CN104352430A - 重组艾塞那肽液体制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种重组艾塞那肽液体制剂，含有下述组分：重组艾塞那肽250μg/ml～500μg/ml；磷酸缓冲液10mmol/L～100mmol/L；甘露醇2.5％(重量/溶液体积)；苯甲酸钠0.25％(重量/溶液体积)；pH为3.5～6.5。本发明的重组艾塞那肽液体制剂在低温和常温下都具有良好的稳定性，可长期储存。

Description

重组艾塞那肽液体制剂

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，具体涉及一种含有重组艾塞那肽的药物组合物。

背景技术

艾塞那肽(Exendin-4，降血糖药)注射液是首个在美国获准上市用于治疗II型糖尿病的肠促胰岛素分泌肽，是一个由39个氨基酸组成的多肽，能有效地控制II型糖尿病患者的血糖。艾塞那肽的作用机制包括促胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、增加β细胞质量、减缓胃排空和抑制食欲等。艾塞那肽可以通过化学合成或基因重组的方法获得。

艾塞那肽注射液已上市产品百泌达(Byetta)，使用醋酸缓冲液，pH4.5，以间甲酚为抑菌剂。中国专利CN 101444618B公开了一种艾塞那肽制剂工艺，其采用甲硫氨酸为增强艾塞那肽稳定性的辅料。中国专利申请CN 102100906A公开了一种艾塞那肽制剂的工艺方法，其使用的保护剂为聚山梨酯80、卵磷脂、普郎尼克F68、人血白蛋白中的一种或其任意两种或两种以上的组合，这种保护剂也就是能增强艾塞那肽稳定性的辅料。

作为生物大分子制剂，如何提高艾塞纳肽液体制剂的稳定性一直是本领域中需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组艾塞那肽液体制剂，通过优化药物辅料成分和配方，获得稳定性更好的制剂。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种重组艾塞那肽液体制剂，其特征在于，含有下述组分：

重组艾塞那肽250μg/ml～500μg/ml

磷酸缓冲液10mmol/L～100mmol/L

甘露醇2.5％(重量/溶液体积)

苯甲酸钠0.25％(重量/溶液体积)

pH为3.5～6.5。

优选的液体制剂pH为4.5～6.0，再优选pH为6.0，优选磷酸缓冲液浓度为50mmol/L～60mmol/L，重组艾塞那肽在液体制剂中的浓度为250μg/ml。

所述液体制剂优选为注射液。

本发明的重组艾塞那肽液体制剂在低温和常温下都具有良好的稳定性，可长期储存。本发明的液体制剂更接近于人体自然状态下的pH值，患者使用时酸痛感少，增加患者用药的顺从性；液体制剂中没有使用合成或天然高分子材料作为辅料，避免了这些分子引入人体后，人体需要较长时间才能将它们清除。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明重组艾塞那肽的制备方法进行详细描述。所用的所有实验试剂和仪器设备，如无特别说明均为普通市售。

重组艾塞那肽：重组艾塞那肽是利用基因重组技术，将艾塞那肽基因或含有艾塞那肽的融合蛋白基因与质粒整合得到表达载体，然后将表达载体转化到某种宿主细胞中，通过培养宿主细胞并对宿主细胞进行诱导，宿主细胞将表达出艾塞那肽或含有艾塞那肽的融合蛋白，再通过分离纯化等手段，可以得到高纯度的艾塞那肽。如参考文献1～4分别介绍了制备重组艾塞那肽工艺方法，熟悉基因重组领域的技术人员，根据文献方法，可以制备得到重组艾塞那肽。

1、刘延杰，林鲁霞，宋长征，季虹，荣海钦，Exendin一4在大肠杆菌中的串联表达、纯化及活性鉴定，生物技术，2011年，21(5)。

2、张红绪，贾孟，周庆峰，张怡，李成伟，exendin-4表达载体构建及其在大肠杆菌中分泌表达，河南师范大学学报(自然科学版)，2009年，37(2)。

3、张红绪，张胎，周庆峰，贾孟，李成伟，Exendin一4真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达，中国药房，2009年，2O(22)。

4、胡娟，重组exendin-4的克隆、表达与纯化，中国协和医科大学硕士学位论文，2007年。

实施例1：处方筛选实验一(缓冲液浓度为30mmol/L)

按表1中各处方的规定，配制各处方。配制后各处方溶液统一置25℃和4℃条件下，分别于第第5周、第10周取样，使用反相HPLC进行纯度测定。处方中艾塞那肽纯度是否能维持较高水平是筛选制剂处方的依据。反相色谱条件为：检测波长215nm，流速1ml/min，进样量20μl，流动相A(乙腈：0.1％TFA＝3：1)，流动相B(0.1％TFA)，使用梯度洗脱：B 65％-20％0-20min；20％-65％20-21min；65％21-27min。艾塞那肽原料在配制成各溶液之前，其纯度为99.15％。各处方测定结果见表2，其中艾塞那肽纯度越高，说明该处方稳定性越好。

表1缓冲液浓度定为30mmol/L，进行处方筛选

表2实施例1各处方稳定性检测结果

可以看出，处方13～15，即使用磷酸缓冲体系，以2.5％的甘露醇为稳定剂，0.25％苯甲酸钠为抑菌剂，当艾塞那肽浓度为0.25mg/ml时，所配制的制剂稳定性较好，于25℃存放10周后，艾塞那肽纯度维持在96％以上，于4℃存放10周后，艾塞那肽纯度维持在97％以上。

实施例2，处方筛选实验二(缓冲液浓度为80mmol/L)

按表3中各处方的规定，配制各处方。配制后各处方溶液统一置25℃和4℃条件下，分别于第5周、第10周取样，使用反相HPLC进行纯度测定。处方中艾塞那肽纯度是否能维持较高水平是筛选制剂处方的依据。反相色谱条件为：检测波长215nm，流速1ml/min，进样量20μl，流动相A(乙腈：0.1％TFA＝3：1)，流动相B(0.1％TFA)，使用梯度洗脱：B 65％-20％0-20min；20％-65％20-21min；65％21-27min。艾塞那肽原料在配制成各溶液之前，其纯度为99.15％。各处方测定结果见表4，其中艾塞那肽纯度越高，说明该处方稳定性越好。

表3缓冲液浓度定为80mmol/L，进行处方筛选

表4实施例2各处方稳定性检测结果

可以看出，处方39～41，即使用磷酸缓冲体系，以2.5％的甘露醇为稳定剂，0.25％苯甲酸钠为抑菌剂，当艾塞那肽浓度为0.25mg/ml时，所配制的制剂稳定性较好，于25℃存放10周后，艾塞那肽纯度维持在96％以上，于4℃存放10周后，艾塞那肽纯度维持在97％以上。

实施例3，处方的进一步优化筛选

通过在实施例1和实施例2，确定了制剂中艾塞那肽浓度为0.25mg/ml，使用磷酸缓冲液作为制剂的缓冲体系，所得制剂的稳定性明显高于其它缓冲体系。本实施例在前两个实施例的基础上，进一步明确最佳缓冲液的浓度和pH值。按表5中各处方的规定，配制各处方。配制后各处方溶液统一置25℃和4℃条件下，分别于第第5周、第10周取样，使用反相HPLC进行纯度测定。处方中艾塞那肽纯度是否能维持较高水平是筛选制剂处方的依据。反相色谱条件为：检测波长215nm，流速1ml/min，进样量20μl，流动相A(乙腈：0.1％TFA＝3：1)，流动相B(0.1％TFA)，使用梯度洗脱：B 65％-20％0-20min；20％-65％20-21min；65％21-27min。艾塞那肽原料在配制成各溶液之前，其纯度为99.15％。各处方测定结果见表6，其中艾塞那肽纯度越高，说明该处方稳定性越好。

表5对磷酸缓冲液体系进一步优化筛选表

表6实施例3各处方稳定性检测结果

可以看出，当磷酸缓冲液浓度为50mmol/L～60mmol/L时，pH值为4.5～6.0时，所得制剂，不论在4℃还是25℃，稳定性都很好。

尤其是当磷酸缓冲液浓度为50mmol/L～60mmol/L时，pH值为6.0时，所得制剂，不论在4℃还是25℃，稳定性最好

本发明不限于以上实施方式，本领域技术人员在本发明基础上可以做成改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (6)

1.一种重组艾塞那肽液体制剂，其特征在于，含有下述组分： 

重组艾塞那肽250μg/ml～500μg/ml； 

磷酸缓冲液10mmol/L～100mmol/L； 

甘露醇2.5％(重量/溶液体积)； 

苯甲酸钠0.25％(重量/溶液体积)； 

pH为3.5～6.5。 

2.权利要求1所述的重组艾塞那肽液体制剂，其特征在于所述制剂的pH为4.5～6.0。 

3.权利要求2所述的重组艾塞那肽液体制剂，其特征在于所述制剂的pH为6.0。 

4.权利要求1所述的重组艾塞那肽液体制剂制剂，其特征在于所述磷酸缓冲液浓度为50mmol/L～60mmol/L。 

5.权利要求1所述的重组艾塞那肽液体制剂，其特征在于所述的重组艾塞那肽在液体制剂中的浓度为250μg/ml。 

6.权利要求1～5任一项所述的重组艾塞那肽液体制剂，其特征在于所述液体制剂为注射液。