KR20110061976A

KR20110061976A - 도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20110061976A
Application number: KR1020090118532A
Authority: KR
Inventors: 김은주; 김영섭; 유시용; 차미란; 유대석; 정이숙
Original assignee: 한국화학연구원
Priority date: 2009-12-02
Filing date: 2009-12-02
Publication date: 2011-06-10

Abstract

본 발명은 도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 도라지에 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 가하여 도라지 추출물을 수득하는 단계(단계 1); 및 상기 단계 1에서 수득한 도라지 추출물로부터 분자량이 500 내지 5,000인 분리막을 이용하여 도라지 막분리 추출물을 수득하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 심근경색율을 감소시킬 뿐만 아니라, 지질 과산화물 농도를 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과가 우수하므로 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

도라지, 도라지 추출물, 심근경색, 심근경색율, 지질 과산화물

Description

도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating myocardial infarction containing the membrane-separated extracts of platycodon grandiflorum as an active ingredient}

본 발명은 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

심근경색(myocardial infarction)은 4, 50대 성인 돌연사의 원인 1위를 차지하는 치명적인 질환으로서 날로 증가하는 추세이다. 허혈성 심장질환 중에서도 안정성 협심증과는 병태생리가 다르고 임상적 예후도 다르다. 안정성 협심증의 경우 반복적이며 특징적인 흉통으로 또는 통상적인 운동부하검사로 병을 예측 진단하고 치료할 수 있으나, 심근경색의 경우에는 소위 취약성 경화반(vulnerable plaque)이 갑자기 파열되어 관상동맥의 혈전성 폐색으로 임상 증상이 발현되는 경우이다. 따라서 심근경색은 통상적인 진단방법이나 혈청지질이나 현재까지 알려진 바이오마커 변화로는 예측이 불가능하다. 이러한 취약성 경화반을 찾을 수 있는 방법은 현재로 서는 혈관 내 심초음파 방법을 이용하는 등 침습적 방법뿐이다. 따라서, 발병 전에 이러한 변화를 예측할 수 있는 바이오마커가 없기 때문에 조기 진단이 매우 어려운 질환이라고 할 수 있다.

심근경색은 심장의 관상동맥 혈관내강이 콜레스테롤과 임파구의 괴사덩어리인 동맥경화반의 축적과 성장으로, 병변이 성장하면서 혈관내강이 좁아져 생기는 관상동맥질환(협심증 등)으로부터 유래되나, 병변의 섬유성막(fibrous cap)이 매우 불안정하여 쉽게 병변의 파열(rupture)이 일어나고 혈전의 형성이 일어나 혈관의 내강이 완전히 막히는 현상(thrombosis)으로 인하여 생긴다. 일단 심근경색이 발생하면 그 혈관의 하위지점에 있는 근육들은 산소와 영양이 공급되지 않아 심장근육의 괴사가 일어난다. 따라서, 심근경색은 죽상경화로 시작되어 장기적으로 진행 발병하나, 병변이 안정적으로 형성되어 섬유성막이 쉽게 파열되지 않는 협심증(angina pectoris)과 달리, 병변의 형성과 파열이 매우 쉽게 진행되는 취약성 동맥경화반(vulnerable plaque)의 형성이라는 점에서 협심증과 차이가 있다.

심근 경색 후의 사망은 경색 발생 수 시간 이내에 가장 많이 일어나는데, 1시간 이내에 약 50%의 환자가 사망하고, 24시간 이내에 약 80%의 환자가 사망하는 것으로 알려져 있다. 그러므로 심근경색의 치료가 빨리 시작될수록 심근 경색에 의한 환자의 사망률을 줄일 수 있다.

또한, 심근경색증 발생 후 재발을 예방함으로써 심근경색증 후 장기 사망률과 이환율을 줄일 수 있다. 심근경색의 재발을 예방하는 약물로는 아스피린, 베타 차단제, ACE 저해제, 항혈전제 등이 알려져 있다. 그러나 아스피린의 경우 알러지, 내성 등의 문제점이 있으며, 항혈전제의 경우에는 출현 위험성이 증가하는 문제점이 있다.

미국등록특허 제5,914,242호(Honkanen et al)는 심장 허혈증 발병 후 환자에게 특정의 세린/트레오닌 포스파타제 효소 억제제 및 관련 폴리펩티드를 투여하는 것을 포함하여, 심근 경색증을 저하시키는 방법을 개시하고 있다. 그러나, 이러한 효소와 폴리펩티드는 값이 비싸고, 약제학적 용도를 위해 제조 및 정제하는 공정이 복잡하다는 문제점이 있다. 대한민국등록특허 제598133호는 심근경색, 부정맥 또는 협심증과 같은 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물로 아지리딘카보닐구아니딘 유도체를 개시하였다. 대한민국공개특허 제2008-88764호는 허혈성 질환의 예방 및 치료에 유효한 크로멘-4-온 화합물을 개시하였다. 그러나, 종래 심근경색의 예방 및 치료용 조성물들은 유기합성에 의해 생성된 것이 대부분이다.

한편, 도라지(Platycodon grandiflorum A. DC)는 오랫동안 식용 및 약용으로 사용되어 왔으며, 이의 주요 약리성분인 테르펜계 사포닌은 진해, 거담작용, 중추신경억제작용(진정, 진통, 해열효과), 염증에 대한 항염증작용, 항궤양 및 위액분비억제작용, 혈관을 확장하여 혈압을 낮추는 항콜린작용, 혈당강하작용 등이 있는 것으로 밝혀져 있다(Toshiyuki Akiyama et al., Chem . Pharm . Bull., 20, 1952(1972); Akihito Tada et al., Chem. Pharm. Bull., 23, 2965(1975); Hiroshi Ishii et al., J. Chem. Soc., Perkin trans I, 661(1984); Eun Bang Lee, J. Pharm. Soc. Kor., 19, 164(1975)).

또한, 도라지의 열수 및 에탄올 추출물은 곰팡이의 아프라톡신을 억제하며, 이눌린 분획은 식균 작용과 고형 암 및 복수 암에 대한 강력한 항종양효능이 있고, 40% 도라지 엑기스는 알코올흡수 억제작용이 있는 것으로 알려져 있다(Hitokoto H.S. et al., Mycopathologia, 66, 16(1979); Michinori Kubo, et al., Shoyakugaku Zasshi, 40, 367(1986); Takaharu Nagao et al., Shoyakugaku Zasshi , 40, 375(1986); JPA 60-89427(1985); JPA 3-264534(1991)).

또한 최근에 밝혀진 효능으로는 고지혈증 치료 활성(Kyung-sook Kim et al., J. Nur. Sci . Vitaminol , 41, 485(1995)), 간 기능 보호 활성(Jeong H. K., et al., CANCER LETTERS, 174, 73(2001)) 및 면역기능 조절 활성(Sang B. Han et al., International Immunopharmacology , 1 , 1969(2001); Jeong H. K., et al., CANCER LETTERS, 166, 17(2001); Jeong H. K., et al., International Immunopharmacology, 1, 1141(2001))을 갖는 것으로 보고된 바 있다. 그러나, 종래 도라지의 추출물의 심근 경색 예방에 효과는 알려진 바가 전혀 없다.

이에 본 발명자들은 자연에 존재하는 천연 성분 중에서 심근 경색을 예방 또는 치료할 수 있는 물질을 개발하기 위해 연구하던 중, 도라지 막분리 추출물이 심근경색율을 감소시킬 뿐만 아니라, 지질 과산화물 농도를 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과를 나타내어 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용 하게 사용할 수 있음을 알아내고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 심근경색율을 감소시킬 뿐만 아니라, 지질 과산화물 농도를 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과가 우수한 도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 심근경색율을 감소시킬 뿐만 아니라, 지질 과산화물 농도를 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과가 우수하므로 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명은 도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 도라지 막분리 추출물은

도라지에 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 가하여 도라지 추출물을 수득하는 단계(단계 1); 및

상기 단계 1에서 수득한 도라지 추출물로부터 분자량이 500 내지 5,000인 분리막을 이용하여 도라지 막분리 추출물을 수득하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

이하 본 발명에 따른 상기 제조방법을 단계별로 더욱 구체적으로 설명한다.

먼저, 본 발명에 따른 상기 단계 1은 추출용매로 도라지 추출물을 수득하는 단계이다.

상기 도라지는 생도라지, 건조도라지 또는 이의 건조물을 분쇄한 분말 등 제한 없이 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 도라지 추출물은 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착수지를 이용하는 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용하여 제조할 수 있으며, 바람직하게는 가온하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하여 제조할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 추출물은 추출용매로 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출될 수 있다. 상기 유기용매는 C₁ 내지 C₄의 알코올, 초산에틸, 염화메틸렌 및 클로로포름으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합용매인 것이 바람직하고, C₁ 내지 C₄의 알코올인 것이 더욱 바람직하고, 메탄올 또는 에탄올로 추출하는 것이 가장 바람직하다. 상기 추출용매는 도라지 중량의 2배 내지 10배로 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 3배 내지 5배로 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

일례로 본 발명에 따른 도라지 추출물은 도라지 분말을 추출용기에 넣고 추출용매를 넣고, 일정시간 방치한 다음 거름종이 등으로 여과하여 알코올 추출물을 얻을 수 있다. 추출시간은 2 내지 10시간인 것이 바람직하며, 4 내지 8시간인 것이 더욱 바람직하다. 이후에 원심분리하는 과정을 수행하여 고형분을 제거한 후, 감압농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 거칠 수 있다.

다음으로, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 수득한 도라지 추출물로부터 분자량이 500 내지 5,000인 분리막을 이용하여 도라지 막분리 추출물을 수득하는 단계로서, 수득한 도라지 막분리 추출물을 감압, 농축하는 과정을 추가로 수행할 수 있다.

상기 도라지 막분리 추출물은 분자량이 500 내지 5,000인 분리막을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 분리막의 분자량이 500 미만인 경우에는 올리고당을 함유하는 물질이 제거되지 않는 문제점이 발생하며, 상기 분리막의 분자량이 5,000 초과 인 경우에는 이눌린 등을 함유하는 물질이 제거되지 않는 문제점이 발생한다.

본 발명에 따른 상기 도라지 막분리 추출물은 심근경색 보호 효과 측정 결과, 아무런 약물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 심근경색율을 약 31% 감소시킴으로써 심근경색 보호 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 상기 도라지 막분리 추출물은 지질 과산화물 농도 변화 효과 측정 결과, 아무런 약물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 MDA 농도를 약 43% 감소시킴으로써 심근경색 보호 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 심근경색율을 감소시킬 뿐만 아니라, 지질 과산화물 농도를 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과가 우수하므로 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 플라티코시드 E(Platycoside E) 및 플라티코딘 D(Platycodin D)를 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 플라티코딘 D는 플라티코딘 D₂, 플라티코딘 D₃, 플라티코딘 D 등의 성분으로 이루어진다.

나아가, 본 발명은 플라티코시드 E를 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/ 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.

상기 도라지 막분리 추출물을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다. 이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 막분리 추출물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다.

상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.

본 발명의 상기 도라지 막분리 추출물을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물을 단위 용량 형태로 제형화하는 경우, 유효성분으로서 막분리 추출물을 약 0.1 내지 1,500 ㎎의 단위용량으로 함유되는 것이 바람직하다. 투여량은 환자의 체중, 나이 및 질병의 특수한 성질과 심각성과 같은 요인에 따라 의사의 처방에 따른다. 그러나, 성인 치료에 필요한 투여량은 투여의 빈도와 강도에 따라 하루에 약 1 내지 500 ㎎ 범위가 보통이다. 성인에게 근육 내 또는 정맥 내 투여 시 일 회 투여량으로는 분리하여 하루에 보통 약 5 내지 300 ㎎의 전체 투여량이면 충분할 것이나, 일부 환자의 경우 더 높은 일일 투여량이 바람직할 수 있다

이하 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다,

단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 제조예 1> 도라지 막분리 추출물의 제조

단계 1: 도라지 추출물의 제조

도라지 분말 1,000 g에 메탄올 5 ℓ를 가하고 수욕 상에서 6시간 동안 2회 환류 추출한 후 추출액을 원심 분리(10,000 × g, 30 분)하여 고형분을 제거하였다. 상등액을 40 ℃에서 감압 농축하여 도라지 메탄올 추출물 360 g을 수득하였다.

단계 2 : 도라지 막분리 추출물의 제조

상기 단계 1에서 얻은 도라지 메탄올 추출물 62 g을 증류수 5,000 ㎖에 녹여 잔류물이 100 ㎖가 될 때까지 한외여과막(ultra-filtration membrane, Pellicon 2 TFF system, Millipore USA, 5 KDa)을 통과시켰다. 남은 잔류물에 500 ㎖의 물을 추가하여 잔류물의 용량이 100 ㎖ 이하가 될 때까지 계속 한외여과막(Pellicon 2, 5 KDa)을 통과시켰다. 한의여과막을 통과한 여과물(MW < 5,000)을 모아 잔류물이 100 ㎖ 이하가 될 때까지 나노여과막(분자량 한계 500 : nano Filtration Process Scale, Low)을 통과시켰다. 나노여과막을 통과하지 못한 잔류물에 물 1,000 ㎖을 추가한 후 잔류물이 100 ㎖ 이하가 될 때까지 반복하여 나노여과막(분자량 한계 500: nano Filtration Process Scale, Low)을 통과시켰다. 잔류물을 감압, 농축하여 분자량이 500 내지 5,000인 도라지 막분리 추출물 23 g을 수득하였다.

< 실시예 1> 도라지 막분리 추출물의 함유 성분 측정

본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물의 함유 성분을 측정하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.

제조예 1의 도라지 막분리 추출물에 대하여 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 함유 성분을 측정하였다. 분석방법으로 실험 기기는 NS-3000i 일체형 고성능 액체크로마토그래피 시스템(integrated HPLC Gradient type(Futecs.co.Ltd))에 광 산란 검출기(Evaporation light scattering detector(ELSD, USA, Softa))를 장착하여 분사구 온도(spray): 25 ℃, 이동 및 검출 온도(Drift, Detector chamber): 70 ℃, 주입 가스 압력(Gas Pressure): 질소 가스(N2 gas): 55.0 psi, 감도(Filter): 4, 역상 칼럼 4.6 × 150 ㎜, 3 ㎛(Chemco) 으로 하고, 온도는 40 ℃를 유지하여 기기 조건을 설정하고 이동상으로는 하기 A와 B 용매를 기울기(gradient) 용리방법을 이용하였다.

A : 50 mM 아세트산 암모늄 : 아세토니트릴 : 메탄올(85 : 10 : 5 v/v%)

B : 50 mM 아세트산 암모늄 : 아세토니트릴 : 메탄올(55 : 40 : 5 v/v%)

유속(flow rate) : 0.5 ㎖/분,

전체 분석 시간(total run time) : 98분

상기 실험에 대한 측정결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물의 경우에는 머무름 시간 20분 이후에 Deapio-platycoside E, Platycoside E, Deapio-platycodin D₃, Platycodin D₃, polygalacin D₂, platycodin acid A, platycodin D₂, platycodin D, 2〃-O-Acetylpolygalacin D₂ 등 도라지의 대표적인 사포닌 성분들이 순서적으로 잘 검출되고 있으며 머무름 시간 5분 이내에서는 도라지의 당 성분들의 피크들이 복잡하게 나타나는 것을 알 수 있다.

< 실시예 2> 도라지 막분리 추출물의 심근경색 보호 효과 측정

본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물의 심근경색 보호 효과를 측정하기 위해 심근경색 동물모델을 이용하여 하기의 실험을 수행하였다.

실험동물(수컷 S.D. rat 250 내지 300 g)은 (주)샘타코로부터 공급받았고 1주일간의 안정화한 후 실험에 사용하였다. 수컷 흰쥐(S.D)를 펜토바르비탈 나트륨(75 ㎎/㎏)으로 마취하여 전체 실험기간 동안 체온조절용 기기(heating blanket)에 연결된 직장에 삽입한 체온 측정용 탐침(rectum probe)을 이용하여 체온을 37.5±0.5 ℃로 일정하게 유지하였다. 대퇴정맥은 약물주입을 위해서, 대퇴동맥은 혈압측정을 위해서 관삽입술을 하며, 호흡기를 60 회/분, 10 ㎖/㎏으로 실행하였다. 갈비뼈 3-4번 사이를 제거한 후 좌심실 하행성 관상동맥(left anterior coronary artery, LAD)를 봉합사(4.0)로 뜬 후 45분 동안 결찰시켜 허혈상태를 만들어 준 후, 90분 동안 재관류하였다. 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물을 수술 전 30분에 300 및 500 ㎎/㎏로 1회 경구투여(동물 수 6마리)하고 LAD를 봉합사로 묶어 45분 동안 허혈상태를 유지시킨 후 90분 동안 다시 재관류하였다. 이때, 대조군으로는 아무런 약물을 처리하지 않은 군을 사용하였다. 재관류 한 후 발생된 심장 경색 크기를 측정하기 위해 2% 에반스 블루 용액(Evan's Blue)을 주입하고, 심장을 잘라낸 후 1% TTC(triphenyltetrazolium chlorid)로 염색하였다. 이때, 허 혈부위 중에서도 경색이 생긴 심근은 TTC에 의해 염색이 되지 않으나 경색이 일어나지 않은 심근은 붉은 벽돌색으로 염색이 되므로 구분이 가능하다. 심근경색 위험부위(area at risk)와 경색 영역(infarct zone) 크기를 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 심근경색율(%)을 계산하였다. 심근경색율이 작을수록 심근경색 보호효과가 우수함을 나타낸다.

심근경색율(%) = (경색영역 / 심근경색 위험부위) × 100

그 결과를 도 2 및 도 3에 나타내었다. 보다 상세하게는, 도 2에 잘라낸 심장의 이미지를 나타내었으며, 도 3에 심근경색율을 나타내었다. 또한, 상기 심근경색 동물모델의 신뢰성을 입증하기 위해 심근경색 위험부위/좌심실 면적(%)을 측정하여 도 3에 나타내었다. 이때, 대조군과 약물 투여군의 심근경색 위험부위/좌심실 면적(%)의 값이 유의성이 없는 것은 좌심실 하행성 관상동맥의 동일부분을 묶었음을 증명하는 것으로 이를 통해 심근경색 동물모델의 신뢰성을 증명할 수 있다.

도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물을 투여한 경우에는 아무런 약물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 경색부위가 현저히 감소함으로써 심근경색 보호 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

도 3에 나타난 바와 같이, 아무런 약물을 처리하지 않은 대조군의 심근경색율은 53.41%이고, 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물을 300 ㎎/㎏ 투여한 경우에는 심근경색율이 48.43%이며, 500 ㎎/㎏ 투여한 경우에는 심근경색율이 36.39%인 것을 알 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물을 500 ㎎/㎏ 투여한 경우에는 아무런 약물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 심근경색율이 약 31% 감소함으로써 심근경색 보호 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

도 4에 나타난 바와 같이, 심근경색 위험부위/좌심실 면적(%)이 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물을 투여한 경우 및 아무런 처리를 하지 않은 대조군 모두 유사한 값을 나타냄으로써 상기 심근경색 동물모델의 신뢰성을 입증할 수 있다.

이로부터 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 심근경색율을 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

< 실시예 3> 도라지 막분리 추출물의 지질 과산화물 농도 변화 효과 측정

심근경색 등의 심혈관질환 환자에서 지질 과산화물 농도가 증가되는 것으로 알려져 있다. 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물의 지질 과산화물 농도 변화 효과를 측정하기 위해 심근경색 동물모델을 이용하여 하기의 실험을 수행하였다.

실험동물(수컷 S.D. rat 250 내지 300 g)은 (주)샘타코로부터 공급받았고 1주일간의 안정화한 후 실험에 사용하였다. 수컷 흰쥐(S.D)를 펜토바르비탈 나트륨(75 ㎎/㎏)으로 마취하여 전체 실험기간 동안 체온조절용 기기(heating blanket)에 연결된 직장에 삽입한 체온 측정용 탐침(rectum probe)을 이용하여 체온을 37.5 ±0.5 ℃로 일정하게 유지하였다. 대퇴정맥은 약물주입을 위해서, 대퇴동맥은 혈압측정을 위해서 관삽입술을 하며, 호흡기를 60 회/분, 10 ㎖/㎏으로 실행하였다. 갈비뼈 3-4번 사이를 제거한 후 좌심실 하행성 관상동맥(left anterior coronary artery, LAD)를 봉합사(4.0)로 뜬 후 45분 동안 결찰시켜 허혈상태를 만들어 준 후, 30분 동안 재관류하였다. 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물을 수술 전 30분에 500 ㎎/㎏로 1회 경구투여(동물 수 5마리)하고 LAD를 봉합사로 묶어 45분 동안 허혈상태를 유지시킨 후 30분 동안 다시 재관류하였다. 이때, 대조군으로는 아무런 약물을 처리하지 않은 군을 사용하였다. 재관류 후 지질 과산화 정도를 나타내는 말론디알데히드(malondialdehyde, MDA)를 측정하기 위해 복대동맥에서 혈액 0.6 ㎖를 채취한 후, 2500 g, 4 ℃에서 10분 동안 원심분리하였다. 원심분리한 후, 상층의 혈장을 취하여 측정 전까지 -80 ℃에서 보관하였다. MDA 측정은 MDA 측정 키트(Northwest Life Sciences사, USA)를 사용하여 532 ㎚ 흡광도에서 측정하였고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 제조예 1의 도라지 막분리 추출물을 투여한 경우에는 아무런 약물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 MDA 농도가 약 43% 감소함으로써 심근경색 보호 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

이로부터 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 지질 과산화물 농도를 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

그러므로 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 심근경색율을 감소시킬 뿐만 아니라, 지질 과산화물 농도를 감소시킴으로써 심근경색을 보호하는 효과가 우수하므로 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<제제예 1> 산제의 제조

도라지 막분리 추출물 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<제제예 2> 정제의 제조

도라지 막분리 추출물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제 를 제조하였다.

< 제제예 3> 캡슐제의 제조

도라지 막분리 추출물 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<제제예 4> 주사제의 제조

도라지 막분리 추출물 100 ㎎

만니톨 180 ㎎

Na₂HPO₄ㆍ2H₂O 26 ㎎

증류수 2974 ㎎

통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.

도 1은 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물의 크로마토그램이고(1: Deapio-platycoside E, 2:Platycoside E, 3:Deapio-platycodin D₃, 4:Platycodin D₃, 5:polygalacin D₂, 6:platycodin acid A, 7:platycodin D₂, 8:platycodin D, 9:2〃-O-Acetylpolygalacin D₂);

도 2는 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물의 심근경색 보호 효과를 측정하기 위해 잘라낸 심장 이미지이고;

도 3은 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물의 심근경색 보호 효과를 측정하기 위해 심근경색율을 나타낸 그래프이고;

도 4는 심근경색 동물모델의 신뢰성을 입증하기 위해 심근경색 위험부위/좌심실 면적(%)을 측정한 그래프이고;

도 5는 본 발명에 따른 도라지 막분리 추출물의 지질 과산화물 농도 변화 효과를 측정한 그래프이다.

Claims

도라지 막분리 추출물을 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 도라지 막분리 추출물은

도라지에 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 가하여 도라지 추출물을 수득하는 단계(단계 1); 및

상기 단계 1에서 수득한 도라지 추출물로부터 분자량이 500 내지 5,000인 분리막을 이용하여 도라지 막분리 추출물을 수득하는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 방법으로 제조되는 것을 특징으로 하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제2항에 있어서, 상기 단계 1의 유기용매는 C₁ 내지 C₄의 알코올, 초산에틸, 염화메틸렌 및 클로로포름으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합용매인 것을 특징으로 하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 상기 유기용매는 C₁ 내지 C₄의 알코올인 것을 특징으로 하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제4항에 있어서, 상기 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 도라지 막분리 추출물은 심근경색율((경색영역/심근경색 위험부위)×100)을 감소시키는 것을 특징으로 하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 도라지 막분리 추출물은 지질 과산화물 농도를 감소시키는 것을 특징으로 하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
플라티코시드 E(Platycoside E) 및 플라티코딘 D(Platycodin D)를 유효성분 으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
플라티코시드 E(Platycoside E)를 유효성분으로 함유하는 심근경색의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.