HRP20020751A2 - Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors - Google Patents

Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors

Info

Publication number
HRP20020751A2
HRP20020751A2 HRP20020751A HRP20020751A2 HR P20020751 A2 HRP20020751 A2 HR P20020751A2 HR P20020751 A HRP20020751 A HR P20020751A HR P20020751 A2 HRP20020751 A2 HR P20020751A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
hydrogen
group
alkyl
compound
aryl
Prior art date
Application number
Other languages
English (en)
Inventor
Peng Cho Tang
Todd Miller
Xiaoyuan Li
Li Sun
Chung-Chen Wei
Shahrzad Shirazian
Congxin Liang
Tomas Vojkovsky
Asaad S Nematalla
Original Assignee
Sugen Inc
Upjohn Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27391578&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HRP20020751(A2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sugen Inc, Upjohn Co filed Critical Sugen Inc
Publication of HRP20020751A2 publication Critical patent/HRP20020751A2/hr
Publication of HRP20020751B1 publication Critical patent/HRP20020751B1/hr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Description

Informacije o srodnim prijavama
Ova prijava zahtijeva prioritet prema 35 U.S.C. 119 (e) U odnosu na U.S. Provisional Application serijske brojeve 60/182,710, uknjižen 15. veljače 2000., 60/126,422 6. lipnja 2000. i serijski br. 60/243,532, uknjižen 27. listopada 2000., čiji su izlaganja ovdje u potpunosti uključena referencom.
Pozadina izuma
Polje izuma
Predloženi izum odnosi se na određene 3-pirolom supstituirane spojeve 2-indolinona koji moduliraju djelovanje protein kinaza («PK»). Stoga su spojevi iz ovog izuma korisni u liječenju poremećaja povezanih s abnormalnim djelovanjem PK. Također su prikazani farmaceutski pripravci koji sadrže te spojeve, postupci liječenja bolesti u kojima se primjenjuju navedeni lijekovi koji uključuju te spojeve i metode njihova pripravljanja.
Stanje u struci
Sljedeće se iznosi samo kao informacija i ne kao prethodno saznanje u odnosu na predloženi izum.
PK su enzimi koji kataliziraju fosforilaciju hidroksi skupina tirozinskih, serinskih i treoninskih dijelova proteina. Posljedice ovog, naizgled jednostavnog djelovanja, su zapanjujuće; 'rast stanice, diferencijacija i prbliferacija tj., u biti svi aspekti života stanice na jedan ili drugi način ovise o djelovanju PK. Nadalje, abnormalno djelovanje PK povezano je s mnoštvom poremećaja, koji se kreću od po život relativno bezopasnih bolesti kao što je 'psorijaza do iznimno virulentnih kao što je glioblastom (karcinom mozga).
PK mogu se prikladno podijeliti u dva razreda, protein tirozin kinaze (PTK)i serin-treonin kinaze (STK).
Jedan od primarnih aspekata djelovanja PTK je njihova povezanost s receptorima faktora rasta. Receptori faktora rasta su proteini s površine stanice. Kad su povezani ligandom faktora rasta, receptori faktora rasta pretvaraju se u aktivni oblik koji uzajamno djeluje s proteinima na unutrašnjoj površini stanične membrane. To dovodi do fosforilacije na tirozinskim dijelovima receptora i drugih proteina i do oblikovanja kompleksa unutar stanice s različitim citoplazmatskim signalnim molekulama koje, zauzvrat, izazivaju brojne stanične odgovore kao što je dioba stanice (proliferacija), stanična diferencijacija, stanični rast, ekspresija metaboličkih učinaka na izvanstanični mikrookoliš, itd. Za potpunije razmatranje, vidi Schlessinger i Ullrich, Neuron, 9:303-391 (1992), koji je ovdje uključen referencom, uključujući sve crteže, kao da je ovdje u potpunosti iznesen.
Receptori za faktore rasta s PTK djelovanjem poznati su kao receptori tirozin kinaza (RTK). Oni obuhvaćaju veliku skupinu transmembranskih receptora s raznovrsnim biološkim djelovanjem. Dosad je prepoznato najmanje devetnaest (19)različitih podfamilija RTK. Primjer je podfamilija označena kao «HER» RTK, koja obuhvaća EGFR (receptor za epitelni faktor rasta), HER2, HER3 i HER4. Ti RTK sadrže izvanstaničnu glikoziliranu domenu vezanja liganda, transmembransku domenu i unutarstaničnu citoplazmatsku katalitičku domenu koje mogu fosforilirati tirozinske dijelove na proteinima.
Druga podfamilija sastoji se od inzulinskog receptora (IR), receptora za faktor rasta sličnog inzulinu I (IGF-1R)i receptora povezanog s inzulinskim receptorom (IRR). IR i IGF-1R uzajamno djeluju s inzulinom, IGF-I i IGF-II oblikujući heterotetramer dviju potpuno izvanstaničnih glikosiliranih a podjedinica i dviju (3 podjedinica koje prolaze kroz staničnu membranu i koje sadrže tirozin kinaznu domenu.
Treća RTK podfamilija navodi se kao skupina receptora faktora rasta porijeklom iz trombocita (PDGFR), koja obuhvaća PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, c-kit i c-fms. Ti receptori sastoje se od glikoziliranih izvastaničnih domena koje se sastoje od različitog broja petlji sličnih imunoglobulinu i unutarstaničih domena u kojima je tirozin kinazna domena prekinuta nepovezanim aminokiselinskim nizovima.
Još jedna skupina, koja se, zbog svoje sličnosti s PDGFR podfamilijom, ponekad svrstava u posljednje navedenu skupinu je podfamilija receptora jetrene kinaze fetusa («flk»). Za ovu skupinu vjeruje se da se sastoji od kinazne umetnute domene-receptora jetrene fetalne kinaze-1 (KDR/FLK-1, VEGF-R2), flk-1R, flk-4 i tirozin kinaze l (flt-1)nalik na fms.
Daljnji član familije receptora faktora rasta tirozin kinaze je podskupina receptora faktora rasta fibroblasta («FGF»). Ta se skupina sastoji od četiri receptora, FGFR1-4, i sedam liganada, FGF1-7. Premda to još nije dobro definirano, izgleda da se receptori sastoje od glikozilirane izvanstanične domene koja sadrži varijabilni broj petlji sličnih imunoglobulinu i unutarstanične domene u kojoj je tirozin kinazni slijed prekinut područjima nepovezanih aminokiselinskih nizova.
Još jedan član familije receptora faktora rasta tirozin kinaze je podskupina receptora vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF). VEGF je dimerni glikoprotein sličan PDGF, ali ima različite biološke funkcije i specifičnost ciljnih stanica in vivo. Posebno, za VEGF se trenutno smatra da ima bitnu ulogu u vaskulogenezi i angiogenezi.
Potpuniji popis poznatih RTK podfamilija opisan je u Plowman et al., DN&P, 7(6):334-339 (1994)koji je ovdje obuhvaćen referencom, uključujući sve crteže, kao da je u potpunosti ovdje iznesen.
UZ RTK, također postoji familija potpuno unutarstaničnih PTK nazvanih «nereceptorske tirozin kinaze» ili «stanične tirozin kinaze». Ovdje će se koristiti potonja naznaka, skraćeno «CTK». CTK ne sadrže izvanstanične i transmembranske domene. Dosad je određeno preko 24 CTK u 11 podfamilija (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes, Fps, Fak, Jak i Ack).
Za sada se čini da je Src podfamilija najveća skupina CTK i uključuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Bik, Hck, Fgr i Yrk. Za detaljniju raspravu o CTK, vidi Bolen, Oncogene, 8:2025-2031 (1993), ovdje obuhvaćen referencom, uključujući sve crteže, kao da je u potpunosti ovdje izneseno.
Serin/treonin kinaze, STK, kao i CTK, pretežno su unutarstanične premda postoji nekoliko receptorskih kinaza tipa STK. STK su najuobičajenije od citosolnih kinaza; tj., kinaza koje obavljaju svoju funkciju u onom dijelu citoplazme koji je različit od citoplazmičkih organela i citoskeleta. Citosol je područje unutar stanice u kojem se zbiva veliki dio stanične intermedijarne metaboličke i biosintetičke aktivnosti; npr., u citosolu se proteini sintetiziraju na ribosomima.
RTK, CTK i STK su sve ustanovljene u mnoštvu patogenih stanja uključujući, osobito, karcinom. Ostala patogena stanja koja su dovedena u vezu s PTK uključuju, bez ograničavanja, psorijazu, cirozu jetre, dijabetes, angiogenezu, restenozu, očne bolesti, reumatioidni artritis i druge upalne poremećaje, imunološke poremećaje kao što je autoimuna bolest, kardiovaskularna bolest poput ateroskleroze i različite bubrežne poremećaje.
U pogledu karcinoma, dvije od glavnih hipoteza ponudile su tumačenja kako je prekomjerna stanična proliferacija koja pokreće razvoj tumora povezana s funkcijama za koje je poznato da su regulirane putem PK. To jest, ukazano je da maligni stanični rast proizlazi iz prekida mehanizama koji nadziru staničnu diobu i/ili diferencijaciju. Pokazano je da su proteinski produkti nekolicine proto-onkogena umiješani u putove prijenosa signala koji reguliraju stanični rast i diferencijaciju. Navedeni proteinski produkti proto-onkogena uključuju faktore izvanstaničnog rasta, PTK receptore faktora transmembranskog rasta (RTK), citoplazmatske PTK (CTK)i citosolne STK, gore razmatrane.
S obzirom na vezu koja se javlja između staničnih aktivnosti povezanih s PK i širokog raspona humanih poremećaja, ne iznenađuje to što su poduzeta znatna nastojanja u pokušaju da se prepoznaju načini moduliranja PK djelovanja. Dio tih nastojanja uključivao je biomimetičke pristupe, koristeći velike molekule po uzoru na one koje su uključene u stvarne stanične procese (npr. mutirani ligandi (U.S. App. no. 4 966 849); topljivi receptori i antitijela (App. no. WO 94/10202, Kendall and Thomas, Proc.Nat'l Acad.Sci., 90:10705-09 (1994), Kim, et al., Nature, 362:841-844 (1993)); RNA ligandi (Jelinek, et al., Biochemistry, 33:10450-56); Takano, et al., Mol.Bio.Celi. 4:358A (1993); Kinsella, et al., Exp. Celi. Res. 199:56-62 (1992); Wright, et al., J. Cellular Phys. 152:448-57)i inhibitori tirozin kinaze (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; U.S. Pat. No. 5 330 992; Mariani, et al., Proc. Am. Assoc. Cancer. Res., 35:2268 (1994)).
Uz gore navedene, poduzeti su pokušaji da se prepoznaju malene molekule koje djeluju kao inhibitori PK. Na primjer, bis- monociklički, biciklički i heterociklički spojevi arila (PCT WO 92/20642), derivati vinileneazaindola (PCT WO 94/14808)i 1-ciklopropil-4-piridilkvinoloni (U.S. Pat. No. 5 330 992; Mariani, et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., 35:2268 (1994)). Spojevi stirila (U.S. Pat. No. 5 217 999), stirilom supstituirani spojevi piridila (U.S. Pat. No. 5 302 606), derivati kinazolina (EP App. No. O 566 266 A1), selenaindoli i selenidi (PCT WO 94/03427), triciklički
polihidroksilni spojevi (PCT WO 92/21660)i spojevi benzilfosfonske kiseline (PCT WO 91/15495)svi su opisani kao inhibitori PTK, korisni u liječenju karcinoma.
Pregled izuma
Predloženi izum odnosi se na određene 3-pirolom supstituirane spojeve 2-indolinona koji moduliraju djelovanje protein kinaza PK te su stoga u liječenju poremećaja povezanih s abnormalnim djelovanjem PK.
Prema tome, u jednom pogledu, predloženi izum odnosi se na 3-pirolom supstituirane 2-indolinone formule (I):
[image]
gdje se:
R1 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroalicičkog, hidroksi, alkoksi, -(CO)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 i -C(O)NR8R9;
R2 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, cijano, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arila, heteroarila, -S(O)2NR13R14 i -SO2R20 (gdje je R20 alkil, aril, aralkil, heteroaril i heteroaralkil);
R3 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, -C(O)R15, -NR13R14, arila, heteroarila, -NR13S(O)2R14 i -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, -NR13C(O)OR14 i -SO2R20 (gdje je R20 alkil, aril, aralkil, heteroaril i heteroaralkil);
R4 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, hidroksi, alkoksi i -NR13R14;
R5 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i -C(O)R10;
R6bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, trihalometila i -C(O)R10;
R7 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, -C(O)R17 i -C(O)R10; ili
R6 i R7 mogu se kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5- i -(CH2)6-; uz uvjet da najmanje jedan od R5, R6 ili R7 mora biti -C(O)R10;
R8 i R9 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i arila;
R10 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, alkoksi, ariloksi, -N (R11)(CH2)nR12 i -NR13R14;
R11 bira iz skupine koja se sastoji od vodika i alkila;
R12 bira iz skupine koja se sastoji od -NR13R14, hidroksi,
-C(O)R15, arila, heteroarila, -N+ (O-)R13R14, -N(OH)R13 i -NHC(O)Ra (gdje je Ra nesupstituirani alkil, haloalkil ili aralkil);
R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, cijanoalkila, cikloalkila, arila i heteroarila; ili
R13 i R14 mogu kombinirati i oblikovati heterocikloskupinu;
R15 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, hidroksi, alkoksi i ariloksi;
R16 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, -C(O)R15,
-NR13R14 i -C(O)NR13R14;
R17 bira iz skupine koja se sastoji od alkila, cikloalkila, arila i heteroarila;
R20 je alkil, aril, aralkil ili heteroaril; i
n i r su nezavisno 1, 2, 3 ili 4; ili njihova farmaceutski prihvatljiva sol.
Povoljno je da se R1 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroalicikličkog, hidroksi, alkoksi, -C(O)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 i -C(O)NR8R9;
R2 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, cijano, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arila, heteroarila, -S(O)2NR13R14;
R3 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, -C(O)R15, -NR13R14, arila, heteroarila, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, i NR13C(O)OR14;
R4 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, hidroksi, alkoksi i -NR13R14;
R5 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i -C(O)R10,
R6 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, i -C(O)R10;
R7 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, -C(O)R17 i -C(O)R10;
R6 i R7 mogu se kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5- i -(CH2)6-; uz uvjet da najmanje jedan od R5, R6 ili R7 mora biti -C(O)R10;
R8 i R9 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i arila;
R10 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, alkoksi, ariloksi, -N (R11)(CH2)nR12 i -NR13R14;
R11 bira iz skupine koja se sastoji od vodika i alkila;
R12 bira iz skupine koja se sastoji od -NR13R14, hidroksi,
-C(O)R15, arila i heteroarila;
R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, cikloalkila, arila i heteroarila;
R13 i R14 mogu kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5- i -(CH2)2O(CH2)2- i -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-;
R15 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, hidroksi, alkoksi i ariloksi;
R16 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, -C(O)R15, -NR13R14 i -C(O)NR13R14;
R17 bira iz skupine koja se sastoji od alkila, cikloalkila, arila i heteroarila i
n i r su nezavisno 1, 2, 3 ili 4; ili njihova farmaceutski prihvatljiva sol.
U drugom pogledu, ovaj izum odnosi se na farmaceutski pripravak koji obuhvaća jedan ili više spojeva formule (I)ili njihovu farmaceutski prihvatljivu sol i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
U trećem pogledu, ovaj izum odnosi se na metodu liječenja bolesti nastalih posredovanjem abnormalnog djelovanja protein kinaze, posebno, receptorske tirozin kinaze (RTK), nereceptorske protein tirozin kinaze (CTK)i serin/treonin protein kinaza (STK), u organizmu, posebno ljudima, koja metoda obuhvaća davanje spomenutom organizmu farmaceutskog pripravka koji obuhvaća spoj formule (I). Takve bolesti primjerice uključuju, bez ograničenja, karcinom, dijabetes, cirozu jetre, krvožilne bolesti kao što je ateroskleroza, angiogeneza, imunološke bolesti kao što je autoimuna bolest i bolest bubrega.
U četvrtom pogledu, ovaj izum odnosi se na metodu moduliranja katalitičkog djelovanja PK, naročito, receptora tirozin kinaza (RTK), non-receptora protein tirozin kinaze (CTK)i serin/treonin protein kinaza (STK), pomoću spoja iz ovog izuma koje se može izvesti in vitro ili in vivo. Posebno, receptor za protein kinazu čije je katalitičko djelovanje modulirano spojem iz ovog izuma, izabran je iz skupine koja se sastoji od EGF, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1R, IRR, PDGFRα, PDGFRβ, CSFIR, C-kit, C-fms, Flk-1R, Flk4, KDR/Flk-1, Flt-1, FGFR-1R, FGFR-2R, FGFR-3R i FGFR-4R. Stanična tirozin kinaza čije je katalitičko djelovanje modulirano spojem iz ovog izuma izabrana je iz skupine koja se sastoji od Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Bik, Hck, Fgr i Yrk. Serin/treonin protein kinaza čije je katalitičko djelovanje modulirano spojem iz ovog izuma izabrana je iz skupine koja se sastoji od CDK2 i Raf.
U petom pogledu, ovaj izum odnosi se na primjenu spoja formule (I) U pripravljanju lijeka korisnog u liječenju bolesti nastalih posredovanjem abnormalnog djelovanja PK.
U šestom pogledu, ovaj izum odnosi se na intermedijar formule (II):
[image]
gdje se:
R5 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i -C(O)R10;
R6 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, i -C(O)R10;
R7 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, -C(O)R17 i -C(O)R10;
R6 i R7 mogu se kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5- i -(CH2)6-; uz uvjet da najmanje jedan od R5, R6 ili R7 mora biti -C(O)R10;
R10 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, alkoksi, ariloksi, -N(R11)(CH2)nR12 i -NR13R14;
R11 bira is skupine koja se sastoji od vodika i alkila;
R12 bira is skupine koja se sastoji od -NR13R14, hidroksi, -C(O)R15, arila i heteroarila;
R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, cijanoalkila, cikloalkila, arila i heteroarila; ili
R13 i R14 mogu kombinirati i oblikovati heterociklo skupinu;
R15 bira is skupine koja se sastoji od vodika, hidroksi, alkoksi i ariloksi;
R17 bira is skupine koja se sastoji od alkila, cikloalkila, arila i heteroarila i
n je 1, 2, 3 ili 4.
Povoljno je da R5 ili R6, u spoju formule II, budu -C(O)R10;
R6 se bira iz skupine koja se sastoji od vodika i alkila, ponajprije, vodika ili metila;
R5 se bira iz skupine koja se sastoji od vodika, i alkila, a naročito vodika ili metila kada je R6 -COR10;
R6 se bira iz skupine koja se sastoji od vodika, i alkila, a naročito vodika ili metila kada je R5 -COR10;
R7 se bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, i arila, a naročito vodika, metila ili fenila;
R10 se bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, alkoksi, -N(R11)(CH2)nR12 i -NR13R14;
R11 se bira iz skupine koja se sastoji od vodika i alkila, ponajprije vodika ili metila;
R12 se bira iz skupine koja se sastoji od -NR13R14;
R13 i R14 se nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika ili alkila; ili
R13 i R14 mogu se kombinirati i oblikovati heterociklo skupinu; i
R15 bira is skupine koja se sastoji od vodika, hidroksi, alkoksi i ariloksi; i
n je 1, 2 ili 3.
Unutar gornjih povoljnih skupina, povoljnije skupine intermedijarnih spojeva su one u kojima su R5, R6, R11, R12, R13 ili R14 nezavisne skupine opisane u odjeljku ispod naslova «povoljna ostvarenja».
U sedmom pogledu, ovaj izum odnosi se na metode pripravljanja spojeva formule (I).
Konačno, ovaj izum također se odnosi na prepoznavanje kemijskog spoja koji modulira katalitičko djelovanje protein kinaze djelovanjem na stanice koje sadrže spomenutu protein kinazu sa spojem ili soli predloženog izuma, a zatim praćenjem djelovanja na spomenute stanice.
Detaljan opis izuma
Definicije
Ako nije drugačije navedeno, pojmovi koji se rabe u prijavi i zahtjevima imaju dolje objašnjena značenja:
«Alkil» se odnosi na zasićene alifatske ugljikovodične radikale koji uključuju skupine ravnog ili razgranatog lanca s 1 do 20 ugljikovih atoma (uvijek kada je naveden numerički interval, npr. «1-20», to znači da skupina, u ovom slučaju, alkilna skupina, može sadržavati l ugljikov atom, 2 ugljikova atoma, 3 ugljikova atoma, itd. sve do uključujući 20 ugljikovih atoma). Alkilne skupine koje sadrže od l do 4 ugljikova atoma nazivaju se niže alkilne skupine. Kada spomenutim nižim alkilnim skupinama nedostaju supstituentu, nazivaju se nesupstituirane niže alkilne skupine. Posebno, alkilna skupina je alkil srednje veličine koji ima l do 10 ugljikovih atoma, npr. metil, etil, propil, 2-propil, n-butil, izo-butil, tert-butil, pentil, i slično. Naročito, niži alkil je s 1 do 4 ugljikova atoma, npr. metil, etil, propil, 2-propil, n-butil, izo-butil, ili tert-butil i slično. Alkilna skupina može biti supstituirana ili nesupstituirana. Kada je supstituirana, supstituentska(e)skupina(e) Je ponajprije jedan ili više, posebno jedan do tri, a naročito jedan ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz skupine koja se sastoji od halo, hidroksi, nesupstituiranog nižeg alkoksi, arila moguće supstituiranog s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, ariloksi moguće supstituiran s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 6-eročlani heteroaril s 1 do 3 dušikova atoma u prstenu, a ugljikovi atomi u prstenu su moguće supstituirani s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 5-eročlani heteroaril s 1 do 3 heteroatoma izabrana iz skupine koja se sastoji od dušika, kisika i sumpora, ugljikovi i dušikovi atomi u skupini su moguće supstituirani s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 5- ili 6-eročlana heteroaliciklička skupina s 1 do 3 heteroatoma izabrana iz skupine koja se sastoji od dušika, kisika i sumpora, ugljikovi i dušikovi atomi (ako ih ima) U skupini mogu se supstituirati s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, merkapto, (nesupstituirani niži alkil)tio, ariltio moguće supstituiran s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, cijano, acil, tioacil, 0-karbamil, N-karbamil, 0-tiokarbamil, N-tiokarbamil, C-amido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, S-sulfonamido, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18-, -R18C(O)O- i -NR18R19, gdje se R18 i R19 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, nesupstituiranog nižeg alkila, trihalometila, nesupstituiranog (C3-C6)cikloalkila, nesupstituiranog nižeg alkenila, nesupstituiranog nižeg alkinila i arila moguće supstituiranog s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine.
Povoljno je, da je alkilna skupina supstituirana s jednim ili dva supstituenta međusobno nezavisno izabrana iz skupine koja se sastoji od hidroksi, 5- ili 6-eročlane heteroalicikličke skupine s od l do 3 heteroatoma izabrana iz skupine koja se sastoji od dušika, kisika i sumpora ugljikovi i dušikovi atomi (ako ih ima) U skupini mogu se supstituirati s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 5-eročlani heteroaril s 1 do 3 heteroatoma izabrana iz skupine koja se sastoji od dušika, kisika i sumpora, ugljikovi i dušikovi atomi u skupini su moguće supstituirani s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 6-eročlani heteroaril s 1 do 3 dušikova atoma u prstenu, a ugljikovi atomi u prstenu su moguće supstituirani s jednom ili više skupina, ponajprije jednom, dvije ili tri skupine koje su, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, ili -NR18R19, gdje su R18 i R19 nezavisno izabrani iz skupine koja se sastoji od vodika, nesupstituiranog nižeg alkila. Još povoljnije je da alkilna skupina bude supstituirana s jednim ili dva supstituenta koji su, međusobno nezavisno, hidroksi, dimetilamino, etilamino, dietilamino, dipropilamino, pirolidino, piperidino, morfolino, piperazino, 4-niži alkilpiperazino, fenil, imidazolil, piridinil, piridazinil, pirimidinil, oksazolil, tirazinil, i slično.
«Cikloalkil» odnosi se na 3- do 8-eročlane samo-ugljikove monociklički prsten, u samo-ugljikovom 5-eročlanom /6-eročlanom ili 6-eročlanom/6-eročlanom vezanom bicikličkom prstenu ili multiciklički vezanoj skupini prstenova («vezan» sistem prstenova znači da svaki prsten u sistemu dijeli susjedni par ugljikovih atoma s drugim prstenom u sistemu)gdje jedan ili više prstenova može sadržavati jednu ili više dvostrukih veza, ali niti jedan od prstenova nema potpuno konjugirani pi-elektronski sustav.
Primjeri, bez ograničenja, cikloalkilnih skupina su ciklopropan, ciklobutan, ciklopentan, ciklopenten, cikloheksan, cikloheksadien, adamantan, cikloheptan, cikloheptatrien, i slično. Cikloalkilna skupina može biti supstituirana ili nesupstituirana. Kada je supstituirana, supstituentska(e)skupina(e) Je ponajprije jedan ili više, a naročito jedan ili dva supstituenta, nezavisno izabrana iz skupine koja se sastoji od nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, halo, hidroksi, nesupstituiranog nižeg alkoksi, arila moguće supstituiranog s jednom ili više, ponajprije jednom ili dvije skupine, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, ariloksi moguće supstituiran s jednom ili više, ponajprije jednom ili dvije skupine, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 6-eročlani heteroaril s 1 do 3 dušikova atoma u prstenu, a ugljikovi atomi u prstenu su moguće supstituirani s jednom ili više skupina, ponajprije jednom ili dvije skupine, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 5-eročlani heteroaril s 1 do 3 heteroatoma izabrana iz skupine koja se sastoji od dušika, kisika i sumpora, ugljikovi i dušikovi atomi u skupini su moguće supstituirani s jednom ili više skupina, ponajprije jednom ili dvije skupine, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, 5- ili 6-eročlane heteroalicikličke skupine s od l do 3 heteroatoma izabrana iz skupine koja se sastoji od dušika, kisika i sumpora ugljikovi i dušikovi atomi (ako ih ima) U skupini mogu se supstituirati s jednom ili više, ponajprije jednom ili dvije skupine, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, merkapto, (nesupstituirani niži alkil)tio, ariltio moguće supstituiran s jednom ili više, ponajprije jednom ili dvije skupine, međusobno nezavisno, halo, hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili nesupstituirane niže alkoksi skupine, cijano, acil, tioacil, O-karbamil, N-karbamil, O-tiokarbamil, N-tiokarbamil, C-amido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, i -NR18R19 su kako su gore definirani.
«Alkenil» se odnosi na nižu alkilnu skupinu, kako je ovdje definirana, koja se sastoji od najmanje dva ugljikova atoma i najmanje jedne ugljik-ugljik dvostruke veze. Reprezentativni primjeri uključuju, ali nisu ograničeni na, etenil, 1-propenil, 2-propenil, 1-, 2-, ili 3-butenil, i slično.
«Alkinil» se odnosi na niže alkilnu skupinu, kako je ovdje definirana, koja se sastoji od najmanje dva ugljikova atoma i najmanje jedne ugljik-ugljik trostruke veze. Reprezentativni primjeri obuhvaćaju, ali nisu ograničeni na, etinil, 1-propinil, 2-propinil, 1-, 2-, ili 3-butinil, i slično.
«Aril» se odnosi na samo-ugljikove monocikličke ili vezane-prstenove policikličke (tj., prstenove koji dijele susjedne parove ugljikovih atoma)skupine od l do 12 ugljikovih atoma koji imaju potpuno konjugirani pi-elektronski sustav. Primjeri, bez ograničenja, arilnih skupina su fenil, naftalenil i antracenil. Arilna skupina može biti supstituirana ili nesupstituirana. Kada je supstituirana, supstituirana(e)skupina(e) Je ponajprije jedna, dvije ili tri, a naročito jedna ili dvije, nezavisno izabrana iz skupine koja se sastoji od nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, halo, hidroksi, nesupstituiranog nižeg alkoksi, merkapto, (nesupstituiranog nižeg alkil)tio, cijano, acila, tioacila, O-karbamila, N-karbamila, O-tiokarbamila, N-tiokarbamila, C-amido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, S-sulfonamido, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, i -NR18R19, uz R18 i R19 kako su gore definirani.
Poželjno je da arilna skupina bude po volji supstituirana s jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana između halo, nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, hidroksi, merkapto, cijano, N-amido, mono ili dialkilamino, karboksi, ili N-sulfonamido.
«Heteroaril» se odnosi na moniciklički ili vezanu skupinu prstenova (tj., prstenove koji dijele susjedni par atoma)od 5 do 12 atoma u prstenu koji sadrži jedan, dva ili tri heteroatoma u prstenu izabrana između N, O, ili S, a preostali atomi u prstenu su C, i, dodatno, koji ima potpuno konjugirani pi-elektronski sustav. Primjeri, bez ograničenja, nesupstituiranih heteroarilnih skupina su pirol, furan, tiofen, imidazol, oksazol, tiazol, pirazol, piridin, pirimidin, kinolin, izokinolin, purin i karbazol. Heteroarilna skupina može biti supstituirana ili nesupstituirana. Kada je supstituirana, supstituirana(e)skupina(e) Je ponajprije jedna, dvije ili tri, a naročito jedna ili dvije, nezavisno izabrana iz skupine koja se sastoji od nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, halo, hidroksi, nesupstituiranog nižeg alkoksi, merkapto, (nesupstituiranog nižeg alkil)tio, cijano, acila, tioacila, O-karbamila, N-karbamila, O-tiokarbamila, N-tiokarbamila, C-amido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, S-sulfonamido, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, i -NR18R19, uz R18 i R19 kako su gore definirani.
Poželjno je da arilna skupina bude po volji supstituirana s jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana između halo, nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, hidroksi, merkapto, cijano, N-amido, mono ili dialkilamino, karboksi, ili N-sulfonamido.
«Heteroaliciklički» odnosi se na monocikličku ili skupinu vezanih prstenova koja ima od 5 do 9 atoma u prstenu u kojem su jedan ili dva atoma u prstenu heteroatomi izabrani između N, O, ili S(O)n (gdje je n cijeli broj od 0 do 2), a preostali atomi u prstenu su C. Prstenovi također mogu imati jednu ili dvije dvostrukih veza. Međutim, prstenovi nemaju potpuno konjugirane pi-elektronske sustave. Primjeri, bez ograničenja, nesupstituiranih heteroalicikličkih skupina su pirolidino, piperidino, piperazino, morfolino, tiomorfolino, homopiperazino, i slično. Heteroaliciklički prsten može biti može biti supstituiran ili nesupstituiran. Kada je supstituiran, supstituirana(e)skupina(e) Je ponajprije jedna, ili više, posebno jedna, dvije ili tri, a naročito jedna ili dvije, nezavisno izabrana iz skupine koja se sastoji od nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, halo, hidroksi, nesupstituiranog nižeg alkoksi, merkapto, (nesupstituiranog nižeg alkil)tio, cijano, acila, tioacila, O-karbamila, N-karbamila, 0-tiokarbamila, N-tiokarbamila, C-amido, N-amido, nitro, N-sulfonamido, S-sulfonamido, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, i -NR18R19, uz R18 i R19 kako su gore definirani.
Poželjno je da heteroaliciklička skupina bude po volji supstituirana s jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana između halo, nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, hidroksi, merkapto, cijano, N-amido, mono ili dialkilamino, karboksi, ili N-sulfonamido.
«Heterocikl» znači zasićeni ciklički radikal od 3 do 8 atoma u prstenu u kojima su jedan ili dva atoma u prstenu heteroatomi izabrani između N, O, ili S(O)n (gdje je n cijeli broj od 0 do 2), a preostali atomi u prstenu su C, pri čemu jedan ili dva C atoma može biti zamijenjen s karbonilnom skupinom. Heterociklilni prsten može biti supstituiran nezavisno s jednim, dva ili tri supstituenta izabrana između moguće supstituiranog nižeg alkila (supstituiranog s 1 ili 2 supstituenta nezavisno izabrana između karboksi ili estera), haloalkila, cijanoalkila, halo, nitro, cijano, hidroksi, alkoksi, amino, monoalkilamino, dialkilamino, aralila, heteroaralkila, -COR (gdje je R alkil)ili -COOR (gdje je R vodik ili alkil). Posebno, pojam heterociklil uključuje, ali nije ograničen na, tetrahidropiranil, 2,2-dimetil-1,3-dioksolan, piperidino, N-metilpiperidin-3-il, piperazino, N-metilpirolidin-3-il, 3-pirolidino, morfolino, tiomorfolino, tiomorfolino-1-oksid, tiomorfolino-1,1-dioksid, 4-etiloksikarbonilpiperazino, 3-oksopiperazino, 2-imidazolidon, 2-pirolidinon, 2-oksohomopiperazino, tetrahidropirimidin-2-on, i njihove derivate.
Poželjno je da heteroaliciklo skupina bude po volji supstituirana s jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana između halo, nesupstituiranog nižeg alkila, nižeg alkila supstituiranog s karboksi, hidroksi esterom, mono ili dialkilamino.
«Hidroksi» se odnosi na -OH skupinu.
«Alkoksi» se odnosi i na -O-(nesupstituirani alkil)i -O-(nesupstituirani cikloalkil)skupinu. Reprezentativni primjeri uključuju, ali nisu ograničeni na, npr. metoksi, etoksi, propoksi, butoksi, ciklopropiloksi, ciklobutiloksi, ciklopentiloksi, cikloheksiloksi, i slično.
«Ariloksi» odnosi se i na -O-arilnu i -O-heteroarilnu skupinu, kako je ovdje definirano. Reprezentativni primjeri uključuju, ali nisu ograničeni na, fenoksi, piridiniloksi, furaniloksi, tieniloksi, pirimidiniloksi, piraziniloksi, i slično, i njihove derivate.
«Merkapto» se odnosi na -SH skupinu.
«Alkiltio» se odnosi i na -S-(nesupstituirani alkil)i -S-(nesupstituirani cikloalkil)skupinu. Reprezentativni primjeri uključuju, ali nisu ograničeni na, npr. metiltio, etiltio, propiltio, butiltio, ciklopropiltio, ciklobutiltio, ciklopentiltio, cikloheksiltio, i slično.
«Ariltio» odnosi se i na -S-arilnu i -S-heteroarilnu skupinu, kako je ovdje definirano. Reprezentativni primjeri uključuju, ali nisu ograničeni na, feniltio, piridiniltio, furaniltio, tieniltio, pirimidiniltio, i slično, i njihove derivate.
«Acil» se odnosi na -C(O)-R11 skupinu, gdje se R1' bira iz skupine koja se sastoji od vodika, nesupstituiranog nižeg alkila, trihalometila, nesupstituiranog cikloalkila, arila moguće supstituiranog s jednim ili više, ponajprije jednim, dva ili tri supstituenta izabrana iz skupine koja se sastoji od nesupstituiranog nižeg alkila, trihalometila, nesupstituiranog nižeg alkoksi, halo i -NR18R19 skupina, heteroarila (povezanih preko ugljika iz prstena)moguće supstituiranog s jednim ili više, ponajprije jednim, dva ili tri supstituenta izabrana iz skupine koja se sastoji od nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, nesupstituiranog nižeg alkoksi, halo i -NR18R19 skupina i heteroalicikličkog (povezanog preko ugljika iz prstena)moguće supstituiranog s jednim ili više, ponajprije jednim, dva ili tri supstituenta izabrana iz skupine koja se sastoji od nesupstituiranog nižeg alkila, trihaloalkila, nesupstituiranog nižeg alkoksi, halo i -NR18R19 skupina. Reprezentativne aci skupine uključuju, ali nisu ograničene na, acetil, trifluoracetil, benzoil, i slično.
«Aldehid» se odnosi na acilnu skupinu u kojoj je R'' vodik.
«Tioacil» se odnosi na -C(S)-R'' skupinu, uz R'' kako je ovdje definiran.
«Ester» se odnosi na -C(O)O-R'' skupinu u kojoj je R''kako je ovdje definiran, osim R1' ne može biti vodik.
«Acetilna» skupina odnosi se na -C(O)CH3 skupinu.
«Halo» skupina odnosi se na fluor, klor, brom ili jod, ponajprije fluor ili klor.
«Trihalometil» skupina odnosi se na -CX3 skupinu u kojoj je X halo skupina kako je ovdje definirana.
«Trihalometansulfonil» skupina odnosi se na X3CS(=O)2- skupine uz X kako je gore definiran.
«Cijano» se odnosi na -C=N skupinu.
«Metilendioksi» se odnosi na -OCH2O- skupinu u kojoj su dva kisikova atoma vezana na susjedne ugljikove atome.
«Etilendioksi» skupina odnosi se na -OCH2CH2O- u kojoj su dva kisikova atoma vezana na susjedne ugljikove atome.
«S-sulfonamido» odnosi se na -S(O)2NR18R19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«N-sulfonamido» odnosi se na - NR18S(O)2R19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«O-karbamil» odnosi se na -OC(O)NR18R19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«N-karbamil» odnosi se na -R18OC(O)NR19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«O-tiokarbamil» odnosi se na -OC(S)NR18R19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«N-tiokarbamil» odnosi se na -R18OC(S)NR19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«Amino» odnosi se na -NR18R19 skupinu, pri čemu su oba R18 i R19 vodik.
«C-amido» odnosi se na -C(O)NR18R19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«N-amido» odnosi se na -R18C(O)NR19 skupinu, uz R18 i R19 kako su ovdje definirani.
«Nitro» se odnosi na -N02 skupinu.
«Haloalkil» znači nesupstituirani alkil, ponajprije nesupstituirani niži alkil, kako je gore definiran, koji je supstituiran s jednim ili više jednakih ili različitih halo atoma, npr., -CH2Cl, -CF3, -CH2CF3, -CH2CCl3, i slično.
«Aralkil» znači nesupstituirani alkil, ponajprije nesupstituirani niži alkil kako je gore definiran koji je supstituiran s arilnom skupinom, kako je gore definirano, npr., -CH2fenil, - (CH2)2fenil, - (CH2)3fenil, -CH3CH (CH3)CH2fenil, i slično i njihovi derivati.
«Heteroaralkilna» skupina znači nesupstituirani alkil, ponajprije nesupstituirani niži alkil, kako je gore definirano, koji je supstituiran s heteroarilnom skupinom, npr., -CH2piridinil, - (CH2)2pirimidinil, - (CH2)3imidazolil, i slično, i njihovi derivati.
«Monoalkilamino» znači radikal -NHR gdje je R nesupstituirani alkil ili nesupstituirana cikloalkilna skupina kako je gore definirano, npr., metilamino, (1-metiletil)aitiino, cikloheksilamino, i slično.
«Dialkilamino» znači radikal -NRR u kojem je svaki R nezavisno nesupstituirani alkil ili nesupstituirana cikloalkilna skupina kako je gore definirano, npr., dimetilamino, dietilamino, (1-metiletil)-etilamino, cikloheksilmetilamino, ciklopentilmetilamino, i slično.
«Cijanoalkil» znači nesupstituirani alkil, ponajprije nesupstituirani niži alkil kako je gore definirano, koji je supstituiran s 1 ili 2 cijano skupine.
«Mogući» ili «moguće» znači da se događaj ili okolnost koji je zatim opisan može, ali ne mora pojaviti, i da opis uključuje slučajeve kada se događaj ili okolnost pojavljuje i slučajeve kada se ne pojavljuje. Primjerice, «heterociklo skupina moguće supstituirana s alkilnom skupinom» znači da alkil može, ali ne mora biti prisutan, i opis uključuje situacije u kojima je hetericiklo skupina supstituirana s alkilnom skupinom te situacije u kojima heterociklo skupina nije supstituirana s alkilnom skupinom.
Pojmovi «2-indolinon», «indolin-2-on» i «2-oksindol» ovdje su upotrijebljeni s mogućnošću međusobne zamjene odnoseći se na molekulu kemijske strukture:
[image]
Pojam «pirol» odnosi se na molekulu kemijske strukture:
[image]
Pojam «pirolom supstituirani 2-indolinon» i «3-pirolidenil-2-indolinon» ovdje su upotrijebljeni s mogućnošću međusobne zamjene odnoseći se na kemijski spoj opće formule
(I).
Spojevi koji imaju istu molekulsku formulu, ali se razlikuju u prirodi ili slijedu vezanja svojih atoma ili rasporedu svojih atoma u prostoru nazvani su «izomerima». Izomeri koji se razlikuju u rasporedu svojih atoma u prostoru zovu se «stereoizomeri». Stereoizomeri koji međusobno nisu zrcalne slike zovu se «dijastereomeri»/ a oni koji su međusobno zrcalne slike koje se ne mogu preklopiti zovu se «enantiomeri». Kada spoj ima asimetrični centar, na primjer, povezan je s dvije različite skupine, par enantiomera je moguć. Enantiomer može biti karakteriziran apsolutnom konfiguracijom svog asimetričnog centra i opisan pravilima R-i S-nizanja Cahn-a i Preloga, ili načinom na koji molekula rotira u ravnini polarizirane svjetlosti te je označen kao desnozakrećući ili lijevozakrećući (tj., kao (+)ili (-)-izomeri, redom). Kiralni spoj može postojati bilo kao pojedinačni enantiomer ili njihova smjesa. Smjesa koja sadrži jednake omjere enantiomera zove se «racemska smjesa».
Spojevi iz ovog izuma mogu imati jedan ili više asimetričnih centara; takvi spojevi mogu se stoga dobiti kao pojedinačni (R)- ili (S)- stereoizomeri ili kao njihove smjese. Primjerice, ako je R6 supstituent u spoju formule (I)2-hidroksietil, tada je ugljik na koji je hidroksi skupina vezana asimetrični centar i prema tome spoj formule (I)može postojati kao (R)- ili (S)-stereoizomer. Ako nije drugačije navedeno, opis ili nazivlje određenog spoja u prijavi i zahtjevima uključuje oba pojedinačna enantiomera i njihove smjese, racemske ili druge. Metode određivanja stereokemije i odvajanje stereoizomera dobro su poznate u struci (vidi diskusiju u poglavlju 4 «Advanced Organic Chemistry», 4. izdanje J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992).
Spojevi formule (I)mogu imati tautomerna i strukturalno izomerna svojstva. Primjerice, spojevi opisani ovdje mogu poprimiti E ili Z konfiguraciju oko dvostruke veze koja povezuje 2-indolinon skupinu s pirolnom skupinom ili mogu biti smjesa E i Z. Ovaj izum obuhvaća bilo koje tautomerne ili strukturalno izomerne oblike ili njihove smjese koji imaju svojstvo moduliranja djelovanja RTK, CTK i/ili STK i nije ograničen na bilo koji tautomerni ili strukturalno izomerni oblik.
«Farmaceutski pripravak» odnosi se na smjesu jednog ili više ovdje opisanih spojeva, ili njihovih fiziološki/farmaceutski prihvatljivih soli ili predlijekova, s drugim kemijskim komponentama, kao što su fiziološki/farmaceutski prihvatljivi prijenosnici i ekscipijensi. Svrha farmaceutskog pripravka je olakšati davanje spoja organizmu.
Spoj formule (I)također može djelovati kao predlijek. Predlijek se odnosi na sredstvo koje se pretvara u lijek in vivo. Predlijekovi su često korisni jer se u nekim slučajevima mogu lakše davati nego lijekovi. Primjerice, mogu biti biodostupni oralnim davanjem dok lijek nije. Predlijek također može imati poboljšanu topljivost u farmaceutskim pripravcima u odnosu na lijek. Primjer, bez ograničenja, predlijeka bio bi spoj iz predloženog izuma koji se daje kao ester («predlijek») kako bi se olakšao prijenos kroz staničnu membranu gdje je topljivost u vodi štetna za pokretljivost, ali se zatim metabolički hidrolizira u karboksilnu kiselinu, aktivnu tvar, jednom kada se nađe unutar stanice gdje je topljivost u vodi korisna.
Daljnji primjer predlijeka mogao bi biti kratki polipeptid, na primjer, bez ograničenja, polipeptid s 2-10 aminokiselina, vezan preko terminalne amino skupine na karboksi skupinu spoja iz ovog izuma gdje je polipeptid hidroliziran ili metaboliziran in vivo radi oslobađanja aktivne molekule. Predlijekovi spoja formule (I)nalaze se unutar dosega ovog izuma.
Dodatno, pomišlja se da bi spoj formule (I)bio metaboliziran enzimima u tijelu organizma kao što je čovjek radi stvaranja metabolita koji može modulirati djelovanje protein kinaza. Takvi metaboliti nalaze se unutar dosega predloženog izuma.
Kako se ovdje rabi, «fiziološki/farmaceutski prihvatljiv prijenosnik» odnosi se na prijenosnik ili razrjeđivač koji ne uzrokuje značajnu iritaciju organizma i ne narušava biološko djelovanje i svojstva davanog lijeka.
«Farmaceutski prihvatljiv ekscipijens» odnosi se na inertnu tvar dodanu farmaceutskom pripravku radi daljnjeg olakšavanja davanja lijeka. Primjeri, bez ograničenja, ekscipijenasa uključuju kalcijev karbonat, kalcijev fosfat, različite šećere i tipove škroba, derivate celuloze, želatinu, biljna ulja i polietilen glikole.
Kako se ovdje rabi, pojam «farmaceutski prihvatljiva sol» odnosi se na one soli koje zadržavaju biološku djelotvornost i svojstva izvornog spoja. Takve soli uključuju:
(i)kiselinsku adicijsku sol dobivenu reakcijom slobodne baze izvornog spoja s anorganskim kiselinama kao što je klorovodična kiselina, bromovodična kiselina, nitratna kiselina, fosfatna kiselina, sulfatna kiselina i perkloratna kiselina i slično, ili s organskim kiselinama kao što je octena kiselina, oksalna kiselina, (D)ili (L) Jabučna kiselina, maleinska kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina, salicilna kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, jantarna kiselina ili malonska kiselina i slično, ponajprije klorovodična kiselina ili (L)-jabučna kiselina kao što je L-malatna sol (2-dietilaminoetil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline; ili
(ii)soli oblikovane kada je kiselinski proton prisutan u izvornom spoju bilo zamijenjen s metalnim ionom, npr. ionom alkalijskog metala, ionom zemnoalkalijskog metala, ionom aluminija; ili se usklađuje s organskom bazom kao što je etanolamin, dietanolamin, trietanolamin, trometamin, N-metilglukamin, i slično.
«PK» se odnosi na receptorsku protein tirozin kinazu (RTK), nereceptorsku ili «staničnu» tirozin kinazu (CTK)i serin/treonin kinaze (STK).
«Metoda» se odnosi na načine, sredstva, tehnike i procedure za postizanje danog zadatka uključujući, ali ne ograničujući na, one načine, sredstva, tehnike i procedure koji su stručnjacima iz područja kemije, farmakologije, biologije, biokemije bilo poznati, ili se mogu jednostavno razviti iz poznatih načina, sredstava, tehnika i procedura.
«Modulacija» ili «moduliranje» odnosi se na promjenu katalitičkog djelovanja RTK, CTK i STK. Posebno, moduliranje se odnosi na aktivaciju katalitičkog djelovanja RTK, CTK i STK, ponajprije aktivaciju ili inhibiciju katalitičkog djelovanja RTK, CTK i STK, ovisno o koncentraciji spoja ili soli kojoj su izloženi RTK, CTK ili STK ili, naročito, inhibiciju katalitičkog djelovanja RTK, CTK i STK.
«Katalitičko djelovanje» odnosi se na brzinu fosforilacije tirozina pod utjecajem, izravnim ili neizravnim, RTK i/ili CTK ili fosforilaciju serina i treonina pod utjecajem, izravnim ili neizravnim, STK.
«Vezanje (spajanje)» odnosi se na dovođenje spoja iz ovog izuma i ciljne PK u vezu tako da spoj može utjecati na katalitičko djelovanje PK, bilo izravno, tj., međudjelovanjem sa samom kinazom, ili neizravno, tj., međudjelovanjem s drugom molekulom o kojoj je ovisno katalitičko djelovanje kinaze. Takvo «vezanje» može se postići in vitro, tj. u testnoj cjevčici, petrijevoj posudi ili slično. U testnoj cjevčici, vezanje može uključiti samo spoj i PK od interesa ili može uključiti sve stanice. Stanice također mogu biti pohranjene ili uzgojene u posudama za uzgoj kulture stanica i u tom okolišu vezane sa spojem. U tom smislu, sposobnost određenog spoja da utječe na poremećaj povezan s PK, tj., IC50 spoja, kako je dolje definirano, može se odrediti prije nego što se spojevi pokušaju upotrijebiti in vivo s puno kompleksnijim živim organizmima. Za stanice izvan organizma, postoji više metoda, dobro poznatih stručnjacima, za vezanje PK i spojeva uključujući, ali ne ograničujući na, izravno stanično mikroinjiciranje i brojne tehnike transmembranskog prijenosa.
«In vitro» odnosi se na procedure izvedene u umjetnom okolišu kao što je, npr., bez ograničenja, u testnoj cjevčici ili sredstvu za uzgoj kulture.
«In vivo» odnosi se na procedure izvedene na živim organizmima kao što je, bez ograničenja, mišu, štakoru ili zecu.
«Poremećaj povezan s PK», «poremećaj potaknut s PK», i «abnormalno djelovanje PK» svi se odnose na stanje karakterizirano neodgovarajućim, tj., smanjenim ili, češće, prekomjernim katalitičkim djelovanjem PK, gdje određena PK može biti RTK, CTK ili STK. Do neodgovarajućeg katalitičkog djelovanja može doći kao rezultat bilo: (1)ekspresije PK u stanicama koje inače ne ekspresiraju PK, (2)povećanoj ekspresiji PK koja dovodi do neželjene stanične proliferacije, diferencijacije i/ili rasta, ili, (3)smanjene ekspresije PK koja dovodi do neželjenog smanjenja stanične proliferacije, diferencijacije i/ili rasta. Prekomjerno djelovanje PK odnosi se na bilo pojačanje gena koji kodira određenu PK ili proizvodnju razine PK djelovanja koje se može povezati sa staničnom proliferacijom, diferencijacijom i/ili poremećajem rasta (koji, kako razina PK raste, ozbiljnost jednog ili više simptoma staničnog poremećaja raste). Smanjeno djelovanje je, naravno, suprotno, u kojem ozbiljnost jednog ili više simptoma staničnog poremećaja raste kako se razina PK djelovanja smanjuje.
«Liječenje» se odnosi na metodu ublažavanja ili otklanjanja staničnog poremećaja nastalog posredovanjem PK i/ili njegovih popratnih simptoma. S obzirom na posebno karcinom, ovi pojmovi jednostavno znače da će vjerojatno trajanje života pojedinca oboljelog od karcinoma biti dulje ili da će jedan ili više simptoma bolesti biti smanjeno.
«Organizam» se odnosi na bilo koju živu jedinku koja ima barem jednu stanicu. Živi organizam može biti jednostavan kao, primjerice, jedna eukariotska stanica ili složen kao sisavac, uključujući ljudsko biće.
«Terapeutski djelotvorna količina» odnosi se na količinu spoja koji se daje koja će u nekoj mjeri ublažiti jedan ili više simptoma poremećaja koji se liječi. S obzirom na liječenje karcinoma, terapeutski djelotvorna količina odnosi se na onu količinu koja ima djelovanje:
(1) smanjenje veličine tumora;
(2) inhibiranje (koje je, usporavanje do neke mjere, poželjno zaustavljanje)metastaza tumora;
(3) inhibiranje do neke mjere (koje je, usporavanje do neke mjere, poželjno zaustavljanje)rasta tumora, i/ili,
(4) ublažavanje do neke mjere (ili, poželjno uklanjanje) Jednog ili više simptoma povezanih s karcinomom.
«Praćenje» znači promatranje ili otkrivanje učinka vezanja spoja sa stanicom koja ekspresira određenu PK. Promatrani ili otkriveni učinak može biti promjena u staničnom fenotipu, u katalitičkom djelovanju PK ili promjena u međudjelovanju PK s prirodno povezujućim partnerom. Tehnike promatranja ili otkrivanja takvih učinaka dobro su poznate u struci.
Gore spomenuti učinak može biti promjena ili nedostatak promjene u staničnom fenotipu, promjena ili nedostatak promjene katalitičkog djelovanja spomenute protein kinaze ili promjena ili nedostatak promjene u međudjelovanju spomenute protein kinaze s prirodno povezujućim partnerom u konačnom pogledu ovog izuma.
«Stanični fenotip» odnosi se na vanjski izgled stanice ili tkiva ili biološke funkcije stanice ili tkiva. Primjeri, bez ograničenja, staničnog fenotipa su veličina stanice, stanični rast, stanična proliferacija, stanična diferencijacija, opstanak stanice, apoptoza, i unos i uporaba nutrijensa. Takva fenotipska svojstva mogu se izmjeriti metodama koje su poznate u struci.
«Prirodno povezujući partner» odnosi se na polipeptid koji veže određenu PK u stanici. Prirodno povezujući partneri mogu imati ulogu u širenju signala u procesu prijenosa signala nastalom posredovanjem PK. Promjena u međudjelovanju prirodno povezujućeg partnera s PK može se manifestirati kao povećana ili smanjena koncentracija kompleksa PK/prirodno povezujućeg partnera i, kao rezultat, vidljiva promjena u sposobnosti PK da posreduje pri prijenosu signala.
Reprezentativni spojevi predloženog izuma prikazani su u tablici I ispod.
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
Brojevi spojeva odgovaraju brojevima primjera u odjeljku primjera. Tako je, sinteza spoja l u tablici l opisana u primjeru 1. Spojevi prisutni u tablici l su samo radi primjera i nije im namjera ograničavanje ovog izuma na bilo koji način.
Povoljna ostvarenja
Dok je najšira definicija izložena u Sažetku izuma, poželjni su stanoviti spojevi Formule (I), navedeni dolje.
(1) Poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj su R1, R3 i R4 vodik.
(2) Još jedna poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj su R1, R2 i R4 vodik.
(3) Još jedna poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj su R1, R2 i R3 vodik.
(4) Još jedna poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj su R2, R3 i R4 vodik.
(5) Još jedna poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj su R1, R2, R3 i R4 vodik.
(6) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj R5, R6 ili R7, naročito R5 ili R6, a osobito poželjno R6 predstavlja -COR10, gdje R10 označava -NR11(CH2)nR12, pri čemu:
R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil, poželjno vodik ili metil;
n je 2,3 ili 4, poželjno 2 ili 3; i
R12 je -NR13R14, gdje su R13 i R14 nezavisno alkil, još povoljnije niži nesupstituirani niži alkil ili R13 i R14 u kombinaciji čine skupinu koja se bira između -(CH2)4-,
-(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- ili -(CH2)2N (CH3)(CH2)2-, poželjno je da su R13 i R14 nezavisno vodik, metil, etil, ili da u kombinaciji čine morfolin-4-il, pirolidin-1-il, piperazin-1-il ili metilpiperazin-1-il.
Još povoljnije, R5 ili R6 u (6)gore je N-(2-dimetilaminoetil-)aminokarbonil, N-(2-etilaminoetil)-N-metilaminokarbonil, N-(3-dimetilaminopropil)-aminokarbonil, N-(2-dietilaminoetil)aminokarbonil, N-(3-etilaminopropil)aminokarbonil, N-(3-dietilaminopropil)aminokarbonil, 3-pirolidin-1-il-propilaminokarbonil, 3-morfolin-4-ilpropil-aminokarbonil, 2-pirolidin-1-iletilaminokarbonil, 2-morfolin-4-iletilaminokarbonil, 2-(4-metilpiperazin-1-il)etilaminokarbonil, 2-(4-metilpiperazin-1-il)propilaminokarbonil, 2-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)propilaminokarbonil, čak još povoljnije N-(2-detil-aminoetil)aminokarbonil ili N-(2-etilaminoetil)aminokarbonil.
(7) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj R5, R6 ili R7, naročito R5 ili R6, a osobito poželjno R6 predstavlja -COR10, gdje R10 označava -NR13R14, pri čemu je R13 vodik, a R14 alkil, poželjno niži alkil supstituiran s hidroksi, aril, heteroaril, heteroaliciklički ili karboksi, a osobito poželjno metil, etil, propil ili butil supstituiran s hidroksi, aril, heteroaliciklički kao što je piperidin, piperazin, morfolin i slično, heteroaril ili karboksi. Još povoljnije unutar ove skupine (7) je da R5 ili R6 bude 2-etoksikarbonilmetil-aminokarbonil, karboksimetilamino-karbonil, 3-hidroksipropil-aminokarbonil, 2-hidroksietilaminokarbonil, 3-triazin-1-ilpropilamino-karbonil, triazin-1-iletilaminokarbonil, 4-hidroksi-feniletilaminokarbonil, 3-imidazol-1-ilpropil-aminokarbonil, piridin-4-ilmetilaminokarbonil, 2-piridin-2-iletilaminokarbonil ili 2-imidazol-1-iletilaminokarbonil.
(8) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj R5, R6 ili R7, naročito R5 ili R6, a osobito poželjno R6 predstavlja -COR10, gdje R10 označava -NR11(CH2)nR12, pri čemu:
R11 je vodik ili alkil, poželjno vodik ili metil; n je 2, 3 ili 4, poželjno 2 ili 3; i R12 je -NR13R14, gdje se R13 i R14 zajedno kombiniraju oblikujući heterocikl, poželjno 5, 6, ili 7-eročlani heterocikl koji sadrži karbonilnu skupinu i 1 ili 2 dušikova atoma. Poželjno je da R5 ili R6 bude 2-(3-etoksikarbonilmetilpiperazin-1-il)etilaminokarbonil, 2-(3-oksopiperazin-1-il)etilaminokarbonil, 2-(imidazolidin-1-il-2-on)etilaminokarbonil, 2-(tetrahidropirimidin-1-il-2-on)etilaminokarbonil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)-etilaminokarbonil, 3-(4-metilpiperazin-1-il)-propilaminokarbonil, 3-(3-etoksikarbonilmetilpiperazin-1-il)-propilaminokarbonil, 3-(3-oksopiperazin-1-il)propilaminokarbonil, 3-(imidazolidin-1-il-2-on)propilaminokarbonil, 3- (tetrahidropirimidin-1-il-2-on)-propilaminokarbonil, 3-(2-oksopirolidin-1-il)propilaminokarbonil, 2-(2-oksohomopiperidin-1-il)etilaminokarbonil ili 3-(2-oksohomopiperidin-1-il )propilaminokarbonil.
(9) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) je ona u kojoj R5, R6 ili R7, naročito R5 ili R6, a osobito poželjno R6 predstavlja -COR10, gdje
(a) R10 označava -NR11 (CH2)nR12, pri čemu:
R11 je vodik ili alkil, poželjno vodik ili metil;
n je 2,3 ili 4, poželjno 2 ili 3; i
R12 je -NR13R14, gdje je R13 vodik, a R14 cijanoalkil ili -NHCOR3, pri čemu je Ra alkil; ili nezavisno alkil, još povoljnije niži nesupstituirani niži alkil; ili
(b) R10 označava -NR13R14, gdje se R13 i R14 zajedno kombiniraju oblikujući heterocikl koji unutar prstena ne sadrži karbonilnu skupinu. . Poželjno je da R5 ili R6 bude 2-(2-cijanoetilamino)etilaminokarbonil, 2-(acetilamino)-etilaminokarbonil, morfolinokarbonil, piperidin-1-il-karbonil, 2-cijanometilaminoetilaminokarbonil ili piperidin-1-ilkarbonil.
(10) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj R5 predstavlja -COR10, gdje R10 označava -NR13R14, pri čemu je R13 vodik, a R14 niži alkil supstituiran s hidroksi, niži alkil supstituiran s hidroksilamino, karboksi, ili -NR18R19, pri čemu su R18 i R19 nezavisno vodik ili niži nesupstituirani alkil, a poželjno je da R5 bude 2-[(dietilamino)-2-hidroksietil]aminokarbonil, 2-(N-etil-N-2-hidroksietilamino)etilaminokarbonil, karboksimetilamino-karbonil, ili 2-(2-hidroksietilamino)etilamino-karbonil.
(11) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj R6 predstavlja -COR10, gdje R10 označava -NR13R14, pri čemu je R13 vodik, a R14 niži alkil supstituiran s hidroksi, niži alkil supstituiran s hidroksilamino, karboksi, ili -NR18R19, pri čemu su R18 i R19 nezavisno vodik ili niži nesupstituirani alkil; poželjno je da R6 bude 2-[(dietilamino)-2-hidroksi]etilaminokarbonil, 2-(N-etil-N-2-hidroksietil-amino)etilaminokarbonil, karboksimetilaminokarbonil, ili 2-(2-hidroksietilamino)etilamino-karbonil.
(12) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) je ona u kojoj R5 predstavlja -COR10, gdje R10 označava -NRn(CH2)nR12, gdje je R12 -N+(O-)NR13R14 ili -N(OH)R13, pri čemu se R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, nesupstituiranog nižeg alkila; poželjno je da R5 bude 2-(N-hidroksi-N-etilamino)-etilaminokarbonil ili 2-[N+(O-)(C2H5)2] etil-aminokarbonil.
(13) Još jedna daljnja poželjna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj R6 predstavlja -COR10, gdje R10 označava -NR11(CH2)nR12, gdje je R12 -N+(O-)NR13R14 ili -N(OH)R13, pri čemu se R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, nesupstituiranog nižeg alkila; poželjno je da R6 bude 2-(N-hidroksi-N-etilamino)-etilaminokarbonil ili 2-[N+(O-)(C2H5)2]etil-aminokarbonil.
(14) U gornjim poželjnim skupinama (6)-(13)kada R5 označava -COR10, tada je još povoljnija skupina spojeva ona u kojoj: R6 se bira is skupine koja se sastoji od vodika i alkila, ponajprije vodika, metila, etila, izopropila, tert-butila, izobutila ili n-butila, a naročito vodika ili metila; i
R7 se bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, i -C(O)R17 pri čemu je R17 hidroksi, alkil ili aril, a naročito vodik, metil, etil, izopropil, n-, izo ili tert-butil, fenil, benzoil, acetil ili karboksi, a još povoljnije metil, vodik ili fenil.
(15) U gornjim poželjnim skupinama (6)-(13)kada R5 označava -COR10, tada je još povoljnija skupina spojeva ona u kojoj se R6 i R7 kombiniraju oblikujući -(CH2)4-.
(16) U gornjim poželjnim skupinama (6)-(13)kada R6označava -COR10, tada je još povoljnija skupina spojeva ona u kojoj: R6 se bira is skupine koja se sastoji od vodika i alkila, ponajprije vodika, metila, etila, izopropila, tert-butila, izobutila ili n-butila, a naročito vodika ili metila; i
R7 se bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, i -C(O)R17 pri čemu je R17 hidroksi, alkil ili aril, a naročito vodik, metil, etil, izopropil, n-, izo ili tert-butil, fenil, benzoil, acetil ili karboksi, a još povoljnije metil, vodik ili fenil.
(17) Unutar gornjih povoljnih i još povoljnijih skupina (6)-(13), još povoljnija skupina spojeva je ona u kojoj:
R1 je vodik, alkil, -C(O)NR8R9, nesupstituirani cikloalkil ili aril, poželjno vodik, fenil, 3,4-dimetoksifenilaminokarbonil, 4-metoksi-3-klorofenil-aminokarbonil, a naročito poželjno vodik ili metil, posebno vodik;
R2 je cijano, vodik, halo, niži alkoksi, aril ili -S(O)2NR13R14, pri čemu je R13 vodik, a R14 vodik, aril ili alkil, a poželjno je da R2 bude vodik, kloro, bromo, fluoro, metoksi, etoksi, fenil, dimetilaminosulfonil, 3-klorofenil-aminosulfonil, karboksi, metoksi, aminosulfonil, metilaminosulfonil, fenilaminosulfonil, piridin-3-il-aminosulfonil, dimetilaminosulfonil, izopropilamino-sulfonil, naročito poželjno vodik, fluoro ili bromo;
R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkoksi, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, aril poželjno aril moguće supstituiran s jednim ili dva supstituenta koji se biraju iz skupine koju čine niži alkil, halo ili niži alkoksi, i heteroaril, poželjno heteroaril moguće supstituiran s jednim ili dva supstituenta izabranih iz skupine koju čine niži alkil, halo ili niži alkoksi; poželjno vodik, metoksi, karboksi, fenil, piridin-3-il, 3,4-diklorofenil, 2-metoksi-5-izopropilfenil, 4-n-butilfenil, 3-izopropilfenil, naročito povoljno vodik ili fenil; i
R4 je vodik.
(18) Još jedna naročito povoljna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj:
R1 je vodik, alkil, -C(O)NR8R9, nesupstituirani cikloalkil ili aril, poželjno vodik, 3,4-dimetoksi-fenil-aminokarbonil, 4-metoksi-3-klorofenilaminokarbonil, čak još povoljnije vodik ili metil, posebno vodik;
R2 je cijano, vodik, halo, niži alkoksi, aril ili -S(O)2NR13R14 gdje je R13 vodik i R14 je vodik, aril ili alkil, poželjno je R2 vodik, kloro, bromo, fluoro, metoksi, etoksi, fenil, dimetilaminosulfonil, izopropilamino-sulfonil, naročito poželjno vodik, fluoro ili bromo;
R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkoksi, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, aril poželjno aril moguće supstituiran jednim ili s dva supstituenta izabranih iz skupine koju čine niži alkil, halo ili niži alkoksi, i heteroaril, poželjno heteroaril moguće supstituiran jednim ili s dva supstituenta izabranih iz skupine koju čine niži alkil, halo ili niži alkoksi; poželjno vodik, metoksi, karboksi, fenil, piridin-3-il, 3,4-diklorofenil, 2-metoksi-5-izopropilfenil, 4-n-butilfenil, 3-izopropilfenil, naročito povoljno vodik ili fenil; i
R4 je vodik.
Unutar gornje povoljne skupine (18), još povoljnoija je skupina spojeva u kojoj:
R5 je -COR10 gdje je R10 kako je definirano u Sažetku izuma, poželjno -NR11 (CH2)nR12 ili -NR13R14 kao što je definirano u Sažetku izuma.
R6 se bira iz skupine koju čine vodik i alkil, poželjno vodik, metil, etil, izopropil, tert-butil, izobutil ili n-butil, još povoljnije vodik ili metil; i
R7 se bira iz skupine koju čine vodik, alkil, aril, heteroaril, i -C(O)R17 gdje je R17 hidroksi, alkil ili aril, još povoljnije vodik, metil, etil, izopropil, n-, izo ili tert-butil, fenil, benzoil, acetil ili karboksi, čak još povoljnije metil, vodik ili fenil.
U gornjoj povoljnoj skupini (18)daljnja povoljna skupina spojeva je ona u kojoj:
R6 je -COR10 gdje je R10 kako je definirano u Sažetku izuma, poželjno -NR11 (CH2)nR12 ili -NR13R14 kao što je definirano u Sažetku izuma.
R5 se bira iz skupine koju čine vodik i alkil, poželjno vodik, metil, etil, izopropil, tert-butil, izobutil ili n-butil, još povoljnije vodik ili metil; i
R7 se bira iz skupine koju čine vodik, alkil, aril, heteroaril, i -C(O)R17 gdje je R17 hidroksi, alkil ili aril, još povoljnije vodik, metil, etil, izopropil, n-, izo ili tert-butil, fenil, benzoil, acetil ili karboksi, čak još povoljnije metil, vodik ili fenil.
(19) Još jedna naročito povoljna skupina spojeva Formule (I) Je ona u kojoj:
R1 i R4 su vodik;
R2 se bira iz skupine koju čine vodik, halo, niži alkoksi, -C(O)R15 i -S(O)2NR13R14;
R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkoksi, -C(O)R15, -S(O)2NR13R14, aril i heteroaril;
R5 je -C(O)R10;
R6 se bira iz skupine koju čine vodik i niži alkil; i
R7 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil i -C(O)R17.
Još je jedno posebno poželjno ostvarenje ovog izuma da, u spoju koji ima strukturu kakva je opisana u (15):
R10 se bira iz skupine koju čine hidroksi, niži alkoksi i -NR11 (CH2)nR12;
n je 2 ili 3;
R11 se bira iz skupine koju čine vodik i niži alkil; i,
R12 se bira iz skupine koju čine aril i -NR13R14.
Daljnje je posebno poželjno ostvarenje ovog izuma da, u spoju koji ima strukturu kakva je opisana u prethodna dva odjeljka, R13 i R14 se nezavisno biraju iz skupine koju čine vodik, niži alkil i, kombinirani,
-(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- ili
-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(20) Još jedno naročito povoljno ostvarenje ovog izuma je spoj u kojem:
R1 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil,
-(CH2)rR16 i -C(O)NR8R9;
R2 se bira iz skupine koju čine vodik, halogen, aril i -S(O)2NR13R14;
R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil, niži alkoksi, aril, heteroaril i -C(O)R15;
R4 je vodik;
R5 se bira iz skupine koju čine vodik i niži alkil;
R6 je -C(O)R10.
R7 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil i aril;
R16 se bira iz skupine koju čine hidroksi i -C(O)R15; i
r je 2 ili 3.
Posebno poželjno ostvarenje ovog izuma je spoj koji ima strukturu opisanu u odjeljku neposredno iznad, u kojoj je R3 aril moguće supstituiran s jednom ili više skupina izabranih iz grupe koju čine niži alkil, niži alkoksi i halo.
(21) Slično, posebno povoljno ostvarenje ovog izuma je spoj u kojem:
R1 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil, -(CH2)rR16 i -C(O)NR8R9;
R2 se bira iz skupine koju čine vodik, halogen, aril i -S(O)2NR13R14;
R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil, niži alkoksi, aril, heteroaril i -C(O)R15;
R4 je vodik;
R5 se bira iz skupine koju čine vodik i niži alkil;
R6 je -C(O)R10.
R7 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil i aril;
R16 se bira iz skupine koju čine hidroksi i -C(O)R15;
r je 2 ili 3,
R10 se bira iz skupine koju čine hidroksi, niži alkoksi, -NR13R14 i -NR11(CH2)nR12, gdje je n jednak 1, 2 ili 3, R11 je vodik i R12 je izabran iz skupine koju čine hidroksi, niži alkoksi, -C(O)R15, heteroaril i -NR13R14.
(22) Daljnje posebno povoljno ostvarenje ovog izuma je spoj koji ima strukturu kao što je opisana u neposredno prethodnom odjeljku u kojoj se R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koju čine vodik, niži alkil, heteroaril i, kombinirani, -(CH2)4-, -(CH2)s-, - (CH2)2O (CH2)2- ili
-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(23) Još jedno naročito povoljno ostvarenje ovog izuma je spoj u kojem:
R1 je -C(O)NR8R9, pri čemu je R8 vodik, a R9 aril moguće supstituiran s jednom ili više skupina koje se biraju iz grupe koju čine halo, hidroksi i niži alkoksi;
R2 se bira iz skupine koju čine vodik, halogen, aril i -S(O)2NR13R14;
R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil, niži alkoksi, aril, heteroaril i -C(O)R15;
R4 je vodik;
R5 se bira iz skupine koju čine vodik i niži alkil;
R6 je -C(O)R10.
R7 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkil i aril;
R16 se bira iz skupine koju čine hidroksi i -C(O)R15; i
r je 2 ili 3.
(24) Još jedno daljnje naročito povoljno ostvarenje ovog izuma je spoj u kojem:
R1 se bira iz skupine koju čine vodik i niži alkil;
R2 se bira iz skupine koju čine vodik, halo, niži alkoksi, aril, -C(O)R15i -S(O)2NR13R14;
R3 se bira iz skupine koju čine vodik, halo, aril, heteroaril i -C(O)R15;
R4 je vodik;
R5 je -C(O)R10; i
R6 i R7, kombinirano, čine -(CH2)4- skupinu.
U spoju koji ima strukturu kakva je opisana u neposredno prethodno odjeljku, naročito je povoljno ostvarenje da R10 bude izabran iz skupine koju čine hidroksi, alkoksi, -NR13R14 i -NH (CH2)nNR13R14, pri čemu je
n jednak 2 ili 3.
Posebno je povoljno ostvarenje ovog izuma da, u spoju strukture kako je opisana u prethodna dva odjeljka, R13 i R14 budu nezavisno izabrani iz skupine koju čine vodik, niži alkil i, kombinirani, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- ili-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
Uporabljivost
PK, čije je katalitičko djelovanje modulirano spojevima iz ovog izuma, uključuju protein tirozin kinaze od kojih postoje dva tipa, receptorske tirozin kinaze (RTK)i stanične tirozin kinaze (CTK), i serin-treonin kinaze (STK). Prijenos signala posredovan s RTK potaknut je izvanstaničnim međudjelovanjem specifičnog faktora rasta (liganda), za kojim slijedi dimerizacija receptora, kratkotrajna stimulacija intrinzičnog djelovanja protein tirozin kinaze te fosforilacija. Time se stvaraju vezna mjesta za unutarstanične signalne prijenosne molekule i dovodi se do oblikovanja kompleksa sa spektrom citoplazmatskih signalnih molekula koje omogućuju odgovarajući stanični odgovor (npr., staničnu diobu, metaboličke učinke na izvanstaničnom mikrookolišu, itd.). Vidi, Schlessinger i Ullrich, 1992, Neuron 9:303-391.
Pokazano je da tirozinska mjesta fosforilacije na receptorima za faktor rasta djeluju kao visokoafinitetna mjesta vezanja SH2 (src podudarnost)domena signalnih molekula. Fantl et al., 1992, Cell 69:413-423, Songvang et al., 1994, Mol. Cell. Biol. 14:2777-2785), Songyang et al., 1993, Cell. 72:767-768, i Koch et al., 1991, Science 252:668-678. Određeno je nekoliko unutarstaničnih supstratnih proteina koji su povezani s RTK. Mogu se podijeliti u dvije glavne skupine: (1)supstrati koji imaju katalitičku domenu, i (2)supstrati koji nemaju takvu domenu, ali koji služe kao adapteri i povezani su s katalitički aktivnim molekulama. Songvang et al., 1993, Cell. 72:767-768. Specifičnost međudjelovanja između receptora i SH2 domena njihovih supstrata određena je aminokiselinskim dijelovima koji neposredno okružuju fosforilirani tirozinski dio. Razlike u veznim afinitetima između SH2 domena i aminokiselinskih nizova koji okružuju fosfotirozinske dijelove na određenim receptorima u skladu su s opaženim razlikama u fosforilacijskim profilima njihovih supstrata. Songvang et al., 1993, Cell. 72:767-768. Ta opažanja ukazuju da je funkcija svake RTK određena ne samo njezinim načinom ekspresiranja i dostupnošću liganda već također i nizom downstream putova prijenosa signala koji su aktivirani određenim receptorom. Prema tome, fosforilacija osigurava važan regulacijski korak koji određuje selektivnost signalnih putova određenih specifičnim receptorima za faktore rasta, kao i diferencijaciju receptora za faktore.
STK, koja je primarno citosolna, utječe na unutarnju biokemiju stanice, često kao silazni odgovor na PTK događaj. STK sudjeluju u signalnom procesu koji započinje sintezu DNK i daljnju mitozu koja dovodi do stanične proliferacije.
Prema tome, PK prijenos signala rezultira, među ostalim odgovorima, staničnom proliferacijom, diferencijacijom, rastom i metabolizmom. Abnormalna stanična proliferacija može rezultirati mnoštvom poremećaja i bolesti, uključujući razvoj neoplazije kao što je karcinom, sarkom, glioblastom i hemangiom, poremećaja kao što je leukemija, psorijaza, arterioskleroza, artritis i dijabetička retinopatija te drugih poremećaja povezanih s nekontroliranom angiogenezom i/ili vaskulogenezom.
Točno razumijevanje mehanizma kojim spojevi iz izuma inhibiraju PK nije potrebno za praktičnu primjenu predloženog izuma. Međutim, premda se ovim ne povezuje ni s kakvim određenim mehanizmom ili teorijom, vjeruje se da spojevi i aminokiseline u katalitičkom području PK međusobno reagiraju. PK tipično ima bilobatnu strukturu pri čemu se ATP, kako se čini, veže u pukotini između dva režnja u području u kojem su aminokiseline sačuvane između PK. Za inhibitore PK vjeruje se da se vežu nekovalentnim međudjelovanjima kao što su vodikove veze, van der Waalsove sile i ionska međudjelovanja u istom općem području u kojem se prethodno spomenuti ATP veže na PK. Posebno, pretpostavlja se da se 2-indolinonska komponenta spojeva iz ovog izuma veže u općem području kojeg uobičajeno zauzima adeninski prsten iz ATP. Specifičnost određene molekule za određenu PK može poteći od dodatnih reakcija između različitih supstituenata na 2-indolinonskoj jezgri i aminokiselinskih domena specifičnih za određenu PK. Prema tome, različiti indolinonski supstituenti mogu doprinijeti povlaštenom vezanju na određene PK. Sposobnost odabira spojeva aktivnih na različitim veznim mjestima ATP (ili drugih nukleotida)čini spojeve ovog izuma korisnima za pronalaženje bilo kojeg proteina s takvim mjestom. Stoga su ovdje izneseni spojevi upotrebljivi u in vitro ispitivanjima takvih proteina kao i in vivo prikazivanju tearpeutskih učinaka putem međudjelovanja s takvim proteinima.
Dodatno, spojevi predloženog izuma pružaju terapeutski pristup liječenju mnogih vrsta solidnih tumora, uključujući, ali ne ograničujući na, Kaposijev sarkom, eritroblastom, glioblastom, meningeom, astrocitom, melanom i mioblastom. Liječenje ili sprječavanje nesolidnih tumorskih karcinoma kao što je leukemija također su obuhvaćeni ovim izumom. Indikacije mogu uključiti, ali nisu ograničene na, karcinome mozga, karcinome mjehura, karcinome jajnika, karcinome želuca, karcinome pankreasa, karcinome debelog crijeva, tumore krvnih stanica, karcinome pluća i karcinome kostiju.
Daljnji primjeri, bez ograničenja, tipova poremećaja povezanih s neodgovarajućim poremećenim djelovanjem PK za koje ovdje opisani spojevi mogu biti korisni u sprječavanju, liječenju ili istraživanju, jesu poremećaji proliferacije stanice, poremećaji veziva i metabolički poremećaji.
Stanični proliferacijski poremećaji, koji se mogu spriječiti, liječiti ili dalje ispitivati predloženim izumom uključuju karcinom, proliferacijske poremećaje krvnih žila i proliferacijske poremećaje mezangijskih stanica.
Proliferacijski poremećaji krvnih žila odnose se na poremećaje povezane s abnormalnom vaskulogenezom (stvaranjem krvnih žila) i angiogenezom (širenjem krvnih žila). Dok vaskulogeneza i angiogeneza imaju važne uloge u mnogim normalnim fiziološkim procesima kao što je embrionalni razvoj, oblikovanje žutog tijela, zacjeljivanje ozljeda i regeneracija organa, oni također imaju ključnu ulogu u razvoju karcinoma koja rezultira oblikovanjem novih kapilara potrebnih za održavanje tumora na životu. Drugi primjeri proliferacijskih poremećaja krvnih žila uključuju artritis, gdje nove kapilarne krvne žile napadaju zglob i uništavaju hrskavicu, očne bolesti, kao što je dijabetička retinopatija u kojoj nove kapilare u retini napadaju staklasto tijelo, uzrokuju krvarenje i sljepoću.
Dva strukturno srodna RTK za koje je ustanovljeno da s visokim afinitetom vežu VEGF su: fms-u sličan tirozin l (fit-1)receptor (Shibuva et al., 1990, Oncogene, 5:519-524; De Vries et al., 1992, Science, 255:989-991)i KDR/FLK-1 receptor, također poznat kao VEGF-R2. Za vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF)ustanovljeno je da je specifični mitogen endotelnih stanica koji potiče rast endotelnih stanica in vitro. Ferrara & Henzel, 1989, Biochein. Biophys. Res. Comm., 161:851-858; Vaisman et al., 1990, J. Biol. Chem., 265:19461-19566. Informacije izložene u U.S. prijavi ser. br. 08/193,829, 08/038,596 i 07/975,750, snažno ukazuju da VEGF nije samo odgovoran za proliferaciju, nego je također i primarni regulator normalne i patološke angiogeneze. Vidi općenito, Klagsburn & Soker, 1993, Current Biology, 3(10)699-702; Houck et al., 1992, J. Biol. Chem., 267:26031-26037.
Normalna vaskulogeneza i angiogeneza imaju važne uloge u mnoštvu fizioloških procesa kao što je razvoj embrija, zacjeljivanje rana, regeneracija organa i ženski reproduktivni procesi kod žena poput razvoja folikula u žutom tijelu tijekom ovulacije i rasta placente tijekom trudnoće. Folkman & Shing, 1992, J.Biological Chem., 267(16):10931-34. Nekontrolirana vaskulogeneza i/ili angiogeneza povezani su s bolestima kao što je dijabetes kao i maligni solidni tumori kojima je za rast potrebna vaskularizacija. Klagsburn & Soker, 1993, Current Biology, 3(10):699-702; Folkham, 1991, J. Natl. Cancer Inst., 82:4-6; Weidner, et al., 1991, New Engl. J. Med., 324:1-5.
Pretpostavljena uloga VEGF u proliferaciji endotelnih stanica i migraciji tijekom angiogeneze i vaskulogeneze ukazuje na važnu ulogu KDR/FLK-1 receptora u tim procesima. Bolesti kao što je dijabetes mellituS(Folkman, 198, na XI. kongresu o trombozi i hemostazi (Verstraeta, et al., eds.), str. 583-596, Leuven University Press, Leuven)i artritis, kao i rast malignih tumora mogu proizaći iz nekontrolirane angiogeneze. Vidi, npr., Folkman, 1971, N. Engl. J. Med., 285:1182-1186. Receptori na koje se VEGF specifično veže važan su i moćan terapeutski cilj za regulaciju i modulaciju vaskulogeneze i/ili angiogeneze i raznih ozbiljnih bolesti koje uključuju abnormalni rast stanica uzrokovan takvim procesom. Plowman, et al., 1994, DN&P, 7(6):334-339. Posebno, visokospecifična uloga receptora KDR/FLK-1 u neovaskularizaciji čini ga odabranim ciljem za terapeutske pristupe liječenju karcinoma i drugih bolesti koje uključuju nekontrolirano oblikovanje krvnih žila.
Prema tome, predloženi izum donosi spojeve koji mogu regulirati i/ili modulirati prijenos signala tirozin kinazom uključujući prijenos signala KDR/FLK-1 receptorom kako bi se inhibirala ili potakla angiogeneza i/ili vaskulogeneza, to jest, spojeve koji inhibiraju, sprječavaju ili ometaju prijenos signala pomoću KDR/FLK-1 kada je aktiviran ligandima kao što je VEGF. Premda se vjeruje da spojevi predloženog izuma djeluju na receptore ili druge komponente duž puta signalnog prijenosa tirozin kinazom, oni također mogu djelovati izravno na tumorske stanice koje proizlaze iz nekontrolirane angiogeneze.
Premda se nomenklatura humanih i murinskih odgovarajućih dijelova generičkog «flk-I» receptora razlikuje, oni su, u mnogim pogledima, međusobno zamjenjivi. Murinski receptor, Flk-1, i njegov humani odgovarajući dio, KDR, dijele podudarnost slijeda od 93.4% unutar unutarstanične domene. Na isti način, murinski FLK-I veže humani VEGF s istim afinitetom kao mišji VEGF, i, sukladno tome, aktiviraju ga ligandi dobiveni iz obje vrste. Millauer et al., 1993, Cell, 72:835-846; Quinn et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:7533-7537. FLK-1 također se povezuje s, a zatim fosforilira tirozinske dijelove humanih RTK supstrata (npr., PLC-y ili p85)kada je koekspresiran u 293 stanicama (humani embrionalni bubrežni fibroblasti).
Modeli koji se temelje na FLK-1 receptoru mogu se prema tome izravno primijeniti za razumijevanje KDR receptora. Na primjer, uporaba murinskog FLK-1 receptora u metodama kojima se određuju spojevi koji reguliraju put prijenosa signala u murine, izravno je primjenjiva na određivanje spojeva koji se mogu upotrijebiti za regulaciju puta prijenosa signala u ljudi, to jest, koji reguliraju djelovanje povezano s KDR receptorom. Prema tome, kemijski spojevi određeni kao inhibitori KDR/FLK-1 in vitro, mogu se primijeniti u odgovarajućim in vivo modelima. Pokazalo se da su oba in vivo životinjska modela, miša i štakora, od iznimne vrijednosti za ispitivanje kliničke moći sredstava koja djeluju na put prijenosa signala induciraneg pomoću KDR/FLK-1.
Prema tome, predloženi izum donosi spojeve koji reguliraju, moduliraju i/ili inhibiraju vaskulogenezu i/ili angiogenezu tako da djeluju na enzimatsku aktivnost KDF/FLK-1 receptora i ometaju prijenos signala pomoću KDR/FLK-1. Stoga, predloženi izum donosi terapeutski pristup liječenju mnogih vrsta solidnih tumora uključujući, ali ne ograničujući na, glioblastom, melanom i Kaposijev sarkom, karcinome jajnika, pluća, dojke, prostate, pankreasa, debelog crijeva i kože. Dodatno, podaci ukazuju da se davanje spojeva koji inhibiraju put prijenosa signala pomoću KDR/Flk-1 također mogu upotrijebiti u liječenju hemangioma, restenoze i dijabetičke retinopatije.
Nadalje, ovaj se izum odnosi na inhibiciju vaskulogeneze i angiogeneze pomoću drugih receptorima posredovanih puteva, uključujući put^ koji obuhvaća flt-1 receptor.
Prijenos signala nastao posredovanjem receptora tirozin kinaze započinje izvanstaničnim međudjelovanjem sa specifičnim faktorom rasta (ligandom), za kojim slijedi dimerizacija receptora, kratkotrajna stimulacija intrizičnog djelovanja protein tirozin kinaze te autofosforilacija. Time se stvaraju vezna mjesta za unutarstanične signalne prijenosne molekule i dovodi se do oblikovanja kompleksa sa spektrom citoplazmatskih signalnih molekula koje omogućuju odgovarajući stanični odgovor, npr., staničnu diobu i metaboličke učinke na izvanstaničnom mikrookolišu. Vidi, Schlessinger i Ullrich, 1992, Neuron 9:1-20.
Bliska podudarnost međustaničnih područja KDR/FLK-1 s onima u PDGF-β receptoru (50.3% podudarnost)i/ili s povezanim flt-1 receptorom ukazuje na indukciju preklapajućih puteva prijenosa signala. Primjerice, za PDGF-β receptor, ustanovljeno je da se članovi src familije (Twamley et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:7696-7700), fosfatidilinozitol-3'-kinaza (Hu et al., 1992, Mol. Cell. Biol., 12:981-990), fosfolipaza cy (Kashishian & Cooper, 1993, Mol. Cell. Biol., 4:49-51), protein koji aktivira ras-GTPazu, (Kashishian et al., 1992, EMBO J., 11:1373-1382), PTP-ID/syp (Kazlauskas et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 10 90:6939-6943), Grb2 (Arvidsson et al., 1994, Mol. Cell. Biol., 14:6715-6726)i adapterske molekule Shc i Nck (Nishimura et al8, 1993, Mol. Cell. Biol., 13:6889-6896), vežu na područja koja uključuju različita mjesta autofosforilacije. Vidi općenito, Claesson-Welsh, 1994, Prog. Grovrth Factor Res., 5:37-54. Prema tome, vjerojatno je da putevi prijenosa signala aktivirani pomoću KDR/FLK-1 uključuju ras put (Rozakis et al., 1992, Nature, 360:689-692), PI-3'-kinazu, src-posredovane i plcy-posredovane puteve. Svaki od tih puteva može imati ključnu ulogu u angiogenom i/ili vaskulogenom učinku KDR/FLK-1 u stanicama endotela. Dakle, u još jednom pogledu, ovaj izum odnosi se na primjenu ovdje opisanih organskih spojeva za modulaciju angiogeneze i vaskulogeneze budući da te procese kontroliraju ti putevi.
Obrnuto, također su uključeni poremećaji povezani sa stezanjem, kontrakcijom ili začepljenjem krvnih žila, kao što je restenoza, i mogu se liječiti ili spriječiti metodama iz ovog izuma.
Fibrotični poremećaji odnose se na abnormalno stvaranje izvanstaničnih matriksa. Primjeri fibrotičnih poremećaja uključuju cirozu jetre, i proliferacijske poremećaje mezangijskih stanica. Ciroza jetre karakterizirana je povećanom količinom sastojaka izvanstaničnog matriksa što rezultira stvaranjem hepatičkog ožiljka. Povećana količina sastojaka izvanstaničnog matriksa u hepatičkom ožiljku također može biti uzrokovana virusnom infekcijom kao što je hepatitis. Izgleda da lipociti imaju glavnu ulogu u cirozi jetre. Ostali obuhvaćeni fibrotički poremećaji uključuju aterosklerozu.
Proliferacijski poremećaji mezangijskih stanica odnose se na poremećaje prouzročene abnormalnom proliferacijom mezangijskih stanica. Mezangijski proliferacijski poremećaji uključuju različite humane bolesti bubrega, kao što je glomerulonefritis, dijabetička nefropatija i maligna nefroskleroza kao i takve poremećaje kao što su sindromi trombotičke mikroangiopatije, odbacivanje transplantata i glomerulopatije. RTK PDGFR je umiješan u održavanje proliferacije mezangijskih stanica. Floege et al., 1993, Kidney International 43:47S-54S.
Mnogi karcinomi su posljedica poremećene proliferacije stanica i, kako je prethodno istaknuto, PK su povezane sa staničnim proliferacijskim poremećajima. Stoga, nije iznenađujuće da su PK kao što su, primjerice, članovi familije RTK, povezane s razvojem karcinoma. Neki od tih receptora, kao EGFR (Tuzi et al., 1991, Br. J. Cancer 63:227-233, Torp et al., 1992, APMIS 100:713-719)HER2/neu (Slamon et al., 1989, Science 244:707-712)i PDGF-R (Kumabe et al., 1992, Oncogene, 7:627-633)prekomjereno su ekspresirani u mnogim tumorima i/ili ih neprestano aktiviraju autokrine petlje. Zapravo, u najčešćim i najozbiljnijim karcinomima ustanovljena je prekomjerena ekspresija tih receptora (Akbasak i Suner-Akbasak et al., 1992, J. Neurol. Sci., 111:119-133, Dickson et al., 1992, Cancer Treatment Res. 61:249-273, Kore et al., 1992, J._ Clin. Invest. 90:1352-1360)i autokrinih petlji (Lee i Donoghue, 1992, J. Cell. Biol., 118:1057-1070, Kore et al., supra, Akbasak i Suner-Akbasak et al., supra). Na primjer, EGFR povezan je s karcinomom skvamoznih stanica, astrocitomom, glioblastomom, karcinomom glave i vrata, karcinomom pluća i karcinomom mjehura. HER2 povezan je s karcinomom dojke, jajnika, želuca, pluća, pankreasa i mjehura. PDGFR povezan je s glioblastomom i melanomom kao i s karcinomom pluća, jajnika i prostate. RTK c-met također je povezan s nastankom malignih tumora. Primjerice, c-met je povezan, između ostalih karcinoma, s kolorektalnim, tiroidnim, pankreasnim, želučanim i hepatocelularnim karcinomima te limfomima. Dodatno, c-met povezan je s leukemijom. Prekomjerena ekspresija c-met gena također je otkrivena u pacijenata s Hodgkinovom bolesti i Burkittovim limfomom.
IGF-IR, osim što je obuhvaćen u prehrambenoj podršci u dijabetesa tipa II, također je povezan s nekoliko tipova karcinoma. Na primjer, IGF-I povezan je s autokrinim stimulatorom rasta za nekoliko tipova tumora, npr. stanicama humanog karcinoma dojke (Arteaga e t al., 1989, J. Clin. Invest. 84:1418-1423) i karcinoma pluća malih stanica (Macauley et al., 1990, Cancer Res., 50:2511-2517). Dodatno, IGF-I, osim što je neizostavno uključen u normalni rast i diferencijaciju živčanog sustava, također se pokazuje i kao autokrini stimulator humanih glioma. Sandberg-Nordqvist et al., 1993, Cancer Res. 53:2475-2478. Činjenica koja daje daljnju potporu važnosti IGF-IR i njegovih liganda u staničnoj proliferaciji jest ta da je rast mnogih staničnih tipova u kulturi (fibroblasti, epitelne stanice, stanice mekanog mišića, T-limfočiti, mijeloidne stanice, hondrociti i osteoblasti (pločaste stanice koštane srži))stimuliran pomoću IGF-I. Goldring i Goldring, 1991, Eukarvotic Gene Expression, 1:301-326. Baserga i Coppola smatraju da IGF-IR ima središnju ulogu u mehanizmu tranformacije i, kao takav, mogao bi biti poželjan cilj terapeutskih zahvata za široki spektar humanih malignih bolesti. Baserga, 1995, Cancer Res., 55:249-252, Baserga, 1994, Cell 79:927-930, Coppola et al., 1994, Mol. Cell. Biol., 14:4588-4595.
STK ustanovljeni su u mnogim tipovima karcinoma uključujući, osobito, karcinom dojke (Cance et al., Int. J. Cancer, 54:571-77 (1983)).
Povezanost između abnormalnog djelovanja PK i bolesti nije ograničena na karcinom. Primjerice, RTK su povezani s bolestima kao što je psorijaza, dijabetes mellitus, endometrioza, angiogeneza, razvoj ateromskog plaka, Alzheimerova bolest, restenoza, von Hippel-Lindauova bolest, epidermalna hiperproliferacija, neurodegenerativne bolesti, macularna degeneracija povezana sa starenjem i hemangiomi. Na primjer, EGFR ustanovljen je prilikom cjeljenja ozljeda rožnice i kože. Oštećenja u Inzulinu-R i IGF-1R ustanovljena su u dijabetes mellitusu tipa II. Potpunija usporedba specifičnih RTK i njihovih terapeutskih indikacija iznesena je u Plowman et al., 1994, DN&P 7:334-339.
Kako je prethodno istaknuto, ne samo RTK već uključujući CTK, ali ne ograničujući na, src, abl, fps, yes, fyn, lyn, Ick, bik, hck, fgr i yrk (osvrt u Bolean et al., 1992, FASEB J., 6:3403-3409)uključeni su proliferacijski i metabolički put prijenosa signala te se stoga može očekivati, i pokazano je, da su uključeni u mnoge PTK-posredovane poremećaje na koje je usmjeren predloženi izum. Primjerice, ustanovljeno je da je mutirani srC(v-src)onkoprotein (pp60v~src) U pileta. Povrh toga, njegov stanični homolog, proto-omkogen pp60v-src prenosi onkogene signale mnogih receptora. Prekomjerena ekspresija EGFR ili HER2/neu u tumorima dovodi do aktivacije konstitutivnog oblika pp60c-src, što je svojstvo malignih stanica, ali ne nastupa u normalnim stanicama. S druge strane, miševi u kojima nema ekspresije c-src pokazuju ne-osteoporotički fenotip, što ukazuje na ključnu ulogu c-src u funkciji osteoklasta i moguću uključenost u srodne poremećaje.
STK su povezani s upalom, autoimunom bolesti, imunoodgovorima, i hiperproliferacijskim poremećajima kao što je restenoza, fibroza, psorijaza, osteoartritis i reumatoidni artritis.
PK su također ustanovljene prilikom implantacije embrija. Stoga, spojevi iz ovog izuma mogu pružiti djelotvornu metodu sprječavanja implatacije embrija i tako biti korisni kao sredstva za kontrolu začeća. Dodatni poremećaji koji se mogu liječiti ili spriječiti primjenom spojeva iz ovog izuma su imunološki poremećaji kao što je autoimuna bolest, AIDS i kardiovaskularne poremećaje kao što je ateroskleroza.
Konačno, trenutno se sumnja da su i RTK i CTK uključeni u hiperimune poremećaje.
Primjeri učinka mnogih reprezentativnih spojeva ovog izuma na nekoliko PTK prikazani su u tablici 2 ispod. Predstavljene spojeve i podatke ne treba shvatiti tako kao da na bilo koji način ograničuju doseg ovog izuma.
Davanje i farmaceutsko pripravljanje
Spoj iz predloženog izuma ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, mogu se davati kao takvi humanom pacijentu ili se mogu davati u farmaceutskim pripravcima u kojima su prethodni materijali pomiješani s odgovarajućim prijenosnicima ili ekscipijensima. Metode formulacije i davanja lijekova mogu se pronaći «Remington's Pharmacological Sciences», Mack Publishing Co., Easton, PA., najnovije izdanje.
Kako se ovdje rabi, «davati» ili «davanje» odnosi se na predaju spoja formule (I)ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutskog pripravka koji sadrži spoj formule (I)iz ovog izuma ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol, organizmu u svrhu sprječavanja ili liječenja poremećaja povezanog s PK.
Prikladni načini davanja mogu uključiti, bez ograničenja, oralno, rektalno, transmukozno ili intestinalno davanje ili intramuskularne, subkutane, intramedularne, intratrahealne, intraperitonelane, intranazalne ili intraokularne injekcije. Povoljni načini davanja su oralno i parenteralno.
Alternativno, spoj se može davati lokalno prije nego sistemski, primjerice, injektiranjem spoja izravno u solidni tumor, uglavnom u formulaciji s polaganim ili neprekidnim otpuštanjem.
Nadalje, lijek se može davati u ciljanom sustavu za predaju lijeka, primjerice, u liposomu obloženom s protutijelom specifičnim za određeni tumor. Liposomi će biti usmjereni na tumor i tumor će ih preuzeti selektivno.
Farmaceutski pripravci iz predloženog izuma mogu se proizvesti procesima koji su dobro poznati u struci, npr., uobičajenim miješanjem, otapanjem, granuliranjem, pripravljanjem dražeja, levigating, pripravijenjem emulzija, kapsula, procesima hvatanje ili liofiliziranja.
Farmaceutski pripravci za primjenu u skladu s predloženim izumom mogu se formulirati na uobičajeni način primjenom jednog ili više fiziološki prihvatljivih prijenosnika koji se sastoje od ekscipijensa i pomoćnih tvari koji olakšavaju obradu aktivnih spojeva u pripravke koji se mogu farmaceutski upotrijebiti. Prava formulacija ovisna je o odabranom načinu davanja.
Za injektiranje, spojevi iz izuma mogu se formulirati u vodenim otopinama, ponajprije u fiziološki kompatibilnim puferima kao što je Hankova otopina, Ringerova otopina ili fiziloška slana pufer otopina. Za transmukozno davanje, u formulaciji se koriste penetranti prikladni za barijeru koja ih mora propustiti. Takvi penetranti su općenito poznati u struci.
Za oralno davanje, spojevi se mogu formulirati kombiniranjem aktivnih spojeva s farmaceutski prihvatljivim prijenosnicima koji su dobro poznati u struci. Takvi prijenosnici omogućavaju da spojevi iz ovog izuma budu formulirani kao tablete, pilule, pastile, dražeje, kapsule, tekućine, gelovi, sirupi, muljevi, suspenzije i slično, za oralno uzimanje. Farmaceutski pripravci za oralnu primjenu mogu se pripraviti pomoću krutog ekscipijensa, rezultirajuća smjesa se može mrviti, a smjesa granula obraditi nakon dodavanja drugih prikladnih pomoćnih tvari ako je potrebno i na kraju se mogu dobiti tablete ili jezgre dražeja. Korisni ekscipijensi su, posebno, punila kao što su šećeri, uključujući laktozu, surkozu, manitol ili sorbitol, pripravke celuloze kao što je, na primjer, kukuruzni škrob, pšenični škrob, rižin škrob, krumpirov škrob i druge materijale kao što je želatina, gumi tragacanth, metilceluloza, hidroksipropil-metilceluloza, natrijeva karboksimetilceluloza, i/ili polivinilpirolidon (PVP). Ako se želi, mogu se dodati sredstva za razgradnju, kao što je poprečno vezan polivinilpirolidon, agar, ili alginička kiselina. Također se može upotrijebiti sol kao što je natrijev alginat.
Dražejne jezgre dane su s odgovarajućim oblogama. Za tu namjenu mogu se upotrijebiti koncentrirane otopine šećera koje mogu sadržavati gumi arabiku, talk, polivinilpirolidon, karbopol gel, polietilen glikol, i/ili titanov dioksid, otopine za lakiranje i odgovarajuća organska otapala ili smjese otapala. Tabletama ili oblogama dražeja mogu se dodati boje ili pigmenti radi prepoznavanja ili obilježavanja različitih kombinacija doza aktivnog spoja.
Farmaceutski pripravci koji se mogu upotrijebiti oralno obuhvaćaju push-fit kapsule od želatine, kao i mekane, zataljene kapsule od želatine i plastifikatora, kao što je glicerol ili sorbitol. Push-fit kapsule mogu sadržavati aktivne tvari u smjesi s punilom kao što je laktoza, vezivnim sredstvom kao što je škrob, i/ili lubrikantom kao što je talk ili magnezijev stearat i, moguće, stabilizatorima. U mekanim kapsulama, aktivni spojevi mogu biti otopljeni ili suspendirani u odgovarajućim tekućinama, kao što su masna ulja, tekući parafin, ili tekući polietilen glikoli. Ovim formulacijama se također mogu dodati stabilizatori.
Farmaceutski pripravci koji se također mogu upotrijebiti uključuju tvrde želatinske kapsule. Kao neograničavajući primjer, formulacija aktivnog spoja u lijeku u obliku kapsule za oralno davanje može se davati u dozama jačine 50 i 200 mg (formulacijski kodovi J-011248-AA-00 i J-011248-AA-01, redom) Dvije jačine doza pripravljene su iz istih granula punjenjem tvrdih želatinskih kapsula različitih veličina, veličine 3 za 50 mg kapsulu i veličine 0 za 200 mg kapsulu. Sastav formulacije može biti, primjerice, kako je navedeno u tablici 2.
TABLICA 2
[image]
Kapsule se mogu pakirati u posudu od smeđeg stakla ili plastične boce radi zaštite aktivnog spoja od svjetla. Posude koje sadrže formulaciju aktivnog spoja u kapsuli moraju se čuvati na kontroliranoj sobnoj temperaturi (15-30°C).
Za davanje inhalacijom, spojevi za primjenu u skladu s predloženim izumom prikladno se predaju u obliku aerosolnog raspršivača primjenom pakiranja pod tlakom ili raspršivača i prikladnog pogonskog punjenja, npr. bez ograničenja, diklorodifluormetana, triklorofluormetana, diklorotetra-fluoretana ili ugljikovog dioksida. U slučaju aerosola pod tlakom, jedinica doziranja može se kontrolirati isporukom ventila kako bi se uzela odmjerena količina. Kapsule i patrone od, na primjer, želatine za uporabu u inhaleru ili insuflatoru mogu se formulirati tako da sadrže mješavinu praha spoja i odgovarajuće osnove kao što je laktoza ili škrob.
Spojevi se također mogu formulirati za parenteralno davanje, npr. bolus injekcijom ili neprekidnom infuzijom. Formulacije za injektiranje mogu biti u jediničnom obliku doziranja, npr., u ampulama ili u višedoznim ambalažama, s dodanim konzervansima. Pripravci mogu biti u obliku suspenzija, otopina ili emulzija u uljnim ili vodenim vehiklima, i mogu sadržavati materijale za formuliranje kao što su suspenzijska, stabilizacijska sredstva i/ili sredstva za raspršivanje.
Farmaceutski pripravci za parenteralno davanje mogu uključiti vodene otopine oblika topljivog u vodi, kao što je, bez ograničenja, sol, aktivnog spoja. Dodatno, suspenzije aktivnih spojeva mogu se pripraviti u lipofilnom vehiklu. Prikladni lipofilni vehikli obuhvaćaju masna ulja kao što je sezamovo ulje, estere sintetičkih masnih kiselina kao što je etil oleat i trigliceride, ili materijale kao što su liposomi. Vodene injekcijske suspenzije mogu sadržavati tvari koje povećavaju viskoznost suspenzije, kao što je karboksimetilceluloza, sorbitol ili dekstran. Po izboru, suspenzija također može sadržavati prikladne stabilizatore i/ili sredstva koja povećavaju topljivost spojeva kako bi se omogućilo pripravljanje visoko koncentriranih otopina.
Alternativno, aktivni sastojak prije uporabe može biti u obliku praha radi konstitucije s prikladnim vehiklom, npr. sterilnom, bezpirogenskom vodom.
Spojevi se također mogu formulirati u pripravke za rektalno davanje, kao što su supozitoriji, klistiri sa zadržavanjem, pomoću, npr., uobičajenih osnova za supozitorije kao što je kako maslac ili drugi gliceridi.
Kao dodatak predhodno opisanim formulacijama, spojevi se također mogu formulirati kao pripravci s polaganim otpuštanjem. Takve formulacije dugog djelovanja mogu se davati implantacijom (primjerice, subkutano ili intramuskularno) ili intramuskularnom injekcijom. Spoj iz ovog izuma može se formulirati za taj način davanja s odgovarajućim polimernim ili hidrofobnim materijalima (na primjer, u emulziji s farmakološki prihvatljivim uljem), s ionsko-izmjeničnim smolama, ili kao nedovoljno topljiv derivat kao što je, bez ograničenja, nedovoljno topljiva sol.
Jedan neograničavajući primjer farmaceutskog prijenosnika za hidrofobne spojeve iz izuma je kosolventni sustav koji obuhvaća benzil alkohol, nepolarni surfaktant, organski polimer koji se može miješati s vodom i vodenu fazu kao što je VPD kosolventni sustav. VPD je otopina 3% w/v benzil alkohola, 8% w/v nepolarnog surfaktanta Polysorbate 80 i 65% w/v polietilen glikola 300, pripravljena prema volumenu u apsolutnom etanolu. VPD kosolventni sustav (VPD:D5W)sastoji se od VPD razrijeđenog s 5% dekstroze u vodenoj otopini. Taj kosolventni sustav dobro otapa hidrofobne spojeve i sam proizvodi nisku toksičnost po sustavnom davanju. Naravno, razmjeri takvog kosolventnog sustava mogu se znatno varirati bez narušavanja njegovih svojstava topljivosti i toksičnosti. Nadalje, pojedine se kosolventne komponente mogu mijenjati: na primjer, i drugi nisko-toksični nepolarni surfaktanti mogu se upotrijebiti umjesto Polysorbate 80, veličina udjela polietilen glikola može se varirati, drugi biokompatibilni polimeri mogu nadomjestiti polietilen glikol, npr. polivinil pirolidon, a drugi šećeri ili polisaharidi mogu zamijeniti dekstrozu.
Alternativno, mogu se primijeniti drugi sustavi dostavljanja hidrofobnih farmaceutskih spojeva. Liposomi i emulzije dobro su poznati primjeri dostavnih vehikula ili prijenosnika za hidrofobne lijekove. Uz to, također se mogu primijeniti stanovita organska otapala kao što je dimetilsulfoksid, premda često po cijenu veće toksičnosti.
Dodatno, spojevi se mogu dostaviti uporabom sustava produženog otpuštanja, kao što su polupropusne matrice krutih hidrofobnih polimera koji sadrže terapeutsko sredstvo. Različite tvari s produženim otpuštanjem ustanovljene su i poznate stručnjacima. Kapsule s produženim otpuštanjem mogu, ovisno o njihovoj kemijskoj prirodi, otpuštati spojeve nekoliko tjedana sve do preko 100 dana. Ovisno o kemijskoj prirodi i biološkoj stabilnosti terapeutskog reagensa, mogu se primijeniti dodatne metode stabilizacije proteina.
Ovi farmaceutski pripravci također se mogu sastojati od prikladnih prijenosnika ili ekscipijensa u krutom stanju ili stanju gela. Primjeri takvih prijenosnika ili ekscipijensa uključuju, ali nisu ograničeni na, kalcijev karbonat, kalcijev fosfat, različite šećere, škrobove, derivate celuloze, želatine i polimere kao što su polietilen glikoli.
Mnogi od spojeva koji moduliraju PK iz ovog izuma mogu se pribaviti kao fiziološki prihvatljive soli u kojima iskazani spoj može oblikovati negativno ili pozitivno nabijene vrste. Primjeri soli u kojima spoj oblikuje pozitivno nabijeni dio uključuju, bez ograničenja, kvaterni amonijak (definiran drugdje u ovoj prijavi), soli kao što je klorovodična, sulfat, karbonat, laktat, tartrat, malat, maleat, sukcinat, pri čemu je dušikov atom kvaterne amonijeve skupine dušik iz odabranog spoja iz izuma koji je reagirao s odgovarajućom kiselinom. Soli u kojima spoj iz izuma oblikuje negativno nabijenu vrstu uključuju, bez ograničenja, natrijeve, kalijeve, kalcijeve i magnezijeve soli oblikovane reakcijom karboksilne kiselinske skupine u spoju s odgovarajućom bazom (npr. natrijevim hidroksidom (NaOH), kalijevim hidroksidom (KOH), kalcijevim hidroksidom (Ca(OH)2), itd.).
Farmaceutski pripravci prikladni za primjenu u predloženom izumu uključuju pripravke u kojima su aktivni sastojci sadržani u količini dovoljnoj za postizanje predviđene svrhe, npr., modulacije djelovanja PK ili liječenja ili sprječavanja poremećaja povezanog s PK.
Posebno, terapeutski djelotvorna količina znači količinu spoja djelotvornu za sprječavanje, ublažavanje ili poboljšanje simptoma bolesti ili produženje života pacijenta koji se liječi.
Određivanje terapeutski djelotvorne količine posve spada u doseg stručnjaka, a posebno s obzirom na detaljno objašnjenje koje je ovdje dano.
Za bilo koji spoj koji se rabi u metodama iz izuma, terapeutski djelotvorna količina ili doza može se početno ustanoviti iz ispitivanja stanične kulture. Zatim, doza se može formulirati za primjenu na životinjskim modelima kako bi se postigao cirkulirajući raspon koncentracija koji uključuje IC50 kako je određeno u staničnoj kulturi (tj., koncentracija testnog spoja kojom se postiže pola maksimalne inhibicije djelovanja PK). Takva informacija može se zatim upotrijebiti za točnije određivanje korisnih doza za ljude.
Toksičnost i terapeutska djelotvornost ovdje opisanih spojeva može se odrediti standardnim farmaceutskim procedurama u staničnim kulturama ili eksperimentalnim životinjama, npr., određivanjem IC50 i LD50 (oba su razmatrana u ovoj prijavi na drugom mjestu)za dani spoj. Podaci dobiveni iz tih ispitivanja staničnih kultura i ispitivanja na životinjama mogu se upotrijebiti u formuliranju raspona doza za primjenu na ljudima. Doziranje može varirati ovisno o primijenjenom obliku doziranja i načinu davanja. Točna formulacija, način davanja i doziranje može odabrati pojedini liječnik s obzirom na stanje pacijenta, (vidi npr., Fingl, et al., 1975, u «The Pharmacological Basis of Therapeutics», pogl. 1 str. 1).
Količina doziranja i interval mogu se individualno podesiti kako bi se omogućile razine aktivnih tvari u plazmi dovoljne za održavanje učinaka moduliranja kinaze. Te razine u plazmi odnose se na minimalnu djelotvornu koncentraciju (MEČ). MEČ će varirati za svaki spoj, ali se može ustanoviti iz in vitro podataka, npr., koncentracija potrebne za postizanje 50-90% inhibicije kinaze može se utvrditi primjenom gore opisanih ispitivanja. Doze potrebne za postizanje MEČ ovisiti će o individualnim svojstvima i načinu davanja. Ispitivanja s HPLC ili bioispitivanja mogu se upotrijebiti za određivanje koncentracije u plazmi.
Intervali doziranja također se mogu odrediti pomoću vrijednosti MEČ. Spojevi bi se trebali davati režimom kojim se održava razina u plazmi iznad MEČ 10-90% vremena, posebno između 30-90%, a naročito između 50-90%.
Za sada, terapeutski djelotvorne količine spojeva formule (I)mogu se kretati u rasponu od približno 25 mg/m2 do 1500 mg/m2 dnevno; posebno oko 3 mg/m2/danu. Još povoljnije 50 mg/qm qd do 400 mg/qd.
U slučaju lokalnog davanja ili selektivnog uzimanja, djelotvorna lokalna koncentracija lijeka ne mora biti povezana s koncentracijom u plazmi i mogu se upotrijebiti druge procedure poznate u struci za određivanje točne količine doziranja i intervala.
Količina pripravka koji se daje ovisit će, naravno, o pacijentu kojeg se liječi, ozbiljnosti bolesti, načinu davanja, procjeni liječnika koji tu količinu određuje, itd.
Pripravci mogu, po želji, biti pruženi u paketu ili sredstvu za raspršivanje, kao što je pribor odobren od FDA, koji može sadržavati jednu ili više jediničnih oblika doziranja koji sadrže aktivni sastojak. Paket može na primjer obuhvaćati metalnu ili plastičnu foliju, kao što je blister pakiranje, paket ili sredstvo za raspršivanje mogu biti popraćeni uputama za davanje. Paket ili sredstvo za raspršivanje također mogu biti popraćeni bilješkom povezanom s ambalažom u obliku propisanom od vladinog ureda koji regulira izradu, uporabu ili prodaju farmaceutskih pripravaka, koja bilješka odražava odobrenje od strane ureda o obliku pripravaka ili o humanom ili veterinarskom davanju. Takva bilješka, na primjer, može biti o označavanju odobrenom od strane Uprave SAD za davanje hrane i lijekova (U.S. Food and Drug Administration)za lijekove na recept ili dodatak o odobrenom proizvodu. Pripravci koji obuhvaćaju spoj iz izuma također mogu biti formulirani u sukladnom farmaceutskom prijenosniku, smješteni u prikladnu ambalažu i etiketirani za liječenje naznačenog stanja. Odgovarajući uvjeti naznačeni na etiketi mogu obihvaćati liječenje tumora, inhibiciju angiogeneze, liječenje fibroze, dijabetesa i slično.
Također je jedan aspekt ovog izuma da se ovdje opisani spoj, ili njegova sol ili predlijek, može kombinirati s drugim kemoterapeutskim sredstvima za liječenje gore razmatranih bolesti i poremećaja. Na primjer, spoj, sol ili predlijek iz ovog izuma mogu se kombinirati s alkilirajućim sredstvima kao što je fluoruracil (5-FU)sam ili u daljnjoj kombinaciji s leukovorinom, ili drugim alkilirajućim sredstvima kao što su, bez ograničavanja, drugi analogoni pirimidina kao što su UFT, kapecitabin, gemcitabin i citarabin, alkil sulfonati, npr. busulfan (korišten u liječenju kronične granulocitne leukemije), improsulfan i piposulfan; aziridini, npr. benzodepa, karbokvon, meturedepa i uredepa; etilenimini i metilmelamini, npr. altretamikn, trietilenmelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilolmelamin; i dušikovi muštardi, npr. klorambucil (korišten u liječenju kronične limfocitne leukemije, primarne makroglobulinemije i ne-Hodgkinovih limfoma), ciklofosfamid (korišten u liječenju Hodgkinove bolesti, multiplog mijeloma, neuroblastoma, karcinoma dojke, karcinoma jajnika, karcinoma pluća, Wilmovog tumora i rabdomiosarkoma), estramustin, ifosfamid, novembrihin, prednimustin i uracilni mustard (korišten u liječenju primarne trombocitoze, ne-Hodgkinovih limfoma, Hodgkinove bolesti i karcinoma jajnika); i triazini, npr. dakarbazin (korišten u liječenju sarkoma mekog tkiva).
Spoj, sol ili predlijek iz ovog izuma može se također upotrebljavati u kombinaciji s drugim antimetabolitičkim kemoterapeutskim sredstvima kao što su, bez ograničavanja, analogoni folne kiseline, npr. metoreksat (korišten u liječenju akutne limfocitične leukemije, koriokarcinoma, mycosis fungiodes karcinoma dojke, karcinoma glave i vrata i osteogenih sarkoma)i pteropterin; i analogoni purina kao što su merkaptopurin i tioguanin koji nalaze primjenu u liječenju akutne granulocitne, akutne limfocitne i kronične granulocitne leukemije).
Promišlja se kako bi spoj, sol ili predlijek iz ovog izuma također mogao biti primijenjen u kombinaciji s kemoterapeutskim sredstvima zasnovanim na prirodnim proizvodima kao što su, bez ograničavanja, vinka alkaloidi, npr. vinblastin (korišten u liječenju karcinoma dojke i testisa), vinkristin i vindezin; epipodofilotoksini, npr. etopozid i tenipozid, koji su oba korisni u liječenju karcinoma testisa i Kaposijevog sarkoma; antibiotička kemoterapeutska sredstva, npr. daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, mitomicin (korišten za liječenje karcinoma želuca, cerviksa, kolona, dojke, mjehura i gušterače), daktinomicin, temozolomid, plikamicin, bleomicin (korišten u liječenju karcinoma kože, ezofagusa i genitourinarnog trakta); i enzimatska kemoterapeutska sredstva kao što je L-asparaginaza.
Osim gore navedenog, spoj, sol ili predlijek iz ovog izuma može se također upotrebljavati u kombinaciji s platinskim koordinacijskim kompleksima (cisplatin itd.); supstituiranim ureama kao što je hidroksiurea; derivatima metilhidrazina, npr. prokarbazinom; adrenokortikalnim supresantima, npr. mitotanom, aminoglutetimidom; i hormonima i hormonskim antagonistima kao što su adrenokortikosteroidi (npr. prednizon), progestini (npr. kaproat hidroksiprogesterona); estrogenima (npr. dietilstilbesterolom); antiestrogenima kao što je tamoksifen; androgenima, npr. propionatom testosterona; i inhibitorima aromataze kao što je anastrozol.
Konačno, također se promišlja kako bi kombinacija spoja iz ovog izuma bila djelotvorna u kombinaciji s mitoksantronom ili paklitakselom za liječenje karcinoma oblika čvrstog tumora ili leukemija kao što je, bez ograničavanja, akutna mijelogena (nelimfocitička)leukemija.
Opći sintetički postupak
Sljedeća opća metodologija može se primijeniti za pripravljanje spojeva iz ovog izuma:
Prikladno supstituirani 2-oksindol (l ekviv.), prikladno supstituirani aldehid (1.2 ekviv.)i baza (0.1 ekviv.)miješaju se u otapalu (1-2 ml/mmol 2-oksindola)i smjesa se zatim zagrijava tijekom od oko 2 sata do oko 12 sati. nakon hlađenja, talog koji se oblikuje profiltrira se, ispere hladnim etanolom ili eterom te isušuje u vakuumu kako bi dao kruti produkt. Ako se ne oblikuje talog, reakcijska smjesa se koncentrira i ostatak se triturira s diklorometanom/eterom, nastala krutina se skupi filtriranjem i zatim isuši. Produkt se dalje može po želji pročistiti kromatografijom.
Baza može biti organska ili anorganska baza. Ako se upotrebljava anorganska baza, poželjno je da to bude dušikova baza. Primjeri organskih dušikovih baza uključuju, ali nisu na njih ograničene, diizopropilamin, trimetilamin, trietilamin, anilin, piridin, 1,8-diazabiciklo[5.4.1]undek-7-en, pirolidin i piperidin.
Primjeri anorganskih baza su, bez ograničavanja, amonijak, hidroksidi alkalijskih metala ili zemnoalkalijskih metala, fosfati, karbonati, bikarbonati, bisulfati i amidi. Alkalijski metali uključuju litij, natrij i kalij dok zemnoalkalijski metali uključuju kalcij, magnezij i barij.
U trenutačno poželjnom ostvarenju ovog izuma, kada je otapalo protično otapalo, poput vode ili alkohola, baza je anorganska baza alkalijskog metala ili zemnoalkalijskog metala, naročito hidroksid alkalijskog metala ili zemnoalkalijskog metala.
Stručnjaku će biti jasno, na temelju znanih općih načela organske sinteze i na temelju ovdje izloženog, koja će baza biti najprikladnija za razmatranu reakciju.
Otapalo u kojem se izvodi reakcija može biti protično ili aprotično otapalo, poželjno je protično otapalo. «Protično otapalo» je otapalo koje ima vodikov(e)atom(e)kovalentno vezan(e)s atomima kisika ili dušika, što čini vodikove atome značajno kiselinskima i time sposobnima da se vežu s otopljenom tvari preko vodikove veze. Primjeri protičnih otapala obuhvaćaju, bez ograničavanja, vodu i alkohole.
«Aprotično otapalo» može biti polarno ili nepolarno ali, u bilo kojem slučaju, ne sadrži kiselinske vodike pa stoga nije sposobno za vezanje s otopljenom tvari preko vodikove veze. Primjeri, bez ograničavanja, nepolarnih aprotičnih otapala jesu pentan, heksan, benzen, toluen, metilen klorid i ugljik tetraklorid. Primjeri polarnih aprotičnih otapala su kloroform, tetrahidrofuran, dimetilsulfoksid i dimet ilformamid.
U trenutačno poželjnom ostvarenju ovog izuma, otapalo je protično otapalo, ponajprije voda ili alkohol kao što je etanol.
Reakcija se izvodi na temperaturama višima od sobne temperature. Temperatura općenito iznosi od oko 30° C do oko 150° C, poželjno oko 80° C do oko 100° C, naročito poželjno od oko 75° C do oko 85° C, što je otprilike točka ključanja etanola. Pod «oko» podrazumijeva se da je raspon temperature poželjno unutar 10 Celzijevih stupnjeva od naznačene temperature, naročito poželjno unutar 5 Celzijevih stupnjeva od naznačene temperature i, nadasve poželjno, unutar 2 Celzijeva stupnja od naznačene temperature. Tako, na primjer, pod «oko 75° C» misli se 75° C ± 10° C, poželjno 75° C ± 5° C i nadasve poželjno 75° C ± 2° C.
2-oksindoli i aldehidi mogu se izravno sintetizirati primjenom tehnika dobro poznatih u kemijskoj struci. Osobe vične struci imat će u vidu da su dostupne i druge sintetičke metode za oblikovanje spojeva iz izuma te da se ono što slijedi pruža u svojstvu primjera, a ne ograničenja.
PRIMJERI
Sljedeći postupci pripravljanja i primjeri dani su kako bi se stručnjacima omogućilo da jasnije razumiju i praktično provedu podneseni izum. Ne treba ih shvatiti kao da ograničavaju doseg izuma, nego samo kao za njega ilustrativne i reprezentativne.
Sintetički primjeri
Metoda A: Formilacija pirola
POC13 (1.1 ekviv.) doda se kap po kap dimetilformamidu (3 ekviv.) na -10° C, poslije čega se doda prikladni pirol otopljen u dimetilformamidu. Nakon miješanja tijekom dva sata, reakcijska smjesa razrijedi se s H2O i zaluži do pH 11 pomoću 10 N KOH. Stvoreni talog skupi se filtriranjem, ispere s H2O i isuši u vakuumskoj peći kako bi dao željeni aldehid.
Metoda B: Saponifikacija estera pirolkarboksilne kiseline
Smjesa estera pirolkarboksilne kiseline i KOH (2-4 ekviv.) U EtOH refluksira se sve dok tankoslojna kromatografija (TLC)ne pokaže da je reakcija završena. Ohlađena reakcijska smjesa zakiseli se do pH 3 pomoću l N HCl. Stvoreni talog skupi se filtriranjem, ispere s H2O i isuši u vakuumskoj peći kako bi dao željenu pirolkarboksilnu kiselinu.
Metoda C: Amidacija
Promiješanoj otopini pirolkarboksilne kiseline otopljene u dimetilformamidu (0.3 M) doda se l-etil-3-(3-dimetilamino-propil)karbodiimid (1.2.), 1-hidroksibenzotriazol (1.2 ekviv.) i trietilamin (2 ekviv.). Doda se prikladni amin (l ekviv.)i reakcija se miješa dok TLC ne pokaže da je završena. Etil acetat zatim se doda reakcijskoj smjesi i otopina ispere zasićenim NaHCO3 i rasolom (uz poseban dodatak soli), isuši nad bezvodnim MgSO4 i koncentrira kako bi se dobio željeni amid.
Metoda D: Kondenzacija aldehida i oksindola koji sadrže supstituente karboksilne kiseline
Smjesa oksindola (1 ekvivalent), 1 ekvivalenta aldehida i 1-3 ekvivalenta piperidina (ili pirolidina) U etanolu (0.4 M)miješa se na 90-100°C dok TLC ne pokaže da je reakcija završena. Smjesa se zatim koncentrira i talog se zakiseli s 2N HCl. Stvoreni talog ispere se s s H2O i EtOH te isuši u vakuumskoj peći kako bi dao produkt.
Metoda D: Kondenzacija aldehida i oksindola koji ne sadrže supstituente karboksilne kiseline
Smjesa oksindola (1 ekvivalent), 1 ekvivalenta aldehida i 1-3 ekvivalenta piperidina (ili pirolidina) U etanolu (0.4 M)miješa se na 90-100°C dok TLC ne pokaže da je reakcija završena. Smjesa se zatim ohladi do sobne temperature, koncentrira i nastala krutina se skupi vakuumskim filtriranjem, ispere s etanolom te isuši kako bi se dobio produkt. Ako se hlađenjem reakcijske smjese ne oblikuje talog, smjesa se koncentrira i pročisti kolonskom kromatografijom.
C. Primjeri sinteza oksindola
Sljedeći primjeri sinteze reprezentativnih oksindola ne trebaju biti shvaćeni kao da na bilo koji način ograničavaju doseg ovog izuma. Na temelju sljedećeg izlaganja, onima koji su vični struci postat će očiti i alternativni putevi do prikazanih oksindola kao i drugi oksindoli koji se mogu upotrijebiti za pripravljanje spojeva iz ovog izuma. Takve sinteze i oksindoli pripadaju dosegu i duhu ovog izuma.
5-amino-2-oksindol
5-nitro-2-oksindol (6.3 g)hidrogenirao se u metanolu preko 10%-tnog paladija na ugljiku, dajući tako 3.0 g (60% donos)spoja iz naslova kao bijele krutine.
5-bromo-2-oksindol
2-oksindol (1.3 g) U 20 mL acetonitrila ohlađeno je na -10°C i 2.0 g N-bromosukcinimida polagano je dodano uz miješanje. Reakcija se miješala 1 sat na -10°C te 2 sata na 0°C. Talog je skupljen, ispran vodom i isušen, dajući tako 1.9 g (90% donos)spoja iz naslova.
4-metil-2-oksindol
Dietil oksalat (30 mL) u 20 mL suhog etera dodan je uz miješanje k 19 g kalij etoksida suspendiranog u 50 mL suhog etera. Smjesa je ohlađena u ledenoj kupelji i polagano je dodano 20 mL 3-nitro-o-ksilena u 20 mL suhog etera. Gusta tamnocrvena smjesa zagrijavana je do refluksa tijekom 0.5 sata, koncentrirana u tamnocrvenu krutinu i obrađivana pomoću 10%-tnog natrij hidroksida sve dok se gotovo sva krutina nije otopila. Tamnocrvena smjesa obrađivana je pomoću 30%-tnog vodikova peroksida dok se crvena boja nije promijenila u žutu. Smjesa je obrađivana naizmjenično s 10%-tnim natrij hidroksidom i 30%-tnim vodikovim peroksidom sve dok se tamnocrvena boja nije izgubila. Krutina je profiltrirana i filtrat je zakiseljen s 6N klorovodične kiseline. Nastali talog skupljen je vakuumskim filtriranjem, ispran vodom i isušen pod vakuumom, dobivajući tako 9.8 g (45% donos)2-metil-6-nitrofeniloctene kiseline kao sivobijele krutine. Krutina se hidrogenirala u metanolu preko 10%-tnog paladija na ugljiku čime je dobiveno 9.04 g spoja iz naslova kao bijele krutine.
7-bromo-5-kloro-2-oksindol
5-kloro-2-oksindol (16.8 g) i 19.6 g N-bromosukcinimida suspendirani su u 140 mL acetonitrila i refluksirani 3 sata. Tankoslojna kromatografija (silicij, etil acetat) uz 2 sata refluksa pokazala je 5-kloro-2-oksindol ili N-bromosukcinimid (Rf 0.8), produkt (Rf 0.85) i drugi produkt (Rf 0.9)čiji se omjeri nisu promijenili poslije još jednog sata refluksa. Smjesa je ohlađena na 10°C, talog je skupljen vakuumskim filtriranjem, ispran s 25 mL etanola i isušen isisavanjem tijekom 20 minuta u lijevku, čime je dobiveno 14.1 g mokrog produkta (56% donos). Krutina je supsendirana u 200 mL denaturiranog etanola te isprana muljem miješanjem i refluksiranjem 10 minuta. Smjesa je ohlađena u ledenoj kupelji na 10°C. Kruti produkt skupljen je vakuumskim filtriranjem, ispran s 25 mL etanola i isušen pod vakuumom na 40°C, dobivajući tako 12.7 g (51% donos)7-bromo-5-kloro-2-oksindola.
5-fluoro-2-oksindol
5-fluoroizatin (8.2 g) otopljen je u 50 mL hidrazin hidrata i refluksiran 1 sat. Reakcijska smjesa tada je izlivena u ledenu vodu. Talog je filtriran, ispran vodom i isušen u vakuumskoj pećnici kako bi se dobio spoj iz naslova.
5-nitro-2-oksindol
2-oksindol (6.5 g) otopljen je u 25 mL koncentrirane sumporne kiseline i smjesa je održavana na -10°C do -15°C, dok je 2.1 mL isparavajuče dušične kiseline dodavano kap po kap.
Nakon dodavanja dušične kiseline reakcijska smjesa miješana je na 0°C kroz 0.5 sata i izlivena u ledenu vodu. Talog je skupljen filtriranjem, ispran vodom i kristaliziran iz 50%-tne octene kiseline. Kristalni produkt tada je filtriran, ispran vodom i isušen u vakuumu, dajući tako 6.3 g (70%)5-nitro-2-oksindola.
5-aminosulfonil-2-oksindol
13.3 g 2-oksindola polagano je dodano u 100 mL tikvicu napunjenoj s 27 mL klorosulfonske kiseline. Temperatura reakcije održavana je ispod 30°C tijekom dodavanja. Nakon dodavanja, reakcijska smjesa miješana je na sobnoj temperaturi 1.5 sat, zagrijavana do 68°C tijekom 1 sata, ohlađena i izlivena u vodu. Talog je ispran s vodom i isušen u vakuumskoj pećnici kako bi dao 11.0 g 5-klorosulfonil-2-oksindola (50% donos)koji je upotrijebljen bez daljnjeg pročišćavanja.
5-klorosulfonil-2-oksindol (2.1 g) dodan je u 10 mL amonijevog hidroksida u 10 mL etanola i miješan preko noći na sobnoj temperaturi. Smjesa je koncentrirana i krutina skupljena vakuumskim filtriranjem, dajući tako 0.4 g (20% donos)spoja iz naslova kao sivobijele krutine.
5-izopropilaminosulfonil-2-oksindol
13.3 g 2-oksindola polagano je dodano u 100 mL tikvicu napunjenoj s 27 mL klorosulfonske kiseline. Temperatura reakcije održavana je ispod 30°C tijekom dodavanja. Reakcijska smjesa miješana je na sobnoj temperaturi 1.5 sat, zagrijavana do 68°C tijekom 1 sata, ohlađena i izlivena u vodu. Nastali talog je profiltriran, ispran s vodom i isušen u vakuumskoj pećnici kako bi dao 11.0 g 5-klorosulfonil-2-oksindola (50% donos)koji je upotrijebljen bez daljnjeg pročišćavanja.
Suspenzija 3 g 5-klorosulfonil-2-oksindola, 1.15 g izopropilamina i 1.2 mL piridina u 50 mL diklorometana miješana je na sobnoj temperaturi 4 sata, za koje vrijeme se oblikovala bijela krutina. Krutina je skupljena vakuumskom filtracijom, isprana muljem vrućim etanolom, ohlađena, skupljena vakuumskom filtracijom i isušena pod vakuumom na 40°C preko noći, čime je dala 1.5 g (45%)5-izopropilaminosulfonil-2-oksindola.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.69 (s, br, 1H, NH), 7.63 (dd, J=2 i 8 Hz, 1H), 7.59 (d, J=2 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 7 Hz, 1H, NH-SO2-), 6.93 (d, J=8 Hz, 1H), 3.57 (s, 2H), 3.14-3.23 (m, 1H, CH-(CH3)2), 0.94 (d, J= 7 Hz, 6H, 2xCH3).
5-fenilaminosulfonil-2-oksindol
Suspenzija 5-klorosulfonil-2-oksindola (1.62 g, 7 mmol), anilina (0.782 mL, 8.4 mmol) i piridina (1 mL) u diklorometanu (20 ml)miješana je na sobnoj temperaturi 4 sata. Reakcijska smjesa razrijeđena je etil acetatom (300 mL) i zakiseljena s 1N klorovodične kiseline (16 mL). Organski sloj je ispran natrijevim bikarbonatom i rasolom, isušen i koncentriran. Ostatak je ispran etanolom (3 mL) i zatim kromatografiran na silikagelu eluirajući s metanolom/diklorometanom 1:9, čime je dobiven 5-fenilaminosulfonil-2-oksindol.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.71 (s, br, 1H, NH), 10.10 (s, br, 1H, NH), 7.57-7.61 (m, 2H), 7.17-7.22 (m, 2H), 7.06-7.09 (m, 2H), 6.97-7.0 (m, 1H), 6.88 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.52 (s, 2H).
Piridin-3-ilamid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline
Otopina 5-klorosulfonil-2-oksindola (3 g) i 3-aminopiridina (1.46 g) u piridinu (15 mL)miješana je na sobnoj temperaturi preko noći, za koje vrijeme je bila prisutna smeđa krutina. krutina je profiltrirana, isprana etanolom i isušena pod vakuumom, čime je dala 1.4 g (38%)piridin-3-ilamida 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.74 (s, 1H, NH), 10.39 (s, 1H, SO2NH), 8.27-8.28 (d, 1H), 8.21-8.23 (m, 1H), 7.59-7.62 (m, 2H), 7.44-7.68 (m, 1H), 7.24-7.28 (m, 1H), 6.69-6.71 (d, 1H), 3.54 (s, 2H).
5-Feniloksindol
5-bromo-2-oksindol (5 g, 23.5 mmol) otopljen je u 110 mL toluena i 110 mL etanola uz miješanje i malo topline. Dodan je tetrakis(trifenilfosfin)paladij(O)(1.9 g, 1.6 mmol), a zatim 40 mL (80 mmol) 2M vodenog natrij karbonata. Toj smjesi dodana je benzen borna kiselina (3.7 g, 30.6 mmol) i smjesa je zagrijavana na 100°C u uljnoj kupelji 12 sati. Reakcija je ohlađena, razrijeđena etil acetatom (500 mL), isprana zasićenim natrij bikarbonatom (200 mL), vodom (200 mL), 1N HCl (200 mL) i rasolom (200 mL). Organski sloj je isušen preko magnezij sulfata i koncentriran čime je dobivena smeđa krutina. trituracija diklorometanom dala je 3.8 g (77%)5-fenil-2-oksindola kao žućkastosmeđu krutinu.
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.4 (br s, 1H, NH), 7.57 (dd, J= 1.8 i 7.2 Hz, 1H), 7.5 do 7.35 (m, 5H), 7.29 (m, 1H), 6.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 209 [M+].
Na sličan način, nogu se pripraviti sljedeći oksindoli:
6-(3,5-diklorofenil)-1,3-dihidroindol-2-on
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.46 (br, 1H, NH), 7.64 (d, J=1.8 Hz, 2H), 7.57 (m, 1H)r 7.27 (m, 2H), 7.05 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 3.5 (s, 2H).
MS-EI m/z 277/279 [M]+.
6-(4-butilfenil)-1,3-dihidroindol-2-on
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.39 (s, 1H, NH), 7.49 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.25 (d, J= 8 Hz, 3H), 7.17 (dd, J= 1.5 i 7.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 3.48 (s, 2H, CH2CO), 2.60 (t, J= 7.5 Hz, 2Hz, CH2CH3), 1.57 (m, 2H, CH2), 1.32 (m, 2H, CH2), 0.9 (t, J = 7.5 Hz, 3H, CH3).
6-(5-izopropil-2-metoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.29 (br s, 1H, NH), 7.16 -7.21 (m, 2H), 7.08 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.97 - 7.01 (m, 2H), 6.89 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H, OCH3), 3.47 (s, 2H, CH2CO), 2.86 (m, 1H, CH(CH3)2), 1-19 (d, J= 6.8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 281 [M]+.
6-(4-etilfenil)-1,3-dihidroindol-2-on
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) 5 10.39 (br s, 1H, NH), 7.50 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.28 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.17 (dd, J= 1.6 & 7.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.48 (s, 2H, CH2CO), 2.63 (q, J= 7.6 Hz, 2H, CH2CH3), 1.20 (t, J= 7.6 Hz, 3H, CH2CH3)
MS-EI m/z 237 [M]+.
6-(3-izopropilfenil)-1,3-dihidroindol-2-on
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.37 (br s, 1H, NH), 7.43 (m, 1H), 7.35-7.39 (m, 1H), 7.17 - 7.27 (m, 3H), 7.01 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 3.49 (s, 2H, CH2CO), 2.95 (m, 1H, CH(CH3)2), 1.24 (d, J = 6.8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 251 [M]+.
6-(2,4-dimetoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.28 (br s, 1H, NH), 7.17 (m, 2H), 6.93 (dd, J= 1.6 & 7.6 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.63 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.58 (d, J= 2.4 & 8.5 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H, OCH3), 3.74 (s, 3H, OCH3), 3.45 (s, 2H, CH2CO).
MS-EI m/z 269 [M]+.
6-piridin-3-il-1,3-dihidroindol-2-on
1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.51 (s, 1H, NH), 8.81 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.55 (dd, J = 1.8 i 5.7 Hz, 1H), 8 (m, 1H), 7.45 (dd, J= 5.7 i 9.3 Hz, 1H), 7.3 (m, 2H), 7.05 (s, 1H), 3.51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 210 [M]+.
(3-kloro-4-etoksifenil)-amid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-4-karboksilne kiseline
Otopini 4-karboksi-2-oksindola (200 mg, 1.13 mmol)i 3-kloro-4-metoksifenilamina (178 mg, 1.13 mmol) u dimetilformamidu (15 mL) na sobnoj temperaturi dodan je benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonij heksafluorfosfat (BOP reagens, 997 mg, 2.26 mmol), a zatim 4-dimetilaminopiridin (206 mg, 1.69 mmol). Smjesa je miješana na sobnoj temperaturi 72 sata. Reakcija je zatim razrijeđena etil acetatom (300 mL), isprana zasićenim natrij bikarbonatom (100 mL), vodom (3x200 mL) i rasolom. Potom je isušena preko magnezij sulfata i koncentrirana. Talog je trituriran etil acetatom čime je dobiven (3-kloro-4-metoksifenil)-amid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-4-karboksilne kiseline kao ružičasta krutina.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.50 (s, br, 1H, NH), 10.12 (s, br, 1H, NH), 7.9 (s, J= 2.5 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 2.5 & 9Hz, 1H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J= 9 Hz, 1H), 6.98 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H, OCH3), 3.69 (s, 2H, CH2).
MS-EI m/z 316 [M]+.
4-karboksi-2-oksindol
Otopina trimetilsilildiazometana u heksanu (2M) dodana je kap po kap otopini 2.01 g 2-kloro-3-karboksi-nitrobenzena u 20 mL metanola na sobnoj temperaturi sve dok se nije prestao daljnji razvitak plina. Zatim je dodana octena kiselina kako bi se uklonio višak trimetilsilildiazometana. Reakcijska smjesa uparena je pod vakuumom i talog je isušen u peći preko noći. Dobiveni 2-kloro-3-metoksikarbonilnitrobenzen bio je dostatno čist za sljedeću reakciju.
Dimetil malonat (6.0 mL) dodan je 1edeno hladnoj suspenziji 2.1 natrij hidrida u 15 mL DMSO. Reakcijska smjesa miješana je na 100°C 1 sat i zatim ohlađena na sobnu temperaturu. 2-kloro-3-metoksikarbonilnitrobenzen (2.15 g) dodan je u jednom obroku i smjesa je zagrijavana na 100°C tijekom 1.5 sata. Zatim je reakcijska smjesa ohlađena na sobnu temperaturu, izlivena u ledenu vodu, zakiseljena do pH 5 i ekstrahirana s etil acetatom. Organski sloj ispran je rasolom, isušen preko bezvodnog natrij sulfata i koncentriran, čime je dobiveno 3.0 g dimetil 2-metoksikarbonil-6-nitrofenil-malonata.
Dimetil 2-metoksikarbonil-6-nitrofenilmalonat (3.0 g) refluksiran je u 50 mL 6 N klorovodične kiseline preko noći. Smjesa je koncentrirana do suhoće, dodano je 20 mL etanola i 1.1 g kositar(II)klorida te je smjesa refluksirana 2 sata. Smjesa je profiltrirana kroz dijatomejsku zemlju, koncentrirana i kromatografirana na silikagelu uz uporabu etil acetatiheksan:octene kiseline kao eluensa čime je dobiveno 0.65 g (37%)4-karboksi-2-oksindola kao bijele krutine.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12.96 (s, br, 1H, COOH), 10.74 (s, br, 1H, NH), 7.53 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.39 (t, J= 8 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 8 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H).
D. Sinteza pirolom supstituiranih 2-indolinona
Primjer 1
4-metil-5-(2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilna kiselina
Etil ester 4-metil-2-pirolkarboksilne kiseline (tržišno dostupan)formiliran je primjenom metode A kako bi se dobio (73%)etil ester 5-formil-4-metil-2-pirolkarboksilne kiseline. Taj je zatim hidroliziran primjenom metode B kako bi se dobila 5-formil-4-metil-1H-pirol-2-karboksilna kiselina (58%).
Okisndol (133 mg, 1 mmol) kondenziran je s 5-formil-4-metil-1H-pirol-2-karboksilnom kiselinom (153 mg)primjenom metode D, dajući time 268 mg (100%) naslovnog spoja kao narančastocrvene krutine.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.84 (s, br, 1H, NH), 12.84 (s, br, 1H, COOH), 10.98 (s, br, 1H, NH), 7.82 (s, J= 7.5 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H, H-vinil), 7.18 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H, CH3).
MS(negativni mod)m/z 266.8 [M-1]+.
Primjer 2.
4-metil-5-(1-metil-2-okso-l,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilna kiselina
1-metil-1,3-dihidroindol-2-on (147 mg, l mmol) kondenziran je s 5-formil-4-metil-1H-pirol-2-karboksilnom kiselinom (153 mg)primjenom metode D kako bi se dobilo 250 mg (86%) naslovnog spoja.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.82 (s, br, 1H, NH), 12.88 (s, br, 1H, COOH), 10.98 (s, br, 1H, NH), 7.82 (s, J= 7.5 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H, H-vinil), 7.18 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.01 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H, CH3).
MS m/z 283.0 [M+1]+.
Primjer 3.
Metil ester 4-metil-5-(2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
Oksindol (105 mg, 0.79 mmol) kondenziran je s metil esterom 5-formil-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (110 mg, 0.67 mmol)primjenom metode E kako bi se dobilo 153.2 mg (81%) naslovnog spoja.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.98 (s, br, 1H, NH), 10.97 (s, br, 1H, NH), 7.82 (s, J= 7.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H, H-vinil), 7.2 (dt, J = 1.2 & 7.7 Hz, 1H), 7.01 (dt, J = 1.2, 7.7 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 2 Hz, 1H).
MS(ES)m/z 283 [M++1].
Primjer 4.
Etil ester 5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
5-kloro-1,3-dihidroindol-2-on (2.22 g, 13.2 mmol) kondenziran je s etil esterom 5-formil-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (2.43 g)primjenom metode E kako bi se dobilo 4.1 g (94%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.95 (s, br, 1H, NH), 7.98 (d, J= 2.2 Hz, 1H, H-4), 7.78 (s, 1H, H-vinil), 7.18 (dd, J= 2.2 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J= 8.3 Hz, 1H, H-7), 7.34 (d, J = 1.8 Hz, 1H, H-31), 4.27 (q, J= 7.2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.33 (s, 3H, CH3), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 330 [M]+.
Primjer 5.
5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4-metil-1H-pirol-2-karboksilna kiselina
Smjesa etil estera 5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (1.3 g, 4 mmol) i kalijevog hidroksida u metanolu (25 mL) i etanola (25 mL) zagrijavala se do refluksa preko noći. Netopljivi materijali uklonjeni su filtracijom, a smjesa neutralizirana s 6N klorovodičnom kiselinom kako bi se dobilo 0.876 g (70%) naslovnog spoja.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.80 (s, br, 1H, NH), 12.90 (s, br, 1H, COOH), 11.06 (s, br, 1H, NH), 8.02 (d, J= 1.8 Hz, 1H, H-4), 7.81 (s, 1H, H-vinil), 7.20 (dd, J = 1.8 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.89 (q, J= 8.3 Hz, 1H, H-7), 6.72 (d, J = 1.8 Hz, 1H, H-3'), 2.35 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 302 [M]+.
Primjer 6.
(3-pirolidin-1-il-propil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.16 g, 0.76 mmol) kondenziran je S(3-pirolidin-1-il-propil)amidom 5-formil-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (0.2 g, pripravljeno metodom C) kako bi se dobilo 60 mg (17%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 11.02 (s, br, 1H, NH), 8.42 (t, J= 5.8 Hz, 1H, CONHCH2), 8.12 (d, J = 1.8 Hz, 1H, H-4), 7.78 (s, 1H, H-vinil), 7.30 (dd, J= 1.8 & 8.4 Hz, 1H, H-6), 6.82 (d, J= 8.4 Hz, 1H, H-7), 6.77 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-31), 3.22-3.31 (m, 2H, CH2), 2.38-2.43 (m, 6H, 3xCH2), 2.35 (s, 3H, CH3), 1.62-1.71 (m, 6H, 3xCH2).
MS-EI m/z 456 i 458 [M+-1 i M+-2].
Primjer 7.
(3-dietilamino-propil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.16 g, 0.76 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-4-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (0.2 g, pripravljeno metodom C) kako bi se dobilo 30 mg (8%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 11.02 (s, br, 1H, NH), 8.40 (m, 1H, CONHCH2), 8.12 (d, J = 1.5 Hz, 1H, H-4), 7.78 (s, 1H, H-vinil), 7.30 (dd, J= 1.5 & 8.2 Hz, 1H, H-6), 6.82 (d, J= 8.2 Hz, 1H, H-7), 6.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-31)f 3.23 (m, 2H, CH2), 2.38-2.45 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.35 (s, 3H, CH3), 1.61 (m, 2H' CH2), 0.93 (t, J = 7.1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 i 460 [M+-1 i M++2].
Primjer 8.
(2-dietilaminoetil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (212 mg, l mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (pripravljeno iz etil pirol-2-karboksilata metodom A, B, a zatim C) kako bi se dobilo 162 mg (38%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.53 (s, br, 1H, NH), 11.06 (s, br, 1H, NH), 8.37 (t, 1H, CONHCH2), 7.89 (m, 2H), 7.32 (dd, J= 2.0 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.80-6.84 (m, 2H), 3.3 (m, 2H, CH2), 2.45-2.55 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2), 0.95 (t, J= 7.2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 430 i 432 [M+-1 i M++1].
Primjer 9.
(2-dietilaminoetil)amid 5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (209 mg, l mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 182 mg (42%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 5 13.56 (s, br, 1H, NH), 11.06 (s, br, 1H, NH), 8.36 (t, 1H, CONHCH2), 7.77 (s, 1H, H-vinil), 7.73 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.46 (m, 2H), 7.32 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 6.96 (m, 1H), 6.80 (m, 1H), 3.31-3.32 (m, 2H, CH2), 2.46-2.53 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2), 0.96 (t, J= 6.9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 428 [M+].
Primjer 10.
(2-dietilaminoetil)-metil-amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-ltf-pirol-2-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (212 mg, l mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)metilamidom 5-formil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 246 mg (55%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.54 (s, br, 1H, NH), 11.06 (s, br, 1H, NH), 7.90 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 1.8 & 8.4 Hz, 1H), 6.82-6.85 (m, 3H), 3.55 (s, br, 2H, CH2), 3.25 (s, br, 3H, NCtf3), 2.57 (t, J= 6.5 Hz, 2H, CH2), 2.45 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 0.91 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 444 i 446 [M+-1 i M++1].
Primjer 11.
(2-dietilaminoetil)metilamid 5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3--ilidenmetil)-lff-pirol-2-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (209 mg, l mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)metilamidom 5-formil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 277 mg (63%) naslovnog spoja.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.58 (s, br, 1H, NH), 11.04 (s, br, 1H, NH), 7.78 (s, 1H, H-vinil), 7.7.3 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.46 (m, 2H), 7.33-7.36 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 6.84 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 3.55 (s, br, 2H, CH2), 3.25 (s, br, 3H, NCH3), 2.58 (t, 2H, CH2), 2.44 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 0.92 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
Primjer 12.
(3-dietilaminopropil)amid 3-metil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
Oksindol (66.5 mg, 0.5 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (pripravljeno iz etil-estera 3-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline metodom B, a zatim C) kako bi se dobilo 39 mg (21%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.34 (s, br, 1H, NH), 10.88 (s, br, 1H, NH), 7.62-7.67 (m, 3H), 7.17 (m, 1H), 6.99 (m, 1H), 6.87 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.63 (d, J = l Hz, 1H), 3.26-3.32 (m, 2H, CH2), 2.41-2.48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.29 (s, 3H, CH3), 1.63 (m, 2H, CH2), 0.93 (t, J = 7.2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 380 [M+] .
Primjer 13.
(3-dietilamino-propil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (106 mg, 0.5 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 35 mg (15%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.35 (s, br, 1H, NH), 11.00 (s, br, 1H, NH), 7.89 (d, J = 1.9 Hz, 1H, H-4), 7.80 (s, 1H, H-vinil), 7.74 (t, J= 5.3 Hz, 1H, CONHCH2), 7.31 (dd, J= 1.9 & 8.4 Hz, 1H, H-6), 6.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H, H-7), 6.63 (s, 1H, H-31), 3.26 (m, 2H, CH2), 2.41-2.48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.29 (s, 3H, CH3), 1.63 (m, 2H, CH2), 0.93 (t, J = 7.1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2)
MS-EI m/z 458 i 460 [M+-1 i M++1].
Primjer 14.
(3-dietilaminopropil)amid 3-metil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (105 mg, 0.5 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 67.8 (30%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.37 (s, br, 1H, NH), 11.02 (s, br, 1H, NH), 7.23-7.73 (m, UH), 3.29 (m, 2H, CH2), 2.41-2.48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.29 (s, 3H, CH3), 1.64 (m, 2H, CH2), 0.94 (t, J = 7.0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 456 [M+].
Primjer 15.
(3-dietilamino-propil)amid 5-(5-metoksi-2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
5-metoksi-1,3-dihidroindol-2-on (82.5 mg, 0.5 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 80 mg (39%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.45 (s, br, 1H, NH), 10.70 (s, br, 1H, NH), 7.68-7.70 (m, 2H), 7.32 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.72-6.79 (m, 2H), 6.60 (s, 1H), 3.73 (s, 3H, OCH3), 3.28 (m, 2H, CH2), 2.41-2.48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.29 (s, 3H, CH3), 1.63 (m, 2H, CH2), 0.93 (t, J = 7.0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 410 [M+].
Primjer 16.
(3-dietilamino-propil)amid 5-(6-metoksi-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
6-metoksi-1,3-dihidroindol-2-on (82.5 mg, 0.5 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 63 mg (31%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.22 (s, br, 1H, NH), 10.86 (s, br, 1H, NH), 7.39-7.63 i 6.37-6.55 (m, 6H), 3.73 (s, 3H, OCH3), 3.3 (m, 2H, CH2), 2.45 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.28 (s, 3H, CH3), 1.63 (m, 2H, CH2), 0.93 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 410 [M+].
Primjer 17.
(2-dietilamino-etil)amid 3-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline
Etil-ester 4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline (May, Donald A.; Lash, Timothy D.; J. Org. Chem., 1992, 57:18, 4820-4828)formiliran je primjenom metode A, a zatim B kako bi se dobila 3-formil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilna kiselina.
5-bromo-l,3-dihidroindol-2-on (1.43 g, 6.8 mmol) kondenziran je S(2-dietilamino-etil)amidom 3-formil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 2.2 g (67%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.47 (s, 1H, NH), 11.0 (s, 1H, NH), 8.0 (d, 1H, NH), 7.70 (s, 1H, CH), 7.28 (dd, J = 2.1 i 8.2 Hz, 1H, ArH), 7.16 (m, 1H, ArH), 6.8 (d, J= 8.3 Hz, 1H, ArH), 3.3 (s, 2H, CONH), 2.5 (m, 6H, 3xNCH2), 2.78 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1.74 (br, s, 4H, CH2CH2CH2CH2), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 i 486 [M+-1 i M++1].
Primjer 18.
(3-dietilamino-propil)amid 3-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (20 mg, 0.1 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 3-formil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 33 mg (46%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.9 (s, 1H, NH), 8.0 (m, 1H, NH), 7.68 (m, 1H, ArH), 7.4 (m, 1H, ArH), 7.29 (d, J = l. 9 i 8.5 Hz, 1H, ArH), 6.8 (d, J = 8 Hz, 1H, ArH), 2.7 (br m, 4H, 2xNCH2), 2.4 (m, 8H, 4xNCH2)/ 1.7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1-6 (br m, 2H, CH2CH2CH2), 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 499 i 501 [M+ i M++2].
Primjer 19.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 3-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (80 mg, 0.4 mmol) kondenziran-je S(3-pirolidin-1-ilpropil)amidom 3-formil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline (120 mg) kako bi se dobilo 43 mg (22%) naslovnog spoja kao smeđe-narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.4 (s, 1H, NH), 10.9 (s, 1H, NH), 8.0 (m, 1H, NH), 7.69 (m, 1H, ArH), 7.49 (m, 1H, ArH), 7.28 (d, J = 1.7 i 7.8 Hz, 1H, ArH), 6.8 (d, J= 8 Hz, 1H, ArH), 3.3 (br m, 2H, 2xNCH2), 2.8 (m, 4H, 2xpirolCH2), 2.5 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1.6 (br m, 8H, 2xpirolCH2CH2, CH2CH2CH2 i CONHCH2).
MS-EI m/z 497 i 499 [M+ i M++2].
Primjer 20.
(2-dietilaminoetil)amid 3-(2-okso-6-piridin-3-il-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline
6-piridin-3-il-1,3-dihidroindol-2-on (60 mg, 0.4 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 3-formil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline (80 mg) kako bi se dobilo 50 mg (38%) naslovnog spoja kao crvenkaste krutine.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.4 (s, 1H, NH), 11 (s, 1H, NK), 8.9 (d, 1H, NH), 8.7 (dd, 1H, ArH), 8.1 (dd, 1H, ArH), 7.9 (d, 1H, ArH), 7.6 (s, 1H, C H), 7.5 (dd, 1H, ArH), 7.3 (dd, 1H, ArH), 7.1 (m, 2H, ArH), 3.35 (m, 2H, CONHCH2), 2.8 (m, 4H, 2xpirolCH2), 2.5 (br m, 6H, N(CH2CH3)2 i NCH2), 1.75 (br s, 4H, 2xpirolCH2CH2), 0.9 (t, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 [M+].
Primjer 21.
(3-dietilaminopropil)amid 4-benzoil-5-(5~bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
Smjesi benzoil-klorida (l ekv.)i aluminijevog klorida (1 ekv.) U dikloroetanu na 0°C dodao se etil 3,5-dimetil-2-pirolkarboksilat (l ekv.). Smjesa se miješala na 80°C 4 sata. Smjesa se zatim ekstrahirala s etil-acetatom (EtOAc)i H2O. Kombinirani organski ekstrakti isprani su sa zasićenom otopinom natrijevog hidrogenkarbonata i luga, isušeni te koncentrirani kako bi se dobilo (51%)4-benzoil-3,5-dimetil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline.
Smjesa etil-estera 4-benzoil-3,5-dimetil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (4.13 g, 15.2 mmol)i amonij-cerij(IV)-nitrata (33 g, 4 ekv.) U 50 ml tetrahidrofurana (THF):octene kiseline (HOAc):H2O refluksirala se preko noći. Reakcijska smjesa zatim se ohladila, ekstrahirala s EtOAc te zalužila do pH 9 s natrijevim karbonatom. Organski sloj zatim se isprao s lugom, isušio (MgSO4)te koncentrirao, a zatim obradio kolonskom kromatografijom kako bi se dobilo 3.25 g (75%)etil-estera 4-benzoil-5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline kao žute krutine.
5-bromo-1,3-dihidro-indol-2-on kondenzirao se s 4-benzoil-5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilnom kiselinom primjenom metode D kako bi se dobila 4-benzoil-5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilna kiselina.
Gornja 4-benzoil-5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilna kiselina zatim se vezala s N,N-dietil-1,3-propandiaminom primjenom metode C kako bi se dobio naslovni spoj.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (m, 1H, CONHCH2), 7.76 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 7.68 (t, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.40 (s, 2H), 7.33 (dd, J = 1.6 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.84 (d, J = 8.3 Hz, 1H, H-7), 3.33 (m, 2H, CH2), 2.42-2.46 (m, 6H, 3xCH2), 2.10 (s, 3H, CH3), 1.65 (m, 2H, CH2), 0.94 (t, J= 7.0 Hz, 6H, N(CH2CH2)2).
MS-EI m/z 564 [M++1].
Primjer 22.
(3-morfolin-4-ilpropil)amid 4-benzoil-5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.10 (s, 1H, NH), 11.14 (br, s, 1H, NH), 7.92 (m, 1H, CONHCH2), 7.75 (m, 2H), 7.69 (t, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 1.9 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.85 (d, J= 8.3 Hz, 1H, H-7), 3.56 (m, 4H, 2xCH2), 3.33 (m, 2H, CH2), 2.35 (m, 6H, 3xCH2), 2.10 (s, 3H, CH3), 1.70 (m, 2H, CH2).
Primjer 23.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 4-benzoil-3-metil-5-(2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.18 (s, 1H, NH), 11.14 (br, s, 1H, NH), 8.01 (m, 1H, CONHCH2), 7.74 (m, 1H), 7.67 (m, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.32 (s, 1H, H-vinil), 7.17 (m, 1H), 6.92 (m, 1H), 3.36 (m, 2H, CH2), 2.44 (m, 6H, 3xCH2), 2.11 (s, 3H, CH3), 1.65-1.75 (m, 6H, 3xCH2).
MS-EI m/z 482 [M+].
Primjer 24.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 4-benzoil-5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.01 (s, 1H, NH), 11.18 (br, s, 1H, NH), 7.98 (m, 1H, CONHCH2), 7.75 (m, 2H), 7.68 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.40 (m, 2H), 7.33 (dd, J= 2.0 & 8.2 Hz, 1H, H-6), 6.84 (d, J= 8.2 Hz, 1H, H-7), 3.34 (m, 2H, CH2), 2.42-2.47 (m, 6H, 3xCH2), 2.09 (s, 3H, CH3), 1.70 (m, 2H, CH2), 1.64 (m, 4H, 2xCH2).
Primjer 25.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 4-benzoil-3~metil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.15 (s, 1H, NH), 11.16 (br, s, 1H, NH), 7.98 (m, 1H, CONHCH2), 7.77 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.69 (m, 1H), 7.53-7.63 (m, 4H), 7.44 (m, 2H), 7.33-7.37 (m, 2H), 7.24 (s, 2H), 7.12 (s, 1H), 3.36 (m, 2H, CH2), 2.43-2.48 (m, 6H, 3xCH2), 2.12 (s, 3H, CH3), 1.74 (m, 2H, CH2), 1.69 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 558 [M+].
Primjer 26.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 4-benzoil-5-(6-metoksi-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
XHNMR (300 MHz, DMSO-d6) 5 13.99 (s, 1H, NH), 11.05 (br, s, 1H, NH), 7 o 93 (m, 1H, CONHCH2), 7.72 (m, 2H), 7.65 (m, 1H), 7.54 (m, 2H), 7.15 (s, 1H, H-vinil), 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H, H-4), 6.51 (dd, J = 2.3 & 8.4 Hz, 1H, H-5), 6.44 (d, J= 2.3 Hz, 1H, H-7), 3.74 (s, 3H, OCH3), 3.35 (m, 2H, CH2), 2.42-2.46 (m, 6H, 3xCH2), 2.10 (s, 3H, CH3), 1.72 (m, 2H, CH2), 1.65 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 512 [M+].
Primjer 27.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 4-benzoil-5-(5-metoksi-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.24 (s, 1H, NH), 10.90 (br, s, 1H, NH), 7.97 (m, 1H, CONHCH2), 7.75 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.69 (m, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.24 (s, 1H, H-vinil), 6.79 (m, 2H), 6.66 (m, 1H), 3.67 (s, 3H, OCH3), 3.34 (m, 2H, CH2), 2.43-2.48 (m, 6H, 3xCH2), 2.14 (s, 3H, CH3), 1.71 (m, 2H, CH2), 1.66 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 512 [M+].
Primjer 28.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 4-benzoil-5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.20 (s, 1H, NH), 11.14 (br, s, 1H, NH), 8.03 (m, 1H, CONHCH2), 7.75 (m, 2H), 7.68 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.38 (s, 1H, H-vinil), 7.08 (m, 1H), 7.01 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 3.34 (m, 2H, CH2), 2.42-2.46 (m, 6H, 3xCH2), 2.09 (s, 3H, CH3)f 1-70 (m, 2H, CH2), 1.65 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 500 [M+].
Primjer 29.
(3-dietilaminopropil)amid 4-acetil-5-(5-bromo-2-okso-l,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
5-bromo-l,3-dihidro-indol-2-on kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 4-acetil-5-formil-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline (pripravljeno iz etil-estera 4-acetil-5-formil-3-metil-ltf-pirol-2-karboksilne kiseline metodom B, a zatim C) kako bi se dobio naslovni spoj.
1NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.19 (s, 1H, Ntf), 11.19 (br, s, 1H, NH), 8.15 (m, 1H, CONHCH2), 8.11 (s, 1H, H-vinil), 7.72 (d, J = 1.8 Hz, 1H, H-4), 7.38 (dd, J= 1.8 & 8.2 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H, H-7), 3.27 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.46 (m, CH2 & 3xCH2), 1.64 (m, 2H, CH2), 0.93 (t, J = 7.1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
Primjer 30.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 4-acetil-5- (5-bromo-2-okso-l, 2-dihidroindol-3--ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
(300 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (m, 1H, CONHCH2), 8.10 (s, 1H, H-vinil), 7.70 (d, 1H, H-4), 7.36 (dd, J = 1.6 & 8.1 Hz, 1H, H-6), 6.85 (d, J= 8.1 Hz, 1H, H-7), 3.32 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, Ctf3CO), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.35-2.48 (m, 6H, 3xCH3), 1.65-1.71 (m, 6H, 3xCH2).
Primjer 31.
(3-morfolin-4-ilpropil)amid 4-acetil-5-(5-bromo-2-okso-l, 2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.20 (s, 1H, NH), 11.26 (br, s, 1H, NH), 8.09 (m, 2H, H-vinil & CONHCH2), 7.73 (d, J= 1.5 Hz, 1H, H-4), 7.38 (dd, J= 1.5 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H, H-7), 3.55 (m, 4H, 2xCH2), 3.26 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.35 (m, 6H, 3xCH3), 1.68 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 514 i 516 [M+-1] & [M++1].
Primjer 32.
(3-hidroksipropil)amid 4-acetil-5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.17 (s, 1H, NH), 11.25 (br, s, 1H, NH), 8.10 (s, 1H, H-vinil), 8.03 (m, 1H, CONHCH2), 7.71 (br s, 1H, H-4), 7.37 (br d, J = 8.4 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H, H-7), 4.51 (br s, 1H, OH), 3.51 (br s, 2H, CH2), 3.36 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.43 (s, 3H, CH3), 1.70 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 445 i 447 [M+-1] & [M++1].
Primjer 34.
(2-morfolin-4-iletil)amid 4-acetil-5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.19 (s, 1H, NH), 11.14 (br, s, 1H, NH), 8.10 (s, 1H, H-vinil), 7.84 (m, 1H, CONtfCH2), 7.71 (d, J = 1.8 Hz, 1H, H-4), 7.38 (dd, J = 1.8 & 8.2 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J= 8.2 Hz, 1H, H-7), 3.58 (m, 4H, 2xCH2), 3.40 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.45 (m, CH3 & CH2).
MS-EI m/z 500 i 502 [M+-1] & [M++1].
Primjer 35.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 4-acetil-5-(5-bromo-2-okso-l,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.17 (s, 1H, NH), 11.23 (br, s, 1H, NH), 8.11 (s, 1H, H-vinil), 7.91 (m, 1H, CONHCH2), 7.73 (d, J= 1.9 Hz, 1H, H-4), 7.39 (dd, J = 1.9 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.88 (d, J= 8.3 Hz, 1H, H-7), 3.40 (m, 2H, CH2), 2.62 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.44 (s, 3H, CH3), 1.69 (m, 4H, 2xCH2).
Primjer 36.
[2-(4-hidroksifenil)etil]amid 4-acetil-5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3--ilidenmetil)-3-metil-1H-pirol-2-karboksilne kiseline
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.21 (s, 1H, NH), 11.18 (s, 1H, OH), 9.09 (s, 1H, NH), 8.06-8.10 (m, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.38 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 3.42 (m, 2H, CH2), 2.72 (m, 2H, CH2), 2.56 (s, 3H, CH3CO), 2.37 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 507 i 509 [M+-1] & [M++1].
Primjer 37 .
(3-dietilaminopropil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Smjesa 2-aminoacetofenon hidroklorida (1 ekv. ), etil-izobutirilacetata (1.2 ekv.) i natrijevog acetata (2.4 ekv.) u H2O miješala se na 100°C 18 sati, a zatim ohladila do sobne temperature. Vodeni sloj se oddekantirao, a ulje otopilo u etil-acetatu. Zatim je ispran s vodom i lugom i isušen kako bi se dobilo (93%)etil-estera 2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kao crveno-smeđeg ulja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (s, br, 1H, NH), 7.14-7.27 (m, 5H), 6.70 (m, 1H, CH(CH3)2), 1.22 (d, J= 7.5 Hz, 6H, CH(CH3)2), 1-04 (t, J= 7.1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 257 [M+].
Gornji pirol formiliran je primjenom metode A kako bi se dobilo (41%) etil-estera 5-formil-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kao crvenkaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.35 (s, br, 1H, N H), 9.14 (s, 1H, CHO), 7.36 (s, 5H), 3.96 (q, J= 7.1 Hz, 2H, CH(CH3)2), 0.90 (t, J = 7.1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 285 [M+].
Ester pirolkarboksilne kiseline hidroliziran je primjenom metode B kako bi se dobilo (57%) 5-formil-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kao bež krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.28 (s, br, 1H, COOH), 12.02 (s, br, 1H, NH), 9.10 (s, 1H, CHO), 7.35 (s, 5H), 3.81 (m, 1H, CH(CH3)2), 1.28 (d, J = 6.9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 257 [M+].
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (120 mg, 0.31 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (pripravljeno metodom C) kako bi se dobilo 120 mg (71%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.23 (s, br, 1H, NH), 11.08 (s, br, 1H, NH), 7.38-7.55 (m, 7H, Ar-H & CONtfCH2), 7.30 (s, 1H, H-vinil), 7.26 (dd, J= 1.8 & 7.8 Hz, 1H), 6.85 (d, J= 8.7 Hz, 1H)3.36 (m, 1H, CH(CH3)2), 3.07 (m, 2H, CH2), 2.34 (q, J= 7.1 Hz, 4H, N(CH2CH3)2), 2.22 (t, J= 6.9 Hz, 2H, CH2), 1.40 (m, 2H, CH2), 1.31 (d, J = 6.9 Hz, 6H, CH(CH3)2), 0.86 (t, J = 7.1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 565.1 [M++1].
Primjer 38.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (127 mg, 0.28 mmol) kondenziran je s 3-pirolidin-1-il-propilaminom (43 mg, 0.336 mmol) kako bi se dobilo 140 mg (66%) naslovnog spoja.
1NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.40 (s, br, 1H, NH), 7.38-7.47 (m, 7H), 7.23-7.27 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.36 (m, 1H, CH(CH3)2), 3.08 (m, 2H, CH2), 2.30 (m, 4H, 2xCH2), 2.20 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2), 1.62 (m, 4H, 2xCH2), 1.42 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2), 1.31 (d, J= 7.2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 560 i 562 [M+-1 i M++1].
Primjer 39.
(2-dietilaminoetil)amid 5- (5-bromo-2-okso-l, 2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-izopropil~4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (57 mg, 0.27 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (120 mg) kako bi se dobilo 78 mg (53%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.23 (s, br, 1H, NH), 11.09 (s, br, 1H, NH), 7.38-7.51 (m, 6H), 7.25-7.28 (m, 2H), 7.19 (t, 1H, CONHCH2), 6.85 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 3.43 (m, 1H, CH(CH3)2), 3.11 (m, 2H, CH2), 2.28-2.39 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2), 1.31 (d, J= 6.9 Hz, CH(CH3;2), 0.85 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2.
MS-EI m/z 548 i 550 [M+-1 i M++1].
Primjer 40.
[3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (53 mg, 0.25 mmol) kondenziran je s [3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]amidom 5-formil-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (300 mg) kako bi se dobilo 65 mg naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.22 (s, br, 1H, NH), 11.08 (s, br, 1H, NH), 7.23-7.50 (m, 9H), 6.85 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 3.37 (m, 1H, CH(CH3)2), 3.05 (m, 2H, CH2), 2.24 (m, 8H, 4xCH2), 2.11 (m, 5H, CH2 & CH3), 1-42 (m, 2H, CH2), 1.31 (d, J= 7.2 Hz, 6H, CH(CH3;2).
MS-EI m/z 589 i 591 [M+-1 i M++1].
Primjer 41.
5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-izopropil-4-fenil-lJf-pirol-3-karboksilna kiselina
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (170 mg, 0.8 mmol) kondenziran je s 5-formil-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom (205 mg) primjenom metode D kako bi se dobilo 210 mg (58%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.31 (s, br, 1H, NH), 11.16 (s, br, 1H, NH), 7.26-7.44 (m, 7H), 7.11 (s, 1H, H-vinil), 6.85 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 3.78 (m, 1H, CH(CH3)2), 1.34 (d, J = 6.9 Hz, 6H, CH(CH3;2).
MS-EI m/z 452 [M++1].
Primjer 42.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (44 mg, 0.21 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2-izopropil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (70 mg, pripravljeno na isti način kao izopropilni analogon, iznad) kako bi se dobilo 0.03 g (27%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.87 (s, br, 1H, N H), 11.11 (s, br, 1H, NH), 7.36-7.51 (m, 6H), 7.26 (dd, <J = 1.8 & 8.1 Hz, 1H), 7.2 (s, 1H, H-vinil), 7.09 (m, 1H, CONHCH2), 6.83 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 3.17 (m, 2H, NCH2), 2.48 (m, CH3), 2.29-2.35 (m, 6H, 3xNCH2), 1.59 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 518 i 520 [M+-1 i M++1].
Primjer 43.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-[6-(2-metoksifenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(2-metoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on (50 mg, 0.21 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2-izopropil-4-fenil-ltf-pirol-3-karboksilne kiseline (70 mg) kako bi se dobilo 0.04 g (35%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.82 (s, br, 1H, NH), 11.02 (s, br, 1H, NH), 7.48 (m, 2H), 7.43 (m, 1H), 7.38 (m, 2H), 7.32 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 7.16 (s, 1H, H-vinil), 7.08 (m, 2H), 7.03 (m, 1H), 7.0 (m, 2H), 3.74 (s, 3H, OCH3), 3.19 (m, 2H, NCtf2), 2.49 (m, CH3), 2.32-2.38 (m, 6H, 3xNCH2), 1.59 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 546 [M+].
Primjer 44.
(2-dimetilaminoetil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (46 mg, 0.22 mmol) kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)amidom 5-formil-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (65 mg) kako bi se dobilo 60 mg naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.86 (s, br, 1H, NH), 11.09 (s, br, 1H, NH), 7.47-7.49 (m, 2H), 7.38-7.41 (m, 4H), 7.26 (dd, J= 2.2 & 8.3 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H, H-vinil), 7.04 (m, 1H, CONHCH2), 6.77 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 3.15 (m, 2H, NCH2), 2.48 (m, CH3), 2.16 (t, J= 6.8 Hz, 2H, 3xNCH2), 2.02 (s, 6H, 2xNCH3).
MS-EI m/z 493 i 494.8 [M+ i M++2].
Primjer 45.
(2-dimetilaminoetil)amid 5-[6-(2-metoksifenil)-2-okso-l,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(2-metoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on (53 mg, 0.22 mmol) kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)amidom 5-formil-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (65 mg) kako bi se dobilo 0.05 g (44%) naslovnog spoja kao narančaste gume.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.82 (s, br, 1H, NH), 11.02 (s, br, 1H, NH), 1.31-1.52 (m, 5H), 7.32 (m, 1H), 7.22-7.27 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.08 (m, 2H), 7.03 (m, 1H), 7.0 (m, 2H), 3.74 (s, 3H, OCH3), 3.15 (m, 2H, NCH2), 2.49 (m, CH3)/ 2.16 (t, J = 6.5 Hz, 2H, NCH2), 2.02 (s, 6H, 2xNCH3).
MS-EI m/z 521 [M++1].
Primjer 46.
Etil-ester 5-(5-bromo-2-okso-l, 2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (60 mg, 0.29 mmol) kondenziran je s etil-esterom 5-formil-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (75 mg) kako bi se dobilo 78 mg (60%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.01 (s, br, 1H, NH), 11.13 (s, br, 1H, NH), 7.42-7.46 (m, 3H), 7.27-7.34 (m, 4H), 7.12 (s, 1H), 6.84 (dd, J = 2.2 & 8.3 Hz, 1H), 3.99-4.03 (m, 2H, OCH2CH3), 2.61 (s, 3H, CH3), 0.98-1.03 (m, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 450 i 452 [M+-1 i M++1].
Primjer 47.
(2-dimetilaminopropil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.47 g, 2.2 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-2-metil-4-fenil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.75 g) kako bi se dobilo 0.11 g (42%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.86 (s, br, 1H, NH), 7.42-7.46 (m, 3H), 7.37-7.50 (m, 7H), 7.24-7.28 (m, 2H), 6.83 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.09 (m, 2H, NCH2), 2.45 (s, 3H, CH3), 2.38 (q, J= 7.1 Hz, 4H, 2xNCH2CH3), 2.26 (t, J = 6.9 Hz, 2H, NCH2), 1.42 (m, 2H, NCH2), 0.87 (t, J = 7.1 Hz, 6H, 2xNCH2CH3).
MS-EI m/z 535.0 i 537 [M+ i M++2].
Primjer 48.
(2-dimetilaminoetil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Smjesa tert-butil 3-oksobutirata i natrijevog nitrita (l ekv.) U octenoj kiselini miješala se na sobnoj temperaturi kako bi se dobio tert-butil-2-hidroksimino-3-oksobutirat.
Etil-3-oksobutirat (l ekv.), cinkov prah (3.8 ekv.) i sirovi tert-butil-2-hidroksimino-3-oksobutirat u octenoj kiselini miješao se na 60°C 1 sat. Reakcijska smjesa izlila se u H2O, a filtrat skupio kako bi se dobilo (65%)2-tert-butiloksikarbonil-3,5-dimetil-4-etoksikarbonilpirola.
Smjesa 2-tert-butiloksikarbonil-3,5-dimetil-4-etoksikarbonilpirola i trietilortoformata (1.5 ekv.) u trifluoroctenoj kiselini miješala se na 15°C 1 sat. Reakcija se koncentrirala, a talog pročistio čime se dobilo (64%)2,4-dimetil-3-etoksikarbonil-5-formilpirola kao žutih iglica.
2,4-dimetil-3-etoksikarbonil-5-formilpirol hidroliziran je primjenom metode B kako bi se dobilo (90%)5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12 (s, br, 2H, NH i CO2H), 9.58 (s, 1H, CHO), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3).
MS m/z 267 [M+].
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.17 g, 0.8 mmol) kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.2 g, pripravljeno metodom C)primjenom metode B kako bi se dobilo 0.3 g (83%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, br, 1H, NH), 10.94 (s, br, 1H, NH), 8.07 (d, J = 1.8 Hz, 1H, H-4), 7.75 (s, 1H, H-vinil), 7.44 (t, J = 5.2 Hz, 1H, CONHCH2), 7.24 (dd, J = l.8 & 8.4 Hz, 1H, H-6), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H, H-7), 3.26-3.33 (m, 2H, NCH2), 2.18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 430 i 432 [M+-1 i M++1].
Primjer 49.
(2-dimetilaminoetil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (0.17 g, 0.8 mmol) kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.2 g) kako bi se dobilo 0.13 g (36%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, br, 1H, Ntf), 10.93 (s, br, 1H, NH), 7.85 (d, J= 7.92 Hz, 1H, H-4), 7.63-7.65 (m, 3H), 7.40-7.47 (m, 3H), 7.32-7.36 (m, 1H, Ar-H), 7.30 (dd, J = 1.6 & 7.9 Hz, 1H, H-5), 7.11 (d, J= 1.6 Hz, 1H, H-7), 3.28-3.34 (m, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 2.38 (t, J= 6.8 Hz, 2H, A7CH2), 2.18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 428 [M+].
Primjer 50.
(2-dimetilaminoetil)amid 5-(5-kloro-2-okso-l, 2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-kloro-l,3-dihidroindol-2-on (0.1 g, 0.6 mmol) kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.15 g) kako bi se dobilo 0.22 g (90%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 10.98 (s, br, 1H, NH), 7.96 (d, J= 2.0 Hz, 1H, H-4), 7.75 (s, 1H, H-vinil), 7.50 (t, J = 5.5 Hz, 1H, CONHCH2), 7.12 (dd, J = 2.0 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H, H-7), 3.26-3.31 (m, 2H, NCH2), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 2.36 (t, J = 6.6 Hz, 2H, NCH2), 2.17 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 386 [M+].
Primjer 51.
(2-dietilaminoetil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.17 g, 0.8 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.2 g) kako bi se dobilo 0.09 g (26%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) 5 13.61 (s, br, 1H, NH), 10.98 (s, br, 1H, NH), 8.09 (d, J= 1.7 Hz, 1H, H-4), 7.76 (s, 1H, H-vinil), 7.42 (t, J = 5.5 Hz, 1H, CONHCH2), 7.24 (dd, J= 1.7 & 8.0 Hz, 1H, H-6), 6.82 (d, J= 8.0 Hz, 1H, H-7), 3.23-3.32 (m, 2H, NCH2), 2.46-2.55 (m, 6H, 3xNCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.42 (s, 3H, CH3), 0.96 (t, J = 7.2 Hz, 6H, 2xNCH2CH3).
MS-EI m/z 458 i 460 [M+-1 i M++1].
Primjer 52.
(2-pirolidin-1-il-etil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.09 g, 0.4 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.1 g) kako bi se dobilo 0.14 g (81%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 10.98 (s, br, 1H, Ntf), 8.09 (d, J = 1.9 Hz, 1H, H-4), 7.76 (s, 1H, H-vinil), 7.53 (t, J = 5.5 Hz, 1H, CONHCH2), 7.24 (dd, J= 1.9 & 8.5 Hz, 1H, H-6), 6.81 (d, J = 8.5 Hz, 1H, H-7), 3.29-3.35 (m, 2H, NCH2), 2.54 (t, J = 6.9 Hz, 2H, NCH2), 2.47 (m, pod DMSO), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 1.66-1.69 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 456 i 458 [M+-1 i M++1].
Primjer 53.
(3-imidazol-1-il-propil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-ltf-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.09 g, 0.4 mmol) kondenziran je S(3-imidazol-1-il-propil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.1 g) kako bi se dobilo 0.1 g (59%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.63 (s, br, 1H, NH), 10.99 (, br, 1H, NH), 8.09 (d, J= 2.2 Hz, 1H, H-4), 7.77 (s, 1H, H-vinil), 7.71 (t, J = 5.7 Hz, 1H, CONHCH2), 7.65 (s, 1H, Ar-H), 7.25 (dd, J = 2.2 & 8.4 Hz, 1H, H-6), 7.20 (s, 1H, Ar-H), 6.89 (s, 1H, Ar-H), 6.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H, H-7), 4.02 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2), 3.18 (q, J= 6.7 Hz, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 1-93 (m, 2H, CH2). MS-EI m/z 467 i 469 [M+-1 i M++1].
Primjer 54.
(2-dimetilaminoetil)amid 5-[6-(2-metoksifenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(2-metoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on (30 mg, 0.13 mmol) kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (30 mg) kako bi se dobilo 0.06 g (100%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste gume.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, br, 1H, NH), 10.89 (s, br, 1H, NH), 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 1H, H-4), 7.63 (s, 1H, H-vinil), 7.46 (t, J = 5.5 Hz, 1H, CONHCH2), 7.28-7.35 (m, 2H), 6.99-7.11 (m, 4H), 3.76 (s, 3H, OCH3), 3.27-3.31 (m, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.39 (s, 3H, CH3), 2.37 (m, 2H, NCH2), 2.18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M+].
Primjer 55.
(2-dimetilaminoetil)amid 5-[6-(3-metoksifenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(3-metoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on (30 mg, 0.13 mmol) kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (30 mg) kako bi se dobilo 8 mg (14%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste gume.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, br, 1H, NH), 10.92 (s, br, 1H, NH), 7.84 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H, H-vinil), 7.42 (m, 1H, CONHCH2), 7.36 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 1.6 & 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 2.8 & 7.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H, OCH3), 3.21-3.33 (m, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 2.36-2.40 (m, 2H, NCH2), 2.18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M+].
Primjer 56.
(2-dietilaminoetil)amid 2,4-dimetil-5-[2-okso-5-fenil-l, 2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-lfl-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (80 mg, 0.4 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.1 g)primjenom metode B kako bi se dobilo 79 mg (46%) naslovnog spoja .
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.66 (s, br, 1H, NH), 10.95 (, br, 1H, NH), 8.15 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H, H-vinil), 7.71 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.40-7.47 (m, 4H), 7.31 (m, 1H), 6.95 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 3.2-3.31 (m, 2H, NCH2), 2.46-2.55 (m, 6H, 3xNCH2), 2.44 (s, 6H, 2xCH3), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 6H, 2x NCH2CH3).
MS-EI m/z 456 [M+].
Primjer 57.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-5-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (0.04 g, 0.2 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirol-3-karboksilne kiseline (0.04 g) kako bi se dobio naslovni spoj kao žutonarančasta krutina.
1NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.65 (s, br, 1H, NH), 10.96 (s, br, 1H, NH), 8.15 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H, H-vinil), 7.71 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.49 (t, J= 6.3 Hz, 1H, CONHCH2), 7.41-7.46 (m, 3H), 7.31 (m, 1H), 6.95 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.08 (m, 4H, 2x NCH2), 3.32 (m, 2H, NCH2), 2.55 (t, J = 7.1 Hz, 2H, NCH2), 2.47 (m, pod DMSO), 2.43 (s, 6H, 2x CH3), 1.66 (m, 4H, 2x CH2).
MS-EI m/z 454 [M+].
Primjer 58.
(3-imidazol-1-ilpropil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-5-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (8 mg, 0.04 mmol) kondenziran je S(3-imidazol-1-ilpropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (10 mg) kako bi se dobilo 10 mg (59%) naslovnog spoja kao narančaste krutine .
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.67 (s, br, 1H, N H), 10.96 (, br, 1H, NH), 8.16 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H, H-vinil), 7.65-7.72 (m, 4H), 7.44 (m, 3H), 7.31 (m, 1H, CONHCH2), 7.21 (s, 1H, Ar-H), 4.02 (t, J= 6.5 Hz, 2H, NCH2), 3.19 (q, J= 6.5 Hz, 2H, CONHCH2), 2.44 (s, 6H, 2x CH3), 1.93 (m, 2H, CH2CH2CH2).
MS-EI m/z 465 [M+].
Primjer 59.
(2-dietilaminoetil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (0.08 g, 0.4 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-lH-pirol-3-karboksilne kiseline (0.1 g) kako bi se dobilo 65 mg (38%) naslovnog spoja kao žute krutina.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 10.99 (, br, 1H, NH), 7.86 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.62-7.66 (m, 3H), 7.40-7.47 (m, 3H), 7.28-7.36 (m, 2H), 7.10 (d, J= 1.2 Hz, 1H)3.26 (m, 2H, NCH2), 2.46-2.55 (m, 6H, 3x NCH2), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 0.97 (t, J= 7.2 Hz, 6H, 2x NCH2CH3)
MS-EI m/z 456 [M+].
Primjer 60.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (30 mg, 0.15 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (40 mg) kako bi se dobilo 5.9 mg (8.5%) naslovnog spoja kao žutonarančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, br, 1H, NH), 10.99 (, br, 1H, NH), 7.86 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.63-7.66 (m, 3H), 7.51 (m, 1H, CONHCH2), 7.45 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 2H), 7.10 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 3.31 (m, 6H, 3x NCH2), 2.55 (t, J= 6.6 Hz, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2x CH2)
MS-EI m/z 454 [M+].
Primjer 61.
(3-imidazol-1-ilpropil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-fenil-l,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (8 mg, 0.04 mmol) kondenziran je S(3-imidazol-1-ilpropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (10 mg) kako bi se dobilo 7.3 mg (43%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, br, 1H, NH), 10.99 (, br, 1H, NH), 7.86 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.62-7.70 (m, 5H), 7.45 (m, 2H), 7.35 (m, 1H), 7.30 (dd, J= 1.4 & 8.2 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.10 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.02 (t, J= 6.9 Hz, 2H, CH2), 3.19 (m, 2H, NCH2CH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 1.93 (t, J = 6.9 Hz, 2H, NCH2)
MS-EI m/z 465 [M+].
Primjer 62.
(2-dietilaminoetil)amid 5-[6-(3,5-diklorofenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(3,5-diklorofenil)-1,3-dihidroindol-2-on (64 mg, 0.23 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (60 mg) kako bi se dobilo 53 mg (44%) naslovnog spoja kao svijetlosmeđe krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, br, 1H, NH), 10.99 (s, 1H, NH), 7.89 (d, J= 7.9 Hz, 1H, H-4), 7.69-7.71 (m, 3H), 7.55 (m, 1H, CONHCH2), 7.37 (m, 2H), 7.14 (d, J = 1.4 Hz, 1H, H-7), 3.27 (m, 2H, NCH2), 2.48-2.58 (m, 6H, 3x NCH2), 2.45 (s, 3H, CH3), 2.42 (s, 3H, CH3), 0.97 (t, J = 6.8 Hz, 6H, 3x NCH2CH3).
MS-EI m/z 526.9 [M++1].
Primjer 63.
(2-dietilaminoetil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-piridin-3-il-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-lfl-pirol-3-karboksilne kiseline
6-piridin-3-il-1,3-dihidroindol-2-on (40 mg, 0.19 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (50 mg) kako bi se dobilo 29 mg (33%) naslovnog spoja kao svijetlonarančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, br, 1H, NH), 11.05 (s, br, 1H, NH), 8.86 (s, br, 1H), 8.53 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 8.04 (m, 1H), 7.91 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H, H-vinil), 7.40-7.48 (m, 2H), 7.35 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 3.26 (m, 2H, NCH2), 2.48-2.55 (m, 3x NCH2), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.38 (s, 3H, CH3), 0.96 (t, J= 6.9 Hz, 6H, 3x NCH2CH3).
MS-EI m/z 457 [M+].
Primjer 64.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-piridin-3-il-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-piridin-3-il-1,3-dihidroindol-2-on (60 mg, 0.28 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (75 mg) kako bi se dobilo 90 mg (71%) naslovnog spoja kao svijetlonarančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 11.05 (s, br, 1H, NH), 8.86 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.54 (dd, J = 1.5 & 4.8 Hz, 1H), 8.05 (m, 1H), 7.91 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H, H-vinil), 7.44-7.53 (m, 2H), 7.36 (dd, J= 1.5 & 8.1 Hz, 1H), 7.15 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 3.33 (m, 2H, NCH2), 2.47-2.57 (m, 6H, 3xNCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2x CH2).
MS-EI m/z 455 [M+].
Primjer 65.
(3-dimetilaminopropil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-piridin-3-il-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-piridin-3-il-1,3-dihidroindol-2-on (42 mg, 0.2 mmol) kondenziran je S(3-dimetilaminopropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (50 mg) kako bi se dobilo 67 mg (75%) naslovnog spoja kao žuto-smeđe krutine.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 11.00 (s, br, 1H, NH), 8.86 (s, br, 1H), 8.54 (s, br, 1H), 8.04 (m, 1H), 7.90 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H, H-vinil), 7.63 (m, 1H), 7.45-7.48 (m, 1H), 7.35 (dd, J = 1.7 & 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 3.21-3.27 (m, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 2.28 (m, 2H, NCH2), 2.14 (s, 6H, 2xNCH3), 1.64 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 443 [M+].
Primjer 66.
(3-dimetilaminopropil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (67 mg, 0.32 mmol) kondenziran je S(3-dimetilaminopropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (81 mg) kako bi se dobilo 40 mg (28%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.66 (s, br, 1H, NH), 10.92 (s, br, 1H, NH), 8.14 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.71 (m, 2H), 7.62 (m, 1H), 7.44 (m, 3H), 7.32 (m, 1H), 6.95 (m, 1H), 3.33 (m, 2H, NCH2), 2.43 (s, 6H, 2xCH3), 2.27 (m, 2H, NCH2), 2.13 (s, 6H, 2xNCH3), 1.63 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 442 [M+].
Primjer 67.
(3-dietilaminopropil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-5-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (1.5 g, 7.16 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (2 g) kako bi se dobilo 1.3 g (40%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.64 (s, 1H, NH), 10.91 (s, 1H, NH), 8.14 (d, J = 1.4 Hz, 1H, ArH), 7.8 (s, 1H, ArH), 7.7 (dd, J = 1.2 i 8.5 Hz, 2H, ArH), 7.6 (t, J = 5.3 Hz, 1H, CONHCH2), 7.4 (m, 3H, ArH), 7.3 (t, J= 7.4 Hz, 1H, ArH), 6.9 (d, J = 8.0 Hz, 1H, ArH), 3.2 (m, 2H, CONHCH2), 2.5 (m, 12H, 3xNCH2 i 2xCH3), 1.61 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0.93 (t, J = 6.7 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 470 [M+].
Primjer 68.
(3-dietilaminopropil)amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-6-fenil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-fenil-1,3-dihidroindol-2-on (1.5 g, 7.16 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (2 g) kako bi se dobilo 1.9 g (57%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.58 (s, 1H, NH), 10.94 (s, 1H, NH), 7.8 (d, J = 7.9 Hz, 1H, ArH), 7.6 (m, 4H, ArH), 7.4 (t, J= 7.5 Hz, 2H, ArH), 7.3 (m, 2H), 7.1 (d, J= 1.4 Hz, 1H, ArH), 3.2 (m, 2H, CONHCH2), 2.5 (m, 12H, 3xNCH2 i 2xCH3), 1.61 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0.93 (t, J= 6.7 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 470 [M+].
Primjer 69.
(3-kloro-4-metoksifenil)amid 3-[4-(3-dietilaminopropilkarbamoil)-3,5-dimetil-1H-pirol-2-ilmetilen]-2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-4-karboksilne kiseline
(3-kloro-4-metoksifenil)amid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-4-karboksilne kiseline (1 g, 3.16 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (1 g, 3.58 mmol) kako bi se dobilo 1.7 g (85%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
MS-EI m/z 578.2 [M+].
Primjer 70.
(3-dietilamino-propil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (0.5 g, 2.36 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (0.51 g) kako bi se dobilo 0.84 g (85%) naslovnog spoja kao crveno-narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, 1H, NH), 10.99 (s, 1H, NH), 8.09 (d, J = 1.8 Hz, 1H, ArH), 7.7 (m, 4H), 7.2 (dd, J = 1.8 i 8.3 Hz, 2H, ArH), 6.8 (d, J = 7.8 Hz, 1H, ArH), 3.3 (br s, 4H, 2xNCH2), 3.2 (m, 2H, CONHCH2), 2.6 (br s, 2H, NCH2 i 2xCH3), 2.4 (s, 6H, 2xCH3), 1.66 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0.98 (t, J= 7.1 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 472 i 474 [M+-1 i M++1].
Primjer 71.
(2-dietilamino-etil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-diizopropil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (100 mg, 0.47 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-diizopropil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (150 mg) kako bi se dobilo 0.15 g (62%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.97 (s, 1H, NH), 10.95 (s, 1H, NH), 8.09 (d, J = 1.3 Hz, 1H, ArH), 7.84 (m, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.23 (dd, J = l.3 i 8.1 Hz, 1H, ArH), 6.8 (d, J= 8.1 Hz, 1H, ArH), 3.5 (m, 1H, CH), 3.3 (m, 3H, CH i NHCH2), 2.5 (br m, 6H, 3xNCH2), 1.28 (d, J = 6.9 Hz, 6H, 2xCH3), 1.23 (d, J = 6.6 Hz, 6H, 2xCH3), 0.96 (m, 6H, 2xCH2CH3).
MS-EI m/z 514 i 516 [M+-1 i M++1].
Primjer 72.
(2-dietilamino-propil)amid 5-(5-bromo-2-okso-l,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-diizopropil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (90 mg, 0.42 mmol) kondenziran je S(3-dietilaminopropil)amidom 5-formil-2,4-diizopropil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (140 mg) kako bi se dobilo 54 mg (25%) naslovnog spoja kao crveno-smeđe krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.98 (s, 1H, NH), 10.96 (s, 1H, NH), 8.09 (d, J = 1.7 Hz, 2H), 7.78 (s, 1H, H-vinil), 7.23 (dd, J = 1.7 i 8.1 Hz, 1H, ArH), 6.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H, ArH), 3.5 (m, 1H, CH), 3.25 (m, 2H, NHCH2), 3.15 (m, 1H, CH), 2.7 (br s, 6H, 3xNCH2), 1.7 (br m, 2H, CH2CH2CH2), 1.28 (d, J = 6.9 Hz, 6H, 2xCH3), 1.24 (d, J= 5.9 Hz, 6H, 2xCH3), 1.06 (m, 6H, 2xCH2CH3).
MS-EI m/z 528 i 530 [M+-1 i M++1].
Primjer 73.
(3-pirolidin-1-ilpropil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-diizopropil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (130 mg, 0.6 mmol) kondenziran je S(3-pirolidin-1-ilpropil)amidom 5-formil-2,4-diizopropil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (150 mg, 0.45 mmol) kako bi se dobilo 36 mg (15%) naslovnog spoja kao smeđe-narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.98 (s, 1H, NH), 10.97 (s, 1H, NH), 8.10 (d, J= 1.6 Hz, 2H), 7.78 (s, 1H, H-vinil), 7.23 (dd, J = 1.6 i 7.6 Hz, 1H, ArH), 6.82 (d, J = 7.6 Hz, 1H, ArH), 3.5 (m, 1H, CH), 3.25 (m, 2H, NHCH2), 3.15 (m, 1H, CH), 2.7 (br s, 6H, 3xNCH2), 1.7 (br m, 6H, 3xNCH2CH2), 1.28 (d, J = 5,6 Hz, 6H, 2xCH3), 1.24 (d, J= 5.7 Hz, 6H, 2xCH3).
MS-EI m/z 526 i 528 [M+-1 i M++1].
Primjer 74.
(Piridin-4-ilmetil)amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-bromo-1,3-dihidroindol-2-on (170 mg, 0.8 mmol) kondenziran je S(piridin-4-ilmetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (200 mg) kako bi se dobilo 14 mg (4%) naslovnog spoja kao žute krutine.
(300 MHz, DMSO-d6) 5 13.67 (s, 1H, NH), 11.01 (s, br IH, NH), 8.51 (dd, J = 1.6 & 4.3 Hz, 2H), 8.23 (t, J = 6.0 Hz, 1H, CONHCH2), 8.11 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H, H-vinil), 7.31 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.25 (dd, J = 1.9 & 8.1 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 4.45 (d, J= 6.0 Hz, 2H, NCH2), 2.46 (s, 6H, 2xCH3).
MS-EI m/z 450 i 452 [M+-1 i M++1].
Primjer 75.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-[6-(4-butilfenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil3-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-[6-(4-butilfenil)]-1,3-dihidroindol-2-on (50 mg, 0.19 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (50 mg) kako bi se dobilo 74 mg (76%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.58 (s, 1H, NH), 10.93 (s, br, 1H, NH), 7.82 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H, H-vinil), 7.54 (d, J= 7.9 Hz, 2H), 7.46 (m, 1H, CONH), 7.26 (m, 3H), 7.09 (s, 1H), 3.30 (m, 2H, CH2), 2.52-2.63 (m, 4H, 2xCH2), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 1.68 (m, 4H, 2xCH2), 1.58 (m, 2H, CH2), 1.34 (m, 2H, CH2), 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 510 [M+].
Primjer 76.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-[6-(5-izopropil-2-metoksifenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(5-izopropil-2-metoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on (50 mg, 0.17 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (45 mg) kako bi se dobilo 67 mg (75%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, 1H, N H), 10.82 (s, br, 1H, N H), 7.77 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H, H-vinil), 7.45 (m, 1H, CONH), 7.0-7.19 (m, 5H), 3.73 (s, 3H, OCH3), 3.32 (m, 2H, CH2), 2.87 (m, 1H, CH(CH3;2), 2.56 (m, 2H, CH2), 2.48 (s, 4H, 2xCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 1.68 (m, 4H, 2xCH2), 1.21 (d, J= 6.8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 527.2 [M++1].
Primjer 77.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-[6-(4-etilfenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(4-etilfenil)-1,3-dihidroindol-2-on (45 mg, 0.19mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (50 mg) kako bi se dobilo 60 mg (65%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, 1H, NH), 10.96 (s, br, 1H, NH), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H, H-vinil), 7.51-7.56 (m, 3H), 7.25-7.30 (m, 3H), 7.08 (d, J= l Hz, 1H), 3.31 (m, 2H, CH2), 2.63 (m, 2H, CH2CH3), 2.55 (m, 2H, CH2), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2xCH2), 1.20 (t, J= 7.5 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 482 [M+].
Primjer 78.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-[6-(2,4-dimetoksifenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil3-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(2,4-dimetoksifenil)-1,3-dihidroindol-2-on (51 mg, 0.19 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (50 mg) kako bi se dobilo 30 mg (31%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, 1H, NH), 10.86 (s, br, 1H, NH), 7.75 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H, H-vinil), 749 (m, 1H, CONH), 7.22 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.03 (m, 1H), 6.97 (S, 1H), 6.58-6.65 (m, 2H), 3.79 (s, 3H, OCH3), 3.76 (s, 3H, OCH3), 3.33 (m, 2H, CH2), 2.55 (m, 2H, CH2), 2.50 (m, 4H, 2xCH2), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.39 (s, 3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 514 [M+].
Primjer 79.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-[6-(3-izopropilfenil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-l.H-pirol-3-karboksilne kiseline
6-(3-izopropilfenil)-1,3-dihidroindol-2-on (48 mg, 0.19 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (50 mg) kako bi se dobilo 59 mg (63%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.63 (s, 1H, NH), 10.97 (s, br, 1H, NH), 7.87 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H, H-vinil), 7.24-7.55 (m, 6H), 7.13 (s, 1H), 3.34 (m, 2H, CH2), 3.30 (m, 1H, CH(CH3)2), 2.60 (m, 2H, CH2), 2.50 (s, 4H, 2xCH2), 2.45 (s, 3H, CH3), 2.43 (s, 3H, CH3), 1.70 (m, 4H, 2xCH2), 1.27 (d, J = 6.9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 496 [M+].
Primjer 80.
(2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fluoro-1,3-dihidroindol-2-on (0.54 g, 3.8 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kako bi se dobilo 0.83 g (55%) naslovnog spoja kao žuto-zelene krutine.
(360 MHz, DMSO-d6) δ 13.66 (s, 1H, NH), 10.83 (s, br, 1H, NH), 7.73 (dd, J = 2.5 & 9.4 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H, H-vinil), 7.37 (t, 1H, CONHCH2CH2), 6.91 (m, 1H), 6.81-6.85 (m, 1H), 3.27 (m, 2H, CH2), 2.51 (m, 6H, 3xCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 0.96 (t, J = 6.9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 398 [M+].
Primjer 80 (alternativna sinteza).
(2-dietilamino-etil)amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Hidrazin hidrat (55%, 3000 mL) i 5-fluorisatin (300 g)zagrijani su do 100°C. U obrocima (100 g)preko 120 minuta uz miješanje dodano je još 5-fluorisatina (500 g). Smjesa se zagrijavala do 110°C te se nastavilo miješati 4 sata. Smjesa se ohladila do sobne temperature, a krutine skupljene vakuum filtracijom kako bi se dobio sirovi hidrazid (2-amino-5-fluoro-fenil)-octene kiseline (748 g). Hidrazid se suspendirao u vodi (700 mL), a pH smjese podesio do < pH 3 s 12 N klorovodičnom kiselinom. Smjesa se miješala 12 sati na sobnoj temperaturi. Krutine su skupljene vakuum filtracijom i dvaput isprane s vodom. Produkt se isušio u vakuumu čime se dobio 5-fluoro-1,3-dihidro-indol-2-on (600 g, 73% donos)kao smeđi prah.
1NMR (dimetilsulfoksid-d6) δ 3.46 (s, 2H, CH2), 6.75, 6.95, 7.05 (3 x m, 3H, aromatski), 10.35 (s, 1H, NH). MS m/z 152 [M+1].
4-etil ester 2-tert-butil ester 3,5-dimetil-1H-pirol-2,4-dikarboksilne kiseline (2600 g) i etanol (7800 mL)snažno su miješani dok se polagano dodavala ION klorovodična kiselina (3650 mL). Temperatura se povisila od 25°C do 35°C i započelo je razvijanje plina. Smjesa se zagrijala do 54°C i miješala uz daljnje zagrijavanje jedan sat kada je temperatura bila 67°C. Smjesa se zagrijavala do 5°C te se uz miješanje polagano dodalo 32 L leda i vode. Krutina je skupljena vakuum filtracijom i triput isprana s vodom. Krutina je isušena zrakom do konstantne mase čime se dobio etil-ester 2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (1418 g, 87% donos)kao rozkava krutina.
1HNMR (dimetilsulfoksid-d6) δ 2.10, 2.35 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 4.13 (q, 2H, CH2), 6.37 (s, 1H, CH), 10.85 (s, 1H, NH). MS m/z 167 [M+1].
Dimetilformamid (322 g) i diklorometan (3700 mL)ohlađeni su u ledenoj kupelji do 4°C te je uz miješanje dodan fosforov oksiklorid (684 g). Polagano je preko 15 minuta u alikvotima dodavan kruti etil-ester 2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (670 g). Maksimalna dosegnuta temperatura iznosila je 18°C. Smjesa se zagrijavala do refluksa jedan sat, ohladila do 10°C u ledenoj kupelji te je brzo dodano 1.6 L ledene vode uz snažno miješanje. Temperatura se povisila do 15°C. Dodana je ION klorovodična kiselina (1.6 L)uz snažno miješanje. Temperatura se povisila do 22°C. Smjesa se ostavila da stoji 30 minuta kako bi se slojevi razdvojili. Smjesa je dosegla maksimum od 40°C. Vodeni sloj se podesio do pH 12-13 s 10N kalijevim hidroksidom (3.8 L)brzinom koja je omogućila da tijekom dodavanja temperatura dosegne i ostane na 55°C. Nakon završetka dodavanja smjesa se ohladila do 10°C i miješala 1 sat. Krutina je skupljena vakuum filtracijom i četiri puta isprana s vodom čime se dobio etil-ester 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (778 g, 100% donos)kao žuta krutina.
1HNMR (DMSO-d6) δ 1.25 (t, 3H, CH3), 2.44, 2.48 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 4.16 (q, 2H, CH2), 9.59 (s, 1H, CHO), 12.15 (br s, 1H, NH).
MS m/z 195 [M+1].
Etil-ester 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (806 g), kalijev hidroksid (548 g), voda (2400 mL) i metanol (300 mL) refluksirani su dva sata uz miješanje, a zatim ohlađeni do 8°C. Smjesa je dvaput ekstrahirana s diklorometanom. Vodeni sloj podešen je na pH 4 s 1000 mL 10 N klorovodične kiseline uz održavanje temperature ispod 15°C. Dodala se voda kako bi se omogućilo miješanje. Krutina je skupljana vakuum filtracijom, triput isprana s vodom i isušena u vakuumu na 50°C čime se dobila 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina (645 g, 93.5% donos) kao žuta krutina.
HNMR (DMSO-d6) δ 2.40, 2.43 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 9.57 (s, 1H, CHO), 12.07 (br s, 2H, NH+COOH).
MS m/z 168 [M+1].
5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina (1204 g) i 6020 mL dimetilformamid miješani su na sobnoj temperaturi dok su dodani l-(3-dimetil-aminopropil-3-etilkarbodiimid hidroklorid (2071 g), hidroksibenzotriazol (1460 g), trietilamin (2016 mL) i dietiletilendiamin (1215 mL). Smjesa se miješala 20 sati na sobnoj temperaturi. Smjesa se razrijedila s 3000 mL vode, 2000 mL luga i 3000 mL zasićene vodene otopine natrijevog hidrogenkarbonata, a pH podesio na više od 10 s ION natrijevim hidroksidom. Smjesa se dvaput ekstrahirala s po 5000 mL 10%-metanola u diklorometanu, a ekstrakti kombinirali, isušili s bezvodnim magnezijevim sulfatom te uparili do suhog u rotavaporu. Smjesa se razrijedila s 1950 mL toluena te ponovo isušila do suhog u rotavaporu. Talog se triturirao s 3:1 heksan:dietil-eterom (4000 mL). Krutine su skupljane vakuum filtracijom, dvaput isprane s 400 mL etil-acetata te sušene u vakuumu na 34°C 21 sat čime se dobio (2-dietilamino-etil)amid 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (819 g, 43% donos) kao svijetlosmeđa krutina.
1HNMR (dimetilsulfoksid-d6) δ 0.96 (t, 6H, 2xCH3), 2.31, 2.38 (2xs, 2xCH3), 2.51 (m, 6H 3xCH2), 3.28 (m, 2H, CH2), 7.34 (m, 1H, amid NH), 9.56 (s, 1H, CHO), 11.86 (s, 1H, pirol NH). MS m/z 266 [M+1].
(2-dietilamino-etil)amid 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (809 g), 5-fluoro-1,3-dihidro-indol-2-on (438 g), etanol (8000 mL) i pirolidin (13 mL)zagrijavali su se na 78°C 3 sata. Smjesa se ohladila do sobne temperature, a krutine skupljene vakuum filtracijom i isprane s etanolom. Krutine su miješane s etanolom (5900 mL)na 72°C 30 minuta.
Smjesa se ohladila do sobne temperature. Krutine su skupljane vakuum filtracijom, isprane s etanolom te sušene u vakuumu na 54°C 130 sati kako bi se dobio (2-dietilamino-etil)amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (1013 g, 88% donos)kao narančasta krutina.
1NMR (dimetilsulfoksid-d6) 5 0.98 (t, 6H, 2xCH3), 2.43, 2.44 (2xs, 2xCH3), 2.50 (m, 6H 3xCH2), 3.28 (q, 2H, CH2), 6.84, 6.92, 7.42, 7.71, 7.50 (5xm, 5H, aromatski, vinil, CONH), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.68 (s, 1H, pirol NH).
MS m/z 397 [M-1].
Primjer 81.
3-[4-(2-dietilaminoetilkarbamoil)-3,5-dimetil-1H-pirol-2-ilmetilen]-2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-6-karboksilna kiselina
2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-6-karboksilna kiselina (80 mg, 0.45 mmol) kondenzirana je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina kako bi se dobilo 210 mg (92%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.6 (s, 1H, NH), 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H, H-vinil), 7.57 (dd, J = 1.5 & 8.0 Hz, 1H), 7.40-7.42 (m, 2H), 3.28 (m, 2H, CH2), 2.88 (m, H-piperidin), 2.54 (s, 6H, 3xCH2), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 1.56 (m, H-piperidin), 0.97 (t, J = 6.98 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 424 [M+].
Primjer 82.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-(5-dimetilsulfamoil-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Dimetilamid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline (90 mg, 0.38 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (100 mg) kako bi se dobilo 100 mg (54%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.65 (s, 1H, NH), 11.30 (s, br, 1H, NH), 8.25 (d, 1H), 7.92 (s, 1H, H-vinil), 7.48-7.53 (m, 2H), 7.07 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.33 (m, 2H, CH2), 2.61 (s, 6H), N(CH3)2), 2.56 (t, 2H, CH2), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.45 (s, 3H, CH3), 2.44 (s, 3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 485 [M+].
Primjer 83.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 5-[5-(3-klorofenilsulfamoil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
(3-kloro-fenil)amid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline (120 mg, 0.38 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (100 mg) kako bi se dobilo 150 mg (69%) naslovnog spoja kao žuto-narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.55 (s, 1H, NH), 11.26 (br s, 1H, NH), 10.30 (br s, 1H, NH), 8.26 (d, 1H), 7.79 (s, 1H, H-vinil), 7.51-7.57 (m, 2H), 7.22 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 7.15 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 7.0 (m, 2H), 3.44 (m, 2H, CH2), 2.57 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.43 (s, 3H, CH3), 1.68 (m, 4H, 2xCH2).
MS m/z 568 [M+].
Primjer 84.
(2-pirolidin-1-iletil)amid 2,4-dimetil-5-[2-okso-5-(piridin-3-ilsulfamoil)-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Piridin-3-ilamid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline (110 mg, 0.38 mmol) kondenziran je S(2-pirolidin-1-iletil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (100 mg) kako bi se dobilo 150 mg (74%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.58 (s, 1H, NH), 8.21 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.04 (m, 1H), 7.76 (s, 1H, H-vinil), 7.49-7.54 (m, 2H), 7.41 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 6.94 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 3.33 (m, 2H, CH2), 2.56 (t, J= 7.06 Hz, 2H, CH2), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.43 (s, 6H, 2xCH3), 1.68 (m, 4H, 2xCH2).
MS m/z 535 [M+].
Primjer 85.
3-[3,5-dimetil-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1H-pirol-2-ilmetilen]-4-(2-hidroksietil)-1,3-dihidroindol-2-on
4-(2-hidroksietil)-1,3-dihidroindol-2-on (71 mg, 0.4 mmol) kondenziran je s 3,5-dimetil-4-(4-metil-piperazin-1-karbonil)-1H-pirol-2-karbaldehidom kako bi se dobilo 90 mg (55%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.25 (s, 1H, NH), 10.88 (s, 1H, NH), 7.57 (s, 1H, H-vinil), 7.03 (m, 1H), 6.75-6.82 (m, 2H), 4.86 (m, 1H, OH), 3.70 (m, 2H, CH2), 3.04 (m, 2H, CH2), 2.48 (m, 4H, 2xCH2), 2.28 (br s, 7H), 2.19 (s, 3H, CH3), 2.18 (s, 3H, CH3).
MS m/z (+ve)4.09.3 [M+].
Primjer 86.
Fenilamid 3-[3,5-dimetil-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-1H-pirol-2-ilmetilen]-2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline
Fenilamid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline (110 mg, 0.4 mmol) kondenziran je s 3,5-dimetil-4-(4-metil-piperazin-1-karbonil)-1H-pirol-2-karbaldehidom (100 mg) kako bi se dobilo 50 mg (24%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.52 (s, 1H, NH), 11.26 (s, 1H, NH), 10.08 (s, 1H, NH), 8.21 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H, H-vinil), 7.50 (dd, J = 1.6 & 8.3 Hz, 1H), 7.19 (m, 2H), 7.10 (m, 2H), 6.97 (m, 2H), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.28 (m, 10H, 2xCH3 & 2xCH2), 2.18 (s, 3H, CH3).
MS m/z 519 [M+].
Primjer 87.
(2-dietilaminoetil)amid 5-(5-dimetilsulfamoil-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Dimetilamid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline (90 mg, 0.38 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (100 mg) kako bi se dobilo 80 mg (43%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.30 (s, 1H, NH), 8.27 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H, H-vinil), 7.49 (dd, J = 1.7 & 8.0 Hz, 1H), 7.44 (m, 1H, CONHCH2CH2), 7.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.26 (m, 2H, CH2), 2.60 (s, 6H, N(CH3)2), 2.53 (m, 2H, CH2), 2.45-2.50 (m, 10H, 2xCH3 & N(CH2CH3)2), 0.96 (t, J= 7.2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 487 [M+].
Primjer 88.
(2-dietilaminoetil)amid 5-[5-(3-klorofenilsulfamoil)-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
(3-klorofenil)amid 2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-5-sulfonske kiseline (120 mg, 3.8 mmol) kondenziran je S(2-dietilaminoetil)amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (100 mg) kako bi se dobilo 80 mg (37%) naslovnog spoja kao žute krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.55 (s, 1H, NH), 11.24 (s, 1H, NH), 10.29 (s, 1H, NH), 8.25 (d, J = 1.87 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H, H-vinil), 7.52 (dd, J= 1.87 & 8.3 Hz, 1H), 7.42 (m, 1H, CONHCH2CH2), 7.22 (t, J = 8.02 Hz, 1H), 7.15 (t, J= 2 Hz, 1H), 7.08 (m, 1H), 7.0 (m, 2H), 3.27 (m, 2H, CH2), 2.48-2.57 (m, 6H, 3xCH2), 2.45 (s, 3H, CH3), 2.44 (s, 3H, CH3), 0.97 (t, J= 7.0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 570.1 [M+].
Primjer 95.
Etil-ester 3-(2-okso-5-fenil-l,2-dihidroindol~3-ilidenmetil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.74 (s, 1H, NH), 11.00 (s, 1H, NH), 8.13 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H, H-vinil), 7.70 (d, J= 7.7 Hz, 2H), 7.49 (dd, J = 1.7 & 8.0 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 7.7 Hz, 2H), 7.32 (m, 1H), 6.96 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.26 (q, J= 7.0 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.79 (m, 2H, CH2), 2.72 (m, 2H, CH2), 1.73 (m, 4H, 2xCH2), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 412 [M+].
Primjer 99.
Etil-ester 3-(2-okso-5-fenilsulfamoil-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-karboksilne kiseline
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.64 (s, 1H, NH), 11.33 (s, 1H, NH), 10.07 (s, 1H, NH), 8.24 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H, H-vinil), 7.57 (dd, J = 1.8 & 8.0 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.11 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 6.99 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.27 (q, J = 7.0 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.80 (m, 2H, CH2), 2.73 (m, 2H, CH2), 1.73 (m, 4H, 2xCH2), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 491 [M+].
Primjer 109.
3-[3-(morfolin-4-karbonil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-ilmetilen]-2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-6-karboksilna kiselina
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, 1H, NH), 12.75 (br s, 1H, COOH), 11.08 (s, 1H, NH), 7.85 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H, H-vinil), 7.62 (dd, J = 1.4 & 7.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 3.65 (m, 4H, 2xCH2), 3.55 (m, 4H, 2xCH2), 2.81 (m, 2H, CH2), 2.54 (m, 2H, CH2), 1.73 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 421 [M+].
Primjer 112.
5-bromo-3-[3-(pirolidin-1-karbonil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-ilmetilen]-1,3-dihidro-indol-2-on
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.56 (s, 1H, NH), 11.00 (s, 1H, NH), 8.05 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H, H-vinil), 7.28 (dd, J= 1.3 & 8.3 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 3.57 (m, 4H, 2xCH2), 2.79 (m, 2H, CH2), 2.65 (m, 2H, CH2), 1.88 (m, 4H, 2xCH2), 1.71 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 439 & 441 [M+-1] & [M++1].
Primjer 114.
3-(3-dimetilkarbamoil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol-1-ilmetilen)-2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-6-karboksilna kiselina
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, 1H, NH), 12.72 (br s, 1H, COOH), 11.05 (s, 1H, NH), 7.85 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H, H-vinil), 7.62 (dd, J= 1.3 & 7.9 Hz, 1H), 7.42 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 3.03 (s, 6H, N(CH3)2), 2.81 (m, 2H, CH2), 2.55 (m, 2H, CH2), 1.73 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 379 [M+].
Primjer 115.
4-metil-5-(5-metilsulfamoil-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilna kiselina
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.56 (br s, 1H, NH), 8.24 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H, H-vinil), 7.74 (d, J= 2.96 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=1.5&8.1Hz, 1H), 7.20 (br m, 1H, NHCH3), 7.03 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 2.57 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 361 [M+].
Primjer 116.
Etil-ester {[4-metil-5-(4-metil-5-metilsulfamoil-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karbonil]-amino}-octene kiseline
Etil-ester 4-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (lit. ref. D.O. Cheng, T. L. Bowman i E. LeGoff; J. Heterocyclic Chem.; 1976; 13; 1145-1147) formiliran je primjenom metode A, hidroliziran primjenom metode B, a zatim amidiran (metoda C) kako bi se dobio etil-ester [(5-formil-4-metil-1H-pirol-3-karbonil)-amino]-octene kiseline.
4-metil-5-metilaminosulfonil-2-oksindol (50 mg, 0.21 mmol) kondenziran je s etil-esterom [(5-formil-4-metil-1H-pirol-3-karbonil)-amino]-octene kiseline (100 mg, 0.42 mmol)i piperidinom (0.1 mL) U etanolu (2 mL) kako bi se dobilo 50 mg (52%) naslovnog spoja.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, 1H, NH), 11.29 (v.br. s, 1H, NH-CO), 8.33 (t, J= 5.8 Hz, 1H, CONHCH2), 7.83 (d, J= 3.11 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H, H-vinil), 7.71 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.34 (br m, 1H, NHCH3), 6.89 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 4.11 (q, J= 7.1 Hz, 2H, OCH2CH3), 3.92 (d, J = 5.8 Hz, 2H, GlyCH2), 2.86 (s, 3H, CH3), 2.48 (s, 3H, CH3), 2.42 (d, J= 4.71 Hz, 3H, HNCH3), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 460 [M+].
Primjer 117.
Etil-ester {[4-metil-5-(5-metilsulfamoil-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karbonil]-amino}-octene kiseline
Smjesa 5-metilaminosulfonil-2-oksindol (0.06 g, 0.22 mmol), etil-estera [(5-formil-4-metil-1H-pirol-3-karbonil)-amino]-octene kiseline (0.075 g, 0.27 mmol) i piperidina (2 kapi) U etanolu (5 mL)zagrijavala se u zataljenoj cijevi na 90°C 12 sati. Talog se nakon hlađenja skupio vakuum filtracijom, isprao s etanolom, triturirao s diklorometanom/eterom i isušio kako bi se dobilo 0.035 g (36%) naslovnog spoja kao žućkasto-smeđe krutine.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.6 (s, 1H, NH), 11 (v.br. s, 1H, NH-CO), 8.30 (t, J= 5.7 Hz, 1H, CONHCH2), 8.25 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H, H-vinil), 7.84 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 1.9 & 8.5 Hz, 1H), 7.14 (br m, 1H, NHCH3), 7.04 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 4.11 (q, J= 6.7 Hz, 2H, OCH2CH3), 3.92 (d, J= 5.7 Hz, 2H, GlyCH2), 2.55 (s, 3H, CH3), 2.41 (m, 3H, NCH3), 1.20 (t, J= 6.7 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 466 [M+].
Primjer 118.
{[4-metil-5-(5-metilsulfamoil-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karbonil3-amino}-octena kiselina
Smjesa etil-estera [(5-formil-4-metil-1H-pirol-3-karbonil)-amino]-octene kiseline (0.142 g, 0.59 mmol)i 1N NaOH (1.2 mL) u metanolu (10 mL) zagrijavala se na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcija se koncentrirala, a talog kondenzirao s 5-metilaminosulfonil-2-oksindolom (0.13 g, 0.48 mmol) i piperidinom (0.12 mL) u etanolu (12 mL) kako bi se dobilo 0.11 g (52%) naslovnog spoja.
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.98 (br s, 1H, NH), 8.17 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.75 (d, J= 3.1 Hz, 1H), 7.51 (dd, J= 2 & 8.2 Hz, 1H), 7.21 (m na br s, 2H), 6.97 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.41 (d, J= 4.2 Hz, 2H, CH2NH), 2.54 (s, 3H, pirol-CH3), 2.39 (s, 3H, ArCH3).
MS m/z 417 [M-1]+.
Primjer 120.
5-metil-2-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilna kiselina
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.77 (br s, 1H, NH), 12.49 (s, 1H, COOH), 11.07 (s, 1H, NH), 8.39 (s, 1H, H-vinil), 7.43 (d, J= 7.47 Hz, 1H), 7.20 (t, J= 7.47 Hz, 1H), 7.03 (t, J= 7.47 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 7.47 Hz, 1H), 6.49 (d, J= 1.53 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 269 [M+H]+.
Primjer 121.
Etil-ester 5-metil-2-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.79 (s, 1H, NH), 11.08 (s, 1H, NH), 8.31 (s, 1H, H-vinil), 7.45 (d, J= 7.52 Hz, 1H), 7.20 (t, J= 7.52 Hz, 1H), 7.03 (t, J= 7.52 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 7.52 Hz, 1H), 6.50 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 4.26 (q, J = 7.2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.33 (s, 3H, CH3), 1.32 (t, J= 7.2 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 297.1 [M+H]+.
Primjer 122.
Etil-ester 2-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
1NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.72 (s, 1H, NH), 11.16 (s, 1H, NH), 8.29 (s, 1H, H-vinil), 7.53 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.35 (dd, J= 2.0 & 8.05 Hz, 1H), 6.87 (t, J= 8.05 Hz, 1H), 6.53 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 4.28 (q, J = 7.03 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.35 (s, 3H, CH3), 1.33 (t, J= 7.03 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 375 & 377 [M+H]+.
Primjer 123.
2-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-5-metil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina
1HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.72 (s, 1H, NH), 12.57 (s, 1H, COOH), 11.19 (s, 1H, NH), 8.36 (s, 1H, H-vinil), 7.51 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 1.4 & 8.17 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 8.17 Hz, 1H), 6.52 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 347 & 349 [M+H]+.
Primjer 124.
(2-pirolidin-1-iletil)-amid 2-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3~ilidenmetil)-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Otopini 2-formil-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (250 mg, 1.63 mmol) u dimetilformamidu (3 mL) dodan je 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (376 mg, 1.2 ekv.), 1-hidroksibenzotriazol (265 mg, 1.2 ekv.), trietilamin (0.45 mL, 2 ekv.)i l-(2-aminoetil)pirolidin (0.23 mL, 1.1 ekv.). Nakon miješanja preko noći na sobnoj temperaturi, reakcija se razrijedila sa zasićenom otopinom natrijevog hidrogenkarbonata i luga (s posebnim dodatkom soli)te ekstrahirala s 10%-nim metanolom u diklorometanu. Kombinirani organski slojevi isprani su s lugom, isušeni s bezvodnim natrijevim sulfatom te koncentrirani kako bi se dobilo 130 mg (2-pirolidin-1-il-etil)-amida 2-formil-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Smjesa 5-bromo-2-oksindola (106 mg, 0.5 mmol), (2-pirolidin-1-il-etil)-amida 2-formil-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (125 mg, l ekv.) i piperidina (0.2 mL) u etanolu (2 mL) zagrijavala se u zataljenoj cijevi na 80°C 1 sat, a zatim ohladila. Oblikovani talog skupio se vakuum filtracijom, isprao s etanolom i etil-acetatom te isušio kako bi se dobio naslovni spoj kao narančasta krutina.
1NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, 1H, NH), 11.06 (br s, 1H, NH), 8.56 (s, 1H, H-vinil), 8.15 (m, 1H, CONHCH2), 7.48 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.31 (dd, J= 1.8 & 7.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 3.35 (m, 2H, HNCH2CH2), 2.56 (t, J= 6.91 Hz, 2H, HNCH2CH2), 2.35 (s, 3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 443/445 [M+ i M++2].
Primjer 125.
(2-dietilaminoetil)-amid 2-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Otopini 2-formil-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (320 mg, 2.1 mmol) u dimetilformamidu (3 mL)dodan je 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (483 mg, 1.2 ekv.), 1-hidroksibenzotriazol (340 mg, 1.2 ekv.), trietilamin (0.59 mL, 2 ekv.)i N,N-dietiletilendiamin (0.32 mL, 1.1 ekv.). Nakon miješanja preko noći na sobnoj temperaturi, reakcija se razrijedila sa zasićenom otopinom natrijevog hidrogenkarbonata i luga (s posebnim dodatkom soli)te ekstrahirala s 10%-nim metanolom u diklorometanu. Kombinirani organski slojevi isprani su s lugom, isušeni s bezvodnim natrijevim sulfatom te koncentrirani kako bi se dobio (2-dietilaminoetil)-amid 2-formil-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Smjesa 5-bromo-2-oksindola (106 mg, 0.5 mmol), (2-dietilaminoetil)-amida 2-formil-5-metil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (126 mg, l ekv.) i piperidina (0.2 mL) u etanolu (2 mL)zagrijavala se u zataljenoj cijevi na 80°C 1 sat, a zatim ohladila. Talog se skupio vakuum filtracijom, isprao s etanolom i etil-acetatom te isušio kako bi se dobio naslovni spoj kao narančasta krutina.
1HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, 1H, NH), 11.11 (br s, 1H, NH), 8.54 (s, 1H, H-vinil), 8.1 (m, 1H, CONHCH2), 7.49 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 2.2 & 8.3 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.58 (d, J= 2.24 Hz, 1H), 3.31 (m, 2H, HNCH2CH2), 2.59 (m, 6H, 3xCH2), 2.36 (s, 3H, CH3), 0.99 (t, J= 6.8 Hz, 6H, N(CH2H3)2).
MS-EI m/z 445/447 [M+ i M++2].
Primjer 126.
(2-dietilamino-etil)-amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Smjesa l,3-dihidro-indol-2-ona (266 mg, 2 mmol), (2-dietilamino-etil)-amida 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (530 mg, 2 mmol) i piperidina (1 kap) u etanolu zagrijavala se na 90°C 2 sata. Reakcija se ohladila do sobne temperature, a rezultirajući talog skupio vakuum filtracijom, isprao s etanolom i isušio kako bi se dobilo 422 mg (55%) naslovnog spoja kao svijetložute krutine.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.7 (s, 1H, NH), 10.9 (s, 1H, NH), 7.88 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H, H-vinil), 7.41 (t, J= 5.4 Hz, 1H, NH), 7.13 (dt, J= 1.2 & 7.6 Hz, 1H), 6.99 (dt, J= 1.2 & 7.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 3.28 (m, 2H), 2.48-2.55 (m, 6H), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 0.97 (t, J= 7.2 Hz, 6H, N(CH2H3)2).
MS + ve APCI 381 [M++1].
Primjer 127.
(2-dietilamino-etil)-amid 5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Smjesa 5-kloro-1,3-dihidro-indol-2-ona (335 mg, 2 mmol), (2-dietilamino-etil)-amida 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (530 mg, 2 mmol)i piperidina (1 kap) u etanolu zagrijavala se na 90°C 2 sata. Reakcija se ohladila do sobne temperature, a rezultirajući talog skupio vakuum filtracijom, isprao s etanolom i isušio kako bi se dobilo 565 mg (68%) naslovnog spoja kao narančaste krutine.
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.65 (s, 1H, NH), 11.0 (s, 1H, NH), 7.98 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H, H-vinil), 7.44 (t, NH), 7.13 (dd, J= 2.1 & 8.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.28 (g, 2H), 2.48-2.53 (m, 6H), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.43 (s, 3H, CH3), 0.97 (t, J= 7.0 Hz, 6H, N(CH2H3)2).
MS + ve APCI 381 [M++1].
Primjer 128.
(2-pirolidin-1-etil)-amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3--karboksilne kiseline
l,3-dihidro-indol-2-on kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)-amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kako bi se dobio naslovni spoj.
MS + ve APCI 379 [M++1].
Primjer 129.
(2-pirolidin-1-il-etil)-amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fluoro-1,3-dihidro-indol-2-on kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)-amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kako bi se dobio naslovni spoj.
MS + ve APCI 397 [M++1].
Postupak uz povećanje količine:
5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina (61 g), 5-fluoro-1,3-dihidro-indol-2-on (79 g), etanol (300 mL) i pirolidin (32 mL) refluksirani su 4.5 sati. Smjesi je dodana octena kiselina (24 mL) te se nastavilo refluksirati 30 minuta. Smjesa se ohladila do sobne temperature, a krutine skupljale vakuum filtracijom i dvaput isprane s etanolom. Krutine su miješane 130 minuta u 40%-tnom acetonu u vodi (400 mL) koja je sadržavala 12 N klorovodičnu kiselinu (6.5 mL). Krutine su skupljene vakuum filtracijom i dvaput isprane s 40%-tnim acetonom u vodi. Krutine su isušene u vakuumu kako bi se dobila 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina (86 g, 79% donos)kao narančasta krutina.
1HNMR (dimetilsulfoksid-d6) δ 2.48, 2.50 (2xs, 6H, 2xCH3), 6.80, 6.88, 7/68, 7.72 (4xm, 4H, aromatski i vinil), 10.88 (s, 1H, CONH), 12.12 (2, 1H, COOH), 13.82 (s, 1H, pirol NH).
MS m/z 299 [M-1].
Miješali su se 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina (100 g) i dimetilformamid (500 mL) te se dodao benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonij heksafluorfosfat (221 g), 1-(2-aminoetil)pirolidin (45.6 g) i trietilamin (93 mL). Smjesa se miješala 2 sata na temperaturi okoline. Kruti produkt se skupljao vakuum filtracijom te isprao s etanolom. Krutine su muljem isprane miješanjem u etanolu (500 mL) jedan sat na 64°C te ohlađene do sobne temperature. Krutine su skupljene vakuum filtracijom, isprane s etanolom te isušene u vakuumu kako bi se dobio (2-pirolidin-1-il-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-l, 2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (101.5 g, 77% donos).
1HNMR (dimetilsulfoksid-d6) δ 1.60 (m, 4H, 2xCH2), 2.40, 2.44 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 4H, 2xCH2), 2.57, 3.35 (2xm, 4H, 2xCH2), 7.53, 7.70, 7.73, 7.76 (4xm, 4H, aromatski i vinil), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.67 (s, 1H, pirol NH). MS m/z 396 [M+1].
Primjer 130.
(2-pirolidin-1-il-etil)-amid 5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-kloro-1,3-dihidro-indol-2-on kondenziran je S(2-pirolidin-1-il-etil)-amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kako bi se dobio naslovni spoj.
MS + ve APCI 413 [M++1].
Primjer 131.
(2-dimetilaminoetil)-amid 2,4-dimetil-5-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
l,3-dihidro-indol-2-on kondenziran je S(2-dimetilamino-etil)-amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kako bi se dobio naslovni spoj.
1NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.63 (s, 1H, NH), 10.90 (s, 1H, NH), 7.78 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H, H-vinil), 7.48 (t, 1H, NH), 7.13 (dt, 1H), 6.98 (dt, 1H), 6.88 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 3.31 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 2.38 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 353 [M++1].
Primjer 132.
(2-dimetilaminoetil)-amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-fluoro-1,3-dihidro-indol-2-on kondenziran je S(2-dimetilaminoetil)-amidom 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline kako bi se dobio naslovni spoj.
1NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.68 (s, 1H, NH), 10.90 (s, 1H, NH), 7.76 (dd, J= 2.4 & 9.4 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H, H-vinil), 7.51 (t, 1H, NH), 6.93 (m, 1H), 6.84 (dd, J= 4.6 & 8.4 Hz, 1H), 3.31 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 2.38 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 371 [M*+1].
Primjer 193.
(2-etilamino-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
(2-etilamino-etil)-amid 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (99 g), etanol (400 mL), 5-fluoro-2-oksindol (32 g) i pirolidin (1.5 g)refluksirani su uz miješanje 3 sata. Smjesa se ohladila do sobne temperature, a krutine skupljene vakuum filtracijom. Krutine su miješane u etanolu na 60°C, ohlađene do sobne temperature te skupljene vakuum filtracijom. Produkt se isušio u vakuumu kako bi se dobio (2-etilamino-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-l,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (75 g, 95% donos).
1HNMR (dimetilsulfoksid-de) δ 1.03 (t, 3H, CH3), 2.42, 2.44 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.56 (q, 2H, CH2), 2.70, 3.30 (2xt, 4H, 2xCH2), 6.85, 6.92, 7.58, 7.72, 7.76 (5xm, 5H, aromatski, vinil i CONH), 10.90 (br s, 1H, CONH), 13.65 (br s, 1H, pirol NH).
MS m/z 369 [M-1].
Primjer 195.
(2-dietil-N-oksoamino-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Metoda A:
(2-dietilamino-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (598 mg)i diklorometan (60 mL) u ledenoj kupelji obrađeni su s 3-kloroperoksibenzojevom kiselinom (336 mg)te se smjesa miješala na sobnoj temperaturi preko noći. Otapalo se obradilo u rotavaporu, a talog suspendirao u metanolu (20 mL). Dodala se voda (20 mL) u kojoj je sadržan natrijev hidroksid (240 mg) te se smjesa miješala jedan sat. Talog se skupio vakuum filtracijom, isprao s 5 mL vode te isušio u vakuumu kako bi se dobio (2-dietil-N-oksoamino-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (510 mg, 82% donos) kao narančasta krutina.
1NMR (DMSO-d6) δ 13.72 (br s, 1H, NH), 11.02 (br s, 1H, CONH), 9.81 (br s, 1H, CONH), 7.75 (dd, 1H, aromatski), 7.70 (s, 1H, aromatski), 6.93 (td, 1H, aromatski), 6.84 (m, 1H, aromatski), 3.63 (m, 2H, CH2), 3.29 (m, 2H, CH2), 3.14 (m, 4H, 2xCH2), 2.47 (s, 1H, CH3), 2.45 (s, 3H, CH3), 1.64 (t, 6H, 2xCH3).
MS m/z 415 [M+1].
Metoda B:
(2-dietilamino-etil)-amid 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (10 g) suspendiran je u diklorometanu (100 mL) te ohlađen u ledenoj kupelji. Uz miješanje je dodana 3-kloroperoksibenzojeva kiselina (13.1 g) te se smjesa ostavila ugrijati do sobne temperature, a zatim miješala preko noći. Smjesa se uparila u rotavaporu do suhog te kromatografirala na koloni silikagela eluirajući s 20% metanolom u diklorometanu. Frakcije koje su sadržavale produkt kombinirane su i uparene u rotavaporu do suhog kako bi se dobio (2-dietil-N-oksoamino-etil)-amid 5-formil-2,4-dimetil-N-pirol-3-karboksilne kiseline (9 g, 83% donos).
(2-dietil-N-oksoamino-etil)-amid 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (9 g), 5-fluoro-1,3-dihidro-indol-2-on ((9 g, 83% donos)), i pirolidin ((9 g, 83% donos)(0.1 g) refluksirani su u etanolu (30 mL) 4 sata. Smjesa se ohladila u ledenoj kupelji, a talog skupio vakuum filtracijom te isprao s etanolom. Krutine su se miješale u etil-acetatu (30 mL), skupljene vakuum filtracijom, isprane s etil-acetatom te isušene u vakuumu kako bi se dobio (2-dietil-N-oksoamino-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (10.3 g, 80% donos)kao narančasta krutina.
1NMR (DMSO-d6) 5 13.72 (br s, 1H, NH), 11.02 (br s, 1H, CONH), 9.81 (br s, 1H, CONH), 7.75 (dd, 1H, aromatski), 7.70 (s, 1H, aromatski), 6.93 (td, 1H, aromatski), 6.84 (m, 1H, aromatski), 3.63 (m, 2H, CH2), 3.29 (m, 2H, CH2), 3.14 (m, 4H, 2xCH2), 2.47 (s, 1H, CH3), 2.45 (s, 3H, CH3), 1.64 (t, 6H, 2xCH3).
MS m/z 415 [M+1].
Primjer 190.
[2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilna kiselina (120 mg, 0.4 mmol)protresena je s EDC, HCl (96 mg, 0.5 mmol), bezvodnim 1-hidroksi-benztriazolom (68 mg, 0.5 mmol)i 2-(2-aminoetilpiridinom pribavljenim od Aldrich u bezvodnom DMF (3 mL) 2-3 dana na sobnoj temperaturi. Reakcijska smjesa razrijedila se s 1M NaHCO3 (1.5 mL), zatim s 8 mL vode. Istaloženi sirovi produkt skupljen je filtracijom, ispran s vodom, isušen i pročišćen kristalizacijom ili kromatografijom kako bi se dobio [2-(piridin-1-il)-etil]-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Primjer 189.
[2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Postupkom kako je opisano u prethodnom primjeru, osim supstitucije 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline s 5-[5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom (127 mg), dobio se [2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Primjer 192.
[2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Postupkom kako je opisano u Primjeru 190 gore, ali supstituirajući 5-[5-fluoro-2-okso-l, 2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnu kiselinu s 5-[5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom (145 mg)dobiven je [2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Primjer 191.
[2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Postupkom kako je opisano u Primjeru 190 gore, ali supstituirajući 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnu kiselinu s 5-[2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom (113 mg)dobiven je [2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Primjer 203.
[2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[5-cijano-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Postupkom kako je opisano u Primjeru 190 gore, ali supstituirajući 5-[5-fluoro-2-okso-l,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnu kiselinu s 5-[5-cijano-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom (123 mg)dobiven je [2-(piridin-1-il)etil]-amid 5-[5-cijano-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Primjeri 142, 186, 187, 188 i 204.
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s l-(2-aminoetil)pirolidinom, pribavljenim od Aldrich Chemical Company, Inc. dobiveni su željeni spojevi.
Primjeri 143-147
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s l-(2-aminoetil)imidazolin-2-onom (pripravljenim zagrijavanjem dimetil-karbonata s bis(2-aminoetil)aminom (2 ekvivalenta) U zataljenoj tikvici do 150°C 30 min., slijedeći proceduru opisanu u U.S. Patentu 2613212 (1950), Rohm & Haas Co. Sirovi produkt pročišćen je na silikagelu primjenom smjese eluensa kloroforma-metanola-vodene otopine amonijaka 80:25:2)dobiveni su željeni spojevi.
Primjeri 148-151 i 184
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil) piridin s etil-esterom 4-(2-aminoetil)piperazin-1-octenom kiselinom (pripravljenim kako slijedi: Etil-ester piperazin-1-octene kiseline (11.22 g) obrađen je s jodoacetonitrilom (5.0 mL) u prisutnosti kalijevog karbonata (6.9 g) u etil-acetatu (260 mL) na 0°C. Po završetku dodavanja jodoacetonitrila (45 min), reakcijska smjesa se dalje miješala na sobnoj temperaturi 11 sati o Reakcijska smjesa profiltrirala se, a filtrati uparili. Talog se hidrogenirao u prisutnosti kobalt-borida (pripravljenog iz CoCl2 i natrijevog borohidrida)na sobnoj temperaturi na 50 psi 2 dana u etanolu. Filtracijom, uparavanjem i kromatografskim pročišćavanjem primjenjujući smjesu eluensa kloroforma-metanola-vodene otopine amonijaka 80:25:2 dobiven je željeni amin (3.306 g) kao blijedožuto ulje) dobiveni su željeni spojevi.
Primjeri 152-153
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s 2-[(2-aminoetilamino)]acetonitrilom (pripravljenim kako slijedi: Otopina jodoacetonitrila (50 mmol) u etil alkoholu (80 ml) dodana je otopini etilen diamina (150 ml) u etil-alkoholu (60 ml)na 0°C tijekom perioda od 30 minuta. Nastavilo se miješati dodatnih 1 sat na 0°C, a zatim na sobnoj temperaturi 14 sati. Dodano je 55 mmol kalijevog karbonata, miješano 30 minuta, profiltrirano, a filtrat se koncentrirao na sobnoj temperaturi. Talog se pročistio na silikagelu primjenjujući smjesu eluensa kloroforma-metanola-vodene otopine amonijaka 80:15:1.5 kako bi se dobio 2-[(2-aminoetilamino)]-acetonitril (3.550 g) koji se odmah upotrijebio)dobiveni su željeni spojevi.
Primjeri 154-158
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s 1-(3-aminopropil)-azepin-2-onom (pripravljenim prema postupku u Kraft A.: J. Chem. Soc. Perkin Trans, l, 6, 1999, 705-14, osim što je hidroliza DBU izvedena na 145°C u prisutnosti litijevog hidroksida (1 sat, 5 ml DBU, 2 ml vode, 420 mg litijevog hidroksid hidrata).
Pročišćavanjem sirovog produkta na silikagelu primjenjujući smjesu eluensa kloroforma-metanola-vodene otopine amonijaka 80:40:4 dobio se l-(3-aminopropil)azepin-2-on (4.973 g, 87% donos) dobiveni su željeni spojevi.
Primjeri 133-135, 159 i 200
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s N-acetil-etilen diaminom, (pripravljenim zagrijavanjem smjese etil-acetata s etilen-diaminom (1.5 ekvivalenata) do 160°C 1 sat u zataljenoj posudi. Vakuum destilacijom dobio se željeni produkt u 56% donosu. N-acetil-etilen diamin također je dostupan u Aldrich)dobiveni su željeni spojevi.
Primjeri 146-140
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s l-(3-aminopropil)-tetrahidro-pirimidin-2-on (pripravljen na isti način kao l-(3-aminopropil)-azepin-2-on prema postupku u Kraft A.: J. Chem. Soc. Perkin Trans, l, 6, 1999, 705-14: Ukratko, 1,3,4,6,7,8-heksahidro-2H-pirimido[1,2-a]pirimidin (4.939 g), litijev hidroksid hidrat (918 mg) i 2 ml vode zagrijavalo se bez otapala u zataljenoj posudi do 145°C 1 sat. Sirovi produkt pročišćen je na koloni silikagela u kloroformu-metanolu-vodenoj otopini amonijaka 80:40:4 kako bi se dobio čisti amin (5.265 g, 94% donos).
Primjeri 141, 160-162 i 185
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s l-(2-aminoetil)-piperazin-2-onom (pripravljenim kako slijedi: Nakon hlađenja u ledenoj kupelji, unutar 5 minuta, čisti tert-butildifenilsilil klorid (25 mL, 97.7 mmol) dodan je kap po kap u otopinu DBU (19.5 ml, 130 mmol) i bis(2-aminoetil)amina (4.32 mL, 40 mmol) u bezvodnom dimetil-acetamidu (80 mL) na sobnoj temperaturi. Smjesa se miješala 5 sati. Etil-ester bromooctene kiseline (6.70 mL, 60 mmol) dodan je odmah nakon hlađenja do sobne temperature. Reakcija se miješala 25 minuta, zatim uparila u visokom vakuumu. Talog se otopio u metanolu (200 ml) te su dodani KHCO3 (10 g) i KF (12 g, 200 mmol) i smjesa se miješala na 60°C 5 sati. Dodano je 10 g Na2CO3, miješano 10 minuta, ohlađeno te profiltrirano. Filtrati su upareni. Talog je ekstrahiran s heksanom (2 puta 250 ml). Materijal netopljiv u heksanu otopljen je u etanolu (60 ml), profiltriran i uparen. Talog se pročistio na koloni silikagela u kloroformu-metanolu-vodenoj otopini amonijaka 80:40:4 kako bi se dobio čisti amin (4.245 g, 74% donos))dobiveni su željeni spojevi.
Primjeri 163-167
Postupcima kako je opisano u Primjerima 190, 189, 191, 192 i 203 gore, ali supstituirajući 2-(2-aminoetil)piridin s 3-[(2-aminoetil)amino]propionitrilom (pripravljenim iz etilen-diamina (150 mmol) i akrilonitrila (50 mmol) U THF na sobnoj temperaturi, kako je opisano u Israel, M. et al.: J. Med. Chem., 7, 1964, 710-16, dobiven je željeni amin (4.294 g)) dobiveni su željeni spojevi.
Primjer 168
[2-(4-metilpiperazin-1-il)-etil]-amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Promiješanoj žutoj blatnoj smjesi 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (90 mg), DMF (0.8 mL) i TEA (0.084 mL) U 20 mL-skoj reakcijskoj cijevi, dodan je BOP reagens (199 mg). Smjesa je u 5 minuta postala bistra. U bistru smjesu dodan je 2-(4-metilpiperazin-1-il)etilamin1 (51 mg). Rezultirajuća otopina miješala se na sobnoj temperaturi preko noći. Produkti u obliku žute krutine istaložili su se iz reakcijskog sistema. Tankoslojnom kromatografijom (10% metanol u metilen-kloridu) ustanovljeno je da se čitav početni materijal pretvorio u produkt. Krutina je izolirana vakuum filtracijom i jedanput isprana s etanolom (1 mL). Krutina je 20 minuta obrađivana ultrazvukom u dietil-eteru (2 mL) te skupljena vakuum filtracijom. Nakon isušivanja u vakuumu, dobiven je (4-metilpiperazin-1-il)-etil]-amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (79 mg, 62% donos).
1NMR (DMSO-d6) δ 2.13 (s, 3H, CH3), 2.40, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.41 (m, 2H, CH2), 2.47 (m, 8H, 4xCH2), 3.30 (m, 2H, CH2), 6.82 (dd, J =4.5, 8.7 Hz, 1H), 6.91 (td, 2J=2.4, 3J = 8.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.75 (dd, J= 2.8, 9.6 Hz, 1H)(aromatski i vinil), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.67 (s, 1H, NH).
LC-MS(m/z)424.4 (M-l).
Primjer 169
(4-metilpiperazin-1-il-etil)-amid 5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Slijedeći postupak iz primjera 168 gore, ali supstituirajući 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnu kiselinu s 5-[5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom (95 mg, 0.3 mmol)dobiven je (4-metilpiperazin-1-il-etil)-amid 5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (76 mg, 58%).
1HNMR (DMSO-d6) δ 2.13 (s, 3H, CH3), 2.41, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.42 (m, 2H, CH2), 2.48 (m, 8H, 4xCH2), 3.30 (m, 2H, CH2), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (dd, J= 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.97 (d, J= 2.0 Hz, 1H)(aromatski i vinil), 10.98 (s, 1H, CONH), 13.62 (s, 1H, NH).
LC-MS(m/z)440.2 (M-1).
Primjer 170
(4-metilpiperazin-1-il-etil)-amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Slijedeći postupak iz primjera 168 gore, ali supstituirajući 5-(5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnu kiselinu s 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom dobiven je (4-metilpiperazin-1-il-etil)-amid 5-(5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (39 mg, 54%)iz SU011670 (54 mg, 0.15 mmol).
1HNMR (DMSO-d6) δ 2.14 (s, 3H, CH3), 2.41, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.42 (m, 2H, CH2), 2.48 (m, 8H, 4xCH2), 3.31 (m, 2H, CH2), 6.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J =2.O, 8.O Hz, 1H), 7.44 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 8.09 (d, J= 2.0 Hz, 1H)(aromatski i vinil), 10.99 (s, 1H, CONH), 13.61 (s, 1H, NH).
LC-MS(m/z)486.6 (M).
Primjer 172
(4-metilpiperazin-1-il-etil)-amid 5-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Slijedeći postupak iz primjera 168 gore, ali supstituirajući 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnu kiselinu SU014900 s 5-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilnom kiselinom dobiven je (4-metilpiperazin-1-il-etil)-amid 5-(2-okso-1,2-dihidro-indol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline, SU014903 (136 mg, 84%) iz SU012120 (112.8 mg, 0.4 mmol).
1HNMR (DMSO-d6) δ 2.13 (s, 3H, CH3), 2.39, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.42 (m, 2H, CH2), 2.48 (m, 8H, 4xCH2), 3.30 (t, 2H, CH2), 6.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.96 (t, J =7.4 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.41 (t, J" = 5.4 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.76 (d, J= 7.6 Hz, 1H)(aromatski i vinil), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.61 (s, 1H, NH).
LC-MS(m/z)406.2 (M-l).
Primjer 171
[2-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)-etil)-amid 5-[2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Promiješanoj žutoj blatnoj smjesi 5-[2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (112.8 mg, 0.4 mmol), DMF (0.5 mL) i trietilamina (0.111 mL) U 20 mL-skoj reakcijskoj cijevi, dodan je BOP reagenS (265 mg). Smjesa je u 5 minuta postala bistra. U bistru smjesu dodan je 2-(2,6-dimetilpiperazin-1-il)etilamin (68.6 mg) (vidi, Tapia, L. Alonso-Cires, P. Lopez-Tudanca, R. Mosguera, L. Labeaga, A. Innerarity, A. Orjales, J. Med. Chem., 1999, 42, 2870-2880). Rezultirajuća otopina miješala se na sobnoj temperaturi preko noći. Tankoslojnom kromatografijom (10% metanol u metilen-kloridu) ustanovljeno je da se čitav početni materijal pretvorio u produkt. Reakcijska smjesa uparila se do suhog, a zatim pročistila flash kromatografijom (CH2Cl2/CH3OH=20/l-15/l), a zatim rekristalizacijom kako bi se dobio [2-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)-etil)-amid 5-[2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (83 mg, 50% donos).
1HNMR (DMSO-d6) δ 1.15, 1.16 (2xs, 6H, 2xCH3), 1.95 (t, J = 11.6 Hz, 2H, CH2), 2.41, 2.47 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 2H, CH2), 3.03 (d, J = 10 Hz, 2H), 3.19 (m, 2H), 3.30 (m, 2H, CH2), 6.86 (d, J= 8.0, Hz, 1H), 6.97 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.11 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.48 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.75 (d, J= 7.6 Hz, 1H)(aromatski i vinil), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.62 (s, 1H, NH).
LC-MS(m/z)422.2 (M+l).
Primjer 173
[2-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)-etil)-amid 5-[5-fluoro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Slijedeći postupak opisan u primjeru 168 gore dobiven je željeni spoj (60 mg, 0.2 mmol).
1NMR (DMSO-d6) δ 0.891, 0.907 (2xs, 6H, 2xCH3), 1.49 (t, J= 10.4 Hz, 2H), 2.40, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.41 (m, 2H, CH2), 2.74 (m, 4H), 3.30 (m, 2H), 6.82 (dd, J= 4.5, 8.7 Hz, 1H), 6.90 (td, 2J = 2.4, 3J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 4.6, 8.4 Hz, 1H)(aromatski i vinil), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.65 (s, 1H, NH). LC-MS(m/z)438.4 (M-1).
Primjer 174
[2-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)-etil)-amid 5-[5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Slijedeći postupak opisan u primjeru 171 gore dobiven je željeni spoj (31.2 mg, 34%) iz 5-[5-kloro-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (63 mg, 0.2 mmol).
1HNMR (DMSO-d6) δ 1.15, 1.16 (2xs, 6H, 2xCH3), 1.95 (t, J = 11.6 Hz, 2H, CH2), 2.40, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 2H, CH2), 3.03 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 3.19 (m, 2H), 3.30 (m, 2H, CH2), 6.85 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.11 (dd, J= 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.52 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.97 (d, J= 2.0 Hz, 1H) (aromatski i vinil), 10.99 (s, 1H, CONH), 13.63 (s, 1H, NH).
LC-MS(m/z)456.2 (M+1).
Primjer 175
[2-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)-etil)-amid 5-[5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol-(3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline
Slijedeći postupak opisan u primjeru 171 gore dobiven je željeni spoj (40 mg, 40%)iz 5-[5-bromo-2-okso-1,2-dihidro-indol- (3Z)-ilidenmetil]-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (74 mg, 0.2 mmol).
1HNMR (DMSO-d6) δ 1.15, 1.16 (2xs, 6H, 2xCH3), 1.95 (t, J = 11.6 Hz, 2H, CH2), 2.40, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 2H, CH2), 3.03 (d, J= 10.4 Hz, 2H), 3.19 (m, 2H), 3.30 (m, 2H, CH2), 6.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.51 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 8.10 (d, J = 2.0 Hz, 1H)(aromatski i vinil), 10.99 (s, 1H, CONH), 13.62 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z)498.4 (M-l).
Biološki primjeri
Sljedeća ispitivanja primijenjena su za pronalaženje onih spojeva koji pokazuju optimalnu razinu željenog djelovanja.
A. Postupci ispitivanja.
Sljedeća ispitivanja mogu se upotrijebiti za određivanje razine djelovanja i učinka različitih spojeva iz predloženog izuma na jednu ili više PK. Slična ispitivanja mogu se dizajnirati duž istih linija za bilo koju PK primjenom u struci dobro poznatih metoda.
Nekoliko ovdje opisanih ispitivanja izvedena su u formatu imunoenzimskog pokusa , ELISA, (Voller, et al., 1980, «Enzyme-Linked Immunosorbent Assay», Manual of Clinical Immunology, 2d ed., Rose and Friedman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., str. 359-371). Opća procedura je kako slijedi: spoj se uvede u stanice koje ekspresiraju testnu kinazu, bilo prirodno ili rekombinantno, za odabrani vremenski period nakon čega se, ako je testna kinaza receptorska, doda ligand za koji je poznato da aktivira receptor. Stanice se raspadaju, a produkt raspadanja premjesti u jažice ELISA ploče prethodno obložene sa specifičnim protutijelom koje prepoznaje supstrat reakcije enzimatske fosforilacije. Ne-supstratne komponenete staničnog produkta raspadanja isperu se, a količina fosforilacije na supstratu detektira se protutijelom koje specifično prepoznaje - fosfotirozin uspoređen s kontrolnim stanicama koje nisu došle u dodir s testnim spojem.
Za sada povoljni protokoli za izvođenje ELISA eksperimenata za određene PK dani su ispod. Međutim, prilagodba tih protokola za određivanje djelovanja spojeva protiv drugih RTK, kao i za CTK i STK, nalazi se unutar dosega znanja stručnjaka. Druga ovdje opisana ispitivanja mjere količinu DNA nastale kao odgovor na aktivaciju testne kinaze, što je općenita mjera proliferacijskog odgovora. Opća procedura za ovo ispitivanje je kako slijedi: spoj se uveo u stanice koje ekspresiraju testnu kinazu, bilo prirodno ili rekombinantno, za odabrani vremenski period nakon čega se, ako je testna kinaza receptorska, dodao ligand za koji je poznato da aktivira receptor. Nakon inkubacije koja je trajala najmanje preko noći, dodao se reagens za označavanje DNA, kao što je 5-bromodeoksiuridin (BrdU) ili H3-timidin. Količina označene DNA detektirana je bilo s anti-BrdU protutijelom ili mjerenjem radioaktivnosti i uspoređena je s kontrolnim stanicama koje nisu došle u dodir s testnim spojem.
GST-FLK-1-BIOISPITIVANJE
Ovo ispitivanje analizira djelovanje tirozin kinaze GST-Flkl na poly(glu,tyr)peptidima.
Materijali i reagensi:
1. Corning ELISA ploče od 96 jažica (Corning kataloški br. 5805-96).
2. poly(glu,tyr)4:1, liofilizat (Sigma kataloški # P0275).
3. Pripravak poly(glu,tyr)(pEY)obloženih ploča za ispitivanje: obloga 2 ug/jažici poly(glu,tyr)(pEY) U 100 ul PBS, držati na sobnoj temperaturi 2 sata ili na 4°C preko noći. Dobro obložiti ploče radi sprječavanja isparavanja.
4. PBS pufer: za l L, promiješati 0.2 g KH2PO4, 1.15 g Na2HPO4, 0.2 g KCl i 8 g NaCl u približno 900 ml dH20. Kada se svi reagensi otope, podesiti pH na 7.2 s HC1. Nadopuniti do l L s dH2O.
5. PBST pufer: l L PBS pufera, dodati 1.0 ml Tween-20.
6. TBB - blokirajući pufer: za l L, miješati 1.21 g TRIS, 8.77 g NaCl, l ml TWEEN-20 u približno 900 ml dH20. Podesiti pH na 7.2 s HC1. Dodati 10 g BSA, miješati kako bi se otopilo. Nadopuniti do l L s dH2O. Profiltrirati radi uklanjanja određene tvari.
7. 1% BSA u PBS: Za pripravu lx radne otopine, dodati 10 g BSA do približno 990 ml PBS pufera, miješati radi otapanja. Nadopuniti do l L s PBS puferom, profiltrirati kako bi se uklonila određena tvar.
8. 50 mM Hepes pH 7.5.
9. GST-Flklcd pročišćen iz sf9 transformacije rekombinantnog baculovirusa (SUGEN, Inc.).
10. 4% DMSO u dH2O.
11. 10 mM ATP u dH2O.
12. 40 mM MnCl2
13. Pufer za razrjeđivanje kinaze (KDB): miješati 10 ml HepeS(pH 7.5), l ml 5M NaCl, 40 uL 100 mM natrijevog ortovanadata i 0.4 mL 5% BSA u dH2O s 88.56 ml dH2O.
14. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom, Applied Scientific Catalog # AS-72092
15. EDTA: miješati 14.12 g etilendiamintetraoctene kiseline (EDTA)do približno 70 ml dH2O. Dodavati 10N sve dok se EDTA ne otopi. Podesiti pH na 8.0. Podesiti ukupni volumen do 100 ml s dH2O.
16. 1° pufer za razrjeđivanje protutijela: miješati 10 ml 5% BSA u PBS puferu s 89.5 ml TBST.
17. Anti-fosfotirozin monoklonalno protutijelo konjugirano s peroksidazom hrena (PY99 HRP, Santa Cruz Biotech).
18. 2,2'-Azinobis(3-etilbenztiazolin-6-sulfonske kiseline)(ABTS, Moss, Cat. No. ABST).
19. 10% SDS.
Procedura:
1. Obložiti Corning ELISA ploče od 96 jažica s 2 μg polyEY peptida u sterilnom PBS kako je opisano u koraku 3 Materijala i reagensa.
2. Ukloniti nevezani ligand iz jažica okretanjem ploče. Isprati jednom s TBST. Lagano istresti ploču na papirni ručnik kako bi se uklonio suvišak tekućine.
3. Svakoj jažici dodati 100 μl 1% BSA u PBS. Inkubirati, uz trešenje, 1 sat na sobnoj temperaturi.
4. Ponoviti korak 2.
5. Natopiti jažice s 50 mM HEPES(pH7.5)(150 μl/jažici).
6. Razrijediti testni spoj u polipropilenskim pločama od 96 jažica s dH2O/4% DMSO do 4 puta željene konačne ispitne koncentracije.
7. U ELISA ploču dodati 25 μl razrijeđenog testnog spoja, staviti 25 μl dH2O/4% DMSO.
8. U svaku jažicu dodati 25 μl 40 mM MnCl2 s 4xATP (2 μM).
9. Dodati 25 μl jažicama s negativnom kontrolom.
10. Razrijediti GST-Flkl s KDB na 0.005 μg(5 ng)/jažici.
11. Svakoj jažici dodati 50 μl razrijeđenog enzima.
12. Inkubirati uz trešenje 15 minuta na sobnoj temperaturi.
13. Zaustaviti reakciju dodavanjem 50 μl 250 mM EDTA (pH 8.0).
14. Isprati 3x s TBST i lagano istresti ploču na papirni ručnik radi uklanjanja viška tekućine.
15. Dodati 100 jal po jažici anti-fosfotirozin HRP konjugata, 1:5,000 razrjeđenje u puferu za razrjeđivanje protutijela. Inkubirati uz trešenje 90 min. na sobnoj temperaturi.
16. Isprati kao u koraku 14.
17. Svakoj jažici dodati 100 μl ABTS otopine sobne temperature.
18. Inkubirati uz trešenje 10 do 15 minuta. Ukloniti sve mjehuriće.
19. Zaustaviti reakciju dodavanjem svakoj jažici 20 μl 10% SDS.
20. Očitati ploču na Dynatech MR7000 ELISA čitaču s testnim filterom na 410 nM i referentnim filterom na 630 nM.
PYK2 BIOISPITIVANJE
Ovo ispitivanje se primjenjuje za mjerenje in vi tro djelovanja kinaze HA epitope-obilježene pyk2 pune dužine (FL.pyk2-HA) u ELISA ispitivanju.
Materijali i reagensi:
1. Corning ELISA ploče od 96 jažica.
2. 12CA5 monoklonalno anti-HA protutijelo (SUGEN, Inc.)
3. PBS(Dulbecco slana otopina puferirana fosfatom (Gibco katalog # 450-1300EB)
4. TBST pufer: za l L, miješati 8.766 g NaCl, 6.057 g TRIS i 1 ml 0.1% Triton K-100 u približno 900 ml dH2O. Podesiti pH na 7.2, nadopuniti do l L.
5. Pufer za blokiranje: za 1L, miješati 100 g 10% BSA, 12.1 g 100 mM TRIS, 58.44 g 1M NaCl i 10 mL 1% TWEEN-20.
6. FL.pyk2-HA iz sf9 staničnih produkata raspadanja (SUGEN, Inc.).
7. 4% DMSO u MilliQue H2O.
8. 10 mM ATP u dH2O.
9. 1M MnCl2.
10. 1M MgCl2.
11. 1M Ditiotreitol (DTT).
12. 10X fosforilacija kinaznog pufera: miješati 5.0 ml IM HepeS (pH 7.5), 0.2 ml 1M MnCl2, 1.0 ml 1M MgCl2, 1.0 ml 10% Triton X-100 u 2.8 ml dH2O. Neposredno prije uporabe, dodati 0.1 ml 1M DTT.
13. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom.
14. 500 mM EDTA u dH2O.
15. Pufer za razrjeđivanje protutijela: za 100 mL, 1 mL 5% BSA/PBS i 1 mL 10% Tween-20 u 88 mL TBS.
16. HRP-konjugiran anti-Ptyr PY99), Santa Cruz Biotech kat. br. SC-7020.
17. ABTS, Moss, kat. br. ABST-2000.
18. 10% SDS.
Procedura:
1. Obložiti Corning ELISA ploče od 96 jažica s 0.5 μg/jažici 12CA5 anti-HA protutijela u 100 μl PBS. Pohraniti preko noći na 4°C
2. Ukloniti nevezano HA protutijelo iz jažica okretanjem ploče. Isprati ploču s dH2O. Lagano istresti ploču na papirni ručnik kako bi se uklonio suvišak tekućine.
3. Svakoj jažici dodati 150 μl pufera za blokiranje. Inkubirati, uz trešenje, 30 min na sobnoj temperaturi.
4. Isprati ploču 4x s TBS-T.
5. Razrijediti produkt raspadanja u PBS(1.5 μg produkta raspadanja /100 μl PBS).
6. Svakoj jažici dodati 100 μl razrijeđenog produkta raspadanja. Tresti na sobnoj temperaturi 1 sat.
7. Isprati kao u koraku 4.
8. U ELISA jažicu koja sadrži vezani pyk2-HA dodati 50 μl 2X kinaznog pufera.
9. Svakoj jažici dodati 25 ul 400 uM testnog spoja u 4% DMSO. Za kontrolne jažice upotrijebiti samo 4% DMSO.
10. Jažicama s negativnom kontrolom dodati 25 ul 0.5 M EDTA.
11. Svim jažicama dodati 25 μl 20 uM ATP. Inkubirati, uz trešenje, 10 minuta.
12. Zaustaviti reakciju dodavanjem svim jažicama 25 μl 500 mM EDTA (pH 8.0).
13. Isprati kao u koraku 4.
14. Svakoj jažici dodati 100 μl HRP konjugatiranog anti-Ptyr, 1:6,000 razrjeđenje u puferu za razrjeđivanje protutijela. Inkubirati uz trešenje 1 sat na sobnoj temperaturi.
15. Isprati ploču 3X s TBST i IX s PBS.
16. Svakoj jažici dodati 100 μl ABST otopine .
17. Ako je potrebno, zaustaviti razvoj reakcije dodavanjem svakoj jažici 20 μl 10% SDS.
18. Očitati ploču na ELISA čitaču s testnim filterom na 410 nM i referentnim filterom na 630 nM.
FGFR1 BIOISPITIVANJE
Ovo ispitivanje primjenjuje se za mjerenje in vitro djelovanja FGF1-R u ELISA ispitivanju.
Materijali i reagensi:
1. Costar ELISA ploče od 96 jažica (Corning katalog # 3369).
2. Poly(Glu-Tyr)(Sigma katalog # P0275).
3. PBS(Gibco katalog # 450-1300EB)
4. 50 mM otopina Hepes pufera.
5. Pufer za blokiranje (5% BSA/PBS).
6. Pročišćeni GST-FGFR1 (SUGEN, Inc.)
7. Pufer za razrjeđivanje kinaze.
Miješati 500 μl IM HepeS(GIBCO), 20 μl 5% BSA/PBS, 10 μl 100 mM natrijevog ortovanadata i 50 μl 5M NaCl.
8. 10mM ATP.
9. ATP/MnCl2 fosforilacijska smjesa: pomiješati 20 μL ATP, 400 μL 1M MnCl2 i 9.56 ml dH2O.
10. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom (Applied Scientific Catalog # AS-72092).
11. 0.5 M EDTA.
12. 0.05% TBST.
Dodati 500 μL TWEEN do l litru TBS.
13. Zečji poliklonalni anti-fosfotirozinski serum (SUGEN, Inc.).
14. Kozji anti-zečji IgG konjugat peroksidaze (Biosource, katalog # ALI0404).
15. ABTS/H2O2 otopina.
Procedura:
1. Obložiti Costar ELISA ploče od 96 jažica s 1 μg/jažici Poly (Glu, Tyr) U 100 μl PBS. Pohraniti preko noći na 4°C.
2. Jedanput isprati obložene ploče s PBS.
3. Svakoj jažici dodati 150 μl 5% BSA/PBS blokirajućeg pufera. Inkubirati uz trešenje, 1 sat na sobnoj temperaturi.
4. 2x isprati ploču s PBS, zatim jedanput s 50 mM Hepes. Lagano istresti ploče na papirni ručnik kako bi se uklonio višak tekućine i mjehurići.
5. Na ploču dodati 25 μl 0.4 mM testnog spoja u 4% DMSO ili 4% samog DMSO (kontrola).
6. Razrijediti pročišćeni GST-FGFR1 u puferu za razrjeđivanje kinaze (5 ng kinaze/50 μl KDB/jažici).
7. Svakoj jažici dodati 50 μL razrjedene kinaze.
8. Početi reakciju kinaze dodavanjem 25 μl/jažici svježe pripravljenog ATP/Mn++ (0.4 ml 1M MnCl2, 40 μl 10 mM ATP, 9.56 ml dH2O), svježe pripravljen).
9. Ovo je brza reakcija kinaze i mora se zaustaviti s 25 μl 0.5M EDTA na način sličan dodavanju ATP.
10. 4x isprati ploču sa svježim TBST.
11. Pripraviti pufer za razrjeđivanje protutijela: Po 50 ml: miješati 5 ml 5% BSA, 250 μl 5% mlijeka i 50 μl 100 mM natrijevog vanadata, do konačnog volumena nadopuniti s 0.05% TBST.
12. Dodati 100 μl po jažici anti-fosfotirozina (1:10000 razrjeđenje u ADB). Inkubirati, uz trešenje 1 sat na sobnoj temperaturi.
13. Isprati kao u koraku 10.
14. Dodati 100 μl po jažici Bioscure kozjeg anti-zečjeg IgG konjugata peroksidaze (razrjeđenje u ADB 1:6000). Inkubirati uz trešenje 1 sat na sobnoj temperaturi.
15. Isprati kao u koraku 10, a zatim s PBS radi uklanjanja mjehurića i viška TWEEN„
16. Svakoj jažici dodati 100 μl ABTS/H2O2.
17. Inkubirati, uz trešenje, 10 do 20 minuta. Ukloniti sve mjehuriće.
18. Očitati ploču na Dvnatech MR7000 ELISA čitaču: testni filter na 410 nM, referentni filtrat 630 nM.
EGFR BIOISPITIVANJE
Ovo ispitivanje primjenjuje se za mjerenje in vitro djelovanja kinaze FGF1-R u ELISA ispitivanju.
Materijali i reagensi:
1. Corning ELISA ploče od 96 jažica.
2. SUMO1 monoklonalno anti-EGFR protutijelo (SUGEN, Inc.).
3. PBS
4. TBST pufer
5. Pufer za blokiranje: za 100 ml, miješati 5.0 g Carnation instant nemasnog mlijeka® sa 100 ml PBS.
6. A431 stanični produkt raspadanja (SUGEN, Inc.).
7. TBS pufer:
8. TBS + 10% DMSO: za 1L, miješati 1.514 g TRIS, 2.192 g NaCl i 25 ml DMSO; nadopuniti do ukupnog volumena od l litre s dH2O.
9. ATP (Adenozin-5'-trifosfat, iz Equine mišića, Sigma kat. br. A-5394), 1.0 mM otopina u dH2O. Ovaj reagens trebao bi se pripraviti neposredno prije uporabe i čuvati na ledu.
10. 1.0 mM MnCl2.
11. ATP/MnC12 fosforilacijska smjesa: za pripravu 10 ml, pomiješati 300 ul l mM ATP, 500 μl MnCl2 i 9.2 ml dH2O. Pripraviti neposredno prije uporabe, čuvati na ledu.
12. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom.
13. EDTA.
14. Zečji poliklonalni anti-fosfotirozinski serum (SUGEN, Inc.).
15. Kozji anti-zečji IgG konjugat peroksidaze (Biosource, katalog # ALI0404).
16. ABTS.
17. 30% vodikov peroksid.
18. ABTS/H2O2.
19. 0.2 M HCl.
Procedura:
1. Obložiti ELISA ploče od 96 jažica s 0.5 μg SUM01 u 100 μl PBS po jažici, čuvati preko noći na 4°C.
2. Ukloniti nevezani SUMO1 iz jažica okretanjem ploče kako bi se uklonila tekućina. Isprati lx s dH2O. Lagano istresti ploču na papirni ručnik kako bi se uklonio višak tekućine.
3. Svakoj jažici dodati 150 μl pufera za blokiranje. Inkubirati, uz trešenje, 30 min. na sobnoj temperaturi.
4. Isprati ploču 3x s deioniziranom vodom, zatim jednom s TBST. Lagano istresti ploču na papirni ručnik kako bi se uklonio višak tekućine i mjehurići.
5. Razrijediti produkt raspadanja u PBS (7 μg produkta raspadanja /100 μl PBS).
6. Dodati 100 μl razrjeđenog produkta raspadanja svakoj jažici. Tresti na sobnoj temperaturi 1 sat.
7. Isprati ploče kao što je u 4, gore.
8. Dodati 120 μl TBS na ELISA ploču koja sadrži uhvaćeni EGFR.
9. Razrijediti testni spoj 1:10 u TBS, staviti u jažicu.
10. Dodati 13.5 μl razrjeđenog testnog spoja na ELISA ploču. Kontrolnim jažicama dodati 13.5 μl TBS u 10% DMSO.
11. Inkubirati, uz trešenje, 30 minuta na sobnoj temperaturi.
12. Svim jažicama, osim negativnoj kontrolnoj, dodati 15 μl fosforilacijske smjese. Konačni volumen u jažici trebao bi biti približno 150 μl uz 3 μM ATP/5 mM MnCl2 konačne koncentracije u svakoj jažici. Inkubirati uz trešenje 5 minuta.
13. Zaustaviti reakciju dodavanjem 16.5 μl otopine EDTA, uz trešenje. Tresti dodatnih 1 min.
14. Isprati 4x s deioniziranom vodom, 2x s TBST.
15. Dodati 100 μl anti-fosfotirozina (1:3000 razrjedenje u TBST)po jažici. Inkubirati uz trešenje, 30-45 min na sobnoj temperaturi.
16. Isprati kao u 4, gore.
17. Svakoj jažici dodati 100 μl Bioscure kozjeg anti-zečjeg IgG konjugata peroksidaze (1:2000 razrjeđenje u TBST). Inkubirati uz trešenje 30 minuta na sobnoj temperaturi.
18. Isprati kao 4, gore.
19. Svakoj jažici dodati 100 μl otopine ABTS/H2O2.
20. Inkubirati 5 do 10 minuta uz trešenje. Ukloniti sve mjehuriće.
21. Ako je potrebno, zaustaviti reakciju dodavanjem 100 μl 0.2 M HCl po jažici.
22. Očitati ploču na Dvnatech MR7000 ELISA čitaču: testni filter na 410 nM, referentni filter 630 nM.
PDGFR BIOISPITIVANJE
Ovo ispitivanje primjenjuje se za mjerenje in vitro djelovanja kinaze FGF1-R u ELISA ispitivanju.
Materijali i reagensi:
1. Corning ELISA ploče od 96 jažica.
2. 28D4C10 monoklonalno anti-PDGFR protutijelo (SUGEN, Inc.).
3. PBS
4. TBST pufer
5. Pufer za blokiranje (isti kao i za EGFR ispitivanje).
6. NIH 3T3 stanični produkt raspadanja koji ekspresira PDGFR-β (SUGEN, Inc.).
7. TBS pufer:
8. TBS + 10% DMSO.
9. ATP.
10. MnCl2.
11. Fosforilacijska smjesa kinaznog pufera: za 10 ml, pomiješati 250 μl l M TRIS, 200 μl 5M NaCl, 100 μl 1M MnCl2 i 50 μl 100 mM Triton K-100 u onoliko dH2O. koliko je potrebno za pripravu 10 ml.
12. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom.
13. EDTA.
14. Zečji poliklonalni anti-fosfotirozinski serum (SUGEN, Inc.).
15. Kozji anti-zečji IgG konjugat peroksidaze (Biosource, kat. br. ALI0404).
16. ABTS.
17. Vodikov peroksid, 30%-tna otopina.
18. ABTS/H2O2.
19. 0.2 M HCl.
Procedura:
1. Obložiti ELISA ploče od 96 jažica s 0.5 μg 28D4C10 u 100 μl PBS po jažici, čuvati preko noći na 4°C.
2. Ukloniti nevezani 28D4C10 iz jažica okretanjem ploče kako bi se uklonila tekućina. Isprati 1 x s dH2O. Lagano istresti ploču na papirni ručnik kako bi se uklonio višak tekućine.
3. Svakoj jažici dodati 150 μl pufera za blokiranje. Inkubirati, uz trešenje, 30 min. na sobnoj temperaturi.
4. Isprati ploču 3x s deioniziranom vodom, zatim jednom s TBST. Lagano istresti ploču na papirni ručnik kako bi se uklonio višak tekućine i mjehurići.
5. Razrijediti produkt raspadanja u HNTG (10 μg produkta raspadanja /100 μl HNTG).
6. Dodati 100 μl razrjeđenog produkta raspadanja svakoj jažici. Tresti na sobnoj temperaturi 60 min.
7. Isprati ploče kao što je u 4, gore.
8. Dodati 80 μl radne smjese kinaznog pufera na ELISA ploču koja sadrži uhvaćeni PDGFR.
9. Razrijediti testni spoj 1:10 u TBS, na polipropilenskim pločama od 96 jažica.
10. Dodati 10 μl razrjeđenog testnog spoja na ELISA ploču. Kontrolnim jažicama dodati 10 μl TBS + 10% DMSO. Inkubirati, uz trešenje, 30 minuta na sobnoj temperaturi.
11. Svim jažicama, osim negativnoj kontrolnoj, izravno dodati 10 μl ATP (konačni volumen u jažici trebao bi biti približno 100 μl uz 20 μM ATP u svakoj jažici). Inkubirati uz trešenje 30 minuta.
12. Zaustaviti reakciju dodavanjem 10 μl otopine EDTA u svaku jažicu
13. Isprati 4x s deioniziranom vodom, dvaput s TBST.
14. Dodati 100 μl anti-fosfotirozina (1:3000 razrjeđenje u TBST) po jažici. Inkubirati uz trešenje, 30-45 min na sobnoj temperaturi.
15. Isprati kao u 4, gore.
16. Svakoj jažici dodati 100 μl Bioscure kozjeg anti-zečjeg IgG konjugata peroksidaze (1:2000 razrjeđenje u TBST). Inkubirati uz trešenje 30 minuta na sobnoj temperaturi.
17. Isprati kao 4, gore.
18. Svakoj jažici dodati 100 μl otopine ABTS/H2O2.
19. Inkubirati 10 do 30 minuta uz trešenje. Ukloniti sve mjehuriće.
20. Ako je potrebno, zaustaviti reakciju dodavanjem 100 μl 0.2 M HCl po jažici.
21. Očitati ploču na Dynatech MR7000 ELISA čitaču uz testni filter na 410 nM i referentni filter 630 nM.
ISPITIVANJE STANIČNE HER-2 KINAZE
Ovo ispitivanje primijenjeno je za mjerenje djelovanja HER-2 kinaze cijelih stanica u ELISA formatu. Materijali i reagensi:
1. DMEM (GIBCO katalog #11965-092).
2. Fetalni goveđi serum (FBS, GIBCO katalog #16000-044), inaktiviran toplinom u vodenoj kupelji 30 min na 56°C
3. Trypsin (GIBCO katalog #25200-056).
4. L-Glutamin (GIBCO katalog #25030-081)
5. HEPES(GIBCO katalog #15630-080).
6. Podloga za uzgoj
Miješati 500 ml DMEM, 55 ml toplinom inaktiviranog FBS, 10 ml HEPES i 5.5 ml L-Glutamina.
7. Podloga bez hranjivog medija
Miješati 500 ml DMEM, 2.5 ml toplinom inaktiviranog FBS, 10 ml HEPES i 5.5 ml L-Glutamina.
8. PBS
9. Mikrotitarske ploče za uzgoj kulture tkiva s 96 jažica ravnog dna. (Corning katalog # 25860).
10. 15 cm posuda za uzgoj kulture tkiva (Corning katalog #08757148).
11. Corning ELISA ploče s 96 jažica.
12. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom.
13. Costar patrone za prijenos za Transtar 96 (Costar katalog # 7610).
14. SUMO 1: monoklonalno anti-EGFR protutijelo (SUGEN, Inc.).
15. TBST pufer.
16. Pufer za blokiranje: 5% Carnation instant mlijeko® u PBS.
17. EGF Ligand: EGF-201, Shinko American, Japan.
Suspendirati prah u 100 μL 10 mM HCl. Dodati 100 μL 10 mM NaOH. Dodati 800 uL PBS i prenesti u Eppendorf-ovu cijev, pohraniti na -20°C dok ne bude spremno za uporabu.
18. HNTG pufer za razgradnju.
Za štok 5x HNTG, miješati 23.83 g Hepes, 43.83 g NaCl, 500 ml glicerola i 100 ml Triton X-100 i onoliko dH2O koliko je potrebno za pripravu ukupno 1 L otopine.
Za 1 x HNTG*, miješati 2 ml HNTG, 100 μL 0.1 M Na3VO4, 250 μL 0.2M Na2P2O7 i 100 μL EDTA.
19. EDTA.
20. Na3VO4. Za pripravu štok otopine, miješati 1.84 g Na3VO4 s 90 ml dH2O. Podesiti pH na 10. Zagrijavati do vrenja u mikrovalnoj pećnici jednu minutu (otopina postaje bistra). Ohladiti do sobne temperature. Podesiti pH na 10. Ponoviti ciklus zagrijavanje/hlađenja dok pH ostaje na 10.
21. 200 mM Na4P2O7.
22. Zečji poliklonalni antiserum specifičan za fosfotirozin (anti-Ptyr protutijelo, SUGEN, Inc.).
23. Antiserum pročišćen afinitetnom kromatografijom, kozje anti-zečje IgG protutijelo, konjugat peroksidaze (Biosource Cat # ALI0404).
24. ABTS otopina.
25. 30% otopina vodikovog peroksida.
26. ABTS/H2O2.
27. 0.2 M HCl.
Procedura:
1. Obložiti Corning ELISA ploče od 96 jažica sa SUMO1 od 1.0 μg po jažici u PBS, 100 μl konačnog volumena/jažici. Pohraniti preko noći na 4°C.
2. Na dan uporabe, ukloniti obložni pufer i ploču isprati 3 puta s dH2O i jedanput s TBST puferom. Sva ispiranja u ovom ispitivanju trebala bi se izvesti na taj način, osim ako nije drugačije navedeno.
3. Svakoj jažici dodati 100 μl pufera za blokiranje. Inkubirati ploču, uz trešenje, 30 min. na sobnoj temperaturi. Neposredno prije uporabe, isprati ploču.
4. Za ovo ispitivanje upotrijebiti EGFr/HER-2 chimera/3T3-C7 staničnu liniju.
5. Odabrati posude s konfluencijom od 80-90%. Skupljati stanice tripsinizacijom i centrifugirati na 100 okr./min. na sobnoj temperaturi 5 min.
6. Ponovo suspendirati stanice na podlogu bez hranjivog medija i prebrojiti s tripan plavim. Potrebna je pokretljivost iznad 90%. Nasaditi stanice na podlozi bez hranjivog medija gustoćom od 2,500 stanica po jažici, 90 μl po jažici, na mikrotitarskoj ploči od 96 jažica. Inkubirati nasađene stanice preko noći na 37°C u 5% CO2.
7. Započeti ispitivanje dva dana nakon nasađivanja.
8. Testni spojevi otopljeni su u 4% DMSO. Uzorci su zatim dalje razrjeđeni izravno na pločama sa DMEM bez hranjivog medija. Tipično, to razrjeđenje biti će 1:10 ili veće. Sve stanice zatim su premještene na ploču za uzgoj stanica pri daljnjem razrjeđenju od 1:10 (10 μl uzorka i sredstva u 90 μl sredstva bez hranjivog medija. Konačna DMSO koncentracija trebala bi biti 1% ili niže. Također se može primijeniti standardno serijsko razrjeđenje.
9. Inkubirati u 5% CO2 na 37°C 2 sata.
10. Pripraviti EGF ligand razrjeđenjem štok EGF (16.5 μM) u toplom DMEM do 150 nM.
11. Pripraviti svježi HNTG* dovoljan za 100 μl po jažici; staviti na led.
12. Nakon 2 sata inkubacije s testnim spojem, stanicama dodati pripravljeni EGF ligand, 50 μl po jažici, za konačnu koncentraciju od 50 nM. Pozitivne kontrolne jažice dobivaju istu količinu EGF. Negativne kontrole ne dobivaju EGF. Inkubirati na 37°C 10 minuta.
13. Ukloniti testni spoj, EGF, i DMEM. Jednom isprati stanice s PBS.
14. Premjestiti HNTG* u stanice, 100 μl po jažici. Staviti na led 5 minuta. U međuvremenu, ukloniti pufer za blokiranje iz ELISA ploče i isprati.
15. Mikropipetom ostrugati stanice s ploče i homogenizirati stanične materijale ponavljanjem aspiriranja i dispergiranja HNTG* pufera za razgradnju. Premjestiti produkt raspadanja na obloženu, blokiranu, ispranu ELISA ploču. Ili, upotrijebiti Costar patronu za premještanje produkta raspadanja na ploču.
16. Inkubirati, uz trešenje, na sobnoj temperaturi 1 sat.
17. Ukloniti produkt raspadanja, isprati. Premjestiti svježe razrijeđeno anti-Ptyr protutijelo (1:3000 u TBST)na ELISA ploču, 100 μl po jažici.
18. Inkubirati, uz trešenje, na sobnoj temperaturi, 30 min.
19. Ukloniti anti-Ptyr protutijelo, isprati. Premjestiti svježe razrijeđeno BIOSOURCE protutijelo na ELISA ploču (1:8000 u TBST, 100 μl po jažici).
20. Inkubirati, uz trešenje, na sobnoj temperaturi 30 minuta.
21. Ukloniti BIOSOURCE protutijelo, isprati. Premjestiti svježe pripravljenu otopinu ABTS/H2O2 na ELISA ploču, 100 μl po jažici.
22. Inkubirati, uz trešenje, 5-10 minuta. Ukloniti sve mjehuriće.
23. Zaustaviti reakciju dodatkom 100 μl O.2M HCl po jažici.
24. Očitati ploču na Dynatech MR7000 ELISA čitaču uz testni filter na 410 nM i referentni filter 630 nM.
CDK2/CYCLIN A ISPITIVANJE
Ovo ispitivanje primijenjeno je za mjerenje in vi tro djelovanja serin/treonin kinaze humanog cdk2/cyclin A u ispitivanju scintilacijske blizine (Scintillation Proximity Assay - SPA).
Materijali i reagensi:
1. Wallac polietilenske tereftalatne (flexi)ploče od 96 jažica (Wallac katalog # 1450-401).
2. Amersham Redivue [γ33P] ATP (Amersham katalog #AH 9968).
3. Amersham streptavidinom obloženi poliviniltoluenski SPA slojevi (Amersham katalog #RPNQ0007). Slojevi bi se trebali uspostaviti u PBS bez magnezija ili kalcija, na 20 mg/ml.
4. Aktivirani cdk2/cyclin A enzimski kompleks pročišćen od Sf9 stanica (SUGEN, Inc.).
5. Biotinilirani peptidni supstrat (Debtide). Peptidni biotin-X-PKTPKKAKKL otopljen je u dH2O na koncentraciju od 5 mg/ml.
6. Peptid/ATP smjesa: za 10 ml, miješati 9.979 ml dH2O, 0.00125 ml «hladnog» ATP, 0.010 ml Debtida i 0.010 ml γ33P-Konačna koncentracija po jažici je 0.5 uM «hladnog» ATP, 0.1 ug Debtida i 0.2 uCi γ 33P ATP.
7. Kinazni pufer: za 10 ml, miješati 8.85 ml dH2O, 0.625 ml TRIS(pH 7.4), 0.25 ml 1M MgCl2, 0.25 ml 10% NP40 i 0.025 ml 1M DTT, dodano svježe neposredno prije uporabe.
8. 10 mM ATP u dH2O.
9. 1M Tris, pH podešen na 7.4 s HCl.
10. 1M MgCl2.
11. 1M DTT.
12. PBS(Gibco katalog # 14190-144).
13. 0.5M EDTA.
14. Otopina za zaustavljanje reakcije: za 10 ml, miješati 9.25 ml PBS, 0.005 ml 100 mM ATP, 0.1 ml 0.5 M EDTA, 0.1 ml 10% Triton X-100 i 1.25 ml 20 mg/ml SPA slojeva.
Procedura:
1. Pripraviti otopine testnih spojeva na 5x željene konačne koncentracije u 5% DMSO. Svakoj jažici dodati 10 ul. Za negativne kontrole, upotrijebiti 10 ul 5% DMSO samog u jažicama.
2. Razrijediti 5 ul cdk2/cyclin A otopine s 2.1 ml 2x kinaznog pufera.
3. Dodati 20 ul enzima svakoj jažici.
4. Dodati 10 μl 0.5 M EDTA jažicama za negativnu kontrolu.
5. Kako bi se započela kinazna reakcija, dodati 20 μl peptid/ATP smjese svakoj jažici. Inkubirati 1 sat bez trešnje.
6. Dodati 200 μl otopine za zaustavljanje reakcije svakoj jažici.
7. Držati najmanje 10 min.
8. Vrtiti ploču na pribl. 2300 okr/min kroz 3-5 min.
9. Očitati ploču uporabom Triluxa ili sličnog čitača.
ISPITIVANJE MET TRANSFOSFORILACIJE
Ovo ispitivanje primijenjeno je za mjerenje razina fosfotirozina na poli(glutaminska kiselina:tirozin (4:1))supstratu kao sredstvu za identificiranje agonista/antagonista met transfosforilacije supstrata.
Materijali i reagensi:
1. Corning Elisa ploče s 96 jažica, Corning katalog # 25805-96.
2. Poly(glu,tyr) 4:1, Sigma, Kat. br. P 0275.
3. PBS, Gibco Katalog # 450-1300EB.
4. 50 mM HEPES
5. Pufer za blokiranje: otopiti 25 g goveđeg seruma albumina, Sigma Kat. br. A-7888, u 500 ml PBS, filtrirati kroz filter od 4 pm.
6. Pročišćeni GST fuzijski protein koji sadrži domenu Met kinaze, Sugen, Inc.
7. PBST pufer.
8. 10% vodenog (MilliQue H2O) DMSO.
9. 10 mM vodenog (dH20)Adenozin-51-trif osf ata, Sigma Kat. br. A-5394.
10. 2x pufer za razrjeđivanje kinaze: za 100 ml,
pomiješati 10 mL 1M HEPES pri pH 7.5 s 0.4 mL 5% BSA/PBS, 0.2 mL 0.1 M natrijevog ortovanadata i l mL 5M natrij klorida u 88.4 mL dH2O.
11. 4x ATP Reakcijska Smjesa: za 10 mL, pomiješati 0.4 mL lM mangan klorida i 0.02 mL 0.1 M ATP u 9.56 mL dH2O.
12. 4x Smjesa Negativne Kontrole: za 10 mL, pomiješati 0.4 mL l M mangan klorida u 9.6 mL dH2O.
13. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom, Applied Scientific Catalog # S-72092.
14. 500 mM EDTA
15. Pufer za razrjeđivanje antitijela: za 100 mL,
pomiješati 10 mL 5% BSA/PBS, 0.5 mL 5% Carnation Instant Milk® u PBS i 0.1 mL 0.1 M natrijevog ortovanadata u 88.4 mL TBST.
16. Zečji poliklonalni antiserum specifičan za fosfotirozin, Sugen, Inc.
17. Kozje anti-zečje protutijelo konjugirano peroksidazom hrena, Biosource, Inc.
18. ABTS Otopina: za l L, pomiješati 19.21 g limunske kiseline, 35.49 g Na2HP04 i 500 mg ABTS s dovoljno dH2O da se načini l L.
19. ABTS/H2O2: pomiješati 15 mL ABST otopine s 2 μL H2O2 pet minuta prije uporabe.
20. 0.2 M HCl.
Procedura:
1. Obložiti ELISA ploče s 2 μg Poly(Glu-Tyr) U 100 μL PBS, pohraniti preko noći na 4°C.
2. Blokirati ploču s 150 μL 5% BSA/PBS 60 min.
3. Isprati ploču dvaput s PBS, jednom s 50 mM Hepes pufera pH 7.4.
4. Svim jažicama dodati 50 μl razrjedene kinaze. (Pročišćena kinaza razrjeđena je s puferom za razrjeđivanje kinaze. Konačna koncentracija trebala bi biti 10 ng/jažici).
5. Na ploču dodati 25 μL testnog spoja (u 4% DMSO) ili samo DMSO (4% u dH2O)za kontrole.
6. Inkubirati smjesu kinaze/spoja 15 minuta.
7. Dodati 25 μL 40 mM MnCl2 negativnim kontrolnim jažicama.
8. Dodati 25 μL smjese ATP/MnCl2 svim drugim jažicama (osim negativnim kontrolnim). Inkubirati 5 min.
9. Dodati 25 μL 500 mM EDTA kako bi se reakcija zaustavila.
10. Isprati ploču 3x s TBST.
11. Svakoj jažici dodati 100 μL zečjeg poliklonalnog anti-Ptyr razrjeđenog 1:10,000 u puferu za razrjeđivanje protutijela. Inkubirati, uz trešenje, na sobnoj temperaturi jedan sat.
12. Isprati ploču 3x s TBST.
13. Razrijediti Biosource anti-zečje protutijelo konjugirano s HRP, 1:6,000 u puferu za razrjedivanje protutijela. Dodati 100 μL po jažici i inkubirati uz trešenje na sobnoj temperaturi jedan sat.
14. Ploču isprati lx s PBS.
15. Svakoj jažici dodati 100 μl ABTS/H2O2 otopine.
16. Ako je potrebno, zaustaviti razvijanje reakcije dodatkom 100 jal 0. 2M HCl po jažici.
17. Očitati ploču na Dvnatech MR7000 ELISA čitaču uz testni filter na 410 nM i referentni filter 630 nM.
ISPITIVANJE IGF-1 TRANSFOSFORILACIJE
Ovo ispitivanje primijenjeno je za mjerenje razina fosfotirozina u poli(glutaminskoj kiselini:tirozinu (4:1))za identificiranje agonista/antagonista gst-IGF-1 transfosforilacije supstrata.
Materijali i reagensi:
1. Corning Elisa ploče s 96 jažica.
2. Poly(Glu-tyr)(4:1), Sigma, Kat. br. P 0275.
3. PBS, Gibco Katalog # 450-1300EB.
4. 50 mM HEPES
5. TBB pufer za blokiranje: za l L, miješati 100 g BSA, 12.1 gTRIS (pH 7.5), 58.44 g natrijevog klorida i 10 mL 1%TWEEN-20.
6. Pročišćeni GST fuzijski protein koji sadrži domenu IGF-1 kinaze, Sugen, Inc.
7. TBST pufer: za l L, miješati 6.057 g Tris, 8.766 g natrijevog klorida i 0.5 ml TWEEN-20 s onoliko dH2O koliko je potrebno do l litre.
8. 4% DMSO Milli-Q H2O.
9. 10 mM ATP u dH2O.
10. 2x pufer za razrjeđivanje kinaze: za 100 ml,
pomiješati 10 mL IM HEPES (pH 7.5)0.4 mL 5% BSA u dH2O, 0.2 mL 0.1 M natrijevog ortovanadata i l mL 5M natrijevog klorida uz onoliko dH2O koliko je potrebno do 100 mL.
11. 4x ATP Reakcijska Smjesa: za 10 mL, pomiješati 0.4 mL l M MnCl2 i 0.008 mL 0.1 M ATP i 9.56 mL dH2O.
12. 4x smjesa negativne kontrole: pomiješati 0.4 mL l M manganovog klorida u 9.60 mL dH2O.
13. NUNC polipropilenske ploče od 96 jažica s V dnom,
14. 500 mM EDTA u dH2O.
15. Pufer za razrjeđivanje antitijela: za 100 mL,
pomiješati 10 mL 5% BSA u PBS, 0.5 mL 5% Carnation Instant Non-fat Milk® u PBS i 0.1 mL 0.1 M natrijevog ortovanadata u 88.4 mL TBST.
16. Zečje poliklonalno antifosfotirozinsko protutijelo, Sugen, Inc.
17. Kozje anti-zečje protutijelo konjugirano HRP, Biosource.
18. ABTS otopina.
19. ABTS/H2O2: pomiješati 15 mL ABTS s 2 μL H2O2 5 minuta prije uporabe.
20. 0.2 M HCl u dH2O.
Procedura:
1. Obložiti ELISA ploče s 2 μg/jažici Poly(Glu-Tyr) 4:1 (Sigma P0275) U 100 μL PBS. Pohraniti ploču preko noći na 4°C.
2. Isprati ploču jednom s PBS.
3. Svakoj jažici dodati 100 jal TBB pufera za blokiranje. Inkubirati ploču 1 sat uz trešenje na sobnoj temperaturi.
4. Isprati ploču jednom s PBS, zatim dvaput 50 mM Hepes pufera pH 7.5.
5. Na ploču dodati 25 μL testnog spoja u 4% DMSO (dobivenog razrjeđivanjem štok otopine 10 mM testnog spoja u 100% DMSO s dH2O).
6. Svim jažicama dodati 10.0 ng gst-IGF-1 kinaze u 50 μL pufera za razrjeđivanje kinaze.
7. Započeti reakciju kinaze dodavanjem 25 μL 4x ATP reakcijske smjese svim testnim jažicama i pozitivnim kontrolnim jažicama. Dodati 25 μL 4x negativne kontrolne smjese svim negativnim kontrolnim jažicama. Inkubirati 10 minuta uz trešenje na sobnoj temperaturi.
8. Dodati 25 μL 0. 5M EDTA (pH 8.0)svim jažicama.
9. Isprati ploču 4x s TBST puferom.
10. Svakoj jažici dodati zečje poliklonalno anti-fosfotirozinsko protutijelo razrjeđeno na 1:10,000 u 100 μl pufera za razrjeđivanje protutijela. Inkubirati, uz trešenje, na sobnoj temperaturi jedan sat.
11. Isprati ploču kao u koraku 9.
12. Svakoj jažici dodati Biosource anti-zečje
protutijelo konjugirano s HRP, razrjeđeno na 1:10,000 u puferu za razrjeđivanje protutijela. Inkubirati uz trešenje na sobnoj temperaturi jedan sat.
13. Isprati ploču kao u koraku 9, a zatim isprati jednom s PBS kako bi se smanjila količina mjehurića i višak Tween-20.
14. Svakoj jažici dodati 100 μl ABTS/H2O2 otopine.
15. Nakon 5 minuta, očitati ploču na ELISA čitaču uz testni filter na 410 nM i referentni filter 630 nM.
ISPITIVANJA INKORPORACIJE BRDU
U sljedećim ispitivanjima upotrijebljene su stanice dizajnirane za ekspresiju odabranog receptora, a zatim procjenu učinka spoja od interesa na djelovanje ligandom inducirane sinteze DNA određivanjem inkorporacije BrdU u DNA. Sljedeći materijali, reagensi i procedura vrijede za svako od sljedećih ispitivanja inkorporacije BrdU. Varijacije za određena ispitivanja su zabilježene.
Materijali i reagensi:
1. Odgovarajući ligand.
2. Odgovarajuće dizajnirane stanice.
3. Reagens za označavanje BrdU: 10 mM, u PBS (pH 7.4) (Boehringer Mannheim, Germany).
4. FixDenat: fiksir otopina (spremna za uporabu) (Boehringer Mannheim, Germany).
5. Anti-BrdU-POD: mišje monoklonalno protutijelo konjugirano s peroksidazom (Boehringer Mannheim, Germany).
6. Otopina TMB supstrata: tetrametilbenzidin (TMB, Boehringer Mannheim, Germany).
7. Otopina za ispiranje: l x PBS, pH 7.4.
8. Albumin, goveđi (BSA), frakcija V prah (Sigma Chemical Co., USA).
Opća procedura:
1. Stanice su nasađene po 8000 stanica/jažici u 10% CS, 2 mM Gln u DMEM, na ploči od 96 jažica. Stanice su inkubirane preko noći na 37°C u 5% CO2.
2. Nakon 24 sata, stanice su isprane s PBS, a zatim serumski izgladnjene u mediju bez seruma (0% CS DMEM s 0.1% BSA)24 sata.
3. 3. dan, stanicama se simultano dodaju odgovarajući ligand i testni spoj. Negativne kontrolne jažice dobivaju DMEM bez seruma sa samo 0.1% BSA; pozitivne kontrolne stanice dobivaju ligand bez testnog spoja. Testni spojevi pripravljeni su u DMEM bez seruma s ligandom na ploči od 96 jažica, i serijski razrjedeni za 7 testnih koncentracija.
4. Nakon 18 sati aktivacije liganda, dodan je razrjeđeni reagens za označavanje BrdU (1:100 u DMEM, 0.1% BSA), a stanice inkubirane s BrdU (konačna koncentracija=10 uM)1.5 sati.
5. Nakon inkubacije s reagensom za označavanje, medij je uklonjen dekantiranjem i laganim udaranjem okrenute ploče na papirnom ručniku. Dodana je FixDenat otopina (50 ul/jažici), a ploče inkubirane na sobnoj temperaturi 45 minuta na tresilici za ploče.
6. FixDenat otopina potpuno je uklonjena dekantiranjem i tapping okrenute ploče na papirnom ručniku. Dodano je mlijeko (5% dehidrirano mlijeko u PBS, 200 μl/jažici)kao otopina za blokiranje, a ploča inkubirana 30 minuta na sobnoj temperaturi na tresilici za ploče.
7. Otopina za blokiranje uklonjena je dekantiranjem, a jažice jednom isprane s PBS. Dodana je Anti-BrdU-POD otopina (razrjeđenje 1:200 u PBS, 1% BSA)(50 ul/jažici), a ploča inkubirana 90 minuta na sobnoj temperaturi na tresilici za ploče.
8. Konjugat protutijela potpuno je uklonjen dekantiranjem i ispiranjem jažica 5 puta s PBS, a ploča isušena invertiranjem i laganim trešenjem na papirnom ručniku.
9. Dodana je TMB otopina supstrata (100 ul/jažici)te inkubirana 20 minuta na sobnoj temperaturi na tresilici za ploče sve dok nije nastalo dovoljno boje za fotometrijsko određivanje.
10. Apsorpcija uzoraka izmjerena je na 410 nm (na način «dualne valne dužine» s očitanjem filtera na 490 nm, kao referentnoj valnoj dužini)na Dynatech ELISA čitaču ploče.
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU INDUCIRANE POMOĆU E6F
Materijali i reagensi:
1. Mišji EGF, 201 (Tovobo Co., Ltd., Japan).
2. 3T3/EGFRC7.
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU Her-2-pokrenute INDUCIRANE POMOĆU EGF
Materijali i reagensi:
1. Mišji EGF, 201 (Tovobo Co., Ltd., Japan).
2. 3T3/EGFr/Her2/EGFr (EGFr s Her-2 kinaznom domenom).
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU Her-4-pokrenute INDUCIRANE POMOĆU EGF
Materijali i reagensi:
1. Mišji EGF, 201 (Tovobo Co., Ltd., Japan).
2. 3T3/EGFr/Her4/EGFr (EGFr s Her-4 kinaznom domenom).
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU INDUCIRANE POMOĆU PDGF
Materijali i reagensi:
1. Humani PDGF B/B (Boehringer Mannheim, Germany).
2. 3T3/EGFRc7.
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU INDUCIRANE POMOĆU FGF
Materijali i reagensi:
1. Humani FGF2/bFGF (Gibco BRL, USA).
2. 3T3c7/EGFr.
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU INDUCIRANE POMOĆU IGF1
Materijali i reagensi:
1. Humani, rekombinantni (G511, Promega Corp., USA).
2. 3T3/IGF1r.
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU INDUCIRANE POMOĆU Inzulina
Materijali i reagensi:
1. Inzulin, kristalni, goveđi, Zine (13007, Gibco BRL, USA).
2. 3T3/H25.
ISPITIVANJE INKORPORACIJE BrdU INDUCIRANE POMOĆU HGF
Materijali i reagensi:
1. Rekombinantni humani HGF (Kat. br. 249-HG, R&D sistemi, Inc. USA).
2. BxPC-3 stanice (ATCC CRL-1687).
Procedura:
1. Stanice su nasađene po 9000 stanica/jažici u RPMI 10% FBS na ploči od 96 jažica. Stanice su inkubirane preko noći na 37°C u 5% CO2.
2. Nakon 24 sata, stanice su isprane s PBS, a zatim serumski izgladnjene u 100 μl medija bez seruma (RPMI s 0.1% BSA)24 sata.
3. 3. dan, stanicama je dodano 25 μl sredstva s ligandom (pripravljenog pri koncentraciji od l μg/ml u RPMI s 0.1% BSA; konačna koncentracija HGF je 200 ng/mL) i testnih spojeva. Negativne kontrolne jažice dobile su 25 μl RPMI bez seruma s 0.1% samo BSA; pozitivne kontrolne stanice primile su ligand (HGF), ali ne i testni spoj. Testni spojevi pripravljeni su u 5 puta njihove konačne koncentracije u bezserumskom RPMI s ligandom na ploči od 96 jažica, i serijski razrjeđeni kako bi se dobilo 7 testnih koncentracija. Tipično, najviša konačna koncentracija testnog spoja je 100 μM, a korištena su 1:3 razrjeđenja (tj. raspon koncentracija konačnog testnog spoja je 0.137-100 μM).
4. 18 sati nakon aktivacije liganda, svakoj jažici dodano je 12.5 μl razrjeđenog reagensa za označavanje BrdU (1:100 u RPMI, 0.1% BSA), a stanice inkubirane s BrdU (konačna koncentracija je 10 μM)1 sat.
5. Isto kao i opća procedura.
6. Isto kao i opća procedura.
7. Otopina za blokiranje uklonjena je dekantiranjem, a jažice jednom isprane s PBS. Dodana je anti-BrdU-POD otopina (razrjeđenje u PBS 1:100, 1% BSA)(100 μl/jažici), a ploča inkubirana 90 minuta na sobnoj temperaturi na tresilici za ploče.
8. Isto kao i opća procedura.
9. Isto kao i opća procedura.
10. Isto kao i opća procedura.
Ispitivanje HUV-EC-C
Ovo ispitivanje primjenjeno je za mjerenje djelovanja spoja protiv PDGF-R, FGF-R, VEGF, aFGF ili Flk-1/KDR, sve prirodno ekspresiraju HUV-EC stanice.
DAN 0
1. Isprati i tripsinizirati HUV-EC-C stanice (humane endotelne stanice umbilikalne žile, (American Type Culture Collection, kataloški br. 1730 CRL)). Isprati s Dulbeccovom slanom otopinom puferiranom fosfatom (D-PBS, dobiveno iz Gibco BRL, kataloški broj 14190-029) 2 puta s oko l ml/10 cm2 tikvice za uzgoj kulture tkiva. Tripsinizirati s 0.05% tripsin-EDTA u neenzimatskoj otopini za disocijaciju stanica (Sigma Chemical Companv, kataloški broj C-1544). 0.05% tripsin pripravljen je razrjeđivanjem 0.25% tripsina/1 mM EDTA (Gibco, kataloški br. 25200-049) U otopini za disocijaciju stanica. Tripsinizirati s oko l ml/25-30 cm2 tikvice za uzgoj kulture tkiva oko 5 minuta na 37°C. Nakon što su stanice odvojene iz tikvice, dodati jednaki volumen medija za ispitivanje i premjestiti u 50 ml sterilnu centrifugalnu cijev (Fisher Scientific, kataloški br. 05-539-6).
2. Ispirati stanice 10 minuta s oko 35 ml medija za ispitivanje u 50 ml sterilnoj centrifugalnoj cijevi na približno 200x g, aspirirati supernatant, i ponovo suspendirati s 35 ml D-PBS. Još dva puta ponoviti ispiranje s D-PBS, ponovo suspendirati stanice u oko l ml medija za ispitivanje/15 cm2 tikvice za uzgoj kulture tkiva. Medij za ispitivanje sastoji se od F12K medija (Gibco BRL, kataloški br. 21127-014) i 0.5% fetalnog goveđeg seruma inaktiviranog toplinom. Prebrojati stanice s Coulter Counter® (Coulter Electronics, Inc.)te stanicama dodati medij za ispitivanje kako bi se dobila koncentracija od 0.8-1.0 x 105 stanica/ml.
3. Dodati stanice na ploče ravnog dna od 96 jažica u koncentracijama od 100 μl/jažici ili 0.8-1.0 x 104 stanica/jažici, inkubirati ~24h na 37°C, 5% CO2.
DAN 1
1. Prirediti dvostruke titracije testnog spoja u odvojenim pločama od 96 jažica, općenito od 50 μM do 0 μM. Upotrijebiti isti medij za ispitivanje koji je naveden za dan 0 u koraku 2, gore. Titracije su načinjene dodavanjem 90 μl/jažici testnog spoja od 200 μM (4x konačna koncentracija jažice)do zadnje jažice u određenoj koloni na ploči. Budući da je štok testni spoj obično 20 mM u DMSO, 200 μM koncentracija lijeka sadrži 2% DMSO.
Razrjeđivač načinjen sve do 2% DMSO u mediju za ispitivanje (F12K +0.5% fetalni goveđi serum)upotrijebljen je kao razrjeđivač za titracije testnog spoja kako bi se razrijedio testni spoj, ali bi se koncentracija DMSO održala konstantnom. Dodati ovaj razrjeđivač u preostale jažice u koloni na 60 μl/jažici. Uzeti 60 μl od 120 μl 200 μM razrjeđenja testnog spoja iz prve jažice u koloni i miješati s 60 μl iz druge jažice u koloni. Uzeti 60 μl iz te jažice i miješati s 60 μl iz treće jažice, i tako dalje sve do završetka dvostrukih titracija. Kada se pomiješa sadržaj jažice koja je susjedna posljednjoj, uzeti 60 μl od 120 μl iz te jažice i odbaciti ih. Ostaviti posljednju jažicu sa 60 μl razrjeđivača DMSO/medij kao kontrolu koja sadrži netestni spoj. Načiniti 9 kolona titriranog testnog spoja, dovoljno za utrostručenje sadržaja jažica za: (1)VEGF (pribavljen od Pepro Tech Inc., kataloški broj 100-200), (2) faktor rasta endotelnih stanica (ECGF) (također poznat kao faktor rasta kiselinskih fibroblasta, ili aFGF) (pribavljen od Boehringer Mannheim Biochemica, kataloški br. 1439 600), ili (3) humani PDGF B/B (1276-956, Boehringer Mannheim, Germany) i kontrolu medija za ispitivanje. ECGF dolazi kao pripravak s natrijevim heparinom.
2. Premjestiti 50 μl/jažici razrjeđenja testnog spoja na ploče za ispitivanje od 96 jažica koje sadrže 0.8-1.0x104 stanica/100 μl/jažici HUV-EC-C stanica od dana O i inkubirati ~2 h na 37°C, 5% CO2.
3. Utrostruceno, dodati 50 ul/jažici 80 ul/ml VEGF, 20 ng/ml ECGF, ili kontrolu medija testnom spoju u svakoj fazi. Kao i kod testnih spojeva, koncentracije faktora rasta su 4x željene konačne koncentracije. Upotrijebiti medij za ispitivanje od dana 0, koraka 2, kako bi se načinile koncentracije faktora rasta. Inkubirati približno 24 sata na 37°C, 5% CO2. Svaka stanica imati će 50 μl razrjeđenja testnog spoja, 50 μl faktora rasta ili medija, i 100 μl stanica, što ukupno iznosi 200 μl/jažici. Prema tome, 4x koncentracije testnog spoja i faktora rasta postaju l x jednom kada se sve doda jažicama.
DAN 2
1. Dodati 3H-timidin (Amersham, kataloški br. TRK-686)pri l μCi/jažici (10 μl/jažici od 100 μCi/ml otopine načinjene u RPMI mediju + 10% fetalnog goveđeg seruma inaktiviranog toplinom i inkubirati -24 h na 37°C, 5% CO2. RPMI je pribavljen od Gibco BRL, kataloški br. 11875-051.
DAN 3
1. Zamrznuti ploče preko noći na -20°C.
DAN 4
Otopiti ploče i pokupiti stanice na filtar papir pomoću aparata Tomtec Harvester 96® (Wallac, kataloški br. 1205-401), očitati rezultat na Wallac Betaplate™ tekućinskom scintilacijskom brojaču.
TABLICA. 3 prikazuje rezultate biološkog testiranja nekih reprezentativnih spojeva iz ovog izuma. Rezultati su prikazani u odnosu na IC50, mikromolekularnu (μM)koncentraciju spoja koji se testira koja uzrokuje 50% promjenu u djelovanju ciljne PKT u usporedbi s djelovanjem PKT u kontroli u koju nije dodan testni spoj. Detaljnije, prikazani rezultati pokazuju koncentraciju testnog spoja potrebnu da uzrokuje 50% smanjenje djelovanja ciljne PKT. Bioispitivanja koja jesu ili se mogu upotrijebiti za procjenu spojeva detaljno su opisana ispod.
TABLICA 3
[image] [image] [image] [image]
IN VIVO ŽIVOTINJSKI MODELI
ŽIVOTINJSKI MODELI SA STRANIM TIJELOM
Sposobnost rasta humanih tumora kao stranih tijela u atimičnim miševima (npr., Balb/c, nu/nu) pruža koristan in vivo model za proučavanje bioloških odgovora na terapije humanih tumora. Od prve uspješne transplantacije stranih tijela humanih tumora u atimične miševe (Rvgaard i Povišen, 1969, Acta Pathol. Microbial. Scand. 77:758-760), transplantirane su mnoge različite stanične linije humanog tumora (npr., dojke, pluća, genitourinarnog, gastro-intestinalnog, glave i vrata, glioblastoma, kostiju i malignih melanoma)i uspješno uzgojeni u imunodeficijentnim miševima. Sljedeća ispitivanja mogla bi se primijeniti za određivanje razine aktivnosti, specifičnosti i učinka različitih spojeva iz predloženog izuma. Tri opća tipa ispitivanja korisna su za vrednovanje spojeva: stanično/katalitička, stanično/biološka i in vivo. Predmet stanično/katalitičkih ispitivanja je određivanje učinka spoja na sposobnost TK da fosforilira tirozine na poznatom supstratu u stanici. Predmet stanično/bioloških ispitivanja je određivanje učinka spoja na biološki odgovor koji TK pobuđuje u stanici. Predmet in vivo ispitivanja je određivanje učinka spoja u životinjskom modelu posebne bolesti kao što je karcinom.
Prikladne stanične linije za subkutane pokuse sa stranim tijelom uključuju C6 stanice (gliomi, ATCC # CCL 107), A375 stanice (melanomi, ATCC # CRL 1619), A431 stanice (epidermalni karcinomi, ATCC # CRL 1555), Calu 6 stanice (pluća, ATCC # HTB 56), PC3 stanice (prostata, ATCC # CRL 1435), SKOV3TP5 stanice i NIH 3T3 fibroblasti genetički dizajnirani da prekomjerno ekspresiraju EGFR, PDGFR, IGF-1R ili bilo koju drugu testnu kinazu. Za izvođenje eksperimenata sa stranim tijelom može se primijeniti sljedeći protokol:
Ženski atimični miševi (BALB/c, nu/nu) pribavljeni su od Simonsen LaboratorieS (Gilroy, CA). Sve životinje čuvane su u čistim sobnim uvjetima u Micro-isolator kavezima s Alpha-dri oblogom. Dobivaju sterilnu hranu za glodavce i vodu ad libitum.
Stanične linije uzgajane su u odgovarajućem mediju (primjerice, MEM, DMEM, Hamov F10, ili Hamov F12 uz 5%-10% fetalni goveđi serum (FBS), i 2 mM glutamin (GLN)). Čitav medij za uzgoj stanične kulture, glutamin, i fetalni goveđi serum pribavljeni su od Gibco Life TechnologieS(Grand Island, NY) ako drugačije nije navedeno. Sve stanice uzgajane su u vlažnoj atmosferi od 90-95% zraka i 5-10% CO2 na 37°C. Sve stanične linije rutinski su subkultivirane dvaput tjedno i negativne su na mikoplazmu kako je određeno Mycotect metodom (Gibco).
Stanice su pokupljene pri ili blizu konfluencije s 0.05% Tripsin-EDTA i oblikovane u kuglice pri 450 x g 10 min. Peleti su ponovo suspendirani u sterilnom PBS ili mediju (bez FBS)do određene koncentracije, a stanice implantirane u hindflank miševa (8-10 miševa po skupini, 2-10 x 106 stanica/životinji). Rast tumora mjeren je tijekom 3 do 6 tjedana pomoću nonija. Volumeni tumora izračunati su kao produkt dužine x širine x visine osim ako nije drugačije navedeno. P vrijednosti izračunate su primjenom Studentovog t-testa. Testni spojevi u 50-100 μL ekscipijensa (DMSO, ili VPD:D5W) mogu se isporučiti IP injekcijom s različitim koncentracijama, općenito počevši s danom jedan nakon implantacije.
MODEL INVAZIJE TUMORA
Sljedeći model invazije tumora razvijen je i može se upotrijebiti za vrednovanje terapeutske vrijednosti i djelotvornosti spojeva koji su prepoznati da selektivno inhibiraju KDR/FLK-1 receptor.
Procedura
Kao eksperimentalne životinje korišteni su imunodeficijentni miševi stari 8 tjedana (ženski)(Simonsen Inc.). Implantacija stanica tumora može se izvesti u laminar flow hood. Za anesteziju intraperitonealno su davani ksilazin/ketamin koktel (100 mg/kg ketamina i 5 mg/kg ksilazina). Načinjena je središnja incizija kako bi se otkrila abdominalna šupljina (dužine približno 1.5 cm)radi ubrizgavanja 107 tumorskih stanica u volumenu od 100 μl medija. Stanice su ubrizgane ili u duodenalni režanj pankreasa ili supserozno u kolon. Peritoneum i mišići zatvoreni su s 6-0 svilenim neprekidnim šavom, a koža pomoću kopče za ranu. Životinje su praćene dnevno.
Analiza
Nakon 2-6 tjedana, ovisno o ukupnom praćenju životinja, miševi su žrtvovani, a lokalne metastaze tumora na različitim organima (pluća, jetra, mozak, želudac, slezena, srce, mišić)izrezane su i analizirane (mjerenje veličine tumora, stupnja invazije, imunokemija, određivanje hibridizacije in situ, itd.).
C-KIT ISPITIVANJE
Ovo ispitivanje primjenjeno je za određivanje razine fosforilacije tirozina pomoću c-kit.
Stanične linije MO7E (humane akutne mijeloidne leukemije)izgladnjene serumom preko noći u 0.1% serumu. Stanice su prethodno obrađene sa spojem (usporedno s izgladnjivanjem serumom), prije stimulacije liganda. Stanice su stimulirane s 250 ng/ml rh-SCF 15 minuta. Nakon stimulacije, stanice su razgrađene i imunoprecipitirane s anti-c-kit protutijelom. Western blot analizom određene su razine fosfotirozina i proteina.
ISPITIVANJE MTT PROLIFERACIJE
Stanice MO7E izgladnjene su serumom i prethodno obrađene sa spojem kako je opisano u eksperimentima fosforilacije. Stanice su stavljene na ploču od 96 jažica po 4xl05 stanica/jažici, u 100 ul RPMI + 10% seruma. Dodan je rh-SCF (100 ng/mL). Nakon 48 sati, dodano je 10 μl 5 mg/ml MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolij bromid) i inkubirano 4 sata. Dodan je kiselinski izopropanol (100 μl 0.04N HCl u izopropanolu) te je izmjerena optička gustoća na valnoj dužini od 550 nm.
ISPITIVANJE APOPTOZE
Inkubirane su M07E stanice +/- SCF i +/- spoj u 10% FBS s rh-GM-CSF (10 ng/mL) i rh-IL-3 (10 ng/mL). Uzorci su ispitani nakon 24 i 48 sati. Za mjerenje aktivirane kaspaze-3, uzorci su isprani s PBS i permeabilizirani s ledeno-hladnim 70% etanolom. Stanice su zatim obilježene s PE-konjugiranom poliklonalnom zečjom anti-aktivnom kaspazom-3 te analizirane pomoću FACS. Za mjerenje cijepanja PARP, uzorci su razgrađeni i analizirani western blot analizom s anti-PARP protutijelom.
Dodatna ispitivanja koja se mogu upotrijebiti za vrednovanje spojeva iz ovog izuma uključuju, bez ograničenja, bio-flk-1 ispitivanje, EGF receptor-HER2 kimerički receptorski pokus na cijelim stanicama, bio-src ispitivanje, bio-lck ispitivanje i ispitivanje koje mjeri fosforilacijsku funkciju raf. Protokoli za svako od ovih ispitivanja mogu se pronaći u U.S. Prijavi ser. br. 09/099,842, koja je ovdje uključena referencom, uključujući sve crteže, ovdje.
Mjerenje -toksičnosti stanice
Terapeutski spojevi trebali bi biti moćniji u inhibiranju djelovanja receptorske tirozin kinaze nego u izvršenju citotoksičnog odgovora. Mjera djelotvornosti i stanične toksičnosti spoja može se dobiti određivanjem terapeutskog indeksa, tj. IC50/LD50. IC50, doza potrebna za postizanje 50% inhibicije, može se izmjeriti primjenom standardnih metoda kao što su one ovdje opisane. LD50, doza koja rezultira 50% toksičnošću, također se može mjeriti standardnim metodama (Mossman, 1983, J. Immunol. Methods, 65:55-63), mjerenjem količine otpuštenog LDH (Korzeniewski i Callewaert, 1983, J. Immunol. Methods, 64:313, Decker i Lohmann-Matthes, 1988, J. Immunol. Methods, 115:61), ili mjerenjem smrtne doze na životinjskim modelima. Povoljni su spojevi s velikim terapeutskim indeksom. Terapeutski indeks trebao bi biti veći od 2, ponajprije najmanje 10, osobito najmanje 50.
B. Primjer rezultata staničnog ispitivanja pomoću (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Kako bi se potvrdila moć (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-ltf-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80)detektiranog u biokemijskim ispitivanjima (vide infra), sposobnost spomenutog spoja da inhibira fosforilaciju RTK ovisnu o ligandu vrednovana je u stanično temeljenim ispitivanjima pomoću NIH-3T3 mišjih stanica dizajniranih za prekomjerenu ekspresiju Flk-1 ili humanog PDGFR(3. (2-Dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80)inhibirao je Flk-1 tirozinsku fosforilaciju ovisnu o VEGF s vrijednošću IC50 od približno 0.03 μM. Ta je vrijednost slična 0.009 μM Ki vrijednosti određenoj za inhibiciju Flk-1 pomoću (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80)određenoj u biološkim ispitivanjima. To ukazuje da (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80) Jednostavno prodire u stanice. U skladu s biokemijskim podacima (vide infra) koji ukazuju da se djelovanja (2-dietilamino-etil) amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80) protiv Flk-1 i PDGFRβ mogu usporediti, također je pronađeno da je on ihnibirao fosforilaciju receptora ovisnu o PDGF u stanicama s vrijednošću IC50 od približno 0.03 μM. Sposobnost (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80) da inhibira c-kit, usko povezan RTK koji veže faktor matičnih stanica (SCF), određena je pomoću M07E stanica koje ekspresiraju taj receptor. U tim stanicama, (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80) inhibirao je c-kit fosforilaciju ovisnu o SCF s vrijednošću IC50 od 0.01-0.1 μM. Taj je spoj također inhibirao c-kit fosforilaciju stimuliranu sa SCF u blasts akutne mijeloidne leukemije (AML) izoliranim iz periferne krvi pacijenata.
Kao dodatak testiranju sposobnosti (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80)da inhibira fosforilaciju receptora ovisnu o ligandu u stanicama, također je ispitano njegovo djelovanje u stanicama in vitro na proliferacijski odgovor ovisan o ligandu (vidi Tablicu 4). U tim studijama, u stanicama umrtvljenim izgladnjivanjem serumom preko noći dodavanjem odgovarajućeg mitogenog liganda započeta je sinteza DNA. Kako je prikazano u tablici 4, (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-l,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80) inhibirao je proliferaciju induciranu s PDGF NIH-3T3 stanica koje prekomjereno ekspresiraju PDGFRα ili PDGFRβ s vrijednostima IC50 0.031 i 0.069 μM, redom, i proliferaciju MO7E stanica induciranu sa SCF s vrijednošću IC50 od 0.007 μM.
TABLICA 4
[image]
Kako je prikazano u tablici 4, postoji općenito podudaranje između biokemijskih i staničnih djelovanja (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80) koje podupire zaključak da taj spoj prolazi kroz stanične membrane. Nadalje, može se zaključiti da su stanični odgovori rezultat djelovanja spoja 80 prema naznačenom cilju. Suprotno tome, kada se testira in vitro u prisutnosti kompletnog medija za uzgoj, za inhibiranje rasta stanica različitih humanih tumora (vidi, tablica 5)bile su potrebne bitno više koncentracije (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80) (>10 μM). To ukazuje da spoj nije izravno inhibirao rast tih stanica pri koncentracijama potrebnim za inhibiranje fosforilacije receptora ovisne o ligandu i stanične proliferacije.
TABLICA 5
[image]
Ukratko, rezultati pokazani u Tablici 5 dobiveni su inkubiranjem stanica kroz 48 sati u potpunom mediju rasta u prisutnosti serijskih razrjeđenja (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline. Na kraju razdoblja rasta, određen je relativni broj stanica. IC50 vrijednosti izračunate su kao koncentracija spoja koja je inhibirala rast stanica za 50% u odnosu na neobrađivane stanice. LDso vrijednosti izračunate su kao koncentracija spoja koja je prouzročila 50%-tno smanjenje broja stanica u odnosu na broj na početku pokusa.
Značajnije ispitivanje na temelju stanica kojim se vrednuje anti-angiogeni potencijal (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80) Je in vitro ispitivanje mitogeneze uz uporabu humanih endotelnih stanica pupčane vene (HUVEC)kao modela sistema za proliferaciju endotelnih stanica presudnu za angiogeni proces. U tom ispitivanju, mitogeni odgovor, mjeren kao povećanje u sintezi DNA, induciran je u serumski izgladnjene HUVEC nakon dodavanja VEGF ili FGF. U tim stanicama, (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80) inhibirao je VEGF- i FGF-inducirani mitogeni odgovor na način ovisan o doziranju s IC50 vrijednostima od 0.004 μM i 0.7 μM redom, kada je spoj bio prisutan kroz cijelo 48-satno ispitivanje.
Ukratko, gorespomenuti rezultati dobiveni su uporabom serumski izgladnjelih HUVEC-a koje su bile inkubirane mitogenim koncentracijama VEGF (100 ng/ml) U prisutnosti serijskih razrjedenja (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80) tijekom 24 sata. Mitogeni odgovor za vrijeme sljedeća 24 sata u prisutnosti liganda i inhibitora kvantiziran je mjerenjem sinteze DNA utemeljenim na inkorporaciji bromodeoksiuridina u staničnu DNA.
U odvojenim pokusima, spoj 80 inhibirao je VEGF-ovisnu fosforilaciju ERK 1/2 (p42/44MAP kinaze), rani downstream cilj od Flk-1/KDR, na način ovisan o doziranju. Inhibitorno djelovanje spoja 80 također se pokazalo kao dugotrajno u tom sustavu; inhibiranje VEGF-ovisne fosforilacije ERK 1/2 čak 48 sati nakon uklanjanja (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80)iz medija koje je uslijedilo za kratkim (2 sata)izlaganjem mikromolarnim koncentracijama spoja.
VEGF je bio prepoznat kao važan faktor preživljavanja za endotelne stanice. Kako (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-l, 2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80) inhibira VEGF-ovisni mitogeni odgovor HUVEC-a, ispitivan je učinak spoja na preživljavanje HUVEC-a. U tim pokusima, cijepanje supstrata 3 kaspaze poli-ADP-ribosil polimeraze (PARP)upotrijebljeno je za očitavanje apoptoze. HUVEC stanice uzgojene u uvjetima bez seruma tijekom 24 sata pokazale su značajne razine cijepanja PARP, kao što je detektirane nakupljanjem 23 kDa fragmenta cijepanja PARP. To je bilo uvelike spriječeno dodavanjem VEGF staničnom mediju, ukazujući kako VEGF djeluje kao faktor preživljavanja u tom ispitivanju. Pokazano je da (2-dietilamino-etil) amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80) inhibira KDR signalizaciju. Prema tome, (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80) inhibirao je VEGF-posredovano preživlajvanje HUVEC-a na način ovisan o doziranju. Dakle, ti podaci ukazuju da je spoj 80 inducirao apoptozu u endotelnim stanicama u kulturi u prisutnosti VEGF.
C. Proučavanje in vivo djelotvornosti
i. Djelotvornost protiv utvrđenih tumora kao stranih tijela
In vivo djelotvornost (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80)proučavana je u subkutanim (SC)modelima stranog tijela uporabom humanih stanica tumora usađenih u stražnje bočno područje atimičnih miševa. Poslije implantacije, tumori su pušteni da se razviju do veličine od 100-550 mm3 prije početka oralne obrade spojem.
Dnevno oralno davanje spoja 80 prouzročilo je o dozi ovisnu inhibiciju rasta A431 tumora kada je obrada započeta pošto su tumori narasli do veličine od 400 mm3. Statistički značajna (P<0.05)inhibicija rasta tumora viđena je kod doziranja od 40 mg/kg/danu (vidi Tablicu 6). U prethodnim pokusima, viša doza (160 mg/kg/danu)spoja nije bila djelotvornija protiv utvrđenih A431 tumora nego doza od 80 mg/kg/danu. Osim toga, miševi obrađivani dozom spoja od 160 mg/kg/danu gubili su na tjelesnoj težini, što je ukazivalo da se viša doza nije niti dobro podnosila. Slični rezultati dobiveni su u pokusu u kojima su A431 tumori pušteni da narastu samo do veličine od 100 mm3 (vidi tablicu 5). U tom drugom pokusu, potpuno povlačenje pojavilo se u šest od osam životinja obrađivanih s 80 mg/kg/danu kroz 21 dan. U tih šest životinja, tumori nisu ponovno rasli za vrijeme 110-dnevnog razdoblja promatranja po završetku obrade. U dvije životinje u kojima su tumori ponovno narasli do velikih razmjera (2000-3000 mm3), tumori su se povukli u odgovoru na drugi krug obrade spojem 80. Važno je da je, u svim pokusima djelotvornosti, (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80)pri 80 mg/kg/danu bio dobro podnošen, čak i kad je doziran neprekidno kroz više od 100 dana.
TABLICA 6
[image]
Ukratko, rezultati prikazani u Tablici 6 dobiveni su uporabom A431 stanica (0.5 x 106 stanica/mišu) koje su bile implantirane SC u stražnje bočno područje atimičnih miševa. Dnevno oralno davanje (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1, 2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (Spoj 80) U vehikulu baziranom na Cremophore-u ili vehikulnoj kontroli započelo je kad su tumori dosegli naznačeni prosječni volumen. Tumori su mjereni uporabom nonija i volumen tumora računat je kao umnožak duljina x širina x visina. P-vrijednosti su izračunate uspoređujući veličinu tumora za životinje koje su obrađivane spojem 80 (n=8)s onima za životinje obrađivane vehikulom (n=16)posljednjeg dana pokusa, primjenom dvokrakog Studentovog t-testa.
Djelotvornost spoja 80 protiv ustanovljenih ljudskih tumora različitih podrijetla određena je primjenom ColO205 (karcinom debelog crijeva), SF763T (gliom) i NCI-H460 (karcinom ne-malih plućnih stanica)stranih tijela (vidi tablicu 7). Ti pokusi vođeni su uporabom (2-dietilamino-etil)amida 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80)davanog oralno po 80mg/kg/danu; u dozi koja je bila djelotovorna i dobro podnašana.
TABLICA 7
[image]
U gorespomenutim pokusima, spoj 80 davan je jednom dnevno po 80 mg/kg u vehikulu na bazi Cremophore-a kad su tumori dosegli naznačenu veličinu. Postotak inhibicije u usporedbi s vehikulom obrađivanom kontrolnom grupom izračunat je po završetku pokusa. P-vrijednosti su izračunate uspoređujući veličinu tumora za životinje koje su obrađivane spojem s onima za životinje obrađivane vehikulom, primjenom dvokrakog Studentovog t-testa.
Iako je (2-dietilamino-etil)amid 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline (spoj 80)inhibirao rast svih tipova tumora prikazanih u tablici 7, bilo je razlike u odgovoru različitih modela stranog tijela. Točnije, rast NCI-H460 i SF763T tumora bio je zaustavljen ili znatno usporen dok su ColO205 tumori, kao što su A431 tumori, pokazali povlačenje kad su obrađivani S(2-dietilamino-etil)amidom 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline.
Kako bi se odredila molekularna osnova za razliku u odgovorima medu modelima sa stranim tijelom, proučavani su SF763T tumori. Stoga su SF763T tumori, koji manje reagirali na obradu (2-dietilamino-etil)amidom 5-(5-fluoro-2-okso-1,2-dihidroindol-3-ilidenmetil)-2,4-dimetil-1H-pirol-3-karboksilne kiseline, vrednovani na molekularnoj razini primjenom imunohistoloških metoda radi određivanja učinka obrade navedenim spojem. Ta proučavanja inicijalno su vođena u tom tipu tumora zato što su SF763T tumori visoko vaskularizirani mikrožilama koje snažno ekspresiraju endotelni stanični marker CD31 pa su stoga vrlo prikladni za proučavanja tumorske mikrožilne gustoće (MVD). Imunohistološko vrednovanje SF763T tumora ukazalo je na to da su tumori obrađivanih životinja imali reducirani MVD u odnosu na vehikulom obrađivane kontrole, što se slaže s anti-angiogenim mehanizmom djelovanja za spoj 80; MVD je bio 24.2 ± 4.1 u životinja obrađenih spojem 80, naprema 39.3 ± 5.7 u onih koje su obrađivane samo vehikulom. Kao što je nagoviješteno pripadnim zaustavljanjem rasta tumora, izrazita inhibicija diobe stanica tumora bila je očita kod tumora koji su obrađivani spojem 80. Ti tumori imali su polovicu mitotičkog indeksa od onog za vehikulom obrađivane životinje (podaci nisu prikazani). Učinak spoja 80 na MVD i diobu stanica tumora ukazuje da spoj ima duboke anti-angiogene i anti-tumorske učinke, čak i pod uvjetima u kojima se tumori ne povlače.
Sposobnost spoja 80 da inhibira PDGFR fosforilaciju, a zatim signalizaciju in vivo također je vrednovana u SF763T tumora, koji ekspresiraju visoke razine PDGFRp. Obrađivanje SF763T tumora spojem 80 snažno je inhibiralo fosforilaciju PDGFRJ3 tirozina u ustanovljenim SF763T tumorima. Spoj 80 također je smanjio razine fosforilatirane (aktivirane)fosfolipaze C gama (PLC-v), neposrednog dovmstream pokazatelja aktiviranja PDGFR. Ti podaci pokazuju da oralno davanje spoja 80 uzrokuje izravni učinak na ciljnu (PDGFR)aktivnost kod tumora in vivo.
Na temelju pokazivanja kako je sposobnost spoja 80 da inhibira VEGF-ovisno signalizaciji kod HUVEC-a in vi tro dugotrajna (vide supra), djelotvornost spoja bila je vrednovana kad je spoj davan neučestalo u ColO205 tumorskom modelu. Kako je pokazano u Tablici 8, 80 mg/kg (91% inhibicija)i 40 mg/kg (84% inhibicija)bilo je djelotvorno kad je davano svakodnevno, ali ne i kad je davano dvaput tjedno. Naprotiv, viša doza spoja 80 (160 mg/kg)inhibirala je (52% inhibicija)rast ustanovljenih ColO205 tumora kad je davana dvaput tjedno, ukazujući kako taj spoj može pokazati djelotvornost kada se daje neučestalo u većoj dozi. Trebalo bi primijetiti kako se režim doziranja mogu odrediti oni koji su uobičajeno vični struci, bez nepriličnog eksperimentiranja.
TABLICA 8
[image]
Ukratko, rezultati pokazani u tablici 8 dobiveni su uporabom ColO205 stanica (0.5 x 106 stanica/mišu)koje su bile implantirane SC u stražnje bočno područje atimičnih miševa. Oralno davanje spoja 80 u skladu s naznačenim rasporedom započelo je kad su tumori dosegli 400 mm3. Tumori su mjereni uporabom nonija i volumen tumora računat je kao umnožak duljina x širina x visina. P-vrijednosti su izračunate uspoređujući veličinu tumora za životinje koje su obrađivane spojem 80 s onima za životinje obrađivane vehikulom posljednjeg dana pokusa, primjenom dvokračnog Studentovog t-testa.
ii. Djelotvornost Spoja 80 u modelu raširene bolesti
Osim što podupire održavanje rasta solidnih primarnih tumora, angiogeneza je također bitna komponenta koja podržava razvitak proširene bolesti zbog metastaze iz primarnog tumora. Učinak spoja 80 na razvitak raširene bolesti ispitivan je u B16-F1 modelu plućne kolonizacije mišjeg melanoma. U tom modelu, B16-F1 stanice inokulirane intravenozno putem repne vene atimičnih miševa koloniziraju pluća i oblikuju tumore. Kako je pokazano u Tablici 9, oralno davanje spoja 80 s 80 mg/kg/danu djelotvorno je smanjilo opterećenje B16-F1 stanica u plućima, kao što je određeno mjerenjima ukupne plućne težine. Ti podaci ukazuju kako spoj 80 može inhibirati proširenu bolest in vivo.
TABLICA 9
[image]
Ukratko, rezultati prikazani u tablici 9 dobiveni su uporabom atimičnih miševa koji su bili inokulirani B16-F1 tumorskim stanicama (5 x 105 stanica/mišu)putem repne vene. Miševi su dnevno obrađivani oralno davanim spojem 80 uz 80 mg/kg/danu (n=10)ili vehikulom (n=18)24 dana nakon inokulacije tumorskim stanicama. Na kraju razdoblja obrađivanja, miševi su žrtvovani, a njihova pluća izvađena i izvagana. Postotak inhibicije izračunat je usporedbom plućne težine onih životinja koje su bile obrađivane spojem 80 s plućnom težinom životinja koje su obrađivane samo vehikulom. P-vrijednosti određene su primjenom dvokračnog Studentovog t-testa.
D. Primjeri biološkog djelovanja
Primjeri in vitro moći spojeva iz ovog izuma pokazani su u Tablici 2.
ZAKLJUČAK
U studijama istraživanja farmakokinetičkih svojstava spojeva u poželjnim ostvarenjima predloženog izuma pokazano je da oralno davanje jedne doze spomenutih spojeva rezultira visokom oralnom biodostupnosti u miševa. Dobra oralna biodopstupnost i linearna farmakokinetika ukazuju da spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma imaju povoljna farmakokinetička svojstva.
Osim toga, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma su snažni inhibitori djelovanja tirozine kinaze split-kinazne domene RTK Flk-1/KDR i PDGFR, koje su uključene u angiogenezu, i RTK c-kita, receptora za faktor matičnih stanica (SCF), koji je uključen u stanovite hematološke karcinome.
U višim koncentracijama, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma također inhibiraju djelovanje tirozin kinaze FGFR-1, trećeg RTK uključenog u angiogenezu. U skladu s njihovim biokemijskim djelovanjem, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma inhibiraju o ligandu ovisnu tirozinsku fosforilaciju ciljnih RTK-ova i in vitro mitogeni odgovor humanih endotelijalnih stanica pupčane vene (HUVEC-a)podraženih s VEGF ili FGF, NIH-3T3 stanica koje ekspresiraju PDGFR podraženih s PDGF i M07E stanica akutne mijeloidne leukemije podraženih s SCF. Naprotiv, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma ne inhibiraju izravno diobu tumorskih stanica u potpunom mediju rasta osim u koncentracijama 2 ili 3 reda veličine viših od onih koje su nužne za inhibiranje o ligandima ovisnih mitogenih odgovora. U proučavanju modela stranog tijela u miševa, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma inhibirali su rast ustanovljenih humanih tumora različitih podrijetla na način ovisan o dozama i uz koncentracije koje su dobro podnesene čak i po produženom (>100 dana)doziranju. Uz 80 mg/kg/danu, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma potaknuli su povlačenje velikih ustanovljenih A431 i ColO203 tumora te uzrokovali značajnu inhibiciju rasta ili zaustavljanja SF763T i NCI-H460 tumora. U miševa koji su nosili SF763T tumore, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma uzrokovali su smanjenje mikrožilne gustoće, fosforilacije PDGFR u tumorima i mitotičnog indeksa u tumorskim stanicama. Pri toj dozi, spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma također su inhibirali plućnu kolonizaciju B16-F1 tumorskim stanicama u modelu metastaze tumora. Proučavanje režima davanja pokazalo je da su spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma najdjelotvorniji kad se daju svakodnevno. Izravni dokaz anti-angiogenog djelovanja spojeva iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma otkriveno je u SF763T tumorima u kojima je smanjena mikrožilna gustoća. Izravni dokazi da spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma inhibiraju PDGFR fosforilaciju i signalizaciju in vivo također su dobiveni kod SF763T tumora.
Uzeti zajedno, ti podaci podupiru shvaćanje da su oralno davani spojevi iz poželjnih ostvarenja predloženog izuma anti-angiogena sredstva za liječenje karcinoma, uključujući solidne tumore i hematološke zloćudnosti u kojima su angiogeneza i/ili signalizaciju kroz c-kit važni u patologiji bolesti.
Smatrat će se da su spojevi, metode i farmaceutski pripravci iz predloženog izuma djelotvorni u moduliranju PK djelovanja te da se stoga očekuje njihova djelotvornost kao terapeutskih sredstava protiv poremećaja povezanih s RTK, CTK i STK.
Osoba vična struci također bi lako shvatila kako je predloženi izum dobro prilagođen za provođenje predmeta i postizanje ciljeva i korisnih učinaka koji su spomenuti, kao i onih koji su im sami po sebi svojstveni. Molekularni kompleksi i metode, postupci, obrade, molekule, specifični spojevi koji su ovdje opisani trenutačno su reprezentativni za povoljna ostvarenja, služe kao primjeri i nisu mišljeni kao ograničenja dosega izuma. Osobama vičnima struci ukazat će se promjene u njima i druge primjene, obuhvaćene duhom izuma i definirane dosegom patentnih zahtjeva.
Osobi vičnoj struci bit će očito da se na ovdje iznesenom izumu mogu načiniti različite supstitucije i modifikacije, kojima se ne izlazi izvan dosega i duha izuma.
Svi patenti i publikacije navedeni u specifikaciji indikativni su za razine onih osoba vičnih struci kojih se izum tiče. Svi patenti i publikacije ovdje su uključeni putem reference u istom opsegu kao da je za svaku pojedinu publikaciju naznačeno specifično i individualno uključivanje putem reference.
Izum koji je ovdje ilustrativno opisan može se primjereno prakticirati u odsutnosti bilo kojeg elementa ili elemenata, čija ograničenja nisu ovdje specifično iznesena. Tako, na primjer, svaki od izraza «koji uključuje», «koji se u biti sastoji od» i «koji se sastoji od» može se u svakom slučaju zamijeniti bilo kojim od ostala dva izraza. Termini i izrazi koji su primjenjivani upotrijebljeni su u smislu opisa, a ne ograničenja te nema namjere da se pri uporabi takvih termina isključe bilo koji ekvivalenti prikazanih i opisanih značajki ili njihovih dijelova, nego se uzima u obzir da su moguće različite modifikacije u okviru predloženog izuma. Dakle, treba shvatiti da, iako je predloženi izum specifično izložen kroz poželjna ostvarenja i moguće inačice, osobe vične struci mogu se poslužiti modifikacijama i varijacijama ovdje iznešenih zamisli te da će se za takve modifikacije i varijacije smatrati da pripadaju dosegu ovog izuma kao da su definirane u priloženim patentnim zahtjevima.
Osim toga, gdje god su značajke ili aspekti izuma opisani u terminima Markushovih skupina, osobe vične struci shvatit će da je time izum također opisan u terminima bilo kojeg pojedinačnog člana ili podskupine članova Markushove grupe. Na primjer, ako je X opisan tako da se bira iz skupine koju čine brom, klor i jod, iskaz da je X brom i iskaz da je X brom i klor dani su time u potpunosti.
Ostala ostvarenja su unutar sljedećih patentnih zahtjeva.

Claims (60)

1. Spoj formule (I): [image] naznačen time, da se: R1 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroalicičkog, hidroksi, alkoksi, -(CO)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 i -C(O)NR8R9; R2 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, cijano, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arila, heteroarila i -S(O)2NR13R14; R3 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, -C(O)R15, -NR13R14, arila, heteroarila, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, -NR13C(O)OR14 i -SO2R20 (gdje je R20 alkil, aril, aralkil, heteroaril i heteroaralkil); R4 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, hidroksi, alkoksi i -NR13R14; R5 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i -C(O)R10; R6 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, trihalometila i -C(O)R10; R7 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, -C(O)R17 i -C(O)R10; ili R6 i R7 mogu se kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5- i -(CH2)6-; uz uvjet da najmanje jedan od R5, R6 ili R7 mora biti -C(O)R10; R8 i R9 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i arila; R10 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, alkoksi, ariloksi, -N(R11)(CH2)nR12 i -NR13R14; R11 bira iz skupine koja se sastoji od vodika i alkila; R12 bira iz skupine koja se sastoji od -NR13R14, hidroksi, -C(O)R15, arila, heteroarila, -N+(O-)R13R14, -N(OH)R13 i -NHC(O)Ra (gdje je Ra nesupstituirani alkil, haloalkil ili aralkil); R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, cijanoalkila, cikloalkila, arila i heteroarila; ili R13 i R14 mogu kombinirati i oblikovati heterocikloskupinu; R15 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, hidroksi, alkoksi i ariloksi; R16 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, -C(O)R15, -NR13R14 i -C(O)NR13R14; R17 bira iz skupine koja se sastoji od alkila, cikloalkila, arila i heteroarila; R20 je alkil, aril, aralkil ili heteroaril; i n i r su nezavisno 1, 2, 3 ili 4; ili njihova farmaceutski prihvatljiva sol.
2. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da se R1 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroalicikličkog, hidroksi, alkoksi, -C(O)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 i -C(O)NR8R9; R2 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halo, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, cijano, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arila, heteroarila, -S(O)2NR13R14; R3 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, trihalometila, hidroksi, alkoksi, -C(O)R15, -NR13R14, arila, heteroarila, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, i -NR13C(O)OR14; R4 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, halogena, alkila, hidroksi, alkoksi i -NR13R14; R5 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i -C(O)R10; R6 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, i -C(O)R10; R7 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, -C(O)R17 i -C(O)R10; R6 i R7 mogu se kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5- i -(CH2)6-; uz uvjet da najmanje jedan od R5, R6 ili R7 mora biti -C(O)R10; R8 i R9 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i arila; R10 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, alkoksi, ariloksi, -N (R11)(CH2)nR12 i -NR13R14; R11 bira iz skupine koja se sastoji od vodika i alkila; R12 bira iz skupine koja se sastoji od –NR13R14, hidroksi, -C(O)R15, arila i heteroarila; R13 i R14 nezavisno biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, cikloalkila, arila i heteroarila; R13 i R14 mogu kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5-, - (CH2)2O(CH2)2- i -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-; R15 bira iz skupine koja se sastoji od vodika, hidroksi, alkoksi i ariloksi; R16 bira iz skupine koja se sastoji od hidroksi, -C(O)R15, -NR13R14 i -C(O)NR13R14; R17 bira iz skupine koja se sastoji od alkila, cikloalkila, arila i heteroarila i n i r su nezavisno 1, 2, 3 ili 4; ili njihova farmaceutski prihvatljiva sol.
3. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 -COR10, pri čemu je R10 -N(R11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 pri čemu su R13 i R14 nezavisno nesupstituirani niži alkil.
4. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 -COR10, pri čemu je R10 -N (R11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 pri čemu R13 i R14 kombinirani čine jednu od skupina -(CH2)4-, -(CH2)5-, - (CH2)2-O- (CH2)2- ili -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
5. Spoj iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 N-(2-dimetilaminoetil)aminokarbonil, N-(2-dietilaminoetil)-N-metil-aminokarbonil, N-(3-dimetilaminopropil) aminokarbonil, N-(2-dietilaminoetil)aminokarbonil, N-(3-etilaminopropil)-aminokarbonil, N-(2-etilaminoetil)aminokarbonil ili N-(3-dietilaminopropil)aminokarbonil.
6. Spoj iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 N-(2-dietil-aminoetil)aminokarbonil ili N-(2-etilaminoetil)aminokarbonil.
7. Spoj iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 3-pirolidin-1-ilpropilaminokarbonil, 3-morfolin-4-ilpropilaminokarbonil, 2-pirolidin-1-iletilaminokarbonil, 2-morfolin-4-il-etilaminokarbonil, 2-(4-metilpiperazin-1-il)etil-aminokarbonil, 2-(3, 5-dimetilpiperazin-1-il)etil-aminokarbonil, 3-(4-metilpiperazin-1-il)propilamino-karbonil ili 3-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)propilamino-karbonil.
8. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 -COR10, pri čemu je R10 -NCR11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 p nesupstituirani niži alkil. R12 je -NR13R14 pri čemu su R13 i R14 nezavisno
9. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R -COR10, pri čemu je R10 -N (R11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 pri čemu R13 i R14 kombinirani čine jednu od skupina -(CH2)4-, -(CH2)5-, - (CH2)2-O-(CH2)2- ili -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
10. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 N-(2-dimetilaminoetil)aminokarbonil, N-(2-dietilaminoetil)-N-metilaminokarbonil, N-(3-dimetilaminopropil)-aminokarbonil, N-(2-dietilaminoetil)-aminokarbonil, N-(3-etilaminopropil)-aminokarbonil, N-(2-etilaminoetil)aminokarbonil ili N-(3-dietilaminopropil)aminokarbonil.
11. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 N-(2-dietilaminoetil)aminokarbonil ili N-(2-etilaminoetil)aminokarbonil.
12. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 3-pirolidin-1-ilpropilaminokarbonil, 3-morfolin-4-ilpropilaminokarbonil, 2-pirolidin-1-iletilaminokarbonil, 2-morfolin-4-il-etilaminokarbonil, 2-(4-metilpiperazin-1-il)etil-aminokarbonil, 2-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)etilaminokarbonil, 3-(4-metilpiperazin-1-il)propilamino-karbonil ili 3-(3,5-dimetilpiperazin-1-il)propilamino-karbonil.
13. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 -COR10, pri čemu je R10 -NR13R14, gdje je R13 vodik i R14 je niži alkil supstituiran s hidroksi, aril, heteroaliciklički, heteroaril ili karboksi.
14. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 3-triazin-1-ilpropilaminokarbonil, 2-triazin-1-iletilaminokarbonil, 3-imidazol-1-ilpropilaminokarbonil, piridin-4-ilmetil-aminokarbonil, 2-piridin-2-iletilaminokarbonil ili 2-imidazol-1-il etilaminokarbonil.
15. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 -COR10, pri čemu je R10 -NR13R14, gdje je R13 vodik i R14 je niži alkil supstituiran s hidroksi, aril, heteroaliciklički, heteroaril ili karboksi.
16. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 2-triazin-1-ilpropilaminokarbonil, 2-triazin-1-iletilaminokarbonil, 3-imidazol-1-ilpropilaminokarbonil, piridin-4-ilmetil-aminokarbonil, 2-piridin-2-iletilaminokarbonil ili 2-imidazol-1-il etilaminokarbonil.
17. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 -COR10, pri čemu je R10 -N (R11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 pri čemu R13 i R14 kombinirani čine heterocikl.
18. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 -COR10, pri čemu je R10 -N (R11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 pri čemu R13 i R14 kombinirani čine heterocikl s 5, 6 ili 7 atoma koji sadrži karbonilnu skupinu i jedan ili dva dušikova atoma unutar prstena.
19. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 2-(3-oksopiperazin-1-il)etilaminokarbonil, 2-(imidazolidin-1-il-2-on)etilaminokarbonil, 2-(tetrahidropirimidin-1-il-2-on)etilaminokarbonil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)-etilaminokarbonil, 3-(3-oksopiperazin-1-il)propil-aminokarbonil, 3-(imidazolidin-1-il-2-on)propil-aminokarbonil, 3-(tetrahidropirimidin-1-il-2-on)-propilaminokarbonil ili 3-(2-oksopirolidin-1-il)propil-aminokarbonil.
20. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 -COR10, pri čemu je R10 -N (R11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 pri čemu R13 i R14 kombinirani čine heterocikl.
21. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 -COR10, pri čemu je R10 -N(R11)(CH2)nR12, gdje: R11 je vodik ili niži nesupstituirani alkil; n je 2 ili 3; i R12 je -NR13R14 pri čemu R13 i R14 kombinirani čine heterocikl s 5, 6 ili 7 atoma koji sadrži karbonilnu skupinu i jedan ili dva dušikova atoma unutar prstena.
22. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 2-(3-oksopiperazin-1-il)etilaminokarbonil, 2-(imidazolidin-1-il-2-on)etilaminokarbonil, 2-(tetrahidropirimidin-1-il-2-on)etilaminokarbonil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)-etilaminokarbonil, 3-(3-oksopiperazin-1-il)propil-aminokarbonil, 3-(imidazolidin-1-il-2-on)propil-aminokarbonil, 3-(tetrahidropirimidin-1-il-2-on)-propilaminokarbonil ili 3-(2-oksopirolidin-1-il)propil-aminokarbonil.
23. Spoj ili sol iz bilo kojeg od Zahtjeva 3-7, 13-14 ili 17-19, naznačen time, da je: R6 izabran iz skupine koju čine vodik i niži nesupstituirani alkil; i R7 izabran iz skupine koju čine vodik, alkil, aril, heteroaril, i -C(O)R17 ,pri čemu je R17 hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili aril.
24. Spoj ili sol iz Zahtjeva 23, naznačen time, da je: R6 izabran iz skupine koju čine vodik i metil; i R7 izabran iz skupine koju čine metil, vodik i fenil
25. Spoj ili sol iz bilo kojeg od Zahtjeva 8-12, 15, 16 ili 20-22, naznačen time, da je: R5 izabran iz skupine koju čine vodik i niži nesupstituirani alkil; i R7 izabran iz skupine koju čine vodik,, alkil, aril, heteroaril, i -C(O)R17 ,pri čemu je R17 hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili aril.
26. Spoj ili sol iz Zahtjeva 25, naznačen time, da je: R6 izabran iz skupine koju čine vodik i metil; i R7 izabran iz skupine koju čine metil, vodik i fenil.
27. Spoj ili sol iz Zahtjeva 23, naznačen time, da: R1 je vodik, nesupstituirani niži alkil, -C(O)NR8R9 , nesupstituirani cikloalkil ili aril; R2 je vodik, halo, niži alkoksi, cijano, aril ili -S(O)2NR13R14 pri čemu je R13 vodik i R14 je vodik, aril ili alkil; R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkoksi, -C(O)R15, - NR13C(O)R14 , aril moguće supstituiran s jednim ili dva supstituenta izabranima iz skupine koju čine niži alkil, halo, ili niži alkoksi, i heteroaril; R4 je vodik.
28. Spoj ili sol iz Zahtjeva 23, naznačen time, da: R1 je vodik ili fenil; R2 je vodik, kloro, bromo, fluoro, metoksi, etoksi, fenil, cijano, dimetilaminosulfonil, 3-klorofenilaminosulfonil, karboksi, metoksi, aminosulfonil, metilaminosulfonil, metilsulfonil etilsulfonil, benzilsulfonil, fenilaminosulfonil, piridin-3-il-aminosulfonil, dimetilaminosulfonil ili izopropilamino-sulfonil; R3 je vodik, metoksi, karboksi, fenil, piridin-3-il, 3,4-diklorofenil, 2-metoksi-5-izopropilfenil, 4-n-butilfenil ili 3-izopropilfenil; i R4 je vodik.
29. Spoj ili sol iz Zahtjeva 23, naznačen time, da: R1 je vodik; R2 je vodik, cijano, fluoro, kloro ili bromo; R3 je vodik; i R4 je vodik.
30. Spoj ili sol iz Zahtjeva 25, naznačen time, da: R1 je vodik, nesupstituirani niži alkil, -C(O)NR8R9, nesupstituirani cikloalkil ili aril; R2 je vodik, halo, niži alkoksi, cijano, aril, -SO2R20 ili -S(O)2NR13R14 gdje je R13 vodik i R14 je vodik, aril ili alkil; R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkoksi, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, aril i heteroaril; i R4 je vodik.
31. Spoj ili sol iz Zahtjeva 25, naznačen time, da: R1 je vodik ili fenil; R2 je vodik, kloro, bromo, fluoro, metoksi, etoksi, fenil, dimetilaminosulfonil, cijano, metilsulfonil, etilsulfonil, benzilsulfonil, 3-klorofenil-aminosulfonil, karboksi, metoksi, aminosulfonil, metilaminosulfonil, fenilaminosulfonil, piridin-3-il-aminosulfonil, dimetilaminosulfonil ili izopropilamino-sulfonil; R3 je vodik, metoksi, karboksi, fenil, piridin-3-il, 3,4-diklorofenil, 2-metoksi-5-izopropilfenil, 4-n-butilfenil ili 3-izopropilfenil; i R4 je vodik.
32. Spoj ili sol iz Zahtjeva 25, naznačen time, da: R1 je vodik; R2 je vodik, cijano, fluoro, kloro ili bromo; R3 je fenil; i R4 je vodik.
33. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da: R1 je vodik, nesupstituirani niži alkil, -C(O)NR8R9, nesupstituirani cikloalkil ili aril; R2 je vodik, halo, niži alkoksi, cijano, aril, ili -S(O)2NR13R14 gdje je R13 vodik i R14 je vodik, aril ili alkil; R3 se bira iz skupine koju čine vodik, niži alkoksi, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, aril i heteroaril; i R4 je vodik.
34. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da: R1 je vodik ili metil; R2 je vodik, cijano, kloro, fluoro ili bromo; R3 se bira iz skupine koju čine vodik ili fenil; i R4 je vodik.
35. Spoj ili sol iz Zahtjeva 33 ili 34, naznačen time, da: R5 je -COR10; R6 se bira iz skupine koju čine vodik i nesupstituirani niži alkil; i R7 se bira iz skupine koju čine vodik, alkil, aril, heteroaril i -C(O)R17, pri čemu je R17 hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili aril.
36. Spoj ili sol iz Zahtjeva 33 ili 34, naznačen time, da: R6 je -COR10; R5 se bira iz skupine koju čine vodik i nesupstituirani niži alkil; i R7 se bira iz skupine koju čine vodik, alkil, aril, heteroaril i -C(O)R17 , pri čemu je R17 hidroksi, nesupstituirani niži alkil ili aril.
37. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da: R5 je -COR10, pri čemu R10 je -NR13R14 , gdje je R13 vodik i R14 je niži alkil supstituiran s hidroksi, niži alkil supstituiran s hidroksialkilamino, karboksi ili -NR18R19 , gdje su R18 i R19 nezavisno vodik ili niži nesupstituirani alkil.
38. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 2-[(dietilamino)-2-hidroksietil]aminokarbonil, 2-(N-etil-N-2-hidroksietilamino)etilaminokarbonil, karboksimetilaminokarbonil ili 2-hidroksietilaminokarbonil.
39. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 -COR10, pri čemu R10 je -NR13R14 , gdje je R13 vodik i R14 je niži alkil supstituiran s hidroksi, niži alkil supstituiran s hidroksialkilamino, karboksi ili -NR18R19, gdje su R18 i R19 nezavisno vodik ili niži nesupstituirani alkil.
40. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen -kime, da je R6 2-[(dietilamino)-2-hidroksietil]aminokarbonil, 2-(N-etil-N-2-hidroksietilamino)etilaminokarbonil, karboksimetilaminokarbonil ili 2-hidroksietilaminokarbonil.
41. Spoj iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 -COR10, pri čemu R10 je -NR11 (CH2)nR12 , gdje R12 je -N+(O-)NR13R14 ili -N(OH)R13pri čemu su R13 i R14 nezavisno izabrani iz skuipine koju čini nesupstituirani niži alkil.
42. Spoj iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R5 2-(N-hidroksi-N-etilamino)atilaminokarbonil ili 2-[N+(O-)(C2H5)2]etil-aminokarbonil.
43. Spoj iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 -COR10, pri čemu R10 je -NR11(CH2)nR12 , gdje R12 je -N+(O-)NR13R14 ili -N(OH)R13pri čemu su R13 i R14 nezavisno izabrani iz skuipine koju čini nesupstituirani niži alkil.
44. Spoj iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je R6 2-(N-hidroksi-N-etilamino)atilaminokarbonil ili 2-[N+(O-)(C2H5)2] etil-aminokarbonil.
45. Spoj ili sol iz Zahtjeva 37, 38, 41 ili 42, naznačen time, da je: R6 izabran iz skupine koju čine vodik ili metil; i R7 izabran iz skupine koju čine metil, vodik ili fenil.
46. Spoj ili sol iz bilo kojeg od Zahtjeva 39, 40, 43, 44 ili 20-22, naznačen time, da je: R5 izabran iz skupine koju čine vodik ili metil; i R7 izabran iz skupine koju čine metil, vodik ili fenil.
47. Spoj ili sol iz Zahtjeva 45, naznačen time, da: R1 je vodik; R2 je vodik, cijano, kloro, fluoro ili bromo; R3 je vodik; i R4 je vodik.
48. Spoj ili sol iz Zahtjeva 45, naznačen time, da: R1 je vodik; R2 je cijano, kloro, fluoro ili bromo; R3 je vodik; i R4 je vodik.
49. Spoj ili sol iz Zahtjeva 1, naznačen time, da je spoj izabran iz skupine koju čine: [image] ili sol njegova L-malata.
50. Farmaceutski pripravak, naznačen time, da obuhvaća spoj ili sol iz Zahtjeva 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.
51. Farmaceutski pripravak, naznačen time, da obuhvaća spoj ili sol iz Zahtjeva 49 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.
52. Metoda za moduliranje katalitičkog djelovanja protein kinaze, naznačena time, da uključuje kontakt spomenute protein kinaze sa spojem ili soli iz Zahtjeva 1 ili 49.
53. Metoda iz Zahtjeva 52, naznačena time, da se spomenuta protein kinaza bira iz skupine koju čine receptorska tirozin kinaza, nereceptorska tirozin kinaza i serin-treonin kinaza.
54. Metoda za liječenje ili sprječavanje poremećaja povezanog s protein kinazom u organizmu, naznačena time, da uključuje davanje terapeutski učinkovite količine farmaceutskog pripravka koji obuhvaća spoj ili sol iz Zahtjeva 50 ili Zahtjeva 51 te tom organizmu farmaceutski prihvatljivi nosač ili ekscipijens.
55. Metoda iz Zahtjeva 54, naznačena time, da je spomenuti poremećaj povezan s protein kinazom izabran iz skupine koju čine poremećaj povezan s receptorskom protein kinazom, poremećaj povezan s nereceptorskom protein kinazom i poremećaj povezan sa serin-treonin kinazom.
56. Metoda iz Zahtjeva 54, naznačena time, da je spomenuti poremećaj povezan s protein kinazom izabran iz skupine koju čine poremećaj povezan s EGFR, poremećaj povezan s PDGFR, poremećaj povezan s IGFR i poremećaj povezan s flk.
57. Metoda iz Zahtjeva 54, naznačena time, da je spomenuti poremećaj povezan s protein kinazom karcinom, izabran iz skupine koju čine karcinom skvamoznih stanica, astrocitom, glioblastom, karcinom pluća, karcinom mjehura, karcinom glave i vrata, melanom, karcinom jajnika, karcinom prostate, karcinom dojke, karcinom malih plućnih stanica, gliom, karcinom debelog crijeva i rektuma, genitourinarni karcinom i gastrointestinalni karcinom.
58. Metoda iz Zahtjeva 54, naznačena time, da je spomenuti poremećaj povezan s protein kinazom izabran iz skupine koju čine dijabetes, autoimuna bolest, hiperproliferacijski poremećaj, restenoza, fibroza, psorijaza, bolest von Heppel-Lindaua, osteoartritis, reumatioidni artritis, angiogeneza, upalni poremećaj, imunološki poremećaj i kardiovaskularna bolest.
59. Metoda iz Zahtjeva 54, naznačena time, da je spomenuti organizam humani.
60. Intermedijar formule (II): [image] naznačen time, da: R5 bira se iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila i -C(O)R10; R6 bira se iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, i -C(O)R10; R7 bira se iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, arila, heteroarila, -C(O)R17 i -C(O)R10; R6 i R7 mogu se kombinirati i oblikovati skupinu izabranu iz skupine koja se sastoji od -(CH2)4-, -(CH2)5- i -(CH2)6-; uz uvjet da najmanje jedan od R5, R6 ili R7 mora biti -C(O)R10; R10 bira se iz skupine koja se sastoji od hidroksi, alkoksi, ariloksi, -N (R11)(CH2)nR12 i -NR13R14; R11 bira se iz skupine koja se sastoji od vodika i alkila; R12 bira se iz skupine koja se sastoji od -NR13R14, hidroksi, -C(O)R15, arila i heteroarila; R13 i R14 nezavisno se biraju iz skupine koja se sastoji od vodika, alkila, cijanoalkila, cikloalkila, arila i heteroarila; ili R13 i R14 mogu se kombinirati i oblikovati heterociklo skupinu; R15 bira se iz skupine koja se sastoji od vodika, hidroksi, alkoksi i ariloksi; R17 bira se iz skupine koja se sastoji od alkila, cikloalkila, arila i heteroarila i n je 1, 2, 3 ili 4.
HR20020751A 2000-02-15 2002-09-13 Pirolom supstituirani 2-indolinoni kao inhibitori protein kinaze HRP20020751B1 (hr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18271000P 2000-02-15 2000-02-15
US21642200P 2000-07-06 2000-07-06
US24353200P 2000-10-27 2000-10-27
PCT/US2001/004813 WO2001060814A2 (en) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HRP20020751A2 true HRP20020751A2 (en) 2004-12-31
HRP20020751B1 HRP20020751B1 (hr) 2011-01-31

Family

ID=27391578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HR20020751A HRP20020751B1 (hr) 2000-02-15 2002-09-13 Pirolom supstituirani 2-indolinoni kao inhibitori protein kinaze

Country Status (43)

Country Link
US (4) US6573293B2 (hr)
EP (1) EP1255752B1 (hr)
JP (1) JP3663382B2 (hr)
KR (1) KR100713960B1 (hr)
CN (1) CN1329390C (hr)
AR (1) AR034118A1 (hr)
AT (1) ATE369359T1 (hr)
AU (2) AU2001239770B2 (hr)
BE (1) BE2010C009I2 (hr)
BG (1) BG65764B1 (hr)
BR (2) BRPI0117360B8 (hr)
CA (1) CA2399358C (hr)
CO (1) CO5280092A1 (hr)
CR (2) CR20120009A (hr)
CY (3) CY1108032T1 (hr)
CZ (1) CZ303705B6 (hr)
DE (3) DE122008000002I1 (hr)
DK (1) DK1255752T3 (hr)
EA (1) EA005996B1 (hr)
ES (1) ES2290117T3 (hr)
FR (1) FR08C0002I2 (hr)
HK (1) HK1051188A1 (hr)
HR (1) HRP20020751B1 (hr)
HU (1) HU228979B1 (hr)
IL (1) IL151127A0 (hr)
IS (1) IS2491B (hr)
LT (1) LTC1255752I2 (hr)
LU (2) LU91407I2 (hr)
ME (1) ME00415B (hr)
MX (1) MXPA02008021A (hr)
MY (1) MY130363A (hr)
NL (2) NL300332I2 (hr)
NO (4) NO325532B1 (hr)
NZ (1) NZ520640A (hr)
PE (1) PE20011083A1 (hr)
PL (1) PL211834B1 (hr)
PT (1) PT1255752E (hr)
RS (1) RS50444B (hr)
SI (1) SI1255752T1 (hr)
SK (1) SK287142B6 (hr)
TW (1) TWI306860B (hr)
UA (1) UA73976C2 (hr)
WO (1) WO2001060814A2 (hr)

Families Citing this family (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6569868B2 (en) 1998-04-16 2003-05-27 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US20040226056A1 (en) * 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
BR0007532A (pt) 1999-01-13 2001-11-20 Univ New York State Res Found Métodos para identificar inibidores de proteìnaquinase, para testar compostos para umacapacidade de inibir a atividade de proteìnaquinase e para inibir uma proteìna quinase, inibidorde proteìna tirosina quinase não peptìdica, e,método de tratar uma condição responsiva a uminibidor de proteìna quinase em um paciente
CA2399358C (en) * 2000-02-15 2006-03-21 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US7030219B2 (en) 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
MY128450A (en) 2000-05-24 2007-02-28 Upjohn Co 1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
EP1294688A2 (en) 2000-06-02 2003-03-26 Sugen, Inc. Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors
WO2002002551A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
ES2318649T3 (es) 2000-10-20 2009-05-01 EISAI R&amp;D MANAGEMENT CO., LTD. Procedimiento de preparacion de derivados de 4-fenoxi quinolinas.
JP2004518669A (ja) 2000-12-20 2004-06-24 スージェン・インコーポレーテッド ４−アリール置換インドリノン
AR042586A1 (es) * 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
EP1247809A3 (en) * 2001-03-30 2003-12-17 Pfizer Products Inc. Triazine compounds useful as sorbitol dehydrogenase inhibitors
US6599902B2 (en) 2001-05-30 2003-07-29 Sugen, Inc. 5-aralkysufonyl-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
DE60227709D1 (de) * 2001-06-29 2008-08-28 Ab Science Die verwendung von c-kithemmern zur behandlung von autoimmunerkrankungen
AR038957A1 (es) * 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
RS53251B (sr) * 2001-08-15 2014-08-29 Pharmacia & Upjohn Company Llc Kristali koji sadrže n-[2-dietilamino)etil]-5-[(5-fluoro-2-okso-3h-indol-3-iliden)metil]-2,4-dimetil-1h-pirol-3- karboksamid so jabučne kiseline, procesi za njihovu pripremu i njihovi preparati
WO2003022815A1 (en) * 2001-09-10 2003-03-20 Sugen, Inc. 3-(4,5,6,7-tetrahydroindol-2-ylmethylidiene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
JP2005508953A (ja) * 2001-10-10 2005-04-07 スージェン・インコーポレーテッド キナーゼ阻害剤としての３−［４−（置換ヘテロサイクリル）−ピロール−２−イルメチリデン］−２−インドリノン誘導体
WO2003035621A1 (en) * 2001-10-22 2003-05-01 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors, methods for designing them, and methods of using them
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
US20030080191A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Allen Lubow Method and apparatus for applying bar code information to products during production
TWI259081B (en) * 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
US6797825B2 (en) 2001-12-13 2004-09-28 Abbott Laboratories Protein kinase inhibitors
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
WO2003052681A1 (en) * 2001-12-17 2003-06-26 International Barcode Corporation Double-sided bar code doubling as a single bar code
US20050131733A1 (en) * 2001-12-17 2005-06-16 Allen Lubow Sealable individual bar coded packets
AU2002360753B2 (en) 2001-12-27 2008-08-21 Theravance, Inc. Indolinone derivatives useful as protein kinase inhibitors
AU2003216282A1 (en) * 2002-02-15 2003-09-09 Pharmacia And Upjohn Company Llc Process for preparing indolinone derivatives
US20040018528A1 (en) * 2002-05-17 2004-01-29 Sugen, Inc. Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals
ITMI20021620A1 (it) * 2002-07-23 2004-01-23 Novuspharma Spa Composto ad ativita' antitumorale
US20060084697A1 (en) * 2002-08-08 2006-04-20 Hallahan Dennis E Pi3k antagonists as radiosensitizers
EP1576129A4 (en) * 2002-08-09 2008-01-23 Theravance Inc ONCOKINASE FUSION POLYPEPTIDES ASSOCIATED WITH HYPERPROLIFERATIVE DISORDERS, NUCLEIC ACIDS ENCODING THESE POLYPEPTIDES AND METHODS OF DETECTION AND IDENTIFICATION THEREOF
US20040121407A1 (en) * 2002-09-06 2004-06-24 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis
HN2003000272A (es) * 2002-09-10 2008-07-29 Pharmacia Italia Spa Formulaciones que comprenden un compuesto de indolinona
AR042042A1 (es) * 2002-11-15 2005-06-08 Sugen Inc Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular
US7626031B2 (en) * 2002-11-15 2009-12-01 Symphony Evolution, Inc. Substituted 3-(diarylmethylene)indolin-2-ones and methods of their use
US20040209937A1 (en) * 2003-02-24 2004-10-21 Sugen, Inc. Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds
US7452913B2 (en) * 2003-02-24 2008-11-18 Pharmacia & Upjohn Company Polymorphs of pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
GEP20084341B (en) 2003-02-26 2008-03-25 Sugen Inc Aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
US7157577B2 (en) * 2003-03-07 2007-01-02 Sugen Inc. 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors
US20040266843A1 (en) * 2003-03-07 2004-12-30 Sugen, Inc. Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)
US7994159B2 (en) * 2003-03-10 2011-08-09 Eisai R&D Management Co., Ltd. c-Kit kinase inhibitor
US20050043233A1 (en) 2003-04-29 2005-02-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combinations for the treatment of diseases involving cell proliferation, migration or apoptosis of myeloma cells or angiogenesis
DE10334582A1 (de) * 2003-07-28 2005-02-24 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid
WO2005023765A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method for catalyzing amidation reactions by the presence of co2
KR20060058728A (ko) * 2003-10-02 2006-05-30 파마시아 앤드 업존 캄파니 엘엘씨 피롤-치환된 인돌리논 화합물의 염 및 다형체
CA2542638A1 (en) * 2003-10-16 2005-04-28 Imclone Systems Incorporated Fibroblast growth factor receptor-1 inhibitors and methods of treatment thereof
TWI347940B (en) 2003-11-07 2011-09-01 Novartis Ag Methods for synthesizing quinolinone compounds
CN101337930B (zh) 2003-11-11 2010-09-08 卫材R&D管理有限公司 脲衍生物的制备方法
JP2007512353A (ja) * 2003-11-26 2007-05-17 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート 高機能インドリノン系プロテインキナーゼ阻害剤
EP1699477A2 (en) * 2003-12-11 2006-09-13 Theravance, Inc. Compositions for use in the treatment of mutant receptor tyrosine kinase driven cellular proliferative diseases
US20050152943A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Medtronic Vascular, Inc. Medical devices to treat or inhibit restenosis
WO2005118543A1 (ja) * 2004-06-03 2005-12-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. キナーゼ阻害薬およびその用途
CA2571421A1 (en) 2004-06-24 2006-01-05 Nicholas Valiante Compounds for immunopotentiation
SE0401790D0 (sv) * 2004-07-07 2004-07-07 Forskarpatent I Syd Ab Tamoxifen response in pre- and postmenopausal breast cancer patients
US20060009510A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method of synthesizing indolinone compounds
ATE463486T1 (de) * 2004-08-26 2010-04-15 Pfizer Enantiomerenreine aminoheteroaryl-verbindungen als proteinkinasehemmer
US8969379B2 (en) 2004-09-17 2015-03-03 Eisai R&D Management Co., Ltd. Pharmaceutical compositions of 4-(3-chloro-4-(cyclopropylaminocarbonyl)aminophenoxy)-7=methoxy-6-quinolinecarboxide
CN100432071C (zh) * 2004-11-05 2008-11-12 中国科学院上海药物研究所 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途
GT200500321A (es) * 2004-11-09 2006-09-04 Compuestos y composiciones como inhibidores de proteina kinase.
BRPI0607579A2 (pt) * 2005-03-23 2009-09-15 Pfizer Prod Inc uso de anticorpo anti-ctla4 e indolinona para a preparação de medicamentos para o tratamento de cáncer
BRPI0608096A2 (pt) 2005-04-26 2009-11-10 Pfizer anticorpos p-caderina
WO2006120557A1 (en) * 2005-05-12 2006-11-16 Pfizer Inc. Anticancer combination therapy using sunitinib malate
TWI441637B (zh) 2005-05-18 2014-06-21 Array Biopharma Inc Ｍｅｋ雜環抑制劑及其使用方法
EP2266974A1 (en) 2005-05-23 2010-12-29 Novartis AG Crystalline and other forms of 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1H-benzimidazol-2-yl]-1H-Quinolin-2-one lactic acid salts
MX2007014810A (es) * 2005-05-26 2008-02-21 Scripps Research Inst Inhibidores de la proteina quinasa mejoradas a base de indolinona.
US20100105031A1 (en) * 2005-08-01 2010-04-29 Esai R & D Management Co., Ltd. Method for prediction of the efficacy of vascularization inhibitor
WO2007015578A1 (ja) 2005-08-02 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を検定する方法
UA94060C2 (ru) 2005-09-07 2011-04-11 Эмджен Фримонт Инк. Моноклональное антитело, которое специфически связывает alk-1
PL1928858T3 (pl) * 2005-09-19 2009-12-31 Zoetis Services Llc Stałe postacie soli pirolo-podstawionego 2-indolinonu
WO2007052849A1 (ja) * 2005-11-07 2007-05-10 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質とc-kitキナーゼ阻害物質との併用
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
BRPI0620939A2 (pt) * 2005-12-29 2011-11-29 Scripps Research Inst derivados de aminoácido de indolinona com base em inibidores de proteìna quinase
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101007801A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的2－二氢吲哚酮衍生物、其制法与医药上的用途
TW200808739A (en) 2006-04-06 2008-02-16 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolines for PDK1 inhibition
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
CN101472915A (zh) 2006-04-19 2009-07-01 诺瓦提斯公司 吲唑化合物和抑制cdc7的方法
EA200802058A1 (ru) 2006-05-09 2009-06-30 Пфайзер Продактс Инк. Производные циклоалкиламинокислот и их фармацевтические композиции
CA2652442C (en) 2006-05-18 2014-12-09 Eisai R & D Management Co., Ltd. Antitumor agent for thyroid cancer
DE102006024834B4 (de) * 2006-05-24 2010-07-01 Schebo Biotech Ag Neue Indol-Pyrrol-Derivate und deren Verwendungen
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
JPWO2008001956A1 (ja) * 2006-06-29 2009-12-03 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 肝線維症治療剤
WO2008008981A1 (en) 2006-07-13 2008-01-17 Zymogenetics, Inc. Interleukin 21 and tyrosine kinase inhibitor combination therapy
CL2007002225A1 (es) 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
JP5238697B2 (ja) 2006-08-04 2013-07-17 武田薬品工業株式会社 縮合複素環誘導体およびその用途
JP5227321B2 (ja) 2006-08-23 2013-07-03 クドス ファーマシューティカルズ リミテッド Ｍｔｏｒ阻害剤としての２−メチルモルホリンピリド−、ピラゾ−及びピリミド−ピリミジン誘導体
KR101472600B1 (ko) * 2006-08-28 2014-12-15 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 미분화형 위암에 대한 항종양제
AU2007294686B2 (en) 2006-09-15 2013-10-31 Equinox Sciences, Llc Kinase inhibitor compounds
WO2008056634A1 (fr) * 2006-11-06 2008-05-15 Theravalues Corporation Nouveau dérivé d'hydroxyindole
NZ576234A (en) 2006-11-06 2011-06-30 Supergen Inc Imidazo[1,2-b]pyridazine and pyrazolo[1,5-a]pyrimidine derivatives and their use as protein kinase inhibitors
JP5542445B2 (ja) 2006-12-04 2014-07-09 江▲蘇▼先声▲薬▼物研究有限公司 ３−ピロロシクロへキシリデン−２−ジヒドロインドリノン誘導体およびその用途
CA2676796C (en) 2007-01-29 2016-02-23 Eisai R & D Management Co., Ltd. Composition for treatment of undifferentiated gastric cancer
MX2009008386A (es) 2007-02-06 2009-10-16 Pfizer Derivados de 2-amino-5,7-dihidro-6h-pirrolo[3,4-d] pirimidina como inhibidores de proteinas de choque termico-90 para tratar cancer.
JPWO2008114819A1 (ja) 2007-03-20 2010-07-08 大日本住友製薬株式会社 新規アデニン化合物
US20090004213A1 (en) * 2007-03-26 2009-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Combination therapy using active immunotherapy
US20090042906A1 (en) * 2007-04-26 2009-02-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods for treating cancers associated with constitutive egfr signaling
WO2008138184A1 (fr) 2007-05-14 2008-11-20 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co.Ltd. Dérivés de pyrrolo-azacycles, leur procédé de fabrication et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinases
WO2008145398A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Pfizer Italia S.R.L. 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors
PE20090370A1 (es) 2007-06-05 2009-04-30 Takeda Pharmaceutical Derivados de heterociclo fusionado como inhibidores de quinasa
WO2009025358A1 (ja) 2007-08-23 2009-02-26 Takeda Pharmaceutical Company Limited 複素環化合物およびその用途
US20090062368A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Protia, Llc Deuterium-enriched sunitinib
PT2197878T (pt) * 2007-09-06 2016-11-04 Boston Biomedical Inc Composições de inibidores de quinase e sua utilização para tratamento do cancro e outras doenças associadas a quinases
CN101861321B (zh) 2007-10-11 2013-02-06 阿斯利康(瑞典)有限公司 作为蛋白激酶b抑制剂的吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物
WO2009060945A1 (ja) 2007-11-09 2009-05-14 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質と抗腫瘍性白金錯体との併用
WO2009067686A2 (en) * 2007-11-21 2009-05-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib hemi-l-malate, polymorphs and preparation thereof, polymorphs of racemic sunitinib malate, compositins containing sunitinib base and malic acid and preparation thereof
US20100256392A1 (en) * 2007-11-21 2010-10-07 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
CA2709083A1 (en) * 2007-12-12 2009-06-18 Medichem S.A. Polymorphic forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone
CA2706571C (en) 2007-12-19 2012-11-27 Genentech, Inc. 5-anilinoimidazopyridines and methods of use
CN101952282A (zh) 2007-12-20 2011-01-19 诺瓦提斯公司 用作pi 3激酶抑制剂的噻唑衍生物
KR20100099185A (ko) 2007-12-21 2010-09-10 제넨테크, 인크. 아자인돌리진 및 이용 방법
AU2009210098B2 (en) * 2008-01-29 2013-06-13 Eisai R & D Management Co., Ltd. Combined use of angiogenesis inhibitor and taxane
EP2240174A1 (en) * 2008-02-13 2010-10-20 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising n-ý2-(diethylamino)ethyl¨-5-ý(5-fluoro-1,2- dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl¨-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide
EP2113248A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2-,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
EP2090306A1 (en) 2008-02-13 2009-08-19 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
CN101255154B (zh) * 2008-02-18 2011-09-07 靳广毅 一种取代的2-吲哚啉酮衍生物和制备方法及其应用
CA2715657A1 (en) * 2008-02-21 2009-08-27 Generics (Uk) Limited Novel polymorphs and processes for their preparation
EP2098521A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-09 Ratiopharm GmbH Crystal forms of N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrolle-3-carboxamide and methods for their prepparation
EP2274303B1 (en) * 2008-03-31 2012-08-29 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Processes for preparing sunitinib and salts thereof
EP2280960A1 (en) 2008-04-16 2011-02-09 Natco Pharma Limited Novel polymorphic forms of sunitinib base
US8158656B2 (en) * 2008-05-16 2012-04-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2292613B1 (en) * 2008-05-23 2015-09-30 Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry Dihydroindolinone derivatives
WO2009154697A2 (en) 2008-05-28 2009-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Disc-1 pathway activators in the control of neurogenesis
SI2313371T1 (sl) * 2008-06-13 2013-02-28 Medichem, S.A. Postopek za pripravo soli 3-pirol substituirane 2-indolinonske jabolčne kisline
WO2009157011A1 (en) * 2008-06-23 2009-12-30 Natco Pharma Limited Process for the preparation of high purity sunitinib and its pharmaceutically acceptable salt
EP2138167A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
WO2009156837A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Medichem, S.A. Amorphous form of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
CN102137866A (zh) * 2008-06-30 2011-07-27 赛林药物股份有限公司 羟吲哚化合物
DE102008031038A1 (de) 2008-06-30 2009-12-31 Alexander Priv.-Doz. Dr. Dömling Sutent zur Anwendung in der Organtransplantation
SG10201510586PA (en) 2008-06-30 2016-01-28 Mesoblast Inc Treatment of Eye Diseases And Excessive Neovascularization Using A Combined Therapy
JP2011526615A (ja) * 2008-07-02 2011-10-13 ジェネリクス・（ユーケー）・リミテッド ３−ピロール置換２−インドリノン誘導体の調製
JP2011527330A (ja) * 2008-07-10 2011-10-27 ジェネリクス・（ユーケー）・リミテッド スニチニブリンゴ酸塩の結晶形の調製方法
KR20110036588A (ko) 2008-07-24 2011-04-07 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 수니티닙 아세테이트 및 이의 다형을 통한 수니티닙 말레이트의 제조 방법
CN102164913A (zh) 2008-07-24 2011-08-24 麦迪凯姆股份公司 一种3-吡咯替代的2-吲哚酮苹果酸盐的结晶体形式
US8993615B2 (en) * 2008-08-08 2015-03-31 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
US20110263670A1 (en) * 2008-08-25 2011-10-27 Vinayak Gore Novel polymorphs of sunitinib and processes for their preparation
US20110159023A1 (en) * 2008-08-25 2011-06-30 Solomon Langermann Pd-1 antagonists and methods for treating infectious disease
JP2012500837A (ja) * 2008-08-25 2012-01-12 ジェネリクス・（ユーケー）・リミテッド 新規な結晶型およびその調製方法
NZ591130A (en) 2008-08-25 2012-09-28 Amplimmune Inc Compositions comprising a PD-1 antagonists and cyclophosphamide and methods of use thereof
US8961930B2 (en) * 2008-09-05 2015-02-24 Imperial Innovations Limited Isatin derivatives for use as in vivo imaging agents
EP2927244A1 (en) 2008-09-19 2015-10-07 MedImmune, LLC Antibodies directed to DLL4 and uses thereof
AR073807A1 (es) * 2008-10-10 2010-12-01 Medichem Sa Proceso para preparar el malato de sunitinib, sal de un acido mas debil que el malato como compuesto intermediario, y proceso para preparar dicha sal intermediaria.
EP2181991A1 (en) 2008-10-28 2010-05-05 LEK Pharmaceuticals D.D. Novel salts of sunitinib
EP2186809A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-19 LEK Pharmaceuticals D.D. New crystal form of sunitinib malate
US20100222371A1 (en) * 2008-11-20 2010-09-02 Children's Medical Center Corporation Prevention of surgical adhesions
WO2010064611A1 (ja) 2008-12-01 2010-06-10 武田薬品工業株式会社 複素環化合物およびその用途
JO3101B1 (ar) 2008-12-02 2017-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات بنزوثيازول كعوامل مضادة للسرطان
US20110053923A1 (en) 2008-12-22 2011-03-03 Astrazeneca Chemical compounds 610
EP2379595A2 (en) 2008-12-23 2011-10-26 AstraZeneca AB Targeted binding agents directed to 5 1 and uses thereof
EP2373643A4 (en) 2009-01-02 2013-08-07 Hetero Research Foundation NEW SUNITINIB MALATE POLYMORPHS
KR20200137052A (ko) 2009-01-16 2020-12-08 엑셀리시스, 인코포레이티드 암의 치료를 위한 ｎ-（４-｛〔６，７-비스（메틸옥시）퀴놀린-4-일〕옥시｝페닐）-ｎ＇-（４-플루오로페닐）사이클로프로판-1,1-디카르복사미드의 말산염 및 그 결정형
EP3360879A1 (en) 2009-02-05 2018-08-15 ImmunoGen, Inc. Benzodiazepine derivatives as cytotoxic agents
SG172857A1 (en) 2009-02-09 2011-08-29 Supergen Inc Pyrrolopyrimidinyl axl kinase inhibitors
US9265764B2 (en) * 2009-02-27 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Uses of chemicals to modulate GSK-3 signaling for treatment of bipolar disorder and other brain disorders
US20100222381A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Hariprasad Vankayalapati Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene DNA methyltransferase inhibitors
WO2010103094A1 (en) 2009-03-13 2010-09-16 Cellzome Limited PYRIMIDINE DERIVATIVES AS mTOR INHIBITORS
WO2010108503A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Life & Brain Gmbh Promotion of neuronal integration in neural stem cell grafts
EP2419423A1 (en) 2009-04-14 2012-02-22 Cellzome Limited Fluoro substituted pyrimidine compounds as jak3 inhibitors
US8530492B2 (en) 2009-04-17 2013-09-10 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
EP2255792A1 (en) 2009-05-20 2010-12-01 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions for N-[2-(Diethylamino)ethyl]5-[(fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indole-3-ylidene) methyl]-2,4-dimenthyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8211901B2 (en) 2009-05-22 2012-07-03 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2264027A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-22 Ratiopharm GmbH Process for the preparation of N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8389580B2 (en) 2009-06-02 2013-03-05 Duke University Arylcyclopropylamines and methods of use
CN101906076B (zh) 2009-06-04 2013-03-13 深圳微芯生物科技有限责任公司 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
WO2011004200A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Generics [Uk] Limited Novel pyrrole derivatives
FR2948940B1 (fr) * 2009-08-04 2011-07-22 Servier Lab Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
CA2771675A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Cellzome Limited Ortho substituted pyrimidine compounds as jak inhibitors
WO2011033472A1 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Ranbaxy Laboratories Limited Salts of sunitinib
MX2012004020A (es) 2009-10-20 2012-05-08 Cellzome Ltd Analogos de heterociclilo pirazolopirimidina como inhibidores de jak.
EP2499133A2 (en) 2009-11-12 2012-09-19 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form i of l-malic acid salt of sunitinib
WO2011061613A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form ii of l-malic acid salt of sunitinib
NZ599405A (en) 2009-11-24 2014-09-26 Medimmune Ltd Targeted binding agents against b7-h1
JP2013512859A (ja) 2009-12-03 2013-04-18 大日本住友製薬株式会社 トール様受容体（ｔｌｒ）を介して作用するイミダゾキノリン
US10166142B2 (en) 2010-01-29 2019-01-01 Forsight Vision4, Inc. Small molecule delivery with implantable therapeutic device
WO2011095802A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Generics [Uk] Limited Hplc method for analyzing sunitinib
WO2011100325A2 (en) * 2010-02-09 2011-08-18 Sicor Inc. Polymorphs of sunitinib salts
CN102933231B (zh) 2010-02-10 2015-07-29 伊缪诺金公司 Cd20抗体及其用途
US8440651B2 (en) 2010-02-22 2013-05-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Pyrido[3,2-d]pyrimidine PI3K delta inhibitor compounds and methods of use
WO2011104555A2 (en) * 2010-02-25 2011-09-01 Generics [Uk] Limited Novel process
CA2792039A1 (en) 2010-03-04 2011-09-09 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the direct preparation of malic acid salt of sunitinib
EP2542536B1 (en) 2010-03-04 2015-01-21 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mtor inhibitors
WO2011110199A1 (en) 2010-03-10 2011-09-15 Synthon B.V. A process for amidation of pyrrole carboxylate compounds
US20160185760A1 (en) 2010-03-18 2016-06-30 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of malic acid salt of sunitinib
EP2550263A4 (en) 2010-03-23 2013-07-24 Univ Johns Hopkins COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISEASE
WO2011128699A2 (en) * 2010-04-16 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Novel process
SG184989A1 (en) 2010-04-30 2012-11-29 Cellzome Ltd Pyrazole compounds as jak inhibitors
WO2011138565A1 (fr) 2010-05-05 2011-11-10 Biorebus Association pharmaceutique contenant l'acide lipoïque, l'acide hydroxycitrique et une somatostatine a titre de principes actifs
EP2392324A1 (en) 2010-06-01 2011-12-07 Societe De Coordination De Recherches Therapeutiques Rhenium complexes and their pharmaceutical use
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
EP2586443B1 (en) 2010-06-25 2016-03-16 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
US20130143915A1 (en) 2010-07-01 2013-06-06 Cellzome Limited Triazolopyridines as tyk2 inhibitors
NZ605449A (en) 2010-07-09 2015-03-27 Genentech Inc Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
WO2012022681A2 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as selective jak inhibitors
WO2012027716A1 (en) 2010-08-27 2012-03-01 Collabrx, Inc. Method to treat melanoma in braf inhibitor-resistant subjects
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
WO2012058780A1 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Scinopharm (Kunshan) Biochemical Technology Co., Ltd. Processes for the preparation of 3-(pyrrol-2-yl)methylene)-2-pyrrolones using 2-silyloxy-pyrroles
WO2012059941A1 (en) * 2010-11-04 2012-05-10 Ind-Swift Laboratories Limited Process for preparation of sunitinib malate and salts thereof
AU2011328237A1 (en) 2010-11-09 2013-05-23 Cellzome Limited Pyridine compounds and aza analogues thereof as TYK2 inhibitors
EP2640384A1 (en) 2010-11-18 2013-09-25 Synta Pharmaceuticals Corp. Preselection of subjects for therapeutic treatment with oxygen sensitive agents based on hypoxic status
CA2818612C (en) 2010-11-19 2020-12-29 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
AR083868A1 (es) 2010-12-03 2013-03-27 Lilly Co Eli Compuestos de oxazol[5,4-b]piridin-5-ilo
JP6009457B2 (ja) 2010-12-23 2016-10-19 ネクター セラピューティクス ポリマー−デスエチルスニチニブコンジュゲート
EP2654799B1 (en) 2010-12-23 2017-11-08 Nektar Therapeutics Polymer-sunitinib conjugates
AP2013007043A0 (en) 2011-01-31 2013-08-31 Novartis Ag Novel heterocyclic derivatives
MX346635B (es) 2011-02-15 2017-03-27 Immunogen Inc Derivados citotoxicos de la benzodiazepina.
EP2675794B1 (en) 2011-02-17 2019-02-13 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Selective fak inhibitors
CA2827171C (en) 2011-02-17 2019-04-09 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Fak inhibitors
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
US8630703B2 (en) 2011-03-09 2014-01-14 Technion Research & Development Foundation Limited Treatment utilizing hydrophobic weak bases chemotherapeutic agents and illumination
CN102115469A (zh) * 2011-03-21 2011-07-06 浙江大学 吲哚啉-2-酮类衍生物的制备和用途
WO2012136622A1 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Cellzome Limited Dihydropyrrolo pyrimidine derivatives as mtor inhibitors
WO2012139019A2 (en) * 2011-04-08 2012-10-11 Beta Pharma, Inc. New indolinone protein kinase inhibitors
CA2828946C (en) 2011-04-18 2016-06-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012143320A1 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Cellzome Limited (7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-yl)amine compounds as jak3 inhibitors
CN102898402B (zh) * 2011-04-26 2016-01-20 北京大学 一种苯并异硒唑酮修饰的吡咯甲酸酯取代的吲哚酮类化合物及其应用
ES2705950T3 (es) 2011-06-03 2019-03-27 Eisai R&D Man Co Ltd Biomarcadores para predecir y valorar la capacidad de respuesta de sujetos con cáncer de tiroides y de riñón a compuestos de lenvatinib
ES2671748T3 (es) 2011-07-21 2018-06-08 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Inhibidores heterocíclicos de proteína quinasas
KR20140047092A (ko) 2011-07-28 2014-04-21 셀좀 리미티드 Jak 억제제로서의 헤테로시클릴 피리미딘 유사체
WO2013017479A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013017480A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013041605A1 (en) 2011-09-20 2013-03-28 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as kinase inhibitors
WO2013041652A1 (en) 2011-09-21 2013-03-28 Cellzome Limited Morpholino substituted urea or carbamate derivatives as mtor inhibitors
EP2763985B1 (en) 2011-10-07 2016-06-22 Cellzome Limited {(4-(4-morpholino-dihydrothieno[3,4-d]pyrimidin-2-yl)aryl}urea or carbamate derivatives as mtor inhibitors
CN102499917B (zh) 2011-10-25 2014-12-17 澳门大学 吲哚酮类化合物在制备神经保护药物中的应用
WO2013061305A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Novartis Ag Novel purine derivatives and their use in the treatment of disease
CN103130774B (zh) * 2011-11-22 2016-06-22 齐鲁制药有限公司 具有酪氨酸激酶抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN103127096B (zh) * 2011-12-02 2015-11-25 杨子娇 吡咯基取代的吲哚类化合物在治疗青光眼病的应用
US20130178520A1 (en) 2011-12-23 2013-07-11 Duke University Methods of treatment using arylcyclopropylamine compounds
AU2012357038B2 (en) 2011-12-23 2016-05-12 Cellzome Limited Pyrimidine-2,4-diamine derivatives as kinase inhibitors
CN102491932A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 天津科技大学 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用
US9206163B2 (en) 2012-03-23 2015-12-08 Laurus Labs Private Ltd. Process for the preparation of sunitinib and its acid addition salts thereof
EP2838538B1 (en) 2012-04-20 2017-03-15 Annji Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclopropanecarboxylate esters of purine analogues
PL399027A1 (pl) 2012-04-27 2013-10-28 Instytut Farmaceutyczny Sposób otrzymywania N-[2-(dietylamino)etylo]-5-formylo-2,4-dimetylo-1H-pirolo-3-karboksyamidu o wysokiej czystosci i jego zastosowanie do wytwarzania sunitynibu
CN102653521B (zh) * 2012-04-27 2014-08-06 首都师范大学 吲哚-2-酮的哌嗪硫代甲酰肼衍生物及其制备方法和用途
DK2844282T3 (da) 2012-05-04 2019-07-15 Pfizer Prostata-associerede antigener og vaccine-baserede immunterapiregimener
JP6381523B2 (ja) 2012-05-16 2018-08-29 ノバルティス アーゲー Ｐｉ−３キナーゼ阻害剤の投与レジメン
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
DK2863955T3 (en) 2012-06-26 2017-01-23 Sutro Biopharma Inc MODIFIED FC PROTEINS, INCLUDING LOCATION-SPECIFIC NON-NATURAL AMINO ACID RESIDUES, CONJUGATES THEREOF, METHODS OF PRODUCING ITS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
US9238644B2 (en) 2012-08-17 2016-01-19 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited VEGFR3 inhibitors
EP2887965A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
ES2907763T3 (es) 2012-08-31 2022-04-26 Sutro Biopharma Inc Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido
WO2014041349A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Tetrahydropyran-4-ylethylamino- or tetrahydropyranyl-4-ethyloxy-pyrimidines or -pyridazines as isoprenylcysteincarboxymethyl transferase inhibitors
WO2014045101A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Cellzome Gmbh Tetrazolo quinoxaline derivatives as tankyrase inhibitors
US9394257B2 (en) 2012-10-16 2016-07-19 Tolero Pharmaceuticals, Inc. PKM2 modulators and methods for their use
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
CN104755463A (zh) 2012-12-21 2015-07-01 卫材R&D管理有限公司 非晶态形式的喹啉衍生物及其生产方法
JP6423804B2 (ja) 2013-02-28 2018-11-14 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤を含む複合体
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
CN105408320B (zh) * 2013-03-13 2019-08-13 北京强新生物科技有限公司 用于治疗癌症的作为癌症干细胞途径激酶抑制剂的3-(芳基或杂芳基)甲基吲哚-2-酮衍生物
AU2014236455B2 (en) 2013-03-14 2018-07-12 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
US10202356B2 (en) 2013-03-14 2019-02-12 Tolero Pharmaceuticals, Inc. JAK2 and ALK2 inhibitors and methods for their use
AR095443A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Fundación Centro Nac De Investig Oncológicas Carlos Iii Heterociclos condensados con acción sobre atr
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
CN104119321B (zh) * 2013-04-28 2017-09-08 齐鲁制药有限公司 二氢吲哚酮衍生物的二马来酸盐及其多晶型物
MX368099B (es) 2013-05-14 2019-09-19 Eisai R&D Man Co Ltd Biomarcadores para predecir y evaluar el grado de respuesta de sujetos con cancer de endometrio a compuestos de tipo lenvatinib.
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
FR3008411B1 (fr) * 2013-07-12 2015-07-03 Servier Lab Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent
ES2813877T3 (es) 2013-08-28 2021-03-25 Crown Bioscience Inc Taicang Distintivos de expresión génica predictivos de la respuesta de un sujeto a un inhibidor multicinasa y métodos de uso de los mismos
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
US9278955B2 (en) 2013-10-18 2016-03-08 Sun Pharmaceutical Industries Limited Ascorbic acid salt of sunitinib
US9604968B2 (en) 2013-10-18 2017-03-28 Sun Pharmaceutical Industries Limited Pure crystalline Form II of L-malic acid salt of sunitinib and processes for its preparation
BR112016008806A2 (pt) 2013-11-01 2017-10-03 Pfizer Vetores para expressão de antígenos associados à próstata
JP2016539149A (ja) 2013-12-06 2016-12-15 ノバルティス アーゲー アルファ−アイソフォーム選択的ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤の投薬レジメン
CN104829596B (zh) 2014-02-10 2017-02-01 石家庄以岭药业股份有限公司 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
CN103923014A (zh) * 2014-05-05 2014-07-16 宁夏宝马药业有限公司 环肌酸制备方法
MY182793A (en) 2014-08-08 2021-02-05 Forsight Vision4 Inc Stable and soluble formulations of receptor tyrosine kinase inhibitors, and methods of preparation thereof
JO3783B1 (ar) 2014-08-28 2021-01-31 Eisai R&D Man Co Ltd مشتق كوينولين عالي النقاء وطريقة لإنتاجه
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
WO2016114322A1 (ja) 2015-01-13 2016-07-21 国立大学法人京都大学 筋萎縮性側索硬化症の予防及び／又は治療剤
DK3263106T3 (da) 2015-02-25 2024-01-08 Eisai R&D Man Co Ltd Fremgangsmåde til undertrykkelse af bitterhed af quinolinderivat
CA2978226A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Merck Sharpe & Dohme Corp. Combination of a pd-1 antagonist and a vegfr/fgfr/ret tyrosine kinase inhibitor for treating cancer
MX2017013383A (es) 2015-04-20 2017-12-07 Tolero Pharmaceuticals Inc Prediccion de respuesta a alvocidib mediante perfilado mitocondrial.
WO2016184793A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating a patient with vegfr inhibitor-resistant metastatic renal cell carcinoma
KR102608921B1 (ko) 2015-05-18 2023-12-01 스미토모 파마 온콜로지, 인크. 생체 이용률이 증가된 알보시딥 프로드러그
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
CN107801379B (zh) 2015-06-16 2021-05-25 卫材R&D管理有限公司 抗癌剂
MX2018001289A (es) 2015-08-03 2018-04-30 Tolero Pharmaceuticals Inc Terapias de combinacion para el tratamiento del cancer.
KR20180058758A (ko) 2015-09-22 2018-06-01 그레이버그 비젼, 인크. 안구 장애의 치료를 위한 화합물 및 조성물
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
AU2016347881A1 (en) 2015-11-02 2018-05-10 Novartis Ag Dosage regimen for a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
EA038755B1 (ru) 2015-11-12 2021-10-14 Грейбаг Вижн, Инк. Агрегирующие микрочастицы для обеспечения замедленного высвобождения терапевтического агента для внутриглазной доставки
KR20180104106A (ko) 2016-01-27 2018-09-19 서트로 바이오파마, 인크. anti-CD74 항체 접합체, anti-CD74 항체 접합체를 포함하는 조성물 및 anti-CD74 항체 접합체의 이용 방법
CN109072241A (zh) 2016-02-08 2018-12-21 维特里萨医疗公司 具有改善的玻璃体内半衰期的组合物及其用途
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
CN107459519A (zh) 2016-06-06 2017-12-12 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶哌啶环衍生物及其制备方法和应用
WO2018045379A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
SG11201903483VA (en) 2016-10-28 2019-05-30 Icahn School Med Mount Sinai Compositions and methods for treating ezh2-mediated cancer
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
US10786502B2 (en) 2016-12-05 2020-09-29 Apros Therapeutics, Inc. Substituted pyrimidines containing acidic groups as TLR7 modulators
EP3548478B1 (en) 2016-12-05 2021-11-17 Apros Therapeutics, Inc. Pyrimidine compounds containing acidic groups
WO2018106870A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Compositions and methods for treating cdk4/6-mediated cancer
US10132797B2 (en) 2016-12-19 2018-11-20 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Profiling peptides and methods for sensitivity profiling
CN106916143B (zh) * 2017-03-14 2019-09-27 哈尔滨医科大学 一种预防和治疗冠心病的药物及其应用
AU2018240462C1 (en) 2017-03-23 2022-12-08 Graybug Vision, Inc. Drugs and compositions for the treatment of ocular disorders
CN111201040A (zh) 2017-05-10 2020-05-26 灰色视觉公司 用于医学疗法的缓释微粒及其悬浮液
WO2019023316A1 (en) 2017-07-26 2019-01-31 Sutro Biopharma, Inc. METHODS OF USING ANTI-CD74 ANTIBODIES AND ANTIBODY CONJUGATES IN THE TREATMENT OF A T CELL LYMPHOMA
WO2019055579A1 (en) 2017-09-12 2019-03-21 Tolero Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT REGIME FOR CANCERS THAT ARE INSENSITIVE TO BCL-2 INHIBITORS USING THE MCL-1 ALVOCIDIB INHIBITOR
US20200353076A1 (en) 2017-09-18 2020-11-12 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor alpha antibody conjugates and their uses
US20200237766A1 (en) 2017-10-13 2020-07-30 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Pkm2 activators in combination with reactive oxygen species for treatment of cancer
NL2019801B1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Univ Leiden Delivery vectors
US11472799B2 (en) 2018-03-06 2022-10-18 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Serine threonine kinase (AKT) degradation / disruption compounds and methods of use
EP3539536A1 (en) 2018-03-15 2019-09-18 MH10 Spolka z ograniczona odpowiedzialnoscia A pharmaceutical composition of sunitinib or its salt thereof in its polymorphic form i
JP7351859B2 (ja) 2018-06-04 2023-09-27 アプロス セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｔｌｒ７の調節に関係する疾患を処置するのに有用な酸性基を含むピリミジン化合物
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
GB201810581D0 (en) 2018-06-28 2018-08-15 Ctxt Pty Ltd Compounds
CA3103995A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Methods for treating diseases associated with abnormal acvr1 expression and acvr1 inhibitors for use in the same
US20220047716A1 (en) 2018-09-17 2022-02-17 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
MX2021006544A (es) 2018-12-04 2021-07-07 Sumitomo Pharma Oncology Inc Inhibidores de cinasa dependiente de ciclina 9 (cdk9) y polimorfos de los mismos para uso como agentes para el tratamiento de cancer.
BR112021011894A2 (pt) 2018-12-21 2021-09-08 Daiichi Sankyo Company, Limited Composição farmacêutica
EP3924351A4 (en) 2019-02-12 2022-12-21 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. FORMULATIONS COMPRISING HETEROCYCLIC PROTEIN KINASE INHIBITORS
WO2020191326A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (aml) with venetoclax failure
AU2020242287A1 (en) 2019-03-21 2021-09-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A Dbait molecule in combination with kinase inhibitor for the treatment of cancer
AU2020245437A1 (en) 2019-03-22 2021-09-30 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising PKM2 modulators and methods of treatment using the same
EP3958845A1 (en) 2019-04-25 2022-03-02 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising amorphous sunitinib
EP3962951A1 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
CN114423463A (zh) 2019-05-06 2022-04-29 西奈山伊坎医学院 作为hpk1的降解剂的异双功能化合物
EP4023639A1 (en) 2019-08-31 2022-07-06 Etern Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. Pyrazole derivative for fgfr inhibitor and preparation method therefor
US20220401436A1 (en) 2019-11-08 2022-12-22 INSERM (Institute National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of cancers that have acquired resistance to kinase inhibitors
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
EP4114852A1 (en) 2020-03-03 2023-01-11 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN111233841A (zh) * 2020-03-17 2020-06-05 湖北扬信医药科技有限公司 一种舒尼替尼有关物质及其制备方法和用途
WO2023278424A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 The Regents Of The University Of California Methods for treating and ameliorating t cell related diseases
CN113717159A (zh) * 2021-09-16 2021-11-30 中国药科大学 吲哚酮类化合物及其药物组合物、制备方法及用途
WO2023081923A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Frequency Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024017372A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种吲哚酮衍生物及其应用

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL104796C (hr) 1957-08-19
DE878539C (de) 1939-08-17 1953-06-05 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen
BE507136A (hr) 1950-11-18
BE553661A (hr) 1955-12-23
NL96047C (hr) 1956-06-08
NL251055A (hr) 1959-04-29
FR1398224A (fr) 1964-05-06 1965-05-07 Ici Ltd Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile
US3308134A (en) 1965-10-22 1967-03-07 Mcneilab Inc Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones
US3551571A (en) 1967-05-19 1970-12-29 Endo Lab Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones
US3564016A (en) 1968-03-07 1971-02-16 Endo Lab Method of decarbonylation
US4070366A (en) 1968-06-12 1978-01-24 Canadian Patents & Development Limited Alkylation process
FR1599772A (hr) 1968-09-17 1970-07-20
US3922163A (en) 1970-01-30 1975-11-25 Upjohn Co Organic compounds and process
US3715364A (en) 1970-12-28 1973-02-06 Merck & Co Inc Nitroimidazole carboxamides
DE2159363A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Antimikrobielle mittel
DE2159362A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159360A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159361A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
GB1384599A (en) 1972-05-04 1975-02-19 Colgate Palmolive Co Coloured detergent compositions
US3880871A (en) 1973-09-27 1975-04-29 Squibb & Sons Inc Isothiocyanophenyl substituted imidazoles
US4002643A (en) 1975-06-27 1977-01-11 Mcneil Laboratories, Inc. Preparation of β-acyl pyrroles
US4002749A (en) 1975-08-12 1977-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Substituted indolinones
US4053613A (en) 1975-09-17 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones
DE2855306A1 (de) 1978-12-21 1980-07-10 Boehringer Sohn Ingelheim Mittel zur senkung der herzfrequenz
GR73560B (hr) 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4343923A (en) 1980-08-07 1982-08-10 Armstrong World Industries, Inc. Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound
CH646956A5 (de) 1981-12-15 1984-12-28 Ciba Geigy Ag Imidazolide.
EP0095285A1 (en) 1982-05-21 1983-11-30 Sumitomo Chemical Company, Limited N-acylimidazoles, their production and use
US4493642A (en) 1982-12-27 1985-01-15 Bogdon Glendon J Orthodontic device and associated orthodontic method
DE3310891A1 (de) 1983-03-25 1984-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4489089A (en) 1983-04-06 1984-12-18 American Cyanamid Company Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides
EP0124482B1 (de) 1983-04-29 1989-11-08 Ciba-Geigy Ag Neue Imidazolide und deren Verwendung als Härter für Polyepoxidverbindungen
DE3415138A1 (de) 1984-04-21 1985-10-31 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide
DE3426419A1 (de) 1984-07-18 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4560700A (en) 1985-02-08 1985-12-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents
JPH078851B2 (ja) 1985-07-29 1995-02-01 鐘淵化学工業株式会社 ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
WO1993012786A1 (en) 1986-07-10 1993-07-08 Howard Harry R Jr Indolinone derivatives
US4853404A (en) 1986-10-13 1989-08-01 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Phenoxyacetic acid derivatives composition and use
US5089516A (en) 1987-03-11 1992-02-18 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity
EP0304493B1 (en) 1987-03-11 1992-09-02 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene derivatives
US5202341A (en) 1987-03-11 1993-04-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity
US5043348A (en) 1987-04-24 1991-08-27 Cassella Aktiengesellschaft Pyrrolealdehydes, their preparation and their use
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
DE3808071A1 (de) 1988-03-11 1989-09-21 Basf Ag Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen
US4868304A (en) 1988-05-27 1989-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Synthesis of nitrogen heterocycles
CA1339784C (en) 1988-06-23 1998-03-31 Shinya Inoue Pyrrolecarboxylic acid derivatives
JPH06104658B2 (ja) 1988-06-23 1994-12-21 三菱化成株式会社 ピロールカルボン酸誘導体
GB8816944D0 (en) 1988-07-15 1988-08-17 Sobio Lab Compounds
DE3824658A1 (de) 1988-07-15 1990-01-18 Schering Ag N-hetaryl-imidazolderivate
US5084280A (en) 1988-12-15 1992-01-28 Chapman Chemical Company Wood preservation composition and method
DE3902439A1 (de) 1989-01-27 1990-08-02 Basf Ag Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern
US5047554A (en) 1989-04-18 1991-09-10 Pfizer Inc. 3-substituted-2-oxindole derivatives
EP0429685B1 (en) 1989-07-25 1997-10-29 Taiho Pharmaceutical Company, Limited Oxoindole derivative
US5258357A (en) 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
CA2032421A1 (en) 1989-12-20 1991-06-21 Mitsubishi Chemical Corporation Pyrrolealdehyde derivative
GB9004483D0 (en) 1990-02-28 1990-04-25 Erba Carlo Spa New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation
CA2012634A1 (en) 1990-03-20 1991-09-20 Hassan Salari Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5196446A (en) 1990-04-16 1993-03-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
US5480883A (en) 1991-05-10 1996-01-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase
SG64322A1 (en) 1991-05-10 1999-04-27 Rhone Poulenc Rorer Int Bis mono and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit egf and/or pdgf receptor tyrosine kinase
GB9115160D0 (en) 1991-07-12 1991-08-28 Erba Carlo Spa Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation
US5124347A (en) 1991-07-31 1992-06-23 Warner-Lambert Co. 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents
HU219131B (hu) 1991-10-18 2001-02-28 Monsanto Co. Módszer és fungicid készítmény növények torsgombabetegségének gátlására és a hatóanyagok
US5322950A (en) 1991-12-05 1994-06-21 Warner-Lambert Company Imidazole with angiotensin II antagonist properties
US5389661A (en) 1991-12-05 1995-02-14 Warner-Lambert Company Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
FR2689397A1 (fr) 1992-04-01 1993-10-08 Adir Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments.
DE4211531A1 (de) 1992-04-06 1993-10-07 Cassella Ag Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten
FR2694004B1 (fr) 1992-07-21 1994-08-26 Adir Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5565324A (en) 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
JP3507124B2 (ja) 1993-05-26 2004-03-15 塩野義製薬株式会社 ベンジリデン誘導体の製造法
EP0632102B1 (de) 1993-06-28 1997-04-02 Bayer Ag Massefärben von Kunststoffen
US5332736A (en) 1993-11-01 1994-07-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles
US5610173A (en) 1994-01-07 1997-03-11 Sugen, Inc. Formulations for lipophilic compounds
GB9507298D0 (en) 1995-04-07 1995-05-31 Pharmacia Spa Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors
US5786488A (en) 1996-11-13 1998-07-28 Sugen, Inc. Synthetic methods for the preparation of indolyquinones
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
JP3246712B2 (ja) 1995-11-15 2002-01-15 株式会社トクヤマ エテニルアミド化合物の製造方法
EP0788890A1 (en) 1996-02-06 1997-08-13 Agfa-Gevaert N.V. Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording
CA2206201A1 (en) 1996-05-29 1997-11-29 Yoshiaki Isobe Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use
ATE255090T1 (de) 1996-08-01 2003-12-15 Merckle Gmbh Acylpyrroldicarbonsäuren und acylindoldicarbonsäuren sowie ihre derivate als hemmstoffe der cytosolischen phospholipase a2
CA2289102A1 (en) * 1997-05-07 1998-11-12 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US6133305A (en) 1997-09-26 2000-10-17 Sugen, Inc. 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity
HUP0103617A2 (hu) * 1998-05-29 2002-02-28 Sugen, Inc. Protein kinázt gátló, pirrolilcsoporttal helyettesített 2-indolszármazékok, e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények, valamint e vegyületek alkalmazása
US6462072B1 (en) 1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives
JP2002542147A (ja) 1998-12-14 2002-12-10 セレジィ ファーマシューティカルス， インコーポレイテッド 肛門直腸障害の処置のための組成物および方法
BR9916327A (pt) * 1998-12-17 2001-09-18 Hoffmann La Roche Oxindóis de 4-alquenila (e alquinila) como inibidores de cinases dependentes de ciclina, em particular, cdk2
US6284894B1 (en) 1998-12-18 2001-09-04 Nycomed Imaging As Preparation of allylic aromatic compounds
AU760964B2 (en) * 1998-12-31 2003-05-22 Sugen, Inc. 3-heteroarylidenyl-2-indolinone compounds for modulating protein kinase activityand for use in cancer chemotherapy
WO2001037820A2 (en) * 1999-11-24 2001-05-31 Sugen, Inc. Ionizable indolinone derivatives and their use as ptk ligands
CA2395461C (en) * 1999-12-22 2010-05-25 Sugen, Inc. Methods of modulating c-kit tyrosine kinase function with indolinone compounds
CA2399358C (en) * 2000-02-15 2006-03-21 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
MY128450A (en) 2000-05-24 2007-02-28 Upjohn Co 1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
WO2002002551A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
JP2004518669A (ja) * 2000-12-20 2004-06-24 スージェン・インコーポレーテッド ４−アリール置換インドリノン

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
ATE369359T1 (de) 2007-08-15
JP3663382B2 (ja) 2005-06-22
CY2010004I2 (el) 2012-01-25
CR20120009A (es) 2012-02-07
NO20023831L (no) 2002-10-15
BRPI0108394B1 (pt) 2018-12-11
LU91407I2 (fr) 2008-03-10
NO325532B1 (no) 2008-06-09
BRPI0108394B8 (pt) 2021-05-25
CY2010004I1 (el) 2012-01-25
BRPI0117360A2 (pt) 2012-01-24
DK1255752T3 (da) 2007-11-26
HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
BRPI0117360B1 (pt) 2018-11-13
NO2010002I1 (no) 2010-03-08
US6573293B2 (en) 2003-06-03
AU2001239770B2 (en) 2006-01-05
CR20120007A (es) 2012-02-24
YU61402A (sh) 2005-07-19
NO2019005I1 (no) 2019-02-11
PE20011083A1 (es) 2001-10-26
ES2290117T3 (es) 2008-02-16
NL300332I1 (nl) 2008-03-03
NO20023831D0 (no) 2002-08-13
HU228979B1 (en) 2013-07-29
MXPA02008021A (es) 2004-04-05
EP1255752B1 (en) 2007-08-08
IL151127A0 (en) 2003-04-10
SI1255752T1 (sl) 2007-12-31
NZ520640A (en) 2005-04-29
BG107078A (bg) 2003-04-30
US20070010569A1 (en) 2007-01-11
NL300332I2 (nl) 2008-04-01
BG65764B1 (bg) 2009-10-30
KR20030003229A (ko) 2003-01-09
DE60129794T2 (de) 2007-12-06
BE2010C009I2 (hr) 2020-01-30
EP1255752A2 (en) 2002-11-13
MY130363A (en) 2007-06-29
NO2010002I2 (no) 2010-12-06
KR100713960B1 (ko) 2007-05-02
PL361209A1 (en) 2004-09-20
CY1108032T1 (el) 2011-04-06
WO2001060814A3 (en) 2002-01-24
NO2008019I2 (no) 2011-10-17
FR08C0002I1 (hr) 2008-03-21
FR08C0002I2 (fr) 2009-01-02
PT1255752E (pt) 2007-10-17
IS2491B (is) 2009-01-15
IS6501A (is) 2002-08-13
BR0108394A (pt) 2004-06-22
UA73976C2 (uk) 2005-10-17
SK13262002A3 (sk) 2003-03-04
LTC1255752I2 (lt) 2019-08-26
LU91657I2 (fr) 2010-05-03
CZ303705B6 (cs) 2013-03-27
JP2003523340A (ja) 2003-08-05
DE122008000002I1 (de) 2008-04-17
CO5280092A1 (es) 2003-05-30
EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
CA2399358A1 (en) 2001-08-23
ME00415B (me) 2011-10-10
CN1439005A (zh) 2003-08-27
NL300430I1 (nl) 2010-03-01
NL300430I2 (nl) 2010-04-01
CN1329390C (zh) 2007-08-01
EA005996B1 (ru) 2005-08-25
LTPA2008002I1 (lt) 2019-02-25
LU91407I9 (hr) 2018-12-28
US20040063773A1 (en) 2004-04-01
HK1051188A1 (en) 2003-07-25
WO2001060814A2 (en) 2001-08-23
US20020156292A1 (en) 2002-10-24
AR034118A1 (es) 2004-02-04
AU3977001A (en) 2001-08-27
PL211834B1 (pl) 2012-06-29
BRPI0117360B8 (pt) 2021-07-06
HRP20020751B1 (hr) 2011-01-31
NO2008019I1 (no) 2009-01-12
RS50444B (sr) 2010-03-02
DE60129794D1 (de) 2007-09-20
US20050176802A1 (en) 2005-08-11
CA2399358C (en) 2006-03-21
US7125905B2 (en) 2006-10-24
US7572924B2 (en) 2009-08-11
SK287142B6 (sk) 2010-01-07
TWI306860B (en) 2009-03-01
CY2008004I1 (el) 2009-11-04
CY2008004I2 (el) 2009-11-04
CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
DE122010000004I1 (de) 2010-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6573293B2 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
EP1370554B1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
AU2001239770A1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US20040138269A1 (en) Substituted pyrroles as kinase inhibitors
AU2002247133A1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
US6797725B2 (en) Prodrugs of a 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
ARAI Request for the grant of a patent on the basis of the submitted results of a substantive examination of a patent application
B1PR Patent granted
PNAN Change of the applicant name, address/residence

Owner name: PHARMACIA & UPJOHN COMPANY LLC, US

Owner name: SUGEN, INC., US

ODRP Renewal fee for the maintenance of a patent

Payment date: 20190129

Year of fee payment: 19

ODRP Renewal fee for the maintenance of a patent

Payment date: 20200204

Year of fee payment: 20

PB20 Patent expired after termination of 20 years

Effective date: 20210215