ES2691534T3 - Derivados de exendina-4 como agonistas selectivos del receptor de glucagón - Google Patents

Abstract

Un compuesto peptídico que tiene la fórmula (I):**Fórmula** X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, Phe, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2- fluorofenilalanina, ciclohexilglicina y terc-leucina, X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu, X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr, R1 representa OH o NH2 o una sal o solvato de este.

Description

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DESCRIPCIÓN

Derivados de exendina-4 como agonistas selectivos del receptor de glucagón.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a análogos de exendina-4 de fórmula (I) o sales o solvatos de estos, que activan el receptor de glucagón y su uso médico, por ejemplo, para el tratamiento de la hipoglucemia grave.

Antecedentes de la invención

La exendina-4 es un péptido de 39 aminoácidos producido por las glándulas salivales del monstruo de Gila (Heloderma suspectum) (Eng, J. et al., J. Biol. Chem., 267:7402-05,1992). La exendina-4 es un activador del receptor del péptido similar a glucagón 1 (GLP-1, por sus siglas en inglés), mientras que no activa de manera significativa el receptor de glucagón.

La secuencia de aminoácidos de la exendina-4 se muestra como la SEQ ID NO: 1 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2

El glucagón es un péptido de 29 aminoácidos que se libera en el torrente circulatorio cuando la glucosa circulante está baja. La secuencia de aminoácidos del glucagón se muestra como la SEQ ID NO 2.

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH

Durante la hipoglucemia, cuando los niveles de glucosa en sangre caen por debajo de lo normal, el glucagón indica al hígado que debe descomponer glucógeno y liberar glucosa, lo que provoca un aumento en los niveles de glucosa en sangre para alcanzar un nivel normal. La hipoglucemia es un efecto secundario común en diabéticos tratados con insulina debido a niveles elevados de glucosa en sangre. Por lo tanto, el papel más importante del glucagón en la regulación de la glucosa es contrarrestar la acción de la insulina y mantener los niveles de glucosa en sangre.

El glucagón tiene un punto isoeléctrico de aproximadamente 7 y, por lo tanto, es apenas escasamente soluble (<0,2 mg/ml) en el intervalo de pH 4-8. Es bien soluble (>10 mg/ml) a valores de pH menores que 3 o mayores que 9 (Bromer, W.W., Handbook of Experimental Pharmacology, tomo 66/1, 1983). Por consiguiente, las disoluciones comerciales disponibles en la actualidad de glucagón (GlucaGen® HypoKit, kit de rescate de emergencia con glucagón) son ácidas y deben prepararse poco tiempo antes de su uso debido a la inestabilidad química y biofísica del glucagón en disolución a un pH bajo (Joshi, A.B. et al, Int. J. Ph. Sci., 203, 115-125, 2000).

La preparación de formulaciones de glucagón con estabilidad mejorada en comparación con las disoluciones de kits comerciales se describe en las solicitudes de patente WO9947160, WO12059762, US2011/0097386, US2011/0237510, US2011/049713, WO12012460, WO12122535, US2012/0071817 y WO13101749.

La preparación de análogos estabilizados de glucagón se describe en las solicitudes de patente WO14016300, WO11049713, WO07056362, WO08086086 y WO09155257.

El uso de 4-tiazolilalanina en la posición 1 de un péptido sintético se ha descrito en WO07140284 para agonistas del receptor de GLP-1. En cambio, en la presente invención, 4-tiazolilalanina proporciona de manera sorprendente agonistas del receptor de glucagón muy activos con actividad reducida en el receptor de GLP-1 en comparación con péptidos que llevan la histidina natural en la posición 1 (glucagón natural).

Breve compendio de la invención

La invención se define mediante las reivindicaciones adjuntas.

En la presente memoria se proporcionan análogos de exendina-4 que activan de manera potente y selectiva el receptor de glucagón y exhiben una solubilidad más alta a un pH casi neutro y una estabilidad química mejorada en disolución en comparación con el glucagón natural. Todos los compuestos incorporan el aminoácido artificial 4- tiazolilalanina en la posición 1. Esto resulta, de manera sorprendente, en una mayor selectividad hacia el receptor de glucagón con respecto al receptor de GLP1 cuando se comparan compuestos idénticos entre sí que difieren solo en la posición 1 (Tza en la posición 1 en lugar de His). Por lo tanto, la presente invención proporciona agonistas del receptor de glucagón altamente selectivos.

La invención proporciona un compuesto peptídico que tiene la fórmula (I):

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Tza-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-Lys-Gln-X14-G[u-Ser-Arg-

Arg-Ala-Gln-X21-Phe-lle-Glu-Trp~Leu-Leu-Ala-X29-Gly-Pro-Glu-Ser-Giy-

Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-R1

(I)

X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, Phe, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2- fluorofenilalanina, ciclohexilglicina y terc-leucina

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle

X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

R1 representa OH o NH2

0 una sal o solvato de este.

Los compuestos de la invención son agonistas del receptor de glucagón, según se determina mediante la observación de que son capaces de estimular la formación de cAMP intracelular tras unirse al receptor para el glucagón. Los compuestos exhiben al menos una actividad relativa de 0,1%, preferiblemente, 0,5%, más preferiblemente, 1,0% e, incluso más preferiblemente, 10,0% en comparación con la del glucagón natural en el receptor de glucagón.

Los compuestos de la invención también activan el receptor de GLP1, según se determina mediante la observación de que son capaces de estimular la formación de cAMP intracelular tras unirse al receptor para GLP1. La actividad de un compuesto dado de la presente invención (expresada por su actividad con respecto a la actividad de GLP1 en el receptor de GLP1) está por debajo de 10%, más preferiblemente, por debajo de 5% e, incluso más preferiblemente, por debajo de 2% en comparación con la actividad del mismo compuesto en el receptor de glucagón (expresada por su actividad con respecto a la actividad del glucagón en el receptor de glucagón).

De manera sorprendente, se halló que los compuestos peptídicos de la fórmula I con 4-tiazolilalanina en la posición

1 exhibieron una activación mayor del receptor de glucagón y mayor selectividad hacia la actividad en el receptor de GLP-1 en comparación con derivados que tienen una histidina en esta posición. La histidina es el aminoácido de origen natural en el glucagón en la posición 1 y se ha demostrado que es importante para el mecanismo de activación del receptor de glucagón (Unson, C.G. et al, Arch. Biochem. Biophys., 300, 747-750, 1993).

Además, los compuestos de la invención tienen preferiblemente una solubilidad mejorada a valores de pH ácidos y/o fisiológicos, p. ej., a pH 4,5 y/o a pH 7,4 a 25 °C, preferiblemente, al menos 0,5 mg/ml, más preferiblemente, al menos 1,0 mg/ml e, incluso más preferiblemente, al menos 10,0 mg/ml.

Además, los compuestos de la invención tienen preferiblemente una estabilidad elevada cuando se almacenan durante 14 días a 50 °C en disolución a pH 7,3 (determinada mediante análisis cromatográficos, según se describe en los Ejemplos). Preferiblemente, los productos de degradación recientemente formados están por debajo de 40%, más preferiblemente, por debajo de 30%, incluso más preferiblemente, por debajo de 20%.

En una realización, el grupo del extremo C R1 es NH2.

En una realización adicional, el grupo del extremo C R1 es OH.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde

X10 representa Leu,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde X10 representa Tyr,

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X21 representa Glu,

X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde X10 representa Val,

X14 representa Leu,

X21 representa Glu,

X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde X10 representa Ile,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

X21 representa Glu,

X29 representa Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde X10 representa 1 -naftilalanina,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

X29 representa Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde X10 representa 2-fluorofenilalanina,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

X21 representa Asp,

X29 representa Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde X10 representa ciclohexilglicina,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

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R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde

X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2- fluorofenilalanina y ciclohexilglicina,

X14 representa Leu,

X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

R1 representa OH o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde

X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Ile, Phe, 1-naftilalanina, ciclohexilglicina y terc- leucina

X14 representa Nle,

X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

X29 representa Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde

X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu, Phe, 1-naftilalanina, 2-fluorofenilalanina y

ciclohexilglicina,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle X21 representa Asp,

X29 representa Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde

X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, fenilglicina, 1-naftilalanina,

ciclohexilglicina y terc-leucina,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle X21 representa Glu,

X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde

X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, Phe, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2- fluorofenilalanina, ciclohexilglicina y terc-leucina,

X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle

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X29 representa Thr,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Una realización adicional se refiere a un grupo de compuestos, en donde X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu y Val,

X14 representa Leu,

X21 representa Glu,

X29 representa Gly,

R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

Los ejemplos específicos de compuestos peptídicos de fórmula (I) son los compuestos de las SEQ ID NO: 3 - 25, así como sales o solvatos de estos.

Los ejemplos específicos de compuestos peptídicos de fórmula (I) son los compuestos de las SEQ ID NO: 3, 5, 6, 9, 15, 20, 23, 24 y 25, así como sales o solvatos de estos.

Cuando el compuesto de fórmula (I) comprende residuos aminoacídicos genéticamente codificados, se describe que se puede proporcionar un ácido nucleico (que puede ser ADN o ARN) que codifica dicho compuesto, un vector de expresión que comprende dicho ácido nucleico y una célula hospedante que contiene dicho ácido nucleico o vector de expresión.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición que comprende un compuesto de la invención en una mezcla con un vehículo. En realizaciones preferidas, la composición es una composición farmacéuticamente aceptable y el vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable. El compuesto de la invención puede estar en forma de una sal, p. ej., una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato, p. ej., un hidrato. En aún un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición para su uso en un método para tratamiento médico, particularmente en medicina humana.

En determinadas realizaciones, el ácido nucleico o el vector de expresión pueden usarse como agentes terapéuticos, p. ej., en tratamiento génico.

Los compuestos de fórmula (I) son adecuados para aplicación terapéutica sin un agente terapéuticamente eficaz adicional. En otras realizaciones, sin embargo, los compuestos se usan junto con al menos un agente terapéuticamente activo adicional, según se describe en “politerapia”.

Los compuestos de la presente invención y la formulación de estos pueden usarse principalmente para tratar la hipoglucemia, aumentar los niveles de glucosa en sangre, como tratamiento complementario con insulina, pero también para reducir y mantener el peso corporal, como antídoto para la intoxicación con bloqueantes beta y bloqueantes de canales de calcio y para inducir la relajación temporal del sistema gastrointestinal para usos radiológicos.

Descripción detallada de la invención Definiciones

Las secuencias de aminoácidos de la presente invención contienen los códigos de una letra y tres letras convencionales para aminoácidos de origen natural, así como los códigos de tres letras generalmente aceptados para otros aminoácidos, tales como Nle (Norleucina).

Además, se utilizaron los siguientes códigos para los aminoácidos que se muestran en la Tabla 1:

Estructura

Nombre

Código

imagen1

L-4-tiazolilalanina

Tza

imagen2

L-ciclohexilglicina

Chg

imagen3

L-fenilglicina

Phg

imagen4

L-terc-leucina

Tle

imagen5

L-2-fluorofenilalanina

2F-Phe

imagen6

L-1-naftilalanina

1 -Nal

El término “exendina-4 natural” se refiere a la exendina-4 natural que tiene la secuencia

HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (SEQ ID NO: 1).

5 La invención proporciona compuestos peptídicos según se definieron anteriormente.

Los compuestos peptídicos de la presente invención comprenden una estructura lineal de ácidos aminocarboxílicos enlazados mediante péptidos, es decir, uniones carboxamida. Preferiblemente, los ácidos aminocarboxílicos son a- ácidos aminocarboxílicos y, más preferiblemente, L-a-ácidos aminocarboxílicos, a menos que se indique de cualquier otra manera. Los compuestos peptídicos comprenden una secuencia estructural de 39 ácidos 10 aminocarboxílicos.

Con el fin de evitar dudas, en las definiciones proporcionadas en la presente memoria, se pretende en general que la secuencia del resto peptídico difiera de la exendina-4 natural en al menos una de las posiciones que se indica que

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admiten variación. Los aminoácidos dentro del resto peptídico pueden considerarse como enumerados de manera consecutiva del 1 al 39 en el sentido convencional del extremo N al extremo C. La referencia a una “posición” dentro del resto peptídico debe interpretarse en consecuencia, así como la referencia a las posiciones dentro de la exendina-4 natural y otras moléculas, p. ej., en la exendina-4, His está en la posición 1, Gly en la posición 2, ..., Met en la posición 14, ... y Ser en la posición 39.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición que comprende un compuesto de la invención, según se describe en la presente memoria, o una sal o solvato de este, en una mezcla con un vehículo.

La invención también proporciona el uso de un compuesto de la presente invención para su uso como un medicamento, particularmente para el tratamiento de una afección, según se describe en la presente memoria.

La invención también proporciona una composición en donde la composición es una composición farmacéuticamente aceptable y el vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Síntesis peptídica

El experto en la técnica conoce una variedad de métodos diferentes para preparar péptidos que se describen en la presente invención. Estos métodos incluyen, pero no se limitan a, vías sintéticas y expresión génica recombinante. Por lo tanto, un modo de preparar estos péptidos es la síntesis en disolución o sobre un soporte sólido y posteriormente el aislamiento y la purificación. Un modo diferente de preparar los péptidos es la expresión génica en una célula hospedante en la que se ha introducido una secuencia de ADN que codifica el péptido. Alternativamente, la expresión génica se puede lograr sin utilizan un sistema celular. Los métodos descritos anteriormente también se pueden combinar de cualquier modo.

Un modo preferido de preparar los péptidos de la presente invención es la síntesis en fase sólida sobre una resina adecuada. La síntesis peptídica en fase sólida es una metodología consolidada (véase, por ejemplo: Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, III., 1984; E. Atherton and R. C. Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis. A Practical Approach, Oxford-IRL Press, Nueva York, 1989). La síntesis en fase sólida se inicia al unir un aminoácido protegido en el extremo N con su extremo carboxílico a un soporte sólido inerte que incluye un enlazador escindible. Este soporte sólido puede ser cualquier polímero que permita el acoplamiento del aminoácido inicial, p. ej., una resina de tritilo, una resina de clorotritilo, una resina de Wang o una resina de Rink, en el que el enlace del grupo carboxílico (o carboxamida para la resina de Rink) con la resina es sensible a ácido (cuando se utiliza la estrategia con Fmoc). El soporte polimérico debe ser estable en las condiciones utilizadas para desproteger el grupo a-amino durante la síntesis peptídica.

Después de que se ha acoplado el primer aminoácido al soporte sólido, se retira el grupo protector a-amino de este aminoácido. Los aminoácidos protegidos restantes luego se acoplan uno tras otro en el orden representado por la secuencia peptídica utilizando reactivos de acoplamiento de amida adecuados, por ejemplo, BOP, HBTU, HATU o DIC (N,N'-diisopropilcarbodiimida) / HOBt (1-hidroxibenzotriazol), en donde BOP, HBTU y HATU se usan con bases de amina terciaria. Alternativamente, el extremo N liberado puede funcionalizarse con grupos distintos de aminoácidos, por ejemplo, ácidos carboxílicos, etc.

Finalmente, el péptido se escinde de la resina y se desprotege. Esto puede lograrse mediante el uso del cóctel de King (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266). A continuación, la materia prima puede purificarse mediante cromatografía, p. ej., RP-HPLC preparativa, si es necesario.

Potencia

Según se usa en la presente memoria, el término “potencia” o “potencia in vitro” es una medida de la capacidad de un compuesto para activar los receptores para GLP-1 o glucagón en un ensayo en células aisladas. Numéricamente, se expresa como el “valor CE50”, que es la concentración eficaz de un compuesto que induce la mitad del aumento máximo de respuesta (p. ej., formación de cAMP intracelular) en un experimento de respuesta a dosis.

Usos terapéuticos

Los compuestos de la invención son agonistas del receptor de glucagón. Dichos agonistas pueden proporcionar en un principio beneficio terapéutico para satisfacer una necesidad clínica para tratar la hipoglucemia.

La hipoglucemia inducida por un medicamento antihiperglucémico, p. ej., tratamiento con insulina, es un riesgo importante en el tratamiento de T1DM y T2DM para mantener el control glucémico. El intento de lograr un control estricto de la glucosa puede aumentar el riesgo de hipoglucemia en el paciente ambulatorio y en el contexto de la medicina intensiva. En un estado sano, las concentraciones de glucosa en plasma en ayunas están normalmente por encima de 70 mg/dL. Si los niveles de azúcar en sangre caen por debajo de este umbral, se produce una hipoglucemia leve en principio con síntomas que todavía pueden ser autotratables. Estos síntomas pueden incluir debilidad, somnolencia, síncope, visión borrosa o una sensación de tristeza e infelicidad. Los síntomas hipoglucémicos también dependen de la edad del paciente y son predominantemente neurológicos en ancianos, mientras que en niños frecuentemente se observa un cambio de conducta. Los episodios hipoglucémicos durante la

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noche pueden resultar en cefaleas en la mañana, mala calidad del sueño, sueños vividos, pesadillas, sudoración profusa en la cama y conducta inquieta. También se ha informado de sonambulismo durante la hipoglucemia nocturna. Si los niveles de azúcar caen aún más, la consecuencia puede ser un episodio de hipoglucemia grave. La hipoglucemia grave se asocia con un nivel de glucosa en suero por debajo de 40-50 mg/dL y este episodio puede resultar en síntomas neuroglucopénicos tales como convulsiones o coma que requiere la asistencia de una segunda persona. La hipoglucemia puede afectar al cerebro y resultar en confusión (conducta anormal o ambos, tal como la incapacidad de completar tareas rutinarias), alteraciones visuales, convulsiones y a veces síncope. Si la hipoglucemia se produce de manera frecuente puede resultar en que se perciba menos y, por lo tanto, aumentar significativamente el riesgo de hipoglucemia grave. La hipoglucemia grave profunda y prolongada puede resultar en la muerte, mientras que los posibles mecanismos responsables de la muerte inducida por hipoglucemia incluyen muerte cerebral y arritmias cardíacas. En promedio, los pacientes con T1DM padecen 2 episodios de hipoglucemia sintomática por semana y 1 episodio de hipoglucemia grave por año. La incidencia de hipoglucemia en pacientes con T2DM tratados con insulina es aproximadamente un tercio de la observada en T1DM. Esta cifra puede aumentar en pacientes con una duración más prolongada del tratamiento con insulina, la existencia de comorbilidades y la edad de los pacientes.

El tratamiento de la hipoglucemia depende de la duración y la intensidad del episodio hipoglucémico. La hipoglucemia leve y moderada se puede autotratar fácilmente al beber o comer bebidas o alimentos que contienen azúcar. Por otro lado, la hipoglucemia grave requiere la ayuda de otra persona. Aunque la aplicación intravenosa de un carbohidrato se restringe a profesionales sanitarios, cualquier persona capacitada puede llevar a cabo la administración de glucagón como medicamento de rescate, ya sea mediante inyección subcutánea o intramuscular. El glucagón es una hormona peptídica producida por las células alfa pancreáticas y liberada en el torrente circulatorio cuando la glucosa circulante está baja. Como hormona de los islotes cuyo efecto contrarresta los de la insulina, el glucagón eleva los niveles de glucosa en sangre al estimular la gluconeogénesis y la glucogenólisis (mientras inhibe simultáneamente la glucólisis y la síntesis de glucógeno) para evitar un estado hipoglucémico.

Existen dos kits de emergencia con glucagón comerciales aprobados como medicamento de rescate para la hipoglucemia grave. El Glucagon Emergency Kit (Eli Lilly and Co, Indianápolis, IN) y el GlucaGen® Hypokit® (Novo Nordisk A/S, Bagsv^rd, Dinamarca). Los kits contienen un vial de glucagón en polvo y una jeringa cargada con disolvente. El kit de glucagón debe reconstituirse antes de su uso. El disolvente se transfiere desde la jeringa hacia el vial y el vial se agita hasta que todo el sólido se haya disuelto. A continuación, la disolución se devuelve a la jeringa y después de que se retiran las burbujas de aire de la jeringa el kit está listo para la administración en la pierna o el abdomen. La dosis recomendada es 1 mg de glucagón en 1 mL de agua estéril para adultos y niños que pesan más de 25 kg y para niños con edades de 6 a 8 o más. Para niños con menos de 25 kg o menores de 6 a 8 años se recomienda la mitad de la dosis (0,5 mL).

Las instrucciones aprobadas por la FDA para ambos productos con glucagón disponibles comercialmente permiten solo el uso inmediato después de que se ha reconstituido el polvo liofilizado en la disolución acuosa. Debido al procedimiento complejo que comprende etapas diferentes para disolver el polvo liofilizado cuidadosamente y completar la inyección, estos productos deben ser administrados a los pacientes por cuidadores o parientes de los pacientes en el caso de una situación de emergencia. Debido a estos requisitos, el glucagón continúa siendo una estrategia terapéutica infrautilizada a pesar de su beneficio documentado para mejorar de manera inmediata la hipoglucemia.

Un producto agonista del receptor de glucagón con estabilidad mejorada en disolución, según se describe en la presente invención, podría permitir un dispositivo de pluma listo para su uso adecuado para que el paciente se autoinyecte. Además de su beneficio como medicamento de rescate, dicho producto podría ofrecer la oportunidad de convertirse en un componente de tratamiento como contraparte de la insulina para la optimización de la glucosa.

Una aplicación distinta puede ser el uso en un sistema de control de páncreas artificial de circuito cerrado automatizado con un suministro de doble bomba de insulina y agonista del receptor de glucagón, según se describe en la presente invención. Dicho sistema implantable mide subcutáneamente la glucosa en sangre y se administra insulina al paciente para que los niveles de glucosa vuelvan a un nivel normal. En cambio, el sistema de páncreas artificial administra un agonista del receptor de glucagón estabilizado para evitar que los niveles de glucosa bajen demasiado.

Por consiguiente, los compuestos de la invención pueden utilizarse para el tratamiento de la hipoglucemia leve a moderada o en un episodio de hipoglucemia grave. Además, las siguientes formas de hipoglucemia podrían tratarse con compuestos de la invención tales como: inducida por tratamientos antidiabéticos, p. ej., tratamientos con insulina, hipoglucemia reactiva o posprandial, hipoglucemia en ayunas, hipoglucemia inducida por alcohol, hipoglucemia posderivación gástrica, hipoglucemia no diabética e hipoglucemia asociada al embarazo.

Como se señaló anteriormente, el glucagón es una hormona con efectos agudos contra los de la insulina, que eleva los niveles de glucosa en sangre al estimular la gluconeogénesis y la glucogenólisis para evitar un estado hipoglucémico. Sin embargo, datos recientes en roedores y humanos revelaron que el glucagón también podría tener efectos beneficiosos sobre el equilibrio energético, la masa de grasa corporal y la ingesta de nutrientes. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse para una variedad de afecciones o trastornos,

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además del tratamiento de la hipoglucemia. Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con otros fármacos terapéuticos activos. El uso terapéutico relevante comprende el tratamiento o la prevención de la hipoglucemia, tanto aguda como crónica, la diabetes mellitus tipo 2, al retrasar la progresión de prediabetes a diabetes tipo 2, p. ej., en estados de tolerancia a la glucosa alterada y/o glucosa en ayunas deficiente, la diabetes gestacional, la diabetes mellitus tipo 1, la obesidad, enfermedades asociadas con el sobrepeso a obesidad, síndrome metabólico/diabesidad, enfermedades cardiovasculares, regulación del apetito y la saciedad en el tratamiento de trastornos alimentarios, p. ej., bulimia y el mantenimiento de un peso corporal reducido tras una pérdida de peso satisfactoria.

Para casos de intoxicación con bloqueantes beta con la presencia de síntomas de bradicardia e hipotensión, se considera que una dosis elevada de glucagón es un antídoto de primera línea. Por lo tanto, una inyección de compuestos de la presente invención puede usarse como defensa en una sobredosis de bloqueantes beta y bloqueantes de canales de calcio.

Un efecto extrahepático del glucagón es la relajación de las células de los músculos lisos en el tracto gastrointestinal, que comprenden el estómago, duodeno, intestino delgado y colon. Los compuestos de la presente invención y la formulación farmacéutica de estos pueden usarse como relajantes de las células de los músculos lisos en combinación con técnicas de imagenología para el tracto gastrointestinal, p. ej., radiografía, tomografía computarizada, sonografía, resonancia magnética e imagenología con medicina nuclear.

Por consiguiente, los compuestos de la presente invención y la formulación de estos pueden usarse para tratar la hipoglucemia, aumentar los niveles de glucosa en sangre, como tratamiento complementario con insulina, para reducir y mantener el peso corporal, como antídoto para la intoxicación con bloqueantes beta y bloqueantes de canales de calcio y para inducir la relajación temporal del sistema gastrointestinal para usos radiológicos.

Composiciones farmacéuticas

El término “composición farmacéutica” indica una mezcla que contiene ingredientes que son compatibles cuando se mezclan y que puede administrarse. Una composición farmacéutica puede incluir uno o más fármacos medicinales. Además, la composición farmacéutica puede incluir vehículos, disolventes, adyuvantes, emolientes, dilatadores, estabilizadores y otros componentes, bien se consideren ingredientes activos o inactivos. Los expertos pueden encontrar orientación para preparar las composiciones farmacéuticas, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (20a ed.) ed. A. R. Gennaro A. R., 2000, Lippencott Williams & Wilkins.

Los derivados peptídicos de exendina-4 de la presente invención, o sales de estos, se administran junto con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéutico aceptable como parte de una composición farmacéutica. Un “vehículo farmacéuticamente aceptable” es un vehículo que es fisiológicamente aceptable mientras conserva las propiedades terapéuticas de la sustancia con la que se administra. Los vehículos farmacéuticos aceptables estándares y sus formulaciones son conocidos para el experto en la técnica y se describen, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (20a ed.) ed. A. R. Gennaro A. R., 2000, Lippencott Williams & Wilkins. Un vehículo farmacéuticamente aceptable de ejemplo es la disolución salina fisiológica.

Los vehículos o diluyentes farmacéuticos aceptables incluyen aquellos usados en formulaciones adecuadas para administración oral, rectal, nasal o parenteral (incluida subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica y transdérmica). Los compuestos de la presente invención típicamente se administrarán por vía parenteral.

El término “sal” o “sal farmacéuticamente aceptable” significa sales de los compuestos de la invención que son seguras y eficaces para su uso en mamíferos. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden incluir, pero no se limitan a, sales de adición de ácido y sales básicas. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen sales de cloruro, sulfato, hidrógeno sulfato, (hidrógeno) fosfato, acetato, citrato, tosilato o mesilato. Los ejemplos de sales básicas incluyen sales con cationes inorgánicos, p. ej., sales de metales alcalinos o alcalinotérreos tales como sales de sodio, potasio, magnesio o calcio y sales con cationes orgánicos tales como sales de amina. Se describen ejemplos adicionales de sales farmacéuticamente aceptables en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (20a ed.) ed. A. R. Gennaro A. R., 2000, Lippencott Williams & Wilkins o en Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection and Use, e.d. P. H. Stahl, C. G. Wermuth, 2002, publicados de manera conjunta por Verlag Helvetica Chimica Acta, Zúrich, Suiza y Wiley-VCH, Weinheim, Alemania.

El término “solvato” significa complejos de los compuestos de la invención o sales de estos con moléculas disolventes, p. ej., moléculas disolventes orgánicas y/o agua.

El término “cantidad terapéuticamente eficaz” de un compuesto se refiere a una cantidad no tóxica, pero suficiente del compuesto para proporcionar el efecto deseado. La cantidad de un compuesto de fórmula (I) necesaria para lograr el efecto biológico deseado depende de varios factores, por ejemplo, el compuesto específico elegido, el uso previsto, el modo de administración y la situación clínica del paciente. Un experto en la técnica puede determinar una cantidad “eficaz” adecuada en cualquier caso individual mediante el uso de experimentos de rutina.

Las composiciones farmacéuticas de la invención son aquellas adecuadas para administración parenteral (por ejemplo, subcutánea, intramuscular, intradérmica o intravenosa), oral, rectal, tópica y peroral (por ejemplo,

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sublingual), aunque el modo de administración más adecuado depende en cada caso individual de la naturaleza y gravedad de la afección que se va a tratar y de la naturaleza del compuesto de fórmula (I) usado en cada caso.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas pueden estar en forma de unidades separadas, por ejemplo, cápsulas, comprimidos y polvos en viales o ampollas, donde cada una contiene una cantidad definida del compuesto; como polvos o gránulos; como disolución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión de aceite en agua o agua en aceite. Se puede proporcionar en una forma inyectable de dosis única, por ejemplo, en la forma de una pluma. Las composiciones, como ya se mencionó, pueden prepararse mediante cualquier método farmacéutico adecuado que incluya una etapa en la que el ingrediente activo y el vehículo (que puede consistir en uno o más ingredientes adicionales) se ponen en contacto.

Politerapia

Además de su uso como medicamento para episodios hipoglucémicos, los compuestos de la presente invención, los agonistas del receptor de glucagón pueden combinarse ampliamente con otros compuestos farmacológicamente activos, tales como todos los fármacos mencionados en la Rote Liste 2014, p. ej., con todos los antidiabéticos mencionados en la Rote Liste 2014, capítulo 12, todos los agentes reductores del peso o supresores del apetito mencionados en la Rote Liste 2014, capítulo 1, todos los agentes hipolipemiantes mencionados en la Rote Liste 2014, capítulo 58, todos los antihipertensores y nefroprotectores, mencionados en la Rote Liste 2014 o todos los diuréticos mencionados en la Rote Liste 2014, capítulo 36.

Las combinaciones de ingredientes activos pueden usarse especialmente para una mejora sinérgica de la acción. Se pueden aplicar mediante administración separada de los ingredientes activos al paciente o en forma de productos de combinación en los que una pluralidad de ingredientes activos está presente en una preparación farmacéutica. Cuando los ingredientes activos se administran mediante administración separada de los ingredientes activos, esto se puede hacer de manera simultánea o sucesiva.

La mayoría de los ingredientes activos mencionados a continuación en la presente memoria se describen en el USP Dictionary of USAN and International Drug Names, Farmacopea de los EE. UU., Rockville 2011.

Otras sustancias activas que son adecuadas para dichas combinaciones incluyen, en particular, aquellas que, por ejemplo, agregan un efecto terapéutico a una o más sustancias activas con respecto a una de las indicaciones mencionadas y/o que permiten reducir la dosificación de una o más sustancias activas.

Los agentes terapéuticos que son adecuados para combinaciones incluyen, por ejemplo, agentes antidiabéticos tales como:

Insulina y derivados de insulina, por ejemplo: Glargina / Lantus® (véase
www.lantus.com). Glulisina / Apidra®, Detemir / Levemir®, Lispro / Humalog® / Liprolog®, Degludec / DegludecPlus, Asparta, insulina basal y análogos (p. ej., LY2963016), insulina PEGilada Lispro (LY2605541), Humulin®, Linjeta™, SuliXen®, NN1045, Insulina plus Symlin®, insulinas de acción rápida y de acción corta (p. ej., Linjeta™, PH20, NN1218, HinsBet®), (APC-002) insulinas en hidrogel, oral, inhalable, transdérmica y sublingual (p. ej., Exubera®, Nasulin®, Afrezza®, Tregopil, TPM 02, Capsulin™, Oral-lyn®, insulina oral Cobalamin®, ORMD-0801, NN1953, VIAtab™). También se incluyen adicionalmente aquellos derivados de insulina que se unen a albúmina u otra proteína mediante un enlazador bifuncional tal como HM12460A (insulina LAPS).

GLP-1, análogos de GLP-1 y agonistas del receptor de GLP-1, por ejemplo: Lixisenatida / AVE0010 / ZP10 / Lixumia, Exenatida / exendina-4 / Byetta® / Bydureon® / ITCA 650, Liraglutida / Victoza®, Semaglutida, Taspoglutida, Albiglutida, Dulaglutida, rExendina-4, CJC-1134-PC, PB-1023, TTP-054, HM-11260C, CM-3, GLP-1 Eligen, ORMD- 0901, NN-9924, Nodexen, Viador-GLP-1, CVX-096, ZYOG-1, ZYD-1, MAR-701, ZP-2929, ZP-3022, CAM-2036, DA- 15864, ARI-2651, ARI-2255, Exenatida-XTEN y Glucagón-XTEN, MAR709, HM1525A, agonistas dobles de GLP1R/GlucagónR, agonistas dobles de GLP1R/GIPR, agonistas triples de GLP1R/GlucagonR/GIPR, combinaciones de agonistas de GLP1R con derivados de insulina tales como IDegLira, Lixilan, etc.

Inhibidores de DPP-4, por ejemplo: Alogliptina / Nesina®, Linagliptina / BI-1356 / Ondero® / Trajenta® / Tradjenta® / Trayenta® / Tradzenta®, Saxagliptina / Onglyza®, Sitagliptina / Januvia® / Xelevia® / Tesave® / Janumet® / Velmetia®- Vildagliptina, Anagliptina, Gemigliptina, Tenegliptina, Melogliptina, Trelagliptina, DA-1229, MK-3102, KM-223.

Inhibidores de SGLT2, por ejemplo: Canaglifozina, Dapaglifloxina, Remoglifoxina, Sergliflozina, Empagliflozina, Ipraglifloxina, Tofoglifloxina, Iuseoglifloxina, LX-4211, PF-04971729, Ro-4998452, EGT-0001442, DSP-3235.

Biguanidas (p. ej., Metformina, Buformina, Fenformina), Tiazolidinadionas (p. ej., Pioglitazona, Rivoglitazona, Rosiglitazona, Troglitazona), agonistas dobles de PPAR (p. ej., Aleglitazar, Muraglitazar, Tesaglitazar), Sulfonilureas (p. ej., Tolbutamida, Glibenclamida, Glimepirida/Amaryl®, Glipizida), Meglitinidas (p. ej., Nateglinida, Repaglinida, Mitiglinida), Inhibidores de alfa-glucosidasa (p. ej., Acarbosa, Miglitol, Voglibosa), Amilina y análogos de Amilina (p. ej., Pramlintida, Symlin®).

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Agonistas de GPR119 (p. ej., GSK-263A, PSN-821, MBX-2982, APD-597), agonistas de GPR40 (p. ej., TAK-875, TUG-424, P-1736, JTT-851, GW9508).

Otros agentes de combinación adecuados son: Cycloset®, inhibidores de 11-beta-HSD (p. ej., LY2523199, BMS770767, RG-4929, BMS816336, AZD-8329, HSD-016, BI-135585), activadores de glucocinasa (p. ej., TTP-399, AMG-151, TAK-329), inhibidores de DGAT (p. ej., LCQ-908), inhibidores de proteína tirosina fosfatasa 1 (p. ej., Trodusquemina), inhibidores de glucosa-6-fosfatasa, inhibidores de fructosa-1,6-bisfosfatasa, inhibidores de glucógeno fosforilasa, inhibidores de fosfoenol piruvato carboxicinasa, inhibidores de glucógeno sintasa cinasa, inhibidores de piruvato deshidrocinasa, alfa2-antagonistas, antagonistas de CCR-2.

Uno o más agentes hipolipidemiantes son también adecuados como agentes de combinación, tales como por ejemplo: Inhibidores de HMG-CoA-reductasa (p. ej., Simvastatina, Atorvastatina), fibratos (p. ej., Bezafibrato, Fenofibrato), ácido nicotínico y los derivados de este (p. ej., Niacina), agonistas y moduladores de PPAR-(alfa, gamma o alfa/gamma) (p. ej., Aleglitazar), agonistas de PPAR-delta, inhibidores de ACAT (p. ej., Avasimiba), inhibidores de absorción de colesterol (p. ej., Ezetimiba), sustancias de unión a ácido biliar (p. ej., Colestiramina), inhibidores de transporte de ácido biliar ileal, inhibidores de MTP o moduladores de PCSK9.

Compuestos elevadores de HDL tales como: Inhibidores de CETP (p. ej., Torcetrapib, Anacetrapid, Dalcetrapid, Evacetrapid, JTT-302, DRL-17822, TA-8995) o reguladores de ABC1.

Otros agentes de combinación adecuados son una o más sustancias activas para el tratamiento de la obesidad, tal como por ejemplo: Sibutramina, Tesofensina, Orlistat, antagonistas del receptor de cannabinoide-1, antagonistas del receptor de mCH-1, agonistas del receptor de MC4, antagonistas de NPY5 o NPY2 (p. ej., Velneperit), beta-3- agonistas, leptina o miméticos de leptina, agonistas del receptor de 5HT2c (p. ej., Lorcaserina), o las combinaciones de bupropiona/naltrexona, bupropiona/zonisamida, bupropiona/fentermina o pramlintida/metreleptina.

Otros agentes de combinación adecuados son:

Péptidos gastrointestinales adicionales tales como el péptido YY 3-36 (PYY3-36) o análogos de este, polipéptido pancreático (PP) o análogos de este, agonistas o antagonistas del receptor de GIP, antagonistas o agonistas inversos de grelina, Xenina y análogos de esta.

Además, las combinaciones con fármacos que influyen sobre la tensión arterial alta, la insuficiente cardíaca crónica o la ateroesclerosis, tales como, p. ej.: Son adecuados antagonistas del receptor de angiotensina II (p. ej., telmisartán, candesartán, valsartán, losartán, eprosartán, irbesartán, olmesartán, tasosartán, azilsartán), inhibidores de ACE, inhibidores de ECE, diuréticos, bloqueantes beta, antagonistas de calcio, hipertensores de acción central, antagonistas del receptor alfa-2-adrenérgico, inhibidores de endopeptidasa neutra, inhibidores de la aglomeración de trombocitos y otros o combinaciones de estos.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de acuerdo con la invención o una sal fisiológicamente aceptable de este combinado con al menos una de las sustancias activas descritas anteriormente como un agente de combinación, para preparar un medicamento que es adecuado para el tratamiento o la prevención de enfermedades o afecciones que pueden ser afectadas por la unión al receptor de glucagón. Se trata preferiblemente de una enfermedad en el contexto del síndrome metabólico, particularmente una de las enfermedades o afecciones indicadas anteriormente, más particularmente la diabetes o la obesidad o complicaciones de estas.

El uso de los compuestos según la invención, o una sal fisiológicamente aceptable de estos, en combinación con una o más sustancias activas puede llevarse a cabo simultáneamente, por separado o secuencialmente.

El uso del compuesto según la invención, o una sal fisiológicamente aceptable de este, en combinación con otra sustancia activa puede llevarse a cabo simultáneamente o en momentos escalonados, pero particularmente en un período de tiempo corto. Si se administran simultáneamente, las dos sustancias activas se proporcionan al paciente juntas; si se usan en momentos escalonados, las dos sustancias activas se proporcionan al paciente en un período menor o igual que 12 horas, pero particularmente menor o igual que 6 horas.

En consecuencia, en otro aspecto, la presente invención se refiere a un medicamento que comprende un compuesto de acuerdo con la invención o una sal fisiológicamente aceptable de este compuesto y al menos una de las sustancias activas descritas anteriormente como agentes de combinación, opcionalmente junto con uno o más vehículos y/o diluyentes inertes.

El compuesto según la invención, o sal o solvato fisiológicamente aceptable de este, y la sustancia activa adicional que se va a combinar con este pueden estar presentes ambos juntos en una formulación, por ejemplo, un comprimido o cápsula, una formulación lista para su uso en una jeringa o dispositivo adecuado, un liofilizado que puede reconstituirse antes de la inyección o por separado en dos formulaciones idénticas o diferentes, por ejemplo, los llamados kits por partes.

Leyendas de las figuras

Figura 1

Fluctuaciones de la glucosa en sangre después de la administración subcutánea de GCG o SEQ. ID 5 en ratas anestesiadas terminalmente. Los valores son medias ± EEM, n=6-8 ratas.

Figura 2

5 Fluctuaciones de la glucosa en sangre después de la administración subcutánea de GCG o SEQ. ID 6 en ratas anestesiadas terminalmente. Los valores son medias ± EEM, n=6-8 ratas.

Figura 3

Efecto de la SEQ. ID 5 y glucagón humano subcutáneos en la glucosa en sangre en perros Figura 4

10 Efecto de la SEQ. ID 5 subcutánea e intramuscular en la glucosa en sangre en perros Figura 5

Efecto de la SEQ. ID 5 con respecto a la SEQ. ID 6 en la glucosa en sangre en perros Métodos

Las abreviaturas empleadas son las siguientes:

2F-Phe 2-fluorofenilalanina

AA aminoácido

cAMP monofosfato de adenosina cíclica

Boc terc-butiloxicarbonilo

BOP hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio

BSA seroalbúmina bovina

tBu butilo terciario

Chg Ciclohexilglicina

CTC Cloruro de 2-clorotritilo

DIC N,N'-diisopropilcarbodiimida

DIPEA N,N-diisopropiletilamina

DMEM Medio de Eagle modificado de Dulbecco

DMF dimetilformamida

EDT etanoditiol

FBS suero fetal bovino

Fmoc fluorenilmetiloxicarbonilo

GCG Glucagón

GLP-1 Péptido relacionado con el glucagón 1

HATU Hexafluorofosfato 2-(1 H-7-azabenzotriazol-1 -il)-1,1,3,3-tetrametiluronio

HBSS Disolución salina equilibrada de Hanks

HBTU Hexafluorofosfato de 2-(1 H-benzotriazol-1 -il)-1,1,3,3-tetrametil-uronio

HEPES Ácido 2-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il]etanosulfónico

HOBt 1-hidroxibenzotriazol

HOSu

N-hidroxisuccinimida

HPLC

Cromatografía líquida de alto rendimiento

HTRF

Fluorescencia homogénea de resolución tardía

IBMX

3-isobutil-1 -metilxantina

Nal

1 -Naftilalanina

PBS

disolución salina tamponada con fosfato

PEG

polietilenglicol

Phg

Fenilglicina

RP-HPLC

Cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa

s.c.

subcutáneo/a

TFA

ácido trifluoroacético

Tle

terc-leucina

TRIS

Tris(hidroximetil)-aminometano

Trt

tritilo

Tza

4-Tiazolilalanina

UV

ultravioleta

Síntesis general de compuestos peptídicos Materiales:

Para la síntesis peptídica en fase sólida se usó resina Fmoc-Ser(tBu)-Wang precargada. La resina Fmoc-Ser(tBu)- 5 Wang se adquirió a Novabiochem con una carga de 0,3 mmol/g.

Los aminoácidos naturales protegidos con Fmoc se adquirieron a Protein Technologies Inc., Senn Chemicals, Merck Biosciences, Novabiochem, Iris Biotech o Bachem.

Los siguientes aminoácidos estándares se usaron a lo largo de las síntesis: Fmoc-L-Ala-OH, Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-L-Asn(Trt)-OH, Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-L-Gln(Trt)-OH, Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-L- 10 His(Trt)-OH, Fmoc-L-Ile-OH, Fmoc-L-Leu-OH, Fmoc-L-Lys(Boc)-OH, Fmoc-L-Phe-OH, Fmoc-L-Pro-OH, Fmoc-L- Ser(tBu)-OH, Fmoc-L-Thr(tBu)-OH, Fmoc-L-Trp(Boc)-OH, Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-L-Val-OH.

Además, los siguientes aminoácidos especiales se adquirieron a los mismos proveedores mencionados anteriormente: Fmoc-L-Tza-OH, Fmoc-L-Phg-OH, Fmoc-L-Nal-OH, Fmoc-L-2F-Phe-OH, Fmoc-L-Chg-OH, Fmoc-L- Tle-OH.

15 Las síntesis peptídicas en fase sólida se llevaron a cabo en un Prelude Peptide Synthesizer (Protein Technologies Inc) utilizando química de Fmoc estándar y activación con HBTU/DIPEA. Se usó DMF como disolvente. Desprotección: 20% de piperidina/DMF durante 2 x 2,5 min. Lavados: 7 x DMF. Acoplamiento 2:5:10 200 mM AA/ 500 mM HBTU / 2M DIPeA en DMF. 2 x durante 20 min. Lavados: 5 x DMF.

Todos los péptidos que se habían sintetizado se escindieron de la resina con el cóctel de escisión de King que 20 consistía en 82,5% de TFA, 5% de fenol, 5% de agua, 5% de tioanisol, 2,5% de EDT. A continuación, los péptidos brutos se precipitaron en éter dietílico o diisopropílico, se centrifugaron y se liofilizaron. Los péptidos se analizaron mediante HPLC analítica y se verificaron mediante espectrometría de masas ESI. Los péptidos brutos se purificaron mediante un procedimiento de purificación con RP-HPLC preparativa convencional.

Procedimiento de purificación con HPLC preparativa general:

25 Los péptidos brutos se purificaron en un Ákta Purifier System o en un Jasco semiprep HPLC System. Se usaron columnas de RP-C18-HPLC preparativa de diferentes tamaños y con diferentes velocidades de flujo dependiendo de la cantidad de péptido bruto a purificar. Se emplearon acetonitrilo + 0,1% de TFA (B) y agua + 0,1% de TFA (A) como eluyentes. Las fracciones que contenían producto se recogieron y liofilizaron para obtener el producto purificado, típicamente una sal de TFA.

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Evaluación de la solubilidad y la estabilidad de los derivados de exendina-4:

Antes de la prueba de solubilidad y estabilidad de un lote de péptido, se determinó su contenido. Por lo tanto, se investigaron dos parámetros, su pureza (HPLC-UV) y la cantidad de carga de sal del lote (cromatografía iónica).

Para la prueba de solubilidad, la concentración diana fue 10 mg/mL de compuesto puro. Por lo tanto, se prepararon disoluciones de muestras sólidas en diferentes sistemas tampón con una concentración de 10 mg/mL de compuesto en función del contenido determinado anteriormente. La HPLC-UV se llevó a cabo después de 2 h de agitación suave a partir del sobrenadante, que se obtuvo mediante 20 min de centrifugación a 4000 rpm.

A continuación, se determinó la solubilidad mediante comparación con las áreas pico de UV obtenidas con una disolución concentrada del péptido a una concentración de 2 mg/mL en agua pura o una cantidad variable de acetonitrilo (control óptico de que todo el compuesto estaba disuelto).

Para la prueba de solubilidad, se llevó a cabo la cromatografía analítica con un sistema Waters UPLC en una Waters ACQUiTy UPLC® CSH™ C18 de 1,7 pm (150 x 2,1 mm) a 50°C con una elución en gradiente a una velocidad de flujo de 0,5 mL/min y monitorizada a 210-225 nm. Los gradientes se establecieron como 20% de B (0-3 min) hasta 75% de B (3-23 min) y posteriormente una etapa de lavado a 98% de B (23,5-30,5) y un período de equilibrio (31-37 min a 20% de B). Tampón A = 0,5% de ácido trifluoracético en agua y B = 0,35% de ácido trifluoracético en acetonitrilo. Opcionalmente, la LC se acopló con un espectrómetro de masas Waters LCT Premier ESI-TOF utilizando el modo de ion positivo.

Para la prueba de estabilidad, la concentración diana fue 1,0 mg/mL de compuesto puro en un tampón TRIS de pH 7,3 (50 mM) que contenía m-cresol (30 mM), cloruro de sodio (85 mM) y polisorbato 20 (8 pM). La disolución se almacenó durante 14 días a 50 °C. Después de dicho tiempo, la disolución se analizó mediante UPLC.

Para la prueba de estabilidad, la UPLC se llevó a cabo en un sistema Waters Acquity UPLC H-Class con una columna Waters Acquity UPLC BEH130 C18 de 1,7 pm (2,1 x 100 mm) a 40°C con una elución en gradiente a una velocidad de flujo de 0,5 mL/min y monitorizada a 215 y 280 nm. Los gradientes se establecieron como 10% de B hasta 90% de B en 19,2 min y luego 90% de B durante 0,8 min. Tampón A = 0,1% de ácido fórmico en agua y B = 0,1% de ácido fórmico en acetonitrilo.

Para la determinación de la cantidad de péptido restante, se compararon las áreas pico del compuesto diana a t0 y t14 que resultó en “% de péptido restante”, siguiendo la ecuación

% de péptido restante = [(área pico de péptido t14) X 100]/área pico de péptido tO.

El “% de pureza normalizada” se define mediante el % de pureza relativa en el día 14 en relación con el % de pureza relativa en t0 siguiendo la ecuación

% de pureza normalizada^[(% de pureza relativa t14) x 100)] /% de pureza relativa tO

El % de pureza relativa en t0 se calculó al dividir el área pico del péptido en t0 entre la suma de todas las áreas pico en t0 siguiendo la ecuación

% de pureza relativa tO = [ (área pico tO) X 100] / suma de todas las áreas pico tO

Asimismo, el % de pureza relativa en t14 se calculó al dividir el área pico del péptido en t14 entre la suma de todas las áreas pico en t14 siguiendo la ecuación

% de pureza relativa t14 = [ (área pico t14) X 100] /suma de todas las áreas pico t14

La posible diferencia entre “% de pureza normalizada” y “% de péptido restante” refleja la cantidad de péptido que no permaneció soluble tras las condiciones de estrés.

Este precipitado incluye productos de degradación no solubles, polímeros y/o fibrilos, que se han retirado antes del análisis mediante centrifugación.

Cromatografía aniónica:

Instrumento: Dionex ICS-2000, pre/columna: Ion Pac AG-18 2 x 50 mm (Dionex)/ AS18 2 x 250 mm (Dionex), eluyente: hidróxido de sodio acuoso, flujo: 0,38 mL/min, gradiente: 0-6 min: 22 mM KOH, 6-12 min: 22-28 mM KoH, 12-15 min: 28-50 mM KOH, 15-20 min: 22 mM KOH, supresor: ASRS 300 2 mm, detección: conductividad.

Los ensayos celulares in vitro para la eficacia del receptor de glucagón:

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El agonismo de los compuestos para el receptor respectivo se determinó mediante ensayos funcionales que miden la respuesta de cAMP de líneas celulares HEK-293 que expresan de manera estable el receptor de GLP-1 o glucagón humano.

El contenido de cAMP de las células se determinó usando un kit de Cisbio Corp. (n.° de cat. 62AM4PEC) basado en HTRF (Fluorescencia homogénea de resolución tardía). Para la preparación, se dividieron las células en matraces de cultivo T175 y se cultivaron durante toda la noche hasta casi la confluencia en medio (DMEM / 10% de FBS). A continuación, el medio se retiró y las células se lavaron con PBS que carecía de calcio y magnesio, con posterior tratamiento de proteinasa con accutasa (n.° de cat. de Sigma-Aldrich A6964). Las células desprendidas se lavaron y resuspendieron en tampón de ensayo (1 x HBSS; 20 mM de HEPES, 0,1% de BSA, 2 mM de IBMX) y se determinó la densidad celular. A continuación, se diluyeron hasta 400000 células/ml y alícuotas de 25 gl dispensadas en los pocillos de placas de 96 pocillos. Para la medición, se agregaron 25 gl del compuesto de prueba en el tampón de ensayo a los pocillos y posteriormente se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de la adición de los reactivos de HTRF diluidos en tampón de lisis (componentes del kit), las placas se incubaron durante 1 h y posteriormente se midió la relación de fluorescencia a 665 / 620 nm. La potencia in vitro de los agonistas se cuantificó al determinar las concentraciones que provocaban la activación del 50% de la respuesta máxima (CE50).

Perfil de glucosa en sangre en ratas anestesiadas:

El método pretendía estudiar un compuesto de prueba en el proceso de la glucogenólisis hepática. Las ratas tuvieron acceso libre al alimento hasta el inicio del experimento. Se puede exponer que el aumento de la glucosa en sangre después de la administración de glucagón (GCG) o mimético de GCG y que duró aproximadamente 60 a 90 minutos, fue el resultado de la descomposición del glucógeno hepático inducida por el GCG o el mimético de GCG. El efecto del mimético de GCG sobre la glucogenólisis hepática y el posterior pico hiperglucémico en la sangre se comparó con el efecto obtenido con una inyección de bolo subcutáneo de GCG a una dosis de 30 gg/kg.

Los niveles de glucosa en sangre se sometieron a ensayo en ratas Wistar macho anestesiadas, según se describió anteriormente (Herling et al. Am J Physiol. 1998; 274:G1087-93). Las ratas se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico (60 mg/kg) y quetamina (10 mg/kg) y se traqueotomizaron. La anestesia se mantuvo durante hasta 5 horas mediante infusión subcutánea de pentobarbital sódico (ajustada a la profundidad anestésica del animal individual; aproximadamente 24 mg/kg/h). La temperatura corporal se monitorizó con un termómetro de sonda rectal y la temperatura se mantuvo a 37 °C por medio de una mesa quirúrgica calefaccionada. Las muestras de sangre para el análisis de glucosa (10 gl) se obtuvieron de la punta de la cola cada 15 minutos. Se dejó que se estabilizaran los niveles de glucosa en sangre de las ratas después de la cirugía durante hasta 2 horas. A continuación, se administraron subcutáneamente GCG, como compuesto de referencia, o el compuesto de prueba. Para GCG, se usó una dosis de 30 gg/kg para inducir la glucogenólisis hepática. El compuesto de prueba SEQ. ID 5 se administró en dosis de 10, 20 y 30 gg/kg, y el compuesto de prueba SEQ. ID 6 se administró en dosis de 10 y 30 gg/kg.

Perfil de glucosa en sangre en perros Beagle normoglucémicos:

Los perros Beagle macho normoglucémicos se mantuvieron en ayunas durante toda la noche antes y durante todo el experimento. Los animales se aleatorizaron en grupos de n = 6 por grupo. En el punto de tiempo 0 min, se trató a los animales con dosis simples del compuesto de prueba o glucagón humano natural, como compuesto de referencia. Las disoluciones para inyección se prepararon poco tiempo antes del experimento. El compuesto de prueba se administró como una inyección simple a través de tres vías diferentes (s.c., i.m. e i.v.) a dosis de 1-100 gg/kg. La extracción de muestras de sangre se llevó a cabo consecutivamente a través de punción en la vena yugular (vena jugularis) antes de la administración del fármaco (= 0 min) y hasta 240 min después. La glucosa en sangre se determinó enzimáticamente (método de hexocinasa) a partir de sangre entera, la insulina se analizó a partir de plasma K-EDTA con ensayo ELISA específico para perros.

Ejemplos

La invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1:

Síntesis de la SEQ ID NO: 25

La síntesis en fase sólida se llevó a cabo sobre resina Fmoc-Ser(tBu)-Wang precargada. La estrategia de síntesis con Fmoc se aplicó con activación con HBTU/DIPEA. Se usaron en la posición 1 Fmoc-Tza-OH y en la posición 10 Fmoc-Tle-OH en el protocolo de síntesis en fase sólida. El péptido se escindió de la resina con el cóctel de King (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266). El producto bruto se purificó a través de HPLC preparativa en una columna Waters (Sunfire, Prep C18) utilizando un gradiente de acetonitrilo/agua (ambos tampones con 0,1% de TFA).

Finalmente, la masa molecular del péptido purificado se confirmó mediante LC-MS.

Ejemplo 2:

Síntesis de la SEQ ID NO: 24

La síntesis en fase sólida se llevó a cabo sobre resina Fmoc-Ser(tBu)-Wang precargada. La estrategia de síntesis con Fmoc se aplicó con activación con HBTU/DIPEA. Se usaron en la posición 1 Fmoc-Tza-OH y en la posición 10 5 Fmoc-Chg-OH en el protocolo de síntesis en fase sólida. El péptido se escindió de la resina con el cóctel de King (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266). El producto bruto se purificó a través de HPLC preparativa en una columna Waters (Sunfire, Prep C18) utilizando un gradiente de acetonitrilo/agua (ambos tampones con 0,1% de TFA).

Finalmente, la masa molecular del péptido purificado se confirmó mediante LC-MS.

10 Ejemplo 3:

Síntesis de la SEQ ID NO: 5

La síntesis en fase sólida se llevó a cabo sobre resina Fmoc-Ser(tBu)-Wang precargada. La estrategia de síntesis con Fmoc se aplicó con activación con HBTU/DIPEA. Se usó en la posición 1 Fmoc-Tza-OH en el protocolo de síntesis en fase sólida. El péptido se escindió de la resina con el cóctel de King (D. S. King, C. G. Fields, G. B. 15 Fields, Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266). El producto bruto se purificó a través de HPLC preparativa en una columna Waters (Sunfire, Prep C18) utilizando un gradiente de acetonitrilo/agua (ambos tampones con 0,1% de TFA).

Finalmente, la masa molecular del péptido purificado se confirmó mediante LC-MS.

De modo análogo, se sintetizaron los péptidos de SEQ ID NO: 3-36, véase la tabla 2.

20 Tabla 2: lista de péptidos sintetizados y comparación del peso molecular calculado con respecto al encontrado.

SEQ ID

masa calc. masa encontrada

3

4259,68 4259,3

4

4229,66 4229,8

5

4279,67 4279,7

6

4323,73 4323,6

7

4259,68 4259,8

8

4273,71 4273,7

9

4215,63 4216,0

10

4293,70 4295,1

11

4357,80 4358,2

12

4273,71 4272,8

13

4293,70 4293,7

14

4273,71 4274,3

15

4259,68 4259,7

16

4273,71 4273,4

SEQ ID

masa calc. masa encontrada

17

4323,73 4323,4

18

4311,69 4311,3

19

4343,70 4343,3

20

4293,70 4293,5

21

4311,69 4311,4

22

4343,76 4343,4

23

4285,72 4285,2

24

4299,69 4299,0

25

4273,65 4273,0

26

4242,64 4242,5

27

4212,61 4212,5

28

4262,56 4262,2

29

4306,68 4306,6

30

4242,64 4240,1

31

4256,66 4256,5

32

4276,65 4276,2

33

4340,75 4340,2

34

4256,66 4256,6

35

4242,64 4242,5

36

4256,66 4254,1

Ejemplo 4: Estabilidad química y solubilidad

La solubilidad y la estabilidad química de los compuestos peptídicos se evaluaron según se describe en los Métodos. Los resultados se proporcionan en la Tabla 3.

5 Tabla 3: Estabilidad química y solubilidad

SEQ ID

Solubilidad (pH 7,4) [mg/ml] Estabilidad (pH 7,3, 50 °C, 2 w) [% de pureza normalizada] Estabilidad (pH 7,3, 50 °C, 2 w) [% de péptido restante]

2

<0,2 70 n/a

1

>10,0 37 33

3

>10,0 94 92

6

>10,0 92 94

5

>10,0 96 88

9

>10,0 83 70

15

>10,0 86 75

20

>10,0 90 90

23

>10,0 94 92

24

>10,0 95 90

25

>10,0 89 82

Ejemplo 5: Datos in vitro del receptor de GLP-1 y de glucagón

Las potencias de los compuestos peptídicos en los receptores de GLP-1 y de glucagón se determinaron al exponer 5 células que expresaban el receptor de glucagón humano (hGLUC R) y el receptor de GLP-1 humano (hGLP-1 R) a los compuestos indicados a concentraciones crecientes y medir el cAMP formado, según se describió en los Métodos.

Los resultados para los derivados de exendina-4 con actividad en el receptor de GLP-1 humano (hGLP-1 R) y el receptor de glucagón humano (hGLUC R) se muestran en la Tabla 4.

10 Tabla 4: Valores de CE50 de análogos peptídicos de exendina-4 en los receptores de GLP-1 y Glucagón (indicados en pM)

SEQ ID NO

CE50 hGLP-1 R [pM] CE50hGLUC R [pM]

1

0,4 >10000000

2

56,6 1,0

3

44333,3 1,8

4

3300,0 0,7

5

2190,0 0,6

6

9300,0 0,5

SEQ ID NO

CE50 hGLP-1 R [pM] CE50 hGLUCR [pM]

7

4190,0 2,4

8

5800,0 2,2

9

12200,0 2,2

10

45000,0 6,0

11

11700,0 0,9

12

20000,0 1,0

13

32100,0 3,1

14

52900,0 1,2

15

34500,0 2,2

16

19700,0 0,9

17

6940,0 1,0

18

25800,0 3,1

19

6640,0 0,7

20

38900,0 3,8

21

49700,0 1,4

22

8570,0 1,0

23

50700,0 3,5

24

8310,0 0,7

25

23100,0 0,8

Ejemplo 6: Prueba de comparación

Una selección de derivados de exendina-4 que comprenden el aminoácido artificial 4-tiazolilalanina en la posición 1 se ha sometido a prueba en comparación con los compuestos correspondientes que tienen histidina en la posición 1.

5 La histidina en la posición 1 es esencial para la activación del receptor en el glucagón, pero también en muchos péptidos relacionados incluido GLP-1 y exendina-4. Por lo tanto, es sorprendente que el aminoácido artificial 4- tiazolilalanina conduzca a una activación incluso mayor del receptor en comparación con compuestos idénticos que tienen la histidina natural en la posición 1. Además, la activación del receptor de GLP-1 que contrarregula el efecto del glucagón se reduce sorprendentemente mediante la introducción del aminoácido artificial 4-tiazolilalanina. Esto 10 conduce a agonistas del receptor de glucagón incluso más selectivos con una relación de actividad de GCG/GLP-1 más alta. Los compuestos del par de referencia y los valores de CE50 correspondientes en los receptores de GLP-1 y de Glucagón (indicados en pM) se proporcionan en la Tabla 5.

Tabla 5: Comparación de derivados de exendina-4 que comprenden el aminoácido artificial 4-tiazolilalanina en la posición 1 con respecto a derivados de exendina-4 que tienen el aminoácido histidina natural en la posición 1. Los valores de CE50 en los receptores de GLP-1 y de Glucagón se indican en pM.

SEQ. ID NO.

Aminoácido en la posición 1 CE50 hGLP-1 R CE50 hGlucagón-R Relación

2

His 56,6 1,0 57:1

3

Tza 44333,3 1,8 24630: 1

26

His 1240,0 9,4 132: 1

4

Tza 3300,0 0,7 4714: 1

27

His 80,8 1,3 62: 1

5

Tza 2190,0 0,6 3650: 1

28

His 52,4 1,0 52: 1

6

Tza 9300,0 0,5 18600:1

29

His 145,0 0,9 161: 1

7

Tza 4190,0 2,4 1746:1

30

His 1180,0 6,5 182: 1

8

Tza 5800,0 2,2 2636: 1

31

His 941,0 4,1 230: 1

10

Tza 45000,0 6,0 7500: 1

32

His 18700,0 12,0 1558:1

11

Tza 11700,0 0,9 13000:1

5

10

15

20

25

30

SEQ. ID NO.

Aminoácido en la posición 1 CE50 hGLP-1 R CE50 hGlucagón-R Relación

33

His 159,0 1,1 145: 1

12

Tza 20000,0 1,0 20000:1

34

His 363,0 1,4 259: 1

15

Tza 34500,0 2,2 15682:1

35

His 934,0 7,1 132:1

15

Tza 19700,0 0,9 21888:1

36

His 358,5 1,4 256: 1

Ejemplo 7: Efecto de la SEQ. ID 5 y la SEQ. ID 6 en la liberación de glucosa en ratas anestesiadas después de inyección s.c.

Durante el período de pretratamiento de 2 h, la glucosa en sangre se estabilizó a un nivel de aproximadamente 6 mmol/l, que representa los valores normales en ratas alimentadas. El GCG a la dosis de 30 pg/kg provocó una rápida elevación de la glucosa en sangre, que alcanzó su pico después de 30 minutos a niveles de glucosa en sangre de aproximadamente 10 a 11 mmol/l. El compuesto de prueba SEQ. ID 5 a las dosis de 10, 20 y 30 pg/kg subcutáneamente provocó un aumento dependiente de la dosis de la glucosa en sangre, que alcanzó su pico 30, 45 y 90 min después de la inyección, respectivamente. La dosis de 20 pg/kg de SEQ. ID 5 demostró una forma de fluctuación de la glucosa en sangre casi comparable con los 30 pg/kg de GCG (Fig. 1).

El compuesto de prueba SEQ. ID 6 a las dosis de 10 y 30 pg/kg provocó un aumento dependiente de la dosis de la glucosa en sangre, que alcanzó su pico 30 y 60 min después de la inyección, respectivamente. La dosis de 10 pg/kg de SEQ. ID 6 demostró una fluctuación de la glucosa en sangre más intensa en comparación con los 30 pg/kg de GCG (Fig. 2).

Ejemplo 8: Efecto de la SEQ. ID 5 y la SEQ. ID 6 en la liberación de glucosa en perros Beagle normoglucémicos después de inyección s.c.

En animales y humanos, la inyección de glucagón conduce a una rápida acumulación de glucógeno hepático que inmediatamente se descompone en glucosa. Esto resulta en un aumento agudo de la glucosa en sangre, pero de corta duración. En perros Beagle normoglucémicos, la inyección subcutánea (s.c.) de 1 pg/kg de glucagón humano conduce a un rápido aumento de la glucosa en sangre de 2-3 mmol/L en 15 min. La inyección s.c. de la SEQ. ID 5 y la SEQ. ID 6 imitó el efecto del glucagón humano en la glucosa en sangre. En el perro, la respuesta de la glucosa total neta (cambio en la AUC(0-240 min) de la glucosa en sangre con respecto al valor inicial) después de la inyección de 1 pg/kg s.c. de la SEQ. ID 5 fue similar a la de 1 pg/kg s.c. de glucagón humano. La respuesta de la glucosa en sangre a la SEQ. ID 5 aumentó dependiendo de la dosis hasta que se alcanzó un pico de aumento de ~3,5-4 mmol/L con 10 pg/kg s.c. (Fig. 3). Más allá de esta dosis más alta, la SEQ. ID 5 s.c. no resultó en una fluctuación de la glucosa más alta. En el perro, el inicio de la respuesta de la glucosa a la SEQ. ID NO. 5 fue similar a la del glucagón humano, mientras que la duración de la respuesta de la glucosa fue ligeramente más extensa. La SEQ. ID 5 exhibió actividad en todas las vías parenterales dado que las inyecciones subcutáneas, intramusculares e intravenosas resultaron en un aumento rápido y transitorio de la glucosa en sangre. No hubo diferencia en la actividad y el perfil de tiempo-acción en la glucosa en sangre entre las inyecciones subcutánea e intramuscular de la SEQ. ID 5 en perros (Fig. 4).

Con respecto a la inducción de una respuesta de glucosa en sangre, la SEQ. ID 5 y la SEQ. ID 6 tuvieron una actividad similar en perros normoglucémicos (Fig. 5).

Tabla 10: Secuencias

SEQ. ID

secuencia

1

H-G-E-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-M-E-E-E-A-V-R-L-F-l-E-W-L-K-N-G- G-P-S-S-G-A-P-P-P-S-NH2

2

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Y-L-D-S-R-R-A-Q-D-F-V-Q-W-L-M-N-T- OH

3

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-D-F-l'E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

4

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- G-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

5

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- G-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

6

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

7

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-V-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

8

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-I-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A-T- G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

9

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-V-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- G-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

10

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Phg-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

SEQ. ID

secuencia

11

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-1Nal-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-l-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

12

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

13

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-F-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-D-F-I-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

14

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-I-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

15

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-D-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

16

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

17

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

18

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-2FPhe-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-D-F-l-E-W- L-L-A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

19

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-1Nal-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-D-F-l-E-W-L- L-A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

20

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Chg-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-O-F-I-E-W-L- L-A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

SEQ. ID

secuencia

21

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-2FPhe-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-D-F-l-E-W-L- L-A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

22

Tza-S-G-G-T-F-T-S-D-1Nal-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-D-F-l-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

23

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Chg-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-D-F-I-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

24

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Chg-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L- L-A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

25

Tza-S-Q-G-T-F-T-S-D-Tle-S-K-Q-NIe-E-S-R-R-A-Q-E-F-l-E-W-L-L- A-T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

26

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-D-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

27

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-l-E-W-L-L-A-G- G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

28

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-l-E-W-L-L-A-G- G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

29

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-Y-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-l-E-W-L-L-A-T- G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

30

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-V-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-l-E-W-L-L-A-T- G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

SEQ. ID

secuencia

31

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-I-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I'E-W-L-L-A-T-G- P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

32

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-Phg-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

33

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-1 Nal-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

34

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-E-F-l-E-W-L-L-A-T- G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

35

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-L-E-S-R-R-A-Q-D-F-l-E-W-L-L-A-T- G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

36

H-S-Q-G-T-F-T-S-D-L-S-K-Q-Nle-E-S-R-R-A-Q-E-F-I-E-W-L-L-A- T-G-P-E-S-G-A-P-P-P-S-OH

LISTADO DE SECUENCIAS

5

10

15

20

25

30

35

<110> Sanofi

<120> Derivados de exendina-4 como agonistas selectivos del receptor de glucagón <130> DE2014/055 <160> 36

<170> PatentIn versión 3.5

<210> 1

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Heloderma suspectum <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (39)..(39)

< 223> Extremo C amidado <400> 1

imagen7

<210>2

< 211> 29

< 212> PRT

< 213> Homo sapiens

<400>2

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25

<210>3

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

5

10

15

20

25

30

<400>3

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210>4

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400>4

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210>5

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400>5

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210>6

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial

5

10

15

20

25

30

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400>6

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210>7

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400>7

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210>8

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400>8

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp lie Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210>9 < 211> 39

5

10

15

20

25

30

35

40

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial

<220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400>9

imagen8

<210> 10

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial

<220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-Fenilglicina (Phg)

<400> 10

imagen9

<210> 11

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial

<220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-1 -Naftilalanina (1 NaI)

5

10

15

20

25

30

35

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 12

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400> 12

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 13

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

<400> 13

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Phe Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 14

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial

5

10

15

20

25

30

35

<220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

<400> 14

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp lie Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 15

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<400> 15

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 16

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

5

10

15

20

25

30

35

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 17

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

<400> 17

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 18

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-2-Fluorofenilglicina (2FPhg) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

5

10

15

20

25

30

35

40

<400> 18

Xaa Ser Gln Gly

1

Arg Arg Ala Gln

20

Ser Gly Ala Pro

35

<210> 19

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial

<220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-1 -Naftilalanina (1 Nal)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

<400> 19

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 20

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-Ciclohexilglicina (Chg) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 5 10 15

Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 25 30

Pro Pro Ser

5

10

15

20

25

30

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 21

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-2-Fluorofenilglicina (2FPhg)

<400> 21

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 22

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-1 -Naftilalanina (1 Nal)

5

10

15

20

25

30

35

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 23

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-Ciclohexilglicina (Chg)

<400> 23

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 24

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-Ciclohexilglicina (Chg) <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

5

10

15

20

25

30

35

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 25

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (1)..(1)

< 223> Xaa es L-4-Tiazolilalanina (Tza)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-terc-Leucina (Tle)

<220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

<400> 25

Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 26

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

<400> 26

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

5

10

15

20

25

30

<210> 27

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <400> 27

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 28

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <400> 28

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 29

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <400> 29

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 30

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial

5

10

15

20

25

30

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 31

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <400> 31

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp lie Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 32

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-Fenilglicina (Phg)

<400> 32

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 33

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (10)..(10)

< 223> Xaa es L-1 -Naftilalanina (1 Nal)

5

10

15

20

25

30

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 34

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <400> 34

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Glu Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35

<210> 35

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <400> 35

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ser 15 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe lie Glu Trp Leu Leu Ala Thr Gly Pro Glu 20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 36

< 211> 39

< 212> PRT

< 213> Secuencia artificial <220>

< 223> Polipéptido artificial <220>

< 221 > MOD_RES

< 222> (14)..(14)

< 223> Xaa es L-Norleucina (Nle)

Claims (23)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto peptídico que tiene la fórmula (I):

   Tza-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-Lys-Gln-X14-Glu-Ser-Arg-

   Arg-Ala-Gln-X21-Phe-lle-Glu-Trp-Leu-Leu-Ala-X29-Gly-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-

   Pro-Pro-Pro-Ser-R1

   (I)

   X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, Phe, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2- fluorofenilalanina, ciclohexilglicina y terc-leucina,

   X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle

   X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

   X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

   R1 representa OH o NH2

   o una sal o solvato de este.
2. 2. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el grupo del extremo C R1 es OH.
3. 3. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, en donde,

   X10 representa Leu,

   X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

   X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

   R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
4. 4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde,

   X10 representa Tyr,

   X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

   X21 representa Glu,

   X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

   R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
5. 5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde,

   X10 representa 1-naftilalanina,

   X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

   X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

   X29 representa Thr,

   R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
6. 6. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde,

   5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   X10 representa ciclohexilglicina,

   X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

   X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

   X29 representa Thr,

   R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
7. 7. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde,

   X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, fenilglicina, 1 -naftilalanina, 2- fluorofenilalanina y ciclohexilglicina,

   X14 representa Leu,

   X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

   X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

   R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
8. 8. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde,

   X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Ile, Phe, 1 -naftilalanina, ciclohexilglicina y terc- leucina

   X14 representa Nle,

   X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

   X29 representa Thr,

   R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
9. 9. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde,

   X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu, Phe, 1 -naftilalanina, 2-fluorofenilalanina y ciclohexilglicina,

   X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle X21 representa Asp,

   X29 representa Thr,

   R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
10. 10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, en donde,

    X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, fenilglicina, 1 -naftilalanina, ciclohexilglicina y terc-leucina,

    X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

    X21 representa Glu,

    X29 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Gly y Thr,

    R1 representa OH, o una sal o solvato de este.

    5

    10

    15

    20

    25

    30

    35

    40
11. 11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, en donde,

    X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu, Val, Ile, Phe, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2- fluorofenilalanina, ciclohexilglicina y terc-leucina,

    X14 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Leu y Nle,

    X21 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Asp y Glu,

    X29 representa Thr,

    R1 representa OH,

    o una sal o solvato de este.
12. 12. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, en donde,

    X10 representa un residuo aminoacídico seleccionado de Tyr, Leu y Val,

    X14 representa Leu,

    X21 representa Glu,

    X29 representa Gly,

    R1 representa OH, o una sal o solvato de este.
13. 13. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, seleccionado de los compuestos de las SEQ. ID NO: 3 - 25, así como sales o solvatos de estos.
14. 14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, seleccionado de los compuestos de las SEQ. ID NO: 3, 5, 6, 9, 15, 20, 23, 24 y 25, así como sales o solvatos de estos.
15. 15. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso en medicina, particularmente, en medicina humana.
16. 16. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso según la reivindicación 15, que está

    presente como un agente activo en una composición farmacéutica junto con al menos un vehículo

    farmacéuticamente aceptable.
17. 17. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso según la reivindicación 15 o 16, junto con al menos un agente terapéuticamente activo adicional, en donde el agente terapéuticamente activo adicional se selecciona de la serie de insulina y derivados de insulina seleccionados de Glargina/Lantus®, Glulisina/Apidra®, Detemir/Levemir®, Lispro/Humalog®/Liprolog®, Degludec/DegludecPlus, Asparta, insulina basal, LY2963016, insulina PEGilada Lispro (LY2605541), Humulin®, SuliXen®, NN1045, Insulina plus Symlin®, insulinas de acción rápida y acción corta seleccionadas de Linjeta™, PH20, NN1218 y HinsBet®, insulinas en hidrogel (APC-002), oral, inhalable, transdérmica y sublingual seleccionadas de Exubera®, Nasulin®, Afrezza®, Tregopil, TPM 02, Capsulin™, Oral-lyn®, insulina oral Cobalamin®, ORMD-0801, NN1953, y VIAtab™, y HM12460A (insulina LaPS),

    GLP-1, análogos de GLP-1 y agonistas del receptor de GLP-1 seleccionados de

    Lixisenatida/AVE0010/ZP10/Lyxumia®, Exenatida/exendina-4/Byetta®/Bydureon®/ITCA 650, Liraglutida/Victoza®, Semaglutida, Taspoglutida, Albiglutida, Dulaglutida, rExendina-4, CJC-1134-PC, PB-1023, TtP 054, HM-112600, CM-3, GLP-1 Eligen, ORMD-0901, NN-9924, Nodexen, Viador-GLP-1, CVX-096, ZYOG-1, ZYD-1, MAR-701, ZP- 2929, ZP-3022, CAM-2036, DA-15864, ARI-2651, ARI-2255, Exenatida-XTEN y Glucagón-XTEN, MAR709, HM1525A,

    agonistas triples del receptor de GLP1/receptor de glucagón/ receptor de GIP,

    combinaciones de agonistas del receptor de GLP1 con derivados de insulina seleccionados de IDegLira y Lixilan,

    agonistas dobles del receptor de GLP1/glucagón,

    agonistas dobles del receptor de GLP1/GIP,

    agonistas del receptor de glucagón, y

    agonistas o antagonistas del receptor de GIP.
18. 18. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso para tratar la hipoglucemia, aumentar los niveles de glucosa en sangre o para su uso en tratamiento complementario con insulina.
19. 19. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso para reducir y mantener el peso corporal, como antídoto para la intoxicación con bloqueantes beta y bloqueantes de canales de calcio y para inducir

    5 la relajación temporal del sistema gastrointestinal para usos radiológicos.
20. 20. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso para el tratamiento o la prevención de la hipoglucemia, la diabetes mellitus tipo 2 y para su uso para retrasar la progresión de la prediabetes a la diabetes tipo 2.
21. 21. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto según una cualquiera de las 10 reivindicaciones 1-14 o una sal o solvato fisiológicamente aceptable de cualquiera de estos.
22. 22. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso en un método para tratar la hipoglucemia, en donde una cantidad eficaz de al menos un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 14 es para su administración con una cantidad eficaz de al menos un otro compuesto útil para tratar la hipoglucemia, y en donde dicha administración es particularmente una administración simultánea, una

    15 administración separada o una administración secuencial.
23. 23. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para su uso según la reivindicación 22, en donde dicha administración es una administración parenteral.

    4^

    en

    glucosa en sangre (mmol/l)

    12

    8

    /

    At

    O Glucagón

    30 |jg/kg s.c. SEQ.ID5

    • 10 pg/kg s.c. ■ 20 pg/kg s.c. 30 pg/kg s.c.

    I. I I I . t I

    -12Q . .-€0. . . 0 . . .60. . .120. .

    imagen1

    minutos después del tratamiento

    imagen2

    .180

    -Vi

    glucosa en sangre (mmol/l)

    12

    10

    8

    6

    4

    2

    O

    o Glucagón

    • SEQ.ID6 ■ SEQ.ID6

    imagen3

    3 0 pg/kg s .c. 3 0 p g/k g s .c . 1 0 p g/k g s .c .

    -12Q . .-60. . . O . . .60. . .120. minutos después del tratamiento

    .180

    imagen4

    4^

    CD

    imagen5

    imagen6