KR101757674B1 - 도깨비바늘 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 증진 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 도깨비바늘(Bidens bipinnata)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 탄력증진 및 피부 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 도깨비바늘 추출물을 유효 성분으로 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 35.0 중량% 를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면, 도깨비바늘(Bidens bipinnata)의 추출물을 이용하여 피부 탄력 증진 및 피부 주름 개선에 우수한 효과가 있는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Description

도깨비바늘 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 증진 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition Comprising Extracts of Bidens bipinnata for Enhancing Skin Tightening and Improving Skin Wrinkle}

본 발명은 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력증진 및 피부 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리적, 화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화 (photo-aging)로 구분되며, 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 노화는 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이의 증가 등에 의해 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우, 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 구체적으로는 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나게 된다.

단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐 (collagen),히아루론산 (hyaluronic acid), 엘라스틴 (elastin), 프로테오글리칸 (proteoglycan), 피브로넥틴 (fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유 라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되어 발생하는 자유 라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

피부 진피의 대부분을 차지하고 있는 콜라겐과 엘라스틴, 이것들을 분해하는 효소인 MMP(Matrix metallo proteinase)의 증가로 주름살이 생기고 피부가 처지게 되는 현상이 발생하게 되며, MMP의 양이 증가하는 가장 큰 이유는 UV에 의한 것이다. 하지만 일상 생활 속에서 많은 시간을 UV에 노출되게 되고 이러한 이유로 주름살은 계속적으로 증가하며 피부의 탄력은 점차 감소된다.

이러한 문제점을 해결하기 위해, 피부의 주름을 개선하고, 탄력을 증진시킬 수 있는 화장료에 대한 연구와 개발이 지속적으로 이루어지고 있으며, 본 발명 역시 이러한 문제점을 해결하기 위하여 이루어졌다.

본 발명자는 피부의 주름과 피부 탄력을 개선하기 위해 천연 식물 성분들에 대한 다양한 피부 생리활성을 검색한 결과, 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물의 유효성분은 엘라스타제(Elastase) 저해 활성, 콜라겐 합성 촉진 효과, MMP-1 생성 억제 효과를 보임으로써 효과적으로 피부의 주름과 탄력을 개선할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기와 같은 목적은 도깨비바늘(Bidens bipinnata)의 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 의해 달성된다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진 효과를 갖는다.

바람직하게는, 상기 도깨비바늘(Bidens bipinnata)의 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 35.0%(w/w)로 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한 바람직하게는, 상기 도깨비바늘 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택되는 추출용매로 추출된 것일 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효성분인 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물로 인하여 엘라스타제 저해활성, 콜라겐 생합성, MMP-1 생성 억제효과가 우수하고, 이로 인해 피부 주름개선 효과와 피부 탄력개선의 효과가 우수하다.

본 발명은 도깨비바늘(Bidens bipinnata)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 사용된 도깨비바늘(Bidens bipinnata)은 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 한해살이풀로써, 주로 한국, 중국, 타이완, 일본, 인도 등 산과 들에 널리 분포하고 있다. 풀의 높이는 25~85cm로 다양하며, 털이 다소 있으며 줄기는 네모지다. 잎은 마주나며 양면에 털이 있으며 2회 깃꼴로 갈라진다. 갈라진 조각은 달걀 모양 혹은 긴 타원형 형태를 하고 있으며 끝이 뾰족하고 톱니가 있다. 꽃은 주로 8~10월에 피며, 지름 6~10mm의 원추꽃차례를 이룬다. 어린 잎은 식용으로 이용하며 생즙은 독벌레에 물렸을 때나 상처에 바르며 꽃을 포함한 줄기와 잎을 약재로 사용한다. 도깨비바늘의 이명으로는 귀침초, 귀채초, 파파침, 참귀사리, 바늘다사리, 털가막사리, 귀황화, 귀골침, 고금황, 바늘다사리이라고도 불린다.

도깨비바늘 생약의 효능으로는 항균, 항암, 해열, 이뇨, 해독, 소종 등의 효능이 있으며 멍든 피를 풀어준다. 적용질환은 감기, 학질, 열이 나는 현상, 간염, 황달, 신장염, 위통, 설사, 장염, 맹장염, 당뇨병, 인후염, 기관지염, 소변이 잘 나오지 않는 증세 등이다. 기타 타박상과 뱀이나 벌레에 물렸을 때에도 치료약으로 쓴다고 알려져 있다.

본 발명의 바람직한 실시형태에 따르면, 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법, (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출할 수 있다. 본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다.

보다 바람직하게는 본 발명의 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다.

한편, 본 발명의 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물은 상기 언급한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다. 또한, 본 발명의 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압 및 고온을 이용한 초임계추출법에 의한 추출물, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출물, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의해 분리된 분획물, 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물, 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획들도 본 발명의 추출물에 포함된다.

본 발명에 따르면, 도깨비바늘 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 35.0 중량% 함유되며, 바람직하게는, 0.001 ~ 20 중량% 함유되고, 더욱 바람직하게는 0.1 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 보습 효과가 나타나지 않으며, 35.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 주름개선 효과나 탄력 증진 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 이하, 하기의 실시예와 실험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리 범위가 이들에 의해 한정 되는 것은 아니다.

제조예 1 - 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물 제조

음건한 도깨비바늘(Bidens bipinnata)의 전초 1kg를 중량 대비 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50 ℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하여 도깨비바늘 추출물 20g을 획득하였다.

실험예 1 - 엘라스타제(Elastase) 저해활성 측정

엘라스타제(Elastase)는 진피 내 피부탄력을 유지시키는 데 중요한 기질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 또한 엘라스타제는 다른 중요한 기질단백질인 콜라겐(collagen)을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다. 따라서 엘라스타제 저해제는 피부주름을 개선하는 작용을 나타내며, 우솔산(ursolic acid) 등이 엘라스타제 저해제로서 이용되고 있다. 엘라스타제는 동물 결합조직의 불용성 탄성 섬유 단백질인 엘라스틴을 분해시켜 피부의 진피조직의 그물망 구조 결합을 끊어줌으로써 주름생성의 주원인인 효소로 알려져 있다. 피부의 진피 조직 속에는 콜라겐과 피부의 탄력성에 관련된 엘라스틴이 그물망 구조를 형성하고 있는데, 이러한 그물망 구조가 깨어지면서, 즉 엘라스틴이 엘라스타제에 의해 분해되어 피부가 처지고 주름이 생기므로 내인성 피부노화가 발생한다. 그러므로 피부노화의 주원인 중의 하나인 엘라스틴 분해효소인 엘라스타제의 활성을 저하시킴으로서 피부노화를 억제할 수 있다.

기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide, S4760, Sigma)를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 445nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 500μL씩 시험관에 취하고, 2mM 트리스-HCl 버퍼(pH8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase(E1250, Sigma)2.5U/mL) 용액 500μL을 가한 후 기질로 50mM 트리스-HCl 버퍼(pH8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3- p-nitroanilide(500μg/mL)을 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. 엘라스타제 저해 활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 하기 수학식 1에 따라 계산하여 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	엘라스타제 저해율(%)
아데노신	500	80.19
제조예1	1,000	74.37
	500	40.69
	100	19.37

상기 표 1에, 1000ppm에서 IC₅₀ 엘라스타제 저해활성을 나타내었다. 표 1을 보면, 도깨비바늘 추출물의 엘라스테아제 저해활성이 우수한 것을 알 수 있으며, 이로부터, 도깨비바늘 추출물이 피부 주름 및 탄력 개선 소재로서의 이용가능성을 확인할 수 있었다.

실험예 2 - 피부 세포 증식 효과

제조예 1에 제조된 도깨비바늘 추출물의 피부 세포 증식에 미치는 효과를 알아보기 위하여, 인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰에 1 x 10⁴세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma사)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다.　이어서, 상기 도깨비바늘 추출물이 500 ~ 1500ppm 농도로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 도깨비바늘 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다.　그런 다음, MTT 용액(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드:5 mg/㎖)을 각각 10 ㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고, 각 웰 당 100 ㎕의 DMSO 용액을 가하여 20분 동안 진탕 시키고, 마이크로 플레이트 판독기 (microplate reader, Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570 nm에서 상층액의 흡광도를 측정하였다. 대조군의 세포증식을 100%로 하여 시료 투입 실험군의 세포증식율(%)을 계산하였다. 세포증식율(%)은 하기의 수학식 2에 대입하여 세포 증식 효과를 산출하고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	세포증식효과(%)
제조예 1	500	64.15
	100	32.97
	10	16.24

실험예 3 - ELISA kit를 이용한 콜라겐(collagen) 생합성 측정 결과

인간 섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기 내에서 10% FBS, Penicillin(50U/ml), Streptomycin(50/ml)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1× 10⁵ 개/ml로 24 웰 플레이트에 500㎕씩 분주한 다음 24시간 배양하였다. 섬유아세포에서 콜라겔 타입 I(collagen type I)의 정량은 Procollagen Type I c-peptide EIAkit(TaKaRa, japan)를 이용하여 효소면역분석법 (immunosorbent assay, ELISA)으로 실시하였는데, 분석을 위해 48시간 동안 배양한 상기의 세포 배양 상등액을 조심스럽게 수집하였다.

먼저 Procollagen Type I c-peptide와 결합하는 항체 (antibody)가 코팅된 스트립(strip)에 48시간 배양된 배양 상등액을 각각 100 ul씩 첨가하고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 세척 버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거한 다음, 여기에 블라킹 버퍼(Blocking buffer) 100 ul씩 넣고, 다시 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 세척 버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 'Procollagen Type I c-peptide'와 결합하는 또 다른 항체에 POD가 콘쥬게이트된(conjugate) 용액(Antiobody-POD conjugate solution) 100 ul씩 넣고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 세척 버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 동량의 기질(substrate) 용액 넣고, 30분간 반응시킨 다음 정지용액(stop solution, 1N H₂SO₄)을 넣고 실험을 종료하였다.

실험이 종료된 스트립(strip)을 450 nm에서 흡광도를 측정하여 콜라겐 표준품과 비교하여 새로 합성된 콜라겐의 양을 PICP 양으로 측정하였으며 PICP양은 ng/2x10⁴세포로 환산하여 콜라겐의 합성효과를 표 3에 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	콜라겐합성량 (ng/2x104)
아스코르브산	100	141
제조예 1	100	137
	10	31

실험예 4 - MMP-1 생성 억제 효과

라겐 분해효소인 MM P-1 생성을 억제하는 효과가 있는지의 여부를 측정하기 위해, MMP-1의 생성을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/ml, Roche, 미합중국)를 비교군으로 하여 MMP-1의 생성을 억제하는 효과를 측정하였다. 인간 정상 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 106세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1 의 도깨비바늘 추출물의 최종 농도 200 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 복주머니란 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham,미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.

시료명	처리농도	MMP-1 생성 저해율(%)
TGF-β	100	60.97
제조예 1	100	55.12
	10	26.74

상기 실험예를 통해 본 발명의 도깨비바늘 추출물은 엘라스타제(Elastase) 저해활성, 콜라겐 합성 증진 효과 및 MMP-1 생성억제 효과가 뛰어남을 확인하였다. 이에, 본 발명의 도깨비바늘 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료를 제조하여 처방예를 제시하나 본 발명의 화장료 조성물이 이 처방예에 한정되는 것은 아니다.

제형예 1 - 화장수

도깨비바늘 추출물을 함유한 화장료 중 화장수의 제형예는 다음 표 5와 같다.

성분	함량(단위:중량%)
	제형예1	비교제형예 1
도깨비바늘 추출물 글리세린 1.3-부틸렌글리콜 피이지1500 알란토인 DL-판테놀 EDTA-2Na 벤조페논-9 소듐 히아루로네이트 에탄올 옥틱도데세스-16 폴리솔베이트 20 방부제, 향, 색소 증류수	2.0 5.0 3.0 1.0 0.1 0.3 0.02 0.04 5.0 10.0 0.2 0.2 미량 잔량	- 5.0 3.0 1.0 0.1 0.3 0.02 0.04 5.0 10.0 0.2 0.2 미량 잔량
합계	100	100

제형예 2 - 크림

도깨비바늘 추출물을 함유한 화장료 중 크림의 제형예는 다음 표 6과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
	제형예 2	비교제형예 2
도깨비바늘 추출물 친유형 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	2.0 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량	- 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량
합계	100	100

제형예 3 - 에센스

도깨비바늘 추출물을 함유한 화장료 중 에센스의 제형예는 다음 표 7과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
	제형예 3	비교제형예 3
도깨비바늘 추출물 글리세린 베타인 피이지 1500 알란토인 DL-판테놀 이.디.티.에이-2Na 벤조페논 - 9 히드록시에칠 셀룰로오스 소듐히아루로네이트 카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민 옥틸도데칸올 옥틸도데세스 -16 에탄올 방부제, 향, 색소 증류수	2.0 10.0 5.0 2.0 0.1 0.3 0.02 0.04 0.1 8.0 0.2 0.18 0.3 0.4 6.0 미량 잔량	- 10.0 5.0 2.0 0.1 0.3 0.02 0.04 0.1 8.0 0.2 0.18 0.3 0.4 6.0 미량 잔량
합계	100	100

실험예 5 - 도깨비바늘 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과 평가

본 발명의 도깨비바늘 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 도깨비바늘 추출물을 2%(v/v)를 함유하고 있는 제형예 2의 크림과, 처방예 2의 크림에서 추출물을 정제수로 대체한 비교 제형예 2의 크림을 사용해 평가하였다. 60명의 30~40세 여성을 무작위로 2개 군으로 나누어 제형예 2와 비교제형예 2의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 눈가를 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 주름 개선 효과를 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 8에 나타낸 바와 같다.

	주름개선효과 우수	주름개선효과 약간	주름개선 효과 없음
제형예 2	8	21	1
비교제형예 2	4	11	15

그 결과, 본 발명의 도깨비바늘 추출물을 함유한 화장료는 도깨비바늘 추출물을 함유하지 않은 비교제형예에 비하여 높은 주름개선 효과를 나타내었으며, 또한, 본 발명의 화장료를 피부에 도포한 부분의 피검자들에서 피부 자극을 관찰할 수 없었다

실험예 6 - 도깨비바늘 추출물을 함유하는 화장료의 피부탄력 개선 효과 평가

본 발명의 화장료의 피부 탄력 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 도깨비바늘 추출물을 각각 2%(v/v) 함유하고 있는 제형예 2의 크림과 제형예 2에서 도깨비바늘 추출물을 정제수로 대체한 비교제형예 2의 크림을 사용해 평가하였다. 60명의 30~40세 여성을 무작위로 2개 군으로 나누어 처방예 2와 비교예의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 양볼을 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 피부 탄력 개선 효과를 Cutometer(C+K,독일)를 이용하여 탄력 증진 유무를 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 9에 나타낸 바와 같다.

	피부탄력 개선효과 우수	피부탄력 개선효과 약간	피부탄력 개선 효과 없음
제형예 2	11	8	11
비교제형예 2	4	7	19

그 결과, 본 발명의 도깨비바늘 추출물을 함유한 제형예 2의 크림은 도깨비바늘 추출물을 함유하지 않은 비교제형예의 크림에 비하여 높은 피부 탄력 증진 효과를 보여주었다. 또한, 본 발명의 화장료를 피부에 도포한 부분의 피검자들에게서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.

Claims (4)

1. 도깨비바늘(Bidens bipinnata) 추출물을 유효성분을 포함하는, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 개선 효과를 갖는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 조성물의 전체 중량에 대하여 도깨비바늘 추출물을 0.0001 ~ 35.0 중량%로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 도깨비바늘 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택되는 추출용매로 추출된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
   
   
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