KR102125409B1

KR102125409B1 - 백당나무 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102125409B1
Application number: KR1020180118362A
Authority: KR
Inventors: 김태양; 이춘몽; 이광식; 이건국
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 2018-10-04
Filing date: 2018-10-04
Publication date: 2020-06-22
Also published as: KR20200038755A

Abstract

본 발명은 백당나무 발효 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 백당나무 발효 추출물을 유효 성분으로 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 40.0 중량% 를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면, 백당나무 추출물은 피부주름 개선에 우수한 효과가 있는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Description

백당나무 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Improving Skin Wrinkle Contaning the Extract of Fermented Vibumum Opulus}

본 발명은 백당나무(Vibumum opulus)을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 구체적으로는 백당나무의 발효 추출물이 포함된 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어막을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로는 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다.

단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되어 발생하는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

노화된 피부에서의 특징으로, 피부에서 엘라스틴 섬유는 콜라겐 섬유와 함께 진피 안쪽에서 가교 결합을 형성하며, 피부 탄력에 관여하고 있다. 나이가 들어감에 따라 피부는 조직학적으로 엘라스틴 섬유의 결핍과 응징, 콜라겐 섬유의 감소, 염증 세포 침윤증가와 엘라스틴 분해 효소인 엘라스타제의 활성의 급격한 증가를 보인다. 따라서 엘라스타제의 작용으로 피부의 탄력이 급격히 저하하게 된다. 엘라스타제를 저해함으로써 피부 노화를 근복적으로 줄여 줄 수 있는 하나의 해결책으로 현재까지 엘라스틴 분해 효소 저해활성을 갖는 천연물에 대한 연구가 계속되고 있다.

뿐만 아니라 노화에는 자유 라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.

산소는 물과 더불어 우리가 살아가는데 없어서는 안 되는 물질이나, 그 산소가 일단 우리의 체내에 들어가면 여러 원인들에 의해 굉장히 활성이 강한 산소로 변하여 혈관 세포를 산화시킨다. 오늘날 질병의 원인의 약 90% 정도가 이 활성산소에 의한 것으로 규명되어지고 있다. 사람의 몸은 약 60조의 세포로 구성되어 있으며, 세포막은 임피질로 형성되어 있어 활성산소가 연결되기 쉽다. 산화반응이 발생하면 불포화 지방산은 과산화지질로 변화한다. 이 과산화지질이 유전자 DNA, RNA, 단백질, 세포막 및 세포 구조 등에 손상을 주어 암이 되거나 여러 성인병의 원인이 되며, 궁극적으로 노화의 원인이 된다. 바로 이러한 활성산소를 없애거나 중화시켜 세포가 산화하는 것을 막는 역할을 하는 물질을 항산화 물질이라고 한다. 일반적으로 피부세포의 구성성분인 지질의 활성산소로 인해 과산화가 일어나면 세포막의 구조가 변형되어 세포 투과성, 유동성, 막 효소와 운반 단백질의 불활성화, 단백질 사슬의 절단, DNA, RNA 손상 등이 발생하여 피부세포가 노화가 일어난다고 알려져 있다. 이러한 이유 때문에 활성산소를 제거하려고 하는 노력이 지속되었으며, 이러한 결과로 인해 많은 황산화 물질이 개발되었다. 지금까지 항산화 작용을 갖는 것으로 알려진 물질로는, 아스코르브산(ascorbic acid), 베타카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT), 디엘-알파 토코페롤(DL-α-tocopherol) 등이 있다. 그러나, 이러한 물질들은 합성물질로 사용되기 때문에, 장기 사용시 또는 다량 사용하여 피부에 사용 시 피부 안전성의 문제를 일으키거나, 화장품에 제형에 함유시 안정성에 문제가 있어 그 사용에 있어 제한을 받고 있는 실정이다. 이에 많은 연구자들이 이러한 문제점들을 해결하고자 많은 노력을 하고 있다.

PCT 국제공개특허 WO1997-17056에는 VIBURNUM 속 식물의 추출물을 사용한 화장료 조성물이 공지되어 있다.

본 발명자는 노화를 개선하기 위해 천연 식물 성분들에 대한 다양한 피부 생리활성을 검색한 결과, 천연 식물 추출물 중에서 백당나무(Vibumum opulus) 발효 추출물이 항산화, 엘라스타제(Elastase) 저해 활성, 콜라겐 합성 촉진 효과, MMP-1 생성 억제 효과를 보임으로써 효과적으로 피부를 개선할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성 하였다.

따라서, 상기와 같은 본 발명의 목적은 백당나무 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 의해 달성된다.

바람직하게는, 상기 백당나무 발효 추출물을 전체 중량에 대하여 0. 001 ~ 40.0 중량% 를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 백당나무 발효 추출물은 개화한 꽃과 열매를 포함한 전초로부터 추출한 유효성분을 함유하는 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 백당나무 발효 추출물은 락토바실러스 애씨도필러스( Lactobacillus acidophilus)(KTCT 3140)와 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)(5854)를 1:1의 비로 혼합하여 발효 후 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 백당나무 발효 추출물은 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트 및 부틸 아세테이트로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매로 추출된 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

본 발명은 백당나무추출물을 유효성분으로 포함하는 중금속, 미세먼지 흡착 및 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함된 유효성분인 백당나무 발효 추출물은 항산화, 엘라스타제 저해, 콜라겐 생합성, MMP-1 생성억제효과가 우수하므로 주름개선, 노화 방지의 효과가 있다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.

본 발명은 백당나무 발효 추출물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물ㅇ에 관한 것이다.

본 발명에 사용된 백당나무는 인동과의 쌍떡잎 식물로써 한국, 일본, 중국에 주로 분포하며, 산지의 습한 곳 주변에서 자란다. 나무껍질은 불규칙하게 갈라져있으며, 잎은 넓은 달걀 모양으로 끝이 3개로 갈라져있다. 백당나무는 예로부터 열매와 뿌리 줄기를 관절통, 이질, 설사, 타박상 등의 효능으로 이용되어져 왔다.

본 발명의 백당나무 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올) , 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출한다. 본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다.

본 발명에서 백당나무 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올) , 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다. 한편, 본 발명의 백당나무 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다. 또한, 본 발명의 백당나무 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계 추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.

본 발명에 따른 백당나무 추출물은 발효과정을 거친 추출물도 포함하는 데 백당나무의 발효추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 백당나무 전초를 100~500메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1~50g/L를 첨가하고 효모 균주 또는 유산균등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다. 상기 미생물은 효모 균주 또는 유산균 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어지는 군중에서 선택될 수 있으며, 예를 들어 락토바실러스 애씨도필러스, 비피도박테리움 락티스 등이 있으며 바람직하게는 락토바실러스 애씨도필러스와 비피도박테리움 락티스를 1:1로 혼합한 것일 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 백당나무 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 40.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 백당나무 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 나타나지 않으며, 40.0 중량% 를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 백당나무 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 항산화 효과, 엘라스타제 저해활성, 콜라겐 생합성 효과, MMP-1 생성억제 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제,비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액,현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다. 이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다.

하기의 제조예는 상기에서 언급한 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법, (d)발효공정을 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물을 얻어 질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 사실이며, 하기에 언급한 제조예에 한정되는 것은 아니다.

제조예 1 - 백당나무 용매 추출물 제조

백당나무의 꽃과 열매를 포함하는 전초를 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음 일정한 크기로 절단하여 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50 ℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 건조한 추출물은 일정 농도로 희석하여 하기의 실험에 사용하였다.

제조예 2 - 백당나무 발효 추출물 제조 (Lactobacillus acidophilus)

제조예 1로부터 획득한 백당나무 추출물을 10g/1L가 되게 배양액에 첨가하였으며, 탄소영양원으로는 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 배양액 당 락토바실러스 애씨도필러스(KTCT 3140)를 50,000cfu/L 첨가 한 후, pH 5~7의 조건으로 37℃에서 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액은 0.25μM 필터를 이용하여 여과한 후 여과액을 농축하여 발효 추출물을 1.0kg을 제조하였다.

제조예 3 - 백당나무 발효 추출물 제조 (Bifidobacterium lactis)

제조예 1로부터 획득한 백당나무 추출물을 10g/1L가 되게 배양액에 첨가하였으며, 탄소영양원으로는 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 배양액 당 비피도박테리움 락티스(5854)를 50,000cfu/L 첨가 한 후, pH 5~7의 조건으로 37℃에서 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액은 0.25μM 필터를 이용하여 여과한 후 여과액을 농축하여 발효 추출물을 1.0kg을 제조하였다.

제조예 4 - 백당나무 혼합 발효 추출물 제조

제조예 1로부터 획득한 백당나무 추출물을 10g/1L가 되게 배양액에 첨가하였으며, 탄소영양원으로는 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트를 첨가하였다. 배양액 당 락토바실러스 애씨도필러스(KTCT 3140)와 비피도박테리움 락티스(5854)를 동일 비율(1:1 중량비)로 각 25,000cfu/L 첨가 한 후, pH 5~7의 조건으로 37℃에서 7일간 배양하였다. 배양 후 배양액은 0.25μM 필터를 이용하여 여과한 후 여과액을 농축하여 발효 추출물을 1.0kg을 제조하였다.

실험예 1 - DPPH 라디칼 소거능 측정

상기의 제조예 1에 대하여 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 L-Ascorbic acid를 비교샘플로 하여 DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 프리라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다. 사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 프리라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76)0.2mM 용액으로서 메탄올에 용해하여 100ml로 한다. 측정방법으로서, 96-웰 플레이트에 0.2mM DPPH 용액 0.15ml과 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.2mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

결과는 수학식 1에 의하여 SC₅₀ 값을 산출하였으며, 결과는 표 1에 나타내었다. 비교군으로써 L-아스코르브산(ascorbic acid)를 사용하였다.

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

시료명	SC ₅₀ (ppm)
제조예1	15.47 ± 1.01
제조예2	12.31 ± 1.51
제조예3	10.59 ± 1.57
제조예4	8.17 ± 1.09
L-ascorbic acid	7.10 ± 1.10

실험예 2 - 엘라스타제(Elastase) 저해 활성 측정

엘라스타제(Elastase)는 진피 내 피부탄력을 유지시키는 데 중요한 기질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 또한 엘라스타제는 다른 중요한 기질단백질인 콜라겐을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다. 따라서 엘라스타제 저해제는 피부주름을 개선하는 작용을 나타내며, 유솔릭 산 등이 엘라스타제 저해제로서 이용되고 있다. 엘라스타제는 동물 결합조직의 불용성 탄성 섬유 단백질인 엘라스틴을 분해시켜 피부의 진피조기의 그물망 구조 결합을 끊어줌으로써 주름생성의 주원인인 효소로 알려져 있다. 피부의 진피 조직 속에는 콜라겐과 피부의 탄력성에 관련된 엘라스틴이 그물망 구조를 형성하고 있는데, 이러한 그물망 구조가 깨어지면서 즉 엘라스틴이 엘라스타제에 의해 분해되어 피부가 처지고 주름이 생기므로 내인성 피부노화가 발생한다. 그러므로 피부노화의 주원인 중의 하나인 엘라스틴 분해효소인 엘라스타제의 활성을 저하시킴으로서 피부노화를 억제할 수 있다. 기질로서 N-석시닐-(L-Ala)3-p-니트로아닐리드, S4760, Sigma를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-니트로아닐리드의 생성량을 445nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 500μL씩 시험관에 취하고, 2mM tris-HCl buffer (pH8.6)에 녹인 돼지 췌장 엘라스타제(E1250, Sigma 2.5U/mL)용액 500μL을 가한 후 기질로 50mM tris-HCl buffer(pH8.6)에 녹인 N-석시닐-(L-Ala)3-p-니트로아닐리드(500μg/mL)를 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. 엘라스타제 저해 활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 하기 수학식 2에 따라 계산하여 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	elastase inhibition (%)
아데노신	5000	78.08 ± 1.41
제조예 1	100	13.97 ± 2.07
제조예 1	1000	35.81 ± 1.73
제조예 2	100	18.27 ± 1.94
제조예 2	1000	37.22 ± 2.17
제조예 3	100	19.79 ± 2.41
제조예 3	1000	40.01 ± 1.92
제조예 4	100	23.16 ± 1.66
제조예 4	1000	57.97 ± 2.13

실험예 3 - ELISA kit를 이용한 콜라겐(collagen) 생합성 측정 결과

인간 섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기 내에서 10% FBS, 페니실린(50U/ml), 스트렙토마이신(50/ml)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1× 10⁵개/ml로 24 웰-플레이트에 500㎕씩 분주한 다음 24시간 배양하였다. 섬유아세포에서 콜라겐 타입 I의 정량은 '프로콜라겐 타입 I c-펩타이드 EIAkit(TaKaRa, japan)'를 이용하여 효소면역분석법(immunosorbent assay, ELISA)으로 실시하였는데, 분석을 위해 48시간 동안 배양한 상기의 세포 배양 상등액을 조심스럽게 수집하였다. 먼저 '프로콜라겐 타입 I c-펩타이드와 결합하는 항체가 코팅된 스트립(strip)에 48시간 배양된 배양 상등액을 각각 100 ul씩 첨가하고 37℃ 에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거한 다음, 여기에 블라킹 버퍼를 100 ul씩 넣고, 다시 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, '프로콜라겐 타입 I c-펩타이드'와 결합하는 또 다른 항체에 POD가 콘쥬게이트된 용액(Antiobody-POD conjugate solution)을 100ul씩 넣고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱 버퍼를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 동량의 기질 용액에 넣고, 30분간 반응시킨 다음 정지용액(stop solution, 1N H2SO4)을 넣고 실험을 종료하였다. 실험이 종료된 스트립을 450nm에서 흡광도를 측정하여 콜라겐 표준품과 비교하여 새로 합성된 콜라겐 양을 PICP양으로 측정하였으며 콜라겐의 합성효과를 표 3에 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	콜라겐 합성량 *(ng/210** ⁴ )
아스코르브산	100	128 ± 4.01
제조예1	100	73 ± 1.54
제조예1	200	91 ± 3.74
제조예2	100	79 ± 2.15
제조예2	200	97 ± 3.21
제조예3	100	76 ± 2.17
제조예3	200	92 ± 2.87
제조예4	100	86 ± 2.07
제조예4	200	104 ± 2.48

실험예 4 - MMP-1 생성 억제 효과

본 실험예 4는 상기 제조예 1 내지 4를 이용하여 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과가 있는지 여부를 측정하기 위해, MMP-1의 생성을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/ml, Roche, 미합중국)를 비교군으로 하여 MMP-1의 생성을 억제하는 효과를 측정하였다. 인간 정상 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 10⁶세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1 내지 4의 백당나무 추출물의 최종 농도 100 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 백당나무 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham,미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.

시료명	처리농도(nM)	MMP-1 생성 저해율(%)
TGF-β	200	70.3 ± 5.24
제조예 1	100	22.41 ± 4.07
제조예 1	200	31.25 ± 5.21
제조예 2	100	26.87 ± 3.37
제조예 2	200	33.25 ± 4.03
제조예 3	100	25.48 ± 3.73
제조예 3	200	34.09 ± 2.91
제조예 4	100	30.89 ± 2.17
제조예 4	200	48.30 ± 2.74

상기의 실험예를 통하여 제조예들의 효능, 효과를 확인할 수 있었으며, 효과가 우수한 제조예 4를 제형에 적용하여 효능 검증을 재실시 하였다.

처방예 1 - 화장수

백당나무 발효 추출물(제조예 4)을 함유한 화장료 중 화장수의 처방예는 다음 표 5와 같다.

성분		함량(단위:중량%)
제형예1	제형예2
제조예4 글리세린 1.3-부틸렌글리콜 피이지1500 알란토인 DL-판테놀 EDTA-2Na 벤조페논-9 소듐 히아루로네이트 에탄올 옥틱도데세스-16 폴리솔베이트 20 방부제, 향, 색소 증류수	- 글리세린 1.3-부틸렌글리콜 피이지1500 알란토인 DL-판테놀 EDTA-2Na 벤조페논-9 소듐 히아루로네이트 에탄올 옥틱도데세스-16 폴리솔베이트 20 방부제, 향, 색소 증류수	3.0 5.0 3.0 1.0 0.1 0.3 0.02 0.04 5.0 10.0 0.2 0.2 미량 잔량
합계		100

처방예 2 - 크림

백당나무 발효 추출물(제조예 4)을 함유한 화장료 중 크림의 처방예는 다음 표 6와 같다.

성분		함량 (단위:중량%)
제형예3	제형예4
제조예4 친유형 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	- 친유형 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	3.0 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량
합계		100

처방예 3 - 에센스

백당나무 발효 추출물(제조예 4)을 함유한 화장료중 에센스의 처방예는 다음 표 7와 같다.

성분		함량 (단위:중량%)
제형예5	제형예6
제조예 4 글리세린 베타인 피이지 1500 알란토인 DL-판테놀 이.디.티.에이-2Na 벤조페논 - 9 히드록시에칠 셀룰로오스 소듐히아루로네이트 카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민 옥틸도데칸올 옥틸도데세스 -16 에탄올 방부제, 향, 색소 증류수	- 글리세린 베타인 피이지 1500 알란토인 DL-판테놀 이.디.티.에이-2Na 벤조페논 - 9 히드록시에칠 셀룰로오스 소듐히아루로네이트 카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민 옥틸도데칸올 옥틸도데세스 -16 에탄올 방부제, 향, 색소 증류수	3.0 10.0 5.0 2.0 0.1 0.3 0.02 0.04 0.1 8.0 0.2 0.18 0.3 0.4 6.0 미량 잔량
합계		100

실시예 1 - 백당나무 발효 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과 평가

본 발명의 백당나무 발효 추출물(제조예 4)을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 백당나무 발효 추출물을 3%(v/v)를 함유하고 있는 제형예 3의 크림과, 크림에서 백당나무 발효 추출물을 정제수로 대체한 제형예 4의 크림을 사용해 평가하였다. 30명의 30-40세 여성을 무작위로 2개군으로 나누어 제형예의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 눈가를 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 주름 개선 효과를 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 8에 나타낸 바와 같다.

	주름개선효과 우수	주름개선효과 약간	주름개선 효과 없음
제형예 3	8	9	3
제형예 4 ( 비교제형예 )	3	8	9

그 결과, 본 발명의 백당나무 추출물을 함유한 화장료는 함유하지 않은 비교예에 비하여 높은 주름개선 효과를 나타내었으며, 본 발명의 화장료를 피부에 도포한 부분의 피검자들에서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.

실시예 2 - 백당나무 발효 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과 평가

본 발명의 백당나무 발효 추출물(제조예 4)을 함유하는 화장료의 피부 탄력 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 백당나무 추출물을 각각 3%(v/v) 함유하고 있는 제형예 3의 크림과 백당나무 추출물을 정제수로 대체한 제형예 4의 크림을 사용해 평가하였다. 30명의 30-40세 여성을 무작위로 2개군으로 나누어 제형예 3과 제형예 4의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 양볼을 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 피부 탄력 개선 효과를 Cutometer(C+K,독일)를 이용하여 탄력 증진 유무를 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 9에 나타낸 바와 같다

	주름개선효과 우수	주름개선효과 약간	주름개선 효과 없음
제형예 3	11	5	4
제형예 4(비교제형)	3	3	14

그 결과, 본 발명의 백당나무 추출물을 함유한 제형예 3의 크림은 백당나무 추출물을 함유하지 않은 제형예 4의 크림에 비하여 높은 피부 탄력 증진 효과를 보여주었으며, 본 발명의 화장료를 피부에 도포한 부분의 피검자들에게서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.

Claims

백당나무 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물로서, 상기 백당나무 발효 추출물은 백당나무 용매 추출물을 락토바실러스 애씨도필러스와 비피도박테리움 락티스를 1:1의 중량비로 혼합하여 발효하여 추출되고, 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0. 001 ~ 40.0 중량%를 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 백당나무 발효 추출물은 개화한 꽃과 열매를 포함한 전초로부터 추출한 유효성분을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 백당나무 용매 추출물은 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트 및 부틸 아세테이트로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매로 추출된 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
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