JP2022550243A - 抗pd-1抗体及びその使用 - Google Patents
抗pd-1抗体及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022550243A JP2022550243A JP2022506438A JP2022506438A JP2022550243A JP 2022550243 A JP2022550243 A JP 2022550243A JP 2022506438 A JP2022506438 A JP 2022506438A JP 2022506438 A JP2022506438 A JP 2022506438A JP 2022550243 A JP2022550243 A JP 2022550243A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- set forth
- antibody
- sequence
- cdr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 302
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 299
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 264
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 264
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 264
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 239
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 91
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 77
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 75
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 75
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 58
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 41
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 423
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 335
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 318
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 316
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 316
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 175
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 63
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 52
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 52
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 44
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 38
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 33
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 31
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 28
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 28
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 28
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 28
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 28
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 26
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 claims description 26
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 23
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 claims description 22
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 22
- 244000309459 oncolytic virus Species 0.000 claims description 22
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 20
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 19
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 19
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 17
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 17
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 claims description 17
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 claims description 17
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 claims description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 17
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 16
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 15
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 14
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 11
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 11
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 claims description 11
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 claims description 11
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 11
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 9
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 9
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 8
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 7
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 6
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 6
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 6
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 claims description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 6
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 5
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 claims description 4
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 claims description 4
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 claims description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 3
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 3
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 claims description 3
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 claims description 3
- 201000002740 oral squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 3
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 claims description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 claims description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 claims description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 2
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 claims description 2
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 claims description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 claims description 2
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 claims description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims 16
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000024799 Thyroid disease Diseases 0.000 claims 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 claims 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 208000021510 thyroid gland disease Diseases 0.000 claims 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 abstract description 36
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 331
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 56
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 56
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 53
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 38
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 230000006870 function Effects 0.000 description 33
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 29
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 23
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 22
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 18
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 15
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 13
- -1 up to 45 Chemical class 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 12
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 11
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 11
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 11
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 10
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 10
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 10
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 10
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 10
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 10
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 9
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 8
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 8
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 8
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 8
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 6
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 6
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 6
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 5
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 5
- 101100519207 Mus musculus Pdcd1 gene Proteins 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 4
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 102100033468 Lysozyme C Human genes 0.000 description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 4
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 3
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 3
- 101001117312 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 2 Proteins 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 3
- 102000048119 human PDCD1LG2 Human genes 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229950007123 tislelizumab Drugs 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 4-hydroxybenzoate Chemical compound OC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 101001117316 Mus musculus Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 238000001190 Q-PCR Methods 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102100032741 SET-binding protein Human genes 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 101000677856 Stenotrophomonas maltophilia (strain K279a) Actin-binding protein Smlt3054 Proteins 0.000 description 2
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000014155 detection of activity Effects 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002022 differential scanning fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004565 granule cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002868 homogeneous time resolved fluorescence Methods 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 229920002745 polystyrene-block- poly(ethylene /butylene) Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 2
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- DENYZIUJOTUUNY-MRXNPFEDSA-N (2R)-14-fluoro-2-methyl-6,9,10,19-tetrazapentacyclo[14.2.1.02,6.08,18.012,17]nonadeca-1(18),8,12(17),13,15-pentaen-11-one Chemical compound FC=1C=C2C=3C=4C(CN5[C@@](C4NC3C1)(CCC5)C)=NNC2=O DENYZIUJOTUUNY-MRXNPFEDSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010028006 B-Cell Activating Factor Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N Chromium-51 Chemical compound [51Cr] VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 1
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- ZBNZXTGUTAYRHI-UHFFFAOYSA-N Dasatinib Chemical compound C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1Cl ZBNZXTGUTAYRHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- GYHNNYVSQQEPJS-OIOBTWANSA-N Gallium-67 Chemical compound [67Ga] GYHNNYVSQQEPJS-OIOBTWANSA-N 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101000998950 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-18 Proteins 0.000 description 1
- 101000839781 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 4-59 Proteins 0.000 description 1
- 101001138089 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-39 Proteins 0.000 description 1
- 101001008255 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 description 1
- 101001008321 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Proteins 0.000 description 1
- 101001047617 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-11 Proteins 0.000 description 1
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 description 1
- 101001008263 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Proteins 0.000 description 1
- 101001042104 Homo sapiens Inducible T-cell costimulator Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 208000003623 Hypoalbuminemia Diseases 0.000 description 1
- 206010021036 Hyponatraemia Diseases 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100036884 Immunoglobulin heavy variable 1-18 Human genes 0.000 description 1
- 102100028405 Immunoglobulin heavy variable 4-59 Human genes 0.000 description 1
- 102100020910 Immunoglobulin kappa variable 1-39 Human genes 0.000 description 1
- 102100022955 Immunoglobulin kappa variable 3-11 Human genes 0.000 description 1
- 102100022964 Immunoglobulin kappa variable 3-20 Human genes 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N Iodine-123 Chemical compound [123I] ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 1
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 1
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 1
- 239000002067 L01XE06 - Dasatinib Substances 0.000 description 1
- 239000002136 L01XE07 - Lapatinib Substances 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 239000012162 RNA isolation reagent Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010070308 Refractory cancer Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 208000031673 T-Cell Cutaneous Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102100036922 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Human genes 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010046431 Urethral cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046458 Urethral neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101100082060 Xenopus laevis pou5f1.1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-BJUDXGSMSA-N carbon-11 Chemical compound [11C] OKTJSMMVPCPJKN-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-YPZZEJLDSA-N cobalt-57 Chemical compound [57Co] GUTLYIVDDKVIGB-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-BJUDXGSMSA-N cobalt-58 Chemical compound [58Co] GUTLYIVDDKVIGB-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 201000007241 cutaneous T cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960002448 dasatinib Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N duocarmycin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=C2NC(C(=O)N3C4=CC(=O)C5=C([C@@]64C[C@@H]6C3)C=C(N5)C(=O)OC)=CC2=C1 VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N 0.000 description 1
- 229960005501 duocarmycin Drugs 0.000 description 1
- 229930184221 duocarmycin Natural products 0.000 description 1
- 239000012893 effector ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- UYAHIZSMUZPPFV-NJFSPNSNSA-N erbium-169 Chemical compound [169Er] UYAHIZSMUZPPFV-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-BJUDXGSMSA-N fluorine-18 atom Chemical compound [18F] YCKRFDGAMUMZLT-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000007487 gallbladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940006110 gallium-67 Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 201000003115 germ cell cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-OUBTZVSYSA-N gold-198 Chemical compound [198Au] PCHJSUWPFVWCPO-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 102000043396 human ICOS Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N imatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002411 imatinib Drugs 0.000 description 1
- 230000006450 immune cell response Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000677 immunologic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124541 immunological agent Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N iodane Chemical compound [125IH] XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229960004891 lapatinib Drugs 0.000 description 1
- BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N lapatinib Chemical compound O1C(CNCCS(=O)(=O)C)=CC=C1C1=CC=C(N=CN=C2NC=3C=C(Cl)C(OCC=4C=C(F)C=CC=4)=CC=3)C2=C1 BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000012917 library technology Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 208000022766 lymph node neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 230000000897 modulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000000174 oncolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001048 orange dye Substances 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229950007072 pamiparib Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 208000025638 primary cutaneous T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229940121497 sintilimab Drugs 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012409 standard PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012301 transgenic model Methods 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
抗PD-1抗体又はその抗原結合性断片、それをコードする核酸分子、及びそれを調製するための方法。抗PD-1抗体又はその抗原結合性断片は、PD-1に対する高い特異性及び高い親和性を有し、免疫系を活性化するように、PD-1/PD-L1及びPD-1/PD-L2の結合を効果的にブロックし、それによって腫瘍成長を阻害する効果を達成することができる。したがって、抗体又はその抗原結合性断片を含有する医薬組成物、及び薬物の調製における医薬組成物の使用を更に含む。薬物は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び/又は処置するために使用される。【選択図】 なし
Description
本発明は、治療用モノクローナル抗体の分野に関し、より詳細には、PD-1に対する抗体、並びに腫瘍、感染症、若しくは自己免疫疾患の予防及び/又は処置におけるその抗体の使用に関する。
プログラム細胞死受容体-1(PD-1)は、288個のアミノ酸を有するI型膜タンパク質であり、主要な免疫チェックポイントのうちの1つとして知られている(Blankら、2005年、Cancer Immunotherapy、54:307~314頁)。PD-1/PD-L1シグナル伝達経路は、免疫寛容、微生物感染、及び腫瘍免疫回避の調節において重要な役割を果たす。PD-1と、そのリガンドのうちの1つであるPD-L1との間の相互作用をブロックすることにより、腫瘍特異的CD8+ T細胞の免疫が改善され、それによって、がん細胞を攻撃し、そうして免疫系が腫瘍細胞を排除することを補助する。PD-1/PD-L1シグナル伝達をブロックすることにより、腫瘍抗原特異的T細胞の増殖を促進することができ、腫瘍細胞の死滅において役割を果たし、それによって局所的な腫瘍成長を阻害することができ(Julie Rら、2012年、N Engl J Med. 366:2455~2465頁);PD-1及びその関連する研究は、 Molecular and Biochemical Aspects of the PD-1 Checkpoint Pathway、Vassiliki A. Boussiotis,NEJM n engl j med 375;18 nejm.org November 3,2016年において詳細に考察されている。PD-1(腫瘍浸潤リンパ球上の)及び/又は腫瘍細胞上のPD-L1の発現は、生検の免疫組織化学的評価により、様々なヒト原発性腫瘍において見出されている。そのような組織としては、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、結腸がん、直腸がん、神経膠腫、膀胱がん、乳がん、腎臓がん、食道がん、胃がん、口腔扁平上皮がん、尿道上皮細胞がん、膵臓がん、及び頭頸部腫瘍などが挙げられる。このことから、PD-1/PD-L1の相互作用をブロックすることにより、腫瘍特異的T細胞の免疫応答性を改善し、免疫系が腫瘍細胞を排除するのを補助することができることを理解することができる。最近では、PD-1が、HIVに感染した個体に由来するT細胞において高度に発現されること、更に、抗PD-1抗体が、慢性ウイルス感染症に対する免疫を増強させ得ることも、研究により示されている。更に、Zhaoらは、マウスにおいてPD-1の発現が陽性である免疫細胞を枯渇させることにより、糖尿病モデルの発症を遅延させることができ、実験的自己免疫性脳脊髄炎によって引き起こされる麻痺を緩和することができることを見出した( Zhao P.ら、Depletion of PD-1-positive cells amelioratesautoimmune disease. Nature Biomedical Engineering 3、292~305頁、2019年)。したがって、PD-1/PD-L1のブロックは、腫瘍、感染症、又は自己免疫疾患の予防及び/又は処置において有用であり得る。
抗PD-1モノクローナル抗体ペンブロリズマブ(Keytruda、Merck)は、PD-L1の発現が陽性の食道がんを有する患者において、化学療法と比較して、死亡のリスクを31%低減させることができるが、しかしながら、ペンブロリズマブは、吐き気及び嘔吐だけでなく、貧血、高血糖、低アルブミン血症、低ナトリウム血症、四肢の疼痛、呼吸困難、運動能力障害、及び他の副作用も引き起こす。再発性又は難治性ホジキンリンパ腫は、PD-1モノクローナル抗体であるシンチリマブに応答するが、しかしながら、患者のうちの18%は、グレード3又は4の有害事象を有し、患者のうちの15%は、重度の有害事象を有する。パミパリブと組み合わせた抗PD-1モノクローナル抗体チスレリズマブの処置に関する第I相臨床試験は、一部の患者が肝炎又は自己免疫性肝炎を発症したことを示しており、尿道がん及び肝臓がんにおけるチスレリズマブの有効性は、依然として臨床試験で調査されている。したがって、新規な抗PD-1モノクローナル抗体の研究及び開発は、早急に解決すべき技術問題となっている。
本出願において、第1に、本発明者らは、PD-1を特異的に認識することができる優れた特性を有するマウス抗体を開発した。それに基づいて、本発明者らは、マウス抗体の深い研究及び改変に関し創造的な仕事を行うことによって、マウス抗体のヒト化抗体を更に開発した。
本発明による抗体、特に、ヒト化抗体は、高い親和性及び特異性でのPD-1への結合などの親マウス抗体の機能及び特性を保持する(又は更には増強する)だけでなく、ヒト化の程度も極めて高く、極めて有益であり、免疫原性反応を引き起こすことなく、ヒト対象に安全に投与することができる。したがって、本発明の抗体には、大きな臨床的価値がある。
本発明の抗体
一態様では、本発明は、PD-1に特異的に結合することができる抗体又はその抗原結合性断片であって、抗体又はその抗原結合性断片が、以下の相補性決定領域(CDR):
(a)配列番号1に記載の重鎖可変領域(VH)に含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号1に記載の重鎖可変領域(VH)に含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号1に記載の重鎖可変領域(VH)に含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号2に記載の軽鎖可変領域(VL)に含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号2に記載の軽鎖可変領域(VL)に含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号2に記載の軽鎖可変領域(VL)に含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
(b)配列番号20に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号20に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号20に記載のVHに含有されるCDR-H3若しくは、CDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号21に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号21に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号21に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
(c)配列番号36に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号36に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号36に記載のVHに含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号37に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号37に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号37に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
(d)配列番号54に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号54に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号54に記載のVHに含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号55に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号55に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号55に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
又は
(e)配列番号68に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号68に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号68に記載のVHに含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号69に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号69に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号69に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント
を含む、抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一態様では、本発明は、PD-1に特異的に結合することができる抗体又はその抗原結合性断片であって、抗体又はその抗原結合性断片が、以下の相補性決定領域(CDR):
(a)配列番号1に記載の重鎖可変領域(VH)に含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号1に記載の重鎖可変領域(VH)に含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号1に記載の重鎖可変領域(VH)に含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号2に記載の軽鎖可変領域(VL)に含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号2に記載の軽鎖可変領域(VL)に含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号2に記載の軽鎖可変領域(VL)に含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
(b)配列番号20に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号20に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号20に記載のVHに含有されるCDR-H3若しくは、CDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号21に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号21に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号21に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
(c)配列番号36に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号36に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号36に記載のVHに含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号37に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号37に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号37に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
(d)配列番号54に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号54に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号54に記載のVHに含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号55に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号55に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号55に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;
又は
(e)配列番号68に記載のVHに含有されるCDR-H1、若しくはCDR-H1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号68に記載のVHに含有されるCDR-H2、若しくはCDR-H2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号68に記載のVHに含有されるCDR-H3、若しくはCDR-H3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント;並びに/又は
配列番号69に記載のVLに含有されるCDR-L1、若しくはCDR-L1の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、配列番号69に記載のVLに含有されるCDR-L2、若しくはCDR-L2の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント、及び配列番号69に記載のVLに含有されるCDR-L3、若しくはCDR-L3の配列と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する、そのバリアント
を含む、抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、置換は、保存的置換である。
好ましくは、CDRが、Kabat又はIMGTの番号付けシステムによって定義される。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片のVH及び/又はVLが、ヒト又はマウスに由来する免疫グロブリンのフレームワーク領域(FR)を含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトPD-1に結合する。
一態様では、本発明は、PD-1に特異的に結合することができる抗体又はその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)を含む、抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、CDRがIMGT番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域を含む:
(a)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号3に記載の配列、又は配列番号3と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号4に記載の配列、又は配列番号4と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号5に記載の配列、又は配列番号5と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号6に記載の配列、又は配列番号6と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号7に記載の配列、又は配列番号7と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号8に記載の配列、又は配列番号8と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
(b)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号22に記載の配列、又は配列番号22と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号23に記載の配列、又は配列番号23と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号24に記載の配列、又は配列番号24と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号25に記載の配列、又は配列番号25と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号26に記載の配列、又は配列番号26と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号27に記載の配列、又は配列番号27と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
(c)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号38に記載の配列、又は配列番号38と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号39に記載の配列、又は配列番号39と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号40に記載の配列、又は配列番号40と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号41に記載の配列、又は配列番号41と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号42に記載の配列、又は配列番号42と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号43に記載の配列、又は配列番号43と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
(d)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号56に記載の配列、又は配列番号56と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号57に記載の配列、又は配列番号57と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号58に記載の配列、又は配列番号58と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号59に記載の配列、又は配列番号59と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号60に記載の配列、又は配列番号60と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号61に記載の配列、又は配列番号61と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
或いは
(e)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号70に記載の配列、又は配列番号70と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号71に記載の配列、又は配列番号71と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号72に記載の配列、又は配列番号72と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号73に記載の配列、又は配列番号73と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号74に記載の配列、又は配列番号74と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号75に記載の配列、又は配列番号75と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3。
(a)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号3に記載の配列、又は配列番号3と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号4に記載の配列、又は配列番号4と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号5に記載の配列、又は配列番号5と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号6に記載の配列、又は配列番号6と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号7に記載の配列、又は配列番号7と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号8に記載の配列、又は配列番号8と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
(b)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号22に記載の配列、又は配列番号22と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号23に記載の配列、又は配列番号23と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号24に記載の配列、又は配列番号24と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号25に記載の配列、又は配列番号25と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号26に記載の配列、又は配列番号26と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号27に記載の配列、又は配列番号27と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
(c)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号38に記載の配列、又は配列番号38と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号39に記載の配列、又は配列番号39と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号40に記載の配列、又は配列番号40と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号41に記載の配列、又は配列番号41と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号42に記載の配列、又は配列番号42と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号43に記載の配列、又は配列番号43と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
(d)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号56に記載の配列、又は配列番号56と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号57に記載の配列、又は配列番号57と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号58に記載の配列、又は配列番号58と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号59に記載の配列、又は配列番号59と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号60に記載の配列、又は配列番号60と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号61に記載の配列、又は配列番号61と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3;
或いは
(e)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号70に記載の配列、又は配列番号70と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H1、配列番号71に記載の配列、又は配列番号71と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H2、配列番号72に記載の配列、又は配列番号72と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-H3;及び/又は
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号73に記載の配列、又は配列番号73と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L1、配列番号74に記載の配列、又は配列番号74と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L2、配列番号75に記載の配列、又は配列番号75と比較して1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加)を有する配列、を有するCDR-L3。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、CDRがIMGT番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域を含む:
(a)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号3に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号4に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号5に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号6に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号7に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号8に記載の配列を有するCDR-L3;
(b)以下の3つのCDR含む重鎖可変領域(VH):配列番号22に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号23に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号24に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号25に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号26に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号27に記載の配列を有するCDR-L3;
(c)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号38に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号39に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号40に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号41に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号42に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号43に記載の配列を有するCDR-L3;
(d)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号56に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号57に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号58に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号59に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号60に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号61に記載の配列を有するCDR-L3;
又は
(e)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号70に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号71に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号72に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号73に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号74に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号75に記載の配列を有するCDR-L3。
(a)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号3に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号4に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号5に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号6に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号7に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号8に記載の配列を有するCDR-L3;
(b)以下の3つのCDR含む重鎖可変領域(VH):配列番号22に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号23に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号24に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号25に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号26に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号27に記載の配列を有するCDR-L3;
(c)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号38に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号39に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号40に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号41に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号42に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号43に記載の配列を有するCDR-L3;
(d)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号56に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号57に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号58に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号59に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号60に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号61に記載の配列を有するCDR-L3;
又は
(e)以下の3つのCDRを含む重鎖可変領域(VH):配列番号70に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号71に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号72に記載の配列を有するCDR-H3;及び/若しくは
以下の3つのCDRを含む軽鎖可変領域(VL):配列番号73に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号74に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号75に記載の配列を有するCDR-L3。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、CDRがKabatの番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)を含む:
(a)以下の3つのCDR:配列番号9に記載の配列又は配列番号9と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号10に記載の配列又は配列番号10と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号12に記載の配列又は配列番号12と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号13に記載の配列又は配列番号13と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号14に記載の配列又は配列番号14と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号15に記載の配列又は配列番号15と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(b)以下の3つのCDR:配列番号28に記載の配列又は配列番号28と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号29に記載の配列又は配列番号29と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号30に記載の配列又は配列番号30と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号31に記載の配列又は配列番号31と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号32に記載の配列又は配列番号32と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号33に記載の配列又は配列番号33と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(c)以下の3つのCDR:配列番号44に記載の配列又は配列番号44と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号45に記載の配列又は配列番号45と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号47に記載の配列又は配列番号47と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号48に記載の配列又は配列番号48と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号49に記載の配列又は配列番号49と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号50に記載の配列又は配列番号50と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(d)以下の3つのCDR:配列番号62に記載の配列又は配列番号62と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号63に記載の配列又は配列番号63と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号64に記載の配列又は配列番号64と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号65に記載の配列又は配列番号65と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号66に記載の配列又は配列番号66と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号67に記載の配列又は配列番号67と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
或いは
(e)以下の3つのCDR:配列番号76に記載の配列又は配列番号76と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号77に記載の配列又は配列番号77と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号78に記載の配列又は配列番号78と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号79に記載の配列又は配列番号79と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号80に記載の配列又は配列番号80と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号81に記載の配列又は配列番号81と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)。
(a)以下の3つのCDR:配列番号9に記載の配列又は配列番号9と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号10に記載の配列又は配列番号10と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号12に記載の配列又は配列番号12と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号13に記載の配列又は配列番号13と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号14に記載の配列又は配列番号14と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号15に記載の配列又は配列番号15と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(b)以下の3つのCDR:配列番号28に記載の配列又は配列番号28と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号29に記載の配列又は配列番号29と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号30に記載の配列又は配列番号30と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号31に記載の配列又は配列番号31と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号32に記載の配列又は配列番号32と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号33に記載の配列又は配列番号33と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(c)以下の3つのCDR:配列番号44に記載の配列又は配列番号44と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号45に記載の配列又は配列番号45と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号47に記載の配列又は配列番号47と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号48に記載の配列又は配列番号48と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号49に記載の配列又は配列番号49と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号50に記載の配列又は配列番号50と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(d)以下の3つのCDR:配列番号62に記載の配列又は配列番号62と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号63に記載の配列又は配列番号63と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号64に記載の配列又は配列番号64と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号65に記載の配列又は配列番号65と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号66に記載の配列又は配列番号66と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号67に記載の配列又は配列番号67と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
或いは
(e)以下の3つのCDR:配列番号76に記載の配列又は配列番号76と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H1、配列番号77に記載の配列又は配列番号77と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H2、配列番号78に記載の配列又は配列番号78と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/又は
以下の3つのCDR:配列番号79に記載の配列又は配列番号79と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L1、配列番号80に記載の配列又は配列番号80と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L2、配列番号81に記載の配列又は配列番号81と比較して1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加)を有する配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、CDRがKabatの番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)を含む:
(a)以下の3つのCDR:配列番号9に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号10に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号12に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号13に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号14に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号15に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(b)以下の3つのCDR:配列番号28に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号29に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号30に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号31に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号32に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号33に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(c)以下の3つのCDR:配列番号44に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号45に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号47に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号48に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号49に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号50に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(d)以下の3つのCDR:配列番号62に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号63に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号64に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号65に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号66に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号67に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
又は
(e)以下の3つのCDR:配列番号76に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号77に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号78に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号79に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号80に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号81に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)。
(a)以下の3つのCDR:配列番号9に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号10に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号12に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号13に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号14に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号15に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(b)以下の3つのCDR:配列番号28に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号29に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号30に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号31に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号32に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号33に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(c)以下の3つのCDR:配列番号44に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号45に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号47に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号48に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号49に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号50に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
(d)以下の3つのCDR:配列番号62に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号63に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号64に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号65に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号66に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号67に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)、
又は
(e)以下の3つのCDR:配列番号76に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号77に記載の配列を有するCDR-H2、配列番号78に記載の配列を有するCDR-H3を含む、重鎖可変領域(VH)、及び/若しくは
以下の3つのCDR:配列番号79に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号80に記載の配列を有するCDR-L2、配列番号81に記載の配列を有するCDR-L3を含む、軽鎖可変領域(VL)。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)であって、重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)内の少なくとも1つのCDRが、上述のIMGT又はKabatによって定義されるCDRと比較して、1個又は複数のアミノ酸の置換、欠失、付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ)である突然変異を含有する、重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)を含む。
好ましくは、本発明の置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のVHは、マウス免疫グロブリンの重鎖可変領域(VH)に由来するフレームワーク領域(FR)を含み、及び/又は本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のVLは、マウス免疫グロブリンの軽鎖可変領域(VL)に由来するフレームワーク領域(FR)を含む。したがって、ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、マウスのものである。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のVHは、ヒト免疫グロブリンの重鎖可変領域(VH)に由来するフレームワーク領域(FR)を含み、及び/又は本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のVLは、ヒト免疫グロブリンの軽鎖可変領域(VL)に由来するフレームワーク領域(FR)を含む。したがって、ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ヒト化されている。そのような実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖可変領域内の1つ若しくは複数のFR及び/又は軽鎖可変領域内の1つ若しくは複数のFRは、1個又は複数の非ヒト(例えば、マウス)アミノ酸残基を含み得、例えば、重鎖可変領域内の1つ若しくは複数のFR、及び/又は軽鎖可変領域内の1つ若しくは複数のFRは、対応するマウスアミノ酸残基が存在する1個又は複数のアミノ酸の逆突然変異を含み得る。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)ヒト免疫グロブリンの重鎖フレームワーク領域又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する生殖系列抗体遺伝子配列と比較して、最大で20個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を含む、重鎖フレームワーク領域又はそのバリアント、及び/又は
(b)ヒト免疫グロブリンの軽鎖フレームワーク領域又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する生殖系列抗体遺伝子配列と比較して、最大で20個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を含む、軽鎖フレームワーク領域又はそのバリアント
を含む。
(a)ヒト免疫グロブリンの重鎖フレームワーク領域又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する生殖系列抗体遺伝子配列と比較して、最大で20個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を含む、重鎖フレームワーク領域又はそのバリアント、及び/又は
(b)ヒト免疫グロブリンの軽鎖フレームワーク領域又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する生殖系列抗体遺伝子配列と比較して、最大で20個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を含む、軽鎖フレームワーク領域又はそのバリアント
を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片のヒト化の程度は、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号1、20、36、54、及び68に記載のいずれか1つの配列、
(ii)配列番号1、20、36、54、及び68に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)配列番号1、20、36、54、及び68に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域(VH)
並びに/或いは
(b)
(iv)配列番号2、21、37、55、及び69に記載のいずれか1つの配列、
(v)配列番号2、21、37、55、及び69に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)配列番号2、21、37、55、及び69に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む。
(a)
(i)配列番号1、20、36、54、及び68に記載のいずれか1つの配列、
(ii)配列番号1、20、36、54、及び68に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)配列番号1、20、36、54、及び68に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域(VH)
並びに/或いは
(b)
(iv)配列番号2、21、37、55、及び69に記載のいずれか1つの配列、
(v)配列番号2、21、37、55、及び69に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)配列番号2、21、37、55、及び69に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号16、17、34、51、及び52に記載のいずれか1つの配列、
(ii)配列番号16、17、34、51、及び52に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)配列番号16、17、34、51、及び52に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域(VH)
並びに/或いは
(b)
(iv)配列番号18、19、35、及び53に記載のいずれか1つの配列、
(v)配列番号18、19、35、及び53に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)配列番号18、19、35、及び53に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む。
(a)
(i)配列番号16、17、34、51、及び52に記載のいずれか1つの配列、
(ii)配列番号16、17、34、51、及び52に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)配列番号16、17、34、51、及び52に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域(VH)
並びに/或いは
(b)
(iv)配列番号18、19、35、及び53に記載のいずれか1つの配列、
(v)配列番号18、19、35、及び53に記載の配列のうちのいずれか1つと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)配列番号18、19、35、及び53に記載の配列のうちのいずれか1つと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域(VL)
を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号1、20、36、54、及び68のうちのいずれか1つに記載の重鎖可変領域(VH)、並びに/又は配列番号2、21、37、55、及び69のうちのいずれか1つに記載の軽鎖可変領域(VL)を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号16、17、34、51、及び52のうちのいずれか1つに記載の重鎖可変領域(VH)、並びに/又は配列番号18、19、35、及び53のうちのいずれか1つに記載の軽鎖可変領域(VL)を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号1に記載のVH、及び/又は配列番号2に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号1に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号2に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号1に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)VH、並びに/或いは配列番号2に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)VLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号16に記載のVH、及び/又は配列番号18に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号16に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号18に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号16に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)VH、並びに/或いは配列番号18に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)VLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号17に記載のVH、及び/又は配列番号19に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号17に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号19に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号17に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)VH、並びに/或いは配列番号19に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)VLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号20に記載のVH、及び/又は配列番号21に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号20に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号21に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号20に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVH、並びに/或いは配列番号21に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号34に記載のVH、及び/又は配列番号35に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号34に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号35に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号34に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVH、並びに/或いは配列番号35に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号36に記載のVH、及び/又は配列番号37に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号36に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号37に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号36に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVH、並びに/或いは配列番号37に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号51若しくは52に記載のVH、及び/又は配列番号53に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号51若しくは52に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号53に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号51又は52に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVH、並びに/或いは配列番号53に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号54に記載のVH、及び/又は配列番号55に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号54に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号55に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号54に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVH、並びに/或いは配列番号55に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号68に記載のVH、及び/又は配列番号69に記載のVLを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号68に記載のVHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVH、及び/又は配列番号69に記載のVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、若しくは100%の配列同一性を有するVLを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号68に記載のVHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVH、並びに/或いは配列番号69に記載のVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有するVLを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)配列番号1に記載の配列を有するVH及び配列番号2に記載の配列を有するVL、
(b)配列番号16に記載の配列を有するVH及び配列番号18に記載の配列を有するVL、
(c)配列番号17に記載の配列を有するVH及び配列番号19に記載の配列を有するVL、
(d)配列番号20に記載の配列を有するVH及び配列番号21に記載の配列を有するVL、
(e)配列番号34に記載の配列を有するVH及び配列番号35に記載の配列を有するVL、
(f)配列番号36に記載の配列を有するVH及び配列番号37に記載の配列を有するVL、
(g)配列番号51に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、
(h)配列番号52に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、
(i)配列番号54に記載の配列を有するVH及び配列番号55に記載の配列を有するVL、
(j)配列番号68に記載の配列を有するVH及び配列番号69に記載の配列を有するVL、
(k)それぞれ、(a)~(j)のうちのいずれかにおけるVH及びVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を独立的に有する、重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)、或いは
(l)それぞれ、(a)~(j)のうちのいずれかにおけるVH及びVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを独立的に有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)、重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)
を含む。好ましくは、置換は、保存的置換である。
(a)配列番号1に記載の配列を有するVH及び配列番号2に記載の配列を有するVL、
(b)配列番号16に記載の配列を有するVH及び配列番号18に記載の配列を有するVL、
(c)配列番号17に記載の配列を有するVH及び配列番号19に記載の配列を有するVL、
(d)配列番号20に記載の配列を有するVH及び配列番号21に記載の配列を有するVL、
(e)配列番号34に記載の配列を有するVH及び配列番号35に記載の配列を有するVL、
(f)配列番号36に記載の配列を有するVH及び配列番号37に記載の配列を有するVL、
(g)配列番号51に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、
(h)配列番号52に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、
(i)配列番号54に記載の配列を有するVH及び配列番号55に記載の配列を有するVL、
(j)配列番号68に記載の配列を有するVH及び配列番号69に記載の配列を有するVL、
(k)それぞれ、(a)~(j)のうちのいずれかにおけるVH及びVLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を独立的に有する、重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)、或いは
(l)それぞれ、(a)~(j)のうちのいずれかにおけるVH及びVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを独立的に有する(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する)、重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)
を含む。好ましくは、置換は、保存的置換である。
上述の態様のうちのいずれか1つにおいて、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、哺乳動物(例えば、マウス又はヒト)免疫グロブリンに由来する定常領域配列又はそのバリアントを更に含み得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖は、ヒト又はマウス免疫グロブリンの重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有する重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントを含み、並びに/或いは本発明の抗体又はその抗原結合性断片の軽鎖は、ヒト又はマウス免疫グロブリンの軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する、軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖は、ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で50個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有する、重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントを含み、並びに/或いは本発明の抗体又はその抗原結合性断片の軽鎖は、ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で50個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有する、軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、マウス免疫グロブリンの重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で50個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有する、重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントを含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、マウス免疫グロブリンの軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で50個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有する、軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントを含む。
一部の実施形態では、定常領域は、抗PD-1抗体分子の特性を改変するように、変更されている、例えば、突然変異されている(例えば、以下の特徴:Fc受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、又は補体機能のうちの1つ又は複数を変更する)。機能は、例えば、抗体のエフェクターリガンド(例えば、FcR又は補体C1q)に対する親和性を変更し、それによって、エフェクター機能を変化させる(例えば、減少させる)ために、抗体定常領域における少なくとも1つのアミノ酸残基を、異なる残基と置き換えることによって、変更することができる。抗体のFc領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、ADCC、ファゴサイトーシス、CDCなどを媒介する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、及びIgEの重鎖定常領域からなる群から選択される、具体的には、例えば、IgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4の重鎖定常領域からなる群から選択される、及びより具体的には、IgG1及びIgG4(例えば、ヒトIgG1又はIgG4)の重鎖定常領域からなる群から選択される、重鎖定常領域(Fc)を含む。一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、カッパ又はラムダ軽鎖定常領域、好ましくは、カッパ軽鎖定常領域(例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域)から選択される、軽鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、(1)ヒトIgG1重鎖定常領域、(2)ヒトIgG4重鎖定常領域、又は(3)ヒトIgG4重鎖定常領域の突然変異体(S228P)からなる群から選択される重鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、ヒトIgG1定常領域(uniprot ID P01857)、又はヒトIgG4定常領域(uniprot ID P01861)を含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントであって、バリアントが、配列番号83と比較して、最大で50個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有する重鎖定常領域(CH)又はそのバリアント、並びに/或いは配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントであって、バリアントが、配列番号84と比較して、最大で50個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有する、軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントを含む。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号82又は83に記載の配列、
(ii)配列番号82又は83に記載の配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)配列番号82又は83に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖定常領域(CH)
並びに/或いは
(b)
(iv)配列番号84に記載の配列、
(v)配列番号84に記載の配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)配列番号84に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖定常領域(CL)
を含む。
(a)
(i)配列番号82又は83に記載の配列、
(ii)配列番号82又は83に記載の配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)配列番号82又は83に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖定常領域(CH)
並びに/或いは
(b)
(iv)配列番号84に記載の配列、
(v)配列番号84に記載の配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)配列番号84に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖定常領域(CL)
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号82又は83に記載の重鎖定常領域(CH)及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号1に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号2に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号1に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号2に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号16に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号18に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号16に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号18に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号17に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号19に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号17に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号19に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号20に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号21に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号20に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号21に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号34に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号35に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号34に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号35に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号36に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号37に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号36に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号37に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号51に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号53に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号51に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号53に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号52に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号53に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号52に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号53に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号54に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号55に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号54に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号55に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
(a)
(i)配列番号68に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号69に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
(a)
(i)配列番号68に記載のVH配列及び配列番号82又は83に記載のCH配列を含む配列、
(ii)(i)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
(b)
(iv)配列番号69に記載のVL配列及び配列番号84に記載のCL配列を含む配列、
(v)(iv)における配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個、若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)を有する配列、或いは
(vi)(iv)における配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、(ii)又は(v)における置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号1に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号2に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号16に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号18に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号17に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号19に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号20に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号21に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号34に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号35に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号36に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号37に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号51に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号53に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号52に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号53に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号54に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号55に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号68に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖と、配列番号69に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、キメラ又はヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、scFv、Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv断片、ジスルフィド連結されたFv(dsFv)、ダイアボディ、二特異性抗体、及び多特異性抗体からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、以下の特性:
(a)50nM未満、例えば、40nM未満、30nM未満、20nM未満、10nM未満、1nM未満、0.1nM未満、1pM未満、0.1pM未満、又はそれよりも低いKDでPD-1(例えば、ヒトPD-1)に結合すること(ここで、KDは、当該技術分野において周知の技法、例えば、バイオレイヤー干渉法(BLI)(例えば、ForteBio Octet(登録商標))若しくはELISAによって測定することができる)、
(b)50nM未満、例えば、40nM未満、30nM未満、20nM未満、10nM未満、1nM未満、0.9nM未満、0.8nM未満、0.7nM未満、0.6nM未満、0.5nM未満、0.4nM未満、0.3nM未満、0.2nM未満、0.1nM未満、0.01nM未満、1pM未満、0.1pM未満、若しくはそれよりも低いEC50でPD-1(例えば、ヒトPD-1)に結合すること(ここで、EC50は、当該技術分野において周知の技法、例えば、フローサイトメトリー若しくは細胞競合ELISAによって測定することができる)、
(c)PD-L1若しくはPD-L2への結合について、約0.1ng/mL~約1000ng/mLのIC50でPD-1と競合すること(好ましくは、IC50は、ELISAによって測定される)、
(d)T細胞活性化を増加させること、例えば、Tリンパ球におけるIFN-γ及び/若しくはIL-2の発現を増加させること、
(e)BTLAにも、PD-L1にも、ICOSにも結合しないこと、
(g)腫瘍細胞を死滅させるか、若しくはその成長を阻害すること、
(g)良好な熱安定性を有すること、又は
(h)ADCP、ADCC、及びCDC活性のうちの少なくとも1つの活性がないか、若しくは低減されていること
のうちの少なくとも1つを示し得る。
(a)50nM未満、例えば、40nM未満、30nM未満、20nM未満、10nM未満、1nM未満、0.1nM未満、1pM未満、0.1pM未満、又はそれよりも低いKDでPD-1(例えば、ヒトPD-1)に結合すること(ここで、KDは、当該技術分野において周知の技法、例えば、バイオレイヤー干渉法(BLI)(例えば、ForteBio Octet(登録商標))若しくはELISAによって測定することができる)、
(b)50nM未満、例えば、40nM未満、30nM未満、20nM未満、10nM未満、1nM未満、0.9nM未満、0.8nM未満、0.7nM未満、0.6nM未満、0.5nM未満、0.4nM未満、0.3nM未満、0.2nM未満、0.1nM未満、0.01nM未満、1pM未満、0.1pM未満、若しくはそれよりも低いEC50でPD-1(例えば、ヒトPD-1)に結合すること(ここで、EC50は、当該技術分野において周知の技法、例えば、フローサイトメトリー若しくは細胞競合ELISAによって測定することができる)、
(c)PD-L1若しくはPD-L2への結合について、約0.1ng/mL~約1000ng/mLのIC50でPD-1と競合すること(好ましくは、IC50は、ELISAによって測定される)、
(d)T細胞活性化を増加させること、例えば、Tリンパ球におけるIFN-γ及び/若しくはIL-2の発現を増加させること、
(e)BTLAにも、PD-L1にも、ICOSにも結合しないこと、
(g)腫瘍細胞を死滅させるか、若しくはその成長を阻害すること、
(g)良好な熱安定性を有すること、又は
(h)ADCP、ADCC、及びCDC活性のうちの少なくとも1つの活性がないか、若しくは低減されていること
のうちの少なくとも1つを示し得る。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ADCP活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ADCC活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、CDC活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、CDC活性を有さない。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ADCP活性を有さない。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ADCC活性を有さない。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ADCP、ADCC、及びCDC活性のうちの1つ、2つ、又は全ての活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ADCP、ADCC、及びCDC活性のうちの1つ、2つ、又は全てを有さない。
抗体の誘導体
本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、追加の分子(例えば、追加のポリペプチド又はタンパク質)との連結によって誘導体化されてもよい。典型的には、抗体又はその抗原結合性断片の誘導体化(例えば、標識化)は、そのPD-1(特に、ヒトPD-1)への結合に悪影響を与えない。そのため、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、そのような誘導体形態を含むことも意図する。例えば、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、(化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合的又は他の方法によって)1つ又は複数の他の分子群、例えば、別の抗体(例えば、二特異性抗体を形成する)、検出剤、薬学的試薬及び/又は抗体若しくは抗原結合性断片の別の分子(例えば、アビジン又はポリヒスチジンタグ)への結合を媒介することができるタンパク質又はポリペプチドに連結されてもよい。
本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、追加の分子(例えば、追加のポリペプチド又はタンパク質)との連結によって誘導体化されてもよい。典型的には、抗体又はその抗原結合性断片の誘導体化(例えば、標識化)は、そのPD-1(特に、ヒトPD-1)への結合に悪影響を与えない。そのため、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、そのような誘導体形態を含むことも意図する。例えば、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、(化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合的又は他の方法によって)1つ又は複数の他の分子群、例えば、別の抗体(例えば、二特異性抗体を形成する)、検出剤、薬学的試薬及び/又は抗体若しくは抗原結合性断片の別の分子(例えば、アビジン又はポリヒスチジンタグ)への結合を媒介することができるタンパク質又はポリペプチドに連結されてもよい。
ある種類の誘導体抗体(例えば、二特異性抗体)は、(同じ又は異なる種類の)2つ以上の抗体を架橋することによって作成される。二特異性抗体を得るための方法は、当技術分野において周知であり、例示的な方法としては、限定されるものではないが、化学的架橋、細胞の遺伝子操作(ハイブリドーマ)又は遺伝子操作が挙げられる。
別の種類の誘導体抗体は、標識抗体である。例えば、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、検出可能なマーカーに連結されていてもよい。本発明の検出可能なマーカーは、蛍光、分光法、光化学、生化学、免疫学、電気学、光学又は化学によって検出される任意の物質であってもよい。そのようなマーカーは、当技術分野において周知であり、その例としては、限定されるものではないが、酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなど)、放射性核種(例えば、3H、125I、35S、14C又は32P)、蛍光色素(例えば、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート(TRITC)、フィコエリトリン(PE)、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット又はシアニン色素誘導体(例えば、Cy7、Alexa 750)、アクリジンエステル化合物、磁気ビーズ(例えば、Dynabeads(登録商標))、コロイド金若しくは着色ガラス若しくはプラスチック(例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど)ビーズなどの熱量測定マーカー、及び上記マーカーによって修飾されたアビジン(例えば、ストレプトアビジン)に結合するためのビオチンが挙げられる。そのようなマーカーは、限定されるものではないが、米国特許第3,817,837号;同第3,850,752号;同第3,939,350号;同第3,996,345号;同第4,277,437号;同第4,275,149号;及び同第4,366,241号を含む特許に開示されており、その全ては、参照によって本明細書に組み込まれる。上記に記載の検出可能なマーカーは、当技術分野において公知の方法によって検出することができる。例えば、放射活性マーカーは、写真用フィルム又はシンチレーション計算機を使用して検出されてもよく、蛍光マーカーは、放射光を検出する光検出器を使用して検出されてもよい。酵素マーカーは、一般に、基質を酵素に提供すること、及び基質に対する酵素の効果によって生成する反応生成物を検出することによって検出され、熱量測定マーカーは、簡便な視覚性着色マーカーによって検出される。ある特定の実施形態では、そのようなマーカーは、イムノアッセイ(例えば、酵素結合イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイなど)において有用である。一部の実施形態では、上記に記載の検出可能なマーカーは、潜在的な立体障害を低減するために、異なる長さのリンカーを介して、本発明の抗体又はその抗原結合性断片に連結されていてもよい。
加えて、本発明の抗体又はその抗原結合性断片はまた、化学基、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)、メチル若しくはエチル、又はグリコシルで誘導体化されてもよい。これらの基を使用して、血清の半減期の増加などの抗体の生物学的特性を改善することができる。
したがって、一態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片、及び上記に記載の検出可能なマーカー、例えば、放射性同位元素、蛍光性物質、発光性物質、着色物質又は酵素であり得るカップリング部分を含むコンジュゲートを提供する。カップリング部分はまた、薬剤、例えば、化学療法剤、放射性核種又は毒素、例えば、パクリタキセル、シクロホスファミド、フルオロウラシル、89Sr、デュオカルマイシンであってもよい。
抗体の誘導体の1つとして、本発明は、第1の抗体若しくはその断片、及び追加の抗体若しくはその断片又は抗体模倣物を含む多特異性抗体であって、第1の抗体若しくはその断片、追加の抗体若しくはその断片又は抗体模倣物が、その元の結合特異性を保持する、多特異性抗体を提供する。第1の抗体又はその断片は、PD-1に特異的に結合する本発明の任意の(モノクローナル)抗体又はその抗原結合性断片である。本明細書で使用される場合、「抗体模倣体」は、抗体の構造なしではあるが、抗体としての抗原への特異的な結合を指す。それらは、通常、約3~20kDaのモル質量を有する人工ペプチド又はタンパク質、例えば、設計アンキリンリピートタンパク質(DARPin)及びフィノマーである。設計アンキリンリピートタンパク質(DARPin)は、中国特許出願公開第104341529号に記載のように、IgG抗体、scFv-Fc抗体断片又はそれらの組合せに連結され得る。抗IL-17aフィノマーは、国際公開第2015/141862号に記載のように、抗IL-6R抗体に結合する。
ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、第1の抗体又はその抗原結合性断片と追加の抗体若しくはその抗原結合性断片又は抗体模倣物とをカップリングさせることによって形成され、それぞれの抗体若しくはその抗原結合性断片又は抗体類似体は、その元の結合特異性を保持し、第1の抗体又はその結合性断片は、本発明の抗体又はその抗原結合性断片である。ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、二特異性抗体、又は三特異性抗体、又は四特異性抗体である。
抗体の調製
本発明の抗体は、当技術分野において公知の様々な方法、例えば、遺伝子操作組換え技術によって調製することができる。例えば、化学合成又はPCR増幅によって本発明の抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子をコードするDNA分子を得ること、得られたDNA分子を発現ベクターに挿入すること、及び次いで宿主細胞にトランスフェクトすること、次いでトランスフェクトされた宿主細胞を、本発明の抗体を発現する特定の条件下で培養することによって調製することができる。
本発明の抗体は、当技術分野において公知の様々な方法、例えば、遺伝子操作組換え技術によって調製することができる。例えば、化学合成又はPCR増幅によって本発明の抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子をコードするDNA分子を得ること、得られたDNA分子を発現ベクターに挿入すること、及び次いで宿主細胞にトランスフェクトすること、次いでトランスフェクトされた宿主細胞を、本発明の抗体を発現する特定の条件下で培養することによって調製することができる。
本発明の抗原結合性断片は、無傷抗体分子を加水分解することによって得ることができる(Morimotoら、J.Biochem.Biophys.Methods 24巻:107~117頁(1992年)及びBrennanら、Science 229巻:81頁(1985年)を参照されたい)。加えて、これらの抗原結合性断片は、組換え宿主細胞によって直接産生させることもできる(Hudson、Curr.Opin.Immunol.11巻:548~557頁(1999年);Littleら、Immunol.Today、21巻:364~370頁(2000年)において概説)。例えば、Fab’断片は、宿主細胞から直接得ることができ、Fab’断片は、化学的にカップリングして、F(ab’)2断片を形成することができる(Carterら、Bio/Technology、10巻:163~167頁(1992年))。更にまた、Fv、Fab又はF(ab’)2断片は、組換え宿主細胞の培養培地から直接単離することもできる。これらの抗原結合性断片を調製するための他の技術は、当業者に周知である。
そのため、別の態様では、本発明は、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、又はそれらの重鎖可変領域及び/若しくは軽鎖可変領域、又はそれらの1つ若しくは複数のCDRをコードする核酸配列を含む単離された核酸分子を提供する。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、当技術分野において公知のコドン縮重に従って、置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、コドン最適化されている。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、(i)本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をそれぞれコードする第1の核酸及び第2の核酸、又は(ii)本発明の抗体又はその抗原結合性断片の、それぞれ、重鎖可変領域及び重鎖定常領域をコードする第1の核酸、並びに軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域をコードする第2の核酸、又は(iii)本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖及び軽鎖をそれぞれコードする第1の核酸及び第2の核酸を含む。ある特定の実施形態では、第1及び第2の核酸は、上記(i)~(iii)における第1及び第2の核酸のうちのいずれか1つの縮重配列、又はそれと実質的に同一の配列の核酸を含む。縮重配列又は実質的に同一の配列は、(i)~(iii)における核酸配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有する配列、或いは1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有するか、又は3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドが異なる配列を指す、例えば、単離された核酸分子は、配列番号85、配列番号87、配列番号89、配列番号46に記載のヌクレオチド配列、又はそれらの縮重配列、又はそれらと実質的に同一の配列を含んでいてもよい。
ある特定の実施形態では、本発明は、抗体の重鎖をコードする核酸分子及び/又は抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む単離された核酸分子であって、抗体の重鎖をコードする核酸分子が、(a)配列番号85に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は(b)(a)のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(a)のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有するか、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、又は(c)(a)のヌクレオチド配列と3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有し、並びに/或いは抗体の軽鎖をコードする核酸分子が、(d)配列番号87に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は(e)(d)のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(d)のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有するか、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、又は(f)(d)のヌクレオチド配列と3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有する、単離された核酸分子を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号85に記載の抗体の重鎖をコードする核酸分子及び/又は配列番号87に記載の抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む。
ある特定の実施形態では、本発明は、抗体の重鎖をコードする核酸分子及び/又は抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む単離された核酸分子であって、抗体の重鎖をコードする核酸分子が、(a)配列番号89に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は(b)(a)のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(a)のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有するか、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、又は(c)(a)のヌクレオチド配列と3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有し、並びに/或いは抗体の軽鎖をコードする核酸分子が、(d)配列番号46に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は(e)(d)のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(d)のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有するか、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、又は(f)(d)のヌクレオチド配列と3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有する、単離された核酸分子を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号89に記載の抗体の重鎖をコードする核酸分子及び/又は配列番号46に記載の抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む。
別の態様では、本発明の単離された核酸分子を含むベクター(例えば、クローニングベクター又は発現ベクター)が提供される。ある特定の実施形態では、本発明のベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ファージ、レンチウイルスなどである。ある特定の実施形態では、ベクターは、対象(例えば、哺乳動物、例えば、ヒト)においてin vivoで本発明の抗体又はその抗原結合性断片を発現することができる。
別の態様では、本発明の単離された核酸分子又は本発明のベクターを含む宿主細胞が提供される。宿主細胞は、真核細胞(例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞)又は原核細胞(例えば、大腸菌(Escherichia coli))であってもよい。好適な真核細胞としては、限定されるものではないが、NS0細胞、Vero細胞、Hela細胞、COS細胞、CHO細胞、HEK293細胞、BHK細胞及びMDCKII細胞が挙げられる。好適な昆虫細胞としては、限定されるものではないが、Sf9細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、本発明の宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えば、CHO(例えば、CHO-K1、CHO-S、CHO DXB11、CHO DG44)である。
別の態様では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を調製するための方法であって、本発明の宿主細胞を、抗体又はその抗原結合性断片の発現を可能にする条件下で培養するステップ、及び抗体又はその抗原結合性断片を培養された宿主細胞培養物から回収するステップを含む方法が提供される。
別の態様では、1つ又は複数のキメラ抗原受容体(CAR)、及びCARを有するか、又は発現する細胞が提供され、CARを有するか、又は発現する細胞は、本発明の任意の抗体若しくは抗原結合性断片(例えば、scFv)、核酸又はベクターを含むか、又は発現する。
CARを受ける細胞は、宿主細胞と呼ばれる。CARを有するか、又は発現する宿主細胞は、CAR細胞と呼ばれる。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、免疫細胞から選択され、好ましくは、免疫細胞は、Tリンパ球、NK細胞、単球、マクロファージ又は樹状細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
CAR細胞の調製は、当技術分野における文献に記載の技術又は条件を参照することができ、例えば、Sambrookら、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、第3版(Huang Peitangら翻訳)を参照するか、又は製品の使用説明書に従って行うことができる。
別の態様では、本発明の単離された核酸分子又は本発明のベクターを含む腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
1つ又はいくつかの本発明の抗体又はその抗原結合性断片をコードする核酸分子が、腫瘍溶解性ウイルスに挿入されているか、又は運ばれることを特徴とする。本発明の核酸分子を運ぶ腫瘍溶解性ウイルスは、1つ又は複数の抗PD-1抗体又はその結合性断片を発現する。
改変された腫瘍溶解性ウイルスの調製については、当技術分野における文献に記載されている技術又は条件を参照することができ(例えば、Sambrookら、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、第3版(Huang Peitangら翻訳)を参照されたい)、又は製品の使用説明書に従って行うことができる。
本発明の核酸分子を運ぶ腫瘍溶解性ウイルスは、抗PD-1抗体又はその抗原結合性断片を送達する、腫瘍細胞を溶解するウイルスの機能を実現しながら、in vivoで抗PD-1抗体又はその抗原結合性断片を発現する機能を実現する、そのようにして腫瘍細胞の溶解及び抗腫瘍免疫の増強の両方の二重の役割を果たすのに有効であり得る。したがって、本発明によって改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用して、腫瘍を予防及び/又は処置するための医薬を調製することができ、本発明によって改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用して、予防及び/又は処置することができる。
別の態様では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片、及びサイトカイン(例えば、IL-2、IL-15、IL-7、IL-12、IL-18、IL-21、TNF-α又はIFNγ)などのポリペプチドである非免疫グロブリン部分を含む融合タンパク質が提供される。
使用、治療方法及び医薬組成物
別の態様では、本発明は、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、腫瘍溶解性ウイルス又は融合タンパク質、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、腫瘍溶解性ウイルス又は融合タンパク質、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の抗体又はその抗原結合性断片、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、上記に記載の単離された核酸分子又はベクターを含む本発明の宿主細胞、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の多特異性抗体、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明のコンジュゲート、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明のCAR細胞、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の腫瘍溶解性ウイルス、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の融合タンパク質、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、医薬組成物はまた、追加の薬学的活性薬剤を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、追加の薬学的活性薬剤は、化学療法剤、抗腫瘍剤、抗感染症剤又は抗自己免疫疾患剤、抗血管新生剤又はチロシンキナーゼ阻害剤である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片及び追加の薬学的活性薬剤は、別々の成分として、又は同じ組成物中の成分として、提供される。そのため、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、追加の薬学的活性薬剤と、組み合わせて又は別々に、同時又は連続して投与することができる。
ある特定の実施形態では、医薬組成物はまた、追加の薬学的活性薬剤を含んでいてもよい。追加の薬学的活性薬剤は、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤からなる群から選択される。抗腫瘍剤は、化学療法剤、免疫調節効果と関連する抗体又は抗腫瘍生体高分子剤を含む。化学療法剤は、抗血管新生剤又はチロシンキナーゼ阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、化学療法剤としては、限定されるものではないが、例えば、5-フルオロウラシル、アクチノマイシン-D、ダウノルビシン、マイトマイシン、ビンクリスチンなど、又はそれらの任意の組合せが挙げられる。
ある特定の実施形態では、放射性医薬品としては、限定されるものではないが、炭素-11、炭素-14、クロム-51、コバルト-57、コバルト-58、エルビウム-169、フッ素-18、ガリウム-67、金-198、インジウム-111、インジウム-113m、ヨウ素-123、ヨウ素-125、ヨウ素-131などが挙げられる。
ある特定の実施形態では、免疫調節効果と関連する抗体は、腫瘍の予防、阻害及び/又は処置において有用な抗体、例えば、抗CTLA-4抗体、抗HER2抗体、抗EGFR抗体、抗LAG-3抗体又はTIM-3抗体などを指し、好ましくは、抗LAG-3抗体はAB12T8(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co.、Ltd.、国際公開第2019/141092号)であり、及びTIM-3抗体はAB12S3(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co.、Ltd.、国際公開第2019/206095号)である。
ある特定の実施形態では、免疫調節効果と関連する薬剤は、炎症若しくは感染症の予防、阻害及び/若しくは処置において有用であるか、又は腫瘍調節効果を有する薬剤、例えば、抗IL-1抗体、抗IL-6抗体、抗TNF-α抗体などを指す。
ある特定の実施形態では、自己免疫疾患と関連する薬剤は、自己免疫疾患の予防、阻害及び/又は処置において有用な薬剤、例えば、抗IL-1抗体、抗IL-6抗体、抗TNF-α抗体、抗CD20抗体、抗Bリンパ球刺激因子(BLyS)抗体などを指す。
ある特定の実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤としては、限定されるものではないが、イマチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ラパチニブ、ダサチニブが挙げられる。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、腫瘍の処置の前、それと同時、又はその後に、他の処置若しくは治療剤と同時に、別々に又は連続して投与される。
別の態様では、本発明の医薬組成物中の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質又はコンジュゲートは、対象における以下の生物学的活性:
(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、
(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、
(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、
(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強する
のうちの少なくとも1つを生じるのに十分である。
(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、
(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、
(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、
(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強する
のうちの少なくとも1つを生じるのに十分である。
別の態様では、本発明は、
(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、
(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、
(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、及び/或いは
(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強する
ための医薬の調製における、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、腫瘍溶解性ウイルス又は融合タンパク質の使用を提供する。
(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、
(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、
(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、及び/或いは
(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強する
ための医薬の調製における、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、腫瘍溶解性ウイルス又は融合タンパク質の使用を提供する。
ある特定の実施形態では、医薬を調製するために使用される場合、本発明の宿主細胞は、上記に記載の単離された核酸分子又はベクターを含む。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質、コンジュゲート、医薬組成物、又は追加の薬学的活性薬剤(例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤)と組み合わせた本発明の医薬組成物は、医薬を調製するために使用され、医薬は、対象(例えば、ヒト)における腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び/又は処置するために使用される。
ある特定の実施形態では、対象は、哺乳動物である。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、コンジュゲート、融合タンパク質、薬剤、医薬組成物、又は追加の薬学的活性薬剤(例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤)と組み合わせた本発明の医薬組成物は、腫瘍を予防及び/又は処置するために使用される。ある特定の実施形態では、腫瘍は、皮膚、骨髄、血液、リンパ液、頭頸部、脳、肺、乳房、胃、肝臓、膵臓、胆嚢、腸、卵巣、前立腺、副腎、腎臓、膀胱、子宮、子宮頸部、精巣、陰茎及び軟組織からなる群からの組織における1つ又は複数から選択される。
ある特定の実施形態では、腫瘍は、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、結腸がん、直腸がん、神経膠腫、膀胱がん、乳がん、腎臓がん、食道がん、胃がん、口腔扁平上皮がん、尿道上皮細胞がん及び膵臓がん、並びに頭頸部腫瘍からなる群における1つ又は複数から選択される。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質、コンジュゲート、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物は、追加の薬学的活性薬剤(例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤)と一緒に、感染症と関連する疾患若しくは状態を予防及び/又は処置するために使用される。ある特定の実施形態では、感染症としては、限定されるものではないが、細菌感染症、病原体感染症、真菌感染症及びウイルス感染症が挙げられる。ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片、ベクター、宿主細胞、多重特異性抗体、コンジュゲートは、慢性ウイルス感染症、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス若しくはHIVなどの感染症などのウイルス感染症を予防及び/若しくは処置するため、又は結核などの他の慢性感染症を予防及び/若しくは処置するために使用される。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質、コンジュゲート、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物は、追加の薬学的活性薬剤(例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤)と一緒に、自己免疫と関連する疾患を予防及び/又は処置するために使用される。ある特定の実施形態では、疾患としては、限定されるものではないが、甲状腺機能亢進症、糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、胃炎、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、紅斑性狼瘡、関節リウマチなどが挙げられる。
別の態様では、本発明は、in vivo/in vitroの(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2の免疫抑制を低減するか、又は軽減する、(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、及び(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強するのうちの少なくとも1つのための方法であって、細胞又は対照に、記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物のうちのいずれか1つを、追加の薬学的活性薬剤(例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤)と一緒に投与するステップを含む方法を提供する。
任意選択で、化学療法剤、抗腫瘍剤、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤又はPD-1経路阻害剤が、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、多特異性抗体、コンジュゲート又は医薬組成物の投与と同時に、その前に又はその後に投与される。
ある特定の実施形態では、対象は、哺乳動物であり、好ましくは、対象は、ヒトである。
したがって、別の態様では、本発明は、対象における腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び/又は処置するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、コンジュゲート、融合タンパク質、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物を、追加の薬学的活性薬剤(例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤)と一緒に投与するステップを含む方法を提供する。
本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、コンジュゲート、融合タンパク質又は医薬組成物は、医薬において公知の任意の剤形、例えば、錠剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ゲル剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、エリキシル剤、ロゼンジ、坐剤、注射剤(注射剤溶液、滅菌注射可能粉末及び濃縮注射可能溶液を含む)、吸入剤、スプレー剤などとして製剤化することができる。好ましい剤形は、意図される投与経路及び治療的使用に依存する。本発明の医薬組成物は、製造及び保管条件下で無菌及び安定でなければならず、注射剤に調製することができる。
加えて、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、好都合な投与のために、医薬組成物の単位剤形中に存在し得る。
本発明の医薬組成物は、「治療有効量」又は「予防有効量」の、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、CAR細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質又はコンジュゲートを含み得る。「予防有効量」は、疾患の発生を予防するか、停止するか、又は遅延させるのに十分な量を意味する。「治療有効量」は、疾患を患っている患者において疾患及びその合併症を治癒するか、又は少なくとも部分的に予防するのに十分な量、例えば、0.1mg/mL~5000mg/mLを意味する。
本発明では、対象は、ヒトなどの哺乳動物であってもよい。
検出方法及びキット
本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、PD-1に特異的に結合することができ、そのため、試料中のPD-1の存在又はレベルを検出するために使用することができる。
本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、PD-1に特異的に結合することができ、そのため、試料中のPD-1の存在又はレベルを検出するために使用することができる。
そのため、別の態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、検出可能なマーカーを有する。好ましい実施形態では、キットは、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を特異的に認識する第2の抗体を更に含む。好ましくは、第2の抗体は、検出可能なマーカーを更に含む。
本発明では、検出可能なマーカーは、蛍光、分光法、光化学、生化学、免疫学、電気学、光学又は化学によって検出される任意の物質であってもよい。そのようなマーカーが、イムノアッセイ(例えば、酵素結合イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイなど)のために好適であることが特に好ましい。そのようなマーカーは、当技術分野において周知であり、限定されるものではないが、酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなど)、放射性核種(例えば、3H、125I、35S、14C又は32P)、蛍光色素(例えば、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート(TRITC)、フィコエリトリン(PE)、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット又はシアニン色素誘導体(例えば、Cy7、Alexa 750))、アクリジンエステル化合物、磁気ビーズ(例えば、Dynabeads(登録商標))、コロイド金若しくは着色ガラス若しくはプラスチック(例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど)ビーズなどの熱量測定マーカー、及び上記マーカーによって修飾されたアビジン(例えば、ストレプトアビジン)に結合するために使用されるビオチンが挙げられる。そのようなマーカーの使用は、限定されるものではないが、米国特許第3,817,837号;同第3,850,752号;同第3,939,350号;同第3,996,345号;同第4,277,437号;同第4,275,149号;及び同第4,366,241号を含む特許において教示されており、その全ては、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明に包含されるマーカーは、当技術分野において公知の方法によって検出することができる。例えば、放射活性マーカーは、写真用フィルム又はシンチレーション計算機を使用して検出されてもよく、蛍光マーカーは、放射光を検出する光検出器を使用して検出されてもよい。酵素マーカーは、一般に、酵素ために基質を提供すること、及び基質に対する酵素の効果によって生成する反応生成物を検出することによって検出されてもよく、熱量測定マーカーは、簡便な視覚性着色マーカーによって検出されてもよい。一部の実施形態では、上記に記載の検出可能なマーカーは、潜在的な立体障害を低減するために、異なる長さのリンカーを介して、本発明の組換えタンパク質に連結されていてもよい。
別の態様では、本発明は、試料中のPD-1の存在又はレベルを検出するための方法であって、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を用いるステップを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、依然として検出可能なマーカーを有する。別の好ましい実施形態では、方法は、検出可能なマーカーを有する薬剤を使用して、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を検出するステップを更に含む。方法は、診断目的又は非診断目的(例えば、PD-1/PD-L1経路の研究、薬物スクリーニング、組織化学的分析など)のために使用されてもよい。ある特定の実施形態では、非診断目的のための試料は、細胞株又はex vivoの細胞培養物などの細胞試料である。
別の態様では、本発明は、試料中のPD-1の存在又はレベルを検出するための方法であって、試料を、本発明の抗体又はその抗原結合性断片と、抗体又はその抗原結合性断片及びPD-1の間で複合体の形成を可能にする条件下で接触させるステップ、及び複合体の形成を検出するステップを含む方法を提供する。
別の態様では、試料中のPD-1の存在又はレベルを検出するためのキットを調製するための本発明の抗体又はその抗原結合性断片の使用が提供される。別の態様では、本発明は、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、融合タンパク質又は医薬組成物のうちの1つ若しくは複数を含む診断用又は治療用キットを提供する。任意選択で、診断用又は治療用キットは、それを使用するための使用説明書を更に含む。
本発明の抗体又は抗原結合性断片は、PD-1に対する高い結合親和性を有し、かつ強い特異性を有する。したがって、本発明の抗体又は抗原結合性断片は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び/又は処置するために好適である。本発明のヒト化抗体及びIgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体は、親のマウス抗体の機能及び性質を保持するだけでなく、より高いヒト化度も有し、そのため、免疫原性反応を引き起こすことなく、ヒト対象に安全に投与することができる。したがって、本発明の抗体又は抗原結合性断片は、高い臨床的価値がある。
用語の定義
本発明では、他に定義されない限り、本明細書において使用される全ての科学用語及び技術用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解される意味と同じ意味を有する。加えて、本明細書において使用される、細胞培養、生化学、核酸化学、免疫研究室及び他の操作ステップは、対応する分野において広く使用される従来のステップである。その一方で、本発明をより良好に理解するために、関連する用語の定義及び説明を下記に提供する。
本発明では、他に定義されない限り、本明細書において使用される全ての科学用語及び技術用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解される意味と同じ意味を有する。加えて、本明細書において使用される、細胞培養、生化学、核酸化学、免疫研究室及び他の操作ステップは、対応する分野において広く使用される従来のステップである。その一方で、本発明をより良好に理解するために、関連する用語の定義及び説明を下記に提供する。
中国語の文法には単数及び複数の規則はなく、本明細書において使用される名詞は、単数及び複数の両方を指し、これは文脈に従って特に決定することができ、したがって、本明細書で使用される名詞を英語に翻訳すると、「1つ又は複数」が先行し得る。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、典型的には、軽鎖(LC)及び重鎖(HC)をそれぞれ有する、ポリペプチド鎖の2つの対で構成される免疫グロブリン分子を指す。軽鎖は、カッパ(κ)又はラムダ(λ)軽鎖のいずれかとして分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α又はεとして分類することができ、抗体のアイソタイプは、それぞれ、IgM、IgD、IgG、IgA及びIgEとして定義することができる。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定量領域は、約12個以上のアミノ酸の「J」セグメントによって連結され、重鎖は、約3個以上のアミノ酸の「D」セグメントも含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域(VH)及び重鎖定常領域(CH)で構成される。重鎖定常領域は、3つのドメイン(CH1、CH2及びCH3)で構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域(VL)及び軽鎖定常領域(CL)で構成される。軽鎖定常領域は、1つのドメインCLで構成される。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、免疫系の様々な細胞(例えば、エフェクター細胞)及び伝統的な補体系の第1成分(C1q)を含む宿主の組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介するなどの様々なエフェクター機能を示す。VH及びVL領域は、フレームワーク領域(FR)と呼ばれる比較的保存された領域で中断された超可変領域(相補性決定領域(CDR)と呼ばれる)に細分化することもできる。それぞれのVH及びVLは、アミノ末端からカルボキシル末端に以下の順序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で配列された3つのCDR及び4つのFRで構成される。それぞれの重鎖/軽鎖の対の可変領域(VH及びVL)は、それぞれ抗原結合部位を形成する。様々な領域又はドメイン中のアミノ酸の分布は、Kabat、Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutions of Health、Bethesda、Md.(1987年及び1991年))、又はChothia及びLesk(1987年) J.Mol.Biol.196巻:901~917頁;Chothiaら、(1989年)Nature 342巻:878~883頁に記載の定義に従ってもよい。
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」又は「CDR」という用語は、抗原結合の原因となる抗体の可変領域中のアミノ酸残基を指す。これらのアミノ酸残基の正確な境界は、当技術分野において公知の様々な番号付けシステム、例えば、Kabatの番号付けシステム(Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、第5版、Public Health Service、National Institutions of Health, Bethesda、Md.、1991年)、Chothiaの番号付けシステム(Chothia及びLesk(1987年))J.Mol.Biol.196巻:901~917頁;Chothiaら(1989年)Nature 342巻:878~883頁)又はIMGTの番号付けシステム(Lefrancら、Dev.Comparat.Immunol.27巻:55~77頁、2003年)に従って定義され得る。所与の抗体について、当業者は、それぞれの番号付けシステムによって定義されるCDRを容易に特定する。また、異なる番号付けシステムの間の対応は、当業者に周知である(例えば、Lefrancら、Dev.Comparat.Immunol.27巻:55~77頁、2003年を参照されたい)。
本発明では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片に含有されるCDRは、当技術分野において公知の様々な番号付けシステムに従って決定され得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片に含有されるCDRは、好ましくは、Kabat又はIMGTの番号付けシステムによって決定される。
本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」又は「FR」残基という用語は、上記で定義されたCDR残基以外の抗体の可変領域中のそれらのアミノ酸残基を指す。
本明細書で使用される場合、「生殖細胞系抗体遺伝子」という用語は、特異的な免疫グロブリンの発現をもたらす遺伝子の再配列及び変異の変異プロセスを受けていない非リンパ球によってコードさえる免疫グロブリン配列である。本発明の様々な実施形態によって提供される利点は、生殖細胞系列抗体遺伝子が、成熟抗体遺伝子よりも個々の動物種の特性を示すより重要なアミノ酸配列の構造を保持しているというコンセンサスに由来する。したがって、この種に治療的に適用される場合、それは、この種によって外因性物質としてあまり認識されない。
「抗体」という用語は、それを生成するための任意の特定の方法によって限定されない。例えば、それは、組換え抗体、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体を含む。抗体は、IgG(例えば、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4サブタイプ)、IgA1、IgA2、IgD、IgE又はIgM抗体などの異なるアイソタイプの抗体であってもよい。
本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合性断片」という用語は、全長抗体による結合と同じ抗原に特異的に結合する能力、及び/又は抗原に特異的に結合するために全長抗原と競合する能力を保持する、全長抗体のポリペプチド断片などの抗体のポリペプチド断片を指し、「抗原結合性部分」としても公知である。一般に、全ての目的のためにその全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Fundamental Immunology、第7章(Paul,W.編、第2版、Raven Press、N.Y.(1989年))を参照されたい。抗体の抗原結合性断片は、組換えDNA技術によって、又は無傷抗体の酵素的若しくは化学的切断によって、生成することができる。抗原結合性断片の非限定的な例としては、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb及び相補性決定領域(CDR)断片、一本鎖抗体(例えば、scFv)、キメラ抗体、ダイアボディ、直鎖状抗体、ナノボディ(例えば、Ablynxからの技術による)、ドメイン抗体(例えば、Domantisからの技術による)、及びポリペプチドに特異的な抗原結合能力を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部分を含むポリペプチドが挙げられる。遺伝子操作して改変された抗体バリアントは、Holligerら、2005年;Nat Biotechnol、23巻:1126~1136頁に概説されている。
本明細書で使用される場合、「全長抗体」という用語は、2つの「全長重鎖」及び2つの「全長軽鎖」で構成される抗体を意味する。ここで、「全長重鎖」は、N末端からC末端に、重鎖可変領域(VH)、重鎖定常領域CH1ドメイン、ヒンジ領域(HR)、重鎖定常領域CH2ドメイン、及び重鎖定常領域CH3ドメインで構成されるポリペプチド鎖を指し、全長抗体がIgGアイソタイプである場合、これは、任意選択で、重鎖定常領域CH4ドメインを更に含む。好ましくは、「全長重鎖」は、N末端からC末端に、VH、CH1、HR、CH2及びCH3で構成されるポリペプチド鎖である。「全長軽鎖」は、N末端からC末端に、軽鎖可変領域(VL)及び軽鎖定常領域(CL)で構成されるポリペプチドである。全長抗体鎖の2つの対は、CL及びCH1の間のジスルフィド架橋、及び2つの全長重鎖のHRの間のジスルフィド架橋によって連結される。本発明の全長抗体は、ヒトなどの単一の種に由来していてもよく、またキメラ抗体又はヒト化抗体であり得る。本発明の全長抗体は、それぞれVH及びVLの対によって形成される2つの抗原結合部位を含み、この部位は、同じ抗原を特異的に認識/結合する。
本明細書で使用される場合、「Fd断片」という用語は、VH及びCH1ドメインで構成される抗体断片を意味し、「dAb断片」という用語は、VHドメインで構成される抗体断片を意味し(Wardら、Nature 341巻:544~546頁(1989年))、「Fab断片」という用語は、VL、VH、CL及びCH1ドメインで構成される抗体断片を意味し、「F(ab’)2断片」という用語は、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された2つのFab断片を含む抗体断片を意味し、「Fab断片」という用語は、完全な軽鎖及び重鎖のFd断片(VH及びCH1ドメインからできている)で構成されるF(ab’)2断片において2つの重鎖断片を連結するジスルフィド架橋を減らすことによって得られる断片を意味する。
本明細書で使用される場合、「Fv断片」という用語は、抗体の単一アームのVL及びVHドメインで構成される抗体断片を意味する。Fv断片は、一般に、完全な抗原結合部位を形成することができる最も小さな抗体断片であると考えられる。それは、一般に、6つのCDRが抗体に抗原結合特異性を付与すると思われる。しかしながら、1つの可変領域(3つの抗原特異的CDRのみを含有するFd断片など)でさえ抗原を認識及び結合することができるが、完全な結合部位よりも低い親和性を有する可能性がある。
本明細書で使用される場合、「Fc断片」という用語は、抗体の第1の重鎖の第2及び第3の定常領域を、抗体の第2の重鎖の第2及び第3の定常領域に、ジスルフィド架橋を介して連結することによって形成される抗体断片を意味する。抗体のFc断片は、抗原結合に関与しないが多くの異なる機能を有する。
本明細書で使用される場合、「scFv」という用語は、VL及びVHがリンカーによって連結されている、VL及びVHドメインを含む単一のポリペプチド鎖を指す(例えば、Birdら、Science 242巻:423~426頁(1988年);Hustonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85巻:5879~5883頁(1988年);及びPluckthun、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies、113巻、Roseburg及びMoore編、Springer-Verlag、New York、269~315頁(1994年)を参照されたい)。そのようなscFv分子は、一般式:NH2-VL-リンカー-VH-COOH又はNH2-VH-リンカー-VL-COOHを有し得る。当技術分野における好適なリンカーは、繰り返されるGGGGSアミノ酸配列又はそのバリアントで構成される。例えば、アミノ酸配列のリンカー(GGGGS)4又はそのバリアントを使用することができる(Holligerら(1993年)、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90巻:6444~6448頁)。本発明において使用され得る他のリンカーは、Alfthanら(1995年)、Protein Eng.8巻:725~731頁;Choiら(2001)、Eur.J.Immunol.31巻:94~106頁;Huら(1996年)、Cancer Res.56巻:3055~3061頁;Kipriyanovら(1999)、J.Mol.Biol.293巻:41~56頁及びRooversら(2001)、Cancer Immunol.に記載されている。一部の場合では、ジスルフィド架橋はまた、scFvのVH及びVLの間に存在してもよい。本明細書で使用される場合、「ジ-scFv」という用語は、2つのscFvを連結することによって形成される抗体断片を指す。
本明細書で使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、VH及びVLドメインが、単一のポリペプチド鎖において発現するが、使用されるリンカーが同じ鎖の2つのドメインの間で対形成するのを可能にするには短すぎ、そのためドメインを他の鎖の相補的ドメインと対形成させ、2つの抗原結合部位を生成することを意味する(例えば、Holliger P.ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90巻:6444~6448頁(1993年)及びPoljak R.J.ら、Structure 2巻:1121~1123頁(1994年)を参照されたい)。
本明細書で使用される場合、「抗体模倣体」は、抗体の構造なしではあるが、抗体としての抗原への特異的な結合を指す。それらは、通常、約3~20kDaのモル質量を有する人工ペプチド又はタンパク質である。例は、設計アンキリンリピートタンパク質(DARPin)及びフィノマーである。設計アンキリンリピートタンパク質(DARPin)は、中国特許出願公開第104341529号に記載のように、IgG抗体、scFv-Fc抗体断片又はそれらの組合せに連結され得る。抗IL-17aフィノマーは、国際公開第2015/141862号に記載のように、抗IL-6R抗体に結合する。
上記抗体断片のそれぞれは、全長抗体が結合する同じ抗原に特異的に結合する能力、及び/又は抗原に特異的に結合するために全長抗体と競合する能力を保持する。
抗原結合性断片(例えば、上記に記載の抗体断片)は、当業者に公知の従来技術(例えば、組換えDNA技術、又は酵素的若しくは化学的切断法)を使用して、所与の抗体(例えば、本発明によって提供される抗体)から得てもよく、抗体の抗原結合性断片は、無傷抗体に関して同じ方法で特異的にスクリーニングされる。
本明細書では、文脈において他が明確に示されない限り、「抗体」という用語への言及は、無傷抗体だけでなく、その抗原結合性断片も含む。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」、「McAb」及び「mAb」という用語は、同じ意味を有し、互換可能に使用され、これは、非常に相同の抗体分子の集団、すなわち、自然発生的に生じることがある天然の変異を除いて同一の抗体分子の集団に由来する抗体又はその断片を指す。モノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープに対して高い特異性を有する。モノクローナル抗体と比較して、ポリクローナル抗体は、通常、少なくとも2つ以上の異なる抗体を含有し、これは通常、抗原上の異なるエピトープを認識する。更にまた、「モノクローナル」という修飾語は、抗体の特徴が、非常に相同の抗体の集団から得られ、抗体を調製するための任意の特定の方法を必要とすると理解することができないことを単に示す。
本発明のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術(例えば、Kohlerら、Nature、256巻:495頁、1975年を参照されたい)、組換えDNA技術(例えば、米国特許出願第4,816,567号を参照されたい)又はファージ抗体ライブラリー技術(例えば、Clacksonら、Nature 352巻:624~628頁、1991年又はMarksら、J.Mol.Biol.222巻:581~597頁、1991年を参照されたい)などの様々な技術によって調製することができる。
例えば、モノクローナル抗体は、以下の通り調製することができる。最初に、マウス又は他の好適な宿主動物を、免疫原(必要によりアジュバントを添加する)で免疫する。免疫された後、動物は、in vivoで免疫原に特異的に結合する抗体を分泌するリンパ球を産生する。加えて、リンパ球は、in vitroでの免疫化によって得ることもできる。目的のリンパ球を収集し、PEGなどの好適な融合試薬を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を得る(Goding、Monoclonal Antibodies:Principles and Practice、59~103頁、Academic Press、1996年)。上記のようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、成長のために好適な培養培地に播種し、次いで、これを特異的抗原に対するモノクローナル抗体の産生を検出するために使用することができる。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を決定するための方法としては、例えば、免疫沈降、又はラジオイムノアッセイ(RIA)、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)などのin vitro結合アッセイが挙げられる。例えば、モノクローナル抗体の親和性は、Munsonら、Anal.Biochem.107巻:220頁(1980年)に記載のスキャッチャード分析によって決定することができる。ハイブリドーマによって産生された抗体の特異性、親和性及び反応性を決定した後、目的の細胞株を、Goding、Monoclonal Antibodies:Principles and Practice、59~103頁、Academic Press、1996年に記載の標準的な限界希釈法によってサブクローニングすることができる。好適な培養培地は、DMEM又はRPMI-1640であり得る。加えて、ハイブリドーマ細胞は、腹水の腫瘍の形態で、動物においてin vivoで成長させることもできる。サブクローニングされた細胞によって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製法、例えば、プロテインAアガロースゲル、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又はアフィニティークロマトグラフィーなどを使用することによって、細胞培養培地、腹水又は血清から単離することができる。
モノクローナル抗体は、遺伝子を操作する組換え技術によって得ることもできる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子をコードするDNA分子を、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子に特異的に結合する核酸プライマーを使用するPCR増幅によってハイブリドーマ細胞から単離することができる。得られたDNA分子を、発現ベクターに挿入し、それを用いて、次いで、宿主細胞(大腸菌細胞、COS細胞、CHO細胞又は免疫グロブリンを産生しない他の骨髄腫細胞)にトランスフェクトし、好適な条件下で培養して、組換えで発現した目的の抗体を得る。
抗体は、プロテインA又はプロテインGを使用するアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の技術によって精製することができる。その後、又は代わりに、特異的抗原(抗体によって認識される標的分子)又はその抗原性エピトープを、カラム上に固定することができ、免疫学的特異的抗体を免疫-アフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。免疫グロブリンの精製のために、例えば、D.Wilkinson(The Scientist、The Scientist, Inc.、Philadelphia Pa.によって公開、14巻、8号(2000年4月17日)、25~28頁)に言及し得る。
本明細書で使用される場合、2つの配列の間の「同一性%」は、2つの配列に共通の同一の位置の数の関数であるが(すなわち、相同性%=同一の位置の数/位置の総数×100)、2つの配列が最適に整列される場合に、導入することが必要なギャップの数及びそれぞれのギャップの長さを考慮する。配列の整列及び2つの配列の間の同一性%の決定は、数学的アルゴリズムによって達成することができる。例えば、2つのアミノ酸配列の間の同一性%は、E.Meyers及びW.Miller(Computer.App.Biosci.、4巻:11~17頁(1988年))のアルゴリズムによって決定することができる。
本明細書で使用される場合、「同一性%」を有する配列は、それと整列されるか、又はそれが由来する配列の抗体-結合特異性などの重要な生物学的活性を保持する。1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する配列は、それと整列されるか、又はそれが由来する配列の抗体-結合特異性などの重要な生物学的活性を保持する。「同一性%」を有するヌクレオチド配列又は3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列は、それが整列されるか、又はそれが由来する配列と類似の機能を達成することができ、例えば、全ての発現タンパク質は、同じ抗原又は分子に特異的に結合することができる。
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、その軽鎖又は/及び重鎖の一部分が抗体(特定の種に由来し得るか、又は特異的抗体のクラス若しくはサブクラスに属し得る)に由来し、軽鎖又は/及び重鎖の他の部分が、別の抗体(同じ若しくは異なる種に由来していてもよく、又は同じ若しくは異なる抗体のクラス若しくはサブクラスに属していてもよい)に由来し、任意の場合では、標的抗原に対する結合活性を保持する、そのような抗体を意味する(Cabillyらに対する米国特許第4,816,567号;Morrisonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、81巻:6851~6855頁(1984年))。
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、アミノ酸配列が、ヒト抗体の配列との相同性を増加させるように改変された、遺伝子操作された非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体のCDR領域の全て又は一部は、非ヒト抗体(ドナー抗体)に由来し、非CDR領域(例えば、可変領域及び/又は定常領域中のFR)の全て又は一部は、ヒト免疫グロブリン(アクセプター抗体)に由来する。ヒト化抗体は、通常、限定されるものではないが、抗原特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を改善する能力、免疫応答を増強する能力などを含む、ドナー抗体の期待される性質を保持する。ドナー抗体は、所望の性質(例えば、抗原特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を増強する能力及び/又は免疫応答を増強する能力)を有する、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類(例えば、カニクイザル)の抗体であってもよい。
ヒト化抗体は、それらが非ヒトドナー抗体(例えば、マウス抗体)の期待される性質を保持するだけでなく、ヒト対象における非ヒトドナー抗体(例えば、マウス抗体)の免疫原性を効果的に低減するので、特に有利である。しかしながら、ドナー抗体のCDR及びアクセプター抗体のFRの間の一致の問題に起因して、ヒト化抗体の期待される性質(例えば、抗原特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を改善する能力及び/又は免疫応答を増強する能力)は、一般に、非ヒトドナー抗体(例えば、マウス抗体)のものよりも低い。
そのため、当技術分野における研究者は、ディープリサーチを開発し、抗体のヒト化におけるいくつかの前進があったが(例えば、Jonesら、Nature、321巻:522~525頁(1986年);Reichmannら、Nature、332巻:323~329頁(1988年);Presta、Curr.Op.Struct.Biol.、2巻:593~596頁(1992年);及びClark、Immunol.Today 21巻:397~402頁(2000年)を参照されたい)、それにもかかわらず、産生したヒト化抗体が可能な限り高いヒト化度を有するだけでなく、ドナー抗体の期待される性質を可能な限り保持するように、所与のドナー抗体を十分にヒト化する方法に対する詳細なガイダンスは先行技術に提供されていない。高いヒト化度(例えば、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%のヒト化)を有するだけでなく、特定のドナー抗体の期待される性質を保持するヒト化抗体を得るために、当業者は、多くの創造性に富んだ作業を費やすことによって、特定のドナー抗体を活用し、調査し、かつ改変しなければならない。
本発明では、可能な限り高いドナー抗体の性質(例えば、抗体特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を改善する能力及び/又は免疫応答を増強する能力)を保持するヒト化抗体を作製するために、本発明のヒト化抗体のフレームワーク領域(FR)は、ヒトアクセプター抗体のアミノ酸残基、及び非ヒトドナー抗体の対応するアミノ酸残基の両方を含む。
本出願では、本発明の抗体の期待される性質は、(1)PD-1(特に、ヒトPD-1)を特異的に認識する/結合する、(2)PD-1のPDL-1への結合を阻害する、及び/又はブロックする、(3)PD-1のPDL-1への結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害する、及び/又はブロックする、(4)免疫細胞の活性を改善する、(5)免疫応答を増強する、(6)抗体依存性細胞媒介性食作用(ADCP)及び/又は抗体依存性細胞媒介性傷害(ADCC)及び/若しくは補体依存性細胞傷害(CDC)を低減するか、又は排除する、を含む。本発明のヒト化抗体は、親抗体(マウス抗体又はマウス-ヒトキメラ抗体)の上記で言及した期待される性質のうちの1つ又は複数を保持する。
本発明のキメラ抗体又はヒト化抗体は、上記のようにして調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に従って調製することができる。重鎖及び軽鎖をコードするDNAは、標的マウスハイブリドーマから得ることができ、標準的な分子生物学技術を使用して、非マウス(例えば、抗体)免疫グロブリン配列を含むように遺伝子操作する。
キメラ抗体を調製するために、マウス免疫グロブリンの可変領域を、当技術分野において公知の方法(例えば、Cabillyらに対する米国特許第4,816,567号を参照されたい)を使用して、ヒト免疫グロブリンの定常領域に連結させることができる。例えば、VHをコードするDNAを、重鎖定常領域をコードする別のDNA分子に作動可能に連結させて、全長重鎖遺伝子を得るか、又はVLをコードするDNAを、軽鎖定常領域CLをコードする別のDNA分子に作動可能に連結させて、全長軽鎖遺伝子(及びFab軽鎖遺伝子)を得る。ヒト重鎖定常領域の遺伝子及び軽鎖定常領域の遺伝子の配列は、当技術分野において公知であり(例えば、Kabat,E.A.ら(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest、第5版、米国保健福祉省、NIH Publication第91-3242を参照されたい)、これらの領域を含有するDNA断片は、標準的なPCR増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、IgG1(例えば、uniprot ID P01857)、IgG2(例えば、uniprot ID P01859)、IgG3(例えば、uniprot ID P01860)、IgG4(例えば、uniprot ID P01861)、IgA、IgE、IgM又はIgDの定常領域、一般に好ましくは、IgG1又はIgG4の定常領域であってもよい。軽鎖定常領域は、κ又はラムダ定常領域、一般に好ましくは、κ定常領域であり得る。
ヒト化抗体を調製するために、マウスCDR領域を、当技術分野において公知の方法(Winterに対する米国特許第5,225,539号;Queenらに対する米国特許第5,530,101号;同第5,585,089号;同第5,693,762号及び同第6,180,370号;並びにLo,Benny,K.C.編、Antibody Engineering:Methods and Protocols、248巻、Humana Press、New Jersey、2004年を参照されたい)を使用して、ヒトフレームワークの配列に挿入することができる。或いは、免疫化後に内因性免疫グロブリンを産生することができないが、無傷ヒト抗体ライブラリーを生成することができる、トランスジェニック動物を用いることもできる(例えば、Jakobovitsら、1993年、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90巻:2551頁;Jakobovitsら、1993年、Nature 362巻:255~258頁;Bruggermannら、1993年、Year in Immunology 7巻:33頁;及びDuchosalら、1992年、Nature 355巻:258頁;Lonbergら(1994年)Nature 368巻(6474号):856~859頁;国際公開第02/43478号を参照されたい)。抗体のヒト化の他の方法としては、ファージディスプレイ技術が挙げられる(Hoogenboomら、1991年、J.Mol.Biol.227巻:381頁;Marksら、J.Mol.Biol.1991年、222巻:581~597頁;Vaughanら、1996年、Nature Biotech 14巻:309頁)。
本明細書で使用される場合、「ヒト化度」という用語は、ヒト化抗体中の非ヒトアミノ酸残基の数を評価するための指標である。ヒト化抗体のヒト化度は、例えば、ヒトVドメインを有する可変領域配列の相同性についてのIMGTウェブサイトからのDomainGapAlignによって予測することができる。
本明細書で使用される場合、「特異的結合」という用語は、抗体及びそれが向けられる抗原の間の反応などの2つの分子の間の非ランダム結合反応を指す。特異的結合相互作用の強さ又は親和性は、相互作用の平衡解離定数(KD)によって示すことができる。本発明では、「KD」という用語は、特異的抗体-抗原の相互作用の解離平衡定数を指し、これは抗体及び抗原の間の結合親和性を記載するために使用される。平衡解離定数が小さいほど、抗原-抗体の結合がより緊密になり、抗体及び抗原の間の親和性が高くなる。ある特定の実施形態では、抗原(又は抗原に特異的な抗体)への抗体特異的結合は、抗体が、約10-9M未満、例えば、約10-9M、10-10M、10-11M若しくは10-12M未満、又はそれよりも低い親和性(KD)で抗原に結合することを意味する。一部の実施形態では、KD≦10×10-8M(好ましくは、KD≦5×10-9M)である場合、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、PD-1に特異的に結合すると考えられる。
2つの分子の間の特異的結合性は、当技術分野において周知の方法を使用して、測定することができる。ある方法は、抗原-結合部位/抗原複合体の形成及び解離の速度を測定することを含む。「結合速度定数」(ka又はkon)及び「解離速度定数」(kdis又はkoff)は両方とも、濃度並びに会合及び解離の実際の速度から計算することができる(Malmqvist M、Nature、1993年、361巻:186~187頁を参照されたい)。kdis/konの比は、解離定数KDに等しい(Daviesら、Annual Rev Biochem、1990年;59巻:439~473頁を参照されたい)。KD、kon及びkdisの値は、任意の有効な方法によって測定することができる。ある特定の実施形態では、解離定数は、生物発光干渉分光法(例えば、ForteBio Octetアッセイ)によって測定することができる。加えて、解離定数は、表面プラズモン共鳴技術(Biacoreなど)又はKinexaによって測定することができる。
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、ポリヌクレオチドが挿入され得る核酸ビヒクルを指す。挿入されたポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の発現が可能である場合、ベクターは、発現ベクターと呼ばれる。ベクターは、形質転換、形質導入又はトランスフェクションにより宿主細胞に導入することができ、その結果、運ばれた遺伝子材料エレメントが、宿主細胞中で発現し得る。ベクターは、当業者に周知であり、限定されるものではないが、プラスミド;ファージミド;コスミド;人工染色体、例えば、酵母人工染色体(YAC)、細菌人工染色体(BAC)又はP1-由来人工染色体(PAC);ファージ、例えば、λファージ又はM13ファージ、及び動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用することができる動物ウイルスとしては、限定されるものではないが、レトロウイルス(レンチウイルスを含む)、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス(例えば、単純ヘルペスウイルス)、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス(例えば、SV40)が挙げられる。ベクターは、限定されるものではないが、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択エレメント及びレポーター遺伝子を含む、発現を制御するエレメントを含有していてもよい。加えて、ベクターはまた、複製開始点を含有していてもよい。
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、ベクターが導入され得る細胞を指し、限定されるものではないが、大腸菌若しくは枯草菌(Bacillus subtilis)などの原核細胞、酵母細胞若しくはアスペルギルス属(Aspergillus)などの真菌細胞、S2ショウジョウバエ細胞若しくはSf9などの昆虫細胞、又は線維芽細胞、CHO細胞、COS細胞、NSO細胞、HeLa細胞、BHK細胞、HEK293細胞若しくはヒト細胞などの動物細胞が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、2つのポリペプチド又は2つの核酸の間の配列の一致度を指すために使用される。比較のための2つの配列中の位置が、同じ塩基又はアミノ酸単量体サブユニットによって占有される場合(例えば、2つのDNA分子のそれぞれにおける位置が、アデニンによって占有されるか、又は2つのポリペプチドのそれぞれにおける位置が、リシンによって占有される)、その結果、分子は、その位置で同一である。2つの配列の間の「同一性パーセンテージ」は、比較される位置の数によって割られた2つの配列によって共有される一致する位置の数×100の関数である。例えば、2つの配列において、10の位置のうち6つの位置が一致する場合、その結果、2つの配列は、60%同一である。例えば、DNA配列CTGACT及びCAGGTTは、50%の同一性を有する(全部で6つの位置のうち3つの位置が一致する)。典型的には、2つの配列を、最大同一性のために、比較及び整列させる。そのような整列は、例えば、Needlemanら(1970)J.Mol.Biol.48巻:443~453頁の方法を使用して実現することができ、これは、Alignプログラム(DNAstar,Inc)などのコンピュータープログラムによって好都合に行うことができる。加えて、2つのアミノ酸配列の間の同一性パーセンテージは、Blossum Matrix 62又はPAM250のいずれか、並びに16、14、12、10、8、6又は4のギャップ重さ及び1、2、3、4、5又は6の長さ重さを使用して、GCGソフトウェアパッケージ(www.gcg.comにおいて利用可能)に組み込まれたGAPプログラムにおけるNeedleman及びWunschのアルゴリズム(J Mol Biol.48巻:444~453頁(1970年))によって決定することができる。
本明細書で使用される場合、「保存的置換」という用語は、アミノ酸配列を含むタンパク質/ポリペプチドの期待される性質に悪影響を与えないか、又はそれを変えないアミノ酸置換を意味する。例えば、保存的置換は、部位特異的変異誘発及びPCR媒介変異誘発などの当技術分野において公知の標準的な技術によって導入され得る。保存的アミノ酸置換は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基、例えば、対応するアミノ酸残基と物理的又は機能的に類似の残基(例えば、類似のサイズ、形状、電荷、共有結合又は水素結合を形成する能力を含む化学的性質などを有する)によるアミノ酸残基の置換を含む。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖(例えば、リシン、アルギニン及びヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸)、非荷電極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン)、ベータ分枝側鎖(例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン)及び芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、対応するアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えることが好ましい。アミノ酸の保存的置換を特定するための方法は、当技術分野において周知である(例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Brummellら、Biochem.32巻:1180~1187頁(1993年);Kobayashiら、Protein Eng.12巻(10号):879~884頁(1999年);及びBurksら、Proc.Natl Acad.Set USA 94巻:412~417頁(1997年)を参照されたい)。
本明細書に含まれる20個の保存的アミノ酸の比較は、従来の使用法に従う。例えば、参照によって本明細書に組み込まれるImmunology-A Synthesis(第2版、E.S.Golub及びD.R.Gren編、Sinauer Associates、Sunderland、Mass.(1991年))を参照されたい。本発明では、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、同じ意味を有し、互換可能に使用される。また、本発明では、アミノ酸は、一般に、当技術分野において周知の一文字及び三文字の略号によって表される。例えば、アラニンは、A又はAlaと表すことができる。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤」という用語は、対象及び活性成分と薬理学的及び/又は生理学的に適合する担体及び/又は賦形剤を意味し、これは当技術分野において周知であり(例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences.Gennaro AR編、第19版、Pennsylvania:Mack Publishing Company、1995年を参照されたい)、限定されるものではないが、pH調整剤、界面活性剤、補助剤、イオン強度増強剤、希釈剤、浸透圧維持試薬、吸収遅延試薬、保存剤が挙げられる。例えば、pH調整剤としては、限定されるものではないが、リン酸緩衝液が挙げられる。界面活性剤としては、限定されるものではないが、カチオン性、アニオン性又は非イオン性界面活性剤、例えば、Tween-80が挙げられる。イオン強度増強剤としては、限定されるものではないが、塩化ナトリウムが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、p-ヒドロキシベンゾエート、トリクロロ-tert-ブチルアルコール、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。浸透圧維持試薬としては、限定されるものではないが、糖、NaClなどが挙げられる。吸収遅延試薬としては、限定されるものではないが、モノステアレート及びゼラチンが挙げられる。希釈剤としては、限定されるものではないが、水、水性緩衝液(例えば、緩衝食塩水)、アルコール及びポリオール(例えば、グリセロール)などが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、チオメルサレート、2-フェノキシエタノール、p-ヒドロキシベンゾエート、トリクロロ-tert-ブチルアルコール、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。安定剤は、当業者によって一般に理解される意味を有し、これは、薬物中の活性成分の所望の活性を安定化することができ、限定されるものではないが、グルタミン酸ナトリウム、ゼラチン、SPGA、糖(ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、ラクトース、デキストラン又はグルコースなど)、アミノ酸(グルタミン酸、グリシンなど)、タンパク質(乾燥ホエイ、アルブミン又はカゼインなど)又はそれらの分解生成物(ラクトアルブミン加水分解物など)が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「予防」という用語は、対象において、in vivoで、疾患若しくは状態若しくは症状(例えば、腫瘍、感染症又は自己免疫疾患)の開始を予防するか、又は遅延させるためのプロセスを指す。本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、有益な又は所望の臨床結果を達成するためのプロセスを指す。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、検出可能又は検出不可能を問わず、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定化(すなわち、悪化させない)、疾患の進行の遅延又は遅らせる、疾患の状態の改善又は緩和、及び症状の寛解(部分的又は全て)が挙げられる。加えて、「処置」は、期待される生存(処置なし)と比較して、生存を延長することも意味し得る。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、例えば、霊長類哺乳動物、例えば、ヒトを指す。一部の実施形態では、対象(例えば、ヒト)は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を有するか、又はそのような疾患を患うリスクがある。
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、所望の効果を達成するか、少なくとも部分的に達成するのに十分な量を指す。例えば、疾患(例えば、腫瘍、感染症又は自己免疫疾患)を予防するための有効量は、疾患(例えば、腫瘍、感染症又は自己免疫疾患)の開始を予防するか、停止するか、又は遅延させるのに十分な量であり、治療有効量は、既に疾患を患っている患者の疾患及びその合併症を治癒するか、又は少なくとも部分的に予防するのに十分な量を指す。そのような有効量を決定することは、当業者の能力の範囲内である。例えば、治療的使用のために有効な量は、処置される疾患の重症度、患者自身の免疫系の一般的症状、年齢、体重及び性別などの患者の一般的状態、投与の経路、並びに同時に投与される他の処置などに依存する。
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は、造血起源を有し、免疫応答において役割を果たす細胞、例えば、B細胞及びT細胞などのリンパ球;ナチュラルキラー細胞;単球、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球及び顆粒細胞などの骨髄性細胞を含む。
本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、免疫細胞(リンパ球、抗原提示細胞、食細胞又は顆粒細胞など)及び免疫細胞又は肝臓によって産生される可溶性高分子(抗体、サイトカイン及び補体を含む)の作用を意味し、これは、侵襲性病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、がん細胞、又は自己免疫性若しくは病理学的炎症の場合における正常なヒト細胞若しくは組織の選択的な損傷、破壊又はヒト身体からの除去をもたらす。本発明では、「抗原特異的T細胞応答」という用語は、T細胞がT細胞に特異的な抗原によって刺激される場合に、T細胞によって生じる免疫応答を指す。抗原特異的刺激に応答してT細胞によって生じる応答の非限定的な例としては、T細胞の増殖及びサイトカイン(例えば、IL-2)の産生が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「エフェクター機能」という用語は、抗体のFc領域(天然配列のFc領域又はアミノ酸配列バリアントのFc領域)に寄与し、かつ抗体のアイソタイプに伴って変化する、それらの生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、限定されるものではないが、Fc受容体の結合親和性、抗体依存性細胞媒介性傷害(ADCC)、補体依存性細胞傷害(CDC)、抗体依存性細胞食作用(ADCP)、細胞表面受容体(B細胞受容体など)の下方調節、B細胞の活性化、サイトカイン分泌、抗体及び抗原-抗体複合体の半減期/クリアランス速度などが挙げられる。抗体のエフェクター機能を変えるための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Fc領域中に変異を導入することによる。
本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞媒介性傷害(ADCC)」という用語は、Fc受容体(FcR)に結合するIgが細胞傷害性細胞(例えば、ナチュラルキラー(NK)細胞、好中球又はマクロファージ)上に存在し、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原が結合する標的細胞に特異的に結合し、次いで細胞毒素を分泌することによって標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害性の一種を意味する。抗体のADCC活性を検出するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、試験される抗体及びFc受容体(例えば、CD16a)の間の結合活性を決定することによって評価される。
本明細書で使用される場合、「補体依存性細胞傷害(CDC)」という用語は、補体成分C1qが抗体Dcに結合することによって補体カスケードを活性化する、細胞傷害性の一種を指す。抗体のCDC活性を検出するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、試験される抗体及びFc受容体(例えば、C1q)の間の結合活性を決定することによって評価される。
「がん」及び「腫瘍」という用語は、互換可能に使用され、in vivoでの異常な細胞の非制御の成長によって特徴付けられる疾患の大きなクラスを指す。調節されない細胞分裂は、隣接する組織に浸潤する悪性の腫瘍又は細胞の形成をもたらすことがあり、これは、リンパ系又は血流を通して身体の離れた部位に転移することがある。がんは、良性及び悪性のがん、並びに休眠中の腫瘍又は微小転移を含む。がんは、血液系悪性腫瘍も含む。
例示的な腫瘍としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液腫瘍(例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫などの骨髄腫)、及び転移性、難治性又は再発性のがんの病変が挙げられ、例えば、限定されるものではないが、食道がん、消化器がん、膵臓がん、甲状腺がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肺がん(例えば、非小細胞肺がん)、肝臓がん、胃がん、頭頸部がん、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、生殖細胞がん、皮膚がん、胸部の腺癌、胆管細胞癌、胆嚢がん、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫(例えば、多発性骨髄腫)、肉腫、膠芽腫、神経膠芽腫及び白血病が挙げられる。
「血液系悪性腫瘍」という用語は、リンパ腫、白血病、骨髄腫又はリンパ系の悪性腫瘍、並びに脾臓がん及びリンパ節腫瘍を含む。例示的なリンパ腫としては、B細胞リンパ腫及びT細胞リンパ腫が挙げられる。B細胞リンパ腫としては、例えば、ホジキンリンパ腫が挙げられる。T細胞リンパ腫としては、例えば、皮膚T細胞性リンパ腫が挙げられる。血液系悪性腫瘍としては、二次性白血病又は急性リンパ性白血病などの白血病も挙げられる。血液系悪性腫瘍としては、骨髄腫(例えば、多発性骨髄腫)、及び他の血液系及び/又はB細胞若しくはT細胞に関連するがんも挙げられる。
「薬学的に許容できる」という用語は、分子全体、分子の断片又は組成物が動物又はヒトに適切に投与される場合に、それらが好ましくないか、アレルギー性か、又は他の有害な反応を生じないことを意味する。薬学的に許容できる担体又はその成分として使用され得る材料の具体例としては、糖(例えば、ラクトース)、デンプン、セルロース及びその誘導体、植物油、ゼラチン、ポリオール(例えば、プロピレングリコール)、アルギン酸などが挙げられる。
本発明の有益な効果
先行技術と比較して、本発明の技術的な解決手段は、以下の有益な効果を有する。
先行技術と比較して、本発明の技術的な解決手段は、以下の有益な効果を有する。
(1)本発明の抗体は、PD-1を特異的に認識/結合し、かつPD-1のPDL-1又はPD-L2への結合をブロックするだけでなく、免疫細胞の活性を増強し、かつin vitro/in vivoで免疫応答を刺激する。したがって、本発明の抗体は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び/又は処置する可能性を有する。
(2)本発明の抗体(特に、ヒト化抗体)は、親のマウス抗体の機能及び性質を保持し、それによって腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び処置する可能性を有するだけでなく、極めて高いヒト化度を有し、そのため、これは、免疫原性反応を引き起こすことなく、ヒト対象に安全に投与することができる。したがって、本発明の抗体(特に、ヒト化抗体)は、高い臨床的価値がある。
配列情報
本発明に関する配列情報は、以下の表に記載され、詳細な配列が配列表に示される。
本発明に関する配列情報は、以下の表に記載され、詳細な配列が配列表に示される。
本発明の実施形態は、添付の図面及び実施例と組み合わせて下記で詳細に説明されることになるが、以下の図面及び実施例が本発明の例証を目的としたものに過ぎず、本発明範囲の限定を目的としたものでないことは、当業者には理解されるであろう。当業者は、本発明の様々な目的及び有利な態様を、図面及び好ましい実施形態についての以下の詳細な説明から実施できるようになる。詳細な技術又は条件の例示を伴わない例については、当技術分野の文献に記載されている技術又は条件を参照することができ(例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition(Huang Peitangらにより翻訳された)を参照されたい)、又は製品使用説明書に従って行うことができる。製造業者を示さずに用いられる試薬又は機器は、市場から購入することができる従来の製品である。
実施例1:抗PD-1モノクローナル抗体の調製
1.1 抗原及び対照抗体の調製
次の3つの材料を免疫化のための抗原として使用した:(i)インタクトヒトPD-1をコードする核酸配列を含有するプラスミド。NP_005009.2のアミノ酸配列のインタクトヒトPD-1をコードするヌクレオチド配列をコドン最適化及び合成(Shanghai Sangon Biotech)により得、次いで、pcDNA3.1ベクターにクローニングし、プラスミドをエンドトキシンフリープラスミド抽出キット(OMEGAから購入した)により抽出し、生理食塩水注射液に溶解した。(ii)ヒトPD-1の細胞外ドメインの組換え融合タンパク質。PD-1の細胞外ドメイン(ECD)とマウスFc(mFc)アミノ酸(AB097847.1)の融合、Nanjing Genscriptによるヌクレオチド配列のコドン最適化及び合成、分子クローニングそしてHEK293F細胞のレンチウイルス感染により、ヒトPD-1-ECD-mFcタンパク質を得、次いで、上清をProAカラムにより精製し、組換えタンパク質の純度をSDS-PAGE及びSECにより検証し、組換えタンパク質ヒトPD-1-mFcの活性をELISAにより検証した。(iii)膜上に完全長ヒトPD-1を発現するCHO-S細胞。CHO-hPD-1細胞株を、分子クローニング、CHO-S細胞のレンチウイルスによる感染、及び圧力下でのスクリーニング、続いてのFACSアッセイにより得た。
1.1 抗原及び対照抗体の調製
次の3つの材料を免疫化のための抗原として使用した:(i)インタクトヒトPD-1をコードする核酸配列を含有するプラスミド。NP_005009.2のアミノ酸配列のインタクトヒトPD-1をコードするヌクレオチド配列をコドン最適化及び合成(Shanghai Sangon Biotech)により得、次いで、pcDNA3.1ベクターにクローニングし、プラスミドをエンドトキシンフリープラスミド抽出キット(OMEGAから購入した)により抽出し、生理食塩水注射液に溶解した。(ii)ヒトPD-1の細胞外ドメインの組換え融合タンパク質。PD-1の細胞外ドメイン(ECD)とマウスFc(mFc)アミノ酸(AB097847.1)の融合、Nanjing Genscriptによるヌクレオチド配列のコドン最適化及び合成、分子クローニングそしてHEK293F細胞のレンチウイルス感染により、ヒトPD-1-ECD-mFcタンパク質を得、次いで、上清をProAカラムにより精製し、組換えタンパク質の純度をSDS-PAGE及びSECにより検証し、組換えタンパク質ヒトPD-1-mFcの活性をELISAにより検証した。(iii)膜上に完全長ヒトPD-1を発現するCHO-S細胞。CHO-hPD-1細胞株を、分子クローニング、CHO-S細胞のレンチウイルスによる感染、及び圧力下でのスクリーニング、続いてのFACSアッセイにより得た。
実験用の対照抗体の調製:ペムブロリズマブ(IMGT ID:472)、シンチリマブ(IMGT ID:859)、及びチスレリズマブ(IMGT ID:757)のアミノ酸配列は、IMGTウェブサイトからのものであり、これらの各々は、Nanjing Genscripによってコドン最適化され、発現ベクターpcCHO1.0へと合成され、それらをPEIによりCHO-S細胞に一過性にトランスフェクトし、得られた細胞が抗体を発現し、その後、上清を精製し、対照抗体1、対照抗体2及び対照抗体3とそれぞれ命名した。
1.2 マウス免疫化
プラスミドDNA、ヒトPD-1細胞外ドメインの組換え融合タンパク質、及びCHO-hPD-1細胞を抗原として使用して、7~8週齢の様々な系統のマウス、例えば、B6C57マウス、Balb/cマウス及びこれらに類するもの(全てBeijing Vital Riverから購入した)を免疫化した。免疫化中に、抗PD-1抗体の血清力価を2週間ごとにELISAにより検出した。マウス脾臓及びリンパ節の単個細胞浮遊液を混合した後に、SP2/0骨髄腫細胞を1:1の量比で添加し、均一に混合した。細胞混合溶液を、洗浄し、電気融合緩衝剤(Zhuhai Qiwen Biotechnology)を用いて再浮遊させた。ここでの浮遊液中の細胞密度は、1×106細胞/mLである。BTX 2000電気融合デバイスによる電気融合後、直ちに細胞浮遊液を融合チャンバから完全培養培地が入っている滅菌遠心分離管に移し、37℃のインキュベーターで少なくとも1時間インキュベートした。次いで、細胞浮遊液を混合し、合計約300プレートの96ウェルプレートに1ウェル当たり2×104細胞の密度で播種した。融合細胞を37℃及び5%CO2で培養した。ハイブリドーマクローンを5日間培養した後、全ての96ウェルプレート内のハイブリドーマクローンを完全培養培地と完全に交換し、7日間成長させた時点で、ハイブリドーマクローンをスクリーニングした。
プラスミドDNA、ヒトPD-1細胞外ドメインの組換え融合タンパク質、及びCHO-hPD-1細胞を抗原として使用して、7~8週齢の様々な系統のマウス、例えば、B6C57マウス、Balb/cマウス及びこれらに類するもの(全てBeijing Vital Riverから購入した)を免疫化した。免疫化中に、抗PD-1抗体の血清力価を2週間ごとにELISAにより検出した。マウス脾臓及びリンパ節の単個細胞浮遊液を混合した後に、SP2/0骨髄腫細胞を1:1の量比で添加し、均一に混合した。細胞混合溶液を、洗浄し、電気融合緩衝剤(Zhuhai Qiwen Biotechnology)を用いて再浮遊させた。ここでの浮遊液中の細胞密度は、1×106細胞/mLである。BTX 2000電気融合デバイスによる電気融合後、直ちに細胞浮遊液を融合チャンバから完全培養培地が入っている滅菌遠心分離管に移し、37℃のインキュベーターで少なくとも1時間インキュベートした。次いで、細胞浮遊液を混合し、合計約300プレートの96ウェルプレートに1ウェル当たり2×104細胞の密度で播種した。融合細胞を37℃及び5%CO2で培養した。ハイブリドーマクローンを5日間培養した後、全ての96ウェルプレート内のハイブリドーマクローンを完全培養培地と完全に交換し、7日間成長させた時点で、ハイブリドーマクローンをスクリーニングした。
1.3 ハイブリドーマスクリーニング
ハイブリドーマスクリーニングをELISA及び競合FACSにより行った。ELISAの詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1の細胞外ドメイン及びサルPD-1の細胞外ドメイン(NP_001107830)を対応するタグとそれぞれ融合させ、ヒトPD-1-His、ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcなどの抗原を、分子クローニング及び相同組換えにより構築し、発現させ、精製し、それをその後、CBS溶液で1μg/mLに希釈し、4℃で一晩、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)にコーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、その後、20μLのハイブリドーマクローン上清を添加し、37℃で2時間インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取った。
ハイブリドーマスクリーニングをELISA及び競合FACSにより行った。ELISAの詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1の細胞外ドメイン及びサルPD-1の細胞外ドメイン(NP_001107830)を対応するタグとそれぞれ融合させ、ヒトPD-1-His、ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcなどの抗原を、分子クローニング及び相同組換えにより構築し、発現させ、精製し、それをその後、CBS溶液で1μg/mLに希釈し、4℃で一晩、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)にコーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、その後、20μLのハイブリドーマクローン上清を添加し、37℃で2時間インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取った。
競合FACSの詳細な実験ステップは、次の通りであった:ELISAスクリーニング後のヒト及びサル結合陽性ハイブリドーマクローンにおいて、競合FACSスクリーニングを行った。完全長ヒトPD-1を発現しているCHO-hPD-1細胞を遠心分離し、リン酸緩衝剤(PBS)で洗浄した。細胞密度をリン酸緩衝剤(PBS)で1×107細胞/mLに調整して、得られた溶液をV底96ウェルプレートに50μL/ウェルで添加し、上清を遠心分離により除去した。陽性ハイブリドーマクローンの50μLの上清を採取して、0.5%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で300nMに希釈した50μLのFITC標識ヒトPD-L1-mFc組換え融合タンパク質と共に、V底96ウェルプレートに添加し、その後、完全に混合し、4℃で暗所において40分間インキュベートした。遠心分離及びリン酸緩衝剤(PBS)での2回の洗浄後、得られたものをフローサイトメトリー(Beckman)及びFlowJoソフトウェアにより解析した。
1.4 抗PD-1ハイブリドーマサブクローニング
1.3で説明したスクリーニングによって、ハイブリドーマクローン42G1、29C6、91D5、14A4及び35E6をサブクローニングのために選択し、このサブクローニングにより生じた抗PD-1抗体を、42G1、29C6、91D5、14A4及び35E6とそれぞれ命名した。詳細には、段階希釈後、ウェル内のハイブリドーマ細胞を細胞計数に供し、60~70個のハイブリドーマ細胞を有する個々のウェルを、96ウェルプレートにおける再浮遊及び播種のために選択し、播種した細胞を37℃、5%CO2で培養した。7日間培養した後、実施例1.3の場合と同じ方法を使用してELISA及びFACSアッセイを行い、1~2個の陽性単一クローンを無血清培地での拡大培養のために各プレートから選択し、次いで、マウス抗体を次の機能性の検証のために回収した。
1.3で説明したスクリーニングによって、ハイブリドーマクローン42G1、29C6、91D5、14A4及び35E6をサブクローニングのために選択し、このサブクローニングにより生じた抗PD-1抗体を、42G1、29C6、91D5、14A4及び35E6とそれぞれ命名した。詳細には、段階希釈後、ウェル内のハイブリドーマ細胞を細胞計数に供し、60~70個のハイブリドーマ細胞を有する個々のウェルを、96ウェルプレートにおける再浮遊及び播種のために選択し、播種した細胞を37℃、5%CO2で培養した。7日間培養した後、実施例1.3の場合と同じ方法を使用してELISA及びFACSアッセイを行い、1~2個の陽性単一クローンを無血清培地での拡大培養のために各プレートから選択し、次いで、マウス抗体を次の機能性の検証のために回収した。
実施例2:抗PD-1マウス抗体の評価
2.1 抗PD-1マウス抗体のヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcに対する結合親和性の判定
マウス抗PD-1抗体のヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcに対する結合親和性の判定するために、ELISAを使用した。詳細な実験ステップは、次の通りである:ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcをCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、次いで、100μLのマウス抗PD-1抗体42G1、29C6及び91D5を添加し(10μg/mLから出発して、4倍段階希釈、2反復)、その後、37℃で2時間、放置してインキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取った。データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
2.1 抗PD-1マウス抗体のヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcに対する結合親和性の判定
マウス抗PD-1抗体のヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcに対する結合親和性の判定するために、ELISAを使用した。詳細な実験ステップは、次の通りである:ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcをCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、次いで、100μLのマウス抗PD-1抗体42G1、29C6及び91D5を添加し(10μg/mLから出発して、4倍段階希釈、2反復)、その後、37℃で2時間、放置してインキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取った。データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
結果を表1に示した。マウス抗体29C6、42G1及び91D5の各々の、ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcに対するEC50は、30~70pMであった。このことは、ヒト又はサルPD-1に対するマウス抗体の良好な結合親和性を示す。
2.2 ヒトPD-1/PD-L1の結合を遮断する抗PD-1マウス抗体の活性の判定
競合ELISAを使用して、マウス抗PD-1抗体によるPD-1/PD-L1の遮断を検証した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hFc抗原をCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、次いで、0.8μg/mLのビオチン化PD-L1-mFcを含有する100μLのマウス抗PD-1抗体42G1、29C6及び91D5を添加し(10μg/mLから出発して、2倍段階希釈、2反復)、室温で2時間、放置してインキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたストレプトアビジンを添加し、その後、室温で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取り、データをGraphprismにインポートしてIC50値を計算した。
競合ELISAを使用して、マウス抗PD-1抗体によるPD-1/PD-L1の遮断を検証した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hFc抗原をCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、次いで、0.8μg/mLのビオチン化PD-L1-mFcを含有する100μLのマウス抗PD-1抗体42G1、29C6及び91D5を添加し(10μg/mLから出発して、2倍段階希釈、2反復)、室温で2時間、放置してインキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたストレプトアビジンを添加し、その後、室温で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取り、データをGraphprismにインポートしてIC50値を計算した。
結果を表1に示した。マウス抗体29C6、42G1及び91D5の各々の、PD-1-hFcのPD-L1-mFcへの結合を遮断するIC50は、nMレベルであった。このことは、PD-1/PD-L1結合を遮断する良好な活性を示した。
2.3 抗PD-1マウス抗体の、CHO-hPD-1の細胞膜表面のPD-1に対する結合親和性の判定
抗ヒトPD-1マウス抗体の、細胞膜表面のPD-1への結合を検証するために、FACS技術を使用してマウス抗体とCHO-hPD-1細胞との親和性を検出した。
抗ヒトPD-1マウス抗体の、細胞膜表面のPD-1への結合を検証するために、FACS技術を使用してマウス抗体とCHO-hPD-1細胞との親和性を検出した。
詳細な実験ステップは、次の通りであった:CHO-hPD-1細胞を500gで3分間遠心分離し、次いで、PBS(1%BSAを含有する)を用いて再浮遊させて6×106細胞/mLにし、50μLを採取して対応する96ウェルプレートに添加し;マウス抗体42G1、29C6及び対照抗体1を、PBS(1%BSAを含有する)で希釈し(1μMから出発して、3倍段階希釈、11濃度点)、次いで50μLを対応する96ウェルプレートに添加し、ブランク対照ウェルには抗体がなく;細胞及び抗体を穏やかに混合し、4℃で1時間放置し、PBSで2回洗浄し、50μLのPBS(1%BSAを含有する)を用いて再浮遊させ;ここで、2.5μLの蛍光二次抗体Alexa Fluor 488抗ヒトIgG Fcを対照抗体1の試料に添加し、2.5μLのFITC抗マウスIgGを42G1及び29C6マウス抗体の試料にそれぞれ添加し、4℃で1時間放置し、PBSで3回洗浄し、その後、フローサイトメトリー(Beckman製;モデル:CytExpert)により検出し、データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
実験結果を図1に示した。この場合、マウス抗体29C6のEC50は、3.12nMであり、42G1のEC50は、6.62nMであり、対照抗体1のEC50は、3.57nMであった。したがって、マウス抗体は、細胞膜表面のPD-1に対して良好な結合親和性を有する。
2.4 hPD-1トランスジェニックマウスにおける抗PD-1マウス抗体のin vivo薬物有効性の判定
in vivoでの抗ヒトPD-1マウス抗体の抗腫瘍効果を検証するために、hPD-1の皮下腫瘍形成モデル(Beijing Vitalstar)トランスジェニックマウスを使用した。アッセイは、次の通りであった:MC38腫瘍細胞(ATCCから購入した)を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地を使用して37℃、5%CO2で培養した。マウスPD-L1は、通常はヒトPD-1に結合することができ、抗ヒトPD-1抗体は、マウスPD-L1のヒトPD-1への結合の遮断後、腫瘍細胞の成長を阻害することができる。指数増殖期のMC38細胞を回収し、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌hPD-1マウスに皮下接種して結腸がんモデルを樹立した。約100mm3の平均体積に達したら、マウスを腫瘍サイズに従って次の群:ヒトIgGの群(陰性対照)、マウス抗体42G1の群、マウス抗体29C6の群及び対照抗体2の群にそれぞれランダムに分けた。この場合、投与する投薬量は、1mg/kgであり、この投薬量を週2回、3週間、腹腔内注射する。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定した。実験的指数は、腫瘍成長に対する薬物の効果を調査するためのものであり、特定の指数は、T/C%又は腫瘍成長阻害%(TGI%)であった。腫瘍直径をノギスにより週2回測定し、腫瘍成長(V)を計算する式は、次のものであった:V=1/2×a×b2(式中、a及びbは、長さ及び幅をそれぞれ示す)。T/C%=T/C×100(式中、C及びTは、溶媒群及び処置群の腫瘍体積又は腫瘍重量をそれぞれ表す)。腫瘍成長阻害(TGI%)=(C-T)/C×100(式中、C及びTは、溶媒群及び処置群の腫瘍体積又は腫瘍重量をそれぞれ表す)。
in vivoでの抗ヒトPD-1マウス抗体の抗腫瘍効果を検証するために、hPD-1の皮下腫瘍形成モデル(Beijing Vitalstar)トランスジェニックマウスを使用した。アッセイは、次の通りであった:MC38腫瘍細胞(ATCCから購入した)を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地を使用して37℃、5%CO2で培養した。マウスPD-L1は、通常はヒトPD-1に結合することができ、抗ヒトPD-1抗体は、マウスPD-L1のヒトPD-1への結合の遮断後、腫瘍細胞の成長を阻害することができる。指数増殖期のMC38細胞を回収し、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌hPD-1マウスに皮下接種して結腸がんモデルを樹立した。約100mm3の平均体積に達したら、マウスを腫瘍サイズに従って次の群:ヒトIgGの群(陰性対照)、マウス抗体42G1の群、マウス抗体29C6の群及び対照抗体2の群にそれぞれランダムに分けた。この場合、投与する投薬量は、1mg/kgであり、この投薬量を週2回、3週間、腹腔内注射する。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定した。実験的指数は、腫瘍成長に対する薬物の効果を調査するためのものであり、特定の指数は、T/C%又は腫瘍成長阻害%(TGI%)であった。腫瘍直径をノギスにより週2回測定し、腫瘍成長(V)を計算する式は、次のものであった:V=1/2×a×b2(式中、a及びbは、長さ及び幅をそれぞれ示す)。T/C%=T/C×100(式中、C及びTは、溶媒群及び処置群の腫瘍体積又は腫瘍重量をそれぞれ表す)。腫瘍成長阻害(TGI%)=(C-T)/C×100(式中、C及びTは、溶媒群及び処置群の腫瘍体積又は腫瘍重量をそれぞれ表す)。
結果を図2に示した:陰性対照群と比較して、マウス抗体29C6群の有効性は有意であり、TGI=97.23%、この場合、完全腫瘍退縮がマウス6匹のうちの3匹に生じ;マウス抗体42G1群の有効性は有意であり、TGI=55.12%、この場合、完全腫瘍退縮がマウス6匹のうちの1匹に生じ;対照抗体2群の有効性は有意であり、TGI=68.99%、この場合、部分腫瘍退縮がマウス6匹のうちの1匹に生じた。
実施例3 抗PD-1抗体配列の入手
マウス抗体配列をGary C.Howardら(Basic Methods in Antibody Production and Character, CRC press, 2000)の方法に従って入手し、候補ハイブリドーマRNAを抽出し、RT-PCRにより増幅して、マウス抗体の軽鎖及び重鎖可変領域を得、次いで、シークエンシングのためにこれらの領域を組み立ててTベクターにした。ハイブリドーマRNAをTRIzol RNA Isolation Reagentキットの使用説明書に従って抽出し、次いで、50μLのDEPC処理水に溶解し、RNA濃度を検出した。RevertAid First Strand cDNA Synthesisキットの使用説明書に従って、オリゴ(dT)18プライマーを使用する逆転写により全cDNAを得た。Gary C.Howardらの方法、並びにIMGTでの全マウス抗体の配列解析を参照して、高相同領域を選択することにより可変領域用の複数の対の上流プライマーを設計し、下流プライマーをCH1相同配列により設計し、プライマープールを使用することによりPCR増幅によって抗体の軽鎖及び重鎖可変領域を得、PCR産物を組み立ててpUCm-Tベクターにし、同定及び配列解析後、抗体の可変領域及びCDR配列を表2に示した。
マウス抗体配列をGary C.Howardら(Basic Methods in Antibody Production and Character, CRC press, 2000)の方法に従って入手し、候補ハイブリドーマRNAを抽出し、RT-PCRにより増幅して、マウス抗体の軽鎖及び重鎖可変領域を得、次いで、シークエンシングのためにこれらの領域を組み立ててTベクターにした。ハイブリドーマRNAをTRIzol RNA Isolation Reagentキットの使用説明書に従って抽出し、次いで、50μLのDEPC処理水に溶解し、RNA濃度を検出した。RevertAid First Strand cDNA Synthesisキットの使用説明書に従って、オリゴ(dT)18プライマーを使用する逆転写により全cDNAを得た。Gary C.Howardらの方法、並びにIMGTでの全マウス抗体の配列解析を参照して、高相同領域を選択することにより可変領域用の複数の対の上流プライマーを設計し、下流プライマーをCH1相同配列により設計し、プライマープールを使用することによりPCR増幅によって抗体の軽鎖及び重鎖可変領域を得、PCR産物を組み立ててpUCm-Tベクターにし、同定及び配列解析後、抗体の可変領域及びCDR配列を表2に示した。
実施例4:抗PD-1キメラ抗体の調製及び判定
4.1 抗PD-1キメラ抗体の発現
キメラ抗体を、14A4、29C6、35E6及び91D5の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と軽鎖カッパ定常領域のアミノ酸配列(配列番号84)との融合によりそれぞれ、並びに14A4、29C6、35E6及び91D5の重鎖可変領域のアミノ酸配列とIgG4の重鎖定常領域のアミノ酸配列(配列番号82)との融合によりそれぞれ構築した。cDNAをコドン最適化後に合成し、プラスミドpTT5(Shanghai sangon Co., Ltd.)にライゲーションした。各キメラ抗体の重鎖を保有するpTT5ベクターと軽鎖を保有するpTT5ベクターとを同時にCHO-S-E細胞(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.により調製された)にトランスフェクトし、培養上清をプロテインAカラム(MabSelect SuRe、GE)により精製してキメラ抗体を得、それらを14A4-CH、29C6-CH、35E6-CH、及び91D5-CHとそれぞれ命名した。
4.1 抗PD-1キメラ抗体の発現
キメラ抗体を、14A4、29C6、35E6及び91D5の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と軽鎖カッパ定常領域のアミノ酸配列(配列番号84)との融合によりそれぞれ、並びに14A4、29C6、35E6及び91D5の重鎖可変領域のアミノ酸配列とIgG4の重鎖定常領域のアミノ酸配列(配列番号82)との融合によりそれぞれ構築した。cDNAをコドン最適化後に合成し、プラスミドpTT5(Shanghai sangon Co., Ltd.)にライゲーションした。各キメラ抗体の重鎖を保有するpTT5ベクターと軽鎖を保有するpTT5ベクターとを同時にCHO-S-E細胞(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.により調製された)にトランスフェクトし、培養上清をプロテインAカラム(MabSelect SuRe、GE)により精製してキメラ抗体を得、それらを14A4-CH、29C6-CH、35E6-CH、及び91D5-CHとそれぞれ命名した。
4.2 抗PD-1キメラ抗体のヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcに対する結合親和性のELISAによる判定
詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFc抗原をCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、その後、100μLのキメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1をそれぞれ添加し(10μg/mLから出発して、4倍段階希釈)、37℃で2時間、インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗ヒト二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取り、データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFc抗原をCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、その後、100μLのキメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1をそれぞれ添加し(10μg/mLから出発して、4倍段階希釈)、37℃で2時間、インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗ヒト二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取り、データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
結果を下記の表3に示した。キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH、及び対照抗体1の各々の、ヒトPD-1-hFc及びサルPD-1-hFcに対する結合親和性EC50は、0.05~0.3nMの範囲であった。
4.3 PD-1/PD-L1結合及びPD-1/PD-L2結合を遮断する抗PD-1キメラの活性のELISAによる判定
詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hFcをCBS溶液で1μg/mLに希釈し、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を、37℃で1時間、ブロッキングに使用した。50μLのキメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH、及び陽性対照抗体1(20μg/mLから出発して、2倍希釈)をそれぞれ添加し、同時に、50μL(1.6μg/mL)のhPD-L1-mFc(hPD-L1アミノ酸配列NP_054862.1)又はhPD-L2-mFc(hPD-L2アミノ酸配列AAI13679)をウェルごとに添加し、その後、室温で2時間インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、HRPで標識されたヤギ抗マウス二次抗体を添加し、その後、室温で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取り、データをGraphprismにインポートしてIC50値を計算した。
詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hFcをCBS溶液で1μg/mLに希釈し、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を、37℃で1時間、ブロッキングに使用した。50μLのキメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH、及び陽性対照抗体1(20μg/mLから出発して、2倍希釈)をそれぞれ添加し、同時に、50μL(1.6μg/mL)のhPD-L1-mFc(hPD-L1アミノ酸配列NP_054862.1)又はhPD-L2-mFc(hPD-L2アミノ酸配列AAI13679)をウェルごとに添加し、その後、室温で2時間インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、HRPで標識されたヤギ抗マウス二次抗体を添加し、その後、室温で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取り、データをGraphprismにインポートしてIC50値を計算した。
結果を下記の表3に示した。キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CHの各々のPD-1/PD-L1結合を遮断する活性は、対照抗体1のものと同等であったこと、及びこれらのキメラ抗体の各々の、PD-1/PD-L2結合を遮断する活性は、対照抗体1のものと同等であったことが、IC50から分かる。
4.4 抗PD-1キメラ抗体のPD-L1/CHO-hPD-1結合を遮断する活性の検出
競合FACS技術を使用して、抗PD-1キメラ抗体のPD-L1/CHO-hPD-1結合を遮断する活性を検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:CHO-hPD-1細胞を500gで3分間遠心分離し、PBS(1%BSAを含有する)を用いて再浮遊させて6×106細胞/mLにし、そのうちの50μLを対応する96ウェルプレートに添加し;キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1をPBS(1%BSAを含有する)で希釈し、0.4μg/mLのPD-L1-mFc-Bioを含有するPBSで1μMに希釈し、次いで3倍希釈して9つの濃度点を得、次いで、50μLを対応する96ウェルプレートに添加し、ブランク対照ウェルには抗体がなく;細胞及び抗体を穏やかに混合し、4℃で1時間放置し、PBSで2回洗浄し、50μLのPBS(1%BSAを含有する)を用いて再浮遊させ;2.5μLのAPCストレプトアビジン蛍光二次抗体を試料の各々に添加し、4℃で1時間放置し;その後、PBSで3回洗浄し、各試料をフローサイトメトリー(Beckman製、モデル:CytExpert)により検出した。データをGraphprismにインポートしてIC50値を計算した。
競合FACS技術を使用して、抗PD-1キメラ抗体のPD-L1/CHO-hPD-1結合を遮断する活性を検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:CHO-hPD-1細胞を500gで3分間遠心分離し、PBS(1%BSAを含有する)を用いて再浮遊させて6×106細胞/mLにし、そのうちの50μLを対応する96ウェルプレートに添加し;キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1をPBS(1%BSAを含有する)で希釈し、0.4μg/mLのPD-L1-mFc-Bioを含有するPBSで1μMに希釈し、次いで3倍希釈して9つの濃度点を得、次いで、50μLを対応する96ウェルプレートに添加し、ブランク対照ウェルには抗体がなく;細胞及び抗体を穏やかに混合し、4℃で1時間放置し、PBSで2回洗浄し、50μLのPBS(1%BSAを含有する)を用いて再浮遊させ;2.5μLのAPCストレプトアビジン蛍光二次抗体を試料の各々に添加し、4℃で1時間放置し;その後、PBSで3回洗浄し、各試料をフローサイトメトリー(Beckman製、モデル:CytExpert)により検出した。データをGraphprismにインポートしてIC50値を計算した。
実験結果を下記の表3、及び図3に示した。キメラ抗体14A4-CH及び91D5-CHは、対照抗体1よりもCHO-hPD-1のPD-L1への結合を遮断する活性が高かったこと;キメラ抗体35E6-CH及び29C6-CHの、CHO-hPD-1のPD-L1への結合を遮断する活性は、陽性抗体1のものと同等であったことが、IC50から分かる。
4.5 抗PD-1キメラ抗体の動的親和性の測定
候補キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1のヒトPD-1-Hisに対する動的親和性を、抗体の抗原に対する動的親和性を検出するためのオクテットフォルテバイオ(Octet ForteBio)(登録商標)により測定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:ProAバイオセンサーは、まず、試験すべき抗体に、応答シグナル値が0.5nmに達するまで、結合させ、次いで、80秒間、ヒトPD-1-Hisタンパク質(500、250、125、62、31、16及び0nM)に結合させ、そしてその後、120秒間、解離させ、測定結果を1:1モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。表4に示すように、キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH及び29C6-CHの各々の会合速度は、対照抗体1のものと比較して(kon値により示される通り)同レベルであったが、これらのキメラ抗体の各々の解離速度は、対照抗体1の解離速度よりも(kdis値により示される通り)1桁遅く、キメラ抗体の各々の親和性は、対照抗体1のものよりもそれぞれ4.3、11.7、15.4及び7.3倍強かった。
候補キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1のヒトPD-1-Hisに対する動的親和性を、抗体の抗原に対する動的親和性を検出するためのオクテットフォルテバイオ(Octet ForteBio)(登録商標)により測定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:ProAバイオセンサーは、まず、試験すべき抗体に、応答シグナル値が0.5nmに達するまで、結合させ、次いで、80秒間、ヒトPD-1-Hisタンパク質(500、250、125、62、31、16及び0nM)に結合させ、そしてその後、120秒間、解離させ、測定結果を1:1モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。表4に示すように、キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH及び29C6-CHの各々の会合速度は、対照抗体1のものと比較して(kon値により示される通り)同レベルであったが、これらのキメラ抗体の各々の解離速度は、対照抗体1の解離速度よりも(kdis値により示される通り)1桁遅く、キメラ抗体の各々の親和性は、対照抗体1のものよりもそれぞれ4.3、11.7、15.4及び7.3倍強かった。
4.6 抗PD-1キメラ抗体の、PD-1/PD-L1結合を遮断する細胞活性
PD-1/PD-L1結合を遮断する細胞生物活性をレポーター遺伝子アッセイにより検出した。CHO-PD-L1-CD3細胞株は、標的細胞として使用されるとPD-L1及び抗CD3-scFvを安定的に発現し、Jurkat-PD-1-NFAT細胞株は、エフェクター細胞として使用されるとPD-1及びルシフェラーゼを安定的に発現し、この場合のルシフェラーゼ遺伝子は、NFATエレメント(転写因子)(IL-2プロモーター)により調節される。PD-1のPD-L1への結合は、下流にシグナル伝達するCD3の伝達を遮断することができ、したがって、ルシフェラーゼの発現を阻害することができ、PD-1抗体又はPDL-1抗体を添加すると、この遮断効果が逆転され、ルシフェラーゼが発現され得るため、蛍光シグナルを検出することができる(Lan Wang, Chuanfei Yu et. al., Development of a robust reporter gene assay to measure the bioactivity of anti-PD-1/anti-PD-L1 therapeutic antibodies. J Pharm Biomed Anal 2017 Oct 25; 145: 447-453を参照されたい)。
PD-1/PD-L1結合を遮断する細胞生物活性をレポーター遺伝子アッセイにより検出した。CHO-PD-L1-CD3細胞株は、標的細胞として使用されるとPD-L1及び抗CD3-scFvを安定的に発現し、Jurkat-PD-1-NFAT細胞株は、エフェクター細胞として使用されるとPD-1及びルシフェラーゼを安定的に発現し、この場合のルシフェラーゼ遺伝子は、NFATエレメント(転写因子)(IL-2プロモーター)により調節される。PD-1のPD-L1への結合は、下流にシグナル伝達するCD3の伝達を遮断することができ、したがって、ルシフェラーゼの発現を阻害することができ、PD-1抗体又はPDL-1抗体を添加すると、この遮断効果が逆転され、ルシフェラーゼが発現され得るため、蛍光シグナルを検出することができる(Lan Wang, Chuanfei Yu et. al., Development of a robust reporter gene assay to measure the bioactivity of anti-PD-1/anti-PD-L1 therapeutic antibodies. J Pharm Biomed Anal 2017 Oct 25; 145: 447-453を参照されたい)。
詳細な実験ステップは、次の通りであった:Jurkat-PD-1-NFAT細胞(Promegaから購入した)及びCHO-S-OKT3-PD-L1細胞(Promegaから購入した)を200gで5分間遠心分離し、検出緩衝剤RPMI1640+1%FBSを用いて再浮遊させた。CHO-S-OKT3-PD-L1細胞を5×105細胞/40μL/ウェルで播種した。CHO-S-OKT3-PDL1細胞が予め播種されているウェルにJurkat-PD-1-NFAT細胞を1.25×106/40μL/ウェルで添加し、その後、20μLのキメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1をそれぞれ添加した(100μMから出発して、2倍段階希釈)。5時間のインキュベーション後、それらを取り出し、室温で20分間、置いておき、20μLの検出試薬Bright-Glo Luciferase(Promega Companyから購入した)を添加し、室温で5分間、揺動させ、マイクロプレートリーダー(BMG Company、PHEARstar FS)を使用して測定した。実験データのGraphprismによる曲線フィッティングを行ってEC50を計算した。結果を表5に示した。キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CH及び対照抗体1の各々の、PD-1/PD-L1結合を遮断する細胞活性は、nMレベルであった。
4.7 抗ヒトPD-1キメラ抗体のTmの判定
抗PD-1キメラ抗体のTm値をDSF(示差走査蛍光定量法)により判定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:抗PD-1キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CHの各々をPBSで1mg/mLに希釈し、各々の12.5μLを採取し、2.5μLの40×SYPRO Orange色素(Life Technologies Co., Ltd.、カタログ番号4306737)及び5μLのddH2Oを添加した。次いで、各試料を、反応用のQ-PCRシステム(AB Applied Biosystems ABI、7500)、Q-PCRパラメーター設定:標的(ROX)、プログラム(25℃、2分;1%ずつ、95%℃;95℃、2分)、に添加した。
抗PD-1キメラ抗体のTm値をDSF(示差走査蛍光定量法)により判定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:抗PD-1キメラ抗体14A4-CH、91D5-CH、35E6-CH、29C6-CHの各々をPBSで1mg/mLに希釈し、各々の12.5μLを採取し、2.5μLの40×SYPRO Orange色素(Life Technologies Co., Ltd.、カタログ番号4306737)及び5μLのddH2Oを添加した。次いで、各試料を、反応用のQ-PCRシステム(AB Applied Biosystems ABI、7500)、Q-PCRパラメーター設定:標的(ROX)、プログラム(25℃、2分;1%ずつ、95%℃;95℃、2分)、に添加した。
結果を図4に示した。この場合、抗PD-1キメラ抗体91D5-CHのTm値は、72.28℃であり、29C6-CHのTm値は、71.46℃であり、14A4-CHのTm値は、68.99℃であり、35E6-CHのTm値は、66.77℃であり、これらの抗体全てに良好な熱安定性があった。
4.8 hPD-1トランスジェニックマウスにおける抗ヒトPD-1キメラ抗体のin vivo薬物有効性の判定
実施例2.4の場合と同じ方法を使用してモデルを樹立した。約100mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:ヒトIgG4の群(陰性対照)、キメラ抗体91D5-CHの群、35E6-CH抗体の群、陽性対照抗体1の群、及び対照抗体3の群にそれぞれランダムに分け、各群に0.5mg/kgの投薬量で週2回、3週間、腹腔内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、特定の結果を図5に示した。陰性対照と比較して、キメラ抗体91D5-CH群の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=75.46%、この場合、完全腫瘍退縮がマウス6匹のうちの3匹に生じ;35E6-CH群の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=73.08%、この場合、完全腫瘍退縮がマウス6匹のうちの3匹に生じ;対照抗体3の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=81.79%、この場合、部分腫瘍退縮がマウス6匹のうちの1匹にのみ生じ;対照抗体1の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=51.80%、この場合、マウス6匹のうちのいずれにも腫瘍退縮は生じなかった。
実施例2.4の場合と同じ方法を使用してモデルを樹立した。約100mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:ヒトIgG4の群(陰性対照)、キメラ抗体91D5-CHの群、35E6-CH抗体の群、陽性対照抗体1の群、及び対照抗体3の群にそれぞれランダムに分け、各群に0.5mg/kgの投薬量で週2回、3週間、腹腔内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、特定の結果を図5に示した。陰性対照と比較して、キメラ抗体91D5-CH群の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=75.46%、この場合、完全腫瘍退縮がマウス6匹のうちの3匹に生じ;35E6-CH群の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=73.08%、この場合、完全腫瘍退縮がマウス6匹のうちの3匹に生じ;対照抗体3の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=81.79%、この場合、部分腫瘍退縮がマウス6匹のうちの1匹にのみ生じ;対照抗体1の有効性は有意であり(p<0.05)、TGI=51.80%、この場合、マウス6匹のうちのいずれにも腫瘍退縮は生じなかった。
実施例5:抗PD-1抗体のヒト化
マウス抗体29C6、35E6及び91D5を、抗体CDRグラフト法を使用してヒト化した。手短に述べると、ヒト化改変は、次のステップを含む:マウスモノクローナル抗体のアミノ酸配列とヒト生殖細胞系列抗体のものをアラインメントして、高い相同性はもちろんヒト生殖細胞系列フレームワーク配列として役立つ良好な物理的及び化学的特性も有する配列を見つけ出すステップ;HLA-DRの親和性を解析し、調査して、親和性が低いヒト生殖細胞系列フレームワーク配列を選択するステップ;並びに選択された重鎖及び軽鎖フレームワーク配列にマウス抗体の6つのCDRをそれぞれグラフトするステップ。
マウス抗体29C6、35E6及び91D5を、抗体CDRグラフト法を使用してヒト化した。手短に述べると、ヒト化改変は、次のステップを含む:マウスモノクローナル抗体のアミノ酸配列とヒト生殖細胞系列抗体のものをアラインメントして、高い相同性はもちろんヒト生殖細胞系列フレームワーク配列として役立つ良好な物理的及び化学的特性も有する配列を見つけ出すステップ;HLA-DRの親和性を解析し、調査して、親和性が低いヒト生殖細胞系列フレームワーク配列を選択するステップ;並びに選択された重鎖及び軽鎖フレームワーク配列にマウス抗体の6つのCDRをそれぞれグラフトするステップ。
詳細には、マウス抗体29C6、35E6及び91D5の重鎖及び軽鎖CDR領域を、対応するヒト化鋳型のFRフレームワークに移植した。29C6の重鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列IGHV1-18*01(IMGT受託番号M99641を参照されたい)であり、29C6の軽鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列IGKV3-11*01(IMGT受託番号X01668を参照されたい)であり;35E6の重鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列IGHV4-59*01(IMGT受託番号AB019438を参照されたい)であり、35E6の軽鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列IGKV3-11*01(IMGT受託番号X01668を参照されたい)であり;91D5の重鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列IGHV1-18*01(IMGT受託番号M99641を参照されたい)であり、91D5の軽鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列IGKV1-39*01(IMGT受託番号X59315を参照されたい)であった。
更に、コンピューターシミュレーション法を使用して、分子ドッキングにより、可変領域及びそれらの隣接領域のフレームワークアミノ酸配列を解析して、3次元組合せモードを調査した。静電力、ファンデルワールス力、親水性及び疎水性、並びにエントロピー値を計算することにより、PD-1と相互作用すること及び空間的配座を維持することができるマウス抗体のアミノ酸配列中の肝要なアミノ酸を解析し、移植抗体内に保持した。換言すると、ヒト化抗体が、マウス抗体の抗原結合能力をできる限り保持することができように、ヒト化鋳型のFR領域内のアミノ酸残基の一連の復帰突然変異を遂行した。
上記方法に従って、マウス抗体29C6のCDRに基づいて、2つのヒト化抗体を構築し、それぞれ、29C6-HZ1及び29C6-HZ2と命名し;マウス抗体35E6のCDRに基づいて、1つのヒト化抗体を構築し、35E6-HZ1と命名し;マウス抗体91D5のCDRに基づいて、2つのヒト化抗体を構築し、それぞれ、91D5-HZ1及び91D5-HZ2と命名した。各ヒト化抗体の重鎖定常領域は、ヒトIgG4重鎖定常領域(配列番号82)であり、その軽鎖定常領域は、ヒト軽鎖カッパ定常領域(配列番号84)であった。
上記のヒト化抗体の可変領域及び定常領域のアミノ酸配列を表6に示した。
実施例6:抗PD-1ヒト化抗体の評価
6.1 ヒト化抗体のヒトPD-1-Hisに対する結合親和性のELISAによる判定
ヒト化PD-1抗体のPD-1-His抗原に対する親和性を検証するために、ELISAを利用した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hisをCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、その後、100μLのキメラ抗体29C6-CH、35E6-CH、91D5-CH及びヒト化抗体29C6-HZ1、29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ1、91D5-HZ2を添加し(10μg/mLから出発して、3倍段階勾配希釈、2反復)、37℃で2時間、インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取った。データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
6.1 ヒト化抗体のヒトPD-1-Hisに対する結合親和性のELISAによる判定
ヒト化PD-1抗体のPD-1-His抗原に対する親和性を検証するために、ELISAを利用した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-hisをCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、その後、100μLのキメラ抗体29C6-CH、35E6-CH、91D5-CH及びヒト化抗体29C6-HZ1、29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ1、91D5-HZ2を添加し(10μg/mLから出発して、3倍段階勾配希釈、2反復)、37℃で2時間、インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体(FC)を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取った。データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
結果を表7に示した。全体的に、ヒト化は、親和性にほとんど影響を与えず、ヒトPD-1-Hisに対する良好な結合親和性を保持した。
6.2 抗ヒトPD-1ヒト化抗体のPD-1-Hisに対する動的親和性の判定
キメラ抗体29C6-CH及び91D5-CH、ヒト化抗体29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ1、91D5-HZ2及び対照抗体1を含む、抗ヒトPD-1ヒト化抗体の、PD-1-Hisに対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)を使用して判定した。詳細な実験ステップは、実施例4.5を参照する。実験結果を表8に示した。キメラ抗体及びヒト化抗体の各々のKD値は、nMレベルであり、対照抗体1のものより強かった。
キメラ抗体29C6-CH及び91D5-CH、ヒト化抗体29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ1、91D5-HZ2及び対照抗体1を含む、抗ヒトPD-1ヒト化抗体の、PD-1-Hisに対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)を使用して判定した。詳細な実験ステップは、実施例4.5を参照する。実験結果を表8に示した。キメラ抗体及びヒト化抗体の各々のKD値は、nMレベルであり、対照抗体1のものより強かった。
6.3 抗ヒトPD-1ヒト化抗体の、ヒトPD-1/ヒトPD-L1結合及びヒトPD-1/ヒトPD-L2結合を遮断する活性の判定
キメラ抗体29C6-CH、91D5-CH及び35E6-CH、並びにヒト化抗体29C6-HZ1、29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ1及び91D5-HZ2、並びに対照抗体1を含む、抗ヒトPD-1ヒト化抗体の、ヒトPD-1/ヒトPD-L1結合及びヒトPD-1/ヒトPD-L2結合を遮断する活性を、競合ELISAにより検出した。また詳細な実験ステップ及び結果解析については実施例4.3を参照されたい。結果を表9に示した。全ての抗体は、ヒトPD-1/ヒトPD-L1又はヒトPD-1/ヒトPD-L2の結合を遮断する良好な活性を有した。
キメラ抗体29C6-CH、91D5-CH及び35E6-CH、並びにヒト化抗体29C6-HZ1、29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ1及び91D5-HZ2、並びに対照抗体1を含む、抗ヒトPD-1ヒト化抗体の、ヒトPD-1/ヒトPD-L1結合及びヒトPD-1/ヒトPD-L2結合を遮断する活性を、競合ELISAにより検出した。また詳細な実験ステップ及び結果解析については実施例4.3を参照されたい。結果を表9に示した。全ての抗体は、ヒトPD-1/ヒトPD-L1又はヒトPD-1/ヒトPD-L2の結合を遮断する良好な活性を有した。
6.4 抗PD-1ヒト化抗体の機能のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
ヒト化抗体29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ2及び対照抗体1を含む抗ヒトPD-1ヒト化抗体の、細胞学的機能を、ルシフェラーゼレポーターシステムを使用して検出した。また詳細な実験ステップについては実施例4.6を参照されたい。結果を図6に示した。この場合、ヒト化抗体29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ2及び対照抗体1により活性化されたルシフェラーゼレポーターシステムからのEC50値は、それぞれ、5.74nM、3.63nM、4.47nM及び3.38nMであった。
ヒト化抗体29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ2及び対照抗体1を含む抗ヒトPD-1ヒト化抗体の、細胞学的機能を、ルシフェラーゼレポーターシステムを使用して検出した。また詳細な実験ステップについては実施例4.6を参照されたい。結果を図6に示した。この場合、ヒト化抗体29C6-HZ2、35E6-HZ1、91D5-HZ2及び対照抗体1により活性化されたルシフェラーゼレポーターシステムからのEC50値は、それぞれ、5.74nM、3.63nM、4.47nM及び3.38nMであった。
6.5 抗PD-1ヒト化抗体は、IL-2を分泌するようにPBMCを刺激するようにブドウ球菌エンテロトキシンB(SEB)を促す
本実験では、抗PD-1ヒト化抗体91D5-HZ2及び29C6-HZ2、対照抗体1、対照抗体3並びにIgG対照抗体、それぞれの影響下でSEB刺激PBMC細胞により分泌されるIL-2サイトカインのレベルを、HTRFアッセイにより測定して、これらの抗体の生物活性を評価した。
本実験では、抗PD-1ヒト化抗体91D5-HZ2及び29C6-HZ2、対照抗体1、対照抗体3並びにIgG対照抗体、それぞれの影響下でSEB刺激PBMC細胞により分泌されるIL-2サイトカインのレベルを、HTRFアッセイにより測定して、これらの抗体の生物活性を評価した。
PBMC細胞は、密度勾配遠心分離を使用することにより、2名のドナーA及びBそれぞれからのヒト新鮮血から調製した。新鮮PBMC細胞を、1ng/mLのSEBを含有する培地に再浮遊させ、細胞密度を5×105/mLに調整し、次いで、96ウェルプレートに1ウェル当たり100μL(5×104細胞/ウェル)で均一に分配した。抗体を3倍勾配で希釈し、1ウェル当たり100μLで添加した。抗体濃度勾配は、1μMから出発した;3倍希釈、各抗体の濃度ごとに2回反復とした。72時間後、細胞上清を遠心分離により回収し、上清中のIL-2の分泌をIL-2 HTRFキット(CisBio)により検出した。
結果を図7-1及び図7-2に示した。この場合、2名のドナーから得たPBMC細胞において、抗体91D5-HZ2及び29C6-HZ2、対照抗体1又は対照抗体2の濃度の増加に伴って、PBMC細胞により産生されるIL-2の量も増加した。このことは、免疫細胞応答を増強する能力を示す。上記結果は、91D5-HZ2、29C6-HZ2、対照抗体1及び対照抗体2全てにT細胞活性を増強する能力があり、91D5-HZ2にはより強い促進効果があることを示していた。
実施例7:抗PD-1ヒト化抗体Fcの設計及び検証
7.1:IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体
PD-1は、主として活性化T細胞に発現されるので、現在のところ、IgG4サブタイプは、PD-1陽性T細胞の死滅を防止するために、市販されている全てのPD-1抗体に使用されている。多くの研究により、ヒトIgG4抗体サブタイプには中等度のADCCがあり、CDCエフェクター機能がほとんどないことが示されている。しかし、天然IgG4は、圧力条件下(例えば、酸性緩衝剤中、又はこれに類するもの)で不安定であることが判明している(Boning Liu, Huaizhu Guo, Jin Xu et. al., Acidーinduced aggregation property of nivolumab is dependent on the Fc. Mabs, 2016, 1942-0862)。
7.1:IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体
PD-1は、主として活性化T細胞に発現されるので、現在のところ、IgG4サブタイプは、PD-1陽性T細胞の死滅を防止するために、市販されている全てのPD-1抗体に使用されている。多くの研究により、ヒトIgG4抗体サブタイプには中等度のADCCがあり、CDCエフェクター機能がほとんどないことが示されている。しかし、天然IgG4は、圧力条件下(例えば、酸性緩衝剤中、又はこれに類するもの)で不安定であることが判明している(Boning Liu, Huaizhu Guo, Jin Xu et. al., Acidーinduced aggregation property of nivolumab is dependent on the Fc. Mabs, 2016, 1942-0862)。
より良好な安定性とヒンジ領域突然変異とを有するIgG1サブタイプは、弱いADCC及びCDC機能を有することができ、その一方で、FCγRIの親和性を欠き、単球系(monocytiv)骨髄系由来サプレッサー細胞(MDSC)によるT細胞のクリアランスを回避することができ;これに基づいて、Fc定常領域の突然変異は、FcRnの親和性を増強して、及びin vivo半減期を延長して、より良好な薬物有効性を得ることができる。本発明者らは、L234A、L235A、D265A、N434A点突然変異(EU番号付け、配列番号83)を含む、変異体IgG1サブタイプFcの定常領域を使用して、FcR結合を除去し、FcRnの親和性を延長した。表10に示すように、91D5-HZ2-IgG1-1Dの重鎖配列(アミノ酸配列番号86)及び軽鎖配列(アミノ酸配列番号88)の核酸コード配列、並びに35E6-HZ1-IgG1-1Dの重鎖配列(アミノ酸配列番号90)及び軽鎖配列(アミノ酸配列番号11)の核酸コード配列を、それぞれ組み立ててpTT5発現ベクターにし、発現のためにPEIによりCHO-S細胞に一過性にトランスフェクトし、ProAによる精製後、91D5-HZ2-IgG1-1D及び35E6-HZ1-IgG1-1D抗体を得た。
7.2 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のPD-1抗原に対する親和性のELISAによる検出
91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3の、ヒトPD-1-mFc及びサルPD-1-hFcに対する親和性を、ELISAにより判定した。詳細な実験ステップについては実施例4.2及び実施例6.1を参照されたい。また結果を表11に示した。この場合、4つのPD-1抗体の各々についてのヒトPD-1-mFc及びサルPD-1-hFcに対するELISA結合親和性は、nMレベルであった。ヒトPD-1-mFcへの結合活性について、91D5-HZ2-IgG1-1Dは、対照抗体1及び対照抗体3よりもわずかに強く、35E6-HZ1-IgG1-1Dは、対照抗体1及び対照抗体3と同等であった。
91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3の、ヒトPD-1-mFc及びサルPD-1-hFcに対する親和性を、ELISAにより判定した。詳細な実験ステップについては実施例4.2及び実施例6.1を参照されたい。また結果を表11に示した。この場合、4つのPD-1抗体の各々についてのヒトPD-1-mFc及びサルPD-1-hFcに対するELISA結合親和性は、nMレベルであった。ヒトPD-1-mFcへの結合活性について、91D5-HZ2-IgG1-1Dは、対照抗体1及び対照抗体3よりもわずかに強く、35E6-HZ1-IgG1-1Dは、対照抗体1及び対照抗体3と同等であった。
7.3 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のPD-1抗原に対する動的親和性の検出
91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3を含む、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、PD-1-Hisに対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)により検出した。また詳細な実験ステップについては実施例4.5を参照されたい。実験結果を表12に示した。この場合、4つの抗体の動的親和性は、全てnMレベルであり、91D5-HZ2-IgG1-1D及び35E6-HZ1-IgG1-1Dの親和性は、対照抗体1及び対照抗体3のものよりも約4~5倍強かった。このことは、それらが、より強い結合活性を有したことを示す。
91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3を含む、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、PD-1-Hisに対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)により検出した。また詳細な実験ステップについては実施例4.5を参照されたい。実験結果を表12に示した。この場合、4つの抗体の動的親和性は、全てnMレベルであり、91D5-HZ2-IgG1-1D及び35E6-HZ1-IgG1-1Dの親和性は、対照抗体1及び対照抗体3のものよりも約4~5倍強かった。このことは、それらが、より強い結合活性を有したことを示す。
7.4 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のCHO-hPD-1に対する親和性の検出
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、細胞膜表面のPD-1への結合を検証するために、FACS技術を使用してマウス抗体のCHO-hPD-1細胞に対する親和性を検出した。
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、細胞膜表面のPD-1への結合を検証するために、FACS技術を使用してマウス抗体のCHO-hPD-1細胞に対する親和性を検出した。
詳細な実験ステップは、次の通りであった:CHO-hPD-1細胞を500gで3分間遠心分離し、PBS(1%BSAを含有する)を用いて再浮遊させて6×106細胞/mLにし、次いで50μLを対応する96ウェルプレートに採取し;FITC標識91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3をPBS(1%BSAを含有する)で希釈し(1μMから出発して、4倍勾配希釈、11濃度点)、次いで、50μLを対応する96ウェルプレートに添加し、1μMのFITC標識IgG陰性対照抗体を陰性対照として使用し、その後、4℃で1時間、置いておき;PBSで3回洗浄し、フローサイトメトリー(製造業者:Beckman、モデル:CytExpert)により検出し、データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。
実験結果を図8及び表11に示した。91D5-HZ2-IgG1-1D及び対照抗体1及び対照抗体3は、CHO-hPD-1の細胞膜表面のPD-1に対して同等の結合親和性を有したが、35E6-HZ1-IgG1-1Dは、対照抗体1及び対照抗体3よりもわずかに強い親和性を有した。
7.5:IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、CHO-hPD-1のPD-L1への結合を遮断する活性の検出
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体が、CHO-hPD-1のPD-L1への結合を遮断することを検証するために、FACS技術を検出に使用した。また詳細な実験ステップについては実施例4.4を参照されたい。
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体が、CHO-hPD-1のPD-L1への結合を遮断することを検証するために、FACS技術を検出に使用した。また詳細な実験ステップについては実施例4.4を参照されたい。
実験結果を図9及び表11に示した。91D5-HZ2-IgG1-1Dの遮断活性は、対照抗体1及び対照抗体3のものと同等であり、35E6-HZ1-IgG1-1Dの遮断活性は、対照抗体1及び対照抗体3のものよりもわずかに強かった。
7.6 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の特異性の検出
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、HUVEC及びHEK293T上皮細胞への非特異的結合を、FACSにより検出した。手短に述べると、HUVEC又はHEK293T細胞の密度を1ウェル当たり2×105細胞に設定した。試験抗体91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3をFITCにより標識し、500nMに希釈し、次いで、HUVEC又はHEK293T細胞と共に4℃で1時間、それぞれインキュベートした。洗浄後、細胞をフローサイトメトリー(製造業者:Beckman、モデル:CytExpert)により検出し、解析した。結果は、非特異的結合が観察されなかったことを示した。
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、HUVEC及びHEK293T上皮細胞への非特異的結合を、FACSにより検出した。手短に述べると、HUVEC又はHEK293T細胞の密度を1ウェル当たり2×105細胞に設定した。試験抗体91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3をFITCにより標識し、500nMに希釈し、次いで、HUVEC又はHEK293T細胞と共に4℃で1時間、それぞれインキュベートした。洗浄後、細胞をフローサイトメトリー(製造業者:Beckman、モデル:CytExpert)により検出し、解析した。結果は、非特異的結合が観察されなかったことを示した。
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、BTLA-his、PD-L1-his及びICOSへの非特異的結合を、ELISAにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:ヒトPD-1-his、ヒトBTLA-his、ヒトICOS及びヒトPD-L1-his(Novoproteinから購入した)をCBS溶液で1μg/mLに希釈し、次いで、96ウェルELISAプレート(Guangzhou Jiete Bioから購入した)に4℃で一晩コーティングした。洗浄後、2%BSAを含有する100μLのリン酸緩衝剤(PBS)を37℃で1時間、ブロッキングに使用し、次いで、100μLの91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D及び対照抗体1(10μg/mL及び1μg/mL)を添加し、2反復を設け、37℃で2時間、インキュベートした。洗浄後、2%BSAを含有するリン酸緩衝剤(PBS)で1:15000の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗ヒトIgG二次抗体を添加し、その後、37℃で1時間インキュベートした。洗浄後、TMB色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して450nmで吸光度値を読み取った。データをGraphprismにインポートしてEC50値を計算した。実験結果を図10に示した。この場合、バックグラウンド(ブランク対照)と比較して、91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D及び対照抗体1は全て、ヒトPD-1抗原に特異的に結合したが、BTLA-hisにも、PD-L1-hisにも、ICOSにも結合しない。
7.7 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のTmの判定
91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3のTm値をDSF(示差走査蛍光定量法)により検出した。また詳細な実験ステップについては実施例4.7を参照されたい。結果を図11に示した。この場合、91D5-HZ2-IgG1-1DのTm値(67.62℃)及び35E6-HZ1-IgG1-1DのTm値(66.58℃)は、対照抗体1のもの(63.95℃)及び対照抗体3のもの(62.56℃)より4~5℃高かった。このことは、薬物開発に有利に働く、より良好な熱安定性を示す。
91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3のTm値をDSF(示差走査蛍光定量法)により検出した。また詳細な実験ステップについては実施例4.7を参照されたい。結果を図11に示した。この場合、91D5-HZ2-IgG1-1DのTm値(67.62℃)及び35E6-HZ1-IgG1-1DのTm値(66.58℃)は、対照抗体1のもの(63.95℃)及び対照抗体3のもの(62.56℃)より4~5℃高かった。このことは、薬物開発に有利に働く、より良好な熱安定性を示す。
7.8 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の細胞学的機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより判定した。また詳細な実験ステップについては実施例4.6を参照されたい。実験結果を図12に示した。この場合、ルシフェラーゼレポーターシステムによる91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3のEC50値は、それぞれ、3.48nM、2.81nM、3.22nM、及び3.79nMであった。
IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の細胞学的機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより判定した。また詳細な実験ステップについては実施例4.6を参照されたい。実験結果を図12に示した。この場合、ルシフェラーゼレポーターシステムによる91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3のEC50値は、それぞれ、3.48nM、2.81nM、3.22nM、及び3.79nMであった。
7.9 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のCD64タンパク質に対する動的親和性の検出
抗体FcのCD64(すなわち、FcγRI)への結合は、ADCP機能を発揮する上での1つの重要な態様であり、91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3を含む、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、CD64(ACROから購入した)に対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)により検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:PBSTで4μg/mLに希釈したCD64タンパク質を最初に固定化して、SAバイオセンサー(Pallから購入した)を使用することにより;抗体をPBST(pH7.0)で100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.125nM、1.5625nM、0nMに希釈し;90秒間結合させ、次いで120秒間解離させ、データを1:1モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。
抗体FcのCD64(すなわち、FcγRI)への結合は、ADCP機能を発揮する上での1つの重要な態様であり、91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3を含む、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、CD64(ACROから購入した)に対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)により検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:PBSTで4μg/mLに希釈したCD64タンパク質を最初に固定化して、SAバイオセンサー(Pallから購入した)を使用することにより;抗体をPBST(pH7.0)で100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.125nM、1.5625nM、0nMに希釈し;90秒間結合させ、次いで120秒間解離させ、データを1:1モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。
91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3のCD64に対する動的親和性にそれぞれ対応する実験結果を、図13-1~13-4に示した。この場合、91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D及び対照抗体3は、CD64に全く結合せず、対照抗体1の動的親和性値は、次の通りであった:KD=6.94E-09(M)、Kon=2.07E-10(1/Ms)及びkdis=3.85E-04(1/s)。このことは、抗体91D5-HZ2-IgG1-1D及び35E6-HZ1-IgG1-1DがADCP活性を生じさせなかったことを示す。
7.10 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のFcRnタンパク質に対する親和性の検出
抗体Fcは、FcRnに結合することができ、その結果、抗体Fcは、in vivoで容易にクリアランスされることがなく、それ故、in vivoでの半減期を延長することになる。91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3を含む、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、FcRn(ACROから購入した)に対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)により測定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:PBSTで3μg/mLに希釈したFcRnタンパク質を最初に固定化して、SAバイオセンサー(Pallから購入した)を使用することにより;PBST(pH6.0)で抗体を200nM、100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.125nM、0nMに希釈するステップ;90秒間結合させ、次いで120秒間解離させるステップ、そしてデータを1:1モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。
抗体Fcは、FcRnに結合することができ、その結果、抗体Fcは、in vivoで容易にクリアランスされることがなく、それ故、in vivoでの半減期を延長することになる。91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3を含む、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の、FcRn(ACROから購入した)に対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ(登録商標)により測定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:PBSTで3μg/mLに希釈したFcRnタンパク質を最初に固定化して、SAバイオセンサー(Pallから購入した)を使用することにより;PBST(pH6.0)で抗体を200nM、100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.125nM、0nMに希釈するステップ;90秒間結合させ、次いで120秒間解離させるステップ、そしてデータを1:1モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。
実験結果を図13に示した。この場合、91D5-HZ2-IgG1-1D及び35E6-HZ1-IgG1-1DのFcRnに対する親和性は、E-09(M)のレベルであり、対照抗体1及び対照抗体2のFcRnに対する親和性は、E-08(M)のレベルであった。IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体の親和性は、対照抗体の親和性よりも2~3倍強かった。in vivoでのその半減期を延長することができる。
7.11 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のADCP活性のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
抗体FcのCD32aへの結合は、ADCP機能を発揮する上での1つの重要な態様であり、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のADCP機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:Jurkat-NFAT/CD32a及びCHO-S-PD-1細胞(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.)を採取し、遠心分離し、RPMI1640+1%FBS培地を用いて再浮遊させ、次いで計数し、2×106細胞/mL及び1×106細胞/mLにそれぞれ希釈し、50μLの細胞浮遊液をウェルごとに添加し;91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1、対照抗体3及びマウスPD-1抗体29C6を希釈し(1.2μMから出発して、2倍希釈、2反復)、対応するウェルに50μL/ウェルで添加し;37℃で5時間のインキュベーション後、マイクロプレートリーダーによる検出のために20μLのone-glo検出試薬(Promegaから購入した)をウェルごとに添加した。
抗体FcのCD32aへの結合は、ADCP機能を発揮する上での1つの重要な態様であり、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のADCP機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:Jurkat-NFAT/CD32a及びCHO-S-PD-1細胞(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.)を採取し、遠心分離し、RPMI1640+1%FBS培地を用いて再浮遊させ、次いで計数し、2×106細胞/mL及び1×106細胞/mLにそれぞれ希釈し、50μLの細胞浮遊液をウェルごとに添加し;91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1、対照抗体3及びマウスPD-1抗体29C6を希釈し(1.2μMから出発して、2倍希釈、2反復)、対応するウェルに50μL/ウェルで添加し;37℃で5時間のインキュベーション後、マイクロプレートリーダーによる検出のために20μLのone-glo検出試薬(Promegaから購入した)をウェルごとに添加した。
結果は、図14に示した通りであり、この場合、マウスPD-1抗体29C6は、強いADCP活性、EC50=6.09nM、を有し、対照抗体1は、弱いADCP活性を有したが、91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D及び対照抗体3は、ADCP活性を全く有さなかった。
7.12 IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のADCC機能のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
抗体FcのCD16aへの結合は、ADCC機能を発揮する上での1つの重要な態様であり、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のADCC機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:Jurkat-NFAT/CD16a及びCHO-S-PD-1細胞(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.)を採取し、遠心分離し、RPMI1640+1%FBS培地を用いて再浮遊させ、次いで計数し、2×106細胞/mL及び1×106細胞/mLにそれぞれ希釈し、50μLの細胞浮遊液をウェルごとに添加し;希釈した91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1、対照抗体3(450μg/mLから出発して、10倍希釈、2反復)、及びマウスPD-1抗体42G1(450μg/mL)を、対応するウェルに50μL/ウェルで添加し;37℃で5時間のインキュベーション後、マイクロプレートリーダーによる検出のために20μLのone-glo検出試薬(Promegaから購入した)をウェルごとに添加した。
抗体FcのCD16aへの結合は、ADCC機能を発揮する上での1つの重要な態様であり、IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のADCC機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった:Jurkat-NFAT/CD16a及びCHO-S-PD-1細胞(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.)を採取し、遠心分離し、RPMI1640+1%FBS培地を用いて再浮遊させ、次いで計数し、2×106細胞/mL及び1×106細胞/mLにそれぞれ希釈し、50μLの細胞浮遊液をウェルごとに添加し;希釈した91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1、対照抗体3(450μg/mLから出発して、10倍希釈、2反復)、及びマウスPD-1抗体42G1(450μg/mL)を、対応するウェルに50μL/ウェルで添加し;37℃で5時間のインキュベーション後、マイクロプレートリーダーによる検出のために20μLのone-glo検出試薬(Promegaから購入した)をウェルごとに添加した。
結果は、図15に示した通りであり、この場合、マウスPD-1抗体42G1は、強いADCC活性を有したが、91D5-HZ2-IgG1-1D、35E6-HZ1-IgG1-1D、対照抗体1及び対照抗体3は、ADCC活性を全く有さなかった。
実施例8:IgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のin vivo薬物有効性試験
35E6-HZ1-IgG1-1D及び91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の、ヒト免疫系再構築マウス又はトランスジェニックマウスにおける皮下移植腫瘍の増殖に対する阻害効果を、実施例8.1~8.3で評価した。詳細には、本発明では、抗体35E6-HZ1-IgG1-1D及び91D5-HZ2-IgG1-1Dを、ヒト非小細胞肺がんHCC827を皮下移植したHu-PBMC-B-NDGマウスモデル、及びマウス結腸がん細胞株MC38を皮下移植したhPD-1/hTIM3トランスジェニックマウスモデルに、尾静脈注射又は腹腔内注射により、週2回、3週間投与した。腫瘍体積の変化及び動物の体重の変化を週2回測定し、本発明の抗体の担腫瘍マウスに対する有効性(腫瘍成長阻害)を計算した。
35E6-HZ1-IgG1-1D及び91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の、ヒト免疫系再構築マウス又はトランスジェニックマウスにおける皮下移植腫瘍の増殖に対する阻害効果を、実施例8.1~8.3で評価した。詳細には、本発明では、抗体35E6-HZ1-IgG1-1D及び91D5-HZ2-IgG1-1Dを、ヒト非小細胞肺がんHCC827を皮下移植したHu-PBMC-B-NDGマウスモデル、及びマウス結腸がん細胞株MC38を皮下移植したhPD-1/hTIM3トランスジェニックマウスモデルに、尾静脈注射又は腹腔内注射により、週2回、3週間投与した。腫瘍体積の変化及び動物の体重の変化を週2回測定し、本発明の抗体の担腫瘍マウスに対する有効性(腫瘍成長阻害)を計算した。
試験薬物:35E6-HZ1-IgG1-1D又は91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の適切な量を使うこと、10μL/gに対応する投薬体積を計算すること、そして投与することになる投薬量に従って生理食塩水で母溶液を対応する投薬溶液体積に希釈すること。同じ用量のヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトIgG1(Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.)及びヒト免疫グロブリンヒトIgG(Chengdu Rongsheng Pharmaceuticals Co., Ltd.)を陰性対照として使用し、キイトルーダ(Merckから購入した;カタログ番号S001195)を陽性対照として使用し、AB12T8(国際公開第2019141092号を参照して調製した)は、併用投与用であった。
実験動物及び細胞株:B-NDGマウス(Biocytogen Jiangsu Co., Ltd)、hPD-1/hTIM-3トランスジェニックマウス(Jiangsu GemPharmatech Co., Ltd.)、マウス結腸がん細胞株MC38(Nanjing Cobioer Gene Technology Co., Ltd)、ヒト非小細胞肺がん細胞株HCC827(ATCC)、及びヒト末梢血単核リンパ球PBMC(AllCELLS)。
実験の群分け及び評価方法
70~150mm3の平均腫瘍体積を有する担腫瘍マウスをランダムに群に分けた(群の数は、試料の数に従って決定した)。群に従って、ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトIgG1、静注用ヒト免疫グロブリンヒトIgG、又は本発明の抗体を、それぞれ、週2回、3週間、投与し、この場合の投与経路は、腹腔内注射又は尾静脈注射であり、投薬体積は、10mL/kgであった。投与後、週2回、ノギスにより腫瘍直径を測定し、腫瘍体積を次の式に従って計算した:V=0.5a×b2(式中、a及びbは、腫瘍の長及び短径をそれぞれ示す)。動物の死亡数を毎日観察して記録した。
70~150mm3の平均腫瘍体積を有する担腫瘍マウスをランダムに群に分けた(群の数は、試料の数に従って決定した)。群に従って、ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトIgG1、静注用ヒト免疫グロブリンヒトIgG、又は本発明の抗体を、それぞれ、週2回、3週間、投与し、この場合の投与経路は、腹腔内注射又は尾静脈注射であり、投薬体積は、10mL/kgであった。投与後、週2回、ノギスにより腫瘍直径を測定し、腫瘍体積を次の式に従って計算した:V=0.5a×b2(式中、a及びbは、腫瘍の長及び短径をそれぞれ示す)。動物の死亡数を毎日観察して記録した。
腫瘍成長阻害TGI(%)を次の式:TGI(%)=[1-(VTend-VT0)/(VCend-VC0)]×100%(式中、VTend:処置群における実験終了時の腫瘍体積の平均値、VT0:処置群における投薬開始時の腫瘍体積の平均値、VCend:陰性対照群における実験終了時の腫瘍体積の平均値、VC0:陰性対照群における投薬開始時の腫瘍体積の平均値)により計算して、式(I)の抗体の腫瘍阻害効果を評価し、相対腫瘍増殖率T/C(%)を次の式:T/C=(VTend/VT0)/(VCend/VC0)により計算して、式(I)の抗体の抗腫瘍有効性を評価した。
8.1 ヒト免疫系再構築マウスhPBMC-B-NDG-HCC827モデル1における35E6-HZ1-IgG1-1Dのin vivo薬物有効性の判定
HCC827(非小細胞肺がん)細胞を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地で、37℃、5%CO2で培養した。指数増殖期のHCC827細胞を回収し、次いで、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌B-NDGマウスに皮下接種して非小細胞肺がんがんモデルを樹立した。PBMCを翌日中に解凍し、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、次いで、担腫瘍マウスに腹腔内接種してそれらの免疫系を再構築した。腫瘍が約97mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトIgG1(陰性対照)群、35E6-HZ1-IgG1-1D抗体群及びキイトルーダ群にランダムに分け、尾静脈経由で週2回、3週間、注射した。投薬後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定した。図16~17に示すような特定の結果を表14に示した。ヒトIgG1陰性対照群と比較して、35E6-HZ1-IgG1-1D抗体群は、HCC827非小細胞肺がん移植腫瘍モデルの腫瘍成長を有意に阻害し、腫瘍成長阻害率(TGI)が104.94%であったが、キイトルーダ群は、明らかな抗腫瘍効果を一切示さなかった。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されず、処置中のマウスにおける耐容性は良好であった。
HCC827(非小細胞肺がん)細胞を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地で、37℃、5%CO2で培養した。指数増殖期のHCC827細胞を回収し、次いで、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌B-NDGマウスに皮下接種して非小細胞肺がんがんモデルを樹立した。PBMCを翌日中に解凍し、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、次いで、担腫瘍マウスに腹腔内接種してそれらの免疫系を再構築した。腫瘍が約97mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトIgG1(陰性対照)群、35E6-HZ1-IgG1-1D抗体群及びキイトルーダ群にランダムに分け、尾静脈経由で週2回、3週間、注射した。投薬後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定した。図16~17に示すような特定の結果を表14に示した。ヒトIgG1陰性対照群と比較して、35E6-HZ1-IgG1-1D抗体群は、HCC827非小細胞肺がん移植腫瘍モデルの腫瘍成長を有意に阻害し、腫瘍成長阻害率(TGI)が104.94%であったが、キイトルーダ群は、明らかな抗腫瘍効果を一切示さなかった。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されず、処置中のマウスにおける耐容性は良好であった。
8.2 ヒト免疫系再構築マウスhPBMC-B-NDG-HCC827モデル2における91D5-HZ2-IgG1-1Dのin vivo薬物有効性の判定
HCC827細胞を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地で、37℃、5%CO2で培養した。指数増殖期のHCC827細胞を回収し、次いで、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌B-NDGマウスに皮下接種して非小細胞肺がんモデルを樹立した。腫瘍細胞を接種した5日後、PBMCを解凍し、次いで、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、次いで、担腫瘍マウスに腹腔内接種してそれらの免疫系を再構築した。腫瘍が約91mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトIgG1(陰性対照)の群、単一91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群、及びLAG3モノクローナル抗体(AB12T8、Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.)と併用での91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群に、それぞれ、ランダムに分け、これらのマウスに尾静脈経由で週2回、2週間、注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、図18~19に示したような特定の結果を表15に示した。ヒトIgG1陰性対照群と比較して、単一91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群には、良好な腫瘍阻害傾向があり、TGIが69.13%であり、更に、LAG3モノクローナル抗体と併用での91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群には、増強された腫瘍阻害効果があり、TGIが83.40%であった。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されなかった。このことは、処置中のマウスにおける良好な耐容性を示す。
HCC827細胞を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地で、37℃、5%CO2で培養した。指数増殖期のHCC827細胞を回収し、次いで、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌B-NDGマウスに皮下接種して非小細胞肺がんモデルを樹立した。腫瘍細胞を接種した5日後、PBMCを解凍し、次いで、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、次いで、担腫瘍マウスに腹腔内接種してそれらの免疫系を再構築した。腫瘍が約91mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトIgG1(陰性対照)の群、単一91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群、及びLAG3モノクローナル抗体(AB12T8、Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd.)と併用での91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群に、それぞれ、ランダムに分け、これらのマウスに尾静脈経由で週2回、2週間、注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、図18~19に示したような特定の結果を表15に示した。ヒトIgG1陰性対照群と比較して、単一91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群には、良好な腫瘍阻害傾向があり、TGIが69.13%であり、更に、LAG3モノクローナル抗体と併用での91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群には、増強された腫瘍阻害効果があり、TGIが83.40%であった。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されなかった。このことは、処置中のマウスにおける良好な耐容性を示す。
8.3 hPD-1/hTIM-3二重トランスジェニックモデルにおけるIgG1-1D変異体抗PD-1ヒト化抗体のin vivo薬物有効性の判定
MC38(マウス結腸がん細胞株)細胞を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地で、37℃、5%CO2で培養した。指数増殖期のMC38細胞を回収し、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、hPD-1/hTIM-3トランスジェニックマウスに皮下接種して結腸がんモデルを樹立した。腫瘍が約83mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:静注用ヒト免疫グロブリンヒトIgG(陰性対照)の群、91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群、35E6-HZ1-IgG1-1D抗体の群、及びキイトルーダの群に、ランダムに分け、これらのマウスに週2回、3週間、腹腔内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、図20~21に示したような特定の結果を表16に示した。ヒトIgG陰性対照群と比較して、91D5-HZ2-IgG1-1D及び35E6-HZ1-IgG1-1Dは、MC38結腸がん移植腫瘍モデルの腫瘍成長を有意に阻害し、TGIがそれぞれ80.30%及び69.23%であった。このことは、キイトルーダ(TGI=48.69%)よりも良好な有効性を示す。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されなかった。このことは、処置中のマウスにおける良好な耐容性を示す。
MC38(マウス結腸がん細胞株)細胞を、10%ウシ胎仔血清を含有するRPMI1640培養培地で、37℃、5%CO2で培養した。指数増殖期のMC38細胞を回収し、PBSを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、hPD-1/hTIM-3トランスジェニックマウスに皮下接種して結腸がんモデルを樹立した。腫瘍が約83mm3の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群:静注用ヒト免疫グロブリンヒトIgG(陰性対照)の群、91D5-HZ2-IgG1-1D抗体の群、35E6-HZ1-IgG1-1D抗体の群、及びキイトルーダの群に、ランダムに分け、これらのマウスに週2回、3週間、腹腔内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、図20~21に示したような特定の結果を表16に示した。ヒトIgG陰性対照群と比較して、91D5-HZ2-IgG1-1D及び35E6-HZ1-IgG1-1Dは、MC38結腸がん移植腫瘍モデルの腫瘍成長を有意に阻害し、TGIがそれぞれ80.30%及び69.23%であった。このことは、キイトルーダ(TGI=48.69%)よりも良好な有効性を示す。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されなかった。このことは、処置中のマウスにおける良好な耐容性を示す。
本発明の特定の実施形態を詳細に説明したが、公開されているあらゆる教示に従ってこれらの詳細に様々な改変及び変更を加えることができ、そのような改変及び変更を加えたものもまた本発明の範囲に含まれることは、当業者には理解されるであろう。本発明の全ては、添付の特許請求の範囲及びそのあらゆる均等物により与えられる。
Claims (30)
- PD-1に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片であって、前記抗体又はその抗原結合性断片が、以下の相補性決定領域(CDR):
(a)配列番号1に記載の重鎖可変領域(VH)に含有される、CDR-H1若しくはその配列バリアント、CDR-H2若しくはその配列バリアント及びCDR-H3若しくはその配列バリアント、並びに/又は
配列番号2に記載の軽鎖可変領域(VL)に含有される、CDR-L1若しくはその配列バリアント、CDR-L2若しくはその配列バリアント及びCDR-L3若しくはその配列バリアント、
(b)配列番号20に記載のVHに含有される、CDR-H1若しくはその配列バリアント、CDR-H2若しくはその配列バリアント及びCDR-H3若しくはその配列バリアント、並びに/又は
配列番号21に記載のVLに含有される、CDR-L1若しくはその配列バリアント、CDR-L2若しくはその配列バリアント及びCDR-L3若しくはその配列バリアント、
(c)配列番号36に記載のVHに含有される、CDR-H1若しくはその配列バリアント、CDR-H2若しくはその配列バリアント及びCDR-H3若しくはその配列バリアント、並びに/又は
配列番号37に記載のVLに含有される、CDR-L1若しくはその配列バリアント、CDR-L2若しくはその配列バリアント及びCDR-L3若しくはその配列バリアント、或いは
(d)配列番号54に記載のVHに含有される、CDR-H1若しくはその配列バリアント、CDR-H2若しくはその配列バリアント及びCDR-H3若しくはその配列バリアント、並びに/又は
配列番号55に記載のVLに含有される、CDR-L1若しくはその配列バリアント、CDR-L2若しくはその配列バリアント及びCDR-L3若しくはその配列バリアント
を含み、
前記配列バリアントが、それが由来するCDRと比較して、1個又は複数のアミノ酸の置換、欠失又は付加(例えば、1個、2個又は3個のアミノ酸の置換、欠失又は付加)を有するCDRであり、好ましくは、前記置換が、保存的置換であり、
好ましくは、CDRが、Kabat又はIMGTの番号付けシステムによって定義され、
好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片の前記VH及び/又はVLが、ヒト又はマウスに由来する免疫グロブリンのフレームワーク領域(FR)を含み、
好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトPD-1に結合する、
抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
(1)重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)であって、IMGTの番号付けシステムによって定義して、
(1a)前記VHが、配列番号3に記載の配列を有する相補性決定領域(CDR)-H1、配列番号4に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号5に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号6に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号7に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号8に記載の配列を有するCDR-L3を含むか、
(1b)前記VHが、配列番号22に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号23に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号24に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号25に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号26に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号27に記載の配列を有するCDR-L3を含むか、
(1c)前記VHが、配列番号38に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号39に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号40に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号41に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号42に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号43に記載の配列を有するCDR-L3を含むか、又は
(1d)前記VHが、配列番号56に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号57に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号58に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号59に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号60に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号61に記載の配列を有するCDR-L3を含む、
VH及び/又はVL、
或いは
(2)重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)であって、Kabatの番号付けシステムによって定義して、
(2a)前記VHが、配列番号9に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号10に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号12に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号13に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号14に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号15に記載の配列を有するCDR-L3を含むか、
(2b)前記VHが、配列番号28に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号29に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号30に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号31に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号32に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号33に記載の配列を有するCDR-L3を含むか、
(2c)前記VHが、配列番号44に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号45に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号47に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号48に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号49に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号50に記載の配列を有するCDR-L3を含むか、
又は
(2d)前記VHが、配列番号62に記載の配列を有するCDR-H1、配列番号63に記載の配列を有するCDR-H2及び配列番号64に記載の配列を有するCDR-H3を含み、並びに/若しくは
前記VLが、配列番号65に記載の配列を有するCDR-L1、配列番号66に記載の配列を有するCDR-L2及び配列番号67に記載の配列を有するCDR-L3を含む、
VH及び/又はVL、
或いは
(3)重鎖可変領域(VH)及び/又は軽鎖可変領域(VL)であって、少なくとも1つのCDRが、(1a)、(1b)、(1c)、(1d)又は(2a)、(2b)、(2c)、(2d)のうちのいずれか1つの前記VH及び/又はVLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個若しくは3個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ)から選択される突然変異を含有し、好ましくは、前記置換が、保存的置換である、
VH及び/又はVL
を含む、
請求項1に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
(a)配列番号1、20、36及び54のうちのいずれか1つに記載のVH、並びに/又は配列番号2、21、37及び55のうちのいずれか1つに記載のVL、
(b)配列番号16、17、34、51及び52のうちのいずれか1つに記載のVH、並びに/又は配列番号18、19、35及び53のうちのいずれか1つに記載のVL、
(c)(a)若しくは(b)のいずれかの前記VHと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する重鎖可変領域(VH);及び/又は(a)若しくは(b)のいずれかの前記VLと少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する軽鎖可変領域(VL)、或いは
(d)(a)若しくは(b)のいずれかの前記VHと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有する重鎖可変領域(VH);及び/又は(a)若しくは(b)のいずれかの前記VLと比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有する軽鎖可変領域(VL)であって、好ましくは、前記置換が、保存的置換である、VH及び/又はVL
を含む、請求項1又は2に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
(a)配列番号1に記載の配列を有するVH及び配列番号2に記載の配列を有するVL、
(b)配列番号16に記載の配列を有するVH及び配列番号18に記載の配列を有するVL、
(c)配列番号17に記載の配列を有するVH及び配列番号19に記載の配列を有するVL、
(d)配列番号20に記載の配列を有するVH及び配列番号21に記載の配列を有するVL、
(e)配列番号34に記載の配列を有するVH及び配列番号35に記載の配列を有するVL、
(f)配列番号36に記載の配列を有するVH及び配列番号37に記載の配列を有するVL、
(g)配列番号51に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、
(h)配列番号52に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、
(i)配列番号54に記載の配列を有するVH及び配列番号55に記載の配列を有するVL、
(j)重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)であって、(a)~(i)のうちのいずれかにおける前記VH及びVLと比較して、前記重鎖可変領域が、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有し、及び/又は前記軽鎖可変領域(VL)が、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するか、或いは
(k)重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)であって、(a)~(i)のうちのいずれかにおける前記VH及びVLと比較して、前記重鎖可変領域(VH)が、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有し、及び/又は前記軽鎖可変領域(VL)が、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有し、好ましくは、前記置換が、保存的置換である
を含む、請求項1~3のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、マウス抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体である、請求項1~4のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
- 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
(a)ヒト免疫グロブリン若しくはそのバリアントの重鎖定常領域(CH)、及び/又は
(b)ヒト免疫グロブリン若しくはそのバリアントの軽鎖定常領域(CL)
を更に含み、
前記バリアントが、それが由来する野生型配列と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するか、又は前記バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、1個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有し、好ましくは、前記置換が、保存的置換であり、
好ましくは、前記重鎖定常領域が、IgG重鎖定常領域、例えば、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4重鎖定常領域であり、
好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、
(1)ヒトIgG1の重鎖定常領域、又は
(2)ヒトIgG4の重鎖定常領域
からなる群から選択される重鎖定常領域を含み、
好ましくは、前記軽鎖定常領域が、カッパ又はラムダ軽鎖定量領域であり、より好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトカッパ軽鎖定常領域を含む、
請求項1~5のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記重鎖定常領域又はそのバリアントが、
(1)EU番号付けシステムによるヒトIgG4の重鎖定常領域の変異体(S228P)、
(2)EU番号付けシステムによる、234、235、265及び434位のうちの少なくとも1つに突然変異を有するヒトIgG1の重鎖定常領域、好ましくは、突然変異:L234A、L235A、D265A及びN434Aのうちの1、2、3又は4つを有するヒトIgG1の重鎖定常領域の変異体(例えば、配列番号83に記載の重鎖定常領域)、
(3)配列番号82に記載の重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントであって、前記バリアントが、配列番号82と比較して、最大で20個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有するか、又は配列番号82と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する、重鎖定常領域(CH)又はそのバリアント、或いは
(4)配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)又はそのバリアントであって、前記バリアントが、配列番号83と比較して、最大で20個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有するか、又は配列番号83と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する、重鎖定常領域(CH)又はそのバリアント
を含み、
(2)又は(4)における前記突然変異又は置換が、前記突然変異又は置換なしの対応する抗体又は抗原結合性断片と比較して、前記抗体又は抗原結合性断片のADCP、ADCC及び/又はCDCの活性をなくすか、又は低減し、
並びに/或いは
前記軽鎖定常領域又はそのバリアントが、
(5)カッパ軽鎖定常領域、又は
(6)配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアントであって、前記バリアントが、配列番号84と比較して、最大で20個のアミノ酸の保存的置換(例えば、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の保存的置換;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の保存的置換)を有するか、又は配列番号84と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する、軽鎖定常領域(CL)又はそのバリアント
を含み、
好ましくは、前記抗体が、配列番号82又は配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む、
請求項6に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体が、
(a)配列番号1に記載のVH及び配列番号83に記載の重鎖定常領域(CH)を含む重鎖、並びに配列番号2に記載のVL及び配列番号84に記載の軽鎖定常領域(CL)を含む軽鎖、
(b)配列番号16に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号18に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(c)配列番号17に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号19に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(d)配列番号20に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号21に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(e)配列番号34に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号35に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(f)配列番号36に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号37に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(g)配列番号51に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号53に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(h)配列番号52に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号53に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(i)配列番号54に記載のVH及び配列番号83に記載のCHを含む重鎖、並びに配列番号55に記載のVL及び配列番号84に記載のCLを含む軽鎖、
(j)重鎖及び軽鎖であって、(a)~(i)のうちのいずれかにおける前記重鎖及び前記軽鎖と、前記重鎖が、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有し、及び/又は前記軽鎖が、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する、重鎖及び軽鎖
を含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
(a)重鎖及び軽鎖であって、
前記重鎖が、
(i)配列番号86に記載の配列、
(ii)(i)に記載の配列と比較して、1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列
を含み、及び
前記軽鎖が、
(iv)配列番号88に記載の配列、
(v)(iv)に記載の配列と比較して、1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)(iv)に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列、
を含み、
好ましくは、(ii)又は(v)における前記置換が、保存的置換である、重鎖及び軽鎖、
或いは
(b)重鎖及び軽鎖であって、
前記重鎖が、
(i)配列番号90に記載の配列、
(ii)(i)に記載の配列と比較して、1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(iii)(i)に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列
を含み、及び
前記軽鎖が、
(iv)配列番号11に記載の配列、
(v)(iv)に記載の配列と比較して、1個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ(例えば、最大で50個、最大で45個、最大で40個、最大で35個、最大で30個、最大で25個、最大で20個、最大で15個、最大で10個若しくは最大で5個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ;例えば、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個若しくは10個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ)を有する配列、又は
(vi)(iv)に記載の配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有する配列(iv)
を含み、
好ましくは、(ii)又は(v)における前記置換が、保存的置換である、重鎖及び軽鎖
を含む、請求項1~8のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv断片、ジスルフィド連結されたFv(dsFv)及びダイアボディからなる群から選択され、
好ましくは、前記scFvが、
(a)配列番号1に記載の配列を有するVH及び配列番号2に記載の配列を有するVL、
(b)配列番号16に記載の配列を有するVH及び配列番号18に記載の配列を有するVL、
(c)配列番号17に記載の配列を有するVH及び配列番号19に記載の配列を有するVL、
(d)配列番号20に記載の配列を有するVH及び配列番号21に記載の配列を有するVL、
(e)配列番号34に記載の配列を有するVH及び配列番号35に記載の配列を有するVL、
(f)配列番号36に記載の配列を有するVH及び配列番号37に記載の配列を有するVL、
(g)配列番号51に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、
(h)配列番号52に記載の配列を有するVH及び配列番号53に記載の配列を有するVL、又は
(i)配列番号54に記載の配列を有するVH及び配列番号55に記載の配列を有するVL
を含む、請求項1~9のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、マーカーを有し、
好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、検出可能なマーカー、例えば、酵素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ)、放射性核種、蛍光色素、発光性物質(例えば、化学発光性物質)又はビオチンを有する、
請求項1~10のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 前記抗体又はその抗原結合性断片が、以下の特性:
(a)50nM未満、例えば、20nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM、1pM、0.1pM未満又はそれよりも低いKDでPD-1(例えば、ヒトPD-1)に結合する、好ましくは、前記KDが、バイオレイヤー干渉法(BLI)又はELISAによって測定される、
(b)50nM未満、例えば、20nM、10nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.01nM、1pM、0.1pM未満又はそれよりも低いEC50でPD-1(例えば、ヒトPD-1)に結合する、好ましくは、前記EC50が、フローサイトメトリー又は細胞競合ELISA技術によって測定される、
(c)約0.1ng/mL~約1000ng/mLの範囲のIC50でPD-1のPD-L1又はPD-L2への結合と競合する、好ましくは、前記IC50が、ELISA技術によって測定される、
(d)T細胞の活性化を増加させる、例えば、Tリンパ球におけるIFN-γ及び/又はIL-2の発現を増加させる、
(e)BTLA、PD-L1又はICOSに結合しない、
(f)腫瘍細胞を死滅させるか、又はその成長を阻害する、
(g)良好な熱安定性を有する、或いは
(h)ADCP、ADCC及びCDCの活性のうちの少なくとも1つがないか、若しくは低減されている、例えば、ADCCの活性がないか、若しくは低減されている;ADCPの活性がないか、若しくは低減されている;ADCPの活性がないか、若しくは低減されており、かつADCCの活性がないか、若しくは低減されている;又は、ADCP、ADCC及びCDCの活性がないか、若しくは低減されている
のうちの少なくとも1つを有する、請求項1~11のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。 - 請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、それらの重鎖及び/若しくは軽鎖、又はそれらの重鎖可変領域及び/若しくは軽鎖可変領域をコードする単離された核酸分子。
- 前記抗体の前記重鎖をコードする核酸分子及び/又は前記抗体の前記軽鎖をコードする核酸分子を含み、
(a)前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、
(i)配列番号85に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
(ii)(i)の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(i)の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有する配列、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、若しくは
(iii)3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドにおいて、(i)の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
からなる群から選択される配列を有し、
並びに/又は、
前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、
(iv)配列番号87に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
(v)(iv)の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(iv)の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有する配列、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、若しくは
(vi)3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドにおいて、(iv)の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
からなる群から選択される配列を有するか、
或いは
(b)前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、
(i)配列番号89に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
(ii)(i)の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(i)の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有する配列、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、若しくは
(iii)3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドにおいて、(i)の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
からなる群から選択される配列を有し、
並びに/又は、
前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、
(iv)配列番号46に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
(v)(iv)の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列(例えば、(iv)の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約85%、90%、95%、99%以上の配列同一性を有する配列、又は1個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列)、若しくは
(vi)3個、6個、15個、30個若しくは45個以下のヌクレオチドにおいて、(iv)の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
からなる群から選択される配列を有し、
好ましくは、前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号85に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有し、及び/又は前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号87に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有し、
好ましくは、前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号89に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有し、及び/又は前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号46に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有する、
請求項13に記載の単離された核酸分子。 - 請求項13又は14に記載の単離された核酸分子を含むベクターであって、好ましくは、クローニングベクター又は発現ベクターであるベクター。
- 請求項13若しくは14に記載の単離された核酸分子、又は請求項15に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片を調製するための方法であって、請求項16に記載の宿主細胞を、前記抗体又はその抗原結合性断片の発現を可能にする条件下で培養するステップ、及び前記抗体又はその抗原結合性断片を培養された宿主細胞培養物から回収するステップを含む方法。
- 第1の抗体若しくはその断片、及び追加の抗体若しくはその断片又は抗体模倣物を含む多特異性抗体であって、前記第1の抗体若しくはその断片が、請求項1~12のいずれか一項に記載のPD-1に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片であり、
好ましくは、前記多特異性抗体が、二特異性抗体、又は三特異性抗体、又は四特異性抗体である、多特異性抗体。 - 抗体又はその抗原結合性断片及びカップリング部分を含むコンジュゲートであって、前記抗体又はその抗原結合性断片が、請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片であり、前記カップリング部分が、検出可能なマーカー、例えば、放射性同位元素、蛍光性物質、発光性物質、着色物質若しくは酵素であるか、又は前記カップリング部分が、薬剤、例えば、化学療法剤、放射性核種若しくは毒素である、コンジュゲート。
- キメラ抗原受容体(CAR)を発現する細胞であって、請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、請求項13若しくは14に記載の核酸分子、又は請求項15に記載のベクターを含むか、又は発現し、好ましくは、前記細胞が、免疫細胞に由来するか、又は前記抗原結合性断片が、scFvから選択され、より好ましくは、前記細胞が、Tリンパ球、NK細胞、単球、マクロファージ又は樹状細胞及びそれらの任意の組合せに由来する、細胞。
- 請求項13若しくは14に記載の核酸分子、又は請求項15に記載のベクターを含む腫瘍溶解性ウイルス。
- 抗体又はその抗原結合性断片及び非免疫グロブリン部分を含む融合タンパク質であって、前記抗体又はその抗原結合性断片が、請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片であり、前記非免疫グロブリン部分が、ポリペプチド、例えば、サイトカイン(例えば、IL-2、IL-15、IL-7、IL-12、IL-18、IL-21、TNF-アルファ又はIFNガンマ)である、融合タンパク質。
- 請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、請求項13若しくは14に記載の核酸分子、請求項15に記載のベクター、請求項16に記載の宿主細胞、請求項18に記載の多特異性抗体、請求項19に記載のコンジュゲート、請求項20に記載のCAR細胞、請求項21に記載の腫瘍溶解性ウイルス及び/又は請求項22に記載の融合タンパク質、並びに薬学的に許容できる担体及び/又は賦形剤を含む医薬組成物であって、
任意選択で、前記医薬組成物が、追加の薬学的活性薬剤、例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤を更に含み、より好ましくは、前記抗腫瘍剤が、免疫調節効果と関連する抗体、例えば、抗LAG-3抗体(例えば、AB12T8)又はTIM-3抗体(例えば、AB12S3)から選択される、
医薬組成物。 - 前記医薬組成物が、対象における以下の生物学的活性:
(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、
(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、
(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、
(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強する
のうちの少なくとも1つを誘発するのに十分な有効用量の前記抗体又はその抗原結合性断片を含む、請求項23に記載の医薬組成物。 - 請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、及び/又は請求項13若しくは14に記載の核酸分子、及び/又は請求項15に記載のベクター、及び/又は請求項16に記載の宿主細胞、及び/又は請求項18に記載の多特異性抗体、及び/又は請求項19に記載のコンジュゲート、及び/又は請求項20に記載のキメラ抗原受容体(CAR)を発現する細胞、及び/又は請求項21に記載の腫瘍溶解性ウイルス、及び/又は請求項22に記載の融合タンパク質、及び/又は請求項23若しくは24に記載の医薬組成物、並びに任意選択で使用説明書を含むキット。
- 腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び/又は処置するための医薬の調製における、請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、又は請求項13若しくは14に記載の核酸分子、又は請求項15に記載のベクター、又は請求項16に記載の宿主細胞、又は請求項18に記載の多特異性抗体、又は請求項19に記載のコンジュゲート、又は請求項20に記載のキメラ抗原受容体(CAR)を発現する細胞、又は請求項21に記載の腫瘍溶解性ウイルス、又は請求項22に記載の融合タンパク質、又は請求項23若しくは24に記載の医薬組成物、又は請求項23若しくは24に記載の医薬組成物及び追加の薬学的活性薬剤(例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤)の使用であって、
任意選択で、前記腫瘍が、以下の組織:皮膚、骨髄、血液、リンパ液、頭頸部、脳、肺、乳房、胃、胆嚢、肝臓、膵臓、腸、卵巣、前立腺、副腎、腎臓、膀胱、子宮、子宮頸部、精巣、陰茎及び軟組織のうちの1つ又は複数に由来し、
任意選択で、前記感染症が、細菌感染症、病原体感染症、真菌感染症及びウイルス感染症からなる群から選択され、
任意選択で、前記感染症が、ウイルス感染症、例えば、HIV、B型肝炎又はC型肝炎であり、任意選択で、前記感染症が、結核であり、
任意選択で、前記自己免疫疾患が、糖尿病、重症筋無力症、胃炎、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、狼瘡、大腸炎、リウマチ性疾患及び甲状腺疾患からなる群から選択され、
好ましくは、前記腫瘍が、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、結腸がん、直腸がん、神経膠腫、膀胱がん、乳がん、腎臓がん、食道がん、胃がん、口腔扁平上皮がん、尿道上皮細胞がん及び膵臓がん、並びに頭頸部腫瘍からなる群から選択され、
好ましくは、前記抗腫瘍剤が、免疫調節効果と関連する抗体、例えば、抗LAG-3抗体(例えば、AB12T8)又はTIM-3抗体(例えば、AB12S3)であり、
任意選択で、請求項23又は24に記載の医薬組成物及び追加の薬学的活性薬剤が、組み合わせて又は別々に、同時又は連続して投与される、
使用。 - 前記医薬が、
(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、
(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、
(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、
(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強する
のうちの少なくとも1つのためである、請求項26に記載の使用。 - in vivo又はin vitroで、(1)PD-1のPD-L1又はPD-L2への結合を阻害するか、又はブロックする、(2)PD-1の活性を下方調節するか、又は排除する、(3)PD-1又はPD-L1又はPD-L2の免疫抑制を低減するか、又は軽減する、(4)Tリンパ球におけるIFNγ又はIL-2の産生を増加させる、及び(5)腫瘍細胞を死滅させるTリンパ球の能力を増強するのうちの少なくとも1つを行うための方法であって、
有効量の、請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、又は請求項13若しくは14に記載の核酸分子、又は請求項15に記載のベクター、又は請求項16に記載の宿主細胞、又は請求項18に記載の多特異性抗体、又は請求項19に記載のコンジュゲート、又は請求項20に記載のキメラ抗原受容体(CAR)を発現する細胞、又は請求項21に記載の腫瘍溶解性ウイルス、又は請求項22に記載の融合タンパク質、又は請求項23若しくは24に記載の医薬組成物を投与するステップ、
任意選択で、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤のうちの1つ若しくは複数を、前記抗体若しくはその抗原結合性断片、前記核酸分子、前記ベクター、前記宿主細胞、前記多特性抗体、前記コンジュゲート又は前記医薬組成物の投与と同時、その前又はその後に投与するステップ
を含む方法。 - 対象における腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び/又は処置するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項23又は24に記載の医薬組成物を投与するステップを含み、前記対象が、哺乳動物であり、好ましくは、前記対象が、ヒトである、方法。
- 試料中のPD-1の存在又はレベルを検出する方法であって、前記試料を、請求項1~12のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片と、前記抗体又はその抗原結合性断片及びPD-1の間で複合体の形成を可能にする条件下で接触させるステップ、及び前記複合体の前記形成を検出するステップを含む方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910939944.8 | 2019-09-30 | ||
CN201910939944 | 2019-09-30 | ||
PCT/CN2020/116417 WO2021063201A1 (zh) | 2019-09-30 | 2020-09-21 | 抗pd-1抗体及其用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022550243A true JP2022550243A (ja) | 2022-12-01 |
JPWO2021063201A5 JPWO2021063201A5 (ja) | 2023-09-20 |
Family
ID=75337572
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022506438A Pending JP2022550243A (ja) | 2019-09-30 | 2020-09-21 | 抗pd-1抗体及びその使用 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP4039704A4 (ja) |
JP (1) | JP2022550243A (ja) |
KR (1) | KR20220070201A (ja) |
CN (1) | CN114206931B (ja) |
WO (1) | WO2021063201A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL311738A (en) * | 2021-09-29 | 2024-05-01 | Akeso Biopharma Inc | ANTI-LAG3 antibody, drug composition and use |
CN114835810B (zh) * | 2022-03-31 | 2024-01-05 | 浙江特瑞思药业股份有限公司 | 一种抗pd-1纳米抗体及其应用 |
WO2023198115A1 (en) * | 2022-04-14 | 2023-10-19 | Beigene Switzerland Gmbh | Stable high concentration sodium chloride formulations containing pd-1 antibody and methods of use thereof |
CN115785269B (zh) * | 2022-11-01 | 2023-09-22 | 四川大学 | 抗pd-l1的抗体及其应用 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3939350A (en) | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4277437A (en) | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4366241A (en) | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
USPP4816P (en) | 1980-09-11 | 1982-01-26 | Mikkelsens Inc. | Kalanchoe plant |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
JP3523245B1 (ja) | 2000-11-30 | 2004-04-26 | メダレックス,インコーポレーテッド | ヒト抗体作製用トランスジェニック染色体導入齧歯動物 |
CN104250302B (zh) * | 2013-06-26 | 2017-11-14 | 上海君实生物医药科技股份有限公司 | 抗pd‑1抗体及其应用 |
KR102236367B1 (ko) | 2013-07-26 | 2021-04-05 | 삼성전자주식회사 | DARPin을 포함하는 이중 특이 키메라 단백질 |
US10323095B2 (en) | 2014-03-17 | 2019-06-18 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation | Antibody-fynomer conjugates |
JP6986965B2 (ja) * | 2014-07-22 | 2021-12-22 | アポロミクス インコーポレイテッド | 抗pd−1抗体 |
EP3218409A2 (en) * | 2014-11-11 | 2017-09-20 | Sutro Biopharma, Inc. | Anti-pd-1 antibodies, compositions comprising anti-pd-1 antibodies and methods of using anti-pd-1 antibodies |
CN105061597B (zh) * | 2015-06-09 | 2016-04-27 | 北京东方百泰生物科技有限公司 | 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法 |
MA42447A (fr) * | 2015-07-13 | 2018-05-23 | Cytomx Therapeutics Inc | Anticorps anti-pd-1, anticorps anti-pd-1 activables, et leurs procédés d'utilisation |
TWI833183B (zh) * | 2015-07-30 | 2024-02-21 | 美商宏觀基因股份有限公司 | Pd-1結合分子和其使用方法 |
CA3000638C (en) * | 2015-09-29 | 2024-02-27 | Asia Biotech Pte. Ltd. | Pd-1 antibodies and uses thereof |
CN107286242B (zh) * | 2016-04-01 | 2019-03-22 | 中山康方生物医药有限公司 | 抗pd-1的单克隆抗体 |
CN106046162B (zh) * | 2016-06-21 | 2019-04-02 | 大庆东竺明生物技术有限公司 | 抗人程序性死亡因子1(pd-1)单克隆抗体的制备及应用 |
CN114456269A (zh) * | 2016-09-21 | 2022-05-10 | 基石药业(苏州)有限公司 | 一种新的pd-1单克隆抗体 |
CN106519034B (zh) * | 2016-12-22 | 2020-09-18 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 抗pd-1抗体及其用途 |
CN110366564B (zh) * | 2016-12-23 | 2023-07-07 | 瑞美德生物医药科技有限公司 | 使用与程序性死亡1(pd-1)结合的抗体的免疫疗法 |
CN110799546B (zh) * | 2017-09-01 | 2023-01-24 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | 重组双特异性抗体 |
CA3082383A1 (en) * | 2017-11-08 | 2019-05-16 | Xencor, Inc. | Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences |
WO2019096136A1 (zh) * | 2017-11-14 | 2019-05-23 | 拜西欧斯(北京)生物技术有限公司 | 抗pd-1抗体及其制备方法和应用 |
US11655295B2 (en) | 2018-01-18 | 2023-05-23 | Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd. | Anti-LAG-3 antibody and use thereof |
EP3768724A4 (en) * | 2018-03-20 | 2022-04-13 | Wuxi Biologics Ireland Limited. | NOVEL ANTI-PD-1 ANTIBODIES |
US11884725B2 (en) | 2018-04-24 | 2024-01-30 | Ampsource Biopharma Shanghai Inc. | Antibody against TIM-3 and application thereof |
-
2020
- 2020-09-21 JP JP2022506438A patent/JP2022550243A/ja active Pending
- 2020-09-21 KR KR1020227003770A patent/KR20220070201A/ko active Search and Examination
- 2020-09-21 CN CN202080055788.XA patent/CN114206931B/zh active Active
- 2020-09-21 WO PCT/CN2020/116417 patent/WO2021063201A1/zh unknown
- 2020-09-21 EP EP20870685.3A patent/EP4039704A4/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP4039704A1 (en) | 2022-08-10 |
CN114206931A (zh) | 2022-03-18 |
EP4039704A4 (en) | 2023-09-20 |
KR20220070201A (ko) | 2022-05-30 |
CN114206931B (zh) | 2024-06-04 |
WO2021063201A1 (zh) | 2021-04-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230192840A1 (en) | Antibody and use thereof | |
JP7401538B2 (ja) | 抗cldn18.2抗体およびその使用 | |
CN108026174B (zh) | 人cd3结合抗体 | |
RU2722788C2 (ru) | Иммуноактивирующая антигенсвязывающая молекула | |
JP2022130393A (ja) | 抗ctla4-抗pd-1二機能性抗体、その医薬組成物および使用 | |
CN112912397A (zh) | 抗cd3抗体及其用途 | |
US11655295B2 (en) | Anti-LAG-3 antibody and use thereof | |
EP4039704A1 (en) | Anti-pd-1 antibody and use thereof | |
JP2023525827A (ja) | 抗cd73抗体およびその使用 | |
KR20230012000A (ko) | 항체 약물 컨쥬게이트, 이의 제조 방법 및 이의 용도 | |
WO2022171080A1 (zh) | 抗cd112r抗体及其用途 | |
WO2019242619A1 (zh) | 全人源的抗lag-3抗体及其应用 | |
CN112566937A (zh) | 对cd3特异性的抗体及其用途 | |
CN115812081A (zh) | 抗ctla-4抗体及其用途 | |
CN115715297A (zh) | 抗flt3抗体和组合物 | |
KR20230074192A (ko) | 인간 cd3 엡실론에 결합하는 신규의 인간 항체 | |
WO2023054421A1 (ja) | がんの治療に用いるための細胞傷害誘導治療剤 | |
CN116925222A (zh) | 抗pvrig抗体、其药物组合物及用途 | |
WO2024094003A1 (zh) | 抗ccr8的抗体及其用途 | |
WO2022068809A1 (zh) | 抗cd3抗体以及其用途 | |
JP2024508597A (ja) | Ror1結合タンパク質及びその用途 | |
TW202334215A (zh) | 靶向cldn18.2之抗體、雙特異性抗體及其應用 | |
JP2023050167A (ja) | がんの治療に用いるための細胞傷害誘導治療剤 | |
TW202246340A (zh) | 抗ctla-4抗體及其應用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230911 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230911 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240903 |