KR102175269B1 - 한속단으로부터 분리된 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 한속단 추출물 또는 한속단으로부터 분리된 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 상기 추출물 또는 화합물은 암 세포(HeLa, HL-60 및 MCF-7 세포)에 대한 세포사멸 효과가 우수하여, 암 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

한속단으로부터 분리된 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 {A pharmaceutical composition comprising compounds isolated from Phlomoides umbrosa(Turcz.) Kamelin and Makhm for preventing or treating cancer}
본 발명은 한속단으로부터 분리된 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
신체를 구성하는 가장 작은 단위인 세포(cell)는 정상 조건의 경우, 세포 자체의 조절 기능에 의해 분열 및 성장하고, 수명이 다하거나 손상되면 스스로 사멸하여 전반적인 수의 균형을 유지한다. 그러나 여러 가지 원인에 의해 세포 자체의 조절 기능에 문제가 생기면 정상적으로 사멸해야 할 비정상 세포들이 과다 증식하게 되며, 경우에 따라 주위 조직 및 장기에 침입하여 종괴(덩어리)를 형성하고 기존의 구조를 파괴하거나 변형시키는데, 이러한 상태를 암(cancer)으로 정의할 수 있다.
암의 종류는 처음 암 세포가 발생한 조직 및 장기에 따라 분류하기도 하고, 암세포의 모양과 발생기원에 따라 분류하기도 한다. 흔히 폐암, 위암, 대장암, 자궁경부암 등은 종양이 처음 생긴 장기를 기준으로 일컫는다. 또한 발생기원 측면에서는 크게 결체조직성 종양, 상피성 종양, 선암 등으로 구분되기도 한다.
암이 발병되어 진행이 계속될 경우, 수술 등의 외과적 치료법과 함께 항암물질 투여에 의한 화학적 치료법이나 방사선치료 등을 병행하여 집중적으로 치료하지만, 다른 질환의 치료에 비해 환자의 상태에 따라 치료방법이 다양하고 복잡하며 대부분 조기 암환자나 특정 암환자에만 국한된 치료방법이고 조혈이나 면역기능 억제 등의 부작용도 나타나, 암으로 인한 사망은 지속적으로 증가하고 있는 추세이다.
최근 질병을 예방 또는 치료할 수 있는 기능이 식품이나 식물체도 가지고 있다는 것이 보고되고 있어, 천연물로부터 생리기능을 가진 물질을 탐색하는 연구가 전 세계적으로 활발히 진행되고 있다(Lee, S. E. et al., J Medicinal Crop Sci., 12, 73-78, 2004). 특히, 천연물에 존재하는 화합물은 그 수가 많을 뿐 아니라 현재까지 알려진 유기합성 기술로는 만들어 내기 어려운 화합물, 예컨대 광학이성질체 등을 포함하는 경우가 많다. 즉, 상기와 같은 경향을 반영한 암 치료를 위한 새로운 접근 방법으로서, 물성과 화학적 구조가 다양하고 독성이 비교적 낮은 천연물 또는 천연물 유래 화합물로부터 부작용이 적고 효능이 뛰어난 항암제의 개발이 필요하다.
한속단(Phlomoides umbrosa (Turcz.) Kamelin & Makhm)은 우리나라 대한민국약전외한약(생약) 규격집에 꿀풀과(Labiatae)의 뿌리로 수재되어 있다. 우리나라의 북부 산악지대를 제외한 산기슭 어느 곳에서나 흔하게 자생하며, 긴 원주형 혹은 방추형의 뿌리가 여러 개 달렸고 바깥면에 세로 잔주름이 있다. 한속단은 통증완화, 항염증, 알러지 질환에 효과가 있으며, 뿌리와 잎은 식품원료로 사용이 가능하다(윤지숙 등, 한국식품과학회지, 48(6), 531-535, 2016).
한속단 유래 화합물의 암 예방 또는 치료용 조성물과 관련된 종래기술로서, 선행논문 [Liu, P. et al., Chem Pharm Bull (Tokyo)., 56(7), 951-955, 2008]에는 속단 유래 화합물의 항암 활성이 개시된 바 있다. 그러나, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 한속단 유래 화합물이 암에 대한 치료 효과가 있음을 확인한 이전 보고는 아직 없다.
윤지숙 등, LC-MS/MS를 이용한 식품 중 천속단과 한속단 지표성분 동시분석, 한국식품과학회지, 48(6), 531-535, 2016. Lee, M. K. et al., Ergosta-7,22-diene-2β,3α,9α-triol from the fruit bodies of Ganoderma lucidum induces apoptosis in human myelocytic HL-60 cells, Phytother Res., 25, 1579-1585, 2011. Lee, S. E. et al., Inhibitory activity on angiotensin converting enzyme (ACE) of Korean medical herbs, J Medicinal Crop Sci., 12, 73-78, 2004. Liu, P. et al., Novel Nortriterpenes from Phlomis umbrosa, Chem Pharm Bull (Tokyo)., 56(7), 951-955, 2008.
본 발명의 목적은 한속단 추출물 또는 한속단으로부터 분리된 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명은 하기 화학 구조를 갖는 플로미수 A(화합물 1, phlomisu A), 플로미수 B(화합물 2, phlomisu B), 플로미수 C(화합물 3, phlomisu C), 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D), 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E) 및 (2α,3α,17R,18β)-19(18→17)-아베오-28-노로린-12-엔-2,3,18,23,24-펜톨(화합물 6, (2α,3α,17R,18β)-19(18→17)-abeo-28-norolean-12-ene-2,3,18,23,24-pentol)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 한속단(Phlomoides umbrosa (Turcz.) Kamelin & Makhm) 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
Figure 112019019996075-pat00001
상기 한속단 추출물은 한속단을 물, C1 내지 C4 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 것이며, 상기 C1 내지 C4의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 추출시 사용되는 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이들의 혼합용액은 사용되는 한속단 중량 대비 1~50배 부피를 사용할 수 있으며 상기 과정을 1~5회 반복하는 것도 가능하다.
상기 추출물의 추출시간은 특별히 제한되는 것은 아니나, 10분 내지 1일 이내에 추출하는 것이 바람직하고, 추출방법은 통상적으로 사용되는 모든 추출방법, 예컨대, 가압 추출, 침지(냉침, 온침), 초음파 추출, 환류 추출법 등을 사용할 수 있으며, 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.
상기 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위하여 여과시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러 내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으며, 식물체 분리 추출에 이용되는 공지의 방법을 단독 또는 적합하게 조합한 방법을 이용할 수 있다.
또한, 상기 추출물은 상기 추출 과정으로부터 얻은 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명은 또한 하기 화학 구조를 갖는 플로미수 A(화합물 1, phlomisu A), 플로미수 B(화합물 2, phlomisu B), 플로미수 C(화합물 3, phlomisu C), 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D), 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E) 및 (2α,3α,17R,18β)-19(18→17)-아베오-28-노로린-12-엔-2,3,18,23,24-펜톨(화합물 6, (2α,3α,17R,18β)-19(18→17)-abeo-28-norolean-12-ene-2,3,18,23,24-pentol)로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
Figure 112019019996075-pat00002
상기 화합물은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 합성하는 것도 가능하며 약학적으로 허용 가능한 염으로 제조될 수도 있으나, 바람직하게는 한속단 추출물로부터 크로마토그래피로 분획하여 얻는다. 상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(flash column chromatography), 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(sephadex LH-20 column chromatography), RP-18 컬럼 크로마토그래피(RP-18 column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography, TLC), 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography) 및 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography, HPLC) 중에서 선택될 수 있다.
상기 암은 폐암, 간암, 위암, 대장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 갑상선암, 흑색종, 혈액암, 결장암, 비소세포성폐암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 소장암, 직장암, 자궁내막암, 질암, 고환암, 식도암, 담도암, 임파선암, 담낭암, 내분비선암, 부신암, 림프종, 다발성 골수종, 흉선종, 중피종, 신장암, 뇌암, 중추신경계종양, 뇌간신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어진 군에서 선택된다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 일반적으로 사용되는 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 적합한 형태로 제형화될 수 있다. “약학적으로 허용 가능”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 또한, 상기 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로즈, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아라비아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산프로필, 탈크, 스테아르산마그네슘 및 광물유를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 안정화제, 결합제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 추출물 또는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 미결정셀룰로오스, 수크로스 또는 락토오스, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 히프로멜로오스 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아르산마그네슘, 탈크 같은 활택제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 유동파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 추출물, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질과 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다.
본 발명에 개시된 추출물 또는 화합물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여시간, 투여경로, 약물의 흡수, 분포 및 배설률, 사용되는 다른 약물의 종류 및 처방자의 판단 등에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또 다른 일면에 있어서, 본 발명은 하기 화학 구조를 갖는 신규 화합물 플로미수 A(화합물 1, phlomisu A), 플로미수 B(화합물 2, phlomisu B), 플로미수 C(화합물 3, phlomisu C), 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D), 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E), 엄브로이리오사이드 A(화합물 7, umbroirioside A), 엄브로이리오사이드 B(화합물 8, umbroirioside B) 및 엄브로이리오사이드 C(화합물 9, Umbroirioside C)에 관한 것이다.
Figure 112019019996075-pat00003
본 발명은 또한,
한속단(Phlomoides umbrosa (Turcz.) Kamelin & Makhm)을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 한속단 추출물을 제조하는 단계;
상기 한속단 추출물을 물에 현탁하고 n-부탄올로 분획한 n-부탄올 분획물을 제조하는 단계; 및
상기 분획물을 크로마토그래피하여 하기 화학 구조의 플로미수 A(화합물 1, phlomisu A), 플로미수 B(화합물 2, phlomisu B), 플로미수 C(화합물 3, phlomisu C), 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D), 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E), 엄브로이리오사이드 A(화합물 7, umbroirioside A), 엄브로이리오사이드 B(화합물 8, umbroirioside B) 및 엄브로이리오사이드 C(화합물 9, Umbroirioside C)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 분리하는 방법; 을 제공한다.
본 발명은 한속단 추출물 또는 한속단으로부터 분리된 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 상기 추출물 또는 화합물은 암 세포(HeLa, HL-60 및 MCF-7 세포)에 대한 세포사멸 효과가 우수하여, 암 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
< 실시예 1. 한속단 추출물 제조 및 한속단 유래 화합물의 분리>
건조된 한속단(Phlomoides umbrosa (Turcz.) Kamelin & Makhm (Lamiaceae), 강원도 영월) 뿌리 15㎏을 60% 에탄올 수용액(3회×20ℓ)으로 실온에서 추출하고, 상기 과정에서 얻은 에탄올 추출액을 50℃에서 감압 농축하여 1.5㎏의 에탄올 추출물을 얻었다. 이후, 상기 에탄올 추출물을 물에 현탁하고, n-부탄올(5ℓ×3회)로 분획하여 550g의 n-부탄올 분획물을 얻었다.
상기 분획물을 염화메틸렌-메탄올-물의 용출 조건으로 오픈 컬럼 크로마토그래피(silica gel, 30-100%(v/v))하여, 15개의 소분획물(Pu1-Pu15)을 얻었다. 상기 소분획물 중 Pu10(40g)을 메탄올-물의 용출 조건(25-100%, v/v)으로 크로마토그래피(YMC RP-18)하여 9개의 소분획물(Pu10A-Pu10I)을 얻었다.
상기 소분획물 중 Pu10H(0.1g)를 메탄올-물(1/1, v/v)을 용매로 사용하여 YMC RP-18 오픈 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 화합물 1(7㎎)을 얻었고, 소분획물 Pu10K(0.15g)를 n-헥산-클로로포름-메탄올(10/5/1, v/v/v)을 용매로 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 화합물 4(5.5㎎)를 얻었다. 소분획물 중 Pu10D(1.5g)를 메탄올-물(1/2.5, v/v)을 용매로 사용하여 YMC RP-18 오픈 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 화합물 7(4.0㎎) 및 화합물 8(6㎎)을 얻었다. 소분획물 중 Pu10G(2.3g)를 메탄올-물(1/1.5, v/v)을 용매로 사용하여 YMC RP-18 오픈 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 화합물 9(8.5㎎)을 얻었다.
다음으로, 상기 소분획물 중 Pu9(5g)를 메탄올-물(30-100%, v/v)을 용매로 사용하여 YMC RP-18 오픈 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 8개의 소분획물(Pu9A-Pu9H)을 얻었다. 상기 소분획물 중 Pu9D(0.22g)를 메탄올-물(1.2/1, v/v)을 용매로 사용하여 YMC RP-18 오픈 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 화합물 3(5㎎)을 얻었고, 소분획물 Pu9G(0.5g)를 n-헥산-클로로포름-메탄올(10/4/1, v/v/v)을 용매로 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 화합물 5(5.5㎎)를 얻었다.
다음으로, 상기 소분획물 중 Pu8(3.3g)을 아세토니트릴-메탄올-물(1/1/2, v/v/v)을 용매로 사용하여 YMC RP-18 오픈 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 7개의 소분획물(Pu8A-Pu8G)을 얻었다. 상기 소분획물 중 Pu8G(0.4g)를 메탄올-물(1/1.5, v/v)을 용매로 사용하여 YMC RP-18 오픈 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 화합물 2(3.2㎎) 및 화합물 6(8㎎)을 얻었다.
상기 과정으로부터 얻은 본 발명 신규 화합물 1~5 및 7~9의 물리화학적 특성은 하기와 같다.
화합물 1. 플로미수 A( Phlomisu A)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 203 (3.74);
Figure 112019019996075-pat00004
+ 2.5 (c 0.5, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3387, 2942, 2866, 1455, 1378, 1200, 1032 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 1 참조;
HRESIMS m/z 555.3660 [M+Na]+ (calcd for C32H52O6Na, 555.3662).
화합물 2. 플로미수 B( Phlomisu B)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 203 (3.76);
Figure 112019019996075-pat00005
+ 2.3 (c 0.6, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3349, 2935, 2865, 1451, 1376, 1226, 1033 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 1 참조;
HRESIMS m/z 555.3657 [M+Na]+ (calcd for C32H52O6Na, 555.3662).
화합물 3. 플로미수 C( Phlomisu C)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 203 (3.82);
Figure 112019019996075-pat00006
+ 3.0 (c 0.5, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3352, 2944, 2837, 1731, 1655, 1451, 1379, 1200, 1022 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 1 참조;
HRESIMS m/z 553.3508 [M+Na]+ (calcd for C32H50O6Na, 553.3505).
화합물 4. 플로미수 D( Phlomisu D)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 203 (3.78);
Figure 112019019996075-pat00007
+ 4.9 (c 0.5, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3329, 2940, 2832, 1728, 1451, 1020 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 2 참조;
HRESIMS m/z 553.3509 [M+Na]+ (calcd for C32H50O6Na, 553.3505).
화합물 5. 플로미수 E( Phlomisu E)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 203 (3.68);
Figure 112019019996075-pat00008
+ 1.8 (c 0.4, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3408, 2947, 2869, 1713, 1376, 1025 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 2 참조;
HRESIMS m/z 513.3193 [M+Na]+ (calcd for C29H46O6Na, 513.3192).
화합물 7. 엄브로이리오사이드 A( Umbroirioside A)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 204 (4.22), 233 (4.02), 315 (3.20);
Figure 112019019996075-pat00009
- 9.9 (c 0.5, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3408, 2940, 2842, 1707, 1636, 1583, 1371, 1278, 1022 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 4 참조;
HRESIMS m/z 903.2911 [M+Na]+ (calcd for C41H52O21Na, 903.2899).
화합물 8. 엄브로이리오사이드 B( Umbroirioside B)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 203 (4.11), 221 (3.99), 260 (3.35), 293 (3.01);
Figure 112019019996075-pat00010
- 7.1 (c 0.5, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3354, 2941, 2836, 1708, 1637, 1595, 1372, 1283, 1023 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 4 참조;
HRESIMS m/z 621.1802 [M+Na]+ (calcd for C27H34O15Na, 621.1795).
화합물 9. 엄브로이리오사이드 C( Umbroirioside C)
흰색 무정형 분말;
UV (MeOH) λmax (log ε) nm: 225 (4.06);
Figure 112019019996075-pat00011
- 7.4 (c 0.5, MeOH);
IR (ΚBr) νmax: 3366, 2918, 1713, 1638, 1592, 1370, 1285, 1080 cm-1;
1H NMR (500 MHz, methanol-d4) 및 13C NMR (125 MHz, methanol-d4) 데이터는 하기 표 4 참조;
HRESIMS m/z 576.1689 [M+Na]+ (calcd for C25H31NO13Na, 576.1693).
Figure 112019019996075-pat00012
Figure 112019019996075-pat00013
Figure 112019019996075-pat00014
< 실시예 2. 항암 활성 확인>
항암 활성을 확인하기 위해 선행논문 [Lee, M. K. et al., Phytother Res., 25, 1579-1585, 2011]를 참고하여 MTT 어세이를 진행하였으며, 이때 사용한 암 세포주로는 자궁경부암세포인 HeLa, 백혈병 세포인 HL-60 및 유방암 세포인 MCF-7이다. 상기 암 세포주는 10%(v/v) FBS(fetal bovine serum) 및 2% 페니실린/100㎍/㎖스트렙토마이신이 포함된 RPMI 배지 또는 IMDM 배지(Gibco BRL, Grand Island, NY)를 사용하여 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다.
96웰 플레이트에 암 세포가 함유된 배양액을 웰 당 1×104세포로 접종하고, 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다. 이후, 농도에 따른 화합물(1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 50.0μM)을 각각 처리하여 48시간을 추가 배양한 다음, 각 웰에 MTT 시약을 최종 농도 5㎍/㎖가 되도록 처리하였다. 4시간 후 플레이트를 1500rpm으로 5분 동안 원심분리하고 배양액을 제거한 다음, 플레이트에 DMSO를 더하여 생성된 포마잔 결정을 용해하였다. 이후, 570㎚에서 Titertek microplate reader로 흡광도를 측정하여 IC50값을 계산하고 이를 표 4에 나타내었다.
조건 IC50(μM)
HeLa HL-60 MCF-7
화합물 4 - 43.7±0.6 49.7±1.2
화합물 5 19.3±1.0 8.4±0.6 15.4±1.9
화합물 6 - 41.7±0.3 -
부탄올 분획물 >200 65.5±0.8 >100
양성대조군
(아드리아마이신)		 1.6±0.5 2.5±0.3 1.1±0.1
상기 표 4를 살펴보면, 본 발명의 한속단 추출물 또는 한속단 유래 화합물은 암 세포에 대한 세포 사멸 효과가 있는 것으로 확인되었으며, 특히 백혈병 세포주인 HL-60에 대한 세포 사멸 효과가 우수하였다. 또한, 화합물 5의 경우 모든 암 세포(HeLa, HL-60 및 MCF-7 세포)에 대해 광범위한 세포 사멸 효과가 나타남을 확인할 수 있었다.
이로부터 본 발명 한속단 추출물 또는 한속단 유래 화합물은 항암용 조성물로 유용하게 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
< 제제예 1. 정제의 제조>
본 발명 화합물 5(플로미수 E) 20g을 각각 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
< 제제예 2. 캡슐제의 제조>
본 발명 화합물 5(플로미수 E) 100㎎, 옥수수전분 100㎎, 유당 100㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2㎎을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
< 제제예 3. 주사제의 제조>
본 발명 화합물 5(플로미수 E) 1g, 염화나트륨 0.6g 및 아스코르브산 0.1g을 증류수에 용해시켜서 100㎖를 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.

Claims (7)

  1. 하기 화학 구조를 갖는 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D) 및 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 한속단(Phlomoides umbrosa (Turcz.) Kamelin & Makhm) 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
    Figure 112020052304640-pat00018
  2. 제1항에 있어서,
    상기 한속단 추출물은 한속단을 물, C1 내지 C4 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 간암, 위암, 대장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 갑상선암, 흑색종, 혈액암, 결장암, 비소세포성폐암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 소장암, 직장암, 자궁내막암, 질암, 고환암, 식도암, 담도암, 임파선암, 담낭암, 내분비선암, 부신암, 림프종, 다발성 골수종, 흉선종, 중피종, 신장암, 뇌암, 중추신경계종양, 뇌간신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 하기 화학 구조를 갖는 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D) 및 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E)로 이루어진 군에서 선택되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
    Figure 112020052304640-pat00019
  5. 제4항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 간암, 위암, 대장암, 방광암, 전립선암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 갑상선암, 흑색종, 혈액암, 결장암, 비소세포성폐암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 소장암, 직장암, 자궁내막암, 질암, 고환암, 식도암, 담도암, 임파선암, 담낭암, 내분비선암, 부신암, 림프종, 다발성 골수종, 흉선종, 중피종, 신장암, 뇌암, 중추신경계종양, 뇌간신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 하기 화학 구조를 갖는 신규 화합물 플로미수 A(화합물 1, phlomisu A), 플로미수 B(화합물 2, phlomisu B), 플로미수 C(화합물 3, phlomisu C), 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D), 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E), 엄브로이리오사이드 A(화합물 7, umbroirioside A), 엄브로이리오사이드 B(화합물 8, umbroirioside B) 및 엄브로이리오사이드 C(화합물 9, Umbroirioside C).
    Figure 112019019996075-pat00017
  7. 한속단(Phlomoides umbrosa (Turcz.) Kamelin & Makhm)을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 한속단 추출물을 제조하는 단계;
    상기 한속단 추출물을 물에 현탁하고 n-부탄올로 분획한 n-부탄올 분획물을 제조하는 단계; 및
    상기 분획물을 크로마토그래피하여 하기 화학 구조의 플로미수 A(화합물 1, phlomisu A), 플로미수 B(화합물 2, phlomisu B), 플로미수 C(화합물 3, phlomisu C), 플로미수 D(화합물 4, phlomisu D), 플로미수 E(화합물 5, phlomisu E), 엄브로이리오사이드 A(화합물 7, umbroirioside A), 엄브로이리오사이드 B(화합물 8, umbroirioside B) 및 엄브로이리오사이드 C(화합물 9, Umbroirioside C)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 분리하는 방법.
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