DE2625221C3 - Arzneimittel zur Kontrolle von Leberkrankeiten - Google Patents

Description

R²OC

Il ο

S —CH-OR³

S-CH,

in der R¹ und R² gleich oder verschieden sind und eine Cj- Cf-AIkylgruppe bedeuten und R³ ein Wasserstoffatom, eine Acetyl- oder Propionylgruppe darstellt.

Die Erfindung betrifft Arzneimittel zur Prophylaxe oder Therapie von Leberleidcn. die mindestens ein l,3-DithioIan-2-yliden-malonsäureesterderivat der allgemeinen Formel I

Il

R¹OC

R²OC

S CH OR'

S CH.

in

in der R¹ und R² gleich oder verschieden sind und eine Q-Ci-Alkylgruppe bedeuten und R¹ ein Wasserstoffatom, eine Acetyl- oder Propionylgruppe darstellt, enthalten.

Angesichts ihrer vielfältigen Funktionen wird die Leber häufig als komplizierte chemische Fabrik bezeichnet. In der Leber erfolgen /ahlreiche chemische Reaktionen auf biochemischem Weg. Als Beispiele hierfür seien Entgiftung. Zuckerstoffwechsel, Eiweiß Stoffwechsel. Fettstoffwechsel. B^;ldung und Sekretion von Galle. Hormonsteuerungen. Prothrombinbildung für die Blutgerinnung. Regenerierung von Leberzellen sowie Speicherung verschiedener, für den lebenden Körper essentieller Elemente (/. B. Fette, Glykogene. Proleine und Vitamine) genannt.

Selbst diese empfindlichen und gut ausgewogenen

MS COOR¹ O

Il

C=C +CHjCOCH-CH₂

/ \ Il

MS COOR² X X

Funktionen der Leber geraten jedoch manchmal in Unordnung, entweder akut oder chronisch. Hierfür kommen verschiedene Ursachen in Frage, wie Alkohol, unzureichende Ernährung, Virusinfektionen, toxische Stoffe, Schädigung des Gallenflusses, Verletzungen von Blut- und Lymphgefäßen in der Leber usw. Die Folgen hiervon sind Fettleber, toxische Leberschäden, alkoholische Hepatitis, Virushepatitis, Leberstauungen, Cholestase, Dubin-Johnson-Syndrom (Gelbsucht) und Leberzirrhose oder Leberhepatome im Endstadium.

Aus der IP-AS 39260/74 ist eine Verbindung bekannt, die unter die Formel I fällt, über deren pharmakologische Wirksamkeit jedoch keine Aussagen gemacht werden. Andererseits sind aus M. N eg wer, Organisch-chemische Arzneimittel, Berlin 1971, die Wirkstoffe Anetholtrithion, Thioctsäure, Thioctsäureamid und Methionin bekannt, die sich als Arzneimittel bei Leberschäden bewährt haben. Wie die untergehenden pharmakologischen Untersuchungen zeigen, sind jedoch die erfindungsgemäßen Arzneimittel bezüglich der Prophylaxe oderTherapie von Leberleiden überlegen.

H. H ο r η b ο s t e I et al. weisen in inn. ivied, in Praxis und Klinik, Stuttgart 1973, S. 15 bis 205, darauf hin, daß der klinischen Anwendung von I.ebermitteln keine großen Erfolgschancen eingeräumt werden. Hier ist jedoch zu berücksichtigen, daß bei nekrotischen Leberkrankheiten, wie z. B. Zirrhose, die Verabreichung von Arzneimitteln die Auswirkungen der Leberschäden leichter erscheinen lassen, da die normalen Zellen aktiviert werden, selbst wenn die nekrotischen Zellen auf natürliche Weise nicht mehr geheilt werden können.

Als Ergebnis umfangreicher Untersuchungen wurde erfindungsgemäß gefunden, daß die Verbindungen der vorgenannten Formel I die l.eberzellen und Sioffwcch· selfunktionen der Leber, wie Zuckerstoffwechi.el. Entgiftung (/.. B. Entgiftung von Alkohol), Bildung und Exkretion von Galle und Gallensai/en (cholerelische Wirkung) und Regenerierung der Leber, /u aktivieren vermögen.

Es wurde gefunden, daß die pharmakologische Aktivität der Verbindungen der allgemeinen Formel I zur Linderung und Heilung der bekannten Leberleiden geeignet ist.

Weiterhin wurde gefunden, daß die pharmakologisehe Wirkung der Verbindungen der allgemeinen Formel I /um Schutz der Leberfunktionen gegenüber einer bestimmten Art von Schädigung oder Belastung geeignet ist.

Bei den Verbindungen der allgemeinen Formel I handelt es sich teilweise um bekann' . Verbindungen Die Herstellung der 4-Acetoxy-l,3 dilhiolan ? ylidonmalinsäiiredialkylestcr(R> = Acetyl) kann/. B dadurch erfolgen, daß man ein Dialkali-2,2 frs (alknxycarbonyl)-1,1 äthylen-dilhiolat mit einem I Acetoxy 1.2-dihalo genäthan in Gegenwart einer geeigneten Base umsel/i. Diese I Imsetzung kann durch das Reaktionsschema

O
R¹OC

R²OC''

Il ο

S (H ()C( H,

S Cl I₂

wiedergegeben werden, in dem R¹ und R² die vorgenannte Bedeutung haben, M ein Alkalimetallatoiri

ist und X ein Halogenatom darstellt. Beispiele für geeignete Basen für die vorgenannte Umsetzung sitid Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumhydrid, metallisches Natrium und terk-Amylalkoholat. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Wasser, Alkohole, Aceton, Benzol, Tetrahydrofuran, Äther, Dioxan, Acetonitril, Dimethylformamid und Dimethylsulfoxid. Im allgemeinen geht die Umsetzung bei einer Temperatur im Bereich von etwa 5 bis 70⁰C vonstatten. Nach Beendigung der Reaktion wird die erhaltene Endverbindung nach üblichen Methoden isoliert.

R¹OC S —CH-OCCHj

C = C
R²OC S-CH-,

IO Die Herstellung dieser Verbindung kann durch Acylierung eines 4-Hydroxy-l,3-dithio|an-2-yliden-malonsäuredialkylesters mit geeigneten Acylierungsmitteln, wie Essig- oder Propionsäureanhydrid bzw. -chlorid, erfolgen. Die Herstellung von 4-Hydroxy-1,3-dithiolan-2-yliden-maIonsäuredialkylestern (R³ = H) kann durch Hydrolyse der entsprechenden 4-Acyloxyverbindungen erfolgen. Verwendet man z. B. eine 4-Acetoxy-Ausgangsverbindung, so kann die vorgenannte Umsetzung durch das Reaktionsschema

wiedergegeben werden, in dem R^! und R³ die vorgenannte Bedeutung haben. Die Hydrolyse kann durch Säuren begünstigt werden. Beispiele für geeignete Säuren sind anorganische Säuren, wie Schwefelsäure, Chlorwasserstoffsäure und Phosphorsäure, sowie organische Säuren, wie p-ToluoIsulfonsäi're. Benzolsulfonsäure und Oxalsäure. Als Lösungsmittel kann Wasser verwendet werden. Im allgemeinen wird jedoch die Verwendung von Wasser zusammen mit einem inerten organischen Lösungsmittel bevorzugt. Beispiele für geeignete, mit Wa- -.er mischbare Lösungsmittel sind D'oxan. Aceton, Dimethylformamid Dimethylsulfoxid und Tetrahydrofuran. Die Umsetzung kann bei Tempe-

R¹OC S-CH-OH

H₂O \ /

> c=c

R²OC S-CH₁

raturcn im Bereich von etwa Raumtemperatur bis 10O⁰C erfolgen, jedoch bestehen bezüglich der Temperatur an sich keine besonderen Beschränkungen. Nach Beendigung der Reaktion wird das Reaktionsprodukt nach üblichen Methoden aufgearbeitet.

In gleicher Weise wie vorstehend beschrieben, kann man auch alle anderen Verbindungen der allgemeinen Formel I herstellen, die in den erfindungsgemäßen jo Mitteln enthalten sind.

Typische Beispiele für erfindungsgemäß geeignete Verbindungen der allgemeinen Formel! sind in Tabelle I zusammengestellt

Verbindung

4-Hydroxy-l,Vdithiol...n-2-yliden-malonsi«urediäthylcster 4-Hydroxy-1.3-dithioIan-2-yliden-malonsiiurediisopropyIester 4-Hydroxy-l.3-di(hiolan-2-yliden-malonsäurec!iisobulylester 4-1 iydroxy-l,3-dithiolan-2-yliden-malonsiiureäthylisopropy !ester 4-Acetoxy-1 .l-dithiolan-2-yliden-malonsäurediälhylester 4-Propionyiüxy-l,3-dithioIan-2-yhden-malonsäurediathylester 4- \cetox>-1 ."!-dilhii)liin-2-ylidcn-mak)nsä urediisopropylester 4- Pri>pionyloxy-1.3-dilhi(jlan-2-yliden-maionsii urediisopropylester 4-¹ScCtOXy-1.3-diihi<ilan-2-yIidenmalonshuredi-n-propylester ¥.'■? bis 63 C
F. 73 bis 74 C
»i 1,5493
ti:' 1,5646
;i 1,5596
/r 1.5505
F. 81 bis 82 C
η 1,5344
» 1.5455

Hie Verbindungen der allgemeinen Formel I besitzen *;<; eine außerordentlich niedrige Toxizität gegenüber Säugetieren. Die LD^n-Werte (männliche Mäuse, p.a.) liegen im Bereich bis /u etwa 6000 mg/kg Körpergewicht Der LD-^-Wert der Verbindung (2) in Tabelle: I !'es' r. B. über 6590 mg/kg. Weiterhin haben diese mi Verbindungen keinen nachteiligen Einfluß auf die behandelten Tiere, sofern die verabreichten Dosen innerhalb des üblichen Rahmens liegen. Dies wird weiter unten noch näher erläutert.

Es sind eine Reihe von Ursachen bekannt, die toxische Leberschäden, Hepatitis und Fetlleber bewirken. Die bei diesen Leiden beobachteten hervorstechenden Schädigungen sind eine Nekrose der Leberzellen, mesenchymale Reaktion und eine Fettansammlung.

Die Merkmale der Nkrose hängen von den sie verursachenden Faktoren ab. Man unterscheidet zentri· lobulare, periportale und diskrete lobulare Nekrose.

Diese Veränderungen können künstlich durch Verabreichung bestimmter Chemikalien an Versuchstiere erzeugt werden.

Die zentrtlobulare Nekrose wird durch Tetrachlorkohlenstoff, Thioacetamid, Chloroform oder Brombenzol, die perioportale Nekrose durch Allylalkohol, und die diskrete lobulare Nekrose zusammen mit der mesenchymale Reaktion durch D-Galactosamin verursacht.

Die Fettleber kann künstlich durch Verabreichung

von Tetrachlorkohlenstoff oder Äthionin verusqcht werden.

Man weiß, daß sämtliche akuten, subakuten und chronischen Leberschädigungen im Endstadium in der Leberzirrhose münden. Künstlich läßt sich die Zirrhose an Versuchstieren durch ständig wiederholte Gaben von Tetrachlorkohlenstoff erzeugen.

Die Untersuchungen haben gezeigt, daß die Verbindungen der allgemeinen Formel I sehr breite und unterschieJiiche pharmakologische Aktivitäten bei folgenden Lebererkrankungen ausüben:

(1) Leberleiden im Zusammenhang mit zentrilobularer Nekrose,

(2) Leberleiden im Zusammenhang mit periportaler Nekrose,

(3) Leberleiden im Zusammenhang mit diskreter lobularer Nekrose und mesenchymaler Reaktion,

(4) Fettleber,

(5) Leberzirrhose,

(6) Toxischen Leberschädigungen,

(7) Leberstauungen, sowie wirksam sind bei der

(8) Stimulierung der Exkretion von GaH' und Gallensalzen (choleretische Aktivität).

Wie vorstehend dargelegt, besitzen die Verbindungen der allgemeinen Formel I eine pharmakologische Aktivität zur Linderung oder Heilung bestehender Leberleiden und zum Schutz der Leber gegen bestimmte Arten der Schädigung oder Belastung. Demgemäß stellen die erfindungsgemäßen Verbindungen wertvolle Arzneistoffe zur Behandlung unterschiedlich verursachter akuter oder chronischer Leberleiden bei Mensch und Tier dar.

Andererseits zeigen die histopathologischen Untersuchungen, daß die Verbindungen der allgemeinen Formel I zentrilobulare Nekrose, periportale Nekrose und diskrete lobulare Nekrose verbunden mit mesenchymaler Reaktion günstig beeinflussen. Demgemäß stellen sie wertvolle Arzneistoffe bei der Behandlung nekrotischer Leberleiden bei Mensch und Tier dar.

Die \ erbindungen der allgemeinen Formel I aktivieren die Leberzellen und die Stoffwechselfunktionen der Leber, z. B. die Exkretion von Galle und Gallensalzen und die Milderung von durch Lebergiften, wie Alkohol, hervorgerufenen Schaden. Demgemäß stellen sie wertvolle Cholagoga bei der Behandlung der Gelbsucht bei Mensch und Tier dar.

Die erfindungsgemäßen Lebermittel zur Behandlung von Leberleiden werden nach Maßgabe des beabsichtigten Wirkungsgrades in geeigneter Form eingesetzt. Hierbei können die Arzneipräparate mittels üblicher Methoden und Maßnahmen zu Arzneimitteln in Form von Gemischen mit pharmakologisch verträglichen Verdünnungsmitteln, gegebenenfalls ohne Zusatz von Trägerstoffen, hergestellt werden. Die Herstellung der einzelnen Verabreichungseinheiten ist dem Fachmann bekannt.

Die Anwendung der erfindungsgemäßen Arzneimittel kann entweder oral oder parenteral erfolgen. Hierfür kommen die üblichen Verabreichungsformen, wie Pulver. Granulate, Tabletten. Dragees, Pillen. Kapseln, Zäpfchen, Suspensionen, Flüssigkeiten, Emulsionen, Ampullen oder Injektionsflüssigkeiten₍ in Frage,

Die Arzneimittel der Erfindung werden nach

Maßgabe der Erfordernisse in aseptischem Zustand

oder in Form isotonisch wässeriger Lösungen zur Verfügung gestellt.

Als Verdünnungsmittel werden hier pharmakologische übliche Stoffe außer solchen der allgemeinen Formel I verstanden. Bei den Verdünnungsmitteln kann es sich um feste, halbfeste oder flüssige Stoffe oder um einzunehmende Kapseln handeln. Beispiele für geeigne-

te Verdünnungsmittel sind Trägerstoffe, Streckmittel, Bindemittel, Netzmittel, Zerfallmittel, grenzflächenaktive Stoffe, Gleitmittel, Dispergator, Puffer, Würzstoffe, Duftstoffe, Farbstoffe, Aromastoffe, Konservierungsmittel, Lösungsvermittler oder Lösungsmittel. Diese

ίο Verdünnungsmitte! können entweder allein oder in Form eines Gemisches aus zwei oder mehr Stoffen verwendet werden. Die Herstellung der erfindungsgemäßen Arzneimittel kann nach üblichen Methoden erfolgen. Hierzu vermischt man z. B. den aktiven Wirkstoff und ein Verdünnungsmittel zu einem Granulat, das dann z. B. zu Tabletten verpreßt wird.

Im allgemeinen ist in den Arzneimitteln der Erfindung der Wirkstoff in einer Menge von etwa 0,01 bis 100 Gewichtsprozent, bezogen auf das Gewicht des Arzneimittels, enthalten.

Für den Fall der Formulierung j Verabreichungseinheiien können die einzelnen Bestcndseile, aus denen das Arzneimittel besteht, entweder gleiche oder unterschiedliche Gestalt besitzen. Am häufigsten finden z. B.

Tabletten, Granulate, Pillen, Pulver. Dragee», Kapseln ode- Ampullen Verwendung.

Wie bereits dargelegt, erfolgt die Anwendung der Arzneimittel der Erfindung oral oder parenteral. Die orale Verabreichung erfolgt vorzugsweise sublingual, die parenterale Verabreichung ζ. Β mittels Injektionen, z. B. subkutan, intramuskulär oder intravenös, oder durch eine Tropfinfusion.

Bei der Anwendung der erfindungsgemäßen Arzneimittel richtet sich die Dosis nach zahlreichen Faktoren,

j5 z. B. der Art des Patienten (z. B. ob Mensch oder Tier), Unterschieden bezüglich Empfindlichkeit, Alter, Geschlecht und Körpergewicht, dem klinischen Bild, dem physiologischen Zustand des Patienten, der Art der Verabreichung, der Zeit und den ZpitabstSnden der

Verabreichung, der Art und den Eigenschaften des Arzneimittels, der Art des Wirkstoffes usw. Demgemäß kann in einigen Fällen die Dosis kleiner sein als die nachfolgend erwähnte Mindestdosis, während in anderen Fällen die Dosis das nachfolgend genannte Maximum überschreiten kann. Soll das Arzneimittel in großer Dosis verabreicht werden, \.ird Unterteilung in mehrere Einzeltagesdosen bevorzugt.

Im Fall der oralen Verabreichung beträgt die wirksame Dosis bei Tieren etwa 0,1 bis 500 mg, vorzugsweise 1 bis 100 mg, jeweils bezogen auf Wirkstoff pro 1 kg Körpergewicht pro Tag. Im Fall der parenteralen Verabreichung liegt die wirksame Dosis bei Tieren im Bereich von 0,01 bis 250 mg, vorzugsweise 0,1 bis 25 mg, jeweils bezogen auf Wirkstoff pro kg Körpergewicht pro Tag.

Im Fall der oralen Verabreichung beträgt die Dosis in der Humanmedizin, abgeleitet von der vorstehend genannten wirksamen Dosis bei Tieren und unter Berücksichtigung der Empfindlichkeitsunterschiede und des SichertHtsrisikos, vorzugsweise etwa 0,1 bis 250 mp. insbesondere 0.5 bis 50 mg, jeweils pro 1 kg Körpergewicht pro Tag. Im Fall der parenteralen Verabreichung liegt die wirksame Dosis für humanmedizinische Zwecke im Bereich von 0,01 bis 100 mg, vorzugsweise 0,1 bis 25 mg, jeweils pro 1 kg Körpergewicht pro Tag.

Die Herstellung einiger Verbindungen der allgemeinen Formel 1 ist nachstehend beschrieben:

A^-Hydroxy-IJ-dithioIan^-ylidenmalonsäurediisopropylester

10,5 g 4-Äcetoxy-l,3-dithioIan-2-ylidcn-nialonsiSurediisopropylester werden in einem Mischlösungsmittel aus 50 ml Dioxan und 10 ml Wasser gelöst. Nachdem man die erhaltene Lösung unter Rühren mit 3,4 g Chlorwasserstoffsäure (35prozentig) versetzt hat, wird das erhaltene Gemisch 2 Stunden in einem Wasserbad auf 80⁰C erhitzt. Hierauf wird die Reaktionsflüssigkeit auf Raumtemperatur abgekühlt und dann mit 100 ml Benzol extrahiert. Die Benzolschicht wird gründlich mit Wasser gewaschen, dann mittels wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und schließlich filtriert. Nachdem man das Natriumsulfat entfernt hat, wird die Hauptmenge des Benzols durch Destillation unter vermindertem Druck entfernt. Beim Versetzen des Rückstandes mit n-Hcxan scheiden sich weiße Kristalle ab, die durch Filtration isoliert werden. Hierbei erhält man die gewünschte Verbindung in Form weißer Kristalle vom F. 73 - 74° C. Ausbeute 87%.

B^-Hydroxy-l^-dithiolan^-ylidenmalonsäurediäthylesler

F.ine Lösung aus 29 g 4-Acetoxy-1,3-dithiolan-2-yliden-malonsäurediäthylester in 120 ml Aceton wird unter Rühren mit 50 ml Schwefelsäure (50prozcntig) versetzt. Nachdem man das erhaltene Gemisch 1 Stunde in einem Wasserbad auf 70⁰C erhitzt hat, wird die Reaktionsflüssigkeit auf Raumtemperatur abgekühlt und dann mit 200 ml Benzol extrahiert. Bei der Aufarbeitung der Benzolschicht gemäß Herstellungsbeispiel A erhält man die gewünschte Verbindung in Form weißer Kristalle vom F. 62 - 63°C. Ausbeute 70%.

C. 4-Acetoxy-1,3-dithiolan-2-ylidenmalonsäurediisopropylester

Ein Gemisch aus 18,8 g Malonsäurediisopropylester und 7,6 g Schwefelkohlenstoff wird unter Rühren bei 10 bis 15⁰C allmählich mit einer Lösung von 8 g Natriumhydroxid in 20 ml Wasser versetzt. Nachdem man das Reakiionsgemisch i Stunde bei der angegebenen Temperatur gehalten hat, versetzt man mit 100 ml Aceton. Nachdem man tropfenweise mit 15,7 g (0,1 Mol) 1,2-Dichloräthylacetat versetzt hat, wird das erhaltene Gemisch 2 Stunden bei 60 bis 70°C gerührt. Nach Beendigung der Reaktion wird überschüssiges Aceton abdestilliert. Hierbei scheidet sich ein weißer Feststoff ab. Nach Umkristallisieren aus η-Hexan erhält man 243 g der gewünschten Verbindung in Form eines weißen Feststoffes vom F. 81 -82°C, Ausbeute 725%.

D. 4-Propionyloxy-1 ^-dithiolan^-ylidenmalonsäurediäthylester

27,5 g (0,1 Mol) 4-Hydroxy-l,3-dithioIan-2-yliden-malonsäurediäthylester und 7,9 g (0,1 MoI) Pyridin wurden in 200 ml Äther gelöst Die erhaltene Lösung wird tropfenweise mit 13 g (0,1 Mol) Fropionsäureanhydrid versetzt Nach Beendigung des Zutropfens rührt man das erhaltene Gemisch noch 1 Stunde bei der angegebenen Temperatur und gießt dann in Wasser ein. Hierbei bildet sich eine Ätherschicht die einen gelben, öligen Stoff enthält Diese Ätherschicht wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und dann der Destillation unterworfen. Hierbei erhält man 28,6 g der gewünschten Verbindung in Form eines öligen Stoffes vom η = 15505. Ausbeute 865%.

E.4-Hydroxy l,3-dithiolan-2-ylidenmalonsäurediälhylesler

9,5 g (0,03 Mol) 4-Acetoxy-l,3-dithiolan-2-yIiden-.malonsäurediäthylester werden in 50 ml Dioxan gelöst. Nachdem man die Lösung mit 60 ml Schwefelsäure (30gcwichtsprozentig = 0,18 Mol) versetzt hat, wird das erhaltene Gemisch unter Rückfluß bei 60 bis 80°C gerührt. Nach Beendigung der Reaktion und Abkühlen des Gemisches extrahiert man das Reaktionsproclukt mit 200 ml Benzol, wäscht es mit wässerigem Natriumhydrogencarbonat und dann mit Wasser und trocknet. Nach Abdestillieren des Benzols erhält man 2,5 g der gewünschten Verbindung in Form weißer Krisfalle vom F. 62 - 63° C, Ausbeute 90%.

In den Konfektionierungsbeispielen 1 bis 7 beziehen sich alle Teilangaben auf das Gewicht.

uciSpicic iuT uic ι ici'atciiürig ucf ιτιϊίίβι

1. Komponente Gew.-Teile

Verbindung(l) 10

Schweres Magnesiumoxid 10

Lactose 80

Die vorgenannten Komponenten werden homogen vermischt und zu einem Pulver pulverisiert.

2. Komptiiente Gew.-Teile

Verbindung (2) 10

Synthetisches Aluminiumsilikat 10

Calciumhydrogenphosphat 5

Lactose 75

Die vorgenannten Komponenten werden gemäß 1 oben zu einem Pulve:r verarbeitet.

3. Komponente

Verbindung (2)

Stärke

Lactose

Kristalline Cellulose

Polyvinylalkohol

Wasser

Gew.-Teile

50 10 15 20 5 30

Die vorgenannten Komponenten werden homogen verknetet, granuliert, getrocknet und gesiebt Hierbei erhält man ein Granulat.

4. 99 Teile des in Beispiel 3 erhaltenen Granulats so werden nach dem Vermischen mit 1 Teil Calciumstearat zu Tabletten mit 10 mm Durchmesser verpreßt.

5. Komponente

Verbindung (4)
Polyvinylalkohol
Wasser

Gew.-Teile

95

30

Die vorgenannten Komponenten werden gemäß Beispiel 3 zu einem Granulat verarbeitet Nachdem man 90 Teile des erhaltenen Granulats mit 10 Teilen kristalliner Cellulose vermischt hat wird das erhaltene Gemisch zu Tabletten mit 8 mm Durchmesser verpreßt Aus diesen Tabletten werden unter Verwendung geeigneter Mengen einer Suspension, die äthanolisches Scheüak, Sirup, Gelatine und ausgefälltes Calciumcarbonat sowie einen Farbstoff enthält Dragees hergestellt

6. Komponente

Verbindung (2)

Nichtionogener grenzflächenaktiver Stoff
isotonische Kochsalzlösung

Gew.-Teile 0,5

2,5 97,0 Olivenöllösung) gegeben. 24 Stunden nach der Verabreichung tötet man die Tiere und begutachtet die Leber. An dem durch Zentrifugieren erhaltenen Plasma wird die p-GPT-Aktivität nach der Methode von Reitman und Frankeis bestimmt; das Ergebnis wird in Karmeneinheiten angegeben.

Die vorgenannten Komponenten werden unter Erlifizen zu einer Lösung vermischt; Nach dem Abkühlen erhält man eine Injektionslösung.

7. Das oben unter 1 hergestellte Plilver wird in handelsübliche Kapseln gefüllt. Hierbei erhält man die gewünschten Kapseln.

!Bewertungsmaßstab für die Leberschädigung Leberschädigungsindex Beschreibung

Pharmakoiogische Untersuchungen normal

leichte Schädigung sichtbar deutliche Schädigung sichtbar schwere Schädigung

a) Die akute Toxizität wurde anhand des LD50-Wertes Jede Zahl bedeutet einen

bei männlichen Mäusen, p.o., bestimmt. Die Werte sind ίΐ> ΓνίϋϋϊέίΊ. ρ-Ό in der folgendenTabelle la enthalten.

Mittelwert aus 5 bis 6

f-.— .,—-.1—L —J-* —.1.

Tabelle Ia

werden für die Berechnung des Mittelwertes mit 1000 eingesetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengestellt, die die Schutzwirkung bei akuter Leberschädigung im Zusammenhang mit zentrilobularer Nekrose wiedergibt.

Verbindung Nr.

LD₅₀, mg/kg Körpergewicht

Anetholtrithion
Thioctsäure
Thioctsäureamid
Methionin

>6000 >6590 6200 5800 4800 3100 4200 5300 3500 3850 1380 1460 >6000

Tabelle 2

Verbindung Nr.

Leberschädigungs- p-GPT index

b) Schutzwirkung bei akuter Leberschädigung im Zusammenhang mit mittels Tetrachlorkohlenstoff künstlicher erzeugter zentrilobularer Nekrose

Die Verabreichung von Tetrachlorkohlenstoff (CCU) löst eine zentrilobulare Nekrose der Leber, verbunden mit dem Verlust von Diphosphorpyridinnucleotid, Leberglykogen, Coenzym A sowie einem Anstieg im Neutralfett, aus. Die Freisetzung mehrerer Enzyme aus den Hepatocyten und der Anstieg der Enzymaktivitäten im Plasma signalisieren die Schädigung der Leber. Eine geeignete Methode zur Bewertung des durch CCU ausgelösten Schädigungsgrades bzw. des Schutzgrades, der von Testsubstanzen erzielt wird, besteht in der Untersuchung der GIutamat-Pyruvat-Transaminase-Aktivität im Plasma (p-GPT).

Methoden

Die Testverbindungen werden in Olivenöl gelöst oder suspendiert und oral in einer Dosis von 250 mg/kg an männliche Mäuse (4 Wochen alter dd-Stamm) verabreicht Nach 6 Stunden wird oral CCU (0,05 ml/kg in

1	0,5
35 2	0,1
3	0,3
4	0,1
5	1,2
•to 6	1,4
7	0,4
8	0,6
9	0,8
■15 Tetrachlorkohlenstoff	5,2
allein
6,8-Dithiooctansäureamid	4.8
Anethoi-Trithion	1,6
5Q Unbehandelt	0,0

>1000

Es ist bekannt, daß Tetrachlorkohlenstoff eine zentrilobulare Nekrose in der Leber auslöst. Die Testergebnisse unter Verwendung von Tetrachlorkohlenstoff zeigen, daß sämtliche Verbindungen der Erfindung eine ausgeprägte Schutzwirkung bei akuter Leberschädigung besitzen und in ihrer Wirksamkeit mit 6,8-Dithiooctansäureamid und Anethoi-Trithion vergleichbar sind, die im Handel zur Behandlung von Leberleiden erhältlich sind.

Aus vorstehendem ergibt sich, daß die erfindungsgemäßen Arzneimittel zur Behandlung von menschlichen und tierischen Leberleiden im Zusammenhang mit zentrilobularer Nekrose geeignet sind.

Die Dosis der Testverbindung variiert nach Maßgabe des Ausmaßes der Leberschädigung in der Leber oder des Leidens. Wenn die Leberschädigung nicht ernsthaft

ist, kann die Dosis der Testverbindung herabgesetzt Werden.

So hai sich z. B. gezeigt, daß die Verbindung der Erfindung selbst bei Dosen von nur 1 bis 2 mg/kg wirksam ist, wenn die Menge des dem Versuchstier verabreichten Tetrachlorkohlenstoffes 0,005 ml/kg beträgt.

c) Schutzwirkung bei akuter Leberschädigung im

Zusammenhang mit durch Brombenzol,

Dimethylnitrosamin und Chloroform künstlich
erzeugter zeiitfilobulafer Nekrose

Brombenzol (BB), Dimethylnitrosamin (DMN) und Chloroform (CF) wirken ähnlich wie Tetrachlorkohlen-

stoff bei der Auslösung von Leberschädigungen im Zusammenhang mit zentrilöbularer Nekrose.

Methoden

Die Testverbindung oder Anethol-Trithion wird jeweils einer Gruppe mit 5 Tieren p.o. mit einer Dosis von 100 mg/kg verabreicht. 6 Stunden danach wird das Hepatotoxin gemäß Tabelle 3 verabreicht. 24 Stunden danach (im Fall von Dimethylnitrosamin ausnahmsweise 15 Stunden danach) werden die Versuchstiere getötet. Aus den Blutproben wird der Hepatotoxizitätsindex jeder Chemikalie bestimmt, woraus wiederum die Wirksamkeit der Wirkstoffe bestimmt wird.

Tabelle 3

Verabreichung von Hepatotoxinen und Hepatotoxizitätsindex

Hepatotoxin	Tier	Dosis	Verabreichungsweg	Hepatotoxizilätsindex
		(ml/kg)
BB	männliche Ratten (SD)	0,75	oral	p-GPT-Aktivität BSP-Test
DMN	männliche Mäuse (4 Wochen alt, dd)	0,05	intraperitoneal	p-GPT-Aktivität BSP-Test
CF	männliche Mäuse (4 Wochen alt, dd)	0,2	oral	p-GPT-Aktivität

Ergebnisse

Ähnlich wie Tetrachlorkohlenstoff stellen auch BB, DMN und CF Hepatotoxine dar, die eine zentrilobulare Nekrose, wie angezeigt, auslösen. Tabelle 4 zeigt, daß die Verbindungen I und 2 der Erfindung dem Hepatotoxizitätsindex normalisieren und damit ihr« hohe Wirksamkeit beim Schutz vor Leberschädigungen unf.er Beweis stellen. Darüber hinaus sind sie in ihrer Wirkung Anethol-Trithion überlegen.

Aus den Ergebnissen ist offensichtlich, daß die erfindungsgemäßen Arzneimittel bei der Behandlung von Leberleiden im Zusammenhang mit zentrilobularer NekroEe in der Human- und Tiermedizin wirksam sind.

Tabelle -J

Schutzwirkung bei akuten Leberschädigungen im Zusammenhang mit zentrilobularer Nekrose

Hepato toxin	Hepatotoxizitätsindex	Kontrolle	Positive Kontrolle*)	Verbindung**) (D	Verbindung**) (2)	Anethol- Trithion**)
BB	p-GPT (Karmeneinheiten) BSP (mg/dl)	16±1,9 2,7+1,7	53 ±27 20,4 ±7,1		22 ±2,3 11,3 ±2,3	28 ±4,1 12,9 ±5,5
DMN	p-GPT BSP	15+1,5 1,5 + 0,3	>600 31,2 ±5,9	257 ±71 17,3 ±3,5	230 ±30 17,4 ±2,9	192 ±54 17,6 ±2,7
CF	P-GPT	20 ±3,0	432 ±58	58±17	183±31	>1000

*) Das Hepatotoxin wurde allein verabreicht.
*♦) Nach der Behandlung mit Verbindung (1), Verbindung (2) oder Anethol-Trithion wurde das Hepatotoxin verabreicht

Wie vorstehend beschrieben, wurden weitere erfindungsgemäße Arzneimittel sowie die Vergleichsverbindungen Thioctsäure und Thioctsäureamid auf ihre Schutzwirkung bei akuter Leberschädigung, die durch Chloroform hervorgerufen worden war, untersucht. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle IVa enthalten:

Tabelle IVa

Hepatoloxin

Hepatotoxizitätsindex
Kontrolle

Positive Kontrolle (Hepatotoxin
wurde allein verabreicht)
Verbindung Nr. 3
Verbindung Nr. 4
Verbindung Nr. 5
Verbindung Nr. 6
Verbindung Nf. 7
Verbindung Nr. 8
Verbindung Nr. 9

Tu: »,.;:,...„ IllUbUUUI Sj

Thioctsäureamid

Chloroform	3
p-GPT	99
21 ±	7
414±	10
43 +	22
37 ±	13
142 +	19
85 ±	29
83 ±	36
158 ±	1 CC IJJ
173 ±	130
ACC -L· "TUU -i.
67(1 +

10

15

20

25

d)Therapeutische Wirkung bei mittels Thioacetamid künstlich erzeugter chronischer Leberschädigung

Thioacetamid (TAA) verursacht, ähnlich wie Tetrachlorkohlenstoff, Leberschädigungen bei Tieren und wird somit häufig zur Auslösung von Leberschädigungen und Fettleberleiden verwendet. Bei den Versuchen dieses Beispiels wird TAA wiederholt an Tiere verabreicht, um chronische Leberschäden hervorzurufen. Anschließend erfolgt die Verabreichung der erfindungsgemäßen Arzneimittel um festzustellen, ob diese Verbindungen wirksam bei der Behandlung chronischer Leberschäden sind.

Methoden

Fünf Gruppen männlicher Ratten (Sprague-Dawley-Stamm) werden wie folgt behandelt:

Gruppe A: Die Ratten erhalten oral 130 iag/kg Thioacetamid, und zwar 36 Tage lang in Dreitagesintervallen (I2malige Verabreichung). Anschließend werden die Tiere 10 Tage auf normale Diät gesetzt.

Gruppe B: Die Ratten erhalten oral 100 mg/kg Thioacetamid, und zwar 36 Tage lang in Dreitagesintervallen (12malige Verabreichung). Dann werden die Tiere 10 Tage auf normale Diät plus 0,2% Verbindung (4) gesetzt.

Gruppe C: Die Ratten erhalten oral 100 mg/kg Thioacetamid, und zwar 36 Tage lang in Dreitagesintervallen (12malige Verabreichung). Dann werden die Tiere iö Tage auf normale Diät plus 0,2% Verbindung (2) gesetzt.

Gruppe D: Die Ratten erhalten oral 100 mg/kg Thioacetamid, und zwar 36 Tage lan^ in Dreitagesintervallen (12malige Verabreichung). Dann werden die Tiere 10 Tage auf normale Diät plus 0,2% Anethol-Trithion gesetzt.

Gruppe E: Kontrollversuch; die Ratten werden auf normale Diät gesetzt.

Aus jeder Gruppe werden in geeigneten Intervallen 5 Ratten für den BSP-Test (Sulfobromphthaleintest) getötet; die Ergebnisse werden angegeben in mg BSP, das in i Deziliter Plasma zurückbleibt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 zusammengestellt.

Tabelle 5

Therapeutische Wirkung auf chronische Leberschäden

Tntiirur

Konzentration von BSP im Plasma (me/dn

Gruppe A Gruppe B Gruppe C Gruppe D ^f Jruppe E

24 Stunden nach viermaliger TAA-Verabreichung 24 Stunden nach achtmaliger TAA-Verabreichung 24 Stunden nach zwölfmaliger TAA-Verabreichung Nach Verabreichung der Verbindungen 2 Tage

5 Tage
10 Tage

	7,2 ±1,2	18,2 ±2,6	9,7 ±4.1	0,3 ±0,1
	3,6 ±0,5	16,8 ±5,2	7,3 ±3,4	-
r	0,3 ±0,1	17,3 ±4,4	0,9 ±0,1	0,8 ±0,1
12,7+3,7	7,0 ±2,8	0,4 ±0,1
8,7 ±1,9	3,1 ±0,7	-
1,4 ±0,4	0,8 ±0,2	0,6+0,1

Durch wiederholte Verabreichung von TAA erhöht sich die BSP-Konzentration im Blut von 16 auf 19 mg/dl, und dieser Wert dauert an. Es wird deshalb angenommen, daß sich die Ratten in einem einem chronischen Leberschaden nahen Zustand befinden. Nach der Verabreichung von TAA erholen sich die Gruppen (B und C), denen die erfindungsgemäßen Arzneimittel verabreicht worden sind, schneller von dem Leberschaden als die unbehandelte Gruppe (Gruppe A).

Dies zeigt, daß die erfindungsgemäßen Arzneimittel wirksam bei der Behandlung von subakuten oder 65

chronischen Leberschäden bzw. Hepatitis bei Mensch und Tier sind.

e) Schutzwirkung bei akuten Leberschäden im

Zusammenhang mit mittels Allylalkohol künstlich

erzeugter periportaler Nekrose

Methoden

Die Arzneimittel der Erfindung oder Anethol-Trithion werden der männlichen Maus (4 Wochen alt, dd-Stamm) mit einer Dosis von 100 mg/kg oral

verabreicht. 6 Stunden danach wird Allylalkohol oral mit einer Dosis von 0,075 mg/kg verabreicht 20 Stunden hierauf werden die Tiere getötet Aus den Blutproben erhält man die restliche BSP-Menge, aus der sich wiederum die SchutzAvirkung der erfindungsgemäßen Verbindung bestimmen läßt Die Ergebnisse für jeweils eine Gruppe von 5 Tieren sind in Tabelle 7 zusammengestellt

Tabelle 6

Schutzwirkung bei akuter Hepatitis im Zusammenhang mit periportaler Nekrose

Uepatotoxtn

Hepatotoxizitäts- Kontrolle*)
index

Positive
Kontrolle**)

Verbindung**) (2)

Anethol-Trithion**)

Allylalkohol

BSP

1,8 ±0,4 28,4 ±4,8

17,1 ±3,8

19,3 ±4,6

*) Das Hepatotoxin wird allein verabreicht

*) Nach Vorbehandlung mit der Verbindung der Erfindung wird das Hepatotoxin verabreicht

Allylalkohol unterscheidet sich von Tetrachlorkohlenstoff oder Brombenzol, Dimethylnitrosamin oder Chloroform insofern, daß er eine mit periportaler N'ekrosc verbundene Leberschädigung hervorruft Wie aus Tabelle 6 hervorgeht, schützt die Verbindung der Erfindung vor der Leberschädigung.

Demgemäß ist das Arzneimittel der Erfindung bei der Behandlung von Leberleiden bei Mensch und Tier, die von periportaler Nekrose begleitet sind, nützlich.

f) Schutzwirkung bei akuter Hepatitis im

Zusammenhang von mittels D-Galaktosamin

hervorgerufener mesenchymaler Reaktion und

diskreter lobulater Nekrose

Bei D-Galactosamin handelt es sich um eine Verbindung, die eine diskrete lobulare Nekrose in Verbindung mit einer mesenchymalen Reaktion, ähnlich der bei Virushepatitis beim Menschen beobachteten Veränderung, hervorruft so daß diese Verbindung häufig zu Erzeugung von künstlicher Virushepatitis Verwendung findet

Methoden

Das Arzneimittel der Erfindung oder Anethol-Tri-2) thion werden der männlichen Ratte (SD-Stamm) mit einer Dosis von 100 mg/kg oral verabreicht 6 Stunden danach wird D-Galactosamin mit einer Dosis von 600 mg/kg intraperitoneal verabreicht. 4 Stunden hierauf werden zusätzlich 300 mg/kg intraperitoneal verabreicht 8 Stunden danach werden die Tiere getötet. Aus den Blutproben werden GPT-Aktivität und Triglycerid in der Leber bestimmt, woraus sich wiederum die Wirkung der erfindungsgemäßen Arzneimittel bestimmen läßt. Die Ergebnisse für jede Gruppe s j mil jeweils 5 Tieren sind in Tabelle 7 zusammengestellt.

Tabelle 7

Schutzwirkung bei akuter Leberschädigung im Zusammenhang mit diskreter lobularer Nekrose

Hepatotoxin

Hepatotoxizitätsindex

Kontrolle Positive Verbindung**) Anethol-

Kontrolle*) (2) Trithion**)

D-Galactosamin GPT (Karmeneinheilen)

Triglycerid in der Leber (mg/g) *) Das Hepatotoxin wurde allein verabreicht
**) Nach der Vorbehandlung mit der Verbindung (2) oder Anethol-Trithion wurde das Hepatotoxin gegeben.

13	±0,5	92 ±	59	65	±12	106	±30
6,5	±12	8,2 ±	2,2	6,2	±0,73	9,2	±1.5

Tabelle 7 zeigt, daß die erfindungsgemäße Verbindung vor Leberschädigung schützt

Demgemäß stellt die Verbindung im erfindungsgemäßen Mittel einen wertvollen Beitrag zur Therapie der menschlichen oder tierischen Hepatitis im Zusammenhang mit mesenchymaler Reaktion und diskreter lobularer Nekrose dar.

g) Wirkung auf die mittels Äthionin künstlich
erzeugte Fettleber

Es gibt zahlreiche Faktoren, die eine Feltleber erzeugen. Man unterscheidet verschiedene Arien nach Maßgabe des Mechanismus der Fettanhäufung oder des Stoffwechsels der Lipoproteine in der Leber. Äthionin ist ein typisches Beispiel, das die erste Art von Fettleber verursacht. Es inhibiert die RNS Und die Proteinsynthese und zerstört die Poiysomen der Leberzelle. Die Fettleber wird ausgelöst durch inhibierung der Proleinsynthese und Störung der Lipoproteine Sekretion.

Im allgemeinen ist die Fettleber eng mit der -,n Anhäufung von Triglyceriden in der Leber verbunden. Im vorliegenden Beispiel erfolgt die Bestimmung des Ausmaßes der Fettleber und der schützenden oder therapeutischen Wirkung bezüglich der Fettleber durch Messung des Triglyceridgehaltes in der Leber.

Methoden

Das Arzneimittel der Erfindung und Methionin werden unabhängig in Olivenöl gelöst oder suspendiert und 4 Wochen alten männlichen Mäusen (dd-Stamm) mit einer Dosis von 250 mg/kg oral verabreicht. 1 Stunde zuvor, gleichzeitig hiermit oder 1 Stunde danach wird Äthionin, gelöst in äquimolarer NaOH-Lösung, mit einer Dosis von 200 mg/kg iniraperiloneal verabreicht.

24 Stunden nach der Verabreichung des Äthionins tötet man die Tiere Und bestimmt den Triglyceridgehalt in der Leber nach der chromotropen Säuremethode. Die Ergebnisse sind in Tabelle 8 zusammengestellt

909 647/333

Tabelle 8

Wirkung auf die Fettleber

Gruppe

Anzahl der Tiere

Triglycerid (mg/g-I-eber)

Verbindung (4)	- 1 Std.	— Äthionin
Verbindung (4)	- 0 Std.	-- Äthionin
Äthionin	-* 1 Std.	— Verbindung (4)
Verbindung (I)	-* 1 Std.	-* Äthionin
Verbindung (1)	- 0 Std.	-~ Äthionin
Äthionin	- 1 Std.	-* Verbindung (1)
Verbindung (2)	- 1 Std.	— Äthionin
Verbindung (2)	- 0 Std.	- Äthionin
Äthionin	• I Std.	·■* Verbindung (2)
Methionin	♦OStd.	* Äthionin

Kontrolle

Äthionin (positive Kontrolle)

Verbindung (4)

Verbindung (1)

Verbindung (2)

Methionin + Äthionin

Die Ergebnisse zeigen, daß die Arzneimittel der Erfindung die abnormale, durch Äthionin ausgelöste Anhäufung von Triglyceriden in eier Leber herabsetzen und somit eine schützende und therapeutische Wirkung bezüglich der Fettleber besitzen. Die Mittel der Erfindung sind Methionin in der vorgenannten Wirkung überlegen. Die Arzneimittel sind somit nützlich bei der Therapie der Fettleber beim Menschen und beim Tier.

h) Therapeutische Wirkung auf mittels

Tetrachlorkohlenstoff künstlich erzeugte

Fettleber

Auch Tetrachlorkohlenstoff cr/eugt eine Fettleben das Krankheitsbild unterscheidet sich jedoch von der durch Äthionin erzeugten Fettleber. Nach allgemeiner Auffassung verursacht Tetrachlorkohlenstoff eine Zerstörung von Mikrosomen, wodurch die Protcinsynihese inhibiert und eine Fettleber erzeugt wird.

Methoden

Tetrachlorkohlenstoff wird J5 Wochen alten männlichen Ratten (SD-Stamm) 4 Tage mit einer Dosis von 1 ml/kg subkutan verabreicht. Nach der letzten Verabreichung wartet man noch 3 Tage, um die Ausbildung der Fetllebcr so stark wie möglich /u machen.

Tabelle 9

Therapeutische Wirkung auf die Fettlebcr 10
10

10
10
10

10
10
10

10
10
10
10

5.8 ±0,43 15,6+1,34

12,0 ±0,77

6,7 ±0,43

12,8 ±0,92

12,3 ±0,82

7,1 ±0,24

11,8 ±0,72

10,3 ±0,96

6.9 ± 0,38 11,8 ±0,39

10,8 ±0,88

Die Verabreichung der erfind-ingsgemäßen Verbindüngen beginnt qm dritten Tag nach Beendigung der Tetrachlorkohlenstoffverabreichung. Sie erfolgt oral, und zwar täglich für eine Dauer von 10 Tagen mit einer Dosis von 50 oder 250 mg/kg. Am elften Tag werden die Tiere getötet. Die Bestimmung der therapeutischen Wirkung erfolgt durch Messung des Flüssigkeitsgehal· tes in der Leber (Triglycerid und Gcsamtfeu) sowie Bestimmung der histopathalogischen Veränderungen.

Die Bestimmung von Triglycerid und Gesamtfett erfolgt colorimetrisch nach der chromolropen Säuremethode bzw. der Bragdonschen Oxydationsmethode.

Die Bewertungen für die histopathologische Veränderung ist wie folgi:

Index I lislopalhologische Veränderungen - normal

± Bildung feinlropfiger Fetlablagerungen, deren

Anzahl jedoch relativ gering ist. + Bildung feintropfiger oder schwach vergrößerter Fettablagerungen bei gleichzeitig erhöhter

Tröpfchenzahl.
+ + Bildung grobtropfiger Fcttabscheidungen.

Die Frgebnisse sind in den Tabellen 9 und 10 zusammengestellt.

Gruppe	Triglycerid	Gcsamtfctt
	(mg/g-Lebcr)	(mg/g-Leber)
Kontrolle	10.9 ± 2.8	59.6 ± 7,6
Positive Kontrolle	53.6 ± 9.2	178,3 + 21,5
Verbindung (4) (50 mg/kg)	40,6 ± 8.2	87.6 ± 7,2
Verbindung (4) (250 mg/kg)	25,3 ±4,2	70,3 ± 7 J
Verbindung (1) (50 ni|;/kg)	36,2 + 7,8	80,2 ± 9,8
Verbindung (1) (250ni|?/kg)	24,9 + 8,2	70,3 ±10,2
Verbindung (2) (50 mg/kg)	38,6 ±8,5	82,3 + 15,1
Verbindung (2) (250 mg/kg)	21,6±7,3	68,3 ±10,3
Methionin (250mi;/kg)	42,7 ±7,2	156,8 ±23,8

19 20

Tabelle 10

Therapeutische Wirkung auf die Fettleber (histopathologisehe Prüfung)

Gruppe

Ausmaß der Fettleber

Kontrolle
Positive Kontrolle

Verbindung (4) (50 mg/kg)
Verbindung (4) (250 mg/kg)

Verbindung (1) (50 mg/kg)

Verbindung (1) (250 mg/kg)

Verbindung (2) (50 mg/kg)

Verbindung (2) (250 mg/kg)

Methionin

Tabelle 9 zeigt, daß die Gruppe »positive Kontrolle«, der Tetrachlorkohlenstoff, jedoch anschließend die erfindungsgemäfie Verbindung nicht verabreicht worden ist, einen hohen Fettlebergrad ausweist und keine Anzeichen von Verbesserung zeigt

Andererseits ist bei den therapeutischen Gruppen, denen das erfindungsgemäße Arzneimittel mit einer Dosis von 50 oder 250 mg/kg verabreicht worden ist, das Ausmaß der Fettleber erheblicii verbesser!, d. h„ das erfindungsgemäße Mittel zeigt einen therapeutischen Effekt.

Im Gegensatz hierzu zeigt Methionin k;ium eine Wirkung bei mittels Tetrachlorkohlenstoff erzeugter F-etileber. ·

Tabelle K) zeigt die Erjebniss der histoiialhologischen Untersuchung. Größe und Anzahl der i-etttröpfchen sind bei den Gruppen, die mit c ii erfindungsgemäßen Mitteln behandelt worden sind, erniedrigt; dies beweist den Rückgang der Feti leber.

Demgemäß ist das erfindungsgemäße Arineimittel hei der Behandlung der Fettleber beim Menichen und beim Tier nützlich.

i)Cholagoge Wirkung

Die Bildung und Exkretion von Gallensalz im (ralienaiislliiB stellen die wichtigen Stoffwechselfunkti'»nen der Leber dar. Wird der Gallerifluß aus irgendeinem Grund gestört, so kommt es m C holestasc und verschiedenen Arten von Leberleiden im Zuge mit einem Dubin-Johnson-Syndrom (Gelbsucht).

Choleretika finden für Patienten zur Verbesserung des Gallenflusses Verwendung. Im vorliegenden Beispiel wird der Einfluß der erfindungsgemäßen Mittel auf die Mengen an Galle und Gallensalz untersucht

Methoden

Jeweils 5 männliche Ratten (4 Wochen alt, SD-JCL-Stamm) einer Gruppe werden mit Pentobarbital-Natrium (37,5 mg/kg, intraperitoneale Injektion) betäubt. Nachdem man die untere Bauchhöhle durch einen Mittelschnitt geöffnet hat, wird in den gemeinen

jo Gallengang ein Polyäthylenkatheter mit einem lichten Durchmesser von 0,5 mm eingeführt. Der Katheter wird durch den Bauchhöhlenschnitt nach außen gelegt, bevor dieser verschlossen wird. Die aus dem Katheter ausfließende Galle wird kontinuierlich in Zeitabständen von 1 Stunde gesammelt Die in 1 Stunde produzierte Gallenmenge wird gev/ogen, die Menge an Gallensalz wird enzymatisch bestimmt (Ikagaku likkenho Koza 1B. Biologica Constituents II, Herausgeber Tamio Yamakawa). Die Menge an Gallensalz wird in Cholinsäureäquivalent angegeben.

Bei der Darstellung der Ergebnisse werden die Mengen an Galle und Gallensalz, die in 1 Stunde vor der Verabreichung des Arzneistoffes gebildet worden sind, mit 100 angesetzt. Das erfindungsgemäße Arzneimittel wird mit einer Dosis von 200 mg/kg oral verabreicht. Als Vergleichsverbindung dient Anethol-Trithion.

Die Ergebnisse sind in den Tabellen 11 und 12 zusammengestellt.

■Idrollj Il .Yi. ^ ir· .ng	auf den Gullenfluß	Verbindung (I) 200 mg/kg	Versuch 2 Kontrolle	Verbindung (2) 200 mg/kg	Versuch S Konirolle	Verbindung (4) 200 mg/kg	Versuch 4 Kontrolle	Anethol- Trilhion 200 mg/kg
	Versuch I Kontrulle	100	ι no	100	100	IOC	i00	100
I Std vor Behandlung	100

Nach Behandlung

JStd. i00±2,4 110±l,8 100 ±2,4 I12±2,4 100±2,4 108 ±2,1 104±3,5 114 ± 15

2Std. 104±6,5 J15 ±6,8 104 + 6,5 117 ±6,8 104 ±: 6,5 120±7,7 101 ±4,9 114 ± 15

3 Std. 92 ±6,4 105 ±6,2 «±6,4 1OI±7,O 92 + 6,4 107 ±6,8 93 ±6,9 102 + 11

4 Std. 88 ±9,7 98 ±8,2 88 ±9,7 97 ±8,3 88 ±9,7 98 ±7,2 84+6,7 95 ± 7,7 5Std. 85 ±9.3 80 ±6,8 85 ±9,3 80 ±7,3 85 ±9,3 88 ±5,3 76 ±6,6 86 ±6,6

Tabelle ]2

Auswirkung auf die Exkretion von Gallensalz

' Zeit	Versuch 1	■ Nach Behandlung	89 ± 6,6	Verbindung	Versuch 2	Verbindung	Versuch 3	Verbindung	Versuch 4	Anethol-
	Kontrolle	1 Std.	92±Π	(D	Kontrolle	(2)	Kontrolle	(4)	Kontrolle	Triihion
f		: 2 Std.		200 mg/kg		200 mg/kg		200 mg/kg		200 mg/kg
h I		100		100		100		100
i 1 Std. vor	100		100		100		100
> Behandlung
103 ±6,8		102 ±7,3		100 ±7,2		108 ± 12
102 ±6,6	89 ± 6,6	100 ±5,8	89 ± 6,6	106 ±7,8	94 ± 6,2	89±11
92±11	92±11	89 ± 9,5

3 Std.

4 Std.

5 Std.

66± 8,8 100±5,8 66± 8,8 106±7,9 66± 8,8 98±4,3 77±11

54 ±15
46±16

95 ±7,7 54 ±15

±5,2 46 ± 1,6 90 ±5,3 16 ±16

66 ± 3,8

±7,2 54 ±15 90 ±7,7 56 ± 9,7 47 ± 3,0

82 ±6,8 52 ±10 3,3 ± 4,0

Aus Tabelle 11 geht hervor, daß der Gp"!enflu3 durch die Verabreichung des erfindungsgemäßen Mittels erhöht wird. Die Gesamtmenge an ausgeschiedener Galle 5 Stunden nach der Verabreichung der Verbindung (1),(2) und (4) ist 1,10-, 1,13-bzw. 1.11 mal größer als beim Kontrollversuch. Demgegenüber ist die Gesamtmenge an ausgeschiedener Galle nach der Verabreichung von Anethol-Trithion i.lOmal größer als beim Kontrollversuch.

Tabelle 12 zeigt, daß die Menge an ausgeschiedenem Gallensalz durch die Verabreichung des erfindungsgemäöen Mittels merklich erhöht wird. Die Gesamtmenge an exkretiertem Gallensalz, 5 Stunden nach der Verabreichung der Verbindung (1), (2) und (4) ist 1,40-, 1,43- bzw. 137mal größer als beim Kontrollversuch. Demgegenüber wird im Fall von Anethol-Trithion keine besondere Erhöhung in der Exkretion von Gallensalz beobachtet. Hieraus folgt, daß die Arzneimittel der Erfindu-g besonders wirksam bei der Förderung der Exkretion von Gallensalz sind.

Die Mittel der Erfindung sind bei der Erhöhung der Exkretion von Gallensalzen wirksam, besitzen daher auch eine choleretische Aktivität, und ihre Wirksamkeit

Tabelle 13

Auswirkung auf die Blutäthanolkonzentration

bei der Behandlung von Leiden der menschlichen oder tierischen Leber oder Gallengänge kann aufgrund der hier dargelegten Ergebnisse bezüglich des Verhaltens von Anethol-Trithion erwartet werden. Wie vorstehend dargelegt, können die Mittel der Erfindung die Stoffwechselfunktion der Leber beeinflussen und sind deshalb bei der Behandlung von durch Cholestase verursachten Leberschädigungen wertvoll.

j) Einfluß auf die Blutäthanolkonzentration
Methoden

Die Testverbindungen werden in Olivenöl gelöst oder suspendiert und männlichen Mäusen (dd-Stamm) mit einer Dosis von 250 mg/kg oral verabreicht. Nach 6 Stunden werden 1000 mg/kg Äthanol oral verabreicht. Dann wird zu dem in Tabelle 13 angegebenen Zeitpunkt Blut in einer Kapillare aus der Schwanzvene entnommen. In dem durch Zentrifugieren erhaltenen Plasma wird die Äthanolkonzentration mittels Gas-FIüssigkeits-Chromatographie (Fl D-Typ) bestimmt. Aus jeder Gruppe werden 5 Mäuse ausgewählt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 13 zusammengestellt.

Äthanolkonzentration im Plasma (ppm)

Kontrolle vorbehandelt mit Verbindung

(D

(2)

(4)

0	27± 17	12± 3	10± 7	9± 4
5	875 ± 203	732 ±102	711 ± 95	730 ± 92
15	810 ± 191	710± 88	558 ± 104	536 ±113
30	6901214	455 ±112	426± 96	373 ±105
60	167+ 76	12± 7	13± 6	7± 2
120	5± 1	nicht bestimmt	nicht bestimmt	nicht bestimmt

Die Äthanolkonzentration im Plasma der mit den erfindungsgemäßen Arzneimitteln behandelten Mäuse ist niedriger als bei normalen Mäusen. Diese Tendenz ist 30, 60 und 120 Minuten nach der Verabreichung von Äthanol besonders ausgeprägt; hieraus folgt, daß die Äthanolmenge bei den behandelten Mäusen rasch erniedrigt wird. Darüber hinaus erholen sich die mit den erfindungsgemäßen Arzneimitteln behandelten Mäuse von dem Vergiftungszustand offensichtlich (visuelle Beobachtung) schneller. Dies zeigt, daß durch Verabreichung der erfindungsgemäßen Mittel vor der Alkoholeinnahme die Alkoholstoffwechselfunktion der Leber bei den Mäusen stimuliert wird.
Demgemäß sind die Arzneimittel der Erfindung zur

Erniedrigung der Blutalkoholkonzentration wertvoll, soweit sie ausreichend lange vor dem Alkoholgenuß appliziert werden.

k) Auswirkung auf den Glucosestoffwechsel
Untersuchungsmethode

Die Testverbindung wird in Olivenöl gelöst und männlichen Mäusen (dd-Stamm) mit einer Dosis von 250 mg/kg oral verabreicht. Nach 6 Stunden werden 4,0 g/kg Glucose oral gegeben. Die gleiche Glucosemenge wird den Kontrolltieren verabreicht. 30, 60, 90 und 120 Minuten nach der Glucoseverabreichung wird den Mäusen 0,02 ml Blut aus der Schwanzvene entnommen. Aus dieser Probe wird der Blutzucker nach der Methode von Somogyi- Nelson bestimmt. Für jede Behandlung werden 5 bis 6 Tiere verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 14 zusammengestellt.

Tabelle 14

Auswirkung auf die Glucosekonzentration im Blut

Zeit	!Blutzucker (mg/dl)	Vorbehandlung	mit Test-
	Kontrolle	Verbindung
		(D	(2)
(min)		138 ±18,2	136±12,3
0	145 + 11,8	260 ±20,4	247 ±20,2
30	311 ±21,9	228 ±15,2	212±13,1
60	290 ± 14,6	188+11,3	177 ±15,5
90	263 ±13,1	132 ±10,4	13O±1O,8
120	251 ±13,5

Die Blutzuckerwerte jeder Gruppe zeigen Peaks nach 30 Minuten, wobei kein wesentlicher Unterschied in den Peakwerten zu sehen ist. Anschließend tritt jedoch ein offensichtlicher Unterschied im Wiedererreichen der Blutzuckerwerte auf, wobei die mit den erfindungsgemäßen Arzneimitteln behandelten Gruppen eine schnellere Erholung zeigen. Dies bedeutet, daß durch die Verabreichung der erfindungsgemäßen Mittel der Glucosestoffwechsel in der Leber stimuliert wird.

Demgemäß zeigen die erfindungsgemäßen Arzneimittel gleichzeitig eine gewisse Erniedrigung der erhöhtfiiBlutglucosekonzentrationen.

Insgesamt betrachtet, zeigen die erfindungsgemäßen Lebermittel ein breites Spektrum von Aktivitäten bei der Behandlung von Lebererkrankuhgen und weisen

somit überraschende Vorteile auf, die sie gegenüber Lebermitteln des Standes der Technik, welche eine z. T.

zwar eine stärkere Aktivität, aber ein wesentlich engeres Wirkspektrum besitzen, als wertvoll erscheinen lassen.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Arzneimittel zur Prophylaxe oder Therapie von Leberleiden, gekennzeichnet durch den Gehalt an mindestens einem 1,3-Dithiolan-2-yIidenmalonsäureesterderivat der allgemeinen Formel I

   Ii

   R¹OC