CZ289383B6 - Polynukleotid a polynukleotidová vakcína proti tuberkulóze - Google Patents
Polynukleotid a polynukleotidová vakcína proti tuberkulóze Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289383B6 CZ289383B6 CZ19971451A CZ145197A CZ289383B6 CZ 289383 B6 CZ289383 B6 CZ 289383B6 CZ 19971451 A CZ19971451 A CZ 19971451A CZ 145197 A CZ145197 A CZ 145197A CZ 289383 B6 CZ289383 B6 CZ 289383B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- dna
- polynucleotide
- mycobacterial
- seq
- genes
- Prior art date
Links
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims description 33
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims description 33
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims description 33
- 229960002109 tuberculosis vaccine Drugs 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 132
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 41
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 claims abstract description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 33
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 8
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 5
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 claims description 4
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims description 3
- 206010062207 Mycobacterial infection Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001355 anti-mycobacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003926 antimycobacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 claims 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 42
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 16
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 abstract description 12
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 abstract description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 7
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 abstract description 7
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 abstract description 5
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 abstract description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 abstract description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 abstract description 3
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 abstract description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 101150045351 phlda3 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 90
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 57
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 32
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 31
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 30
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 description 21
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 21
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 17
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 16
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 16
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 15
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 9
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 9
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 9
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 7
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 7
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 7
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 7
- 101150085703 vir gene Proteins 0.000 description 7
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 6
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 6
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 6
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 6
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 229940065638 intron a Drugs 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 4
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 101150089247 B7 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000701083 Bovine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 101710088335 Diacylglycerol acyltransferase/mycolyltransferase Ag85A Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101100268670 Caenorhabditis elegans acc-3 gene Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 101710088334 Diacylglycerol acyltransferase/mycolyltransferase Ag85B Proteins 0.000 description 2
- 101710088427 Diacylglycerol acyltransferase/mycolyltransferase Ag85C Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010059343 MM Form Creatine Kinase Proteins 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000036981 active tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 2
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000006303 Chaperonin 60 Human genes 0.000 description 1
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000926206 Homo sapiens Putative glutathione hydrolase 3 proenzyme Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000721701 Lynx Species 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- PKVZBNCYEICAQP-UHFFFAOYSA-N Mecamylamine hydrochloride Chemical compound Cl.C1CC2C(C)(C)C(NC)(C)C1C2 PKVZBNCYEICAQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 1
- 101001043272 Mycobacterium tuberculosis (strain ATCC 25177 / H37Ra) Lipoprotein LpqH Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101710181935 Phosphate-binding protein PstS 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 108010007131 Pulmonary Surfactant-Associated Protein B Proteins 0.000 description 1
- 102100032617 Pulmonary surfactant-associated protein B Human genes 0.000 description 1
- 102100034060 Putative glutathione hydrolase 3 proenzyme Human genes 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940038444 antibody-based vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- BKHZIBWEHPHYAI-UHFFFAOYSA-N chloroform;3-methylbutan-1-ol Chemical compound ClC(Cl)Cl.CC(C)CCO BKHZIBWEHPHYAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011554 guinea pig model Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 230000002324 hematogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 108700010900 influenza virus proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 1
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940090046 jet injector Drugs 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 101150109249 lacI gene Proteins 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005877 long-lasting humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- YFCUZWYIPBUQBD-ZOWNYOTGSA-N n-[(3s)-7-amino-1-chloro-2-oxoheptan-3-yl]-4-methylbenzenesulfonamide;hydron;chloride Chemical compound Cl.CC1=CC=C(S(=O)(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)CCl)C=C1 YFCUZWYIPBUQBD-ZOWNYOTGSA-N 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- YNDXUCZADRHECN-JNQJZLCISA-N triamcinolone acetonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(C)(C)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O YNDXUCZADRHECN-JNQJZLCISA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Geny antigen 85A, 85B, 85C, k duj c proteiny Mycobacterium tuberculosis (M.tb) byly klonov ny do eukaryotick²ch expresn ch vektor za · elem exprese k dovan²ch protein v sav ch svalov²ch bu k ch in vivo. Zv °ata byla imunizov na injekc t chto DNA konstrukt , ozna ovan²ch jako polynukleotidov vakc ny nebo PNV, do sval . Byla produkov na imuniza n antis ra proti antigen m M.tb. Ve slezinn²ch bu k ch vakcinovan²ch my byly detekov ny specifick odpov di T-bun k a profil sekrece cytokinu jako odpov na antigen (85) ukazoval na T.sub.h.n.1 typ odpov di pomocn²ch T-bun k (tj. vysok² IL-2 a IFN-.gama.). Ochrann · innost M.tb DNA vakc ny byla uk z na na my ch po infekci M. bovis BCG, jak bylo zm °eno sn en m rozmno ov n mykobakteri ve slezin ch a plic ch my , vakcinovan²ch M.tb DNA ve srovn n ke kontroln m my m vakcinovan²m DNA nebo prim rn infekc my , se kter²mi dosud nebyly prov d ny pokusy.\
Description
Dosavadní stav techniky
Hlavní překážkou při vývoji vakcín proti virům a bakteriím, zvláště těm s více sérotypy nebo vysokou rychlostí mutace, proti kterým je potřebné získání neutralizačních protilátek a/nebo ochranné buňkou zprostředkované imunologické odpovědi, je různorodost vnějších proteinů mezi různými izoláty nebo kmeny. Protože cytotoxické T-lymfocyty (CTL) jak u myší, tak i u člověka, jsou schopné rozpoznat epitopy, odvozené od konzervovaných vnitřních virových proteinů [J.W. Yewdell et al., Proč. Nati. Acad. Sci. (USA) 82, 1785 (1985); A.R.M. Townsend, et al., Cell 44, 959 (1986); A.J. McMichael et al., J. Gen. Virol. 67, 719 (1986); J. Bastin etal., J. Exp. Med. 165, 1508 (1987); A.R.M. Townsend and H. Bodmer, Annu. Rev. Immunol. 7, 601 (1989)], A.R.M. Townsend and H. Bodmer, Annu, Rev. Immunol. 1, 601 (1989)], a jsou pravděpodobně důležité při imunologické odpovědi proti virům [Y.-L. Lin and B.A. Askonas, J. Exp. Med. 154, 225 (1981); I. Gardner et al., Eur. J. Immunol. 4, 68 (1974); K.L. Yap and G.L. Ada, Nátuře 273, 238 (1978); A.J. McMichael et al., New Engl. J. Med. 309,13 (1983); P.M. Taylor and B.A. Askonas, Immunol. 58, 417 (1986)], bylo úsilí zaměřeno směrem k vývoji CTL vakcín, schopných poskytnout heterologní ochranu proti různým virovým kmenům.
Je znáno, že CTL zabíjejí buňky, infikované viry nebo bakteriemi, když jejich T buněčné receptory rozpoznávají cizí peptidy, spojené s molekulami MHC třídy I a/nebo třídy II. Tyto peptidy mohou být odvozeny z endogenně syntetizovaných cizích proteinů bez ohledu na umístění proteinů nebo jejich funkci uvnitř patogenu. Rozpoznáním epitopů konzervovaných proteinů mohou CTL poskytnout heterologní ochranu. V případě intracelulámí bakterie jsou proteiny, sekrenované bakterií nebo uvolňované z bakterie zpracovány a prezentovány molekulami MHC třídy I a II, čímž jsou generovány odpovědi T buněk, které mohou hrát roli při snížení nebo odstranění infekce.
Většina snad o vyvolání odpovědi CTL používala pro produkci proteinových antigenů uvnitř buňky buď replikačních vektorů [J.R. Bennink et al., výše.3\\, 578 (1984); J.R. Bennink and J.W. Yewdell Curr. Top. Microbiol. Immunol. 163, 153 (1990); C.K.. Stover et al., Nátuře 351, 456 (1991); A. Aldovini and R.A. Young, Nátuře 351, 479 (1991); R. Schafer etal., J. Immunol. 149, 53 (1992); C.S. Hahn et al., Proč. nati. Acad. Sci. (USA) 89, 2679 (1992)], nebo se soustředila na zavedení peptidů do cytosolu [F.R. Carbone and M.J. Bevan, J. Exp. Med. 169, 603 (1989); K. Dereš et al., Nátuře 342, 561 (1989); H. Takahashi et al., výše. 344, 873 (1990); D.S. Collins et al., J. Immunol. 148, 3336 (1992); M. J. Newman et al., výše. 148, 2357 (1992)]. Oba tyto přístupy mají omezení, která mohou omezit jejich použitelnost jako vakcín. Retrovirální vektory mají omezení velikosti a struktury polypeptidů, které mohou být exprimo vány jako fuzní proteiny při zachování schopnosti replikace rekombinantního viru [A.D. Miller, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 158, 1 (1992)], a účinnost vektorů jako je vakcinie pro následné imunizace musí být kompromisem vzhledem k imunologické odpovědi proti vakcinii [E.L. Cooney et al., Lancet 337, 567 (1991)]. Virální vektory a modifikované patogeny také mají vážná rizika, která mohou zabránit jejich použití u lidí [R.R. Redfield et al., New Engl. J. Med. 316, 673 (1987); L. Mascola et al.. Arch Intern. Med. 149, 1569 (1989)]. Volba peptidových epitopů, které mají být přítomny, je dále závislá na struktuře MHC antigenů jednotlivce a peptidové vakcíny proto mohou mít omezenou účinnost vzhledem k různorodosti MHC u nepříbuzných populací.
Benvenisty, N., adn Reshef, I.. /PNAS 83, 9551-9555, (1986)] ukázali, že by mohla být exprimována DNA, vysrážená CaCl2, zavedená do myší intraperitoneálně (i.p.), intravenózně (i.v.) nebo intramuskulámě (i.m.). Ukázalo se, že intramuskulámí (i.m.) injekce DNA expresního vektoru do myši vede k absorpci DNA svalovými buňkami a expresi proteinu, kódovaného DNA [J.A. Wolff et al.. Science 247, 1465 (1990); G. Ascadi et al., Nátuře 352, 815 (1991)]. Ukázalo se, že plazmidy se zachovávají epizomálně a nereplikují se. Následně byla
-1 CZ 289383 B6 pozorována perzistentní exprese po i.m. injekci do kosterního svalstva krys, rys a primátů a srdečního svalu krys [H. Lin et al., Circulation 82, 2217 (1990); R.N. Kitsis et al., Proč. Nati. Acad. Sci. (USA) 88, 4138 (1991); E. Hansen et al., FEBS Letí. 290, 73 (1991); S. Jiao et al., Hum. Gene Therapy 3,21 (1992); J.A. Wolff et al., Human Mol. Genet, 1, 363 (1992)]. Technika použití nukleových kyselin jako terapeutických prostředků se popisuje ve WO 90/11092 (4. říjen 1990), ve které byly použity pro vakcinaci obratlovců nahé polynukleotidy.
Nedávno byly popsány koordinační úlohy B7 a hlavního histokompatibilního komplexu (MHC) epitopů na povrchu buněk santigeny při aktivaci CTL pro odstranění tumorů [Edgington, Biotechnology 11, 1117-1119, 1993]. Jakmile molekula MHC na povrchu buněk prezentující antigen (antigen presenting cell, APC) vystaví epitop receptoru T-buňky (TCR), B7, exprimované na povrchu stejné APC působí jako druhý signál svou vazbou na CTLA-4 nebo CD28. Výsledkem je rychlé rozdělení CD4+ pomocných T-buněk, které signalizují CD8+ T-buňkám, že mají proliferovat a zabíjet APC.
Pro úspěch této metody není nutné, aby imunizace byla intramuskulámí. Tang et al., [Nátuře, 356, 152-154 (1992)]ukázali, že zavedení zlatých mikroprojektilů, pokrytých DNA, kódující bovinní růstový hormon (BGH) do kůže myší, mělo za následek produkce protilátek anti-BGH v těle myší. Furth et al., [Analytical Biochemistry, 205, 365-368, (1992)] ukázali, že pro transfekci kůže, svalů, tuku a prsních tkání živých zvířat by mohl být použit tryskový injektor. V poslední době byla popsána řada metod pro zavedení nukleových kyselin [Friedman, T., Science, 244, 1275-1281 (1989)], viz také Robinson et al., [Abstracts ofPapers Presented at the 1992 Mee on Modern Approaches to New Vaccines, Including Prevention of AIDS, Cold Spring Harbor, str. 92; Vaccine 11, 957 (1993)], při které byla přidávána DNA ptačí chřipky kuřatům im, ip a iv, čímž bylo dosaženo ochrany proti letální expozici.
Intravenózní injekci komplexu DNA: kationtový lipozom myši ukázali Zhu et al., [Science 261, 209-211 (9 července 1993); viz také WO 93/24640, 9. prosinec 1993], přičemž tato injekce měla za následek systémovou expresi klonovaného transgenu. V poslední době ohlásili Ulmer et al., [Science 259, 1745-1749, (1993)] heterologní ochranu proti infekci virem chřipky injekcí DNA, kódující virové proteiny chřipky.
Wang et al., [P.N.A.S. USA 90, 4156-4160 (květen 1993)] ukázali vytvoření imunologické odpovědi u myší proti HTV intramuskulámí injekcí klonovaného genomického (neštěpeného) genu HIV. Avšak úroveň imunologických odpovědí, která byla dosažena, byla velmi nízká a systém využíval části LTR (long terminál repeat) promotoru viru myšího tumoru prsu (MMTV) a částí promotoru a terminátoru opičího viru 40 (SV40). O viru SV40 je známo, že transformuje buňky, pravděpodobně integrací do buněčné DNA hostitele. Systém, popisovaný Wangem a dalšími, je tedy zcela nevhodný pro podávání člověku, které je hlavním předmětem předkládaného vynálezu.
WO 93/17706 popisuje způsob vakcinace zvířete proti viru, přičemž nosné částice byly pokryty genovým konstruktem a pokryté částice byly vpraveny do buněk zvířete.
Studie Wolffa a dalších (výše) původně ukázaly, že intramuskulámí injekce plazmidové DNA, kódující reporterový gen, má za následek expresi tohoto genu v myocytech v místě injekce a jeho blízkosti. Poslední zprávy ukázaly úspěšnou imunizaci myši proti chřipce injekcí plazmidu, kódujícího hemaglutinin chřipky typu A. (Montgomery, D.L. et al., 1993, Cell Biol., 12. str. 777783), nebo nukleoproteinu (Montgomery, D.L. et al., výše; Ulmer, J. B. et al., 1993, Science, 259. str. 1745-1749). První použití DNA imunizace pro herpetický virus popisují (Cox et al., 1993, J. Virol. 67, str. 5664-5667).
-2CZ 289383 B6
U myší a telat způsobila injekce plazmidu, kódujícího bovinní herpes virus 1 (BHV-1) glykoprotein g IV vytvoření protilátek anti-g IV. Po intranasálním podání viru BHV-1 měla imunizovaná telata snížené příznaky a podstatně méně viru, než kontroly.
Tuberkulóza (TB) je chronické infekční onemocnění plic, způsobené patogenem Mycobacterium tuberculosis. TB je ve světě jedna z klinicky nejvýznamnějších infekcí s každoročním výsledkem tří milionů úmrtí a 10 milionů nových případů. Odhaduje se, že až jedna třetina světové populace může být tuberkulózou infikována, přičemž v rozvojových zemích je hlášeno 55 milionů případů aktivní TB. Do začátku tohoto století byla úmrtnost na tuberkulózu v USA na první místě. Avšak se zlepšenými hygienickými podmínkami a s příchodem antimikrobiálních léků výskyt a mortalita stále klesaly až k bodu, kdy bylo předpovězeno, že nemoc by mohla být do roku 2000 vymýcena. Avšak v nejvíce vyvinutých státech počet případů aktivní TB každoročně od 80. let stoupal. Část tohoto návratu byla připisována přistěhovalectví a rostoucímu počtu jedinců s imunologickou nedostatečností, infikovaných HIV. Pokud nedojde k poklesu, předpokládá se, že TB si vyžádá v příštích deseti letech více než 30 milionů lidských životů. Co je na těchto číslech alarmující je to, že se stále více týkají kmenů M. tuberculosis, rezistentních na větší počet léčiv (multidrug-resistant, MDR). Tyto kmeny MDR nejsou léčitelné pomocí tradičních léků a byly odpovědné za několik vypuknutí onemocnění TB v poslední době, zvláště v městských centrech.
Proto jednou z klíčových složek v dlouhodobém přístupu k léčení TB bude účinná vakcína [pro přehled viz Bloom and Murray, 1993, Science 257,1055],
M. tuberculosis je intracelulámí patogen, který infikuje makrofágy a je schopen přežívat v nepříznivém prostředí fagolysozomu v tomto typu buňky. Většina vdechnutých bacilů je zničena aktivovanými alveolámími makrofágy. Bacily, které přežijí, se však mohou pomnožit v makrofázích a po smrti buňky se uvolnit, což signalizuje místní infiltrace lymfocytů, monocytů a makrofágů. Lyže makrofágů, naplněných bacily, je zprostředkována hypersenzitivitou zpožděného typu (DTH) a má za následek vyvinutí pevného kaseozního tuberkulu, obklopujícího oblast infikovaných buněk. Pokračující DTH způsobí zkapalnění tuberkulu, a tím uvolnění zachycených bacilů. Velká dávka extracelulámích bacilů spouští další DTH, což způsobuje poškození bronchů a disseminaci lymfatickými, hematogenními a bronchiálními cestami a popřípadě dovolí infekčním bacilům šířit se respirační cestou.
Imunita proti TB zahrnuje několik typů efektorových buněk. Účinným prostředkem minimalizace intracelulámího pomnožování mykobakterií je aktivace makrofágů cytokiny, jako je interferon-γ. Úplné eradikace bacilů tímto způsobem se však často nedosáhne. Získání ochrany proti TB vyžaduje T-lymfocyty. Mezi nimi se zdají důležité T buňky CD8+ a CD4+ [Ořme et al., 1993, J. Infect. Dis. 167, 1481). Buňky tohoto typu sekrenují jako odpověď na mykobakterie interferon-γ, což svědčí o imunologické odpovědi Thl, a mají cytotoxickou aktivitu vůči cílovým buňkám mykobakterií. V novějších studiích, kde se používalo β-2 mikroglobulin- a CD8defícientních myší, se pro poskytnutí ochrany proti M. tuberculosis ukázaly jako kritické odezvy CTL [Flynn et al., 1992, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 89, 12013; Flynn et al., 1993, J. Exp. Med. 178, 2249; Cooper et al, 1993, J. Exp. Med. 178, 2243]; Naopak se zdá, že B-lymfocyty se procesu nezúčastní a pasivní přenos antimykobakteriálních protilátek ochranu neposkytuje. Proto musí účinné vakcíny proti TB vytvořit imunologické odpovědi, zprostředkované buňkami.
Antigenní stimulace T buněk vyžaduje přítomnost MHC-molekul. Aby získaly mykobakteriální antigen přístup k drahám, kterými se antigeny vytvoří, musí být uvolněny z bakterie. V infikovaných makrofázích by toho mohlo být dosaženo sekrecí nebo bakteriální lyží. Mykobakterie mají mnoho potenciálních T buněčných antigenů a několik z nich je již identifikováno [Andersen 1994, Dan. Med. Bull. 4, 205]. Některé z těchto antigenů jsou bakterií vylučovány. Obecně se předpokládá, že imunita proti TB je zprostředkována CD8+ a CD4+T buňkami, zaměřenými proti těmto sekrenovaným antigenům. Na modelech myší a morčete bylo
-3CZ 289383 B6 dosaženo ochrany proti infekci bakteriemi TB, měřeno snížením úbytku tělesné hmotnosti, použitím směsi vylučovaných mykobakteriálních antigenů [Pal and Horowitz, 1992 Infect. Immunity 60, 4781; Andersen 1994, Infect. Immunity 62, 2536; Coilins, 1994, Veterin. Microbiol. 40, 95].
V bakterii M. tuberculosis bylo identifikováno několik potenciálně protektivních T buněčných antigenů, a některé z nich jsou zkoumány jako cílová místa pro vakcíny. Poslední práce naznačují, že převažující T buněčné antigeny jsou ty proteiny, které jsou sekrenovány mykobakterií během jejich pobytu v makrofázích, jako: i) komplex proteinů antigenů 85 (85A, 85B, 85C) [Wiker a Harboe, 1992, Microbiol. Rev. 56, 648], ii) 6 kDa protein zakončený ESAT6 [Andersen 1994, Infect. Immunity 62, 2536], iii) 38 kDA lipoprotein shomologií kPhoS [Young and Garbe, 1991, Res. Microbiol. 142, 55; Andersen, 1992, J. Infect. Dis. 166, 874], iv) 65 kDa GroEL heat-shock protein [Sivá a Lowrie, 1994, Immunol. 82, 244], v) 55 kDa protein bohatý na prolin a threonin [Romain et al, 1993, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 90, 5322], a vi) 19 kDa lipoprotein [Faith et al, 1991, Immunol. 74, 1].
Geny pro každý ze tří proteinů antigenů 85 (A, B, a C) byly klonovány a sekvenovány [Borremans et al., 1989, Infect. Immunity 57, 3123; Content et al., Infect. Immunity 59, 3205; DeWit et al 1994, DNA, Seq. 4, 267]. Navíc jsou tyto strukturně příbuzné proteiny cílovými místy pro silné odpovědi T-buněk jak po infekci, tak i vakcinaci [Huygen et al, 1988, Scand. J. Immunol. 27, 187; Launois et al, 1991, Clin. Exp. Immunol. 86, 286; Huygen et al, 1992, Infect. Immunity 60, 2880; Munk et al, 1994, Infect. Immunity 62, 726; Launois et al, 1994, Infect. Immunity 62, 3679]. Proto se proteiny antigenů 85 považují za dobrá cílová místa pro vakcíny.
Podstata vynálezu
Pro testování účinnosti DNA imunizace při prevenci onemocnění M.tb byly do eukaryotických expresních vektorů klonovány sekvence DNA, kódující protein M.tb. Tyto DNA konstrukty vyvolávají, pokud se injikují zvířatům, imunologickou odpověď. Imunizovaná zvířata jsou infikována mykobakterií, aby bylo možno vyhodnotit, jestli přímá imunizace DNA genem (nebo jinými geny M.tb) je může ochránit před onemocněním. Předmětem tohoto vynálezu jsou tedy nukleové kyseliny, včetně DNA konstrukt a RNA transkriptů, schopné po přímém zavedení do tkání zvířete injekcí nebo jiným způsobem indukovat expresi proteinů M.tb ze skupiny proteinů antigenů 85 (85A, 85B, 85C) in vivo. Injekce těchto nukleových kyselin může vyvolat imunologickou odpověď, která má za následek produkci citotoxických T-lymfocytů (CTL), specifických pro antigeny M.tb, stejně jako vyvolání odpovědi M.tb - specifických pomocných lymfocytů, které po následném napadení bakterií mají ochranný účinek. Tyto nukleové kyseliny je možno použít jako vakcíny pro indukci imunity vůči M.tb, která může zabránit infekci a/nebo zlepšit průběh onemocnění, souvisejících s M.tb.
Tento vynález poskytuje polynukleotid, který po přímém zavedení obratlovci in vivo včetně savců, jako je člověk, indukuje expresi kódovaných proteinů v těle zvířete. Termín polynukleotid zde označuje nukleovou kyselinu, která obsahuje nezbytné regulační prvky, takže po zavedení do živé buňky obratlovce je schopna zaměřit buněčné mechanismy na produkci translačních produktů, kódovaných geny, které polynukleotid obsahuje. Tímto polynukleotidem je polydeoxyribonukleová kyselina, obsahující geny Mycobacterium tuberculosis (M.tb) antigenů 85A, 85B, 85C, operativně připojené k transkripčnímu promotoru. V dalším provedení vynálezu obsahuje polynukleotidová vakcína polyribonukleovou kyselinu, kódující geny M.tb antigenů 85A, 85B, 85C, které jsou schopny translace mechanismy eukaryotické buňky (ribozomy, tRNA a jinými translačními faktory). V případě, že protein, kódovaný polynukleotidem, je takový, který se normálně ve zvířecí buňce s výjimkou patologických stavů nevyskytuje (tj. nějaký heterologní protein), například protein, spojený sM.tb, je aktivován imunitní systém zvířete za vzniku ochranné imunologické odpovědi. Protože tyto exogenní proteiny jsou produkovány vlastními
-4CZ 289383 B6 tkáněmi zvířete, exprimované proteiny jsou zpracovávány hlavním histokompatibilním systémem (MHC) analogickým způsobem, jako se vyskytuje při skutečné infekci M.tb. Jak ukazuje tento vynález, má to za následek indukci imunologické odpovědi proti M.tb. Polynukleotidy pro účely vytvoření imunologických odpovědí na kódovaný protein se zde označují jako polynukleotidové vakcíny nebo PNV.
Mnoho provedení předmětného vynálezu může odborník v oboru vyvodit ze specifikace. Tak např. může být úspěšně použito jiných transkripčních promotorů, terminátorů, nosných vektorů nebo specifických genových sekvencí.
Předkládaný vynález dále poskytuje použití polynukleotidu, kteiý po zavedení do tkáně savce indukuje expresi polynukleotidu in vivo, a tím je produkován kódovaný protein. Odborníku v oboru je zřejmé, že je možno vytvořit variace a deriváty nukleotidové sekvence, kódující protein, které mění sekvenci aminokyselin kódovaného proteinu. Změněný exprimovaný protein může mít pozměněnou sekvenci aminokyselin, ale také ještě vyvolávat imunologickou odpověď, reagující s mykobakteriálním proteinem, tj. být funkčním ekvivalentem z hlediska antigenní funkce. Navíc mohou být také konstruktovány fragmenty úplných genů, kódující části nebo úplný protein. Tyto fragmenty mohou kódovat protein nebo peptid, vyvolávající vznik protilátek, reagujících s mykobakteriálním proteinem, a jsou proto považovány za funkční ekvivalenty z hlediska antigenní funkce.
V jednom z provedení tohoto vynálezu je gen, kódující genový produkt M.tb antigenů 85 A, 85B, 85C, zařazen do expresního vektoru. Vektor obsahuje transkripční promotor, rozpoznávaný eukaryotickou RNA polymerázou a terminátor transkripce, umístěný na konci sekvence, kódující gen M.tb. Ve výhodném provedení vynálezu je promotorem promotor cytomegaloviru se sekvencí intronu A (CMV-intA), avšak odborníkům v oboru bude zřejmé, že může být použito jakéhokoliv z velkého množství jiných známých promotorů jako je silný imunoglobulinový promotor nebo promotorů jiného eukaryotického genu. Výhodným terminátorem transkripce je terminátor bovinního růstového hormonu. Výhodná je kombinace CMVintA-BGH terminátor. Navíc je možno pro usnadnění přípravy prokaryotických buněk s polynukleotidem popř. zařadit do expresního vektoru pod transkripční kontrolu vhodného prokaryotického promotoru markér rezistence k antibiotiku. Může být použito genů pro rezistanci kampicilinu, neomycinu nebo jiným vhodným antibiotikům. Ve výhodném provedení tohoto vynálezu kóduje gen pro rezistanci k antibiotikům genový produkt pro rezistanci k neomycinu/kanamycinu. Pro dosažení vysoké produkce polynukleotidu růstem v prokaryotických organismech je výhodné, pokud vektor obsahuje prokaryotický počátek replikace a má vysoký počet kopií. Tyto prvky poskytuje jakýkoliv z velkého množství komerčně dostupných prokaryotických klonovacích vektorů. Ve výhodném provedení tohoto vynálezu jsou tyto funkce poskytovány komerčně dostupnými vektory, známými jako série pUC. Může však být žádoucí odstranit sekvence DNA, které nejsou nezbytné. Tak mohou být odstraněny sekvence, kódující v pUC lacZ a lacl. Je také vhodné, když se vektory nemohou replikovat v eukaryotických buňkách. To minimalizuje riziko integrace sekvencí polynukleotidové vakcíny do genomu příjemce.
V další provedení se používá expresního vektoru pnRSV, přičemž jako promotoru je použita část long terminál repeat (LTR) viru Rousova sarkomu (RSV). V dalším provedení se používá VI, mutovaný vektor pBR322, do kterého byl klonován CMV promotor a BGH terminátor transkripce. Ve výhodném provedení tohoto vynálezu byly kombinovány prvky VI a pUC19 za vzniku expresního vektoru, označovaného VIJ.
Do vektoru VIJ, VIJtPA nebo jiného požadovaného expresního vektoru je klonován některý z genů M.tb, jako je jeden z komplexních genů antigenu 85 nebo kterýkoliv jiný gen M.tb, který může indukovat imunologické odpovědi proti Mtb (CTL, pomocné T-lymfocyty a protilátky).
V dalším provedení je gen pro ampicilinovou rezistenci z vektoru VIJ odstraněn a nahrazen genem pro neomycinovou rezistenci za vytvoření vektoru VIJ-neo, do kterého může být klonován některý z rozdílných genů M.tb pro použití podle tohoto vynálezu. V ještě dalším
-5CZ 289383 B6 provedení je vektorem vektor VIJns, který je stejný jako VIJ-neo s výjimkou toho, že do jiného restrikčního místa Kpnl v poloze 2114 vektoru VIJ-neo bylo vloženo jediné restrikční místo Sfíl. Výskyt míst Sfil v DNA lidského genomu je velmi nízký (přibližně jedno místo na sto tisíc bází). Tento vektor tedy dovoluje monitorování integrace expresního vektoru do hostitelské DNA jednoduchým štěpením extrahované genomické DNA enzymem Sfil. V dalším provedení je vektorem vektor VIR. Z tohoto vektoru je odstraněno maximální možné množství DNA, a tím je vytvořen vysoce kompaktní vektor. Tento vektor dovoluje použít delší inzerty s menšími ohledy na to, jestli jsou kódovány nežádoucí sekvence, a optimalizace přijímání konstruktu, kódujícího specifické virové geny, zavedeného do okolní tkáně, buňkami. Výše uvedené modifikace vektorů a vývojové postupy mohou být uskutečněny způsoby, které jsou odborníkům v oboru známé.
Odborník v oboru rozpozná, že jedním z použití předkládaného vynálezu je poskytnutí systému pro testování a analýzu in vivo stejně jako in vitro, takže může být vytvořena korelace sekvenční diverzity M.tb s proliferativními odezvami CTL a T-buněk i jinými parametry. Izolace a klonování těchto různých genů může být prováděna odborníkům v oboru známými způsoby. Vynález dále poskytuje způsob pro systematickou identifikaci kmenů a sekvencí M.tb pro výrobu vakcín. Zavedení genů z primárních izolátů z kmenů M.tb poskytuje imunogen, který indukuje imunologické odpovědi proti klinickým izolátům organismu a splňuje tedy požadavky, které dosud v oboru nebyly možno splnit. Dále, jestliže se mění virulentní izoláty, imunogen může být podle potřeby změněn, aby zahrnul nové sekvence.
V jednom z provedení tohoto vynálezu je gen, kódující protein M.tb, přímo připojen k transkripčnímu promotoru. Může být žádoucí použití tkáňově specifických promotorů nebo zesilujících sekvencí (enhancerů), například enhanceru svalové kreatinkinázy (MCK), aby se umožnilo omezit expresi polynukleotidu v určitých typech tkání. Např. myocyty jsou terminálně diferenciované buňky, které se nedělí. Integrace cizí DNA do chromozomů bude patrně vyžadovat jak buněčné dělení, tak i syntézu proteinů. Může být tedy výhodné omezení exprese proteinů na buňky, které se nedělí, jako jsou myocyty. Použití promotoru CMV je však vhodné pro dosažení exprese v mnoha tkáních, do kterých byl zaveden PNV.
M.tb a jiné geny jsou s výhodou ligovány do expresního vektoru, který byl speciálně optimalizován pro polynukleotidovou vakcinaci. Elementy obsahují promotor transkripce, imunogenní epitopy, další cistrony, kódující geny pro zvýšení nebo modulaci imunologické odpovědi sjejich vlastními promotory, terminátorem transkripce, bakteriálním počátkem replikace a genem pro rezistenci k antibiotiku, jak je popsáno výše. Vektor může popřípadě obsahovat vnitřní místa přístupu kribozomu (ribosome entry sites, IRES), pro expresi polycistronní mRNA. Odborníkům v oboru bude jasné, že RNA, která byla transkribována in vitro pro produkci multicistronní mRNA, kódované DNA protějšky, je rovněž předmětem tohoto vynálezu. Pro tento účel je žádoucí jako transkripčního promotoru užít takových silných promotorů RNA polymerázy, jako jsou T7 nebo SP6, a provedení in vitro run-on transkripce s templátem linearizované DNA. Tyto metody jsou v oboru dobře známé.
Ochranná účinnost polynukleotidových imunogenů M.tb proti případnému napadení bakteriemi je demonstrována imunizací DNA podle tohoto vynálezu. To je výhodné, protože není přítomen žádný infekční organismus, není požadována replikace/uspořádání bakterie a je dovolená volba determinanty. Navíc protože sekvence mykobakteriálních genových produktů může být konzervována mezi různými kmen M.tb, je získána ochrana proti budoucímu napadení jiným kmenem M.tb.
Injekce expresního vektoru DNA, kódujícího antigen 85A, B nebo C může mít za následek vytvoření významné ochranné imunity proti budoucímu napadení. Zvláště mohou být vytvářeny odpovědi specifických CTL a pomocných T-lymfocytů.
Protože každý z genových produktů M.tb vykazuje vysoký stupeň konzervace mezi různými kmeny M.tb a protože imunologické odpovědi mohou být vytvářeny jako odpověď na
-6CZ 289383 B6 intracelulámí expresi a zpracování MHC, očekává se, že mnoho konstruktů M.tb PNV dá vzniknout imunologickým odpovědím se zkříženou reaktivitou.
Vynález poskytuje prostředek pro indukci heterologní ochranné imunity bez potřeby samoreplikujícího prostředku nebo pomocné látky. Vytváření vysokého titru protilátek proti exprimovaným proteinům po injekci virálního proteinu a DNA lidského růstového hormonu [Tang et. al., Nátuře 356, 152, 1992] ukazuje, že jde o snadný a vysoce účinný prostředek pro vytváření vakcín, založených na protilátkách, buď odděleně nebo v kombinaci svakcínami cytotoxických T-lymfocytů a pomocných T-lymfocytů, zaměřených proti konzervovaným antigenům.
Snadnost produkce a čištění konstruktů DNA je zřejmá ve srovnání s tradičním čištěním proteinů a umožňuje vytváření kombinovaných vakcín. Tak mohou být připraveny vícenásobné konstrukty, např. komplexní geny antigenu 85 a mohou být připraveny jakékoliv jiné geny M.tb včetně genů, které nepocházejí -z.bi.tb, mohou být míšeny a podávány společně. Navíc je po injekci DNA zachována exprese proteinů [H. Lin et al., Circulation 82, 2217 (1990); R.N. Kitsis etal., Proč. Nati. Acad. Sci. (USA) 88, 4138 (1991); E. Hansen etal., FEBS Letí. 290, 73 (1991); S. Jiao et al.., Num. Gene Therapy 3, 21 (1992); J.A. Wolff et al., Human Mol. Genet. 1, 363 (1992)], může být zvýšeno zachování paměti B- a T-buněk [D. Gray and P. matzinger, J. Exp. med. 174, 969 (1991); S. Oehen et al., tamtéž 176, 1273 (1992)], a tím připravit podmínky pro dlouhotrvající humorální a buněčnou imunitu.
Množství exprimovatelné DNA nebo přepisované RNA k zavedení do příjemce vakcíny může kolísat ve velmi širokém rozmezí a může závist na síle promotorů transkripce a translace. Navíc velikost imunologické odpovědi může záviset na stupni exprese proteinu a na imunogenicitě exprimovaného genového produktu. Obecně se účinná množství pohybují v rozsahu od přibližně 1 ng až 5 mg, 100 ng až 2,5 mg, 1 pg až 750 pg a s výhodou přibližně 10 pg až 300 pg DNA, která jsou podávána přímo do svalové tkáně. Vhodné jsou také podkožní injekce, intradarmální zavedení, vtlačení skrz kůže a jiné způsoby podávání, jako je intraperitoneální, intravenózní nebo inhalační. Rovněž se předpokládá, že je možno provádět posilovači očkování. Po vakcinaci polynukleotidovým imunogenem M.tb se také předpokládá udržování proteinovými imunogeny M.tb, jako je komplex antigenu 85. Může být také výhodné parenterální podávání, jako intravenózní, intramuskulámí, subkutánní nebo jinými způsoby podávání proteinu interleukin-12 (nebo jiných cytokinů, např. GMCSF), současně nebo po parenterálním podání PNV podle tohoto vynálezu.
Polynukleotid může být nahý, tj. nespojený s jinými proteiny, pomocnými látkami nebo jinými prostředky, které ovlivňují imunitní systém příjemce. V tomto případě je žádoucí, aby byl polynukleotid ve fyziologicky přijatelném roztoku, jako je sterilní fyziologický roztok nebo sterilní pufrovaný fyziologický roztok, přičemž roztoky nemají být na tyto látky omezeny. DNA může být alternativně asociována s lipozomy, jako jsou licitinové lipozomy nebo jiné v oboru známé lipozomy za vzniku směsi DNA-lipozom, nebo může být DNA asociována s pomocnými látkami, známými v oboru, aby bylo dosaženo zesílení imunologických odpovědí, jako je protein nebo jiný nosič. Mohou být také použity prostředky, které usnadňují vstup DNA do buňky, z nichž neomezují příklady jsou ionty vápníku. Tyto látky se zde obecně označují jako prostředky usnadňující transfekci a farmaceuticky přijatelné nosiče. V oboru jsou známy také techniky povlékání mikroprojektilů polynukleotidem, které jsou také užitečné ve spojení s tímto vynálezem. Pro humánní použití je užitečné, aby konečný produkt DNA byl ve farmaceuticky přijatelném nosiči nebo pufrovaném roztoku. Farmaceuticky přijatelné nosiče nebo roztoky pufrů jsou v oboru známy a zahrnují přípravky, popisované v řadě textů, jako je Remington‘s Pharmaceutical Sciences.
V dalším provedení je vynálezem polynukleotid, který obsahuje sousedící sekvence nukleových kyselin, které jsou po zavedení uvedeného polynukleotidu do eukaryotické tkáně in vivo schopny exprese za vytvoření genového produktu. Kódovaný genový produkt působí s výhodou buď jako
-7CZ 289383 B6 imunostimulant nebo jako antigen, schopný vyvolat imunologickou odpověď. Sekvence nukleových kyselin v tomto provedení tedy kódují imunogenní epitop M.tb a popřípadě cytokin nebo stimulační prvek T-buňky, jako např. člen proteinové rodiny B7.
Imunizace genem má proti imunizaci genovým produktem několik výhod. První je relativní jednoduchost, s jakou může být přirozený nebo téměř přirozený antigen předložen imunitnímu systému. Savčí proteiny, exprimované rekombinantním způsobem v bakteriích, kvasinkách nebo dokonce savčích buňkách často vyžadují pro zajištění příslušné antigenicity výrazné úpravy. Druhou výhodou imunizace DNA je schopnost imunogenu vstoupit do procesu MHC třídy I a vzbudit odpověď cytotoxické T-buňky. Iminizace myší DNA, kódující nukleoprotein (NP) chřipky A vyvolala odpověď CD8+ na NP, která myši chránila proti napadení heterologními kmeny chřipky (Montgomery, D.L. et al., výše; Ulmer, J. et al., výše).
Existuje silný důkaz pro to, že buňkami zprostředkovaná imunita je důležitá při kontrole infekce M.tb [Ořme et al, 1993, J. Infect. Dis. 167, 1481; Cooper et al. 1993, J. Exp. Med. 178, 2243; Flynn et al., 1993, J. Exp. med. 178, 2249; Ořme et al, 1993, J. Immunol. 151, 518). Protože imunizace DNA může vyvolat jak humorální, tak i buněčné imunitní odpovědi, její největší výhodou může být to, že poskytuje relativně jednoduchý způsob prozkoumat velké množství genů M.tb na jejich schopnost vakcinace.
Imunizace injekcí DNA také dovoluje, jak je diskutováno výše, pohotové vytvoření vícesložkových subjednotkových vakcín. Nedávno byla ohlášena souběžná imunizace větším množstvím genů chřipky. (Donnelly, J. et al., 1994, Vaccines, str. 55-59). Vložení genů, jejichž produkty aktivují odlišné části imunitního systému, do vakcíny proti M.tb, může také poskytnout dobrou ochranu proti budoucímu napadení.
Vakcíny podle předkládaného vynálezu jsou použitelné pro podávání domácím nebo hospodářským zvířatům stejně jako člověku. Vakcíny podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro prevenci a/nebo potírání infekce jakýchkoliv hospodářských zvířat, včetně, ale ne omezeno na mléčný skot, který je náchylný na mykobakteriální infekci. Techniky podávány těchto vakcín zvířatům a lidem jsou známy odborníkům ve veterinárním, popř. humánním lékařství.
Následující příklady mají ilustrovat předkládaný vynález, aniž by ho však měly jakkoliv omezovat.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Vektory pro produkci vakcíny
A) Expresní vektor V1
Expresní vektor VI byl konstruován z pCMVIE-AKI-DHFR [Y. Whant et al., J. Virol. 61, 1769 (1987)]. Geny AKI a DHFR byly odstraněny štěpením vektoru EcoR I a samovolnou ligací. Tento vektor neobsahuje v CMV promotoru intron A, takže byl přidán jako fragment PCR kterému chybělo vnitřní štěpící místo Sac I [v poloze 1855 podle číslování v: B.S. Chapman et al., Nuc. Acids Res. 19, 3979 (1991)]. Templát, použitý pro reakce PCR, byl pCMVintA-Lux, vyrobeného ligací fragmentů Hind III a Nhe I z pCMV6al20 [viz B.S. Champan et al., výše,] který zahrnuje zesilující sekvenci/promotor hCMV-IE 1 a intron A, do štěpících míst Hind III a Xba I plazmidu pBL3 za vytvoření pCMVIntBL. Fragment luciferázového genu o délce 1881
-8CZ 289383 B6 párů bází (HindlII-Sma I Klenow filled—in) z RSV-Lux [J.R. de Wet et al., Mol. Cell Biol. 7, 725, 1987] byl klonován do restrikčního místa Sal I plazmidu pCMVIntBL, který byl doplněn Klenowovým fragmentem a vystaven působení fosfatázy.
Primery, které přemostily intron A, jsou:
5‘ primer, SEQ,ID:1: 5‘-CTATATAAGCAGAG CTCGTTTAG-3‘;
3‘ primer, SEQ ID:2: 5‘-GTAGCAAAGATCTAAGGACGGTGA CTGCAG-3‘.
Primery, použité pro odstranění štěpícího místa Sac I jsou:
fragment ve správném smyslu primer, SEQ ID:3: 5-GTATGTGTCTGAAAATGAGCGTGGAGATTGGGCTCGCAC-3‘ a fragment v opačném smyslu primer, SEQ ID:4: 5‘-GTGCGAGCCCAATCTCCACGCTCATTTTCAGACACA TAC-3‘.
PCR fragment byl štěpen enzymy Sac I a Bgl II a vložen do vektoru, který byl štěpen stejnými enzymy.
B) Expresní vektor VIJ
Účelem vytvoření vektoru VIJ bylo odstranit úseky promotoru a terminátoru transkripce z vektoru VI, aby je bylo možno umístit do lépe definované sestavy, vytvořit kompaktnější vektor a zlepšit výtěžky při čištění plazmidu.
VIJ je odvozen z vektorů VI a pUC 18, komerčně dostupného plazmidu. VI byl štěpen restrikčními enzymy Sspl a EcoRI za vytvoření dvou fragmentů DNA. Menší z těchto fragmentů, který obsahuje promotor CMVintA a terminátor transkripce bovinního růstového hormonu (BGH), který řídí expresi heterologních genů, byl vyčištěn z genu na agarózové elektroforéze. Konce tohoto fragmentu DNA pak byly „zatupeny“ za použití T4 DNA polymerázy, aby byla umožněna jeho ligace do dalšího DNA fragmentu s „tupými“ konci.
Jako základ tohoto expresního vektoru byl použit plazmid pUC18. Je znám tím, že poskytuje vysoké výtěžky plazmidu, má dobře definovanou sekvenci a funkci a malou velikost. Částečným štěpením restrikčním enzymem Haell byl z tohoto vektoru odstraněn celý lac operon. Zbylý plazmid byl čištěn na agarózovém gelu, zatupen T4 DNA polymerázou, štěpen telecí žaludeční alkalickou fosfatázou a ligován do elementu CMVintA/BGH, který byl popsán výše. Byly získány plazmidy, které měly obě možné orientace promotorových prvků vzhledem ke kostře pUC. Jeden z těchto plazmidů poskytoval mnohem vyšší výtěžky DNA v bakterii E. coli a byl označen VJ. Struktura tohoto vektoru byla ověřena sekvenční analýzou spojovacích oblastí a bylo ukázáno, že poskytuje srovnatelnou nebo vyšší expresi heterologních genů ve srovnání s VI.
C) Expresní vektor V1J neo
Bylo nezbytné odstranit gen ampr, používaný pro selekci bakterie, nesoucí VIJ, protože ve velkoobjemových fermentorech může být ampicilin nežádoucí. Gen ampr byl z kostry pUC VIJ odstraněn štěpením restrikčními enzymy Sspl a Eamll051. Zbylý plazmid byl čištěn agarózovou elektroforázou, zatupen T4 DNA polymerázou a štěpen telecí žaludeční alkalickou fosfatázou. Pomocí restrikčního enzymu Pstl byl z plazmidu pUC4K vyštěpen gen kanr, odvozený od transposonu 903, čištěn agarózovou elektroforézou a zatupen T4 DNA polymerázou. Tento fragment byl ligován s kostrou VIJ, čímž byly odvozeny plazmidy s genem kanr v obou orientacích, které byly označeny jako VIJneo #1 a #3. Sekvence každého z těchto plazmidů byla potvrzena analýzou restrikčním enzymovým štěpením, DNA sekvenováním spojovacích oblastí a bylo zjištěno, že produkuje podobné množství plazmidu jako VIJ. Tyto vektory VIJneo měly
-9CZ 289383 B6 také srovnatelnou expresi heterologních genových produktů jako VIJ. Jako expresní konstrukt by vybrán VIJneo #3, dále označovaný jako VIJneo, který obsahovat gen kanr ve stejné orientaci jako gen ampf ve VIJ.
D) Expresní vektor V1 Jns
Aby bylo umožněno studium integrace, do vektoru VIJnebo bylo přidáno štěpící místo Sfil. Do místa Kpnl uvnitř sekvence BGH vektoru byl přidán komerčně dostupný Sfil linker o délce 13 párů bází (New England BioLabs). VIJneo byl linearizován enzymem Kpnl, vyčištěn na gelu, zatupen T4 DNA polymerázou a ligován do Sfil linkeru s tupými konci. Izoláty klonů byly vybrány restrikčním mapováním a ověřeny sekvenováním přes linker. Nový vektor byl označen VI Jns. Exprese heterologních genů VI Jns (s místem Sfil) byla srovnatelná s expresí stejných genů ve VIJneo (s místem Kpnl).
E) VIJns-tPa
Aby bylo možno přidat k sekrenovaným a/nebo membránovým proteinům heterologní vedoucí peptidovou sekvenci, byl VI Jns modifikován, aby zahrnoval vedoucí sekvenci lidského tkáňově specifického plazminigenového aktivátoru (tPA). Syntetické komplementární oligomery byly spojeny a potom ligovány do VIJn, který byl štěpen enzymem BglII. Oligomery ve správném a opačném smyslu byly 5‘-GATC ACC ATG GAT GCA ATG AAG AGA GGG CTC TGC TGT GTG CTG CTG CTG TGT GGA GCA GTC TTC GTT TCG CCC AGC GA-3‘, SEQ.ID.5:, a 5‘-GAT CTC GCT GGG CGA AAC GAA GAC TGC TCC ACA CAG CAG CAG CAC ACA GCA GAG CCC TCT CTT CAT TGC ATC CAT GGT-3‘, SEQ.ID:6. V oligomerů se správným smyslem je podtržena Kozokova sekvence. Tyto oligomery mají překrývající se báze kompatibilní pro ligaci do sekvencí, štěpených BglII. Po ligaci je místo proti směru BglII zničeno, zatímco druhé místo po směru BglII je zachováno pro následné ligace. Sekvence jak spojovacích míst, tak i celé vedoucí sekvence tPA, byly ověřovány DNA sekvenováním. Navíc, aby bylo možno potvrdit shodu s optimalizovaným vektorem VI Jns (=VlJneo se štěpícím místem Sfil), bylo v místě Knpl uvnitř terminátorové oblast BGH vektoru VIJn-tPa vloženo místo Sfil pomocí zatupení místa Kpnl T4 DNA polymerázou, následovaným ligaci s linkerem Sfil (katalogové #1138, New England Biolabs). Tato modifikace byla ověřena restrikčním štěpením a agarózovou elektroforézou.
F) pGEM-3-X-IRES-B7 (kde X = jakýkoli antigenní gen) Jako příklad dicistronního konstruktu vakcíny, která poskytuje koordinovanou expresi genu, kódujícího imunogen a genu, kódujícího imunostimulační protein, byl pomocí PCR amplifikován z buněčné linie B-lymfomu CH1 (získané z ATCC) gen murin B7. B7 je členem rodiny proteinů, které poskytují nezbytno kostimulaci aktivaci T-buněk antigenem v souvislosti s hlavními histokompatibilními komplexy I a II. CH1 buňky jsou dobrým zdrojem B7 mRNA, protože jsou fonetypově konstitutivně aktivovány a B7 je primárně exprimován aktivovanými buňkami, produkujícími antigen, jako jsou B buňky a makrofágy. Tyto buňky byly dále stimulovány in vitro použitím cAMP nebo IL-4 a mRNA, připravené použitím standardních postupů s guanidinium thiokyanátem. Syntéza cDNA byla prováděna s použitím této mRNA pomocí kitu GeneAmp RNA PCR (Perkin-Elmer Cetus) a příměrového oligomerů (5‘-GTA CCT CAT GAG CCA CAT AAT ACC ATG-3‘, SEQ.ID:7), specifického pro B7, umístěného po směru od translačního otevřeného čtecího rámce B7. B7 byl amplifikován pomocí PCR s použitím následujících PCR oligomerů ve správném a opačném smyslu: 5’-GGT ACA AGA TCT ACC ATG GCT TGC AAT TGT CAG TTG ATG C-3’, SEQ. ID:8: a 5’-CCA CAT AGA TCT CCA TGG GAA CTA AAG GAA GAC GGT CTG TTC-3’, SEQ. ID:9:. Tyto oligomery poskytují restrikční místa BglII na koncích inzertu a Kozákovu translační iniciační sekvenci, obsahující restrikční místo Ncol a další místo Ncol, umístěné bezprostředně před 3’-koncovým místem BglII. Štěpení enzymem Ncol poskytlo fragment, vhodný pro klonování do pGEM 3-IRES který byl štěpen enzymem Ncol. Výsledný vektor pGEM-3-IRES-B7, obsahuje
-10CZ 289383 B6 kazetu IRES-B7 která může být snadno převedena na VIJns-X, kde X představuje gen, kódující antigen.
G) pGEM-3-X-IRES-GM-CSF (kde X = jakýkoli antigenní gen) Tento vektor obsahuje kazetu analogickou jako v položce C s výjimkou toho, že na místo genu B7 je použit gen pro imunostimulující cytokin, GM-CSF. GM-CSF je cytokin pro diferenciaci a stimulaci makrofágů, o kterém bylo zjištěno, že vyvolává silní antitumorové aktivity T-buněk in vivo [G. Dranoff et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90, 3539 (1993).
H) pGEM-3-X-IRES-lL-12 (kde X = jakýkoli antigenní gen) Tento vektor obsahuje kazetu analogickou jako v položce C s výjimkou toho, že na místo genu B7 je použit gen pro imunostimulující cytokin IL-12. Ukázalo se, že IL-12 má důležitou roli při postupu imunologických odpovědí směrem k buněčným drahám, kde jsou dominujícími T-buňky, což je v protikladu k humorálním imunologickým odezvám [L. Alfonso etal., Science, 263,235,1994].
Příklad 2
Příprava vektoru VIR
Při pokračujícím úsilí o optimalizaci základního vakcinačního vektoru byl připraven derivát VIJns, označený jako VIR. Cílem konstrukce tohoto vektoru bylo získat vakcinační vektor bez nepotřebných sekvencí DNA s minimální velikostí, který si stále zachovává celkově optimalizované expresní charakteristiky exprese heterologního genu a vysoké výtěžeky plazmidu, jak je tomu u VIJ a VIJns. Z literatury i experimentálně bylo zjištěno, že 1) bez ovlivnění výtěžku plazmidu z bakterie lze odstranit oblasti v kostře pUC, obsahující počátek replikace E. coli; 2) může bý odstraněn 3’-oblast genu kanr, která následuje po otevřeném čtecím rámci kanamycinu, pokud na její místo je vložen bakteriální terminátor; a 3) ~300 bp od 3’-poloviny terminátoru BGH může být odstraněno bez ovlivnění jeho regulační funkce (následující po původním restřikčním štěpícím místě Kpnl uvnitř elementu BGH).
VIR byl konstruován s použitím PCR pro syntézu tří segmentů DNA zVIJns, přestavujících DMVintA promotor/BGH terminátor, počátek replikace a oblasti kanamycinové rezistence. Ke každému konci segmentu byla přidána s použitím PCR oligimerů štěpící místa pro restrikční enzymy, jedinečná pro každý segment: Sspl a Xho I pro CMVintA/BGH; EcoRV a BamHI pro gen kanr; a Bell a Sall pro orf.
Tato enzymová místa byla zvolena proto, že dovolují přímou ligaci každého z DNA segmentů, odvozeného pomocí PCR bez následné ztráty těchto míst: EcoRV a Sspl zahechávají DNA s tupými konci, které jsou kompatibilní pro ligaci, zatímco BamHI a Bell zanechávají komplementární překrývající se konce, jako je tomu u Sall a Xhol. Po získání těchto segmentů pomocí PCR byl každý segment štěpen vhodnými výše uvedenými restrikčními enzymy a potom společně ligován v jediné reakční směsi, obsahující všechny tři segmenty DNA. 5’-konec počátku orf byl navržen tak, aby obsahoval T2 rho independentní terminátorovou sekvenci, která se normálně v této oblasti nalézá, a může tedy poskytnou terminační informaci pro gen pro kanamycinovou rezistenci. Identita ligovaného produktu byla potvrzena štěpením restrikčními enzymy (>8 enzymů) stejně jako sekvenováním DNA ligačních spojení. Výtěžky DNA plazmidu a heterologní exprese s použitím virových genů se u VIR jeví podobná jako u VIJns. Celková redukce velikosti vektoru, které bylo dosaženo, je 1346 bp (VIJns = 4,86 kb; VIR = 3,52 kb).
-11 CZ 289383 B6
Sekvence PCR oligomerů, použité pro syntézu VIR (restrikční štěpící místa jsou podtržena a identifikována v hranatých závorkách po uvedené sekvenci):
(1) 5’-GGT ACA AATATT GG CTA TTG GCC ATT GCA TAC G-3’ [Sspl], SEQ.ID: 10:;
(2) 5’-CCA CAT CTC GAG GAA CCG GGT CAA TTC TTC AGC ACC-3’ [Xhol], SEQ.ID: 11.
(pro segment CMVintA/BGH) (3) 5’-GGT ACA GAT ATC GGA AAG CCA CGT TGT GTC TCA AAA TC-3’ [EcoRV], SEQ.ID: 12:
(4) 5’-CCA CAT GGA TCC G TAA TGC TCT GCC AGT GTT ACA ACC-3’ [BamHI], SEQ.ID: 13:
(pro genový segment rezistence proti kanamycinu) (5) 5’-GGT ACA TGA TCA CGT AGA AAA GAT CAA AGG ATC TTC TTG-3’ [Bell], SEQ.ID: 14:, (6) 5’-CCA CAT GTC GAC CC GTA AAA AGG CCG CGT TGC TGG-3’ [Sall], SEQ.ID: 15:
(pro počátek replikace E. colí)
Příklad 3
Kultivace buněk a transfekce
Pro přípravu stabilně transfekovaných buněčných linií, exprimujících antigeny M.tb byly pěstovány buňky RD (lidský rhabdomyosarkom ATCC CCL 136) při 37 °C, 5% CO2, v modifikovaném médiu Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM), doplněným 10% teplem inaktivovaného fetálního bovinního séra, 20m M HEPES, 4 mM L-glutaminu, a 100 pg/ml penicilinu a streptomycinu. Buňky byly vysety v množství 1,5 x 106 buněk/lOOmm2 misku a pěstovány 18 hodin. Buňky byly transfekovány množstvím 10 pg/misku TB konstruktu a 10 pg kotransfekovaného Cat konstruktu s použitím kitu CellPhect kit (Pharmacia) a byl proveden glycerolový šok (15% glycerol vPBS, pH 7,2 po dobu 2,5 min) 5 hod po přídavku DNA k buňkám. Kultury byly sklizeny 72 hodin po transfekci omytím ploten 2 x 10 ml ledového PBS, pH 7,2, přídavkem 5 ml ledového TEN pufru (40 mM, Tris-Cl, pH 7,5, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl) a seškrabáním. Pro analýzu exprese proteinů byly centrifugáty lyžovány v 50 pl pufru Single Detergent Lysin Buffer (50 mM Tris-Cl, pH 8,0, 150 mM NaCl, 0,02% NaN3, 1 % Nonidet P-40, 100 mM PMSF, 2 pg/ml aprotinin, 2 pg/ml leupeptin, a 1 pg/ml Pepstatin A) a sonikovány na ledu (2 - 15 s expozice). Lyzáty byly centrifugovány při 13 000 x g, 4 °C, po dobu 10 min. Koncentrace proteinů byla určována metodou podle Brandforda, 20 pg proteinu buněčného extraktu bylo naneseno na dráhu polyakrylamidového gelu (Novex) s 10% TRISglycinem, potom přeneseno na membránu Immobilon P 5 (Millipore). Imunobloty byly ponechány přes noc reagovat s myší monoklonální protilátkou TD17-4 v řetění 1 : 20, [Huygen et al, 1994, Infect. Immunity 62, 363], potom následovala 1,5 hodinová reakce skozí antimyší IgGFc peroxidázou (Jackson) v ředění 1 : 1000. Bloty byly vyvinuty pomocí kitu ECL (Amarsham).
-12CZ 289383 B6
Příklad 4
Klonování a příprava DNA
1. Konstrukce VlJns-tPA-85A (obsahujícího matumí AG85A se signální sekvencí tPA) byla provedena s použitím následujících primerů:
fragment ve správném smyslu 85A. Cl primer [SEQ.ID.NO.:16]
GG AAG ATC TTT TCC CGG CCG GGC TTG CCG
Bgl II fragment v opačném smyslu 85A primer [SEQ.ID:NO.:17)
GGAAGATCTTGTCTGTTCGGAGCTAGGC.
Ag85A zM. tuberculosis byl amplifikován zplazmidu p85A.tub, který byl připraven ligací fragmentu o délce 800 bp Hind III do fragmentu 1600 bp HindlII-Sphl z obr. 2 podle: Borremans et al. 1989 [Infect. Immunity 57, 3123]. Výsledný inzert 2400 bp byl subklonován do míst Hind III a Sph I vektoru BlueScribe M13+. Celá kódující sekvence a okrajové oblasti v BlueScribe M 13a (VCS/Stratagene) byly amplifikovány PCR s uvedenými primery v následujících podmínkách. Každá 100 μΐ reakce obsahuje 2,5 U enzymu Cloned PFU DNA Polymerase (Stretagene), 200 mM dNTP, 0,5 pg každého z primerů a 250 ng templátu DNA vreakčním pufru, doplněném enzymem (Stratagen). Termální reaktor Hybaid byl naprogramován následujícím způsobem: 5 min denaturace při 94 °C následovaná 25 cykly (1 min při 94 °C, 2 min při 55 °C a 3 min při 72 °C), zakončená desetiminutovým prodloužením při 72 °C.
Amplifikovaná DNA byla štěpena 50 pg/ml enzymu Proteinase K (Boehringer Mannheim) po dobu 30 min při 37 °C, zahřívána 10 min při 95 °C, potom následovaly 2 fenolové extrakce (chloroform - izoamylalkohol) a vysrážená jedním olejem izopropylalkoholu, promyta dvakrát 70% ethanolem, usušena a rozpuštěna ve 20 μΐ H2O. 3 μg amplifikované DNA byly štěpeny 40 U Bgl II (Boehringer Mannhei) a 907 bp fragment (v případě 85A-C 1) byl izolován na 1 % agarózovém gelu a extrahován na „Prep a Gene“ (BioRad) podle instrukcí výrobce.
ng tohoto fragmentu bylo ligováno do 20 ng BglII štěpeného a defosforylovaného vektoru VIJns.tPa v 10 μΐ reakci, obsahující 2,5 U enzymu T4 DNA ligázy (Amersham) v ligačním pufru po dobu 16 hod při 14 °C, transformováno do kompetentních buněk DH5 E. coli (BRL) a vyseto na LB agarové médium s obsahem kanamycinu (50 pg/ml). Transformanty byly odpíchnuty a jejich plazmidová DNA byla štěpena enzymem BglII (pro potvrzení přítomnosti inzertu) a enzymem Pvull pro určení jeho orientace.
2. Konstrukce V lJns-85A [C2] (obsahující matumí Ag85A bez signální sekvence) byla provedena s použitím následujících primerů:
Fragment ve správném smyslu 85A C2 [SEQ.ID.NO.: 18]
GGAAGATCTACC ATG GGC TTT TCC CGG CCG GGC TTG C
Fragment v opačném smyslu 85A [SEQ.ID.NO.: 17]
GGAAGATCTTGCTGTTCGGAGCTAGGC.
Bylo použito stejného postupu jako v části 1 kromě toho, že klonování bylo provedeno do vektoru VIJns.
-13CZ 289383 B6
3. Konstrukce VlJns-85A [C3] (obsahuje Ag85A sjeho vlastní signálovou sekvencí) byla provedena s použití následujících primerů:
Fragment ve správném smyslu 85A C3 [SEQ.ID.NO.: 19]
GGAAGATCTACC ATG GCA CAG CTT GTT GAC AGG GTT
Fragment v opačném smyslu 85A [SEQ.ID.NO.: 17]
GGAAGATCTTGCTGTTCGGAGCTAGGC.
Bylo použito stejného postupu jako v části 1 kromě toho, že klonování bylo prováděno do vektoru VIJns.
4. Konstrukce VlJns-tPA-85B [Cl] (obsahuje Ag85B se signálovou sekvencí tPA) byla provedena s použitím následujících primerů:
Fragment ve správném smyslu 85B [Cl] [SEQ.ID.NO.: 20]
GGAAG ATC TCC TTC TCC CGG CCG GGG CTG CCG GTC GAG
Fragment v opačném smyslu 85B [SEQ.ID.NO.: 21]
GGAAGATCTAACCTTCGGTTGATCCCGTCAGCC.
Bylo použito stejného postupu jako v části 1 kromě toho, že templátem pro PCR byl p85B.tub.
5. Konstrukce VlJns-tPA-85C [Cl] (obsahuje Ag85C se signální sekvencí tPA) byla provedena s použitím následujících primerů:
Fragment ve správném smyslu 85C [Cl] [SEQ.ID.NO.: 22]
GGAAG ATC TCC TTC TCT AGG CCC GGT CTT CCA
Fragment v opačném smyslu 85C [SEQ.ID.NO.: 23]
GGAAGATCTTGCCGATGCTGGCTTGCTGGCTCAGGC.
Bylo použito stejného postupu jako v části 1 kromě toho, že templátem pro PCR byl p85C.tub.
6. Konstrukce VlJns-85B [C2] (obsahuje Ag85B bez signální sekvence) se provádí s použitím následujících primerů:
Fragment ve správném smyslu 85B [C2] [SEQ.ID.NO.: 24]
GGA AGA TCT ACC ATG GGC TTC TCC CGG CCG GGG CTG C
Fragment v opačném smyslu 85B [SEQ.ID.NO.: 21]
GGAAGATCTAACCTCGGTTGATCCCGTCAGCC.
Bylo použito stejného postupu jako v části 1 kromě toho, že templátem pro CPR je p85B.tub a že klonování se provádí do VIJns.
-14CZ 289383 B6
7. Konstrukce VlJns95C [C2] (obsahuje Ag85C bez signální sekvence) se provádí s použitím následujících primerů:
Fragment ve správném smyslu 85C [C2] [SEQ.ID.NO.: 25]
GGA AGA TCT ACC ATG GGA TTC TCT AGG CCC GGT CTT C
Fragment v opačném smyslu 85C [SEQ.ID.NO.: 23]
GGAAGATCTTGCCGATGCTGGCTTGCTGGCTCAGGC.
Používá se stejného postupu jako v části 1 kromě toho, že templátem pro PCR je p85C.tub a že se klonuje do VIJns.
Po restrikční analýze jsou všechny konstrukce částečně sekvenovány podél spojení vektorů. Příprava DNA ve velkém měřítku se provádí přesně podle způsobu, popsaného v (Montgomery, D.L. et al., výše).
Plazmidové konstrukce byly charakterizovány restrikčním mapováním a sekvenční analýzou spojů vektor-inzert (viz obr. 1-6). Výsledky byly ve shodě se sekvenčními daty, publikovanými pro M.tb a ukázaly, že iniciační kodon byl ve všech konstruktech intaktní (obr. 7). Jsou také ukázány různé další aminokyselinové zbytky nepříbuzné kM.tb Ag85, vložené jako výsledek klonování.
Příklad 5
Exprese proteinů M.tb z plazmidů VIJns.tPA
Buňky rhabdomyosarkomu (ATCC CCL136) byly vysety 1 den před použitím s hustotou 1,2 x 106 buněk na 9,5 cm2 jamku do šestijamkových destiček pro tkáňové kultury v médiu DMEM s vysokým obsahem glukózy, doplněným 10 % teplem inaktivovaného fetálního telecího séra, 2 mM L-glutaminu, 25 mM HEPS, 50 U/ml penicilinu a 50 pg/ml streptomycinu. (Vše od firmy Brl-Gibro) Plazmidová DNA, extrahovala směsí fenol: chloroform a čištěná centrifugací v chloridu česném byla vysrážena fosfátem vápenatým s použitím reagencií Pharmacia CellPhect podle návodu výrobce kromě toho, že pro každou 9,5 cm2 jamku buněk RD je použito 5-15 pg. Buňky byly šokovány glycerolem 6 hod po přídavku kalciumfosfátové sraženiny DNA; po výměně média byly kultury 2 dny před sklizní inkubovány.
Byly připraveny lyzáty transfekovaných kultur v roztoku 1 x RIPA (0,5 % SDS, 1,0 % TRITON X-100,1 % deoxycholát sodný, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, 25 mM TRIS-HC1 pH 7,4) doplněném 1 μΜ leupeptinu, 1 μΜ pepstatinu, 300 nM aprotininu, a 10 μΜ TLCK, a pro snížení viskozity krátce sonikovány. Lyzáty byly pro elektroforézu na 10% gelech Tricine (Novex) a potom přeneseny na nitrocelulózové membrány. Imunobloty byly zpracovány s monoklonálními protilátkami pro M.tb 17/4 a 32/15 [Huygen et al, 1994, Infect. Immunity 62, 363] a vyvinuty detekčním kitem ECL firmy (Amersham).
Exprese genů komplexu antigenu 85 M.tb byla demontrována tranzientní transfekcí RD buněk. Lyzáty transfekovaných nebo zdánlivě transfekovaných buněk byly frakcionovány pomocí SDS PAGE a analyzovány imunobloty. Obr. 8 ukazuje, že RD buňky, transfekované VlJns.tPA-85A (Cl), VlJns.tPA-85A (C2), VlJns.tPA-85A (C3), a VlJns.tPA-85B (Cl) exprimují imunoreaktivní protein se zdánlivou molekulovou hmotností přibližně 30-32 kDa.
-15CZ 289383 B6
Příklad 6
Imunizace PNV a exprese proteinů antigenu 85 in vivo
Pět až šest týdnů staré samice myší BALB/c a C57BL/6 byly anestetizovány intraperitoneální (i.p.) injekcí směsi 10 mg ketaminu. HC1 (Aveco, Fořt Dodge, IA) a 0,5 mg xylazinu (Mobley Corp., Shawnee, KS.) ve fyziologickém roztoku. Zadní nohy byly omyty 70% ethanolem. Zvířatům bylo třikrát injekcí podáno 100 μΐ DNA (2 mg/ml) suspendované ve fyziologickém roztoku: 50 μΐ do každé nohy. 17-18 den po imunizaci, byly odebrány vzorky séra a testovány na přítomnost protilátek anti-Ag85. Obr. 9 ukazuje na imunoblotu specifickou reaktivitu séra u myší, kterým byla podána Ag85 DNA (Cl) ale ne u myší, které dostaly kontrolní DNA bez obsahu genového inzertu (VIJ). Reaktivita byla detekována až k ředění séra alespoň 1:160 proti 300 ng čištěného antigenu 85A (obr. 9b). To ukazuje, že injekce Ag85 DNA vedla k expresi Ag85 in vivo, takže byla schopna vytvářet protilátky jak u myší BALB/c tak u C57BL/6 (B6).
Příklad Ί
Odpovědi antigen 85-specifických T-buněk
Buňky sleziny vakcinovaných myší byly analyzovány na sekreci cytokinu v odpověď na specifickou restimulaci antigenem, jak je popsáno v: Huygen et al., 1992 [Infect. Immunity 60, 2880]. Buňky sleziny byly konkrétně inkubovány s proteiny filtrátu kultury (CF) z M. bovis BCG čištěného antigenu 85A nebo 20-memího peptidu (p25) odpovídajícího známému epitopu T-buněk u myši C57BL/6 (aminokyseliny 241-260). Myši byly imunizovány VlJns.tPA85A (Cl) (100 pg) třikrát ve třítýdenních intervalech a analyzovány 17 dní po poslední injekci. Cytokiny byly stanoveny s použitím biologických testů na IL-2, interferon-γ (IFN-γ) a IL-6, atestem ELISA na IL-4 a IL-10. Jak u myší BALB, tak i C57BL/6, vakcinovaných VlJns.PA85A (Cl) byla pozorována podstatná produkce IL-2 a IFN-γ (obr. 10-13). Navíc myši C57BL/6 reagovaly také na epitop H-2b-omezených T-buněk (obr. 13). U myší, vakcinovaných VlJns.t-PA85A nebyly úplně IL-4, IL-6 a IL-10 zvýšeny (obr. 14-16). Tyto výsledky ukazují, že DNA vakcínou byla generována odpověď pomocných T-buněk typu Thl.
Příklad 8
Ochrana před napadením mykobakteriemi
Pro testování účinnosti DNA vakcíny proti M.tb, byla myším podána intravenózní injekce živých bakterií M. bovis BCG (0,5 mg) a zmnožení BCG bylo analyzováno ve slezině a plicích. Jako kontrola bylo měřeno zmnožení BCG při infekci myši, se kterou ještě nebyl prováděn pokus (primární infekce) a při infekci myši, která byla vakcinována BCG v podobě injekce DNA (sekundární infekce). Počet životaschopných bakterií (colony-forming units, CFU) v plicích myší, vakcinovaných VlJns.tPA85A (Cl), byl podstatně snížen ve srovnání s myší s primární infekcí nebo myší, vakcinovanou kontrolní DNA VIJ.
U myši C57B1/6, byl osmý den po infekci (obr. 17) snížen CFU o 83 % a u myši BALB/c byl snížen dvacátý den (obr. 18) CFU o 65 %. Ve slezině byl snížen CFU dvacátý den po infekci u myši BALB/c a osmý den po infekci u myši C57BL/6 o přibližně 40 % (obr. 19). Proto imunilogické odpovědi, pozorované po injekci DNA vakcíny Mtb poskytovaly ochranu v modelu s napadením živých M. bovis.
- 16CZ 289383 B6
VÝPIS SEKVENCÍ (1) Obecné informace (i) Žadatel: CONTENT, JEAN
HUYGEN, KŘIS
LUI, MANGARETA.
MONTGOMERY, DONNA ULMER, JEFFREY (ii) Název vynálezu: Polynukleotidová vakcína proti tuberkulóze (iii) Počet sekvencí: 25 (iv) Adresa pro korespondenci:
(A) Adresát: JACK L. TRIBBLE (B) Ulice: 126 E. LINCOLN AVE., P.O. BOX 2000 (C) Město: RAHWAY (D) Stát: NEW JERSEY (E) Země: USA (F) PSČ: 07065-0907 (v) Počítačová forma:
(A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC compatible (C) Operační systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentln Release #1.0, Version #1.25 (vi) Údaje o žádosti:
(A) Číslo žádosti: US 08/338,992 (B) Datum podání: 14-11-1994 (C) Klasifikace:
(viii) Informace o patentovém zástupci:
(A) Jméno: TRIBBLE, JACK L.
(B) Číslo registrace: 32,633 (C) REFERENCE/DOCKET NLJNIBER: 1932 (ix) Telekomunikační informace:
(A) Telefon: (908) 594-5321 (B) Telefax: (908) 594-A720 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 23 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární
- 17CZ 289383 B6 (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 1:
CTATATAAGC AGAGCTCGGTT TAG 23 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO:2:
GTAGCAAAGA TCTAAGGACG GTGACTGCAG 30 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 39 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO:3:
GTATGTGTCT GAAAATGAGC GTGGAGATTG GGCTCGCAC 39 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 39 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ IDNO:4:
GTGCGAGCCC AATCTCCACG CTCATTTTCA GACACATAC 39
-18CZ 289383 Β6 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 78 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ IDNO:5:
GATCACCATG GATGCAATGA AGAGAGGGCT CTGCTGTGTG 40
CTGCTGCTGT GTGGAGCAGT CTTCGTTTCG CCCAGCGA 78 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 78 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ IDNO:6:
GATCTCGCTG GGCGAAACGA AGACTGCTCC ACACAGCAGC 40
AGCACACAGC AGAGCCCTCT CTTCATTGCA TCCATGGT 78 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 27 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ IDNO:7:
GTACCTCATG AGCCACATAA TACCATG 27
-19CZ 289383 B6 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:8:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 40 párů bází (B) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO:8:
GGTACAAGAT CTACCATGGC TTGCAATTGT CAGTTCATGC 40 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 42 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ IDNO:9:
CCACATAGAT CTCCATGGGA ACTAAAGGAA GACGGTCTGT TC 42 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 10:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 33 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 10:
GGTACAAATA TTGGCTATTG GCCATTGCAT ACG 33 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 11:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 36 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 11 :
-20CZ 289383 B6
CCACATCTCG AGGAACCGGG TCAATTCTTC AGCACC 36 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 12:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 38 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 12:
GGTACAGATA TCGGAAAGCC ACGTTGTGTC TCAAAATC 38 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 13:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 37 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 13:
CCACATGGAT CCGTAATGCT CTGCCAGTGT TACAACC 37 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 14:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 39 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 14:
GGTACATGAT CACGTAGAAA AGATCAAAGG ATCTTCTTG 39
-21 CZ 289383 B6 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 15:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 34 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 15:
CCACATGTCG ACCCGTAAAAA GGCCGCGTTG CTGG 35 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 16:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 29 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 16:
GGAAGATCTT TTCCCGGCCG GGCTTGCCG 29 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 17:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 28 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 17:
GGAAGATCTT GTCTGTTCGG AGCTAGGC 28 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 18:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 37 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární
-22CZ 289383 B6 (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 18:
GG AAGATCTA CC ATGGGCTT TTCCCGGCCG GGCTTGC 3 7 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO: 19:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 36 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 19:
GGAAGATCTA CCATGGCACA GCTTGTTGAC AGGGTT 36 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:20:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 38 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQIDNO:20:
GGAAGATCTC CTTCTCCCGG CCGGGGCTGC CGGTCGAG 38 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:21:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 33 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ IDNO:21:
GGAAGATCTA ACCTTCGGTT GATCCCGTCA GCC 33
-23CZ 289383 B6 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:22:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 32 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ IDNO:22:
GGAAGATCTC CTTCTCTAGG CCCGGTCTTC CA 32 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:23:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 36 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO:23:
GGAAGATCTT GCCGATGCTG GCTTGCTGGC TCAGGC 36 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:24:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 37 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO:24:
GGAAGATCTA CCATGGGCTT CTCCCGGCCG GGGCTGC 37 (2) INFORMACE PRO SEQ ID NO:25:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 37 párů bází (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP ŘETĚZCE: jednoduchý (D) TOPOLOGIE: lineární
-24CZ 289383 B6 (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomická) (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO:25:
GGAAGATCTA CC ATGGGCTT CTCTAGGCCC GGTCTTC 3 Ί
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1. Obecný princip klonování genů M.tb do expresních vektorů.
Obr. 2. Vektorová mapa VIJns. tPA85A.Cl.
Obr. 3. Vektorová mapa VI Jns.85A.C2.
Obr. 4. Vektorová mapa V I Jns.85A.C3.
Obr. 5. Vektorová mapa V I Jns.tPA85B.C 1.
Obr. 6. Vektorová mapa VI Jns.tPA85C.C 1.
Obr. 7. Ověření N-koncové sekvence konstruktů.
Obr. 8. Exprese proteinů M.tb ve tkáňové kultuře.
Obr. 9. Produkce protilátek specifických proti antigenu 85A v DNA-vakcinované myši.
Obr. 10. Produkce IL-2 v BALB/c myších Tb DNA vakcínou.
Obr. 11. Produkce IL-2 v C57B1/6 myších Tb DNA vakcínou.
Obr. 12. Produkce IFN-γ in BALB/c myších TB DNA vakcínou.
Obr. 13. Produkce IFN-γ in C57BL/6 myších Tb DNA vakcínou.
Obr. 14. Chybějící produkce IL-4 in BALB/c myších způsobená Tb DNA vakcínou.
Obr. 15. Chybějící produkce IL-6 v myších Tb DNA způsobená vakcínou.
Obr. 16. Chybějící produkce IL-10 v myších Tb DNA způsobená vakcínou.
Obr. 17. Snížení multiplikace BCG v plicích C57BL/6 myší, vakcinovaných Tb DNA vakcínou.
Obr. 18. Snížení multiplikace BCG v plicích BALB/c myší, vakcinovaných TbDNA vakcínou.
Obr. 19. Snížení multiplikace BCG ve slezinách BALB/c myší, vakcinovaných Tb DNA vakcínou.
Obr. 20. Snížení multiplikace BCG ve slezinách C57B1/6 myší, vakcinovaných Tb DNA vakcínou.
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Polynukleotid, který po zavedení do tkáně obratlovce indukuje jednu nebo více antimykobakteriálních imunologických odpovědí, zvolených zodpovědí protilátek, CTL, pomocných T-lymfocytů a ochranných imunologických odpovědí, kde uvedený polynukleotid obsahuje jeden nebo více genů, kódujících alespoň jeden mykobakteriální antigen ze skupiny 85A, 85B a 85C nebo jejich funkčních ekvivalentů z hlediska antigenní funkce, přičemž uvedené geny jsou operativně připojeny k promotoru transkripce.
- 2. Polynukleotid podle nároku 1, obsahující:a) eukaryotický promotor transkripce;b) otevřený čtecí rámec genu, kódující alespoň jeden antigenní mykobakteriální epitop operativně připojený k uvedenému promotoru,c) signál ukončení translace, a-25CZ 289383 B6d) popřípadě obsahuje jedno nebo více operativně spojených vnitřních vazebných míst pro ribozomy, jeden nebo více otevřených čtecích rámců, kódujících jeden nebo více dalších genů, a jeden nebo více signálů ukončení transkripce.5
- 3. Polynukleotid podle nároku 2, kde uvedené další geny podle odst. d) jsou imunomodulační nebo imunostimulační geny, zvolené ze skupiny GM-CSF, IL-12, interferon a člen rodiny B7 kostimulačních proteinů T-buněk.
- 4. Polynukleotid podle nároku 2 nebo 3, kde gen kódující mykobakteriální antigen kóduje io protein Mycobacterium tuberculosis nebo jeho funkční ekvivalent z hlediska antigenní funkce.
- 5. Polynukleotid podle některého z nároků 1 až 4, kde gen kódující antigenní mykobakteriální epitop kóduje protein, zvolený ze skupiny antigen 85A, 85B a/nebo 85C a jeho funkční ekvivalent z hlediska antigenní funkce.
- 6. Polynukleotid podle některého z nároků 1 až 5 pro použití pro indukci imunologických odpovědí u obratlovce proti mykobakteriálním antigenům.
- 7. Polynukleotid podle některého z nároků 1 až 5, vyvolávající po zavedení do tkáně20 obratlovce imunologickou odpověď, která zabraňuje mykobakteriální infekci a/nebo odstraňuje mykobakteriální onemocnění, pro použití pro indukci imunologických odpovědí proti mykobakteriálním antigenům.
- 8. Použití polynukleotidu podle některého z nároků 1 až 5 pro výrobu farmaceutického 25 prostředku pro indukci jedné nebo více antimykobakteriálních imunologických odpovědí, zvolených z odpovědí protilátek, CTL, pomocných T-lymfocytů a ochranných imunologických odpovědí, po zavedení do tkáně pacienta.
- 9. Použití podle nároku 8, kde uvedeným pacientem je domácí nebo hospodářské zvíře.
- 10. Vakcína pro indukci imunologických odpovědí proti mykobakteriálním antigenům, vyznačující se tím, že obsahuje polynukleotid podle některého z nároků 1 až 5 a farmaceuticky přijatelný nosič.35 11. Vakcína pro indukci imunologických odpovědí proti mykobakteriální infekci u domácích nebo hospodářských zvířat, vyznačující se tím, že obsahuje polynukleotid podle nároků 1 až 5 a farmaceuticky přijatelný nosič.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/338,992 US5736524A (en) | 1994-11-14 | 1994-11-14 | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
| PCT/US1995/014899 WO1996015241A2 (en) | 1994-11-14 | 1995-11-13 | A polynucleotide tuberculosis vaccine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ145197A3 CZ145197A3 (en) | 1997-10-15 |
| CZ289383B6 true CZ289383B6 (cs) | 2002-01-16 |
Family
ID=23326996
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19971451A CZ289383B6 (cs) | 1994-11-14 | 1995-11-13 | Polynukleotid a polynukleotidová vakcína proti tuberkulóze |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5736524A (cs) |
| EP (1) | EP0792358B1 (cs) |
| JP (1) | JP3881014B2 (cs) |
| KR (1) | KR970707281A (cs) |
| CN (1) | CN1171814A (cs) |
| AT (1) | ATE296882T1 (cs) |
| AU (1) | AU715067B2 (cs) |
| CZ (1) | CZ289383B6 (cs) |
| DE (1) | DE69534250T2 (cs) |
| DK (1) | DK0792358T3 (cs) |
| ES (1) | ES2242193T3 (cs) |
| FI (1) | FI972034A (cs) |
| HU (1) | HU222369B1 (cs) |
| IL (1) | IL115883A0 (cs) |
| MX (1) | MX9703606A (cs) |
| NO (1) | NO972196L (cs) |
| NZ (1) | NZ296477A (cs) |
| PL (1) | PL184839B1 (cs) |
| PT (1) | PT792358E (cs) |
| RU (1) | RU2186109C2 (cs) |
| SK (1) | SK283254B6 (cs) |
| WO (1) | WO1996015241A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA959608B (cs) |
Families Citing this family (318)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2711670B1 (fr) | 1993-10-22 | 1996-01-12 | Pasteur Institut | Vecteur nucléotidique, composition le contenant et vaccin pour l'immunisation à l'encontre d'une hépatite. |
| US6995008B1 (en) * | 1994-03-07 | 2006-02-07 | Merck & Co., Inc. | Coordinate in vivo gene expression |
| US6727230B1 (en) * | 1994-03-25 | 2004-04-27 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs |
| US5736524A (en) * | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
| FR2732895B1 (fr) * | 1995-04-11 | 1997-05-16 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Utilisation d'un compose amphipathique cationique comme agent de transfection, comme adjuvant de vaccin, ou comme medicament |
| US6592877B1 (en) | 1995-09-01 | 2003-07-15 | Corixa Corporation | Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis |
| US6290969B1 (en) * | 1995-09-01 | 2001-09-18 | Corixa Corporation | Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis |
| US6458366B1 (en) | 1995-09-01 | 2002-10-01 | Corixa Corporation | Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis |
| US6338852B1 (en) | 1995-09-01 | 2002-01-15 | Corixa Corporation | Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis |
| US20020165183A1 (en) * | 1999-11-29 | 2002-11-07 | Hans Herweijer | Methods for genetic immunization |
| US20070021364A1 (en) * | 1995-12-13 | 2007-01-25 | Hans Herweijer | Methods for genetic immunization |
| ZA973642B (en) * | 1996-04-26 | 1997-11-25 | Merck & Co Inc | DNA vaccine formulations. |
| US5846946A (en) * | 1996-06-14 | 1998-12-08 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Compositions and methods for administering Borrelia DNA |
| FR2751228B1 (fr) * | 1996-07-19 | 1998-11-20 | Rhone Merieux | Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique |
| FR2751225B1 (fr) * | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique aviaire |
| CA2266656A1 (en) * | 1996-09-17 | 1998-03-26 | Chiron Corporation | Compositions and methods for treating intracellular diseases |
| US20060002959A1 (en) * | 1996-11-14 | 2006-01-05 | Government Of The United States | Skin-sctive adjuvants for transcutaneous immuization |
| US6797276B1 (en) * | 1996-11-14 | 2004-09-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Use of penetration enhancers and barrier disruption agents to enhance the transcutaneous immune response |
| US5980898A (en) * | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
| US20060002949A1 (en) | 1996-11-14 | 2006-01-05 | Army Govt. Of The Usa, As Rep. By Secretary Of The Office Of The Command Judge Advocate, Hq Usamrmc. | Transcutaneous immunization without heterologous adjuvant |
| WO1998035029A1 (en) * | 1997-02-07 | 1998-08-13 | Vanderbilt University | Synthetic genes for recombinant mycobacterium proteins |
| US6261281B1 (en) * | 1997-04-03 | 2001-07-17 | Electrofect As | Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells |
| US20040258703A1 (en) * | 1997-11-14 | 2004-12-23 | The Government Of The Us, As Represented By The Secretary Of The Army | Skin-active adjuvants for transcutaneous immunization |
| JP2002511396A (ja) * | 1998-04-14 | 2002-04-16 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | ポリヌクレオチド製剤の無針投与 |
| DE69941545D1 (de) | 1998-11-04 | 2009-11-26 | Isis Innovation | Tuberkulose diagnose test |
| US8197461B1 (en) | 1998-12-04 | 2012-06-12 | Durect Corporation | Controlled release system for delivering therapeutic agents into the inner ear |
| US6465633B1 (en) | 1998-12-24 | 2002-10-15 | Corixa Corporation | Compositions and methods of their use in the treatment, prevention and diagnosis of tuberculosis |
| WO2000047227A2 (en) * | 1999-02-09 | 2000-08-17 | Powderject Vaccines, Inc. | Mycobacterium tuberculosis, immunization |
| EP1165132B1 (en) * | 1999-04-08 | 2011-10-19 | Intercell USA, Inc. | Dry formulation for transcutaneous immunization |
| US20040265285A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-30 | Monash University | Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration |
| US20040241842A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-02 | Monash University | Stimulation of thymus for vaccination development |
| US20070274946A1 (en) * | 1999-04-15 | 2007-11-29 | Norwood Immunoloty, Ltd. | Tolerance to Graft Prior to Thymic Reactivation |
| US20050020524A1 (en) * | 1999-04-15 | 2005-01-27 | Monash University | Hematopoietic stem cell gene therapy |
| AUPR074500A0 (en) * | 2000-10-13 | 2000-11-09 | Monash University | Treatment of t cell disorders |
| US20040259803A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Disease prevention by reactivation of the thymus |
| US20040258672A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Graft acceptance through manipulation of thymic regeneration |
| US6545127B1 (en) * | 1999-06-28 | 2003-04-08 | Oklahoma Medical Research Foundation | Catalytically active recombinant memapsin and methods of use thereof |
| US6514948B1 (en) * | 1999-07-02 | 2003-02-04 | The Regents Of The University Of California | Method for enhancing an immune response |
| US20050100928A1 (en) * | 1999-09-16 | 2005-05-12 | Zycos Inc., A Delaware Corporation | Nucleic acids encoding polyepitope polypeptides |
| EP2278022A3 (en) * | 1999-11-01 | 2011-05-18 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Expression vectors, transfection systems, and method of use thereof |
| AU1661201A (en) | 1999-11-18 | 2001-05-30 | Epimmune, Inc. | Heteroclitic analogs and related methods |
| CA2398207A1 (en) * | 1999-12-22 | 2001-06-28 | The Ohio State University Research Foundation | Methods for protecting against lethal infection with bacillus anthracis |
| FR2804028B1 (fr) * | 2000-01-21 | 2004-06-04 | Merial Sas | Vaccins adn ameliores pour animaux de rente |
| US6552006B2 (en) | 2000-01-31 | 2003-04-22 | The Regents Of The University Of California | Immunomodulatory polynucleotides in treatment of an infection by an intracellular pathogen |
| US6613751B2 (en) | 2000-02-23 | 2003-09-02 | The Regents Of The University Of California | Method for treating inflammatory bowel disease and other forms of gastrointestinal inflammation |
| US20030130217A1 (en) * | 2000-02-23 | 2003-07-10 | Eyal Raz | Method for treating inflammatory bowel disease and other forms of gastrointestinal inflammation |
| JP2003531865A (ja) * | 2000-04-28 | 2003-10-28 | アメリカ合衆国 | Ｄｎａおよびワクシニアウイルスベクターワクチンの組み合わせを用いた免疫原性の改善 |
| US6590087B1 (en) * | 2000-05-25 | 2003-07-08 | Johns Hopkins University | whmD, an essential cell division gene from mycobacteria |
| WO2002004018A2 (en) * | 2000-07-10 | 2002-01-17 | Colorado State University Research Foundation | Mid-life vaccine and methods for boosting anti-mycobacterial immunity |
| ATE429643T1 (de) | 2000-07-12 | 2009-05-15 | Agensys Inc | Neues tumor antigen das für diagnose und therapie von blasen-, eierstock-, lungen- und nierenkrebs verwendet werden kann |
| EP1313850B1 (en) | 2000-08-28 | 2008-08-06 | Agensys, Inc. | Nucleic acid and corresponding protein entitled 85p1b3 useful in treatment and detection of cancer |
| US20060088512A1 (en) * | 2001-10-15 | 2006-04-27 | Monash University | Treatment of T cell disorders |
| EP1455816A4 (en) | 2000-10-19 | 2007-03-28 | Epimmune Inc | HLA CLASS I AND II BINDING PEPTIDES AND THEIR USE |
| US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
| US7754208B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
| WO2002064162A2 (en) * | 2001-02-13 | 2002-08-22 | Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of The Army | Vaccine for transcutaneous immunization |
| US7491394B2 (en) | 2001-02-15 | 2009-02-17 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Cytotoxic factors for modulating cell death |
| US6924358B2 (en) | 2001-03-05 | 2005-08-02 | Agensys, Inc. | 121P1F1: a tissue specific protein highly expressed in various cancers |
| US7271240B2 (en) | 2001-03-14 | 2007-09-18 | Agensys, Inc. | 125P5C8: a tissue specific protein highly expressed in various cancers |
| US8034791B2 (en) | 2001-04-06 | 2011-10-11 | The University Of Chicago | Activation of Egr-1 promoter by DNA damaging chemotherapeutics |
| ES2380007T3 (es) * | 2001-04-06 | 2012-05-07 | The University Of Chicago | Inducción por agentes quimioterapéuticos de la actividad del promotor Egr-1 en la terapia génica |
| US20040242523A1 (en) * | 2003-03-06 | 2004-12-02 | Ana-Farber Cancer Institue And The Univiersity Of Chicago | Chemo-inducible cancer gene therapy |
| CA2443123A1 (en) | 2001-04-10 | 2002-10-24 | Agensys, Inc. | Nuleic acids and corresponding proteins useful in the detection and treatment of various cancers |
| US20030191073A1 (en) | 2001-11-07 | 2003-10-09 | Challita-Eid Pia M. | Nucleic acid and corresponding protein entitled 161P2F10B useful in treatment and detection of cancer |
| US7013940B2 (en) * | 2001-04-19 | 2006-03-21 | Michelin Recherche Et Technique S.A. | Device for attenuating cavity noise in a tire and wheel |
| JP4338402B2 (ja) | 2001-05-22 | 2009-10-07 | ユニバーシティ オブ シカゴ | Ｎ４ウイルス一本鎖ｄｎａ依存的ｒｎａポリメラーゼ |
| WO2003015716A2 (en) * | 2001-08-13 | 2003-02-27 | Ige Therapeutics, Inc. | Immunoglobulin e vaccines and methods of use thereof |
| WO2003022995A2 (en) | 2001-09-06 | 2003-03-20 | Agensys, Inc. | Nucleic acid and corresponding protein entitled steap-1 useful in treatment and detection of cancer |
| BR0213965A (pt) * | 2001-10-26 | 2005-03-15 | Baylor College Medicine | Composição e método para alterar as propriedades de massa corporal magra e ósseas em um indivìduo |
| WO2003049700A2 (en) | 2001-12-11 | 2003-06-19 | Advisys, Inc. | Growth hormone releasing hormone suplementation for treating chronically ill subjects |
| CN1617888A (zh) * | 2002-01-18 | 2005-05-18 | 伊诺维奥埃斯 | 用于肌内给药的双特异性抗体dna的构建 |
| AU2003210818A1 (en) * | 2002-02-01 | 2003-09-02 | Cornell Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for treatment of infectious and inflammatory diseases |
| US20030166282A1 (en) | 2002-02-01 | 2003-09-04 | David Brown | High potency siRNAS for reducing the expression of target genes |
| US20060009409A1 (en) | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
| ATE529512T1 (de) * | 2002-02-01 | 2011-11-15 | Life Technologies Corp | Doppelsträngige oligonukleotide |
| US20050267025A1 (en) * | 2002-02-01 | 2005-12-01 | Ho John L | Compositions and methods for treatment of infectious and inflammatory diseases |
| US20070037769A1 (en) * | 2003-03-14 | 2007-02-15 | Multicell Immunotherapeutics, Inc. | Compositions and methods to treat and control tumors by loading antigen presenting cells |
| EP1485403A4 (en) * | 2002-03-15 | 2007-08-08 | Multicell Immunotherapeutics I | COMPOSITIONS AND METHOD FOR INTRODUCTION OR REINFORCEMENT OF ANTIBODY AND MAIN THISTOCOMPATIBILITY CLASS I OR CLASS II RESTRICTED T-CELL REACTIONS USING IMMUNOMODULATING, NON-CODING RNA MOTIVES |
| EP2258712A3 (en) | 2002-03-15 | 2011-05-04 | Multicell Immunotherapeutics, Inc. | Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs |
| US7078037B2 (en) * | 2002-04-19 | 2006-07-18 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Peptides and DNA encoding the peptides useful for immunizations against Coccidioides spp. infections |
| AU2003301841A1 (en) * | 2002-05-01 | 2004-06-07 | National Institutes Of Health | Immunotherapy regimens in hiv-infected patients |
| CA2488682C (en) | 2002-06-10 | 2014-04-01 | Vaccinex, Inc. | Gene differentially expressed in breast and bladder cancer and encoded polypeptides |
| EP1575500A4 (en) * | 2002-07-12 | 2007-01-03 | Univ Johns Hopkins | MESOTHELIN VACCINE AND MODEL SYSTEMS |
| US20090110702A1 (en) | 2002-07-12 | 2009-04-30 | The Johns Hopkins University | Mesothelin Vaccines and Model Systems and Control of Tumors |
| US9200036B2 (en) | 2002-07-12 | 2015-12-01 | The Johns Hopkins University | Mesothelin vaccines and model systems |
| AU2003304195B8 (en) | 2002-07-15 | 2008-08-28 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Combinatorial protein library screening by periplasmic expression |
| US20040029275A1 (en) * | 2002-08-10 | 2004-02-12 | David Brown | Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs |
| EP1578396A4 (en) | 2002-08-12 | 2007-01-17 | David Kirn | METHODS AND COMPOSITIONS RELATING TO POXVIRUS AND CANCER |
| US20040081653A1 (en) | 2002-08-16 | 2004-04-29 | Raitano Arthur B. | Nucleic acids and corresponding proteins entitled 251P5G2 useful in treatment and detection of cancer |
| DE60332377D1 (de) * | 2002-10-21 | 2010-06-10 | Eisai Inc | Zusammensetzungen und verfahren zurbehandlung von krankheiten, die durch das humane papillomavirus vermitteltwerden |
| CA2503346C (en) | 2002-11-27 | 2014-03-18 | Agensys, Inc. | Nucleic acid and corresponding protein entitled 24p4c12 useful in treatment and detection of cancer |
| EP1903056A3 (en) | 2002-12-10 | 2008-05-07 | Idm Pharma, Inc. | HLA-A1, -A2 -A3, -A24, -B7, and -B44 binding peptides comprising tumor associated antigen epitopes, and compositions thereof |
| AU2004210975B2 (en) | 2003-02-10 | 2008-04-10 | Agensys, Inc. | Nucleic acid and corresponding protein named 158P1D7 useful in the treatment and detection of bladder and other cancers |
| US7262027B2 (en) * | 2003-03-14 | 2007-08-28 | Medical College Of Ohio | Polypeptide and DNA immunization against Coccidioides spp. infections |
| JP2006522806A (ja) * | 2003-03-26 | 2006-10-05 | マルチセル・イミュノセラピューティクス，インコーポレイテッド | 細胞死及び／又はアポトーシスを誘導するための、選択されたｒｎａモチーフ |
| TW200424214A (en) * | 2003-04-21 | 2004-11-16 | Advisys Inc | Plasmid mediated GHRH supplementation for renal failures |
| US20070037151A1 (en) * | 2003-04-28 | 2007-02-15 | Babe Lilia M | Cd4+ human papillomavirus (hpv) epitopes |
| DK1629088T3 (da) | 2003-05-30 | 2012-05-07 | Agensys Inc | Varianter af prostatastamcelleantigen (psca) og undersekvenser deraf |
| WO2004110482A1 (en) * | 2003-06-13 | 2004-12-23 | Isis Innovation Limited | Improved vaccines |
| US20070224615A1 (en) * | 2003-07-09 | 2007-09-27 | Invitrogen Corporation | Methods for assaying protein-protein interactions |
| CN1894581B (zh) | 2003-07-09 | 2012-02-01 | 生命技术公司 | 检测蛋白-蛋白相互作用的方法 |
| ATE557099T1 (de) * | 2003-09-05 | 2012-05-15 | Genencor Int | Hpv cd8+ t-zell-epitope |
| US20080279812A1 (en) * | 2003-12-05 | 2008-11-13 | Norwood Immunology, Ltd. | Disease Prevention and Vaccination Prior to Thymic Reactivation |
| WO2005077977A2 (en) * | 2004-02-11 | 2005-08-25 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P Angeletti Spa | Carcinoembryonic antigen fusions proteins and uses thereof |
| EP1735435A1 (en) * | 2004-03-18 | 2006-12-27 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Methods and compositions involving s-ship promoter regions |
| MXPA06013834A (es) | 2004-05-28 | 2007-03-01 | Agensys Inc | Anticuerpos y moleculas relacionadas que enlazan a proteinas psca. |
| US20090221440A1 (en) * | 2004-07-12 | 2009-09-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions related to identifying protein-protein interactions |
| WO2006135382A2 (en) | 2004-08-04 | 2006-12-21 | Chemocentryx, Inc. | Enzymatic activities in chemokine-mediated inflammation |
| ES2534304T3 (es) | 2004-11-12 | 2015-04-21 | Asuragen, Inc. | Procedimientos y composiciones que implican miARN y moléculas inhibidoras de miARN |
| SG159555A1 (en) | 2004-11-16 | 2010-03-30 | Crucell Holland Bv | Multivalent vaccines comprising recombinant viral vectors |
| AP2869A (en) * | 2004-12-01 | 2014-03-31 | Aeras Global Tb Vaccine Found | Electroporation of mycobacterium and overexpression of antigens in mycobacteria |
| CA2597404A1 (en) * | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Merck & Co. Inc. | Adenovirus serotype 26 vectors, nucleic acid and viruses produced thereby |
| DK2325305T3 (en) | 2005-02-25 | 2014-03-03 | Oncotherapy Science Inc | Peptide vaccines for cancers that express TTK-, URLC10- or KOC1 polypeptide |
| ES2385396T3 (es) | 2005-02-28 | 2012-07-24 | Oncotherapy Science, Inc. | Péptidos epítopos derivados del receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular y vacunas que contienen estos péptidos |
| EP1863848A4 (en) | 2005-03-31 | 2009-09-23 | Agensys Inc | CORRESPONDING ANTIBODIES AND MOLECULES THAT ATTACH PROTEINS 161P2F10B |
| SI1912675T1 (sl) | 2005-07-25 | 2014-07-31 | Emergent Product Development Seattle, Llc | zmanjšanje števila celic B z uporabo molekul, ki se specifično vežejo na CD37 in CD20 |
| SI1910839T1 (sl) | 2005-07-27 | 2016-06-30 | Oncotherapy Science, Inc. | Gen tom34 povezan z rakom kolona |
| AU2006279896A1 (en) * | 2005-08-10 | 2007-02-22 | Oklahoma Medical Research Foundation | Truncated memapsin 2 for use for treating Alzheimer's disease |
| CA2621982C (en) * | 2005-09-07 | 2017-11-28 | Jennerex Biotherapeutics Ulc | Systemic treatment of metastatic and/or systemically-disseminated cancers using gm-csf-expressing poxviruses |
| US8980246B2 (en) | 2005-09-07 | 2015-03-17 | Sillajen Biotherapeutics, Inc. | Oncolytic vaccinia virus cancer therapy |
| US7919258B2 (en) * | 2005-10-07 | 2011-04-05 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Rapid tuberculosis detection method |
| CA2637598A1 (en) | 2006-01-18 | 2007-02-14 | University Of Chicago | Compositions and methods related to staphylococcal bacterium proteins |
| BRPI0708912B8 (pt) * | 2006-03-14 | 2021-07-27 | Univ Oregon Health & Science | métodos in vitro para detecção de mycobacterium tuberculosis e de células t expressando cd8 que especificamente reconhecem seq id no: 11 em um indivíduo |
| GB0605474D0 (en) * | 2006-03-17 | 2006-04-26 | Isis Innovation | Clinical correlates |
| CA2654317A1 (en) | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Single-chain multivalent binding proteins with effector function |
| WO2008014484A1 (en) | 2006-07-27 | 2008-01-31 | University Of Maryland, Baltimore | Cellular receptor for antiproliferative factor |
| JP5606067B2 (ja) | 2006-09-15 | 2014-10-15 | オタワ ホスピタル リサーチ インスティテュート | 腫瘍崩壊性ラブドウイルス |
| CN102850433B (zh) | 2006-10-17 | 2016-03-02 | 肿瘤疗法科学股份有限公司 | 用于表达mphosph1或depdc1多肽的癌症的肽疫苗 |
| AU2007351787A1 (en) * | 2006-10-20 | 2008-10-30 | Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Modified cyanobacteria |
| EP2102239B1 (en) | 2006-11-30 | 2012-04-25 | Research Development Foundation | Improved immunoglobulin libraries |
| TWI610939B (zh) | 2007-02-21 | 2018-01-11 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | 表現腫瘤相關抗原之癌症的胜肽疫苗 |
| KR20080084528A (ko) | 2007-03-15 | 2008-09-19 | 제네렉스 바이오테라퓨틱스 인크. | 종양살상형 백시니아 바이러스 암 치료 |
| TW201425333A (zh) | 2007-04-11 | 2014-07-01 | Oncotherapy Science Inc | 腫瘤血管內皮標誌８胜肽及包含此胜肽之疫苗 |
| US8629245B2 (en) | 2007-05-01 | 2014-01-14 | Research Development Foundation | Immunoglobulin Fc libraries |
| AU2008287195A1 (en) * | 2007-07-06 | 2009-02-19 | Emergent Product Development Seattle, Llc | Binding peptides having a C-terminally disposed specific binding domain |
| WO2009029831A1 (en) | 2007-08-31 | 2009-03-05 | University Of Chicago | Methods and compositions related to immunizing against staphylococcal lung diseases and conditions |
| EP3085707B1 (en) | 2007-11-01 | 2019-02-27 | Mayo Foundation for Medical Education and Research | Hla-dr binding peptides and their uses |
| KR101588736B1 (ko) | 2008-01-10 | 2016-01-26 | 리서치 디벨롭먼트 파운데이션 | 얼리키아 샤피엔시스에 대한 백신 및 진단제 |
| JP2011510308A (ja) * | 2008-01-23 | 2011-03-31 | リグスホスピタル | バイオマーカーｙｋｌ−４０のレベルの測定により見出される生存予後に基く心血管疾患を患う個体の分類 |
| JP5674476B2 (ja) | 2008-01-25 | 2015-02-25 | ピー５３ インコーポレイテッド | Ｐ５３バイオマーカー |
| WO2009117439A2 (en) | 2008-03-17 | 2009-09-24 | The Scripps Research Institute | Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells |
| WO2009117134A2 (en) * | 2008-03-21 | 2009-09-24 | National Institutes Of Health | Aerosolized genetic vaccines and methods of use |
| PT2132228E (pt) * | 2008-04-11 | 2011-10-11 | Emergent Product Dev Seattle | Imunoterapia de cd37 e sua combinação com um quimioterápico bifuncional |
| US9017660B2 (en) | 2009-11-11 | 2015-04-28 | Advaxis, Inc. | Compositions and methods for prevention of escape mutation in the treatment of Her2/neu over-expressing tumors |
| US9650639B2 (en) | 2008-05-19 | 2017-05-16 | Advaxis, Inc. | Dual delivery system for heterologous antigens |
| ES2741730T3 (es) | 2008-05-19 | 2020-02-12 | Advaxis Inc | Sistema de administración doble para antígenos heterólogos que comprende una cepa de Listeria recombinante atenuada por la mutación de dal/dat y la deleción de ActA que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión de listeriolisina O - antígeno prostático específico |
| CA2954948A1 (en) | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Cellular Dynamics International, Inc. | Methods for the production of ips cells using non-viral approach |
| US8299232B2 (en) * | 2008-07-25 | 2012-10-30 | Department Of Biotechnology | Constructing a DNA chimera for vaccine development against leishmaniasis and tuberculosis |
| CN107988261A (zh) | 2008-08-12 | 2018-05-04 | 细胞动力国际有限公司 | 产生ips细胞的方法 |
| AU2009282625A1 (en) | 2008-08-18 | 2010-02-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Derivatives of APF and methods of use |
| JP5764822B2 (ja) | 2008-08-27 | 2015-08-19 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | がんの治療および診断の標的遺伝子としてのｐｒｍｔ１ |
| AU2009302582A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | University Of Chicago | Compositions and methods related to bacterial Eap, Emp, and/or AdsA proteins |
| WO2010048252A1 (en) * | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Intervet International B.V. | Lawsonia intracellularis vaccines |
| TWI539160B (zh) | 2008-12-05 | 2016-06-21 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ｗｄｒｐｕｈ抗原決定位胜肽以及含此胜肽之疫苗 |
| JP5651125B2 (ja) | 2008-12-10 | 2015-01-07 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | Ｍｅｋ阻害剤に対する耐性を付与するｍｅｋ突然変異 |
| WO2010077955A1 (en) | 2008-12-17 | 2010-07-08 | The Scripps Research Institute | Generation and maintenance of stem cells |
| JP2012515532A (ja) | 2009-01-20 | 2012-07-12 | ラモット アット テル アビブ ユニバーシティ， リミテッド | Ｍｉｒ−２１プロモーター駆動性標的がん治療 |
| TWI469791B (zh) | 2009-02-18 | 2015-01-21 | Oncotherapy Science Inc | Ｆｏｘｍ１胜肽以及含此胜肽之疫苗 |
| JP5799394B2 (ja) | 2009-03-18 | 2015-10-28 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | Ｎｅｉｌ３ペプチドおよびそれを含むワクチン |
| KR101773368B1 (ko) | 2009-04-03 | 2017-08-31 | 유니버시티 오브 시카고 | 단백질 Ａ(ＳｐＡ) 변이체와 관련된 조성물 및 방법 |
| EP3061766B1 (en) | 2009-04-28 | 2019-12-25 | Vanderbilt University | Compositions and methods for the treatment of disorders involving epithelial cell apoptosis |
| TWI507204B (zh) | 2009-05-26 | 2015-11-11 | Oncotherapy Science Inc | Ｃｄｃ４５ｌ胜肽與含此胜肽之疫苗 |
| CN102459575A (zh) | 2009-06-05 | 2012-05-16 | 细胞动力国际有限公司 | 重编程t细胞和造血细胞的方法 |
| WO2011025826A1 (en) | 2009-08-26 | 2011-03-03 | Research Development Foundation | Methods for creating antibody libraries |
| WO2011032180A1 (en) | 2009-09-14 | 2011-03-17 | Jennerex, Inc. | Oncolytic vaccinia virus combination cancer therapy |
| WO2011038290A2 (en) | 2009-09-25 | 2011-03-31 | The U. S. A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 and their use |
| JP2013506682A (ja) * | 2009-09-30 | 2013-02-28 | セント ルイス ユニバーシティ | 異種亜型インフルエンザｔ細胞応答を誘発するためのペプチド |
| ES2638464T3 (es) | 2009-10-16 | 2017-10-20 | The Scripps Research Institute | Inducción de células pluripotentes |
| US10016617B2 (en) | 2009-11-11 | 2018-07-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Combination immuno therapy and radiotherapy for the treatment of Her-2-positive cancers |
| EP2510088B1 (en) | 2009-12-10 | 2016-10-05 | Ottawa Hospital Research Institute | Oncolytic rhabdovirus |
| TW201136604A (en) | 2009-12-14 | 2011-11-01 | Oncotherapy Science Inc | TMEM22 peptides and vaccines including the same |
| WO2011100508A2 (en) | 2010-02-12 | 2011-08-18 | Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Methods and compositions related to glycoprotein-immunoglobulin fusions |
| MX340392B (es) | 2010-02-25 | 2016-07-06 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Mutaciones del protooncogen de serina/treonina-proteina cinasa b-raf (braf) que confieren resistencia a los inhibidores del protooncogen de serina/treonina-proteina cinasa b-raf. |
| WO2011106705A2 (en) | 2010-02-26 | 2011-09-01 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Dna-protein vaccination protocols |
| EP2542678B1 (en) | 2010-03-04 | 2017-04-12 | InteRNA Technologies B.V. | A MiRNA MOLECULE DEFINED BY ITS SOURCE AND ITS THERAPEUTIC USES IN CANCER ASSOCIATED WITH EMT |
| SG10201501857YA (en) | 2010-03-11 | 2015-05-28 | Oncotherapy Science Inc | Hjurp Peptides And Vaccines Including The Same |
| CN102959076B (zh) | 2010-03-31 | 2015-09-16 | 斯克里普斯研究所 | 重编程细胞 |
| TWI538685B (zh) | 2010-04-02 | 2016-06-21 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ｅｃｔ２胜肽及含此胜肽之疫苗 |
| JP2013523818A (ja) | 2010-04-05 | 2013-06-17 | ザ・ユニバーシティー・オブ・シカゴ | 免疫反応のエンハンサーとしてのプロテインＡ（ＳｐＡ）抗体に関連する組成物および方法 |
| WO2011126976A1 (en) | 2010-04-07 | 2011-10-13 | Vanderbilt University | Reovirus vaccines and methods of use therefor |
| DK2560672T3 (en) | 2010-04-19 | 2014-03-17 | Res Dev Foundation | RTEF-1 variants and their uses |
| EP3333259B1 (en) | 2010-06-09 | 2021-02-24 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | A mek1 mutation conferring resistance to raf and mek inhibitors |
| WO2011159726A2 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-22 | The Scripps Research Institute | Reprogramming of cells to a new fate |
| CN103003416B (zh) | 2010-06-15 | 2016-11-16 | 细胞动力学国际有限公司 | 从小体积的外周血产生诱导性多潜能干细胞 |
| CA2802087A1 (en) | 2010-06-15 | 2011-12-22 | Cellular Dynamics International, Inc. | A compendium of ready-built stem cell models for interrogation of biological response |
| CN103037885B (zh) | 2010-07-02 | 2015-08-26 | 芝加哥大学 | 与蛋白A(SpA)变体相关的组合物和方法 |
| CA2804599C (en) | 2010-07-06 | 2023-01-31 | Interna Technologies Bv | Mirna and its diagnostic and therapeutic uses in diseases or conditions associated with melanoma, or in diseases or conditions associated with activated braf pathway |
| US8785192B2 (en) | 2010-07-07 | 2014-07-22 | Cellular Dynamics International, Inc. | Endothelial cell production by programming |
| US8765470B2 (en) | 2010-08-04 | 2014-07-01 | Cellular Dynamics International, Inc. | Reprogramming immortalized B-cells to induced pluripotent stem cells |
| JP5793194B2 (ja) | 2010-09-09 | 2015-10-14 | ザ・ユニバーシティ・オブ・シカゴＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏ | 感染防御ブドウ球菌抗原が関与する方法および組成物 |
| CN103501803B (zh) | 2010-09-22 | 2015-12-02 | 科罗拉多大学董事会 | Smad7的治疗应用 |
| US20130267029A1 (en) | 2010-10-01 | 2013-10-10 | Fundacion Centro Nacional de Ivestigaciones Oncologicas, Carlos | Manipulation of stem cell function by p53 isoforms |
| EP2621527A4 (en) | 2010-10-01 | 2015-12-09 | Univ Pennsylvania | USE OF LISTERIA VACCINE VECTORS TO REVERSE VACCINE IMMUNITY IN PATIENTS WITH PARASITIC INFECTIONS |
| KR102703637B1 (ko) | 2010-12-22 | 2024-09-05 | 페이트 세러퓨틱스, 인코포레이티드 | 단세포 분류 및 iPSC의 증강된 재프로그래밍을 위한 세포 배양 플랫폼 |
| AU2012204467B2 (en) | 2011-01-04 | 2016-08-18 | Sillajen, Inc. | Generation of antibodies to tumor antigens and generation of tumor specific complement dependent cytotoxicity by administration of oncolytic vaccinia virus |
| EP2474617A1 (en) | 2011-01-11 | 2012-07-11 | InteRNA Technologies BV | Mir for treating neo-angiogenesis |
| RU2539035C2 (ru) * | 2011-01-13 | 2015-01-10 | Амир Закиевич Максютов | Профилактическая или терапевтическая полиэпитопная противотуберкулезная вакцинная конструкция, обеспечивающая индукцию клеточного иммунного ответа cd4+ или cd8+ т-лимфоцитов |
| CA2826467C (en) | 2011-02-07 | 2019-11-12 | Research Development Foundation | Engineered immunoglobulin fc polypeptides |
| JP6005666B2 (ja) | 2011-02-08 | 2016-10-12 | セルラー ダイナミクス インターナショナル， インコーポレイテッド | プログラミングによる造血前駆細胞の生産 |
| EP2683400A4 (en) | 2011-03-11 | 2014-09-17 | Advaxis | ADJUVANZIA ON LISTERIA BASE |
| EP3406628A1 (en) | 2011-04-08 | 2018-11-28 | Evaxion Biotech ApS | Proteins and nucleic acids useful in vaccines targeting staphylococcus aureus |
| US8945588B2 (en) | 2011-05-06 | 2015-02-03 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides |
| WO2012156535A1 (en) | 2011-05-19 | 2012-11-22 | Fundación Progreso Y Salud | Highly inducible dual-promoter lentiviral tet-on system |
| EP2718427B1 (en) | 2011-06-08 | 2017-01-11 | Children's Hospital of Eastern Ontario Research Institute Inc. | Compositions for glioblastoma treatment |
| EP2732029B1 (en) | 2011-07-11 | 2019-01-16 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Methods for cell reprogramming and genome engineering |
| US9725490B2 (en) | 2011-07-29 | 2017-08-08 | Tokushima University | ERAP1-derived peptide and use thereof |
| CA2842887C (en) | 2011-08-12 | 2021-01-19 | Oncotherapy Science, Inc. | Mphosph1 peptides and vaccines including the same |
| CA2845259A1 (en) | 2011-08-15 | 2013-02-21 | The University Of Chicago | Compositions and methods related to antibodies to staphylococcal protein a |
| WO2013026015A1 (en) | 2011-08-18 | 2013-02-21 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Muc1 ligand traps for use in treating cancers |
| JP2013046596A (ja) * | 2011-08-29 | 2013-03-07 | Alpha-Nano-Medica Co Ltd | 新規な複合体、それを含有する医薬及び癌の治療方法 |
| US9273102B2 (en) | 2011-10-12 | 2016-03-01 | Niels Iversen Møller | Peptides derived from Campylobacter jejuni and their use in vaccination |
| MX355759B (es) | 2011-10-28 | 2018-04-27 | Oncotherapy Science Inc | Peptidos topk y vacunas que incluyen los mismos. |
| ES2886147T3 (es) | 2011-12-22 | 2021-12-16 | Interna Tech B V | MiARN para el tratamiento del cáncer de cabeza y de cuello |
| SG10201700392UA (en) | 2012-03-12 | 2017-03-30 | Advaxis Inc | Suppressor cell function inhibition following listeria vaccine treatment |
| EP2844275B1 (en) | 2012-04-26 | 2020-05-13 | University of Chicago | Staphylococcal coagulase antigens and methods of their use |
| CA2910320A1 (en) | 2012-04-26 | 2013-10-31 | University Of Chicago | Compositions and methods related to antibodies that neutralize coagulase activity during staphylococcus aureus disease |
| JP6255594B2 (ja) | 2012-07-10 | 2018-01-10 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | Ｔｈ１細胞のＬＹ６Ｋエピトープペプチドおよびこれを含有するワクチン |
| JP6259983B2 (ja) | 2012-07-10 | 2018-01-17 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | Ｔｈ１細胞のＫＩＦ２０Ａエピトープペプチドおよびこれを含有するワクチン |
| MX362912B (es) | 2012-09-11 | 2019-02-22 | Oncotherapy Science Inc | Péptidos ube2t y vacunas que incluyen los mismos. |
| WO2014065945A1 (en) | 2012-10-23 | 2014-05-01 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Antibodies with engineered igg fc domains |
| US10201556B2 (en) | 2012-11-06 | 2019-02-12 | Interna Technologies B.V. | Combination for use in treating diseases or conditions associated with melanoma, or treating diseases or conditions associated with activated B-raf pathway |
| WO2014116721A1 (en) | 2013-01-22 | 2014-07-31 | The Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Geminiviral vector for expression of rituximab |
| JP6475172B2 (ja) | 2013-02-20 | 2019-02-27 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | ラットの遺伝子組換え |
| RU2684211C2 (ru) | 2013-02-21 | 2019-04-04 | Тёрнстоун Лимитед Партнершип | Композиция вакцины |
| WO2014130770A1 (en) | 2013-02-22 | 2014-08-28 | Cellular Dynamics International, Inc. | Hepatocyte production via forward programming by combined genetic and chemical engineering |
| US10086093B2 (en) | 2013-02-28 | 2018-10-02 | The General Hospital Corporation | miRNA profiling compositions and methods of use |
| US10456448B2 (en) | 2013-03-08 | 2019-10-29 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | PTD-SMAD7 therapeutics |
| TWI658049B (zh) | 2013-03-12 | 2019-05-01 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ｋｎｔｃ２胜肽及含此胜肽之疫苗 |
| EP2968506B1 (en) * | 2013-03-15 | 2019-07-31 | Université de Genève | Anti-mycobacterial vaccines |
| ES2702622T3 (es) | 2013-03-27 | 2019-03-04 | Immunovaccine Technologies Inc | Método para mejorar la eficacia de una vacuna de survivina en el tratamiento de cáncer |
| RU2520078C1 (ru) * | 2013-04-25 | 2014-06-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА Ag85A-DBD И ДЕКСТРАНА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pAg85A-DBD, ШТАММ Escherichia coli [pREP4, pAg85A-DBD], ХИМЕРНЫЙ БЕЛОК Ag85A-DBD |
| AU2014317861B2 (en) | 2013-09-09 | 2019-11-28 | Figene, Llc | Gene therapy for the regeneration of chondrocytes or cartilage type cells |
| WO2015070009A2 (en) | 2013-11-08 | 2015-05-14 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Vh4 antibodies against gray matter neuron and astrocyte |
| WO2015070050A1 (en) | 2013-11-08 | 2015-05-14 | Baylor Research Institute | Nuclear loclization of glp-1 stimulates myocardial regeneration and reverses heart failure |
| WO2015082536A1 (en) | 2013-12-03 | 2015-06-11 | Evaxion Biotech Aps | Proteins and nucleic acids useful in vaccines targeting staphylococcus aureus |
| EP3099719B1 (en) | 2014-01-29 | 2020-04-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies against the muc1-c/extracellular domain (muc1-c/ecd) |
| WO2015123561A2 (en) | 2014-02-14 | 2015-08-20 | University Of Utah Research Foundation | Methods and compositions for inhibiting retinopathy of prematurity |
| CA2940765A1 (en) | 2014-02-25 | 2015-09-03 | Research Development Foundation | Sty peptides for inhibition of angiogenesis |
| EP3114214B1 (en) | 2014-03-04 | 2023-11-01 | Fate Therapeutics, Inc. | Improved reprogramming methods and cell culture platforms |
| US20170107486A1 (en) | 2014-04-21 | 2017-04-20 | Cellular Dynamics International, Inc. | Hepatocyte production via forward programming by combined genetic and chemical engineering |
| CN111925431A (zh) | 2014-08-04 | 2020-11-13 | 肿瘤疗法科学股份有限公司 | Koc1衍生的肽和包含它们的疫苗 |
| US10676514B2 (en) | 2014-08-04 | 2020-06-09 | Oncotherapy Science, Inc. | CDCA1-derived peptide and vaccine containing same |
| ES2856834T3 (es) | 2014-08-04 | 2021-09-28 | Oncotherapy Science Inc | Péptido derivado de URLC10 y vacuna que contiene el mismo |
| US20180363070A9 (en) | 2014-08-12 | 2018-12-20 | Univ Wayne State | Systems and methods to detect stem cell stress and uses thereof |
| US20180169211A1 (en) | 2014-11-13 | 2018-06-21 | Evaxion Biotech Aps | Peptides derived from acinetobacter baumannii and their use in vaccination |
| EP3242883A4 (en) | 2015-01-06 | 2018-10-17 | ImmunoVaccine Technologies Inc. | Lipid a mimics, methods of preparation, and uses thereof |
| WO2016113252A2 (en) | 2015-01-12 | 2016-07-21 | Evaxion Biotech Aps | Proteins and nucleic acids useful in vaccines targeting klebsiella pneumoniae |
| EP3250675A1 (en) | 2015-01-28 | 2017-12-06 | SABIC Global Technologies B.V. | Methods and compositions for high-efficiency production of biofuel and/or biomass |
| CA2976236A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Research Development Foundation | Engineered immunoglobulin fc polypeptides displaying improved complement activation |
| WO2016134293A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Baylor College Of Medicine | p63 INACTIVATION FOR THE TREATMENT OF HEART FAILURE |
| EP4276106A3 (en) | 2015-05-13 | 2024-01-24 | The United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Methods and compositions for inducing an immune response using conserved element constructs |
| WO2016196366A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-12-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Extension of replicative lifespan in diseases of premature aging using p53 isoforms |
| WO2017005670A1 (en) | 2015-07-04 | 2017-01-12 | Evaxion Biotech Aps | Proteins and nucleic acids useful in vaccines targeting pseudomonas aeruginosa |
| US10526408B2 (en) | 2015-08-28 | 2020-01-07 | Research Development Foundation | Engineered antibody FC variants |
| EP3352760A4 (en) | 2015-09-21 | 2019-03-06 | Aptevo Research and Development LLC | CD3 BINDING POLYPEPTIDES |
| MX2018004308A (es) | 2015-10-08 | 2018-05-01 | Oncotherapy Science Inc | Peptido derivado de foxm1 y vacuna que lo incluye. |
| KR20180055918A (ko) | 2015-10-16 | 2018-05-25 | 페이트 세러퓨틱스, 인코포레이티드 | 기저 상태 다능성의 유도 및 유지를 위한 플랫폼 |
| DK3365435T3 (da) | 2015-10-20 | 2021-04-06 | Fujifilm Cellular Dynamics Inc | Produktion af hæmatopoietiske prækursorceller med multi-afstamning med genetisk programmering |
| MX2018005274A (es) | 2015-10-30 | 2019-09-19 | The Regents Of The Universtiy Of California | Metodos para la generacion de celulas-t a partir de celulas madre y metodos inmunoterapeuticos que utilizan las celulas-t. |
| LT3370733T (lt) | 2015-11-02 | 2021-10-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Cd40 aktyvinimo ir imuninės kontrolės taškų blokados būdai |
| US20190038713A1 (en) | 2015-11-07 | 2019-02-07 | Multivir Inc. | Compositions comprising tumor suppressor gene therapy and immune checkpoint blockade for the treatment of cancer |
| PL3373968T3 (pl) | 2015-11-09 | 2024-08-05 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Glipikan 2 jako marker nowotworowy i cel terapeutyczny |
| EP3419654B1 (en) | 2016-02-22 | 2022-04-27 | Evaxion Biotech A/S | Proteins and nucleic acids useful in vaccines targeting staphylococcus aureus |
| CA3019635A1 (en) | 2016-03-31 | 2017-10-05 | Baylor Research Institute | Angiopoietin-like protein 8 (angptl8) |
| WO2017216384A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | Evaxion Biotech Aps | Vaccination targeting ichthyophthirius multifiliis |
| US11091775B2 (en) * | 2016-06-22 | 2021-08-17 | Oregon Health And Science University | Recombinant cytomegalovirus vectors as vaccines for tuberculosis |
| WO2017220787A1 (en) | 2016-06-24 | 2017-12-28 | Evaxion Biotech Aps | Vaccines against aearomonas salmonicida infection |
| JP7099967B2 (ja) | 2016-07-01 | 2022-07-12 | リサーチ ディベロップメント ファウンデーション | 幹細胞由来移植片からの増殖性細胞の排除 |
| WO2018015575A1 (en) | 2016-07-22 | 2018-01-25 | Evaxion Biotech Aps | Chimeric proteins for inducing immunity towards infection with s. aureus |
| WO2018035429A1 (en) | 2016-08-18 | 2018-02-22 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Peptides that inhibit syndecan-1 activation of vla-4 and igf-1r |
| CN109963590B (zh) | 2016-09-02 | 2024-03-15 | 加利福尼亚大学董事会 | 涉及白介素-6受体α结合单链可变片段的方法和组合物 |
| EP3523423B1 (en) | 2016-10-05 | 2024-07-31 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Methods for directed differentiation of pluripotent stem cells to hla homozygous immune cells |
| AU2017340634B2 (en) | 2016-10-05 | 2022-06-02 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Generating mature lineages from induced pluripotent stem cells with MECP2 disruption |
| AU2017375958A1 (en) | 2016-12-12 | 2019-07-04 | Multivir Inc. | Methods and compositions comprising viral gene therapy and an immune checkpoint inhibitor for treatment and prevention of cancer and infectious diseases |
| EP3565576A1 (en) | 2017-01-05 | 2019-11-13 | Evaxion Biotech ApS | Vaccines targeting pseudomonas aeruginosa |
| KR102668891B1 (ko) | 2017-04-18 | 2024-05-29 | 후지필름 셀룰러 다이내믹스, 인코포레이티드 | 항원-특이적 면역 이펙터 세포 |
| AU2018358016A1 (en) | 2017-11-03 | 2020-05-07 | Interna Technologies B.V. | MiRNA molecule, equivalent, antagomir, or source thereof for treating and/or diagnosing a condition and/or a disease associated with neuronal deficiency or for neuronal (re)generation |
| US11612618B2 (en) | 2017-11-14 | 2023-03-28 | Henry Ford Health System | Compositions for use in the treatment and prevention of cardiovascular disorders resulting from cerebrovascular injury |
| JP2021509815A (ja) | 2018-01-05 | 2021-04-08 | オタワ ホスピタル リサーチ インスティチュート | 改変ワクシニアベクター |
| WO2019145399A1 (en) | 2018-01-24 | 2019-08-01 | Evaxion Biotech Aps | Vaccines for prophylaxis of s. aureus infections |
| AU2019322487B2 (en) | 2018-03-19 | 2024-04-18 | Multivir Inc. | Methods and compositions comprising tumor suppressor gene therapy and CD122/CD132 agonists for the treatment of cancer |
| CA3133899A1 (en) | 2018-03-30 | 2019-10-03 | University Of Geneva | Micro rna expression constructs and uses thereof |
| TW202023581A (zh) | 2018-08-02 | 2020-07-01 | 日商腫瘤療法 科學股份有限公司 | 來自cdca1的胜肽及含有此的疫苗 |
| JP7450945B2 (ja) | 2018-08-30 | 2024-03-18 | テナヤ セラピューティクス， インコーポレイテッド | ミオカルディンおよびａｓｃｌ１を用いた心細胞リプログラミング |
| WO2020069313A2 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Henry Ford Health System | Use of extracellular vesicles in combination with tissue plasminogen activator and/or thrombectomy to treat stroke |
| WO2020083904A1 (en) | 2018-10-22 | 2020-04-30 | Evaxion Biotech Aps | Vaccines targeting m. catharrhalis |
| WO2020111167A1 (ja) | 2018-11-30 | 2020-06-04 | 国立大学法人徳島大学 | Ｂｉｇ３－ｐｈｂ２相互作用阻害ｐｈｂ２由来ペプチドを含む乳がん治療薬 |
| WO2020171889A1 (en) | 2019-02-19 | 2020-08-27 | University Of Rochester | Blocking lipid accumulation or inflammation in thyroid eye disease |
| US20220143168A1 (en) | 2019-02-27 | 2022-05-12 | Evaxion Biotech A/S | Vaccines targeting H. influenzae |
| SG10201905939WA (en) | 2019-06-26 | 2021-01-28 | Cell Mogrify Australia Pty Ltd | Cell culture methods and compositions |
| EP3997226A1 (en) | 2019-07-11 | 2022-05-18 | Tenaya Therapeutics, Inc. | Cardiac cell reprogramming with micrornas and other factors |
| EP3999546A1 (en) | 2019-07-19 | 2022-05-25 | The Children's Hospital of Philadelphia | Chimeric antigen receptors containing glypican 2 binding domains |
| EP4045044A1 (en) | 2019-10-18 | 2022-08-24 | The Regents Of The University Of California | Plxdc activators and their use in the treatment of blood vessel disorders |
| KR102237349B1 (ko) | 2019-10-23 | 2021-04-07 | 한국과학기술연구원 | 니코틴 중독 또는 금단 증상 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
| WO2021113644A1 (en) | 2019-12-05 | 2021-06-10 | Multivir Inc. | Combinations comprising a cd8+ t cell enhancer, an immune checkpoint inhibitor and radiotherapy for targeted and abscopal effects for the treatment of cancer |
| EP4087593A1 (en) | 2020-01-06 | 2022-11-16 | Evaxion Biotech A/S | Vaccines targeting neisseria gonorrhoeae |
| EP4114421A1 (en) | 2020-03-02 | 2023-01-11 | Tenaya Therapeutics, Inc. | Gene vector control by cardiomyocyte-expressed micrornas |
| JP2023520359A (ja) | 2020-03-25 | 2023-05-17 | エラスムス・ユニヴァーシティ・メディカル・センター・ロッテルダム | 放射性核種イメージングのためのレポーター系 |
| EP4157864A1 (en) | 2020-05-27 | 2023-04-05 | Antion Biosciences SA | Adapter molecules to re-direct car t cells to an antigen of interest |
| IL298085A (en) | 2020-05-29 | 2023-01-01 | Fujifilm Cellular Dynamics Inc | Retinal pigment epithelium and bicellular photoreceptor aggregates and methods of using them |
| MX2022015002A (es) | 2020-05-29 | 2023-03-03 | Fujifilm Cellular Dynamics Inc | Bicapa del epitelio pigmentario de la retina y fotorreceptores y uso de los mismos. |
| WO2022053130A1 (en) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Sid Alex Group, S.R.O. | Antago-mir-155 for treatment of v-src, c-src-tyrosine kinase-induced cancers |
| EP4291216A1 (en) | 2021-02-09 | 2023-12-20 | University of Houston System | Oncolytic virus for systemic delivery and enhanced anti-tumor activities |
| US20240122865A1 (en) | 2021-02-19 | 2024-04-18 | Pfizer Inc. | Methods of Protecting RNA |
| BR112023021993A2 (pt) | 2021-05-03 | 2024-02-20 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Métodos de geração de células endoteliais da córnea madura |
| CN117716020A (zh) | 2021-05-07 | 2024-03-15 | 安斯泰来再生医药协会 | 产生成熟肝细胞的方法 |
| WO2022251443A1 (en) | 2021-05-26 | 2022-12-01 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Methods to prevent rapid silencing of genes in pluripotent stem cells |
| EP4366762A1 (en) | 2021-07-05 | 2024-05-15 | Evaxion Biotech A/S | Vaccines targeting neisseria gonorrhoeae |
| EP4436595A1 (en) | 2021-11-22 | 2024-10-02 | Pfizer Inc. | Reducing risk of antigen mimicry in immunogenic medicaments |
| WO2023144779A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Pfizer Inc. | Coronavirus antigen variants |
| US20230295661A1 (en) | 2022-03-16 | 2023-09-21 | University Of Houston System | Persistent hsv gene delivery system |
| GB202205265D0 (en) | 2022-04-11 | 2022-05-25 | Mogrify Ltd | Cell conversion |
| WO2023213393A1 (en) | 2022-05-04 | 2023-11-09 | Evaxion Biotech A/S | Staphylococcal protein variants and truncates |
| GB202206507D0 (en) | 2022-05-04 | 2022-06-15 | Antion Biosciences Sa | Expression construct |
| WO2023239940A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Research Development Foundation | Engineered fcriib selective igg1 fc variants and uses thereof |
| US20240003871A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Ipsc-derived astrocytes and methods of use thereof |
| WO2024130212A1 (en) | 2022-12-16 | 2024-06-20 | Turnstone Biologics Corp. | Recombinant vaccinia virus encoding one or more natural killer cell and t lymphocyte inhibitors |
| WO2024186630A1 (en) | 2023-03-03 | 2024-09-12 | Henry Ford Health System | Use of extracellular vesicles for the treatment of cancer |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5591632A (en) * | 1987-03-02 | 1997-01-07 | Beth Israel Hospital | Recombinant BCG |
| US5807830A (en) * | 1987-12-30 | 1998-09-15 | Cytoven J.V. | Method for treatment of purulent inflammatory diseases |
| DE69034078T2 (de) * | 1989-03-21 | 2004-04-01 | Vical, Inc., San Diego | Expression von exogenen Polynukleotidsequenzen in Wirbeltieren |
| ATE189684T1 (de) * | 1989-09-19 | 2000-02-15 | Innogenetics Nv | Rekombinante polypeptide und peptide, dafür kodierende nukleinsäuren und ihre verwendung in der tuberkulose-diagnose |
| EP0499003A1 (en) * | 1991-02-14 | 1992-08-19 | N.V. Innogenetics S.A. | Polypeptides and peptides, particularly recombinant polypeptides and peptides, nucleic acids coding for the same and use of these polypeptides and peptides in the diagnosis of tuberculosis |
| US5643578A (en) * | 1992-03-23 | 1997-07-01 | University Of Massachusetts Medical Center | Immunization by inoculation of DNA transcription unit |
| IL108915A0 (en) * | 1993-03-18 | 1994-06-24 | Merck & Co Inc | Polynucleotide vaccine against influenza virus |
| US5955077A (en) * | 1993-07-02 | 1999-09-21 | Statens Seruminstitut | Tuberculosis vaccine |
| IL113817A (en) * | 1994-06-30 | 2001-03-19 | Merck & Co Inc | Polynucleotide for vaccination against the umbilical cord virus |
| US5736524A (en) * | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
| AU6280596A (en) * | 1995-06-15 | 1997-01-15 | University Of Victoria Innovation And Development Corporation | Mycobacterium tuberculosis dna sequences encoding immunostimlatory peptides |
| US6160093A (en) * | 1996-08-29 | 2000-12-12 | Genesis Researth And Development Corporation Limited | Compounds and methods for treatment and diagnosis of mycobacterial infections |
-
1994
- 1994-11-14 US US08/338,992 patent/US5736524A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-11-06 IL IL11588395A patent/IL115883A0/xx unknown
- 1995-11-13 KR KR1019970703204A patent/KR970707281A/ko not_active Application Discontinuation
- 1995-11-13 HU HU9701841A patent/HU222369B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-11-13 RU RU97110087/13A patent/RU2186109C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-11-13 CZ CZ19971451A patent/CZ289383B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-11-13 ES ES95939161T patent/ES2242193T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-13 PL PL95320091A patent/PL184839B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-11-13 AU AU41102/96A patent/AU715067B2/en not_active Ceased
- 1995-11-13 EP EP95939161A patent/EP0792358B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-13 PT PT95939161T patent/PT792358E/pt unknown
- 1995-11-13 AT AT95939161T patent/ATE296882T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-11-13 CN CN95197250A patent/CN1171814A/zh active Pending
- 1995-11-13 DK DK95939161T patent/DK0792358T3/da active
- 1995-11-13 DE DE69534250T patent/DE69534250T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-11-13 ZA ZA959608A patent/ZA959608B/xx unknown
- 1995-11-13 JP JP51633096A patent/JP3881014B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-11-13 WO PCT/US1995/014899 patent/WO1996015241A2/en not_active Application Discontinuation
- 1995-11-13 NZ NZ296477A patent/NZ296477A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-11-13 SK SK597-97A patent/SK283254B6/sk not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-05-13 NO NO972196A patent/NO972196L/no not_active Application Discontinuation
- 1997-05-13 FI FI972034A patent/FI972034A/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-05-14 MX MX9703606A patent/MX9703606A/es not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-01-22 US US09/010,733 patent/US6384018B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0792358B1 (en) | A polynucleotide tuberculosis vaccine | |
| US7097965B2 (en) | Targeting antigens to the MHC class I processing pathway with an anthrax toxin fusion protein | |
| EP0620277A1 (en) | Nucleic acid pharmaceuticals | |
| EA012037B1 (ru) | Поливалентные вакцины, содержащие рекомбинантные вирусные векторы | |
| CZ304884B6 (cs) | Kompozice pro vyvolání zesílené imunitní odpovědi proti peptidovému nebo proteinovému antigenu u savce a její použití pro výrobu vakcíny | |
| US6875584B1 (en) | Prophylactic and therapeutic immunization against protozoan infection and disease | |
| JPH10500128A (ja) | マイコバクテリア感染症に対するワクチン | |
| JP4653934B2 (ja) | バクテリオファージによって仲介される免疫化方法 | |
| SK216792A3 (en) | Imunogenic polypeptide | |
| AU708460B2 (en) | A polynucleotide herpes virus vaccine | |
| CA2393861A1 (en) | Polynucleotide vaccines expressing codon optimized hiv-1 nef and modified hiv-1 nef | |
| MXPA06004025A (es) | Farmaco para el tratamiento de infecciones por leishmanias. | |
| WO2019059817A1 (en) | VACCINE BASED ON FUSION PROTEIN AND PLASMIDIC DNA | |
| CA2205175C (en) | A polynucleotide tuberculosis vaccine | |
| JPH10507066A (ja) | ニワトリ感染性貧血ウイルスワクチン | |
| KR101598876B1 (ko) | 리슈마니아증 및 결핵에 대한 백신 개발을 위한 ｄｎａ 키메라의 작제 | |
| EP0811066A1 (en) | Dna molecule encoding for cellular uptake of mycobacterium tuberculosis and uses thereof | |
| Deshpande | Host-pathogen interaction in bovine respiratory disease:(1) DNA immunization against bovine herpesvirus-1.(2) Role of CD18 in Mannheimia haemolytica leukotoxin-induced cytolysis of bovine leukocytes | |
| JP2001501101A (ja) | ポリヌクレオチドヘルペスウイルスワクチン | |
| US20030118601A1 (en) | FIV vaccine | |
| KR19990022600A (ko) | 진단및치료용의헬리코박터피롤리관련핵산및아미노산서열 | |
| PT969862E (pt) | Genes sintéticos gag de hiv |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20091113 |