ES2643438T3

ES2643438T3 - Nuevos derivados del ácido sinapínico

Info

Publication number: ES2643438T3
Application number: ES14703109.0T
Authority: ES
Inventors: Pierre-Yves Le Roy; Yves Le Guen
Original assignee: PHARMASYNTHESE
Current assignee: PHARMASYNTHESE
Priority date: 2013-01-08
Filing date: 2014-01-07
Publication date: 2017-11-22
Anticipated expiration: 2034-01-07
Also published as: WO2014108629A1; HK1212978A1; US20150353469A1; US9463338B2; FR3000742B1; EP2943478B1; EP2943478A1; FR3000742A1

Description

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DESCRIPCION

Nuevos derivados del acido sinapfnico.

La presente invencion tiene por objeto nuevos derivados del acido sinapfnico y la utilizacion de estos derivados para aplicaciones cosmeticas o farmaceuticas.

Antioxidantes

La oxidacion forma parte de una reaccion de oxidorreduccion que transfiere unos electrones de una sustancia hacia un agente oxidante. Esta reaccion puede producir unos radicales libres que provocan unas reacciones en cadena. Aunque las reacciones de oxidacion son necesarias para la vida, tambien pueden ser destructivas.

El estres oxidativo se ha cuestionado en la patogenesis de numerosas enfermedades humanas. Asf, el estres oxidativo puede danar, incluso matar las celulas y puede ser una causa parcial del desarrollo de varias enfermedades degenerativas cronicas que incluyen el cancer, la disfuncion cardiaca y la degeneracion neuronal. Se conoce tambien que unas moleculas oxidantes pueden danar unas moleculas biologicas tales como las protefnas, los lfpidos o el ADN. Aunque el cuerpo humano ha desarrollado unas herramientas de lucha contra los radicales libres, el proceso de eliminacion no es eficaz al 100%.

En la actualidad se acepta ampliamente que el estres oxidativo esta implicado en el proceso de envejecimiento de las celulas de la piel (Ames, B. N., Shigenaga, M. K. y Hagen, T. M. (1993), «Oxidants, Antioxidants, and the Degenerative Diseases of Aging», Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 7915-7922). Los antioxidantes son, por lo tanto, susceptibles de retrasar el envejecimiento cutaneo.

Los antioxidantes son capaces de detener estas reacciones en cadena reduciendose con los radicales libres, aniquilando asf su accion. Asf, las plantas y los animales utilizan y producen numerosos antioxidantes, es decir unas moleculas susceptibles de disminuir o impedir la oxidacion de otras sustancias qufmicas.

En el marco del tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo, es util por lo tanto identificar unos compuestos que tengan una actividad antioxidante.

Elastina

La elastina es una protefna de la familia de las protefnas fibrosas de tipo estructural. La elastina es sintetizada y segregada en el espacio extracelular por los fibroblastos, en primer lugar en proelastina, y despues en tropoelastina.

La elastina es el componente principal de las fibras elasticas.

La elastina se encuentra en la dermis de la piel, actuando esta como soporte. El buen funcionamiento de la piel, en particular, esta estrechamente relacionado con las caracterfsticas de la elastina, que puede estirarse hasta el 150% de su longitud en reposo antes de romperse.

Asf, permite que los tejidos se estiren y vuelvan a encontrar su estado inicial despues del estiramiento, lo cual les da flexibilidad.

Por otro lado, la produccion total de elastina se detiene alrededor de la pubertad, despues de lo cual, la cantidad de elastina disponible disminuira con el tiempo, lo cual conllevara, por ejemplo, durante el envejecimiento, una perdida de elasticidad y de tonicidad de la dermis que ya no puede oponerse a los efectos de contraccion de los musculos sub-yacentes, dando lugar a la aparicion de arrugas.

En el marco del tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo, es util por lo tanto identificar unos compuestos capaces de inducir un aumento significativo de la neosfntesis de elastina.

Colageno

El colageno es una familia de protefnas, generalmente presente en forma fibrilar. Esta presente en la matriz extra-celular de los organismos. Estas protefnas tienen como funcion conferir a los tejidos una resistencia mecanica al estiramiento.

Contrariamente a la elastina presente tambien en los tejidos conjuntivos, el colageno es inextensible y resiste bien a la traccion. Existen diferentes tipos de colageno segun el organo considerado. Por ejemplo, el colageno de tipo I (que representa el 90% del colageno de un vertebrado) constituye la trama del hueso (comparable a los armazones de hormigon armado), y mas generalmente de los tejidos conjuntivos banales. Se encuentra en los huesos, la piel, los tendones, la cornea y los organos internos.

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La produccion de colageno en la piel empieza a disminuir a partir de los 25 anos, pero esta ralentizacion se acelera en la cuarentena, con una perdida colagenica que podrfa girar a alrededor del 1% por ano.

Consecuencias de la ralentizacion de la produccion de colageno y de sus alteraciones, la piel retiene menos agua, se vuelve menos flexible, se reduce y se arruga.

En el marco del tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo, es util por lo tanto identificar unos compuestos que favorezcan la neosfntesis de colageno de tipo I (pro-colageno I).

Progerina

El envejecimiento cutaneo puede ser atribuido tambien a ciertas enfermedades bien conocidas, incluyendo la progeria o sfndrome de Hutchinson-Gilford. Los sfntomas de esta enfermedad se caracterizan por un envejecimiento acelerado que conduce a la muerte del paciente.

En esta patologfa, la lamina-A, una protefna que participa en la formacion de la lamina nuclear e implicada en la estabilidad del nucleo de la estructura de la cromatina y de la expresion de los genes, esta presente en una forma truncada denominada progerina.

Por otro lado, se ha demostrado recientemente (C. Verdy, J.-E. Branka y N. Mekideche, «Quantitative assessment of lactate and progerine production in normal human cutaneous cells during normal ageing: effect of an alaria esculenta extract», Int. J. Cosmetic Science, 2011, 1-5) que unos extractos de alga Aleria esculenta, que inducen una disminucion significativa de la neo-sfntesis de progerina, mostraban asimismo un efecto notable sobre una actividad anti-edad de la piel.

En el marco del tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo o del tratamiento terapeutico del envejecimiento cutaneo, en particular de la enfermedad de Hutchinson-Gilford, es util por lo tanto identificar unos compuestos que permitan disminuir la neosfntesis de progerina.

Glicerol

El tejido adiposo (masa grasa) es un tejido conjuntivo especial cuya constitucion se parece a la de un tejido conjuntivo, con una sustancia fundamental, unas fibras y sus celulas. Es de hecho un tejido conjuntivo que contiene unas celulas grasas que almacenan los lfpidos, denominadas “adipocitos”.

Estas reservas de lfpidos estan constituidas por trigliceridos. Estos trigliceridos se sintetizan en el interior del adipocito, pero la endocitosis, es decir la difusion de estos trigliceridos a traves de la membrana citoplasmatica, no esta facilitada. El adipocito segregara por lo tanto en la sangre una lipasa para escindir los trigliceridos en acido graso y glicerol, que son facilmente asimilables por el adipocito. El mecanismo inverso se efectua en la excrecion de las reservas lipfdicas por medio de una enzima, la lecitina.

En el marco de un tratamiento cosmetico adelgazante, es util por lo tanto identificar unos compuestos que permitan disminuir la tasa de glicerol en los tejidos adiposos.

Melano-moduladores

La epidermis, el cabello y el pelo se colorean mediante unos pigmentos, las melaninas, producidas por unas celulas especializadas de gran tamano: los melanocitos. Estan situados en la capa mas profunda de la epidermis. Estos pigmentos melanicos sirven para proteger la epidermis y las capas profundas de la piel de las agresiones externas, en particular de los rayos ultravioletas. Las melaninas desempenan asf un papel fotoprotector importante. La biosfntesis de melanina se efectua segun una serie compleja de reacciones enzimaticas denominada melanogenesis.

En el marco de un tratamiento cosmetico de blanqueamiento de la piel o de aclaramiento de la piel, es util por lo tanto identificar unos compuestos que permitan regular (disminuir) la sfntesis de melanina.

El acido sinapfnico, tambien denominado acido sinapico o acido 3,5-dimetoxi-4-hidroxicinamico, es un acido fenolico de formula qufmica:

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El acido sinapfnico se encuentra en una amplia variedad de plantas, en particular en las plantas oleaginosas, en particular en las semillas de colza.

La utilizacion del acido sinapfnico y de sus derivados cercanos en el campo cosmetico es conocida en la tecnica anterior. Asf, la solicitud de patente EP-A-1 437 117 describe la utilizacion del acido sinapfnico y de sus derivados cercanos para la preparacion de composiciones cosmeticas susceptibles de ser utilizadas en el marco del tratamiento anti-edad o anti-arrugas.

La solicitud de patente EP-A-1 967 175 describe por su parte la utilizacion de derivados del acido sinapfnico como agente blanqueante de la piel. Tambien se sugiere una actividad anti-edad. No obstante, no se proporciona ningun resultado experimental que permita confirmar una actividad de este tipo.

Sin embargo, ninguna de estas solicitudes de patente describe los compuestos segun la presente invencion.

Ahora bien, se han encontrado ahora nuevos derivados del acido sinapfnico que, de manera totalmente sorprendente, son eficaces en el marco del tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo; en el marco del tratamiento terapeutico del envejecimiento cutaneo, en particular en el marco del tratamiento de la enfermedad de Hutchinson-Gilford; y/o en el marco de un tratamiento cosmetico adelgazante.

La presente invencion tiene por lo tanto por objeto un compuesto de formula general (I)

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en la que:

- R1 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C2-C6 o un grupo -(C=O)-R3;

- R2 se selecciona como siendo un grupo -O-R4 o -(N)R5R6;

- R3 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C1-C6;

- R4 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C12-C16, alquenilo de C12-C16, alquinilo de C12-C16, fenilo, 4-piranona, alquil C1-C16-fenilo, alquenil C2-C16-fenilo, alquinil C2-C16-fenilo, cicloalquilo de C3-C6, alquil C1-C16-cicloalquilo de C3-C6, alquenil C2-C16-cicloalquilo de C3-C6 y alquinil C2-C16-cicloalquilo de C3- C6; estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi de C1-C6, alquil C1-C6-tio, alquil C1-C6-carboniloxi, fenilo, alcoxi C1- C6-fenilo, o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6 o alquil C1-C6-carboniloxi;

- R5 y R6 se seleccionan independientemente el uno del otro como siendo un atomo de hidrogeno o un grupo seleccionado de entre alquilo de C1-C16, alquenilo de C2-C16, alquinilo de C2-C16, fenilo, alquil C1- C16-fenilo, alquenil C2-C16-fenilo, alquinil C2-C16-fenilo, alcoxi C1-C16-indol, cicloalquilo de C3-C6, alquil C1- C16-cicloalquilo de C3-C6, alquenil C2-C16-cicloalquilo de C3-C6 y alquinil C2-C16-cicloalquilo de C3-C6; estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6, alquil C1-C6-carboniloxi, fenilo, alcoxi C1-C6- fenilo, o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados

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independientemente los unos de los otros como siendo un grupo alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6 o alquil Ci-C6-carboniloxi;

- o R5 y R6 forman, con el atomo de nitrogeno al que estan unidos, un heterociclo seleccionado de entre la piperidina, la morfolina, la hexametilenimina o la pirrolidina, eventualmente sustituido por uno o varios alquilo de C1-C6;

con la excepcion de los compuestos siguientes:

- 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-morfolino-cinamamida;

- 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(2-metilmorfolino)-cinamamida; y

- 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(3,4,5-trimetoxifenil)-cinamamida.

Los compuestos segun la presente invencion no se han descrito nunca anteriormente. Estos compuestos presentan una actividad antioxidante, son capaces de inducir un aumento significativo de la neosfntesis de la elastina y/o favorecen la neosfntesis del colageno de tipo I (pro-colageno I), permitiendo asf su utilizacion en el marco del tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo.

Estos compuestos permiten tambien disminuir significativamente la neosfntesis de progerina y pueden, por lo tanto, ser utilizados en el marco del tratamiento terapeutico del envejecimiento cutaneo, en particular en el marco del tratamiento de la enfermedad de Hutchinson-Gilforf, o en el tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo.

Los compuestos de la invencion permiten disminuir la tasa de glicerol en los tejidos adiposos, y son, por lo tanto, utiles en el marco de un tratamiento cosmetico adelgazante.

Finalmente, los compuestos de la invencion permiten regular (disminuir) la sfntesis de melanina y pueden, por lo tanto, ser utilizados en el marco de un tratamiento cosmetico de blanqueamiento de la piel.

En el marco de la presente invencion:

- se entiende por “alquilo de Cx-Cy”, una cadena hidrocarbonada saturada, lineal o ramificada, y que comprende de x a y atomos de carbono;

- se entiende por “alquenilo de Cx-Cy” una cadena hidrocarbonada insaturada, lineal o ramificada, que contiene por lo menos un doble enlace, y que comprende de x a y atomos de carbono;

- se entiende por “alquinilo de Cx-Cy” una cadena hidrocarbonada insaturada, lineal o ramificada, que contiene por lo menos un triple enlace, y que comprende de x a y atomos de carbono;

- se entiende por “alcoxi de Cx-Cy” un grupo -O-(alquilo Cx-Cy);

- se entiende por “cicloalquilo de Cx-Cy” un grupo hidrocarbonado saturado que puede ser mono- o policfclico y que comprende de x a y atomos de carbono;

- los terminos “alquilo”, alquenilo”, “alquinilo, “cicloalquilo” tales como se han definido anteriormente, conservan la misma definicion cuando integran el nombre de un grupo tal como, por ejemplo, alquiltio, hidroxialquilo, alquilfenilo, alquilcarboniloxi, etc.;

- se entiende por “heterociclo” cualquier ciclo de 5 o 6 atomos, del cual por lo menos uno es un atomo de nitrogeno, de azufre o de oxfgeno;

- se entiende por “tratamiento del envejecimiento cutaneo” cualquier tratamiento cosmetico o terapeutico que comprende la aplicacion topica de uno o varios principios activos para hacer menos visibles y/o disminuir las senales exteriores del envejecimiento cutaneo, tales como las arrugas;

- se entiende por “tratamiento cosmetico adelgazante” cualquier tratamiento cosmetico que comprende la aplicacion topica de uno o varios principios activos para obtener una reduccion del volumen del tejido adiposo hipodermico y/o una reduccion de las estrfas o del aspecto “piel de naranja” del tejido cutaneo;

- se entiende por “tratamiento cosmetico de blanqueamiento de la piel” cualquier tratamiento cosmetico que comprende la aplicacion topica de uno o varios principios activos para obtener una reduccion de sfntesis de melanina, en particular el tratamiento cosmetico de las efelides (pecas), del cloasma (manchas marrones de la cara), y de las pigmentaciones debidas a la senescencia.

Preferentemente, la presente invencion tiene por objeto un compuesto de formula general (I) tal como se ha

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definido anteriormente, en el que las caracterfsticas siguientes se seleccionan solas o en combinacion:

- R1 se selecciona como siendo un grupo -(C=O)-R3;

- R3 se selecciona como siendo un grupo metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo. Mas preferentemente,

R3 se selecciona como siendo un grupo metilo;

- R4 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C12-C16, fenilo, 4-piranona, alquil Ci-Ci6-fenilo, alquenil C2-Ci6-fenilo y cicloalquilo de C3-C6, estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo

hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi de C1-C6 alquil C1-C6-tio, alquil C1-C6-

carboniloxi, piperidina, morfolina, fenilo, alcoxi C1-C6-fenilo, o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios alquil C1-C6-carboniloxi. Mas preferentemente, R4 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C12-C16; 4-piranona eventualmente sustituida por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxialquilo de C1-C6; fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo alquilo de C1-C6 o hidroxialquilo de C1-C6; alquil C1-C16-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo alcoxi C1-C6-alquil C1-C6-tio, alquil C1-C6-carboniloxi, alcoxi C1-C6-fenilo o alquenil C2-C6-fenilo, a su vez eventualmente sustituido por uno o varios alquil C1-C6-carboniloxi; alquenil C2-C16- fenilo; y cicloalquilo de C3-C6. De manera muy preferida, R4 se selecciona como siendo la 4-piranona, el 3,4,5-trimetoxibenzilo o un alquilo de C16;

- R5 y R6 se seleccionan independientemente el uno del otro como siendo un atomo de hidrogeno o un grupo seleccionado de entre alquilo de C1-C16, alquenilo de C2-C16, fenilo, piperidina, morfolina, alquil C1- C16-fenilo, alcoxi C1-C16-indol y cicloalquilo de C3-C6, estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6, alquil C1-C6-carboniloxi, fenilo, alcoxi C1-C6-fenilo, o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6 o alquil C1-C6-carboniloxi. Mas preferentemente, R5 y R6 se seleccionan independientemente el uno del otro como siendo un atomo de hidrogeno o un grupo seleccionado de entre alquilo de C1-C16; alquenilo de C2-C16; fenilo; piperidina; morfolina eventualmente sustituida por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi o alquilo de C1-C6; alquil C1-C16-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi o alcoxi de C1-C6; alcoxi C1-C16-indol; y cicloalquilo de C3-C6. De manera muy preferida, R5 es un atomo de hidrogeno y R6 se selecciona como siendo un alquilo de C16 o el 4- hidroxifeniletilo; y/o

- R5 y R6 forman, con el atomo de nitrogeno al que estan unidos, un heterociclo seleccionado de entre la piperidina, la morfolina, la hexametilenimina o la pirrolidina, eventualmente sustituido por uno o varios alquilo de C1-C6.

Los compuestos de formula (I) se pueden preparar mediante cualquier procedimiento conocido y utilizado clasicamente por el experto en la materia, en particular por analogfa con los procedimientos descritos en Chemische Berichte, 1952, 12, 1181.

A tftulo de ejemplo, algunos compuestos de formula (I) segun la presente invencion, para los cuales R4 es un grupo -O-R6 se pueden preparar:

- o bien por condensacion del cloruro del acido 4-acetoxi sinapfnico (obtenido por ejemplo segun Monatsch, Chem 41, 271 (1920)) con un grupo R6 tal como se ha definido anteriormente, en presencia de una amina terciaria, tal como la trietilamina, la piridina o la diisopropiletilamina, a una temperatura que varfa de 20°C a 155°C, y preferentemente a 25°C;

- o bien por esterificacion del acido sinapfnico dentro del tolueno en reflujo con el acido sulfurico o el acido metanosulfonico como catalizador, y despues acetilacion del ester a temperatura ambiente en la piridina con el anhfdrido acetico;

segun los esquemas de reaccion siguientes

imagen3

Asimismo, algunos compuestos de formula (I) segun la presente invencion, para los cuales R4 es un grupo - (N)R7R8 se pueden preparar:

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- o bien por condensacion del cloruro del acido 4-acetoxi sinapfnico (obtenido, por ejemplo, segun Spath, Monatsh, chem 41, 271 (1920)) con un grupo -(N)R7R8 tal como se ha definido anteriormente, efectuandose la reaccion en un disolvente clorado, tal como el cloruro de metileno, el cloroformo o de disolventes aromaticos tales como el tolueno o el diclorobenceno, en presencia de una amina terciaria o

10 de un amplio exceso de la amina de reaccion, a una temperatura que varfa de 20°C a 155°C, y

preferentemente a 25°C;

- o bien por reaccion en la dimetilformamida (DMF) o el tetrahidrofurano (THF) del acetato del acido sinapfnico sobre una amina en presencia de EDCl y de HOBt y de una amina terciaria;

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- o bien por un metodo denominado con anhfdrido mixto, es decir, por reaccion del acetato del acido sinapfnico en la acetona (u otros disolventes neutros) con una amina terciaria tal como la trietilamina y un cloroformiato de alquilo, tales como el cloroformiato de etilo, o el cloroformiato de isobutilo, seguido de la reaccion de una amina primaria o secundaria;

segun los esquemas de reaccion siguientes.

imagen4

MeO

Acido sinapinico

Acetilacion

MeO

l. Clo

uracion

1. TEA, acetona

l.DMFo THF

EDO, HOBt

2. Ami

dacion

2. Amidacion

MeO

7„8

O-NRR

MeO

Los compuestos de formula (I) segun la presente invencion pueden por lo tanto ser utilizados en cosmetica para el tratamiento del envejecimiento cutaneo, para un tratamiento adelgazante y/o para el blanqueamiento de la piel. 5

La presente invencion tiene por lo tanto tambien como objeto la utilizacion cosmetica de uno o varios compuestos de formula (I) tales como se ha definido anteriormente, como agente anti-edad, como agente adelgazante y/o como agente de blanqueamiento de la piel.

10 La presente invencion tiene asimismo por objeto una composicion cosmetica que comprende (a tftulo de principio activo) uno o varios compuestos de formula (I) tales como se han definido anteriormente, asf como su utilizacion para el tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo, para un tratamiento cosmetico adelgazante y/o para un tratamiento cosmetico de blanqueamiento de la piel.

15 Los compuestos de formula (I) segun la presente invencion se pueden utilizar tambien en el marco del tratamiento terapeutico del envejecimiento cutaneo, en particular en el marco del tratamiento de la enfermedad de Hutchinson-Gilford.

La presente invencion tiene por lo tanto tambien por objeto una composicion farmaceutica que comprende (a

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tftulo de principio activo) uno o varios compuestos de formula (I) tales como se han definido anteriormente. Preferentemente, la presente invencion tiene por objeto una composicion farmaceutica que comprende, a tftulo de principio activo, uno o varios compuestos de formula (I) tales como se han definido anteriormente, para el tratamiento del envejecimiento cutaneo. De manera muy preferida, la presente invencion tiene por objeto una composicion farmaceutica que comprende (a tftulo de principio activo) uno o varios compuestos de formula (I) tales como se han definido anteriormente, para su utilizacion en el marco del tratamiento de la enfermedad de Hutchinson-Gilford.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion se pueden formular en cualquier forma galenica apropiada para su administracion. Las composiciones segun la presente invencion se pueden formular asf en forma de crema, gel, locion, leche, emulsion aceite en agua o agua en aceite, solucion, unguento, pulverizador, aceite corporal, locion para despues del afeitado, jabon, barra protectora de labios, barra y lapiz para maquillaje.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion contienen uno o varios compuestos de formula (I) segun la presente invencion en unos contenidos que van del 0,005% al 75% en peso total de la composicion, preferentemente del 0,01% al 25% en peso total de la composicion, mas preferentemente del 0,05% al 5% en peso total de la composicion.

Para la preparacion de estas composiciones cosmeticas o farmaceuticas, uno o varios compuestos de formula (I) segun la presente invencion o una o varias de sus sales farmaceuticamente aceptables se mezclan con los excipientes utilizados clasicamente en el campo cosmetico.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion pueden adoptar la forma de una crema en la que uno o varios compuestos de formula (I) segun la presente invencion, o una o varias de sus sales farmaceuticamente aceptables estan asociados a los excipientes utilizados habitualmente en cosmetologfa.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion pueden adoptar la forma de geles en los excipientes apropiados tales como los esteres de celulosa u otros agentes gelificantes, tales como el carbopol, el sepinov (poliacrilato), la goma guar, etc.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion pueden tambien adoptar la forma de una locion o de una solucion en las que uno o varios compuestos de formula (I) segun la presente invencion, o una o varias de sus sales farmaceuticamente aceptables estan en forma encapsulada.

Las microesferas segun la invencion pueden estar, por ejemplo, constituidas por cuerpos grasos, por agar y por agua. Uno o varios compuestos de formula (I) segun la presente invencion, o una o varias de sus sales farmaceuticamente aceptables, pueden ser incorporadas en unos vectores de tipo liposomas, glicoesferas, ciclodextrinas, en quilomicrones, macro-, micro-, nano-partfculas, asf como macro-, micro- y nanocapsulas, y tambien ser absorbidas en polfmeros organicos en polvo, los talcos, bentonitas y otros soportes minerales.

Estas emulsiones tienen una buena estabilidad y se pueden conservar durante el tiempo necesario para la utilizacion a unas temperaturas comprendidas entre 0 y 50°C sin que haya sedimentacion de los constituyentes o separacion de fases.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion pueden tambien contener unos aditivos o unos adyuvantes habituales en cosmetologfa, como por ejemplo unos agentes antimicrobianos o unos perfumes, pero tambien unos lfpidos de extraccion o de sfntesis, unos polfmeros gelificantes y viscosificantes, unos tensioactivos, y unos emulsionantes, unos principios activos hidro- o liposolubles, unos extractos de plantas, unos extractos tisulares, unos extractos marinos, o unos activos de sfntesis.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion pueden tambien comprender otros principios activos complementarios seleccionados por su accion. Cuando las composiciones segun la presente invencion contienen unos principios activos complementarios, estos estan generalmente presentes en la composicion a una concentracion suficientemente elevada para que puedan ejercer su actividad.

Las composiciones cosmeticas o farmaceuticas segun la presente invencion se utilizan preferentemente a diario y son aplicadas una o varias veces al dfa.

La presente invencion se ilustra de manera no limitativa mediante los ejemplos siguientes.

Ejemplo 1: Compuestos segun la invencion

Compuesto: P.f. (°C) GC masa LCHP masa

McO MeO 0 '----' Compuesto 1: 132 428

McO McO O Compuesto 2: 145 386

MeO MeO O N----' Compuesto 3: 101 370

MeO ^—0—^ ^ 0—(CH,), —CII3 MeO O Compuesto 4: 82

MeO OMe O—^ ^ ^—OMe MeO O OMe Compuesto 5: 158 446

MeO MeO O N----' Compuesto 6: 134 368

MeO McO O '----' '---- Compuesto 7: 132 446

MeO ---- V°-0-^^Q MeO O ' Compuesto 8: 143 398

MeO MeO O Compuesto 9: 142 402

Compuesto: P.f. (°C) GC masa LCHP masa

MeO 0 __ o }—v rT V^o'1 MeO 0 0 Compuesto 10: 183 390

MeO 0 ^0—;,' o '.-'J v ,, o—C ._: o MeO 0 ; O 0 Compuesto 11: 208 560

MeO 0 /. ,, MeO 0 ''----' Compuesto 12: 112

MeO MeO 0 Compuesto 13: 137

—0 0— MeO M MeO 0 Compuesto 14: 118 416

—0 MeO \)—<^ \ MeO 0 Compuesto 15: 143 416

—0 OH MeO C y MeO 0 Compuesto 16: 191 402

0— MeO M MeO 0 Compuesto 17: 121 386

Compuesto: P.f. (°C) GC masa LCHP masa

—O MeO $ \ MeO 0 Compuesto 18: 99 386

MeO MeO O Compuesto 19: 100 341

MeO )—O J— o—^ MeO 0 Compuesto 20: 183 363

MeO j------y ^0^0)----^ —' MeO O Compuesto 21: 148 333

MeO \ ^ \ H / ° \ / ^ /~c-«H33 MeO O Compuesto 22: 128

MeO MeO O Compuesto 23: 140 357

MeO °V_ }r~\ H /0\}-------'\/N_C8H17 MeO O Compuesto 24: 125 377

MeO MeO O Compuesto 25: 130 355

MeO y^3^^_(C1Vr_0 MeO O Compuesto 26: 132 383

Compuesto: P.f. (°C) GC masa LCHP masa

McO °A ')r~\ H / 0 \=/V/N_C4H9 MeO 0 Compuesto 27: 161 321

McO <\ H / 0 \ /-----n-c3h7 MeO 0 Compuesto 28: 143 307

MeO MeO 0 Compuesto 29: 137 369

MeO )r~\ \ o-M—^n-c8h17 MeO O Compuesto 30: aceite 391

McO —r)A McO 0 0 \ Compuesto 31: 148 438

McO MeO 0 Compuesto 32: aceite 335

McO n \___, CH,CH„ \\ y/A H J / ° \ /-----\\ N CH3 ^ CH,CH, MeO 0 Compuesto 33: 150 377

McO McO O Compuesto 34: 204 305

Compuesto: P.f. (°C) GC masa LCHP masa

MeO MeO O Compuesto 35: 146 385

MeO MeO O Compuesto 36: 99 385

MeO °^ MeO O Compuesto 37: 135 321

MeO MeO O Compuesto 38: 154 305

MeO HO /=\ MeO O Compuesto 39: 204

MeO /=\ MeO O Compuesto 40: 399

MeO /=\ ' MeO O Compuesto 41: 413

Ejemplo 2: Preparacion del 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato de 2-(4-acetoxifenil)-etilo (compuesto 1)

Ejemplo 2.1 - Preparacion del cloruro de acido del acetato del acido sinapfnico

imagen5

5

Se ponen en suspension 7 g del acetato de acido sinapfnico en 60 ml de cloroformo. Se anaden despues 0,5 g de dimetilformamida (DMF) y despues se vierten 9,4 g de cloruro de tionilo. Se agita la mezcla de 5 a 20 h a 10 20°C, y despues se calienta a reflujo durante 3 h p or lo menos hasta 8 horas como maximo.

El cloroformo y el exceso de cloruro de tionilo se destilan al vacfo a 50-60°C.

El cloruro del acetato del acido sinapfnico (p.f.: 140-144°C) se obtiene en forma de un producto crist alizado,

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amarillo.

Ejemplo 2.2 - Preparation del 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato de 2-(4-acetoxifenil)-etilo (compuesto 1)

imagen6

Se ponen en solucion 7,5 g del cloruro del acetato de acido sinapfnico obtenido anteriormente en 60 ml de cloroformo o de cloruro de metileno o de tolueno. Se anaden 6 g de trietilamina (u otra amina terciaria), y despues 7,2 g (1 mol eq.) de acetato de 2-(4-hidroxifenil)etilo (obtenido segun Tetrahedron, 56, (2000), 51695175).

Se agita la mezcla a 20°C durante 10h. Se sigue la evolucion de la reaccion por CCM (cloroformo/metanol 9/1, revelacion UV). La solucion se lava tres veces con 100 g de agua, y despues se concentra al vacfo en seco. Los cristales obtenidos se recristalizan tres veces en 60 ml de etanol absoluto.

Despues de la filtracion y del secado, se afslan 2,4 g (un 43% de rendimiento) de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato de 2-(4-acetoxifenil)-etilo (compuesto 1) en forma de un polvo blanco roto (p.f.: 132°C/GC/ma sa = 98%).

Ejemplo 3: Preparacion del 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato del 2-isopropil-5-metilfenilo (compuesto 8)

imagen7

Se ponen en solucion 7,5 g de cloruro del acetato de acido sinapfnico obtenido segun el ejemplo 2.1 en 60 ml de cloroformo. Se anaden 8 g de piridina y 4 g de timol.

Se agita la mezcla a 20°C durante 10h como mfnimo. Se sigue la evolucion de la reaccion por CCM (cloroformo/metanol 9/1, revelacion UV). La mezcla se lava tres veces con 100 g de agua. La fase organica se concentra al vacfo en seco. El residuo obtenido se recristaliza en el etanol absoluto.

Despues de la filtracion y del secado, se obtienen 4,8 g (un 46% de rendimiento) de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato del 2-isopropil-5-metil fenilo en forma de un polvo de color crema (p.f. 143°C/GC/masa = 98,5 %)

Ejemplo 4: Preparacion del 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato de n-hexadecilo (compuesto 4)

imagen8

Se ponen en solucion 7,5 g de cloruro del acetato de acido sinapfnico obtenido segun el ejemplo 2.1 en 60 ml de diclorometano. Se anaden 8 g de dietilisopropilamina y 7 g de n-hexadecanol.

Se agita la mezcla a 20°C durante 20h aproximadamente. La evolucion de la reaccion se sigue por CCM (cloroformo/metanol 9/1, revelacion UV). La mezcla se lava tres veces con 100 g de agua. La fase organica se concentra al vacfo en seco. El residuo obtenido se recristaliza en isopropanol.

Despues de la filtracion y del secado (a 60°C), se obtienen 6,0 g (un 44% de rendimiento) de 4-acetoxi-3,5- dimetoxi cinamato de n-hexadecilo en forma de un polvo blanco crema (p.f.: 82°C/Analisis centesimales +/- 0,3% conforme/RMN conforme).

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Ejemplo 5: Preparacion del 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato de n-hexadecilo (compuesto 4)

Ejemplo 4.1 - Preparacion del 3,5-dimetoxi cinamato de n-hexadecilo

imagen9

En un reactor equipado de un Dean Stark, se ponen en suspension 11,2 g de acido sinapfnico (I) en 100 ml de tolueno. Se anaden 20 g de n-hexadecanol y 1 g de acido sulfurico. El conjunto se lleva a reflujo durante 5h, se extrae el agua.

El medio se enfrfa hasta aproximadamente 50°C y se concentra al vacfo. Se anaden al residuo 120 ml de acetato de etilo.

La solucion obtenida se lava dos veces con 100 g de agua, y despues se concentra el disolvente al vacfo a 50°C. Se anaden 120 ml de heptano al residuo y el conjunto se calienta a reflujo (solubilizacion) y despues se enfrfa hasta aproximadamente 20°C.

Los cristales beige se escurren y se secan a 60°C. Se afslan 20 g (rendimiento del 89%) de 3,5-dimetoxi cinamato de n-hexadecilo (p.f.: 62‘0/FTIR: conforme/LCHP: 98,8%/RMN conforme).

Ejemplo 4.2 - Preparacion del: 4-acetoxi-3,5-dimetoxi cinamato de n-hexadecilo (compuesto 4)

imagen10

Se disuelven 20 g de 3,5-dimetoxi cinamato de n-hexadecilo obtenido anteriormente en 100 g de piridina y se anaden 28 g de anhfdrido acetico. La evolucion de la reaccion se sigue por CCM en la mezcla cloroformo/metanol (9/1).

Despues de aproximadamente 20 horas a 20°C, la solu cion se concentra al vacfo a 55°C. Se anaden 100 ml de cloruro de metileno al residuo y se lava la solucion obtenida 2 veces con 100 g de agua.

La fase organica se concentra al vacfo. Se anaden 110 ml de isopropanol al residuo y se calienta el conjunto a reflujo (solubilizacion) y despues se enfrfa hasta aproximadamente 20°C.

Los cristales formados se escurren y se secan a 60°C. Se afslan 12,8 g (rendimiento del 57,3%) de 4-acetoxi-3,5- dimetoxi cinamato de n-hexadecilo en forma de polvo blanco (p.f.: 82°C/FTIR: conforme/RMN conforme).

Ejemplo 6: Preparacion del 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(fenil)-cinamamida (compuesto 19)

imagen11

Se ponen en solucion 5 g del acetato del acido sinapfnico en 30 ml de dimetilformamida (DMF).

Se anaden 4 g de EDCl.HCl y despues 2,8 g de HOBt.H2O. Se agita el medio a 20-25°C durante una hora.

Se anaden 10 g de trietilamina y despues 2 g de anilina sucesivamente al medio. Se agita la mezcla a 20°C durante 20h. Se anaden 100 g de agua y 100 ml de cloroformo, se agita el medio durante 30 minutos y despues se deja decantar.

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La fase organica inferior se retira y despues se lava dos veces con 70 ml de agua y se concentra al vacfo en seco. El residuo oleoso se recoge en 50 ml de heptano. El precipitado formado se filtra y se seca en horno ventilado a 60°C.

Se afslan 3,2 g (rendimiento del 50%) de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(fenil)-cinamamida en forma de un polvo blanco roto (p.f.: 100°C/LCHP masa: 341/FTIR: confo rime).

Ejemplo 7: Preparacion de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(cis-2,6-dimetilmorfolino)-cinamamida (compuesto 20)

imagen12

Se ponen en solucion 7,5 g del acetato de acido sinapfnico obtenido segun el ejemplo 2.1 en 60 ml de cloroformo y despues la mezcla se enfrfa a -10°C, se anaden 6 g de trietilamina y despues 3 g de cis-2,6-dimetilmorfolina gota a gota a una temperature inferior a 0°C.

Se agita el conjunto a 20°C durante 20h. El medio de reaccion se lava 3 veces con 100 g de agua. La fase organica inferior se concentra al vacfo en seco. El residuo se recristaliza en el acetato de isopropilo. El precipitado formado se filtra y se seca en horno ventilado a 60°C.

Se afslan 5,2 g (rendimiento del 54%) de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(cis-2,6-dimetilmorfolino)-cinamamida en forma de un polvo de color crema (p.f.: 183°C/LCHP masa: 363/FTIR: conforme).

Ejemplo 8: Preparacion de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi -N-(piperidino)-cinamamida (compuesto 21)

imagen13

Se ponen en suspension 5 g del acetato del acido sinapfnico en 50 ml de acetona. Se anade 1,9 g de trietilamina. Se obtiene entonces una solucion.

Se enfrfa el conjunto a aproximadamente -10°C y se anaden 2,6 g de cloroformiato de isobutilo gota a gota a una temperatura inferior a -5°C. Se agita el conjunto d urante una hora entre -5 y -10°C, y despues se anad e 1,7 g de piperidina, no superando la temperatura los 5°C. Se agita el medio a 20°C durante 20h. Se anaden enton ces 200 g de agua y el precipitado formado se filtra y despues se seca en horno ventilado a 60°C.

El solido obtenido se recristaliza en un mfnimo de metanol. Despues de la filtracion y del secado, se afslan 3,5 g (rendimiento del 55,5%) de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(piperidino)-cinamamida en forma de un polvo blanco (p.f.: 148°C/LCHP masa: 333/FTIR: conforme).

Ejemplo 9: Preparacion de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(3-fenilpropil)-cinamamida (compuesto 26)

imagen14

Se ponen en suspension 5 g del acetato del acido sinapfnico en 50 ml de acetona. Se anade 1,9 g de trietilamina.

Se enfrfa el conjunto hasta aproximadamente -10°C y se anaden 2,4 g de cloroformiato de etilo gota a gota a una temperatura inferior a -5°C.

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Se agita el conjunto durante una hora entre -5 y -10°C y despues se anaden 2,55 g de fenil-3-propilami na-1, no superando la temperature los 0°C. Se agita el medio a 20°C durante 12h.

Se anaden entonces 50 g de agua y el precipitado formado se filtra y despues se recristaliza en un mfnimo de etanol a 96° Despues de la filtracion y del secado, se afslan 4,6 g (rendimiento 62%) de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi- N-(3-fenilpropil)-cinamamida en forma de un polvo blanco (p.f.: 132°C/LCHP masa: 383/FTIR: conforme).

Ejemplo 10: Preparacion de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(5-metoxitriptamil)-cinamamida (compuesto 31)

imagen15

Se ponen en suspension 5 g del acetato del acido sinapfnico en 100 ml de acetona. Se anade 1,7 g de trietilamina.

Se enfrfa el conjunto hasta aproximadamente -10°C y se anaden 2,9 g de cloroformiato de isobutilo gota a gota a una temperatura inferior a -5°C.

Se agita el conjunto durante una hora entre -5 y -10°C y se anaden a continuacion 3,6 g de 5-metoxitri ptamina, no superando la temperatura los 0°C. El medio se ag ita a 25°C durante 48h. Se anaden 300 g de agua.

Despues de dos horas de agitacion, el precipitado formado se filtra y despues se recristaliza en el isopropanol. Despues de la filtracion y del secado, se afslan 4,2 g (rendimiento del 51%) en forma de un polvo de color crema (p.f.: 148°C/LCHP masa: 438/LCHP: 98% s/s %/FTIR: conforme).

Ejemplo 11: Preparacion de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(4'-hidroxifeniletil)-cinamamida (compuesto 36)

imagen16

Se ponen en suspension 5 g del acetato del acido sinapfnico en 80 ml de acetona. Se anaden 2 g de diisopropiletilamina.

El conjunto se enfrfa hasta aproximadamente -10°C y se anaden 2,9 g de cloroformiato de isobutilo gota a gota a una temperatura inferior a -5°C. Se agita el conjun to durante una hora entre -5 y -10°C.

Se anaden a continuacion 2 g de diisopropiletilamina y 3,3 g de clorhidrato de tiramina. Se agita el medio a 20°C durante 24h. Se anaden 300 g de agua.

Despues de dos horas de agitacion, el precipitado formado se filtra y despues se recristaliza en el etanol a 96° Despues de la filtracion y del secado, se afslan 6,1 g (rendimiento del 84%) de 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(4'- hidroxifeniletil)-cinamamida en forma de un polvo ligeramente coloreado (p.f.: 99°C/LCHP masa: 385/LCH P: 98,1% s/s % FtIR: conforme).

Ejemplo 12 - Actividad antioxidante

Se ha utilizado el metodo ORAC (Oxigen Radical Absorbance Capacity) descrito en Cao, G., Alessio, H. M., Cutler, R. G. Free radical Biology & Medecine 1993, 14: 303-311 «Oxigen-Radical Absorbance Capacity assay for antioxydants» y Benderitter, M., Vincent-Genid, L., Pouget, J. P., Voisin, P. Radiation Research 2003; 159 (4): 471-483 «The cell membrane as a bioosensor of oxydative stress induced by radiation exposure: multiparameter investigation» para medir la capacidad antioxidante de los compuestos de la invencion.

Por convencion, la actividad antioxidante ORAC de cualquier molecula se mide con respecto a una referencia reconocida que es un analogo de la vitamina E, el trolox (acido 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcroman-2-carboxflico),

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correspondiendo la capacidad antioxidante de 1 pM (micromol) de trolox por definicion a 1 unidad ORAC.

Los valores ORAC se anotan habitualmente en pmol TE/g (en micro mol de trolox Equivalente por gramo de producto a ensayar).

El trolox posee, teniendo en cuenta estas definiciones, un fndice ORAC de aproximadamente 3995 unidades.

Se han medido los valores ORAC de los compuestos 26 y 34 (media de 3 mediciones).

Los resultados se detallan en la Tabla 1 siguiente.

Tabla 1

Compuesto: Actividad antioxidante ORAC (pmol TE/g)

Trolox: 3995

Compuesto 31: 4874± 216

Compuesto 39: 20968 ± 992

Asf, se observa que el compuesto 26 posee una actividad antioxidante ligeramente superior a la del trolox, mientras que el compuesto 34 posee una actividad antioxidante 5 veces mas elevada que la del trolox.

Ejemplo 13 - Efectos adelgazantes

Se ha evaluado la actividad de los compuestos de la invencion sobre los adipocitos. Para ello, se han realizado unos ensayos sobre unos explantes de tejidos adiposos mantenidos en supervivencia segun el protocolo experimental siguiente.

Los productos a ensayar se introducen en el medio de cultivo. Despues de 9 dfas de tratamiento, la actividad se evalua mediante una dosificacion del glicerol liberado en el medio de cultivo.

Con el fin de poder comparar la actividad potencial de las moleculas, se utiliza como activo de referencia la cafefna (Sigma ref. C-0750 lote 127F0396), conocida por su actividad sobre los adipocitos (Studlar M. Z Ernahrungswiss. Junio de 1973; 12(2):109-20, “The effect of caffeine on the metabolism of lipids and carbohydrates").

Los explantes se preparan a partir de una plastia abdominal (P921-AB-40) de un donante femenino de 40 anos. Se han preparado 54 explantes de tejidos y se han puesto en supervivencia en medio suplementado con antibioticos penicilina/estreptomicina (Gibco ref. 15140 lote 918578) a 37°C y al 5% de CO2.

El tratamiento se ha realizado sobre 3 explantes mediante incorporacion de 100 pl de producto (el mismo al 2% de concentracion en el disolvente adecuado, DMSO) en 2 ml de medio de cultivo en los dfas D0, D2, D3, D5 y D7. La cafefna se ha diluido a la concentracion deseada en el medio de cultivo para estos mismos dfas. Los explantes de control no han recibido ningun tratamiento.

El D0, los 3 explantes se han extrafdo y congelado a -80°C. El D9, los explantes restantes se han extrafdo y conservado en las mismas condiciones. La extraccion de los lfpidos del medio de cultivo se ha realizado segun un modo de realizacion probado. El analisis del glicerol del medio de cultivo se ha realizado con la ayuda del kit de dosificacion del glicerol (Megazyme, K-GROL) en microplacas de 96 pocillos y la lectura se ha realizado a 340 nm con un lector de microplacas Tecam Infinite M200 asociado al programa Magellan.

Los resultados obtenidos se detallan en la Tabla 2 siguiente.

Tabla 2

Glicerol (mg/ml): Media Desviacion estandar % con respecto a la cafefna

Medio de cultivo: 0,022 0,005 4%

Cafefna (referencia): 0,096 0,022 100%

Compuesto 5: 0,083 0,037 82%

Compuesto 22: 0,114 0,047 124%

Los compuestos 5 y 22 poseen, por lo tanto, una actividad adelgazante mejorada comparada con la de la cafefna, reconocida como la referencia en la materia. En particular, la molecula 22 muestra una accion adelgazante un 24% superior a la de la cafefna.

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Ejemplo 14: Efecto sobre la produccion de progerina en unos cultivos monocapas de fibroblastos dermicos humanos normales procedentes de un sujeto maduro

Con el fin de estudiar la influencia de los compuestos de la invencion sobre la concentracion de progerina en las celulas, se ha utilizado el metodo de dosificacion descrito por C. Verdy, J.-E. Branka y N. Mekideche en «Quantitative assessment of lactate and progerine production in normal human cutaneous cells during normal ageing: effect of an alaria esculenta extract», Int. J. Cosmetic Science, 2011, 1-5.

El sistema de ensayo consiste en unas monocapas de fibroblastos dermicos humanos normales adultos obtenidos cultivando unas celulas procedentes de una plastia abdominal realizada en una mujer de 54 anos de edad.

La insulina a 10 nM se ha utilizado como producto de referencia en este estudio.

Las celulas se incubaron durante 96 horas en ausencia (control) o en presencia del producto de referencia o de concentraciones crecientes del activo en el ensayo (0,01 pg/ml; 0,1 pg/ml; 1 pg/ml).

El compuesto a ensayar se solubiliza en 1 mg/ml en DMSO, y despues se diluye en el medio de incubacion de las celulas, con una concentracion constante del 0,1% (v/v) en DMSO.

Al final del periodo de incubacion, por un lado, la progerina se ha cuantificado en los lisados celulares (obtenidos por accion de los ultrasonidos) con la ayuda de una dosificacion ELISA, sensible y especffica y, por otro lado, las protefnas contenidas en los lisados celulares se han cuantificado mediante un metodo de espectrocolorimetrfa (metodo de Bradford - Bradford M. (1976) Anal. Biochem., 72, 248-254).

La significatividad estadfstica de las diferencias observadas entre las condiciones “control” y “producto de referencia” se ha evaluado mediante un ensayo de Student (Student t test). La significatividad estadfstica de las diferencias observadas entre las condiciones “control” y los “productos en ensayo” se ha evaluado mediante un analisis de la varianza de un factor (One Way ANOVA) seguido de un ensayo de Holm-Sidak (*: p<0,05).

Los resultados obtenidos se detallan en las Tablas 3 y 4 siguientes.

Tabla 3

: Compuesto 2 Compuesto 5 Compuesto 10

(ng/ml)
(ng/ml)
(ng/ml)

10: 100 500 10 100 500 50 500 5000

Progerina (ng/mg de protefna): 233,7 170,6 300,1 284,0 206,0 916,2 274,9 301,7 261,2

353,5: 196,3 328,4 243,7 364,1 1021,7 225,1 296,1 245,9

273,6: 402,4 250,5 391,4 398,6 657,0 292,3 271,0 366,9

Media: 286,9* 256,4* 293* 306,4* 322,9* 865,0 264,1* 289,6* 291,4*

S.D.: 61,0 127,0 39,4 76,3 102,7 187,7 34,9 16,3 65,9

% DMSO: 25,8 23,1 26,4 27,6 29,1 77,9 23,8 26,1 26,2

Diferencia (%): -74,2 -76,9 -73,6 -72,4 -70,9 -22,1 -76,2 -73,9 -73,8

(*) Media significativamente indiferente de la del grupo DMSO (p<0,05)

Tabla 4

: Compuesto 22 Compuesto 36

(ng/ml)
(ng/ml)

10: 100 500 50 500 5000

Progerina (ng/mg de protefna): 880,7 711,0 967,8 1552,2 249,8 215,8

801,5: 548,8 727,4 690,1 288,8 200,8

830,7: 500,9 562,4 555,6 252,1 207,9

Media: 837,7 586,9* 752,5 932,6 263,6* 208,2*

S.D.: 40,1 110,1 203,9 540,8 21,8 7,5

% DMSO: 75,4 52,9 67,8 84,0 23,7 18,8

Diferencia (%): -24,6 -47,1 -32,2 -16,0 -76,3 -81,2

(*) Media significativamente indiferente de la del grupo DMSO (p<0,05)

En las condiciones experimentales consideradas, los compuestos 2, 5, 10, 22 y 36 disminuyen significativamente la neosfntesis de progerina y compensan asf el desequilibrio en la produccion de progerina observada durante el envejecimiento.

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Ejemplo 15: Efecto sobre la produccion de pro-colageno de tipo I en unos cultivos monocapas de fibroblastos dermicos humanos normales procedentes de un sujeto maduro

El activador de referencia utilizado es el Transforming Growth Factor p (TGF-p) a 1 ng/ml.

Las celulas se han incubado durante 48 horas en ausencia (control) o en presencia del producto de referencia o de concentraciones crecientes del activo en el ensayo (10 ng/ml; 100 ng/ml; 500 ng/ml o 1000 ng/ml).

Al final del periodo de incubacion, el pro-colageno de tipo I contenido en los medios de incubacion de los fibroblastos se ha cuantificado con la ayuda de un kit E.I.A. sensible y especffico.

Al final del periodo de incubacion, las protefnas contenidas en los lisados celulares se han cuantificado mediante un metodo de espectrocolorimetrfa (metodo de Bradford - Bradford M. (1976) Anal. Biochem., 72, 248-254).

La significatividad estadfstica de las diferencias observadas entre las condiciones “control” y “producto de referencia” se ha evaluado mediante un ensayo de Student (Student t test). La significatividad estadfstica de las diferencias observadas entre las condiciones “control” y los “productos en el ensayo” se ha evaluado mediante un analisis de la varianza de un factor (One Way ANOVA) seguido de un ensayo de Holm-Sidak (*: p<0,05).

Los resultados se dan en forma de pg de pro-colageno de tipo I por mg de protefna (media +/- la desviacion estandar, S.D.) y se detallan en la Tabla 5 siguiente.

Tabla 5

: Compuesto 5 Compuesto 10 Compuesto 36

(ng/ml)
(ng/ml)
(ng/ml)

10: 100 500 10 100 500 50 500 5000

Procolageno (pg/mg de protefna): 45,3 53,0 66,1 45,6 74,0 90,6 68,1 59,2 73,8

37,0: 52,3 62,3 48,7 75,9 95,4 57,8 65,1 64,8

36,8: 46,3 71,4 70,3 86,4 89,8 65,3 67,2 64,4

Media: 39,7* 50,5 66,6* 54,9 78,8* 91,9* 63,7* 63,9* 67,7*

S.D.: 4,8 3,7 4,5 13,4 6,7 3,1 5,3 4,1 5,3

% DMSO: 75,7 96,3 126,9 104,6 150,2 175,3 121,5 121,8 129,0

Diferencia (%): -24,3 -3,7 26,9 4,6 50,2 75,3 21,5 21,8 29,0

(*) Media significativamente indiferente de la del grupo DMSO (p<0,05)

Los compuestos dados en ejemplo inducen un aumento significativo de la neosfntesis de pro-colageno de tipo I, confiriendoles una actividad reestructurante de la matriz extracelular, y por lo tanto un efecto anti-edad de la piel.

Ejemplo 16: Efecto sobre la neosfntesis de la elastina en unos cultivos monocapas de fibroblastos dermicos humanos normales procedentes de un sujeto maduro

El activador de referencia utilizado es el acido ascorbico a 100 pg/ml.

Las celulas se incubaron durante 96 horas en ausencia (control) o en presencia del producto de referencia o de concentraciones crecientes del activo en el ensayo (10 ng/ml; 100 ng/ml; 500 ng/ml).

Al final del periodo de incubacion, la elastina contenida en el medio de incubacion de los explantes se ha cuantificado mediante un metodo espectrocolorimetrico.

Al final del periodo de incubacion, las protefnas contenidas en el lisado celular se han cuantificado mediante un

5

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metodo de espectrocolorimetrfa (metodo de de Bradford - Bradford M. (1976) Anal. Biochem., 72, 248-254).

Los resultados se dan en forma de pg de elastina por mg de protefna (media +/- desviacion estandar, S.D.).

A una concentracion de 10 ng/ml, los compuestos 22 y 36 daban respectivamente un aumento de la neosfntesis de la elastina de +16,7% y de +63,7%.

Ejemplo 17: Efecto sobre la sfntesis de la melanina

Estos experimentos han permitido demostrar la capacidad de los compuestos de la invencion para modular la produccion de melanina de melanocitos humanos normales cultivados en monocapas fibroblasticas de DKK.

Sistema de ensayo

Se han obtenido unas monocapas de fibroblastos dermicos humanos normales cultivando unas celulas procedentes de una plastia abdominal realizada en una mujer de 54 anos. Para la realizacion de los ensayos, estas celulas se han cultivado hasta la obtencion de monocapas confluentes.

Unas monocapas de melanocitos humanos normales se han obtenido cultivando unas celulas procedentes de una plastia abdominal realizada en una mujer de 41 anos. Para la realizacion de los ensayos, estos cultivos se han cultivado hasta la obtencion de monocapas no confluentes.

Incubacidn de los productos

Los fibroblastos se han incubado durante 48 horas a 37°C, bajo atmosfera humeda y al 5% de CO2, en ausencia (medio de cultivo solo) o en presencia de concentraciones crecientes (10; 50 ng/ml) del compuesto 5.

Despues, se han incubado los melanocitos durante 72 horas a 37°C, bajo atmosfera humeda y al 5% de CO2, en ausencia (medio de cultivo solo), o en presencia de acido kojico a 250 pM o de los medios fibroblasticos acondicionados (vease anteriormente) diluidos al 1/10 en el medio de cultivo de los melanocitos.

Preparacion del activo compuesto 5:

El activo se ha solubilizado en DMSO (sulfoxido de dimetilo).

Las diluciones se han realizado a continuacion en el medio de incubacion de las celulas con una concentracion constante del 0,01% (v/v) de DMSO.

Evaluacion de los efectos

Dosificacion de la melanina

Al final del periodo de incubacion, se ha cuantificado el contenido intracelular en melanina en los lisados melanocitarios mediante una medicion espectrofotometrica a 405 nm.

Dosificacion de las proteinas

Al final del periodo de incubacion, se han cuantificado las proteinas contenidas en los lisados celulares mediante un metodo espectrocolorimetrico (metodo de Bradford).

Resultados y estadfsticas

Los resultados se dan en forma de pg de melanina intracelular por mg de proteinas totales del tapiz celular (medias +/- desviacion estandar, S.D.).

La significatividad estadfstica de las diferencias observadas entre la condicion “control” y “producto en el ensayo” se ha evaluado mediante un analisis de la varianza de un factor (One Way ANOVA) seguido de un ensayo de Holm-Sidak (*: p<0,05).

Los resultados obtenidos se detallan en las tablas 6 y 7 siguientes,

Tabla 6

: Control Acido kojico 250 pM DMSO 0,1 %

Melanina/Protefnas (pg/mg): 16,7 14,3 15,8

15,2: 13,4 17,0

: Control Acido kojico 250 pM DMSO 0,1 %

: 16,5 14,1 18,1

Media: 16,1 14,0 17,0

S.D.: 0,8 0,5 1,1

% de control: 100,0 86,6* 105,1

(*) Media significativamente indiferente de la del DMSO 0,1% (p<0,05)

Tabla 7

: Compuesto 5 DMSO 0,01%

10 ng/ml: 50 ng/ml 100 ng/ml

Melanina/Protefnas (qg/mg): 14,2 14,3 15,8 16,1

11,7: 14,7 16,7 17,3

13,7: 14,7 16,0 18,4

Media: 14,3* 14,4* 16,2 17,3

S.D.: 1,3 0,2 0,5 1,1

% DMSO: 83,0 83,6 93,7 100,0

Diferencia (%): -17,0 -16,4 -6,3

(*) Media significativamente indiferente de la del DMSO 0,1% (p<0,05)

5

Estos resultados demuestran que el compuesto 5 disminuye la sfntesis de melanina en manera significativa, lo cual le confiere una actividad blanqueante.

los melanocitos de

Claims

5

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15

20

25

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35

40

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50

55

REIVINDICACIONES

1. Compuesto de formula general (I)

imagen1

en la que:

- R1 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C2-C6 o un grupo -(C=O)-R3;

- R2 se selecciona como siendo un grupo -O-R4 o -(N)R5R6;

- R3 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C1-C6;

- R4 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C12-C16, alquenilo de C12-C16, alquinilo de C12-C16,

fenilo, 4-piranona, alquil C1-C16-fenilo, alquenil C2-C16-fenilo, alquinil C2-C16-fenilo, cicloalquilo de C3-C6, alquil C1-C16-cicloalquilo de C3-C6, alquenil C2-C16-cicloalquilo de C3-C6 y alquinil C2-C16-cicloalquilo de C3- C6; estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi de C1-C6, alquil C1-C6-tio, alquil C1-C6-carboniloxi, fenilo, alcoxi C1- C6-fenilo, o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6 o alquil C1-C6-carboniloxi;

- R5 y R6 se seleccionan independientemente el uno del otro como siendo un atomo de hidrogeno o un grupo seleccionado de entre alquilo de C1-C16, alquenilo de C2-C16, alquinilo de C2-C16, fenilo, alquil C1- C16-fenilo, alquenil C2-C16-fenilo, alquinil C2-C16-fenilo, alcoxi C1-C16-indol, cicloalquilo de C3-C6, alquil C1- C16-cicloalquilo de C3-C6, alquenil C2-C16-cicloalquilo de C3-C6 y alquinil C2-C16-cicloalquilo de C3-C6; estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6, alquil C1-C6-carboniloxi, fenilo, alcoxi C1-C6- fenilo, o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6 o alquil C1-C6-carboniloxi;

- o R5 y R6 forman, con el atomo de nitrogeno al que estan unidos, un heterociclo seleccionado de entre la piperidina, la morfolina, la hexametilenimina o la pirrolidina, eventualmente sustituido por uno o varios alquilo de C1-C6;

con la excepcion de los compuestos siguientes:

- 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-morfolino-cinamamida;

- 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(2-metilmorfolino)-cinamamida; y

- 4-acetoxi-3,5-dimetoxi-N-(3,4,5-trimetoxifenil)-cinamamida.
2. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que R1 se selecciona como siendo un grupo -(C=O)- R5.
3. Compuesto segun la reivindicacion 1 o 2, caracterizado por que R3 se selecciona como siendo un grupo metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo.
4. Compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que R4 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C12-C16, fenilo, 4-piranona, alquil C-i-C16-fenilo, alquenil C2-C-i6-fenilo y cicloalquilo de C3-C6, estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi de C1-C6, alquil C1-Cartio, alquil C1-C6-carboniloxi, piperidina, morfolina, fenilo, alcoxi C1-C6- fenilo, o alquenil C2-Ca-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios alquil C1-Ca-carboniloxi.
5. Compuesto segun la reivindicacion 4, caracterizado por que R4 se selecciona como siendo un grupo alquilo de

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C12-C16; 4-piranona eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxialquilo de C1-C6; fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo alquilo de C1-C6 o hidroxialquilo de C1-C6; alquil C1-C16-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo alcoxi de C1-C6 alquil C1-C6-tio, alquil C1-C6-carboniloxi, alcoxi C1-C6-fenilo o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido a su vez por uno o varios alquil C1-C6- carboniloxi; alquenil C2-C16-fenilo; y cicloalquilo de C3-C6.
6. Compuesto segun la reivindicacion 5, caracterizado por que R4 se selecciona como siendo la 4-piranona, el 3,4,5-trimetoxibencilo o un alquilo de C16.
7. Compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por que R5 y R6 se seleccionan independientemente el uno del otro como siendo un atomo de hidrogeno o un grupo seleccionado de entre alquilo de C1-C16, alquenilo de C2-C16, fenilo, piperidina, morfolina, alquil C1-C16-fenilo, alcoxi C1-C16-indol y cicloalquilo de C3-C6, estando cada uno de estos grupos eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi, amino, alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6, alquil C1-C6-carboniloxi, fenilo, alcoxi C1-C6-fenilo, o alquenil C2-C6-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo alquilo de C1-C6, hidroxialquilo de C1-C6, alcoxi C1-C6, tioalquilo de C1-C6 o alquil C1-C6-carboniloxi.
8. Compuesto segun la reivindicacion 7, caracterizado por que R5 y R6 se seleccionan independientemente el uno del otro como siendo un atomo de hidrogeno o un grupo seleccionado de entre alquilo de C1-C16; alquenilo de C2-C16; fenilo; piperidina; morfolina eventualmente sustituida por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi o alquilo de C1-C6; alquil C1-C16-fenilo eventualmente sustituido por uno o varios sustituyentes seleccionados independientemente los unos de los otros como siendo un grupo hidroxi o alcoxi de C1-C6; alcoxi C1-C16-indol; y cicloalquilo de C3-C6.
9. Compuesto segun la reivindicacion 8, caracterizado por que R5 es un atomo de hidrogeno y R6 se selecciona como siendo un grupo alquilo de C16 o el 4-hidroxifeniletilo.
10. Composicion cosmetica que comprende un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
11. Composicion segun la reivindicacion 10 para el tratamiento cosmetico del envejecimiento cutaneo, para un tratamiento cosmetico adelgazante y/o para un tratamiento cosmetico de blanqueamiento de la piel.
12. Composicion farmaceutica que comprende un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
13. Composicion segun la reivindicacion 12, para su utilizacion en el marco del tratamiento de la enfermedad de Hutchinson-Gilford.