JP2009022247A - 培養容器及び培養組織回収方法 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞シートを移植用の支持体に容易に載置できる培養容器を提供する。
【解決手段】培養容器１は、一体的に形成された基底板２と側板３を有する。基底板２の上面２ａには培養板４が載置されている。培養板４の上面には培養面４ａが形成されている。培養面４ａは温度応答性を有する。細胞シートは培養面４ａ上にて培養される。細胞シートが培養されたら、細胞シートを培養板４とともに取り出し、細胞シートの上面を支持体Ｕに貼り付ける。続いて、温度を低下させて細胞シートと培養面４ａとの接着力を低下させることにより細胞シートを支持体に移す。
【選択図】図１

Description

この発明は、医学、生物学、生化学等の分野において組織の培養に用いられる培養容器、及び、それにより培養された組織の回収方法に関する。

培養容器は、生体組織から採取された細胞、細菌、カビ等の各種組織の培養に広く用いられている。代表的な培養容器としてペトリ皿（Petri Dish）がある。ペトリ皿は、組織が培養される面（培養面）を有する底板と、培養面を取り囲むように底板の周端に形成された側壁とを有する。底板は円盤状に成形されたものが多い。

ペトリ皿は、ポリスチレン（polystyrene）等の高分子素材からなり、射出成形法等の加工法により成形される。また、電離放射線を照射して高分子の結合を分断することにより、培養面の構造の方向性を除去したペトリ皿が普及している。更に、薬剤等を用いて培養面をコーティングすることにより、培養面に機能を持たせたペトリ皿も開発されている（たとえば特許文献１、２を参照）。

ペトリ皿で組織（特に細胞）を培養する場合、その培養工程はもちろん、培養された組織をペトリ皿から回収する工程も次のような理由から重要である。

培養中の細胞は、細胞外マトリクス（extracellular matrix）と呼ばれる結合組織を細胞膜外に形成する。細胞外マトリクスは、接着タンパクを分泌する。この接着タンパクは細胞同士を接着し、それによりシート状に増殖した細胞組織（細胞シート）が得られる。

また、接着タンパクは、細胞と培養面を接着するようにも作用する。したがって、細胞シートを回収する際には、細胞と培養面との接着を解除する必要がある。そのために、従来では接着タンパクを分解する酵素を培養液中に添加していた。

しかし、この分解酵素は細胞間の接着タンパクをも分解するため、細胞シートを形成する細胞がバラバラに分離してしまう。そのため、細胞が懸濁した状態の培養液を遠心分離器にかけるなどして細胞を回収していた。

一方、培養された細胞シートをシート形状のまま使用したいとの要望が従来からあった。しかし、上記のような以前の培養手法ではこの要望に応えることはできなかった。

近年、この状況を打開する技術が開発された。それは、ペトリ皿の培養面に温度応答性を持たせるものである（たとえば特許文献１を参照）。温度応答性とは、培養される組織に対する接着力が温度に応じて変化する性質である。

温度応答性を持つ培養面は、たとえば次のようにして形成される。まず、スピンコート等の手法により、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（ＩＰＡＡｍ）液を培養面に均一の厚さに塗布する。次に、電子線を照射し、ＩＰＡＡｍと培養面との間に共有結合を生じさせる。続いて、共有結合を形成しなかったＩＰＡＡｍを高圧洗浄で除去する。最後に、滅菌処理を施す。

なお、この方法では電子線が照射された部分のみに共有結合が形成されることから、電子線の照射範囲を制御することで、任意形状の温度応答性表面を形成することが可能である。電子線の照射範囲を制御する方法としては、たとえば遮蔽マスクを用いる方法や、電子線を走査する方法などがある。

このようにして温度応答性が付与された培養面は、培養時の温度である３７度では接着タンパクと強く結合する。それにより、培養された細胞シートは培養面に接着している。

細胞シートを回収する際には、ペトリ皿を冷水に浸けるなどして温度を２０度程度まで下げる。すると、培養面上のＩＰＡＡｍの分子形状が変化して接着タンパクとの結合が失われ、細胞が培養面から分離される。このとき、細胞間の接着タンパクは分解されないため、細胞同士は接着状態を保持している。したがって、ペトリ皿から細胞シートをそのまま回収できる。

なお、細胞シートは非常に薄く、ペトリ皿から剥離する際に丸まったり損傷したりし易い。そのため、実際の剥離作業においては、一般に、細胞シートの上面に紙を付着させ、この状態で温度を２０度程度まで低下させる。そして、紙と細胞シートとを一体的にペトリ皿から回収するようになっている。

ペトリ皿から回収された細胞シートは、たとえば移植用の支持体に載置される。支持体は、たとえばプラスティックや金属等の剛性を有する材料からなる。細胞シートを支持体に載置する作業は、次のようにして行われる。まず、細胞シートに付着した紙の反対の面を支持体の表面に接触させる。紙は培養液を含んでいるので、その表面張力により紙が支持体に貼り付く。次に、細胞シートと支持体との間に位置する紙を慎重に引き抜いて、細胞シートを支持体に接触させる。

このとき、細胞シートとペトリ皿とを結合していた細胞外マトリクス（接着タンパク）は、支持体との接触面の反対側の面に位置している。すなわち、支持体に載置された細胞シートの細胞外マトリクスは、露出した状態となっている。

細胞シートを移植する際には、細胞外マトリクス側の面を生体組織に接触させる。そうすることで、細胞外マトリクスから分泌される接着タンパクの作用により、細胞シートが生体組織に速やかに接着する。

特開２００６−２９６７１９号公報 特開２００６−３２５５３２号公報

しかしながら、上記のような紙を用いた作業は手間が掛かる上、無菌状態で行うことが難しかった。更には、細胞シートが丸まってしまうなどの失敗が生じ易く、長時間掛けて培養した細胞シートが無駄になることもあった。

これらの事情を勘案すると、紙を使わずに、細胞シートをペトリ皿から直接に支持体に貼り付けられれば好適である。しかし、従来のペトリ皿等の培養容器では、側壁が邪魔になり、そのような作業工程を実現することは不可能である。

なお、側壁が邪魔になりにくい大型のペトリ皿を用いることも考えられるが、次のような新たな問題が生じてしまう。

第１に、培養中に汚染（雑菌等の繁殖、不潔物の接触、培養液への異常成分の混入など）が生じた場合に、大きなサイズの細胞シート全体を破棄しなければならない。また、ペトリ皿のサイズが大きくなるほどに汚染のリスクも増大すると考えられる。

第２に、培養に際しては、培養面の単位面積あたり所定個数の細胞を播種する必要があるので、大型のペトリ皿を用いる場合には、種となる細胞を多量に用意しなければならない。

第３に、大型の細胞シートが形成されると、これを必要な大きさに切り分ける必要が生じる。細胞シートを切る作業は、無菌状態で行うことが難しい。また、細胞シートが丸まってしまうなどの失敗も生じ易い。

また、従来のペトリ皿は、円形の培養面を有しているので、一般に円形の細胞シートが培養される。しかし、帯状等の好適な形状の細胞シートを用いるのが便利なことが多い。円形の細胞シートから帯状等の細胞シートを作成するには、円形の細胞シートを切断する作業が必要であり、汚染や失敗のリスクが増大してしまう。

なお、帯状の細胞シートを作成するために、表面が矩形状等の底板を有するペトリ皿を用いることも考えられる。しかし、角の部分に細胞が付着し易く、細胞シートの生長に偏りが生じ、細胞シートの均一性が失われてしまう。

また、表面が円形の底板上に帯状の培養面（細胞が付着する面）が形成されたペトリ皿を用いることも考えられる。しかし、播種する細胞の数は底板の表面の面積に比例し、また、回収できる細胞シートは培養面上に形成された部分だけであるので、培養面以外の領域に播種された細胞が無駄になる。なお、円の内部に含まれる長方形の面積は、円の面積よりもかなり小さくなることを考慮すると、播種された細胞のうちの半数かそれ以上が無駄になってしまう。

なお、以上ではペトリ皿の場合について詳しく説明したが、組織の培養に用いられる培養容器一般においても同様の問題が生じる。

この発明は、以上のような問題を解決するためになされたもので、培養された細胞シートを移植用の支持体に容易に載置することが可能な培養容器及び培養組織回収方法を提供することを目的とする。

また、この発明は、好適な形状の細胞シートを容易に作成することが可能な培養容器及び培養組織回収方法を提供することを他の目的とする。

上記目的を達成するために、請求項１に記載の発明は、組織が培養される培養面を有する底板と、前記培養面を取り囲むように前記底板の周縁に沿って形成された側板とを備える培養容器であって、前記培養面を含む前記底板の一部又は全部とその他の部分とが分離可能とされていることを特徴とする。

また、請求項３に記載の発明は、前記底板が、円盤状に形成され、かつ、互いの底辺を向かい合わせて配置された２つの略台形状の培養面を有することを特徴とする。

また、請求項３０に記載の発明は、組織が培養される培養面を有する底板と前記培養面を取り囲むように前記底板の周縁に沿って形成された側板とを有する培養容器によって培養された組織を回収する方法であって、前記培養面を含む前記底板の一部又は全部とその他の部分とを分離するステップと、前記分離後の前記培養面から培養された組織を回収するステップとを含んでいることを特徴とする。

請求項１に記載の発明に係る培養容器によれば、培養面を含む底板の一部又は全部とその他の部分とが分離可能に構成されているので、培養面上に生成された細胞シートを底板の一部又は全部とともに取り出し、そのまま移植用の支持体に細胞シートを移すことができる。したがって、培養された細胞シートを移植用の支持体に容易に載置することが可能である。

また、請求項３に記載の発明に係る培養容器によれば、底板が、円盤状に形成され、かつ、互いの底辺を向かい合わせて配置された２つの略台形状の培養面を有するので、２つの略台形状の細胞シートを生成することができる。これらの細胞シートを適宜に並べることにより、帯状等の好適な形状の細胞シートを作成することが可能である。

また、請求項３０に記載の発明に係る培養組織回収方法によれば、培養面を含む底板の一部又は全部とその他の部分とを分離し、分離後の培養面から培養された組織を回収することができるので、培養面上に生成された細胞シートを底板の一部又は全部とともに取り出し、そのまま移植用の支持体に細胞シートを移すことができる。したがって、培養された細胞シートを移植用の支持体に容易に載置することが可能である。

この発明に係る培養容器及び培養組織回収方法について、図面を参照しながら詳細に説明する。

〈培養容器〉
培養容器は、たとえば生体に移植される細胞の培養などに使用される。以下、培養容器の様々な具体例を説明する。なお、これらの具体例に示す技術思想を適宜に組み合わせた培養容器を作成することが可能である。

［第１の具体例］
培養容器の第１の具体例を図１に示す。図１（Ａ）は、培養容器１の側方断面図である。図１（Ｂ）は、培養容器１の上面図である。以下、特に指摘しない限り、図１（Ａ）における上方を「上」と称し、下方を「下」と称する。

培養容器１は基底板２と側板３を有する。基底板２と側板３は、それぞれ、たとえばポリスチレン等の任意の素材により形成される。基底板２と側板３は一体的に形成されている。基底板２は円盤状である。側板３は、基底板２のエッジ部分（周縁）から上方に延びる円筒状の板として形成されている。

このように、培養容器１は、上方が開放され、下方に基底板２を有する扁平な円筒状の容器である。なお、培養容器１は、上方の開放部分を覆う蓋（図示せず）とともに用いられることが多い。培養容器１は、基底板２の下面２ｂをテーブルＴ上に接触させるように配置される（図２参照）。培養組織に埃や菌等が付着することを避けるときには、上記の蓋が用いられる。

基底板２の上面２ａには培養板４が載置される。培養板４は、たとえばポリスチレン等の任意の素材により形成される。なお、培養板４は、たとえば組織の生長状態を顕微鏡で観察するために、光を透過する素材で形成されることが望ましい。培養板４は円盤状である。基底板２と培養板４は、この発明の「底板」の一例である。

培養板４の上面には培養面４ａが形成されている。培養面４ａは、たとえば、培養板４の上面に親和性変化素材を定着することで形成される。

親和性変更素材とは、培養される組織との親和性（細胞親和性；培養される細胞との接着力の度合い）が外部からの作用によって変化する素材を意味する。親和性変更素材としては、細胞培養時の環境下において細胞親和性の高いものが用いられる。親和性変更素材の例としては、温度の変化に応じて親和性が変化する素材（温度応答性素材）や、所定波長の光を受けたときに親和性が変化する素材（光応答性素材）などがある。温度応答性素材としては、たとえば上記特許文献１や特開２００６−８９７５号公報に記載されたものがある。また、光応答性素材としては、たとえば特開２００５−２１０９３６号公報や特開２００６−８９７５号公報に記載されたものがある。なお、温度の変化や光の照射以外の外部からの作用によって細胞親和性が変化する素材を用いることも可能である。

培養面４ａは、図１（Ｂ）に示すように、培養板４の上面のエッジ部分を除いて形成される。これは次のような理由による。エッジ部分にも培養面を形成した場合、エッジ部分にも細胞が増殖して接着することがある。これ自体には問題は無いが、もし細胞が基底板２にまで増殖すると、培養板４を基底板２から取り外す際に（後述）、細胞シートが損傷を受けるおそれが生じる。培養板４のエッジ部分のマージンは、このような事態を防止するために有効である。なお、このマージンの幅は、たとえば０．５〜１．０ｍｍ程度ないしはそれ以上であることが望ましい。

このような培養容器１の使用例を説明する。ここでは、培養面４ａを形成する親和性変更素材は、３７度程度の温度で細胞親和性が高く、２０度程度の温度で細胞親和性が低い温度応答性素材であるとする。

まず、培養面４ａ上に細胞を播種する。次に、図２に示すように、培養容器１内に培養液Ｌを注ぎ入れる。培養液Ｌは、細胞面４ａが液中に浸る量だけ使用される。以上の準備の後に培養が開始される。このとき、培養される細胞の環境温度が３７度程度になるように温度が調整される。温度の調整は、培養環境の調整を行うための公知の培養装置により行う（たとえば特開２００６−１６６７４７号公報を参照）。

このような環境下で細胞を培養することにより細胞シートＳが生成される。細胞シートＳは、温度応答性素材の細胞親和性により培養面４ａに接着している。

細胞シートＳが生成されたら、培養板４を基底板２から取り外す。続いて、図３に示すように、培養板４上に生成された細胞シートＳの上面を移植用の支持体Ｕに密着させる。この状態で、温度を２０度程度まで低下させる。それにより温度応答性素材の細胞親和性が低下するので、細胞シートＳを培養板４から容易に剥離させることができる（図４を参照）。以上で、培養板４から支持体Ｕに細胞シートＳを移す作業は終了となる。

支持体Ｕに密着している細胞シートＳは、培養面４ａに接着されていた面、つまり細胞外マトリクス（接着タンパク）が存在する面が開放されている。この面（移植面）は、図４における下方向の面である。

次に、支持体Ｕに密着している細胞シートＳを生体組織に移植する。この作業は、図５に示すように、支持体Ｕに密着している細胞シートＳの移植面を生体組織Ｂ（患部等）に密着させることにより行う。支持体Ｕは、適宜なタイミングで細胞シートＳから剥離される。

このように、細胞シートＳは、細胞外マトリクスが存在する移植面が生体組織Ｂに密着するように移植される。それにより、細胞外マトリクスから分泌される接着タンパクが、細胞シートＳと生体組織Ｂとを接着させるように作用し、生体組織Ｂに対する細胞シートＳの定着を促す。

以上のような培養容器１によれば、培養面４ａを含む底板の一部（培養板４）と、その他の部分（基底板２及び側板３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートＳを培養板４とともに回収し、細胞シートＳを支持体Ｕに容易に載置することができる。

［第２の具体例］
培養容器の第２の具体例を図６に示す。図６は、培養容器１０の側方断面図である。培養容器１０は、第１の具体例の培養容器１と同様に基底板１２と側板１３を有する。基底板１２と側板１３は一体的に形成されている。

基底板１２の上面１２ａには培養板１４が載置される。培養板１４は、細胞の培養時に使用される培養液よりも大きな比重を有する。そのために、培養板１４は、たとえば、ガラス等の比重の大きな素材からなる板状部材１４ａの表面を、ポリスチレン等の任意の素材でコーティングして形成される。

なお、板状部材１４ａの材質は、使用される培養液の比重に応じて決定することができる。一般に、培養液の比重は生理食塩水と同程度である。

培養板１４を構成する各素材は、組織の生長状態を顕微鏡で観察するために、光を透過する素材で形成されることが望ましい。

培養板１４の上面には、組織の培養領域となる培養面が形成されている。培養面は、たとえば、培養板１４の上面に親和性変化素材を定着することで形成される。

板状部材１４ａは、この発明の「固定部材」の一例である。また、基底板１２と培養板１４は、この発明の「底板」の一例である。

このような培養容器１０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板１４）と、その他の部分（基底板１２及び側板１３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板１４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器１０は、培養板１４の比重を培養液の比重よりも大きくする板状部材１４ａを備えている。それにより、培養容器１０を移動する際や、培養液を交換する際に、培養板１４が動いたり浮かび上がったりして細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。特に、特に培養初期には、細胞シートが薄いために損傷を受けやすいが、培養容器１０によれば、細胞シートに損傷を与えずに培養液の交換等を行うことができる。

［第３の具体例］
培養容器の第３の具体例を図７に示す。図７は、培養容器２０の側方断面図である。培養容器２０は、第１の具体例の培養容器１と同様に基底板２２と側板２３を有する。基底板２２と側板２３は一体的に形成されている。

基底板２２の上面２２ａには培養板２４が載置される。培養板２４は、細胞の培養時に使用される培養液よりも大きな比重を有する。そのために、培養板２４は、そのエッジ部分におもり２４ａが埋め込まれている。培養板２４のそれ以外の部分は、ポリスチレン等の任意の素材からなる。

おもり２４ａは、たとえば金属等の比重の大きな素材により形成されている。おもり１４ａの材質は、使用される培養液の比重に応じて決定できる。おもり２４ａは、培養板２４の中央領域を取り囲むように設けられていてもよいし、複数のおもり２４ａを分散させて配置してもよい。後者の場合、培養板２４を安定させるために、複数のおもり２４ａを等間隔で配置させることが望ましい。

細胞シートを顕微鏡で観察するために、少なくともおもり２４ａを除く領域は、透明な素材で形成されることが望ましい。上記のように、おもり２４ａは、培養板２４のエッジ部分に設けられる。したがって、不透明な素材によりおもり２４ａが形成されたとしても、細胞シートの観察の妨げになりにくい。

培養板２４の上面には、組織の培養領域となる培養面が形成されている。培養面は、たとえば、培養板２４の上面に親和性変化素材を定着することで形成される。

おもり２４ａは、この発明の「固定部材」の一例である。また、基底板２２と培養板２４は、この発明の「底板」の一例である。

このような培養容器２０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板２４）と、その他の部分（基底板２２及び側板２３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板２４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器２０は、培養板２４の比重を培養液の比重よりも大きくするおもり２４ａを備えている。それにより、培養容器２０を移動する際や、培養液を交換する際に、培養板２４が動いたり浮かび上がったりして細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。

［第４の具体例］
培養容器の第４の具体例を図８に示す。図８は、培養容器３０の側方断面図である。培養容器３０は、第１の具体例の培養容器１と同様に基底板３２と側板３３を有する。基底板３２と側板３３は一体的に形成されている。

基底板３２の上面３２ａには培養板３４が載置される。培養板３４は、ポリスチレン等の任意の素材により形成される。培養板３４のエッジ部分には、たとえば鉄等の強磁性体の素材からなる強磁性部材３４ａが埋め込まれている。なお、強磁性部材３４ａは、第３の具体例のようにおもりとしても作用するものであってもよい。

細胞シートを顕微鏡で観察するために、少なくとも強磁性部材３４ａを除く領域は、透明な素材で形成されることが望ましい。

培養板３４の上面には、組織の培養領域となる培養面が形成されている。培養面は、たとえば、培養板３４の上面に親和性変化素材を定着することで形成される。

培養容器３０は、図８に示すように、テーブルＴ上に配置された磁石部材Ｍ上に載置される。磁石部材Ｍは、たとえばシート状に成形されたゴム磁石である。培養容器３０を磁石部材Ｍ上に載置すると、磁石部材Ｍは強磁性部材３４ａに対して引力を及ぼす。この引力の強さは、培養板３４の質量と、培養液中で培養板３４に左右する浮力とを考慮し、培養液中の培養板３４が移動したり浮き上がったりしない程度に設定できる。

強磁性部材３４ａは、この発明の「固定部材」の一例である。また、基底板３２と培養板３４は、この発明の「底板」の一例である。

このような培養容器３０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板３４）と、その他の部分（基底板３２及び側板３３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板３４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器３０は、磁石部材Ｍ上に載置することで、強磁性部材３４ａが磁石部材Ｍに引き付けられ、それにより培養板３４が基底板３２に対して分離可能に固定される。したがって、培養容器３０を移動する際や、培養液を交換する際に、培養板３４が動いたり浮かび上がったりして細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。

なお、培養板３４を基底板３２から分離する際には、培養容器３０を磁石部材Ｍから遠ざければよい。また、基底板３２を抑えつつ、磁石部材Ｍの引力を超える力で培養板３４を引き出すことで、培養板３４を基底板３２から分離してもよい。

培養容器３０は、テーブルＴ上に配置された磁石部材Ｍ上に載置されて使用されるが、基底板に磁石部材を埋め込んでも同様の効果を得ることが可能である。

また、培養板に磁石を埋め込んでもよい。この場合、鉄等の強磁性体からなるテーブル上に培養容器を載置して細胞を培養する。また、テーブル上に鉄板等の強磁性部材を配置し、この強磁性部材上に培養容器を載置してもよい。また、基底板に強磁性部材を埋め込んでもよい。このような培養容器によっても、培養容器３０と同様の効果が得られる。

［第５の具体例］
培養容器の第５の具体例を図９に示す。図９は、培養容器４０の側方断面図である。培養容器４０は、第１の具体例の培養容器１と同様に基底板４２と側板４３を有する。基底板４２と側板４３は一体的に形成されている。

基底板４２の上面４２ａには培養板４４が載置される。上面４２ａのたとえば中央領域には凸部４２ｂが形成されている。凸部４２ｂは、たとえば、上方に向かうに連れて径が増大する形状を有する。培養板４４の下面のたとえば中央領域には凹部４４ａが形成されている。凹部４４ａは、たとえば、上方に向かうに連れて径が増大する形状を有する。

凸部４２ｂと凹部４４ａは同一の形状（たとえば円形）に成形されている。また、凸部４２ｂの上面（径が最大の部分）の径は、凹部４４ａの開口径よりも僅かに小さく設計される。

基底板４２（凸部４２ｂ）及び／又は培養板４４（凹部４４ａ）は、変形可能な弾性部材、たとえばポリスチレン等により形成されている。このような凸部４２ｂと凹部４４ａとの組み合わせにより、基底板４２の一部と培養板４４の一部とが分離可能に係合される。すなわち、基底板４２や側板４３を抑えつつ培養板４４を引き上げることで、凸部４２ｂ及び／又は凹部４４ａが変形し、培養板４４を基底板４２から取り外すことができる。逆に、凸部４２ａと凹部４４の位置を合わせ、培養板４４を基底板４２に押さえつけることで、基底板４２に培養板４４を装着することができる。

凸部４２ｂと凹部４４ａは、この発明の「係合機構」の一例である。また、基底板４２と培養板４４は、この発明の「底板」の一例である。

培養板４４の上面には、組織の培養領域となる培養面が形成されている。培養面は、たとえば、培養板４４の上面に親和性変化素材を定着することで形成される。

このような培養容器４０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板４４）と、その他の部分（基底板４２及び側板４３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板４４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器４０によれば、凸部４２ｂと凹部４４ａにより培養板４４が基底板４２に固定されるので、培養容器４０を移動する際や、培養液を交換する際に、培養板４４が動いたり浮かび上がったりして細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。

培養容器４０では、基底板４２の凸部４２ｂと培養板４４の凹部４４ａとが係合するように構成されているが、凹凸が逆の係合機構を採用することも可能である。

たとえば、図１０に示す培養容器５０は、基底板５２の上面５２ａに凹部５２ｂを有し、培養板５４の下面に凸部５４ａを有する。基底板５２は側板５３と一体的に形成されている。更に、基底板５２（凹部５２ｂ）及び／又は培養板５４（凸部５４ａ）は、ポリスチレン等の変形可能な弾性素材によって形成される。このような培養容器５０によっても、培養容器４０と同様の効果が得られる。

［第６の具体例］
培養容器の第６の具体例を図１１に示す。図１１は、培養容器６０の側方断面図である。培養容器６０は、第１の具体例の培養容器１と同様に基底板６２と側板６３を有する。基底板６２と側板６３は一体的に形成されている。基底板６２の上面６２ａには培養板６４が載置される。

側板６３の内面６３ａには突出部６３ｂが設けられている。突出部６３ｂは、側板６３と一体的に形成されていてもよいし、内面６３ａに接合されていてもよい。突出部６３ｂは、基底板６２の上面６２ａから、培養板６４の厚さよりも僅かに上方に設けられることが望ましい。突出部６３ｂの先端は、培養板６４の上面（培養面側）よりも上方に位置している。突出部６３ｂは、内面６３ａを一周に亘って設けられてもよい。また、複数の突出部６３ａが所定間隔（たとえば等間隔）を介して設けられてもよい。

側板６３（突出部６３ｂ）及び／又は培養板６４は、ポリスチレン等の変形可能な弾性部材により形成される。それにより、培養板６４は基底板６２に対して分離可能とされる。すなわち、側板６３を抑えつつ培養板６４を引き上げることで、突出部６３ｂ及び／又は培養板６４が変形し、培養板６４を基底板６２から分離することができる。逆に、培養板６４のエッジ部分を突出部６３ｂ上に配置し、培養板６４を基底板６２に向けて押し込むことで、突出部６３ｂ及び／又は培養板６４が変形し、突出部６３ｂの下方位置に培養板６４を装着することができる。

突出部６３ｂは、この発明の「突出部材」の一例である。また、基底板６２と培養板６４は、この発明の「底板」の一例である。

培養板６４の上面には、組織の培養領域となる培養面が形成されている。培養面は、たとえば、培養板６４の上面に親和性変化素材を定着することで形成される。

このような培養容器６０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板６４）と、その他の部分（基底板６２及び側板６３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板６４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器６０によれば、突出部６３ｂが培養板６４の移動（特に上方への移動）を制限するように作用するので、培養容器６０を移動する際や、培養液を交換する際に、培養板６４が動いたり浮かび上がったりして細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。

［第７の具体例］
基底板と培養板とを接合することにより、基底板に対して培養板を分離可能に固定することが可能である。そのような培養容器の具体例を図１２に示す。図１２は、培養容器７０の拡大側方断面図である。なお、図１２では側板は省略されている。培養容器７０の基底板７２は、側板と一体的に形成されている。

基底板７２の上面には、粘着材７５を介して培養板７４が載置される。粘着材７５は、たとえば基底板７２の上面に塗布される。その上に培養板７４を配置することにより当該構成が実現される。粘着材７５は、たとえば３７度程度で粘着性が高く、それより低い所定温度で粘着性が低下する素材（つまり温度応答性素材）からなる。粘着材７５は、この発明の「接合部材」の一例であり、少なくとも培養時に基底板７２と培養板７４とを接合する。

このような培養容器７０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板７４）と、その他の部分（基底板７２及び側板）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板７４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器７０によれば、粘着材７５が基底板７２と培養板７４を接合するように作用するので、培養容器７０を移動する際や、培養液を交換する際に、培養板７４が動いたり浮かび上がったりして細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。

接合部材を有する培養容器の他の具体例を図１３に示す。培養容器８０の基底板８２は、側板（図示せず）と一体的に形成されている。基底板８２の上面には、親和性変化素材（温度応答性素材、光応答性素材等）からなる接合層８５が設けられている。また、培養板８４の下面にも同様の親和性変化素材からなる接合層８６が設けられている。各接合層８５、８６は、たとえば当該面に塗布される。

接合層８５、８６の間には接着タンパク層８７が設けられている。接着タンパク層８７は、生体細胞の細胞外マトリクスから分泌された接着タンパクからなる。また、人工的に合成された接着タンパクを用いて接着タンパク層８７を形成してもよい。

各接合層８５、８６と接着タンパク層８７は、たとえば、３７度程度の温度で強く接合し、２０度程度の温度で接合力が弱くなる。接合層８５、８６及び接着タンパク層８７は、この発明の「接合部材」の一例である。

このような培養容器８０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板８４）と、その他の部分（基底板８２及び側板）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板８４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器８０によれば、接合部材が基底板８２と培養板８４を接合するように作用するので、培養容器８０を移動する際や、培養液を交換する際に、培養板８４が動いたり浮かび上がったりして細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。

更に、培養容器８０の接合部材は、外部からの作用（温度変化、光の照射等）によって接合力が変化するので、細胞シートを培養容器８０から容易に回収できる。

［第８の具体例］
培養容器の第８の具体例を図１４に示す。図１４は、培養容器９０の側方断面図である。培養容器９０は、第１の具体例の培養容器１と同様に基底板９２と側板９３を有する。基底板９２と側板９３は一体的に形成されている。基底板９２の上面９２ａには培養板９４が載置される。

基底板９２の上面９２ａには凹部９２ｂが形成されている。また、培養板９４の下面には凸部９４ａが形成されている。凹部９２ｂと凸部９４ａは、培養板９４を基底板９２上に載置したときに、互いに係合する位置に形成されている。

凹部９２ｂと凸部９４ａは、基底板９２に対する培養板９４の側壁９３の方向（水平方向）への移動を制限するように作用する。凹部９２ｂと凸部９４ａは、この発明の「移動制限手段」の一例である。

このような培養容器９０によれば、培養面を含む底板の一部（培養板９４）と、その他の部分（基底板９２及び側板９３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板９４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器９０によれば、移動制限手段が培養板９４の水平方向への移動を制限するので、特に培養時に培養容器９０が水平方向に移動して細胞シートに損傷を与える事態を防止できる。

なお、培養容器９０においては、基底板９２に凹部９２ｂが設けられ、培養板９４に凸部９４ａが設けられているが、これとは逆に、基底板に凸部が設けられ、培養板に凹部が設けられた構成を適用することも可能である。

［第９の具体例］
培養容器の第９の具体例を図１５に示す。図１５は、培養容器１００の側方断面図である。培養容器１００は、第１の具体例の培養容器１と同様に基底板１０２と側板１０３を有する。基底板１０２と側板１０３は一体的に形成されている。基底板１０２の上面１０２ａには培養板１０４が載置される。

第８の具体例と同様に、基底板１０２の上面１０２ａには凹部１０２ｂが形成され、培養板１０４の下面には凸部１０４ａが形成されている。

培養板１０４のエッジ部分には、所定の器具１０９と係合する係合部１０４ｂが形成されている。器具１０９としては、たとえば鉤付きピンセットが用いられる。鉤付きピンセットの先端には鉤部が設けられている。係合部１０４ａは、この鉤部と係合する切り欠きである。なお、培養板１０４の縁端と側板１０３の内面との間には、器具１０９の先端部を挿入可能な間隙が設けられている。ユーザは、この間隙に器具１０９の先端を挿入して係合部１０４ｂに係合させ、器具１０９とともに培養板１０４を引き上げることにより、培養板１０４を取り出すことができる。

このような培養容器１００によれば、培養面を含む底板の一部（培養板１０４）と、その他の部分（基底板１０２及び側板１０３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを培養板１０４とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

また、培養容器１００によれば、係合部１０４ｂを備えているので、器具１０９を用いて容易に培養板１０４を取り出せる。

なお、培養容器１００においては培養板１０４に一つの係合部が設けられているが、二つ以上の係合部を設けることも可能である。また、培養板を取り出すための器具の形態は任意である。このとき、器具に応じた形態の係合部が培養板に設けられる。

［第１０の具体例］
培養容器の第１０の具体例を図１６〜図１８に示す。図１６は培養容器１１０の上面図、図１７は側方断面図、図１８は斜視図である。

培養容器１１０は、底板１１２と側板１１３を有する。底板１１２や側板１１３は、ポリスチレン等の任意の素材で形成される。底板１１２と側板１１３は一体的に形成されている。前述の具体例では、底板は複数（２枚）の板状部材により構成されるが、この具体例の培養容器１１０では、底板１１２は１枚の板状部材により構成される。この板状部材（底板１１２）は、後述のように分割可能に形成されている。

底板１１２の上面１１２ａには、円形状の培養面１１２Ａが設けられている。円形状の培養面１１２Ａは、その中心位置が上面１１２ａの中心位置に一致するように形成されている。培養面１１２Ａは、たとえば、上面１１２ａに親和性変化素材を定着することにより形成される。

底板１１２の下面１１２ｂには、底板１１２の径方向に沿って複数の溝１１２ｃが形成されている。すなわち、複数の溝１１２ｃは放射状に形成されている。また、下面１１２ｂには、培養面１１２Ａのエッジ部分に沿った溝１１２ｄが形成されている。溝１１２ｄは、たとえば、培養面１１２Ａのエッジよりも僅かに外側に形成される。溝１１２ｃは、培養面１１２Ａの裏面には形成されず、溝１１２ｄと底板１１２のエッジ部分とを結ぶように形成される。

また、側板１１３の外面には、上下方向（上面１１２ａに直交する方向）に沿って複数の溝１１３ａが形成されている。溝１１３ａは、径方向の溝１１２ｃと同じ個数だけ設けられている。溝１１２ｃと溝１１３ａは、底板１１２と側板１１３の境界位置で連結している。

各溝１１２ｃ、１１２ｄ、１１３ａは、底板１１２や側板１１３を分割するためのものである。そのために、各溝１１２ｃ、１１２ｄ、１１３ａは、たとえばＶ字状に形成される。また、各溝１１２ｃ、１１２ｄ、１１３ａは、たとえば、最深部における肉厚が０．１〜０．５ｍｍ程度となるように形成される。なお、各溝１１２ｃ、１１２ｄ、１１３ａの形状や深さは、底板１１２や側板１１３の材質や厚さや分割態様に応じて適宜に決定することができる。

培養容器１１０は、培養面１１２Ａ上に細胞シートが形成された後に、溝１１２ｃ、１１２ｄ、１１３ａに沿って複数に分割される。図１８は、分割後の培養容器１１０の形態を表している。分割作業は、たとえばペンチ等の工具を用いて行うことができる。

このような培養容器１１０によれば、培養面１１２Ａを含む底板１１２の一部（底板１１２の中央部分）と、その他の部分（底板１１２の周辺領域及び側板１１３）とが分離可能に構成されているので、培養された細胞シートを底板１１２の中央部分とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

なお、底板１１２や側板１１３の材質がポリスチレンである場合、事前にＸ線を照射して高分子を切断することにより、底板１１２や側板１１３を溝１１２ｃ、１１２ｄ、１１３ａに沿って容易に分割することができる。また、Ｘ線の照射により分子の方向性を除去することにより、溝１１２ｃ、１１２ｄ、１１３ａに沿って綺麗に分割でき、細かい破片が出ることも少なくなる。したがって、培養面１１２Ａを含む底板１１２の中央部分を容易に取り出すことができ、細胞シートを損傷する可能性も低い。

［第１１の具体例］
培養容器の第１１の具体例を図１９〜図２１に示す。図１９は培養容器１２０の側方断面図、図２０は底板１２２と側板１２３の連結部分の拡大側方断面図、図２１は底板１２２の斜視図である。

培養容器１２０は、底板１２２と側板１２３を有する。底板１２２や側板１２３は、ポリスチレン等の任意の素材で形成される。底板１２２と側板１２３は、後述のように分解可能に連結されている。底板１２２は１枚の板状部材により構成される。

底板１２２の上面１２２ａには、図２１に示すように円形状の培養面１２２Ａが設けられている。培養面１２２Ａは、その中心位置が上面１２２ａの中心位置に一致するように形成されている。培養面１２２Ａは、たとえば、上面１２２ａに親和性変化素材を定着することにより形成される。

底板１２２と側板１２３の連結部分には連結部材１２４が設けられている。底板１２２の周端部には、図２０に示すように凹部１２２ｃが形成されている。連結部材１２４は、リング形状の部材であり、凹部１２２ｃに嵌め込まれている。連結部材１２４は、たとえばゴムやシリコン等の摩擦力が大きく伸縮可能な弾性部材により形成される。

側板１２３の下端部分の内面側には、図２０に示すように切り欠き部１２３ａが形成されている。切り欠き部１２３ａの中間位置付近には凹部１２３ｂが形成されている。

連結部材１２４は、側板１２３の凹部１２３に嵌め込まれる。すなわち、凹部１２２ｃと凹部１２３ｂの双方に連結部材１２４を嵌め込むことで、底板１２２と側板１２３とが連結される。連結部材１２４は、この発明の「嵌合部材」の一例である。

連結部材１２４は、前述のように摩擦力の大きな材質で形成されているので、底板１２２と側板１２３は確実に連結される。また、側板１２３を抑えつつ底板１２２を下方に引き抜くことで、培養容器１２０を底板１２２と側板１２３に容易に分解することができる。

このような培養容器１２０によれば、培養面１２２Ａを有する底板１２２と側板１２３とが分解可能に構成されているので、培養された細胞シートを底板１２２とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートを容易に載置することができる。

なお、底板１２２の凹部１２２ｃを側板１２３の凹部１２３ｂよりも深く形成することが望ましい。それにより、連結部材１２４が底板１２２に装着されたままで培養容器１２０を分解でき、連結部材１２４が外れて細胞シートに触れて損傷する事態を防止できる。

［第１２の具体例］
培養容器の第１２の具体例を図２２〜図２４に示す。図２２は培養容器１３０の上面図、図２３と図２４は側方断面図である。

培養容器１３０は、底板１３２と側板１３３を有する。底板１３２や側板１３３は、ポリスチレン等の任意の素材で形成される。底板１３２は１枚の板状部材により構成される。底板１３２の上面１３２ａには、図２２に示すように矩形状の培養面１３２Ａが設けられている。培養面１３２Ａは、その中央位置が上面１３２ａの中央位置に一致するように形成されている。培養面１３２Ａと側板１３３との間には、たとえば１ｍｍ程度のマージンが設けられる。それにより、培養される細胞が側板１３３に到達することを防止できる。培養面１３２Ａは、たとえば、上面１３２ａに親和性変化素材を定着することにより形成される。

底板１３２と側板１３３は、図２３に示すように接着部材１３４により連結される。接着部材１３４は、たとえば、ポリジメチルシロキサンやシリコンゴムのような、滅菌可能な粘着性樹脂からなる。

底板１３２と側板１３３の接合方法の例を説明する。まず、ポリジメチルシロキサンを側板１３３の下端部に塗布し、しばらく放置して固化させる。次に、固化したポリジメチルシロキサンの上から更にポリジメチルシロキサンを塗布する。そして、これを半分程度固化させてから底板１３２に押し当てて底板１３２と側板１３３とを接合する。このような接合方法により、培養液の液漏れが起こらないように底板１３２と側板１３３を連結することができる。

このようにして底板１３２と側板１３３とを接合すれば、接着部材１３４を冷却して接着部材１３４を固化させることにより、底板１３２と側板１３３とを分離できる。接着部材１３４の冷却は、たとえば、底板１３２を冷却手段（天板を冷却可能なテーブル等）の上に載置することで行う。

このような培養容器１３０によれば、培養面１３２Ａを有する底板１３２と側板１３３とが分解可能に構成されているので、培養された細胞シートＳを底板１３２とともに回収し、移植用の支持体に細胞シートＳを容易に載置することができる。特に、接着部材１３４を冷却するだけで、細胞シートＳを容易に回収できる。

［第１３の具体例］
培養容器の第１３の具体例を図２５〜図２７に示す。図２５は培養容器１４０の上面図、図２６と図２７は細胞シートの並べ方を表す図である。

培養容器１４０は、底板と側板１４３を有する。底板や側板１４３は、ポリスチレン等の任意の素材で形成される。底板は１枚の板状部材により構成される。底板及び側板１４３は、たとえば、前述した具体例のいずれかの形態を有する。

底板の上面１４２ａには、図２５に示すように、２つの略台形状の培養面１４２Ａ、１４２Ｂが設けられている。培養面１４２Ａ、１４２Ｂは、互いの底辺（平行な２辺のうちの長い方の辺）を向かい合わせるように配置されている。その中央位置が上面１３２ａの中央位置に一致するように形成されている。このような培養面１４２Ａ、１４２Ｂの形状及び配置は、円形の底板の上面１４２ａの面積を有効利用するためである。すなわち、このような形状及び配置により、一定面積の上面１４２ａで大きな面積の細胞シートを培養することが可能となる。各培養面１４２Ａ、１４２Ｂは、たとえば、上面１４２ａに親和性変化素材を定着することにより形成される。

このような培養面１４２Ａ、１４２Ｂを有する培養容器１４０によれば、略台形状の２つの細胞シートＳＡ、ＳＢが生成される。細胞シートＳＡ、ＳＢは、同じ培養容器１４０で同じ条件（温度や湿度等）で培養されるので、高い均一性を有する。

図２６は細胞シートＳＡ、ＳＢの使用例を表す。細胞シートＳＡ、ＳＢは、このように帯状（長い平行四辺形状）に並べて生体組織に移植することができる。このとき、移植用の支持体上に帯状に並べて載置してから移植してもよいし、細胞シートＳＡ、ＳＢをそれぞれ支持体に載置し、移植部位に帯状に並べて貼り付けてもよい。

なお、細胞シートＳＡ、ＳＢの間の間隙は、移植後の細胞シートＳＡ、ＳＢの増殖により自然に埋まる。また、この間隙は、支持体が変形（湾曲等）した際に、細胞シートに皺が寄ることを防止する作用を奏する。それにより、柔軟性を有する操作性の良い支持体を効果的に使用することが可能となる。

図２７は細胞シートＳＡ、ＳＢの他の使用例を表す。この使用例では、複数の培養容器１４０が使用される。各培養容器１４０から、上記と同様に一組の細胞シートＳＡ、ＳＢが生成される。このようにして生成された複数組の細胞シートＳＡ、ＳＢを図２７のように並べることで、広い範囲の移植部位に対応可能である。なお、移植部位の大きさに応じて、使用する培養容器１４０の個数を決定できる。

［第１４の具体例］
培養容器の第１４の具体例を図２８〜図３０に示す。図２８は培養容器１５０の上面図、図２９は細胞シートの並べ方を表す図、図３０は培養板の上面図である。

培養容器１５０は、基底板と側板１５３を有する。基底板や側板１５３は、ポリスチレン等の任意の素材で形成される。基底板の上面１５２ａには２つの培養板１５４、１５５が載置されている。

培養板１５４、１５５には、それぞれ、略台形状の培養面１５４Ａ、１５５Ａが設けられている。培養面１５４Ａ、１５５Ａが互いの底辺を向かい合わせる状態で、培養板１５４、１５５は上面１５２ａに載置されている。各培養面１５４Ａ、１５５Ａは、たとえば、培養板１５４、１５５に親和性変化素材を定着することにより形成される。

このような培養面１５４Ａ、１５５Ａを有する培養容器１５０によれば、略台形状の２つの細胞シートＳＣ、ＳＤが生成される。細胞シートＳＣ、ＳＤは、同じ培養容器１５０で同じ条件で培養されるので、高い均一性を有する。

細胞シートＳＣ、ＳＤは、それぞれ培養板１５４、１５５とともに取り出され、図２９に示すように帯状に並べて生体組織に移植することができる。このとき、移植用の支持体上に帯状に並べて載置してから移植してもよいし、細胞シートＳＣ、ＳＤをそれぞれ支持体に載置し、移植部位に帯状に並べて貼り付けてもよい。

なお、細胞シートＳＣ、ＳＤの間の間隙は、移植後の細胞シートＳＣ、ＳＤの増殖により自然に埋まる。また、この間隙は、支持体が変形（湾曲等）した際に、細胞シートに皺が寄ることを防止する作用を奏する。それにより、柔軟性を有する操作性の良い支持体を効果的に使用することが可能となる。

また、複数の培養容器１５０を用いて複数組の細胞シートＳＣ、ＳＤを生成し、図２７に示すように並べることにより、広い範囲の移植部位に対応することが可能となる。このとき、移植部位の大きさに応じて、使用する培養容器１５０の個数を決定できる。

培養板１５４、１５５の代わりに、図３０に示す培養板１５６を用いることが可能である。培養板１５６には、略台形状の培養面１５６Ａが設けられている。培養板１５６のエッジ部分（培養面１５６Ａの外側）には、おもり１５６ａ、１５６ｂ、１５６ｃが設けられている。各おもり１５６ａ、１５６ｂ、１５６ｃは、たとえば金属等の比重の大きな素材により形成される。それにより、培養板１５６の比重が培養液の比重よりも大きくなり、培養時に培養板１５６が移動したり浮かび上がったりしないようになっている。

［第１５の具体例］
培養容器の第１５の具体例を図３１、図３２に示す。図３１は培養容器１６０の上面図、図３２は細胞シートの並べ方を表す図である。

培養容器１６０は、底板と側板１６３を有する。底板や側板１６３は、ポリスチレン等の任意の素材で形成される。底板の上面１６２ａには２つの培養面１６４Ａ、１６５Ａが形成されている。

各培養面１６４Ａ、１６５Ａは、それぞれ、略台形状に形成されている。培養面１６４Ａ、１６５Ａは、互いの底辺を向かい合わせるように配置されている。各培養面１６４Ａ、１６５Ａは、たとえば上面１６２ａに親和性変化素材を定着することにより形成される。

底板の下面には、円形上の基底板の径方向に溝１６２ｃが形成されている。また、底板の下面には、培養面１６４Ａ、１６５Ａの僅かに外側に溝１６２ｄが形成されている。更に、底板の下面には、培養面１６４Ａ、１６５Ａの底面の間に、底板を横切るように溝１６２ｅが形成されている。

側板１６３の外面には、上面１６２ａに直交する方向に複数の溝１６３ａが形成されている。各溝１６３ａは、底板と側板１６３との境界位置において、底板の溝１６２ｃ、１６２ｅと連結している。なお、各溝１６２ｃ、１６２ｄ、１６２ｅ、１６３ａは、たとえばＶ字形状に形成されている。また、各溝１６２ｃ、１６２ｄ、１６２ｅ、１６３ａの厚さは適宜に決定できる。

このような培養容器１６０によれば、前述した第１０の具体例と同様に培養容器１６０を溝１６２ｃ、１６２ｄ、１６２ｅ、１６３ａに沿って分割し、培養面１６４Ａを有する底板の一部１６４と、培養面１６５Ａを有する底板の一部１６５を回収することができる。

培養面１６４、１６５には、それぞれ、略台形状の細胞シートＳＥ、ＳＦが生成される。細胞シートＳＥ、ＳＦは、同じ培養容器１６０で同じ条件で培養されるので、高い均一性を有する。

細胞シートＳＥ、ＳＦは、それぞれ底板の一部１６４、１６５とともに回収され、図３２に示すように帯状に並べて生体組織に移植することができる。このとき、移植用の支持体上に帯状に並べて載置してから移植してもよいし、細胞シートＳＥ、ＳＦをそれぞれ支持体に載置し、移植部位に帯状に並べて貼り付けてもよい。

なお、細胞シートＳＥ、ＳＦの間の間隙は、移植後の細胞シートＳＥ、ＳＦの増殖により自然に埋まる。また、この間隙は、支持体が変形（湾曲等）した際に、細胞シートに皺が寄ることを防止する作用を奏する。それにより、柔軟性を有する操作性の良い支持体を効果的に使用することが可能となる。

また、複数の培養容器１６０を用いて複数組の細胞シートＳＥ、ＳＦを生成し、図２７に示すように並べることにより、広い範囲の移植部位に対応することが可能となる。このとき、移植部位の大きさに応じて、使用する培養容器１６０の個数を決定できる。

［変形例］
以上に説明した培養容器の変形例を説明する。

上記の具体例では、培養面の個数は１つ又は２つであるが、３つ以上の培養面を有していてもよい。

たとえば角膜や網膜の移植手術のように、小さな細胞シートを生成する場合に、図３３に示す培養容器１７０を用いることができる。培養容器１７０は、一体的に形成された基底板と側板１７３を有する。基底板の上面１７２ａには、培養板１７４が載置される。培養板１７４には、複数の小さな培養面１７４Ａが設けられている。培養板１７４のエッジ部分には、切り欠き部１７４ａ、１７４ｂが形成されている。切り欠き部１７４ａ、１７４ｂは、第９の具体例と同様に、所定の器具と係合する係合部として作用する。ユーザは、細胞シートが培養された後に、所定の器具を用いて培養板１７４を容易に取り出すことができる。

上記の具体例では、培養面の形状は略台形、円形又は矩形であるが、これら以外の形状の培養面を適宜に形成することが可能である。たとえば、培養面の形状を略平面充填形状にすることができる。平面充填形状とは、平面を埋め尽くす性質を有する図形の形状を意味する。平面充填形状には、たとえば、三角形、四角形、向かい合う３組の辺が平行かつ長さが等しい六角形などがある。また、２種類以上の図形の組み合わせにより平面を充填するものでもよい。このような平面充填形状の培養面を用いれば、平面充填形状の細胞シートを生成することができる。それにより、帯状等の任意形状の細胞シートを適宜に作成することが可能となる。

［培養組織回収方法］
この発明に係る培養組織回収方法について説明する。この培養組織回収方法は、培養された組織（細胞シート）を培養組織から回収する方法である。培養組織は、上記の具体例に示したように、組織が培養される培養面を有する底板と、培養面を取り囲むように底板の周縁に沿って形成された側板とを有する。

まず、培養面を含む底板の一部又は全部とその他の部分とを分離する。分離方法としては、次の２種類がある。第１に、底板が基底板と培養板とを有する場合（つまり複数の板状部材からなる場合）には、培養板を基底板及び側板から分離する。第２に、底板が一枚の板状部材からなる場合には、底板を分割することにより、培養面を含む底板の一部をその他の部分から分離する。

次に、分離後の培養面から培養された細胞シートを回収する。この作業は、培養面上に生成された細胞シートを移植用の支持体に直接に移すことで行う。

このような培養組織回収方法によれば、培養された細胞シートを移植用の支持体に容易に載置することが可能である。

この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略図である。図１（Ａ）は培養容器の側方断面図である。図１（Ｂ）は培養容器の上面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の使用例を説明するための概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の使用例を説明するための概略側方図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の使用例を説明するための概略側方図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の使用例を説明するための概略側方図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略上面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の使用例を説明するための概略斜視図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略斜視図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略上面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の使用例を説明するための概略側方断面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略上面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態により培養された細胞シートの並べ方の一例を表す概略図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態により培養された細胞シートの並べ方の一例を表す概略図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略上面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態により培養された細胞シートの並べ方の一例を表す概略図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略上面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の構成の一例を表す概略上面図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態により培養された細胞シートの並べ方の一例を表す概略図である。 この発明に係る培養容器の実施の形態の変形例の構成の一例を表す概略上面図である。

符号の説明

１ 培養容器
２ 基底板
２ａ 上面
２ｂ 下面
３ 側板
４ 培養板
４ａ 培養面
Ｕ 移植用の支持体

Claims (30)

1. 組織が培養される培養面を有する底板と、前記培養面を取り囲むように前記底板の周縁に沿って形成された側板とを備える培養容器であって、
   前記培養面を含む前記底板の一部又は全部とその他の部分とが分離可能とされている、
   ことを特徴とする培養容器。
2. 前記底板は複数の培養面を有し、
   前記複数の培養面をそれぞれ分離可能とした、
   ことを特徴とする請求項１に記載の培養容器。
3. 前記底板は、円盤状に形成され、かつ、互いの底辺を向かい合わせて配置された２つの略台形状の培養面を有する、
   ことを特徴とする請求項２に記載の培養容器。
4. 前記培養面は、略平面充填形状に形成されている、
   ことを特徴とする請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の培養容器。
5. 前記底板は、円盤状に形成され、かつ、円形状の培養面を有する、
   ことを特徴とする請求項１に記載の培養容器。
6. 前記底板は、一方の面に前記培養面を有する１枚の板状部材である、
   ことを特徴とする請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の培養容器。
7. 前記一方の面は、前記培養面を含む第１領域と、その他の部分からなる第２領域とを有し、
   前記板状部材は、前記第１領域と前記第２領域とを分離させるように分割可能とされている、
   ことを特徴とする請求項６に記載の培養容器。
8. 前記板状部材の他方の面には、前記第１領域と前記第２領域との境界の裏側位置に沿って溝が形成されており、
   前記板状部材は、前記溝に沿って分割可能とされている、
   ことを特徴とする請求項７に記載の培養容器。
9. 前記側板の外面には、前記一方の面に直交する方向に沿って溝が形成されており、
   前記側板は、該溝に沿って分割可能とされている、
   ことを特徴とする請求項８に記載の培養容器。
10. 前記板状部材の溝と前記側板の溝とは、前記板状部材と前記側板との境界位置で連結している、
    ことを特徴とする請求項９に記載の培養容器。
11. 前記板状部材と前記側板とが分離可能とされている、
    ことを特徴とする請求項６に記載の培養容器。
12. 前記板状部材と前記側板とを分解可能に連結する連結手段を備える、
    ことを特徴とする請求項１１に記載の培養容器。
13. 前記板状部材の周端部には第１凹部が形成され、
    前記側板の下端の内面には第２凹部が形成され、
    前記連結手段は、前記第１凹部及び前記第２凹部の双方に嵌合されて、前記板状部材と前記側板とを連結する嵌合部材を含む、
    ことを特徴とする請求項１２に記載の培養容器。
14. 前記連結手段は、前記板状部材と前記側板とを接着する接着部材を含む、
    ことを特徴とする請求項１２に記載の培養容器。
15. 前記底板は、前記側板と一体に形成された基底板と、一方の面に培養面を有し、他方の面が前記基底板に接するように前記基底板上に載置される培養板とを含む、
    ことを特徴とする請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の培養容器。
16. 前記底板は、前記基底板に対して前記培養板を分離可能に固定する固定手段を含む、
    ことを特徴とする請求項１５に記載の培養容器。
17. 前記固定手段は、前記培養板に設けられ、前記培養板の比重を培養液よりも大きくする部材を含む、
    ことを特徴とする請求項１６に記載の培養容器。
18. 前記固定手段は、前記培養板に設けられ、強磁性体の素材からなる部材を含む、
    ことを特徴とする請求項１６に記載の培養容器。
19. 前記固定手段は、前記培養板に設けられた磁石を含む、
    ことを特徴とする請求項１６に記載の培養容器。
20. 前記基底板及び／又は前記培養板は、変形可能な弾性素材からなり、
    前記固定手段は、前記基底板の一部と前記培養板の一部とを前記変形により分離可能に係合させる係合機構を含む、
    ことを特徴とする請求項１６に記載の培養容器。
21. 前記固定手段は、前記側板又は前記基底板から突出し、先端が前記培養板の前記一方の面側に位置して前記培養板の移動を制限する突出部材を含み、
    前記培養板及び／又は前記突出部材は、変形可能な弾性素材からなる、
    ことを特徴とする請求項１６に記載の培養容器。
22. 前記固定手段は、前記基底板と前記培養板とを接合する接合部材を含む、
    ことを特徴とする請求項１６に記載の培養容器。
23. 前記接合部材は、外部からの作用によって接合力が変化する素材からなる部材を含む、
    ことを特徴とする請求項２２に記載の培養容器。
24. 前記底板は、前記基底板に対する前記培養板の前記側板の方向への移動を制限する移動制限手段を含む、
    ことを特徴とする請求項１５に記載の培養容器。
25. 前記移動制限手段は、前記基底板及び前記培養板の一方に形成された凹部と、他方に形成されて前記凹部に係合する凸部とを含む、
    ことを特徴とする請求項２４に記載の培養容器。
26. 前記培養板は、前記培養板を前記基底板から分離するための所定の器具と係合する係合部を備える、
    ことを特徴とする請求項１５に記載の培養容器。
27. 培養面は、培養される組織との親和性が外部からの作用によって変化する親和性変化素材を前記底板に定着して形成される、
    ことを特徴とする請求項１〜請求項２６のいずれか一項に記載の培養容器。
28. 前記親和性変化素材は、温度の変化に応じて前記親和性が変化する温度応答性素材である、
    ことを特徴とする請求項２７に記載の培養容器。
29. 前記親和性変化素材は、所定波長の光を受けたときに前記親和性が変化する光応答性素材である、
    ことを特徴とする請求項２７に記載の培養容器。
30. 組織が培養される培養面を有する底板と前記培養面を取り囲むように前記底板の周縁に沿って形成された側板とを有する培養容器によって培養された組織を回収する方法であって、
    前記培養面を含む前記底板の一部又は全部とその他の部分とを分離するステップと、
    前記分離後の前記培養面から培養された組織を回収するステップと、
    を含んでいることを特徴とする培養組織回収方法。

Images