EA043582B1 - Антитела против pd-1, активируемые антитела против pd-1 и способы их применения - Google Patents

Антитела против pd-1, активируемые антитела против pd-1 и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
EA043582B1
EA043582B1 EA201890285 EA043582B1 EA 043582 B1 EA043582 B1 EA 043582B1 EA 201890285 EA201890285 EA 201890285 EA 043582 B1 EA043582 B1 EA 043582B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
sequence
amino acid
acid sequence
antibody
Prior art date
Application number
EA201890285
Other languages
English (en)
Inventor
Кимберли Энн Типтон
Джеймс Уилльям УЭСТ
Чанти Мариатег Чан
Original Assignee
Сайтомкс Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сайтомкс Терапьютикс, Инк. filed Critical Сайтомкс Терапьютикс, Инк.
Publication of EA043582B1 publication Critical patent/EA043582B1/ru

Links

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение в целом относится к антителам, которые специфично связывают белок программируемой смерти клеток 1 (PD-1), активируемым антителам, которые специфично связываются с PD-1, и способам получения и применения таких антител против PD-1 и активируемых антител против PD-1 в различных терапевтических, диагностических и профилактических показаниях.
Уровень техники
Терапии, основанные на применении антител, доказали эффективность при лечении нескольких заболеваний, однако в некоторых случаях токсичность, обусловленная широкой экспрессией мишени, ограничивала их терапевтическую эффективность. Кроме того, терапия, основанная на применении антител, демонстрировала другие ограничения, такие как быстрый клиренс из кровотока после введения.
В условиях длительной стимуляции T-клетки апрегулируют и поддерживают экспрессию ингибирующего рецептора PD-1 с негативной регуляцией качества и силы T-клеточных ответов. Основной лиганд PD-1, PD-L1, апрегулирован на многих опухолевых клетках и был связан с ингибированием противоопухолевого T-клеточного иммунитета посредством его связывания с PD-1 на инфильтрирующих опухоль T-клетках.
Клинические испытания подтвердили способность антител блокировать PD-1 или PD-L1 с восстановлением активности длительного опухолеспецифичного иммунитета у больных с различными типами опухолей (Herbst et al., 2014; Lipson et al., 2015). Впрочем, поскольку подобные механизмы регулируют противоопухолевый иммунитет и аутотолерантность, системная доставка таких терапий, направленно воздействующих на контрольные точки, может также индуцировать системный аутоиммунитет, который может быть усилен с применением методов комбинированного лечения; таких как ниволумаб или пембролизумаб (против PD-1) и ипилимумаб (против CTLA4). Таким образом, необходимы новые методы, которые обеспечивают противоопухолевую активность без нарушения регуляции системного иммунитета.
В области низкомолекулярных терапевтических средств были разработаны стратегии получения пролекарств активного химического соединения. Такие пролекарства вводят в относительно неактивной (или значительно менее активной) форме. После введения пролекарство метаболизируется in vivo в активное соединение. Такие стратегии получения пролекарств могут обеспечивать повышенную селективность лекарственного средства в отношении его предполагаемой мишени и уменьшение побочных действий.
Таким образом, в области терапии, основанной на применении антител, сохраняется потребность в антителах, которые воспроизводят требуемые характеристики низкомолекулярного пролекарства.
Сущность изобретения
В настоящем описании предложены антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфично связывают белок программируемой смерти клеток 1 (PD-1), также известный как CD279, SLEB2 и/или hSLE1. Использование термина PD-1 должно охватывать любую его вариацию, такую как, в качестве неограничивающего примера, PD1 и/или PD 1, при этом все изменения используются в настоящем изобретении попеременно. Аберрантная экспрессия и/или активность PD-1 и PD-1-связанная сигнализация участвуют в патогенезе многих заболеваний и нарушений, таких как рак.
В настоящем изобретении предложены моноклональные антитела (мАт), активируемые антитела, а также их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфично связывают PD-1.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают PD-1. В некоторых вариантах осуществления, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают PD-1, являются моноклональным антителом, доменным антителом, одноцепочечным, Fab-фрагментом, F(ab')2-фрагментом, scFv, scAb dAb, однодоменным антителом из тяжелых цепей или однодоменным антителом их легких цепей. В некоторых вариантах осуществления такое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают PD-1, являются мышиным, другого грызуна, химерным, гуманизированным или полностью человеческим моноклональным антителом.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связываются с PD-1 млекопитающего, где АВ обладает одной или более характеристиками, выбранными из группы, состоящей из следующего: (a) АВ ингибирует связывание PD-1 млекопитающего с PDL1 млекопитающего со значением EC50 меньше 5 нМ; (b) АВ ингибирует связывание PD-1 млекопитающего с PDL2 млекопитающего со значением EC50 меньше 5 нМ; и (с) АВ специфично связывается с PD-1 человека и PD-1 яванского макака.
- 1 043582
В некоторых вариантах осуществления антитело специфично связывается с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации от 0,01 до 5 нМ, от 0,05 до 5 нМ, от 0,1 до 5 нМ, от 0,2 до 5 нМ, от 0,3 до 5 нМ, от 0,4 до 5 нМ, от 0,5 до 5 нМ, от 0,75 до 5 нМ, от 1 до 5 нМ, от 2 до 5 нМ, от 0,01 до 2 нМ, от 0,05 до 2 нМ, от 0,1 до 2 нМ, от 0,2 до 2 нМ, от 0,3 до 2 нМ, от 0,4 до 2 нМ, от 0,5 до 2 нМ, от 0,75 до 1 нМ, от 1 до 2 нМ, от 0,01 до 1 нМ, от 0,05 до 1 нМ, от 0,1 до 1 нМ, от 0,2 до 1 нМ, от 0,3 до 1 нМ, от 0,4 до 1 нМ, от 0,5 до 1 нМ, от 0,75 до 1 нМ, от 0,01 до 0,75 нМ, от 0,05 до 0,75 нМ, от 0,1 до 0,75 нМ, от 0,2 до 0,75 нМ, от 0,3 до 0,75 нМ, от 0,4 до 0,75 нМ, от 0,5 до 0,75 нМ, от 0,01 до 0,5 нМ, от 0,05 до 0,5 нМ, от 0,1 до 0,5 нМ, от 0,2 до 0,5 нМ, от 0,3 до 0,5 нМ, от 0,4 до 0,5 нМ, от 0,01 до 0,4 нМ, от 0,05 до 0,4 нМ, от 0,1 до 0,4 нМ, от 0,2 до 0,4 нМ, от 0,3 до 0,4 нМ, от 0,01 до 0,3 нМ, от 0,05 до 0,3 нМ, от 0,1 до 0,3 нМ, от 0,2 до 0,3 нМ, от 0,01 до 0,2 нМ, от 0,05 до 0,2 нМ, от 0,1 до 0,2 нМ, от 0,01 до 0,1 нМ, от 0,05 до 0,1 нМ или от 0,01 до 0,05 нМ.
В некоторых вариантах осуществления PD-1 млекопитающего выбран из группы, состоящей из PD1 человека и PD-1 яванского макака. В некоторых вариантах осуществления PD-1 млекопитающего является мышиным PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело специфично связывается с PD-1 человека и PD-1 яванского макака с константой диссоциации меньше или равной 1 нМ. В некоторых вариантах осуществления PD-1 млекопитающего является человеческим PD-1.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфично связываются с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации меньше или равной 0,01 нМ, меньше или равной 0,05 нМ, меньше или равной 0,1 нМ, меньше или равной 0,2 нМ, меньше или равной 0,3 нМ, меньше или равной 0,4 нМ, меньше или равной 0,5 нМ, меньше или равной 0,75 нМ и меньше или равной 1 нМ.
В некоторых вариантах осуществления антитело обладает одной или более характеристиками, выбранными из группы, состоящей из следующего: (a) АВ специфично связывает PD-1 человека и PD-1 яванского макака; (b) AB ингибирует связывание PDL1 человека и PDL2 человека с PD-1 человека; (с) АВ ингибирует связывание PDL1 яванского макака и PDL2 яванского макака с PD-1 яванского макака; (d) АВ специфично связывается с мышиным PD-1; и (е) АВ ингибирует связывание мышиного PDL1 и мышиного PDL2 с мышиным PD-1.
В некоторых вариантах осуществления антитело блокирует способность природного лиганда связываться с PDL1 млекопитающего с ЕС50 от 0,1 до 10 нМ, от 0,1 до 5 нМ, от 0,1 до 3 нМ, от 0,1 до 2 нМ, от 0,1 до 1 нМ, от 0,1 до 0,5 нМ, от 0,1 до 0,25 нМ, от 0,25 до 10 нМ, от 0,25 до 5 нМ, от 0,25 до 3 нМ, от 0,25 до 2 нМ, от 0,25 до 1 нМ, от 0,25 до 0,5 нМ, от 0,5 до 10 нМ, от 0,5 до 5 нМ, от 0,5 до 3 нМ, от 0,5 до 2 нМ, от 0,5 до 1 нМ, от 1 до 10 нМ, от 1 до 5 нМ, от 1 до 3 нМ, от 1 до 2 нМ, от 2 до 10 нМ, от 2 до 5 нМ, от 2 до 3 нМ, от 3 до 10 нМ, от 3 до 5 нМ или от 5 до 10 нМ. В некоторых вариантах осуществления природным лигандом является PDL1 млекопитающего или PDL2 млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления природный лиганд выбран из группы, состоящей из: PDL1 человека, PDL2 человека, PDL1 яванского макака и PDL2 яванского макака. В некоторых вариантах осуществления природным лигандом является мышиный PDL1 или мышиный PDL2.
В некоторых вариантах осуществления антитело блокирует способность природного лиганда связываться с PDL1 млекопитающего с EC50 меньше или равной 0,1 нМ, меньше или равной 0,25 нМ, меньше или равной 0,5 нм, меньше или равной 1 нМ, меньше или равной 2 нМ, меньше или равной 3 нМ, меньше или равной 4 нМ, меньше или равной 5 нМ или меньше или равной 10 нМ.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и лег- 2 043582 кую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или 47. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает: (a) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 653-657; (b) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 658-663; (с) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 664-668; (d) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:669-677; (е) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 678-682; и (f) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 683-687.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательно- 3 043582 сти VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ D NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); и последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изо- 4 043582 бретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); и последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления антитело включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления антитело включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и аминокислотную последовательность
- 5 043582 легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательности VL CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где комбинация является комбинацией трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает легкую цепь, которая включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация является комбинацией трех CDR последовательностей легкой цепи (VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, показанная в одной строке в табл. 8, и последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, показанной в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, и последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей VH CDR последовательности, показанной в одной строке в табл. 8, и соответствующей VL CDR, показанной в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей CDR последовательности в комбинации трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3),
- 6 043582 показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает легкую цепь, которая включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей CDR последовательности в комбинации трех CDR последовательностей легкой цепи (VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); и последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична TNDDY (SEQ ID NO: 1707).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); и последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90,
- 7 043582
91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96,
97, 98, 99% или более идентична LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична
QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой ки- 8 043582 слоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:, выбранного из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:, выбранного из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой ки
- 9 043582 слоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включены в мультиспецифичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела специфично связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включены в биспецифичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где по меньшей мере одно плечо биспецифичного антитела специфично связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела,
- 10 043582 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает: (a) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 653-657; (b) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 658-663; (с) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 664-668; (d) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 669-677; (е) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 678-682; и (f) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 683-687 В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3,
- 11 043582 последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); и последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислот- 12 043582 ной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO:
1514, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); и последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи,
- 13 043582 которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности
SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); и последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична TNDDY (SEQ ID NO: 1707).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); и последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична KGVSTSGYSY (SeQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или бо- 14 043582 лее идентична LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательность VH CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательность VH CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательность VL CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательность VL CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательность VL CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация является комбинацией шести CDR последовательностей (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 и VL CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где комбинация является комбинацией трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей VH CDR последовательности, показанной в одной строке в табл. 8, и соответствующей VL CDR, показанной в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного антитела, например биспецифичного антитела, включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей CDR последовательности в комбинации трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
- 15 043582
В настоящем описании также предложены активируемые антитела, которые включают антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают PD-1, соединенные с маскирующей частью (MM), такой, что присоединение MM уменьшает способность антитела или его антигенсвязывающего фрагмента связывать PD-1. В некоторых вариантах осуществления MM присоединена через расщепляемую часть (CM), которая включает последовательность, которая функционирует в качестве субстрата для протеазы. Активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию активируются при расщеплении расщепляемой части протеазой. Например, протеазу продуцирует опухоль, которая находится вблизи от T-клеток, которые экспрессируют PD-1. В некоторых вариантах осуществления протеазу продуцирует опухоль, которая колокализована с T-клетками, которые экспрессируют PD1.
Активируемые антитела против PD-1, предложенные в настоящем изобретении, также указанные в настоящем изобретении как активируемые антитела против PD-1 или активируемые антитела к PD-1, являются стабильными в кровотоке, активируются в предполагаемых участках терапии и/или диагностики, но не в нормальной, например, здоровой ткани или другой ткани, не предназначенной для лечения и/или диагностики, и, в случае активации, демонстрируют связывание с PD-1, которое, по меньшей мере, сопоставимо с соответствующим, немодифицированным антителом.
В изобретении также предложены способы лечения, предотвращения и/или задержки начала или прогрессии, или облегчения симптома, связанного с аберрантной экспрессией и/или активностью PD-1, у субъекта с применением антител или активируемых антител, которые связывают PD-1, в особенности активируемых антител, которые связывают и нейтрализуют или иным образом ингибируют по меньшей мере одну биологическую активность PD-1.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает активируемое антитело, которое в активированном состоянии специфично связывается с PD-1 млекопитающего, где указанное активируемое антитело включает: антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связываются с PD-1 млекопитающего; маскирующую часть (MM), которая ингибирует связывание АВ с PD-1 млекопитающего, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии; и расщепляемую часть (CM), соединенную с AB, где CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает активируемое антитело, которое в активированном состоянии: (a) специфично связывается с PD-1 млекопитающего; и (b) специфично блокирует связывание природного лиганда PD-1 с PD-1 млекопитающего, где активируемое антитело включает: антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связываются с PD-1 млекопитающего; маскирующую часть (MM), которая ингибирует связывание АВ с PD-1 млекопитающего, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии; и расщепляемую часть (CM), соединенную с AB, где CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии специфично связывается с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации от 0,5 до 1 нМ, от 0,5 до 2 нМ, от 0,5 до 5 нМ, от 0,5 до 10 нМ, от 0,5 до 15 нМ, от 0,5 до 20 нМ, от 0,5 до 25 нМ, от 0,5 до 50 нМ, от 0,5 до 75 нМ, от 0,5 до 100 нМ, от 0,5 до 150 нМ, от 0,5 до 200 нМ, от 0,5 до 300 нМ, от 0,5 до 400 нМ, от 1 до 2 нМ, от 1 до 5 нМ, от 1 до 10 нМ, от 1 до 15 нМ, от 1 до 20 нМ, от 1 до 25 нМ, от 1 до 50 нМ, от 1 до 75 нМ, от 1 до 100 нМ, от 1 до 150 нМ, от 1 до 200 нМ, от 1 до 300 нМ, от 1 до 400 нМ, от 2 до 5 нМ, от 2 до 10 нМ, от 2 до 15 нМ, от 2 до 20 нМ, от 2 до 25 нМ, от 2 до 50 нМ, от 2 до 75 нМ, от 2 до 100 нМ, от 2 до 150 нМ, от 2 до 200 нМ, от 2 до 300 нМ, от 2 до 400 нМ, от 5 до 10 нМ, от 5 до 15 нМ, от 5 до 20 нМ, от 5 до 25 нМ, от 5 до 50 нМ, от 5 до 75 нМ, от 5 до 100 нМ, от 5 до 150 нМ, от 5 до 200 нМ, от 5 до 300 нМ, от 5 до 400 нМ, от 10 до 15 нМ, от 10 до 20 нМ, от 10 до 25 нМ, от 10 до 50 нМ, от 10 до 75 нМ, от 10 до 100 нМ, от 10 до 150 нМ, от 10 до 200 нМ, от 10 до 300 нМ, от 10 до 400 нМ, от 15 до 20 нМ, от 15 до 2 5 нМ, от 15 до 50 нМ, от 15 до 75 нМ, от 15 до 100 нМ, от 15 до 150 нМ, от 15 до 200 нМ, от 15 до 300 нМ, от 15 до 400 нМ, от 20 до 25 нМ, от 20 до 50 нМ, от 20 до 75 нМ, от 20 до 100 нМ, от 20 до 150 нМ, от 20 до 200 нМ, от 20 до 300 нМ, от 20 до 400 нМ, от 25 до 50 нМ, от 25 до 75 нМ, от 25 до 100 нМ, от 25 до 150 нМ, от 2 5 до 200 нМ, от 25 до 300 нМ, от 25 до 400 нМ, от 50 до 75 нМ, от 50 до 100 нМ, от 50 до 150 нМ, от 50 до 200 нМ, от 50 до 300 нМ, от 50 до 400 нМ, от 75 до 100 нМ, от 75 до 150 нМ, от 75 до 200 нМ, от 75 до 300 нМ, от 75 до 400 нМ, от 100 до 150 нМ, от 100 до 200 нМ, от 100 до 300 нМ, от 100 до 400 нМ, от 150 до 200 нМ, от 150 до 300 нМ, от 150 до 400 нМ, от 200 до 300 нМ, от 200 до 400 нМ или от 300 до 400 нМ.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в активированном состоянии специфично связывается с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации от 0,01 до 5 нМ, от 0,05 до 5 нМ, от 0,1 до 5 нМ, от 0,2 до 5 нМ, от 0,3 до 5 нМ, от 0,4 до 5 нМ, от 0,5 до 5 нМ, от 0,75 до 5 нМ, от 1 до 5 нМ, от 2 до 5 нМ, от 0,01 до 2 нМ, от 0,05 до 2 нМ, от 0,1 до 2 нМ, от 0,2 до 2 нМ, от 0,3 до 2 нМ, от 0,4 до 2 нМ, от 0,5 до 2 нМ, от 0,75 до 1 нМ, от 1 до 2 нМ, от 0,01 до 1 нМ, от 0,05 до 1 нМ, от 0,1 до 1 нМ, от 0,2 до 1 нМ, от 0,3 до 1 нМ, от 0,4 до 1 нМ, от 0,5 до 1 нМ, от 0,75 до 1 нМ, от 0,01 до 0,75 нМ, от 0,05 до 0,75 нМ, от 0,1 до 0,75 нМ, от 0,2 до 0,75 нМ, от 0,3 до 0,75 нМ, от 0,4 до 0,75 нМ, от 0,5 до 0,75 нМ, от
- 16 043582
0,01 до 0,5 нМ, от 0,05 до 0,5 нМ, от 0,1 до 0,5 нМ, от 0,2 до 0,5 нМ, от 0,3 до 0,5 нМ, от 0,4 до 0,5 нМ, от
0,01 до 0,4 нМ, от 0,05 до 0,4 нМ, от 0,1 до 0,4 нМ, от 0,2 до 0,4 нМ, от 0,3 до 0,4 нМ, от 0,01 до 0,3 нМ, от 0,05 до 0,3 нМ, от 0,1 до 0,3 нМ, от 0,2 до 0,3 нМ, от 0,01 до 0,2 нМ, от 0,05 до 0,2 нМ, от 0,1 до 0,2 нМ, от 0,01 до 0,1 нМ, от 0,05 до 0,1 нМ или от 0,01 до 0,05 нМ.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает AB, которое специфично связывается с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации от 0,01 до 5 нМ, от 0,05 до 5 нМ, от 0,1 до 5 нМ, от 0,2 до 5 нМ, от 0,3 до 5 нМ, от 0,4 до 5 нМ, от 0,5 до 5 нМ, от 0,75 до 5 нМ, от 1 до 5 нМ, от 2 до 5 нМ, от 0,01 до 2 нМ, от 0,05 до 2 нМ, от 0,1 до 2 нМ, от 0,2 до 2 нМ, от 0,3 до 2 нМ, от 0,4 до 2 нМ, от 0,5 до 2 нМ, от 0,75 до 1 нМ, от 1 до 2 нМ, от 0,01 до 1 нМ, от 0,05 до 1 нМ, от 0,1 до 1 нМ, от 0,2 до 1 нМ, от 0,3 до 1 нМ, от 0,4 до 1 нМ, от 0,5 до 1 нМ, от 0,75 до 1 нМ, от 0,01 до 0,75 нМ, от 0,05 до 0,75 нМ, от 0,1 до 0,75 нМ, от 0,2 до 0,75 нМ, от 0,3 до 0,75 нМ, от 0,4 до 0,75 нМ, от 0,5 до 0,75 нМ, от 0,01 до 0,5 нМ, от 0,05 до 0,5 нМ, от 0,1 до 0,5 нМ, от 0,2 до 0,5 нМ, от 0,3 до 0,5 нМ, от 0,4 до 0,5 нМ, от 0,01 до 0,4 нМ, от 0,05 до 0,4 нМ, от 0,1 до 0,4 нМ, от 0,2 до 0,4 нМ, от 0,3 до 0,4 нМ, от 0,01 до 0,3 нМ, от 0,05 до 0,3 нМ, от 0,1 до 0,3 нМ, от 0,2 до 0,3 нМ, от 0,01 до 0,2 нМ, от 0,05 до 0,2 нМ, от 0,1 до 0,2 нМ, от 0,01 до 0,1 нМ, от 0,05 до 0,1 нМ или от 0,01 до 0,05 нМ.
В некоторых вариантах осуществления PD-1 млекопитающего выбран из группы, состоящей из PD1 человека и PD-1 яванского макака. В некоторых вариантах осуществления АВ специфично связывается с PD-1 человека и PD-1 яванского макака с константой диссоциации меньше или равной 1 нМ. В некоторых вариантах осуществления PD-1 млекопитающего является человеческим PD-1. В некоторых вариантах осуществления АВ обладает одной или более характеристиками, выбранными из группы, состоящей из следующего: (a) АВ специфично связывает PD-1 человека и PD-1 яванского макака; (b) АВ ингибирует связывание человеческого PDL1 и человеческого PDL2 с PD-1 человека; и (с) АВ ингибирует связывание PDL1 яванского макака и PDL2 яванского макака с PD-1 яванского макака.
В некоторых вариантах осуществления PD-1 млекопитающего является мышиным PD-1. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает AB, которое специфично связывает мышиный PD-1 или ингибирует связывание мышиного PDL1 и мышиного PDL2 с мышиным PD-1.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии специфично связывается с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации больше или равной 0,5 нМ, больше или равной 1 нМ, больше или равной 2 нМ, больше или равной 3 нМ, больше или равной 4 нМ, больше или равной 5 нМ, больше или равной 10 нМ, больше или равной 15 нМ, больше или равной 20 нМ, больше или равной 25 нМ, больше или равной 50 нМ, больше или равной 75 нМ, больше или равной 100 нМ, больше или равной 150 нМ, больше или равной 200 нМ, больше или равной 300 нМ и/или больше или равной 400 нМ.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в активированном состоянии специфично связывается с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации меньше или равной 0,01 нМ, меньше или равной 0,05 нМ, меньше или равной 0,1 нМ, меньше или равной 0,2 нМ, меньше или равной 0,3 нМ, меньше или равной 0,4 нМ, меньше или равной 0,5 нМ, меньше или равной 0,75 нМ и меньше или равной 1 нМ.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает AB, которое специфично связывается с PD-1 млекопитающего с константой диссоциации меньше или равной 0,01 нМ, меньше или равной 0,05 нМ, меньше или равной 0,1 нМ, меньше или равной 0,2 нМ, меньше или равной 0,3 нМ, меньше или равной 0,4 нМ, меньше или равной 0,5 нМ, меньше или равной 0,75 нМ и меньше или равной 1 нМ.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает AB, которое блокирует способность природного лиганда связываться с PDL1 млекопитающего с EC50 от 0,1 до 10 нМ, от 0,1 до 5 нМ, от 0,1 до 3 нМ, от 0,1 до 2 нМ, от 0,1 до 1 нМ, от 0,1 до 0,5 нМ, от 0,1 до 0,25 нМ, от 0,25 до 10 нМ, от 0,25 до 5 нМ, от 0,25 до 3 нМ, от 0,25 до 2 нМ, от 0,25 до 1 нМ, от 0,25 до 0,5 нМ, от 0,5 до 10 нМ, от 0,5 до 5 нМ, от 0,5 до 3 нМ, от 0,5 до 2 нМ, от 0,5 до 1 нМ, от 1 до 10 нМ, от 1 до 5 нМ, от 1 до 3 нМ, от 1 до 2 нМ, от 2 до 10 нМ, от 2 до 5 нМ, от 2 до 3 нМ, от 3 до 10 нМ, от 3 до 5 нМ или от 5 до 10 нМ.
В некоторых вариантах осуществления природным лигандом является PDL1 млекопитающего или PDL2 млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления природный лиганд выбран из группы, состоящей из: PDL1 человека, PDL2 человека, PDL1 яванского макака и PDL2 яванского макака.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело обладает одной или более следующими характеристиками: (a) АВ вызывает диабет 1 типа у мыши с диабетом без ожирения (NOD); и (b) активируемое антитело в нерасщепленном состоянии ингибирует индукцию диабета 1 типа у NOD мыши.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело ингибирует индукцию диабета 1 типа у NOD мыши после введения активируемого антитела в однократной дозе от 0,5 до 15 мг/кг, от 1 до 15 мг/кг, от 2 до 15 мг/кг, от 3 до 15 мг/кг, от 5 до 15 мг/кг, от 10 до 15 мг/кг, от 0,5 до 10 мг/кг, от 1 до 10 мг/кг, от 2 до 10 мг/кг, от 3 до 10 мг/кг, от 5 до 10 мг/кг, от 0,5 до 5 мг/кг, от 1 до 5 мг/кг, от 2 до 5 мг/кг, от 3 до 5 мг/кг, от 0,5 до 3 мг/кг, от 1 до 3 мг/кг, от 2 до 3 мг/кг, от 0,5 до 2 мг/кг, от 1 до 2 мг/кг или от 0,5 до 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело ингибирует индукцию диа- 17 043582 бета 1 типа у NOD мыши после введения активируемого антитела в однократной дозе от 3 до 10 мг/кг, от 3 мг/кг или 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело ингибирует индукцию диабета 1 типа у NOD мыши после введения активируемого антитела в однократной дозе от 3 до 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело ингибирует индукцию диабета 1 типа у NOD мыши после введения активируемого антитела в однократной дозе 3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело ингибирует индукцию диабета 1 типа у NOD мыши после введения активируемого антитела в однократной дозе 10 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе от 0,5 до 15 мг/кг, от 1 до 15 мг/кг, от 2 до 15 мг/кг, от 3 до 15 мг/кг, от 5 до 15 мг/кг, от 10 до 15 мг/кг, от 0,5 до 10 мг/кг, от 1 до 10 мг/кг, от 2 до 10 мг/кг, от 3 до 10 мг/кг, от 5 до 10 мг/кг, от 0,5 до 5 мг/кг, от 1 до 5 мг/кг, от 2 до 5 мг/кг, от 3 до 5 мг/кг, от 0,5 до 3 мг/кг, от 1 до 3 мг/кг, от 2 до 3 мг/кг, от 0,5 до 2 мг/кг, от 1 до 2 мг/кг или от 0,5 до 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе от 1 до 20 мг/кг, 1 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг или 20 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе от 1 до 20 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе 3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе 5 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у NOD мыши после введения АВ в однократной дозе 20 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело обладает одной или более следующими характеристиками: (a) активируемое антитело в нерасщепленном состоянии не вызывает диабет 1 типа у больше чем 50% популяции мышей с диабетом без ожирения (NOD), и (b) АВ вызывает диабет 1 типа у больше чем 50%, больше чем 60%, больше чем 70%, больше чем 80%, 50-100%, 50-75% или 7090% популяции NOD мышей.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не вызывает диабет 1 типа у больше чем 50%, больше чем 60%, больше чем 70%, больше чем 80%, 50-100%, 50-75% или 70-90% популяции NOD мышей после введения каждой мыши в популяции однократной дозы активируемого антитела в дозе: от 0,5 до 15 мг/кг, от 1 до 15 мг/кг, от 2 до 15 мг/кг, от 3 до 15 мг/кг, от 5 до 15 мг/кг, от 10 до 15 мг/кг, от 0,5 до 10 мг/кг, от 1 до 10 мг/кг, от 2 до 10 мг/кг, от 3 до 10 мг/кг, от 5 до 10 мг/кг, от 0,5 до 5 мг/кг, от 1 до 5 мг/кг, от 2 до 5 мг/кг, от 3 до 5 мг/кг, от 0,5 до 3 мг/кг, от 1 до 3 мг/кг, от 2 до 3 мг/кг, от 0,5 до 2 мг/кг, от 1 до 2 мг/кг или от 0,5 до 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело ингибирует индукцию диабета 1 типа у NOD мыши после введения активируемого антитела в однократной дозе от 3 до 10 мг/кг, 3 мг/кг или 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой от 3 до 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой 3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой 10 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело обладает одной или более следующими характеристиками: (a) активируемое антитело в нерасщепленном состоянии не вызывает диабет 1 типа у больше чем 50%, больше чем 60%, больше чем 70%, больше чем 80%, 50-100%, 50-75% или 7090% популяции мышей с диабетом без ожирения (NOD) при введении в однократной дозе 3 мг/кг; и (b) AB вызывает диабет 1 типа у больше чем 50%, больше чем 60%, больше чем 70%, больше чем 80%, 50100%, 50-75% или 70-90% популяции NOD мышей при введении в однократной дозе 3 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело обладает одной или более следующими характеристиками: (a) активируемое антитело в нерасщепленном состоянии не вызывает диабет 1 типа у больше чем 50%, больше чем 60%, больше чем 70%, больше чем 80%, 50-100%, 50-75% или 7090% популяции мышей с диабетом без ожирения (NOD) при введении в однократной дозе 10 мг/кг; и (b) AB вызывает диабет 1 типа у больше чем 50%, больше чем 60%, больше чем 70%, больше чем 80%, 50100%, 50-75% или 70-90% популяции NOD мышей при введении в однократной дозе 10 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления АВ вызывает диабет 1 типа у больше чем 50%, больше чем 60%, больше чем 70%, больше чем 80%, 50-100%, 50-75% или 70-90% популяции NOD мышей после введения каждой мыши в популяции однократной дозы АВ в дозе: от 2 до 15 мг/кг, от 3 до 15 мг/кг, от 5 до 15 мг/кг, от 10 до 15 мг/кг, от 2 до 10 мг/кг, от 3 до 10 мг/кг, от 5 до 10 мг/кг, от 2 до 5 мг/кг, от 3 до 5 мг/кг или от 2 до 3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой от 3 до 20 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг или 20 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой от 3 до 20 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой 3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой 5 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза является однократной дозой 20 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии не вызывает диабет 1 типа у больше чем 50% популяции мышей с диабетом без ожирения (NOD), где популя
- 18 043582 ции NOD мышей параллельно вводят дозу антитела против CTLA4.
В некоторых вариантах осуществления популяции NOD мышей вводят однократную дозу активируемого антитела в дозе от 2 до 15 мг/кг, от 3 до 15 мг/кг, от 5 до 15 мг/кг, от 10 до 15 мг/кг, от 2 до 10 мг/кг, от 3 до 10 мг/кг, от 5 до 10 мг/кг, от 2 до 5 мг/кг, от 3 до 5 мг/кг или от 2 до 3 мг/кг одновременно с дозой антитела против CTLA4. В некоторых вариантах осуществления популяции NOD мышей вводят однократную дозу активируемого антитела в дозе 10 мг/кг одновременно с дозой антитела против CTLA4.
В некоторых вариантах осуществления популяции NOD мышей вводят однократную дозу антитела против CTLA4 в дозе от 2 до 15 мг/кг, от 3 до 15 мг/кг, от 5 до 15 мг/кг или от 10 до 15 мг/кг одновременно с дозой активируемого антитела против PD-1. В некоторых вариантах осуществления популяции NOD мышей вводят однократную дозу антитела против CTLA4 в дозе 10 мг/кг одновременно с дозой активируемого антитела против PD-1.
В некоторых вариантах осуществления популяции NOD мышей вводят однократную дозу активируемого антитела в дозе от 5 до 15 мг/кг и однократную дозу антитела против CTLA4 в дозе от 5 до 15 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления популяции NOD мышей вводят однократную дозу активируемого антитела в дозе 10 мг/кг одновременно с однократной дозой антитела против CTLA4 в дозе 10 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления NOD мышь является самкой мыши сублинии NOD/ShiLtJ. В некоторых вариантах осуществления в популяции NOD мышей каждая мышь имеет возраст 5 недель на момент первого введения активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления в популяции NOD мышей каждая мышь имеет возраст 10 недель на момент первого введения активируемого антитела.
Активируемые антитела в активированном состоянии связывают PD-1 и включают: (i) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связываются с PD-1; (ii) маскирующую часть (MM), которая, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, ингибирует связывание АВ с PD-1; и (с) расщепляемую часть (CM), соединенную с AB, где CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру, от N-конца к С-концу: ММ-СМ-АВ или АВ-СМ-ММ.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает соединительный пептид между MM и CM.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает соединительный пептид между CM и AB.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает первый соединительный пептид (LP1) и второй соединительный пептид (LP2), и где активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-LP1-CM-LP2-AB или AB-LP2-CMLP1-MM. В некоторых вариантах осуществления два соединительных пептида не должны обязательно быть идентичными друг другу. В некоторых вариантах осуществления каждый из LP1 и LP2 является пептидом длиной приблизительно 1-20 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из LP1 или LP2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (GS)n, (GGS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 363) и (GGGS)n (SEQ ID NO: 364), где n является целым числом, равным по меньшей мере единице.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из LP1 или LP2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGSG (SEQ ID NO: 365), GGSGG (SEQ ID NO: 366), GSGSG (SEQ ID NO: 367), GSGGG (SEQ ID NO: 368), GGGSG (SEQ ID NO: 369) и GSSSG (SEQ ID NO: 370).
В некоторых вариантах осуществления LP1 включает аминокислотную последовательность GSSGGSGGSGGSG (SEQ ID NO: 371), GSSGGSGGSGG (SEQ ID NO: 372), GSSGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 373), GSSGGSGGSGGSGGGS (SEQ ID NO: 374), GSSGGSGGSG (SEQ ID NO: 375), GSSGGSGGSGS (SEQ ID NO: 376), GGGSSGGS (SEQ ID NO: 65) или GGGSSGG (SEQ ID NO: 1040).
В некоторых вариантах осуществления LP2 включает аминокислотную последовательность GSS, GGS, GGGS (SEQ ID NO: 377), GSSGT (SEQ ID NO: 378) или GSSG (SEQ ID NO: 379).
В некоторых вариантах осуществления AB имеет константу диссоциации (Kd) приблизительно 100 нМ или меньше в отношении связывания с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связывают PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают PD-1, являются моноклональным антителом, доменным антителом, одноцепочечным, Fab-фрагментом, F(ab')2-фрагментом, scFv, scAb, dAb, однодоменным антителом из тяжелой цепи или однодоменным антителом из легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления такое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают PD-1, являются мышиным, другого грызуна, химерным, гуманизированным или полностью человеческим моноклональным антителом.
- 19 043582
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или 47. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает: (a) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 653-657; (b) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 658-663; (с) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 664668; (d) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 669-677; (е) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 678-682; и (f) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 683-687.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1
- 20 043582 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID N0: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); и последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707).
- 21 043582
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD1 включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514, и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); и последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93,
- 22 043582
94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе против PD-1 включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из последовательностей тяжелой цепи, показанных в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе против PD-1 включает аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из последовательностей легкой цепи, показанных в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе против PD-1 включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из последовательностей тяжелой цепи, показанных в табл. 7, и аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из последовательностей легкой цепи, показанных в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе против PD-1 включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей тяжелой цепи, показанных в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе против PD-1 включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей легкой цепи, показанных в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе против PD-1 включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей тяжелой цепи, показанных в табл. 7, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей легкой цепи, показанных в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95,
- 23 043582
96, 97, 98, 99% или более идентична GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); и последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична TNDDY (SEQ ID NO: 1707).
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); и последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713).
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична KGVSTSGYSY (SeQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления, AB в активируемом антителе включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной
- 24 043582 области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательность VH CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательность VH CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательность VL CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательность VL CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательность VL CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, и последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где комбинация является комбинацией трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей CDR последовательности в комбинации трех VH CDR последовательностей (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8, и в комбинации трех VL CDR последовательностей (VL CDR1, VL CDR2 и VL CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей CDR последовательности в комбинации трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, показанной в табл. 9; последовательности VH CDR2, показанной в табл. 9; последовательности VH CDR3, показанной в табл. 9; последовательности VL CDR1, показанной в табл. 9; последовательности
- 25 043582
VL CDR2, показанной в табл. 9; и последовательности VL CDR3, показанной в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR1, показанной в табл. 9; последовательность VH CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR2, показанной в табл. 9; последовательность VH CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR3, показанной в табл. 9; последовательность VL CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR1, показанной в табл. 9; последовательность VL CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR2, показанной в табл. 9; и последовательность VL CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR3, показанной в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация является комбинацией, показанной в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей CDR последовательности в комбинации, показанной в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675 или SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675 или SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74,77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675 или SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, и константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из
- 26 043582 группы, состоящей из 381, 382, 383 и 1807.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675 или SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807, и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, и константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 675; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, константную область тяжелой цепи человеческого им- 27 043582 муноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и
1807, и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, и константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664, константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807, и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; CM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где ком- 28 043582 бинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; CM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93, 99; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 10921102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), которая указана в настоящем изобретении как маска PD034 или PD34, расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2011, и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последователь
- 29 043582 ности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), и комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), которая указана в настоящем изобретении как маска PD034 или PD34, расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2012, и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101), и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101), и комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21
- 30 043582 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), которая указана в настоящем изобретении как маска PD034 или PD34, расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2011, и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), и комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), которая указана в настоящем изобретении как маска PD034 или PD34, расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2001, и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности
- 31 043582 из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), и комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO: 361), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2002, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть
- 32 043582 (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1092), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2003, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1095), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2006, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1096), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2007, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабель
- 33 043582 ной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1097), которая также указана в настоящем изобретении как 2008, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1098), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2009, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1099), которая также указана в настоящем изобретении как 2010, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последо
- 34 043582 вательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO: 1102), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2013, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность TSYCSIEHYPCNTHH (SEQ ID NO: 99), расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1111), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2014, и комбинацию, выбранную из группы, состоящей из: (a) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 47; (b) комбинации последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает последовательность VL CDR1 SEQ ID NO: 676; последовательность VL CDR2 SEQ ID NO: 678; последовательность VL CDR3 SEQ ID NO: 683; последовательность VH CDR1 SEQ ID NO: 653; последовательность VH CDR2 SEQ ID NO: 658; и последовательность VH CDR3 SEQ ID NO: 664; и (с) комбинации последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 21 и последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63,
- 35 043582
381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO:
или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1151; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1152; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1190; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1191; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1198; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1199; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2055; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2054; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2057; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2056; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2059; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2058; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2055; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2053.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2054; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2053.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2057; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2053.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2056; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2053.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2059; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2053.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2058; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2053.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1351-1362; расщепляемую часть (CM), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательно- 36 043582 сти VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 638. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1351-1362; CM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716). В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1351-1362; CM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; VH последовательность SEQ ID NO: 1514 и VL последовательность SEQ ID NO: 638. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1206-1217; CM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где комбинация включает VH CDR последовательности из последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346 и VL CDR последовательности из последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 626. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1206-1217; CM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:
- 37 043582
214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; и комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710). В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1206-1217; CM, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157; VH последовательность SEQ ID NO: 1346 и VL последовательность SEQ ID NO: 626. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно включает константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина или константную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина и константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления константный домен тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63, 381, 382, 383 и 1807. В некоторых вариантах осуществления константный домен легкой цепи человеческого иммуноглобулина является человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 1344.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2012; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2011; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2001; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO: 361), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2002; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1092), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2003; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1095), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2006; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1096), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2007; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последо
- 38 043582 вательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1097), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2008; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1098), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2009; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1099), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2010; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO: 1102), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2013; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1111), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2014; последовательность тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и последовательность легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2012; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2011; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2001; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO: 361), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2002; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1092), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2003; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1095), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2006; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
- 39 043582
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1096), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2007; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1097), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2008; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1098), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2009; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1099), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2010; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO: 1102), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2013; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1111), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2014; вариабельную область тяжелой цепи (VH) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и вариабельную область легкой цепи (VL) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2012; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2011; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2001; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDR-области) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO: 361), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2002; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDR-области) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую амино- 40 043582 кислотную последовательность ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1092), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2003; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDR-области) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1095), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2006; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1096), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2007; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1097), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2008; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1098), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2009; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1099), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2010; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO: 1102), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2013; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает MM, включающую аминокислотную последовательность ACRICQDHPATKWNS (SEQ ID NO: 549), CM, включающую аминокислотную последовательность ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1111), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2014; определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDRобласти) последовательности тяжелой цепи (HC) SEQ ID NO: 546 и определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR-области) последовательности легкой цепи (LC) SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1808, 1810, 1812, 1814, 1816, 1818, 1820, 1822, 1824, 1826, 1828 и 1830; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1808; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1810; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1812; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1814; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
- 41 043582
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1816; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1818; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1820; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1822; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1824; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1826; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1828; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1830; и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SeQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ iD NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую ами- 42 043582 нокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеи
- 43 043582 новой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 38, и последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности нуклеиновой кислоты легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 и 60.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет константу диссоциации, т.е. константа диссоциации в состоянии равновесия, Kd для связывания с AB, которая превышает Kd для связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая не превышает Kd для связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая не меньше Kd для связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая приблизительно равна Kd для связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая меньше Kd для связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая не более чем в 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500 или 1000 раз превышает Kd для связывания AB с PD-1. В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая в пределах 1-5, 2-5, 2-10, 5-10, 5-20, 5-50, 5100, 10-100, 10-1000, 20-100, 20-1000 или 100-1000 раз превышает Kdgля связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая меньше аффинности связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая не превышает аффинность связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая приблизительно равна аффинности связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая не меньше аффинности связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая превышает аффинность связывания AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая в 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500 или 1000 раз меньше аффинности связывания AB с PD-1. В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая в пределах 1-5, 2-5, 2-10, 510, 5-20, 5-50, 5-100, 10-100, 10-1000, 20-100, 20-1000 или 100-1000 раз меньше аффинности связывания AB с PD-1. В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая в 2-20 раз меньше аффинности связывания AB с PD-1. В некоторых вариантах осуществления MM нековалентно связана с AB и при эквимолярной концентрации к AB не ингибирует связывание AB с PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM не препятствует или не конкурирует с AB за связывание с PD-1, когда активируемое антитело находится в расщепленном состоянии.
В некоторых вариантах осуществления MM является полипептидом длиной приблизительно 2-40 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления MM является полипептидом длиной до приблизительно 40 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления MM является полипептидом длиной не больше 40 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления последовательность полипептида MM отличается от последовательности PD-1. В некоторых вариантах осуществления последовательность полипептида MM отличается от последовательности человеческого PD-1. В некоторых вариантах осуществления последовательность полипептида MM не больше чем на 50% идентична любому природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления последовательность полипептида MM отличается от последовательности PD-1 и не больше чем на 40%, 30%, 25%, 20%, 15% или 10% идентична любому природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления последовательность полипептида MM не больше чем на 50% идентична человеческому PD-1. В некоторых вариантах осуществления последовательность полипептида MM отличается от последовательности PD-1 и не больше чем на 40%, 30%, 25%, 20%, 15% или 10% идентична человеческому PD-1.
В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66-213, 384-514, 548-571, 1206-1295 и 1351-1465. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66-213, 384-514, 548-571, 1206-1295 и 1351-1465. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из
- 44 043582 группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 67, 70, 71, 74, 77, 81, 82, 84, 90, 91, 93 и 99. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66, 71, 74, 77, 82, 84, 90, 91, 93 и 99. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1206-1217. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1351-1362.
В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66-213. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 66-213.
В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 384-514. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 384-514.
В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 548-571. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 548-571.
В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1206-1295. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1206-1295.
В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1351-1465. В некоторых вариантах осуществления MM включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1351-1465.
В некоторых вариантах осуществления антитело или активируемое антитело включает тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2052 и 2053.
В некоторых вариантах осуществления антитело или активируемое антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2054-2059.
В некоторых вариантах осуществления антитело или активируемое антитело включает тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2052 и 2053, и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2054-2059.
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в два раза больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в пять раз больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в 10 раз больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в 20 раз больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в 40 раз больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в 100 раз больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в 1000 раз больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
- 45 043582
В некоторых вариантах осуществления соединение MM с AB уменьшает способность AB связывать
PD-1 таким образом, что константа диссоциации (Kd) AB, при соединении с MM, в отношении PD-1 по меньшей мере в 10000 раз больше, чем Kd AB, если оно не соединено с MM, в отношении PD-1.
В некоторых вариантах осуществления, в присутствии PD-1, MM уменьшает способность AB связывать PD-1 по меньшей мере на 90%, когда CM не расщеплен, по сравнению с тем, когда CM расщеплен, при анализе in vitro с помощью анализа с вытеснением мишени, такого как, например, анализ, описанный в публикации PCT WO 2010/081173, содержание которой настоящим полностью включено посредством отсылки.
В некоторых вариантах осуществления протеаза, которая расщепляет CM, активна, например апрегулирована, в пораженной ткани, при этом протеаза расщепляет CM в активируемом антителе, когда активируемое антитело подвергается воздействию протеазы.
В некоторых вариантах осуществления протеазу продуцирует опухоль, которая находится вблизи от T-клеток, которые экспрессируют PD-1, и протеаза расщепляет CM в активируемом антителе, когда активируемое антитело подвергается воздействию протеазы. В некоторых вариантах осуществления протеазу продуцирует опухоль, которая колокализована с Т-клетками, которые экспрессируют PD-1, и протеаза расщепляет CM в активируемом антителе, когда активируемое антитело подвергается воздействию протеазы.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в два раза больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии (т.е. когда активируемое антитело находится в расщепленном состоянии) AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в пять раз больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии (т.е. когда активируемое антитело находится в расщепленном состоянии) AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии (т.е. когда активируемое антитело находится в расщепленном состоянии) AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в 20 раз больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии (т.е. когда активируемое антитело находится в расщепленном состоянии) AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в 40 раз больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в 50 раз больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в 100 раз больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM помещают в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание активируемого антитела с PD-1 уменьшается с константой диссоциации, которая по меньшей мере в 200 раз больше, чем константа диссоциации для связывания немодифицированного AB с PD-1, тогда как в расщепленном состоянии AB связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM является полипептидом длиной до 15 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления CM является полипептидом, который включает первую расщепляемую часть (CM1), которая является субстратом по меньшей мере для одной матриксной металлопротеиназы (MMP), и вторую расщепляемую часть (CM2), которая является субстратом по меньшей мере для одной сериновой протеазы (SP). В некоторых вариантах осуществления каждая субстрат- 46 043582 ная последовательность CM1 и субстратная последовательность CM2 CM1-CM2 субстрата независимо представляет собой полипептид длиной до 15 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для одной протеазы, которая апрегулирована или предположительно апрегулирована при раке. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для одной протеазы, которая апрегулирована или предположительно апрегулирована при воспалении. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для одной протеазы, которая апрегулирована или предположительно апрегулирована при аутоиммунной реакции.
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для одной протеазы, выбранной из группы, состоящей из матриксной металлопротеиназы (MMP), тромбина, эластазы нейтрофилов, цистеиновой протеазы, легумаина и сериновой протеазы, такой как матриптаза (MT-SP1) и урокиназа (uPA). Без ограничения теорией, считается, что такие протеазы апрегулированы по меньшей мере при одном из рака, воспаления и/или аутоиммунной реакции.
Примеры субстратов включают, без ограничения перечисленными, субстраты, расщепляемые один или более следующими ферментами или протеазами, перечисленными в табл. 3.
В некоторых вариантах осуществления CM выбрана для применения с определенной протеазой, например протеазой, которая, как известно, колокализована с мишенью активируемого антитела. Например, протеазу продуцирует опухоль, которая находится вблизи от T-клеток, которые экспрессируют PD1. В некоторых вариантах осуществления протеазу продуцирует опухоль, которая колокализована с Tклетками, которые экспрессируют PD-1.
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для одной MMP. Примеры MMP включают MMP, перечисленные в табл. 3. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для протеазы, выбранной из группы, состоящей из MMP9, MMP14, MMP1, MMP3, MMP13, MMP17, MMP11 и MMP19. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для MMP9. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для MMP14.
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом, который включает последовательность
TGRGPSWV (SEQ ID
NO: 295); SARGPSRW (SEQ ID NO: 319); TARGPSFK (SEQ ID NO: 297);
LSGRSDNH (SEQ ID NO: 294); GGWHTGRN (SEQ ID NO: 320); HTGRSGAL (SEQ ID NO: 321); PLTGRSGG (SEQ ID NO: 296); AARGPAIH (SEQ ID
NO: 322); RGPAFNPM (SEQ ID NO: 323); SSRGPAYL (SEQ ID NO: 324);
RGPATPIM (SEQ ID NO: 325); RGPA (SEQ ID NO: 326); GGQPSGMWGW (SEQ ID NO: 327); FPRPLGITGL (SEQ ID NO: 328); VHMPLGFLGP (SEQ
ID NO: 302); SPLTGRSG (SEQ ID NO: 329); SAGFSLPA (SEQ ID NO:
330); LAPLGLQRR (SEQ ID NO: 331); SGGPLGVR (SEQ ID NO: 332);
PLGL (SEQ ID NO: 333); LSGRSGNH (SEQ ID NO: 1157); SGRSANPRG (SEQ ID NO: 1158); LSGRSDDH (SEQ ID NO: 1161); LSGRSDIH (SEQ ID
NO: 1162); LSGRSDQH (SEQ ID NO: 1165); LSGRSDTH (SEQ ID NO:
1166); LSGRSDYH (SEQ ID NO: 1169); LSGRSDNP (SEQ ID NO: 1520);
LSGRSANP (SEQ ID NO: 1695); LSGRSANI (SEQ ID NO: 1696); и/или
LSGRSDNI (SEQ ID NO: 1697).
В некоторых вариантах осуществления LSGRSDNH (SEQ ID NO: 294). CM включает аминокислотную последовательность
В некоторых вариантах осуществления TGRGPSWV (SEQ ID NO: 295). CM включает аминокислотную последовательность
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность PLTGRSGG (SEQ ID NO: 296).
В некоторых вариантах осуществления GGQPSGMWGW (SEQ ID NO: 327). CM включает аминокислотную последовательность
В некоторых вариантах осуществления FPRPLGITGL (SEQ ID NO: 328). CM включает аминокислотную последовательность
В некоторых вариантах осуществления VHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 302). CM включает аминокислотную последовательность
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность PLGL (SEQ ID NO: 333).
В некоторых вариантах осуществления SARGPSRW (SEQ ID NO: 319). CM включает аминокислотную последовательность
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность
- 47 043582
TARGPSFK (SEQ ID NO: 297).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность
GGWHTGRN (SEQ ID NO: 320).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность
HTGRSGAL (SEQ ID NO: 321).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность AARGPAIH (SEQ ID NO: 322).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность RGPAFNPM (SEQ ID NO: 323).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность SSRGPAYL (SEQ ID NO: 324).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность RGPATPIM (SEQ ID NO: 325).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность RGPA (SEQ ID NO: 326).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSGNH (SEQ ID NO: 1157).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность SGRSANPRG (SEQ ID NO: 1158).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSDDH (SEQ ID NO: 1161).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSDIH (SEQ ID NO: 1162).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSDQH (SEQ ID NO: 1165).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSDTH (SEQ ID NO: 1166).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSDYH (SEQ ID NO: 1169).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSDNP (SEQ ID NO: 1520).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSANP (SEQ ID NO: 1695).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSANI (SEQ ID NO: 1696).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LSGRSDNI (SEQ ID NO: 1697).
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для MMP и включает последовательность
ISSGLSS (SEQ ID
NO: 334); QNQALRMA (SEQ ID NO: 305); AQNLLGMV (SEQ ID NO: 304);
STFPFGMF (SEQ ID NO: 307); PVGYTSSL (SEQ ID NO: 335); DWLYWPGI (SEQ ID NO: 336), ISSGLLSS (SEQ ID NO: 308), LKAAPRWA (SEQ ID
NO: 337); GPSHLVLT (SEQ ID NO: 338); LPGGLSPW (SEQ ID NO: 339);
MGLFSEAG (SEQ ID NO: 340); SPLPLRVP (SEQ ID NO: 341); RMHLRSLG (SEQ ID NO: 342); LAAPLGLL (SEQ ID NO: 306); AVGLLAPP (SEQ ID
NO: 303); LLAPSHRA (SEQ ID NO: 343); PAGLWLDP (SEQ ID NO: 309);
MIAPVAYR (SEQ ID NO: 1698); RPSPMWAY (SEQ ID NO: 1699); WATPRPMR (SEQ ID NO: 1700); FRLLDWQW (SEQ ID NO: 1701); ISSGL (SEQ ID NO:
1702); ISSGLLS (SEQ ID NO: 1703); и/или ISSGLL (SEQ ID NO: 1704) .
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность ISSGLSS (SEQ ID NO: 334).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность QNQALRMA (SEQ ID NO: 305).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность AQNLLGMV (SEQ ID NO: 304).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность STFPFGMF (SEQ ID NO: 307).
- 48 043582
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность
PVGYTSSL (SEQ ID NO: 335).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность
DWLYWPGI (SEQ ID NO: 336).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность ISSGLLSS (SEQ ID NO: 308).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LKAAPRWA (SEQ ID NO: 337).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность GPSHLVLT (SEQ ID NO: 338).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LPGGLSPW (SEQ ID NO: 339).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность MGLFSEAG (SEQ ID NO: 340).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность SPLPLRVP (SEQ ID NO: 341).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность RMHLRSLG (SEQ ID NO: 342).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LAAPLGLL (SEQ ID NO: 306).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность AVGLLAPP (SEQ ID NO: 303).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность LLAPSHRA (SEQ ID NO: 343).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность PAGLWLDP (SEQ ID NO: 309).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность MIAPVAYR (SEQ ID NO: 1698).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность RPSPMWAY (SEQ ID NO: 1699).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность WATPRPMR (SEQ ID NO: 1700).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность FRLLDWQW (SEQ ID NO: 1701).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность ISSGL (SEQ ID NO: 1702).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность ISSGLLS (SEQ ID NO: 1703).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность ISSGLL (SEQ ID NO: 1704).
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для тромбина.
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для тромбина и включает последовательность GPRSFGL (SEQ ID NO: 344) или GPRSFG (SEQ ID NO: 345).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность GPRSFGL (SEQ ID NO: 344).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность GPRSFG (SEQ ID NO: 345).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
NTLSGRSENHSG (SEQ ID NO: 298); NTLSGRSGNHGS (SEQ ID
NO: 299); TSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 300); TSGRSANP (SEQ ID NO: 301); VAGRSMRP (SEQ ID NO: 310); WPEGRRS (SEQ ID NO: 311);
ILPRSPAF (SEQ ID NO: 312); MVLGRSLL (SEQ ID NO: 313); QGRAITFI (SEQ ID NO: 314); SPRSIMLA (SEQ ID NO: 315); и SMLRSMPL (SEQ ID NO: 316).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность NTLSGRSENHSG (SEQ ID NO: 298).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность NTLSGRSGNHGS (SEQ ID NO: 299).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность
- 49 043582
TSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 300).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность
TSGRSANP (SEQ ID NO: 301).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность VAGRSMRP (SEQ ID NO: 310).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность WPEGRRS (SEQ ID NO: 311).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность ILPRSPAF (SEQ ID NO: 312).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность MVLGRSLL (SEQ ID NO: 313).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность QGRAITFI (SEQ ID NO: 314).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность SPRSIMLA (SEQ ID NO: 315).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность SMLRSMPL (SEQ ID NO: 316).
В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294-361, 1092-1112, 1157, 1158, 1161, 1162, 1165, 1166, 1169, 1520 и 1695-1704. В некоторых вариантах осуществления CM включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 214, 294, 300, 302, 303, 305, 308, 318, 347, 361, 1092-1102, 1111 и 1157.
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для эластазы нейтрофилов. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для сериновой протеазы. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для uPA. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для легумаина. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для матриптазы. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для цистеиновой протеазы. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом для цистеиновой протеазы, такой как ка тепсин.
В некоторых вариантах осуществления CM является CM1-CM2 субстратом и включает последова тельность
ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214); ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 346); AVGLLAPPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 347); TSTSGRSANPRGGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 348); VHMPLGFLGPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 349); TSTSGRSANPRGGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 350); AVGLLAPPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 318); LSGRSDNHGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 351);
VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 352); LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 353); LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 354); LSGRSGNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 355); ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 356); LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 357);
QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 358); LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 359); QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 360);
ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO: 361); ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1092); AVGLLAPPTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1093); AVGLLAPPSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1094); ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1095); ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1096); ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1097); ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1098); ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1099); ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100); ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101); ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO: 1102);
AVGLLAPPGGLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1103); AVGLLAPPGGLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1104); AVGLLAPPGGLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1105);
AVGLLAPPGGLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1106); AVGLLAPPGGLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1107); AVGLLAPPGGLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1108);
- 50 043582
AVGLLAPPGGLSGRSANP (SEQ ID NO: 1109); AVGLLAPPGGLSGRSANI (SEQ ID NO: 1110); ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1111); и/или
AVGLLAPPGGLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1112) .
В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2001. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 346), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1001/LP'/0001, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 347), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1004/LP'/0003, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность TSTSGRSANPRGGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 348), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0003/LP'/1004, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность VHMPLGFLGPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 349), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1003/LP'/0003, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность TSTSGRSANPRGGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 350), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0003/LP'/1003, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 318), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1004/LP'/0001, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность LSGRSDNHGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 351), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0001/LP'/1004, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 352), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1003/LP'/0001, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 353), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0001/LP'/1003, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 354), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0001/LP'/1001, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность LSGRSGNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 355), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0002/LP'/1001, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 356), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1001/LP'/0002, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1CM2 субстрат включает последовательность LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 357), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0001/LP'/1002, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 358), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1002/LP'/0001, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 359), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0002/LP'/1002, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 360), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 1002/LP'/0002, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GGSGGS (SEQ ID NO: 1519). В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO: 361), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2002. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2
- 51 043582 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1092), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2003. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1093), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2004. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1094), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2005. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1095), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2006. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1096), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2007. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1097), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2008. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1098), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2009. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1099), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2010. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2011. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2012. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO: 1102), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2013. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1103), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3006. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1104), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3007. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1105), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3008. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1106), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3009. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1107), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3010. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1108), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3011. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSANP (SEQ ID NO: 1109), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3012. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSANI (SEQ ID NO: 1110), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3013. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1111), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 2014. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность и/или AVGLLAPPGGLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1112), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 3014. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность GLSGRSDNHGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 1970), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0001/LP'/1004, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG. В некоторых вариантах осуществления CM1-CM2 субстрат включает последовательность GLSGRSDNHGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 1971), которая также указана в настоящем изобретении как субстрат 0001/LP'/1003, где LP' при использовании в данном CM1-CM2 субстрате является аминокислотной последовательностью GG.
В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для двух протеаз. В некоторых вариантах осуществления каждая протеаза выбрана из группы, состоящей из протеаз, показанных в табл. 3. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для двух протеаз, где одна из протеаз выбрана из группы, состоящей из MMP, тромбина, эластазы нейтрофилов, цистеиновой протеазы, uPA, легумаина и матриптазы, и другая протеаза выбрана из группы, состоящей из протеаз, показанных в табл. 3. В некоторых вариантах осуществления CM является субстратом по меньшей мере для двух протеаз, выбранных из группы, состоящей из MMP, тромбина, эластазы нейтрофилов, цистеиновой протеазы, uPA, легумаина и матриптазы.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает, по меньшей мере, первую CM и вторую CM. В некоторых вариантах осуществления первая CM и вторая CM представляют собой полипептиды длиной не больше 15 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления первая CM и вторая CM в активируемом антителе в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру, от Nконца к С-концу: ММ-СМ1-СМ2-АВ или АВ-СМ2-СМ1-ММ. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна из первой CM и второй CM является полипептидом, который функционирует как
- 52 043582 субстрат для протеазы, выбранной из группы, состоящей из MMP, тромбина, эластазы нейтрофилов, цистеиновой протеазы, uPA, легумаина и матриптазы. В некоторых вариантах осуществления первую CM расщепляет первое расщепляющее средство, выбранное из группы, состоящей из MMP, тромбина, эластазы нейтрофилов, цистеиновой протеазы, uPA, легумаина и матриптазы, в целевой ткани, и вторую CM расщепляет второе расщепляющее средство в целевой ткани. В некоторых вариантах осуществления другая протеаза выбрана из группы, состоящей из протеаз, показанных в табл. 3. В некоторых вариантах осуществления первое расщепляющее средство и второе расщепляющее средство являются одной и той же протеазой, выбранной из группы, состоящей из MMP, тромбина, эластазы нейтрофилов, цистеиновой протеазы, uPA, легумаина и матриптазы, а первая CM и вторая CM являются разными субстратами для фермента. В некоторых вариантах осуществления первое расщепляющее средство и второе расщепляющее средство являются одной и той же протеазой, выбранной из группы, состоящей из протеаз, показанных в табл. 3. В некоторых вариантах осуществления первое расщепляющее средство и второе расщепляющее средство являются разными протеазами. В некоторых вариантах осуществления первое расщепляющее средство и второе расщепляющее средство колокализованы в целевой ткани. В некоторых вариантах осуществления первую CM и вторую CM расщепляет по меньшей мере одно расщепляющее средство в целевой ткани.
В некоторых вариантах осуществления активируемые антитела подвергаются воздействию и расщепляются протеазой таким образом, что в активированном или расщепленном состоянии активированное антитело включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая включает, по меньшей мере, часть последовательности LP2 и/или CM после расщепления CM протеазой.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело также включает средство, конъюгированное с AB. В некоторых вариантах осуществления средство, конъюгированное с AB или AB активируемого антитела, является терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления средство конъюгировано с AB через расщепляемый линкер. В некоторых вариантах осуществления средство конъюгировано с AB через линкер, который включает по меньшей мере одну последовательность CM1CM2 субстрата. В некоторых вариантах осуществления средство конъюгировано с AB через нерасщепляемый линкер.
В некоторых вариантах осуществления средство является противовоспалительным средством.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело также включает детектируемую часть. В некоторых вариантах осуществления детектируемая часть является диагностическим средством.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело также включает сигнальный пептид. В некоторых вариантах осуществления сигнальный пептид конъюгирован с активируемым антителом через спейсер. В некоторых вариантах осуществления спейсер конъюгирован с активируемым антителом без сигнального пептида. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела в следующей структуре, от N-конца к С-концу: спейсер-ММ-СМ-AB. Пример спейсера, соединенного непосредственно с N-концом MM активируемого антитела, выбран из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. Дополнительные примеры спейсеров включают GQSGQG (SEQ ID NO: 2042), QSGQG (SEQ ID NO: 2043), SGQG (SEQ ID NO: 2044), GQG (SEQ ID NO: 2045), QG (SEQ ID NO: 2046) и G. В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQG (SEQ ID NO: 362). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQ (SEQ ID NO: 913). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSG (SEQ ID NO: 914). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQS (SEQ ID NO: 915). В некоторых вариантах осуществления, спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQ (SEQ ID NO: 916). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QG (SEQ ID NO: 917). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотный остаток Q. В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность GQSGQG (SEQ ID NO: 2042). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QSGQG (SEQ ID NO: 2043). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность SGQG (SEQ ID NO: 2044). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность GQG (SEQ ID NO: 2045). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QG (SEQ ID NO: 2046). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность G. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не включает спейсерную последовательность.
В некоторых вариантах осуществления АВ активируемого антитела обычно содержит одну или более дисульфидных связей. В некоторых вариантах осуществления AB может быть сконструировано таким образом, что оно включает одну или более дисульфидных связей.
- 53 043582
В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела более длительный, чем у соответствующего антитела; например, рК активируемого антитела более длительная, чем у соответствующего антитела. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела аналогичен полупериоду существования в сыворотке соответствующего антитела. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 15 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 12 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 11 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 10 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 9 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 8 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 7 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере б дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 5 дней при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 4 дня при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 3 дня при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 2 дня при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 24 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 20 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 18 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 16 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 14 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 12 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 10 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 8 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере б часов при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 4 ч при введении в организм. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования в сыворотке активируемого антитела составляет по меньшей мере 3 ч при введении в организм.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 является моноспецифичным.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 является мультиспецифичным, например, в качестве неограничивающего примера, биспецифичным или трифункциональным. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 входит в состав пробиспецифичной захватывающей T-клетки (BITE) молекулы, т.е. BITE включает маскирующую часть и расщепляемую часть. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 входит в состав про-химерного антигенного рецептора (CAR) модифицированной T-клетки, модифицированной NK-клетки или другой модифицированной иммунной эффекторной клетки. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 входит в состав другого рекомбинантного рецептора на иммунной эффекторной клетке; т.е. про-CAR или другой про-рекомбинантный рецептор включают маскирующую часть и расщепляемую часть.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включены в мультиспецифичное активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела специфично связывает PD-1. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включены в биспецифичное активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где по меньшей мере одно плечо биспецифичного активируемого антитела специфично связывает PD-1.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную по- 54 043582 следовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23,
25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:
21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или SEQ ID NO: 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45 или 47. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 45. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 21 и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 47.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает: (a) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 653-657; (b) определяю- 55 043582 щую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 658-663; (с) определяющую комплементарность область вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 664-668; (d) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 669-677; (е) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 678-682; и (f) определяющую комплементарность область вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3), включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 683-687
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653); последовательность VH CDR2 включает
- 56 043582
YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658); и последовательность VH CDR3 включает EDYGTSPFVY (SEQ ID
NO: 664); последовательность VL CDR1 включает RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676); последовательность VL CDR2 включает AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и последовательность VL CDR3 включает
QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1346 и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); и последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GITFSNSG (SEQ ID NO: 1705); последовательность VH CDR2 включает IWYDGSKR (SEQ ID NO: 1706); последовательность VH CDR3 включает TNDDY (SEQ ID NO: 1707); последовательность VL CDR1 включает QSVSSY (SEQ ID NO: 1708); последовательность VL CDR2 включает DAS (SEQ ID NO: 1709); и последовательность VL CDR3 включает QQSSNWPRT (SEQ ID NO: 1710).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию CDR последовательностей аминокислотной последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1514 и CDR последовательностей аминокислотной последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH
- 57 043582
CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); и последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где последовательность VH CDR1 включает GYTFTNYY (SEQ ID NO: 1711); последовательность VH CDR2 включает INPSNGGT (SEQ ID NO: 1712); последовательность VH CDR3 включает RRDYRFDMGFDY (SEQ ID NO: 1713); последовательность VL CDR1 включает KGVSTSGYSY (SEQ ID NO: 1714); последовательность VL CDR2 включает LAS (SEQ ID NO: 1715); и последовательность VL CDR3 включает QHSRDLPLT (SEQ ID NO: 1716).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1346, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 626.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает аминокислотную по- 58 043582 следовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1514, и аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 638.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 1 (VH CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRH1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 2 (VH CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRH2), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области тяжелой цепи 3 (VH CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRH3), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 1 (VL CDR1, также указанной в настоящем изобретении как CDRL1), последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 2 (VL CDR2, также указанной в настоящем изобретении как CDRL2) и последовательности определяющей комплементарность области вариабельной области легкой цепи 3 (VL CDR3, также указанной в настоящем изобретении как CDRL3), где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2, последовательности VH CDR3, последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, где по меньшей мере одна CDR последовательность выбрана из группы, состоящей из последовательности VH CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR2, показанной в табл. 8; последовательности VH CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VH CDR3, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR1, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR1, показанной в табл. 8; последовательности VL CDR2, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR2, показанной в табл. 8; и последовательности VL CDR3, которая включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична последовательности VL CDR3, показанной в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, и последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где комбинация является комбинацией трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно плечо мультиспецифичного активируемого антитела, например биспецифичного активируемого антитела, включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, и последовательности VL CDR1, последовательности VL CDR2 и последовательности VL CDR3, показанных в одной строке в табл. 8, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей VH CDR последовательности, показанной в одной строке в табл. 8, и соответствующей VL CDR последовательности, показанной в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь, которая включает комбинацию последовательности VH CDR1, последовательности VH CDR2 и последовательности VH CDR3, где каждая CDR последовательность в комбинации включает последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична соответствующей CDR последовательности в комбинации трех CDR последовательностей тяжелой цепи (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), показанных в одной строке в табл. 8.
В некоторых вариантах осуществления антитела против PD-1 и/или активируемые антитела против PD-1, описанные в настоящем изобретении, применяются вместе с одним или более дополнительными
- 59 043582 средствами или комбинацией дополнительных средств. Подходящие дополнительные средства включают другие экспериментальные противоопухолевые средства, разрабатываемые для определенных применений, существующие фармацевтические и/или хирургические терапии для предполагаемого применения, такого как, например, при раке. Например, антитела против PD-1 и/или активируемые антитела против PD-1 могут применяться в сочетании с дополнительным химиотерапевтическим или противоопухолевым средством.
В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство включает по меньшей мере одно экспериментальное противоопухолевое средство, разрабатываемое для определенных применений. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство включает по меньшей мере одно вещество, которое уже одобрено для одного показания, но проходит исследование для другого. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство включает по меньшей мере одно вещество, которое в настоящее время не одобрено для применения ни по одному показанию, но проходит исследование для применения по одному или более показаниям в целях получения разрешения регулирующего органа. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство включает по меньшей мере одно средство, которое является фармацевтической терапией для предполагаемого применения. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство включает по меньшей мере одно средство, которое является хирургической терапией рака. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство включает по меньшей мере одно средство, которое является фармацевтической терапией для предполагаемого применения. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство включает по меньшей мере одно средство, которое является хирургической терапией рака. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство является химиотерапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство является противоопухолевым средством. В некоторых вариантах осуществления дополнительные средства являются комбинацией любых двух или более таких средств.
В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство(а) является химиотерапевтическим средством, таким как химиотерапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из доцетаксела, паклитаксела, абраксана (т.е. альбумин-конъюгированного паклитаксела), доксорубицина, оксалиплатина, карбоплатина, цисплатина, иринотекана и гемцитабина.
В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство(а) является ингибитором контрольной точки, ингибитором киназы, средством, направляющим ингибиторы в микроокружение опухоли, и/или агонистом T-клеток или NK-клеток. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство(а) является лучевой терапией, отдельно или в комбинации с другим дополнительным средством(ами), таким как химиотерапевтическое или противоопухолевое средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство(а) является вакциной, онковирусом и/или ДК-активирующим средством, таким как, в качестве неограничивающего примера, агонист toll-подобного рецептора (TLR) и/или a-CD40. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство(а) является опухолеспецифичным антителом, созданным для уничтожения опухоли посредством ADCC или посредством прямого конъюгирования с токсином (например, конъюгатом антитела-лекарственного средства (ADC)).
В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольной точки является ингибитором мишени, выбранной из группы, состоящей из CTLA-4, LAG-3, PD-1, PD-1, TIGIT, TIM-3, B7H4, BTLA и Vista. В некоторых вариантах осуществления ингибитор киназы выбран из группы, состоящей из ингибиторов В-RAFi, MEKi и Btk, таких как ибрутиниб. В некоторых вариантах осуществления ингибитором киназы является кризотиниб. В некоторых вариантах осуществления ингибитором B-RAF является вемурафиниб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор микроокружения опухоли выбран из группы, состоящей из ингибитора ИДО, ингибитора a-CSF1R, ингибитора a-CCR4, TGF-бета, супрессорной клетки миелоидного происхождения или Т-регуляторной клетки. В некоторых вариантах осуществления агонист выбран из группы, состоящей из Ох4о, GITR, CD137, ICOS, CD27 и HVEM.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором LAG-3. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором PD-1. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором PD-1. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором TIGIT. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором TIM-3. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором B7H4. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором Vista. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором B-RAFi. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором MEKi. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором Btk. В некоторых вариантах осуществления ингибитором является ибрутиниб. В некоторых вариантах осуществления ингибитором является кризотиниб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором ИДО. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором a-CSF1R. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является ингибитором a-CCR4. В некоторых вариантах осуществления ингибитором является TGF-бета. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является супрессорной клеткой
- 60 043582 миелоидного происхождения. В некоторых вариантах осуществления ингибитор является Трегуляторной клеткой.
В некоторых вариантах осуществления агонистом является Ox40. В некоторых вариантах осуществления агонистом является GITR. В некоторых вариантах осуществления агонистом является CD137. В некоторых вариантах осуществления агонистом является ICOS. В некоторых вариантах осуществления агонистом является CD27. В некоторых вариантах осуществления агонистом является HVEM.
В некоторых вариантах осуществления антитело и/или активируемое антитело против PD-1 вводят в течение и/или после лечения в комбинации с одним или более дополнительными средствами, такими как, например, химиотерапевтическое средство, противовоспалительное средство и/или иммунодепрессант. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство входят в состав одной терапевтической композиции, и антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство вводят одновременно. В альтернативе антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство отделены друг от друга, например, каждое входит в состав отдельной терапевтической композиции, и антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство вводят одновременно, или антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство вводят в разное время в течение курса лечения. Например, антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 вводят до введения дополнительного средство, антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 вводят после введения дополнительного средство или антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство вводят поочередно. Как описано в настоящем изобретении, антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство вводят в однократных дозах или в многократных дозах.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство(а) вводят одновременно. Например, антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство(а) могут входить в состав одной композиции или введены в двух или более отдельных композициях. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство(а) вводят последовательно, или антитело против PD-1, и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство вводят в разное время в течение курса лечения.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 вводят в течение и/или после лечения в комбинации с одним или более дополнительными средствами, такими как, в качестве неограничивающего примера, химиотерапевтическое средство, противовоспалительное средство и/или иммунодепрессант, такие как алкилирующее средство, антиметаболит, антимикротубулиновое средство, ингибитор топоизомеразы, цитотоксический антибиотик и/или любое другое средство, повреждающее нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является таксан, такой как паклитаксел (например, Абраксан®). В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является антиметаболит, такой как гемцитабин. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является алкилирующее средство, такое как химиотерапевтическое средство на основе платины, такое как карбоплатин или цисплатин. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является средство направленного воздействия, такое как ингибитор киназы, например, сорафениб или эрлотиниб. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является средство направленного воздействия, такое как другое антитело, например, моноклональное антитело (например, бевацизумаб), биспецифичное антитело или мультиспецифичное антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является ингибитор протеасом, такой как бортезомиб или карфилзомиб. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является иммуномодулирующее средство, такое как ленолидомид или IL-2. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является радиация. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является средство, которое специалисты в данной области считают стандартом лечения. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является химиотерапевтическое средство, известное специалистам в данной области.
В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является другое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и/или другое активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является другое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и/или другое активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент против той же мишени, что и первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и/или активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, например, против PD-1. В некоторых вариантах осуществления дополнительным средством является другое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и/или другое активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент против мишени, отличающейся от мишени первого антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, первого конъюгированного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или активируемого антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
В качестве неограничивающего примера, антитело или антигенсвязывающий фрагмент и/или AB
- 61 043582 активируемого антитела является партнером по связыванию с любой мишенью, перечисленной в табл. 1.
Таблица 1 _______________________Примеры мишеней_______________________
1-92-LFA-3 CD52 DL4 4 HVEM LIF-R STEAP1
Альфа-4 интегрин CD5 6 DLK1 Гиалуронидаза Льюис X STEAP2
Альфа-V интегрин CD64 DLL 4 ICOS LIGHT TAG-72
альфа4бета1 интегрин CD70 DPP-4 ТЕЫальфа LRP4 TAPA1
альфа4бета7 интегрин CD71 DSG1 ТЕЫбета LRRC26 ТСЕбета
AGR2 CD74 EGFR IFNraMMa MCSP TIGIT
Анти-ЛьюисY EGFRviii IgE Мезотелии TIM-3
Апелина J рецептор CD80 Эндотелина В рецептор (ETBR) Рецептор IgE (FceRI) MRP4 TLR2
APRIL CD81 ENPP3 IGF MUC1 TLR4
Муцин-16
В7-Н4 CD86 ЕрСАМ IGF1R (MUC16, CA-125) TLR6
BAFF CD95 EPHA2 IL1B Na/K АТФаза Эластаза TLR7
ВТ LA CD117 EPHB2 ILIR нейтрофило TLR8
в
С5 комплемента CD125 ERBB3 IL2 NGF TLR9
С-242 CD132 (IL-2RG) F-белок PCB IL11 Никастрин TMEM31
СА9 CD133 FAP IL12 Notchрецепторы ФНОальфа
СА19-9 (Льюис а) CD137 FGF-2 IL12p40 Notch 1 TNFR
Карбоангидраза 9 CD138 FGF8 IL-12R, IL12R6eTal Notch 2 TNFRS12A
CD2 CD166 FGFR1 IL13 Notch 3 TRAIL-RI
CD3 CD172A FGFR2 IL13R Notch 4 TRAIL-R2
CD6 CD248 FGFR3 IL15 NOV Трансферрин
CD9 CDH6 FGFR4 IL17 OSM-R Рецептор трансферрина
CDlla СЕАСАМ5 (CEA) Рецептор фолата IL18 OX-40 TRK-A
CD19 СЕАСАМ6 (NCA-90) GAL3ST1 IL21 PAR2 TRK-B
CD20 Клаудин- 3 G-CSF IL23 PDGF-AA uPAR
CD22 Клаудин- 4 G-CSFR IL23R PDGF-BB VAP1
CD24 cMet GD2 IL27/IL27R (wsxl) РВСЕИальфа VCAM-1
CD25 Коллаген GITR IL29 PDGFR6eTa VEGF
CD27 Cripto GLUT1 IL-31R PD-1 VEGF-A
CD28 CSFR GLUT 4 IL31/IL31R PD-L1 VEGF-B
CD30 CSFR-1 GM-CSF IL2R PD-L2 VEGF-C
CD33 CTLA-4 GM-CSFR IL4 Фосфатидил -серин VEGF-D
CD38 CTGF GP Ilb/IIIa рецепторы IL4R P1GF VEGFR1
CD40 CXCL10 Gpl30 IL6, IL6R PSCA VEGFR2
CD40L CXCL13 GPIIB/IIIA Инсулиновый рецептор PSMA VEGFR3
CD41 CXCR1 GPNMB Jagged лиганды RAAG12 VISTA
CD44 CXCR2 GRP7 8 Jagged 1 RAGE WISP-1
CD44v6 HER2/neu Jagged 2 SLC44A4 WISP-2
CD47 CXCR4 HGF LAG-3 Сфингозин1-фосфат WISP-3
CD51 CYR61 hGH
В качестве неограничивающего примера, антитело или антигенсвязывающий фрагмент и/или AB активируемого антитела является или получено из антитела, перечисленного в табл. 2.
- 62 043582
Таблица 2
Примеры источников антител
Торговое наименование антитела (название антитела) Мишень
Авастин™ (бевацизумаб) VEGF
Луцентис™ (ранибизумаб) VEGF
Эрбитукс™ (цетуксимаб) EGFR
Вектибикс™ (панитумумаб) EGFR
Ремикейд™ (инфликсимаб) ФНОа
Хумира™ (адалимумаб) ФНОа
Тизабри™ (натализумаб) Интегрина4
Симулект™ (базиликсимаб) IL2R
Солирис™ (экулизумаб) Комплемент С5
Раптива™ (эфализумаб) CDlla
Веххаг™ (тозитумомаб) CD2 0
Zevalin™ (ибритумомаб тиуксетан) CD2 0
Rituxan™ (ритуксимаб) CD2 0
Окрелизумаб CD2 0
Арзерра™ (офатумумаб) CD2 0
Газива™ (обинитузумаб) CD2 0
Зенапакс™ (даклизумаб) CD25
Адцетрис™ (брентуксимаб ведотин) CD30
Милотарг™ (гемтузумаб) CD33
Милотарг™ (гемтузумаб озогамицин) CD33
Кэмпас™ (алемтузумаб) CD52
РеоПро™ (абциксимаб) Гликопротеиновый рецептор Ilb/IIIa
Ксолар™ (омализумаб) IgE
Герцептин™ (трастузумаб) Her2
Кадсила™ (трастузумаб эмтанзин) Нег2
Синагис™ (паливизумаб) F-белок РСВ
(ипилимумаб) CTLA-4
(тремелимумаб) CTLA-4
Ни5с8 CD40L
(пертузумаб) Her2-neu
(эртумаксомаб) CD3/Her2-neu
Оренсия™ (абатацепт) CTLA-4
(танезумаб) NGF
(бавитуксимаб) Фосфатидилсерин
(залутумумаб) EGFR
(мапатумумаб) EGFR
(матузумаб) EGFR
(нимотузумаб) EGFR
ICR62 EGFR
мАт 528 EGFR
СН806 EGFR
MDX-447 EGFR/CD64
(эдреколомаб) EpCAM
RAV12 RAAG12
huJ591 PSMA
Enbrel™ (этанерцепт) ΦΗΟ-R
Amevive™ (алефацепт) 1-92-LFA-3
Antril™, Kineret™ (анакинра) IL-IRa
GC1008 ТСЕбета
Notch, например, Notch 1
Jagged 1 или Jagged 2
(адекатумумаб) EpCAM
(фигитумумаб) IGF1R
(тоцилизумаб) Рецептор IL-6
Стелара™ (устекинумаб) IL-12/IL-23
Пролиа™ (деносумаб) RANKL
В некоторых вариантах осуществления дополнительное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и/или активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент являются моноклональным антителом, доменным антителом, одноцепочечным, Fab-фрагментом, F(ab')2-фрагментом, scFv, scAb, dAb, однодоменным антителом из тяжелой цепи или однодоменным антителом из легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления дополнительное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и/или активируемое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент являются мышиным, другого гры- 63 043582 зуна, химерным, гуманизированным или полностью человеческим моноклональным антителом.
В настоящем описании также предложены способы получения полипептида антитела против PD-1 и/или активируемого антитела против PD-1 при культивировании клетки при условиях, которые приводят к экспрессии такого полипептида, где клетка включает выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело и/или активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении, и/или векторы, которые включают такие выделенные последовательности нуклеиновых кислот. В настоящем описании предложены способы получения антитела и/или активируемого антитела при культивировании клетки при условиях, которые приводят к экспрессии антитела и/или активируемого антитела, где клетка включает выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело и/или активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении, и/или векторы, которые включают такие выделенные последовательности нуклеиновых кислот.
В изобретении также предложен способ получения активируемых антител, которые в активированном состоянии связывают PD-1, путем: (a) культивирования клетки, включающей конструкцию нуклеиновой кислоты, которая кодирует активируемое антитело, при условиях, которые приводят к экспрессии активируемого антитела, где активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM) и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связывают PD-1, (i) где CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы; и (ii) где CM помещен в активируемое антитело таким образом, что, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, MM препятствует специфичному связыванию AB с PD-1, а в расщепленном состоянии MM не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с PD-1; и (b) выделения активируемого антитела. Подходящие AB, MM и/или CM включают любые из AB, MM и/или CM, раскрытых в настоящем изобретении.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру, от N-конца к С-концу: ММ-СМ-АВ или АВ-СМ-ММ. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает соединительный пептид между MM и CM. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает соединительный пептид между CM и AB. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает первый соединительный пептид (LP1) и второй соединительный пептид (LP2), и где активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-LP1-CM-LP2-AB или AB-LP2-CM-LP1-MM. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру, от N-конца к С-концу: спейсер-ММ-LP1-СМ-LP2-АВ или AB-LP2-CM-LP1-MMспейсер.
В некоторых вариантах осуществления два соединительных пептида не должны быть обязательно идентичными друг другу.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из LP1 или LP2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (GS)n, (GGS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 363) и (GGGS)n (SEQ ID NO: 364), где n является целым числом, равным по меньшей мере единице.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из LP1 или LP2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGSG (SEQ ID NO: 365), GGSGG (SEQ ID NO: 366), GSGSG (SEQ ID NO: 367), GSGGG (SEQ ID NO: 368), GGGSG (SEQ ID NO: 369) и GSSSG (SEQ ID NO: 370).
В некоторых вариантах осуществления LP1 включает аминокислотную последовательность GSSGGSGGSGGSG (SEQ ID NO:
371), GSSGGSGGSGG (SEQ ID NO: 372), GSSGGSGGSGGS (SEQ ID NO:
373), GSSGGSGGSGGSGGGS (SEQ ID NO: 374), GSSGGSGGSG (SEQ ID NO:
375), GSSGGSGGSGS (SEQ ID NO: 376), GGGSSGGS (SEQ ID NO: 65) или GGGSSGG (SEQ ID NO: 1040).
В некоторых вариантах осуществления LP2 включает аминокислотную последовательность GSS, GGS, GGGS (SEQ ID NO: 377), GSSGT (SEQ ID NO: 378) или GSSG (SEQ ID NO: 379).
В изобретении предложены способы предотвращения, задержки прогрессирования, лечения, облегчения симптома или иного уменьшения тяжести нарушения или заболевания у субъекта посредством введения нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества антитела против PD1, конъюгированного антитела против PD-1, активируемого антитела против PD-1 и/или конъюгированного активируемого антитела против PD-1, описанного в настоящем изобретении.
В изобретении также предложен способ уменьшения иммунной супрессии, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества антитела против PD-1 и/или активируемого антитела против PD-1, описанного в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления иммунная супрессия является супрессией активности T-клеток. В некоторых вариантах осуществления иммунная супрессия опосредована связыванием PD-1 на T-клетках с PD-L1 или PD-L2 на опухолевых клетках или других иммунных клетках. В некоторых вариантах осуществления в изобретении предложен способ уменьшения или ингибирования связывания PD-L1 (также указанного в настоя- 64 043582 щем изобретении как PDL1) и/или PD-L2 (также указанного в настоящем изобретении как PDL2) с PD-1 на T-клетках. Лиганды PD-L1 и/или PD-L2 часто присутствуют на опухолевых клетках или других иммунных клетках.
В изобретении также предложены способы предотвращения, задержки прогрессирования, лечения, облегчения симптома или иного уменьшения тяжести рака у субъекта посредством введения терапевтически эффективного количества антитела против PD-1 и/или активируемого антитела против PD-1, описанного в настоящем изобретении, нуждающемуся в этом субъекту. PD-1, как известно, экспрессируется на иммунных клетках, таких как T-клетки, в различных раковых опухолях, таких как, в качестве неограничивающего примера, меланома, немелкоклеточный рак легкого, рак носоглотки, глиобластома/смешанная глиома, аденокарцинома толстой кишки, печеночноклеточный рак, уротелиальный рак, множественная миелома, рак яичника, рак желудка, рак пищевода, рак поджелудочной железы, почечноклеточная карцинома (RCC), рак молочной железы, лимфомы, такие как лимфома Ходжкина, и лейкозы. См., например, Chen et al., Molecular Pathways: Next-Generation Immunotherapy - Inhibiting Programmed Death-Ligand 1 and Programmed Death-1, Clin. Can. Res., vol. 18: 6580-6587 (2012), содержание которого настоящим полностью включено посредством отсылки.
В некоторых вариантах осуществления раком является рак мочевого пузыря, рак кости, рак молочной железы, карциноид, рак шейки матки, холангиокарцинома, рак толстой кишки, рак эндометрия, глиома, рак головы и шеи, рак печени, рак легкого, лимфома, такая как лимфома Ходжкина, меланома, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак почки, саркома, рак кожи, рак желудка, рак яичка, рак тимуса, рак щитовидной железы, рак мочеполовой системы и/или уротелиальный рак.
В некоторых вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из меланомы (MEL), почечно-клеточной карциномы (RCC), плоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), неплоскоклеточного NSCLC, рака толстой и прямой кишки (CRC), кастрационно-резистентного рака предстательной железы (CRPC), печеночноклеточной карциномы (HCC), плоскоклеточной карциномы головы и шеи, тимомы, карцином пищевода, яичника, желудочно-кишечного тракта и молочной железы, или гематобластоза, такого как множественная миелома, В-клеточная лимфома, T-клеточная лимфома, лимфома Ходжкина, первичная медиастинальная В-клеточная лимфома и хронический миелогенный лейкоз.
В изобретении также предложены способы лечения больных раком с аутоиммунным заболеванием или воспалительным заболеванием, посредством введения терапевтически эффективного количества антитела против PD-1 и/или активируемого антитела против PD-1, описанного в настоящем изобретении, нуждающемуся в этом субъекту. В некоторых вариантах осуществления аутоиммунным заболеванием является колит, РА, панкреатит, диабет или пневмонит.
Антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1, применяемые в любом из вариантов осуществления указанных способов и применений, можно вводить на любой стадии заболевания. Например, такое антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 можно вводить страдающему раком больному на любой стадии, от ранней до метастатической. Термины субъект и больной используются в настоящем изобретении попеременно.
В некоторых вариантах осуществления субъект является млекопитающим, таким как человек, не относящийся к человеку примат, домашнее животное (например, кошка, собака, лошадь), сельскохозяйственное животное, рабочее животное или животное зоопарка. В некоторых вариантах осуществления субъект является человеком. В некоторых вариантах осуществления субъект является домашним животным. В некоторых вариантах осуществления субъект является животным, лечение которого проводит ветеринар.
Антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и их терапевтические формы вводят субъекту, страдающему или подверженному риску возникновения заболевания или нарушения, связанного с иммунной супрессией, такой как иммунная супрессия, опосредованная связыванием PD-1 на Tклетках с PD-L1 или PD-L2 на опухолевых клетках или других иммунных клетках. В некоторых вариантах осуществления иммунная супрессия является супрессией активности T-клеток. Субъекта, страдающего или подверженного риску возникновения заболевания или нарушения, связанного с такой иммунной супрессией, идентифицируют с применением различных способов, известных в уровне техники. Например, субъектов, страдающих раком или другим неопластическим заболеванием, идентифицируют при использовании различных клинических и/или лабораторных исследований, таких как физикальное обследование и анализ крови, мочи и/или стула для оценки состояния здоровья. Например, субъектов, страдающих воспалением и/или воспалительным заболеванием, идентифицируют при использовании различных клинических и/или лабораторных исследований, таких как физикальное обследование и/или анализ физиологических жидкостей, например анализ крови, мочи и/или стула, для оценки состояния здоровья.
Введение антитела против PD-1 и/или активируемого антитела против PD-1 больному, страдающему заболеванием или нарушением, связанным с иммунной супрессией, такой как иммунная супрессия, опосредованная связыванием PD-1 на T-клетках с PD-L1 или PD-L2 на опухолевых клетках или других иммунных клетках, считают успешным, если достигнута какая-либо из множества лабораторных или
- 65 043582 клинических целей. Например, введение антитела против PD-1 и/или активируемого антитела против PD-1 больному, страдающему заболеванием или нарушением, связанным с такой иммунной супрессией, считают успешным, если один или больше симптомов, связанных с заболеванием или нарушением, облегчается, уменьшается, ингибируется или не прогрессирует до следующего, т.е. более тяжелого, состояния. Введение антитела против PD-1 и/или конъюгированного активируемого антитела против PD-1 больному, страдающему заболеванием или нарушением, связанным с иммунной супрессией, такой как иммунная супрессия, опосредованная связыванием PD-1 на T-клетках с PD-L1 или PD-L2 на опухолевых клетках или других иммунных клетках, считают успешным, если заболевание или нарушение переходят в стадию ремиссии или не прогрессируют до следующего, т.е. более тяжелого, состояния.
В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 и/или конъюгированное активируемое антитело против PD-1 вводят в течение и/или после лечения в комбинации с одним или более дополнительными средствами, такими как, например, химиотерапевтическое средство, противовоспалительное средство и/или иммунодепрессант. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство(а) вводят одновременно. Например, антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство(а) могут входить в состав одной композиции или введены в двух или более отдельных композициях. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1 и дополнительное средство(а) вводят последовательно.
В изобретении также предложены способы и наборы для применения активируемых антител против PD-1 при различных диагностических и/или профилактических показаниях. Например, в изобретении предложены способы и наборы для обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства и представляющей интерес мишени у субъекта или в образце посредством: (i) контакта субъекта или образца с активируемым антителом против PD-1, где активируемое антитело против PD-1 включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которую расщепляет расщепляющее средство, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает представляющую интерес мишень, где активируемое антитело против PD-1 в нерасщепленном, неактивированном состоянии включает следующую структуру, от N-конца к С-концу: ММ-СМ-АВ или АВ-СМ-ММ; (a) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с PD-1, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию и не является модифицированной формой природного партнера AB по связыванию; и (b) где в том случае, когда AB находится в нерасщепленном, неактивированном состоянии, MM препятствует специфичному связыванию AB с PD-1, и когда AB находится в расщепленном, активированном состоянии, MM не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с PD-1; и (ii) измерения уровня активированного активируемого антитела против PD-1 у субъекта или в образце, где детектируемый уровень активированного активируемого антитела против PD-1 у субъекта или в образце указывает на то, что расщепляющее средство и PD-1 присутствуют у субъекта или в образце, и где недетектируемый уровень активированного активируемого антитела против PD-1 у субъекта или в образце указывает на то, что расщепляющее средство, PD-1 или расщепляющее средство и PD-1 отсутствуют у субъекта или в образце.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 является активируемым антителом против PD-1, которое конъюгировано с терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела против PD-1 у субъекта или в образце выполняют с применением вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления вторичный реагент является антителом, включающим детектируемую метку.
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов активируемое антитело против PD-1 включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов детектируемая метка включает визуализирующее средство, контрастирующее средство, фермент, флуоресцентную метку, хромофор, краситель, ионы одного или более металлов или метку на основе лиганда. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов визуализирующее средство включает радиоизотоп. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов радиоизотопом является индий или технеций. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов контрастирующее средство включает иод, гадолиний или оксид железа. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов фермент включает пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу или β-галактозидазу. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов флуоресцентная метка включает желтый флуоресцентный белок (YFP), сине-зеленый флуоресцентный белок (CFP), зеленый флуоресцентный белок (GFP), модифицированный красный флуоресцентный белок (mRFP), красный флуоресцентный белок tdimer2 (RFP tdimer2), HCRED или производное европия. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов люминесцентная метка включает производное N-метилакридиния. В некоторых вариантах осуществления указанных способов метка включа- 66 043582 ет метку Alexa Fluor®, такую как Alex Fluor® 680 или Alexa Fluor® 750. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов метка на основе лиганда включает биотин, авидин, стрептавидин или один или несколько гаптенов.
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов субъект является млекопитающим. В некоторых вариантах осуществления указанных способов субъект является человеком. В некоторых вариантах осуществления субъект является не относящимся к человеку млекопитающим, таким как не относящийся к человеку примат, домашнее животное (например, кошка, собака, лошадь), сельскохозяйственное животное, рабочее животное или животное зоопарка. В некоторых вариантах осуществления субъект является грызуном.
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов способ является способом in vivo. В некоторых вариантах осуществления указанных способов способ является способом in situ. В некоторых вариантах осуществления указанных способов способ является способом ex vivo. В некоторых вариантах осуществления указанных способов способ является способом in vitro.
В некоторых вариантах осуществления способов и наборов способ применяется для идентификации или иного определения популяции пациентов, подходящей для лечения активируемым антителом против PD-1 согласно настоящему описанию, с последующим лечением путем введения активируемого антитела против PD-1 нуждающемуся в этом субъекту. Например, больных, которые показывают положительный результат на мишень (например, PD-1) и протеазу, которая расщепляет субстрат по расщепляемой части (CM) активируемого антитела против PD-1, при исследовании в данных способах, идентифицируют как подходящих кандидатов на лечение таким активируемым антителом против PD-1, включающим такую CM, после чего больному вводят терапевтически эффективное количество активируемого антитела против PD-1, которое было протестировано. Аналогичным образом, больные, которые показывают отрицательный результат на мишень (например, PD-1) и/или протеазу, которая расщепляет субстрат по CM в активируемом антителе, при исследовании с применением данных способов, могут быть идентифицированы как подходящие кандидаты для другой формы терапии. В некоторых вариантах осуществления такие больные могут проходить исследование с другими активируемыми антителами против PD-1, пока не будет определено подходящее для лечения активируемое антитело против PD-1 (например, активируемое антитело против PD-1, включающее CM, которая расщепляется в пораженном участке в организме больного). В некоторых вариантах осуществления больному затем вводят терапевтически эффективное количество активируемого антитела против PD-1, на которое больной показал положительный результат. Подходящие AB, MM и/или CM включают любой из AB, MM и/или CM, раскрытых в настоящем изобретении.
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут включать антитело согласно изобретению и носитель. Такие фармацевтические композиции могут быть включены в наборы, такие как, например, диагностические наборы.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 - график, на котором показаны результаты анализа связывания ELISA с использованием разных мышиных антител, которые связывают человеческий PD-1 (т.е. антител против hPD-1), указанных в настоящем изобретении как 245-M3, также указанного в настоящем изобретении как M3 (VH: SEQ ID NO: 9; VL: SEQ ID NO: 11), 245-M5, также указанного в настоящем изобретении как М5 (VH: SEQ ID NO: 13; VL: SEQ ID NO: 15), 136-M13, также указанного в настоящем изобретении как М13 (VH: SEQ ID NO: 1; VL: SEQ ID NO: 3), 136-M19, также указанного в настоящем изобретении как М19 (VH: SEQ ID NO: 5; VL: SEQ ID NO: 7), и 136-М14, также указанного в настоящем изобретении как М14 (VH: SEQ ID NO: 17; VL: SEQ ID NO: 19). Антитела против PD-1 ниволумаб (также указанный в настоящем изобретении как ниво или NV1) и пембролизумаб (также указанный в настоящем изобретении как пембро или РМ1, или РМ1 АВ) использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 2 - серия графиков, на которых продемонстрировано, что разные мышиные антитела против hPD-1 блокируют связывание лигандов PD-L1 человека (hPD-L1) и PD-L2 человека (hPD-L2) с PD-1 человека.
Фиг. 3 - серия графиков, на которых продемонстрировано, что разные мышиные антитела против hPD-1 блокируют связывание лигандов PD-L1 человека (hPD-L1) и PD-L2 человека (hPD-L2) с PD-1 человека.
Фиг. 4 - график, на котором показано связывание с человеческим PD-1 различных антител против hPD-1 согласно настоящему описанию, указанных в настоящем изобретении как А1.0 (VH: SEQ ID NO: 21; VL: SEQ ID NO: 39), A1.2 (VH: SEQ ID NO: 21; VL: SEQ ID NO: 43) и A1.4 (VH: SEQ ID NO: 21; VL: SEQ ID NO: 45), как определяли с помощью ELISA. Антитело против PD-1 пембролизумаб (РМ1) использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 5 - график, на котором показано связывание с человеческим PD-1 различных антител против hPD-1 согласно настоящему описанию, указанных в настоящем изобретении как A1.5 (VH: SEQ ID NO: 21; VL: SEQ ID NO: 47), A1.6 (VH: SEQ ID NO: 21; VL: SEQ ID NO: 49), Ba2 (VH: SEQ ID NO: 29; VL: SEQ ID NO: 57), Bb2 (VH: SEQ ID NO: 31; VL: SEQ ID NO: 57), C1.1 (VH: SEQ ID NO: 33; VL: SEQ ID NO: 41) и D4 (VH: SEQ ID NO: 37; VL: SEQ ID NO: 59), как определяли с помощью ELISA. Антитела
- 67 043582 против PD-1 ниволумаб (NV1) и пембролизумаб (РМ1) использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 6 - серия графиков, на которых показана способность различных антител против hPD-1 согласно настоящему описанию, указанных в настоящем изобретении как А1.0, А1.2 и А1.4, ингибировать связывание между человеческим PD-1 (hPD-1) и человеческими PDL-1 (hPDL-1) и PDL-2 (hPDL-2), как определяли с помощью ELISA. Антитело против PD-1 пембролизумаб (РМ1) использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 7 - серия графиков, на которых показана способность различных антител против hPD-1 согласно настоящему описанию, указанных в настоящем изобретении как A1.5 и С1.1, ингибировать связывание между hPD-1 и hPDL-1 и hPDL-2, как определяли с помощью ELISA. Антитела против PD-1 ниволумаб (NV1) и пембролизумаб (РМ1) использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 8 - график, на котором показана способность различных антител против hPD-1 согласно настоящему описанию, указанных в настоящем изобретении как A1.5, Ba2, Bb2, С1.1 и D4, ингибировать связывание между hPD-1 и hPDL-1, как определяли с помощью ELISA. Антитела против PD-1 ниволумаб (NV1) и пембролизумаб (РМ1) использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 9 - график, на котором показана способность различных антител против hPD-1 согласно настоящему описанию, указанных в настоящем изобретении как A1.5, Ва2, Bb2, С1.1 и D4, ингибировать связывание между hPD-1 и hPDL-2, как определяли с помощью ELISA. Антитела против PD-1 ниволумаб (NV1) и пембролизумаб (РМ1) использовали в качестве положительного контроля.
Фиг. 10 - график, на котором показано, что антитело против PD-1, указанное в настоящем изобретении как A1.5, специфично связывает hPD-1, как определяли с помощью ELISA. Антитело A1.5 против PD-1 тестировали в отношении панели человеческих и мышиных белков.
Фиг. 11А и 11В - серия графиков, на которых показана способность антитела против PD-1, A1.5, блокировать связывание Fab-фрагментов антител против PD-1, ниволумаба (NV1) и пембролизумаба (РМ1), с PD-1. На этих графиках также продемонстрировано, что антитело против PD-1, A1.5, связывает другой эпитоп в отличие от NV1 и/или РМ1.
Фиг. 12 - график, на котором показано, что антитело против PD-1, A1.5, обладает активностью, аналогичной активности ниволумаба (NV1) и пембролизумаба (РМ1), при измерении в тесте с повторной стимуляцией T-клеток. На фиг. 12 МКПК обрабатывали следующим образом: МКПК: ЦМВ+ HemaCare донор С сеяли в количестве 2х105 клеток/лунка; стимулированные 5 мкг/мл ЦМВ лизата +/- антитело против PD-1 или изотипический контроль; IFN-γ ELISA анализ проводили на супернатанте, собранном в день 4.
Фиг. 13 - серия графиков, на которых продемонстрировано, что антитела против PD-1, A1.5 и Ва2, связывают мономерный человеческий PD-1 (hPD1) с подобной или более высокой аффинностью, чем антитела против PD-1 ниволумаб (Nivo) и пембролизумаб (Pembro).
Фиг. 14 - серия графиков, на которых показано связывание с человеческим PD-1 антитела против PD-1, A1.4, и различных активируемых антител против PD-1, которые включают разные маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как 0PD-1 (SEQ ID NO: 66), PD02 (SEQ ID NO: 67), PD03 (SEQ ID NO: 68), PD08 (SEQ ID NO: 73), PD09 (SEQ ID NO: 74), и PD10 (SEQ ID NO: 75), как определяли с помощью ELISA.
Фиг. 15 - серия графиков, на которых показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1, A1.5, и различных активируемых антител против PD-1, которые включают антитело против PD-1, A1.5, и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как 0PD-1
(SEQ ID NO: । 56) , PD02 (SEQ ID NO: : 67), PD03
(SEQ ID NO: 68), PD05 (SEQ ID NO: 70) , PD06 (SEQ ID NO: 71)
(Планшет 1) ; PD08 (SEQ ID NO: 73) , PD09 (SEQ ID NO : 74), PD10
(SEQ ID NO: 75) , PD11 (SEQ ID NO: 76) , PD12 (SEQ ID NO: 77)
(Планшет 2); PD13 (SEQ ID NO: 78) , PD14 (SEQ ID NO : 79), PD15
(SEQ ID NO: 80), PD16 (SEQ ID NO: 81) , PD17 (SEQ ID NO: 82)
(Планшет 3); PD18 (SEQ ID NO: 83) , PD19 (SEQ ID NO : 84), PD20
(SEQ ID NO: 85) , PD21 (SEQ ID NO: 86) , PD22 (SEQ ID NO: 87)
(Планшет 4); и PD23 । (SEQ ID NO: 88) , PD24 (SEQ ID NO: 89)
(Планшет 5) .
Фиг. 16 - график, на котором показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1, A 1.5, и различных активируемых антител против PD-1, которые включают антитело против PD-1, A1.5, расщепляемую часть, указанную в настоящем изобретении как 3001, которая включает последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 318), и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как PD02, PD12 и PD16.
Фиг. 17 - серия графиков, на которых показано связывание с hPD-1 антителом против PD-1, A1.5, и
- 68 043582 различными активируемыми антителами против PD-1, которые включают антитело против PD-1 A1.5, расщепляемую часть, указанную в настоящем изобретении как 2001, которая включает последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как PD05 (SEQ ID NO: 70), PD06 (SEQ ID NO: 71), PD09 (SEQ ID NO: 74) (верхняя левая панель); PD12 (SEQ ID NO: 77), PD23 (SEQ ID NO: 88), PD25 (SEQ ID NO: 90) (верхняя правая панель); PD26 (SEQ ID NO: 91), PD27 (SEQ ID NO: 92), PD28 (SEQ ID NO: 93) (нижняя левая панель); и PD30 (SEQ ID NO: 95), PD33 (SEQ ID NO: 98), PD35 (SEQ ID NO: 100) (нижняя правая панель).
Фиг. 18 - серия графиков, на которых показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1, A1.5, и различных активируемых антител против PD-1, которые включают антитело против PD-1, A1.5, и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как PD34 (SEQ ID NO: 99), PD06 (SEQ ID NO: 71), PD09 (SEQ ID NO: 74) (верхняя левая панель); PD34 (SEQ ID NO: 99), PD12 (SEQ ID NO: 77), PD17 (SEQ ID NO: 82) (верхняя правая панель); PD34 (SEQ ID NO: 99), PD19 (SEQ ID NO: 84), PD25 (SEQ ID NO: 90) (нижняя левая панель); и PD34 (SEQ ID NO: 99), PD26 (SEQ ID NO: 91), PD28 (SEQ ID NO: 93) (нижняя правая панель).
Фиг. 19 - график, на котором показана способность активируемых A1.5 антител против PD1 согласно настоящему описанию, увеличивать ЦМВ-стимулируемую секрецию IFN-гамма по сравнению с контрольным hIgG4, но с пониженной активностью по сравнению с исходным антителом против PD1, A1.5. Протестированные активируемые антитела включают антитело против PD-1, A1.5, расщепляемую часть, указанную в настоящем изобретении как 2001, и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как PD06, PD05, PD11, PD12, PD14 и PD19. На фиг. 19 МКПК обрабатывали следующим образом: МКПК: ЦМВ+ HemaCare донор С сеяли в количестве 2x105 клеток/лунка; стимулированные 5мкг/мл ЦМВ лизата +/- антитело против PD-1 или изотипический контроль; IFN-γ ELISA анализ проводили на супернатанте, собранном в день 4.
Фиг. 20А и 20В - серия графиков, на которых показана способность антитела против PD-1, указанного в настоящем изобретении как J43v2 (Тяжелая цепь (ТЦ) : SEQ ID NO: 546; Легкая цепь (ЛЦ): SEQ ID NO: 543), блокировать связывание мышиного PD-L1 (mPD-L1) и мышиного PD-L2 (mPD-L2) с клетками, экспрессирующими мышиный PD-1 (mPD-1) с одноразрядными нМ значениями EC50.
Фиг. 21 - график, на котором показана дозозависимая индукция диабета у NOD мышей антителом, указанным в настоящем изобретении как J43v2 m2a (ТЦ: SEQ ID NO: 546; ЛЦ: SEQ ID NO: 543).
Фиг. 22 - серия графиков, на которых показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1, J43v2 m2a, и различных активируемых антител против PD-1, которые включают антитело против PD-1, J43v2 m2a, и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как МР01 (SEQ ID NO: 384), МР02 (SEQ ID NO: 385), MP03 (SEQ ID NO: 386), MP04 (SEQ ID NO: 387), MP05 (SEQ ID NO: 388) (верхняя левая панель); МР06 (SEQ ID NO: 389), MP07 (SEQ ID NO: 390), MP08 (SEQ ID NO: 391), MP09 (SEQ ID NO: 392), MP10, также указанную в настоящем изобретении как МР010 (SEQ ID NO: 393) (верхняя правая панель); МР11, также указанную в настоящем изобретении как МР011 (SEQ ID NO: 394), МР12, также указанную в настоящем изобретении как МР012 (SEQ ID NO: 395), МР13, также указанную в настоящем изобретении как МР013 (SEQ ID NO: 396), МР14, также указанную в настоящем изобретении как МР014 (SEQ ID NO: 397) (нижняя панель).
Фиг. 23 - график, на котором показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1, J43v2 m2a, и различных активируемых антител против PD-1, которые включают антитело против PD-1, J43v2 m2a, расщепляемую часть, указанную в настоящем изобретении как 2001, и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как МР5-2 (SEQ ID NO: 565), МР7-1 (SEQ ID NO: 558), MP7-5 (SEQ ID NO: 562), MP8-2 (SEQ ID NO: 549) (верхняя панель); и MP7-1 (SEQ ID NO: 558), MP8-9 (SEQ ID NO: 556), MP8-8 (SEQ ID NO: 555) (нижняя панель).
Фиг. 24 - график, на котором показано, что антитело против PD-1, J43v2, вызывало диабет у NOD мышей с повышением частоты при увеличении дозы, и что активируемые J43v2 антитела против PD-1 демонстрировали уменьшение диабета по сравнению с антителами в подобных дозах.
Фиг. 25А и 25В - серия графиков, на которых показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1, A1.5, и различных активируемых антител согласно настоящему описанию, включающих антитело против PD1, A1.5, маскирующую часть, указанную в настоящем изобретении как PD34 (SEQ ID NO: 99), и, на фиг. 25А, субстраты, указанные в настоящем изобретении как 2006 (SEQ ID NO: 1095), 2007 (SEQ ID NO: 1096), 2008 (SEQ ID NO: 1097), 2009 (SEQ ID NO: 1098) и 2001 (SEQ ID NO: 214), и, на фиг. 25В, субстраты, указанные в настоящем изобретении как 2001 (SEQ ID NO: 214), 2008 (SEQ ID NO: 1097), 2012 (SEQ ID NO: 1101), 2011 (SEQ ID NO: 1100) и 2003 (SEQ ID NO: 1092).
Фиг. 26А, 26В и 26С - серия графиков, на которых показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1 ниволумаба (NV1) и различных активируемых антител согласно настоящему описанию, включающих антитело против PD1, NV1, субстрат, указанный в настоящем изобретении как 2001 (SEQ ID NO: 214), и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как
- 69 043582
NV01 (SEQ ID
NO: 1206), NV02 (SEQ ID NO: 1207), NV03 (SEQ ID NO: 1208), NV04 (SEQ ID NO: 1209), NV05 (SEQ ID NO: 1210), NV06 (SEQ ID NO:
1211), NV07 (SEQ ID NO: 1212), NV08 (SEQ ID NO: 1213), NV09 (SEQ
ID NO: 1214), NV10 (SEQ ID NO: 1215), NV11 (SEQ ID NO: 1216) и NV12 (SEQ ID NO: 1217).
Фиг. 27А, 27В, и 27С - серия графиков, на которых показано связывание с hPD-1 антитела против PD-1 пембролизумаба (РМ1) и различных активируемых антител согласно настоящему описанию, включающих антитело против PD1, РМ1, субстрат, указанный в настоящем изобретении как 2001 (SEQ ID NO: 214), и маскирующие части, указанные в настоящем изобретении как
РМ01 (SEQ ID NO: 1351), РМ02 (SEQ ID NO: 1352), PM03 (SEQ ID NO:
1353), PM04 (SEQ ID NO: 1354), PM05 (SEQ ID NO: 1355), PM06 (SEQ
ID NO: 1356), PM07 (SEQ ID NO: 1357), PM08 (SEQ ID NO: 1358),
PM09 (SEQ ID NO: 1359), PM10 (SEQ ID NO: 1360), PM11 (SEQ ID NO: 1361) и PM12 (SEQ ID NO: 1362).
Фиг. 28 - график, на котором показана специфичность маскирующих частей для различных активируемых антител согласно настоящему описанию, которые включают антитело против PD-1, A1.5 (PD), антитело против PD-1, NV1 (NV), и антитело против PD-1, PM1 (РМ), и различные комбинации маски и субстрата.
Фиг. 29А и 29В - серия графиков, на которых показано связывание с PD-1 IgG2a эффекторнонегативного (EN) антитела против PD1, J43 (J43 m2a EN), и различных активируемых антител согласно настоящему описанию, включающих IgG2a эффекторно-негативное (EN) J43 антитело против PD1 (J43 m2a EN) и различные комбинации субстрата и маски.
Фиг. 30 - график, на котором показано, что EN антитело против PD-1, J43m2a, вызывало диабет у NOD мышей с повышением частоты при увеличении дозы, и что EN активируемые J43m2a антитела против PD-1 демонстрировали уменьшенный диабет по сравнению с антителами в подобных дозах.
Фиг. 31А и 31В - серия графиков, на которых показано, что активируемые антитела против PD1 согласно настоящему описанию, МР7-12001 m2a EN и МР8-22001 m2a EN, ингибируют рост сингенных опухолей МС38 аналогично положительному контрольному антителу против PD1, J43 m2a EN, как в качестве отдельных средств (фиг. 31А), так и в комбинации с коммерчески доступным антителом против CTLA4, 9D9 mIgG2b (фиг. 31В).
Фиг. 32А, 32В, 32С, 32D и 32Е - серия графиков, на которых показано, что антитело против человеческого PD-1, указанное в настоящем изобретении как Ab A1.5 (т.е. VH SEQ ID NO: 21 и VL SEQ ID NO: 47), блокирует PD-L1/PD-L2 связывание с PD-1 и сильно активирует T-клетки в тесте с вторичной активацией антигенами.
На фиг. 31А показано связывание антитела A1.5 против человеческого PD-1 с иммобилизованным человеческим PD-1, при обнаружении с помощью стандартного ELISA на планшетах, и на фиг. 31В показано связывание антитела A1.5 с PD1 яванского макака, при обнаружении с помощью ELISA.
На фиг. 32С показано ингибирование биотинилированного человеческого PD-L1 с иммобилизованным PD1 антителом A1.5, при определении с помощью ELISA, и на фиг. 32D показано ингибирование биотинилированного человеческого PD-L2 с иммобилизованным PD-1, при определении с помощью ELISA.
На фиг. 32Е продемонстрировано, что антитело A1.5 увеличивает продукцию IFN-γ в анализе с повторной стимуляцией T-клеток ЦМВ.
Фиг. 33А и 33В - серия графиков, на которых показано, что активируемое антитело против PD1, указанное в настоящем изобретении как A1.5 PD34 2001 (т.е. VH SEQ ID NO: 21, VL SEQ ID NO: 47, маскирующая часть SEQ ID NO: 99 и расщепляемая часть SEQ ID NO: 214), связывает человеческий PD1 с пониженной аффинностью по сравнению с исходным антителом к PD-1, т.е. антителом A1.5 (фиг. 33А), при этом активируемое антитело A1.5 PD34 2001 показывает функциональное маскирование в тесте с вторичной активацией T-клеток антигеном ЦМВ (фиг. 33В).
Фиг. 34 - график и таблица, в которых показаны результаты фармакокинетического (ФК) анализа образцов плазмы яванских макаков после болюсного введения однократной в/в дозы антитела A1.5 или активируемого A1.5 антитела, указанного в настоящем изобретении как A1.5 PD34 2001, в количестве 1 мг/кг или 5 мг/кг. Средние ФК параметры, показанные для A1.5 и для A1.5 PD34 2001.
Фиг. 35 - график, на котором показано, что комбинация 10 мг/кг антитела против PD-1, J43, плюс 10 мг/кг антитела против CTLA-4, вводимая в дни 0, 4 и 7, вызывала диабет у 50% NOD мышей на день одиннадцать, тогда как такая же схема дозирования активируемых J43 антител против PD-1 с антителом к CTLA-4 не приводила к индукции диабета до дня восемнадцать.
- 70 043582
Фиг. 36 - график, на котором показано, что активируемые антитела против PD1, МР8-2 2012 m2a
EN и МР8-22011 m2a EN, ингибируют рост сингенных опухолей МС38 аналогично положительному контрольному антителу против PD1, J43 m2a EN, как в качестве отдельных средств, так и в комбинации с антителом против CTLA4, 9D9 mIgG2b.
Фиг. 37 - серия графиков, на которых показано, что комбинированная обработка антителом CTLA4 и активируемым антителом J43 защищает мышей при повторном введении опухолевых клеток МС38.
Фиг. 38 - график, на котором показано, что антитело против PD-1, вводимое отдельно или в комбинации с антителом против CTLA4, вызывало диабет у NOD мышей, тогда как активируемое антитело против PD-1 в качестве единственного средства или в комбинации с антителом против CTLA4 не приводило к индукции диабета до дня пятнадцать.
Фиг. 39 - график, на котором продемонстрировано, что активируемое A1.5 против PD-1 и активируемые антитела на основе ниволумаба согласно вариантам осуществления повышают продукцию IFN-γ в тесте повторной стимуляции T-клеток ЦМВ по сравнению с контрольным антителом, но не до такой степени, как антитело против PD-1 A1.5 или ниволумаб.
Фиг. 40 - график, на котором продемонстрировано, что активируемое антитело против PD-1 на основе пембролизумаба согласно вариантам осуществления повышает продукцию IFN-γ в тесте повторной стимуляции T-клеток ЦМВ по сравнению с контрольным антителом, но не до такой степени, как антитело против PD-1 A1.5 или пембролизумаб.
Подробное описание изобретения
В настоящем изобретении предложены моноклональные антитела (мАт), активируемые антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфично связывают белок программируемой смерти клеток 1 (PD-1), также известный как CD279. Предполагается, что использование термина PD-1 охватывает любую его вариацию, такую как, в качестве неограничивающего примера, PD1 и/или PD1, при этом все вариации используются в настоящем изобретении попеременно. Аберрантная экспрессия и/или активность PD-1 и PD-1-связанная сигнализация участвуют в патогенезе многих заболеваний и нарушений, таких как рак.
PD-1, рецептор клеточной поверхности, который относится к суперсемейству иммуноглобулинов, экспрессируется на T-клетках и про-В-клетках. Как известно, PD-1 связывает два лиганда, PD-L1 и PDL2. PD-1 экспрессируется на поверхности активированных T-клеток, при этом взаимодействие между PD-1 и PD-L1 и/или PD-L2 действует как иммунная контрольная точка, так как связывание PD-L1 или PD-L2 с PD-1 инактивирует T-клетку. Таким образом, PD-1 играет роль в даунрегуляции иммунной системы, предотвращении активации T-клеток, которая, в свою очередь, уменьшает аутоиммунные реакции и способоствует аутотолерантности.
Моноклональные антитела против PD-1 и активированные активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию связывают и нейтрализуют или иным образом ингибируют способность PD-1 связывать или иным образом взаимодействовать с PD-L1 и/или PD-L2. Моноклональные антитела против PD-1 и активированные активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию связывают и нейтрализуют или иным образом ингибируют по меньшей мере одну биологическую активность PD-1. Например, моноклональные антитела против PD-1 и активированные активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию связывают PD-1 и блокируют или иным образом ингибируют активацию PD-1 лигандом на активированных T-клетках. В отличие от традиционных химиотерапии и других направленных противоопухолевых терапий, которые проявляют свое действие посредством прямой цитотоксичности или ингибирования роста опухоли, моноклональные антитела и активируемые антитела согласно настоящему описанию блокируют негативный регулятор Т-клеточной активации и ответа, что позволяет иммунной системе атаковать опухоль.
Активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию включают антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают PD-1, соединенные с маскирующей частью (MM), такой, что присоединение MM уменьшает способность антитела или его антигенсвязывающего фрагмента связывать PD-1. MM присоединяют через расщепляемую часть (CM), которая включает последовательность, которая функционирует как субстрат для протеазы.
Активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию активируются при расщеплении расщепляемой части протеазой. Например, протеазу продуцирует опухоль, которая находится вблизи от T-клеток, которые экспрессируют PD-1. В некоторых вариантах осуществления протеазу продуцирует опухоль, которая колокализована с T-клетками, которые экспрессируют PD-1. В активированном, т.е. расщепленном, состоянии активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию связывают PD-1, экспрессируемый на поверхности T-клеток.
Активируемые антитела против PD-1 применяются в способах лечения, предотвращения, задержки прогрессирования, улучшения и/или облегчения симптома заболевания или нарушения, ассоциируемого со связыванием лиганда, выбранного из группы, состоящей из PD-L1 и PD-L2, с PD-1 на T-клетке. Такие лиганды часто присутствуют на опухолевых клетках и других иммунных клетках. Связывание таких лигандов с PD-1 может приводить к иммунной супрессии, такой как супрессия активности T-клеток, кото- 71 043582 рую уменьшают антитела против PD1 и активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию. Например, активируемые антитела против PD-1 применяются в способах лечения, предотвращения, задержки прогрессирования, улучшения и/или облегчения симптома рака или другого неопластического заболевания.
Примеры активируемых антител против PD-1 согласно изобретению включают, например, активируемые антитела, которые включают тяжелую цепь и легкую цепь, которые являются или получены из антител, описанных в примерах, например в примерах 1, 2, 8, 9, 14 и 15.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 3, 7, 11, 15, 19, 39, 41, 43,
45, 47, 49, 51 , 53, 55, 57, 59, 215, 217, 219, 221, 223, 225,
227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 245, 247, 249, 251, 253,
255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279,
281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 515, 517, 519, 521, 523, 525,
527, 529, 531, 533, 535, 537, 539, 541, 572, 574, 576, 578, 580,
582, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 933, 935, 937, 939, 941,
943, 945, 947, 949, 951, 953, 955, 957, 959, 961, 963, 965, 967,
969, 971, 973, 975, 977, 979, 981, 983, 985, 987, 989, 991, 993,
995, 997, 999, 1001 , 1003, 1005, 1007, 1009 , 1011, 1013, 1015,
1017, 1019, 1021, 1023, 1025, 1027, 1030, 1032, 1034, 1036,
1039, 1041-1090, 1113-1120, 1123, 1124, 1127, 1128, 1131, 1132,
1134, 1135, 1138, 1139, 1143, 1144, 1147, 1148, 1151, 1152,
1155, 1156, 1159, 1160, 1163, 1164, 1167, 1168, 1170, 1171,
1174, 1175, 1178, 1179, 1182, 1183, 1186, 1187, 1190, 1191,
1194, 1195, 1198, 1199, 1202, 1203, 2055, 2054, 2057, 2056, 2059 и 2058.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57,
59, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237,
239, 241, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263,265,
267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289,291,
293, 515, 517, 519, 521, 523, 525, 527, 529, 531, 533, 535,537,
539, 541, 572, 574, 576, 578, 580, 582, 584, 919, 921, 923,925,
927, 929, 931, 933, 935, 937, 939, 941, 943, 945, 947, 949,951,
953, 955, 957, 959, 961, 963, 965, 967, 969, 971, 973, 975,977,
979, 981, 983, 985, 987, 989, 991, 993, 995, 997, 999, 1001,
1003, 1005, 1007, 1009, 1011, 1013, 1015, 1017, 1019,1021,
1023, 1025, 1027, 1029, 1030, 1032, 1034, 1036, 1039, 1041-1090,
1113-1120, 1123, 1127, 1131, 1134, 1138, 1144, 1148, 1152, 1156,
1160, 1164, 1168, 1170, 1174, 1178, 1182, 1186, 1190,1194,
1198, 1203, 2055, 2054, 2057, 2056, 2059 и 2058.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 и 59. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
- 72 043582
SEQ ID NO
215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 239,
241, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267,
269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293,
584, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 933, 935, 937, 939, 941,
943, 945, 947, 949, 951, 953, 955, 957, 959, 961, 963, 965, 967,
969, 971, 973, 975, 977, 979, 981, 983, 985, 987, 989, 991, 993,
995 и 997.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233,
235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259,
261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285,
287, 289, 291, 293, 572, 574, 576, 578, 580, 582, 1029, 1120,
1124, 1128, 1132, 1135, 1139, 1143, 1147, 1151, 1155, 1159,
1163, 1167, 1171, 1175, 1179, 1183, 1187, 1191, 1195, 1199,
1203, 2055, 2054, 2057, 2056, 2059 и 2058.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 515, 517, 519, 521,
523, 525, 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539, 541, 572, 574, 576,
578, 580, 582, 999, 1001, 1003, 1005, 1007, 1009, 1011, 1013,
1015, 1017, 1019, 1021, 1023, 1025, 1027, 1029, 1030, 1032,
1034, 1036, 1039, 1041-1090, 1113-1120, 1123, 1127, 1131, 1134,
1138, 1144, 1148, 1152, 1156, 1160, 1164, 1168, 1170, 1174,
1178, 1182, 1186, 1190, 1194, 1198, 1203, 2055, 2054, 2057,
2056, 2059 и 2058.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 215, 217, 219, 221, 223, 225,
227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251,
253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277,
279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 515, 517, 519, 521, 523,
525, 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539, 541, 572, 574, 576, 578,
580, 582, 919, 921, 923, 925, 927, 929, 931, 933, 935, 937, 939,
941, 943, 945, 947, 949, 951, 953, 955, 957, 959, 961, 963, 965,
967, 969, 971, 973, 975, 977, 979, 981, 983, 985, 987, 989, 991,
993, 995, 997, 1027, 1028, 1029, 1030, 1032, 1034, 1036, 1039, 1041-1076, 1113-1120, 1123, 1124, 1127, 1128, 1131, 1132, 1134, 1135, 1138, 1139, 1143, 1144, 1147, 1148, 1151, 1152,1155,
1156, 1159, 1160, 1163, 1164, 1167, 1168, 1170, 1171,1174,
1175, 1178, 1179, 1182, 1183, 1186, 1187, 1190, 1191,1194,
1195, 1198, 1199, 1202, 12032055, 2054, 2057, 2056, 2059 и 2058.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 и 37, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
- 73 043582
SEQ ID NO: 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253,255,
257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279,281,
283, 285, 287, 289, 291, 293, 919, 921, 923, 925, 927, 929,931,
933, 935, 937, 939, 941, 943, 945, 947, 949, 951, 953, 955,957,
959, 961, 963, 965, 967, 969, 971, 973, 975, 977, 979, 981,983,
985, 987, 989, 991, 993, 995, 997, 1028, 1029, 1041-1076, 1138, 1139, 1143, 1144, 1147, 1148, 1151, 1152, 1155, 1156,1159,
1160, 1163, 1164, 1167, 1168, 1170, 1171, 1174, 1175,1178,
1179, 1182, 1183, 1186, 1187, 1190, 1191, 1194, 1195,1198,
1199, 1202, 1203, 2055, 2054, 2057, 2056, 2059 и 2058.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 919, 921, 923, 925,
927, 929, 931, 933, 935, 937, 939, 941, 943, 945, 947, 949, 951,
953, 955, 957, 959, 961, 963, 965, 967, 969, 971, 973, 975, 977,
979, 981, 983, 985, 987, 989, 991, 993, 995, 997, 1028, 1041-
1076, 1138, 1144, 1148, 1152, 1156, 1160, 1164, 1168, 1170,
1174, 1178, 1182, 1186, 1190, 1194, 1198, 1202, 2055, 2057 и
2059.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 215, 217, 219, 221,
223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247,
249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273,
275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 1029, 1139,
1143, 1147, 1151, 1155, 1159, 1163, 1167, 1171, 1175, 1179,
1183, 1187, 1191, 1195, 1199, 1203, 2054, 2056 и 2058.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 546, и легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 515, 517, 519, 521,
523, 525, 527, 529, 531, 533, 535, 537, 539, 541, 572, 574, 576,
578, 580, 582, 999, 1001, 1003, 1005, 1007, 1009, 1011, 1013,
1015, 1017, 1019, 1021, 1023, 1025, 1027, 1030, 1032, 1034,
1036, 1039, 1077-1090, 1113-1120, 1123, 1124, 1127, 1128, 1131,
1132, 1134 и 1135.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 999, 1001, 1003, 1005, 1007,
1009, 1011, 1013, 1015, 1017, 1019, 1021, 1023, 1025, 1027,
1030, 1032, 1034, 1036, 1039, 1070-1090, 1119, 1123, 1127, 1131 и 1134.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 515, 517, 519, 521, 523, 525,
527, 529, 531, 533, 535, 537, 539, 541, 572, 574, 576, 578, 580, 582, 1120, 1124, 1128, 1132 и 1135.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности тяжелой цепи, показанной
- 74 043582 в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает легкую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности легкой цепи, показанной в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает тяжелую цепь, которая включает или получена из аминокислотной последовательности тяжелой цепи, показанной в табл. 7, и легкой цепи, которая включает или получена из аминокислотной последовательности легкой цепи, показанной в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе A в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе B в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе C в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе D в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе E в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе F в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе H в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе I в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе J в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе K в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе L в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе M в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи, как показано в группе N в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи, как показано в группе O в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе P в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности вариабельной области тяжелой цепи и последовательности вариабельной области легкой цепи из комбинаций, показанных в группе Q в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR) последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе A в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе A в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе A в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе A в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе В в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе B в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе B в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последо
- 75 043582 вательностей тяжелой цепи, показанных в группе В в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе C в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе C в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе С в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе С в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе D в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе D в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе D в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе D в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Е в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе E в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе E в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Е в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе F в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе F в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе F в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе F в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе G в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе G в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе G в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе G в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе H в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе H в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе H в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе H в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе I в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе I в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе I в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе I в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе J в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе J в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1
- 76 043582 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе J в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе J в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе K в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе K в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе K в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе K в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе L в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе L в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе L в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе L в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе M в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе M в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе М в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе М в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе N в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе N в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе N в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе N в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе O в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе O в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе O в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе O в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе P в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе P в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе P в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе P в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Q в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе Q в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Q в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Q в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе R в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает
- 77 043582 комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе R в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе R в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе R в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе S в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе S в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе S в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе S в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Т в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе Т в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Т в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе Т в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе U в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе U в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе U в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе U в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе V в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 619 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1856, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 619 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1856, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1846 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1858, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1846 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1858, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1843 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1859, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1843 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1859, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1847 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1847 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию
- 78 043582
CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1848 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1860, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1848 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1860, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1844 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1861, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1844 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1861, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1841 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1841 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1842 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1842 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1845 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1845 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1835 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1857, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1835 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1857, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1836 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1862, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1836 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1862, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1837 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1863, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1837 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1863, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1838 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1864, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1838 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1864, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1838 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1865, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1838 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1865, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1839 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1864, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах
- 79 043582 осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1839 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1864, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1839 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1865, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1839 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1865, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1840 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1866, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1840 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1866, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1841 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1867, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1841 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1867, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1841 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1868, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1841 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1868, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1849 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1858, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1849 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1858, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1853 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1859, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1853 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1859, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1869 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1869 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1850 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1860, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1850 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1860, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1851 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1861, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1851 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 1861, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1852 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1852 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в
- 80 043582 табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1854 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1854 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1855 и комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 1855 и последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 737, как показано в группе V в табл. 7.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе W в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей легкой цепи, показанных в группе W в табл. 7. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR-областей последовательности тяжелой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе W в табл. 7, и CDR-областей последовательности легкой цепи из последовательностей тяжелой цепи, показанных в группе W в табл. 7.
Таблица 7
Последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) для активируемых антител, которые связывают PD-1
Группа А
VH QVQLVESGGDVVQPGGSLRLSCAASGVAFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNMLYLQMNSLRAEDTAMYYCARNDDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 615)
VH QVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCAASGLTFTNYGFHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNNLRAEDTAVYYCATGDDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 617)
VH QVYLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMTSLRVEDTAVYYCASNVDHWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 618)
VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1346)
VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSLSRSSFFWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLK SRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVRDYDILTGDEDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 620)
VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTTSGITFSSYGFHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYADSVKG RFTLSRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVTGDDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 621)
VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSLSRSSYFWGWIRQPPGKGLEWIASIFYSGETYFNPSLK SRVTISVDTSRNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDYDILTGDEDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 623)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLIIYDASNRATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 624)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDTSNRATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 625)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 626)
VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASNLRSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSYPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 628)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 629)
- 81 043582
VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSYPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 630)
Группа В
VH QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYYLYWMKQRPGQGLEWIGGVNPSNGGTNFSEKFKS KATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTRRDSNYDGGFDYWGQGTTLTVSSAK (SEQ ID NO: 631)
VH QVQLQQPGAELVKPGTSVKLSCKASGYTFTNYYMYWVKQRPGQGLEWIGGINPSNGGTNFNEKFKN KATLTVDSSSSTTYMQLSSLTSEDSAVYYCTRRDYRFDMGFDYWGQGTTLTVSSAK (SEQ ID NO: 632)
VH MDWTWSILFLVAAPTGAHSQVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEW MGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQG TTVTVSS (SEQ ID NO: 633)
VH QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKN RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 634)
VH EVQLVLSGGGFVQPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQNPERRLVWVATITGGGRNTYYPDSVKG RFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAMYYCTRQGYDGYTWFAYWGQGTLVTVS (627)
VL DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGFSYLHWYQQKPGQPPKLLIFLASNLESGVPARF SGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSWELPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 635)
VL DIVLTQSPASLAVSLGQRAAISCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQSPKLLIYLASYLESGVPARF SGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRDLPLTFGTGTKLELK (SEQ ID NO: 636)
VL MAPVQLLGLLVLFLPAMRCEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQA PRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 637)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 638)
VL MAPVQLLGLLVLFLPAMRCEIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQS PQLLIYLASYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 639)
VL EIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQSPQLLIYLASYLESGVPDRF SGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 640)
VL MAPVQLLGLLVLFLPAMRCDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQS PQLLIYLASYLESGVPDRFSGSGSGTAFTLKISRVEAEDVGLYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 641)
VL DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQSPQLLIYLASYLESGVPDRF SGSGSGTAFTLKISRVEAEDVGLYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 642)
VL DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISCRASESVDNSGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASNPGSGVPARF SGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTELEIKR (SEQ ID NO: 725)
ТЦ MAVLGLLFCLVTFPSCVLSQVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEW MGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQG TTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL SLGK (SEQ ID NO: 643)
ТЦ QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKN RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLA PCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT KTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:
- 82 043582
644)
тц MAVLGLLFCLVTFPSCVLSQVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEW MGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQG TTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPGK (SEQ ID NO: 645)
тц QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKN RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 646)
лц MAPVQLLGLLVLFLPAMRCEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQA PRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRT VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 647)
лц EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 648)
лц MAPVQLLGLLVLFLPAMRCEIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQS PQLLIYLASYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIKRT VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 649)
лц EIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQSPQLLIYLASYLESGVPDRF SGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 650)
лц MAPVQLLGLLVLFLPAMRCDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQS PQLLIYLASYLESGVPDRFSGSGSGTAFTLKISRVEAEDVGLYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIKRT VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 651)
лц DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKGVSTSGYSYLHWYLQKPGQSPQLLIYLASYLESGVPDRF SGSGSGTAFTLKISRVEAEDVGLYYCQHSRDLPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYAC EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 652)
Группа С
VH DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYINYSGSTSYNPSLKS RISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCARWIGSSAWYFDVWGAGTTVTV (SEQ ID NO: 726)
VL DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSGQNIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFFGVPDR ISGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCFQGSHVPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 727)
VH QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTTYYLYWVRQRPGQGLEWIGGINPSNGGTNFNEKFKS KATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCTRRDYRYDRGFDYWGQGTSVTV (SEQ ID NO: 728)
VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGFNYIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARF SGSGSGTDFTLNIHPVEDEDAATYYCQHSRELPLTFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 729)
VH QVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKAFGYTFTTYPIEWMKQNHGKSLEWIGNFHPYNDDTKYNEKFKG KAKLTVEKSSTTVYLELSRLTSDDSAVYYCARENYGSHGGFVYWGQGTLVTV (SEQ ID NO:
- 83 043582
730)
VL ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVISSYLHWYQQKSGASPKLWIYSTSNLASGVPDRFSGS GSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQYNGYPLTFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 731)
Группа D
LFTVTVPKELYIIEHGSNVTLECNFDTGSHVNLGAITASLQKVENDTSPHRERATLLEEQLPLGKA SFHIPQVQVRDEGQYQCIIIYGVAWDYKYLTLKVKASYRKINTHILKVPETDEVELTCQATGYPLA EVSWPNVSVPANTSHSRTPEGLYQVTSVLRLKPPPGRNFSCVFWNTHVRELTLASIDLQSQMEPRT HPTWEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 732)
Группа E
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDADYSSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 733)
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKASGYTLTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPRGATISYAQKFQG RVTMTRDTSTSTVYMELRNLKSEDTALYYCATAGIYGFDFDYWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 734)
VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGAYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYNGNTYYNPSLR SLVTISVDASKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARASDYVWGGYRYMDAFDIWGRGTLITVSS (SEQ ID NO: 735)
VH GAHSEVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYWCDRMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKENWGSYFDLWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 736)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVMVIYKDTERPSGIPERFSGSSS GTKVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNSITYRVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 737)
VL QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGGYNYVSWYQHHPGKAPKLIIYDVTNRPSGVSDRFSG SKSGNTASLTISGLLAEDEGDYYCSSYTIVTNFEVLFGGGTKLTV (SEQ ID NO: 738)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSNSNIGSNSVNWYQQLPGTAPKLLIYGNNQRPSGVPDRFSGS KSGTSASLAISGLQSENEADYYCAAWDDSLNGPVFGRGTKVTVLGE (SEQ ID NO: 739)
VL GVHSDIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGRAPKVLIYKASTLESGVPSRF SGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPWTFGQGTKLEIKR (SEQ ID NO: 740)
Группа F
VH QVQLVQSGHEVKQPGASVKMSCKASGYSFTSSWIHWVKQAPGQGLEWIGYIYPSTGFTEYNQKFKD RATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWRDSSGYHAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO : 7 41)
VH QVQLVQSGHEVKQPGASVKMSCKASGYSFTSSWIHWVRQAPGQGLEWIGYIYPSTGFTEYNQKFKD RATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWRDSSGYHAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO : 7 4 2)
VL EIVLTQSPATLSLSPGQRLTISCRASQSVSTSGYSYMHWYQQKPDQSPKLLIKFGSNLESGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQHSWEIPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 743)
VL DIVLTQSPATLSLSPGQRLTISCRASQSVSTSGYSYMHWYQQKPDQSPKLLIKFGSNLESGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSWEIPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 744)
Группа H
VH QGQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPIHGLEWIGVIESETGGTAYNQKFKG RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGITTVATTYYWYFDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 745)
VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 746)
Группа I
VH MGLGLQWVFFVALLKGVHCEVRLLESGGGLVKPEGSLKLSCVASGFTFSDYFMSWVRQAPGKGLEW
- 84 043582
VAHIYTKSYNYATYYSGSVKGRFTISRDDSRSMVYLQMNNLRTEDTATYYCTRDGSGYPSLDFWGQ GTQVTVSSATTTAPSVYPLAPACDSTTKS (SEQ ID NO: 747)
VL YELTQPPSASVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSG TTATLTIRDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNK ATLVCLVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVT HEGETVEKSLSPAECL (SEQ ID NO: 748)
Бс Ат METDTLLLWVLLLWVPGSTGDAAQPARRARRTKLGTELGSPGLQEFEVRLLESGGGLVKPEGSLKL SCVASGFTFSDYFMSWVRQAPGKGLEWVAHIYTKSYNYATYYSGSVKGRFTISRDDSRSMVYLQMN NLRTEDTATYYCTRDGSGYPSLDFWGQGTQVTVSSGGGGSDIQMTQSPSSLPASLGDRVTINCQAS QDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYY NYPWTFGPGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHW VRQAPGRGLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWD KNYWGQGTMVTVSSGGGGSYELTQPPSASVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIY DDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGPRG GPEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH (SEQ ID NO: 749)
Группа J
VH QLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRV TMTTDTSTSTATMELRSLRSDDTAVYYCARGRGYSYGIDAFDIWGQGTMVT (SEQ ID NO: 750)
VH LSYVLTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDSERPSGIPERFSGSS SGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLGQP (SEQ ID NO: 751)
Группа К
VH QVQLQQSGPGLVRPSQTLSLSCDISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTFYRSKWYHDYALS VKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVSPGDTAVYFCVREDIDGRLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 752)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYIFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKIGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSVSTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 753)
VH MAEVQLLESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHYMHWVRQAPGQGLEWMGVINPSGGSTSYAQKF QGRVTMTRDTSTSTVYMDLSSLRSEDTAVYYCARRSEAYYHGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 754)
VH EVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYIFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKIGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 755)
VH QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEATGFTFSRYWMHWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDTLEYYGSGILENAMGYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 756)
VH EVQLVESGGGLVRPGGSLRLACAASGFSFSDYYMTWIRQAPGRGLEWIAYISDSGQTVHYADSVKG RFTISRDNTKNSLFLQVNTLRAEDTAVYYCAREDLLGYYLQSWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 757)
VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGEHDAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 758)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYIFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKIGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSVSTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 759)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYIFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKIGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSVSTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 760)
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQG RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKVSAGTESWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 761)
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG
- 85 043582
RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGLYGDEDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 762)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYIFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKIGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 763)
VH QMQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQG QVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCASGVTRKRYSSSWPPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 764)
VH QVQLQQWGAGLLKSSETLSLSCAVYGGTFRDDHWSWIRQPPGKGLEWIGESHHTGRTIYNPSLRSR VTMSIDTSKNEFSLILRSVTAADTATYFCARGNNYVWGNQEDFWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 765)
VH QVQLQQSGPGLVRPSQTLSLSCDISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTFYRSKWYHDYALS VKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVSPGDTAVYFCVREDIDGRLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO : 7 6 6)
VH EVQLVESGGALVQPGGSLRLSCAVSGFTFSDHYMDWVRQAPGKGLEWVARSRNKGNSYTTEYAASV RGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRVGVVPALDGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 767)
VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMHWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDTLEYYGSGILENAMGYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 768)
VH EVQLLESGGGVVQTGRSLRLSCSDSGSTFRSQAMHWVRQTPGKGLEWLAVTSHDGSKTYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGEDTAVYYCARGGRGYTYDHSFFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO : 7 6 9)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYIFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKDGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 770)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYIFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 771)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKDGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 772)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVS (SEQ ID NO: 773)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYKFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKSGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 774)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKSGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 775)
VH QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYKFSDNGVNWVRQAPGQGLEWMGWINTKDGNPTYAQGFTG RFVFSLDTSISTTYLQISSLQAGDTAVYYCAREHDYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 776)
VL LPVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSG SKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSAWDDSLNADVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 777)
VL QPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGTNTVNWYQQVPGTAPKLLIHGNDQRPSGVPDRFSGS KSDTSASLAITGLQSDDDADYYCSAWDDSLNADVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 778)
VL QAVLTQPPSASATPGQRVTISCSGSDSNIGTNYVYWYQQFPGTAPQPLIYRDNQRPSGVPDRFSGS KSGTSASLAISGLRSEDEATYFCSTWDDSLNGWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 779)
VL QPVLTQPRSVSGSPGQSITTSCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSG SKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLEVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 780)
- 86 043582
VL YELMQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAAYDVHWYQQLPGKAPKLVMFANSNRPSGVPDRFSGS KSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDISLRAYVFGTGTKLTVL (SEQ ID NO: 781)
VL SYELMQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGTNTVNWYQHLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGS KSGTSASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSPNGWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 782)
VL QAVLTQPPSVSAAPGQRVTISCSGSNSNIADTYVSWYQQLPGTAPRLLIYDNDQRPSGIPDRFSGS KSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSGVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 783)
VL QSVLTQPASVSGSPGQSVTISCTGSSSDVGAYNFVSWYRQYPGKAPKLLIYEVNKRPSDVPDRFSG SKFGNTASLTVSGLQADDEADYYCSSYAGSTDVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 784)
VL LPVLTQPPSVSGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGS KSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDESLNGDVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 785)
VL AIRMTQSPSFLSASVGDRVTITCRTSQNIYNYLNWYQQKPGKAPELLIFVASSLQSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLQPEDFATYFCLQDHSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 786)
VL LPVLTQPPSVSEVPGQRVTISCSGGISNIGSNAVNWYQHFPGKAPKLLIYYNDLLPSGVSDRFSAS KSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDNLSAYVFATGTKVTVL (SEQ ID NO: 787)
VL QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQHHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSG SKSAITASLTISGLLTEDEADYYCSAWDDSLNADVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 788)
VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYLNWYQQKPGKAPKVLITDASSLETGVPSRFSGSG SGTDFTFTISSLQPEDTATYFCQQYDDLPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 789)
VL QAGLTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVTKRPSGVSNRFSG SKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTYVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 790)
VL QPVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSG SKSGNTASLAITGLQSDDDADYYCSAWDDSLNADVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 791)
VL QAGLTQPPSVSKGLRQTATLTCTGNSNNIGDQGAAWLQQHQGHPPRLLSYRNNNRPSGISERLSAS RSGNIASLTITGLQPEDEADYYCSAWDSSLSVWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 792)
VL QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGS KSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGYVFGTGTKLTVL (SEQ ID NO: 793)
VL AIRMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASENIRNLLAWYQQKPGKAPELLIHGASTLGTGVPSRFSGGG SGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYESYFNTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 794)
Группа L
VH QVQLVESGPGVKKPGSSLKLSCTVSGFTFSSYDYYMHWVRQAPGNGLEWMAVIWYSGSNTYYNDSL KSRFSITRDNSKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCARAYFGVDVWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 795)
VL DIVMTQSPASLSVSVGDRATISCRASQGIGNTLAWYQQKPGQAPKRLLIYRASQGIGNTLAGVPAR FSGDGDGTDFTLTIDDLEEPEDFATYYCQQYDHVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 796)
Группа M
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAFGYTFTTYPIEWMRQAHGQGLEWIGNFHPYNDDTKYNEKFKG RVTMTVDKSTTTVYMELSSLRSEDTAVYYCARENYGSHGGFVYWGQGTLVTVS (SEQ ID NO: 797)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAFGYTFTTYPIEWMRQAHGQGLEWIGNFHPYNDDTKYNEKFKG RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARENYGSHGGFVYWGQGTLVTVS (SEQ ID NO: 798)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAFGYTFTTYPIEWVRQAPGQGLEWMGNFHPYNDDTKYNEKFKG RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARENYGSHGGFVYWGQGTLVTVS (SEQ ID NO: 799)
VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTTYPIEWVRQAPGQGLEWMGNFHPYNDDTKYNEKFKG RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARENYGSHGGFVYWGQGTLVTVS (SEQ ID NO: 800)
VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAFGYTFTTYPIEWMRQAHGQGLEWIGNFHPYNDDTKYNEKFKG RVTITVDKSTTTVYMELSSLRSEDTAVYYCARENYGSHGGFVYWGQGTLVTVS (SEQ ID NO: 801)
VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAFGYTFTTYPIEWMRQAHGQGLEWIGNFHPYNDDTKYNEKFKG
- 87 043582
RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARENYGSHGGFVYWGQGTLVTVS (SEQ ID NO: 802)
VL ENVLTQSPFSLSASVGDRVTITCRASSSVISSYLHWYQQKPAKAPKLWIYSTSNLASGVPDRFSGS GSGTSYTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 803)
VL ENVLTQSPFSLSASVGDRVTITCRASSSVISSYLHWYQQKPAKAPKLFIYSTSNLASGVPSRFSGS GSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 804)
VL ENVLTQSPFSLSASVGDRVTITCRASSSVISSYLHWYQQKPAKAPKLWIYSTSNLASGVPDRFSGS GSGTSYTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 805)
VL ENVMTQSPFSLSASVGDRVTITCRASSSVISSYLHWYQQKPAKAPKLFIYSTSNLASGVPSRFSGS GSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYNGYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 806)
VL ENVMTQSPFSLSASVGDRVTITCRASSSVISSYLHWYQQKPAKAPKLFIYSTSNLASGVPSRFSGS GSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 807)
VL ENVLTQSPFSLSASVGDRVTITCRASSSVISSYLHWYQQKPAKAPKLFIYSTSNLASGVPSRFSGS GSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 808)
VL ENVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASSSVISSYLHWYQQKPGQAPRLWIYSTSNLASGVPDRFSGS GSGTSYTLTISRLEPEDFATYYCQQYNGYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 809)
VL ENVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASSSVISSYLHWYQQKPGQAPRLWIYSTSNLASGVPDRFSGS GSGTSYTLTISRLEPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 810)
Группа N
VH QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYYLYWMKQRPGQGLEWIGGVNPSNGGTNFSEKFKS KATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTRRDSNYDGGFDYWGQGTTLTVSSAK (SEQ ID NO: 631)
VL DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGFSYLHWYQQKPGQPPKLLIFLASNLESGVPARF SGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSWELPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 635)
Группа 0
VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSYTIYSADSVKG RFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARRGYGSFYEYYFDYWGQGTTVTVS (SEQ ID NO: 1521)
VL QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMYWYQQKPGQAPRLLIYLTSNRATGIPARFSGSGS GTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSNPFTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1522)
Группа P
VH EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKN RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1523)
VH EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWIRQSPSRGLEWLGNIYPGTGGSNFDEKFKN RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1524)
VH EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKN RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1525)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1526)
VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPP RFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1527)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1528)
VL DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1529)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1530)
VL EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS
- 88 043582
RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1531)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1532)
VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1533)
VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1534)
ТЦ EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKN RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1535)
ТЦ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWMHWIRQSPSRGLEWLGNIYPGTGGSNFDEKFKN RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1536)
ТЦ EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWIRQSPSRGLEWLGNIYPGTGGSNFDEKFKN RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1537)
ТЦ EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKN RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1538)
ТЦ EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWVRQATGQGLEWMGNIYPGTGGSNFDEKFKN RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 1539)
ТЦ EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYTFTTYWMHWIRQSPSRGLEWLGNIYPGTGGSNFDEKFKN RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRWTTGTGAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 1540)
ЛЦ EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1541)
ЛЦ DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGIPP RFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK
- 89 043582
SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1542)
лц EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1543)
лц DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1544)
лц EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1545)
лц EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1546)
лц DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1547)
лц DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1548)
лц EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKSSQSLLDSGNQKNFLTWYQQKPGQAPRLLIYWASTRESGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLEAEDAATYYCQNDYSYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1834)
Группа Q
VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFTFSSYTMNWVRQAPGKGLEWVSGISDTGGNTYYTDSVKG RFTVSRDNSKNTLSLOMNSLRAEDTAVYYCAKDQGGSYPYYFHYWGQGSLVTVSS (SEQ ID NO: 1549)
VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSNNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGFTYYTDSVKGR FTISRHNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYYDTSDYWTFFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1550)
VH OVOLVESGGGVVOSGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNIYYSDSVKG RFTISRANSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPGHWNYFFEYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1551)
VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCGASGFTFRNYDMHWVRQITGKGLEWVSAIGSAGDTYYPDSVKGR FTISRENAKNSLYLQMNSLRVGDTAVYYCTRDIHCSSTRCYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1552)
VH EVOLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFKFSNEWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPV KGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDQDFWSGYYTGADYYGMDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 1553)
VH OMOLOOWGAGLLKPSETLSLTCVVYGGSLNGYYWSWIROSPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKNR VTMSVDTSKIQFSLKLTSVTVADTAVYYCAREGLLPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1554)
VH QLQLQESGPDLVKPSDTLSLTCTVSDDSISSTTYYWAWIRQPPGKGLEWIGSMSYNGNNYYNPSLK SRVAISAGTSOKOFSLKLTSVTAADTAVYHCARHLGYNGNWYPFDFWGQGILVTVSS (SEQ ID NO: 1555)
VH EVOVVESGGGLVEPGRSLRLSCKASGFTFDDYAMHWVROTPGKALEWVSGINWSGNNIGYADSVKG
- 90 043582
RFTISKDDAKNSLYLQMNSLRPEDTALYYCTKDISITGTLDAFDyWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 1556)
VH OVOLVESGGGVVOPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIIWSDGDSEYNLDSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRVEDSAVYYCARDRDLEDIWGQGTMVTSS (SEQ ID NO: 1557)
VH EVOLLESGGVLVOPGGSLRLSCAASGFTFSNFGMTWVROAPGKGLEWVSGISGGGRDTYFADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLKGEDTAVYYCVKWGNIYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1558)
VH EVOLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQVPGKGLEWVSGISWNDGKTVYAESVKG RFIISRDNAKNSLYLEMNSLRAEDTALYYCARDWQYLIERYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1559)
VH EVOLVESGGGVVRPGGSLRLSCTASGFTFDDYGMSWVROAPGKGLEWISGIGWTGGRSSYADSVRG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLGAEDTALYYCARDRQWLYQWYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1560)
VH EVQLVESGGRVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQLPGKGLEWVAGISWNDGKTVYAESVKG RFIISRDNAKNSLHLEMNSLRAEDTALYYCARDWQYLIDRYFDFWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1561)
VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIGWSSGSIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMDSLRPEDSALYYCAKAYTFMITLYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1562)
VH EVOLVESGGGLVOPGRSLRLSCAASGFTFDDYDMHWVRQAPGKGLEWVSGSGWNRGSLGYADSVKG RFTISRDNAKKSLYLQMNSVRVEDTALYYCAKGFVVVSAAYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1563)
VH QVQLVQSGAEVKRPGSSVKVSCKVSGVT FRNFAIIWVROAPGOGLEWMGGIIPFFSAANYAOSFQG RVTITPDESTSTAFMELASLRSEDTAVYYCAREGERGHTYGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1564)
VH EVOLVESGGGLVOSGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQPPGKGLEWVSGINWNRGRTGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNDLRVEDTALYYCAKAEQWLDEGYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1565)
VH EVOLVESGGGLVORGGSLRLSCAASGFSFSSYAMNWVROAPGKGLEWVSTISDSGGSTYYADSVKG RFTISRDNSKNTLSLQMNSLRAEDTAVYYCAKDQGGSYPYYFHYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1566)
VH EVOLVESGGGLVOPGRSLRLSCAASGFTFEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIGWSNVKIGYADSVKG RFTISRDNVRNSLYLQMNSLRTEDTAFYYCVKMTSMLTLYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1567)
VH QVQLVQSGAEVKRPGASVKVSCKASGYTFTSFYMYWVROAPGOGLEWMGIINPSDGSTSNAOKFOG RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRVAGDIFDIWGOGTMTVSS (SEQ ID NO: 1568)
VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYHWNWIRQSPGKGLEWIGYIYYIGSTDYNPSLESR VTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYCARVPVGATGASDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 1569)
VH EVOLVESGGSVVRPGGSLRLSCVVSGFTFEDYGLSWVROIPGKGLEWVSGISWTGGNTGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTALYHCTRDROWLMQWYFDYWGOGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1570)
VH QVOLVESGGGVVOPGRSLRLSCSASGFTFSAYAMHWVRQAPGKGLEWVAAISYGGSDKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRTDDTAVYYCAKSAHWNFFFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1571)
VH EVOLVESGGGLVOPGRSLRLSCVASGFALHDYAMHWVROVPGKGLEWVSSISWNSGVIGYADSLKG RFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTALYYCAKGSGSYYVSWFDPWGOGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1572)
VH QLQLQESGPGLVQPSETLSLTCTVSGDSISSTAYHWDWIRQPPGKGLEWIGTITYNGNTYFNPSLK SRVTISVDTSKNQFSLKLLSMTAAETAVFYCARHLGYNSDFFPFDFWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1573)
- 91 043582
VH EVQLVESGGGLVRPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMAWVRQTPGKGLEGVSAIGGSGDSTYYVDSVKG RFTISRDNSKSTLFLQMNSLRAEDTAVYYCVKVRNYDGSFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 1574)
VL DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLIWYOOKPGTAPKFLIYAASSLQSGVPSRFSGCG SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 1575)
VL EIVMTOSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYOOKPGOAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQSGDFAVYYCQQYNNWPLTFGGGTKVEIN (SEQ ID NO: 1576)
VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYOOKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSG SGTEFTLTISSLQSGDFAVYYCQQYNNWPLTFGGGTKVEIN (SEQ ID NO: 1577)
VL DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINNYLNWYOOKPGKAPKLLIYTASSLQSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLOPEDFATYYCQQSYSTPPLTFGOGTOLEIK (SEQ ID NO: 1578)
VL DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYOOKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 1579)
VL DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYOOKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 1580)
VL EIVLTQSPGTLSLSPGERVTLSCRASQSVYSNYLAWYOONPGQAPRLLIYAASNRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYATSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1581)
VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYOOKPGQAPRLLIYGASSRTTGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1582)
VL DIOMTOSPISVSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWYOOKPGIAPKLLIYSASSLOSGVPSRFRGSG SGTDFTLTIGSLOPEDFATYYCOQAHSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1583)
VL DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYOOKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSRFSGSG SGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1584)
VL DIQMTQSPSSLSASVGDSITITCRASLSINTFLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLHGGVPSRFSGSG SGTDFTLTIRTLQPEDFATYYCQQSSNTPFTFGPGTVVDFR (SEQ ID NO: 1585)
VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYOOKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1586)
VL DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYOOKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 1587)
ТЦ EVOLLESGGVLVOPGGSLRLSCAASGFTFSNFGMTWVROAPGKGLEWVSGISGGGRDTYFADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLKGEDTAVYYCVKWGNIYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1588)
ТЦ EVOVVESGGGLVEPGRSLRLSCKASGFTFDDYAMHWVRQTPGKALEWVSGISWSGNNIGYADSVKG RFTISKDDAKNSLYLQMNSLRPEDTALYYCTKDISITGTLDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFP LAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL GTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1589)
ТЦ EVQLVESGGGLVRPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMAWVRQTPGKGLEGVSAIGGSGDSTYYVDSVKG RFTISRDNSKSTLFLQMNSLRAEDTAVYYCVKVRNYDGSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTK TYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSS IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1590)
ТЦ QVQLVQSGAEVKRPGSSVKVSCKVSGVT FRNFAIIWVRQAPGQGLEWMGGIIPFFSAANYAQSFQG
- 92 043582
RVTITPDESTSTAFMELASLRSEDTAVYYCAREGERGHTYGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP SSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1591)
лц DIOMTOSPSSLSASVGDSITITCRASLSINTFLNWYOOKPGKAPNLLIYAASSLHGGVPSRFSGSG SGTDFTLTIRTLOPEDFATYYCOQSSNTPFTFGPGTVVDFRRTVAAPSVFIFPPSDEOLKSGTASV VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1592)
лц DIOMTOSPISVSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWYOOKPGIAPKLLIYSASSLQSGVPSRFRGSG SGTDFTLTIGSLQPEDFATYYCQQAHSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASV VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1593)
лц EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYOOKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGS GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTAS VVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1594)
лц DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYOOKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSLOPEDFATYYCQQSYSTPPITFGOGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTAS VVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1595)
Группа R
VH EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWLRQTPEKRLEWVATMSGGGRDIYYPDSMKG RFTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCARQYYDDWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 1719)
VH OVOLKOSGPGLVOPSONLSVTCTVSGFSLTTYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGSTDYNAAFISR LTISKDNARSOVFFKMNSLOVNDTAMYYCAREKSVYGNYVGAMDYWGOGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1720)
VH EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCGASGFTFSSYGMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGRDIYYPDSVKG RLTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCVRQYYDDWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 1721)
VH DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNQLEWMAYISYSGYTSYNPSLKS RISITRDTSKNOFFLQLNSVTTEDTATYYCARSLDYDYGTMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1722)
VH EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFRSYDMSWVRQTPEKILEWVATISGGGSYTYYQDSVKG RFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTALYYCASPYGPYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1723)
VH DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNQLEWMAYISYSGYTSYNPSLKS RISITRDTSRNOFFLQLNSVTTEDTATYYCARSLDYDYGTMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1724)
VH EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCSASGFSFSYYDMSWVRQTPEKGLEWVATISGGGRNTYFIDSVKG RFTISRDNVKNNLYLLMS SLRSEDTALYYCAS PYEGAVDFWGQGT SVTVS S (SEQ ID NO: 1725)
VH EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPEKRLEWATISGGGRDTYYLDSVKGR FTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCVRQYYDDWFAYWGQGTLVSNSA (SEQ ID NO: 1726)
VH QVOLOOSGDELVRPGTSVKMSCKAAGYTFTNNWIGWVKQRPGHGLEWIGDFYPGGGYTNYNEKFKG KATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAIYYCARGYGTNYWYFDVWGAGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1727)
VH QIHLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGLKWMGWISGYTREPTYAADFKG RFAISLETSASTAYLQINDLKNEDMATYFCARDVFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1728)
- 93 043582
VH QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFGMNWVRQAPGQGLKWMGWISGYTREPTYAADFKG RFVISLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1729)
VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSISSDYAWNWIRQPPGKGLEWMAYISYSGYTSYNPSLKS RITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSLDYDYGTMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1730)
VL DIVLTOTPATLSVTPGDSVSLSCRASOSISNNLHWYOOKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSG SGTDFTLNINSVETEDFGMYFCQQSNSWPLTFGAGTKLELKR (SEQ ID NO: 1731)
VL SIVMTOTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSDDVAWYOOKPGQSPKLLIYYAFNRYTGVPDRFTGSG YGTDFTFTISTVQSEDLAVYFCQQDYRSPWTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 1732)
VL DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISNDLHWYOOKSHESPRLLIKYVSQSISGIPSRFSGSG SGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSDSWPLTFGAGTKLELKR (SEQ ID NO: 1733)
VL QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRANSSVSSMHWYQQKPGSSPEPWIYAISNLAFGVPTRFSGSGS GTSYSLTISRVEAEDAATYFCQQWSSRPPTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 1734)
VL DIOMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQSINVWLSWYOQKPGNIPKLLIYRASNLHTGVPSRFSGSG SGTGFTLTISSLQPDDIATYYCQQGQSYPWTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 1735)
VL QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRANSSVSSMHWYQQKPGSSPEPWIYAISNLAFGVPARFSGSGS GTSYSLTISRVEAEDAATYFCQQWNSRPPTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 1736)
VL DIVMTOSHKVMSTSVGDRVSITCKASQDVDNAVAWYOONPGQSPKLLIKWASTRHHGVPDRFTGSG SGTDFTLTISTVQSEDLADFFCQQYSTFPYTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 1737)
VL DIVLTOTPATLSVTPGDSVSLSCRASOSLSNNLHWYOOKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSG SGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSNSWPLTFGAGTKLEMKR (SEQ ID NO: 1738)
VL NIVMTOTPKILFISAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYOOKPGQSPKLLIYYAFTRYIGVPDRFTGSG YGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO: 1739)
VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGYSFMNWFQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARF SGSGSRTNFTLTINPVEADDVATYFCQQSNADPTFGGGTNLEIKR (SEQ ID NO: 174 0)
VL DIVLTOSPASLAVSPGORATITCRASESVDNYGYSFMNWFOOKPGQPPKLLIYRASNLESGVPARF SGSGSRTDFTLTINPVEANDTANYYCQQSNADPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1741)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRANSSVSSMHWYQQKPGQSPEPWIYAISNLAFGVPARFSGSGS GTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSRPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1742)
Группа S
VH QVQLVQSGSEVKKSGSSVKVSCKTSGGTFSITNYAINWVRQAPGQGLEWMGGILPIFGAAKYAQKF QDRVTITADESTNTAYLELSSLTSEDTAMYYCARGKRWLQSDLQYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1743)
VL QPVLTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGSYDLVSWYQQSPGKVPKLLIYEGVKRPSGVSNRFSG SKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGTRNFVFGGGTQLTVL (SEQ ID NO: 1744)
Группа T
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVKQAPGQGLEWIGGINPSNGGTNYNEKFKN KATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRRDYRYDMGFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1745)
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMYWVRQAPGQGLEWMGGVNPSNGGTNFNEKFKS
RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRDYRYDMGFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1746)
VH EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTNYYMYWVKQSHGKSLEWIGGINPSNGGTNYNEKFKN KATLTVDKSSSTAYMELNSLTSEDSAVYYCARRDYRYDMGFDYWGAGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1747)
VH EVQLQQSGPVLVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYMYWVKQSHGKSLEWIGGVNPSNGGTNFNEKFKS
KATLTVDKSSSTAYMELNSLTSEDSAVYYCARRDYRYDMGFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1748)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATISCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQHSRELPLTFGTGTKVEIK (SEQ ID NO: 1749)
VL QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGSSPRLLIYLASYLESGVPVRF
- 94 043582
SGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQHSRELPLTFGTGTRLEIK (SEQ ID NO: 1750)
Группа U
VH QVQLQQSGAELMKPGASVKMSCKTTGYIFSSYWIGWVKQRPGHGLEWIGKIFPGSGSADYNENFKG KATFTVDTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGYGNYLYFDVWGAGTTVTVSS (SEQ ID NO: 619)
VH DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGHSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYSGRTSYNPSLTS RISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCARGYALDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1835)
VH EVKLVESGGGLVSPGGSLKLSCAASGFTFSTFGMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGSDTYYPDSVQG RFIISRYNAKNNLYLQMNSLRPEDTALYYCARQGYDVYSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 1836)
VH EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSTYGMSWVRQTPEKRLQWVATISGGGSNTYYSDSVKG RFTISRDNAKNNLYLQMSSLRSEDTALYYCARQRDSAWFASWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 1837)
VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSTFGMSWVRQAPGKGLEWVSTISGGGSDTYYPDSVQG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGYDVYSWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1838)
VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTFGMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSDTYYPDSVQG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQGYDVYSWFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1839)
VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSTYGMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSNTYYSDSVKG RFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCARQRDSAWFASWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1840)
VH EVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFPHYGISWVROAPGOGLEWMGWISAYNGNTNYAOKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDVDYGTGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1841)
VH EVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTRQGISWVROAPGOGLEWMGWISAYNGNTKYAOKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDVDYGSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1842)
VH EVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFSTFGISWVROAPGOGLEWMGWISAYNGNTNYAOKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDVDYSSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1843)
VH EVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTRYGISWVROAPGOGLEWMGWVSAHNGNTNYAOKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDADYGSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1844)
VH EVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFPHYGISWVROAPGOGLEWMGWISAYNGNTNYAOKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAEYGSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1845)
VH EVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTWYGISWVROAPGOGLEWMGWISAYNGNTNYAOKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDSEYSSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1846)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFETYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAEYSLGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1847)
VH EVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFRQYGISWVROAPGOGLEWMGWISAYNGNTNYAOKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAEYGSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1848)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTWYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDSEYRSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1849)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFRQYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAEYRSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1850)
- 95 043582
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTRYGISWVRQAPGQGLEWMGWVSAHNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDADYRSGSGYWGQGTLVTVSSS (SEQ ID NO: 1851)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFPHYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDVDYRTGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1852)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFSTFGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDVDYRSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1853)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTRQGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTKYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDVDYRSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1854)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFPHYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAEYRSGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1855)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFETYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG RVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDAEYRLGSGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1869)
VL NIVMTOTPKFLLVSAGDRITITCKASQSVSDDVAWYOOKPGQSPKLLISYAFKRYIGVPDRFTGSG YGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQNYNSPYTFGGGTKLELKR (SEQ ID NO: 1856)
VL OIVLSOSPAILSASPGEKVTMTCRTSSSVNYMHWFOQKPGSSPKPWIYATSKLASGVPARFSGSGS GTSYSLTISRVEAEDAATYFCQQWISDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 1857)
VL SYELTOPPSVSVSPGOTARITCSGDALTTQYAYWYOOKPGOAPVMVIYKDTERPSGIPERFSGSSS GTKVTLTISGVOAEDEADYYCQSADNSITYRVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 1858)
VL SYELTQPPSVSVSPGOTARITCSGDALSEQYAYWYOOKPGQAPVMVIYKDTERPSGIPERFSGSSS GTKVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNSITYRVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 1859)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVMVIYKDTERPSGIPERFSGSSS GTKVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNSITYRVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 737)
VL SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVMVLYKDTERPSGIPERFSGSSS GTKVTLTISGVQAEDEDYYCQSDNSITYRVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 1860)
VL SYELTQPPSVSVSPGOTARITCSGDALPMQYGYWYOOKPGQAPVMVIYKDTERPSGIPERFSGSSS GTKVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNSITYRVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 1861)
VL DIILTQSPASLAVSLGQRAAISCRASESVDNSGISFMSWFQQKPGQPPKLLIYTASNQGSGVPARF SGSGSGTEFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIR (SEQ ID NO: 1862)
VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASENVDDYGVSFMNWFQQKPGQPPKLLIYPASNQGSGVPARF SGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 1863)
VL DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVDNSGISFMSWYQQKPGKAPKLLIYTASNQGSGVPSRF SGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1864)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVDNSGISFMSWYQQKPGQAPRLLIYTASNQGSGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1865)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASENVDDYGVSFMNWYQQKPGQAPRLLIYPASNQGSGIPARF SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1866)
VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASENVDDYGVSFMNWYQQKPGQAPRLLIYPASNQGSGIPDRF SGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1867)
VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASENVDDYGVSFMNWYQQKPGQPPKLLIYPASNQGSGVPDRF SGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 1868)
Группа V
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIYPGSSLTNYNEKFKN
RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLLTGTFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1870)
VH OVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIYPGSSLTNYNEKFKN
RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLSTGTFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:
- 96 043582
1871)
VH OVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIYPGSSITNYNEKFKN
RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLTTGTFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1872)
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIWPGSSLTNYNEKFKN
RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLLTGTFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1873)
VH DIVMTQ S P DSLAVS LGE RATINCKSSQSLWDSGNQKNFLTWY QQ KPGQ P P KLLIYWTSTRESGVPD RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1874)
VL DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLWDSGNQKNFLTWYOOKPGQPPKLLIYWTSYRESGVPD RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1875)
VL DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSOSLWDSGNQKNFLTWYOOKPGOPPKLLIYWTSYRESGVPD RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPHTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1876)
VL DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLWDSTNQKNFLTWYOOKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPD RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1877)
ТЦ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIYPGSSLTNYNEKFKN
RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLSTGTFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1878)
ТЦ OVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWMGNIYPGSSLTNYNEKFKN
RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARLSTGTFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 1879)
ЛЦ DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLWDSGNQKNFLTWYOOKPGQPPKLLIYWTSYRESGVPD RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYFYPHTFGGGTKVEIKRGTVAAPSVFIFPPSDEQL KSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1880)
Группа W
VH EVQLQESGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIDPSNSETSLNQKFKD KATLNVDKSTNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSRGNYAYEMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1972)
VH EVQLQESGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIEPSSSETSLNQKFKD KATLNVDKSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSRGNYAYEMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1973)
VH EVQLQESGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIDPYSSETSLNQKFKD KATLNVDKISNTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARSRGNYAYDMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1974)
VH EVQLQESGPELVRPGASVKMSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIDPSNSETSLNQKFKD KATLNVDKSSKTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSRGNYAYDMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1975)
VH EVQLQESGAELVMPGASVKMSCKASGYTFTDYWMHWVKQRPGQGLEWIGAIDTSDSYTSYHQNFKG KATLTEDESSSTAYMQLSSLTSEDSAIYYCARRDYGGFGYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1976)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKKSHGKSLEWIGDIDPNNGGTIYNQKFKG KATLTVDKSSRTAYMELRSLTSEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1977)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCRASGYIFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGGTIYNQKFKD
- 97 043582
KTTLTVDKSSRTAYMELRSLTSEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1978)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQNHGKSLEWIGDIDPNNGDTIYNQKFKG KATLTVDKSSRTAYMELRSLTSEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1979)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNSGGSIYNQKFKG KATLTVDKSSRTVYMELRSLTSEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1980)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKITCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGGTIYNQKFKG KATLTVDKSSNTAYMELRSLASEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSVSVSS (SEQ ID NO: 1981)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGGTIYNQNFKG KATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1982)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGGIIYNQKFKG KAALTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1983)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGGIIYNQKFKG KAALTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCTRWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1984)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGNTIYNQKFKG KATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCTKWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1985)
VH EVQLQESGPELVRPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVMQSHGKSLEWIGDIDPNNGGTIYNQKFKG KATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCTRWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1986)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNVDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGGTFYNQKFKG KATLTVDKSSSTAHMELRSLTSEDTAVYYCVRWRSSMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1987)
VH EVQLQESGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNTGTTFYNQDFKG KATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARWRSSMDYWGQGTSLTVSS (SEQ ID NO: 1988)
VH EVQLQESGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEMHWVKQTPVHGLEWIGVIDPGTGGTAYNQKFKV KALLTADKSSNTAYMELRSLTSEDSAVYYCTSEKFGSNYYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1989)
VH EVQLQESGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGAIDPETGGTAYNQKFKG KAILTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTSEKFGSSYYFDYWGQGTTFTVSS (SEQ ID NO: 1990)
VH EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGSPTYNPSLKS QFSITRDTSKNQFFLQLNSLTTEDTATYYCARGLGGHYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1991)
VH EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGSPTYNPSLKS QFSITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCARGLGGHYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1992)
VH EVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNKLEWMGFIHYSGDTNYNPSLKS RFSITRDTSKNQFFLHLNSVTPEDTATYYCASPSRLLFDYWGHGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1993)
VH EVQLQESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVDWVRQSPGKGLEWLGVIWGVGSTNYNSALKSR LSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAMYYCASDGFVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1994)
VH EVQLQESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVDWVRQSPGKGLEWLGVIWGIGSTNYNSALKSR LSISKDNSKSQVFLKMNSLQSDDTAMYYCASDGFVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1995)
VH EVQLQESGPSLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWRGGNTDYNAAFMSR LSITKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCAASMIGGYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1996)
- 98 043582
VH EVQLQESGPSLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWRGGNTDYNAAFMSR LSITKDNSKSQVFFKFHSLQTDDTAIYYCAASMIGGYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 1997)
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGMIDPSNSETSLNQKFQG RVTMTVDKSTNTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSRGNYAYEMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1998)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGMIDPSNSETSLNQKFQG RVTLNVDKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRGNYAYEMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1999)
VH EVQLVQSGTEVTKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWLGMIDPSNSETTLNQKFQG RVTMTVDKSTNTVYMELTSLRSEDTAVYYCARSRGNYAYEMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 2000)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQGLEWMGIIDPGTGGTAYNQKFQG RVTMTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTSEKFGSNYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 2001)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQGLEWMGIIDPGTGGTAYNQKFQG RVTMTADKSTNTVYMELSSLRSEDTAVYYCTSEKFGSNYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 2002)
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQRLEWMGVIDPGTGGTAYNQKFQG RVTITADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTSEKFGSNYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 2003)
VL DIVLTQTPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSNYLYWYQQRPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGS GSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPPTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 2004)
VL DIVITQTTAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSNYLYWYQQRPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGS GSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPPTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 2005)
VL DIVMTQTPATMSASPGEKVTLTCSASSSVNSNYLYWYQQKPGSSPKVWIYSTSNLASGVPARFSGS GSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPPTFGSGTKLELK (SEQ ID NO: 2006)
VL DIVMTQTTATMSASPGEKVTLTCSASSSVNSNYLYWYQQKPGSSPKVWIYSTSNLASGVPARFSGS GSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPPTFGSGTKLELK (SEQ ID NO: 2007)
VL DIVLTQSTAIMSASPGEKVTLTCSASSGVNSNYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGS GSGTSYSLTISSVEAEDAASYFCHQWSSYPPTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 2008)
VL DIVLTQTPSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2009)
VL DIVLTQSPSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2010)
VL DIVITQSPSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSELPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2011)
VL DIVMTQSPSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQRPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSNLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2012)
VL DIVMTQSPSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSELPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2013)
VL DIVMTQSTSSLSASLGDRVTISCSASQGISHYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTIRNLEPEDIATYYCQQYSELPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2014)
VL DIVMTQSPSSLSASLGDRVTISCSASQGISHYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTIRNLEPEDIATYYCQQYSELPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2015)
VL DIVMTQSPSSLSASLGDRVTISCSASQDISSYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSELPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2016)
VL DIVMTQTPSSLSASLGDRVTISCSASQGISYYLNWYQQKPDGTIKLLIYYTLSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSELPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2017)
VL DIVMTQTPSSMSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSYLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2018)
VL DIVMTQTPSSLSASLGDRVTISCSASQGIGNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSNLHSGVPSRFSGRG SGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSNLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2019)
- 99 043582
VL DIVMTQSPSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSNLHSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISDLAPEDIATYYCQQYSYLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2020)
VL DIVITQSPLSLPVGLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2021)
VL DIVLTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 2022)
VL DIVLTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSDGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 2023)
VL DIVITQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSDGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 2024)
VL DIVMTQSTLSLPVSLGDQVSISCRSSQSIVHSDGNTYLEWYLQKPGQSPNLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 2025)
VL DIVLTQDELSNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQVLIYFMSTRASGVSDR FSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYCQQLVDFPFTFGSGTKLELK (SEQ ID NO: 2026)
VL DIVMTQDELYNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQVLIYFMSTRASGVSDR FSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYCQQLVDFPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 2027)
VL DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGTQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPD RFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPLTFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 2028)
VL DIVLTQTTATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSG SGSDFTLTVNSVEPEDVGVYYCQNGHSYPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 2029)
VL DIVLTQSPDTLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSG SGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSYPYTFGGGTKLELK (SEQ ID NO: 2030)
VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSSNYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNRATGIPARFSGS GSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSYPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2031)
VL DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSSNYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLATGIPARFSGS GSGTDYTLTISSLEPEDFAVYFCHQWSSYPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2032)
VL DIVLTQSPGTLSLSPGEKVTLSCRASSSVSSNYLYWYQQKPGQAPRLVIYSTSNLATGIPDRFSGS GSGTDYTLTISRLEPEDFAVYFCHQWSSYPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 2034)
VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQTIVHSDGNTYLEWYQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2035)
VL DIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQTIVHSDGNTYLEWYQQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2036)
VL DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQTIVHSDGNTYLEWYQQRPGQPPRLLIYKVSNRFSGVPDR FSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2037)
Следует обратить внимание на то, что:
(i) последовательности, представленные в группе B, группе P, группе Q и группе V и обозначенные ТЦ и ЛЦ, являются аминокислотными последовательностями тяжелой цепи и легкой цепи; все другие последовательности, представленные в табл. 7, являются последовательностями вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи;
(ii) последовательность, представленная в группе D, является слитым белком, включающим полипептид B7-DC и полипептид иммуноглобулина; и (iii) в группе I последняя последовательность является последовательностью биспецифичного антитела (БсАт).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает CDR последовательность, показанную в табл. 8, комбинацию VL CDR последовательностей (VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3), выбранную из группы, состоящей из тех комбинаций, показанных в одной строке табл. 8, комбинацию VH CDR последовательностей (VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), выбранную из группы, состоящей из тех комбинаций, показанных в табл. 8, или комбинацию VL CDR и VH CDR последовательностей (VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3), выбранную из группы, состоящей из тех комбинаций, показанных в табл. 8. CDR области были определены согласно определению AbM, как описано в таблице определения CDR на веб-сайте группы биоинформатики Andrew C.R. Martin, в UCL.
- 100 043582
Таблица 8
CDR последовательности антител и активируемых антител, которые связывают PD-1
VH
Название Ат CDR1 (SEQ ID NO) CDR2 (SEQ ID NO) CDR3 (SEQ ID NO)
М13 GFTFSGYAMS (653) YISNSGGNAH (658) EDYGTSPFVY (664)
М19 GYTFTDYYMD (654) YIYPKNGGSS (659) KWATDY (665)
М3 GFTFSNYAMS (655) YISNGGGDTH (660) ENYGTSPFVY (666)
М5 GFSFSSYDMS (656) TISGGGRYTY (661) NYYGFDY (667)
М14 GFTFSSYGMS (657) TISGGGRDIY (662) LYLGFDY (668)
А GFTFSGYAMS (653) YISNSGGNAH (658) EDYGTSPFVY (664)
АЬ GFTFSGYAMS (653) YISNSGGNAH (658) EDYGTSPFVY (664)
Ае GFTFSGYAMS (653) YISNSGGNTH (663) EDYGTSPFVY (664)
Af GFTFSGYAMS (653) YISNSGGNTH (663) EDYGTSPFVY (664)
Ва GYTFTDYYMD (654) YIYPKNGGSS (659) KWATDY (665)
ВЬ GYTFTDYYMD (654) YIYPKNGGSS (659) KWATDY (665)
С GFTFSNYAMS (655) YISNGGGDTH (660) ENYGTSPFVY (666)
Са GFTFSNYAMS (655) AYISNQGGDTH (2041) ENYGTSPFVY (666)
D GFSFSSYDMS (656) TISGGGRYTY (661) NYYGFDY (667)
1.0
1.1
1.2
1.4
1.5
1.6
cl 1.7
1.9
1.10
2
4
VL
CDR1 (SEQ ID NO) CDR2 (SEQ ID NO) CDR3 (SEQ ID NO)
RASESVDNYGIS FMN (669) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
KSSQSLLYSSNQ KNYL (670) WASIRES (679) QQCDSYPWT (684)
RASESVDNYGIS FMN (669) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
KASQDVGTAVA (671) WASTRHT (680) QQYSSYPWT (685)
LASQTIGTWLA (672) AATSLAD (681) QQLYSIPWT (686)
RASESVDNYGIS FMN (673) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
RASESVDNYGIS FMN (673) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
RASESVDQYGIS FMN (674) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
RASESVDSYGIS FMN (675) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
RASESVDAYGIS FMN (676) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
RASESVDNYGIS FMN (673) AASDQGS (682) QQSKDVPWT (683)
RASESVDAYGIS FMN (676) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
RASESVDAY (676)GISFMN AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
RASESVDAYGIS FMN (676) AASNQGS (678) QQSKDVPWT (683)
KSSQSLLYSSNQ KNYLA (677) WASIRES (679) QQSDSYPWT (687)
KASQDVGTAVA (671) WASTRHT (680) QQYSSYPWT (685)
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает или получено из антитела, которое произведено, секретировано или иным образом продуцировано гибридомой, такой как, например, гибридома(ы), раскрытая в патенте США 8,927,697 и публикациях заявок на патент США US 2011-0171215 и US 2015-0152180, и депонированная в Европейской коллекции клеточных культур (ECACC) под регистрационным номером 08090902; 08090903; и 08090901.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает или получено из антитела, которое произведено, секретировано или иным образом продуцировано гибридомой, такой как, например, гибридома(ы), раскрытая в публикации заявки на патент США US 2014-0335093, и депонированная в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) под депозитарным номером 1-4122.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает или получено из антитела, которое произведено, секретировано или иным образом продуцировано гибридомой, такой как, например, гибридома(ы), раскрытая в номере публикации PCT WO 2015/058573 или WO 2014/206107, и депонированная в Китайской коллекции культур Комитета Центра общей микробиологии под регистрационным номером 8351.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает или получено из антитела, которое произведено, секретировано или иным образом продуцировано гибридомой, такой как, например, гибридома(ы), раскрытая в публикации заявки на патент США US2011177088, и депонированная в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) под депозитарным номером 13745.
- 101 043582
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает CDR последовательность, показанную в табл. 9, комбинацию VL CDR последовательностей, выбранных из группы, состоящей из таких комбинаций, которые показаны в табл. 9, и/или комбинацию VH CDR последовательностей, выбранных из группы, состоящей из таких комбинаций, которые показаны в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе А в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе А в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе А в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе А в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе В в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе В в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе В в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе B в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе С в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе С в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе С в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе С в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе E в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе E в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе E в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе E в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе F в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе F в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе F в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе F в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе G в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе G в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе G в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе G в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе H в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе H в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе H в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе H в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных
- 102 043582 в группе L в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе L в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе L в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе L в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе M в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе M в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе M в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе M в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе N в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе N в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе N в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе N в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе O в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе O в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе O в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе O в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе P в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе P в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе P в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе P в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе Q в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе Q в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе Q в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе Q в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе R в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе R в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе R в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе R в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе T в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе T в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе T в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей лег
- 103 043582 кой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе T в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе U в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе U в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе U в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе U в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе V в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе V в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе V в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе V в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе W в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе W в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе W в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе W в табл. 9.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе X в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе X в табл. 9. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 включает комбинацию CDR последовательностей тяжелой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе X в табл. 9, и комбинацию CDR последовательностей легкой цепи, выбранных из группы, состоящей из комбинаций, показанных в группе X в табл. 9.
- 104 043582
Таблица 9 Дополнительные CDR последовательности для антител и активируемых антител, которые связывают PD-1
Груп na A
VH VL
CDR1 CDR2 CDR3 (SEQ ID NO: ) CDRl CDR2 CDR3
(SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:)
NYGMH (688) λ ZIWYDGSNKYYAD NDDY (700) RASQSVSSYLA DAS N RAT QQRSNWPLT
3VKG (694) (704) (706) (710)
NYGFH (689) λ ZIWYDGSKKYYAD GDDY (701) RASQSVSSYLA DTSNRAT QQRSNWPLT
3VKG (695) (704) (707) (710)
NYGMH (688) □IWYDGSNKYYAD NVDH (702) RASQSVSSYLA DAS N RAT QQSSNWPRT
3VKG (696) (704) (706) (711)
NSGMH (690) VIWYDGSKRYYAD NDDY (700) RASQSVSSYLA DAS N RAT QQSSNWPRT
3VKG (697) (704) (706) (711)
RSSFFWG 3IYYSGSTYYNPS DYDILTGDEDY RASQGISSWLA AASNLRS QQYYSYPRT
(691) LKS (698) (703) (705) (708) (712)
SYGFH (692) λ ZIWYDGSKKYYAD GDDY (701) RASQSVSSYLA DAS N RAT QQRSNWPLT
3VKG (695) (704) (706) (710)
RSSYFWG 3IFYSGETYFNPS DYDILTGDEDY RASQGISSWLA AASSLQS QQYYSYPRT
(693) LKS (699) (703) (705) (709) (712)
Груп па В
VH VL
CDRl CDR2 CDR3 (SEQ ID NO: ) CDRl CDR2 CDR3
(SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:)
SYYLY (713) GVNPSNGGTNFS RDSNYDGGFDY RASKSVSTSGFS LASNLES QHSWELPLT
EKFKS (715) (717) YLH (719) (721) (723)
NYYMY (714) GINPSNGGTNFN RDYRFDMGFDY RASKGVSTSGYS LASYLES QHSRDLPLT
EKFKN (716) (718) YLH (720) (722) (724)
AASGFTFSSYAMi TITGGGRNTYYP QGYDGYTWFAY RASESVDNSGIS AASNPGS QQSKEVPWT
(627) DSVKG (817) (823) FMN (8 3 0) (836) (840)
TVSSGFTFSSFGMi TISGGGSNTYYP IYDVAWFAY RSSQTIVHSDGN AASNQGS FQGSHVPYT
(811) DSVK (818) (824) TYLE (831) (678) (841)
KGSGYSFTDYALl· VISTHYGDTVYN EGYGSLFYFDQ RASESVDSYGNS KVSNRFS QQNNEVPLT
(812) QRFKG (1832) (825) FMN (832) (837) (842)
KASGYAFTSYNIY YIDLYNGDTSYN EGRLSFDY RSSQSIVQSNGN LASNLDS FQGSHVPYT
(813) EKF (819) (826) TYLE (833) (838) (843)
AASGFTFSNYDMi YISGGGGNTYYP ISLTGIFDY RSSQTIVHGNGN SAS T LAS QQGFGTSNVENP
(814) DTL (820) (827) TYLE (834) (839) (844)
AASGFTFNSYGMi TISGGGSYTYYP GNYVYVMDY QASENIYSSLA
(815) DSVQG (821) (828) (835)
KGSGYIFTDYVMl· VISTYYSNINYN EGFGRPYWYFD
(816) QKFKG (822) V (829)
Группа C
VH VL
CDRl CDR2 CDR3 (SEQ ID NO: ) CDRl CDR2 CDR3
(SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:)
- 105 043582
GYSITSDYAWN (845) YINYSGSTSYNP SLKS (847) WIGSSAWYFDV (849) RSGQNIVHSNGN TYLE (851) KVSNRFF (853) FQGSHVPFT (855)
GYTFTTYYLY (846) GINPSNGGTNFN EKFK (848) RDYRYDRGFDY (850) RASKSVSTSGFN YIH (852) LASNLES (721) QHSRELPLT (856)
Группа E
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO:)
SYGIS (857) WISAYNGNTNYA QKLQG (861) DADYSSGSGY (865) SGDALPKQYAY (869) KDTERPS (872) QSADNSITYRV (876)
SYYIH (858) IINPRGATISYA QKFQG (862) AGIYGFDFDY (866) TGTSNDVGGYNY VS (870) DVTNRPS (873) SSYTIVTNFEVL (877)
SGAYYWS (859) YIYYNGNTYYNP SLRS (863) ASDYVWGGYRY MDAFDI (867) SGSNSNIGSNSV N (871) GNNQRPS (874) AAWDDSLNGPV (878)
SSYWMS (860) AISGSGGSTYYA DSVKG (864) ENWGSYFDL (868) RASQGISSWLA (705) KASTLES (875) QQSYSTPWT (879)
Группа F
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO:)
SSWIH (880) YIYPSTGFTEYN QKFKD (881) WRDSSGYHAMD Y (882) RASQSVSTSGYS YMH (883) FGSNLES (884) QHSWEIPYT (885)
Группа L
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO:)
GFTFSSYDYYMH (886) VIWYSGSNTYYN DSLKS (887) AYFGVDV (888) RASQGIGNTLA (889) RASQGIGNTLA (889) QQYDHVPLT (891)
Группа G
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO:)
GFSLTSYGVH (892) VIWAGGSTNYNS ALMS (895) GFSLTSYGVH (896) KASQSVSNDVA (898) YAFHRFT (900)
VIWAGGSTNYNPS LKS (893) ARAYGNYWYIDV (896) ARAYGNYWYID V (897) KSSESVSNDVA (899)
VIYAGGSTNYNPS LKS (894) HQAYSSPYT (895)
Группа H
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO:)
DYEMH (9 01) VIESETGGTAYN QKFKG (902) EGITTVATTYY WYFDV (903) RSSQSIVHSNGN TYLE (904) KVSNRFS (905) FQGSHVPLT (906)
Группа M
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO: ) CDR3 (SEQ ID NO:)
GYTFTTYPIE (907) NFHPYNDDTKYN EKFK (908) RASSSVISSYLH (909) STSNLAS (910) QQYNGYPLT (911)
QQYNSYPLT (912)
- 106 043582
Группа Ν
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO:)
SYYLY (713) GVNPSNGGTNFS EKFK (1596) RDSNYDGGFDY (717) RASKSVSTSGFS YLH (719) LASNLES (721) QHSWELPLT (723)
Группа P
VH VL
CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO: ) CDR1 (SEQ ID NO:) CDR2 (SEQ ID NO:) CDR3 (SEQ ID NO:)
GYTFTTY (854) YPGTGG (1597) WTTGTGAY (1598) SQSLLDSGNQKN F (1599) WAS (1600) DYSYPY (1601)
TYWMH (1602) NIYPGTGGSNFD EKFK (1603) KSSQSLLDSGNQ KNFL (1833) WASTRES (1604) QNDYSYPYT (1605)
GYTFTTYWMH (1606)
Группа Q
VH VL
GFTFSSYT (1607) ISDTGGNT (1608) AKDQGGSYPYY FHY (1609) QSISSY (1610) AAS (1611) QQSYSTPPIT (1612)
GFTVSNNY (1613) IYSGGFT (1614) ARYYYDTSDYW TFFDY (1615) QSVSSN (1616) GAS (1617) QQYNNWPLT (1618)
GFTFSSYG (1619) IWYDGSNI (1620) ARPGHWNYFFE Y (1621) QSINNY (1622) TAS (1623) QQSYSTPPLT (1624)
GFTFRNYD (1625) IGSAGDT (1626) TRDIHCSSTRC YGMDV (1627) QSISNY (1628) AAS (1611) QQSYSTPPIT (1612)
GFKFSNEW (1629) IKSKTDGGTT (1630) TTDQDFWSGYY TGADYYGMDV (1631) AAS (1611) QQSYSTPPIT (1612)
GGSLNGYY (1632) IDHSGST (1633) AREGLLPFDY (1634) QSVYSNY (1635) AAS (1611) HQYATSPWT (1636)
DDSISSTTYY (1637) MSYNGNN (1637) ARHLGYNGNWY PFDF (1638) QSVSSSY (1639) GAS (1640) QQYGSSPWT (1641)
GFTFDDYA (1642) INWSGNNI (1643) TKDISITGTLD AFDV (1644) QGISNW (1645) SAS (1646) QQAHSFPLT (1647)
GFTFSSYG (1619) IWSDGDSE (1648) ARDRDLEDI (1649) QGIRND (1650) AAS (1611) LQHNSYPLT (1651)
GFTFSNFG (1652) ISGGGRDT (1653) VKWGNIYFDY (1654) LSINTF (1655) AAS (1611) QQSSNTPFT (1656)
GFTFDDYG (1657) ISWNDGKT (1658) ARDWQYLIERY FDY (1659) QSVSSSY (1639) GAS (1640) QQYGSSPWT (1641)
GFTFDDYG (1657) IGWTGGRS (1660) ARDRQWLVQWY FDY (1661) QSISSY (1610) AAS (1611) QQSYSTPPIT (1612)
GFTFDDYG (1657) ISWNDGKT (1658) ARDWQYLIDRY FDF (1662)
GFTFDDYA (1642) IGWSSGSI (1663) AKAYTFMITLY FDY (1664)
GFTFDDYD (1665) SGWNRGSL (1666) AKGFVWSAAY FDY (1667)
GVTFRNFA (1668) IIPFFSAA (1669) AREGERGHTYG FDY (1670)
GFTFDDYA (1642) INWNRGRT (1671) AKAEQWLDEGY FDY (1672)
GETFEDYA (1673) ISDSGGST (1674) AKDQGGSYPYY FHY (1609)
GYTFTSFY (1675) IGWSNVKI (1676) VKAYTSMLTLY FDY (1677)
- 107 043582
GGSISSYH (1678) GFTFEDYG (1681) GFTFSAYA (1684) GFALHDYA (1687) GDSISSTAYH (1687) GFTFSTYA (1690) SYGMS (1751) TYGVH (1757) SYGMS (1751) SDYAWN (1767) SYDMS (1773) SDYAWN (1767) YYDMS (1780) SYGMS (1751) NNWIG (1788) NFGMN (1794) GYTFTSYYMY (1800) GYTFTNYYMY (1806) INPSDGST (1679) IYYIGST (1682) ISWTGGNT (1685) ISYGGSDK (1688) ISWNSGVI (1717) ITYNGNT (1691) IGGSGDST (1693) VH TMSGGGRDIYYP DSMKG (1752) VIWSGGSTDYNA AFIS (1758) TISGGGRDIYYP DSVKG (1763) YISYSGYTSYNP SLKS (1768) TISGGGSYTYYQ DSVKG (1774) YISYSGYTSYNP SLKS (1768) TISGGGRNTYFI DSVKG (1781) TISGGGRDTYYL DSVKG (1786) DFYPGGGYTNYN EKFKG (1789) WISGYTREPTYA ADFKG (1795) VH GVNPSNGGTNFN EKFKS (1801) GINPSNGGTNYN EKFKN (890) ARRVAGDIFDI (1680) ARVPVGATGAS DV (1683) TRDRQWLMQWY FDY (1686) AKSAHWNFFFD Y (1689) AKGSGSYYVSW FDP (1718) ARHLGYNSDFF PFDF (1692) VKVRNYDGSFD I (1694) Группа R QYYDDWFAY RASQSISNNLH (1753) (1754) EKSVYGNYVGA KASQSVSDDVA MDY (1759) (1760) QYYDDWFAY RASQSISNDLH (1753) (1764) SLDYDYGTMDY RANSSVSSMH (1769) (1770) PYGPYFDY HASQSINVWLS (1775) (1776) SLDYDYGTMDY RANSSVSSMH (1769) (1770) PYEGAVDF KASQDVDNAVA (1782) (1783) QYYDDWFAY RASQSLSNNLH (1753) (1787) GYGTNYWYFDV KASQSVSNDVA (1790) (1791) DVFDY RASESVDNYGYS (1796) FMN (1797) Группа T RDYRYDMGFDY RASKGVSTSGYS (1802) YLH (1803) RDYRYDMGFDY (1802) Группа U VL YASQSIS (1755) YAFNRYT (1761) YVSQSIS (1765) AISNLAF (1771) ASNLHT (1777) AISNLAF (1771) WASTRHH (1784) YASQSIS (1755) YAFTRYI (1792) RASNLES (1798) VL LASYLE (1804) QQSNSWPLT (1756) QQDYRSPWT (1762) QQSDSWPLT (1766) QQWSSRPPT (1772) QQGQSYPWT (1778) QQWNSRPPT (1779) QQYSTFPYT (1785) QQSNSWPLT (1756) QQDYSSPYT (1793) QQSNADPT (1799) QHSRELPLT (1805)
VH VL
G (T/R/I) (F/L) (S/E/ T/P/R) (T/S/ H/Q/R/ W) (F/Y/ Q) (1881) W (I/V) S A (Y/H) N G Ν T (K/N) Y A Q К L Q G (1882) (Q/-) GY (G/D)(N/V)Y (L/S)(Y/W) (D/А)(Y/V) (1883) S G D A L (P/T/S) (M/T/E/K) Q Y (G/A) Y (1884) Q Q (N/S/W) (Y/K/I) (N/E/S) (S/V/D/T) P (Y/W) T (1885)
- 108 043582
(Τ/R/W/Q/H/S) (Y/F/ Q) G (M/I) (1886) (T/A) I S G (S/G) G (S/G).(S/D/N) T Y Y (A/P/S) D S V (K/Q) G (1887) D (A/V/S)(D/E) Y (S/G/R)(S/L/ T) (1888), при условии, что если А в положении 2, то в положении 5 не D или S
GYALDY (2038)
GYIFSSY (1889) FPGSGS (1890) GYGNYLYFDV (1891) KASQSVSDDVA (1760) YAFKRYI (1892) QQNYNSPYT (1893)
SYWIG (1894) KIFPGSGSADYN ENFKG (1895) DSEYSSGSGY (1896) SGDALTTQYAY (1897) KDTERPS (872) QSADNSITYRV (876)
QRDSAWFAS (2039) RASESVDNSGIS FMS (1898) ATSKLAS (1899) QQWISDPWT (1900)
SGDALSEQYAY (1901) TASNQGS (1902) QQSKEVPWT (840)
SGDALPKQYAY (869)
SGDALPMQYGY (1903)
RTSSSVNYMH (1904)
GYRFTWY (1905) SAYNGN (1906) DVDYSSGSGY (1907)
WYGIS (1908) WISAYNGNTNYA QKLQG (861) DAEYSLGSGY (1909)
GYRFSTF (1910) SAHNGN (1911) DAEYGSGSGY (1912)
TFGIS (1913) WVSAHNGNTNYA QKLQG (1914) DADYGSGSGY (1915)
GYRFETY (1916) SYSGR (1917) DVDYGTGSGY (1918)
GYRFRQY (1919) YISYSGRTSYNP SLTS (1920) DVDYGSGSGY (1921)
QYGIS (1922) SGGGSD (1923) DAEYGSGSGY (1912)
GYRFTRY (1924) TISGGGSDTYYP DSVQG (1925) GYALDY (2038)
RYGIS (1926) QGYDVYSWFAY (1927)
GYRFPHY (1928)
HYGIS (1929)
GYRFTRQ (1930)
RQGIS (1931)
GHSITSDY (1932)
SDYAWN (1767)
GFTFSTF (1933)
TFGMS (1934)
Группа V
VH VL
GWSLTGPG (1935) IYGDGST (1936) AYEYAMDW (1937) WSVSTSGKSY (1938) LLS (1939) YHIRDLT (2040)
- 109 043582
GYTFTSYWIN (1940) GYTFTSY (1946) SYWIN (1952) VH YPGSSL (1941) NIYPGSSLTNYN EKFKN (1947) YPGSSI (1953) NIYPGSSITNYN EKFKN (1958) WPGSSL (1962) NIWPGSSLTNYN EKFKN (1963) NIYPGSSSTNYN EKFKN (1964) Груп LSTGTFAY (1942) LTTGTFAY (1948) LLTGTFAY (1954) L(L/S)TGTFA Y (1959) na W KSSQSLWDSTNQ KNFLT (1943) KSSQSLWDSGNQ KNFLT (1949) KSSQSLLDSGNQ KNFLT (1955) KSSQSL(W/L)D S(G/T)NQKNFL T (1960) VL WTSTRES (1944) WTSYRES (1950) WTS (T/Y) RES (1956) QNDYFYPLT (1945) QNDYFYPHT (1951) QNDYSYPLT (1957) QNDY(F/S)YP( L/H)T (1961)
NI(Y/W)PGSS (L/l/S)TNYNE KFKN (1965)
Группа X
VH VL
GLTFSSSG (1966) IWYDGSKR (1706) ATNNDY (1967) RASQSVSSYLA (704) TASNRAT (1968) QQYSNWPRT (1969)
AB в активируемых антителах согласно настоящему описанию специфично связывают PD-1 мишень, такую как, например, PD-1 млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления такие AB связывают PD-1 млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления такие AB связывают PD-1 человека. В некоторых вариантах осуществления такие AB связывают PD-1 не относящегося к человеку примата. Также в настоящее описание включены AB, которые связываются с тем же эпитопом PD-1, что и антитело согласно настоящему описанию и/или активированное активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении. Также в настоящее описание включены AB, которые конкурируют с антителом против PD-1 и/или активированным активируемым антителом против PD-1, описанным в настоящем изобретении, за связывание с PD-1 мишенью, например, человеческим PD-1. Также в настоящее описание включены AB, которые перекрестно конкурируют с антителом против PD-1 и/или активированным активируемым антителом против PD-1, описанным в настоящем изобретении, за связывание с PD-1 мишенью, например, человеческим PD-1.
Активируемые антитела против PD-1, предложенные в настоящем изобретении, включают маскирующую часть. В некоторых вариантах осуществления маскирующая часть является аминокислотной последовательностью, которая соединена или иным образом прикреплена к антителу против PD-1 и помещена в конструкцию активируемого антитела против PD-1 таким образом, что маскирующая часть уменьшает способность антитела против PD-1 специфично связывать PD-1. Подходящие маскирующие части определяют с применением любого из множества известных способов. Например, пептидные маскирующие части определяют с применением способов, описанных в публикации PCT WO 2009/025846 (Daugherty et al.), содержание которой настоящим полностью включено посредством отсылки.
Активируемые антитела против PD-1, предложенные в настоящем изобретении, включают расщепляемую часть. В некоторых вариантах осуществления расщепляемая часть включает аминокислотную последовательность, которая является субстратом для протеазы, обычно внеклеточной протеазы. Подходящие субстраты определяют с применением любого из множества известных способов. Например, пептидные субстраты определяют с применением способов, описанных в патенте США 7,666,817 (Daugherty et al.); в патенте США 8,563,269 (Stagliano et al.); и в публикации PCT WO 2014/026136 (La Porte et al.), содержание каждого из которых настоящим полностью включены посредством отсылки. См. также Boulware et al., Evolutionary optimization of peptide substrates for proteases that exhibit rapid hydrolysis kinetics, Biotechnol Bioeng. 106.3 (2010): 339-46.
Примерные субстраты включают, без ограничения перечисленными, субстраты, расщепляемые одной или более следующими ферментами или протеазами, перечисленными в табл. 3.
Таблица 3
Примерные протеазы и/или ферменты
ADAMS, ADAMTS, например, ADAM 8 ADAM 9 ADAMI0 ADAM12 ADAM15 ADAMI7/ТАСЕ Цистеиновые протеиназы, например, Крузипаин Легумаин Отубаин-2 Сериновые протеазы, например, активированный протеин С Катепсин А Катепсин G Химаза протеазные факторы свертывания крови (например, FVIIa, FIXa, FXa, FXIa,
KLK протеазы, например, KLK4
- 110 043582
ADAMDEC1 KLK5 ЕХПа)
ADAMTS1 KLK6 Эластаза
ADAMTS4 KLK7 Гранзим В
ADAMTS5 KLK8 Гуанидинобензоатаза
KLK10 HtrAl
Аспартат-протеазы, ΚΤιΚΊ 1 Эластаза нейтрофилов
например. человека
ВАСЕ KLK13 Лактоферрин
Ренин KLK14 Марапсин
NS3/4A
Аспарагиновые катепсины, Металлопротеиназы, РАСЕ 4
например, например,
Катепсин D Меприн Плазмин
Катепсин Е Неприлизин PSA
PSMA tPA
Каспазы, например, ВМР-1 Тромбин
Каспаза 1 Триптаза
Каспаза 2 ММР протеазы, например, и РА
Каспаза 3 ММР1
Каспаза 4 ММР2 Трансмембранные сериновые
протеазы II типа (TTSP),
Каспаза 5 ММРЗ например,
Каспаза 6 ММР7 DESC1
Каспаза 7 ММР 8 DPP-4
Каспаза 8 ММР 9 FAP
Каспаза 9 ММР10 Гепсин
Каспаза 10 ММР11 Ма триптаза-2
Каспаза 14 ММР12 МТ-ЗР1/Матриптаза
ММР13 TMPRSS2
Цистеиновые катепсины,
ММР14 TMPRSS3
например,
Катепсин В ММР15 TMPRSS4
Катепсин С ММР16
Катепсин К ММР17
Катепсин L ММР19
Катепсин S ММР2 0
Катепсин V/L2 ММР23
Катепсин X/Z/P ММР24
ММР2 6
ММР27
Активируемые антитела против PD-1, описанные в настоящем изобретении, позволяют преодолеть ограничение терапии с применением антител, в особенности терапевтических средств на основе антител, которые, как известно, токсичны, по меньшей мере в некоторой степени, in vivo. Опосредованная мишенью токсичность составляет главное ограничение для разработки терапевтических антител. Активируемые антитела против PD-1, предложенные в настоящем изобретении, созданы с целью решения проблемы токсичности, связанной с ингибированием мишени в нормальных тканях обычными терапевтическими антителами. Такие активируемые антитела против PD-1 остаются маскированными до протеолитической активации в очаге заболевания. Начиная с применения антитела против PD-1 в качестве исходного терапевтического антитела, активируемые антитела против PD-1 согласно изобретению были созданы путем соединения антитела с ингибирующей маской через линкер, который включает субстрат протеазы.
При модификации AB с применением MM и в присутствии мишени, специфичное связывание AB с его мишенью уменьшено или ингибировано по сравнению со специфичным связыванием AB, не модифицированного MM, или со специфичным связыванием исходного AB с мишенью.
Kd AB, модифицированного MM, в отношении мишени по меньшей мере в 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2,500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000000, 5000000, 10000000, 50000000 раз или больше, или в пределах 5-10, 10-100, 10-1000, 10-10000, 10-100000, 10-1000000, 10-10000000, 100-1000, 100-10000, 100-100000, 100-1000000, 100-10000000, 1000-10000, 1000-100000, 1000-1000000, 100010000000, 10000-100000, 10000-1000000, 10000-10000000, 100000-1000000 или 100000-10000000 раз больше, чем Kd AB, не модифицированного MM, или исходного AB в отношении мишени. С другой стороны аффинность связывания AB, модифицированного MM, в отношении мишени по меньшей мере в 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2,500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000000, 5000000, 10000000, 50000000 раз или больше, или в пределах 5-10, 10-100, 10-1000, 10-10000, 10-100000, 101000000, 10-10000000, 100-1000, 100-10000, 100-100000, 100-1000000, 100-10000000, 1000-10000, 1000100000, 1000-1000000, 1000-10000000, 10000-100000, 10000-1000000, 10000-10000000, 100000-1000000 или 100000-10000000 раз ниже, чем аффинность связывания AB, не модифицированного MM, или исходного AB в отношении мишени.
В некоторых вариантах осуществления константа диссоциации (Kd) MM в отношении AB обычно
- 111 043582 больше, чем Kd AB в отношении мишени. Kd MM в отношении AB может быть по меньшей мере 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2,500, 5000, 10000, 100000, 1000000 или даже в 10000000 раз больше, чем Kd AB в отношении мишени. С другой стороны аффинность связывания MM в отношении AB обычно ниже, чем аффинность связывания AB в отношении мишени. Аффинность связывания MM в отношении AB может быть по меньшей мере 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2,500, 5000, 10000, 100000, 1000000 или даже в 10000000 раз ниже, чем аффинность связывания AB в отношении мишени.
В некоторых вариантах осуществления константа диссоциации (Kd) MM в отношении AB приблизительно равна Kd AB в отношении мишени. В некоторых вариантах осуществления константа диссоциации (Kd) MM в отношении AB не превышает константу диссоциации AB в отношении мишени.
В некоторых вариантах осуществления константа диссоциации (Kd) MM в отношении AB меньше, чем константа диссоциации AB в отношении мишени.
В некоторых вариантах осуществления константа диссоциации (Kd) MM в отношении AB больше, чем константа диссоциации AB в отношении мишени.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая не превышает Kd для связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая не меньше Kd для связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая приблизительно равна Kd для связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая меньше Kd для связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая больше, чем Kd для связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая не больше чем в 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500 или 1000 раз больше, чем Kd для связывания AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления MM имеет Kd для связывания с AB, которая в пределах 1-5, 2-5, 2-10, 5-10, 5-20, 5-50, 5-100, 10-100, 10-1000, 20-100, 20-1000 или 100-1000 раз больше Kd для связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая меньше аффинности связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая не превышает аффинность связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая приблизительно равна аффинности связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая не меньше аффинности связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая превышает аффинность связывания AB с мишенью.
В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая в 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500 или 1000 раз меньше, чем аффинность связывания AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая в пределах 1-5, 25, 2-10, 5-10, 5-20, 5-50, 5-100, 10-100, 10-1000, 20-100, 20-1000 или 100-1000 раз меньше, чем аффинность связывания AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления MM обладает аффинностью связывания с AB, которая в 2-20 раз меньше, чем аффинность связывания AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления MM нековалентно связана с AB и при эквимолярной концентрации к AB не ингибирует связывание AB с мишенью.
В случае, когда AB модифицировано MM и находится в присутствии мишени, специфичное связывание AB с его мишенью уменьшено или ингибировано по сравнению со специфичным связыванием AB, не модифицированного MM, или со специфичным связыванием исходного AB с мишенью. При сравнении со связыванием AB, не модифицированного MM, или со связыванием исходного AB с мишенью, способность AB связывать мишень при его модификации MM может быть уменьшена по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и даже 100% в течение по меньшей мере 2, 4, 6, 8, 12, 28, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 84 или 96 ч или 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 или 180 дней, или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев или больше, при измерении в анализе in vivo или in vitro.
MM ингибирует связывание AB с мишенью. MM связывает антигенсвязывающий домен AB и ингибирует связывание AB с мишенью. MM может стерически ингибировать связывание AB с мишенью. MM может аллостерически ингибировать связывание AB с его мишенью. В таких вариантах осуществления, когда AB модифицировано или соединено с MM и находится в присутствии мишени, связывание AB с мишенью отсутствует или по существу отсутствует, или сохраняется не больше 0,001, 0,01, 0,1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 или 50% связывания AB с мишенью по сравнению со связыванием AB, не модифицированного MM, связыванием исходного AB или AB, не соединенного с MM, с ми- 112 043582 шенью, в течение по меньшей мере 2, 4, 6, 8, 12, 28, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 84 или 96 ч или 5, 10, 15, 30, 45,
60, 90, 120, 150 или 180 дней, или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев или больше, при измерении в анализе in vivo или in vitro.
В случае, когда AB соединено с или модифицировано MM, MM маскирует или уменьшает, или иным образом ингибирует специфичное связывание AB с мишенью. В случае, когда AB соединено с или модифицировано MM, такое связывание или модификация могут вызывать структурное изменение, которое уменьшает или ингибирует способность AB специфично связывать свою мишень.
AB, соединенное с или модифицированное MM, может быть представлено следующими формулами (в порядке от N-(амино) концевой области к С-(карбокси) концевой области:
(MM)-(AB) (ab)-(mm) (Mm)-L-(AB) (AB)-L-(MM) где MM - маскирующая часть,
AB - антитело или соответствующий фрагмент антитела, и
L - линкер.
Во многих вариантах осуществления может потребоваться ввести в состав один или более линкеров, например, гибких линкеров, для обеспечения гибкости.
В некоторых вариантах осуществления MM не является природным партнером AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не обладает или по существу не обладает гомологией с каким-либо природным партнером AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или 80% подобна какому-либо природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или 80% идентична какому-либо природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 25% идентична какомулибо природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 50% идентична какому-либо природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 20% идентична какому-либо природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 10% идентична какому-либо природному партнеру AB по связыванию.
В некоторых вариантах осуществления активируемые антитела включают AB, которое модифицировано MM, и также включают одну или более расщепляемых частей (CM). Такие активируемые антитела демонстрируют активируемое/переключаемое связывание с мишенью AB. Активируемые антитела обычно включают антитело или фрагмент антитела (AB), модифицированные или соединенные с маскирующей частью (MM) и модифицируемой или расщепляемой частью (CM). В некоторых вариантах осуществления CM содержит аминокислотную последовательность, которая служит в качестве субстрата для по меньшей мере одной протеазы.
Элементы активируемых антител расположены так, чтобы MM и CM были помещены таким образом, что в расщепленном (или относительно активном) состоянии, и в присутствии мишени, AB связывало мишень, тогда как в том случае, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном (или относительно неактивном) состоянии в присутствии мишени, специфичное связывание AB со своей мишенью было уменьшено или ингибировано. Специфичное связывание AB со своей мишенью может быть уменьшено в результате ингибирования или маскирования MM способности AB специфично связывать свою мишень.
Kd AB, модифицированного MM и CM, в отношении мишени по меньшей мере в
5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000,
2,500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000000, 5000000,
10000000, 50000000 раз или больше, или в пределах 5-10, 10-100, 10-1000, 10-10000, 10-100000, 10-1000000, 10-10000000, 100-1000, 100-10000, 100-100000, 100-1000000, 100-10000000, 1000-10000,
1000-100000, 1000-1000000, 1000-10000000, 10000-100000, 100001000000, 10000-10000000, 100000-1000000 или 100000-10000000 раз больше, чем Kd AB, не модифицированного MM и CM, или исходного AB в отношении мишени. С другой стороны аффинность связывания AB, модифицированного MM и CM, в отношении мишени по меньшей мере в
- 113 043582
5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000, 2,500, 5000, 10000, 50000, 100000, 500000, 1000000, 5000000, 10000000, 50000000 раз или
I больше, или в пределах 5-10, 10-100, 10-1000, 10-10000, 10100000, 10-1000000, 10-10000000, 100-1000, 100-10000, 100100000, 100-1000000, 100-10000000, 1000-10000, 1000-100000, 1000-1000000, 1000-10000000, 10000-100000, 10000-1000000, 1000010000000, 100000-1000000 или 100000-10000000 раз ниже, чем аффинность связывания AB, не модифицированного MM и CM, или исходного AB в отношении мишени.
В случае, когда AB модифицировано MM и CM и находится в присутствии мишени, но не в присутствии модифицирующего средства (например, по меньшей мере одной протеазы), специфичное связывание AB со своей мишенью уменьшено или ингибировано по сравнению со специфичным связыванием AB, не модифицированного MM и CM, или исходного AB с мишенью. При сравнении со связыванием исходного AB или связыванием AB, не модифицированного MM и CM, со своей мишенью, способность AB связывать мишень при его модификации MM и CM может быть уменьшена по меньшей мере на 50, 60, 70, 80, 90, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и даже 100% в течение по меньшей мере 2, 4, 6, 8, 12, 28, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 84 или 96 ч или 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 или 180 дней, или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев или больше, при измерении в анализе in vivo или in vitro.
При использовании в настоящем описании термин расщепленное состояние относится к состоянию активируемых антител после модификации CM по меньшей мере одной протеазой. Термин нерасщепленное состояние при использовании в настоящем описании относится к состоянию активируемых антител в отсутствие расщепления CM протеазой. Как обсуждали выше, термин активируемые антитела используется в настоящем изобретении для обозначения активируемого антитела как в его нерасщепленном (нативном) состоянии, так и в его расщепленном состоянии. Среднему специалисту в данной области будет очевидно, что в некоторых вариантах осуществления расщепленное активируемое антитело может не иметь MM вследствие расщепления CM протеазой, что приводит к высвобожению, по меньшей мере, MM (например, когда MM не соединена с активируемыми антителами ковалентной связью (например, дисульфидной связью между остатками цистеина)).
Под активируемым или переключаемым подразумевается, что активируемое антитело демонстрирует первый уровень связывания с мишенью, когда активируемое антитело находится в ингибированном, маскированном или нерасщепленном состоянии (то есть в первой конформации), и второй уровень связывания с мишенью в неингибированном, немаскированном и/или расщепленном состоянии (то есть во второй конформации), где второй уровень связывания с мишенью превышает первый уровень связывания. Как правило, доступ мишени к AB активируемого антитела является более высоким в присутствии расщепляющего средства, способного расщеплять CM, чем при отсутствии такого расщепляющего средства. Таким образом, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, связывание AB с мишенью ингибировано и AB может быть маскировано от связывания с мишенью (то есть первая конформация является такой, что AB не может связываться с мишенью), а в расщепленном состоянии AB не ингибировано или не маскировано от связывания с мишенью.
CM и AB активируемых антител выбраны таким образом, что AB представляет собой связывающую часть для данной мишени, и CM представляет собой субстрат для протеазы. В некоторых вариантах осуществления протеаза колокализована с мишенью в области, подвергаемой лечению, или области, подвергаемой диагностике, у субъекта. При использовании в настоящем описании колокализованный относится к присутствию в том же участке или в относительной близости. В некоторых вариантах осуществления протеаза расщепляет CM с получением активированного антитела, которое связывается с мишенью, расположенной вблизи от участка расщепления. Активируемые антитела, раскрытые в настоящем изобретении, находят конкретное применение, когда, например, протеаза, способная расщеплять участок в CM, присутствует на относительно более высоких уровнях в, или в непосредственной близости от, содержащей мишень ткани в области, подвергаемой лечению, или в области, подвергаемой диагностике, чем в ткани в областях, не подвергаемых лечению (например, в здоровой ткани). В некоторых вариантах осуществления CM, согласно настоящему описанию, также расщепляет одна или более других протеаз. В некоторых вариантах осуществления это - одна или более других протеаз, которые колокализованы с мишенью, и которые вызывают расщепление CM in vivo.
В некоторых вариантах осуществления активируемые антитела обеспечивают снижение токсичности и/или нежелательных побочных действий, которые в ином случае могут возникать в результате связывания AB в участках, в которых лечение не предусмотрено, если AB не было бы маскировано или иным образом не было бы ингибировано связывание AB с мишенью.
Как правило, активируемое антитело можно создать путем выбора представляющего интерес AB и конструирования остальной части активируемого антитела таким образом, что при конформационном ограничении MM обеспечивала маскирование AB или уменьшение связывания AB со своей мишенью.
- 114 043582
Критерии структурного конструирования можно учитывать при получении указанного функционального признака.
Предложены активируемые антитела, демонстрирующие переключаемый фенотип требуемого динамического диапазона для связывания мишени в ингибированной и неингибированной конформации. Динамический диапазон обычно относится к отношению: (a) максимального обнаруживаемого уровня параметра в первом наборе условий к (b) минимальному обнаруживаемому уровню такого параметра во втором наборе условий. Например, в отношении активируемого антитела динамический диапазон относится к отношению: (a) максимального обнаруживаемого уровня белка-мишени, связывающегося с активируемым антителом в присутствии по меньшей мере одной протеазы, способной расщеплять CM активируемых антител, к (b) минимальному обнаруживаемому уровню белка-мишени, связывающегося с активируемым антителом в отсутствие протеазы.
Динамический диапазон активируемого антитела можно вычислить как отношение константы диссоциации при обработке расщепляющим активируемое антитело средством (например, ферментом) к константе диссоциации при обработке расщепляющего активируемые антитела средством. Чем больше динамический диапазон активируемого антитела, тем лучше переключаемый фенотип активируемого антитела. Активируемые антитела, обладающие относительно более высокими значениями динамического диапазона (например, больше 1), демонстрируют более предпочтительные переключаемые фенотипы, при этом связывание белка-мишени активируемыми антителами проходит в более высокой степени (например, проходит с преобладанием) в присутствии расщепляющего средства (например, фермента), способного расщеплять CM активируемых антител, чем в отсутствие расщепляющего средства.
Активируемые антитела могут быть предоставлены в различных структурных конфигурациях. Примеры формул активируемых антител приведены ниже. В частности, предполагается, что порядок расположения AB, MM и CM, от N-конца к С-концу, в активируемом антителе может быть изменен на обратный. Кроме того, также предполагается, что CM и MM могут перекрываться по аминокислотной последовательности, например, CM может содержаться внутри MM.
Например, активируемые антитела могут быть представлены следующей формулой (в порядке от амино-(N) концевой области к карбокси-(С) концевой области):
(MM)-(CM)-(AB) (AB)-(CM)-(MM) где MM - маскирующая часть,
CM - расщепляемая часть, и
AB -антитело или его фрагмент.
Следует отметить, что, хотя MM и CM указаны в представленных выше формулах как отдельные компоненты, предполагается, во всех примерах осуществления изобретения (включая формулы), раскрытых в настоящем изобретении, что аминокислотные последовательности MM и CM могут перекрываться, например, CM может полностью или частично содержаться внутри MM. Кроме того, вышеуказанные формулы могут содержать дополнительные аминокислотные последовательности, которые могут быть расположены на N-конце или С-конце относительно элементов активируемых антител.
В некоторых вариантах осуществления MM не является природным партнером AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не содержит или по существу не содержит гомологии с каким-либо природным партнером AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или 80% подобна любому природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75% или 80% идентична любому природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 50% идентична любому природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 25% идентична любому природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 20% идентична любому природному партнеру AB по связыванию. В некоторых вариантах осуществления MM не больше чем на 10% идентична любому природному партнеру AB по связыванию.
Во многих вариантах осуществления изобретения может потребоваться введение в конструкцию активируемого антитела одного или более линкеров, например, гибких линкеров, для обеспечения гибкости в одном или более соединениях MM-СМ и/или СМ-AB. Например, AB, MM и/или CM могут не содержать нужное число остатков (например, Gly, Ser, Asp, Asn, в особенности Gly и Ser, в частности Gly) для обеспечения требуемой гибкости. Таким образом, переключаемый фенотип таких конструкций активируемых антител может быть улучшен при введении одной или более аминокислот с получением гибкого линкера. Кроме того, как будет описано ниже, в тех случаях, когда активируемое антитело представлено в виде конформационно ограниченной конструкции, гибкий линкер может быть функционально встроен для облегчения образования и сохранения циклической структуры в нерасщепленном активируемом антителе.
Например, в некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает одну из следующих формул (где формула ниже представляет аминокислотную последовательность в направлении
- 115 043582 от N- к С-концу или в направлении от С- к N-концу):
(MM)-L1-(CM)-(AB) (MM)-(CM)-L2-(AB) (MM)-L1-(CM)-L2-(AB) где MM, CM и AB имеют определенное выше значение;
L1 и L2 независимо и необязательно присутствуют или отсутствуют и являются одинаковыми или разными гибкими линкерами, которые включают по меньшей мере 1 гибкую аминокислоту (например, Gly).
Кроме того, в приведенных выше формулах предусмотрены дополнительные аминокислотные последовательности, которые могут быть помещены на N-конце или С-конце относительно элементов активируемых антител. Примеры включают, без ограничения перечисленными, направленно взаимодействующие части (например, лиганд рецептора клетки, присутствующей в целевой ткани) и части, увеличивающие полупериод существования в сыворотке (например, полипептиды, которые связывают сывороточные белки, такие как иммуноглобулин (например, IgG) или сывороточный альбумин (например, человеческий сывороточный альбумин (HSA)).
CM специфично расщепляется по меньшей мере одной протеазой со скоростью приблизительно 0,001-1500x104 М-1с-1 или по меньшей мере 0,001, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1, 2,5, 5, 7,5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 250, 500, 750, 1000, 1250 или 1500x104 М-1с-1. В некоторых вариантах осуществления CM специфично расщепляется со скоростью приблизительно 100000 М-1с-1. В некоторых вариантах осуществления CM специфично расщепляется со скоростью от приблизительно 1x102 до приблизительно 1x106 М-с-1 (т.е. от приблизительно 1x102 до приблизительно 1x106 М-1с-1).
Для специфичного расщепления ферментом, осуществляется контакт между ферментом и СМ. Когда активируемое антитело, включающее AB, соединенное с MM и CM, находится в присутствии мишени и достаточной ферментативной активности, CM может быть расщеплена. Достаточная ферментативная активность может относиться к способности фермента осуществлять контакт с CM и вызывать расщепление. Можно легко предположить, что фермент может находиться вблизи от CM, но не сможет вызывать расщепление из-за других клеточных факторов или белковой модификации фермента.
Линкеры, подходящие для применения в композициях, описанных в настоящем изобретении, обычно являются такими линкерами, которые обеспечивают гибкость модифицированного AB или активируемых антител, что облегчает ингибирование связывания AB с мишенью. Такие линкеры обычно называют гибкими линкерами. Подходящие линкеры могут быть с легкостью выбраны и могут иметь любую подходящую длину, такую как от 1 аминокислоты (например, Gly) до 20 аминокислот, от 2 аминокислот до 15 аминокислот, от 3 аминокислот до 12 аминокислот, в том числе от 4 аминокислот до 10 аминокислот, от 5 аминокислот до 9 аминокислот, от 6 аминокислот до 8 аминокислот или от 7 аминокислот до 8 аминокислот, и могут иметь длину 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 аминокислот.
Примеры гибких линкеров включают глициновые полимеры (G)n, глицин-сериновые полимеры (включая, например, (GS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 363) и (GGGS)n(SEQ ID NO: 364), где n является целым числом, равным по меньшей мере единице), глицин-аланиновые полимеры, аланин-сериновые полимеры и другие гибкие линкеры, известные в уровне техники. Глициновые и глицин-сериновые полимеры являются относительно не структурированными и поэтому могут служить в качестве нейтрального соединения между компонентами. Глицину доступно значительно большее фи-пси пространство, чем даже аланину, при этом он гораздо меньше ограничен по сравнению с остатками, имеющими более длинные боковые цепи (см. Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)). Примеры гибких линкеров включают, без ограничения перечисленными,
GGSG (SEQ ID NO: 365), GGSGG (SEQ ID NO: 366),
GSGSG (SEQ ID NO: 367), GSGGG (SEQ ID NO: 368), GGGSG (SEQ ID
NO: 369), GSSSG (SEQ ID NO: 370) и т.п. Среднему специалисту должно быть понятно, что конструкция активируемых антител может включать линкеры, которые являются полностью или частично гибкими, такими, что линкер может включать гибкий линкер, а также одну или более частей, которые сообщают структуре меньшую гибкость с получением требуемой структуры активируемых антител.
В настоящем описании также предложены композиции и способы, которые включают активируемое антитело против PD-1, которое включает антитело или фрагмент антитела (AB), которые специфично связывают PD-1, где AB соединено с маскирующей частью (MM), которая уменьшает способность AB связывать свою мишень. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело против PD-1 дополнительно включает расщепляемую часть (CM), которая является субстратом для протеазы. Композиции и способы, предложенные в настоящем изобретении, обеспечивают присоединение одного или более средств к одному или более остаткам цистеина в AB без нарушения активности (например, маскирующей, активирующей или связывающей активности) активируемого антитела против PD-1. В некоторых вариантах осуществления композиции и способы, предложенные в настоящем изобретении, обеспе
- 116 043582 чивают присоединение одного или более средств к одному или более остаткам цистеина в AB без уменьшения или какого-либо иного нарушения одной или более дисульфидных связей в MM. Композиции и способы, предложенные в настоящем изобретении, обеспечивают получение активируемого антитела против PD-1, которое конъюгировано с одним или более средствами, например любыми терапевтическими, диагностическими и/или профилактическими средствами, например, в некоторых вариантах осуществления средство(а) не конъюгировано с MM активируемого антитела против PD-1. Композиции и способы, предложенные в настоящем изобретении, обеспечивают получение конъюгированных активируемых антител против PD-1, в которых MM сохраняет способность эффективно маскировать AB активируемого антитела в нерасщепленном состоянии. Композиции и способы, предложенные в настоящем изобретении, обеспечивают получение конъюгированных активируемых антител против PD-1, в которых активируемое антитело все еще активируется, т.е. расщепляется, в присутствии протеазы, которая может расщеплять СМ.
Активируемые антитела против PD-1 имеют по меньшей мере одну точку конъюгирования для средства, но в способах и композициях, предложенных в настоящем изобретении, не все возможные точки конъюгирования доступны для конъюгирования средства. В некоторых вариантах осуществления одной или более точками конъюгирования являются атомы серы, входящие в дисульфидные связи. В некоторых вариантах осуществления одной или более точками конъюгирования являются атомы серы, входящие в межцепочечные дисульфидные связи. В некоторых вариантах осуществления одной или более точками конъюгирования являются атомы серы, входящие в межцепочечные сульфидные связи, но не атомы серы, входящие в межцепочечные дисульфидные связи. В некоторых вариантах осуществления одной или более точками конъюгирования являются атомы серы цистеина или других аминокислотных остатков, содержащих атом серы. Такие остатки могут присутствовать в структуре природного антитела или могут быть включены в антитело с помощью сайт-направленного мутагенеза, химического превращения или ошибочного включения неприродных аминокислот.
Также предложены способы получения конъюгата активируемого антитела против PD-1, содержащего одну или более межцепочечных дисульфидных связей в AB и одну или более межцепочечных дисульфидных связей в MM, и лекарственного средства, способного реагировать со свободными тиолами. Способ обычно включает частичное восстановление межцепочечных дисульфидных связей в активируемом антителе восстановителем, таким как, например, ТКЭФ; и конъюгирование лекарственного средства, способного реагировать со свободными тиолами в частично восстановленном активируемом антителе. При использовании в настоящем описании термин частичное восстановление относится к случаям, когда активируемое антитело против PD-1 подвергают контакту с восстановителем, и при этом восстанавливаются не все дисульфидные связи, например, не все возможные участки конъюгирования. В некоторых вариантах осуществления восстанавливаются меньше 99, 98, 97, 96, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10 или меньше 5% всех возможных участков конъюгирования.
В других вариантах осуществления предложен способ восстановления и конъюгирования средства, например лекарственного средства, с активируемым антителом против PD-1, что обеспечивает селективность при введении средства. Способ обычно включает частичное восстановление активируемого антитела против PD-1 восстановителем таким образом, что любые участки конъюгирования в маскирующей части или другой, не являющейся AB, части активируемого антитела не восстанавливаются, и конъюгирование средства с межцепочечными тиолами в AB. Участок(ки) конъюгирования выбирают так, чтобы обеспечить требуемое введение средства с конъюгированием в нужном участке. Восстановителем является, например, ТКЭФ. Условия реакции восстановления, такие как, например, отношение восстановителя к активируемому антителу, продолжительность инкубирования, температура во время инкубирования, pH восстанавливающего реакционного раствора и т.д., определяют при определении условий, которые обеспечивают получение конъюгированного активируемого антитела, в котором MM сохраняет способность эффективно маскировать AB активируемого антитела в нерасщепленном состоянии. Отношение восстановителя к активируемому антителу против PD-1 изменяется в зависимости от активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления отношение восстановителя к активируемому антителу против PD-1 будет находиться в диапазоне от приблизительно 20:1 до 1:1, от приблизительно 10:1 до 1:1, от приблизительно 9:1 до 1:1, от приблизительно 8:1 до 1:1, от приблизительно 7:1 до 1:1, от приблизительно 6:1 до 1:1, от приблизительно 5:1 до 1:1, от приблизительно 4:1 до 1:1, от приблизительно 3:1 до 1:1, от приблизительно 2:1 до 1:1, от приблизительно 20:1 до 1:1,5, от приблизительно 10:1 до 1:1,5, от приблизительно 9:1 до 1:1,5, от приблизительно 8:1 до 1:1,5, от приблизительно 7:1 до 1:1,5, от приблизительно 6:1 до 1:1,5, от приблизительно 5:1 до 1:1,5, от приблизительно 4:1 до 1:1,5, от приблизительно 3:1 до 1:1,5, от приблизительно 2:1 до 1:1,5, от приблизительно 1.5:1 до 1:1,5 или от приблизительно 1:1 до 1:1,5. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 5:1 до 1:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 5:1 до 1.5:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 4:1 до 1:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 4:1 до 1,5:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 8:1 до приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от
- 117 043582 приблизительно 2,5:1 до 1:1.
В некоторых вариантах осуществления предложен способ восстановления межцепочечных дисульфидных связей в AB активируемого антитела против PD-1 и конъюгирования средства, например тиолсодержащего средства, такого как лекарственное средство, с полученными в результате межцепочечными тиолами для селективного расположения средства (средств) на AB. Способ обычно включает частичное восстановление AB восстановителем, с образованием по меньшей мере двух межцепочечных тиолов, без образования всех возможных межцепочечных тиолов в активируемом антителе; и конъюгирование средства с межцепочечными тиолами частично восстановленного AB. Например, AB активируемого антитела частично восстанавливают в течение приблизительно 1 ч при температуре приблизительно 37°С, при необходимом отношении восстановителя:активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления отношение восстановителя к активируемому антителу находится в диапазоне от приблизительно 20:1 до 1:1, от приблизительно 10:1 до 1:1, от приблизительно 9:1 до 1:1, от приблизительно 8:1 до 1:1, от приблизительно 7:1 до 1:1, от приблизительно 6:1 до 1:1, от приблизительно 5:1 до 1:1, от приблизительно 4:1 до 1:1, от приблизительно 3:1 до 1:1, от приблизительно 2:1 до 1:1, от приблизительно 20:1 до 1:1.5, от приблизительно 10:1 до 1:1,5, от приблизительно 9:1 до 1:1,5, от приблизительно 8:1 до 1:1,5, от приблизительно 7:1 до 1:1,5, от приблизительно 6:1 до 1:1,5, от приблизительно 5:1 до 1:1,5, от приблизительно 4:1 до 1:1,5, от приблизительно 3:1 до 1:1,5, от приблизительно 2:1 до 1:1,5, от приблизительно 1,5:1 до 1:1,5, или от приблизительно 1:1 до 1:1,5. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 5:1 до 1:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 5:1 до 1.5:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 4:1 до 1:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 4:1 до 1.5:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 8:1 до приблизительно 1:1. В некоторых вариантах осуществления отношение находится в диапазоне от приблизительно 2.5:1 до 1:1.
Тиолсодержащим реагентом может быть, например, цистеин или N-ацетилцистеин. Восстановителем может быть, например, ТКЭФ. В некоторых вариантах осуществления восстановленное активируемое антитело перед конъюгированием может быть очищено с помощью, например, колоночной хроматографии, диализа или диафильтрации. В альтернативе восстановленное антитело не очищают после частичного восстановления и перед конъюгированием.
В изобретении также предложены частично восстановленные активируемые антитела против PD-1, где по меньшей мере одна межцепочечная дисульфидная связь в активируемом антителе была восстановлена восстановителем без нарушения межцепочечных дисульфидных связей в активируемом антителе, где активируемое антитело включает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связываются с PD-1, маскирующую часть (MM), которая ингибирует связывание AB активируемого антитела в нерасщепленном состоянии с PD-1 мишенью, и расщепляемую часть (CM), соединенную с AB, где CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы. В некоторых вариантах осуществления MM соединена с AB через СМ. В некоторых вариантах осуществления одна или более межцепочечных дисульфидных связей активируемого антитела не нарушены восстановителем. В некоторых вариантах осуществления одна или более межцепочечных дисульфидных связей MM в активируемом антителе не нарушены восстановителем. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру от N-конца к Сконцу: MM-CM-AB или AB-CM-MM. В некоторых вариантах осуществления восстановителем является ТКЭФ.
В настоящем описании также предложены частично восстановленные активируемые антитела, где по меньшей мере одна межцепочечная дисульфидная связь в активируемом антителе была восстановлена восстановителем без нарушения межцепочечных дисульфидных связей в активируемом антителе, где активируемое антитело включает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB), которые специфично связываются с мишенью, например PD-1, маскирующую часть (MM), которая ингибирует связывание AB активируемого антитела в нерасщепленном состоянии с мишенью, и расщепляемую часть (CM), соединенную с AB, где CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для по меньшей мере одной протеазы. В некоторых вариантах осуществления MM соединена с AB через СМ. В некоторых вариантах осуществления одна или более межцепочечных дисульфидных связей активируемого антитела не нарушены восстановителем. В некоторых вариантах осуществления одна или более межцепочечных дисульфидных связей MM в активируемом антителе не нарушены восстановителем. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру от N-конца к С-концу: MM-CM-AB или AB-CM-MM. В некоторых вариантах осуществления восстановителем является ТКЭФ.
В некоторых вариантах осуществления активируемые антитела, описанные в настоящем изобретении, также включают средство, конъюгированное с активируемым антителом. В некоторых вариантах осуществления конъюгированное средство является терапевтическим средством, таким как противовоспалительное средство. В таких вариантах осуществления средство конъюгировано с углеводной группой активируемого антитела, например, в некоторых вариантах осуществления, когда углеводная группа
- 118 043582 расположена за пределами антигенсвязывающей области антитела или антигенсвязывающего фрагмента в активируемом антителе. В некоторых вариантах осуществления средство конъюгировано с сульфгидрильной группой антитела или антигенсвязывающего фрагмента в активируемом антителе.
В некоторых вариантах осуществления средство является детектируемой частью, такой как, например, метка или другой маркер. Например, средство является или включает меченную радиоактивным изотопом аминокислоту, одну или более биотинильных групп, которые можно детектировать с помощью меченого авидина (например, стрептавидина, содержащего флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которая может быть обнаружена с помощью оптических или калориметрических методов), один или более радиоизотопов или радионуклидов, одну или более флуоресцентных меток, одну или более ферментных меток и/или одно или более хемилюминесцентных веществ. В некоторых вариантах осуществления детектируемые молекулы присоединены с помощью спейсерных молекул.
Средним специалистам в данной области известно множество возможных молекул, которые можно присоединить к полученным антителам согласно настоящему описанию. См., например, публикацию Conjugate Vaccines, Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse and R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989), все содержание которой включено в настоящую заявку посредством отсылки.
Присоединение может быть выполнено с помощью любой химической реакции, которая свяжет две молекулы, при условии, что антитело и другая молекула сохранят свою соответствующую активность. Такое связывание может включать множество химических механизмов, например, ковалентное связывание, аффинное связывание, интеркаляцию, координационное связывание и комплексообразование. В некоторых вариантах осуществления связывание, все же, является ковалентным связыванием. Ковалентное связывание может быть выполнено либо посредством прямой конденсации существующих боковых цепей, либо путем включения внешних мостиковых молекул. Множество бивалентных или поливалентных связывающих агентов могут применяться при соединении белковых молекул, таких как антитела настоящего описания, с другими молекулами. Например, репрезентативные связывающие агенты могут включать такие органические соединения, как сложные тиоэфиры, цианамиды, сукцинимидные сложные эфиры, диизоциианаты, глутаральдегид, диазобензолы и гексаметилендиамины. Данный перечень не следует считать исчерпывающим перечнем различных классов связывающих агентов, известных в уровне техники, а скорее примерным перечнем наиболее часто применяемых связывающих агентов. См. Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); и Vitetta et al., Science 238:1098 (1987).
В некоторых вариантах осуществления, в дополнение к композициям и способам, предложенным в настоящем изобретении, конъюгированное активируемое антитело может быть также модифицировано для сайт-специфического конъюгирования посредством введения или иного включения модифицированных аминокислотных последовательностей в последовательность активируемого антитела. Такие модифицированные аминокислотные последовательности создают с возможностью контролируемого помещения и/или дозированного введения конъюгируемого средства в конъюгированное активируемое антитело. Например, активируемое антитело может быть сконструировано с включением цистеиновых замен в положениях на легких и тяжелых цепях, которые обеспечивают введение реакционноспособных тиоловых групп и не только не оказывают отрицательного влияния на фолдинг и сборку белка, но и не изменяют связывание антигена. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело может быть сконструировано с включением или иным введением одного или более неприродных аминокислотных остатков в активируемое антитело с получением подходящих участков для конъюгирования. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело может быть сконструировано с включением или иным введением ферментативно активируемых пептидных последовательностей в последовательность активируемого антитела.
Подходящие линкеры описаны в литературе. См., например, публикацию Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984), в которой описано применение MBS (м-малеимидобензоил-Nгидроксисукцинимидного сложного эфира). См. также патент США 5,030,719, в котором описано применение галогенированного производного ацетилгидразида, соединенного с антителом через олигопептидный линкер. В некоторых вариантах осуществления подходящие линкеры включают: (i) EDC (гидрохлорид (1-этил-3-(3-диметиламино-пропил)карбодиимида); (ii) SMPT (4-сукцинимидилоксикарбонил-альфаметил-альфа-(2-пиридил-дитио)-толуол (Pierce Chem. Co., кат. (21558G)); (iii) SPDP (сукцинимидил-6-[3(2-пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат (Pierce Chem. Co., кат. 21651G)); (iv) сульфо-LC-SPDP (сульфосукцинимидил-6-[3-(2-пиридилдитио)пропионамид]гексаноат (Pierce Chem. Co., кат. 2165-G)); и (v) сульфо-NHS (N-гидроксисульфо-сукцинимид: Pierce Chem. Co., кат. 24510), конъюгированный с EDC. Дополнительные линкеры включают, без ограничения перечисленными, SMCC, сульфо-SMCC, SPDB или сульфо-SPDB.
Линкеры, описанные выше, содержат компоненты, которые обладают различными характеристиками, что позволяет получать конъюгаты с различными физико-химическими свойствами. Например, сульфо-NHS сложные эфиры алкилкарбоксилатов являются более стабильными, нежели сульфо-NHS сложные эфиры ароматических карбоксилатов. Линкеры, содержащие сложные эфиры NHS, обладают
- 119 043582 меньшей растворимостью, нежели сульфо-NHS сложные эфиры. Кроме того, SMPT линкер содержит стерически затрудненную дисульфидную связь и может образовывать конъюгаты с повышенной стабильностью. Дисульфидные связи в целом являются менее стабильными, чем другие связи, поскольку дисульфидная связь расщепляется in vitro, что приводит к меньшему доступному количеству конъюгата. Сульфо-NHS, в частности, может увеличивать стабильность карбодиимидных сшивок. Карбодиимидные сшивки (такие как EDC), в случае использования в сочетании с сульфо-NHS, образуют сложные эфиры, которые более устойчивы к гидролизу, чем реакция карбодиимидного сшивания в отдельности.
В некоторых вариантах осуществления линкеры являются расщепляемыми. В некоторых вариантах осуществления линкеры являются нерасщепляемыми. В некоторых вариантах осуществления присутствуют два или более линкеров. Указанные два или более линкеров являются одинаковыми, т.е. расщепляемыми или нерасщепляемыми, или указанные два или более линкера являются разными, т.е. по меньшей мере один является расщепляемым, и по меньшей мере один является нерасщепляемым.
В настоящем описании применяется несколько способов присоединения средств к AB: (a) присоединение к углеводным группам AB или (b) присоединение к сульфгидрильным группам AB, или (с) присоединение к аминогруппам AB, или (d) присоединение к карбоксильным группам AB. Согласно описанию, AB могут быть ковалентно присоединены к средству через промежуточный линкер, имеющий по меньшей мере две реакционноспособных группы - одна для реакции с AB и одна для реакции со средством. Линкер, который может включать любое совместимое органическое соединение, может быть выбран таким образом, что реакция с AB (или средством) не оказывает негативного влияния на реактивность и селективность AB. Кроме того, присоединение линкера к средству не может нарушать активность средства. Подходящие линкеры для реакции с окисленными антителами или окисленными фрагментами антител включают такие линкеры, которые содержат амин, выбранный из группы, состоящей из групп первичного амина, вторичного амина, гидразина, гидразида, гидроксиламина, фенилгидразина, семикарбазида и тиосемикарбазида. Такие реакционноспособные функциональные группы могут существовать как часть структуры линкера или могут быть введены при подходящей химической модификации линкеров, не содержащих такие группы.
Согласно настоящему описанию линкеры, подходящие для присоединения к восстановленным AB, включают такие линкеры, которые имеют определенные реакционноспособные группы, способные к реакции с сульфгидрильной группой восстановленного антитела или фрагмента. Такие реакционноспособные группы включают, без ограничения перечисленными: реакционноспособные галогеналкильные группы (включая, например, галогенацетильные группы), п-меркурибензоатные группы и группы, способные к реакциям присоединения по типу реакции Михаэля (в том числе, например, малеимиды и группы такого типа, как описано в Mitra and Lawton, 1979, J. Mer. Chem. Soc. 101: 3097-3110).
Согласно настоящему описанию подходящие линкеры для присоединения ни к окисленным, ни к восстановленным AB включают такие линкеры, которые имеют определенные функциональные группы, способные к реакции с первичными аминогруппами, присутствующими в немодифицированных остатках лизина в Ab. Такие реакционноспособные группы включают, без ограничения перечисленными, NHS карбоксильные или карбоновые сложные эфиры, сульфо-NHS карбоксильные или карбоновые сложные эфиры, 4-нитрофенил карбоксильные или карбоновые сложные эфиры, пентафторфенил карбоксильные или карбоновые сложные эфиры, ацилимидазолы, изоцианаты и изотиоцианаты.
Согласно настоящему описанию подходящие линкеры для присоединения ни к окисленным, ни к восстановленным AB включают такие линкеры, которые имеют определенные функциональные группы, способные к реакции с карбоксильными группами, присутствующими в аспартатных или глутаматных остатках в Ab, которые были активированы подходящими реагентами. Подходящие активирующие реагенты включают EDC, с или без добавления NHS или сульфо-NHS, и другие дегидратирующие агенты, используемые для образования карбоксамидов. В таких случаях функциональные группы, присутствующие в подходящих линкерах, включают первичные и вторичные амины, гидразины, гидроксиламины, и гидразиды.
Средство может быть присоединено к линкеру до или после присоединения линкера к AB. В некоторых применениях может потребоваться сначала получить промежуточное соединение структуры АВлинкер, где линкер не несет ассоциированное с ним средство. В зависимости от конкретного применения определенное средство может быть затем ковалентно присоединено к линкеру. В некоторых вариантах осуществления AB сначала присоединяют к MM, CM и ассоциированным линкерам, а затем присоединяют к линкеру в целях конъюгирования.
Разветвленные линкеры. В определенных вариантах осуществления изобретения применяются разветвленные линкеры, которые имеют несколько сайтов для присоединения средств. В случае линкеров с множеством сайтов, ковалентное связывание с AB позволяет получать промежуточное соединение структуры АВ-линкер, к которому можно присоединить средство по различным сайтам. Указанные сайты могут быть альдегидными или сульфгидрильными группами или любым химическим сайтом, к которому могут быть присоединены средства.
В альтернативе более высокая удельная активность (или более высокое отношение средств к АВ) может быть достигнута в результате присоединения линкера с одним сайтом к множеству сайтов AB.
- 120 043582
Такое множество сайтов можно ввести в AB двумя способами. Во-первых, можно ввести несколько альдегидных групп и/или сульфгидрильных групп в одно и то же AB. Во-вторых, можно присоединить к альдегидной или сульфгидрильной группе AB разветвленный линкер, имеющий множество функциональных сайтов для последующего присоединения к линкерам. Функциональные сайты разветвленного линкера или линкера с множеством сайтов могут быть альдегидными или сульфгидрильными группами или могут быть любым химическим сайтом, к которому могут быть присоединены линкеры. Еще более высокая удельная активность может быть получена при объединении двух указанных подходов, то есть присоединения линкеров с множеством сайтов к нескольким сайтам AB.
Расщепляемые линкеры. В одном варианте осуществления согласно настоящему описанию могут применяться пептидные линкеры, подверженные расщеплению ферментами системы комплемента, такими как, без ограничения перечисленными, активатор плазминогена урокиназного типа, тканевой активатор плазминогена, трипсин, плазмин или другой фермент, обладающий протеолитической активностью. В соответствии с одним способом согласно настоящему описанию средство присоединяют посредством линкера, подверженного расщеплению комплементом. Антитело выбирают из класса, который способен активировать комплемент. Таким образом, конъюгат антитела-средства активирует каскад комплемента и высвобождает средство в целевом участке. В соответствии с другим способом согласно настоящему изобретению средство присоединяют посредством линкера, подверженного расщеплению ферментами, обладающими протеолитической активностью, такими как активатор плазминогена урокиназного типа, тканевой активатор плазминогена, плазмин или трипсин.
Неограничивающие примеры последовательностей расщепляемых линкеров представлены в табл. 5.
Таблица 5
Примеры линкерных последовательностей для конгьюгирования
Аминокислотная последовательность
Типы расщепляемых последовательностей
Последовательности, расщепляемые
плазмином
Проурокиназа PRFKIIGG (SEQ ID NO: 587) PRFRIIGG (SEQ ID NO: 588)
ΤΘΕβ SSRHRRALD (SEQ ID NO: 589)
Плазминоген RKSSIIIRMRDVVL (SEQ ID NO: 590)
Стафилокиназа SSSFDKGKYKKGDDA (SEQ ID NO: 591) SSSFDKGKYKRGDDA (SEQ ID NO: 592)
Последовательности, расщепляемые фактором Ха Последовательности, расщепляемые ММР IEGR (SEQ ID NO: 593) IDGR (SEQ ID NO: 594) GGSIDGR (SEQ ID NO: 595)
Желатиназа А Последовательности, расщепляемые коллагеназой PLGLWA (SEQ ID NO: 596)
Коллаген кожи теленка (al(I) цепь) GPQGIAGQ (SEQ ID NO: 597)
Коллаген кожи теленка (α2(Ι) цепь) GPQGLLGA (SEQ ID NO: 598)
Бычий коллаген хряща (al(II) цепь) GIAGQ (SEQ ID NO: 599)
Коллаген печени человека (al(III) цепь) GPLGIAGI (SEQ ID NO: 600)
а2М человека GPEGLRVG (SEQ ID NO: 601)
ΡΖΡ человека YGAGLGVV (SEQ ID NO: 602) AGLGVVER (SEQ ID NO: 603) AGLGISST (SEQ ID NO: 604)
оцМ крысы EPQALAMS (SEQ ID NO: 605) QALAMSAI (SEQ ID NO: 606)
а2М крысы AAYHLVSQ (SEQ ID NO: 607) MDAFLESS (SEQ ID NO: 608)
axI3(2J) крысы ESLPVVAV (SEQ ID NO: 609)
axI3(27J) крысы SAPAVESE (SEQ ID NO: 610)
Коллагеназа фибробластов человека DVAQFVLT (SEQ ID NO: 611)
(автолитически расщепляемая) VAQFVLTE (SEQ ID NO: 612) AQFVLTEG (SEQ ID NO: 613) PVQPIGPQ (SEQ ID NO: 614)
Кроме того, средства могут быть присоединены к антителу через дисульфидные связи (например,
- 121 043582 дисульфидные связи молекулы цистеина). Поскольку многие опухоли обычно в больших количествах высвобождают глутатион (восстановитель), глутатион может восстанавливать дисульфидные связи с последующим высвобождением средства на участке доставки. В некоторых вариантах осуществления восстановитель, который может модифицировать CM, также может модифицировать линкер конъюгированного активируемого антитела.
Спейсеры и расщепляемые элементы. В некоторых вариантах осуществления может потребоваться сконструировать линкер таким образом, чтобы оптимизировать расстояние между средством и AB активируемого антитела. Это может быть достигнуто при помощи линкера общей структуры:
W-(CH2)n-Q где W является -NH-CH2- или -CH2-;
Q является аминокислотой, пептидом; и n является целым числом от 0 до 20.
В некоторых вариантах осуществления линкер может включать спейсерный элемент и расщепляемый элемент. Спейсерный элемент служит для помещения расщепляемого элемента на расстоянии от ядра AB таким образом, что расщепляемый элемент является более доступным для фермента, ответственного за расщепление. Некоторые из разветвленных линкеров, описанных выше, могут служить в качестве спейсерных элементов.
В процессе всего обсуждения следует понимать, что присоединение линкера к средству (или спейсерного элемента к расщепляемому элементу или расщепляемого элемента к средству) не должно быть обязательно конкретным способом присоединения или реакцией. Любая реакция, дающая продукт с подходящей стабильностью и биологической совместимостью, является приемлемой.
Сывороточный комплемент и выбор линкеров. Согласно одному из способов настоящего изобретения в случаях, когда необходимо высвобождение средства, применяют AB, которое является антителом класса, который способен активировать комплемент. Полученный в результате конъюгат сохраняет способность связывать антиген и активировать каскад комплемента. Таким образом, согласно данному варианту осуществления настоящего изобретения средство присоединяют к одному концу расщепляемого линкера или расщепляемого элемента, а другой конец линкерной группы присоединяют к определенному участку на AB. Например, если средство имеет гидроксильную группу или аминогруппу, оно может быть присоединено к С-концу пептида, аминокислоте или другому надлежащим образом выбранному линкеру через сложноэфирную или амидную связь, соответственно. Например, такие средства могут быть присоединены к линкерному пептиду при помощи карбодиимидной реакции. Если средство содержит функциональные группы, которые могут помешать присоединению к линкеру, такие мешающие функциональные группы можно блокировать перед присоединением и деблокировать сразу после получения конъюгата продукта или промежуточного соединения.
Противоположный или N-конец линкера затем используют либо непосредственно, либо после дополнительной модификации для связывания с AB, которое способно активировать комплемент.
Линкеры (или спейсерные элементы линкеров) могут иметь любую требуемую длину, при этом один конец линкера может быть ковалентно присоединен к определенным сайтам на AB активируемого антитела. Другой конец линкера или спейсерного элемента может быть присоединен к аминокислотному или пептидному линкеру.
Таким образом, когда такие конъюгаты связываются с антигеном в присутствии комплемента, амидная или сложноэфирная связь, через которую средство присоединено к линкеру, расщепляется, что приводит к высвобождению средства в активной форме. Указанные конъюгаты при введении субъекту обеспечивают доставку и высвобождение средства в целевом участке и особенно эффективны для in vivo доставки фармацевтических средств, антибиотиков, антиметаболитов, антипролиферативных средств и т.п., как представлено в табл. 5, без ограничения ими.
Линкеры для высвобождения без активации комплемента. В еще одном применении направленной доставки предпочтительно высвобождение средства без активации комплемента, поскольку активация каскада комплемента, в конечном счете, может вызывать лизис клетки-мишени. Поэтому указанный подход можно применять в том случае, когда доставку и высвобождение средства нужно выполнить без лизиса клетки-мишени. Такая цель ставится при необходимости доставки в клетки-мишени клеточных медиаторов, таких как гормоны, ферменты, кортикостероиды, нейротрансмиттеры, гены или ферменты. Такие конъюгаты могут быть получены при присоединении средства к AB, которое не способно активировать комплемент, через линкер, который умеренно подвергается расщеплению сывороточными протеазами. При введении такого конъюгата индивиду быстро образуются комплексы антигена-антитела, при этом расщепление средства проходит медленно, в результате чего соединение высвобождается в целевом участке.
Биохимические кросс-линкеры. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело может быть конъюгировано с одним или более терапевтическими средствами при помощи определенных биохимических кросс-линкеров. Перекрестносшивающие реагенты образуют молекулярные мостики, которые связывают функциональные группы двух разных молекул. Для поэтапного связывания двух различных белков могут применяться гетеро-бифункциональные кросс-линкеры, которые исключают обра- 122 043582 зование нежелательного гомополимера.
Также могут применяться пептидиловые линкеры, расщепляемые лизосомальными протеазами, например, Val-Cit, Val-Ala или другие дипептиды. Кроме того, могут применяться кислото-лабильные линкеры, расщепляемые в среде с низким pH в лизосоме, например, бис-сиалиловый эфир. Другие подходящие линкеры включают катепсин-лабильные субстраты, в особенности такие, которые показывают оптимальную функцию при кислотном pH.
Примеры гетеро-бифункциональных кросс-линкеров представлены в табл. 6.
Таблица 6
Примеры гетеро-бифункциональных кросс-линкеров
Линкер ГЕТЕРО-БИФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ КРОСС-ЛИНКЕРЫ Длина спейсерной ножки после перекрестного сшивания (ангстремы)
Взаимодействие Преимущества и применения
SMPT Первичные амины Более высокая стабильность 11, 2 А
Сульфгидрилы
SPDP Первичные амины Тиолирование Возможность 6,8 А
Сульфгидрилы расщепления при перекрестном сшивании
LC-SPDP Первичные амины Удлиненная спейсерная ножка 15, 6 А
Сульфгидрилы
Сульфо-LCSPDP Первичные амины Удлиненная спейсерная ножка 15, 6 А
Сульфгидрилы Водорастворимый Устойчивая
SMCC Первичные амины реакционноспособная малеимидная группа 11, 6 А
Сульфгидрилы Конъюгирование антитела с ферментом Конъюгирование гаптена с белком-
носителем
Устойчивая
Сульфо-SMCC Первичные амины реакционноспособная малеимидная группа 11, 6 А
Сульфгидрилы Водорастворимый Конъюгирование антитела с ферментом
MBS Первичные амины Конъюгирование антитела с ферментом Конъюгирование 9, 9 А
Сульфгидрилы гаптена с белком-
носителем
Сульфо-MBS Первичные амины Сульфгидрилы Водорастворимый 9, 9 А
SI АВ Первичные амины Конъюгирование антитела с ферментом 10, 6 А
Сульфгидрилы
Сульфо-SIAB Первичные амины Сульфгидрилы Водорастворимый 10, 6 А
SMPB Первичные амины Удлиненная спейсерная ножка 14,5 А
Сульфгидрилы Конъюгирование антитела с ферментом
Сульфо-SMPB Первичные амины Удлиненная спейсерная ножка 14,5 А
Сульфгидрилы Водорастворимый
EDE/Сульфо- NHS Первичные амины Конъюгирование гаптена с носителем 0
Карбоксильные группы
ABH Углеводы Реагирует с сахарными группами 11, 9 А
Неселективное
Нерасщепляемые линкеры или прямое присоединение. В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему описанию может быть создан такой конъюгат, который обеспечивает доставку сред- 123 043582 ства к мишени, но высвобождение не происходит. Это может быть достигнуто при присоединении средства к AB напрямую или через нерасщепляемый линкер.
Указанные нерасщепляемые линкеры могут включать аминокислоты, пептиды, D-аминокислоты или другие органические соединения, которые могут быть модифицированы с включением функциональных групп, которые могут затем использоваться в присоединении к AB с помощью способов, описанных в настоящем изобретении. Общая формула такого органического линкера может быть следующей:
W-(CH2)n-Q где W является -NH-CH2- или -CH2-;
Q является аминокислотой, пептидом; и n является целым числом от 0 до 20.
Нерасщепляемые конъюгаты. В некоторых вариантах осуществления соединение может быть присоединено к таким AB, которые не активируют комплемент. При использовании таких AB, которые не способны к активации комплемента, указанное присоединение может быть выполнено при использовании линкеров, которые подвергаются расщеплению активированным комплементом, или при использовании линкеров, которые не подвергаются расщеплению активированным комплементом.
Антитела, раскрытые в настоящем изобретении, могут быть также изготовлены в форме иммунолипосом. Липосомы, содержащие антитело, изготавливают способами, известными в уровне техники, как описано в Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980); и патентах США 4,485,045 и 4,544,545. Липосомы с увеличенным периодом циркуляции раскрыты в патенте США 5,013,556.
Особо полезные липосомы могут быть получены способом обращенно-фазового выпаривания с липидной композицией, включающей фосфатидилхолин, холестерин и ПЭГ-дериватизированный фосфатидилэтаноламин (ПЭГ-ФЭ). Липосомы пропускают через фильтры с порами определенного размера, с получением липосом требуемого диаметра. Fab'-фрагменты антитела согласно настоящему описанию могут быть конъюгированы с липосомами, как описано в Martin et al., J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982), посредством реакции дисульфидного обмена.
Определения.
Если не указано иное, научные и технические термины, используемые в настоящем описании, должны иметь значения, под которыми их обычно понимают специалисты в данной области техники. Термин объект или объекты относится к одному или более таким объектам. Например, соединение относится к одному или более соединениям. Таким образом, термины один или более и по меньшей мере один могут использоваться попеременно. Кроме того, если из контекста не следует иное, термины в единственном числе включают множества, а множественные термины включают единственное число. Как правило, номенклатура, используемая в отношении, и технологии, культивирования клеток и тканей, молекулярной биологии, а также химии белков и олиго- или полинуклеотидов и гибридизации, описанные в настоящем изобретении, хорошо известны и широко используются в данной области. Стандартные методы используются для рекомбинантной ДНК, синтеза олигонуклеотидов и культивирования тканей, а также трансформации (например, электропорация, липофекция). Ферментативные реакции и методики очистки проводят в соответствии с инструкциями производителя или как обычно проводят в данной области, или как описано в настоящем изобретении. Вышеуказанные способы и методики обычно проводят в соответствии со стандартными способами, хорошо известными в уровне техники и описанными в различных общих и более конкретных источниках, которые цитируются и обсуждаются в тексте настоящего описания. См., Например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)). Номенклатура, используемая в отношении, и лабораторные процедуры и методики, аналитической химии, химии органического синтеза, а также фармакологической и фармацевтической химии хорошо известна и широко используется в данной области. Стандартные методики используются для химического синтеза, химического анализа, получения, изготовления лекарственных форм и доставки лекарственных средств, а также для лечения пациентов.
Следует понимать, что при использовании в соответствии с настоящим описанием, следующие термины, если не указано иное, должны иметь следующие значения:
При использовании в настоящем описании термин антитело относится к молекулам иммуноглобулинов и антигенсвязывающим частям молекул иммуноглобулинов (Ig), т.е. молекулам, которые содержат антигенсвязывающий участок, который специфично связывает антиген (иммунореагирует с антигеном). Под специфично связывает или иммунореагирует с, или иммуноспецифично связывает понимается, что антитело реагирует с одной или более антигенными детерминантами требуемого антигена и не реагирует с другими полипептидами или связывается с намного более низкой аффинностью (Kd>106). Антитела включают, без ограничения перечисленными, поликлональное, моноклональное, химерное, доменное антитело, одноцепочечное, Fab и F(ab')2-фрагменты, scFv и Fab экспрессионную библиотеку.
Основная структурная единица антитела, как известно, включает тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем каждая пара содержит одну легкую (приблизительно 25 кДа) и одну тяжелую цепь (приблизительно 50-70 кДа). N-концевая часть каждой цепи
- 124 043582 включает вариабельную область из приблизительно 100-110 или более аминокислот, главным образом ответственных за распознавание антигена. С-концевая часть каждой цепи определяет константную область, главным образом ответственную за эффекторную функцию. Как правило, молекулы антитела, полученные у людей, относятся к любому из классов IgG, IgM, IgA, IgE и IgD, которые отличаются друг от друга свойствами тяжелой цепи, присутствующей в молекуле. Некоторые классы также имеют субклассы, такие как IgG1, IgG2 и другие. Кроме того, у людей легкая цепь может быть каппа цепью или лямбда цепью.
Термин моноклональное антитело (мАт) или композиция моноклонального антитела при использовании в настоящем описании относится к совокупности молекул антитела, которые содержат только один молекулярный тип молекулы антитела, состоящей из уникального продукта гена легкой цепи и уникального продукта гена тяжелой цепи. В частности, определяющие комплементарность области (CDR-области) моноклонального антитела идентичны во всех молекулах данной совокупности. МАт содержат антигенсвязывающий участок, способный к иммунореакции с конкретным эпитопом антигена, который отличается уникальной аффинностью связывания к нему.
Термин антигенсвязывающий участок или связывающая часть относится к части молекулы иммуноглобулина, которая участвует в связывании антигена. Антигенсвязывающий участок сформирован аминокислотными остатками N-концевых вариабельных (V) областей тяжелой (H) и легкой (L) цепи. Три высокопеременных фрагмента в V-областях тяжелой и легкой цепей, называемые гипервариабельными областями, распределены между более консервативными фланкирующими фрагментами, известными как каркасные области или FR-области. Таким образом, термин FR относится к аминокислотным последовательностям, которые обычно присутствуют между и прилегают к гипервариабельным областям в иммуноглобулинах. В молекуле антитела три гипервариабельных области легкой цепи и три гипервариабельных области тяжелой цепи расположены друг относительно друга в трехмерном пространстве с формированием антигенсвязывающей поверхности. Антигенсвязывающая поверхность комплементарна трехмерной поверхности связываемого антигена, и три гипервариабельных области каждой тяжелой и легкой цепей называются определяющими комплементарность областями или CDRобластями. Отнесение аминокислот к каждому домену выполнено в соответствии с определениями, приведенными в Rabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)), или Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989).
При использовании в настоящем описании термин эпитоп включает любую белковую детерминанту, способную к специфичному связыванию с иммуноглобулином, scFv или T-клеточным рецептором. Термин эпитоп включает любую белковую етерминанту, способную к специфичному связыванию с иммуноглобулином или T-клеточным рецептором. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты или сахарные боковые цепи, и обычно имеют определенные трехмерные структурные характеристики, а также определенные зарядовые характеристики. Например, могут быть индуцированы антитела против N-концевых или С-концевых пептидов полипептида. Антитело, как говорят, специфично связывает антиген, когда константа диссоциации составляет<>1 мкМ; в некоторых вариантах осуществления<>100 нМ и в некоторых вариантах осуществления<>10 нМ.
При использовании в настоящем описании термины специфичное связывание, иммунологическое связывание и свойства иммунологического связывания относятся к нековалентным взаимодействиям такого типа, которые проходят между молекулой иммуноглобулина и антигеном, к которому специфичен иммуноглобулин. Сила или аффинность иммунологических связывающих взаимодействий может быть выражена через константу диссоциации (Kd) такого взаимодействия, где меньшая Kd соответствует более высокой аффинности. Свойства иммунологического связывания выбранных полипептидов могут быть определены количественно при использовании способов, известных в уровне техники. Один такой способ включает измерение скорости образования и диссоциации комплекса между антигенсвязывающим участком/антигеном, где такие скорости зависят от концентраций партнеров по комплексу, аффинности взаимодействия и геометрических параметров, которые в равной степени влияют на скорость в обоих направлениях. Таким образом, константа скорости ассоциации (Kon) и константа скорости диссоциации (Koff) могут быть определены при вычислении концентраций и фактических скоростей ассоциации и диссоциации. См. Nature 361:186-87 (1993). Отношение Koff/Kon равно константе диссоциации Kd. См. в общем Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473. Антитело согласно настоящему описанию, как говорят, специфично связывается с мишенью, когда константа связывания (Kd) составляет<>1 мкМ, в некоторых вариантах осуществления<>100 нМ, в некоторых вариантах осуществления<>10 нМ и в некоторых вариантах осуществления от<>100 пМ до приблизительно 1 пМ, при измерении с помощью таких анализов, как анализы связывания радиоизотопно меченного лиганда или подобные анализы, известные специалистам в данной области.
Термин выделенный полинуклеотид при использовании в настоящем описании должен означать полинуклеотид геномного, кДНК или синтетического происхождения или некоторую комбинацию перечисленного, где выделенный полинуклеотид, в силу своего происхождения: (1) не связан со всем или
- 125 043582 частью полинуклеотида, в котором выделенный полинуклеотид существует в природе, (2) функционально связан с полинуклеотидом, с которым он не связан в природе, или (3) не существует в природе как часть более протяженной последовательности. Полинуклеотиды в соответствии с настоящим описанием включают молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие молекулы тяжелой цепи иммуноглобулина, показанные в настоящем изобретении, и молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие молекулы легкой цепи иммуноглобулина, показанные в настоящем изобретении.
Термин выделенный белок, указанный в настоящем изобретении, означает белок, происходящий из кДНК, рекомбинантной РНК или синтетического происхождения, или некоторую комбинацию перечисленного, где выделенный белок, в силу своего происхождения или источника происхождения: (1) не связан с существующими в природе белками, (2) не содержит других белков из того же источника, например, не содержит мышиных белков, (3) экспрессирован клеткой из другого биологического вида, или (4) не существует в природе.
Термин полипептид используется в настоящем изобретении как общий термин для обозначения нативного белка, фрагментов или аналогов полипептидной последовательности. Следовательно, нативные белковые фрагменты и аналоги являются разновидностями полипептида. Полипептиды в соответствии с описанием включают молекулы тяжелой цепи иммуноглобулина, показанные в настоящем изобретении, и молекулы легкой цепи иммуноглобулина, показанные в настоящем изобретении, а также молекулы антител, сформированные комбинациями, включающими молекулы тяжелой цепи иммуноглобулина с молекулами легкой цепи иммуноглобулина, такими как молекулы каппа-легкой цепи иммуноглобулина, и наоборот, а также их фрагменты и аналоги.
Термин природный при использовании в настоящем описании применительно к объекту относится к тому, что объект может быть обнаружен в природе. Например, полипептидная или полинуклеотидная последовательность, которая присутствует в организме (включая вирусы), которая может быть выделена из источника в природе и которая не была преднамеренно модифицирована человеком в лаборатории или иным образом, является природной.
Термин фукционально связанный при использовании в настоящем описании относится к положениям компонентов, описанных выше, которые находятся в отношениях, позволяющих им функционировать согласно их назначению. Контрольная последовательность, функционально связанная с кодирующей последовательностью, лигирована таким образом, что экспрессия кодирующей последовательности достигается при условиях, совместимых с контрольными последовательностями.
Термин контрольная последовательность при использовании в настоящем описании относится к полинуклеотидным последовательностям, которые необходимы для выполнения экспрессии и процессинга кодирующих последовательностей, с которыми они лигированы. Природа таких контрольных последовательностей отличается в зависимости от организма-хозяина, например, у прокариотов такие контрольные последовательности обычно включают промотор, участок связывания рибосомы и последовательность терминации транскрипции, а у эукариотов, как правило, такие контрольные последовательности включают промоторы и последовательность терминации транскрипции. Предполагается, что термин контрольные последовательности включает, как минимум, все компоненты, присутствие которых важно для экспрессии и процессинга, и также может включать дополнительные компоненты, присутствие которых выгодно, например, лидерные последовательности и слитые последовательности-партнеры. Термин полинуклеотид, как указанно в настоящем изобретении, означает нуклеотиды длиной по меньшей мере 10 оснований, рибонуклеотиды или дезоксинуклеотиды, или модифицированную форму нуклеотида любого типа. Термин включает одноцепочечные и двухцепочечные формы ДНК.
Термин олигонуклеотид, указанный в настоящем изобретении, включает природные и модифицированные нуклеотиды, соединенные друг с другом природными и неприродными олигонуклеотидными связями. Олигонуклеотиды представляют собой подгруппу полинуклеотидов, обычно включающих длину 200 оснований или меньше. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотиды имеют длину 10-60 оснований, а в некоторых вариантах осуществления - длину 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20-40 оснований. Олигонуклеотиды обычно одноцепочечные, как, например, в случае зондов, хотя олигонуклеотиды могут быть двухцепочечными, например, для применения в конструировании генного мутанта. Олигонуклеотиды согласно настоящему описанию являются смысловыми или антисмысловыми олигонуклеотидами.
Термин природные нуклеотиды, указанный в настоящем изобретении, включает дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды. Термин модифицированные нуклеотиды, указанный в настоящем изобретении, включает нуклеотиды с модифицированными или замещенными сахарными группами и т.п. Термин олигонуклеотидные связи, указанный в настоящем изобретении, включает такие олигонуклеотидные связи, как фосфоротиоат, фосфородитиоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфороанилотиоат, фосфораниладат, фосфороамидат и т.п. См., например, LaPlanche et al., Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al., J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984), Stein et al., Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988), Zon et al., Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al., Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al., патент США 5,151,510; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990). При необходимости олигонуклеотид может вклю
- 126 043582 чать метку для обнаружения.
При использовании в настоящем описании двадцать обычных аминокислот и их сокращенные обозначения соответствуют стандартному применению. См. Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D.R. Green, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)). Стереоизомеры (например, Dаминокислоты) двадцати обычных аминокислот, неприродных аминокислот, таких как α-, αдизамещенные аминокислоты, N-алкиламинокислоты, молочная кислота и другие нестандартные аминокислоты также быть могут подходящими компонентами для полипептидов согласно настоящему описанию. Примеры нестандартных аминокислот включают: 4-гидроксипролин, γ-карбоксиглутамат, ε-N,N,Nтриметиллизин, ε-N-ацетиллизин, О-фосфосерин, N-ацетилсерин, N-формилметионин, 3-метилгистидин, 5-гидроксилизин, σ-N-метиларгинин, а также другие подобные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В обозначении полипептида, используемом в настоящем изобретении, левое направление является N-концевым направлением, и правое направление является С-концевым направлением, в соответствии со стандартным применением и правилами.
Аналогичным образом, если не указано иное, левый конец одноцепочечных полинуклеотидных последовательностей является 5'-концом, левое направление двухцепочечных полинуклеотидных последовательностей указывают как 5'-направление. Направление 5'^3' присоединения растущих РНКтранскриптов указывают как направление транскрипции, области последовательности на цепи ДНК, имеющие ту же последовательность, что и РНК, и которые расположены 5' относительно 5'-конца РНКтранскрипта, именуются последовательностями, расположенными выше по ходу транскрипции, области последовательности на цепи ДНК, имеющие ту же последовательность, что и РНК, и которые расположены 3' относительно 3'-конца РНК-транскрипта, именуются последовательностями, расположенными ниже по ходу транскрипции.
Примененительно к полипептидам, термин существенная идентичность означает что две пептидных последовательности, при их оптимальном выравнивании, например, с помощью программ GAP или BESTFIT при использовании весов пропуска по умолчанию, обладают по меньшей мере 80-процентной идентичностью последовательности, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 90процентной идентичностью последовательности, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 95-процентной идентичностью последовательности и в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 99-процентной идентичностью последовательности.
В некоторых вариантах осуществления положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами.
Как обсуждается в настоящем изобретении, незначительные вариации в аминокислотных последовательностях антител или молекул иммуноглобулинов считаются включенными в настоящее описание при условии, что такие вариации в аминокислотной последовательности сохраняют по меньшей мере 75%, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 80, 90, 95% и в некоторых вариантах осуществления 99%. В частности, предусмотрены консервативные аминокислотные замены.
Консервативные замены являются такими заменами, которые происходят в пределах семейства аминокислот, которые имеют родственные боковые цепи. Генетически кодируемые аминокислоты обычно подразделяются на следующие семейства: (1) кислотные аминокислоты - аспартат, глутамат; (2) основные аминокислоты - лизин, аргинин, гистидин; (3) неполярные аминокислоты - аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан, и (4) незаряженные полярные аминокислоты - глицин, аспарагин, глутамин, цистеин, серин, треонин, тирозин. Гидрофильньные аминокислоты включают аргинин, аспарагин, аспартат, глутамин, глутамат, гистидин, лизин, серин и треонин. Гидрофобные аминокислоты включают аланин, цистеин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, триптофан, тирнозин и валин. Другие семейства аминокислот включают:
(i) серин и треонин, которые относятся к семейству алифатических гидрокси-аминокислот;
(ii) аспарагин и глутамин, которые относятся к семейству амидсодержащих аминокислот;
(iii) аланин, валин, лейцин и изолейцин, которые относятся к семейству алифатических аминокислот; и (iv) фенилаланин, триптофан и тирозин, которые относятся к семейству ароматических аминокислот.
Например, разумно ожидать, что выделенная замена лейцина изолейцином или валином, аспартата глутаматом, треонина серином или подобная замена аминокислоты структурно родственной аминокислотой не будет оказывать существенного воздействия на связывание или свойства полученной в результате молекулы, особенно если такая замена не включает аминокислоту в участке каркасной области. Приведет ли изменение аминокислоты в функциональном пептиде, можно с легкостью определить при анализе специфичной активности производного полипептида. Анализы подробно описаны в настоящем изобретении. Фрагменты или аналоги антител или молекул иммуноглобулинов могут быть с легкостью получены средними специалистами в данной области. Подходящие N- и С-концы фрагментов или аналогов находятся вблизи границ функциональных доменов. Структурные и функциональные домены могут быть определены при сравнении данных нуклеотидной и/или аминокислотной последовательности с об
- 127 043582 щедоступными или коммерческими базами данных последовательностей. В некоторых вариантах осуществления компьютерные методы сравнения применяют для определения мотивов последовательностей или предсказанных белковых конформационных доменов, которые присутствуют в других белках с известной структурой и/или функцией. Известны способы определения белковых последовательностей, которые сворачиваются в известную трехмерную структуру (Bowie et al., Science 253:164 (1991)). Таким образом, предыдущие примеры демонстрируют, что специалисты в данной области могут распознать мотивы последовательности и структурные конформации, которые могут использоваться для определения структурных и функциональных доменов в соответствии с настоящим описанием.
Подходящие аминокислотные замены являются заменами, которые:
(1) уменьшают склонность к протеолизу, (2) уменьшают склонность к окислению, (3) изменяют аффинность связывания при образовании белковых комплексов, (4) изменяют аффинности связывания, и (5) придают или изменяют другие физико-химические или функциональные свойства таких аналогов.
Аналоги могут включать различные мутеины последовательности кроме природной пептидной последовательности. Например, одна или множество аминокислотных замен (например, консервативных аминокислотных замен) могут быть сделаны в природной последовательности (например, в части полипептида за пределами домена(ов), формирующего межмолекулярные контакты).
Консервативная аминокислотная замена не должна приводить к существенному изменению структурных свойств исходной последовательности (например, замена аминокислоты не должна приводить к нарушению спирали, которая существует в исходной последовательности, или разрушению других типов вторичной структуры, которая характеризует исходную последовательность). Примеры известных в уровне техники вторичных и третичных структур полипептидов описаны в Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); и Thornton et al., Nature 354:105 (1991).
Термин фрагмент полипептида при использовании в настоящем описании относится к полипептиду, который имеет N-концевую и/или С-концевую делецию и/или одну или более внутренних делеций, но где остальная аминокислотная последовательность идентична соответствующим положениям в природной последовательности, полученной, например, из полноразмерной последовательности кДНК. Фрагменты, как правило, имеют длину по меньшей мере 5, 6, 8 или 10 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 14 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 20 аминокислот, обычно по меньшей мере 50 аминокислот и в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 70 аминокислот. Термин аналог при использовании в настоящем описании относится к полипептидам, которые состоят из сегмента длиной по меньшей мере 25 аминокислот, который обладает существенной идентичностью с частью производной аминокислотной последовательности, и который способен специфично связываться с мишенью при подходящих для связывания условиях. Как правило, аналоги полипептида включают консервативную аминокислотную замену (или добавление, или делецию) по сравнению с природной последовательностью. Аналоги, как правило, имеют длину по меньшей мере 20 аминокислот, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 50 аминокислот или больше и часто могут иметь такую же длину, что и полноразмерный природный полипептид.
Термин средство используется в настоящем изобретении для обозначения химического соединения, смеси химических соединений, биологической макромолекулы или экстракта, полученного из биологических материалов.
При использовании в настоящем описании термины метка или меченный относятся к включению детектируемого маркера, например, включению меченной радиоактивным изотопом аминокислоты или присоединению к полипептиду биотинильных групп, которые можно обнаружить с помощью меченого авидина (например, стрептавидина, содержащего флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которая может быть обнаружена с помощью оптических или калориметрических методов). В определенных ситуациях метка или маркер также могут быть терапевтическими. Различные методы мечения полипептидов и гликопротеинов известны в уровне техники и могут применяться. Примеры меток для полипептидов включают, без ограничения перечисленными, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3H, 14С, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, n1In, 125I, 131I), флуоресцентные метки (например, ФИТЦ, родамин, лантаноидные люминофоры), ферментные метки (например, пероксидазу хрена, βгалактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу), хемилюминесцентные, биотинильные группы, заданные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, пары последовательностей с лейциновыми молниями, сайты связывания вторичных антител, металлсвязывающие домены, эпитопные метки). В некоторых вариантах осуществления метки присоединены через спейсерные ножки различной длины для уменьшения потенциального стерического затруднения. Термин фармацевтическое средство или лекарственное средство при использовании в настоящем описании относится к химическому соединению или композиции, способной оказывать требуемое терапевтическое воздействие при
- 128 043582 правильном введении пациенту.
Другие химические термины в настоящем изобретении используются согласно стандартному использованию в данной области, как показано в The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S.,
Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985)).
При использовании в настоящем описании по существу чистый означает, что рассматриваемый компонент является преобладающим присутствующим компонентом (т.е. в молярном отношении он представлен больше, чем какие-либо другие отдельные компоненты в композиции), и в некоторых вариантах осуществления по существу очищенная фракция является композицией, в которой рассматриваемый компонент составляет по меньшей мере приблизительно 50 процентов (в молярном отношении) от всех присутствующих макромолекулярных компонентов.
Обычно по существу чистая композиция будет включать больше чем приблизительно 80 процентов всех макромолекулярных компонентов, присутствующих в композиции, в некоторых вариантах осуществления больше чем приблизительно 85, 90, 95 и 99%. В некоторых вариантах осуществления рассматриваемый компонент очищен до существенной гомогенности (контаминирующие компоненты не могут быть обнаружены в композиции с помощью стандартных методов обнаружения), где композиция состоит по существу из одного макромолекулярного компонента.
Термин пациент включает человека и животных.
Антитела и/или активируемые антитела согласно настоящему описанию специфично связывают данную мишень, например, человеческий белок-мишень, такой как человеческий PD-1. Также в настоящее описание включены антитела и/или активируемые антитела, которые связываются с тем же эпитопом, что и антитела и/или активируемые антитела, описанные в настоящем изобретении. Также в настоящее описание включены антитела и/или активируемые антитела, которые конкурируют с антителом против PD-1 и/или активируемым антителом против PD-1, описанным в настоящем изобретении, за связывание с PD-1, например, человеческим PD-1. Также в настоящее описание включены антитела и/или активируемые антитела, которые перекрестно конкурируют с антителом против PD-1 и/или активируемым антителом против PD-1, описанным в настоящем изобретении, за связывание с PD-1, например, человеческим PD-1.
Специалистам в данной области известно, что без излишнего экспериментирования можно определить, обладает ли моноклональное антитело (например, мышиное моноклональное или гуманизированное антитело) такой же специфичностью, как моноклональное антитело, применяемое в способах, описанных в настоящем изобретении, при определении, препятствует ли первое связыванию последнего с мишенью. Если тестируемое моноклональное антитело конкурирует с моноклональным антителом согласно настоящему описанию, что проявляется в уменьшении связывания моноклональным антителом согласно настоящему описанию, то указанные два моноклональных антитела связываются с одним и тем же или близкородственными эпитопами. Альтернативный способ определения, обладает ли моноклональное антитело специфичностью моноклонального антитела согласно настоящему описанию, состоит в предварительном инкубировании моноклонального антитела согласно настоящему описанию с мишенью и последующем добавлении тестируемого моноклонального антитела для определения, ингибируется ли способность тестируемого моноклонального антитела связывать мишень. Если тестируемое моноклональное антитело ингибируется, то тогда, по всей вероятности, оно обладает такой же, или функционально эквивалентной, эпитопной специфичностью, что и моноклональное антитело согласно настоящему описанию.
Мультиспецифичные активируемые антитела. В настоящем описании также предложены мультиспецифичные активируемые антитела против PD-1.
Мультиспецифичные активируемые антитела, предложенные в настоящем изобретении, представляют собой мультиспецифичные антитела, которые распознают PD-1 и по меньшей мере один или более различных антигенов или эпитопов, и которые включают по меньшей мере одну маскирующую часть (MM), связанную по меньшей мере с одним антиген- или эпитопсвязывающим доменом мультиспецифичного антитела таким образом, что присоединение MM уменьшает способность антиген- или эпитопсвязывающего домена связывать свою мишень. В некоторых вариантах осуществления MM соединена с антиген- или эпитопсвязывающим доменом мультиспецифичного антитела через расщепляемую часть (CM), которая функционирует как субстрат по меньшей мере для одной протеазы. Активируемые мультиспецифичные антитела, предложенные в настоящем изобретении, стабильны в кровотоке, активируются в предполагаемых участках терапии и/или диагностики, но не в нормальной, т.е. здоровой, ткани, и в активированном состоянии демонстрируют связывание с мишенью, которое, по меньшей мере, сопоставимо с соответствующим, немодифицированным мультиспецифичным антителом.
В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичные активируемые антитела созданы с возможностью связывания с иммунными эффекторными клетками и также указаны в настоящем изобретении как связывающиеся с иммуно-эффекторными клетками мультиспецифичные активируемые антитела. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичные активируемые антитела созданы с возможностью связывания с лейкоцитами и также указаны в настоящем изобретении как связывающиеся с лейкоцитами мультиспецифичные активируемые антитела. В некоторых вариантах осуществления мультис- 129 043582 пецифичные активируемые антитела созданы с возможностью связывания с Т-клетками и также указаны в настоящем изобретении как связывающиеся с Т-клетками мультиспецифичные активируемые антитела. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичные активируемые антитела связывают поверхностный антиген на лейкоците, например, на Т-клетке, на естественной киллерной (NK) клетке, на миелоидной мононуклеарной клетке, на макрофаге и/или на другой иммунной эффекторной клетке. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является лейкоцит. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является Т-клетка. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является NK-клетка. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является мононуклеарная клетка, такая как миелоидная мононуклеарная клетка. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичные активируемые антитела созданы с возможностью связываться или иным образом взаимодействовать больше чем с одной мишенью и/или больше чем с одним эпитопом, и также указаны в настоящем изобретении как мультиантигенспецифичные активируемые антитела. При использовании в настоящем описании термины мишень и антиген используются попеременно.
В некоторых вариантах осуществления связывающиеся с иммунными эффекторными клетками мультиспецифичные активируемые антитела согласно настоящему описанию включают специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают PD-1, и связывающееся с иммунной эффекторной клеткой антитело или его антигенсвязывающую часть, где по меньшей мере одно из специфичного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или связывающегося с иммунной эффекторной клеткой антитела или его антигенсвязывающей части является маскированным. В некоторых вариантах осуществления связывающееся с иммунной эффекторной клеткой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ1), которые связывают первую связывающую иммунную эффекторную клетку-мишень, где АВ 1 соединено с маскирующей частью (MM1) таким образом, что соединение с MM1 уменьшает способность АВ1 связывать первую мишень. В некоторых вариантах осуществления специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают второе антитело или его фрагмент, которые включают второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ2), которые связывают PD-1, где АВ2 соединено с маскирующей частью (MM2) таким образом, что соединение с MM2 уменьшает способность АВ2 связывать PD-1. В некоторых вариантах осуществления связывающееся с иммунной эффекторной клеткой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ1), которые связывают первую связывающую иммунную эффекторную клетку-мишень, где АВ1 соединено с маскирующей частью (MM1) таким образом, что соединение с MM1 уменьшает способность АВ1 связывать первую мишень, и специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают второе антитело или его фрагмент, которые включают второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ2), которые связывают PD-1, где АВ2 соединено с маскирующей частью (MM2) таким образом, что соединение с MM2 уменьшает способность АВ2 связывать PD-1. В некоторых вариантах осуществления не связывающимся с иммунной эффекторной клеткой антителом является противоопухолевое антитело. В некоторых вариантах осуществления неиммуноклеточным эффекторным антителом является IgG. В некоторых вариантах осуществления связывающимся с иммунной эффекторной клеткой антителом является scFv. В некоторых вариантах осуществления PD-1-специфичным антителом (например, неиммуноклеточным эффекторным антителом) является IgG, а связывающимся с иммунной эффекторной клеткой антителом является scFv. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является лейкоцит. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является T-клетка. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является NKклетка. В некоторых вариантах осуществления иммунной эффекторной клеткой является миелоидная мононуклеарная клетка.
В некоторых вариантах осуществления связывающиеся с T-клетками мультиспецифичные активируемые антитела согласно настоящему описанию включают PD-1-специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и связывающееся с T-клетками антитело или его антигенсвязывающую часть, где по меньшей мере одно из PD-1-специфичного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или связывающегося с T-клетками антитела или его антигенсвязывающей части является маскированным. В некоторых вариантах осуществления связывающееся с T-клетками антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ1), которые связывают первую связывающуюся T-клетку-мишень, где АВ1 соединено с маскирующей частью (MM1) таким образом, что соединение с MM1 уменьшает способность АВ1 связывать первую мишень. В некоторых вариантах осуществления специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают второе антитело или его фрагмент, которые включают второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ2), которые связывают PD-1, где АВ2 соединено с маскирующей частью (MM2) таким образом, что соединение с MM2 уменьшает способность АВ2 связывать PD-1. В некоторых вариантах осуществления связывающееся с T-клетками антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ1), которые связывают первую связывающуюся T-клетку-мишень, где АВ1 соединено с маскирующей частью (MM1) таким образом, что соеди- 130 043582 нение с MM1 уменьшает способность АВ1 связывать первую мишень, и специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают второе антитело или его фрагмент, которые включают второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ2), которые связывают PD-1, где АВ2 соединено с маскирующей частью (MM2) таким образом, что соединение с MM2 уменьшает способность АВ2 связывать PD-1.
В некоторых вариантах осуществления связывающегося с иммунной эффекторной клеткой мультиспецифичного активируемого антитела, одним антигеном является PD-1, а другой антиген, как правило, является стимулирующим или ингибирующим рецептором, присутствующим на поверхности Tклетки, естественной киллерной (NK) клетке, миелоидной мононуклеарной клетки, макрофага и/или другой иммунной эффекторной клетки, таким как, без ограничения перечисленными, В7-Н4, BTLA, CD3, CD4, CD8, CD16a, CD25, CD27, CD28, CD32, CD56, CD137, CTLA-4, GITR, HVEM, ICOS, LAG3, NKG2D, ОХ40, TIGIT, TIM3 или VISTA. В некоторых вариантах осуществления антиген является стимулирующим рецептором, присутствующим на поверхности T-клетки или NK-клетки; примеры таких стимулирующих рецепторов включают, без ограничения перечисленными, CD3, CD27, CD28, CD137 (также называемый 4-1BB), GITR, HVEM, ICOS, NKG2D и OX40. В некоторых вариантах осуществления антиген является ингибирующим рецептором, присутствующим на поверхности T-клетки; примеры таких ингибирующих рецепторов включают, без ограничения перечисленными, BTLA, CTLA-4, LAG3, TIGIT, TIM3 и NK-экспрессируемые KIR-рецепторы. Домен антитела, придающий специфичность к Тклеточному поверхностному антигену, также можно заменить лигандом или доменом лиганда, который связывается с Т-клеточным рецептором, NK-клеточным рецептором, макрофагальным рецептором и/или другим рецептором иммунных эффекторных клеток, таким как, без ограничения перечисленными, B7-1, B7-2, В7НЗ, PDL1, PDL2 или TNFSF9.
В некоторых вариантах осуществления связывающееся с T-клетками мультиспецифичное активируемое антитело включает scFv против CD3-эпсилон (CD3ε, также указанного в настоящем изобретении как CD3e и CD3) и специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где по меньшей мере одно из scFv против CD3ε и/или специфичного антитела или его антигенсвязывающей части является маскированным. В некоторых вариантах осуществления scFv против CD3ε включает первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ1), которые связывают CD3ε, где АВ1 соединено с маскирующей частью (MM1) таким образом, что соединение с MM1 уменьшает способность АВ1 связывать CD3ε. В некоторых вариантах осуществления специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают второе антитело или его фрагмент, которые включают второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ2), которые связывают PD-1, где АВ2 соединено с маскирующей частью (MM2) таким образом, что соединение с MM2 уменьшает способность АВ2 связывать PD-1. В некоторых вариантах осуществления scFv против CD3ε включает первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ1), которые связывают CD3ε, где АВ1 соединено с маскирующей частью (MM1) таким образом, что соединение с MM1 уменьшает способность АВ1 связывать CD3ε, и специфичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включают второе антитело или его фрагмент, которые включают второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ2), которые связывают PD-1, где АВ2 соединено с маскирующей частью (MM2) таким образом, что соединение с MM2 уменьшает способность АВ2 связывать PD-1.
В некоторых вариантах осуществления мультиантигенспецифичные антитела и/или мультиантигенспецифичные активируемые антитела включают по меньшей мере первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают первую мишень и/или первый эпитоп, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают вторую мишень и/или второй эпитоп. В некоторых вариантах осуществления мультиантигенспецифичные антитела и/или мультиантигенспецифичные активируемые антитела связывают две или более разных мишеней. В некоторых вариантах осуществления мультиантигенспецифичные антитела и/или мультиантигенспецифичные активируемые антитела связывают два или больше разных эпитопов на одной и той же мишени. В некоторых вариантах осуществления мультиантигенспецифичные антитела и/или мультиантигенспецифичные активируемые антитела связывают комбинацию двух или более разных мишеней и двух или более разных эпитопов на одной и той же мишени.
В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело, включающее IgG, имеет маскированные IgG вариабельные домены. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело, включающее scFv, имеет маскированные scFv домены. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело имеет IgG вариабельные домены и scFv домены, где по меньшей мере один из IgG вариабельных доменов соединен с маскирующей частью. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело имеет IgG вариабельные домены и scFv домены, где по меньшей мере один из scFv доменов соединен с маскирующей частью. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело имеет IgG вариабельные домены и scFv домены, где по меньшей мере один из IgG вариабельных доменов соединен с маскирующей частью, и по меньшей мере один из scFv доменов соединен с маскирующей частью. В
- 131 043582 некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело имеет IgG вариабельные домены и scFv домены, где каждый из IgG вариабельных доменов и scFv доменов соединен со своей собственной маскирующей частью. В некоторых вариантах осуществления один домен антитела мультиспецифичного активируемого антитела обладает специфичностью к антигену-мишени, а другой домен антитела обладает специфичностью к Т-клеточному поверхностному антигену. В некоторых вариантах осуществления один домен антитела мультиспецифичного активируемого антитела обладает специфичностью к антигену-мишени, а другой домен антитела обладает специфичностью к другому антигенумишени. В некоторых вариантах осуществления один домен антитела мультиспецифичного активируемого антитела обладает специфичностью к эпитопу антигена-мишени, а другой домен антитела обладает специфичностью к другому эпитопу антигена-мишени.
В мультиспецифичном активируемом антителе, scFv может быть слит с С-концом тяжелой цепи IgG активируемого антитела, с С-концом легкой цепи IgG активируемого антитела или с С-концом тяжелой и легкой цепей IgG активируемого антитела. В мультиспецифичном активируемом антителе, scFv может быть слит с N-концом тяжелой цепи IgG активируемого антитела, с N-концом легкой цепи IgG активируемого антитела или с N-концом тяжелой и легкой цепей IgG активируемого антитела. В мультиспецифичном активируемом антителе, scFv может быть слит с любой комбинацией одного или более С-концов и одного или более N-концов IgG активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления маскирующая часть (MM), связанная с расщепляемой частью (CM), присоединена и маскирует антигенсвязывающий домен IgG. В некоторых вариантах осуществления маскирующая часть (MM), связанная с расщепляемой частью (CM), присоединена и маскирует антигенсвязывающий домен по меньшей мере одного scFv. В некоторых вариантах осуществления маскирующая часть (MM), связанная с расщепляемой частью (CM), присоединена и маскирует антигенсвязывающий домен IgG, и маскирующая часть (MM), связанная с расщепляемой частью (CM), присоединена и маскирует антигенсвязывающий домен по меньшей мере одного scFv.
В настоящем описании представлены примеры структур мультиспецифичных активируемых антител, которые включают, без ограничения перечисленными, следующие:
(VL-CL)2: (VH-CH1-CH2-CH3L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2; (VL-CL)2: (VH-CH1-CH2-CH3-L4-VL*-L3VH*-L2-CM-L1-MM)2; (MM-L1-CM-L2-VL-CL)2 : (VH-CH1-CH2-CH3-L4-VH*L3-VL*)2; (MM-L1-CM-L2-VL-CL)2 : (VH-CH1-CH2-CH3-L4-VL*-L3-VH*)2;
(VL-CL)2 : (MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VLCL) 2: (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) г; (MM-L1-CM-L2VL-CL)2: (VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) г; (MM-L1-CM-L2-VLCL) 2: (VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CML1-MM)2: (VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1MM)2: (VH-CH1-CH2-CH3)2; (MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VL-CL)2: (VHCH1-CH2-CH3)2; (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VL-CL)2: (VH-CH1-CH2CH3)2; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2: (MM-L1-CM-L2-VL*-L3VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM)2: (MML1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2CM-L1-MM)2: (MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CLL4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2 : (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*)2 : (MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VHCH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*)2 : (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*)2 : (MM-L1-CM-L2-VL*-L3VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*)2: (MM-L1-CM-L2VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1MM)2: (VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2CM-L1-MM)2: (VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; (VL-CL-L4-VL*-L3VH*-L2-CM-L1-MM)2 : (VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3)2; или (VL-CLL4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM)2: (VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2, где VL и VH представляют собой вариабельные домены легкой и тяжелой цепи первой специфичности, содержащиеся в IgG; VL* и VH* представляют собой вариабельные домены второй специфичности, содержащиеся в scFv; L1 является линкерным пептидом, соединяющим маскирующую часть (MM) и расщепляемую часть (CM); L2 является линкерным пептидом, соединяющим расщепляемую часть (CM) и антитело; L3 является линкерным пептидом, соединяющим вариабельные домены scFv; L4 является линкерным пептидом, соединяющим антитело первой специфичности с антителом второй специфично- 132 043582 сти; CL является константным доменом легкой цепи; и CH1, CH2, CH3 являются константными доменами тяжелой цепи. Первая и вторая специфичности могут быть направлены в отношении любого антигена или эпитопа.
В некоторых вариантах осуществления связывающегося с T-клеткой мультиспецифичного активируемого антитела, одним антигеном является PD-1, а другой антиген, как правило, является стимулирующим (также указанным в настоящем изобретении как активирующим) или ингибирующим рецептором, присутствующим на поверхности T-клетки, естественной киллерной (NK) клетки, миелоидной мононуклеарной клетки, макрофага и/или другой иммунной эффекторной клетки, такой как, без ограничения перечисленными, В7-Н4, BTLA, CD3, CD4, CD8, CD16a, CD25, CD27, CD28, CD32, CD56, CD137 (также называемый TNFRSF9), CTLA-4, GITR, HVEM, ICOS, LAG3, NKG2D, OX40, PD-1, TIGIT, TIM3 или VISTA. Домен антитела, придающий специфичность к Т-клеточному поверхностному антигену, также можно заменить лигандом или доменом лиганда, который связывается с Т-клеточным рецептором, NK-клеточным рецептором, макрофагальным рецептором и/или другим рецептором иммунных эффекторных клеток.
В некоторых вариантах осуществления специфичное антитело является антителом против PD-1, раскрытым в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления специфичное антитело может находиться в форме активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления scFvфрагмент(ы) может находиться в форме про-scFv-фрагмента (см., например, WO 2009/025846, WO 2010/081173).
В некоторых вариантах осуществления scFv является специфичным для связывания CD3ε и включает или получен из антитела или его фрагмента, которые связывают CD3c, например, CH2527, FN18, Н2С, ОКТ3, 2С11, UCHT1 или V9. В некоторых вариантах осуществления scFv является специфичным для связывания CTLA-4 (также указанного в настоящем изобретении как CTLA и CTLA4).
В некоторых вариантах осуществления scFv против CTLA-4 включает аминокислотную последовательность:
GGGSGGGGSGSGGGSGGGGSGGGEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAW
YQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFG GGTKVEIKRSGGSTITSYNVYYTKLSSSGTQVQLVQTGGGWQPGRSLRLSCAASGSTFSSYAM SWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAT NSLYWYFDLWGRGTLVTVSSAS (SEQ ID NO: 585)
В некоторых вариантах осуществления scFv против CTLA-4 включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 585.
В некоторых вариантах осуществления scFv против CD3e включает аминокислотную последовательность:
GGGSGGGGSGSGGGSGGGGSGGGQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHW
VKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYY DDHYCLDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVS YMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNP FTFGSGTKLEINR (SEQ ID NO: 586)
В некоторых вариантах осуществления scFv против CD3e включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 586.
В некоторых вариантах осуществления scFv является специфичным для связывания одной или более Т-клеток, одной или более NK-клеток и/или одного или более макрофагов. В некоторых вариантах осуществления scFv является специфичным для связывания мишени, выбранной из группы, состоящей из B7-H4, BTLA, CD3, CD4, CD8, CD16a, CD25, CD27, CD28, CD32, CD56, CD137, CTLA-4, GITR, HVEM, ICOS, LAG3, NKG2D, OX40, TIGIT, TIM3 или VISTA.
В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело также включает средство, конъюгированное с AB. В некоторых вариантах осуществления средство является терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления средство конъюгировано с мультиспецифичным активируемым антителом через линкер. В некоторых вариантах осуществления средство конъюгировано с AB через расщепляемый линкер. В некоторых вариантах осуществления линкер является нерасщепляемым линкером.
В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело также включает детектируемую молекулу. В некоторых вариантах осуществления детектируемая молекула является диагностическим средством.
В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело обычно содержит одну или более дисульфидных связей. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное
- 133 043582 активируемое антитело может быть сконструировано с включением одной или более дисульфидных связей.
В настоящем описании также предложена выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая мультиспецифичное активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении, а также векторы, которые включают такие выделенные последовательности нуклеиновых кислот. В настоящем описании предложены способы получения мультиспецифичного активируемого антитела посредством культивирования клетки при условиях, которые приводят к экспрессии активируемого антитела, где клетка включает такую молекулу нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления клетка включает такой вектор.
В настоящем описании также предложен способ производства мультиспецифичных активируемых антител согласно настоящему описанию посредством: (a) культивирования клетки, включающей конструкцию нуклеиновой кислоты, которая кодирует мультиспецифичное активируемое антитело, при условиях, которые приводят к экспрессии мультиспецифичного активируемого, и (b) выделения мультиспецифичного активируемого антитела. Подходящие AB, MM и/или CM включают любой из AB, MM и/или CM, раскрытых в настоящем изобретении.
В настоящем описании также предложены мультиспецифичные активируемые антитела и/или композиции мультиспецифичных активируемых антител, которые включают по меньшей мере первое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB1), которые специфично связывают первую мишень или первый эпитоп, и второе антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (AB2), которые связывают вторую мишень или второй эпитоп, где, по меньшей мере, AB1 соединен или иным образом прикреплен к маскирующей части (MM1) таким образом, что соединение с MM1 уменьшает способность AB1 связывать свою мишень. В некоторых вариантах осуществления MM1 соединен с AB1 через последовательность первой расщепляемой части (CM1), которая включает субстрат для протеазы, например, протеазы, которая колокализована с мишенью AB1 на участке лечения или участке диагностики у субъекта. Мультиспецифичные активируемые антитела, предложенные в настоящем изобретении, стабильны в кровотоке, активируются в предполагаемых участках терапии и/или диагностики, но не в нормальной, т.е. здоровой, ткани, и в активированном состоянии демонстрируют связывание с мишенью AB1, которое, по меньшей мере, сопоставимо с соответствующим, немодифицированным мультиспецифичным антителом. Подходящие AB, MM и/или CM включают любой из AB, MM и/или CM, раскрытых в настоящем изобретении.
В настоящем описании также предложены композиции и способы, которые включают мультиспецифичное активируемое антитело, которое включает, по меньшей мере, первое антитело или фрагмент антитела (AB1), которые специфично связывают мишень, и второе антитело или фрагмент антитела (AB2), где по меньшей мере первый AB в мультиспецифичном активируемом антителе соединен с маскирующей частью (MM1), что уменьшает способность AB1 связывать свою мишень. В некоторых вариантах осуществления каждый AB соединено с MM, что уменьшает способность его соответствующего AB связываться с каждой мишенью. Например, в вариантах осуществления биспецифичного активируемого антитела, AB1 соединен с первой маскирующей частью (MM1), что уменьшает способность AB1 связывать свою мишень, и AB2 соединен со второй маскирующей частью (MM2), что уменьшает способность AB2 связывать свою мишень. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело включает больше двух областей АВ; в таких вариантах осуществления AB1 соединена с первой маскирующей частью (MM1), что уменьшает способность AB1 связывать свою мишень, AB2 соединена со второй маскирующей частью (MM2), что уменьшает способность AB2 связывать свою мишень, AB3 соединена с третьей маскирующей частью (MM3), что уменьшает способность AB3 связать свою мишень, и так далее для каждого AB в мультиспецифичном активируемом антителе. Подходящие AB, MM и/или CM включают любой из AB, MM и/или CM, раскрытых в настоящем изобретении.
В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело дополнительно включает по меньшей мере одну расщепляемую часть (CM), которая является субстратом для протеазы, где CM соединяет MM с AB. Например, в некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело включает, по меньшей мере, первое антитело или фрагмент антитела (AB1), которые специфично связывают мишень, и второе антитело или фрагмент антитела (AB2), где по меньшей мере первый AB в мультиспецифичном активируемом антителе соединен через первую расщепляемую часть (СМ1) с маскирующей частью (MM1), что уменьшает способность AB1 связывать свою мишень. В некоторых вариантах осуществления биспецифичного активируемого антитела, AB1 соединена через СМ1 с MM1, и AB2 соединена через вторую расщепляемую часть (СМ2) со второй маскирующей частью (MM2), что уменьшает способность AB2 связывать свою мишень. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифичное активируемое антитело включает больше двух областей АВ; в некоторых из таких вариантов осуществления AB1 соединена через СМ1 с MM1, AB2 соединена через СМ2 с MM2, и AB3 соединена через третью расщепляемую часть (CM3) с третьей маскирующей частью (MM3), что уменьшает способность AB3 связывать свою мишень, и так далее для каждого AB в мультиспецифичном активируемом антителе. Подходящие AB, MM и/или CM включают любой из AB, MM и/или CM, раскрытых в настоящем изобретении.
- 134 043582
Активируемые антитела, содержащие несвязывающие стерические части или партнеры по связыванию для несвязывающих стерических частей В настоящем описании также предложены активируемые антитела, которые включают несвязывающие стерические части (NB) или партнеры по связыванию (BP) для несвязывающих стерических частей, где BP рекрутирует или иным образом привлекает NB к активируемому антителу. Активируемые антитела, предложенные в настоящем изобретении, включают, например, активируемое антитело, которое включает несвязывающую стерическую часть (NB), расщепляемый линкер (CL) и антитело или фрагмент антитела (AB), которые связывают мишень; активируемое антитело, которое включает партнер по связыванию для несвязывающей стерической части (BP), CL и АВ; и активируемое антитело, которое включает ВР, к которому рекрутируется NB, CL и AB, которое связывает мишень. Активируемые антитела, в которых NB ковалентно связана с CL и AB активируемого антитела или ассоциирована при взаимодействии с ВР, который ковалентно связан с CL и AB активируемого антитела, указаны в настоящем изобретении как NB-содержащие активируемые антитела. Под активируемым или переключаемым подразумевается, что активируемое антитело демонстрирует первый уровень связывания с мишенью, когда активируемое антитело находится в ингибированном, маскированном или нерасщепленном состоянии (т.е. первой конформации), и второй уровень связывания с мишенью, когда активируемое антитело находится в свободном, немаскированном и/или расщепленном состоянии (т.е. второй конформации, т.е. активированное антитело), где второй уровень связывания мишени больше, чем первый уровень связывания мишени. Композиции активируемых антител могут демонстрировать увеличенную биодоступность и более блогоприятное биораспределение по сравнению с обычными терапевтическими антителами.
В некоторых вариантах осуществления активируемые антитела обеспечивают сниженную токсичность и/или нежелательное побочное действие, которые в ином случае могли возникать в результате связывания на не предусмотренных для лечения участках и/или не предусмотренных для диагностики участках, если бы AB не было маскировано или иным образом не было ингибировано его связывание с таким участком.
Активируемые антитела против PD-1, которые включают несвязывающую стерическую часть (NB), могут быть получены с применением способов, представленных в публикации PCT WO 2013/192546, содержание которой настоящим полностью включено посредством отсылки.
Применение антител и активируемых антител
Следует понимать, что введение терапевтических соединений в соответствии с настоящим описанием будут проводить с подходящими носителями, вспомогательными веществами и другими средствами, которые входят в состав лекарственных форм для обеспечения улучшенного транспорта, доставки, переносимости и т.п. Множество подходящих лекарственных форм можно найти в справочнике, известном всем химикам-фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), в частности, в главе 87 за авторством Blaug, Seymour. Такие лекарственные формы включают, например, порошки, пасты, мази, гели, воска, масла, липиды, содержащие липиды (катионные или анионные) везикулы (такие как Lipofectin™), конъюгаты ДНК, безводные абсорбирующие пасты, эмульсии по типу масло в воде и вода в масле, эмульсии карбовакс (полиэтиленгликоли различной молекулярной массы), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. Любая из предыдущих смесей может быть подходящей в лечении и способах лечения в соответствии с настоящим описанием, при условии, что действующее вещество в лекарственной форме не инактивируется компонентами лекарственной формы, и лекарственная форма физиологически совместима и переносима с путем введения. См. также публикации Baldrick P. Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance. Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. Lyophilization and development of solid protein Pharmaceuticals. Int. J. Pharm. 203 (1-2):1-60 (2000), Charman WN Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts. J Pharm Sci.89(8):967-78 (2000), Powell et al. Compendium of excipients for parenteral formulations PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998), и ссылки в них для получения дополнительной информации по лекарственным формам, вспомогательным веществам и носителям, известным химикам-фармацевтам.
Терапевтические лекарственные формы согласно настоящему описанию, которые включают антитело против PD-1 и/или активируемое антитело против PD-1, такие как, в качестве неограничивающего примера, антитело и/или активируемое антитело, применяются для предотвращения, лечения или иного уменьшения тяжести заболевания или нарушения, связанного с аберрантной экспрессией и/или активностью мишени. Например, терапевтические лекарственные формы согласно настоящему описанию, которые включают антитело и/или активируемое антитело, применяются для лечения или иного уменьшения тяжести рака или другого неопластического заболевания, воспаления, воспалительного заболевания и/или аутоиммунного заболевания. В некоторых вариантах осуществления рак является солидной опухолью или гемобластозом, где экспрессируется мишень. В некоторых вариантах осуществления рак является солидной опухолью, где экспрессируется мишень. В некоторых вариантах осуществления рак является гемобластозом, где экспрессируется мишень. В некоторых вариантах осуществления мишень экспрессируется на паренхиме (например, в раковой опухоли, части органа или ткани, которая часто выполняет функцию(и) органа или ткани). В некоторых вариантах осуществления мишень экспрессируется на клет- 135 043582 ке, ткани или органе. В некоторых вариантах осуществления мишень экспрессируется на строме (т.е.
соединительном поддерживающем каркасе клетки, ткани или органа). В некоторых вариантах осуществления мишень экспрессируется на остеобласте. В некоторых вариантах осуществления мишень экспрессируется на эндотелии (сосудистой сети). В некоторых вариантах осуществления мишень экспрессируется на раковой стволовой клетке.
Эффективность профилактики, уменьшения тяжести или лечения определяют с помощью любого известного метода диагностки или лечения заболевания или нарушения, связанного с экспрессией и/или активностью мишени, такой как, например, аберрантная экспрессия и/или активность мишени. Увеличение продолжительности выживаемости субъекта или иная задержка развития заболевания или нарушения, связанного с экспрессией и/или активностью мишени, например аберрантной экспрессией и/или активностью мишени, у субъекта указывают, что антитело и/или активируемое антитело обладают клинической эффективностью.
Антитело и/или активируемое антитело можно вводить в форме фармацевтических композиций. Принципы и критерии, используемые при получении таких композиций, а также руководства по выбору компонентов, представлены, например, в Remington: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994; and Peptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New York.
В некоторых вариантах осуществления, в которых применяются фрагменты антител, выбирают наименьший фрагмент, который специфично связывается с доменом связывания белка-мишени. Например, на основе последовательностей вариабельной области антитела могут быть созданы пептидные молекулы, которые сохраняют способность связывать последовательность белка-мишени. Такие пептиды могут быть синтезированы химически и/или получены с помощью технологии рекомбинантных ДНК. См., например, Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993). Лекарственная форма при необходимости также может содержать больше одного действующего вещества для конкретного показания, подвергаемого лечению, например, в некоторых вариантах осуществления, действующие вещества с дополнительными активностями, которые не оказывают негативного влияния друг на друга. В некоторых вариантах осуществления, или дополнительно, композиция может включать средство, которое усиливает ее функцию, такое как, например, цитотоксическое средство, цитокин, химиотерапевтическое средство или ингибирующее рост средство. Такие молекулы предпочтительно присутствуют в комбинации в количествах, которые являются эффективными для предполагаемой цели.
Действующие вещества также могут быть заключены в микрокапсулы, изготовленные, например, с помощью методов коацервации или поверхностной полимеризации, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и микрокапсулы из полиметилметакрилата, соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственных средств (например, липосомах, альбуминовых микросферах, микроэмульсиях, наночастицах и нанокапсулах) или в макроэмульсиях.
Лекарственные формы, применяемые для in vivo введения, должны быть стерильными. Это с легкостью достигается при фильтрации через стерилизующие фильтрационные мембраны.
Могут быть изготовлены препараты с пролонгированным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с пролонгированным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, где матрицы изготовлены в форме формованных изделий, например, пленок или микрокапсул. Примеры матриц пролонгированного высвобождения включают полиэфиры, гидрогели (например, поли-(2-гидроксиэтил-метакрилат) или поливиниловый спирт), полилактиды (патент США 3,773,919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и у-этил-Ь-глутамат, неразлагаемый этилен-винилацетат, разлагаемые сополимеры молочной кислоты-гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOT™ (микросферы для инъекций, состоящие из сополимера молочной кислотыгликолевой кислоты и лейпролида ацетата), и поли-О-(-)-3-гидроксимасляную кислоту. Тогда как такие полимеры, как этилен-винилацетат и молочная кислота-гликолевая кислота обеспечивают высвобождение молекул в течение более 100 дней, некоторые гидрогели высвобождают белки в течение более коротких периодов времени.
В некоторых вариантах осуществления антитело и/или активируемое антитело содержит детектируемую метку. Используется интактное антитело или его фрагмент (например, Fab, scFv или F(ab)2). Предполагается, что термин меченый, в отношении зонда или антитела, охватывает прямое мечение зонда или антитела посредством соединения (т.е. физического связывания) детектируемого вещества с зондом или антителом, а также непрямое мечение зонда или антитела при взаимодействии с другим реактивом, который помечен непосредственно. Примеры непрямого мечения включают обнаружение основного антитела при использовании флуоресцентно меченного вторичного антитела и концевого мечения ДНК-зонда биотином таким образом, что он может быть обнаружен с помощью флуоресцентно меченного стрептавидина. Предполагается, что термин биологический образец включает ткани, клетки и биологические жидкости, выделенные у субъекта, а также ткани, клетки и жидкости, присутствующие в организме субъекта. В рамки применения термина биологический образец, таким образом, включены
- 136 043582 кровь и фракция или компонент крови, в том числе сыворотка крови, плазма крови или лимфа. Таким образом, способ обнаружения согласно настоящему описанию может применяться для обнаружения анализируемой мРНК, белка или геномной ДНК в биологическом образце in vitro, а также in vivo. Например, способы in vitro обнаружения анализируемой мРНК включают Нозерн-гибридизацию и гибридизацию in situ. Способы in vitro обнаружения анализируемого белка включают иммуноферментные анализы (ELISA), Вестерн-блоттинг, иммунопреципитацию, иммунохимическое окрашивание и иммунофлуоресценцию. Способы in vitro обнаружения анализируемой геномной ДНК включают Саузерн-гибридизацию. Процедуры проведения иммуноанализов описаны, например в ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology, Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; Immunoassay, E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996; и Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985. Кроме того, способы in vivo обнаружения анализируемого белка включают введение субъекту меченого антитела против анализируемого белка. Например, антитело может быть помечено радиоактивным маркером, присутствие и местоположение которого в организме субъекта может быть обнаружено с помощью стандартных методов визуализации.
Антитела и/или активируемые антитела согласно настоящему описанию также могут применяться в различных диагностических и профилактических лекарственных формах. В одном варианте осуществления антитело и/или активируемое антитело вводят пациентам, которые подвергаются риску развития одного или более вышеуказанных нарушений. Предрасположенность пациента или органа к одному или более вышеуказанным нарушениям может быть определена при использовании генотипических, серологических или биохимических маркеров.
В некоторых вариантах осуществления настоящего описания антитела и/или активируемые антитела вводят отдельным людям с диагнозом клинического показания, связанного с одним или более вышеуказанными нарушениями. После диагностики антитело и/или активируемое антитело вводят для облегчения или устранения эффектов клинического показания.
Антитело и/или активируемое антитело согласно настоящему описанию также могут применяться при обнаружении мишени в образцах пациента и, соответственно, могут применяться в качестве диагностических средств. Например, антитела и/или активируемые антитела и их конъюгированные версии согласно настоящему описанию применяются в анализах in vitro, например ELISA, для обнаружения уровней мишени в образце пациента.
В некоторых вариантах осуществления антитела против PDL1 применяются в качестве диагностического средства для пациентов, которые с более высокой вероятностью будут благоприятно отвечать на лечение антителом против PD-1 и/или активируемым антителом согласно настоящему описанию. В таких вариантах осуществления экспрессию PD-L1 в биоптатах опухоли на опухолевых клетках и инфильтрирующих иммунных клетках и экспрессию PD-L1 на иммунных клетках в крови используют для определения присутствия активного иммунитета и, таким образом, потенциала для супрессии активности Т-клеток в результате связывания PD-1 с PD-L1.
В одном варианте осуществления антитело, конъюгированное антитело, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело согласно настоящему описанию иммобилизованы на твердой подложке (например, лунке(ах) микротитровального планшета). Иммобилизованное антитело, конъюгированное антитело, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело служат в качестве захватывающего антитела для любой мишени, которая может присутствовать в тестируемом образце. Перед контактом иммобилизованного антитела и/или активируемого антитела, и/или их конъюгированных версий с образцом пациента, твердую подложку промывают и обрабатывают блокирующим средством, таким как молочный белок или альбумин, для предотвращения неспецифичной адсорбции аналита.
Затем лунки обрабатывают тестируемым образцом, подозреваемым на содержание антигена, или раствором, содержащим стандартное количество антигена. Такой образец является, например, образцом сыворотки субъекта, подозреваемого на наличие уровней циркулирующего антигена, которые считают диагностическим критерием наличия патологии. После удаления при промывке тестируемого образца или стандарта, твердую подложку обрабатывают вторым антителом, которое помечено с возможностью детектирования. Меченое второе антитело служит в качестве детектирующего антитела. Уровень детектируемой метки измеряют и определяют концентрацию антигена-мишени в тестируемом образце при сравнении с калибровочной кривой, полученной на основе стандартных образцов.
Следует понимать, что на основе результатов, полученных с применением антител и активируемых антител согласно настоящему описанию и их конъюгированных версий в диагностическом тесте in vitro, можно определить стадию заболевания у субъекта по уровням экспрессии антигена-мишени. Для данного заболевания образцы крови забирают у субъектов с диагностированными различными стадиями прогрессирования заболевания и/или в различных моментах при терапевтическом лечении заболевания. При использовании совокупности образцов, которые дают статистически значимые результаты для каждой стадии прогрессирования или терапии, определяют диапазон концентраций антигена, который можно считать характерным для каждой стадии.
- 137 043582
Антитело, конъюгированное антитело, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело также могут применяться в диагностических и/или визуализационных способах. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами in vitro. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами in vivo. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами in situ. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами ex vivo. Например, активируемые антитела, содержащие ферментативно расщепляемую CM, могут применяться для обнаружения присутствия или отсутствия фермента, который способен расщеплять СМ. Такие активируемые антитела могут применяться в диагностике, которая может включать in vivo обнаружение (например, качественное или количественное) ферментной активности (или, в некоторых вариантах осуществления, окружения с повышенным восстановительным потенциалом, таким как восстановительный потенциал, который может обеспечить восстановление дисульфидной связи) посредством измеряемого накопления активированных антител (т.е. антител, образующихся в результате расщепления активируемого антитела) в данной клетке или ткани данного организма-хозяина. Такое накопление активированных антител указывает не только на то, что ткань экспрессирует ферментативную активность (или повышенный восстановительный потенциал в зависимости от природы CM), но также и на то, что ткань экспрессирует мишень, с которой связывается активированное антитело.
Например, CM может быть выбрана в качестве субстрата по меньшей мере для одной протеазы, присутствующей на участке опухоли, на участке вирусной или бактериальной инфекции в биологически ограниченном участке (например, таком как в абсцессе, в органе и т.п.) и т.п. AB может быть таким, которое связывает антиген-мишень. С применением способов, раскрытых в настоящем изобретении, или, в соответствующих случаях, способов, известных специалисту в данной области, детектируемая метка (например, флуоресцентная метка или радиоактивная метка, или радиоактивный индикатор) может быть конъюгирована с AB или другой областью антитела и/или активируемого антитела. Подходящие детектируемые метки обсуждаются в контексте вышеуказанных способов скрининга, при этом дополнительные определенные примеры приведены ниже. При использовании AB, специфичного к белку или пептиду патологического состояния, вместе с по меньшей мере одной протеазой, активность которой повышена в представляющей интерес пораженной ткани, активируемые антитела продемонстрируют увеличенный уровень связывания с пораженной тканью по сравнению с тканями, в которых СМ-специфичный фермент отсутствует на поддающемся обнаружению уровне или присутствует на более низком уровне, чем в пораженной ткани, или неактивен (например, находится в форме профермента или в комплексе с ингибитором). Поскольку небольшие белки и пептиды быстро выводятся из крови системой почечной фильтрации, и поскольку фермент, специфичный к CM, отсутствует на поддающемся обнаружению уровне (или присутствует на более низких уровнях в нормальных тканях, или присутствует в неактивной конформации), накопление активированных антител в пораженной ткани повышено по сравнению с нормальными тканями.
В другом примере активируемые антитела могут применяться для обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства в образце. Например, в случае, когда активируемые антитела содержат CM, подверженную расщеплению ферментом, активируемые антитела могут применяться для обнаружения (качественного или количественного) присутствия фермента в образце. В другом примере, когда активируемые антитела содержат CM, подверженную расщеплению восстановителем, активируемые антитела могут применяться для обнаружения (качественного или количественного) присутствия в образце восстанавливающих условий. Для облегчения анализа в данных способах, активируемые антитела могут быть помечены с возможностью детектирования и могут быть связаны с подложкой (например, твердой подложкой, такой как стекло или сфера). Детектируемая метка может быть расположена на части активируемого антитела, которая не высвобождается после расщепления, например, детектируемая метка может быть меткой с тушением флуоресценции или другой меткой, которая не поддается обнаружению, пока не произошло расщепление. Анализ может быть проведен, например, при контакте иммобилизованных, меченных с возможностью обнаружения активируемых антител с образцом, подозреваемым на содержание фермента и/или восстановителя, в течение времени, достаточного для того, чтобы произошло расщепление, с последующей промывкой для удаления избытка образца и примесей. Присутствие или отсутствие расщепляющего средства (например, фермента или восстановителя) в образце затем оценивают по изменению детектируемого сигнала активируемых антител перед контактом с образцом, например, присутствию и/или увеличению детектируемого сигнала вследствие расщепления активируемого антитела расщепляющим средством в образце.
Такие способы обнаружения могут быть также адаптированы, чтобы обеспечивать обнаружение присутствия или отсутствия мишени, которая способна к связыванию AB активируемых антител в расщепленном состоянии. Таким образом, анализы могут быть адаптированы для оценки присутствия или отсутствия расщепляющего средства и присутствия или отсутствия представляющей интерес мишени. Присутствие или отсутствие расщепляющего средства может быть обнаружено по присутствию и/или увеличению детектируемой метки активируемых антител, как описано выше, и присутствие или отсутствие мишени может быть обнаружено при обнаружении комплекса мишень-АВ, например, при помощи антитела против мишени, меченного с возможностью обнаружения.
- 138 043582
Активируемые антитела также могут применяться при визуализации in situ для подтверждения активации активируемого антитела, например, при расщеплении протеазой, и связывания с конкретной мишенью. Визуализация in situ является методикой, которая позволяет устанавливать локализацию протеолитической активности и мишени в биологических образцах, таких как культуры клеток или срезы тканей. При помощи указанной методики можно подтверждать как связывание с данной мишенью, так и протеолитическую активность по присутствию детектируемой метки (например, флуоресцентной метки).
Такие способы могут применяться с любыми замороженными клетками или тканью, полученной из пораженного участка (например, опухолевой ткани) или нормальных тканей. Такие способы также могут применяться с недавно полученными образцами клеток или тканей.
В таких методиках активируемое антитело помечено детектируемой меткой. Детектируемая метка может быть флуоресцентным красителем (например, флуорофором, флуоресцеин-изотиоцианатом (ФИТЦ), родамин-изотиоцианатом (ТРИТЦ), меткой Alexa Fluor®), поглощающим в ближней инфракрасной (БИК) области красителем (например, нанокристаллами Qdot®), коллоидным металлом, гаптеном, радиоактивным маркером, биотином и усиливающим реагентом, таким как стрептавидин, или ферментом (например, пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой).
Обнаружение метки в образце, который инкубировали с меченым активируемым антителом, указывает, что образец содержит мишень и содержит протеазу, которая специфична в отношении CM активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления присутствие протеазы может быть подтверждено при использовании ингибиторов протеаз широкого спектра, таких как ингибиторы, описанные в настоящем изобретении, и/или при помощи средства, которое является специфичным в отношении протеазы, например, антитела, такого как A11, которое является специфичным в отношении протеазы матриптазы и ингибирует протеолитическую активность матриптазы; см., например, международную публикацию WO 2010/129609, опубликованную 11 ноября 2010 года. Такой же метод применения ингибиторов протеаз широкого спектра, таких как ингибиторы, описанные в настоящем изобретении, и/или применения более селективного ингибирующего средства может применяться для идентификации протеазы, которая является специфичной в отношении CM активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления присутствие мишени может быть подтверждено с применением средства, которое является специфичным в отношении мишени, например, другого антитела, или детектируемая метка может конкурировать с немеченой мишенью. В некоторых вариантах осуществления может применяться немеченое активируемое антитело с детектированием посредством меченого вторичного антитела или более сложной системы детектирования.
Подобные методики также могут применяться для in vivo визуализации, где обнаружение флуоресцентного сигнала у субъекта, например млекопитающего, в том числе человека, указывает, что пораженный участок содержит мишень и содержит протеазу, которая является специфичной в отношении CM активируемого антитела.
Такие методики также могут применяться в наборах и/или в качестве реактивов для обнаружения, идентификации или исследования протеазной активности во множестве клеток, тканей и организмов на основе протеаза-специфичной CM в активируемом антителе.
В настоящем описании предложены способы применения антител и/или активируемых антител в различных диагностических и/или профилактических показаниях. Например, в настоящем описании предложены способы обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства и представляющей интерес мишени у субъекта или в образце посредством: (i) контакта субъекта или образца с активируемым антителом, где активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, например протеазой, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает представляющую интерес мишень, где активируемое антитело в нерасщепленном, неактивированном состоянии включает следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-CM-AB или AB-CM-MM; (a) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию и не является модифицированной формой природного партнера AB по связыванию; и (b) где в нерасщепленном, неактивированном состоянии MM препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, а в расщепленном, активированном состоянии MM не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью; и (ii) измерения уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство и мишень присутствуют у субъекта или в образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство, мишень или расщепляющее средство и мишень отсутствуют и/или присутствуют в недостаточном количестве у субъекта или в образце. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуще- 139 043582 ствления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела у субъекта или в образце выполняют при использовании вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления вторичный реагент является антителом, включающим детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены способы обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства у субъекта или в образце посредством: (i) контакта субъекта или образца с активируемым антителом в присутствии представляющей интерес мишени, например, мишени, где активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, например протеазой, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает представляющую интерес мишень, где активируемое антитело в нерасщепленном, неактивированном состоянии включает следующую структуру, от N-конца к С-концу: MMCM-AB или AB-CM-MM; (a) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию и не является модифицированной формой природного партнера AB по связыванию; и (b) где в нерасщепленном, неактивированном состоянии MM препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, а в расщепленном, активированном состоянии MM не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью; и (ii) измерения уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство присутствует у субъекта или в образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство отсутствует и/или присутствует в недостаточном количестве у субъекта или в образце. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела у субъекта или в образце выполняют при использовании вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления вторичный реагент является антителом, включающим детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены наборы для применения в способах обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства и мишени у субъекта или в образце, где наборы включают, по меньшей мере, активируемое антитело, которое включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, например протеазой, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает представляющую интерес мишень, где активируемое антитело в нерасщепленном, неактивированном состоянии включает следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-CM-AB или AB-CM-MM; (a) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию и не является модифицированной формой природного партнера AB по связыванию; и (b) где в нерасщепленном, неактивированном состоянии MM препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, а в расщепленном, активированном состоянии MM не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью; и (ii) измерение уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство присутствует у субъекта или в образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство отсутствует и/или присутствует в недостаточном количестве у субъекта или в образце. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела у субъекта или в образце выполняют при использовании вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления вторичный реагент является антителом, включающим детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены способы обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства у субъекта или в образце посредством: (i) контакта субъекта или образца с активируемым антителом, где активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, например протеазой, антигенсвязывающий домен (AB), который специфично связывает мишень, и детектируемую метку, где активируемое антитело в нерасщепленном, неактивированном состоянии включает следующую структуру, от N-конца к С- 140 043582 концу: MM-CM-AB или AB-CM-MM; где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию и не является модифицированной формой природного партнера AB по связыванию; где в нерасщепленном, неактивированном состоянии MM препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, а в расщепленном, активированном состоянии MM не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью; и где детектируемая метка помещена на часть активируемого антитела, которая высвобождается после расщепления CM; и (ii) измерения уровня поддающейся обнаружению метки у субъекта или в образце, где поддающийся обнаружению уровень поддающейся обнаружению метки у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство отсутствует и/или присутствует в недостаточном количестве у субъекта или в образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня поддающейся обнаружению метки у субъекта или в образце указывает, что расщепляющее средство присутствует у субъекта или в образце. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела у субъекта или в образце выполняют при использовании вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления вторичный реагент является антителом, включающим детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены наборы для применения в способах обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства и мишени у субъекта или в образце, где наборы включают, по меньшей мере, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело (например, активируемое антитело, с которым конъюгировано терапевтическое средство), описанное в настоящем изобретении, для применения в контакте с субъектом или биологическим образцом, и средства для обнаружения уровня активированного активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство и мишень присутствуют у субъекта или в биологическом образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство, мишень или расщепляющее средство и мишень отсутствуют и/или присутствуют в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце, в результате чего связывание мишени и/или расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце.
В настоящем описании также предложены способы обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства у субъекта или в образце посредством: (i) контакта субъекта или биологического образца с активируемым антителом в присутствии мишени и (ii) измерения уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство присутствует у субъекта или в биологическом образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство отсутствует и/или присутствует в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце на поддающемся обнаружению уровне, в результате чего расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце. Такое активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, например протеазой, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает мишень, где активируемое антитело в нерасщепленном (т.е. неактивированном) состоянии включает следующую структуру, от N-конца к Сконцу: MM-CM-AB или AB-CM-MM; (a) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию; и (b) где MM активируемого антитела в нерасщепленном состоянии препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, и где MM активируемого антитела в расщепленном (т.е. активированном) состоянии не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка присоединена к маскирующей части. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка присоединена к расщепляемой части на N-конце относительно сайта расщепления протеазой. В некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий участок AB маскирован. В некоторых вариантах осуществления, в которых антитело согласно настоящему описанию имеет по меньшей мере два антигенсвязывающих участка, по меньшей мере один антигенсвязывающий участок маскирован, и по меньшей мере один антигенсвязывающий участок не маскирован. В некоторых вариантах осуществления
- 141 043582 маскированы все антигенсвязывающие участки. В некоторых вариантах осуществления этап измерения включает применение вторичного реагента, включающего детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены наборы для применения в способах обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства и мишени у субъекта или в образце, где наборы включают, по меньшей мере, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении, для применения в контакте субъекта или биологического образца с активируемым антителом в присутствии мишени и измерения уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство присутствует у субъекта или в биологическом образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство отсутствует и/или присутствует в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце на поддающемся обнаружению уровне, в результате чего расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце. Такое активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, например протеазой, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает мишень, где активируемое антитело в нерасщепленном (т.е. неактивированном) состоянии включает следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-CM-AB или ABCM-MM; (a) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию; и (b) где MM активируемого антитела в нерасщепленном состоянии препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, и где MM активируемого антитела в расщепленном (т.е. активированном) состоянии не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка присоединена к маскирующей части. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка присоединена к расщепляемой части на N-конце относительно сайта расщепления протеазой. В некоторых вариантах осуществления один антигенсвязывающий участок AB маскирован. В некоторых вариантах осуществления, в которых антитело согласно настоящему описанию имеет по меньшей мере два антигенсвязывающих участка, по меньшей мере один антигенсвязывающий участок маскирован, и по меньшей мере один антигенсвязывающий участок не маскирован. В некоторых вариантах осуществления маскированы все антигенсвязывающие участки. В некоторых вариантах осуществления этап измерения включает применение вторичного реагента, включающего детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены наборы для применения в способах обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства у субъекта или в образце, где наборы включают, по меньшей мере, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении, для применения в контакте с субъектом или биологическим образцом, и средства для обнаружения уровня активированного активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце, где активируемое антитело включает детектируемую метку, которая помещена на часть активируемого антитела, которая высвобождается после расщепления CM, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство отсутствует и/или присутствует в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце, в результате чего связывание мишени и/или расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце, и где отсутствие поддающегося обнаружению уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство присутствует у субъекта или в биологическом образце на поддающемся обнаружению уровне.
В настоящем описании предложены способы обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства и мишени у субъекта или в образце посредством: (i) контакта субъекта или биологического образца с активируемым антителом, где активируемое антитело включает детектируемую метку, которая помещена на часть активируемого антитела, которая высвобождается после расщепления CM, и (ii) измерения уровня активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство, мишень или расщепляющее средство и мишень отсутствуют и/или присутствуют в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце, в результате чего связывание мишени и/или расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце, и где сниженный поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство и мишень присутствуют у субъекта или в биологическом образце. Сниженный уровень поддающейся обнаружению метки является, например, снижением на приблизительно 5%, на приблизительно 10%, на приблизительно 15%, на приблизительно 20%%, на приблизи- 142 043582 тельно 25%, на приблизительно 30%, на приблизительно 35%, на приблизительно 40%, на приблизительно 45%, на приблизительно 50%%, на приблизительно 55%, на приблизительно 60%, на приблизительно 65%, на приблизительно 70%, на приблизительно 75%, на приблизительно 80%, на приблизительно 85%, на приблизительно 90%, на приблизительно 95% и/или на приблизительно 100%. Такое активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает мишень, где активируемое антитело в нерасщепленном (т.е. неактивированном) состоянии включает следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-CM-AB или AB-CM-MM; (a) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию; и (b) где MM активируемого антитела в нерасщепленном состоянии препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, и где MM активируемого антитела в расщепленном (т.е. активированном) состоянии не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела у субъекта или в образце выполняют при использовании вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления вторичный реагент является антителом, включающим детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены наборы для применения в способах обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства и мишени у субъекта или в образце, где наборы включают, по меньшей мере, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении, для применения в контакте с субъектом или биологическим образцом, и средства для обнаружения уровня активированного активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце, где поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство, мишень или расщепляющее средство и мишень отсутствуют и/или присутствуют в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце, в результате чего связывание мишени и/или расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце, и где сниженный поддающийся обнаружению уровень активированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство и мишень присутствуют у субъекта или в биологическом образце. Сниженный уровень поддающейся обнаружению метки является, например, снижением на приблизительно 5%, на приблизительно 10%, на приблизительно 15%, на приблизительно 20%, на приблизительно 25%, на приблизительно 30%, на приблизительно 35%, на приблизительно 40%, на приблизительно 45%, на приблизительно 50%, на приблизительно 55%, на приблизительно 60%, на приблизительно 65%, на приблизительно 70%, на приблизительно 75%, на приблизительно 80%, на приблизительно 85%, на приблизительно 90%, на приблизительно 95% и/или на приблизительно 100%.
В настоящем описании также предложены способы обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства у субъекта или в образце посредством:
(i) контакта субъекта или биологического образца с активируемым антителом, где активируемое антитело включает детектируемую метку, которая помещена на часть активируемого антитела, которая высвобождается после расщепления CM; и (ii) измерения уровня поддающейся обнаружению метки у субъекта или в биологическом образце, где поддающийся обнаружению уровень поддающейся обнаружению метки у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство отсутствует и/или присутствует в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце на поддающемся обнаружению уровне, в результате чего расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце, и где сниженный поддающийся обнаружению уровень поддающейся обнаружению метки у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство присутствует у субъекта или в биологическом образце.
Сниженный уровень поддающейся обнаружению метки является, например, снижением на приблизительно 5%, на приблизительно 10%, на приблизительно 15%, на приблизительно 20%, на приблизительно 25%, на приблизительно 30%, на приблизительно 35%, на приблизительно 40%, на приблизительно 45%, на приблизительно 50%, на приблизительно 55%, на приблизительно 60%, на приблизительно 65%, на приблизительно 70%, на приблизительно 75%, на приблизительно 80%, на приблизительно 85%, на приблизительно 90%, на приблизительно 95% и/или на приблизительно 100%. Такое активируемое антитело включает маскирующую часть (MM), расщепляемую часть (CM), которая расщепляется расщепляющим средством, и антигенсвязывающий домен или его фрагмент (AB), который специфично связывает мишень, где активируемое антитело в нерасщепленном (т.е. неактивированном) состоянии включает
- 143 043582 следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-CM-AB или AB-CM-MM; (а) где MM является пептидом, который ингибирует связывание AB с мишенью, и где MM не имеет аминокислотной последовательности природного партнера AB по связыванию; и (b) где MM активируемого антитела в нерасщепленном состоянии препятствует специфичному связыванию AB с мишенью, и где MM активируемого антитела в расщепленном (т.е. активированном) состоянии не препятствует или не конкурирует со специфичным связыванием AB с мишенью. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела у субъекта или в образце выполняют при использовании вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления вторичным реагентом является антитело, включающее детектируемую метку.
В настоящем описании также предложены наборы для применения в способах обнаружения присутствия или отсутствия представляющего интерес расщепляющего средства у субъекта или в образце, где наборы включают, по меньшей мере, активируемое антитело и/или конъюгированное активируемое антитело, описанное в настоящем изобретении, для применения в контакте с субъектом или биологическим образцом, и средства для обнаружения уровня активированного активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела у субъекта или в биологическом образце, где активируемое антитело включает детектируемую метку, которая помещена на часть активируемого антитела, которая высвобождается после расщепления CM, где поддающийся обнаружению уровень поддающейся обнаружению метки у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство, мишень или расщепляющее средство и мишень отсутствуют и/или присутствуют в недостаточном количестве у субъекта или в биологическом образце, в результате чего связывание мишени и/или расщепление протеазой активируемого антитела невозможно обнаружить у субъекта или в биологическом образце, и где сниженный поддающийся обнаружению уровень поддающейся обнаружению метки у субъекта или в биологическом образце указывает, что расщепляющее средство и мишень присутствуют у субъекта или в биологическом образце. Сниженный уровень поддающейся обнаружению метки является, например, снижением на приблизительно 5%, на приблизительно 10%, на приблизительно 15%, на приблизительно 20%, на приблизительно 25%, на приблизительно 30%, на приблизительно 35%, на приблизительно 40%, на приблизительно 45%, на приблизительно 50%, на приблизительно 55%, на приблизительно 60%, на приблизительно 65%, на приблизительно 70%, на приблизительно 75%, на приблизительно 80%, на приблизительно 85%, на приблизительно 90%, на приблизительно 95% и/или на приблизительно 100%.
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов детектируемая метка включает визуализирующее средство, контрастирующее средство, фермент, флуоресцентную метку, хромофор, краситель, ионы одного или более металлов или метку на основе лиганда. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов визуализирующее средство включает радиоизотоп. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов радиоизотопом является индий или технеций. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов контрастирующее средство включает иод, гадолиний или оксид железа. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов фермент включает пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу или р-галактозидазу. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов флуоресцентная метка включает желтый флуоресцентный белок (YFP), сине-зеленый флуоресцентный белок (CFP), зеленый флуоресцентный белок (GFP), модифицированный красный флуоресцентный белок (mRFP), красный флуоресцентный белок tdimer2 (RFP tdimer2), HCRED или производное европия. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов люминесцентная метка включает производное Nметилакридиния. В некоторых вариантах осуществления указанных способов метка включает метку Alexa Fluor®, такую как Alex Fluor® 680 или Alexa Fluor® 750. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов метка на основе лиганда включает биотин, авидин, стрептавидин или один или более гаптенов.
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов субъект является млекопитающим. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов субъект является человеком. В некоторых вариантах осуществления субъект является не относящимся к человеку млекопитающим, таким как не относящийся к человеку примат, домашнее животное (например, кошка, собака, лошадь), сельскохозяйственное животное, рабочее животное или животное зоопарка. В некоторых вариантах осуществления субъект является грызуном.
В некоторых вариантах осуществления указанных способов способ является способом in vivo. В некоторых вариантах осуществления указанных способов способ является способом in situ. В некоторых вариантах осуществления указанных способов способ является способом ex vivo. В некоторых вариантах осуществления указанных способов способ является способом in vitro.
- 144 043582
В некоторых вариантах осуществления визуализация in situ и/или визуализация in vivo могут применяться в способах определения, каких больных требуется лечить. Например, при визуализации in situ, активируемые антитела применяют для скрининга образцов больных с целью определения больных, имеющих соответствующую протеазу(ы) и мишень(и) в соответствующем местоположении, например, в области опухоли.
В некоторых вариантах осуществления визуализация in situ применяется для определения или иного уточнения совокупности больных, подходящих для лечения активируемым антителом согласно настоящему описанию. Например, больных, которые показывают положительный результат анализа на мишень (например, мишень) и протеазу, которая расщепляет субстрат по расщепляемой части (CM) тестируемого активируемого антитела (например, активированные антитела накапливаются в пораженном участке), идентифицируют как подходящих кандидатов для лечения таким активируемым антителом, включающим такую СМ. Аналогичным образом, больных, которые показывают отрицательный результат анализа на мишень (например, мишень) и/или протеазу, которая расщепляет субстрат в CM в активируемом антителе, тестируемом с применением таких способов, можно идентифицировать как подходящих кандидатов для другой формы терапии. В некоторых вариантах осуществления таких больных, которые показывают отрицательный результат в отношении первого активируемого антитела, можно тестировать с другими активируемыми антителами, включающими разные CM, пока не будет идентифицировано подходящее активируемое антитело для лечения (например, активируемое антитело, включающее CM, которая расщепляется в организме больного в пораженном участке). В некоторых вариантах осуществления больному затем вводят терапевтически эффективное количество активируемого антитела, в отношении которого больной показал положительный результат.
В некоторых вариантах осуществления визуализация in vivo применяется для определения или иного уточнения совокупности больных, подходящих для лечения активируемым антителом согласно настоящему описанию. Например, больных, которые показывают положительный результат на мишень (например, мишень) и протеазу, которая расщепляет субстрат по расщепляемой части (CM) тестируемого активируемого антитела (например, активированные антитела накапливаются в пораженном участке), идентифицируют как подходящих кандидатов для лечения таким активируемым антителом, включающим такую СМ. Аналогичным образом, больные, которые показывают отрицательный результат, могут быть идентифицированы как подходящие кандидаты для другой формы терапии. В некоторых вариантах осуществления таких больных, которые показывают отрицательный результат в отношении первого активируемого антитела, можно тестировать с другими активируемыми антителами, включающими разные CM, пока не будет идентифицировано подходящее активируемое антитело для лечения (например, активируемое антитело, включающее CM, которая расщепляется в организме больного в пораженном участке). В некоторых вариантах осуществления больному затем вводят терапевтически эффективное количество активируемого антитела, в отношении которого больной показал положительный результат.
В некоторых вариантах осуществления способов и наборов, способы или наборы применяются для определения или иного уточнения совокупности больных, подходящих для лечения активируемым антителом согласно настоящему описанию. Например, больных, которые показывают положительный результат на мишень (например, мишень) и протеазу, которая расщепляет субстрат в расщепляемой части (CM) активируемого антитела, тестируемого в данных способах, идентифицируют как подходящих кандидатов для лечения таким активируемым антителом, включающим такую СМ. Аналогичным образом, больных, которые показывают отрицательный результат на мишень (например, мишень) и протеазу, которая расщепляет субстрат в CM в активируемом антителе, тестируемом с применением таких способов, можно идентифицировать как подходящих кандидатов для другой формы терапии. В некоторых вариантах осуществления таких больных можно тестировать с другими активируемыми антителами, пока не будет определено подходящее активируемое антитело для лечения (например, активируемое антитело, включающее CM, которая расщепляется в организме больного в пораженном участке). В некоторых вариантах осуществления больных, которые показывают отрицательный результат на какую-либо мишень (например, мишень), идентифицируют как подходящих кандидатов для лечения таким активируемым антителом, включающим такую СМ. В некоторых вариантах осуществления больных, которые показывают отрицательный результат на какую-либо мишень (например, мишень), идентифицируют как неподходящих кандидатов для лечения таким активируемым антителом, включающим такую СМ. В некоторых вариантах осуществления таких больных можно тестировать с другими активируемыми антителами, пока не будет определено подходящее активируемое антитело для лечения (например, активируемое антитело, включающее CM, которая расщепляется в организме больного в пораженном участке). В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело является активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не конъюгировано со средством. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка помещена на AB. В некоторых вариантах осуществления измерение уровня активируемого антитела у субъекта или в образце выполняют при использовании вторичного реагента, который специфично связывается с активированным антителом, где реагент включает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления
- 145 043582 вторичный реагент является антителом, включающим детектируемую метку.
В некоторых вариантах осуществления способ или набор применяются для определения или иного уточнения совокупности больных, подходящих для лечения активируемым антителом против мишени и/или конъюгированным активируемым антителом (например, активируемым антителом, с которым конъюгировано терапевтическое средство) согласно настоящему описанию, с последующим лечением путем введения активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела нуждающемуся в этом субъекту. Например, больных, которые показывают положительный результат на мишень (например, мишень) и протеазу, которая расщепляет субстрат в расщепляемой части (CM) активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела, тестируемого в данных способах, идентифицируют как подходящих кандидатов для лечения таким антителом и/или таким конъюгированным активируемым антителом, включающим такую CM, и затем больному вводят терапевтически эффективное количество активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела, которое тестировали. Аналогичным образом, больные, которые показывают отрицательный результат на мишень (например, мишень) и/или протеазу, которая расщепляет субстрат в CM в активируемом антителе, тестируемом с применением таких способов, могут быть идентифицированы как подходящие кандидаты для другой формы терапии. В некоторых вариантах осуществления таких больных можно тестировать с другим антителом и/или конъюгированным активируемым антителом до определения подходящего антитела и/или конъюгированного активируемого антитела для лечения (например, активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела, включающего CM, которая расщепляется в организме больного в пораженном участке). В некоторых вариантах осуществления больному затем вводят терапевтически эффективное количество активируемого антитела и/или конъюгированного активируемого антитела, в отношении которого больной показал положительный результат.
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов, MM является пептидом, имеющим длину от приблизительно 4 до 40 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов активируемое антитело включает линкерный пептид, где линкерный пептид расположен между MM и СМ. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов активируемое антитело включает линкерный пептид, где линкерный пептид расположен между AB и СМ. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов активируемое антитело включает первый линкерный пептид (L1) и второй линкерный пептид (L2), где первый линкерный пептид расположен между MM и CM, а второй линкерный пептид расположен между AB и СМ. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов каждый из L1 и L2 является пептидом длиной приблизительно 1-20 аминокислот, и где каждый из L1 и L2 не должен обязательно быть одним и тем же линкером. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов один или оба L1 и L2 включают глицин-сериновый полимер. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов по меньшей мере один из L1 и L2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (GS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 363) и (GGGS)n (SEQ ID NO: 364), где n является целым числом, равным по меньшей мере единице. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов по меньшей мере один из L1 и L2 включает аминокислотную последовательность, имеющую формулу (GGS)n, где n является целым числом, равным по меньшей мере единице. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов по меньшей мере один из L1 и L2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGSG (SEQ ID NO: 365), GGSGG (SEQ ID NO: 366), GSGSG (SEQ ID NO: 367), GSGGG (SEQ ID NO: 368), GGGSG (SEQ ID NO: 369) и GSSSG (SEQ ID NO: 370).
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов, AB включает последовательность антитела или фрагмента антитела, выбранную из перекрестно-реактивных последовательностей антител, представленных в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов, AB включает Fab-фрагмент, scFv или одноцепочечное антитело (scAb).
В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов расщепляющее средство является протеазой, которая колокализована у субъекта или в образце с мишенью, и CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы, где протеаза расщепляет CM в активируемом антителе, когда активируемое антитело подвергается воздействию протеазы. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов, CM является полипептидом длиной до 15 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов, CM соединена с Nконцом AB. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов, CM соединена с Сконцом AB. В некоторых вариантах осуществления указанных способов и наборов, CM соединена с Nконцом VL цепи AB.
Антитела и/или активируемые антитела согласно настоящему описанию применяются в диагностических и профилактических лекарственных формах. В одном варианте осуществления активируемое антитело вводят пациентам, которые подвергаются риску развития одного или более из вышеуказанных воспаления, воспалительных нарушений, рака или других нарушений.
Предрасположенность пациента или органа к одному или более вышеуказанным нарушениям может быть определена при использовании генотипических, серологических или биохимических маркеров.
- 146 043582
В некоторых вариантах осуществления согласно настоящему описанию, антитела и/или активируемые антитела вводят людям с диагностированным клиническим показанием, связанным с одним или более вышеуказанными нарушениями. После диагностики антитело и/или активируемое антитело вводят для уменьшения тяжести или устранения эффектов клинического показания.
Антитела и/или активируемые антитела согласно настоящему описанию также могут применяться при обнаружении мишени в образцах больных и, соответственно, могут применяться в качестве диагностических средств. Например, антитела и/или активируемые антитела согласно настоящему описанию применяются в анализах in vitro, например ELISA, для определения уровней мишени в образце больного.
В некоторых вариантах осуществления антитела против PDL1 применяются в качестве диагностического средства у больных, которые с более высокой вероятностью будут благоприятно отвечать на лечение антителом против PD-1 и/или активируемым антителом согласно настоящему описанию. В таких вариантах осуществления экспрессию PD-L1 в биоптатах опухоли на опухолевых клетках и инфильтрирующих иммунных клетках и экспрессию PD-L1 на иммунных клетках в крови используют для определения присутствия активного иммунитета и, таким образом, потенциала для супрессии активности Тклеток в результате связывания PD-1 с PD-L1.
В одном варианте осуществления антитело и/или активируемое антитело согласно настоящему описанию иммобилизованы на твердой подложке (например, лунке(ах) микротитровального планшета). Иммобилизованное антитело и/или активируемое антитело служат в качестве захватывающего антитела для любой мишени, которая может присутствовать в исследуемом образце. Перед контактом иммобилизованного антитела и/или активируемого антитела с образцом больного твердую подложку промывают и обрабатывают блокирующим реагентом, таким как молочный белок или альбумин, для предотвращения неспецифичной адсорбции аналита.
Затем лунки обрабатывают тестируемым образцом, подозреваемым на содержание антигена, или раствором, содержащим стандартное количество антигена. Такой образец является, например, образцом сыворотки субъекта, подозреваемого на наличие уровней циркулирующего антигена, которые считают диагностическим критерием наличия патологии. После удаления тестируемого образца или стандарта при промывке, твердую подложку обрабатывают вторым антителом, которое помечено с возможностью детектирования. Меченое второе антитело служит в качестве детектирующего антитела. Уровень детектируемой метки измеряют и определяют концентрацию антигена-мишени в тестируемом образце при сравнении с калибровочной кривой, полученной на основе стандартных образцов.
Следует понимать, что на основе результатов, полученных с применением антител и/или активируемых антител согласно настоящему описанию в диагностическом тесте in vitro, можно определить стадию заболевания у субъекта по уровням экспрессии антигена-мишени. Для данного заболевания образцы крови забирают у субъектов с диагностированными различными стадиями прогрессирования заболевания и/или в различных моментах при терапевтическом лечении заболевания. При использовании совокупности образцов, которые дают статистически значимые результаты для каждой стадии прогрессирования или терапии, определяют диапазон концентраций антигена, который можно считать характерным для каждой стадии.
Антитела, конъюгированные антитела, активируемые антитела и/или конъюгированные активируемые антитела также могут применяться в диагностических и/или визуализационных способах. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами in vitro. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами in vivo. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами in situ. В некоторых вариантах осуществления такие способы являются способами ex vivo. Например, активируемые антитела, содержащие ферментативно расщепляемую CM, могут применяться для обнаружения присутствия или отсутствия фермента, который способен расщеплять СМ. Такие активируемые антитела могут применяться в диагностике, которая может включать in vivo обнаружение (например, качественное или количественное) ферментной активности (или, в некоторых вариантах осуществления, окружения с повышенным восстановительным потенциалом, таким как восстановительный потенциал, который может обеспечить восстановление дисульфидной связи) посредством измеряемого накопления активированных антител (т.е. антител, образующихся в результате расщепления активируемого антитела) в данной клетке или ткани данного организма-хозяина. Такое накопление активированных антител указывает не только на то, что ткань экспрессирует ферментативную активность (или повышенный восстановительный потенциал в зависимости от природы CM), но также и на то, что ткань экспрессирует мишень, с которой связывается активированное антитело.
Например, CM может быть выбрана в качестве субстрата протеазы, присутствующей на участке опухоли, на участке вирусной или бактериальной инфекции в биологически ограниченном участке (например, таком как в абсцессе, в органе и т.п.) и т.п. AB может быть таким, которое связывает антигенмишень. С применением способов, известных специалисту в данной области, детектируемая метка (например, флуоресцентная метка или радиоактивная метка, или радиоактивный индикатор) могут быть конъюгированы с AB или другой областью активируемого антитела. Подходящие детектируемые метки обсуждаются в контексте вышеуказанных способов скрининга, при этом дополнительные определенные примеры приведены ниже. При использовании AB, специфичного к белку или пептиду патологического
- 147 043582 состояния, вместе с по меньшей мере одной протеазой, активность которой повышена в представляющей интерес пораженной ткани, активируемые антитела продемонстрируют увеличенный уровень связывания с пораженной тканью по сравнению с тканями, в которых СМ-специфичный фермент отсутствует на поддающемся обнаружению уровне или присутствует на более низком уровне, чем в пораженной ткани, или неактивен (например, находится в форме профермента или в комплексе с ингибитором). Поскольку небольшие белки и пептиды быстро выводятся из крови системой почечной фильтрации, и поскольку фермент, специфичный к CM, отсутствует на поддающемся обнаружению уровне (или присутствует на более низких уровнях в нормальных тканях, или присутствует в неактивной конформации), накопление активированных антител в пораженной ткани повышено по сравнению с нормальными тканями.
В другом примере активируемые антитела могут применяться для обнаружения присутствия или отсутствия расщепляющего средства в образце. Например, в случае, когда активируемые антитела содержат CM, подверженную расщеплению ферментом, активируемые антитела могут применяться для обнаружения (качественного или количественного) присутствия фермента в образце. В другом примере, когда активируемые антитела содержат CM, подверженную расщеплению восстановителем, активируемые антитела могут применяться для обнаружения (качественного или количественного) присутствия в образце восстанавливающих условий. Для облегчения анализа в данных способах, активируемые антитела могут быть помечены с возможностью детектирования и могут быть связаны с подложкой (например, твердой подложкой, такой как стекло или сфера). Детектируемая метка может быть расположена на части активируемого антитела, которая не высвобождается после расщепления, например, детектируемая метка может быть меткой с тушением флуоресценции или другой меткой, которая не поддается обнаружению, пока не произошло расщепление. Анализ может быть проведен, например, при контакте иммобилизованных, меченных с возможностью обнаружения активируемых антител с образцом, подозреваемым на содержание фермента и/или восстановителя, в течение времени, достаточного для того, чтобы произошло расщепление, с последующей промывкой для удаления избытка образца и примесей. Присутствие или отсутствие расщепляющего средства (например, фермента или восстановителя) в образце затем оценивают по изменению детектируемого сигнала активируемых антител перед контактом с образцом, например, присутствию и/или увеличению детектируемого сигнала вследствие расщепления активируемого антитела расщепляющим средством в образце.
Такие способы обнаружения могут быть также адаптированы, чтобы обеспечивать обнаружение присутствия или отсутствия мишени, которая способна к связыванию AB активируемых антител в расщепленном состоянии. Таким образом, анализы могут быть адаптированы для оценки присутствия или отсутствия расщепляющего средства и присутствия или отсутствия представляющей интерес мишени. Присутствие или отсутствие расщепляющего средства может быть обнаружено по присутствию и/или увеличению детектируемой метки активируемых антител, как описано выше, и присутствие или отсутствие мишени может быть обнаружено при обнаружении комплекса мишень-AB, например, при помощи антитела против мишени, меченного с возможностью обнаружения.
Активируемые антитела также могут применяться при визуализации in situ для подтверждения активации активируемого антитела, например, при расщеплении протеазой, и связывания с конкретной мишенью. Визуализация in situ является методикой, которая позволяет устанавливать локализацию протеолитической активности и мишени в биологических образцах, таких как культуры клеток или срезы тканей. При помощи указанной методики можно подтверждать как связывание с данной мишенью, так и протеолитическую активность по присутствию детектируемой метки (например, флуоресцентной метки).
Такие методики могут применяться с любыми замороженными клетками или тканью, полученной из пораженного участка (например, опухолевой ткани) или нормальных тканей. Такие методики также могут применяться с недавно полученными образцами клеток или тканей.
В таких методиках активируемое антитело помечено детектируемой меткой. Детектируемая метка может быть флуоресцентным красителем (например, флуоресцеин-изотиоцианатом (ФИТЦ), родаминизотиоцианатом (ТРИТЦ)), поглощающим в ближней инфракрасной (БИК) области красителем (например, нанокристаллами Qdot®), коллоидным металлом, гаптеном, радиоактивным маркером, биотином и усиливающим реагентом, таким как стрептавидин, или ферментом (например, пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой).
Обнаружение метки в образце, который инкубировали с меченым активируемым антителом, указывает, что образец содержит мишень и содержит протеазу, которая специфична в отношении CM активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления присутствие протеазы может быть подтверждено при использовании ингибиторов протеаз широкого спектра, таких как ингибиторы, описанные в настоящем изобретении, и/или при помощи средства, которое является специфичным в отношении протеазы, например, антитела, такого как All, которое является специфичным в отношении протеазы матриптазы и ингибирует протеолитическую активность матриптазы; см., например, международную публикацию WO 2010/129609, опубликованную 11 ноября 2010 года. Такой же метод применения ингибиторов протеаз широкого спектра, таких как ингибиторы, описанные в настоящем изобретении, и/или применения более селективного ингибирующего средства может применяться для идентификации протеазы или класса протеаз, которые являются специфичными в отношении CM активируемого антитела. В неко- 148 043582 торых вариантах осуществления присутствие мишени может быть подтверждено с применением средства, которое является специфичным в отношении мишени, например, другого антитела, или детектируемая метка может конкурировать с немеченой мишенью. В некоторых вариантах осуществления может применяться немеченое активируемое антитело с детектированием посредством меченого вторичного антитела или более сложной системы детектирования.
Подобные методики также могут применяться для in vivo визуализации, где обнаружение флуоресцентного сигнала у субъекта, например млекопитающего, в том числе человека, указывает, что пораженный участок содержит мишень и содержит протеазу, которая является специфичной в отношении CM активируемого антитела.
Такие методики также могут применяться в наборах и/или в качестве реактивов для обнаружения, идентификации или исследования протеазной активности во множестве клеток, тканей и организмов на основе протеаза-специфичной CM в активируемом антителе.
В некоторых вариантах осуществления визуализация in situ и/или визуализация in vivo может применяться в способах идентификации пациентов, которых требуется лечить. Например, при визуализации in situ, активируемые антитела применяются для скрининга образцов пациентов, чтобы идентифицировать пациентов, имеющих соответствующую протеазу(ы) и мишень(и) в соответствующем местоположении, например, в области опухоли.
В некоторых вариантах осуществления визуализация in situ применяется для определения или иного уточнения совокупности больных, подходящих для лечения активируемым антителом согласно настоящему описанию. Например, больных, которые показывают положительный результат на мишень и протеазу, которая расщепляет субстрат в расщепляемой части (CM) тестируемого активируемого антитела (например, активированные антитела накапливаются в пораженном участке), идентифицируют как подходящих кандидатов для лечения таким активируемым антителом, включающим такую СМ. Аналогичным образом, больных, которые показывают отрицательный результат на мишень и/или протеазу, которая расщепляет субстрат в CM в активируемом антителе, тестируемом с применением таких способов, идентифицируют как подходящих кандидатов для другой формы терапии (т.е. не подходящих для лечения тестируемым активируемым антителом). В некоторых вариантах осуществления таких больных, которые показывают отрицательный результат в отношении первого активируемого антитела, можно тестировать с другими активируемыми антителами, включающими разные CM, пока не будет определено подходящее активируемое антитело для лечения (например, активируемое антитело, включающее CM, которая расщепляется в организме больного в пораженном участке).
В некоторых вариантах осуществления визуализация in vivo применяется для определения или иного уточнения совокупности больных, подходящих для лечения активируемым антителом согласно настоящему описанию. Например, больных, которые показывают положительный результат на мишень и протеазу, которая расщепляет субстрат в расщепляемой части (CM) тестируемого активируемого антитела (например, активированные антитела накапливаются в пораженном участке), идентифицируют как подходящих кандидатов для лечения таким активируемым антителом, включающим такую СМ. Аналогичным образом, больных, которые показывают отрицательный результат, идентифицируют как подходящих кандидатов для другой формы терапии (т.е. не подходящих для лечения тестируемым активируемым антителом). В некоторых вариантах осуществления таких больных, которые показывают отрицательный результат в отношении первого активируемого антитела, можно тестировать с другими активируемыми антителами, включающими разные CM, пока не будет определено подходящее активируемое антитело для лечения (например, активируемое антитело, включающее CM, которая расщепляется в организме больного в пораженном участке). Фармацевтические композиции антитела и/или активируемые антитела согласно настоящему описанию (также указанные в настоящем изобретении как активные соединения), и их производные, фрагменты, аналоги и гомологи могут быть включены в фармацевтические композиции, подходящие для введения. Такие композиции, как правило, включают антитело и/или активируемое антитело и фармацевтически приемлемый носитель. При использовании в настоящем описании предполагается, что термин фармацевтически приемлемый носитель включает любые возможные растворители, дисперсионные среды, покрытия, противобактериальные и противогрибковые средства, изотонические вещества и вещества, задерживающие абсорбцию, и т.п., совместимые с фармацевтическим применением. Подходящие носители описаны в новом выпуске Remington's Pharmaceutical Sciences, стандартного справочного текста в данной области, который включен в настоящую заявку посредством отсылки. Подходящие примеры таких носителей или разбавителей включают, без ограничения перечисленными, воду, раствор хлорида натрия, растворы Рингера, раствор декстрозы и 5% человеческий сувороточный альбумин. Также могут использоваться липосомы и неводные растворители, такие как нелетучие масла. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных веществ известно в уровне техники. За исключением тех случаев, когда стандартные среды или средство несовместимы с активным соединением, предусмотрено их применение в композициях. Дополнительные активные соединения также могут быть включены в композиции.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему описанию имеет такой состав, который соответствует ее предполагаемому пути введения. Примеры путей введения включают парентеральное, на- 149 043582 пример внутривенное, внутрикожное, подкожное, пероральное (например, ингаляцию), чрескожное (т.е. наружное), чресслизистое и ректальное введение. Растворы или суспензии, применяемые для парентерального, внутрикожного или подкожного применения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как воду для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; противобактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновую кислоту или бисульфит натрия; хелатообразующие вещества, такие как этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА); буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и вещества для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстрозу. Показатель pH можно регулировать кислотами или основаниями, такими как соляная кислота или гидроксид натрия. Препарат для парентерального применения может быть заключен в ампулы, шприцы для одноразового применения или многодозовые флаконы, изготовленные из стекла или пластмассы.
Фармацевтические композиции, подходящие для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы (при растворимости в воде) или дисперсии и стерильные порошки для экстемпорального приготовления стерильных растворов или дисперсии для инъекций. Для внутривенного введения подходящие носители включают физиологический раствор, бактериостатическую воду, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) или фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). Во всех случаях композиция должна быть стерильной и должна быть текучей до такой степени, чтобы присутствовала возможность легкого применения с помощью шприца. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения и должна быть предохранена от контаминирующего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль, и т.п.) и их подходящие смеси. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, при помощи покрытия, такого как лецитин, путем поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсии и при помощи поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных противобактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. В некоторых вариантах осуществления потребуется включение изотонических средств, например Сахаров, полиспиртов, таких как маннит, сорбит, хлорид натрия, в композиции. Пролонгированная абсорбция композиций для инъекций может быть получена при включении в композицию вещества, которое задерживает абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина.
Стерильные растворы для инъекций могут быть приготовлены путем включения действующего соединения в необходимом количестве в подходящий растворитель с одним или комбинацией компонентов, перечисленных выше, при необходимости, с последующей стерилизацией фильтрованием. Обычно дисперсии изготавливают путем включения действующего соединения в стерильный растворитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые компоненты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций способы изготовления включают вакуумную сушку и лиофильную сушку, которые позволяют получить порошок действующего вещества плюс любой дополнительный требуемый компонент из его предварительно простерилизованного фильтрованием раствора.
Композиции для перорального применения обычно включают инертный разбавитель или носитель для приема внутрь.
Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. Для перорального введения терапевтического средства действующее соединение может быть включено в состав с вспомогательными веществами и может применяться в форме таблеток, пастилок или капсул. Композиции для перорального применения также могут быть изготовлены при использовании текучего носителя для применения в качестве средства для полоскания рта, в котором соединение в текучем носителе применяют в полости рта и полощут и сплевывают или глотают. Фармацевтически совместимые связующие вещества и/или вспомогательные материалы могут быть включены в качестве части композиции. Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать любой из следующих компонентов или соединений аналогичного характера: связующее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакант или желатин; вспомогательное вещество, такое как крахмал или лактоза, разрыхлитель, такой как альгиновая кислота, примогель или кукурузный крахмал; смазывающее вещество, такое как стеарат магния или Sterotes; скользящее вещество, такое как коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или ароматизатор, такой как мята, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор.
Для ингаляционного применения соединения доставляют в форме аэрозольного спрея из контейнера под давлением или дозатора, который содержит подходящий пропеллент, например, газ, такой как углекислый газ, или небулайзера.
Системное введение также может быть проведено чресслизистым или чрескожным путями. В случае чресслизистого или чрескожного введения, в лекарственной форме используют способствующие проникновению вещества, которые соответствуют барьеру, через который требуется проникнуть. Такие
- 150 043582 способствующие проникновению вещества широко известны в уровне техники и включают, например для чресслизистого введения, детергенты, соли желчных кислот и производные фузидовой кислоты.
Чресслизистое введение может быть выполнено с помощью назальных спреев или суппозиториев. В случае чрескожного введения действующие соединения включают в состав мазей, бальзамов, гелей или кремов, как известно в уровне техники.
Соединения также могут быть изготовлены в форме суппозиториев (например, со стандартными суппозиторными основами, такими как масло какао и другие глицериды) или удерживаемых микроклизм для ректальной доставки.
В одном варианте осуществления действующие соединения приготавливают с носителями, которые защищают соединение от быстрого выведения из организма, например, в виде лекарственной формы с контролируемым высвобождением, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут применяться биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этилен-винилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы изготовления таких лекарственных форм будут очевидны специалистам. Материалы также могут быть получены коммерчески из Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомальные суспензии (включающие липосомы, направленно взаимодействующие с инфицированными клетками посредством моноклональных антител к вирусным антигенам) также могут применяться в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Они могут быть изготовлены согласно способам, известным специалистам в данной области, например, как описано в патенте США 4,522,811.
Наиболее предпочтительно изготавливать композиции для перорального или парентерального применения в стандартной лекарственной форме для удобства введения и единообразия дозирования. Стандартная лекарственная форма при использовании в настоящем изобретении относится к физически дискретным единицам, которым подходят в качестве однократных доз для субъекта, подлежащего лечению; каждая единица содержит заданное количество действующего соединения, вычисленное так, чтобы оно оказывало требуемое терапевтическое воздействие, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Требования для стандартных лекарственных форм согласно настоящему описанию продиктованы и непосредственно зависят от уникальных особенностей действующего соединения, а также конкретного терапевтического эффекта, который требуется достичь, и ограничений, характерных в области изготовления композиций такого действующего соединения для лечения людей.
Фармацевтические композиции могут быть включены в контейнер, упаковку или дозатор вместе с инструкциями по применению.
Далее изобретение будет описано в следующих примерах, которые не ограничивают объем изобретения, описанный в формуле изобретения.
Примеры
Пример 1. Создание мышиных антител согласно вариантам осуществления, которые связывают человеческий PD-1 и блокируют связывание hPD-L1 и hPD-L2 с человеческим PD-1.
В данном примере продемонстрировано, что мышиные антитела согласно настоящему описанию, которые связывают человеческий PD-1, могут быть выделены из гибридом, полученных при иммунизации мышей рекомбинантным человеческим белком PD-1, и что такое связывание может ингибировать связывание PD-1 с PDL1 и PDL2.
Шесть самок мышей NZBWF1/J (Jackson Laboratories, Sacramento, CA; кат. 100008) иммунизировали в правый бок рекомбинантным человеческим PD-1 (Sino Biological, Beijing, P.R. Chin; кат. ABIN2181605) в дни 0, 7 и 21. В день 28 у иммунизированных мышей забирали сыворотку и измеряли связывание с HEK293-hPD-1 (клетки, трансфицированные вектором экспрессии, кодирующим человеческий PD-1 (Origene, кат. SC117011)). Все шесть мышей показали положительное связывание. Спленоциты выделяли у мышей 1, 3 и 6 и подвергали слиянию с мышиными В-клетками SP0; аналогичным образом, спленоциты выделяли у мышей 2, 4 и 5 и подвергали слиянию с В-клетками мыши SP0, с получением пулов гибридом, m136 и m245. Пулы гибридом, m136 и m245, полученные в результате двух указанных слияний, сеяли с получением моноклональных культур и исследовали супернатанты клональных культур на антитела, способные к связыванию с клетками HEK293-hPD-1, но не с нетрансфицированными клетками HEK293. Клоны гибридом, экспрессирующие антитела против PD-1, отбирали для последующего анализа.
Последовательности антител, применяемых в исследованиях, представленных в настоящем изобретении, показаны ниже:
m136-М13-MHC723 mIgG1/K МНС723НС.1 Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVKLVE S GGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYAMSWVROTPAKRLEWVAYISNSGGNAH
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLOMSSLRSEDTAMYYCTREDYGTSPFVYWGOGTLVTVSA (SEQ ID NO: 1)
MHC723HC.1 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
- 151 043582
GAAGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAACCTGGAGGGTCCCTGAAACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGGCTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCG GCGAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCATACATTAGTAATAGTGGTGGTAACGCCCACTATCCAGACA GTGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTATACCTGCAAATGAG CAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTACTGTACAAGAGAGGACTACGGTACTAGTCCT TTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA (SEQ ID NO: 2)
MHC723LC.3 Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIVLTQS PAS LAVS LGQRT ТIS CRASESVDNYGISFMNWFQQKPGOPPKLLIYAASNQG
SGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAVYFCQQSKDVPWTFGGGTKLEIR (SEQ ID NO:
3)
MHC723LC.3 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATTGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTTGGGCAGAGGACCAC
CATCTCCTGCAGAGCCAGCGAAAGTGTTGATAATTATGGCATTAGTTTTATGAACTGGTTCCAA CAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATGCTGCATCCAACCAAGGATCCGGGGTCC CTGCCAGGTTTAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGCCTCAACATCCATCCTATGGAGGA GGATGATACTGCAGTGTATTTCTGTCAGCAAAGTAAGGACGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGC ACCAAGCTGGAAATCAGAC (SEQ ID NO: 4) ml36-M19 - МНС725 m!gG2b/K МНС725НС.2 Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVOLOOSGPELVKPGDSVKMSCKASGYTFTDYYMDWVKOSHGKSLEWIGYIYPKNGGSS
YNOKFKGKATLTVDKSSSTAYMELHSLTSEDSAVYYCARKWATDYWGOGTTLTVSS (SEQ ID NO: 5)
МНС725НС.2 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGATTCAGTGAAGAT GTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACATTCACTGACTACTACATGGACTGGGTGAAGCAGAGCCAT GGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTTATCCTAAAAATGGTGGTTCCAGCTACAATCAGA AGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCAGCACAGCCTACATGGAGCTCCA CAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAAAGGTCGTAGCTACGGACTAC TGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 6)
MHC725LC.2 Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIVMS QS PS S LAVSVGEKVTMS CKSSQSLLYSSNQKNYLAWYOOKPGOSPKLLIFWASI
RESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDRAVYYCOQCDSYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID
NO: 7)
MHC725LC.2 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATTGTGATGTCACAGTCTCCATCCTCCCTAGCTGTGTCAGTTGGAGAGAAGGTTAC TATGAGCTGCAAGTCCAGTCAGAGCCTTTTATATAGTAGCAATCAAAAGAACTACTTGGCCTGG TACCAGCAGAAACCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATTTTCTGGGCATCTATTAGGGAATCTG GGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTGT GAAGGCTGAAGACCGGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATGTGATAGCTATCCGTGGACGTTCGGT GGAGGCACCAAACTGGAAATCAAAC (SEQ ID NO: 8) m245-M3 - МНС728 m!gG2a/K МНС728НС.4 Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVKLVE S GGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVROTPAKRLEWVAYISNGGGDTH
YPDSLKGRFTVSRDNAKNTLYLOMSSLKSEDTAMYYCARENYGTSPFVYWGOGTLVTVSA (SEQ ID NO: 9)
МНС728НС.4 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAACCTGGAGGGTCCCTGAAACT
CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCG GCGAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCATACATTAGTAATGGTGGTGGTGACACCCACTATCCAGACA G Т Т ТAAAG G G С С GAT Т САС С G Т С Т С СAGAGACААТ G С СAAGAACАС С С Т G ТАС С ТАСАААТ GAG СAGТСТGAAGТСТGAGGACACGGССATGТАТТАСТGТGСAAGAGAAAACТACGGТАСТAGТССС TTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA (SEQ ID NO: 10)
MHC728LC.2 Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
- 152043582
DIVLTQS PAS LAVS LGQRATIS CRASESVDNYGISFMNWFOQKPGOPPKLLIYAASNQG SGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCOQSKDVPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 11)
MHC728LC.2 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATTGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCAGAGGGCCAC
CATCTCCTGCAGAGCCAGCGAAAGTGTTGATAATTATGGCATTAGTTTTATGAACTGGTTCCAA CAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATGCTGCATCCAACCAAGGATCCGGGGTCC CTGCCAGGTTTAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGCCTCAACATCCATCCTATGGAGGA GGATGATACTGCAATGTATTTCTGTCAGCAAAGTAAAGATGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGC ACCAAGCTGGAAATCAAAC (SEQ ID NO: 12) m245-М5 - MHC729 mIgG1/K MHC729HC.1 Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVQLVE S GGGLVKS GGSLKLSCAHSGFSFSSYDMSWVRQTPAKRLEWVATISGGGRYTY
YPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSGLRSEDTAMYYCASNYYGFDYWGOGTTLTVSS (SEQ
ID NO: 13)
MHC729HC.1 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGTCTGGAGGGTCCCTGAAACT
CTCCTGTGCGCATTCTGGATTCAGTTTTAGTAGTTATGACATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCG GCGAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGGTGGTGGTCGTTACACCTACTATCCAGACA GTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAG CGGTCTGAGGTCTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGTAATTACTACGGTTTTGACTAC TGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 14)
MHC729LC.3 Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIVMTOSHKFMSTSVGDRVSITCKASODVGTAVAWYOQKPGOSPKLLIYWASTRHTGVP
DRFTGSGSGTDFTLTISNVOSEDLADYFCOQYSSYPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 15)
MHC729LC.3 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GATATTGTGAT GAG С С AG Т С Т С АС АААТ Т С AT G Т С С АС АТ С AG TAG GAGAC AG G G Т С AG
CATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGGGTACTGCTGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGG CAATCTCCTAAACTACTGATTTACTGGGCATCCACCCGGCACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCA CGGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATTAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGC AGATTATTTCTGTCAGCAATATAGCAGCTATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAA ATCAAAC (SEQ ID NO: 16) m136-M14 - MHC724 mIgG2a/K MHC724HC.3 Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
KVMLVE S GGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVROTPEKRLEWVATISGGGRDIY
YADTVKGRFTISRDNAKNTLYLOMSSLRSEDTALYFCARLYLGFDYWGOGTTLTVSS (SEQ
ID NO: 17)
МНС724НС.З Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
AAAGTGATGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACT
CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCG GAGAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGGTGGTGGTAGAGACATCTACTACGCAGACA С Т G Т GAAG G G С С GAT Т САС САТ С Т С СAGAGACААТ G С СAAGAACАС С С Т G ТАС С ТАСАААТ GAG CAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCTTGTATTTCTGTGCAAGGCTCTACCTGGGGTTTGACTAC TGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 18)
MHC724LC. 1 Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIOMTOSPASOSASLGESVTITCLASQTIGTWLAWYOQKPGKSPOLLIYAATSLADGVP
SRFSGSGSGTKFSFKISSLOAEDFVSYYCQQLYSIPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 19)
MHC724LC.1 Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
- 153 043582
GACATTCAGATGACCCAGTCTCCTGCCTCCCAGTCTGCATCTCTGGGAGAAAGTGTCAC
CAT САС AT GC С T G G C AAG T C AGAC CAT T G G TAG AT GG T T AG C AT G G T AT C AG C AGAAAC C AG GG
AAATCTCCTCAGCTCCTGATTTATGCTGCAACCAGCTTGGCAGATGGGGTCCCATCAAGGTTCA GTGGTAGTGGATСTGGCACAAAATTTTСTTTCAAGATCAGCAGCCTACAGGCTGAAGATTTTGT AAGT TATТАС T G T CAACAAC T T TAGAG TAT T С C G T GGACAT T CGG T GGAGGCAC CAAGC T GGAA ATCAAAC (SEQ ID NO: 20)
Связывание мышиных антител m136-M13, m136-M19, m245-M3, m245-M5 и m136-M14 с человеческим PD-1 подтверждали с помощью ELISA (Фигура 1). Коротко, человеческий PD-1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитела против PD-1 наносили на планшет в серийном разведении и позволяли связываться. Планшеты промывали PBST (PBS, pH 7,2+0,05% Tween-20). Связанное антитело детектировали HRP-конъюгатом IgG против мышиных антител (Sigma, St Louis, МО) и визуализировали хромогенным субстратом ТМВ (Thermo Scientific, Rockford, IL). Кривые строили в Prizm (Sigma Plot), и данные аппроксимировали в модели насыщающего связывания с одним участком. Антитела против PD-1, ниволумаб (NV1) и/или пембролизумаб (РМ1), использовали в качестве положительного контроля в анализах связывания с Fabспецифичным HRP-конъюгатом IgG против человеческих антител (Sigma, St Louis, МО) для детектирования. Значения Kd для каждого протестированного антитела показаны ниже в табл. 10:
Таблица 10
Значения Kd для протестированных антител
Связывание мышиных антител m136-M13, m136-M19, m245-M3, m245-M5 и m136-M14 с человеческим PD-1 ингибировало связывание PD-1 с PDL1 и PDL2 в анализе ингибирования ELISA (фиг. 2-3). Анализы ингибирования ELISA проводили следующим образом. Человеческий PD-1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитела против PD-1 наносили на планшет в серийном разведении в присутствии 2 нМ биотинилированного PD-L1 или 2 нМ биотинилированного PDL2. Связывание биотинилированного PD-L1 и PD-L2 детектировали поли-HRP конъюгатом стрептавидина Pierce™ (Thermo Scientific, Rockford, IL) и визуализировали с использованием ТМВ. Кривые строили в Prizm (Sigma Plot), аппроксимировали данные в модели конкурентного связывания с одним участком и определяли IC50. Значения IC50 для антител М13 и М14 показаны ниже в табл. 11.
Таблица 11
Значения IC50 для протестированных антител
IC50 (нМ) hPDLl/Fc hPDL2/Fc
M13 3,3 2
M14 4, 8 2, 8
Пример 2. Получение и тестирование гуманизированных антител против PD-1.
В данном примере продемонстрировано, что мышиные антитела согласно настоящему описанию, которые связывают человеческий PD-1, могут быть превращены в гуманизированные антитела IgG, которые сохраняют способность связывания с PD-1 и ингибирования связывания PDL1 и PDL2 с PD-1.
Вариабельные домены мышиных антител против PD-1, полученных, как описано в примере 1, гуманизировали и экспрессировали в виде полноразмерных hIgG4/h-Kanna антител. Полностью человеческие IgG антитела против PD-1 экспрессировали из транзиентно трансфицированных клеток HEK293 и очищали из супернатанта культуры с помощью хроматографии с белком А.
Последовательности гуманизированных антител, применяемых в исследованиях, представленных в настоящем изобретении, показаны ниже:
PD-1 A HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
ЕVQLVE S GGGLVQPGGS LRLS CAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNAH
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTS PFVYWGQGTLVTVS S (SEQ ID NO: 21)
PD-1 A HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
- 154 043582
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACT
GAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTTAGCGGCTACGCCATGAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCT
GGCAAAGGCCTGGAATGGGTGGCCTACATCAGCAACAGCGGCGGCAATGCCCACTACGCCGATA
GCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAA
CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCACCAGAGAGGACTACGGCACCAGCCCC
TTCGTGTATTGGGGCCAGGGTACCCTCGTGACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 22)
PD-1 Ab HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVOLVESGGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVROAPGKGLEWVSYISNSGGNAH
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCAKEDYGTSPFVYWGOGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23)
PD-1 Ab HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACT
GAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTTAGCGGCTACGCCATGAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCT
GGCAAAGGCCTGGAATGGGTGAGTTACATCAGCAACAGCGGCGGCAATGCCCACTACGCCGATA
GCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAA
CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGAGGACTACGGCACCAGCCCC
TTCGTGTATTGGGGCCAGGGTACCCTCGTGACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 24)
PD-1 Ae HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVQLVE S GGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVROAPGKGLEWVAYISNSGGNTH
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCAREDYGTSPFVYWGOGTLVTVSS (SEQ ID NO: 25)
PD-1 Ae HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACT
GAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTTAGCGGCTACGCCATGAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCT
GGCAAAGGCCTGGAATGGGTGGCCTACATCAGCAACAGCGGCGGCAATACCCACTACGCCGATA
GCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAA
CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGACTACGGCACCAGCCCC
TTCGTGTATTGGGGCCAGGGTACCCTCGTGACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 26)
PD-1 Af HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVQLVE S GGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNTH
YADSLKGRFTVSRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCAREDYGTSPFVYWGOGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27)
PD-1 Af HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACT
GAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTTAGCGGCTACGCCATGAGCTGGGTGCGCCAGGCTCCT
GGCAAAGGCCTGGAATGGGTGGCCTACATCAGCAACAGCGGCGGCAATACCCACTACGCCGATA
GCCTGAAGGGCCGGTTCACCGTCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAA
CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGACTACGGCACCAGCCCC
TTCGTGTATTGGGGCCAGGGTACCCTCGTGACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 28)
PD-1 Ba HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
QVQLVQS GAEVKKPGASVKMS CKASGYTFTDYYMDWVROAPGOGLEWIGYIYPKNGGSS
YAOKFOGRATLTVDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARKVVATDYWGOGTLLTVSS (SEQ
ID NO: 29)
PD-1 Ba HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCAGGCGCCAGCGTGAAGAT
GAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTACATGGACTGGGTGCGCCAGGCCCCT
GGACAGGGACTGGAATGGATCGGCTACATCTACCCCAAGAACGGCGGCAGCAGCTACGCCCAGA
AGTTCCAGGGCAGAGCCACCCTGACCGTGGACACCAGCACAAGCACCGCCTACATGGAACTGAG
CAGCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAAAGGTGGTGGCCACAGACTAC
TGGGGCCAGGGTACCCTGCTGACCGTGTCTAGT (SEQ ID NO: 30)
PD-1 Bb HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
- 155 043582
QVQLVQS GAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTDYYMDWVROAPGOGLEWIGYIYPKNGGSS
YAOKFOGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARKVVATDYWGOGTLLTVSS (SEQ ID NO: 31)
PD-1 Bb HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCAGGCGCCAGCGTGAAGAT
GAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTACATGGACTGGGTGCGCCAGGCCCCT
GGACAGGGACTGGAATGGATCGGCTACATCTACCCCAAGAACGGCGGCAGCAGCTACGCCCAGA
AGTTCCAGGGCAGAGCCACCCTGACCGTGGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAG
CAGCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAAAGGTGGTGGCCACAGACTAC
TGGGGCCAGGGTACCCTGCTGACCGTGTCTAGT (SEQ ID NO: 32)
PD-1 С HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVQLVE S GGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVROAPGKGLEWVAYISNGGGDTH
YADSLKGRFTVSRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARENYGTSPFVYWGOGTLVTVSS (SEQ ID NO: 33)
PD-1 С HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACT
GAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCT
GGAAAAGGCCTGGAATGGGTGGCCTACATCAGCAACGGCGGAGGCGATACCCACTACGCCGATA
GCCTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAA
CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGAGAGAACTACGGCACCAGCCCC TTCGTGTACTGGGGCCAGGGTACCCTCGTGACCGTGTCCTCT (SEQ ID NO: 34)
PD-1 Ca HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVQLVE S GGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVROAPGKGLEWVAYISNQGGDTH
YADSLKGRFTVSRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCARENYGTSPFVYWGOGTLVTVSS (SEQ ID NO: 35)
PD-1 Ca HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACT
GAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCT
GGAAAAGGCCTGGAATGGGTGGCCTACATCAGCCAAGGCGGAGGCGATACCCACTACGCCGATA
GCCTGAAGGGCCGGTTCACCGTGTCCAGAGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAA
CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGAGAGAACTACGGCACCAGCCCC TTCGTGTACTGGGGCCAGGGTACCCTCGTGACCGTGTCCTCT (SEQ ID NO: 36)
PD-1 D HV Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи:
EVQLVE S GGGLVOPGGSLRLSCAHSGFSFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGRYTY
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNYYGFDYWGOGTLLTVSS (SEQ ID NO: 37)
PD-1 D HV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области тяжелой цепи:
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACT
GAGCTGTGCCCACAGCGGCTTCAGCTTCAGCAGCTACGACATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCT
GGCAAAGGACTGGAATGGGTGGCCACAATCAGCGGCGGAGGCCGGTACACCTACTACGCCGATA
GCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAA
CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGCAACTACTACGGCTTCGACTAC
TGGGGCCAGGGTACCCTGCTGACCGTGTCATCT (SEQ ID NO: 38)
PD-1 1.0 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSSL SASVGDRVTIТ CRASESVDNYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCOQSKDVPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 39)
PD-1 1.0 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAACTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
- 156 043582
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT
ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 40)
PD-1 1.1 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSS L SVSVGDRATIТ CRASESVDNYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCOQSKDVPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 41)
PD-1 1.1 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCCGTGTCCGTGGGCGACAGAGCCAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAACTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 42)
PD-1 1.2 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSSL SASVGDRVTIТ CRASESVDQYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCQQSKDVPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 43)
PD-1 1.2 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACCAATACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 44)
PD-1 1.4 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSSL SASVGDRVTIT CRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCOQSKDVPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 45)
PD-1 1.4 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAGTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 46)
PD-1 1.5 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSSL SASVGDRVTIT CRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCOQSKDVPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 47)
PD-1 1.5 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT
ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 48)
PD-1 1.6 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSSL SASVGDRVTIT CRASESVDNYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASDQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCQQSKDVPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 49)
PD-1 1.6 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
- 157 043582
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAACTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCGATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 50)
PD-1 1.7 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSS L SVSVGDRATIТ CRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCOQSKDVPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 51)
PD-1 1.7 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCCGTGTCCGTGGGCGACAGAGCCAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 52)
PD-1 1.9 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSSL SASVGDRVTIТ CRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCOQSKDVPWTFGOGTKVEIK (SEQ ID NO: 53)
PD-1 1.9 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGT ACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 54)
PD-1 1.10 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIQLTQSPSSL SASVGDRVTIT CRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQG
SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMOPEDFATYYCOQSKDVPYTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 55)
PD-1 1.10 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAG
CAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGC
CAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCC
CGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTACACCTTTGGCCAGGGT ACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 56)
PD-1 2 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
DIOMTOSPSSLSASVGDRVTMTCKSSOSLLYSSNQKNYLAWYOOKPGKAPKLLIFWASI
RESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVOPEDFATYYCOQSDSYPWTFGOGTKLEIK (SEQ ID NO: 57)
PD-1 2 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGATAGAGTGAC
CATGACCTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTGCTGTACTCCAGCAACCAGAAGAACTACCTGGCCTGG
TATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTTCTGGGCCAGCATCCGGGAAAGCG
GCGTGCCCAGCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCAGCGT
GCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGACAGCTACCCCTGGACCTTTGGC CAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG (SEQ ID NO: 58)
PD-1 4 LV Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи:
- 158 043582
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYOQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVP
SRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQYSSYPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 59)
PD-1 4 LV Последовательность нуклеиновой кислоты вариабельной области легкой цепи:
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGAC
CATCACATGCAAGGCCAGCCAGGACGTGGGAACAGCCGTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGC
AAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGACACACCGGCGTGCCCAGCAGATTTT
CTGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCAGCGTGCAGCCCGAGGACTTCGC
CACCTACTACTGCCAGCAGTACAGCAGCTACCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAA
ATCAAG (SEQ ID NO: 60)
Аминокислотная последовательность каппа константной области:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ
DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 61)
Последовательность нуклеиновой кислоты каппа константной области:
CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATC
TGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGG
AAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGG ACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGT CTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGA GAGTGT (SEQ ID NO: 62)
Аминокислотная последовательность hIgG4 S228P:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLF
PPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNH
YTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 63)
Последовательность нуклеиновой кислоты hIgG4 S228P:
GCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTGTAGCAGAAGCACCAGCGA
GTCTACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGG
AACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT
ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCAAGACCTACACCTGTAA
CGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAATCTAAGTACGGCCCTCCC
TGCCCTCCTTGCCCAGCCCCTGAATTTCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAAC CCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA GGAAGACCCTGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACA AAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACC AGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTGCCCAGCTCCAT CGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCA TCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCA GCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCC CGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGACTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGA AGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA (SEQ ID NO: 64)
Такие вариабельные области тяжелой цепи (VH) и вариабельные области легкой цепи (VL) могут применяться в различных комбинациях для получения антител против PD-1 согласно настоящему описанию. Например, антитело, указанное в настоящем изобретении как A1.0, включает VH последовательность SEQ ID NO: 21 и VL последовательность SEQ ID NO: 39, антитело A1.5 включает VH последовательность SEQ ID NO: 21 и VL последовательность SEQ ID NO: 47; антитело, указанное в настоящем изобретении как С1.1, включает VH последовательность SEQ ID NO: 33 и VL последовательность SEQ ID NO: 41, и так далее.
Как показано на фиг. 4-5, гуманизированные антитела против PD-1 связывались с hPD-1 в стандартном ELISA аналогично ниволумабу и/или пембролизумабу, при этом связывание гуманизированных антител ингибировало связывание PD-1 с PDL1 и PDL2 (фиг. 6-9) в анализе ингибирования ELISA. Ана
- 159 043582 лизы ELISA проводили следующим образом. Для связывания hPD-1 в анализах ELISA, человеческий PD1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитела против PD-1 наносили на планшет в серийном разведении и позволяли связываться. Связанное антитело детектировали HRP-конъюгатом IgG против антител человека (Fabспецифичным) (Sigma, St Louis, МО) и визуализировали хромогенным субстратом ТМВ (Thermo Scientific, Rockford, IL). Кривые стороили в Prizm (Sigma Plot) и аппроксимировали данные в модели насыщающего связывания с одним участком. Для анализов ингибирования лиганда ELISA, человеческий PD1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитела против PD-1 наносили на планшет в серийном разведении в присутствии 2 нМ биотинилированного hPD-L1 или 2 нМ биотинилированного hPD-L2. Связывание детектировали полиHRP конъюгатом стрептавидина Pierce™ (Thermo Scientific, Rockford, IL) и визуализировали ТМВ. Кривые строили в Prizm (Sigma Plot) и аппроксимировали данные в модели конкурентного связывания с одним участком, и определяли IC50.
Пример 3. Антитела против PD-1 показывают специфичность при связывании.
Пример 3 показывает, что гуманизированные антитела против PD-1 групп A1 и C1 согласно настоящему описанию специфично связываются с hPD-1 в ELISA на плашетах.
Связывание антитела против PD-1 A1.5 согласно настоящему описанию было высокоспецифичным в отношении hPD-1-Fc в стандартном ELISA против панели различных белков человека и мыши (фиг. 10). Связывание против PD-1 A1.5 детектировали HRP-конъюгатом IgG против антител человека (Fabспецифичным) (Sigma, St Louis, МО) и визуализировали хромогенным субстратом ТМВ (Thermo Scientific, Rockford, IL). Кривые строили в Prizm (Sigma Plot) и аппроксимировали данные в модели насыщающего связывания с одним участком.
Пример 4. Связывание антителами эпитопов на PD-1.
В данном примере сравниваются эпитопы, связываемые гуманизированными антителами против PD-1 согласно настоящему описанию, ниволумабом и пембролизумабом.
Ниволумаб и пембролизумаб - антитела против PD-1, каждое из которых связывает человеческий PD-1, и такое связывание каждого из них ингибирует связывание PD-1 с PDL1 и PDL2. Для картирования эпитопов гуманизированных антител групп А1 и С1 согласно настоящему описанию, проводили анализы ELISA ингибирования PD-1, и сравнивали результаты с ингибированием ниволумабом и пембролизумабом. Серийные разведения ниволумаба, пембролизумаба, антител А1 и С1 инкубировали в присутствии биотинилированного Fab ниволумаба или биотинилированного Fab пембролизумаба при концентрации 0,3 нМ в стандартном планшетном формате ELISA с hPD-1-Fc (R & D systems, Minneapolis, MN). Связывание биотинилированного Fab детектировали поли-HRP конъюгатом стрептавидина Pierce™ (Thermo Scientific, Rockford, IL) и визуализировали TMB (Thermo Scientific, Rockford IL) и 1Н HCl. Антитела, относящиеся к группам А1 и С1 согласно настоящему описанию, блокировали связывание биотинилированного Fab пембролизумаба с PD-1 так же, как антитело пембролизумаб, и в более полной степени, чем антитело ниволумаб (фиг. 11А). Такие же антитела А1 и С1 согласно настоящему описанию блокировали связывание биотинилированного ниволумаба аналогично антителу ниволумаб и в более полной степени, чем антитело пембролизумаб (фиг. 11В). Данные на фиг. 11А и 11В показывают, что антитела А1 и С1 согласно настоящему описанию полностью блокируют ниволумаб и пембролизумаб, тогда как ниволумаб и пембролизумаб не полностью блокируют друг друга.
Пример 5. Антитело А1.5 против PD-1 повышает ЦМВ-стимулируемую секрецию цитокинов клетками МКПК ЦМВ-положительного донора.
В данном примере мононуклеарные клетки периферической крови ЦМВ-положительного донора инкубировали в присутствии ЦМВ вирусного лизата и антител против PD-1 согласно настоящему описанию, чтобы оценить воздействие таких антител против PD-1 на секрецию цитокина интерферона-гамма (IFN-гамма, IFNg, IFN-g, IFNy или IFN-γ).
МКПК ЦМВ-положительного донора (Hemacare) сеяли в количестве 2х105 клеток/лунка в присутствии ЦМВ вирусного лизата (Astarte) и антитела против PD-1 A1.5 согласно настоящему описанию или антитела hIgG4 изотипического контроля. Через четыре дня супернатант удаляли из каждой лунки и исследовали уровни IFN-гамма при использовании набора для ELISA анализа IFN-гамма (Life Technologies, Carlsbad, CA) (фиг. 12). Антитело против PD-1 A1.5 повышало ЦМВ-стимулируемую секрецию IFNгамма по сравнению с контрольным hIgG4, и с активностью, подобной антителам против PD-1, ниволумабу и пембролизумабу.
Пример 6. Антитела против PD-1 связываются с мономерным hPD-1 с высокой аффинностью и медленной кинетикой диссоциации.
В данном примере показано, что гуманизированные антитела против PD-1 согласно настоящему описанию связываются с высокой аффинностью и медленной диссоциацией с мономерным PD-1.
Активируемые антитела могут активироваться однократно, с образованием моновалентной связывающей части, или двухкратно, с образованием бивалентной связывающей части. Активация одного плеча антител с разными авидностями может способствовать связывающей и биологической активности
- 160 043582 активируемых антител с более высокими моновалентными аффинностями. Антитела против PD-1 A1.5 и Bba2 согласно настоящему описанию, а также ниволумаб и пембролизумаб иммобилизировали в эквивалентных плотностях на сенсорах Forte-Bio Octet для интерферометрии биослоев (Pall ForteBio, Menlo Park, CA) и позволяли связываться с серийным разведением человеческого PD-1-His (R & D systems, Minneapolis, MN) в растворе. Кинетический анализ прводили с помощью программы ForteBio Data Analysis. Результаты (фиг. 13) показывают, что антитела PD-1 согласно настоящему описанию связывают мономерный PD-1 с подобной или более высокой аффинностью и подобной или более медленной константой диссоциации, чем ниволумаб или пембролизумаб.
Пример 7. Маскирующие части активируемых антител против PD-1 М13/А1.4/А1.5.
В данном примере описана идентификация маскирующих частей (MM), которые уменьшают связывание антител против PD-1 согласно настоящему описанию со своими мишенями.
Антитела против PD-1 Ш136-М13, А1.4 и А1.5 использовали для скрининга библиотек с применением способа, аналогичного описанному в международной публикации PCT WO 2010/081173, опубликованной 15 июля 2010 года. Скрининг состоял из одного раунда МАКС и пяти раундов ФАКС сортировки. Для начальной МАКС, приблизительно 2x1011 клеток инкубировали с антителом m136-М13 в концентрации 100 нМ, и 6x106 связывающих средств собирали при использовании сфер Dynabeads с белком G (Invitrogen). Раунды ФАКС проводили путем мечения клеток антителом m136-М19, меченным красителем DyLight 650 (Thermo-Fisher), для раундов ФАКС 1-4 следующим образом: 100 нМ раунд ФАКС 1 (F1), 10 нМ раунд ФАКС 2 (F2), 2 нМ раунд ФАКС 3 (F3) и 1 нМ раунд ФАКС 4 (F4), с уменьшением процента связывающих средств согласно оценке флуоресценции, собранной в каждом раунде. В раунде ФАКС 5 (F5) клетки метили 1 нМ антитела А1.5, меченного DyLight 650, и отбирали 0,2-4% наиболее ярких клеток. Отдельные пептидные клоны из F3, F4 и F5 идентифицировали с помощью секвенирования и затем тестировали на их способность связывать А1.4 DyLight-650 или А1.5 DyLight-650.
Последовательности маскирующих частей антител против PD-1 m136-М13, А1.4 и А1.5 перечислены в табл. 12 (маскирующая часть 00PD-1 также именуется в настоящем описании как 0PD-1 и/или 0PD1; маскирующая часть 0PD02 также именуется в настоящем изобретении как PD02 и/или PD02, и так далее).
Таблица 12
Маскирующие части
Маска Аминокислотная последовательность SEQ ID NO:
PD001 AMSGCSWSAFCPYLA 66
PD002 DVNCAIWYSVCTTVP 67
PD003 LVCPLYALSSGVCMG 68
PD004 SVNCRIWSAVCAGYE 69
PD005 MLVCSLQPTAMCERV 70
PD006 APRCYMFASYCKSQY 71
PD007 VGPCELTPKPVCNTY 72
PD008 ETCNQYERSSGLCFA 73
PD009 APRTCYTYQCSSFYT 74
PD010 GLCSWYLSSSGLCVD 75
PD011 VPWCQLTPRVMCMWA 76
PD012 NWLDCQFYSECSVYG 77
PD013 SCPLYVMSSFGGCWD 78
PD014 MSHCWMFSSSCDGVK 79
PD015 VSYCTWLIEVTCLRG 80
PD016 VLCAAYALSSGICGG 81
PD017 TTCNLYQQSSMFCNA 82
PD018 APRCYMFASYCKSQY 83
PD019 PCDQNPYFYPYVCHA 84
PD020 SVCPMYALSSMLCGA 85
PD021 LSVECYVFSRCSSLP 86
PD022 FYCTYLVSLTCHPQ 87
PD023 SMAGCQWSSFCVQRD 88
PD024 IYSCYMFASRCTSDK 89
PD025 SRCSVYEVSSGLCDW 90
- 161 043582
PD026 GMCSAYAYSSKLCTI 91
PD027 MTTNTCNLLCQQFLT 92
PD028 FQPCLMFASSCFTSK 93
PD029 WNCHPAGVGPVFCEV 94
PD030 ALCSMYLASSGLCNK 95
PD031 NYLSCQFFQNCYETY 96
PD032 GWCLFSDMWLGLCSA 97
PD033 EFCARDWLPYQCSSF 98
PD034 TSYCSIEHYPCNTHH 99
PD035 PYICSSFPLDCQAGQ 100
PD036 VGCEWYMSSSGMCSR 101
PD037 EVCGGCSMQSVSCWP 102
PD038 FTECQLSPKAICMSN 103
PD039 KYCLFSEYVEGTCLN 104
PD040 SGCPMYAWGWDECWR 105
PD041 VDCPWYASSSAICSR 106
PD042 DMLLCQIRGSCAAWG 107
PD043 ECHPYQASASLWCGY 108
PD044 MMMGCMWSAWCPPSR 109
PD045 NAYFRCSLMCNMIMF 110
PD046 ACCKESVHSVHDCKR 111
- 162 043582
PD047 ACIGINSYMSNYCYL 112
PD048 ANCSFLELTNKFCTI 113
PD049 AYCSYLMFASNPCII 114
PD050 CFTSKCPCLCYSLLA 115
PD051 CLCRDINCWLGCSKT 116
PD052 CWCDIYCSPYQCSSF 117
PD053 DCIYYYQQSANLCSY 118
PD054 DCTGVNYYIDKHCTN 119
PD055 DECHGYLRSSGLCGG 120
PD056 DICSAYAASSGFCYY 121
PD057 DIICVLTPTAWCGRT 122
PD058 DNCCMYCSWWIACRD 123
PD059 DSCQWYMLSADLCGT 124
PD060 DSVCFSSSSFLCHKS 125
PD061 DTMCAIWWTVCSGGR 126
PD062 ECTYQTSSFHEACMS 127
PD063 EGCNLYERSSYGCNN 128
PD064 EGCTAFAMSAGICGG 129
PD065 EQSCSLTPIAFCWSE 130
PD066 EWCNAYISSSKLCST 131
PD067 FEVCYMFASACRNGM 132
PD068 FSCSWYAESSSLCDI 133
PD069 FVCQMFEASSGLCGG 134
PD070 FYCPCCMFASSCGSR 135
PD071 FYCSYLPGASHQCSH 136
PD072 FYCSYLYMCEVCCYE 137
PD073 GFCTQHTVLTWCPTS 138
PD074 GSCPSYAVSAGLCYA 139
PD075 GSQCFLTPTAFCTHT 140
PD076 GTCHPYMQSSKICNN 141
PD077 GVECFVFTGGCGGYG 142
PD078 HELCNGHWVPCCWAY 143
PD079 ICDSYYAVSSGLCLL 144
PD080 IGCAWYVSSAGWCSP 145
PD081 INLCWMFASECGEHH 146
PD082 KCWLAEMTNLEHCNM 147
PD083 KHCSDFAYSSRLCDR 148
PD084 KVCSSYASSSGLCGW 149
PD085 LDSCYMFASYCVQAV 150
PD086 LLACHPIFVTVCQTR 151
PD087 LLSCPYNPEHVCHTS 152
- 163 043582
PD088 LMCSLYALSSNLCGR 153
PD089 LMWCVLFLWSWCCRI 154
PD090 LPICHLTPTAVCTHI 155
PD091 LSNMCLAFGSCLYAW 156
PD092 LSRCHPIWYTICQNP 157
PD093 LTQCMSVHKECGGYE 158
PD094 LVNCRIWSWVCEEAT 159
PD095 LYCSWYQMSSAVCKE 160
PD096 MECGWYALSARFCEV 161
PD097 MTCSPYAMSAHFCNE 162
PD098 MVCSLYAYSASLCGA 163
PD099 NALCWSTFSWWCDMD 164
PD-100 NFTCMLTPKAYCVQT 165
PD-101 NGACIFTLSWCTNKT 166
PD-102 NGCELYAAASGLCRT 167
PD-103 NIECSVFGRCCCDNY 168
PD-104 PACRPMFWNRSCDNI 169
PD-105 PCRVSNMFFPYNCLD 170
PD-106 PIMCMLLPESYCWIW 171
PD-107 PQSCYMFASLCMPNG 172
PD-108 PRCPQGLPLYQCSSF 173
PD-109 PSVECLVFKRCYALP 174
PD-110 PVCQRSATIYNCNWF 175
PD-111 QCAAYYISSFGGCSN 176
PD-112 QFGCFMLARDFCGTY 177
PD-113 QMMCPYNPEHKCHQK 178
PD-114 QRECWMFASSCNSKN 179
PD-115 QSNMCTTYICSSFNY 180
PD-116 QSRCHSLAPYLCSSF 181
PD-117 RAYCSLLFADSCNNN 182
PD-118 RCIGINQYIDSNCYN 183
PD-119 RLSCFMFASQCALEF 184
PD-120 RQCIILMNHRQCFFK 185
PD-121 RSCTPYMMSSSLCNT 186
PD-122 RYCHYWKMPYECSSF 187
PD-123 SCVSLSWFDMLKCYE 188
PD-124 SDNCEIWWTVCSAAM 189
PD-125 SFCWSYLVSSGLCGV 190
PD-126 SMCMNNYGTTIMCGN 191
PD-127 SMVGCGWSTFCPSRG 192
PD-128 SSLHCANGHTCPFCL 193
- 164 043582
PD-129 SVCSYYEESSGICSP 194
PD-130 SWCGWYAASSGVCAL 195
PD-131 TCISQTIDSYLNCVN 196
PD-132 TFCNLYTKSSNICMS 197
PD-133 TYCVFHEYLDNTCNN 198
PD-134 VATGCPNLMLCGSWP 199
PD-135 VEYCSLLLGNRCDYW 200
PD-136 VGCNMYLMSAGLCVD 201
PD-137 VLYCSWDSGTCVGSH 202
PD-138 VMFSCYYLETCAPGV 203
PD-139 VRIGLCPESCLVSGF 204
PD-140 VTCTYYATSSSLCNT 205
PD-141 VTGCILLPKAWCWGD 206
PD-142 VWCSIYEYSSNLCSR 207
PD-143 WMLECQYNNTCNNMT 208
PD-144 WPCSPLEYYNNICNV 209
PD-145 WTYDCHLNQTCPTYY 210
PD-146 YCSINMYLIGGNCMY 211
PD-147 YFCSLYANSAGFCGG 212
PD-148 YVSCYMFSSSCPSTW 213
Пример 8. Активируемые антитела против PD-1 А1.4 и А1.5.
В данном примере описаны примеры активируемых антител против PD-1, А1. 4 и А1.5, согласно настоящему описанию.
Активируемые антитела А1.4 против PD-1, включающие маскирующую часть М13 против PD-1, расщепляемую часть и антитело против PD-1 A1.4 согласно настоящему описанию, и активируемые антитела А1.5 против PD-1, включающие маскирующую часть против PD-1 M13 или против PD-1 A1.5, расщепляемую часть, выбранную из группы, состоящей из расщепляемой части, и антитело против PD-1 А1.5, получали согласно способам, аналогичным описанным в публикациях PCT WO 2009/025846 и WO 2010/081173, содержание которых настоящим полностью включено посредством отсылки. В некоторых вариантах осуществления расщепляемую часть выбирали из группы, состоящей из расщепляемой части, указанной в настоящем изобретении как 2001 и включающей последовательность ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214), и расщепляемой части, указанной в настоящем изобретении как 3001 и включающей последовательность AVGLLAPPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 318). Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновых кислот нескольких вариабельных доменов активируемых антител против PD-1 согласно настоящему описанию представлены ниже. Антитела были получены, как hIgG4, содержащий одну аминокислотную замену, S228P (Angal, et al. 1993. Mol Immunol 30:105-8.), в формате HC и hK LC.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело также включает спейсерную последовательность. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела в следующей структуре, от N-конца к С-концу: спейсер-MM-CM-AB. В некоторых вариантах осуществления спейсер, соединенный непосредственно с N-концом MM активируемого антитела, выбран из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQG (SEQ ID NO: 362). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQ (SEQ ID NO: 913). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSG (SEQ ID NO: 914). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQS (SEQ ID NO: 915). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQ (SEQ ID NO: 916). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QG (SEQ ID NO: 917). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотный остаток Q. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не включает спейсерную последовательность.
Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию могут включать любую подходящую спейсерную последовательность, такую как, например, спейсерная последовательность, выбранная из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID
- 165 043582
NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. Дополнительные примеры спейсеров включают GQSGQG (SEQ ID NO: 2042), QSGQG (SEQ ID NO: 2043), SGQG (SEQ ID NO: 2044), GQG (SEQ ID NO: 2045), QG (SEQ ID NO: 2046) и G. Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области также будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию в некоторых вариантах осуществления не включают спейсерную последовательность.
Вариабельные домены активируемого антитела против PD-1:
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.4 PD001 2001 (SEQ ID NO:
919) ]
[QGQSGQG][AMSGCSWSAFCPYLAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 215)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.4 PD001 2001:
AMSGCSWSAFCPYLAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ
PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1041)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.4 PD001 2001 (SEQ ID NO:
920) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGATGAGTGGGTGCTCGTGGTCTGCTTTTTGCCC
GTATTTGGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGATCCGACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAGTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 216) [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.4 PD002 2001 (SEQ ID NO: 921) ]
[QGQSGQG][DVNCAIWYSVCTTVPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 217)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.4 PD002 2001:
DVNCAIWYSVCTTVPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ
PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1042)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.4 PD002 2001 (SEQ ID NO:
922) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GATGTTAATTGCGCTATTTGGTATTCGGTGTGCAC
TACTGTTCCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAGTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 218) [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.4 PD003 2001 (SEQ ID NO: 923) ]
[QGQSGQG][LVCPLYALSSGVCMGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 219)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.4 PD003 2001:
- 166 043582
LVCPLYALSSGVCMGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1043)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.4 PD003 2001 (SEQ ID NO: 924) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTGGTTTGCCCTTTGTATGCATTGAGTTCTGGGGT GTGCATGGGGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAGTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 220)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.4 PD008 2001 (SEQ ID NO: 925) ]
[QGQSGQG][ETCNQYERSSGLCFAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 221)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.4 PD008 2001:
ETCNQYERSSGLCFAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1044)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.4 PD008 2001 (SEQ ID NO: 926) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GAGACTTGCAATCAGTATGAGAGGTCGAGTGGTTT GTGCTTTGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAGTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 222)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.4 PD009 2001 (SEQ ID NO: 927) ]
[QGQSGQG][APRTCYTYQCSSFYTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 223)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.4 PD009 2001:
- 167 043582
APRTCYTYQCSSFYTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1045)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.4 PD009 2001 (SEQ ID NO
928) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGCCGCGGACGTGCTATACGTATCAGTGCTCTAG
TTTTTATACTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGATCCGACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAGTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 224)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.4 PD010 2001 (SEQ ID NO
929) ]
[QGQSGQG][GLCSWYLSSSGLCVDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 225)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.4 PD010 2001:
GLCSWYLSSSGLCVDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDSYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1046)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.4 PD010 2001 (SEQ ID NO
930) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GGTCTTTGCAGTTGGTATCTTAGTAGTTCGGGTTT GTGCGTGGATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACAGTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 226)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD01 2001 (SEQ ID NO
931) ]
[QGQSGQG][AMSGCSWSAFCPYLAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 227)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD01 2001:
AMSGCSWSAFCPYLAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1047)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD001 2001 (SEQ ID NO
932) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGATGAGTGGGTGCTCGTGGTCTGCTTTTTGCCC GTATTTGGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
- 168 043582
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 228)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD002 2001 (SEQ ID NO: 933) ]
[QGQSGQG][DVNCAIWYSVCTTVPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 229)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD002 2001:
DVNCAIWYSVCTTVPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1048)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD002 2001 (SEQ ID NO: 934) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GATGTTAATTGCGCTATTTGGTATTCGGTGTGCAC TACTGTTCCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 230)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD003 2001 (SEQ ID NO: 935) ]
[QGQSGQG][LVCPLYALSSGVCMGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 231)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD003 2001:
LVCPLYALSSGVCMGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1049)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD003 2001 (SEQ ID NO: 936) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTGGTTTGCCCTTTGTATGCATTGAGTTCTGGGGT GTGCATGGGGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 232)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD004 2001 (SEQ ID NO: 937) ]
[QGQSGQG][SVNCRIWSAVCAGYEGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 233)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD004 2001:
- 169043582
SVNCRIWSAVCAGYEGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1050)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD004 2001 (SEQ ID NO: 938) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TCTGTGAATTGCCGGATTTGGTCGGCTGTTTGCGC GGGGTATGAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 234)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD005 2001 (SEQ ID NO: 939) ]
[QGQSGQG][MLVCSLQPTAMCERVGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 235)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD005 2001:
MLVCSLQPTAMCERVGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1051)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD005 2001 (SEQ ID NO: 940) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ATGCTTGTGTGCTCGTTGCAGCCTACTGCGATGTG CGAGCGGGTGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 236)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD006 2001 (SEQ ID NO 941) ]
[QGQSGQG][APRCYMFASYCKSQYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 237)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD006 2001:
- 170 043582
APRCYMFASYCKSQYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 941)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD006 2001 (SEQ ID NO
942) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGCCTAGGTGCTATATGTTTGCGTCGTATTGCAA GAGTCAGTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 238)
Последовательность нуклеиновой кислоты PD-1 1.5 PD006 2001:
GCGCCTAGGTGCTATATGTTTGCGTCGTATTGCAAGAGTCAGTATGGAGGTGGCTCGAG CGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGATCCGAT ATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCT GTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCC CGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGA TTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACT TCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCT GGAAATCAAG (SEQ ID NO: 942)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD007 2001 (SEQ ID NO
943) ]
[QGQSGQG][VGPCELTPKPVCNTYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 239)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD007 2001:
VGPCELTPKPVCNTYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1052)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD007 2001 (SEQ ID NO
944) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTGGGGCCTTGCGAGTTGACGCCGAAGCCTGTTTG CAATACGTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 240)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD008 2001 (SEQ ID NO
945) ]
[QGQSGQG][ETCNQYERSSGLCFAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 241)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD008 2001:
- 171 043582
ETCNQYERSSGLCFAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1053)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD008 2001 (SEQ ID NO
946) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GAGACTTGCAATCAGTATGAGAGGTCGAGTGGTTT GTGCTTTGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 242)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD009 2001 (SEQ ID NO
947) ]
[QGQSGQG][APRTCYTYQCSSFYTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 243)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD009 2001:
APRTCYTYQCSSFYTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1054)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD009 2001 (SEQ ID NO
948) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGCCGCGGACGTGCTATACGTATCAGTGCTCTAG TTTTTATACTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 244)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD010 2001 (SEQ ID NO
949) ]
[QGQSGQG][GLCSWYLSSSGLCVDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 245)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD010 2001:
GLCSWYLSSSGLCVDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1055)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD010 2001 (SEQ ID NO
950) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GGTCTTTGCAGTTGGTATCTTAGTAGTTCGGGTTT GTGCGTGGATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
- 172 043582
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 246)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD011 2001 (SEQ ID NO 951) ]
[QGQSGQG][VPWCQLTPRVMCMWAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 247)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD011 2001:
VPWCQLTPRVMCMWAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1056)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD011 2001 (SEQ ID NO: 952) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTGCCTTGGTGCCAGTTGACGCCGCGGGTTATGTG CATGTGGGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 248)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD012 2001 (SEQ ID NO: 953) ]
[QGQSGQG][NWLDCQFYSECSVYGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 249)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD012 2001:
NWLDCQFYSECSVYGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 953)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD012 2001 (SEQ ID NO: 954) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][AATTGGTTGGATTGCCAGTTTTATTCTGAGTGCTC TGTTTATGGTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 250)
Последовательность нуклеиновой кислоты PD-1 1.5 PD012 2001:
- 173 043582
AATTGGTTGGATTGCCAGTTTTATTCTGAGTGCTCTGTTTATGGTGGAGGTGGCTCGAG CGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGATCCGAT ATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCT GTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCC CGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGA TTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACT TCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCT GGAAATCAAG (SEQ ID NO: 954)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD013 2001 (SEQ ID NO 955) ]
[QGQSGQG][SCPLYVMSSFGGCWDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 251)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD013 2001:
SCPLYVMSSFGGCWDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1057)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD013 2001 (SEQ ID NO: 956) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TCGTGCCCTTTGTATGTGATGTCTAGTTTTGGTGG GTGCTGGGATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 252)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD014 2001 (SEQ ID NO: 957) ]
[QGQSGQG][MSHCWMFSSSCDGVKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 253)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD014 2001:
- 174 043582
MSHCWMFSSSCDGVKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1058)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD014 2001 (SEQ ID NO
958) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ATGAGTCATTGCTGGATGTTTTCGAGTTCTTGCGA
TGGGGTGAAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 254)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD015 2001 (SEQ ID NO
959) ]
[QGQSGQG][VSYCTWLIEVTCLRGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 255)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD015 2001:
VSYCTWLIEVTCLRGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1059)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD015 2001 (SEQ ID NO
960) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTTTCGTATTGCACGTGGTTGATTGAGGTGACTTG CCTGAGGGGTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 256)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD016 2001 (SEQ ID NO
961) ]
[QGQSGQG][VLCAAYALSSGICGGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 257)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD016 2001:
- 175 043582
VLCAAYALSSGICGGGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1060)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD016 2001 (SEQ ID NO: 962) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTTTTGTGCGCTGCTTATGCTTTGAGTTCGGGTAT TTGCGGTGGGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 258)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD017 2001 (SEQ ID NO: 963) ]
[QGQSGQG][TTCNLYQQSSMFCNAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 259)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD017 2001:
TTCNLYQQSSMFCNAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1061)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD017 2001 (SEQ ID NO 964) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ACGACTTGCAATCTGTATCAGCAGTCTTCTATGTT TTGCAATGCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 260)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD018 2001 (SEQ ID NO 965) ]
[QGQSGQG][APRCYMFASYCKSQYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 261)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD018 2001:
- 176 043582
APRCYMFASYCKSQYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1062)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD018 2001 (SEQ ID NO
966) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGCCTAGGTGCTATATGTTTGCGTCGTATTGCAA
GAGTCAGTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 262)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD019 2001 (SEQ ID NO
967) ]
[QGQSGQG][PCDQNPYFYPYVCHAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 263)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD019 2001:
PCDQNPYFYPYVCHAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 967)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD019 2001 (SEQ ID NO
968) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CCTTGCGATCAGAATCCGTATTTTTATCCGTATGT GTGCCATGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 264)
Последовательность нуклеиновой кислоты PD-1 1.5 PD019 2001:
CCTTGCGATCAGAATCCGTATTTTTATCCGTATGTGTGCCATGCGGGAGGTGGCTCGAG
CGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGATCCGAT ATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCT GTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCC CGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGA TTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACT TCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCT GGAAATCAAG (SEQ ID NO: 968)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD020 2001 (SEQ ID NO:
969) ]
[QGQSGQG][SVCPMYALSSMLCGAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 265)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD020 2001:
- 177 043582
SVCPMYALSSMLCGAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1063)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD020 2001 (SEQ ID NO 970) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TCTGTGTGCCCTATGTATGCGTTGAGTTCTATGTT GTGCGGTGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 266)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD021 2001 (SEQ ID NO 971) ]
[QGQSGQG][LSVECYVFSRCSSLPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 267)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD021 2001:
LSVECYVFSRCSSLPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1064)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD021 2001 (SEQ ID NO: 972) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTGTCTGTGGAGTGCTATGTGTTTTCGCGGTGCAG TAGTCTGCCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 268)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD022 2001 (SEQ ID NO: 973) ]
[QGQSGQG][FYCTYLVSLTCHPQGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSS LSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 269)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD022 2001:
- 178 043582
FYCTYLVSLTCHPQGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVT
ITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQP EDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1065)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD022 2001 (SEQ ID NO: 974) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTTTATTGCACTTATTTGGTGTCTTTGACTTGCCA TCCGCAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGAC AATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGG GCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCAT GAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAG GGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCA GCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGAC CTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 270)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD023 2001 (SEQ ID NO: 975) ]
[QGQSGQG][SMAGCQWSSFCVQRDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 271)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD023 2001:
SMAGCQWSSFCVQRDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1066)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD023 2001 (SEQ ID NO: 976) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TCTATGGCGGGTTGCCAGTGGAGTTCGTTTTGCGT GCAGCGGGATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 272)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD024 2001 (SEQ ID NO: 977) ]
[QGQSGQG][IYSCYMFASRCTSDKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 273)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD024 2001:
- 179 043582
IYSCYMFASRCTSDKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1067)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD024 2001 (SEQ ID NO: 978) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ATTTATTCGTGCTATATGTTTGCTTCGCGGTGCAC GTCTGATAAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 274)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD002 3001 (SEQ ID NO: 979) ]
[QGQSGQG][DVNCAIWYSVCTTVPGGGSSGGAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGSDIQLTQ SPSSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 275)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD002 3001:
DVNCAIWYSVCTTVPGGGSSGGAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGSDIQLTQSPSSLSASVG DRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1068)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD002 3001 (SEQ ID NO: 980) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT]CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGTGATGTTAATTGCGCT ATTTGGTATTCGGTGTGCACTACTGTTCCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCG GACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGATCCGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCGC TGTGGGACTGCTGGCTCCTCCTGGTGGCCTGTCTGGCAGATCTGATAACCACGGAGGATCCGAT ATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCT GTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCC CGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGA TTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACT TCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCT GGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 276)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD12 3001 (SEQ ID NO: 981) ]
[QGQSGQG][NWLDCQFYSECSVYGGGGSSGGAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGSDIQLTQ SPSSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 277)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD12 3001:
- 180 043582
NWLDCQFYSECSVYGGGGSSGGAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGSDIQLTQSPSSLSASVG DRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1069)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD12 3001 (SEQ ID NO: 982) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][AATTGGTTGGATTGCCAGTTTTATTCTGAGTGCTC TGTTTATGGTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCGCTGTGGGACTGCTGGCTCCTC CTGGTGGCCTGTCTGGCAGATCTGATAACCACGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCC TAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTG GACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGC TGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGG CACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAG CAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 278)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD16 3001 (SEQ ID NO: 983) ]
[QGQSGQG][VLCAAYALSSGICGGGGGSSGGAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGSDIQLTQ
SPSSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSG SGTDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 279)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD16 3001:
VLCAAYALSSGICGGGGGSSGGAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGSDIQLTQSPSSLSASVG
DRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1070)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD16 3001 (SEQ ID NO: 984) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTTTTGTGCGCTGCTTATGCTTTGAGTTCGGGTAT TTGCGGTGGGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCGCTGTGGGACTGCTGGCTCCTC CTGGTGGCCTGTCTGGCAGATCTGATAACCACGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCC TAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTG GACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGC TGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGG CACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAG
CAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO : 2 8 0)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD025 2001 (SEQ ID NO: 985) ]
[QGQSGQG][SRCSVYEVSSGLCDWGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 281)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD025 2001:
SRCSVYEVSSGLCDWGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1071)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD025 2001 (SEQ ID NO:
- 181 043582
986) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TCTCGTTGCTCTGTGTATGAGGTTTCGTCGGGGCT GTGCGATTGGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 282)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)][PD-1 1.5 PD026 2001 (SEQ ID NO 987) ]
[QGQSGQG][GMCSAYAYSSKLCTIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 283)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD026 2001:
GMCSAYAYSSKLCTIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1072)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD026 2001 (SEQ ID NO: 988) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GGGATGTGCTCGGCGTATGCTTATTCGAGTAAGTT GTGCACTATTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 284)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD027 2001 (SEQ ID NO: 989) ]
[QGQSGQG][MTTNTCNLLCQQFLTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 285)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD027 2001:
MTTNTCNLLCQQFLTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ
- 182 043582
PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1073)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD027 2001 (SEQ ID NO 990) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ATGACTACGAATACTTGCAATCTGTTGTGCCAGCA GTTTTTGACGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 286)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD028 2001 (SEQ ID NO 991) ]
[QGQSGQG][FQPCLMFASSCFTSKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 287)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD028 2001:
FQPCLMFASSCFTSKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 991)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD028 2001 (SEQ ID NO: 992) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTTCAGCCGTGCCTGATGTTTGCGAGTAGTTGCTT TACTAGTAAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 288)
Последовательность нуклеиновой кислоты PD-1 1.5 PD028 2001:
TTTCAGCCGTGCCTGATGTTTGCGAGTAGTTGCTTTACTAGTAAGGGAGGTGGCTCGAG CGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGATCCGAT ATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCT GTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCC CGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGA TTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACT TCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCT GGAAATCAAG (SEQ ID NO: 992)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD030 2001 (SEQ ID NO 993) ]
[QGQSGQG][ALCSMYLASSGLCNKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 289)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD030 2001:
- 183 043582
ALCSMYLASSGLCNKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1074)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD030 2001 (SEQ ID NO: 994) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGCTTTGCAGTATGTATCTTGCTAGTTCTGGGCT GTGCAATAAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 290)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD033 2001 (SEQ ID NO: 995) ]
[QGQSGQG][EFCARDWLPYQCSSFGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 291)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD033 2001:
EFCARDWLPYQCSSFGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1075)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD033 2001 (SEQ ID NO: 996) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GAGTTTTGCGCTCGGGATTGGCTGCCGTATCAGTG CTCGAGTTTTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 292)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD034 2001 (SEQ ID NO 1028)]
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1029)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD034 2001:
- 184 043582
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1028)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD034 2001 (SEQ ID NO: 1030)
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ACGTCATACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1031)
Последовательность нуклеиновой кислоты PD-1 1.5 PD034 2001:
ACGTCATACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAATACACATCATGGAGGTGGCTCGAG CGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGATCCGAT ATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCT GTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCC CGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGA TTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACT TCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCT GGAAATCAAG (SEQ ID NO: 1030)
[спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD035 2001 (SEQ ID NO: 997) ]
[QGQSGQG][PYICSSFPLDCQAGQGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 293)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD035 2001:
PYICSSFPLDCQAGQGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1076)
[спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD035 2001 (SEQ ID NO: 998) ]
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CCTTATATTTGCTCTAGTTTTCCGTTGGATTGCCA GGCGGGTCAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 584)
Пример 9. Активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию.
В данном примере продемонстрировано, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию могут быть получены в различных комбинациях доменов MM, CM, VL и VH, а также в различных изотипах Ig. Кроме того, в данном примере продемонстрировано, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию могут быть получены в различных комбинациях доменов MM, CM, VLCDR1, VLCDR2, VLCDR3, VHCDR1, VHCDR2 и VHCDR3, а также в различных изотипах Ig.
- 185 043582
Таблица 13
Маск, посл-ть Субстраты: VL SEQ ID NO: VH SEQ ID NO: VL CDR-области SEQ ID NO: CDR1 CDR2 CDR3 VH CDR-области SEQ ID NO: CDR1 CDR2 CDR3
AMSGCSWSAFCPYLA (SEQ ID NO: 66) LSGRSDNH (SEQ ID NO: 294) 1 3 653 658 664 669 678 683
DVNCAIWYSVCTTVP (SEQ ID NO: 67) TGRGPSWV (SEQ ID NO: 295) 5 7 654 659 665 670 679 684
LVCPLYALSSGVCMG (SEQ ID NO: 68) PLTGRSGG (SEQ ID NO: 296) 9 11 655 660 666 671 680 685
SVNCRIWSAVCAGYE (SEQ ID NO: 69) TARGPSFK (SEQ ID NO: 297) 13 15 656 661 667 672 681 686
MLVCSLQPTAMCERV (SEQ ID NO: 70) NTLSGRSENHSG (SEQ ID NO: 298) 17 19 657 662 668 673 682 687
APRCYMFASYCKSQY NTLSGRSGNHGS 21 3 9 6 63 674
(SEQ ID NO: 71) (SEQ ID NO: 299)
VGPCELTPKPVCNTY TSTSGRSANPRG 23 41 675
(SEQ ID NO: 72) (SEQ ID NO: 300)
ETCNQYERSSGLCFA TSGRSANP 2 5 43 676
(SEQ ID NO: 73) (SEQ ID NO: 301)
APRTCYTYQCSSFYT VHMPLGFLGP 27 45 677
(SEQ ID NO: 74) (SEQ ID NO: 302)
GLCSWYLSSSGLCVD AVGLLAPP 9 Q Λ Ί VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 75) (SEQ ID NO: 303) Z У 4 / SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3
VPWCQLTPRVMCMWA AQNLLGMV 31 49 VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 76) (SEQ ID NO: 304) SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 7
NWLDCQFYSECSVYG QNQALRMA 33 51 VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 77) (SEQ ID NO: 305) SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 11
SCPLYVMSSFGGCWD LAAPLGLL 35 VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 78) (SEQ ID NO: 306) SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 15
MSHCWMFSSSCDGVK STFPFGMF VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 79) (SEQ ID NO: 307) 5 5 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 19
VSYCTWLIEVTCLRG ISSGLLSS £ Ί VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 80) (SEQ ID NO: 308) 0 / SEQ ID NO: 21 SEQ ID NO: 39
VLCAAYALSSGICGG PAGLWLDP c Q VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 81) (SEQ ID NO: 309) О У SEQ ID NO: 23 SEQ ID NO: 41
TTCNLYQQSSMFCNA VAGRSMRP VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 82) (SEQ ID NO: 310) SEQ ID NO: 25 SEQ ID NO: 43
APRCYMFASYCKSQY VVPEGRRS VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 83) (SEQ ID NO: 311) SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 45
PCDQNPYFYPYVCHA ILPRSPAF VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 84) (SEQ ID NO: 312) SEQ ID NO: 29 SEQ ID NO: 47
SVCPMYALSSMLCGA MVLGRSLL VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 85) (SEQ ID NO: 313) SEQ ID NO: 31 SEQ ID NO: 49
LSVECYVFSRCSSLP QGRAITFI VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 86) (SEQ ID NO: 314) SEQ ID NO: 33 SEQ ID NO: 51
FYCTYLVSLTCHPQ SPRSIMLA VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 87) (SEQ ID NO: 315) SEQ ID NO: 35 SEQ ID NO: 53
SMAGCQWS S FCVQRD SMLRSMPL VL CDR-области VH CDR-области
(SEQ ID NO: 88) (SEQ ID NO: 316) SEQ ID NO: 37 SEQ ID NO: 55
IYSCYMFASRCTSDK SARGPSRW VH CDR-области
(SEQ ID NO: 89) (SEQ ID NO: 319) SEQ ID NO: 57
SRCSVYEVSSGLCDW GWHTGRN VH CDR-области
(SEQ ID NO: 90) (SEQ ID NO: 320) SEQ ID NO: 59
GMCSAYAYSSKLCTI HTGRSGAL ЛЦ CDR-области ТЦ CDR-области
(SEQ ID NO: 91) (SEQ ID NO: 321) SEQ ID NO: 543 SEQ ID NO: 546
MTTNTCNLLCQQFLT AARGPAIH
(SEQ ID NO: 92) (SEQ ID NO: 322)
FQPCLMFASSCFTSK RGPAFNPM
(SEQ ID NO: 93) (SEQ ID NO: 323)
WNCHPAGVGPVFCEV SSRGPAYL
(SEQ ID NO: 94) (SEQ ID NO: 324)
ALCSMYLASSGLCNK RGPATPIM
(SEQ ID NO: 95) (SEQ ID NO: 325)
NYLSCQFFQNCYETY RGPA
(SEQ ID NO: 96) (SEQ ID NO: 326)
GWCLFSDMWLGLCSA GGQPSGMWGW
(SEQ ID NO: 97) (SEQ ID NO: 327)
EFCARDWLPYQCSSF FPRPLGITGL
(SEQ ID NO: 98) (SEQ ID NO: 328)
TSYCSIEHYPCNTHH SPLTGRSG
(SEQ ID NO: 99) (SEQ ID NO: 329)
PYICSSFPLDCQAGQ SAGFSLPA
(SEQ ID NO: 100) (SEQ ID NO: 330)
- 186 043582
VGCEWYMSSSGMCSR LAPLGLQRR
(SEQ ID NO: 101) EVCGGCSMQSVSCWP (SEQ ID NO: 102) FTECQLSPKAICMSN (SEQ ID NO: 103) KYCLFSEYVEGTCLN (SEQ ID NO: 104) SGCPMYAWGWDECWR (SEQ ID NO: 105) VDCPWYASSSAICSR (SEQ ID NO: 106) DMLLCQIRGSCAAWG (SEQ ID NO: 107) ECHPYQASASLWCGY (SEQ ID NO: 108) MMMGCMWSAWCPPSR (SEQ ID NO: 109) NAYFRCSLMCNMIMF (SEQ ID NO: 110) ACCKESVHSVHDCKR (SEQ ID NO: 111) ACIGINSYMSNYCYL (SEQ ID NO: 112) ANCSFLELTNKFCTI (SEQ ID NO: 113) AYCSYLMFASNPCII (SEQ ID NO: 114) CFTSKCPCLCYSLLA (SEQ ID NO: 115) CLCRDINCWLGCSKT (SEQ ID NO: 116) CWCDIYCSPYQCSSF (SEQ ID NO: 117) DCIYYYQQSANLCSY (SEQ ID NO: 118) DCTGVNYYIDKHCTN (SEQ ID NO: 119) (SEQ ID NO: 331) SGGPLGVR (SEQ ID NO: 332) PLGL (SEQ ID NO: 333) ISSGLSS (SEQ ID NO: 334) PVGYTSSL (SEQ ID NO: 335) DWLYWPGI (SEQ ID NO: 336) LKAAPRWA (SEQ ID NO: 337) GPSHLVLT (SEQ ID NO: 338) LPGGLSPW (SEQ ID NO: 339) MGLFSEAG (SEQ ID NO: 340) SPLPLRVP (SEQ ID NO: 341) RMHLRSLG (SEQ ID NO: 342) LLAPSHRA (SEQ ID NO: 343) GPRSFGL (SEQ ID NO: 344) GPRSFG (SEQ ID NO: 345) LSGRSGNH (SEQ ID NO: 1157) SGRSANPRG (SEQ ID NO: 1158) LSGRSDDH (SEQ ID NO: 1161) LSGRSDIH (SEQ ID NO: 1162)
DECHGYLRSSGLCGG (SEQ ID NO: 120) DICSAYAASSGFCYY (SEQ ID NO: 121) DIICVLTPTAWCGRT (SEQ ID NO: 122) DNCCMYCSWWIACRD (SEQ ID NO: 123) DSCQWYMLSADLCGT (SEQ ID NO: 124) DSVCFSSSSFLCHKS (SEQ ID NO: 125) DTMCAIWWTVCSGGR (SEQ ID NO: 126) ECTYQTSSFHEACMS (SEQ ID NO: 127) EGCNLYERSSYGCNN (SEQ ID NO: 128) EGCTAFAMSAGICGG (SEQ ID NO: 129) EQSCSLTPIAFCWSE (SEQ ID NO: 130) EWCNAYISSSKLCST (SEQ ID NO: 131) FEVCYMFASACRNGM (SEQ ID NO: 132) FSCSWYAESSSLCDI (SEQ ID NO: 133) FVCQMFEASSGLCGG (SEQ ID NO: 134) FYCPCCMFASSCGSR (SEQ ID NO: 135) FYCSYLPGASHQCSH (SEQ ID NO: 136) FYCSYLYMCEVCCYE (SEQ ID NO: 137) GFCTQHTVLTWCPTS (SEQ ID NO: 138) LSGRSDQH (SEQ ID NO: 1165) LSGRSDTH (SEQ ID NO: 1166) LSGRSDYH (SEQ ID NO: 1169) LSGRSDNP (SEQ ID NO: 1520) LSGRSANP (SEQ ID NO: 1695) LSGRSANI (SEQ ID NO: 1696) LSGRSDNI (SEQ ID NO: 1697) MIAPVAYR (SEQ ID NO: 1698) RPSPMWAY (SEQ ID NO: 1699) WATPRPMR (SEQ ID NO: 1700) FRLLDWQW (SEQ ID NO: 1701) ISSGL (SEQ ID NO: 1702) ISSGLLS (SEQ ID NO: 1703) ISSGLL (SEQ ID NO: 1704) ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 214) AVGLLAPPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 318) ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 346) ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 346) AVGLLAPPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 347)
- 187 043582
GSCPSYAVSAGLCYA (SEQ ID NO: 139) GSQCFLTPTAFCTHT (SEQ ID NO: 140) GTCHPYMQSSKICNN (SEQ ID NO: 141) GVECFVFTGGCGGYG (SEQ ID NO: 142) HELCNGHWVPCCWAY (SEQ ID NO: 143) ICDSYYAVSSGLCLL (SEQ ID NO: 144) IGCAWYVSSAGWCSP (SEQ ID NO: 145) INLCWMFASECGEHH (SEQ ID NO: 146) KCWLAEMTNLEHCNM (SEQ ID NO: 147) KHCSDFAYSSRLCDR (SEQ ID NO: 148) KVCSSYASSSGLCGW (SEQ ID NO: 149) LDSCYMFASYCVQAV (SEQ ID NO: 150) LLACHPIFVTVCQTR (SEQ ID NO: 151) LLSCPYNPEHVCHTS (SEQ ID NO: 152) LMCSLYALSSNLCGR (SEQ ID NO: 153) LMWCVLFLWSWCCRI (SEQ ID NO: 154) LPICHLTPTAVCTHI (SEQ ID NO: 155) LSNMCLAFGSCLYAW (SEQ ID NO: 156) LSRCHPIWYTICQNP (SEQ ID NO: 157) LTQCMSVHKECGGYE (SEQ ID NO: 158) LVNCRIWSWVCEEAT (SEQ ID NO: 159) LYCSWYQMSSAVCKE (SEQ ID NO: 160) MECGWYALSARFCEV (SEQ ID NO: 161) MTCSPYAMSAHFCNE (SEQ ID NO: 162) MVCSLYAYSASLCGA (SEQ ID NO: 163) NALCWSTFSWWCDMD (SEQ ID NO: 164) NFTCMLTPKAYCVQT (SEQ ID NO: 165) NGACIFTLSWCTNKT (SEQ ID NO: 166) NGCELYAAASGLCRT (SEQ ID NO: 167) NIECSVFGRCCCDNY (SEQ ID NO: 168) PACRPMFWNRSCDNI (SEQ ID NO: 169) PCRVSNMFFPYNCLD (SEQ ID NO: 170) PIMCMLLPESYCWIW (SEQ ID NO: 171) PQSCYMFASLCMPNG (SEQ ID NO: 172) PRCPQGLPLYQCSSF (SEQ ID NO: 173) PSVECLVFKRCYALP (SEQ ID NO: 174) PVCQRSATIYNCNWF (SEQ ID NO: 175) QCAAYYISSFGGCSN (SEQ ID NO: 176)
TSTSGRSANPRGGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 348) VHMPLGFLGPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 349) TSTSGRSANPRGGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 350) LSGRSDNHGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 351) VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 352) LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 353) LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 354) LSGRSGNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 355) ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 356) LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 357) QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 358) LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 359) QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 360) ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO: 361) ISSGLLSSGGSGGSLSGRNH (SEQ ID NO: 1091) ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1092) AVGLLAPPTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1093) AVGLLAPPSGRSANPRG (SEQ ID NO: 1094) ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1095) ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1096) ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1097) ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1098) ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1099) ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1100) ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO: 1101) ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO: 1102) AVGLLAPPGGLSGRSDDH (SEQ ID NO: 1103) AVGLLAPPGGLSGRSDIH (SEQ ID NO: 1104) AVGLLAPPGGLSGRSDQH (SEQ ID NO: 1105) AVGLLAPPGGLSGRSDTH (SEQ ID NO: 1106) AVGLLAPPGGLSGRSDYH (SEQ ID NO: 1107) AVGLLAPPGGLSGRSDNP (SEQ ID NO: 1108) AVGLLAPPGGLSGRSANP (SEQ ID NO: 1109) AVGLLAPPGGLSGRSANI (SEQ ID NO: 1110) ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1111) AVGLLAPPGGLSGRSDNI (SEQ ID NO: 1112)
- 188 043582
QFGCFMLARDFCGTY (SEQ ID NO: 177) QMMCPYNPEHKCHQK (SEQ ID NO: 178) QRECWMFASSCNSKN (SEQ ID NO: 179) QSNMCTTYICSSFNY (SEQ ID NO: 180) QSRCHSLAPYLCSSF (SEQ ID NO: 181) RAYCSLLFADSCNNN (SEQ ID NO: 182) RCIGINQYIDSNCYN (SEQ ID NO: 183) RLSCFMFASQCALEF (SEQ ID NO: 184) RQCIILMNHRQCFFK (SEQ ID NO: 185) RSCTPYMMSSSLCNT (SEQ ID NO: 186) RYCHYWKMPYECSSF (SEQ ID NO: 187) SCVSLSWFDMLKCYE (SEQ ID NO: 188) SDNCEIWWTVCSAAM (SEQ ID NO: 189) SFCWSYLVSSGLCGV (SEQ ID NO: 190) SMCMNNYGTTIMCGN (SEQ ID NO: 191) SMVGCGWSTFCPSRG (SEQ ID NO: 192) SSLHCANGHTCPFCL (SEQ ID NO: 193) SVCSYYEESSGICSP (SEQ ID NO: 194) SWCGWYAASSGVCAL (SEQ ID NO: 195) TCISQTIDSYLNCVN (SEQ ID NO: 196) TFCNLYTKSSNICMS (SEQ ID NO: 197) TYCVFHEYLDNTCNN (SEQ ID NO: 198) VATGCPNLMLCGSWP (SEQ ID NO: 199) VEYCSLLLGNRCDYW (SEQ ID NO: 200) VGCNMYLMSAGLCVD (SEQ ID NO: 201) VLYCSWDSGTCVGSH (SEQ ID NO: 202) VMFSCYYLETCAPGV (SEQ ID NO: 203) VRIGLCPESCLVSGF (SEQ ID NO: 204) VTCTYYATSSSLCNT (SEQ ID NO: 205) VTGCILLPKAWCWGD (SEQ ID NO: 206) VWCSIYEYSSNLCSR (SEQ ID NO: 207) WMLECQYNNTCNNMT (SEQ ID NO: 208) WPCSPLEYYNNICNV (SEQ ID NO: 209) WTYDCHLNQTCPTYY (SEQ ID NO: 210) YCSINMYLIGGNCMY (SEQ ID NO: 211) YFCSLYANSAGFCGG (SEQ ID NO: 212) YVSCYMFSSSCPSTW (SEQ ID NO: 213) ____________________________________________________________________________________________
Любую из комбинаций, описанных в табл. 13, можно комбинировать с константными областями иммуноглобулина человека с получением полностью гуманизированных IgG, включающих IgG1, IgG2, IgG4 или мутантные константные области, с получением человеческих IgG с измененными функциями, такими как IgG1 N297A, IgG1 N297Q или IgG4 S228P. Дополнительные примеры известны специалистам в данной области. Примеры аминокислот константной области тяжелой цепи Ig, в которых мутации по меньшей мере по одной аминокислоте приводят к сниженной функции Fc, включают, без ограничения перечисленными, мутации по аминокислоте 228, 233, 234, 235, 236, 237, 239, 2 52, 254, 256, 265, 270, 297, 318, 320, 322, 327, 329, 330 и 331 константной области тяжелой цепи. Примеры комбинаций мутантных аминокислот также известны в уровне техники, такие как, без ограничения перечисленными, комбинация мутаций по аминокислотам 234, 235 и 331, таких как L234F, L235E и P331S, или комбинация аминокислот 318, 320 и 322, таких как E318А, К32ОА и К322А.
В качестве примера маскирующую часть, включающую SEQ ID NO: 66, можно комбинировать с
- 189 043582 субстратом, включающим SEQ ID NO: 294, и VL областью, включающей SEQ ID NO: 39, в комбинации с человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61, с получением легкой цепи, включающей SEQ ID NO: 380. В некоторых вариантах осуществления, например, VH область, включающая SEQ ID NO: 21, может быть объединена с константным доменом тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, с получением тяжелой цепи IgG1 (SEQ ID NO: 2048), тяжелой цепи IgG4 (SEQ ID NO: 2051), тяжелой цепи IgG4 S228P (SEQ ID NO: 2047), мутантной тяжелой цепи IgG1 N2 97A (SEQ ID NO: 2049) или мутантной тяжелой цепи IgG1 N297Q (SEQ ID NO: 2050). Коэкспрессия SEQ ID NO: 380 с SEQ ID NO: 2048 приведет к активируемому антителу IgG1 против PD-1. Коэкспрессия SEQ ID NO: 380 с SEQ ID NO: 2051 приведет к активируемому антителу IgG4 против PD-1. Коэкспрессия SEQ ID NO: 380 с SEQ ID NO: 2047 приведет к активируемому антителу IgG4 S228P против PD-1. Коэкспрессия SEQ ID NO: 380 с SEQ ID NO: 2049 приведет к активируемому антителу IgG1 N297A против PD-1. Коэкспрессия SEQ ID NO: 380 с SEQ ID NO: 2050 приведет к активируемому антителу IgG1 N297Q против PD-1.
В некоторых вариантах осуществления маскирующую часть, включающую SEQ ID NO: 99, комбинируют с субстратом, включающим SEQ ID NO: 214, и VL областью, включающей SEQ ID NO: 47, в комбинации с человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61, с получением легкой цепи, включающей SEQ ID NO: 2 055. В некоторых вариантах осуществления спейсер QGQSGQG (SEQ ID NO: 362) добавлен на N-конец SEQ ID NO: 2055 с получением SEQ ID NO: 2054. В некоторых вариантах осуществления маскирующую часть, включающую SEQ ID NO: 99, комбинируют с субстратом, включающим SEQ ID NO: 1100, и VL областью, включающей SEQ ID NO: 47, в комбинации с человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61, с получением легкой цепи, включающей SEQ ID NO: 2057. В некоторых вариантах осуществления спейсер QGQSGQG (SEQ ID NO: 362) добавлен на N-конец SEQ ID NO: 2057 с получением SEQ ID NO: 2056. В некоторых вариантах осуществления маскирующую часть, включающую SEQ ID NO: 99, комбинируют с субстратом, включающим SEQ ID NO: 1101, и VL областью, включающей SEQ ID NO: 47, в комбинации с человеческим каппа константным доменом, включающим SEQ ID NO: 61, с получением легкой цепи, включающей SEQ ID NO: 2059. В некоторых вариантах осуществления спейсер QGQSGQG (SEQ ID NO: 362) добавлен на Nконец SEQ ID NO: 2059 с получением SEQ ID NO: 2058. В некоторых вариантах осуществления VH область, включающую SEQ ID NO: 21, можно комбинировать с константным доменом тяжелой цепи иммуноглобулина человека IgG4 S22 8P, включающим SEQ ID NO: 63, с получением тяжелой цепи, включающей SEQ ID NO: 2052. В некоторых вариантах осуществления С-концевой лизин в SEQ ID NO: 2052 отсутствует с получением аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 2053. Коэкспрессия любой из указанных легких цепей с любой из указанных тяжелых цепей приведет к получению активируемого антитела согласно вариантам осуществления.
Аминокислотные последовательности константной области показаны ниже в SEQ ID NO: 381, 382, 383 и 1807.
CH1-концевая аминокислотная последовательность Тц IgG1:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV flfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqy|n|styrws VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCL VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 381)
CH1-концевая аминокислотная последовательность IgG1NA:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV flfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqy||]styrws VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCL VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 382)
CH1-концевая аминокислотная последовательность IgG1NQ:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV flfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqy|q|styrws VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCL VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 1807)
CH1-концевая аминокислотная последовательность Тц IgG4:
- 190 043582
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP|P|CPAPEFLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 383)
Аминокислотная последовательность легкой цепи (Лц):
AMSGCSWSAFCPYLA[XI]LSGRSDNH[Х2]DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASES
VDNYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQPEDFATYYC
QQSKDVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN
ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 380) где каждый из X1 и X2 независимо может быть соединительным пептидом или отсутствовать.
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи (Тц) IgG4 S228P:
EVQLVE S GGGLVOPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVROAPGKGLEWVAYISNSGGNAH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTSPFVYWGOGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS LGK (SEQ ID NO: 2047)
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи (Тц) IgG1:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNAH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTSPFVYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP kpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqy|n|styrvvsvltvl HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG (SEQ ID NO: 2048)
Аминокислотная последовательность Тц IgG1NA:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNAH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTSPFVYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP kpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqy||]styrwsvltvl HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG (SEQ ID NO: 2049)
Аминокислотная последовательность Тц IgG1NQ:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNAH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTSPFVYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP kpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqy|q|styrwsvltvl HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG (SEQ ID NO: 2050)
Аминокислотная последовательность Тц IgG4:
- 191 043582
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNAH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTSPFVYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP||]CPAPEFLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSLG (SEQ ID NO: 2051)
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи 1 (SEQ ID NO: 2052):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNAH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTSPFVYWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS LGK
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи 2 (SEQ ID NO: 2053):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVAYISNSGGNAH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTREDYGTSPFVYWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS LG
Аминокислотная последовательность легкой цепи 1 со спейсером (SEQ ID NO: 2054):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASW CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC]
Аминокислотная последовательность легкой цепи 1 без спейсера (SEQ ID NO: 2055):
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC
Аминокислотная последовательность легкой цепи 2 со спейсером (SEQ ID NO: 2056):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASW CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC]
Аминокислотная последовательность легкой цепи 2 со спейсером (SEQ ID NO: 2057):
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC
Аминокислотная последовательность легкой цепи 3 со спейсером (SEQ ID NO: 2058):
- 192 043582
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSDIQLTQSPS SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASW CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC]
Аминокислотная последовательность легкой цепи 3 со спейсером (SEQ ID NO: 2059):
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC
Пример 10. Оценка эффективности маскирующих частей.
В данном примере описаны активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию с пониженным связыванием с hPD-1.
Маскирование способности антитела связываться со своим антигеном является примером ингибирования связывания. Степень ингибирования зависит от аффинности антитела к его антигену, аффинности маскирующей молекулы (также указанной в настоящем изобретении как маска) к антителу и концентрации всех реагентов. Локальные концентрации присоединенной пептидной маски (ингибитора) очень высоки в отношении активируемого антитела, порядка 10 мМ, поэтому пептиды с умеренной аффинностью будут эффективно маскировать связывание антигена активируемым антителом.
Эффективность маскирования оценивали с помощью стандартного планшетного ELISA. Коротко, человеческий PD-1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитела против PD-1 и активируемые антитела наносили на планшет в серийном разведении и позволяли связываться. Связанное антитело и активируемые антитела детектировали Fab-специфичным HRP-конъюгатом IgG против человеческих антител (Sigma, St Louis, МО) и визуализировали хромогенным субстратом ТМВ (Thermo Scientific, Rockford, IL). Показаны кривые изотерм связывания для активируемых антител против PD-1, А1.4 и А1.5 (фиг. 14-18). Кривые строили в Prizm (Sigma Plot); данные аппроксимировали в модели насыщающего связывания с одним участком и определяли равновесную константу диссоциации, Kd. Эффективность маскирования вычисляли путем деления Kd для связывания активируемых антител на Kd исходного антитела. Значения эффективности маскирования (ME) для протестированных антител показаны в табл. 14 и табл. 15 ниже (маскирующая часть 00PD-1 также именуется в настоящем изобретении как 0PD-1 и/или 0PD-1; маскирующая часть 0PD02 также именуется в настоящем изобретении как PD02 и/или PD02, и так далее), и значения кажущейся Kd (нМ) и эффективности маскирования (ME) для протестированных активируемых антител показаны в табл. 26.
Значения эффективности
Таблица 14
Значения эффективности
антител на фиг. 18 антител на фиг. 14
- 193 043582
Таблица 26
Значения кажущейся Kd и эффективности маскирования для протестированных активируемых антител на фиг. 15
Молекула Кажущаяся KD, нМ Эффективность маскирования
А1.5 (п=5 сред.) 1, 8
PD01 348 193
PD02 21 12
PD03 109 61
PD05 68 38
PD06 71 39
PD08 55 31
PD09 10 6
PD10 54 30
PD11 67 37
PD12 25 14
PD13 151 84
PD14 100 56
PD15 117 65
PD16 57 32
PD17 22 12
PD18 75 42
PD19 93 52
PD2 0 77 43
PD21 49 27
PD22 41 23
PD23 31 17
PD24 92 51
Пример 11. Активируемые антитела против PD-1 вариантов осуществления функционально маскированы в тесте с повторной стимуляцией человеческих Т-клеток.
В данном примере описано воздействие маскирующих частей на биологическую функцию антитела против PD-1 (фиг. 19).
МКПК ЦМВ-положительного донора (Hemacare) сеяли в количестве 2х105 клеток/лунка в присутствии ЦМВ вирусного лизата (Astarte) и антитела против PD-1 A1.5, активируемого антитела против PD1 согласно настоящему описанию или контрольного изотипического hIgG4 антитела. Через четыре дня супернатант удаляли из каждой лунки и определяли уровни IFN-гамма с использованием набора для ELISA анализа IFN-гамма (Life Technologies, Carlsbad, CA). Активируемые антитела против PD-1 А1.5 увеличивали ЦМВ-стимулируемую секрецию IFN-гамма по сравнению с контрольным hIgG4, но с пониженной активностью по сравнению с исходным антителом против PD-1 A1.5 (фиг. 19).
Пример 12. Антитело mIgG2a J43v2 против мышиного PD-1 связывает мышиный PD-1 и блокирует связывание мышиного PD-L1 и мышиного PD-L2.
В данном примере продемонстрировано, что антитело J43 серого хомячка против мышиного PD-1 (US 7,858,746; Agata et al., 1996, International Immunology, Vol. 8 No. 5, стр. 765-77) может функционально экспрессироваться как мышиное IgG2a антитело.
Антитело J43 против мышиного PD-1 переформатировали в мышиное IgG2a антитело с ЛЦ хомяка (аминокислота SEQ ID NO: 543; нуклеотид SEQ ID NO: 544 или SEQ ID NO: 545) путем слияния вариабельного домена тяжелой цепи с mIgG2a, получив в результате аминокислоту SEQ ID NO: 546, нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 547. Полноразмерное J43v2 mIgG2a (также называемое J43v2, J43 m2a и J43v2 m2a) экспрессировали посредством транзиентной трансфекции клеток HEK293 и очищали из супернатанта культуры с помощью хроматографии с белком G. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является антитело, включающее легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 543. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является антитело, включающее тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является антитело, включающее легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 543, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является антитело, включающее CDR-области антитела, включающие легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 543, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 546.
Функциональность исследовали посредством связывания J43v2 m2a с клетками HEK293, экспрес- 194 043582 сирующими мышиный PD-1, и подтверждения того, что связывание J43v2 m2a с HEK293-mPD-1 ингибировало связывание биотинилированного mPD-L1 и биотинилированного mPD-L2 с HEK293-mPD-1 (фиг.
20).
Приблизительно 100000 mPD-1 HEK293 клеток переносили в 96-луночный планшет с круглодонными (имеющими U-образное дно) лунками. Для эксперимента связывания, титрование 1:4 антитела J43v2 m2a, начиная со 150 нМ, добавляли к клеткам. Для экспериментов блокирования, 20 нМ биотинилированного mPD-L1-Fc или 20 нМ биотинилированного mPD-L2-Fc предварительно смешивали с 1:4 титрованием J43v2 m2a, начиная со 150 нМ, и добавляли к клеткам. Обе смеси инкубировали в течение 1 ч на льду и промывали клетки 3 раза. Связывание антитела J43v2 m2a детектировали при использовании вторичного антитела против мышиных антител (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA). Для эксперимента блокирования биотинилированный PD-L1 или биотинилированный PD-L2 детектировали при использовании стрептавидина-ФЭ (Life Technologies, Carlsbad, CA). Связывание и блокирование инкубировали в течение 30 мин на льду, промывали и регистрировали на проточном цитометре (MACSQuant).
Пример 13. J43v2 m2a вызывает диабет в модели на NOD мышах.
В данном примере было подтверждено, что антитело против PD-1, J43v2 m2a, вызывает диабет в модели на NOD мышах.
То, что антитело J43v2 m2a вызывает диабет у NOD мышей, подтверждали следующим образом. Мыши NOD сублинии NOD/ShiLtJ были получены из Jackson Laboratory в возрасте 8 недель и проходили акклиматизацию в исследовательском центре в течение 2 недель. На 10 неделе мышей исслодовали на наличие диабета перед включением в исследование, распределяли в группы и вводили дозы, как указано в табл. 16. на фиг. 21 показана дозозависимая индукция диабета у NOD мышей антителом J43v2 m2a. В день восемь после введения однократной дозы у 100% мышей в группе, получавшей изотипическое контрольное mIgG2a антитело, диабет не развивался, тогда как в группах 20 мг/кг, 3 мг/кг и 1 мг/кг 0%, 14% и 86% мышей не имели диабет, соответственно.
Таблица 16 Схема исследования
Группа Кол-во Пол Обработка Доза (мг/кг) Объем дозы (мл/кг) Схема введения Путь
1 7 F mIgG2a (Cl.18.4) 20 10 Раз в 7 дней в/б
2 7 F Антитело к PD-1 (J43v2) 20 10 Раз в 7 дней в/б
3 7 F Антитело к PD-1 (J43v2) 5 10 Раз в 7 дней в/б
4 7 F Антитело к PD-1 (J43v2) 1 10 Раз в 7 дней в/б
Пример 14. Маскирующие части активируемого J43 против мышиного PD-1.
В данном примере описана идентификация маскирующих частей (MM), которые уменьшают связывание антитела J43 против PD-1 со своей мишенью.
Антитело против PD-1 J43v2 mIgG2a использовали для скрининга библиотек с применением способа, подобного описанному в международной публикации PCT WO 2010/081173, опубликованной 15 июля 2010 года. Скрининг состоял из одного раунда МАКС и трех раундов ФАКС сортировки. Для начальной МАКС приблизительно 1х1012 клеток инкубировали с антителом J43v2 m2a при концентрации 200 нМ и отбирали приблизительно 9х107 связывающих средств при использовании сфер Dynabeads с белком G (Life Technologies, Carlsbad, CA). Раунды ФАКС проводили путем мечения клеток антителом J43v2 m2a, меченным красителем DyLight 650 (Thermo-Fisher), и собирали клетки с наиболее интенсивной флуоресценцией следующим образом: 200 нМ J43-650 с отбором наиболее ярких 3% в раунде ФАКС 1 (F1), 20 нМ J43-650 с отбором наиболее ярких 8% в раунде ФАКС 2 (F2) и 1 нМ J43-650 с отбором наиболее двух популяций, наиболее ярких 20% и наиболее ярких 0,5%, в раунде ФАКС 3 (F3-20 и F3-0.5). Отдельные клоны пептидов из F2, F3-20 и F3-0.5 идентифицировали с помощью секвенирования (табл. 17), и затем подтверждали способность отобранных клонов пептидов МР001-МР014 связывать J43-650 (маскирующая часть МР001 также указана в настоящем изобретении как МР01 и/или МР-01; маскирующая часть МР002 также указана в настоящем изобретении как МР02 и/или МР-02, и так далее).
- 195 043582
Таблица 17
Последовательности маскирующих частей
Маска Аминокислотная последовательность SEQ ID NO:
МР001 DYTYCRWVNWCLSGV 384
МР002 ILCPEDPWGHKCKLP 385
МР003 TNIWSCQTYCDHKHK 386
МР004 SDHKCKLQNCMNTKV 387
МР005 PGNCHPMQKEMCQFI 388
МР006 VEHLCYTHNKCKHPD 389
МР007 TIPRCGQHPKCKDTL 390
МР008 ACRICQDHPKTKWNS 391
МР009 LIQCTGNLDHKCKHY 392
МР010 IPCHHSADHKHKCTS 393
МР011 SRQICADYNCHNKYK 394
МР012 QPCNPQIDHKIKCIY 395
МР013 HYTICMTHNKCKDMA 396
МР014 ANSCLAVEHKCKHNY 397
МР015 AALHCTEHKCKNHIK 398
МР016 APCIINTVDWKSCEI 399
МР017 ATNWCTHKQKCKQDM 400
МР018 DCYNEHKLKTRVCNN 401
МР019 DEMQCSHKQKCTNSK 402
МР020 DVGICSQHNKCKPTK 403
МР021 EKYCSSDDHKCKITL 404
МР022 ELECSHNKVKNCIQI 405
МР023 ELHPCNTHKCKPIVN 406
МР024 EVGSCNHPKCKSNNY 407
МР025 EYSPSLAHPKLKDNA 408
МР026 FESLHPKGKHPEDLG 409
МР027 FPLCVRADRVCGDAQ 410
МР028 FQAPPASHNKLKPSL 411
МР029 GAIDSCHHKCKSPHY 412
МР030 GKIYTCEHNCTFGYS 413
МР031 HCTVNNHSSDHKCKI 414
МР032 HGTQCTHNKCKPILS 415
МРОЗЗ HIGWCLHPKCKTTTT 416
МР034 HLRTCIQKWCEHKMK 417
МР035 HTDCTMMSNHKCKIN 418
МР036 IRQQCTALACLLKVH 419
МР037 KGCSTHKMRAYCNQM 420
МР038 KMFTPCKIWCNNSYN 421
МР039 KTMCSGHKQKCNNSS 422
МР040 LACHSASLVDHKCKL 423
МР041 LCNVSMDHKHKPCYL 424
МР042 LGLNCFSEHKCKEHM 425
МР043 LGTCTHKHKNCNYTL 426
МР044 LHEGCTTHNKCKPIA 427
МР045 LKRSCTGHWTCYTNW 428
МР046 LQRCTHKEKYCHAIH 429
МР047 LSHCYDHKRKCSYIV 430
МР048 LSKCHNKEKNCSNNN 431
МР049 MDTCEMHKQKCRPSF 432
МР050 MHNECLTHKCKVPIT 433
МР051 MLTLCNTNACHKEKN 434
МР052 MRPCLNNLEHKCKHY 435
МР053 MSRCPTHKMKCSLNI 436
МР054 MWICQEHKLKCMTDT 437
МР055 MYYCKRRSAFYCTLN 438
- 196 043582
MP056 NDCQHDKQMHKCKMH 439
MP057 NFGPCPMLLGCFGFR 440
MP058 NHTDCSHPKCKSHDS 441
MP059 NLNCPHKQKNCDKYH 442
MP060 NPQCTPIDHKCKTHH 443
MP061 NTTSCTHPKCKHQGK 444
MP062 NVGGCDNYGCHKLKN 445
MP063 PCSPGNLTWDHKCKY 446
MP064 PFTKCHGFNKCKEHT 447
MP065 PGDKCTHKEKCYYNN 448
MP066 PNICNLDHKRKCRIN 449
MP067 PQLACKHPKCKDAGN 450
MP068 PSCTMWTHGGVCKHA 451
MP069 PSHRHPLAKPGFRVE 452
MP070 PTCFKTHNKSKCNRV 453
MP071 PTPVCHHNFHCFGYD 454
MP072 QATCQWKKRSKCHNK 455
MP073 QHSWCQHKAKCNYGN 456
MP074 QNCSPTYTTHKCKLT 457
MP075 QSSNCEHKRKCSSIS 458
MP076 RPCLLGLVPDHKCKL 459
MP077 RRSCMRSINTCKQKY 460
MP078 RSSCPTVTPQNCENQ 461
MP079 RTMCLDLNHKCKPSN 462
MP080 RTYWCTNHNKCKHNM 463
MP081 RVENCEHNQYCHKWK 464
MP082 SCHEDDHKNKNICSL 465
MP083 SDTCVMNHPKCKRDN 466
MP084 SSTCFHPNQKECMTK 467
MP085 SSYCGGITMRCRRAM 468
MP086 STGYCTYVNWCNYTN 469
MP087 THKCKLHLQVCTQTT 470
MP088 TMNCTHPKQKCQHTN 471
MP089 TNVLCESHNCDHKNK 472
MP090 TQHAASLGVEHKSKI 473
MP091 TQLPCFDDHKCKNTN 474
MP092 TSDSCMRQKCEHKEK 475
MP093 TTCDDHKYKHKCAQL 476
MP094 TTCGAHKEKQHCIYT 477
MP095 TTYCAYWHNKCKFET 478
MP096 VGPTCGHAKCKQSEV 479
- 197 043582
MP097 VSHPCNTHKCKTNIV 480
MP098 WDCRNTSHPKLKCHN 481
MP099 WSPCNSDHKRKCNNG 482
MP100 YANMSCEYDCHKMKY 483
MP101 YANPCTHKEKCHFKN 484
MP102 YDCSPSWTHPKCKHK 485
MP103 YGWTCTTHPKCKTTN 486
MP104 YQKCHPKAKDCGNNT 487
MP105 YWECPNMEHNKCKNN 488
MP106 PMGNRYCVLDHPKLK 489
MP107 GHKSCCQKHCEYTQT 490
MP108 LYLEMCSCCCWESIT 491
MP109 ACQAQHCYKTYACKP 492
MP110 CCYTCSVHPKCKNQL 493
MP111 CKHRCSHKEKCPANH 494
MP112 CHVLFCLMQCCRWSL 495
MP113 LNSSLVFDHPKAKPN 496
MP114 MCLLCRSKFGCKVKG 497
MP115 IICNDHKCKQNQCNN 498
MP116 IRCSLRDSLCGCERM 499
MP117 TSCQPPKHKCTCNHG 500
MP118 TQCPHRCVKPNCWLH 501
MP119 KCCETKRNHKHCTYK 502
MP120 LPHCCHKAKHCNHTS 503
MP121 PAMCAAIHEKCCIKV 504
MP122 PRSCGNQLCPCHYYK 505
MP123 TNKCSCNHNMKCINY 506
MP124 VETCCQHNKCKYPFI 507
MP125 IFCCSNHEDHKCKTN 508
MP126 VCRLICPLTCVIGVG 509
MP127 FHGCCSVYSCLTNPG 510
MP128 ALACHPKQKPLEGQL 511
MP129 SIICCATSSCPLKHL 512
MP130 APCCRPHKEKPIDSR 513
MP131 WELCCPSADCRVAMG 514
Пример 15. Исследование активируемых антител против мышного PD-1.
В данном примере описаны активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию с пониженным связыванием с hPD-1 по сравнению со связыванием исходного антитела.
Эффективность маскирования оценивали с помощью стандартного планшетного ELISA. Коротко, мышиный PD-1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитело J43v2 и активируемое антитело J43v2, включающие указанные маски, расщепляемую часть 2001 и антитело J43v2, наносили на планшет в серийном разведении и позволяли связываться. Связанное антитело и активируемые антитела детектировали HRP-конъюгатом IgG против мышиных антител (Sigma, St Louis, МО) и визуализировали хромогенным субстратом ТМВ (Thermo Scientific, Rockford, IL). Кривые строили в Prizm (Sigma Plot). Все активируемые антитела J43 показали сильно пониженное связывание по сравнению с исходным J43 (фиг. 22).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело также включает спейсерную последовательность. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела в следующей структуре, от N-конца к С-концу: спейсер-MM-CM-AB. В некоторых вариантах осуществления спейсер, соединенный непосредственно с N-концом MM активируемого антитела, выбран из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQG (SEQ ID NO: 362). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQ (SEQ ID NO: 913). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSG (SEQ ID NO: 914). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, амино- 198 043582 кислотную последовательность QGQS (SEQ ID NO: 915). В некоторых вариантах осуществления, спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQ (SEQ ID NO: 916). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QG (SEQ ID NO: 917). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотный остаток Q. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не включает спейсерную последовательность.
Дополнительные примеры спейсеров включают GQSGQG (SEQ ID NO: 2042), QSGQG (SEQ ID NO: 2043), SGQG (SEQ ID NO: 2044), GQG (SEQ ID NO: 2045), QG (SEQ ID NO: 2046) и G.
Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию могут включать любую подходящую спейсерную последовательность, такую как, например, спейсерная последовательность, выбранная из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. Дополнительные примеры спейсеров включают GQSGQG (SEQ ID NO: 2042), QSGQG (SEQ ID NO: 2043), SGQG (SEQ ID NO: 2044), GQG (SEQ ID NO: 2045), QG (SEQ ID NO: 2046) и G. Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области также будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию в некоторых вариантах осуществления не включают спейсерную последовательность.
Вариабельные домены легкой цепи активируемого антитела против мышиного PD-1.
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 МР001 2001 (SEQ ID NO: 999)]:
[QGQSGQG][DYTYCRWVNWCLSGVGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI
RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 515)
Аминокислотная последовательность J43 MP001 2001:
DYTYCRWVNWCLSGVGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1077)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP001 2001 (SEQ ID NO: 1000)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GATTATACGTATTGCCGTTGGGTTAATTGGTGCTT
GTCTGGGGTGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG СAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCT (SEQ ID NO: 516)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 МР002 2001 (SEQ ID NO: 1001)]:
[QGQSGQG][ILCPEDPWGHKCKLPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI
RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 517)
Аминокислотная последовательность J43 МР002 2001:
ILCPEDPWGHKCKLPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1078)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР002 2001 (SEQ ID NO: 1002)]:
- 199 043582
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ATTCTGTGCCCGGAGGATCCGTGGGGGCATAAGTG
CAAGCTGCCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G Τ T GATAG T GATAG СAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 518)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP003 2001 (SEQ ID NO: 1003)]:
[QGQSGQG][TNIWSCQTYCDHKHKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 519)
Аминокислотная последовательность J43 MP003 2001:
TNIWSCQTYCDHKHKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1079)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР003 2001 (SEQ ID NO: 1004)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ACGAATATTTGGAGTTGCCAGACTTATTGCGATCA
TAAGCATAAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G Τ T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 520)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 МР004 2001 (SEQ ID NO: 1005)]:
[QGQSGQG][SDHKCKLQNCMNTKVGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI
RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 521)
Аминокислотная последовательность J43 MP004 2001:
SDHKCKLQNCMNTKVGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1080)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР004 2001 (SEQ ID NO: 1006)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][AGTGATCATAAGTGCAAGCTTCAGAATTGCATGAA
TACTAAGGTTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG
AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG
AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G Τ T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT
TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 522)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP005 2001 (SEQ ID NO: 1007)]:
[QGQSGQG][PGNCHPMQKEMCQFIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 523)
Аминокислотная последовательность J43 MP005 2001:
- 200 043582
PGNCHPMQKEMCQFIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1081)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР005 2001 (SEQ ID NO: 1008)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CCTGGTAATTGCCATCCTATGCAGAAGGAGATGTG
CCAGTTTATTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG
AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA
AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT
GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG
AG GAT GAAG G T GAG TATTACTGTTTCT GAG GATAT G T T GATAG T GATAG СAAAT TGTATGTTTT
TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 524)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP006 2001 (SEQ ID NO: 1009)]:
[QGQSGQG][VEHLCYTHNKCKHPDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI
RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 525)
Аминокислотная последовательность J43 MP006 2001:
VEHLCYTHNKCKHPDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1082)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP006 2001 (SEQ ID NO: 1010)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTTGAGCATTTGTGCTATACGCATAATAAGTGCAA
GCATCCTGATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG
AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA
AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT
GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG
AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT
TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 526)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP007 2001 (SEQ ID NO: 1011)]:
[QGQSGQG][TIPRCGQHPKCKDTLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI
RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 527)
Аминокислотная последовательность J43 МР007 2001:
TIPRCGQHPKCKDTLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1083)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР007 2001 (SEQ ID NO: 1012)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ACTATTCCGAGGTGCGGTCAGCATCCGAAGTGCAA
GGATACTTTGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG
AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA
AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT
GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG
AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT
TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 528)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP008 2001 (SEQ ID NO:
- 201 043582
1013)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPKTKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 529)
Аминокислотная последовательность J43 MP008 2001:
ACRICQDHPKTKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1084)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР008 2001 (SEQ ID
NO: 1014)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGTGCCGTATTTGTCAGGATCATCCTAAGACGAA GTGGAATTCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG СAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 530)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP009 2001 (SEQ ID NO: 1015)]:
[QGQSGQG][LIQCTGNLDHKCKHYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI
RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 531)
Аминокислотная последовательность J43 МР009 2001:
LIQCTGNLDHKCKHYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1085)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР009 2001 (SEQ ID
NO: 1016)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CTTATTCAGTGCACTGGTAATCTTGATCATAAGTG CAAGCATTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCT (SEQ ID NO: 532)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP010 2001 (SEQ ID NO: 1017)]:
[QGQSGQG][IPCHHSADHKHKCTSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 533)
Аминокислотная последовательность J43 MP010 2001:
IPCHHSADHKHKCTSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1086)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP010 2001 (SEQ ID
NO: 1018)]:
- 202 043582
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ATTCCTTGCCATCATAGTGCTGATCATAAGCATAA GTGCACGAGTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG СAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 534)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 МР011 2001 (SEQ ID NO: 1019)]:
[QGQSGQG][SRQICADYNCHNKYKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 535)
Аминокислотная последовательность J43 МР011 2001:
SRQICADYNCHNKYKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1087)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР011 2001 (SEQ ID NO: 1020)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TCGCGGCAGATTTGCGCTGATTATAATTGCCATAA TAAGTATAAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 536)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP012 2001 (SEQ ID NO: 1021)]:
[QGQSGQG][QPCNPQIDHKIKCIYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 537)
Аминокислотная последовательность J43 MP012 2001:
QPCNPQIDHKIKCIYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1088)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР012 2001 (SEQ ID NO: 1022)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CAGCCTTGCAATCCGCAGATTGATCATAAGATTAA
GTGCATTTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 538)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 МР013 2001 (SEQ ID NO: 1023)]:
[QGQSGQG][HYTICMTHNKCKDMAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 539)
Аминокислотная последовательность J43 МР013 2001:
- 203 043582
HYTICMTHNKCKDMAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1089)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР013 2001 (SEQ ID NO: 1024)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CATTATACTATTTGCATGACGCATAATAAGTGCAA GGATATGGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG СAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 540)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP014 2001 (SEQ ID NO: 1025)]:
[QGQSGQG][ANSCLAVEHKCKHNYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 541)
Аминокислотная последовательность J43 MP014 2001:
ANSCLAVEHKCKHNYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD
YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1090)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР014 2001 (SEQ ID NO: 1026)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCTAATAGTTGCCTTGCTGTTGAGCATAAGTGCAA GCATAATTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTTATGAGCTGACTCAGCCACCTTCAGCATCAGTCAATGTAGGAG AGACTGTCAAAATCACCTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCA AAGGTCAGACCAGACCATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCT GAAAGAATCTCTGGGTCCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTG AG GAT GAAG G T GAC TATTACTGTTTCT CAG GATAT G T T GATAG T GATAG CAAAT TGTATGTTTT TGGCAGCGGAACCCAGCTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 542) Реформатированные тяжелая и легкая цепи против мышиного PD-1: Аминокислотная последовательность легкой цепи (ЛЦ) J43v2:
YELTQPPSASVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPER
ISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPP
SPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQW KSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPAECL (SEQ ID NO: 543)
Нуклеотидная последовательность 1 ЛЦ J43v2:
ТАТ GAG С Т GAC Т СAG С САС С Т Т СAG CAT СAG Т СААТ G ТAG GAGAGAC Т G Т СААААТ САС CTGCTCTGGGGACCAATTGCCGAAATATTTTGCAGATTGGTTTCATCAAAGGTCAGACCAGACC ATTTTGCAAGTGATATATGATGATAATAAGCGCCCCTCGGGTATCCCTGAAAGAATCTCTGGGT CCAGCTCAGGGACAACAGCCACCTTGACCATCAGAGATGTCCGGGCTGAGGATGAAGGTGACTA TTACTGTTTCTCAGGATATGTTGATAGTGATAGCAAATTGTATGTTTTTGGCAGCGGAACCCAG CTCACCGTCCTAGGTGGACCCAAGTCTTCTCCCAAAGTCACAGTGTTTCCACCTTCACCTGAGG AGCTCCGGACAAACAAAGCCACACTGGTGTGTCTGGTTAATGACTTCTACCCGGGTTCTGCAAC AGTGACCTGGAAGGCAAATGGAGCAACTATCAATGATGGGGTGAAGACTACAAAGCCTTCCAAA CAGGGCCAAAACTACATGACCAGCAGCTACCTAAGTTTGACAGCAGACCAGTGGAAATCTCACA ACAGGGTTTCCTGCCAAGTTACCCATGAAGGGGAAACTGTGGAGAAGAGTTTGTCCCCTGCAGA ATGTCTT (SEQ ID NO: 544)
Нуклеотидная последовательность 2 ЛЦ J43v2:
- 204 043582
TACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCGAGACAGTGAAGATCAC CTGTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCAGCGGAGCGACCAGACA ATCCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGAATCAGCGGAA GCAGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCGAGGACGAGGGCGACTA CTACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTTCGGCTCCGGTACCCAG CTGACAGTGCTGGGCGGACCTAAGAGCAGCCCCAAAGTGACCGTGTTCCCCCCAAGCCCCGAGG AACTGAGGACCAACAAGGCCACCCTCGTGTGCCTCGTGAACGACTTCTACCCTGGCAGCGCCAC CGTGACCTGGAAAGCCAATGGCGCCACCATCAACGACGGCGTGAAAACCACCAAGCCCAGCAAG CAGGGCCAGAACTACATGACCAGCAGCTACCTGAGCCTGACCGCCGACCAGTGGAAGTCCCACA ACAGAGTGTCCTGCCAAGTGACCCACGAGGGGGAAACCGTGGAAAAGAGCCTGAGCCCTGCCGA GTGCCTG (SEQ ID NO: 545)
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи (ТЦ) J43v2 mIgG2a:
EVRLLESGGGLVKPEGSLKLSCVASGFTFSDYFMSWVRQAPGKGLEWVAHIYTKSYNYA TYYSGSVKGRFTISRDDSRSMVYLQMNNLRTEDTATYYCTRDGSGYPSLDFWGQGTQVTVSSAK TTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSS SVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKI KDVLMIS L S PIVT CVWDVS E DD P DVQIS W FVNNVE VH T AQ T Q T HRE D YNS T LRWS AL PIQHQ DWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPE DIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSWHEGLHNHHTTK SFSRTPGK (SEQ ID NO: 546)
Последовательность нуклеиновой кислоты ТЦ J43v2 mIgG2a:
GAGGTGCGGCTTCTGGAGTCTGGTGGAGGATTAGTGAAGCCTGAGGGGTCACTGAAACT CTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTATTTCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCA GGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCTCACATATACACGAAAAGTTATAATTATGCAACTTATTACT CGGGTTCGGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCCAGAGATGATTCCCGAAGCATGGTCTACCTGCA AATGAACAACCTGAGAACTGAGGACACGGCCACTTATTACTGTACAAGAGATGGAAGCGGATAT CCCTCTCTGGATTTCTGGGGTCAAGGGACCCAAGTCACTGTCTCCTCAGCTAAAACAACAGCCC CATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATG CCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGT GGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTG TAACCTCGAGCACCTGGCCCAGCCAGTCCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCAC CAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCCATGCAAATGC CCAGCACCTAACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTAC TCATGATCTCCCTGAGCCCCATAGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGA T G T С CAGAT GAG CTGGTTTGT GAACAAC G T G GAAG TAGACACAG С T CAGACACAAAC C CATAGA GAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGA GTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAAAGACCTCCCAGCGCCCATCGAGAGAACCAT CTCAAAACCCAAAGGGTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGAAGAAGAG AT GAC TAAGAAACAG G T СAC T С T GAC CTGCATGGT CACAGAC TTCATGCCT GAAGACAT T TAC G TGGAGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGAACCAGTCCTGGACTC TGATGGTTСTТАСTTCATGTACAGCAAGCTGAGAGTGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGAAAT AGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCC GGACTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 547)
Пример 16. Активируемые антитела против mPD-1 с различной эффективностью маскирования.
В данном примере описана модуляция эффективности маскирования антител против mPD-1 путем усечения маскирующей части и одиночной аминокислотной замены.
Четыре активируемых антитела J43 отбирали с получением семейств активируемых антител против mPD-1 посредством усечения маскирующей части или аминокислотной замены одного или более остатков MM. в табл. 18 перечислены сконструированные MM. Активируемые антитела J43v2 со сконструированной MM и субстратом 2001 получали посредством трансфекции 30 мл клеток HEK293 и отобранные активируемые антитела (последовательности MPtrunc ELISA ЛЦ активируемых антител) оценивали
- 205 043582 на маскирование с помощью ELISA, как описано в примере 15 (фиг. 23).
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело также включает спейсерную последовательность. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела в следующей структуре, от N-конца к С-концу: спейсер-MM-CM-AB. В некоторых вариантах осуществления спейсер, соединенный непосредственно с N-концом MM активируемого антитела, выбран из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQG (SEQ ID NO: 362). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQ (SEQ ID NO: 913). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSG (SEQ ID NO: 914). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQS (SEQ ID NO: 915). В некоторых вариантах осуществления, спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQ (SEQ ID NO: 916). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QG (SEQ ID NO: 917). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотный остаток Q. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не включает спейсерную последовательность.
Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию могут включать любую подходящую спейсерную последовательность, такую как, например, спейсерная последовательность, выбранная из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области также будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию в некоторых вариантах осуществления не включают спейсерную последовательность.
Таблица 18
Последовательности маскирующих частей
Маска Аминокислотная последовательность SEQ ID NO:
MP8-1 QDHPKTKWNS 548
MP8-2 ACRICQDHPATKWNS 549
MP8-3 ACRICQDHPKTAWNS 550
MP8-4 ACRICQDAPKTKWNS 551
MP8-5 ACRICQDHAKTKWNS 552
MP8-6 DHPATKWNS 553
MP8-7 DHPKTAWNS 554
MP8-8 DAPKTKWNS 555
MP8-9 DAPATKWNS 556
MP8-10 ACRICQDHP 557
MP7-1 HPQSKDTL 558
MP7-2 HPKSQDTL 559
MP7-3 TIPRCGQHPLCLDTL 560
MP7-4 HPLSLDTL 561
MP7-5 HPASKDTL 562
MP7-6 HPKSADTL 563
MP5-1 PGNCHPLQKELCQFI 564
MP5-2 HPLQKELAQFI 565
MP5-3 HPLALELAQFI 566
MP5-4 PGNCHPLQLELCQFI 567
МРЗ-1 TNIWSCQTYCDHAHA 568
МРЗ-2 TNIWSCQTYCDHAHL 569
МРЗ-З TNIWSCQTYCDHLHA 570
МРЗ-4 TNIWSCQTYCDHKHA 571
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 МР5-2 2001 (SEQ ID NO: 1027)]:
- 206 043582
[QGQSGQG][HPLQKELAQFIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNV
GETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVR AEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 572)
Аминокислотная последовательность J43 МР5-2 2001:
HPLQKELAQFIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKITCSG
DQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGDYYCF SGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1113)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР5-2 2001 (SEQ ID
NO: 1038)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CATCCTCTGCAGAAGGAGCTGGCCCAGTTTATTGG AGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGC GGAGGCTCTTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCGAGACAGTGAAGA TCACCTGTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCAGCGGAGCGACCA GACAATCCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGAATCAGC GGAAGCAGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCGAGGACGAGGGCG ACTACTACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTTCGGCTCCGGTAC CCAGCTGACAGTGCTGGGCGGACCTAAGAGCAGCCCCAAAGTGACCGTGTTCCCCCCAAGCCCC GAGGAACTGAGGACCAACAAGGCCACCCTCGTGTGCCTCGTGAACGACTTCTACCCTGGCAGCG CCACCGTGACCTGGAAAGCCAATGGCGCCACCATCAACGACGGCGTGAAAACCACCAAGCCCAG CAAGCAGGGCCAGAACTACATGACCAGCAGCTACCTGAGCCTGACCGCCGACCAGTGGAAGTCC CACAACAGAGTGTCCTGCCAAGTGACCCACGAGGGGGAAACCGTGGAAAAGAGCCTGAGCCCTG CCGAGTGCCTG (SEQ ID NO: 573)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP7-1 2001 (SEQ ID NO: 1039)]:
[QGQSGQG][HPQSKDTLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGET
VKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAED EGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 574)
Аминокислотная последовательность J43 MP7-1 2001:
HPQSKDTLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKITCSGDQL
PKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGDYYCFSGY
VDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1114)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР7-1 2001 (SEQ ID
NO: 1029)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CATCCGCAGTCTAAGGATACTTTGGGAGGTGGCTC GAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGCTCT TACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCGAGACAGTGAAGATCACCTGTA GCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCAGCGGAGCGACCAGACAATCCT GCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGAATCAGCGGAAGCAGC AGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCGAGGACGAGGGCGACTACTACT GCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTTCGGCTCCGGTACCCAGCTGAC AGTGCTGGGCGGACCTAAGAGCAGCCCCAAAGTGACCGTGTTCCCCCCAAGCCCCGAGGAACTG AGGACCAACAAGGCCACCCTCGTGTGCCTCGTGAACGACTTCTACCCTGGCAGCGCCACCGTGA CCTGGAAAGCCAATGGCGCCACCATCAACGACGGCGTGAAAACCACCAAGCCCAGCAAGCAGGG CCAGAACTACATGACCAGCAGCTACCTGAGCCTGACCGCCGACCAGTGGAAGTCCCACAACAGA GTGTCCTGCCAAGTGACCCACGAGGGGGAAACCGTGGAAAAGAGCCTGAGCCCTGCCGAGTGCC TG (SEQ ID NO: 575)
MPtrunc ELISA ЛЦ активируемых антител:
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP7-5 2001 (SEQ ID NO: 1115)]:
[QGQSGQG][HPASKDTLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGET
VKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAED EGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 576)
- 207 043582
Аминокислотная последовательность J43 MP7-5 2001:
HPASKDTLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKITCSGDQL
PKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGDYYCFSGY
VDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1115)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 МР7-5 2001 (SEQ ID NO: 1031)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CATCCGGCGTCTAAGGATACTTTGGGAGGTGGCTC
GAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGCTCT
TACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCGAGACAGTGAAGATCACCTGTA
GCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCAGCGGAGCGACCAGACAATCCT
GCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGAATCAGCGGAAGCAGC
AGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCGAGGACGAGGGCGACTACTACT
GCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTTCGGCTCCGGTACCCAGCTGAC
AGTGCTGGGCGGACCTAAGAGCAGCCCCAAAGTGACCGTGTTCCCCCCAAGCCCCGAGGAACTG
AGGACCAACAAGGCCACCCTCGTGTGCCTCGTGAACGACTTCTACCCTGGCAGCGCCACCGTGA
CCTGGAAAGCCAATGGCGCCACCATCAACGACGGCGTGAAAACCACCAAGCCCAGCAAGCAGGG
CCAGAACTACATGACCAGCAGCTACCTGAGCCTGACCGCCGACCAGTGGAAGTCCCACAACAGA
GTGTCCTGCCAAGTGACCCACGAGGGGGAAACCGTGGAAAAGAGCCTGAGCCCTGCCGAGTGCC
TG (SEQ ID NO: 577)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP8-2 2001 (SEQ ID NO: 1032)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI
RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 578)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-2 2001:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI
TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1116)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] J43 MP8-2 2001 (SEQ ID NO: 1033)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGTGCCGTATTTGTCAGGATCATCCTGCGACGAA GTGGAATTCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGAGGCTCTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCGA GACAGTGAAGATCACCTGTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCAG CGGAGCGACCAGACAATCCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCCG AGAGAATCAGCGGAAGCAGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCGA GGACGAGGGCGACTACTACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTTC GGCTCCGGTACCCAGCTGACAGTGCTGGGCGGACCTAAGAGCAGCCCCAAAGTGACCGTGTTCC CCCCAAGCCCCGAGGAACTGAGGACCAACAAGGCCACCCTCGTGTGCCTCGTGAACGACTTCTA CCCTGGCAGCGCCACCGTGACCTGGAAAGCCAATGGCGCCACCATCAACGACGGCGTGAAAACC ACCAAGCCCAGCAAGCAGGGCCAGAACTACATGACCAGCAGCTACCTGAGCCTGACCGCCGACC AGTGGAAGTCCCACAACAGAGTGTCCTGCCAAGTGACCCACGAGGGGGAAACCGTGGAAAAGAG CCTGAGCCCTGCCGAGTGCCTG (SEQ ID NO: 579)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP8-8 2001 (SEQ ID NO: 1034)]:
[QGQSGQG][DAPKTKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGE
TVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAE DEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 580)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-8 2001:
DAPKTKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKITCSGDQ
LPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGDYYCFSG YVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1117)
- 208 043582
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] J43 MP8-8 2001 (SEQ ID
NO: 1035)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GATGCTCCTAAGACGAAGTGGAATTCTGGAGGTGG
CTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGC
TCTTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCGAGACAGTGAAGATCACCT
GTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCAGCGGAGCGACCAGACAAT
CCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGAATCAGCGGAAGC
AGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCGAGGACGAGGGCGACTACT
ACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTTCGGCTCCGGTACCCAGCT
GACAGTGCTGGGCGGACCTAAGAGCAGCCCCAAAGTGACCGTGTTCCCCCCAAGCCCCGAGGAA
CTGAGGACCAACAAGGCCACCCTCGTGTGCCTCGTGAACGACTTCTACCCTGGCAGCGCCACCG
TGACCTGGAAAGCCAATGGCGCCACCATCAACGACGGCGTGAAAACCACCAAGCCCAGCAAGCA
GGGCCAGAACTACATGACCAGCAGCTACCTGAGCCTGACCGCCGACCAGTGGAAGTCCCACAAC
AGAGTGTCCTGCCAAGTGACCCACGAGGGGGAAACCGTGGAAAAGAGCCTGAGCCCTGCCGAGT
GCCTG (SEQ ID NO: 581)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP8-9 2001 (SEQ ID NO: 1036)]:
[QGQSGQG][DAPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGE
TVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAE
DEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 582)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-9 2001:
DAPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKITCSGDQ
LPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGDYYCFSG
YVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1118)
Последовательность нуклеиновой кислоты [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP8-9 2001 (SEQ ID NO: 1037)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GATGCTCCTGCGACGAAGTGGAATTCTGGAGGTGG
CTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGAGGC
TCTTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCGAGACAGTGAAGATCACCT
GTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCAGCGGAGCGACCAGACAAT
CCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCCGAGAGAATCAGCGGAAGC
AGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCGAGGACGAGGGCGACTACT
ACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTTCGGCTCCGGTACCCAGCT
GACAGTGCTGGGCGGACCTAAGAGCAGCCCCAAAGTGACCGTGTTCCCCCCAAGCCCCGAGGAA
CTGAGGACCAACAAGGCCACCCTCGTGTGCCTCGTGAACGACTTCTACCCTGGCAGCGCCACCG
TGACCTGGAAAGCCAATGGCGCCACCATCAACGACGGCGTGAAAACCACCAAGCCCAGCAAGCA
GGGCCAGAACTACATGACCAGCAGCTACCTGAGCCTGACCGCCGACCAGTGGAAGTCCCACAAC
AGAGTGTCCTGCCAAGTGACCCACGAGGGGGAAACCGTGGAAAAGAGCCTGAGCCCTGCCGAGT
GCCTG (SEQ ID NO: 583)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP8-2 2003 (SEQ ID NO: 1119):
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSYELTQPPS
ASVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLT
IRDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 1120)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-2 2003:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSYELTQPPSASVNVGETVK
ITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEG DYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1119)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP8-2 2003 (SEQ ID NO: 1121):
- 209 043582
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGTGCCGTATTTGTCAGGATCATCCTGCGACGAA GTGGAATTCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GCCAATCCTCGTGGCGGAGGATCCTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGG GCGAGACAGTGAAGATCACCTGTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCA CCAGCGGAGCGACCAGACAATCCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATC CCCGAGAGAATCAGCGGAAGCAGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGG CCGAGGACGAGGGCGACTACTACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGT GTTCGGCTCCGGTACCCAGCTGACAGTGCTG] (SEQ ID NO: 1122)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP8-2 2005 (SEQ ID NO: 1123):
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGAVGLLAPPSGRSANPRGGGSYELTQPP
SASVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATL TIRDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 1124)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-2 2005:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGAVGLLAPPSGRSANPRGGGSYELTQPPSASVNVGETV KITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDE GDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1123)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP8-2 2008 (SEQ ID NO: 1127):
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDGHGGGSYELTQPPSA
SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 1128)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-2 2008:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDGHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1127)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP8-2 2008 (SEQ ID NO: 1129):
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGTGCCGTATTTGTCAGGATCATCCTGCGACGAA
GTGGAATTCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACCAGCACGGCGGAGGATCCTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCG AGACAGTGAAGATCACCTGTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCA GCGGAGCGACCAGACAATCCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCC GAGAGAATCAGCGGAAGCAGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCG AGGACGAGGGCGACTACTACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTT CGGCTCCGGTACCCAGCTGACAGTGCTG] (SEQ ID NO: 1130)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-2 2012:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1131)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP8-2 2012 (SEQ ID NO: 616):
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGTGCCGTATTTGTCAGGATCATCCTGCGACGAA
GTGGAATTCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTG.TCCGGCAGATC CGCTAATGCGGGCGGAGGATCCTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGC GAGACAGTGAAGATCACCTGTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACC AGCGGAGCGACCAGACAATCCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCC CGAGAGAATCAGCGGAAGCAGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCC GAGGACGAGGGCGACTACTACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACArGCAAGCTGTACGTG TTCGGCTCCGGTACCCAGCTGACAGTGCTG] (SEQ ID NO: 1133)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43 MP8-2 2011 (SEQ ID NO: 1134):
- 210 043582
[QGQSGQG][AGRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL] (SEQ ID NO: 1135)
Аминокислотная последовательность J43 MP8-2 2011:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVL (SEQ ID NO: 1134)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [J43 MP8-2 2011 (SEQ ID NO: 1136): [CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGTGCCGTATTTGTCAGGATCATCCTGCGACGAA
GTGGAATTCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCCCGGCGGAGGATCCTACGAGCTGACCCAGCCTCCTAGCGCCTCCGTGAATGTGGGCG AGACAGTGAAGATCACCTGTAGCGGCGACCAGCTGCCCAAGTACTTCGCCGACTGGTTCCACCA GCGGAGCGACCAGACAATCCTGCAAGTGATCTACGACGACAACAAGCGGCCCAGCGGCATCCCC GAGAGAATCAGCGGAAGCAGCAGCGGCACCACCGCCACCCTGACCATTAGAGATGTGCGGGCCG AGGACGAGGGCGACTACTACTGCTTTAGCGGCTACGTGGACAGCGACAGCAAGCTGTACGTGTT CGGCTCCGGTACCCAGCTGACAGTGCTG] (SEQ ID NO: 1137)
Пример 17. Активируемые антитела J43 против мышиного PD-1 уменьшают число случаев диабета у NOD мышей.
В данном примере активируемые антитела против PD-1 J43 исследовали на способность защищать от анти-PD-l индукции диабета у NOD мышей. NOD мыши сублинии NOD/ShiLtJ были получены из Jackson Laboratory в возрасте 8 недель и проходили акклиматизацию в исследовательском центре в течение 2 недель. На 10 неделе мышей проверяли на наличие диабета перед включением в исследование, распределяли в группы и вводили дозы, как указано в табл. 4.
Таблица 4 Схема дозирования
Группа Кол-во Пол Обработка Доза (мг/кг) Объем дозы (мл/кг) Схема введения Путь
1 7 F mIgG2a (Cl.18.4) 10 10 Раз в 7 дней в/б
2 7 F Антитело к PD-1 J43 т2а 10 10 Раз в 7 дней в/б
3 7 F Антитело к PD-1 J43 т2а 3 10 Раз в 7 дней в/б
4 7 F Антитело к PD-1 J43 т2а 1 10 Раз в 7 дней в/б
5 7 F J43 МР7-1 2001 т2а 10 10 Раз в 7 дней в/б
6 7 F J43 МР7-1 2001 т2а 3 10 Раз в 7 дней в/б
7 7 F J43 МР8-2 2001 т2а 10 10 Раз в 7 дней в/б
8 7 F J43 МР8-2 2001 т2а 3 10 Раз в 7 дней в/б
На фиг. 24, на которой представлена зависимость % мышей без диабета от числа дней после введения дозы, показано, что антитело против PD-1 J43 вызывало диабет у NOD мышей с увеличением частоты при увеличении дозы. В день четырнадцать после введения дозы процент мышей без диабета в группах, получавших антитело, составил 14%, 43% и 71% для групп дозы 20 мг/кг, 1 мг/кг и 3 мг/кг, соответственно. Активируемые антитела J43 МР7-1 2001 т2а и J43 МР8-2 2001 т2а потребовали увеличения дозы, чтобы вызвать диабет с частотой, сопоставимой с исходным антителом. В день четырнадцать после введения дозы J43 МР7-1 2001 ш2а, 57% в группе 20 мг/кг не имели диабета, и все мыши в группе 3 мг/кг не имели диабета. В день четырнадцать после введения дозы J43 МР8-2 2001 ш2а, 71% в группе 20 мг/кг и 86% в группе 3 мг/кг не имели диабета.
Пример 18. Оценка эффективности маскирующих частей.
В данном примере описаны дополнительные активируемые антитела против PD-1, которые показывают пониженное связывание с hPD-1.
Примеры дополнительных активируемых антител согласно настоящему описанию, включающих антитело против PD1 А1.5 и различные комбинации маски и субстрата, были получены с применением способов, описанных в настоящем изобретении.
Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновых кислот указанных вариабельных доменов активируемых антител против PD-1 настоящего описания представлены ниже. Антитела были получены в виде h!gG4, содержащих одну аминокислотную замену, S228P (Angal, et al., 1993. Mol Immunol 30:105-8.) в ТЦ и hK ЛЦ формате.
Эффективность маскирования нескольких таких активируемых антител определяли, как описано в настоящем изобретении. Результаты показаны на фиг. 25А и 25В.
В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело также включает спейсерную последовательность. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с ММ активи
-211 043582 руемого антитела. В некоторых вариантах осуществления спейсер соединен непосредственно с MM активируемого антитела в следующей структуре, от N-конца к С-концу: спейсер-MM-CM-AB. В некоторых вариантах осуществления спейсер, соединенный непосредственно с N-концом MM активируемого антитела, выбран из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQG (SEQ ID NO: 362). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSGQ (SEQ ID NO: 913). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQSG (SEQ ID NO: 914). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQS (SEQ ID NO: 915). В некоторых вариантах осуществления, спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QGQ (SEQ ID NO: 916). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотную последовательность QG (SEQ ID NO: 917). В некоторых вариантах осуществления спейсер включает, по меньшей мере, аминокислотный остаток Q. В некоторых вариантах осуществления активируемое антитело не включает спейсерную последовательность. Дополнительные примеры спейсеров включают GQSGQG (SEQ ID NO: 2042), QSGQG (SEQ ID NO: 2043), SGQG (SEQ ID NO: 2044), GQG (SEQ ID NO: 2045), QG (SEQ ID NO: 2046) и G.
Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию могут включать любую подходящую спейсерную последовательность, такую как, например, спейсерная последовательность, выбранная из группы, состоящей из QGQSGQG (SEQ ID NO: 362), QGQSGQ (SEQ ID NO: 913), QGQSG (SEQ ID NO: 914), QGQS (SEQ ID NO: 915), QGQ (SEQ ID NO: 916), QG (SEQ ID NO: 917) и Q. Дополнительные примеры спейсеров включают GQSGQG (SEQ ID NO: 2042), QSGQG (SEQ ID NO: 2043), SGQG (SEQ ID NO: 2044), GQG (SEQ ID NO: 2045), QG (SEQ ID NO: 2046) и G. Хотя последовательности, показанные ниже, включают спейсерную последовательность SEQ ID NO: 362, средним специалистам в данной области также будет известно, что активируемые антитела против PD-1 согласно настоящему описанию в некоторых вариантах осуществления не включают спейсерную последовательность.
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD01 2003 (SEQ ID NO: 1138):
[QGQSGQG][AMSGCSWSAFCPYLAGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSDIQLTQSP
SSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSG
TDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1139)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD01 2003:
AMSGCSWSAFCPYLAGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDR
VTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSM QPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1138)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD001 2003 (SEQ ID NO: 1141)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGATGAGTGGGTGCTCGTGGTCTGCTTTTTGCCC
GTATTTGGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GCCAATCCTCGTGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCA GCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAG CTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGC AATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGA CCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCC CTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1142)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD01 2012 (SEQ ID NO: 1144):
[QGQSGQG][AMSGCSWSAFCPYLGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSDIQLTQSPSS
LSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1143)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD01 2012:
AMSGCSWSAFCPYLGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVT
ITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQP
EDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1144)
- 212 043582
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD01 2012 (SEQ ID NO:
1145)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGATGAGTGGGTGCTCGTGGTCTGCTTTTTGCCC
GTATTTGGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GCTAATCCCGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1146)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD01 2011 (SEQ ID NO: 1148):
[QGQSGQG][AMSGCSWSAFCPYLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSDIQLTQSPSS
LSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1147)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD01 2011:
AMSGCSWSAFCPYLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVT
ITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQP EDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1148)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD01 2011 (SEQ ID NO:
1149)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGATGAGTGGGTGCTCGTGGTCTGCTTTTTGCCC
GTATTTGGCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCCCGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1150)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2001 (SEQ ID NO: 1152):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1151)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2001:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1152)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2001 (SEQ ID NO:
1153)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA
TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1154)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 1004/GG/0001 (SEQ ID NO: 1156):
- 213 043582
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGGSDIQL
TQSPSSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSG SGSGTDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1155)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 1004/GG/0001:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSAVGLLAPPGGLSGRSDNHGGGSDIQLTQSPSSLSAS
VGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLT ISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1156)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2005 (SEQ ID NO: 1160):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSAVGLLAPPSGRSANPRGGGGSDIQLT
QSPSSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGS GSGTDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1159)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2005:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSAVGLLAPPSGRSANPRGGGGSDIQLTQSPSSLSASV
GDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1160)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2010 (SEQ ID NO: 1164):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDYHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1163)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2010:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDYHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1164)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2014 (SEQ ID NO: 1168):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNIGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1167)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2014:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNIGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ
PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1168)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2003 (SEQ ID NO: 1170):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSDIQLTQSP
SSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSG TDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1171)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2003:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDR
VTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSM QPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1170)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2003 (SEQ ID NO: 1172)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GCCAATCCTCGTGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCA GCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAG CTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGC AATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGA CCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCC CTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1173)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2006 (SEQ ID NO:
- 214 043582
1174):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDDHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1175)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2006:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDDHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1174)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2006 (SEQ ID NO: 1176)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACGATCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1177)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2007 (SEQ ID NO: 1178):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDIHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1179)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2007:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDIHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1178)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2007 (SEQ ID NO: 1180)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACATTCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1181)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2009 (SEQ ID NO: 1182):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDTHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1183)
Аминокислотная последовательность [PD-1 1.5 PD34 2009:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDTHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1182)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2009 (SEQ ID NO: 1184)]:
- 215 043582
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA
TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACACTCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1185)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2008 (SEQ ID NO: 1186):
[QGQSGQG] [TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDQHGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1187)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2008:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDQHGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ
PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1186)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2008 (SEQ ID NO: 1188)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA
TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACCAGCACGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1189)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2012 (SEQ ID NO: 1190):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1191)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2012:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ
PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1190)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2012 (SEQ ID NO: 1192)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA
TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GCTAATCCCGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG
TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT
CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT
CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA
TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG
GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1193)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2013 (SEQ ID NO: 1194):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANIGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1195)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2013:
- 216 043582
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSANIGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ
PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1194)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2013 (SEQ ID NO:
1196)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GCTAATATTGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1197)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD34 2011 (SEQ ID NO: 1198):
[QGQSGQG][TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSDIQLTQSPS
SLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1199)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD34 2011:
TSYCSIEHYPCNTHHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRV
TITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSMQ PEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1198)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1125)] [PD-1 1.5 PD034 2011 (SEQ ID NO: 1200)]:
[CAGGGGCAATCTGGCCAGGGG][ACGTCTTACTGCAGTATTGAGCATTACCCCTGCAA TACACATCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCCCGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCG TGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAGCTT CATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGCAAT CAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCA TCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCCCTG GACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1201)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PD-1 1.5 PD006 2003 (SEQ ID NO: 1202):
[QGQSGQG][APRCYMFASYCKSQYGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSDIQLTQSP
SSLSASVGDRVTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSG TDFTLTISSMQPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK] (SEQ ID NO: 1203)
Аминокислотная последовательность PD-1 1.5 PD006 2003:
APRCYMFASYCKSQYGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDR
VTITCRASESVDAYGISFMNWFQQKPGKAPKLLIYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSM QPEDFATYYCQQSKDVPWTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1202)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PD-1 1.5 PD006 2003 (SEQ ID NO: 1204)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCGCCTAGGTGCTATATGTTTGCGTCGTATTGCAA GAGTCAGTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GCCAATCCTCGTGGCGGAGGATCCGATATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCA GCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGACGCTTACGGCATCAG CTTCATGAACTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCCAGC AATCAGGGCAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGA CCATCAGCAGCATGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAAGGACGTGCC CTGGACCTTTGGCCAGGGTACCAAGCTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1205)
Пример 19. Маскирующие части активируемого антитела против PD1 ниволумаба.
В данном примере описана идентификация маскирующих частей (MM), которые уменьшают связы
- 217 043582 вание антитела против PD1.
Ниволумаба со своей мишенью.
Антитело против PD1 Ниволумаб (NV1) (см., например, US 8,008,449) использовали для скрининга библиотек с применением способа, подобного описанному в международной публикации PCT WO 2010/081173, опубликованной 15 июля 2010 года. Скрининг состоял из одного раунда МАКС и четырех раундов ФАКС сортировки. Для начальной МАКС приблизительно 6x1011 клеток инкубировали с антителом NV1 при концентрации 100 нМ и отбирали приблизительно 3x107 связывающих средств при использовании сфер Dynabeads с белком A (Life Technologies, Carlsbad, CA). Раунды ФАКС проводили посредством мечения клеток антителом NV1, меченным красителем DyLight 650 (Thermo-Fisher), и отбирали клетки с наиболее сильной флуоресценцией следующим образом: 20 нМ NV1-650 с отбором наиболее ярких 13% в раунде ФАКС 1 (F1), 2 нМ NV1-650 с отбором наиболее ярких 2% в раунде ФАКС 2 (F2-1), 1 нМ NV1-650 с отбором наиболее ярких 1% в раунде ФАКС 3 (F3-1b) и 1 нМ NV1-650 с отбором двух популяций, наиболее ярких 88% и наиболее ярких 1% в раунде ФАКС 4 (F4-lb.1 и F4-1b.2). Отдельные клоны пептидов из F4-1b.1 и F4-1b.2 идентифицировали с помощью секвенирования (табл. 19), и затем отобранные клоны пептидов NV01-NV12 подтверждали на их способность связывать NV1 (маскирующая часть NV001 также указана в настоящем изобретении как NV01 и/или NV-01; маскирующая часть NV002 также указана в настоящем изобретении как NV02 и/или NV-02, и так далее).
Таблица 19
Маска Аминокислотная последовательность SEQ ID NO:
NV01 RYCHAANPDRFCGIY 1206
NV02 PRVCSTDGGDYCLLP 1207
NV03 PRPQCHHRHNCPDHP 1208
NV04 KCSRPAHQNPDRCSR 1209
NV05 ASYRCPDYKCSHTKH 1210
NV0 6 LPRCPDHPIKCIETK 1211
NV07 YTFGCPDRYCDRAAT 1212
NV0 8 RGCPDFNPPSHCYTA 1213
NV0 9 RDYCGPQSPDYCHEI 1214
NV10 PNKPCPDLQCYVTNY 1215
NV11 PRVACGEPDLCYSNT 1216
- 218 043582
NV12 RGCKKHTISTLTCPD 1217
NV13 PAYRCPDRPPCKNQM 1218
NV14 NARCYPYFGDNCHMN 1220
NV15 PTLRCPDRWCYDSPR 1221
NV16 PSNLCPDKWCQTWRS 1222
NV17 TPRYCAASYCPAHGY 1223
NV18 RPGCGAVSPRCPDAP 1224
NV19 VLRCHKQNPDNCNNH 1225
NV2 0 GVKSCREPDFCSRGS 1226
NV21 RNNLCPDYSCNNHNS 1227
NV22 RAACHRLNPDACTNG 1228
NV2 3 VCQSDRIPDYVTCTD 1229
NV2 4 RNCRIASINPDYCNI 1230
NV2 5 KEWRCPDYKCKPSYH 1231
NV2 6 NLRICHKSLCPDYIK 1232
NV2 7 NTHKCSNTNICPSFN 1233
NV2 8 STRYCQASQCQMSPY 1234
NV2 9 THRFCTASLCNKNTS 1235
NV3 0 YTLCNTRSPDWCPNK 1236
NV31 IRCTTGQSPDYCPQS 1237
NV32 RCNQPDKNDQMLCNI 1238
NV33 GTCRTDHQSPDYCYY 1239
NV34 RGCFRSGDSLGMCPD 1240
NV35 SGCFDSNEHRHCSRI 1241
NV3 6 NRCMKLWYNPDCVAR 1242
NV37 PLCARPHYWSPCDQS 1243
NV3 8 DSKCHPNSPDYCFNS 1244
NV3 9 NGSCRPLGGDFCGNR 1245
NV4 0 KTRCIEMSGDYCAKS 1246
NV41 IRPCMYNWGDLCNQF 1247
NV42 VKTCMENNPDYCYNN 1248
NV4 3 LRMCFEASGDYCDQQ 1249
NV4 4 IRKCQLDGPDQCMLT 1250
NV4 5 KWKCHKNNPNYCNNR 1251
NV4 6 RTMCLDTNPDYCQSH 1252
NV4 7 LAACHSMDSHRCPDY 1253
NV4 8 RSPCIHNATMCPDYT 1254
NV4 9 MPRCPDWPPRCSMVI 1255
NV50 VRQLCRLPDYCPSGK 1256
NV51 PRPPCAQSLNCPDRA 1257
NV52 SFGRCTLVRTCPDFM 1258
- 219 043582
NV53 RDKPCPDFSCATIHY 1259
NV54 ATKPCPDRWCTMSTL 1260
NV55 SSNRCPDLRCTHHNM 1261
NV5 6 RGSMCPDLHCSLSHI 1262
NV57 NYQRCPDRTCMHNII 1263
NV58 QKRPCPDRKCHAHYN 1264
NV59 QNHRCPDRWCNKTTN 1265
NV60 RLNLCPDKHCHMTNL 1266
NV61 PQDRCPDKRCTNPGN 1267
NV62 SRWRCPDYKCEHGKY 1268
NV63 YENQCPDLYCNRYSM 1269
NV64 TARSCPVFNCPDNNS 1270
NV65 MDQRCPDAWCTSKPK 1271
NV6 6 GDLRCPDRLCPRHSL 1272
NV67 IQYLCPDYHCKASNN 1273
NV68 QHHRCPDRYCNSNNN 1274
NV69 TVALCPDYSCYHINN 1275
NV7 0 SPWRCPDRYCLSNHD 1276
NV71 SSKRCPDRFCNKTHA 1277
NV72 HTDRCPDYKCSQNHF 1278
NV7 3 SRSNCTPQRCNSDYH 1279
NV7 4 FAARCPDKYCAIHTN 1280
NV7 5 GSARCPDLVCQQTKQ 1281
NV7 6 RNLMCPDKFCNKNTK 1282
NV7 7 NIRLCPDKVCTPTWV 1283
NV7 8 MTDLCPDAHCAKTHM 1284
NV7 9 PYSRLCAYPCPDFVG 1285
NV8 0 LCGCARSPDYCKCRG 1286
NV81 WGRCERVPDCCCPRG 1287
NV82 TRNTCHTRICYGMAC 1288
NV8 3 CVCTSCSSYWTLCPD 1289
NV8 4 LCCSRGSNCPDRCTW 1290
NV8 5 CCPLCQANMCPDNQS 1291
NV8 6 ECKLCCPDLYCGGTM 1292
NV8 7 CSNPMCAYCCPDLIL 1293
NV8 8 CPRCNTYSKHDCYHQ 1294
NV8 9 FCCASKMPAPSNCHT 1295
Пример 20. Активируемые Ниволумаб антитела против PD1.
В данном примере описаны примеры активируемых Ниволумаб антител против PD1 согласно настоящему описанию.
Активируемые антитела против PD1 NV1, включающие анти-PD1 NV1 маскирующую часть, расщепляемую часть и антитело против PD1 NV1 согласно настоящему описанию, были получены согласно способам, подобным описанным в публикациях PCT WO 2009/025846 и WO 2010/081173. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1346. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 626. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1346, и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 626. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее CDR-области активируемого антитела против PD-1, включающего тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1346, и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 626.
Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновых кислот нескольких вариабельных доменов активируемых антител против PD1 настоящего описания представлены ниже. Антитела получали в виде hIgG4, содержащих одну аминокислотную замену, S228P (Angal, et al., 1993. Mol Immunol 30:105-8), в ТЦ и hK ЛЦ формате.
- 220 043582
Последовательность легкой цепи NV1:
EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASOSVSSYLAWYOQKPGOAPRLLIYDASNRATGIP
ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCOQSSNWPRTFGOGTKVEIK (SEQ ID NO: 626)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV01 2001 (SEQ ID NO:
1296):
[QGQSGQG][RYCHAANPDRFCGIYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1297)
Аминокислотная последовательность NV1 NV01 2001:
RYCHAANPDRFCGIYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1296)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV01 2001 (SEQ ID NO:
1298)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CGGTATTGCCATGCTGCGAATCCTGATCGGTTTTG CGGTATTTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1299)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV02 2001 (SEQ ID NO: 1300):
[QGQSGQG][PRVCSTDGGDYCLLPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1301)
Аминокислотная последовательность NV1 NV02 2001:
PRVCSTDGGDYCLLPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1300)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV02 2001 (SEQ ID NO:
1302)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CCTAGGGTTTGCTCTACTGATGGTGGTGATTATTG CTTGCTTCCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1303)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV03 2001 (SEQ ID NO: 1304):
[QGQSGQG][PRPQCHHRHNCPDHPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1305)
Аминокислотная последовательность NV1 NV03 2001:
PRPQCHHRHNCPDHPGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1304)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV03 2001 (SEQ ID NO: 1306)]:
- 221 043582
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CCTCGTCCGCAGTGCCATCATCGGCATAATTGTCC TGATCATCCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1307)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV04 2001 (SEQ ID NO: 1308):
[QGQSGQG][KCSRPAHQNPDRCSRGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1309)
Аминокислотная последовательность NV1 NV04 2001:
KCSRPAHQNPDRCSRGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1308)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV04 2001 (SEQ ID NO: 1310)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][AAGTGCTCGCGGCCTGCTCATCAGAATCCGGATCG TTGCTCGCGAGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1311)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV05 2001 (SEQ ID NO: 1312):
[QGQSGQG][ASYRCPDYKCSHTKHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1313)
Аминокислотная последовательность NV1 NV05 2001:
ASYRCPDYKCSHTKHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1312)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV05 2001 (SEQ ID NO: 1314)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GCTTCGTATCGGTGCCCTGATTATAAGTGCAGTCA TACTAAGCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1315)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV06 2001 (SEQ ID NO: 1316):
[QGQSGQG][LPRCPDHPIKCIETKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1317)
Аминокислотная последовательность NV1 NV06 2001:
- 222 043582
LPRCPDHPIKCIETKGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1316)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV06 2001 (SEQ ID NO: 1318)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTGCCGAGGTGCCCGGATCATCCGATTAAGTGCAT
TGAGACTAAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA
GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC
CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC
CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG
CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1319)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV07 2001 (SEQ ID NO: 1320):
[QGQSGQG][YTFGCPDRYCDRAATGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT
ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1321)
Аминокислотная последовательность NV1 NV07 2001:
YTFGCPDRYCDRAATGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1320)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV07 2001 (SEQ ID NO: 1322)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TATACGTTTGGTTGCCCTGATAGGTATTGCGATCG
TGCGGCGACGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA
GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC
CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC
CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG
CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1323)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV08 2001 (SEQ ID NO: 1324):
[QGQSGQG][RGCPDFNPPSHCYTAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT
ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1325)
Аминокислотная последовательность NV1 NV08 2001:
RGCPDFNPPSHCYTAGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1324)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV08 2001 (SEQ ID NO: 1326)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CGTGGTTGTCCGGATTTTAATCCTCCTTCTCATTG
CTATACTGCTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA
GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC
CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC
CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG
CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1327)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV09 2001 (SEQ ID NO: 1328):
- 223 043582
[QGQSGQG][RDYCGPQSPDYCHEIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT
ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1329)
Аминокислотная последовательность NV1 NV09 2001:
RDYCGPQSPDYCHEIGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1328)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV09 2001 (SEQ ID NO: 1330)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][AGGGATTATTGCGGGCCTCAGAGTCCTGATTATTG
CCATGAGATTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA
GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC
CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC
CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG
CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1331)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV10 2001 (SEQ ID NO: 1332):
[QGQSGQG][PNKPCPDLQCYVTNYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT
ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1333)
Аминокислотная последовательность NV 1 NV 10 2001:
PNKPCPDLQCYVTNYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1332)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV10 2001 (SEQ ID NO: 1334)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CCGAATAAGCCTTGCCCGGATCTGCAGTGCTATGT
GACGAATTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA
GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC
CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC
CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG
CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1335)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV11 2001 (SEQ ID NO: 1336):
[QGQSGQG][PRVACGEPDLCYSNTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT
ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1337)
Аминокислотная последовательность NV1 NV11 2001:
PRVACGEPDLCYSNTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1336)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV11 2001 (SEQ ID NO: 1338)]:
- 224 043582
[ CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT] [CCGCGGGTTGCTTGCGGTGAGCCTGATCTTTGCTA TTCTAATACTGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1339)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [NV1 NV12 2001 (SEQ ID NO: 1340):
[QGQSGQG][RGCKKHTISTLTCPDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1341)
Аминокислотная последовательность NV1 NV12 2001:
RGCKKHTISTLTCPDGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1340)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [NV1 NV12 2001 (SEQ ID NO: 1342)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CGGGGGTGCAAGAAGCATACTATTTCGACGCTTAC
GTGCCCTGATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCAGCCAGAGCGTGTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCA GCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATCTACGATGCCAGCAATAGAGCCACCGGCATC CCCGCCAGATTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCTCCCTGGAAC CCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCCGGACATTTGGCCAGGG CACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1343) Человеческая каппа константная область RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ
DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1344)
Человеческая каппа константная область
CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATC TGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGG AAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGG ACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGT CTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGA GAGTGT (SEQ ID NO: 1345) Вариабельная ТЦ NV1
OVOLVESGGGWOPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRY
YADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGOGTLVTVSS (SEQ ID
NO: 1346)
Вариабельная ТЦ NV1
CAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGAGTGGTGCAGCCTGGCAGAAGCCTGAGACT GGACTGCAAGGCCAGCGGCATCACCTTCAGCAACAGCGGCATGCACTGGGTGCGCCAGGCCCCT GGAAAAGGCCTGGAATGGGTGGCCGTGATTTGGTACGACGGCAGCAAGCGGTACTACGCCGACA GCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAATACCCTGTTCCTGCAGATGAA CAGCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCAACGACGACTATTGGGGCCAG GGCACACTCGTGACCGTGTCCTCT (SEQ ID NO: 1347) Константная hIgG4 S228P
- 225 043582
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 1348)
Константная hIgG4 S228P
GCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTGTAGCAGAAGCACCAGCGA
GTCTACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGG AACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT ACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCAAGACCTACACCTGTAA CGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAATCTAAGTACGGCCCTCCC TGCCCTCCTTGCCCAGCCCCTGAATTTCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAAC CCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA GGAAGACCCTGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACA AAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACC AGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTGCCCAGCTCCAT CGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCA TCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCA GCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCC CGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGACTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGG CAGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGA AGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA (SEQ ID NO: 1349)
Пример 21. Исследование активируемых антител против PD1 NV1.
В данном примере описаны активируемые антитела против PD1 NV1 с пониженным связыванием с hPD1.
Эффективность маскирования оценивали с помощью стандартного планшетного ELISA. Коротко, человеческий PD1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитело NV1 и активируемые антитела NV1 наносили на планшет в серийном разведении и позволяли связываться. Связанное антитело и активируемые антитела детектировали HRP-конъюгатом против Fab человека (Sigma, St Louis, МО) и визуализировали хромогенным субстратом ТМВ (Thermo Scientific, Rockford, IL). Кривые строили в Prizm (Sigma Plot). Все активируемые антитела NV1 показывали уменьшенное связывание по сравнению с исходным NV1, как показано на фиг. 26.
Пример 22. Маскирующие части активируемого пембролизумаба против PD1.
В данном примере описана идентификация маскирующих частей (MM), которые уменьшают связывание антитела против PD1 пембролизумаба со своей мишенью.
Антитело против PD1 Пембролизумаб (PM1) (см., например, US 8,354,509) использовали для скрининга библиотек с применением способа, подобного описанному в международной публикации PCT WO 2010/081173, опубликованной 15 июля 2010 года. Скрининг состоял из одного раунда МАКС и трех раундов ФАКС сортировки. Для начальной МАКС приблизительно 1,6х1012 клеток инкубировали с антителом PM1 при концентрации 200 нМ и отбирали приблизительно 8х106 связывающих средств при использовании сфер Dynabeads с белком A (Life Technologies, Carlsbad, CA). Раунды ФАКС проводили посредством мечения клеток антителом PM1, меченным красителем DyLight 650 (Thermo-Fisher) и отбирали клетки с наиболее сильной флуоресценцией следующим образом: 100 нМ PM1-650 с отбором наиболее ярких 10% в раунде ФАКС 1 (5,6х 105 для F1), 10 нМ PM1-650 с отбором наиболее ярких 1,5% в раунде ФАКС 2 (1,4х104 для F2), 1 нМ PM1-650 с отбором всех связывающих средств с превышением фона (4000) и наиболее ярких 0,2% (820) в раунде ФАКС 3 (F3). Отдельные клоны пептидов из двух популяций F3 идентифицировали с помощью секвенирования (табл. 20), и затем отобранные клоны пептидов РМО1-РМ12 подтверждали на их способность связывать PM1 (маскирующая часть РМ001 также указана в настоящем изобретении как РМ01 и/или РМ-01; маскирующая часть РМ002 также указана в настоящем изобретении как РМ02 и/или РМ-02, и так далее).
- 226 043582
Таблица 20
Маска Аминокислотная последовательность SEQ ID NO:
РМ01 GCDFTSAKHNCGSGW 1351
РМ02 VGSNCWTGPACALTS 1352
РМОЗ FCAVMFDFLSDRCLH 1353
РМ04 FCPPWLDYLGNKCMT 1354
РМ05 MSCWDFSSAQGCGQH 1355
РМ0 6 LMCADLHYNHYNCKY 1356
РМ07 ELCGWQSFSGVCTSE 1357
РМ0 8 WTYENCWASCQPHLE 1358
РМ0 9 KLTEDFSSAA 1359
РМ10 VGQSCFSGLVCDRQL 1360
РМ11 ISHYCFSGKSCRD 1361
РМ12 HCIPDFTSAAGDCMR 1362
РМ13 RLVSAYSFS 1363
РМ14 KFHHSHPLVHDFTSA 1364
РМ15 ASYPDFSSANGVGLR 1365
РМ16 GLATTLSNVDFTSAG 1366
РМ17 DFTSANSAFSGDAST 1367
РМ18 GRLPGHSWDFTSAW 1368
РМ19 SGSFYSSSAFDFTSA 1369
РМ2 0 CDDFTSAQHSRINEC 1370
РМ21 CDFTSAQGKKCRTAL 1371
РМ22 YYIDKYQSPSYGPVL 1372
РМ2 3 FSVARARSSADFTSS 1373
РМ2 4 DSDFTSAGSADSRSR 1374
РМ2 5 CDFTSATSISKRCDH 1375
РМ2 6 IESSASSWGLQASRN 1376
РМ2 7 PRYHNLNFTTPALSPGS 1377
РМ2 8 DLFARFPLDRDFTSA 1378
РМ2 9 HCNFTTPPYCSSTLW 1379
РМЗО NVPIILLTDRQLLSG 1380
РМ31 NPTACDFTSSMATYC 1381
РМ32 FVRTVRFSNSMFSVP 1382
РМЗЗ YDFSSASNSSPSRQT 1383
РМ34 AHPDFSSAMRGNLLG 1384
РМ35 SSHVVHKDFTSANSR 1385
РМ3 6 CPDFTSANGGGCWQM 1386
РМ37 SLGQSYPTDFTCPGC 1387
РМ3 8 ASMRSHEQRDFTSAY 1388
РМ3 9 SCQFWFTLCSGGVFH 1389
РМ4 0 PYPNNRTGMHDFTSA 1390
РМ41 KPFPIDFTSAGTSGT 1391
РМ42 SIKSFIPRDDFTSAA 1392
РМ4 3 GIKNPATPFVDFTSA 1393
РМ4 4 LSHTYPRGSSTIEAS 1394
РМ4 5 PSLDFSSAT 1395
РМ4 6 AFTPRIAPTFDVMKE 1396
РМ4 7 LCGLQIPPDCERS 1397
РМ4 8 AAKMVSHSERDFTSA 1398
РМ4 9 VSVECFSGMQCPHYY 1399
РМ50 ASKCRLPCMASTQIY 1400
РМ51 GLRSCNIYFSIPCTY 1401
РМ52 RGTSDGTLDFTTARS 1402
РМ53 SMYPSASRLLHPQYP 1403
-227043582
PM54 HCISCYDFTSAAGSF 1404
PM55 SSGRWGDAWACARIC 1405
PM5 6 RVFSDFTSASHSFGG 1406
PM57 TDRHSASGRDFTSAH 1407
PM58 AHCEDFSSAERIATMGC 1408
PM59 ACDPYSFSIPCDDRL 1409
PM60 NSPFTLSHIYDR 1410
PM61 IGTNFTTPSAFVAFP 1411
PM62 RDAFPIYRNADFSTP 1412
PM63 SIPNASSYNFTSSSG 1413
PM64 AGIPDKRHTYDFTSA 1414
PM65 WPLAHDSRDWNFTTP 1415
PM6 6 RHSPSSGHVDFTSAG 1416
PM67 SCFAWTDPVWNRCSW 1417
PM68 MPCDWTGPGKIWCGG 1418
PM69 RDCDFSTANFRSCNK 1419
PM7 0 LSCWSPNYLHCNDH 1420
PM71 FVCGLYSFSGVCQGV 1421
PM72 IGLMCFSGLQCPMLA 1422
PM7 3 PGMNCFSGEICQMST 1423
PM7 4 GDVGSCWASCGLQGG 1424
PM7 5 SQFQDCWASCGASFT 1425
PM7 6 VGSLNCWYSCGDIWL 1426
PM7 7 MCESWLNFLGDQCGM 1427
PM7 8 RCMISQSSFSGMCGM 1428
PM7 9 NCAPWTSNMSNHCLK 1429
PM8 0 LCGVGSATGLELCGV 1430
PM81 GCDFSSLGGRQPCTP 1431
PM82 MGCNFTTYPYHTCNT 1432
PM8 3 GSCDFTSGAGKKCGS 1433
PM8 4 VSCDFTSSHARMCSR 1434
PM8 5 MRCTDFYYNHTNCIG 1435
PM8 6 RSCDFTSAANKYCAT 1436
PM8 7 LYCDSFSVPRPNCAP 1437
PM8 8 NSCDFTSARVSKCST 1438
PM8 9 STCSDNFTTPMPCNT 1439
PM90 DICNDRPNLTHCHYF 1440
PM91 LRCDDFTSAIGCRGY 1441
PM92 EGCDFTSALHSCNNY 1442
PM93 RKGCGDFTSASCFW 1443
PM94 GMLCAGSSFGLCESM 1444
- 228 043582
PM95 RESCFGSSLGLCTNK 1445
PM9 6 ILRCYDIPTNCMNFN 1446
PM97 NSECTFGAMYCRNKP 1447
PM98 ASGCFDEDIRCSGGA 1448
PM99 HYFCNQSNPSCQTAP 1449
PM10 0 AMGCELGGAGCIGSP 1450
PM101 TLKCHMPRKLCANDP 1451
PM102 RPACRDLPHNCITST 1452
PM103 QMSCHGNFTTCHSNP 1453
PM104 LTGCARGARPCRLRV 1454
PM105 WSELCLAGPSCGWVG 1455
PM10 6 VTKSCWQLPHCITAP 1456
PM107 KAASCPHNQICNMTA 1457
PM10 8 VSKNCFSGMMCPVFA 1458
PM10 9 NRSSCWTGPTCHVLH 1459
PM110 ARTGCSGPVCLNDVS 1460
PM111 STRTCLAFTCINGNT 1461
PM112 MLDGNCWYACSYKNT 1462
PM113 FSRSDCWSACAPWRV 1463
PM114 GGRMDCWASCQPLSR 1464
PM115 NSPHSCMTNCDFTSA 1465
Пример 23. Активируемые пембролизумаб антитела против PD1.
В данном примере описаны примеры активируемых пембролизумаб антител против PD1 согласно настоящему описанию.
Активируемые антитела против PD1 РМ1, включающие анти-PDl РМ1 маскирующую часть, расщепляемую часть и антитело против PD1 РМ1 согласно настоящему описанию, получали согласно способам, подобным описанным в публикациях PCT WO 2009/025846 и WO 2010/081173. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1514. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 638. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1514, и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 638. Одним из вариантов осуществления настоящего описания является активируемое антитело против PD-1, включающее CDR-области активируемого антитела против PD-1, включающего тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1514, и легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 638.
Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновых кислот нескольких вариабельных доменов активируемых антител против PD1 настоящего описания представлены ниже. Антитела были получены в виде hIgG4, содержащих одну аминокислотную замену, S228P (Angal, et al., 1993. Mol Immunol 30:105-8.), в ТЦ и hK ЛЦ формате.
Аминокислотная последовательность легкой цепи РМ1:
EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYOQKPGOAPRLLIYLASYLE
SGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 638)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [РМ1 РМ01 2001 (SEQ ID NO: 1466)]:
[QGQSGQG][CDFTSAKHNCGSGWGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSL
SPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTL
TISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1467)
Аминокислотная последовательность PM1 PM01 2001:
CDFTSAKHNCGSGWGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
RASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDF AVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1466)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1126)] [PM1 PM01 2001 (SEQ ID NO: 1468)]:
-229043582
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGA][TGCGATTTTACTTCTGCCAAGCACAATTGCGGCTC TGGCTGGGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCAC GGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTGGCGAAAGAG CCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCTGCACTGGTA TCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTGGAAAGCGGC GTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCAGCCTGG AACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGACATTTGGCGG AGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1469)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM02 2001 (SEQ ID NO: 1470)]:
[QGQSGQG][VGSNCWTGPACALTSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1471)
Аминокислотная последовательность PM1 PM02 2001:
VGSNCWTGPACALTSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1470)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM02 2001 (SEQ ID NO: 1472)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTTGGGTCGAATTGCTGGACGGGGCCGGCGTGCGC TTTGACGTCGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1473)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM03 2001 (SEQ ID NO: 1474)]:
[QGQSGQG][FCAVMFDFLSDRCLHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1475)
Аминокислотная последовательность PM1 PM03 2001:
FCAVMFDFLSDRCLHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1474)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM03 2001 (SEQ ID NO: 1476)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTTTGCGCTGTGATGTTTGATTTTCTGTCTGATCG GTGCCTGCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1477)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM04 2001 (SEQ ID NO: 1478)]:
[QGQSGQG][FCPPWLDYLGNKCMTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1479)
Аминокислотная последовательность PM1 PM04 2001:
- 230 043582
FCPPWLDYLGNKCMTGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1478)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM04 2001 (SEQ ID NO: 1480)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTTTGCCCGCCGTGGTTGGATTATTTGGGTAATAA GTGCATGACGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1481)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM05 2001 (SEQ ID NO: 1482)]:
[QGQSGQG][MSCWDFSSAQGCGQHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1483)
Аминокислотная последовательность PM1 PM05 2001:
MSCWDFSSAQGCGQHGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1482)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM05 2001 (SEQ ID NO: 1484)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][ATGTCTTGCTGGGATTTTTCTTCGGCTCAGGGGTG CGGTCAGCATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1485)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM06 2001 (SEQ ID NO: 1486)]:
[QGQSGQG][LMCADLHYNHYNCKYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1487)
Аминокислотная последовательность PM1 PM06 2001:
LMCADLHYNHYNCKYGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1486)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM06 2001 (SEQ ID NO: 1488)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TTGATGTGCGCTGATTTGCATTATAATCATTATAA TTGCAAGTATGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1489)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM07 2001 (SEQ ID NO: 1490)]:
- 231 043582
[QGQSGQG][ELCGWQSFSGVCTSEGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1491)
Аминокислотная последовательность PM1 PM07 2001:
ELCGWQSFSGVCTSEGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1490)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM07 2001 (SEQ ID NO: 1492)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GAGTTGTGCGGTTGGCAGAGTTTTTCGGGGGTTTG
CACTAGTGAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT
GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG
GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA
GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1493)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM08 2001 (SEQ ID NO: 1494)]:
[QGQSGQG][WTYENCWASCQPHLEGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1495)
Аминокислотная последовательность PM1 PM08 2001:
WTYENCWASCQPHLEGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1494)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM08 2001 (SEQ ID NO: 1496)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][TGGACTTATGAGAATTGCTGGGCTTCGTGCCAGCC TCATTTGGAGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1497)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 913)] [PM1 PM09 2001 (SEQ ID NO: 1498)]:
[QGQSGQ][KLTEDFSSAAGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGER
ATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1499)
Аминокислотная последовательность PM1 PM09 2001:
KLTEDFSSAAGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASK
GVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYY CQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1498)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1518)] [PM1 PM09 2001 (SEQ ID NO: 1500)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAA][AAGCTTACTGAGGATTTTTCTAGCGCAGCAGGCTCGAG
CGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGATCCGAGATC
- 232 043582
GTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTGGCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTA
GAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGG
CCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTGGAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTT
TCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCG
CCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGACATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGA
AATCAAG] (SEQ ID NO: 1501)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM10 2001 (SEQ ID NO: 1502)]:
[QGQSGQG][VGQSCFSGLVCDRQLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD
FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1503)
Аминокислотная последовательность PM1 PM10 2001:
VGQSCFSGLVCDRQLGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1502)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM10 2001 (SEQ ID NO: 1504)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][GTGGGGCAGAGTTGCTTTTCTGGGCTGGTTTGCGA
TAGGCAGCTGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC
GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG
GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT
GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG
GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA
GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC
ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1505)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 913)] [PM1 PM11 2001 (SEQ ID NO: 1506)]:
[QGQSGQ][ISHYCFSGKSCRDGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSP
GERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTI
SSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1507)
Аминокислотная последовательность PM1 PM11 2001:
ISHYCFSGKSCRDGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCR
ASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA
VYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1506)
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 1518)] [PM1 PM11 2001 (SEQ ID NO: 1508)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAA][ATCTCTCACTATTGTTTCAGTGGCAAATCCTGCAGGGA
CGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCCGACAATCACGGCGGA
TCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTGGCGAAAGAGCCACCC
TGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCTGCACTGGTATCAGCA
GAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTGGAAAGCGGCGTGCCC
GCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCAGCCTGGAACCCG
AGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGACATTTGGCGGAGGCAC
CAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1509)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [PM1 PM12 2001 (SEQ ID NO: 1510)]:
[QGQSGQG][HCIPDFTSAAGDCMRGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPAT
LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTD
FTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK] (SEQ ID NO: 1511)
Аминокислотная последовательность PM1 PM12 2001:
HCIPDFTSAAGDCMRGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGSEIVLTQSPATLSLSPGERAT
LSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP
EDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1510)
- 233 043582
Нуклеотидная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 918)] [PM1 PM12 2001 (SEQ ID NO:
1512)]:
[CAAGGCCAGTCTGGCCAAGGT][CATTGCATTCCTGATTTTACTTCTGCTGCTGGTGA
TTGCATGAGGGGAGGTGGCTCGAGCGGCGGCTCTATCTCTTCCGGACTGCTGTCCGGCAGATCC GACAATCACGGCGGATCCGAGATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTG GCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGTAGAGCCTCTAAGGGCGTGTCCACCAGCGGCTACAGCTACCT GCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCTACCTGGCCTCCTACCTG GAAAGCGGCGTGCCCGCCAGATTTTCTGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCA GCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACAGCAGGGACCTGCCCCTGAC ATTTGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG] (SEQ ID NO: 1513)
Вариабельная ТЦ PM1
QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYT FTNYYMYWVROAPGOGLEWMGGINPSNGGTN
FNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLOFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGOGTTVTVSS (SEQ ID NO: 1514)
Вариабельная ТЦ PM1
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGTGGAAGTGAAGAAACCAGGCGCCAGCGTGAAGGT
GTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTTACCAACTACTACATGTACTGGGTGCGCCAGGCCCCA
GGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCGGCATCAACCCCAGCAACGGCGGCACCAACTTCAACGAGA
AG T T CAAGAACAGAG T GAC С С T GAC СAC C GACAG CAG СAC СAC СAC C G С C TAGAT G GAAC T GAA GTCCCTGCAGTTCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACGGGACTACAGATTCGACATG
GGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACAACCGTGACCGTGTCTAGT (SEQ ID NO: 1515)
Пример 24. Исследование активируемых PM1 антител против PD1.
В данном примере описаны активируемые PM1 антитела против PD1 с пониженным связыванием с hPD1.
Эффективность маскирования оценивали с помощью стандартного планшетного ELISA. Коротко, человеческий PD1-Fc (R and D systems, Minneapolis, MN) адсорбировали в лунках 96-луночного планшета для ELISA. Очищенные антитело PM1 и активируемые антитела PM1 наносили на планшет в серийном разведении и позволяли связываться. Связанное антитело и активируемые антитела детектировали HRP-конъюгатом против Fab человека (Sigma, St Louis, МО) и визуализировали хромогенным субстратом ТМВ (Thermo Scientific, Rockford, IL). Кривые строили в Prizm (Sigma Plot). Все активируемые антитела PM1 показали уменьшенное связывание по сравнению с исходным PM1, как показано на фиг. 27А, 27В и 27С.
Пример 25. Исследование активируемых антител против PD1 согласно настоящему описанию.
Оценивали связывающие свойства нескольких маскирующих частей согласно настоящему описанию, идентифицированных для антител A1.5 (PD), NV1 (NV) и PM1 (РМ). Восемь клонов пептидов из каждого эксперимента по поиску маски выращивали в течение ночи при 37°С, 850 об/мин в плашете с глубокими 2 мл лунками, в LB+хлорамфеникол+0,2% глюкозы, разводили 1:20 в LB+хлорамфеникол и выращивали 105 мин при 37°С, 850 об/мин. Экспрессию пептидов индуцировали при добавлении 0,04% арабинозы в течение 35 мин и окрашивали клоны 1 нМ A1.5-DyLight 650, 1 нМ NV1-Dylight 650 и 1 нМ PM1-Dylight 650 в холодном PBS+0,5% BSA. Клоны центрифугировали, удаляли окрашивающий раствор и ресуспендировали клетки в PBS+1% формальдегида. Флуоресценцию измеряли на проточном цитометре MACSQuant Analyser 10 производства Miltenyi Biotec, Inc. (San Diego, CA). Как показано на фиг. 28, маскирующие части были связаны с антителом против PD1, используемым в скрининге библиотеке, в результате которого они были идентифицированы.
Пример 26. Оценка связывания маскирующей части эффекторно-негативными активируемыми антителами.
В данном примере описаны дополнительные активируемые антитела против PD-1 J43, которые демонстрируют пониженное связывание с мышиным PD-1.
Примеры дополнительных активируемых антител согласно настоящему описанию, включающих эффекторно-негативное (EN) IgG2a антитело против PD1 J43 (J43 m2a EN) и различные комбинации маски и субстрата, были получены с применением способов, описанных в настоящем изобретении. Аминокислотные последовательности и последовательности нуклеиновых кислот константной области антитела IgG2a EN представлены ниже. Плазмида, кодирующая указанную эффекторно-негативную Fcобласть, pFUSE-mIgG2Ae1-Fc, доступна от InvivoGen, San Diego, CA. Fc-область mIgG2a сконструировали посредством мутации следующих аминокислот для уменьшения связывания с FcR и C1q: L235E и E318A/K320A/K322A.
- 234 043582 > m!gG2a ΕΝ
AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQS DLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLEGGPSV FIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVS ALPIQHQDWMSGKAFACAVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTUM BTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGL HNHHTTKSFSRTPGK (SEQ ID NO: 1516) > mIgG2a EN
GCCAAGACAACAGCCCCCAGCGTGTACCCTCTGGCCCCTGTGTGTGGCGATACCACAGG CAGCTCTGTGACCCTGGGCTGCCTCGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGCCAGTGACCCTGACCTGG AACAGCGGCTCTCTGTCTAGCGGCGTGCACACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGCGACCTGTACA CCCTGAGCAGCAGCGTGACCGTGACCAGCAGCACATGGCCCAGCCAGAGCATCACCTGTAACGT GGCCCACCCTGCCAGCTCCACCAAGGTGGACAAGAAGATCGAGCCCAGAGGCCCCACCATCAAG CCTTGCCCCCCTTGCAAATGCCCTGCCCCCAATCTGGAAGGCGGCCCTAGCGTGTTCATCTTCC CACCCAAGATCAAGGACGTGCTGATGATCAGCCTGAGCCCCATCGTGACCTGCGTGGTGGTGGA CGTGTCCGAGGACGACCCCGATGTGCAGATCAGTTGGTTCGTGAACAACGTGGAAGTGCACACC GCCCAGACCCAGACACACAGAGAGGACTACAACAGCACCCTGAGAGTGGTGTCCGCCCTGCCCA TCCAGCACCAGGATTGGATGAGCGGCAAGGCCTTCGCCTGCGCTGTGAACAACAAGGACCTGCC AGCCCCCATCGAGCGGACCATCTCTAAGCCTAAGGGCAGCGTGCGGGCTCCCCAGGTGTACGTG CTGCCTCCTC CAGAG GAAGAGAT GAG CAAGAAACAAG T GAGAC T GACAT G CAT G G T СAC C GAC T TCATGCCCGAGGACATCTACGTGGAATGGACCAACAACGGCAAGACCGAGCTGAACTACAAGAA CACCGAGCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTACTTCATGTACAGCAAGCTGCGGGTGGAAAAG AAAAACTGGGTGGAACGGAACAGCTACAGCTGCAGCGTGGTGCACGAGGGCCTGCACAATCACC ACACCACCAAGAGCTTCAGCCGGACCCCTGGAAAA (SEQ ID NO: 1517)
Эффективность маскирования нескольких таких активируемых антител определяли, как описано в настоящем изобретении. Результаты показаны на фиг. 29А и фиг. 29В.
ЛЦ активируемых антител J43m2a EN.
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2001 (SEQ ID NO: 1808)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1809)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2001:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1808)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2011 (SEQ ID NO: 1810)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1811)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2011:
- 235 043582
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNPGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1810)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2012 (SEQ ID NO: 1812)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1813)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2012:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANPGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1812)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2002 (SEQ ID NO: 1814)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSGNHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1815)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2002:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSGNHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1814)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2003 (SEQ ID NO: 1816)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGGSYELTQPP SASVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATL TIRDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATL VCLVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTH EGETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1817)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2003:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANPRGGGGSYELTQPPSASVNVGETV KITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDE GDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPG SATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLS PAECL (SEQ ID NO: 1816)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2006 (SEQ ID NO: 1818)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDDHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1819)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2006:
- 236 043582
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDDHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1818)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2007 (SEQ ID NO: 1820)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDIHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1821)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2007:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDIHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1820)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2008 (SEQ ID NO: 1822)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDQHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1823)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2008:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDQHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1822)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2009 (SEQ ID NO: 1824)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDTHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1825)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2009:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDTHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1824)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a EN MP8-2 2010 (SEQ ID NO: 1826)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDYHGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1827)
Аминокислотная последовательность J43m2a EN MP8-2 2010:
- 237 043582
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDYHGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1826)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a ΕΝ MP8-2 2013 (SEQ ID NO: 1828)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANIGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1829)
Аминокислотная последовательность J43m2a ΕΝ MP8-2 2013:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSANIGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1828)
Аминокислотная последовательность [спейсер (SEQ ID NO: 362)] [J43m2a ΕΝ MP8-2 2014 (SEQ ID NO: 1830)]:
[QGQSGQG][ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNIGGGSYELTQPPSA SVNVGETVKITCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTI RDVRAEDEGDYYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVC LVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEG ETVEKSLSPAECL] (SEQ ID NO: 1831)
Аминокислотная последовательность J43m2a ΕΝ MP8-2 2014:
ACRICQDHPATKWNSGGGSSGGSISSGLLSGRSDNIGGGSYELTQPPSASVNVGETVKI TCSGDQLPKYFADWFHQRSDQTILQVIYDDNKRPSGIPERISGSSSGTTATLTIRDVRAEDEGD YYCFSGYVDSDSKLYVFGSGTQLTVLGGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSA TVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPA ECL (SEQ ID NO: 1830)
Пример 27. Активируемые антитела J43 m2a ΕΝ против мышиного PD-1 уменьшают число случаев диабета у NOD мышей.
В данном примере активируемые антитела против PD1 J43 т2а EN (эффекторно-негативные) исследовали на способность защищать от индукции PD-1 ш2а EN-опосредованного диабета у NOD мышей.
NOD мыши сублинии NOD/ShiLtJ были получены из Jackson Laboratory в возрасте 8 недель и проходили акклиматизацию в исследовательском центре в течение 2 недель. На 10 неделе мышей проверяли на наличие диабета перед включением в исследование, распределяли в группы и вводили дозы, как указано в табл. 21.
Таблица 21
Группа Кол-во Пол Обработка Доза (мг/кг) Объем дозы (мл/кг) Схема введения Путь
1 7 F mIgG2a (Cl.18.4) 10 10 Раз в 7 дней в/б
2 7 F Антитело к PD-1 J43 m2a EN 10 10 Раз в 7 дней в/б
3 7 F Антитело к PD-1 J43 m2a EN 3 10 Раз в 7 дней в/б
4 7 F Антитело к PD-1 J43 m2a EN 1 10 Раз в 7 дней в/б
5 7 F J43 МР7-1 2001 т2а EN 10 10 Раз в 7 дней в/б
6 7 F J43 МР7-1 2001 т2а EN 3 10 Раз в 7 дней в/б
7 7 F J43 МР8-2 2001 т2а EN 10 10 Раз в 7 дней в/б
8 7 F J43 МР8-2 2001 т2а EN 3 10 Раз в 7 дней в/б
На фиг. 30, на которой представлена зависимость % мышей без диабета от числа дней после введения дозы, показано, что антитело против PD-1 J43 вызывало диабет у NOD мышей с увеличением частоты при увеличении дозы. В день одиннадцать после введения дозы процент мышей без диабета в группах, получавших антитело, составил 29%, 43% и 71% для групп дозы 10 мг/кг, 3 мг/кг и 1 мг/кг, соответственно. Активируемые антитела J43 МР7-1 2001 ш2а EN и J43 МР8-2 2001 т2а EN потребовали увеличения дозы, чтобы вызвать диабет с частотой, сопоставимой с исходным антителом. В день одиннадцать
-238 043582 после введения дозы J43 МР7-1 2001 m2a EN, 71% в группе 10 мг/кг не имели диабета, и 86% в группе 3 мг/кг не имели диабета. В день четырнадцать после введения дозы J43 MP8-2 2001 m2a EN, 86% в группе мг/кг и 100% в группе 3 мг/кг не имели диабета.
Пример 28. Активируемые антитела J43 m2a EN против мышиного PD-1 демонстрируют эффективность в модели сингенной опухоли MC38.
В данном примере продемонстрировано, что активируемые антитела вариантов осуществления способны уменьшать рост сингенных опухолей MC38.
В данном примере активируемые антитела против PD1 J43 МР7-1 2001 m2a EN и J43 MP8-2 2001 m2a EN исследовали на способность уменьшать рост сингенных опухолей MC38.
Линия клеток карциномы толстой кишки мыши MC38 была получена из ATCC. MC38 выращивали в RPMI-1640 с добавкой 10% эмбриональной бычьей сыворотки при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Клетки собирали в течение периода логарифмического роста, ресуспендировали в PBS до надлежащей концентрации клеток и держали во льду для индукции роста опухоли.
Каждой мыши подкожно, в правый бок, инокулировали 1,5x106 клеток MC38 в PBS для развития опухоли. Лечение начинали, когда средний размер опухоли достигал приблизительно 80 мм3 (60-120 мм3). Размеры опухоли измеряли два раза в неделю по двум измерениям при помощи штангенциркуля и выражали объем в мм3 при использовании формулы: V=0,5axb2, где a и b - больший и меньший диаметры опухоли, соответственно.
Мышей распределяли в группы и производили дозирование, как указано в табл. 22.
Таблица 22
Группа Кол-во Обработка Доза (мг/кг) Объем дозы (мл/кг) Схема введения Путь
1 10 mlgGl МОРС-2l+mIgG12b МРС11 10 + 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
2 10 Антитело к CTLA4 9D9 mIgG2b 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
3 10 Антитело к PD-1 (J43 т2а EN) 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
4 10 J43 МР8-2 2001 m2a EN 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
5 10 J43 МР7-1 2001 m2a EN 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
6 10 Антитело к PD-1 (J43 т2а ENJ+антитело к CTLA4 9D9 mIgG2b 10 + 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
7 10 J43 МР8-2 2001 m2a EN+антитело к CTLA4 9D9 mIgG2b 10 + 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
8 10 J43 МР7-1 2001 m2a EN+антитело к CTLA4 9D9 m!gG2b 10 + 10 10 2 раза в неделю в течение 3 недель в/б
На фиг. 31А и 31В, на которой представлена зависимость объема опухоли от количества дней после введения начальной дозы, продемонстрировано, что активируемые антитела против PD1 МР7-1 2001 m2a EN и MP8-2 2001 m2a EN ингибируют рост сингенных опухолей MC38 аналогично антителу J43 m2a EN против PD1 положительного контроля как в качестве отдельных средств, так и в комбинации с антителом против CTLA4 9D9 mIgG2b (BioXCell, West Lebanon, NH).
Пример 29. Оценка антител против человеческого PD-1 и активируемых антител против человеческого PD-1 в тесте с вторичной активацией антигеном.
В данном примере продемонстрировано, что антитела против PD1 и активированные активируемые антитела против PD1 вариантов осуществления (т.е. активируемые антитела, в которых CM была расщеплена протеазой) способны блокировать связывание PD-L1/PD-L2 с PD-1 и активировать Т-клетки в тесте с вторичной активацией антигеном.
Как показано на фиг. 32А-32Е, антитело против человеческого PD-1, указанное в настоящем изобретении как A1.5 Ab (т.е. VH SEQ ID NO: 21 и VL SEQ ID NO: 47), блокирует связывание PD-L1/PD-L2 с PD-1 и мощно активирует Т-клетки в тесте с вторичной активацией антигеном. Связывание A1.5 Ab против человеческого PD-1 с иммобилизованным человеческим PD-1, детектированное с помощью стандартного планшетного ELISA, показано на фиг. 32А, и связывании A1.5 Ab с PD-1 яванского макака (также указанным в настоящем изобретении как cyno-PD1, Sino Biological, кат. 90311-С02Н), детектированное с помощью ELISA, показано на фиг. 32В. Ингибирование связывания биотинилированного человеческого PD-L1 (также указанного в настоящем изобретении как 6uotuh-PD-L1) с иммобилизованным PD1 при воздействии A1.5 Ab, как определяли с помощью ELISA, показано на фиг. 32С, и ингибирование связывания биотинилированного человеческого PD-L2 (также указанного в настоящем изобретении как 6uotuh-PD-L2) с иммобилизованным PD-1, при определении с помощью ELISA, показано на фиг. 32D.
Как показано на фиг. 32Е, A1.5 Ab увеличивает продукцию IFN-γ в тесте с повторной стимуляцией
- 239 043582
Т-клеток ЦМВ. Коротко, ЦМВ+ человеческие МКПК сеяли в количестве 250000 клеток/лунка с изотипическим контрольным антителом или с A1.5 Ab и стимулировали 5 мкг/мл ЦМВ лизата в течение 4 дней.
Уровни IFN-γ в супернатанте измеряли с помощью ELISA.
Как показано на фиг. 33А и 33В, активируемое антитело против PD1, указанное в настоящем изобретении как A1.5 PD34 2001 (т.е. VH SEQ ID NO: 21, VL SEQ ID NO: 47, маскирующая часть SEQ ID NO: 99 и расщепляемая часть SEQ ID NO: 214), связывает человеческий PD-1 с пониженной аффинностью по сравнению с исходным антителом к PD-1, т.е. A1.5 Ab (фиг. 33А), и активируемое антитело A1.5 PD34 2001 показывает функциональное маскирование в тесте с вторичной активацией Т-клеток ЦМВ антигеном (фиг. 33В). Коротко, 4 мг/мл активируемого антитела A1.5 PD34 2001 объединяли с 0 мкг/мл или 60 мкг/мл рекомбинантной человеческой урокиназы (rh uPA, R&D, кат. 1310-SE) и инкубировали при 37°С в течение ночи. Связывание активируемого антитела, инкубированного с uPA, с hPD1, анализировали с помощью стандартного планшетного ELISA. Как показано на фиг. 33, активируемые антитела против PD1 согласно настоящему описанию снова приобретают полное связывание после активации протеазой.
Пример 30. Фармакокинетическая оценка активируемых антител против человеческого PD-1 в модели на не относящихся к человеку приматах.
В данном примере продемонстрированы фармакокинетические данные и данные дозопропорциональности для антител против PD-1 и активируемых антител против PD-1 согласно вариантам осуществления.
Коротко, самкам яванских макаков (n=2/группа) вводили однократную в/в болюсную дозу антитела A1.5 или активируемого антитела, указанного в настоящем изобретении как A1.5 PD34 2001, в дозе 1 мг/кг или 5 мг/кг. Образцы плазмы исследовали на концентрацию A1.5 и A1.5 PD34 2001 с помощью сертифицированного сэндвич-ELISA против человеческих антител. Результаты показаны на фиг. 34, где каждая линия соответствует одному индивиду. Средние параметры ФК показанные для A1.5 и для PD34 A1.5 2001. Аналогичные результаты наблюдали для активируемых антител PD34 A1.5 2012 и PD34 A1.5 2011, вводимых яванским макакам в подобном исследовании.
Пример 31. Активируемые антитела J43 против мышиного PD-1 уменьшают число случаев диабета у NOD мышей, получавших антитело против CTLA4.
В данном примере активируемые антитела против PD-1 J43 исследовали на способность защищать от индукции анти-PD-1 диабета у NOD мышей при введении одновременно с антителом против CTLA-4 9D9 mIgG2b (BioXCell кат. #ВЕ0164). NOD мыши сублинии NOD/ShiLtJ были получены из Jackson Laboratory в возрасте 4 недели и проходили акклиматизацию в исследовательском центре в течение 1 недели. На 5 неделе мышей проверяли на наличие диабета перед включением в исследование, распределяли в группы и вводили дозы, как указано в табл. 23. При использовании в настоящем изобретении антитело, указанное как J43 m2a EN (и соответствующие вариации) включает тяжелую цепь (ТЦ) SEQ ID NO: 546; легкую цепь (ЛЦ) SEQ ID NO: 543; и константную область SEQ ID NO: 1516. При использовании в настоящем изобретении активируемое антитело, указанное как J43 MP8-2 2012 m2a EN, является активируемым антителом, включающим антитело J43 m2a EN, маскирующую часть MP8-2 (SEQ ID NO: 549) и субстрат 2012 (SEQ ID NO: 1101), и активируемое антитело, указанное как J43 MP8-2 2001 m2a EN, является активируемым антителом, включающим антитело J43 m2a EN, маскирующую часть MP8-2 (SEQ ID NO: 549) и субстрат 2001 (SEQ ID NO: 214).
Таблица 23 Схема дозирования
Обработка
Группа Кол-во Изделие #1 Доза (мг/кг) Изделие #2 Доза (мг/кг) Объем дозы (мл/кг) Схема введения Путь
1 8 mlgGl МОРС-21 10 mIgG2b МРС-11 10 10 d0, d4, d7 в/б
2 8 Антитело к CTLA4 9D9 m!gG2b 10 mlgGl МОРС-21 10 10 dO, d4, d7 в/б
3 8 Антитело к PD-1 (J43 m2a EN) 10 mIgG2b МРС-11 10 10 dO, d4, d7 в/б
4 8 Антитело к PD-1 (J43 m2a EN) 1 mIgG2b МРС-11 10 10 dO, d4, d7 в/б
5 8 Антитело к PD-1 (J43 m2a EN) 10 Антитело к CTLA4 9D9 mIgG2b 10 10 dO, d4, d7 в/б
6 8 Антитело к PD-1 (J43 m2a EN) 1 Антитело к CTLA4 9D9 mIgG2b 10 10 dO, d4, d7 в/б
7 8 J43 МР8-2 2012 т2а EN 10 mIgG2b МРС-11 10 10 dO, d4, d7 в/б
8 8 J43 МР8-2 2012 т2а EN 10 Антитело к CTLA4 9D9 m!gG2b 10 10 dO, d4, d7 в/б
- 240 043582
9 8 J43 МР8-2 2001 т2а EN 10 mIgG2b МРС-11 10 10 d0, d4, d7 в/б
10 8 J43 МР8-2 2001 т2а EN 10 Антитело к CTLA4 9D9 m!gG2b 10 10 dO, d4, d7 b/6
На фиг. 35, на которой представлена зависимость % мышей без диабета от колиичества дней после введения начальной дозы, показано, что комбинация 10 мг/кг антитела против PD-1 J43 плюс 10 мг/кг антитела против CTLA-4, вводимая в дни 0, 4 и 7, индуцировала диабет у 50% NOD мышей в день одиннадцать, хотя такая же схема дозирования активируемых антител против PD-1 J43 с антителом CTLA-4 не приводила к индукции диабета до дня восемнадцать.
Пример 32. Активируемые антитела J43 m2a EN против мышиного PD-1 демонстрируют повышенную эффективность при совместном введении с антителом против CTLA4 в модели сингенной опухоли MC38.
В данном примере продемонстрировано, что активируемые антитела согласно вариантам осуществления способны уменьшать рост сингенных опухолей MC38 в качестве отдельных средств и вызывать регрессию опухоли MC38 при использовании совместно с антителом против CTLA4 9D9 mIgG2b.
В данном Примере активируемые антитела против PD1 J43 MP8-2 2011 m2a EN и J43 MP8-2 2012 m2a EN исследовали на способность замедлять рост или, в комбинации с антителом против CTLA4, вызывать регрессию сингенных опухолей MC38. При использовании в настоящем изобретении антитело, указанное как J43 m2a EN (и соответствующие вариации), включает тяжелую цепь (ТЦ) SEQ ID NO: 546; легкую цепь (ЛЦ) SEQ ID NO: 543; и константную область SEQ ID NO: 1516. При использовании в настоящем изобретении активируемое антитело, указанное как J43 MP8-2 2011 m2a EN, является активируемым антителом, включающим антитело J43 m2a EN, маскирующую часть MP8-2 (SEQ ID NO: 549) и субстрат 2011 (SEQ ID NO: 1100), и активируемое антитело, указанное как J43 MP8-2 2012 m2a EN, является активируемым антителом, включающим антитело J43 m2a EN, маскирующую часть MP8-2 (SEQ ID NO: 549) и субстрат 2012 (SEQ ID NO: 1101).
Линия клеток карциномы толстой кишки мыши MC38 была получена из ATCC. Клетки MC38 выращивали в RPMI-1640 с добавкой 10% эмбриональной бычьей сыворотки при 37°С в атмосфере 5% CO2 в воздухе. Клетки собирали в течение периода логарифмического роста, ресуспендировали в PBS до надлежащей концентрации клеток и держали во льду для индукции роста опухоли.
Каждой мыши подкожно, в правый бок, инокулировали 1,5x106 клеток MC38 в PBS для развития опухоли. Лечение начинали, когда средний размер опухоли достигал приблизительно 60 мм3 (45-80 мм3). Размеры опухоли измеряли два раза в неделю, по двум измерениям, с помощью штангенциркуля и выражали объем в мм3 при использовании формулы: V=0,5axb2, где a и b - больший и меньший диаметры опухоли, соответственно.
Мышей распределяли в группы и вводили дозы, как указано в табл. 24.
Таблица 24
Группа Кол-во Обработка Дова (мг/кг) Объем ДОЗЫ (мл/кг) Схема введения Путь
2 раза в неделю
1 10 mlgGl MOPC-2l+m!gG12b МРС-11 10 + 10 10 в течение 3 в/б
недель
2 раза в неделю
2 10 Антитело к CTLA4 9D9 m!gG2b 10 10 в течение 3 в/б
недель
2 раза в неделю
3 10 Антитело к PD-1 (J43 m2a EN) 10 10 в течение 3 в/б
недель
2 раза в неделю
4 10 J43 МР8-2 2012 т2а EN 10 10 в течение 3 в/б
недель
2 раза в неделю
5 10 J43 МР8-2 2011 т2а EN 10 10 в течение 3 в/б
недель
Антитело к PD-1 (J43 т2а 2 раза в неделю
6 10 ЕЫ)+антитело к CTLA4 9D9 10 + 10 10 в течение 3 в/б
mIgG2b недель
J43 МР8-2 2012 m2a 2 раза в неделю
7 10 EN+антитело к CTLA4 9D9 10 + 10 10 в течение 3 в/б
mIgG2b недель
J43 МР8-2 2011 m2a 2 раза в неделю
8 10 EN+антитело к CTLA4 9D9 10 + 10 10 в течение 3 в/б
m!gG2b недель
На фиг. 36, на которой представлена зависимость объема опухоли от количества дней после введения начальной дозы, продемонстрировано, что активируемые антитела против PD1 MP8-2 2012 m2a EN и MP8-2 2011 m2a EN ингибируют рост сингенных опухолей MC38 аналогично антителу J43 m2a EN против PD1 положительного контроля как в качестве отдельных средств, так и в комбинации с антителом против CTLA4 9D9 mIgG2b (BioXCell, West Lebanon, NH).
Пример 33. Активируемые антитела J43 m2a EN против мышиного PD-1 показывают стойкую про- 241 043582 тивоопухолевую активность при совместном введении с антителом против CTLA4 в модели сингенной опухоли MC38.
В данном примере продемонстрировано, что активируемые антитела против PD-1 согласно вариантам осуществления в комбинации с антителами против CTLA4 индуцируют стойкие полные противоопухолевые ответы в модели сингенной опухоли MC38.
В данном примере всем животным, получавшим комбинации средств против CTLA4 и против PD1 из примера 28, которые показали длительную регрессию опухоли ((i) антитело против PD-1 J43 m2aEN+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b (указанные на фиг. 37 как антитело против PD-1 J43 m2aEN+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b) (n=8), (ii) активируемое антитело против PD-1 J43 MP8-2 2012 m2a EN+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b (указанные на фиг. 37 как АА m2a EN J43 MP8-2 2012+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b, где АА обозначает активируемое антитело) (n=8) и активируемое антитело против PD-1 J43 MP8-2 2011 m2a EN+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b (указанные на фиг. 37 как АА m2a EN J43 MP8-2 2011+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b, где АА обозначает активируемое антитело) (n=6)), в день 38 имплантировали 1,5 х106 опухолевых клеток MC38 в левый бок, напротив исходной имплантации MC38. Пяти необработанный мышам имплантировали 1,5х106 опухолевых клеток MC38 для подтверждения туморогенной активности клеток MC38.
На фиг. 37 показано, что ни одна мышь, ранее получавшая комбинации средств против PD1 и против CTLA4, не показала возобновление роста на исходных участках опухоли (правый бок) или рост новых опухолей (левый бок), тогда как все пять необработанных контрольных мышей показали быстрый рост опухоли.
Пример 34. Активируемые антитела J43 против мышиного PD-1 уменьшают число случаев диабета у NOD мышей, одновременно получавших антитело против CTLA4.
В данном примере продемонстрировано, что активируемые антитела против PD-1 согласно вариантам осуществления в комбинации с антителами против CTLA4 защищали NOD мышей от индукции PD-1 m2a EN-опосредованного диабета.
В данном примере активируемое антитело против PD-1 J43 MP8-2 2011 m2aEN исследовали на способность защищать от анти-PD-1 индукции диабета у NOD мышей при одновременном введении с антителом против CTLA-4 9D9 mIgG2b (BioXcell кат. #ВЕ0164). NOD мыши сублинии NOD/ShiLtJ были получены из Jackson Laboratory в возрасте 4 недель и проходили акклиматизацию в исследовательском центре в течение 1 недели. На 5 неделе мышей проверяли на наличие диабета перед включением в исследование, распределяли в группы и вводили дозы, как указано в табл. 25.
Таблица 25 Схема дозирования
Обработка
Группа Кол-во Изделие #1 Доза (мг/кг) Изделие #2 Доза (мг/кг) Объем дозы (мл/кг) Схема введения Путь
1 8 Антитело к CTLA4 9D9 mIgG2b 10 mlgGl МОРС-21 10 10 d0, d4, d7 в/б
2 8 Антитело к PD-1 (J43 m2a EN) 10 mIgG2b МРС-11 10 10 d0, d4, d7 в/б
3 8 Антитело к PD-1 (J43 m2a EN) 10 Антитело к CTLA4 9D9 mIgG2b 10 10 dO, d4, d7 в/б
4 8 J43 МР8-2 2011 т2а EN 10 mIgG2b МРС-11 10 10 dO, d4, d7 в/б
5 8 J43 МР8-2 2011 т2а EN 10 Антитело к CTLA4 9D9 m!gG2b 10 10 dO, d4, d7 в/б
На фиг. 38, на которой представлена зависимость % мышей без диабета от количества дней после введения начальной дозы, показано, что отдельное средство антитело против PD-1 J43 (указанное на фигуре как Ат против PD1 J43) и комбинация 10 мг/кг антитела против PD-1 J43 плюс 10 мг/кг антитела против CTLA4 (указанные на фигуре как Ат против PD1 J43+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b), вводимые в дни 0, 4 и 7, вызывали диабет у 25% NOD мышей в день девять. Напротив, такая же схема дозирования активируемого антитела против PD-1 J43 MP8-2 2011 m2a EN (указанного на фигуре как m2a EN AA J43 MP8-2 2011, где AA обозначает активируемое антитело) в качестве отдельного средства или в комбинации с антителом против CTLA4 (указанной на фигуре как AA m2a EN J43 MP8-2 2011+антитело против CTLA4 9D9 mIgG2b, где AA обозначает активируемое антитело) не приводила к индукции диабета до дня пятнадцать.
Пример 35. Активируемые ниволумаб антитела против PD-1 вариантов осуществления функционально маскированы в тесте с повторной стимуляцией человеческих T-клеток.
В данном примере описано влияние маскирующих частей на биологическую функцию антитела против PD-1 ниволумаба.
МКПК ЦМВ-положительного донора (Hemacare) сеяли в количестве 2х105 клеток/лунка в присут- 242 043582 ствии ЦМВ вирусного лизата (Astarte) и антитела против PD-1 A1.5, активируемого антитела против PD1 A1.5 PD34 2001, антитела против PD-1 ниволумаба (NV1), активируемого ниволумаб антитела против
PD-1 NV1 NV07 2001 или изотипического контрольного hIgG4 антитела. Через четыре дня супернатант удаляли из каждой лунки и уровни IFN-гамма анализировали при использовании набора для ELISA анализа IFN-гамма (Life Technologies, Carlsbad, CA).
На фиг. 39 продемонстрировано, что активируемое антитело против PD-1 A1.5 PD34 2001 (указанное на фигуре как AA A1.5 PD34 2001, где AA обозначает активируемое антитело) и активируемое ниволумаб антитело против PD1 NV1 NV07 2001 (указанное на фигуре как AA NV1 NV07 2001, где AA обозначает активируемое антитело) вызывали увеличение ЦМВ-стимулируемой секреции IFN-гамма по сравнению с контрольным hIgG4 антителом (указанным на фигуре как hIgG4), но обладали пониженной активностью по сравнению с исходным антителом против PD-1 A1.5 (указанным на фигуре как A1.5) или исходным антителом против PD-1 ниволумабом (указанным на фигуре как NV1).
Пример 36. Активируемые пембролизумаб антитела против PD-1 вариантов осуществления функционально маскированы в тесте с повторной стимуляцией человеческих T-клеток.
В данном примере описано влияние маскирующих частей на биологическую функцию антитела против PD-1 пембролизумаба.
МКПК ЦМВ-положительного донора (Hemacare) сеяли в количестве 2x105 клеток/лунка в присутствии 4 мкг/мл ЦМВ вирусного лизата (Astarte) и антитела против PD-1 A1.5, антитела против PD-1 пембролизумаба (PM1), активируемого пембролизумаб антитела против PD-1 PM1 PM07 2001 или изотипического контрольного hIgG4 антитела. Через четыре дня супернатант удаляли из каждой лунки и анализировали уровни IFN-гамма при использовании набора для ELISA анализа IFN-гамма (Life Technologies, Carlsbad, CA).
На фиг. 40 продемонстрировано, что активируемое пембролизумаб антитело против PD1 PM1 PM07 2001 (указанное на фигуре как AA PM1 PM07 2001, где AA обозначает активируемое антитело) вызывало увеличение ЦМВ-стимулируемой секреции IFN-гамма по сравнению с контрольным hIgG4 антителом (указанным на фигуре как hIgG4), но обладало пониженной активностью по сравнению с исходным антителом против PD-1 A1.5 (указанным на фигуре как A1.5) или исходным антителом против PD-1 пембролизумабом (указанным на фигуре как PM1).
Другие варианты осуществления
Хотя изобретение было описано в соответствии с его подробным описанием, предыдущее описание предназначено для иллюстрации, а не ограничения объема изобретения, который определяется объемом прилагаемой формулы изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации находятся в рамках следующего.

Claims (44)

1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ), которое специфично связывается с PD-1 млекопитающего, где АВ содержит:
VH CDR1, включающую аминокислотную последовательность GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653);
VH CDR2, включающую аминокислотную последовательность YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658);
VH CDR3, включающую аминокислотную последовательность EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664);
VL CDR1, включающую аминокислотную последовательность RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676);
VL CDR2, включающую аминокислотную последовательность AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и
VL CDR3, включающую аминокислотную последовательность QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683).
2. Активируемое антитело, которое в активированном состоянии специфично связывается с PD-1 млекопитающего, где указанное активируемое антитело содержит:
антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ), которое специфично связывается с PD-1 млекопитающего, где АВ включает:
VH CDR1, включающую аминокислотную последовательность GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653);
VH CDR2, включающую аминокислотную последовательность YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658);
VH CDR3, включающую аминокислотную последовательность EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664);
VL CDR1, включающую аминокислотную последовательность RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676);
VL CDR2, включающую аминокислотную последовательность AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и
VL CDR3, включающую аминокислотную последовательность QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683);
маскирующую часть (MM), которая ингибирует связывание AB с PD-1 млекопитающего, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, где MM содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99; и расщепляемую часть (CM), соединенную с АВ, где CM является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы, где CM содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1100.
- 243 043582
3. Активируемое антитело, которое в активированном состоянии:
(а) специфично связывается с PD-1 млекопитающего; и (b) специфично блокирует связывание природного лиганда PD-1 с PD-1 млекопитающего, где активируемое антитело включает:
антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (АВ), который специфично связывается с PD-1 млекопитающего, где АВ включает:
VH CDR1, включающую аминокислотную последовательность GFTFSGYAMS (SEQ ID NO: 653);
VH CDR2, включающую аминокислотную последовательность YISNSGGNAH (SEQ ID NO: 658);
VH CDR3, включающую аминокислотную последовательность EDYGTSPFVY (SEQ ID NO: 664);
VL CDR1, включающую аминокислотную последовательность RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675) или RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676);
VL CDR2, включающую аминокислотную последовательность AASNQGS (SEQ ID NO: 678); и
VL CDR3, включающую аминокислотную последовательность QQSKDVPWT (SEQ ID NO: 683);
маскирующую часть (MM), которая ингибирует связывание АВ с PD-1 млекопитающего, когда активируемое антитело находится в нерасщепленном состоянии, где MM содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99; и расщепляемую часть (СМ), соединенную с АВ, где СМ является полипептидом, который функционирует в качестве субстрата для протеазы, где СМ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1100.
4. Антитело по п.1 или активируемое антитело по п.2 или 3, где антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab-фрагмента, F(ab')2 фрагмента, scFv, scAb, dAb, антитела на основе одного домена тяжелой цепи и антитела на основе одного домена легкой цепи.
5. Антитело по любому из пп.1 или 4 или активируемое антитело по пп.2-4, где АВ включает вариабельную область тяжелой цепи (VH), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, и вариабельную область легкой цепи (VL), включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47.
6. Активируемое антитело по любому из пп.2-5, где АВ связан с CM; и/или MM связан с CM так, что активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет последовательность структур от N-конца до С-конца как указано: MM-CM-АВ или АВ-СМ-ММ.
7. Активируемое антитело по любому из пп.2-6, включающее аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2056 или 2057.
8. Конъюгированное антитело, включающее антитело по любому из пп.1, 4 или 5, конъюгированное с диагностическим средством.
9. Фармацевтическая композиция для лечения PDL1-опосредованного нарушения или заболевания, включающая антитело по любому из пп.1, 4 или 5, или активируемое антитело по любому из пп.2-7 или конъюгированное антитело, или конъюгированное активируемое антитело по п.35 или 37 и вспомогательное вещество.
10. Фармацевтическая композиция для лечения PDL1-опосредованного нарушения или заболевания, включающая антитело по любому из пп.1, 4 или 5 или активируемое антитело по любому из пп.2-7, носитель и дополнительное терапевтическое средство.
11. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая активируемое антитело по любому из пп.2-7.
12. Экспрессионный вектор, включающий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.11.
13. Способ получения активируемого антитела посредством культивирования клетки при условиях, которые приводят к экспрессии активируемого антитела, где клетка включает молекулу нуклеиновой кислоты по п.11.
14. Способ производства активируемого антитела, которое в активированном состоянии связывает PD-1, где способ включает:
(a) культивирование клетки, включающей конструкцию нуклеиновой кислоты, которая кодирует активируемое антитело, при условиях, которые приводят к экспрессии активируемого антитела по любому из пп.2-7; и (b) выделение активируемого антитела.
15. Способ уменьшения связывания лиганда, выбранного из группы, состоящей из PDL1 или PDL2, с PD-1 на Т-клетках, включающий введение пациенту эффективного количества антитела по любому из пп.1, 4 или 5 или активируемого антитела по любому из пп.2-7, или фармацевтической композиции по п.9 или 10.
16. Способ по п.15, где способ включает введение дополнительного терапевтического средства.
17. Способ уменьшения иммунной супрессии, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1, 4 или 5 или активируемого антитела по любому из пп.2-7, или конъюгированного антитела, или конъюгированного активируемого антитела по п.8, или фармацевтической композиции по любому из пп.9 или 10.
18. Способ по п.17, где иммунная супрессия опосредована связыванием PD-1 на Т-клетках с PDL1
- 244 043582 или PDL2 на опухолевых клетках; и где способ включает введение дополнительного терапевтического средства.
19. Способ лечения, облегчения симптома или задержки прогрессирования нарушения или заболевания, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1, 4 или 5 или активируемого антитела по любому из пп.2-7, или фармацевтической композиции по любому из пп.9 или 10; где способ включает введение дополнительного терапевтического средства.
20. Способ по п.19, где PDL1-опосредованным нарушением или заболеванием является рак;
где рак выбран из группы, состоящей из рака мочевого пузыря, рака костей, рака молочной железы, карциноида, рака шейки матки, холангиокарциномы, рака толстой кишки, рака эндометрия, глиомы, рака головы и шеи, рака печени, рака легкого, лимфомы, меланомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака почки, саркомы, рака кожи, рака желудка, рака яичка, рака тимуса, рака щитовидной железы, рака мочеполовой системы или уротелиального рака, меланомы (MEL), почечно-клеточной карциномы (RCC), плоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), неплоскоклеточного NSCLC, рака толстой и прямой кишки (CRC), кастрационно-резистентного рака предстательной железы (CRPC), печеночноклеточной карциномы (НСС), плоскоклеточной карциномы головы и шеи, тимомы, карцином пищевода, яичника, желудочно-кишечного тракта и молочной железы, и гематобластоза, такого как множественная миелома, В-клеточная лимфома, Т-клеточная лимфома, лимфома Ходжкина, первичная медиастинальная В-клеточная лимфома или хронический миелогенный лейкоз; и где способ включает введение дополнительного терапевтического средства.
21. Антитело по п.1 или 4 или активируемое антитело по пп.2-4, где АВ включает VH, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, и VL, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45.
22. Активируемое антитело по п.6, где АВ непосредственно связан с CM, или АВ связан с CM через соединительный пептид.
23. Активируемое антитело по п.6 или 22, где активируемое антитело включает соединительный пептид между MM и CM, или где активируемое антитело включает соединительный пептид между CM и АВ, или где активируемое антитело включает первый соединительный пептид (LP1) и второй соединительный пептид (LP2), и где активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующую структуру, от N-конца к С-концу: MM-LP1-CM-LP2-AB или AB-LP2-CM-LP1-MM; где каждый из LP1 и LP2 является пептидом длиной приблизительно 1-20 аминокислот.
24. Конъюгированное антитело по п.8, где диагностическое средство конъюгировано с антителом через линкер.
25. Конъюгированное антитело по п.24, где линкер является расщепляемым или нерасщепляемым линкером.
26. Конъюгированное антитело по п.24, где диагностическое средство представляет собой детектируемую группу.
27. Активируемое антитело по п.7, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2053.
28. Активируемое антитело по п.27, где активируемое антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2056.
29. Активируемое антитело по п.27, где активируемое антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2056, и где активируемое антитело включает тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
30. Активируемое антитело по п.27, где активируемое антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2057, и где активируемое антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2052.
31. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело по любому из пп.1, 4 или 5.
32. Вектор экспрессии, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.31.
33. Антитело по п.1 или 4 или активируемое антитело по любому из пп.2-4, где VL CDR1 содержит аминокислотную последовательность RASESVDSYGISFMN (SEQ ID NO: 675).
34. Антитело по любому из п.1 или 4 или активируемое антитело по любому из пп.2-4, где VL CDR1 содержит аминокислотную последовательность RASESVDAYGISFMN (SEQ ID NO: 676).
35. Конъюгированное антитело, содержащее антитело по любому из пп.1, 4 или 5, конъюгированное с терапевтическим средством.
36. Активируемое антитело по любому из пп.2-7, конъюгированное с диагностическим средством.
37. Активируемое антитело по любому из пп.2-7, конъюгированное с терапевтическим средством.
38. Конъюгированное антитело по п.35, где терапевтическое средство конъюгировано с антителом через линкер.
39. Активируемое антитело по п.36, где диагностическое средство конъюгировано с активируемым антителом через линкер.
40. Активируемое антитело по п.37, где терапевтическое средство конъюгировано с активируемым антителом через линкер.
- 245 043582
41. Конъюгированное антитело по п.38, где линкер представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер.
42. Активируемое антитело по п.39, где линкер представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер.
43. Активируемое антитело по п.40, где линкер представляет собой расщепляемый или нерасщепляемый линкер.
44. Активируемое антитело по п.39, где диагностическое средство представляет собой детектируемую группу.
EA201890285 2015-07-13 2016-07-13 Антитела против pd-1, активируемые антитела против pd-1 и способы их применения EA043582B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62/191,902 2015-07-13
US62/205,825 2015-08-17
US62/295,314 2016-02-15
US62/323,543 2016-04-15
US62/333,629 2016-05-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EA043582B1 true EA043582B1 (ru) 2023-06-02

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10513558B2 (en) Anti-PD1 antibodies, activatable anti-PD1 antibodies, and methods of use thereof
US10669339B2 (en) Anti-PDL1 antibodies, activatable anti-PDL1 antibodies, and methods of use thereof
US11548944B2 (en) Matrix metalloprotease-cleavable and serine protease-cleavable substrates and methods of use thereof
US10233244B2 (en) Anti-ITGA3 antibodies, activatable anti-ITGA3 antibodies, and methods of use thereof
EP3292150B1 (en) Activatable anti-cd166 antibodies, and methods of use thereof
BR112021010433A2 (pt) Substratos cliváveis de metaloprotease de matriz e de serina ou cisteína protease e métodos de uso destes
IL255416B1 (en) Anti-CD71 antibodies, activatable anti-CD71 antibodies, preparations containing them and their uses
EA043582B1 (ru) Антитела против pd-1, активируемые антитела против pd-1 и способы их применения
EA039736B1 (ru) Анти-pdl1-антитела, активируемые анти-pdl1-антитела и способы их применения
EA042544B1 (ru) Расщепляемые матриксными металлопротеиназами и расщепляемые сериновыми протеиназами вещества и способы их использования
NZ736142B2 (en) Anti-pdl1 antibodies, activatable anti-pdl1 antibodies, and methods of use thereof