JP2007137884A - Has2−刺激性植物抽出物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明はヒアルロナン・シンセターゼの合成、特にヒアルロナン・シンセターゼ2(HAS2)の合成を刺激するための植物抽出物に関する。
【選択図】 なし
Description
細胞外マトリックスは蛋白質または炭水化物源の様々な分子の複雑な網状組織よりなり、それらは細胞機能を修正するために好ましい環境に寄与する。
本発明の一つの目的は、皮膚内の、そして特に真皮内のグリコサミノグリカン類および
ヒアルロン酸の量を増加し且つ皮膚の引き締まり性(firmness)を増加するために、HAS2の発現および/または活性を刺激するための局所的に使用できる化合物、特に植物から抽出される化合物を提供することである。
図1はトウグワの抽出物を用いるHAS2刺激のグラフ表示である。
本発明は、第一の面で、化粧品組成物中での、ヒアルロナン・シンセターゼの発現および/または活性を刺激するための、そして特にヒアルロナン・シンセターゼ2(HAS2)の発現および/または活性を刺激するための、活性成分としての、有効量の少なくとも1種の植物抽出物の使用を記述する。ここで使用される用語「有効量」は、ここに開示されている利点を独立してまたは組み合わせて包含する、明白な利点を有意に誘発するのに十分な量の抽出物を意味する。
には例えば真皮の如きヒト皮膚組織内のHAS2蛋白質をコードする遺伝子の発現の刺激を得ることを可能にする。
vulgaris)、ヤエナリ(Phaseolus aureus)、スグリ(Ribes uva−crispa)、ナギイカダ(Ruscus aculeatus)、ソラマネ(Vicia faba equina)、エンドウマメ(Pisum sativum)、ルピナス(Lupinus angustifolius)、マオウ(Ephedra sinica)、ヨモギキク(Tanacetum vulgare)、インド・カイガラサルビア(Alpinia galanga)、トウグワ(Morus alba)、ジェーオウブリー(Pentadiplandra brazzeana)、またはそのような抽出物の混合物。
それらの混合物よりなる群から選択されるプロトン性溶媒を使用することができる。特にピリジン、ブタノン、アセトン、Ac2O、(Me2N)2CO、PhCN、CH3CH2CN、HMPA、PhNO2、MeNO2、DMF、MeCN、スルホラン、DMSO、HCONH2、HCONHMe、CH3CONHMe、およびそれらの混合物よりなる群から選択される有極性非プロトン性溶媒を使用することもできる。水、アルコール、例えばエタノール、プロパノール、イソプロパノールもしくはブタノール、ポリオール、例えばブチレングリコール、またはエステル、例えば酢酸エチル、或いはこれらの溶媒の混合物が好ましく使用される。上記溶媒の混合物の割合は一般的に1:1〜1:100の間の、そして好ましくは1:1〜1:10の間の、範囲にわたり、25/75混合物が例えば使用される。
ョン、マイクロエマルジョンもしくはナノエマルジョン、特に水中油型もしくは油中水型もしくは複合型またはシリコーン−ベースのもの;特にガラスもしくはプラスチック瓶内または計量瓶内またはエーロゾル内の、ローション;並びにアンプル;漿液;液体石鹸;皮膚クレンジングバー;軟膏;ムース;例えばスティックの形態の、特に口紅の形態の、無水の、好ましくは液体の、ペースト状のまたは固体の生成物よりなる群から選択される形態に調合される。
(A)外科的切除から由来する腹部生検からのコラゲナーゼ抽出後に、正常なヒト線維芽細胞が得られる。
10%の牛漿液(ハイクローン(Hyclone)、25mg/lのゲンタマイシン、100000IU/lのペニシリン、1mg/lのアンフォテリシンBおよび50mg/lのアスコルビン酸ナトリウム(シグマ(Sigma))が補充されたダルベッコの改変イーグル培地(DMEMグルタミン安定化、インビトロゲン(Invitrogen))より構成された線維芽細胞培養培地(FCM)中で線維芽細胞を増殖させる。1個のウエル当たり1.5mlのFCMを分配させそして培養を37℃において5%CO2下で行う。培地を1週間に3回交換する。線維芽細胞を次に1cm2当たり10000個の細胞で24−ウエルプレートの中に1mlの線維芽細胞基本培地(プロモセル(Promocell))内で接種しそして集密性になるまで増殖させる。
熱で、例えば45℃で、または還流下で、抽出を行うことも可能である。抽出は好ましくは撹拌しながら行われる。抽出方法は当業者に既知である。使用される植物の部分は得ようとする抽出物に関連して変動しうる。
線維芽細胞を実施例1に示された通りにして製造しそして次第に増える量の選択された抽出物の存在下でインキュベートする。mRNA抽出後に、HAS2をコードするmRNAの量を実施例1に記載されている通りにしてQ−RT−PCRを用いて検出する。結果は試験対照として使用される無処置の細胞培養物の関数として百分率活性化として示され、そして図1に示される。この活性剤に関して有意な服用量−効果が観察され、それはその活性が相対的に特異的でなければならないことを意味する。1%で使用される時には、この抽出物はHAS2mRNAの90%より大きい刺激を得ることを可能にし、それは非常に重要であり且つ非常に有意な結果である。
線維芽細胞を実施例1に示された通りにして製造しそして次第に増える量の選択された抽出物(マオウの抽出物)の存在下でインキュベートする。mRNA抽出後に、HAS2をコードするmRNAの量を実施例1に記載されている通りにしてQ−RT−PCRを用いて検出する。結果は試験対照として使用される無処置の細胞培養物の関数として百分率活性化として示され、そして図2に示される。この活性剤に関して有意な服用量−効果が観察され、それはその活性が相対的に特異的でなければならないことを意味する。1%で使用される時には、この抽出物はHAS2mRNAの155%の刺激を得ることを可能にし、それは非常に重要な結果である。
線維芽細胞を実施例1に示された通りにして製造しそして次第に増える量の選択された抽出物(ガラナの抽出物)の存在下でインキュベートする。mRNA抽出後に、HAS2をコードするmRNAの量を実施例1に記載されている通りにしてQ−RT−PCRを用いて検出する。結果は試験対照として使用される無処置の細胞培養物の関数として百分率活性化として示され、そして図3に示される。この活性剤に関して有意な服用量−効果が観察され、それはその活性が相対的に特異的でなければならないことを意味する。1%で使用される時には、この抽出物はHAS2mRNAの500%の刺激を得ることを可能にし、それは非常に重要な結果である。
線維芽細胞を実施例1に示された通りにして製造しそして次第に増える量の選択された抽出物(ヨモギキクの抽出物)の存在下でインキュベートする。mRNA抽出後に、HA
S2をコードするmRNAの量を実施例1に記載されている通りにしてQ−RT−PCRを用いて検出する。結果は試験対照として使用される無処置の細胞培養物の関数として百分率活性化として示され、そして図4に示される。この活性剤に関して有意な服用量−効果が観察され、それはその活性が相対的に特異的でなければならないことを意味する。1%で使用される時には、この抽出物はHAS2mRNAの260%の刺激を得ることを可能にし、それは非常に重要な結果である。
線維芽細胞を実施例1に示された通りにして製造しそして次第に増える量の選択された抽出物(インド・カイガラサルビア)の存在下でインキュベートする。mRNA抽出後に、HAS2をコードするmRNAの量を実施例1に記載されている通りにしてQ−RT−PCRを用いて検出する。結果は試験対照として使用される無処置の細胞培養物の関数として百分率活性化として示され、そして図5に示される。この活性剤に関して有意な服用量−効果が観察され、それはその活性が相対的に特異的でなければならないことを意味する。1%で使用される時には、この抽出物はHAS2mRNAの180%の刺激を得ることを可能にし、それは非常に重要な結果である。
本発明のペンタジプァンドラ・ブラッゼアナ(Pentadiplandra brazzeana)の抽出物(JVEG060A)、インド・カイガラサルビアの抽出物(JVEG 203A)、ヨモギキクの抽出物(JVEG 681A)およびトウグワの抽出物(JVEG 022A)の生成物を、それらがグルコサミノグリカン類(GAG類、特にヒアルロン酸)の新合成を刺激するそれらの能力に関して評価する。選択された生物学的モデルは真皮同等物(DE、線維芽細胞を含んでなる収縮したコラーゲンの遊離格子)および単層培養における正常なヒト真皮線維芽細胞の培養物(NHDF類)である。
真皮同等物を製造しそして次に2%FCSを含有するDMEM培地(インビトロゲン)の中に入れそして7日間にわたり培地を3日毎に交換しながら放置して収縮させた。DE類を引き続き試験化合物または対比化合物(TGF−ベータ、10ng/ml)の存在下または不存在下(対照)で48時間または72時間にわたり37℃および5%CO2において、インキュベーションの終了前24時間にトリチエーションされたグルコサミンを添加しながら、インキュベートした。
正常なヒト真皮線維芽細胞を完全DMEM培地の中に接種しそして24時間にわたり37℃および5%CO2において予備インキュベートし、そして培養培地を次に試験化合物または対比生成物(TGF−ベータ、10ng/ml)を含有するかまたは含有しない(対照)2%漿液を有するDMEM培地で置換した。各実験条件は三重に行われた。細胞を引き続き37℃において72時間にわたり、インキュベーションの終了前24時間にトリチエーションされたグルコサミンを添加しながら、インキュベートした。
インキュベーションの終了前24時間に、トリチエーションされたグルコサミン(D−[6−3H]−グルコサミン、1.37Tbq/ミリモル、37Ci/ミリモル、33μCi/ml)を培養物に加える。グルコサミノグリカン抽出をDE培養上澄み液(分泌された/可溶性部分)に対して、実際のDE類内で、粉砕により(抽出された部分)、または線維芽細胞培養物内でカオトロピック緩衝液(50mMのトリス/HCl、4Mのグアニジン、5mMのEDTA、pH8.0)を用いて、行う。精製はイオン交換クロマトグラフィー、すなわち高緊縮条件下でのQ−セファロースビーズ上のアニオン性分子の吸着、6Mのウレアおよび0.2MのNaClを用いるわずかなおよび中程度のアニオン性の分子の脱着、並びに洗浄、により行われる。担体(主としてGAG類、2MのNaClで溶離された)上に残存する非常にカチオン性の分子に導入された放射活性の測定は液体シンチレーションにより行われる。結果は対照と比べたグリコサミノグリカン合成における百分率変動として表示される。複合比較用のダネット試験(Dunnett‘s test)を用いる変種(アノーバ(ANOVA))の分析により集団間比較を行った。
対比生成物TGF−ベータは真皮同等物の可溶性であり且つ分泌されたGAG部分へのグルコサミンの導入を大きく刺激した(対照と比べて3の因数による刺激)。この結果は検定を確認する。
TGE−ベータは真皮同等物から抽出されたGAG部分へのグルコサミンの導入を刺激したが、可溶性部分内より穏やかであった(対照と比べて1.6の因数による刺激)。この結果は検定を確認する。
この試験の目的は、別個の適用後30分および1日1回使用後の1ヶ月間にわたる、引き締まり性および弾性に対する本発明の生成物の効果を評価することである。皮膚の生機能性質に対する効果を、皮膚表面上の大きな対象の反動の動態記録に基づく技術であるバ
リストメーターにより評価する。
−曲線下の面積が回復されたエネルギーを測定する。後者は皮膚の弾性および引き締まり性の両者により影響を受け、面積内における減少が引き締まり性に相当する。
−弾性に関連する反動が消える速度を示す反動の吸収度であるアルファ:アルファが増加する場合には、弾性が減少する。
・志願者の86%で測定された窪みにおける改良、後者における16%の改良(最大値:−37%)。
・アルファ計数は62%ほど有意に増加しそして曲線下の面積は32%ほど有意に減少する:これらの2つのパラメーターは窪みに関連しておりそしてその結果として引き締まり効果を確認する。
1ヶ月間にわたるクリームの1日2回使用後に、図6に示されているように、皮膚は12%ほど有意に引き締まる。
・志願者の71%で測定された窪みにおける改良、後者における13%の改良(最大値:−31%)。
・アルファ計数は8%ほど有意に増加しそして曲線下の面積は18%ほど有意に減少し、これらも皮膚の引き締まりがあることを確認する。
1ヶ月間にわたる漿液の1日2回使用後に、図7に示されているように、皮膚は7%ほど有意に引き締まる。
レチノイン酸とは異なり、HAS2合成を刺激するために選択された分子であるTNF−アルファおよびIL1は化粧品用途に不適切な前−炎症性機構を含まない。それ故、実施例6の条件下でのインド・カイガラサルビアの抽出物の使用は、線維芽細胞培養物上で、HAS2を刺激しうるが、同時にHAS2を刺激することが知られている前−炎症性サイトカイン類、例えばIL1、TNFaまたはTGFβ(実施例6の陽性対照)の合成を刺激しない(接触後48時間の線維芽細胞培養上澄み液に対する検定)。
調合物a:O/Wエマルジョン
A 水 100にする量
ブチレングリコール 2
グリセロール 3
燐酸ナトリウムジヒドロキシセチル、 2
イソプロピルヒドロキシセチルエーテル
B ステアリン酸グリコールSE 14
トリイソノナオイン 5
オクチルココエート 6
C ブチレングリコール、 2
メチルパラベン、
エチルパラベン、
プロピルパラベン、
5.5に調節されたpH
D 本発明の生成物 0.01−10%
調合物b:O/Wエマルジョン
A 水 100にする量
ブチレングリコール 2
グリセロール 3
ポリアクリルアミド、 2.8
イソパラフィン、ラウレス−7
B ブチレングリコール、 2.5
メチルパラベン、
エチルパラベン、
プロピルパラベン; 2
フェノキシエタノール、
メチルパラベン、
プロピルパラベン、
ブチルパラベン、
エチルパラベン
D 本発明の生成物 0.01−10%
調合物c:O/Wエマルジョン
A カルボマー 0.50
プロピレングリコール 3
グリセロール 5
水 100にする量
B オクチルココエート 5
ビサボロール 0.30
ジメチコーン 0.30
C 水酸化ナトリウム 1.60
D フェノキシエタノール、 0.50
メチルパラベン、
プロピルパラベン、
ブチルパラベン、エチルパラベン、
E 香料 0.30
F 本発明の生成物 0.01−10%
A ステアリン酸ジポリヒドロキシPEG−30 3
カプリン酸トリグリセリド類 3
オクタン酸セテアリル 4
アジピン酸ジブチル 3
ブドウ種油 1.5
ホホバ油 1.5
フェノキシエタノール、 0.5
メチルパラベン、
プロピルパラベン、
ブチルパラベン、エチルパラベン
B グリセロール 3
ブチレングリコール 3
硫酸マグネシウム 0.5
EDTA 0.05
水 100にする量
C シクロメチコーン 1
ジメチコーン 1
D 香料 0.3
E 本発明の生成物 0.01−10%
水 100にする量
B ブチレングリコール、 0.5
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
フェノキシエタノール、 0.5
メチルパラベン、
プロピルパラベン、
ブチルパラベン、エチルパラベン
C クエン酸 0.8
D ラウレス硫酸ナトリウム 40.0
E 本発明の生成物 0.01−10%
A 鉱油 17.0
イソステアリン酸イソステアリル 31.5
ジペラルゴン酸プロピレングリコール 2.6
イソステアリン酸プロピレングリコール 1.7
PEG−8蜜蝋 3.0
水素化されたヤシ仁油グリセリド類、 3.4
水素化されたヤシグリセリド類
ラノリン油 3.4
ゴマ油 1.7
乳酸セチル 1.7
鉱油、ラノリンアルコール 3.0
B ひまし油 100にする量
二酸化チタン 3.9
CI 15850:1 0.616
CI 45410:1 0.256
CI 19140:1 0.048
CI 77491 2.048
C 本発明の生成物 0.01−5%
A 水 100にする量
カルボマー 0.5
ブチレングリコール 15
フェノキシエタノール、メチルパラベン、 0.5
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
B 本発明の生成物 0.01−10%
Claims (10)
- (a)有効量の、ガラナ(Paullinia cupana)、オトギリソウ(Hypericum hircinum)、竹(Bambusa vulgaris)、ヤエナリ(Phaseolus aureus)、スグリ(Ribes uva−crispa)、ナギイカダ(Ruscus aculeatus)、ソラマネ(Vicia faba equina)、エンドウマメ(Pisum sativum)、ルピナス(Lupinus angustifolius)、マオウ(Ephedra sinica)、ヨモギキク(Tanacetum vulgare)、インド・カイガラサルビア(Alpinia galanga)、トウグワ(Morus alba)、ジェーオウブリー(J‘oublie)(Pentadiplandra brazzeana)、およびそれらの混合物よりなる群から選択される少なくとも1種の刺激剤、並びに
(b)皮膚学的に許容可能な担体
を含んでなる組成物を皮膚組織に局所的に適用する段階を含んでなる、皮膚組織の線維芽細胞中のヒアルロナン・シンセターゼ2(HAS2)の発現および/または活性を刺激する方法。 - 刺激剤がトウグワ(Morus alba)の抽出物、マオウ(Ephedra sinica)の抽出物、ガラナ(Paullinia cupana)の抽出物、ヨモギキク(Tanacetum vulgare)の抽出物、インド・カイガラサルビア(Alpinia galanga)の抽出物、ジェーオウブリー(Pentadiplandra brazzeana)の抽出物、またはそれらの混合物よりなる群から選択される請求項1に記載の方法。
- 刺激剤の有効量が合計組成物の0.001〜20重量%間の量である請求項1に記載の方法。
- 皮膚内で引き締まり性(firmness)および/または弾性および/または組織水分付与性を改良し、並びに/或いは皮膚障壁効果を増加し、並びに/或いは組織回復力を増加し、或いは脈管形成または血液毛管の新形成を調節し、並びに/或いは治癒および/または細胞の増殖、泳動もしくは分化および/または皮膚萎縮を改良することが意図される、並びに/或いは皮膚上の老化の影響を減じ、そして特に老化の過程で観察される皮膚の引き締まり性の損失、および/または萎縮瘢痕および/または老化の過程で観察される萎縮した皮膚組織を減じ、特に真皮萎縮を減ずることが意図される化粧品組成物中の活性成分としての有効量の少なくとも1種の植物抽出物の使用であって、該植物抽出物がガラナ(Paullinia cupana)、オトギリソウ(Hypericum hircinum)、竹(Bambusa vulgaris)、ヤエナリ(Phaseolus aureus)、スグリ(Ribes uva−crispa)、ナギイカダ(Ruscus aculeatus)、ソラマネ(Vicia faba equina)、エンドウマメ(Pisum sativum)、ルピナス(Lupinus angustifolius)、マオウ(Ephedra sinica)、ヨモギキク(Tanacetum vulgare)、インド・カイガラサルビア(Alpinia galanga)、トウグワ(Morus alba)、ジェーオウブリー(Pentadiplandra brazzeana)、およびそれらの混合物よりなる群から選択される使用。
- (a)有効量のヒアルロナン・シンセターゼの発現または活性を刺激可能な、ガラナ(Paullinia cupana)、オトギリソウ(Hypericum hircinum)、竹(Bambusa vulgaris)、ヤエナリ(Phaseolus aureus)、スグリ(Ribes uva−crispa)、ナギイカダ(Rusc
us aculeatus)、ソラマネ(Vicia faba equina)、エンドウマメ(Pisum sativum)、ルピナス(Lupinus angustifolius)、マオウ(Ephedra sinica)、ヨモギキク(Tanacetum vulgare)、インド・カイガラサルビア(Alpinia galanga)、トウグワ(Morus alba)、ジェーオウブリー(Pentadiplandra brazzeana)、およびそれらの混合物よりなる群から選択される少なくとも1種の植物抽出物、並びに
(b)少なくとも1種の化粧品的に許容可能な賦形剤
を含んでなる局所化粧品組成物。 - 組成物が少なくとも1種の追加の活性な化粧品成分をさらに含んでなる請求項4に記載の局所化粧品組成物。
- 組成物が水性もしくは油性溶液、グリームまたは水性ゲルもしくは油性ゲル、シャンプー、ミルク、エマルジョン、マイクロエマルジョンもしくはナノエマルジョン、ローション、エーロゾル、およびアンプル、漿液、液体石鹸、皮膚クレンジングバー、軟膏、ムース、或いは無水スティックよりなる群から選択される形態に調合される請求項4に記載の局所化粧品組成物。
- 植物抽出物の量が合計組成物の0.001〜20重量%間である請求項4に記載の局所化粧品組成物。
- 植物抽出物の量が合計組成物の0.001〜10重量%間である請求項7に記載の局所化粧品組成物。
- 植物抽出物の量が合計組成物の0.01〜10重量%間である請求項8に記載の局所化粧品組成物。
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