DE3537656C2

DE3537656C2 -

Info

Publication number: DE3537656C2
Application number: DE3537656A
Authority: DE
Inventors: Rolf Dr. 5000 Koeln De Madaus; Klaus Dr. 5060 Bergisch Gladbach De Goerler; Hartwig Dr. 5000 Koeln De Soicke
Original assignee: Dr Madaus GmbH and Co
Current assignee: Madaus Holding GmbH
Priority date: 1984-11-22
Filing date: 1985-10-23
Publication date: 1989-03-16
Also published as: JPH05271071A; MX172175B; YU43690B; ES8609312A1; GB2167746B; SE8505488L; CS837985A2; FR2573426B1; CA1337125C; IE852927L; NO160206C; LU86164A1; FI854536L; DE3537656A1; HUT40115A; EG17710A; HU195504B; NL192204B; DK164866C; ES8704482A1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Silibinin und pharmazeutische Mittel, die diese Verbindung enthalten.

Die Mariendistel - Silybum marianum (L.) Gaertn. (Carduus marianus L.) - ist eine seit dem Altertum bekannte Heilpflanze. Von den in den Früchten dieser Pflanze vorkommenden Flavolignanen wurde eine Komponente, Silybin, von R. Münster isoliert, vgl. Dissertation R. Münster, München, 1966. Die chemische Struktur dieser Verbindung wurde von A. Pelter und R. Hänsel, vgl. Tetrahedron Letters, London, Band 25, Seiten 2911-2916 (1968), aufgeklärt.

Es ist bekannt, daß Silybin, früher auch Silymarin I genannt, ein wertvolles Lebertherapeutikum ist, vgl. DE-AS 17 67 666. Ein technisches Verfahren zur Herstellung von Silybin (Silymarin I) ist z. B. in der DE-AS 19 23 082 beschrieben.

Bereits 1974 hatten H. Wagner, P. Diesel und M. Seitz, Arzneimittelforschung, Band 24 (4), Seiten 466-471, in bezug auf Silybin zwei Stellungsisomere vermutet, nämlich Silybin und Isosilybin. Diese Vermutung wurde von. A. Arnone, L. Merlini und A. Zanarotti, Journal Chemical Society Chem. comm., 1979, Band 16, Seiten 696/97, präzisiert und experimentell bestätigt. Demnach besteht das bekannte Silybin aus zwei verschiedenen Verbindungen, nämlich den Verbindungen der nachstehenden Strukturformeln A und B:

Aus diesen Strukturformeln ist ersichtlich, daß es sich bei diesen Verbindungen um Stellungsisomere handelt. Die Verbindung der Formel (A) hat neuerdings die INN-Bezeichnung Silibinin. Diese Bezeichnung wird auch in der vorliegenden Anmeldung für die Verbindung der Formel (A) verwendet.

Die beiden oben bezeichneten Verbindungen A und B sind bisher nur in analytischen Mengen getrennt und hergestellt worden, und über pharmakologische Wirkungen der einzelnen Isomeren haben V. Quercia, N. Pierini, V. Valcavi, R. Caponi, S. Innocenti und S. Tedeschi, Anal. Chem. Symp. Ser. 13, Seiten 1 bis 13 (1983) widersprüchlich berichtet. Zunächst wird die Trennung von beiden Substanzen als zweifelhaft angegeben und danach den getrennten Substanzen die gleiche pharmakologische Wirksamkeit im Phallodin-Intoxikationsmodell zugeschrieben. Dieses läßt sich mit tatsächlich reinen Substanzen nicht reproduzieren.

Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Gewinnung von isosilybinfreiem Silibinin sowie silibininhaltige pharmazeutische Mittel bereitzustellen.

Gegenstand der Erfindung ist daher ein Verfahren zur Gewinnung von Silibinin der Formel:

wobei man getrocknete Früchte von Silybum marianum L. Gaertn. von der Hauptmenge des fetten Öles befreit, indem man die Zellen der Früchte durch hohen mechanischen Druck aufsprengt, dann den noch einen Restölgehalt von 5 bis 10% aufweisenden Preßrückstand erschöpfend mit Ethylacetat extrahiert, das Ethylacetat abdampft, hierauf den erhaltenen Trockenrückstand in einer Menge von 2 Gewichtsprozent in der aus Methanol und Wasser bestehenden Unterphase eines ternären Lösungsmittelgemisches aus 95 Gewichtsteilen Methanol, 5 Gewichtsteilen Wasser und 100 Gewichtsteilen Petroläther (Kp. 40 bis 60°C) löst, zur Entfernung flockiger Feststoffpartikel klarzentrifugiert und in diesem Lösungsmittelsystem den Trockenrückstand der multiplikativen, gleichförmigen Verteilung im Gegenstrom unterwirft, wobei das gesamtfließende Volumenverhältnis von Oberphase/Unterphase gleich 1 : 1 erhalten bleibt, und anschließend aus der abfließenden Unterphase durch Eindampfen im Vakuum zur Trockne ein 70 bis 80%iges Polyhydroxyphenylchromanongemisch (Silymarin I-IV = Silymarin I-IV-Gruppe) als bräunliches Pulver isoliert, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man

a) das erhaltene bräunliche Pulver in der 3 bis 5fachen Gewichtsmenge Methanol suspendiert, die erhaltene Suspension unter Rühren zum Sieden erhitzt,
b) anschließend etwa 1/3 bis 2/3 des Methanols unter vermindertem Druck entfernt und das Konzentrat bei Raumtemperatur stehenläßt,
c) das dabei ausgefallene Produkt abfiltriert, 1 bis 3mal mit möglichst wenig kaltem Methanol wäscht und trocknet,
d) in der 40 bis 60fachen Gewichtsmenge Ethylacetat unter Erhitzen löst, mit Aktivkohle unter Rückflußbedingungen behandelt, von der Aktivkohle abfiltriert, unter vermindertem Druck das Filtrat auf etwa 1/10 des ursprünglichen Volumens einengt,
e) das Konzentrat unter starkem Rühren mit etwa 1/10 des Volumens des Konzentrats an Methanol versetzt, einige Stunden bei Raumtemperatur stehenläßt, vor dem Abnutschen des ausgefallenen Produktes mit einem Intensivmischer aufrührt,
f) das abgesaugte Produkt 1 bis 3mal mit wenig Ethylacetat nachwäscht und im Vakuum trocknet.

Isosilybinfreies Silibinin läßt sich auch dadurch herstellen, daß man

a) ein Gewichtsteil des erhaltenen bräunlichen Pulvers, welches nachstehend als Mengenbezug genommen wird, in 0,7 bis 1,5 Gewichtsteilen wassergesättigtem Ethylacetat suspendiert, und die erhaltene Suspension ein bis zwei Tage stehenläßt und den Niederschlag absaugt,
b) den erhaltenen Niederschlag mit 0,07 bis 0,15 Gewichtsteilen kaltem wassergesättigtem Ethylacetat wäscht und bei 30 bis 50°C im Vakuum trocknet,
c) dieses Produkt in 30 bis 50 Gewichtsteilen trockenem (wasserfreiem) Ethylacetat in der Siedehitze löst, mit 0,2 bis 0,4 Gewichtsteilen Aktivkohle zwei Stunden am Rückfluß behandelt, filtriert und das Filtrat bei 30 bis 50°C im Vakuum auf 1/12 des zur Auflösung eingesetzten Lösungsmittels einengt,
d) zu dem Konzentrat 0,5 bis 0,8 Gewichtsteile wassergesättigtes Ethylacetat zugibt, das ausgefallene Silibinin nach 5 bis 10 Stunden abfiltriert und
e) das Silibinin in 0,9 bis 1,8 Gewichtsteilen technischem Ethylacetat suspendiert, erneut filtriert, bei 30 bis 50°C im Vakuum vortrocknet, das vorgetrocknete Produkt vermahlt und erneut bei 30 bis 50°C im Vakuum trocknet.

Das in Stufe a) als Ausgangsprodukt verwendete bräunliche Pulver bzw. Rohsilymarin ist ein Gemisch aus den Silymarinen I-IV. Durch die Behandlung des Rohsilymarins mit wassergesättigtem Ethylacetat erfolgt im wesentlichen die Abtrennung der Hauptanteile an Silymarinen II bis IV (Silibinin ist Silymarin I) und der 20 bis 30% Begleitstoffe im Rohsilymarin sowie ein Teil Isosilybin. Man erhält auf diese Weise in Stufe b) Rohsilibinin mit einer Ausbeute je nach Rohsilymarinqualität von 80 bis 85% (bezogen auf den Silibiningehalt im Rohsilymarin) und mit einem Gehalt von 80 bis 84%.

Das Rohsilibinin ist wie im Stand der Technik beschrieben ein Gemisch aus Isosilybin und Silibinin im Verhältnis von ca. 1 : 4.

In den Stufen c) bis e) erfolgt die Abtrennung der Hauptanteile an Isosilybin vom Silibinin sowie des Rests an anderen vorhergenannten Bestandteilen.

Ein besonderer Vorteil dieses Abtrennungsverfahrens ist die Verwendung von nur einem einzigen Lösungsmittel, nämlich Ethylacetat, allerdings mit verschiedenen Wassergehalten. Dabei ist es wesentlich, in Stufe c) wasserfreies Ethylacetat und in Stufe d) wassergesättigtes Ethylacetat einzusetzen. Man erhält anhand des erfindungsgemäßen Verfahrens Silibinin in einer Ausbeute von 79-85% (bezogen auf Silibinin im Rohsilibinin) und mit einem Gehalt von 96-98% Silibinin.

Eine besonders bevorzugte Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht darin, daß man

a) ein Gewichtsteil des bräunlichen Pulvers in 0,9 Gewichtsteilen wassergesättigtem Ethylacetat suspendiert, 48 Stunden bei Raumtemperatur stehenläßt und den erhaltenen Niederschlag absaugt,
b) den Niederschlag mit 0,09 Teilen kaltem wassergesättigtem Ethylacetat wäscht und 48 Stunden bei 40°C im Vakuum trocknet,
c) das erhaltene Produkt in 36 Gewichtsteilen trockenem Ethylacetat in der Siedehitze löst, mit 0,36 Gewichtsteilen Aktivkohle zwei Stunden am Rückfluß erhitzt, filtriert und bei 50°C im Vakuum auf 1/12 des zur Auflösung eingesetzten Lösungsmittels einengt,
d) zu dem Konzentrat bei Raumtemperatur 0,6 Gewichtsteile wassergesättigtes Ethylacetat gibt, 12 Stunden bei Raumtemperatur stehenläßt und das ausgefallene Produkt abfiltriert,
e) dieses Produkt zweimal in jeweils 1,8 Gewichtsteilen technischem Ethylacetat suspendiert und filtriert, 24 Stunden bei 40°C im Vakuum vortrocknet, vermahlt und 48 Stunden bei 40°C im Vakuum nachtrocknet.

Es wurde gefunden, daß isosilybinfreies Silibinin für pharmazeutische Zwecke sehr geeignet ist. Überraschenderweise fand man, daß es wesentliche Vorteile gegenüber den anderen bekannten Bestandteilen von Silybum-marianum-Extrakten hat. Es ist besonders geeignet zur Behandlung von Leberzirrhose und toxisch-metabolischen Leberschäden. Es kann auch vorbeugend angewendet werden, so daß die geschilderten Schäden erst gar nicht auftreten.

Gegenstand der Erfindung sind daher auch Arzneimittel, die Silibinin enthalten. Sie werden meist systemisch angewendet, z. B. in Form von Pillen, Kapseln, Lösungen, in üblichen Trägern und gegebenenfalls zusammen mit üblichen Hilfsstoffen. Die Tagesdosis für einen erwachsenen Menschen beträgt etwa 50-500 mg, je nach Zustand des Patienten und der Schwere der Krankheitssymptome.

Beispiel 1 Herstellung von isosilybinfreiem Silibinin

500 g eines Polyhydroxyphenylchromanongemisches (Silymarin I-IV = Silymarin I-IV-Gruppe; Gehalt ca. 70%), das erhalten wurde gemäß Spalte 8, Zeilen 14-19 der DE-AS 19 23 082, auf die hiermit Bezug genommen wird, suspendiert man in
2 kg Methanol 2,53 l und erhitzt unter Rühren 15 Minuten zum Sieden. Aus der so erhaltenen Lösung kann nach dieser Zeit bereits etwas Silibinin ausfallen. Anschließend zieht man im Vakuum 0,75 bis 1,25 kg 0,96-1,58 l Methanol ab und läßt den Rückstand 10-28 Tage bei Raumtemperatur stehen. Das ausgefallene Silibinin wird filtriert und zweimal mit je
50 ml kaltem Methanol nachgewaschen. Nach Trocknen bei 40°C im Vakuum wird das isolierte Rohsilibinin wie folgt weitergereinigt:
60 g Rohsilibinin werden in 3 l technischem Ethylacetat unter Erhitzen gelöst; anschließend mit 20 g Aktivkohle versetzt und weitere 2 Stunden unter Rückflußbedingungen gerührt. Danach wird klarfiltriert und die Lösung bei 50°C unter vermindertem Druck auf ca. 250 ml eingeengt. Das Konzentrat wird 15 min unter Verwendung eines Ultra-Turraxgeräts aufgerührt und unter Rühren mit 25 ml Methanol versetzt. Anschließend wird die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Vor dem Abnutschen des dabei ausgefallenen Silybins wird nochmals 5 min ebenfalls mit Hilfe eines Ultra-Turraxgerätes aufgerührt. Der abgenutschte Niederschlag wird 2mal mit 50 ml Ethylacetat nachgewaschen und im Vakuumtrockenschrank über Nacht bei 40°C getrocknet. Anschließend wird das Produkt vermahlen und unter den gleichen Bedingungen 48 Stunden nachgetrocknet.

Beispiel 2 Herstellung von isosilybinfreiem Silibinin

1 kg eines Polyhydroxyphenylchromanongemisches (Silymarin I-IV = Silymarin I-IV-Gruppe; Gehalt ca. 70%) als bräunliches Pulver auch hier Rohsilymarin genannt, das erhalten wurde gemäß Spalte 8, Zeilen 14-19 der DE-AS 19 23 082, auf die hiermit Bezug genommen wird, suspendiert man in
1 l wassergesättigtem Ethylacetat 30 min mit dem Turrax. Nach 48 Stunden Stehen bei Raumtemperatur wird der Niederschlag abgesaugt, mit
100 ml kaltem, wassergesättigtem Ethylacetat gewaschen und 48 Stunden bei 40°C im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute dieses Zwischenproduktes, Rohsilibinin, beträgt je nach Rohsilymarinqualität 80-85% - bezogen auf Silibiningehalt im Rohsilymarin - bei einem Gehalt von 80-84%.

Das Rohsilibinin wird in
40 l trockenem Ethylacetat in der Siedehitze gelöst, mit
360 g Aktivkohle 2 Stunden am Rückfluß gekocht, filtriert und auf
3330 ml Gesamtvolumen bei 50°C im Vakuum eingeengt. Dieser Lösung wird unter intensivem Rühren bei Raumtemperatur
667 ml wassergesättigtes Ethylacetat zugesetzt. Nach 1-3 Stunden setzt danach die Kristallisation des Silibinins ein. Nach Stehen über Nacht wird das ausgefallene Silibinin durch Filtration abgetrennt, zweimal mit je
1200 ml technischem Ethylacetat 5-10 min suspendiert, erneut filtriert und 24 Stunden im Vakuum bei 40°C vorgetrocknet. Nach dem Vermahlen wird 48 Stunden bei 40°C im Vakuum nachgetrocknet.

Silibinausbeute - bezogen auf Silibinin in Rohsilibinin - 79-85% bei einem Gehalt von 96-98,5% Silibinin je nach Rohsilibininqualität.

Sowohl für das Silibinin-Produkt aus dem Beispiel 1 als auch aus dem Beispiel 2 wurden folgende physikalisch-chemischen Kenndaten festgestellt:

a) ¹H-NMR [Pyridin-d₅; 100 MHz]

b) ¹³C-NMR [Pyridin-d₅; 25,18 MHz]
C Atom
δ [ppm]
4
198,43
7	168,85
5	165,06
9	163,75
16	149,89
17	148,82
4′	145,05
3′	144,71
1′	131,33
14	128,45
6′	123,83
19	121,83
2′	117,50
5′	117,15
18	116,62
15	112,11
10	101,61
6	97,56
8	96,27
2	84,31
12	79,97
13	77,13
3	73,36
11	61,48
20	55,99

c) Fp.: 165-168°C; 180°C dec.
d) UV: λ _max = 288 nm; log ζ = 4,34.
e) IR (KBr): 3450 cm^-1 (OH), 1635 cm^-1 (C=O), 1510 cm^-1.

Klinische Versuche mit Silibinin

Toxische Leberschäden haben in den letzten Jahrzehnten außerordentlich stark zugenommen. Die häufigste Schädigungsursache ist nach wie vor der Alkohol.

Durch kontrollierte Studien konnte man die Überlegenheit von Silibinin gegenüber einer Scheintherapie (Plazebo) oder anderen Vergleichstherapien beweisen. In einer Doppelstudie wurde bei 66 Patienten mit alkoholtoxischem Leberschaden wurde Silibinin (n = 31) gegen Plazebo (n = 35) randomisiert geprüft.

Die statistisch ausgewerteten Ergebnisse zeigten, daß Silibinin dem Plazebo signifikant überlegen ist. Auffällig war dabei die wesentlich kürzere Ausheilungszeit gegenüber dem Plazebo. In einer zweiten Doppelblindstudie mit 76 Patienten, von denen 39 Silibinin und 37 eine Kontrolltherapie bekamen, waren die Unterschiede zugunsten von Silibinin hochsignifikant.

Bei den lebertoxischen Auswirkungen der Narkose im Zusammenhang mit Operationen der Bauchorgane konnte nachgewiesen werden, daß die präoperative Gabe von Silibinin den postoperativen Anstieg der Leberenzyme im Blut signifikant senkt. Auch der heute immer häufigere, durch bestimmte Arzneimittel induzierte Leberschaden wird durch Silibinin wirkungsvoll verhindert. Dies konnte am Beispiel einer Phenylhydantoin-induzierten Hepatose gezeigt werden, bei der sich trotz weiterer Verordnung des unbedingt notwendigen, krampfverhindernden Medikamentes bei gleichzeitiger Verabreichung von Silibinin sämtliche Laborwerte innerhalb kurzer Zeit normalisierten.

Weitere Untersuchungen bei Kranken mit Schizophrenien und schweren Leberschäden durch Verordnung von Chlorpromazin zeigten ebenfalls die positive Wirkung von Silibinin. Andere Versuche betreffen die Verhinderung leberschädigender Auswirkungen von z. B. Chloroquin oder Asparaginase. Bei berufsbedingten Leberschäden konnte man bei allen behandelten Patienten die pathologisch erhöhten Laborbefunde wesentlich verbessern, unabhängig von der jeweiligen Ursache oder von möglichen zusätzlichen Erkrankungen.

Darüber hinaus gibt es genügend Hinweise, daß Silibinin auch bei chronisch-entzündlichen Lebererkrankungen und Leberzirrhose wesentliche Besserungen hervorruft. Beispielsweise wurden Patienten mit Leberzirrhose im Rahmen einer Langzeitstudie in eine randomisierte Doppelblindstudie aufgenommen, in der Silibinin gegen ein Plazebo geprüft wurde. Kriterium für die Bewertung des therapeutischen Erfolgs war vor allem die Überlebenszeit. Hier zeigte sich eine deutliche Überlegenheit von Silibinin gegenüber der Plazebo-Behandlung.

Wirkungsvergleich zwischen Silibinin und Isosilybin und Silybin (Silibinin/Isosilybingemisch) im Modell der Phalloidin- und Praseodymintoxikation bei der Maus nach intravenöser Gabe.

Die antihepatotoxische Wirkung von Silibinin, Isosilybin Silybin als N-Methylglucaminsalze wurde in den Dosen 50 und 100 mg kg^-1, bezogen auf Silibinin, im Modell der Phalloidin- und Praseodymvergiftung der Maus nach intravenöser Applikation untersucht. Die Applikation der Prüfsubstanz erfolgte 1 Std. vor Phalloidin bzw. 1 Std. vor und 6 Std., 24 Std. und 48 Std. nach Praseodym. Ausgewertet wurden bei der Phalloidinvergiftung die Überlebensrate und bei der Praseodymvergiftung verschiedene Serum- und Leberparameter 72 Std. nach Intoxikation.

Bei der Phalloidin-Intoxikation betrug die Überlebensrate nach Silibinin in beiden Dosen 100%, mit den übrigen Substanzen wurde die Überlebensrate von 40% bei den unbehandelten, geschädigten Kontrollen nicht überschritten.

Isosilybin erwies sich im Zusammenhang mit der Praseodym- Intoxikation als unverträglicher, so daß die Dosis von 100 mg kg^-1 in zwei Teilapplikationen aufgesplittet werden mußte.

Claims

1. Verfahren zur Gewinnung von isosilybinfreiem Silibinin der Formel wobei man getrocknete Früchte von Silybum marianum L. Gaertn. von der Hauptmenge des fetten Öles befreit, indem man die Zellen der Früchte durch hohen mechanischen Druck aufsprengt, dann den noch einen Restölgehalt von 5 bis 10% aufweisenden Preßrückstand erschöpfend mit Ethylacetat extrahiert, das Ethylacetat abdampft, hierauf den erhaltenen Trockenrückstand in einer Menge von 2 Gewichtsprozent in der aus Methanol und Wasser bestehenden Unterphase eines ternären Lösungsmittelgemisches aus 95 Gewichtsteilen Methanol, 5 Gewichtsteilen Wasser und 100 Gewichtsteilen Petroläther (Kp. 40 bis 60°C) löst, zur Entfernung flockiger Feststoffpartikel klarzentrifugiert und in diesem Lösungsmittelsystem den Trockenrückstand der multiplikativen, gleichförmigen Verteilung im Gegenstrom unterwirft, wobei das gesamtfließende Volumenverhältnis von Oberphase/Unterphase gleich 1 : 1 erhalten bleibt, und anschließend aus der abfließenden Unterphase durch Eindampfen im Vakuum zur Trockne ein 70- bis 80%iges Polyhydroxyphenylchromanongemisch (Roh-Silymarin) als bräunliches Pulver isoliert, dadurch gekennzeichnet, daß man

a) das erhaltene bräunliche Pulver in der 3- bis 5fachen Gewichtsmenge Methanol suspendiert, die erhaltene Suspension unter Rühren zum Sieden erhitzt,
b) anschließend etwa 1/3 bis 2/3 des Methanols unter vermindertem Druck entfernt und das Konzentrat bei Raumtemperatur stehenläßt,
c) das dabei ausgefallene Produkt abfiltriert, 1- bis 3mal mit möglichst wenig kaltem Methanol wäscht und trocknet,
d) das getrocknete Produkt in der 40- bis 60fachen Gewichtsmenge Ethylacetat unter Erhitzen löst, mit Aktivkohle unter Rückflußbedingungen behandelt, von der Aktivkohle abfiltriert, unter vermindertem Druck das Filtrat auf etwa 1/10 des ursprünglichen Volumens einengt,
e) das Konzentrat unter starkem Rühren mit etwa 1/10 des Volumens des Konzentrats an Methanol versetzt, einige Stunden bei Raumtemperatur stehenläßt, vor dem Abnutschen des ausgefallenen Produktes mit einem Intensivmischer aufrührt,
f) das abgesaugte Produkt 1- bis 3mal mit wenig Ethylacetat nachwäscht und im Vakuum trocknet.

2. Weitere Ausbildung des Verfahrens nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man

a) ein Gewichtsteil des erhaltenen bräunlichen Pulvers in 0,7 bis 1,5 Gewichtsteilen wassergesättigtem Ethylacetat suspendiert, die erhaltene Suspension ein bis zwei Tage stehenläßt und den Niederschlag absaugt,
b) den erhaltenen Niederschlag mit 0,07 bis 0,15 Gewichtsteilen kaltem wassergesättigtem Ethylacetat wäscht und bei 30 bis 50°C im Vakuum trocknet,
c) dieses Produkt in 30 bis 50 Gewichtsteilen wasserfreiem Ethylacetat in der Siedehitze löst, mit 0,2 bis 0,4 Gewichtsteilen Aktivkohle zwei Stunden am Rückfluß behandelt, filtriert und das Filtrat bei 30 bis 50°C im Vakuum auf 1/12 des zur Auflösung eingesetzten Lösungsmittels einengt,
d) zu dem Konzentrat 0,5 bis 0,8 Gewichtsanteile wassergesättigtes Ethylacetat zugibt, das ausgefallene Silibinin nach 5 bis 10 Stunden abfiltriert und
e) das Silibinin in 0,9 bis 1,8 Gewichtsteilen technischem Ethylacetat suspendiert, erneut filtriert, bei 30 bis 50°C im Vakuum vortrocknet, das vorgetrocknete Produkt vermahlt und erneut bei 30 bis 50°C im Vakuum trocknet, wobei alle Gewichtsteile auf das Gewicht des bräunlichen Pulvers bezogen sind.

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man

a) ein Gewichtsteil des bräunlichen Pulvers in 0,9 Gewichtsteilen wassergesättigtem Ethylacetat suspendiert, 48 Stunden bei Raumtemperatur stehenläßt und den erhaltenen Niederschlag absaugt,
b) den Niederschlag mit 0,09 Teilen kaltem wassergesättigtem Ethylacetat wäscht und 48 Stunden bei 40°C im Vakuum trocknet,
c) das erhaltene Produkt in 36 Gewichtsteilen wasserfreiem Ethylacetat in der Siedehitze löst, mit 0,36 Gewichtsteilen Aktivkohle zwei Stunden am Rückfluß erhitzt, filtriert und bei 50°C im Vakuum auf 1/12 des zur Auflösung eingesetzten Lösungsmittels einengt,
d) zu dem Konzentrat bei Raumtemperatur 0,6 Gewichtsteile wassergesättigtes Ethylacetat gibt, 12 Stunden bei Raumtemperatur stehenläßt und das ausgefallene Produkt abfiltriert,
e) dieses Produkt zweimal in jeweils 1,8 Gewichtsteilen technischem Ethylacetat suspendiert und filtriert, 24 Stunden bei 40°C im Vakuum vortrocknet, vermahlt und 48 Stunden bei 40°C im Vakuum nachtrocknet.

4. Pharmazeutische Mittel, enthaltend isosilybinfreies Silibinin erhältlich gemäß Anspruch 1 bis 3 gegebenenfalls in einem pharmazeutischen Träger und/oder zusammen mit einem Hilfsstoff.