DK172879B1 - Silibininholdigt farmaceutisk præparat - Google Patents

Description

i DK 172879 B1

Den foreliggende opfindelsen angår et silibininholdigt farmaceutisk præparat.

Silybum marianum (L.) Gaertn. (Carduus marianus L.) har 5 siden oldtiden været en kendt lægeplante. Af flavolignaner, som forekommer i frugterne af denne plante, har R. Munster isoleret en komponent, silybin, jf. Dissertation R. Munster,

Munchen, 1966. Denne forbindelses kemiske struktur er bestemt af A. Pelter og R. Hånsel, jf. Tetrahedron Letters, London, 10 bind 25, S. 2911-2916 (1968).

Det er kendt, at silybin, der tidligere også blev kaldt silymarin I, er et værdifuldt leverterapeutikum, jf. DE-fremlæggelsesskrift nr. 1.767.666. En teknisk fremgangsmåde 15 til fremstilling af silybin (silymarin I) er eksempelvis beskrevet i DE-fremlæggelsesskrift nr. 1.923.082.

Allerede i 1974 blev der fremsat formodninger om, at silybin omfatter to stillingsisomerer, nemlig silybin og isosilybin, 20 jf. H. Wagner, P. Diesel og M. Seitz, Arzneimittelforschung, bind 24 (4), s. 466-471, 1974. Denne formodning er blevet præciseret og eksperimentelt bekræftet af A. Arnone, L.

Merlini og A. Zanarotti, Journal Chemical Society Chem. comm., 1979, bind 16, s. 696-697. Ifølge dette litteratursted 25 består det kendte silybin af to forskellige forbindelser, nemlig forbindelserne med de nedenfor anførte strukturformler A og B.

~ CHjOH

30 H°v y. o iQf X j/v °CH>

I (I OH OH

OH O

(A) Silibinin

V

i DK 172879 B1 2

OH

OH O (B) hosilybin

De to ovenfor anførte forbindelser A og B er hidtil kun adskilt og fremstillet i analytiske mængder, og der forelig-15 ger modstridende oplysninger om de enkelte isomerers farmakologiske virkninger, jf. V. Quercia, N. Pierini, V.

Valcavi, R.Caponi, S. Innocenti og S. Tedechi, Anal. Chem.

Symp. Ser. 13, side 1-13 (1983). Først betegnes adskillelsen af de to stoffer som tvivlsom, og derpå tilskrives de adski-20 1te stoffer samme farmakologiske virkning i phallodinin-toxikationsmodellen. Dette resultat kan ikke reproduceres med virkeligt rene stoffer.

En fremgangsmåde til isolering af isosilybinfrit silibinin 25 med formlen

0 CH,OH

ho\^oJ^ )C\/och·

I 11 OH OH

OH O

er beskrevet i beskrivelsen til DK-patentansøgning nr.

35 5376/85.

v DK 172879 B1 3

Det har vist sig, at isosilybinfrit silibinin er særdeles velegnet til farmaceutiske formål. Det har overraskende vist sig, at det har væsentlige fordele i forhold til de andre kendte bestanddele i silybum-marianum-ekstrakter. Det 5 er især velegnet til behandling af leverzirrhose og toksiskmetaboliske leverbeskadigelser. Det kan også anvendes til præventiv behandling, således at de beskrevne beskadigelser slet ikke optræder.

10 Det farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen er ejendommeligt ved, at det indeholder isosilybinfrit silibninin med den ovenfor anførte formel, eventuelt i et farmaceutisk bærestof og/eller sammen med et hjælpestof. Det anvendes for det meste systemisk, f.eks. i form af piller, kapsler og opløs-15 ninger, i gængse bærestoffer og eventuelt sammen med almindelige hjælpestoffer. Dagsdosis for et voksent menneske udgør ca. 50-500 mg, afhængigt af patientens tilstand og sygdomssymptomernes sværhedsgrad.

20 Præparatet ifølge opfindelsen samt fremstillingen af isosilybinfrit silibinin illustreres nærmere i de efterfølgende eksempler.

Eksempel 1 25

Silibininholdige kapsler fremstilles på i og for sig kendt måde. Blandingen indeholdt i hver enkelt kapsel har følgende sammensætning:

Silibinin 70 mg 30 Lactose · 1 H20 43,25 mg

Talkum 15 mg

Magnesiumstearat 5 mg

Polysorbat 80 1.75 mg 135 mg 35

Hver enkelt kapselskal har følgende sammensætning: DK 172879 B1 4

Jernoxid-rødt, E 17 0,78 mg

Jernoxid-sort, E 172 0,0312 mg

Titandioxid, E 171 0,78 mg

Gelatine IB.4088 mg 5 Kapselskal + blanding 213 mg

Eksempel 2

Silibininholdige tabletter med nedenstående sammensætning 10 pr. tablet fremstilles på i og for sig kendt måde.

Silibinin 70,0 mg

Kolloidt siliciumdioxid 1,5 mg 85%'s glycerol 2,25 mg

Polysorbat 80 2,5 mg 15 Stearinsyre 2,5 mg

Talkum 2,5 mg

Mikrokrystallinsk cellulose 11,5 mg

Hvedestivelse 23,25 mg

Lactose 1 · H20 114.0 ma 20 230,0 mg

Eksempel 3

Fremstilling af isosilybinfrit silibinin.

25 500 g polyhydroxyphenylchromanonblanding (silymarin I-IV = silymarin I-IV-gruppe, renhed ca. 70%), der er fremstillet som beskrevet i DE-fremlæggelsesskrift nr. 1.923.082, spalte 8, linie 14-19, suspenderes i 2 kg methanol (ca. 2,53 1), 30 og suspensionen opvarmes under omrøring til kogning i 15 minutter. Fra den dannede opløsning udfældes efter dette tidsrum allerede noget silibinin. Derpå afdampes i vakuum 0,75-1,25 kg (ca. 0,96-1,58 1) methanol, og remanensen henstår i 10-28 dage ved stuetemperatur. Det udfældede silibinin 35 frafiltreres og eftervaskes med to gange 50 ml kold methanol.

Efter tørring i vakuum ved 40*C oparbejdes det isolerede rå 5 DK 172879 B1 - silibinin på følgende måde: 60 g rå silibinin opløses i 3 1 teknisk ethylacetat under opvarmning. Derpå tilsættes 20 g aktivt kul, og blandingen 5 omrøres i yderligere 2 timer under tilbagesvalingsbetingelser. Derefter foretages klarfiltrering, og opløsningen inddampes ved 50*C under formindsket tryk til ca. 250 ml. Koncentratet omrøres i 15 minutter under anvendelse af et ultra-turraxapparat, og under omrøring tilsættes 25 ml methanol.

10 Derefter henstår blandingen natten over ved stuetemperatur.

Inden frasugningen af det udfældede silybin foretages endnu en gang omrøring i 5 minutter ligeledes ved hjælp af et ultra-turraxapparatur. Det frasugede bundfald eftervaskes med 2 gange 50 ml ethylacetat og tørres i et vakuumtørreskab 15 natten over ved 40*C. Derefter formales produktet og efter-tørres under de samme betingelser i 48 timer.

> DK 172879 B1 6

Silibininet fremstillet ifølge eksempel 3 har følgende fysisk-kemiske data: 5 1H-NMRr pyridln-dc;; 100 MHz] «[ppm] 3,79 s 3H OCH3

3,8-4,2 m IH CH2-0H

4,25-4,40 m IH 2Ή

5,05 d(J = 11 Hz) IH 3H

5,39 d(J = 8 Hz) IH 3Ή

5,48 d(J = 11 Hz) IH 2H

6,41 d(J = 2 Hz) IH 6H

6,51 d(J = 2 Hz) IH 8H

7,1-7,6 6H arom. H

13C-NMRrpyridin-d^; 25,18 MHz 1 C-Atom «[ ppm ] 4 198,43 7 168,85 5 165,06 9 163,75 16 149,89 17 148,82 4' 145,05 3' 144,71 1' 131,33 14 128,45 6' 123,83 19 121,83 2' 117,50 5' 117,15 18 116,62 15 112,11 10 101,61 6 97,56 8 96,27 2 84,31 12 79,97 13 77,13 3 73,36 11 61,48 20 55,99

Smp.: 165-168“C i 180*0 (sønderdeling) UV: Xmax = 288 nm; log f = 4,34 IR (KBr): 3450 cm-1(OH), 1635 ^-^-(0=0), 1510 cm"1.

j '3 DK 172879 B1 7

Kliniske forsag med sillblnin.

Toksiske leverskader har i de sidste årtier taget et overordentligt stor omfang. De hyppigste årsager til disse skader 5 er nu som før alkohol.

Ved kontrollerede undersøgelser har man påvist silibinins overlegne virkning i forhold til placebobehandling eller behandling med sammenlignings forbindelser. Ved dobbeltforsøg 10 med 66 patienter med alkoholtoksiske leverskader foretages randomiseret afprøvning af silibinin (n - 31) mod placebopræparat (n - 35).

Ved statistisk behandling af forsøgsresultaterne viser det 15 sig, at silibinin har en signifikant bedre virkning i forhold til placebopræparatet. Især skal fremhæves den væsentlige kortere helbredelsestid i forhold til helbredelsestiden opnået med placebopræparatet. Ved et andet dobbeltblindforsøg med 76 patienter, hvoraf 39 behandles med silibinin og 37 20 med et kontrolpræparat, er resultaterne opnået med silibinin signifikant bedre end resultaterne opnået med kontrolpræpa-raterne.

Ved de levertoksiske indvirkninger af narkose i forbindelse 25 med operationer af maveorganeme er det påvist, at den præoperative indgivelse af silibinin signifikant sænker den postoperative forøgelse af leverenzymerne i blodet. Også de i dag stadig oftere af visse lægemidler inducerede leverskader forhindres effektivt ved hjælp af silibinin. Dette kan 30 påvises ved hjælp af en phenylhydantoin-induceret hepatose, hvor der til trods for den fortsatte ordinering af det ubetinget nødvendige, krampeforhindrende medikament ved samtidig indgift af silibinin opnås normalisering af samtlige labo-ratorieværdier i løbet af kort tid.

35

Andre undersøgelser af patienter med skizofreni og svære DK 172879 B1 8 leverskader som felge af ordinering af chlorpromazin viser ligeledes den positive virkning af silibinin. Andre forseg omhandler forebyggelsen af levebeskadigelser fremkaldt af f.eks. chloroquin eller asparaginase. Ved erhversbetingede 5 leverskader har man hos alle patienterne kunnet forbedre de patologisk forøgede laboratorieresultater uafhængigt af den pågældende årsag eller af eventuelle sygdomme.

Desuden er der tilstrækkelig indikation af, at silibinin 10 også ved kronisk-inflammatoriske leversygdomme og lever-zirrhose fremkalder væsentlige forbedringer. Man har eksempelvis behandlet patienter med leverzirrhose ved et langtids-I forsøg med et randomidiseret dobbeltblindforsøg, ved hvilket silibinin afprøves mod et placebopræparat. Kriteriet for 15 bedømmelsen af det terapeutiske resultat var ført og fremmest overlevelsestiden. Her viste silibinin en tydelig overlegenhed i forhold til behandlingen med placebopræparatet.

Virkningssammenligning mellem silibinin og isosilybin og 20 silybin (silibinin/isosilybinblanding) ved forsøget med phalloidin- og praseodymintoksikation hos mus efter intravenøs indgift.

Den antihepatotoksiske virkning af silibinin, isosilybin og 25 silybin som H-methylglucaminsalte undersøges i doser på 50 og 100 mg/kg, beregnet på silibinin, ved forsøgsmodellen med phalloidin- og praseodymforgiftning af mus efter intravenøs indgift. Indgivelsen af forsøgsforbindelsen foretages 1 time inden indgivelsen af phalloidin eller 1 time 30 før og 6 timer, 24 timer og 48 timer efter indgivelsen af praseodym. Ved phalloidinforgiftningen bedømmes overlevelsesraten, og ved praseodymforgiftningen bedømmes forskellige serum- og leverparametre 72 timer efter intoksikationen.

35 Ved phalloidin-intoksikationen udgør overlevelsesraten efter silibinin i begge doser 100%, med de øvrige stoffer opnås DK 172879 B1 9 der ikke en ovérlevelsesrate på over 40% i forhold til de ubehandlede, beskadigede kontroldyr.

Isosilybin viste sig i sammenhæng med praseodym-intoksika-5 tionen som uforenelig, således at dosen på 100 mg/kg måtte opdeles i to deldoser.

Claims (2)

1. 0 CHjOH
2. 10. II OH OH OH O eventuelt i et farmaceutisk bærestof og/eller sammen med et hjælpestof. : j J /