ES2292362B1

ES2292362B1 - Utilizacion de los derivados del acido para-cumarico o para-hidroxic inamico en composiciones cosmeticas o dermatologicas.

Info

Publication number: ES2292362B1
Application number: ES200602836A
Authority: ES
Inventors: Sabrina Okombi; Delphine Rival; Ahcene Boumendjel; Anne-Marie Mariotte; Eric J.L. Perrier
Original assignee: Universite Joseph Fourier Grenoble 1; Engelhard Lyon SA
Current assignee: Universite Joseph Fourier Grenoble 1; BASF Beauty Care Solutions France SAS
Priority date: 2005-11-08
Filing date: 2006-11-08
Publication date: 2009-08-07
Anticipated expiration: 2026-11-08
Also published as: FR2892923B1; US9089499B2; FR2892923A1; US20110237551A1; KR101390061B1; DE102006052963A1; JP2007131622A; GB2465703B; US20070183996A1; US8481593B2; GB2431876B; JP5562513B2; GB0622038D0; GB2431876A; KR20070049582A; GB2465703A; ES2292362A1; GB201002692D0; US20130272983A1

Abstract

Utilización de los derivados del ácido para-cumárico o pa- ra-hidroxicinámico en composiciones cosméticas o dermatológicas.

La invención se relaciona con la utilización de los derivados del ácido para-cumárico o para-hidroxicinámico en composiciones cosméticas o dermatológicas.

La invención se relaciona especialmente con la utilización de al menos un compuesto derivado del ácido para-cumárico de la fórmula general (I) siguiente:

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donde especialmente Z representa un oxígeno o un grupo -NH- y X e Y son idénticos y representan cada uno un grupo CH o CH_{2}, como principio activo que tiene una ac-

tividad despigmentante, anti-radicales y/o antiinflamatoria.

La invención se relaciona igualmente con la utilización de los compuestos anteriores para efectuar un cuidado cosmético o la preparación de una composición farmacéutica, especialmente para despigmentar una zona de la piel y tener una actividad anti-radicales y/o antiinflamatoria.

Description

Utilización de los derivados del ácido para-cumárico o para-hidroxicinámico en composiciones cosméticas o dermatológicas.

La presente invención se relaciona esencialmente con la utilización de al menos un derivado del ácido p-cumárico como agente cosmético o para la fabricación de una composición farmacéutica, especialmente dermatológica, con actividad despigmentante o con efecto inhibidor de la melanogénesis y/o con actividad anti-radicales y/o antiinflamatoria.

La invención cubre igualmente composiciones cosméticas o composiciones farmacéuticas, especialmente dermatológicas, así obtenidas, con actividad despigmentante o con efecto inhibidor de la melanogénesis y/o con actividad anti-radicales y/o antiinflamatoria.

La invención cubre aún un procedimiento de cuidado cosmético o un procedimiento de tratamiento terapéutico de despigmentación que utiliza derivados del ácido p-cumárico como agentes activos frente a la despigmentación.

La invención cubre aún un procedimiento de cuidado cosmético o un procedimiento de tratamiento terapéutico para obtener un efecto anti-radicales y/o antiinflamatorio utilizando derivados del ácido p-cumárico antes citados.

Estado de la técnica

Para luchar contra las radiaciones solares, la piel posee células diferenciadas particularmente adaptadas a esta función: los melanocitos. En el curso de un procedimiento complejo, la melanogénesis, éstos fabrican un pigmento obscuro, la melanina, que tiene por efecto proteger las estructuras cutáneas y aumentar el tiempo necesario para contraer un eritema solar. Sin embargo, no todas las melaninas son protectoras y existe en particular una forma de melanina, llamada feomelanina, que es extremadamente fototóxica. Capaz como todas las melaninas de reaccionar con ciertas formas de radicales libres, provoca la formación de radicales libres aún más tóxicos, susceptibles de causar daños irreversibles sobre el material genético de los queratinocitos. Por otra parte, ciertos trastornos ligados a una disfunción de la unidad de melanización son susceptibles de provocar una hiperpigmentación a veces particularmente poco estética.

Así, la utilización de inhibidores de la síntesis de melanina es particularmente interesante en cosmetología, no sólo para aplicaciones en las que se busca una verdadera despigmentación, como en el caso del blanqueamiento de piel muy pigmentada o de la inhibición de la hiperpigmentación en ciertos aspectos poco estéticos, por ejemplo, pero también para aplicaciones que aspiran a aclarar la tez, a dar luminosidad a la piel y brillo a los tejidos de superficie. Esta inhibición de la síntesis de melanina puede ser también particularmente interesante en el marco del tratamiento terapéutico para tratar una verdadera patología.

Los ácidos para-cumárico o para-hidroxicinámico han sido ya descritos como inhibidores de la producción de melanina en numerosos trabajos. No obstante, estas substancias no permiten obtener efectos inhibidores de la síntesis de melanina significativos. Esta actividad demasiado baja no permite obtener efectos suficientemente potentes y estas substancias son, pues, muy poco utilizadas en aplicaciones cosméticas o farmacéuticas por vía tópica que permitan luchar eficazmente contra las pigmentaciones desagradables.

El estado de la técnica menciona, en particular, la utilización de la vitamina C (o sus derivados) o del ácido cójico (o sus derivados) como inhibidores de la tirosinasa; sin embargo, estas moléculas son o bien citotóxicas a la concentración utilizada, o bien poco eficaces. En particular, es conocida la utilización del ácido ferúlico o del ácido cafeico como agente despigmentante en composiciones cosméticas. Sin embargo, estas composiciones no dan una entera satisfacción desde el punto de vista de la eficacia de la acción despigmentante.

Fines de la invención

Así, la presente invención tiene esencialmente por objeto resolver el problema técnico, consistente en disponer de un agente despigmentante más activo que los habitualmente utilizados, como, por ejemplo, el ácido cafeico o el ácido ferúlico.

La presente invención tiene igualmente como objetivo disponer de composiciones que utilicen agentes despigmentantes y de métodos de cuidados cosméticos y/o de tratamiento farmacéutico que utilicen estos agentes despigmentantes, así como la utilización de estos agentes despigmentantes para ejercer una actividad anti-radicales y/o antiinflamatoria.

La presente invención tiene igualmente por objeto proporcionar composiciones cuyos compuestos activos sean extractos de vegetales.

La presente invención tiene igualmente por objeto proporcionar composiciones aplicables por vía tópica.

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La presente invención tiene igualmente por objeto proporcionar agentes despigmentantes que permitan luchar contra la hiperpigmentación de la piel, especialmente con un fin estético, principalmente cuando la piel presenta al menos una zona localizada hiperpigmentada.

La presente invención tiene como objeto resolver los problemas técnicos antes mencionados de manera segura, fiable y especialmente evitando los efectos secundarios indeseables, particularmente en el ser humano, por ejemplo disminuyendo la citotoxicidad de los agentes activos utilizados.

Descripción de la invención

Los inventores han resuelto este problema sintetizando nuevos derivados químicos del ácido para-cumárico y en particular del ácido cafeico o del ácido ferúlico, incluso derivados híbridos de estas dos moléculas en ciertos casos. El efecto inhibidor de la síntesis de melanina de las moléculas as descritas es extremadamente fuerte, el perfil toxicológico de estas moléculas es perfecto para aplicaciones cosméticas y dermofarmacéuticas y la incorporación de estas substancias en formulaciones cosméticas o farmacéuticas es posible sin que se haya encontrado ningún problema importante. Estas substancias son, pues, del todo convenientes en el marco de aplicaciones cosméticas y farmacéuticas.

Por otra parte, comparando el efecto despigmentante de las substancias así obtenidas, que son especialmente derivados del ácido para-cumárico injertados sobre derivados de tiramina, de dopamina o de tirosol, con el efecto de los compuestos derivados del ácido para-cumárico, como el ácido cafeico o el ácido ferúlico, en mezcla con la tiramina, la dopamina o el tirosol, los inventores han constatado de manera totalmente sorprendente que los compuestos de la presente invención tienen una actividad muy superior en relación a dicha mezcla.

Así, la invención se relaciona con la utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto derivado del ácido para-cumárico de la fórmula general (I) siguiente:

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donde:

Z representa un oxígeno o un grupo -NH-;

X e Y son idénticos y representan cada uno un grupo CH (cis o trans) o CH_{2};

n es un número, preferiblemente un número entero, que varía de 1 a 12;

Ra y Rb son idénticos o diferentes, preferiblemente idénticos, y representan un átomo de hidrógeno; un grupo acilo lineal o ramificado, preferiblemente C_{1-12}; un alquilo lineal o ramificado, saturado o no, preferiblemente C_{1-12}; un grupo sulfonilo (SO_{3}H) salificado o no; o un grupo fosfonato (PO_{3}H_{2}) salificado o no; pudiendo estar ORa y/o ORb en presencia de una base en forma disociada, por ejemplo en forma de O-Na^{+};

R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan independientemente los unos de los otros: un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un átomo de halógeno, una función ácida salificada o no, una función aldehído, una función amida, una función amina (primaria, secundaria o terciaria) en forma básica o salificada, un grupo ciano, un grupo tiol, un grupo nitro, un azúcar (O-heterósido), un grupo alquilato lineal o ramificado preferiblemente C_{1-12}, una cadena de alquilo lineal o ramificada preferiblemente C_{1-12}, una cadena alquenilo lineal o ramificada preferiblemente C_{1-12}, una cadena tioalquilo lineal o ramificada preferiblemente C_{1-12}, una cadena alcoxi lineal o ramificada preferiblemente C_{1-12}, una cadena alqueniloxi preferiblemente C_{1-12}, un grupo sulfato salificado o no, un grupo sulfonilo salificado o no, un grupo fosfonato salificado o no, un grupo fosfato salificado o no o un grupo silanol, donde las cadenas carbonadas preferiblemente C_{1-12} pueden estar substituidas;

como principio activo en una composición cosmética o farmacéutica, ventajosamente aplicada por vía tópica.

Ventajosamente, los compuestos utilizados son los compuestos trans, aunque la invención cubre también los compuestos cis o una mezcla cis/trans, que incluye preferiblemente más compuestos trans.

Descripción detallada de la invención

En lo que sigue, los grupos identificados de forma general (Ra, Rb, R_{1}, R_{2}, etc.) se refieren a cualquier fórmula que incluya dichos grupos y especialmente a la fórmula general I. Así, todas las combinaciones que puedan ser efectuadas a partir de los modos de realización ventajosos quedan cubiertas por la presente invención.

Ventajosamente, la presente invención se relaciona con la utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto derivado del ácido para-cumárico de fórmula general (I) tal como se ha definido anteriormente como agente despigmentante, o como principio activo con actividad anti-radicales o antiinflamatoria, en una composición cosmética.

Ventajosamente, Ra y Rb representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, un grupo acilo lineal o ramificado C_{1-12}, un grupo sulfonilo (SO_{3}H) salificado o no o un grupo fosfonato (PO_{3}H_{2}) salificado o no y preferiblemente un átomo de hidrógeno.

Ventajosamente, se representan derivados preferidos por la fórmula química II, donde los grupos de R_{1} a R_{8}, X, Y, Z y n representan los elementos citados en la fórmula general I:

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Ventajosamente, se representan derivados preferidos por la fórmula química III, donde los grupos R_{2}, R_{3}, R_{6} y R_{7} X, Y, Z y n representan los elementos citados en la fórmula general I:

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Preferiblemente, la invención cubre derivados del ácido para-cumárico, denominados derivados de ácido ferúlico, que responden a la fórmula general I donde:

Ra, Rb, R_{1}, R_{4}, R_{5} y R_{8} representan preferiblemente un hidrógeno;

R_{3} representa preferiblemente un grupo metoxi y R_{2} es un hidrógeno, y

X e Y representan cada uno un grupo CH y n es igual a dos.

Estos derivados pueden ser representados por las fórmulas siguientes (IVa y IVb), donde R_{6} y R_{7} representan los elementos citados en la fórmula general I:

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En las fórmulas precedentes IVa y IVb, R_{6} y R_{7} son preferiblemente hidrógenos, lo que corresponde a los dos derivados descritos para las fórmulas IVa1 y IVb1 siguientes:

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Preferiblemente, los compuestos a los que también concierne esta invención son los derivados del ácido para-cumárico denominados derivados de ácido cafeico, que responden a la fórmula general I donde:

Ra y Rb, R_{1}, R_{2}, R_{4}, R_{5} y R_{8} representan preferiblemente un hidrógeno;

R_{3} representa preferiblemente un hidroxilo y R_{2} es un hidrógeno;

X e Y representan cada uno un CH y n es igual a dos.

Estos derivados están representados por las fórmulas siguientes (Va y Vb), donde R_{6} y R_{7} representan los elementos citados en la fórmula general I:

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En las fórmulas Va y Vb, R_{6} y R_{7} son preferiblemente hidrógenos, lo que corresponde a los dos derivados descritos por las fórmulas Va1 y Vb1 siguientes:

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La invención se relaciona igualmente con los derivados del ácido para-cumárico que responden a la fórmula general I donde:

Los substituyentes Ra, Rb, R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan un hidrógeno y n es preferiblemente igual a dos.

Ventajosamente, R_{1}, R_{4}, R_{5} y R_{8} representan un hidrógeno.

Ventajosamente, los substituyentes R_{2} y R_{3} son seleccionados entre un grupo hidroxilo, eventualmente en forma salificada, o metoxi y un átomo de hidrógeno.

Ventajosamente, los substituyentes R_{6} y R_{7} son seleccionados entre un grupo hidroxilo, eventualmente en forma salificada, o metoxi y un átomo de hidrógeno.

Preferiblemente, n = 2.

Ventajosamente, los substituyentes R_{6} y R_{7} son seleccionados entre un grupo hidroxilo, eventualmente en forma salificada, y un átomo de hidrógeno.

Según un primer modo de realización, los derivados del ácido para-cumárico son derivados de ácido ferúlico donde:

Ra, Rb, R_{1}, R_{2} y R_{4} representan preferiblemente un átomo de hidrógeno;

R_{3} representa preferiblemente un grupo metoxi;

X e Y representan cada uno un grupo CH y n es igual a dos;

pudiendo estar representados estos derivados por las fórmulas siguientes (IIa y IIb):

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donde:

R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son tal como se ha definido anteriormente.

Ventajosamente, en las fórmulas IIa y IIb, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno.

Según un segundo modo de realización, en las fórmulas IIa y IIb, R_{5}, R_{6} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno y R_{7} representa un grupo hidroxilo, lo que corresponde a los dos derivados descritos por las fórmulas siguientes:

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Ventajosamente, los derivados del ácido para-cumárico son derivados de ácido cafeico, donde:

R_{3} representa preferiblemente un grupo hidroxilo, y

X e Y representan cada uno un grupo CH y n es igual a dos;

pudiendo estos derivados estar representados por las fórmulas siguientes (IIIa y IIIb):

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donde:

R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son tales como los definidos anteriormente.

Ventajosamente, en las fórmulas IIIa y IIIb, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno.

Ventajosamente, en las fórmulas IIIa y IIIb, R_{5}, R_{6} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno y R_{7} representa un grupo hidroxilo, lo que corresponde a los dos derivados descritos por las fórmulas IIIa1 y IIIb2 siguientes:

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Ventajosamente, los substituyentes Ra, Rb, R_{1} R_{2}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno,

R_{3} representa un grupo hidroxilo y

n es igual a dos,

pudiendo estos derivados estar representados por las fórmulas siguientes (VIa y VIb), donde X e Y son grupos CH o CH_{2}

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Según un modo de realización ventajoso, se extrae el compuesto de un vegetal, cuyo extracto contiene preferiblemente un compuesto seleccionado entre:

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Es de todo punto ventajoso utilizar, en particular en cosmética, compuestos naturales, en particular procedentes de vegetales, de manera que se garantice a los usuarios la procedencia sana de los compuestos activos utilizados. El experto en la técnica conoce igualmente las diferentes ventajas de utilizar compuestos naturales extraídos de vegetales.

Es ventajoso obtener un extracto de vegetales utilizados como materia prima a partir de un solvente preferiblemente polar, y preferiblemente agua, una mezcla de agua/alcohol o poliol, como una mezcla de agua/glicol o agua/etanol, o un poliol, o un alcohol como el etanol. Se puede utilizar también el acetato de etilo o la acetona o una mezcla cualquiera de los solventes antes citados. El extracto es preferiblemente filtrado y luego secado. Es también posible efectuar la extracción con un calentamiento moderado, como, por ejemplo, a 45ºC. La extracción es efectuada preferiblemente con agitación. Los procedimientos de extracción son bien conocidos por el experto en la técnica. La parte de los vegetales utilizada puede varar en función del extracto que se ha de obtener.

La invención se relaciona, en particular, con la utilización de los compuestos antes citados para ejercer una actividad despigmentante o un efecto inhibidor de la melanogénesis, especialmente por aplicación tópica sobre al menos una zona del tejido cutáneo de un sujeto.

La invención se relaciona, en particular, con la utilización de los compuestos antes citados para disminuir la pigmentación de dicha zona del tejido cutáneo.

La invención se relaciona también con un procedimiento de cuidado cosmético, que consiste en la aplicación tópica de una composición tal como se ha definido anteriormente.

Ventajosamente, el cuidado cosmético permite disminuir la pigmentación de la piel a nivel de la zona de aplicación.

La invención se relaciona además con la formulación de composiciones cosméticas que contienen los compuestos antes mencionados.

La invención se relaciona también con la utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto tal como se ha definido anteriormente para la preparación de una composición farmacéutica destinada a ejercer una actividad despigmentante o un efecto inhibidor de la melanogénesis, especialmente por aplicación tópica sobre al menos una zona del tejido cutáneo de un sujeto que presenta una hiperpigmentación.

La invención se relaciona también con la utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto tal como se ha definido anteriormente para la preparación de una composición cosmética o farmacéutica destinada a ejercer una actividad anti-radicales y/o antiinflamatoria. En efecto, debido a su actividad anti-radicales, los compuestos de la invención pueden reducir la molécula de L-Dopa para frenar oxidación a compuesto cromóforo. Por su fuerte actividad anti-radicales, los compuestos de la invención son compuestos antiinflamatorios: en efecto, los radicales libres generados como consecuencia de un estrés W o de otro tipo inducen la cascada de la inflamación. Ésta es la razón de que compuestos que tienen propiedades anti-radicales inhiban la cascada de la inflamación.

La invención se relaciona, en particular, con los compuestos preferidos siguientes, que son particularmente ejemplificados.

Sin embargo, otros fines, características y ventajas de la invención se le aparecerán claramente al experto en la técnica tras la lectura de la descripción explicativa que hace referencia a los ejemplos que se dan únicamente a título ilustrativo y que no sabrían en modo alguno limitar el alcance de la invención.

Los ejemplos forman parte integrante de la presente invención y cualquier característica que aparezca como nueva con respecto a un estado de la técnica anterior cualquiera a partir de la descripción tomada en su conjunto, incluidos los ejemplos, forma parte integrante de la invención en su función y en su generalidad.

Así, cada ejemplo tiene un alcance general.

Por otra parte, en los ejemplos, todos los porcentajes están dados en peso, salvo indicación en contrario, y la temperatura es expresada en grados Celsius, salvo indicación en contrario, y la presión es la presión atmosférica, salvo indicación en contrario.

Ejemplos I - Derivados de ácido ferúlico (4-hidroxi-3-metoxicinámico) Ejemplo 1 N-trans-feruloildopamina (SO-I-146)

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Se enfría una solución de ácido ferúlico (300 mg, 1,54 mmol) y de trietilamina (1,5 eq., 2,31 mmol) en DMF (3,5 ml) a 3 ó 4ºC con ayuda de un baño de hielo. Se añaden una amina, 3-hidroxitiramina (dopamina) (1 eq., 1,54 mmol), seguida de una solución de BOP, (hexafluorofosfato) de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio (1 eq., 1,54 mmol) en diclorometano (3,5 ml) al medio; se agita el conjunto durante treinta minutos en el baño de hielo y luego durante 20 h a temperatura ambiente. Se detiene entonces la agitación y se evapora el diclorometano a vacío. Se vierten 30 ml de agua en la solución restante y se extrae la mezcla obtenida con acetato de etilo (3 x 75 ml). Se lava sucesivamente la fase orgánica con 100 ml de una solución de HCl 1 N, 100 ml de agua y 100 ml de una solución 1M de bicarbonato de sodio (NaHCO_{3}). Se seca entonces sobre sulfato de sodio y se evapora a sequedad.

Se obtiene el producto en forma de un precipitado blanco tras la purificación por cromatografía en columna de gel de sílice.

Ejemplo 2 N-trans-feruloil-3,4-dimetoxidopamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 1 con ácido ferúlico y 2-(3,4-dimetoxifenil)etilamina en lugar de ácido ferúlico y dopamina; el compuesto obtenido es la N-trans-feruloil-3,4-dimetoxidopamina.

Ejemplo 3 N-transferuloiltiramina

Se aplica el protocolo del ejemplo 1 con ácido ferúlico y tiramina en lugar de ácido ferúlico y dopamina; el compuesto obtenido es la N-trans-feruloiltiramina.

Ejemplo 4 N-trans-feruloil-4-hidroxi-3-metoxifenilmetilamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 1 con ácido ferúlico y 4-hidroxi-3-metoxibencilamina en lugar de ácido ferúlico y dopamina; el compuesto obtenido es la N-trans-feruloil-4-hidroxi-3-metoxifenilmetilamina.

Ejemplo 5 N-dihidroferuloiltiramina

Se aplica el protocolo del ejemplo 1 con ácido dihidroferúlico y tiramina en lugar de ácido ferúlico y dopamina; el compuesto obtenido es la N-dihidroferuloiltiramina.

Ejemplo 6 N-dihidroferuloildopamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 1 con ácido dihidroferúlico y 3-hidroxitiramina en lugar de ácido ferúlico y dopamina; el compuesto obtenido es la N-dihidroferuloildopamina.

Ejemplo 7 Síntesis de un éster del ácido ferúlico: trans-ferulato de 2- (p-hidroxifeniletilo)

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Se solubiliza el ácido ferúlico (4-hidroxi-3-metoxicinámico, 250 mg, 1,28 mmol) en diclorometano (10 ml) y se añade DMAP (dimetilaminopiridina, 157 mg, 1,28 mmol). Después de la solubilización de los dos productos, se añade tirosol (353,7 mg, 2,56 mmol), seguido de EDCI [1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 368 mg, 1,92 mmol]. Se agita la mezcla obtenida durante 20 h a temperatura ambiente. Se diluye entonces el medio de reacción con acetato de etilo (32 ml) y agua (6 ml). Se separa la fase orgánica de la fase acuosa, que se vuelve a extraer con acetato de etilo. Se juntan las fases orgánicas, se secan mediante sulfato de magnesio, se lavan con una solución saturada de NaCl y se evaporan a sequedad. Se obtiene el producto en forma de un precipitado blanco tras cromatografía en columna de gel de sílice utilizando una mezcla de acetato de etilo 5/ciclohexano 5.

Ejemplo 8 Trans-ferulato de 2-(3,4-dihidrosifeniletilo)

Se aplica el protocolo del ejemplo 7 anterior con ácido ferúlico y 3-hidroxitirosol en lugar de ácido ferúlico y tirosol; el compuesto obtenido es el trans-ferulato de 3,4-dihidroxifeniletilo (fórmula IVb2).

II - Derivados de ácido cafeico (3,4-dihidroxicinámico) Ejemplo 9 N-trans-cafeoiltizamina

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Se enfría una solución de ácido cafeico (300 mg, 1,66 mmol) y de trietilamina (1,5 eq., 2,49 mmol) en DMF (3,5 ml) a 4ºC con ayuda de un baño de hielo. Se añade una amina, la tiramina (1 eq., 1,66 mmol), segu: la de una solución de BOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio, 1 eq., 1,66 mmol) en diclorometano (3,5 ml) al medio; se agita el conjunto durante treinta minutos en el baño de hielo y luego durante 20 h a temperatura ambiente. Se detiene entonces la agitación y se evapora el diclorometano a vacío. Se vierten 30 ml de agua en la solución restante y se extrae la mezcla obtenida con acetato de etilo (3x75 ml). Se lava sucesivamente la fase orgánica con 100 ml de una solución de HCl 1N, 100 ml de agua y 100 ml de una solución 1M de bicarbonato de sodio (NaHCO_{3}). Se seca entonces sobre sulfato de sodio y se evapora a sequedad.

Se obtiene el producto en forma de un precipitado blanco tras purificación por cromatografía en columna de gel de sílice.

Ejemplo 10 N-trans-cafeoildopamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 9 con ácido cafeico y 3-hidroxitiramina (dopamina) en lugar de ácido cafeico y tiramina; el compuesto obtenido es la N-trans-cafeoildopamina.

Ejemplo 11 N-trans-cafeoil-4-hidroxi-3-metoxifenilmetilamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 9 con ácido cafeico y 4-hidroxi-3-metoxibencilamina en lugar de ácido cafeico y tiramina; el compuesto obtenido es la N-trans-cafeoil-4-hidroxi-3-metoxifenilmetilamina.

Ejemplo 12 N-trans-cafeoil-3,4-dimetoxidopamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 9 con ácido cafeico y 2-(3,4-dimetoxifenil)etilamina en lugar de ácido cafeico y tiramina; el compuesto obtenido es la N-trans-cafeoil-3,4-dimetoxidopamina.

Ejemplo 13 Dihidrocafeoiltiramina

Se aplica el protocolo del ejemplo 9 con ácido 3-(3,4-dihidroxifenil)propiónico y tiramina en lugar de ácido cafeico y tiramina; el compuesto obtenido es la dihidrocafeoiltiramina.

Ejemplo 14 Síntesis de un éster del ácido cafeico: trans-cafeoato de 2-(4-hidroxifenil)etilo (fórmula IVb1)

Se aplica el protocolo del ejemplo 7 con ácido cafeico y tirosol en lugar de ácido ferúlico y tirosol; el compuesto obtenido es el trans-cafeoato de 2-(4-hidroxifeniletilo) (fórmula IVb1).

Ejemplo 15 Trans-cafeoato de 2-(3,4-dihidroxifenil)etilo (fórmula IVb2)

Se aplica el protocolo del ejemplo 14 anterior con ácido cafeico y 3-hidroxitirosol en lugar de ácido cafeico y tirosol; el compuesto obtenido es el trans-cafevato de 2-(3,4-dihidroxifeniletilo) (fórmula IVb2).

III - Derivados del ácido cumárico (4-hidroxicinámico) Ejemplo 16 N-dihidrocumaroiltiramina

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Se enfría una solución de ácido 3-(4-hidroxifenil)propiónico o ácido p-dihidrocumárico (1 g, 6,02 mmol) y de trietilamina (1,5 eq., 9,03 mmol) en DMF (10 ml) a 4ºC con ayuda de un baño de hielo. Se añade una amina, tiramina (1 eq., 6,02 mmol), seguida de una solución de BOP (hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio, 1 eq., 6,02 mmol) en diclorometano (10 ml) al medio; se agita el conjunto durante treinta minutos en el baño de hielo y luego durante 20 h a temperatura ambiente. Se detiene entonces la agitación y se evapora el diclorometano a vacío. Se vierten 100 ml de agua en la solución restante y se extrae la mezcla obtenida con acetato de etilo (3x75 ml). Se lava sucesivamente la fase orgánica con 100 ml de una solución de HCl 1N, 100 ml de agua y 100 ml de una solución 1M de bicarbonato de sodio (NaHCO_{3}). Se seca entonces sobre sulfato de sodio y se evapora a sequedad.

Ejemplo 17 Éster del ácido para-cumárico: trans-cumarato de 2-(4-hidroxifenil)etilo

Se aplica el protocolo del ejemplo 7 anterior con ácido p-cumárico y tirosol en lugar de ácido ferúlico y tirosol; el compuesto obtenido es el trans-cumarato de 2-(4-hidroxifenil)etilo (fórmula VIb, X e Y son CH).

Ejemplo 18 Dihidrocumarato de 2-(4-hidroxifenil)etilo

Se aplica el protocolo del ejemplo 7 anterior con ácido p-dihidrocumárico (o ácido florético) y tirosol en lugar de ácido ferúlico y tirosol; el compuesto obtenido es el dihidrocumarato de 2-(4-hidroxifenil)etilo (fórmula VIb, X e Y son CH_{2}).

Ejemplo 19 N-3-(4-fosfatofenil)propanoil-2-(4-fosfatofenil)etilamina

23

Se dispersan el producto del ejemplo 16 (180 mg, 0,63 mmol) e hidruro de sodio (37,8 mg, 1,57 mmol, 2,5 eq.) en 4 ml de DMF anhidra (2 ml) bajo argón. Se agita vigorosamente la mezcla obtenida durante 30 minutos a 0ºC y se añade luego 1 ml de una solución de cloruro de dietilfosfato (273 \mul, 3 eq.) en DMF (1 ml). Se continúa agitando durante una noche entera. Se vierte el medio de reacción en 10 ml de agua helada y se extrae con acetato de etilo (2x10 ml). Se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se evapora a sequedad para obtener un residuo claro.

Se solubiliza el residuo obtenido anteriormente (300 mg) en 3 ml de diclorometano anhidro y se enfría la solución obtenida a 0ºC. Se añade un exceso de bromuro de trimetilsililo (1 ml) gota a gota con agitación y se continúa la agitación durante 4 h a temperatura ambiente. Se evapora entonces el solvente a vacío. Se obtiene el producto en forma de un precipitado blanco tras purificación por cromatografía de fase invertida con agua 85/metanol 15 y liofilización de las fracciones de la columna.

Ejemplo 20 N-trans-3-(3-metoxi-4-fosfatofenil)propenoil-2-(4-fosfatofenil)etilamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 19 al producto del ejemplo 1; el compuesto obtenido es la N-trans-3-(3-metoxi-4-fosfatofenil)propenoil-2-(4-fosfatofenil)-etilamina.

Ejemplo 21 N-trans-3-(3,4-difosfatofenil)propenoil-2-(4-fosfatofenil)etilamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 19 al producto del ejemplo 9; el compuesto obtenido es la N-trans-3-(3,4-difosfatofenil)propenoil-2-(4-fosfatofenil etilamina.

Ejemplo 22 N-trans-3-(3-metoxi-4-sulfatofenil)propenoil-2-(4-sulfatofenil)etilamina

24

A una solución del producto del ejemplo 3 (150 mg, 0,455 mmol) en 2 ml de DMF se añade un complejo de piridina y de trióxido de azufre (2,73 mmol, 6 eq.). Se agita la solución obtenida durante 20 h a temperatura ambiente y luego se añaden 4 ml de una solución acuosa de bicarbonato de sodio.

Se obtiene el producto en forma de un precipitado blanco tras purificación por cromatografía en columna de fase invertida (agua).

Ejemplo 23 N-trans-3-(3-metoxi-4-sulfatofenil)propenoil-2-(3,4-disulfatofenil)etilamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 22 al producto del ejemplo 1; el compuesto obtenido es la N-trans-3-(3-metoxi-4-sulfatofenil)propenoil-2-(3,4-disulfatofenil)etilamina.

Ejemplo 24 N-3-(4-sulfatofenil)propanoil-2-(4-sulfatofenil)etilamina

Se aplica el protocolo del ejemplo 22 al producto del ejemplo 16; el compuesto obtenido es la N-3-(4-sulfatofenil)propanoil-2-(4-sulfatofenil)etilamina.

Ejemplo 25 De la invención: la invención se relaciona con extractos de plantas, conocidas por contener uno de los derivados del ácido para-cumárico descritos en los ejemplos anteriores:

Como se ha mencionado en la descripción, la presente invención es ventajosamente realizada a partir de extractos naturales, preferiblemente de extractos vegetales.

La tabla 1 siguiente describe los derivados naturales identificados en plantas.

TABLA 1

25

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Así, se han realizado diferentes composiciones a partir de los vegetales de la tabla anterior. La invención cubre cualquier extracto a partir de estas plantas, en particular los extractos obtenidos según el ejemplo 26 siguiente.

Se prefiere así realizar una extracción, preferiblemente con un solvente polar o una mezcla de solventes polares, eventualmente a reflujo, preferiblemente de la parte de la planta mencionada en la tabla 1. Una vez realizada la extracción, se filtra la solución y eventualmente se resolubiliza en un solvente polar o una mezcla de solventes polares.

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Ejemplo 26 De la invención: extracciones realizadas a partir de las plantas conocidas por contener uno de los derivados del ácido para-cumárico de la invención:

Preferiblemente, se prepara un extracto de Hibiscus cannabinus a partir de cortezas cortadas al 10% (p/p) en etanol a reflujo. Se realiza la extracción durante 1 hora y luego se filtra la solución, se elimina el etanol y se solubiliza la N-trans-feruloiltiramina (producto del ejemplo 3) obtenida al 5% (p/p) en una mezcla de agua/glicol y se ultrafiltra después sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Preferiblemente, se prepara un extracto de Hibiscus cannabinus a partir de cortezas cortadas al 10% (p/p) en acetato de etilo. Se realiza la extracción durante 1 hora y luego se filtra la solución, se elimina el acetato de etilo y se solubiliza la N-trans-feruloiltiramina (producto del ejemplo 3) obtenida al 5% (p/p) en una mezcla de agua/glicol y se ultrafiltra después sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Preferiblemente, se prepara un extracto de Hibiscus cannabinus a partir de cortezas cortadas al 10% (p/p) en acetona. Se realiza la extracción durante 1 hora y luego se filtra la solución, se elimina la acetona y se solubiliza la N-trans-feruloiltiramina (producto del ejemplo 3) obtenida al 5% (p/p) en una mezcla de agua/glicol y se ultrafiltra después sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Preferiblemente, se prepara un extracto de Hibiscus cannabinus a partir de cortezas cortadas al 10% (p/p) en una mezcla constituida por un 75% de agua y un 25% de butilenglicol. Se realiza la maceración durante 1 noche a 45º y se ultrafiltra luego la N-trans-feruloiltiramina (producto del ejemplo 3) sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Preferiblemente, se prepara un extracto de Lycium chinense a partir de raíces cortadas al 10% (p/p) en etanol a reflujo. Se realiza la extracción durante 1 hora y luego se filtra la solución, se elimina el etanol y se solubiliza la N-trans-dihidrocafeoiltiramina (producto del ejemplo 13) obtenida al 5% (p/p) en una mezcla de agua/glicol y se ultrafiltra después sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Preferiblemente, se prepara un extracto de Lycium chinense a partir de cortezas cortadas al 10% (p/p) en acetato de etilo. Se realiza la extracción durante 1 hora y luego se filtra la solución, se elimina el acetato de etilo y se solubiliza la N-trans-dihidrocafeoiltiramina (producto del ejemplo 13) obtenida al 5% (p/p) en una mezcla de agua/glicol y se ultrafiltra después sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Preferiblemente, se prepara un extracto de Lycium chinense a partir de cortezas cortadas al 10% (p/p) en acetona. Se realiza la extracción durante 1 hora y luego se filtra la solución, se elimina la acetona y se solubiliza la N-trans-dihidrocafeoiltiramina (producto del ejemplo 13) obtenida al 5% (p/p) en una mezcla de agua/glicol y se ultrafiltra después sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales, de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Se prepara un extracto de Lycium chinense a partir de cortezas cortadas al 10% (p/p) en una mezcla constituida por un 75% de agua y un 25% de butilenglicol. Se realiza la maceración durante 1 noche a 45ºC y se ultrafiltra luego la N-trans-dihidrocafeoiltiramina (producto del ejemplo 13) obtenida sobre un filtro cerámico a diferentes umbrales de corte y finalmente se filtra a 0,45 \mum.

Se obtuvieron igualmente los otros extractos mencionados en la tabla 1 según los diferentes protocolos antes citados en relación a los compuestos de los ejemplos 3 y 13. Las variaciones de protocolo aportadas son directamente accesibles para el experto en la técnica gracias a sus conocimientos generales.

Ejemplo 27

De la invención: ensayo in vitro de la inhibición por los derivados del ácido p-cumárico de la tirosinasa aislada:

La tirosinasa catalia la formación de L-dopaquinona y luego del dopacromo a partir de L-Dopa. Ahora bien, el dopacromo es un compuesto coloreado cuantificable por espectrofotometría visible a 490 nm. La utilización de un agente activo capaz de modificar la actividad enzimática se va a traducir en una variación de la densidad óptica a
490 nm.

La razón de las velocidades de formación del dopacromo permite determinar de forma precisa las activaciones o las inhibiciones obtenidas con las diferentes moléculas estudiadas.

Se incuba la muestra de ensayo en presencia de tirosinasa de hongo (Sigma) durante 5 minutos con agitación. Se incuba la L-DOPA (Sigma), substrato de la tirosinasa, durante 10 minutos al abrigo de la luz en presencia o no de las moléculas de ensayo. Se realiza el cálculo del porcentaje de inhibición refiriendo la DO del ensayo a la DO del control negativo sin molécula. El control positivo utilizado es el ácido cójico (Sigma) al 0,01% = 45% \pm 5% de inhibición.

En el marco de este ensayo in vitro, se estudiaron los derivados del ácido p-cumárico a concentraciones finales de 10^{-4}M y 10^{-5}M. En la tabla 2 se describen los resultados obtenidos.

TABLA 2 Inhibición de la tirosinasa de hongo por diferentes derivados del ácido para-cumárico a 490 nm, expresada en porcentaje de inhibición

27

Resulta claramente de la tabla 2 anterior que los derivados estudiados inhiben la tirosinasa incluso a bajas concentraciones.

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Ejemplo 28

De la invención: ensayo in vitro de la inhibición por los derivados del ácido p-cumárico de la tirosinasa humana:

La tirosina humana obtenida a partir de extractos melanocíticos de donantes sanos cataliza la formación de L-Dopaquinona a partir de L-Dopa. Ahora bien, la L-dopaquinona puede ser cuantificada por espectrofotometría visible a 490 nm gracias a un cromógeno: la 3-metil-2-benzotiazolinona hidrazona (METH).

Este reactivo atrapa las o-quinonas sintetizadas por la tirosinasa para dar un compuesto MBTH-o-quinona estable y soluble que posee una densidad óptica molar elevada.

Así, la utilización de un agente activo capaz de modificar la actividad enzimática se va a traducir en una variación de la DO a 490 nm comparativamente a la obtenida en el control negativo (100% de actividad).

Se obtiene el extracto melanocitario tras Tisis de las membranas celulares de los melanocitos humanos normales realizada por choque térmico. Se recupera el sobrenadante y se incuba después con METH (Sigma) y L-Dopa (Sigma). Se da la DO a 490 nm medida después de 30 minutos para cada agente activo estudiado con respecto a la obtenida para el control y se calcula el porcentaje de inhibición dando la DO del ensayo (molécula estudiada) con respecto a la DO del control negativo (sin molécula). El control positivo utilizado es el ácido cójico al 0,1% (60% \pm 5% de inhibición).

En la tabla 3 se dan los resultados obtenidos.

TABLA 3 Inhibición de la tirosinasa humana por los derivados del ácido p-cumárico a 490 nm, resultados expresados en porcentaje de inhibición

29

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Resulta de la tabla 3 anterior que la actividad inhibitoria de los derivados del ácido para-cumárico está presente, aunque modesta, en este modelo particular de tirosinasa humana aislada.

Ejemplo 29

De la invención: ensayo de inhibición de la tirosinasa humana estudiada en monocapa tras aplicación de los agentes activos de ensayo sobre melanocitos humanos normales:

Se siembran los melanocitos humanos normales (procedentes de plastia abdominal) en placa de 24 pocillos a razón de 80.000 células por pocillo. Se cultivan hasta la confluencia y se aplican los agentes activos durante 24 horas en los medios de cultivo. Después de 24 horas, se eliminan los medios y se desprenden los melanocitos por acción mecánica. Se realiza una extracción por choque térmico, se recuperan después los sobrenadantes y se incuban luego con METH (Sigma) y L-Dopa (Sigma). Se mide la DO a 490 nm después de 30 minutos y se calcula la inhibición de la tirosinasa dando la DO a 490 nm a la razón de proteína (medida en cada pocillo de cultivo) del ensayo con respecto a la razón DO 490 nm/concentración de proteína del control negativo (control no tratado). Se calcula así un porcentaje de la actividad anti-tirosinasa con respecto al control no tratado.

El control negativo del experimento es el ácido cójico aplicado al 0,1% sobre los melanocitos (para una inhibición medida del 20% \pm 5%).

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TABLA 4 Inhibición de la tirosinasa humana tras aplicación de los derivados del ácido p-cumárico y de los productos comerciales sobre melanocitos humanos normales, resultados expresados en porcentaje de inhibición (nd: no determinado)

30

31

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Resulta claramente de la tabla anterior que los resultados obtenidos en este modelo traducen una eficacia real de los derivados del ácido para-cumárico sobre la inhibición de la melanogénesis humana. Los porcentajes de inhibición observados son muy netamente superiores a los obtenidos en un modelo muy alejado del viviente, a saber, la tirosinasa de hongo y por contacto directo con una tirosinasa extraída de melanocitos humanos normales.

Los derivados del ácido para-cumárico presentan, pues, una actividad particularmente inesperada para el experto en la técnica y muy significativa sobre la inhibición de la tirosinasa humana, mientras que la eficacia es menor en un modelo menos pertinente que utiliza una tirosinasa de hongo, ampliamente utilizada y descrita en la bibliografía.

La tiramina y la dopamina fueron estudiadas a 10^{-4}M (véase la tabla anterior) y presentaban una actividad muy baja. Las moléculas procedentes de la reacción 0 entre el ácido cafeico y la tiramina o la dopamina (respectivamente, los compuestos procedentes de los ejemplos 9 y 10) permitieron aumentar muy significativamente la actividad anti-tirosinasa. Tanto más cuanto que el ácido ferúlico y la tiramina o dopamina producen el mismo efecto (respectivamente, los compuestos de los ejemplos 1 y 3), siendo igualmente el ácido ferúlico solo muy poco activo.

El análogo metilado de la dopamina permite obtener un efecto de inhibición de la síntesis de melaninas mensurable, pero más débil que los derivados no metilados. La molécula procedente de la reacción entre el ácido cafeico y el análogo metilado de la dopamina por una parte (compuesto del ejemplo 12) y la procedente del ácido ferúlico y del mismo compuesto por otra parte (compuesto del ejemplo 2) no permiten una actividad tan fuerte.

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Ejemplo 30

De la invención: ensayo de inhibición de la tirosinasa humana tras aplicación de los compuestos de los ejemplos 9, 10, 1 y 3 sobre melanocitos humanos normales de diferentes donantes:

Los compuestos de los ejemplos antes citados fueron estudiados sobre melanocitos de donantes diferentes, pero de fototipos claros, según el protocolo descrito en el ejemplo 29. Los donantes estudiados son los siguientes:

- donante S (donante estudiado en el ejemplo 12): 46 años

- donante 1: 40 años

- donante 2: 47 años

- donante 3: 33 años

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En las tablas siguientes se describen los resultados obtenidos:

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TABLAS 5 Inhibición de la tirosinasa por los compuestos de los ejemplos 9, 10, 1 y 3 sobre 4 donantes diferentes

32

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34

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35

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36

Los resultados obtenidos muestran una gran eficacia de los compuestos en 4 donantes diferentes.

Ejemplo 31

De la invención: ensayo de la tirosinasa humana tras aplicación de los compuestos de los ejemplos 3, 9 y 1 sobre melanocitos humanos normales de diferentes donantes de fototipos moreno y negro:

Se estudia el compuesto del ejemplo 1 en cultivos de melanocitos procedentes de 2 donantes de fototipos morenos y de un donante de fototipo negro. El protocolo aplicado es el descrito en el ejemplo 29.

En las tablas 6 se describen los resultados obtenidos en los 2 donantes de fototipos morenos.

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TABLA 6 Inhibiciones de la tirosinasa obtenidas con el compuesto del ejemplo 3 en 2 donantes de fototipos morenos

37

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38

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39

Los resultados obtenidos sobre los fototipos morenos muestran que la actividad anti-tirosinasa es dosis-dependiente y fuerte. En la siguiente tabla 7 se describen los resultados obtenidos con el donante de fototipo negro (31 años de edad).

TABLA 7 Inhibición obtenida para el compuesto de los ejemplos 3 y 9 en un donante de piel negroide

40

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41

La actividad inhibitoria de tirosinasa procedente de donante de piel negroide es dosis-dependiente y confirma los resultados obtenidos por una parte en donantes de fototipos claros.

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Ejemplo 32

De la invención: estudio de la citotoxicidad de los derivados del ácido para-cumárico:

Se estudia la citotoxicidad de los agentes activos sobre melanocitos humanos normales en placa de 24 pocillos por dosificación con PNPP (fosfato de p-nitrofenilo), substancia transformada en p-nitrofenol por las fosfatasas ácidas intracelulares de las células viables.

La absorbancia del p-nitrofenol a 405 nm es directamente proporcional al número de células viables.

Se estudian los agentes activos a 2 concentraciones diferentes (10^{-4} M y 10^{-5} M) y se añaden al medio de cultivo y se incuban a 37ºC durante 24 horas. Se realiza la dosificación del PNPP sobre el tapiz celular y se expresan los resultados en porcentaje de viabilidad con respecto al control negativo (pocillos no tratados).

En la siguiente tabla 8 se resumen los resultados obtenidos:

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TABLA 8 Porcentajes de viabilidad obtenidos para los diferentes derivados del ácido p-cumárico sobre melanocitos humanos normales (las moléculas fueron estudiadas a 2 concentraciones, 10^{-4} M y 10^{-5} M

42

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Las moléculas estudiadas no son citotóxicas cuando se estudian a concentraciones molares de 10^{-4} y 10^{-5} M, ya que los porcentajes de viabilidad obtenidos son superiores al 75% de viabilidad (umbral tolerado). Sólo 2 moléculas presentan un umbral inferior al 75% cuando se estudian a 10^{-4} M, a saber, las moléculas de los ejemplos 11 y 12. Para evaluarlas, estas moléculas deberán ser, pues, estudiadas en monocapa a concentraciones inferiores a 10^{-4} M (10^{-5} M, por ejemplo).

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Ejemplo 33

De la invención: comparación de la eficacia de los derivados del ácido para-cumárico y de las moléculas cuasi-fármacos:

Se realiza un estudio con moléculas conocidas en la literatura por su actividad despigmentante; estas moléculas son aplicadas al modelo descrito en el ejemplo 29 para comparar su eficacia con respecto a las moléculas descritas en los diferentes ejemplos.

Se pudo evaluar la vitamina C estabilizada por un grupo fosfato de magnesio, o VitC PMg, asi como el ácido cójico, en nuestro modelo.

En la tabla 9 se describen los resultados obtenidos.

TABLA 9 Inhibición de la tirosinasa obtenida para controles de la literatura

43

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Las moléculas estudiadas han mostrado ser ineficaces en el modelo descrito en el ejemplo 29 comparativamente a los derivados del ácido para-cumárico, particularmente activos a concentraciones mucho más bajas. En efecto, ninguna molécula ha permitido inhibir la tirosinasa humana a un umbral comparable al de los derivados del ácido para-cumárico.

La vitamina C, estudiada al 3% y al 0,3%, presenta razones de inhibición importantes en la medida en que esta molécula tiene una acción citotóxica sobre los melanocitos y no específica.

Por consiguiente, esta molécula no puede ser considerada como activa en nuestro modelo.

Los derivados del ácido para-cumárico demuestran ser moléculas muy eficaces sobre la tirosinasa humana normal.

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Ejemplo 34

De la invención: estudio de la actividad anti-radicales de los derivados del ácido para-cumárico:

Se evaluó la actividad anti-radicales de los derivados procedentes de las síntesis antes descritas en un modelo in vitro acelular que utiliza DPPH.

Por su estructura magnética, el 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo puede aceptar un electrón o un radical hidrógeno para convertirse en una molécula diamagnética estable.

Este radical libre, de color violeta en etanol, presenta una fuerte banda de absorción a 520 nm.

La adición de un compuesto que aporta electrones conlleva una decoloración del 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo proporcional al número de electrones captados por el radical, que puede ir seguida de medición de la absorbancia a
520 nm.

Se incuba el DPPH durante 30 minutos en presencia de los derivados antes descritos estudiados a una concentración de 10^{-5}M, o solo para el control. Al final de la incubación, se evalúa la actividad anti-radicales de los derivados anteriores midiendo la absorbancia de la solución a 520 nm.

Se calcula la actividad anti-radicales de cada producto según la fórmula en porcentaje:

100 - ((DO_{520} en presencia del compuesto de ensayo/DO_{520} en ausencia de compuesto) x 100)

TABLA 10 Actividad anti-radicales de los compuestos de la invención

44

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Los compuestos antes descritos presentan una actividad anti-radicales y ello a una concentración de 10^{-5}M.

Por su fuerte actividad anti-radicales, los compuestos de la invención son compuestos anti-inflamatorios: en efecto, los radicales libres generados como consecuencia de un estrés UV u otro inducen la cascada de la inflamación. Es por lo que compuestos que tienen propiedades anti-radicales inhiben la cascada de la inflamación.

Se entiende por "productos de la invención" los compuestos que responden a la fórmula general I, así como los compuestos preferidos y especialmente los compuestos descritos en los ejemplos 1 a 26.

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Ejemplo 35

De la invención: utilización de los productos de la invención en formulaciones cosméticas o farmacéuticas de tipo emulsión aceite-en-agua:

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Formulación 35a

100

Formulación 35b

101

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Formulación 35c

102

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Ejemplo 36

De la invención: utilización de los productos de la invención en una formulación de tipo agua en aceite:

103

104

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Ejemplo 37

De la invención: utilización de los productos de la invención en una formulación de tipo champú o gel de ducha:

105

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Ejemplo 38

De la invención: utilización de los productos de la invención en una formulación de tipo rojo de labios y otros productos anhidros:

106

107

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Ejemplo 39

De la invención: utilización de los productos de la invención en una formulación de geles acuosos (contornos de ojo, adelgazantes, etc.):

108

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Ejemplo 40

De la invención: utilización de los productos de la invención en una formulación de tipo emulsión triple: Emulsión primaria W1/O

109

Emulsión secundaria Wl/O/W2

110

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Ejemplo 41

De la invención: preparación de formulaciones farmacéuticas que contienen el producto de la invención:

Formulación 41a

Preparación de comprimidos

111

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Formulación 41b

Preparación de una pomada

112

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Formulación 41c

Preparación de una fórmula inyectable

113

Ejemplo 42 Evaluación de la aceptación cosmética de una preparación que contiene el objeto de la invención

Los ensayos de toxicología fueron realizados sobre el compuesto obtenido según el ejemplo 1 incorporado al 10% en un gel de xantano al 0,5%, mediante una evaluación ocular en conejo, mediante estudio de la ausencia de toxicidad anormal por administración oral única en rata y mediante el estudio del poder sensibilizante en cobaya.

Evaluación de la irritación primaria cutánea en conejo

Se aplican las preparaciones antes descritas sin dilución a la dosis de 0,5 ml sobre la piel de 3 conejos según el método preconizado por la directiva OCDE concerniente al estudio del "efecto irritante/corrosivo agudo sobre la piel".

Se clasifican los productos según los criterios definidos por la resolución del 1/2/1982 publicada en el JORF del 21/02/82.

Los resultados de estos ensayos permitieron concluir que los productos de la invención se clasificaban como no irritantes para la piel.

Evaluación de la irritación ocular en conejo

Se instilaron las preparaciones antes descritas puras una sola vez, a razón de 0,1 ml, en el ojo de 3 conejos según el método preconizado por la directiva de la OCDE nº 405 del 24 de febrero de 1987 concerniente al estudio del "efecto irritante/corrosivo agudo sobre los ojos".

Los resultados de esta prueba permiten concluir que las preparaciones pueden ser consideradas como no irritantes para los ojos, en el sentido de la directiva 91/326 CEE, utilizadas puras o sin dilución.

Ensayo sobre la ausencia de toxicidad anormal por administración oral única en rata

Se administraron las preparaciones descritas una vez por vía oral a la dosis de 2 g/kg de peso corporal a 5 ratas machos y 5 ratas hembras según un protocolo inspirado en la directiva de la OCDE nº 401 del 24 de febrero de 1987 y adaptado a los productos cosméticos.

La DL_{0} y la DL_{50} resultan ser superiores a 2.000 mg/kg. Las preparaciones estudiadas no son, pues, clasificadas entre las preparaciones peligrosas por ingestión.

Evaluación del potencial de sensibilización cutánea en cobaya

Se someten las preparaciones descritas a la prueba de maximización descrita por Magnusson y Kligmann, protocolo de acuerdo con la línea directriz nº 406 de la OCDE.

Las preparaciones son clasificadas como no sensibilizantes por contacto con la piel.

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TABLA 11 Fórmulas químicas

46

47

49

51

Claims

1. Utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto derivado del ácido para-cumárico de la fórmula general (I) siguiente:

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53

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donde:

Z representa un oxígeno o un grupo -NH-;

X e Y son idénticos y representan cada uno un grupo CH o CH_{2} ;

n es un número, preferiblemente un número entero, que varía de 1 a 12;

Ra y Rb son idénticos o diferentes, preferiblemente idénticos, y representan un átomo de hidrógeno; un grupo acilo lineal o ramificado, preferiblemente C_{1-12}; un alquilo lineal o ramificado, saturado o no, preferiblemente C_{1-12};

un grupo sulfonilo (SO_{3}H) salificado o no; o un grupo fosfonato (PO_{3}H_{2}) salificado o no; pudiendo estar ORa y/o ORb en presencia de una base en forma disociada, por ejemplo en forma de O-Na^{+};

como principio activo en una composición cosmética.

2. Utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto derivado del ácido para-cumárico de fórmula general (I) tal como se ha definido en la reivindicación 1 como agente despigmentante en una composición cosmética.

3. Utilización, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada por representar Ra y Rb cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, un grupo acilo lineal o ramificado C_{1-12}, un grupo sulfonilo (SO_{3}H) salificado o no o un grupo fosfonato (PO_{3}H_{2}) salificado o no y preferiblemente un hidrógeno.

4. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que el compuesto derivado del ácido para-cumárico está representado por la fórmula química II, donde los grupos R_{1} a R_{8}, X, Y, Z y n representan los elementos citados en la fórmula general I:

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54

\newpage

5. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que el compuesto derivado del ácido para-cumárico está representado por la fórmula química III, donde los grupos R_{2}, R_{3}, R_{6} y R_{7}, X, Y, Z y n representan los elementos citados en la fórmula general I:

55

6. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que el compuesto derivado del ácido para-cumárico está representado por las fórmulas siguientes (IVa y IVb), donde R_{6} y R_{7} representan los elementos citados en la fórmula general I:

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7. Utilización, según la reivindicación 6, caracterizada por el hecho de que, en las fórmulas anteriores IVa y IVb, R_{6} y R_{7} son preferiblemente hidrógenos, lo que corresponde a los dos derivados descritos para las fórmulas IVa1 y IVb1 siguientes:

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8. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por el hecho de que el compuesto derivado del ácido para-cumárico está representado por las fórmulas siguientes (Va y Vb), donde R_{6} y R_{7} representan los elementos citados en la fórmula general I:

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9. Utilización, según la reivindicación 8, caracterizada por el hecho de que, en las fórmulas Va y Vb, R_{6} y R_{7} son preferiblemente hidrógenos, lo que corresponde a los dos derivados descritos por las fórmulas Va1 y Vb1 siguientes:

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10. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que R_{1}, R_{4}, R_{5} y R_{8} representan un hidrógeno.

11. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que los substituyentes R_{2} y R_{3} son seleccionados entre un grupo hidroxilo, eventualmente en forma salificada, o metoxi y un átomo de hidrógeno.

12. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que los substituyentes R_{6} y R_{7} son seleccionados entre un grupo hidroxilo, eventualmente en forma salificada, o metoxi y un átomo de hidrógeno.

13. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que n = 2.

14. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por el hecho de que los substituyentes R_{6} y R_{7} son seleccionados entre un grupo hidroxilo y un átomo de hidrógeno.

15. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por el hecho de que los derivados del ácido para-cumárico son derivados del ácido ferúlico donde:

Ra, Rb, R_{1}, R_{7} y R_{4} representan preferiblemente un átomo de hidrógeno,

R_{3} representa un grupo metoxi y

X e Y representan cada uno un grupo CH y n es igual a dos,

pudiendo estos derivados ser representados por las fórmulas siguientes (IIa y IIb):

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donde:

R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son tal como se ha definido anteriormente.

16. Utilización, según la reivindicación 15, caracterizada por el hecho de que, en las fórmulas IIa y IIb, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno.

17. Utilización, según la reivindicación 15, caracterizada por el hecho de que, en las fórmulas IIa y IIb, R_{5}, R_{6} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno y R_{7} representa un grupo hidroxilo, lo que corresponde a los dos derivados descritos por las fórmulas siguientes:

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18. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por el hecho de que los derivados del ácido para-cumárico son derivados de ácido cafeico, donde:

R_{3} representa preferiblemente un grupo hidroxilo, y

X e Y representan cada uno un grupo CH y n es igual a dos;

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donde:

R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son tales como los definidos anteriormente.

19. Utilización, según la reivindicación 18, caracterizada por el hecho de que, en las fórmulas IIIa y IIIb, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno.

20. Utilización, según la reivindicación 18, caracterizada por el hecho de que, en las fórmulas IIIa y IIIb, R_{5}, R_{6} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno y R_{7} representa un grupo hidroxilo, lo que corresponde a los dos derivados descritos por las fórmulas IIIa1 y IIIb2 siguientes:

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21. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por el hecho de que los substituyentes Ra, Rb, R_{1}, R_{2}, R_{4} R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} representan cada uno un átomo de hidrógeno,

R_{3} representa un grupo hidroxilo y

n es igual a dos,

pudiendo estos derivados estar representados

por las fórmulas siguientes (VIa y VIb), donde X e Y son grupos CH o CH_{2}:

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22. Utilización, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizada por el hecho de que el compuesto es extraído de un vegetal, cuyo extracto contiene preferiblemente un compuesto seleccionado entre:

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23. Utilización de una composición tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores para ejercer una actividad despigmentante o un efecto inhibidor de la melanogénesis, especialmente por aplicación tópica sobre al menos una zona del tejido cutáneo de un sujeto.

24. Utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 como principio activo con actividad anti-radicales y/o antiinflamatoria en una composición cosmética.

25. Procedimiento de cuidado cosmético, caracterizado por incluir la aplicación tópica de una composición tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22.

26. Procedimiento de cuidado cosmético, según la reivindicación 25, para disminuir la pigmentación de la piel a nivel de la zona de aplicación.

27. Utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para la preparación de una composición farmacéutica destinada a ejercer una actividad despigmentante o un efecto inhibidor de la melanogénesis, especialmente por aplicación tópica sobre al menos una zona del tejido cutáneo de un sujeto que presenta una hiperpigmentación.

28. Utilización de una cantidad eficaz de al menos un compuesto tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para la preparación de una composición farmacéutica destinada a ejercer una actividad anti-radicales y/o antiinflamatoria.