DE69802260T2

DE69802260T2 - Pharmazeutische Zusammensetzungen enthaltend Lactobacillus brevis und Lactobacillus salivarius zur Behandlung von Vaginainfektionen

Info

Publication number: DE69802260T2
Application number: DE69802260T
Authority: DE
Inventors: Renata Maria Anna Cavaliere Vesely; Claudio De Simone
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-04-30
Filing date: 1998-04-30
Publication date: 2002-07-04
Anticipated expiration: 2018-05-01
Also published as: PT956858E; HU225491B1; AR017404A1; DK0956858T3; DE69802260D1; HUP9802525A3; USRE39892E1; EP0956858B1; US6277370B1; PL329780A1; CA2254548A1; HK1022439A1; HUP9802525A1; HU9802525D0; EP0956858A1; KR19990083612A; AU745286B2; AU9240098A; ES2165139T3; PL189577B1

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf die Verwendung von besonderen Arten von Milchbakterien zur Zubereitung von pharmazeutischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Vaginainfektionen sowie auf die so zubereiteten pharmazeutischen Zusammensetzungen.
Die normale Vagina und die normale Zervix beherbergen eine Reihe von Bakterien, die mit jenen gastrointestinalen vergleichbar sind. Diese Bakterien sind häufig mit nicht gonokokkischen Infektionen des weiblichen Geschlechtsapparates verwickelt (z.B.: vulvovaginale Abszesse und Abszesse der Bartolino-Drüse oder der größeren Vestibulardrüse, endometritische, salpingitische, ovariale Abszesse und Pelviperitonitis). Im Verlaufe von Beckenentzündungsstörungen nicht geschlechtlicher Natur wird häufig eine Mischung von anaeroben und aeroben Bakterien vorgefunden; eine solche Reihe von Bakterien kann für Infektionen nach gynäkologischen, chirurgischen Eingriffen, Geburt, Abortus verantwortlich sein und ist den intrauterinen Einrichtungen zur Vorbeugung der Schwangerschaft (IUD) zugeordnet worden.
Die bakterische Vaginosis ist die Folge einer bakterischen Zusammenwirkung, die für die Substitution auf dem vaginalen Niveau der Milchbakterien seitens einer hohen Anzahl von anaerobischen Bakterien, inbegriffen Bacteroides, Peptostreptokokkus, Peptokokkus, Mobiluncus G. vaginalis verantwortlich ist. Dieses Syndrom ist durch eine schlechtriechende, jedoch nicht besonders irritierende Sekretion gekennzeichnet. Der Juckreiz ist geringfügig und die Diaspareunie ist außergewöhnlich selten. Die bakterische Vaginosis ist im allgemeinen unter Frauen diagnostiziert, die vaginale Störungen aufweisen, obwohl 50% der Frauen, die auf die Diagnosekriterien für bakterische Vaginosis ansprechen, asyntomatisch sind. Die bakterielle Vaginosis ist der sexuellen Aktivität zugeordnet und nimmt mit der Zunahme der Anzahl der Geschlechtspartner zu; diese Affektikon wird jedoch nicht als ausschließlich sexuelle Übertragung angesehen.
Obwohl die bakterielle Vaginosis eine leichte Störung ist, kann sie vorbereitend sein für die Entwicklung von schwerwiegenderen Infektionen des Geschlechtsapparates, insbesondere während der Schwangerschaft.
Die Diagnose der bakteriellen Vaginosis erfolgt, wenn drei von vier der folgenden Kriterien vorgefunden werden:
(1) Vaginale, homogene, nicht entzündliche Sekretion, die an den Vaginalwänden anhaftet;
(2) vaginaler Fluss mit einem pH größer als 4, 5;
(3) Indikationszellen; und
(4) ekelhafter Geruch der vaginalen Sekretion vor oder nach der Zugabe von 10% von Kaliumhydroxid (Test von Whiff).
Die Vaginitis ist hingegen durch eine abnormale Vaginalsekretion, durch lokale Irritation und durch Vulvajuckreiz gekennzeichnet. Diese Symptome sind die Erscheinung einer lokalen Infektion durch T. vaginalis, o Candida (vor allem Candida albicans). Die Vaginosis und die symptomatische Vaginitis sind dem Diabetes, Hypoparatyroidismus, veränderten Abwehr des Gastorganismus cortiscosteroidea Therapie, antibiotische Therapie mit weitem Spektrum, oralen, empfängnisverhütenden Arzneimitteln und Schwangerschaft zuzuordnen. Der Juckreiz und die Sekretion sind die Hauptsymptome der Vaginitis von Candida. Gelegentlich erscheint Dispareunie. Es kann Erythem der Vulva und vulvovaginales Mundschwämmchen festgestellt werden. Die Vaginitis-Diagnose von Candida erfordert die Anwesenheit von lokalen Symptomen, da üblicherweise die Frauen die Candida in der Vagina ohne irgend einer Störungsäußerung haben können. Die Ergebnisse letzter Studien haben das Erkennen der Rolle ermutigt, welche die Milchbakterien beim Erhalten eines normalen Bakteriengleichgewichtes innerhalb der dynamischen Ökosysteme besitzen, wie die Vagina und zur Vorbeugung von geschlechtlichen Infektionen, die durch pathogene Organismen verursacht werden.
Es ist sehr wohl die Tatsache bekannt, dass zahlreiche Milchbakterien die Vagina von erwachsenen, gesunden Frauen kolonisieren. Sie verbreiten sich, indem sie als Energiespender das Glykogensekret aus der vaginalen Schleimhautmembrane benutzen und mit den pathogenen Wirkstoffen wetteifern, die von dieser derart abstammen, dass das vom Angriff von anderen Bakterien verteidigte vaginale Lumen erhalten bleibt.
Es wurden vor allem Sulfonamide, Antibiotika und Desinfektionsmittel zur Behandlung der oben angeführten Krankheiten (beispielsweise die nicht spezifische Vaginitis, die Vaginosis, der Vulvajuckreiz) verwendet. Insbesondere wurden in den letzten Jahren mit der Entwicklung von zahlreichen Antibiotika, häufig antibiotische Präparate an Patienten verabreicht. Die in der Vagina anwesenden Milchbakterien können zufolge der Verabreichung dieser Antibiotika absterben. Unglücklicherweise können die pathogenen Bakterien (beispielsweise Staphylokokkus) Widerstand gegen die Antibiotika gewinnen und daher die Behandlung dieser Krankheiten unter Verabreichung von Antibiotika schwierig gestalten.
Im Patent US-A-5176911 wurde die Verwendung von Milchbakterien in der Gynäkologie zur Behandlung von vaginalen Infektionen vorgeschlagen.
Dieses Dokument erwähnt die folgenden Bakterien: Lactobacillus casei, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei subsp. pseudoplantarum und Lactobacillus crispatus, und rät Konzentrationen von Bakterien von 10³ bis 10¹&sup0; CFU/g, bevorzugter Weise etwa 10&sup6; CFU/g.
All diese beispielhaften Zusammensetzungen in diesem Dokument enthalten als wesentliche Bestandteile den Lactobacillus casei und/oder del Lactobacillus fermentum, mit den Konzentrationen von 1 · 10&sup6; CFU/g. In der Praxis lehrt jedoch dieses Dokument, dass der Lactobacillus casei und/oder der Lactobacillus fermentum wesentliche Bestandteile zur Zubereitung von pharmazeutischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Vaginainfektionen sind und dass solche Zusammensetzungen mit Bakterienkonzentrationen von 1 · 10&sup6; CFU/g (eine "Kolonie bildende Einheit") wirksam sind.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen des bekannten Standes der Technik, die in der Form von eierförmigen Zäpfchen oder Tabletten, Milchbakterien enthalten, zur vaginalen Verwendung hergestellt werden, sind nicht genügend wirksam bei der Wiederherstellung der Kolonialisierung der Vagina. Es ist überdies hervorzuheben, dass die erhebliche Proportion der Bakterienzellen durch den physikalischen Aufprall abstirbt, der im Augenblick gegeben ist, wo die eierförmigen Zäpfchen zubereitet werden und ihre Anzahl wird weiter herabgesetzt, sobald sie sich in Vaginallumen ausbreiten und die Vermehrung beginnen sollte.
Es bleibt daher die Notwendigkeit, über geeignete Arten von Milchbakterien oder deren Mischungen und pharmazeutische, sie enthaltende Zusammensetzungen derart zu verfügen, dass sich die Mängel der Zusammensetzungen des bekannten Standes der Technik vorliegen.
Insbesondere bleibt die Notwendigkeit von pharmazeutischen Zusammensetzungen für die vaginale Verwendung, die derartige Eigenschaften besitzen sollen, dass die Verabreichung an den Patienten real heilsam wird.
Die Ausführungsformen der pharmazeutischen Zusammensetzungen müssten überdies derart sein, dass die Anzahl der Milchbakterien in der Phase der Ausbreitung konstant erhalten wird und eine ständige und konstante Aktion in der Zeit der Milchbakterien während der Diffusion im Vaginallumen sichergestellt wird.
Die Anmelder haben gefunden, dass pharmazeutische Zusammensetzungen auf der Basis von erheblich wirksamen Milchbakterien zur Behandlung von Vaginainfektionen unter der Bedingung erhalten werden können, dass möglichst weitgehend folgende Merkmale zufriedengestellt werden:
(a) die ausgewählten Stämme von Milchbakterien müssen eine hohe Affinität zum Vaginalepithel aufweisen, d. h. eine hohe Fähigkeit an den Epithelzellen der Vagina anzuhaften, da diese Eigenschaft das Zusammenwirken der Bakterien mit der Vaginalschleimhaut sowohl unter physiologischen als auch pathologischen Bedingungen (wobei so eine Wettlaufwirkung mit den pathogenen Mikroorganismen an den empfangenden Epithelorten entwickelt wird) und die Wiederherstellung der Mikroflora und der optimalen pH-Bedingungen erlaubt;
(b) mindestens ein Stamm von ausgewählten Milchbakterien muss eine hohe Fähigkeit besitzen, Wasserstoffperoxyd aufzuweisen, das eine unmittelbare Hemmwirkung auf die pathogenen Mikroorganismen entwickelt; und
(c) mindestens ein Stamm von ausgewählten Milchbakterien muss durch eine hohe Fähigkeit gekennzeichnet sein, kompetitiv mit der Adhärenz der Candida albicans an HeLa Zellen zu interferieren.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die, pharmazeutische Zusammensetzungen auf der Basis von Milchbakterien zu liefern, die in einem höchstmöglichen Ausmaß die oben angegebenen Merkmale zufrieden stellen und daher wirksam für die Behandlung von Vaginainfektionen, wie etwa Vaginitis und Vaginosis verwendbar sind. Dazu haben die Anmelder gefunden, dass die Milchbakterien der Art Lactobacillus brevis und Lactobacillus salivarius subsp. salicinius die Gesamtheit der oben angegebenen drei Merkmale in einem gegenüber anderen Arten von Milchbakterien bemerkenswert höheren Ausmaßes zufrieden stellen.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die, pharmazeutische Zusammensetzungen zu liefern, die für die vaginale Verabreichung geeignet sind und Milchbakterien umfassen, die hergestellt sind in der Form von: flüssigen Zusammensetzungen, Zusammensetzungen in der Form von Salbe oder Pomade und festen Zusammensetzungen insbesondere in der Form von eierförmigen Zäpfchen und Tabletten.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die, pharmazeutische, feste Zusammensetzungen zu liefern, die imstande sind, die in ihnen übertragenen Milchbakterien in Abhängigkeit der Zeit auf differenzierte Weise abzugeben.
Diese Aufgaben und weitere, die klar aus der ausführlichen, nachfolgenden Beschreibung hervorgehen, werden durch die vorliegende Erfindung gelöst, die in einer ersten Ausführungsform als Gegenstand die Verwendung einer Assoziation von Milchbakterien der Art Lactobacillus brevis und Lactobacillus salivarius subsp. salicinius zur Zubereitung einer pharmazeutischen Zusammensetzung hat, die unter vaginalen Verabreichung zur Behandlung von Vaginainfektionen wie beispielsweise Vaginitis und Vaginosis zu verwenden ist.
In einer weiteren Ausführungsform hat die vorliegende Erfindung als Gegenstand die oben erwähnte pharmazeutische Zusammensetzung.
In besonderen Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung können die Bakterien der Art Lactobacillus brevis und Lactobacillus salivarius subsp. salicinius in Kombination mit einer oder mehreren Arten von Milchbakterien verwendet werden, die unter Lactobacillus salivarlus subsp. salivarlus, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus minutus und Lactobacillus gasseri gewählt werden.
Bevorzugter Weise umfasst die in der pharmazeutischen Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung verwendete Assoziation von Bakterien die Arten Lactobacillus brevis, Lactobacillus salivarius subsp. salicinius und Lactobacillus gasseri oder besteht aus denselben.
Besondere Beispiele von verwendbaren Milchbakterien sind: Lactobacillus brevis ATCC 4006 und ATCC 14869 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius ATCC 11742 Lactobacillus gassen ATCC 9857
Unter ATCC versteht man American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA.
Bevorzugt ist in der gemäß der vorliegenden Erfindung verwendeten Assoziation von Bakterien die Konzentration von Bakterien von 10&sup7; bis 10¹³ CFU/g, bevorzugter Weise von, 10&sup8; bis 10¹² CFU/g, noch bevorzugter Weise von mehr als 10&sup9; bis 10¹² CFU/g. Bevorzugter Weise ist in dieser Assoziation von Bakterien jede Art mit einer Konzentration von 10&sup8; bis 10¹² CFU/g anwesend.
Die Bakterienkulturen sind bevorzugter Weise in lyophilisierter Form.
Für die praktische Verwendung sind die pharmazeutischen Zusammensetzungen der Erfindung in Flüssigform (Lösungen für Spülungen) von Salben oder Pomaden oder in fester Form unter Form von eierförmigen Zäpfchen oder Vaginaltabletten, Tütchen oder ähnlichen zubereitet.
Die in der Form von Tabletten zubereiteten, pharmazeutischen Zusammensetzungen, können einschichtig oder vielschichtig mit differenzierten Abgabezeiten sein.
Insbesondere können die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung in der Form von Tabletten zubereitet sein, beide enthaltend die genannten Arten der Milchbakterien, mit Bindemitteln und Zusätzen derart übertragend gestaltet, dass die Bakterienabgabegeschwindigkeit der äußersten Schicht größer ist als die Bakterienabgabegeschwindigkeit der inneren Schicht.
Beispielsweise können die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung in der Form von Tabletten zubereitet sein, die aus zwei Schichten bestehen. Solche zwei Schichten können derart ausgeführt sein, dass die Bakterien der äußeren Schicht in einer Zeit von 10 bis 25 Minuten, beispielsweise von etwa 10 bis 20 Minuten abgegeben werden, während die Bakterien der inneren Schicht nacheinander in einer Zeit von 25 bis 50 Minuten, beispielsweise von etwa 30 bis 40 Minuten abgegeben werden.
In einer bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthalten die pharmazeutischen Zusammensetzungen auch ein Puffermittel, das imstande ist, für einige Stunden nach der Verabreichung einen intravaginalen pH aufrecht zu erhalten, der in einem Bereich zwischen 3 bis 5,5 stabilisiert ist. Das Puffermittel ist ein Puffersystem bestehend aus einer schwachen Säure, gewählt unter einer beliebigen schwachen, anorganischen oder organischen, pharmazeutisch verträglichen Säure wie beispielsweise Borsäure, Milchsäure, Askorbinsäure, Zitronen- oder Essigsäure, in Kombination mit dem jeweiligen Natriumsalz oder einem anderen, pharmazeutisch verträglichen Salz der konjugierten Lauge mit der verwendeten schwachen Säure. Bevorzugter Weise ist der pH- Wert im Bereich von 4,2 bis 4,5 gepuffert und bevorzugter Weise verwendet man als Puffermittel ein Puffersystem bestehend aus: Milchsäure und Natriumlaktat oder Askorbinsäure und Natriumaskorbat.
Weitere Bestandteile oder Ingredienzien, die eventuell in die Zubereitungen der vorliegenden Erfindung aufgenommen sind, sind Düfte, Menthol, Eukalyptusessenz, Methylsalizylat oder Salizylate wie topische Erfrischungsmittel, Hydrocortison oder andere entzündungshemmende Steroide (von 0,01 bis 500 mg/g), antiphlogistische Mittel, antimikrobische Mittel und Anfeuchtungsmittel (EDTA, Dodekaäthylenglykol Monolaurat, usw.) Östriol (von (),001 bis 1 mg/g) und/oder weitere hormonale Substanzen oder mit hormonaler Aktivität, Maisstärke oder Kartoffelstärke, Vitamine, Antioxidanzien, Enzyme (Ialuronidase), Eparinolde, Lycodain und andere topische Anästhetika, Pflanzenextrakte (Belladonna), Zink, Kalzium und Wismut.
Für die Zubereitung von wässrigen Formulierungen für Spülungen und Ausspülungen werden Fläschchen verwendet, die mit Behältern versehen Sind, die liophilisierte Mikroorganismen enthalten, die vor der Verwendung in einen geeigneten, flüssigen Träger gelöst werden, der getrennt in den Fläschchen enthalten ist. Die Zusammensetzungen der Erfindung sind praktisch frei von einer jeglichen Toxizität und weisen keine systematische Absorptionen derart auf, dass die Verabreichung auch an schwangere Patienten und bei Fällen der Intoleranz für antimykotische und antibakterische. Arzneimitteln erlaubt wird.
Die klinische, bis heute angeeignete Erfahrung zeigt als besonders geeignet und wirksam ein Behandlungsschema an, das die Verabreichung der Zusammensetzung der Erfindung in der Form von Tabletten, Salben oder eierförmigen Zäpfchen umfasst, die vor dem Schlaf verabreicht werden, wobei eine Spülung am nachfolgenden Morgen erfolgt.
Nachdem die vorliegende Erfindung im allgemeinen beschrieben wurde, wird sie bessere verstanden werden, indem Bezug genommen wird auf einige spezifische Beispiele, die hier nur für erläuternde Zwecke geliefert werden und nicht im begrenzenden Sinn aufzufassen sind.

BEISPIELE

Beispiel 1

ANHAFTEN DER MILCHBAKTERIEN AN DEN HeLa ZELLEN.

Mit diesem Versuch wurde die Fähigkeit von verschiedenen vom American Type Culture Collection (ATCC) kommenden Stämmen von Lactobacillus an HeLa Zellen anzuhaftenden überprüft, eine Zellenlinie, die ihren Ursprung in einem menschlichen Karzinom des Gebärmutterhalses hat. Die He-La Zellen wurden als Gewebekultureinzelschichten in Fläschchen in MEM (Minimal Essential Medium) mit der Zugabe von 10% (v/v) von fetalen Rindserum (FBS) bewahrt. Es wurde die Anhaftungsreaktion in einer Kulturplatte für Gewebe mit mehrfachen Grübchen, enthaltend ein steriles Deckglas (24 · 24 mm) in jedem Grübchen durchgeführt. Es wurde in ein jedes Grübchen 1 ml von Suspension von HeLa Zellen mit einer Konzentration von 1,2 · 10&sup5; Zellen/ml und die Platten wurden für 24 Stunden bei 37ºC in einer CO&sub2; Atmosphäre bei 5 % brüten gelassen. Vor dem Anhaftungsversuch wurden die Bakterienstämme in einer Subkulturbrühe von MRS (Difco) gelassen. Nach einer Inkubation von 24 Stunden bei 37ºC unter anaerobischen Bedingungen (CO&sub2; bei 15%) wurden die Bakterien in einer neuen Brühe "wiedergestärkt" und daher für eine Nacht mit denselben Versuchsbedingungen brüten gelassen. Es wurde eine anaerobe Umgebung erhalten, in dem die Bakterien in einem Gefäß gebrütet wurden, wobei die Bakterien in einem spezifische "Anaerogen" Tütchen (Oxoid) enthaltendem Behälter inkubiert gelassen wurden. Für den Adhärenzversuch wurden verschiedene Bakteriensuspensionsverdünnungen in MEM auf Zelleneinzelschichten für eine Stunde bei 37ºC unter mikroaerophylen Bedingungen gelassen. Nach verschiedenen Spülungen in PBS zur Beseitigung der Mikroorganismen, die nicht anhafteten, wurden die Zellen mit 0,4 ml von May Grumwald pro Grübchen für 4 Minuten fixiert, mit vardünntem Giemsa in Wasser für 15 Minuten vor der Überprüfung am optischen Mikroskop gewaschen. Es wurden die Bearbeitungskonzentrationen aufgrund des Anteils von Zellen mit adhärenten Bakterien und der Anzahl von Bakterien/Zelle gewählt. Es wurde die Höchstadhärenz mit Konzentrationen von 5 · 10&sup9; Bakterien/ml erhalten.
Die in Fig. 1 angegebenen, erhaltenen Ergebnisse, geben an, dass die getesteten Milchbakterien in der Lage sind an HeLa Zellen anzuhaften, wobei sie verschieden Adhärenzgrade an den Gastzellen aufweisen. Die höchsten Adhärenzgrade wurden in der Art Lactobacillus brevis und Lactobacillus salivarlus subsp. salicinius vorgefunden. Der Lactobacillus casei, außer dass er einen niedrigen Adhäsionsgrad aufweist, ist invasiv und daher nicht für die Zubereitung der pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung geeignet. Tabelle 1 Anhaftung von verschiedenen Milchbakterienstämmen an HeLa Zellen
Die mengenmäßige Bakterienadhäsion wird als Anteil in Frozenten von zufällig gewählten 300 Zellen mit adhärenten Bakterien und als Durchschnittszahl von adhärenten Bakterien pro Zelle gewählt.
(a) + = invasiv; +/- = leicht invasiv; - = nicht invasiv.

Beispiel 2

ANTI-CANDIDA EFFEKT DER MILCHBAKTERIEN

Es wurde die Fähigkeit verschiedener Milchbakterien überprüft, in kompetitiver Weise mit der Adhärenz der Candida albicans und daher auf die Infektionsanfälligkeit der Candida albicans an HeLa Zellen zu interferieren.
Zur Bewertung der Beeinflussung der Milchbakterien auf das Adhäsionsniveau der Pilze (C. albicans) an Gastzellen, einzelschichtig von HeLa Zellen, die in Platten zu 24 sterile Deckgläser enthaltende Grübchen gewachsen waten, wurden mit 0,1 ml einer Milchbakterienmischung und C. albicans (zwei von menschlicher Vagina isolierte klinische Proben, jeweils in dieser Studie CA2 und CA3 genannt) verdünnt in PBS wurden mit Endkonzentrationen jeweils von 5 · 10&sup9; Bakterien/ml und 5 · 10&sup8; Pilze/ml eingeimpft.
Nach einer Stunde Inkubation bei 37ºC und mikroaerophylen Bedingungen wurden die Zellen 5 Mal in PBS gewaschen, fixiert mit May Grunwald und Giemsa. Es wurden dann die Gläser am optischen Mikroskop (mit 1000facher Vergrößerung) geprüft und es wurde das Niveau der an den HeLa Zellen anhaftenden Mikroorganismen bewertet. Die erhaltenen, in der Tabelle 2 angegebenen Ergebnisse beweisen, dass die geprüften Milchbakterien in der Lage sind, die Adhärenz des C. albicans an HeLa Zellen herabzusetzen, wobei der höchste Grad an Hemmungsaktivität von L. brevis ATCC 4006 aufgewiesen wurde, der eine Verminderung von ungefähr 50% der Zellenanzahl mit angehafteter Candida erzeugt und die Anzahl von Pilzen/Zelle um ungefähr der Hälfte der Kontrolle herabsetzte.

Tabelle 2

Kompetitive Ausschließung der Adhäsion der C. albicans an HeLa Zellen seitens der Milchbakterien.
Für den Versuch der kompetitiven Ausschließung, wurden die Milchbakterien und die Pilze jeweils mit der Endkonzentration von 5 · 10&sup9;/Grübchen und 5 · 10&sup9;/Grübchen verwendet.

Beispiel 3

ERZEUGUNG VON WASSERSTOFFPEROXYD SEITENS DER MILCHBAKTERIEN

Es wurde die Fähigkeit von fünf Milchbakterienarten überprüft, H&sub2;O&sub2; zu erzeugen. Die Bakterien wurden in Kulturen an einer Agarplatte mit Tetramethylbenzidin aufgebracht. Nach 3 Inkubationstagen bei 37ºC in einem Gefäß unter anaerobischen Bedingungen wurden die Agarplatten der Luft ausgesetzt. Auf diese Weise reagiert die im Kulturmittel anwesende Peroxydase mit dem durch die Milchbakterien erzeugten H&sub2;O&sub2;. Die nachfolgende Oxydation des Tetramethylbenzidin wird durch eine Blaupigmentation der den H&sub2;O&sub2; erzeugenden Kolonien erfasst. Die erhaltenen, in Tabelle 3 angegebenen Ergebnisse beweisen dass der L. salivarlus subsp. salicinius ATCC 11742 und der L. gasseri ATCC 3857 gegenüber H&sub2;O&sub2; positiv waren.
Der L. casei ATCC 8530 hat keinerlei positives Resultat gezeigt. Die weiteren geprüften Stämme waren frei von jeglicher Reaktion. Diese Ergebnisse geben an, dass keinerlei Korrelation zwischen der Erzeugung von H&sub2;O&sub2; seitens der Milchbakterien und der kompetitiven Ausschließung der Adhäsion der C. albicans an HeLa Zellen seitens der Bakterien bestand.

Tabelle 3

Erzeugung von Wasserstoffperoxyd seitens der Milchbakterien

Milchbakterien Erzeugung von H&sub2;O&sub2;
A) Lactobacillus salivarius subs. salicinius (ATCC 11742) +
B) Laca obacillus brevis
(ATCC 4006) -
C) Lacaobacillus brevis (ATCC 14869) -
D) Lactobacillus gasseri (ATCC 3857) +
E) L. casei (ATCC 8530) -
+ = Blaupigmentation aller Bakterienkolonien
+/- - leichte Blaupigmentation
- - keine pigmentierte Kolonie
Beispielsweise, jedoch nicht begrenzend, werden nachfolgend einige Beispiele von bevorzugten pharmazeutischen Zusammensetzungen wiedergegeben, die zur Herstellung von Tabletten, eierförmigen Zäpfchen, Salben und flüssigen Lösungen zur vaginalen Verabreichung von lyophilisierten Mikrobenkulturen, bestehend aus einer Assoziation von mehreren Mikrobenarten bestimmt sind.

BEISPIELE VON VAGINALEN PRÄPARATEN

Beispiel 4

Einheitszusammensetzung zur Vorbereitung von leicht sprudelnden Tabletten mit schneller Abgabe umfassend Träger und eine lyophilisierte Mikrobenkultur(1 · 10&sub1;&sub0; CFU/g) bestehend aus einer Assoziation von L. brevis ATCC 4006 und L. salivarius - subsp. salicinius ATCC 11742 (im Verhältnis 1 : 1):
Lyophilisierte Mikrobenkultur 500 mg
Laktose 350 mg
Maisstärke 200 mg
Adipinsäure 67 mg
Natrium Bikarbonat 67 mg
Magnesium Stearat 11 mg
Stearinsäure 3 mg
Kolloidale Kieselsäure 2 mg
Für die Zubereitung der Tabletten, die die oben genannte Zusammensetzung aufweisen, ist erforderlich, mit der vorhergehenden Vorbereitung eines Granulates vorzugehen.
Dem geschmierten Granulat werden 500,0 g des oben genannten, zuvor gesiebten Mikrobenkulturlyophilisat auf einem Gitter von 300 um zugesetzt und für weitere 15 Minuten vermischt. Das so erhaltene Granulat wird einer nachfolgenden Verdichtung unterzogen, wobei eine Drehverdichtungsmaschine verwendet wurde, die mit eierförmig profilierten Stempel versehen ist, wobei Tabletten für den vaginalen Gebrauch des Durchschnittsgewichtes von 1200 mg erhalten wurden.
Die erhaltenen Tabletten weisen eine Verfallzeit von zirka 10 Minuten auf, wobei das in Farmacopea Ufficiale Italiana beschriebene Gerät verwendet wurde.

Beispiel 5

Einheitszusammensetzung für die Zubereitung von Tabletten mit langsamer Abgabe, umfassend Träger und dieselbe lyophilisierte Mikrobenkultur des Beispiels 4:
lyophilisierte Mikrobenkultur 500 mg
Mannit 560 mg
Hydroxypropylmethylzellulose 80 mg
Talkum 18 mg
Magnesium Stearat 19 mg
Kolloidale Kieselsäure 3 mg
Die lyophilisierte Mikrobenkultur wird kalibriert, indem die schwammige Masse auf ein Gitter von 270 um gepresst wird; dem gesiebten Produkt wird Mannitol zugegeben, das zuvor an einem 270 um Grill gesiebt wurde, Hydroxypropilmethylcellulose, Talkum Magnesium Stearat und kolloidale Kieselsäure. Die gesamte Masse wird 30 Minuten in einem Mischer für Pulver nach der Art Turbula T2A vermischt. Die so erhaltene Mischung wird einer nachfolgenden Verdichtung unterzogen, wobei eine Drehverdichtungsmaschine von eierförmig profilierten Stempeln verwendet wurde, wobei Tabletten für vaginale Verwendung des Durchschnittsgewichtes von 1200 mg erhalten wurden.
Die erhaltenen Tabletten weisen eine Verfallzeit von etwa 30 Minuten auf, wobei das in Parmacopea Ufficiale Italiana beschriebene Gerät verwendet wurde.

Beispiel 6

Zubereitung von doppelschichtigen Tabletten (eine Schicht mit rascher Abgabe und eine Schicht mit langsamer Abgabe), die Träger und dieselbe lyophilisierte, Mikrobenkultur des Beispiels 4 umfassen.
Einheitszusammensetzung für die Zubereitung der Schicht mit rascher Abgabe (es handelt sich um eine leicht brausende Schicht):
lyophilisierte Mikrobenkultur 250 mg
Laktose 240 mg
Maisstärke 41 ma
Adipinsäure 30 mg
Natrium Bikarbonat 30 mg
Magnesium Stearat 6 mg
Stearinsäure 2 mg
Kolloidale Kieselsäure 1 mg
Einheitszusammensetzung für die Zubereitung der Schicht mit langsamer Abgabe:
lyophilisierte, Mikrobenkultur 250 mg
Mannit 280 mg
Hydroxypropylmethylzellululose 50 mg
Talkum 9 mg
Magnesium Stearat 10 mg
Kolloidale Kieselsäure 1 mg
Das für die Schicht mit rascher Abgabe zu verwendende Granulat wird zubereitet, indem das im Beispiel 4 beschriebene Verfahren verwendet wird; die für die Schicht mit langsamer Abgabe zu verwendende Mischung wird zubereitet, indem das im Beispiel 5 beschriebene Verfahren verwendet wird.
Das für die Schicht mit rascher Abgabe beschriebene Granulat und die für die Zubereitung der Schicht mit langsamer Abgabe beschriebene Mischung werden in zwei verschieden Fülltrichter einer Verdichtungsmaschine geladen, die geeignet ist, doppelschichtige Tabletten zu erzeugen (Typ Manesty Layer Press), die mit gewölbten, eierförmigen Stempeln versehen ist.
Die Maschine wird derart eingestellt, dass doppelschichtige Tabletten mit einem mittleren Gesamtgewicht von 1200 mg erhalten werden, die aus zwei Schichten von jeweils 600 mg bestehen und jeweils 250 mg einer lyophilisierten Mikrobenkultur enthalten.
Die erhaltenen, doppelschichtigen, den Zerfalltest unterzogenen Tabletten weisen, unter Verwendung des in Farmacopea Ufficiale Italiana beschriebenen Gerätes, weisen eine Zerfallzeit von ungefähr 15 Minuten für die Schicht mit rascher Abgabe und von 30 bis 40 Minuten für die Schicht mit langsamer Abgabe auf.

Beispiel 7

EIERFÖRMIGE ZÄPFCHEN

Aktiver Ansatz: 1 g derselben lyophilisierten Mikrobenkultur des Beispiels 4.
Bindemittel: 2,5 g semisynthetische Glyzeride und Kartoffelstärke.

Beispiel 8

VAGINASALBE (Tube zu 10 g)

Aktiver Ansatz: 1 g derselben lyophilisierten Mikrobenkultur des Beispiels 4.
Bindemittel: Hydriertes Lanolin (2 g), Vaselinöl (2 g), Dimethylpolysiloxan (3 g), SiO&sub2; (4 g)

Beispiel 9

FLÄSCHCHEN MIT SPEICHER

Jedes Fläschchen enthält:
a) Speicher: 2 g derselben lyophilisierten Mikrobenkultur des Beispiels 4.
b) Fläschchen (10 ml): Glyzerin 3 g und Wasser q.b. zu 10 ml.

Beispiele von 10 bis 15

Die Beispiele von 4 bis 9 wurden mit denselben Modalitäten, jeweils in solchen Beispielen erläutert, mit dem einzigen Unterschied, dass eine lyophilisierte Mikrobenkultur (Konzentration 1 · 10¹&sup0; CFU/g) verwendet wurde, aus der Art L. brevis ATCC 14869, L. salivarius subsp. salicinius ATCC 11742 und L. gasseri ATCC 9857 im Verhältnis 1 : 1 : 1 besteht.
Die gesamten gemäß den Beispielen von 4 bis 15 erhaltenen, pharmazeutischen Präparate haben sich als bemerkenswert wirksam in der Behandlung von Patienten mit Vaginosis und Vaginitis gezeigt.

Claims

1. Verwendung einer Assoziation von Milchbakterien der Arten Lactobacillus brevis und Lactobacillus salivarius subsp. salicinius zur Zubereitung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur vaginalen Verabreichung zur Behandlung von Vaginosis und Vaginitis.

2. Verwendung nach Anspruch 1, bei der diese Assoziation von Milchbakterien auch eine oder mehrere Arten von Milchbakterien umfasst, gewählt unter Lactobacillus salivarlus subsp. salivarius, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus minutus und Lactobacillus gasseri.

3. Verwendung nach Anspruch 1, bei der die Assoziation von Milchbakterien aus den Arten Lactobacillus brevis, Lactobacillus salivarius subsp. salicinius und Lactobacillus gasseri besteht.

4. Verwendung nach einem oder mehreren der vorstehenden Ansprüche, bei der die Assoziation von Milchbakterien mit einer Konzentration von 10&sup7; bis 10¹³ CFU/g verwendet wird.

5. Verwendung nach einem oder mehreren der vorstehenden Ansprüche, bei der die pharmazeutische Zusammensetzung in flüssiger Form, als Salbe oder als Pomade, eierförmig oder als Tabletten zubereitet wird.

6. Verwendung nach Anspruch 5, bei der die pharmazeutische Zusammensetzung in der Form von Tabletten zubereitet wird, umfassend mindestens zwei Schichten, beiden enthaltend die genannten Arten der Milchbakterien, mit Bindemitteln und Zusätzen derart übertragend gestaltet, dass die Bakterienabgabegeschwindigkeit der äußersten Schicht größer ist als die Bakterienabgabegeschwindigkeit der inneren Schicht.

7. Pharmazeutische Zusammensetzung der Verwendung durch vaginale Verabreichung zur Behandlung von Vaginainfektionen, umfassend eine Assoziation der Milchbakterien der Art Lactobacillus brevis und Lactobacillus salivarlus subsp. salicinius.

8. Zusammensetzung nach Anspruch 7, bei der die Assoziation von Milchbakterien auch eine oder mehrere Arten von Milchbakterien umfasst, gewählt unter Lactobacillus salivarius subsp. salivarius, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus minutus und Lactobacillus gasseri.

9. Zusammensetzung nach Anspruch 7, bei der die Assoziation von Milchbakterien aus den Arten Lactobacillus brevis, Lactobacillus salivarius subsp. salicinius und Lactobacillus gasseri besteht.

10. Zusammensetzung nach einem oder mehreren Ansprüchen von 7 bis 9, bei der die Assoziation von Milchbakterien mit einer Konzentration von 10&sup7; bis 10¹³ CFU/g verwendet wird.

11. Zusammensetzung nach einem oder mehreren Ansprüchen von 7 bis 10 in Flüssigform, als Salbe oder Pomade, unter Eierform oder als Tabletten.

12. Zusammensetzung nach Anspruch 11, in der Form von Tabletten, umfassend mindestens zwei Schichten, beide enthaltend die genannten Arten von Milchbakterien, mit üblichen Bindemitteln und Zusätzen, derart übertragend gestaltet, dass die Bakterienabgabegeschwindigkeit der äußersten Schicht höher ist als die Bakterienabgabegeschwindigkeit der inneren Schicht.