DE2625053C3

DE2625053C3 - Arzneimittel zur Kontrolle von Leberkrankheiten

Info

Publication number: DE2625053C3
Application number: DE2625053A
Authority: DE
Inventors: Hitoshi Toyonaka Kurono; Tsutomu Kasai Sakai; Kuniaki Neyagawa Taninaka
Original assignee: Nihon Nohyaku Co Ltd
Current assignee: Nihon Nohyaku Co Ltd
Priority date: 1975-06-06
Filing date: 1976-06-03
Publication date: 1980-01-10
Also published as: DE2625053B2; FR2313038A1; JPS5618576B2; DE2625053A1; GB1509818A; JPS51144735A; FR2313038B1

Description

C = C

R²X²C
O

worin R¹ und R², die gleich oder unterschiedlich sind, je einzeln eine Ci- bis Cs-Alkylgruppe oder eine Q-bis Q-Alkoxyäthylgnippe bedeuten, X¹ und X², die

S-CH₁

gleich der unterschiedlich sind, je einzeln ein Sauerstoff- oder Schwefelatom bedeuten und η 0 oder 1 bedeutet, enthält.

Die Erfindung betrifft Arzneimittel zur Kontrolle von Leberkrankheiten, die eine 1,3-Dithiaverbindung der allgemeinen Formel I:

R¹OC

S-CH,

C = C

R²OC

Il ο

enthalten, worin R¹ und R², die gleich oder unterschiedlich sind, je einzeln eine Cr bis Cs-Alkylgruppe oder eine Ci- bis C4-Alkoxyäthylgruppe bedeuten, X¹ und X², die gleich oder unterschiedlich sind, je einzeln ein Sauerstoff- oder Schwefelatom bedeuten und η O oder 1 bedeutet.

In der Leber werden verschiedene chemische Reaktionen biologisch bewirkt, wie eine Entgiftung, der Zuckermetabolismus, der Proteinmetabolismus, der Flüssigkeitsmetabolismus, die Bildung und Sekretion von Galle bzw. von Gallenflüssigkeit, die Kontrolle der Hormone, die Bildung von dem Blutkoagulans Prothrombin, die Regeneration von Leberzellen und die Speicherung von verschiedenen Elementen, die für den lebenden Körper erforderlich sind bzw. diesen ergeben (Fetie Glycogene, Proteine und Vitamine).

Diese komplizierten und gut ausgeglichenen Leberfunktionen werden manchmal gestört, entweder akut oder chronisch. Eine solche Störung kann auf verschiedene Faktoren zurückzuführen sein, wie Alkohol, ungenügende Ernährung, Viren. Arzneimittel, die als Gifte wirken. Störung des Gallenflusses, Läsionen von Blut- und lymphatischen Gefäßen in der Leber usw. bo Dabei können solche Krankheiten, wie beispielsweise eine Fettleber, toxische Leberschäden, alkoholische Hepatitis, virale Hepatitis, Stauung in der Leber, Cholestase, Gelbsucht und Zirrhose oder ein Hepatom als Endstufe, auftreten. b=>

Aus den US-PS 37 61 596, 38 56 814 und 38 76 663 ist bekannt, daß Verbindungen der Formel I fungizide Wirksamkeit besitzen.

S-CH₂
(O)_n

Überraschenderweise wurde gefunden, daß die Verbindungen, die durch die zuvor angegebene allgemeine Formel I dargestellt werden, die Leberzellen und die metabolischen Funktionen der Leber aktivieren, wie den Zuckermetabolismus, die Entgiftung (beispielsweise die Entgiftung von Alkohol), die Bildung und Exkretion von Galle und Gallenflüssigkeit und von Gallensalzen (choleretische Wirkung) und die Regeneration der Leber.

Überraschenderweise wurde weiterhin gefunden, daß die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel I dargestellt werden, die pharmakoln^ische Aktivität besitzen, vorhandene Leberschäden zu mildern oder zu heilen und dabei die aus M. N e g w e r, organisch-chemische Arzneimittel, Berlin, 1971 bekannten Arzneimittel Anetholtrithion, Thioctsäure, Thioctsäureamid und Methionin in dieser Hinsicht zu übertreffen, wie aus den unten folgenden pharmakologischen Untersuchungen hervorgeht. Zwar weisen H. Hornbostel et al., Inn. Med. in Praxis und Klinik, Stuttgart 1973, S. 15-205, darauf hin, daß die Möglichkeiten zur Heilung von nekrotischen Leberkrankheiten äußerst gering sind. Jedoch können bei Verabreichung der erfindungsgemäßen Arzneimittel die normalen Zellen aktiviert werden und so das Erscheinungsbild nekrotischer Leberkrankheiten, wie z. B. Zirrhose, weniger schwer werden lassen, wenn auch die nekrotischen Zellen selbst nicht mehr auf natürliche Weise geheilt werden können.

Überraschenderweise wurde weiterhin gefunden, daß die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel I dargestellt werden, die pharmakologische Wirkung

besitzen, die Funktion der Leber gegen bestimmte allgemeine Formel I dargestellt werden, umfassen

Arten von Schäden oder Belastung zu schützen. teilweise bekannte Verbindungen und sie können nach

Die Verbindungen, die durch die zuvor angegebene dem folgenden Reaktionsschema synthetisiert werden:

O π	CH₂ + CS₂ -	Base	O	0 Η	\ /^s°
Il R¹X¹C			R¹X¹C	Il R¹X¹C R²X²C Μ	C — C S^a
/ R²X²C π			R²X²C^ Il O 0 Μ	Il O
Il O		Il R¹X¹C
		R²X²C^ Il		S-CH₂
	CH₂-HaI i CH₂-HaI	Il 0	\ / C=C / \	S-C
	H₂O₂		\ C /	s—c

			, — V- \	:h₂
				:k₂

		S-CH₂
		1 O

worin R¹, X¹, R² und X² die zuvor gegebenen Bedeutungen besitzen und Hai ein Halogenatom bedeutet.

Das heißt, ein Malonsäure- oder Thiolmalonsäureester wird mit Schwefelkohlenstoff in Anwesenheit einer Base umgesetzt Das entstehende Dithiolat wird mit einem Dihalogenoäthan umgesetzt. Dabei erhält man l,3-Dithiolan-2-ylidenmalonat oder Thiolmalonat, das einer Verbindung der allgemeinen Formel I

entspricht, wenn nO ist.

Wird das so erhaltene Malonat oder Thiolmalonat mit einem geeigneten Oxidationsmittel, beispielsweise Wasserstoffperoxid, oxidiert, so erhält mas «in Oxid, das der Verbindung der allgemeinen Forme! I entspricht, wenn π 1 ist.

Typische Beispiele von Verbindungen, die durch die allgemeine Formel 1 dargestellt werden, sind in der folgenden Tabelle I aufgeführt.

Tabelle O	Nr.	I	S-CH₂	X¹	X²	R¹	R²	Fp. ( C) oder Kp. ( C/mmHg) oder Brechungsindex
R¹X¹C	1 2 3 4 5		(O),		0 0 0 0 0	CH₃ C₂H₅ U-C₃H₇ --C₁H₇ n-CIIo	CH, C₂H₅ U-C₃H₇ i-C,H₇ n-CJI«	Fp. 64-66 Fp. 48-49 Fp. 50,5-51 Fp. 54,5-55 Kp. 171/0,09
	\ C== C /	0 0 0 0 0
R²X²C ' Ν
Il 0
π
0 0 0 0 0

Fortsetzung

R'	R"	Fp. ( C) oder Kp.
		( C7mm Hg) oder
		Brechungsindex
i-C₄H,	1-C₄H₉	Kp. 177-183/0,23
S-C₄H₉	S-C₄H₉	Kp. 175-180/0,5
t-C₄H₉	t-C₄H,	Fp. 88-89
n-C₅H„	U-C₅H₁₁	Kp. 192-194/0,07
i-CsH,,	!-C₅H₁₁	Kp. 180-186/0,08
CH₃	CH₃	Kp. 134-138/0,1
C₂H₅	C₂H₅	Kp. 132-135/0,1
1-C₃H₇	S-C₃H₇	Kp. 151/1,5
Ti-C₄H₉	n-C₄H₉	Kp. 148/0,07
CH₃OC₂H₄	CH₃OC₂H₄	Kp. 204-205/0,09
C₂H₅OC₂H₄	C₂H₅OC₂H₄	Fp. 36-38
H-C₄H₉OC₂H₄	U-C₄H₉OC₂H.	Kp. 208/0,06
CH₃	C₂H₅	Kp. 158-159/0,15
CH₃	1-C₃H₇	Fp. 67-68
CH₃	i-C₄H,	Kp. 173-175/0,05
C₂H₅	1-C₃H₇	Fp. 51-52
C₂H₅	S-C₄H₉	Kp. 171-173/0,2
J-C₃H₇	J-C₄H₉	Fp. 47-49
J-C₃H₇		Fp. 51-54
C₂H₅	C2H5OC2H4	Kp. 171-175/0,07
C₂H₅	C₂H₅	Kp. 172-174/0,7
C₂H₅	J-C₃H₇	Kp. 170-179/0,7
C₂H₅	U-C₄H₉	Fp. 31-32
CH₃	CH₃	Fp. 49-54
C₂H₅	C₂H₅	Fp. 75-77
S-C₃H₇	J-C₃H₇	Fp. 78-W3
i-C₄H₉	i-C₄H₉	Fp. 66-72
t-C₄H₉	t-C₄H₉	Fp. 129-134
CH₃	1-C₄H₉	nV 1,5543
C₂H₅	1-C₃H₇	Fp. 66-67
i-C₃H₇	C2H5OC2H4	n'o" 1,5644

11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1

0 0 0 0 0 S S S S 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 S S S S 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 S S S 0 0 0 0 0 0 0 0

Die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel I dargestellt werden, besitzen gegenüber Säugetieren eine äußerst niedrige Toxizität. Ihre akute orale Toxizität bei männlichen Mäusen, ausgedrückt als LD50-Werte, liegt bis zu etwa 6000 mg/kg Körpergewich!

Beispielsweise betragen die LDso-Werte der Verbindungen 2, 4, 21 und 31 der Tabelle 11110 mg/kg, 1350 mg/kg, 223C mg/kg und mehr als 6000 mg/kg. Die Verbindungen besitzen weiterhin keine nachteiligen Wirkungen auf die Versuchstiere, wenn sie diesen in solchen Dosismengen verabreicht werden, die innerhalb der üblichen Verabreichungsbereiche liegen. Dies wird unten noch näher erläutert.

Es ist eine Reihe von Kausalfaktc-ren bekannt, die toxische Leberschäden, Hepatitis und Fettleber induzieren. Die hauptsächlichen Änderungen, die man bei diesen Krankheiten beobachtet, sind die Nekrose der Leberzellen, die Mesenchymreaktion und die Akkumulation von Lipiden.

Die Art der Nekrose hängt von dem KausalFaktor ab. Sie kann in eine centrilobuläre Nekrose, eine periporta-Ie Nekrose und eine diskrete loburale Nekrose eingeteilt werden.

Diese Änderungen können experimentell bei Modellveruschen erreicht werden, wenn man Labortieren die folgenden toxischen Stoffe verabreicht.

Die centrilobuläre Nekrose kann durch Tetrachlorkohlenstoff, Thioacetamid, Chloroform oder Brombenzoi induziert werden.

Die periportale Nekrose wird durch Allylalkohol induziert

Die diskrete lobulare Nekrose, die mit der Mesenchymreaktion assoziiert ist, kann durch D-Galactosamin induziert wcden.

Die Fettleber kann an einem Modell durch Verabreichung Von Tetrachlorkohlenstoff oder Ethionin veranschaulicht werden.

Es ist bekannt, daß alle diese akuten, subakuten und chronischen Leberschäden bei der Endstufe in Zirrhose übergehen. Irr, Labor kann die Zirrhose am Modell durch langzeitige wiederholte Verabreichung von Tetrachlorkohlenstoff an die Versuchstiere induziert werden.

Versuche haben gezeigt, daß die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel I dargestellt werden, günstige pharmakologische Aktivitäten bei folgenden Lebcrkrankhciten ausüben:

(1) Leberkrankheiten, die mit der centrilobulärcn Nekrose verbunden sind.

(2) Leberkrankheiten, die mit periportaler Nekrose assoziiert sind,

(3) Leberkrankheiten, die mit diskreter lobularcr Nekrose und Mesenchymreaktion assoziiert sind,

(4) Fettleber.

(5) Zirrhose.

(6) toxische l.ebersehaden.

(7) Stauung in der Leber; ferner wird

(8) die Exkretion von Galle bzw. Gallenflüssigkcit und Gallensalzcn (choleretische Aktivität) stimuliert.

Wie oben ausgeführt, besitzen die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I die pharmakologische Wirkung, vorhandene Leberkrankheiten wenigstens zu mildern oder in einigen Fällen zu heilen und die Leber gegenüber bestimmten Arten von Schaden oder Belastung zu schützen. Die Verbindungen können daher in den erfindungsgemäßen Arzneimitteln zur Kontrolle von akuten oder chronischen Lebcrkrankhciten von Menschen und Tieren, die durch verschiedene Ursachen induziert werden, eine nützliche Wirksamkeit ausüben.

Histopathologische Beobachtungen haben gezeigt, daß die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel I dargestellt werden, die centrilobuläre Nekrose. die pcriportalc Nekrose und die diskrete lobularc Nekrose. die mit der Mesenchymreaktion assoziiert ist, die in der Leber auftritt, günstig beeinflussen. Sie sind somit nützliche Arzneimittel zur Kontrolle von nekrotischen Leberkrankheiten von Menschen und Tieren.

Die erfindungsgemäßen Arzneipräparate aktivieren die Leberzellen und die metabolische Funktion der Leber einschließlich der Exkretion von Galle bzw. Gallenflüssigkeit und Gallensalzen und die Milderung von durch Hepatotoxine, wie Alkohol hervorgerufene Schaden.

als Mittel bei Gelbsucht von Menschen und Tieren.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können Menschen und Tieren verabreicht werden.

Die Verbindungen, die durch die allgemeine Formel I dargestellt werden, können bei ihrer Verwendung als Arzneimittel zur Kontrolle von Leberkrankheiten in einer Form verwendet werden, die für die beabsichtigte Wirkung geeignet ist. Sie können als Arzneimittel zur Kontrolle von Leberkrankheiten alleine verwendet werden. Sie können auch nach üblichen Verfahren formuliert werden und die auf diesem Gebiet üblichen Maßnahmen können verwendet werden. Sie können als Arzneimittel in Form eines Gemisches mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel bzw. Träger und/oder mit anderen pharmakologisch aktiven Substanzen verwendet werden. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können in Darreichungseinheiten vorliegen, die für die einzelnen Anwendungszwecke geeignet sind und welche die aktive Verbindung allein oder in einem Gemisch mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel enthalten.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können entweder oral oder parenteral verabreicht werden. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können in einer für die orale oder parenterale Verabreichung geeigneten Form vorliegen.

Die erfindurigsgcmaßen Arzneimittel können in FOrm von Pulvern. Körnchen. Tabletten, mit /.ucker beschichteten Tabletten. Pillen. Kapseln. Supposilorien. Suspensionen. Flüssigkeiten. Emulsionen. Ampullen. Injektionen und ähnlichen vorliegen.

Die crfindungsgemäßen Arzneimittel werden je nach Bedarf formuliert, z. B. in aseptischem Zustand oder in Form einer isotonischen wäßrigen Lösung.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I können in Form eines Gemisches mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel verwendet werden. Der Ausdruck »Verdünnungsmittel« bedeutet ein pharmazeutisch übliches Material außer den Verbindungen der allgemeinen Formel I. Das Verdünnungsmittel kann fest, halbfest, flüssig oder eine vcrdatibarc Kapsel sein. Beispiele von Verdünnungsmitteln sind Träger bzw. Vehikel. Streckmittel. Bindemittel. Benetzungsmittel, Zerfallsmittel, oberflächenaktive Mitlei, Schmiermittel. Dispersionsmittel, PuffersubMan/en. Geschmacks mittel bzw. Gewürzstoffe, Farbstoffe. Aromastoffe. Konservierungsmittel. Lösuiigsvermittlcr. Lösungsmittel und andere übliche Hilfsstoffe. Diese Verdünnungsmittel können entweder allein oder in Form eines Gemisches aus zwei oder mehreren Substanzen verwendet werden.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel werden in an sich bekannter Weise hergestellt. Beispielsweise kann man ein Gemisch aus aktivem Bestandteil und Verdünnungsmittel herstellen, beispielsweise in Form von Körnchen, und die so geformte körnige Zusammensetzung kann beispielsweise /u Körnern verformt werden und diese können beispielsweise zu Tabletten verformt werden.

Im allgemeinen enthalten die erfindungsgemäßen Arzneimittel ungefähr 0,01 bis 100 Gew.% aktiver Verbindung, bezogen auf das Gewicht des Arzneimittels.

Werden die erfindungsgemäßen Verbindungen zu Verabreichungseinheiten verarbeitet, so können die einzelnen Bestandteile, die das formulierte Mittel ergeben, entweder gleich oder unterschiedlich geformt

SCMl. L/IC Ulli lllCIMCIi VCIWCIlUCtCII TUI HICII MIIU

beispielsweise Tabletten. Körnchen. Pillen, Pulver, mit Zucker beschichtete Tabletten, Kapseln. Ampullen und ähnliche Formen.

Für die Kontrolle der verschiedenen Leberschäden und der verschiedenen daraus entstehenden Krankheiten können die erfindungsgemäßen Arzneimittel Menschen und Tiere nach üblichen Verfahren verabreicht werden, so daß man die gleichen Wirkungen wie bei ^tn zuvor beschriebenen Tierversuchen erhält. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können oral oder parenteral verabreicht werden. Die orale Verabreichung umfaßt die sublinguale Verabreichung und die parenterale Verabreichung umfaßt die Verabreichung durch INjektion einschließlich beispielsweise subkutane, intramuskuläre und intravenöse Injektionen und Installationen.

Die Dosis des erfindungsgemäßen Arzneimittels hängt, wie bekannt, von vielen Faktoren ab einschließlich der Art des Subjekts (ob das Arzneimittel Menschen oder Tieren verabreicht wird), dem Unterschied in der Anfälligkeit, dem Alter, dem Geschlecht, dem Körpergewicht, dem klinischen Bild, dem physikalischen Zustand der Patienten, der Art der Verabreichung, der Zeit und dem Intervall der Verabreichung, der Art und der Eigenschaften des Arzneimittels, der Art des aktiven Bestandteils usw. In einigen Fällen kann die Dosis an Arzneimittel kleiner sein als die im folgenden erwähnte

Minimaldosis und in anderen Rillen kann die Dosis größer sein als die im folgenden erwähnte Maximumdosis. Wird das Arzneimittel in einer hohen Dosis verabreicht, wird es vorteilhaft portionsweise mehrere Male am Tag verabreicht.

Bei der oralen Verabreichung liegt eine wirksame Dosis für Tiere im Bereich von 0,1 bis 500 mg, bevorzugt I bis 100 mg, an aktiven Bestandteil pro kg Körpergewicht pro Tag. Bei der Parcnteralen Verabreichung liegt die wirksame Dosis für Tiere im Bereich von 0,01 bis 250 mg, bevorzugt 0,1 bis 25 mg, an aktivem Bestandieil pro kg Körpergewicht pro Tag.

Bei der oralen Verabreichung liegt die wirksame Dosis für Menschen, die von der oben erwähnten wirksamen Dosis für Tiere hinsichtlich der Empfindlichkeit, dem Unterschied und der Sicherheit abgeleitet wird, bevorzugt im Bereich von 0,1 bis 250 mg, mehr bevorzugt bei 0,5 bis 50 mg, pro kg Körpergewicht pro lag. Bei der parenteraien Verabreichung iiegi die wirksame Dosis für Menschen im Bereich von 0,01 bis 100 mg, bevorzugt 0,1 bis 25 mg, pro Körpergewicht pro Tag.

In den Konfektionierungsbeispielen I bis 7 sind alle Teile durch das Gewicht ausgedrückt.

Herstellung von
Di-(methoxyäthyl)-l,3-dithiolan-2-ylidenmalonat

22 g (0,1 Mol) Di-(methoxyäthyl)-malonat und 7.6 g _v0,l Mol) Tetrachlorkohlenstoff werden vermischt. Das Gemisch wird auf 20⁰C gekühlt. Tropfenweise werden 40.2 g (0,3 Mol) 40%ige wäßrige Lösung aus kaustischer Pottasche bei der gleichen Temperatur zugegeben. Nach der Zugabe werden 50 ml Wasser zugegeben und das Gemisch kann bei dieser Temperatur reagieren. 50 g (0,5 Mol) 1.2-Dichloräthan werden zugegeben und dann wird bei einer Temperatur von 60 bis 80⁰C während 4 h umgesetzt. Nach Beendigung der Umsetzung wird das Reaktionsgemisch mit 300 ml Äthyläther extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und der Λ tkap \xi\vA oUHoctilliort

21,5 g (Ausbeute 68%) einer schwachgelben öligen Verbindung mit einem Siedepunkt von 204 bis 205°C/0,09 mm Hg werden nach der Destillation des A^r> Rückstands bei vermindertem Druck erhalten.

Konfektionierungsbeispiele

1) Diäthyl-l,3-dithiolan-2-yliden-

malonat (Verbindung 2) 10 Teile

schweres Magnesiumoxid 10 Teile

Lactose 80 Teile

Die oben beschriebenen Komponenten werden homogen vermischt und unter Herstellung eines Pulvers pulverisiert.

2) 2-(Diisopropoxycarbony')-methyüden-13-dithiolan-l -oxid
(Verbindung 31) 10 Teile
synthetisches Aluminiumsilicat 10 Teile
Calciumhydrogenphosphat 5 Teile
Lactose 75 Teile

Die oben beschriebenen Komponenten werden auf gleiche Weise wie in Beispiel 1 zur Herstellung eines Pulvers behandelt.

3) Diisopropyl-l,3-dithiolan-2-ylidenmalonat (Verbindung 4) 50 Teile Stärke 10 Teile Lactose 15 Teile kristalline Cellulose 20Teile Polyvinylalkohol 5 Teile Wasser 30 Teile

Die oben beschriebenen Komponenten werden zur Herstellung von Körnchen bzw. einem Granulat homogen geknetet, granuliert, getrocknet und gesiebt.

4) 99 Teile des gemäß Beispiel 3 erhaltenen Granulats werden mit I Teil Calciumstearat verarbeitet und dann unter Druck zur Herstellung von Tabletten mit einem Durchmesser von 10 mm verformt.

5) Methylisopropyl-1,3-dithiolan-2-ylidenmalonat (Verbindung 19) 95Teile Polyvinylalkohol 5 Teile Wasser 30 Teile

Die oben beschriebenen Komponenten werden auf gleiche Weise wie im Beispiel 3 unter Granulatherstellung behandelt. 90 Teile des so hergestellten Granulats werden mit 10 Teilen kristalliner Cellulose vermischt und dann unter Druck unter Herstellung von Tabletten mit einem Durchmesser von 8 mm verformt. Die Tabletten werden unter Verwendung geeigneter Mengen einer Suspension, die äthanolischen Schellack. Sirup, Gelatine und ausgefallenes Calciumcarbonat und einen Farbstoff enthält, zu mit Zucker beschichteten Tabletten verarbeitet.

6) Di-n-propyl-1,3-dithiolan-2-ylidenmalonat (Verbindung 3) 0,5 Teile nicht-ionisches oberflächenaktives

Mittel 2,5 Teile

isotonische Natriumchloridlösung 97 Teile

Die obigen Bestandteile werden zusammen unter Erwärmung vermischt. Man erhält eine Lösung, die dann abgekühlt wird und für die Injektion verwendbar ist.

Ϊ) Das gemäb Beispiel 1 erhaltene Pulver wird in im Handel erhältliche Kapseln eingefüllt und man erhält gefüllte Kapseln.

Pharmakologische Untersuchungen

a) Die akute orale Toxizität bei männlichen Mäusen, ausgedrückt als LDw-Werte wurde für die folgenden Verbindungen gemäß der Erfindung ermittelt:

Tabelle Ia

Akute orale Toxizität bei männlichen Mäusen

Verbindung Nr.

LD₅₀ mg/kg Körpergewicht

b0

65 1
2
3
4
5
6
7

4800 1110 1540 1350 2700 2600 3100 3300

l-'ortset/uim

Verbindung Nr.

LDsii mg/kg Körpergewicht

18 5300

19 4400

20 4600

21 2230

22 2100

23 1800

30 > 6000

31 >6000

32 >6000

33 >6000

34 >6000

35 >6000 Anetol-trithion 3850 Thioctsäure 1380 Thioctsäureamid 1460 Methionin >6000

b) Schutzwirkung auf akute Leberschäden, die mit der centrilobulären Nekrose verbunden sind (Modelversiich unter Verwendung von Tetrachlorkohlenstoff):

Die Verabreichung von Tetrachlorkohlenstoff (CCU) ergibt eine centrilobuläre Nekrose der Leber, die mit einem Verlust an Diphosphorpyridinnukleotid, hepalitischem Glykogen, Coen/.ym A und einer Erhöhung an Neutralfett assoziiert ist. Die Freigabe von verschiedenen Enzymen von den Hepatocyten und eine Erhöhung der Enzymaktivität in dem Plasma werden als Folge der Leberschäden erkannt. Ein geeignetes Mittel zur Bewertung der Schädigung, die durch CCU induziert wird, oder des Schutzes, der durch Arzneimittel erhalten wird, besteht darin, die Plasma-Glutaminsäure-Brenztraubensäure-Transaminase-(p-GPT-)Aktivität zu untersuchen.

Verfahren:

Die Testverbindungen werden in Olivenöl gelöst oder suspendiert und oral in einer Dosis von 250 mg/kg männlichen Mäusen (vier Wochen alt, dd-Stamm) verabreicht. Nach 6 h wird CCU oral (0,05 ml/kg als Olivenöllösung) verabreicht. Die Tiere werden 24 h nach der CCU-Verabreichung getötet und die Leber wird grob geprüft. Das Plasma wird durch Zentrifugieren abgetrennt. Die Aktivitäten an p-GPT werden nach dem Verfahren von R e i t m a η und F r a η k e 1 s bestimmt und in Karmen-Einheiten ausgedrückt.

Die Bewertung für den Leberschadenindex ist die folgende:

Leberschadenindex

Beschreibung

normal

etwas erkennbar

klar erkennbarer Schaden

schwerer Schaden

Jede Zahl gibt einen durchschnittlichen Wert von 5 bis 6 Mäusen an. Die Werte von p-GPT über 1000 Karmen-Einheiten werden als 1000 für die durchschnittliche Berechnung angenommen.

Ergebnisse

Tabelle II

Schutzwirkung bei akuten Leberschüden, die mit der centrilobulären Nekrose assoziiert sind

Verbindung Nr.

Leberschadenindex

P-OPT

ι ;	200
2 (	47
3	26
4 (	23
5	322
6 (	26
7	!02
8	230
O	550
10	350
Ii ;	750
12	36
13	105
14	241
15	85
16	150
17	242
18	240
19	89
20 (	62
21 (	64
22 (	67
23	102
24	152
25	85
26 (	62
27 (	18
28 (	31
29 (	222
30 (	156
31 (	121
32	180
33	212
34	102
35 (	152
36	210
Tetrachlorkohlenstoff alleine	> 1,000
Thioctsäureamid <■	763
Anetholtrithion	38
Vergleich (	35

).8
,0
\2
5,0
),5
,2
,2
ι τ
U
!,5
,0
,4
,4
,5
,0
!,0
,4
,0
),2
),6
),4
,0
,2
,0
),6
X4
3,8
),6
),8
3,8
1,0
1,4
1,0
D,8
1,4
5,2
»,8
1,6
]

Es ist gut bekannt, daß Tetrachlorkohlenstoff die centrilobuläre Nekrose in der Leber induziert. Aus den Ergebnissen der Versuche, die unter Verwendung von Tetrachlorkohlenstoff durchgeführt wurden, ist erkennbar, daß die untersuchten erfindungsgemäßen Mittel eine ausgeprägte Schutzwirkung bei akuten Leberschäden zeigen. Sie sind in ihrer Wirkung vergleichbar mit Thioctsäureamid und Anetholtrithion, zwei zur Zeit im Handel erhältliche Arzneimittel für Leberkrankheiten.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel sind nützlich bei der Kontrolle von menschlichen und tierischen Leberkrankheiten, die mit centrilobulärer Nekrose verbunden sind.

Die Dosis der Testverbindung variiert abhängig von dem Grad der Leberschädigung. Wenn die Leberschädigung im Modell nicht stark ist, kann die Dosis der Testverbindung reduziert werden.

F.s wurde beispielsweise gefunden, daß die untersuchten erfindungsgemäßen Mittel wirksam sind, selbst bei einer Dosis, die so niedrig ist wie I bis 2 mg/kg, wenn die Menge an Tetrachlorkohlenstoff, die einem Tier verabreicht wird, 0,005 ml/kg beträgt.

c) Schutzwirkung auf einen akuten Leberschaden, assoziiert mit centrilobulärer Nekrose (Versuchsmodelle unter Verwendung von Brombenzol, Dimethylnitrosamin und Chloroform):

Brombenzol (das im folgenden ah BB abgekürzt wird), Dimethylnitrosamin (das im folgenden als DMN abgekürzt wird) und Chloroform (das im folgenden als CF" abgekürzt wird) ahnein Tetrachlorkohlenstoff bei

der Induzierung von l.eberschäden. die mit centrilobulärer Nekrose assoziiert sind.

Verfahren

Die Testverbindung oder Anetholt'ithion wird oral jeweils einer Gruppe von 5 Tieren in einer Dosis von 100 mg/kg verabreicht. 6 h danach wird Hepatotoxin in der in Tabelle III angegebenen Dosis und in dem angegebenen Weg verabreicht. 24 h danach (ausgenommen im Fall des Dimethylnitroseamins 15 h danach) werden die Tiere getötet und Blutproben werden gesammelt. Die Indizes der Hepatotoxizität werden von jeder lebcrtoxischen Substanz bestimmt und daraus wird die Wirksamkeit der Verbindung bewertet.

Tabelle III

Verabreichung von Hepatotoxin und der Index der Hepatotoxizität

Hepatotoxin

Tier

Uosis (ml/kg)

Koute

Index der Hepatotoxizität

BB männliche Ratten (SD) 0,75

DMN männliche Mäuse (4 Wochen alt, dd) 0.05 CF männliche Mäuse (4 Wochen alt, dd) 0,2

Ergebnisse

Ähnlich wie bei Tetrachlorkohlenstoff ist bekannt, daß BB, DMN und CF Hepatotoxine sind, die eine Ji centrilobuläre Nekrose induzieren. Wie aus Tabelle IV erkennbar ist. normalisieren die erfindungsgemäßen Verbindungen 2, 4 und 21 die Indizes der Hepatotoxizität und dadurch wird ihre hohe Wirksamkeit beim

intraperitoneal

P-GPT-Aktivität BSP-Test
p-GPT-Aktivität BSP-Test
p-GPT-Aktivität

Schutz von Leberschädigungen erkennbar.

Hinsichtlich dieser Wirkung sind sie besser als Anetholtrithion.

Daraus kann abgeleitet werden, daß das erfindungsgemäße Arzneimittel bei der Kontrolle von Lebererkrankungen bei Menschen und Tieren, die mit centrilobulärer Nekrose einhergehen, eine günstige Wirkung ausüben kann.

Tabelle IV

Schutzwirkungen auf akute Leberschädigungen, die mit centrilobulärer Nekrose einhergehen

Hepato- Index der Hepato	Vergleich Positive	Verbindung Verbindung	Chloroform	Verbindung Nr. 6	Verbindung	Anethol
toxin toxizität	Kontrolle*)	2**) 4«)	p-GPT	Verbindung Nr. 7	21**)	trithion**)
BB p-GPT	16 ±1,9 53 ±27	23 ±3,7	21 ± 3	55 Verbindung Nr. 8		78 ±4,1
(Karmen-Einheit)			414 ± 99	Verbindung Nr. 18
BSP (mg/dl)	2,7 ±1,7 20,4 ±7,1	10,6 ±4,5	93 ± 22	Verbindung Nr. 19		12,9 ±5,5
DMN P-GPT	15 ±1,5 >600	236 ±64 204 ±44	51± 18	Verbindung Nr. 20	188 ±48	192 ±54
BSP	1,5 ±0,3 31,2±5,9	18,7 ±4,2 10±2,0	78± 18	Verbindung Nr. 22	15,3 ±4,1	17,6 ±2,7
CF P-GPT	20 ±3,0 432 ±58	37 ± 12 58 ± 15	60 Verbindung Nr. 23	42 ±8,7	>1000
*) Es wird nur Hepatotoxin	verabreicht.		Verbindung Nr. 30
**) Nach der Behandlung mit	den Verbindungen 2, 4, 21 oder mit Anetholtrithion wird das	Verbindung Nr. 31	Hepatotoxin verabreicht.
d) Die Schutzwirkung auf	akute Leberschädigungen,	Verbindung Nr. 32
die mit centrilobulärer Nekrose, verursacht durch	Verbindung Nr. 33
Chloroform, einhergehen, wurde wie unter c) oben mit	65 Verbindung Nr. 34
weiteren erfindungsgemäßen Mitteln sowie mit weite	Verbindung Nr. 35
ren Vergleichsbindungen untersucht. Die erhaltenen	Thioctsäure
Werte sind in Tabelle IVa enthalten:	Thioctsäureamid

Tabelle IVa

Hepatotoxin
Index der Hepatotoxin
Vergleich
positive Kontrolle
Verbindung Nr. 1
Verbindung Nr. 3
Verbindung Nr. 5
	63± 15
	67± 17
	71+ 21
108+ 30
49± 8
39± 6
74± 18
120+ 31
74+ 28
57 ± 12
95 ± 14
117+ 28
83± 18
38± 7
464 ±155
620 ±130

e) Therapeutische Wirkung auf chronische Leberschäden (Versuchsmodell unter Verwendung von Thioacetamid):

Thioacetamid (das im folgenden als »TAA« abgekürzt wird) verursacht bei Tieren ähnlich wie Tetrachlorkohlenstoff Leberschäden. Es wird daher häufig als Substanz zur Erzielung eines Leberschadens und einer Fettleber verwendet. Bei den Versuchen dieses Beispiels wird Tieren TAA wiederholt verabreicht, um chronische Leberschäden zu induzieren, und dann werden die erfindungsgemäßen Arzneimittel verabreicht, um fest zustellen, ob sie gegenüber chronischen Leberschäden wirksam sind oder nicht.

Verfahren

Fünf Gruppen von mannlichen Ratten (Sprague-Dawley-Stamm) werden folgendermaßen behandelt:

Gruppe A: Den Ratten werden oral 100 mg/kg Thioacetamid mit Intervallen von 3 Tagen während 36 Tagen verabreicht (Verabreichung erfolgt 12mal), dann werden die Ratten 10 Tage normal gefüttert.

Gruppe B: Den Ratten werden oral 100 mg/kg Thioacetamid mit Intervallen von 3 Tagen während 36 Tagen verabreicht (die Verabreichung erfolgt 12m al), dann werden sie 10 Tage normal gefüttert und erhalten gleichzeitig 0,2% Verbindung 4.

Gruppe C: Den Ratten werden oral 100 mg/kg Thioacetamid mit Intervallen von 3 Tagen 20

während 36 Tagen verabreicht (die Verabreichung erfolgte 12mal), dann werden sie normal 10 Tage gefüttert und erhalten 0,2% Verbindung 2.

Gruppe D: Den Ratten werden oral 100 mg/kg Thio acetamid mit Intervallen von 3 Tagen während 36 Tagen verabreicht (die Verabreichung erfolgt 12mal), dann werden sie 10 Tage normal gefüttert und erhalten 0,2% Anetholtrithion.

Gruppe F.: Die Ratten werden normal gefüttert und zum Vergleich verwendet.

Aus jeder Gruppe werden in geeigneten Intervallen für den BSP-(SuIfobromphvhaIein-)Test fünf Ratten getötet. Die Ergebnisse davon sind als Mengen (mg) von BSP, die in 1 dl Plasm? verbleiben, angegeben.

Ergebnisse Tabelle V Therapeutische Wirkung auf chronische Leberschäden

Zeit der Tötung

Konzentration an BSP im Plasma (mg/dl)

Gruppe A Gruppe B Gruppe C Gruppe D Gruppe E

24 h nach einer 4fachen TAA-Verabreichung
24 h nach einer 8fachen TAA-Verabreichung
24 h nach einer 12fachen TAA-Verabreichung

Nach der Verabreichung der Verbindungen
2 Tage
5 Tage
10 Tage

Durch die wiederholte Verabreichung von TAA steigt die Konzentration an BSP im Blut auf 16 bis 19 mg/dl an. Diese Werte dauern an und daraus wird geschlossen, daß die Ratten praktisch einen chronischen Leberschaden haben. Nach der Verabreichung von TAA heilt der Leberschaden der Gruppen, die die erfindungsgemäßen Arzneimittel verabreicht bekommen haben (Gruppen B und C), schneller als bei der Gruppe, die kein

	!8,2 ±2,6	9,7 ±4,1	0,3 ±0,1
	16,8 ±5,2	7,3 ±3,4	-
	17,3 ±4,4	0,9 ±0,1	0,8 ±0,1
12,7±3,7	7,6 ±1,1 9,8 ±3,1	0,4 ±0,1
8,7 ±1,9	3,8 ±0,5 4,7 ±0,8	-
1,4 ±0,4	0,3 ±0,1 0,8 ±0,2	0,6 ±0,1

Arzneimittel verabreicht bekommen hat (Gruppe A).

Daraus folgt, daß die erfindungsgemäßen Arzneimittel bei einem subakuten oder chronischen Leberschaden oder bei der Hepatitis in Menschen und Tieren wirksam sind.

f) Schutzwirkung auf den akuten Leberschaden, der mit der periportalen Nekrose einhergeht (Versuchsmodell unter Verwendung von Allylalkohol):

Verfahren

Das erfindungsgemälk- Mittel oder Anetholtrilhion wird oral jeweils einer Gruppe von männlichen Mäusen (4 Wochen alt, dd-Stamm) in einer Dosis von 100 mg/kg verabreicht. 6 h danach wird Allylalkohol in einer Dosis von 0.075 ml/kg oral verabreicht. 24 h danach werden die Tiere getötet und Blutproben werden entnommen Die Restmenge an BSP wird mit dem BSP-Test bestimmt. Daraus wird jeweils die Schutzwirkung de erfindungsgemäßen Mittels errechnet.

909 682/318

Ergebnisse

Tabelle VI

Schutzwirkung bei akuten Leberschäden, die mit der periportalen Nekrose einhergehen

Hepatotoxin

Index der
Hepatoloxizität

Vergleich Positiver
Vergleich**)

Verbindung 4**)

Anetholtrithion**)

Allylalkohol

BSP

1,8 ±0,4 28,4+4,8

16 ±2,3

*) Es wird nur Hepatotoxin verabreicht
**) Nach der Behandlung mit der Verbindung 4 oder Anetholtrithion wird das Hepatotoxin verabreicht.

19,3 ±4,6

Allylalkohol unterscheidet sich von Tetrachlorkohlenstoff oder Brombenzol, Dimethylnitrosamin oder Chloroform dadurch, daß er Leberschäden, die mit periportaler Nekrose einhergehen, induziert. Wie aus Tabelle IV hervorgeht, schützen die erfindungsgemäßen Arzneimittel vor diesen Leberschäden.

Das erfindungsgemäße Arzneimittel ist nützlich bei Leberschäden bei Menschen oder bei Tieren, die mit periportaler Nekrose einhergehen.

g) Schutzwirkung auf die akute Hepatitis, die mit der Mesenchymreaktion und der diskreten lobularen Nekrose assoziiert ist (Versuchsmodell unter Verwendung von D-Galactosamin):

D-Galactosamin ist eine Verbindung, die eine diskrete lobulare Nekrose induziert, die mit der Mesenchymreaktion einhergeht ähnlich wie die Änderungen, die man bei menschlicher Virushepatitis beobachtet, so daß sie häufig zur Erzeugung eines Modells für eine Virushepatitis verwendet wird.

Verfahren

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel oder Anetholtrithion wird oral jeweils einer Gruppe von männlichen Ratten (SD-Stamm) in einer Dosis von 100 mg/kg verabreicht. 6 h danach wird D-Galactosamin intraperitoneal in einer Dosis von 600 mg/kg verabreicht. 4 h danach werden zusätzlich je 300 mg/kg intraperitoneal verabreicht. 8 h danach werden die Tiere getötet und Blutproben werden entnommen. Die GPT-Aktivität und das Triglycerid in der Leber werden zur Bewertung der Wirkung des erfindungsgemäßen Mittels bestimmt.

Ergebnisse
Tabelle VII

Schutzwirkung auf die akuten Leberschäden, die mit der diskreten lobularen Nekrose einhergehen

Hepatotoxin Index der Vergleich Positive Verbindung Verbindung Verbindung Anethol-

Hepatotoxizität Kontrolle*) 2**) 4**) 21**) trithion**)

D-Galactosamin GPT (Karmen-Einheit) 13±0,5 92±59 68+32 63±23 47±21 106±30 Triglycerid in der 6,5 ±1,2 8,2 ±2,2 7,2 ±1,5 4,6 ±0,73 6,8 ±1,2 9,2 ±1,5

Leber (mg/g)

*) Es wird nur Hepatotoxin verabreicht.

**) Nach der Behandlung mit der Verbindung 2, der Verbindung 4, der Verbindung 21 oder Anetholtrithion wird Hepatotoxin verabreicht.

Wie aus Tabelle VII erkennbar ist, schützen die erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber Leberschäden.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel sind somit bei der Therapie von Hepatitis bei Menschen und Tieren, die mit der Mesenchymreaktion und der diskreten lobularen Nekrose einhergeht, nützlich.

h) Einfluß auf die Fettleber (Versuchsmodell unter Verwendung von Ethionin):

Es sind eine Reihe von Faktoren bekannt, die die Fettleber induzieren. Der Mechanismus ist bei ihrem Auftreten immer der gleiche, unabhängig davon, was der Faktor ist. Ethionin ist eine typische Verbindung, die die Fettleber induziert. Sie inhibiert RNA- und Proteinsynthesen und zerstört die Polysome der Leberzellen. Die Fettleber wird durch die Inhibierung der Proteinsynthese und die Störung der Lipoproteinsekretion induziert.

Im allgemeinen steht die Fettiiber in engem Zusammenhang zu der Akkumulation von Triglycerid in dei Leber. Bei diesem Beispiel werden der Grad der Fettleber und der Schutz oder die therapeutische Wirkung gegen die Fettleber durch Messung des Triglyceridgehalts in der Leber bestimmt.

Verfahren

Bei diesem Versuch werden als Tiere 4 Wochen alte männliche Mäuse (dd-Stamm) verwendet. Jeweils eine Gruppe von 5 Mäusen erhalten 5 Tage

Mi lang normales Futter (Kontrolle) normales Futter plus 0,2% Ethionin (positiver Vergleich), normales Futter plus 0,2% Ethionin plus 0,2% erfindungsgemäße Verbindung oder normales Futter plus 0,2% Ethionin und 0,2% Methionin (Bezugsfutter). Am Ende einer Zeit

(,·> von 5 Tagen wird der Gehalt an Triglycerid in der Leber kolorimetrisch durch ein chromotropes Säureverfahren bestimmt. Die Ergebnisse sind als Trioleingehalt (mg/g Leber) angegeben.

Ergebnisse

Tabelle VIII

Einfluß auf die Fettleber

Gruppe

Triglycerid (mg/g)

Kontrolle 6,7 ±0,72

Ethionin + Verbindung 30 12,6 + 2,3

Ethionin + Verbindung 4 10,4 ± 1,6

Ethionin + Verbindung 22 11,3 + 0,96

Ethionin + Methionin 13,2 ± 2,1

Ethionin allein 20,5+ 1,6

Die erfindungsgemäßen Mittel unterdrücken die abnormale Akkumulation von Triglycerid in der Leber, die durch Ethicnin induziert ist, und sie zeigen gegenüber der Fettleber eine schützende und therapeutische Wirkung. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel sind hinsichtlich der oben beschriebenen Wirkung Methionin überlegen.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel sind somit nützlich bei der Fettleber bei Menschen und Tieren.

i) Therapeutische Wirkung auf die Fettleber (Versuchsmodell unter Verwendung von Tetrachlorkohlenstoff):

Tetrachlorkohlenstoff induziert ebenfalls die Fettleber, aber das Krankheitsbild ucterscheidet sich von dem der durch Ethionin induzierten Fe ileber. Es wird allgemein angenommen, daß Tetrachlorkohlenstoff die Mikrosomen beschädigt und dadurch eine Proteinsynthese inhibiert und die Fettleber induziert.

Verfahren

Tetrachlorkohlenstoff wird subkutan jeweils einer Gruppe von 5 bzw. 7 35 Wochen alten männlichen Ratten (SD-Stamm) während 4 Tagen in einer Dosis von 1 ml/kg verabreicht. Die behandelten Tiere werden 3 Tage nach der letzten Verabreichung auf übliche Weise gehalten, so daß sich die Fettleber am tasten manifestieren kann.

Am dritten Tag nach Beendigung der Verabreichung von Tetrachlorkohlenstoff beginnt man mit der Verabreichung der erfindungsgemäßen Mittel. Sie werden oral 10 Tage lang an jedem Tag in einer Dosis von 50 oder 250 mg/kg verabreicht. Am 11. Tag werden die Tiere getötet Die therapeutische Wirkung wird bestimmt, indem man den Gehalt an Lipid in der Leber (Triglycerid und Gesamtlipid) bestimmt und die histopathologischen Änderungen prüft. Das Triglycerid und das Gesamtlipid werden kolorimetrisch nach dem chromotropen Säureverfahren und dem Bragdon-Oxidationsverfahren bestimmt.

Die Indizes für die histopathologischen Änderungen sind die folgenden:

Index Histopathologische Änderungen

normal

Bildung von kleinen Tröpfchenabscheidungen aus Lipid, aber die Anzahl der Tröpfchen ist nicht so groß

Bildung von kleinen oder etwas stärkeren

Tröpfchenabscheidungen aus Lipid und

höhere Zahl an Tröpfchen

++ Bildung von großen Tröpfchenabscheidungen aus Lipid

Ergebnisse

Tabelle IX

Therapeutische Wirkung auf die Fettleber

Gruppe

Triglycerid
(mg/g Leber)

Gesamtlipid
(mg/g Leber)

Vergleich³)
Positive Kontrolle*¹)

Verbindung 1
Verbindung 2
Verbindung 3
Verbindung 4
ibid.

Verbindung 5
Verbindung 6
Verbindung 7
Verbindung 8
Verbindung 18
Verbindung 19
Verbindung 20

(250 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg) (50 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg) (250 mg/kg)

12,3 ±	1,6*)	61,8 ± 5,8*)
(14,5 ±	1,8)	(57,6 ± 8,6)
62,3 ±	10,3*)	183,3 ±28,6*)
(68,2 ±	6,3)	(171,8 ±24,9)
(36,4 ±	7,5)	(110,5 ±21,3)
(24,3 ±	4,2)	(82,4 ±18,1)
(19,2 ±	2,4)	(69,7 ± 9,1)
42,3 ±	6,3	107,6 ±12,3
23,6 ±	3,8	72,3 ± 9,6
(24,1 ±	3,9)	(71,3 zir 11,1)
(20,6 ±	2,3)	(68,8 ± 9,3)
(22,2 ±	3,4)	(74,1 ±11,7)
(24,8 +	3,6)	(70,6 ±12,4)
(29,6 ±	5,9)	(90.2 ±18,2)
(25,3 ±	4,1)	(72,2 ±16,2)
(22,8 ±	3,0)	(74,9 ± 10,3)

	Fortsetzung	(50 mg/kg)	26 25 053	22
21	Gruppe	(250 mg/kg)
	(250 mg/kg)		Gesamtlipid
Verbindung 21	(250 mg/kg)	Triglycerid	(mg/g Leber)
ibid.	(250 mg/kg)	(mg/g Leber)	97,8 ±10,3
Verbindung 22	(250 mg/kg)	40,6 ± 6,8	70,2 ± 8,3
Verbindung 23	(50 mg/kg)	24,8 ± 3,2	(73,8 ± 9,2)
Verbindung 30	(250 mg/kg)	(20,4 ± 2,9)	(81,7 ±15,2)
Verbindung 31	(250 mg/kg)	(28,2 ± 6,6)	(62,6 ±12,4)
Verbindung 32	(250 mg/kg)	(25,3+ 4,4)	(60,9 ± 8,6)
ibid.	(250 mg/kg)	(16,2 ± 2,2)	112,4 ±12,3
Verbindung 33	(250 mg/kg)	48,3+ 7,6	77,2 ± 8,7
Verbindung 34	(250 m^/kg)	26,3 ± 4,2	(76,3 ±13,4)
Verbindung 35	(250 mg/kg)	(27,4 ± 4,9)	(67,7 ±10,6)
Methionin	(250 mg/kg)	(28,2 ± 5,2)	(63,4 ± 7,9)
Anetholtrithion	(19,4 ± 2,4)	168,6 ±2,0
Thioctsäure	58,2 ± 9,6	(166,5 ±26,1)
Thioctsäureamid	(70,9 ± 8,4)	(172,1 ±28,5)
	(54,8 ±11,1)	(169,6 ±23,2)
	(58,2 ± 8,5)

*) Die Werte wurden nur in einer Testserie für die Veruindungen Nr. 4, 21, 32 und die Vergleichsverbindung Methionin erhalten.

^a) Ohne Lebergift, ohne Arzneimittel.

^b) Lebergift verabreicht, jedoch kein Arzneimittel.

Tabelle X

Therapeutische Wirkung auf die Fettleber

Gruppe	^b)	(250 mg/kg)	Grac	_ —	-	±	-	-	_	f	±
	(250 mg/kg)	i der Fettleber	+ -t-f	± ±	± ±	-	f+	++	±)
Vergleich³)	(250 mg/kg)	(Einzeltiere)	+ ±	- -	•f —	-	+	f)	±	-
Positive Kontrolle	(50 mg/kg)	_	±	±	± ±	± ±	±	±)
Verbindung 1	(250 mg/kg)	+	±	+	±	-	±)	±	±
Verbindung 2		/	± ±	- -	±	±
Verbindung 3	(250 mg/kg)	/	-		±	±	±	±
Verbindung 4	(50 mg/kg)	(-	- -		±	-
ibid.	(250 mg/kg)	±	-	±	±)
		(-	±	+	f	fl
Verbindung 5	(250 mg/kg)	-	-	±)	±	-
Verbindung 6	(250 mg/kg)	(-	—	±
ibid.	(50 mg/kg)	±	±	±)
	(250 mg/kg)	(-	±	±)
Verbindung 7	(250 mg/kg)	±	±	±	±	±)
Verbindung 8	(250 mg/kg)	(-	±	±
Verbindung 13	(250 mg/kg)	(-	±	+)
ibid.	(250 mg/kg)	±	±	±)
Verbindung 18	(250 mg/kg)	-	±	±)
Verbindung 19	(250 mg/kg)	(-	±	±
Verbindung 20	(250 mg/kg)	/	±	±)
Verbindung 21	(250 mg/kg)	(-	±	±)
Verbindung 22	(-	±	±)
Verbindung 23	(-	-	±)
Verbindung 30	i
Verbindung 31	(·■
	(-

l'orlscl/unii

Gruppe

Grad der l-ettleber (liinzeltiere)

Verbindung 32
Verbindung 33
Verbindung 34
Verbindung 35
Methionin

(250 mg/kg)
(250 mg/kg)
(250 mg/kg)
(250 mg/kg)
(250 mg/kg)

Anetholtrithion (250 mg/kg) (+ +

Thioctsiiure (250 mg/kg) (+ +

Thioctsäureamid (250 mg/kg) (+ +

^h) l.ebergift verabreicht, jedorh kein Arzneimittel

Wie aus Tabelle IX hervorgeht, zeigt die Gruppe »positive Kontrolle«, der Tetrachlorkohlenstoff verabreicht wurde, aber anschließend kein erfindungsgemäßes Mittel, einen hohen Grad der Fettleber und keine Anzeichen von Verbesserung.

Im Gegensatz dazu zeigen die therapeutischen Gruppen, denen die erfindungsgemäßen Arzneimittel in Wirkdosen von oder 250 mg/kg verabreicht wurden, eine wesentliche Verbesserung bei der Ausbildung der Fettleber. In anderen Worten zeigen die erfindungsgemäßen Arzneimittel eine therapeutische Wirkung.

Im Gegensatz dazu zeigt Methionin kaum eine therapeutische Wirkung gegen Fettleber, die durch Tetrachlorkohlenstoff induziert wird.

In der Tabelle X sind die Ergebnisse der histopathologischen Prüfung dargestellt. Die Größe und die Anzahl der Lipidtröpfchen vermindern sich bei den Gruppen, die mit den erfindungsgemäßen Mitteln behandelt wurden, und dadurch wird eine Heilung der Fettleber

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel sind daher nützlich bei Fettleber bei Menschen und Tieren.

^Therapeutische Wirkung auf die Zirrhose:

Fast alle Leberkrankheiten, die durch verschiedene Ursachen verursacht werden, schreiten schließlich so weit fort, daß es Zir.hose ergibt. Die Zirrhose ist die Endstufe der Leberkrankheiten und ist hinsichtlich der kausalen Ursache schwierig zu klassifizieren. Üblicherweise wird eine Versuchszirrhose durch langzeitige wiederholende Verabreichung von Tetrachlorkohlen stoff induziert.

Die therapeutische Wirkung der erfindungsgemäßer Arzne.mittel auf Zirrhose, die durch Tctrachlorkohlen Stoffverabreichung induziert wurde, wird geprüft.

Verfahren

Eine 10%ige Tetrachlorkohlenstofflösung in Olivenö wird männlichen Ratten (4 Wochen alt. SD-Stamm intraperitoneal in einer Dosis von 0,5 ml Tetrachlorkoh lenstoff/kg zweimal in einer Woche während einer Zeil von 10 Wochen für die Induzierung der Zirrhose verabreicht. 4 Tage nach der Endverabreichung vor Tetrachlorkohlenstoff wird die Bildung eines Pseudolo bulus bestätigt. Die kranken Tiere werden in zwe Gruppen geteilt. Die therapeutische Gruppe erhält eir Fnttpr Has 7000 nnm Her Vprhindnnu 4 pnthält wohingegen die positive Kontrollgruppe normale: Futter erhält. Die Kontrollgruppe, der nur reines Olivenöl verabreicht wird, erhält das normale Futter.

1, 2. 4 und 8 Wochen nach Beginn der Fütterung mil der Verbindung 4 werden 5 Tiere aus jeder Gruppe getötet und die therapeutische Wirkung auf Zirrhose wird bestimmt, indem man die Plasmatransaminaseaktivität (p-GPT und p-GOT, Reitman-Fr.inkel-Verfahren] bestimmt und die histopathologischen Änderunger feststellt.

Der Grad der Zirrhose bei der histopathologischen Prüfung wird folgendermaßen bewertet:

Index Histopathologische Änderungen

normal ± geringe Bildung von Pseudolobuius

+ geringe Bildung von Pseudolobuius, geringe Fibröse

++ mäßige Bildung und Kohäsion von Pseudolobuius, mäßige Fibröse

+++ starke Kohäsion von Pseudolobuius, starke Fibröse

Ergebnisse

Tabelle Xl

Therapeutische Wirkung der erfindungsgemäßen Arzneimittel auf die Zirrhose (Transaminaseaktivität)

ZfV der	p-GPT-Aktivität	(Karmen-Einheit)	therapeutische	P-GOI-Aktivität	(Karmen-Einheit)	therapeutische
Therapie	Vergleich	positiver	Gruppe	Vergleich	positiver	Gruppe
(Wochen)		Vergleich			Vergleich
0	24,0 ±2,2	122 ± 18	81,6 ±25,4	62,8 ±5,1	491 ±83	277 ±135
1	20,6 ±1,7	78,2 ±18,6	28,8 ±3,0	58,8+4,7	264,6 ±56	96,8 ± 2,6
2	21,2 ±2.0	33,8 ±2,0	40,6 ±3,8	54,8+2,5	123 ± 16	64,0 ±5,5
4	38.8 ±2.1	43,0 ±3,8	32,8 ±6,1	79,2 ±5,5	82,8 ±3,5	91,8 ±7,2
8	23,6 ±3.3	35,8 ±4,4	78.6 + 2.6	105,8 ±8,2

Tabelle XIl

Therapeutische Wirkung der erfindungsgemäßen Arzneimittel auf Zirrhose (histopathologische Prüfung)

Zeit der
Therapie

(Wochen)

Vergleich

Positiver Vergleich Therapeutische Gruppe

Dabei wurde angenommen, daß alle Tiere Zirrhose hatten, nachdem Tetrachlorkohlenstoff während einer Zeit von 10 Wochen verabreicht wurde. Wie aus 1 aDelle XI hervorgeht, normalisieren die Verbindungen die erhöhte Plasmatransaminaseaktivität, insbesondere die Plasma-GOT-Aktivität, schnell.

Aus Tabelle XII geht die therapeutische Wirkung auf Zirrhose hervor. Bei der positiven Kontrollgruppe beobachtet man während einer Zeit von 8 Wochen nach der letzten Verabreichung von Tetrachlorkohlenstoff einen mäßigen bis starken Grad an Zirrhose einschließlich einer Fibröse der Leber, eines Auftretens von Pseudolobulus und seiner Kohäsion. Im Gegensatz dazu haben sich bei der therapeutischen Gruppe die Kohäsion des Pseudolobulus und die Fibröse nach 2 Wochen stark verbessert und dies zeigt die therapeutische Wirkung der Mittel auf Zirrhose.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können daher bei der Therapie von chronischen Leberkrankheiten und Zirrhose bei Menschen und Tieren nützlich sein.

k) Gallenflußfördernde Wirkung:

Die Bildung und Exkretion von biliären Salzen bzw. Gallensalzen im Gallenausfluß sind wichtige metabolische Funktionen der Leber. Wenn der Gailenfluß durch irgendwelche Ursachen gestört ist, werden Cholestase und verschiedene Arten von Leberkrankheiten, die mit der Gelbsucht einhergehen, induziert werden.

Zur Verbesserung des Gallenflusses werden Arzneimittel für die Cholerese verwendet. In diesem Beispiel wird die Wirkung der erfindungsgemaöen iviiuei auf die Mengen an Galle und Gallensalzen untersucht.

Verfahren

Jeweils 5 männliche Ratten (4 Wochen alt, SD-JOL-Stamm) werden mit Natriumpentabarbital (37,5 mg/kg, intraperitoneale Injektion) anästhesiert. Die Bauchhöhle wird durch einen Mittellinienschnitt geöffnet. Der übliche Gallengang wird mit einem Polyäthylenrohr mit einem äußeren Durchmesser von 0,8 mm kathederisiert. Das Katheter wird nach außen durch eine Bauchschnittwunde vor dem Verschließen gebracht Galle wird aus aus dem Katheter kontinuierlich in Zeitintervallen von 1 h gesammelt Die in 1 h gebildete Gallenmenge wird durch Abwiegen bestimmt und die der Gallensalze wird nach dem enzymatischen Verfahren (Ikagiku Jikkenho Koza 1B, Biological Constituents II, veröffentlicht von Tamio Yamakawa) bestimmt Die Menge an Gallensalzen wird als Äquivalent für die Cholsäure angegeben.

Bei der Darstellung der Ergebnisse werden die Mengen an Galle und Gallensalzen, die in einer h vor der Verabreichung des Arzneimittels gebildet werden, als 100 angenommen. Die erfindungsgemäßen Mittel werden oral in einer Dosis von 200 mg/kg verabreicht. Als Vergleich wird Anetholtrithion verwendet

	27	Verbin dung 2	2(3	25 053	Versuch 2	Verbin dung 4	Versuch 3	28	Versuch 4	Anethol- trithion
Tabelle XIII		(200 mg/kg)	Ergebnisse	Vergleich	(200 mg/kg)	Vergleich		Vergleich	(200 mg/kg)
Einfluß auf den	Gallenfluß	100			100				100
Zeit	Versuch I	108 ±3,8	100	110 ±4,2	100		100	114 ± 15
	Vergleich	1 1 (. -4- A Τ	100 ±2,4	!!5+6 3	100 ±2,4	Verbin dung 20	104 ±3,5	! !4 ± 15
		109 ±8,3	IQ/1 -4-£ <	110 ±7,2	ifM +6,5	(200 mg/kg)	ιοί +4 9	102±ll
Vor der Be handlung I h	100	108 ±8,5	92 ±6,4	112±8,5	92 ± 6,4	100	93 ±6,9	95 ± 7,7
Nach der Be handlung 1 h	100 ±2,4	98 ±3,8	88 ±9,7	92 ±4,7	88 ±9,7	113 ±4,3	84 ±6,7	86 ± 6,6
T £.	1 ηλ -4- A ς	85 ±9,3		85 ±9,3	112 ± 8,2	76 ±6,6
3	92 ± 6,4			106 ±6,3
4	88 ±9,7			113±8,8
5	85 ±9,3	93 ±3,8

Tabelle XIV

Einfluß auf die Extraktion von Gallensalzen

Zeit	Versuch 1	Verbind dung 2	Versuch 2	Verbin dung 4	Versuch 3	Verbin dung 20	Versuch 4	Anethol trithion
	Vergleich	(200 mg/kg)	Vergleich	(200 mg/kg)	Vergleich	(200 mg/kg)	Vergleich	(200 mg/kg)
		100		100		100		100
Vor der Be handlung lh	100	108 ±18	100	105 ± 13	100	104 ± 11	100	108 ±12
Nach der Be handlung lh	89 ±6,6	nn + i?	89 ±6,6	ns+ 20	89 ±6,6	119 ± 13	94 ±6,2	89 ±11
■)	9?+ 11	133 ± 18	97 + 11	132 ±26	92±11	120 + 17	89 ±9.5	66 ±3,8
3	66 ±8,8	12O±21	66 ±8,3	115 ±23	66 ±8,8	113±18	77 ±11	47 ±3,0
4	54 ±15	86 ±8,9	54 ±15	8,1 ±7,2	54 ±15	82 ±7,3	56 ±9,7	3,3 ±4,0
5	46±16	46 ±16	46±16	52 ±10

Aus Tabelle XIII geht hervor, daß der Gallenfluß durch Verabreichung der erfindungsgemäßen Mittel erhöht wird. Die Menge an gesamter ausgeschiedener so Galle während 5 h nach der Verabreichung der Verbindung 2, der Verbindung 4 und der Verbindung 20 ist um das 1,15-, 1,15- und l,14fache größer als bei der Vergleichsprobe. Im Falle von Anetholtrithion ist die Menge an insgesamt abgeschiedener Galle um das l.lOfache größer als bei der Vergleichsprobe.

Aus Tabelle XIV ist erkennbar, daß die Menge an ausgeschiedenen Gallensalzen bei der Verabreichung der erfindungsgemäßen Mittel stark erhöht ist. Die Menge an den gesamten Gallensalzen, die während 5h μ nach der Verabreichung der Verbindung 2, der Verbindung 4 und der Verbindung 20 ausgeschieden wird, ist um das 1,63-, 1,61- und l,55fache größer als bei der Vergleichsprobe. Bei Anetholtrithion beobachtet man keine besondere Erhöhung bei der Ausscheidung an Gallensalzen. Die erfindungsgemäßen Mittti sind somit besonders wirksam. Zur Exkretion von Gallensalzen.

Die erfindungsgemäßen Mittel können als Arzneimittel zur Erhöhung der Exkretion der Gallensalze bezeichnet werden, nämlich als Choleretika, und ihre Wirksamkeit bei entsprechenden Leberkrankheiten oder bei Krankheiten des Gallenweges bei Menschen und Tieren kann aus dem bekannten Verhalten des Anetholtrithions erwartet werden. Wie oben ausgeführt, stimulieren die erfindungsgemäßen Arzneimittel die metabolische Funktion der Leber und sind somit wichtige Arzneimittel zur Kontrolle .von Leberkrankheiten, die durch Cholestase hervorgerufen werden.

1) Einfluß auf die Konzentration an Äthylalkohol im Blut:

Verfahren

Die Testverbindungen werden in Olivenöl gelöst oder Suspendiert und oral in einer Dosis von 250 mg/kg männlichen Mäusen j^dd-Stamm) verabreicht. Nach 6 h werden 1000 mg/kg Äthylalkohol oral verabreicht. Das Blut wird in einer Kapillare aus der Schwanzvene zu den

im Zusammenhang mit den Ergebnissen aufgeführten Zeiten entnommen. Das Plasma wird durch Zentrifugieren erhalten. Die Konzentration an Äthylalkohol im

Plasma wird durch das Gas/Flüssigkeits-CTiromatographie der FID-Art bestimmt. In jeder Gruppe werden 5 Mäuse verwendet.

	XV	Ergebnisse	an Äthylalkohol im Plasma (ppm)	Verbindung 2	Verbindung 26	Verbindung 31
Tabelle			Verbindung für die Vorbehandlung	8± 3	10± 3	12+ 8
Einfluß		auf die Konzentration an Äthylalkohol im Blut	Verbindung 4	712 ± 75	690 ±102	720 ±145
Zeit	Konzentration	9± 4	fvS + 98	694 + 8fi	583 + I r>
	Vergleich	727± 84	422 ±100	432 ± 96	343± 13
(min)		715 + 146	I5± 8	12± 8	5± 2
0	27 ± 17	430 + 105	nicht festgestellt	nicht festgestellt	nicht festgestellt
5	875 ±203	13± 11
IS	810+ 191	nicht festgestellt
30	690 ±214
60	167 ± 76
120	5± 1

Die Konzentration an Äthylalkohol in Plasma ist bei den mit den erfindungsgemäßen Mitteln behandelten Mäusen niedriger als bei den Vergleichsmäusen. Dies zeigt sich insbesondere 30, 60 und 120 min nach der Verabreichung von Äthylalkohol. Man kann daraus schließen, daß die Menge an Äthylalkohol in den behandelten Mäusen schnell abnimmt. Die mit den erfindungsgemäßen Mitteln behandelten Mäuse erholen sich schneller und finden schneller in den nicht-vergifteten Zustand zurück, wenn man sie visuell beobachtet. Dies zeigt, daß die metabolische Funktion der Leber für den Alkohol durch die Verabreichung der erfindungsgemäßen Arzneimittel stimuliert wird.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel bewirken somit eine Erniedrigung der Konzentration an Alkohol im Blut, sofern sie in ausreichendem Abstand vor der Applikation von Aethanol verabreicht werden.

m) Wirkung auf den Glucosemetabolismus:
Verfahren

Die Testverbindungen werden in Olivenöl gelöst und oral in einer Dosis von 250 mg/kg männlichen Mäusen (dd-Stamm) verabreicht. Nach 6 h werden 4,0 g/kg Glucose oral verabreicht. Die gleiche Menge an Glucose wird in den Vergleichstieren verabreicht. 0.02 ml Blut wird aus der Schwanzvene der Maus nach 30, 60 und 120 min nach der Giucoseverarbeitung entnommen. Der Blutzucker wird nach dem Verfahren von Somogyi-Nflson bestimmt. Für jede Behandlung wird eine Anzahl von 5 bis 6 Mäusen verwendet.

Ergebnisse

Tabelle XVI

Wirkung auf die Konzentration der Glucose im Blut

Zeit	Blutzucker (mg/dl)	Testverbindung für die	Vorbehandlung	Verbindung 12
	Vergleich	Verbindung 4	Verbindung 24	141 ±11,3 (100%)
(min)		134±24,8 (100%)	135 ±13,2 (100%)	264±21,5 (187%)
0	145 ±11,8 (100%)	258 ±22,2 (192%)	248 ±20,2 (184%)	225 ±17,2 (160%)
30	311 ±21,9 (214%)	232 ±13,0 (173%)	214 ±18,8 (158%)	167 ±15,6 (118%)
60	290 ± 14,6 (200%)	190±23,6 (142%)	173 ±24,4 (128%)	142 ±13,2 (100%)
90	263 ±13,1 (181%)	152 ±23,4 (113%)	140 ±16,3 (104%)
120	251 ±13,5 (173%)

Die Blutzuckerwerte für jede Gruppe zeigen Peaks nach 30 min und in den Werten für die Peaks beobachtet man keine wesentlichen Änderungen. Danach wird jedoch ein starker Unterschied in der Wiederherstellung des Biutzuckerwerts beobachtet und die mit den erfindungsgemäßen Arzneimitteln behandelten Tiere zeigen eine wesentlich schnellere Wiederherstellung. Dies zeigt, daß durch die Verabreichung der erfindungsgemäßen Mittel die metabolische Funktion der Leber für die Glucose stimuliert wird.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel zeigen somit gleichzeitig eine gewisse Erniedrigung der erhöhten Blutglucosekonzentrationen.

Eine Gesamtbetrachung der geschilderten pharmako-

31 32

logischen Untersuchungen ergibt,daß dip erfindungsge- Technik, die z.T. zwar im

mäßen Lebertherapeutika ein umfangreiches Spektrum Wirksamkeit aber im allge

an Aktivitäten bei der Behandlung von Lebersiörungen engeres Wirkspektrum besitze

aufweisen und somit überraschende Vorteile zeigen, lassen,

welche sie gegenüber Lebermitteln des Standes der ι

Claims

Patentanspruch:

Arzneimittel zur Kontrolle von Leberkrankheiten, dadurch gekennzeichnet, daß es eine 1,3-Dithiaverbindung der allgemeinen Formel I

Il

R¹X¹C

S-CH,