JP6999267B2 - ルピンペプチド抽出物および皮膚の張り - Google Patents
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Description
本発明は、皮膚の張りの喪失を予防することまたは皮膚の張りを強化することを目的とした、ルピンペプチド抽出物の使用に関する。有利には、ルピンペプチド抽出物は、くぼみ(凹み)の出現を予防、および/または皮膚のくぼみを軽減することができる。
真皮とは、表皮および皮下組織の間に含まれている、皮膚の3つの構成層のうちの1つである。真皮は、皮膚を下から支える結合組織であり、真皮の主要細胞集団である線維芽細胞から生成された、細胞外マトリックス(ECM)から主になる。
(a)ルピンタンパク質フラクションの抽出;
(b)ステップ(a)-で得られたタンパク質フラクションの加水分解;
(c)ペプチド抽出物の回収。
-保存料なく、滅菌容器内に層流下で分配する;または
-「清潔」な容器に分配する前に、保存料の添加を経て微生物学的に安定化させる。潜在的に使用することがきる保存料として、パラベンおよび/またはフェノキシエタノールの混合物(例えば、0.5%のPhenonip)が挙げられる。パラベンを含まない混合物が好ましい(例えば、フェノキシエタノール(1%)、クエン酸(0.5%)、アスコルビン酸(0.08%)の混合物);または
-噴霧乾燥または凍結乾燥を介して乾燥させることによって安定化させ、湿度および微生物汚染から保護された密封袋に包装することができる、乾燥形態でペプチド抽出物を得る。
i) 好適な溶剤を用いて、ルピン種子から脂質を抽出し、かつルピンタンパク質および単糖類フラクションを回収する;
ii) 限外濾過によってタンパク質フラクションを抽出し、当該タンパク質フラクションを回収する。
粉砕、脱脂ルピンケーキの調製
ルピン種子を粉砕し、エタノールを用いて脂質を抽出した。
このステップは、アルカリpHでの可溶性フラクションの水性可溶化、続く不溶性物質の分離を含んでなる。
タンパク質を含有する限外濾過未透過物を、100g/1の濃度に調製し、次いで、約3時間、55℃にて、Alcalase# (NOVO NORDISK)の存在下で、pH8.0に加水分解した。加水分解後、85℃で、15分間、加水分解によって酵素を変性させた。溶液が冷却されると直ちに、塩酸の添加を経て中性化させた。得られたペプチドを、10,000ダルトンの下限値を有する限外濾過モジュールで透析濾過によって精製した。得られた水溶液を、脱塩(塩化ナトリウムの除去)およびペプチドフラクションの濃縮のためにナノ濾過した。ペプチドの溶液を、3%の活性炭素を用いて脱色し(50℃で1時間)、炭素を濾過によって除去した。
梱包の前に、溶液は、滅菌して精密濾過(0.2μm)され、次いで以下を行うことができる:
-「清潔な」容器(Laboratoires Expanscienceによって販売されているActimp(商標)1.9.3(10%のルピンペプチドから作られている))に分配する前に、パラベンを含まない混合物(フェノキシエタノール(1%)、クエン酸(0.5%)、ソルビン酸(0.08%))の添加を介して、微生物学的に安定化させる。
-乾燥形態のペプチドを得るために、凍結乾燥によって安定化させ、湿度および微生物汚染から保護された密封袋に包装する(Laboratoires Expanscienceによって販売されているActimp(商標)粉末)。
-外観: 均質的、非吸湿性粉末;
-色:オフホワイト;
化学的組成:
-糖の総含有量(アントロンとのアッセイ):<4 %
-塩素含有量(SIGMAキット整理番号: 955-30):<6%
-含水量(100℃、4時間):<8%
-ペプチド含有量:>80%
-pH(20g/lの溶液):7.06
-可溶性(浸透水):>100g/L
in vitroで培養したヒト線維芽細胞から寄託された合成コラーゲン線維中へのAGEの非酵素的挿入を観察した。トリチウム化したグルコースの細胞外マトリックスのタンパク質への組込に基づく、放射能検出法を用いた。
線維芽細胞を含有する真皮同等物のモデルは、線維芽細胞とコラーゲン線維の間における相互作用の質の評価を可能とする。これら真皮同等物の自由な収縮/反応は、コラーゲンネットワークに張力をかける、細胞の動力学的活性に起因する。
張力をかけた真皮同等物中の線維芽細胞によって発達した等尺性力でルピンペプチド抽出物の効果を研究した(GlasBox(商標)モデル)。
ヒトの皮膚の外植片でルピンペプチド抽出物の活性を評価した:細胞外マトリックス(I型およびIII型コラーゲン)および表皮真皮接合部(IV型コラーゲン、ラミニン5)のマーカーを免疫染色によって分析した。
I型およびIV型コラーゲンならびにラミニン5を凍結部分に染色し、蛍光(FITC)下で検出し、細胞核を、プロピジウムヨウ化物で対比染色した。
III型コラーゲンは、パラフィン部分を染色し、ペルオキシダーゼを用いて検出した。
Claims (10)
- 皮膚のくぼみの出現の予防もしくは皮膚のくぼみの軽減のための、または体のシルエットの再形成のための、0.001~30乾燥重量%のルピンペプチド抽出物を含んでなる、化粧料組成物であって、前記ルピンペプチド抽出物が、ルピン属(Lupinus)植物から抽出されるタンパク質のフラクションの酵素加水分解により得られ、かつペプチド抽出物の全乾燥重量に対して、少なくとも80重量%のペプチドを含んでなる、化粧料組成物。
- 皮膚が体の皮膚である、請求項1に記載の化粧料組成物。
- 0.05~0.2重量%のルピンペプチド抽出物を含んでなる、請求項1に記載の化粧料組成物。
- 前記ルピンペプチド抽出物のペプチドが、10,000Da未満の分子量を有する、請求項1~3のいずれか一項に記載の化粧料組成物。
- 前記ペプチド抽出物が、4重量%未満の糖および/または1重量%未満の脂質を含んでなる、請求項1~4のいずれか一項に記載の化粧料組成物。
- 前記ペプチド抽出物のペプチドが、130Daを超える分子量を有する、請求項1~5のいずれか一項に記載の化粧料組成物。
- 前記ペプチド抽出物が、白花ルピナス(lupinus albus)のペプチド抽出物である、請求項1~6のいずれか一項に記載の化粧料組成物。
- 局所適用のための、または経口経路によって摂取するための、請求項1~7のいずれか一項に記載の化粧料組成物。
- 前記化粧料組成物が、さらにゲル化剤、保存料、酸化防止剤、溶剤、香料、充填剤、化学的または鉱物フィルター、顔料、キレート剤、臭気吸収剤、熱水泉および/または着色材を含んでなる、請求項1に記載の化粧料組成物。
- ルピン属(Lupinus)植物から抽出されるタンパク質のフラクションの酵素加水分解により得られるルピンペプチド抽出物であって、ペプチド抽出物の全乾燥重量に対して少なくとも80重量%のペプチドを含んでなる、ルピンペプチド抽出物からなる、抗糖化剤。
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