SE457957B - Foerfarande foer framstaellning av isosilybinfritt silibinin samt farmaceutiskt medel innehaallande naemnda silibinin - Google Patents

Description

457 957 2 10 15 _20 25 30 35 40 H (B) Isosilybin Av dessa strukturformler framgår, föreningar är fråga om ställningsisomere A har nu för tiden INN-beteckningen sili används även i föreliggande A. att det i fall av dessa r. Föreningen med formeln binin. Denna beteckning ansökan för föreningen med formeln De båda ovan angivna föreningarna A och B har hittills framställts och separerats endast i analytiska mängder, är känt vad det avser farmakologiska verkningar för de e isomererna. och inget nskilda Till grund för uppfinningen ligger därför uppgiften att tillhandahålla ett förfarande för framställning av isosilybin- fritt silibinin liksom silibininhaltiga farmaceutiska medel: Uppfinningen avser således ett förfarande för framställ- ning av silibinin med formeln OH OH O vid vilket man befriar torkade frukter av Sil ybum marianum L.

Gaertn. från huvudmängden av den feta oljan genom att man spränger frukternas celler medelst högt mekanisk tryck, uttömmande med etylacetat extraherar pressâterstoden, som ännu uppvisar en rest- oljehalt av 5-10%, avdunstar etylacetatet, upplöser den erhållna en av metanol och vatten _lösningsmedelsblandning torrâterstoden i en mängd av 2 vikts% i d bestående underfasen av en ternär 10 15 20 25 30 35 40 457 957 -: »_ av 95 viktsdelar metanol, 5 viktsdelar vatten och 100 viktsde- lar petroleumeter (kokpunkt 40-6000), klar-centrifugerar för av- lägsnande av flockiga fastämnespartiklar och i detta lösnings- flerfaldig, likformig fördelning i motström, varvid volymförhållandet över- fas/underfas hålles på 1:1, och därefter från den utströmmande medelssystem underkastar den torra återstoden underfasen genom indunstning i vakuum till torrhet isolerar en 70-80%-ig polyhydroxifenylkromanonblandning (silymarin I-IV = silymarin I-IV-grupp) som ett brunaktigt pulver, varvid förfaran- det utmärkes av att man suspenderar det erhållna brunaktiga pulv- ret i den 3-5-faldiga viktsmängden metanol, upphettar den er- hållna suspensionen under omröring till kokning, därefter avlägs- nar ungefär 1/3-2/3 av metanolen under förminskat tryck, låter koncentratet stå vid rumstemperatur, frånfiltrerar den därvid utfällda produkten, tvättar 1-3 gånger med minsta möjliga mängd kall metanol, torkar, upplöser i den 40-60-faldiga viktsmängden ättiksyraester, behandlar med aktivt kol under återflödesbetingel- ser, frànfiltrerar det aktiva kolet, indunstar under förminskat tryck filtratet till ungefär 1/10 av den ursprungliga volymen, försätter koncentratet under kraftig omröring med metanol i en mängd av ungefär 1/10 av volymen av koncentratet, förvarar några timmar vid rumstemperatur, omrör före filtrering av den utfällda produkten medelst en omrörare med hög effekt, eftertvättar den avsugna produkten 1-3 gånger med en liten mängd ättiksyraester och torkar i vakuum.

Isosilybinfritt silibinin kan även framställas genom att man ' a) suspenderar en viktsdel av det erhållna, brunaktiga pulv- ret, som nedan antas vara referensmängd, i 0,7-1,5 viktsdelar vattenmättat etylacetat, och låter den erhållna suspensionen stå under 1-2 dagar och frånsuger fällningen, b) tvättar den erhållna fällningen med 0,07-0,15 viktsdelar kallt vattenmättat etylacetat och torkar vid 30-SOOC i vakuum, c) upplöser denna produkt i 30-50íviktsdelar torkat (vatten- fritt) etylacetat i värmen från kokningen, behandlar med 0,2- 0,4 viktsdelar aktivt kol under 2 h under återflöde, filtrerar och indunstar filtratet vid 30-50°C i vakuum till 1/12 av det fiör upplösningen använda lösningsmedlets volym, d) tillsätter koncentratet 0,5-0,8 viktsdelar vattenmättat etylacetat, fränfiltierar det utfäilaa silibininet efter 5-10 h 457 957 10 15 20 25 30 35 40 och e) suspenderar silibininet i 0,9-1,8 viktsdelar tekniskt etyl- acetat, filtrerar på nytt, förtorkar i vakuum vid 30-SOOC, maler den i förväg torkade produkten och torkar på nytt vid 30-SOOC i vakuum.

Det i steg a)som utgângsprodukt använda brunaktiga pulvret resp råsilymarin är en blandning av silymarinerna I-IV. Genom behandlingen av råsilymarinet med vattenmättat etylacetat sker huvudsakligen separeringen av huvuddelarna av silymarin II -IV (silibinin är silymarin I) och av de till 20-30% uppgående med- följande substanserna i råsilymarin liksom en del isosilybin.

Man erhåller på detta sätt i steg b)råsilibinin med ett utbyte 5% (räknat på v 80-84%. såsom beskrives i samband med teknikens' ståndpunkt, en blandning av isosilybin och silibi det ungefär 1:4- i beroende av kvaliteten för råsilymarinet av 80-8 silibininhalten i råsilymarinet) och med en halt a Råsilibininet är, nin i förhållan- I stegen c)-e) sker separeringen av huvuddelarna av isosily- bin och av silibinin liksom resten av andra ova n beskrivna be- ståndsdelar.

En särskild fördel med detta separeringsförfarande är an- vändningen av endast ett enda lösningsmedel, nämligen etylacetat, dock med olika vattenhalter.

Därvid är det väsentligt att i steg c) använda vattenfritt etylacetat och i ste g d) med vatten mättat etylacetat.

Man erhåller medelst förfarandet enli gt uppfinningen silibinin i ett utbyte av 79 -85%_(räknat på silibinin i râsili- bininet) och med en silibininhált av 96-98%.

En särskilt föredragen utföringsform av förfarandet enligt uppfinningen består i att man a) suspenderar en viktsdel av det brunaktiga pulvret i 0,9 Vikts- delar vattenmättat etylacetat, låter suspensionen stå under 48 ger den erhållna fällningen, b) tvättar fällningen med 0,09delar kallt vatte och torkar under 48 h vid 40°C i vakuum, h vid rumstemperatur och frânsu nmättat etylacetat c) upplöser den erhållna produkten i 36 viktsdela acetat i värmen från dess kokning, 2 h med 0,36 viktsdelar aktivt kol, 5o9c i vakuum till 1/12 av det för upplösnm r torkat etyl- upphettar under återflöde under filtrerar och indunstar vid gen använda lösningsmedlets volym, emperatur0,6 viktsdelar vat- tenmättat etylacetat, förvarar vid rumstemperatur under 12 h och 10 15 20 25 30 35 40 5 457 957 frånfiltrerar den utfällda produkten, e) suspenderar denna produkt två gånger i vardera 1,8 viktsde- lar tekniskt etylacetat och filtrerar, torkar under 24 h i var kuum vid 40°C, maler och eftertorkar under 48 h i vakuum vid 4o°c.

Det har visat sig att isosilybinfritt silibinin är mycket lämpligt för farmaceutiska ändamål. På ett överraskande sätt fann man, att det har väsentliga fördelar i relation till andra kända beståndsdelar i extrakt av Silybum marianum. Det är särskilt lämpligt för behandling av levercirros.och toxiskrmetaboliska leverskador. Det kan även användas i förebyggande syfte så att de beskrivna skadorna icke alls uppträder.

Uppfinningen avser således även läkemedel, som innehåller silibinin, De används mestadel systemiskt, exempelvis i form av piller, kapslar, lösningar, i vanliga bärare och eventuellt till- sammans med vanliga hjälpämnen. Dygnsdosen för en vuxen människa uppgår till ungefär 50-S00 mg, i beroende av patientens till- stånd och sjukdomssymptomens svårighetsgrad.

EXEMPEL 1 framställning av isosilybinfrict sí1ibinin= 500 g av en polyhydroxifenylkromanonblandning (silymarin I-IV = silymarin I-IV-grupp; halt ca 70%), som erhållits enligt kolumn 8, raderna 14-19 i DE-AS 1 923 082, till vilken hänvis- ningf göres, suspenderar man i 2 kg metanol E 2,53 l och upphet- tar under omröring under 15 min till kokning. Ur den så erhållna lösningen kan efter denna tidsperiod redan något silibinin falla ut. Därefter avaunscar man 1 vakuum o,1s-1,25 kg 2 0,96-1,58 1 metanol och låter återstoden stå vid rumstemperatur under 10-28 dygn. Det utfällda silibininet filtreras och tvättas två gånger med 50 ml kall metanol varje gång. Efter torkning vid 40°C i vakuum renas det isolerade råsilibininet åter på följande sätt: 60 g råsilibinin upplöses 1 3 1 teknisk ättiksyraester under upp- hettning; sedan tillsättes 20 g aktivt kol och omröring företas under återflödesbetingelser under ytterligare 2 h. Därefter sker en*klar-filtrering och lösningen indunstas vid SOOC under för- minskat tryck till ca 250 ml. Koncentratet omröres under 15 min under användning av en anordning av typen ultra-Turrax och för- sättes med 25 ml metanol under omröring. Därefter får blandningen stå över natten vid rumstemperatur.Förefiltreringen av det där- vid utfällda silybinet omröres ännu en gång 5 min likaledes med 457 957 ' s _ _' 10 15 20 25 30 35 40 6 1' 2 hjälp av en apparat av ultra-Turrax. Den frånfiltrerade fällningen tvättas därefter två gånger med 50 ml ättiksyraester och torkas i vakuumtorkskåp över natten vid 40°C. Slutligen males produkten och torkas under samma betingelser under 48 h.

EXEMPEL 2 Framställning av isosilybinfritt silibinin: 1 kg av en polyhydroxifenylkromanonblandning (silymarin I-IV = silymarin I-IV-grupp; halt ca 70%) i form av ett brunak- tigt pulver, även här benämnt råsilymarin, som erhållits enligt kolumn 8, raderna 14-19 i.DE-AS 1 923 082, till vilken här hän- visning göres, suspenderar man i 1 l vattenmättad ättiksyraester under 30 min med användning av apparaten av typen Turrax.'Sedan suspensionen fått stå vid rumstemperatur vid 48 h frånsuges fäll- ningen, tvättas med 100 ml kall, vattenmättad ättiksyraester och torkas under 48 h vid 40°C i vakuum. Utbytet för denna mellan- produkt, râsilibinin, uppgår allt efter råsilymarinkvalitet till 80-85%, räknat på silibininhalten i råsilymarinet, vid en halt av 80-84%.

Râslibininet upplöses ir40 l torkad ättiksyraester i värmen från kokningen, kokas med 360 g aktivt kol under 2 h vid åter- flöde, filtrerassoch indunstas till en totalvolym av 3 330 ml vid 50°C i vakuum. Denna lösning tillsättes under intensiv om- röring vid rumstemperatur 667 ml vattenmättad ättiksyraester.

Efter 1 -3 h börjar därefter kristallisationen av silibininet.

Efter förvaring över natten separeras.det utfällda silibininet genom filtrering, suspenderas två gånger med varje gång 1 200 ml teknisk ättiksyraester under 5-10 min, kas under 24 n 1 vakuum via 4o°c. under 48 h vid 4o°c 1 vakuum. filtreras på nytt och tor- Efter malning torkas produkten Utbytet av silibinin räknat på halten silibinin i râsilibininet uppgår till.79-85% vid en halt av 96 -98,5% silibinin i beroende av râsilibininkvaliteten.

Kliniska försök med silibinin Toxiska leverskador har ökat utomor de senaste årtiondena. holen. dentligt kraftigt under Den vanligaste orsaken är såsom förr alko- Genom kontrollerade studier kunde man bevisa överlägsen- heten för silibinin gentemot en skenter api (placebo) eller andra jämförelseterapier.

I ett dubbelstudium prövades i fall avv66 patienter míalkoholtoxiska leverskado r silibinin (n = 31) mot placebo (n = 35) slumpmässigt. “ 10 15 20 25 30 35 40 7 457 957 be statistiskt utvärderade resultaten visade, att silibinin signifikant är överlägset placebon. Páfallande var därvid den väsentligt kortare läkningstiden gentemot placebon. I en andra dubbelblindstudie med 76 patienter, av vilka 39 erhöll silibinin och 37 en kontrollterapi, var skillnaderna ytterst signifikanta till silibininets fördel.

Vid de levertoxiska verkningarna av narkos i samband med bukoperationer, kunde påvisas, att den preoperativa tillförseln av silibinin markant sänktezden postoperativa ökningen av lever- enzymerna i blodet. även de idag allt vanligare, av bestämda läkemedel inducerade leverskador förhindras effektivt med sili- binin. Detta kunde exempelvis visas medelst enifenylhydantoin- inducerad hepatos, vid vilken trots ytterligare föreskrivning av det absolut nödvändiga, krampförhindrande läkemedlet vid samti- dig administrering av silibinin samtliga analysvärden normali: serades inom kort tid. ' Ytterligare undersökningar bland patienter med schizofreni och svåra leverskador som följd av föreskrivning av klorpromazin visade likaledes den positiva effekten av silibinin. Andra för- sök avsåg förhindrandet av leverskadande verkningar av exempel- vis klorokvin eller asparaginas. I fall av yrkesbetingadeulever- skador kunde man i fall av samtliga behandlade patienter väsent- ligt förbättra de patologiskt förhöjda laboratcrievärdena, obe- roende av den aktuella orsaken eller eventuella ytterligare sjuk- domar.

Därutöver finns det tillräckliga bevis på att silibinin åstadkommer väsentliga förbättringar även i fall av kroniska leversjukdomar och levercirros. Exempelvis ingick patienter med levercirros inom ramen för ett lângtidsstudium i ett slumpmässigt dubbelblindförsök, där silibinin provades mot en placebo. Kri- terium för värderingen av det terapeutiska resultatet var fram- för allt överlevnadstiden. Härvid var behandlingen med silibinin tydligt överlägsen placebo-behandlingen.

Jämförelse avseende verkan mellan silibinin och isosilybin och silybin (si1ibinin/isosilybin-blandning) enligt modellen med falloidin- och praseodymintoxikation på möss efter intravenös administrering Den antihepatotoxiska verkan av silibinin, isosilybin och silybin som N-metylglukaminsalter undersöktes i doserna 50 och 100 mg/kg, räknat på silibinin, i enlighet med modellen för fal- "457 957' 10 8 "f" ' loidin; och praseodymförgiftning på möss efterlintravenös admin nistrering. Administreringen av provsubstansen skedde 1 h före falloidin resp 1 h före och 6 h, 24 h och 48 h efter praseodym.

I fall av falloidinförgiftningen utvärderades öve rlevnadsgraden och i fall av praseodymförgiftningen utvärderades olika serum- och leverparamefirar 72 h efter intoxikation.

I fall av falloidinintoxikationen uppgick överlevnadsgra- den efter administrering av silibinin i båda doserna till 100%, medan med de övriga.substanserna överlevnadsgradeh av 40% i fall av de obehandlade, skadade kontrolldäuren icke överskreds.

Isosilybin visade sig ofördragbart tillsammans med praseo- dymintoxikationen, varför dosen av 100 m g/kg måste uppdelas-i två deldoser, Z

Claims (3)

10 15 20 25 30 35 40 , 457 957 T-'fi RATENTKRAV

1. förfarande för framställning av isosilybinfritt srïl-* binin med formeln: OH varvid man befriar torkade frukter av Silybum marianum L.Gaertn från huvudmängden av den feta oljan genom att man spränger fruk- ternas celler genom anbringande av högt mekaniskt tryck, därefter uttömmande med etylacetat extraherar den genom den mekaniska be- handlingen bildade pressåtersüfien vilken ännu uppvisar en restolje- halt av 5-10%, indunstar etylacetatetpuppfikær'den erhållna, torra återstoden i en mängd av 2 vikts% i den av metanol och vatten bestående underfasen till en tfirflär lösningsmedelsblandning av 95 viktsdelarnemxnl/5 viktsdelar vatten och 100 viktsdelar pet- roleumeter (Kp 40-GOOCJ, klarcentrifugerar för avlägsnande av flockiga fastämnespartiklar och underkastar i detta lösningsmedels- system den upplösta torra âterstoderr' ett flertal, likformiga fördel- ningar iv motström, varvid volymförhâllandet överfas/underfas hâlles vid 1:1, och därefter utgående från den bortströmmande underfasen genom indunstning i vakuum till torrhet isolerar en 70-80%-ig polyhydroxifenylkromanonblandning (silymarin I-IV = silymarin I-IV-grupp) som ett brunaktigt pulver, k ä n n e t e c k - n a t av att man suspenderar det erhållna brunaktiga pulvret i den 3-5-faldiga viktsmängden metanol, upphettar den erhållna sus- pensionen under omröring till kokning, därefter avlägsnar unge- fär 1/3 - 2/3 av metanolen under förminskat tryck, låter koncent- ratet stå vid rumstemperatur, frånfiltrerar därvid utfälld pro- dukt, tvättar 1-3 gånger med minsta möjliga mängd kall metanol, torkar, upplöser i den 40-60-faldiga viktsmängden ättiksyraester I återflödesbe- tingelser, frånfiltrerar det aktiva kolet, indunstar under för- under upphettning, behandlar med aktivt kol under minskat tryck filtratet till ungefär 1/10 av den ursprungliga volymenlförsätter koncentratet med metanol under kraftig omrö- ring i en mängd av ungefär 1/10 av koncentratets volym, förvarar under några timmar vid rumstemperatur, omrör kraftigt med en 457 957 e 'ff blandare före filtreringen av den utfällda Pf°d“kten' fvättar h den filtrerade produkten 1-3 gånger medlitet attiksyraester oc torkar i vakuum, eller suspenderar en viktsdel av det erhållna brunaktiga pulvret, som nedan antas som referensmängd, i 0,7-1,5 viktsdelar med vat- ten mättat etylacetat, och låter den erhållna suspensionen stå under 1-2 dygn och suger ifrån fällningen, tvättar den erhållna fällningen med 0,07-0,15 viktsdelar kallt, med vatten mättat etylacetat och torkar i vakuum vid 30-SOOC, upplöser denna produkt i 30-50 viktsdelar torrt (vattenfritt) etylacetat i värmen från kokningen, behandlar med 0,2-0,4'vikts- delar aktivt kol under 2 h under âterflöde, filtrerar och induns- tar filtratet vid 30-50°C i vakuum till 1/12 av det för upplös- ningen använda lösningsmedlets volym, tillför koncentratet 0,5-0,8 viktsdelar vattenmättat etylace- tat, frånfiltrerar det utfällda silibininet efter 5-10 h och suspenderar silibininet i 0,9-1,8 viktsdelar tekniskt etyl- acetat, filtrerar på nytt, torkar i vakuum vid 30-SOOC, maler den torkade produkten och torkar på nytt i vakuum vid 30-50°C.

2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att man a) suspenderar en viktsdel av det brunaktiga pulvret i 0,9 vikts- delar vattenmättat etylacetat, förvarar under 48 h vid rumstempe- ratur och suger ifrân den erhållna fällningen, b) tvättar fänningen mea_o,o9 delar kallt, vattenmättat etyl- eacetat och torkar under 48 h vid 40°C i vakuum, c) upplöser den erhållna produkten i 36 viktsdelar torrt etyl- acetat i värmen från kokningen, upphettar med 0,36 viktsdelar aktivt kol under 2 h under âterflöde, filtrerar och indunstar vid 5000 i vakuum till 1/12 av det för upplösningen använda lösningsmedlets volym, d) tillsätter koncentratet vid rumstemperatur 0,6 viktsdelar vattenmättat etylacetat, förvarar under 12 h vid rumstemperatur och frânfiltrerar den utfällda produkten, e) suspenderar denna produkt två gånger i 1,8 viktsdelar tekniskt etylacetat varje gång och filtrerar, torkar under 24 h i vakuum vid 40OC, maler och eftertorkar under 48 h i vakuum vid 40°C.

3..Farmaceutiskt medel innehållande Såsom aktiv komponent ísosilybinfritt silibinin, eventuellt i en Farmace utisk bärare och/eller tillsammans med ett hjälpämne. I