HU219057B - Inszekticid hatású proteinek Homoptera rovarok ellen és alkalmazásuk a növényvédelemben - Google Patents

Inszekticid hatású proteinek Homoptera rovarok ellen és alkalmazásuk a növényvédelemben Download PDF

Info

Publication number
HU219057B
HU219057B HU9400571A HU9400571A HU219057B HU 219057 B HU219057 B HU 219057B HU 9400571 A HU9400571 A HU 9400571A HU 9400571 A HU9400571 A HU 9400571A HU 219057 B HU219057 B HU 219057B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
plant
gene
promoter
protein
gna
Prior art date
Application number
HU9400571A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT70273A (en
HU9400571D0 (en
Inventor
Donald Boulter
Angharad Margaret Roscoe Gatehouse
Vaughan Alan Hilder
Kevin Powell
Original Assignee
Novartis Ag.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB919118365A external-priority patent/GB9118365D0/en
Priority claimed from GB919121195A external-priority patent/GB9121195D0/en
Application filed by Novartis Ag. filed Critical Novartis Ag.
Publication of HU9400571D0 publication Critical patent/HU9400571D0/hu
Publication of HUT70273A publication Critical patent/HUT70273A/hu
Publication of HU219057B publication Critical patent/HU219057B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/20—Fabaceae or Leguminosae [Pea or Legume family], e.g. pea, lentil, soybean, clover, acacia, honey locust, derris or millettia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/40—Liliopsida [monocotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/40—Liliopsida [monocotyledons]
    • A01N65/44—Poaceae or Gramineae [Grass family], e.g. bamboo, lemon grass or citronella grass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C07K14/42—Lectins, e.g. concanavalin, phytohaemagglutinin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

A találmány Homoptera rovarkártevőkre toxikus vagy antimetabolikushatású proteinek előállítására, és ennek e rovarok elleni védekezésbentörténő felhasználására vonatkozik. A találmány szerinti transzgénnövény Homoptera rovarkártevőkre toxikus vagy antimetabolikus hatásúproteint kódoló gént tartalmaz; ez a gén olyan promoterrel állkapcsolatban, amely a növény floémjében eredményezi a génexpresszióját. ŕ

Description

A találmány bizonyos proteineknek a Homoptera rendbe tartozó, növényi nedvekkel táplálkozó növénykártevő rovarok elleni küzdelemben történő felhasználására, továbbá az említett proteineknek a növények Homoptera kártevők elleni fokozott rezisztenciáinak kialakításához történő alkalmazására vonatkozik.
A Homoptera rend - melyet gyakran a Hemiptera rend elkülönült alrendjeként említenek - a növényi tetvek néven ismert rovarokat foglalja magában. Ezen rovarok szúró-szívó szájszervvel rendelkeznek és növényi nedvekkel táplálkoznak. A rendbe tartoznak a levéltetvek (Aphididae család), a liszteskék (Aleyrodidae), a sarkantyúskabócák (Delphacidae), a mezei kabócák (Cicadellidae), a levélbolhák (Psyllidae), a gyapjas levéltetvek (Pemphigidae), a karmazsintetvek (Pseudococcidae) és a pajzstetvek (Coccidae, Diaspididae, Asterolecaniidae és Margarodidae). Sok faj veszedelmes mezőgazdasági és kertészetitermény-kártevő, illetve dísznövénykártevő, például a borsólevéltetű, a feketebablevéltetű, a gyapotlevéltetű, a zöldalma-levéltetű, a melegháziburgonya-levéltetű a szilvalevélsodró levéltetű, a banánlevéltetű, a káposzta-levéltetű, a fehérrépalevéltetű, a zöld őszibarack-levéltetű, a kukorica-levéltetű, a búzalevéltetű, a káposztaliszteske, a dohányliszteske, a melegházi liszteske, a citrustripsz, a barna sarkantyúskabóca, a barna rizs-sarkantyúskabóca, a cukornád-sarkantyúskabóca, a fehér hátú sarkantyúskabóca, a zöld mezei kabóca, a répa-mezeikabóca, a ráncos szárnyú mezei kabóca, az almalevélbolha, a körtelevélbolha, a gyapjas almalevéltetű, a gyapjas salátagyökér-levéltetű, a szőlőfiloxéra, a hosszú farkú karmazsintetű, az ananász-karmazsintetű, a sávos karmazsintetű, a rózsaszín cukomád-karmazsintetű, a gyapjas pajzstetű, az olajfapajzstetű, a kagylós pajzstetű, a San Jose-pajzstetű, a kaliforniai vörös pajzstetű, a floridai vörös pajzstetű és a kókuszpajzstetű.
Az említett rovarok táplálkozásuk eredményeként többféle módon okozhatnak terméskárt. A növényi nedvek szívásával megfosztják a növényt a víztől és a tápanyagoktól, ami a növény életképességének elvesztéséhez és kiszáradásához vezet. A néhány faj nyálában jelen levő fitotoxikus anyagok, illetve a táplálkozás során a floém mechanikus károsítása a levélzet eltorzulását és elhalását (például az úgynevezett „levéltetűégés” esetében) és - a szemtermések esetében fonnyadt magvakat és gabonavakságot eredményez. A rovarok szúró-szívó szájszervének a növény szövetei közé történő behatolása olyan sérüléseket eredményez, amelyen keresztül a növénypatogének bejuthatnak. A növényi tetvek bőséges mézharmat ürítése elősegíti a korompenész megtelepedését, illetve a mézharmat ragadóssága miatt akadályozza a gabonafélék és a gyapot betakarítását. E kártevők által okozott legsúlyosabb károk némelyike indirekt, mivel ezen rovarok növényi vírusok vektoraiként szolgálnak. A Homopterák által terjesztett súlyos vírusbetegség például a kukoricasávosság, a répa fejzsugorodása, az északi gabonamozaikosság, a zabrozetta, a körtevész, a dohány mozaikossága, a karfiol mozaikossága, a fehérrépa mozaikossága, a rizs narancslevelűsége, a rizs törpenövése, a rizs sárga törpenövése, a rizs múló sárgasága, a rizs fűszerű satnyulása, a cukornád Fijibetegsége, a manióka mozaikossága, a gyapot levélfodrossága, a dohány levélfodrossága, az édesburgonya B vírus, a földimogyoró-rozetta, a banán csúcsfodrossága, a citrustriszteza, az ananász karmazsintetves fonnyadása és a kakaó duzzadt saqadása. A Homoptera rovarok populációinak csökkentése hasznos lehet a felsorolt és egyéb növényi vírusbetegségek visszaszorításában. A találmány a növényi nedveket szívó rovarkártevők leküzdésének problémájára vonatkozik.
Az 1940-es évek vége óta az említett kártevők visszaszorításának módjai a szintetikus szerves vegyületek külsőleg történő alkalmazására összpontosultak. A Homopterák táplálkozási szokásai miatt a hatékony inszekticideknek érintkezés vagy a növényi szövetekből történő felvétel során kell kifejteniük mérgező hatásukat. Inszekticidként klórozott szénhidrogént, szubsztituált fenolszármazékot, szerves foszfátot, karbamátot és piretrint alkalmaztak, de a növényvédelem ilyen formája a szakemberek számára ismert, egyre növekvő mértékű gondokkal kerül szembe. A rovarkártevők peszticidekkel szembeni rezisztenciája kialakulásának problémája különösen kritikus a Homopterák esetében, ahol a kifejezetten rövid generációs idő lehetővé teszi a rezisztens biotípusok gyors megjelenését. Például a barna rizs-sarkantyúskabóca minden kétséget kizáróan körülbelül 18 hónap alatt új biotípust fejleszt ki.
A rovarkártevők elleni biológiai védekezést alternatív lehetőségként részesítik előnyben. Az ilyen módszer a megcélzott kártevő populációjának visszaszorításához annak természetes vírus-, baktérium- és gombakórokozóit, illetve természetes gerinctelen és gerinces ragadozóit használja fel. Például a granulózis és polihedrózis vírusok hatásosak egyes hernyók és levéldarázslárvák ellen (például Heliothis PHV), és a Bacillus thuringiensis kurstaki bizonyos hernyók ellen hatékony. A kórokozó/élősködő gombákat a rovarok több rendjéből széleskörűen azonosították, beleértve a Homopterákat is. A Verticilium lecanii alkalmasnak bizonyult a levéltetvek és a liszteskék melegházi visszaszorítására, nem így a szabadban. Néhány esetben alkalmazták a rovarkártevők szabadon élő és élősködő ragadozóit, főleg állandó ökoszisztémában, például melegházban és gyümölcsösben. Melegházban például különféle, Hymenoptera (hártyásszámyúak), Coleoptera (bogarak) és Acaridea (atkák) rendbe tartozó fajt alkalmaztak a levéltetvek és a liszteskék leküzdésére. A biológiai védekezés széles körű bevezetését korlátozták a nagy mennyiségű előállítás és a széles körű alkalmazás problémái, illetve a földeken a folyamatos ellenőrzés lehetőségének hiánya.
Egy előnyös megoldás az eredendően rovarrezisztens növényfajták, -változatok, -törzsek alkalmazása, amely egységes, rovarkártevők elleni védekezési program keretében hajtható végre. Az ilyen, rovarkártevőkkel szemben ellenálló, igénytelen, antibiózist vagy rovarkártevő-toleranciát mutató, rezisztens törzsek előállítása a termésnövelő növénytermesztési programok egyik fő célja. Olyan esetekben, ahol a Homopterák elleni rezisztencia biokémiai mechanizmusa ismert, a re2
HU 219 057 Β zisztencia megléte specifikus, nem protein jellegű másodlagos anyagcseretermékek megváltozott szintjének köszönhető. E megközelítést korlátozza a rezisztenciára vonatkozó genetikai variabilitás mértéke, amely a kereszteződési csíraplazmából mutatható ki. Egy adott rovarkártevő elleni rezisztencia forrása gyakran nem hozzáférhető. Ezt tovább korlátozza az a tény, hogy az adott jelleg mezőgazdaságilag megfelelő genetikai hátterű biztosításához szükséges nagyszámú visszakeresztezéssel terhelt rezisztens fajta előállításához hosszú időre van szükség. Az új, rovarrezisztens növény törzsek bevezetésére válaszul új rovarbiotípusok keletkeznek, amelyekre a növények nem rezisztensek. A szintetikus inszekticidek alkalmazásához hasonlóan a rezisztenciát megszakító biotípusok kifejlődése különleges gondot jelent a Homopterák esetében. Például a Nemzetközi Rizskutató Intézetben (IRRI, International Rice Research Institute, Manila, Fülöp-szigetek) sok, a barna sarkantyúskabócára (BPH) rezisztens rizsváltozatot fejlesztettek ki, amelyek bizonyos időn keresztül kiváló védekezést nyújtottak a földeken az említett rovar ellen. Azonban néhány területen olyan mennyiségben fejlődtek ki a rezisztenciát megszakító biotípusok, hogy veszélyeztették a helyi rizstermelést. Az új, rezisztenciát megszakító rovarbiotípusok ugyanolyan ütemben jelennek meg, mint ahogy az IRRI kifejleszt egy-egy új BPH-rezisztens változatot. Ilyenformán folyamatosan szükség van új BPH-rezisztencia-génforrásokra, hogy azok bevonhatók legyenek a termesztési programba.
E kérdésben hasznos segítség lehet a génsebészet, mivel alkalmazásával a kiválasztott növénytörzsekbe egyszerűen inszertálhatók az inszekticid proteineket kódoló gének, függetlenül attól, hogy a kérdéses protein milyen természetes forrásból származik, illetve hogy az keresztezhető-e a gazdanövénnyel. A tudományban számos olyan eset ismert, amikor idegen géneket juttatnak transzgén növényekbe, ami meghatározza a levelek, gyökerek, szárak vagy termések rágásával táplálkozó rovarokra toxikus vagy antimetabolikus proteinek termelődésének szintjét.
Az EPA 0142 924 számú európai közrebocsátási irat (Agrigenetics Research Associates Ltd.) B. thuringiensis delta-endotoxin - amely larvicid hatású bizonyos Lepidopterákra - transzgén növényekben történő termelését írja le. Hasonlóan az EPA 0193 259 számú európai közrebocsátási irat (Plánt Genetic Systems NV) csonkított Bt toxin gént expresszáló transzgén növényekben történő Lepidoptera toxikus protein termelést ír le. Azon Bt toxin géneket, amelyek a transzgén növényekbe történő bejuttatás folytán alkalmasak a Coleoptera rendbe tartozó rovarok elleni védekezésre, az EPA 0289 479 (Monsanto Co.) és az EPA 0305 275 (Plánt Genetic System) számú európai közrebocsátási írat írja le. Az EPA 0339 009 számú európai közrebocsátási irat (Monsanto Co.) a Lepidoptera-specifikus Bt toxin hatékonyságának tripszininhibitor koexpresszálásával történő fokozását írja le transzgén növényekben.
Az EPA 0272 144 számú európai közrebocsátási irat (Agricultural Genetics Co.) ismerteti, hogy a tehénborsóból származó, tripszininhibitort kódoló gén transzgén növényekben történő expressziója mind a Lepidoptera, mind a Coleoptera rendbe tartozó kártevők ellen növeli a növény rezisztenciáját.
Az EPA 0337 750 számú európai közrebocsátási irat (Plánt Cell Research Institute Inc.) a vad Phaseolus bab magjának tartalék proteinjét, az arcelint kódoló gének transzgén növényekbe történő bejuttatását és expresszálását írja le, s felveti annak lehetőségét, hogy e módszer alkalmas lehet a Coleoptera kártevők elleni védekezésre.
Az EPA 0351 924 számú európai közrebocsátási irat (Shell International Research Maatschappij BV) a veteményborsóból származó lektint kódoló gének transzgén növényekbe történő bejuttatását és expresszálását írja le, amely fokozza a Lepidoptera-lárvák elleni rezisztenciát. A PCT/GB91/01290 számú szabadalmi bejelentés (Agricultural Genetics Co.) az egyszikű Amaryllidaceae és Alliaceae családból származó lektint kódoló géneknek a Lepidopterák és a Coleopterák elleni védekezésben történő alkalmazására vonatkozik. E módszer emlősök számára nem okoz toxicitást. Az EPA 0427 529 számú európai közrebocsátási irat (Pioneer Hi-Bred International Inc.) különböző lelktinek Lepidoptera és Coleoptera kártevők leküzdésében történő felhasználását írja le.
Az említett proteineket - inszekticid hatásuk kifejtése érdekében - a rovaroknak el kell fogyasztaniuk, s úgy tűnik, hogy elsődleges működési területük a középbél (Hoffmann, C. és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85, 7844-, 1984; Gatehouse, A. M. R. és Boulter, D., J. Sci. Food Agric., 34, 345-350, 1983; Gatehouse és munkatársai, J. Sci. Food Agric., 35,373-380,1984). A növényi nedveket szívó Homopterák emésztőrendszere azonban a rovarok osztályában sok tekintetben szokatlan, például nincs begyük, középbelük nincs beburkolva peritrofikus membránnal, és a hidrolitikus emésztőenzimek hiányoznak (lásd például Terra, W. R., Annu. Rév. Entomol., 35, 181-200, 1990). A növényi szöveteket rágó, illetve növényi nedveket szívó rovarok eltérő táplálkozási módja, táplálékforrása és bélrendszere ismeretében nagyon meglepő lenne, ha az egyik rovarcsoport ellen inszekticid hatással rendelkező proteinek hatásosak lennének egy másik rovarcsoport ellen is.
Az ábrák rövid leírása
Az 1. ábra a barna sarkantyúskabócával - a Homoptera rendbe tartozó rovarkártevők elleni védekezésben hatásos (például búzacsíra-agglutinin), illetve nem hatásos (például tehénborsó-tripszininhibitor) proteinek megkülönböztetése érdekében - végzett mesterségestáplálék-biovizsgálat adatait ábrázolja.
A 2. ábra a zöld őszibarack-levéltetűvel (Myzus persicae) végzett mesterségestáplálék-biovizsgálat adatait ábrázolja, bemutatva a rovar túlélésének GNA (a hóvirág lektinje) jelenlétében történő csökkenését.
A 3. ábra az idegen gének transzgén növényekben történő floémspecifikus expresszálásához alkalmas promotert tartalmazó pSC-plazmid, illetve az ennek előállításához használt pDB2 és pDA intermedier plazmidok géntérképét ábrázolja.
HU 219 057 Β
A 4. ábra az RSsl promoter gént és az R3sl intron 1 szekvenciát tartalmazó pSS24NN30B plazmid - amely hasznos intermedier plazmid - géntérképét ábrázolja.
Az 5. ábra a pSSG4NN30B plazmid RSsl promoter+intron 1 régiója pozitív szálának nukleotidszekvenciáját ábrázolja; ez a szekvencia alkalmas a gének egyszikű promoterből kiinduló, növényekben történő floémspecifikus expresszálásához.
A 6. ábra a floémspecifikus expressziós kazettaként alkalmazható pSCB plazmid géntérképét és a pSCIGNA plazmid - amely a hóviráglektin strukturális génjének specifikus vektora - géntérképét ábrázolja.
A 7. ábra a GNA-nak RSsl génpromoterből kiinduló, transzgén növények floémjában történő expressziójához biner vektorként alkalmazható pBRSSLT2-plazmid géntérképét ábrázolja.
A 8. ábra a pSCGNARl plazmid - amely közvetlen DNS-felvétel útján a hóviráglektingén bejuttatásához alkalmas, floémspecifikus expressziós egység - géntérképét, továbbá az előzőhöz hasonló, higromicinrezisztenciára történő szelekciót lehetővé tevő pSCGNAR2 plazmid géntérképét, valamint a pSCGNAR2 előállítnának intermedier pJITAph plazmidjának géntérképét ábrázolja.
A 9. ábra a pRSSLTR plazmid - amely transzgénes rizsnövények floémjában az RSsl promoterből történő GNA-expresszióhoz alkalmazható - géntérképét ábrázolja.
A 10. ábra a GNA-t expresszáló transzgén és kontroll-dohánynövények zöld őszibarack-levéltetű (Myzus persicae) elleni teljes növény biovizsgálatának adatait ábrázolja.
All. ábra a GNA-t expresszáló transzgén és kontroll-dohánynövények M. persicae ellen végzett levélkorong biovizsgálatának adatait ábrázolja.
Kimutattuk, hogy bizonyos proteinek inszekticidaktivitással rendelkeznek, ha a barna sarkantyúskabócának (BPH) emésztőrendszeren keresztül (enterálisan) adjuk. Ilyenformán a találmány eljárást bocsát közre Homoptera rovarok - beleértve a BPH-t - elpusztítására, melynek során a rovaroknak enterálisan, inszekticid hatást kifejtő mennyiségben megfelelő proteint, például Galanthus nivalis lektint (hóviráglektin; GNA) és Triticum vulgare lektint (búzacsíraagglutinin, WGA) adunk. Mivel a megcélzott rovarok kizárólag floémnedvvel táplálkoznak, a proteint ebben a nedvben kell biztosítanunk. A külsőleg alkalmazott proteinek nem képesek bekerülni a kezelt növények floémnedvébe. Mindamellett a szóban forgó proteineket klónozó gének izolálhatok, klónozhatok és megfelelő expressziós kazettába inszertálhatók, továbbá eljuttathatók az alkalmas növény genomjába, mégpedig úgy, hogy az expresszió a floémben történjen. Ilyenformán módszerünk előnyben részesített megvalósítása magában foglalja egy Homoptera rovarokat pusztító proteint - mint például a hóviráglektint vagy a búzacsíraagglutinint - kódoló DNS-szekvenciának a gazdanövény genomjába történő inszercióját - a növényben működőképes, floémspecifikus promoterszekvenciákat illetően helyes orientációban.
A növényekben történő génexpresszióhoz legelterjedtebben használt promoterszekvenciák találmányunk céljaira nem kimondottan alkalmasak. A karfiol-mozaikvírus (CaMV) 35S génjéből (Odell, J. T. és munkatársai, Natúré, 313, 551-554,1985), az Agrobacterium nopalin-szintázból (nos) és oktopin-szintázból (öcs), a szójabab kis alegységű ribulóz-l,5-bifoszfát-karboxiláz-génjéből (Berry-Lowe és munkatársai, J. Molec. Appl. Génét., 1, 483-498, 1982) és a klorofill a-bkötő protein génjéből (Simpson és munkatársai, Natúré, 323, 551-554, 1986) származó promoterszekvenciákat a Lepidoptera és Coleoptera rendbe tartozó, növényeket rágó rovarok elleni inszekticidaktivitással rendelkező proteinek expresszálásához részesítették előnyben. Ezek azonban nem rendelkeznek a találmányunk előnyös megvalósítási módjaihoz szükséges specifitással. Az utóbbi időkben kimutatták, hogy a 4xB2+A promoterstruktúra (Benfey és munkatársai, EMBO J., 9,1677-1684,1990), az olajrepcemag extenzin gén promotere (Shirsat, A. és munkatársai, Plánt Molec. Biok, 17, 701-709, 1991) és a rizs szacharózszintáz gén promotere (Yang, N-S. és Russel, D., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 4144-4148, 1990) a transzgén növények háncsszövetében magas szinten irányítják a proteinek expresszálását. A találmány előnyös megvalósítása kiméra-DNS-struktúrákat foglal magában, melyekben a Homopterákat pusztító proteint kódoló szekvenciákat a 4xB2+A promoter, az extenzin génpromoter vagy a rizs szacharóz génpromoter közül kiválasztott egyik szekvencia szabályozza. Ezen struktúrák a megfelelő orientációban poliadenilációs jelet és transzkripciós terminálási jelet is tartalmaznak. Ezeket a szekvenciákat a nopalin-színtetáz-gén (NOS) terminátorrégiója biztosítja.
A leírt génexpressziós struktúrákat szelektálható markergének expresszióját irányító járulékos struktúrgénekhez kapcsoljuk, hogy lehetővé váljon a transzformáit növényi sejtek szelektálása. Előnyben részesített szelekciós ágensek a kanamicin és higromicin antibiotikumok, de a szakemberek számára több lehetőség is ismeretes.
A fenti expressziós struktúrák sok, a tudományban ismert plazmidvektorban/baktériumgazdában fenntarthatok és tenyészthetők.
A találmány szerinti módon transzformálni kívánt növények elsősorban olyan mezőgazdasági haszonnövények, amelyek érzékenyek a Homoptera rovarok által okozott fertőzésére és károsításra. Ilyenek a rizs, kukorica, búza, árpa, cirok, zab, köles, alma, körte, a citrusfélék, cukorrépa, burgonya, paradicsom, dohány, gyapot stb.
A következő leírás a példák segítségével tovább ismerteti a találmány szerinti struktúrákat és azok előállításának, illetve felhasználásának módjait. Mindamellett nyilvánvaló, hogy a szakemberek számára ismert alternatív eljárások is alkalmazhatók. A tudományban sok standard molekuláris biológiai módszer ismeretes, amelyeket itt külön nem részletezünk - ezek leírása megtalálható például Sambrook, J. és munkatársai Molecular Cloning: A Laboratoty Manual című köny4
HU 219 057 Β vében (Cold Spring Harbour Press, New York, 2. kiadás, 1989).
1. példa
Homoptera rovarokat pusztító proteinek azonosítása
Valamely proteinről nincs alapunk a priori feltételezni, hogy a Homopterák ellen inszekticidaktivitással rendelkezik, de a váratlan tapasztalat hatására, miszerint a GNA ilyen aktivitást mutat, kiértékeltük a Homopterák különböző - mesterséges táplálékban adott - proteinekre vonatkozó érzékenységét. Elsőként a barna rizs-sarkantyúskabócát (BBH, Nilaparvata lugens) használtuk a proteinek inszekticidaktivitásának vizsgálatához.
1.1. A rovarok tenyésztése
A rovarokat 16 órás megvilágítással, 25 ±2 °C hőmérsékleten, 75-85% relatív páratartalom mellett tenyésztettük. A rovarokat 40-60 napos, „Taichung Native 1” (INI) változatba tartozó Oryza sativa növényeken tartottuk, s a törzstenyészet fenntartása érdekében hetente új növényeket adtunk a tenyészedényekbe.
1.2. Mesterséges táplálás
Az MMD1 elnevezésű mesterséges táplálék a Mitsuhashi-féle táplálékon (Rév. Plánt. Protec. Rés., 7, 57-67, 1974) alapul, amely pedig a Mittler és Daddféle levéltetű-táplálék (Natúré, 195,404,1962) módosítása. Az összetevőket az 1. táblázatban soroljuk fel. A táplálék tápanyagokban gazdag, a mikroorganizmusfertőzés megelőzése érdekében 0,2 pm pórusméretű Millipore*™) szűrőn keresztül 10 ml-es aliquotokat mértünk ki. A táplálékot a nem stabil nátrium-aszkorbát megromlásának elkerülése érdekében -20 °C-on maximum négy hétig műanyag tartályokban tároltuk.
1. táblázat
Az MMD1 táplálék összetétele
Összetevők mg/100 ml
MgSO4-7H2O 123
K2HPO4 750
Szacharóz 5000
L-alanin 100
L-arginin HC1 270
L-aszparagin 550
L-aszparaginsav 140
L-cisztein 40
L-glutaminsav 140
L-glutamin 150
Glicin 80
L-hisztidin 80
L-izoleucin 80
L-leucin 80
L-lizin HC1 120
L-metionin 80
Összetevők mg/100 ml
L-fenil-alanin 40
L-prolin 80
DL-szerin 80
L-treonin 140
L-triptofán 80
L-tirozin 40
L-valin 80
Tiamin HC1 2,5
Riboflavin 0,5
Nikotinsav 10
Piridoxin HC1 2,5
Fólsav 0,5
Kalcium-pantotenát 5
Inozitol 50
Kolin-klorid 50
Biotin 0,1
Nátrium-aszkorbát 100
FeCl3-6H2O 2,23
CuCl2-2H2O 0,27
MnCl2-4H2O 0,79
ZnCl2 1,19
CaCl2-2H2O 3,12
Mivel a tirozin desztillált vízben nehezen oldódik, először 1 N HCI-ban feloldottuk. A riboflavint oldódása érdekében kis térfogatú vízben melegítettük. Ahol szükséges volt, a pH-t KOH-dal és HCl-val 6,5 értékre állítottuk be.
A tápoldatot a Mitsuhashi (1974) által mezei kabócák és sarkantyúskabócák tenyésztéséhez leírt etetőedény módosításán alapuló edénybe tettük. Ez egy 35 mm átmérőjű, 10 mm mélységű kör alakú műanyag tartály, melynek egyik vége nyitott. Az edény alját előzetesen desztillált vízben áztatott 35 mm átmérőjű Whatman!™) Nol szűrőpapírral vontuk be. Az edény nyitott végét eredeti területének négyszeresére nyújtott Parafilm<™> membránnal borítottuk be. Erre az alapmembránra a tápoldat 200 μΐ-es cseppjét helyeztük, s azt egy újabb réteg kinyújtott Parafílm membránnal fedtük be, miáltal egy úgynevezett etetőzsákot hoztunk létre.
1.3. Táplálási vizsgálatok
A N. lugens lárváit a hajtások óvatos lemetszésével távolítottuk el a gazdanövényről, s minden vizsgálati edénybe finom ecset felhasználásával öt lárvát helyeztünk. Frissen kikelt első lárvaállapotú, illetve harmadik lárvaállapotban lévő lárvákat használtunk: a kontrolitáplálékon mutatott túlélés kedvezőbb az idősebb, erőteljesebb lárvák esetében. A tesztproteineket 0,1% (tömeg/térfogat) arányban adtuk a mesterséges táplálékhoz. Minden tesztsorozatban egy hozzáadott protein nélküli táplálékkontrollt és egy táplálékot egyáltalán nem tartalmazó kontrollt alkalmaztunk. Valamennyi
HU 219 057 Β vizsgálatot tíz ismétléssel végeztük. A kísérleti edényeket hűtött inkubátorban, 16 órás megvilágítással, ±2 °C hőmérsékleten tartottuk. A friss tápanyagellátás érdekében a táplálékot naponta cseréltük. Az életben maradt lárvákat naponta megszámoltuk. 5
Eredmények
Az alkalmazott MMD1 táplálék nem biztosítja a lárvák kifejlett állapotig történő fejlődését, de a maximálisan 18 napos túlélés elérhető, mely idő alatt a lárvák elérik negyedik lárvastádiumukat. A teljes kifejlődésig 10 történő túlélés megvalósítható oly módon, hogy az etetőzsákokat nyomás alá helyezzük (az etetőzsák fölé helyezett körülbelül 5 cm magasságú vízoszlop segítségével), de ez nem szükséges a proteinek inszekticidaktivitásának kimutatásához. Táplálék hiányában néhány 15 rovar két napig életben maradt (1. ábra). Az Abbott szerint (Journal of Economic Entomology, 18, 265-267, 1925) módosított mortalitás növekedését - azon a napon, amikor valamennyi nem táplált rovar elpusztult használtuk a tesztelt protein hatásosságának mértékeként. Meg kell jegyeznünk, hogy ez a formula a módosított mortalitásra negatív értéket ad, amennyiben a rovarok túlélése - a kontrolihoz képest - fokozódik a tesztelt protein jelenlétében. Számos olyan proteint találtunk, amelyek a rovarok szempontjából jótékony hatásúak. A túlélési gyakoriságot független G-teszt alkalmazásával (például Sokai, R. R. és Rohlf, F. J.: Introduction to biostatistics, W. H. Freeman and Co., San Francisco, pp. 286-303, 1973) statisztikus vizsgálatnak vetettük alá. Ahol szükséges volt, az adatokhoz a Yates-féle korrekciót alkalmaztuk (ha n<200). Amint arra az 1. ábrából következtetni lehet, a mortalitás 50 százaléknál nagyobb arányú növekedése jelentős toxikus vagy antimetabolikus hatást jelent. Az első lárvastádiumú lárvákra vonatkozó eredményeket a 2. táblázatban, a harmadik lárvastádiumban lévőkét pedig a 3. táblázatban közöljük.
2. táblázat
Különböző proteinek első lárvastádiumban lévő N. lugens elleni inszekticidaktivitásának biológiai vizsgálata
Protein Módosított mortalitás Gadj P(HO:CON=EXP) Hatékonyság
Inért proteinek
BSA -138 12,554 <0,001 ***
ÓVA 4 0 >0,05 nem jelentős
Lektinek
GNA 76 42,224 <0,001 **♦
PHA 27 4,528 <0,05 *
PLA -2 0 >0,05 nem jelentős
WGA 75 42,840 <0,001
LCA n. m.
HGA n. m.
JCA n. m.
ConA n. m.
PPL n. m.
Enziminhibitorok
CpTI -13 0,160 >0,05 nem jelentős
WAX n. m.
Enzimek
Chase n. m.
LPO n. m.
PPO n. m.
ÓVA - ovalbumin; BSA - szarvasmarha -szérumalbumin; GNA - hóviráglektin; PHA - fitohemagglutinin; PLA - borsólektin A; WGA - búzacsíra-hemagglutinin; LCA - lencselektin; HGA bagolyborsólektin; JCA - jakalinlektin; ConA konkanavalin A; PPL - burgonyalektin; CpTI tehénborsó-tipszininhibitor; WAX - búza rovarspecifikus α-amilázinhibitor; Chase - babendokitináz; LPO - szójabab-lipoxidáz; PPO Streptomyces polifenol-oxidáz; n. m. - nem meghatározott.
HU 219 057 Β
3. táblázat
Különböző proteinek harmadik lárvastádiumban lévő N. lugens elleni inszekticidaktivitásának biológiai vizsgálata
Protein Módosított mortalitás Gadj P(HO:CON=EXP) Hatékonyság
Inért proteinek
BSA n. m.
ÓVA n. m.
Lektinek
GNA 79 104,642 <0,001 ***
PHA -145 9,752 <0,005 **
PLA n. m.
WGA 78 61,724 <0,001 ***
LCA 22 4,336 <0,05 *
HGA 28 2,726 >0,05 nem jelentős
JCA -3 0 >0,05 nem jelentős
ConA 30 1,980 >0,05 nem jelentős
PPL -10 0,164 >0,05 nem jelentős
Enziminhibitorok
CpTI n. m.
WAX -4 0 >0,05 nem jelentős
Enzimek
Chase -55 9,762 <0,005 »♦
LPO 85 63,724 <0,001 **♦
PPO 12 0,330 >0,05 nem jelentős
A rövidítések jelentése megegyezik a 2. táblázatban megadottakkal.
A hóvirágból (Galanthus nivalis) és a búzacsírából (Triticum vulgare) származó lektinek (GNA, illetve WGA) a barna sarkantyúskabóca ellen jelentős inszekticidaktivitással rendelkeznek, s hasznosak a Homoptera rovarok elleni növényvédelemben. A lipoxidázenzim (lipoxigenáz; linoleát: oxigén oxidoreduktáz; EC 1.13.11.12) szintén jelentős inszekticidaktivitással rendelkezik.
1.4. Táplálási vizsgálatok zöld mezei kabócák ellen
Azt találtuk, hogy a mesterségestáplálék-biovizsgálatban a barna sarkantyúskabóca ellen inszekticidaktivitást mutató bizonyos proteinek szintén hatásosak a Homoptera renden belül más családba tartozó (Cicadellidae [=Jassidae]), növényi nedvekkel táplálkozó rovarok ellen. A zöld mezei kabóca (Nephotettix nigropictus) szórványosan jelentkező, veszedelmes rizskártevő, s számos betegséget okozó vírus - például a rizs sárga törpenövése és múló sárgasága - vektora. A zöld mezei kabócát az 1.1-1.3. pontokban leírt módon tenyésztettük és vizsgáltuk. A 4. táblázatban látható eredmények azt mutatják, hogy a hóviráglektin ugyanúgy hatásos a mezei kabóca ellen, mint a bama sarkantyúskabóca ellen.
4. táblázat
Különböző proteinek harmadik lárvastádiumban lévő Nephotettix nigropictus (zöld mezei kabóca) elleni inszekticidaktivitásának biológiai vizsgálata
Protein Módosított mortalitás Gadj P(HO:CON=EXP) Hatékonyság
Lektinek
GNA 87 11,110 <0,001 ***
WGA 15 0,674 >0,05 nem jelentős
Enzimek
LPO 5 0,052 >0,05 nem jelentős
A rövidítések jelentése megegyezik a 2. táblázatban leírtakkal.
HU 219 057 Β
1.5. Táplálási vizsgálatok a zöld őszibarack-levéltetű ellen
Megállapítottuk azt is, hogy a hóviráglektin a mesterséges táplálék biológiai vizsgálatban nemcsak a barna sarkantyúskabóca és a zöld mezei kabóca ellen haté- 5 kony inszekticid, hanem a Homoptera renden belül egy harmadik családba, az Aphididae-be tartozó növényi nedveket szívó rovarok ellen is. Az Aphididae képezi a növényi tetvek legfontosabb csoportját, mely inkább a mérsékelt övi életkörülményekhez alkalmazkodott, 10 mint a trópusihoz. A Myzus persicae (zöld őszibaracklevéltetű) világszerte elteijedt, veszedelmes polifág növénykártevő, amely több mint 100 különböző betegséget okozó vírus vektoraként ismeretes. Sok biotípusa többrétű rezisztenciát mutat az általánosan használt peszticidek ellen.
A levéltetveket a laboratóriumban dohánynövényen (Nicotiana tabacum var. Samsun NN) tartottuk.
A GNA-val végzett mesterségestáplálék-biovizsgálatot a korábban leírt módon, az 1.3. pontban leírt, hidroszta- 20 tikus nyomást felhasználó rendszerrel végeztük frissen kikelt és szárnyas lárvák ellen, a Mittler és Dadd által leírt (Natúré, 195, 404, 1962) táplálék megváltoztatása nélkül. A 2. ábrán látható eredmények azt bizonyítják, hogy a GNA jelentős mértékben csökkenti a mesterséges táplálékon élő zöld őszibarack-levéltetű túlélését. Bár az 1.3. pontban említett módosított mortalitás kisebb, mint a többi tesztelt Homoptera esetében (25 ±4%), a protein a rovarok túlölését illetően nyilvánvalóan jelentős károsítóhatással rendelkezik. A protein az életben maradó rovarok további fejlődésére is káros hatású. Az élő rovaron méretét négynapos táplálás után képelemzéssel mértük. Az 5. táblázatban közölt eredmények azt mutatják, hogy a GNA-t tartalmazó táplálékon 15 a lárvák mérete jelentősen csökkent. A lárvák méretének ilyen nagyságrendű csökkenése arra enged következtetni, hogy a GNA nagymértékben hat a rovarok kifejlődésének időtartamára és szaporodóképességükre, s ezáltal jelentésen csökkenti a levéltetű-populáció növekedésének ütemét.
5. táblázat
A kontroll és GNA-t tartalmazó mesterséges táplálékon nevelt levéltetvek mérete
Kontroll +GNA F P(HO:ml=m2)
Átlagos hossz (nm±középérték szórása) 0,86+0,03 0,61+0,01 62,809 <0,01
Átlagos szélesség (nm+középérték szórása) 0,38+0,02 0,26+0,01 41,795 <0,01
Ilyenformán, azonosíthatók bizonyos proteinek - beleértve a GNA-t, de nem korlátozva kizárólag erre amelyek a Homoptera rendbe tartozó rovarok különböző csoportjai ellen hatásosak.
2. példa
Szövetspecifíkus promoter előállítása
2.1.4xB2+A
A CaMV35S génpromoter a szakemberek számára hatásos konstitutív promoterként ismeretes, mely a transzgén növények legtöbb szervében működőképes. Széles körű aktivitását számos, egymástól eltérő dómén és szubdomén interakciója irányítja, amelyek különböző kombinációit vizsgálták, s kimutatták, hogy a transzgén növényekben történő expresszió különféle módjait biztosítják (Frang és munkatársai, The Flant Cell, 1, 141-150, 1989; Benfey és munkatársai, EMBO J., 8, 2195-2202, 1989; Benfey és munkatársai, EMBO J., 9, 1677-1684, 1990[a]; Benfey és munkatársai, EMBO J., 9, 1685-1696,1990[b]). A 4xB2+A elnevezésű kombinációról kimutatták, hogy jelentős expressziót biztosít a vaszkuláris szövetekben, beleértve a floémszövetet is (Benfey és munkatársai, 1990[a]). Ez a kombináció a 35S gén -155-(-)102 régiójának a 35S gén -90-(+)8 régiójához kapcsolódó négyszeres tandem ismétlődését tartalmazza (Benfey és munkatársai, 1990[b]), amely különösen alkalmas lehet találmányunk céljaihoz.
A pDB2 jelű plazmid-DNS-t, mely a 4xB2 fragmenst a pEMBL12 plazmid Sáli és Xhol helyei között inszertálva tartalmazza (a pEMBL12x a pEMBL12 származéka, a BamHI hely 5’ végére bevitt Xhol hellyel; a pEMBL plazmidcsaládot Dente és munkatársai [Nucl. Acids Rés., 11,1645-1655,1983] írták le, továbbá a pDA jelű plazmid-DNS-t, mely az A fragmenst a pEMBL 18 plazmid Xhol és Sáli helyei között inszertálva tartalmazza, Dr. P. N. Benfeytől és a Laboratory of Plánt Molecular Biologytól (Rockefeller University, New York) kaptuk.
A plazmid-DNS-eket megfelelő E. coli DH5a sejtek (Northumbria Biologicals Ltd., Cramlington, U. K.) ampicillinrezisztencia kialakítása érdekében történő transzformálásához használtuk. Ebben és a következő példákban a plazmid-DNS-eket hagyományos „mini preparatív” módszerekkel állítottuk elő. A pDB2-ből a DNS-t Sáli és Xhol restrikciós enzimekkel emésztettük, és a restrikciós íragmenseket agarózgélen végzett elektroforézissel választottuk el egymástól. A 194 bp hosszúságú 4xB2 fragmenst izoláltuk a gélről, és tisztítottuk. Ezt a fragmenst a pDA plazmidból származó - Xhol enzimmel történő emésztéssel linearizált - DNS-sel kapcsoltuk össze. Ezt használtuk a megfelelő E. coli DH5a sejtek transzformálásához, mellyel a pSC jelű plazmidot - amely a számunkra hasznos 4 χ B2+A promotert tartalmazza - magában foglaló kiónt állítottuk elő (3. ábra).
HU 219 057 Β
2.2. Rizs-szacharóz-szintáz
A Homopterákat pusztító proteinek expresszálásához különösen alkalmasak a homológ promoterek. Ennek megfelelően ebben a példában olyan homológ promotert bocsátunk rendelkezésre, amely az egyszikű rizsben (Oryza sativa) hatékony génexpressziót biztosít, s amely heterológ rendszerekben is alkalmas floémspecifikus promoter.
A kukorica szacharóz-szintáz-1 gén (Sh-1), amely azUPD glükóz: D-fruktóz 2-a-D-glükozil-transzferázt (EC 2.4.1.13) kódolja azon kevés egyszikű gének egyike, amelyek promoterszekvenciáit korábban klónozták (Burr, B. és Burr, F., Cell 29,977-986,1982; Geiser és munkatársai, EMBO J., 1,1455-1460,1982). Kimutatták, hogy a transzlációs starthelyet és az Sh-1 primer transzkriptum 5’ transzlálatlan régióját magában foglaló Sh-1 promoter a transzgén növények floémsejtjeiben nagyon specifikus expressziót irányítanak (Yang, N-S. és Russell, D., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 4144-4148, 1990). A kukorica Sh-1 génszekvenciákat a rizs-szacharóz-szintetáz-promoterszekvenciák előállításához használtuk az alábbiak szerint.
Hagyományos tecnikákkal szintetikus oligonukleotidokat állítottunk elő. E szekvenciák:
’-TTCGTGCTGAAGGACAAGA ’-CTGCACGAATGCGCCCTT megfelelnek a publikált Sh-1 génszekvencia kódolószálának +4264-től +4282-ig terjedő, illetve a nem kódoló szál +4564-től +4581-ig terjedő nukleotidjainak (Werr, W. és munkatársai, EMBO J., 4, 1373-1380, 1985). A szekvenciákat primerként használtuk a kukoricamag genom-DNS-ből származó, +4264-től +4581-ig terjedő Sh-1 génfragmens amplifíkációjához, melyhez standard polimeráz-láncreakció (PCR) technikát alkalmaztunk lásd például Innis, M. A. és munkatársai (szerkesztők): PCR protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, San Diego, 1990). Az amplifikált terméket hagyományos technikákkal pUC18 plazmid Smal helyére klónoztuk. A kapott plazmidot pUEX-ként jelöltük. A pUEX plazmid próbaként a rizs-szacharóz-szintáz rizs-genom-DNS-könyvtárakból történő azonosításához alkalmas. Az ilyen könyvtárak a szakemberek számára ismert, különféle módszerekkel állíthatók elő. Az e példában használt, kereskedelemben beszerezhető EMBL-3 bakteriofág rizs-genomDNS-könyvtárat a Clontech Laboratories Inc.-tól (Palo Alto, USA) vásároltuk. 6,8 χ 105 plakk 32P-izotóppal jelölt, pUEX plazmidból származó inszertek felhasználásával, hagyományos módszerekkel történő screenelése 10 pozitív kiónt eredményezett. A RSS2.4 klón - karakterizálása alapján - teljes hosszúságú rizs szacharózszintáz-1 gént tartalmaz. E kiónt részletesen vizsgáltuk hagyományos módon végzett restrikciós térképezéssel, szubklónozással és szekvenálással (Wang, M. és munkatársai, Plánt Mól. Bioi., 19,381-835,1992).
A rizs szacharóz-szintáz-1 promoter/intron-1 szekvenciát - a RSS2.4 kiónon belül - az Sh-1 szekvenciával történő összehasonlítással azonosítottuk; eszerint az körülbelül 3,1 kb hosszúságú, Nhel restrikciós enzimmel emésztett ffagmensen helyezkedik el. E fragmenst izoláltuk, és standard tecnikákkal a pUC19 plazmid Xbal helyére klóroztuk, miáltal a pSS24NN30B plazmidot kaptuk, amely az RSsI promoter/intron-1 szekvenciákat tartalmazó, hasznos intermedier plazmid (4. ábra). E 3,1 kb hosszúságú fragmens szekvenciájának találmányunk céljaira alkalmas részét az 5. ábrán mutatjuk be; az ábrázolt szekvenciának van még egy 200 bp hosszúságú upstream szakasza, amely nem szükséges a találmány megvalósításához, s amely olyan - a szakemberek számára ismert - technikákkal, mint a restrikciós enzimes emésztés, az exonukleázos emésztés vagy a PCR-amplifíkáció, teljesen vagy részlegesen eltávolítható.
3. példa
Növényi expressziós struktúrák
A találmány céljait illetően előnyben részesített proteinek egyike a hóviráglektin. A következő példák intermedier vektorokat biztosítanak e protein egy- és kétszikű transzgén növények floémjában történő expressziójához. A szakemberek számára nyilvánvaló lesz, hogy e módszerek könnyen alkalmazhatók más proteinekre is. Hasonlóan, annak ellenére, hogy a példák nagy részében valamelyik előnyben részesített promotert alkalmazzuk, azok könnyen alkalmazhatók más floémspecifikus promoterekhez is.
3.1. Struktúrák a GNA kétszikű floémben történő expresszáláshoz
3.1.1. Struktúrák a 4xB2+A promoterből kiinduló expresszióhoz
A pROK2 Agrobacterium biner vektort (Hilder és munkatársai, Natúré, 330, 160-163, 1987) HindlII és BamHI restrikciós enzimekkel emésztettük, hogy kivágjuk a CaMV35S promotert. A pSC-plazmidot (lásd 2.1. példa) szintén HindlII és BamHI enzimekkel emésztettük, és a 4 χ B2+A szekvenciát tartalmazó 292 kb hosszúságú fragmenst a restrikciós fragmensek agarózgélelektroforézises szeparátumából tisztítottuk. E fragmenst a HindlI/BamHI által kivágott pROK fragmenshez kapcsoltuk, miáltal a pSCB-t állítottuk elő (6. ábra), amely a 4x82+A promoterből kiinduló növényi expresszióhoz alkalmas kazetta.
A plGNA2 plazmidot a WO 92/02139 számú nemzetközi közzétételi iratban (Agricultural Genetics Co.) részletesen leírták. E plazmid a pUC19 BamHI és KpnI helyei között tartalmazza a GNA prekurzor protein teljes kódolószekvenciáját. A GNA szekvenciáját a plGNA2 DNS BamHI és KpnI restrikciós enzimekkel történő emésztésével és a restrikciós fragmensek agarózgél-elektroforézises szeparátumából történő extrakcióval izoláltuk. A kapott fragmenst a BamHI és KpnI enzimekkel emésztett pSCB plazmidba ligáltuk, miáltal a pSCIGNA plazmidhoz jutottunk (6. ábra), mely a GNA 4xB2+A promoterből kiinduló expresszálásához - transzgén növények floémjában - alkalmas vektor.
3.1.2. Struktúrák az RSsl promoterből kiinduló expresszióhoz
A pBI101.2 plazmid a pBIN19-ből származó, a kereskedelemben beszerezhető (Clontech Laboratories Inc., Palo Alto, CA)4. tumefaciens biner vektor, amely
HU 219 057 Β promoter nélküli GUS gén kazettát tartalmaz. A plazmid DNS-t Sáli és BamHI restrikciós endonukleázokkal emésztettük, majd a pSS24NN30B plazmid (2.2. példa) restrikciós enzimes emésztéséből származó fragmensek közül izolált Sall-BamHI restrikciós fragmens- 5 sel kapcsoltuk össze, miáltal a pBRSS7 plazmidot nyertük, amely az RSsl promoterből kiinduló GUS-expresszióhoz transzgén növényekben alkalmas biner vektor. E struktúrát standard, Agrobacterium-közvetett géntranszferrel transzgén dohánynövénybe juttattuk, és az 10 e promoterből a kétszikű transzgén növényben kiinduló expresszió floémspecifítását standard citológiai GUSelemzéssel mutattuk ki.
A GUS gént Smal és SstI restrikciós endonukleázokkal történő emésztéssel távolítottuk el a pBRSS7 15 plazmidból, és az SstI helyről a 3’ túlnyúló szálat T4 DNS-polimerázzal távolítottuk el. A GNA kódolószekvenciát Smal-PstI restrikciós fragmensként a plGNA2 plazmidból készítettük. A PstI hely 3’ túlnyúló szálát T4 polimerázos kezeléssel távolítottuk el. Ezé- 20 két a fragmenseket „tompavég-ligálással” kapcsoltuk egymáshoz, és E. coli DH5a sejtekbe klónoztuk. Azokat a kiónokat, amelyek az RSsl promotert illetően funkcionálisan megfelelő orientációban tartalmazzák a GNA kódolószekvenciát, diagnosztikai restrikciós analízissel azonosítottuk, melynek során HindlII enzimet, amely körülbelül 2,1 kb hosszúságú, a GNA szekvenciát helyes orientációban tartalmazó fragmenst, s ezzel szemben körülbelül 1,5 kb hosszú, ellenkező orientációjú fragmenst hoz létre - és EcoRI enzimet - amely körülbelül 1,7 kb hosszú, a GNA szekvenciát helyes orientációban tartalmazó fragmenst, s ezzel szemben kevesebb mint 0,6 kb hosszú, ellenkező orientációjú fragmenst hoz létre - alkalmaztunk, miáltal a pBRSSLT2 jelű plazmidot (17. ábra) nyertük, amely a GNA RSsl promoterből kiinduló, transzgén növények floémjában történő expressziójához alkalmas biner vektor.
Meg kell jegyeznünk, hogy ez a struktúra tartalmaz egy, az RSsl 2. exonjából származó, kereten belüli transzlációs kezdő kodont, amely a GNA preprotein kezdő kodonjától upstream irányban, 36 nukleotidnyi hosszúságban helyezkedik el. Ez a GNA preprotein Nterminálisan 12 további aminosav jelenlétét eredményezi - ezek közül három a RSsl-tői, kilenc a polilinkertól származik:
RSsl polilinker GNA
ATGGGATCCCCGGGGATCCTCTAGAGTCCGGTTCCATG MGS PGDPLE SGSM
Ezt az N-terminális-kibővítést a találmány céljait illetően nem tartjuk fontosnak.
3.2. Struktúrák a GNA rizsfloémben történő expressziójához
3.2.1. Struktúrák a 4xB2+A promoterből kiinduló expresszióhoz
A pSCIGNA plazmidot (lásd 3.1.1. példa) Bglll és EcoRI enzimekkel emésztettük, és az nptll gént és a GNA expressziós struktúrát tartalmazó fragmenst agarózgélról tisztítottuk, majd a BamHI és EcoRI restrikciós enzimekkel emésztett pUC18 plazmiddal ligáltuk. A kapott pSCGNARl plazmid a rizs transzformálásához alkalmazható (8. ábra).
Valamennyi korábbi példában a Tn5 transzpozonból származó nptll gént használtuk a transzformált növényi szövetek kanamicinre történő szelekciójának biztosításához. A kanamicinről azonban azt állítják, hogy a transzgén rizsben sterilitást okoz (Li, Z. és munkatársai, Plánt Mól. Bioi. Rep., 8, 276-291, 1990). Emiatt az E. coliból származó aphlV gént alkalmaztuk a rizs transzformálásához alkalmas másik struktúra előállításához, mely lehetővé teszi a transzformált növényi szövet higromicinre történő szelekcióját. A pJIT72 plazmidot BamHI és HindlII enzimekkel emésztettük, és az aphlV génszekvenciát tartalmazó. 1110 bp hosszúságú fragmenst agarózgélről tisztítottuk. A pJIT30Neo plazmidot HindlII és EcoRI enzimekkel emésztettük és a nagy fragmenst agarózgélről tisztítottuk. A fragmenseket összekevertük, és SÍ nukleázos kezeléssel tompa végeket alakítottunk ki. A nukleáz inaktiválása után a fragmenseket ligáltuk, és megfelelő E. coli DH5a sejtek transzformálásához használtuk. A rekombináns plazmidokat Kpnl+EcoRI és Xhol+EcoRI enzimek felhasználásával restrikciós analízissel screeneltük, hogy olyan struktúrát azonosítsunk, amelyben az aphlV gén a promoter- és a terminátorszekvenciákat illetően helyes orientációban helyezkedik el. Az ennek megfelelő struktúrát pJIT30Aph néven jelöltük (8. ábra). A pSCGNARl plazmidot HindlII és EcoRI enzimekkel emésztettük, és a GNA expressziós fragmenst agarózgélről tisztítottuk. E fragmenst az Xhol enzimes emésztéssel linearizált pJIT30Aph plazmiddal kevertük össze, és a fragmenseket SÍ nukleázos kezeléssel tompa végűvé alakítottuk. A nukleáz inaktiválása után a fragmenseket ligáltuk, és az E. coli DH5a transzformálásához használtuk fel. A kapott pSCGNAR2 jelzésű struktúra (8. ábra) a higromicinre rezisztens transzgén rizsnövények floémjában alkalmas a GNA expresszálásához. Az intakt pSCGNAR2 struktúra vagy a linearizált PstI plazmid felhasználható a rizs transzformálására.
3.2.2. Struktúra az RSsl promoterből kiinduló expresszióhoz
A (rizs szacharóz-szintáz prometer - GNA kódolószekvencia nopalin-szintetáz terminátor - Ti plazmid bal oldali széle) DNS-fragmenst a pBRSSLT2 plazmidból (lásd 3.1.2 példa) Sáli és Bglll restrikciós endonukleázokkal történő emésztéssel izoláltuk. E fragmenst a kereskedelemben beszerezhető pSK plazmidvektor (Stratagene, San Diego, CA) Sáli és BamHI helyei közé klónoztuk, miáltal a pKRSSLT plazmidot hoztuk létre. E szekvenciákat azután KpnI/XhoI restrikciós endonukleázos emésztéssel izoláltuk a pKRSSLT plaz10
HU 219 057 Β midből, és a pJIT30 KpnI és Xhol helyei közé klónoztuk, miáltal a pRSSLTR plazmidhoz jutottunk (9. ábra). Ez utóbbi plazmid alkalmas a transzgén rizsnövények floémjában RSsl promoterből kiinduló GNA-expresszióhoz.
4. példa
Transzgén növények előállítása
4.1. Transzgén dohány
A pSCIGNA (3.1.1. példa) és a pBRSSLT2 (3.1.2. példa) GNA-t expresszáló struktúrákat pRK2013 plazmidot tartalmazó E. coli HB101 felhasználásával, triparentális keresztezéssel Agrobacterium tumefaciens LBA4404 törzsbe vittük be standard eljárással (Bevan, M., Nucl. Acid. Rés., 12, 103-110, 1984). Ezután a GNA génstruktúrát Agrobacterium közvetítésével, levélkorongok felhasználásával történő géntranszferrel vittük be a dohánynövényekbe (Nicotiana tabacum var. Samsun NN). Az elkészült transzgén növényeket hagyományos módszerek szerint regeneráltuk (Fraley és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 4803-4807, 1983: Horsch és munkatársai, Science, 227,1229-1231,1985). A GNA expressziójának szintje proteinextraktum dot-blotjai alapján, nyúl anti-GNA antiszérum és 35S-jelölt szamár antinyúl IgG (Amersham International plc., Amersham, U. K.) másodlagos antitest felhasználásával, immunológiás módszerrel határozható meg (Jahn és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 1684-1687, 1984). A levágott szár- és levélmetszetek nitrocellulóz membránon készített lenyomatait anti-GNA primer antitesttel teszteltük, és HRP-konjugált kecske antinyúl másodlagos antitest (Bio-Rad Laboratories Ltd., Watford, U. K.) és a kereskedelemben beszerezhető ECL immunvizsgálati jeleket detektáló reagensek (Amersham International plc., Amersham, U. K.) felhasználásával nagy felbontású kemilumineszcencia (ECL) rendszerrel tettük láthatóvá. E módszerrel mutattuk ki a szóban forgó promoterekből kiinduló floémspecifikus GNA-expressziót. A kiválasztott növényeket önbeporzással szaporítottuk, és az SÍ generációnak az inszertált géneket illetően homozigóta egyedeit az S2 generációban kanamicinrezisztencia-szegregációs analízissel azonosítottuk. A homozigóta, GNA-t expresszáló S2 generációs növényeket - az egész növényt zöld őszibarack-levéltetűvel (Myzus persicae) ellepve - Homoptera kártevők elleni rezisztenciára teszteltük.
A CaMV35S génpromoter a tudományban hatékonyabb promoterként ismeretes, amely a transzgén növények legtöbb szövetében - beleértve a vaszkuláris szövetet - működőképes. A GNA CaMV35S génpromoterből kiinduló expresszálását biztosító génstruktúrák transzgén dohánynövényekbe - találmányunk szempontjaitól eltérő célok érdekében - történő bevitelét is részletesen leírták a WO 92/02139 számú nemzetköziközzétételi iratban (Agricultural Genetics Co.). A 15GNA1#79 jelű, az említett iratban leírt GNA-expresszáló törzsből származó transzgén Nicotiana tabacum var. Samsun NN növények ivartalanul szaporított példányait (amelyek standard módszerekkel szármetszetekből készültek), illetve a GNA-t nem expresszáló kontrollnövényeket az Agricultural Genetics Company APTL-től (Babraham, Cambridge) szereztük be. A szóban forgó törzsben a GNA-expresszió helyét és relatív szintjét poliklonális nyúl anti-GNA primer antitest és HRP-konjugált másodlagos antitest felhasználásával, szár és levél vékonymetszetek immuncitológiai vizsgálatával határoztuk meg.
Kimutattuk, hogy a 15GNA1#79 dohánynövények floémjában a GNA-expresszió látszólagos szintje a mezofillumhoz képest magasabb annál, mint amit a transzgén dohánynövényekben a CaMV35S promoter által irányított GUS-génexpresszió relatív szintjének általunk végzett és publikált vizsgálatai alapján feltételezhettünk. A két gén expressziójának relatív szintje közötti különbség a gének intracelluláris célmechanizmusának eltéréseiből adódhat.
A 15GNA1#79 dohánynövények floémjében mutatkozó, viszonylag magas szintű, nem optimális promoterből kiinduló GNA-expresszió miatt e törzset alkalmasnak ítéltük a zöld őszibarack-levéltetű elleni biológiai teszthez.
4.2. Transzgén rizs
A GNA-génexpressziós struktúrák bármely, a szakemberek számára ismert eljárással bevihetők a rizsnövényekbe (Shimamoto és munkatársai, Natúré, 338, 274-276, 1989; Yang és munkatársai, Plánt Cell Rep., 7, 421-425, 1988; Zhang és munkatársai, Plánt Cell Rep., 7, 379-384, 1988; Li és munkatársai, Plánt Mól. Bioi. Rep., 8, 276-291, 1990). E példában a Yang és munkatársai (1988) által leírt eljárást alkalmazzuk a floémben GNA-t expresszáló rizsnövények előállításához.
Az IRRI-től beszerzett „Taipei 309” rizsváltozatot alkalmaztuk a sejtszuszpenziós tenyészet forrásaként, melyből a sejtfalak cellulózzal és pektinázzal történő enzimatikus emésztése útján protoplasztok állíthatók elő. A protoplasztokat pSCGNARl vagy pSCGNAR2 (3.2.1. példa) vagy pRSSLTR plazmiddal (3.2.2. példa) inkubáltuk, és a plazmid DNS-felvételének indukálása érdekében elektromos impulzussal kezeltük. A protoplasztokat ezután a transzformált sejtek kiszelektálása érdekében kanamicint (a pSCGNARl és pRSSLTR plazmidok esetében), illetve higromicint (a pSCGNAR2 esetében) tartalmazó táptalajon tenyésztettük. Az antibiotikumrezisztens kalluszokat regeneráló táptalajra vittük, hogy transzgén rizspalántákat neveljünk belőlük, amelyeket később a teljes kifejlődésig talajba ültetve tartottunk. A regenerálódott növények GNA-expresszálása a
4.1. példában leírt módon immunológiai módszerekkel vizsgálható. A homozigóta transzgén növényeket a 4.1. példában a dohány esetében leírt önbeporzással nyertük, és azokat a növényi nedveket szívó rovarkártevők - esetünkben a barna sarkantyúskabóca - elleni rezisztencia vizsgálatához használtuk, kontrollként transzformálatlan „Taipei 309” növények felhasználásával. A kívánt rezisztencia jellemzőit mutató növényekről összegyűjtöttük a magvakat - az ezekből származó növények továbbtenyészthetők és bevonhatók a hagyományos rizsfejlesztési programokba.
HU 219 057 Β
5. példa
A transzgén növények növényi nedveket szívó rovarok elleni vizsgálata
A floémszövetükben GNA-t expresszáló transzgén dohánynövényeket (4.1. példa) az 1.5. példában leírt módon tenyésztett zöld őszibarack-levéltetű (Myzus persicaé) elleni biológiai vizsgálattal teszteltük.
5.1. Teljes növénybiológiai vizsgálat
A 15GNA1#79 törzsbe (4.1. példa) tartozó transzgén dohánynövények ivartalanul szaporított példányait szármetszetekből, standard módszerek alkalmazásával állítottuk elő. E növényeket és a transzformálatlan, ivartalanul szaporított N. tabacum var. Samsun kontrollnövényeket 5 hüvelykes (körülbelül 12,7 cm) cserepekbe ültettük, és egyenként 24x24x40 cm-es plexidobozokba téve kontrollált környezeti feltételeket biztosító tenyészszobában neveltük. Amikor a növények körülbelül 20 cm-es magasságot értek el, mindegyikre nyolc darab késői lárvastádiumban lévő szárnyas levéltetűt helyeztünk. A levéltetű-populáció növekedését a növényeken található levéltetvek számolásával követtük nyomon. A 10. ábrán látható eredmények azt mutatják, hogy a transzgén növényeken a levéltetű-populáció mérete jelentősen csökkent. A populáció növekedésének aránya a kétszereződési időből (TD) becsülhető, miszerint
TD=0,30103/m, ahol „m” a levéltetvek számának tízes alapú logaritmusa időarányos regressziójának differenciálhányadosa. A transzgén növényeken a TD értéke - a kontrolinövényeken tapasztalható 4,4 ±0,2 naphoz képest 4,8±0,2 napra emelkedett.
5.2. Levélkorong-biológiaivizsgálat
A kontroll- és a GNA-t expresszáló transzgén növényeket 30-40 cm magasság eléréséig neveltük. A teljesen kifejlett levelekből - elkerülve a nagy levélereket tartalmazó részeket - 25 mm átmérőjű korongokat vágtunk. A levélkorongokat 5 cm átmérőjű, egyszer használatos Petri-csészékben, felső oldalukkal lefelé, 10 ml csapvíz felületén lebegtettük. Valamennyi levélkorongra két késői lárvastádiumban lévő, szárnyas levéltetvet helyeztünk, és a fedeles csészéket kontrollált környezeti feltételeket biztosító tenyészszobában tartottuk. A levéltetveket naponta számoltuk.
All. ábrán látható eredmények azt mutatják, hogy a transzgén növényeken jelentős mértékben csökkent a levéltetű-populáció nagysága. Ilyenformán a levélkorong-vizsgálatból származó eredmények megegyeznek a teljes növényvizsgálat eredményeivel - az előbbi azonban nagyobb számú ismétlést tesz lehetővé.
A levéltetű-populáció fentiek szerint számított kétszereződési ideje a transzgénes növényekből készült levélkorongok esetében nagyobb (TD=2,47 nap), mint a kontrollnövényekből készült korongok esetében (TD=1,62 nap).
A levélkorong biológiai vizsgálatát több kontrollés transzgén növény levelének felhasználásával, illetve az egyes kontroll- és transzgén növényekről származó több különböző levél felhasználásával ismételtük meg. Az egyes levélkorongokon hétnapos vizsgálat után jelen levő levéltetvek számának statisztikus analízise világosan mutatja a transzgén növények leveléről származó korongokon a levéltetvek számának csökkenését (6. táblázat). Az ugyanazon növényről származó levelek esetében a variációs koefficiens körülbelül 20% volt; a különböző kontrollnövények esetében ez 54%, míg a különböző transzgén növények esetében 75% volt.
6. táblázat
A különböző, GNA-t expresszáló transzgén, illetve kontrolldohánynövények M. persicae elleni levélkorong-biológiaivizsgálata
Levéltetvek levélkorongonkénti átlagos száma N Középérték szórása
Kontroll 38,8 6 ±8,6
15GNA1#79 8,3 6 ±2,5
Annak megállapítása érdekében, hogy a GNA-t expresszáló transzgén növényen életben maradó levéltetvek vajon öröklött rezisztenciájú alcsoportot reprezentálnak-e, a levélkorong-biológiaivizsgálatot úgy végeztük, hogy a kontrolldohánynövényen tartott levéltetvek túlélését összehasonlítottuk a hat hétig (mely idő alatt a levéltetvek jó néhány generációja kifejlődhet) GNA-t expresszáló transzgén dohánynövényen tartott levéltetvek túlélésével. Az eredmények (7. táblázat) azt mutatják, hogy a GNA-val kondicionált levéltetvek változatlanul érzékenyek a transzgén dohánynövények GNAexpresszálására.
7. táblázat
Kontroll- és GNA-t expresszáló transzgén dohánynövények levélkorong-biológiaivizsgálata kontroll- és GNA-t expresszáló transzgén növényen kondicionált M. persicae ellen
A lcvélkorong származása Levéltetvek lcvclkorongonkénti átlagos száma ±középértékszórása
a levéltetvek származása:
kontroll GNA
Kontroll 11,8±3,0 12,0±2,8
15GNA#79 3,3±1,8 2,5±1,8
A leírt biológiai vizsgálatok azt bizonyítják, hogy a mesterséges táplálékban hatásosnak bizonyult proteinek abban az esetben is hatásosak a szóban forgó rovarokra, ha a transzgén növények floémjéban expresszálódnak.

Claims (12)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Transzgén növény, amely a Homoptera rovarkártevőkre toxikus vagy antimetabolikus hatású proteint kódoló gént tartalmaz, azzal jellemezve, hogy a gén egy olyan promoterrel áll kapcsolatban, amely a transzgén növény floémjéban eredményezi a gén expresszióját.
    HU 219 057 Β
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti növény, azzal jellemezve, hogy lektint vagy lipoxidázt kódoló gént tartalmaz.
  3. 3. A 2. igénypont szerinti növény, azzal jellemezve, hogy az említett lektinként hóviráglektint vagy búzacsíraagglutinint, illetve az említett lipoxidázként borsólipoxidáz 1-et kódoló gént tartalmaz.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti növény, azzal jellemezve, hogy promoterként 4xB2+A promotert, rizs szacharóz-szintáz génpromotert vagy olajrepcemag extenzin génpromotert tartalmaz.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti növény, azzal jellemezve, hogy a növény rizs, kukorica vagy bármely más transzformálható növény lehet.
  6. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti növény, azzal jellemezve, hogy az említett növény a levéltetvek, a sarkantyúskabócák, a mezei kabócák, a liszteskék, a tajtékoskabócák vagy a pajzstetvek közül származó Homoptera rovarkártevők elleni védelemmel van ellátva.
  7. 7. Eljárás transzgén növények előállítására, azzal jellemezve, hogy a növény genomjába Homoptera növénykártevőkre toxikus vagy antimetabolikus hatású proteint kódoló gént juttatunk, mely olyan promoterrel áll kapcsolatban, amely a növény floémjéban eredményezi a gén expresszióját.
  8. 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett gént a növény genomjába oly módon juttatjuk be, hogy a növényből származó anyagot, a gént a promoterrel együtt tartalmazó, ártalmatlan A. tumefaciens törzzsel fertőzzük meg, és a növényt regeneráljuk a megfertőzött növényi anyagból.
  9. 9. DNS-szekvencia, azzal jellemezve, hogy egy Homoptera rovarkártevőkre toxikus vagy antimetabolikus hatású proteint kódoló gént és e génnel működőképes kapcsolatban lévő, floémspecifikus növényi promotert tartalmaz.
  10. 10. Eljárás Homoptera rovarkártevők leküzdésére, azzal jellemezve, hogy a rovarkártevő ellen enterálisan olyan, a rovarra toxikus vagy antimetabolikus hatású proteint alkalmazunk, amely a transzgén növény floémjéban expresszálódik.
  11. 11. A Homoptera rovarkártevőbe toxikus vagy antimetabolikus hatást kifejtő protein alkalmazása e rovarkártevők leküzdésére, azzal jellemezve, hogy az említett proteint a növény floémjében fejezzük ki.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a protein, a rovarkártevők táplálékához adva, a proteint nem tartalmazó táplálék esetében tapasztalható mortalitáshoz képest a mortalitás legalább 50%-os emelkedését eredményezi.
HU9400571A 1991-08-27 1992-08-26 Inszekticid hatású proteinek Homoptera rovarok ellen és alkalmazásuk a növényvédelemben HU219057B (hu)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB919118365A GB9118365D0 (en) 1991-08-27 1991-08-27 Proteins with insecticidal properties against homopteran insects and their use in plant
GB919121195A GB9121195D0 (en) 1991-10-04 1991-10-04 Proteins with insecticidal properties against homopteran insects and their use in plant protection
PCT/GB1992/001565 WO1993004177A1 (en) 1991-08-27 1992-08-26 Proteins with insecticidal properties against homopteran insects and their use in plant protection

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9400571D0 HU9400571D0 (en) 1994-05-30
HUT70273A HUT70273A (en) 1995-09-28
HU219057B true HU219057B (hu) 2001-02-28

Family

ID=26299446

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9400571A HU219057B (hu) 1991-08-27 1992-08-26 Inszekticid hatású proteinek Homoptera rovarok ellen és alkalmazásuk a növényvédelemben

Country Status (12)

Country Link
US (1) US5604121A (hu)
EP (1) EP0600993B1 (hu)
JP (1) JPH06510187A (hu)
AT (1) ATE186571T1 (hu)
AU (1) AU668096B2 (hu)
CA (1) CA2116449C (hu)
DE (1) DE69230290T2 (hu)
DK (1) DK0600993T3 (hu)
ES (1) ES2140416T3 (hu)
GR (1) GR3032297T3 (hu)
HU (1) HU219057B (hu)
WO (1) WO1993004177A1 (hu)

Families Citing this family (408)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU1439995A (en) * 1993-12-13 1995-07-03 Ecogen Inc. Control of aphids with (bacillus thuringiensis) toxin proteins
CN1037913C (zh) * 1995-12-28 1998-04-01 中国农业科学院生物技术研究中心 编码杀虫蛋白质的融合基因和表达载体及其应用
AU6221599A (en) * 1998-10-16 2000-05-08 Scottish Crop Research Institute Tissue-specific promoters for gene expression
EP1171453A2 (en) 1999-04-21 2002-01-16 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods useful for the control of insect larvae
WO2000062615A1 (en) 1999-04-21 2000-10-26 University Of Florida Research Foundation, Inc. Neuropeptides and their use for pest control
US6593299B1 (en) 1999-04-21 2003-07-15 University Of Florida Research Foundation, Inc. Compositions and methods for controlling pests
AR035799A1 (es) 2001-03-30 2004-07-14 Syngenta Participations Ag Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos.
EP2270165A3 (en) 2001-06-22 2011-09-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Defensin polynucleotides and methods of use
BR0211139A (pt) * 2001-07-13 2004-10-26 Pioneer Hi Bred Int Promotores de tecido vascular
WO2003078639A2 (en) 2002-03-16 2003-09-25 The University Of York Transgenic plants expressing enzymes involved in fatty acid biosynthesis
US20040268441A1 (en) 2002-07-19 2004-12-30 University Of South Carolina Compositions and methods for the modulation of gene expression in plants
EP2535414B1 (en) 2003-04-29 2017-12-13 Pioneer Hi-Bred International Inc. Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes
AU2005234725B2 (en) 2003-05-22 2012-02-23 Evogene Ltd. Methods of Increasing Abiotic Stress Tolerance and/or Biomass in Plants and Plants Generated Thereby
US7554007B2 (en) * 2003-05-22 2009-06-30 Evogene Ltd. Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants
CA2978152C (en) 2003-05-22 2021-01-26 Evogene Ltd. Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants and plants generated thereby
BRPI0411874A (pt) 2003-06-23 2006-08-08 Pionner Hi Bred International potencial de staygreen controlado em plantas por gene simples obtido por engenharia genética
US20050120415A1 (en) 2003-10-09 2005-06-02 E.I. Du Pont De Nemours And Company Gene silencing
CA2557356A1 (en) 2004-02-20 2006-03-16 E.I. Du Pont De Nemours & Company Lipases and methods of use
US7208474B2 (en) 2004-02-25 2007-04-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Bacillus thuringiensis crystal polypeptides, polynucleotides, and compositions thereof
EP2343373B1 (en) * 2004-06-14 2017-05-10 Evogene Ltd. Polynucleotides and polypeptides involved in plant fiber development and methods of using same
AU2005327983B2 (en) 2004-06-30 2008-08-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of protecting plants from pathogenic fungi
BR122015026853B1 (pt) 2004-07-02 2017-03-28 Du Pont cassete de expressão, microorganismo transformado, método para indução de resistência a patógeno de planta em uma planta, composição anti-patogênica e método para proteção de uma planta contra um patógeno de planta
US7211658B2 (en) * 2004-10-05 2007-05-01 E.I. Dupont Denemours And Company Insecticidal plant cyclotide with activity against homopteran insects
WO2006071219A1 (en) 2004-12-28 2006-07-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Improved grain quality through altered expression of seed proteins
WO2006091194A1 (en) 2005-02-23 2006-08-31 North Carolina State University Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes
WO2006094084A2 (en) 2005-03-02 2006-09-08 Instituto Nacional De Tecnologia Agropecuaria Herbicide-resistant rice plants, polynucleotides encoding herbicide-resistant acetohydroxyacid synthase large subunit proteins, and methods of use
CN103484531B (zh) 2005-07-01 2015-10-21 巴斯福股份公司 抗除草剂的向日葵植物、编码抗除草剂的乙酰羟酸合酶大亚基蛋白的多核苷酸和使用方法
MX338183B (es) 2005-10-24 2016-04-06 Evogene Ltd Polipeptidos aislados, polinucleotidos que los codifican, plantas transgenicas quie expresan los mismos y metodos para usarlos.
JP2009515522A (ja) 2005-11-10 2009-04-16 パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド Ｄｏｆ（ｄｎａｂｉｎｄｉｎｇｗｉｔｈｏｎｅｆｉｎｇｅｒ）配列および使用方法
US20090012029A1 (en) * 2006-01-06 2009-01-08 Hussey Richard S Cyst Nematode Resistant Transgenic Plants
BRPI0710455A2 (pt) 2006-04-19 2011-08-16 Pioneer Hi Bred Int polipeptìdeo isolado, polinucleotìdeo isolado e métodos para aumentar o nìvel de um polipeptìdeo em uma planta, para modular o nìvel de um polipeptìdeo em uma planta e para modificar o crescimento de uma planta
CA2652461C (en) 2006-05-16 2015-12-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Antifungal polypeptides and uses thereof in inducing fungal resistance in plants
CN101490267B (zh) 2006-05-17 2013-04-17 先锋高级育种国际公司 人工植物微染色体
MX2009003616A (es) 2006-10-05 2009-05-11 Du Pont Secuencias de microarn del maiz.
CA2672756C (en) * 2006-12-20 2018-11-20 Evogene Ltd. Polynucleotides and polypeptides involved in plant fiber development and methods of using same
EP2561750A1 (en) 2007-04-04 2013-02-27 BASF Plant Science GmbH AHAS mutants
EP2392661B1 (en) 2007-04-04 2016-11-09 Basf Se Herbicide-resistant Brassica plants and methods of use
KR100829450B1 (ko) * 2007-04-06 2008-05-15 경북대학교 산학협력단 ＭＤＲ１에 대한 ｓｈＲＮＡ 및 티미딘 인산화효소를발현하는 재조합 벡터 및 이의 용도
EP2154946B1 (en) * 2007-04-09 2013-06-05 Evogene Ltd. Polynucleotides, polypeptides and methods for increasing oil content, growth rate and biomass of plants
US8496653B2 (en) * 2007-04-23 2013-07-30 Boston Scientific Scimed, Inc. Thrombus removal
WO2008145629A2 (en) 2007-05-25 2008-12-04 Cropdesign N.V. Yield enhancement in plants by modulation of maize alfins
BRPI0816750A2 (pt) 2007-06-29 2015-09-29 Pioneer Hi Bred Int métodos para alterar o genoma de uma célula de planta monocotiledônea e para modificar uma sequência alvo genômica endógena específica e planta de milho
CA2694481C (en) 2007-07-24 2018-11-13 Evogene Ltd. Polynucleotides, polypeptides encoded thereby, and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance and/or biomass and/or yield in plants expressing same
EP2180780A2 (en) 2007-08-29 2010-05-05 E. I. du Pont de Nemours and Company Methods involving genes encoding nucleoside diphosphatase kinase (ndk) polypeptides and homologs thereof for modifying the plant's root architecture
WO2009061776A1 (en) 2007-11-07 2009-05-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Plants having altered agronomic characteristics under nitrogen limiting conditions and related constructs and methods involving genes encoding lnt2 polypeptides and homologs thereof
WO2009064771A2 (en) 2007-11-12 2009-05-22 North Carolina State University Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes
CA2703903A1 (en) 2007-11-20 2009-05-28 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plants with altered root architecture, related constructs and methods involving genes encoding leucine rich repeat kinase (llrk) polypeptides and homologs thereof
WO2009067580A2 (en) 2007-11-20 2009-05-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize ethylene signaling genes and modulation of same for improved stress tolerance in plants
EP2070416A1 (de) * 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Verwendung von Wirkstoffkombinationen zur Bekämpfung von tierischen Schädlingen
US8937217B2 (en) 2007-12-18 2015-01-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Down-regulation of gene expression using artificial microRNAs
US8115055B2 (en) 2007-12-18 2012-02-14 E.I. Du Pont De Nemours And Company Down-regulation of gene expression using artificial microRNAs
WO2009083958A2 (en) 2007-12-27 2009-07-09 Evogene Ltd. Isolated polypeptides, polynucleotides useful for modifying water user efficiency, fertilizer use efficiency, biotic/abiotic stress tolerance, yield and biomass in plants
US8367895B2 (en) 2008-01-17 2013-02-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides from the family aphididae
US8847013B2 (en) 2008-01-17 2014-09-30 Pioneer Hi Bred International Inc Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides from lepidoptera
US8487159B2 (en) * 2008-04-28 2013-07-16 Metabolix, Inc. Production of polyhydroxybutyrate in switchgrass
BRPI0908666B1 (pt) * 2008-05-22 2021-06-15 Evogene Ltd Método de aumento do teor do óleo, do rendimento de sementes, da taxa de crescimento e/ou da biomassa de uma planta quando comparada a uma planta nativa, e, construção de ácido nucleico isolado
AR072638A1 (es) 2008-07-31 2010-09-08 Nidera Sa Tecnologia de control de malezas y de tolerancia a herbicidas residuales
AU2008360729A1 (en) 2008-08-18 2010-02-25 Seoul National University Industry Foundation Method for controlling cancer metastasis or cancer cell migration by modulating the cellular level of lysyl tRNA synthetase
BR122021014201B1 (pt) 2008-08-18 2022-08-16 Evogene Ltd. Método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, e, construção de ácido nucleico isolado
AP2011005671A0 (en) 2008-09-26 2011-04-30 Basf Agrochemical Products Bv Herbicide-resistant AHAS-mutants and methods of use.
AR074071A1 (es) 2008-10-30 2010-12-22 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos aislados y metodos para utilizarlos para aumentar el rendimiento de la planta, biomasa, tasa de crecimiento, vigor, contenido de aceite, tolerancia al estres abiotico de las plantas y eficacia en el uso de nitrogeno
GB2465749B (en) 2008-11-25 2013-05-08 Algentech Sas Plant cell transformation method
GB2465748B (en) 2008-11-25 2012-04-25 Algentech Sas Plant cell transformation method
TW201021712A (en) * 2008-12-03 2010-06-16 Univ Nat Taiwan Preparation method of biological insecticides using mammalian carbohydrate-binding protein
WO2010065867A1 (en) 2008-12-04 2010-06-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for enhanced yield by targeted expression of knotted1
EP2376636A1 (en) 2008-12-17 2011-10-19 E. I. du Pont de Nemours and Company Plants having altered agronomic characteristics under nitrogen limiting conditions and related constructs and methods involving genes encoding lnt9 polypeptides
US20120004114A1 (en) 2008-12-22 2012-01-05 E. I. Du Pont De Nemours And Company And Pioneer Hi-Bred International Nucleotide sequences encoding gsh1 polypeptides and methods of use
MX340023B (es) 2008-12-29 2016-06-22 Evogene Ltd Polinucleotidos, polipeptidos codificados, y metodos para utilizarlos para aumentar la tolerancia al estres abiotico, biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan.
CN101768213B (zh) 2008-12-30 2012-05-30 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种与植物分蘖数目相关的蛋白及其编码基因与应用
EP2206723A1 (en) 2009-01-12 2010-07-14 Bonas, Ulla Modular DNA-binding domains
US20110239315A1 (en) 2009-01-12 2011-09-29 Ulla Bonas Modular dna-binding domains and methods of use
CA2749524C (en) 2009-01-22 2021-07-06 Syngenta Participations Ag Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
US9347046B2 (en) 2009-01-22 2016-05-24 Syngenta Participations Ag Hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
GB2467167B (en) 2009-01-26 2013-09-11 Algentech Sas Gene targeting in plants
CN101817879A (zh) 2009-02-26 2010-09-01 中国科学院遗传与发育生物学研究所 金属硫蛋白及其编码基因与应用
US8937220B2 (en) 2009-03-02 2015-01-20 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield, biomass, vigor and/or growth rate of a plant
BRPI1006284A2 (pt) 2009-03-09 2015-08-25 E I Du Pont Ne Nemours And Company " planta que compreende no seu genoma uma construção de dna recombinante que compreende um polinucleotídeo ligado operativamente a pelo menos um elemento regulador, método de aumento da tolerância à seca em plantas, polinucleotídeo isolado, polinucleotídeo, vetor, construção de dna recombinante, célula e planta ou semente "
US9085633B2 (en) 2009-03-27 2015-07-21 E I Du Pont De Nemours And Company Plants having altered agronomic characteristics under nitrogen limiting conditions and related constructs and methods involving genes encoding SNF2 domain-containing polypeptides
EA201171245A1 (ru) 2009-04-14 2012-05-30 Пайонир Хай-Бред Интернешнл, Инк. Модуляция acc-синтазы, улучшающая урожайность растений при условиях низкого содержания азота
MX2011011678A (es) 2009-05-04 2011-12-06 Pioneer Hi Bred Int Mejora de la produccion en plantas mediante la modulacion del factor de transcripcion ap2.
KR101324390B1 (ko) 2009-06-05 2013-11-01 설대우 단일 또는 멀티 표적 유전자를 억제하는 멀티-시스트로닉 ｓｈＲＮＡ 발현 카세트
US20120047603A1 (en) 2009-06-09 2012-02-23 Allen Stephen M Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding fatty acid desaturase family polypeptides
CN107129998A (zh) 2009-06-10 2017-09-05 淡马锡生命科学研究院有限公司 用于棉花中基因功能性分析的病毒诱导的基因沉默(vigs)
ES2773985T3 (es) 2009-06-10 2020-07-16 Evogene Ltd Polinucleótidos y polipéptidos aislados, y métodos para usar los mismos para incrementar la eficiencia en el uso de nitrógeno, rendimiento, tasa de crecimiento, vigor, biomasa, contenido de aceite, y/o tolerancia al estrés abiótico
US20120174261A1 (en) 2009-06-30 2012-07-05 E. I. Du Pont De Nemours And Company Plant seeds with alterred storage compound levels, related constructs and methods involving genes encoding cytosolic pyrophosphatase
AU2010286111A1 (en) 2009-08-21 2012-02-16 Beeologics Inc. Preventing and curing beneficial insect diseases via plant transcribed molecules
BR122018067925B8 (pt) 2009-08-28 2022-12-06 Du Pont Polinucleotídeo isolado, cassete de expressão, método para controlar uma praga de plantas do tipo coleoptera e método para obtenção de uma planta
CA2773707A1 (en) 2009-09-15 2011-03-24 Metabolix, Inc. Generation of high polyhydroxybutrate producing oilseeds with improved germination and seedling establishment
WO2011046772A1 (en) 2009-10-15 2011-04-21 E. I. Du Pont De Nemours And Company Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding self-incompatibility protein related polypeptides
AR078828A1 (es) 2009-10-30 2011-12-07 Du Pont Plantas tolerantes a la sequia y constructos y metodos relacionados que involucran genes que codifican a los polipeptidos dtp21
AR078829A1 (es) 2009-10-30 2011-12-07 Du Pont Plantas y semillas con niveles alterados de compuesto de almacenamiento, construcciones relacionadas y metodos relacionados con genes que codifican proteinas similares a las aldolasas bacterianas de la clase ii del acido 2,4- dihidroxi-hept-2-eno-1,7-dioico
EP2504441B1 (en) 2009-11-23 2020-07-22 E. I. du Pont de Nemours and Company Sucrose transporter genes for increasing plant seed lipids
WO2011067745A2 (en) 2009-12-06 2011-06-09 Rosetta Green Ltd. Compositions and methods for enhancing plants resistance to abiotic stress
WO2011080674A2 (en) 2009-12-28 2011-07-07 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
WO2011082310A2 (en) 2009-12-30 2011-07-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for targeted polynucleotide modification
EP3078748B1 (en) 2009-12-30 2021-08-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for the introduction and regulated expression of genes in plants
EP2519639A1 (en) 2009-12-31 2012-11-07 Pioneer Hi-Bred International Inc. Direct and continuous root alone or root/shoot production from transgenic events derived from green regenerative tissues and its applications
EP2529028A1 (en) 2010-01-26 2012-12-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Polynucleotide and polypeptide sequences associated with herbicide tolerance
WO2011097215A2 (en) 2010-02-02 2011-08-11 E.I. Du Pont De Nemours And Company Plants with altered root architecture, related constructs and methods involving genes encoding lectin protein kinase (lpk) polypeptides and homologs thereof
WO2011109618A2 (en) 2010-03-03 2011-09-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Plant seeds with altered storage compound levels, related constructs and methods involving genes encoding oxidoreductase motif polypeptides
EP2563112A4 (en) 2010-04-28 2014-03-05 Evogene Ltd INSULATED POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES AND METHODS OF USING THE SAME FOR INCREASING PLANT YIELD AND / OR AGRICULTURAL CHARACTERISTICS
WO2011136909A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 E.I. Dupont De Nemours And Company Alteration of plant architecture characteristics in plants
BR112012028132A2 (pt) 2010-05-04 2015-09-15 Basf Se plantas que tem tolerância aumentada a herbicidas
MX2012012672A (es) 2010-05-06 2012-12-17 Du Pont Gen y proteina acc sintasa 3 de maiz y sus usos.
CN102933712A (zh) 2010-06-09 2013-02-13 纳幕尔杜邦公司 用于在植物中调节转基因表达的调控序列
WO2011161431A2 (en) 2010-06-22 2011-12-29 Glaxosmithkline Australia Pty Limited Methyltransferase nucleic acids and polypeptides
MX365030B (es) 2010-06-25 2019-05-21 Du Pont Composiciones y metodos para mejorar la resistencia al tizon norteño de las hojas en maiz.
BR112012033668A2 (pt) 2010-07-01 2017-06-13 Du Pont planta e semente transgênica, método para a produção de um planta transgênica, produto e/ou subproduto obtido a partir da semente transgênica, polinucleotídeo isolado e planta ou semente compreendendo uma cosntrução de dna recombinante
US9512188B2 (en) 2010-07-12 2016-12-06 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (Aro) (Volcani Center) Isolated polynucleotides and methods and plants using same for regulating plant acidity
CA3044439C (en) 2010-07-22 2023-12-19 Sun Pharmaceutical Industries (Australia) Pty Ltd Plant cytochrome p450
UA112969C2 (uk) 2010-08-03 2016-11-25 Сібас Юс Ллс Рослина, стійка до одного або більше ррх-інгібуючих гербіцидів, яка містить мутантний ген протопорфіриноген ix оксидази (ррх)
US20120122223A1 (en) 2010-08-03 2012-05-17 Cibus Us Llc Mutated protoporphyrinogen ix oxidase (ppx) genes
EP2603591A1 (en) 2010-08-13 2013-06-19 Pioneer Hi-Bred International Inc. Compositions and methods comprising sequences having hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (hppd) activity
US8865967B2 (en) 2010-08-23 2014-10-21 Pioneer Hi Bred International Inc Defensin variants and methods of use
MX365161B (es) 2010-08-30 2019-05-24 Evogene Ltd Polinucleótidos y polipéptidos aislados, y métodos para utilizarlos para aumentar la eficacia en el uso de nitrógeno, rendimiento, tasa de crecimiento, vigor, biomasa, contenido de aceite y/o tolerancia al estrés abiótico.
CA2807836A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Vacuole targeting peptides and methods of use
WO2012037324A2 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Metabolix, Inc. Increasing carbon flow for polyhydroxybutyrate production in biomass crops
CA2814187A1 (en) 2010-10-28 2012-05-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding dtp6 polypeptides
CA2820706C (en) 2010-12-03 2018-05-22 Ms Technologies, Llc Optimized expression of glyphosate resistance encoding nucleic acid molecules in plant cells
MX347362B (es) 2010-12-16 2017-04-10 Basf Agro Bv Plantas que tienen mayor tolerancia a herbicidas.
US20130269063A1 (en) 2010-12-20 2013-10-10 Pioneer Hi Bred International Inc Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding mate-efflux polypeptides
BR122021002251B1 (pt) 2010-12-22 2021-09-14 Evogene Ltd Método para aumentar a tolerância ao estresse abiótico, rendimento, biomassa, taxa de crescimento, vigor, conteúdo de óleo, rendimento de fibras, qualidade de fibras e/ou eficiência de utilização de nitrogênio de uma planta, e, construção de ácido nucleico isolado
WO2012092106A1 (en) 2010-12-28 2012-07-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
CA2826284C (en) 2011-02-01 2021-06-08 Colorado Wheat Research Foundation, Inc. Acetyl co-enzyme a carboxylase herbicide resistant plants
US9109231B2 (en) 2011-02-11 2015-08-18 Pioneer Hi Bred International Inc Synthetic insecticidal proteins active against corn rootworm
US8878007B2 (en) 2011-03-10 2014-11-04 Pioneer Hi Bred International Inc Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity
AR085533A1 (es) 2011-03-23 2013-10-09 Pioneer Hi Bred Int Metodos de produccion de un locus de rasgos transgenicos complejo
WO2012131495A2 (en) 2011-03-30 2012-10-04 Universidad Nacional Autónoma de México Mutant bacillus thuringiensis cry genes and methods of use
US20120266324A1 (en) 2011-04-15 2012-10-18 Pioneer Hi Bred International Inc. Self-Reproducing Hybrid Plants
AR086243A1 (es) 2011-05-03 2013-11-27 Evogene Ltd Polipeptidos y polinucleotidos aislados y metodos para su uso, para aumentar el rendimiento, la biomasa, el indice de crecimiento, el vigor, el contenido de aceite, la tolerancia al estres abiotico de las plantas y la eficiencia en el uso del nitrogeno
US9062317B2 (en) 2011-05-09 2015-06-23 E I Du Pont De Nemours And Company Methods and compositions for silencing gene families using artificial microRNAs
WO2012156976A1 (en) 2011-05-16 2012-11-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods of producing artemisinin in non-host plants and vectors for use in same
US9150625B2 (en) 2011-05-23 2015-10-06 E I Du Pont De Nemours And Company Chloroplast transit peptides and methods of their use
AU2012333207A1 (en) 2011-06-21 2014-01-23 E.I. Du Pont De Nemours And Company Methods and compositions for producing male sterile plants
AR087167A1 (es) 2011-07-12 2014-02-26 Two Blades Foundation Genes de resistencia al tizon tardio
WO2013012643A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Polynucleotides encoding trehalose-6-phosphate phosphatase and methods of use thereof
US9556449B2 (en) 2011-07-15 2017-01-31 Syngenta Participations Ag Methods of increasing yield and stress tolerance in a plant by decreasing the activity of a trehalose-6-phosphate phosphatase
WO2013015993A1 (en) 2011-07-28 2013-01-31 Syngenta Participations Ag Methods and compositions for controlling nematode pests
WO2013019456A1 (en) 2011-08-02 2013-02-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for high-throughput screening of transgenic plants
EP2739739A1 (en) 2011-08-03 2014-06-11 E. I. Du Pont de Nemours and Company Methods and compositions for targeted integration in a plant
AU2012301912A1 (en) 2011-08-31 2014-03-06 E. I. Dupont De Nemours & Company Methods for tissue culture and transformation of sugarcane
US20140298544A1 (en) 2011-10-28 2014-10-02 Pioneer Hi Bred International Inc Engineered PEP carboxylase variants for improved plant productivity
IN2014DN02042A (hu) 2011-10-28 2015-05-15 Du Pont
CA2851855A1 (en) 2011-10-31 2013-05-10 Bp Corporation North America Inc. Use of plant promoters in filamentous fungi
US20140182011A1 (en) 2011-11-03 2014-06-26 The University Of Hong Kong Methods Using Acyl-Coenzyme A-Binding Proteins to Enchance Drought Tolerance in Genetically Modified Plants
CA2853490A1 (en) 2011-11-03 2013-05-10 Syngenta Participations Ag Polynucleotides, polypeptides and methods for enhancing photoassimilation in plants
EP2800814A1 (en) 2012-01-06 2014-11-12 Pioneer Hi-Bred International Inc. A method to screen plants for genetic elements inducing parthenogenesis in plants
WO2013109754A1 (en) 2012-01-17 2013-07-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant transcription factors, promoters and uses thereof
ES2635115T3 (es) 2012-01-23 2017-10-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Regulación por disminución de expresión génica utilizando micro ARN artificiales para silenciar genes biosintéticos de ácidos grasos
WO2013111018A1 (en) 2012-01-26 2013-08-01 Norfolk Plant Sciences, Ltd. Methods for increasing the anthocyanin content of citrus fruit
AR089793A1 (es) 2012-01-27 2014-09-17 Du Pont Metodos y composiciones para generar locus de rasgos transgenicos complejos
WO2013118120A2 (en) 2012-02-06 2013-08-15 Rosetta Green Ltd. Isolated polynucleotides expressing or modulating micrornas or targets of same, transgenic plants comprising same and uses thereof in improving nitrogen use efficiency, abiotic stress tolerance, biomass, vigor or yield of a plant
EP2814965B1 (en) 2012-02-16 2018-03-21 Syngenta Participations AG Engineered pesticidal proteins
WO2013134651A1 (en) 2012-03-09 2013-09-12 Board Of Trustees Of Michigan State University Method of enhancing plant drought tolerance by expression of ndr1
GB201204407D0 (en) 2012-03-13 2012-04-25 Glaxosmithkline Australia Pty Ltd Nucleic acid molecule
BR112014027468A2 (pt) 2012-05-04 2017-06-27 Du Pont polinucleotídeo isolado ou recombinante, construção de dna recombinante, célula, planta, explante vegetal, semente transgênica, polipeptídeo isolado, composição, métodos de produção de meganuclease, de introdução de rompimento e de integração de um polinucleotídeo.
US9347105B2 (en) 2012-06-15 2016-05-24 Pioneer Hi Bred International Inc Genetic loci associated with resistance of soybean to cyst nematode and methods of use
CA2876426A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Methods and compositions involving als variants with native substrate preference
AR091489A1 (es) 2012-06-19 2015-02-11 Basf Se Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas inhibidores de la protoporfirinogeno oxidasa (ppo)
BR112014032080A2 (pt) 2012-06-20 2017-06-27 Cold Spring Harbor Laboratory gene de terminação de flor (tmf) e métodos de uso.
EP2864484A1 (en) 2012-06-22 2015-04-29 Syngenta Participations AG Biological control of coleopteran pests
GB201211079D0 (en) 2012-06-22 2012-08-01 Univ Exeter The Controlling dormancy in hybrid seed
WO2014036048A1 (en) 2012-08-30 2014-03-06 E. I. Du Pont De Nemours And Company Long intergenic non-coding rnas in maize
US9816102B2 (en) 2012-09-13 2017-11-14 Indiana University Research And Technology Corporation Compositions and systems for conferring disease resistance in plants and methods of use thereof
CN104884625A (zh) 2012-10-15 2015-09-02 先锋国际良种公司 增强cry内毒素的活性的方法和组合物
US20140123339A1 (en) 2012-10-31 2014-05-01 Pioneer Hi Bred International Inc Transformed Plants Having Increased Beta-Carotene Levels, Increased Half-Life and Bioavailability and Methods of Producing Such
EP2922398A4 (en) 2012-11-23 2016-05-04 Hexima Ltd ANTI-PATHOGENIC METHODS
US20140173775A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for producing and selecting transgenic plants
EP3702364A1 (en) 2012-12-18 2020-09-02 Yield10 Bioscience, Inc. Transcriptional regulation for improved plant productivity
US20150351390A1 (en) 2012-12-21 2015-12-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for auxin-analog conjugation
BR112015018254A2 (pt) 2013-01-31 2017-08-22 Purdue Research Foundation Métodos para produzir uma planta transgênica e para identificar um alelo, planta ou semente, semente da planta e método para identificar uma primeira planta
CN105189760A (zh) 2013-03-01 2015-12-23 加利福尼亚大学董事会 用于将rna聚合酶和非编码rna生物发生靶向特定基因座的方法和组合物
CN105247055A (zh) 2013-03-11 2016-01-13 先锋国际良种公司 用于增强植物茎机械强度的组合物和方法
BR112015022742A2 (pt) 2013-03-11 2018-11-27 Pionner Hi Bred Int Inc métodos e composições que empregam um domínio de estabilização dependente de sulfonilureia
CA2905377A1 (en) 2013-03-11 2014-10-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions to improve the spread of chemical signals in plants
US9803214B2 (en) 2013-03-12 2017-10-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Breeding pair of wheat plants comprising an MS45 promoter inverted repeat that confers male sterility and a construct that restores fertility
UA123532C2 (uk) 2013-03-12 2021-04-21 Е. І. Дю Пон Де Немур Енд Компані Спосіб ідентифікації варіантного сайта розпізнавання для сконструйованого засобу, що рідко розщеплює, для індукції двониткового розриву
US9416368B2 (en) 2013-03-13 2016-08-16 E I Du Pont De Nemours And Company Identification of P. pachyrhizi protein effectors and their use in producing Asian soybean rust (ASR) resistant plants
BR112015023268A2 (pt) 2013-03-13 2018-05-02 Du Pont método para reduzir a expressão, construto de dna, método de obtenção de célula vegetal, método de obtenção de planta transgênica ou uma parte de planta
CN105339380A (zh) 2013-03-14 2016-02-17 先锋国际良种公司 用以防治昆虫害虫的组合物和方法
BR112015023272A2 (pt) 2013-03-14 2017-07-18 Pioneer Hi Bred Int célula vegetal, planta, explante vegetal, semente transgênica, método para produzir uma célula vegetal tendo um polinucleotídeo heterólogo que codifica um polipeptídeo tendo atividade de dicamba descarboxilase, método para controlar plantas daninhas em um campo contendo uma cultura e método para controlar plantas daninhas em um campo contendo uma cultura
CN114703210A (zh) 2013-03-14 2022-07-05 希博斯美国有限公司 突变的丙二烯氧合酶2(aos2)基因
US20160040149A1 (en) 2013-03-14 2016-02-11 Pioneer Hi-Bred International Inc. Compositions Having Dicamba Decarboxylase Activity and Methods of Use
EP2971000A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Pioneer Hi Bred Int PHI-4 POLYPEPTIDES AND METHOD FOR THEIR USE
WO2014145768A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Bp Corporation North America Inc. Use of non-fungal 5' utrs in filamentous fungi
US9957515B2 (en) 2013-03-15 2018-05-01 Cibus Us Llc Methods and compositions for targeted gene modification
EA201591445A1 (ru) 2013-03-15 2016-03-31 Сибас Юс Ллс Способы и композиции для повышения эффективности направленной модификации генов с применением опосредованной олигонуклеотидами репарации генов
WO2014151213A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding dtp32 polypeptides
CN103146711B (zh) * 2013-03-19 2014-08-27 陕西师范大学 人工合成抗蚜虫基因asgna及其合成方法和应用
US11459579B2 (en) 2013-07-09 2022-10-04 Board Of Trustees Of Michigan State University Transgenic plants produced with a K-domain, and methods and expression cassettes related thereto
US10570409B2 (en) 2013-07-09 2020-02-25 Board Of Trustees Of Michigan State University Transgenic plants produced with a K-domain, and methods and expression cassettes related thereto
CA2918452A1 (en) 2013-07-15 2015-01-22 Donald Danforth Plant Science Center Enhanced oil production and stress tolerance in plants
WO2015021139A2 (en) 2013-08-08 2015-02-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having broad spectrum activity and uses thereof
WO2015023846A2 (en) 2013-08-16 2015-02-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CA3157565A1 (en) 2013-08-22 2015-02-26 E. I. Du Pont De Nemours And Company Plant genome modification using guide rna/cas endonuclease systems and methods of use
EP4159028A1 (en) 2013-09-13 2023-04-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2015057600A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 E. I. Du Pont De Nemours And Company Glyphosate-n-acetyltransferase (glyat) sequences and methods of use
CA2928830A1 (en) 2013-10-29 2015-05-07 Shai J. Lawit Self-reproducing hybrid plants
JP6707028B2 (ja) 2013-12-09 2020-06-10 ベイラー カレッジ オブ メディスンＢａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 心筋細胞新生におけるｈｉｐｐｏ及びジストロフィン複合体シグナル伝達
CA2935703A1 (en) 2013-12-30 2015-07-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Drought tolerant plants and related constructs and methods involving genes encoding dtp4 polypeptides
US20170166920A1 (en) 2014-01-30 2017-06-15 Two Blades Foundation Plants with enhanced resistance to phytophthora
MX2016010187A (es) 2014-02-07 2017-07-11 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas y metodos para su uso.
BR112016018103B1 (pt) 2014-02-07 2024-01-16 E.I. Du Pont De Nemours And Company Polipeptídeo e seu uso, polinucleotídeo, composição, proteína de fusão, método para controlar uma população, método para inibir o crescimento, método para controlar a infestação, método para obtenção de uma planta ou célula vegetal, construto
KR102450868B1 (ko) 2014-03-14 2022-10-06 시버스 유에스 엘엘씨 올리고뉴클레오타이드 매개 유전자 보수를 사용한 표적화된 유전자 변형의 효율을 증가시키기 위한 방법 및 조성물
WO2015150465A2 (en) 2014-04-03 2015-10-08 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
WO2015171603A1 (en) 2014-05-06 2015-11-12 Two Blades Foundation Methods for producing plants with enhanced resistance to oomycete pathogens
WO2016000237A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Pioneer Overseas Corporation Plants having enhanced tolerance to insect pests and related constructs and methods involving insect tolerance genes
BR112017000482A2 (pt) 2014-07-11 2017-11-07 Du Pont métodos para produzir uma planta mutante e para gerar uma planta, planta, semente, rna, métodos para produzir uma célula, para duplicar um fragmento gênico, para substituir uma primeira sequência promotora, para inserir um elemento regulador em uma sequência de nucleotídeos e para inserir um íntron em uma sequência de nucleotídeos, planta de milho e célula vegetal
AU2015315651A1 (en) 2014-09-12 2017-02-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Generation of site-specific-integration sites for complex trait loci in corn and soybean, and methods of use
WO2016044092A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Pioneer Hi Bred International Inc Compositions and methods to control insect pests
CA2963550A1 (en) 2014-10-16 2016-04-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having broad spectrum activity and uses thereof
CA2963558C (en) 2014-10-16 2023-04-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
MX2017004814A (es) 2014-10-16 2017-08-02 Pioneer Hi Bred Int Polipeptidos insecticidas que tienen un espectro de actividad mejorado y sus usos.
SG11201703132UA (en) 2014-10-22 2017-05-30 Temasek Life Sciences Lab Ltd Terpene synthases from ylang ylang (cananga odorata var. fruticosa)
EA038321B1 (ru) 2014-11-06 2021-08-09 Е.И. Дюпон Де Немур Энд Компани Опосредуемая пептидом доставка направляемой рнк эндонуклеазы в клетки
MX2017007619A (es) 2014-12-12 2017-09-18 Syngenta Participations Ag Composiciones y metodos para controlar plagas en plantas.
WO2016100309A1 (en) 2014-12-16 2016-06-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Restoration of male fertility in wheat
US20180066026A1 (en) 2014-12-17 2018-03-08 Ei Du Pont De Nemours And Company Modulation of yep6 gene expression to increase yield and other related traits in plants
EP3234156A1 (en) 2014-12-19 2017-10-25 AgBiome, Inc. Methods and compositions for providing resistance to glufosinate
US11041158B2 (en) 2014-12-22 2021-06-22 AgBiome, Inc. Optimization methods for making a synthetic gene
BR112017013528A2 (pt) 2014-12-23 2018-03-06 Syngenta Participations Ag controle biológico de pragas de coleópteros
JP7040941B2 (ja) 2015-01-21 2022-03-23 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 除草剤耐性の増加した植物
CN107406858A (zh) 2015-02-25 2017-11-28 先锋国际良种公司 用于指导rna/cas内切核酸酶复合物的调节型表达的组合物和方法
MX2017011525A (es) 2015-03-11 2018-01-30 Pioneer Hi Bred Int Combinaciones insecticidas de pip-72 y metodos de uso.
BR112017017279A2 (pt) 2015-03-19 2018-04-17 Pioneer Hi Bred Int métodos para introduzir um gene inibidor de pólen, para introduzir dois genes inibidores de pólen, para introduzir dois genes marcadores coloridos e de introgressão acelerada de traço e planta
US11174467B2 (en) 2015-04-08 2021-11-16 Yield10 Bioscience, Inc. Plants with enhanced yield and methods of construction
EP3280271A4 (en) 2015-04-10 2019-04-10 Syngenta Participations AG ANIMAL FEED COMPOSITIONS AND METHODS OF USE
US20160304898A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 AgBiome, Inc. Pesticidal Genes and Methods of Use
RU2738424C2 (ru) 2015-04-22 2020-12-14 Агбайоми, Инк. Пестицидные гены и способы их применения
US20180142251A1 (en) 2015-05-06 2018-05-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for the production of unreduced, non-recombined gametes and clonal offspring
CN107709564B (zh) 2015-05-09 2021-11-02 双刃基金会 来自少花龙葵的抗晚疫病基因及使用方法
BR112017024429A2 (pt) 2015-05-11 2018-08-14 E I Du Pont De Nemours And Company Us polinucleotídeo isolado, construto de dna, método para conferir resistência a doenças, planta, semente, método para reduzir um ou mais sintomas de uma doença, método para produzir uma planta, método para testar uma planta, método para melhorar a resistência de plantas
CN107709562A (zh) 2015-05-15 2018-02-16 先锋国际良种公司 指导rna/cas内切核酸酶系统
RU2017144238A (ru) 2015-05-19 2019-06-19 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные белки и способы их применения
CN114805503A (zh) 2015-06-03 2022-07-29 农业生物群落股份有限公司 杀虫基因和使用方法
US10647995B2 (en) 2015-06-16 2020-05-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
US20160366881A1 (en) 2015-06-22 2016-12-22 AgBiome, Inc. Pesticidal Genes and Methods of Use
RU2762832C2 (ru) 2015-08-06 2021-12-23 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные белки растительного происхождения и способы их применения
CA2995995A1 (en) 2015-08-24 2017-03-02 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof
CN108513584A (zh) 2015-08-28 2018-09-07 先锋国际良种公司 苍白杆菌介导的植物转化
WO2017062790A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 Two Blades Foundation Cold shock protein receptors and methods of use
BR112018007351A2 (pt) 2015-10-12 2018-10-23 Du Pont métodos de seleção de células e levedura
KR20180059535A (ko) 2015-10-20 2018-06-04 파이어니어 하이 부렛드 인터내쇼날 인코포레이팃드 마커-프리 게놈 변형을 위한 방법 및 조성물
CA3001979A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
EP3370509A1 (en) 2015-11-03 2018-09-12 Two Blades Foundation Wheat stripe rust resistance genes and methods of use
WO2017079026A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 E. I. Du Pont De Nemours And Company Generation of complex trait loci in soybean and methods of use
EP3390431A1 (en) 2015-12-18 2018-10-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
RU2021110857A (ru) 2015-12-22 2021-04-26 Агбайоми, Инк. Пестицидные гены и способы использования
WO2017136668A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 Yield10 Bioscience, Inc. Transgenic land plants comprising a putative bicarbonate transporter protein of an edible eukaryotic algae
EA201891629A1 (ru) 2016-02-09 2019-03-29 Сибас Юс Ллс Способы и композиции для повышения эффективности нацеленной модификации генов с применением опосредуемой олигонуклеотидами репарации генов
US9896696B2 (en) 2016-02-15 2018-02-20 Benson Hill Biosystems, Inc. Compositions and methods for modifying genomes
WO2017155715A1 (en) 2016-03-11 2017-09-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel cas9 systems and methods of use
CA3010628A1 (en) 2016-03-11 2017-09-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel cas9 systems and methods of use
US20190098858A1 (en) 2016-03-18 2019-04-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for producing clonal, non-reduced, non-recombined gametes
RU2018137045A (ru) 2016-04-14 2020-05-14 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. Инсектицидные полипептиды, обладающие улучшенным спектром активности, и пути их применения
AR108284A1 (es) 2016-04-19 2018-08-08 Pioneer Hi Bred Int Combinaciones insecticidas de polipéptidos que tienen espectro de actividad mejorado y usos de éstas
EP3451837B1 (en) 2016-05-04 2021-08-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2017198859A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 BASF Agro B.V. Dual transit peptides for targeting polypeptides
US11286493B2 (en) 2016-05-27 2022-03-29 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for targeting RNA polymerases and non-coding RNA biogenesis to specific loci
WO2017205834A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Transgenic plants with increased photosynthesis efficiency and growth
BR112018076047A2 (pt) 2016-06-16 2019-03-26 Pioneer Hi Bred Int elemento de silenciamento, construto de dna, cassete de expressão, célula hospedeira, composição, célula vegetal, planta ou parte de planta, semente transgênica, método para controlar um inseto-praga de planta e kit
EP3260542A1 (en) 2016-06-20 2017-12-27 Algentech Protein production in plant cells
MX2018015906A (es) 2016-07-01 2019-04-04 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas de plantas y metodos para sus usos.
WO2018013333A1 (en) 2016-07-12 2018-01-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
CN109688807B (zh) 2016-07-15 2023-04-28 巴斯夫欧洲公司 具有增加的除草剂耐受性的植物
BR112019001483A2 (pt) 2016-07-27 2019-09-10 Basf Agro Bv método para controlar a vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas
RU2019110131A (ru) 2016-09-06 2020-10-08 Агбайоми, Инк. Пестицидные гены и способы использования
WO2018076335A1 (en) 2016-10-31 2018-05-03 Institute Of Genetics And Developmental Biology, Chinese Academy Of Sciences Compositions and methods for enhancing abiotic stress tolerance
US11021716B2 (en) 2016-11-01 2021-06-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
US11174295B2 (en) 2016-12-14 2021-11-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3555299A1 (en) 2016-12-16 2019-10-23 Two Blades Foundation Late blight resistance genes and methods of use
US11879132B2 (en) 2016-12-20 2024-01-23 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
EP3558004A1 (en) 2016-12-22 2019-10-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2018136783A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 The Regents Of The University Of California Targeted gene activation in plants
WO2018140214A1 (en) 2017-01-24 2018-08-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nematicidal protein from pseudomonas
WO2018140362A1 (en) 2017-01-26 2018-08-02 The Regents Of The University Of California Targeted gene demethylation in plants
WO2018140859A2 (en) 2017-01-30 2018-08-02 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
CA3052794A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal combinations of plant derived insecticidal proteins and methods for their use
WO2018156686A1 (en) 2017-02-22 2018-08-30 Yield10 Bioscience, Inc. Transgenic land plants comprising enhanced levels of mitochondrial transporter protein
BR112019021380A2 (pt) 2017-04-11 2020-05-05 Agbiome Inc genes pesticidas e métodos de uso
WO2018202800A1 (en) 2017-05-03 2018-11-08 Kws Saat Se Use of crispr-cas endonucleases for plant genome engineering
EP3622076A1 (en) 2017-05-11 2020-03-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2018209209A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Two Blades Foundation Methods for screening proteins for pattern recognition receptor function in plant protoplasts
US20200308598A1 (en) 2017-05-26 2020-10-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof
CN111542608A (zh) 2017-07-28 2020-08-14 双刃基金会 马铃薯y病毒抗性基因及使用方法
US20190093117A1 (en) 2017-07-31 2019-03-28 R. J. Reynolds Tobacco Company Methods and compositions for viral-based gene editing in plants
EP4036105A3 (en) 2017-08-03 2022-11-02 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
EP3665279B1 (en) 2017-08-09 2023-07-19 Benson Hill, Inc. Compositions and methods for modifying genomes
US11649465B2 (en) 2017-09-11 2023-05-16 R.J. Reynolds Tobacco Company Methods and compositions for increasing expression of genes of interest in a plant by co-expression with p21
WO2019074598A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. VIRUS-INDUCED GENETIC SILENCING TECHNOLOGY FOR THE CONTROL OF INSECTS IN MAIZE
WO2019108619A1 (en) 2017-11-28 2019-06-06 Two Blades Foundation Methods and compositions for enhancing the disease resistance of plants
BR112020010778A2 (pt) 2017-11-29 2020-11-24 Basf Se método para controlar a vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas
US11492639B2 (en) 2017-12-19 2022-11-08 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal polypeptides and uses thereof
EP3728606A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 Agbiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
US11359208B2 (en) 2018-01-09 2022-06-14 Cibus Us Llc Shatterproof genes and mutations
WO2019140351A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Two Blades Foundation Stem rust resistance genes and methods of use
EP3740578A4 (en) 2018-01-17 2021-12-29 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
WO2019145693A1 (en) 2018-01-23 2019-08-01 The University Of York Inhibitory agent
BR112020016306A2 (pt) 2018-02-12 2020-12-15 Curators Of The University Of Missouri Gene (saur) suprarregulado pequeno de auxina para o melhoramento da arquitetura do sistema radicular da planta, tolerância ao encharcamento, resistência à seca, e rendimento
EP3759489A1 (en) 2018-03-02 2021-01-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant health assay
CA3092078A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
CA3092075A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
EP3781692A1 (en) 2018-04-20 2021-02-24 Agbiome, Inc. Pesticidal proteins and methods of use
EP3802807A1 (en) 2018-06-05 2021-04-14 Lifeedit, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
EP3818075A1 (en) 2018-07-04 2021-05-12 Ukko Inc. Methods of de-epitoping wheat proteins and use of same for the treatment of celiac disease
WO2020046701A1 (en) 2018-08-29 2020-03-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3846615A4 (en) 2018-09-04 2022-05-25 Yield10 Bioscience, Inc. GENETICALLY MODIFIED LAND PLANTS THAT EXPRESS AN INCREASED SEED YIELD PROTEIN AND/OR AN RNA FOR INCREASED SEED YIELD
EP3902911B1 (en) 2018-12-27 2023-12-13 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Polypeptides useful for gene editing and methods of use
US20220251595A1 (en) 2019-06-27 2022-08-11 Two Blades Foundation Engineered atrlp23 pattern recognition receptors and methods of use
WO2021001784A1 (en) 2019-07-04 2021-01-07 Ukko Inc. De-epitoped alpha gliadin and use of same for the management of celiac disease and gluten sensitivity
WO2021011348A1 (en) 2019-07-12 2021-01-21 The Regents Of The University Of California Plants with enhanced resistance to bacterial pathogens
CN110452896B (zh) * 2019-08-08 2022-08-16 南京农业大学 一种植物抗虫相关蛋白OsPAL6和OsPAL8及其编码基因与应用
KR20220062289A (ko) 2019-08-12 2022-05-16 라이프에디트 테라퓨틱스, 인크. Rna-가이드된 뉴클레아제 및 그의 활성 단편 및 변이체 및 사용 방법
CA3153301A1 (en) 2019-09-05 2021-03-11 Benson Hill, Inc. Compositions and methods for modifying genomes
BR112022008415A2 (pt) 2019-11-05 2022-09-06 Pairwise Plants Services Inc Composições e métodos para substituição do dna codificado pelo rna dos alelos
US11976278B2 (en) 2019-12-06 2024-05-07 Pairwise Plants Services, Inc. Recruitment methods and compounds, compositions and systems for recruitment
EP4085133A1 (en) 2019-12-30 2022-11-09 Lifeedit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
EP4097229A1 (en) 2020-01-30 2022-12-07 Pairwise Plants Services, Inc. Compositions, systems, and methods for base diversification
BR112022012417A2 (pt) 2020-01-31 2022-08-30 Pairwise Plants Services Inc Supressão da resposta de evitação da sombra nas plantas
US20230063560A1 (en) 2020-02-04 2023-03-02 Pairwise Plans Services, Inc. Thornless and/or prickleless rubus plants
EP4107274A1 (en) 2020-02-21 2022-12-28 Pairwise Plants Services, Inc. Improved resistance to soybean cyst nematode through gene editing
US20210292754A1 (en) 2020-03-16 2021-09-23 Pairwise Plants Services, Inc. Natural guide architectures and methods of making and using the same
CN115335513A (zh) 2020-03-23 2022-11-11 株式会社库利金 包含双特异性核酸分子的溶瘤病毒的结构
WO2021194183A1 (ko) 2020-03-25 2021-09-30 ㈜큐리진 면역 회피성 항종양 아데노바이러스
US11999946B2 (en) 2020-03-26 2024-06-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
US11882808B2 (en) 2020-03-27 2024-01-30 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving resistance to soybean rust
WO2021202513A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Elo Life Systems Modulation of endogenous mogroside pathway genes in watermelon and other cucurbits
EP4135512A1 (en) 2020-04-16 2023-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
TW202208626A (zh) 2020-04-24 2022-03-01 美商生命編輯公司 Rna引導核酸酶及其活性片段與變體，以及使用方法
CA3173882A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 Alexandra Briner CRAWLEY Rna-guided nucleic acid binding proteins and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2021247477A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
CA3175936A1 (en) 2020-06-12 2021-12-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Alteration of seed composition in plants
EP4168558A1 (en) 2020-06-17 2023-04-26 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
US12043827B2 (en) 2020-06-30 2024-07-23 Pairwise Plants Services, Inc. Compositions, systems, and methods for base diversification
BR112022027035A2 (pt) 2020-07-14 2023-04-11 Pioneer Hi Bred Int Proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas
IL299812A (en) 2020-07-15 2023-03-01 Lifeedit Therapeutics Inc Uracil stabilizing proteins and active fragments and their variants and methods of use
BR112023002602A2 (pt) 2020-08-10 2023-04-04 Du Pont Composições e métodos para aumentar a resistência a helmintosporiose no milho
CA3192195A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Pairwise Plants Services, Inc. Engineered proteins and methods of use thereof
CA3173886A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 Tyson D. BOWEN Dna modifying enzymes and active fragments and variants thereof and methods of use
CR20230175A (es) 2020-10-23 2023-07-26 Elo Life Systems Inc Métodos para producir plantas de vainilla con mejor sabor y producción agronómica
JP2023549339A (ja) 2020-11-06 2023-11-24 ペアワイズ・プランツ・サーヴィシズ，インコーポレイテッド 対立遺伝子の、ｒｎａによりコードされるｄｎａ置換のための組成物および方法
EP4251755A2 (en) 2020-11-24 2023-10-04 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
WO2022115498A1 (en) 2020-11-26 2022-06-02 Ukko Inc. Modified high molecular weight glutenin subunit and uses thereof
EP4291641A1 (en) 2021-02-11 2023-12-20 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants
MX2023009799A (es) 2021-02-25 2023-10-30 Pairwise Plants Services Inc Metodos y composiciones para modificar la arquitectura radicular en plantas.
TW202302853A (zh) 2021-02-26 2023-01-16 加拿大商新格諾康植物技術公司 自紅萵苣高量生產多酚之方法及其用途
JP2024511131A (ja) 2021-03-22 2024-03-12 ライフエディット セラピューティクス，インコーポレイティド Ｄｎａ改変酵素とその活性な断片およびバリアント、ならびに利用の方法
US20240141311A1 (en) 2021-04-22 2024-05-02 North Carolina State University Compositions and methods for generating male sterile plants
EP4334457A1 (en) 2021-05-06 2024-03-13 Agbiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
JP2024518825A (ja) 2021-05-11 2024-05-07 トゥー・ブレーズ・ファウンデーション 疾病耐性に関する機能検査のための植物疾病耐性遺伝子のライブラリーを調製する方法
GB202107057D0 (en) 2021-05-18 2021-06-30 Univ York Glycosylation method
AU2022290278A1 (en) 2021-06-11 2024-01-04 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna polymerase iii promoters and methods of use
US20220403475A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Pairwise Plants Services, Inc. Reporter constructs, compositions comprising the same, and methods of use thereof
UY39822A (es) 2021-06-17 2022-12-30 Pairwise Plants Services Inc Modificación de factores de transcripción de la familia de factores reguladores del crecimiento en s
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
EP4362663A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing root system development
CA3229056A1 (en) 2021-08-12 2023-02-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
EP4388110A1 (en) 2021-08-17 2024-06-26 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants
MX2024002276A (es) 2021-08-30 2024-03-07 Pairwise Plants Services Inc Modificacion de genes de peptidasa de union a ubiquitinaen plantas para mejorar rasgos de rendimiento.
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
WO2023031161A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Plants having increased tolerance to herbicides
WO2023049728A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Pairwise Plants Services, Inc. Color-based and/or visual methods for identifying the presence of a transgene and compositions and constructs relating to the same
EP4405377A1 (en) 2021-09-21 2024-07-31 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
EP4408859A1 (en) 2021-09-30 2024-08-07 Two Blades Foundation Plant disease resistance genes against stem rust and methods of use
CA3237641A1 (en) 2021-10-04 2023-04-13 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
CN118302434A (zh) 2021-10-07 2024-07-05 成对植物服务股份有限公司 用于改善小花育性和种子产量的方法
WO2023073333A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 The University Of Manchester Error prone dna polymerase for organelle mutation
GB202116307D0 (en) 2021-11-12 2021-12-29 Syngenta Crop Protection Ag Herbicide resistance
WO2023107943A1 (en) 2021-12-07 2023-06-15 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
US20230295646A1 (en) 2021-12-13 2023-09-21 Pairwise Plants Services, Inc. Model editing systems and methods relating to the same
AU2022421751A1 (en) 2021-12-21 2024-08-08 Curigin Co.,Ltd. Immune-cloaking antitumor adenovirus
WO2023119135A1 (en) 2021-12-21 2023-06-29 Benson Hill, Inc. Compositions and methods for modifying genomes
WO2023133440A1 (en) 2022-01-06 2023-07-13 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for trichome removal
WO2023141464A1 (en) 2022-01-18 2023-07-27 AgBiome, Inc. Method for designing synthetic nucleotide sequences
AU2023208961A1 (en) 2022-01-24 2024-09-12 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
AR128372A1 (es) 2022-01-31 2024-04-24 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas
WO2023154887A1 (en) 2022-02-11 2023-08-17 Northeast Agricultural University Methods and compositions for increasing protein and/or oil content and modifying oil profile in a plant
US20230383271A1 (en) 2022-02-28 2023-11-30 Pairwise Plants Services, Inc. Engineered proteins and methods of use thereof
WO2023168217A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
WO2023192838A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
WO2023196886A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
WO2023205714A1 (en) 2022-04-21 2023-10-26 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
WO2023215704A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance
AR129223A1 (es) 2022-05-05 2024-07-31 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectura radicular y/o mejorar los rangos de rendimiento de las plantas
WO2024006679A1 (en) 2022-06-27 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
US20240002873A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
US20240000031A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024023578A1 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Institut Pasteur Hsc70-4 in host-induced and spray-induced gene silencing
US20240043857A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
US20240060081A1 (en) 2022-08-11 2024-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
WO2024033901A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2024044596A1 (en) 2022-08-23 2024-02-29 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
TW202424186A (zh) 2022-08-25 2024-06-16 美商生命編輯治療學公司 Rna引導核酸酶中介基因編輯用之具鎖核酸引導 rna之化學修飾
US20240090466A1 (en) 2022-09-08 2024-03-21 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
WO2024095245A2 (en) 2022-11-04 2024-05-10 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Evolved adenine deaminases and rna-guided nuclease fusion proteins with internal insertion sites and methods of use
WO2024121558A1 (en) 2022-12-07 2024-06-13 The University Of York Enzyme having pepulsol synthase activity
WO2024126113A1 (en) 2022-12-12 2024-06-20 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Plants having increased tolerance to herbicides
WO2024129674A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 AgBiome, Inc. Pesticidal genes and methods of use
WO2024130102A2 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Pairwise Plants Services, Inc. Fusion proteins comprising an intein polypeptide and methods of use thereof
WO2024137911A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Pairwise Plants Services, Inc. Engineered proteins and methods of use thereof
WO2024158934A1 (en) 2023-01-24 2024-08-02 Yale University Compositions and methods for controlling t-dna copy number in transformed plants
WO2024160989A1 (en) 2023-02-03 2024-08-08 Syngenta Crop Protection Ag Herbicide resistant plants
WO2024166076A1 (en) 2023-02-10 2024-08-15 King Abdullah University Of Science And Technology Recombinant production of antimicrobial peptides in planta
WO2024173622A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
WO2024182746A1 (en) 2023-03-01 2024-09-06 Pairwise Plants Services, Inc. Engineered proteins and methods of use thereof
US20240294933A1 (en) 2023-03-02 2024-09-05 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
US20240301438A1 (en) 2023-03-09 2024-09-12 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid signaling pathway genes for improving yield traits in plants

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0135343A1 (en) * 1983-08-19 1985-03-27 Agricultural Genetics Company Limited Plant protection method
BR8404834A (pt) * 1983-09-26 1985-08-13 Agrigenetics Res Ass Metodo para modificar geneticamente uma celula vegetal
BR8600161A (pt) * 1985-01-18 1986-09-23 Plant Genetic Systems Nv Gene quimerico,vetores de plasmidio hibrido,intermediario,processo para controlar insetos em agricultura ou horticultura,composicao inseticida,processo para transformar celulas de plantas para expressar uma toxina de polipeptideo produzida por bacillus thuringiensis,planta,semente de planta,cultura de celulas e plasmidio
FI875467A (fi) * 1986-12-19 1988-06-20 Agricultural Genetics Co Dna-molekyler, som aer nyttiga vid vaextskydd.
TR27832A (tr) * 1987-04-29 1995-08-31 Monsanto Co Zararli ucucu hasarata mukavim bitkiler.
JPH02500566A (ja) * 1987-08-17 1990-03-01 プラント・ジェネティック・システムズ・エヌ・ブイ バチルス・スリンギエンシスからのｄｎａ配列で形質転換された植物
TR24186A (tr) * 1988-04-11 1991-05-30 Monsanto Co Hasere zehirlerinin etkinligini arttirmak icin yoentem
NO891483L (no) * 1988-04-12 1989-10-13 Plant Cell Res Inst Arcelin fra lagringsproteiner fra phaseolus vulgaris.
EP0351924A3 (en) * 1988-07-20 1991-04-03 Nickerson Seeds Limited Improvements relating to transgenic plants
US5026209A (en) * 1989-08-04 1991-06-25 Eau-Viron Incorporated Containment casing for a deep well gravity pressure reactor vessel
DE3926390A1 (de) * 1989-08-10 1991-02-14 Bayer Ag Verwendung von lysozym genen in pflanzen zur resistenzerhoehung
EP0427529B1 (en) * 1989-11-07 1995-04-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Larvicidal lectins and plant insect resistance based thereon
AU7165491A (en) * 1989-12-08 1991-07-18 Trustees Of Rockefeller University, The Novel organ-specific plant promoter sequences
ATE183884T1 (de) * 1990-07-30 1999-09-15 Novartis Ag Insektizide proteine

Also Published As

Publication number Publication date
AU2464592A (en) 1993-03-16
US5604121A (en) 1997-02-18
ATE186571T1 (de) 1999-11-15
HUT70273A (en) 1995-09-28
DE69230290D1 (de) 1999-12-16
CA2116449C (en) 2005-04-05
EP0600993B1 (en) 1999-11-10
WO1993004177A1 (en) 1993-03-04
AU668096B2 (en) 1996-04-26
DK0600993T3 (da) 2000-05-08
GR3032297T3 (en) 2000-04-27
DE69230290T2 (de) 2000-07-20
CA2116449A1 (en) 1993-03-04
JPH06510187A (ja) 1994-11-17
ES2140416T3 (es) 2000-03-01
HU9400571D0 (en) 1994-05-30
EP0600993A1 (en) 1994-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU219057B (hu) Inszekticid hatású proteinek Homoptera rovarok ellen és alkalmazásuk a növényvédelemben
CA3018255C (en) Herbicide tolerant protein, coding gene thereof and use thereof
US20060225154A1 (en) Method for increasing expression of stress defense genes
BRPI0810672A2 (pt) polinucleotídeo codificando uma proteína inibitória de inseto tic807, métodos para expressá-lo em uma planta, e para detectá-lo, identificá-lo ou isolá-lo assim como kit para tal, célula hospedeira transformada, métodos para controle e proteção de planta de um inseto-praga, proteína isolada, kit para sua detecção, vetor de dna recombinante para expressá-la, produto de consumo e anticorpo
CN102796187B (zh) 基于RNAi技术防治害虫的新方法
AU2016228053B2 (en) Uses of insecticidal protein
CA2186737A1 (en) Nematicidal proteins
CN104824010A (zh) 杀虫蛋白的用途
CA3154740A1 (en) Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptide, encoding gene thereof and use thereof
CN112368296A (zh) 新型昆虫抑制性蛋白
CN112313338A (zh) 重组基因
WO1992021753A1 (en) Insecticidal proteins and method for plant protection
US20040172671A1 (en) Transgenic plants protected against parasitic plants
CN104920425A (zh) 杀虫蛋白的用途
WO2008155139A2 (en) Methods and means for the production of plants with improved stress resistance
JPWO2006057306A1 (ja) ストレス耐性及び／又は生産性を改良したイネ科植物、及びその作出方法
US11674152B2 (en) Anti-armyworm use of CRY1AB/CRY1ACZM gene
WO2023216140A1 (zh) 杀虫蛋白的用途
WO2023216141A1 (zh) 杀虫蛋白的用途
KR100951062B1 (ko) 배추 유래의 해충 저항성 디펜신을 코딩하는 비알디 1 유전자, 이를 이용한 형질전환체 및 상기 유전자를 발현시켜 해충 저항성을 증진시키는 방법
CN116253779A (zh) 杀虫蛋白的用途
CA3236161A1 (en) Mutated hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptide, and coding gene and use thereof
JP4573691B2 (ja) 種々の環境ストレス耐性を改良した植物、その作出方法、並びにポリアミン代謝関連酵素遺伝子
CN115992173A (zh) 一种制备抗花瓣侵染病害转基因材料的方法
CN117616117A (zh) 新型昆虫抑制蛋白

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: PESTAX LIMITED, GB

DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: NOVARTIS A.G., CH

HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: SYNGENTA PARTICIPATIONS AG, CH

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees