KR101872357B1 - 짝자래나무 추출물을 함유하는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물 - Google Patents

짝자래나무 추출물을 함유하는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 짝자래나무 추출물 0.001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면, 짝자래나무 추출물은 탄력 증진과 피부주름 개선에 우수한 효과가 있는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Description

짝자래나무 추출물을 함유하는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR ENHANCING SKIN ELASTICITY CONTAINING EXTRACT OF RHAMNUS YOSHINOI}
본 발명은 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 짝자래나무 추출물을 함유하는 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진용 화장료 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광 노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로는 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다.
단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유 라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되어 발생하는 자유 라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.
피부에서 엘라스틴 섬유는 콜라겐 섬유와 함께 진피 안쪽에서 가교 결합을 형성하며, 피부 탄력에 관여하고 있다. 나이가 들어감에 따라 피부는 조직학적으로 엘라스틴 섬유의 결핍과 응집, 콜라겐 섬유의 감소, 염증 세포 침윤증가와 엘라스틴 분해 효소인 엘라스타제의 활성의 급격한 증가를 보인다.
엘라스타제는 진피 내 피부탄력을 유지시키는 데 중요한 기질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 또한, 엘라스타제는 다른 중요한 기질단백질인 콜라겐을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다. 따라서 엘라스타제 저해제는 피부주름을 개선하는 작용을 나타내며, 우르솔산(ursolic acid) 등이 엘라스타제 저해제로서 이용되고 있다. 엘라스타제는 동물 결합조직의 불용성 탄성 섬유 단백질인 엘라스틴을 분해시켜 피부의 진피조직의 그물망 구조 결합을 끊는, 주름생성의 주원인인 효소로 알려져 있다. 피부의 진피 조직 속에는 콜라겐과 피부의 탄력성에 관련된 엘라스틴이 그물망 구조를 형성하고 있는데, 이러한 그물망 구조가 깨어지면서 즉 엘라스틴이 엘라스타제에 의해 분해되어 피부가 처지고 주름이 생기므로 내인성 피부노화가 발생한다. 그러므로 피부노화의 주원인 중의 하나인 엘라스틴 분해효소인 엘라스타제의 활성을 저하시킴으로서 피부노화를 억제할 수 있다.
따라서 엘라스타제의 작용으로 피부의 탄력이 급격히 저하하게 된다. 엘라스타제를 저해함으로써 피부 노화를 근복적으로 줄일 수 있는 하나의 해결책으로 현재까지 엘라스틴 분해 효소 저해활성을 갖는 천연물에 대한 연구가 계속되고 있다.
노화에는 자유 라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.
본 발명자는 노화를 개선하기 위해 천연 식물 성분들에 대한 다양한 피부 생리활성을 검색한 결과, 천연 식물 추출물 중에서 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물이 엘라스타제(Elastase) 저해 활성, 콜라겐 합성 촉진 효과, MMP-1 생성 억제 효과를 나타내여 효과적으로 피부 주름을 개선하고 피부 탄력을 증진시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 포함하는 주름 개선 및 피부 탄력 증진용 화장료 조성물에 관한 것이다.
바람직하게는, 짝자래나무 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 내지 30.0 중량% 함유된다.
바람직하게는, 짝자래나무 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4 개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 핵산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계추출법, (c) 초음파 추출법 및 (d) 미생물을 이용한 발효 추출법으로 이루어진 군에서 선택된 추출법에 의해 추출된다.
바람직하게는, 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는다.
본 발명은 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함된 유효성분인 짝자래나무 추출물은 콜라겐 생합성, MMP-1 생성 억제 효과가 우수하고, 화장료에 적용시 주름개선 및 탄력 증진의 효과가 우수하다.
본 발명은 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 사용된 짝자래나무는 갈매나무과의 나무로, 만주, 일본 그리고 한국에서 자생하는 나무이다. 갈매나무는 낙엽수로 높이는 최대 2m 내지 2.5m까지 자란다. 나무껍질은 회갈색이고 피목이 많이 발달했다. 잎은 어긋나게 나며 타원 모양이다. 잎의 끝은 짧고 가장자리에는 톱니가 있다. 잎자루의 길이는 5mm 내지 10mm이다. 황록색의 꽃이 오뉴월에 개화한다. 원뿔모양 꽃차례는 새가지 끝에 달리며 털이 있다. 열매는 가을에 검정색으로 익는다. 하천 지역이나 상류 계곡의 바위틈에서 자주 볼 수 있으며 양수로 광선을 좋아하고 내한성이 강하여 전국 어디에서나 심을 수 있지만 공해에는 약하다. 아고산대 능선에 넓게 분포한다.
본 발명에 있어서, 짝자래나무 추출물은 다양한 기관 또는 부분(예: 잎, 수피, 가지, 꽃, 뿌리, 열매, 줄기 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 전초 또는 뿌리로부터 얻은 추출물이고, 가장 바람직하게는 전초로부터 얻은 추출물을 의미한다.
본 발명의 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출할 수 있다.
본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다. 본 발명에서 짝자래나무 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻을 수 있고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻을 수 있다.
한편, 본 발명의 짝자래나무 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.
또한, 본 발명의 짝자래나무 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.
본 발명에 따른 짝자래나무 추출물은 발효과정을 거친 추출물도 포함하는 데 짝자래나무의 발효추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 짝자래나무를 100~500메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1~50g/L를 첨가하고 효모 균주 또는 유산균등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5 내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다.
본 발명에 따르면, 상기 짝자래나무 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 30.0 중량% 함유될 수 있고, 바람직하게는 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10.0 중량% 함유될 수 있다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.
따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 짝자래나무 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 elastase 저해활성, collagen 생합성 효과, MMP-1 생성억제 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.
발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다. 하기의 제조예는 상기에서 언급한 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법, (d)발효공정을 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물을 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 사실이며, 하기에 언급한 제조예에 한정되는 것은 아니다.
제조예 1 - 짝자래나무 ( Rhamnus yoshinoi ) 추출물 제조
짝자래나무 200g을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음 분쇄하고 70%(V/V) 에탄올 수용액을 시료 중량의 10배(2L) 양을 가하여 실온에서 72시간 침지 추출하여 동일한 방법으로 3회 반복 추출한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였고 그 결과 약 21g(약 10중량%)을 수득하였다. 건조한 추출물은 일정 농도로 희석하여 하기의 실험에 사용하였다.
실험예 1 - 엘라스타제(Elastase) 저해활성 측정
기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide(S4760, Sigma)를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 445nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 500μL씩 시험관에 취하고, 2mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase(E1250, Sigma, 2.5U/mL) 용액 500μL을 가한 후 기질로 50mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide(500μg/mL)을 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. 엘라스타제 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 하기 수학식 1에 따라 계산하여 나타내었다.
Figure 112016122542872-pat00001
시료명 처리농도(ppm) 엘라스타제 저해율(%)
아데노신 5000 85.32 ± 3.24
제조예 1 100 31.19 ± 1.02
500 49.88 ± 4.12
1000 70.56 ± 6.17
상기 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 짝자래나무 추출물의 엘라스타제 저해율이 우수한 것을 알 수 있다.
실험예 2 - 콜라게나제 ( Collagenase ) 저해활성 측정
콜라게나제 저해활성 측정은 Wunsch 등의 방법에 따라 측정하였다. 즉 반응구는 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.5)에 4 mM CaCl2를 첨가하여, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(300ppm)를 녹인 기질액 0.25 mL 및 시료용액 0.1 mL의 혼합액에 콜라게나제(200ppm) 0.15 mL를 첨가하여 실온에서 20분간 방치한 후 6% 시트르산 0.5 mL을 넣어 반응을 정지시킨 후, 에틸 아세테이트 1.5 mL을 첨가하여 320nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라게나제 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다. 결과는 표 2에 나타내었다. 비교군으로써 부틸레이티드 하이드록시아니솔(butylated hydroxyanisol)을 사용하였다.
시료명 처리농도(ppm) 콜라게나제 저해활성(%)
부틸레이티드 하이드록시아니솔 500 82.64 ± 5.15
제조예 1 100 26.41 ± 4.62
250 68.79 ± 6.25
500 80.29 ± 7.51
상기 표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 짝자래나무 추출물을 함유하는 제조예 1은 비교군과 유사한 콜라게나제 저해 활성을 나타내는 것을 알 수 있다.
실험예 3 - ELISA kit를 이용한 콜라겐(collagen) 생합성 측정 결과
인간 섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO2 배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기 내에서 10% FBS, Penicillin(50U/mL), Streptomycin(50/mL)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1× 105개/mL로 24 well plate에 500㎕씩 분주한 다음 24시간 배양하였다. 섬유아세포에서 콜라겐 타입 I(collagen type I)의 정량은 'Procollagen Type I c-peptide EIAkit(TaKaRa, japan)'를 이용하여 효소면역분석법(immunosorbent assay, ELISA)으로 실시하였는데, 분석을 위해 48시간 동안 배양한 상기의 세포 배양 상등액을 조심스럽게 수집하였다. 먼저 'Procollagen Type I c-peptide'와 결합하는 항체가 코팅된 스트립(strip)에 48시간 배양된 배양 상등액을 각각 100ul씩 첨가하고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거한 다음, 여기에 블라킹 버퍼(Blocking buffer) 100 ul씩 넣고, 다시 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 'Procollagen Type I c-peptide'와 결합하는 또 다른 항체에 POD가 콘쥬게이트(conjugate)된 용액(Antiobody-POD conjugate solution) 100 ul씩 넣고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱 버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 동량의 기질 (substrate) 용액 넣고, 30분간 반응시킨 다음 정지용액(stop solution, 1N H2SO4)을 넣고 실험을 종료하였다. 실험이 종료된 스트립(strip)을 450 nm에서 흡광도를 측정하여 콜라겐 표준품과 비교하여 새로 합성된 콜라겐 양을 PICP 양으로 측정하였으며 PICP양은 ng/2x104세포로 환산하여 콜라겐의 합성효과를 표 3에 나타내었다.
시료명 처리농도(ppm) 콜라겐 합성량
(ng/2x104)
아스코르브산 100 130 ± 5.91
제조예1 100 114 ± 7.16
250 188 ± 4.92
상기 표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 짝자래나무 추출물은 대조군인 아스코르브산에 견줄만한 콜라겐 합성 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.
실험예 4 - MMP -1 생성 억제 효과
본 실험예 4는 상기 제조예 1의 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 이용하여 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과가 있는지를 측정하기 위해, MMP-1의 생성을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/mL, Roche, 미합중국)를 비교군으로 하여 MMP-1의 생성을 억제하는 효과를 측정하였다. 인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에각 웰당 1×106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1의 짝자래나무 추출물을 최종 농도 100㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 짝자래나무 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham,미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 2에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.
Figure 112016122542872-pat00002
시료명 처리농도(nM) MMP-1 생성 저해율(%)
TGF-β 200 70.30 ± 4.19
제조예 1 100 30.12 ± 2.19
250 69.88 ± 4.92
상기 표 4에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 짝자래나무 추출물을 함유하는 제조예 1은 TGF-β와 유사한 효과를 나타내어 MMP-1의 생성을 효과적으로 저해하는 것을 알 수 있다.
처방예 1 - 화장수
짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 함유한 화장료 중 화장수의 처방예는 다음 표 5와 같다.
성분 함량(단위:중량%)
제조예 1
글리세린
1.3-부틸렌글리콜
피이지1500
알란토인
DL-판테놀
EDTA-2Na
벤조페논-9
소듐 히아루로네이트
에탄올
옥틱도데세스-16
폴리솔베이트 20
방부제, 향, 색소
증류수		 3.0
5.0
3.0
1.0
0.1
0.3
0.02
0.04
5.0
10.0
0.2
0.2
미량
잔량
합계 100
처방예 2 - 크림
짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 함유한 화장료 중 크림의 처방예는 다음 표 6과 같다
성분 함량 (단위:중량%)
제조예 1
친유형 모노스테아린산글리세린
세테아릴알콜
스테아린산
밀납
폴리솔베이트 60
솔비탄스테아레이트
경화식물유
스쿠알란
광물유
트리옥타노인
디메치콘
소듐마그네슘실리케이트
글리세린
베타인
트리에타올아민
소듐히아루로네이트
방부제, 향, 색소
증류수		 3.0
2.0
2.2
1.5
1.0
1.5
0.6
1.0
3.0
5.0
5.0
1.0
0.1
5.0
3.0
1.0
4.0
미량
잔량
합계 100
처방예 3 - 에센스
짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 함유한 화장료 중 에센스의 처방예는 다음 표 7과 같다.
성분 함량 (단위:중량%)
제조예 1
글리세린
베타인
피이지 1500
알란토인
DL-판테놀
이.디.티.에이-2Na
벤조페논 - 9
히드록시에칠 셀룰로오스
소듐히아루로네이트
카르복시비닐폴리머
트리에탄올아민
옥틸도데칸올
옥틸도데세스 -16
에탄올
방부제, 향, 색소
증류수		 3.0
10.0
5.0
2.0
0.1
0.3
0.02
0.04
0.1
8.0
0.2
0.18
0.3
0.4
6.0
미량
잔량
합계 100
비교처방예 1 - 크림
짝자래나무 추출물을 함유하지 않은 것을 제외하고는 표 6의 처방과 동일하게 제조하였다.
실험예 5 - 짝자래나무 ( Rhamnus yoshinoi ) 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과 평가
본 발명의 짝자래나무 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 짝자래나무 추출물을 3 중량%를 함유하고 있는 처방예 2의 크림과, 크림에서 추출물을 정제수로 대체한 비교처방예 1의 크림을 사용해 평가하였다. 30명의 30-40세 여성을 무작위로 2개군으로 나누어 제형예의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 눈가를 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 주름 개선 효과를 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 8에 나타낸 바와 같다.
주름개선효과 우수 주름개선효과 약간 주름개선 효과 없음
처방예 2 11 13 6
비교처방예 1 6 10 14
상기 표 8에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 짝자래나무 추출물을 함유하는 화장료는 비교처방예 1에 비하여 높은 주름개선 효과를 나타내었다. 또한, 본 발명의 화장료를 피부에 도포한 피검자들에게서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.
실험예 6 - 짝자래나무 ( Rhamnus yoshinoi ) 추출물을 함유하는 화장료의 탄력 증진 효과 평가
본 발명의 화장료의 피부 탄력 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 짝자래나무 추출물을 3 중량% 함유하고 있는 처방예 2의 크림과 비교처방예 1의 크림을 사용해 평가하였다. 30명의 30-40세 여성을 무작위로 2개군으로 나누어 처방예 2와 비교처방예 1의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 양볼을 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 피부 탄력 개선 효과를 Cutometer(C+K,독일)를 이용하여 탄력 증진 유무를 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 9에 나타낸 바와 같다.
탄력증진효과 우수 탄력증진효과 약간 탄력증진 효과 없음
처방예 2 15 10 5
비교처방예 1 5 12 13
상기 표 9에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 함유한 처방예 2의 크림은 짝자래나무 추출물을 함유하지 않은 비교처방예 1의 크림에 비하여 높은 피부 탄력 증진 효과를 나타내었다.

Claims (5)

  1. 짝자래나무(Rhamnus yoshinoi) 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 짝자래나무 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 내지 30.0 중량% 함유되는, 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 짝자래나무 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4 개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 핵산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계추출법, (c) 초음파 추출법 및 (d) 미생물을 이용한 발효 추출법으로 이루어진 군에서 선택된 추출법에 의해 추출되는, 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는, 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
  5. 삭제
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