CN101670096B - 含有艾塞那肽的药物制剂 - Google Patents

Abstract

含有艾塞那肽的药物制剂。本发明提供了一种适合多用给药的稳定药物制剂，包含艾塞那肽、能够维持制剂在水溶液状态下pH值为3.0-7.0的缓冲液、药学上可接受的辅料和防腐剂，所述的辅料可任选自葡萄糖、蔗糖、甲硫氨酸、甘露醇或甘氨酸的一种或几种，所述的防腐剂选自苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾或三氯叔丁醇。本发明的优点在于通过添加一些能被人体接受的成分，增强了艾塞那肽的理化与生物学活性的稳定，从而制备出一种适合于临床使用，特别是注射使用的制剂。

Description

含有艾塞那肽的药物制剂

发明领域

本发明涉及一种艾塞那肽的稳定药物制剂，该药物制剂可用于糖尿病患者的治疗。

技术背景

艾塞那肽(exenatide或exendin-4)最先从大毒蜥(Heloderm suspectum)的唾液分泌物中分离出来(Eng，J.等，J.Biol.Chem.，265：20259-62，1990；Eng，J.等，J.Biol.Chem.，267：7402-05，1992)，这是一种39个氨基酸的多肽，其氨基酸序列与类胰高血糖素glucagon-like peptide-1(GLP-1)有约53％的同源性(Goke等，J.Biol.Chem.，268：19650-55，1993)，其氨基酸序列结构如下：

His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-GIy-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser

药理学研究发现，艾塞那肽具有和GLP-1相似的作用，即能刺激胰腺β细胞分泌胰岛素。艾塞那肽可以在体外作用于某些分泌胰岛素的细胞上的GLP-1受体、作用于来自豚鼠胰脏的散布腺泡细胞和作用于来自胃的壁细胞；还报道所述肽刺激促生长素抑制素释放并且抑制分离的胃中的胃泌素释放(Goke等，J.Biol.Chem.，268：19650-55，1993；Schepp等，Eur.J.Pharmacol.，69：183-91，1994；Eissele等，Life Sci.，55：629-34，1994)。艾塞那肽明显比GLP-1的作用时间长(Eng，J.exendin-4对db/db小鼠的高血糖症的延长效应(Prolonged effect ofexendin-4on hyperglycemia of db/db mice)，Diabeteds1996年5月；45(增刊2)：152A(摘要554))。

艾塞那肽可以和人类GLP-1受体结合并且激活该受体，从而促进胰岛素的合成和分泌。艾塞那肽是一种新的分子实体，它与其他的降糖药在结构上毫无相关性。虽然艾塞那肽呈血糖依赖性促进胰岛素的分泌，但是它和胰岛素也没有结构相关性，并且临床上也没有证据表明它可以作为胰岛素的替代品。

艾塞那肽在人类和大鼠的基础受体系统中诱导cAMP产生的作用与GLP-1基本相同，最显著的受体结合部位在胰腺胰岛部位。在灌流大鼠中发现艾塞那肽可以促进第一时相胰岛素分泌和第二时相胰岛素分泌。细胞水平的研究表明艾塞那肽在胰岛素和生长抑素不存在的情况下可以阻断胰高血糖素的作用。这就提示了艾塞那肽在单细胞水平也有作用。艾塞那肽还可以剂量依赖性地减慢胃排空速度，急性艾塞那肽注射可以剂量依赖性的减少摄食量至约75％(在动物或人类均有此现象)。在体内实验中，艾塞那肽能通过多种作用机制改善禁食和餐后的血糖浓度，适合用于2型糖尿病患者的长期治疗。该药物由美国Amylin公司和礼来公司合作开发，FDA已批准其上市，商品名Byetta，用于对单独使用二甲双胍、磺脲类药物或二甲双胍和磺脲类药物联用治疗未能获得良好控制的2型糖尿病患者的辅助治疗。

目前国内外报道的有关艾塞那肽(exendin-4)的专利文献有很多，兹列举如下：

 

专利号	申请日期	申请人	专利名称	内容简介
					us5424286	1993.5.24	Eng John	exendin-3and exendin-4polypeptides，andpharmaceuticalcompositions comprisingsame	包含exendin-3和exendin-4多肽的药物组合物，以及该组合物在治疗糖尿病和高血糖疾病中的应用。
us5846937	1997.3.3	Ontario Inc	Method of using exendinand GLP-1to affect thecentral nervous system	exendin-3，exendin-4，GLP-1或GLP-1受体激动剂作用于哺乳动物，使之产生镇静或抗焦虑作用。
					us6506724	1999.6.1	AmylinPharmaceuticals，Inc.	Use of exendins andagonists thereof for thetreatment of gestationaldiabetes mellitus	exendin以及exendin激动剂在治疗gestational diabetesmellitus(糖尿病的一种)的应用

 

us6703359	2000.9.22	AmylinPharmaceuticals，Inc.	Inotropic and diureticeffects of exendin andGLP-1	exendin，GLP-1及其类似物在利尿以及在增加心脏收缩中的应用
					us6723530	1998.2.5	AmylinPharmaceuticals，Inc.	Polynucleotides encodingproexendin，and methodsand uses thereof	重组合成表达proexendin多肽专利
us6858576	1997.8.8	AmylinPharmaceuticals，Inc.	Methods for regulatinggastrointestinal motility	应用exendin激动剂调节胃肠道动力的方法
					CN97197091.2	1997.6.5	曼海姆泊灵格股份公司	Exendin类似物，其制备方法及含有它们的药物制剂	本发明涉及新的可用于治疗糖尿病Exendin类似物，其制备方法及含有它们的药物制剂。
CN01112856.9	2001.5.10	上海华谊生物技术有限公司	促胰岛素分泌肽衍生物	本发明涉及治疗II型糖尿病的促进胰岛素分泌的多肽化合物Exendin—4的衍生物和其适用于药用的盐
					CN00809516.7	2000.4.28	AmylinPharmaceuticals，Inc.	修饰的exendin和exendin激动剂	本发明提供具有与例如一个或更多个聚乙二醇聚合物连接的exendin或exendin激动剂的新型修饰的exendin或exendin激动剂及其有关制剂和剂量和给药方法。这些修饰的exendin或exendin激动剂、组合物和方法可用于治疗糖尿病和通过降低血浆葡萄糖或延迟和/或减慢胃排空或抑制进食量而受益的多种病症。

 

CN02l11564.8	2002.4.29	上海华谊生物技术有限公司	促胰岛素分泌肽Exendin4类似物及其盐的新用途	本发明公开了一种促胰岛素分泌肽Exendin4类似物及其盐的新用途，具体来说，公开了促胰岛素分泌肽Exendin4类似物及其盐在制备治疗II型糖尿病的药物中的应用。
					CN00804847.9	2000.1.14	AmylinPharmaceuticals，Inc.	新型exendin激动剂制剂及其给药方法	提供新型exendin和exendin激动剂化合物制剂及其剂量和给药方法。这些组合物和方法可用于治疗糖尿病和得益于降低血浆血糖或延迟和/或减慢胃排空或抑制摄取食物的病症。
CN02111563.x	2002.4.29	上海复星生物医药研究院有限公司	一种exendin-4多肽的制备方法	重组表达生产exendin-4多肽的生产方法专利
					CN00805017.1	2000.1.14	AmylinPharmaceuticals，Inc.	抑制胰高血糖素的方法	本发明提供使用一种exendin、一种exendin激动剂或者一种exendin或exendin激动剂与一个或多个聚乙二醇聚合物连接的修饰的exendin或exendin激动剂的方法，例如用于降低被试者胰高血糖素水平和/或抑制被试者胰高血糖素的分泌。

艾塞那肽作为一种多肽类药物，其稳定性无法与常规化学药物相比，其理化、生物学性质在长期贮存时会因受到多种环境因素的影响而发生变化。例如对温度，氧和紫外线高度敏感。由于这些因素的作用，可能发生多种物理或化学变化，例如吸附，聚合和氧化。因此如果贮存期间艾塞那肽的稳定性不能保证的话，会导致给药剂量的变化从而影响疗效。因此，研究出一种能稳定保存艾塞那肽，并适合于实际临床使用的药物制剂是极其有意义的。本发明涉及的就是此方面内容。

发明内容

本发明的目的是提出一种含有艾塞那肽的稳定药剂，其在室温条件下具有良好的稳定性，具有更好的安全性。

本研究的发明者通过大量的处方筛选和稳定性实验，意外地获得了一种稳定的药用组合物。与现有的技术方案相比，该组合物极大的降低了器壁对艾塞那肽的吸附。而且，发明者通过稳定性实验还意外发现，根据本发明所制备的艾塞那肽注射液，与现有的技术方案相比较，具有更好的热稳定性，可以在室温下保存较长时间而不影响其含量和质量，从而有利于糖尿病患者的日常使用，特别是旅行期间的携带和使用。

本发明提供了一种适合多用给药的稳定药物制剂，包含艾塞那肽、能够维持制剂在水溶液状态下pH值为3.0-7.0的缓冲液、药学上可接受的辅料和防腐剂，所述的辅料可任选自葡萄糖、蔗糖、甲硫氨酸、甘露醇或甘氨酸的一种或几种，所述的防腐剂选自苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾或三氯叔丁醇。本发明的优点在于通过添加一些能被人体接受的成分，增强了艾塞那肽的理化与生物学活性的稳定，从而制备出一种适合于临床使用，特别是注射使用的制剂。这种制剂可以防止有效成分(艾塞那肽)由于容器吸附，或因降解、氧化等多种因素而导致失效，从而方便运输、长期保存和临床使用。

上述药物制剂中，艾塞那肽在液体制剂中的浓度为10-500μg/ml，优选50-300μg/ml，最优选为250μg/ml。

上述药物制剂中，适用于本发明的缓冲液为能够维持制剂在水溶液状态下pH值为3.0-7.0的任何一种缓冲液，可任选自磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、巴比妥钠缓冲液或柠檬酸缓冲液，浓度为5-100mmol/L，优选10-30mmol/L，最优选20mmol/L；缓冲液的pH范围在3.0-7.0，优选4.0-6.0，最优选pH为4.5。其中，缓冲液优选磷酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或醋酸-醋酸钠缓冲液，最优选的是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，浓度为5-100mmol/L，优选10-30mmol/L，最优选的浓度为20mmol/L，溶液的pH范围在3.0-7.0之间，优选4.0-6.0，最优选pH为4.5。

上述药物制剂中，药学上可接受的辅料可选用甲硫氨酸、葡萄糖、蔗糖、甘露醇或甘氨酸的一种或几种，优选甲硫氨酸或甘氨酸，最优选甲硫氨酸。甲硫氨酸(或甘氨酸)的浓度(重量/溶液体积，w/v)为1％-6％，优选为2％-4％，最优选为3％。

上述药物制剂中，防腐剂可选用苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾或三氯叔丁醇，浓度(重量/溶液体积，w/v)为0.005％—5.0％。防腐剂优选苯甲酸钠，含量(重量/溶液体积，w/v)为0.005％—5.0％，优选0.2％—2.0％，最优选0.5％。

根据需要，还可将上述的药物制剂制备为冻干粉针，冻干前的液体制剂基本上为等张和/或等渗的，因此冻干后加入适量的注射用水能够还原形成等张或等渗溶液。

适用于本发明的缓冲液为能够维持制剂在水溶液状态下pH值为3.0-7.0的任何一种缓冲液，如磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、巴比妥钠缓冲液和柠檬酸缓冲液等。本发明优选的缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，pH值优选4.0-6.0，最优选为4.5。为了考察不同pH条件下制剂的稳定性，按如下条件进行了不同pH条件对制剂稳定性的影响实验：

通过筛选不同pH值条件下的艾塞那肽稳定性，方法如下：称取艾塞那肽，加水溶解成250μg/ml的艾塞那肽溶液，将该溶液分为4份，分别用不同pH的缓冲液调pH至3.5、4.5、5.5、6.5，然后放入40℃烘箱中加速试验十天，用HPLC检测方法观察产品降解情况，见表1。

①pH＝3.5(醋酸-醋酸钠缓冲液)，20mmol/L

②pH＝4.5(磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液)，20mmol/L

③pH＝5.5(磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液)，20mmol/L

④pH＝6.5(磷酸缓冲液)，20mmol/L

RP-HPLC法检测艾塞那肽注射液的方法如下：

仪器：色谱柱：Sepax C₄4.6×150mm(Sepax Technologies，Inc.)

试剂：磷酸缓冲液(PBS)：称取KH₂PO₄11.58g，H₃PO₄(85％)10.9g，加水定容到1000ml。

流动相A：PBS468g与乙腈26g混合，过滤脱气

流动相B：PBS536g与乙腈338g混合，过滤脱气

操作方法：

流速1ml/min；检测波长：214nm；柱温：55℃

 

Time/min	A％	B％
			0	35	65
6	28	72
			33	28	72
34	35	65
			45	35	65

含量测定：

将标准品用注射用水稀释成不同浓度的溶液，用上述高效液相的操作方法进行检测，不同浓度的标准品得到不同的峰面积，然后用Excel软件作标准曲线，得到计算公式，以备样品定量用。

样品含量计算：取样品用上述高效液相的操作方法进行检测，将得到的峰面积代入到标准曲线的计算公式，就可得到样品的含量值。

有关物质计算：以杂质峰面积占总积分面积的含量计算。

表1：不同pH值条件下样品的稳定性

 

样品pH	①	②	③	④
					起始样有关物质	1.13％	0.98％	1.09％	1.09％
10天后有关物质	9.74％	1.05％	3.37％	10.78％
					10天后溶液pH	3.34	4.55	5.61	6.82

结果：艾塞那肽在pH4.5以下或5.5以上都易降解，而在4.5、5.5时较稳定，两者以pH4.5为最佳。本发明优选磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，是因为柠檬酸本身具有杀菌作用，对于制剂的长期贮存具有一定的作用，另外柠檬酸还具有止痛作用，可以减轻本制剂因pH较酸在注射时带来的痛疼。

多肽药物注射剂组合物中，合适的稳定剂对于多肽药物的稳定是极其重要的(Wang W，Martin-Moe S，Pan C etal.Stabilization of a polypeptide in non-aqueoussolvents.Int J Pharm.2007Sep15)为了达到本发明的目的，发明者还研究了大量不同制剂辅料对艾塞那肽稳定性的影响。一般适合多肽制剂应用的辅料有糖类、氨基酸类、表面活性剂、醇类、金属螯合剂等。本发明选择了一些适合于人体应用的辅料进行了筛选。

适用于本发明的糖类可选择多种单糖，寡糖和多糖及磷脂和核苷酸衍生物。典型例子如下：三价和更高的蔗糖醇，例如甘油，，赤藓醇，阿糖醇，木糖醇，山梨醇和甘露糖醇；酸性糖例如葡萄糖醛酸，艾杜糖醛酸，神经氨糖酸，半乳糖醛酸，葡萄糖酮酸，甘露糖醛酸，透明质酸及其盐，硫酸软骨素及其盐，还有肝素，菊粉，几丁质及其衍生物，糊精，平均分子量为5000—150000的葡聚糖和海藻酸及其盐。这些糖类，可以单独添加，也可以联合使用。

适用于本发明的多肽、氨基酸及衍生物可以从下述一组物质中选择而来的：甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸、色氨酸、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等以及它们的衍生物。它们可以单独添加，也可以联合使用。

适用于本发明的非离子表面活性剂，例如脱水山梨醇脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯(如脱水山梨糖醇辛酸单酯，脱水山梨糖醇月桂酸单酯和脱水山梨糖醇棕榈酸单酯)，聚甘油脂肪酸酯(例如甘油辛酸单酯，甘油肉豆蔻酸单脂霜和甘油硬脂肪酸单酯)，聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯甘油脂肪酸酯，聚氧乙烯乙二醇脂肪酸酯，聚氧乙烯烷基醚，聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚，聚氧乙烯苯醚，聚氧乙基化硬蓖麻油，聚氧乙基化蜂蜡衍生物，聚氧乙烯化羊毛脂衍生物或者聚氧乙烯脂肪酸酰胺，阳离子表面活性剂是烷基硫酸盐(如有一个C₁₀—C₁₈烷基的烷基硫酸盐)，聚乙烯烷基醚硫酸盐，磺基琥珀酸酯盐，天然表面活性剂是：卵磷脂，甘油磷脂，神经鞘磷脂，蔗糖脂肪酸酯等。当然这些表面活性剂既可以单独使用，可以混合用。

为了研究在加有不同辅料添加剂条件下艾塞那肽的稳定性，进行了以下实验，方法如下：先配制不同的辅料溶液，然后称取艾塞那肽，将其加入到不同的辅料溶液中溶解成约250μg/ml的艾塞那肽制剂溶液，每个不同辅料组中都含有20mM pH4.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，并且都用NaOH或HCl调pH至4.5。配制完后放入40℃烘箱中进行加速试验，每周取样用HPLC检测，观察产品降解情况，具体结果见下表。

表2：辅料组成表

以下为不同配方稳定性实验结果：

(1)样品的澄明度：表3显示样品在40℃条件下存放4周后没有浑浊现象产生。

表3：样品在40℃条件下存放4周澄明度检测结果

(2)RP-HPLC检测

利用RP-HPLC的方法，每周取样检测。表4、5显示样品在40℃加速条件下，只有含有甘露醇与甲硫氨酸的样品的有关物质与肽含量没有发生大的变化，其它样品的有关物质都有较大的增加，肽含量明显降低。

表4：样品在40℃条件下存放4周，每一周用RP-HPLC检测有关物质

表5：样品在40℃条件下存放4周，每周用RP-HPLC检测肽含量

综合以上实验结果可得出以下结论：糖类(包括葡萄糖、蔗糖、甘露醇)的添加，对艾塞那肽能起一定的稳定作用；表面活性剂不能减少其有关物质的增加；EDTA对制剂的稳定也没有什么影响；而氨基酸类中甘氨酸或甲硫氨酸能对对制品的稳定性起作用，特别是甲硫氨酸能对制剂有最好的保护作用，甲硫氨酸在制剂中起着抗氧化剂和等渗调节剂双重作用，可以减少有关物质的增加，并能使艾塞那肽在制剂中的肽含量保持稳定，因此最终优选甲硫氨酸作为艾塞那肽制剂的辅料。由于考虑到注射给药制剂的渗透压应与人体生理渗透压相近，从而选择3％(W/V)的浓度作为制剂中甲硫氨酸最优用量。

为使含有艾塞那肽的药物制剂适合多次给药，在药物制剂中还需要加入合适的防腐剂。防腐剂的加入可以延长药用制剂的保存时间，但同时也对制剂中的艾塞那肽的稳定性产生了不良影响。由于艾塞那肽在制剂中是极微量的(10-500

μg/ml)，这么低的浓度，任何一个因素的变化，例如pH、温度、辅料或者防腐剂的变化都将会使艾塞那肽在制剂中产生明显变化(肽含量有较大减少，有关物质大量增加)，从而影响制剂的稳定。要选择合适的防腐剂，必须要考虑制剂的最佳pH范围、特定浓度范围的艾塞那肽和辅料等相关因素，由于这些多因素影响的复杂性和不确定性，使得要寻找到适合加入到本发明药物制剂中的防腐剂并不是一件容易的事。发明人经过大量筛选，发现苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾或三氯叔丁醇是比较理想的防腐剂。苯甲酸在常温下微溶于水，在空气(特别是热空气)中微挥发，有吸湿性，大约常温下0.34g/100ml；但溶于热水；也溶于乙醇、氯仿和非挥发性油。苯甲酸钠和苯甲酸的性状和防腐性能都差不多。苯甲酸钠易溶于水(常温)53.0g/100ml左右；苯甲酸钠也是酸性防腐剂，在碱性介质中无杀菌、抑菌作用。三氯叔丁醇在水中的溶解度较低，并且在碱性溶液中不稳定，在酸性溶液中较稳定。其防腐作用在酸性条件效果较好。由于适合艾塞那肽的pH范围也为酸性条件，因此这几种防腐剂正好适合，考虑到苯甲酸钠的添加较方便，因此以添加苯甲酸钠作为制剂的防腐剂为最佳。优选的含量(重量/溶液体积，w/v)为0.005％一5.0％，更优选0.2％—2.0％，最优选0.5％。

通过以上的研究，发明者认为如下的药剂组合是理想的：10-500μg/ml的艾塞那肽，优选的为30-300μg/ml，最佳浓度为250μg/ml；1％-6％(w/v)浓度的甲硫氨酸、甘氨酸、葡萄糖、蔗糖或甘露醇，优选2％-4％浓度的甲硫氨酸或甘氨酸，最优选甲硫氨酸浓度为3％。所选缓冲液可为磷酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液或醋酸-醋酸钠缓冲液，优选的是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，浓度为5-100mmol/L，最优选的浓度为20mmol/L。溶液的pH范围在3.0-7.0之间，优选为4.0-6.0，最优的是4.5。防腐剂可选自苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾或三氯叔丁醇，优选苯甲酸钠。防腐剂的含量(重量/溶液体积，w/v)为0.005％—5.0％，更优选0.2％—2.0％，最优选0.5％。

优选的，艾塞那肽在液体制剂中浓度为10-500μg/ml，甲硫氨酸的浓度(重量/溶液体积，w/v)为1-6％，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的浓度为5-100mmol/L，苯甲酸钠的浓度(重量/溶液体积，w/v)为0.005％—5％，溶液的pH为3.0-7.0。

更优选的，该药物制剂中，艾塞那肽在液体制剂中浓度为50-300μg/ml，甲硫氨酸的浓度(重量/溶液体积，w/v)为2-4％，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的浓度为10-30mmol/L，苯甲酸钠的浓度(重量/溶液体积，w/v)为0.2％—2.0％，溶液的pH为4.0-6.0。

最优选的，该药物制剂中，艾塞那肽在液体制剂中浓度为250μg/ml，甲硫氨酸的浓度(重量/溶液体积，w/v)为3％，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的浓度为20mmol/L，苯甲酸钠的浓度(重量/溶液体积，w/v)为0.5％，溶液的pH为4.5。

上述的药物制剂可用于对单独使用二甲双胍、磺脲类药物或二甲双胍和磺脲类药物联用治疗未能获得良好控制的2型糖尿病患者的辅助治疗，临床使用时为皮下注射。一种优选的临床给药方案为每天两次皮下注射，每次5-10μg的艾塞那肽。

根据本发明制备的艾塞那肽注射液制剂与现有的技术方案(美国专利US6902744和US7115569)进行了不同条件下稳定性的比较。从实例一、二中可看出，本发明的制剂处方在室温条件下对保持艾塞那肽在制剂中的稳定性明显优于根据美国专利(US6902744和US7115569)已开发上市的

制剂处方。

在本发明药物组合的基础上改变其中组分的浓度或加入其他物质，但对提高艾塞那肽稳定性没有显著改变，仍被视为本发明的一部分。

为了进一步阐明本发明，提供了下列例子，这些例子仅仅是为了进一步说明本发明，并不意味着作为一种限制。

具体实施方式

实例1：防腐剂的筛选

为了研究在加有不同防腐剂条件下艾塞那肽的稳定性，进行了以下实验，方法如下：先配制不同防腐剂溶液，每组溶液中都含有3％甲硫氨酸与20mM pH4.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，然后称取艾塞那肽，将其加入到不同的防腐剂溶液中溶解成约250μg/ml的艾塞那肽制剂溶液，再用NaOH或HCl调pH至4.5。配制完后放入25℃恒温箱中进行加速试验，每2周取样用HPLC检测，观察样品降解情况，具体结果见下表。

Byetta处方：250μg/ml的艾塞那肽+2.2mg/ml间甲酚+4％甘露醇+30mM醋酸缓冲液

表6：不同防腐剂的添加

表7：在25度条件下定期反相检测的有关物质含量

从上述结果可得，山梨酸和对羟基苯甲酸甲酯不适合用于艾塞那肽制剂的防腐剂，其存在引起了艾塞那肽自身的降解。而苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾和三氯叔丁醇在处方中的防腐作用要好于间甲酚。其中以苯甲酸钠的添加较方便(因为苯甲酸和三氯叔丁醇的水溶性不好)，因此以添加苯甲酸钠作为制剂的防腐剂为最佳。

实例2：不同浓度的苯甲酸钠的筛选

先配制含有不同浓度苯甲酸钠溶液，每组溶液中都含有3％甲硫氨酸与20mM pH4.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，然后称取艾塞那肽，将其加入到不同的防腐剂溶液中溶解成约250μg/ml的艾塞那肽制剂溶液，再用NaOH或HCl调pH至4.5。配制完后放入25℃恒温箱中进行加速试验，每2周取样用HPLC检测，观察样品降解情况，具体结果见下表。

表8：定期反相检测有关物的含量

从上述结果可得：0.005％—5％(尤其是0.2％-2.0％)的苯甲酸钠具有较好的防腐效果，但是考虑到防腐剂一般对人体会有一定的毒害作用，因此采用0.5％的苯甲酸为最佳选择。

Claims (22)

1.一种含有艾塞那肽的药物制剂，其特征在于：所述的药物制剂含有艾塞那肽、能够维持制剂在水溶液状态下pH值为3.0-7.0的缓冲液、药学上可接受的辅料以及防腐剂，所述的辅料选自甲硫氨酸或甘氨酸，质量浓度为1％-6％；所述的防腐剂选自质量浓度为0.1％的苯甲酸、0.005％-5.0％的苯甲酸钠、1％的山梨酸钾或0.4％的三氯叔丁醇。

2.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于：所述的缓冲液任选自磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、巴比妥钠缓冲液或柠檬酸缓冲液，浓度为5-100mmol/L，pH范围在3.0-7.0。

3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于：所述的缓冲液浓度为10-30mmol/L，pH范围在4.0-6.0。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于：所述的缓冲液浓度为20mmol/L，pH值为在4.5。

5.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于：所述的缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，浓度为5-100mmol/L，pH范围在3.0-7.0。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于：所述的缓冲液浓度为10-30mmol/L，pH值为4.0-6.0。

7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于：所述的缓冲液浓度为20mmol/L，pH范围在4.5。

8.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料为甲硫氨酸或甘氨酸，质量浓度为2％-4％。

9.根据权利要求8所述的药物制剂，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料为甲硫氨酸或甘氨酸，质量浓度为3％。

10.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于：艾塞那肽在液体制剂中的浓度为10-500μg/ml。

11.根据权利要求10所述的药物制剂，其特征在于：艾塞那肽在液体制剂中的浓度为50-300μg/ml。

12.根据权利要求11所述的药物制剂，其特征在于：艾塞那肽在液体制剂中的浓度为250μg/ml。

13.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于：所述的防腐剂为苯甲酸钠，质量浓度为0.005％-5.0％。

14.根据权利要求13所述的药物制剂，其特征在于：所述的防腐剂为苯甲酸钠，质量浓度为0.2％-2.0％。

15.根据权利要求13所述的药物制剂，其特征在于：所述的防腐剂为苯甲酸钠，质量浓度为0.5％。

16.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于：艾塞那肽在液体制剂中浓度为10-500μg/ml，甲硫氨酸的质量浓度为1％-6％，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的浓度为5-100mmol/L，苯甲酸钠的质量浓度为0.005％-5.0％，溶液的pH为3.0-7.0。

17.根据权利要求16所述的药物制剂，其特征在于：艾塞那肽在液体制剂中浓度为50-300μg/ml，甲硫氨酸的质量浓度为2％-4％，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的浓度为10-30mmol/L，苯甲酸钠的质量浓度为0.2％-2.0％，溶液的pH为4.0-6.0。

18.根据权利要求17所述的药物制剂，其特征在于：艾塞那肽在液体制剂中浓度为250μg/ml，甲硫氨酸的质量浓度为3％，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的浓度为20mmol/L，苯甲酸钠的质量浓度为0.5％，溶液的pH为4.5。

19.根据权利要求1-18任一项所述的药物制剂，其特征在于：所述药物制剂制备为冻干粉针。

20.艾塞那肽在制备权利要求1-18任一项所述的药物制剂的用途，所述药物制剂用于治疗2型糖尿病。

21.根据权利要求20所述的艾塞那肽在制备药物制剂的用途，其特征在于：所述的药用制剂为皮下注射。

22.根据权利要求21所述的艾塞那肽在制备药物制剂的用途，其特征在于：所述的药用制剂为皮下注射，每天两次，每次5-10μg艾塞那肽。