CZ2003151A3

CZ2003151A3 - Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek

Info

Publication number: CZ2003151A3
Application number: CZ2003151A
Authority: CZ
Inventors: Jinping L. Mccormick; Haiyan Wang; Russell E. Pike; Stephane L. Bogen; Tin Yau Chan; Yi-Tsung Liu; Zhaoning Zhu; F. George Njoroge; Ashok Arasappan; Tejal N. Parekh; Ashit K. Ganguly; Kevin X. Chen; Srikanth Venkatraman; Henry A. Vaccaro; Patrick A. Pinto; Bama Santhanam; Wanli Wu; Siska Hendrata; Yuhua Huang; Scott Jeffrey Kemp
Original assignee: Schering Corporation; Corvas International, Inc.
Priority date: 2000-07-21
Filing date: 2001-07-19
Publication date: 2003-05-14
Also published as: RU2008126266A; SI1385870T1; CN102206247B; CN1498224A; US20110117057A1; SK752003A3; DE122012000004I1; JP2004504404A; CN102372764A; ECSP034438A; AU7698801A; US20030216325A1; EP1385870B1; SK288064B6; ZA200210312B; AR033985A1; KR100939155B1; KR20090030330A; NO20030272L; TWI324611B

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových inhibitorů proteázy hepatitidy C („HCV“), farmaceutických prostředků s obsahem jednoho nebo více těchto inhibitorů a použití pro léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění. Vynález zvláště popisuje nové peptidové sloučeniny jako inhibitory serinové proteázy NS3/NS4a viru HCV.

Dosavadní stav techniky

Virus hepatitidy C (HCV) je pozitivní ((+)-sense) jednořetězcový RNA virus, který je podle předpokladů hlavním činitelem vyvolávajícím non-A, non-B hepatitidu (NANBH), zvláště s krví asociovanou NANBH (BB-NANBH) (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 89/04669 a evropská patentová přihláška No. EP 381 216). NANBH je třeba odlišovat od jiných typů jaterních onemocnění indukovaných viry, jako je onemocnění vyvolané virem hepatitidy A (HAV), virem hepatitidy B (HBV), virem hepatitidy delta (HDV), cytomegalovirem (CMV) a virem Epstein-Barrové (EBV), stejně jako od jiných forem jaterních onemocnění jako je alkoholismus a primární cirrhosa jater.

V nedávné době byla identifikována, klonována a exprimována proteáza HCV nezbytná pro zpracování (procesing) polypeptidů a replikaci viru; viz například US patent No. 5,712,145. Tento polyprotein o přibližné délce 3000 aminokyselin obsahuje, od aminového konce ke karboxylovému konci, protein nukleokapsidy (C), proteiny obalu (E1 a E2) a několik nestrukturních proteinů (NS1, 2, 3, 4a, 5a a 5b). NS3 je protein o velikosti přibližně 68 kDa kódovaný přibližně 1893 nukleotidy genomu HCV, který obsahuje dvě odlišné

domény: (a) doménu serinové proteázy, která se skládá z přibližně 200 N-koncových aminokyselin; a (b) doménu RNA-dependentní ATPázy na C-konci proteinu. Předpokládá se, že proteáza NS3 patří do skupiny chymotrypsinových proteáz _z _dúvodu své podobnosti v sekvenci proteinu, celkové trojrozměrné struktuře a mechanismu katalýzy. Jiné enzymy podobné chymotrypsinu jsou elastáza, faktor Xa, thrombin, trypsin, plasmin, urokináza, tPA a PSA. Serinová proteáza viru HCV NS3 je odpovědná za proteolýzu polypeptidu (polyproteinu) ve spojeních NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a a

NS5a/NS5b a je tedy odpovědná za vytvoření čtyř virových proteinů v průběhu replikace viru. Serinová proteáza NS3 viru HCV je tedy přitažlivým cílem pro antivirovou chemoterapii.

Bylo zjištěno, že protein NS4a, což je polypeptid o délce přibližně 6 kDa, je kofaktorem aktivity serinové proteázy u proteázy

NS3. Autologní štěpení spojení NS3/NS4a serinovou proteázou NS3/NS4a probíhá intramolekulárně (tj. cis), zatímco jiná místa štěpení jsou zpracována intermolekulárně (tj. trans).

Analýza přirozených štěpících míst proteázy HCV odhalila přítomnost cysteinu v místě P1 a šeřinu v místě P1’ a skutečnost, že tyto zbytky jsou ve spojeních NS4a/NS4b, NS4b/NS5a a NS5a/NS5b přísně konzervovány. Spojení NS3/NS4a obsahuje threonin v místě P1 a serin v místě P1’. Substituce Cys-»Thr v místě NS3/NS4a podle předpokladů odpovídá za požadavek cis namísto trans zpracování v místě tohoto spojení, viz např. Pizzi a další (1994), Proč. Nati. Acad.

Sci. (USA) 91: 888 - 892, Failla a další (1996), Folding & Design 1: 35 - 42. Štěpící místo NS3/NS4a je také tolerantnější vůči mutagenezi než jiná místa, viz např. Kollykhalov a další (1994), J. Virol. 68: 7525 7533. Bylo také zjištěno, že pro účinné štěpení jsou nezbytné kyselé zbytky v oblasti proti směru transkripce vzhledem k místu štěpení, viz např. Komoda a další (1994), J. Virol. 68: 7351 - 7357.

• ·

Mezi již popsané inhibitory proteázy HCV patří antioxidanty (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 98/14181), některé peptidy a peptidové analogy (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 98/17679, Landro a další (1997), Biochem. 36: 9340 - 9348, Ingallinella a další (1998), Biochem. 37: 8906 - 8914, Llinas- Brunet a další (1998), Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 1713 - 1718), inhibitory založené na polypeptidu o délce 70 aminokyselin eglin c (Martin a další (1998), Biochem. 37: 11459 - 11468), inhibitory afinitně selektované z lidského pankreatického sekrečního inhibitoru trypsinu (hPSTI-C3) a miniprotilátky, tzv. minibody repertoires (MBip) (Dimasi a další (1997), J. Virol. 71: 7461 - 7469), cV_HE2 („kamelizovaná“ variabilní doména fragmentu protilátky) (Martin a další (1997), Protein Eng. 10: 607 - 614), a a1-antichymotrypsin (ACT) (Elzouki a další (1997), J. Hepat. 27: 42 - 28). Nedávno byl popsán ribozym navržený pro selektivní ničení RNA viru hepatitidy C (viz BioWorld Today 9 (217: 4 (10. listopadu 1998)).

Je možno odkázat také na zveřejněné přihlášky PCT No. WO 98/17679, zveřejněná 30. dubna 1998 (Vertex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496 zveřejněná 28. května 1998 (F.

Hoffmann-La Roche AG); a WO 99/07734, zveřejněná 18. února 1999 (Boehringer Ingelheim Canada Ltd.).

Předpokládá se, že virus HCV se účastní cirrhosy jater a indukce hepatocelulárního karcinomu. Prognóza pro pacienty trpící infekcí HCV je v současnosti špatná. Infekci HCV je možné léčit obtížněji než jiné formy hepatitidy v důsledku nedostatku inuminy nebo návratu onemocnění v souvislosti s infekcí HCV. Současné údaje ukazují, že po diagnóze cirrhosy je míra přežití po čtyřech letech 50 %. Pacienti s diagnózou lokalizovaného resektovatelného hepatocelulárního karcinomu mají míru přežití 5 let 10 až 30 %, zatímco pacienti s lokalizovaným neresektovatelným hepatocelulárním karcinomem mají míru přežití 5 let nižší než 1 %.

. · • · ••.χν

Odkazuje se také na článek A. Marchetti a další, Synleff, S1, 1000 - 1002 (1999), ve kterém se popisuje syntéza bicyklických analogů inhibitoru proteázy NS3 viru HCV. Tam popisovaná sloučenina má vzorec:

Je možno také odkázat na článek autorů W. Han a další, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett. (2000) 10, 711 - 713, který popisuje přípravu některých a-ketoamidů, α-ketoesterů a a-diketonů obsahujících allylové a ethylové funkční skupiny.

Je také možno odkázat na WO Ό0/09558 (Přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limited; zveřejněno 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce:

o • ·

·· -*5·přičemž v uvedené přihlášce jsou definovány různé skupiny v tomto vzorci. Ilustrativní sloučenina této řady je:

Je možno také odkázat na dokument WO 00/09543 (přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limited; zveřejněný 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce:

A-i \

,Q

a kde se definují různé substituenty obsažené v tomto vzorci. Pro ilustraci této řady sloučenin je možno uvést sloučeninu:

·* -·β·-

ο

Současné způsoby léčení hepatitidy C zahrnují léčbu interferonem-α. (INFa) a kombinovanou terapii ribavirinem a interferonem, viz např. Beremguer a další (1998), Proč, Assoc.' Am, Physicians 110 (2): 98 - 112. Tyto způsoby léčení však mají nízkou míru trvalé odezvy-a časté vedlejší účinky, viz např. Hoofnagle a další (1997), N. Engl. J. Med. 336: 347. V současnosti není k dispozici žádná vakcina proti infekci HCV.

Související patentové přihlášky No. 60/194,607, datum podání 5. dubna 2000, a No. 60/198,204, datum podání 19. dubna 2000, No. 60/220,110, datum podání 21. července 2000, No. 60/220,109, datum podání 21. července 2000, No. 60/220,107, datum podání 21. července 2000, No. 60/254,869, datum podání 12. prosince 2000 a No. 60/220,101, datum podání 21. července 2000, popisují různé typy peptidů a/nebo jiných sloučenin jako inhibitorů serinové proteázy NS-3 viru hepatitidy C.

Trvá potřeba nalézt nové způsoby léčení infekce HCV. Předmětem předkládaného vynálezu je proto poskytnutí sloučenin použitelných při léčbě nebo prevenci nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C.

Dalším,předmětem je poskytnutí způsobů léčení nebo prevence nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C.

Ještě dalším předmětem předkládaného vynálezu je poskytnutí způsobů modulace aktivity serinových... proteáz, _ zvláště serinové proteázy HCV NS3/NS4a HCV s použitím poskytnutých sloučenin.

Další předmět vynálezu je poskytnutí způsobů modulace zpracování (processingu) polypeptidu HCV s použitím poskytnutých sloučenin.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje ve svých mnoha provedeních novou skupinu inhibitorů proteázy HCV, farmaceutické prostředky obsahující jednu nebo více těchto sloučenin, způsoby přípravy farmaceutických prostředků s obsahem jedné nebo více těchto sloučenin a způsoby léčení, prevence a odstraňování jednoho nebo více příznaků hepatitidy C. Poskytují se také způsoby modulace interakce polypeptidu HCV s proteázou HCV. Mezi poskytovanými sloučeninami jsou výhodné sloučeniny, které inhibují aktivitu serinové proteázy NS3/NS4a HCV. Předkládaná přihláška popisuje sloučeninu včetně enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty uvedené sloučeniny nebo uvedeného prekurzoru, kde sloučenina má obecnou strukturu ukázanou ve vzorci I:

R‘ vzorec I £2

• · · • · · ·· ·’-·8 kde:

Υ je zvoleno ze skupiny: alkyl, alkylaryl, heteroalkyl, heteroaryl, arylheteroaryl, alkylheteroaryl, cykloalkyl, alkyloxy, alkylaryloxy, arylnxy. heteroaryloxy, heterocykioalkyioxy,_cykloaikyloxy,, alkylamino, 5 arylamino, alkylarylamino, arylamino, heteroarylamino, cykloalkylamino a heterocykloalkylamino, s podmínkou, že Y může být popřípadě substituováno skupinami X¹¹ nebo X¹²,

X¹¹ je alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, heterocyklyl, heterocyklylalkyl, aryl, alkylaryl, arylalkyl, heteroaryl, alkylheteroaryl, nebo heteroarylalkyl, s podmínkou, že X¹¹ může být navíc popřípadě substituováno X¹²;

X¹² je hydroxy, alkoxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino, arylamino, alkylsulfonyl, arylsulfonyl, alkylsulfonamido, arylsulfonamido, karboxy, karbalkoxy, karboxamido, alkoxykarbonylamino, alkoxykarbonyloxy, alkylureido, arylureido, halogen, kyano nebo nitro, s podmínkou, že skupina alkyl, alkoxy a aryl může být navíc popřípadě substituována skupinami nezávisle zvolenými z X¹²;

je COR⁵ nebo B(OR)2, kde R⁵ je H, OH, OR⁸, NR⁹R¹⁰, CF3, C₂F₅, C₃F₇, CF₂R⁶, R⁶, nebo COR⁷, kde R⁷ je H, OH, OR⁸, CHR⁹R¹⁰, nebo NR⁹R¹⁰, kde R⁶, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, cykloalkyl, arylalkyl, heteroarylalkyl, [CH(R¹ )j_pCOOR¹¹, [CH(R¹ )]_PCONR¹²R¹³, [CH(R¹ )]_PCH(OH)R¹¹,

CH(R¹')CONHCH(R²’)CONR¹²R¹³,

CH(R¹')CONHCH(R²’)CONHCH(R³')COOR¹¹,

CH(R¹')CONHCH(R²')CONHCH(R³')CONR¹²R¹³, ,3\ [CH(R¹’)]_pSO₂R [CH(R¹’)]_PCOR

CH(R¹')CONHCH(R²')COOR¹¹,

CH(R¹')CONHCH(R²')R',

CH(R¹')CONHCH(R²’)CONHCH(R³’)CONHCH(R⁴’)COORⁱCH(R¹’)CONHCH(R²’)CONHCH(R³')CONHCH(R⁴')CONR¹²R¹

3\ >4’\

CHÍR¹ )CONHCH(R² )CONHCH(R'³ )CONHCH(R^il )CONHCH(R° ).11 •‘-•g COOR¹¹, a

CH(R¹')CONHCH(R²')CONHCH(R³')CONHCH(R⁴’)CONHCH(R⁵’)CONR¹²R¹³, kde R¹ , R², R³, R⁴, R⁵, R¹¹, R¹², R¹³ a R' jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl a heteroaralkyl;

Z je zvoleno ze skupiny O, N, CH nebo CR;

W může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže W je přítomna, W je zvolena ze skupiny C=O, C=S, C(=N-CN), nebo SO2;

Q může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže Q je přítomna, Q je CH, N, P, (CH₂)_p, (CHR)_P, (CRR’)_p, O, NR, S, nebo SO₂; a jestliže Q je nepřítomna, M může být přítomna nebo nepřítomna; jestliže Q a M jsou nepřítomné, A je přímo navázána na L;

A je O, CH₂, (CHR)_P, (CHR-CHR’)_P, (CRR’)_P, NR, S, SO₂ nebo vazba;

E je CH, N, CR, nebo dvojná vazba k A, L nebo G;

G může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže G je přítomna, G je (CH₂)_p, (CHR)p, nebo (CRR’)p; a jestliže G je nepřítomna, J je přítomna a E je přímo navázána na atom uhlíku ve vzorci I, ke kterému je navázána skupina G;

J může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže J je přítomna, J je (CH₂)_p, (CHR)p, nebo (CRR’)_P, SO₂, NH, NR nebo O; a jestliže J je nepřítomna, G je přítomna a E je přímo navázána na N ukázaný ve vzorci I jako navázaný na J;

L může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže L je přítomna, L je CH, CR, O, S nebo NR; a jestliže L je nepřítomna, potom M může být přítomna nebo nepřítomna; a jestliže je M přítomna a L nepřítomna, potom M je přímo a nezávisle navázána na E, a J je přímo a nezávisle navázána na E;

• ·· ·· « · • φ • · • ·

Φ·· ···· ·· • φ • φ ·· • Φ ····

--Ίο -Μ může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže M je přítomna, M je O, NR, S, SO₂, (CH₂)_p, (CHR)_p(CHR-CHR’)_p, nebo (CRR’)_P;

p je číslo od 0 do 6; a

R, R’, R^z, R° a R* jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H; Ci-C-io-alkyi;

C₂-Ci₀-alkenyl; C₃-C₈-cykloalkyl; C₃-C₈-heterocykloalkyl, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, halogen; (cykloalkyl)alkyl a (heterocykloalkyl)alkyl, kde uvedený cykloalkyl je vytvořen ze 3 až 8 atomů uhlíku, a 0 až 6 atomů kyslíku, dusíku, síry, nebo fosforu, a uvedený alkyl obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku; aryl; heteroaryl; alkylaryl; a alkylheteroaryl;

kde uvedené skupiny alkyl, heteroalkyl, alkenyl, heteroalkenyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl mohou být popřípadě a chemicky vhodně substituovány, přičemž termín „substituovaný“ označuje případnou a chemicky vhodnou substituci jednou nebo více skupinami zvolenými ze skupiny alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, heterocykl, halogen, hydroxy, thio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, sulfonamido, sulfoxid, sulfon, sulfonylmočovina, hydrazid, a hydroxamát;

dále kde uvedená jednotka N-C-G-E-L-J-N znamená 5-člennou nebo 6-člennou cyklickou kruhovou strukturu s podmínkou, že jestliže tato jednotka N-C-G-E-L-J-N představuje 5-člennou cyklickou kruhovou strukturu, nebo jestliže bicyklická kruhová struktura ve vzorci I zahrnujícím N, C, G, E, L, J, N, A, Q, a M znamená 5-člennou cyklickou kruhovou strukturu, potom uvedená 5-členná cyklická kruhová struktura neobsahuje jako část cyklického kruhu karbonylovou skupinu.

Mezi výše uvedenými definicemi pro různé skupiny vzorce I jsou výhodné významy pro různé skupiny následující:

WVýhodná definice pro R¹ je COR⁵, kde R⁵ je H, OH, COOR⁸ nebo CONR⁹R¹⁰, kde R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou definovány výše. Výhodná skupina pro R¹ je dále COCONR⁹R¹⁰, kde R⁹ je H; a R^w je H, R¹⁴, fCH(R¹')]pCOOR¹¹, [CH(R¹’)]pCONR¹²R¹³, [CH(R2’)_]pSO2R¹¹, [CH(R¹ )]_PSO₂NR¹²R¹³, [CH(R¹’)]pCOR¹¹,

CH(R¹')CONHCH(R²’)COOR¹¹, CH(R¹’)CONHCH(R²')CONR¹²R¹³, nebo CH(R¹’)CONHCH(R²')(R’), kde R¹⁴ je H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl, alkenyl, alkinyl nebo heteroaralkyl.

Mezi skupiny výhodné ve významu R¹⁰ patří: H, R¹⁴,

CH(R¹ )COOR¹¹, CH(R¹ )CH(R¹ )COOR¹¹, CH(R¹’)CONR¹²R¹³, CH(R¹')CH(R¹')CONR¹²R¹³, CH(R¹')CH(R¹')SO2R¹¹, CH(R¹’)CH(R¹')-SO2NR¹²R¹³, CH(R¹ )CH(R¹ )COR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²')COOR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²')CONR¹²R¹³, nebo CH(R¹')CONHCH(R²’)(R’), kde

R¹ je H nebo alkyl, a R² je fenyl, substituovaný fenyl, heteroatomem substituovaný fenyl, thiofenyl, cykloalkyl, piperidyl nebo pyridyl.

Výhodnější skupiny jsou následující: pro R¹ je výhodná skupina H, pro R¹¹ je H, methyl, ethyl, allyl, řerc-butyl, benzyl, a-methylbenzyl, α,α-dimethylbenzyl, 1-methylcyklopropyl nebo 1-methylcyklopentyl; pro

R’ je hydroxymethyl nebo CH₂CONR¹²R¹³, kde NR¹²R¹³ je zvoleno ze skupiny:

/-NH₂,

-NHMe,

N^X-OH

H

-NH-n-Pr,

Me Me

-N(Me)OMe,

OH

HN /

OH

Me

Me Me ™ Me

O

Me Me / N Me Me

-N

Z.

/-nQ • ·· · • · · · · · • · · · ·

kde U⁶ je H, OH, nebo CH₂OH;

R¹⁴ je s výhodou zvolena ze skupiny: H, Me, Et, n-propyl, methoxy, cyklopropyl, n-butyl, 1 -but-3-inyl, benzyl, a-methylbenzyl, fenethyl, allyl, 1-but-3-enyl, OMe, cyklopropylmethyl; a

R² je s výhodou nezávisle zvolena ze skupiny:

kde:

U¹ a U² mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny H, F, CH₂COOH, CH₂COOMe, CH2CONH2, CH₂CONHMe, CH₂CONMe2, azido, amino, hydroxyl, substituovaný amino, substituovaný hydroxyl;

U³ a U⁴ mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny O a S;

U⁵ je zvolena ze skupiny alkylsulfonyl, arylsulfonyl, heteroalkylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, alkylkarbonyl, arylkarbonyl, heteroalkylkarbonyl, heteroarylkarbonyl, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, heteroaryloxykarbonyl, • 0 • · · ·

alkylaminokarbonyl, arylaminokarbonyl, heteroarylaminokarbonyl nebo jejich kombinace.

Výhodné skupiny ve významu R² jsou:

Výhodné skupiny ve významu R³ jsou:

<ww

o

λλλλ.

*WW

ΛΛΛΛί ^C1 Cl Me-^Me ^F F • · · · · · · • · · • · · • · · « . -t ς : ·

I «Λ · · · · η, ο

CHq

H₃rPcH₃

R'

kde R³¹ = OH nebo O-alkyl;

Y¹⁹ je zvolena z následujících skupin:

•₆h₅

X

A; ch₃

6^H5 a Y²⁰ je zvolena z následujících skupin:

h₃'CH3

H;

\AcH3

NHMs

H3

CH₃

A ^~\/Si(CH₃)₃

NHAc

Nejvýhodnější skupiny pro R³ jsou:

CHs^CHa CH₃

CH₃ CRf ch₃ 'CH₃

31· ch₃ 'CH₃ '0-4

Ό

F F

COR'

-i.s

Některé další výhodné skupiny jsou následující: pro výhodná skupina N, pro R⁴ je H, a pro W je C=O.

Navíc mohou být skupiny Z-C-R³ ve vzorci I, kde R⁴přítomno, reprezentovány následujícími strukturami:

Z je není

Výhodné skupiny pro Y jsou:

M'

Mě

Me

M,

0-3

%

0-1

'0 k

HOOC'^^xy^x^y

CH₃

H₃COOC^x\ “°X/ ch₃ i

Hooc^y

HOOO.

COOH

HOOC' -r ? CH₃

COOH

F

/

Z

Me Me

·· ·· «· ··· · • -· ·

-·2Γ kde:

Υ¹¹ je zvolena ze skupiny H, COOH, COOEt, OMe, Ph, OPh, NHMe, NHAc, NHPh, CH(Me)2, 1-triazolyl, 1-imidazolyl a NHCH₂COOH;

Y¹² je zvolena ze skupiny H, COOH, COOMe, OMe, F, Cl nebo Br; Y¹³ je zvolena z následujících skupin:

Y¹⁴ je zvolena ze skupiny MeSO₂, Ac, Boc, iBoc, Cbz, nebo Alloc;

γΐ5 θ γΐ6 j_{SQU nez}ávisle zvoleny ze skupiny alkyl, aryl, heteroalkyl a heteroaryl;

Y¹⁷ je CF_3l NO_2i CONH₂, OH, COOCH₃, OCH₃, OC₆H₅, C₆H₅, COC₆H₅, NH₂ nebo COOH; a

Y¹⁸ je COOCH3, NO₂, N(CH₃)_2i F, OCH_3i CH₂COOH, COOH, SO₂NH₂, nebo NHCOCH3.

Y může výhodněji znamenat:

•22·-.:

COOH

•· ····

kde:

Y¹⁷ = CF₃, NO₂, CONH₂, OH, NH₂ nebo COOH;

Y¹⁸ = F, COOH,

Ještě výhodnější skupiny ve významu Y jsou:

Me Me

Me

Mě

Me

Me h₃cso₂hn_Xx>₁₎

Me^x⁷

Me

Me /

·« ·· ·'·.·

Jak je ukázáno ve vzorci I, jednotka

/

N-znamená cyklickou kruhovou strukturu, která může být 5-členná nebo 6-členná kruhová struktura. Jestliže cyklický kruh znamená 5členný kruh, předkládaný vynález požaduje, aby 5-členný kruh neobsahoval jako součást cyklické kruhové struktury karbonylovou skupinu. Tento 5-clenný kruh má s výhodou následující strukturu:

kde R a R’ jsou definovány výše. Výhodná 5-členná kruhová ·· ·· ·· ···· • · · · · · · Φ ·

struktura je následující:

kde R²⁰ je zvolena z následujících skupin:

Pětičlenný kruh spolu se sousedícími dvěma karbonylovými skupinami stojícími mimo tento kruh může být dále například následující:

O ® · ·

9· přičemž R²¹ a R²² mohou být v tomto případě stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny z následujících skupin:

Pětičlenná kruhová struktura

může mít například následující výhodné významy:

O o

O • · · · ·· Μ

ve vzorci I může být reprezentována následujícími strukturami b

Výhodné definice pro b jsou:

o

Ve struktuře c jsou skupiny G a J nezávisle zvoleny ze skupiny (CH₂)_P, (CHR)p, (CHR-CHR’)p a (CRR’)_P; A a M jsou nezávisle zvoleny ze skupiny O, S, SO₂, NR, (CH₂)_P, (CHR)_P, (CHR-CHR’)_P, a (CRR’)_P; a Q je CH₂, CHR, CRR’, NH, NR, 0, S, SO₂, NR, (CH₂)_P, (CHR)_P, a (CRR’)_P.

Výhodné definice pro strukturu c jsou:

f₃c

Kde cyklická kruhová struktura je znázorněna jako:

a její nejvýhodnější významy jsou následující:

Ν'

o ·· ····

Pokud není definováno jinak, všechny technické a vědecké termíny používané v předkládané přihlášce mají stejný význam běžně používaný odborníky v oboru, do kterého předkládaný vynález patří. Tak například termín alkyl (včetně alkylových částí skupiny alkoxy) označuje jednovaznou skupinu odvozenou od přímého nebo rozvětveného nasyceného uhlovodíku odstraněním jednoho atomu, s obsahem 1 až 8 atomů uhlíku, s výhodou od 1 do 6;

aryl znamená karbocyklickou skupinu obsahující od 6 do 14 atomů uhlíku a alespoň jeden benzenoidní kruh, přičemž jako místa navázání substituentů jsou možné všechny dostupné substituovatelné aromatické atomy uhlíku karbocyklické skupiny. Výhodné arylové skupiny zahrnují fenyl, 1-naftyl, 2-naftyl a indanyl, zvláště fenyl a substituovaný fenyl;

aralkyl znamená skupinu obsahující arylovou skupinu navázanou přes nižší alkyl;

alkylaryl znamená skupinu obsahující nižší alkyl navázaný přes io arylovou skupinu;

cykloalkyl znamená nasycený karbocyklický kruh s 3 až 8 atomy uhlíku, s výhodou 5 nebo 6, popřípadě substituovaný;

heterocykl znamená navíc k dále definovaným heteroarylovým skupinám nasycené a nenasycené cyklické organické skupiny obsahující alespoň jeden atom O, S a/nebo N přerušující strukturu karbocyklického kruhu, který se skládá z jednoho kruhu nebo dvou fúzovaných kruhů, kde každý kruh je 5-, 6- nebo 7-členný a může nebo nemusí obsahovat dvojné vazby postrádající delokalizované pi elektrony, kde tato kruhová struktura má od 2 do 8, s výhodou od 3 do

6 atomů uhlíku, např. 2- nebo 3-piperidinyl, 2- nebo 3-piperazinyl, 2nebo 3-morfolinyl, nebo 2- nebo 3-thiomorfolinyl;

halogen znamená fluor, chlor, brom a jod;

heteroaryl znamená cyklickou organickou skupinu obsahující alespoň jeden atom O, S a/nebo N přerušující strukturu karbocyklického kruhu a obsahující dostatečný počet delokalizovaných pi elektronů pro poskytnutí aromatického charakteru, přičemž aromatická heterocyklylová skupina obsahuje od 2 do 14, s výhodou 4 nebo 5 atomů uhlíku, např. 2-, 3- nebo 4-pyridyl, 2- nebo 3-furyl, 2nebo 3-thienyl, 2-, 4- nebo 5-thiazolyl, 2- nebo 4-imidazolyl, 2-, 430 nebo 5-pyrimidinyl, 2-pyrazinyl, nebo 3- nebo 4-pyridazinyl, atd.

Výhodné heteroarylové skupiny jsou 2-, 3- a 4-pyridyl; takové heteroarylové skupiny mohou také být popřípadě substituovány. Navíc, pokud není zvláště definováno, znamená termín „substituovaný nebo nesubstituovaný“ nebo „popřípadě substituovaný“, že příslušná skupina je popřípadě a chemicky vhodně substituována skupinou náležející k R¹² nebo R¹³. Jak se zde používá, „prekurzor“ znamená sloučeniny, které jsou prekurzory léčiva, které po podání pacientovi uvolňuje léčivo in vivo prostřednictvím některých chemických nebo fyziologických procesů (např. prekurzor se na požadovanou formu io léčiva převede v prostředí fyziologického pH nebo působením enzymů).

Vynález také zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomery a jiné optické isomery sloučenin vzorce I, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelné soli, solváty a deriváty.

Další předmět vynálezu jsou farmaceutické prostředky obsahující jako účinnou složku sloučeninu vzorce I (nebo její sůl, solvát nebo isomery) spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou.

Vynález také poskytuje způsoby přípravy sloučenin vzorce I, stejně jako způsob léčení onemocnění jako je například HCV, AIDS (syndrom získané imunitní nedostatečnosti) a souvisejících stavů. Způsoby léčení zahrnují podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo farmaceutických prostředků s obsahem sloučeniny vzorce I pacientovi v případě potřeby.

Popisuje se také použití sloučeniny vzorce I pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení HCV, AIDS a souvisejících stavů.

Popisuje se také způsob léčení onemocnění souvisejícího s virem hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle vynálezu.

Popisuje se také způsob modulace aktivity proteázy viru hepatitidy C (HCV), který zahrnuje uvedení proteázy HCV do staku s jednou nebo více sloučeninami podle vynálezu.

Popisuje se také způsob léčení, prevence nebo zmírnění 5 jednoho nebo více příznaků hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle vynálezu. Proteáza HCV je proteáza NS3 nebo NS4a. Sloučeniny podle vynálezu inhibují tuto proteázu. Modulují také zpracování polypeptidu viru hepatitidy C (HCV).

Podrobný popis výhodných provedení

V jednom provedení popisuje předkládaný vynález sloučeniny vzorce I jako inhibitory proteázy HCV, zvláště serinové proteázy HCV NS3/NS4a nebo jejich farmaceuticky přijatelný derivát, přičemž různé definice se uvádějí výše.

Reprezentativní sloučeniny podle vynálezu s vynikající inhibiční aktivitou na proteázu HCV jsou uvedeny níže v tabulkách 1 až 5 spolu s jejich aktivitou (rozmezí hodnot K* v nM). Některé sloučeniny včetně některých dalších sloučenin se dále uvádějí v nárocích.

Tabulka 1: Sloučeniny a výsledky kontinuálního testu s proteázou HCV

Sloučenina z příkladu č.	Rozmezí Ki*
1	C
2	C
3	C
4	C
5	C
6	C
7	C

• · · · • · · · •\ · · • · · · * · « ···· ·· ···> 27 ».· ··

8	C
9	C
10	C
11	C
12	C
13	C
14	C
15	C
16	C
17	C
18	C
19	C
20	C
21	C
22	C
23	C
24	C
25	C
26	C
27	C
28	C
29	C
30	C
31	C
32	C
33	C
34	C
35	c
36	c
37	c
38	c

•-•38 2*

39	C
40	C
41	C
42	C
43	C
44	C
45	C
46	C
47	C
48	C
49	C
50	C
51	C
52	C
53	C
54	C
55	C
56	C
56	C
58	C
59	C
60	C
61	C
62	C
63	C
64	C
65	C
66	c
67	c
68	B
69	C

•	·«	·· ··	99 9999
•	•	• · ·	9 9 9
•	•	• · · • · ···_· Q	• · · · Q j· ··

70	C
71	B
72	C
73	B
74	C
75	C
76	A
77	B
78	A
79	C
80	A
81	C
82	A
83	B
84	C
85	C
86	B
87	B
88	A .
89	B
90	C
91	C
92	C
93	C
94	C
95	C
96	C
97	C
98	B
99	B
100	A

·♦ ·· • · · · · · ·· ····

101	A
102	C
103	C
104	C
105	C
106	C
107	B
108	A
109	A
110	A
111	A
112	A
113	B
114	A
115	B
116	A
117	A
118	A
119	A
120	A
121	B
122	B
123	A
124	B
125	B
126	B
127	A
128	A
129	A
130	B
131	A

·♦ ·* • · ·· ···· *··

132	A
133	A
134	B
135	A
136	A
137	A
138	A
139	A
140	B
141	A
142	A
143	B
144	B
145	C
146	A
147	A
148	B
149	A
150	A
151	A
152	A
153	A
154	A
155	B
156	B
157	B
158	C
159	B
160	A
161	A
162	A

• ♦♦	• ·		• ·	··		• · · ·
• · · ·	•	•	• ·	•	•	•
• ·	•	•	Á	•	•	•
• ·	•	•	•	•	•	• ·
	• ·		····	A 9 ·.·		• ·

163	C
164	A
165	C
166	B
167	A
168	C
169	B
170	B
171	A
172	A
173	A
174	A
175	A
176	B
177	B
178	A
179	A
180	B
181	A
182	B
183	A
184	A
185	A
186	A
187	A
188	A
189	B
190	B
191	B
192	A
193	A

• ·· ·· · · · · ···· • · · · · · · · · · · • ··· ····

194	B
195	A
196	B
197	A
198	A
199	A
200	A
201	B
202	A
203	B
204	B
205	B
206	B
207	B
208	A
209	A
210	A
211	A
212	A
213	B
214	B
215	B
216	B
217	C
218	A
219	A
220	A
221	A
222	A
223	B
224	C

» · · · · · 1 ·· ·*ι·44 - * ··

225	C
226	A
227	A
228	C
229	A
230	A
231	A
232	C
233	C
234	C
235	C
236	B
237	C
238	A
239	C
240	A
241	C
242	B
243	C
244	B
245	C
246	B
247	A
248	A
249	C
250	C
251	B
252	C
253	C
254	B
255	B

• · · · · « · ·’ ·*·ί45*.· ··

256	A
257	C
258	A
259	A
260	C
261	C
262	A
263	B
264	B
265	C
266	B
267	A
268	C
269	A
270	C
271	A
272	C
273	C
274	C
275	C
276	A
277	B
278	A
279	B
280	A
281	C
282	C
283	C
284	C
285	C
286	C

• ··	··	··		··	····
·· « ·	« ·	« ·	*	*	•
• ·	• ·	•	•	•	• ·
	··	»··»	AR	··	• ·

287	C
288	B
289	B
290	C
291	C
292	C
293	C
294	C
295	C
296	B
297	C
298	C
299	B
300	B
301	C
302	C
303	B
304	C
305	C
306	C
307	B
308	B
309	C
310	C
311	C
312	C
313	B
314	A
315	B
316	B
317	A

•-•V-·*

318	A
319	A
320	A
321	C
322	C
323	C
324	C
325	A
326	A
327	C
328	B
329	B
330	A
331	A
332	A
333	B
334	B
335	B
336	A
337	A
338	C
339	A
340	C
341	C
342	C
343	A
344	C
345	C
346	C
347	B
348	B

• ·

349	C
350	C
351	C
352	C
353	C
354	C
355	C
356	A
357	A
358	C
359	A
360	B
361	B
362	C

Rozmezí Kj* používaná v kontinuálním testu HCV:

Kategorie A = 1 - 100 nM; kategorie B = 101 - 1000 nM; kategorie C >1000 nM.

Některé typy sloučenin podle vynálezu a způsoby syntézy různých typů sloučenin podle vynálezu vzorce I jsou uvedeny dále a potom schematicky popsány na ilustrativních příkladech.

·· ····

Ph

Me

A^°· (R = t-butyl, X = NH2) (R = Isobutyi, X = NH2) (R = t-butyl, X = OH) (R = Trichloroethyl, X = OH) °ó

O o

Me

NH₂

Me °ó ⁰ ϊ°

°Ó °i

OH

Me

Me‘

Me (X = OH) (X = O^l3u) -(X=-NH₂) (X = NHMe) (X = NMe;>)

Ό ° ϊ° °o

Η P

H O ^ΝκΛ

Me

OH

(X = NHMe) (X = OH)

(X = O‘Bu)(X = OH) (X = NH₂) (X = NMe₂)

(X = O^lBu) (X = OH) (X = NH₂) (X = NMe₂) (X = NMeOMe) (R = t-butyf) (R = Isobutyl) •· ·· ····

NMe?

ΝΜβχ

Me

Me Me

• · • · • · • · · ·

Me

Ο

• · • · · ·

• · ····

··

VyCH,

O-^NH ^χ°

H.C X

O^NH h/ch,

πχ^ fi

HA-NH

H£ ch, ° Η,Χ ca.

π^α-ς

X®,

‘57

• · ... · ’58* ····

ΗΝ^.Ο

HA ΝΗ

Η,ο-γ

CH, ο

'OL

CH,

····

OyQ

V^CH,

n^yCH,

’ΒΌ ·* ····

^yCH,

• *« · ·· ·· • 0 a · ·

► a · φ »· ··

Vy“.

n-.^CH,

ks.

®s u

·· ···«

- 64 • · · · · ·

·· ··

CH,

, ος • · ····

CH,

·· 4444 ••44 44 4444

- 68 44 44

•· ·· ·· ······ ► ····♦ 0 · φ • ···· ·· ···· ·· ··

• **	·* ··	·· ····
• · ·	• · * ·	• · ·
• ·	• * ·	• · · ·
·· ··*>·	·· ····	·· ··

fH,

^0

·· ·· * · · · • · r • · · · • · * •··»· ·«

- 73 ·· • · ···· ·· ···· • · • · ® · · • · ·· • · «·

CH,

• · • · • ·

• · 4 4 4 · · · 4 4 4 4 • · · · · ·· · • 4 · 4 4 4 4 • „4 44 4444 • *“* /0 ···· 44 44

CH

O “•-•77 -·

O

O o

·· ·· ··

-79 ·· ··

CH.

O • · • · • · · ·

*-•81 ^&·

r° λ/

o

»-65 -

V závislosti na své struktuře mohou tvořit sloučeniny podle vynálezu farmaceuticky přijatelné soli s organickými nebo anorganickými kyselinami, nebo organickými nebo anorganickými bázemi. Příklady vhodných kyselin pro tvorbu takových solí jsou kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, octová, citrónová, malonová, salicylová, jablečná, fumarová, jantarová, askorbová, maleiová, methansulfonová a jiné minerální a karboxylové kyseliny, dobře známé odborníkům v oboru. Pro tvorbu solí s bázemi jsou vhodné báze například NaOH, KOH, NH₄OH, tetraalkylamonium-hydroxid, apod.

V dalším provedení poskytuje předkládaný vynález farmaceutické prostředky s obsahem peptidů podle vynálezu jako účinné složky. Tyto farmaceutické prostředky obecně dále obsahují farmaceuticky přijatelné nosné ředivo, pomocnou látku nebo nosič (souhrnně zde označované jako nosné materiály). Pro svou inhibiční aktivitu na HCV jsou takové farmaceutické prostředky použitelné při léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění.

V ještě dalším provedení poskytuje předkládaný vynález způsoby přípravy farmaceutických prostředků s obsahem sloučenin podle vynálezu jako účinných složek. Ve farmaceutických prostředcích a způsobech podle předkládaného vynálezu budou účinné složky typicky podávány spolu s vhodnými nosnými materiály vhodně volenými s ohledem na zamýšlenou formu podávání, tj. orální tablety, kapsle (buď s pevnou, polotuhou nebo kapalnou náplní), prášky pro rekonstituci, orální gely, elixíry, dispergovatelné granule, sirupy,

suspenze apod., a v souladu s běžnou farmaceutickou praxí. Například pro orální podávání ve formě tablet nebo kapslí může být účinná složka léčiva kombinována s jakýmkoli orálním netoxickým farmaceuticky přijatelným inertním nosičem jako je laktóza, škrob, sacharóza, celulóza, stearan hořečnatý, fosforečnan vápenatý, síran vápenatý, talek, mannitol, ethylalkohol (kapalné formy) apod. Navíc mohou být do směsi v případě potřeby nebo nutnosti přidány vhodná pojivá, kluzné látky, rozvolňovadla a barviva. Prášky a tablety mohou obsahovat od přibližně 5 do přibližně 95 % hmotnostních prostředku podle vynálezu. Mezi vhodná pojivá patří škrob, želatina, přírodní cukry, kukuřičná sladidla, přírodní a syntetické gumy jako je akácie, alginát sodný, karboxymethylcelulóza, polyethylenglykol a vosky.

Mezi kluznými látkami je možno zmínit pro použití v těchto dávkových formách kyselinu boritou, benzoan sodný, octan sodný, chlorid sodný, apod. Rozvolňovadla zahrnují škrob, methylcelulózu, guarovou gumu apod.

V případě potřeby mohou být také přidána sladidla a ochucovací látky. Některé výše uvedené kategorie, zvláště rozvolňovadla, řediva, kluzné látky, pojivá apod. jsou podrobněji diskutovány dále.

Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být dále formulovány ve formě s prodlouženým uvolňováním, aby se dosáhlo uvolňování kterékoli složky nebo více složek nebo účinných látek řízenou rychlostí pro optimalizaci léčebných účinků, například inhibiční aktivity na HCV apod. Vhodné dávkové formy pro prodloužené uvolňování zahrnují vrstvené tablety obsahující vrstvy s různými rychlostmi rozpadávání, nebo polymerní matrice pro řízené uvolňování impregnované účinnými složkami a tvarované do tablet nebo kapslí s obsahem těchto impregnovaných nebo zapouzdřených porézních polymerních matric.

Preparáty v kapalné formě zahrnují roztoky, suspenze a emulze. Jako příklad lze uvést vodu nebo roztoky voda-propylenglykol pro

• «4	4«	• 4	• 4	4·		'4 4 4	4
• ·	4	•	4 4	•	4		•
•	•	•	•	4	4	•	4
4		• 4 37·-·	4 •444	4 4 ·	4	4 4 4	4

parenterální injekce nebo přidávání sladidel a sedativ pro orální roztoky, suspenze a emulze. Preparáty v kapalné formě mohou také zahrnovat roztoky pro intranazální podávání.

Aerosolové prostředky vhodné pro inhalaci mohou obsahovat roztoky a pevné látky ve formě prášku, které mohou být v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je inertní stlačený plyn, např. dusík.

Pro přípravu čípků se nejprve nízkotající vosk jako je směs glyceridů mastných kyselin jako kakaové máslo nejprve roztaví a účinná složka se v tomto základu homogenně disperguje mícháním nebo podobným způsobem míšení. Roztavená homogenní směs se potom vlije do forem běžné velikosti, ponechá se ochladit a tím ztuhne.

Zahrnuty jsou také prostředky v pevné formě, které jsou určené pro převedení na kapalné prostředky buď pro orální nebo parenterální podávání krátce před použitím. Takové kapalné formy zahrnují roztoky, suspenze a emulze.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány transdermálně. Transdermální prostředky mohou mít formu krémů, mlék, aerosolů a/nebo emulzí a mohou být obsaženy v transdermální náplasti typu matrice nebo zásobníku, jak je v oboru k tomuto účelu běžné.

S výhodou se sloučenina podává orálně, intravenózně nebo subkutánně.

Farmaceutický prostředek je s výhodou v jednotkové dávkové formě. V takové formě je prostředek rozdělený do jednotkových dávek vhodné velikosti obsahujícících příslušná množství účinných složek, například účinné množství pro dosažení požadovaného účelu.

Množství účinné sloučeniny podle vynálezu v jednotkové dávce prostředku se může obecně lišit nebo nastavit od přibližně 1,0 mg do * · * *· ······ ·· · · · « · · ·· · * · · · · · · « přibližně 1000 mg, s výhodou od přibližně 1,0 do přibližně 950 mg, výhodněji od přibližně 1,0 do přibližně 500 mg, a typicky od přibližně 1 do přibližně 250 mg, podle konkrétního použití. Použitá účinná dávka se může lišit v závislosti na věku, pohlaví, hmotnosti a vážnosti onemocnění pacienta. Tyto techniky jsou odborníkům v oboru dobře známé.

Orální dávková forma s obsahem účinných složek se obecně může podávat člověku 1 nebo 2 x za den. Množství a četnost podávání se bude upravovat podle úsudku ošetřujícího lékaře. Doporučený denní dávkový režim pro orální podávání může být obecně v rozmezí od přibližně 1,0 mg do přibližně 1000 mg zá*ciěn7~v jednoriivých nebo rozdělených dávkách.

Některé použitelné termíny jsou popsány dále:

Kapsle označuje zvláštní zásobní nebo obálku vyrobenou z methylcelulózy, polyvinylalkoholů nebo denaturovaných želatin nebo škrobu pro uchovávání obsažených prostředků s účinnými složkami. Kapsle (tobolky) s tvrdým obalem se typicky vyrábějí ze směsí želatin z kostí a vepřové kůže s vysokou pevností gelu. Samotná kapsle může obsahovat malá množství barviv, zakalovacích prostředků, plastifikátorů a ochranných látek.

Tableta označuje lisovanou nebo odlévanou pevnou dávkovou formu obsahující účinné složky s vhodnými ředivy. Tableta se může připravovat lisováním směsí nebo granulátů získaných granulací za mokra, granulací za sucha nebo kompaktizací.

Orální gely jsou účinné složky dispergované nebo solubilizované v hydrofilní polotuhé matrici.

Prášek pro rekonstituci označuje práškové směsi obsahující účinné složky a vhodná řediva, které mohou být suspendovány ve vodě nebo ovocných šťávách.

*·*· 8δ··

Ředivo označuje látky, které obvykle tvoří hlavní část prostředku nebo dávkové formy. Mezi vhodná řediva patří cukry jako je laktóza, sacharóza, mannitol a sorbitol; škroby odvozené z pšenice, kukuřice, rýže a brambor; a celulózy jako je mikrokrystalická celulóza. Množství řediva v prostředku může být v rozmezí od přibližně 10 do přibližně 90 % hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 25 do přibližně 75 %, výhodněji od přibližně 30 do přibližně 60 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 12 do přibližně 60 %.

Rozvolňovadlo označuje materiály přidávané do prostředku, aby napomáhaly jeho rozpadu (desintegraci) a uvolnění účinných látek.

_____ _ 1 ____-I I ivieZi vnuuiia iuZvumuvauia patři SKroDy; „za stuaena rozpuswe modifikované škroby jako je sodný karboxymethylškrob; přírodní a syntetické gumy jako je karubová guma, karaya, guar, tragakant a agar; deriváty celulózy jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylceluiózy; mikrokrystalické celulózy a zesítěné mikrokrystalické celulózy jako je sodná sůl kroskarmelózy; algináty jako je kyselina alginová a alginát sodný; jíly jako jsou bentonity; a šumivé směsi. Množství rozvolňovadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 15 % hmotnostních z prostředku, výhodněji od přibližně 4 do přibližně 10 % hmotnostních.

Pojivo označuje látku, která váže nebo „lepí“ prášky dohromady a přivádí je do kohezivního stavu vytvářením granulí, a ve formulaci slouží jako „adhezivní látka“. Pojivá zvyšují kohezivní pevnost, která je již získána pomocí řediva nebo objemotvorného prostředku. Vhodná pojivá zahrnují cukry jako je sacharóza; škroby odvozené od pšenice, kukuřice, rýže a brambor; přírodní gumy jako je akácie, želatina a tragakant; deriváty mořských řas jako je kyselina alginová, alginát sodný a alginát vápenatoamonný; celulózové materiály jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylceluiózy a hydroxypropylmethylcelulóza; polyvinylpyrrolidon; a anorganické látky jako je křemičitan hlinitý. Množství pojivá v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 20 % hmotnostních z prostředku, . · · nA · · · · · · ··· ·»··. yu·· ···· ·* ·· výhodněji od přibližně 3 do přibližně 10 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 3 do přibližně 6 % hmotnostních.

Mazadlo označuje látku přidanou k dávkové formě pro umožnění uvoinění tabiet, granulí atd. po lisování z raznice nebo matrice snížením tření nebo otěru. Vhodná mazadla zahrnují kovové stearany jako je stearan hořečnatý, stearan vápenatý nebo stearan draselný; kyselinu stearovou; vysokotající vosky; a ve vodě rozpustná mazadla jako je chlorid sodný, benzoan sodný, octan sodný, olean sodný, polyethylenglykoly a d/l-leucin. Mazadla se obvykle přidávají až v posledním kroku před lisováním, protože musí být přítomná na površích granulí a mezi nimi a částmi tabletovacího lisu. Množství mazadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 0,2 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 %, výhodněji od přibližně 0,3 do přibližně 1,5 % hmotnostních.

Kluzná látka je materiál, který zabraňuje shlukování a zlepšuje tokové vlastnosti granulátů, takže se dosáhne hladkého a stejnoměrného toku. Mezi vhodné kluzné látky patří oxid křemičitý a talek. Množství kluzné látky v prostředku může být od přibližně 0,1 % do přibližně 5 % hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 % hmotnostních.

Barviva jsou pomocné látky, které poskytují prostředku nebo dávkové formě zbarvení. Tyto pomocné látky mohou zahrnovat potravinářská barviva a potravinářská brviva adsorbovaná na vhodný adsorbent jako je jíl nebo oxid hlinitý. Množství barviva se může lišit od přibližně 0,1 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,1 do přibližně 1 %.

Biologická dostupnost označuje rychlost a míru, ve které se účinná složka nebo terapeutická část absorbuje do systémového oběhu z podané dávkové formy ve srovnání se standardem nebo kontrolou.

• *· ttf ·· ······ • · · · · ·*· · · · ···»···· • · · · 9 · · · · · • · - Qí . · · · ·· · ······· '^Μ'^,·« ···· ·· ··

Běžné způsoby přípravy tablet jsou známé. Tyto metody zahrnují suché metody jako je přímé lisování nebo lisování granulátu vyrobeného kompaktizací, nebo mokré metody nebo jiné speciální postupy. Běžné metody pro výrobu jiných forem pro podávání, jako jsou například kapsle, čípky apod., jsou rovněž dobře známé v oboru.

Další provedení vynálezu popisuje použití popisovaných farmaceutických prostředků pro léčení onemocnění jako je například hepatitida C apod. Tento způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství farmaceutického prostředku podle vynálezu pacientovi trpícímu takovým onemocněním v případě potřeby.

V ještě dalším provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány pro léčbu HCV u člověka v monoterapii nebo při kombinační terapii (např. v dvojité nebo trojité kombinaci atd.), jako například v kombinaci s antivirovými prostředky a/nebo imunomofulsřními prostředky.

Příklady takových antivirových a/nebo imunomodulačních prostředků zahrnují Ribavirin (firmy Schering-Plough Corporation, Madison, New Jersey) a Levovirin™ (firmy ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, California), VP 50406™ (firmy Viropharma, Incorporated,

Exton, Pennsylvania), ISIS 14803™ (firmy ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, California), Heptazyme™ (firmy Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497™ (firmy Vertex Pharmaceuticals, Cambridge, Massachusetts), Thymosin™ (firmy SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California), Maxamine™ (Maxim

Pharmaceuticals, San Diego, California), mykofenolátmofetil (firmy Hoffman-LaRoche, Nutley, New Jersey), interferon (jako je například interferon-alfa, konjugáty PEG-interferonu-alfa) apod. „Konjugáty PEG-interferon-alfa jsou molekuly interferonu alfa kovalentně navázané na molekulu PEG. Ilustrativní konjugáty PEG-interferon alfa zahrnují interferon alfa-2a (Roferon™, firmy Hoffman La-Roche, Nutley, New Jersey) ve formě pegylovaného interferonu alfa-2a (např.

·» ·ί» * * · · • · ·

92*·“ ···« ·· .·«· • · · « · · • «· · ·· · dodávaný pod obchodním názvem Pegasys™), interferon alfa-2b (Intron™, firmy Schering-Plough Corporation) ve formě pegylovaného interferonu alfa-2b (např. dodávaného pod obchodním názvem PEGIntron™), interferon a!fa-2c (Berofor Aípha™, firmy Boehringer

Ingelheim, Ingelheim, Německo) nebo konvenční interferon definovaný určením konvenční sekvence v přírodě se vyskytujících interferonů alfa (Infergen™, firmy Amgen, Thousand Oaks, Kalifornie).

Jak bylo uvedeno výše, předkládaný vynález zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomery a jiné stereoisomery sloučenin. Jak bude tedy odborníkovi v oboru zřejmé, některé ze sloučenin podle vynálezu mohou existovat ve vhodných isomerních formách. Tyto varianty rovněž spadají do rámce předkládaného vynálezu.

Další provedení vynálezu popisuje způsob přípravy popisovaných sloučenin. Tyto sloučeniny se mohou vyrábět různými v oboru známými způsoby. Reprezentativní ilustrativní postupy se uvádějí v následujících reakčních schématech. Je zřejmé, že i když následující ilustrativní schémata popisují přípravu pouze několika reprezentativních sloučenin podle vynálezu, vhodná náhrada jakékoli z obou nepřírodních aminikyselin povede k vytvoření požadovaných sloučenin založených na této substituci. Také tyto variace spadají do rámce vynálezu.

V popisu schémat, příprav a příkladů se používají následující zkratky:

THF Tetrahydrofuran

DMF N, N-Dimethylformamid

EtOAc Ethylacetát

AcOH Kyselina octová

HOOBt 3-Hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-on

EDCI Hydrochlorid 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodi

3o -imidu

NMM /V-Methylmorfolin

	• *« ·· ·· ·· ···· ···· ···· · 9 · • ··· ···· • · · · · · · ·
ADDP	1,1’- (Azodikarbobyl)dipiperidin
DEAD	Diethylazodikarboxylát
MeOH	Methanol
EtOH	Ethano!
Et₂O DMSO	Diethylether Dimethylsulfoxid
HOBt	N-Hydroxybenzotriazol
PyBrOP DCM	Brom-tris-pyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát Dichlormethan
DCC	1,3-Dicyklohexylkarbodiimid
TEMPO	2,2,6,6-Tetramethyl-l-piperidinyloxy
Phg Chg Bn	Fenylglycin Cyklohexylglycin Benzyl
Bzl	Benzyl
Et	Ethyl
Ph	Fenyl
iBoc	Isobutoxykarbonyl
iPr	Isopropyl

Bu nebo Bu¹: řerc-Butyl

Boc	terc-Butyloxykarbonyl
Cbz	Benzyloxykarbonyl
Cp Ts	Cyklopentyldienyl p-Toluensulfonyl
Me	Methyl
HATU	0-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium

-hexafluorfosfát

DMAP	4-N,N-Dimethylaminopyridin
Bop	Benzotriazol-1-yl-oxy-tris(dimethylamino)hexafluorfosfát

Obecná schémata přípravy

Následující schémata popisují způsoby syntézy meziproduktů stavebních bloků.

Schéma 1 hCi FMFhg-CCC&j

BocHl

1.2

HCCGt

HjCJ

NVM

O

Y

• - yo·- · ·

Schéma 2

HCI H₂N-Phg-NMe₂

Schéma 3

HCl-hf n

<3.

tíCL

LiOH

3.5 aioxan

COOMe

3.3 dioxan -H₂O COOMe

Boc

COOH

3.4

Schéma 4

• · ··· • · ·β

Schéma 5

5.2

5.3 .- 97 :Schéma 6

IBoc-Chg-OH 6.0 _N x^OCHaPh HOOBt lboc-Chg o ^EDC1’^NMM

6.1 >- Ň \r-OCH₂Ph lboc-Chg o

OH io Schéma 7

« · • · · ·

Schéma 8

— 4C1H₃N

OH

COOCH₃

R

o

BOP, NMM	BocHN. A	LiA1H₄
CH3ONHCH3.HCI	I 1 R CH₃

(CH₃)₂C(OH)CN	OH BocHN^X^	AcCI, CH3OH
Et₃N	1 R

1. BOC2O

BocHN^ .

OH

COOH

2. LiOH, THF/H₂O

NH4CI, EDCl HOOBt

OH

Schéma 9

O ^Ph^^N^^x^OC₂H₅

Ph

¹'^{KOt BU}\ ^Ρίΐγ^Νγ^ΌΟ₂Η₅

Br R ^{Ph k}R

1. vod. HCI, Et₂O BocHN^Jk_QC2. Boc₂O k_R oc₂h₅ o

LiOH, BocHN^Jk_OH

THF/H₂O kde R= stejné jako na schématu 8

OH /· hc-H₂n_vI_CONH2

R'

Schéma 10 (Boc)₂O DMAP co₂h . Et₃N

Boc CH₃CN

Ck /Cl

Boc

CO₂tBu

Ck /Cl *CO₂Me H HCI

CF₃CO₂H ch₂ci₂

BocHN. /CO₂H

CO₂tBu i

Boc ζψ^ΌΟ₂Η H -CF₃CO₂H

HATU iPr,NEt

DMF

CHCI₃

NaOH(50%)

Et₃NBnCI

HCI

MeOH

• »

Schéma 12 'N BOc

CO₂Me

LiN(SiMe₃)₂

Mel.THF -78°—*--20°C

O'

-λ , a) LiEt₃BH jvf CO₂Me _{b) Et3S}j_{Hi BFa} ._QEt2

BOc ^^Ό0₂Μβ

BOc

KOH

MeOH, H₂O 40°C, 16h

N

BOc co₂h

Schéma 13

Boc^O

MCPBA

H?N, 'SMe

BocNH.

'SMe

-Et₃N, CH₂CI₂

1ΒοοΝΗ^^9__Μθ

II

O

4M HCI hci.h₂n.

dioxan o

II

S-Me

II

O

Schéma 14 ch₃c₆h₄so₂ci

TsO^^>

DMAP/báze (Boc)₂NH

Cs₂CO₃

Lil aceton

BocBoc^z

4M HCI dioxan . HCI.H₂hK^^

Schéma 15

OH

DCC, DMAP

CH₂CI₂

H₂, 10% Pd/C vod'. 10% HCI

isopropanol

HCI.H₂I • ·

Schéma 16

ČNCH₂CO₂CH₃

CH₃CO₂H, CH₂CI₂

LiOH, THF labor. teplota

Ph

HCI.H₂N^CONMe₂

1. HOOBt, EDCI NMM, DMF

2. 4N HCI, dioxan

Schéma 17

O o V_J

CO₂Et

\_!

•-*104·- ···· • · »·

\_i

KHMDS trisylazid

hco₂h

DAST

30% HoO,

N_3/z .CO₂H

LiOH

H₂N_/z.CO₂Me

F F

Schéma 18

Schéma 19

H₂ (345 kPa) Rh na C, 7 dnů

2o Schéma 20 >^^0H

CF₃

N,N-disukcinimidylkarbonát

Et₃N, CH₃CN

CL ^O-N

CF, O

Příprava meziproduktů

Preparativní příklad 1 Krok A_Sloučenina (1.1)

Ph

K míchanému roztoku sloučeniny (1.08) (3,00 g, 12,0 mmol (S. L. Harbeson a další J. Med. Chem. 37 No. 18 (1994) 2918 - 2929) io v DMF (15 ml) a CH₂CI₂ (15 ml) byly při -20 °C přidány HOOBt (1,97 g, 12,0 mmol), /V-methylmorfolin (4,0 ml, 36,0 mmol) a EDCI (2,79 g, 14,5 mmol) a směs byla míchána 10 min, a potom bylů přidán HCI.H₂N-Gly-OBn (2,56 g, 13,0 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 2 hod, udržován v chladicím boxu přes noc a potom zakoncentrován do sucha, a potom zředěn EtOAc (150 ml). Roztok EtOAc byl potom dvakrát promyt nasyceným NaHCOo, H₂O, 5% H3PO4, roztokem soli, sušen nad Na₂SO₄, zfiltrován a zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (1.09) (4,5 g, 94 %). LRMS m/z MH^T = 395,1.

Krok B Sloučenina (1.1)

Roztok sloučeniny (1.09) (7,00 g, 17,8 mmol) v absolutním ethanolu (300 ml) byl míchán při teplotě laboratoře v atmosféře vodíku v přítomnosti Pd-C (300 mg, 10 %). Postup reakce byl monitorován ··

TLC. Po 2 hod byla směs zfiltrována přes lože celitu a získaný roztok byl zakoncentrován ve vakuu za získání sloučeniny (1.1) (5,40 g, kvantitativní). LRMS m/z MH⁺ = 305,1.

Preparativní příklad 2

Krok A Sloučenina (1.3)

OH

BocHN X

I ( ⁰

OH + HoN

Ph ^COOBu¹

BocHN

O Ph

COOBu (1.1) (1-2) (1-3)

Směs sloučeniny (1.1) z preparativního příkladu 1, krok B výše (1 ekv.), sloučeniny (1.2) (firmy Novabiochem, katalogové číslo 04-125147) (1,03 ekv.), HOOBt (1,03 ekv.), N-methylmorfolinu (2,2 ekv.) a dimethylformamidu (70 ml/g) byla míchána při -20 °C. Byl přidán EDCI (1,04 ekv.) a reakční směs byla míchána 48 hod. Reakční směs byla vlita do 5% vodného KH₂PO₄ a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty chladným 5% vodným K₂CO₃, potom 5% vodným KH₂PO₄, potom roztokem soli, a organická vrstva byla sušena nad bezvodým MgSO₄. Směs byla zfiltrována, potom odpařena a filtrát sušen ve vakuu, zbytek byl rozetřen s Et₂Ohexanem, a zfiltrován, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (1.3) (86% výtěžek), C₂₅H₃9N₃O₇ (493,60), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 494,3.

Krok B_Sloučenina (1.4)

BocHN

COOBi?

Sloučenina (1.3) z preparativního příkladu 2, krok A (3,0 g) byla smísena s 4N HCI/dioxan (36 ml) a míchána při teplotě laboratoře 7 min. Směs byla vlita do 1,5 I chladného (5 °C) hexanu a míchána, io potom ponechána v chladu stát 0,5 hod. Směs byla zfiltrována odsátím v suché atmosféře a oddělená pevná látka byla dále sušena, za získání v názvu uvedené sloučeniny (1.4) (2,3 g, 88% výtěžek), • C20H31N3O5.HCI. ¹H NMR (DMS,O-d₆/NaOD) δ 7,38 (m, 5H), 5,25 (m, 1H), 4,3 - 4,1 (m, 1H), 3,8 (m, 2H), 3,4 - 3,3 (m, překrytý D₂O), 1,7 15 1,1 (m, 4H), 1,35 (s, 9H), 0,83 (m, 3H).

Preparativní příklad 3

Sloučenina (1.5)

BocHN

N COOBu

BocHN

Sloučenina (1.3) z preparativního příkladu 2, krok A, byla zpracována v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 7, krok A níže, za poskytnutí sloučeniny (1.5).

• ·· ·· ·· ··♦· • · · ♦ · ·· · • ♦ · · · · · • « · · · · · · ·

Preparativní příklad 4

Sloučenina (1.6)

Sloučenina (1.5) z preparativního příkladu 3 byla zpracována v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok B, za získání sloučeniny (1.6).

Preparativní příklad 5

K roztoku hydrochloridu dimethylaminu (1,61 g, 19,7 mmol), N~ Boc-fenylglycinu, sloučeniny (2.08) (4,50 g, 17,9 mmol, Bachem Co. # A-2225), HOOBt (3,07 g, 18,8 mmol) a EDCI (4,12 g, 21,5 mmol) v bezvodém DMF (200 ml) a CH2CI2 (150 ml) byl při -20 °C přidán NMM (5,90 ml, 53,7 mmol). Po 30 min míchání při této teplotě byla reakční směs udržována v mrazicím boxu přes noc (18 hod). Potom byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byly přidány EtOAc (450 ml), roztok soli (100 ml) a 5% H3PO4 (100 ml). Po oddělení vrstev byla organická vrstva promyta 5% H3PO4 (100 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 150 ml), vodou(150 ml) a roztokem soli (150 ml), sušena (MgSO₄), zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, za získání sloučeniny (2,09) (4,86 g) jako • · Λ .< % * · * * · · ·····« 110·- ···· ·· ·· bílé pevné látky, která byla použita bez dalšího čištění.

Krok B Sloučenina (2.1)

BocHN

CH₃

(2.09)

Sloučenina (2.09) z preparativního příkladu 5, krok A (4,70 g, io surová) byla rozpuštěna ve 4N HCI (60 ml, 240 mmol) a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře. Vývin reakce byl monitorován TLC. Po 4 hod byl roztok zakoncentrován ve vakuu za získání sloučeniny (2.1) jako bílé pevné látky, která byla použita v příští reakci bez dalšího čištění. LRMS m/z MH⁺- 179,0.

Preparativní příklad 6 Krok A_Sloučenina (2.2)

OH H y

BocHN

Ph

HCI Ji OH + H₂N CONMe₂ o Ph' (1.1) (2.1)

OH H ň i

BocHN N'^A'CONMe₂ t ^{0 H} (2.2)

V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, s použitím hydrochloridu fenylglycin-N,N-dimethylamidu namísto hydrochloridu fenylglycin-t-butylesteru byla připravena sloučenina (2.2). Hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 465,3.

114· - ···« ·· ·· • · · · • · · ·· ··.· • · · • ·

Krok B

Sloučenina (2.3)

Sloučenina (2.2) z kroku A (1,85 g) byla ponechána reagovat se směsí 4N HCI/dioxan (50 ml) při teplotě laboratoře 1 hod. Směs byla odpařena ve vakuu ve vodní lázni při teplotě 20 °C, smísena s isopropyletherem, zfiltrována a sušena za poskytnutí sloučeniny io (2.3) (1,57 g, 98% výtěžek), Ci8H₂₈N₄O4.HCI, hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 365,3.

Preparativní příklad 7 Krok A_Sloučenina (2.4)

BocHN

JkA

N CONMe₂H ²

Ph

Roztok sloučeniny (2.2) z preparativního příkladu 5, krok A (2,0 g) v dichlormethanu (60 ml) byl smísen s dimethylsulfoxidem (3,0 ml) a kyselinou 2,2-dichloroctovou (0,70 ml). Míchaná směs byla ochlazena na 5 °C a potom byl přidán 1M roztok dicyklohexylkarbodiimid/dichlormethan (8,5 ml). Chladná lázeň byla odstraněna a směs byla míchána 22 hod. Byl přidán 2-propanol (0,5 ml) a míchání pokračovalo 1 hod. Směs byla zfiltrována, promyta ledově chladným 0,1 N NaOH (50 ml), potom ledově chladným 0,1 N HCI (50 ml), potom 5% vodným KH₂PO₄, potom nasyceným roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým síranem hořečnatým,

112potom zfiltrován. Filtrát byl odpařen a čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí ethylacetátem, za získání sloučeniny (2.3) (1,87 g, 94% výtěžek), C₂3H₃4N₄O₆, hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 463,3.

Krok B Sloučenina (2.5)

H o Ph ^Ns^'N^^xC0NMe₂H ² (2.4)

HC!·

H₂N

O

(2.5)

CONMe₂ ίο V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok B, byla připravena sloučenina (2.5).

Preparativní příklad 8

Krok A Sloučenina (3.1) £5H O

COOMe (3.01) (3.1)

V baňce byly smíchány methylester N-Cbz-hydroxyprolinu (dostupný od firmy Bachem Biosciences, Incorporated, King of Prussia, Pennsylvánie), sloučenina (3.01) (3,0 g), toluen (30 ml) a ethylacetát (30 ml). Směs byla důkladně míchána a potom byl přidán roztok NaBr/voda (1,28 g/5 ml). Do tohoto roztoku byl přidán 2,2,6,6tetramethyl-1-piperidinyloxylový volný radikál (TEMPO, 17 mg, Aldrich

Chemicals, Milwaukee, Wisconsin). Míchaná směs byla ochlazena na 5 °C a potom byly po kapkách přidány připravený roztok oxidantu [komerčně dostupný bělicí prostředek, Cloro® (18 ml), NaHCO3 (2,75 g) a voda pro doplnění na 40 ml] v průběhu 0,5 hod. Ke směsi ·· ·· byl přidán 2-propanol (0,2 ml). Organická vrstva byla oddělena a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem. Organické extrakty byly spojeny, promyty 2% thiosíranem sodným, potom nasyceným roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO4, zfiltrován a filtrát odpařen ve vakuu za získání bledě žluté gumy vhodné pro následující reakce (2,9 g, 97% výtěžek), CuH^NOs (277,28), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 278,1.

Krok B_Sloučenina (3.2)

Sloučenina (3.1) z kroku A výše (7,8 g) byla rozpuštěna v dichlormethanu (100 ml) a ochlazena na 15 °C. K této směsi byl nejprve přidán 1,3-propandithiol (3,1 ml) a potom čerstvě předestilovaný etherát fluoridu boritého (3,7 ml). Směs byla míchána při teplotě laboratoře 18 hod. Během důkladného míchání byl opatrně přidán roztok K₂CO3/voda (2 g/30 mi), a potom nasycený NaHCO₃ (10 ml). Organická vrstva byla oddělena od vodné vrstvy (pH —7,4), promyta vodou (10 ml), potom roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO4, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí toluenem, potom gradientem hexan-Et₂O (2 : 3 až 0 : 1) za získání hnědého oleje (7,0 g,

68% výtěžek), Ci7H₂₁N0₄S2 (367,48), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 368,1.

Krok C

Sloučenina (3.3)

9 ·· ·· 9 «9 · « j j 4·. ···♦

Cbz'

Γτ

COOMe (3-2) s^-s

Bo<y

COOMe (3-3)

Roztok sloučeniny (3.2) z kroku B výše (45 g) v acetonitrilu (800 ml) byl najednou při 20 °C smísen s čerstvě předestilovaným jodtrimethylsilanem (53 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 30 min, potom vlita do čerstvě připraveného roztoku di-tbutyldikarbonátu (107 g), ethyletheru (150 ml) a diisopropylethylaminu (66,5 ml). Směs byla míchána ještě 30 min, promyta hexanem (2 x 500 ml). K nižší acetonitrilové vrstvě byl přidán ethylacetát (1000 ml) a potom byla vrstva promyta 10% vodným KH2PO4 (2 x 700 ml), a roztokem soli. Filtrát byl odpařen ve vakuu ve vodní lázni při 25 °C, převeden do čerstvého ethylacetátu (1000 ml), a postupně promyt 0,1N HCI, 0,1N NaOH, 10% vodným KH2PO4, a roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek (66 g) byl čištěn chromatografií na silikagelu (2 kg), s elucí hexanem (2 I), potom směsí Et₂O/hexan (55 : 45,2 I), potom Et₂O (2 I), za získání oranžové gumy, která pomalu krystalizovala za stání (28 g, 6S% výtěžek), C14H23NO4S2 (333,46), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 334,1.

Krok D Sloučenina (3.4) _Boč^N^COOM^e (3-3)

Bo<<^^COOH (3-4)

Roztok sloučeniny (3.3) z kroku C výše (11 g) v dioxanu (150 ml) při 20 °C byl smísen s 1N vodným LiOH (47 ml) a míchán 30 hod. Směs byla zakoncentrována ve vakuu ve vodní lázni při 30 °C na poloviční objem. Zbytek byl zředěn vodou (300 ml), extrahován Et₂O (2 x 200 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH ~4 použitím 12N HCI (3 ·« ·· ·· • · · · ·. · • · · · · , · · • · · · ···· « • Λ S 2Ζ-* * * * · · ···*- 110-···· ·· ·· »· ··»· až 4 ml), extrahována ethylacetátem a promyta roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu za získání sloučeniny (3.4) (8,1 g, 78%), C13H21NO4S2 (319,44), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 320,1.

Krok E_Sloučenina (3.5)

BoX '^C00Me(3-3)

O

HCI-K'¹'' COOMe (3-5)

K roztoku sloučeniny (3.3) z kroku C výše (1 g) v dioxanu (5 ml), byl přidán 4N roztok HCI-dioxan (50 ml). Směs byla důkladně míchána 1 hod. Směs byla odpařena ve vakuu ve 25 °C vodní lázni. Zbytek byl smísen s EÍ2O a zfiltrován, za získání v názvu uvedené sloučeniny (0,76 g, 93% výtěžek), C₉H₁₅NO2S2.HCI (269,81), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 234,0.

Preparativní příklad 9

Použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příklad 8, krok B, s použitím ethandithiolu namísto propandithiolu, byla získána sloučenina (3.6).

·· ··«·

•	··
··	• *
•	•
•	• ·
•	₁

·· ·· ► · · ·

I · · • · • · • · • · · ··

Krok B Sloučenina (3,7)

ΓΊ

S^S

Cbz^^{N C00M}® (3.6)

ΓΊ

S použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příklad 8, krok C, s použitím sloučeniny (3.6) namísto sloučeniny (3.2) byla získána sloučenina (3.7).

io Krok C_Sloučenina (3,8)

ΓΊ

Boc „N—^*cOOMe (3.7)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 8, krok D, s použitím sloučeniny (3.7) namísto sloučeniny (3.3) byla získána sloučenina (3.8).

Krok D

Sloučenina (3.9)

ΓΊ

Γ^-!

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 8, krok E, s nahrazením sloučeniny (3.7) místo (3.3) byla získána sloučenina (3.9).

Preparativní příklad 10

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A byla připravena sloučenina (4.1), C33H48N4O9S2 (708,89).

Krok B Sloučenina (4.2)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok B byla připravena sloučenina (4.2), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 609,3.

Krok C Sloučenina (4.3) o

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A, byla připravena sloučenina (4.3), C4iH6iN₅O₁₀S2 (708,89), hmotnostní spektrum (FAB), M+1 = 709,3.

Krok D_Sloučenina (4.4)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 7, krok A, byla připravena sloučenina (4.4).

Preparativní příklad 11 Krok A Sloučenina (4.5)

S použitím v podstatě stejného postupu jako příkladu 2, krok A, byla připravena sloučenina (4.5).

v preparativním ·_ ή 1 C>_ · · · ·· · ···) ι c/»· ···· ·· ··

Krok B Sloučenina (4.6)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok B, byla připravenasloučenina (4.6).

Krok C Sloučenina (4.7)

Sloučenina (4.9) z preparativního příkladu 12, byla ponechána reagovat se sloučeninou (4.6) z kroku B výše, v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za získání sloučeniny (4.7).

Krok D Sloučenina (4,8) •»‘•->20 <Ί η

lboc-Ch

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 7, krok A, byla připravena sloučenina (4.8).

Preparativní příklad 12

Sloučenina (4.9) /-BuOCOCI + H-Chg-OH (4.01) (4.02) > lboc-Chg-OH (4.9)

Roztok L-cyklohexylglycinu (4.02) (1,0 ekv.), dimethylformamidu (20 ml/g) a diisopropylethylaminu (1,1 ekv.) byl při 5 °C smísen s isobutylchlorformátem (4.01) (1,1 ekv.). Chladná lázeň byla odstraněna a směs byla míchána 6 hod. Reakční směs byla vlita do 5% vodného KH₂PO₄ a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty 5% vodným K₂CO₃, potom 5% vodným KH₂PC>4, potom roztokem soli, a organické vrstvy byly sušeny nad bezvodým MgSO₄. Směs se zfiltruje, filtrát odpaří ve vakuu, zbytek se čistí v případě potřeby chromatografií nebo jiným způsobem, zbytek se rozetře se směsí Et₂O-hexan, a zfiltruje, za získání v názvu uvedené sloučeniny (4.9), C-i₃H₂₃NO₄ (257,33).

Preparativní příklad 13

Sloučenina (13.1) /-BuOCOCI + H-Thr(Bzl)-OH-> lboc-Thr(Bzl)-OH (4.01) (13.02) (13.1)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 12, s použitím L-O-benzylthreoninu (13.02) (Wang et al, J.

Chem. Soc., Perkin Trans. 1_, (1997) No. 5,621 - 624) namísto Lcyklohexylglycinu (4.02) se připraví sloučenina (13.1), Ci6H₂₃NO₅(309,36), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 310,2.

Preparativní příklad 14

Sloučenina (4.8) z preparativního příkladu 11, krok D (1,0 g) byla ponechána reagovat s roztokem bezvodé kyseliny trifluoroctovédichlormethanu (1 : 1,50 ml) 2 hod. Roztok byl zředěn xylenem (100 ml) a odpařen ve vakuu. Zbytek byl smísen s Et₂O a zfiltrován, za získání v názvu uvedené sloučeniny (5.1) (0,9 g), C37H₅3N₅O9S₂(775,98), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 =776,5.

Krok B Sloučenina (5.2)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A, byla sloučenina (5.1) ponechána reagovat s amoniakem (0,5M roztok 1,4-dioxanu), za získání v názvu uvedené sloučeniny (5.2) C₃7H54N6O₈S₂ (774,99), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 775,4.

Preparativní příklad 15

Směs sloučeniny (5.1) z preparativního příkladu 14, krok A (0,15 g), N,N-dimethylaminu (0,12 ml 2M roztoku THF), io dimethylformamidu (10 ml) a vazebného činidla PyBrOP (0,11 g) byla ochlazena na 5 °C, potom byl přidán diisopropylethylamin (DIEA nebo DIPEA, 0,12 ml). Směs byla míchána za chladu 1 min, potom při teplotě laboratoře 6 hod. Reakční směs byla vlita do 5% vodného H3PO4 (50 ml) a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty chladným 5% vodným K2CO3, potom 5% vodným KH2PO4, potom roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí MeOH-CH₂CI₂, za získání v názvu uvedené sloučeniny (5.3), C39H58N6O8S2 (803,05), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 803,5.

Preparativní příklad 16

Krok A Sloučenina (6.2)

OCH2Ph • ·

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A, byla sloučenina (6.1) hydrochlorid benzylesteru hydroxyprolinu ponechána reagovat se sloučeninou (4.9) z preparativního příkladu 12, za získání v názvu uvedené sloučeniny (6.2), C₂5H₃₆N₂O₆ (460,56), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 461,2.

Krok B_Sloučenina (6.3)

- S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 8 byla připravena sloučenina (6.3), C₂5H34N₂C>6 (458,55), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 459,2.

Krok C (6.4)

Směs sloučeniny (6.3) z kroku B (1 g), 10% Pd/C (0,05 g) a EtOH (100 ml) byla míchána za tlaku 0,1 MPa H₂ 6 hod. Směs byla zfiltrována a odpařena do sucha ve vakuu za získání v názvu uvedené sloučeniny (6.4) (0,77 g), Ci₈H₂₈N₂O₆ (368,42) hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 369,2.

.-:.124'

Preparativní příklad 17

Krok A Sloučenina (7.1)

nu θ Ph HCl ?^H d U I ,OH + ⁿ2

N CONMe, H ² (2-3)

o.

O Ph h ?^H Η I 1

CONMe-, iboc-Chg o í ⁰ (7.1) io Sloučenina (6.4) z preparativního příkladu 16, krok C, byla ponechána reagovat se sloučeninou (2.3) z preparativního příkladu 6, krok B, stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za získání sloučeniny (7.1), C₃₆H₅4N₆O₉ (714,85), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 715,9.

Krok B_Sloučenina (7.2)

N CONMe₂H

CONMe?

Sloučenina (7.1) byla ponechána reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 7, krok A, za získání sloučeniny (7.2), C₃₆H5₂N₆O9 (712,83), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 713,5.

Sloučenina (7.2) z kroku B výše byla ponechána reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 8, krok B, s 1,4-butandithiolem, za získání v názvu uvedené sloučeniny (7.3), C₄₀H₆oN₆0₈S₂ (817,07), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 817,5.

io S použitím výše uvedených postupů byly připraveny sloučeniny uvedené v připojené tabulce 2. Jako obecná poznámka ke všem tabulkám stejně jako k příkladům a schématům v této přihlášce platí, že všechny atomy dusíku s otevřenou nedoplněnou vazbou • v chemických strukturách v příkladech a tabulkách znamenají NH, nebo v případě koncového atomu dusíku -NH₂. Podobně jakýkoli atom kyslíku s otevřenou nedoplněnou vazbou v chemických strukturách v příkladech a tabulkách znamená skupinu -OH.

Syntéza na pevné fázi

Obecné postupy pro vazebné reakce na pevné fázi

Syntéza byla prováděna v reakční nádobě vytvořené z polypropylenové stříkačky jako patrony opatřené u dna polypropylenovou fritou. Aminokyseliny chráněné Fmoc byly navazovány za standardních podmínek syntézy na pevné fázi. Do každé reakční nádoby bylo vloženo 100 mg výchozí pryskyřice FmocSieber (přibližně 0,03 mmol). Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (2 x). Ochranná skupina Fmoc byla odstraňována 2 ml 20 % obj./obj. roztoku piperidinu v DMF 20 min. Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (4 x). Vazebná reakce byla prováděna v DMF (2 ml), s použitím e« ··

0,1 mmol Fmoc-aminokyseliny, 0,1 mmol HATU [O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu] a 0,2 mmol DIPEA (N,N-diisopropylethylamin). Po třepání 2 hod byla reakční nádoba odsáta a pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (4 x). Vazebný cyklus byl opakován s další Fmoc-aminokyselinou nebo zakončovací skupinou.

Obecný postup pro Dess-Martinovu oxidaci na pevné fázi

Syntéza byla prováděna v reakční nádobě, která byla vytvořena w z polypropylenové stříkačky jako patrony opatřené u dna polypropylenovou fritou. Hydroxysloučenina navázaná na pryskyřici (přibližně 0,03 mmol) byla smísena s roztokem 0,12 mmol DessMartinova perjodinanu a 0,12 mmol t-BuOH v 2 ml DCM 4 hod. Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly 20% obj./obj. roztoku iPrOH v DCM, THF a 50% obj./obj. roztokem THF ve vodě (4 x), THF (4 x) a DCM (4 x).

Preparativní příklad 18

Příprava N-Fmoc-2’,3^,-dimethoxvfenylglvcinu Sloučenina (901)

901A

901B 901c

• ·

K roztoku kyanidu drasleného (1,465 g, 22,5 mmol) a uhličitanu amonného (5,045 g, 52,5 mmol) ve vodě (15 ml) byl přidán roztok sloučeniny 2,3-dimethoxybenzaldehyu 901A (2,5 g, 15 mmol) v ethanolu (15 ml). Reakční směs byla zahřívána při 40 °C 24 hod. Objem roztoku byl snížen na 10 ml odpařením za sníženého tlaku. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (15 ml) a sloučenina 901B byla získána jako bílá sraženina. Sloučenina 901B io byla izolována filtrací (2,2 g, 9,3 mmol). Sloučenina 901B byla rozpuštěna v 10% hmotn./hmotn. vodném roztoku hydroxidu sodného (15 ml) a získaný roztok byl zahříván pod zpětným chladičem 24 hod. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo upraveno na neutrální (pH 7). Získaný roztok s obsahem sloučeniny

901C byl odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v 5% obj./obj. vodném roztoku hydrogenuhličitanu sodného (150 ml). Roztok byl ochlazen na 0 °C v ledové lázni a byly přidány 1,4-dioxan (30 ml) a roztok 9-fluorenylmethylsukcinimidylkarbonátu (2,7 g, 8 mmol) v 1,4dioxanu (30 ml) při 0 °C. Reakční směs byla ponechána ohřát na

2o laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře 24 hod. 1,4dioxan byl odpařen za sníženého tlaku. Vodný roztok byl promyt diethyletherem. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo nastaveno do kyselé oblasti (pH 1). Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za získání požadované sloučeniny 901 jako bílé pěnovité látky (3,44 g, 7,9 mmol). MS (LCMS elektrorozprašování) 434,1 MH⁺.

K roztoku N-Fmoc-fenylalaninu 801A (5 g, 12,9 mmol) v bezvodém DCM (22 ml) ochlazeném na -30 °C ve směsi suchý ledaceton byl postupně přidán N-methylpyrrolidin (1,96 ml, 16,1 mmol) a methylchlorformát (1,2 ml, 15,5 mmol). Reakční směs byla míchána při

-30 °C 1 hod a byl přidán roztok N,O-dimethylhydroxyl-aminhydrochloridu (1,51 g, 15,5 mol) a N-methylpyrrolidinu (1,96 ml, 16,1 mmol) v bezvodém DCM (8 ml). Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře přes noc. Byl přidán toluen a organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za poskytnutí sloučeniny 801B (4 g, 9,29 mmol).

K roztoku Red-AI (6,28 ml, 21,4 mmol) v bezvodém toluenu (8 ml) ochlazenému na -20 °C v lázni suchý led-aceton byl přidán roztok sloučeniny 801B (4 g, 9,29 mmol) v bezvodém toluenu (12 ml). Reakční směs byla míchána při -20 °C 1,5 hod. Organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surový produkt 801C byl použit v příští reakci bez dalšího čištění.

K roztoku sloučeniny 801C (přibližně 9,29 mmol) v hexanu (15 ml) byl postupně přidán roztok kyanidu drasleného (24 mg,

0,37 mmol) a tetrabutylamoniumjodidu (34 mg, 0,092 mmol) ve vodě (4 ml) a acetonkyanohydrin (1,27 ml, 13,9 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 24 hod. Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva io byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání sloučeniny 801D (2,4 g,

6,03 mmol).

K roztoku sloučeniny 801D (2,4 g, 6,03 mmol) v 1,4-dioxanu (11 ml) byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (11 ml).

Reakční směs byla zahřívána na 80 °C 3 hod. Byl přidán ethylacetát (25 ml) a voda (25 ml). Organická vrstva byla promyta roztokem soli a sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání požadované sloučeniny 801 jako bílé pěnovité látky (2 g, 4,8 mmol). MS (LCMS-elektrorozprašování) 418,1

MH⁺.

Schéma 8

FmocHN-P

301A

H

N-P %

OH O ,

FmocHN^A^ N-P

FmocHN^Jt ^~^P ^H O 301C

CH,

301D

A

Q.

H

N-P

301F ,N-P ·· ··· · • · · • · ·

OH

ch₃

Sloučeniny 301B, 301C, 301D, 301E, 301F a 301G navázané na pryskyřici byly připraveny obecným postupem pro vazebné reakce na pevné fázi, přičemž se vycházelo ze 100 mg pryskyřice Fmoc-Sieber (0,03 mmol). Sloučenina 301G navázaná na pryskyřici byla oxidována na sloučeninu 301H navázanou na pryskyřici s použitím obecného postupu pro Dess-Martinovu oxidaci na pevné fázi. Sloučenina 301H navázaná na pryskyřici byla smísena s 4 ml 2% obj./obj. roztoku TFA v DCM 5 min. Filtrát byl přidán k 1 ml AcOH a roztok byl zakoncentrován ve vakuu centrifugací, za získání sloučeniny 301J (0,0069 g, 29% výtěžek). MS (LCMS-elektrorozprašování) 771,2, MH+.

S použitím techniky syntézy na pevné fázi podrobně popsané výše a následujících skupin pro různé substituce ve sloučenině vzorce 1 byly připraveny sloučeniny v tabulce 3:

•· 0 00 0

-W-:

Y-W-:

•>Í3Í

-°γ| Hacyí

ο ο

o o

·· ·· ·· ·· v » · * · · ·· ··«>» • · 9 • · · · ·· ··

-Z-:

'Vju*'

V^NV

R³ ^ZW' h₃c ch₃

njV' h₃c i/V* ch₃

/W*

k ^OH

OH

>*-•13(3··** ··«

• ·ί-·4 37*·-· ····

Λ/V» <vvn 'VV'

OH

Cl

^zVv> <w» ,ch, o^oh 'W'

Η₃ΟγΟΗ₃ *VV>

Tabulka 3

Sloučeniny připravené syntézou na pevné fázi » ·· · · ·· · · · < • ···· ·· < • · · · · · · • Λ Λ * *· * *· «-·η·ο9 -·· ...... ·«

• · • •»441 - · · ····

·· ·4 ·· ·· ·«·· • · ····.·· *

Struktura	Třída Ki*
r	C
y. r	c
Ά o r -ÁVřr^grCS'	c
HO r	c
HO r	c
	c
HO r	c
HO r	c

• ·· ·* ·· ·· ··#* ·· · · ···· · · · • · · » · · · » • · Η A Ο · · · · ·· · ··· »-<·|·4·θ -·· ···· ·· ··

• ·* ·· • < · · · « » e e ·* ··»* * «.*^44 -·· ····

«· ·· ·· 99 ····

9 9 9 9 9 9 * · » • «4 λ C · ·· · · · · • ΟΦίβΗΌ -99 9999 99 99

Struktura	Třída Ki*
Λ?	c
γ Ρ J Η I L ο ° 1 ° V °	c
ζ	c
•Z+vZŽZ	c
	c
	c
Ζ+νγίΖΖ	c
Ύ’Ίί ι 11 0 Κ ^νΑΛΑΓΎΊ1'·'ν 0Ρ* ο ⁰ ο^0	c
Ζ+τΖΖιΖ	c

• ·· · ···· • · · « ·· ··

e β

- 1*47*-·

Struktura	Třída Ki*
P	B
. ^P - V^YťT^Ap ó’	c
_r P •w~vp4^ ^Ί 0	C
OŤ^ý.pWAp ó	c
^z	c
< V^PpOgr^	c
P -JvL; JaO P„ Ta T T T t 9 oko <“-/ 1 1 > ° ) 0 ° 0	c
P -Avpíw⁵	c

·· ····

- ΐ48’⁴··

Struktura	Třída Ki*
	C
/	C
	B
f 9 l ( .	C
/ o	B
	C
r a	B
/ (η a * η ⁹ ®	B

····

- Ť49·*·

Struktura	Třída Ki*
/ \ ^s ó	C
	A
a o p s ·_ό>	A
° ° cf 0	A
	B
y. 9 cF	A
p 0 1 \>	B
	B

Struktura	Třída Ki*
X	B
	c
	B
⁹ -íXW	B
>4-	B
X	B
, 4j ° Syx/Mv	C
4-¾^	B

····

• ·

···· ··

-154- «··«

• 4 • ·· 4 . ígff.:.

Struktura	Třída Ki*
P	B
	c
O l·	c
O ( o^Yťr^ ^X 0'	c
v ó'°	A
O . < □ L o ó°	B
P oPWPVjív-o 0	A
P ^Ί 0	A

*· ···· • ·: · · .: : · .....·· :. :

*· ···· .· · « fr • « « • ··« fsr,:..

.· · · · . ♦ · ·

......%S8.,;

·· ·· ·· • β

.....• · β · • 9>

* · *· «··· «

• · ··

·· ··· · .· ·: ιεο.·- ·: :

• · · · · · ·· ··

• <·

161.·- ·: :. :

·· ···· ·· .·· ·· «· · · · 1 • · · ·

• · ·· ·· ·· » · · β β β 9 9 9 .·* ·4ιβ2.-·’ ·:

>··· ·· ···· 99 99

»· ·· ·· ···· .· •-řiGCy· ·: :. :

• · • · • · • · ···· ·· ··

·· • · • · • · ···<

134.·· ····

·· ···· _β - · ® ® 9 0 Ο

..... · ·· ·

MSB • · · ·· ···· ·· ···· • · * · ·· ··

: 167.·-

• · • · ·· ··· · • · ·· ···· · · < • · · · · · · ·· --:168 ,· ·: :. :

···· ·· ···· ·· ··

·· ····

·· ···· .·’ ^72-.· _ * * · · • ···· ·· .f

·· ···· • A Α·

• · · · A ·

·· ····

·· ···· • ♦ « ··

·· · ·· · ·· ·* • · · ·

·· ·«*· • · · · ·· ··

·· ·· • · ♦ · *· «···

Struktura	Třída Ki*
	B
0 0 \ 0 0	C
	B .
0 0^0 0	C
	C
0 0^0- 0	c
^ΧίγτΧ--	c
νΧφ<	B

·· ···· .· ·· ·· ·· ·; · · · · · ·

Struktura	Třída Ki*
	B
	c
	c
°—i— (ΓΧ	c
	c

Další sloučeniny, které byly připraveny, včetně jejich rozmezí aktivity (Ki*), jsou uvedeny v přiložených tabulkách 4 a 5. Postup použitý pro přípravu sloučenin v tabulkách 4 a 5 je uveden níže.

I) Syntéza meziproduktů pro sloučeniny v tabulkách 4 a 5

Příklad I

Syntéza 4, 4-dimethylprolinmethylesteru (H-Pro(4,4-diMe)-OMe)

HCbHN· •OMe

O • ·

Krok 1

Syntéza terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-methyl-L-pyroqíutamátu (Boc-PyroGlu(4-methvl)-OtBu)

K roztoku terc-butyl-N-terc-butoxykarbonylpyroglutamátu (11,5 g, 40 mmol) v THF (200 ml) míchanému při -78 °C, byl přidán 1M io roztok hexamethyldisilazidu lithného v THF (42 ml, 42 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byl přidán methyljodid (3,11 ml, 50 mmol). Po 2 hod přidávání při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (200 ml). Roztok byl • mřchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (3 x 200 ml). 15 Spojené organické vrstvy byly promyty roztokem soli (200 mí), sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn chromatografií s elucí směsí 1 : 1 ethylacetát/hexany za získání Boc-PyroGlu(4-methyl)-OtBu (10,6 g, 35,4 mmol, 88 %) jako směsi isomerů (2 : 1 cis : trans).

Krok 2

Syntéza terc-butyl-N-terc-butoxykarbonvl-4,4-dimethyl-L-pyroglutamátu (Boc-PyroGlu(4,4-dimethyl)-QtBu)

K roztoku

ter-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-methyl-L25

·· ·*·· pyroglutamátu (1,2 g, 4,0 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) míchanému při -78 °C byl přidán 1M roztok hexamethyldisilazidu lithného v tetrahydrofuranu (4,4 ml, 4,4 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byl přidán methyljodid (0,33 ml, 5,2 mmol). Po 3 hod přidávání při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (40 ml). Roztok byl míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 25 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml), roztokem soli (50 ml), sušeny io (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání Boc-PyroGlu(4,4dimethyl)-OtBu (0,673 g, 54 %).

Krok 3

Syntéza terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethylprolinu (Boc1.5 - -Pró-(4,4-dimethyl)-OtBu)

Bylo použito modifikace známého postupu

Pedregal, C.;

Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia Ruano, J. L., Tetrahedron Letters 1994, 35(13), 2053 - 2056).

K roztoku terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethylpyro-glutamátu (2,0 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml), míchanému při

-78 °C, byl přidán 1M roztok triethylborohydridu lithného v tetrahydrofuranu (2,4 ml, 2,4 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (5 ml). Reakční směs byla ponořena do lázně led/voda a byl přidán 30% vodný peroxid vodíku (10 kapek). Roztok byl míchán po dobu 20 min při 0 °C, potom byla reakční směs —480 • · zakoncentrována ve vakuu pro odstranění tetrahydrofuranu. Vodný roztok byl zředěn vodou (10 ml) a extrahován dichlormethanem (3 x 40 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na2SO4), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (20 ml) a triethylsilanu (310 μΙ, 2,0 mmol), potom ochlazen na -78 °C a po kapkách byl přidán diethyletherát fluoridu boritého (270 pl, 2,13 mmol). Míchání pokračovalo 30 min, během kterých byly přidány další triethylsilan (310 μΙ, 2,0 mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (270 μΙ, 2,13 mmol). Po míchání při -78 °C další 2 hod byla chladicí io lázeň odstraněna a byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (4 ml). Po 5 min byla směs extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání Boc-Pro(4,4-dimethyl)-OtBu..

Krok 4

Syntéza 4,4-dimethylprolinu (H-Pro(4,4-dimethyl)-OH)

Roztok sloučeniny ter-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethyl-prolinu v dichlormethanu (5 ml) a kyseliny trifluoroctové (5 ml) byl míchán při teplotě laboratoře pět hodin. Roztok byl zakoncentrován, sušen ve vysokém vakuu a převeden do příštího kroku bez dalšího čištění.

• · ····

Krok 5

Syntéza N-terc-butoxvkarbonvl-4,4-dimethylprolinu (Boc-Pro(4,4-dimethyl)-OH)

K roztoku trifluoracetátové soli 4,4-dimethylprolinu (1,5 mmol) v dioxanu (7 ml), acetonitrilu (12 ml) a diisopropylethylaminu (700 K, 4 mmol) byl přidán roztok sloučeniny di-terc-butyldikarbonátu (475 mg, 2,18 mmol) v acetonitrilu (5 ml). Po míchání 12 hod při teplotě laboratoře byl roztok zakoncentrován ve vakuu, rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (50 ml) a promyt diethyletherem (3 x 40 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH 3 kyselinou citrónovou, potom extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány.

Krok 6

Syntéza hydrochloridové soli 4,4-dimethylprolinmethylesteru (HCI.H-Pro(4,4-dimethyl)-OMe)

K roztoku Boc-Pro(4,4-diMe)-OH (0,5 g, 2,06 mmol) v bezvodém methanolu (8 ml) byl přidán po kapkách thionylchlorid (448 I,

T82

6,18 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 6 hod při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována na amorfní pevnou látku (377 mg, 95 %).

Příklad II

Obecný postup syntézy N-tercbutoxykarbonyl-4-alkvl-4-methvlprolinu

R Me

Sloučeniny, ve kterých skupina R je allyl a benzyl, byly syntetizovány následujícími kroky 1 až 4 níže:

Krok 1

Syntéza terc-butvl-N-terc-butoxvkarbonyl-4-alkvl-4-methyl-L-pyro-glutamátu

K roztoku ter-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-methyl-L-pyroglutamátu (10,2 g, mmol) (viz příklad I, krok 1) v tetrahydrofuranu (170 ml), míchanému při -78 °C, byl přidán 1M roztok hexamethyldisilazidu lithného v tetrahydrofuranu (37,5 ml, 37,5 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 40 min byl přidán alkylhalid (61,4 mmol). Po dalších 3 hod při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (200 ml). Roztok byl míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly zředěny hexany (150 ml) a promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (2 x 100 ml) a roztokem soli (100 ml), sušeny (Na2SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím 20% ethylacetátu v hexanech, za získání čistého terc-buty!-N-terc-butoxykarbonyl-4-alkyl-4-methyl-L-pyrow -glutamátu.

Krok 2

Syntéza terc-butyl-N-terc-butoxvkarbonyl-4-alkyl-4-methvlprolinu

Bylo použito modifikace známého postupu Pedregal, C.; 20 Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia Ruano, J. L.,

Tetrahedron Letters (1994) 35(13), 2053 - 2056).

K roztoku terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-alkyl-4-methylpyro-glutamátu (16,6 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml), míchanému při -78 °C, byl přidán 1M roztok triethylborohydridu lithného v tetrahydrofuranu (20 ml, 20 mmol) po kapkách v průběhu 10 min. Po 120 min byla chladicí lázeň ponechána ohřát na -25 °C, přičemž v tomto okamžiku byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (40 ml). Reakční směs byla ponořena do lázně led/voda a byl přidán 30% vodný peroxid vodíku (4 ml). Roztok byl míchán po dobu 10 min •184.-.

při O °C, potom byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu pro odstranění tetrahydrofuranu. Vodný roztok byl zředěn vodou (300 ml) a extrahován dichlormethanem (3 x 200 ml). Organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (100 ml) a triethylsilanu (2,6 ml, mmol), potom ochlazen na -78 °C po kapkách byl přidán diethyletherát fluoridu boritého (2,2 ml, mmol). Míchání pokračovalo 1 hod, a potom byl přidán další triethylsilan (2,6 ml, mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (2,2 ml, mmol). Po míchání při -78 °C další 4 hod byla io chladicí lázeň odstraněna a byly přidány nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (30 ml) a-voda (150 ml). Po 5 min byla směs extrahována dichlormethanemem (3 x 200 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány.

. Kr.ok 3

Syntéza 4-alkyl-4-methylprolinu

O

X

-methylprolinu v dichlormethanu (5 ml) a kyselině trifluoroctové (5 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 5 hod. Byl přidán toluen a roztok byl zakoncentrován a potom sušen ve vysokém vakuu.

Krok 4

Syntéza N-terc-butoxykarbonyl-4-alkyl-4-methyprolinu

Η • β

Κ roztoku trifluoracetátové soli 4-alkyl-4-methy iproli n u 5 (1,5 mmol) v dioxanu (7 ml), acetonitrilu (12 ml) a diisopropylethylaminu (700 pl, 4 mmol) byl přidán roztok di-terc-butyldikarbonátu (475 mg, 2,18 mmol) v acetonitrilu (5 ml). Po 12 hod míchání při teplotě laboratoře byl roztok zakoncentrován ve vakuu, rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (50 ml) a io promyt diethyletherem (3 x 40 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH 3 1N kyselinou chlorovodíkovou, potom extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na2SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsi 1 : 1 ethylacetát/hexany s 1% kyselinou octovou.

Příklad III

Syntéza N-terc-butoxvkarbonyl-4-propyl-4-methvlprolinu

Roztok N-tercbutoxykarbonyl-4-allyl-4-methylprolinu (400 mg, 1,48 mmol) (viz příklad II, krok 4) a 10% Pd na uhlí (400 mg) v methanolu (20 ml) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 4 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována.

$.

Příklad IV

Syntéza Boc-4-cyklohexylprolinu

O

H

Roztok komerčně dostupného Boc-4-fenylprolinu (750 mg) a 5% Rh na uhlí (750 mg) v methanolu (15 ml) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 24 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována za získání 730 mg produktu.

Příklad V

Příprava kyseliny fluorenvlmethoxvkarbonvl-Pro(4-spirocyklopentan)karboxylové .OH

Krok 1

Syntéza (4-allyl)-terc-butylesteru kyseliny Boc-pyroglutamové

OiBu

LiHMDS allylbromíd itBu

Boc O

THF

Boc O • · ^,;··Μ87^;-..·’.·· ·· *···

Κ chlazenému (-78 °C) roztoku komerčně dostupného N-Boc-terc-butylpyroglutamátu (10 g, 35,1 mmol) v THF (175 ml) byl přidán hexamethyldisilazid lithný (36,8 ml, 36,8 mmol) v průběhu 5 min.

Míchání pokračovalo 30 min. Do prvního roztoku byl po kapkách přidán roztok allylbromidu (6,1 mi, 70,2 mmol) v THF (39 ml). Po 2 hod při -78 °C byla reakce ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku chloridu amonného (50 ml). Reakční směs byla potom zředěna ethylacetátem a vrstvy byly odděleny. Organická vrstva byla sušena io nad síranem sodným a zakoncentrována. Blesková chromatografie na koloně prováděná ve směsi 2 : 8 éthylacetát : hexany poskytla produkt (6 g, 53%). NMR δ ppm (CDCI₃): 5,7 (m, 1H), 5,1 (dd, 2H), 4,4 (m, 1H),

2,6 (m, 2H), 2,4 (m, 1 H), 1,8-2,2 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,4 (s, 9H).

Krok 2

Syntéza (4,4-diallyl)-terc-butylesteru kyseliny N-Boc-pyroglutamové

(4-allyl)-terc-butylester kyseliny N-Boc-pyroglutamové získaný v kroku 1 výše (2,68 g, 8,24 mmol) byl podroben druhé alkylaci allylbromidem za podobných podmínek. Blesková chromatografie ve směsi 15 : 85 ethylacetát : hexany poskytla 2,13 g produktu (71 %) jako čirého oleje.

• ·

Krok 3

Syntéza Boc-Pro(4,4-diallvl)-terc-butvlesterii

Část a): K chladnému (-78 °C) roztoku Boc-PyroGlu(4,4-diallyl)-terc-butylesteru (2,13 g, 5,83 mmol) v tetrahydrofuranu (14 ml) byl přidán triethylborohydrid lithný (1M v tetrahydrofuranu, 7,29 ml, 7,29 mmol) v průběhu 5 min. Po 2 hod při -78 °C byla reakce ohřátá na 0 °C a ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a 30% peroxidu vodíku (20 kapek). Míchání pokračovalo 20 min. Tetrahydrofuran byl odstraněn za sníženého tlaku a vzniklý hustý bílý zbytek byl zředěn vodou (80 ml) a extrahován 3 x dichlormethanem. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována a převedena do dalšího kroku bez čištění.

Část b): K produktu získanému v části (a) v dichlormethanu (14 ml) byl přidán triethylsilan (931 μΙ, 5,83 mmol) a potom diethyletherát fluoridu boritého (776 μΙ, 6,12 mmol). Po 30 min byl přidán další triethylsilan (931 μΙ, 5,83 mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (776, μΙ, 6,12 mmol) a reakční směs byla míchána při -78 °C 3 hod, a reakce byla ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vody. Reakční směs byla extrahována dichlormethanem a organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Blesková chromatografie v 15% ethylacetátu v hexanech poskytla 1.07 bezbarvý olej (57 %). NMR δ ppm (CDCI3): 5,7 - 5,8 (m, 2H), 5,1 (m, 4H), 4,1 - 4,2 (2 dďs, 1H rotamery), 3,5 - 3,3 (dd, 1H) a 3,2 (dd, 1H) rotamery, 2,2 - 2,0 (m, 5H), 1,7 (m, 1 H), 1,46 (s, 9H), 1,43 (s, 9H).

·

Krok 4

Syntéza Boc-Pro(4-spirocyklopenten)-terc-butylesteru

K Boc-Pro(4,4-diallyl)-terc-butylesteru (1,07 g, 3,31 mmol) v dichlormethanu (66 ml) - byl přidán 5% dichlorid bis(tricyklohexylfosfin)benzylidenruthenia IV (Grubbův katalyzátor) a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 1,5 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně v 15% ethylacetátu v hexanech. Byl získán žlutý olej (0,57'g, 53 %). NMR δ ppm (CDCI₃): 5,56 (bs, 2H), 4,2 a 4,1 (t, 1H, rotamery), 3,2 - 3,5 (m, 2H), 2,2 - 2,5 (m, 5H), 1,9 (dd, 1H) 1,47 a 1,46 (2 s’s, 9H, rotamery), 1,45 a 1,44 (2 s’s, 9H, rotamery).

Krok 5

Syntéza Boc-Pro(4-spirocvklopentan)-terc-butylesteru

Roztok Boc-Pro(4-spirocyklopenten)-terc-butylesteru (1,12 g) v methanolu (18 ml), vodě (4 ml) a kyselině octové (4 ml) byl umístěn v Parrově třepačce a byl hydrogenován 3 hod při 35 psi (241 kPa) v přítomnosti 10% paladia na uhlí (300 mg). Katalyzátor byl odfiltrován ·· a filtrát byl zakoncentrován na bezbarvý olej (1,26 g). NMR δ ppm (CDCIs): 4,1 a 4,2 (t, 1H, rotamery, 3,4 (d, 1H), 3,2 (d, 1H), 2,1 (m, 1H), 1,9 (m, 1H), 1,6 - 1,7 (m, 10H), 1,5 (3 s's, 18H, rotamery).

Krok 6

Syntéza kyseliny Fmoc-Pro(4-spirocvklopentan)-karboxylové

Boc-Pro(4-spirocyklopentan)-terc-butylester (1,26, 3,9 mmol) byl míchán s dichlormethanem (10 ml) a kyselinou trifluoroctovou (15 ml) 3 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a získaný žlutý olej byl rozpuštěn ve vodě (6 ml). Po částech byl přidán fluorenylmethylsukcinylkarbonát (1,45 g, 4,3 mmol) rozpuštěný v dioxanu (6 ml) a potom uhličitan draselný (2,16 g, 15,6 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 18 hod a zakoncentrována. Zbytek byl zředěn nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a promyt diethyletherem (3x10 ml). Vodná vrstva byla potom okyselena na pH ~1 1N roztokem hydrogensíranu sodného a extrahována ethylacetátem. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na béžovou pěnu (1,3 g, 100 %).

Příklad VI

Syntéza Boc-Pro(4t-NH(Fmoc))-OH

Krok 1

····

Syntéza benzylesteru N^a-terc-butoxvkarbonvl-cis-4-chlor-L-prolinu

Cl

Směs komerčně dostupného N-terc-butoxykarbonyl-trans-4-hydroxyprolinu (8,79 g, 38 mmol), uhličitanu draselného (13,0 g, 94 mmol), benzylbromidu (4,5 ml, 38 mmol) a dimethylformamidu (150 ml) byla míchána po dobu 18 hod. Byl přidán ethylacetát (100 ml) a směs byla zfiltrována. Bílý objemný filtrát byl vyčeřen přidáním 1M HCl (100 ml). Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. K surovému benzylesteru byl přidán toluen a roztok byl zfiltrován a znovu zakoncentrován. Byly přidány dichlormethan (70 ml) a chlorid uhličitý (70 ml), a potom trifenylfosfin (21,11 g, 80 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 10 hod, reakce byla ukončena ethanolem (7 ml) a míchána dalších 5 hod. Roztok byl zakoncentrován na přibližně 100 ml, potom byl přidán dichlormethan (40 ml) a potom ether (200 ml) za míchání. Roztok byl chlazen 4 hod, zfiltrován a zakoncentrován za získání žlutohnědého oleje, který byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsi ether/hexan/dichlormethan 2 : 2 : 1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (9,13 g, 26,9 mmol, 71 %) jako bílé pevné látky.

·· ····

Krok 2

Syntéza benzylesteru N^a-terc-butoxvkarbonvl-trans-4-azido-L-prolinu

Roztok benzylesteru N^a-terc-butoxykarbonyl-cis-4-chlor-L-prolinu (9,0 g, 26,5 mmol) a azidu sodného (7,36 g, 113 mmol) v dimethylformamidu (270 ml) byl zahříván při 75 °C 2 dny. Byla přidána voda (100 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem . (3-x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Olej byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsi ethylacetát/hexany 1 : 1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (8,59 g, 24,8 mmol, 94 %).

Krok 3

Syntéza Boc-Pro(4t-NH(Fmoc))-OH

Směs benzylesteru N-a-t-butoxykarbonyl-trans-4-azido-L-prolinu (8,59 g, 24,8 mmol) a 10% paladia na uhlí (900 mg) v ethanolu

(500 ml) byla hydrogenována při 50 psi (345 kPa) 14 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Směs byla zfiltrována, zakoncentrována, rozpuštěna v methanolu (60 ml), znovu zfiltrována a zakoncentrována, za získání bezbarvého oleje. Olej byl rozpuštěn ve vodě (53 ml) obsahující uhličitan sodný (5,31 g, 50,1 mmol) a byl přidán roztok fluorenylmethylsukcinylkarbonátu (8,37 g, 29,8 mmol) v dioxanu (60 ml) v průběhu 40 min. Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 17 hod, potom byla zakoncentrována pro odstranění dioxanu a zředěna vodou (200 ml). Roztok byl promyt etherem (3 x 100 ml). pH vodného roztoku bylo upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (pozor - pění!) a vody· (100 ml). Směs byla extrahována dichlormethanem (400 ml, 100 ml, 100 ml) a spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny.

Příklad VII

Syntéza N-t-butoxykarbonvl-4-trans-(N-fluorenvlmethyloxykarbonyl-aminomethyl)-L-prolinu (Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-OH)

Syntéza benzylesteru terc-butoxykarbonyl-cis-4-hydroxv-L-prolinu (Boc- Pro(4-cis-OH)-QBn)

Ke směsi cis-hydroxy-L-prolinu (5 g, 38,1 mmol) v benzenu (45 ml) a benzylalkoholu (45 ml) byl přidán monohydrát kyseliny ptoluensulfonové (7,6 g, 40,0 mmol). Reakční směs byla zahřívána na 125 °C 20 hod, přičemž voda (2 ml) byla odstraňována použitím DeanStark přístroje. Roztok byl zfiltrován dokud byl horký, a potom byl io přidán ether (150 ml). Roztok byl ponechán ochladit 3 hod při teplotě laboratoře, potom 3 hod při 4 °C. Získaná pevná látka byla oddělena, promyta etherem (100 ml) a sušena ve vakuu 1 hod, za získání 13,5 g bílé pevné látky. Pevná látka byla rozpuštěna v dioxanu (40 ml) a byl přidán diisopropylethylamin (7,6 ml), potom di-terc-butyldikarbonát (10 g, 45,8 mmol) v průběhu 5 min, přičemž pro udržování konstantní reakční teploty byla používána ledová lázeň. Po 10 hod při teplotě laboratoře byla reakční směs vlita do chladné vody (200 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 100 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím 40 až 60% ethylacetátu v hexanech za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (10,04 g, 31,24 mmol, 82 %).

Krok 2

Syntéza benzylesteru N-t-butoxykarbonyl-cis-4-mesyloxy-L-prolinu (Boc-Pro(4-cis-OMs)-OBn)

N·- 393 o

K roztoku Boc-Pro(4-cis-OH)-OBn (8,45 g, 26,3 mmol) v pyridinu (65 ml) byl při 0 °C po kapkách přidáván methansulfonylchlorid (3,4 ml, 44 mmol) v průběhu 7 min. Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 2 hod, potom byla míchána přes noc. Roztok sloučeniny 10 % vody v pyridinu (20 ml) byl přidán io v průběhu 15 min a reakční směs byla zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě a extrahován ethylacetátem (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 50 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (50 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány.

Získaný zbytek byl rozpuštěn v toluenu (100 ml) a zakoncentrován pro odstranění stop pyridinu. Zbytek byl sušen ve vakuu 30 min za získání v názvu uvedené sloučeniny (10,7 g, 102 %), potom použit v dalším kroku bez čištění.

Krok 3

Benzylester N-t-butoxykarbonvl-trans-4R-kyano-L-prolinu (Boc-Pro(4-trans-CN)-OBn)

CN

Roztok Boc-Pro(4-cis-OMs)-OBn (10,7 g, 26,3 mmol) a

TI 96 tetrabutylamoniumkyanidu (15,0 g, 56 mmol) v dimethylformamidu (100 ml) byl zahříván v olejové lázni na 55 °C 28 hod. Po ochlazení byla přidána voda (150 ml) a směs byla extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 100 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (100 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií (1 : 1 ether/hexany) a potom rekrystalizován ze směsi ethylacetát/hexany za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (2,40 g, 7,26 mmol, 28 %).

Krok 4

N-t-butoxvkarbonvl-4-trans-N-fluorenylmethvloxykarbonylamino-methyl)-L-prolin (Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-OH)

Směs sloučeniny z kroku 3 výše (2,31 g, 7 mmol), vody (10 ml), methanolu (85 ml) a 10% paladia na uhlí (700 mg) byla hydrogenována při 50 psi (345 kPa) 11 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována. Ke zbytku byla přidána voda (15 ml) a uhličitan sodný (1,5 g, 14,2 mmol). V průběhu 5 min byl přidán roztok fluorenylmethyi-sukcinylkarbonátu (2,36 g, 7,0 mmol) v dioxanu (17 ml) a míchání pokračovalo 28 hod při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu na 15 ml objemu a byla přidána voda (100 ml). Roztok byl promyt etherem (3 x 75 ml). pH vodného roztoku bylo upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (přibližně 20 g, pozor pění!) a vody (100 ml). Směs byla extrahována dichlormethanem (4 x

39?

100 ml), a spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt obsahoval jednu hlavní nečistotu, jejíž odstranění vyžadovalo třístupňové čištění. Surový produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu (50 ml) a kyselině trifluoroctové (50 ml) a míchán 5 hod před zakoncentrováním. Zbytek byl čištěn preparativní HPLC s reverzními fázemi. Čistá trifluoracetátová sůl 4-(N-fluorenylmethyloxykarbonylamíno-methyl)prolinu (1,887 g, 3,93 mmol) byla rozpuštěna v dioxanu (10 mi), acetonitrilu (20 ml) a diisopropylethylaminu (1,4 ml, 8 mmol). K io reakční směsi byl přidán roztok di-terc-butyldikarbonátu (1,1g, 5 mmol) v dioxanu (5 ml). Po 18 hod míchání bylo pH roztoku upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (pozor - pění!) a vody (100 ml). Směs byla extrahována ethylacetátem (3 x 150 ml) a spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným vodným chloridem sodným (100 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt byl rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (100 ml) a promyt etherem (3 x 75 ml). Vodná vrstva byla nastavena na pH 3 přidáním kyseliny citrónové, potom extrahována dichlormethanem (4 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání v názvu uvedené sloučeniny (1,373 g, 2,94 mmol, 42 %).

Příklad Vlil

Syntéza 3,4-isopropylidenprolinolu • · <4 /fn ♦ · * * *

-· 158 ·· · · · « • · · · · · · ·

Krok I

Cyklopropanační reakce (Tetrahedron Lett. 1993, 34(16) 2691 a 2695)

K míchanému roztoku isopropyltrifenylfosfoniumjodidu (4,14 g, 9,58 mmol) v tetrahydrofuranu (60 ml) bylo při 0 °C přidáno nbutyllithium (1,6M v hexanech, 5,64 ml, 9,02 mmol) v průběhu 5 min. io Po 30 min byl přidán roztok enamidu ((5R,7S)-5-fenyl-5,6,7,7a-tetrahydro-6-oxapyrrolyzin-3-onu) (1,206 g, 6,0 mmol) (viz J. Org. Chem. 1999, 64(2), 547, kde je popsána syntéza enamidového výchozího materiálu) v tetrahydrofuranu (40 ml) v průběhu 10 min. Po

- 10 min přidávání byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla 15 míchána při teplotě laboratoře 4 hod. Reakční směs byla vlita do vody (400 ml) a extrahována diethyletherem (400 ml) a ethylacetátem (2 x 400 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání požadovaného surového produktu. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s elucí směsí 3 :

5 : 2 ethylacetát/hexany/methylenchlorid, za získání čistého cyklopropanovaného produktu (750 mg, 3,08 mmol, 51 %).

Krok 2

Syntéza 3,4-isopropylidenprolinol-Pf3,4-(diMe-cyklopropyl)l-alkoholu) (J. Pro. Chem. (1999) 64(2), 330)

·- 219©

Směs produktu získaného v kroku 1 výše (1,23 g, 5,06 mmol) a lithiumaluminumhydridu (1,0M v THF, 15 ml, 15 mmol) byla zahřívána pod zpětným chladičem 5 hod. Po ochlazení na 0 °C byl zbytek aluminumhydridu opatrně odstraněn přidáváním nasyceného vodného roztoku síranu sodného (1,5 ml) po kapkách v průběhu 15 min. Směs byla zředěna ethylacetátem (40 ml) a potom zfiltrována přes celit. Filtrát byl sušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován za io získání surového N-benzylaminoalkoholu (1,25 g), který byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění. Roztok surového Nbenzylaminoalkoholu (1,25 g, 5,06 mmol) v 1 : 1 kyselina octová/ethylacetát (30 ml) s 10% Pd/C (1 g) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje.

- Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí a filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě (30 ml) a pH bylo nastaveno na 13 50% NaOH. Směs byla extrahována etherem (3 x 60 ml). Spojené extrakty byly sušeny síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání surového aminoalkoholu (485 mg, 3,43 mmol). Tento materiál byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění.

Příklad IX

Syntéza kyseliny iBoc-G(Chx)-Pro(3,4-isopropyliden)-karboxvlové

O

Ό ·· ···· • · *·····

20θ·- ····

Krok 1

Syntéza isobutyloxykarbonvlcvklohexvlqlvcinu (iBoc-G (Chx)-OH)

K roztoku komerčně dostupného hydrochloridu cyklohexylglycinu (15 g, 77,4 mmol) v acetonitrilu (320 ml) a vodě (320 ml) byl přidán uhličitan draselný. K čirému roztoku byl přidán isobutylchloroformát (11,1 ml, 85,1 mmol) v průběhu 15 min a reakční směs byla míchána po ''dobu 17 hod. Acetonitril byl odstraněn za sníženého tlaku a zbývající vodná vrstva byla extrahována dvakrát etherem (100 ml).

Vodná vrstva byla potom okyselena na pH 1 6N kyselinou chlorovodíkovou a extrahována dichlormethanem (3 x 300 ml). Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována, za získání 18,64 g (94%) produktu jako bílé pevné látky.

Krok 2

Syntéza isobutvloxykarbonvlcvklohexvlqlycyl-3,4-isopropylidenprolinu (iBoc-GChx)-Pf3,4-diMe-cyklopropyl)1-OH)

a) Vazebná reakce

• ·« ·· ·» »··· • · · · e © · · « · _β • · · · · ··· • ········ β • · · · · ···· ··* ···· 20Ť*- ···· ** ··

Κ roztoku iBoc-G(Chx)-OH (890 mg, 3,45 mmol) v acetonitrilu (20 ml) byl přidán HATU (1,33 g, 3,5 mmol), HOAt (476 mg, 3,5 g) a potom diisopropylethylamin (2,5 ml, 14 mmol). Po 2 min byl přidán 3,4-isopropylidenprolinol (485 mg, 3,43 mmol) a reakční směs byla míchána přes noc. Byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný a potom byla směs extrahována etherem a ethylacetátem. Spojené organické vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s elucí směsí 1 - : 1 ethylacetát/hexany za získání čistého dipeptidového alkoholu iBocio G(Chx)-3,4-isopropylidenprolinolu (870 mg, 2,3 mmol, 67 %). b) Krok Jonesovy oxidace

K roztoku dipeptidového alkoholu iBoc-G(Chx)-3,4isopropylidenprolinolu (100 mg, 0,26 mmol) v acetonu (2 ml) míchanému při 0 °C bylo přidáno Jonesovo činidlo (300 μΙ) po kapkách . v průběhu 5 min [Jonesovo činidlo: připraveno z oxidu chromitého (13,4 g) a koncentrované kyseliny sírové (11,5 ml) zředěné vodou na celkový objem 50 ml.] Po míchání při 0 °C 3 hod byl přidán isopropanol (500 μΙ) a míchání pokračovalo dalších 10 min. Reakční směs byla zředěna vodou (20 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání dipeptidu iBoc-G(Chx)-3,4isopropylidenprolinu (100 mg, 0,25 mmol, 96 %).

Příklad X

Syntéza N-Cbz-3,4-methanoprolinu

•OH ·· ···· *4 4 • · 4 ·- 202-···· · · · ··

Krok 1

Směs výchozího benzyíidenu (J. Org. Chěm. 1999, 64(2), 547) (4,6 g, 21,4 mmol) a lithiumaluminumhydridu (1,0M v THF, 64 ml, 64 mmol) byla vařena pod zpětným chladičem 5 hod. Po ochlazení na 0 °C byl zbylý aluminumhydrid opatrně rozložen přidáváním po io kapkách nasyceného vodného síranu sodného (5 ml) v průběhu 15 min. Směs byla zředěna ethylacetátem (200 ml) a potom zfiltrována přes' celit. Filtrát byl sušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován za získání surového N-benzylaminoalkoholu (3,45 g), který byl převeden do příštího kroku bez dalšího čištění.

Krok 2

Syntéza N-benzyloxykarbonyl-3,4-methanoprolinolu (CBz-P(3,4-CH2)oi

Roztok surového N-benzylaminoalkoholu (3 g, 14,76 mmol) v methanolu (120 ml) a koncentrované HCI (1,5 ml) s 10% Pd/C (300 mg) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 hod. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí a filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn ve směsi voda/dioxan (100 ml) a byl přidán diisopropylethylamin (3,2 ml). Byl přidán • ·

benzylchlorformát (2,76 ml, 16,2 mmol) a reakční směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována, rozpuštěna v 1M HCI (100 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsi 1 : 3 ethylacetát/hexany za získání N-Cbz-3,4methanoprolinolu (2,4 g).

Krok 3

Syntéza N-benzvloxvkarbonyl-3,4-methanoprolinu (CBz-P(3,4-CH2)-OH

K roztoku N-Cbz-3,4-methanoprolinolu (2,2 g, 8,90 mmol) v acetonu (68 ml) míchanému při 0 °C bylo přidáno Jonesovo činidlo (6,6 ml) po kapkách v průběhu 5 min. [Jonesovo činidlo: připraveno z oxidu chromitého (13,4 g) a koncentrované kyseliny sírové (11,5 ml) zředěné vodou na celkový objem 50 ml.] Po míchání při 0 °C 3 hod byl přidán isopropanol (11 mi) a míchání pokračovalo ještě 10 min. Reakční směs byla zředěna vodou (400 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 500 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad síranem hořečnatým, zfiltrovány a zakoncentrovány za poskytnutí NCbz-3,4-methanoprolinu (2,25 g, 96 %).

• · · · • ·

2U4 Příklad XI

Boc

O

Syntéza Boc-(6S-karboethoxymethano)prol

Syntéza v názvu uvedené sloučeniny byla prováděna postupem podle Marinozzi, M.; Nataini, B.; Ni, Μ. H.; Costantino, G.; Pellicciari R., II Farmaco (1995) 50(5), 327 - 331.

Příklad XII

Syntéza kyseliny Boc-3-morfolinkarboxylové

Boc

Syntéza v názvu uvedené sloučeniny byla prováděna postupem podle Kogami Y., Okawa, K.,‘Bull. Chem. Soc. Jpn. (1987) 60, 2963 2965.

Příklad XIII

Syntéza N-terc-butoxykarbonvl-2-aza-3S-hvdroxvkarbonvl[2,2,21-bicyklooktanu o

OH

- 2TJ5 Roztok surového 2-aza-2-(1-fenylethyl)-3S-methoxykarbonyl-[2,2,2]bicyklookt-5-enu (10 mmol) (Tetrahedron (1992) 48(44) 9707 5 9718) a 10% Pd na uhlí (1 g) v methanolu (30 ml) byl okyselen 12N

HCl, potom hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn v koncentrované HCl a míchán přes noc. Roztok byl io zakoncentrován a znovu rozpuštěn v acetonitrilu (50 ml). Byly přidány diisopropylethylamin (3,5 ml) a di-terc-butyldikarbonát (1 g). Reakční směs byla míchána po dobu 24 hod a potom zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn v CH2CI2 a 5% vodné kyselině sírové. Reakční směs byla extrahována CH₂CI₂ a spojené organické vrstvy byly . zakoncentrovány. Zbytek býl rozpuštěn v 10% nasyceném hydrogenuhličitanu sodném, promyt diethyletherem (2 x) a okyselen 5% vodnou kyselinou sírovou. Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené ethylacetátové vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání N-terc-butoxykarbonyl-2-aza20 -3S-hydroxykarbonyl-[2,2,2]-bicyklooktanu (650 mg).

Příklad XIV

Syntéza isobutvloxykarbonylcvklohexvlglvcvi-4,4-dimethylprolinu (Boc-G(Chx)-P(4,4-dimethyl)-OH)

O

OH

O • · • ·

K roztoku iBoc-G(Chx)-OH (příklad IX, krok 1) (377 mg, 1,95 mmol) v acetonitrilu (7 ml) byly postupně přidány HCI.HN-Pro(4,4-dimethyl)OMe (příklad I,’ krok 6) (377 mg, 1,95 mmol), Nio -hydroxybenzotriazol (239 mg, 1,75 mmol), TBTU (845 mg, 2,63 mmol) a diisopropylethylamin (1,35 ml, 7,8 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 18 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu. Organická

- vrstva byla promyta dvakrát 10 ml částmi nasyceného roztoku 15 hydrogenuhličitanu sodného, 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na bílou pevnou látku (612 mg, 79 %).

Krok 2

Syntéza iBoc-G(Chx)-P(4,4-dimethyl)-OH

Methylester získaný v kroku 1 výše (612 mg, 1,54 mmol) v methanolu (6 ml) byl saponifikován v přítomnosti 2M hydroxidu lithného (1,16 ml) 3 hod. Methanol byl odsát za sníženého tlaku a • · zbytek byl zředěn ethylacetátem a okyselen na pH 2 1N kyselinou chlorovodíkovou. Vrstvy byly odděleny a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli, sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována.

Příklad XV

Syntéza dimethylamidu L-fenylqlycinu

Krok 1

Syntéza dimethylamidu Ν-benzyloxvkarbonyl-L-fenvlqlycinu (CBz-Phg-NMe₂)

N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycin (25 g, 88 mmol) byl rozpuštěn v THF (800 ml) a ochlazen na -10 °C. Byly přidány N-methylmorfolin (9,7 ml, 88 mmol) a isobutylchloroformát (11,4 ml, 88,0 mmol) a směs byla ponechána míchat 1 min. Byl přidán dimethylamin (100 ml, 2M v THF) a reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu. Směs byla zfiltrována a filtrát byl zakoncentrován ve vakuu za získání dimethylamidu N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinu (32,5 g) jako žlutého oleje.

·*

Krok 2

Syntéza dimethylamidu L-fenylglycinu (H-Phg-NMeg)

Dimethylamid N-Benzyloxykarbonyl-L-feny!glycinu (32,5 g) získaný výše byl rozpuštěn v methanolu (750 ml) a bylo přidáno 10% paladium na aktivním uhlí (3,3 g). Tato směs byla hydrogenována v Parrově přístroji při 35 psi (241 kPa) 2 hod. Reakční směs byla zfiltrována a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu a zbytek rekrystalizován ze směsi methanol-hexany za získání fenylglycindimethylamidu (26 g) jako bělavé pevné látky. Enantiomerní přebytek tohoto materiálu byl zjištěn >99 % analýzou HPLC 2,3,4,6-tetra-O-acetylglukopyranosylthioisokyanátového derivátu.

Příklad XVI

Syntéza (l-methylcvklohexvl)qlycinu

Krok 1

-methyl-1 -hydroxvmethylcyklohexan • · ·

OH

>C^0H

K roztoku 1-methyl-1-hydroxykarbonylcyklohexanu (10 g, 5 70 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) byl při 0 °C přidán 1M diboran v tetrahydrofuranu (200 ml, 200 mmol) v průběhu 90 min. Chladicí lázeň byla odstraněna a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře dva dny. Zbývající boran byl rozložen pomalým přidáváním nasyceného hydrogensíranu sodného (10 ml) v průběhu 90 min za io chlazení. Byl přidán další hydrogensíran sodný (200 ml) a po 20 min míchání byla vodná vrstva odstraněna. Organická vrstva byla promyta vodou a nasyceným chloridem sodným, sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím 20% diethyletheru v hexanech za poskytnutí 1-methyl-115 hýdroxymethylcyklohexanu (6,17 g, 48 mmol, 69 %).

Krok 2

1-Methylcyklohexvlkarboxaldehyd

K roztoku 1-methyl-1-hydroxymethylcyklohexanu (6,17 g, 48 mmol) a triethylaminu (20,1 ml, 144 mmol) v dichlormethanu (150 ml) byl při 0 °C přidán roztok komplexu pyridin - oxid sírový (22,9 g, 144 mmol) v dimethylsulfoxidu (150 ml) v průběhu 15 min. Chladicí lázeň byla ponechána ohřívat na laboratorní teplotu dvě hodiny, a potom byla reakční směs vlita do roztoku soli s ledem (400 ml). Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy byly zředěny hexany (600 ml) a promyty 1M HCI (2 x 150 ml), nasyceným chloridem sodným (2 x 100 ml), sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií za získání 1-methylcyklo-hexylkarboxaldehydu (1,77 g, 13,8 mmol, 29 %).

Krok 3

Syntéza N-formyl-N-glykosyl-l-methylcvklohexyl-terc-butylamidu

Syntéza 2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-arabinosylaminu byla prováděna podle zveřejněného postupu (Kunz. H.; Pfrengle, W.; Ruck, K.; Wilfried, S., Syntesis (1991) 1039 - 1042).

K roztoku 1-methylcyklohexylkarboxaldehydu (1,17 g, 8,34 mmol), 2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-arabinosylaminu (8,3 g, 20,7 mmol), kyseliny mravenčí (850 pl, 22,2 mmol) a terc-butylisokyanidu (2,4 ml, 21,2 mmol) v tetrahydrofuranu (170 ml) byl při -30 °C přidán 0,5M chlorid zinečnatý v tetrahydrofuranu (41 ml, 20,57 mmol). Roztok byl míchán při -20 °C 3 dny, potom zakoncentrován. Zbytek byl zředěn CH2CI2 (500 ml), promyt nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 500 ml), vodou (500 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý produkt (4,3 g, 6,6 mmol, 33 %).

• ·

217 Krok 4

Syntéza (1 -methylcvklohexvQglycinu

CIH3N,,A_oh

Roztok produktu získaného v kroku 3 výše (4,3 g, 6,6 mmol) v dichlormethanu (30 ml) a nasyceného bezvodého methanolického io HCI (30 ml) byl míchán přes noc. Roztok byl zakoncentrován a zbytek byl rozpuštěn ve vodě (100 ml) a promyt pentanem (2 x 100 ml). Vodná vrstva byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v 6N HCI (50 ml) a vařen pod zpětným chladičem 30 hod. Roztok byl zakoncentrován za získání surového hydrochloridu (1-methylcyklo15 -hexyl)glycinu (790 mg, 3,82 mmol, 58 %).

Příklad XVII

Syntéza (4,4-dimethylcyklohexyi)qlycinu o

H

Krok 1

Syntéza 4,4-dimethylcyklohexanonu

O o

• ·

2*1*2

Směs 4,4-dimethylcyklohex-2-en-1-onu (12 ml, 91,2 mmol) a 10% Pd na uhlí typu Degussa (2 g) byla hydrogenována při 40 psi (276 kPa) 18 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována (¹H NMR ukázala směs ketonu a alkoholu v poměru 5 : 3). Směs byla rozpuštěna v acetonu (400 ml) a ochlazena na 0 °C. Bylo přidáno Jonesovo činidlo (40 ml) v průběhu 30 min a chladicí lázeň byla odstraněna. Po 2 dnech byl přebytek acetonu odpařen a získaný zbytek-byl rozpuštěn ve vodě a diethyletheru. Etherová vrstva byla promývána vodou až do odstranění zbarvení, sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání 4,4-dimethylcyklohexanonu (7,4 g, 58,6 mmol, 64 %).

Krok 2

Syntéza methylenoletheru 4,4-dimethylcyklohexvlkarboxaldehvduOMe

O

K roztoku methoxymethyltrifenylfošfoniurrichloridu (8,6 g) v tetrahydrofuranu (125 ml) bylo při 0 °C přidáno n-butyllithium (1,6M v hexanech, 14,3 ml) v průběhu 10 min. Po 30 min byla reakční směs ochlazena na -78 C a byl přidán roztok 4,4-dimethylcyklohexanonu (2,45 g, 19,1 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) byl přidán v průběhu 20 min. Po 1 hod byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla pomalu ohřátá na 0 °C. Reakční směs byla zředěna nasyceným chloridem amonným (50 ml), ethylacetátem (100 ml) a hexany (100 ml). Organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli, sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Zbytek byl míchán s hexany (70 ml) 10 min a zfiltrován. Filtrát byl zakoncentrován a čištěn chromatografií s použitím 25% ethylacetátu v hexanech za poskytnutí ·· ···· v názvu uvedené sloučeniny (1,925 g, 12,5 mmol, 65 %).

Krok 3

4,4-Dimethvlcvklohexylkarboxaldehyd ^OMe

Roztok methylenoletheru 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu (1,925 g, 12,5 mmol) (krok II výše), tetrahydrofuranu (100 ml) a 6M HCI (20 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4 hod. Reakční směs byla zředěna hexany, diethyletherem, roztokem soli a vodou. Organická vrstva byla sušena, zfiitrována a zakoncentrována za získání 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu (1,0 g, 7,1 mmol, 57 %).

Krok 4

Syntéza N-formyl-N-qlykosyl-4,4-dimethylcyklohexyl-terc-butyiamidu

K roztoku 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu (1,17 g, 8,34 mmol), 2,3,4-trí-O-pívaloyl-a-D-arabinosylaminu (3,43 g, 8,55 mmol), kyseliny mravenčí (350 μΙ, 9,17 mmol) a tercbutylisokyanidu (990 pl, 8,76 mmol) v THF (70 ml) byl při -30 °C přidán 0,5M chlorid zinečnatý v tetrahydrofuranu (17 ml, 8,5 mmol). Roztok ·· ·· • · « •· ···· *-· 2Τ4·- · byl míchán při -20 °C 2 dny, potom zakoncentrován. Zbytek byl zředěn dichlormethanemem (200 ml), promyt nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 200 ml), vodou (200 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý produkt (2,1 g, 3,3 mmol, 39 %).

Krok 5

Syntéza (4,4-dimethylcyklohexyl)glycinu

Roztok Ugiho produktu získaného v kroku 4 výše (2,1 g,

3,3 mmol) v dichlormethanu (20 ml) a nasyceného bezvodého methanolického HCI (20 ml) byl míchán přes noc. Roztok byl zakoncentrován a zbytek byl rozpuštěn ve vodě (100 ml) a promyt pentanem (2 x 100 ml). Vodná vrstva byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v 6N HCI (40 ml) a vařen pod zpětným chladičem 30 hod. Roztok byl zakoncentrován za získání surového hydrochloridu (1-methylcyklohexyl)glycinu (300 mg, 1,36 mmol, 41 %).

Příklad XVIII

Syntéza Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OH

Boc-HN'

OH ·♦ ·· • · ♦ « • · · • · · • · ·

-·₂Ϊ5··· ·

Krok 1

Příprava Boc-norvalinolu

K roztoku Boc-norvalinu (25,0 g, 0,115 mol) v tetrahydrofuranu (461 ml), ochlazenému na 0 °C, byl po kapkách přidán komplex boran/tetrahydrofuran (461 ml 1,0M roztok v tetrahydrofuranu). Po io 1 hod při 0 °C byl roztok ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 1,5 hod. TLC ukázala, že reakce je ukončena. Byl přidán methanol pro zastavení reakce. Roztok byl zakoncentrován za získání v názvu uvedené sloučeniny (22,56 g, 96 %) jako pěnovitého sirupu. TLC produktů ukázala uspokojivou čistotu. R_f = 0,34 (40% ethylacetát/hexany).

K Boc-norvalinolu (7,77 g, 38 mmol) v bezvodém dimethyl25 -sulfoxidu (153 ml) a toluenu (153 ml) byl přidán EDC (73,32 g, 382 mmol). Potom byl roztok ochlazen na 0 °C, po kapkách byla přidána kyselina dichloroctová (15,8 ml, 191 mmol). Když bylo přidávání ukončeno byla reakční směs míchána po dobu 15 min. Roztok byl ponechán ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 2 hod.

Reakční směs byla zakoncentrována pro odstranění toluenu, potom byla rozpuštěna v ethylacetátu. Roztok byl postupně promyt 1N hydrogensíranem sodným, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován, za získání surového Boc-norvalinalu, který byl ihned použit v dalším kroku. TLC R_f = 0,84 (40% ethylacetát/hexany).

Krok 3

Syntéza Boc-nVal-(CHOH)-Gly-QEt

K roztoku surového Boc-norvalinalu (4,18 g, 20,77 mmol) v dichlormethanu (83 ml) byl přidán ethylisokyanoacetát (2,72 ml, 24,93 mmol) a pyridin (6,72 ml, 83,09 mmol). Potom byl roztok , ochlazen na 0 °C, po kapkách byla přidána kyselina trifluoroctová (4,15 ml, 41,54 mmol). Po 1 hod míchání byl roztok míchán při teplotě laboratoře 18 hod, přičemž rozpouštědlo bylo ponecháno odpařit za laboratorních podmínek z reakční směsi z nezakryté nádoby. Reakční směs byla zakoncentrována, potom rozpuštěna v ethylacetátu. Roztok byl postupně promyt 1N hydrogensíranem sodným, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a potom zakoncentrován. Zbytek byi čištěn bleskovou chromatografií s elucí směsí 20% : 40% ethylacetát/hexany, za získání 2,8 g v názvu uvedené sloučeniny jako žlutého sirupu. Hmotnostní spektroskopie s nízkým rozlišením potvrdila přítomnost požadovaného produktu (MH⁺ 333).

2ΊΤ-

Získaný produkt (Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OEt) (1,52 g, 4,70 mmol) rozpuštěný v ethanolu (23 ml) byl zmýdelňován 1N hydroxidem lithným (18,81 ml) dvě hodiny při teplotě laboratoře. Reakční směs byla okyselena na pH = 2 iontoměničovou pryskyřicí Dowex® 50 WX8, míchána 20 min a potom zfiltrována. Pryskyřice byla důkladně promyta ethanolem a vodou a spojené filtráty byly zakoncentrovány na bílou pěnu (0,48 g, 33 %).

Příklad XVIV

Syntéza (2R,3S,4S,5S)-terc-butyl-N-CBz-3-amino-2-hydroxv-4,5-methylenhexanoátu

K roztoku terc-butyldiethylfosfonoacetátu (4,7 ml, 20 mmol) rozpuštěného v THF (50 ml) bylo při -78 °C přidáno 1,6M n-butyl·· ·«·«

-lithium v hexanech (12,4 ml). Po 30 min byl přidán (1S,2S)-2-methylcyklopropylkarboxaldehyd (1 g, 12 mmol) (Barrett, A. G. M.; Doubleday, W. W.; Kasdorf, K.; Tustin, G. J., J. Org. Chem. (1996) 61, 3280) v diethyletheru (100 ml), v průběhu 10 min. Reakční směs byla zahřívána na 0 °C 2 hod a na 6 °C 12 hod. Reakce byla ukončena nasyceným chloridem amonným (20 ml) a organická vrstva byla oddělena, promyta 50 ml roztokem soli a sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována, za získání 3,5 g čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý nenasycený terc-butylester (1,4 g).

Krok 2

K roztoku benzylkarbamátu (3,55 g, 23,5 mmol) v n-propanolu (24 ml) byl přidán roztok hydroxidu sodného (900 mg, 22,7 mmol) ve vodě (48 ml), a potom terc-butylhypochlorit (2,57 ml, 22,7 mmol). Po 15 min byla reakční směs ochlazena na 0 °C a byl přidán (DHQ^PHAL (350 mg, 0,45 mmol) v n-propanolu (24 ml), a potom nenasycený tercbutylester (1,4 g) z kroku výše, v n-propanolu (48 ml). Nakonec byl přidán osman draselný (110 mg, 0,30 mmol) ve vodě (2 ml) a roztok se rychle zbarvil tmavě zeleně, přičemž zbarvení přetrvalo 4 hod. Po 6 hod byl přidán nasycený síran sodný (50 ml) a směs byla extrahována ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty roztokem soli (30 ml), sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány. Blesková chromatografie s 20% ethylacetátem v hexanech poskytla požadovaný terc-butylester s aminovou skupinou chráněnou cBzjako bílou pevnou látku (316 mg).

·· ····

Směs amino-terc-butylesteru chráněného CBz (316 mg, 0,9 mmol) a 32 mg 10% paladia na uhlí v 9 ml methanolu byla hydrogenována 8 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována, za io získání volného aminu jako čirého oleje (195 mg).

Příklad XX

.Ke komerčně dostupnému 2R-hydroxy-3-methylbutanu (410 mg, 4,65, mmol) byl přidán roztok 20 % fosgenu v toluenu (1 ml, 2 mmol).

Roztok byl míchán po dobu 6 hod pro vytvoření chloroformátu (2 mmol), který byl ponechán reagovat ihned přímo s požadovaným aminem. S-isomer byl syntetizován stejným postupem.

¹ « · β

• 4 • ···· ο 9-

4···

- 220 ····

II) Příklad syntézy inhibitorů HCV v roztoku

Příklad XXI

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethvl)-Leu(CQ)-Gly-Phg-dimethyl-amidu v roztoku

io Krok 1

Syntéza terc-butyloxykarbonylleucinalu (Boc-Leu-CHO)

Boc-HN' .oi dichlormethan, dimethylsulfoxid ->

pyridin . SO₃

K roztoku komerčně dostupného (Advanced Chem Tech) Boc-L-leucinolu (0,78 g, 3,6 mmol) v bezvodém dichlormethanu (17,5 ml) byl přidán triethylamin (2 ml, 14,36 mmol) a směs byla ochlazena na 0 °C. Byl přidán dimethylsulfoxid (17,5 ml) a potom komplex pyridin - oxid sírový (2,3 g, 14,36 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu dvou hodin. TLC ve směsi 1 : 1 ethylacetát : hexany povrdila ukončení reakce. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek zředěn ethylacetátem. Ethylacetátová vrstva byla promyta 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 75 ml) a potom nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 75 ml) a roztokem soli (75 ml). Organická vrstva byla sušena (síran sodný), zfiltrována a zakoncentrována, za získání 775 mg produktu.

•· ·· ·< » · · . .

• · · · · · • · • · • · · · · * · · · · • 9 ··

221 Krok 2

Syntéza ethylesteru Boc-2-hvdroxv-3-amino-5-methylhexanoylglvcinu (Boc-Leu-HOH)-Gly-OEt)

kyselina trifluoroctová pyridin, CNCH₂CO₂Et dichlormethan

Boc-HN'

O

w K roztoku Boc-Leucinaldehydu (0,77 g, 3,59 mmol) v bezvodém dichlormethanu (24 ml) byl přidán bezvodý pyridin (1,16 ml, 14,36 mmol) a ethylisokyanoacetát (0,4 ml, 4,66 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a v průběhu dvou minut byla přidána kyselina trifluoroctová (0,55 ml, 7/18 mmol). Reakční směs byla uzavřena víčkem a míchána při 4 °C čtyři dny, a při teplotě laboratoře jeden den. Reakční směs byla zředěna dichlormethanem (350 ml) a dvakrát promyta vždy 75 ml 1M kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně 2 x 6 (51 x 152 mm) silikagelu s použitím 10% ethylacetátu v hexanech (800 ml) a potom 1 : 1 ethylacetátem v hexanech (800 ml). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány za získání 980 mg (79 %) produktu.

Krok 3

Syntéza Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH

Boc-HN'

OH tTY .OB

OH

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OEt (0,98 g, 2,83 mmol) v ethanolu (11,3 ml) byl přidán 2M hydroxid lithný (4,25 ml) a reakční směs byla míchána po dobu pěti hodin při teplotě laboratoře. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla zředěna 5 ethylacetátem. Organická vrstva byla promyta 1M kyselinou chlorovodíkovou ,a potom roztokem soli, sušena, zfiltrována a zakoncentrována, za získání 775 mg (86 %) produktu jako bílé pevné látky.

io Krok 4

Syntéza Boc-Leu-(CHQH)-Glv-Phg-dimethylamidu

.OH

H-Phg-N(Me)₂EDC, HOBt

DIEA, acetonitril

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH (0,37 g, 1,18 mmol) v acetonitrilu (23 ml) byly postupně přidány fenylglycindimethylamid (získaný v příkladu XV, krok 2), EDC (0,34 g, 1,76 mmol), Nhydroxybenzotriazol (HOBt) (0,18 g, 1,-18 mmol) a diisopropylethylamin (DIEA) (0,82 ml, 4,7 mmol), a reakční směs byla míchána po dobu 18 hod při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl zředěn ethylacetátem a postupně promyt dvěma 75 ml podíly 1M kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla potom sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Surový produkt byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně silikagelu 2 x 6 (51 x

152 mm) s použitím směsi 4 : 1 ethylacetát : hexany (700 ml) a potom ethylacetátem (1000 ml) a 10% methanolem v dichlormethanu (600 ml). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány, za získání 445 mg (80 %) bílé pevné látky.

Krok 5

Syntéza trifluoracetátové soli H-Leu-(CHOH)-Gly-Phq-dimethylamidu

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-dimethylamidu (70 mg, 0,146 mmol) v dichlormethanu (1 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (1 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 1 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a převedena do dalšího kroku bez dalšího čištění.

Krok 6

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethyl)-Leu-(CHOH)-Gly-Phqdimethylamidu

K roztoku iBoc-G(Chx)-P(4,4-diMe)-OH (příklad XIV, krok 2) (53 mg, 0,148 mmol) v acetonitrilu (3 ml) byly postupně přidány TFA.2HN-Leu(CHOH)Gly-Phg-NMe2 (61 mg, 0,148 mmol), N-hydroxy30

-benzotriazol (HOBt) (23 mg, 0,148 mmol), TBTU (71,5 mg, 0,222 mmol a diisopropylethylamin (103 I, 0,593 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 18 hod a zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 5 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x5 ml) a roztokem soli (2 x 5 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Produkt (100 mg) byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění.

io Krok 7

Syntéza Boc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethvl)-Leu-(CO)-Gly-Phq-dimethyl-amidu

K roztoku iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethyl)-l_eu-(CHOH)-Gly-Phg-dimethylamidu (30 mg, 0,04 mmol) v dichlormethanu (1 ml) bylo přidáno komerčně dostupné Dess-Martinovo činidlo (Omega Chemical Company lne.) (67,8 mg, 0,16 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 90 min. Reakční směs byla zakoncentrována a

------zbytek byl míchán v 5% thiosíranu sodném. _Potom__byl zředěn dichlormethanem a vrstvy byly odděleny. Organická vrstva byla promyta thiosíranem sodným (4x3 ml), a potom vodou a roztokem • · ·· ·· ···· • · · · 9 · • · · · «

- 225 soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována. Surový produkt byl rozpuštěn v hexanech a isopropylalkoholu a byl čištěn HPLC na koloně silikatelu Kromasil 5 a normální fází (Fenomenex, 250 x 21,20 mm, velikost pórů 100 A, částice gelu 5 pm) s elucí 30 min gradientem tvořeným 0 až 25% isopropylalkoholem v hexanech (25 ml/min). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány. Lyofilizace z vody poskytla 6,7 mg bílého prášku. Hmotnostní spektrum s nízkým rozlišením potvrdilo požadovanou hmotnost (MH⁺ = 741,4).

- - ··

III) Syntéza na pevné fázi

Syntéza na pevné fázi je použitelná pro výrobu malých množství některých sloučenin podle vynálezu. Jako je tomu u běžné syntézy peptidů na pevné fázi, reaktory pro syntézu peptidylylketoamidů na pevné fázi jsou tvořeny reaktorovou nádobou, jejíž alespoň jeden povrch je propustný pro rozpouštědlo a rozpuštěná reakční činidla, ale není propustný pro pryskyřici používanou při syntéze se zvolenou velikostí zrna. Mezi tyto reaktory patří skleněné reakční nádoby pro reakce na pevné fázi s fritou ze sintrovaného skla, polypropylenové trubičky nebo kolony opatřené fritami nebo reaktory typu Kans™ firmy Irori lne., San Diego, CA. Typ zvoleného reaktoru závisí na potřebném objemu pryskyřice pevné fáze a v různých stupních syntézy mohou být použity různé typy reaktorů. V následujících příkladech se bude odkazovat na dále uvedené postupy:

Postup A

Vazebná reakce: K pryskyřici suspendované v N-methyl________-pyrrolidinu (NMP) (10 až 15 ml/g pryskyřice) byly přidány Fmocaminokyselina (2 ekv.), HOAt (2 ekv.), HATU (2 ekv.) a diisopropylethylamin (4 ekv.). Směs byla ponechána reagovat 4 až

- 226 48 hod. Reakční činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dimethylformamidem, dichlormethanem, methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (použito 10 až 15 ml rozpouštědla/g pryskyřice). Pryskyřice byla potom usušena ve vakuu.

Postup B

Odstranění ochranných skupin Fmoc: Pryskyřice chráněná Fmoc byla ponechána reagovat s 20% piperidinem v dimethylformamidu (10 ml činidla/g pryskyřice) 30 min. Činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dimethylformamidem, dichlormethanem, io methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).

Postup C

Odstranění ochranné skupiny Boc: Pryskyřice chráněná Boc byla smísena se směsí 1 : 1 dichlormethan a kyselina trifluoroctová 20 až

60 min (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice). Činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dichlormethanem, dimethylformamidem, 5% diisopropylethylaminem v dimethyl-formamidu, dimethylformamidem, dichlormethanem a dimethyl-formamidem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).

Postup D

Hydrolýza semikarbazonu: Pryskyřice byla suspendována ve štěpícím koktejlu (10 ml/g pryskyřice) s obsahem směsi kyselina trifluoroctová : kyselina pyrohroznová : dichlormethan : voda 9:2:2: 1 dvě hodiny. Reakční činidla byla odsáta a postup byl opakován ještě třikrát. Pryskyřice byla postupně promyta dichlormethanem, vodou a dichlormethanem a sušena ve vakuu.

Postup E

Štěpe η í H F: Usušený materiáI peptid-nVaI (CO)-G-O- P AM pryskyřice (50 mg) byl umístěn do nádoby pro HF obsahující malou míchací tyčinku. Jako látka vychytávající radikály byl přidán anisol

·· · ·· ·

227 (10% celkového objemu). V přítomnosti kyseliny glutamové a aminokyselin s obsahem cysteinu byly přidány také thioanisol (10 %) a 1,2-ethandithiol (0,2 %). Nádoba pro HF byla potom zavěšena do přístroje pro HF (Immuno Dynamics) a systém byl 5 min proplachován dusíkem. Nádoba byla potom ochlazena na -70 °C v lázni suchý led/isopropanol. Po 20 min byl destilován HF pro dosažení potřebného objemu (10 ml HF/g pryskyřice). Reakce byla ponechána probíhat 1,5 hod 0 °C. Zpracování spočívalo v odstranění veškerého HF pomocí dusíku. Potom byl k pryskyřici přidán dichlormethan a směs byla io míchána po dobu 5 min. Potom byla přidána 20% kyselina octová ve vodě (4 ml). Po 20 min míchání byla pryskyřice zfiltrována s použitím nálevky opatřené fritou a dichlormethan byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek a směs byly promyty hexany (2 x) pro odstranění vychytávacích sloučenin. Mezitím byla pryskyřice namočena do 1 ml methanolu. Vodná vrstva (20% HOAc) byla přidána zpět k pryskyřici a směs byla míchána 5 min a potom zfiltrována. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla lyofilizována. Peptid byl potom rozpuštěn v 10 až 25% methanolu (s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové) a čištěn HPLC s reverzními fázemi.

Příklad XXII

Příklad syntézy na pevné fázi inhibitorů Hep C: (iBoc-G(Chx)-P(4tNHSC>2Ph)-nV-(CO)-G-G(Ph)-NH2)

O

-228 Krok 1

Syntéza Fmoc-nV-(dpsc)-Gly-OH

A) Syntéza allylisokyanoacetátu (kroky a - b níže)

a) Syntéza draselné soli kyseliny isokyanoctové ^cn-A)B -- ^CNxX- KEthylisokyanoacetát (96,6 ml, 0,88 mol) byl přidán po kapkách io ke chlazenému roztoku ethanolu (1,5 I) a hydroxidu draselného (59,52 g, 1,0 mol). Reakční směs byla pomalu ohřátá na laboratorní teplotu. Po dvou hodinách byl vysrážený produkt zfiltrován na skleněné nálevce a promyt několika pod.íly chlazeného ethanolu. Draselná sůl kyseliny isokyanoctové, která byla získána, byla usušena ve vakuu na zlatohnědou pevnou látku (99,92 g, 91,8 %).

b) Syntéza allylisokyanoacetátu ^CNJ^₀- K⁺ -^'^'Oailyl

K produktu z části a) (99,92 g, 0,81 mol) -rozpuštěnému v acetonitrilu (810 ml) byl přidán allylbromid (92 ml, 1,05 mol). Po zahřívání pod zpětným chladičem 4 hod byl získán tmavý hnědý roztok. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v etheru (1,5 I) a promyt třikrát vodou (500 mi). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována na tmavý hnědý sirup. Surový materiál byl čištěn vakuovou destilací při tlaku 7 mm Hg (933 Pa) (98 °C) na čirý olej (78,92 g, 78 %). NMR δ ppm (CDCI₃): 5,9 (m, 1H),

- 229 5,3 (m, 2H), 4,7 (d, 2H), 4,25 (s, 2H).

B) Syntéza 9-fluorenvlmethoxvkarbonylnorvalinalu (kroky a - c níže)

a) Syntéza methylesteru 9-fluorenylmethoxvkarbonvl-L-norvalinu (Fmoc-nVal-OMe)

ίο K chlazenému roztoku komerčně dostupného Fmoc-norvalinu (25 g, 73,75 mmol) v bezvodém methanolu (469 ml) byl v průběhu jedné hodiny přidán thionylchlorid (53,76 mi, 737,5 mmol). TLC v ethylacetátu provedená o hodinu později potvrdila ukončení reakce (Rf = 0,85). Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu. Organická vrstva byla promyta několika 200 ml podíly nasyceného hydrogenuhličitanu sodného a potom roztokem soli. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání Fmoc-norVal-OMe) jako bílé pevné látky (26,03 g) v kvantitativním výtěžku. NMR δ ppm (CD₃OD): 7,7 (m, 2H),

2o 7,6 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 4,3 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 3,7 (s, 3H), 1,7 (m, 1H), 1,6 (m, 1H), 1,4 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).

b) Syntéza 9-fluorenylmethoxykarbonylnorvalinolu (Fmoc-nValinol)

Fmoc-HN' .O,

Fmoc-HN' .OH

K Fmoc-nVal-OMe (26,03 g, 73,75 mmol) v tetrahydrofuranu ·· ·· • · · · · · (123 ml) a methanolu (246 ml) byl přidán chlorid vápenatý (16,37 g, 147,49 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a v několika částech byl přidán borohydrid sodný (11,16 g, 294,98 mmol). K získané husté pastě byl přidán methanol (500 ml) a reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře 90 min. TLC ve směsi 2 : 3 ethylacetát : hexany potvrdila ukončení reakce (Rf = 0,25). Reakce byla ukončena pomalým přidáváním vody (100 ml) při 0 °C. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná fáze byla zředěna ethylacetátem. Organická vrstva byla promyta vodou (3 x 500 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 500 ml) a roztokem soli (500 ml). Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na bílou pevnou látku (21,70 g, 90,5 %). NMR δ ppm (CD₃OD): 7,8 (m, 2H), 7,7 (m, 2H), 7,4 (m, 2H),

7,3 (m/2H), 4,3 - 4,5 (m, 2H), 4,2 (m, 1H), 3,6 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 1,5 (m, 1H), 1,3 - 1,4 (m, 3H), 0,99 (m, 3H).

c) Syntéza 9-fluorenylmethoxykarbonylnorvalinalu (Fmoc-nVal-CHQ)

Fmoc-HN

Fmoc-HN' .H

O

K roztoku Fmoc-norValinolu (21,70 g, 66,77 mmol) v dichlor-methanu (668 ml) byl přidán triethylamin (37,23 ml, 267 mmol) a roztok byl ochlazen na 0 °C. K chlazenému roztoku byla přidána suspenze komplexu pyridin - oxid sírový (42,51 g, 267 mmol) v dimethylsulfoxidu (96 ml). Po jedné hodině TLC ve směsi 2 : 3 ethylacetát : hexany potvrdila ukončení reakce. Dichlormethan byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt vodou (2 x 50 ml), 1N nasyceným hydrogensíranem sodným (2 x 50 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 50 ml)

• · ··· · a roztokem soli (50 ml). Organická vrstva byla zakoncentrována za získání bílé pevné látky. Byl předpokládán teoretický výtěžek (21,57 g) a sloučenina byla převedena do dalšího kroku bez dalšího čištění.

C) Syntéza trifluoracetátové soli difenylmethylsemikarbazidu (dpsc) (kroky a - b níže)

a) Syntéza Boc-semikarbazid-4-yl-difenylmethanu

K roztoku karbonyldiimidazolu (16,2 g, 0,10 mol) v dimethyl-formamidu (225 ml) byl přidán roztok t-butylkarbazátu (13,2 g, 0,100 mol) v dimethylformamidu (225 ml) po kapkách v průběhu 30 min. V průběhu dalších 30 min byl přidán difenylmethylamin (18,3 g, 0,10 mol) 30 min. Reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře 1 hod. Byla přidána voda (10 ml) a směs byla zakoncentrována na přibližně 150 ml za sníženého tlaku. Tento roztok byl vlit do vody (500 ml) a extrahován ethylacetátem (400 ml).

Ethylacetátová fáze byla promyta dvakrát vždy 75 ml 1N HCI, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a chloridem sodným, a sušena síranem hořečnatým. Směs byla zfiltrována a roztok byl zakoncentrován za získání 29,5 g (85% výtěžek) bílé pěny. Tento materiál mohl být čištěn rekrysíalizací ze směsi ethylacetát/hexan, ale byl dostatečně čistý pro okamžité použití v dalším kroku: teplota tání 142 - 143 °C. ¹H NMR (CDCI₃) d 1,45 (s, 9H), 6,10 (dd, 2H), 6,42 (s, 1H), 6,67 (bs, 1H), 7,21 - 7,31 (m, 10H). Analyticky vypočteno pro C19H23N3O3: C, 66,84; H, 6,79; N, 12,31. Nalezeno: C, 66,46; H, 6,75; N; 12,90.

·· »··· •-222- ’·

b) Syntéza trifluoracetátové soli difenylmethylsemikarbazidu (dpsc)

Roztok Boc-semikarbazid-4-yl-difenylmethanu (3,43 g, 10 mmol) v dichlormethanu (12,5 ml) byl smísen s 12,5 ml kyseliny trifluoroctové při teplotě laboratoře a míchán 30 min. Roztok byl přidán po kapkách io k 75 ml etheru a získaná pevná látka (2,7 g, 80 %) byla oddělena filtrací. Teplota tání 182 - 184 °C. ¹H NMR (CD3OD) d 6,05 (s, 1H), 7,21 - 7,35 (m, 10H). ¹³C NMR (CD3OD) d 57,6, 118,3 (q, CF₃), 126,7,

127,9, 141,6, 156,9, 160,9 (q, CF₃CO₂H).

D) Syntéza Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-O-allylu

allylisokyanoacetát

->

pyridin, kys. trifluoroctová dichlormethan

Fmoc-HN'

K roztoku Fmoc-nVal-CHO (krok IB) (5,47 g, 16,90 mmol) v dichlormethanu (170 ml) byl přidán allylisokyanoacetát (krok IA) (2,46 ml, 20,28 mmol) a pyridin (5,47 ml, 67,61 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a po kapkách byla přidána kyselina trifluoroctová (3,38 ml, 33,80 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 1 hod a potom při teplotě laboratoře 48 hod. TLC provedená v ethylacetátu potvrdila ukončení reakce. Reakční směs byla zakoncentrována a čištěna bleskovou chromatografií s použitím 20% až 70% ethylacetátu v. hexanech. Frakce obsahující požadovaný produkt byly spojeny a zakoncentrovány na bílou pěnu (6,88 g, • ·· ·· · 9 • 9 • · • ·

9····*« ··

•· • ·

99·· .· 9 • 9

87.3 %). TLC ve směsi 50 : 50 ethylacetátu ukázala jednu skvrnu (Rf = 0,37). NMR 8 ppm (CD₃OD): 7,8 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 7,4 (m, 2H),

7.3 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 5,1 - 5,4 (m, 2H), 4,55 - 4,65 (m, 2H), 4,3 4.4 (m, 2H), 4,15 - 4,25 (m, 1H), 4,01 (s, 1H), 3,9 - 4,0 (m, 3H), 1,5 5 1,6 (m, 2H), 1,35 - 1,45 (m, 3H), 0,9 (m, 3H).

E) Syntéza Fmoc-nVal-(CO)-Glv-Oallylu

kyselina dichloroctová -:-.->

dimethyisulfoxid, toluen

Fmoc-HN'

a-Af

K roztoku Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-Oallylu (krok D) (5,01 g, 10,77 mmol) v dimethylsulfoxidu (100 ml) a toluenu (100 ml) byl přidán

EDO (20,6 g, 107,7 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a po kapkách byla přidána kyselina dichloroctová (4,44 ml, 53,83 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 15 min při 0 °C a 1 hod při teplotě laboratoře. Po ochlazení na 0 °C byla přidána voda (70 ml) a toluen byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl zředěn ethylacetátem a promyt několikrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom 1N hydrogensíranem sodným a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována. Byl předpokládán teoretický výtěžek 4,99 g a reakční směs byla převedena do dalšího kroku bez dalšího čištění. TLC v 50 : 50 ethylacetátu ukázala jednu skvrnu (Rf = 0,73).

F) Syntéza Fmoc-nVal-(dpsc)-Glv-Oallylu

difenylmethylsemikarbazid ->

octan sodný, voda, ethanol

•.”234 ”

K roztoku Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oallylu (krok E) (4,99 g, 10,75 mmol) v ethanolu (130 ml) a vodě (42 ml) byly postupně přidány trifluoracetátová sůl difenylmethylsemikarbazidu (dpsc) (krok IC) (7,6 g, 21,5 mmol) a octan sodný.3H2O (1,76 g, 12,9 mmol). Reakční směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 90 min. Ukončení reakce bylo potvrzeno TLC prováděné ve směsi 1 ; 1 ethylacetát : hexan. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 1N hydrogensíranem sodným (2 x 10 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x10 ml), a potom io roztokem soli (10 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií v 20% až 50% ethylacetátu v hexanech, za získání bílé pevné látky (5,76 g„ 78 %). TLC ve směsi 50 : 50 ethylacetát ; hexan ukázala dvě skvrny (cis a trans isomery) s R_f = 0,42 a 0,5.

G) Syntéza Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-QH

dimedon, katalyzátor ->

tetrahydrofuran

K roztoku Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallylu (krok IG) (4,53 g, 25 6,59 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) byl přidán dimedon (4,62 g,

32,97 mmol) a potom katalyzátor tetrakis(trifenylfosfin)paladium(0) (0,76 g, 0,66 mmol). Ukončení reakce bylo potvrzeno TLC po 90 min s použitím směsi 9 : 1 dichlormethan : methanol. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt třikrát

5 0 ml 0,1 M dihydrogenfosforečnanu draselného. Organická vrstva byla potom smísena s 50 ml hydrogensíranu sodného a dvě fáze byly

- 235 10 míchány po dobu 15 min. Fáze byly odděleny a postup byl opakován ještě dvakrát. Organická vrstva byla sušena a zakoncentrován a čištěna bleskovou chromatografií s 20% až 100% ethylacetátem v hexanech. Potom následoval roztok 9 : 1 dichlormethan : methanol. Frakce odpovídající čistému produktu byly spojeny a zakoncentrovány za získání bílé pevné látky (3,99 g, 94 %). TLC ve směsi 9 : 1 dichlormethan : methanol ukázala dvě skvrny (cis a trans isomery). NMR δ ppm (CD3OD): 7,75 (m, 2H), 7,6 (m, 3H), 7,2 - 7,4 (m, 14H), 6,1 - 6,2 (m, 1H), 4,25 - 4,4 (m, 2H), 4,1 - 4,2 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 1,6-1,8 (m, 2H), 1,3-1,5 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).

Krok 2

Syntéza H-Phg-MBHA pryskyřice

Komerčně dostupná MBHA pryskyřice (2,6 g, 1,12 mmol/g, 2,91 mmol) byla převedena do 250 ml reakční nádoby pro syntézu na pevné fázi opatřené fritou a vstupem dusíku. Potom byla důkladně promyta 30 ml podíly dichlormethanu, methanolu, dimethylformamidu a dichlormethanu a ponechána reagovat 18 hod s komerčně dostupným Fmoc-Phg-OH (2,17 g, 5,82 mmol) podle postupu A s 99,82% účinností. Pryskyřice byla potom zbavena ochranné skupiny Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

• · ····

- 236 Krok 3

Syntéza H-nVal(dpsc)-Gly-Pha-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice

Pryskyřice získaná v kroku II (2,6 g, 0,8 mmol/g, 2,91 mmol) byla ponechána reagovat s Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallylem (krok IG) (5,82 mmol, 3,77 g) podle postupu A. Po. 18 hod kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 99,91 % účinnost reakce. Pryskyřice byla zbavena Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce

Krok 4

Syntéza Boc-Pro(4t-NHFmoc)-nVal (dpsc)-Gly-Pha-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice

Sloučenina H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice (krok 3 výše) (600 mg, 0,8 mmol/g, 0,67 mmol) byla převedena do polypropylenové trubičky opatřené fritou a byla ponechána reagovat s Boc-Pro(4t-NHFmoc)-OH (příklad VI, krok 3) (610 mg, 1,34 mmol)

237 jako v postupu A. Po 18 hod kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 99,96% účinnost reakce.

Krok 5

Syntéza Boc-Pro(4t-NH₂)-nVal(dpsc)-Glv-Pha-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice

Pryskyřice z předcházejícího kroku (Boc-Pro(4t-NHFmoc)nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 6

Syntéza Boc-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice

K pryskyřici získané v předcházejícím kroku (Boc-Pro(4t-NH₂)-

-‘238 ·’

nVal(dpsc)Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (0,2 g, 0,22 mmol) suspendované v NMP (2 ml) byl přidán 2,4,6-kolidin (0,24 ml, 1,79 mmol) a benzensulfonylchlorid a reakční směs byla třepána 18 hod. Rozpouštědlo bylo odsáto a pryskyřice byla důkladně promyta

2 ml podíly dichlormethanu, methanolu, dimethylformamidu a dichlormethanu. Kvalitativní ninhydrinová analýza ukázala bezbarvé kuličky a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 7 w Syntéza Fmoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSÓ2Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice

JMH

Fmoc-HN

O ° ^H X

N^x^Y'^N'V^NH-MBHA pryskyřice

NH-CH(Ph)₂

Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (Boc-Pro(4tNHSO₂Bn)-nVal(dpsc)Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Boc postupem C. Fmoc-G(Chx) (0,17 g, 0,45 mmol) byl potom navázán podle postupu A. Po 18 hod ukázala kvalitativní ninhydrinová analýza bezbarvé kuličky a kvantitativní ninhydrinová analýza 99,79% účinnost reakce.

9

Krok 8

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-n\/al(dpsc)-Glv-Phq-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice

NH

NH-CH(Ph)₂

Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (Fmoc-G(Chx)Pro(4t-NHSC>2Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšnou reakci. K pryskyřici (0,2 g, 0,22 mmol) suspendované ve 2 ml NMP byl přidán isobutylchlorformát (0,12 ml, 0,90 mmol) a potom diisopropylethylamin (0,31 ml, 1,79 mmol), a reakční směs byla třepána 18 hod při teplotě laboratoře. Kvalitativní ninhydrinová analýza ukázala bezbarvé kuličky a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 9

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSC>2Bn)-nVal(CO)-Glv-Pha-MBHA pryskyřice

• ·

^H O

NH-MBHA pryskyřice

Sloučenina z předcházejícího kroku (iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (200 mg) byla vystavena hydroiýze semikarbazonu postupem D.

Krok 10

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(CO)-Gly-Pha-NH2

Pryskyřice z předcházejícího kroku (iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(CO)Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (100 mg) byla štěpena HF (podmínky štěpení dle postupu E) za získání požadovaného surového produktu. Materiál byl čištěn HPLC s použitím kolony 2,2 x 25 cm s reverzními fázemi, s obsahem C-18 pryskyřice složené z částic gelu velikosti 10 pm s velikostí pórů 300 A, s elucí gradientem 20 až 50% acetonitrilu ve vodě. Analytická HPLC ·· ···· s použitím a kolony 4,6 x 250 mm s reverzními fázemi, s obsahem ΟΙ 8 pryskyřice s velikostí částic 5 pm a velikostí pórů 300 A, s elucí 25 až 75% acetonitrilem (obsahující 0,1% kyselinu trifluoroctovou) ukázala jeden vrchol v čase 13,5 min. Hmotnostní spektrometrie s nízkým rozlišením potvrdila požadovanou hmotnost (MH⁺ 826,4).

IV, Další sloučeniny připravené syntézou v roztoku

Reprezentativní postupy pro přípravu dalších sloučenin podle vynálezu jsou ukázány dále, přičemž sloučeniny připravené těmito io postupy jsou uvedeny v tabulce 5.

Příklad XXIII

Příprava sloučeniny vzorce XXIII

2o Krokl

OC₂H₅

Míchaný roztok ketiminu XXIIIa (50 g, 187,1 mmol) pod N₂v suchém THF (400 ml) byl ochlazen na -78 °C a smísen s 1M ·» »··» • · · ·· ··

-Ž'42 -·* roztokem K-^lBuO (220 ml, 1,15 ekv.) v THF. Reakční směs byla ohřátá na 0 °C a míchána 1 hod a smísena s brommethylcyklobutanem (28 ml, 249 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 48 hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v Et₂O (300 ml) a smísen s vodným HCI (2M, 300 ml). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 5 hod a extrahován Et₂O (1 I). Vodná vrstva byla zalkalizována na pH ~12 až 14 NaOH (50 % vod. roztok) a extrahována CH₂CI₂ (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání čistého io aminu (XXIIIb, 18 g) jako bezbarvého oleje.

Krok 2

Roztok aminu XXIIIb (18 g, 105,2 mmol) při 0 °C v CH₂CI₂(350 ml) byl smísen s di-terc-butyldikarbonátem (23 g, 105,4 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 12 hod. Po ukončení reakce

2o (TLC) byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl rozpuštěn v THF/H₂O (200 ml, 1 : 1) a smísen s LiOH.H₂O (6,5 g, 158,5 mmol) a míchán při teplotě laboratoře 3 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a základní vodná vrstva byla extrahována Et₂O. Vodná vrstva byla okyselena konc. HCI na pH ~1 až 2 a extrahována

CH₂CI₂. Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu za získání XXIIIc jako bezbarvého viskózního oleje, který byl použit v příštím kroku bez dalšího čištění.

·· ·· • * * « • · · ? · · ·· ·>·· ·· • »··

- 243 • · · 4 «· ··

Krok 3

Roztok kyseliny XXIIIc (15,0 g, 62 mmol) v CH2CI2 (250 ml) byl smísen s činidlem BOP (41,1 g, 93 mmol), N-methylmorfolinem (27 ml), hydrochloridem N,O-dimethylhydroxylaminu (9,07 g, 93 mmol) a míchán přes noc při laboratorní teplotě. Reakční směs byla zředěna

1N vod. HCI (250 ml), vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována CH₂CI₂ (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografií (SiO₂, EtOAc/hex 2 : 3) za získání amidu XXIIId (15,0 g) jako bezbarvé pevné látky.

Krok 4

XXIIId

Roztok amidu XXIIId (15 g, 52,1 mmol) v suchém THF (200 ml) byl po kapkách smísen s roztokem LiAIH₄ (1M, 93 ml, 93 mmol) při 0 °C. Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 1 hod a reakce byla opatrně ukončena při 0 °C roztokem KHSO₄ (10% vod.) a směs byla míchána 0,5 hod. Reakční směs byla zředěna vodným HCI (1M, 150 ml) a extrahována CH₂Cl2 (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodným HCI (1M), nasyceným NaHCO₃, roztokem soli, a sušeny (MgSO₄). Směs byla zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání XXIIIe jako viskózního bezbarvého oleje (14 g).

·· ····

- 244 Krok 5

BocHN

OH

CN

XXIIIf

Roztok aldehydu XXIIIe (14 g, 61,6 mmol) v CH2CI2 (50 ml), byl smísen s Et₃N (10,73 ml, 74,4 mmol) a acetonkyanohydrinem (10,86 g, 127,57 mmol) a míchán při teplotě laboratoře 24 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zředěna vod. HCI (1M, 200 ml) a extrahována do CH₂CI₂ (3 x 200 ml). Spojená organická vrstva byla promyta H₂O, roztokem soli, sušena (MgS0₄), zfiltrována, zakoncentrována a čištěna chromatografií (SiO₂, EtOAc/hex 1 : 4) za získání XXIIIf (10,3 g) jako bezbarvé kapaliny.

Krok 6

Methanol nasycený HCI*, připravený probubláváním plynného HCI do CH3OH (700 ml) při 0 °C, byl smísen s kyanohydrinem XXIIIf a zahříván pod zpětným chladičem 24 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání XXIIIg, která byla použita v dalším kroku bez čištění.

*Alternativně může být použit 6M HCI připravený přidáním AcCI do suchého methanolu.

XXHIg XXHIh

Roztok hydrochloridu aminu XXlllg v CH2CI2 (200 ml) byl smísen s Et₃N (45,0 ml, 315 mmol) a Boc₂O (45,7 g, 209 mmol) při -78 °C. Reakční směs byla potom míchána při teplotě laboratoře přes noc a zředěna HCI (2M, 200 ml) a extrahována do CH₂CI₂ Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄) zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografií (EtOAc/hex 1 : 4) za získání hydroxyesteru XXIIIh.

Krok 8

XXJIlh

XXIlIi

Roztok methylesteru XXIIIh (3 g, 10,5 mmol) v THF/H₂O (1 : 1) byl smísen s LiOH.H₂O (645 mg, 15,75 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 2 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI (1M, 15 ml) a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl sušen ve vakuu.

Roztok kyseliny v CH2CI2 (50 ml) a DMF (25 ml) byl smísen s NH₄CI (2,94 g, 55,5 mmol), EDCl (3,15 g, 16,5 mmol), HOOBt (2,69 g, 16,5 mmol) a NMM (4,4 g, 44 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 3 dny. Rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu a zbytek byl zředěn vodným HCI (250 ml) a extrahován

- 246 CH₂CI₂. Spojené organické vrstvy byly promyty vodným nasyceným NaHCO₃, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány, za získání XXIIIi, která byla použita jako taková v následujících krocích. (Alternativně může také být XXIIIi získána přímo reakcí sloučeniny

XXIIIf (4,5 g, 17,7 mmol) s vodným H₂O₂ (10 ml), LiOH.H₂O (820 mg, 20,8 mmol) při 0 °C v 50 ml CH₃OH 0,5 hod.).

XXlIJi XXlIIj

Roztok sloučeniny XXIIIi získané v předcházejícím kroku byl rozpuštěn v 4N HCI v dioxanu a-míchán při teplotě laboratoře po dobu

2 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání XXlIIj jako pevné látky, která byla použita bez dalšího čištění.

Krok 10

BocHN

CH3x^CH₃

O CH^CHs

OH

/OCH₃

N'H2CI ó

OCH3

N

Ά ⁰

Ό

BocHN

XXfflk xxmi

XXfflm

Aminoester XXIIII byl připraven následující metodou podle R. Zhang a J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999, 64, 330), s tím rozdílem, že skupina Boc byla odštěpena reakcí Boc-chráněné ο β

247 aminokyseliny s methanolickým HCI.

Roztok komerčně dostupné aminokyseliny Boc-Chg-OH, XXIIIk (Senn Chemicals, 6,64 g, 24,1 mmol) a aminhydrochloridu XXIIII (4,5 g, 22 mmol) v CH2CI2 (100 ml) byl při 0 °C smisen s činidlem BOP a míchán při teplotě laboratoře po dobu 15 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu, potom byla zředěna vodným 1M HCI a extrahována do EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným NaHCO₃ (200 ml), sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, a čištěny chromatografií (S1O2, EtOAc/hex

3 : 7), za získání XXIIIm (6,0 g) jako bezbarvé pevné látky.

Krok 11

CH₃^xCH₃

BocHN^xU och₃

NH₂

XXIIIm XXllln

Roztok methylesteru XXIIIm (4,0 g, 9,79 mmol) v THF/H2O (1 :

1) byl smjsen s L1OH.H2O (401 mg, 9,79 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 3 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (1,5 g; 3,74 mmol) v DMF/CH2CI2 (1 : 1, 50 ml) byl smisen s aminem XXIIIj (772 mg, 3,74 mmol), EDCI (1,07 g, 5,61 mmol), HOOBt (959 mg, 5,61 mmol) a NMM (2,15 ml, 14,96 mmol) při -10 °C. Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI a extrahován CH2CI2, Spojené organické vrstvy byly extrahovány vod. NaHCO3, vod. HCI, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a

- 248 zakoncentrovány ve vakuu za získání XXIIIn (2,08 g) jako světle hnědě zbarvené pevné látky.

Krok 12

nh₂

XXIIIn XXIII

Roztok amidu XXIIIn (2,08 g, 3,79 mmol) v toluenu a DMSO (1:1, 20 ml) při 0 °C byl smísen s EDCl (7,24 g, 37,9 mmol) a kyselinou dichloroctovou (2,42* g, 19,9 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 4 hod. Reakční směs byla zředěna CH₂CI₂, promyta nasyceným NaHCO₃ a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (SiO₂, aceton/hexany 3 : 7), za získání XXIII jako bezbarvé pevné látky.

Příklad XXIV

Příprava sloučeniny vzorce XXIV

XXIV

- 249 Krok 1

0 BocHN_>JL_oh ^cH₃^CH₃	CH^CKs ⁺ QrT³ H₂Cl 0	CH₃-_x^_xCH₃ ΒοοΗΝ^Αθ ° ^εΗφ^Η3
XXIVa	xxnn	xxrvb

Roztok Boc-terc-Lue XXIVa (Fluka, 5,0 g 21,6 mmol) v suchém CH2CI2/DMF (50 ml, 1 : 1) byl ochlazen na 0 °C a smísen s aminem

XXIIII (5,3 g, 25,7 mmol), NMM (6,5 g, 64,8 mmol) a činidlem BOP (11,6 g, 25,7 mmol). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 24 hod, zředěna vodným HCI (1M) a extrahována CH₂CI₂. Spojené organické vrstvy byly promyty HCI (vod., 1M), nasyceným ^: NáHCO₃, roztokem soli, .sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografií (SÍO2, aceton/hexan 1 : 5) za získání sloučeniny XXIVb jako bezbarvé pevné látky.

Krok 2

XXIVb

Roztok methylesteru XXIVb (4,0 g, 10,46 mmol) byl rozpuštěn v HCI (4M roztok dioxanu) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 3 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání hydrochloridové soli aminu, která byla použita v dalším kroku.

····

250 Roztok hydrochloridové soli aminu (397 mg, 1,24 mmol) v CH₂CI₂ (10 ml) byl ochlazen na -78 °C a smísen s tercbutylisokyanátem (250 mg, 2,5 mmol) a míchán při laboratorní teplotě přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl zředěn vodným HCI (1M) a extrahován CH₂CI₂. Spojené organické vrstvy byly promyty vodným HCI (1M), nasyceným NaHCO₃ a roztokem soli. Organické vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a zbytek byl čištěn chromatografií (SiO₂, aceton/hex 1 : 4), za získání XXIVc jako bezbarvé pevné látky.

· .

Krok 3

Roztok methylesteru XXIVc (381 mg, 1,0 mmol) v THF/H₂O (1:1,1,5 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (62 mg, 1,5 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 3 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (254,9 mg, 0,69 mmol) v DMF/CH₂CI₂ (1:1, 5,0 ml) byl smísen s aminem XXIIIj (159 mg, 0,763 mmol), EDCI (199 mg, 1,04 mmol), HOOBt (169,5 mg, 1,04 mmol) a NMM (280 mg,

2,77 mmol) při -20 °C. Reakční směs byla míchána při -20 °C 48 hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI a extrahován EtOAc. Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCCH, vodným HCI, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu, za získání sloučeniny XXIVd (470 mg) jako

251 světle hnědé pevné látky.

Krok 4

XXIVd

Roztok amidu XXIVd (470 mg, 0,9 mmol) v toluenu a DMSO (1 : 1, 20 mi) byl při 0 °C smísen s EDCI (1,72 g, 9,0 mmol) a kyselinou dichloroctovou (0,37 ml, 4,5 mmol) a míchán při 0 °C 4 hod. Reakční směs byla zředěna CH2CI2 a promyta nasyceným roztokem NaHCCh a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (SiO₂, aceton/hexany 3 : 7), za získání XXIV jako bezbarvé pevné látky.

Příklad XXV

Příprava sloučeniny vzorce XXV

XXV

- 252 Krok 1

FmocHN^^

O

XXVa

OH

FmccHN'^Y'

O CH₃

XXVc

Roztok Fmoc-glycinu (Bachem, 2,0 g, 6,87 mmol) v CH2CI2 (20 ml) byl smísen s 2-fenyl-2-propanolem (Aldrich, 3,36 g, 24,7 mmol), DCC (1M roztok CH₂CI₂, 8,24 ml), DMAP (167 mg, 1,37 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 24 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zředěna Et20 (100 ml). Oddělená pevná látka byla zfiltrována a filtrát byl promyt nasyceným roztokem NaHCO3. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (S1O2, EtOAc/hexany 1 : 5) za získání esteru XXVc (1,1 g) jako bezbarvé viskózní kapaliny.

Krok 2

FmocHN'”^Y

O CH₃

XXVc

Roztok sloučeniny XXVc v CH2CI2 (16,0 ml) byl smísen s piperidinem (4,0 ml) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu

0,5 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (S1O2, aceton/hexany 1 : 10 až 1 : 1) za získání aminu XXVd (420 mg) jako bezbarvé kapaliny.

- 253 Krok 3

XXJVc

Roztok methylesteru XXIVc (381 mg, 1,0 mmol) v THF/H2O (1 : 1 ,5 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (62 mg, 1,5 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 3 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (2,0 g, 5,5 mmol) v DMF/CH2CI2 (1:1, 40,0 ml) byl při -10 °C smísen s aminem XXIIIg (1,51 g, 6,8 mmol),'EDCI (1,57 g, 8,25 mmol), HOOBt (1,41 g, 8,25 mmol) a NMM (2,5 g,

24,7 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 hod a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI (100 ml) a extrahován CH₂CI₂ (3 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCO₃, vodným HCI, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu za získání XXVe (3,17 g) jako světle hnědé pevné látky, která byla dále použita bez čištění.

Krok 4

CH₃^CH₃ ch₃^ch₃ i_i OH t_i <2 >xa v

W³

XXVe

Roztok methylesteru XXVe (2,5

9.

XXVf

4,66 mmol) ···· v THF/H2O/CH3OH (1 : 1 : 1, 60 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (200 mg, 4,87 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 4 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (200,0 mg, 0,38 mmol) v DMF/CH2CI2 (1 : 1,

6,0 ml) byl při -10 °C smísen s aminem XXVd (78 mg, 0,4 mmol), EDCI (105 mg, 0,55 mmol), HOOBt (95 mg, 0,55 mmol) a NMM (150 mg, 1,48 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI (30 ml) a extrahován CH2CI2 (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCO₃ (2 x 30 ml), vodným HCI, roztokem soli (30 ml), sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu za získání XXVf (240 mg) jako bezbarvé pevné látky.

XXV

Roztok sloučeniny XXVf (240 mg, 0,28 mmol) v CH2CI2 (10 ml) byl smísen s Dess-Martinovým činidlem (Omega, 242 mg, 0,56 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 2 hod. Po ukončení oxidace (TLC, aceton/hexany 1 : 4) byla reakční směs zředěna nasyceným roztokem NaHCO₃ (20 ml) a Na2S₂O₃ (10% vodný roztok, 20 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 30 min a extrahována CH₂CI₂ (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány nasyceným roztokem NaHCO₃, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, a čištěny chromatografií (SiO₂, aceton/hexany 1 : 5), za získání XXV (122 mg) jako bezbarvé pevné látky.

Příklad XXVI io Příprava sloučeniny vzorce XXVI

Krok 1

	^V^*co₂h	, CY ^_N'^'CO₂tBu
20	Boc	Boc
	XXVIa	XXVIb

K míchanému roztoku N-Boc-3,4-dehydroprolinu XXVIa (5,0 g, 23,5 mmol), di-terc-butyldikarbonátu (7,5 g, 34,4 mmol), a 4-N,N-dimethylaminopyridinu (0,40 g, 3,33 mmol) v acetonitrilu (100 ml) při teplotě laboratoře byl přidán triethylamin (5,0 ml, 35,6 mmol). Získaný roztok byl míchán při této teplotě 18 hod před zakoncentrováním ve vakuu. Tmavě hnědý zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně s elucí 10 až 25% EtOAc/hexan, za poskytnutí produktu XXVIb ···· ♦···

-256 jako světležlutého oleje (5,29 g, 84 %).

Krok 2

Cl^Cl

I

CO₂tBu

Boc

XXVlb rv ^_N-^*CO₂tBu

Boc

XXVIc

K míchanému roztoku dehydroprolinu XXVlb (10,1 g, 37,4 mmol), benzyltriethylamoniumchloridu (1,60 g, 7,02 mmol) w v chlorformu (120 ml) při teplotě laboratoře byl přidán 50% vodný hydroxid sodný (120 g). Po důkladném míchání při této teplotě po dobu 24 hod byla černá směs zředěna CH₂CI₂ (200 ml) a diethyletherem (600 ml). Po oddělení vrstev byl vodný roztok extrahován CH₂CI₂/Et₂O (1 : 2, 3-x 600 ml). Organický roztok byl sušen (MgSO₄) a zakoncentrován. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně s použitím 5 až 20% EtOAc/hexan, za získání 9,34 g (71 %) sloučeniny XXVIc jako bělavé pevné látky.

Krok 3

Cl^Cl ^jXcO₂tBu

6_N^CO₂H •cf₃co₂h

Boc

XXVIc

XXVId

Roztok sloučeniny XXVIc (9,34 g, 26,5 mmol) v CH₂CI₂ (25 ml) a 25 CF₃CO₂H (50 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4,5 hod před zakoncentrováním ve vakuu, za získání hnědého zbytku, který byl použit v kroku 4 bez dalšího čištění.

Krok 4

Cl^C!

^Ň^CO₂H

H

CF₃CO₂H ···· I

- 257 Cl^ci

ΛΎ ^_N^CO₂Me

H

HCI xxníd

XXIlIs

Komerční koncentrovaná kyselina chlorovodíková (4,5 ml) byla přidána k roztoku zbytku z kroku 3 v methanolu (70 ml) a získaná směs byla ohřátá na 65 °C v olejové lázni. Po 18 hod byla směs zakoncentrována ve vakuu za poskytnutí hnědého oleje XXVIe, který byl použit v kroku 5 bez dalšího čištění.

Krok 5

Cl^CI

15	Ci^CI \_N^CO₂Me H · HCI	BocHN^.C0₂H ó
	XXVIe	XXVIf

ζ/^00₂Μβ

K míchanému roztoku prolinmethylesteru XXVIe z kroku 4, komerčního N-Boc-cyklohexylglycinu XXVIf (10,2 g, 40,0 mmol) a [O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu] (HATU) (16,0 g, 42,1 mmol) v DMF (200 ml) byl při 0 °C přidán diisopropylethylamin (18,0 ml, 104 mmol). Po ohřátí na laboratorní teplotu spolu s ledovou lázní přes noc (18 hod) byla reakční směs zředěna EtOAc (600 ml), 5% H₃PO₄ (150 ml) a roztokem soli (150 ml). Organický roztok byl promyt 5% H₃PO₄ (150 ml), nasyceným NaHCO₃(2 x 200 ml), potom sušen (MgSO₄), zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně s použitím 5 - 20% EtOAc/hexan, za získání 3,84 g (32 %, tři kroky) sloučeniny XXVIg jako bělavé pevné látky.

Krok 6

BocHN

Ci^CJ ^<ζ/^ΟΟ₂Η

BocHN

XXVIg XXVIh io Roztok methylesteru XXVIg (5,87g, 13,1 mmol) a LiOH (1,65 g,

39,3 mmol) v THF/MeOH/H₂O (1 : 1 : 1, 90 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4 hod. Methanol a THF byly odstraněny za sníženého tlaku. Vodný roztok byl okyselen na ρ·Η 2 použitím 1N vodného roztoku HCI (50 ml) a nasycen pevným chloridem sodným, před extrahováním

EtOAc (3 x 150 ml). Organické roztoky byly spojeny, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, za získání bílé pevné látky XXVIh (5,8 g, kvantitativní).

Krok 7

CI^CI

BocHN^Aq

nh₂ nh₂

XXVIh

Požadovaný produkt XXlIli byl připraven jako v postupu v příkladu XXIII, krok 11.

• ···· *··* »· * · · · i

Krok 8

··. ·· » · 9

nh₂

XXV»

XXVI

Požadovaný produkt XXVI byl připraven podobným postupem jako v příkladu XXIII, krok 12.

Příklad XXVII

Příprava sloučeniny vzorce XXVII

15.

Krok 1

XXVIi

v příkladu XXIII, krok 9.

►:..26θ.»·.:.. ·..··..·

Krok 2

nh₂

XXVllb

XXV! la

Požadovaný produkt XXVllb byl připraven postupem jako v příkladu XXIV, krok 2.

Krok 3

Cl^CI

OH

Η Η I o

O

NH₂ ^c'v^ct

ΛΛ . h

Η » nů O

nh₂

XXVllb XXVII

Požadovaný produkt XXVII byl připraven postupem jako v příkladu XXIII, krok 12.

Příklad XXVIII

Příprava sloučeniny vzorce XXVIII wa™²

BocHN^Aq ⁰

Me^T^Me

Me

XXVIll

Krok 1

Meziprodukt XXIII, kroky 3 až 6.

XXVIIIb

XXVIIIb byl připraven postupem jako v příkladu

Krok 2

XXVlllc XXVIIIb

XXVIIId krok 2 (XXVlllc) (0,7g) byla ι-s Kyselina z příkladu XXIV, ponechána reagovat s produktem z kroku 1 výše (0,436 g), HATU (0,934 g) a DIPEA (1,64 ml) způsobem popsaným v příkladu IX, krok 2a, za získání 0,66 g požadovaného produktu XXVIIId.

Krok 3

Μβ'Χ'Μβ Me

XXVIlle

XXVIIId

Produkt z kroku 2 (0,5 g) byl ponechán reagovat s Dess25

Martinovým činidlem (1 g) způsobem popsaným v předcházejícím příkladu XX, krok 7. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (40% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo 0,35 g produktu XXVIIIe. Hmotnostní spektrum (LCMS) 522 (M+H⁺).

XXVIIIe XXVlItf

Produkt z kroku 4 (0,3 g) byl přidán k 1/1 roztoku H₂O/MeOH (20 ml) a pevného NaHCO₃ (242 mg, 5 ekv.). Po 18 hod míchání při teplotě laboratoře byla reakční' směs zředěna EtOAc a vrstvy byly

1.5 odděleny. Vodná vrstva byla okyselena na pH 2 HCI 1,0N a extrahována EtOAc. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, za získání produktu XXVIIIf jako bílého prášku (0,26 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 508 (M+H⁺).

XXVIÍff

Produkt z kroku 5 (0,15 g) byl rozpuštěn v CH2CI2 a ponechán reagovat s HATU (0,137 g), NH₄CI (0,08 g, 5 ekv.) a DIPEA (0,53 ml).

—2G3~ · · · ·

Po 2 hod při teplotě laboratoře byla reakční směs zředěna EtOAc, promyta 10% roztokem kyseliny citrónové, potom nasyceným roztokem NaHCO3. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (30% aceton, hexan, osid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXVIII (0,096 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 507 (M+H⁺).

Příklad XXIX io Příprava sloučeniny vzorce XXIX

XXlXa

K roztoku výchozího aldehydu (4,0 g) v CH2CI2 (75 ml) při 0 °C byla přidána kyselina octová (2,0 ekv., 2,15 ml) a potom methyliso-kyanoacetát (1,1 ekv., 1,9 ml). Reakční směs byla potom postupně ohřátá na laboratorní teplotu. Po 18 hod (přes noc) byla reakční směs zředěna EtOAc a promyta nasyceným roztokem NaHCO₃. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, za získání surové směsi.

Čištění bleskovou chromatografií na koloně (30 až 40% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo produkt XXIXa (4,5 g).

Krok 2

XXIXa XXIXb ₁₀ K 0 °C roztoku sloučeniny XXIXa (4,4 g) v THF (100 ml) bylo přidáno 26 ml (2,2 ekv.) 1,0N roztoku LiOH. Reakční směs byla míchána při této teplotě 2 hod, potom ohřátá na laboratorní teplotu. Po 2 hod byla reakční směs okyselena na pH 2 1,0N roztokem HCI. Byl přidán EtOAc a vrstvy byly odděleny. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání produktu XXIXb (3,7 g).

Krok 3

XXlXc •-265 -• · · ·

Kyselina XXIXb byla ponechána reagovat s aminem z příkladu XV postupem popsaným v příkladu XXI, krok 4. Získaný meziprodukt byl potom smísen s HCI způsobem popsaným v příkladu XXIII, krok 9, za získání produktu XXIXc.

Krok 4

V

Kyselina XXVlIlc (2,43 g) byla rozpuštěna v CH₂CI₂ a byla ponechána reagovat s aminem XXIXc (2,47 g), HATU (2,5 g) a DIPEA (5,8 ml) postupem popsaným v příkladu IX, krok 2a, za poskytnutí, po čištění bleskovou chromatografií na koloně (4% MeOH, CH₂Ci₂, oxid křemičitý), požadovaného produktu XXIXd (4,35 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 727 (M+H⁺).

Krok 5

Produkt z kroku 4 (4,2, g) byl ponechán reagovat s DessMartinovým činidlem (6,4 g) způsobem popsaným v preparativním příkladu XX, krok 7. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (100%

EtOAc, oxid křemičitý) poskytlo 3 g finálního produktu XXIX. Hmotnostní spektrum (LCMS) 725 (M+H⁺).

Příklad XXX

Příprava sloučeniny vzorce XXX

XXX ”*2G7

Krok 1 >r^0H cf₃

Alkohol 2-(trifluormethyl)propan-2-ol (1,28 g) byl ponechán reagovat s N,N-disukciminidylkarbonátem (3,84 g) a Et₃N (4,2 ml) v suchém CH₃CN (50 ml) 18 hod. Směs byla zředěna EtOAc (200 ml) a zfiltrována. Filtrát byl promyt NaHCO₃, roztokem soli, potom sušen io nad MgSO₄, zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu za získání surové směsi. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (50% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXXa (0,3 g).

XXIX

XXXb

Produkt z příkladu XXIX (0,3 g) byl smisen se 100 ml 4,ON HCI v dioxanu. Po 1 hod bylo přidáno 200 ml EÍ2O a získaná sraženina byla odfiltrována a sušena ve vakuu za získání produktu XXXb (0,27 g) jako bílého prášku. Hmotnostní spektrum (LCMS) 625 (MHCI+H⁺).

Krok 3

N.

K roztoku XXXb (0,05 g) v CH₂CI₂ (5 ml) při teplotě laboratoře byl přidán DIPEA (0,040 ml), XXXa (1,5 ekv., 0,030 g) a potom jeden krystal DMAP. Po 30 min byla reakční směs zředěna EtOAc (20 ml) a promyta HCI 1,5N, potom NaHCC>3, potom roztokem soli. Vrstva EtOAc byla sušena nad MgSO4, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění preparativní chromatografií (40% aceton, hexan, osid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXX (0,044 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 779 (M+H⁺).

Příklad XXXI

Příprava sloučeniny vzorce XXXI •-•269·-

XXXI

·»»

XXXb

K roztoku sloučeniny XXXb (0,05 g) v CH₂CI₂ (5 ml) při teplotě laboratoře byl přidán DIPEA (0,040 ml) a terc-butylisokyanát (1,2 ekv., 0,01 ml). Po 18 hod byla reakční směs zředěna EtOAc (20 ml) a promyta HCl 1,5N, NaHCO₃ a roztokem soli. Vrstva EtOAc byla sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění preparativní chromatografií (100% EtOAc, oxid křemičitý) poskytlo finální produkt XXXI (0,021 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 724 (M+H⁺).

Příklad XXXII

Příprava sloučeniny vzorce XXXII

XXVIII

nh₂

XXXlla

Produkt z příkladu XXVIII byl zpracován způsobem popsaným v preparativním příkladu XXX, krok 2, za získání produktu XXXlla. Hmotnostní spektrum (LCMS) 407 (M-HCI+H⁺).

Krok 2

X°Y°X cf₃ o

XXXa

XXXlla *-271 -* *··’

Amin XXXIIa byl ponechán reagovat se sloučeninou XXXa způsobem popsaným v preparativním příkladu XXX, krok 3, za získání požadovaného produktu XXXII. Hmotnostní spektrum (LCMS) 508 (M+H⁺).

Příklad XXXIII

Příprava sloučeniny vzorce XXXIII

Krok 1

XXXIII

V

nh₂ v

nh₂

XXX111

Amin XXXIIa byl ponechán reagovat s terc-butylisokyanátem způsobem popsaným v příkladu XXXI, krok 1, za získání produktu XXXIII. Hmotnostní spektrum (LCMS) 561 (M+H⁺).

·· ···· •±•272

Příklad XXXIV

Příprava sloučeniny vzorce XXXIV

Krok 1

Ke směsi esteru (6,0 g) a molekulárních sít (5,2 g) v bezvodém methylenchloridu (35 ml) byl přidán pyrrolidin (5,7 ml, 66,36 mmol). Získaná hnědá kaše byla míchána při teplotě laboratoře pod N₂24 hod, zfiltrována a promyta bezvodým CH₃CN. Spojený filtrát byl zakoncentrován za získání požadovaného produktu.

-Cl

Nal, K₂CO₃

o ”•273 >· ····

K roztoku produktu z předcházejícího kroku v CH₃CN (35 ml) byl přidán bezvodý K₂CO₃, methallylchlorid (2,77 g, 30,5 mmol), Nal (1,07 g, 6,7 mmol). Získaná kaše byla míchána při teplotě laboratoře v atmosféře N₂ 24 hod. Bylo přidáno 50 ml ledově chladné vody a potom 2N roztok KHSO4 dokud pH nebylo 1. Byl přidán EtOAc (100 ml) a směs byla míchána po dobu 0,75 hod. Spojená organická vrstva byla oddělena a promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄ a odpařena, za získání požadovaného produktu.

1N LiOH/dioxan ->

Produkt z předcházejícího kroku (2,7 g, 8,16 mmol) byl rozpuštěn v dioxanu (20 ml) a smísen s čerstvě připraveným 1N LiOH (9 ml). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě v atmosféře N₂ 20 hod. Reakční směs byla vložena do EtOAc a promyta H₂O. Spojená vodná fáze byla ochlazena na 0 °C a okyselena na pH 1,65 s použitím 1N HCI. Kalná směs byla extrahována EtOAc (2 x 100 ml). Spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄, a zakoncentrována, za získání požadované kyseliny (3,40 g).

Krok 4

0· ·♦»·

K suspenzi NaBH(0Ac)3 (3,93 g, 18,5 mmol) v CH2CI2 (55 ml) byl přidán roztok produktu z předcházejícího kroku v bezvodém CH₂CI₂(20 ml) a kyselina octová (2 ml). Kaše byla míchána při laboratorní teplotě 20 hod. Ke kaši byla přidána ledově chladná voda (100 ml) a směs byla míchána 1/2 hod. Organická vrstva byla oddělena, zfiitrována, sušena a odpařena za získání požadovaného produktu.

Roztok produktu z předcházejícího kroku (1,9 g) v MeOH (40 ml) 20 byl smísen s přebytkem roztoku CH₂N₂/Et2P a směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována do sucha za získání surového zbytku. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem EtOAc/hexan, za získání 1,07 g čistého požadovaného produktu.

Krok 6 *· ····

Roztok produktu z předcházejícího kroku (1,36 g) v bezvodém CH₂CI₂ (40 ml) byl smísen s BF₃.Me₂O (0,7 ml). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 20 hod a reakce byla ukončena NaHCO₃ (30 ml) a dále míchána 1/2 hod. Organická vrstva byla oddělena a spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄, zakoncentrována, za získání surového zbytku. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem EtOAc/hexan, za získání 0,88 g požadované sloučeniny.

Krok 7

K roztoku produktu (0,92 g) z předcházejícího kroku v MeOH (30 ml) bylo přidáno 10% Pd/C <0,16 g) při teplotě laboratoře a směs byla hydrogenována při teplotě laboratoře při tlaku 1 atm (0,1 MPa). Reakční směs byla míchána po dobu 4 hod a zakoncentrována do sucha, za získání požadované sloučeniny.

Krok 8

postupem popsaným

Požadovaný produkt v příkladu XXIII, krok 10.

byl připraven

Požadovaná kyselina byla připravena postupem z příkladu XXIV, 20 krok 3.

Krok 10

XXXIV

Požadovaný produkt XXXIV byl připraven postupem jako v příkladu XXIX, kroky 4 až 5.

Příklad XXXV

Příprava sloučeniny vzorce XXXV

Roztok triethylfosfonátu (44,8 g) v THF (30 ml) byl při 0 °C smísen s 1M roztokem (200 ml) bis(trimethylsilylamidu) sodného v THF. Získaná směs byla míchána při teplotě laboratoře 0,5 hod a potom ochlazena na 0 °C. Po kapkách byl přidán roztok 1,4cyklohexandionethylenketalu (15,6 g) v THF (50 ml), a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 18 hod. Reakční směs byla potom ochlazena na 0 °C, smísena s chladnou vodnou kyselinou citrónovou a směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl promyt nasyceným vodným NaHCO₃, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem CH₂CI₂/EtOAc, za získání v názvu _» · • ···· ·· ··

uvedené sloučeniny (21 g), 92% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 227,3 (M+H⁺).
Krok 2
XO₂Et	^CO₂Et
0*0 \_J	U O \_J
Produkt z předcházejícího kroku (20 g) byl rozpuštěn v EtOH (150 ml) a smísen s 10% Pd/C při tlaku 1 atm (0,1 MPa) vodíku 3 dny. Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené

sloučeniny (20,3 g), 100 % výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 229,2 (M+H⁺).

1.5 Krok 3

Produkt z předcházejícího kroku (20 g) byl rozpuštěn v MeOH (150 ml) a smísen s roztokem LiOH (3,6 g) ve vodě (50 ml). Směs byla míchána po dobu 18 hod a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v chladné vodě (100 ml), roztok byl okyselen na pH 2 až 3 5N HCI, a získaná směs byla extrahována EtOAc. Extract byl sušen nad bezvodým Na2SO4, zfiltrován a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (17,1 g), 97% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 201,2 (M+H⁺).

Krok 4

1. Produkt z předcházejícího kroku (3,0 g) byl rozpuštěn v Et₂O (150 ml), smísen s Et₃N (2,1 ml) a roztok byl ochlazen na -78 °C. Po kapkách byl přidán pivaloylchlorid (1,85 ml) a po 0,25 hod dalšího io míchání byla reakce ponechána ohřát na 0 °C v průběhu 0,75 hod, a potom byla znovu ochlazena na -78 °C, za získání roztoku směsného anhydridu pro reakci v části 2.

2. Roztok (S)-4-benzyl-2-oxazolidinonu (2,66 g) v THF (22 ml) byl ochlazen na -78 °C a po kapkách byl přidán 1,6M roztok (9,38 ml) n-butyllithia v hexanu. Po dalším 0,33 hod míchání při této teplotě byl roztok převeden jehlou do chladného roztoku z části 1. Směs byla míchána při -78 °C, potom ohřátá na 0 °C a míchána při této teplotě 0,5 hod. Organická vrstva byla oddělena, vodná vrstva byla extrahována Et₂O, spojené organické podíly byly promyty roztokem soli, sušeny nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrovány, a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem hexan/EtOAc (9 : 1) za získání v názvu uvedené sloučeniny (5,0 g), 93% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 360,4 (M+H⁺).

Krok 5

-28Λ

Produkt z předcházejícího kroku (2,7 g) byl rozpuštěn v THF (25 ml), ochlazen na -78 °C, převeden jehlou do roztoku 0,5M bis(trimethylsiiyl)amid draselný/toluen (16,5 ml) v THF (25 ml) při -78 C, a získaný roztok byl míchán při -78 °C 0,75 hod. K tomuto roztoku byl jehlou přidán roztok trisylazidu (3,01 g) v THF (25 ml), předem ochlazený na -78 °C. Po 1,5 min byla reakce ukončena kyselinou octovou (1,99 ml), ohřátá na laboratorní teplotu a potom míchána 16 hod. Reakční směs byla zředěna EtOAc (300 ml) a promyta 5% vodným NaCI. Vodná fáze byla extrahována EtOAc, spojené organické fáze byly promyty nasyceným vodným NaHCO3, potom roztokem soli, potom sušeny nad bezvodým Na2SO₄, zfiltrovány a filtrát odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí EtOAc/hexan (1 : 3), za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,65 g), 88% výtěžek.

Krok 6

Produkt z předcházejícího kroku (11,4 g) byl rozpuštěn v 95% kyselině mravenčí (70 ml) a zahříván na 70 °C 0,5 hod za míchání. Roztok byl odpařen ve vakuu a zbytek byl vložen do EtOAc. Roztok byl promyt nasyceným vodným NaHCOs, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiitrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu za získání v názvu uvedené sloučeniny (8,2 g).

.- 231 • ·

Krok 7

Produkt z předcházejícího kroku (8,2 g) byl rozpuštěn v CH₂CI₂(16 ml) a ponechán reagovat s trifluoridem diethylaminosírovým (DAST, 7,00 ml) při laboratorní teplotě 3 hod. Reakční směs byla vlita io do směsi led/voda (200 cm³) a extrahována CH₂CI₂. Extrakt byl promyt nasyceným vodným NaHCCh, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí EtOAc/hexan (15 : 85), za získání v názvu uvedené sloučeniny (4,5 g), 52% výtěžek.

¹⁵

Krok 8

Produkt z předcházejícího kroku (3,7 g) byl rozpuštěn ve směsi THF (150 ml) a vody (48 ml), ochlazen na 0 °C, smísen s 30% H₂O₂(3,95 ml), a potom s LiOH.H₂O (0,86 g). Směs byla míchána po dobu 1 hod při 0 °C, potom byla reakce ukončena roztokem Na₂SC>3 (5,6 g) ve vodě (30 ml), a potom byl přidán roztok 0,5N NaHCO3 (100 ml). Směs byla zakoncentrována ve vakuu na 1/2 objemu, zředěna vodou (do 500 ml), a extrahována CH₂CI₂ (4 x 200 ml). Vodná fáze byla okyselena na pH 1 až 2 5N HCI, a extrahována EtOAc (4 x 200 ml). Extrakt byl promyt roztokem soli; potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen, za získání v názvu uvedené sloučeniny (1,95 g), 91% výtěžek, který byl ihned použit v dalším kroku.

Produkt z předcházejícího příkladu (2,6 g) byl rozpuštěn v Et₂O (50 mi) a míšen po kapkách s roztokem CH₂N₂ v Et₂O, dokud roztok zůstával žlutý. Roztok byl míchán po dobu 18 hod, potom odpařen ve vakuu za získání v názvu uvedené sloučeniny (2.8), která byla ihned použita v dalším kroku.

Krok 10

OMe

W,..

OMe

Produkt z předcházejícíhokroku (1,95 g) byl rozpuštěn v MeOH 25 (150 ml), smísen s kyselinou mravenčí (1,7 ml), potom smísen s 10%

Pd/C (3,3 g, Degussa type E101) při tlaku 1 atm (0,1 MPa) vodíku 1,5 hod. Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,1 g) jako soli s kyselinou mravenčí, která byla t

.τ 28a ihned použita v dalším kroku.

Krok 11

O

F F *-

OMe

Produkt z předcházejícího kroku (2,1 g) byl rozpuštěn v 1,4dioxanu (100 ml) a byl přidán di-terc-butyldlkarbonát (1,9 g) a potom w diisopropylethylamin (2,9 ml). Roztok byl míchán po dobu 18 hod a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl smisen s vodným 5% KH2PO4 a směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl promyt roztokem soli, potom sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí gradientem

CH₂CI₂/Et₂O, za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,5 g), 99% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 307,9 (M+H⁺).

Krok 12

Produkt z předcházejícího kroku (2,5 g) byl rozpuštěn v 1,4dioxanu (35 ml), smisen s vodným 1M LiOH (17 ml), a míchán 2 hod.

Reakce byla ukončena směsí led/voda (125 ml), směs byla okyselena na pH 3 až 4 3N HCI, a extrahována EtOAc. Extrakt byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,3 g), 96% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB)

294,0 (M+H⁺).

Krok 13

Požadovaný produkt byl připraven podle postupu v příkladu 10 XXIII, krok 10.

r

Požadovaný produkt byl XXIV, krok 3.

připraven podle postupu v příkladu

Krok 15

Me^Me

Požadovaná kyselina byla připravena podle postupu z příkladu XXIX, krok 4.

Příklad XXXVI

Příprava sloučenin vzorců XXXVI a XXXVIII

Sloučeniny vzorců XXXVI a XXXVIII byly připraveny podle následujícího schématu a s použitím výše popsaných preparativních příkladů 11 až 15.

O

Bu

cf. Preparative Example 15

OH

[0}

V

F

F-

XXXVII

Sloučenina vzorce XXXVIb byla připravena ze sloučeniny vzorce XXXVIa následujícími známými postupy:

XXXVIa

10% Pd/C

TsOH, MeOH, H₂O

XXXVIb

K roztoku sloučeniny XXXVIa (6,58 g, 22 mmoi) v 100 ml MeOH 15 byly přidány 10% Pd/C (0,8 g) a kyselina p-toluensulfonová (4,2 g). Reakční směs byla zpracována hydrogenací při teplotě laboratoře přes noc. Reakční směs byla zfiitrována přes celit a promyta přebytkem MeOH. Spojený filtrát byl zakoncentrován ve vakuu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny XXXVIb jako gumy. Konverze sloučeniny

XXXVIb na XXXVI a XXXVII probíhala způsobem ukázaným na schématu výše a v preparativních příkladech 11 až 15.

Příklad XXXVIII

Příprava sloučeniny vzorce XXXVIII

Sloučenina vzorce XXXVIII byla připravena s použitím následujícího schématu a preparativních příkladů 11 až 15 diskutovaných výše.

>•«*28%·· ···· *··**··*

4M HCl in _C|_H ,h₂N dioxan,

OH

EDCI, HOBf NMM, DMF

XXXVIII

Příklad XXXIX

Syntéza sloučeniny vzorce XXXIX

XXXIX

Krok 1 ·* ·· ·· ··< • · · · · · · ·

CbzHN^^ /

Cl

CbzHN

XXXIXb

XXXlXa

Roztok sulfonylchloridu XXXlXa připraveného postupem podle 5 H. Mcklwain (J. Chem. Soc. 1941, 75) byl přidán po kapkách ke směsi 1,1 ekv. t-butylmethyiaminu a triethylaminu při -78 °C a směs byla míchána při laboratorní teplotě 2 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (SiO₂, hex/aceton : 1) za získání sulfonamidu XXXIXb jako bezbarvého oleje.

Krok 2

CbzHN

XXXIXb

XXXIXc

Roztok Cbz-chráněného aminu XXXIXb byl rozpuštěn v methanolu a smísen s 5 mol% Pd/C (5% hmotn./hmotn.) a hydrogenován při 60 psi (414 kPa). Reakční směs byla zfiltrována přes lože celitu a zakoncentrována ve vakuu za získání volného aminu

XXXIXc, který stáním ztuhnul.

Krok 3 >r

XXVe

·♦ ··

28a·-.:..

Hydroxysulfonamid XXXIXd byl syntetizován podobně jako v postupu syntézy sloučeniny XXVf, kromě náhrady aminu XXVd sloučeninou XXXIXc. Surová reakční směs byla ihned použita v další reakci.

Krok 4

H

N

XXXIX

Hydroxyamid XXXIXd byl oxidován na sloučeninu XXXIX s použitím Dess-Martinova činidla postupem popsaným pro syntézu sloučeniny XXV (krok 5). Surová směs byla čištěna chromatografií (SiO₂, aceton/hexan 3 : 7), za získání sloučeniny XXXIX jako bezbarvé pevné látky.

Test na inhibiční aktivitu na HCV proteázu

Spektrofotometrický test

Spektrofotometrický test na serinovou proteázu HCV byl prováděn pro sloučeniny podle vynálezu postupem popsaným autory R. Zhang a další, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268 - 275, jehož obsah se zařazuje odkazem. Test je založen na proteolýze chromogenních esterových substrátů a je vhodný pro kontinuální monitorování aktivity HCV proteázy NS3. Substráty byly odvozeny od místa P sekvence spojení NS5A-NS5B (Ac-DTEDWX(Nva), kde X = A nebo P), jehož C-koncové karboxylové skupiny byly esterifikovány • ·; · ♦ · · · · • · · · · · • · · · · jedním ze čtyř různých chromoforních alkoholů (3- nebo 4-nitrofenol, 7-hydroxy-4-methyl-kumarin, nebo 4-fenylazofenol). Dále je uvedena syntéza, charakterizace a použití těchto nových spektrofotometrických esterových substrátů pro screening velkého množství vzorků a podrobné kinetické vyhodnocení inhibitorů proteázy NS3 HCV.

Materiály a metody

Materiály: Chemická činidla pro pufry potřebné pro test byla získána od firmy Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri).

Činidla pro syntézu peptidů byla od firmy Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) a Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Peptidy byly syntetizovány ručně nebo na automatickém syntezátoru ABI model 431A (firmy Applied

Biosystems). Spektrofotometr UV/VIS Spectrometer model LAMBDA 12 byl od firmy Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) a 96-jamkové destičky pro UV byly získány od firmy Corning (Corning, New York). Předehřívací blok byl od firmy USA Scientific (Ocala, Florida) a míchačka pro 96-jamkové destičky byla od firmy Labline Instruments (Melrose Park, Illinois). Odečítací zařízení pro mikrotitrační destičky Spectramax Plus s monochromátorem bylo získáno od firmy Molecular Devices (Sunnyvale, California).

Příprava enzymu:

Rekombinantní heterodimerní proteáza HCV NS3/NS4A (kmen

1a) byla připravena použitím dříve zveřejněných postupů (D. L. Sáli a další, Biochemistry, 37 (1998) 3392 - 3401). Koncentrace proteinů byly zjišťovány metodou barvení Biorad s použitím standardů protézy HCV dříve kvantifikované analýzou aminokyselin. Před zahájením testu byl vyměněn pufr pro skladování enzymu (50 mM fosforečnan sodný pH • · ·* ·· ·· ···· • · ···· ·· · • · · · · · ·

8,0, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid a 10 mM DTT) za testovací pufr (25 mM MOPS pH 6,5, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid, 5 μΜ EDTA a 5 pM DTT) s použitím hotových kolon Biorad Bio-Spin P-6.

Syntéza a čištění substrátu

Syntéza substrátů byla prováděna podle autorů R. Zhang a další, (výše) a byla zahájena ukotvením Fmoc-Nva-OH na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici s použitím standardního protokolu (K. io Barlos a další, Int. J. Pept. Protein Pes., 37 (1991), 513 - 520). Peptidy byly potom sestaveny použitím chemických reakcí Fmoc, buď ručně nebo na automatickém syntezátoru peptidů ABI model 431. Nacetylované a úplně chráněné fragmenty peptidů byly od pryskyřice odštěpeny buď 10% kyselinou octovou (HOAc) a 10% trifluorethanolem (TFE) v dichlormethanu (DCM) 30 min, nebo 2% kyselinou trifluoroctovou (TFA) v DCM 10 min. Spojený filtrát a promývací roztok DCM byl azeotropně odpařen (nebo opakovaně extrahován vodným roztokem Na₂CO₃) pro odstranění kyseliny použité při štěpení. Fáze DCM byla sušena nad Na₂SO₄ a odpařena.

Esterové substráty byly sestaveny použitím standardních reakčních postupů kyselina - alkohol (K. Holmber a další, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410 - 412). Fragmenty peptidů byly rozpuštěny v bezvodém pyridinu (30 až 60 mg/ml), co kterého bylo přidáno 10 molárních ekvivalentů chromoforu a katalytické množství (0,1 ekv.) kyseliny para-toluensulfonové (pTSA). Byl přidán dicyklohexyl-karbodiimid (DCC, 3 ekv.) pro zahájení reakcí. Tvorba produktu byla monitorována HPLC a bylo zjištěno, že je u konce po 12 až 72 hod reakce při teplotě laboratoře. Pyridinové rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a dále azeotropním odpařením s toluenem. Ester peptidů byl zbaven ochranných skupin 95% TFA v DCM 2 hod a extrahován třikrát bezvodým ethyletherem pro odstranění přebytku chromoforu. Substrát

-292«.· ···· bez ochranných skupin byl čištěn HPLC s reverzními fázemi na koloně C3 nebo C8 s gradientem 30% až 60% acetonitril (s použitím šesti objemů kolony). Celkový výtěžek po čištění HPLC byl přibližně 20 až 30 %. Molekulová hmotnost byla potvrzena hmotnostní spektroskopií s elektrorozprašovací ionizací. Substráty byly uchovány ve formě suchého prášku v exikátoru.

Spektra substrátů a produktů

Spektra substrátů a odpovídajících chromoforních produktů byla io získána v testovacím pufru pH 6,5. Extinkční koeficienty byly zjištěny při optimální vlnové délce mimo vrchol v kyvetách 1 cm (340 nm pro 3Np a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím vícenásobného ředění. Optimální vlnová délka mimo vrchol byla definována jako vlnová délka, která poskytne maximální frakční rozdíl v absorbanci mezi substrátem a produktem (OD produktu - OD substrátu)/OD substrátu).

Test na proteázy

Testy na proteázu HCV byly prováděny při 30 °C s použitím 20 200 pl reakční směsi v 96-jamkové mikrotitrační destičce. Podmínky testovacího pufru (25 mM MOPS pH 6,5, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid, 5 μΜ EDTA a 5 μΜ DTT) byly optimalizovány pro heterodimer NS3/NS4A (D. L. Sáli a další, výše)). Typicky bylo do jamek vloženo 150 μΙ směsí pufru, substrátu a inhibitoru (konečná koncentrace DMSO 4 % obj./obj.) a ponechány inkubovat při 30 °C přibližně 3 min. Pro zahájení reakce bylo potom použito 50 μΙ předehřáté proteázy (12 nM, 30 °C) v testovacím pufru (konečný objem 200 μΙ). Destičky byly monitorovány po celou dobu testu (60 min) pro zjištění absorbance při příslušné vlnové délce (340 nm pro 3-Np a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím

• 4 4«

4 4

4 •4 4444

-2&3 odečítacího zařízení pro mikrotitrační destičky Spectromax Plus vybaveného monochromátorem (přijatelné výsledky lze také získat s odečítacími přístroji využívajícími spektrální filtry). Proteolytické štěpení esterové vazby mezi Nva a chromoforem bylo monitorováno při vhodné vlnové délce proti blanku bez přidaného enzymu jako kontrole pro neenzymatickou hydrolýzu. Vyhodnocení kinetických parametrů substrátu bylo prováděno v třicetinásobném rozmezí koncentrací (~6 až 200 μΜ). Počáteční rychlosti byly zjištěny metodou lineární regrese a kinetické konstanty byly získány proložením těchto io údajů pomocí rovnice Michaelise-Mentenové pomocí nelineární regresní analýzy (Mac Curve Fit 1,1, K. Raner). Čísla přeměny (k_cat) byla vypočtena za předpokladu úplné aktivity enzymu.

Vyhodnocení inhibitorů a inaktivátorů

Inhibiční konstanty (K,) pro kompetitivní inhibitory Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH(27), Ac-DTEDVVA(Nva)-OH a Ac-DTEDWP(Nva)-OH byly zjištěny experimentálně při pevných koncentracích enzymu a substrátu vynesením poměru v₀/Vj proti koncentraci inhibitoru ([l]o) podle přeuspořádané rovnice Michaelise-Mentenové pro kinetiku kompetitivní inhibice: ν₀/ν, = 1 + [l]₀/(Ki (1 + [S]₀/K_m)), kde v₀ je neinhibovaná počáteční rychlost, v, je počáteční rychlost v přítomnosti inhibitoru při jakékoli dané koncentraci inhibitoru ([l]₀) a [S]_o je použitá koncentrace substrátu. Získané údaje byly proloženy metodou lineární regrese a výsledná směrnice, 1/(K,(1 + [S]o/K_m) byla použita pro výpočet hodnoty K,*.

Získané hodnoty K* pro různé sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou uvedené v tabulce výše, kde byly sloučeniny uspořádány v pořadí podle rozmezí hodnot K,*. Z výsledků těchto testů je zřejmé odborníkovi v oboru, že sloučeniny podle vynálezu jsou výborně použitelné jako inhibitory serinové proteázy NS3.

» ·· »4 ·« *· ···· • · · · * · · · t · » • ······· .:..:1.294.:1. ‘

I když byl předkládaný vynález popsán na uvedených konkrétních provedeních, odborníkovi v oboru budou zřejmé mnohé alternativy, modifikace a jiné variace těchto příkladů. Všechny takové alternativy, modifikace a variace mají spadat do rámce a podstaty předkládaného vynálezu.

·· *· «· « · < · · ·

Λ · · - Μ .*-235;

···· ·· ··«· ·· ···* • · · • * · • · · · • · « » • · ·»

Tabulka 2

Příklad	Struktura	Mh
1	^νΧ°Χ o ⁰ ? <Ύ ΥγΑ□Λ⁰ > ° QÝ	691,7853
2	o T* i β β”1	627,7441
3	o jí X es	754,8883
4	rAp / ° \ <' · ?=0 o ®s	527,6259
5	9 X j-4 V ς 9 e O\	698,7799
6	0 0 <:	631,7352
7	^VyQ CH, 0 A~N Υχ s «X	381,476

• c ·· · · ·· ····

8	n A WC -Z~^N ,° o V_p 0 ,5	540,6626
9	·= /—x_^ CH	498,5813
10	AAn /-=λ i A Qo ^? i	633,7482
11	o I / A?^{K 4} Q-f „ ~ /T—* o o »· _e' \ ,» _'/ a ®s	641,7249
12	^.cA “· z-H 0 'o»,	641,7249
13	cop n? .^s·^ .^- “ Ά o > M	683,8061
14	a Q-t «^e «A’ vo r* v	637,7802

..· ,-:237 ·-

15	->^c /-o *S^C	637,7802
16	⁼' :^_u ,.P 0	637,7802
17	= z-A~< ó	626,769
18	•w~· r\ o \ i ý H.C-li *A—v I ° ΖΛ z,° ~· z-Aa '-yPr O	613,6707
19	íXq « U. ⁰ O-f ·= oH^j? ,· ^>=λ o	613,6707
20	l ⁰ <^\,? Z-H '· · -< X3	627,5978
21	ZVA Zk.· vo	609,726

•..•r:298

22	· A· A ,/ <_íZ HO	609,726
23	A V a \~_ζ 4?	609,726
24	=” _y~ s. >^e o \_/ ý⁰' /=° K3	611,742
25	^ν'’ά^«Λ^ v ' 0 M ^οΛ í ΗΛ	600,7183 -
26	0 N $ 'M.C	554,7361
27	i >/ ) r	478,5937
28	XOÍp °s (Sh H $ v	546,7132

• · -*PQQ ·- · · • · · · & · ·

29	ςηΧρ <=*! 0 Μ . •-cX <; MX	562,7562
30	O or^WA-, •iV ί-Α ®S ο^Λμ / H.C-y*Ss=O ©» J	699,8519
31	o 'ÁÍ 0«a í H.S	643,7435
32	NX, - O M • í w,c	> 509,6077
33	a£o Ar s >-- . ⁰ )-s 1 rx /— ' - »u^	637,7802
34	> 0 //“» 0 ^c+ >—* % v Ο-Ηχ³ ,=^Λ=Χ, =Ά=ολ	637,7802
35	yíXq ° \J-A°	579,6995

36	0 .0	537,6619
37	ο^ΓΛ O A 0 v . ⁰/j~t ry CH	539,6342
. 38	A «.<= A.L? o )—« O K ,°A-_W H,^OS	597,7149
39	0 JáA	493,6055
40	^H-% 0 Ος-^-Ν 0 A	632,8044
41	» ; \ 1 λ _> A o -<> °=\ M s w,C	747,8965
42	χγλΑρ A° Η.=^Ο\ J C^H isc-X^X^5,0 n í H£	523,6348

•4 ···· ϊ·3Θ1 -·· ··

43	°yQ Η,ς °S	598,7024
44	,<Υ £ HÍV⁵ OS	578,712
45	VS ο Ck/N 0 -£ \_Γ	495,6214
46	ο% / CM, o 9 ^C^^N ^sC x JI n x x ^v ° s a 0 M.C °S	627,7878
47	Q-l H ° Jt <4·~-*γ^ο ° ° 0	541,5501
48	p\ _H c Z = CDy° ° ‘ °Ί 0	543,666
49	«, 0 < 0 η I i ii „, <Α^”γ° » Ί 0	501,5847

• * • ·· ·

50	-r*	656,7394
51	γ ⁰ u χ°	578,712
52	J3c ⁰⁵ o—°S cX	725,8901
53	c^V- δ	584,6782
54	V· ° £ X	538,6467
55	Λ^ PP F h ΓΎλ ó T o X2c 0-4· °*> ch	635,8248
56	X °x χχχ Λ4^ό	527,6695

- 57		810,9557
58	ΟΜ = Α Ύ>Χ“ ΧΎ7*ό ο	552,6737
59	0 Ο	592,7391
60	α^:ίΑ ηΊ ' ο J ή	534,702
61	.Άλ C \	653,8232
62	ΑΑ^Χ^^'-'θ ^{0 0} οί 1 kc^--	696,892
63	ϋ 0 > 0 \χ4\>Κ^α ο ο αχ. ^Ά·	606,7662

71	• ’ό	746,9118
72	Q Ρ ΧΡό UL ’ ’ό	646,7935
73	^! ’ό	746,9118
74	ο—' '% νΑ· f . U >^CA η V“ Wu	668,8782
75	CH '7¹ A X . X ΎΧά 0 O	628,8129
75	« γ Ρ r , X ,=Ά 8 V	760,9792
77	X ,C^> 0 <V-« ΥύΜ óP	818,0723

78	,Λ	.£ Ο Ά’	761,964
	ο·, β ητ ι · η 1 ί	Ο /—< Γ* χ Γ 5 °*^Szt^s,x“Y 0 ο	li _ό~Ό	844,0702
79-
	c»S	h ρ 1—\ Τ' vxL/a 0	0 II ίί ¹ Ό	753,9443
80
		1 ο		844,0702
	ο Άγ-'οΑΑ os	f-\ »$ 'ΐΡ'] Γ* η ’ ^s ‘0
81
		Ί Ρ		753,9443
	0 OS	1 γ\ τ* ο xaL. J< Κ >< > 0	Ό
82
		ο		747,8965
	ο ^χ	ν?Ρ ο	W- Ό
83
	β A ’^'γ^οΑΡ es	Ί Ο J ί r~\ Γ* 'Τι**! ( ^β ο χΛ. 9 τγ >< ’Γ 4	<·ΛΧ ‘0	804,0049
84

·· ····

•-•307

85	'0	879,2858
86	o P o ‘0	823,1774
87	P A)~v_ct· SA χ-Χ 0^3 H_C O %—* w	832,0994
88	P '”Λ-« Vy 0 f\ a ρ SA K.C A O 'ŠV-* Vpó. 'όυ	775,9911
89	Α§Λ , ^! 0	725,8301
90	PC c r% / %-* M. _nc^! 0 V ° Tó	698,9483
91	OH >% o_x Ao X^-S. 0. ' ⁰ Wrt Oo	642,84

·· ···· ·* -·3ϋ8-··

92	<3 ΊΓ u I /Λ. ;1 ο ° Χ^..^ ®	t~< Γ¹° 0	Α	853,0995
		fi		789,9778
	ο ο<, β j'·'*	γά Γ*
		ť Ο	7»
		γ> 0	~δ
93
				809,9682
	° 9	—\ Γ*
	ρΛΡΤ	γ r ο J [ i	Γ⁷
	ΟΜ	ό	ό°
94
	,9	Ρ Ρ Γ*		878,8583
	χςταρ L ⁰	Α
95
	ο	Ρ		772,006
	<χιΧ 0	Ο Λ ₀ΡΡγΡ Ο	Γ 0
96
	ο	Ρ		761,9672
	11	γ\ Γ
		^Ύζ^- Ρ ο 1 >!	Γ
	CK, C	ΡΡρ
		0	0
97
		□η		728,85
	β ΊΓ	rV* Γ¹
		ι ^β	ο „ ”
	®s ⁰	9^ύ^>^ 'Ρ
		9	'0
98

·· ··

-*3t)9 --

99	Οη Ο α45 .	828,0239
	⁰ λί	<ε ο
			789,0334
		SA ο / ο	X
	XČÁ Οο
100
		kc . rA Ρο<	775,0063
	Γ	„U	r⁴ ο

	^Ύό	P-S Μ
101
			ο	886,1102
	α.	Vs o. γΌγ''
	ό „ i « y	<Α ο / 3
102	^Ύό	%
	XČ%		ΜΗ,	880,8306
	ο		-^=γΑ,
	ο* -		ο
103
				855,0718
	1 ] ο ΊΓ	Η r
		1 °	Γ
	° Ο i 0 ν' ®s	⁰ ο	Ά
104
	η	ΟΜ		790,7047
	χφτÍ	5.4
	ΟΜ	ο	0
105

♦ * ·«·>· ý··

-310 - ··

106	Ý~, hXAA—’γ^ ° 0	821,0543
107	Λ . =>S 0 ^! ‘0	685,7812
108	~ ¹ '0	891,8973
109	ΌχΧ Τ^Λα ~· ' Ό	775,0063
110	<XájX?Z ⁰ y^HX% ‘ ‘0	785,0452
111	o / « _s rC) y n>—x ?s vA K,^ = V' °	789,0334
112	„ ,-A ) %P⁵ ° r· \A η,Λι 0 Ví	803,0605

·<

¹ « * • · • ·♦·· ·· ·9 • ♦ · ► · ft ·· »···

-211 • · · • · * • · · • · · · ·· ··

113	X ο Λ>?ε - J ·Χρ )—^ΟΜ 0	862,4689
114	'X Ό -,Χ - Ο. 0	884,1323
115	X Ό ο ‘Xr-y oXVy ° φ - J ρ ΡΡ	889,5384
116	- κΧ5ΧΓ ? S? ^χάτΧνΧ “ · '0	887,1794
117	.Q£>~ χ Ppyp? r < ⁰ “’ Λο ’	831,071
118	X- Ύύ^ΎΫ í r ’ y«, ° Λ^γνγΧ ’ Ό	830,0863
119	0 v o ,J\. Js. -Αχ. Xos_xk. y^»s ^{0 a}o	858,1405

Ύ

120	Ο Ο	874,1399
121	ος ο _ο ο -•°^s fAr* J /A_£jp> ^-· ο 0	904,1227
122	^α 0 Τ'''’·' 'Y^J^XV^Z^^SO ⁰ ® χΖχ	929,195
123		873,0867
124	’ ‘ό	872,1019
125	op, Λ-Ο^ΟΟίώ,ΡΧ' ^{1 ;}ó	900,1561
126	• ΊΟΟί£·	860,11

127	fX 1$X? Τ' (^0 ok ·Α\ΝγΛ ’ ‘O	804,0016
128	O-oX^-Q¹^ p ⁰ o^í5^x^x><^í<^^M^^5řo n ii ) ’ Ό	803,0169
129	-SV- • '0	831,071
130	O - š ^á '0	806,0612
131	• '0	749,9528
132	χζ-^·, ’ΓΡ Η ? • '0	748,9681
133	J«A£layf~) =S ..Α^γ^χγγ^ • ’0	777,0223

	η η	842,1382
ο	'V· ^γ£·
134	•
		<	786,0299
135
136	c	A* i. ^Ύό'	813,0994
	a ^sS^xv^z^^x*^s· m	V I ° Ό	829,0988
137
138	^αΛ%& ⁰ * II 0	»4	788,0022
139	^a+WA ’ Xy, 0	YX’	815,0717
	,9/Pr -. · οΑΑ,Ατ- o	-ST _M 1 ⁰	846,1265
140

141	u·	790,0181
142	° Λ-γνγΧ, ' Ό	817,0876
143	• ‘0	833,087
144	,ο L .,=$ ^r» x^A,zx4 - ,χ-χιΡ μ—/ On,	911,2017
145	<o .i^í. ,-J · - v.· 1 f zr— ex, \ o / \\ • ^{0 v} Z \~-/ f^\ ³ °*1	931,1921
146	a _f ,9 QjPvyV^^tv^ yXo ⁰ 4 r ►SC—\	844,1106
147	X ° X X· ° V ¹ r³ H.C—S. . ®S	788,0022

• « ··

148	k O l O 0 / β <	815,0717
149	0,X Α°γγΧν XX °O	817,0876
150	'-•ΧΧΑ'ΓΤ	831,1147
151	_Γ. ΧνΧ- ~~τχ. · S„·	819,0599
152	Q .· A^;A. _νΧζ·’-γ^-Λ_ο ’ S “ •Ó '	833,087
153	n, WXS ^{s 5}'0	829,0988
154	Q o XvX A ’ Ό	845,0981

··

-·Τ17-·· ··

155 .	r° “ M,e—s. Oi,	816,0784
156	p °y— ⁰ ° i ° ⁰ Γ”	773,0125
157	AAS X p Q CVP^PX? '-Xj τ γ t - ir'=s V~P° ’ \ = t 4 Γ* H,C-\ =*>	787,0396
153	2 v p Q CPP^P.' = o 0 L 5 ó'-'c^⁰' v- ^e ! ,:-C CH,	850,0959
159	o qLjuiX yP° = γ “ = r	807,03
160	O Q <XvX^lP p yP° ⁼ V r^r ^M»^c'-N	821,0571
161	o qLjyP -<	793,9876

; · · · · · * · » · · « .

• · · · ·· »

- 3*Ϊ8 - ’·

162	qSXjY ΧΚ ’ V ° A	759,9701
163	A. .9 v \	767,9714
164	Λ 0 y—' 0 0 Q Χγγ’Ά_ν oko 0 0 / 0 1 Η 1 > ®s r° ^os	711,863
165	X rY? V\ o r\ Γ Y	712,8506
166	p Μ-/ ' V“\ P ^r r> X X 0/0 H,ť^\| O V	712,8506
167	p ^/Os Ύ 0 1 \ S~ °s τ p J. 0 / 9 Ά	817,0876
168	'Sv+X r P xX 0. ‘ ⁰ o -y-* ^Lob	817,0876

169	-Λ ο ° γ AS Op	817,0876
170	ο - / CK, ·% >jA γ □ Sa Μ C^S 0 ^<5^-* Zft	817,0876
171	_o».=~pos Ύ'ο^.Λζ'γ' ο -'.‘γ·-, ‘ 6	777,0223
172	ο ^Apjy. .... ' Α	777,0223
173	ρ Ζ Η Ζ \ Ρ^ο « X ο Υο 0?%	801,0882
174	0 ° ί Τ ΓΤ’ Γ- ⁼ΎΎ^^Υ < 5 ₌χ-^γο ·Α^γγ>„ ³ Ό	919,9515
175	A? χρΡΑρ • ‘0	919,9515

176	ο o, γ jj °	892,8821
177	ax/XXV-w% ‘ O	892,8821
178	“A-pos ’f) ' ‘^{: Ύ}ο'	818,0723
179	Oí, /~\ »,C-jJoH. \ ) v '. Χλα,^.^χ, ' Ό	761,964
180	.'XXk, ^sC) .Λ J 'S,-⁰' ·· Ύ^Τ^·	789,0334
181	s^TXx, x^aJA A °S o _οΛ_<^_γΛ.^-·._ΎΛ_ο ° Ό .	789,0334
182	? I^r\- f ° Ό	820,0883

	»S£· 0 OS	£«· O	763,9799
áá^xa 0	ΘΜ -ητΆ³ '0
183
	H,c-	A Ό		791,0494
	^γ~· oÁ-	Ao	SCs_Mx»S 1
	04,	o* '» *	A A
			0
184
	* A	A· O '		791,0494
	o	J ®S
	M OS	» 1 f »	*As„z»S
		_ι-^\ζ-^λχ_μζ>55>₃
		3	'O
.185
	>S-	A O		791,0494
		1 ry y Ol f S
	V os	° A- A J< ⁰ * :
			^só
186
		- O.		809,0674
	^A	A) ? Ί	>s^c'ys
	ó	o A AA z o' n ηρ N 0	ΆΆ° ’0
187
	CH	o, O		809,0674
	^A	ϊ7Λ	V-y=S
	ó	° °^^ΜΎ\| 0	Α<^Ν'^χχ^Χ5!5’⁰ ‘0
188
	CM	losO		823,0945
	° 1	ry^! ?·
		A X o
	0	° Α-.Ά'-'ΎγΑ Ό
189

190		823,0945
191	⁰ I f’\^s Λ ⁰ ° A O CM,	865,1758
192	⁰ ( Y\ ρ π-ΑΆ r í 4? ⁼ o os	865,1758
193	.· o r k Y' xA C l 9 o ^YÁ XX' Y^os	817,0876
194	jQ ') ·~τ'-ν' a>S \__i o* os X ^{1 0} >ss η o <»— PP XX H.C	817,0876
195	JQ X · Z-' r· A < *· -<	1606,121
196	_ z 9 x -Pí ·- Pk-í_: •M	1606,121

197		1638,12
198	.·ο M	1638,12
199	v^X'5Vx oř ° Ό	775,0063
200	•V-ίϊ», Ά) ’ -ΊΤΎ^’	775,0063
201	Ό ’ ^s $ - .Λ’γΑ^{3 3} ’ Ο Ο -'	763,887
202	0 = J = 0 «^W· r Ό ~	707,7786
203	''·/—\ ° ; γ fs °ό ‘	734,848

··· ····

- 324 -

	Q	Ω	774,9659
	V—ζ / ii	o a Ar o»
	r³	OS
204
	a	O	800,0139
	Λ. ! X—o · ®s	0 0 Af ( II ll <0 0 ©5 ®S
205
	M3		687,7971
	n N—A. / V—Á < <5 / 0 V r°	I T lí > 0 0 ®S
206
	i a		714,8666
	%_J ⁰
	_r³
	'©s
207
	©s fA⁰· ν-Ά· 0 ’’	O —1 o,, A.xx ' ^:ó	853,0774
208
	⁰ f r Ύ^Χ'-Χγ' ‘6	p. · I 0 Ά' Αν«Ύχ· ³ ‘0	853,0774
209
		811,0398
		1 A o
	Ů ’’	• O
210

·* -’5?5 - -

211	ο Γ /-' 'S cx, j> _ο 1 S ΛΛΑ^ ο ⁰	I rV^a O	811,0398
	-ScAA, Ο ό ·. -ν·^	γ* n \| ^c Ό	811,0398
212
	Q =% νΑΑ/”'-'' 5,·	^0 =·, “V¹“’ 0	817,0876
213
	Q os Vy- “V? ’^s-	í> Af 7' -'Ύ'Υκ, a	817,0876
214
		X^S. éČ5' ' MSř	835,1057
215
216	V -S o Vo < V K.c >V V o °J ° YM vsp-r)	630,8288
	OH v o r\ / v	616,8018
217	H.C _Q %J A u i! ? v	^ko

• · ·* -’326 - ·’ ·’

218	A o «, ^ΠΎ’^Υ'⁰' ι'Α A o < 0 0 s- IÍ °Y °S r° κ,ς^ςχ,	742,9208
219	•sej? A o n. ? „ j τ ? kc r· Λύυ * ιΓ ° v ³γ OS r° V^CN,	744,9367
220	.—04 ne r-ζ XAv )γ-^Ν - h,£L°s ° ⁰ =S	735,9694
221	ScAs jQ άΠη Λ ° 0 Αγνγ^*,	853,0774
222	=3 9 Γ iΓ^{1 5} ^₃aA/7 a . ° _α ⁰ Ό	809,0862
223	Η ^MC yXO CsAx o x cl	749,9965
224	O-Ot, >% 0 Ho C γ-? ΉΑ «,<<, 0 V« °h.H°sH /* oC VA =*,	612,7703

• ··©·

-•S27 -

225	OH hP y-N CH. H.c\ 7 xU o ! o H,cr η o p-N	598,7432
226	H,C PS •Τ' Q ^^O'^í*YS'^Nx^yr^N''^>> ϊζΖγ^ο⁰ V °γ^Ν Z r°	758,9638
227	Z ° ^CV^{N CMj} l r³ K,C^OS	684,8401
228	-TC 0 γό· O ©S *1°“ Y-4 o ' o M,cT N 0 %^-N xZ0	758,9638
229	O CK 0ý X> yA 0 r T >Á Vpó V5pV£,	758,9638
230	π, θ’. \ SO^ch, \ ) o 1 ,—“^s °s rAy r s .00 0 °° ' ϊ- γ;	795,0404
231	O\ /“\ o I f v* °s 0 '^p·	795,0404

232	q r	o o \ΛΧΧ <>T ⁰ í 1 °	624,7815
233	>-o\ o 'X··“ Ύ X	0 0 J 11 i 1 o	610,7544
234 .	n^sP /-®s 0 CV XXCír +[ ⁰ΟγΝ X	O X xA-^-LV'“. 1 o o	770,9749
	Λ«;	c— CM, x o A kcJ y-N + \ 2 o / 'ó 3	612,7703
235		x'—\ ⁰¹ • νχ =«,
235	X X+^! V Η,^γβ ^M»^C CM,	'T^t o C 'Ά <X ywX <0 0 A.,	722,8369
237	CH / hx A ‘ \ o_v / O H,cJ %-~^N CM, J*». c /^0 > 0 V^N XX^AjX, <=s	598,7432
	CM, β Γ r χλΧί ».c 2 0	o “Τ’* °*> Xv·· • '0	795,0592
238

239	A ρ b r ₀;V= H,c □ ·ν-« <=*»	758,9638
240	⁰ ZAjA.^y^₀ • Ό	839,0414
241	9 Ρ = Λ cX·¹ 'v	729,8375
242	hC ., x<> ' \ o ! 0 / H,= V o ^o^' °	756,0443
243	by / \—o« ^H,s »^ρ» -Λ Ρ Η ~ΐΡ, Cx ^{1 0} ^M’“ γ ’ 0 V»«	701,9518
244	H»C >-P -C-A^^S 0 ‘ ⁰ ^^7 o <v-* vyM	734,0159
245	^Vps /^M**\^OH ,6. « Γ^* Vv ⁰ o b xé%	715,9789

* ··· ·

• · · · 9

370 - ” ··

246	xí .. Ύ ο V	715,9789
247	/—Ο γ4 # \ Ο V” Ύ'Ύ^ώ	741,9951
248	η ό ΟχΧσχ ° οΑ^γΑ»-γ0, • '0	821,0786
249	_HC0 ^Hi^C \ 0. / Ο ) S>-N Μο 4. 0/0 Η.Ο η 0 0-Ν XXX ®S	626,7974
250	CH, _Ζ ^ΟΗ , X H.C > 0 -A— N i „ H / jy x «Ύ-Η ^v «, - \_Χ=η, os	612,7703
251	Xy4> £0X ° X =γ °S r° ^^cm,	698,8672
252	0 0-i 0 O ⁰ £ ⁰ X °Y* °S X	674,842

···»

331 • 9 • « • « « ·· ··

253	£<A= ° ° °γ^Ν r Η,σ^ΟΗ,	584,7162
254	H,SVo, %J ° XtÁ)	735,9694
255	yr ~ ' -<. <=> ρ ·Ρ o A . Ja L^AA O\	772,9909
256	. /-O °\ o p. A^! · v	776,9383
257	KC P \ 0 'Ά / V- P YÁ A. o / o Η,<Ρη o P--^N °γ·^,<Α.Ρ ⁰ A-~ '—/ H,C AP A	626,7974
258	/°-O <Γ (Pj o ^U^AxX A· 1’ r°	835,0189
259	/-O 9 . .Ά AhťPP’ -o-* ’ -<	835,0189

• *«·« ·· • · ' · ¹ · a • ·· · ·

- 532 -

260	,ν· νΛ)	612,7703
261	*-.c-£.os Λ¹ °s ° oX-'S₁X-''y”y^j% ¹ Ό	636,856
262	λ?2λ, ,<·% rX ’ ^N ° ⁵o‘	686,856
263	vK ,.°s -.«γ-Λ Υγ Λ ύ~· ’ ”Q	686,856
264		686,856
265	-A κ,ΓΎ^ο > °y Y r° V'''·».	742,9236
266	,<\ ⁰ í ^/~*\_j/^^s	738,9325

·· • · <···· • ···· ••-733

267	i. ί ΑΧγχ ' Ό	738,9325
268	h_c ^&·< y-. 0. xPvyV^yxx; xp p (V r	817,0444
269	Sr-y% χ·^Λ·ΎΧΧΑ~-'Χ ' ‘Ó	738,9325.
270	C Cřt rPV z^X C_x ! ^XC H.C X o X—*< ΥΫΧ «χ-'-χχ ^x°s	772,3909
271	»,=-s.os Ά ⁰ F r~V* Ύ~ο^Λ»Ατγ f; =s ’ Αγ.~γ, ° Ό	795,0592
272	>=0/ / ^ o °·. d J >— o 0 \ ' U ” < ⁴ ’ M CH. xc-P ť“ i '* ^{H !l} XA ° Ϋ Ύ X X	758,9638
273	K,C ,°S ιΓι 0 ί J >—, β β ΊΓ 0^1 ₅^X^X0° γ X i V =>S	810,9966

..‘.:384 • ·

274	CW, o-⁰⁴· < \4° x»*x>. o. / o κσ A o n °s	610,7544
275	^CH1 ,^OH , Vr' A <k t ⁰ H.C η 0 X— N vvM =H,	596,7273
27S	o ck. s O r- 4 A. o. i o WX o$	756,9479
277	0 o< o< >*—·. CM» VÁ O ,4 o Jr° ' cx,	756,9479
278	o rXx 0 r\ á^z (/ o / 0 0 'Ši—M ° x x-^s 0 o	744,9799
279	4 i li £4-^0 ° V v r h,c^os	698,8672
280	°Y °S X	698,8672

• · »365 -

281	γΥ *I^C ok® 0 HO ° 1 OS	709,8471
282	H.C Pl •y—. Y<A_O° < = V A X	598,7432
233 '	X~· ' 0 _c ?>9νγΧχ^ o<0 0 1 Ά +», -,0^0.,	810,9966
284	-s=A n O - _N s „ s i ~ «? Yy yy^” ά Y °Y A r° *Y^=>S	758,9633
235	vj? o ζγ,,^ϊ Y.4CY Χγ= ° γ °^^w Yx, X,	742,9236
286	_ , Ο», Ύ», _x r· ΥνγΥ^-ΆΎΡΡ γτ- χ ΟΥ I·#'*'·®,	817,0444
287	Λ Y^l Y ό· A	817,0444

288	⁰ _v χδ Τ' >X\| o ° XA	759,9526
289	^QydX< :íV o ° S^g ΟγΝ CH.. H.C ’	494,6367
290	o χ_,~.. X vⁿ° ’ '“ Xo 0 / 0 o ^Μ>^ίγ^Ο'γΆ-^	719,9263
291	H,C ř”> A . =0 χΧ/ΧΧ“· X	731,938
292	o ζ ps >% α Xo c/X o_K / o 0 V-* ~Έ?+Ο	677,8887
293	ζΑ JWX κΧγΆ ° > v* X r° H,C-^CH,	612,7703
294	-A q .Xy-U X^SY . V⁴ X X	612,7703

-•δβ-7 -

295	q, os Ογ γΟΟ' S L ž I v o ó X .	716,9261
296	Τ' Q (XnJO\A/X v °Y^N Y r° M,c^OS	717,9109
297	H,C ,°S _ • On ctxj OzO_xrxOⁱ V ° X	950,0884
298	y<=s < , r-^. II A ) ⁰ \X u g V YrÝ)	729,9221
299	«3=^0-, VvOO.=, k= ιϊ iY ⁰vv s °V v y os	578,712
300	Vs^CK. dxj W s⁴ °γ^Ν Ύ Vos	564,5349
301	o ÍL J o q (XtXv PS lil T U V «v °s r° tSC-^CH,	703,8838

·· 2*338 -

302	O ΧΑΧΑ CQCí v	553,7021
X .	®s
303	YU o ςγ °^ⁿ Z	_o »Q Λ^ΧΛ» X ®s	703,8838
304	A xA' 1 r° H,cX	0 JX^ i “ S° <x	552,7173
	v		523,6756
305	XAV í R ΗΧ^γ^Ο °γ^Ν A CH,·	0 yx K ⁰ X
306	χΧ, 0 CA~ AA° ¹ ΟγΝ r	r~\ = 0 V xxY ť	731,9783
	^v^&-·		509,6485
307	z CK N X A-V Y ' CH,	A
308	X A °S ť «-.X L o “,Χ-Χ γ £X° =>S	ΫΤ	508,6638

’· -·0·39 - ··

309	M.C ο Ο^Ν ΟΗ, Η,ΧίΧ,	731,9783
310	ζΑ Ο^Ν W, (^Ο	667,8503
311	° < ° ο^,ν «, 1 r° Η,σ'-'ςκ,	667,8503
312	M.C Ή ΥΥΡ V Á Γ° KC—\ ch,	567,7292
313	Ρ] ΑΑ □ ο γ «, CPhPPP JLa«> Γ> \|Υ i lf * Η Ρρ ⁰ γ ⁰°γ” Ρ	724,9054
314	Ρ PAA ’ ’ V «Η»	724,9054
315	^Cx/°Y Α Ο Γ~\ ? ° ?** „ fYYr^</szy^<'^w- Ρρ^β S^c °γ^Ν (° Ύ··=»>	762,9736

316	‘Λ _c, ^^c>-z55· ° \ 0 0 ι^- Ί °γ- X.	764,9896
317	Ά /=^ ΑααΡο =*> ? ιΓ ι» ιτ ° S⁰ =<Χ <=s Η,ς^ΟΧ,	764,9896
318	Ά ' η ο »αΡ γ Μ,Ο-— Α> Ο V ⁰ 0 ^Hl^C \| i V A / H,C‘^Z^CH,	764,9896
319	kAa γΑ=⁰ γ «.c^os	908,0734
320	τ . , 0 - ΓΛ _M ° „ ’ i O ΥΎ 0 \ 0 0 Y °X 'z	724,9054
321	νγ l^^c > o^x «, ! KC-^y⁰ Κ.ΫΓ •	508,3538
322	Ja Η,Υγ^Ο η γ =», CK	522,6909

323	«.χ’ΑΑ’'⁰·’ ΟγΝ CH,	522,6909
324	ta.e «*» '9- o J-.9 ^7k9x₌ ⁰ s ⁰ ° Y .. A r° MjC^^CK	731,938
325	0 CM, Y w—< CH, □ A A x,\__\=/ «Υ s V- ³ taSá ^Chi 0— CH,	744,9367
326	o A A A ’ C YP 'T” °<S^Z^N 1= CH,	727,9102
327	«í” O - AyV M °γ^Ν A ,x	567,7292

·· ·· ·· ·· ····

328	r .	584,8029
329	Π Ck^XXXU λΧ XyA₀ ⁰ Μ ° ^=Μ, JŽ	726,9214
330	· π ' <χ .·. áxáXAs «,Ά * ° <Τ^^Λ'^ν ο Η,Ρη-'^ο η Ύ X X	726,9214
331	'V' Pí ζχηχ υ °%x ^=χ, X	726,9214
332	V* ρ ΧχΧχ ΡΧΑ⁰ γ Υ χ r H,C^x'T*^CK, CH	740,9484
333	Ο CH, ,·χ ’ χ° X) V Τ' X/ Ο /Χ . H.C—f 0 <5>-Η X-yAX ΧχΧγ,	688,8284
334	JŽWA- °γ ;χ V ος	564,6849

335	V CH,	550,6578
336	J-Γ •Α·ο v y- \=/ V* »k Αλ, n,e--< p “«i-Aos^—C 9 ' 4	820,9918
337	π _n0yJWX^ °γ^Ν Υ-χΑ «,= CH,	710,8784
338	w~yv ^y-VV⁵ °S O .i / o\ °s	. 746,9089
339	^N'V“'· A ° V ° °γ «s X *S^C o$	710,8784
340	/-Y/-⁰'⁰' jAv tSC^CH, OS	590,6823
341	^VA Λ ’ ϊ V ™ 'zMvVkA„χ^, ^ΛαΓΥζ V 4 X	716,9261

• ···· ·· -·θ>44 - ·· ··

342	β Ο». .Ν ks CX Η,σ-^οί,	539,675
343	ο ,ο$ Αν Ο ' /^Ζ υ H,C W <5 ! 0 H,C-4Z λ <^-Μ ®S	772,9473
344	HC χ ν^Λ t) Ρ*. ^Μ>ΧγΧ □ °Ά~ν ° ΥΫΫ> ΑΑΑ cm,	731,938
345	ΜΟ “ο A ο ί^Μ> ^Η’°ΆΧ 0. / 0 H,C Α 0 V--* ⁰ CH, CH,	731,938
346	ΜΟ Xr^A CH, H.C-A/ x-L ο. / □ H-C > 0 '^--Η υΧΛ •.^•‘-Vp·. °*Ί	731,938
347	Vy«, ch, 0>A'Aa~'^^ch= y °y^N A V H>= CH,	546,7132
348	rsOvvSAAr^· ° y ° °Y* A Ά *1= CH,	606,7662

-···’··

349	ATt °yⁿ b V H.C 'ch,	578,712
350	Y ος CH,	564,7722
351 '	'Ρϊχχ °Y'^N b CH,	548,7291
352	H,°_y ^CH= V - CH,	562,7562
353	Y*¹ /. ος ybbTr γ Y 5X° OS	642,8432
354	Cb-ΎΥ^ Η,οΥ ΡΥΥ ’ A-V v O^N CH, «,	536,718
I 355	yyO ;Y^₌ S T T . °γ^Ν b HC-—x° HpT CH,	574,7673

356	Χ“· Π Xx ^>4 Ο < 0 ČK ⁰ K,c ° l Y °S 0 H>- CH,	726,9214
357	h,' £>0o⁰ V ⁰ *»^C CH,	726,9214
35S	Vy°S £X0o ⁰ V °γ^Ν = X<^O v «,	530,7279
359	04 o o ΧΧφΧχ °0 °s v H>= CH,	639,799
360	CH, ΟγγΧν®· •X/^ ° L = S<Y0 4 V Y £0 “S	538,6902
361	k,=0 γ 0 Y° os	562,7562
362	0 000X V X OS	566^7444

·· -·347 - ·· ·’

Tabulka 4

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
CM, -A T’ L^;—í ri,C Pp p 0 0 ⁰ θ =^Η^γ^Λ'χ^γ^Ν'0>₁κ,	iBoc-G{Chx)-P(4t- NHiBoc)-nV-(CO)- G-G(Ph)-Am	A
OX3 $ΑΆ~5? j£x ^x ⁰ °O	(2-CO2)PhCO- G(Chx)-P(4t- MeNHC0Ph(3- OPh)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	A
Op o** _%N CH 0 ,-f CM, Η,=~Υν Τ I S ? ⁰ Á ^YvyZ», u · -q	iBcc-G(Chx)-P(4í- NHS02Ph)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	A
9 -.=^v9y λ ^i, u · -_o	iBoc-G(Chx)-P(4t- UreaPh)-nV-(CO)- G-G(Ph)-Am	A
9 J CK, ⁰ [“ ť CH, •yvAV Z 8 i ^{u !} ’ó	iBoc-G(Chx)-P(4t- MeNHCOPh)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	A
o 1^,0 X’ 0. X ^H-^c Ά i π i ° °o	iBoc-G(Chx)-P(4t- MeNHS02Ph)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	A
CTO •'^Τ'ΖΖΧλ.-υ-Λ.., U . -_ó	iBoc-G(Chx)-P(4t- MeNHC0Ph(3- OPh))-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	B

• · ·» ·· ···· • · · · · · · • · · · · · ϋ4δ - ·· ··

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
9 X-P jP 0 0 o^OH ° XS ο^Λ^ν-ΧΖ^ΗχΛ_ΗΗ]	(2-CO2)PhCOG(chx)-P(4tUreaPh)-nV-(CO)G-G(ph)-Am .	C
XV» (X N ch, 9 /—δ ^ch3 i ° ° ⁰ X\| o^AiAxrxX· ^u · °&.	iBcc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(4Me)Ph)- nV(CO)-G-G(Ph)- Am	B
4 • Λ •^ΧύΟ'' ”0	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(3CI)Ph)- nV-{CO)-G-G(Ph)- Am	B
'YXL,, s u . »θ	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(4- NHAc)Ph)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	A
”4- •xxA-xv o ·	ÍBcc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(3,4- diCI)Ph)-nV-(CO)- G-G(Ph)-Am	B
co N CM, 0 /—<* CM. „XyX-Q 0 „ u · -_o	iBoc-G(Chx)-P(4í- Urea-1-Np)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	B
4 ^Λ<24χ. · Ό	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-2-Np)-nV- (C0)-G-G(Ph)-Am	B

·· «« ·· *· *·»ι • · · · · · * · 4 • · · Α Λ Λ · · · ’ ···· ««-·3Φ9 - ·· ··

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
Χχ» CH- Ο /— '»·' CH J ₀ ⁰ Αι _£Π>τ-'·^0χ,τ'~γΑΑΝΗ, u	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(4CI)Ph)- nV-(CO)-G-G(Ph)- Am	B
Η.. υ · ·0	ÍBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-5(2,3- dihydrobenzofuran ))-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	B
0«. ----- -5— “Ό.. S^T „ J_F~\ ?^Η· η,ι'^^'ΧΆ^ Ά < = Ο ⁰ ό	iBcc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-6(4- OMe)Courmarin)- nV-(CO)-G-G(Ph)- Am	B
_xiH, ό 1 U ° °ο	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-Ph(4-OMe))- nV-(CO)-G-G(Ph)- Am	A
ό ι 1 CH, « /Ή ^c”» _ΜΑ-γ/-γ Η 5 ° Ό-ν·^-	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-Ph(4-C!))-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	B
ό Ύ 1’ „ .^Axýj”' ^Á] Π-%Α~“γΉ ° °0	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-Ph(4-C!))-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	Č
ό ι »^3 Η ^e*» η ί~~f ί”’ •‘-^Ύ'ΑχΖυ-^Α.., υ ^!ό	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-Ph(4-Ac))- nV-{CO)-G-G(Ph)- Am	B

*· ···» • ·· »· ·· »·«· « · * · * · · • · · · ·««« • · < · · ···· · • · · · < · *· · ··· ··<· ·· -·§Φ0 - ·· ··

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
'ΆΑυ-;-	iBcc-G(Chx)-P(4t- Urss-Ph(4-Ac))- nV-{CO)-G-G(Ph)- Am	B
‘Ά- ⁰ zS Α^ΑγΑ», ° °Ó ..	iBcc-G(Chx)-P(4t- Nh’SO2-Ph(4- OMe))-nV-{CO)-G- G(Ph)-Am	B
ou ° °ó	iBcc-V-P(4t- NHSC2-Ph)-nV- (CO>G-G(Ph)-Am	B
Qf CH. 0 /—< CH, .ΆΡΙΑ í ⁰	iBcc-G(Chx)-P(4t- NKS02-1Np)-nV- (CQ)-G-G(Ph)-Am	B
n Q> AA? Λ ^! ž ΛΑ,---------- u . ·_ο	iBcc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-8- Quinoline)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	B
X¹ η,= Ύ γ ř K* ^Zz ^CMl zAZ ZpZníA'’, u ·	(2,5-diFA C02)PhC0- G«Chx)-P(4t-NH- iEoc)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	A
a,. - „N ° /—n ch, A\A? >; Zc.^a η, ΖΑΡ^ύΖη, u .	(2,5-diF-5- C02)PhC0- G(Chx)-P(4t- NHS02-Ph)-nV- (CO}-G-G(Ph)-Am	A

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
CH, I =. Ύ° ^cXX_r-_Ti-C'' Λ . Y° γ. A .	(3,4-ďiCl-6- C02)PhC0- G(Chx)-P(4t-NH- iSoc)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	A
Ύ-..Υ-0 j“. _f oXh° Υη οΧ»ΥΥ.-~γ^Ν>Χ»Η. A · · 6	(3,4-a'iCI-6- C02)PhC0- G(Chx)-P(4t- UreaPh)-nV(CO)- G-G(Ph)-Am	A
Qr’ M-^.0 _%N CH, 0 /—f' CH, .YvYý > 0 , ⁰ (Ϋ AVvY- o =_o	ÍBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-(3-C!)Ph)-nV- (C0)-G-G(Ph)-Am	B
O oY CA »^N V ^{0 0} O^OH° r^S o^N-^./^y\A_NM. ^u ‘ Ό	(3,4-diCI-o- C02)PhC0- G(Chx)-P(4t- NHS02-Ph)-nV- (C0)-G-G(Ph)-Am	A
Pj ch, Vii o o γ² YyWY Ό C	i3oc-G(Chx)-P(3,4 iPr)-nV-(CO)-G- G(Ph)-OH	A
γ^Λ^Ατ'Υγ^Χ CH, 0 0 k 0 0	iBoc-G(Chx)-P(4t- Chx)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	B
OS 0 0 γ 0 Ot	iBoc-G(Chx)-P(4- diMe)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	A

-·3$2

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
CH, O 0 L O 0 CH,	iBoc-G(Chx)-P(4- Bn,4-Me)-nV-(CO) G-G(Ph)-Am	B
,02 . ,0 CHj 0 0 l 0 0 CHi	iBoc-G(Chx)-P(4- spirocyclopentane )-nV-{CO)-G- G(Ph)-OH	A
X%X-x • ’Ó	iBoc-G(Chx)-2- Azabicycio(2.2.2]o ctane-3-CO-nV- (C0)-G-G(Ph)-Am	B
qX o χ/ΧΑΑ'αΧ⁰' o 0 U 0 0	iPrOCO-G(Chx)- P(4-0tBu)-nV- (CO)-G-G(Ph)-OH	A
Q Q νΧγδχΧν ^{0 0} 07	Neopentoxy(CO)G(Chx)-P(4-0tBu)nV- (CO)-G-G(Ph)· OH	B
oOa , »9 OS 0 0^0 07	Neopentoxy(CO)G(Cbx)-P(OH)-nV(CO)-G- G(Ph)OH	B
07	Ethoxy(CO)G(Chx)-P(OH)-nV(CO)-G- G(Ph)OH	B

-3S3

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
0 θ Vn ο ⁰ 1 J HC °Κ£ ⁰ \ /	iBoc-G(Chx)-P{4,4 diMe)-nV-(CO)- GG(Ph)-N(Me)2	A
Α Π Χγνί Ό X °	ÍBoc-G(Chx)-P(3,4 iPr)-nV-(CO)- GG(Ph)-N(Me)2	A
0 ΛχΧ χ: οχΑ	iBoc-G(Chx)-P(4spirocyciopentane )- nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A
1 1 H.C/ *i^{c 0} < 7 ch₃	ÍBoc-G(Chx)-P(4cMe,4t-Pr)- nV(CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
0 Ο\ ° Ν Q CK 'ό'ί Η)	ÍBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)- GG(Ph)-OMe	A
Φ) θ Vn 0 0 CH, X-Xb	iBoc-G(Chx)-P(4spirocyciopentane )- nV-(CO)-GG(Ph)-OMe	A
ΧγΧγ/χΧ·- °ό· £	iBoc-G(Chx)-P(3t- Me)-nV-(CO)- G- G(Ph)-N(Me)2	A

·· -&54

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
₀ 0^H^ ₀ 0 O, 0. O^J 0^ <X CH,	iBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)- S(Me)-G(Ph)-OH	A
.Ογ ₀ Ό P ° ° γ °	iBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)-S- G(Ph)-OH	B
.Ογ o „Q •'Υ'ΛΥχγΥ'Υ“ CH, 0 0^0 0 °S	iBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)- G(Ac)-G(Ph)-OH	C
Q γ _o 0 Af-WYY ⁰ 0 ) 0 0 &,	N-Me-G(Chx)P(4,4-diMe)-nV(CO)-G-G(Ph)C02H	C
a,,. 0 0^/0	ÍBoc-G(tBu)-P(4,4- diMe)-nV-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
0 0 ‘χΑγΧγΧΥν O, 0 ⁰ 0. 0¾	iBoc-G(Chx)-P(3,4 (diMe- cyclopropyl))- G((S,S)-Me- cyciopropyl)-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)	A
c CH, 0 0 } 0 0	iBoc-G(Chx)-P(6S- CEM)-nV-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
CH,	iPoc-G(tBu)-P(4,4- diMe)-nV-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
0 O ^ΑΑ_ί^γγ^!<ΑΑ_ί'% CH, 0 0 ) 0 0	iBoc-G(Chx)-P(6R- CEM)-nV-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
yY CH, 0 0 0 0 OH,	iBoc-G(tBu)-P(4,4- diMe)-l-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A .
os	((R)-l-Me-iBoc)- G(Chx)-P(4,4- diMe)-nV-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
os o ₀ o	iBcc-G(Chx)-P(5- c/t-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-C02H	A
oooo^	iBoc-G(Chx)-P(5- cis-Ph)-nV-(CO)- G-G(Ph)-C02H	B
υ-ΛαΧαΧ^· 1 0 o f 0	iBoc-G(4,4- diMeChx)-P(4,4- diMe)-nV-<CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
i 0 0 { o 0 ·	iEcc-G(l-MeChx)- P(4,4-<3iMepnV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
¹ o o k 0 0	iEcc-G(Chx)-P(3,4 CK2)-nV-{C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
••'X-pYA,,. “' ' fA P H,C H—/ CH, 0 'CH,	ÍEoc-Chg-Pip-nV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	C
Ap^AA-XP 9 °	iEoc-G(Chx)-P(4,4 ciMe)-L-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
pxXPXaAz o o o o^l	iPcc-G(tBu)-P(4,4- áiMe)-L-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
YYXPPaYý ° ° ° ⁰ PA U	iPoc-G(tBu)-P(5- c/t-Me)-nV-{CO)- G-G(Pn)-N(Me)2	A
	((R)-l-Me-iBoc)- G(tBu)-P(4,4- áiMepiV-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A

• ····

-357 - ·’

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
¹ 0 0 k 0 0	(S)--í-MeiBoc- G(Chx)-P(4,4- diMe)-nV-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
	iBoc-G(tBu)-P(4- cis-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
	iBoc-G(Chx)-P(4- cis-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
ΧχΧ	iBoc-G(tBu)-P(5- cis-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
XwX 0 ° r ⁰	iBoc-G(Chx)-P(5- cis-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
' 0 0 k 0 0	i6oc-G(Chx)-P(t- 3Ph)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	B
OO^O 0	iBoc-allo(lle)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
	Ap o · 0 \	pp	2 0	ÍBoc-G(Chx)-Pip(4 morpholino)-nV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	B
	A i		Ά	iBoc-G(l-MeChx)-	A
c	x—		A	P[3,4-{diMe-
0		0 0 LPx	X	cyclopropyi)]-nV-
'^Vj^z^^sO^XK'	Ύ l\		(CO)-G-G(Ph)- N(Me)2

z			•p	ÍBcc-G(l-MeChx)-	A
o<		L -j Π		P[3,4-(aiMe-
γΆ		Xa	cyclopropyl)]-L- (CO)-G-G(Ph)-
	Ί			N(Me)2
				iBoc-G(tBu)-P[3,4-	A
ρ<λΧ	P	(diMe- cyciopropyi)]-L- (CO)-G-G(Ph)-
	2	0	0	N(Me)2
	p	ff	p	iBoc-erythro-D,L- F(beta-Me)-P(4,4-	A
A		γ*~Ά	p	diMe)- nV-{CO)-G-G(Ph)-
□ _opr		0	N(Me)2
	v		p	((R)-1-Me)iBoc-	A
X	Ay	γΑ	2	G(1-MeChx)-P[3,4· (diMe- cyclorpropyl)3-nV-
0	° r	0		(CO)-G-G(Ph)- N(Me)2
			γ	iPoc-G(tBu)-P[3,4-	A
A	<0	Γ’ XP	(diMe- cyclopropyl)]-nV- (CO)-G-G(Ph)-
	o O /	0	0	N(Me)2
	0¾

’-&59 A.··..'

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
	pi	(Λ			iPoc-G(tBu)-P[3,4-	A
	b	l			(diMe-
y	i \ 0	ui		cyclopropyi)]-L-
		P	Oi	(CO)-G-G(Ph)-
0	0 j 0 Hpl		0		N(Me)2
	Oi
					ÍBoc-G(tBu)-P(3,4-	A
H.C	,cn .xA	o	b		CH2)-nV-(C0)-G-
		n		b	G(Ph)-N(Me)2
OS	0 0 ζ os	0	c	5
			y		iBoc-G(Chx)-P(3,4	A
syJJ.	ftv	( 0 yb	y	Ύ	CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2
CH,	o ° ζ	o	0
		íi	y		iPoc-G(t8u)-P(3,4-	A
CH ob	o	Π 0	y	ch,	CH2)-nV-(C0)-G-
ΑΛΛ	bjvA		tf		G(Ph)-N(Me)2
c	° /	0	o
	\
		fl			((R)-1-Me)iBoc-	A
,α’ΛΧ °s	0 0^/0 °S	o	.	G(tBu)-P(3,4- CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2
r			Y		((R)-1-Me)iBcc-	A
rx 0 ν'	Jxl	o¹	r		G(1-MeChx)-P(3,4
ybV ,	cný / _f [ ó o ζ OS	_Yb, 0	i c		CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2

·· ···· ··· ···· ·· ··

• · ·· ····

.a-PYxV' £0S ° ° »γ^Ν HjC^.0 H,cYT CH,	479	B
^H:0 Ογ^Ν Η,^^Ο ' H.Crl ³ CH,	v,	507	A
H,= _V=H, Π0	J0X; ίο'
I I HjC^I = H,	CH,	521	A
Ύ“>	JU,
f[ \|H o o i \X // Η,Χ<	T » < 0 1 CH,	612	A

^Hj^Cx^^CH3
k Z X	0”·	533	A
Η,= _χ=Η, X0n °r^N Η,σΓ ’ CH,	•V	569	A
v X	S. o	557	B

·· ····

-*3δ’2 -

α£>	521	C
V Υ	555	Α
ΡρύΥ γγοΑ° Η° Λ ο /j\ · ¹	497	C
-yyz< γΤ X	569	Β
αγπγ Y“ Υ X ** ix·	533	Β
γΆ Α	519	C
OÁ Τ ι ιι X ο ·	621	Β

····

- 364 -

γ αγψ Χ^{Ν 11} Υ	519	Β \
γ ‘A“	535	Β
H,C_y=^H, .. ρ.9υΑ »,=γγο γ_Η] =- CH, ’ <=,	523	C
Η - C*i ^Η·-Χ/ ’ \ ο V ^ΗΧ ^{Μ JW} CH,	493	Β
»--X^CH> V^* 1 ^κ;χ° ^Mi^u CHj	547	Β
Ύ Y ''^ ^HAy°	519	Α
νγ γ· ·Α° • %	505	C

«· « · • ···· ·· *· ···· * · • · • « .· · ·· • · ··

v Ογ-Ν řtó	X CH,	494	B
	0
X? i 0 /V	J1>*L \ ⁰	480	B
ΟγΝ •Μγ* «1	os
V
χΑ, ° v r^N CH,	0 >m. v CH,	466	C
«Λ/*¹
v ^Xz°	X	493	B
°s
H-%0	0
CjvJ	0	505	B
v r° OS
n+V
ojny	491	B

η - CH.
CX	o ^AvÁs/¹’¹»
	η T ií o V o	541	B
Ογ,Μ »1=γΧ° CH,	CH,

• · · · · ·

-.366:«

í- Z t>	478	C
v X	555	B
ΟγΧΧτΤ X	554	B
^h’V^h‘ í-AVxV' 0 - 0 Η.='η^ ⁰ °*γ-^Ν ^H,= ^° h,cX CH,	465	C
W.C .°^-½ * Ϋ α£Χ ΟγΝ CM, «Ρ_>χ^Ν	520	A
v oAx kAA ° v ° v ° σ’	553	A
Xy ογ ^v y^N os	532	A

'1 ·· ·· ·· • · • · · ·

• · • ·

^μΑ	547	B
o\|yy <y^{N ν} X	547	B
Οη yfyA θγ^Ν X Hpy ° os	553	A
Hry ;yuy ’ Q^N CH, σ	520	B
Aa A^· —^! X	521	A
	543	C
y	569	B

\ .368.

·· ··· ·

⁰ k ° Gy^N Xf° as	507	B
aá ⁰
χίδχρ q^N CH,	522	B

C Ja >*K JL X^H. / xx' J ΟγΝ CH,	606	C
h,c_v=h, Γ\ i NH
χοηφτ °yH CH, H,C^O CH,	4S3	B
Η^_γΟΠ, .XčxX OyN CH, ‘X CH,	467	c
^HX^CM·
XX*^Pss₀ ⁰ '^^C«X °y^N ^H’^C><⁰ H,C^I ³ CH,	507	B

Z X. M 1 NH. ch, ** «Γ i? a AV <y“ P'	572	A

• · · · · · · · • · ý · « ·

Po ΟγΛΛ	718	C
opYr Υ Υ	547	Α
οΡχ ρ·^κδ Ρ //	6S6	Β
opy χ	540	C
γΡγ Υ Υ	554	Β
Μγ· ΟγΝ ¹ 1	540	Β
V 0 V '	632	. Β

• · • · · ·

--.3733:.

oJAy	566	C
oAA'	599	B
Aý A	553	B
OtYjA	1 568	B
Άχ v Y	566	A
qAAá 'V¹ Ύ	566	A
Αχ· A A	644	A

• · ·· ··· · \372.

=>·	543	C
χ X	574	A
Ογίχν	534	C
Χγ. k	549	B
Οχ.'· kjo X	562	A
o^nV Y X	662	A
X · ωΧ °-5sX X	563	B

• · ·· ·· · · · ·

373-

Y	518	Β
ΐ#9 ^CM= Υ	492	Β
CX^Wr- γ	533	Α
γχΑΥ 5γΝ =Η, ύ^ν i* Otj	510	C
κγ, χγ 9 X	504	Α
Η,ςγ, _η αα-, χχΑΑ₀ ° <γ,Ν Η,ΙΧ^,Ν	530	Β
Υ Υ V 9	516	Β

v X	574	Β
Yt	561	Β
cyxp ťy V	533	Β
Y'A· 0	493	C
OaX A X	546	Α
ΟγΡΡΥ X	' 561	Α
γχχ «ΧγΝ Υ Υ	505	Β

· · · · · •-.373 r, ·· ·· ··

ν'	490	3
*\^CM' h,< WyV¹ rM·⁰ γ Ο^γ- S», . ^M’^CX,	539	C
X	532	A
A 2-i o .. ^^χ^,<χζ^γ^>Μ: KC CH,	561	A
ΧλχΤ'νΓ χχ X	573	A
	567	A
xr ’	531	A

*·<···· · » <

• · ♦ · · .· · ···· *»·3Ζ6·· *··**··'

°Χ^α /Λ Q-ι γνγν X Χ°	608	Α
cyXv χσ □ X	587	Β
•V X	561	Β
QijcX X	581	Α
χΧν V X	573	Α
apP	624	Α
yx	547	Α

*· ···· ·· ·· • · · ·

• · ··

X¹ X	583	Α
cZAt r	545	Β
Χχ Y ^b	609	C
Αχ >r	549	C
χχχΑ χ θ	575	C
°x^a
χχ° X X	613	Α
cxX γ	573	Α

·· ·« * · · ·> · * · ·

• ···· ..378···

oJÍv-tV X	561	A
ojÍró' a	625	A
X ./--	666	C
yA X	588	A
cj_x X3 cyx °y< a“	599	A
OyAW v X’	573	A
^a\,a X X“	587	A

·· 4···

Ύ Y'	515	Α
χ δ JL. ,ΝΗ, CH, Μ j) jT 1) κ,ςχ^ο ⁰ ΥΧ Υ £γ° Υ CM,	535	Β
γ^Μ’ ΑΧ Υ γ ^C>S	551	Α
Ύ’ γ- Υ γ	531	Α
Ογ. · V Υ	651	Α
Ά V	506	Α
Υ· >ί γ ’	520	Α

**.· ·» '·· 99 9999 ····«'· 99 9 • 99 '9 9 9 9 ’ Αέο:-'. ’

cr	546	A
Ó	602	A
Η,Υ Η,ΟΥ fňVfl ’ χλ ° S ° <Y OS H.C T γο _ΡΑ^	549	B
γ a&ťf «1° I • \ .0 Η,ογ' p-4 f	587	A
xXA“ X v v ^v KC íl „,X>° Ά ^r F	561	A
ύ^! . 1 v'	517	B
^H=^cy^CH = H.cYX ° °γ^Ν	491	B

u - CH, °x M,CCKj	533	B
«,ΟΧνΝτ' O^N °A HX^OCH,	507	A
4'	598	A
Y X	535	A
ojoX »<γ>· X	561	A
Q J Η P ^z~\ Λκ a VOx o )— o ^o=\ z	633	A
_V=H, YY £V It CH, Ύ Yr H,C CH,	497	' C

·· ··«· • · ^w —^w— —. * · · ·

^αγ^α Q0Y0 χ' x X	607	A
0ΧΥ0 V	574	B
αΧν V i	518	B
oJcXý X	580	C
ΟγΥ0 x o	544	B
?' Ά-- íM V X .	562	A
’<5γ- X	561	A

• ·« • · · · ·· ····

X CX	587	. A
\x
C J< -NH. ycX L II YlT <x ,	533	A
M C C H _ X
<x CH,	559	A
H.C CH - Y^^CMl o^yx γ^Ν A, ^Hi=y° κ,ο-γ CM,	557	C
Y /A p
i x χτ χ xx₀ ⁰ S ° X	535	A
“.^ΑύΧ”' px-v V X F p 4%° ^HÍ^{C CH}J	525	B
Xk X'	547	A

·· ····

·· ·· • * · · • · ·

- Φ§5··*· «· ···· « · · • · · • * · · • ♦ · · ·* ··

^M’^=s^^CH1 cJyA·· A H,C	559	A
^M,=v^CH’ A ;;\<Γ °γΧ p'· H,C	1 II < 0	R-JO	A
^HsCV	AA ^-N H.
Γ ] °y Cr 1 CH,	i T \ ⁰	573	B
Η,Ο^Η.			‘
V“ ° ^HV° H,C CH,	xJJxX l 0 F í	595	B
H,= _y=H> cJA 0<^N 1 -Ά	4Χ». t ^u y	575	A
H,C_y=H,	0 il
X\ X Js. ^N, ClXi v »v^N ,H,C CH,	. /4 X^H: \| li \ ⁰>—.c	560	B
H,C_y=H,	□ i]
CH, N T< h,cXj L ” ’ As o Η,ί^γ^Ο %j^^N _V ^M’^c_7< H,C CH,	1 » x ⁰ ř F	534	C

• · • · • · • ·· ·

-Λδϊ:-;,

Hpííoi, »°A«, MoX ^{ν 0} Žz//Yfo ° °Q	759	B
ΑΑ	669	B
χγ	669	A
γ Π A ' o o y? ch, SX-	554	C
XX í XXγγ^xf «, ,X° x °S v	610	8
ps r i Αχ*ifA C^N V 04,	711	A
V“ x°	713	A

·- 388*-

γΥ ° \^{0 0} \|Υ /V	713	A
Xa^ap YJ V a ΟγΝ k Y⁰	732	A
XjcaSk XV 4 γ^Ν k A¹	733	A .
0 0 Y^S 1 ΥΥ-U-Xk 9γ^Ν k	733	A M
;aa, «a V 1 HA^-0 1 Δ	737	A
^Ha^CH- Π A o o Y o. „ A γΥ κ?Υ%⁰ k° =γΝ ^V OS	657	A
yp 0 ΫυΥΛ^· A⁰ v° H,cYcHj	612	C

·» ·· ·· ·· ····

·· · · ·· · · · ·

CH, '0X AAch, ΑΛλ/9 Ά γ “ Ό	745	C
A Xch, CH 0 I (—k 7 C-, •Y\AAv'O'’4 0 ^SX- “ “Xy-aA ° “A 0	745	C
^h~jJch ^X-ch, <H, O Γ ΓΆ ' 1 II 1 Z >-0J _Hr χ 'hc N 1 II 1 ΧΑχγΧ ° u	745	C
4? Γ ΨΥ ΧΛΫ 4 o ΑΑ H£ ^!· 1 A 11 _M Γ ⁰ Υ.γγχγ Yo • ’C	759	C
_K(.OS HCjY HSi, ch, ^SL-ot y fř Γ Γ\Ι ΧΛΑγγ r ° ⁰ Α·/γ4χρν% ⁰ °ó	759	C
ch Ύ CH o 1 m / z-CH. XAApQX γ 0 XYý	759	C
X v CH,	668	C

ΧΛ k/k/kg ° X ° ⁰	636	Β
ΟγΝ k Α³	733	Α
k 9	767	Β
ya -<χΑ_; ο χ° ⁰ HAT-OS Η£	626	S
ΖγχΡ^Λρίς ΡγΥΤ k° °	715	C
ΑΑ 0-, ο 0 y \| yA k°	715	Α
χ·ρ.· 7	699	8

·· ·· :- 394’• · · · · ·

A	γ		725	A
M_r- 7	^CHi o ^«UCnUI aa
A <	⁰ 1		781	B
o—s	^<=Mi
ď
	A p >
ΑΧ	v? A	^Η^Ά’	743	B
	O PxP-Z
	0	ó
Η,	H.C A-rw P
A ti Η,Ρ'Υ'ί	W		743	C
	⁰ *J	Ϊ 1
	0	A

	H,C X, °Ί \
H,C	-sL*CHj
P? I κ,ζ/'ΑΆ	ΧΆ J	_ ‘A- X²* 0 < '	743	A
	o	Ό


... °s \
O, 0 1	-P / OS
	ΆΛ	Hi._>z,O·,	757	B
	CT N if ^X 0	A’
	γ

MX	Y- \
CH, 0 PA *,c cr >	í%	₃	757	C
	o A-P	PyA„
	ó	°Q

·· ·· ·· ···· • · · · · · · · ··

’ό	741	C
'V—1 , ° ° ''f \| ⁰ Η	715	C
	837	6
tÁA Xď	751	Α
□ v y~ ν?Η· =6 Η ' “Λ ⁰ '	725	C
γΗ	711	C
Η$*.'	737	Α

• · ·· ·· ·· ···· .· ’394·-·: : . :

··· ·· ···· ·· ··

f ςΛ μ S Χ_ο° γ ΟγΝ Υ^Ο	0 Αμ 0	775	Α
XyVV *	ο οφ, Xm-V X. ο 0	729	Α
Χγ°γ ΧΥ ° ο Ϋ	•wS/ . ο 0	729	Α
X	ο οφ, Αχ,// X 0 0	715	Α
-Αχ 2'	,Α	775	Α
>·	YQv 0	739	Α
Το
	I ^{χ χΖ}'^χχ*τ^/χ^χΖ ' Ό¹	713	Α

•« ·· ·· ·· ··· ·

x . cO XXA 5\s ° S ⁰ <9 Π^,Ν CH, Ά H,C	719	A
Q A φ X, ΑΧ Y ° >-«, HX	719	A
0 ó A/aXo K?A_oo y y ^CK· c XcH, H.C	719	A
οΧχ9 b	773	A
a . · 9 α<^Α CH, Ύ Η Ά ^HJ- CH,	727	A
X” · · 9 χΑΧ ° V hX-CH, =<^~ CH. ' X ^Mi- C>S	727	A
^H’V’ O OjS^M CM, ’=γ° *1= CH,	727	A

•» · · ' · · · · · · · · • · » t · ·! · ·

·· ···· ·· ··

,γ Λ	787	Α
LVA ° y ° °ν\ Χ° Ý	809	C
σ\|χ '·	709	Α
JwaSx χν y V ^ν χ°	769	Β
X 0 _m _η ς\.νΧ ^χχχ ο^ο ο V «0/0 ηΑΊ - OS	723	C
XyAX ΑΧ -X '	713	Α
y % Υ	723	. Α

·· ·· ··· · • ·· · ·

• · · · · · ·· ··

γρ V P Y	723	Β
cYyyY v X	771	C
γ O ZA o ⁹ * · V ¹ Y Ύ	741	A ·
fP ' o ajXí 1 ° ^-.- 1 -A/ Yí =s	725	A
AoAxx Y“ v ^Y \o	745	A
kj+> · pX'^' λΡ	716	A
9^Α_α · 0 Y	733	A

• 0 00

• 0 ···· ·· ····

y X Τ'	713	Α
X · ·9γ sVX V ⁵v σ	753	Α
Y“ - Χ Ηί <*»	726	Α
X . ·. Χ· pw V · V - X	712	Α
ν χ.	771	3
Χχσ'ί··· . Τ' ^L-·	804	Α
..ΧΑ-χ^'· v U -C'	726	Α

- 599»-

Κ· ,· 0 γ- σ'	746	Α
V 0 σ'	752	Α
V Ύ -C' ®*.	741	Α
γ 0 cy xCxxXr ch, τ Ν OS YSX ° S ° ^{Μ 0} ο^χ·*μ ©% Ύ Η ,C <Χ ,	727	Α
Ύ“ Ο _ίΗρ<γ0σΧγ . ;00 J 0 « °Υ °’> Ύ° »ι	699	Α
,70.0: 0Λ° \ ⁰ \0 «*ι σ	739	Α
Χ^Ύ'Χ'-^-χ'“ X ' ' X	712	Α

WO2c.

Υ· A A ? ϊΥ ρ ΑΑΑΓ Ργν γ Hp C-i,	671	C
v . .0 χΥγ-Χ ΖΥ	780	Α
ο ΧΑ Χχ CXTpT^Y'’· Ύ •·χ	884	Α
γΧ X ο \_. □ 0 cm, • οχΧχ⁷* γ χ =s	855	Α
^ΗΛ ^CHi Λ Ο /—«' ο 3 ^CH? ζΧ-ΧγχΛ,Αγ. _Μ,=γχΤ χ ’ Υη. X	757	Β
^ΜΎ> Α a δχΧγΧχΑ Υγ% ⁰ Υ ° <Α ÍH, X CM,	741	Β
χ 0 οχΑ-Χο γ Α X °s	779	Β

Cl ΫΫΥ Y V-Xy-V, OkO 0 0-^N ' r	725	A
Y	787	A
<4 v x°	785	A
cyN k x°	737	A
YY(l Y X’	737	A
^ccYp 4 Q Y	739	A
Y	855	A

• ·· ·· ·· ·· ···· • · » · «·· · · · · • · · ·. · -» · · • · «. 4<j4r . · · · · «·· ···· φ#'*'·¹··· ·· ··

Yp... J X	826	A
YtÝYV	857	A
oÁwb x^Y '	826	A
Y	765	A
« O yy Y	792	A
y	799	A
yyY 7	784	A

.· ·· ·· ·« ·· ···· '· · · · « * · « · f Λ • · · % ·«·· * * · · a JK r- · ·· · · ·

·..··..·

Cm, “V »c cm,	750	A
^ΗΛ CH, A O z—( ° ⁰ h.= A	771	A
^M>^c. ^CM- =λ o - y Ά :á° ^CH 1	771	A

··

1· ·«··

•	·»
• ·	• ·
•	•
•	*
•	•

t 4)&·-

;?γΑ_β· k ’ ^α^γ''^ΛΛ ^^CM, y° κ,ς ς_Η<	525	C
y^Ý=- ^Q=V'^K -- V F o,	508	3
^M,cy^CM’ A - A - :i AA 0 ^ÍM’ 1	501	C
^h,V^h’ _ίΗιΟγ»χΑ-=- ' ^ΗΆ Α 2 < 2 ^Ml~ í o 1 , _o°^ ^CH> Λ' Ί ( Μ,ε'^^ςκ,	587	8
_H. χφγόΓΗ- %Χ··^Μ ^{: CH}J	454	C
_o /Wh'⁵ γ_γ-Αο° γ ⁰ /j\ \	512	c
Υφ° S°	538	c

• ·· ·· ·· *· ···· ·· < · < · · · · 9 9 • ··· ···· • · ♦ · ztín7 · · · · · • « r /· - · · · · ··· ···· e· *··* λ· *·

' ° a	538	C
γνΖ S° °ů	522	C
γρχ Ťf'	496	c
H^OS ΛΑ o cXwyyxsxos £<V v v· y	522	c
¼Ak ΥυΆ° Y	540	c
yY X	598	c
Vy“> ZA Η,σ pp o SP/ H,cX os	480	• c

·'· ····

-Í4QJ? -.:

• · · · : -:409--, • · « • · · · · · • ·

aa ΟγΧχ X oko A° A CH,	407	C
H C ^CKi y ° xA H.YíHj CH,	3S3	C
Η,ε^-Χ
X JX -A W Ύτ ^CHi o X o 6	433	C
^H:Cy^CH’ AA o X AT o	419	C
φ · v X ' OS	534	C
Ax 1 U - Q A CH,	520	B
v· Ax x- 1 X	534	C

• · · · • · ·

- ft1G• · • · · · · · ·· ··· ·


Y * Y	520	B
u * CH. O^N H,C hY CH,	550	C
^H,cx^CHl
C\A₀ o χ=, . Y YxA HXY CHj	536	C
w í“ CH. Υχ/ ' Ύ.Υ 0 l o hYY° Y γΝ · CH, H,C 0 Η,Ο'Τ CH,	538	C
ΟχΑ-Χ X	553	3
^<^A^TV X	532	C
QxWf	570	c
Υ ' Y

• ·

: -3414·-. 3 • ·

Δγ Υ Υ	584	C
X ®s	418	C
Q1, χΑ γ- γ	' 554	C
-χ γ· iYYjA¹γΑ Α> ^ΗΥ 3- CH,	508	C
X ΖΔ ο
4 Αχ χ χ^Η CH, X Yf Υ Υ <ζ* :υ ^Μ:~ CH,	494	B
Υ^Η· οΑΔγ Υ Δ Μ,ε^,ο Η X ^M’^c CH,	562	C
h,C_v ^CH’ . oÁY’ Y A ;γ ^m3^c CH,	548	A

-:432 -·: :.

• · · · · 9

ηΆ° ³“ CH,	520	C
h,c_v=h, o P\r%<Y^0HCJXx, ° ° H.C^O H,ST CH,	506	C
Y v-* ^c*. X K- 0-1 _	540	C
H,C^CH, cpA v S H,C_x° ^CH: H*,Al ¹ CH,	562	C
H C , Ύ a·. - .- C\a γ γ s „ŤY“ • CH,	548	B
_H,C_y ^cK, YÝ' Η,=ΧΥ=° ⁰ O^N HjCx.0 +Ά	480	C
H CH, X H,C^Y^· 0 O^N Κ,ιγ-⁰ A	466	c

·· ····

-I4U-.

·· ····

-vy xv, čxV \==/~Ί jS l/” ^CH>γ X κγ» CH,	568	C
P⁷ Η,γ^° CH,	554	B
^H5y.CH, Λ\ fi ^^0K caxqn °A 1 H,=-N CH,	508	B
ΎγΌΗι 4X4 Ύ“ CHj	482	c
^hY=h, n X [ it Υγ^α ° ch,^c 1 H.C^O _H,c-y CH,	4S6	c
H,cy^H, A X - caxxp' γ H₃cY CHj	522	c
ž-yJU 44 V	535	c

·* - · · ·· ····

γ ^γ	539	Β
γ η γ X ηΥΤ - οχ	553	Β
γ Υγ° γ -> γ Α Υ ' C*í	557	C
ΥΧ^ΜΓ ][ ⁰ ¹ °ΥγΥ 0	561	C
ΓΗ ©4 υα υα HC 0 [ [—1 ! Ο⁴, γχ= ΧΡγ^ 0	567	C
CH, Ρ hkLcK ,Υ<9 H_C 0 I i\ > /—~ ' ι 1 i >·°J ' ΥΡςΥγΥ < 0 “ ° A-W 0	531	« C
.Λ¹' 0 γ	495	C

·· ·· • · • ·· · ··· ····

• · · · · · ·· ···· ·· ··

Ογ^{Ν 11} χ°	654	B
••V· _Η- V“ Α ΡΑζ⁰ H.C í • ^CřS	549	C
halX ^ΑΧ fA 1 QX 0	567	C
ΑΡ, CH, 0 Γ 1—\ / <C-, ΑζΛΟχ 0	581	c
Αγη C^M 9 X	654	c
Kapa 'γΛ⁰ v q^nh CH. A<° nc c?\	626	5
x¹	654	. A

·< ·· • · · · ♦ · · : : : ·. • · · · · · · ·· ···· ·· ·· ·· ··· ·

γΧΥ X	535	C
X	535	Β
Υν >·_γγ..· γ-	523	C
ΧυΎ°^ο γ ' ⁰ xjx '	523	C
'=^^χ ' =s	561	Β
ΥχΥχ ΥΎΧ° γ ⁰ X	511	C
ΧϊΥ'·^ χ-γ V	537	C

·· ····

·· ·· • · · 4 · ·· ···· ·*. · : ϊ ·.

CyN Y	641	B
' 0 X '	630	C
! ⁽fťW^O χν₀ c V 0 A oy X X	653	s
i χγνχΓχ χχ 0 λ 0 ó A <y A Y	653	θ
XX y- ., k. ⁰ > 0 axatXx³	553	c
K o oO aa YyA A 0	655	c
Xyy γ^οΧ° v	629	• c

*· ···· • · · · · • · Λ Α Γϊ· * : -:41« - ;

·* ····

γΥ y ° y	539	C
v if 1 I y« ° S ° ° y	521	C
y° v	521	C
ΡγΥτ'^ γ_γΥ„° y Ό	547	C
yy ό	547	C
γγ Ý“\ ® θ yy <γ* °s ·γ° - CH,	590 =	B
<s=_v°s yy γ· «.	590	B

• ·· ·« 00 • · 0 0 0 00 0 : .·.: -:42cr-.

0 0 0 0 000 09·· 00 0000 »0 0000 • 0 0

0 0 • · 0 • *0 0 • 0 00

°y ^Ν X	641	Β
X CK, \ ) οί ο Γ ,—\ ch ι Ι^νΧ J 0	565	C
Η,= >-^CH> H,=JAk, > _=Hj ^ηΆ’ χ χ\ο S 0	579	C
t°^yA^o° Ρ	644	C
γ_ΥΑ ° γ íQ ⁰ σ	587	C
C^N Ρ Α	654	Β
Ρ	716	Β

• 9 9 · 9 9

A	663	5
v X	670	r“.
X ^{ř ?} X	666	kz
x ° ° . Α'ΫγΑ'ν* áa° s ° Ax °y* ¹¹ X°	666	c
;Á/AX> %/- 1 X’	630	3
°γ^{Ν 1} X	531	c
W° Y	.563	c

• · • · · ·

YyX° V ⁰ X	537	C
χί V <γ.Μ os X ’ οχ	575	Β
^os Α . ? , η ο·*, ιΓ^ιΑ 00 0 ’ =γ^Ν os :ρτ • CH,	591	6
γ¹ 0? 3γ» =S 1 <=*»	586	C
V’ 4-1 ο °S Χγ³ H.C ¹’ °S	536	C
:χ·= V Χ·^Ν OS Η-.Χ° Κθ ' ο*,	585	Β
Χ0 070’ <γΝ Ο*, X os	563	Β

• · · ·

Ά χγ- ν Δ Η^ΧχΟ ΗΧ< ' =Η,	^CH.	547	B
Η?Υ% ° =γΝ Η,ΧχΟ KďP - os	^w,	519	C
HCyCH, ΛΑ ^η £ ^η CH, s 1 ”X I hXA o < o HC το 1 ΟγΝΗ CH, ^HY° X chi	H 0 xZ*	640	B
tAaaX^ v¹	zA	546	B
• j u YT X/£ \ ' Δ	í	646	B
H - CH, ^!'y Z—i o / \ II	0 N ¹¹ -H
xXŤ*’ Y To AY η βγ» CH, Η,^-^Χ⁰ H.C<I		594	C

=γ CH, :?r³• «,		592	B

•· · · ·· ·· · ··· : : ,·4Ζ4:- :. :

• · · ·· ···· ·· · ·

pXva” ykx ° k ° Υ,χ m, - CKj	533	C
0ζϊΧτ^ XX X X	545	C
\A xXór^ x Ύ 0 X	S59	8
v X'	609	A
yv X? ΧγΧ oko o X	635	B
yy % Μ ¹¹ 0 X	685	B
XX x¹	519	C

• * .· ,:&5

ΧΛ₀ v X	Χ··<Χ^ y o Xk	621	Β
^H=^C\/^CH3 Vy’ V⁰ ⁰⁴³	y»,	521	Β
v_y°s fl X A N nvn J\A₀ o S o Αγ^Ν Híy’ X	A	547	Β

Q M p V ;χ ’ °s	573	3
H=^CV^CH>
F /1 M Ϊ . YZ\/'V*V XAaT X o o Υ-, QyN ^V IX ' OS		609	3
I F ji AL o χ V A °γ^Ν X	Χγ—, . < 0	547	Β
Ax° V QyN X	X sr	719	Β

• · · ·

χ°	. 719	C
X 0 0 >γΑ_ο0 \ ° ^- Ογ^Ν X X	653	3
ήΗ^τφρ- Ý X	597	Β
Υτν^ Αγ^Ν C χ°	697	Α
ζ;Φ X'	619	Β
V Α0γ> χΦ 0 °γ^Ν χ χ°	651	C
kí- Υ/ό χ°	592	Β

	587	C
δ Υ> obv*· I X	563	Β
ΡΑΓΆ _κ ° „ _CH_ οχτΑ =Χ ^χ Α ' °Ί	589	C
Αα-^ ><ρ= ° S ° ^ϊγ* X χ³	621	C
ΑγίΑ °χ X λ⁴	519	C
Α . ΧΧηΧ X	597	Β
ΡΑ <Ύ 0¾ ρΡ Kcn <*>	549	C

·· • ·. · • · Λ* · · ·

	535	C
XX
XT ^M£x° Η CV	=*>
XY Χγ A Ys 0 V H-A/i ►ss-T CM,	o H o m₃	''^o.	521	B
V_Ý°4 řXx ΟγΝ OS γ °s		519	C
X X“ X“	V	vo	689	c
řx XyV Y X		-<^xO	611	c
X °y X	Y	m)	600	c
%Y Y Y‘	Y[	0 x·^ v	595	B

··

·· ···· ·· ···· • · · • · 4 · ·

4 · « • · · ·

λα ř C H , S N Až” \|Y^N C H. ⁰ η ° cm, °X=H, H,C	541	C
^HY^H’ ? CM, Ν'Α<'ΑΑ^ζΝχχ/^ί_Η, ;χλ ° y ° γΝ , Η,ίγ^,Ο 1	549	B
Xv— X X^I	593	C
θΡΧ”ΊΧ ΟγΝ x°	680	B
X¹	559	C
Zz A	559	C
y - X	573	B

*· ·· ·· ·· ··»· • · · · · · ·· · ··· ···* *··* .-.4.30 -..· ·..*

	644	C
ΑΧυ^ yvs-v S° A θ A ¹	537	C
v X’	627	C
Χγ ý Λ	609	Β
<γγ·γγ^Υ V°° y γ γ.Ν χ°.	664	Β
, X JYÁ ρΑ ° Υ ° /V γΝ S X	650	C
X » OpAkY Υ” k Υ	661	Β

• · · · · · 4 · ·

Υ- Ý	571	C
Χ'Σ	6S1	Β
Υ	607	δ
Ατγχ χ^Ύ	625	C
' Ύ’ Χοχ^- Ο^Η H,C □ H,cXh,	575	Β
Η C CH , X ΫΥ •γ H,C ^Η!^Ε·Σ_εΜ)	575	. 3
^H'^cy.^CM' ClÝX^- γ ,χ» ^Μ ’* CH, ’	575	3

·· ····

^HlS^/K' οΧΆ CH, ^CM í	575	B
„ - C H , ’ χ CH, r	559	B
„ - CH, X AÁ CH, <y	573	B
AÁ x XA.q	637	B
'* /	473	C
A. cčcnA x 9 X	559	B
»A,«. sX·· X. 'sy v . V »e o.,	549	C

• · ·« · # ·· ····

·'· · · · · ·· ··

Ύ X	587	C
bý- χ^γ	547	C
bbcb Υ X	547	Β
QjXcX χ	573	C
χ . οχηΧ γ > X	573	C
Υ X	607	C
ΟγγΥ'-^ 1 X	595	Β

• · · ·

4S4

Υ r	581	3
	609	Β
r Ο	629	C
, $γγγ'^ /Αγ\Α_β ’ y %	694	C
Χγγ X	605	C
yxÁA X	579	C
Χύ á	627	C

«» · ♦ · * 99 9999

«Λ/» Αώ- ·χ°	563	C
\Υ Yý	571	C
X opnA a^- k 1 X	572	3
Ογγ^ ΎΧ·' Ϋ y	551	C
ΟλγίΫΓ^ Ý γ·	609	C
οχχ^ V ί	593	6
ΟχγπΑ 7	593	C

• ·· · · ·· · ·

-·4·36 -

c? '	613	C
OZVA Z '	5S3	B
	5S1	C
-_H 7ΑΥγ' ’ X- CH,	571	B
AX .. A o ? QyvAP AvW v • ch,	577	C
YA > A ° V	615	C
*+_vos p. °γ^Μ A «£ CH,	571	C

• · · ·

- 437 -

”=9^3 οΥοΥ γ Υ HjC CH,	571	C
γγγ <^^Ν Υ χ° V CH,	545	C
χΥ Α 'Ύ %/* Υ_: ^Η+γ V CH,	633	I C
ΑΥγ, Au. Ύ³ ^rtJ- CH,	535	Β
ΥΥΥ V Υ V Η>£ θ',	587	Β
>Ά“= Υ Υ γΥ Υ γ μ/\η,	647	Β
γ V	512	C

- 438 -

v 1 η.=^-=> ►Ύ ’ =H,	575	C
Ογ^Η	S58	C
Χγγν γ ⁰ \°f 0 '	621	C
ΧγχΑ° Ύ° 0	565	C
oSWr^ °υ Η X	572	A
Ησψ^ γ-·' Η . XÓ Η£ CM,	587	A
Vy-», Y0Wr-. v A, «,	587	B

	509	C
ΑΧ rhi.	0 ΑγΑγ X Ch.
H_C i • °S	0 A-^	533	C
H-.=y h\ °
ΟγΧγχ^ A·'¹ A 1 h4 Ά CH,	0	537	B
ΑγγΧΥ' CXyx^-%. 9	544	C
X , χγγ Y Y'	594 ^:	B
CpY V X	í / VYf	695	B
íyCH,	0
L >X Xs 0 γ 0 v Ar	L β X	650	B

-’4*40 - *·

K-C Q-j - Ά : ΟγΧΥρ Χη. Αγ-ρχ⁰¹. CH, CH,	600	Β
VyCH, /A¹'· Ύ^Ν >H,	628	Α
oYY' V A, N H.C	556	S
K' yv A. -X Οχ	674	Β
X’ A <γ<« «Η Ύ Ach,	579	C
X,,⁵· ΑΦ Y' Ά' -? «η	637	C
.γρ0Άγ· * β-,	671	C

Αχ X	583	C
ηχ v S H.C^° ^CH= η,Χϊ CH,	587	B
χ·	601	B
Hř_y°S -xXx^y 5γ ° Y Ύ'¹ CH, 1 HX_A° YY HX	623	B
“Xos Cy ΧΧ'^’’ y X X³ «4 CH,	621	A
Xy xpX '	645	C
V_y3S φΧ- y* X X	664	• B

’2f42 - ” ·*

np-CH, cáXX Ύ° X ^r^N ' ' w,	573	C
X · Y	559	C
“V· C JL A. ° 2 ° o Ύ Y* i	847	B
ojXór'^ pY X, Oř	651	B
X	547	C
X	561	B
Y P	561	B

• ··	99 ··	··	····
• · ·	9 · · ·	• · ·
• ·	• · ·	• · · ·
• · · ·· ·	♦ · -»žtó9	- ··	• ·

·» ·· ‘M44 -

by X .	567	C
Υ	539	C
yý	519	e
YrA ‘Υ⁰ ΥΎ'° ° \° = >^ο A Υ b=YQ	708	B
yypVbb V ^π b	649	c
«Υ*. Υ Υη_; ^ΗΎ³ ^Η£ CH,	561	' s
by ·* γ	461	c

·♦ ·♦ 99 99 9999

9 9 9 9 9 9 9 *

\ 0 X. 00 Υ 0 V	0	531	C
Οχ0ϊ3 ν X	4	606	Α
ΥΟ Ύ' χ.		606	Α
Q0 V Ύ		592	Α
χ Ό0τ 00'	J 7	666	C
Q0P V σ'	£	626	Β
0x0 0 ο	0 r	640	Β

» ·· ·· ·····♦ • · · · ·> · · · • · · A*ACl · · · • · · · - 44& -· · · • · ···· ·· ··

(χΧτ ó	654	B
A	6S8	B
	654	E
Αχ ΟΧγ 0	753	C
A0 o Ά’ ? T A — Hx4<y₃ ⁰ x. ⁰ Ύ V. F	638	A
γ La CA χγχχ y	683	3
«ΧΑχ y ' \ 1	593	A

·♦ ·<···

X	621	Α
Λ . .	607	Β
σ'	627	Β
H.C -W ’ y~^M> Η,Ο-ΧγΑ 0 V Ο =γ Υ, Ό	586	Α
«/> 4V TJ <^« °S	534	Β
πίγ ΧΑΧ <γ =Η, X	560	C
ΟΑσΧ 7 \ . £	621	Α

.448 *· * · * · ·

Ύ=η, .3¼ h.c Μ Ά“ι ^HT“ CHj ’	ο V—	616	Β
^Ηχ KC ΧγΣ 0 V ο Υ'^Ν XH. α^Ν		572	Α
YoS A „ X Μ χ X τΛ ⁰ ^·ΟΗ° <γ^Ν κρ-[ 0-U	'''^CH. -	547	C
H.C -μ - γ~Υ
0γ% ⁰ ^CH,⁰ X ^Κ-Χ>/⁰ H.C-j CH,		561	C
YyX χΑΎ ΟγΝ ^ΗόΧ H.C-) C4,	521	C
οχΧ Υ-· I X	^rA	620	Β
gJAy Υ X	γ	578	Β

·» 4444

4444

4 4 • · 4

Λ 4 4 '

4 4 4

4C 44

	560	A
V k2A k	O Z
	0 If
	P	620	A
y *1° CH,
A	í\A	618	B
v cr'
q-Ja		632	B
v¹ cr
qA
X Ý	' z	662	B
Ά Υγ·	Z	5S2	B
Z
}	Z	590	B

• β

	690	Β
Ζ	609	Β
/Α ° ° ΑγΧ °^^Ν Υκ. /Π⁷	749	Β
ΗΧ ,-η X ’ ο ΨαύΑ^·^ AyA ⁰ Υ ° γ Α, Ν^_ -χ Ρ	648	Α
Υ<Η, φΥΑ Ογ” Υ, 0	783	Β
^hF_vH ΑΑΑΑ γ A U Υζ	783	Β
σ^τγΧ V X’	634	C

ονγν Υ χ³	648	C
οφτγχ V' χ³	634	C
Υ X	649	C
οχΧχ Υ Υ	629	C
Υ Υ'	657	C
^σχ^α oýjv <3γ^Ν Α X	614	Α
B^Sr qJyv ΟγΝ X χ°	702	Β

·

462 -*

sy3r OSA oy x x°	702	A
y· -YXýx'''' Sh, H,C CH,	675	B
^°¾ ř~A O 0 CL ·< Λ Λ φψ ; =X Sk. i · ^K.%/° *= CHj	647	B
YyAK ^ζϊΤΐ A X η/\η,	563	C
CH, qSAa «y %s H-.y° σς	619	C
9 . οΦφ u	432	C
A\	576	C

- 453·-: : .*

	617	Β
	651	C
-<Γ\_ - ΧΎΫΧ V C0	637	C
—ΧΧ¹ Ý	684	Β
οΧγ Υ	685	Β
Υφ γ	698	Β
Ο^Χ 1	605	Β

	620	Β
oprX γ.	672	C
σ	620	Β
Όζ$ύΑ'^ γχ · y V Ύ	594	Β
οΡ^χ V Ο	606	Β
OppY Υ Υ '	580	C
X α5χΧ V τ	532	Β

opÁ- a¹	572	B
αγγΆ	738	A
Ρ P	718	B
	664	B
^aA ΟγΝ A X°	614	B
opA^ A	624 '	B
opÝ^ Y <r	558	B

·· ·· · ·· · » · « · · · :- 45*7 --: : .* · »··♦ ·· ···· ·· ··

/Á ⁰ γ k X V CH,	o A · 4,	634	A

A
	706	C
•V
Ά
Ύ=η>	„0
n 3 γσν	YJ o	757	A
£/	CH.


c&X	662	A
	X
Y
^Μγο\
C&ÝAX	660	A
V
x
CH,
V
	0
\\ /A γγ
XyA) ^υ		648	A
0,. M X	A
X
γ	o
\\ A fy	Χύ
X%°	\ ⁰	648	C
v	A
. x°

? -Λ-, γΥ X	668	S
χ^Ύ	618	Α
σσ Υ X'	660	5 .
Χυ V	601	Β
X Υ	673	Β
Χ^; YY“ V' < X“ ·	662	Α Μ
χχ X	602	Α

• ·« ·4 ·4 ·*···· • · · · ’· · « · · · · • · · 4 · 4 4 ·

np^cn, oJJAv o X ° h-cX-OS 1 CH, %H, ^HV H,C CH,	681	A
kc ,°i 0 «γ» °s P~<° ^CH>	631	C
o ΟγΗ °S .Xť⁰ H,C	c.55	C
v QjfYVX v* Ύ H,C CH,	689	B
Sp-K, ΧνΧχΎΧ v 4 ^hv HiC CM,	660	A
pÝ	538	C
•VyCH, XX»	764	A

• ·

cAXx ργ X Pf	816	C
ÝÚ Xr	780	B
X- , i Y Y Y z-~> X ° \ ⁰ Oy X	560	C
Xp X	602	C
pY ^XX^yA _KppAo° χ ° =* pY ⁰¹¹ •PA P² CK,	. 625	B
p^CH, 'Χ^ΊΓ o” A V A ^HP<° ^Hp CH,	685	B
Χρχ X X	587	A

οΧτ'Λ-' X	587	Α
V X	601	Α
Υ X	625	Β
γγ^ I X’	601	Α
γχΗτΗ^ Υ α	627	•Β
Χγ %γ-’ C F	679	Α
Χγ X	628	Α

• ·· ·« ·» ·· ···· ···· · · · · ·· ·

v <X	587	A
Ty y A	641	A
»*_ν=Η, Π 'χγϊΧA kyk> ° k ° ° y A ^HX° H-.C OS	659	A
AÁ 0 ' C-L οΑΑ'Υ A H,C CH,	674	A
y AAóyo Y k X°	615	B
y cAA° X k k	641	8
y cAAo y k . x°	641	B

• 00 ·« 00 0· 00*0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 «

οΥγ	627	A
ΑΧ	665	A
Ύ	614	A
^γ⁵¹) c44%xo Ύ . 4 κγ= V ας	. 737	B
Ύ, αΜχ γ* Υη, Η,γ,Ο κ,ε ος	666	A
γγ 44° ι⁰ γ·^Μ Υ HjC CH,	660	A
oJYcX	591	C

v J \ °γ^Ν Y x°	615	C
A^1-’ θγ^!γ fi v A Ar	754	B
CpÓA' . Y A Y H,C CH,	577	c
A αΡΧα γ^Ν X, v A^J Voi,	694	A
AY ⁰ γ ⁰ Y	702	A
ΡγΑΥ 1 Y	701	A
“v“’ C^ŤA QyN V V K,C CH,	546	B

·· ···· • · · • · ·

4SS<

ΥΥ Ογ* Υ H,C CH,	520	B
s=Y ýp Ύ υ σ	546	B
S%,os ob bxxO cy Y'^N Yx, V H.C CH,	723	B
VyOS οΧΧγ y b YY HX CH,	675	A
AA o o n rYYY W*·” γ γ y X Y	771	B
-v 0 YYY Ύ υ y Y	847	C
opy b	641	‘ A

00 *0 00 0 000 00*0 00 0 «5δ0 0 0 0 0 0000

Ar χ^τ	613	Α
ογΧ Α	651	C
cy Υ°	700	Α .
γ υυ °γ X³	569	Α
ΧΧάγ Υ Ach *>^Ζ Ar	755	Β
^Μ·γ-ίκ, ΥλΥ· γψ υ γ X, Ar	786	Α
ΑΥγ	669	Β

• *· *· ·· ·* »*·· ··«· · · · · t * · • · » · · * · · β 0 0 9 9 e · o o o • Ate-7 · · · · · β · ··♦ <W>0 - ·· ···· ·· ··

V yyy	601	A
γ Y	601	B
^cyCl χχγγ ν^Ν Y	683	A
X - . qXíAyyy Y Y	673	A
H,C qj Y ? 0 αΥΫγ, γ Y Vv“ A	680	A
X · oYY^ Ύ Y	602	A
oYrÁYrÝ γ A . X	735	A

• ·

.......... ···;

-.468 i · .:: ·.

oXx Y’v A	743	A
Pxa Y	655	B

Υγ Ck^N '-' ^KY *5° O,	692	A
χ^ M ř—\ o o YY γ <*, Y^N ΜΛ CH,	639	A
A ° .0 . ΑχΧ X ° \ ⁰ γ <*: Y O,	639	A
γΧτ-ΎΫ Y . X'	675	A
<x	621	A

• · • · • · · · • . : : . ..:469 ·-..··· • · · · · ·

X » «9 Ύ^ν ' Χ°	6S8	Α
X ° «9 <VA-X> αΑ ° k ° ν χ°	642	Α
X , ~ QXUU ° kj ’ V X³	654	Α
Ύ-a¹λΑ ⁰ . =γ^Ν “S A CT,	601	C
a'”’ CH, Η,3-_>Υ’^α ηΆΓ *	663	, Β
°γ^Ν *	641	Α
αγΫΓΖΖ k X	702	Α

·· ··· ·

• ·

X	701	Α
X	588	Β
\χ ΟΧΥΤ X X I ,χ	638	Α ΖΛ
CXy, X · Οχ V τ, X	630	Α
QvvV-ννθ Λ^ϊ γ X ^ς X	697	Α
CY ΟγΧ^ ^χ·· S' Υ <χ	621	Α
QijXX X X	608	Β

v X'	632	Α
η ΑγΥΥ» γ =Η Η,<γ° Η,= 04,	667	Β
,χ_ο ° χ ° γ W, OS .	520	8
Y°s p^AkV^rX Υ?ΥΥ₀ ο Υ, ° θΗ£ 04, γ X γο 04,	645	η ο
^ΗΥγ CXjAo ° y ⁰ HJC-X. γΝ CH ' Υ⁰ Λ,	669	C
^ΗΥ ΑχΑ η-ζ KC CH,	575	Α
Υ oAŮX γ Ά Υ° H.C 04,	709	Β

··»·


V YY V ch,	652	Β
Y°s 00 Y^N Y Yx^N ηΛη,	0 A	714	A
γ χνφ <ϊγ °S 0 >SC	561	Β
H,=Y YJ φ · <y- , Υ		561	Β
Y ^Η °s
Ύ' X Ο « 1 » Χ0Γ =γΝ ^ř ř _χο Υ H,C CH,	0	635	Β

• ·· ·· ···· * · · • o 9

H₃c_ycH₃ ,-< /\ H H A X θ ¹ ΟγΝΗ r h₃c ch₃	I H Y^^NCH₃ Y °	580	A
h₃c^ch₃
,_> r~\ H	2 H
rx %V' —\ A X o ^χ-·γ^χγ O^NH X,	Ay L o	606	A


H₃CyCH₃ Λ H ? A λχΧ·	/Axx
653	A	i 1
u p ch₃ n i ) ΧχΑ° X	o ^H U		1 1 í
XXH				1
H₃c 0 H₃cx
ch₃		- -----		-J

”-’474-

Zastupuje:

• · •·:·475 ·.

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina, včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty uvedené sloučeniny nebo uvedeného prekurzoru, kde sloučenina má obecnou strukturu ukázanou ve vzorci

H

N

Ř²

R¹ kde:

Y je zvoleno ze skupiny: alkyl, alkylaryl, heteroalkyl, heteroaryl, arylheteroaryl, alkylheteroaryl, cykloalkyl, alkyloxy, alkylaryloxy, aryloxy, heteroaryloxy, heterocykloalkyloxy, cykloalkyloxy,, alkylamino, arylamino, alkylarylamino, arylamino, heteroarylamino, cykloalkylamino

2o a heterocykloalkylamino, s podmínkou, že Y může být popřípadě substituováno skupinami X¹¹ nebo X¹²,

X¹² je hydroxy, alkoxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino, arylamino, alkylsulfonyl, arylsulfonyl, alkylsulfonamido, arylsulfonamido, karboxy, karbalkoxy, karboxamido,

Claims

alkoxykarbonylamino, alkoxykarbonyloxy, alkylureido, arylureido, halogen, kyano nebo nitro, s podmínkou, že skupina alkyl, alkoxy a aryl může být navíc popřípadě substituována skupinami nezávisle zvolenými z X¹²;

R¹ je COR⁵ nebo B(OR)2, kde R⁵je H, OH, OR⁸, NR⁹R¹⁰, CF3, C₂F₅, C₃F₇, CF₂R⁶, R⁶, nebo COR⁷, kde R⁷ je H, OH, OR⁸, CHR⁹R¹⁰, nebo NR⁹R¹⁰, kde R⁶, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, cykloalkyl, arylalkyl, heteroarylalkyl, [CH(R¹ )]PCOOR¹¹, [CH(R¹’)]pSO₂R¹¹ , [CH(R¹’)]pCOR¹¹,

CH(R¹')CONHCH(R²')COOR¹¹, [CH(R¹')]_pCONR¹²R¹³ [CH(R¹ )]_PCH(OH)R¹¹,

CH(R¹’)CONHCH(R²’)CONR¹²R¹³, ,2\

CH(R¹')CONHCH(R²')R', .11

CH(R¹ )CONHCH(R^Z )CONHCH(R° )COOR'

CH(R¹’)CONHCH(R²')CONHCH(R³')CONR¹²R¹³,

CH(R¹’)CONHCH(R²’)CONHCH(R³')CONHCH(R⁴')COOR¹¹,

CH(R¹')CONHCH(R²’)CONHCH(R³')CONHCH(R⁴')CONR¹²R¹³,

CH(R¹')CONHCH(R²')CONHCH(R³')CONHCH(R⁴')CONHCH(R⁵')COOR¹¹, a ‘ ,1' ,4\

CH(R³ )CONHCH(R^Z )CONHCH(R³ jCONHCHÍR'* )CONHCH(R

CONR¹²R¹³, kde R¹’, R², R³, R⁴, R⁵, R¹¹,

R¹², R¹³ a R’ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl a heteroaralkyl;

je zvoleno ze skupiny O, N, CH nebo CR;

může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže W je přítomna, W je zvolena ze skupiny C=O, C=S, C(=N-CN), nebo SO₂;

Q může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže Q je přítomna, Q je CH, N, P, (CH₂)_P, (CHR)_P, (CRR’)_P, O, NR, S, nebo SO₂; a jestliže Q je nepřítomna, M může být přítomna nebo nepřítomna; jestliže Q a M jsou nepřítomné, A je přímo navázána na L;

• · ><•477*·.* .j..

A je O, CH₂, (CHR)p, (CHR-CHR’)_P, (CRR’)_P, NR, S, S0₂ nebo vazba;

E je CH, N, CR, nebo dvojná vazba k A, L nebo G;

G může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže G je přítomna, G

5 je (CH₂)_p, (CHR)_P, nebo (CRR’)p; a jestliže G je nepřítomna, J je přítomna a E je přímo navázána na atom uhlíku ve vzorci I, ke kterému je navázána skupina G;

J může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže J je přítomna, J je (CH₂)_p, (CHR)_P, nebo (CRR’)_P, SO₂, NH, NR nebo O; a jestliže

10 J je nepřítomna, G je přítomna a E je přímo navázána na N ukázaný ve vzorci I jako navázaný na J;

L může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže L je přítomna, L je CH, CR, O, S nebo NR; a jestliže L je nepřítomna, potom M může být přítomna nebo nepřítomna; a jestliže je M přítomna a L

15 nepřítomna, potom M je přímo a nezávisle navázána na E, a J je přímo a nezávisle navázána na E;

M může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže M je přítomna, M je O, NR, S, SO₂, (CH₂)_p, (CHR)_p(CHR-CHR’)_p, nebo (CRR’)_P;

p je číslo od 0 do 6; a

20 R, R’, R², R³ a R⁴ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H; Ci-Cw-alkyl;

C₂-Cio-alkenyl; C3-C₈-cykloalkyl; C3-Cg-heterocykloalkyl, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, halogen; (cykloalkyl)alkyl a (heterocykloalkyl)alkyl, kde uvedený

25 cykloalkyl je vytvořen ze 3 až 8 atomů uhlíku, a 0 až 6 atomů kyslíku, dusíku, síry, nebo fosforu, a uvedený alkyl obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku; aryl; heteroaryl; alkylaryl; a alkylheteroaryl;

kde uvedené skupiny alkyl, heteroalkyl, alkenyl, heteroalkenyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl mohou být popřípadě a

30 chemicky vhodně substituovány, přičemž termín „substituovaný“ označuje případnou a chemicky vhodnou substituci jednou nebo více skupinami zvolenými ze skupiny alkyl, alkenýl, alkinyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, heterocykl, halogen, hydroxy, thio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, sulfonamido, sulfoxid, sulfon, sulfonylmočovina, hydrazid, a hydroxamát;

dále kde uvedená jednotka N-C-G-E-L-J-N znamená 5-člennou nebo 6-člennou cyklickou kruhovou strukturu s podmínkou, že jestliže tato jednotka N-C-G-E-L-J-N představuje 5-člennou cyklickou kruhovou strukturu, nebo jestliže bicyklická kruhová struktura ve vzorci I zahrnující N, C, G, E, L, J, N, A, Q, a M znamená 5-člennou cyklickou kruhovou strukturu, potom uvedená 5-členná cyklická kruhová struktura neobsahuje jako část cyklického kruhu karbonylovou skupinu.
2. Sloučenina podle nároku 1, kde R¹ je COR^{4 5}, a R^{5 *} je H, OH, COOR⁸ nebo CONR⁹R¹⁰.
3. Sloučenina podle nároku 2, kde R¹ je COCONR⁹R¹⁰, a R⁹ je H, R¹⁰ je H, R¹⁴, [CH(R¹’)]PCOOR¹¹, [CH(R¹')]PCONR¹²R¹³, [CH(R¹')]PSO2R¹¹, [CH(R¹')]pSO₂NR¹²R¹³, [CH(R¹')]_PCOR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²')COOR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²')CONR¹²R¹³, nebo CH(R¹’)CONHCH(R²')(R’), kde R¹⁴ je H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl, alkenyl, alkinyl nebo heteroaralkyl.
4. Sloučenina podle nároku 3, kde R¹⁰ je H, R¹⁴,

CH(R¹ )COOR¹¹, CH(R¹’)CH(R¹’)COOR¹¹, CH(R¹')CONR¹²R¹³,

CH(R¹')CH(R¹')CONR¹²R¹³, CH(R¹')CH(R¹')SO2R¹¹, CH(R¹ )CH(R¹)-SO2NR¹²R¹³, CH(R^r)CH(R¹)COR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²')COOR¹¹, . · · · · · ·

CH(R¹')CONHCH(R²')CONR¹²R¹³, nebo CH(R¹')CONHCH(R²’)(R'), kde R¹’ je H nebo alkyl, a R² je fenyl, substituovaný fenyl, heteroatomem substituovaný fenyl, thiofenyl, cykloalkyl, piperidyl nebo pyridyl.
5. Sloučenina podle nároku 4, kde R¹ je H.
6. Sloučenina podle nároku 5, kde R¹¹ je H, methyl, ethyl, allyl, ferc-butyl, benzyl, cc-methylbenzyl, a,a-dimethylbenzyl, 1-methylcyklopropyl nebo 1-methylcyklopentyl;

R’ je hydroxymethyl nebo CH2CONR¹²R¹³;

R² je nezávisle zvolena ze skupiny:

kde:

U¹ a U² mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny H, F, CH₂COOH, CH₂COOMe, CH₂CONH₂, CH₂CONHMe, CH₂CONMe₂, azido, amino, hydroxyl, substituovaný amino, substituovaný hydroxyl;

U³ a U⁴ mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny O a S;

U⁵ je zvolena ze skupiny alkylsulfonyl, arylsulfonyl, heteroalkylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, alkylkarbonyl, arylkarbonyl, heteroalkylkarbonyl, heteroarylkarbonyl, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, heteroaryloxykarbonyl, • ·· ·» ·· · · · · * · · · • · · · · ·« '*-•480 • ·· · alkylaminokarbonyi, arylaminokarbonyl, heteroarylaminokarbonyl nebo jejich kombinace; a

NR¹²R¹³ je zvoleno ze skupiny:

/—NH₂, NHMe, í-NH-n-Pr, A N(Me)OMe, νΆ-οη

H nAgh H |

Me

Me_K

Me Me

HnX/OH

Me

Me

H kde U⁶ je H, OH, nebo CH₂OH, a

R¹⁴ je zvoleno ze skupiny H, Me, Et, n-propyl, methoxy, cyklopropyl, n-butyl, 1 -but-3-inyl, benzyl, cc-methylbenzyl, fenethyl, allyl, 1but-3-enyl, OMe, cyklopropylmethyl
7. Sloučenina podle nároku 2, kde z následující skupiny

R² je zvolena ch₃ λ

II

Λ/W ·* ·· * · β Ο Ce · • · · · · • v«ř8i cf₃

F' ch₃ ch₃

Λ >

Xf i/w* k

o ch₃ ch₃ ^{r 1} f₃c' ? ch₃ch₃ čh₃ 'CH₃

S(0)o-2 ^YS(0)>2

9 = 0-3 ch₃ ch₃ ^fyA n = 0-3
8. Sloučenina podle nároku 7, kde R³ je zvolena z následující skupiny chPxh₃ ch₃ ch₃ch₃ ³ 'CH,

CH,

CH «ZViXu

P

H,C

SCH,

F F

CH₃. h₃c 'S COOEÍ ·· ·· *e » 9 · C ·· 99·· » · • · j nn · · 9 ··· **4*82 -»· ···· • 9 « » · · • ♦ · » · 9 9 ·· ··

COOH <ww «ΛΛΛ» >Vk/V^

AAASV «/W.

wvw

Me

OH

CÍ

Me Me

C!

Me'

Me

COOH

0-3 X

F₃ďOF₃ \AArt.

F^f *ww

VW\.

H-O j CH₃

R²¹ h₃c^/2'^ch3 ³ ch3

CF₃ γ19 kde

R³¹ je OH nebo O-alkyl;

Y¹⁹ je zvolena z následujících skupin:

•-..483.;

a Υ²⁰ je zvolena z následujících skupin:

Y Y X XX³ yA^ch₃ ‘ Y ^X^NHMs Ϊ <γΟΗ₃ \Ύ ch₃ Sloučenina podle

'COOH

15 Z následující skupiny

ChAcH, Υ, CH 'CH, ,31

COR'

SC2NH2

Voh₃

-NHAc

Ach₃ ch₃

COR' >0-4

ΛΛΑΛ» chAy

ΛΛ/Ά WW

OH

Me Me

CH₃

0-3 >WVV

Λ/ΙΛΛ ΛΛΖνΛ.

10. Sloučenina podle nároku 9, kde Z je N a R⁴ je H.

11 Sloučenina podle nároku 10, kde W je C-O.

12. Sloučenina podle nároku 11, kde Y je zvolena z následující skupiny

Me ^Me γ A -η·-, A v1

Y¹ . MeCbCr^

I

γ’44\

Υ¹³

ΗΧΟΟ

ΗΟΟ

HOOC <?h₃

Α y

CH₃ h₃cY

Η₃(/γ

COOH y

0-2

HOCC'

COOH y

• · • · ·· ·· • · · ·

1-3 y

OOH y

c₆h₅- y

COOH /

ch₃

CH \x

Z

F

Cl • ·

15 kde:

Y¹¹ je zvolena ze skupiny H, COOH, COOEt, OMe, Ph, OPh, NHMe, NHAc, NHPh, CH(Me)₂, 1-triazoiyl, 1-imidazolyl a NHCH₂COOH;

Y¹² je zvolena ze skupiny H, COOH, COOMe, OMe, F, Cl nebo Br; Y¹³ je zvolena z následujících skupin:

CbzHN

5 Y¹⁴ je zvolena ze skupiny MeSO₂, Ac, Boc, iBoc, Cbz, nebo Ailoc;

γΐ5 θ γΐ6 j_sou nezávisle zvoleny ze skupiny alkyl, aryl, heteroalkyl a heteroaryl;

Y¹⁷ je CF₃, NO_2i CONH₂, OH, COOCH3, OCH₃, OCeHs, C_SH₅, COC₆H₅, NH₂ nebo COOH; a w Y¹⁸ je COOCH3, NO₂, N(CH₃)₂, F, OCH₃, CH₂COOH, COOH, SO2NH2, nebo NHCOCH3.

13. Sloučenina podle nároku 12, kde Y je zvolena ze skupiny

CY.

MeX

Me

H

Me^>Ns

MeX

CCI₃ •7

Me i

Me^xřX MeX /

Me

N.

^-7

CH;

H₃COOC'

CH

COOH ^H00Cx^y

OH

X

ΗΟΟ

1-2

COOH

1-4

COOH

Me er

Mi ^Μβγφ mX ^Me

Me kde:

γ¹⁷ = CF₃, N0₂, CONH_2i OH, NH₂ nebo COOH;

Y¹⁸ = F, COOH.

14. Sloučenina podle nároku 13, kde Y je zvolena z následující skupiny • ·

15. Sloučenina podle nároku 14, kde L a M jsou nepřítomny a J je přímo navázána na E.

16. Sloučenina podle nároku 14, kde L, J a M jsou nepřítomny 5 a E je přímo navázána na N.

17. Sloučenina podle nároku 14, kde G a M jsou nepřítomny.

18. Sloučenina podle nároku 14, kde skupina znamena

2o 19. Sloučenina podle nároku 18, kde struktura a je zvolena z následujících struktur:

O

M9»..

kde R²⁰ je zvolena z následujících skupin:

21. Sloučenina podle nároku 18, kde struktura a je:

4 4 4 4 44 4« 4 4 4 · 44 4444 4 4 4 -4 4 · · 4 4 4 4 • 4 ···· -•494·*· 44 44

kde R²¹ a R²² mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny z následujících skupin:

22. Sloučenina podle nároku 18, kde struktura a je zvolena z 25 následujících struktur:

• ·· ·

23. Sloučenina podle nároku 14, kde b

kde Q může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže je Q přítomna, M je přímo navázána na A.

·· ····
9 e e e e e e e

25. Sloučenina podle nároku 14, znamená kde skupiny G a J jsou nezávisle zvoleny ze skupiny (CH₂)_P, (CHR)p, (CHR-CHR’)_P a (CRR’)_P; A a M jsou nezávisle zvoleny ze skupiny O, S, SO₂, NR, (CH₂)_P, (CHR)_P, (CHR-CHR’)_P, a (CRR’)_P; a Q je CH₂, CHR, CRR’, NH, NR, O, S, SO₂, NR, (CH₂)_P, (CHR)_P, a (CRR’)_P.

«4

44 4444 • 44

4 4 4 4 4

27. Sloučenina podle nároku 14, kde:

X,

Μ I je zvolena z následujících struktur:

44 44 4 4 44 4 4 4 4

4 4 β e β β 44 4

4 4 · 4 4 4 4

29. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje sloučeninu podle nároku io 1.

30. Farmaceutický prostředek podle nároku 29 pro použití při léčení onemocnění souvisejících s HCV.

15 31. Farmaceutický prostředek podle nároku 29, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič.

32. Farmaceutický prostředek podle nároku 31,

2o vyznačující se tím, že dále obsahuje antivirový prostředek.

33. Farmaceutický prostředek podle nároku 32, vyznačující se tím, že ještě dále obsahuje

25 interferon.

«4 ·»· • · · 4 « » • * 4 · • a ·«

34. Farmaceutický prostředek podle nároku 33, vyznačující se tím, že antivirový prostředek je ribavirin a interferon je α-interferon nebo pegylovaný interferon.

5 35. Způsob léčení onemocnění souvisejících s HCV, kde tento způsob zahrnuje podávání farmaceutického prostředku s obsahem terapeuticky účinných množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi v případě potřeby.

w 36. Způsob podle nároku 35, kde podání se provádí orálně nebo subkutánně.

37. Použití sloučeniny podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení onemocnění souvisejících s

15 HCV.

38. Způsob výroby farmaceutického prostředku pro léčení onemocnění souvisejících s HCV, vyznačující se tím, že se do dokonalého styku přivedou sloučenina podle nároku 1 a

2o farmaceuticky přijatelný nosič.

39. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů uvedené

25 sloučeniny nebo jejích prekurzorů, která je zvolena ze skupiny sloučenin:

• ♦» 00 · 4 • ·

0« ·· • «0 0 • 0 ·

00 000« * 0 0

0 0«

0 0 Λ

0 0 0 0

00 0«

Me' (R = t-butyl, X = NH₂) (R = Isobutyl, X = NH₂) (R = t-butyl, X = OH) (R = T richloroethyl, X = OH)

Me zXo.

<JL

-NH₂ (X = OH) (X = O^!Bu) (X = NH₂) (X = NHMe) (X = NMe^ °Ó °

-OH

Me

Me • · ·· ···· t- SD4’-!

• *····· (X = NKMe) (X = OH) (X = nh₂) (X = NMe₂) (R = t-butyl) (R = Isobutyl) (X = O*Bu) (X = OH) (X = NH₂) (X = NMe₂) (X = NMeOMe)

- 5ΐ)5*- • · · · · · ·· · · · ·

Me

O • · · · • · · ·

• · • « • · · ·

H,C

CH, v-

CH,

0« · · 0 0 00 0000 00 0 0 0000 ·0 0

- <1Π - · ·· · ·· · • 0 0 00 00 00 ·· ·· ····

-· 572 ·· «·«· ί * · 4 - _ • · · · «· ·· “AyS

· · ·· ·· • * • · · · • · « 6 9 e » * e • ·' » · · • • • • · « · · • • • · «.•AHA . « » * · · · « · • 9

*> «'«i . · « ·· ’· · · ·

9.« « '« '9 '9 < « β 6' · : ? . t : .·. i : ·.

• _ . * · · 9 · · · • _ ·· ···· «>· ··

Y=H,

*: ’ :

··

J 4

VyC·, · i ·· «· ·· ···« •sté -

H.C CH, • 4 i :

’5T7’-

Sk, ' - 5 T8 *· ·· » T · 1 ί 4 · i · · ·'·· ···· •» ···· ·· ·· ·'· ♦ * * • a '*···

L»· »· ♦ ·

Y

H,C CH,

CH_a

9 9 .52£· • I ·9 9 9 9 '·♦ ,9 ’· '·

9 ,Φ' ·

9. 9 -9 •9 ····

9« 999·

9 9'

9 · • 9

9 9 .9 9' • · 'β ♦♦ ♦ · » · « ·· *···

9 · · *· »*•520·- ·* *·** » · · · ·♦ ·*

44 ·· » · · « • 4 444» l·' · · · .· ·.· · • · 4 · « ·· 4444 ·· •526’- γ

/\

M-L η

• ·· ·* ·· ·* ···· *« · · · · · · · · · • · · a e β e c • ·ι··-· · '·· · · • > · · · · · * * •*•52·^- ·♦ ♦··· ·* ·· •a ···· o xz γ • 4 ···· • ··

44 · · β β

4 * ·· ♦· • · · · β β · • · · • · · ·· ···· β · · * · · · • · · · ·· ·· ·· ··*· ·· • · do··· ·· • · « · • · · • · · ·· ··«· • · · 9 ·· ·· ·· ···· ·· ·· • · ···· • · ·· • · · · · · • · • ·· · o

cw₃ • · • · • · · ·

-.5Λ5 o

o o

o • · • · · · · · o

·· ·· ·« ···· e · # « · β • C*5 Ο· · · · ·- ©00 · · · · • · ···· · · · · o

o o

« · * β β β β β ₆

40. Farmaceutický prostředek pro léčení onemocnění souvisejících s HCV, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 39 a farmaceuticky přijatelný nosič.

41. Farmaceutický prostředek podle nároku 40, vyznač u j í c í se tím, že dále obsahuje antivirový prostředek. 15 42. Farmaceutický prostředek podle nároku 41,

vyznačující se tím, že ještě dále obsahuje interferon nebo konjugát PEG - interferon alfa.

43. Farmaceutický prostředek podle nároku 42, 20 vyznačující se tím, že antivirový prostředek je ribavirin a interferon je alfa interferon.

44. Způsob léčení onemocnění souvisejícího s virem hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo

25 více sloučenin podle nároku 39.

45. Způsob modulace aktivity proteázy viru hepatitidy C, HCV, vyznačující se tím, že proteáza HCV se přivede do styku s jednou nebo více sloučeninami podle nároku 39.

46. Způsob léčení, prevence nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 39.

47. Způsob podle nároku 45, kde proteáza HCV je proteáza NS3/NS4a.

48. Způsob podle nároku 47, kde sloučenina nebo sloučeniny inhibují HCV proteázu ŇS3/NS4a.

49. Způsob modulace zpracování polypeptidu viru hepatitidy

C, HCV, vyznačující se tím, že se směs obsahující polypeptid HCV za podmínek, při kterých se tento polypeptid zpracovává, přivede do styku s jednou nebo více sloučeninami podle nároku 39.

50. Sloučenina podle nároku 8, kde skupina R³ je:

51. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerú, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

WS

52. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

nh₂

53. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

nh₂ o

• » * · · · I • · ♦ · · 9 • t - · · · <

·· 9 9 9 9

54. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

nh₂

55. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

NHc

56. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

57. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

nh₂

58. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

O· .NH • ···· :-344--:

59. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

60. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této

15 sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

61. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku sloučeninu včetně svých

25 enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

·· ·· ·· ·«···· ···· ·· ’-.βΛ5 • ·· ·· ·· ·· ·**· «4 44 β · « · « · β • · · · ···· · ···« • *· ·» ·· * · · β β β β β «β · • · »· · · · ··

62. Farmaceutický prostředek podle nároku 61, vyznačující se tím, že dále obsahuje antivirový prostředek.

5 63. Farmaceutický prostředek podle nároku 62, vyznačující se tím, že ještě dále obsahuje interferon nebo konjugát PEG - interferon alfa.

64. Farmaceutický prostředek podle nároku 63, io vyznačující se tím, že antivirový prostředek je ribavirin a interferon je interferon alfa.

65. Způsob léčení onemocnění souvisejících s HCV, kde tento způsob zahrnuje podávání farmaceutického prostředku s obsahem terapeuticky účinných množství sloučeniny včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je: