＬ１に対する哺乳動物ＰＤ－１の結合を阻害する；（ｂ）ＡＢは、５ｎＭ未満のＥＣ５０値で哺乳動物ＰＤＬ２に対する哺乳動物ＰＤ－１の結合を阻害する；および（ｃ）ＡＢは、ヒトＰＤ－１およびカニクイザルＰＤ－１に特異的に結合する。【選択図】図１

Description

関連出願
本願は、2015年7月13日に出願された米国特許仮出願第62/191,902号；2015年8月17日に出願された米国特許仮出願第62/205,825号；2016年2月15日に出願された米国特許仮出願第62/295,314号；2016年4月15日に出願された米国特許仮出願第62/323,543号および2016年5月9日に出願された米国特許仮出願第62/333,629号の恩典を主張する。これらのそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
発明の分野
本発明は、概して、プログラム細胞死タンパク質1（PD-1）に特異的に結合する抗体、PD-1に特異的に結合する活性化可能抗体、ならびに様々な治療上、診断上、および予防上の適用において、これらの抗PD-1抗体および抗PD-1活性化可能抗体を作製および使用する方法に関する。
発明の背景
抗体に基づく療法は、いくつかの疾患については有効な処置だと判明しているが、場合によっては、広範な標的発現による毒性があるために、その治療有効性が制約されている。さらに、抗体に基づく治療法は、投与後、循環から急速に排出されるなど他の制約を示してきた。
慢性刺激の条件下で、T細胞は、阻害性受容体PD-1の発現をアップレギュレートおよび維持して、T細胞応答の質および大きさを負に調節する。PD-1の主要リガンドPD-L1は多くの腫瘍細胞上でアップレギュレートされており、腫瘍浸潤性T細胞に対するPD-1の関与を介して抗腫瘍T細胞免疫の阻害に関連している。抗体によるPD-1またはPD-L1のいずれかの遮断の、複数の腫瘍タイプにわたって患者における永続的な腫瘍特異免疫の活性を回復させる能力が、臨床試験により確認されている。(Herbst et al, 2014; Lipson et al, 2015)。しかし、類似の機構が抗腫瘍免疫および自己寛容を制御するため、これらのチェックポイントを標的とする療法の全身送達は、例えばニボルマブまたはペンブロリズマブ(抗PD-1)とイピリムマブ(抗CTLA4)のような併用処置で悪化されうる全身性自己免疫を誘導することもある。それゆえ、全身免疫を調節解除することなく抗腫瘍活性を提供する新しいアプローチが必要とされる。
低分子治療法の分野では、活性のある化学実体のプロドラッグを提供するための戦略が立案されている。このようなプロドラッグは比較的不活性な形態(または活性がかなり低い形態)で投与される。ひとたび投与されると、プロドラッグはインビボで活性化合物に代謝される。このようなプロドラッグ戦略は、意図された標的に対する薬物の選択性を高め、副作用を低減することができる。
従って、抗体に基づく治療法の分野では、低分子プロドラッグの望ましい特徴を摸倣する抗体が引き続き必要とされている。
本開示は、CD279、SLEB2および/またはhSLE1としても知られているプログラム細胞死タンパク質1 (PD-1)に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。「PD-1」という用語の使用は、非限定的な例として、PD1および/またはPD 1のような、その任意の変化形を網羅するように意図され、全ての変化形が本明細書において互換的に用いられる。PD-1およびPD-1関連シグナル伝達の異常な発現および/または活性は、がんのような、多くの疾患および障害の病因に関与している。
本発明は、PD-1に特異的に結合するモノクローナル抗体(mAbs)、活性化可能抗体、およびその抗原結合断片を提供する。
いくつかの態様において、前記抗体は、PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様において、PD-1に結合する抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、シングルドメイン重鎖抗体、またはシングルドメイン軽鎖抗体である。いくつかの態様において、このような、PD-1に結合する抗体またはその抗原結合断片は、マウス抗体、他のげっ歯類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。
いくつかの態様において、抗体は、哺乳動物PD-1に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)を含み、ここでABは、以下からなる群より選択される特徴の1つまたは複数を有する：(a) ABは、5 nM未満のEC50値で哺乳動物PDL1に対する哺乳動物PD-1の結合を阻害する; (b) ABは、5 nM未満のEC50値で哺乳動物PDL2に対する哺乳動物PD-1の結合を阻害する; および(c) ABは、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、抗体は0.01 nM～5 nM、0.05 nM～5 nM、0.1 nM～5 nM、0.2 nM～5 nM、0.3 nM～5 nM、0.4 nM～5 nM、0.5 nM～5 nM、0.75 nM～5 nM、1 nM～5 nM、2 nM～5 nM、0.01 nM～2 nM、0.05 nM～2 nM、0.1 nM～2 nM、0.2 nM～2 nM、0.3 nM～2 nM、0.4 nM～2 nM、0.5 nM～2 nM、0.75 nM～1 nM、1 nM～2 nM、0.01 nM～1 nM、0.05 nM～1 nM、0.1 nM～1 nM、0.2 nM～1 nM、0.3 nM～1 nM、0.4 nM～1 nM、0.5 nM～1 nM、0.75 nM～1 nM、0.01 nM～0.75 nM、0.05 nM～0.75 nM、0.1 nM～0.75 nM、0.2 nM～0.75 nM、0.3 nM～0.75 nM、0.4 nM～0.75 nM、0.5 nM～0.75 nM、0.01 nM～0.5 nM、0.05 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.2 nM～0.5 nM、0.3 nM～0.5 nM、0.4 nM～0.5 nM、0.01 nM～0.4 nM、0.05 nM～0.4 nM、0.1 nM～0.4 nM、0.2 nM～0.4 nM、0.3 nM～0.4 nM、0.01 nM～0.3 nM、0.05 nM～0.3 nM、0.1 nM～0.3 nM、0.2 nM～0.3 nM、0.01 nM～0.2 nM、0.05 nM～0.2 nM、0.1 nM～0.2 nM、0.01 nM～0.1 nM、0.05 nM～0.1 nM、または0.01 nM～0.05 nMの解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、哺乳動物PD-1は、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1からなる群より選択される。いくつかの態様において、哺乳動物PD-1はマウスPD-1である。いくつかの態様において、抗体は、1 nM以下の解離定数でヒトPD-1またはカニクイザルPD-1に特異的に結合する。いくつかの態様において、哺乳動物PD-1はヒトPD-1である。
いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、0.01 nM以下、0.05 nM以下、0.1 nM以下、0.2 nM以下、0.3 nM以下、0.4 nM以下、0.5 nM以下、0.75 nM以下、および1 nM以下である解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、抗体は、以下からなる群より選択される特徴の1つまたは複数を有する：(a) ABが、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1に特異的に結合する; (b) ABが、ヒトPD-1に対するヒトPDL1およびヒトPDL2の結合を阻害する; (c) ABが、カニクイザルPD-1に対するカニクイザルPDL1およびカニクイザルPDL2の結合を阻害する; (d) ABが、マウスPD-1に特異的に結合する; および(e) ABが、マウスPD-1に対するマウスPDL1およびマウスPDL2の結合を阻害する。
いくつかの態様において、抗体は0.1 nM～10 nM、0.1 nM～5 nM、0.1 nM～3 nM、0.1 nM～2 nM、0.1 nM～1 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.25 nM、0.25 nM～10 nM、0.25 nM～5 nM、0.25 nM～3 nM、0.25 nM～2 nM、0.25 nM～1 nM、0.25 nM～0.5 nM、0.5 nM～10 nM、0.5 nM～5 nM、0.5 nM～3 nM、0.5 nM～2 nM、0.5 nM～1 nM、1 nM～10 nM、1 nM～5 nM、1 nM～3 nM、1 nM～2 nM、2 nM～10 nM、2 nM～5 nM、2 nM～3 nM、3 nM～10 nM、3 nM～5 nM、または5 nM～10 nMのEC50で、哺乳動物PDL1に結合する天然リガンドの能力をブロックする。いくつかの態様において、天然リガンドは哺乳動物PDL1または哺乳動物PDL2である。いくつかの態様において、天然リガンドは、ヒトPDL1、ヒトPDL2、カニクイザルPDL1、およびカニクイザルPDL2からなる群より選択される。いくつかの態様において、天然リガンドはマウスPDL1またはマウスPDL2である。
いくつかの態様において、抗体は、0.1 nM以下、0.25 nM以下、0.5 nM以下、1 nM以下、2 nM以下、3 nM以下、4 nM以下、5 nM以下または10 nM以下のEC50で、哺乳動物PDL1に結合する天然リガンドの能力をブロックする。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖を含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 45のまたはSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45または47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、(a) SEQ ID NO: 653～657からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1); (b) SEQ ID NO: 658～663からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2); (c) SEQ ID NO: 664～668からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3); (d) SEQ ID NO: 669～677からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1); (e) SEQ ID NO: 678～682からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2); および(f) SEQ ID NO: 683～687からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3)を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000002
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000003
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000004
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000005
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000006
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000007
を含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000008
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000009
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000010
を含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000011
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000012
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000013
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000014
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000015
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000016
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000017
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000018
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000019
を含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000020
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000021
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000022
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000023
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000024
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000025
を含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000026
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000027
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000028
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000029
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000030
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000031
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000032
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000033
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000034
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000035
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000036
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000037
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000038
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000039
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000040
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000041
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000042
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000043
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000044
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000045
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000046
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000047
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000048
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000049
を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000050
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000051
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000052
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000053
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000054
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000055
を含む。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸を含む。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸を含む。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 45のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様において、抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列; 表8に示されるVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CD2配列; 表8に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせは、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖を含み、ここで該組み合わせは、表8の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、抗体は、表8の単列内に示されるVH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、ならびに表8の単列内に示されるVL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、抗体は、表8の単列内に示されるVH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、ならびに表8の単列内に示されるVL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される対応するVH CDR配列および表8の単列内に示される対応するVL CDRと少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖を含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000056
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000057
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000058
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000059
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000060
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000061
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000062
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000063
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR3配列は
Figure 2022064924000064
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000065
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000066
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000067
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000068
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000069
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000070
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000071
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000072
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000073
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000074
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000075
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR3配列は
Figure 2022064924000076
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000077
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000078
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000079
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗PD-1は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列、およびSEQ ID NO: 626のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列、およびSEQ ID NO: 638のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗PD-1は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列、およびSEQ ID NO: 626のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列、およびSEQ ID NO: 638のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、多重特異性抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、ここで多重特異性抗体の少なくとも1つの腕部がPD-1に特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合断片は、二重特異性抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、ここで二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部がPD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列とを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 45のまたはSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45または47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、(a) SEQ ID NO: 653～657からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1); (b) SEQ ID NO: 658～663からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2); (c) SEQ ID NO: 664～668からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3); (d) SEQ ID NO: 669～677からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1); (e) SEQ ID NO: 678～682からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2); および(f) SEQ ID NO: 683～687からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3)を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000080
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000081
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000082
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000083
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000084
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000085
を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000086
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000087
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000088
を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000089
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000090
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000091
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000092
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000093
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000094
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000095
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000096
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000097
を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000098
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000099
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000100
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000101
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000102
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000103
を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000104
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000105
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000106
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000107
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000108
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000109
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000110
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000111
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000112
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000113
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000114
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000115
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000116
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000117
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000118
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000119
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000120
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000121
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000122
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000123
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000124
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000125
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000126
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000127
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000128
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000129
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000130
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000131
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000132
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000133
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸を含む。いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000134
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000135
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000136
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000137
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000138
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000139
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000140
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000141
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR3配列は
Figure 2022064924000142
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000143
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000144
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000145
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000146
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000147
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000148
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000149
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000150
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000151
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000152
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000153
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR3配列は
Figure 2022064924000154
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000155
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000156
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000157
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列; 表8に示されるVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CD2配列; 表8に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせは、表8の単列内に示される6つのCDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、およびVL CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせは、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、表8の単列内に示されるVH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、ならびに表8の単列内に示されるVL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される対応するVH CDR配列および表8の単列内に示される対応するVL CDRと少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
本開示はまた、MMのカップリングがPD-1に結合する抗体またはその抗原結合断片の能力を低減させるような、マスキング部分(MM)にカップリングされたPD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む活性化可能抗体を提供する。いくつかの態様において、MMはプロテアーゼの基質として機能する配列を含む切断可能部分(CM)を介してカップリングされる。本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、切断可能部分がプロテアーゼによって切断される場合に活性化される。例えば、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞に近接する腫瘍によって産生される。いくつかの態様において、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞と共局在する腫瘍によって産生される。
本明細書において抗PD-1活性化可能抗体またはPD-1活性化可能抗体ともいわれる、本明細書において提供される活性化可能抗PD-1抗体は、循環血中で安定であり、意図された治療部位および/または診断部位で活性化されるが、しかし正常な、例えば健常な組織または処置および/もしくは診断の標的とされない他の組織では活性化されず、活性化されると、対応する非修飾抗体に少なくとも匹敵するPD-1への結合を示す。
本発明はまた、PD-1に結合する抗体または活性化可能抗体、特に、PD-1に結合して中和するか、そうでなければPD-1の少なくとも1つの生物学的活性を阻害する活性化可能抗体を用いて対象におけるPD-1の異常な発現および/もしくは活性に関連する症状を処置する、予防する、および/またはその症状の発症もしくは進行を遅らせる、またはその症状を緩和する方法を提供する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、活性化状態では哺乳動物PD-1に特異的に結合する活性化可能抗体を含み、該活性化可能抗体は、以下を含む：哺乳動物PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB); 活性化可能抗体が非切断状態にある場合に哺乳動物PD-1に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM); およびABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、前記CM。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、活性化状態では、(a) 哺乳動物PD-1に特異的に結合する; かつ(b) PD-1の天然リガンドが哺乳動物PD-1に結合するのを特異的にブロックする、活性化可能抗体を含み、該活性化可能抗体は、以下を含む：哺乳動物PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB); 活性化可能抗体が非切断状態にある場合に哺乳動物PD-1に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM); およびABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、前記CM。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、非切断状態では0.5 nM～1 nM、0.5 nM～2 nM、0.5 nM～5 nM、0.5 nM～10 nM、0.5 nM～15 nM、0.5 nM～20 nM、0.5 nM～25 nM、0.5 nM～50 nM、0.5 nM～75 nM、0.5 nM～100 nM、0.5 nM～150 nM、0.5 nM～200 nM、0.5 nM～300 nM、0.5 nM～400 nM、1 nM～2 nM、1 nM～5 nM、1 nM～10 nM、1 nM～15 nM、1 nM～20 nM、1 nM～25 nM、1 nM～50 nM、1 nM～75 nM、1 nM～100 nM、1 nM～150 nM、1 nM～200 nM、1 nM～300 nM、1 nM～400 nM、2 nM～5 nM、2 nM～10 nM、2 nM～15 nM、2 nM～20 nM、2 nM～25 nM、2 nM～50 nM、2 nM～75 nM、2 nM～100 nM、2 nM～150 nM、2 nM～200 nM、2 nM～300 nM、2 nM～400 nM、5 nM～10 nM、5 nM～15 nM、5 nM～20 nM、5 nM～25 nM、5 nM～50 nM、5 nM～75 nM、5 nM～100 nM、5 nM～150 nM、5 nM～200 nM、5 nM～300 nM、5 nM～400 nM、10 nM～15 nM、10 nM～20 nM、10 nM～25 nM、10 nM～50 nM、10 nM～75 nM、10 nM～100 nM、10 nM～150 nM、10 nM～200 nM、10 nM～300 nM、10 nM～400 nM、15 nM～20 nM、15 nM～25 nM、15 nM～50 nM、15 nM～75 nM、15 nM～100 nM、15 nM～150 nM、15 nM～200 nM、15 nM～300 nM、15 nM～400 nM、20 nM～25 nM、20 nM～50 nM、20 nM～75 nM、20 nM～100 nM、20 nM～150 nM、20 nM～200 nM、20 nM～300 nM、20 nM～400 nM、25 nM～50 nM、25 nM～75 nM、25 nM～100 nM、25 nM～150 nM、25 nM～200 nM、25 nM～300 nM、25 nM～400 nM、50 nM～75 nM、50 nM～100 nM、50 nM～150 nM、50 nM～200 nM、50 nM～300 nM、50 nM～400 nM、75 nM～100 nM、75 nM～150 nM、75 nM～200 nM、75 nM～300 nM、75 nM～400 nM、100 nM～150 nM、100 nM～200 nM、100 nM～300 nM、100 nM～400 nM、150 nM～200 nM、150 nM～300 nM、150 nM～400 nM、200 nM～300 nM、200 nM～400 nM、または300 nM～400 nMの解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、活性化状態では0.01 nM～5 nM、0.05 nM～5 nM、0.1 nM～5 nM、0.2 nM～5 nM、0.3 nM～5 nM、0.4 nM～5 nM、0.5 nM～5 nM、0.75 nM～5 nM、1 nM～5 nM、2 nM～5 nM、0.01 nM～2 nM、0.05 nM～2 nM、0.1 nM～2 nM、0.2 nM～2 nM、0.3 nM～2 nM、0.4 nM～2 nM、0.5 nM～2 nM、0.75 nM～1 nM、1 nM～2 nM、0.01 nM～1 nM、0.05 nM～1 nM、0.1 nM～1 nM、0.2 nM～1 nM、0.3 nM～1 nM、0.4 nM～1 nM、0.5 nM～1 nM、0.75 nM～1 nM、0.01 nM～0.75 nM、0.05 nM～0.75 nM、0.1 nM～0.75 nM、0.2 nM～0.75 nM、0.3 nM～0.75 nM、0.4 nM～0.75 nM、0.5 nM～0.75 nM、0.01 nM～0.5 nM、0.05 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.2 nM～0.5 nM、0.3 nM～0.5 nM、0.4 nM～0.5 nM、0.01 nM～0.4 nM、0.05 nM～0.4 nM、0.1 nM～0.4 nM、0.2 nM～0.4 nM、0.3 nM～0.4 nM、0.01 nM～0.3 nM、0.05 nM～0.3 nM、0.1 nM～0.3 nM、0.2 nM～0.3 nM、0.01 nM～0.2 nM、0.05 nM～0.2 nM、0.1 nM～0.2 nM、0.01 nM～0.1 nM、0.05 nM～0.1 nM、または0.01 nM～0.05 nMの解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、0.01 nM～5 nM、0.05 nM～5 nM、0.1 nM～5 nM、0.2 nM～5 nM、0.3 nM～5 nM、0.4 nM～5 nM、0.5 nM～5 nM、0.75 nM～5 nM、1 nM～5 nM、2 nM～5 nM、0.01 nM～2 nM、0.05 nM～2 nM、0.1 nM～2 nM、0.2 nM～2 nM、0.3 nM～2 nM、0.4 nM～2 nM、0.5 nM～2 nM、0.75 nM～1 nM、1 nM～2 nM、0.01 nM～1 nM、0.05 nM～1 nM、0.1 nM～1 nM、0.2 nM～1 nM、0.3 nM～1 nM、0.4 nM～1 nM、0.5 nM～1 nM、0.75 nM～1 nM、0.01 nM～0.75 nM、0.05 nM～0.75 nM、0.1 nM～0.75 nM、0.2 nM～0.75 nM、0.3 nM～0.75 nM、0.4 nM～0.75 nM、0.5 nM～0.75 nM、0.01 nM～0.5 nM、0.05 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.2 nM～0.5 nM、0.3 nM～0.5 nM、0.4 nM～0.5 nM、0.01 nM～0.4 nM、0.05 nM～0.4 nM、0.1 nM～0.4 nM、0.2 nM～0.4 nM、0.3 nM～0.4 nM、0.01 nM～0.3 nM、0.05 nM～0.3 nM、0.1 nM～0.3 nM、0.2 nM～0.3 nM、0.01 nM～0.2 nM、0.05 nM～0.2 nM、0.1 nM～0.2 nM、0.01 nM～0.1 nM、0.05 nM～0.1 nM、または0.01 nM～0.05 nMの解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合するABを含む。
いくつかの態様において、哺乳動物PD-1は、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1からなる群より選択される。いくつかの態様において、ABは、1 nM以下の解離定数でヒトPD-1またはカニクイザルPD-1に特異的に結合する。いくつかの態様において、哺乳動物PD-1はヒトPD-1である。いくつかの態様において、ABは、以下からなる群より選択される特徴の1つまたは複数を有する：(a) ABは、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1に特異的に結合する; (b) ABは、ヒトPD-1に対するヒトPDL1およびヒトPDL2の結合を阻害する; ならびに(c) ABは、カニクイザルPD-1に対するカニクイザルPDL1およびカニクイザルPDL2の結合を阻害する。
いくつかの態様において、哺乳動物PD-1はマウスPD-1である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、マウスPD-1に特異的に結合するか、またはマウスPD1に対するマウスPDL1およびマウスPDL2の結合を阻害するABを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、非切断状態では0.5 nM以上、1 nM以上、2 nM以上、3 nM以上、4 nM以上、5 nM以上、10 nM以上、15 nM以上、20 nM以上、25 nM以上、50 nM以上、75 nM以上、100 nM以上、150 nM以上、200 nM以上、300 nM以上および/または400 nM以上の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、活性化状態では0.01 nM以下、0.05 nM以下、0.1 nM以下、0.2 nM以下、0.3 nM以下、0.4 nM以下、0.5 nM以下、0.75 nM以下、および1 nM以下の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、0.01 nM、0.05 nM、0.1 nM、0.2 nM、0.3 nM、0.4 nM、0.5 nM、0.75 nM以下、および1 nM以下の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合するABを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、0.1 nM～10 nM、0.1 nM～5 nM、0.1 nM～3 nM、0.1 nM～2 nM、0.1 nM～1 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.25 nM、0.25 nM～10 nM、0.25 nM～5 nM、0.25 nM～3 nM、0.25 nM～2 nM、0.25 nM～1 nM、0.25 nM～0.5 nM、0.5 nM～10 nM、0.5 nM～5 nM、0.5 nM～3 nM、0.5 nM～2 nM、0.5 nM～1 nM、1 nM～10 nM、1 nM～5 nM、1 nM～3 nM、1 nM～2 nM、2 nM～10 nM、2 nM～5 nM、2 nM～3 nM、3 nM～10 nM、3 nM～5 nM、または5 nM～10 nMのEC50で哺乳動物PDL1に結合する天然リガンドの能力をブロックするABを含む。
いくつかの態様において、天然リガンドは哺乳動物PDL1または哺乳動物PDL2である。いくつかの態様において、天然リガンドは、ヒトPDL1、ヒトPDL2、カニクイザルPDL1、およびカニクイザルPDL2からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、以下の特徴の1つまたは複数を有する: (a) ABは、非肥満糖尿病(NOD)マウスにおいて1型糖尿病を誘発する; および(b) 活性化可能抗体は、非切断状態ではNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、0.5 mg/kg～15 mg/kg、1 mg/kg～15 mg/kg、2 mg/kg～15 mg/kg、3 mg/kg～15 mg/kg、5 mg/kg～15 mg/kg、10 mg/kg～15 mg/kg、0.5 mg/kg～10 mg/kg、1 mg/kg～10 mg/kg、2 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kg～10 mg/kg、5 mg/kg～10 mg/kg、0.5 mg/kg～5 mg/kg、1 mg/kg～5 mg/kg、2 mg/kg～5 mg/kg、3 mg/kg～5 mg/kg、0.5 mg/kg～3 mg/kg、1 mg/kg～3 mg/kg、2 mg/kg～3 mg/kg、0.5 mg/kg～2 mg/kg、1 mg/kg～2 mg/kg、または0.5 mg/kg～1 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、3 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kgまたは10 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、3 mg/kg～10 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、3 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、10 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する。
いくつかの態様において、ABは、0.5 mg/kg～15 mg/kg、1 mg/kg～15 mg/kg、2 mg/kg～15 mg/kg、3 mg/kg～15 mg/kg、5 mg/kg～15 mg/kg、10 mg/kg～15 mg/kg、0.5 mg/kg～10 mg/kg、1 mg/kg～10 mg/kg、2 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kg～10 mg/kg、5 mg/kg～10 mg/kg、0.5 mg/kg～5 mg/kg、1 mg/kg～5 mg/kg、2 mg/kg～5 mg/kg、3 mg/kg～5 mg/kg、0.5 mg/kg～3 mg/kg、1 mg/kg～3 mg/kg、2 mg/kg～3 mg/kg、0.5 mg/kg～2 mg/kg、1 mg/kg～2 mg/kg、または0.5 mg/kg～1 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、ABは、1 mg/kg～20 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、または20 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、ABは、1 mg/kg～20 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、ABは、1 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、ABは、3 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、ABは、5 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、ABは、10 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、ABは、20 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、以下の特徴の1つまたは複数を有する: (a) 活性化可能抗体は、非切断状態では非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超において1型糖尿病を誘発しない、および(b) ABは、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、NODマウス集団における各マウスへの、0.5 mg/kg～15 mg/kg、1 mg/kg～15 mg/kg、2 mg/kg～15 mg/kg、3 mg/kg～15 mg/kg、5 mg/kg～15 mg/kg、10 mg/kg～15 mg/kg、0.5 mg/kg～10 mg/kg、1 mg/kg～10 mg/kg、2 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kg～10 mg/kg、5 mg/kg～10 mg/kg、0.5 mg/kg～5 mg/kg、1 mg/kg～5 mg/kg、2 mg/kg～5 mg/kg、3 mg/kg～5 mg/kg、0.5 mg/kg～3 mg/kg、1 mg/kg～3 mg/kg、2 mg/kg～3 mg/kg、0.5 mg/kg～2 mg/kg、1 mg/kg～2 mg/kg、または0.5 mg/kg～1 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量の投与後に、該集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、3 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kgまたは10 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する。いくつかの態様において、用量は3 mg/kg～10 mg/kgの単回用量である。いくつかの態様において、用量は3 mg/kgの単回用量である。いくつかの態様において、用量は10 mg/kgの単回用量である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、以下の特徴の1つまたは複数を有する: (a) 活性化可能抗体は、非切断状態では3 mg/kgの単回用量で投与された場合に非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない; および(b) ABは、3 mg/kgの単回用量で投与された場合に、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、以下の特徴の1つまたは複数を有する: (a) 活性化可能抗体は、非切断状態では10 mg/kgの単回用量で投与された場合に非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない; および(b) ABは、10 mg/kgの単回用量で投与された場合に、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する。
いくつかの態様において、ABは、NODマウス集団における各マウスへの、2 mg/kg～15 mg/kg、3 mg/kg～15 mg/kg、5 mg/kg～15 mg/kg、10 mg/kg～15 mg/kg、2 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kg～10 mg/kg、5 mg/kg～10 mg/kg、2 mg/kg～5 mg/kg、3 mg/kg～5 mg/kg、または2 mg/kg～3 mg/kgの投与量でのABの単回用量の投与後に、該集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する。いくつかの態様において、用量は3 mg/kg～20 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、または20 mg/kgの単回用量である。いくつかの態様において、用量は3 mg/kg～20 mg/kgの単回用量である。いくつかの態様において、用量は3 mg/kgの単回用量である。いくつかの態様において、用量は5 mg/kgの単回用量である。いくつかの態様において、用量は10 mg/kgの単回用量である。いくつかの態様において、用量は20 mg/kgの単回用量である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、非切断状態では抗CTLA4抗体を同時に投与した非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超において1型糖尿病を誘発しない。
いくつかの態様において、NODマウス集団は、抗CTLA4抗体の用量と同時に2 mg/kg～15 mg/kg、3 mg/kg～15 mg/kg、5 mg/kg～15 mg/kg、10 mg/kg～15 mg/kg、2 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kg～10 mg/kg、5 mg/kg～10 mg/kg、2 mg/kg～5 mg/kg、3 mg/kg～5 mg/kg、または2 mg/kg～3 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量を各々投与される。いくつかの態様において、NODマウス集団は、抗CTLA4抗体の用量と同時に10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量を各々投与される。
いくつかの態様において、NODマウス集団は、抗PD-1活性化可能抗体の用量と同時に2 mg/kg～15 mg/kg、3 mg/kg～15 mg/kg、5 mg/kg～15 mg/kg、または10 mg/kg～15 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量を各々投与される。いくつかの態様において、NODマウス集団は、抗PD-1活性化可能抗体の用量と同時に10 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量を各々投与される。
いくつかの態様において、NODマウス集団は、5 mg/kg～15 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量および5 mg/kg～15 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量を各々投与される。いくつかの態様において、NODマウス集団は、10 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量と同時に10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量を各々投与される。
いくつかの態様において、NODマウスは雌性NOD/ShiLtJマウス亜系である。いくつかの態様において、NODマウス集団は、活性化可能抗体の最初の投与時に各々5週齢である。いくつかの態様において、NODマウス集団は、活性化可能抗体の最初の投与時に各々10週齢である。
活性化可能抗体は、活性化状態ではPD-1に結合し、(i) PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)と、(ii) 活性化可能抗体が非切断状態にある場合にABとPD-1との結合を阻害するマスキング部分(MM)と、(c)ABにカップリングされた切断可能部分(CM)とを含み、該CMは、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を有する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、MMとCMとの間に連結ペプチドを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、CMとABとの間に連結ペプチドを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MMのような構造的配置を有する。いくつかの態様において、2つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。いくつかの態様において、LP1およびLP2の各々は、約1～20アミノ酸の長さのペプチドである。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n(SEQ ID NO:363)、および(GGGS)n(SEQ ID NO:364)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、nは、少なくとも1の整数である。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、
Figure 2022064924000158
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、LP1は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000159
を含む。
いくつかの態様において、LP2は、アミノ酸配列GSS、GGS、GGGS(SEQ ID NO:377)、GSSGT(SEQ ID NO:378)、またはGSSG(SEQ ID NO:379)を含む。
いくつかの態様において、ABは、PD-1に対する結合について、約100nM以下の解離定数（Kd）を有する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)を含む。いくつかの態様において、PD-1に結合する抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、シングルドメイン重鎖抗体、またはシングルドメイン軽鎖抗体である。いくつかの態様において、このような、PD-1に結合する抗体またはその抗原結合断片は、マウス抗体、他のげっ歯類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 45のまたはSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45または47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、(a) SEQ ID NO: 653～657からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1); (b) SEQ ID NO: 658～663からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2); (c) SEQ ID NO: 664～668からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3); (d) SEQ ID NO: 669～677からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1); (e) SEQ ID NO: 678～682からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2); および(f) SEQ ID NO: 683～687からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000160
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000161
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000162
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000163
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000164
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000165
を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000166
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000167
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000168
を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000169
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000170
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000171
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000172
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000173
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000174
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000175
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000176
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000177
を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000178
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000179
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000180
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000181
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000182
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000183
を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000184
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000185
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000186
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000187
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000188
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000189
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000190
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000191
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000192
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000193
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000194
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000195
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000196
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000197
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000198
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000199
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000200
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000201
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000202
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000203
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000204
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000205
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000206
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000207
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000208
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000209
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000210
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000211
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000212
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000213
を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 45のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖配列と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖配列とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体のABは、表7に示される重鎖配列からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体のABは、表7に示される軽鎖配列からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体のABは、表7に示される重鎖配列からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列と、表7に示される軽鎖配列からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体のABは、表7に示される重鎖配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体のABは、表7に示される軽鎖配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体のABは、表7に示される重鎖配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、表7に示される軽鎖配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000214
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000215
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000216
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000217
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000218
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000219
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000220
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000221
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR3配列は
Figure 2022064924000222
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000223
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000224
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000225
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000226
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000227
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000228
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000229
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000230
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000231
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000232
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000233
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VH CDR3配列は
Figure 2022064924000234
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000235
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000236
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000237
と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列; 表8に示されるVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CD2配列; 表8に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表8の単列内に示されるVH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、ならびに表8の単列内に示されるVL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせは、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表8の単列内に示されるVH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、表8の単列内に示されるVL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される3つのVH CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける、ならびに表8の単列内に示される3つのVL CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、およびVL CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表9に示されるVH CDR1配列; 表9に示されるVH CDR2配列; 表9に示されるVH CDR3配列; 表9に示されるVL CDR1配列; 表9に示されるVL CDR2配列; および表9に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表9に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列; 表9に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CD2配列; 表9に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列; 表9に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列; 表9に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列; および表9に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、表9に示される組み合わせである、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表9に示される組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); ならびにSEQ ID NO: 675またはSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 675またはSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ならびにヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 675またはSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ならびにヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 675またはSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ならびにヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、かつヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 675のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 675のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ならびにヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 675のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ならびにヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 675のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ならびにヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、かつヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); ならびにSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ならびにヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ならびにヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ならびにヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、かつヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCM; ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCM; ならびにSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、本明細書においてマスクPD034またはPD34といわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000238
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2011ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000239
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000240
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000241
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、
アミノ酸配列
Figure 2022064924000242
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000243
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、本明細書においてマスクPD034またはPD34といわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000244
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2012ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000245
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000246
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000247
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000248
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000249
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、本明細書においてマスクPD034またはPD34といわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000250
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2011ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000251
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000252
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000253
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000254
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000255
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、本明細書においてマスクPD034またはPD34といわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000256
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2001ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000257
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000258
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000259
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000260
を含むマスキング部分(MM)、アミノ酸配列
Figure 2022064924000261
を含む切断可能部分(CM)、ならびにSEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000262
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2002ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000263
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000264
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2003ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000265
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000266
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2006ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000267
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000268
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2007ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000269
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000270
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2008ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000271
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000272
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2009ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000273
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000274
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において2010ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000275
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000276
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2013ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000277
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000278
を含むマスキング部分(MM)、本明細書において基質2014ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000279
を含む切断可能部分(CM)、ならびに(a) SEQ ID NO: 21の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; (b) SEQ ID NO: 676のVL CDR1配列; SEQ ID NO: 678のVL CDR2配列; SEQ ID NO: 683のVL CDR3配列; SEQ ID NO: 653のVH CDR1配列; SEQ ID NO: 658のVH CDR2配列; およびSEQ ID NO: 664のVH CDR3配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ; ならびに(c) SEQ ID NO: 21の可変重鎖(VH)配列およびSEQ ID NO: 47の可変軽鎖(VL)配列の組み合わせからなる群より選択される組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1151のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1152のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1190のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1191のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1198のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1199のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2055のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2052のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2054のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2052のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2057のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2052のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2056のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2052のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2059のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2052のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2058のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2052のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2055のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2053のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2054のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2053のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2057のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2053のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2056のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2053のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2059のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2053のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2058のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 2053のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1351～1362からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むマスキング部分(MM); SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む切断可能部分(CM); ならびにSEQ ID NO: 1514の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 638の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1351～1362からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCM; ならびにVH CDR1配列が
Figure 2022064924000280
を含み; VH CDR2配列が
Figure 2022064924000281
を含み; VH CDR3配列が
Figure 2022064924000282
を含み; VL CDR1配列が
Figure 2022064924000283
を含み; VL CDR2配列が
Figure 2022064924000284
を含み; かつVL CDR3配列
Figure 2022064924000285
を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1351～1362からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCM; SEQ ID NO: 1514のVH配列ならびにSEQ ID NO: 638のVL配列を含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1206～1217からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCM; ならびにSEQ ID NO: 1346の可変重鎖配列のVH CDR配列およびSEQ ID NO: 626の可変軽鎖配列のVL CDR配列を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1206～1217からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCM; ならびにVH CDR1配列が
Figure 2022064924000286
を含み; VH CDR2配列が
Figure 2022064924000287
を含み; VH CDR3配列が
Figure 2022064924000288
を含み; VL CDR1配列が
Figure 2022064924000289
を含み; VL CDR2配列が
Figure 2022064924000290
を含み; かつVL CDR3配列
Figure 2022064924000291
を含む、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1206～1217からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むMM; SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCM; SEQ ID NO: 1346のVH配列ならびにSEQ ID NO: 626のVL配列を含む。いくつかの態様において、組み合わせは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン、またはヒト免疫グロブリン重鎖定常領域およびヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの両方をさらに含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 63、381、382、383、および1807からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインは、SEQ ID NO: 61またはSEQ ID NO: 1344を含むヒトκ定常ドメインである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000292
を含むMM、本明細書において基質2012ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000293
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000294
を含むMM、本明細書において基質2011ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000295
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000296
を含むMM、本明細書において基質2001ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000297
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000298
を含むMM、本明細書において基質2002ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000299
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000300
を含むMM、本明細書において基質2003ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000301
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000302
を含むMM、本明細書において基質2006ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000303
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000304
を含むMM、本明細書において基質2007ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000305
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000306
を含むMM、本明細書において基質2008ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000307
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000308
を含むMM、本明細書において基質2009ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000309
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000310
を含むMM、本明細書において基質2010ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000311
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000312
を含むMM、本明細書において基質2013ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000313
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000314
を含むMM、本明細書において基質2014ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000315
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000316
を含むMM、本明細書において基質2012ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000317
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000318
を含むMM、本明細書において基質2011ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000319
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000320
を含むMM、本明細書において基質2001ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000321
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000322
を含むMM、本明細書において基質2002ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000323
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000324
を含むMM、本明細書において基質2003ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000325
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000326
を含むMM、本明細書において基質2006ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000327
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000328
を含むMM、本明細書において基質2007ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000329
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000330
を含むMM、本明細書において基質2008ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000331
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000332
を含むMM、本明細書において基質2009ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000333
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000334
を含むMM、本明細書において基質2010ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000335
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000336
を含むMM、本明細書において基質2013ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000337
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000338
を含むMM、本明細書において基質2014ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000339
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の可変重鎖領域(VH)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の可変軽鎖領域(VL)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000340
を含むMM、本明細書において基質2012ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000341
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000342
を含むMM、本明細書において基質2011ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000343
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000344
を含むMM、本明細書において基質2001ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000345
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000346
を含むMM、本明細書において基質2002ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000347
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000348
を含むMM、本明細書において基質2003ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000349
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000350
を含むMM、本明細書において基質2006ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000351
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000352
を含むMM、本明細書において基質2007ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000353
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000354
を含むMM、本明細書において基質2008ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000355
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000356
を含むMM、本明細書において基質2009ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000357
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000358
を含むMM、本明細書において基質2010ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000359
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000360
を含むMM、本明細書において基質2013ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000361
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000362
を含むMM、本明細書において基質2014ともいわれる、アミノ酸配列
Figure 2022064924000363
を含むCM; SEQ ID NO: 546の重鎖(HC)配列の重鎖相補性決定領域(CDR)、およびSEQ ID NO: 543の軽鎖(LC)配列の軽鎖相補性決定領域(CDR)を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1808、1810、1812、1814、1816、1818、1820、1822、1824、1826、1828、および1830からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖; ならびにSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1808のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1810のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1812のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1814のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1816のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1818のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1820のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1822のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1824のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1826のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1828のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1830のアミノ酸配列を含む軽鎖; およびSEQ ID NO: 546のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸をコードする核酸配列を含む核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 4、8、12、16、20、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 22、24、26、28、30、32、34、36、および38からなる群より選択される重鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列、ならびにSEQ ID NO: 40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、および60からなる群より選択される軽鎖核酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合についてのKdよりも大きい解離定数、すなわち平衡状態での解離定数、Kdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合についてのKd以下であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合についてのKd以上であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合についてのKdにほぼ等しいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合についてのKd未満であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合についてのKdより2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、または1,000倍以下だけ大きいKdを有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合についてのKdより1～5、2～5、2～10、5～10、5～20、5～50、5～100、10～100、10～1,000、20～100、20～1000、または100～1,000倍大きいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性未満である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性以下である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性にほぼ等しい親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性以上である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性よりも大きい親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性より2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、または1,000倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性より1～5、2～5、2～10、5～10、5～20、5～50、5～100、10～100、10～1,000、20～100、20～1000、または100～1,000倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、PD-1に対するABの結合の親和性より2～20倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、ABに共有結合していない、かつABに対して等モル濃度のMMは、PD-1に対するABの結合を阻害しない。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が切断状態にある場合、MMはPD-1に対する結合についてABに干渉も競合もしない。
いくつかの態様において、MMは、約2～40アミノ酸の長さのポリペプチドである。いくつかの態様において、MMは、約40アミノ酸までの長さのポリペプチドである。
いくつかの態様において、MMは、40アミノ酸以下の長さのポリペプチドである。
いくつかの態様において、MMのポリペプチド配列はPD-1のポリペプチド配列とは異なる。いくつかの態様において、MMのポリペプチド配列はヒトPD-1のポリペプチド配列とは異なる。いくつかの態様において、MMのポリペプチド配列は、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が50%以下である。いくつかの態様において、MMのポリペプチド配列は、PD-1のポリペプチド配列とは異なり、かつ、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が40%、30%、25%、20%、15%、または10%以下である。いくつかの態様において、MMのポリペプチド配列は、ヒトPD-1に対する同一性が50%以下である。いくつかの態様において、MMのポリペプチド配列は、PD-1のポリペプチド配列とは異なり、かつ、ヒトPD-1に対する同一性が40%、30%、25%、20%、15%、または10%以下である。
いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 66～213、384～514、548～571、1206～1295、および1351～1465からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 66～213、384～514、548～571、1206～1295、および1351～1465からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、および99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 66、71、74、77、82、84、90、91、93、および99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 1206～1217からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 1351～1362からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 66～213からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 66～213からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 384～514からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 384～514からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 548～571からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 548～571からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 1206～1295からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 1206～1295からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 1351～1465からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、MMは、SEQ ID NO: 1351～1465からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、抗体または活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2052および2053からなる群より選択されるアミノ酸を含む重鎖を含む。
いくつかの態様において、抗体または活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2054～2059からなる群より選択されるアミノ酸を含む軽鎖を含む。
いくつかの態様において、抗体または活性化可能抗体は、SEQ ID NO: 2052および2053からなる群より選択されるアミノ酸を含む重鎖と、SEQ ID NO: 2054～2059からなる群より選択されるアミノ酸を含む軽鎖とを含む。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも2倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも5倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも10倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも20倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも40倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも100倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも1000倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様では、PD-1に対する、MMにカップリングしている時のABの解離定数(Kd)が、PD-1に対する、MMにカップリングしていない時のABのKdの少なくとも10,000倍になるように、MMがABにカップリングすることによって、ABの、PD-1に結合する能力が低下する。
いくつかの態様において、標的置換(target displacement)アッセイ、例えば、PCT公開番号WO2010/081173に記載のアッセイを用いてインビトロでアッセイした時、CMが切断されている場合と比較して、CMが切断されていない場合、PD-1の存在下で、MMによって、ABのPD-1に結合する能力は少なくとも90％低下する。WO2010/081173の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
いくつかの態様において、CMを切断するプロテアーゼは、罹患組織において活性があり、例えばアップレギュレートされており、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露された時に、活性化可能抗体にあるCMを切断する。
いくつかの態様において、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞に近接する腫瘍によって産生され、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露されると、プロテアーゼは活性化可能抗体におけるCMを切断する。いくつかの態様において、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞と共局在する腫瘍によって産生され、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露されると、プロテアーゼは活性化可能抗体におけるCMを切断する。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも2倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも5倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも10倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも20倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合(すなわち、活性化可能抗体が切断状態にある場合)は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも40倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも50倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも100倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体が非切断状態にある場合は、活性化可能抗体とPD-1との結合が、改変されていないABとPD-1との結合の解離定数の少なくとも200倍の解離定数で起こるように低下するが、切断状態にある場合は、ABがPD-1に結合するように、CMは、活性化可能抗体に配置される。
いくつかの態様において、CMは、15アミノ酸までの長さのポリペプチドである。
いくつかの態様において、CMは、少なくとも1つのマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)の基質である第1の切断可能部分(CM1)と、少なくとも1種類のセリンプロテアーゼ(SP)の基質である第2の切断可能部分(CM2)を含むポリペプチドである。いくつかの態様において、CM1-CM2基質のCM1基質配列およびCM2基質配列はそれぞれ、独立して、15アミノ酸までの長さのポリペプチドである。
いくつかの態様において、CMは、がんにおいてアップレギュレートされている、またはがんにおいてアップレギュレートされていると考えられている、少なくとも1種類のプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMは、炎症においてアップレギュレートされている、または炎症においてアップレギュレートされていると考えられている、少なくとも1種類のプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMは、自己免疫においてアップレギュレートされている、または自己免疫においてアップレギュレートされていると考えられている、少なくとも1種類のプロテアーゼの基質である。
いくつかの態様において、CMは、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、レグマイン(legumain)、およびセリンプロテアーゼ、例えば、マトリプターゼ(MT-SP1)、ならびにウロキナーゼ(uPA)からなる群より選択される少なくとも1種類のプロテアーゼの基質である。理論に拘束されるものではないが、これらのプロテアーゼは、がん、炎症、および/または自己免疫の少なくとも1つにおいてアップレギュレートされていると考えられている。
例示的な基質には、表3に列挙した以下の酵素またはプロテアーゼの1つまたは複数によって切断可能な基質が含まれるが、これに限定されない。
いくつかの態様において、CMは、特定のプロテアーゼ、例えば、活性化可能抗体の標的と共存することが知られているプロテアーゼと共に使用するために選択される。例えば、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞に近接する腫瘍によって産生される。いくつかの態様において、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞と共局在する腫瘍によって産生される。
いくつかの態様において、CMは、少なくとも1種類のMMPの基質である。MMPの例には、表3に列挙したMMPが含まれる。いくつかの態様において、CMは、MMP9、MMP14、MMP1、MMP3、MMP13、MMP17、MMP11、およびMMP19からなる群より選択されるプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMはMMP9の基質である。いくつかの態様において、CMはMMP14の基質である。
いくつかの態様において、CMは、配列
Figure 2022064924000364
を含む基質である。
いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000365
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000366
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000367
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000368
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000369
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000370
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000371
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000372
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000373
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000374
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000375
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000376
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000377
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000378
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000379
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000380
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000381
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000382
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000383
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000384
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000385
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000386
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000387
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000388
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000389
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000390
を含む。いくつかの態様において、CMはアミノ酸配列
Figure 2022064924000391
を含む。
いくつかの態様において、CMはMMPの基質であり、配列
Figure 2022064924000392
を含む。
いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000393
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000394
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000395
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000396
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000397
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000398
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000399
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000400
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000401
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000402
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000403
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000404
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000405
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000406
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000407
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000408
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000409
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000410
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000411
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000412
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000413
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000414
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000415
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000416
を含む。
いくつかの態様において、CMはトロンビンの基質である。いくつかの態様において、CMはトロンビンの基質であり、配列
Figure 2022064924000417
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000418
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000419
を含む。
いくつかの態様において、CMは、
Figure 2022064924000420
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000421
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000422
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000423
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000424
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000425
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000426
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000427
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000428
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000429
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000430
を含む。いくつかの態様において、CMは、アミノ酸配列
Figure 2022064924000431
を含む。
いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO: 214、294～361、1092～1112、1157、1158、1161、1162、1165、1166、1169、1520、および1695～1704からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、CMは、SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CMは好中球エラスターゼの基質である。いくつかの態様において、CMはセリンプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMはuPAの基質である。いくつかの態様において、CMはレグマインの基質である。いくつかの態様において、CMはマトリプターゼの基質である。いくつかの態様において、CMはシステインプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、CMは、カテプシンなどのシステインプロテアーゼの基質である。
いくつかの態様において、CMはCM1～CM2基質であり、以下の配列を含む。
Figure 2022064924000432
いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000433
を含み、これは本明細書において基質2001ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000434
を含み、これは本明細書において基質1001/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000435
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000436
を含み、これは本明細書において基質1004/LP'/0003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000437
を含み、これは本明細書において基質0003/LP'/1004ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000438
を含み、これは本明細書において基質1003/LP'/0003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000439
を含み、これは本明細書において基質0003/LP'/1003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000440
を含み、これは本明細書において基質1004/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000441
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1004ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000442
を含み、これは本明細書において基質1003/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000443
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000444
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000445
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000446
を含み、これは本明細書において基質0002/LP'/1001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000447
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000448
を含み、これは本明細書において基質1001/LP'/0002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000449
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000450
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000451
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000452
を含み、これは本明細書において基質1002/LP'/0001ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000453
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000454
を含み、これは本明細書において基質0002/LP'/1002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000455
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000456
を含み、これは本明細書において基質1002/LP'/0002ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000457
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000458
を含み、これは本明細書において基質2002ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000459
を含み、これは本明細書において基質2003ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000460
を含み、これは本明細書において基質2004ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000461
を含み、これは本明細書において基質2005ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000462
を含み、これは本明細書において基質2006ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000463
を含み、これは本明細書において基質2007ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000464
を含み、これは本明細書において基質2008ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000465
を含み、これは本明細書において基質2009ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000466
を含み、これは本明細書において基質2010ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000467
を含み、これは本明細書において基質2011ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000468
を含み、これは本明細書において基質2012ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000469
を含み、これは本明細書において基質2013ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000470
を含み、これは本明細書において基質3006ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000471
を含み、これは本明細書において基質3007ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000472
を含み、これは本明細書において基質3008ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000473
を含み、これは本明細書において基質3009ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000474
を含み、これは本明細書において基質3010ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000475
を含み、これは本明細書において基質3011ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000476
を含み、これは本明細書において基質3012ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000477
を含み、これは本明細書において基質3013ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000478
を含み、これは本明細書において基質2014ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列および/または
Figure 2022064924000479
を含み、これは本明細書において基質3014ともいわれる。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000480
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1004ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。いくつかの態様において、CM1-CM2基質は配列
Figure 2022064924000481
を含み、これは本明細書において基質0001/LP'/1003ともいわれ、ここでこのCM1-CM2基質で使用されるLP'は、アミノ酸配列
GG
である。
いくつかの態様において、CMは、少なくとも2種類のプロテアーゼの基質である。いくつかの態様において、それぞれのプロテアーゼは、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの態様において、CMは、少なくとも2種類のプロテアーゼの基質であり、プロテアーゼの一方は、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択され、他方のプロテアーゼは、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの態様において、CMは、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される少なくとも2種類のプロテアーゼの基質である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は少なくとも第1のCMおよび第2のCMを含む。いくつかの態様において、第1のCMおよび第2のCMはそれぞれ、15アミノ酸以下の長さのポリペプチドである。いくつかの態様において、非切断状態の活性化可能抗体にある第1のCMおよび第2のCMは、N末端からC末端に向かって、MM-CM1-CM2-ABまたはAB-CM2-CM1-MMのような構造的配置を有する。いくつかの態様において、第1のCMおよび第2のCMの少なくとも1つは、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択されるプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。いくつかの態様において、第1のCMは、標的組織にある、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される第1の切断作用物質によって切断され、第2のCMは、標的組織にある第2の切断作用物質によって切断される。いくつかの態様において、他のプロテアーゼは、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は、MMP、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、uPA、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される同じプロテアーゼであり、第1のCMおよび第2のCMは、この酵素の異なる基質である。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は、表3に示したプロテアーゼからなる群より選択される同じプロテアーゼである。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は異なるプロテアーゼである。いくつかの態様において、第1の切断作用物質および第2の切断作用物質は標的組織において共存している。いくつかの態様において、第1のCMおよび第2のCMは、標的組織にある少なくとも1種類の切断作用物質によって切断される。
いくつかの態様において、プロテアーゼがCMを切断した後に、活性化された抗体が、活性化状態または切断状態では、LP2および/またはCM配列の少なくとも一部を含む軽鎖アミノ酸配列を含むように、活性化可能抗体はプロテアーゼに曝露され、プロテアーゼによって切断される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体はまた、ABにコンジュゲートされた作用物質も含む。いくつかの態様において、ABにコンジュゲートされた作用物質または活性化可能抗体のABは治療用作用物質である。いくつかの態様において、前記作用物質は、切断可能なリンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、前記作用物質は、少なくとも1つのCM1-CM2基質配列を含むリンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、前記作用物質は、切断不可能なリンカーを介してABにコンジュゲートされている。
いくつかの態様において、前記作用物質は抗炎症作用物質である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体はまた、検出可能部分も含む。いくつかの態様において、検出可能部分は診断用作用物質である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体はまた、シグナルペプチドも含む。いくつかの態様において、シグナルペプチドはスペーサーを介して活性化可能抗体にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、スペーサーは、シグナルペプチドの非存在下において活性化可能抗体にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、スペーサーは、活性化可能抗体のMMに直接接合される。いくつかの態様において、スペーサーは、N末端からC末端に向かって、スペーサー-MM-CM-ABという構造的配置で活性化可能抗体のMMに直接接合される。活性化可能抗体のMMのN末端に直接接合されたスペーサーの例は、
Figure 2022064924000482
およびQからなる群より選択される。スペーサーのさらなる例としては、
Figure 2022064924000483
およびGが挙げられる。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000484
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000485
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000486
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000487
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000488
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000489
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸残基Qを含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000490
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000491
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000492
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000493
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000494
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは少なくともアミノ酸配列Gを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体はスペーサー配列を含まない。
いくつかの態様において、活性化可能抗体のABは、天然には1つまたは複数のジスルフィド結合を含む。いくつかの態様において、ABは、1つまたは複数のジスルフィド結合を含むように操作することができる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期より長い。例えば、活性化可能抗体のpKは、対応する抗体のpKより長い。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期と同様である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも15日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも12日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも11日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも10日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも9日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも8日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも7日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも6日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも5日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも4日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも3日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも2日である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも24時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも20時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも18時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも16時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも14時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも12時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも10時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも8時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも6時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも4時間である。いくつかの態様において、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与された場合に少なくとも3時間である。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は単一特異性である。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は多重特異性であり、例えば、非限定的な例として、二重特異性または三機能性である。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、プロ二重特異性T細胞エンゲージャー(Bispecific T Cell Engager：BITE)分子の一部として処方される、すなわち、このBITEはマスキング部分と切断可能部分とを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、プロキメラ抗原受容体(CAR)によって改変されたT細胞、改変されたNK細胞、または他の改変された免疫エフェクター細胞の一部として処方される。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、免疫エフェクター細胞上の別の操作受容体、すなわち、マスキング部分と切断可能部分とを含むプロCARまたは他のプロ操作受容体の一部として処方される。
いくつかの態様において、活性化可能抗体またはその抗原結合断片は多重特異性活性化可能抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、多重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つのアームはPD-1に特異的に結合する。いくつかの態様において、活性化可能抗体またはその抗原結合断片は二重特異性活性化可能抗体またはその抗原結合断片に組み入れられ、二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つのアームはPD-1に特異的に結合する。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列とを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列とを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45またはSEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 45を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、アミノ酸配列SEQ ID NO: 21を含むか、またはそれに由来する重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO: 47を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 45のまたはSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45または47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 45の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 47の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、(a) SEQ ID NO: 653～657からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1); (b) SEQ ID NO: 658～663からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2); (c) SEQ ID NO: 664～668からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3); (d) SEQ ID NO: 669～677からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1); (e) SEQ ID NO: 678～682からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2); および(f) SEQ ID NO: 683～687からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3)を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000495
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000496
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000497
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000498
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000499
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000500
を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000501
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000502
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000503
を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000504
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000505
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000506
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000507
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000508
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000509
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000510
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000511
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000512
を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000513
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000514
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000515
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000516
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000517
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000518
を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000519
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000520
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000521
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000522
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000523
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000524
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000525
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000526
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000527
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000528
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000529
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000530
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000531
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000532
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000533
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000534
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000535
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000536
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列のCDR配列およびSEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、および可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000537
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000538
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000539
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列、および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここでVL CDR1配列は
Figure 2022064924000540
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000541
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000542
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここでVH CDR1配列は
Figure 2022064924000543
を含み; VH CDR2配列は
Figure 2022064924000544
を含み; およびVH CDR3配列は
Figure 2022064924000545
を含み; VL CDR1配列は
Figure 2022064924000546
を含み; VL CDR2配列は
Figure 2022064924000547
を含み; およびVL CDR3配列は
Figure 2022064924000548
を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸を含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一である軽鎖アミノ酸とを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1、本明細書においてCDRH1ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2、本明細書においてCDRH2ともいわれる)配列、可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3、本明細書においてCDRH3ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1、本明細書においてCDRL1ともいわれる)配列、可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2、本明細書においてCDRL2ともいわれる)配列および可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3、本明細書においてCDRL3ともいわれる)配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列; 表8に示されるVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで少なくとも1つのCDR配列が、表8に示されるVH CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR1配列; 表8に示されるVH CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CD2配列; 表8に示されるVH CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVH CDR3配列; 表8に示されるVL CDR1配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR1配列; 表8に示されるVL CDR2配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR2配列; および表8に示されるVL CDR3配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含むVL CDR3配列からなる群より選択される。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、表8の単列内に示されるVH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、ならびに表8の単列内に示されるVL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせは、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体、例えば二重特異性活性化可能抗体の少なくとも1つの腕部は、表8の単列内に示されるVH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、ならびに表8の単列内に示されるVL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される対応するVH CDR配列および表8の単列内に示される対応するVL CDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、抗体は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで該組み合わせにおける各CDR配列は、表8の単列内に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせにおける対応するCDR配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一である配列を含む。
いくつかの態様において、本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体は、1つもしくは複数のさらなる作用因子またはさらなる作用因子の組み合わせと併せて用いられる。適当なさらなる作用因子は、特定の用途のために開発中の他の実験的抗がん剤、意図した用途、例えばがんのための現行の薬学的および/または外科的療法を含む。例えば、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体を、さらなる化学療法剤または抗新生物剤と併せて用いることができる。
いくつかの態様において、さらなる作用因子は、特定の用途のために開発中の少なくとも1つの実験的抗がん剤を含む。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、1つの適応症に既に承認されているが、しかし別の適応症において試験されている少なくとも1つの薬剤を含む。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、任意の適応症において現在承認されていないが、しかし規制当局の承認を得る目的で1つまたは複数の適応症において試験されている少なくとも1つの薬剤を含む。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、意図した用途のための薬学的療法である少なくとも1つの薬剤を含む。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、がんの外科的療法である少なくとも1つの作用因子を含む。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、意図した用途のための薬学的療法である少なくとも1つの薬剤を含む。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、がんの外科的療法である少なくとも1つの作用因子を含む。いくつかの態様において、さらなる作用因子は化学療法剤である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は抗新生物剤である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、これらの作用因子の任意の2つまたはそれ以上の組み合わせである。
いくつかの態様において、さらなる作用因子は、化学療法剤、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、アブラキサン(すなわち、アルブミンにコンジュゲートしたパクリタキセル)、ドキソルビシン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シスプラチン、イリノテカン、およびゲムシタビンからなる群より選択される化学療法剤である。
いくつかの態様において、さらなる作用因子は、チェックポイント阻害剤、キナーゼ阻害剤、腫瘍微小環境にある阻害因子を標的とする作用因子、および/またはT細胞アゴニストもしくはNKアゴニストである。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、単独の、または例えば化学療法剤または抗新生物剤などの別のさらなる作用因子と組み合わせた、放射線療法である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、ワクチン、オンコウイルス、および/またはDC活性化剤、例えば、非限定的な例として、toll様受容体(TLR)アゴニストおよび/またはα-CD40である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、ADCCを介して、または毒素への直接的なコンジュゲート(例えば、抗体薬物コンジュゲート(ADC))を介して腫瘍を死滅するように設計された、腫瘍を標的とする抗体である。
いくつかの態様において、チェックポイント阻害剤は、CTLA-4、LAG-3、PD-1、PD-1、TIGIT、TIM-3、B7H4、BTLA、およびVistaからなる群より選択される標的の阻害剤である。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、B-RAFi、MEKi、およびBtk阻害剤、例えば、イブルチニブからなる群より選択される。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤はクリゾチニブである。いくつかの態様において、B-RAF阻害剤はベムラフェニブである。いくつかの態様において、腫瘍微小環境阻害剤は、IDO阻害剤、α-CSF1R阻害剤、α-CCR4阻害剤、TGF-β、骨髄系由来サプレッサー細胞、または制御性T細胞からなる群より選択される。いくつかの態様において、アゴニストは、Ox40、GITR、CD137、ICOS、CD27、およびHVEMからなる群より選択される。
いくつかの態様において、前記阻害剤はCTLA-4阻害剤である。いくつかの態様において、阻害剤はLAG-3阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はPD-1阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はPD-1阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はTIGIT阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はTIM-3阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はB7H4阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はVista阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はB-RAFi阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はMEKi阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はBtk阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はイブルチニブである。いくつかの態様において、前記阻害剤はクリゾチニブである。いくつかの態様において、前記阻害剤はIDO阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はα-CSF1R阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はα-CCR4阻害剤である。いくつかの態様において、前記阻害剤はTGF-βである。いくつかの態様において、前記阻害剤は骨髄系由来サプレッサー細胞である。いくつかの態様において、前記阻害剤は制御性T細胞である。
いくつかの態様において、前記アゴニストはOx40である。いくつかの態様において、アゴニストはGITRである。いくつかの態様において、アゴニストはCD137である。いくつかの態様において、アゴニストはICOSである。いくつかの態様において、アゴニストはCD27である。いくつかの態様において、アゴニストはHVEMである。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗体は、1種類または複数種類のさらなる作用因子、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および/または免疫抑制剤と組み合わせて処置中および/または処置後に投与される。いくつかの態様において、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は単一の治療用組成物に処方され、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は同時に投与される。あるいは、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は互いに分かれており、例えば、それぞれは、別々の治療用組成物に処方され、抗PD-1抗体および/もしくは活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、同時に投与されるか、または抗PD-1抗体および/もしくは活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、処置レジメン中に異なる時間に投与される。例えば、抗PD-1抗体および/もしくは活性化可能抗PD-1抗体は、さらなる作用因子が投与される前に投与されるか、抗PD-1抗体および/もしくは活性化可能抗PD-1抗体は、さらなる作用因子が投与された後に投与されるか、または抗PD-1抗体および/もしくは活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、交互に投与される。本明細書において説明されるように、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、単一の用量で、または複数の用量で投与される。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は同時に投与される。例えば、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、単一の組成物に処方されてもよく、または2種類以上の別々の組成物として投与されてもよい。いくつかの態様において、抗PD-1抗体および/もしくは活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、連続して投与されるか、または抗PD-1抗体および/もしくは活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、処置レジメン中に異なる時間に投与される。
いくつかの態様において、処置の間および/または処置の後に、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体は、1種類または複数種類のさらなる作用因子、例えば、非限定的な例として、化学療法剤、抗炎症剤、および/または免疫抑制剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性抗生物質、および/または他の任意の核酸損傷剤と組み合わせて投与される。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、タキサン、例えば、パクリタキセル(例えば、Abraxane(登録商標))である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、代謝拮抗剤、例えば、ゲムシタビンである。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、アルキル化剤、例えば、カルボプラチンまたはシスプラチンなどの白金に基づく化学療法である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、ターゲティングされた作用物質、例えば、キナーゼ阻害剤、例えば、ソラフェニブまたはエルロチニブである。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、ターゲティングされた作用物質、例えば、別の抗体、例えば、モノクローナル抗体(例えば、ベバシズマブ)、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、プロテオソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブまたはカーフィルゾミブである。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、免疫調節剤、例えば、レノリドミンドまたはIL-2である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は放射線である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、当業者によって治療の標準だとみなされている作用因子である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、当業者に周知の化学療法である。
いくつかの態様において、さらなる作用因子は、別の抗体もしくはその抗原結合断片、および/または別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、第1の抗体もしくはその抗原結合断片、および/または活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片と同じ標的に対する、例えば、PD-1に対する、別の抗体もしくはその抗原結合断片、および/または別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの態様において、さらなる作用因子は、第1の抗体もしくはその抗原結合断片、第1のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合断片、および/または活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片の標的とは異なる標的に対する、別の抗体もしくはその抗原結合断片、および/または別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片である。
非限定的な例として、前記抗体もしくは抗原結合断片および/または活性化可能抗体のABは、表1に列挙した任意の標的の結合パートナーである。
（表１）例示的な標的
Figure 2022064924000549
Figure 2022064924000550
非限定的な例として、前記抗体もしくは抗原結合断片および/または活性化可能抗体のABは、表2に列挙した抗体であるか、または該抗体に由来する。
（表２）Abの例示的な供給源
Figure 2022064924000551
Figure 2022064924000552
Figure 2022064924000553
いくつかの態様において、さらなる抗体もしくはその抗原結合断片および/または活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、シングルドメイン重鎖抗体、またはシングルドメイン軽鎖抗体である。いくつかの態様において、さらなる抗体もしくはその抗原結合断片および/または活性化可能抗体もしくはその抗原結合断片は、マウス抗体、他のげっ歯類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。
本開示はまた、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体ポリペプチドの発現をもたらす条件下で細胞を培養することによって該ポリペプチドを産生する方法であって、前記細胞が、本明細書に記載の抗体および/もしくは活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、ならびに/またはこれらの単離された核酸配列を含むベクターを含む、前記方法も提供する。本開示は、抗体および/または活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することによって抗体および/または活性化可能抗体を産生する方法であって、前記細胞が、本明細書に記載の抗体および/もしくは活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、ならびに/またはこれらの単離された核酸配列を含むベクターを含む、前記方法を提供する。
本発明はまた、以下の工程によって、活性化状態ではPD-1に結合する活性化可能抗体を製造する方法も提供する：(a)活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養する工程であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断可能部分(CM)と、PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB)とを含み、(i)CMが、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、(ii)活性化可能抗体が非切断状態にある場合にMMがPD-1に対するABの特異的結合に干渉するように、および活性化可能抗体が切断状態にある場合はMMがPD-1に対するABの特異的結合に干渉も競合もしないように、CMが活性化可能抗体に配置される、前記工程、および(b)活性化可能抗体を回収する工程。適切なAB、MM、および/またはCMは、本明細書において開示された任意のAB、MM、および/またはCMを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を有する。いくつかの態様において、活性化可能抗体はMMとCMとの間に連結ペプチドを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体はCMとABとの間に連結ペプチドを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MMのような構造的配置を有する。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、非切断状態では、N末端からC末端に向かって、スペーサー-MM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MM-スペーサーのような構造的配置を有する。
いくつかの態様において、2つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n(SEQ ID NO:363)、および(GGGS)n(SEQ ID NO:364)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、nは、少なくとも1の整数である。
いくつかの態様において、LP1またはLP2の少なくとも1つは、
Figure 2022064924000554
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、LP1は、アミノ酸配列
Figure 2022064924000555
を含む。
いくつかの態様において、LP2は、アミノ酸配列GSS、GGS、GGGS(SEQ ID NO:377)、GSSGT(SEQ ID NO:378)、またはGSSG(SEQ ID NO:379)を含む。
本発明は、治療的有効量の本明細書に記載の抗PD-1抗体、コンジュゲートされた抗PD-1抗体、活性化可能抗PD-1抗体、および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗PD-1抗体をその必要のある対象に投与することによって、対象において障害または疾患を予防する、該疾患の進行を遅らせる、該疾患を処置する、該疾患の症状を緩和する、または別の形で該疾患を寛解させる方法を提供する。
本発明はまた、治療的有効量の、本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体を、その必要のある対象に投与する段階を含む、免疫抑制を低減させる方法を提供する。いくつかの態様において、免疫抑制はT細胞活性の抑制である。いくつかの態様において、免疫抑制は腫瘍細胞または他の免疫細胞上のPD-L1またはPD-L2に対するT細胞上のPD-1の係合によって媒介される。いくつかの態様において、本発明は、T細胞上のPD-1に対する、PD-L1 (本明細書においてPDL1ともいわれる)および/またはPD-L2 (本明細書においてPDL2ともいわれる)の結合を低減させまたは阻害する方法を提供する。リガンドPD-L1および/またはPD-L2は、腫瘍細胞または他の免疫細胞上に見られることが多い。
本発明はまた、治療的有効量の、本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体を、その必要のある対象に投与する段階により対象においてがんを予防する、がんの進行を遅らせる、がんを処置する、がんの症状を緩和する、またはそれ以外の方法でがんを改善する方法を提供する。PD-1は、非限定的な例として、黒色腫、非小細胞肺癌、鼻咽腔癌、神経膠芽腫/混合性神経膠腫、結腸腺癌、肝細胞癌、尿路上皮癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、胃癌、食道癌、膵臓癌、腎細胞癌(RCC)、乳癌、ホジキンリンパ腫のような、リンパ腫、および白血病のような、種々のがんにおいて、T細胞のような、免疫細胞上に発現されることが知られている。(例えば、Chen et al., 「Molecular Pathways: Next-Generation Immunotherapy - Inhibiting Programmed Death-Ligand 1 and Programmed Death-1」, Clin. Can. Res., vol. 18: 6580-6587 (2012)を参照されたく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる)。
いくつかの態様において、がんは膀胱癌、骨がん、乳癌、カルチノイド、子宮頸癌、胆管癌、結腸癌、子宮内膜癌、神経膠腫、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、ホジキンリンパ腫のようなリンパ腫、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、および/または尿路上皮癌である。
いくつかの態様において、がんは、黒色腫(MEL)、腎細胞癌(RCC)、扁平上皮非小細胞肺癌(NSCLC)、非扁平上皮NSCLC、大腸癌(CRC)、去勢抵抗性前立腺癌(CRPC)、肝細胞癌(HCC)、頭頸部扁平上皮癌、胸腺腫、食道、卵巣、胃腸管および乳房の癌、または多発性骨髄腫、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫および慢性骨髄性白血病のような血液悪性腫瘍からなる群より選択される。
本発明はまた、治療的有効量の、本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体を、その必要のある対象に投与する段階により自己免疫疾患または炎症性疾患を有するがん患者を処置する方法を提供する。いくつかの態様において、自己免疫疾患は、大腸炎、RA、膵炎、糖尿病、または肺炎である。
これらの方法および使用の態様のいずれかにおいて用いられる抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体は、疾患の任意の段階で投与することができる。例えば、そのような抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体は、早期から転移までの、任意の段階のがんに罹患している患者に投与することができる。対象および患者という用語は、本明細書において互換的に用いられる。
いくつかの態様において、対象は、哺乳動物、例えばヒト、非ヒト霊長類、伴侶動物(例えば、ネコ、イヌ、ウマ)、家畜、ワークアニマル(work animal)、または動物園の動物である。いくつかの態様において、対象はヒトである。いくつかの態様において、対象は伴侶動物である。いくつかの態様において、対象は、獣医師のケアを受けている動物である。
抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体ならびにその治療用製剤は、腫瘍細胞または他の免疫細胞上のPD-L1またはPD-L2によるT細胞上のPD-1の係合によって媒介される免疫抑制のような、免疫抑制に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象に投与される。いくつかの態様において、免疫抑制はT細胞活性の抑制である。そのような免疫抑制に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象は、当技術分野において公知の種々の方法のいずれかを用いて同定される。例えば、健康状態を評価するための身体検査ならびに血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて、がんまたは他の新生物状態に罹患している対象が同定される。例えば、炎症および/または炎症性障害に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査および/または体液分析、例えば血液、尿および/または便分析のような種々の臨床検査および/または検査室検査のいずれかを用いて同定される。
腫瘍細胞または他の免疫細胞上のPD-L1またはPD-L2によるT細胞上のPD-1の係合によって媒介される免疫抑制のような、免疫抑制に関連する疾患または障害に罹患している患者に対する抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体の投与は、種々の検査室または臨床の目的のいずれかが達成されるなら成功と見なされる。例えば、そのような免疫抑制に関連する疾患または障害に罹患している患者に対する抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体の投与は、疾患または障害に関連する症状の1つまたは複数が軽減すれば、低減すれば、阻害されれば、またはさらなる、すなわちさらに悪い状態に進行しなければ成功と見なされる。腫瘍細胞または他の免疫細胞上のPD-L1またはPD-L2に対するT細胞上のPD-1の係合によって媒介される免疫抑制のような、免疫抑制に関連する疾患または障害に罹患している患者に対する抗PD-1抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗PD-1抗体の投与は、疾患または障害が寛解期に入れば、またはさらなる、すなわちさらに悪い状態に進行しなければ成功と見なされる。
いくつかの態様において、抗PD-1抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗PD-1抗体は、1種類または複数種類のさらなる作用因子、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および/または免疫抑制剤と組み合わせて、処置中および/または処置後に投与される。いくつかの態様において、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、同時に投与される。例えば、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は、単一の組成物に処方されてもよく、または2種類以上の別々の組成物として投与されてもよい。いくつかの態様において、抗PD-1抗体および/または活性化可能抗PD-1抗体と、さらなる作用因子は連続して投与される。
本発明はまた、様々な診断上および/または予防上の適用において、活性化可能抗PD-1抗体を使用するための方法およびキットも提供する。例えば、本発明は、以下の工程によって、対象または試料における切断作用物質および関心対象の標的の有無を検出するための方法およびキットを提供する：(i)対象または試料を抗PD-1活性化可能抗体と接触させる工程であって、抗PD-1活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質によって切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、切断されておらず活性化されていない状態にある抗PD-1活性化可能抗体がN末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み、(a)MMがABとPD-1との結合を阻害するペプチドであり、かつMMがABの天然結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、かつABの天然結合パートナーの改変型ではなく、(b)ABが切断されておらず活性化されていない状態にある場合に、MMがPD-1に対するABの特異的結合に干渉し、ABが切断され活性化状態にある場合は、MMがPD-1に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない、前記工程と、(ii)対象または試料における、活性化された抗PD-1活性化可能抗体のレベルを測定する工程であって、対象または試料に、活性化された抗PD-1活性化可能抗体の検出可能なレベルがあることは、切断作用物質およびPD-1が対象または試料に存在することを示し、対象または試料に、活性化された抗PD-1活性化可能抗体の検出可能なレベルが無いことは、対象または試料に切断作用物質が存在しないか、PD-1が存在しないか、または切断作用物質とPD-1が両方とも存在しないことを示す、前記工程。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートした活性化可能抗PD-1抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はAB上に配置される。いくつかの態様において、対象または試料における活性化可能抗PD-1抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて成し遂げられ、試薬は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、検出可能な標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、検出可能な標識は、イメージング剤、造影剤(contrasting agent)、酵素、蛍光標識、発色団、色素、1つもしくは複数の金属イオン、またはリガンドをベースとする標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、イメージング剤は放射性同位体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、放射性同位体はインジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、造影剤は、ヨウ素、ガドリニウム、または酸化鉄を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ-ガラクトシダーゼを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質(YFP)、シアン蛍光タンパク質(CFP)、緑色蛍光タンパク質(GFP)、改変赤色蛍光タンパク質(mRFP)、赤色蛍光タンパク質tdimer2(RFP tdimer2)、HCRED、またはユーロピウム誘導体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、ルミネセンス標識はN-メチルアクリジウム(methylacrydium)誘導体を含む。これらの方法のいくつかの態様において、標識は、Alexa Fluor(登録商標)標識、例えば、Alex Fluor(登録商標)680またはAlexa Fluor(登録商標)750を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、リガンドをベースとする標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、または1つもしくは複数のハプテンを含む。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、対象は哺乳動物である。これらの方法のいくつかの態様において、対象はヒトである。いくつかの態様において、対象は非ヒト哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル(例えば、ネコ、イヌ、ウマ)、家畜、ワークアニマル、または動物園の動物である。いくつかの態様において、対象は、げっ歯類である。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、前記方法はインビボ方法である。これらの方法のいくつかの態様において、前記方法はインサイチュー方法である。これらの方法のいくつかの態様において、前記方法はエクスビボ方法である。これらの方法のいくつかの態様において、前記方法はインビトロ方法である。
前記方法およびキットのいくつかの態様において、前記方法は、本開示の抗PD-1活性化可能抗体を用いた処置に適した患者集団を特定するか、または別の方法で正確にし、それに続いて、処置を必要とする対象に、活性化可能抗PD-1抗体を投与することによって処置するのに用いられる。例えば、標的(例えば、PD-1)と、これらの方法において試験されている抗PD-1活性化可能抗体の切断可能部分(CM)にある基質を切断するプロテアーゼの両方が陽性と試験結果がでた患者は、このようなCMを含む、このような抗PD-1活性化可能抗体を用いた処置に適した候補であると特定され、次いで、この患者には、治療的有効量の、試験された活性化可能抗PD-1抗体が投与される。同様に、標的(例えば、PD-1)と、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体のCMにある基質を切断するプロテアーゼのいずれか、または両方が陰性と試験結果がでた患者は、別の形の療法に適した候補であると特定される可能性がある。いくつかの態様では、処置に適した抗PD-1活性化可能抗体(例えば、疾患部位で患者によって切断されるCMを含む抗PD-1活性化可能抗体)が特定されるまで、このような患者は他の抗PD-1活性化可能抗体を用いて試験することができる。いくつかの態様では、次いで、患者には、患者において陽性と試験結果がでた治療的有効量の活性化可能抗PD-1抗体が投与される。適切なAB、MM、および/またはCMには、本明細書において開示された任意のAB、MM、および/またはCMが含まれる。
本発明による薬学的組成物は本発明の抗体と担体を含んでもよい。これらの薬学的組成物は、例えば、診断キットなどのキットに含まれてもよい。
図1は、本明細書においてM3とも呼ばれる245-M3（VH：SEQ ID NO:9；VL：SEQ ID NO:11）、本明細書においてM5とも呼ばれる245-M5（VH：SEQ ID NO:13；VL：SEQ ID NO:15）、本明細書においてM13とも呼ばれる136-M13（VH：SEQ ID NO:1；VL：SEQ ID NO:3）、本明細書においてM19とも呼ばれる136-M19（VH：SEQ ID NO:5；VL：SEQ ID NO:7）、および本明細書においてM14とも呼ばれる136-M14（VH：SEQ ID NO:17；VL：SEQ ID NO:19）として本明細書において言及される、ヒトPD-1に結合する様々なマウス抗体（即ち、抗hPD-1抗体）を使用したELISA結合アッセイの結果を示すグラフである。（本明細書において「nivo」または「NV1」とも呼ばれる）抗PD-1抗体ニボルマブ、および（本明細書において「pembro」または「PM1」もしくは「PM1 AB」とも呼ばれる）ペムブロリズマブが、陽性対照として使用された。 図2は、様々なマウス抗hPD-1抗体が、ヒトPD-1に対する、リガンドであるヒトPD-L1（hPD-L1）およびヒトPD-L2（hPD-L2）の結合をブロックすることを証明する一連のグラフである。 図3は、様々なマウス抗hPD-1抗体が、ヒトPD-1に対する、リガンドであるヒトPD-L1（hPD-L1）およびヒトPD-L2（hPD-L2）の結合をブロックすることを証明する一連のグラフである。 図4は、ELISAによって決定された、ヒトPD-1に対する、本明細書においてA1.0（VH：SEQ ID NO:21；VL：SEQ ID NO:39）、A1.2（VH：SEQ ID NO:21；VL：SEQ ID NO:43）、およびA1.4（VH：SEQ ID NO:21；VL：SEQ ID NO:45）と呼ばれる本開示の様々な抗hPD-1抗体の結合を示すグラフである。抗PD-1抗体ペムブロリズマブ（「PM1」）が陽性対照として使用された。 図5は、ELISAによって決定された、ヒトPD-1に対する、本明細書においてA1.5（VH：SEQ ID NO:21；VL：SEQ ID NO:47）、A1.6（VH：SEQ ID NO:21；VL：SEQ ID NO:49）、Ba2（VH：SEQ ID NO:29；VL：SEQ ID NO:57）、Bb2（VH：SEQ ID NO:31；VL：SEQ ID NO:57）、C1.1（VH：SEQ ID NO:33；VL：SEQ ID NO:41）、およびD4（VH：SEQ ID NO:37；VL：SEQ ID NO:59）と呼ばれる本開示の様々な抗hPD-1抗体の結合を示すグラフである。抗PD-1抗体ニボルマブ（「NV1」）およびペムブロリズマブ（「PM1」）が陽性対照として使用された。 図6は、ELISAによって決定されたように、本明細書においてA1.0、A1.2、およびA1.4と呼ばれる本開示の様々な抗hPD-1抗体が、ヒトPD-1（hPD-1）とヒトPDL-1（hPDL-1）およびヒトPDL-2（hPDL-2）の両方との間の結合を阻害することができることを示す一連のグラフである。抗PD-1抗体ペムブロリズマブ（「PM1」）が陽性対照として使用された。 図7は、ELISAによって決定されたように、本明細書においてA1.5およびC1.1と呼ばれる本開示の様々な抗hPD-1抗体が、hPD-1とhPDL-1およびhPDL-2の両方との間の結合を阻害することができることを示す一連のグラフである。抗PD-1抗体ニボルマブ（「NV1」）およびペムブロリズマブ（「PM1」）が陽性対照として使用された。 図8は、ELISAによって決定されたように、本明細書においてA1.5、Ba2、Bb2、C1.1、およびD4と呼ばれる本開示の様々な抗hPD-1抗体が、hPD-1とhPDL-1との間の結合を阻害することができることを示すグラフである。抗PD-1抗体ニボルマブ（「NV1」）およびペムブロリズマブ（「PM1」）が陽性対照として使用された。 図9は、ELISAによって決定されたように、本明細書においてA1.5、Ba2、Bb2、C1.1、およびD4と呼ばれる本開示の様々な抗hPD-1抗体が、hPD-1とhPDL-2との間の結合を阻害することができることを示すグラフである。抗PD-1抗体ニボルマブ（「NV1」）およびペムブロリズマブ（「PM1」）が陽性対照として使用された。 図10は、ELISAによって決定されたように、本明細書においてA1.5と呼ばれる抗PD-1抗体がhPD-1と特異的に結合することを示すグラフである。A1.5抗PD-1抗体がヒトタンパク質およびマウスタンパク質のパネルに対して試験された。 図11Aおよび11Bは、抗PD-1抗体A1.5が、PD-1に対する抗PD-1抗体ニボルマブ（「NV1」）およびペムブロリズマブ（「PM1」）のFab断片の結合をブロックすることができることを示す一連のグラフである。これらのグラフは、抗PD-1抗体A1.5が、NV1および/またはPM1のいずれかに由来する別個のエピトープに結合することも証明している。 図11Aおよび11Bは、抗PD-1抗体A1.5が、PD-1に対する抗PD-1抗体ニボルマブ（「NV1」）およびペムブロリズマブ（「PM1」）のFab断片の結合をブロックすることができることを示す一連のグラフである。これらのグラフは、抗PD-1抗体A1.5が、NV1および/またはPM1のいずれかに由来する別個のエピトープに結合することも証明している。 図12は、抗PD-1抗体A1.5が、T細胞再刺激アッセイにおいて測定されたニボルマブ（「NV1」）およびペムブロリズマブ（「PM1」）の効力と同等の効力を有することを証明するグラフである。図12において、PMBCは以下のように処理された：PBMC：CMV+HemaCareドナーCを2×105細胞/ウェルで播種し；5μg/mL CMV溶解物+/-抗PD-1またはアイソタイプ対照によって刺激し；4日目の上清に対してIFN-γ ELISAアッセイを実施した。 図13は、抗PD-1抗体A1.5およびBa2が、抗PD-1抗体ニボルマブ（「Nivo」）およびペムブロリズマブ（「Pembro」）と同等以上の親和性で、単量体ヒトPD-1（hPD1）と結合することを証明する一連のグラフである。 図14は、ELISAによって決定された、ヒトPD-1に対する、抗PD-1抗体A1.4による、ならびに本明細書においてPD01（SEQ ID NO:66）、PD02（SEQ ID NO:67）、PD03（SEQ ID NO:68）、PD08（SEQ ID NO:73）、PD09（SEQ ID NO:74）、およびPD10（SEQ ID NO:75）と呼ばれる様々なマスキング部分を含む様々な活性化可能抗PD-1抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図15は、抗PD-1抗体A1.5、ならびに抗PD-1抗体A1.5と、本明細書においてPD01（SEQ ID NO:66）、PD02（SEQ ID NO:67）、PD03（SEQ ID NO:68）、PD05（SEQ ID NO:70）、PD06（SEQ ID NO:71）（プレート1）；PD08（SEQ ID NO:73）、PD09（SEQ ID NO:74）、PD10（SEQ ID NO:75）、PD11（SEQ ID NO:76）、PD12（SEQ ID NO:77）（プレート2）；PD13（SEQ ID NO:78）、PD14（SEQ ID NO:79）、PD15（SEQ ID NO:80）、PD16（SEQ ID NO:81）、PD17（SEQ ID NO:82）（プレート3）；PD18（SEQ ID NO:83）、PD19（SEQ ID NO:84）、PD20（SEQ ID NO:85）、PD21（SEQ ID NO:86）、PD22（SEQ ID NO:87）（プレート4）;およびPD23（SEQ ID NO:88）、PD24（SEQ ID NO:89）（プレート5）と呼ばれるマスキング部分とを含む様々な活性化可能抗PD-1抗体による、hPD-1との結合を示す一連のグラフである。 図15-1の続きの図である。 図15-2の続きの図である。 図16は、hPD-1に対する、抗PD-1抗体A1.5による、ならびに抗PD-1抗体A1.5と、配列AVGLLAPPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 318)を含む本明細書において3001と呼ばれる切断可能部分と、本明細書においてPD02、PD12、およびPD16と呼ばれるマスキング部分とを含む様々な活性化可能抗PD-1抗体による結合を示すグラフである。 図17は、hPD-1に対する、抗PD-1抗体A1.5による、ならびに抗PD-1抗体A1.5と、配列ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214)を含む本明細書において2001と呼ばれる切断可能部分と、本明細書においてPD05（SEQ ID NO:70）、PD06（SEQ ID NO:71）、PD09（SEQ ID NO:74）（左上パネル）；PD12（SEQ ID NO:77）、PD23（SEQ ID NO:88）、PD25（SEQ ID NO:90）（右上パネル）；PD26（SEQ ID NO:91）、PD27（SEQ ID NO:92）、PD28（SEQ ID NO:93）（左下パネル）;およびPD30（SEQ ID NO:95）、PD33（SEQ ID NO:98）、PD35（SEQ ID NO:100）（右下パネル）と呼ばれるマスキング部分とを含む様々な活性化可能抗PD-1抗体による結合を示す一連のグラフである。 図18は、hPD-1に対する、抗PD-1抗体A1.5による、ならびに抗PD-1抗体A1.5と、本明細書においてPD34（SEQ ID NO:99）、PD06（SEQ ID NO:71）、PD09（SEQ ID NO:74）（左上パネル）；PD34（SEQ ID NO:99）、PD12（SEQ ID NO:77）、PD17（SEQ ID NO:82）（右上パネル）；PD34（SEQ ID NO:99）、PD19（SEQ ID NO:84）、PD25（SEQ ID NO:90）（左下パネル）;およびPD34（SEQ ID NO:99）、PD26（SEQ ID NO:91）、PD28（SEQ ID NO:93）（右下パネル）と呼ばれるマスキング部分とを含む様々な活性化可能抗PD-1抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図19は、本開示の抗PD1 A1.5活性化可能抗体が、対照hIgG4と比較して、CMVによって刺激されるIFN-ガンマ分泌を増加させることができるが、抗PD1 A1.5親抗体と比べて減少した効力を有することを示すグラフである。試験された活性化可能抗体は、抗PD-1抗体A1.5と、本明細書において2001と呼ばれる切断可能部分と、本明細書においてPD06、PD05、PD11、PD12、PD14、およびPD19と呼ばれるマスキング部分とを含む。図19において、PMBCは以下のように処理された：PBMC：CMV+HemaCareドナーCを2×105細胞/ウェルで播種し；5μg/mL CMV溶解物+/-抗PD-1またはアイソタイプ対照によって刺激し；4日目の上清に対してIFN-γ ELISAアッセイを実施した。 図20Aおよび20Bは、本明細書においてJ43v2と呼ばれる抗PD-1抗体（重鎖（HC）：SEQ ID NO:546；軽鎖（LC）：SEQ ID NO:543）が、1桁のnM EC50値で、マウスPD-1（mPD-1）発現細胞に対するマウスPD-L1（mPD-L1）およびマウスPD-L2（mPD-L2）の結合をブロックすることができることを示す一連のグラフである。 図20Aおよび20Bは、本明細書においてJ43v2と呼ばれる抗PD-1抗体（重鎖（HC）：SEQ ID NO:546；軽鎖（LC）：SEQ ID NO:543）が、1桁のnM EC50値で、マウスPD-1（mPD-1）発現細胞に対するマウスPD-L1（mPD-L1）およびマウスPD-L2（mPD-L2）の結合をブロックすることができることを示す一連のグラフである。 図21は、本明細書においてJ43v2 m2aと呼ばれる抗体（HC：SEQ ID NO:546；LC：SEQ ID NO:543）によるNODマウスにおける糖尿病の用量依存性の誘導を示すグラフである。 図22は、hPD-1に対する、抗PD-1抗体J43v2 m2aによる、および抗PD-1抗体J43v2 m2aと、本明細書においてMP01（SEQ ID NO:384）、MP02（SEQ ID NO:385）、MP03（SEQ ID NO:386）、MP04（SEQ ID NO:387）、MP05（SEQ ID NO:388）（左上パネル）；MP06（SEQ ID NO:389）、MP07（SEQ ID NO:390）、MP08（SEQ ID NO:391）、MP09（SEQ ID NO:392）、本明細書においてMP010とも呼ばれるMP10（SEQ ID NO:393）（右上パネル）；本明細書においてMP011とも呼ばれるMP11（SEQ ID NO:394）、本明細書においてMP012とも呼ばれるMP12（SEQ ID NO:395）、本明細書においてMP013とも呼ばれるMP13（SEQ ID NO:396）、本明細書においてMP014とも呼ばれるMP14（SEQ ID NO:397）（下パネル）と呼ばれるマスキング部分とを含む様々な活性化可能抗PD-1抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図23は、hPD-1に対する、抗PD-1抗体J43v2 m2aによる、ならびに抗PD-1抗体J43v2 m2aと、本明細書において2001と呼ばれる切断可能部分と、本明細書においてMP5-2（SEQ ID NO:565）、MP7-1（SEQ ID NO:558）、MP7-5（SEQ ID NO:562）、MP8-2（SEQ ID NO:549）（上パネル）；およびMP7-1（SEQ ID NO:558）、MP8-9（SEQ ID NO:556）、MP8-8（SEQ ID NO:555）（下プレート）と呼ばれるマスキング部分とを含む様々な活性化可能抗PD-1抗体による結合を示すグラフである。 図24は、抗PD-1 J43v2抗体が、投与量が増加するにつれ増加する頻度で、NODマウスにおいて糖尿病を誘導したこと、および抗PD-1 J43v2活性化可能抗体は、類似の用量の抗体と比較して、糖尿病が減少したことを示すグラフである。 図25Aおよび25Bは、hPD-1に対する、抗PD-1抗体A1.5による、ならびに抗PD1抗体A1.5と、本明細書においてPD34（SEQ ID NO:99）と呼ばれるマスキング部分と、図25Aについては、本明細書において2006（SEQ ID NO:1095）、2007（SEQ ID NO:1096）、2008（SEQ ID NO:1097）、2009（SEQ ID NO:1098）、および2001（SEQ ID NO:214）と呼ばれる基質、図25Bについては、本明細書において2001（SEQ ID NO:214）、2008（SEQ ID NO:1097）、2012（SEQ ID NO:1101）、2011（SEQ ID NO:1100）、および2003（SEQ ID NO:1092）と呼ばれる基質とを含む本開示の様々な活性化可能抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図25Aおよび25Bは、hPD-1に対する、抗PD-1抗体A1.5による、ならびに抗PD1抗体A1.5と、本明細書においてPD34（SEQ ID NO:99）と呼ばれるマスキング部分と、図25Aについては、本明細書において2006（SEQ ID NO:1095）、2007（SEQ ID NO:1096）、2008（SEQ ID NO:1097）、2009（SEQ ID NO:1098）、および2001（SEQ ID NO:214）と呼ばれる基質、図25Bについては、本明細書において2001（SEQ ID NO:214）、2008（SEQ ID NO:1097）、2012（SEQ ID NO:1101）、2011（SEQ ID NO:1100）、および2003（SEQ ID NO:1092）と呼ばれる基質とを含む本開示の様々な活性化可能抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図26A、26B、および26Cは、hPD-1に対する、抗PD-1抗体ニボルマブ（NV1）による、ならびに抗PD1抗体NV1と、本明細書において2001（SEQ ID NO:214）と呼ばれる基質と、本明細書においてNV01（SEQ ID NO:1206）、NV02（SEQ ID NO:1207）、NV03（SEQ ID NO:1208）、NV04（SEQ ID NO:1209）、NV05（SEQ ID NO:1210）、NV06（SEQ ID NO:1211）、NV07（SEQ ID NO:1212）、NV08（SEQ ID NO:1213）、NV09（SEQ ID NO:1214）、NV10（SEQ ID NO:1215）、NV11（SEQ ID NO:1216）、およびNV12（SEQ ID NO:1217）と呼ばれるマスキング部分とを含む本開示の様々な活性化可能抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図27A、27B、および27Cは、hPD-1に対する、抗PD-1抗体ペムブロリズマブ（PM1）による、ならびに抗PD1抗体PM1と、本明細書において2001（SEQ ID NO:214）と呼ばれる基質と、本明細書においてPM01（SEQ ID NO:1351）、PM02（SEQ ID NO:1352）、PM03（SEQ ID NO:1353）、PM04（SEQ ID NO:1354）、PM05（SEQ ID NO:1355）、PM06（SEQ ID NO:1356）、PM07（SEQ ID NO:1357）、PM08（SEQ ID NO:1358）、PM09（SEQ ID NO:1359）、PM10（SEQ ID NO:1360）、PM11（SEQ ID NO:1361）、およびPM12（SEQ ID NO:1362）と呼ばれるマスキング部分とを含む本開示の様々な活性化可能抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図28は、抗PD-1 A1.5（PD）抗体、NV1（NV）抗体、およびPM1（PM）抗体と、多様なマスクおよび基質の組み合わせとを含む本開示の様々な活性化可能抗体についてのマスキング部分の特異性を示すグラフである。 図29Aおよび29Bは、PD1に対する、IgG2aエフェクター陰性（EN）抗PD1抗体J43（J43 m2a EN）による、ならびにIgG2aエフェクター陰性（EN）抗PD1抗体J43（J43 m2a EN）と、多様なマスクおよび基質の組み合わせとを含む本開示の様々な活性化可能抗体による結合を示す、一連のグラフである。 図30は、抗PD-1 J43m2a EN抗体が、投与量が増加するにつれ増加する頻度で、NODマウスにおいて糖尿病を誘導したこと、および抗PD-1 J43m2a EN活性化可能抗体が、類似の用量の抗体と比較して糖尿病が減少したことを示すグラフである。 図31Aおよび31Bは、本開示の抗PD1活性化可能抗体MP7-1 2001 m2a ENおよびMP8-2 2001 m2a ENが、単剤としても（図31A）、市販の抗CTLA4抗体9D9 mIgG2bとの組み合わせでも（図31B）、陽性対照である抗PD1抗体J43 m2a ENと同様にMC38同系腫瘍の増殖を阻害することを示す一連のグラフである。 図32A、32B、32C、32D、および32Eは、本明細書においてA1.5 Abと呼ばれる抗ヒトPD1抗体（即ち、SEQ ID NO:21のVHおよびSEQ ID NO:47のVL）が、抗原リコールアッセイにおいて、PD1に対するPD-L1/PD-L2の結合をブロックし、T細胞を強力に活性化することを示す一連のグラフである。図31Aは、標準的なプレートELISAによって検出された、固定化ヒトPD1に対する抗ヒトPD-1 A1.5 Abの結合を示し、図31Bは、ELISAによって検出された、カニクイザルPD1に対するA1.5 Abの結合を示す。図32Cは、ELISAによって決定された、固定化PD1に対するビオチン化ヒトPD-L1のA1.5 Abによる阻害を示し、図32Dは、ELISAによって決定された、固定化PD1に対するビオチン化ヒトPD-L2の阻害を示す。図32Eは、A1.5 Abが、CMV T細胞再刺激アッセイにおいてIFN-γ産生を増強することを証明する。 図33Aおよび33Bは、本明細書においてA1.5 PD34 2001と呼ばれる活性化可能抗PD1抗体（即ち、SEQ ID NO:21のVH、SEQ ID NO:47のVL、SEQ ID NO:99のマスキング部分、およびSEQ ID NO:214の切断可能部分）が、親PD-1 Ab、即ち、A1.5 Abと比べて減少した親和性でヒトPD1と結合すること（図33A）、ならびにA1.5 PD34 2001活性化可能抗体が、CMV T細胞抗原リコールアッセイにおいて機能的マスキングを示すこと（図33B）を示す一連のグラフである。 図34は、A1.5抗体または本明細書においてA1.5 PD34 2001と呼ばれる活性化可能抗体のいずれかの1mg/kgまたは5mg/kgの単回IVボーラス用量を投与した後のカニクイザル由来の血漿試料の薬物動態学的（PK）分析の結果を示すグラフおよび表である。A1.5およびA1.5 PD34 2001の両方について平均PKパラメータが示される。 図35は、0日目、4日目、および7日目に投与された10mg/kg 抗PD-1 J43抗体＋10mg/kg 抗CTLA-4抗体の組み合わせは、11日目までにNODマウスの50％において糖尿病を誘導したが、活性化可能抗PD-1 J43抗体のCTLA-4抗体との同一の投与スケジュールは、18日目まで糖尿病の誘導をもたらさなかったことを示すグラフである。 図36は、抗PD1活性化可能抗体MP8-2 2012 m2a ENおよびMP8-2 2011 m2a ENが、単剤としても、抗CTLA4抗体9D9 mIgG2bとの組み合わせでも、陽性対照である抗PD1抗体J43 m2a ENと同等にMC38同系腫瘍の増殖を阻害することを示すグラフである。 図37は、CTLA4抗体およびJ43活性化可能抗体の組み合わせによる処置が、MC38腫瘍細胞による再誘発に対してマウスを保護することを示す一連のグラフである。 図38は、単独でまたは抗CTLA4抗体との組み合わせで投与された抗PD-1抗体は、NODマウスにおいて糖尿病を誘導したが、抗PD-1活性化可能抗体は、単剤としても、抗CTLA4抗体との組み合わせでも、15日目まで糖尿病の誘導をもたらさなかったことを示すグラフである。 図39は、本態様の抗PD-1活性化可能A1.5抗体および活性化可能ニボルマブ抗体が、対照抗体と比較して、CMV T細胞再刺激アッセイにおけるIFN-ガンマ産生を増強するが、抗PD-1抗体A1.5またはニボルマブによって達成される程ではないことを証明するグラフである。 図40は、本態様の抗PD-1活性化可能ペムブロリズマブ抗体が、対照抗体と比較して、CMV T細胞再刺激アッセイにおけるIFN-ガンマ産生を増強するが、抗PD-1抗体A1.5またはペムブロリズマブによって達成される程ではないことを証明するグラフである。
発明の詳細な説明
本発明は、CD279としても知られているプログラム細胞死タンパク質1 (PD-1)に特異的に結合するモノクローナル抗体(mAbs)、活性化可能抗体、およびその抗原結合断片を提供する。「PD-1」という用語の使用は、非限定的な例として、PD1および/またはPD 1のような、その任意の変化形を網羅するように意図され、全ての変化形が本明細書において互換的に用いられる。PD-1およびPD-1関連シグナル伝達の異常な発現および/または活性は、がんのような、多くの疾患および障害の病因に関与している。
免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞表面受容体であるPD-1は、T細胞およびプロB細胞上に発現される。PD-1は2つのリガンドであるPD-L1およびPD-L2に結合することが知られている。PD-1は活性化T細胞の表面上に発現され、PD-1とPD-L1および/またはPD-L2との間の相互作用は、PD-1に対するPD-L1またはPD-L2の結合がT細胞を不活性化するので、免疫チェックポイントとして機能する。したがって、PD-1はT細胞の活性化を妨げることにより免疫系をダウンレギュレートする役割を果たし、これが、自己免疫を低減させ、自己寛容を促進する。
本開示の抗PD-1モノクローナル抗体および活性化された活性化可能抗PD-1抗体は、PD-1に結合して中和するか、そうでなければPD-L1および/もしくはPD-L2と結合するまたはそれ以外の方法で相互作用するPD-1の能力を阻害する。本開示の抗PD-1モノクローナル抗体および活性化された活性化可能抗PD-1抗体は、PD-1に結合して中和するか、そうでなければPD-1の少なくとも1つの生物学的活性を阻害する。例えば、本開示の抗PD-1モノクローナル抗体および活性化された活性化可能抗PD-1抗体は、PD-1に結合して、活性化T細胞上のPD-1のリガンド活性化をブロックするかまたはそれ以外の方法で阻害する。直接的な細胞傷害性阻害または腫瘍増殖阻害によって効果を発揮する従来の化学療法および他のターゲティングされた抗がん療法とは対照的に、本開示のモノクローナル抗体および活性化可能抗体は、T細胞活性化および応答の負の調節因子をブロックし、それによって免疫系が腫瘍を攻撃することを可能にする。
本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、マスキング部分(MM)のカップリングがPD-1に結合する抗体またはその抗原結合断片の能力を低減させるような、MMにカップリングされた、PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。MMは、プロテアーゼの基質として機能する配列を含む切断可能部分(CM)を介してカップリングされる。
本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、切断可能部分がプロテアーゼによって切断される場合に活性化される。例えば、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞に近接する腫瘍によって産生される。いくつかの態様において、プロテアーゼは、PD-1を発現するT細胞と共局在する腫瘍によって産生される。活性化された、すなわち、切断された状態では、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、T細胞表面上に発現されたPD-1に結合する。
活性化可能抗PD-1抗体は、T細胞上のPD-1に対するPD-L1およびPD-L2からなる群より選択されるリガンドの結合に関連する疾患または障害の症状を処置する、予防する、その症状の進行を遅らせる、その症状を改善するおよび/または緩和する方法において用いられる。そのようなリガンドは、腫瘍細胞および他の免疫細胞上に見出されることが多い。PD-1に対するそのようなリガンドの結合は、本開示の抗PD1抗体および活性化可能抗PD-1抗体によって低減される免疫抑制、例えばT細胞活性の抑制をもたらし得る。例えば、活性化可能抗PD-1抗体は、がんまたは他の新生物状態の症状を処置する、予防する、その症状の進行を遅らせる、その症状を改善するおよび/または緩和する方法において用いられる。
本発明の例示的な活性化可能抗PD-1抗体としては、例えば、実施例に、例えば実施例1、2、8、9、14および15に記述される抗体であるか、またはそれに由来する重鎖および軽鎖を含む活性化可能抗体が挙げられる。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 1、5、9、13、17、21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 3、7、11、15、19、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1030、1032、1034、1036、1039、1041～1090、1113～1120、1123、1124、1127、1128、1131、1132、1134、1135、1138、1139、1143、1144、1147、1148、1151、1152、1155、1156、1159、1160、1163、1164、1167、1168、1170、1171、1174、1175、1178、1179、1182、1183、1186、1187、1190、1191、1194、1195、1198、1199、1202、1203、2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、584、919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1029、1030、1032、1034、1036、1039、1041～1090、1113～1120、1123、1127、1131、1134、1138、1144、1148、1152、1156、1160、1164、1168、1170、1174、1178、1182、1186、1190、1194、1198、1203、2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、軽鎖は、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する。いくつかの態様において、軽鎖は、SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、584、919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、および997からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、572、574、576、578、580、582、1029、1120、1124、1128、1132、1135、1139、1143、1147、1151、1155、1159、1163、1167、1171、1175、1179、1183、1187、1191、1195、1199、1203、2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、軽鎖は、SEQ ID NO: 515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1029、1030、1032、1034、1036、1039、1041～1090、1113～1120、1123、1127、1131、1134、1138、1144、1148、1152、1156、1160、1164、1168、1170、1174、1178、1182、1186、1190、1194、1198、1203、2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、1027、1028、1029、1030、1032、1034、1036、1039、1041～1076、1113～1120、1123、1124、1127、1128、1131、1132、1134、1135、1138、1139、1143、1144、1147、1148、1151、1152、1155、1156、1159、1160、1163、1164、1167、1168、1170、1171、1174、1175、1178、1179、1182、1183、1186、1187、1190、1191、1194、1195、1198、1199、1202、1203 2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、および37からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、1028、1029、1041～1076、1138、1139、1143、1144、1147、1148、1151、1152、1155、1156、1159、1160、1163、1164、1167、1168、1170、1171、1174、1175、1178、1179、1182、1183、1186、1187、1190、1191、1194、1195、1198、1199、1202、1203、2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、軽鎖は、SEQ ID NO: 919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、1028、1041～1076、1138、1144、1148、1152、1156、1160、1164、1168、1170、1174、1178、1182、1186、1190、1194、1198、1202、2055、2057、および2059からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、軽鎖は、SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、1029、1139、1143、1147、1151、1155、1159、1163、1167、1171、1175、1179、1183、1187、1191、1195、1199、1203、2054、2056、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 546からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、SEQ ID NO: 515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1030、1032、1034、1036、1039、1077～1090、1113～1120、1123、1124、1127、1128、1131、1132、1134、および1135からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1030、1032、1034、1036、1039、1070～1090、1119、1123、1127、1131、および1134からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、SEQ ID NO: 515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、1120、1124、1128、1132、および1135からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7に示される重鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7に示される軽鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖を含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7に示される重鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖と、表7に示される軽鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する軽鎖とを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループAに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループBに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループCに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループDに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループEに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループFに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループHに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループIに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループJに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループKに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループLに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループMに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループNに示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループOに示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループPに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループQに示される組み合わせ由来の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループAに示される重鎖配列由来の重鎖配列の相補性決定領域(CDR)配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループAに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループAに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDR、および表7のグループAに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループBに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループBに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループBに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDR、および表7のグループBに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループCに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループCに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループCに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループCに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループDに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループDに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループDに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループDに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループEに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループEに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループEに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループEに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループFに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループFに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループFに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループFに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループGに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループGに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループGに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループGに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループHに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループHに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループHに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループHに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループIに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループIに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループIに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループIに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループJに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループJに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループJに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループJに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループKに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループKに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループKに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループKに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループLに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループLに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループLに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループLに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループMに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループMに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループMに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループMに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループNに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループNに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループNに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループNに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループOに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループOに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループOに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループOに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループPに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループPに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループPに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループPに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループQに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループQに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループQに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループQに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループRに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループRに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループRに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループRに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループSに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループSに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループSに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループSに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループTに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループTに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループTに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループTに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループUに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループUに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループUに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループUに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループVに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 619の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1856の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 619の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1856の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1846の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1858の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1846の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1858の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1843の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1859の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1843の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1859の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1847の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1847の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1848の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1860の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1848の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1860の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1844の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1861の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1844の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1861の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1841の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1841の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1842の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1842の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1845の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1845の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1835の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1857の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1835の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1857の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1836の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1862の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1836の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1862の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1837の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1863の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1837の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1863の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1838の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1864の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1838の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1864の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1838の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1865の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1838の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1865の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1839の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1864の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1839の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1864の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1839の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1865の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1839の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1865の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1840の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1866の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1840の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1866の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1841の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1867の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1841の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1867の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1841の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1868の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1841の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1868の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1849の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1858の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1849の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1858の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1853の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1859の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1853の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1859の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1869の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1869の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1850の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1860の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1850の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1860の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1851の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 1861の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1851の重鎖配列およびSEQ ID NO: 1861の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1852の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1852の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1854の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1854の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1855の重鎖配列のCDRの組み合わせおよびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループVに示されるSEQ ID NO: 1855の重鎖配列およびSEQ ID NO: 737の軽鎖配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループWに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループWに示される軽鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表7のグループWに示される重鎖配列由来の重鎖配列のCDRおよび表7のグループWに示される重鎖配列由来の軽鎖配列のCDRの組み合わせを含む。
（表７）PD-1に結合する活性化可能抗体の可変重鎖領域(VH)および可変軽鎖領域(VL)の配列
Figure 2022064924000556
Figure 2022064924000557
Figure 2022064924000558
Figure 2022064924000559
Figure 2022064924000560
Figure 2022064924000561
Figure 2022064924000562
Figure 2022064924000563
Figure 2022064924000564
Figure 2022064924000565
Figure 2022064924000566
Figure 2022064924000567
Figure 2022064924000568
Figure 2022064924000569
Figure 2022064924000570
Figure 2022064924000571
Figure 2022064924000572
Figure 2022064924000573
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Figure 2022064924000575
Figure 2022064924000576
Figure 2022064924000577
Figure 2022064924000578
Figure 2022064924000579
(i) グループB、グループP、グループQ、およびグループVに対して提供され、「HC」および「LC」と表される配列は、重鎖および軽鎖アミノ酸配列であり; 表7に提示される他の全ての配列は、可変重鎖および可変軽鎖配列であり;
(ii) グループDにおいて提供される配列は、B7-DCポリペプチドおよび免疫グロブリンポリペプチドを含む融合タンパク質であり; ならびに
(iii) グループIにおいて、最後の配列は二重特異性抗体(BsAb)配列である
ことに留意されたい。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表8に示されるCDR配列、表8の単一列内に示される組み合わせからなる群より選択されるVL CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせ、表8に示される組み合わせからなる群より選択されるVH CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせ、または表8に示される組み合わせからなる群より選択されるVL CDRおよびVH CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせを含む。CDR領域は、UCLにあるAndrew C. R. Martin のバイオインフォマティクスグループウェブサイトにおけるCDR定義の表に記載されるように、AbM定義に従って定義した。
（表８）PD-1に結合する抗体および活性化可能抗体のCDR配列
Figure 2022064924000580
Figure 2022064924000581
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、米国特許第8,927,697号ならびに米国特許出願公開第US 2011-0171215号および同第US 2015-0152180号において開示され、かつEuropean Collection of Cell Cultures (ECACC)にアクセッション番号08090902; 08090903; および08090901の下で寄託されているハイブリドーマのような、ハイブリドーマによって生成され、分泌されまたはそれ以外の方法で産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、米国特許出願公開第US 2014-0335093号において開示され、かつCollection Nationale De Cultures De Microorganismes (CNCM)に寄託番号1-4122の下で寄託されているハイブリドーマのような、ハイブリドーマによって生成され、分泌されまたはそれ以外の方法で産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、PCT公開番号WO 2015/058573またはWO 2014/206107において開示され、かつChina Culture Collection Committee General Microbiology Centerにアクセッション番号8351の下で寄託されているハイブリドーマのような、ハイブリドーマによって生成され、分泌されまたはそれ以外の方法で産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、米国特許出願公開第US2011177088号において開示され、かつCollection Nationale De Cultures De Microorganismes (CNCM)に寄託番号1-3745の下で寄託されているハイブリドーマのような、ハイブリドーマによって生成され、分泌されまたはそれ以外の方法で産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9に示されるCDR配列、表9に示される組み合わせからなる群より選択されるVL CDR配列の組み合わせ、および/または表9に示される組み合わせからなる群より選択されるVH CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループAに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループBに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループCに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループEに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループEに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループEに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループEに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループFに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループFに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループFに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループFに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループGに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループGに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループGに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループGに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループHに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループHに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループHに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループHに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループLに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループLに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループLに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループLに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループMに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループMに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループMに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループMに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループNに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループNに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループNに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループNに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループOに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループOに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループOに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループOに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループPに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループPに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループPに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループPに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループQに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループQに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループQに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループQに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループRに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループRに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループRに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループRに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループTに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループTに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループTに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループTに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループUに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループUに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループUに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループUに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループVに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループVに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループVに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループVに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループWに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループWに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループWに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループWに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループXに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループXに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、表9のグループXに示される組み合わせからなる群より選択される重鎖CDR配列の組み合わせ、および表9のグループXに示される組み合わせからなる群より選択される軽鎖CDR配列の組み合わせを含む。
（表９）PD-1に結合する抗体および活性化可能抗体の追加的なCDR配列
Figure 2022064924000582
Figure 2022064924000583
Figure 2022064924000584
Figure 2022064924000585
Figure 2022064924000586
Figure 2022064924000587
Figure 2022064924000588
本開示の活性化可能抗体におけるABは、例えば、哺乳動物PD-1のような、PD-1標的に特異的に結合する。いくつかの態様において、そのようなAbは哺乳動物PD-1に結合する。いくつかの態様において、そのようなAbはヒトPD-1に結合する。いくつかの態様において、そのようなAbは非ヒト霊長類PD-1に結合する。本開示の抗体および/または本明細書において記述される活性化された活性化可能抗体と同じPD-1エピトープに結合するABも本開示に含まれる。PD-1標的、例えばヒトPD-1に対する結合について、本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または活性化された抗PD-1活性化可能抗体と競合するABも本開示に含まれる。PD-1標的、例えばヒトPD-1に対する結合について、本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または活性化された抗PD-1活性化可能抗体と交差競合するABも本開示に含まれる。
本明細書で提供される活性化可能抗PD-1抗体は、マスキング部分を含む。いくつかの態様において、マスキング部分は、抗PD-1抗体にカップリングされるかまたは別の方法で付加されるアミノ酸配列であり、マスキング部分が、抗PD-1抗体のPD-1に特異的に結合する能力を低減させるように、活性化可能抗PD-1抗体構築物内に位置づけられる。好適なマスキング部分は、様々な公知の技法のいずれかを用いて特定される。例えば、ペプチドマスキング部分は、DaughertyらによるPCT公開公報第WO 2009/025846号に記載されている方法を用いて特定され、それらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
本明細書で提供される活性化可能抗PD-1抗体は、切断可能部分を含む。いくつかの態様において、切断可能部分は、プロテアーゼ、通常は細胞外プロテアーゼに対する基質であるアミノ酸配列を含む。好適な基質は、様々な公知の技法のいずれかを用いて特定される。例えば、ペプチド基質は、Daughertyらによる米国特許第7,666,817号；Staglianoらによる米国特許第8,563,269号；およびLa PorteらによるPCT公開公報第WO 2014/026136号に記載されている方法を用いて特定され、それらの各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。（Boulware et al. "Evolutionary optimization of peptide substrates for proteases that exhibit rapid hydrolysis kinetics." Biotechnol Bioeng. 106.3 (2010): 339-46も参照されたい。）
例示的な基質には、表3に列挙される以下の酵素またはプロテアーゼのうちの1つまたは複数によって切断可能な基質が含まれるが、それらに限定されない。
（表３）例示的なプロテアーゼおよび／または酵素
Figure 2022064924000589
本明細書に記載される活性化可能抗PD-1抗体は、抗体治療法、とりわけ、インビボで少なくともある程度まで毒性であることが公知である抗体治療法の限界を克服する。標的媒介性毒性は、治療用抗体の開発にとって大きな制限となっている。本明細書で提供される活性化可能抗PD-1抗体は、伝統的な治療用抗体による正常組織中の標的の阻害と関連する毒性に対処するように設計されている。これらの活性化可能抗PD-1抗体は、疾患の部位でタンパク質分解性に活性化されるまでマスクされたままである。親治療用抗体として抗PD-1抗体から出発して、本発明の活性化可能抗PD-1抗体を、プロテアーゼ基質を組み込むリンカーを通して抗体を阻害性マスクにカップリングすることによって作製した。
ABがMMで修飾され、かつ標的の存在下にある場合、ABのその標的に対する特異的結合は、標的に対する、MMで修飾されていないABの特異的結合または親ABの特異的結合と比較して、低減または阻害される。
標的に対する、MMで修飾されたABのKdは、標的に対する、MMで修飾されていないABまたは親ABのKdよりも、少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれよりも大きい、または、5～10、10～100、10～1,000、10～10,000、10～100,000、10～1,000,000、10～10,000,000、100～1,000、100～10,000、100～100,000、100～1,000,000、100～10,000,000、1,000～10,000、1,000～100,000、1,000～1,000,000、1000～10,000,000、10,000～100,000、10,000～1,000,000、10,000～10,000,000、100,000～1,000,000、もしくは100,000～10,000,000倍大きい。逆に、標的に対する、MMで修飾されたABの結合親和性は、標的に対する、MMで修飾されていないABまたは親ABの結合親和性よりも、少なくとも2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれよりも大きい、または、5～10、10～100、10～1,000、10～10,000、10～100,000、10～1,000,000、10～10,000,000、100～1,000、100～10,000、100～100,000、100～1,000,000、100～10,000,000、1,000～10,000、1,000～100,000、1,000～1,000,000、1000～10,000,000、10,000～100,000、10,000～1,000,000、10,000～10,000,000、100,000～1,000,000、もしくは100,000～10,000,000倍低い。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数（Kd）は、一般に、標的に対するABのKdよりも大きい。ABに対するMMのKdは、標的に対するABのKdよりも少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、100,000、1,000,000倍、または10,000,000倍大きいことすらある。逆に、ABに対するMMの結合親和性は、一般に、標的に対するABの結合親和性よりも低い。ABに対するMMの結合親和性は、標的に対するABの結合親和性よりも少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、100,000、1,000,000倍、または10,000,000倍低いことすらある。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数（Kd）は、標的に対するABのKdとほぼ同等である。いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数（Kd）は、標的に対するABの解離定数以下である。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数（Kd）は、標的に対するABの解離定数よりも小さい。
いくつかの態様において、ABに対するMMの解離定数（Kd）は、標的に対するABの解離定数よりも大きい。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKd以下であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKd以上であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdとほぼ同等であるKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdよりも小さいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdよりも大きいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合についてのKdの2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、または1,000倍以下だけ大きいKdを有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合のKdの1～5、2～5、2～10、5～10、5～20、5～50、5～100、10～100、10～1,000、20～100、20～1000、または100～1,000倍大きいKdを有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも低い親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性以下である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性とほぼ同等である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性以上である親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも高い親和性を有する。
いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも2、3、4、5、10、25、50、100、250、500、または1,000倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも1～5、2～5、2～10、5～10、5～20、5～50、5～100、10～100、10～1,000、20～100、20～1000、または100～1,000倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、MMは、ABに対する結合について、標的に対するABの結合親和性よりも2～20倍低い親和性を有する。いくつかの態様において、ABに共有結合で連結されておらず、かつABと等モル濃度のMMは、標的に対するABの結合を阻害しない。
ABがMMで修飾され、かつ標的の存在下にある場合、ABのその標的に対する特異的結合は、標的に対する、MMで修飾されていないABの特異的結合または親ABの特異的結合と比較して、低減または阻害される。標的に対する、MMで修飾されていないABの結合または親ABの結合と比較した場合、MMで修飾した場合の、標的に結合するABの能力は、インビボでまたはインビトロアッセイにおいて測定した際、少なくとも2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84、もしくは96時間、または5、10、15、30、45、60、90、120、150、もしくは180日、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、もしくは12か月またはそれより長くに渡って、少なくとも50％、60％、70％、80％、90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、およびさらに100％低減され得る。
MMは、標的に対するABの結合を阻害する。MMは、ABの抗原結合ドメインに結合し、標的に対するABの結合を阻害する。MMは、標的に対するABの結合を立体的に阻害することができる。MMは、ABのその標的に対する結合をアロステリックに阻害することができる。これらの態様において、ABが修飾されるかまたはMMにカップリングされ、かつ標的の存在下にある場合、インビボでまたはインビトロアッセイにおいて測定した際、少なくとも2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84、もしくは96時間、または5、10、15、30、45、60、90、120、150、もしくは180日、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、もしくは12か月またはそれより長くに渡って、標的に対するABの結合は存在しないかもしくは実質的に結合が存在せず、または、標的に対する、MMで修飾されていないAB、親AB、もしくはMMにカップリングされていないABの結合と比較して、標的に対するABの結合は、0.001％、0.01％、0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、または50％以下である。
ABがMMにカップリングされるかまたはMMにより修飾されている場合、MMは、標的に対するABの特異的結合を「マスクする」か、または低減させるか、またはさもなくば阻害する。ABがMMにカップリングされるかまたはMMにより修飾されている場合、そのようなカップリングまたは修飾は、構造変化をもたらすことができ、それが、ABのその標的に特異的に結合する能力を低減または阻害する。
MMにカップリングされるかまたはMMで修飾されているABは、以下の式によって表すことができる（アミノ（N）末端領域からカルボキシル（C）末端領域への順序）：
(MM)-(AB)
(AB)-(MM)
(MM)-L-(AB)
(AB)-L-(MM)
式中、MMはマスキング部分であり、ABは抗体またはその抗体断片であり、かつLはリンカーである。多くの態様において、可動性を提供するために1つまたは複数のリンカー、例えばフレキシブルリンカーを、組成物中に挿入することが望ましい可能性がある。
ある特定の態様において、MMは、ABの天然の結合パートナーではない。いくつかの態様において、MMは、ABのいずれの天然の結合パートナーに対しても相同性を有さないか、または実質的に相同性を有さない。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する類似性は、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、または80％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、または80％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、25％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、50％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、20％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、10％以下である。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、MMにより修飾され、かつ1つまたは複数の切断可能部分（CM）も含むABを含む。そのような活性化可能抗体は、ABの標的に対して、活性化可能／切り換え可能な結合を呈する。活性化可能抗体は、一般に、マスキング部分（MM）および修飾可能または切断可能な部分（CM）により修飾されるかまたはそれにカップリングされた、抗体または抗体断片（AB）を含む。いくつかの態様において、CMは、少なくとも1つのプロテアーゼに対する基質として働くアミノ酸配列を含有する。
活性化可能抗体の要素は、切断された（または相対的に活性の）状態および標的の存在下で、ABが標的に結合し、活性化可能抗体が切断されていない（または相対的に不活性の）状態で標的の存在下にある間は、ABのその標的に対する特異的結合が低減または阻害されるように、MMおよびCMが位置づけられて配置される。ABのその標的に対する特異的結合は、ABのその標的に特異的に結合する能力のMMによる阻害またはマスキングに起因して低減され得る。
標的に対するMMおよびCMで修飾されたABのKdは、標的に対するMMおよびCMで修飾されていないABまたは親ABのKdよりも、少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれより大きい、または、5～10、10～100、10～1,000、10～10,000、10～100,000、10～1,000,000、10～10,000,000、100～1,000、100～10,000、100～100,000、100～1,000,000、100～10,000,000、1,000～10,000、1,000～100,000、1,000～1,000,000、1000～10,000,000、10,000～100,000、10,000～1,000,000、10,000～10,000,000、100,000～1,000,000、もしくは100,000～10,000,000倍大きい。逆に、標的に対するMMおよびCMで修飾されたABの結合親和性は、標的に対するMMおよびCMで修飾されていないABまたは親ABの結合親和性よりも、少なくとも5、10、25、50、100、250、500、1,000、2,500、5,000、10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、5,000,000、10,000,000、50,000,000倍もしくはそれより大きい、または、5～10、10～100、10～1,000、10～10,000、10～100,000、10～1,000,000、10～10,000,000、100～1,000、100～10,000、100～100,000、100～1,000,000、100～10,000,000、1,000～10,000、1,000～100,000、1,000～1,000,000、1000～10,000,000、10,000～100,000、10,000～1,000,000、10,000～10,000,000、100,000～1,000,000、もしくは100,000～10,000,000倍低い。
ABがMMおよびCMで修飾され、標的の存在下にあるが修飾作用物質（例えば、少なくとも1つのプロテアーゼ）の存在下にはない時、ABのその標的に対する特異的結合は、標的に対するMMおよびCMで修飾されていないABまたは親ABの特異的結合と比較して、低減または阻害される。その標的に対する、親ABの結合またはMMおよびCMで修飾されていないABの結合と比較した場合、MMおよびCMで修飾された際の標的に結合するABの能力は、インビボでまたはインビトロアッセイにおいて測定した際、少なくとも2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84、もしくは96時間、または5、10、15、30、45、60、90、120、150、もしくは180日、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、もしくは12か月またはそれより長くに渡って、少なくとも50％、60％、70％、80％、90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、およびさらに100％低減され得る。
本明細書において使用される際、切断状態という用語は、少なくとも1つのプロテアーゼによるCMの修飾後の活性化可能抗体の様子を指す。非切断状態という用語は、本明細書において使用される際、プロテアーゼによるCMの切断のない活性化可能抗体の様子を指す。上記で議論されるように、「活性化可能抗体」という用語は、その切断されていない（天然の）状態、およびその切断状態の両方の活性化可能抗体を指すように、本明細書において使用される。いくつかの態様において、切断された活性化可能抗体は、（例えば、MMが共有結合（例えば、システイン残基間のジスルフィド結合）によって活性化可能抗体に接合されていない場合は）少なくともMMの放出を結果としてもたらす、プロテアーゼによるCMの切断のためにMMを欠如する可能性があることが、当業者に明らかであろう。
活性化可能または切り替え可能とは、活性化可能抗体が阻害された状態、マスクされた状態、または非切断状態（すなわち、第1のコンフォメーション）にある場合、活性化可能抗体が標的に対する結合の第1のレベルを示し、阻害されていない状態、マスクされていない状態、および／または切断状態（すなわち、第2のコンフォメーション）にある場合は、標的に対する結合の第2のレベルを示し、ここで標的結合の第2のレベルが結合の第1のレベルよりも大きいことを意味する。一般に、活性化可能抗体のABに対する標的のアクセスは、CMを切断することができる切断作用物質、すなわちプロテアーゼの存在下では、そのような切断作用物質の非存在下よりも大きい。したがって、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ABは、標的結合から阻害され、標的結合からマスクされることができ（すなわち、第1のコンフォメーションは、ABが標的に結合できないようなものである）、切断状態にある場合は、ABは、標的結合について阻害されないか、またはマスクされない。
活性化可能抗体のCMおよびABは、ABが所定の標的に対する結合部分に相当し、CMがプロテアーゼに対する基質に相当するように選択される。いくつかの態様において、プロテアーゼは、対象における処置部位または診断部位で標的と共局在化する。本明細書において使用される際、共局在化とは、同じ部位または相対的にすぐ近くにあることを指す。いくつかの態様において、プロテアーゼはCMを切断し、切断部位の近くに位置する標的に結合する活性化抗体を生じる。本明細書において開示される活性化可能抗体は、例えば、CM中の部位を切断することができるプロテアーゼ、すなわちプロテアーゼが処置部位または診断部位の標的含有組織においてまたは標的含有組織のすぐ近くに、非処置部位の組織において（例えば、健常組織において）よりも相対的に高いレベルで存在する場合、特定の用途を見いだす。いくつかの態様において、本開示のCMはまた、1つまたは複数の他のプロテアーゼによっても切断される。いくつかの態様において、それは、標的と共局在化し、インビボでCMの切断を担う1つまたは複数の他のプロテアーゼである。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、ABが標的に対する結合からマスクされていないかまたはさもなくば阻害されていない場合に、非処置部位でのABの結合にさもなくば起因しうる毒性および／または有害副作用の低減を提供する。
一般に、活性化可能抗体は、関心対象のABを選択すること、および、コンフォメーション的に束縛された時に、MMがABのマスキングまたはABのその標的に対する結合の低減を提供するように、活性化可能抗体の残りの部分を構築することによって設計することができる。構造設計基準は、この機能的特色を提供するように考慮に入れることができる。
阻害されたコンフォメーション対阻害されていないコンフォメーションにおいて、標的結合について望ましいダイナミックレンジの切り換え可能な表現型を呈する活性化可能抗体が、提供される。ダイナミックレンジとは、一般に、（a）第1のセットの条件下でのパラメータの最大検出レベルの、（b）第2のセットの条件下でのそのパラメータの最小検出値に対する比を指す。例えば、活性化可能抗体の文脈において、ダイナミックレンジとは、（a）活性化可能抗体のCMを切断することができる少なくとも1つのプロテアーゼの存在下での活性化可能抗体への標的タンパク質結合の最大検出レベルの、（b）プロテアーゼの非存在下での活性化可能抗体への標的タンパク質結合の最小検出レベルに対する比を指す。活性化可能抗体のダイナミックレンジは、活性化可能抗体切断作用物質（例えば、酵素）処置の解離定数の、活性化可能抗体切断作用物質処置の解離定数に対する比として算出することができる。活性化可能抗体のダイナミックレンジが大きければ大きいほど、活性化可能抗体の切り換え可能な表現型は良好である。相対的に高い（例えば、1よりも大きい）ダイナミックレンジ値を有する活性化可能抗体は、活性化可能抗体による標的タンパク質結合が、活性化可能抗体のCMを切断することができる切断作用物質（例えば、酵素）の存在下で、切断作用物質の非存在下よりも大きい程度まで起こる（例えば、優勢に起こる）ように、より望ましい切り換え表現型を呈する。
活性化可能抗体は、様々な構造的配置で提供することができる。活性化可能抗体の例示的な式は、下記で提供される。AB、MM、およびCMのN末端からC末端への順序は、活性化可能抗体内で逆であり得ることが、特に企図される。CMおよびMMは、例えば、CMがMM内に含有されるように、アミノ酸配列において重複し得ることもまた、特に企図される。
例えば、活性化可能抗体は、以下の式によって表すことができる（アミノ（N）末端領域からカルボキシル（C）末端領域への順序）：
(MM)-(CM)-(AB)
(AB)-(CM)-(MM)
式中、MMはマスキング部分であり、CMは切断可能部分であり、かつABは抗体またはその断片である。MMおよびCMは、上記の式において別個の構成要素として示されているが、本明細書において開示されるすべての例示的な態様（式を含む）において、MMおよびCMのアミノ酸配列は、例えば、CMがMM内に完全にまたは部分的に含有されるように重複しうると企図されることに、注目されるべきである。加えて、上記の式は、活性化可能抗体要素のN末端またはC末端に位置づけられ得る追加的なアミノ酸配列を提供する。
ある特定の態様において、MMは、ABの天然の結合パートナーではない。いくつかの態様において、MMは、ABのいずれの天然の結合パートナーに対しても相同性を有さないか、または実質的に相同性を有さない。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する類似性は、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、または80％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、または80％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、50％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、25％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、20％以下である。いくつかの態様において、MMの、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性は、10％以下である。
多くの態様において、MM-CM接合部、CM-AB接合部、またはその両方のうちの1つまたは複数で可動性を提供するために、1つまたは複数のリンカー、例えばフレキシブルリンカーを、活性化可能抗体構築物中に挿入することが望ましい可能性がある。例えば、AB、MM、および／またはCMは、望ましい可動性を提供するのに十分な数の残基（例えば、Gly、Ser、Asp、Asn、特にGlyおよびSer、とりわけGly）を含有しない場合がある。そのような際、そのような活性化可能抗体構築物の切り換え可能な表現型は、フレキシブルリンカーを提供するための1つまたは複数のアミノ酸の導入から恩恵を受ける可能性がある。加えて、下記のように、活性化可能抗体がコンフォメーション的に束縛された構築物として提供される場合には、フレキシブルリンカーを、切断されていない活性化可能抗体における環状構造の形成および維持を促進するために機能的に挿入することができる。
例えば、ある特定の態様において、活性化可能抗体は、以下の式（下記の式は、N末端からC末端の方向、またはC末端からN末端の方向のいずれかでのアミノ酸配列を表す）のうちの1つを含むことができる：
(MM)-L1-(CM)-(AB)
(MM)-(CM)-L2-(AB)
(MM)-L1-(CM)-L2-(AB)
式中、MM、CM、およびABは上記で定義されたようであり；L1およびL2は、各々独立しており、任意で存在するかまたは欠如しており、少なくとも1つの可動性アミノ酸（例えば、Gly）を含む、同じかまたは異なるフレキシブルリンカーである。加えて、上記の式は、活性化可能抗体要素のN末端またはC末端に位置づけられ得る追加的なアミノ酸配列を提供する。例には、標的部分（例えば、標的組織中に存在する細胞の受容体に対するリガンド）および血清半減期延長部分（例えば、免疫グロブリン（例えば、IgG）または血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（HAS））などの血清タンパク質に結合するポリペプチド）が含まれるが、それらに限定されない。
CMは、約0.001～1500×104 M-1S-1または少なくとも0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、2.5、5、7.5、10、15、20、25、50、75、100、125、150、200、250、500、750、1000、1250、もしくは1500×104 M-1S-1の速度で少なくとも1つのプロテアーゼによって特異的に切断される。いくつかの態様において、CMは、約100,000 M-1S-1の速度で特異的に切断される。いくつかの態様において、CMは、約1×10E2～約1×10E6 M-1S-1（すなわち、約1×102～約1×106 M-1S-1）の速度で特異的に切断される。
酵素による特異的切断のために、酵素とCMとの間の接触がなされる。MMおよびCMにカップリングされたABを含む活性化可能抗体が、標的および十分な酵素活性の存在下にある場合に、CMは切断され得る。十分な酵素活性とは、CMと接触して切断をもたらす酵素の能力を指すことができる。酵素は、CMの付近にあり得るが、他の細胞因子または酵素のタンパク質修飾のために切断できないことを、容易に想定することができる。
本明細書に記載される組成物における使用に適しているリンカーは、一般に、修飾されたABまたは活性化可能抗体の可動性を提供して、標的に対するABの結合の阻害を促進するものである。そのようなリンカーは、一般に、フレキシブルリンカーと呼ばれる。適しているリンカーは、容易に選択することができ、様々な長さ、例えば、4アミノ酸～10アミノ酸、5アミノ酸～9アミノ酸、6アミノ酸～8アミノ酸、または7アミノ酸～8アミノ酸を含む、1アミノ酸（例えば、Gly）～20アミノ酸、2アミノ酸～15アミノ酸、3アミノ酸～12アミノ酸の適しているいずれかであることができ、長さが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20アミノ酸であることができる。
例示的なフレキシブルリンカーには、グリシンポリマー(G)n、グリシン-セリンポリマー（例えば、(GS)n、(GSGGS)n（SEQ ID NO:363）および(GGGS)n（SEQ ID NO:364）（式中、nは少なくとも1の整数である）を含む）、グリシン-アラニンポリマー、アラニン-セリンポリマー、および当技術分野において公知である他のフレキシブルリンカーが含まれる。グリシンポリマーおよびグリシン-セリンポリマーは、相対的に構造化されておらず、そのため、構成要素間の中性のつなぎとして働くことができる。グリシンは、互角のアラニンよりも有意に大きいphi-psi空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもずっと制限されない（Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)）。例示的なフレキシブルリンカーには、
Figure 2022064924000590
などが含まれるが、それらに限定されない。当業者は、リンカーが、フレキシブルリンカー、およびより可動性が低い構造を付与して望ましい活性化可能抗体構造を提供する1つまたは複数の部分を含むことができるように、活性化可能抗体の設計が、すべてまたは部分的に可動性であるリンカーを含みうることを認識しているであろう。
本開示はまた、PD-1に特異的に結合する抗体または抗体断片（AB）を含み、該ABが、該ABのその標的に結合する能力を減少させるマスキング部分（MM）にカップリングされている、活性化可能抗PD-1抗体を含む組成物および方法も提供する。いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体は、プロテアーゼに対する基質である切断可能部分（CM）をさらに含む。本明細書で提供される組成物および方法は、活性化可能抗PD-1抗体の活性（例えば、マスキング活性、活性化活性、または結合活性）を損なうことなく、AB中の1つまたは複数のシステイン残基に対する1つまたは複数の作用物質の付加を可能にする。いくつかの態様において、本明細書で提供される組成物および方法は、MM内の1つまたは複数のジスルフィド結合を低減させるかまたはさもなくば妨害することなく、AB中の1つまたは複数のシステイン残基に対する1つまたは複数の作用物質の付加を可能にする。本明細書で提供される組成物および方法は、1つまたは複数の作用物質、例えば、様々な治療用、診断用、および／または予防用作用物質のいずれかにコンジュゲートされている活性化可能抗PD-1抗体を生じ、例えば、いくつかの態様においては、作用物質のいずれも活性化可能抗PD-1抗体のMMにコンジュゲートされていない。本明細書で提供される組成物および方法は、MMが、非切断状態において活性化可能抗体のABを効果的かつ効率的にマスクする能力を保持する、コンジュゲートされた活性化可能抗PD-1抗体を生じる。本明細書で提供される組成物および方法は、活性化可能抗体がさらに活性化されている、すなわち、CMを切断することができるプロテアーゼの存在下で切断されている、コンジュゲートされた活性化可能抗PD-1抗体を生じる。
活性化可能抗PD-1抗体は、作用物質に対するコンジュゲーションの少なくとも1つの点を有するが、本明細書で提供される方法および組成物においては、すべてよりは少ない可能なコンジュゲーションの点が、作用物質に対するコンジュゲーションのために利用可能である。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、鎖間ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、鎖間スルフィド結合に関与する硫黄原子であるが、鎖内ジスルフィド結合に関与する硫黄原子ではない。いくつかの態様において、1つまたは複数のコンジュゲーションの点は、システインまたは硫黄原子を含有する他のアミノ酸残基の硫黄原子である。そのような残基は、抗体構造中に天然に存在することができ、または、部位特異的変異誘発、化学変換、または非天然アミノ酸の誤取り込みによって抗体中に組み込むことができる。
AB中の1つまたは複数の鎖間ジスルフィド結合、およびMM中の1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合を有する活性化可能抗PD-1抗体と、遊離チオールと反応する薬物とのコンジュゲートを調製する方法もまた提供される。方法は、一般に、活性化可能抗体中の鎖間ジスルフィド結合を、例えばTCEPなどの還元剤で部分的に還元する工程；および、遊離チオールと反応する薬物を、部分的に還元された活性化可能抗体にコンジュゲートする工程を含む。本明細書において使用される際、部分的還元という用語は、活性化可能抗PD-1抗体を還元剤と接触させ、すべてよりは少ないジスルフィド結合、例えば、すべてよりは少ない可能なコンジュゲーションの部位が還元される状況を指す。いくつかの態様において、すべての可能なコンジュゲーションの部位の99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％未満、または5％未満が還元される。
さらに他の態様において、作用物質、例えば薬物を還元して活性化可能抗PD-1抗体にコンジュゲートして、作用物質の配置において選択性を結果としてもたらす方法が提供される。方法は、一般に、活性化可能抗体のマスキング部分または他の非AB部分中のいずれのコンジュゲーション部位も還元されないように、活性化可能抗PD-1抗体を還元剤で部分的に還元する工程、および、作用物質をAB中の鎖間チオールにコンジュゲートする工程を含む。コンジュゲーション部位は、作用物質の望ましい配置を可能にして、コンジュゲーションを望ましい部位で起こさせるように選択される。還元剤は、例えばTCEPである。例えば、還元剤の活性化可能抗体に対する比、インキュベーションの長さ、インキュベーション中の温度、還元反応溶液のpHなどのような還元反応条件は、MMが、非切断状態において活性化可能抗体のABを効果的かつ効率的にマスクする能力を保持する、コンジュゲートされた活性化可能抗体を生じる条件を特定することによって決定される。還元剤の活性化可能抗PD-1抗体に対する比は、活性化可能抗体に応じて変動することになる。いくつかの態様において、還元剤の活性化可能抗PD-1抗体に対する比は、約20：1～1：1、約10：1～1：1、約9：1～1：1、約8：1～1：1、約7：1～1：1、約6：1～1：1、約5：1～1：1、約4：1～1：1、約3：1～1：1、約2：1～1：1、約20：1～1：1.5、約10：1～1：1.5、約9：1～1：1.5、約8：1～1：1.5、約7：1～1：1.5、約6：1～1：1.5、約5：1～1：1.5、約4：1～1：1.5、約3：1～1：1.5、約2：1～1：1.5、約1.5：1～1：1.5、または約1：1～1：1.5の範囲であろう。いくつかの態様において、比は約5：1～1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約5：1～1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1～1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1～1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約8：1～約1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約2.5：1～1：1の範囲である。
いくつかの態様において、活性化可能抗PD-1抗体のAB中の鎖間ジスルフィド結合を還元し、作用物質、例えば薬物などのチオール含有作用物質を、結果として生じた鎖間チオールにコンジュゲートして作用物質をAB上に選択的に置く方法が提供される。方法は、一般に、ABを還元剤で部分的に還元して、活性化可能抗体中のすべての可能な鎖間チオールを形成させることなく、少なくとも2つの鎖間チオールを形成させる工程；および、部分的に還元されたABの鎖間チオールに作用物質をコンジュゲートする工程を含む。例えば、活性化可能抗体のABは、約37℃で約1時間、還元剤：活性化可能抗体の望ましい比で部分的に還元される。いくつかの態様において、還元剤の活性化可能抗体に対する比は、約20：1～1：1、約10：1～1：1、約9：1～1：1、約8：1～1：1、約7：1～1：1、約6：1～1：1、約5：1～1：1、約4：1～1：1、約3：1～1：1、約2：1～1：1、約20：1～1：1.5、約10：1～1：1.5、約9：1～1：1.5、約8：1～1：1.5、約7：1～1：1.5、約6：1～1：1.5、約5：1～1：1.5、約4：1～1：1.5、約3：1～1：1.5、約2：1～1：1.5、約1.5：1～1：1.5、または約1：1～1：1.5の範囲であろう。いくつかの態様において、比は約5：1～1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約5：1～1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1～1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約4：1～1.5：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約8：1～約1：1の範囲である。いくつかの態様において、比は約2.5：1～1：1の範囲である。
チオール含有試薬は、例えば、システインまたはN-アセチルシステインであることができる。還元剤は、例えばTCEPであることができる。いくつかの態様において、還元された活性化可能抗体は、コンジュゲーションの前に、例えば、カラムクロマトグラフィー、透析、または透析濾過を用いて精製することができる。あるいは、還元された抗体は、部分的還元の後、およびコンジュゲーションの前に精製されない。
本発明はまた、活性化可能抗体中の少なくとも1つの鎖間ジスルフィド結合が、活性化可能抗体中のいずれの鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく還元剤で還元されている、部分的に還元された活性化可能抗PD-1抗体も提供し、該活性化可能抗体は、PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（AB）と、非切断状態においてPD-1標的に対する活性化可能抗体のABの結合を阻害するマスキング部分（MM）と、ABにカップリングされた切断可能部分（CM）とを含み、該CMは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。いくつかの態様において、MMは、CMを介してABにカップリングされている。いくつかの態様において、活性化可能抗体の1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、活性化可能抗体内のMMの1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、非切断状態では、活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって以下のような構造的配置を有する：MM-CM-ABまたはAB-CM-MM。いくつかの態様において、還元剤はTCEPである。
本開示はまた、活性化可能抗体中の少なくとも1つの鎖間ジスルフィド結合が、活性化可能抗体中のいずれの鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく還元剤で還元されている、部分的に還元された活性化可能抗体も提供し、該活性化可能抗体は、標的、例えばPD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（AB）と、非切断状態において標的に対する活性化可能抗体のABの結合を阻害するマスキング部分（MM）と、ABにカップリングされた切断可能部分（CM）とを含み、該CMは、少なくとも1つのプロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。いくつかの態様において、MMは、CMを介してABにカップリングされている。いくつかの態様において、活性化可能抗体の1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、活性化可能抗体内のMMの1つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの態様において、非切断状態における活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、以下のような構造的配置を有する：MM-CM-ABまたはAB-CM-MM。いくつかの態様において、還元剤はTCEPである。
いくつかの態様において、本明細書に記載される活性化可能抗体はまた、活性化可能抗体にコンジュゲートされた作用物質も含む。いくつかの態様において、コンジュゲートされた作用物質は、抗炎症性作用物質などの治療用作用物質である。そのような態様において、例えば、炭水化物部分が活性化可能抗体中の抗体または抗原結合断片の抗原結合領域の外側に位置するいくつかの態様において、作用物質は、活性化可能抗体の炭水化物部分にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は、活性化可能抗体中の抗体または抗原結合断片のスルフヒドリル基にコンジュゲートされている。
いくつかの態様において、作用物質は、例えば、標識または他のマーカーなどの検出可能部分である。例えば、作用物質は、放射標識されたアミノ酸、マークされたアビジン（例えば、光学的方法または熱量測定法によって検出することができる蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができる1つもしくは複数のビオチン化部分、1つもしくは複数の放射性同位体もしくは放射性核種、1つもしくは複数の蛍光標識、1つもしくは複数の酵素標識、および／または1つもしくは複数の化学発光作用物質であるか、またはそれらを含む。いくつかの態様において、検出可能部分は、スペーサー分子によって付加される。
当業者は、多種多様の可能な部分を、本開示の結果として生じた抗体にカップリングできることを認識しているであろう。（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み入れられる"Conjugate Vaccines", Contributions to Microbiology and Immunology, J.M. Cruse and R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989)を参照されたい。）
カップリングは、抗体および他の部分がそのそれぞれの活性を保持する限り、2つの分子を結合することになる任意の化学反応によって達成することができる。この連結は、多くの化学的機構、例として、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、および複合体化を含むことができる。しかし、いくつかの態様において、結合は共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合、または外部架橋分子の組み込みのいずれかによって成し遂げることができる。多くの二価または多価の連結剤が、本開示の抗体などのタンパク質分子を他の分子にカップリングするのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤には、チオエステル類、カルボジイミド類、スクシンイミドエステル類、ジイソシアナート類、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン類、およびヘキサメチレンジアミン類などの有機化合物が含まれることができる。この一覧は、当技術分野において公知である種々のクラスのカップリング剤を網羅するようには意図されないが、むしろ、より一般的なカップリング剤を例示する。（Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984)；Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982)）；およびVitetta et al., Science 238:1098 (1987)を参照されたい。）
いくつかの態様において、本明細書で提供される組成物および方法に加えて、コンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、活性化可能抗体配列に挿入されるかまたは別の方法で含まれる修飾アミノ酸配列を通して、部位特異的コンジュゲーションのために修飾することもできる。これらの修飾アミノ酸配列は、コンジュゲートされた活性化可能抗体内で、コンジュゲートされた作用物質の配置および／または投与量の制御を可能にするように設計される。例えば、活性化可能抗体は、反応性チオール基を提供して、タンパク質のフォールディングおよびアセンブリに負の影響も及ぼさず、抗原結合も変更しない軽鎖および重鎖上の位置で、システイン置換を含むように作製することができる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、コンジュゲーションに適している部位を提供するために、活性化可能抗体内に1つまたは複数の非天然アミノ酸残基を含むか、または別の方法で導入するように作製することができる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、活性化可能抗体配列内に酵素学的に活性化可能なペプチド配列を含むか、または別の方法で導入するように作製することができる。
好適なリンカーは、文献に記載されている。（例えば、MBS（M-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステルの使用を記載している、Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984）を参照されたい。）また、オリゴペプチドリンカーとして抗体にカップリングされるハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用を記載している、米国特許第5,030,719号も参照されたい。いくつかの態様において、好適なリンカーには、（i）EDC（1-エチル-3-(3-ジメチルアミノ-プロピル)カルボジイミドヒドロクロリド）；（ii）SMPT（4-スクシンイミジルオキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)-トルエン）（Pierce Chem. Co., カタログ21558G）；（iii）SPDP（スクシンイミジル-6[3-(2-ピリジルジチオ)プロピオンアミド]ヘキサノアート）（Pierce Chem. Co., カタログ番号21651G）；（iv）スルホ-LC-SPDP（スルホスクシンイミジル6[3-(2-ピリジルジチオ)-プロピアンアミド]ヘキサノアート）（Pierce Chem. Co. カタログ番号2165-G）；および（v）EDCにコンジュゲートされたスルホ-NHS（N-ヒドロキシスルホ-スクシンイミド：Pierce Chem. Co., カタログ番号24510）が含まれる。追加的なリンカーには、SMCC、スルホ-SMCC、SPDB、またはスルホ-SPDBが含まれるが、それらに限定されない。
上記のリンカーは、様々な属性を有する構成要素を含有し、したがって、異なる物理化学的特性を有するコンジュゲートをもたらす。例えば、アルキルカルボキシラートのスルホ-NHSエステルは、芳香族カルボキシラートのスルホ-NHSエステルよりも安定である。NHS-エステルを含有するリンカーは、スルホ-NHSエステルよりも溶解度が低い。さらに、リンカーSMPTは、立体的に妨げられたジスルフィド結合を含有し、安定性が増大したコンジュゲートを形成することができる。ジスルフィド連結は、一般に、インビトロで切断されるために他の連結よりも安定性が低く、利用可能なコンジュゲートがより少ない状態を結果としてもたらす。スルホ-NHSは、とりわけ、カルボジイミドカップリングの安定性を増強することができる。カルボジイミドカップリング（EDCなど）は、スルホ-NHSと共に使用される時、加水分解に対してカルボジイミドカップリング反応単独よりも耐性であるエステルを形成する。
いくつかの態様において、リンカーは切断可能である。いくつかの態様において、リンカーは切断不可能である。いくつかの態様において、2つ以上のリンカーが存在する。2つ以上のリンカーはすべて同じであり、すなわち、切断可能もしくは切断不可能であるか、または、2つ以上のリンカーは異なり、すなわち、少なくとも1つは切断可能および少なくとも1つは切断不可能である。
本開示は、作用物質をABに付加するためのいくつかの方法：（a）ABの炭水化物部分への付加、または（b）ABのスルフヒドリル基への付加、または（c）ABのアミノ基への付加、または（d）ABのカルボキシラート基への付加を利用する。本開示によると、ABは、少なくとも2つの反応基、ABと反応する1つおよび作用物質と反応する1つを有する中間体リンカーを通して、作用物質に共有結合で付加することができる。任意の適合性有機化合物を含むことができるリンカーは、AB（または作用物質）との反応がABの反応性および選択性に有害な影響を及ぼさないように選択することができる。さらに、リンカーの作用物質への付加は、作用物質の活性を破壊しえない。酸化された抗体または酸化された抗体断片との反応に適しているリンカーには、一級アミン、二級アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジド、およびチオセミカルバジド基からなる群より選択されるアミンを含有するものが含まれる。そのような反応性官能基は、リンカーの構造の一部として存在することができ、または、そのような基を含有しないリンカーの好適な化学修飾によって導入することができる。
本開示によると、還元されたABへの付加に適しているリンカーには、還元された抗体または断片のスルフヒドリル基と反応することができる、ある特定の反応基を有するものが含まれる。そのような反応基には、反応性ハロアルキル基（例えば、ハロアセチル基を含む）、p-水銀安息香酸基、およびマイケル型付加反応が可能である基（例えば、マレイミド類およびMitra and Lawton, 1979, J. Amer, Chem. Soc. 101: 3097-3110により記載されているタイプの基を含む）が含まれるが、それらに限定されない。
本開示によると、酸化も還元もされていないAbへの付加に適しているリンカーには、Ab中の修飾されていないリジン残基に存在する一級アミノ基と反応することができる、ある特定の官能基を有するものが含まれる。そのような反応基には、NHSカルボン酸または炭酸エステル類、スルホ-NHSカルボン酸または炭酸エステル類、4-ニトロフェニルカルボン酸または炭酸エステル類、ペンタフルオロフェニルカルボン酸または炭酸エステル類、アシルイミダゾール類、イソシアナート類、およびイソチオシアナート類を含まれるが、それらに限定されない。
本開示によると、酸化も還元もされていないAbへの付加に適しているリンカーには、好適な試薬で活性化されている、Ab中のアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基に存在するカルボン酸基と反応することができる、ある特定の官能基を有するものが含まれる。好適な活性化試薬には、NHSまたはスルホ-NHSが加えられているかまたは加えられていないEDC、および、カルボキサミド形成に利用される他の脱水剤が含まれる。これらの例において、好適なリンカー中に存在する官能基には、一級および二級アミン類、ヒドラジン類、ヒドロキシルアミン類、ならびにヒドラジド類が含まれることになる。
作用物質は、リンカーがABに付加される前または後に、リンカーに付加することができる。ある特定の適用において、リンカーが会合した作用物質から遊離しているAB-リンカー中間体を最初に生じることが望ましい可能性がある。特定の適用に応じて、特異的な作用物質を、次いで、リンカーに共有結合で付加することができる。いくつかの態様において、ABは、MM、CM、および会合したリンカーに最初に付加され、次いで、コンジュゲーションの目的でリンカーに付加される。
分岐型リンカー：具体的な態様において、作用物質の付加のための複数部位を有する分岐型リンカーが利用される。複数部位リンカーについては、ABへの単一の共有結合性付加が、数多くの部位で作用物質に結合することができるAB-リンカー中間体を結果としてもたらすことになる。部位は、アルデヒド基もしくはスルフヒドリル基、または作用物質が付加することができる任意の化学的部位であることができる。
いくつかの態様において、より高い比活性（または作用物質のABに対するより高い比）は、AB上の複数の部位での単一部位リンカーの付加によって成し遂げることができる。この複数の部位は、2つの方法のいずれかによってAB中に導入することができる。第1に、同じAB中に複数のアルデヒド基および／またはスルフヒドリル基を生成することができる。第2に、ABのアルデヒドまたはスルフヒドリルに、その後のリンカーへの付加のために複数の官能部位を有する「分岐型リンカー」を付加することができる。分岐型リンカーまたは複数部位リンカーの官能部位は、アルデヒド基もしくはスルフヒドリル基であることができるか、または、リンカーを付加することができる任意の化学的部位であることができる。さらにより高い比活性は、これらの2つのアプローチを組み合わせること、すなわち、AB上のいくつかの部位で複数部位リンカーを付加することによって得ることができる。
切断可能なリンカー：u-プラスミノーゲンアクチベーター、組織プラスミノーゲンアクチベーター、トリプシン、プラスミン、またはタンパク質分解活性を有する別の酵素などであるがそれらに限定されない、補体系の酵素による切断を受けやすいペプチドリンカーを、本開示の1つの態様において使用することができる。本開示の1つの方法によると、作用物質は、補体による切断を受けやすいリンカーを介して付加される。抗体は、補体を活性化することができるクラスから選択される。したがって、抗体-作用物質コンジュゲートは、補体カスケードを活性化し、標的部位で作用物質を放出する。本開示の別の方法によると、作用物質は、u-プラスミノーゲンアクチベーター、組織プラスミノーゲンアクチベーター、プラスミン、またはトリプシンなどのタンパク質分解活性を有する酵素による切断を受けやすいリンカーを介して付加される。
切断可能なリンカー配列の非限定的な例を、表5において提供する。
（表５）コンジュゲーションのための例示的なリンカー配列
Figure 2022064924000591
加えて、作用物質を、ジスルフィド結合（例えば、システイン分子上のジスルフィド結合）を介してABに付加することができる。多くの腫瘍は、高レベルのグルタチオン（還元剤）を天然に放出するため、これは、ジスルフィド結合を還元して、送達の部位での作用物質のその後の放出を伴うことができる。いくつかの態様において、CMを修飾するであろう還元剤はまた、コンジュゲートされた活性化可能抗体のリンカーも修飾するであろう。
スペーサーおよび切断可能要素：いくつかの態様において、活性化可能抗体の作用物質とABとの間の間隔を最適化するような方式で、リンカーを構築することが必要であり得る。これは、以下の一般構造のリンカーの使用によって達成することができる：
W-(CH2)n-Q
式中、
Wは--NH--CH2--または--CH2--のいずれかであり；
Qはアミノ酸、ペプチドであり；かつ
nは0～20の整数である。
いくつかの態様において、リンカーは、スペーサー要素および切断可能要素を含みうる。スペーサー要素は、切断可能要素が切断を担う酵素によりアクセス可能であるように、切断可能要素をABのコアから離れて位置づけるために働く。上記の分岐型リンカーのある特定のものは、スペーサー要素として働きうる。
この議論を通して、リンカーの作用物質への（またはスペーサー要素の切断可能要素への、または切断可能要素の作用物質への）付加は、特定の様式の付加または反応である必要はないことが理解されるべきである。好適な安定性および生物学的適合性の産物を提供する任意の反応が、受け入れられる。
血清補体およびリンカーの選択：本開示の1つの方法によると、作用物質の放出が望ましい時、補体を活性化することができるクラスの抗体であるABが使用される。結果として生じたコンジュゲートは、抗原を結合する能力、および補体カスケードを活性化する能力の両方を保持する。したがって、本開示のこの態様によると、作用物質は、切断可能なリンカーまたは切断可能要素の1つの末端に接合され、リンカー基のもう1つの末端は、AB上の特定の部位に付加される。例えば、作用物質がヒドロキシ基またはアミノ基を有する場合は、ペプチド、アミノ酸、または他の適するように選択されたリンカーのカルボキシ末端に、それぞれ、エステル結合またはアミド結合を介して付加されうる。例えば、そのような作用物質は、カルボジイミド反応を介してリンカーペプチドに付加されうる。作用物質が、リンカーへの付加に干渉するであろう官能基を含有する場合は、これらの干渉する官能基を、付加の前に遮断し、ひとたび産物コンジュゲートまたは中間体が作製されたら脱遮断することができる。リンカーの反対の末端またはアミノ末端を、次いで、直接、または、補体を活性化することができるABに対する結合のためのさらなる修飾後のいずれかに使用する。
リンカー（またはリンカーのスペーサー要素）は、任意の望ましい長さであることができ、その1つの末端は、活性化可能抗体のAB上の特定の部位に共有結合で付加させることができる。リンカーまたはスペーサー要素のもう1つの末端は、アミノ酸またはペプチドリンカーに付加されうる。
したがって、これらのコンジュゲートが補体の存在下で抗原に結合する時、作用物質をリンカーに付加するアミド結合またはエステル結合が切断され、作用物質のその活性型での放出を結果としてもたらすことになる。これらのコンジュゲートは、対象に投与される時、標的部位での作用物質の送達および放出を達成することになり、表5に提示されるがそれらに限定されない、薬学的作用物質、抗生物質、代謝拮抗物質、抗増殖作用物質などのインビボ送達に特に有効である。
補体活性化を伴わない放出のためのリンカー：ターゲティングされた送達のさらに別の適用において、補体カスケードの活性化は最終的に標的細胞を溶解することになるため、補体活性化を伴わない作用物質の送達が望ましい。そのため、このアプローチは、標的細胞を殺傷することなく作用物質の送達および放出が達成されるべきである場合に有用である。ホルモン、酵素、コルチコステロイド、神経伝達物質、遺伝子または酵素などの細胞媒介物質の標的細胞への送達が望ましい時、そのようなことが目標である。これらのコンジュゲートは、血清プロテアーゼによる切断を少々受けやすいリンカーを介して、補体を活性化することができないABに作用物質を付加することによって調製されうる。このコンジュゲートが個体に投与される時、作用物質の切断はゆっくり起こることになるが、抗原-抗体複合体は急速に形成し、したがって標的部位での化合物の放出を結果としてもたらすことになる。
生化学的クロスリンカー：いくつかの態様において、活性化可能抗体は、ある特定の生化学的クロスリンカーを用いて1つまたは複数の治療用作用物質にコンジュゲートされうる。架橋試薬は、2つの異なる分子の官能基を結びつける分子架橋を形成する。2つの異なるタンパク質を段階的様式で連結するために、望ましくないホモポリマー形成を排除するヘテロ二官能性クロスリンカーを使用することができる。
リソソームプロテアーゼによって切断可能であるペプチジルリンカー、例えば、Val-Cit、Val-Ala、または他のジペプチドもまた有用である。加えて、リソソームの低pH環境で切断可能である酸に不安定なリンカー、例えば、ビスシアリルエーテルが使用されうる。他の好適なリンカーには、カテプシンに不安定な基質、特に酸性pHで最適な機能を示すものが含まれる。
例示的なヘテロ二官能性クロスリンカーを、表6に参照として載せる。
（表６）例示的なヘテロ二官能性クロスリンカー
Figure 2022064924000592
切断不可能なリンカーまたは直接付加：本開示のいくつかの態様において、コンジュゲートは、作用物質が標的に送達されるが放出されないように設計されうる。これは、直接または切断不可能なリンカーを介してのいずれかで、作用物質をABに付加することによって達成することができる。
これらの切断不可能なリンカーには、アミノ酸、ペプチド、D-アミノ酸、または、本明細書に記載される方法によるABへの付加においてその後利用することができる官能基を含むように改変されうる他の有機化合物が含まれうる。そのような有機リンカーについての一般式は、
W-(CH2)n-Q
であることができ、
式中、
Wは--NH--CH2--または--CH2--のいずれかであり；
Qはアミノ酸、ペプチドであり；かつ
nは0～20の整数である。
切断不可能なコンジュゲート：いくつかの態様において、化合物は、補体を活性化しないABに付加されうる。補体活性化ができないABを使用する時、この付加は、活性化された補体による切断を受けやすいリンカーを用いて、または、活性化された補体による切断を受けやすくないリンカーを用いて達成することができる。
本明細書において開示される抗体はまた、イムノリポソームとして製剤化することもできる。抗体を含有するリポソームは、Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985)；Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980)；ならびに米国特許第4,485,045号および第4,544,545号に記載されているものなどの、当技術分野において公知である方法によって調製される。増強された循環時間を有するリポソームは、米国特許第5,013,556号において開示されている。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（PEG-PE）を含む脂質組成で、逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、望ましい直径を有するリポソームを生じるように規定された孔サイズのフィルターを通して押し出し成形される。本開示の抗体のFab'断片は、ジスルフィド相互交換反応を介して、Martin et al., J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982)に記載されているように、リポソームにコンジュゲートすることができる。
定義
特に別の定義がなければ、本開示に関連して用いられる科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。「1つの(a)」実体または「1つの(an)」実体という用語は、その実体の1つまたは複数をいう。例えば、1つの化合物(a compound)は、1つまたは複数の化合物(one or more compounds)をいう。したがって、「1つの(a)」、「1つの(an)」、「1つまたは複数の(one or more)」および「少なくとも1つの(at least one)」という用語は、互換的に用いることができる。さらに、文脈に別段の定めがない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書において記述される細胞および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴまたはポリヌクレオチド化学およびハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法や、それらの技法は、当技術分野において周知で、一般的に用いられるものである。組み換えDNA、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換(例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション)のために標準的な技法が用いられる。酵素反応および精製技法は、製造業者の仕様書にしたがって、または当技術分野において一般的に行われるように、または本明細書において記述されるように行われる。前述の技法および手順は一般に、当技術分野において周知の従来の方法にしたがって、および本明細書の全体にわたって引用され論じられている種々の一般的なおよびより具体的な参考文献に記述されているように行われる。例えば、Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))を参照されたい。本明細書において記述される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および薬化学に関連して利用される命名法、ならびにそれらの実験手順および技法は、当技術分野において周知で、一般的に用いられるものである。化学合成、化学分析、薬学的調製、処方、ならびに患者への送達および患者の処置のために標準的な技法が用いられる。
本開示にしたがって利用される場合、以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
本明細書において用いられる場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン(Ig)分子の抗原結合部分、すなわち、抗原に特異的に結合する(抗原と免疫反応する)抗原結合部位を含む分子をいう。「特異的に結合する」または「～と免疫反応する」または「免疫特異的に結合する」とは、抗体が所望の抗原の1つもしくは複数の抗原性決定基と反応し、その他のポリペプチドとは反応しないか、またはかなり低い親和性(Kd＞10-6)で結合することを意味する。抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ドメイン抗体、単鎖、FabおよびF(ab')2断片、scFv、ならびにFab発現ライブラリーが含まれるが、これらに限定されることはない。
抗体の基本構造単位は、四量体を含むことが知られている。各四量体は、各対が1本の「軽」鎖(約25 kDa)および1本の「重」鎖(約50～70 kDa)を有する、ポリペプチド鎖の2つの同一の対で構成される。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主に担う約100～110個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を定義する。一般的に、ヒトから得られる抗体分子は、分子に存在する重鎖の性質が互いに異なるIgG、IgM、IgA、IgEおよびIgDのクラスのいずれかに関連する。あるクラスはIgG1、IgG2などのような、サブクラスも同様に有する。さらに、ヒトでは、軽鎖はカッパ鎖またはラムダ鎖であり得る。
本明細書において用いられる「モノクローナル抗体」(mAb)または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、固有の軽鎖遺伝子産物および固有の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子の1つの分子種のみを含む抗体分子集団をいう。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域(CDR)は、その集団の全ての分子において同一である。MAbは、抗原に対する固有の結合親和性によって特徴付けられる特定の抗原エピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含む。
「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分をいう。抗原結合部位は、重(「H」)鎖および軽(「L」) 鎖のN末端可変(「V」)領域のアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」といわれる、重鎖および軽鎖のV領域内の3つの高度に多様な伸長部が、「フレームワーク領域」または「FR」として知られるいっそう保存された隣接伸長部の間に挿入される。このように、「FR」という用語は、免疫グロブリンの超可変領域の間に、および超可変領域に隣接して天然に見出されるアミノ酸配列をいう。抗体分子において、軽鎖の3つの超可変領域および重鎖の3つの超可変領域は、三次元空間で互いに関連して配置されて、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合した抗原の三次元表面と相補的であり、重鎖および軽鎖の各々の3つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「CDR」といわれる。各ドメインに対するアミノ酸の割付は、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))、またはChothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989)の定義に従う。
本明細書において用いられる場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン、scFvまたはT細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはT細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面官能基からなり、通常、特異的な三次元構造特徴、ならびに特異的な電荷特徴を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのN末端ペプチドまたはC末端ペプチドに対して作製されうる。抗体は、解離定数が1μM以下; いくつかの態様では100 nM以下およびいくつかの態様では10 nM以下である場合に抗原に特異的に結合すると言われる。
本明細書において用いられる場合、「特異的結合」、「免疫学的な結合」および「免疫学的な結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリン分子が特異的である抗原との間に起こるタイプの非共有結合性相互作用をいう。免疫学的な結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数(Kd)に関して表現することができ、ここでKdが小さいほど親和性が大きくなることを表す。選択されたポリペプチドの免疫学的な結合特性は、当技術分野において周知の方法を用いて定量することができる。そのような1つの方法では、抗原結合部位/抗原複合体の形成および解離の速度を測定する段階を伴い、ここでそれらの速度は複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。したがって、濃度ならびに実際の結合速度および解離速度の計算により「結合速度(on rate)定数」(Kon)および「解離速度(off rate)定数」(Koff)の両方を決定することができる(Nature 361:186-87 (1993)を参照のこと)。Koff/Konの比率は、解離定数Kdに等しい(一般的には、Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473を参照のこと)。本開示の抗体は、放射性リガンド結合アッセイ法または当業者に公知の類似のアッセイ法のようなアッセイにより測定された場合に、結合定数(Kd)が1 μM以下、いくつかの態様では100 nM以下、いくつかの態様では10 nM以下、およびいくつかの態様では100 pM以下～約1 pMであれば、標的に特異的に結合すると言われる。
本明細書において用いられる「単離(された)ポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム、cDNA、もしくは合成由来のポリヌクレオチドまたはそのいくつかの組み合わせを意味するものとし、その起源によって「単離(された)ポリヌクレオチド」は、(1) 「単離(された)ポリヌクレオチド」が天然において見出されるポリヌクレオチドの全部または一部に結び付いていない、(2) 天然において連結されていないポリヌクレオチドに機能的に連結されている、または(3) より大きい配列の一部として天然において存在しない。本開示によるポリヌクレオチドは、本明細書において示される重鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子、および本明細書において示される軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子を含む。
本明細書において言及される「単離(された)タンパク質」という用語は、cDNA、組み換えRNAもしくは合成由来のタンパク質、またはそのいくつかの組み合わせを意味し、その由来または起源によって「単離(された)タンパク質」は、(1) 天然において見出されるタンパク質に結び付いていない、(2) 同じ起源の他のタンパク質を含まない、例えば、マウスタンパク質を含まない、(3) 異なる種からの細胞によって発現される、または(4) 天然において存在しない。
「ポリペプチド」という用語は本明細書において一般的な用語として用いられ、ポリペプチド配列の本来のタンパク質、断片または類似体をいう。ゆえに、本来のタンパク質断片および類似体は、ポリペプチド属の種である。本開示によるポリペプチドは、本明細書において示される重鎖免疫グロブリン分子および本明細書において示される軽鎖免疫グロブリン分子、ならびに重鎖免疫グロブリン分子と、カッパ軽鎖免疫グロブリン分子のような軽鎖免疫グロブリン分子とを含む組み合わせ、およびその逆によって形成される抗体分子、ならびにその断片および類似体を含む。
本明細書において物体に適用される場合に用いられる「天然に存在する」という用語は、天然において物体を見出すことができるという事実をいう。例えば、天然の供給源から単離することができる生物(ウイルスを含む)に存在し、かつ研究室において人為的にまたはそれ以外の方法で意図的に修飾されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
本明細書において用いられる「機能的に連結された」という用語は、そのように記述された構成要素の位置がその意図される方法でそれらを機能させる関係にあることをいう。コード配列に「機能的に連結された」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列と適合性の条件下で達成されるようにライゲーションされる。
本明細書において用いられる「制御配列」という用語は、それらがライゲーションされるコード配列の発現およびプロセッシングを達成するために必要であるポリヌクレオチド配列をいう。そのような制御配列の性質は、原核生物では宿主生物に応じて異なり、そのような制御配列は一般に、真核生物ではプロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含み、一般に、そのような制御配列はプロモーターおよび転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、少なくとも、発現およびプロセッシングにとって存在が不可欠な全ての構成要素を含むことが意図され、同様に存在が有利となる追加の構成要素、例えばリーダー配列および融合パートナー配列を含むことができる。本明細書において言及される「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかの、長さが少なくとも10塩基のヌクレオチドまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾型を意味する。この用語は、DNAの一本鎖型および二本鎖型を含む。
本明細書において言及されるオリゴヌクレオチドという用語は、天然に存在するヌクレオチド、ならびに天然に存在するおよび天然に存在しないオリゴヌクレオチド結合によってともに連結された修飾ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、200塩基またはそれ未満の長さを一般的に含むポリヌクレオチドサブセットである。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、長さが10～60塩基であり、いくつかの態様において、長さが12、13、14、15、16、17、18、19、または20～40塩基である。オリゴヌクレオチドは通常、例えばプローブの場合、一本鎖であるが、例えば遺伝子変異体の構築に用いる場合には、オリゴヌクレオチドは二本鎖であり得る。本開示のオリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
本明細書において言及される「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書において言及される「修飾ヌクレオチド」という用語は、修飾されたまたは置換された糖基などを有するヌクレオチドを含む。本明細書において言及される「オリゴヌクレオチド結合」という用語は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレロエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、ホスホロンミデート(phosphoronmidate)などのようなオリゴヌクレオチド結合を含む。例えば、LaPlanche et al. Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984)、Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988)、Zon et al. Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. 米国特許第5,151,510号; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、所望なら、検出用の標識を含むことができる。
本明細書において用いられる場合、20種類の通常アミノ酸およびその略語は、慣例的用法に従う。Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Green, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))を参照されたい。20種類の通常アミノ酸の立体異性体(例えば、D-アミノ酸)、非天然アミノ酸、例えばα-,α-二置換アミノ酸、N-アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非通常アミノ酸も同様に、本開示のポリペプチドに適した成分であり得る。非通常アミノ酸の例としては、4ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタメート、ε-N,N,N-トリメチルリジン、ε-N-アセチルリジン、O-ホスホセリン、N-アセチルセリン、N-ホルミルメチオニン、3-メチルヒスチジン、5-ヒドロキシリジン、σ-N-メチルアルギニン、ならびに他の類似のアミノ酸およびイミノ酸(例えば、4-ヒドロキシプロリン)が挙げられる。本明細書において用いられるポリペプチドの表記において、標準的な用法および慣例にしたがって、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向である。
同様に、特別の定めのない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端は5'末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は、5'方向といわれる。新生RNA転写産物の5'から3'への付加の方向は転写方向といわれ、RNAと同じ配列を有し、RNA転写産物の5'末端に対して5'側にあるDNA鎖上の配列領域は「上流配列」といわれ、RNAと同じ配列を有し、RNA転写産物の3'末端に対して3'側にあるDNA鎖上の配列領域は「下流配列」といわれる。
ポリペプチドに適用される場合、「実質的な同一性」という用語は、2つのペプチド配列が、例えばプログラムGAPまたはBESTFITなどにより、デフォルトのギャップ重みを用いて最適に整列された場合に、少なくとも80%の配列同一性、いくつかの態様において、少なくとも90%の配列同一性、いくつかの態様において、少なくとも95%の配列同一性、およびいくつかの態様において、少なくとも99%の配列同一性を共有することを意味する。
いくつかの態様において、同一でない残基の位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
本明細書において論じられるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列の軽微な変化は、アミノ酸配列の変化が、少なくとも75%、いくつかの態様において、少なくとも80%、90%、95%、およびいくつかの態様において99%を維持する限り、本開示によって包含されると企図される。特に、保存的アミノ酸交換が企図される。保存的交換は、その側鎖が関連するアミノ酸のファミリー内で行われるものである。遺伝的にコードされるアミノ酸は一般に、以下のファミリーに分けられる: (1) 酸性アミノ酸はアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩であり; (2) 塩基性アミノ酸はリジン、アルギニン、ヒスチジンであり; (3) 非極性アミノ酸はアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、および(4) 非荷電極性アミノ酸はグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸には、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グルタミン酸塩、ヒスチジン、リジン、セリンおよびトレオニンが含まれる。疎水性アミノ酸には、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが含まれる。他のアミノ酸ファミリーには、(i) 脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリンおよびトレオニン; (ii) アミド含有ファミリーであるアスパラギンおよびグルタミン; (iii) 脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン; ならびに(iv) 芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンが含まれる。例えば、ロイシンとイソロイシンまたはバリンとの、アスパラギン酸塩とグルタミン酸塩との、トレオニンとセリンとの単独交換、またはアミノ酸と構造的に関連するアミノ酸との同類交換は、特に交換にはフレームワーク部位内のアミノ酸が含まれない場合、結果的に得られる分子の結合または特性に大きな影響を及ぼさないと予想することは妥当である。アミノ酸の変化によって機能的ペプチドが得られるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることにより容易に判定することができる。アッセイ法は、本明細書において詳細に記述される。当業者は、抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体を容易に調製することができる。断片または類似体の好適なアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界付近に存在する。構造的および機能的ドメインは、公共または専用の配列データベースとのヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列データの比較によって同定することができる。いくつかの態様において、コンピュータ化比較法を用いて、既知構造および/または機能の他のタンパク質に存在する配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンフォメーションドメインを同定する。既知の三次元構造に折り畳まれるタンパク質配列を同定する方法は、公知である。Bowie et al. Science 253: 164 (1991)。このように、前述の例は、本開示によって構造的および機能的ドメインを定義するために用いられうる配列モチーフおよび構造的コンフォメーションを当業者が認識できることを実証する。
好適なアミノ酸置換は、(1) タンパク質分解に対する感受性を低減させる、(2) 酸化に対する感受性を低減させる、(3) タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる、(4) 結合親和性を変化させる、および(5) そのような類似体の他の物理化学的または機能的特性を付与または改変するものである。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々なムテインを含むことができる。例えば、1つまたは複数のアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)が、天然に存在する配列において(例えば、分子間接触を形成するドメイン外のポリペプチドの部分において行われうる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化させてはならない(例えば、交換アミノ酸は、親配列に存在するらせんを切断させる傾向も、親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を崩壊させる傾向もあってはならない)。当技術分野で認識されるポリペプチドの二次および三次構造の例はProteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); およびThornton et at. Nature 354: 105 (1991)に記述されている。
本明細書において用いられる「ポリペプチド断片」という用語は、アミノ末端および/またはカルボキシ末端欠失および/または1つもしくは複数の内部欠失を有するが、しかし残りのアミノ酸配列は、例えば、完全長cDNA配列から推定される天然配列における対応する位置と同一であるポリペプチドをいう。断片は、典型的には、少なくとも5、6、8または10アミノ酸長であり、いくつかの態様において、少なくとも14アミノ酸長であり、いくつかの態様において、少なくとも20アミノ酸長であり、通常は、少なくとも50アミノ酸長であり、およびいくつかの態様において、少なくとも70アミノ酸長である。本明細書において用いられる「類似体」という用語は、推定されたアミノ酸配列の部分と実質的な同一性を有し、かつ好適な結合条件下で、標的への特異的結合を有する少なくとも25アミノ酸のセグメントで構成されるポリペプチドをいう。典型的には、ポリペプチド類似体は、天然に存在する配列に関して保存的アミノ酸置換(または付加もしくは欠失)を含む。類似体は、典型的には、少なくとも20アミノ酸長、いくつかの態様において、少なくとも50アミノ酸長またはそれ以上であり、完全長の天然ポリペプチドと同じくらい長いことも多い。
「作用物質」という用語は、本明細書において、化学化合物、化学化合物の混合物、生物学的高分子、または生物学的材料から作製された抽出物を示すために用いられる。
本明細書において用いられる場合、「標識」または「標識された」という用語は、例えば、放射性標識アミノ酸の組み入れ、またはマーキングされたアビジン(例えば、光学的方法もしくは熱量測定法によって検出できる蛍光マーカーもしくは酵素活性を含むストレプトアビジン)によって検出できるビオチニル部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの組み入れをいう。ある特定の状況では、標識またはマーカーは治療的であることもできる。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法が当技術分野において公知であり、用いることができる。ポリペプチドの標識の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されることはない: 放射性同位体または放射性核種(例えば、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、蛍光標識(例えば、FITC、ローダミン、ランタニド蛍光体)、酵素標識(例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、p-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ)、化学発光物質、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ(例えばロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ)。いくつかの態様において、潜在的な立体障害を低減させるために、様々な長さのスペーサーアームによって標識が結合される。本明細書において用いられる「薬学的作用物質(pharmaceutical agent)または薬物」という用語は、患者に適切に投与された場合に、所望の治療効果を誘導することができる化学化合物または組成物をいう。
本明細書における他の化学用語は、The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985))によって例証されるように、当技術分野における慣例的用法にしたがって用いられる。
本明細書において用いられる場合、「実質的に純粋な」とは、目的種が、存在する優勢な種である(すなわち、モルに基づいて、組成物中の他の任意の個々の種より豊富に存在する)ことを意味し、いくつかの態様において、実質的に精製された画分は、目的種が、存在する全ての高分子種の少なくとも約50パーセント(モルに基づいて)を構成する組成物である。
一般的に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種の約80%超、いくつかの態様において、約85%、90%、95%および99%超を構成するであろう。いくつかの態様において、目的種は、組成物が単一の高分子種から本質的になる、本質的な均一性となるまで精製される(通常の検出法によって組成物中に夾雑種を検出することができない)。
患者という用語には、ヒトおよび獣医学の対象が含まれる。
本開示の抗体および/または活性化可能抗体は、所定の標的、例えばヒトPD-1のようなヒト標的タンパク質に特異的に結合する。本明細書において記述される抗体および/または活性化可能抗体と同じエピトープに結合する抗体および/または活性化可能抗体も本開示に含まれる。本開示にはまた、PD-1、例えばヒトPD-1に対する結合について、本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または抗PD-1活性化可能抗体と競合する、抗体および/または抗体活性化可能抗体も含まれる。本開示にはまた、PD-1、例えばヒトPD-1に対する結合について本明細書において記述される抗PD-1抗体および/または抗PD-1活性化可能抗体と交差競合する、抗体および/または抗体活性化可能抗体も含まれる。
モノクローナル抗体(例えば、マウスモノクローナル抗体またはヒト化抗体)が、本明細書において記述される方法において用いられるモノクローナル抗体と同じ特異性を有するかどうかを、前者が後者を標的に結合させないようにするかどうかを確かめることにより、過度の実験なしに、判定することが可能であることを当業者は認識するであろう。試験されているモノクローナル抗体が、本開示のモノクローナル抗体による結合の減少によって示されるように、本開示のモノクローナル抗体と競合するなら、この2つのモノクローナル抗体は、同じ、または密接に関連するエピトープに結合する。モノクローナル抗体が本開示のモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを判定するための別の方法は、本開示のモノクローナル抗体を標的とプレインキュベートし、次に試験されているモノクローナル抗体を添加して、試験されているモノクローナル抗体は標的に結合するその能力が阻害されるかを判定することである。試験されているモノクローナル抗体が阻害されるなら、恐らく、それは本開示のモノクローナル抗体と同じ、または機能的に等価な、エピトープ特異性を有する。
多重特異性活性化可能抗体
本開示はまた、多重特異性抗PD-1活性化可能抗体を提供する。本明細書において提供される多重特異性活性化可能抗体は、PD-1および少なくとも1つまたは複数の異なる抗原またはエピトープを認識し、かつ多重特異性抗体の少なくとも1つの抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインに連結された少なくとも1つのマスキング部分(MM)を含む多重特異性抗体であり、MMのカップリングによって、抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインのその標的に結合する能力が低減される。いくつかの態様において、MMは、少なくとも1つのプロテアーゼの基質として機能する切断可能部分(CM)を介して、多重特異性抗体の抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインにカップリングされている。本明細書において提供される活性化可能な多重特異性抗体は、循環血中で安定であり、意図された治療部位および/または診断部位で活性化されるが、しかし正常な、すなわち健常な組織では活性化されず、活性化されると、対応する非修飾多重特異性抗体に少なくとも匹敵する標的への結合を示す。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、免疫エフェクター細胞に係合するようにデザインされ、本明細書において免疫エフェクター細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体ともいわれる。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、白血球に係合するようにデザインされ、本明細書において白血球係合性の多重特異性活性化可能抗体ともいわれる。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、T細胞に係合するようにデザインされ、本明細書においてT細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体ともいわれる。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、白血球上、例えばT細胞上、ナチュラルキラー(NK)細胞上、骨髄単核細胞上、マクロファージ上、および/または別の免疫エフェクター細胞上の表面抗原に係合する。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は白血球である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はT細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はNK細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は骨髄単核細胞のような、単核細胞である。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、2つ以上の標的および/または2つ以上のエピトープと結合するかまたはそうでなければ相互作用するようにデザインされ、本明細書において多抗原標的性の活性化可能抗体ともいわれる。本明細書において用いられる場合、「標的」および「抗原」という用語は互換的に用いられる。
いくつかの態様において、本開示の免疫エフェクター細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体は、PD-1に結合するターゲティング抗体またはその抗原結合断片、および免疫エフェクター細胞係合性の抗体またはその抗原結合部分を含み、ここで該ターゲティング抗体もしくはその抗原結合断片および/または免疫エフェクター細胞係合性の抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも1つがマスクされている。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1の免疫エフェクター細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、ターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、PD-1に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがPD-1に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1の免疫エフェクター細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合され、かつターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、PD-1に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがPD-1に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、非免疫エフェクター細胞係合性の抗体は、がんターゲティング抗体である。いくつかの態様において、非免疫細胞エフェクター抗体はIgGである。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞係合性の抗体はscFvである。いくつかの態様において、PD-1ターゲティング抗体(例えば、非免疫細胞エフェクター抗体)はIgGであり、かつ免疫エフェクター細胞係合性の抗体はscFvである。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は白血球である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はT細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞はNK細胞である。いくつかの態様において、免疫エフェクター細胞は骨髄単核細胞である。
いくつかの態様において、本開示のT細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体は、PD-1ターゲティング抗体またはその抗原結合断片およびT細胞係合性の抗体またはその抗原結合部分を含み、ここでPD-1ターゲティング抗体もしくはその抗原結合断片および/またはT細胞係合性の抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも1つがマスクされている。いくつかの態様において、T細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1のT細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、ターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、PD-1に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがPD-1に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、T細胞係合性の抗体またはその抗原結合断片は、第1のT細胞係合性の標的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングが第1の標的に結合するAB1の能力を低減させるように結合され、かつターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、PD-1に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがPD-1に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。
免疫エフェクター細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体のいくつかの態様において、1つの抗原はPD-1であり、別の抗原は、典型的には、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および/または限定されるものではないが、B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、TIGIT、TIM3もしくはVISTAのような、他の免疫エフェクター細胞の表面上に存在する刺激性または阻害性の受容体である。いくつかの態様において、抗原は、T細胞またはNK細胞の表面上に存在する刺激性受容体であり; そのような刺激性受容体の例としては、CD3、CD27、CD28、CD137 (4-1BBともいわれる)、GITR、HVEM、ICOS、NKG2DおよびOX40が挙げられるが、これらに限定されることはない。いくつかの態様において、抗原は、T細胞の表面上に存在する阻害性受容体であり; そのような阻害性受容体の例としては、BTLA、CTLA-4、LAG3、TIGIT、TIM3およびNK発現KIRが挙げられるが、これらに限定されることはない。T細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインはまた、限定されるものではないが、B7-1、B7-2、B7H3、PDL1、PDL2またはTNFSF9のような、T細胞受容体、NK細胞受容体、マクロファージ受容体、および/または他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換されうる。
いくつかの態様において、T細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体は、抗CD3イプシロン(CD3ε、本明細書においてCD3eおよびCD3ともいわれる) scFvならびにターゲティング抗体またはその抗原結合断片を含み、ここで抗CD3ε scFvおよび/またはターゲティング抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも1つがマスクされている。いくつかの態様において、CD3ε scFvは、CD3εに結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングがCD3εに結合するAB1の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、ターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、PD-1に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがPD-1に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。いくつかの態様において、CD3ε scFvは、CD3εに結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)を含み、ここでAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングがCD3εに結合するAB1の能力を低減させるように結合され、かつターゲティング抗体またはその抗原結合断片は、PD-1に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む第2の抗体またはその断片を含み、ここでAB2はマスキング部分(MM2)に、MM2のカップリングがPD-1に結合するAB2の能力を低減させるように結合されている。
いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、少なくとも、第1の標的および/または第1のエピトープに結合する第1の抗体またはその抗原結合断片、ならびに第2の標的および/または第2のエピトープに結合する第2の抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、2つまたはそれ以上の異なる標的に結合する。いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、同じ標的上の2つまたはそれ以上の異なるエピトープに結合する。いくつかの態様において、多抗原ターゲティング抗体および/または多抗原ターゲティング活性化可能抗体は、2つまたはそれ以上の異なる標的および同じ標的上の2つまたはそれ以上の異なるエピトープの組み合わせに結合する。
いくつかの態様において、IgGを含む多重特異性活性化可能抗体は、IgG可変ドメインがマスクされている。いくつかの態様において、scFvを含む多重特異性活性化可能抗体は、scFvドメインがマスクされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでIgG可変ドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでscFvドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでIgG可変ドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされ、かつscFvドメインの少なくとも1つがマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、複数のIgG可変ドメインおよび複数のscFvドメインの両方を有し、ここでIgG可変ドメインおよびscFvドメインの各々が、それ自体のマスキング部分にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体の1つの抗体ドメインは標的抗原に対する特異性を有し、別の抗体ドメインはT細胞表面抗原に対する特異性を有する。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体の1つの抗体ドメインは標的抗原に対する特異性を有し、別の抗体ドメインは別の標的抗原に対する特異性を有する。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体の1つの抗体ドメインは標的抗原のエピトープに対する特異性を有し、別の抗体ドメインは該標的抗原の別のエピトープに対する特異性を有する。
多重特異性活性化可能抗体において、scFvは、IgG活性化可能抗体の重鎖のカルボキシル末端に、IgG活性化可能抗体の軽鎖のカルボキシル末端に、またはIgG活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のカルボキシル末端に融合することができる。多重特異性活性化可能抗体において、scFvは、IgG活性化可能抗体の重鎖のアミノ末端に、IgG活性化可能抗体の軽鎖のアミノ末端に、またはIgG活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のアミノ末端に融合することができる。多重特異性活性化可能抗体において、scFvは、IgG活性化可能抗体の1つまたは複数のカルボキシル末端および1つまたは複数のアミノ末端の任意の組み合わせに融合することができる。いくつかの態様において、切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、IgGの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクする。いくつかの態様において、切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、少なくとも1つのscFvの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクする。いくつかの態様において、切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、IgGの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクし、かつ切断可能部分(CM)に連結されたマスキング部分(MM)は、少なくとも1つのscFvの抗原結合ドメインに結合され、それをマスクする。
本開示は、以下を含むがそれらに限定されない、多重特異性活性化可能抗体の構造の例を提供する:
Figure 2022064924000593
上記構造中: VLおよびVHは、IgGに含まれる、第1の特異性の軽鎖および重鎖可変ドメインを表し; VL＊およびVH＊は、scFvに含まれる、第2の特異性の可変ドメインを表し; L1は、マスキング部分(MM)と切断可能部分(CM)とをつなぐリンカーペプチドであり; L2は、切断可能部分(CM)と抗体とをつなぐリンカーペプチドであり; L3は、scFvの可変ドメイン間をつなぐリンカーペプチドであり; L4は、第1の特異性の抗体を第2の特異性の抗体につなぐリンカーペプチドであり; CLは軽鎖定常ドメインであり; ならびにCH1、CH2、CH3は重鎖定常ドメインである。第1および第2の特異性は、任意の抗原またはエピトープに対するものであり得る。
T細胞係合性の多重特異性活性化可能抗体のいくつかの態様において、1つの抗原はPD-1であり、別の抗原は、典型的には、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および/または限定されるものではないが、B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137 (TNFRSF9ともいわれる)、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、PD-1、TIGIT、TIM3もしくはVISTAのような、他の免疫エフェクター細胞の表面上に存在する刺激性(本明細書において活性化ともいわれる)または阻害性の受容体である。T細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインはまた、T細胞受容体、NK細胞受容体、マクロファージ受容体、および/または他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換されうる。
いくつかの態様において、ターゲティング抗体は、本明細書において開示される抗PD-1抗体である。いくつかの態様において、ターゲティング抗体は、活性化可能抗体の形態であることができる。いくつかの態様において、scFvはPro-scFvの形態であることができる(例えば、WO 2009/025846、WO 2010/081173を参照のこと)。
いくつかの態様において、scFvは、CD3εの結合に特異的であり、CD3εに結合する抗体またはその断片、例えばCH2527、FN18、H2C、OKT3、2C11、UCHT1またはV9を含むか、またはそれらに由来する。いくつかの態様において、scFvは、CTLA-4 (本明細書においてCTLAおよびCTLA4ともいわれる)の結合に特異的である。
いくつかの態様において、抗CTLA-4 scFvは、アミノ酸配列:
Figure 2022064924000594
を含む。
いくつかの態様において、抗CTLA-4 scFvは、SEQ ID NO:585のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、抗CD3ε scFvは、アミノ酸配列:
Figure 2022064924000595
を含む。
いくつかの態様において、抗CD3ε scFvは、SEQ ID NO:586のアミノ酸配列と少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、scFvは、1つもしくは複数のT細胞、1つもしくは複数のNK細胞および/または1つもしくは複数のマクロファージの結合に特異的である。いくつかの態様において、scFvは、B7-H4、BTLA、CD3、CD4、CD8、CD16a、CD25、CD27、CD28、CD32、CD56、CD137、CTLA-4、GITR、HVEM、ICOS、LAG3、NKG2D、OX40、TIGIT、TIM3またはVISTAからなる群より選択される標的の結合に特異的である。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体には、ABにコンジュゲートされた作用物質も含まれる。いくつかの態様において、作用物質は治療用作用物質である。いくつかの態様において、作用物質はリンカーを介して多重特異性活性化可能抗体にコンジュゲートされている。いくつかの態様において、作用物質は切断可能なリンカーを介してABにコンジュゲートされている。いくつかの態様において、リンカーは切断不可能なリンカーである。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体はまた、検出可能部分も含む。いくつかの態様において、検出可能部分は診断用作用物質である。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、天然には、1つまたは複数のジスルフィド結合を含む。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、1つまたは複数のジスルフィド結合を含むように操作することができる。
本開示はまた、本明細書において記述される多重特異性活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、およびこれらの単離された核酸配列を含むベクターを提供する。本開示は、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、そのような核酸分子を含む細胞を培養することによって、多重特異性活性化可能抗体を産生する方法を提供する。いくつかの態様において、細胞はそのようなベクターを含む。
本開示はまた、(a) 多重特異性活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、多重特異性活性化可能抗体をコードする核酸構築体を含む細胞を培養すること、および(b) 多重特異性活性化可能抗体を回収することによって、本開示の多重特異性活性化可能抗体を製造する方法を提供する。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
本開示はまた、少なくとも、第1の標的または第1のエピトープに特異的に結合する第1の抗体またはその抗原結合断片(AB1)および第2の標的または第2のエピトープに特異的に結合する第2の抗体またはその抗原結合断片(AB2)を含む多重特異性活性化可能抗体および/または多重特異性活性化可能抗体組成物を提供し、ここで少なくともAB1はマスキング部分(MM1)に、MM1のカップリングがAB1のその標的に結合する能力を低減させるようにカップリングされているか、またはそれ以外の方法で結合されている。いくつかの態様において、MM1は、プロテアーゼ、例えば対象における処置部位または診断部位でAB1の標的と共局在化されているプロテアーゼの基質を含む第1の切断可能部分(CM1)配列を介してAB1にカップリングされている。本明細書において提供される多重特異性活性化可能抗体は、循環血中で安定であり、意図された治療部位および/または診断部位で活性化されるが、しかし正常な、すなわち健常な組織では活性化されず、活性化されると、対応する非修飾多重特異性抗体に少なくとも匹敵するAB1の標的への結合を示す。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
本開示はまた、少なくとも、標的に特異的に結合する第1の抗体または抗体断片(AB1)および第2の抗体または抗体断片(AB2)を含む多重特異性活性化可能抗体を含む組成物および方法を提供し、ここで少なくとも多重特異性活性化可能抗体における第1のABは、AB1のその標的に結合する能力を低下させるマスキング部分(MM1)にカップリングされている。いくつかの態様において、各ABは、各標的に対するその対応するABの能力を低下させるMMにカップリングされている。例えば、二重特異性の活性化可能抗体の態様において、AB1は、AB1のその標的に結合する能力を低下させる第1のマスキング部分(MM1)にカップリングされており、AB2は、AB2のその標的に結合する能力を低下させる第2のマスキング部分(MM2)にカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は2つを超えるAB領域を含み; そのような態様において、多重特異性活性化可能抗体における各ABについて、AB1は、AB1のその標的に結合する能力を低下させる第1のマスキング部分(MM1)にカップリングされており、AB2は、AB2のその標的に結合する能力を低下させる第2のマスキング部分(MM2)にカップリングされており、AB3は、AB3のその標的に結合する能力を低下させる第3のマスキング部分(MM3)にカップリングされている、などである。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、プロテアーゼの基質である少なくとも1つの切断可能部分(CM)をさらに含み、ここでCMがMMをABに連結している。例えば、いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は、少なくとも、標的に特異的に結合する第1の抗体または抗体断片(AB1)および第2の抗体または抗体断片(AB2)を含み、ここで少なくとも多重特異性活性化可能抗体における第1のABは、AB1のその標的に結合する能力を低下させるマスキング部分(MM1)に第1の切断可能部分(CM1)を介してカップリングされている。いくつかの二重特異性の活性化可能抗体の態様において、AB1はMM1にCM1を介してカップリングされており、AB2は、AB2のその標的に結合する能力を低下させる第2のマスキング部分(MM2)に第2の切断可能部分(CM2)を介してカップリングされている。いくつかの態様において、多重特異性活性化可能抗体は2つを超えるAB領域を含み; これらの態様のいくつかにおいて、多重特異性活性化可能抗体における各ABについて、AB1はMM1にCM1を介してカップリングされており、AB2はMM2にCM2を介してカップリングされており、AB3は、AB3のその標的に結合する能力を低下させる第3のマスキング部分(MM3)に第3の切断可能部分(CM3)を介してカップリングされている、などである。好適なAB、MMおよび/またはCMは、本明細書において開示されるAB、MMおよび/またはCMのいずれかを含む。
非結合性立体部分または非結合性立体部分の結合パートナーを有する活性化可能抗体
本開示はまた、非結合性立体部分(NB)または非結合性立体部分の結合パートナー(BP)を含む活性化可能抗体を提供し、ここでBPが、活性化可能抗体にNBを動員するか、またはそれ以外の方法で誘引する。本明細書において提供される活性化可能抗体には、例えば、非結合性立体部分(NB)、切断可能なリンカー(CL)および標的に結合する抗体または抗体断片(AB)を含む活性化可能抗体; 非結合性立体部分の結合パートナー(BP)、CLおよびABを含む活性化可能抗体; ならびにNBが動員されたBP、CLおよび標的に結合するABを含む活性化可能抗体が含まれる。NBが活性化可能抗体のCLおよびABに共有結合しているか、または活性化可能抗体のCLおよびABに共有結合しているBPとの相互作用により結び付いている活性化可能抗体は、本明細書において「NBを含有する活性化可能抗体」といわれる。活性化可能または切り替え可能とは、活性化可能抗体が阻害された状態、マスクされた状態、または非切断状態(なわち、第1のコンフォメーション)にある場合、活性化可能抗体が標的に対する結合の第1レベルを示し、活性化可能抗体が阻害されていない状態、マスクされていない状態、および/または切断状態(すなわち、第2のコンフォメーション、すなわち、活性化抗体)にある場合は、標的に対する結合の第2レベルを示し、ここで標的結合の第2レベルが標的結合の第1レベルよりも大きいことを意味する。活性化可能抗体組成物は、従来の抗体治療法と比べて、増大された生物学的利用能およびさらに好ましい生体内分布を示すことができる。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、ABが非処置部位および/または非診断部位への結合からマスクされていないかまたはそれ以外の方法で阻害されていない場合に、そのような部位への結合によって活性化可能抗体でない場合に生じうる毒性および/または有害な副作用の低減をもたらす。
非結合性立体部分(NB)を含む抗PD-1活性化可能抗体は、PCT公開番号WO 2013/192546に記載された方法を用いて作製することができ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
抗体および活性化可能抗体の使用
本開示による治療実体の投与は、改善された移入、送達、寛容などを提供するよう製剤に組み入れられる、好適な担体、賦形剤および他の作用物質とともに投与されることが理解されよう。全薬剤師に公知の処方集: Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975))、特にその中の、Blaug, Seymourによる第87章において多数の適切な製剤を見出すことができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質(陽イオンまたは陰イオン性)含有小胞(リポフェクチン(商標)のような)、DNAコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型乳剤、乳剤カーボワックス(様々な分子量のポリエチレングリコール)、半固体ゲル、およびカーボワックスを含有する半固体混合物が含まれる。前述の混合物のいずれも、製剤中の活性成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路と生理学的に適合性かつ認容性である限り、本開示による処置および治療において適切であり得る。薬剤師には周知の製剤、賦形剤および担体に関するさらなる情報については、Baldrick P. 「Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance.」 Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. 「Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.」 Int. J. Pharm. 203(1-2): 1-60 (2000), Charman WN 「Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts.」 J Pharm Sci.89(8):967-78 (2000), Powell et al. 「Compendium of excipients for parenteral formulations」 PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)およびその中の引用文献も参照されたい。
非限定的な例として、抗体および/または活性化可能抗体のような、抗PD-1抗体および/または活性化可能な抗PD-1抗体を含む、本開示の治療用製剤は、異常な標的発現および/または活性に関連する疾患または障害を予防、処置またはそれ以外の方法で改善するために用いられる。例えば、抗体および/または活性化可能抗体を含む、本開示の治療用製剤は、がんまたは他の新生物状態、炎症、炎症性障害、および/または自己免疫疾患を処置またはそれ以外の方法で改善するために用いられる。いくつかの態様において、がんは、標的が発現される固形腫瘍または血液悪性腫瘍である。いくつかの態様において、がんは、標的が発現される固形腫瘍である。いくつかの態様において、がんは、標的が発現される血液悪性腫瘍である。いくつかの態様において、標的は実質上(例えば、がん、臓器または組織の機能を行うことが多い臓器または組織の部分中)に発現される。いくつかの態様において、標的は細胞、組織または臓器上に発現される。いくつかの態様において、標的は間質(すなわち、細胞、組織または臓器の結合支持骨格)上に発現される。いくつかの態様において、標的は骨芽細胞上に発現される。いくつかの態様において、標的は内皮(血管系)上に発現される。いくつかの態様において、標的はがん幹細胞上に発現される。
予防、改善または処置の有効性は、例えば、異常な標的発現および/または活性のような、標的発現および/または活性に関連する疾患または障害を診断または処置するための任意の公知の方法に関連して判定される。対象の生存時間を延長させるか、またはそうでなければ対象における標的発現および/もしくは活性、例えば異常な標的発現および/もしくは活性に関連する疾患または障害の進行を遅らせることにより、抗体および/または活性化可能抗体が臨床的利益をもたらすことが示唆される。
抗体および/または活性化可能抗体は、薬学的組成物の形態で投与することができる。そのような組成物の調製に関与する原理および考察、ならびに成分の選択における指針は、例えば、Remington : The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa. : 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994; およびPeptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New Yorkにおいて提供されている。
抗体断片が用いられるいくつかの態様において、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小の断片が選択される。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子をデザインすることができる。そのようなペプチドは、化学的に合成することができ、および/または組み換えDNA技術によって産生することができる。(例えば、Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)を参照されたい)。製剤は、処置される特定の適応症に対し必要に応じて2つ以上の活性化合物、例えば、いくつかの態様において、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有することもできる。いくつかの態様において、またはさらに、組成物は、例えば、細胞傷害剤、サイトカイン、化学療法剤または成長阻害剤のような、その機能を増強する作用物質を含むことができる。そのような分子は、意図された目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によってまたは界面重合化によって調製されたマイクロカプセル、例えば、コロイド薬物送達系(例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル)において、またはマクロエマルジョンにおいて、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メチルメタクリレート)マイクロカプセルに閉じ込めることができる。
インビボ投与のために用いられる製剤は無菌でなければならない。これは、滅菌ろ過膜によるろ過によって容易に達成される。
徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の好適な例としては、マトリックスが、成型された物品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形状である、抗体を含有する固体疎水性重合体の半透過性マトリックスが挙げられる。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル(例えば、ポリ(2-ヒドロキシエチル-メタクリレート)、またはポリ(ビニルアルコール))、ポリラクチド(米国特許第3,773,919号)、L-グルタミン酸とγエチル-L-グルタメートの共重合体、非分解性エチレン酢酸ビニル、LUPRON DEPOT(商標)のような分解性の乳酸-グリコール酸共重合体(乳酸-グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドで構成される注射可能なミクロスフェア)、ならびにポリ-D-(-)-3-ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン酢酸ビニルおよび乳酸-グリコール酸のような重合体は、100日を超える分子の放出を可能にするが、ある特定のヒドロゲルは、タンパク質をより短い期間放出する。
いくつかの態様において、抗体および/または活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。無傷の抗体またはその断片(例えば、Fab、scFvまたはF(ab)2)が用いられる。プローブまたは抗体に関して「標識された」という用語は、検出可能な物質をプローブまたは抗体にカップリングさせる(すなわち、物理的に連結させる)ことによるプローブまたは抗体の直接的標識、および直接的に標識されている別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接的標識を包含することが意図される。間接的標識の例としては、蛍光的に標識された二次抗体を用いる一次抗体の検出、および蛍光的に標識されたストレプトアビジンによって検出できるようにビオチンを用いたDNAプローブの末端標識が挙げられる。「生体サンプル」という用語は、対象から単離された組織、細胞および生体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞および液体を含むことが意図される。それゆえ、血液、および血清、血漿、またはリンパ液を含む血液の画分または成分は「生体サンプル」という用語の用法内に含まれる。すなわち、本開示の検出法を用いて、インビトロおよびインビボで生体サンプル中の被分析物mRNA、タンパク質またはゲノムDNAを検出することができる。例えば、被分析物mRNAの検出のためのインビトロ技法には、ノザンハイブリダイゼーションおよびインサイチューハイブリダイゼーションが含まれる。被分析物タンパク質の検出のためのインビトロ技法には、酵素免疫測定法(ELISA)、ウエスタンブロット、免疫沈降、免疫化学的染色、および免疫蛍光が含まれる。被分析物ゲノムDNAの検出のためのインビトロ技法には、サザンハイブリダイゼーションが含まれる。免疫アッセイ法を行うための手順は、例えば、「ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology」, Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; 「Immunoassay」, E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996; および「Practice and Theory of Enzyme Immunoassays」, P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985に記述されている。さらに、被分析物タンパク質の検出のためのインビボ技法は、標識された抗被分析物タンパク質抗体を対象に導入する段階を含む。例えば、標準的な撮像技法によって対象における存在および位置を検出できる放射性マーカーで、抗体を標識することができる。
本開示の抗体および/または活性化可能抗体は、種々の診断および予防用製剤においても有用である。1つの態様において、抗体および/または活性化可能抗体は、上記の障害の1つまたは複数を発症する危険性のある患者に投与される。上記の障害の1つまたは複数に対する患者または臓器の素因は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカーまたは生化学的マーカーを用いて判定することができる。
本開示のいくつかの態様において、抗体および/または活性化可能抗体は、上記の障害の1つまたは複数に関連する臨床的適応症と診断されたヒト個体に投与される。診断時に、抗体および/または活性化可能抗体は、臨床的適応症の影響を緩和するか、または反転させるために投与される。
本開示の抗体および/または活性化可能抗体はまた、患者サンプル中の標的の検出において有用であり、したがって診断薬として有用である。例えば、本開示の、抗体および/または活性化可能抗体、ならびにそれらのコンジュゲートバージョンは、患者サンプルにおける標的レベルを検出するためにインビトロアッセイ法、例えばELISAにおいて用いられる。
いくつかの態様において、抗PDL1抗体は、本開示の抗PD-1抗体および/または活性化可能抗体による処置に好ましく応答する可能性がより高い患者の診断として用いられる。これらの態様において、能動免疫の存在、したがってPD-L1によるPD-1の関与を通じたT細胞活性の抑制の可能性を示すために、腫瘍細胞および浸潤性免疫細胞の両方に対する腫瘍生検でのPD-L1発現ならびに血液中の免疫細胞に対するPD-L1発現が用いられる。
1つの態様において、本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、固体支持体(例えば、マイクロタイタープレートのウェル)上に固定化される。固定化された抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、試験サンプル中に存在しうる任意の標的の捕捉抗体として働く。固定化された抗体および/もしくは活性化可能抗体、ならびに/またはそれらのコンジュゲートバージョンを患者サンプルと接触させる前に、固体支持体をすすぎ、乳タンパク質またはアルブミンのようなブロッキング剤で処理して被分析物の非特異的吸着を防ぐ。
引き続いて、抗原を含有するのではないかと疑われる試験サンプルを用いて、または標準の抗原量を含有する溶液を用いてウェルを処理する。そのようなサンプルは、例えば、病態の診断になると考えられる循環血中抗原レベルを有するのではないかと疑われる対象由来の血清サンプルである。試験サンプルまたは標準物質をすすいだ後、固体支持体を、検出可能に標識されている二次抗体で処理する。標識された二次抗体は、検出用抗体として働く。検出可能な標識のレベルを測定し、標準サンプルから作成した標準曲線との比較によって試験サンプル中の標的抗原の濃度を判定する。
インビトロ診断アッセイ法において、本開示の抗体および活性化可能抗体、ならびにそれらのコンジュゲートバージョンを用いて得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づいて対象において疾患を病期分類することが可能であるものと理解されよう。所与の疾患について、血液のサンプルは、疾患進行の様々な段階にあると診断された対象から、および/または疾患の治療的処置における様々な時点で採取される。進行または治療の各段階について統計的に有意な結果を提供するサンプルの集団を用いて、各段階に特徴的であるとみなされうる抗原の濃度の範囲が指定される。
抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、診断方法および/または撮像方法において用いることもできる。いくつかの態様において、そのような方法はインビトロの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインビボの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインサイチューの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はエクスビボの方法である。例えば、酵素的に切断可能なCMを有する活性化可能抗体を用いて、CMを切断することができる酵素の有無を検出することができる。そのような活性化可能抗体は、診断法において用いることができ、これには、所与の宿主生物の所与の細胞または組織において活性化された抗体(すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体)の、測定された蓄積による酵素活性(または、いくつかの態様において、ジスルフィド結合の還元をもたらすことができるものなどの増大した還元電位の環境)のインビボでの検出(例えば、定性的または定量的)が含まれうる。活性化された抗体のそのような蓄積からは、組織が酵素活性(またはCMの性質に依って増大した還元電位)を発現することだけでなく、活性化された抗体が結合する標的を組織が発現することも示唆される。
例えば、CMは、腫瘍の部位、生物学的に限定された部位(例えば、膿瘍中、臓器中などのような)におけるウイルス感染または細菌感染の部位などで見出される少なくとも1つのプロテアーゼの基質であるように選択することができる。ABは、標的抗原に結合するものであることができる。本明細書において開示される方法、または適切な場合には、当業者によく知られている方法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性追跡子)をABまたは抗体および/もしくは活性化可能抗体の他の領域にコンジュゲートさせることができる。好適な検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の文脈において論じられており、さらなる具体的な例が以下に提供されている。関心対象の疾患組織において活性が上昇する少なくとも1つのプロテアーゼとともに、疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なABを用いることにより、活性化可能抗体は、CM特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない、もしくは疾患組織におけるよりも低いレベルで存在するか、または不活性である(例えば、酵素前駆体の形態にあるもしくは阻害物質との複合体の状態にある)組織と比べて、疾患組織への結合速度の増大を示すであろう。小さなタンパク質およびペプチドが腎臓ろ過システムによって血液から迅速に除去されるため、およびCMに特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない(または、非疾患組織ではより低いレベルで存在するか、もしくは不活性なコンフォメーションで存在する)ため、疾患組織における活性化された抗体の蓄積は、非疾患組織と比べて増大する。
別の例では、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の切断作用物質の有無を検出することができる。例えば、活性化可能抗体が酵素による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の酵素の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。別の例では、活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプルにおける還元条件の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。これらの方法における分析を容易にするために、活性化可能抗体を検出可能に標識することができ、支持体(例えば、スライドまたはビーズのような固体支持体)に結合させることができる。検出可能な標識は、活性化可能抗体の、切断後に放出されない部分に配置することができ、例えば、検出可能な標識は、切断が行われるまで検出できない消光された蛍光標識または他の標識であることができる。アッセイ法は、例えば、固定化された検出可能に標識された活性化可能抗体を、切断が行われるのに十分な時間、酵素および/または還元剤を含有するのではないかと疑われるサンプルと接触させ、次に洗浄して過剰なサンプルおよび夾雑物を除去することによって行うことができる。次に、サンプル中の切断作用物質(例えば、酵素または還元剤)の有無を、サンプルと接触させる前の活性化可能抗体の検出可能なシグナルの変化、例えば、サンプル中の切断作用物質による活性化可能抗体の切断に起因する検出可能なシグナルの存在および/または増加によって評価する。
そのような検出方法は、切断時に活性化可能抗体のABに結合できる標的の有無の検出を同様に提供するように適合させることができる。したがって、アッセイ法は、切断作用物質の有無および関心対象の標的の有無を評価するように適合させることができる。切断作用物質の有無は、上記のように活性化可能抗体の、検出可能な標識の存在および/または増加によって検出することができ、標的の有無は、例えば検出可能に標識された抗標的抗体の使用による、標的-AB複合体の検出によって検出することができる。
活性化可能抗体はまた、例えばプロテアーゼ切断、および特定の標的への結合による、活性化可能抗体活性化の検証のためのインサイチュー撮像において有用である。インサイチュー撮像は、細胞培養または組織切片のような生体サンプルにおけるタンパク質分解活性および標的の局在確認を可能にする技法である。この技法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識)の存在に基づき、所与の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認することが可能である。
これらの技法は、疾患部位(例えば腫瘍組織)または健常組織に由来するどんな凍結細胞または組織でも有用である。これらの技法はまた、新鮮な細胞または組織サンプルでも有用である。
これらの技法においては、活性化可能抗体は検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素(例えばフルオロフォア、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、ローダミンイソチオシアネート(TRITC)、Alexa Fluor (登録商標)標識)、近赤外(NIR)色素(例えば、Qdot(登録商標)ナノクリスタル)、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンのような増幅試薬、または酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)であり得る。
標識された活性化可能抗体とともにインキュベートされたサンプル中の標識の検出は、サンプルが標的を含み、活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含有することを示す。いくつかの態様において、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いることにより、および/またはプロテアーゼに特異的な作用物質、例えば、プロテアーゼのマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する、A11のような抗体を用いることにより、プロテアーゼの存在を確認することができる; 例えば、2010年11月11日付で刊行された国際公開番号WO 2010/129609を参照されたい。活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを同定するために、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いる、および/またはより選択的な阻害剤を用いることによる同じ手法を用いることができる。いくつかの態様において、標的の存在は標的に特異的な作用物質、例えば、別の抗体を用いて確認することができ、または検出可能な標識は非標識の標的と競合させることができる。いくつかの態様において、標識された二次抗体またはより複雑な検出系による検出とともに、標識されていない活性化可能抗体を用いることができる。
同様の技法はまた、対象、例えば、ヒトを含む哺乳動物における蛍光シグナルの検出から、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含むことが示唆される、インビボ撮像にも有用である。
これらの技法はまた、活性化可能抗体におけるプロテアーゼ特異的CMに基づく、種々の細胞、組織および生物におけるプロテアーゼ活性を検出、同定、または特性を明らかにするためのキットにおいておよび/または試薬として有用である。
本開示は、種々の診断上および/または予防上の適用において抗体および/または活性化可能抗体を用いる方法を提供する。例えば、本開示は、以下によって対象またはサンプルにおける切断作用物質および関心対象の標的の有無を検出する方法を提供する：(i) 活性化可能抗体と対象またはサンプルを接触させる段階であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体が、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; (a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するABの結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のABの結合パートナーの修飾型ではなく; および(b) 切断されていない非活性化状態において、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない、前記段階; ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質および標的が対象またはサンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、以下によって対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供する：(i) 関心対象の標的、例えば、標的の存在下において活性化可能抗体と対象またはサンプルを接触させる段階であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体が、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; (a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のAB結合パートナーの修飾型ではなく; および(b) 切断されていない非活性化状態において、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない、前記段階; ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象またはサンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、関心対象の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含む活性化可能抗体を含むキットを提供し、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; (a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつ、MMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のAB結合パートナーの修飾型ではなく; および(b) 切断されていない非活性化状態において、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない; ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象またはサンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、以下によって対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供する：(i) 活性化可能抗体と対象またはサンプルを接触させる段階であって、活性化可能抗体が、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメイン(AB)と、検出可能な標識とを含み、ここで、切断されていない非活性化状態にある活性化可能抗体が、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; MMが、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMが、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たずかつ天然のAB結合パートナーの修飾型ではなく; 切断されていない非活性化状態において、MMが、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された活性化状態では、MMが、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない; かつ、検出可能な標識が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される、前記段階; ならびに(ii) 対象またはサンプルにおける検出可能な標識のレベルを測定する段階であって、対象またはサンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象もしくはサンプル中に存在しないおよび/または十分に存在しないことが示唆され、かつ、対象またはサンプルにおける検出可能な標識の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象またはサンプル中に存在することが示唆される、前記段階。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体(例えば、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体)ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくは生体サンプル中に存在しないおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出することができないことが示唆される。
本開示はまた、(i) 標的の存在下において活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させること、および(ii) 対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定することによって、対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくは生体サンプル中に検出可能なレベルで存在しないおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出することができないことが示唆される。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; (a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず; および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、検出可能な標識は、マスキング部分に結合される。いくつかの態様において、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位に対してN末端側の切断可能部分に結合される。いくつかの態様において、ABの単一の抗原結合部位がマスクされる。本開示の抗体が少なくとも2つの抗原結合部位を有するいくつかの態様において、少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされ、かつ少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされない。いくつかの態様において、全ての抗原結合部位がマスクされる。いくつかの態様において、測定する段階は、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、標的の存在下において活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させかつ対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定するのに用いるための、本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を含む該キットを提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に存在することが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象もしくは生体サンプル中に検出可能なレベルで存在しないおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出することができないことが示唆される。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; (a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず; および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ、切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、検出可能な標識は、マスキング部分に結合される。いくつかの態様において、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位に対してN末端側の切断可能部分に結合される。いくつかの態様において、ABの単一の抗原結合部位がマスクされる。本開示の抗体が少なくとも2つの抗原結合部位を有するいくつかの態様において、少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされ、かつ少なくとも1つの抗原結合部位がマスクされない。いくつかの態様において、全ての抗原結合部位がマスクされる。いくつかの態様において、測定する段階は、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、活性化可能抗体は、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含み、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象もしくは生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出不能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に検出可能なレベルで存在することが示唆される。
本開示は、(i) 活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させることであって、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含む、前記接触、および(ii) 対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体のレベルを測定することによって、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法を提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象または生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質により切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; (a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず; および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける切断作用物質および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくは生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。
本開示はまた、(i) 活性化可能抗体と対象または生体サンプルを接触させることであって、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含む、前記接触; および(ii) 対象または生体サンプルにおける検出可能な標識のレベルを測定することによって、対象またはサンプルにおける切断作用物質の有無を検出する方法を提供し、ここで、対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルから、切断作用物質が対象または生体サンプル中に検出可能なレベルで存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。そのような活性化可能抗体は、マスキング部分(MM)と、切断作用物質により切断される切断可能部分(CM)と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片(AB)とを含み、ここで、切断されていない(すなわち非活性化)状態にある活性化可能抗体は、N末端からC末端に向かって、MM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含み; (a) MMは、標的に対するABの結合を阻害するペプチドであり、かつMMは、天然に存在するAB結合パートナーのアミノ酸配列を持たず; および(b) 非切断状態において、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉し、かつ切断された(すなわち、活性化)状態では、活性化可能抗体のMMは、標的に対するABの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
本開示はまた、対象またはサンプルにおける関心対象の切断作用物質の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、少なくとも、対象または生体サンプルと接触させるのに用いるための本明細書において記述される活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体サンプルにおける活性化された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含む該キットを提供し、ここで、活性化可能抗体が、活性化可能抗体の、CMの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含み、ここで対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルから、切断作用物質、標的、もしくは切断作用物質と標的の両方が対象もしくは生体サンプル中に存在せずおよび/または十分に存在せず、したがって活性化可能抗体の標的結合および/またはプロテアーゼ切断を、対象または生体サンプルにおいて検出できないことが示唆され、かつ、対象または生体サンプルにおける検出可能な標識の検出可能なレベルの低減から、切断作用物質および標的が対象または生体サンプル中に存在することが示唆される。検出可能な標識のレベルの低減は、例えば、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%および/または約100%の低減である。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は検出可能な標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、検出可能な標識は、造影剤、コントラスト剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、1つもしくは複数の金属イオン、またはリガンドに基づく標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、造影剤は放射性同位体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、放射性同位体はインジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、コントラスト剤は、ヨウ素、ガドリニウムまたは酸化鉄を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ-ガラクトシダーゼを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、蛍光標識は黄色蛍光タンパク質(YFP)、シアン蛍光タンパク質(CFP)、緑色蛍光タンパク質(GFP)、修飾赤色蛍光タンパク質(mRFP)、赤色蛍光タンパク質tdimer2 (RFP tdimer2)、HCREDまたはユーロピウム誘導体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、発光標識はN-メチルアクリジウム誘導体を含む。これらの方法のいくつかの態様において、標識は、Alex Fluor(登録商標)680またはAlexa Fluor(登録商標)750のような、Alexa Fluor(登録商標)標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、リガンドに基づく標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたは1つもしくは複数のハプテンを含む。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、対象は哺乳動物である。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、対象はヒトである。いくつかの態様において、対象は、非ヒト霊長類、伴侶動物(例えば、ネコ、イヌ、ウマ)、家畜、作業動物、または動物園の動物のような、非ヒト哺乳動物である。いくつかの態様において、対象はげっ歯類である。
これらの方法のいくつかの態様において、本方法はインビボの方法である。これらの方法のいくつかの態様において、本方法はインサイチューの方法である。これらの方法のいくつかの態様において、本方法はエクスビボの方法である。これらの方法のいくつかの態様において、本方法はインビトロの方法である。
いくつかの態様において、インサイチュー撮像および/またはインビボ撮像は、どの患者を処置するかを同定する方法において有用である。例えば、インサイチュー撮像では、活性化可能抗体を用いて患者サンプルをスクリーニングし、適切なプロテアーゼおよび標的を適切な位置、例えば腫瘍部位に有する患者を同定する。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインサイチュー撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の一方または両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、患者にその後、患者が試験で陽性となった活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインビボ撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、患者にその後、患者が試験で陽性となった活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。
本方法およびキットのいくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するために本方法またはキットが用いられる。例えば、これらの方法において試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、そのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、標的(例えば、標的)の一方の検査で陰性となる患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。いくつかの態様において、標的(例えば、標的)の一方の検査で陰性となる患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補ではないとして同定される。いくつかの態様において、そのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで他の活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの態様において、活性化可能抗体は作用物質にコンジュゲートされていない。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの態様において、検出可能な標識はABに配置される。いくつかの態様において、対象またはサンプルにおける活性化可能抗体のレベルを測定する段階は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬であって、検出可能な標識を含む該試薬を用いて達成される。いくつかの態様において、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
いくつかの態様において、本開示の抗標的活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体(例えば、治療用作用物質がコンジュゲートされている活性化可能抗体)での処置に適した患者集団を同定しまたはそうでなければ精緻化し、引き続いてその活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を、その必要のある対象に投与することによる処置を行うために方法またはキットが用いられる。例えば、これらの方法において試験されている活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の両方の検査で陽性となる患者は、そのようなCMを含むそのような抗体および/またはそのようなコンジュゲートされた活性化可能抗体による処置に適した候補として同定され、患者にその後、試験された活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的(例えば、標的)の一方または両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した候補として同定されうる。いくつかの態様において、そのような患者は、処置に適した抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体)が同定されるまで他の抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体で試験することができる。いくつかの態様において、患者にその後、患者が試験で陽性となった活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の治療的有効量が投与される。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、MMは、約4～40アミノ酸の長さを有するペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は、MMとCMとの間に位置しているリンカーペプチドを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は、ABとCMとの間に位置しているリンカーペプチドを含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、活性化可能抗体は、第1のリンカーペプチド(L1)および第2のリンカーペプチド(L2)を含み、第1のリンカーペプチドはMMとCMとの間に位置し、かつ第2のリンカーペプチドはABとCMとの間に位置している。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の各々は、約1～20アミノ酸の長さのペプチドであり、L1およびL2の各々は同じリンカーである必要はない。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の一方または両方は、グリシン-セリン重合体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の少なくとも一方は、(GS)n、(GSGGS)n (SEQ ID NO:363)および(GGGS)n (SEQ ID NO:364)からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ここでnは少なくとも1の整数である。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の少なくとも一方は、式(GGS)nを有するアミノ酸配列を含み、ここでnは少なくとも1の整数である。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、L1およびL2の少なくとも一方は、
Figure 2022064924000596
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、ABは、本明細書において提示される交差反応性抗体配列から選択される抗体または抗体断片配列を含む。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、ABはFab断片、scFvまたは単鎖抗体(scAb)を含む。
これらの方法およびキットのいくつかの態様において、切断作用物質は、対象またはサンプル中に標的とともに共局在化されるプロテアーゼであり、CMは、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、ここでプロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露される場合に活性化可能抗体中のCMを切断する。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMは、15アミノ酸までの長さのポリペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMはABのN末端にカップリングされる。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMはABのC末端にカップリングされる。これらの方法およびキットのいくつかの態様において、CMは、ABのVL鎖のN末端にカップリングされる。
本開示の抗体および/または活性化可能抗体は、診断および予防用製剤において用いられる。1つの態様において、活性化可能抗体は、前述の炎症、炎症性障害、がんまたは他の障害の1つまたは複数を発症する危険性のある患者に投与される。
前述の障害の1つまたは複数に対する患者または臓器の素因は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカーまたは生化学的マーカーを用いて判定することができる。
本開示のいくつかの態様において、抗体および/または活性化可能抗体は、前述の障害の1つまたは複数に関連する臨床的適応症と診断されたヒト個体に投与される。診断時に、抗体および/または活性化可能抗体が、臨床的適応症の影響を緩和するか、または反転させるために投与される。
本開示の抗体および/または活性化可能抗体はまた、患者サンプル中の標的の検出においても有用であり、したがって診断薬として有用である。例えば、本開示の抗体および/または活性化可能抗体は、患者サンプルにおける標的レベルを検出するためにインビトロアッセイ法、例えばELISAにおいて用いられる。
いくつかの態様において、抗PDL1抗体は、本開示の抗PD-1抗体および/または活性化可能抗体による処置に好ましく応答する可能性がより高い患者の診断として用いられる。これらの態様において、能動免疫の存在、したがってPD-L1によるPD-1の関与を通じたT細胞活性の抑制の可能性を示すために、腫瘍細胞および浸潤性免疫細胞の両方に対する腫瘍生検でのPD-L1発現ならびに血液中の免疫細胞に対するPD-L1発現が用いられる。
1つの態様において、本開示の抗体および/または活性化可能抗体は、固体支持体(例えば、マイクロタイタープレートのウェル)上に固定化される。固定化された抗体および/または活性化可能抗体は、試験サンプル中に存在しうる任意の標的の捕捉抗体として働く。固定化された抗体および/または活性化可能抗体を患者サンプルと接触させる前に、固体支持体をすすぎ、乳タンパク質またはアルブミンのようなブロッキング剤で処理して被分析物の非特異的吸着を防ぐ。
引き続いて、抗原を含有するのではないかと疑われる試験サンプルを用いて、または標準の抗原量を含有する溶液を用いてウェルを処理する。そのようなサンプルは、例えば、病態の診断になると考えられる循環血中抗原のレベルを有するのではないかと疑われる対象由来の血清サンプルである。試験サンプルまたは標準物質をすすいだ後、固体支持体を、検出可能に標識されている二次抗体で処理する。標識された二次抗体は、検出用抗体として働く。検出可能な標識のレベルを測定し、標準サンプルから作成した標準曲線との比較によって試験サンプル中の標的抗原の濃度を判定する。
インビトロ診断アッセイ法において、本開示の抗体および/または活性化可能抗体を用いて得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づいて対象において疾患を病期分類することが可能であるものと理解されよう。所与の疾患について、血液のサンプルは、疾患進行の様々な段階にあると診断された対象から、および/または疾患の治療的処置における様々な時点で採取される。進行または治療の各段階について統計的に有意な結果を提供するサンプルの集団を用いて、各段階に特徴的であるとみなされうる抗原の濃度の範囲が指定される。
抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および/またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、診断方法および/または撮像方法において用いることもできる。いくつかの態様において、そのような方法はインビトロの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインビボの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はインサイチューの方法である。いくつかの態様において、そのような方法はエクスビボの方法である。例えば、酵素的に切断可能なCMを有する活性化可能抗体を用いて、CMを切断することができる酵素の有無を検出することができる。そのような活性化可能抗体は、診断法において用いることができ、これには、所与の宿主生物の所与の細胞または組織において活性化された抗体(すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体)の、測定された蓄積による酵素活性(または、いくつかの態様において、ジスルフィド結合の還元をもたらすことができるものなどの増大した還元電位の環境)のインビボでの検出(例えば、定性的または定量的)が含まれうる。活性化された抗体のそのような蓄積からは、組織が酵素活性(またはCMの性質に依って増大した還元電位)を発現することだけでなく、活性化された抗体が結合する標的を組織が発現することも示唆される。
例えば、CMは、腫瘍の部位、生物学的に限定された部位(例えば、膿瘍中、臓器中などのような)におけるウイルス感染または細菌感染の部位などで見出されるプロテアーゼのプロテアーゼ基質であるように選択することができる。ABは、標的抗原に結合するものであることができる。当業者によく知られている方法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性追跡子)をABまたは活性化可能抗体の他の領域にコンジュゲートさせることができる。好適な検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の文脈において論じられており、さらなる具体的な例が以下に提供されている。関心対象の疾患組織において活性が上昇するプロテアーゼとともに、疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なABを用いることにより、活性化可能抗体は、CM特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない、もしくは疾患組織におけるよりも低いレベルで存在するか、または不活性である(例えば、酵素前駆体の形態にあるもしくは阻害物質との複合体の状態にある)組織と比べて、疾患組織への結合速度の増大を示すであろう。小さなタンパク質およびペプチドが腎臓ろ過システムによって血液から迅速に除去されるため、およびCMに特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない(または非疾患組織ではより低いレベルで存在するか、もしくは不活性なコンフォメーションで存在する)ので、疾患組織における活性化された抗体の蓄積は、非疾患組織と比べて増大する。
別の例では、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の切断作用物質の有無を検出することができる。例えば、活性化可能抗体が酵素による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプル中の酵素の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。別の例では、活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいCMを含む場合、活性化可能抗体を用いて、サンプルにおける還元条件の存在を(定性的または定量的に)検出することができる。これらの方法における分析を容易にするために、活性化可能抗体を検出可能に標識することができ、支持体(例えば、スライドまたはビーズのような固体支持体)に結合させることができる。検出可能な標識は、活性化可能抗体の、切断後に放出されない部分に配置することができ、例えば、検出可能な標識は、切断が行われるまで検出できない消光された蛍光標識または他の標識であることができる。アッセイ法は、例えば、固定化された検出可能に標識された活性化可能抗体を、切断が行われるのに十分な時間、酵素および/または還元剤を含有するのではないかと疑われるサンプルと接触させ、次に洗浄して過剰なサンプルおよび夾雑物を除去することによって行うことができる。次に、サンプル中の切断作用物質(例えば、酵素または還元剤)の有無を、サンプルと接触させる前の活性化可能抗体の検出可能なシグナルの変化、例えば、サンプル中の切断作用物質による活性化可能抗体の切断に起因する検出可能なシグナルの存在および/または増加によって評価する。
そのような検出方法は、切断時に活性化可能抗体のABに結合できる標的の有無の検出を同様に提供するように適合させることができる。したがって、アッセイ法は、切断作用物質の有無および関心対象の標的の有無を評価するように適合させることができる。切断作用物質の有無は、上記のように活性化可能抗体の、検出可能な標識の存在および/または増加によって検出することができ、標的の有無は、例えば検出可能に標識された抗標的抗体の使用による、標的-AB複合体の検出によって検出することができる。
活性化可能抗体はまた、例えばプロテアーゼ切断、および特定の標的への結合による、活性化可能抗体活性化の検証のためのインサイチュー撮像においても有用である。インサイチュー撮像は、細胞培養または組織切片のような生体サンプルにおけるタンパク質分解活性および標的の局在確認を可能にする技法である。この技法を用いて、検出可能な標識(例えば、蛍光標識)の存在に基づき、所与の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認することが可能である。
これらの技法は、疾患部位(例えば腫瘍組織)または健常組織に由来するどんな凍結細胞または組織でも有用である。これらの技法はまた、新鮮な細胞または組織サンプルでも有用である。
これらの技法においては、活性化可能抗体は検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素(例えばフルオレセインイソチオシアネート(FITC)、ローダミンイソチオシアネート(TRITC)、近赤外(NIR)色素(例えば、Qdot(登録商標)ナノクリスタル)、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンのような増幅試薬、または酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)であり得る。
標識された活性化可能抗体とともにインキュベートされたサンプル中の標識の検出は、サンプルが標的を含み、活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含有することを示す。いくつかの態様において、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いることにより、および/またはプロテアーゼに特異的な作用物質、例えば、プロテアーゼのマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する、A11のような抗体を用いることにより、プロテアーゼの存在を確認することができる; 例えば、2010年11月11日付で刊行された国際公開番号WO 2010/129609を参照されたい。活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼまたはプロテアーゼのクラスを同定するために、本明細書において記述されるものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いる、および/またはより選択的な阻害剤を用いることによる同じ手法を用いることができる。いくつかの態様において、標的の存在は標的に特異的な作用物質、例えば、別の抗体を用いて確認することができ、または検出可能な標識は非標識の標的と競合させることができる。いくつかの態様において、標識された二次抗体またはより複雑な検出系による検出とともに、標識されていない活性化可能抗体を用いることができる。
同様の技法はまた、対象、例えば、ヒトを含む哺乳動物における蛍光シグナルの検出から、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のCMに特異的なプロテアーゼを含むことが示唆される、インビボ撮像にも有用である。
これらの技法はまた、活性化可能抗体におけるプロテアーゼ特異的CMに基づく種々の細胞、組織および生物におけるプロテアーゼ活性を検出、同定、または特性を明らかにするためのキットにおいておよび/または試薬として有用である。
いくつかの態様において、インサイチュー撮像および/またはインビボ撮像は、どの患者を処置するかを同定する方法において有用である。例えば、インサイチュー撮像では、活性化可能抗体を用いて患者サンプルをスクリーニングし、適切なプロテアーゼおよび標的を適切な位置、例えば腫瘍部位に有する患者を同定する。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインサイチュー撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、これらの方法を用いて試験されている活性化可能抗体中のCMにおける基質を切断するプロテアーゼおよび標的の一方または両方の検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した(すなわち、試験されている活性化可能抗体での処置に適していない)候補として同定される。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。
いくつかの態様において、本開示の活性化可能抗体での処置に適した患者集団を同定するかまたはそうでなければ精緻化するためにインビボ撮像が用いられる。例えば、試験されている活性化可能抗体の切断可能部分(CM)における基質を切断するプロテアーゼおよび標的の両方の検査で陽性となる(例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積させる)患者は、そのようなCMを含むそのような活性化可能抗体による処置に適した候補として同定される。同様に、検査で陰性となる患者は、別の治療形態に適した(すなわち、試験されている活性化可能抗体での処置に適していない)候補として同定される。いくつかの態様において、第1の活性化可能抗体に関する検査で陰性となるそのような患者は、処置に適した活性化可能抗体(例えば、疾患の部位で患者により切断されるCMを含む活性化可能抗体)が同定されるまで、異なるCMを含む他の活性化可能抗体で試験することができる。
薬学的組成物
本開示の抗体および/または活性化可能抗体(本明細書において「活性化合物」ともいわれる)、ならびにその誘導体、断片、類似体および相同体は、投与に適した薬学的組成物に組み入れることができる。そのような組成物は、典型的には、抗体および/または活性化可能抗体ならびに薬学的に許容される担体を含む。本明細書において用いられる場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与に適合する任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。好適な担体は、参照により本明細書に組み入れられる、この分野における標準的な参考テキストであるRemington's Pharmaceutical Sciencesの最新版に記述されている。そのような担体または希釈剤の好適な例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、および5%ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されることはない。リポソームおよび固定油のような非水性媒体も用いられうる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒質および剤の使用は、当技術分野において周知である。任意の従来の媒質または剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物におけるその使用が企図される。補充性の活性化合物を組成物に組み入れることもできる。
本開示の薬学的組成物は、その意図される投与経路に適合するように処方される。投与経路の例としては非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口(例えば、吸入)、経皮(すなわち、局所)、経粘膜および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用に用いられる溶液または懸濁液は、以下の成分: 注射用水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような滅菌希釈剤; ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤; アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤; エチレンジアミン四酢酸(EDTA)のようなキレート剤; 酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような張度調整剤を含むことができる。pHは、塩酸または水酸化ナトリウムのような、酸または塩基で調節することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与バイアルに封入することができる。
注射可能な用途に適した薬学的組成物は、滅菌水溶液(水溶性の場合)または滅菌分散液および注射可能な滅菌溶液または滅菌分散液の即時調製用の滅菌粉末を含む。静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Cremophor EL (商標) (BASF, Parsippany, N.J.)またはリン酸緩衝生理食塩水(PBS)が挙げられる。いかなる場合でも、この組成物は無菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性とするべきである。これは製造および保存の条件下で安定でなければならず、これは細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。この担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど)、およびその好適な混合物を含む溶媒または分散媒とすることができる。その適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合には必要とされる粒径の維持によりおよび界面活性剤の使用により維持することができる。微生物の作用からの保護はさまざまな抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成することができる。いくつかの態様において、等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを組成物の中に含めることが望ましいであろう。注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物の中に含めることにより実現することができる。
注射可能な滅菌溶液は、必要とされる量の活性化合物を適切な溶媒中に、必要に応じて、上記に列挙した成分の一つまたは組み合わせとともに組み入れ、続けてろ過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は活性化合物を、基本的な分散媒および上記に列挙したものから必要とされるその他の成分を含む滅菌媒体の中に組み入れることによって調製される。注射可能な滅菌溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製の方法は、活性成分に加えて所望とされる付加的な任意の成分の粉末を予め滅菌ろ過したその溶液からもたらす真空乾燥法および凍結乾燥法である。
経口用組成物は一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む。それらはゼラチンカプセルの中に封入され、または錠剤に圧縮されることができる。治療的な経口投与を目的に、活性化合物を賦形剤とともに組み入れて、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口用組成物はうがい薬として用いるために液体担体を使用して調製することもでき、この場合、液体担体中の化合物は経口的に適用され、かつこれで口をすすぎ(swished)、かつ喀出されまたは嚥下される。薬学的に適合する結合剤および/または補助物質を、組成物の一部として含めることができる。この錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、以下の成分のいずれかまたは似通った性質の化合物を含むことができる: 微結晶性セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンのような結合剤; でんぷんもしくはラクトースのような賦形剤、アルギン酸、Primogel、もしくはとうもろこしでんぷんのような崩壊剤; ステアリン酸マグネシウムもしくはSterotesのような滑沢剤; コロイド状二酸化ケイ素のような流動促進剤; スクロースもしくはサッカリンのような甘味剤; またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ風味のような香料添加剤。
吸入による投与の場合、化合物は、適した噴射剤、例えば、二酸化炭素のようなガスを含有する加圧容器もしくは分注機、または噴霧器からエアロゾルスプレイの形態で送達される。
全身投与を経粘膜的なまたは経皮的な手段によるものとすることもできる。経粘膜投与または経皮投与の場合、浸透される障壁に適した浸透剤が処方物の中に用いられる。そのような浸透剤は一般に当技術分野において公知であり、例えば、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は鼻腔用スプレイまたは坐剤の使用により達成することができる。経皮投与の場合、活性化合物は当技術分野において一般に公知であるように軟膏剤、膏薬、ゲル、またはクリームの中に処方される。
化合物はまた、直腸送達のために坐剤(例えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従来の坐剤基剤を用いて)または停留浣腸の形態で調製することもできる。
1つの態様において、活性化合物はインプラントおよびマイクロカプセル化した送達系を含めて、制御放出処方物のような、体内からの迅速除去から化合物を防御する担体とともに調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生体分解・生体適合性高分子を用いることができる。そのような処方物の調製方法は当業者には明らかであろう。その材料はAlza社およびNova Pharmaceuticals社から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液(ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体によって感染細胞を標的とするリポソームを含めて)を薬学的に許容される担体として用いることもできる。これらは当業者に公知の方法により、例えば、米国特許第4,522,811号に記述されているように、調製することができる。
投与の容易さおよび投与量の均一性のために、経口用組成物または非経口用組成物を投与量単位形態で処方することが特に有利である。投与量単位形態とは、本明細書において用いられる場合、処置される対象のために単一投与量として適した、物理的に不連続な単位をいい、各単位は、所望の治療効果を生じると計算された所定量の活性化合物を、必要とされる薬学的担体に関連して含有する。本開示の投与量単位形態の仕様は、活性化合物の独特の特徴および達成されたい特定の治療効果、ならびにそのような活性化合物を個体の処置のために配合する技術に固有の制限により決定され、それらに直接依存する。
薬学的組成物は、投与のための使用説明書とともに容器、パックまたは分注機に含めることができる。
本発明は、特許請求の範囲に記述された本発明の範囲を限定するものではない以下の実施例においてさらに記述されよう。
実施例1. ヒトPD-1に結合し、hPD-L1およびhPD-L2のヒトPD-1との結合をブロックする本態様のマウス抗体の生成
本実施例は、組換えヒトPD-1タンパク質を用いたマウス免疫に由来するハイブリドーマから、ヒトPD-1に結合する本開示のマウス抗体が単離され得ること、ならびにそのような結合が、PD-1のPDL1およびPDL2との結合を阻害し得ることを証明する。
0日目、7日目、および21日目に、6匹のNZBWF1/J雌マウス（Jackson Laboratories, Sacramento, CA；カタログ番号100008）を、右側腹部において、組換えヒトPD-1（Sino Biological, Beijing, P.R. China；カタログ番号ABIN2181605）によって免疫した。28日目に、免疫されたマウスから血清を採取し、HEK293-hPD-1（ヒトPD-1をコードする発現ベクター（Origene、カタログ番号SC117011）によってトランスフェクトされた細胞）との結合を測定した。6匹のマウスは全て陽性結合を示した。マウス1、3、および6から脾細胞を単離し、SP0マウスB細胞と融合させ；同様に、マウス2、4、および5から脾細胞を単離し、SP0マウスB細胞と融合させ、ハイブリドーマのプールm136およびm245を作製した。2つの融合から発生したハイブリドーマプールm136およびm245を、シングルクローンのために播種し、HEK293-hPD-1細胞に結合することができ、かつトランスフェクトされていないHEK293細胞には結合しない抗体について、クローン培養上清をアッセイした。抗PD-1抗体を発現するハイブリドーマクローンを、さらなる分析のために選択した。
本明細書に提示された研究において使用された抗体の配列を、以下に示す：
Figure 2022064924000597
Figure 2022064924000598
Figure 2022064924000599
Figure 2022064924000600
Figure 2022064924000601
マウス抗体m136-M13、m136-M19、m245-M3、m245-M5、およびm136-M14のヒトPD-1との結合を、ELISAによって確認した（図1）。簡単に説明すると、ヒトPD-1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製された抗PD-1抗体を、段階希釈してプレートに適用し、結合させた。プレートを、PBST（PBS, pH 7.2＋0.05％Tween-20）によって洗浄した。結合した抗体を、抗マウスIgG-HRPコンジュゲート（Sigma, St Louis, MO）によって検出し、発色性基質TMB（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成し、データを単一部位飽和結合のモデルに適合させた。抗PD-1抗体ニボルマブ（NV1）および/またはペムブロリズマブ（PM1）を、検出のためのFAb特異的抗ヒトIgG-HRPコンジュゲート（Sigma, St Louis, MO）と共に、結合アッセイにおける陽性対照として使用した。試験された各抗体についてのKdを以下の表10に示す。
（表１０）試験された抗体についてのKd値：
Figure 2022064924000602
マウス抗体m136-M13、m136-M19、m245-M3、m245-M5、およびm136-M14のヒトPD-1との結合は、阻害ELISAアッセイにおいて、PD-1のPDL1およびPDL2との結合を阻害した（図2～3）。阻害ELISAは以下のように実施された。ヒトPD-1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製された抗PD-1抗体を、2nMビオチン化PD-L1または2nMビオチン化PDL2の存在下で段階希釈してプレートに適用した。ビオチン化PD-L1およびビオチン化PD-L2の結合を、Pierce（商標）ストレプトアビジン-ポリHRPコンジュゲート（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって検出し、TMBによって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成し、データを単一部位競合結合のモデルに適合させ、IC50を決定した。M13抗体およびM14抗体についてのIC50値を以下の表11に示す。
（表１１）試験された抗体についてのIC50値
Figure 2022064924000603
実施例2. ヒト化抗PD-1抗体の作製および試験
本実施例は、ヒトPD-1に結合する本開示のマウス抗体を、PD-1との結合、ならびにPDL1およびPDL2のPD-1との結合の阻害を保持するヒト化IgG抗体へ変換することが可能であることを証明する。
実施例1に記載されるように作製されたマウス抗PD-1抗体の可変ドメインをヒト化し、全長hIgG4/h κ抗体として発現させた。一過性にトランスフェクトされたHEK-293細胞から、完全ヒトIgG抗PD-1抗体を発現させ、プロテインAクロマトグラフィによって培養上清から精製した。
本明細書に提示された研究において使用されたヒト化抗体の配列を、以下に示す：
Figure 2022064924000604
Figure 2022064924000605
Figure 2022064924000606
Figure 2022064924000607
Figure 2022064924000608
Figure 2022064924000609
Figure 2022064924000610
Figure 2022064924000611
Figure 2022064924000612
Figure 2022064924000613
これらの重鎖可変領域（VH）および軽鎖可変領域（VL）を、本開示の抗PD-1抗体を作製するため、多様な組み合わせで使用することができる。例えば、本明細書においてA1.0と呼ばれる抗体は、SEQ ID NO:21のVH配列とSEQ ID NO:39のVL配列とを含み、A1.5抗体は、SEQ ID NO:21のVH配列とSEQ ID NO:47のVL配列とを含み；本明細書においてC1.1と呼ばれる抗体は、SEQ ID NO:33のVH配列とSEQ ID NO:41のVL配列とを含む、等である。
図4～5に示されるように、ヒト化抗PD-1抗体は、標準的なELISAにおいて、ニボルマブおよび/またはペムブロリズマブと同様にhPD-1に結合し、ヒト化抗体の結合は、阻害ELISAにおいて、PD-1のPDL1およびPDL2との結合を阻害した（図6～9）。ELISAは以下のように実施された。hPD-1結合ELISAについては、ヒトPD-1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製された抗PD-1抗体を、段階希釈してプレートに適用し、結合させた。結合した抗体を、抗ヒトIgG-HRPコンジュゲート（FAb特異的）（Sigma, St Louis, MO）によって検出し、発色性基質TMB（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成し、データを単一部位飽和結合のモデルに適合させた。リガンド阻害ELISAについては、ヒトPD-1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製された抗PD-1抗体を、2nMビオチン化hPD-L1または2nMビオチン化hPD-L2の存在下で段階希釈してプレートに適用した。Pierce（商標）ストレプトアビジン-ポリHRPコンジュゲート（Thermo Scientific, Rockford, IL）、TMBによって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成し、データを単一部位競合結合のモデルに適合させ、IC50を決定した。
実施例3：抗PD-1抗体は結合の特異性を示す
実施例3は、プレートELISAによって、本開示のヒト化抗PD-1抗体群A1およびC1がhPD-1に特異的に結合することを示す。
本開示の抗PD-1抗体A1.5の結合は、多数のヒトタンパク質およびマウスタンパク質のパネルに対する標準的なELISAにおいて、hPD-1-Fcに高度に特異的であった（図10）。抗PD-1 A1.5の結合を、抗ヒトIgG-HRPコンジュゲート（FAb特異的）（Sigma, St Louis, MO）によって検出し、発色性基質TMB（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成し、データを単一部位飽和結合のモデルに適合させた。
実施例4：抗PD-1エピトープ結合
本実施例は、本開示のヒト化抗PD-1抗体、ニボルマブ、およびペムブロリズマブが結合するエピトープを比較する。
抗PD-1抗体ニボルマブおよびペムブロリズマブは、各々、ヒトPD-1に結合し、各々によるそのような結合は、PD-1のPDL1およびPDL2との結合を阻害する。本開示のヒト化抗体群A1およびC1のエピトープをマッピングするため、抗PD-1阻害ELISAを実施し、ニボルマブおよびペムブロリズマブによる阻害と比較した。ニボルマブ、ペムブロリズマブ、A1抗体、およびC1抗体の希釈系列を、hPD-1-Fc（R & D systems, Minneapolis, MN）による標準的なプレートELISAフォーマットで、0.3nMの濃度のビオチン化ニボルマブFAbまたはビオチン化ペムブロリズマブFAbの存在下でインキュベートした。ビオチン化FAbの結合を、Pierce（商標）ストレプトアビジン-ポリHRPコンジュゲート（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって検出し、TMB（Thermo Scientific, Rockford IL）および1N HClによって可視化した。本開示のA1群およびC1群に属する抗体は、ペムブロリズマブ抗体と同等に、かつニボルマブ抗体より完全に、ビオチン化ペムブロリズマブFAbのPD-1との結合をブロックした（図11A）。同一の本開示のA1抗体およびC1抗体は、ニボルマブ抗体と同等に、かつペムブロリズマブ抗体より完全に、ビオチン化ニボルマブの結合をブロックした（図11B）。図11Aおよび11Bのデータは、本開示のA1抗体およびC1抗体は、ニボルマブおよびペムブロリズマブの両方を完全にブロックするが、ニボルマブおよびペムブロリズマブの、互いに対するブロックは不完全であることを示している。
実施例5：抗PD-1 A1.5は、CMVによって刺激される、CMV陽性ドナー由来のPBMCによるサイトカイン分泌を増強する
本実施例においては、インターフェロンガンマ（IFN-ガンマ、IFNg、IFN-g、IFNγ、またはIFN-γ）サイトカイン分泌に対する本開示の抗PD-1抗体の効果を査定するため、CMV陽性ドナー由来の末梢血単核細胞を、CMVウイルス溶解物および本開示の抗PD-1抗体の存在下でインキュベートした。
CMV陽性ドナー由来のPBMC（Hemacare）を、CMVウイルス溶解物（Astarte）および本開示の抗PD-1抗体A1.5またはhIgG4アイソタイプ対照抗体のいずれかの存在下で、2×105細胞/ウェルで播種した。4日後に、上清を各ウェルから除去し、IFN-ガンマELISAキット（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用して、IFN-ガンマレベルをアッセイした（図12）。抗PD-1抗体A1.5は、対照hIgG4と比較して、抗PD-1抗体ニボルマブおよびペムブロリズマブと同等の効力で、CMVによって刺激されるIFN-ガンマ分泌を増加させた。
実施例6：抗PD-1抗体は高い親和性および遅い解離反応速度で単量体hPD-1と結合する
本実施例においては、本開示のヒト化抗PD-1抗体が、高い親和性および遅い解離で、単量体PD-1と結合することを示す。
活性化可能抗体は、単一に活性化して、1価の結合部分をもたらしてもよいし、または二重に活性化して、2価の結合部分をもたらしてもよい。異なるアビディティを有する抗体のシングルアーム活性化は、より高い1価の親和性を有する活性化可能抗体の結合および生物学的活性にとって有利であり得る。本開示の抗PD-1抗体A1.5およびBba2、ならびにニボルマブおよびペムブロリズマブを、Forte-Bio Octet BioLayer Inferometry（Pall ForteBio, Menlo Park, CA）センサー上に等しい密度で固定化し、溶液中のヒトPD-1-His（R & D systems, Minneapolis, MN）の段階希釈物と結合させた。動力学的分析を、ForteBio Data Analysisソフトウェアによって実施した。結果（図13）は、本開示のPD-1抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブと同等かまたはより高い親和性で、同等かまたはより遅い解離定数で、単量体PD-1と結合することを示す。
実施例7：活性化可能抗PD-1 M13/A1.4/A1.5抗体のマスキング部分
本実施例は、標的に対する本開示の抗PD-1抗体の結合を低下させるマスキング部分（MM）の同定を記載する。
2010年7月15日に公開されたPCT国際公開番号WO 2010/081173に記載されたものと類似の方法を使用して、ライブラリーをスクリーニングするため、抗PD-1抗体m136-M13、A1.4、およびA1.5を使用した。スクリーニングは、1回のMACS選別および5回のFACS選別からなっていた。最初のMACSのため、およそ2×1011個の細胞を100nMの濃度のm136-M13抗体と共にインキュベートし、6×106個の結合細胞をProtein-G Dynabeads（Invitrogen）を使用して収集した。FACSの反復は、以下のように、1～4回目のFACSについて、DyLight 650（Thermo-Fisher）によって標識されたm136-M19抗体によって細胞を標識して実施された：100nM 1回目FACS（F1）、10nM 2回目FACS（F2）、2nM 3回目FACS（F3）、および1nM 4回目FACS（F4）。各回で収集される蛍光によって査定される結合細胞の割合は、次第に小さくなった。5回目FACS（F5）については、1nM DyLight 650によって標識されたA1.5抗体によって、細胞を標識し、細胞の最も明るい0.2～4％を収集した。F3、F4、およびF5に由来する個々のペプチドクローンを、配列分析によって同定し、その後、DyLight-650 A1.4またはDyLight-650 A1.5と結合する能力について確証した。
抗PD-1 m136-M13、A1.4、およびA1.5のマスキング部分の配列を、表12に列挙する（マスキング部分PD001は、本開示においてPD01および/またはPD-01とも呼ばれ；マスキング部分PD002は、本明細書においてPD02および/またはPD-02とも呼ばれ、以下同様である）:
（表１２）マスキング部分
Figure 2022064924000614
Figure 2022064924000615
Figure 2022064924000616
Figure 2022064924000617
Figure 2022064924000618
Figure 2022064924000619
実施例8：活性化可能な抗PD-1 A1.4抗体およびA1.5抗体
本実施例は、本開示の活性化可能な抗PD-1 A1.4抗体およびA1.5抗体の例を記載する。
本開示の抗PD-1 M13マスキング部分と、切断可能部分と、抗PD-1 A1.4抗体とを含む活性化可能抗PD-1 A1.4抗体、および抗PD-1 M13または抗PD-1 A1.5のマスキング部分と、切断可能部分からなる群より選択される切断可能部分と、抗PD-1 A1.5抗体とを含む活性化可能抗PD-1 A1.5抗体を、PCT公開番号WO 2009/025846およびWO 2010/081173（これらの内容は、参照によってその全体が本明細書に組み入れられる）に記載されたものと類似の方法に従って作製した。いくつかの態様において、切断可能部分は、本明細書において「2001」と呼ばれ、配列
Figure 2022064924000620
を含む切断可能部分、および本明細書において「3001」と呼ばれ、配列
Figure 2022064924000621
を含む切断可能部分からなる群より選択される。本開示の数種類の活性化可能抗PD-1抗体可変ドメインのアミノ酸配列および核酸配列を、以下に提供する。抗体は、単一アミノ酸置換S228P（Angal, et al. 1993. Mol Immunol 30:105-8）HCおよびhK LCフォーマットを含有しているhIgG4として作製された。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列も含む。いくつかの態様において、スペーサーは、活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、スペーサーは、N末端からC末端に向かって、スペーサー-MM-CM-ABという構造的配置で活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、活性化可能抗体のMMのN末端へ直接接合されるスペーサーは、
Figure 2022064924000622
からなる群より選択される。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000623
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000624
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000625
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000626
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000627
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000628
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸残基Qを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列を含まない。
以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、
Figure 2022064924000629
からなる群より選択されるスペーサー配列のような任意の適当なスペーサー配列を含んでいてよいことを、当業者は認識する。スペーサーのさらなる例には、
Figure 2022064924000630
が含まれる。以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、いくつかの態様において、スペーサー配列を含まないことも、当業者は認識するであろう。
活性化可能抗PD-1の可変ドメイン：
Figure 2022064924000631
Figure 2022064924000632
Figure 2022064924000633
Figure 2022064924000634
Figure 2022064924000635
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Figure 2022064924000639
Figure 2022064924000640
Figure 2022064924000641
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Figure 2022064924000643
Figure 2022064924000644
Figure 2022064924000645
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Figure 2022064924000649
Figure 2022064924000650
Figure 2022064924000651
Figure 2022064924000652
Figure 2022064924000653
Figure 2022064924000654
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Figure 2022064924000656
Figure 2022064924000657
Figure 2022064924000658
Figure 2022064924000659
Figure 2022064924000660
実施例9：本開示の抗PD-1活性化可能抗体
本実施例は、本開示の抗PD-1活性化可能抗体を、MMドメイン、CMドメイン、VLドメイン、およびVHドメインの多様な組み合わせで、ならびに多様な別個のIgアイソタイプで作製することもできることを証明する。さらに、本実施例は、本開示の抗PD-1活性化可能抗体を、MMドメイン、CMドメイン、VLCDR1ドメイン、VLCDR2ドメイン、VLCDR3ドメイン、VHCDR1ドメイン、VHCDR2ドメイン、およびVHCDR3ドメインの多様な組み合わせで、ならびに多様な別個のIgアイソタイプで作製することもできることを証明する。
（表１３Ａ）
Figure 2022064924000661
Figure 2022064924000662
Figure 2022064924000663
Figure 2022064924000664
Figure 2022064924000665
Figure 2022064924000666
Figure 2022064924000667
Figure 2022064924000668
Figure 2022064924000669
Figure 2022064924000670
Figure 2022064924000671
Figure 2022064924000672
（表１３Ｂ）
Figure 2022064924000673
Figure 2022064924000674
Figure 2022064924000675
Figure 2022064924000676
Figure 2022064924000677
Figure 2022064924000678
Figure 2022064924000679
Figure 2022064924000680
Figure 2022064924000681
（表１３Ｃ）
Figure 2022064924000682
Figure 2022064924000683
Figure 2022064924000684
Figure 2022064924000685
Figure 2022064924000686
Figure 2022064924000687
Figure 2022064924000688
Figure 2022064924000689
Figure 2022064924000690
（表１３Ｄ）
Figure 2022064924000691
Figure 2022064924000692
Figure 2022064924000693
Figure 2022064924000694
Figure 2022064924000695
Figure 2022064924000696
Figure 2022064924000697
Figure 2022064924000698
Figure 2022064924000699
Figure 2022064924000700
Figure 2022064924000701
Figure 2022064924000702
表13A、13B、13C、および/または13Dに記載された組み合わせのいずれかを、ヒト免疫グロブリン定常領域と組み合わせて、IgG1、IgG2、IgG4を含む完全ヒト化IgGをもたらすこともできるし、または変異型定常領域と組み合わせて、IgG1 N297A、IgG1 N297Q、もしくはIgG4 S228Pのような変更された機能を有するヒトIgGをもたらすこともできる。さらなる例は当業者に公知である。少なくとも1個のアミノ酸における変異が低下したFc機能に至るIg重鎖定常領域アミノ酸の例には、重鎖定常領域のアミノ酸228、233、234、235、236、237、239、252、254、256、265、270、297、318、320、322、327、329、330、および331における変異が含まれるが、これらに限定されるわけではない。以下に限定されるわけではないが、L234F、L235E、およびP331Sのようなアミノ酸234、235、および331における変異の組み合わせ、またはE318A、K320A、およびK322Aのようなアミノ酸318、320、および322の組み合わせのような、変異型アミノ酸の組み合わせの例も、当技術分野において公知である。
一例として、SEQ ID NO:66を含むマスキング部分を、SEQ ID NO:294を含む基質、およびSEQ ID NO:61を含むヒトκ定常ドメインと組み合わせられたSEQ ID NO:39を含むVL領域と組み合わせて、SEQ ID NO:380を含む軽鎖を作製することができる。いくつかの態様において、例えば、SEQ ID NO:21を含むVH領域を、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインと組み合わせて、IgG1重鎖（SEQ ID NO:2048）、IgG4重鎖（SEQ ID NO:2051）、IgG4 S228P重鎖（SEQ ID NO:2047）、変異型IgG1 N297A重鎖（SEQ ID NO:2049）、または変異型IgG1 N297Q重鎖（SEQ ID NO:2050）を与えることができる。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2048との同時発現は、IgG1抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2051との同時発現は、IgG4抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2047との同時発現は、IgG4S228P抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2049との同時発現は、IgG1 N297A抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2050との同時発現は、IgG1 N297Q抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。
いくつかの態様において、SEQ ID NO:99を含むマスキング部分を、SEQ ID NO:214を含む基質、およびSEQ ID NO:61を含むヒトκ定常ドメインと組み合わせられたSEQ ID NO:47を含むVL領域と組み合わせて、SEQ ID NO:2055を含む軽鎖を作製することができる。いくつかの態様において、スペーサー
Figure 2022064924000703
が、SEQ ID NO:2055のN末端に付加され、SEQ ID NO:2054が形成される。いくつかの態様において、SEQ ID NO:99を含むマスキング部分が、SEQ ID NO:1100を含む基質、およびSEQ ID NO:61を含むヒトκ定常ドメインと組み合わせられたSEQ ID NO:47を含むVL領域と組み合わせられ、SEQ ID NO:2057を含む軽鎖が作製される。いくつかの態様において、スペーサー
Figure 2022064924000704
が、SEQ ID NO:2057のN末端に付加され、SEQ ID NO:2056が形成される。いくつかの態様において、SEQ ID NO:99を含むマスキング部分が、SEQ ID NO:1101を含む基質、およびSEQ ID NO:61を含むヒトκ定常ドメインと組み合わせられたSEQ ID NO:47を含むVL領域と組み合わせられ、SEQ ID NO:2059を含む軽鎖が作製される。いくつかの態様において、スペーサー
Figure 2022064924000705
が、SEQ ID NO:2059のN末端に付加され、SEQ ID NO:2058が形成される。いくつかの態様において、SEQ ID NO:21を含むVH領域が、SEQ ID NO:63を含むIgG4 S228Pヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインと組み合わせられ、SEQ ID NO:2052を含む重鎖が作製されてもよい。いくつかの態様において、SEQ ID NO:2052のC末端リジンが欠失し、SEQ ID NO:2053を有するアミノ酸配列が形成される。これらの軽鎖のいずれか1つの、これらの重鎖のいずれか1つとの同時発現は、本態様の活性化可能抗体の作製に至るであろう。
定常領域アミノ酸配列を、以下にSEQ ID NO:381、382、383、および1807で示す。
Figure 2022064924000706
Figure 2022064924000707
Figure 2022064924000708
Figure 2022064924000709
Figure 2022064924000710
Figure 2022064924000711
実施例10：マスキング部分の効率の評価
本実施例は、hPD-1に対する低下した結合を有する本開示の活性化可能抗PD-1抗体を記載する。
抗体の抗原と結合する能力のマスキングは、結合の阻害の一例である。阻害の程度は、抗原に対する抗体の親和性、抗体に対する（本明細書においてマスクとも呼ばれる）マスキング部分の親和性、および全ての反応物の濃度に依存する。活性化可能抗体の情況において、連結されたペプチドマスク（阻害剤）の局所濃度は極めて高く、およそ10mMであり、従って、中程度の親和性のペプチドが、活性化可能抗体の抗原結合を効果的にマスクするであろう。
標準的なプレートELISAによって、マスキング効率を評価した。簡単に説明すると、ヒトPD-1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製された抗PD-1抗体および活性化可能抗体を、段階希釈してプレートに適用し、結合させた。結合した抗体および活性化可能抗体を、FAb特異的抗ヒトIgG-HRPコンジュゲート（Sigma, St Louis, MO）によって検出し、発色性基質TMB（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって可視化した。抗PD-1 A1.4活性化可能抗体および抗PD-1 A1.5活性化可能抗体についての結合等温線のプロットが示される（図14～18）。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成し；データを単一部位飽和結合のモデルに適合させ、平衡解離定数Kdを決定した。活性化可能抗体の結合についてのKdを親抗体のKdで割ることによって、マスキング効率を計算した。試験された抗体についてのマスキング効率（ME）値を、以下の表14および表15に示し（マスキング部分PD001は、本明細書においてPD01および/またはPD-01とも呼ばれ；マスキング部分PD002は、本明細書においてPD02および/またはPD-02とも呼ばれ、以下同様である）、試験された活性化可能抗体についての見かけのKd（nM）およびマスキング効率（ME）値を、表26に示す。
（表１４）図14において試験された活性化可能抗体についてのマスキング効率値
Figure 2022064924000712
（表１５）図18において試験された活性化可能抗体についてのマスキング効率値
Figure 2022064924000713
（表２６）図15において試験された活性化可能抗体について見かけのKdおよびマスキング効率値
Figure 2022064924000714
実施例11：本態様の抗PD-1活性化可能抗体はヒトT細胞再刺激アッセイにおいて機能的にマスクされる
本実施例は、抗PD-1抗体の生物学的機能に対するマスキング部分の効果を記載する（図19）。
CMV陽性ドナー由来のPBMC（Hemacare）を、CMVウイルス溶解物（Astarte）と、抗PD-1抗体A1.5（本開示の抗PD-1活性化可能抗体）またはhIgG4アイソタイプ対照抗体のいずれかの存在下で、2×105細胞/ウェルで播種した。4日後に、上清を各ウェルから除去し、IFN-ガンマレベルを、IFN-ガンマELISAキット（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用してアッセイした。抗PD-1 A1.5活性化可能抗体は、CMVによって刺激されるIFN-ガンマ分泌を、対照hIgG4と比較して増加させたが、抗PD-1 A1.5親抗体と比べて減少した効力を有していた（図19）。
実施例12：抗マウスPD-1 J43v2 mIgG2a抗体はマウスPD-1と結合して、マウスPD-L1およびマウスPD-L2の結合をブロックする
本実施例は、アルメニアンハムスター抗マウスPD-1 J43抗体（US 7,858,746；Agata et al, 1996, International Immunology, Vol.8 No.5 pp765-77）を、マウスIgG2a抗体として機能的に発現させることが可能であることを証明する。
抗マウスPD-1抗体J43を、アミノ酸SEQ ID NO:546、ヌクレオチド配列SEQ ID NO:547をもたらす、重鎖可変ドメインのmIgG2aとの融合によって、ハムスターLC（SEQ ID NO:543のアミノ酸；SEQ ID NO:544またはSEQ ID NO:545のヌクレオチド）、マウスIgG2a抗体として再フォーマットした。（J43v2、J43 m2a、およびJ43v2 m2aとも呼ばれる）全長J43v2 mIgG2aを、HEK293細胞の一過性トランスフェクションによって発現させ、Protein Gクロマトグラフィによって培養上清から精製した。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:543を含む軽鎖を含む抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:546を含む重鎖を含む抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:543を含む軽鎖、およびアミノ酸配列SEQ ID NO:546を含む重鎖を含む抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:543を含む軽鎖、およびアミノ酸配列SEQ ID NO:546を含む重鎖を含む抗体のCDRを含む抗体である。
J43v2 m2aを、マウスPD-1を発現するHEK293細胞と結合させ、J43v2 m2aのHEK293-mPD-1との結合が、ビオチン化mPD-L1およびビオチン化mPD-L2のHEK293-mPD-1との結合を阻害することを確認することによって、機能性をアッセイした（図20）。約100,000個のmPD-1 HEK293細胞をU底96穴プレートへ移した。結合実験については、1:4漸増量（titration）の150nMから出発するJ43v2 m2a抗体を細胞へ添加した。ブロック実験については、20nMのビオチン化mPD-L1-Fcまたは20nMのビオチン化mPD-L2-Fcを、1:4漸増量の150nMから出発するJ43v2 m2aと予め混合して、細胞へ添加した。両方とも、氷上で1時間インキュベートし、細胞を3回洗浄した。J43v2 m2a抗体の結合を、抗マウス二次抗体（Jackson Immunoresearch, West Grove, PA）を使用して検出した。ブロック実験については、ストレプトアビジン-PE（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用して、ビオチン化PD-L1またはビオチン化PD-L2を検出した。結合およびブロックの両方を、氷上で30分間インキュベートし、洗浄し、フローサイトメーター（MACSQuant）で読み取った。
実施例13：J43v2 m2aはNODマウスモデルにおいて糖尿病を誘導する
本実施例においては、抗PD-1 J43v2 m2a抗体がNODマウスモデルにおいて糖尿病を誘導することを確認した。
以下のように、抗体J43v2 m2aがNODマウスにおいて糖尿病を誘導することを確認した。NODマウス亜型NOD/ShiLtJを、8週目にJackson Laboratoryから入手し、2週間、環境に馴化させた。10週目に、マウスを、登録前の糖尿病についてチェックし、グループ化し、表16に示されるように投与した。図21は、NODマウスにおける糖尿病のJ43v2 m2aによる用量依存性の誘導を示す。単回投与後8日目に、mIgG2aアイソタイプ対照群のマウスは、100％、非糖尿病のままであったが、20mg/kg群、3mg/kg群、および1mg/kg群で非糖尿病のままであるのは、それぞれ0％、14％、および86％であった。
（表１６）研究設計
Figure 2022064924000715
実施例14：活性化可能抗マウスPD-1 J43のマスキング部分
本実施例は、標的に対する抗PD-1 J43抗体の結合を低下させるマスキング部分（MM）の同定を記載する。
2010年7月15日に公開されたPCT国際公開番号WO 2010/081173に記載されたものと類似の方法を使用して、ライブラリーをスクリーニングするため、抗PD-1 J43v2 mIgG2aを使用した。スクリーニングは、1回のMACS選別および3回のFACS選別からなっていた。最初のMACSのため、およそ1×1012個の細胞を200nMの濃度のJ43v2 m2a抗体と共にインキュベートし、およそ9×107個の結合細胞をProtein-G Dynabeads（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用して収集した。FACSの繰り返しは、DyLight 650（Thermo-Fisher）によって標識されたJ43v2 m2a抗体によって細胞を標識し、以下のように、最も強い蛍光を有する細胞を収集して実施された：1回目のFACS（F1）については、200nM J43-650によって最も明るい3％を収集、2回目のFACS（F2）については、20nM J43-650によって最も明るい8％を収集、3回目のFACS（F3-20およびF3-0.5）については、1nM J43-650によって2個の集団、最も明るい20％および最も明るい0.5％を収集。F2、F3-20、およびF3-0.5からの個々のペプチドクローンを、配列分析によって同定し（表17）、その後、選択されたペプチドクローンMP001～MP014を、J43-650と結合する能力について確証した（マスキング部分MP001は、本明細書においてMP01および/またはMP-01とも呼ばれ；マスキング部分MP002は、本明細書においてMP02および/またはMP-02とも呼ばれ、以下同様である）。
（表１７）マスキング部分の配列
Figure 2022064924000716
Figure 2022064924000717
Figure 2022064924000718
Figure 2022064924000719
Figure 2022064924000720
実施例15：活性化可能抗マウスPD-1抗体の特性評価
本実施例は、親抗体による結合と比較して低下したhPD-1との結合を有する本開示の活性化可能抗PD-1抗体を記載する。
マスキング効率を、標準的なプレートELISAによって評価した。簡単に説明すると、マウスPD-1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製されたJ43v2、および示されたマスクと切断可能部分2001と抗体J43v2とを含む活性化可能J43v2抗体を、段階希釈してプレートへ適用し、結合させた。結合した抗体および活性化可能抗体を、抗マウスIgG-HRPコンジュゲート（Sigma, St Louis, MO）によって検出し、発色性基質TMB（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成した。全ての活性化可能J43抗体が、親J43と比較して強く減少した結合を示した（図22）。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列も含む。いくつかの態様において、スペーサーは、活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、スペーサーは、N末端からC末端に向かって、スペーサー-MM-CM-ABという構造的配置で活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、活性化可能抗体のMMのN末端へ直接接合されるスペーサーは、
Figure 2022064924000721
からなる群より選択される。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000722
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000723
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000724
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000725
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000726
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000727
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸残基Qを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列を含まない。
スペーサーのさらなる例には、
Figure 2022064924000728
が含まれる。
以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、
Figure 2022064924000729
からなる群より選択されるスペーサー配列のような任意の適当なスペーサー配列を含んでいてよいことを、当業者は認識する。スペーサーのさらなる例には、
Figure 2022064924000730
が含まれる。以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、いくつかの態様において、スペーサー配列を含まないことも、当業者は認識するであろう。

活性化可能抗マウスPD-1軽鎖可変ドメイン
Figure 2022064924000731
Figure 2022064924000732
Figure 2022064924000733
Figure 2022064924000734
Figure 2022064924000735
Figure 2022064924000736
Figure 2022064924000737
Figure 2022064924000738
Figure 2022064924000739
Figure 2022064924000740
Figure 2022064924000741

再フォーマットした抗マウスPD-1重鎖および軽鎖：
Figure 2022064924000742
Figure 2022064924000743
Figure 2022064924000744
実施例16：様々なマスキング効率を有する活性化可能抗mPD-1抗体
本実施例は、マスキング部分切断および単一アミノ酸置換による抗mPD-1抗体マスキング効率の調節を記載する。
マスキング部分切断または1個もしくは複数個のMM残基のアミノ酸置換によって、活性化可能抗mPD-1抗体のファミリーを生成するために、4種類のJ43活性化可能抗体を選択した。表18は設計されたMMを列挙する。設計されたMMと2001基質とを含む活性化可能J43v2抗体を、30mL HEK293細胞のトランスフェクションによって作製し、選択された活性化可能抗体（配列 MP切断ELISA活性化可能抗体LC）を、実施例15に記載されたELISAによって、マスキングについて評価した（図23）。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列も含む。いくつかの態様において、スペーサーは、活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、スペーサーは、N末端からC末端に向かって、スペーサー-MM-CM-ABという構造的配置で活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、活性化可能抗体のMMのN末端へ直接接合されるスペーサーは、
Figure 2022064924000745
からなる群より選択される。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000746
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000747
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000748
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000749
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000750
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000751
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸残基Qを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列を含まない。
以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、
Figure 2022064924000752
からなる群より選択されるスペーサー配列のような、任意の適当なスペーサー配列を含んでいてよいことを、当業者は認識する。以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、いくつかの態様において、スペーサー配列を含まないことも、当業者は認識するであろう。
（表１８）マスキング部分の配列
Figure 2022064924000753
Figure 2022064924000754
Figure 2022064924000755

MP切断ELISA活性化可能抗体LC：
Figure 2022064924000756
Figure 2022064924000757
Figure 2022064924000758
Figure 2022064924000759
Figure 2022064924000760
Figure 2022064924000761
Figure 2022064924000762
実施例17：活性化可能抗マウスPD-1 J43抗体はNODマウスにおいて糖尿病の発生率を低下させる
本実施例においては、NODマウスにおいて抗PD-1による糖尿病の誘導から保護する能力について、抗PD-1 J43活性化可能抗体を分析した。NODマウス亜型NOD/ShiLtJを、8週目にJackson Laboratoryから入手し、2週間、環境に馴化させた。10週目に、マウスを登録前の糖尿病についてチェックし、グループ化し、表4に示されるように投与した。
（表４）投与計画
Figure 2022064924000763
投与後日数に対して非糖尿病(％)をプロットした図24は、抗PD-1 J43抗体が、投与量が増加するにつれ増加する頻度で、NODマウスにおいて糖尿病を誘導したことを示している。投与後14日目に、抗体処置群についての非糖尿病マウスの百分率は、20mg/kg投与群、3mg/kg投与群、および1mg/kg投与群について、それぞれ、14％、43％、および71％であった。活性化可能抗体J43 MP7-1 2001 m2aおよびJ43 MP8-2 2001 m2aは、親抗体に匹敵する頻度で糖尿病を誘導するには、増加した用量を必要とした。J43 MP7-1 2001 m2aの投与後14日目に、20mg/kg群の57％が非糖尿病のままであり、3mg/kgの全てが非糖尿病であった。J43 MP8-2 2001 m2aの投与後14日目に、20mg/kg群の71％および3mg/kg群の86％が非糖尿病のままであった。
実施例18：マスキング部分の効率の評価
本実施例は、hPD-1に対する低下した結合を示すさらなる活性化可能抗PD-1抗体を記載する。
抗PD1抗体A1.5ならびに多様なマスクおよび基質の組み合わせを含む本開示のさらなる活性化可能抗体の例を、本明細書に記載される技術を使用して作製した。本開示のこれらの活性化可能抗PD-1抗体可変ドメインのアミノ酸配列および核酸配列を、以下に提供する。抗体は、単一アミノ酸置換S228P（Angal, et al. 1993. Mol Immunol 30:105-8）HCおよびhK LCフォーマットを含有しているhIgG4として作製された。
これらの活性化可能抗体のうちの数種類の抗体のマスキング効率を、本明細書に記載されるように決定した。結果を図25Aおよび25Bに示す。
いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列も含む。いくつかの態様において、スペーサーは、活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、スペーサーは、N末端からC末端に向かって、スペーサー-MM-CM-ABという構造的配置で活性化可能抗体のMMへ直接接合される。いくつかの態様において、活性化可能抗体のMMのN末端へ直接接合されるスペーサーは、
Figure 2022064924000764
からなる群より選択される。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000765
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000766
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000767
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000768
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000769
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列
Figure 2022064924000770
を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくともアミノ酸残基Qを含む。いくつかの態様において、活性化可能抗体は、スペーサー配列を含まない。スペーサーのさらなる例には、
Figure 2022064924000771
が含まれる。
以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、例えば、
Figure 2022064924000772
からなる群より選択されるスペーサー配列のような任意の適当なスペーサー配列を含んでいてよいことを、当業者は認識する。スペーサーのさらなる例には、
Figure 2022064924000773
が含まれる。以下に示される配列は、SEQ ID NO:362のスペーサー配列を含むが、本開示の活性化可能抗PD-1抗体は、いくつかの態様において、スペーサー配列を含まないことも、当業者は認識するであろう。
Figure 2022064924000774
Figure 2022064924000775
Figure 2022064924000776
Figure 2022064924000777
Figure 2022064924000778
Figure 2022064924000779
Figure 2022064924000780
Figure 2022064924000781
Figure 2022064924000782
Figure 2022064924000783
Figure 2022064924000784
Figure 2022064924000785
実施例19：活性化可能抗PD1ニボルマブのマスキング部分
本実施例は、標的に対する抗PD1ニボルマブ抗体の結合を低下させるマスキング部分（MM）の同定を記載する。
2010年7月15日に公開されたPCT国際公開番号WO 2010/081173に記載されたものと類似の方法を使用して、ライブラリーをスクリーニングするため、抗PD1ニボルマブ（NV1）（例えば、US 8,008,449を参照すること）を使用した。スクリーニングは、1回のMACS選別および4回のFACS選別からなっていた。最初のMACSのため、およそ6×1011個の細胞を100nMの濃度のNV1抗体と共にインキュベートし、およそ3×107個の結合細胞をProtein-A Dynabeads（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用して収集した。FACSの繰り返しは、DyLight 650（Thermo-Fisher）によって標識されたNV1抗体によって細胞を標識し、以下のように、最も強い蛍光を有する細胞を収集して実施された：1回目のFACS（F1）については、20nM NV1-650によって最も明るい13％を収集、2回目のFACS（F2-1）については、2nM NV1-650によって最も明るい2％を収集、3回目のFACS（F3-1b）については、1nM NV1-650によって最も明るい1％を収集、4回目のFACS（F4-1b.1およびF4-1b.2）については、1nM NV1-650によって2個の集団、最も明るい88％および最も明るい1％を収集。F4-1b.1およびF4-1b.2からの個々のペプチドクローンを、配列分析によって同定し（表19）、その後、選択されたペプチドクローンNV01～NV12を、NV1と結合する能力について確証した（マスキング部分NV001は、本明細書においてNV01および/またはNV-01とも呼ばれ；マスキング部分NV002は、本明細書においてNV02および/またはNV-02とも呼ばれ、以下同様である）。
（表１９）
Figure 2022064924000786
Figure 2022064924000787
Figure 2022064924000788
Figure 2022064924000789
実施例20：活性化可能抗PD1ニボルマブ抗体
本実施例は、本開示の活性化可能抗PD1ニボルマブ抗体の例を記載する。
PCT公開番号WO 2009/025846およびWO 2010/081173に記載されたものと類似の方法に従って、本開示の抗PD1 NV1マスキング部分と切断可能部分と抗PD1 NV1抗体とを含む活性化可能抗PD1 NV1抗体を作製した。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:1346を含む重鎖を含む抗PD-1活性化可能抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:626を含む軽鎖を含む抗PD-1活性化可能抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:1346を含む重鎖とアミノ酸配列SEQ ID NO:626を含む軽鎖とを含む抗PD-1活性化可能抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:1346を含む重鎖とアミノ酸配列SEQ ID NO:626を含む軽鎖とを含む抗PD-1活性化可能抗体のCDRを含む抗PD-1活性化可能抗体である。
本開示の数種類の活性化可能抗PD1抗体可変ドメインのアミノ酸配列および核酸配列を、以下に提供する。抗体は、単一アミノ酸置換S228P（Angal, et al. 1993. Mol Immunol 30:105-8）HCおよびhK LCフォーマットを含有しているhIgG4として作製された。
Figure 2022064924000790
Figure 2022064924000791
Figure 2022064924000792
Figure 2022064924000793
Figure 2022064924000794
Figure 2022064924000795
Figure 2022064924000796
Figure 2022064924000797
Figure 2022064924000798
Figure 2022064924000799
Figure 2022064924000800
実施例21：活性化可能抗PD1 NV1抗体の特性評価
本実施例は、hPD1に対する低下した結合を有する活性化可能抗PD1 NV1抗体を記載する。
マスキング効率を、標準的なプレートELISAによって評価した。簡単に説明すると、ヒトPD1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製されたNV1および活性化可能NV1抗体を、段階希釈してプレートへ適用し、結合させた。結合した抗体および活性化可能抗体を、抗hu Fab-HRPコンジュゲート（Sigma, St Louis, MO）によって検出し、発色性基質TMB（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成した。図26に示されるように、全ての活性化可能NV1抗体が、親NV1と比較して減少した結合を示した。
実施例22：活性化可能抗PD1ペムブロリズマブのマスキング部分
本実施例は、標的に対する抗PD1ペムブロリズマブ抗体の結合を低下させるマスキング部分（MM）の同定を記載する。
2010年7月15日に公開されたPCT国際公開番号WO 2010/081173に記載されたものと類似の方法を使用して、ライブラリーをスクリーニングするため、抗PD1ペムブロリズマブ（PM1）（例えば、US 8,354,509を参照すること）を使用した。スクリーニングは、1回のMACS選別および3回のFACS選別からなっていた。最初のMACSのため、およそ1.6×1012個の細胞を200nMの濃度のPM1抗体と共にインキュベートし、およそ8×106個の結合細胞をProtein-A Dynabeads（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用して収集した。FACSの繰り返しは、DyLight 650（Thermo-Fisher）によって標識されたPM1抗体によって細胞を標識し、以下のように最も強い蛍光を有する細胞を収集して実施された：1回目のFACS（F1、5.6×105個）については100nM PM1-650によって最も明るい10％を収集、2回目のFACS（F2、1.4×104個）については10nM PM1-650によって最も明るい1.5％を収集、3回目のFACS（F3）については1nM PM1-650によってバックグラウンドを超える全ての結合細胞（4,000個）および上位0.2％（820個）を収集。2個のF3集団からの個々のペプチドクローンを、配列分析によって同定し（表20）、その後、選択されたペプチドクローンPM01～PM12を、PM1と結合する能力について確証した（マスキング部分PM001は、本明細書においてPM01および/またはPM-01とも呼ばれ；マスキング部分PM002は、本明細書においてPM02および/またはPM-02とも呼ばれ、以下同様である）。
（表２０）
Figure 2022064924000801
Figure 2022064924000802
Figure 2022064924000803
Figure 2022064924000804
実施例23：活性化可能抗PD1ペムブロリズマブ抗体
本実施例は、本開示の活性化可能抗PD1ペムブロリズマブ抗体の例を記載する。
本開示の抗PD1 PM1マスキング部分と切断可能部分と抗PD1 PM1抗体とを含む活性化可能抗PD1 PM1抗体を、PCT公開番号WO 2009/025846およびWO 2010/081173に記載されたものと類似の方法に従って作製した。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:1514を含む重鎖を含む抗PD-1活性化可能抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:638を含む軽鎖を含む抗PD-1活性化可能抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:1514を含む重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO:638を含む軽鎖とを含む抗PD-1活性化可能抗体である。本開示の一つの態様は、アミノ酸配列SEQ ID NO:1514を含む重鎖と、アミノ酸配列SEQ ID NO:638を含む軽鎖とを含む抗PD-1活性化可能抗体のCDRを含む抗PD-1活性化可能抗体である。
本開示の数種類の活性化可能抗PD1抗体可変ドメインのアミノ酸配列および核酸配列を、以下に提供する。抗体は、単一アミノ酸置換S228P（Angal, et al. 1993. Mol Immunol 30:105-8）HCおよびhK LCフォーマットを含有しているhIgG4として作製された。
Figure 2022064924000805
Figure 2022064924000806
Figure 2022064924000807
Figure 2022064924000808
Figure 2022064924000809
Figure 2022064924000810
Figure 2022064924000811
Figure 2022064924000812
Figure 2022064924000813
Figure 2022064924000814
実施例24：活性化可能抗PD1 PM1抗体の特性評価
本実施例は、hPD1に対する低下した結合を有する活性化可能抗PD1 PM1抗体を記載する。
マスキング効率を、標準的なプレートELISAによって評価した。簡単に説明すると、ヒトPD1-Fc（R and D systems, Minneapolis, MN）を、96穴ELISAプレートのウェルに吸着させた。精製されたPM1および活性化可能PM1抗体を、段階希釈してプレートへ適用し、結合させた。結合した抗体および活性化可能抗体を、抗hu Fab-HRPコンジュゲート（Sigma, St Louis, MO）によって検出し、発色性基質TMB（Thermo Scientific, Rockford, IL）によって可視化した。プロットをPrizm（Sigma Plot）で生成した。図27A、27B、および27Cに示されるように、全ての活性化可能PM1抗体が、親PM1と比較して減少した結合を示した。
実施例25：本開示の抗PD1活性化可能抗体の特性評価
A1.5（PD）抗体、NV1（NV）抗体、およびPM1（PM）抗体について同定された本開示の数種類のマスキング部分の結合特性を評価した。各マスク発見努力からの8個のペプチドクローンを、2mLディープウェルプレートにおいて、LB＋クロラムフェニコール＋0.2％グルコースにおいて、37℃、850rpmで一晩増殖させ、LB＋クロラムフェニコールで1:20希釈し、37℃、850rpmで105分増殖させた。35分間、0.04％アラビノースの添加によってペプチド発現を誘導し、クローンを、冷PBS＋0.5％BSA中の1nM A1.5-DyLight 650、1nM PM1-Dylight 650、および1nM NV1-Dylight 650によって染色した。クローンをペレット化し、染色溶液を除去し、細胞をPBS＋1％ホルムアルデヒドに再懸濁させた。Miltenyi Biotec, Inc.（San Diego, CA）によって製造されたMACSQuant Analyzer 10フローサイトメーターで、蛍光を測定した。図28に示されるように、マスキング部分は、それらが同定されたライブラリースクリーニングにおいて使用された抗PD1抗体と結合した。
実施例26：エフェクター陰性活性化可能抗体によるマスキング部分結合の評価
本実施例は、マウスPD-1に対する低下した結合を示すさらなる活性化可能抗PD-1 J43抗体を記載する。
IgG2aエフェクター陰性（EN）抗PD1抗体J43（J43 m2a EN）ならびに多様なマスクおよび基質の組み合わせを含む本開示のさらなる活性化可能抗体の例を、本明細書に記載される技術を使用して作製した。IgG2a EN抗体の定常領域のアミノ酸配列および核酸配列を、以下に提供する。このエフェクター陰性Fc領域をコードするプラスミドpFUSE-mIgG2Ae1-Fcは、InvivoGen, San Diego, CAから入手可能である。mIgG2aのFc領域は、FcRおよびC1qとの結合を低下させるため、以下のアミノ酸を変異させることによって改変されていた：L235EおよびE318A/K320A/K322A。
Figure 2022064924000815
Figure 2022064924000816
これらの活性化可能抗体のうちの数種類の抗体のマスキング効率を、本明細書に記載されるように決定した。結果は図29Aおよび図29Bに示される。
Figure 2022064924000817
Figure 2022064924000818
Figure 2022064924000819
Figure 2022064924000820
Figure 2022064924000821
Figure 2022064924000822
Figure 2022064924000823
実施例27：活性化可能抗マウスPD1 J43 m2a EN抗体はNODマウスにおいて糖尿病の発生率を低下させる
本実施例においては、抗PD1 J43 m2a EN（エフェクター陰性）活性化可能抗体を、NODマウスにおいてPD1 m2a ENによって媒介される糖尿病の誘導から保護する能力について分析した。
NODマウス亜型NOD/ShiLtJを、8週目にJackson Laboratoryから入手し、2週間、環境に馴化させた。10週目に、マウスを登録前の糖尿病についてチェックし、グループ化し、表21に示されるように投与した。
（表２１）
Figure 2022064924000824
投与後日数に対して非糖尿病(％)をプロットした図30は、抗PD-1 J43抗体が、投与量が増加するにつれ増加する頻度で、NODマウスにおいて糖尿病を誘導しことを示している。投与後11日目に、抗体処置群についての非糖尿病マウスの百分率は、10mg/kg投与群、3mg/kg投与群、および1mg/kg投与群について、それぞれ、29％、43％、および71％であった。活性化可能抗体J43 MP7-1 2001 m2a ENおよびJ43 MP8-2 2001 m2a ENは、親抗体に匹敵する頻度で糖尿病を誘導するには、増加した用量を必要とした。J43 MP7-1 2001 m2a ENの投与後11日目に、10mg/kg群の71％が非糖尿病のままであり、3mg/kgの86％が非糖尿病であった。J43 MP8-2 2001 m2a ENの投与後14日目に、10mg/kg群の86％および3mg/kg群の100％が非糖尿病のままであった。
実施例28. 活性化可能抗マウスPD1 J43 m2a EN抗体はMC38同系腫瘍モデルにおいて効力を示す
本実施例は、本態様の活性化可能抗体がMC38同系腫瘍の増殖を低下させることができることを証明する。
本実施例においては、抗PD1活性化可能抗体J43 MP7-1 2001 m2a ENおよびJ43 MP8-2 2001 m2a ENを、MC38同系腫瘍の増殖を低下させる能力について分析した。
マウス結腸癌細胞株MC38をATCCから入手した。MC38を、空気中5％CO2の雰囲気で、37℃で、10％ウシ胎仔血清が補足されたRPMI-1640において増殖させた。細胞を対数増殖期に採集し、適切な細胞濃度でPBSに再懸濁させ、腫瘍誘導のため氷上で維持した。
腫瘍発達のため、PBS中の1.5×106個のMC38細胞を、各マウスの右側腹部に皮下接種した。平均腫瘍サイズがおよそ80mm3（60～120mm3）に達した時、処置を開始した。週2回、ノギスを使用して、二次元で腫瘍サイズを測定し、式：V＝0.5a×b2（aおよびbは、それぞれ、腫瘍の長経および短径である）を使用して、体積をmm3で表した。
マウスをグループ化し、表22に示されるように投与した。
（表２２）
Figure 2022064924000825
初回投与後日数に対して腫瘍体積をプロットした図31Aおよび31Bは、抗PD1活性化可能抗体MP7-1 2001 m2a ENおよびMP8-2 2001 m2a ENが、単剤としても、抗CTLA4抗体9D9 mIgG2b（BioXCell, West Lebanon, NH）との組み合わせでも、陽性対照抗PD1抗体J43 m2a ENと同等に、MC38同系腫瘍の増殖を阻害することを証明している。
実施例29. 抗原リコールアッセイにおける抗ヒトPD1抗体および活性化可能抗ヒトPD1抗体の評価
本実施例は、本態様の抗PD1抗体および活性化された活性化可能抗PD1抗体（即ち、CMがプロテアーゼによって切断された活性化可能抗体）が、抗原リコールアッセイにおいて、PD-L1/PD-L2のPD1との結合をブロックし、T細胞を活性化することができることを証明する。
図32A～32Eに示されるように、本明細書においてA1.5 Abと呼ばれる抗ヒトPD1抗体（即ち、SEQ ID NO:21のVHおよびSEQ ID NO:47のVL）は、抗原リコールアッセイにおいて、PD1に対するPD-L1/PD-L2の結合をブロックし、T細胞を強力に活性化する。標準的なプレートELISAによって検出された抗ヒトPD-1 A1.5 Abの固定化ヒトPD1との結合は、図32Aに示され、ELISAによって検出されたA1.5 AbのカニクイザルPD1（本明細書においてcyno-PD1とも呼ばれる、Sino Biological、カタログ番号90311-C02H）との結合は、図32Bに示される。ELISAによって決定された、固定化PD1に対するビオチン化ヒトPD-L1（本明細書においてビオチン-PD-L1とも呼ばれる）のA1.5 Abによる阻害は、図32Cに示され、ELISAによって決定された、固定化PD1に対するビオチン化ヒトPD-L2（本明細書においてビオチン-PD-L2とも呼ばれる）の阻害は、図32Dに示される。
図32Eに示されるように、A1.5 Abは、CMV T細胞再刺激アッセイにおいてIFN-γ産生を増強する。簡単に説明すると、CMV＋ヒトPBMCを、アイソタイプ対照抗体またはA1.5 Abと共に、250,000細胞/ウェルで播種し、4日間、5μg/mL CMV溶解物によって刺激した。上清IFN-γレベルをELISAによって測定した。
図33Aおよび33Bに示されるように、本明細書においてA1.5 PD34 2001と呼ばれる活性化可能抗PD1抗体（即ち、SEQ ID NO:21のVH、SEQ ID NO:47のVL、SEQ ID NO:99のマスキング部分、およびSEQ ID NO:214の切断可能部分）は、親PD-1 Ab、即ち、A1.5 Abと比べて減少した親和性でヒトPD1と結合し（図33A）、A1.5 PD34 2001活性化可能抗体は、CMV T細胞抗原リコールアッセイにおいて機能的マスキングを示す（図33B）。簡単に説明すると、4mg/mLのA1.5 PD34 2001活性化可能抗体を、0μg/mLまたは60μg/mL組換えヒトウロキナーゼ（rh uPA, R&D、カタログ番号1310-SE）と組み合わせ、37℃で一晩インキュベートした。uPAと共にインキュベートされた活性化可能抗体のhPD1との結合を、標準的なプレートELISAによってアッセイした。図33に示されるように、本開示の活性化可能抗PD1抗体は、プロテアーゼによる活性化の後に、活性化された完全な結合を回復する。
実施例30. 非ヒト霊長類モデルにおける活性化可能抗ヒトPD1抗体の薬物動態学的評価
本実施例は、本態様の抗PD-1抗体および抗PD-1活性化可能抗体についての薬物動態学的データおよび用量比例性データを証明する。
簡単に説明すると、雌カニクイザル（n＝2/群）に、A1.5抗体または本明細書においてA1.5 PD34 2001と呼ばれる活性化可能抗体の1mg/kgまたは5mg/kgの単回IVボーラス用量を投与した。認定されている抗ヒトサンドイッチELISAによって、A1.5およびA1.5 PD34 2001の濃度について血漿試料を分析した。結果は、図34に示され、図中、各線は1個体を表す。A1.5およびA1.5 PD34 2001の両方について、平均PKパラメータを示す。類似の研究において、カニクイザルへ投与された活性化可能抗体A1.5 PD34 2012およびA1.5 PD34 2011についても、類似の結果が見られた。
実施例31. 活性化可能抗マウスPD-1 J43抗体は抗CTLA4抗体を投与されたNODマウスにおいて糖尿病の発生率を低下させる
本実施例においては、抗CTLA-4 9D9 mIgG2b抗体（BioXCell、カタログ番号BE0164）と同時に投与された時に、NODマウスにおいて抗PD-1による糖尿病の誘導から保護する能力について、抗PD-1 J43活性化可能抗体を分析した。NODマウス亜型NOD/ShiLtJを、4週目にJackson Laboratoryから入手し、1週間、環境に馴化させた。5週目に、マウスを登録前の糖尿病についてチェックし、グループ化し、表23に示されるように投与した。本明細書において使用されるように、「J43 m2a EN」（およびその変動）と呼ばれる抗体は、SEQ ID NO:546の重鎖（HC）；SEQ ID NO:543の軽鎖（LC）；およびSEQ ID NO:1516の定常領域を含む。本明細書において使用されるように、「J43 MP8-2 2012 m2a EN」と呼ばれる活性化可能抗体は、J43 m2a EN抗体とMP8-2マスキング部分（SEQ ID NO:549）と2012基質（SEQ ID NO:1101）とを含む活性化可能抗体であり、「J43 MP8-2 2001 m2a EN」と呼ばれる活性化可能抗体は、J43 m2a EN抗体とMP8-2マスキング部分（SEQ ID NO:549）と2001基質（SEQ ID NO:214）とを含む活性化可能抗体である。
（表２３）投与計画
Figure 2022064924000826
初回投与後日数に対して非糖尿病(％)をプロットした図35は、0日目、4日目、および7日目に投与された10mg/kg 抗PD-1 J43抗体＋10mg/kg 抗CTLA-4抗体の組み合わせは、11日目までにNODマウスの50％において糖尿病を誘導したが、活性化可能抗PD-1 J43抗体のCTLA-4抗体との同一の投与スケジュールは、18日目まで糖尿病の誘導をもたらさなかったことを示している。
実施例32. 活性化可能抗マウスPD1 J43 m2a EN抗体はMC38同系腫瘍モデルにおいて抗CTLA4抗体と同時投与された時に増強された効力を示す
本実施例は、本態様の活性化可能抗体が、単剤として、MC38同系腫瘍の増殖を低下させ、抗CTLA4抗体9D9 mIgG2bと同時投与された時、MC38腫瘍の退縮を誘導することができることを証明する。
本実施例においては、抗PD1活性化可能抗体J43 MP8-2 2011 m2a ENおよびJ43 MP8-2 2012 m2a ENを、MC38同系腫瘍の増殖を遅延させる能力、または抗CTLA4抗体との組み合わせで、MC38同系腫瘍の退縮を誘導する能力について分析した。本明細書において使用されるように、「J43 m2a EN」（およびその変動）と呼ばれる抗体は、SEQ ID NO:546の重鎖（HC）；SEQ ID NO:543の軽鎖（LC）；およびSEQ ID NO:1516の定常領域を含む。本明細書において使用されるように、「J43 MP8-2 2011 m2a EN」と呼ばれる活性化可能抗体は、J43 m2a EN抗体とMP8-2マスキング部分（SEQ ID NO:549）と2011基質（SEQ ID NO:1100）とを含む活性化可能抗体であり、「J43 MP8-2 2012 m2a EN」と呼ばれる活性化可能抗体は、J43 m2a EN抗体とMP8-2マスキング部分（SEQ ID NO:549）と2012基質（SEQ ID NO:1101）とを含む活性化可能抗体である。
マウス結腸癌細胞株MC38をATCCから入手した。MC38細胞を、空気中5％CO2の雰囲気において37℃で10％ウシ胎仔血清が補足されたRPMI-1640において増殖させた。細胞を対数増殖期に採集し、適切な細胞濃度でPBSに再懸濁させ、腫瘍誘導のため氷上で維持した。
腫瘍発達のため、PBS中の1.5×106個のMC38細胞を、各マウスの右側腹部に皮下接種した。平均腫瘍サイズがおよそ60mm3（45～80mm3）に達した時、処置を開始した。腫瘍サイズを、週2回、ノギスを使用して二次元で測定し、式：V＝0.5a×b2（aおよびbは、それぞれ、腫瘍の長経および短径である）を使用して、体積をmm3で表した。
マウスをグループ化し、表24に示されるように投与した。
（表２４）
Figure 2022064924000827
初回投与後日数に対して腫瘍体積をプロットした図36は、抗PD1活性化可能抗体MP8-2 2012 m2a ENおよびMP8-2 2011 m2a ENが、単剤としても、抗CTLA4抗体9D9 mIgG2b（BioXCell, West Lebanon, NH）との組み合わせでも、陽性対照抗PD1抗体J43 m2a ENと同等に、MC38同系腫瘍の増殖を阻害することを証明している。
実施例33. 活性化可能抗マウスPD1 J43 m2a EN抗体はMC38同系腫瘍モデルにおいて抗CTLA4抗体と同時投与された時に永続性の抗腫瘍活性を示す
本実施例は、抗CTLA4抗体と組み合わせられた本態様の抗PD-1活性化可能抗体が、MC38同系腫瘍モデルにおいて永続性の抗腫瘍完全応答を誘導することを証明する。
本実施例においては、持続性の腫瘍退縮を示した実施例28からの抗CTLA4剤および抗PD1剤の組み合わせ（（i）（図37において「抗PD-1 J43 m2aEN抗体」＋「抗CTLA4 9D9 mIgG2b抗体」と呼ばれる）抗PD-1 J43 m2aEN＋抗CTLA4 9D9 mIgG2b（n＝8）、（ii）（図37において「J43 MP8-2 2011 m2a EN AA」＋「抗CTLA4 9D9 mIgG2b抗体」（AAは活性化可能抗体を表す）と呼ばれる）活性化可能抗体抗PD-1 J43 MP8-2 2012 m2a EN＋抗CTLA4 9D9 mIgG2b（n＝8）、および（図37において「J43 MP8-2 2011 m2a EN AA」＋「抗CTLA4 9D9 mIgG2b抗体」（AAは活性化可能抗体を表す）と呼ばれる）活性化可能抗体抗PD-1 J43 MP8-2 2011 m2a EN＋抗CTLA4 9D9 mIgG2b（n＝6））によって処置された全ての動物に、38日目に、最初のMC38移植の反対の左側腹部において、1.5×106個のMC38腫瘍細胞を移植した。MC38細胞の腫瘍形成活性を確認するため、未処置の5匹のマウスに1.5×106個のMC38腫瘍細胞を移植した。
図37は、抗PD1剤および抗CTLA4剤の組み合わせによって予め処置されたマウスは、最初の腫瘍部位（右側腹部）の再増殖も、新しい腫瘍（左側腹部）の増殖も示さなかったが、未処置の対照マウスは、5匹全てが、急速な腫瘍増殖を示したことを示している。
実施例34. 活性化可能抗マウスPD-1 J43抗体は抗CTLA4抗体を同時投与されたNODマウスにおいて糖尿病の発生率を低下させる
本実施例は、抗CTLA4抗体と組み合わせられた本態様の抗PD-1活性化可能抗体が、PD1 m2a ENによって媒介される糖尿病の誘導からNODマウスを保護したことを証明する。
本実施例においては、抗CTLA-4 9D9 mIgG2b抗体（BioXcell、カタログ番号BE0164）と同時に投与された時に、NODマウスにおいて抗PD-1による糖尿病の誘導から保護する能力について、抗PD-1 J43活性化可能抗体MP8-2 2011 m2aENを分析した。NODマウス亜型NOD/ShiLtJを、4週目にJackson Laboratoryから入手し、1週間、環境に馴化させた。5週目に、マウスを登録前の糖尿病についてチェックし、グループ化し、表25に示されるように投与した。
（表２５）投与計画
Figure 2022064924000828
初回投与後日数に対して非糖尿病(％)をプロットした図38は、0日目、4日目、および7日目に投与された（図中、「抗PD1 J43 Ab」と呼ばれる）単剤抗PD-1 J43抗体および（図中、「抗PD1 J43 Ab」＋「抗CTLA4 9D9 mIgG2b」と呼ばれる）10mg/kg 抗PD-1 J43抗体＋10mg/kg 抗CTLA4抗体の組み合わせが、9日目までにNODマウスの25％において糖尿病を誘導したことを示している。対照的に、活性化可能抗体抗PD-1 J43 MP8-2 2011 m2a ENの同一の投与スケジュールは、（図中、「J43 MP8-2 2011 m2a EN AA」（AAは活性化可能抗体を表す）と呼ばれる）単剤としても、または（図中、「J43 MP08-2 2011 m2a EN AA」＋「抗CTLA4 9D9 mIgG2b」（AAは活性化可能抗体を表す）と呼ばれる）抗CTLA4抗体との組み合わせでも、15日目まで糖尿病の誘導をもたらさなかった。
実施例35. 本態様の抗PD-1ニボルマブ活性化可能抗体はヒトT細胞再刺激アッセイにおいて機能的にマスクされる
本実施例は、抗PD-1ニボルマブ抗体の生物学的機能に対するマスキング部分の効果を記載する。
CMV陽性ドナー由来のPBMC（Hemacare）を、CMVウイルス溶解物（Astarte）および抗PD-1抗体A1.5、抗PD-1活性化可能抗体A1.5 PD34 2001、抗PD-1抗体ニボルマブ（NV1）、抗PD-1ニボルマブ活性化可能抗体NV1 NV07 2001、またはhIgG4アイソタイプ対照抗体のいずれかの存在下で、2×105細胞/ウェルで播種した。4日後に、上清を各ウェルから除去し、IFN-ガンマレベルをIFN-ガンマELISAキット（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用してアッセイした。
図39は、（図中、「A1.5 PD34 2001 AA」（AAは活性化可能抗体を表す）と呼ばれる）抗PD-1活性化可能抗体A1.5 PD34 2001、および（図中、「NV1 NV07 2001 AA」（AAは活性化可能抗体を表す）と呼ばれる）抗PD1ニボルマブ活性化可能抗体NV1 NV07 2001は、（図中、hIgG4と呼ばれる）対照hIgG4抗体と比較して、CMVによって刺激されるIFN-ガンマ分泌を増加させたが、（図中、A1.5と呼ばれる）抗PD-1親抗体A1.5または（図中、NV1と呼ばれる）抗PD-1親抗体ニボルマブと比べて減少した効力を有していたことを証明している。
実施例36. 本態様の抗PD-1ペムブロリズマブ活性化可能抗体はヒトT細胞再刺激アッセイにおいて機能的にマスクされる
本実施例は、抗PD-1ペムブロリズマブ抗体の生物学的機能に対するマスキング部分の効果を記載する。
CMV陽性ドナー由来のPBMC（Hemacare）を、4ug/ml CMVウイルス溶解物（Astarte）および抗PD-1抗体A1.5、抗PD-1抗体ペムブロリズマブ（PM1）、抗PD-1ペムブロリズマブ活性化可能抗体PM1 PM07 2001、またはhIgG4アイソタイプ対照抗体のいずれかの存在下で、2×105細胞/ウェルで播種した。4日後に、上清を各ウェルから除去し、IFN-ガンマレベルをIFN-ガンマELISAキット（Life Technologies, Carlsbad, CA）を使用してアッセイした。
図40は、（図中、「PM1 PM07 2001 AA」（AAは活性化可能抗体を表す）と呼ばれる）抗PD1ペムブロリズマブ活性化可能抗体PM1 PM07 2001は、（図中、hIgG4と呼ばれる）対照hIgG4抗体と比較して、CMVによって刺激されるIFN-ガンマ分泌を増加させたが、（図中、A1.5と呼ばれる）抗PD-1親抗体A1.5または（図中、PM1と呼ばれる）抗PD-1親抗体ペムブロリズマブと比べて減少した効力を有していたことを証明している。
他の態様
本発明をその詳細な説明とともに説明してきたが、前述の説明は例示することを意図するものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではないことが意図される。他の局面、利点および修正は、以下の範囲内にある。
（表８）PD-1に結合する抗体および活性化可能抗体のCDR配列
Figure 2022064924000898
Figure 2022064924000899
（表９）PD-1に結合する抗体および活性化可能抗体の追加的なCDR配列
Figure 2022064924000900
Figure 2022064924000901
Figure 2022064924000902
Figure 2022064924000903
Figure 2022064924000904
Figure 2022064924000905
Figure 2022064924000906
（表１３Ａ）
Figure 2022064924000907
Figure 2022064924000908
Figure 2022064924000909
Figure 2022064924000910
Figure 2022064924000911
Figure 2022064924000912
Figure 2022064924000913
Figure 2022064924000914
Figure 2022064924000915
Figure 2022064924000916
Figure 2022064924000917
Figure 2022064924000918
（表１３Ｂ）
Figure 2022064924000919
Figure 2022064924000920
Figure 2022064924000921
Figure 2022064924000922
Figure 2022064924000923
Figure 2022064924000924
Figure 2022064924000925
Figure 2022064924000926
Figure 2022064924000927
（表１３Ｃ）
Figure 2022064924000928
Figure 2022064924000929
Figure 2022064924000930
Figure 2022064924000931
Figure 2022064924000932
Figure 2022064924000933
Figure 2022064924000934
Figure 2022064924000935
Figure 2022064924000936
（表１３Ｄ）
Figure 2022064924000937
Figure 2022064924000938
Figure 2022064924000939
Figure 2022064924000940
Figure 2022064924000941
Figure 2022064924000942
Figure 2022064924000943
Figure 2022064924000944
Figure 2022064924000945
Figure 2022064924000946
Figure 2022064924000947
Figure 2022064924000948
一例として、SEQ ID NO:66を含むマスキング部分を、SEQ ID NO:294を含む基質、およびSEQ ID NO:61を含むヒトκ定常ドメインと組み合わせられたSEQ ID NO:39を含むVL領域と組み合わせて、軽鎖を作製することができ、これは、リンカー領域を含んでも含まなくてもよい。そのようなものの一例はSEQ ID NO:380であるが、より長いリンカー配列を有する他の態様も意図される。いくつかの態様において、例えば、SEQ ID NO:21を含むVH領域を、ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインと組み合わせて、IgG1重鎖（SEQ ID NO:2048）、IgG4重鎖（SEQ ID NO:2051）、IgG4 S228P重鎖（SEQ ID NO:2047）、変異型IgG1 N297A重鎖（SEQ ID NO:2049）、または変異型IgG1 N297Q重鎖（SEQ ID NO:2050）を与えることができる。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2048との同時発現は、IgG1抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2051との同時発現は、IgG4抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2047との同時発現は、IgG4S228P抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2049との同時発現は、IgG1 N297A抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。SEQ ID NO:380のSEQ ID NO:2050との同時発現は、IgG1 N297Q抗PD-1活性化可能抗体を与えるであろう。
定常領域アミノ酸配列を、以下にSEQ ID NO:381、382、383、および1807で示す。
Figure 2022064924000949
Figure 2022064924000950
Figure 2022064924000951
Figure 2022064924000952
Figure 2022064924000953
Figure 2022064924000954
Figure 2022064924000955
Figure 2022064924000956

MP切断ELISA活性化可能抗体LC：
Figure 2022064924000957
Figure 2022064924000958
Figure 2022064924000959
Figure 2022064924000960
Figure 2022064924000961
Figure 2022064924000962
Figure 2022064924000963
本発明による薬学的組成物は本発明の抗体と担体を含んでもよい。これらの薬学的組成物は、例えば、診断キットなどのキットに含まれてもよい。
[本発明1001]
哺乳動物PD-1に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、該ABが、以下からなる群より選択される特徴のうちの1つまたは複数を有する、前記抗体またはその抗原結合断片(AB)：
(a) ABは、5 nM未満のEC 50 値で哺乳動物PDL1に対する哺乳動物PD-1の結合を阻害する;
(b) ABは、5 nM未満のEC 50 値で哺乳動物PDL2に対する哺乳動物PD-1の結合を阻害する; および
(c) ABは、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1に特異的に結合する。
[本発明1002]
活性化状態では、哺乳動物PD-1に特異的に結合する活性化可能抗体であって、以下を含む、前記活性化可能抗体：
哺乳動物PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB);
活性化可能抗体が非切断状態にある場合に哺乳動物PD-1に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM); および
ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、前記CM。
[本発明1003]
活性化状態では、
(a) 哺乳動物PD-1に特異的に結合する; かつ
(b) PD-1の天然リガンドが哺乳動物PD-1に結合するのを特異的にブロックする、
活性化可能抗体であって、
哺乳動物PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB);
活性化可能抗体が非切断状態にある場合に哺乳動物PD-1に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM); および
ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、前記CM
を含む、前記活性化可能抗体。
[本発明1004]
非切断状態では、
0.5 nM～1 nM、0.5 nM～2 nM、0.5 nM～5 nM、0.5 nM～10 nM、0.5 nM～15 nM、0.5 nM～20 nM、0.5 nM～25 nM、0.5 nM～50 nM、0.5 nM～75 nM、0.5 nM～100 nM、0.5 nM～150 nM、0.5 nM～200 nM、0.5 nM～300 nM、0.5 nM～400 nM、
1 nM～2 nM、1 nM～5 nM、1 nM～10 nM、1 nM～15 nM、1 nM～20 nM、1 nM～25 nM、1 nM～50 nM、1 nM～75 nM、1 nM～100 nM、1 nM～150 nM、1 nM～200 nM、1 nM～300 nM、1 nM～400 nM、
2 nM～5 nM、2 nM～10 nM、2 nM～15 nM、2 nM～20 nM、2 nM～25 nM、2 nM～50 nM、2 nM～75 nM、2 nM～100 nM、2 nM～150 nM、2 nM～200 nM、2 nM～300 nM、2 nM～400 nM、
5 nM～10 nM、5 nM～15 nM、5 nM～20 nM、5 nM～25 nM、5 nM～50 nM、5 nM～75 nM、5 nM～100 nM、5 nM～150 nM、5 nM～200 nM、5 nM～300 nM、5 nM～400 nM、
10 nM～15 nM、10 nM～20 nM、10 nM～25 nM、10 nM～50 nM、10 nM～75 nM、10 nM～100 nM、10 nM～150 nM、10 nM～200 nM、10 nM～300 nM、10 nM～400 nM、
15 nM～20 nM、15 nM～25 nM、15 nM～50 nM、15 nM～75 nM、15 nM～100 nM、15 nM～150 nM、15 nM～200 nM、15 nM～300 nM、15 nM～400 nM、
20 nM～25 nM、20 nM～50 nM、20 nM～75 nM、20 nM～100 nM、20 nM～150 nM、20 nM～200 nM、20 nM～300 nM、20 nM～400 nM、
25 nM～50 nM、25 nM～75 nM、25 nM～100 nM、25 nM～150 nM、25 nM～200 nM、25 nM～300 nM、25 nM～400 nM、
50 nM～75 nM、50 nM～100 nM、50 nM～150 nM、50 nM～200 nM、50 nM～300 nM、50 nM～400 nM、
75 nM～100 nM、75 nM～150 nM、75 nM～200 nM、75 nM～300 nM、75 nM～400 nM、
150 nM～200 nM、150 nM～300 nM、150 nM～400 nM、
200 nM～300 nM、200 nM～400 nM、または
300 nM～400 nM
の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する、本発明1002または1003の活性化可能抗体。
[本発明1005]
活性化状態では、
0.01 nM～5 nM、0.05 nM～5 nM、0.1 nM～5 nM、0.2 nM～5 nM、0.3 nM～5 nM、0.4 nM～5 nM、0.5 nM～5 nM、0.75 nM～5 nM、1 nM～5 nM、2 nM～5 nM、
0.01 nM～2 nM、0.05 nM～2 nM、0.1 nM～2 nM、0.2 nM～2 nM、0.3 nM～2 nM、0.4 nM～2 nM、0.5 nM～2 nM、0.75 nM～1 nM、1 nM～2 nM、
0.01 nM～1 nM、0.05 nM～1 nM、0.1 nM～1 nM、0.2 nM～1 nM、0.3 nM～1 nM、0.4 nM～1 nM、0.5 nM～1 nM、0.75 nM～1 nM、
0.01 nM～0.75 nM、0.05 nM～0.75 nM、0.1 nM～0.75 nM、0.2 nM～0.75 nM、0.3 nM～0.75 nM、0.4 nM～0.75 nM、0.5 nM～0.75 nM、
0.01 nM～0.5 nM、0.05 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.2 nM～0.5 nM、0.3 nM～0.5 nM、0.4 nM～0.5 nM、
0.01 nM～0.4 nM、0.05 nM～0.4 nM、0.1 nM～0.4 nM、0.2 nM～0.4 nM、0.3 nM～0.4 nM、
0.01 nM～0.3 nM、0.05 nM～0.3 nM、0.1 nM～0.3 nM、0.2 nM～0.3 nM、
0.01 nM～0.2 nM、0.05 nM～0.2 nM、0.1 nM～0.2 nM、
0.01 nM～0.1 nM、0.05 nM～0.1 nM、または
0.01 nM～0.05 nM
の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する、本発明1002～1004のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1006]
ABが、
0.01 nM～5 nM、0.05 nM～5 nM、0.1 nM～5 nM、0.2 nM～5 nM、0.3 nM～5 nM、0.4 nM～5 nM、0.5 nM～5 nM、0.75 nM～5 nM、1 nM～5 nM、2 nM～5 nM、
0.01 nM～2 nM、0.05 nM～2 nM、0.1 nM～2 nM、0.2 nM～2 nM、0.3 nM～2 nM、0.4 nM～2 nM、0.5 nM～2 nM、0.75 nM～1 nM、1 nM～2 nM、
0.01 nM～1 nM、0.05 nM～1 nM、0.1 nM～1 nM、0.2 nM～1 nM、0.3 nM～1 nM、0.4 nM～1 nM、0.5 nM～1 nM、0.75 nM～1 nM、
0.01 nM～0.75 nM、0.05 nM～0.75 nM、0.1 nM～0.75 nM、0.2 nM～0.75 nM、0.3 nM～0.75 nM、0.4 nM～0.75 nM、0.5 nM～0.75 nM、
0.01 nM～0.5 nM、0.05 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.2 nM～0.5 nM、0.3 nM～0.5 nM、0.4 nM～0.5 nM、
0.01 nM～0.4 nM、0.05 nM～0.4 nM、0.1 nM～0.4 nM、0.2 nM～0.4 nM、0.3 nM～0.4 nM、
0.01 nM～0.3 nM、0.05 nM～0.3 nM、0.1 nM～0.3 nM、0.2 nM～0.3 nM、
0.01 nM～0.2 nM、0.05 nM～0.2 nM、0.1 nM～0.2 nM、
0.01 nM～0.1 nM、0.05 nM～0.1 nM、または
0.01 nM～0.05 nM
の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する、本発明1001の抗体または本発明1002～1005のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1007]
哺乳動物PD-1が、ヒトPD-1、マウスPD-1、およびカニクイザルPD-1からなる群より選択される、本発明1001もしくは1006の抗体、または本発明1002～1006のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1008]
ABが1 nM未満の解離定数でヒトPD-1またはカニクイザルPD-1に特異的に結合する、本発明1001、1006もしくは1007のいずれかの抗体、または本発明1002～1007のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1009]
哺乳動物PD-1がヒトPD-1である、本発明1001および1006～1008のいずれかの抗体または本発明1002～1008のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1010]
ABが、以下からなる群より選択される特徴のうちの1つまたは複数を有する、本発明1001および1006～1009のいずれかの抗体、または本発明1002～1009のいずれかの活性化可能抗体：
(a) ABは、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1に特異的に結合する;
(b) ABは、ヒトPD-1に対するヒトPDL1およびヒトPDL2の結合を阻害する;
(c) ABは、カニクイザルPD-1に対するカニクイザルPDL1およびカニクイザルPDL2の結合を阻害する;
(d) ABは、マウスPD-1に特異的に結合する。
[本発明1011]
ABが、
0.1 nM～10 nM、0.1 nM～5 nM、0.1 nM～3 nM、0.1 nM～2 nM、0.1 nM～1 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.25 nM、
0.25 nM～10 nM、0.25 nM～5 nM、0.25 nM～3 nM、0.25 nM～2 nM、0.25 nM～1 nM、0.25 nM～0.5 nM、
0.5 nM～10 nM、0.5 nM～5 nM、0.5 nM～3 nM、0.5 nM～2 nM、0.5 nM～1 nM、
1 nM～10 nM、1 nM～5 nM、1 nM～3 nM、1 nM～2 nM、
2 nM～10 nM、2 nM～5 nM、2 nM～3 nM、
3 nM～10 nM、3 nM～5 nM、または
5 nM～10 nM
のEC 50 で、哺乳動物PDL1に結合する天然リガンドの能力をブロックする、本発明1001および1006～1010のいずれかの抗体または本発明1002～1010のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1012]
天然リガンドが哺乳動物PDL1または哺乳動物PDL2である、本発明1011の抗体または活性化可能抗体。
[本発明1013]
天然リガンドが、ヒトPDL1、ヒトPDL2、マウスPDL1、マウスPDL2、カニクイザルPDL1、およびカニクイザルPDL2からなる群より選択される、本発明1011の抗体または活性化可能抗体。
[本発明1014]
(a) ABは、非肥満糖尿病(NOD)マウスにおいて1型糖尿病を誘発する; および
(b) 活性化可能抗体は、非切断状態ではNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する、
本発明1002～1013のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1015]
3 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kgまたは10 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する、本発明1014の活性化可能抗体。
[本発明1016]
ABが、1 mg/kg～20 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kgまたは20 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する、本発明1015の活性化可能抗体。
[本発明1017]
(a) 活性化可能抗体は、非切断状態では非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超において1型糖尿病を誘発しない、および
(b) ABは、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、
本発明1002～1016のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1018]
NODマウス集団における各マウスへの、3 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kgまたは10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量の投与後に、該集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない、本発明1017の活性化可能抗体。
[本発明1019]
(a) 活性化可能抗体は、非切断状態では3 mg/kgの単回用量で投与された場合に非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない; および
(b) ABは、3 mg/kgの単回用量で投与された場合に、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、
本発明1018の活性化可能抗体。
[本発明1020]
(a) 活性化可能抗体は、非切断状態では10 mg/kgの単回用量で投与された場合に非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない; および
(b) ABは、10 mg/kgの単回用量で投与された場合に、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、
本発明1018の活性化可能抗体。
[本発明1021]
NODマウス集団における各マウスへの、3 mg/kg～20 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kgまたは20 mg/kgの投与量でのABの単回用量の投与後に、ABが、該集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、本発明1018の活性化可能抗体。
[本発明1022]
非切断状態では、抗CTLA4抗体を同時に投与した非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超において1型糖尿病を誘発しない、本発明1002～1016のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1023]
NODマウス集団が、10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量を各々投与される、本発明1022の活性化可能抗体。
[本発明1024]
NODマウス集団が、10 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量を各々投与される、本発明1022または1023の活性化可能抗体。
[本発明1025]
NODマウス集団が、10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量および10 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量を各々投与される、本発明1022～1024のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1026]
NODマウスが雌性NOD/ShiLtJマウス亜系である、本発明1014～1025のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1027]
NODマウス集団が、活性化可能抗体の最初の投与時に各々5週齢である、本発明1026の活性化可能抗体。
[本発明1028]
NODマウス集団が、活性化可能抗体の最初の投与時に各々10週齢である、本発明1026の活性化可能抗体。
[本発明1029]
ABが、
(a) SEQ ID NO: 653～657からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1);
(b) SEQ ID NO: 658～663からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2);
(c) SEQ ID NO: 664～668からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3);
(d) SEQ ID NO: 669～677からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1);
(e) SEQ ID NO: 678～682からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2); および
(f) SEQ ID NO: 683～687からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3)
を含む、本発明1001および1006～1013のいずれかの抗体または本発明1002～1028のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1030]
ABが、
Figure 2022064924000964
を含むVH CDR1配列;
Figure 2022064924000965
を含むVH CDR2配列;
Figure 2022064924000966
を含むVH CDR3配列;
Figure 2022064924000967
を含むVL CDR1配列;
Figure 2022064924000968
を含むVL CDR2配列; および
Figure 2022064924000969
を含むVL CDR3配列
を含む、本発明1001、1006～1013、および1029のいずれかの抗体または本発明1002～1029のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1031]
ABが、
Figure 2022064924000970
を含むVH CDR1配列;
Figure 2022064924000971
を含むVH CDR2配列;
Figure 2022064924000972
を含むVH CDR3配列;
Figure 2022064924000973
を含むVL CDR1配列;
Figure 2022064924000974
を含むVL CDR2配列; および
Figure 2022064924000975
を含むVL CDR3配列
を含む、本発明1001、1006～1013、1029、および1030のいずれかの抗体または本発明1002～1030のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1032]
ABが、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、37、2052、および2053からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖(VH)と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖(VL)とを含む、本発明1001、1006～1013、および1029～1031のいずれかの抗体または本発明1002～1031のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1033]
ABが、SEQ ID NO: 21、2052、および2053からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むVHと、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列を含むVLとを含む、本発明1001、1006～1013、および1029～1032のいずれかの抗体または本発明1002～1032のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1034]
ABが、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含むVHと、SEQ ID NO: 45のアミノ酸配列を含むVLとを含む、本発明1001、1006～1013、および1029～1033のいずれかの抗体または本発明1002～1033のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1035]
MMが、ABに対する結合について、PD-1に対するABの解離定数よりも大きい解離定数を有する、本発明1002～1034のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1036]
前記活性化可能抗体が切断状態にある場合、MMが、PD-1に対する結合についてABに干渉も競合もしない、本発明1002～1035のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1037]
MMが、40アミノ酸以下の長さのポリペプチドである、本発明1002～1036のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1038]
MMのポリペプチド配列がヒトPD-1のポリペプチド配列とは異なる、本発明1002～1037のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1039]
MMのポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、50%以下である、本発明1002～1038のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1040]
MMのポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、25%以下である、本発明1002～1039のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1041]
MMが、SEQ ID NO: 66～213、384～514、および548～571からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1040のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1042]
MMが、SEQ ID NO: 384～514および548～571からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1040のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1043]
MMが、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、および99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1040のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1044]
CMが、罹患組織において活性であるプロテアーゼの基質である、本発明1002～1043のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1045]
CMが、SEQ ID NO: 214、294-361、1092～1112、1157、1158、1161、1162、1165、1166、1169、1520、および1695～1704からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1044のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1046]
CMが、SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1044のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1047]
その抗原結合断片が、Fab断片、F(ab') 2 断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択される、本発明1001、1006～1013、および1029～1034のいずれかの抗体または本発明1002～1044のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1048]
ABがCMに連結されている、本発明1002～1047のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1049]
ABがCMに直接連結されている、本発明1048の活性化可能抗体。
[本発明1050]
ABが連結ペプチドを介してCMに連結されている、本発明1048の活性化可能抗体。
[本発明1051]
非切断状態では前記活性化可能抗体がN末端からC末端に向かってMM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含むように、MMがCMに連結されている、本発明1002～1050のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1052]
MMとCMとの間に連結ペプチドを含む、本発明1051の活性化可能抗体。
[本発明1053]
CMとABとの間に連結ペプチドを含む、本発明1051の活性化可能抗体。
[本発明1054]
前記活性化可能抗体が第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、かつ非切断状態では該活性化可能抗体がN末端からC末端に向かってMM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MMのような構造的配置を有する、本発明1051の活性化可能抗体。
[本発明1055]
2つの連結ペプチドが互いに同一である必要はない、本発明1055の活性化可能抗体。
[本発明1056]
LP1およびLP2の各々が、約1～20アミノ酸長のペプチドである、本発明1054または1055の活性化可能抗体。
[本発明1057]
SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、1028、1029、1041～1076、1138、1139、1143、1144、1147、1148、1151、1152、1155、1156、1159、1160、1163、1164、1167、1168、1170、1171、1174、1175、1178、1179、1182、1183、1186、1187、1190、1191、1194、1195、1198、1199、1202、1203、2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1058]
SEQ ID NO: 919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、1028、1041～1076、1138、1144、1148、1152、1156、1160、1164、1168、1170、1174、1178、1182、1186、1190、1194、1198、1202、2055、2057、および2059からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1059]
SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、1029、1139、1143、1147、1151、1155、1159、1163、1167、1171、1175、1179、1183、1187、1191、1195、1199、1203、2054、2056、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1002～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1060]
SEQ ID NO: 515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1030、1032、1034、1036、1039、1077～1090、1113～1120、1123、1124、1127、1128、1131、1132、1134、および1135のアミノ酸配列を含む、本発明1002～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1061]
SEQ ID NO: 999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1030、1032、1034、1036、1039、1070～1090、1119、1123、1127、1131、および1134のアミノ酸配列を含む、本発明1002～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1062]
SEQ ID NO: 515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、1120、1124、1128、1132、および1135のアミノ酸配列を含む、本発明1002～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1063]
ABが、
(i) SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列と、SEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列との組み合わせ、または
(ii) VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ
を含み、ここでVH CDR1配列が
Figure 2022064924000976
を含み; VH CDR2配列が
Figure 2022064924000977
を含み; VH CDR3配列が
Figure 2022064924000978
を含み; VL CDR1配列が
Figure 2022064924000979
を含み; VL CDR2配列が
Figure 2022064924000980
を含み; およびVL CDR3配列が
Figure 2022064924000981
を含む、
本発明1002～1028および1035～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1064]
MMが、SEQ ID NO: 1206～1295からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1063の活性化可能抗体。
[本発明1065]
ABが、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、本発明1063または1064の活性化可能抗体。
[本発明1066]
SEQ ID NO: 1296、1297、1300、1301、1304、1305、1308、1309、1312、1313、1316、1317、1320、1321、1324、1325、1328、1329、1332、1333、1336、1337、1340、および1341からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1063～1065のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1067]
SEQ ID NO: 1297、1301、1305、1309、1313、1317、1321、1325、1329、1333、1337、および1341からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1063～1066のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1068]
ABが、
(i) SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列と、SEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列との組み合わせ、または
(ii) VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ
を含み、ここでVH CDR1配列が
Figure 2022064924000982
を含み; VH CDR2配列が
Figure 2022064924000983
を含み; VH CDR3配列が
Figure 2022064924000984
を含み; VL CDR1配列が
Figure 2022064924000985
を含み; VL CDR2配列が
Figure 2022064924000986
を含み; およびVL CDR3配列が
Figure 2022064924000987
を含む、
本発明1002～1028および1035～1056のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1069]
MMが、SEQ ID NO: 1351～1465からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1068の活性化可能抗体。
[本発明1070]
ABが、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、本発明1068または1069の活性化可能抗体。
[本発明1071]
SEQ ID NO: 1466、1467、1470、1471、1474、1475、1478、1479、1482、1483、1486、1487、1490、1491、1494、1495、1498、1499、1502、1503、1506、1507、1510、および1511からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1069～1070のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1072]
SEQ ID NO: 1467、1471、1475、1479、1483、1487、1491、1495、1499、1503、1507、および1511からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1069～1070のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1073]
作用物質にコンジュゲートされた、本発明1001、1006～1013、1029～1034、および1047のいずれかの抗体または本発明1002～1072のいずれかの活性化可能抗体を含む、コンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
[本発明1074]
作用物質がリンカーを介して活性化可能抗体にコンジュゲートされている、本発明1073のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
[本発明1075]
リンカーが切断可能リンカーである、本発明1074のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
[本発明1076]
リンカーが非切断可能リンカーである、本発明1074のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
[本発明1077]
作用物質が検出可能部分である、本発明1073～1076のいずれかのコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
[本発明1078]
検出可能部分が診断用作用物質である、本発明1077のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
[本発明1079]
本発明1001、1006～1013、1029～1034、および1047のいずれかの抗体、本発明1002～1070のいずれかの活性化可能抗体、または本発明1073～1078のいずれかのコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体、ならびに担体を含む、薬学的組成物。
[本発明1080]
本発明1001、1006～1013、1029～1034、および1047のいずれかの抗体または本発明1002～1072のいずれかの活性化可能抗体を含む、薬学的組成物。
[本発明1081]
さらなる作用物質を含む、本発明1079の薬学的組成物。
[本発明1082]
さらなる作用物質を含む、本発明1080の薬学的組成物。
[本発明1083]
さらなる作用物質が治療用作用物質である、本発明1081の薬学的組成物。
[本発明1084]
さらなる作用物質が治療用作用物質である、本発明1082の薬学的組成物。
[本発明1085]
本発明1001、1006～1013、1029～1034、および1047のいずれかの抗体または本発明1002～1072のいずれかの活性化可能抗体をコードする、単離された核酸分子。
[本発明1086]
本発明1085の単離された核酸分子を含むベクター。
[本発明1087]
本発明1085の核酸分子を含む細胞を、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で培養することによって、活性化可能抗体を産生する方法。
[本発明1088]
(a) 本発明1002～1072のいずれかの活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、活性化可能抗体をコードする核酸構築体を含む細胞を培養する段階; および
(b) 活性化可能抗体を回収する段階
を含む、活性化状態ではPD-1に結合する活性化可能抗体を製造する方法。
[本発明1089]
有効量の、本発明1001、1006～1013、1029～1034、および1047のいずれかの抗体もしくは本発明1002～1072のいずれかの活性化可能抗体、または本発明1080、1082もしくは1083の薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、T細胞上のPD-1に対するPDL1またはPDL2からなる群より選択されるリガンドの結合を低減させる方法。
[本発明1090]
治療的有効量の、本発明1001～1008のいずれかの単離された抗体、本発明1002～1072のいずれかのもしくは本発明1039～1065のいずれかのもしくは本発明1066～1070のいずれかの活性化可能抗体、または本発明1080、1082もしくは1083のいずれかの薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、T細胞上のPD-1に対するPDL1またはPDL2からなる群より選択されるリガンドの結合を低減させる方法。
[本発明1091]
リガンドが腫瘍または他の免疫細胞上に位置する、本発明1089または1090の方法。
[本発明1092]
治療的有効量の、本発明1001、1006～1013、1029～1034、および1047のいずれかの抗体もしくは本発明1002～1072のいずれかの活性化可能抗体、もしくは本発明1073～1078のいずれかのコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または本発明1080、1082もしくは1083のいずれかの薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、免疫抑制を低減させる方法。
[本発明1093]
免疫抑制が、T細胞上のPD-1の、腫瘍または他の免疫細胞上のPDL1またはPDL2に対する係合によって媒介される、本発明1092の方法。
[本発明1094]
治療的有効量の、本発明1001、1006～1013、1029～1034、および1047のいずれかの抗体または本発明1002～1070のいずれかの活性化可能抗体、または本発明1080、1082もしくは1083のいずれかの薬学的組成物を、その必要のある対象投与する段階を含む、障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法。
[本発明1095]
PDL1により媒介される障害または疾患が、がんである、本発明1084の方法。
[本発明1096]
がんが、膀胱癌、骨がん、乳癌、カルチノイド、子宮頸癌、胆管癌、結腸癌、子宮内膜癌、神経膠腫、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、または尿路上皮癌である、本発明1095の方法。
[本発明1097]
がんが、黒色腫(MEL)、腎細胞癌(RCC)、扁平上皮非小細胞肺癌(NSCLC)、非扁平上皮NSCLC、大腸癌(CRC)、去勢抵抗性前立腺癌(CRPC)、肝細胞癌(HCC)、頭頸部扁平上皮癌、胸腺腫、食道、卵巣、胃腸管および乳房の癌、または例えば多発性骨髄腫、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫および慢性骨髄性白血病などの血液悪性腫瘍からなる群より選択される、本発明1095の方法。
[本発明1098]
さらなる作用物質を投与する段階を含む、本発明1089～1097のいずれかの方法。
[本発明1099]
さらなる作用物質が治療用作用物質である、本発明1098の方法。
[本発明1100]
SEQ ID NO: 1296、1300、1304、1308、1312、1316、1320、1324、1328、1332、1336、および1340からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1063～1065のいずれかの活性化可能抗体。
[本発明1101]
SEQ ID NO: 1466、1470、1474、1478、1482、1486、1490、1494、1498、1502、1506、および1510からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1069～1070のいずれかの活性化可能抗体。

Claims (101)

  1. 哺乳動物PD-1に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片(AB)であって、該ABが、以下からなる群より選択される特徴のうちの1つまたは複数を有する、前記抗体またはその抗原結合断片(AB)：
    (a) ABは、5 nM未満のEC50値で哺乳動物PDL1に対する哺乳動物PD-1の結合を阻害する;
    (b) ABは、5 nM未満のEC50値で哺乳動物PDL2に対する哺乳動物PD-1の結合を阻害する; および
    (c) ABは、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1に特異的に結合する。
  2. 活性化状態では、哺乳動物PD-1に特異的に結合する活性化可能抗体であって、以下を含む、前記活性化可能抗体：
    哺乳動物PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB);
    活性化可能抗体が非切断状態にある場合に哺乳動物PD-1に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM); および
    ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、前記CM。
  3. 活性化状態では、
    (a) 哺乳動物PD-1に特異的に結合する; かつ
    (b) PD-1の天然リガンドが哺乳動物PD-1に結合するのを特異的にブロックする、
    活性化可能抗体であって、
    哺乳動物PD-1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片(AB);
    活性化可能抗体が非切断状態にある場合に哺乳動物PD-1に対するABの結合を阻害するマスキング部分(MM); および
    ABにカップリングされた切断可能部分(CM)であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、前記CM
    を含む、前記活性化可能抗体。
  4. 非切断状態では、
    0.5 nM～1 nM、0.5 nM～2 nM、0.5 nM～5 nM、0.5 nM～10 nM、0.5 nM～15 nM、0.5 nM～20 nM、0.5 nM～25 nM、0.5 nM～50 nM、0.5 nM～75 nM、0.5 nM～100 nM、0.5 nM～150 nM、0.5 nM～200 nM、0.5 nM～300 nM、0.5 nM～400 nM、
    1 nM～2 nM、1 nM～5 nM、1 nM～10 nM、1 nM～15 nM、1 nM～20 nM、1 nM～25 nM、1 nM～50 nM、1 nM～75 nM、1 nM～100 nM、1 nM～150 nM、1 nM～200 nM、1 nM～300 nM、1 nM～400 nM、
    2 nM～5 nM、2 nM～10 nM、2 nM～15 nM、2 nM～20 nM、2 nM～25 nM、2 nM～50 nM、2 nM～75 nM、2 nM～100 nM、2 nM～150 nM、2 nM～200 nM、2 nM～300 nM、2 nM～400 nM、
    5 nM～10 nM、5 nM～15 nM、5 nM～20 nM、5 nM～25 nM、5 nM～50 nM、5 nM～75 nM、5 nM～100 nM、5 nM～150 nM、5 nM～200 nM、5 nM～300 nM、5 nM～400 nM、
    10 nM～15 nM、10 nM～20 nM、10 nM～25 nM、10 nM～50 nM、10 nM～75 nM、10 nM～100 nM、10 nM～150 nM、10 nM～200 nM、10 nM～300 nM、10 nM～400 nM、
    15 nM～20 nM、15 nM～25 nM、15 nM～50 nM、15 nM～75 nM、15 nM～100 nM、15 nM～150 nM、15 nM～200 nM、15 nM～300 nM、15 nM～400 nM、
    20 nM～25 nM、20 nM～50 nM、20 nM～75 nM、20 nM～100 nM、20 nM～150 nM、20 nM～200 nM、20 nM～300 nM、20 nM～400 nM、
    25 nM～50 nM、25 nM～75 nM、25 nM～100 nM、25 nM～150 nM、25 nM～200 nM、25 nM～300 nM、25 nM～400 nM、
    50 nM～75 nM、50 nM～100 nM、50 nM～150 nM、50 nM～200 nM、50 nM～300 nM、50 nM～400 nM、
    75 nM～100 nM、75 nM～150 nM、75 nM～200 nM、75 nM～300 nM、75 nM～400 nM、
    150 nM～200 nM、150 nM～300 nM、150 nM～400 nM、
    200 nM～300 nM、200 nM～400 nM、または
    300 nM～400 nM
    の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する、請求項2または3記載の活性化可能抗体。
  5. 活性化状態では、
    0.01 nM～5 nM、0.05 nM～5 nM、0.1 nM～5 nM、0.2 nM～5 nM、0.3 nM～5 nM、0.4 nM～5 nM、0.5 nM～5 nM、0.75 nM～5 nM、1 nM～5 nM、2 nM～5 nM、
    0.01 nM～2 nM、0.05 nM～2 nM、0.1 nM～2 nM、0.2 nM～2 nM、0.3 nM～2 nM、0.4 nM～2 nM、0.5 nM～2 nM、0.75 nM～1 nM、1 nM～2 nM、
    0.01 nM～1 nM、0.05 nM～1 nM、0.1 nM～1 nM、0.2 nM～1 nM、0.3 nM～1 nM、0.4 nM～1 nM、0.5 nM～1 nM、0.75 nM～1 nM、
    0.01 nM～0.75 nM、0.05 nM～0.75 nM、0.1 nM～0.75 nM、0.2 nM～0.75 nM、0.3 nM～0.75 nM、0.4 nM～0.75 nM、0.5 nM～0.75 nM、
    0.01 nM～0.5 nM、0.05 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.2 nM～0.5 nM、0.3 nM～0.5 nM、0.4 nM～0.5 nM、
    0.01 nM～0.4 nM、0.05 nM～0.4 nM、0.1 nM～0.4 nM、0.2 nM～0.4 nM、0.3 nM～0.4 nM、
    0.01 nM～0.3 nM、0.05 nM～0.3 nM、0.1 nM～0.3 nM、0.2 nM～0.3 nM、
    0.01 nM～0.2 nM、0.05 nM～0.2 nM、0.1 nM～0.2 nM、
    0.01 nM～0.1 nM、0.05 nM～0.1 nM、または
    0.01 nM～0.05 nM
    の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する、請求項2～4のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  6. ABが、
    0.01 nM～5 nM、0.05 nM～5 nM、0.1 nM～5 nM、0.2 nM～5 nM、0.3 nM～5 nM、0.4 nM～5 nM、0.5 nM～5 nM、0.75 nM～5 nM、1 nM～5 nM、2 nM～5 nM、
    0.01 nM～2 nM、0.05 nM～2 nM、0.1 nM～2 nM、0.2 nM～2 nM、0.3 nM～2 nM、0.4 nM～2 nM、0.5 nM～2 nM、0.75 nM～1 nM、1 nM～2 nM、
    0.01 nM～1 nM、0.05 nM～1 nM、0.1 nM～1 nM、0.2 nM～1 nM、0.3 nM～1 nM、0.4 nM～1 nM、0.5 nM～1 nM、0.75 nM～1 nM、
    0.01 nM～0.75 nM、0.05 nM～0.75 nM、0.1 nM～0.75 nM、0.2 nM～0.75 nM、0.3 nM～0.75 nM、0.4 nM～0.75 nM、0.5 nM～0.75 nM、
    0.01 nM～0.5 nM、0.05 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.2 nM～0.5 nM、0.3 nM～0.5 nM、0.4 nM～0.5 nM、
    0.01 nM～0.4 nM、0.05 nM～0.4 nM、0.1 nM～0.4 nM、0.2 nM～0.4 nM、0.3 nM～0.4 nM、
    0.01 nM～0.3 nM、0.05 nM～0.3 nM、0.1 nM～0.3 nM、0.2 nM～0.3 nM、
    0.01 nM～0.2 nM、0.05 nM～0.2 nM、0.1 nM～0.2 nM、
    0.01 nM～0.1 nM、0.05 nM～0.1 nM、または
    0.01 nM～0.05 nM
    の解離定数で哺乳動物PD-1に特異的に結合する、請求項1記載の抗体または請求項2～5のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  7. 哺乳動物PD-1が、ヒトPD-1、マウスPD-1、およびカニクイザルPD-1からなる群より選択される、請求項1もしくは6記載の抗体、または請求項2～6のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  8. ABが1 nM未満の解離定数でヒトPD-1またはカニクイザルPD-1に特異的に結合する、請求項1、6もしくは7のいずれか一項記載の抗体、または請求項2～7のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  9. 哺乳動物PD-1がヒトPD-1である、請求項1および6～8のいずれか一項記載の抗体または請求項2～8のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  10. ABが、以下からなる群より選択される特徴のうちの1つまたは複数を有する、請求項1および6～9のいずれか一項記載の抗体、または請求項2～9のいずれか一項記載の活性化可能抗体：
    (a) ABは、ヒトPD-1およびカニクイザルPD-1に特異的に結合する;
    (b) ABは、ヒトPD-1に対するヒトPDL1およびヒトPDL2の結合を阻害する;
    (c) ABは、カニクイザルPD-1に対するカニクイザルPDL1およびカニクイザルPDL2の結合を阻害する;
    (d) ABは、マウスPD-1に特異的に結合する。
  11. ABが、
    0.1 nM～10 nM、0.1 nM～5 nM、0.1 nM～3 nM、0.1 nM～2 nM、0.1 nM～1 nM、0.1 nM～0.5 nM、0.1 nM～0.25 nM、
    0.25 nM～10 nM、0.25 nM～5 nM、0.25 nM～3 nM、0.25 nM～2 nM、0.25 nM～1 nM、0.25 nM～0.5 nM、
    0.5 nM～10 nM、0.5 nM～5 nM、0.5 nM～3 nM、0.5 nM～2 nM、0.5 nM～1 nM、
    1 nM～10 nM、1 nM～5 nM、1 nM～3 nM、1 nM～2 nM、
    2 nM～10 nM、2 nM～5 nM、2 nM～3 nM、
    3 nM～10 nM、3 nM～5 nM、または
    5 nM～10 nM
    のEC50で、哺乳動物PDL1に結合する天然リガンドの能力をブロックする、請求項1および6～10のいずれか一項記載の抗体または請求項2～10のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  12. 天然リガンドが哺乳動物PDL1または哺乳動物PDL2である、請求項11記載の抗体または活性化可能抗体。
  13. 天然リガンドが、ヒトPDL1、ヒトPDL2、マウスPDL1、マウスPDL2、カニクイザルPDL1、およびカニクイザルPDL2からなる群より選択される、請求項11記載の抗体または活性化可能抗体。
  14. (a) ABは、非肥満糖尿病(NOD)マウスにおいて1型糖尿病を誘発する; および
    (b) 活性化可能抗体は、非切断状態ではNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する、
    請求項2～13のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  15. 3 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kgまたは10 mg/kgの単回用量での活性化可能抗体の投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病の誘発を阻害する、請求項14記載の活性化可能抗体。
  16. ABが、1 mg/kg～20 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kgまたは20 mg/kgの単回用量でのABの投与後にNODマウスにおいて1型糖尿病を誘発する、請求項15記載の活性化可能抗体。
  17. (a) 活性化可能抗体は、非切断状態では非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超において1型糖尿病を誘発しない、および
    (b) ABは、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、
    請求項2～16のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  18. NODマウス集団における各マウスへの、3 mg/kg～10 mg/kg、3 mg/kgまたは10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量の投与後に、該集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない、請求項17記載の活性化可能抗体。
  19. (a) 活性化可能抗体は、非切断状態では3 mg/kgの単回用量で投与された場合に非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない; および
    (b) ABは、3 mg/kgの単回用量で投与された場合に、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、
    請求項18記載の活性化可能抗体。
  20. (a) 活性化可能抗体は、非切断状態では10 mg/kgの単回用量で投与された場合に非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発しない; および
    (b) ABは、10 mg/kgの単回用量で投与された場合に、NODマウス集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、
    請求項18記載の活性化可能抗体。
  21. NODマウス集団における各マウスへの、3 mg/kg～20 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kgまたは20 mg/kgの投与量でのABの単回用量の投与後に、ABが、該集団の50%超、60%超、70%超、80%超、50%～100%、50%～75%、または70%～90%において1型糖尿病を誘発する、請求項18記載の活性化可能抗体。
  22. 非切断状態では、抗CTLA4抗体を同時に投与した非肥満糖尿病(NOD)マウス集団の50%超において1型糖尿病を誘発しない、請求項2～16のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  23. NODマウス集団が、10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量を各々投与される、請求項22記載の活性化可能抗体。
  24. NODマウス集団が、10 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量を各々投与される、請求項22または23記載の活性化可能抗体。
  25. NODマウス集団が、10 mg/kgの投与量での活性化可能抗体の単回用量および10 mg/kgの投与量での抗CTLA4抗体の単回用量を各々投与される、請求項22～24のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  26. NODマウスが雌性NOD/ShiLtJマウス亜系である、請求項14～25のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  27. NODマウス集団が、活性化可能抗体の最初の投与時に各々5週齢である、請求項26記載の活性化可能抗体。
  28. NODマウス集団が、活性化可能抗体の最初の投与時に各々10週齢である、請求項26記載の活性化可能抗体。
  29. ABが、
    (a) SEQ ID NO: 653～657からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1 (VH CDR1);
    (b) SEQ ID NO: 658～663からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2 (VH CDR2);
    (c) SEQ ID NO: 664～668からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3 (VH CDR3);
    (d) SEQ ID NO: 669～677からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1 (VL CDR1);
    (e) SEQ ID NO: 678～682からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2 (VL CDR2); および
    (f) SEQ ID NO: 683～687からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3 (VL CDR3)
    を含む、請求項1および6～13のいずれか一項記載の抗体または請求項2～28のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  30. ABが、
    Figure 2022064924000829
    を含むVH CDR1配列;
    Figure 2022064924000830
    を含むVH CDR2配列;
    Figure 2022064924000831
    を含むVH CDR3配列;
    Figure 2022064924000832
    を含むVL CDR1配列;
    Figure 2022064924000833
    を含むVL CDR2配列; および
    Figure 2022064924000834
    を含むVL CDR3配列
    を含む、請求項1、6～13、および29のいずれか一項記載の抗体または請求項2～29のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  31. ABが、
    Figure 2022064924000835
    を含むVH CDR1配列;
    Figure 2022064924000836
    を含むVH CDR2配列;
    Figure 2022064924000837
    を含むVH CDR3配列;
    Figure 2022064924000838
    を含むVL CDR1配列;
    Figure 2022064924000839
    を含むVL CDR2配列; および
    Figure 2022064924000840
    を含むVL CDR3配列
    を含む、請求項1、6～13、29、および30のいずれか一項記載の抗体または請求項2～30のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  32. ABが、SEQ ID NO: 21、23、25、27、29、31、33、35、37、2052、および2053からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖(VH)と、SEQ ID NO: 39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、および59からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖(VL)とを含む、請求項1、6～13、および29～31のいずれか一項記載の抗体または請求項2～31のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  33. ABが、SEQ ID NO: 21、2052、および2053からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むVHと、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列を含むVLとを含む、請求項1、6～13、および29～32のいずれか一項記載の抗体または請求項2～32のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  34. ABが、SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列を含むVHと、SEQ ID NO: 45のアミノ酸配列を含むVLとを含む、請求項1、6～13、および29～33のいずれか一項記載の抗体または請求項2～33のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  35. MMが、ABに対する結合について、PD-1に対するABの解離定数よりも大きい解離定数を有する、請求項2～34のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  36. 前記活性化可能抗体が切断状態にある場合、MMが、PD-1に対する結合についてABに干渉も競合もしない、請求項2～35のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  37. MMが、40アミノ酸以下の長さのポリペプチドである、請求項2～36のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  38. MMのポリペプチド配列がヒトPD-1のポリペプチド配列とは異なる、請求項2～37のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  39. MMのポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、50%以下である、請求項2～38のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  40. MMのポリペプチド配列の、ABのあらゆる天然の結合パートナーに対する同一性が、25%以下である、請求項2～39のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  41. MMが、SEQ ID NO: 66～213、384～514、および548～571からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～40のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  42. MMが、SEQ ID NO: 384～514および548～571からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～40のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  43. MMが、SEQ ID NO: 66、67、70、71、74、77、81、82、84、90、91、93、および99からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～40のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  44. CMが、罹患組織において活性であるプロテアーゼの基質である、請求項2～43のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  45. CMが、SEQ ID NO: 214、294-361、1092～1112、1157、1158、1161、1162、1165、1166、1169、1520、および1695～1704からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～44のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  46. CMが、SEQ ID NO: 214、294、300、302、303、305、308、318、347、361、1092～1102、1111、および1157からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～44のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  47. その抗原結合断片が、Fab断片、F(ab')2断片、scFv、scAb、dAb、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択される、請求項1、6～13、および29～34のいずれか一項記載の抗体または請求項2～44のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  48. ABがCMに連結されている、請求項2～47のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  49. ABがCMに直接連結されている、請求項48記載の活性化可能抗体。
  50. ABが連結ペプチドを介してCMに連結されている、請求項48記載の活性化可能抗体。
  51. 非切断状態では前記活性化可能抗体がN末端からC末端に向かってMM-CM-ABまたはAB-CM-MMのような構造的配置を含むように、MMがCMに連結されている、請求項2～50のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  52. MMとCMとの間に連結ペプチドを含む、請求項51記載の活性化可能抗体。
  53. CMとABとの間に連結ペプチドを含む、請求項51記載の活性化可能抗体。
  54. 前記活性化可能抗体が第1の連結ペプチド(LP1)および第2の連結ペプチド(LP2)を含み、かつ非切断状態では該活性化可能抗体がN末端からC末端に向かってMM-LP1-CM-LP2-ABまたはAB-LP2-CM-LP1-MMのような構造的配置を有する、請求項51記載の活性化可能抗体。
  55. 2つの連結ペプチドが互いに同一である必要はない、請求項55記載の活性化可能抗体。
  56. LP1およびLP2の各々が、約1～20アミノ酸長のペプチドである、請求項54または55記載の活性化可能抗体。
  57. SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、1028、1029、1041～1076、1138、1139、1143、1144、1147、1148、1151、1152、1155、1156、1159、1160、1163、1164、1167、1168、1170、1171、1174、1175、1178、1179、1182、1183、1186、1187、1190、1191、1194、1195、1198、1199、1202、1203、2055、2054、2057、2056、2059、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  58. SEQ ID NO: 919、921、923、925、927、929、931、933、935、937、939、941、943、945、947、949、951、953、955、957、959、961、963、965、967、969、971、973、975、977、979、981、983、985、987、989、991、993、995、997、1028、1041～1076、1138、1144、1148、1152、1156、1160、1164、1168、1170、1174、1178、1182、1186、1190、1194、1198、1202、2055、2057、および2059からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  59. SEQ ID NO: 215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、1029、1139、1143、1147、1151、1155、1159、1163、1167、1171、1175、1179、1183、1187、1191、1195、1199、1203、2054、2056、および2058からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  60. SEQ ID NO: 515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1030、1032、1034、1036、1039、1077～1090、1113～1120、1123、1124、1127、1128、1131、1132、1134、および1135のアミノ酸配列を含む、請求項2～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  61. SEQ ID NO: 999、1001、1003、1005、1007、1009、1011、1013、1015、1017、1019、1021、1023、1025、1027、1030、1032、1034、1036、1039、1070～1090、1119、1123、1127、1131、および1134のアミノ酸配列を含む、請求項2～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  62. SEQ ID NO: 515、517、519、521、523、525、527、529、531、533、535、537、539、541、572、574、576、578、580、582、1120、1124、1128、1132、および1135のアミノ酸配列を含む、請求項2～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  63. ABが、
    (i) SEQ ID NO: 1346の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列と、SEQ ID NO: 626の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列との組み合わせ、または
    (ii) VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ
    を含み、ここでVH CDR1配列が
    Figure 2022064924000841
    を含み; VH CDR2配列が
    Figure 2022064924000842
    を含み; VH CDR3配列が
    Figure 2022064924000843
    を含み; VL CDR1配列が
    Figure 2022064924000844
    を含み; VL CDR2配列が
    Figure 2022064924000845
    を含み; およびVL CDR3配列が
    Figure 2022064924000846
    を含む、
    請求項2～28および35～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  64. MMが、SEQ ID NO: 1206～1295からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項63記載の活性化可能抗体。
  65. ABが、SEQ ID NO: 1346のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO: 626のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項63または64記載の活性化可能抗体。
  66. SEQ ID NO: 1296、1297、1300、1301、1304、1305、1308、1309、1312、1313、1316、1317、1320、1321、1324、1325、1328、1329、1332、1333、1336、1337、1340、および1341からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項63～65のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  67. SEQ ID NO: 1297、1301、1305、1309、1313、1317、1321、1325、1329、1333、1337、および1341からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項63～66のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  68. ABが、
    (i) SEQ ID NO: 1514の重鎖アミノ酸配列の相補性決定領域(CDR)配列と、SEQ ID NO: 638の軽鎖アミノ酸配列のCDR配列との組み合わせ、または
    (ii) VH CDR1配列、VH CDR2配列、VH CDR3配列、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせ
    を含み、ここでVH CDR1配列が
    Figure 2022064924000847
    を含み; VH CDR2配列が
    Figure 2022064924000848
    を含み; VH CDR3配列が
    Figure 2022064924000849
    を含み; VL CDR1配列が
    Figure 2022064924000850
    を含み; VL CDR2配列が
    Figure 2022064924000851
    を含み; およびVL CDR3配列が
    Figure 2022064924000852
    を含む、
    請求項2～28および35～56のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  69. MMが、SEQ ID NO: 1351～1465からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項68記載の活性化可能抗体。
  70. ABが、SEQ ID NO: 1514のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO: 638のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項68または69記載の活性化可能抗体。
  71. SEQ ID NO: 1466、1467、1470、1471、1474、1475、1478、1479、1482、1483、1486、1487、1490、1491、1494、1495、1498、1499、1502、1503、1506、1507、1510、および1511からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項69～70のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  72. SEQ ID NO: 1467、1471、1475、1479、1483、1487、1491、1495、1499、1503、1507、および1511からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項69～70のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  73. 作用物質にコンジュゲートされた、請求項1、6～13、29～34、および47のいずれか一項記載の抗体または請求項2～72のいずれか一項記載の活性化可能抗体を含む、コンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  74. 作用物質がリンカーを介して活性化可能抗体にコンジュゲートされている、請求項73記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  75. リンカーが切断可能リンカーである、請求項74記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  76. リンカーが非切断可能リンカーである、請求項74記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  77. 作用物質が検出可能部分である、請求項73～76のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  78. 検出可能部分が診断用作用物質である、請求項77記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。
  79. 請求項1、6～13、29～34、および47のいずれか一項記載の抗体、請求項2～70のいずれか一項記載の活性化可能抗体、または請求項73～78のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体、ならびに担体を含む、薬学的組成物。
  80. 請求項1、6～13、29～34、および47のいずれか一項記載の抗体または請求項2～72のいずれか一項記載の活性化可能抗体を含む、薬学的組成物。
  81. さらなる作用物質を含む、請求項79記載の薬学的組成物。
  82. さらなる作用物質を含む、請求項80記載の薬学的組成物。
  83. さらなる作用物質が治療用作用物質である、請求項81記載の薬学的組成物。
  84. さらなる作用物質が治療用作用物質である、請求項82記載の薬学的組成物。
  85. 請求項1、6～13、29～34、および47のいずれか一項記載の抗体または請求項2～72のいずれか一項記載の活性化可能抗体をコードする、単離された核酸分子。
  86. 請求項85記載の単離された核酸分子を含むベクター。
  87. 請求項85記載の核酸分子を含む細胞を、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で培養することによって、活性化可能抗体を産生する方法。
  88. (a) 請求項2～72のいずれか一項記載の活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、活性化可能抗体をコードする核酸構築体を含む細胞を培養する段階; および
    (b) 活性化可能抗体を回収する段階
    を含む、活性化状態ではPD-1に結合する活性化可能抗体を製造する方法。
  89. 有効量の、請求項1、6～13、29～34、および47のいずれか一項記載の抗体もしくは請求項2～72のいずれか一項記載の活性化可能抗体、または請求項80、82もしくは83記載の薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、T細胞上のPD-1に対するPDL1またはPDL2からなる群より選択されるリガンドの結合を低減させる方法。
  90. 治療的有効量の、請求項1～8のいずれか一項記載の単離された抗体、請求項2～72のいずれか一項記載のもしくは請求項39～65のいずれか一項記載のもしくは請求項66～70のいずれか一項記載の活性化可能抗体、または請求項80、82もしくは83のいずれか一項記載の薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、T細胞上のPD-1に対するPDL1またはPDL2からなる群より選択されるリガンドの結合を低減させる方法。
  91. リガンドが腫瘍または他の免疫細胞上に位置する、請求項89または90記載の方法。
  92. 治療的有効量の、請求項1、6～13、29～34、および47のいずれか一項記載の抗体もしくは請求項2～72のいずれか一項記載の活性化可能抗体、もしくは請求項73～78のいずれか一項記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項80、82もしくは83のいずれか一項記載の薬学的組成物を、その必要のある対象に投与する段階を含む、免疫抑制を低減させる方法。
  93. 免疫抑制が、T細胞上のPD-1の、腫瘍または他の免疫細胞上のPDL1またはPDL2に対する係合によって媒介される、請求項92記載の方法。
  94. 治療的有効量の、請求項1、6～13、29～34、および47のいずれか一項記載の抗体または請求項2～70のいずれか一項記載の活性化可能抗体、または請求項80、82もしくは83のいずれか一項記載の薬学的組成物を、その必要のある対象投与する段階を含む、障害または疾患を処置する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法。
  95. PDL1により媒介される障害または疾患が、がんである、請求項84記載の方法。
  96. がんが、膀胱癌、骨がん、乳癌、カルチノイド、子宮頸癌、胆管癌、結腸癌、子宮内膜癌、神経膠腫、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、または尿路上皮癌である、請求項95記載の方法。
  97. がんが、黒色腫(MEL)、腎細胞癌(RCC)、扁平上皮非小細胞肺癌(NSCLC)、非扁平上皮NSCLC、大腸癌(CRC)、去勢抵抗性前立腺癌(CRPC)、肝細胞癌(HCC)、頭頸部扁平上皮癌、胸腺腫、食道、卵巣、胃腸管および乳房の癌、または例えば多発性骨髄腫、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、原発性縦隔B細胞リンパ腫および慢性骨髄性白血病などの血液悪性腫瘍からなる群より選択される、請求項95記載の方法。
  98. さらなる作用物質を投与する段階を含む、請求項89～97のいずれか一項記載の方法。
  99. さらなる作用物質が治療用作用物質である、請求項98記載の方法。
  100. SEQ ID NO: 1296、1300、1304、1308、1312、1316、1320、1324、1328、1332、1336、および1340からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項63～65のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
  101. SEQ ID NO: 1466、1470、1474、1478、1482、1486、1490、1494、1498、1502、1506、および1510からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項69～70のいずれか一項記載の活性化可能抗体。
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