ES2262522T3 - Combinacion de bacterias de acido lactico y su uso para la prevencion y/o tratamiento de infecciones y estados patologicos inflamatorios. - Google Patents

Combinacion de bacterias de acido lactico y su uso para la prevencion y/o tratamiento de infecciones y estados patologicos inflamatorios.

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ES2262522T3 ES00940762T ES00940762T ES2262522T3 ES 2262522 T3 ES2262522 T3 ES 2262522T3 ES 00940762 T ES00940762 T ES 00940762T ES 00940762 T ES00940762 T ES 00940762T ES 2262522 T3 ES2262522 T3 ES 2262522T3
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Abstract

Combinación de bacterias de ácido láctico que comprende (a) un primer componente constituido por al menos una cepa de bacteria láctica productora de H2O2, y (a) un segundo componente constituidos por al menos una cepa de bacteria láctica que utiliza arginina, seleccionándose el componente (a) del grupo constituido por las cepas de las especies Lactobacillus crispatus, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus casei, y el componente (b) es la cepa Lactobacillus brevis CD2 depositada en el DSM - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, el 6 de febrero de 1998 con número de acceso DSM 11988 a tenor del tratado de Budapest.

Description

Combinación de bacterias de ácido láctico y su uso para la prevención y/o tratamiento de infecciones y estados patológicos inflamatorios.
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La presente invención se refiere a una combinación de bacterias de ácido láctico y su uso para preparar un suplemento alimenticio, un producto para la higiene o una preparación farmacéutica para la prevención y/o tratamiento de infecciones y estados patológicos inflamatorios causados por bacterias, virus u hongos, en especial en la boca, vagina, uretra, nariz, ojos oídos.
Las bacterias de ácido láctico son bacterias Gram-positivas que producen ácido láctico mediante la fermentación de glucosa. Streptococcus thermophilus está incluida también esta definición por convenio.
Es bien conocido que las cepas de bacterias lácticas que producen H_{2}O_{2} pueden actuar como reguladores de la flora bacteriana en orificios corporales y sobre membranas mucosas. Se ha demostrado que las bacterias lácticas productoras de H_{2}O_{2} pueden antagonizar E. coli, N. gonorrhoea, G. vaginalis, C. trachomatis, U. urealyticum y B. bivius. No obstante, estas bacterias tienen solo un beneficio limitado cuando se usan en la práctica médica. Esto se puede apreciar por el hecho de que las preparaciones basadas en bacterias lácticas (por ejemplo pesarios vaginales) destinadas al tratamiento de infecciones por los microorganismos anteriores (por ejemplo vaginitis) no están muy consideradas por los médicos, quienes prefieren tratar a sus pacientes con antibióticos o agentes quimioterápicos.
Hasta donde llegan los conocimientos de los autores de la invención, no se ha atribuido acción antibacteriana o reguladora de la flora en orificios corporales y en membranas mucosas a bacterias lácticas que utilizan arginina.
Se ha descubierto de forma sorprendente que la actividad de las bacterias lácticas productoras de H_{2}O_{2} se potencia de forma considerable mediante la adición de una o más cepas de bacterias lácticas que puedan utilizar arginina. La arginina forma parte de diversos péptidos encontrados en fluidos biológicos y también está presente como arginina libre. Muchas especies bacterianas la utilizan para su propia nutrición y crecimiento. Las bacterias lácticas que utilizan arginina pueden, por tanto, privar a otras bacterias patógenas o potencialmente patógenas de una cierta cantidad de arginina que -aunque no suficiente para interrumpir su crecimiento- hacen que sean más susceptibles a la acción del H_{2}O_{2} producido por las bacterias lácticas.
La presente invención proporciona por tanto una combinación de bacterias lácticas como se define en las reivindicaciones, que comprende:
(a)
un primer componente consistente en al menos una cepa de bacteria láctica productora de H_{2}O_{2}, y
(b)
un segundo componente consistente en al menos una cepa de bacterias lácticas que utilizan arginina.
La cepa de bacterias lácticas en el componente (a) se elige de un grupo constituido por las cepas de las especies Lactobacillus crispatus, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus casei, mientras que la cepa de la bacteria láctica en el componente (b) es la cepa Lactobacillus brevis CD2 depositada en el DSM - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania el 6 de febrero de 1998 con el número de acceso DSM 11988 según el Tratado de Budapest.
La relación del número de bacterias en el componente (a) al número de bacterias en el componente (b) varía con preferencia de 1:100 a 100:1 y, más especialmente de 1:5 a 5:1, siendo la relación más preferida 1:1.
La combinación se puede administrar en forma de dosis unitaria que comprende de 1 x 10^{2} a 5 x 10^{11} bacterias de componente (a) y de 1 x 10^{2} a 5 x 10^{11} bacterias de componente (b), con preferencia 1 x 10^{9} bacterias de componente (a) y 3 x 10^{9} bacterias de componente (b).
La combinación también se puede administrar en forma de comprimidos, comprimidos para desleír, caramelos, gomas de mascar, cápsulas de gelatina, pesarios, supositorios y microenemas, así como en forma de granulado, cremas dentales y geles, polvos para la dentadura postiza, enjuagues bucales, dentífricos, pulverizadores, suspensiones y pomadas.
De acuerdo con otra realización de la invención, la combinación comprende además al menos otra cepa de bacteria láctica elegida del grupo constituido por:
Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus leichmannii, Lactobacillus minutus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus brevis, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium angulatum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium erik- sonii, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium plantarum y Streptococcus thermophilus.
La combinación también puede comprender vitaminas, bases de amonio cuaternario, sales minerales, antioxidantes y agentes contra la placa.
La invención también se refiere al uso de una combinación de bacterias lácticas como se define en la reivindicaciones que comprende:
(a) un primer componente consistente en al menos una cepa de bacteria láctica productora de H_{2}O_{2}, y
(b) un segundo componente consistente en al menos una cepa de bacterias lácticas que utilizan arginina para preparar un suplemento alimentario, un producto para la higiene o una preparación farmacéutica para la prevención y/o tratamiento de infecciones y estados patológicos inflamatorios causados por bacterias, virus u hongos, en especial en la boca, vagina, uretra, nariz, ojos y oídos. Estas infecciones y estados patológicos inflamatorios incluyen gingivitis, periodontitis, mucositis y estomatitis causadas por fármacos y/o agentes físicos, síndrome de Behçet, diaqueratosis de la cavidad oral, glositis, llagas en la garganta, sialadenitis, sialolitiasis, penfingo, líquen plano, síndrome de Sjogren, vaginosis, vaginitis, uretritis, prostatitis, proctitis, otitis, conjuntivitis, rinitis, sinusitis, leucoplasia, aftas, herpes e infecciones por Helicobacter pilori en la cavidad oral.
La combinación también se puede usar con ventaja para el tratamiento de la cavidad oral como desodorante oral, agente antiinflamatorio, anticaries y/o antiplaca.
Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar los diversos aspectos de la invención con más detalle aunque no se considerarán en modo alguno que son limitantes de la invención.
Ejemplo 1
Se evaluó el efecto inhibidor de bacterias lácticas productoras de H_{2}O_{2} (Componente A); bacterias lácticas que utilizan arginina (Componente B); y la combinación de las dos cepas, de forma específica en la relación 1:1 (Combinación AB); sobre el crecimiento de bacterias potencialmente patógenas.
De forma resumida, se ajustó primero el cultivo de las bacterias lácticas a ensayar a pH neutro, debido a que un pH ácido inhibe de por si el crecimiento bacteriano. La suspensión se sometió a filtración estéril y el filtrado se usó para impregnar una serie de discos de papel absorbente (30 \mul de filtrado por disco). Los discos se colocaron en una placa de medio de crecimiento selectivo que se había inoculado con 0,1 ml de Gardnerella vaginalis (una cepa que provoca vaginosis y que se aisló en un laboratorio) junto con un disco control que se impregnó únicamente con 30 \mul de agua destilada. Después de incubar durante 24 horas a 37ºC, se evaluó la inhibición del crecimiento de los patógenos midiendo el diámetro del halo alrededor del disco en milímetros.
Se llevó a cabo una segunda serie de ensayos con Streptococcus mutans como patógeno diana, siendo esta especie el agente causante de la placa dental y la caries.
La caracterización de las bacterias como productoras de H_{2}O_{2} se realizó por la reacción de benzidina peroxidasa clásica, que revela las colonias de bacterias que producen H_{2}O_{2} por una coloración azul. La actividad de arginina deshidrolasa se determinó para evaluar la capacidad de las bacterias lácticas para utilizar arginina (M.C. Manca de Nadra, Milchwissenschaft, 37 (1982) páginas 669-670].
Las bacterias lácticas se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Estados
Unidos.
Cepa bacteriana Halo de inhibición (actividad
anti-G. vaginalis, mm)
Productor de H_{2}O_{2} (Componente A)
Lactobacillus crispatus (ATCC 39197) 75
Lactobacillus salivarius (ATCC 11741) 60
Lactobacillus crispatus + Lactobacillus salivarius 63
Utilizador de arginina (Componente B)
Lactobacillus brevis (ATCC 14869) 0
Lactobacillus fermentum (ATCC 14931) 2
Lactobacillus brevis + Lactobacillus fermentum 0
Combinación AB (relación de A a B 1:1)
Lactobacillus crispatus + Lactobacillus brevis 112
Lactobacillus crispatus + Lactobacillus fermentum 100
Lactobacillus salivarius + Lactobacillus brevis 117
Lactobacillus salivarius + Lactobacillus fermentum 104
(Continuación)
Cepa bacteriana Halo de inhibición (actividad
anti-S. mutants, mm)
Productor de H_{2}O_{2} (Componente A)
Lactobacillus crispatus (ATCC 39197) 98
Lactobacillus salivarius (ATCC 11741) 102
Lactobacillus crispatus + Lactobacillus salivarius 99
Utilizador de arginina (Componente B)
Lactobacillus brevis (ATCC 14869) 0
Lactobacillus fermentum (ATCC 14931) 1
Lactobacillus brevis + Lactobacillus fermentum 1
Combinación AB (relación de A a B 1:1)
Lactobacillus crispatus + Lactobacillus brevis 118
Lactobacillus crispatus + Lactobacillus fermentum 126
Lactobacillus salivarius + Lactobacillus brevis 121
Lactobacillus salivarius + Lactobacillus fermentum 120 
\global\parskip0.990000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2
Se prepararon comprimidos para desleír con la siguiente composición unitaria:
Combinación AB
(Lactobacillus salivarius + Lactobacillus brevis, relación 1:1) 4000 millones
Manitol 400 mg
Sacarina 5 mg
Polioxietileno 50 mg
Estearato de magnesio 15 mg
Talco 25 mg
Sílice 5 mg
Estos comprimidos se administraron a cuatro voluntarios a los que se pidió que no se lavaran los dientes o usaran goma de mascar durante la semana anterior. Los sujetos tomaron tres comprimidos al día durante una semana, después de las comidas, dejando que los comprimidos se disolvieran en la boca. Las evaluaciones clínicas se realizaron tanto para el índice de placa dental como para el índice de placa gingival.
Para la placa dental se usó el siguiente sistema de puntuación en seis dientes (primer molar superior derecho; incisivo central superior izquierdo; primer premolar superior izquierdo; primer molar inferior izquierdo; incisivo central inferior derecho; primer premolar inferior derecho):
0 - sin aparición de placa
1 - no hay placa visible
2 - placa visible
3 - placa muy evidente.
El siguiente sistema de puntuación se adoptó para evaluar la placa gingival, usando el margen de los seis dientes anteriormente mencionados:
0 - sin inflamación
1 - ligera inflamación
2 - inflamación moderada con hemorragia al contacto
3 - inflamación notable, con tendencia a hemorragia espontánea.
Los datos combinados obtenidos para los seis dientes de los cuatro voluntarios fueron los siguientes:
Sujeto Índice de placa dental Índice de placa gingival
0 7 días 0 7días
Nº 1 8 2 7 1
Nº 2 9 3 10 3
Nº 3 15 5 6 2
Nº 4 15 7 8 3
Ejemplo 3
Se trataron durante diez días cuatro sujetos con un diagnóstico clínico e histológico de úlceras aftosas recurrentes con seis comprimidos para desleír al día, cuya composición se da en el Ejemplo 2.
Todos los pacientes tratados mostraron una curación completa de las úlceras al finalizar el curso de diez días y ninguno de ellos tuvo nuevas úlceras durante el mes siguiente.
Para mejorar el aroma y apariencia de la combinación AB bacteriana, se pueden añadir agentes colorantes y edulcorantes adecuados, tales como sacarina, esencia de menta y xilitol, como es habitual y bien conocido por los expertos en la técnica.
La combinación AB se puede administrar en forma de granulado, caramelos, goma de mascar, cápsulas de gelatina, cremas y geles dentales, polvos para la dentadura postiza, enjuagues bucales, dentífricos, comprimidos, pesarios, supositorios, pulverizadores, suspensiones y microenemas.
Ejemplo 4 Preparación de una pasta dental Base de pasta dental
Composición porcentual:
\hskip0,5cm Fosfato cálcico dihidratado 37,5%
\hskip0,5cm Glicerol (85% en agua) 30,0%
\hskip0,5cm Aroma (aceite de menta) 1,0%
\hskip0,5cm Carboximetilcelulosa sódica 1,0%
\hskip0,5cm Agua purificada 20,8%
\hskip0,5cm Sacarina sódica (solución acuosa al 1%) 2,5%
\hskip0,5cm Lauril sulfato sódico 2,0%
\hskip0,5cm Agua purificada 5,2%
\overline{100.0%}
Composición en peso:
\hskip0,5cm Fosfato cálcico dihidratado 337,5 g
\hskip0,5cm Glicerol (85% en agua) 270,0 g
\hskip0,5cm Aroma (aceite de menta) 9,0 g
\hskip0,5cm Carboximetilcelulosa sódica 9,0 g
\hskip0,5cm Agua purificada 187,2 g
\hskip0,5cm Sacarina sódica (solución acuosa al 1%) 22,5 g
\hskip0,5cm Lauril sulfato sódico 18,0 g
\hskip0,5cm Agua purificada 48,8 g
\overline{900.0%}
El glicerol se añadió al fosfato cálcico dihidratado, que se había molido y pasado a través de un tamiz de malla 50. La mezcla se dejó hidratar, dando lugar a una pasta homogénea densa. El aroma (1% de esencia de menta) se añadió en este punto.
Se hidrato la carboximetil celulosa de sodio en agua durante la noche (concentración de 4,6% en agua purificada).
La solución de sacarina sódica se añadió al gel espeso resultante.
El gel polimérico se vertió en un mortero que ya contenía el fosfato cálcico que se había hidratado con glicerol y se mezclaron intensamente los componentes.
Se preparó por separado una solución aproximadamente 28% de laurilsulfato sódico en agua purificada.
La solución de laurilsulfato sódico se añadió entonces a la pasta espesa de fosfato dicálcico.
La pasta homogénea espesa resultante, que tenía buenas propiedades reológicas se mezcló durante unos pocos minutos y luego se refinó haciéndola pasar por una refinador con rodillos. Esto proporcionó una pasta homogénea color blanco nieve con un agradable aroma de menta.
Se hicieron pasar a través de un tamiz de malla 50 38,5 g de bacterias lácticas liofilizadas (L. salivarius + L. brevis, 1 : 1; 10^{10} CFU/g) y se añadió en pequeñas porciones al resto (770 g) de la base de pasta dental anterior. La pasta homogénea resultante tenía un color marrón ligeramente pálido y un olor a menta.
Ejemplo 5 Preparación de comprimidos vaginales de liberación rápida
Se prepararon comprimidos vaginales recubiertos con una capa efervescente mediante granulación por vía húmeda. Los comprimidos pesaban 2100 mg cada uno y contenían 100 mg de la combinación de bacterias lácticas como sustancia activa.
Cada comprimido vaginal tenía la siguiente composición:
Bacterias lácticas liofilizadas y seleccionadas (30 x 10^{9} de L. brevis, 30 x 10^{9}
de L. salivarius y 90 x 10^{9} de L. plantarum por gramo) 100,0 mg
Lactosa 1368,0 mg
Almidón de maíz 246,0 mg
Ácido adípico 192,0 mg
Bicarbonato sódico 150,0 mg
Estearato de magnesio 30,0 mg
Ácido esteárico 9,0 mg
Sílice coloidal 5,0 mg
\overline{2100.0 \ mg}

Claims (18)

1. Combinación de bacterias de ácido láctico que comprende
(a) un primer componente constituido por al menos una cepa de bacteria láctica productora de H_{2}O_{2}, y
(a) un segundo componente constituidos por al menos una cepa de bacteria láctica que utiliza arginina, seleccionándose el componente (a) del grupo constituido por las cepas de las especies Lactobacillus crispatus, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus casei, y el componente (b) es la cepa Lactobacillus brevis CD2 depositada en el DSM - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, el 6 de febrero de 1998 con número de acceso DSM 11988 a tenor del tratado de Budapest.
2. Combinación según la reivindicación 1, en la que la relación del número de bacterias en el componente (a) al número de bacterias en el componente (b) varía de 1:100 a 100:1.
3. Combinación según la reivindicación 2, en la que la citada relación varía de 1:5 a 5:1.
4. Combinación según la reivindicación 3, en la que la citada relación es 1:1.
5. Combinación según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en unidades de dosis unitaria que comprenden de 1 x 10^{2} a 5 x 10^{11} bacterias de componente (a) y de 1 x 10^{2} a 5 x 10^{11} bacterias de componente (b).
6. Combinación según la reivindicación 5, que comprende 1 x 10^{9} bacterias de componente (a) y 3 x 10^{9} bacterias de componente (b).
7. Combinación según la reivindicación 5 ó 6, en forma de comprimidos, comprimidos para desleír, caramelos, goma de mascar, cápsulas de gelatina, pesarios, supositorios y microenemas.
8. Combinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en forma de granulados, cremas y geles dentales, polvos para la dentadura postiza, enjuagues bucales, dentífricos, pulverizadores, suspensiones y pomadas.
9. Combinación según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además al menos una cepa adicional de bacteria láctica elegida de un grupo constituido por Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus leichmannii, Lactobacillus minutus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus brevis, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium angulatum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium eriksonii, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium plantarum y Streptococcus thermophilus.
10. Combinación según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además vitaminas, bases de amonio cuaternario, sales minerales, antioxidantes y agentes contra la placa.
11. Uso de una combinación de bacterias lácticas que comprende:
(a) un primer componente constituido por al menos una cepa de bacteria láctica productora de H_{2}O_{2}, y
(b) un segundo componente constituido por al menos una cepa de bacteria láctica que utiliza arginina, seleccionándose el componente (a) del grupo constituido por las cepas de las especies Lactobacillus crispatus, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus casei, y el componente (b) es la cepa Lactobacillus brevis CD2 depositada en el DSM - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, el 6 de febrero de 1998 con número de acceso DSM 11988 a tenor del tratado de Budapest, para preparar un suplemento alimentario, un producto para la higiene o una preparación farmacéutica que tiene actividad inhibidora del crecimiento del agente patógeno para la prevención y/o tratamiento de infecciones y estados patológicos inflamatorios causados por bacterias, virus u hongos, en especial en la boca, vagina, uretra, nariz, ojos y oídos.
12. Uso según la reivindicación 11, en la que las infecciones y estados patológicos inflamatorios incluyen gingivitis, periodontitis, mucositis y estomatitis provocados por fármacos y/o agentes físicos, síndrome de Behçet, diaqueratosis de la cavidad oral, glositis, llagas en la garganta, sialadenitis, sialolitiasis, penfingo, líquen plano, síndrome de Sjogren, vaginosis, vaginitis, uretritis, prostatitis, proctitis, otitis, conjuntivitis, rinitis, sinusitis, leucoplasia, aftas, herpes e infecciones por Helicobacter pilori en la cavidad oral.
13. Uso según la reivindicación 11 ó 12 para el tratamiento de la cavidad oral como como agente antiinflamatorio, anticaries y/o antiplaca.
14. Uso según la reivindicación 11, para el tratamiento de la cavidad oral como desodorante.
15. La composición según la reivindicación 1, en la que el componente (a) es Lactobacillus crispatus.
16. La composición según la reivindicación 1, en la que el componente (a) es Lactobacillus salivarius.
17. La composición según la reivindicación 1, en la que el componente (a) es Lactobacillus salivarius y el componente (b) comprende además Lactobacillus fermentum.
18. La composición según las reivindicaciones 13-17, en la que la relación del número de bacterias en el componente (a) al número de bacterias en el componente (b) es 1:1.
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