DE2625220C3

DE2625220C3 - Arzneimittel zur Behandlung von Leberkrankheiten

Info

Publication number: DE2625220C3
Application number: DE2625220A
Authority: DE
Inventors: Tsutomu Sakai Kasai; Hitoshi Toyonaka Kurono; Kuniaki Neyagawa Taninaka
Original assignee: Nihon Nohyaku Co Ltd
Current assignee: Nihon Nohyaku Co Ltd
Priority date: 1975-06-06
Filing date: 1976-06-04
Publication date: 1979-11-22
Also published as: FR2313041B1; DE2625220B2; JPS51144733A; DE2625220A1; JPS5618578B2; US4022907A; FR2313041A1; GB1518376A

Description

R²OC S

in der R' und R² jeweils gleich oder verschieden sind und Ci-Cä-Alkylreste bedeuten und η eine ganze Zahl mit einem Wert von 1,3 oder 4 ist.

Die Erfindung betrifft Arzneimittel zur Behandlung von Leberkrankheiten, enthaltend eine 1,3-Dithiaverhindung der allgemeinen Formel I

R¹OC

= C

R²OC

Il ο

(CH₂),
/

(D

in der R¹ und R² jeweils gleich oder verschieden sind und Ci-Cs-Alkylreste bedeuten und η eine ganze Zahl mit einem Wert von 1,3 oder 4 ist.

Aufgrund ihrer vielseitigen Funktionen wird die Leber häufig als chemische Fabrik bezeichnet. In der Leber laufen verschiedene chemische Reaktionen ab, wie Entgiftung, Zuckerstoffwechsel, Proteinstoffwechsel, Lipidstoffwechsel, Bildung und Ausscheidung von Gallenflüssigkeit, Steuerung von Hormonen, Bildung von Prothrombin zur Blutkoagulation, Regeneration von Leberzellen und Depotbildung von verschiedenen Bestandteilen, wie Fetten, Glycogenen, Proteinen und Vitaminen.

Durch verschiedene Einflüsse kann das komplizierte Gleichgewicht akut oder chronisch gestört werden, beispielsweise durch Alkohol, unzureichende Ernährung, Viren, Arzneistoffe, Gifte, Störungen des, Gallenflusses und Verletzungen von Blut- und Lymphgefäßen in der Leber. Dadurch werden Krankheiten hervorgerufen, wie Fettleber, toxische Leberstörungen, alkoholische Hepatitis, Virushepatitis, Stauungsleber, Cholestase, Gelbsucht und Zirrhosen oder Hepatome im Endstadium.

Aus M. N e g w e r, Organisch-chemische \rzneimittel, Berlin, 1971, sind die Wirksubstanzen Anetholtrithion, Thioktsäure, Thioktsäureamid und Methionin bekannt, die eine positive Wirkung bei Leberschädigungen aufweisen. Demgegenüber sind jedoch die erfindungsgemäßen Arzneimittel von besserer Wirksamkeit, wie in den pharmakologischen Untersuchungen unten nachgewiesen wird. Gemäß H. Hornbostel et al, Inn. med. in Prax. u. Klin., Stuttgart 1973, Seiten 15 bis 205, sind Leberkrankheiten häufig nicht heilbar, insbesondere sind nekrotische Leberzellen nicht mehr zu heilen. Jedoch besitzt das erfindungsgemäße Arzneimittel eine aktivierende Wirkung auf die noch gesunden Leberzellen, so daß die Wirkung der nekrotischen Leberzellen auf die gesamte Leberfunktion weniger gefährlich ist.
Aufgrund umfangreicher Untersuchungen wurde festgestellt, daß die Verbindung der allgemeinen Formel I eine aktivierende Wirkung auf Leberzellen und Stoffwechselfunktionen der Leber aufweisen, wie weiter unten noch erläutert wird, beispielsweise auf den Zuckerstoffwechsel, beschleunigte Entgiftung von Alkohol. Bildung und Ausscheidung von Gallenfliissigkeit und biliären Salzen (choleretische Wirkung) und Regeneration der Leber. Ferner wurde festgestellt, daß die erfindungsgemäßen Mittel bei bereits bestehenden Lebererkrankungen eine bessernde oder heilende Wirkung aufweisen. Schließlich wurde gefunden, daß diese Mittel die Leberfunktion auch gegen gewisse Beschädigungen oder Überlastungen schützen können.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I sind teilweise bekannt und lassen sich nach folgendem Reaktionsschema herstellen:

ο Il	Yh₂ + C	Base S₂ - *	O Μ	\ "s	hal-(CHj)	„-hai	O Η	S C \ , S	(I)
Il R¹ OC \ R²OC Μ			Il R¹OC \ C R²OC π				Il R¹OC \ C R²OC
Il O		Il 0			O
			\ KH₂I_n

In diesem Schema haben R¹, R² und η die vorstehende Base und durch Reaktion des erhaltenen Dithiolats mit

Bedeutung und hai bedeutet ein Halogenatom. 65 einem Dihalogenalkan herstellen. Spezielle Beispiele für

Somit lassen sich die Verbindungen der allgemeinen Verbindungen der allgemeinen Formel 1 sind in

Formel 1 durch Umsetzung eines Malonesters mit Tabelle I zusammengestellt.
Schwefelkohlenstoff in Gegenwart einer geeigneten

Tabelle I	R²OC μ	/	S	\	S	R^!	R²	F. ("C) oder Kp. fC/mmHg)
O	Il O	C \	(CH₂J_n
R¹OC	Verbindung		CH₃	CH₃	F. 158-159°C
\	Nr.		C₂H₅	C₂H₅	F. 97-99^rC
C =	1	η	n-QH,	n-QH,	F. 77,5-78°C
2		i-C₃H,	1-QH₇	F. 104-105 C
3	1	n-QH,	n-QH,	F. 51-51,5 C
4	1	n-QH,,	n-QH,,	Kp. 175-179 C/0,07mmHg
5	1	QH₅	i-QH₇	F. 37-39 C
6	1	CH₃	CH₃	Kp. 141-146 C/0,07mmHg
7	1	C₂H₅	C₂H₅	F. 60-60,5 C
8	1	H-C₃H₇	n-QH,	F. 42,5-43 C
9	1	i-C₃H₇	i-C₃H₇	F. 95-96 C
10	3	n-QH,	n-QH,	F. 51-51,5 C
11	3	C₂H₅	t-QH,	F. 96-99 C
12	3	CH₃	CH₃	Kp. 146-149 C/0,15mmHg
13	3	C₂H₅	C₂H₅	F. 67,5 C
14	3	.-C₃H₇	n-QH,	Kp. 146-148 C/0,2mmHg
15	3	i-QH₇	S-C₃H₇	F. 71-73 C
16	4	n-QH,	n-QH,	Kp. 158-161 C/0,15mmHg
17	4	n-CjH„	n-QH„	Kp. 161-164 C/0,2mmHg
18	4	QH₅	s-QH,	Kp. 141-145 C/0,15ttimHg
19	4
20	4
	4
	4

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I weisen bei Säugetieren eine äußerst geringe Toxizitä» auf. Die LD50-Werte bei oraler Verabreichung an Mäijse liegen im Bereich von 1000 bis 6000 mg/kg oder mehr. Beispielsweise betragen die LD50-Werte der Verbindungen 4, 11 und 17 aus Tabelle I mehr als 5000 mg/kg. Ferner zeigen diese Verbindungen bei Verabfolgung im üblichen Dosisbereich keine schädlichen Wirkungen.

Dies wird weiter unten noch näher erläutert.

Es sind eine Reihe von Ursachen bekannt, die zu toxischen Leberschädigungen, Hepatitis und Fettlebex führen. Die vorherrschenden Veränderungen, die sich bei derartigen Erkrankungen beobachten lassen, sind Nekrosen der Leberzellen, mesenchymale Reaktionen und Anhäufung von Lipiden. Das Erscheinungsbild von Nekrosen hängt von der Ursache ab. Nekrosen lassen sich in zentrilobuläre Nekrosen, periportale Nekrosen und diskrete lobuläre Nekrosen einteilen. Derartige Veränderungen lassen sich experimentell durch Verabfolgung der folgenden Verbindungen an Labortiere hervorrufen. Zentrilobuläre Nekrosen werden durch Tetrachlorkohlenstoff, Thioacetamid, Chloroform oder Brombenzol hervorgerufen. Periportale Nekrosen lausen sich durch Allylalkohol induzieren. Diskrete lobuläre Nekrosen, die mit mesenchymalen Reaktionen verbunden sind, können durch D-Galactosamin hervorgerufen werden. Eine Fettleber läßt sich durch Verabfolgung von Tetrachlorkohlenstoff oder Äthionin ■»5 hervorrufen.

Alle diese akuten, subakuten und chronischen

Leberschädigungen gehen im Endstadium in Zirrhosen üb ;r. Beim Versuchstier lassen sich Zirrhosen durch eine Langzeitverabfolgung von Tetrachlorkohlenstoff hervorrufen.

Untersuchungen haben ergeben, daß diese Lebermittel ein sehr breites pharmakologisches Wirkungsspektrum bei folgenden Lebererkrankungen aufweisen:

« (1) Lebererkrankungen, die mit zentrilobulärer Nekrose verbunden sind;

(2) Lebererkrankungen, die mit periporialer Nekrose verbunden sind;

(3) Lebererkrankungen, die mit diskreter lobulärer Nekrose und mesenchymalen Reaktionen verbunden sind;

(4) Fettleber;

(5) Zirrhosen;

(6) toxischen Leberschädigungen;
(7) Leberstauungen, sowie

(8) Stimulierung der Ausscheidung von Gallenflüssigkeit und biliären Salzen (choleretische Aktivität) bewirken.

30

Demgemäß eignen sich die erfindungsgemäßen Arzneimittel bei durch verschiedene Ursachen hervorgerufenen, akuten oder chronischen Lebererkrankungen von Menschen und Tieren.

Histopathologische Untersuchungen haben ergeben, daß diese Mittel, wie bereits erwähnt, zur Behandlung von zentrilobulären Nekrosen, periportalen Nekrosen und diskreten iobulären Nekrosen der Leber, die mit mesenchymalen Reaktionen verbunden sind, verwendet werden können.

Aufgrund ihrer aktivierenden Wirkung auf die Leberzellen und die Stoffwechselfunktionen der Leber, einschließlich Ausscheidung von Gallenflüssigkeit und biliären Salzen, Zuckerstoffwechsel und Milderung von durch Hepatotoxine, wie Alkohol, hervorgerufenen Schaden können die erfindungsgemäßen Mittel als gallentreibende Mittel oder als Mittel bei Gelbsucht von Menschen und Tieren verwendet werden.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I werden in üblicher Weise je nach der beabsichtigten Wirkung in eine entsprechende Darreichungsform gebracht. Beispielsweise können sie zur Behandlung von Lebererkrankungen direkt ohne Zusatzstoffe vervendel werden. Sie können aber auch nach üblichen Verfahren mit pharmakologisch verträglichen Hilfsstoffen vermischt werden.

Die Arzneipräparate der Erfindung körnen oral oder parenteral verabfolgt werden. Sie werden je nach Verabfolgungsweg in eine entsprechende Darreichungsform gebracht.

Beispielsweise können die Arzneistoffe der Erfindung zu Pulvern. Granulaten, Tabletten, zuckerbeschichtete Tabletten, Pillen, Kapseln, Suppositorien. Suspensionen, Flüssigkeiten, Emulsionen, Ampullen und Injektionsflüsligkeiten konfektioniert werden.

Je nach Bedarf werden die Arzneipräparate in aseptischem Zustand oder in Form von isotonischen wäßrigen Lösungen zur Verfügung gestellt.

Als Hilfsstoffe können Feststoffe, halbfeste Stoffe, Flüssigkeiten oder verträgliche Kapseln verwendet werden. Beispiele für Verdünnungsmittel sind Träger-Jtoffe, Füllstoffe, Bindemittel, Netzmittel, Zerfallsmittel, grenzflächenaktive Mittel. Gleitmittel, Dispergiermittel, Puffer. Würzen, Desodorantien, Farbstoffe. Gejchmacksstoffe. Konservierungsmittel, Lösungsvermittterund Lösungsmittel.

Diese Substanzen können entw "der einzeln oder im Gemisch aus zwei oder mehr der vorgenannten Produkte eingesetzt werden.

Die Arzneipräparate der Erfindung werden nach an sich üblichen Verfahre? hergestellt. Beispielsweise wird ein Gemisch aus Arzneistoff und Verdünnungsmittel granuliert und 1. B. zu Tabletten verpreßt.

Im allgemeinen weisen die Arzneipräparate einen Wirkstoffgehalt von etwa 0,01 bis 100 Gewichtsprozent, bezogen auf da«· Gesamtgewicht, auf.

Zur Behandlung der verschiedenen Leberschäden und der daraus entstehenden Krankheiten werden die Arzneipräparate der Erfindung an Menschen und Tiere nach in an sich üblicher Weise auf oralem oder parenteralem Wege verabfolgt. Die orale Verabfolgung sehließt auch die sublinguale Verabfelgung ein. Die parenteral Verabfolgung schließt auch Injektionen, beispielsweise subkutane, intramuskuläre und intravenöse Injektionen, und Instillationen ein.

Die Wirkstoffdosis hängt bekanntlich von vielen Faktoren ab, Wie Spezies, Unterschiede in Empfindlichkeit. Alter, Geschlecht und Körpergewicht, klinisches

40

45 Erscheinungsbild, Zustand der Patienten, Verabfolgungsweg, Zeit und Abstand der Verabfolgung, Art und Eigenschaft des Arzneipräparats und Art des Wirkstoffs. In einigen Fällen kann die Dosis deshalb unter der vorerwähnten Minimaldosis liegen, während in anderen Fällen eine über der Maximaldosis liegende Wirkstoffdosis notwendig ist Bei Verabfolgung der Arzneipräparate in großen Dosen wird vorzugsweise eine unterteilte, mehrmals täglich gegebene Verabfoljung bevorzugt.

Bei oraler Verabfolgung liegen wirksame Dosen bei Tieren im Bereich von 0,1 bis 500 mg, vorzugsweise 1 bis 100 mg Wirkstoff pro 1 kg Körpergewicht pro Tag. Bei parenteraier Verabfolgung liegen wirksame Dosen bei Tieren im Bereich von 0,01 bis 250 mg, vorzugsweise 0,1 bis 25 mg Wirkstoff pro 1 kg Körpergewicht pro Tag.

Bei oraler Verabfolgung an Menschen ergeben sich aus den vorerwähnten Tierdosen unter Berücksichtigung einer unterschiedlichen Empfindlichkeit und unter Einhaltung eines Sicherheitsbereichs Dosen von 0,1 bis 250 mg, vorzugsweise 0,5 bis 50 m^ pro 1 kg Körpergewicht pro Tag. Bei parenteraier Vevabfolgung liegen die entsprechenden Dosen für Menschen im Bereich von 0,01 bis 100 mg, vorzugsweise 0,1 bis 25 mg, pro 1 kg Körpergewicht pro Tag.

Die Teilangaben in den Konfektionierungsbeispielen bezithen sich auf das Gewicht

Herstellung von 13-Dithietan-2-yIiden-malonsäure-diisopropyIester

Ein Gemisch aus 20 g (0,1 Mol) Malonsäurediisopropylester und 7,6 g (0,1 Mol) Schwefelkohlenstoff wird tropfenweise bei einer Temperatur unter 20°C mit einer 30prozentigen wäßrigen Lösung mit einem Gehalt an 8,8 g (0,22 Mol) Natriumhydroxid versetzt. Nach 30minütigem Rühren in diesem Temperaturbereich wird das Gemisch mit 23,7 g(0,11 Mol) 1,4-Dibrombutan versetzt und 2 Stunden bei 50 bis 70⁰C umgesetzt. Nach beendeter Umsetzung wird das Reaktionsgemisch in 300 ml Eiswasser gegossen. Die gewünschte Verbindung fällt in Form von weißen Kristallen aus. Die Kristalle werden abfiltriert, mit Wasser gewaschen, getrocknet und aus einer Mischung von Diäthyläther und η-Hexan umkristallisiert. Man erhält 25 g gereinigte Kristalle vom F. 71 bis 73°C in einer Ausbeute von 78,5 Prozent d. Theorie.

Konfektionierungsbeispiel 1

Folgende Bestandteile werden homogen vermischt und zu einem Pulver pulverisiert:

13-Dithietan-2-ylidenmalonsäure di n-propylester
(Verbindung 3) 10 Teile

Schweres Magnesiumoxid 10 Teile

Lactose 80 Teile

Konfektionierungsbeispiel 2

Die folgenden Bestandteile werden gemäß Beispiel 1 zu einem Pulver verarbeitet:

l,3-Dithietan-2-yliden-	10 Teile
malonsäure-diisopropylester
(Verbindung 4)	10 Teile
Synthetisches Aluminium	5 Teile
silikat	' 75 Teile
Calciumhydrogenphosphat
Lactose

Konfektionierungsbeispiel 3

Die folgenden Bestandteile werden homogen verknetet, granuliert, getrocknet und gesiebt:

Vefbindling-Nf.

LD50 rrig/kg

l,3-Dithian-2-yliden-	50 Teile
malonsäure-diisopropylesler	10 Teile
(Verbindung 11)	15 Teile
Stärke	20 Teile
Lactose	5 Teile
Kristalline Cellulose	30 Teile
Polyvinylalkohol
Wasser

Il

17

Anetholtritliion

Thioctsäure

Thiöclsäufcamid

Methionin

>5000

3850

1380

1460

>6000

Konfektionierungsbeispiel 4

99 Teile des Granulats von Beispiel 3 werden mit i Teil Calciumstearal vermischt und anschließend zu einer Tablette von 10 mm Durchmesser verpreßt.

Konfeklinnioriingsbeisnicl 5

Die folgenden Bestandteile werden gemäß Beispiel 3 zu einem Granulat verarbeitet:

l,3-Dithian-2-yliden-	95 Teile
malonsäure-di-n-propylester	5 Teile
(Verbindung 10)	30 Teile
Polyvinylalkohol
Wasser

90 Teile des erhaltenen Granulats werden mit 10 Teilen kristalliner Cellulose vermischt und anschließend zu Tabletten von 8 mm Durchmesser verpreßt. Aus diesen Tabletten wird unter Verwendung entsprechender Mengen einer Suspension mit einem Gehalt an äthanolischem Schellack, Sirup, Gelatine und gefälltem Calciumcarbonat sowie unter Verwendung eines Färb-Stoffs eine Tablette mit einem Zuckerüberzug hergestellt.

Konfektionierungsbeispiel 6

Die folgenden Bestandteile werden unter Erhitzen gelöst und zu einer Injektionslösung abgekühlt:

2. Untersuchung der Schutzwirkung bei akuten

Leberschädigungen mit zentrilobulärer Nekrose

(Versuchsmodell unter Verwendung von

Tetrachlorkohlenstoff)

Durch Verabfolgung von Tetrachlorkohlenstoff wird eine zentrilobuläre Nekrose der Leber verbunden mit ernein Veflüäi ur'i DipnusjJnupyikJiii-MüOicuuu, Lcucf* glycogen, Coenzym A und einem Anstieg an Neiitralfett induziert. Als Ergebnis der Leberschädigung läßt sich eine Freisetzung von verschiedenen Enzymen aus den Lebcrzellen und ein Anstieg von Enzymaktivitäten im Plasma beobachten. Ein geeignetes Mittel zur Bewertung des durch CCU induzierten Schädigungsgrads oder der durch die Arzneistoffe hervorgerufenen Schulzwirkung stellt die Untersuchung der Glutamat-Pyruvat-Transaminas,¹ Aktivität im Plasma (p-GPT) dar.

Verbindung 11	0,5 Teile
Nichtionogenes grenzflächen
aktives Mittel	2,5 Teile
Isotonische Natriumchlorid
lösung	97,0 Teile

Konfektionierungsbeispiel 7

Das gemäß Beispiel 1 erhaltene Pulver wird
handelsübliche Kapseln gefüllt

Methode

Die zu untersuchenden Verbindungen werden in Olivenöl gelöst oder suspendiert und in einer Dosis von 250 mg/kg an männliche Mäuse (4 Wochen alt, dd-Stamm) verabfolgt. Nach 6 Stunden wird CCU oral in einer Dosis von 0,05 ml/kg als Lösung in Olivenöl verabfolgt. 24 Stunden nach der CCU-Verabfolgung werden die Tiere getötet und einer groben Leberüberprüfung unterzogen. Ferner wird das Plasma abzentrifugiert und gemäß dem Verfahren von R ε i t rn a η und Frankpls auf die n-GPT-Aktivität untersucht. Die Ergebnisse werden in Karmen-Einheiten angegeben.
Für die Leberschädigung gilt folgender Bewertungsmaßstab:

Für die Leberschädigung gilt folgender
in 50 Bewertungsmaßstab:

Pharmakologische Untersuchungen
1.Akute Toxizität

Die akute orale Toxizität bei männlichen Mäusen wurde überprüft. Die erhaltenen LD«- Werte sind in "der folgenden Tabelle Ia zusammengefaßt:

Tabelle Ia

Akute Toxizität bei männlichen Mäusen

Bewertung der
Leberschädigung

Beschreibung des Zustands der
Leber

normal

leichte Schädigungen

deutlich feststellbare

Schädigungen

schwere Schädigungen

Verbindung-Nr.

LD50 mg/kg

>fi000
>6000
>5000

Die einzelnen Zahlenwerte stellen Durchschnittswerte für 5 bis 6 Mäuse dar. ρ-GPT-Werte von über 1000 Karmen-Einheiten werden aus Zweckmäßigkeitsgründen für die Berechnung des Durchschnitts als 1000 angenommen.

ίο

Tabelle II	akuten Leberschädigungen mit	Bewertung der	p-GPT
Schutzwirkung bei	zentrilobulärer Nekrose	Leberschädigung
	Verbindung Nr.	1,5	341
		0,3	29
1	0,2	22
2	0,0	20
3	1,2	158
4	1.2	167
5	0,6	54
6	2,8	437
7	2,2	366
8	2,2	50
9	2,3	215
10	i,3	*r J
11	1,4	125
i2	3,5	762
13	3,2	533
14	3,0	710
15	3,6	688
16	0,5	41
17	0,7	157
18	1,0	188
19	5,2	>1000
20	4,8	763
CCI₄ allein	1,6 _v	38
Liponsäureamid	-0	35
A^stholtrithion
Kontrolle

10

Bekanntlich ruft Tetrachlorkohlenstoff zentrilobuliire Nekrosen an der Leber hervor. Die unter Verwendung von Tetrachlorkohlenstoff erhaltenen Versuchsergebnisse zeigen, daß sämtliche erfindungsgemäßen Lebermittel eine deutliche Schutzwirkung bei akuten Leberschädigungen hervorrufen. Sie sind in ihrer Wirksamkeit mit Liponsäureamid und Anethol-trithion, zwei handelsüblichen Arzneistoffen zur Behandlung von Leberkrankheiten, vergleichbar.

Die Dosis der Arzneistoffe hängt vom Grad der Leberschädigung ab. Bei leichteren Leberschäcligungen kann die Wirkstoffdosis verringert werden.

Beispielsweise wurde festgestellt, daß die erfindungsgemäßen Mittel noch in Dosen von 1 bis 2 mg/kg wirksam sind, wenn die an die Versuchstiere verabfolgte Tetrachlorkohlenstoffmenge 0,005 ml/kg beträgt.

3»Schutzwirkung gegen akute Leberschädigungen

mit zentrilobulärer Nekrose

(Versuchsmodell unter Verwendung von

Dimethylnitrosamin und Chloroform)

Dimethylnitrosamin und Chloroform verursachen ähnlich wie Tetrachlorkohlenstoff LebefschädigUngeh mit zentrilobulärer Nekrose.

Methode

Die zu untersuchenden Verbindungen oder Anetholtrithion werden 5 Tieren in einer Gruppe in Dosen von 100 mg/kg oral verabfolgt.

6 Stunden danach wird das Hepatotoxin in den in Tabelle III angegebenen Dosen und auf die dort angegebene Verabreichungsart gegeben. 20 Stunden später bzw. im Fall von Dimethylnitrosamin 15 Stunden später werden die Tiere getötet und Blutproben gewonnen. Die Hepatotoxizität wird jeweils bestimmt. Daraus läßt sich die Wirksamkeit der Verbindungen der Erfindung feststellen.

25

30

Tabelle III

Hepatotoxin

Tier

• Dosis Verabreichungsweg

Index der Hepatotoxizität

Dimethylnitrosamin männliche Mäuse 0,05 i.p.

(4 Wochen alt, dd-Stamm) Chloroform ibid. 0,2 oral

p-GPT-Aktivität
BSP-Test

p-GPT-Aktivität

Tabelle IV

Schutzwirkung gegen akute Leberschädigungen mit zentrilobulärer Nekrose

Hepatotoxin	Index der Hepatotoxizität	Kontrolle	j Positive	Verbin	Verbin	Anetholtrithion
			\ Kontrolle*)	dung 3**)	dung 4**)
Dimethyl	p-GPT-Aktivität	15 ±1,5	:>6oo	198±39	172 ±46	192 ±54
nitrosamin	(Karmen-Einheiten)
	BSP	15+0,3	"1,2 ±5,9	16,1 ±3,7	12,8 ±2,3	17,6 ±2,7
	(mg/dl)
Chloroform	p-GPT-Aktivität	20 ±3,0	*32 ±58	43 ±7,2	35 ±8,0	>1000

*): Es wird nur das Hepatotoxin verabfolgt.
**): Nach der Behandlung mit Verbindung 3, Verbindung4 oiler Anethol-trithion wird das Hepatotoxin verabfolgt.

Wie sich aus Tabelle IV ergibt, wird durch Verabfolgung der Verbindungen 3 und 4 der index ckr Hepatotoxizität normalisiert, was die SchutzwirkLng dieser Verbindungen bei Leberschädigungen beweist. In bezug auf ihre Wirksamkeit sind die erfindungsgemäßen Arzneimittel Anethol-trithion überlegen.

Ebenso wurde die Schutzwirkung gegen akute Leberschädigung mit zentrilobulärer Nekrose unter

Verwendung von Chloroform mittels der Verbindung 2 Sowie der Vergleichsverbindung Thioctsäure und Thioctsäureamid untersucht. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle IVa enthalten:

Tabelle IVa

llepatoloxin

Chloroform

Index der Hepatoloxizität

Konirolle

Positive Kontrolle

Verbindung 2

Thioctsäure

Thioctsäureamid

p-GPT-Aktivität

21± 3
4!4± 99

40 ± 12
466 + 155
620 ±130

4.Therapeutische Wirkung

bei chronischen Leberschädigungen

(Versuchsmodell unter Verwendung

von Thioacetamid)

Thioacetamid (als TAA abgekürzt) verursacht wie Tetrachlorkohlenstoff bei Tieren Leberschädigungen und wird häufig als chemisches Mittel zur Erzeugung von Leberschädigungen und Fettleber verwendet. Zur Induktion von Leberschädigungen wird TAA wiederholt an die Versuchstiere verabfolgt. Anschließend werden die Arzneimittel der Erfindung verabreicht, um ihre Wirkung gegen chronische Leberschädigungen festzustellen.

25

Methode

Gruppen von männlichen Rallen (Sprague Dawley-Stamm) werden folgendermaßen behandelt:

_r> Gruppe A: Den Ra'ten werden innerhalb von 36 Tagen 12mal je 100 mg/kg Thioacetamid (in Abständen von 3 Tagen) verabfolgL Anschließend erhalten die Tiere 10 Tage eine normale Diät.

ίο Gruppe B: Den Ratten werden innerhalb von 36 Tagen 12mal je 100 mg/kg Thioacetamid (in Abständen von 3 Tagen) verabfolgt. Anschließend erhalten sie 10 Tage die Normaldiät und 0,2 Prozent der Verbindung 4.

Gruppe C: Den Ratten werden innerhalb von 36 Tagen 12mal je 100 mg/kg Thioacetamid (in Abständen von 3 Tagen) verabfolgt Anschließend erhalten sie 10 Tage die Normaldiät und 0,2 Prozent der Verbindung 2.

i*üp|JC \j\ Den ι\αιΐ£Π

-U_nIU .,„„ ICTnnon

12mal je 100 mg/kg Thioacetamid (in Abständen von 3 Tagen) verabfolgt. Anschließend erhalten sie 10 Tage die Normaldiät plus 0,2 Prozent Anethol-trithion.
Gruppe E: Die Tiere dieser Kontrollgruppe erhalten die Normaldiät.

In entsprechenden Abständen werden 5 Rillten aus jeder Gruppe zur Durchführung des BSP-Tests (Sulfobromphthalein-Test) getötet. Die Ergebnisse dieser Untersuchung werden als Menge (mg) von in 1 dl Plasma verbleibendem BSP angegeben.

Tabelle V

Therapeutische Wirkung auf chronische Leberschädigungen

Töten der Tiere

Gruppe Λ
(mg/dl)

Gruppe B Gruppe C

Gruppe D Gruppe E

24 SId. nach 4maliger Verabfolgung

»viii inn

24 Std. nach 8maligcr Verabfolgung
von TAA

24 Std. nach 12maliger Verabfolgung
von TAA

Nach Verabfolgung der Arzneistoffe

2 Tage

5 Tage
10 Tage

12,7 ±3,7
8,7 ±1,9
1,4 ±0,4

18,2 ±2,6
16,8 ±5,2
17,3 ±4,4

7,1 ±0,8 3,2+0,6 0,6 ±0,2 7,5 ±1,2
3,8 ±0,4
0,7 ±0,1

9,7 ±4,1
7,3+3,4
0,9 ±0,1

0,3 ±0,1

0,8 ±0,1

0,4 ±0,1 0,6+0,1

Durch die wiederholte Verabfolgung von TAA steigt die BSP-Konzentration im Blut auf 16 bis 19 mg/dl. Da diese Konzentration unvei ändert bleibt, wird angenommen, da.ß die Ratten einen einer chronischen Leberschädigung verwandten Zustand erreicht haben. Nach der Verabfolgung von TAA erholen sich die Gruppen B und C, denen die Lebermittel der Erfindung verabfolgt worden sind, rascher von der Leberschädigung als die nicht behandelte Gruppe A. Dies zeigt, daß die Arzneimittel der Erfindung bei subakuter oder chronischer Hepatitis oder bei Lebers'chädigungen bei Menschen und Tieren wirksam sind.

5. Wirkung auf den Äthanolspiegel im Blut

Methode

Die zu untersuchenden Verbindungen werden in Olivenöl gelöst oder suspendiert und in Dosen von mg/kg oral an männliche Mäuse vom dd-Stamm verabfolgt Nach 6 Stunden werden 100 mg/kg Äthanol oral gegeben. Zu den angegebenen Zeitpunkten wird Blut aus der Schwanzvene in eine Kapillare entnommen. Das Plasma wird abzentrifugiert Die Äthanolkonzentration im Plasma wird durch Gas-FIüssig-Chromatographie vorn FID-Typ bestimmt Jede Gruppe besteht aus 5 Mäusen.

Tabelle VI

Wirkung auf den Äthanolspiege! im Blut

Zeit	Äthanol konzentration	im Plasma (ppm)	Verbindung 4	Verbindung 10	Verbindung 20
	Kontrolle	Vorbehandlung mit	10± 3	13± 4	15± 2
(min)		Verbindung 2	695 ±122	753± 78	7IO±134
O	27± 17	11± 4	637 ±113	698± 95	652 ±143
5	875 ±203	714 ± 167	410+ 77	451 ±114	404 ± 93
15	810 ± 191	655 ±102	15± 8	12+ 11	I8± 6
30	690 + 214	426±101	N. D.	N. D.	N. D.
60	167 ± 76	15± 10
120	5± 1	N. D.		*ti tftnri* nptinlnri**	nlt~ rVtn nlrtltt KηItπ η
		nicht nachzuweisen
Dis

die mit Veibindungen der Erfindung behandelt worden jihd, ist i'.iedriger als bei den Kontroiltieren. Diese Tendenz ist insbesondere 30, 60 und 120 Minuten nach Verabfolgung von Äthanol ausgeprägt. Dies zeigt, daß die Älhanolmenge bei den behandelten Mäusen rasch abnimmt. Ferner ergibt eine Beobachtung der Mäuse, daß sich die behandelten Tiere offensichtlich rascher delten. Dies zeigt, daß die Stoffwechselfunktion der Leber in bezug auf den Alkoholabbau durch Verabfolgung der Verbindungen der Erfindung stimuliert wird. Daraus kann gefolgert werden, daß die Lebermiltel der Erfindung gleichzeitig dazu beitragen, Alkohol beschleunigt abzubauen, sofern sie in ausreichendem Abstand vor dem Alkoholgenuß verabreicht werden.

6. Wirkung auf den Glucosestoffwechsel Methode

Die zu untersuchenden Verbindungen werden in Olivenöl gelöst und in Dosen von 250 mg/kg an männliche Mäuse vom dd-Stamm oral verabfolgt. 6 Stunden später werden oral 4,0 g/kg Glucose verabfolgt Die gleiche Glucosemenge wird den Kontroiltieren gegeben. 30, 60, 90 und 120 Minuten nach der Glucoseverabfolgung werden den Tieren jeweils 0,02 ml Blut aus der Schwanzvene entnommen. Der Blutzucker wird gemäß dem Verfahren von Somogyi — Nelson gemessen. Jede Behandlungsgruppe besteht aus 5 bis 6 Mäusen.

i \ Tabelle VII	Blutzucker (mg/dl)	im Blut	Verbindung 4	Verbindung 10
! Wirkung auf die Glucosekonzentration	Kontrolle		168 ±20,4	148 ±14,7
! ^zeit		Vorbehandlung mit	280 ±10,8	267 ±21,2
\	145 + 11,8 (100%)	Verbindung 2	215 + 20,1	222 ±18,3
I (min)	311 ±21,9 (214%)	142 ±22,8	164 ±16,5	162 ±14,4
0	290 ± 14,6 (200%)	258 ±17,5	165+15,3	148 ±18,8
j 30	263 ±13,1 (181%)	229 ±18,7
j 60	251 ±13,5 (173%)	183 ±18,1
1 90		150 + 20,4
1 120

Die Blutzuckerwerte der einzelnen Gruppen zeigen nach 30 Minuten ein Maximum, die einzelnen Maxima weisen dabei keinen wesentlichen Unterschied auf. Anschließend zeigen sich jedoch deutliche Unterschiede. Bei den behandelten Gruppen werden die Normalwerte schneller erreicht Dies zeigt, daß durch Verabfolgung der Arzneimittel der Erfindung die Leberfunktion in bezug auf den Glucosestoffwechsel stimuliert wird. Demzufolge bewirken die Arzneimittel der Erfindung gleichzeitig eine Senkung hoher Zuckerspiegel im Blut

Eine Gesamtbetrachtung der geschilderten pharmakologischen Untersuchungen läßt erkennen, daß die erfindungsgemäßen Lebertherapeutika ein umfangreiches Spektrum an Aktivitäten bei der Behandlung von Leberstörungen aufweisen und somit überraschende Vorteile zeigen, welche sie gegenüber Lebermitteln des Standes der Technik, die z.T. zwar im einzelnen eine stärkere Wirksamkeit, aber im allgemeinen ein wesentlich engeres Wirkspektnim besitzen, als wertvoll erscheinen iassen.

Claims

Patentanspruch:

Arzneimittel zur Behandlung von Leberkrankheiten, enthaltend eine 1,3-Dithiaverbindung der allgemeinen Formel I

R¹OC S

C = C (CH₂)„ (I)