CZ303213B6 - Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostredek - Google Patents

Abstract

Sloucenina (boceprevir) s inhibicní aktivitou na proteázu viru hepatitidy C (HCV), a zpusob prípravy této slouceniny. Farmaceutické prostredky s obsahem této slouceniny jsou použitelné pro lécení infekce virem hepatitidy C.

Description

Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových inhibitorů proteázy hepatitidy C („HCV“), farmaceutických prostředků s obsahem jednoho nebo více těchto inhibitorů a použití těchto inhibitorů pro léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění. Vynález zvláště popisuje nové peptidové sloučeniny jako inhibitory serinové proteázy NS3/NS4a viru HCV.

Dosavadní stav techniky

Virus hepatitidy C (HCV) je pozitivní ((+)-sense) jednořetězcový RNA virus, který je podle předpokladů hlavním činitelem vyvolávajícím non-A, non-B hepatitidu (NANBH), zvláště s krví asociovanou NANBH (BB-NANBH) (viz mezinárodní patentová přihláška WO 89/04 669 a evropská patentová přihláška EP 381 216). NANBH je třeba odlišovat od jiných typů jatemích onemocnění indukovaných viry, jako je onemocnění vyvolané virem hepatitidy A (HAV), virem hepatitidy B (HBV), virem hepatitidy delta (HDV), cytomegalovirem (CMV) a virem Epstein20 Barrové (EBV), stejně jako od jiných forem jatemích onemocnění jako je alkoholismus a primární cirrhosa jater.

V nedávné době byla identifikována, klonována a exprimována proteáza HCV nezbytná pro zpracování polypeptidů a replikaci viru; viz například patent US 5 712 145. Tento polyprotein o při25 bližné délce 3000 aminokyselin obsahuje, od aminového konce ke karboxylovému konci, nukleokapsidový protein (C), obalové proteiny (El a E2) a několik nestruktumích proteinů (NS1, 2, 3, 4a, 5a a 5b). NS3 je protein o velikosti přibližně 68 kDa kódovaný přibližně 1893 nukleotidy genomu HCV, který obsahuje dvě odlišné domény: (a) doménu serinové proteázy, která se skládá z přibližně 200 N-koncových aminokyselin; a (b) doménu RNA-dependentní ATPázy na C-kon30 ci proteinu. Předpokládá se, že proteáza NS3 patří do skupiny chymotrypsinových proteáz z důvodů své podobnosti v sekvenci proteinu, celkové trojrozměrné struktuře a mechanismus katalýzy. Jiné enzymy podobné chymotrypsinu jsou elastáza, faktor Xa, thrombin, trypsin, plasmin, urokináza, tPa a PSA. Serinová proteáza viru HCV NS3 je odpovědná za proteolýzu polypeptidu (polyproteinu) ve spojeních NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a aNS5a/NS5b aje tedy odpovědná za vytvoření čtyř virových proteinů v průběhu replikace viru. Serinová proteáza NS3 viru HCV je tedy přitažlivým cílem pro antivirovou chemoterapii.

Bylo zjištěno, že protein NS4a, což je polypeptid o délce přibližně 6 kDa, je kofaktorem aktivity serinové proteázy u proteázy NS3. Autologní štěpení spojení NS3/NS4a serinovou proteázou

NS3/NS4a probíhá intramolekulámě (tj. cis), zatímco jiná místa štěpení jsou zpracována intermotekulámě (tj. trans).

Analýza přirozených štěpících míst proteázy HCV odhalila přítomnost cysteinu v místě Pl a šeřinu v místě ΡΓ a skutečnost, že tyto zbytky jsou ve spojeních NS4a/NS4b, NS4b/NS5a aNS5a/NS5b přísně konzervovány. Spojení NS3/NS4a obsahuje threonin v místě Pl a serin v místě ΡΓ. Substituce Cys->Thr v místě NS3/NS4a podle předpokladů odpovídá za požadavek cis namísto trans zpracování v místě tohoto spojení, viz např. Pizzi a další (1994), Proč. Nati, Acad. Sci. (USA) 91; 888 až 892, Failla a další (1996), Foldin & Design 1: 35 až 42. Štěpící místo NS3/NS4a je také tolerantnější vůči mutagenezi než jiná místa, viz např. Kollykhalov a další (1994), J. Virol. 68: 7525 až 7533. Bylo také zjištěno, že pro účinné štěpení jsou nezbytné kyselé zbytky v oblasti proti směru transkripce vzhledem k místu štěpení, viz např. Komoda a další (1994), J. Virol. 68: 7351 až 7357.

Mezi již popsané inhibitory proteázy HCV patří antioxidanty (viz mezinárodní patentová přihláš55 ka WO 98/14181), některé peptidy a peptidové analogy (viz mezinárodní patentová přihláška

- 1 CZ 303213 B6

WO 98/17679, Landro a další (1997), Biochem. 36: 9340 až 9348, Ingallinella a další (1998), Biochem. 37: 8906 až 8914, Llinas-Brunet a další (1998), Bioorg. Med. Chem. Lett 8: 1713 až 1718), inhibitory založené na polypeptidů o délce 70 aminokyselin eglin c (Martin a další (1998), Biochem. 37: 11459 až 11468), inhibitory afinitně selektované z lidského pankreatického sekreč5 ního inhibitoru trypsinu (hPSTI-C3) a miniprotilátky, tzv. miníbody reportoires (MBip) (Dimasi a další (1997), J. Virol. 71: 7461 až 7469), cV_HE2 („kamelizovaná“ variabilní doména fragmentu protilátky) (Martin a další (1997), Protein Eng. 10: 607 až 614), aal-antichymotrypsin (ACT) (Elzouki) a další (1997), J. Hepat 27: 42 až 28). Nedávno byl popsán ribozym navržený pro selektivní ničení RNA viru hepatitidy C (viz BioWorld Today 9 (217: 4 (10. listopadu 1998)).

io

Je možno odkázat také na zveřejněné PCT přihlášky WO 98/17 679, zveřejněná 30. dubna 1998 (Vertex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22 496 zveřejněná 28. května 1998 (F. HoffmanLa Roche AG); a WO 99/07734, zveřejněná 18. února 1999 (Boehringer Ingeheim Canada Ltd.).

Předpokládá se, že virus HCV se účastní cirrhosy jater a indukce hepatocelulámího karcinomu. Prognóza pro pacienty trpící infekcí HCV je v současnosti špatná. Infekci HCV je možné léčit obtížněji než jiné formy hepatitidy v důsledku nedostatku imunity nebo návratu onemocnění v souvislosti s infekcí HCV. Současné údaje ukazují, že po diagnóze cirrhosy je míra přežití po čtyřech letech 50 %. Pacienti s diagnózou lokalizovaného resektovatelného hepatocelulámího karcinomu mají míru přežití 5 let 10 až 30 %, zatímco pacienti s lokalizovaným neresektovatelným hepatocelulámím karcinomem mají míru přežití 5 let nižší než 1 %.

Odkazuje se také na článek A. Marchetti a další, Synleff, Sl, 1000 až 1002 (1999), ve kterém se popisuje syntéza bicyklických analogů inhibitoru proteázy NS3 viru HCV. Tam popisovaná slou25 cenina má vzorec:

Je možno také odkázat na článek autorů W. Han a další, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett. (2000) 10, 711 až 713, který popisuje přípravu některých a-ketoamidů, α-ketoesterů a a-diketonů obsahujících allylové a ethylové funkční skupiny.

Je také možno odkázat na WO 00/09 558 (Přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limited; zveřejněno 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce:

-2CZ 303213 B6 přičemž v uvedené přihlášce jsou definovány různé skupiny v tomto vzorci. Ilustrativní sloučenina této řady je:

Je možno také odkázat na dokument WO 00/09 543 (přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limi5 ted; zveřejněný 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce:

Z

a kde se definují různé substituenty obsažené v tomto vzorci. Pro ilustraci této řady sloučenin je možno uvést sloučeninu:

io Současné způsoby léčení hepatitidy C zahrnují léčbu interferonem-α (FNFa) a kombinovanou terapii ribavirinem a interferonem, viz např. Beremguer a další (1998), Proč. Assoc. Am. Physicians 110 (2): 98 až 112. Tyto způsoby léčení však mají nízkou míru trvalé odezvy a časté vedlejší účinky, viz např. Hoofnagle a další (1997), N. Engl. J. Med. 336: 347. V současnosti není k dispozici žádná vakcína proti infekci HCV.

Související patentové přihlášky Č 60/194,607, datum podání 5. dubna 2000, a č. 60/198,204, datum podání 19. dubna 2000, Č. 60/220,110, datum podání 21. července 2000, č. 60/220,109, datum podání 21. července 2000, Č. 60/220,107, datum podání 21. července 2000, č. 60/254,869,

-3CZ 303213 B6 datum podání 12. prosince 2000 a č. 60/220,101, datum podání 21. července 2000, popisují různé typy peptidů a/nebo jiných sloučenin jako inhibitorů serinové proteáz NS-3 viru hepatitidy C.

WO 99/07 734 popisuje peptidové analogy, které jsou údajně účinné proti viru hepatitidy C.

WO 98/17 679 popisuje sloučeniny pro inhibici proteáz, zvláště serinových proteáz, a zvláště proteáz HCV NS3.

Trvá potřeba nalézt nové způsoby léčení infekce HCV. Předmětem předkládaného vynálezu je proto poskytnutí sloučenin použitelných při léčbě nebo prevenci nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C.

Dalším předmětem předkládaného vynálezu je poskytnutí sloučenin použitelných pro modulaci aktivity serinových proteáz, zvláště serinové proteázy HCV NS3/NS4a.

Další předmět vynálezu je poskytnutí sloučenin použitelných pro modulaci zpracování polypeptidu HCV.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje novou skupinu inhibitorů proteázy HCV a farmaceutické prostředky obsahující jednu nebo více těchto sloučenin. Popisuje se použití uvedených sloučenin pro léčení, prevenci a zmírňování jednoho nebo více příznaků hepatitidy C. Popisují se také použití pro modulaci interakce polypeptidu HCV s proteázou HCV. Mezi poskytovanými sloučeninami jsou výhodné sloučeniny, které inhibují aktivitu serinové proteázy NS3/NS4a HCV. Předkládaný vynález poskytuje sloučeninu včetně enantiomerů, stereoizomerů, rotamerů, tautomerů a racemátů, a farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty uvedené sloučeniny.

Předmětem vynálezu je tedy bicyklická sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu viru hepatitidy C, kde tato sloučenina má strukturu:

včetně všech jejích stereoizomerů, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

-4CZ 303213 B6

V dalším provedení předkládaného vynálezu tato sloučenina má strukturu:

/

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

V dalším provedení předkládaného vynálezu tato sloučenina má strukturu

h f y ί κ

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

V dalším provedení předkládaného vynálezu tato sloučenina má strukturu io

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

V dalším provedení předkládaného vynálezu tato sloučenina má strukturu:

-5CZ 303213 B6

V dalším provedení předkládaného vynálezu tato sloučenina má strukturu:

V dalším provedení předkládaného vynálezu tato sloučenina má strukturu:

V dalším provedení předkládaného vynálezu tato sloučenina má strukturu:

Ve výhodném provedení předkládaný vynález poskytuje směs s inhibiční aktivitou na proteázu viru hepatitidy C, která obsahuje první sloučeninu podle definovanou výše nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl se strukturou

-6CZ 303213 B6 a druhou sloučeninou definovanou výše nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl se strukturou \/

nh₂

V dalším provedení předkládaný vynález poskytuje farmaceutický prostředek obsahující kteroukoli sloučeninu uvedenou výše nebo směs uvedenou výše a farmaceuticky přijatelný nosič.

V dalším provedení předkládaný vynález poskytuje použití kterékoli sloučeniny uvedené výše nebo směsi uvedené výše pro výrobu léčiva pro léčení infekce virem hepatitidy C.

Předmětem vynálezu je také kterákoli ze sloučenin uvedených výše nebo směs uvedená výše pro io použití pro léčení infekce virem hepatitidy C.

Předmětem vynálezu je také použití kombinace (i) kterékoli sloučeniny uvedené výše nebo směsi uvedené výše a (ii) interferonu nebo antivirové látky pro výrobu léčiva pro léčení infekce virem hepatitidy C.

Předmětem vynálezu je také použití kombinace (i) kterékoli sloučeniny uvedené výše nebo směsi uvedené výše, (ii) interferonu a (iii) antivirové látky pro výrobu léčiva pro léčení infekce virem hepatitidy C.

Ve výhodném provedení je uvedenou antivirovou látkou ribavirin. V dalším výhodném provedení interferon je a—interferon. V dalším výhodném provedení α-interferonje PEG-interferon.

Pokud není definováno jinak, všechny technické a vědecké termíny používané v předkládané přihlášce mají stejný význam běžně používaný odborníky v oboru, do kterého předkládaný vynález patří.

Vynález tedy také zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomery a jiné optické izomeiy sloučenin vzorce 1, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelné soli, solváty a deriváty.

Další předmět vynálezu jsou farmaceutické prostředky obsahující jako účinnou složku sloučeninu vzorce I (nebo její sůl, solvát nebo izomery) spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou.

Vynález také popisuje způsoby přípravy sloučenin vzorce I, stejně jako popisuje způsoby léčení onemocnění jako je například HCV, AIDS (syndrom získané imunitní nedostatečnosti) a souvisejících stavů. Způsoby léčení zahrnují podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo farmaceutických prostředků s obsahem sloučeniny vzorce I pacientovi v případě potřeby.

Popisuje se také použití sloučeniny vzorce Ϊ pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení HCV, AIDS a souvisejících stavů.

Popisuje se také způsob léčení onemocnění souvisejícího s virem hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle vynálezu.

-7CZ 303213 B6

Popisuje se také způsob modulace aktivity proteázy viru hepatitidy C (HCV), který zahrnuje uvedení proteázy HCV do kontaktu s jednou nebo více sloučeninami podle vynálezu.

Popisuje se také způsob léčení, prevence nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C, 5 který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle vynálezu. Proteáza

HCV je proteáza NS3 nebo NS4a. Sloučeniny podle vynálezu inhibují tuto proteázu. Modulují také zpracování polypeptidů viru hepatitidy C (HCV).

Podrobný popis výhodných provedení

V jednom provedení popisuje předkládaný vynález sloučeniny vzorce I jako inhibitory proteázy HCV, zvláště serinové proteázy HCV NS3/NS4a nebo jejich farmaceuticky přijatelný derivát, přičemž různé definice se uvádějí výše.

Sloučeniny podle vynálezu vykazují vynikající inhibiční aktivitu na proteázu HCV (rozmezí hodnot Kj* v nM). Rozmezí Kj* používaná v kontinuálním testu HCV:

Kategorie A = 1 až lOOnM; kategorie B = 101 až lOOOnM; kategorie C >1000nM.

V závislosti na své struktuře mohou tvořit sloučeniny podle vynálezu farmaceuticky přijatelné soli s organickými nebo anorganickými kyselinami, nebo organickými nebo anorganickými bázemi. Příklady vhodných kyselin pro tvorbu takových solí jsou kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, octová, citrónová, malonová, salicylová, jablečná, fumarová, jantarová, askorbová, maleinová, methan sul fonová a jiné minerální a karboxyiové kyseliny, dobře známé odborníkům v oboru. Pro tvorbu solí s bázemi jsou vhodné báze například NaOH, KOH, NH4OH, tetraalkylamonium-hydroxid, apod.

V dalším provedení poskytuje předkládaný vynález farmaceutické prostředky s obsahem peptidů podle vynálezu jako účinné složky. Tyto farmaceutické prostředky obecně dále obsahují farmaceuticky přijatelné nosné ředivo, pomocnou látku nebo nosič (souhrnně zde označované jako nosné materiály). Pro svou inhibiční aktivitu na HCV jsou takové farmaceutické prostředky použitelné při léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění,

V ještě dalším provedení popisuje předkládaný vynález způsoby přípravu farmaceutických prostředků s obsahem sloučenin podle vynálezu jako účinných složek. Ve farmaceutických prostředcích a způsobech podle předkládaného vynálezu budou účinné složky typicky podávány spolu s vhodnými nosnými materiály vhodně volenými s ohledem na zamýšlenou formu podávání, tj. orální tablety, kapsle (buď s pevnou, polotuhou, nebo kapalnou náplní), prášky pro rekonstituci, orální gely, elixíry, dispergovatelné granule, sirupy, suspenze apod., a v souladu s běžnou farmaceutickou praxí. Například pro orální podávání ve formě tablet nebo kapslí může být účinná složka léčiva kombinována sjakýmkoli orálním netoxickým farmaceuticky přijatelným inertním nosičem jako je laktóza, škrob, sacharóza, celulóza, stearan hořečnatý, fosforečnan vápenatý, síran vápenatý, talek, mannitol, ethylalkohol (kapalné formy) apod. Navíc mohou být do směsi v případě potřeby nebo nutnosti přidány vhodná pojivá, kluzné látky, rozvolňovadla a barviva. Prášky a tablety mohou obsahovat od přibližně 5 do přibližně 95 % hmotnostních prostředku podle vynálezu. Mezi vhodná pojivá patří škrob, želatina, přírodní cukry, kukuřičná sladidla, přírodní a syntetické gumy jako je akácie, alginát sodný, karboxymethylcelulóza, polyethylenglykol a vosky.

Mezi kluznými látkami je možno zmínit pro použití v těchto dávkových formách kyselinu boritou, benzoan sodný, octan sodný, chlorid sodný, apod. Rozvolňovadla zahrnují škrob, methylcelulózu, guarovou gumu apod.

-8CZ 303213 B6

V případě potřeby mohou být také přidána sladidla a ochucovací látky. Některé výše uvedené kategorie, zvláště rozvolňovadla, řediva, kluzné látky, pojivá apod. jsou podrobněji diskutovány dále.

Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být dále formulovány ve formě s prodlouženým uvolňováním, aby se dosáhlo uvolňování kterékoli složky nebo více složek nebo účinných látek řízenou rychlostí pro optimalizaci léčebných účinků, například inhibiční aktivity na HCV apod. Vhodné dávkové formy pro prodloužené uvolňování zahrnují vrstvené tablety obsahující vrstvy s různými rychlostmi rozpadávání, nebo polymemí matrice pro řízené uvolňování impregio nované účinnými složkami a tvarované do tablet nebo kapslí s obsahem těchto impregnovaných nebo zapouzdřených porézních polymemích matric.

Preparáty v kapalné formě zahrnují roztoky, suspenze a emulze. Jako příklad lze uvést vodu nebo roztoky voda-propylenglykol pro parenterální injekce nebo přidávání sladidel a sedativ pro orální roztoky, suspenze a emulze. Preparáty v kapalné formě mohou také zahrnovat roztoky pro intranazální podávání.

Aerosolové prostředky vhodné pro inhalaci mohou obsahovat roztoky a pevné látky ve formě prášku, které mohou být v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je inertní stlače20 ný plyn, např. dusík.

Pro přípravku čípků se nejprve nízkotající vosk jako je směs glyceridů mastných kyselin jako kakaové máslo nejprve roztaví a účinná složka se v tomto základu homogenně disperguje mícháním nebo podobným způsobem míšení. Roztavená homogenní směs se potom vlije do forem běž25 né velikosti, ponechá se ochladit a tím ztuhne.

Zahrnuty jsou také prostředky v pevné formě, které jsou určené pro převedení na kapalné prostředky buď pro orální, nebo parenterální podávání krátce před použitím. Takové kapalné formy zahrnují roztoky, suspenze a emulze.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány transdermálně. Transdermální prostředky mohou mít formu krémů, mlék, aerosolů a/nebo emulzí a mohou být obsaženy v transdermální náplasti typu matrice nebo zásobníku, jak je v oboru k tomuto účelu běžné.

S výhodou se sloučenina podává orálně, intravenózně nebo subkutánně.

Farmaceutický prostředek je s výhodou v jednotkové dávkové formě. V takové formě je prostředek rozdělený do jednotkových dávek vhodné velikosti obsahujících příslušná množství účinných složek, například účinné množství pro dosažení požadovaného účelu.

Množství účinné sloučeniny podle vynálezu v jednotkové dávce prostředku se může obecně lišit nebo nastavit od přibližně 1,0 do přibližně 1000 mg, s výhodou od přibližně 1,0 do přibližně 950 mg, výhodněji od přibližně 1,0 do přibližně 500 mg, a typicky od přibližně 1 do přibližně 250 mg, podle konkrétního použití. Použitá účinná dávka se může lišit v závislosti na věku, pohlaví, hmotnosti a vážnosti onemocnění pacienta. Tyto techniky jsou odborníkům v oboru dobře známé.

Orální dávková forma s obsahem účinných složek se obecně může podávat člověku 1 nebo 2 x za den. Množství a četnost podávání se bude upravovat podle úsudku ošetřujícího lékaře. Doporuče50 ný denní dávkový režim pro orální podávání může být obecně v rozmezí od přibližně 1,0 do přibližně 1000 mg za den, v jednotlivých nebo rozdělených dávkách.

-9CZ 303213 B6

Některé použité termíny jsou popsány dále:

Kapsle označuje zvláštní zásobník nebo obálku vyrobenou z methyleelulózy, polyvinylalkoholů nebo denaturovaných želatin nebo škrobu pro uchovávání obsažených prostředků s účinnými složkami. Kapsle (tobolky) s tvrdým obalem se typicky vyrábějí ze směsí želatin z kostí a vepřové kůže s vysokou pevností gelu. Samotná kapsle může obsahovat malá množství barviv, zakalovacích prostředků, plastifikátorů a ochranných látek.

Tableta označuje lisovanou nebo odlévanou pevnou dávkovou formu obsahující účinné složky s vhodnými ředivy. Tableta se může připravovat lisováním směsí nebo granulátů získaných granulací za mokra, granulací za sucha nebo kompaktizací.

Orální gely jsou účinné složky dispergované nebo solubilizované v hydrofilní polotuhé matrici.

Prášek pro rekonstituci označuje práškové směsi obsahující účinné složky a vhodná řediva, které mohou být suspendovány ve vodě nebo ovocných šťávách.

Ředivo označuje látky, které obvykle tvoří hlavní část prostředku nebo dávkové formy. Mezi vhodná řediva patří cukry jako je laktóza, sacharóza, mannitol a sorbitoi; škroby odvozené z pše20 nice, kukuřice, rýže a brambor; a celulózy jako je mikrokrystalická celulóza. Množství řediva v prostředku může být v rozmezí od přibližně 10 do přibližně 90 % hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 25 do přibližně 75 %, výhodněji od přibližně 30 do přibližně 60 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 12 do přibližně 60 %.

Rozvolňovadlo označuje materiály přidávané do prostředku, aby napomáhaly jeho rozpadu (desintegraci) a uvolnění účinných látek. Mezi vhodná rozvolňovadla patří Škroby; „za studená rozpustné“ modifikované Škroby jako je sodný karboxymethylškrob; přírodní a syntetické gumy jako je karubová guma, karaya, guar, tragakant a agar; deriváty celulózy jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylcelulózy; mikrokrystalické celulózy a zesítěné mikrokrystalické celu30 lózy jako je sodná sůl kroskarmelózy; algináty jako je kyselina alginová a aiginát sodný; j íly jako jsou bentoniny; a šumivé směsi. Množství rozvolňovadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 15 % hmotnostních z prostředku, výhodněji od přibližně 4 do přibližně 10 % hmotnostních.

Pojivo označuje látku, která váže nebo „lepí“ prášky dohromady a přivádí je do kohezivního stavu vytvářením granulí, a ve formulaci slouží jako „adhezní látka“. Pojivá zvyšují kohezivní pevnost, která je již získána pomocí řediva nebo objemotvomého prostředku. Vhodná pojivá zahrnují cukry jako je sacharóza; škroby odvozené od pšenice, kukuřice, rýže a brambor; přírodní gumy jako je akácie, želatina a tragakant; deriváty mořských řas jako je kyselina alginová, aiginát sod40 ný a aiginát vápenatoamonný; celulózové materiály jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylcelulózy a hydroxypropylmethylceiulóza; polyvinylpyrrolidon; a anorganické látky jako je křemičitan hlinitý. Množství pojivá v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 20 % hmotnostních z prostředku, výhodněji od přibližně 3 do přibližně 10 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 3 do přibližně 6 % hmotnostních.

Mazadlo označuje látku přidanou k dávkové formě pro umožnění uvolnění tablet, granulí atd. po lisování zraznice nebo matrice snížením tření nebo otěru. Vhodná mazadla zahrnují kovové stearany jako je stearan hořečnatý, stearan vápenatý nebo stearan draselný; kyselinu stearovou; vysokotající vosky; a ve vodě rozpustná mazadla jako je chlorid sodný, benzoan sodný, octan sodný, oleát sodný, polyethylenglykoly a d/l-leucin. Mazadla se obvykle přidávají až v posledním kroku před lisováním, protože musí být přítomná na površích granulí a mezi nimi a částmi tabletovacího lisu. Množství mazadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 0,2 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 %, výhodněji od přibližně 0,3 do přibližně 1,5 % hmotnostních.

- 10CZ 303213 B6

Kluzná látka je materiál, který zabraňuje shlukování a zlepšuje tokové vlastnosti granulátů, takže se dosáhne hladkého a stejnoměrného toku. Mezi vhodné kluzné látky patří oxid křemičitý a talek. Množství kluzné látky v prostředku může být od přibližně 0,1 % do přibližně 5 % hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 % hmotnostních.

Barviva jsou pomocné látky, které poskytují prostředku nebo dávkové formě zbarvení. Tyto pomocné látky mohou zahrnovat potravinářská barviva a potravinářská barviva adsorbovaná na vhodný adsorbent jako je jíl nebo oxid hlinitý. Množství barviva se může lišit od přibližně 0,1 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,1 do přibližně 1 %.

Biologická dostupnost označuje rychlost a míru, ve které se účinná složka nebo terapeutická část absorbuje do systémového oběhu z podané dávkové formy ve srovnání se standardem nebo kontrolou.

Běžné způsoby přípravy tablet jsou známé. Tyto metody zahrnují suché metody jako je přímé lisování nebo lisování granulátu vyrobeného kompaktizací, nebo mokré metody nebo jiné speciální postupy. Běžné metody pro výrobu jiných forem pro podávání, jako jsou například kapsle, čípky apod., jsou rovněž dobře známé v oboru.

Popisované farmaceutické prostředky mohou být používány pro léčení onemocnění jako je například hepatitida C apod. Tento způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství farmaceutického prostředku podle vynálezu pacientovi trpícímu takovým onemocněním v případě potřeby.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být používány pro léčbu HCV u člověka v monoterapii nebo při kombinační terapii (např. v dvojité nebo trojité kombinaci atd.), jako například v kombinaci s antivirovými prostředky a/nebo imunomodulačními prostředky.

Příklady takových antivirových a/nebo imunomodulačních prostředků zahrnují Ribavirin (firmy

Schering-Plough Corporation, Madison, New Jersey) a Levovirin™ (firmy ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, California), VP 50406™ (firmy Viropharma, Incorporated, Exton, Pennsylvania), ISIS 14803™ (firmy ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, California), Heptazyme™ (firmy Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497™ (firmy Vertex Pharmaceuticals, Cambridge, Massachusetts), Thymosin™ (firmy SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California), Maxa35 mine™ (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California), mykofenolátmofetil (firmy HoffmanLaRoche, Nutley, New Jersey), interferon (jako je například interferon-alfa, konjugáty PEGinterferonu-alfa) apod. „Konjugáty PEG-interferon-alfa“ jsou molekuly interferonu alfa kovalentně navázané na molekulu PEG. Ilustrativní konjugáty PEG-interferon alfa zahrnují interferon alfa-2a (Roferon™, firmy Hoffman La-Roche, Nutley, New Jersey) ve formě pegylovaného interferonu alfa-2a (např. dodávaný pod obchodním názvem Pegasys™), interferon alfa-2b (Intron™, firmy Schering-Plough Corporation) ve formě pegylovaného interferonu alfa-2b (např. dodávaného pod obchodním názvem PEG-lntron™), interferon alfa-2a (Berofor Alpha , firmy Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Německo) nebo konvenční interferon definovaný určením konvenční sekvence v přírodě se vyskytujících interferonů alfa (Intergen , firmy Amgen, Thou45 sand Oaks, Kalifornie).

Jak bylo uvedeno výše, předkládaný vynález zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomeiy a jiné stereoizomery sloučenin. Jak bude tedy odborníkovi v oboru zřejmé, některé ze sloučenin podle vynálezu mohou existovat ve vhodných izomemích formách. Tyto varianty rovněž spadají do rámce předkládaného vynálezu.

Sloučeniny podle vynálezu se mohou připravovat řadou způsobu známých v oboru, reprezentativní ilustrativní postupy jsou uvedeny v následujících schématech. Následující ilustrativní schémata popisují přípravu širší skupiny příbuzných sloučenin, přičemž příklad XXIV popisuje pří55 právu sloučenin podle vynálezu. Ostatní příklady se poskytují pro srovnání.

- 11 CZ 303213 B6

V popisu schémat, příprav a příkladů se používají následující zkratky:

THF

DMF EtOAc AcOH HOOBt EDCI io NMM ADDP DEAD MeOH EtOH

Et₂O DMSO HOBt PyBrOP DCM

DCC TEMPO Phg Chg Bn

Bzl Et Ph i Boc iPr *Bu nebo Bu*; Boc Cbz Cp Ts

Me HATU DMAP Bop

Tetrahydrofuran

N ,N-D i methy I formám id

Ethylacetát

Kyselina octová

3- Hydroxy-l ,2,3-benzotriazin_4(3H)-on

Hydrochlorid l-(3-di methy lam inopropyl)-3-ethylkarbodiitnidu

A-Methylmorfolin

1,1 '-{Azodikarbonyl)dipiperidin

Diethyl azod ikarboxy lát

Methanol

Ethanol

Diethylether

Dimethylsulfoxid

N-Hydroxybenzotriazol

Brom-tris-pyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát

Dichlormethan

1,3-Dicyklohexylkarbodiimid

2,2,6,6-Tetramethyl-l-piperidinyloxy

Fenylglycín

Cyklohexylglycin

Benzyl

Benzyl

Ethyl

Fenyl

I sobutoxy karbony 1

Isopropyl terc-Butyl terc-Buty loxykarbony 1

Benzy loxy karbonyl

Cyklopentyl díenyl p-Toluensulfonyl

Methyl

0-<7-Azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfát

4- N,N-Dimethylaminopyridin

Benzotriazol-1 -y l-oxy-tris(dimethylamino)hexafluorfosfát

- 12CZ 303213 B6

Obecná schémata přípravy

Následující schémata popisují způsoby syntézy meziproduktů - stavebních bloků.

Schéma 1

-13CZ 303213 B6

Schéma 2

BocH

o (1.1)

Schéma 3

HS

BF₃a₂O < Jf

Cbz^^^COOMe (3.2)

1. TMSl (3 ekv.), 30 mtn

2. Boc₂0 (4 ekv.)/ (i-Pr)₂NEt ¢3 ,1 ekv.)/ THF, 20 min

Jt!CL

JJOH , _Λ dioxan ζ j dioxan -H₂O

HCí- eo^^C^cOOMe n

Boc^xN^^COOH (3.5) (3.3) (3.4)

- 14CZ 303213 B6

Schéma 4

Schéma 5

-15CZ 303213 B6

Schéma 6

IBoc-Chg-OH (6.0)

OCH₂Ph HOOBt EDCI, NMM

_N ^/yOCH₂Ph Ibcc-Chg o (6.2)

NaOCt

NaBr

TEMPO

H2 « yOCH₂Ph pd/C Ibcc Chg q (boc Chg o

OH (6.4) (6.3)

Schéma 7

-16CZ 303213 B6

Schéma 8

O

BOP, NMM CH₃ONHCH₃.HCl

BocHN.

N^ACH₃ ch₃

LíAIH₄

OH

CIH₃N

cooch₃

R

OH

BocHLk _x kde R = (CH₃)₂C(OH)CN

Et₃N

1. BOC2O

2. LÍOH7 thf/h₂o ’CONH₂

OH

BocHN

CN

R

BocHN

OH

COOH

4M HCl/Díoxan

AcCI, CH₃OH

NH4CI, EDCl

HOOBt

OH

ČlHsNykcONH,

R

-17Schéma 9

Schéma 10

(Boc)₂G

DMAP

Boc

Et₃N

CH₃CN

CO₂tBu

Bcc

CHCI₃

NaOH(50%)

Et₃NBnCl

CI^CI ^/^CO₂tSu

CF₃CO₂H ch₂ci₂

Boc ci^,ci

H CF₃CO₂H

HCi

MeOH

Cl^Cl

BocHN^CO₂H ^/^CO₂Me H · HCI

HATU iPr,NEt

DMF

Cl^CI

-19CZ 303213 B6

8F₃ . Me₂0 / CH₂CI₂

Schéma 12

KOH

MeOH, H₂O 40 °C, 16 h

N BOc 'CO₂H

-20CZ 303213 B6

Schéma 13

SMe ’SMe

BocjO

BocNH^/x.

MCPBA

Et₃N, CH₂CI₂ ^tB0CNH^'í-_Me

II

O

4M HCI dioxan

HC1.H₂N

Schéma 14 ch₃c₆h₄so₂ci ——--DMAP/báze (Boc)₂NH

Cs₂CO₃

Lil aceton

Boc^z

4M HCI

-- HCl.H₂W\p\^ dioxan

Schéma 15 o o _ΟΛ_Ν-^Ρ

H

OH

DCC, DMAP ^0H ch₂ci₂

H₂, 10% Pd/C vod. 10% HCI isopropanol

O rA

HCI.H₂Nr OP

-21 CZ 303213 B6

Schéma 16

‘oko tábor, teplota

Ph

Ha.H₂N^CONMe₂

1. HOOBt, EDCI NMM, DMF

2. 4N HCI, díoxan

Schéma 17 °\_y°

O Q v_y

CO₂Et

-22CZ 303213 B6

KHMDS trisylazid

HCO₂H

-23CZ 303213 B6

Schéma 18 πΒιι₄ΝΟΗ (Boc)₂O

Schéma 19

H₂ (345 kPa) Rh na C. 7 dnů

Schéma 20

V^H

CF₃

Et₃N_t CH₃CN

N.N-disukcinimidylkarbonát

-24CZ 303213 B6

Příprava meziproduktů

Preparativní příklad 1

Krok A Sloučenina (1.1)

K míchanému roztoku sloučeniny (1.08) (3,00 g, 12,0 mmol (S. L. Harbeson a další, J. Med Chem. 37 No. 18 (1994) 2918 až 2929) v DMF (15 ml) a CH₂C1₂ (15 ml) byly při-20 °C přidány io HOOBt (1,97 g, 12,0 mmol), TV-methylmorfolin (4,0 ml, 36,0 mmol) a EDCI (2,79 g, 14,5 mmol) a směs byla míchána 10 min, a potom byl přidán HCl.H₂N-Gly-OBn (2,56 g, 13,0 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 2 h, udržován v chladicím boxu přes noc a potom zakoncentrován do sucha, a potom zředěn EtOAc (150 ml). Roztok EtOAc byl potom dvakrát promyt nasyceným NaHCO₃, H₂O 5% H₃PO₄, roztokem soli, sušen nad Na₂SO₄, zfiltrován a zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (1.09) (4,5 g, 94 %). LRMS m/z MH⁺ = 395,1.

Krok B Sloučenina (1.1)

OH un jr

BocHN^X^ N f ° (1.09) 'Ph

(1-1)

Roztok sloučeniny (1.09) (7,00 g, 17,8 mmol) v absolutním ethanoíu (300 ml) byl míchán při tep20 lotě laboratoře v atmosféře vodíku v přítomnosti Pd-C (300 mg, 10 %). Postup reakce byl monitorován TLC. Po 2 h byla směs zfiltrována přes lože celitu a získaný roztok byl zakoncentrován ve vakuu za získání sloučeniny (1.1) (5,40 g, kvantitativní). LRMS m/z MH⁺ = 305,1.

Preparativní příklad 2 Krok A Sloučenina (1.3) ?^H H í? ™ , hX^COOBu'

Q Ph

BocHN ^Ν'·^'n^COOBu¹

J 5 ^H (1.1) (1.2) (1.3)

Směs sloučeniny (1.1) z preparativního příkladu 1, krok B výše (1 ekv.), sloučeniny (1.2) (firmy

Novabiochem, katalogové číslo 04-12-5147) (1,03 ekv.), HOOBt (1,03 ekv.), N-methylmorfolinu (2,2 ekv.) a dimethylformamidu (70 mí/g) byla míchána při -20 °C. Byl přidán EDCI (1,04 ekv.) a reakční směs byla míchána 48 h. Reakční směs byla vlita do 5% vodného KH₂PO₄ a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty chladným 5% vod-25CZ 303213 B6 ným K₂CO₃, potom 5% vodným ΚΗ2ΡΟ4» potom roztokem soli, a organická vrstva byla sušena nad bezvodým MgSCh- Směs byla zfíltrována, potom odpařena a filtrát sušen ve vakuu, zbytek byl rozetřen s Et₂O-hexanem, a zfiltrován, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (1.3) (86% výtěžek), C25H39N3O7 (493,60), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 494,3.

Krok B Sloučenina (1.4)

Sloučenina (1.3) z preparativního příklad 2, krok A (3,0 g) byla smísena s 4N HCl/dioxan (36 ml) a míchána pří teplotě laboratoře 7 min. Směs byla vlita do 1,5 1 chladného (5 °C) hexanu a míchá10 na, potom ponechána v chladu stát 0,5 h. Směs byla zfíltrována odsátím v suché atmosféře a oddělená pevná látka byla dále sušena, za získání v názvu uvedené sloučeniny (1.4) (2,3 g, 88% výtěžek), C_mH3,N₃O5.HCI. 'H NMR (DMSO-cVNaOD) δ 7,38 (m, 5H), 5,25 (m, IH), 4,3 4,1 (m, IH), 3,8 (m, 2H), 3,4 - 3,3 (m, překiytý D₂O), 1,7 - 1,1 (m, 4H), 1,35 (s,9H), 0,83 (m, 3H).

Preparativní příklad 3 Sloučenina (1.5)

BocHN

H _n ° Ph BocHN X.ÍM-.A

N COOBu H (1-5)

Sloučenina (l .3) z preparativního příkladu 2, krok A, byla zpracována v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 7, krok A níže, za poskytnutí sloučeniny (1.5).

Preparativní příklad 4 Sloučenina (1.6)

Sloučenina (1.5) z preparativního příkladu 3 byla zpracována v podstatě stejným způsobem jako 30 v preparativním příkladu 2, krok B, za získání sloučeniny (1.6).

-26CZ 303213 B6

Preparativní příklad 5 Krok A Sloučenina (2.09)

(2.08) (2.09)

K roztoku hydrochloridu dimethy laminu (1,61 g, 19,7 mmol), V-Boc-fenylglycinu, sloučeniny (2.08) (4,50 g, 17,9 mmol, Bachem Co. # A-2225), HOOBt(3,07g, 18,8 mmol) a EDC1 (4,12 g, 21,5 mmol) v bezvodém DMF (200 ml) a CH₂C1₂ (150 ml) byl při -20 °C přidán NMM (5,90 ml, 53,7 mmol). Po 30 min míchání při této teplotě byla reakční směs udržována v mrazicím boxu pres noc (18 h). Potom byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byly přidány EtOAc (450 ml), roztok soli (100 ml) a 5% H₃PO₄ (100 ml). Po oddělení vrstev byla organická vrstva promyta 5% H₃PO₄ (100 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 150 ml), vodou (150 ml) a roztokem soli (150 ml), sušena (MgSO₄), zfiltrována a zákonce ntrována ve vakuu, za získání sloučeniny (2,09) (4,86 g) jako bílé pevné látky, která byla použita bez dalšího čištění.

Krok B Sloučenina (2.1)

Λ '^H3 8<κΗΝ'^Αγ^ΝΌΗ₃ (2.09)

Sloučenina (2.09) z preparativního příkladu 5, krok A (4,70 g, surová) byla rozpuštěna ve 4N HCI (60 ml, 240 mmol) a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře. Vývin reakce byl monitorován TLC. Po 4 h byl roztok zakoncentrován ve vakuu za získání sloučeniny (2.1) jako bílé pevné látky, která byla použita v příští reakci bez dalšího čištění. LRMS m/z MH⁺ = 179,0.

Preparativní příklad 6

Krok A Sloučenina (2.2)

BocHN on w θ

N A hci τ ^OH ₊ H₂N^CONMe₂ (U) (2.1)

BocHN

V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, s použitím hydrochloridu fenylglycin-N,N-dimethylamidu namísto hydrochloridu fenylglycin-t-butylesteru byla připravena sloučenina (2.2). Hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 465,3.

-27CZ 303213 B6

Krok B Sloučenina (2.3)

OH

BocHN

O ^Ph

V-A,

H

CONMe-

OH

O ^{Ph Nx}^N^X^CONMe,

H (2-2) (2.3)

Sloučenina (2.2) z kroku A (1,85 g) byla ponechána reagovat se směsí 4N HCl/dioxan (50 ml) pri teplotě laboratoře 1 h. Směs byla odpařena ve vakuu ve vodní lázni pri teplotě 20 °C, smí sena s isopropyletherem, zfiltrována a sušena za poskytnutí sloučeniny (2.3) (1,57 g, 98% výtěžek), C18H28N4O4.HCI, hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 365,3.

Preparativní příklad 7

Krok A Sloučenina (2.4) ?^{H H} 11 1

BocHN

CONMe₂

Β00ΗΝ^γ^^Λ_εοΝΜβζ

Roztok sloučeniny (2.2) z preparativního příkladu 5, krok A (2,0 g) v dichlormethanu (60 ml) byl smí sen s d i methyl sul fox idem (3,0 ml) a kyselinou 2,2-dichloroctovou (0,70 ml). Míchaná směs byla ochlazena na 5 °C a potom byl přidán 1M roztok dicyklohexylkarbodiimid/dichlormethan (8,5 ml). Chladná lázeň byla odstraněna a směs byla míchána 22 h. Byl přidán 2-propanol (0,5 ml) a míchání pokračovalo 1 h. Směs byla zfiltrována, promyta ledově chladným Ο,ΙΝ NaOH (50 ml), potom ledově chladným Ο,ΙΝ HCI (50 ml), potom 5% vodným KH2P4, potom nasyceným roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým síranem hořečnatým, potom zfiltrován. Filtrát byl odpařen a čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí ethylacetátem, za získání sloučeniny (2.3) (1,87 g, 94% výtěžek), C23H34N4O6, hmotnostní spektrum (FAB) M+l =463,3.

Krok B Sloučenina (2.5)

O Η θ Jf (2.4)

HCI

Ph ^N'^'fj'^^S'CONMe₂ (2.5)

V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok B, byla připravena sloučenina (2.5).

-28 Cbz'” CO OMe (3.1)

Preparativní příklad 8 Krok A Sloučenina (3.1)

ΌΗ

Cbz^xirXOOMe (3-01)

V baňce byly smíchány methylester N-Cbz-hydroxyprolinu (dostupný od firmy Bachem Biosciences, Incorporated, King of Prussia, Pennsylvánie), sloučenina (3.01) (3,0 g), toluen (30 ml) a ethylacetát (30 ml). Směs byla důkladně míchána a potom byl přidán roztok NaBr/voda (1,28 g/5 ml). Do tohoto roztoku byl přidán 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxylovaný volný radikál (TEMPO, 17 mg, Aldrich Chemicals, Milwaukee, Wisconsin). Míchaná směs byla ochlaio zena na 5 °C a potom byly po kapkách přidány připravený roztok oxídantu [komerčně dostupný bělicí prostředek, Cloro® (18 ml), NaHCO₃ (2,75 g) a voda pro doplnění na 40 ml] v průběhu 0,5 h. Ke směsi byl přidán 2-propanol (0,2 ml). Organická vrstva byla oddělena a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem. Organické extrakty byly spojeny, promyty 2% thiosíranem sodným, potom nasyceným roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfilt15 rován a filtrát odpařen ve vakuu za získání bledě žluté gumy vhodné pro následující reakce (2,9 g, 97% výtěžek). C₁₄Hi₅NO₅ (277,28), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 278,1.

Krok B Sloučenina (3.2)

(3.1) (3.2)

Sloučenina (3.1) z kroku A výše (7,8 g) byla rozpuštěna v dichlormethanu (100 ml) a ochlazena na 15 °C. K této směsi byl nejprve přidán 1,3-propandithiol (3,1 ml) a potom čerstvě předestilovaný etherát fluoridu boritého (3,7 ml). Směs byla míchána pri teplotě laboratoře 18 h. Během důkladného míchání byl opatrně přidán roztok K₂CO₃/voda (2g/30ml), a potom nasycený NaHCO₃ (10 ml). Organická vrstva byla oddělena od vodné vrstvy (pH ~7,4), promyta vodou (10 ml), potom roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografii na silikagelu s elucí toluenem, potom gradientem hexan-Et₂O (2 : 3 až 0 : 1) za získání hnědého oleje (7,0 g, 68% výtěžek), Ci7H₂]NO₄S₂ (367,48), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 368,1.

Krok C Sloučenina (3.3) ^^f^COOMe (3-2) rr %

Bo^^^COOMe (33)

Roztok sloučeniny (3.2) z kroku B výše (45 g) v acetonitrilu (800 ml) byl najednou pri 20 °C smísen s čerstvě předestilovaným jodtrimethylsilanem (53 ml). Reakční směs byla míchána po

-29CZ 303213 B6 dobu 30 min, potom vlita do čerstvě připraveného roztoku di-t-butyldikarbonátu (107 g), ethyletheru (150 ml) a diisopropylethylaminu (66,5 ml). Směs byla míchána ještě 30 min, promyta hexanem (2 x 500 ml). K nižší acetontrilové vrstvě by přidán ethylacetát (1000 ml) a potom byla vrstva promyta 10% vodným KH₂PO₄ (2 x 700 ml), a roztokem soli. Filtrát byl odpařen ve vakuu ve vodní lázni při 25 °C, převeden do Čerstvého ethylacetátu (1000 ml), a postupně promyt 0,lN HCI, 0,lN NaOH, 10% vodným KH₂PO₄, a roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek (66 g) byl čištěn chromatografii na silikagelu (2 kg), s elucí hexanem (2 I), potom směsí Et₂O/hexan (55 : 45,2 1), potom Et₂O (2 l), za získání oranžové gumy, která pomalu krystalizovala za stání (28 g, 69% výtěžek), io C|₄H₂₃NO₄S₂ (333,46), hmotnostní spektrum (FAB) M+I = 334,1.

Krok D Sloučenina (3.4)

O

Boď'^K~'^COOMe

O * tí

Bo<r^N^^COOH (3.3) (3.4)

Roztok sloučeniny (3.3) z kroku C výše (11 g) v dioxanu (150 ml) při 20 °C byl smísen s IN vodným LiOH (47 ml) a míchán 30 h. Směs byla zakoncentrována ve vakuu ve vodní lázni při 30 °C na poloviční objem. Zbytek byl zředěn vodou (300 ml), extrahován Et₂O (2 x 200 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH -4 použitím 12N HCI (3 až 4 ml), extrahována ethylacetátem a promyta roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, filtrován a odpařen ve vakuu za získání sloučeniny (3.4) (8,1 g, 78%), C|₃H₂iNO₄S₂ (319,44), hmotnostní spektrum (FAB) M+l -320,1.

Krok E Sloučenina (3.5)

K roztoku sloučeniny (3.3) z kroku C výše (1 g) v dioxanu (5 ml), byl přidán 4N roztok HC125 dioxan (50 ml). Směs byla důkladně míchána 1 h. Směs byla odpařena ve vakuu ve 25 °C vodní lázni. Zbytek byl smísen s Et₂O a zfiltrován, za získání v názvu uvedené sloučeniny (0,76 g, 93% výtěžek), C9H15NO2S2.HCI (269,81), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 234,0.

-30CZ 303213 B6

Preparativní příklad 9 Krok A Sloučenina (3.6)

r~]

Použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příklad 8, krok B, s použitím ethandithiolu namísto propandithiolu, byla získána sloučenina (3.6).

Krok B Sloučenina (3.7)

Γ~1 ΓΊ

io S použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příklad 8, krok C, s použitím sloučeniny (3,6) namísto sloučeniny (3.2) byla získána sloučenina (3.7).

KrokC Sloučenina (3.8)

ΓΊ

o, _ ^»COOH

Boc (3.8)

S použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příkladu 8, krok D, s použitím sloučeniny (3.7) namísto sloučeniny (3.3) byla získána sloučenina (3.8).

Krok D Sloučenina (3.9)

ΓΊ

ΓΊ

S použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příkladu 8, krok E, s nahrazením sloučeniny (3.7) místo (3.3) byla získána sloučenina (3.9).

-31 CZ 303213 B6

Preparativní příklad 10

S použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příklad 2, krok A byla připravena sloučenina (4.1), C33H48N4O9S2 (708,89).

Krok B Sloučenina (4.2)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok B byla připravena sloučenina (4.2), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 609,3.

Krok C Sloučenina (4.3)

ΓΊ

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A, byla připravena sloučenina (4.3), C₄|H₆|N₅OioS2 (708,89), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 709,3.

-32CZ 303213 B6

sloučenina (4.4).

Preparativní příklad 11

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A, byla připravena sloučenina (4.5).

Krok B Sloučenina (4.6)

sloučenina (4.6).

-33CZ 303213 B6

Krok C Sloučenina (4.7) n

Sloučenina (4.9) z preparati vního příkladu 12, byla ponechána reagovat se sloučeninou (4.6) z kroku B výše, v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za získání sloučeniny (4.7).

Krok D Sloučenina (4.8)

io sloučenina (4,8).

Preparativní příklad 12

Sloučenina (4.9) /-BuOCOCI + H-Chg-OH-> lboc-Chg-OH (4.01) (4.02) (4.9)

Roztok L-cyklohexyIglycinu (4.02) (1,0 ekv.), dimethylformamidu (20 ml/g) a diisopropylethy 1aminu (1,1 ekv.) byl při 5 °C smísen s isobutylchlorformátem (4.01) (1,1 ekv.). Chladná lázeň byla odstraněna a směs byla míchána 6 h. Reakční směs byla vlita do 5% vodného KH₂PO₄ a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty 5% vodným K₂CO₃, potom 5% vodným KH₂PO₄, potom roztokem soli, a organické vrstvy byly sušeny nad bezvodým MgSO₄. Směs se zfiltruje, filtrát odpaří ve vakuu, zbytek se čistí v případě potřeby chromatografií nebo jiným způsobem, zbytek se rozetře se směsí Et₂O-hexan, a zfiltruje, za získání v názvu uvedené sloučeniny (4.9), Ci₃H₂₃NO₄ (257,33).

-34CZ 303213 B6

Preparativní příklad 13

Sloučenina (13,1)

Z-BuOCOCI + H-Thr(Bzl)-OH-> lboc-Thr(Bzl)-OH (4.01) (13.02) (13.1)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 12, s použitím L-Obenzylthreoninu (13.02) (Wang et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (1997) No. 5,621 až 624) namísto L-cyklohexylglycinu (4.02) se připraví sloučenina (13.1), Ci₆H₂3NO₅ (309,36), hmotnostní spektrum (FAB) M+l =310,2.

Preparativní příklad 14

Sloučenina (4.8) z preparativního příkladu 11, krok D (1,0 g) byla ponechána reagovat s roz15 tokem bezvodé kyseliny trífluoroctové-dichlormethanu (1 : 1,50 ml) 2 h. Roztok byl zředěn xylenem (100 ml) a odpařen ve vakuu. Zbytek byl smísen s Et₂O a zfiltrován za získání v názvu uvedené sloučeniny (5.1) (0,9 g), C37H53N5O9S2 (775,98), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 776,5.

Krok B Sloučenina (5.2)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A, byla sloučeni na (5.1) ponechána reagovat s amoniakem (0,5M roztok 1,4-dioxanu), za získání v názvu uvede né sloučeniny (5.2) C37H54N6O8S2 (774,99), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 775,4.

-35CZ 303213 B6

Preparativní příklad 15

Směs sloučeniny (5.1) z preparativního příkladu 14, krok A (0,15 g), Ν,Ν-dimethyIaminu (0,12 ml 2M roztoku THF), dimethylformamidu (10 ml) a vazebného činidla PyBrOP (0,11 g) byla ochlazena na 5 °C, potom byl přidán diisopropylethylamin (DIEA nebo DIPEA, 0,12 ml). Směs byla míchána za chladu 1 min, potom při teplotě laboratoře 6 h. Reakční směs byla vlita do 5% vodného H₃PO₄ (50 ml) a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty chladným 5% vodným K₂CO₃, potom 5% vodným KH₂PO₄, potom roztokem solí. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografii na silikagelu, s elucí MeOH-CH₂Cl₂, za získání v názvu uvedené sloučeniny (53), CísHsgNéOgSi (803,05), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 803,5.

Preparativní příklad 16

Krok A Sloučenina (6.2)

OCHzPh

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok A, byla sloučenina (6.1) hydrochlorid benzy lesteru hydroxyprolinu ponechána reagovat se sloučeninou (4.9) z prepa20 rativního příkladu 12, za získání v názvu uvedené sloučeniny (6.2), C₂5H₃6N₂O₆ (460,56), hmotnostní spektrum (FAB) M+l - 461,2.

Krok B Sloučenina (6.3)

OCH₂Ph

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 8 byla připravena sloučenina (63), C₂₅H3₄N₂O₆ (458,55), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 459,2.

-36CZ 303213 B6

Krok C Sloučenina (6.4)

Směs sloučeniny (6.3) z kroku Β (1 g), 10% Pd/C (0,05 g) a EtOH (100 ml) byla míchána za tlaku OJ MPa H₂ 6 h. Směs byla zfiltrována a odpařena do sucha ve vakuu za získání v názvu uvedené sloučeniny (6.4) (0,77 g), C,₈H₂₈N₂O₆ (368,42) hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 369,2.

Preparativní příklad 17 io

Krok A Sloučenina (7.1)

Sloučenina (6.4) z preparativního příkladu 16, krok C, byla ponechána reagovat se sloučeninou (2.3) z preparativního příkladu 6, krok B, stejným způsobem jako v preparativní příkladu 2, krok

A, za získání sloučeniny (7.1), C36H54N6O9 (714,85), hmotnostní spektrum (FAB) M+1=715,9.

Sloučenina (7.1) byla ponechána reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním pří20 kladu 7, krok A, za získání sloučeniny (7.2), C₃₆H5₂N₆O9 (712,83), hmotnostní spektrum (FAB)

M+l =713,5.

-37CZ 303213 B6

CONMe₂

Sloučenina (7.2) z kroku B výše byla ponechána reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 8, krok B, s 1,4-butandithiolem, za získání v názvu uvedené sloučeniny (7.3), CíoHéoNeOgSz (817,07), hmotnostní spektrum (FAB) M+l = 817,5.

S použitím výše uvedených postupů byly připraveny sloučeniny uvedené v připojené tabulce 2. Jako obecná poznámka ke všem tabulkám stejně jako k příkladům a schématům v této přihlášce platí, že všechny atomy dusíku s otevřenou nedoplněnou vazbou v chemických strukturách v příkladech a tabulkách znamenají NH, nebo v případě koncového atomu dusíku -NH₂. Podobně jakýkoli atom kyslíku s otevřenou nedoplněnou vazbou v chemických strukturách v příkladech a tabulkách znamená skupinu -OH.

Syntéza na pevné fázi

Obecné postupy pro vazebné reakce na pevné fázi

Syntéza byla prováděna v reakční nádobě vytvořené z polypropylenové stříkačky jako patrony opatřené u dna polypropylenovou fritou. Aminokyseliny chráněné Fmoc byly navazovány za standardních podmínek syntézy na pevné fázi. Do každé reakční nádoby bylo vloženo 100 mg výchozí pryskyřice Fmoc-Sieber (přibližně 0,03 mmol). Pryskyřice byla promyta 2ml podíly DMF (2 x). Ochranná skupina Fmoc byla odstraňována 2 ml 20 % obj ./obj. roztoku piperidinu v DMF 20 min. Pryskyřice byla promyta 2ml podíly DMF (4 x). Vazebná reakce byla prováděna v DMF (2 ml), s použitím 0,1 mmol Fmoc-aminokyseliny, 0,1 mmol HATU [O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu] a 0,2 mmol DIPEA (N,N-diisopropy lethy lamin). Po třepání 2 h byla reakční nádoba odsáta a pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (4 x). Vazebný cyklus byl opakován s další Fmoc-aminokyselinou nebo zakončovací skupinou.

Obecný postup pro Dess-Martinovu oxidaci na pevné fázi

Syntéza byla prováděna v reakční nádobě, která byla vytvořena z polypropylenové stříkačky jako patrony opatřené u dna polypropylenovou fritou. Hydroxysloučenina navázaná na pryskyřici (přibližně 0,03 mmol) byla smísena s roztokem 0,12 mmol Dess-Martinova perjodinanu a 0,12 mmol t-BuOH v 2 ml DCM 4 h. Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly 20% obj./obj. roztoku iPrOH v DMC, THF a 50% obj ./obj. roztokem THF ve vodě (4 x), THF (4 x) a DCM (4 x).

-38CZ 303213 B6

Preparativní příklad 18

Příprava N-Fmoc-2',3 “dimethoxyfenylgiycinu Sloučenina (901)

901A

IB

90lC

K roztoku kyanidu draselného (1,465 g, 22,5 mmol) a uhličitanu amonného (5,045 g, 52,5 mmol) ve vodě (15 ml) byl přidán roztok sloučeniny 2,3-dimethoxybenzaldehydu 901A (2,5 g, 15 mmol) v ethanolu (15 ml). Reakční směs byla zahřívána při 40 °C 24 h. Objem roztoku byl snížen na 10 ml odpařením za sníženého tlaku. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (15 ml) a sloučenina 901B byla získána jako bílá sraženina. Sloučenina 901B byla izolovalo na filtrací (2,2 g, 9,3 mmol). Sloučenina 90IB byla rozpuštěna v 10% hmotn./hmotn. vodném roztoku hydroxidu sodného (15 ml) a získaný roztok byl zahříván pod zpětným chladičem 24 h. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo upraveno na neutrální (pH 7). Získaný roztok s obsahem sloučeniny 90IC byl odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v 5% obj./obj. vodném roztoku hydrogenuhličitanu sodného (150 ml). Roztok byl ochlazen na

0°C v ledové lázni a byly přidány 1,4-dioxan (30 ml) a roztok 9-ťluorenylmethylsukcinimidyIkarbonátu (2,7 g, 8 mmol) v 1,4-dioxanu (30 m) při 0 °C. Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře 24 h. 1,4-dioxan byl odpařen za sníženého tlaku. Vodný roztok byl promyt d iethy letherem. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo nastaveno do kyselé oblasti (pH 1). Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za získání požadované sloučeniny 901 jako bílé pěnovité látky (3,44 g, 7,9 mmol). MS (LCMS elektrorozprašování) 434,1 MH⁺.

-39CZ 303213 B6

Preparativní příklad 19

Sloučenina (801)

OH

O

801A

FmocHN^'OMe

O

H

O

801C

8013

OH

SOUD

ΌΗ

OH

SOI

K roztoku N-Fmoc-fenylalaninu 801A (5 g, 12,9 mmol) v bezvodém DCM (22 ml) ochlazeném na -30 °C ve směsi suchý led-aceton byl postupně přidán N-methylpyrrolidin (1,96 ml,

16,1 mmol) a methy leh lorformát (1,2 ml, 15,5 mmol). Reakční směs byla míchána při -30 °C 1 h a byl přidán roztok N,O-dimethylhydroxyl-aminhydrochloridu (1,51 g, 15,5 mmol) aN-methylpyrrolidinu (1,96 ml, 16,1 mmol) v bezvodém DCM (8 ml). Reakční směs byla ponechána ohřát io na laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře přes noc. Byl přidán toluen a organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za poskytnutí sloučeniny 80IB (4 g,

9,29 mmol).

K roztoku Red-Al (6,28 ml, 21,4 mmol) v bezvodém toluenu (8 ml) ochlazenému na -20 °C v lázni suchý led-aceton byl přidán roztok sloučeniny 801B (4 g, 9,29 mmol) v bezvodém toluenu (12 ml). Reakční směs byla míchána pri -20 °C 1,5 h. Organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surový produkt 801C byl použit v příští reakci bez dalšího čištění.

K roztoku sloučeniny 801C (přibližně 9,29 mmol) v hexanu (15 ml) byl postupně přidán roztok kyanidu draselného (24 mg, 0,37 mmol) a tetrabutylamoniumjodidu (34 mg, 0,092 mmol) ve vodě (4 ml) a acetonkyanohydrin (1,27 ml, 13,9 mmol). Reakční směs byla míchána pri teplotě laboratoře 24 h. Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání sloučeniny 801D (2,4 g, 6,03 mmol).

K roztoku sloučeniny 80ID (2,4 g, 6,03 mmol) v 1,4-dioxanu (11 ml) byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (11 ml). Reakční směs byla zahřívána na 80 °C 3 h. Byl přidán ethylacetát (25 ml) a voda (25 ml). Organická vrstva byla promyta roztokem soli a sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání požadované sloučeniny 801 jako bílé pěnovité látky (2 g, 4,8 mmol). MS (LCMS-elektrorozprašování)

418,1 MFT.

-40CZ 303213 B6

Schéma 8

FmocHN-p

301A

FmocKN

V

CH₃

301D

FmccHN^^ _{0 V o} CH₃

301F

H

H ? H 2 I H ^ΝχΑ/^ΝχΛη> ^tJ-P

NK

-41 CZ 303213 B6

Příklad 301J

Schéma 8 Sloučenina (301J)

nh₂ (301J)

Sloučeniny 301B, 301C, 30ID, 30IE, 301F a 301G navázané na pryskyřici byly připraveny obecným postupem pro vazebné reakce na pevné fázi, přičemž se vycházelo ze 100 mg pryskyřice Fmoc-Sieber (0,03 mmol). Sloučenina 301G navázaná na pryskyřici byla oxidována na sloučeninu 301H navázanou na pryskyřici s použitím obecného postupu pro Dess-Martinovu oxidaci na pevné fázi. Sloučenina 301H navázaná na pryskyřici byla smísena s 4 ml 2% obj./obj. io roztoku TFA a DCM 5 min. Filtrát by přidán k 1 ml AcOH a roztok byl zakoncentrován ve vakuu centrifugací, za získání sloučeniny 301J (0,0069 g, 29% výtěžek). MS (LCMS-elektrorozpraáování) 771,2, MH+.

S použitím techniky syntézy na pevné fázi podrobně popsané výše byly připraveny sloučeniny i? v tabulce 3:

-42CZ 303213 B6

Tabulka 3

Sloučeniny připravené syntézou na pevné fázi

Struktura	Třída Kí*
r	c
Ύ	c
M\^a	c
	c
y	c
~r	c
”r	c
_ JO r	c

-43CZ 303213 B6

-44CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	c
V- Y	c
r Γ	c
Ά Y	c
y. r L o .	c
v. 'r	c
<	c
Ίγ·γ’υ:;-Ο^	c

-45CZ 303213 B6

-46CZ 303213 B6

-47CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
P	c
	B
P	C
	B
c P VMpr^r-	C
O P	C
? %č °,ó X *^*1« o V. ° o\ '*	c
a í	c

-48CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	c
λ? ’ * 1 ° *	c
X	c
Xl íu-0-^·	C
	C
	c
	c
	c
	c

-49CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	c
Q	c
xX/flX	c
OH	c
HO	c
NHL	c
9 o	B
	B

-50CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
p	B
	c
	c
Q	c
/ ? o	c
o	c
/..fa o	c
P +¼¾5	c

-51 CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	c
	C
\	B
a i Ί O	c
• < -Aýx^P	B
	C
	B
	B

-52CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
l	c
P	A
	A
C?Wf	A
	B
p aWťT^-+ 0	A
	B
	B

-53CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	B
	C
z J	B
P	B
	B
	B
	C
	B

-54CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	B
	B
	B
?	B
o	B
p	C
	C
	A

-55CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	B
P	B
p	B
p	B
?	B
.P \ 1 -gl	B
< P -ί·,.φ	B
	C

-56CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	B
P	B
\sJvtJ7	B
, 9	B
	B
0^V%O	A
C?r^\jr^O	B
P	B

-57CZ 303213 B6

Struktura	Třída Kí*
y/ypip	B
o:;ívá	B
A*	C
p ΟΑ'/ό'ίίΑ'	B
P	B
? O^VxSr^O	B
	B
ΟΤ?-γγ^Ο	B

-58CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
P.	B
	C
P	C
	c
P	A
o ( o L σ 0'	B
o cř^Ý?p~o	A
P	A

-59CZ 303213 B6

-60CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
?	A
P	B
	B
? aWťr^-o Ί o	c
	B
cř+Λ^δ	B
?	8
	B

-61 CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	c
? ,	c
P	c
P cřTVrVfto ‘Ý'ós	c
X °W'ófT°	B
	B
ο’Α'Χ’τ^γο	B
cTXXt^5	B

-62CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	A
	B
	C
0’	C
cr^Vr^cž	B
	B
	B
X 0^^Υγ>ΛΓ	8

-63CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	A
	A
c?^0	A
c?H^·	A
	S
ířW^?5	C
	B
	A

-64CZ 303213 B6

-65CZ 303213 B6

-66CZ 303213 B6

-67CZ 303213 B6

-68CZ 303213 B6

-69CZ 303213 B6

-70CZ 303213 B6

-71 CZ 303213 B6

-72CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
<O 0 r v—	B
rQ 0 y**i 2 ·	B
. fiL^iSL	B
<O . .0 β L· í> 1 &'-	B
•rO fj F	B
<τθ n	C
-η£Χν<. x--% « L o o X	B
cO 0	B

-73CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	c
<~O Q	c
“ Ί 'ťr	c
s-Q f5 CP~	c
SSxu£. ηςτ^ν Λν	B
Z~Q q MS	c
<O Q	c
<~O n	c

-74CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
ró o v	c
	c
'Áj	C
SSjUUtSL Vo	c
$Xw£~ νμ.	c
Λγ,	c
’ '‘S-	c
	c

-75CZ 303213 B6

-76CZ 303213 B6

-77CZ 303213 B6

- 78CZ 303213 B6

-79CZ 303213 B6

Struktura	Třída Ki*
	B
0 O ( 0 Ξ 0	C
-^Xx Χγ	B
o Χήχ o	C
	c
	c
	c
υΑΥ^*^	3

-80CZ 303213 B6

Další sloučeniny, které byly připraveny, včetně jejich rozmezí aktivity (Ki*), jsou uvedeny v přiložených tabulkách 4 a 5. Postup použitý pro přípravu sloučenin v tabulkách 4 a 5 je uveden níže.

I) Syntéza meziproduktů pro sloučeniny v tabulkách 4 a 5

Příklad 1 io Syntéza 4,4-dimethylprolinmethy lesteru (H-Pro(4,4-diMe)-OMe)

-81 CZ 303213 B6

Krok 1

Syntéza terc-buty l-N-terc-butoxykarbonyl—4-methyl-L-pyroglutamátu ( Boc-PyroG lu(4methyl)-OtBu)

K roztoku terc-buty l-N-terc-butoxykarbonylpyroglutamátu (11,5 g, 40 mmol) v THF (200 ml) míchanému pri -78 °C byl přidán 1M roztok hexamethyldisilazidu lithného v THF (42 ml, 42 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byl přidán methyljodid (3,11 ml, 50 mmol). Po 2 h přidávání při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (200 ml). Roztok byl míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty roztokem soli (200 ml), sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn chromatografií s elucí směsí 1 : 1 ethylacetát/hexany za získání Boc-PyrGIu(4-methyl)-OtBu (10,6 g, 35,4 mmol, 88 %) jako směsi izomerů (2 : 1 cis : trans).

Krok 2

Syntéza terc-buty l-N-terc-butoxy karbony 1-4,4-d i methy 1-L-pyrogl utamátu (Boc-PyroG lu(4,420 dimethy l)-OtBu)

K roztoku terc-buty 1-N-terc-butoxykarbony 1-4—methy 1-L-pyrogl utamátu (1,2 g, 4,0 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) míchanému při -78 °C byl přidán 1M roztok hexamethyldisilazidu lithného v tetrahydrofuranu (4,4 ml, 4,4 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byl při25 dán methyljodid (0,33 ml, 5,2 mmol). Po 3 h přidávání při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (40 ml). Roztok byl míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 25 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml), roztokem soli (50 ml), sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání Boc-PyroG lu(4,4-dimethyl)-OtBu (0,673 g, 54 %).

-82CZ 303213 B6

Krok 3

Syntéza terc-buty 1-N-terc-butoxy karbony 1-4,4—dimethylprolinu (Boc-Pro-(4,4-dimethyl)5 OtBu)

Bylo použito modifikace známého postupu: Pedregal, C.; Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia Ruano, J. L., Tetrahedron Letters 1994, 35(13), 2053 až 2056).

ίο K roztoku terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyí-4,4-dimethylpyroglutamátu (2,0 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml), míchanému pri -78 °C, byl přidán IM roztok triethy lborohydridu lithného v tetrahydrofuranu (2,4 ml, 2,4 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (5 ml). Reakční směs byla ponořena do lázně led/voda a byl přidán 30% vodný peroxid vodíku (10 kapek). Roztok byl míchán po dobu 20 min při 0 °C, potom byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu pro odstranění tetrahydrofuranu. Vodný roztok byl zředěn vodou (10 ml) a extrahován dichlormethanem (3x 40 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (20 ml) a triethylasilanu (310 μί, 2,0 mmol), potom ochlazen na -78 °C a po kapkách byl přidán diethy letherát fluoridu boritého (270 μΙ, 2,13 mmol). Míchání pokračovalo 30 min, během kterých byly přidány další triethylamin (310 μί, 2,0 mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (270 μί, 2,13 mmol). Po míchání pri -78 °C další 2 hod byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (4 ml). Po 5 min byla směs extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání Boc-Pro(4,4-d imethy l)-OtBu.

Krok 4

Syntéza 4,4-dimethylprolinu (H-Pro(4,4-dimethyl)-OH)

Roztok sloučeniny terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethylprolinu v dichlormethanu (5 ml) a kyseliny trifluoroctové (5 ml) byl míchán při teplotě laboratoře pět hodin. Roztok byl zakoncentrován, sušen ve vysokém vakuu a převeden do příštího kroku bez dalšího čištění.

-83 CZ 303213 B6

Krok 5

Syntéza N-terc-butoxy karbony 1-4,4—dimethylprolinu (Boc-Pro(4,4-dimethy l)-OH)

K roztoku trifluoracetátové soli 4,4-dimethylprolinu (1,5 mmol) vdioxanu (7 ml), acetonitrilu (12 ml) a diisopropylethylaminu (700 K, 4 mmol) byl přidán roztok sloučeniny di-terc-butyld i karbonátu (475 mg, 2,18 mmol) v acetonitrilu (5 ml). Po míchání 12 h při teplotě laboratoře byl roztok zakoncentrován ve vakuu, rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (50 ml) a promyt diethyletherem (3 x 40 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH 3 kyselinou io citrónovou, potom extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány.

Krok 6

Syntéza hydrochloridové soli 4,4-dimethylprolinmethyIesteru (HCl.H-Pro(4,4-dimethyl)-OMe)

K roztoku Boc-Pro(4,4-diMe)-OH (0,5 g, 2,06 mmol) v bezvodém methanolu (8 ml) byl přidán po kapkách thionylchlorid (448 I, 6,18 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 6 h při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována na amorfní pevnou látku (377 mg, 95 %).

Příklad 11

Obecný postup syntézy N-terc-butoxykarbonyl-4-alkyl-4-methyl pro linu

Sloučeniny, ve kterých skupina R je allyl a benzyl, byly syntetizovány následujícími kroky 1 až 4 níže:

-84CZ 303213 B6

Krok 1

Syntéza terč- buty 1-N-terc-butoxy karbony 1-4—al ky 1^4—methy 1-L-py rog I utamátu

K roztoku terc-buty l-N-terc-butoxy kar bony 1^-methy 1-L-py rog 1 utamátu (10,2 g, mmol) (viz příklad I, krok 1) v tetrahydrofuranu (170 ml), míchanému při -78 °C, byl přidán IM roztok hexamethyldisilazidu lithného v tetrahydrofuranu (37,5 ml, 37,5 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 40 min byl přidán alkylhalid (61,4 mmol). Po dalších 3 h při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (200 ml). Roztok byl míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly zředěny hexany (150 ml) a promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (2 x 100 ml) a roztokem soli (100 ml), sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografii s použitím 20% ethylacetátu v hexanech, za získání čistého terc-buty 1-N-terc-butoxy karbony 1-4-alkyM-methyl-L-pyroglutamátu.

Krok 2

Syntéza terc-buty 1-N-terc-butoxy karbony 1-4-alky 1-4—methy tprol inu

Bylo použito modifikace známého postupu Pedregal, C.; Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia Ruano, J. L., Tetrahedron Letters (1994) 35(13), 2053 až 2056).

K roztoku terc-buty 1-N-terc-butoxy karbony 1-4—alky l-4-methy lpy rogl utamátu (16,6 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml), míchanému při -78 °C, byl přidán 1M roztok triethylborohydridu lithného v tetrahydrofuranu (20 ml, 20 mmol) po kapkách v průběhu 10 min. Po 120 min byla chladicí lázeň ponechána ohřát na -25 °C, přičemž v tomto okamžiku byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitanu sodný (40 ml). Reakční směs byla ponořena do lázně led/voda a byl přidán

30% vodný peroxid vodíku (4 ml). Roztok byl míchán po dobu 10 min při 0°C, potom byla 30 reakční směs zakoncentrována ve vakuu pro odstranění tetrahydrofuranu. Vodný roztok byl zředěn vodou (300 ml) a extrahován dichlormethanem (3 x 200 ml). Organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (100 ml) a triethylsilanu (2,6 ml, mmol), potom ochlazen na -78 °C po kapkách byl přidán diethyletherát fluoridu boritého (2,2 ml, mmol). Míchání pokračovalo 1 h, a potom byl přidán další triethylamin (2,6 ml, mmol) a diethylethereát fluoridu boritého (2,2 ml, mmol). Po míchání pri -78 °C další 4 h byla chladicí lázeň odstraněna a byly přidány nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (30 ml)

-85 CZ 303213 B6 a voda (150 ml). Po 5 min byla směs extrahována dichlormethanem (3 x 200 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány.

Krok 3

Syntéza 4-alkyl—4-methy Iprolinu

io

Roztok sloučeniny terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl—4-alkyl-4-methylprolinu v dichlormethanu (5 ml) a kyselině trifluoroctové (5 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 5 h. Byl přidán toluen a roztok byl zakoncentrován a potom sušen ve vysokém vakuu.

Krok 4

Syntéza N-terc-butoxy karbony M—alkyl-4-methylproIinu

K roztoku trifluoracetátové soli 4—alkyl—4-methy Iprolinu (1,5 mmol) v dioxanu (7 ml), acetonitrilu (12 ml) a diisopropylethylaminu (700 μΐ, 4 mmol) byl přidán roztok di-terc-butyldikarbonátu (475 mg, 2,18 mmol) v acetonitrilu (5 ml). Po 12 h míchání při teplotě laboratoře byl roztok zakoncentrován ve vakuu, rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (50 ml) a promyt diethyletherem (3 x 40 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH 3 IN kyselinou chlorovodíkovou, potom extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsí 1 : 1 ethylacetát/hexany s 1% kyselinou octovou.

-86CZ 303213 B6

Příklad III

Syntéza N--terc-butoxykarbonyl-4-propyl-4-methylprolinu

Roztok N-^Jterc-butoxykarbonyl—4—allyl-4—methylprolinu (400 mg, 1,48 mmol) (viz přikladli, krok 4) a 10% Pd na uhlí (400 mg) v methanolu (20 ml) byl hydrogenován pří 50 psi (345 kPa) 4 h. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována.

Příklad IV

Syntéza Boc—4-cyklohexyl prolinu

Roztok komerčně dostupného Boc-4-fenylprolinu (750 mg) a 5% Rh na uhlí (750 mg) v metha nolu (15 ml) byl hydrogenován pří 50 psi (345 kPa) 24 h. Směs byla zfiltrována azakoncent rována za získání 730 mg produktu.

Příklad V

Příprava kyseliny fluorenylmethoxykarbonyl-Pro(4-spirocyklopentan)karboxylové

-87CZ 303213 B6

Krok 1

Syntéza (4-allyl)-terc-butylesteru kyseliny Boc-pyrogiutamové

K chlazenému (-78 °C) roztoku komerčně dostupného N-Boc-terc-butylpyroglutamátu (10 g,

35,1 mmol) v THF (175 ml) byl přidán hexamethyldisilazid lithný (36,8 ml, 36,8 mmol) v průběhu 5 min. Míchání pokračovalo 30 min. Do prvního roztoku byl po kapkách přidán roztok allylbromidu (6,1 ml, 70,2 mmol) v THF (39 ml). Po 2 b při -78 °C byla reakce ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku chloridu amonného (50 ml). Reakční směs byla potom zředěna io ethylacetátem a vrstvy byly odděleny. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným a zakoncentrována. Blesková chromatografie na koloně prováděna ve směsi 2 : 8 ethylacetát: hexany poskytla produkt (6 g, 53%). NMR δ ppm (CDCb): 5,7 (m, IH), 5,1 (dd, 2H), 4,4 (m, IH), 2,6 (m, 2H), 2,4 (m, 1 H), 1,8-2,2 (m, IH), 1,45 (s,9H), l,4(s,9H).

Krok 2

Syntéza (4,4-diallyl>-terc-buty lesteru kyseliny N-Boc-pyroglutamové

(4-al lyl ý-terc-buty lester kyseliny N-Boc-pyroglutamové získaný v kroku 1 výše (2,68 g, 20 8,24 mmol) byl podroben druhé alkylaci allylbromidem za podobných podmínek. Blesková chromatografie ve směsi 15 : 85 ethylacetát: hexany poskytla 2,13 g produktu (71 %) jako čirého oleje.

Krok 3

Syntéza Boc-Pro(4,4—diallyl)-terc-butylesterů

Část a): K chladnému (-78 °C) roztoku Boc-Pyro-GIu(4,4-dialIyl)-terc-butylesteru (2,13 g, 5,83 mmol) v tetrahydrofuranu (14 ml) byl přidán triethylborohydrid lithný (IM vtetrahydro30 furanu, 7,29 ml, 7,29 mmol) v průběhu 5 min. Po 2 h při -78 °C byla reakce ohřátá na 0 °C a ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a 30% peroxidu vodíku (20 kapek). Míchání pokračovalo 20 min. Tetrahydrofuran byl odstraněn za sníženého tlaku a vzniklý hustý bílý zbytek byl zředěn vodou (80 ml) a extrahován 3 x dichlor-88CZ 303213 B6 methanem. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována a převedena do dalšího kroku bez čištění.

Část b): K produktu získanému v části (a) v dichlormethanu (14 ml) byl přidán triethylsilan (931 μ|, 5,83 mmol) a potom diethyletherát fluoridu boritého (776 μΐ, 6,12 mmol). Po 30 min byl přidán další triethylsilan (931 μΐ, 5,83 mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (776 μΐ, 6,12 mmol) a reakční směs byla míchána při -78 °C 3 h, a reakce byla ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku hydrogenuhliČitanu sodného a vody. Reakční směs byla extrahována dichlormethanem a organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Blesková chro10 matografíe v 15% ethylacetátu v hexanech poskytla 1.07 bezbarvý olej (57%). NMR δ ppm (CDC1J: 5,7 - 5,8 (m, 2H), 5,1 (m, 4H), 4,1 - 4,2 (2 dďs, IH rotamery), 3,5-3,3 (dd, IH) a3,2 (dd, IH) rotamery, 2,2 -2,0 (m, 5H), 1,7 (m, 1 H), 1,46 (s, 9H), 1,43 (s, 9H).

Krok 4

Syntéza Boc-Pro(4—spirocyklopenten)-terc-butylesteru

K Boc-Pro(4,4-diallyl)-terc-butylesteru (1,07 g, 3,31 mmol) v dichlormethanu (66 ml) byl přidán 5% dichlorid bis(tricyklohexylfosfin)benzylidenruthenia IV (Grubbův katalyzátor) a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 1,5 h. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografii na koloně v 15% ethylacetátu v hexanech. Byl získán žlutý olej (0,57 g, 53 %). NMR δ ppm (CDC1₃): 5,56 (bs, 2H), 4,2 a 4,1 (t, IH, rotamery), 3,2 - 3,5 (m, 2H), 2,2 - 2,5 (m, 5H), 1,9 (dd, IH), 1,47 a 1,46 (2 s's, 9H, rotamery), 1,45 a 1,44 (2 s's, 9H, rotamery).

Krok 5

Syntéza Boc-Pro(4-spirocyklopentan)-terc-butylesteru

Roztok Boc—Pro(4—spirocyklopenten)-terc-butylesteru (1,12 g) v methanolu (18 ml), vodě (4 ml) a kyselině octové (4 ml) byl umístěn v Parrově třepačce a byl hydrogenován 3 h při 35 psi (241 kPa) v přítomnosti 10% palladia na uhlí (300 mg). Katalyzátor byl odfiltrován a filtrát byl zakoncentrován na bezbarvý olej (1,26 g). NMR δ ppm (CDCI3): 4,1 a 4,2 (t, IH, rotamery, 3,4 (d, IH), 3,2 (d, IH), 2,1 (m, IH), 1,9 (m, IH), 1,6 - 1,7 (m, 10H), 1,5 (3 s's, 18H, rotamery),

-89CZ 303213 B6

Krok 6

Syntéza kyseliny Fmoc-Pro(4—spirocyklopentan)-karboxylové

Boc-Pro(4-spirocyklopentan)-terc-butyIester (1,26 g, 3,9 mmol) byl míchán s dichlormethanem (10 ml) a kyselinou trifluoroctovou (15 ml) 3 h. Reakční směs byla zakoncentrována a získaný žlutý olej byl rozpuštěn ve vodě (6 ml). Po částech byl přidán fluoreny Imethy I suke i nyl karbonát (1,45 g, 4,3 mmol) rozpuštěný v dioxanu (6 ml) a potom uhličitan draselný (2,16 g, 15,6 mmol). io Reakční směs byla míchána po dobu 18 h a zakoncentrována. Zbytek byl zředěn nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a promyt diethyletherem (3 x 10 ml). Vodná vrstva byla potom okyselena na pH ~1 IN roztokem hydrogensíranu sodného a extrahována ethylacetátem. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na béžovou pěnu (1,3 g, 100 %).

Příklad VI

Syntéza Boc-Pro(4t-NH(Fmoc))-OH

Směs komerčně dostupného N-terc-butoxykarbonyl-trans-4-hydroxyprolinu (8,79 g, 38 mmol), uhličitanu draselného (13,0 g, 94 mmol), benzy Ibromidu (4,5 ml, 38 mmol) a dimethylformamidu (150 ml) byla míchána po dobu 18 h. Byl přidán ethylacetát (100 ml) a směs byla zfiltrována. Bílý objemný filtrát byl vyčeřen přidáním lm HCI (100 ml). Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 50 ml), sušeny (síran sodný), zfíltrovány a zakoncentrovány. K surovému benzylesteru byl přidán toluen a roztok byl zfiltrován a znovu zakoncentrován. Byly přidány dichlormethan

-90CZ 303213 B6 (70 ml) a chlorid uhličitý (70 ml), a potom trífenylfosfin (21,11 g, 80 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 10 h, reakce byla ukončena ethanolem (7 ml) a míchána dalších 5 h. Roztok byl zakoncentrován na přibližně 100 ml, potom byl přidán dichlormethan (40 ml) a potom ether (200 ml) za míchání. Roztok byl chlazen 4 h, zfiltrován a zakoncentrován za získání žlutohnědé5 ho oleje, který byl čištěn bleskovou ehromatografií s použitím směsi ether/hexan/dichlormethan 2:2: 1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (9,13 g, 26,9 mmol, 71 %) jako bílé pevné látky.

Krok 2 o

Syntéza benzylesteru N“-terc-butoxykarbonyl-trans-4-azido-L-prolinu

Roztok benzylesteru NMerc-butoxykarbonyl-cis-4-chlor-L-prolinu (9,0 g, 26,5 mmol) a azidu sodného (7,36 g, 113 mmol) v dimethylformamidu (270 ml) byl zahříván při 75 °C 2 dny. Byla přidána voda (100 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (3 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Olej byl čištěn bleskovou ehromatografií s použitím směsi ethylacetát/hexany 1 : 1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (8,59 g, 24,8 mmol, 94 %).

Krok 3

Syntéza Boc-Pro(4t-NH(Fmoc)-OH

Směs benzylesteru N-a-t-butoxykarbonyl-trans-4-azido-L-prolinu (8,59 g, 24,8 mmol) a 10% palladia na uhlí (900 mg) v ethanolu (500 ml) byla hydrogenována při 50 psi (345 kPa) 14 h s použitím Panova hydrogenačního přístroje. Směs byla zfiltrována, zakoncentrována, rozpuštěna v methanolu (60 ml), znovu filtrována a zakoncentrována, za získání bezbarvého oleje. Olej byl rozpuštěn ve vodě (53 ml) obsahující uhličitan sodný (5,31 g, 50,1 mmol) a byl přidán roztok fluorenylmethylsukcinylkarbonátu (8,37 g, 29,8 mmol) v dioxanu (60 ml) v průběhu 40 min.

Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 17 h, potom byla zakoncentrována pro odstranění dioxanu a zředěna vodou (200 ml). Roztok byl promyt etherem (3 x 100 ml). pH vodného roztoku bylo upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (pozor - pění!) a vody (100 ml). Směs byla extrahována díehlormethanem (400 ml, 100 ml, 100 ml) a spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny.

-91 CZ 303213 B6

Příklad VII

Syntéza N-t-butoxykarbonyl-4-trans-(N-fluorenylmethyloxykarbonylaminomethyl)-L-prolinu 5 (Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-OH)

H

Krok 1

Syntéza benzylesteru terc-butoxy karbony l-cis-4—hydroxy-L-prolinu (Boc-Pro(4-cis-OH)io OBn)

OH

Ke směsi cis-hydroxy-L-prolinu (5 g, 38,1 mmol) v benzenu (45 ml) a benzylalkoholu (45 ml) byl přidán monohydrát kyseliny p-toluensulfonové (7,6 g, 40,0 mmol). Reakční směs byla zahřívána na 125 °C 20 h, přičemž voda (2 ml) byla odstraňována použitím Dean-Stark přístroje.

Roztok byl zfiltrován dokud byl horký, a potom byl přidán ether (150 ml). Roztok byl ponechán ochladit 3 h při teplotě laboratoře, potom 3 h při 4 °C. Získaná pevná látka byla oddělena, promyta etherem (100 ml) a sušena ve vakuu 1 h, za získání 13,5 g bílé pevné látky. Pevná látka byla rozpuštěna v dioxanu (40 ml) a byl přidán diisopropy lethy lamin (7,6 ml), potom di-terc-butyld i karbonát (10 g, 45,8 mmol) v průběhu 5 min, přičemž pro udržování konstantní reakční teploty byla používána ledová lázeň. Po 10 h při teplotě laboratoře byla reakční směs vlita do chladné vody (200 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 100 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt byl čištěn bleskovou ehromatografií s použitím 40 až 60% ethyiacetátu v hexanech za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (10,04g,

31,24 mmol, 82 %).

-92CZ 303213 B6

Krok 2

Syntéza benzylesteru N-t-butoxykarbonyl-cis-4-mesyloxy-L-prolinu (Boc-Pro(4-cis-OMs}_ OBn)

K roztoku Boc-Pro(4—cis-OH)—OBn (8,45 g, 26,3 mmol) v pyridinu (65 ml) byl při 0 °C po kapkách přidáván methansulfony leh lorid (3,4 ml, 44 mmol) v průběhu 2 h, potom byla míchána přes noc. Roztok 10 % vody v pyridinu (20 ml) byl přidán v průběhu 15 min a reakční směs byla zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě a extrahován ethylacetátem (2 x 200 ml), io Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 50 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (50 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Získaný zbytek byl rozpuštěn v toluenu (100 ml) a zakoncentrován pro odstranění stop pyridinu. Zbytek byl sušen ve vakuu 30 min za získání v názvu uvedené sloučeniny (10,7 g, 102 %), potom použit v dalším kroku bez čištění.

Krok 3

Benzylester N-t-butoxykarbonyl-trans-4R-kyano-L-prolinu (Boc-Pro(4-trans-CN)-OBn)

Roztok Boc—Pro(4—cis-OMs)-OBn (10,7 g, 26,3 mmol) a tetrabutylamoniumkyanidu (15,0 g, 56 mmol) v dimethylformamidu (100 ml) byl zahříván v olejové lázni na 55 °C 28 h. Po ochlazení byla přidána voda (150 mi) a směs byla extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 100 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (100 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Získaný zbytek byl čištěn blesko25 vou chromatografií (1:1 ether/hexany) a potom rekrystalizován ze směsi ethylacetát/hexany za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (2,40 g, 7,26 mmol, 28 %).

-93CZ 303213 B6

Krok 4

N-t-butoxykarbonyl-4-trans-N-fluorenylmethyloxykarbonylaminomethyl)-L-prolin (Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-OH ,H

Směs sloučeniny z kroku 3 výše (2,31 g, 7 mmol), vody (10 ml), methanolu (85 ml) a 10% palladia na uhlí (700 mg) byla hydrogenována při 50 psi (345 kPa) 11 h s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována. Ke zbytku byla přidána voda (15 ml) a uhličitan sodný (1,5 g, 14,2 mmol). V průběhu 5 min byl přidán roztok fluorenylio methylsukcinylkarbonátu (2,36 g, 7,0 mmol) v dioxanu (17 ml) a míchání pokračovalo 28 h při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu na 15 ml objemu a byla přidána voda (100 ml). Roztok byl promyty etherem (3 x 75 ml). pH vodného roztoku bylo upraveno na přidáním kyseliny citrónové (přibližně 20 g, pozor - pění!) a vody (100 ml). Směs byla extrahována dichlormethanem (4 x 100 ml), a spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt obsahoval jednu hlavní nečistotu, jejíž odstranění vyžadovalo třístupňové čištění. Surový produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu (50 ml) a kyselině trifluoroctové (50 ml) a míchán 5 h před zakoncentrováním. Zbytek byl čištěn preparativní HPLC s reverzními fázemi. Čistá trifluoroctová sůl 4—(N-fluoreny Imethy loxykarbonylaminomethyl)prolinu (1,887 g, 3,93 mmol) byla rozpuštěna v dioxanu (10 ml), acetonitrilu (20 ml) adiisopropylethylaminu (1,4 ml, 8 mmol). K reakční směsi byl přidán roztok di-terc-butyldikarbonátu (1,1 g, 5 mmol) v dioxanu (5 ml). Po 18 h míchání bylo pH roztoku upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (pozor - pění!) a vody (100 ml). Směs byla extrahována ethylacetátem (3 x 150 ml) a spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným vodným chloridem sodným (100 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt byl rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (100 ml) a promyt etherem (3 x 75 ml). Vodná vrstva byla nastavena na pH 3 přidáním kyseliny citrónové, potom extrahována dichlormethanem (4 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání v názvu uvedené sloučeniny (1,373 g, 2,94 mmol, 42 %).

Příklad VIII

Syntéza 3,4-isopropylidenprolinolu

H

-94CZ 303213 B6

Krok 1

Cyklopropanační reakce (Tetrahedron Lett. 1993, 34(16) 2691 a 2695)

K míchanému roztoku isopropyltrifenylfosfoniumjodidu (4,14 g, 9,58 mmol) v tetrahydrofuranu (60 ml) bylo přidáno n-butyllithium (1,6M v hexanech, 5,64 ml, 9,02 mmol) v průběhu 5 min. Po 30 min byl přidán roztok enamidu ((5R,7S)-5-fenyl-5,6,7,7a-tetrahydro-6-oxapyrrolyzin-3onu (1,206 g, 6,0 mmol) (viz J. Org. Chem. 1999, 64(2), 547), kde je popsána syntéza enamidového výchozího materiálu) v tetrahydrofuranu (40 ml) v průběhu 10 min. Po 10 min přidávání io byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 4 h. Reakční směs byla vlita do vody (400 ml) a extrahována diethyletherem (400 ml) a ethylacetátem (2 x 400 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání požadovaného surového produktu. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografii s elucí směsí 3:5:2 ethylacetát/hexany/methylenchlorid, za získání čistého cyklopropanovaného pro15 duktu (750 mg, 3,08 mmol, 51 %).

Krok 2

Syntéza 3,4—isopropylidenprolinol-P[3,4—(diMe—cyklopropyl)]-alkoholu) (J. Pro, Chem. (1999),

Směs produktu získaného v kroku 1 výše (1,23 g, 5,06 mmol) a lithiumaluminumhydridu (l,0M v THF, 15 ml, 15 mmol) byla zahřívána pod zpětným chladičem 5 h. Po ochlazení na 0 °C byl zbytek aluminumhydridu opatrně odstraněn přidáváním nasyceného vodného roztoku síranu sod25 ného (1,5 ml) po kapkách v průběhu 15 min. Směs byla zředěna ethylacetátem (40 ml) a potom zfiltrována přes celit. Filtrát byl sušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován za získání surového N—benzylaminoalkoholu (1,25 g), který byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění. Roztok surového N-benzylaminoalkoholu (1,25 g, 5,06 mmol) v 1 : 1 kyselina octová/ethylacetát (30 ml) s 10% Pd/C (1 g) byl hydrogenován při 50 psí (345 kPa) 16 h s použitím

Parrova hydrogenačního přístroje. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí a filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě (30 ml) a pH bylo nastaveno na 13 50% NaOH. Směs byla extrahována etherem (3 x 60 ml). Spojené extrakty byly sušeny síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání surového aminoalkoholu (485 mg, 3,43 mmol). Tento materiál byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění.

-95CZ 303213 B6

Příklad IX

Syntéza kyseliny iBoc-G(Chx)-Pro(3,4—isopropyljden)-karboxylove

Krok I

Syntéza isobutyloxykarbonylcyklohexylglycinu (iBoc-G (Chx)-OH)

K roztoku komerčně dostupného hydrochloridu cyklohexylglycinu (15 g, 77,4 mmol) v acetonitrilu (320 ml) a vodě (320 ml) byl přidán uhličitan draselný. K čirému roztoku byl přidán isobutylchloroformiát (11,1 ml, 85,1 mmol) v průběhu 15 min a reakční směs byla míchána po dobu 17 h. Acetonitril byl odstraněn za sníženého tlaku a zbývající vodná vrstva byla extrahována dvakrát etherem (100 ml). Vodná vrstva byla potom okyselena na pH 1 6N kyselinou chlorovodíko15 vou a extrahována dichlormethanem (3 x 300 ml). Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována, za získání 18,64 g (94 %) produktu jako bílé pevné látky.

Krok 2

Syntéza isobutyloxykarbonylcyklohexylglycyl-3,4-isopropylidenprolinu (iBoc-GChx)-P[3,4diMe-cyklopropyl)]-OH)

Jonesova oxidace

s w

Oe

a) Vazebná reakce

K roztoku iBoc-G(Chx)-OH (890 mg, 3,45 mmol) v acetonitrilu (20 ml) byl přidán HATU (1,33 g, 3,5 mmol), HOAt (476 mg, 3,5 g) a potom diisopropylethylamin (2,5 ml, 14 mmol).

Po 2 min byl přidán 3,4-isopropylidenproIinol (485 mg, 3,43 mmol) a reakční směs byla míchána

-96CZ 303213 B6 pres noc. Byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný a potom byla směs extrahována etherem a ethylacetátem. Spojené organické vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografii s elucí směsí 1 : 1 ethylacetát/hexany za získání čistého dipeptidového alkoholu iBoc-G(Chx)-3,4-isopropylidenprolinolu (870 mg, 2,3 mmol,

67 %).

b) Krok Jonesovy oxidace

K roztoku dipeptidového alkoholu iBoc-G(Chx)-3,4-isopropylidenprolinonu (100 mg, io 0,26 mmol) v acetonu (2 ml) míchanému při 0 °C bylo přidáno Jonesovo činidlo (300 μΐ) po kapkách v průběhu 5 min [Jonesovo činidlo: připraveno z oxidu chromitého (13,4 g) a koncentrované kyseliny sírové (11,5 ml) zředěné vodou na celkový objem 50 ml.]. Po míchání pri 0 °C 3 h byl přidán isopropanol (500 μΐ) a míchání pokračovalo dalších 10 min. Reakční směs byla zředěna vodou (20 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly suše15 ny, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání dipeptidu iBoc-G(Chx)-3,4—isopropylidenprolinu (100 mg, 0,25 mmol, 96 %).

Příklad X

Syntéza N-Cbz-3,4-methanoprolinu

Krok 1

Syntéza N-benzyl-3,4-methanoprolinolu

Směs výchozího benzylidenu (J. Org. Chem. 1999, 64(2), 547) (4,6 g, 21,4 mmol) a lithiumaluminumhydridu (l,0M v THF, 64 ml, 64 mmol) byla vařena pod zpětným chladičem 5 h. Po ochlazení na 0 °C byl zbylý aluminumhydrid opatrně rozložen přidáváním po kapkách nasyceného vodného síranu sodného (5 ml) v průběhu 15 min. Směs byla zředěna ethylacetátem (200 ml) a potom zfiltrována přes celit. Filtrát byl sušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován za získání surového N-benzylaminoalkoholu (3,45 g), který byl převeden do příštího kroku bez dalšího čištění.

-97CZ 303213 B6

Krok 2

Syntéza N-benzyloxy karbony 1-3,4-methanoprolinolu (CBz-P(3,4-CH₂)-ol

Roztok surového N-benzylaminoalkoholu (3 g, 14,76) v methanolu (120 ml) a koncentrované HCI (1,5 ml) s 10% Pd/C (300 mg) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 h. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí a filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn ve směsi voda/dioxan (100 ml) a byl přidán diisopropy Iethy lamin (3,2 ml). Byl přidán io benzylchlorformát (2,76 ml, 16,2 mmol) a reakční směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována, rozpuštěna v IM HCI (100 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml).

Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografii s použitím směsi 1 : 3 ethylacetát/hexany za získání NCbz-3,4-methanoprolinolu (2,4 g).

Krok 3

Syntéza N-benzyloxykarbonyl-3,4-methanoprolinu (Cbz-P(3,4-CH₂)-OH

K roztoku N-Cbz-3,4-methanoprolinolu (2,2 g, 8,90 mmol) v acetonu (68 ml) míchanému při 0 °C bylo přidáno Jonesovo činidlo (6,6 ml) po kapkách v průběhu 5 min. [Jonesovo činidlo: připraveno z oxidu chromitého (13,4 g) a koncentrované kyseliny sírové (11,5 ml) zředěné vodou na celkový objem 50 ml.] Po míchání při 0 °C 3 h byl přidán ísopropanol (11 ml) a míchání pokračovalo ještě 10 min. Reakční směs byla zředěna vodou (400 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x

500 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad síranem hořečnatým, zfiltrovány a zakoncentrovány za poskytnutí N-Cbz-3,4-methanoprolinu (2,25 g, 96 %).

Příklad XI

Syntéza Boc-(6S-karboethoxymethano)prol inu

-98CZ 303213 B6

Syntéza v názvu uvedené sloučeniny byla prováděna postupem podle Marinozzi, M.; Nataini, B.; Ni, Μ. H.; Costantino, G.; Pellicciari R., II Farmaco (1995) 50(5), 327 až 331.

s Příklad XII

Syntéza kyseliny Boc-3-morfolinkarboxylové

Boc

Syntéza v názvu uvedené sloučeniny byla prováděna postupem podle Kogami Y., Okawa, K., io Bulí Chem. Soc. Jpn. (1987) 60,2963 až 2965.

Příklad XIII

Syntéza N-terc-butoxykarbony I-2-aza-3 S-hydroxy karbony 1 [2,2,2] bicy kiooktanu

Roztok surového 2-aza-2-(l-fenylethyl)-3S-methoxykarbonyl[2,2,2]bicyklookt-5-enu (10 mmol) (Tetrahedron (1992) 48(44) 9707 až 9718) a 10% Pd na uhlí (1 g) v methanolu (30 ml) byl okyselen 12N HCI, potom hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 h s použitím Parro20 va hydrogenačního přístroje. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí, filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn v koncentrované HCI a míchán přes noc. Roztok byl zakoncentrován a znovu rozpuštěn v acetonitrilu (50 ml). Byly přidány diisopropylethylamin (3,5 ml) a di-terc-butyldikarbonát (1 g). Reakční směs byla míchána po dobu 24 h a potom zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn v CH2CI2 a 5% vodné kyselině sírové. Reakční směs byla extrahována CH₂C1₂ a spojené organické vrstvy byly zakoncentrovány. Zbytek byl rozpuštěn v 10% nasyceným hydrogenuhličitanu sodném, promyt diethyletherem (2 x) a okyselen 5% vodnou kyselinou sírovou. Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené ethylacetátové vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání N-terc-butoxykarbonyl-2-aza3S-hydroxykarbonyl-[2,2,2]-bicyklooktanu (650 mg).

-99CZ 303213 B6

Příklad XIV

Syntéza isobutyloxykarbonylcyklohexylglycyl“4,4-dimethylprolinu (Boc-G(Chx)-P(4,4-di5 methy l)_OH)

Krok l

Syntéza iBoc-G(Chx)-P(4,4-dimethyl)OMe

K roztoku iBoc-G(Chx)-OH (příklad IX, krok 1) (377 mg, 1,95 mmol) v acetonitrilu (7 ml) byly postupně přidány HCl.HN-Pro(4,4-dimethyl)OMe (příklad I, krok 6) (377 mg, 1,95 mmol), N-hydroxy benzotriazol (239 mg, 1,75 m mol), TBTU (845 mg, 2,63 mmol) a di isopropy lethylamin (1,35 ml, 7,8 mmol). Reakční směs byla míchána pri teplotě laboratoře 18 h. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu. Organická vrstva byla promytá dvakrát 10 ml částmi nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, IN roztokem kyseliny chlorovodíkové a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na bílou pevnou látku (612 mg, 79 %),

Krok 2

Syntéza iBoc-G(Chx)-P(4,4-dimethyI)-OH

Methylester získaný v kroku 1 výše (612 mg, 1,54 mmol) v methanolu (6 ml) byl saponifikován v přítomnosti 2M hydroxidu lithného (1,16 ml) 3 h. Methanol byl odsát za sníženého tlaku a zbytek byl zředěn ethylacetátem a okyselen na pH 2 IN kyselinou chlorovodíkovou. Vrstvy byly

- 100CZ 303213 B6 odděleny a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli, sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována.

Příklad XV

Syntéza dimethylamidu L-fenylglycinu

Krok 1 io

Syntéza dimethylamidu N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinu (CBz-Phg-NMe₂)

N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycin (25 g, 88 mmol) byl rozpuštěn v THF (800 ml) a ochlazen na -10 °C. Byly přidány N-methylmorfolin (9,7 ml, 88 mmol) a isobutylchloroformát (11,4 ml,

88,0 mmol) a směs byla ponechána míchat 1 min. Byl přidán dimethylamin (100 ml, 2M v THF) a reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu. Směs byla zfiltrována a filtrát byl zakoncentrován ve vakuu za získání dimethylamidu N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinu (32,5 g) jako žlutého oleje.

Krok 2

Syntéza dimethylamidu L-fenylglycinu (H-Phg-NMe₂)

Dimethy lam id N-Benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinu (32,5 g) získaný výše byl rozpuštěn v methanolu (750 ml) a bylo přidáno 10% palladium na aktivním uhlí (3,3 g). Tato směs byla hydrogenována v Parrově přístroji při 35 psi (241 kPa) 2 h. Reakční směs byla zfiltrována a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu a zbytek rekrystalizován ze směsi methanol-hexany za získání fenylglycindimethylamidu (26 g) jako bělavé pevné látky. Enantiomemí přebytek tohoto

- 101 CZ 303213 B6 materiálu byl zjištěn >99% analýzou HPLC 2,3,4,6-tetra-O-acetylglukopyranosylthioisokyanátového derivátu.

Příklad XV!

Syntéza (l-methylcyklohexyl)glycinu

Krok 1

1—methyl—1—hydroxy methylcyklohexan OH

OH

K roztoku 1-methyl-1-hydroxykarbonylcyklohexanu (10 g, 70 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) byl při 0 ^ŮC přidán ÍM diboran v tetrahydrofuranu (200 ml, 200 mmol) v průběhu

90 min. Chladicí lázeň byla odstraněna a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře dva dny. Zbývající boran byl rozložen pomalým přidáváním nasyceného hydrogensíranu sodného (10 ml) v průběhu 90 min za chlazení. Byl přidán další hydrogensíran sodný (200 ml) a po 20 min míchání byla vodná vrstva odstraněna. Organická vrstva byla promyta vodou a nasyceným chloridem sodným, sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Zbytek byl čištěn bleskovou ehromatografií s použitím 20% diethyletheru v hexanech za poskytnutí 1-methy 1-1-hydroxymethylcyklohexanu (6,17 g, 48 mmol, 69 %).

Krok 2

1 -Methy leyklohexylkarboxaldehyd

K roztoku 1-methyl-l-hydroxymethylcyklohexanu (6,17 g, 48 mmol) a triethylaminu (20,1 ml, 144 mmol) v dichlormethanu (150 ml) byl při 0 °C přidán roztok komplexu pyridin - oxid sírový (22,9 g, 144 mmol) v dimethylsulfoxidu (150 ml) v průběhu 15 min. Chladicí lázeň byla pone30 chána ohřívat na laboratorní teplotu dvě hodiny, a potom byla reakční směs vlita do roztoku soli s ledem (400 ml). Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována díehlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy byly zředěny hexany (600 ml) a promyty ÍM HCI (2 x 150 ml), nasyceným chloridem sodným (2 x 100 ml), sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou ehromatografií za získání 1-methylcyklohexylkarboxaldehydu (1,77 g, 13,8 mmol, 29 %).

-102CZ 303213 B6

Krok 3

Syntéza N-formy l-N-gly kosy 1- i -methy Icyklohexy l-terc-butyl amidu

Syntéza 2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-arabinosylaminu byla prováděna podle zveřejněného postupu (Kunz. H.; Pfrengle, W.; Ruck, K.; Wilfried, S., Synthesis (1991) 1039 až 1042).

K roztoku 1-methylcyklohexylkarboxaldehydu (1,17 g, 8,34 mmol), 2,3,4-tri-O-pivaloyl-Darabinosylaminu (8,3 g, 20,7 mmol), kyseliny mravenčí (850 μΐ, 22,2 mmol) a terc-butyl isoio kyanidu (2,4 ml, 21,2 mmol) v tetrahydrofuranu (170 ml) byl při -30 ^ŮC přidán 0,5M chlorid zínečnatý v tetrahydrofuranu (41 ml, 20,57 mmol). Roztok byl míchán pri -20 °C 3 dny, potom zakoncentrován. Zbytek byl zředěn CH₂C1₂ (500 ml), promyt nasyceným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného (2 x 500 ml), vodou (500 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) is poskytla čirý produkt (4,3 g, 6,6 mmol, 33 %).

Krok 4

Syntéza (1 -methy Icyklohexy l)glycinu

Roztok produktu získaného v kroku 3 výše (4,3 g, 6,6 mmol) v dichlormethanu (30 ml) a nasyceného bezvodého methanolického HCl (30 ml) byl míchán přes noc. Roztok byl zakoncentrován a zbytek byl rozpuštěn ve vodě (100 ml) a promyt pentanem (2 x 100 ml). Vodná vrstva byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v 6N HCl (50 ml) a vařen pod zpětným chladičem 30 h.

Roztok byl zakoncentrován za získání surového hydrochloridu (1-methy Icyklohexy l)glycinu (790 mg, 3,82 mmol, 58 %).

- 103CZ 303213 B6

Příklad XVII

Syntéza (4,4-dimethylcyklohexyl)glycinu

Krok 1

Syntéza 4,4-dimethylcyklohexanonu

Směs 4,4-dimethylcyklohex-2-en-1 -onu (12 ml, 91,2 mmol) a 10% Pd na uhlí typu Degussa io (2 g) byla hydrogenována při 40 psi (276 kPa) 18 h. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována ('HNMR ukázala směs ketonu a alkoholu v poměru 5 : 3). Směs byla rozpuštěna v acetonu (400 ml) a ochlazena na 0 °C. Bylo přidáno Jonesovo činidlo (40 ml) v průběhu 30 min a chladicí lázeň byla odstraněna. Po 2 dnech byl přebytek acetonu odpařen a získaný zbytek byl rozpuštěn ve vodě a diethyletheru. Etherová vrstva byla promývána vodou až do odstranění zbarvení, suše15 na, zfiltrována a zakoncentrována za získání 4,4-dimethylcyklohexanonu (7,4 g, 58,6 mmol, 64 %).

Krok 2

Syntéza methylenoletheru 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu

K roztoku methoxymethyltrifenylfosfoniumchloridu (8,6 g) v tetrahydrofuranu (125 ml) bylo při 0°C přidáno n-butyl lithium (1,6M v hexanech, 14,3 ml) v průběhu 10 min. Po 30 min byla reakční směs ochlazena na -78 °C a v průběhu 20 min. byl přidán roztok 4,4-dimethylcyklo25 hexanonu (2,45 g, 19,1 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml). Po l h byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla pomalu ohřátá na 0 °C. Reakční směs byla zředěna nasyceným chloridem amonným (50 ml), ethylacetátem (100 ml) a hexany (100 ml). Organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli, sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Zbytek byl míchán s hexany (70 ml) 10 min a zfiltrován. Filtrát byl zakoncentrován a čištěn chromatografií s použitím 25% ethylacetátu v hexanech za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (1,925 g, 12,5 mmol, 65 %).

- 104CZ 303213 B6

Krok 3

Roztok methylenoletheru 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu (1,925 g, 12,5 mmol) (Krok ll výše), tetrahydrofuranu (100 ml) a 6M HC1 (20 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4 h. Reakční směs byla zředěna hexany, diethyletherem, roztokem soli a vodou. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání 4,4-dimethylcyklohexyIkarboxaldehydu (1,0 g, 7,1 mmol, 57 %).

io

Krok 4

Syntéza N-formyI-N-glykosyM,4--dimethylcyklohexyl-terc-butylamidu

ZnCL, kys. mravenčí, terc-butylisokyanid tetrahydrofuran

is K roztoku 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu (1,17 g, 8,34 mmol), 2,3,4-tri-O-pivaloyla-D-arabinosylaminu (3,43 g, 8,55 mmol), kyseliny mravenčí (350 μΐ, 9,17 mmol) a terc-butylisokyanidu (990 μΐ, 8,76 mmol) v THF (70 ml) byl při -30 °C přidán 0,5M chlorid zinečnatý v tetrahydrofuranu (17 ml, 8,5 mmol). Roztok byl míchán při -20 °C 2 dny, potom zakoncentrován. Zbytek byl zředěn dichlormethanem (200 ml), promyt nasyceným roztokem hydrogenuhliči20 tanu sodného (2 x 200 ml), vodou (200 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý produkt (2,1 g, 3,3 mmol, 39 %).

Krok 5

Syntéza (4,4-dimethylcyklohexyl)glycinu

- 105CZ 303213 B6

Roztok Lfgiho produktu získaného v kroku 4 výše (2,1 g, 3,3 mmol) v dichlormethanu (20 ml) a nasyceného bezvodého methanolického HCI (20 ml) byl míchán přes noc. Roztok byl zakoncentrován a zbytek byl rozpuštěn ve vodě (100 ml) a promyt pentanem (2 x 100 ml). Vodná vrstva byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v 6N HCI (40 ml) a vařen pod zpětným chladičem 30 h. Roztok byl zakoncentrován za získání surového hydrochloridu (1-methylcyklohexyl)glycinu (300 mg, 1,36 mmol, 41 %).

Příklad XVIII

Syntéza Boc-nVal-(CHOH)-43Iy-OH

Krok 1

Příprava Boc-norvalinolu

H BHyTBF,

Boc-HN

K roztoku Boc-norvalinu (25,0 g, 0,115 mol) v tetrahydrofuranu (461 ml), ochlazenému na 0 °C, byl po kapkách přidán komplex boran/tetrahydroťuran (461 ml, l,0M roztok v tetrahydrofuranu). Po 1 h při 0 °C byl roztok ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 1,5 h. TLC ukázala, že reakce je ukončena. Byl přidán methanol pro zastavení reakce. Roztok byl zakoncentrován za získání v názvu uvedené sloučeniny (22,56 g, 96 %) jako pěnovítého sirupu. TLC produktů ukázala uspokojivou čistotu. R_f = 0,34 (40% ethylacetát/hexany).

Krok 2

Příprava Boc-norvalinalu

Boc-HN'

CI₂CHCO₂H, EDC ,OH------>

toluen, DMSO

K Boc-norvalinolu (7,77 g, 38 mmol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (153 ml) a toluenu (153 ml) byl přidán EDC (73,32 g, 382 mmol). Potom byl roztok ochlazen na 0 °C, po kapkách byla přidána kyselina dichloroctová (15,8 ml, 191 mmol). Když bylo přidávání ukončeno byla reakční směs míchána po dobu 15 min. Roztok byl ponechán ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 2 h. Reakční směs byla zakoncentrována pro odstranění toluenu, potom byla rozpuštěna v ethylacetátu. Roztok byl postupně promyt IN hydrogen síranem sodným, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován, za získání surového Boc-norvalinalu, který byl ihned použit v dalším kroku. TLC R_f = 0,84 (40% ethylacetát/hexany).

- 106CZ 303213 B6

Krok 3

Syntéza Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OEt

K roztoku surového Boc-norvalinalu (4,18 g, 20,77 mmol) v dichlormethanu (83 ml) byl přidán ethyl isokyanoacetat (2,72 ml, 24,93 mmol) a pyridin (6,72 ml, 83,09 mmol). Potom byl roztok ochlazen na 0 °C, po kapkách byla přidána kyselina trifluoroctová (4,15 ml, 41,54 mmol). Po 1 h míchání byl roztok míchán při teplotě laboratoře 18 h, přičemž rozpouštědlo bylo ponecháno io odpařit za laboratorních podmínek z reakční směsi z nezakryté nádoby. Reakční směs byla zakoncentrována, potom rozpuštěna v ethylacetátu. Roztok byl postupně promyt IN hydrogensíranem sodným, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a potom zakoncentrován. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografii s elucí směsí 20% : 40% ethylacetát/hexany, za získání 2,8 g v názvu uvedené sloučeniny jako žlutého sirupu. Hmotnostní spektroskopie s nízkým rozlišením potvrdila přítomnost požadovaného produktu (MH⁺ 333),

Krok 4

Syntéza Boc—nVal-(CHOH)-Gly-OH

Získaný produkt (Boc-nVal-(CHOHpGly-OEt) (1,52 g, 4,70 mmol) rozpuštěný v ethanolu (23 ml) byl zmýdelňován IN hydroxidem lithným (18,81 ml) dvě hodiny pn teplotě laboratoře. Reakční směs byla okyselena na pH = 2 iontoměničovou pryskyřicí Dowex® 50 WX8, míchána

20 min a potom zfiltrována. Pryskyřice byla důkladně promyta ethanolem a vodou a spojené filtráty byly zakoncentrovány na bílou pěnu (0,48 g, 33 %).

Příklad XIX

Syntéza (2R,3 S,4S,5S)-terc-butyl-N-CBz-3-amino-2-hydroxy-4,5-methylenhexanoátu

- 107CZ 303213 B6

Krok 1

K roztoku terc-buty Idiethylfosfonoacetátu (4,7 ml, 20 mmol) rozpuštěného v THF (50 ml) bylo při -78 °C přidáno 1,6M n-butyllithium v hexanech (12,4 ml). Po 30 min byl přidán (lS,2S)-2methylcyklopropylkarboxaldehyd (1 g, 12 mmol) (Barret, A. G. M.; Doubleday ,W. W.; Kasdorf, K.; Tustin, G. J., J. Org. Chem. (1996) 61, 3280) v diethyletheru (100 ml), v průběhu 10 min. Reakční směs byla zahřívána na 0 °C 2 a na 6 °C 12 h. Reakce byla ukončena nasyceným chloridem amonným (20 ml) a organická vrstva byla oddělena, promyta 50ml roztokem soli ,o a sušena nad síranem sodným, zfíltrována a zakoncentrována, za získání 3,5 g čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý nenasycený terc-buty lester (Mg).

Krok 2

K roztoku benzyIkarbamátu (3,55 g, 23,5 mmol) v n-propanolu (24 ml) byl přidán roztok hydroxidu sodného (900 mg, 22,7 mmol) ve vodě (48 ml), a potom terc-buty Ihypoch lorid (2,57 ml, 22,7 mmol). Po 15 min byla reakční směs ochlazena na 0 °C a byl přidán (DHQEPHAL (350 mg, 0,45 mmol) v n-propanolu (24 ml), a potom nenasycený terc-buty lester (1,4 g) z kroku výše, v n-propanolu (48 ml). Nakonec byl přidán osman draselný (110 mg, 0,30 mmol) ve vodě (2 ml) a roztok se rychle zbarvil tmavě zeleně, přičemž zbarvení přetrvalo 4 h. Po 6 h byl přidán nasycený síran sodný (50 ml) a směs byla extrahována ethylacetátem (2 x 50 1). Spojené organické vrstvy byly promyty roztokem soli (30 ml), sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány. Blesková chromatografie s 20% ethylacetátem v hexanech poskytla požadovaný terc-buty lester s aminovou skupinou chráněnou cBz jako bílou pevnou látku (316 mg).

Krok 3

- 108CZ 303213 B6

Směs amino-terc-buty lesteru chráněného CBz (316 mg, 0,9 mmol) a 32 mg 10% palladia na uhlí v 9 ml methanolu byla hydrogenována 8 h. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována, za získání volného aminu jako čirého oleje (195 mg).

Příklad XX

Syntéza 1 R,2-dimethylpropylchloroformátu

io Ke komerčně dostupnému 2 R-hydroxy-3-methyl butanu (410 mg, 4,65 mmol) byl přidán roztok 20 % fosgenu v toluenu (1 ml, 2 mmol). Roztok byl míchán po dobu 6 h pro vytvoření chloroformátu (2 mmol), který byl ponechán reagovat ihned přímo s požadovaným aminem. S-izomer byl syntetizován stejným postupem.

is II) Příklad syntézy inhibitorů HCV v roztoku

Příklad XXI

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dirnethyl)-Leu(CO)-Gly-Phg-dimethylarriidu v roztoku

K roztoku komerčně dostupného (Advanced Chem Tech) Boc-L-Ieucinolu (0,78 g, 3,6 mmol) v bezvodém dichlormethanu (17,5 ml) byl přidán triethylamin (2 ml, 14,36 mmol) a směs byla ochlazena na 0 °C. Byl přidán dimethylsulfoxid (17,5 ml) a potom komplex pyridin - oxid sírový (2,3 g, 14,36 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu dvou hodin. TLC ve směsi 1 : 1 ethyl30 acetát: hexany potvrdila ukončení reakce. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek zředěn ethylacetátem. Ethylacetátová vrstva byla promyta 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 75 ml) a potom nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 75 ml) a roztokem soli (75 ml). Organická vrstva byla sušena (síran sodný), zfiltrována a zakoncentrována, za získání 775 mg produktu.

- 109CZ 303213 B6

Krok 2

Syntéza ethylesteru Boc-2-hydroxy-3-amino-5-methylhexanoylglycinu (Boc-Leu-HOH)5 Gly-OEt)

kyselina trifluoroctová pyridin, CNCH₂CO₂Et *— ——--—----dichlormethan

K roztoku Boc-Leucinaldehydu (0,77 g, 3,59 mmol) v bezvodém dichlormethanu (24 ml) byl přidán bezvodý pyridin (1,16 ml, 14,36 mmol) a ethyl i soky anoacetát (0,4 ml, 4,66 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a v průběhu dvou minut byla přidána kyselina trifluoroctová io (0,55 ml, 7/18 mmol). Reakční směs byla uzavřena víčkem a míchána při 4°C čtyři dny, a při teplotě laboratoře jeden den. Reakční směs byla zředěna dichlormethanem (350 ml) a dvakrát promyta vždy 75 ml 1M kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou ehromatografií na koloně 2 x 6” (51 x 152 mm) silikagelu s použitím

10% ethyiacetátu v hexanech (800 ml) a potom 1 : 1 ethylacetátem v hexanech (800 ml). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány za získání 980 mg (79 %) produktu.

Krok 3

Syntéza Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)“Gly-OEt (0,98 g, 2,83 mmol) v ethanolu (11,3 mmol) byl přidán 2M hydroxid lithný (4,25 ml) a reakční směs byla míchána po dobu pěti hodin při teplotě laboratoře. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla zředěna ethylacetátem.

Organická vrstva byla promyta 1M kyselinou chlorovodíkovou a potom roztokem soli, sušena, zfiltrována a zakoncentrována, za získání 775 mg (86 %) produktu jako bílé pevné látky.

Krok 4

Syntéza Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-dimethylamÍdu

H-Phg-N(Me)₂ EDC, HOBt

DIEA, acetonitril

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH (0,37 g, 1,18 mmol) v acetonitrilu (23 ml) byly postupně přidány fenylglycindimethylamid (získaný v příkladu XV, krok 2), EDC (0,34 g, 1,76 mmol),

N-hydroxy benzotriazol (HOBt) (0,18 g, 1,18 mmol) a diisopropy lethy lamin (DIEA) (0,82 ml,

- 110CZ 303213 B6

4,7 mmol), a reakční směs byla míchána po dobu 18 h při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl zředěn ethylacetátem a postupně promyt dvěma 75 ml podíly 1M kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla potom sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Surový produkt byl čištěn bleskovou chromatografii na koloně silikagelu 2 x 6 (51 x 152 mm) s použitím směsi 4 : l ethylacetát : hexany (700 ml) a potom ethylacetátem (1000 ml) a 10% methanolem v dichlormethanu (600 ml). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány, za získání 445 mg (80 % bílé pevné látky.

io Krok 5

Syntéza trifluoracetátové soli H-Leu_(CHOH)-Gly-Phg-dimethylamidu

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-d imethy lam idu (70 mg, 0,146 mmol) v dichlormethanu 15 (1 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (1 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 1 h. Reakční směs byla zakoncentrována a převedena do dalšího kroku bez dalšího čištění.

Krok 6

Syntéza i Boc-G(Chx)-Pro(4,4~dirnethyl)-Leu-(CHOH)-Gly_Phg-<Í imethy lam idu

K roztoku iBoc-G(Chx)-P(4,4—diMe)-OH (příklad XIV, krok 2) (53 mg, 0,148 mmol) v acetonitrilu (3 ml) byly postupně přidány TFA.2HN-Leu(CHOH)Gly-Phg-NMe₂ (61 mg, 0,148 mmol), N-hydroxybenzotriazol (HOBt) (23 mg, 0,148 mmol), TBTU (71,5 mg,

0,222 mmol a diisopropylethylamin (103 1, 0,593 mmol). Reakční směs byla míchána pri teplotě laboratoře 18 h a zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 1M kyselinou chlorovodíkovou (2x5 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x5 ml) a roztokem soli (2x5 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Produkt (100 mg) byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění.

- 111 CZ 303213 B6

Krok 7

Syntéza Boc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethy l)-Leu-(C 0)-0 ly-Phg-d i methy lam idu

K roztoku i Boc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethy l)-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-d imethy lam idu (30 mg, 0,04 mmol) v dichlormethanu (1 ml) bylo přidáno komerčně dostupné Dess-Martinovo činidlo (Omega Chemical Company lne.) (67,8 mg, 0,16 mmol) a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 90 min. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl míchán v 5% thiosíranu sodném. Potom byl zředěn dichlormethanem a vrstvy byly odděleny. Organická vrstva byla proio myta thiosíranem sodným (4x3 ml), a potom vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována. Surový produkt byl rozpuštěn v hexanech a isopropylalkoholu a byl čištěn HPLC na koloně silikagelu Kromasil 5 a normální fází (Fenomenex, 250 x 21,20 mm, velikost pórů 100 Á, částice gelu 5 pm) s elucí 30 min gradientem tvořeným 0 až 25% i sopropy (alkoholem v hexanech (25 ml/min). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány. Lyofilizace z vody poskytla 6,7 mg bílého prášku. Hmotnostní spektrum s nízkým rozlišením potvrdilo požadovanou hmotnost (MH⁺ = 741,4). lil) Syntéza na pevné fázi

Syntéza na pevné fází je použitelná pro výrobu malých množství některých sloučenin podle vynálezu. Jako je tomu u běžné syntézy peptidů na pevné fázi, reaktory pro syntézu peptidylylketoamidů na pevné fázi jsou tvořeny reaktorovou nádobou, jejíž alespoň jeden povrch je propustný pro rozpouštědlo a rozpuštěné reakční činidla, ale není propustný pro pryskyřici používanou při syntéze se zvolenou velikostí zrna. Mezi tyto reaktory patří skleněné reakční nádoby pro reakce na pevné fázi s fritou ze sintrovaného skla, polypropylenové trubičky nebo kolony opatřené fritami nebo reaktory typu Kans™ firmy Irori lne., San Diego, CA. Typ zvoleného reaktoru závisí na potřebném objemu pryskyřice pevné fáze a v různých stupních syntézy mohou být použity různé typy reaktorů. V následujících příkladech se bude odkazovat na dále uvedené postupy:

Postup A

Vazebná reakce: Kpiyskyřici suspendované v N-methy lpyrrolidinu (NMP) (10 až 15 ml/g pryskyřice) byly přidány Fmoc-aminokyselina (2 ekv.), HOAt (2 ekv.), HATU (2 ekv.) a diiso35 propylethylamin (4 ekv.). Směs byla ponechána reagovat 4 až 48 h. Reakční činidla byla odsáta a piyskyřice byla postupně promyta di methy lformam idem, dichlormethanem, methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (použito 10 až 15 ml rozpouštědla/g pryskyřice). Pryskyřice byla potom usušena ve vakuu.

Postup B

Odstranění ochranných skupin Fmoc: Pryskyřice chráněná Fmoc byla ponechána reagovat s 20% piperidinem v dimethylformamidu (10 ml činidla/g pryskyřice) 30 min. Činidla byla odsáta a pry- 112 CZ 303213 B6 skyřice byla postupně promytá dimethyl formám idem, dichlormethanem, methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).

Postup C

Odstranění ochranné skupiny Boc: Pryskyřice chráněná Boc byla smísena se směsí 1:1 dichlormethan a kyselina trifluoroctová 20 až 60 min (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice). Činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promytá dichlormethanem, dimethylformamidem, 5% diisopropylethylaminem v dimethy Iformamidu, dimethylformamidem, dichlormethanem a dimethylio formamidem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).

Postup D

Hydrolýza semikarbazonu: Pryskyřice byla suspendována ve štěpícím koktejlu (10 ml/g prys15 kyřice) s obsahem směsi kyselina trifluoroctová : kyselina pyrohroznová : dichlormethan : voda 9:2:2:1 dvě hodiny. Reakční činidla byla odsáta a postup byl opakován ještě třikrát. Pryskyřice byla postupně promytá dichlormethanem, vodou a dichlormethanem a sušena ve vakuu.

Postup E ²⁰

Štěpení HF: Usušený materiál peptid-nVal(CO)-G-0-PAM pryskyřice (50 mg) byl umístěn do nádoby pro HF obsahující malou míchací tyčinku. Jako látka vychytávající radikály byl přidán anisol (10 % celkového objemu). V přítomnosti kyseliny glutamové a aminokyselin s obsahem cysteinu byly přidány také thioanisol (10 %) a 1,2-ethandithiol (0,2 %). Nádoba pro HF byla potom zavěšena do přístroje pro HF (Immuno Dynamics) a systém byl 5 min proplachován dusíkem. Nádoba byla potom ochlazena na -70 °C v lázni suchý led/isopropanol. Po 20 min byl destilován HF pro dosažení potřebného objemu (10 ml HF/g pryskyřice). Reakce byla ponechána probíhat 1,5 h 0 °C. Zpracování spočívalo v odstranění veškerého HF pomocí dusíku. Potom byl k pryskyřici přidán dichlormethan a směs byla míchána po dobu 5 min. Potom byla přidána 20% kyselina octová ve vodě (4 ml). Po 20 min míchání byla pryskyřice zfiltrována s použitím nálevky opatřené fritou a dichlormethan byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek a směs byly promyty hexany (2 x ) pro odstranění vychytávacích sloučenin. Mezitím byla pryskyřice namočena do 1 ml methanolu. Vodná vrstva (20% HOAc) byla přidána zpět k pryskyřici a směs byla míchána 5 min a potom zfiltrována. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla lyofili35 zována. Peptid byl potom rozpuštěn v 10 až 25% methanolu (s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové) a čištěn HPLC s reverzními fázemi.

Příklad XXII

Příklad syntézy na pevné fázi inhibitorů Hep C: (iBoc-G(Chx)-P(4t-NHS0₂-Ph)-nV-(C0)-GG(Ph)-NH₂)

113CZ 303213 B6

Krok 1

Syntéza Fmoc-nV-(dpsc)-Íjly-OH

A) Syntéza allylisokyanoacetátu (kroky a - b níže) a) Syntéza draselné soli kyseliny isokyanoctové

Ethy li soky anoacetát (96,6 ml, 0,88 mol) byl přidán po kapkách ke chlazenému roztoku ethanolu io (1,5 1) a hydroxidu draselného (59,52 g, 1,0 mol). Reakční směs byla pomalu ohřátá na laboratorní teplotu. Po dvou hodinách byl vysrážený produkt zfiltrován na skleněné nálevce a promyt několika podíly chlazeného ethanolu. Draselná sůl kyseliny isokyanoctové, která byla získána, byla usušena ve vakuu na zlatohnědou pevnou látku (99,92 g, 91,8 %).

b) Syntéza allylisokyanoacetátu

CN

K⁺

K produktu zčásti a) (99,92 g, 0,81 mol) rozpuštěnému v acetonitrilu (810 ml) byl přidán altylbromid (92 ml, 1,05 mol). Po zahřívání pod zpětným chladičem 4 h byl získán tmavý hnědý roztok. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v etheru (1,5 ml) a promyt třikrát vodou (500 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována na tmavý hnědý sirup. Surový materiál byl čištěn vakuovou destilací při tlaku 7 mm Hg (933 Pa) (98 °C) na čirý olej (78,92 g, 78 %). NMR δ ppm (CDC1₃): 5,9 (m, IH), 5,3 (m, 2H), 4,7 (d, 2H), 4,25 (s, 2H).

B) Syntéza 9-fluorenyl methoxy karbony lnorvalinalu (kroky a - c níže)

a) Syntéza methylesteru 9-fluorenylmethoxykarbonyl-L-norvalinu (Fmoc-nVal-OMe)

K chlazenému roztoku komerčně dostupného Fmoc-norvalinu (25 g, 73,75 mmol) v bezvodém methanolu (469 ml) byl v průběhu jedné hodiny přidán thionylchlorid (53,76 ml, 737,5 mmol).

TLC v ethylacetátu provedená o hodinu později potvrdila ukončení reakce (R_f = 0,85), Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu. Organická vrstva byla promyta několika 200 ml podíly nasyceného hydrogenuhličitanu sodného a potom roztokem soli. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání Fmoc-norVal-OMe) jako bílé pevné látky (26,03 g) v kvantitativním výtěžku. NMR δ ppm (CD₃OD): 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 2H),

7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 4,3 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 3,7 (s, 3H), 1,7 (m, IH), 1,6 (m, IH), 1,4 (m,

2H), 0,95 (t,3H).

-114CZ 303213 B6

b) Syntéza 9-fluorenylmethoxykarbonylnorvalinolu (Fmoc-nValinol)

JL σ-* JL ΌΗ

Fmoc-ΗΝ γ ^x Fmoc-HN*^^

O

K Fmoc-nVal-OMe (26,03 g, 73,75 mmol) v tetrahydrofuranu (123 ml) a methanolu (246 ml) s byl přidán chlorid vápenatý (16,37 g, 147,49 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a v několika Částech byl přidán borohydrid sodný (11,16 g, 294,98 mmol). K získané husté pastě byl přidán methanol (500 ml) a reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře min. TLC ve směsi 2 : 3 ethylacetát: hexany potvrdila ukončení reakce (R_f = 0,25). Reakce byla ukončena pomalým přidáváním vody (100 ml) při 0°C. Methanol byl odstraněn za snížeio ného tlaku a vodná fáze byla zředěna ethylacetátem. Organická vrstva byla promyta vodou (3 x

500 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 500 ml) a roztokem soli (500 ml). Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na bílou pevnou látku (21,70 g, 90,5 %). NMR δ ppm (CD₃OD): 7,8 (m, 2H), 7,7 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 4,3 - 4,5 (m, 2H), 4,2 (m, IH), 3,6 (s, IH), 3,5 (s, 2H), 1,5 (m, IH), 1,3-1,4 ís (m, 3H), 0,99 (m, 3H).

c) Syntéza 9-fluorenylmethoxykarbonylnorvalinalu (Fmoc-nVal-CHO)

Fmoc-HN

O

K roztoku Fmoc-norValinolu (21,70 g, 66,77 mmol) v dichlormethanu (668 ml) byl přidán tri20 ethylamin (37,23 ml, 267 mmol) a roztok byl ochlazen na 0 °C. K chlazenému roztoku byla přidána suspenze komplexu pyridin - oxid sírový (42,51 g, 267 mmol) v dimethylsulfoxidu (96 ml). Po jedné hodině TLC ve směsi 2 : 3 ethylacetát : hexany potvrdila ukončení reakce. Dichlormethan byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt vodou (2 x 50 ml), IN nasyceným hydrogensíranem sodným (2 x 50 ml), nasyceným roztokem hydro25 genuhličitanu sodného (2 x 50 ml) a roztokem soli (50 ml). Organická vrstva byla zakoncentrována za získání bílé pevné látky. Byl předpokládán teoretický výtěžek (21,57 g) a sloučenina byla převedena do dalšího kroku bez dalšího čištění.

C) Syntéza trifluoracetátové soli difeny Imethy Isemikarbazidu (dpsc) (kroky a - b níže)

a) Syntéza Boc-semikarbazid-4-yl-difenylmethanu

K roztoku karbonyldiimidazolu (16,2 g, 0,10 mol) v dimethylformamidu (225 ml) byl přidán roztok t-butylkarbazátu (13,2 g, 0,100 mol) v dimethylformamidu (225 ml) po kapkách v průběhu 30 min. V průběhu dalších 30 min byl přidán difenylmethylamin (18,3 g, 0,10 mol) 30 min. Reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře 1 h. Byla přidána voda (10 ml) a směs byla zakoncentrována na přibližně 150 ml za sníženého tlaku. Tento roztok byl vlit do vody

-115CZ 303213 B6 (500 ml) a extrahován ethylacetátem (400 ml). Ethylacetátová fáze byla promyta dvakrát vždy 75 ml IN HCI, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a chloridem sodným, a sušena síranem hořečnatým. Směs byla zfiltrována a roztok byl zakoncentrován za získání 29,5 g (85% výtěžek) bílé pěny. Tento materiál mohl být čištěn rekrystalizací ze směsi ethylacetát/hexan, ale byl dostatečně čistý pro okamžité použití v dalším kroku: teplota tání 142 až 143 °C. 'H NMR (CDCb) d 1,45 (s, 9H), 6,10 (dd, 2H), 6,42 (s, IH), 6,67 (bs, IH), 7,21 - 7,31 (m, 10H). Analyticky vypočteno pro C|₉H₂₃N₃O₃: C, 66,84; H, 6,79; N, 12,31. Nalezeno: C, 66,46; H, 6,75; N; 12,90.

b) Syntéza trifluoracetátové soli d i fenyl methyl sem i karbazidu (dpsc)

Roztok Boc-semikarbazid-4-yl-difenylmethanu (3,43 g, 10 mmol) v dichlormethanu (12,5 ml) byl smísen s 12,5 ml kyseliny trifluoroctové při teplotě laboratoře a míchán 30 min. Roztok byl přidán po kapkách k 75 ml etheru a získaná pevná látka (2,7 g, 80 %) byla oddělena filtrací. Teplota tání 182 až 184 °C. 'H NMR (CD₃OD) d 6,05 (s, IH), 7,21 - 7,35 (m, 10H). ^l3C NMR (CD₃OD) d 57,6, 118,3 (q,CF₃), 126,7, 127,9, 141,6, 156,9, 160,9 (q, CF₃CO₂H).

K roztoku Fmoc-nVal-CHO (krok IB) (5,47 g, 16,90 mmol) v dichlormethanu (170 ml) byl přidán allylisokyanoacetát (krok 1A) (2,46 ml, 20,28 mmol) a pyridin (5,47 ml, 67,61 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a po kapkách byla přidána kyselina trifluoroctová (3,38 ml, 33,80 mmol). Reakční směs byla míchána pri 0 °C 1 h a potom při teplotě laboratoře 48 hod. TLC provedená v ethylacetátu potvrdila ukončení reakce. Reakční směs byla zakoncentrována a čištěna bleskovou chromatografii s použitím 20 až 70% ethylacetátu v hexanech. Frakce obsahující požadovaný produkt byly spojeny a zakoncentrovány na bílou pěnu (6,88 g, 87,3 %). TLC ve směsi 50 : 50 ethylacetátu ukázala jednu skvrnu (Rf = 0,37). NMR δ ppm (CD₃OD): 7,8 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 5,9 (m, IH), 5,1 - 5,4 (m, 2H), 4,55 - 4,65 (m, 2H),

4,3-4,4 (m, 2H), 4,15-4,25 (m, IH), 4,01 (s, IH), 3,9 -4,0 (m, 3H), 1,5 - 1,6 (m, 2H), 1,35 1,45 (m,3H), 0,9 (m, 3H).

E) Syntéza Fmoc-nVal-(CO)-Gly_Oallylu

Fmoc-H

OH

O“ kyselina dichloroctová ----—► dimethylsulfoxid, toluen

Fmoc-HI

K roztoku Fmoc-nVal-{CHOH)-Gly-Oallylu (krok D) (5,01 g, 10,77 mmol) v dimethy 1sulfoxidu (100 ml) a toluenu (100 ml) byl přidán EDC (20,6 g, 107,7 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a po kapkách byla přidána kyselina dichloroctová (4,44 ml, 53,83 mmol).

- 116 CZ 303213 B6

Reakční směs byla míchána po dobu 15 min při 0 °C a 1 h při teplotě laboratoře. Po ochlazení na 0 °C byla přidána voda (70 ml) a toluen byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl zředěn ethylacetátem a promyt několikrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom IN hydrogensíranem sodným a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována. Byl předpokládán teoretický výtěžek 4,99 g a reakční směs byla převedena do dalšího kroku bez dalšího čištění. TLC v 50 : 50 ethylacetátu ukázala jednu skvrnu (R_f=0,73).

F) Syntéza Fmoc-nVal-(dpsc)-G1y-Oallylu io

Fmoc-HI

octan sodný, voda, ethanol difenylmethytsemikarbazid

K roztoku Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oallylu (krok E) (4,99 g, 10,75 mmol) v ethanolu (130 ml) a vodě (42 ml) byly postupně přidány trifluoracetátová sůl difenylmethylsemikarbazidu (dpsc) (krok IC) (7,6 g, 21,5 mmol) a octan sodný.3H₂O (1,76 g, 12,9 mmol). Reakční směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 90 min. Ukončení reakce bylo potvrzeno TLC prováděné ve směsi 1 : 1 ethylacetát: hexan. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt IN hydrogensíranem sodným (2 x 10 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 10 ml), a potom roztokem soli (10 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií v 20 až 50% ethylacetátu v hexanech, za získání bílé pevné látky (5,76 g, 78 %). TLC ve směsi 50 : 50 ethylacetát : hexan ukázala dvě skvrny (cis a trans izomery) s Rf = 0,42 a 0,5.

K roztoku Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallylu (krok IG) (4,53 g, 6,59 mmol) v tetrahydrofuranu (300 m 1) byl přidán dimedon (4,62 g, 32,97 mmol) a potom katalyzátor tetrakis( tri feny Ifosfin)palladium(O) (0,76 g, 0,66 mmol). Ukončení reakce bylo potvrzeno TLC po 90 min s použitím směsi 9 : 1 dichlormethan : methanol. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt třikrát 50 ml 0,1M dihydrogenfosforečnanu draselného. Organická vrstva byla potom smísena s 50 ml hydrogensíranu sodného a dvě fáze byly míchány po dobu 15 min.

Fáze byly odděleny a postup byl opakován ještě dvakrát. Organická vrstva byla sušena a zakoncentrována a čištěna bleskovou chromatografií s 20 až 100% ethylacetátem v hexanech. Potom následoval roztok 9 : 1 dichlormethan : methanol. Frakce odpovídající Čistému produktu byly spojeny a zakoncentrovány za získání bílé pevné látky (3,99 g, 94 %). TLC ve směsi 9 : 1 dichlormethan : methanol ukázala dvě skvrny (cis a trans izomery). NMR δ ppm (CD₃OD): 7,75 (m, 2H), 7,6 (mn, 3H), 7,2 - 7,4 (m, 14H), 6,1 - 6,2 (m, IH), 4,25 - 4,4 (m, 2H), 4,1 - 4,2 (m,

2H), 3,85 (s, 2H), 1,6-1,8 (m, 2H), 1,3 - 1,5 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).

- 117CZ 303213 B6

Krok 2

Komerčně dostupná MBHA pryskyřice (2,6g, 1,12 mmol/g, 2,91 mmol) byla převedena do 250 ml reakční nádoby pro syntézu na pevné fázi opatřené fritou a vstupem dusíku. Potom byla důkladně promyta 30ml podíly dichlormethanu, methanolu, dimethylformamidu a dichlormethanu a ponechána reagovat 18 h s komerčně dostupným Fmoc-Phg-OH (2,17 g, 5,82 mmol) podle postupu A s 99,82% účinností. Pryskyřice byla potom zbavena ochranné skupiny Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 3

Syntéza H-nVal(dpsc)-GIy-Pha-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice

Pryskyřice získaná v kroku II (2,6 g, 0,8 mmol/g, 2,91 mmol) byla ponechána reagovat s FmocnVal-(dpsc}-Gly-OaHylem (krok IG) (5,82 mmol, 3,77 g) podle postupu A. Po 18 h kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 99,91% účinnost reakce. Pryskyřice byla zbavena Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 4

Syntéza Boc-Pro(4t-NHFmoc}“nVal (dpsc)-Gly-Pha-MBHA pryskyřice

NH-M8HA pryskyřice

-118CZ 303213 B6

Sloučenina H-nVal(dpsc)-<jly-Phg-MBHA pryskyřice (krok 3 výše) (600 mg, 0,8 mmol/g, 0,67 mmol) byla převedena do polypropylenové trubičky opatřené frítou a byla ponechána reagovat s Boc-Pro(4t-NHFmoc>-OH (příklad VI, krok 3) (610 mg, 1,34 mmol) jako v postupu A. Po 18 h kvantitativní ninhy dřino vá analýza ukázala 99,96% účinnost reakce.

Krok 5

Syntéza Boc-Pro(4t-NH₂)-nVal(dpsc)-Gly-Pha-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice to Pryskyřice z předcházejícího kroku (Boc-Pro(4t-NHFmoc}-nVal(dpsc)—Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 6

Syntéza Boc-Pro(4t-NHS0₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice

pryskyřice

K pryskyřici získané v předcházejícím kroku (Boc-Pro(4t-NH₂)-nVal(dpsc)Gly-Phg-MBHA 20 pryskyřice) (0,2 g, 0,22 mmol) suspendované v NMP (2 ml) byl přidán 2,4,6-kolídin (0,24 ml,

1,79 mmol) a benzensulfonylchlorid a reakční směs byla třepána 18 h. Rozpouštědlo bylo odsáto a pryskyřice byla důkladně promyta 2ml podíly dichlormethanu, methanolu, dimethylformamidu a dichlormethanu. Kvalitativní ninhydrinová analýza ukázala bezbarvé kuličky a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

-119CZ 303213 B6

Krok 7

Syntéza Fmoc-G(Chx}-Pro(4t-NHS02Bn)-nVal(dpsc)-GIy-Phq-MBHA pryskyřice

Fmoc-HN

Η n

Ν^χΧχ<^-^'ν^'ΝΗ-ΜΒΗΑ pryskyřice H 11 Ξ

NH-CH(Ph)2

Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (Boc-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(dpsc)Gly-PhgMBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Boc postupem C. Fmoc-G(Chx) (0,17g, 0,45 mmol) byl potom navázán podle postupu A. Po 18 h ukázala kvalitativní ninhydrinová analýza bezbarvé kuličky a kvantitativní ninhydrinová analýza 99,79% účinnost reakce.

io Krok 8

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice

oX

NH-CH(Ph)₂

Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (Fmoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(dpsc)-Gly15 Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšnou reakci,

K pryskyřici (0,2 g, 0,22 mmol) suspendované ve 2 ml NMP byl přidán isobutylchlorformát (0,12 ml, 0,90 mmol) a potom diisopropylethylamin (0,31 ml, 1,79 mmol), a reakční směs byla třepána 18 h při teplotě laboratoře. Kvalitativní ninhydrinová analýza ukázala bezbarvé kuličky

2o a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

- 120CZ 303213 B6

Krok 9

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHS02Bn)-nVal(CO-Gly-Pha-MBHA pryskyřice

NH-MBHA pryskyřice

Sloučenina z předcházejícího kroku (iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHS0₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-PhgMBHA pryskyřice) (200 mg) byla vystavena hydrolýze semikarbazonu postupem D.

Krok 10 io Syntéza iBoc—G(Chx)-Pro(4t—NHSO₂Bn)-nVal(CO)-Gly-Pha-NH2

Pryskyřice získaná z předcházejícího kroku (iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Bn)-nVal(CO)GlyPhg-MBHA pryskyřice) (100 mg) byla štěpena HF (podmínky štěpení dle postupu E) za získání požadovaného surového produktu. Materiál byl čištěn HPLC s použitím kolony 2,2 x 25 cm s reverzními fázemi, s obsahem C-18 pryskyřice složené z částic gelu velikosti 10 pm s velikostí pórů 300 A, s elucí gradientem 20 až 50% acetonitrilu ve vodě. Analytická HPLC s použitím a kolony 4,6 x 250 mm s reverzními fázemi, s obsahem C-18 pryskyřice s velikostí částic 5 pm a velikostí pórů 300 Á, s elucí 25 až 75% acetonitrilem (obsahující 0,1% kyselinu trifluoroctovou) ukázala jeden vrchol v čase 13,5 min. Hmotnostní spektrometrie s nízkým rozlišením potvr20 díla požadovanou hmotnost (MH^ 826,4).

IV. Další sloučeniny připravené syntézou v roztoku

Reprezentativní postupy pro přípravu dalších sloučenin podle vynáiezu jsou ukázány dále, při25 čemž sloučeniny připravené těmito postupy jsou uvedeny v tabulce 5.

- 121 CZ 303213 B6

Příklad XXIII

Příprava sloučeniny vzorce XXIII ch₃ ch₃

(XX11I)

Krok 1

Míchaný roztok ketiminu XXIIIa (50 g, 187,1 mmol) pod N₂ v suchém THF (400 ml) byl ochlazen na -78 °C a smísen s ÍM roztokem K-*BuO (220 ml, 1,15 ekv.) v THF. Reakční směs byla ohřátá na 0 °C a míchána 1 h a smí sena s brommethylcyklobutanem (28 ml, 249 mmol). Reakční io směs byla míchána pri teplotě laboratoře 48 h a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v Et₂O (300 ml) a smísen s vodným HCI (2M, 300 ml). Získaný roztok byl míchán pri teplotě laboratoře 5 h a extrahován Et₂O (1 1). Vodná vrstva byla zalkalizována na pH ~12 až 14 NaOH (50 % vod. roztok) a extrahována CH2CI2 (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovaný za získání čistého aminu (XXIIlb, 18 g) jako bezbart5 vého oleje.

Krok 2

(XXIIlb)

Roztok aminu XXIIlb (18 g, 105,2 mmol) pri 0 °C v CH₂C1₂ (350 ml) byl smísen s di-terc-butyl20 dikarbonátem (23 g, 105,4 mmol) a míchán pri teplotě laboratoře pod dobu 12 h. Po ukončení reakce (TLC) byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl rozpuštěn v THF/H₂O (200 ml, 1 : 1) a smísen s LiOH.H₂O (6,5 g, 158,5 mmol) a míchán pri teplotě laboratoře 3 h. Reakční směs byla zakoncentrována a základní vodná vrstva byla extrahována Et₂O. Vodná vrstva byla okyselena konc. HCI na pH -1 až 2 a extrahována CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovaný ve vakuu za získání XXIIIc jako bezbarvého viskózního oleje, který byl použit v příštím kroku bez dalšího čištění.

- 122CZ 303213 B6

Krok 3

Roztok kyseliny XXIIIc (15,0 g, 62 mmol) vCH₂Cl₂ (250 ml) byl smísen s činidlem BOP 5 (41,1 g, 93 mmol), N-methy Imorfo línem (27 ml), hydrochloridem Ν,Ο-dimethylhydroxylaminu (9,07 g, 93 mmol) a míchán pres noc při laboratorní teplotě. Reakční směs byla zředěna IN vod. HCI (250 ml), vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována CH₂C1₂ (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografii (SiO₂, EtOAc/hex 2 : 3) za získání amidu XXIIId (15,0 g) jako bezbarvé pevné io látky.

Krok 4

BocHN^X k

(XXIIId) (XXIIle)

Roztok amidu XXIIId (15 g, 52,1 mmol) v suchém THF (200 ml) byl po kapkách smísen s roz15 tokem L1AIH4 (ÍM, 93 ml, 93 mmol) pri 0 °C. Reakční směs byla míchána pri teplotě laboratoře h a reakce byla opatrně ukončena pri 0 °C roztokem KHSO₄ (10% vod.) a směs byla míchána 0,5 h. Reakční směs byla zředěna vodným HCI (ÍM, 150 ml) a extrahována CH₂C1₂ (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodným HCI (ÍM), nasyceným NaHCO₃, roztokem soli, a sušeny (MgSO₄). Směs byla zfíltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání XXIIle jako viskózního bezbarvého oleje (14 g).

Krok 5

BocHN

(XXIIle) (XXUif)

Roztok aldehydu XXIIle (14 g, 61,6 mmol) vCH₂Cl₂ (50 ml), byl smísen s Et₃N (10,73 ml, 25 74,4 mmol) a acetonkyanohydrínem (10,86 g, 127,57 mmol) a míchán pri teplotě laboratoře 24 h.

Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zředěna vod. HCI (ÍM, 200 ml) a extrahována do CH₂C1₂ (3 x 200 ml). Spojená organická vrstva byla promyta H₂O, roztokem soli, sušena (MgSO₄), zfíltrována, zakoncentrována a čištěna chromatografii (SiO₂, EtOAc/hex l : 4) za získání XXIIIf (10,3 g) jako bezbarvé kapaliny.

-123CZ 303213 B6

Krok 6

- + ?^H CIH₃N^X.OCH₃

Ή (XXIIIg)

Methanol nasycený HCI*, připravený probubláváním plynného HCI do CH₃OH (700 ml) při 0 °C, byl smísen s kyanohydrinem XXIIIf a zahříván pod zpětným chladičem 24 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání XXIIIg, která byla použita v dalším kroku bez čištění.

•Alternativně může být použit 6M HCI připravený přidáním AcCl do suchého methanolu.

Krok 7

_!() (XXlllQ) (XXIHh)

Roztok hydrochloridu aminu XXIIIg v CH₂C1₂ (200 ml) byl smísen s Et₃N (45,0 ml, 315 mmol) a Boc₂O (45,7 g, 209 mmol) při -78 °C. Reakční směs byla potom míchána při teplotě laboratoře přes noc a zředěna HCI (2M, 200 ml) a extrahována do CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄) zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografii (EtOAc/hex

1 : 4) za získání hydroxyesteru XXIIIh.

Krok 8

Roztok methylesteru XXIIIh (3 g, 10,5 mmol) vTHF/H₂O (1 : 1) byl smísen s LiOH.H₂O (645 mg, 15,75 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 2 h. Reakční směs byla okyselena vodným HCI (1 Μ, 15 ml) a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl sušen ve vakuu.

Roztok kyseliny v CH₂CI₂ (50 ml) a DMF (25 ml) byl smísen sNKvCI (2,94 g, 55,5 mmol), EDCI (3,15 g, 16,5 mmol), HOOBt (2,69 g, 16,5 mmol) a NMM (4,4 g, 44 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 3 dny. Rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu a zbytek byl zředěn vodným HCI (250 ml) a extrahován CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy byly promyty vodným nasyceným NaHCO₃, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány, za získání XXIIIi, která byla použita jako taková v následujících krocích. (Alternativně může také být XXIIIi získána přímo reakcí sloučeniny XXIIIf (4,5 g, 17,7 mmol) svodným H₂O₂ (10 ml), LiOH.H₂O (820 mg, 20,8 mmoi) při 0 °C v 50 ml CH₃OH 0,5 h.).

- 124CZ 303213 B6

Krok 9

Roztok sloučeniny XXIlíi získané v předcházejícím kroku byl rozpuštěn v 4N HCI v dioxanu a míchán při teplotě laboratoře po dobu 2 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání XXIÍIj jako pevné látky, která byla použita bez dalšího čištění.

Krok 10

O eochn^A_oh ó

(XXQIk)

CH^CHa

H2CI 'o (ΧΧΠΗ)

CH3^CH₃

(ΧΧΠΙϊπ)

Aminoester XXIHI byl připraven následující metodou podle R. Zhang a J. S. Madalengoitia io (J. Org. Chem. 1999, 64, 330), s tím rozdílem, že skupina Boc byla odštěpena reakcí Boc-chráněné aminokyseliny s methanolickým HCI.

Roztok komerčně dostupné aminokyseliny Boc-Chg-OH, XXIIIk (Senn Chemicals, 6,64 g,

24,1 m mol) a aminohydrochloridu XXI1I1 (4,5 g, 22 mmol) v CH₂C1₂ (100 ml) byl při 0 °C smí15 sen s činidlem BOP a míchán při teplotě laboratoře po dobu 15 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu, potom byla zředěna vodným 1M HCI a extrahována do EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným NaHCO₃ (200 ml), sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, a čištěny ehromatografií (SiO₂, EtOAc/hex 3 : 7), za získání XXIIIm (6,0 g) jako bezbarvé pevné látky.

Krok 11

CH^CHs

BocHN^Á-θ ⁰ ó

(XXIIIm)

NH2

- 125CZ 303213 B6

Roztok methylesteru XXIIIm (4,0 g, 9,79 mmol) v THF/H₂O (I : 1) byl smísen s LÍOH.H₂O (401 mg, 9,79 mmol) a míchán pří teplotě laboratoře pod dobu 3 h. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (1,5 g; 3,74 mmol) v DMF/CH₂C1₂ (1 : 1, 50 ml) byl smísen s aminem XXIIIj (772 mg, 3,74 mmol), EDCI (1,07 g, 5,61 mmol), HOOBt (959 mg, 5,61 mmol) a NMM (2,15 ml, 14,96 mmol) při -10 °C), Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 h a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným IM HCI a extrahován CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy byly extrahovány vod. NaHCO₃, vod. HCI, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakonio centrovány ve vakuu za získání XXIIIn (2,08 g) jako světle hnědě zbarvené pevné látky.

Krok 12

CH₃^CH₃

CH₃^CH₃

( XXIIIn) (XXlll)

Roztok amidu XXIIIn (2,08 g, 3,79 mmol) v toluenu a DMSO (1 : 1, 20 ml) pri 0 °C byl smísen 15 s EDCI (7,24 g, 37,9 mmol) a kyselinou dichloroctovou (2,42 g, 19,9 mmol) a míchán pri teplotě laboratoře po dobu 4 h. Reakční směs byla zředěna CH₂C1₂, promyta nasyceným NaHCO₃ a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografii (SiO₂, aceton/hexany 3 : 7), za získání XXII jako bezbarvé pevné látky.

Příklad XXIV

Příprava sloučeniny vzorce XXIV

CH

K/CH₃

(XXIV) nh₂

- 126CZ 303213 B6

Krok 1

BocHN^Jk

OH ^CH3cH3^H3 (XXIVa) ^CH3x/^CH3 ,och₃

H₂C1 o (ΧΧΠΠ) ch₃^ch₃

och₃

N li BocHN^A^ ^{0 CH}3^H₃ (xxrvb)

Roztok Boc-terc-Leu XXIVa (Fluka, 5,0 g, 21,6 mmol) v suchém CH₂C1₂/DMF (50 ml, 1 : 1) 5 byl ochlazen na 0 °C a smísen s aminem XXIIII (5,3 g, 25,7 mmol), NMM (6,5 g, 64,8 mmol) a činidlem BOP (11,6 g, 25,7 mmol). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 24 h, zředěna vodným HCI (IM) a extrahována CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy byly promyty HCI (IM) a extrahována CH2CI2. Spojené organické vrstvy byly promyty HCI (vod., IM), nasyceným

NaHCO₃, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfíltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a čištěny to chromatografii (SiO₂, aceton/hexan 1 : 5) za získání sloučeniny XXIVb jako bezbarvé pevné látky.

Krok 2

CH₃^CH₃

Ον™·

BocHN^X_q ^{0 ch}4§h₃ (XXIVb)

(XXIVc)

Roztok methylesterů XXIVb (4,0 g, 10,46 mmol) byl rozpuštěn v HCI (4M roztok dioxanu) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 3 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání hydrochloridové soli aminu, která byla použita v dalším kroku.

Roztok hydrochloridové soli aminu (397 mg, 1,24 mmol) vCH₂Cl₂ (10 ml) byl ochlazen na

-78 °C a smísen s terc-butyl isokyanátem (250 mg, 2,5 mmol) a míchán při laboratorní teplotě přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl zředěn vodným HCI (IM) a extrahován CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy byly promyty vodným HCI (IM), nasyceným NaHCO₃ a roztokem soli. Organické vrstvy byly sušeny, zfíltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a zbytek byl čištěn chromatografii (SiO₂, aceton/hex 1 : 4), za získání XXIVc jako bezbarvé pev25 né látky.

- 127CZ 303213 B6

Krok 3

(XXI Ve) ch_3vch₃

(XXIVd)

Roztok methylesteru XXIVc (381 mg, 1,0 mmol) vTHF/H₂O (1 : 1, 1,5 ml) byl smísen 5 s LiOH.H₂O (62 mg, 1,5 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 3 h. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (254,9 mg, 0,69 mmol) v DMF/CH₂CI₂ (1:1, 5,0 ml) byl smísen s aminem XXllIj (159 mg, 0,763 mmol), EDCI (199 mg, 1,04 mmol), HOOBt (169,5 mg, 1,04 mmol) to a NMM (280 mg, 2,77 mmol) při -20 °C. Reakční směs byla míchána při -20 °C 48 h a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným IM HCI a extrahován EtOAc. Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCO₃, vodným HCI, roztokem solí, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu, za získání sloučeniny XXIVd (470 mg) jako světle hnědé pevné látky.

Krok 4 ch₃^ch₃

OH

Η Η i _Ω ' y₀ °

nh₂ (XXIV) (XXIVd)

Roztok amidu XXIVd (470 mg, 0,9 mmol) v toluenu a DMSO (1 : 1, 20 ml) byl při 0 °C smísen s EDCI (1,72 g, 9,0 mmol) a kyselinou dichloroctovou (0,37 ml, 4,5 mmol) a míchán při 0 °C

4 h. Reakční směs byla zředěna CH₂C1₂ a promyta nasyceným roztokem NaHCO₃ a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografii (SiO₂, aceton/hexany 3 : 7), za získání XXIV jako bezbarvé pevné látky.

- 128CZ 303213 B6

Příklad XXV

Příprava sloučeniny vzorce XXV

CH<

3\ >CH' _{h h} xx+m ch₃^.n^n_k>_5í^⁰ \ ⁰ Ctf

Krok 1

FmocHN-^Y

O

OH (XXV)

(XXVb) (XXVc) (XXVa)

Roztok Fmoc-glycinu (Bachem, 2,0 g, 6,87 mmol) vCH₂CI₂ (20 ml) byl smísen s 2-fenyí-2propanolem (Aldrich, 3,36 g, 24,7 mmol), DCC (ÍM roztok CH₂C1₂, 8,24 ml), DMAP (167 mg, io 1,37 mmol) a míchán pri teplotě laboratoře po dobu 24 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zředěna Et₂O (100 ml). Oddělená pevná látka byla zfiltrována a filtrát byl promyt nasyceným roztokem NaHCO3. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄, zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografii (SiO_2} EtOAc/hexany 1 : 5) za získání esteru XXVc (1,1 g) jako bezbarvé viskózní kapaliny.

Krok 2 —XXr--xr+X (XXVc) (XXVd)

Roztok sloučeniny XXVc v CH₂C1₂ (16,0 ml) byl smísen s piperidinem (4,0 ml) a míchán pri teplotě laboratoře po dobu 0,5 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a čištěna chro20 matografií (SiO₂, aceton/hexany 1 : 10 až 1 : 1) za získání aminu XXVd (420 mg) jako bezbarvé kapaliny.

- 129CZ 303213 B6

Krok 3

(XXVe)

Roztok methylesteru XXIVc (381 mg, 1,0 mmol) vTHF/H₂O (1 : 1, 5 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (62 mg, 1,5 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 3 h. Reakční směs byla okyselena vodným HCl a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (2,0 g, 5,5 mmol) v DMF/CH₂C1₂ (1:1, 40,0 ml) byl při -10 °C smísen s aminem XXIlIg (1,51 g, 6,8 mmol), EDCI (1,57 g, 8,25 mmol), HOBt (1,41 g, 8,25 mmol) aNMM (2,5 g, 24,7 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 h a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek io byl zředěn vodným 1M HCl (100 ml) a extrahován CH2CI2 (3 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCO₃, vodným HCl, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu za získání XXVe (3,17 g) jako světle hnědé pevné látky, která byla dále použita bez Čištění.

Krok 4

(XXVe) (XXVf)

Roztok methylesteru XXVe (2,5 g, 4,66 mmol) v THF/H2O/CH3OH (1 : 1 : 1, 60 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (200 mg, 4,87 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 4 h. Reakční směs byla okyselena vodným HCl a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (200,0 mg, 0,38 mmol) v DMF/CH₂C1₂ (1 : 1, 6,0 ml) by při -10 °C smísen s aminem XXVd (78 mg, 0,4 mmol), EDCI (105 mg, 0,55 mmol), HOOBt (95 mg, 0,55 mmol) aNMM (150 mg, 1,48 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 h a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCl (30 ml) a extrahován CH₂C1₂ (3 x 30 ml), vodným

HCl, roztokem soli (30 ml), sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu za získání XXVf (240 mg) jako bezbarvé pevné látky.

-130CZ 303213 B6

Krok 5

CH₃^CH₃

(XXV)

Roztok sloučeniny XXVf (240 mg, 0,28 mmol) v CH₂C1₂ (10 ml) byl smísen s Dess-Martinovým činidlem (Omega, 242 mg, 0,56 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 2 h. Po ukončení oxidace (TLC, aceton/hexany 1 : 4) byla reakční směs zředěna nasyceným roztokem NaHCO₃ (20 ml) a Na₂S₂O₃ (10% vodný roztok 20 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 30 min a extrahována CH₂C1₂ (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány nasyceným roztokem NaHCO₃, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, a čištěny chromatografii (SiO₂, aceton/hexany 1 ; 5), za získání XXV (122 mg) jako bezbarvé pevné látky.

Příklad XXVI

Příprava sloučeniny vzorce XXVI

Krokl

NH:

O^CO₂H

I

Soc (XXVla) ^Ň-M-COatBu

Boc (XXVlb)

K míchanému roztoku N-Boc-3,4-dehydroprolinu XXVla (5,0 g, 23,5 mmol), di-terc-butyldikarbonátu (7,5 g, 34,4 mmol), a 4-N,N-dimethylaminopyridinu (0,40 g, 3,33 mmol) v aceto- 131 CZ 303213 B6 nitrilu (100 ml) při teplotě laboratoře byl přidán triethylamin (5,0 ml, 35,6 mmol). Získaný roztok byl míchán při této teplotě 18 h před zakoncentrován ím ve vakuu. Tmavě hnědý zbytek byl čištěn bleskovou ehromatografií na koloně s elucí 10 až 25% EtOAc/hexan, za poskytnutí produktu XXVlb jako světležlutého oleje (5,29 g, 84 %).

Krok 2

CI^CI

Boc co^Bu £^*C0₂tBu

Soc (XXVlb) (XXVIc)

K míchanému roztoku dehydroprolinu XXVlb (10,1 g, 37,4 mmol), benzyltriethylamoniumchloridu (1,60 g, 7,02 mmol) v chloroformu (120 ml) při teplotě laboratoře byl přidán 50% vodný ío hydroxid sodný (120 g). Po důkladném míchání při této teplotě po dobu 24 h byla černá směs zředěna CH₂CI₂ (200 ml) a diethyletherem (600 ml). Po oddělení vrstev byl vodný roztok extrahován CH₂CI₂/Et₂O (I : 2,3 x 600 ml). Organický roztok byl sušen (MgSO₄) a zakoncentrován. Zbytek byl čištěn bleskovou ehromatografií na koloně s použitím 5 až 20% EtOAc/hexan, za získání 9,34 g (71 %) sloučeniny XXVIc jako bělavé pevné látky.

Krok 3

Cl^CI	CI^CI
/~Λ r	O-CCH =F‘mH H
^N^*C02tBu r Boc
(XXVIc)	(XXVId)
Roztok sloučeniny XXVIc (9,34 g, 26,5 mmol) v CH2C12 (25 ml) a CF3CO2H (50 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4,5 h před zakoncentrován ím ve vakuu, za získání hnědého zbytku, který byl použit v kroku 4 bez dalšího čištění.

Krok 4

cf₃co₂h a^ci

CO₂Me

HCI (XXllld) (XXlUe)

Komerční koncentrovaná kyselina chlorovodíková (4,5 ml) byla přidána k roztoku zbytku z kro25 ku 3 v methanolu (70 ml) a získaná směs byla ohřátá na 65 °C v olejové lázni. Po 18 h byla směs zakoncentrována ve vakuu za poskytnutí hnědého oleje XXV Ie, který byl použit v kroku 5 bez dalšího čištění.

-132 CZ 303213 B6

Krok 5

CI^CI £^*CO2Me H - HCI

BocHN^CO^H

(XXVle) (XXVH)

Ct^Cl

BocHN ^/^CO₂Me hn^Aq

(XXVIg)

K míchanému roztoku prolinmethylesteru XXVle z kroku 4, komerčního N-Boc-cyklohexylglycinu XXVIf (10,2 g, 40,0 mmol) a [O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluromumhexafluorfosfátu] (HATU) (16,0 g, 42,1 mmol) v DMF (200 ml) byl při 0 °C přidán diisopropylethylamin (18,0 ml, 104 mmol). Po ohřátí na laboratorní teplotu spolu s ledovou lázní přes noc (18 h) byla reakční směs zředěna EtOAc (600 ml), 5% H₃PO₄ (150 ml) a roztokem soli (150 ml). Organický roztok byl promyt 5% H₃PO₄ (150 ml), nasyceným NaHCO₃ (2 x 200 ml), potom sušen (MgSO₄), zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně s použitím 5 až 20% EtOAc/hexan, za získání 3,84 g (32 %, tří kroky) sloučeniny XXVIg jako bělavé pevné látky.

Krok 6

Cl^Cl

CL ,CI

BocHN^zk,

_]5 (XXVIg) (XXVIh)

Roztok methylesteru XXVIg (5,87 g, 13,1 mmol) a LiOH (1,65 g, 39,3 mmol) v THF/MeOH/H₂O (1 : 1 : 1, 90 ml) byl míchán pri teplotě laboratoře 4 h. Methanol a THF byly odstraněny za sníženého tlaku. Vodný roztok byl okyselen na pH 2 použitím IN vodného roztoku HCI (50 ml) a nasycen pevným chloridem sodným, před extrahováním EtOAc (3 x 150 ml). Organické rozto20 ky byly spojeny, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, za získání bílé pevné látky XXVIh (5,8 g, kvantitativní).

Krok 7

(XXVIh) (XXfflj)

nh₂

- 133 CZ 303213 B6

Požadovaný produkt XXIIIi byl připraven jako v postupu v příkladu XXIII, krok 11.

Krok 8

NH₂

(XXVW) (XXVI)

Požadovaný produkt XXVI byl připraven podobným postupem jako v příkladu XXIII, krok 12.

Příklad XXVII io Příprava sloučeniny vzorce XXVII

(XXVII) nh₂

Krok 1

(XXVli) (XXVHa)

Požadovaný produkt XXVila byl připraven postupem jako v příkladu XXIII, krok 9.

- 134CZ 303213 B6

ó

(XXVI lb) (XXVila)

Požadovaný produkt XXVIIb byl připraven postupem jako v příkladu XXIV, krok 2.

Krok 3

í xxviib)

NH₂ (XXVII)

Požadovaný produkt XXVII byl připraven postupem jako v příkladu XXIII, krok 12.

Příklad XXVIII

Příprava sloučeniny vzorce XXVII

BochikA-q ⁰ \°

Μβ'+Μβ

Me (XXVHI)

- 135CZ 303213 B6

Krok 1

(XXVIHb)

Meziprodukt XXVIHb byl připraven postupem jako v příkladu XXIII, kroky 3 až 6.

Krok 2

Me, ,Me

8ocHN^A-_o

Me^Me

Me (XXVtlIc)

OH

H₂N^Js.0Me (XXVUIb)

OMe (XXVHId)

Kyselina z příkladu XXIV, krok 2 (XXVIIlc) (0,7 g) byla ponechána reagovat s produktem z kroku 1 výše (0,436 g), HATU (0,934 g) a DIPEA (1,64 ml) způsobem popsaným v příkladu IX, krok 2a, za získání 0,66 g požadovaného produktu XXVHId.

Krok 3

Me^Me

Me^Me

Me (XXVHId)

Produkt z kroku 2 (0,5 g) byl ponechán reagovat s Dess-Martinovým činidlem (1 g) způsobem popsaným v předcházejícím příkladu XX, krok 7. Čištění bleskovou chromatografii na koloně is (40% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo 0,35 g produktu XXVIlIe. Hmotnostní spektrum (LCMS)522 (M+H⁺).

Krok 4

(XXVHIe) (XXVHtf)

- 136CZ 303213 B6

Produkt z kroku 4 (0,3 g) byl přidán k 1/1 roztoku H₂O/MeOH (20 ml) a pevného NaHCO₃ (242 mg, 5 ekv.). Po 18 h míchání při teplotě laboratoře byla reakční směs zředěna EtOAc a vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla okyselena na pH 2 HCI l,0N a extrahována EtOAc. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentro5 vána ve vakuu, za získání produktu XXVII If jako bílého prášku (0,26 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 508 (M+H⁺).

(XXVHtf)

(xxvím io

Produkt z kroku 5 (0,15 g) byl rozpuštěn vCH₂Cl₂ a ponechán reagovat s HATU (0,137 g), NH₄C 1 (0,08 g, 5 ekv.) a DIPEA (0,53 ml). Po 2 h při teplotě laboratoře byla reakční směs zředěna EtOAc, promyta 10% roztokem kyseliny citrónové, potom nasyceným roztokem NaHCCh. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění bleskovou chromatografii na koloně (30% aceton, hexan, oxid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXVIII (0,96 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) (507 (M+H’).

Příklad XXIX

Příprava sloučeniny vzorce XXIX

- 137CZ 303213 B6

Krok 1

(XXIXa)

K roztoku výchozího aldehydu (4,0 g) v CH₂C1₂ (75 ml) při 0 °C byla přidána kyselina octová 5 (2,0 ekv., 2,15 ml) a potom methy li sokyanoacetát (1,1 ekv., 1,9 ml). Reakční směs byla potom postupně ohřátá na laboratorní teplotu. Po 18 h (pres noc) byla reakční směs zředěna EtOAc a promyta nasyceným roztokem NaHCO₃. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO4, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, za získání surové směsi. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (30 až 40% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo produkt io XXIXa (4,5 g).

Krok 2

(XXIXb)

K 0 °C roztoku sloučeniny XXIXa (4,4 g) v THF (100 ml) bylo přidáno 26 ml (2,2 ekv.) 1,0N 15 roztoku LiOH. Reakční směs byla míchána při této teplotě 2 h, potom ohřátá na laboratorní teplotu. Po 2 h byla reakční směs okyselena na pH 2 l,0N roztokem HC1. Byl přidán EtOAc a vrstvy byly odděleny. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO4, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání produktu XXIXb (3,7 g).

Krok 3

- 138CZ 303213 B6

Kyselina XXIXb byla ponechána reagovat s aminem z příkladu XV postupem popsaným v příkladu XXI, krok 4. Získaný meziprodukt by potom smísen s HCI způsobem popsaným v příkladu XXIII, krok 9, za získání produktu XXIXc.

Krok 4 v

(XXIXd)

Kyselina XXVIIlc (2,43 g) byla rozpuštěna v CH2CI2 a byla ponechána reagovat s aminem XXIXc (2,47 g), HATU (2,5 g) a DIPEA (5,8 ml) postupem popsaným v příkladu IX, krok 2a, za poskytnutí, po čištění bleskovou chromatografii na koloně (4% MeOH, CH2CI2, oxid křemičitý), požadovaného produktu XXIXd (4,35 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 727 (M+H⁺).

Krok 5

!

(XXIX >

Produkt z kroku 4 (4,2 g) byl ponechán reagovat s Dess-Martinovým činidlem (6,4 g) způsobem 15 popsaným v preparativním příkladu XX, krok 7. Čistění bleskovou chromatografíí na koloně (100% EtOAc, oxid křemičitý) poskytlo 3 g finálního produktu XXIX. Hmotnostní spektrum (LCMS) 725 (M+H).

- 139CZ 303213 B6

Příklad XXX

Příprava sloučeniny vzorce XXX

(XXX)

Krok 1 >r^OH cf₃

io

Alkohol 2-(triťluormethyl)propan-2-ol (1,28 g) byl ponechán reagovat s N,N-disukcinimidylkarbonátem (3,84 g) a Et₃N (4,2 ml) v suchém CH₃CN (50 ml) 18 h. Směs byla zředěna EtOAc (200 ml) a zfiltrována. Filtrát byl promyt NaHCO₃, roztokem soli, potom sušen nad MgSO₄, zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu za získání surové směsi. Čištění bleskovou chromatograťií na koloně (50% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXXa (0,3 g).

Krok 2

- 140(XXXb)

Produkt z příkladu XXIX (0,3 g) byl smísen se 100 ml 4,ON HCl v dioxanu. Po 1 h bylo přidáno

200 ml Et₂O a získaná sraženina byla odfiltrována a sušena ve vakuu za získání produktu XXXb (0,27 g) jako bílého prášku. Hmotnostní spektrum (LCMS) 625 (M-HCI+H⁺).

Krok 3

ÁV'*;

cf₃ o (XXXa) v

Ύ >r°

cf₃ (XXX)

K roztoku XXXb (0,05 g) v CH₂C1₂ (5 ml) pri teplotě laboratoře byl přidán DIPEA (0,040 ml), XXXa (1,5 ekv., 0,030 g) a potom jeden krystal DMAP. Po 30 min byla reakční směs zředěna EtOAc (20 ml) a promyta HCI 1,5N, potom NaHCO₃, potom roztokem soli. Vrstva EtOAc byla sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění preparativní chromatografii (40% aceton, hexan, oxid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXX (0,044 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 779 (M+H⁺).

Příklad XXXI

Příprava sloučeniny vzorce XXXI

(XXXI)

-141 CZ 303213 B6

Krok 1

(XXXI)

K roztoku sloučeniny XXXb (0,05 g) v CH₂C1₂ (5 ml) při teplotě laboratoře byl přidán DIPEA 5 (0,040 ml) a terc-buty li sokyanát (1,2 ekv., 0,01 ml). Po 18 h byla reakční směs zředěna EtOAc (20 ml) a promytá HCl 1,5N, NaHCO₃ a roztokem soli. Vrstva EtOAc byla sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění preparativní chromatografii (100% EtOAc, oxid křemičitý), poskytlo finální produkt XXXI (0,021 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 724 (M+H^T).

Příklad XXXII

Příprava sloučeniny vzorce XXXII v

NH,

(XXXII)

- 142CZ 303213 B6

Krok I

v

X *

(XXXIIa)

Produkt z příkladu XXVIII byl zpracován způsobem popsaným v preparativním příkladu XXX, krok 2, za získání produktu XXXIIa. Hmotnostní spektrum (LCMS) 407 (M-HCI+H*).

Krok 2

Amin XXXIIa byl ponechán reagovat se sloučeninou XXXa způsobem popsaným v preparaio tivním příkladu XXX, krok 3, za získání požadovaného produktu XXXIL Hmotnostní spektrum (LCMS) 508 (M+H*).

Příklad XXXIII 15

Příprava sloučeniny vzorce XXXIII

V

(XXXIII)

-143CZ 303213 B6

Krok 1

V

(xxxnn

Amin XXXIIa byl ponechán reagovat s terc-butyl i sokyanátem způsobem popsaným v příkladu XXXI, krok 1, za získání produktu XXXIII. Hmotnostní spektrum (LCMS) 561 (M+H⁺).

Příklad XXXIV

Příprava sloučeniny vzorce XXXIV io

(XXXIV)

Krok 1

Ke směsi esteru (6,0 g) a molekulárních sít (5,2 g) v bezvodém methylenchloridu (35 ml) byl přidán pyrrolidin (5,7 ml, 66,36 mmol). Získaná hnědá kaše byla míchána pri teplotě laboratoře pod N₂ 24 h, zfiltrována a promyta bezvodým CH₃CN. Spojený filtrát byl zakoncentrován za získání požadovaného produktu.

- 144CZ 303213 B6

K roztoku produktu z předcházejícího kroku v CH₃CN (35 ml) byl přidán bezvodý K₂CO₃, 5 methally leh lorid (2,77 g, 30,5 mmol), Nal (1,07 g, 6,7 mmol). Získaná kaše byla míchána pri teplotě laboratoře v atmosféře N₂ 24 h. Bylo přidáno 50 ml ledově chladné vody a potom 2N roztok KHSO4 dokud pH nebylo 1. Byl přidán EtOAc (100 ml) a směs byla míchána po dobu

0,75 h. Spojená organická vrstva byla oddělena a promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄ a odpařena, za získání požadovaného produktu.

Krok 3

Produkt z předcházejícího kroku (2,7 g, 8,16 mmol) byl rozpuštěn v dioxanu (20 ml) a smísen s čerstvě připraveným IN LiOH (9 ml). Reakční směs byia míchána při laboratorní teplotě v atmosféře N₂ 20 h. Reakční směs byla vložena do EtOAc a promyta H₂O. Spojená vodná fáze byla ochlazena na 0 °C a okyselena na pH 1,65 s použitím IN HCI. Kalná směs byla extrahována EtOAc (2 x 100 ml). Spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄, a zakoncentrována, za získání požadované kyseliny (3,40 g).

Krok 4

K suspenzi NaBH(OAc)₃ (3,93 g, 18,5 mmol) v CH₂C1₂ (55 ml) byl přidán roztok produktu z předcházejícího kroku v bezvodém CH₂C1₂ (20 ml) a kyselina octová (2 ml). Kaše byla míchána při laboratorní teplotě 20 h. Ke kaši byla přidána ledově chladná voda (100 ml) a směs byla míchána 1/2 h. Organická vrstva byla oddělena, zfíltrována, sušena a odpařena za získání požadovaného produktu.

- 145CZ 303213 B6

Krok 5

Roztok produktu z předcházejícího kroku (1,9 g) v MeOH (40 ml) byl smísen s přebytkem 5 roztoku CH₂N₂/Et₂P a směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována do sucha za získání surového zbytku. Zbytek byl čištěn ehromatografií na silikagelu s elucí gradientem

EtOAc/hexan, za získání 1,07 g čistého požadovaného produktu.

Krok 6

Roztok produktu z předcházejícího kroku (1,36 g) v bezvodém CH₂C1₂ (40 ml) byl smísen s BF₃.Me₂O (0,7 ml). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 20 h a reakce byla ukončena NaHCO₃ (30 ml) a dále míchána 1/2 h. Organická vrstva byla oddělena a spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄, zakoncentrována, za získání surového zbytku. Zbytek byl čištěn ehromatografií na silikagelu s elucí gradientem EtOAc/hexan, za získání 0,88 g požadované sloučeniny.

Krok 7

K roztoku produktu (0,92 g) z předcházejícího kroku v MeOH (30 ml) bylo přidáno 10% Pd/C (0,16 g) při teplotě laboratoře a směs byla hydrogenována při teplotě laboratoře při tlaku I atm (0,1 MPa). Reakční směs byla míchána po dobu 4 h a zakoncentrována do sucha, za získání požadované sloučeniny.

- 146CZ 303213 B6

Krok 8

Požadovaný produkt byl připraven postupem popsaným v příkladu XXIII, krok 10.

Krok 9

Požadovaná kyselina byla připravena postupem z příkladu XXIV, krok 3.

io Krok 10

(XXXIV)

Požadovaný produkt XXXIV byl připraven postupem jako v příkladu XXIX, kroky 4 až 5.

- 147CZ 303213 B6

Příklad XXXV

Příprava sloučeniny vzorce XXXV

Krok 1

Roztok tri ethy Ifosfonátu (44,8 g) v THF (30 ml) byl pri 0 °C smí sen s 1M roztokem (200 ml) bis(trimethylsilylamidu) sodného v THF. Získaná směs byla míchána pri teplotě laboratoře 0,5 h a potom ochlazena na 0°C. Po kapkách byl přidán roztok 1,4—cyklohexandionethylenketalu io (15,6 g) v THF (50 ml), a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 18 h. Reakční směs byla potom ochlazena na 0 °C, smísena s chladnou vodnou kyselinou citrónovou a směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl promyt nasyceným vodným NaHCO₃, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem CH₂Cl₂/EtOAc, za získání v názvu uvedené sloučeniny (21 g), 92% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 227,3 (M+H*).

Krok 2

Produkt z předcházejícího kroku (20 g) byl rozpuštěn v EtOH (150 ml) a smísen s 10% Pd/C při 20 tlaku 1 atm (0,1 MPa) vodíku 3 dny. Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (20,3 g), 100% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 229,2 (M+H*).

- 148CZ 303213 B6

Krok 3

Produkt z předcházejícího kroku (20 g) byl rozpuštěn v MeOH (150 ml) a smísen s roztokem LiOH (3,6 g) ve vodě (50 ml). Směs byla míchána po dobu 18 h a zakoncentrována ve vakuu,

Zbytek byl rozpuštěn v chladné vodě (100 ml), roztok byl okyselen na pH 2 až 3 5N HCI, a získaná směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (17,1 g), 97% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 201,2 (M+H⁺).

io Krok 4

1. Produkt z předcházejícího kroku (3,0 g) byl rozpuštěn v Et₂O (150 ml), smísen s EbN (2,1 ml) a roztok byl ochlazen na -78 °C. Po kapkách byl přidán pivaloyIchlorid (1,85 ml) a po 0,25 h dalšího míchání byla reakce ponechána ohřát na 0 °C v průběhu 0,75 h, a potom byla znovu ochlazena na -78 °C, za získání roztoku směsného anhydridu pro reakci v části 2.

2. Roztok (S)-4~benzyl-2-oxazolidinonu (2,66 g) v THF (22 m t) byl ochlazen na -78 °C a po kapkách byl přidán 1,6M roztok (9,38 ml) n-butyllithia v hexanu. Po dalším 0,33 h míchání při této teplotě byl roztok převeden jehlou do chladného roztoku z části 1. Směs byla míchána při

-78 °C, potom ohřátá na 0 °C a míchána při této teplotě 0,5 h. Organická vrstva byla oddělena, vodná vrstva byla extrahována Et₂O, spojené organické podíly byly promyty roztokem soli, sušeny nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrovány, a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografii na silikagelu s elucí gradientem hexan/EtOAc (9 : 1) za získání v názvu uvedené sloučeniny (5,0 g), 93% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 360,4 (M+H⁺).

Krok 5

- 149Produkt z předcházejícího kroku (2,7 g) byl rozpuštěn v THF (25 ml), ochlazen na -78 °C, převeden jehlou do roztoku 0,5M bis(trimethyísilyl)amid draselný/toluen (16,5 ml) v THF (25 ml) při

-78 °C, a získaný roztok byl míchán při -78 °C 0,75 h. K tomuto roztoku byl jehlou přidán roztok trisylazidu (3,01 g) v THF (25 ml), předem ochlazený na -78 °C. Po 1,5 min byla reakce ukončena kyselinou octovou (1,99 ml), ohřátá na laboratorní teplotu a potom míchána 16 h.

Reakční směs byla zředěna EtOAc (300 ml) a promyta 5% vodným NaCI. Vodná fáze byla extraCZ 303213 B6 hována EtOAc, spojené organické fáze byly promyty nasyceným vodným NaHCO₃, potom roztokem soli, potom sušeny nad bezvodým Na₂SO4, zfiltrovány a filtrát odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografii na silikagelu, s elucí EtOAc/hexan (1 : 3), za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,65 g), 88% výtěžek.

Krok 6

Produkt z předcházejícího kroku (11,4 g) byl rozpuštěn v 95% kyselině mravenčí (70 ml) a zahříván na 70 °C 0,5 h za míchání. Roztok byl odpařen ve vakuu a zbytek byl vložen do EtOAc. Roztok byl promyt nasyceným vodným NaHCO₃, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografii na silikagelu za získání v názvu uvedené sloučeniny (8,2 g).

Krok 7

Produkt z předcházejícího kroku (8,2 g) byl rozpuštěn vCH₂Cl₂ (16 ml) a ponechán reagovat s trifluoridem diethylaminosírovým (DAST, 7,00 ml) při laboratorní teplotě 3 h. Reakční směs byla vlita do směsi led/voda (200 cm³) a extrahována CH₂C1₂. Extrakt byl promyt nasyceným vodným NaHCO₃, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen, Zbytek byl čištěn chromatografii na silikagelu, s elucí EtOAc/hexan (15 : 85), za získání v názvu uvedené sloučeniny (4,5 g), 52% výtěžek.

Krok 8

Produkt z předcházejícího kroku (3,7 g) byl rozpuštěn ve směsi THF (150 ml) a vody (48 ml), ochlazen na 0 °C, smísen s 30% H₂O₂ (3,95 m 1), a po tom s LiOH.H₂O (0,86 g). Směs byla míchána po dobu 1 h při 0 °C, potom byla reakce ukončena roztokem Na₂SO₃ (5,6 g) ve vodě (30 ml), a potom byl přidán roztok 0,5N NaHCO₃ (100 ml). Směs byla zakoncentrována ve vakuu na 1/2 objemu, zředěna vodou (do 500 ml), a extrahována CH₂Cl₂ (4 x 200 ml). Vodná fáze byla okyselena na pH 1 až 2 5N HCI, a extrahována EtOAc (4 x 200 ml). Extrakt byl promyt roztokem soli; potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen, za získání v názvu uvedené sloučeniny (1,95 g), 91% výtěžek, který byl ihned použit v dalším kroku.

- 150CZ 303213 B6

Krok 9

Produkt z předcházejícího příkladu (2,6 g) byl rozpuštěn v Et₂O (50 ml) a míšen po kapkách s roztokem CH₂N₂ v Et₂O, dokud roztok zůstával žlutý. Roztok byl míchán po dobu 18 h, potom odpařen ve vakuu za získání v názvu uvedené sloučeniny (2.8), která byla ihned použita v dalším kroku.

Krok 10 ^N%.

OMe

OMe io Produkt z předcházejícího kroku (1,95 g) byl rozpuštěn v MeOH (150 ml), smísen s kyselinou mravenčí (1,7 ml), potom smísen s 10% Pd/C (3,3 g, Degussa type El 01) při tlaku 1 atm (0,1 MPa) vodíku 1,5 h. Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,1 g)jako soli s kyselinou mravenčí, která byla ihned použita v dalším kroku.

Krokll ^hí^om.

OMe

Produkt z předcházejícího kroku (2,1 g) byl rozpuštěn v 1,4-dioxanu (100 ml) a byl přidán di-terc-butyldikarbonát (1,9 g) a potom diisopropylethylamin (2,9 ml). Roztok byl míchán po dobu 18 h a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek by smísen s vodným 5% KH₂PO₄ a směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl promyt roztokem soli, potom sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografii na silikagelu, s elucí gradientem CH₂Cl₂/Et₂O, za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,5 g), 99% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 307,9 (M+H).

Krok 12

>

OH

-151CZ 303213 B6

Produkt z předcházejícího kroku (2,5 g) byl rozpuštěn v 1,4-dioxanu (35 ml), smísen s vodným IM LiOH (17 ml), a míchán 2 h. Reakce byla ukončena směsí led/voda (125 ml), směs byla okyselena na pH 3 až 4 3N HCI, a extrahována EtOAc. Extrakt byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,3 g), 96% výtěžek.

Hmotnostní spektrum (FAB) 294,0 (M+H⁺).

Krok 13

Požadovaný produkt byl připraven podle postupu v příkladu XXIII, krok 10.

Krok 14

Požadovaný produkt byl připraven podle postupu v příkladu XXIV, krok 3.

Krok 15

Me^Me

152CZ 303213 B6

Požadovaná kyselina byla připravena podle postupu z příkladu XXIX, krok 4.

Příklad XXXVI

Příprava sloučenin vzorců XXXVI a XXXVIII io

Sloučeniny vzorců XXXVI a XXXVIII byly připraveny podle následujícího schématu a s použi tím výše popsaných preparativních příkladů 11 až 15.

F

O— 10% Pd/C

BoO^O ° ^TS°^H’ ^MeCH’ ^H2° (XXXVIa)

cf. Preparatfve Exampte 15

[Oí

(XXXVH)

Sloučenina vzorce XXXVlb byla připravena ze sloučeniny vzorce XXXVIa následujícími zná mými postupy:

-153CZ 303213 B6

(XXXVla)

10% Pd/C TsOH, MeCH, H₂O

^—1

OMe

O (XXXVIb)

K roztoku sloučeniny XXXVla (6,58 g, 22 mmol) v 100 ml MeOH byly přidány 10% Pd/C (0,8 g) a kyselina p-toluensulfonová (4,2 g). Reakční směs byla zpracována hydrogenaci při teplotě laboratoře přes noc. Reakční směs byla zfiltrována přes celit a promyta přebytkem

MeOH. Spojený filtrát byl zakoncentrován ve vakuu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny XXXVIb jako gumy. Konverze sloučeniny XXXVIb na XXXVI a XXXVII probíhala způsobem ukázaným na schématu výše a v preparativních příkladech 11 až 15.

io Příklad XXXVIII

Příprava sloučeniny vzorce XXXVIII

Sloučenina vzorce XXXVIII byla připravena s použitím následujícího schématu a preparativních 15 příkladů 11 až 15 diskutovaných výše.

- 154CZ 303213 B6

N.

O .N—

Příklad XXXIX

Syntéza sloučeniny vzorce XXXIX

(XXXIX) ~7\

Krok 1 ” CbzHN o^o o*^so b (XXXlXa) (XXXIXb)

Roztok sulfonylchloridu XXXIXa připraveného postupem podle H. Mcklwain (J. Chem. Soc.

1941, 75) byl přidán po kapkách ke směsi 1,1 ekv. t-butyl methy lam inu a triethylaminu pri

-78 °C a směs byla míchána pri laboratorní teplotě 2 h. Reakční směs byla zakoncentrována ve io vakuu a čištěna chromatografii (SiO₂, hex/aceton 4 : 1) za získání sulfonamidu XXXIXb jako bezbarvého oleje.

Krok 2

CbzHN^—,.-Ν'χ O^>S*O (XXXlXb)

(XXXlXc)

Roztok Cbz-chráněného aminu XXXIXb byl rozpuštěn v methanolu a smísen s 5 mol % Pd/C (5% hmotn ./hmotn.) a hydrogenován při 60 psi (414 kPa). Reakční směs byla zfiltrována přes lože celitu a zakoncentrována ve vakuu za získání volného aminu XXXIXc, který stáním ztuhnul.

Krok 3

(XXVe)

(XXXIXd)

Hydroxysulfonamid XXXIXd byl syntetizován podobně jako v postupu syntézy sloučeniny XXVf, kromě náhrady aminu XXVd sloučeninou XXXIXc. Surová reakční směs byla ihned použita v další reakci.

- 15520

Krok 4 ch₃^ch₃

^CH^ (XXXIXd) ch₃^ch₃ '^Νγ^Νγ^ο Q >f Ύ °^ch€h^ (XXXIX) s-o O' N— x

Hydroxyamid XXXIXd byl oxidován na sloučeninu XXXIX s použitím Dess-Martinova činidla postupem popsaným pro syntézu sloučeniny XXV (krok 5). Surová směs byla čištěna chromatografií (SiO₂, aceton/hexan 3 : 7), za získání sloučeniny XXXIX jako bezbarvé pevné látky.

Test na inhibiční aktivitu na HCV proteázu

Spektrofotometrický test

Spektrofotometrický test na serinovou proteázu HCV byl prováděn pro sloučeniny podle vynálezu postupem popsaným autory R. Zhang a další, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268 až 275, jehož obsah se zařazuje odkazem. Test je založen na proteolýze chromogenních esterových substrátů a je vhodný pro kontinuální monitorování aktivity HCV proteázy NS3. Substráty byly odvozeny od místa P sekvence spojení NS5A-NS5B (Ac-DTEDWX(Nva), kde X = A nebo P), jehož C-koncové karboxylové skupiny byly esterifikovány jedním ze čtyř různých chromoforních alkoholů (3- nebo 4-nitrofenol, 7-hydroxy-4-methylkumarin, nebo 4-fenylazofenol). Dále je uvedena syntéza, charakterizace a použití těchto nových spektrofotometrických esterových substrátů pro screening velkého množství vzorků a podrobné kinetické vyhodnocení inhibitorů proteázy NS3 HCV.

Materiály a metody

Materiály; Chemická činidla pro pufry potřebné pro test byla získána od firmy Sigma Chemical Company (St Louis, Missouri). Činidla pro syntézu peptidů byla od firmy Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, Califomia), Applied Biosystems (Foster City, Califomia) a Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Peptidy byly syntetizovány ručně nebo na automatickém syntezátoru ABI model 431A (firmy Applied Biosystems). Spektrofotometr UV/VIS Spectrometer model LAMBDA 12 byl od firmy Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) a 96-jamkové destičky pro UV byly získány od firmy Corning (Corning, New York). Předehřívací blok byl od firmy USA Scientific (Ocala, Florida) a míchačka pro 96-jamkové destičky byla od firmy Labilně Instruments (Melrose Park, Illinois). Odečítací zařízení pro mikrotitrační destičky Spectramax Plus s monochromátorem bylo získáno od firmy Molecuiar Devices (Sunnyvale, Califomia). Příprava enzymu

Rekombinantní heterodimemí proteáza HCV NS3/NS4A (kmen la) byla připravena použitím dříve zveřejněných postupů (D. L. Sáli a další, Biochemistry, 37 (1998) 3392 až 3401). Koncentrace proteinů byly zjišťovány metodou barvení Biorad s použitím standardů proteázy HCV dříve kvantifikované analýzou aminokyselin. Před zahájením testu byl vyměněn pufr pro skladování enzymu (50mM fosforečnan sodný pH 8,0, 300mM NaCl, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid a lOmM DTT) za testovací pufr (25mM MOPS pH 6,5, 300mM NaCl, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid, 5μΜ EDTA a 5μΜ DTT) s použitím hotových kolon Biorad Bio-Spin P-6.

- 156CZ 303213 B6

Syntéza a čištění substrátu

Syntéza substrátů byla prováděna podle autorů R. Zhang a další, (výše) a byla zahájena ukotvením Fmoc-Nva-OH na 2-chIortritylchloridovou pryskyřicí s použitím standardního protokolu (K. Barlos a další, Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991), 513 až 520). Peptidy byly potom sestaveny použitím chemických reakcí Fmoc, buď ručně, nebo na automatickém syntetizátoru peptidů AB1 model 431. N-acetylované a úplně chráněné fragmenty peptidů byly od pryskyřice odštěpeny bud* 10% kyselinou octovou (HOAc) a 10% trifluorethanolem (TFE) v dichlormethanu (DCM) 30 min, nebo 2% kyselinou trifluoroctovou (TFA) v DCM 10 min. Spojený filtrát a proio mývací roztok DCM byl azeotropně odpařen (nebo opakovaně extrahován vodným roztokem Na₂CO₃) pro odstranění kyseliny použité při štěpení. Fáze DCM byla sušena nad Na₂SO₄ a odpařena.

Esterové substráty byly sestaveny použitím standardních reakčních postupů kyselina - alkohol (K.. Holmber a další, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410 až 412). Fragmenty peptidů byly rozpuštěny v bezvodém pyridinu (30 až 60 mg/ml), do kterého bylo přidáno 10 molámích ekvivalentů chromoforu a katalytické množství (0,1 ekv.) kyseliny para^toluensulfonové (pTSA). Byl přidán dicyklohexylkarbodiimid (DCC, 3 ekv.) pro zahájení reakcí. Tvorba produktu byla monitorována HPLC a bylo zjištěno, že je u konce po 12 až 72 h reakce při teplotě laboratoře. Pyridinové rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a dále azeotropním odpařením s toluenem. Ester peptidů byl zbaven ochranných skupin 95% TFA v DCM 2 h a extrahován třikrát bezvodým ethyletherem pro odstranění přebytku chromoforu. Substrát bez ochranných skupin byl čištěn HPLC s reverzními fázemi na koloně C3 nebo C8 s gradientem 30 az 60% acetonitril (s použitím šesti objemů kolony). Celkový výtěžek po čištění HPLC byl přibližně 20 až 30 %. Molekulová hmotnost byla potvrzena hmotnostní spektroskopií s elektrorozprašovací ionizací. Substráty byly uchovány ve formě suchého prášku v exsikátoru.

Spektra substrátů a produktů

Spektra substrátů a odpovídajících chromofomích produktů byla získána v testovacím pufru pH 6,5. Extinkění koeficienty byly zjištěny při optimální vlnové délce mimo vrchol v ky větách 1 cm (340 nm pro 3-Np a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím vícenásobného ředění. Optimální vlnová délka mimo vrchol byla definována jako vlnová délka, která poskytne maximální frakční rozdíl v absorbanci mezi substrátem a produktem (OD produktu - OD sub35 strátu)/OD substrátu).

Test na proteázy

Testy na proteázu HCV byly prováděny pri 30 °C s použitím 200 μί reakční směsi v 96-jamkové mikrotitrační destičce. Podmínky testovacího pufru (25mM MOPS pH 6,5, 300mM NaCl, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid, 5μΜ EDTA a 5μΜ DTT) byly optimalizovány pro heterodimer NS3/NS4A (D. L. Sáli a další, výše)). Typicky bylo do jamek vloženo 150 μί směsí pufru, substrátu a inhibitoru (konečná koncentrace DMSO 4 % obj ./obj.) a ponechány inkubovat při 30 °C přibližně 3 min. Pro zahájení reakce bylo potom použito 50 μί předehřáté proteázy (12nM, 30 °C) v testovacím pufru (konečný objem 200 μί). Destičky byly monitorovány po celou dobu testu (60 min) pro zjištění absorbance při příslušné vlnové délce (340 nm pro 3-Np a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím odečítacího zařízení pro mikrotitrační destičky Spectromax Plus vybaveného monochromátorem (přijatelné výsledky lze také získat s odečítacími přístroji využívajícími spektrální filtry). Proteolytické štěpení esterové vazby mezi Nva a chromofo50 rem bylo monitorováno pri vhodné vlnové délce proti blanku bez přidaného enzymu jako kontrole pro neenzymatickou hydrolýzu. Vyhodnocení kinetických parametrů substrátu bylo prováděno v tricetinásobném rozmezí koncentrací (~6 až 200μΜ). Počáteční rychlosti byly zjištěny metodou lineární regrese a kinetické konstanty byly získány proložením těchto údajů pomocí rovnice

- 157CZ 303213 B6

Michaelise-Mentenové pomocí nelineární regresní analýzy (Mac Curve Fit 1,1, K. Raner). Čísla přeměny (A_cat) byla vypočtena za předpokladu úplné aktivity enzymu.

Vyhodnocení inhibitorů a inaktivátorů

Inhibiční konstanty (Kj) pro kompetitivní inhibitory Ac-D-(D-Gla)~L-l-(Cha)-C-OH(27), Ac-DTEDVVA(Nva)-OH a Ac-DTEDWP(Nva)-OH byly zjištěny experimentálně při pevných koncentracích enzymu a substrátu vynesením poměru Vq/ví proti koncentrací inhibitoru ([I]o) podle přeuspořádané rovnice Michaelise-Mentenové pro kinetiku kompetitivní inhibice: Vq/ví - 1 + ío [I]o/(Kj (1 + [S]o/K_m)), kde v₀ je neinhibovaná počáteční rychlost, Vj je počáteční rychlost v přítomnosti inhibitoru při jakékoli dané koncentraci inhibitoru ([I]_o) a [S]_o je použitá koncentrace substrátu. Získané údaje byly proloženy metodou lineární regrese a výsledná směrnice, l/(Kj(l + [S]o/K_m) byla použita pro výpočet hodnoty Kj*.

Získané hodnoty Kj* pro různé sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou uvedené v tabulce výše, kde byly sloučeniny uspořádány v pořadí podle rozmezí hodnot Kj*. Z výsledků těchto testů je zřejmé odborníkovi v oboru, že sloučeniny podle vynálezu jsou výborně použitelné jako inhibitory serinové proteázy NS3.

1 když byl předkládaný vynález popsán na uvedených konkrétních provedeních, odborníkovi v oboru budou zřejmě mnohé alternativy, modifikace a jiné variace těchto příkladů. Všechny takové alternativy, modifikace a variace mají spadat do rámce a podstaty předkládaného vynálezu.

- 158CZ 303213 B6

Tabulka 2

Příklad	Struktura	f Mh
1		591/853
I 2	*<$- i	627,7441
3	*r'r^ A -v· C O, \ v	754,8883
4	*<>· 1 c. 4 i	527,6259
5	„Ap ΑΛ A	638,7799
6	rAAp ay*^> „A 0 -'‘-Cp £.	631,7352
7	^VyQ CHj □ Α» S OS	381,476

- 159CZ 303213 B6

8	V ° X» J	540,6526
9	'X v s-\j 'on	498,5813
10		| 633,7482
11	- ° ‘-£~ e	641,7249
12	* ’ X XX *1	641,7249
13	.. >. e> v	683,8061
14	-¾. >O v	537,7802

- 160CZ 303213 B6

15	*V	637,7802
16	yhq	637,7802
17	yFc. -3	625,769
18	a' -J <«	613,6707
19	v ^~\-f f4 yy *<	613,6707
20	° μ\< \aa	627,5978
21	'.Xkz X3	609,726

- 161 CZ 303213 B6

22	* q. MO	609,726
23		609,726
24	~£?°7γ . «1	611,742
25	„ΧΧγ-νΛ,ρ *-<γ· /	600,7183
25	cf~Č? N $ V	554,7361
27	°ϊγ ·*<$· ¥ < vu:	478,5937
23	•XYp oAm ¥ 5 F	546,7132

- 162CZ 303213 B6

29	«S	562,7562
30	k^v r => Λ $ «1-	699,8519
31	CTÍv^Ao -ó- $	643,7435
32	°ν5'ΥΛΛΌ ~ Γ M $ 'V*	509,6077
33	v&> <r ’ X* os /-^-, β y a M S^os	637,7802
34	5 ►scr+os °Aí*os	637,7802
35	Xi . Y . v o^U	579,6995

-163CZ 303213 B6

36	z-H,	537,6619
37	CH	539,5342
38	faG-fa. \ ,+χ,. Η,ίΛ^ CM	597,7149
39	T^Y-^xAo'^04' CK^N °	493,6055
40	Ύ^-Λο^·04’ Y °0 é(5^	632,8044
41	o «4 $ *c	747,3965
42	o >- °^Γ -'-far M s HX	523,6348

- 164 CZ 303213 B6

	<vs, V		598.7024
43
	cVr/r ev V J, »s		573,712
44
-5	VyX		495,6214
		X	627,7878
46	, 1 «S o c S^ ^'sC á 1 η. 1 Λ ,λΆΆλ %Λ«.
	= Λ		541,6501
47	ν^ιχχ CDQ’»' Η S Ο	0
	^vA/á λ°	y^>*· c	543,666
48	Ο
	Γ AAAJUl L ο Η ί		501,5847
49	ό

- 165CZ 303213 B6

50		656/394
51	ν' u X	578,712
52	<y·	725,8901
53	X ' ' ο	£84,6782
54	Χ'Χ' X	538,6467
55	XVrW- X'. ' Ο7 °	335,8248
56	X Χ-ΛΛ ΧαΧ	527,6695

- 166CZ 303213 B6

57	<Á	310,9557
53	CN ..A s °y> ° ^Cffú O	552,6737
59	*sC'^x2 o ' J 3 A* SOVo O	592,7391
60	V* v^O 'ďX. ^3=/^ X J	534,702
61	O 2 V-4 j ° 7 c	653,8232
62	t x íS * 3 (Π « ° σϊ	696,892 f
63	x^Us^K^·3 0 o	606,7662

- 167CZ 303213 B6

64	r ’έ xr- v	643,7435
65	ΟυζτψΑ 1 1 fil·. a\ os	742,8771
66	935 ” ί	747,8965
57	»/ a--S- Zryr * á r% β $ ·	747,8365
58	o, ’ ’ó‘	761,9236
69	Q P c-í-OOo	747,8965
70	ϊ ^'a	733,913

- 168CZ 303213 B6

71	O P p ? Ύ n ? i 2 S	746,9118
72	o ^'^ιί^'^Ί i ? ? ’ ‘0	646,7935
73	n p^ Λ s • 0	746,9118
74	s* v) G ·s-·Vó OX	668,6782
75	v> γΛ r yT *Α9 0 %-N ° Ύό%	628,8129
76	λ :X-?- Xí	760,9792
77	-8 „x .χ··'-1-·	818,0723

- 169CZ 303213 B6

78	0 ί o ΓΛ. h> r <r JL o. t o β Ή—«	761,964
79·	‘ ’ό	344,0702
80	o o rxYrí r - •ΛΛΛ-τ^- ‘ ’Ó	753,9443
81	.9 > T9	844,0702
82	.o P “ ό	753,9443
83	.0 Ρ ‘ ’ó	747,3965
84	• 0	804,0049

- 170CZ 303213 B6

35	η θ ‘ ’ό	379,2858
86	“'i 8 ΑΑγ\-γ>Α- ' 'ό	823,1774
87	9 *0 1 V“ ’ ΌΌ	832,0994
88	ο -ό— r· -Α »ν	775,9911
39	^Λ$ζβ β 1 ’ό	725,8901
90	>ν\ = > -v·* c P ο W .,=^ 0	638,9483
91	<3Η »>% β /Α Λ » 'TÍŽ	642,84

- 171 CZ 303213 B6

92		i 853,0995
93	Ó	789,9778
94	o A ů 1—\ Óh Ó	309,9682
95	njf	878,8583
96	Ω Q ^Wk 5 X’	772,006
97	x? ‘ ό	761,9672
98		728,85

- 172CZ 303213 B6

99	Ο-, o o	328,0239
100	,O r *' i s y*	789,0334
101	,•0 , Yr	775,0063
102	Q θχ 'S yK C ώ .047 Yťti. O O	886,1102
103	o 9 if f*~\ 0,1 •X. ' 0	880,8306
104	o F ' 0	355,0718
105	• 0	790,7047

-173CZ 303213 B6

106	- · ”· γ- %ΧΑΛ.-~-.·γ< - J 0	821,0543
107	Λ i “S ’ ΑΑΑτΥ*/* 4 so	685,7812
108	Λ * y	891,8973
109	~ΑΑΑ _ - “ Ό	775,0063
110	σ'Λ%Α - ° οί+^/+γ+>.Λγ''’·γ'**β c = Ά	785,0452
111	ο \Λ s V ·	789,0334
112	Μ> νίΤτ X ULV “	803,0605

- 174CZ 303213 B6

113	ΎΧ, p p//. 'S „ίΚ,-ρ o	862,4689
114	o · p^· Λ	884,1323
115	ΧΪ, O „pr\‘ ΑλΛ ’ Οϊ «^χΡΛ «κ*.	835,5384
116	3 I Γ u · Ό	887,1794
117	.pp. tTpóPXw. • ’ό	831,071
118	0 O i I <7 r V^Vť / s r* . y, • Λ^.γγ'· v 0	830,0883
I 119	‘ ‘O	858/405

- 175CZ 303213 B6

120		374,1399
121	σ? η * Ο-'- k y'-cp	904,1227
122	• ’Ο	929,195
123	. / - ?Tý	373,0867
124		872,1019
125	A^^Sjk^X' ’ Jo	900,1561
126		860,11

- 176CZ 303213 B6

127	1	804,0016
128	ΟΑ$Λ?Λ O	803,0169
129	Ο'ΑΡ//’Z. 'V' ’ ’Ó	831,071
130	• *O	806,0612
131	m-í^Q «, ·®γ—iř*+ ř * — ° V/*5 • ‘6	749,9528
132	se^o<l »f\ °S 3 ' ‘0	748,9681
133		777,0223

- 177 CZ 303213 B6

134		842,1382
135		786,0299
136	U.4y?· ' Ό	813,0994
137	0 β ? νγ>	829,0988
138	αχ££> ί'Ύό*	788,0022
139	ο. 15 rfaj'	815,0717
140		846,1265

- 178CZ 303213 B6

141	*ó	750,0181
142	• βό	817,0876
143	' ~γ	833,087
144	^ΎΧ, cy αΧΧΙ ’ ·Οχ - 3 X	511,2017
145	σ?_ο L ζ'*· Α-· )Χ Α Α ’ β /-/ f-\	931,1921
146	Cl - »9 ν-Γ^ “V Α	844,1106
147	Ο . .0 r^	788,0022

- 179CZ 303213 B6

148		815,0717
149		817,0876
150	Q o	831,1147
151	Ka-= •Α'γ'τζί'Γ“”^ · •O -	819,0599
152	Si.Or .t^Tr^-r-	833,087
153	n ‘^5’ 1 V	829,0988
154	· S 0 *	845,0981

- 180CZ 303213 B6

155	Ύ r· A* r*	316,0734
156	Γ- p O\	773,0125
157	x 0 O <X G	787,0396
153	9 PuWAx V** f G	850,0959
159	o Xx Q-^o í V <	807,03
160	o ? 0 Q <X-J^AaX* >Ή ί YT^ 5 ” U í ^os	821,0571
151	z**i v ° S° r*	793,9876

- 181CZ 303213 B6

162	Q Αλ9 Qa, · y 1 A	759,9701
163	9/ζγ\Τ^Ύ·Ί< Λ	757,9714
164	:9 QPvýS'^'^ <b · \ · Λ •'“'V	711,863
165	O y e^'Á * ca ? A- 0 γ\ν> CA	712,3506
166	9, v -o~Z / %—* D , V^’	712,8506
167	Y Γ. Ais y· 'CD	317,0876
168	-vr *> 'νΡ' ’ “ A, .<· vY 0 G	817,0876

- 182 CZ 303213 B6

169	S x r Sa - s v Ynl Gt)	317,0876
170	-& -SyrO-- YaSÍ, ό a	817,0876
171	^£př>. =s ° 1 Ό	777,0223
172		777,0223
173	-Ρ Λ = Sa * ] S V-* 'θ%	801,0882
174	Q <3 xAa4Ax ' Ó	919,9515
175	^γ^γΑ,Χ^Λ? A, •AJy. · .ΛΛ/χ^γΎ1.. • ‘0	919,9515

- 183CZ 303213 B6

176	° Ό	892,8821
177	* Ό	892,8821
178	v-p**s Ό ’ “ α Μ	818,0723
179	’ ’ό	761,964
180	^κ^0ΛχΛγίγ' ’ * Α ’	789,0334
181	*‘ Wfg	789,0334
182	ββ	820,0883

-184CZ 303213 B6

183	s '0	763,9799
184		791,0494
185	Q f'» **>»-** '^’ο	791,0494
186		791,0494
187	j β --βγ*. Ó ’ » “ X'	809,0674
188	O f /-“» ?\ ^\>γγ s « ú ··	809,0674
189	M-PX? η I Z\ ’ Γ· λ--^Αν>Υ</ J o Ό ^.Wrg-. .	823,0945

- 185CZ 303213 B6

190	0 c	323,0945
191	Λ *< i	865,1753
192	M-Sos 4? ‘ O\	865,1758
193	Λ Kj yG-ýf Γ . 9. ° °- ^1 ,. ? r w <\e	817,0876
194	,-Q v) ν^'Λ-Γ 7*· x-x- 0 > C h,^ . y- XČQ ·Λ M	817,0876
195	„ x>: Tv°: 'W 4	1606/21
196	>Q - Tv >- OX	1606/21

-186CZ 303213 B6

197	Λ τΧι. X p	1638,12
198	X	1638,12
199	s 5 A	775,0063
200	;γΧ\ jP «χ·'	775,0063
201	'0	762,887
202	, / ο , ηνΑ-ΑΧ- ,^εΑ-^’Ύ^^Άο ° 3 3 °ό' “	707,7786
203	'XyXU Α’νΧ · / * ‘0	734,848

- 187CZ 303213 B6

204	O n	774,9659
205		800,0139
206	QjT^-vY^S.*· A“ ’	687,7971
207	QJpVYV^-Xr'’'. Cr«° V r	714,8666
208	’ό ·Λν-τχ·	853,0774
209	,~h£\ y «.S^es · -Q	853,0774
210	<.£: νΑΆ Λ ν' ó -W--.	811,0398

- 188CZ 303213 B6

211	-Ο^Α,ΛγΛγ^ j íy—	811,0358
212 I	ΥΛγ Λ	811,0298
213	A s '·' 5 '· 0	817,0876
214	n ^Xx?· * V “ Ό λ	817,0876
215	c\	335,1057 | i
216	A 0 r\, (V“ nS* o xé%	630,8288
I 217	OH χ,ίγ®, L _< 't .f vH>5	616,8018

- 189CZ 303213 B6

218	m>c>UvAí0 0 V a a γ re H^OS	742,9208
219	ΐΡγ*. · S · =>^ es X	744,9367
220	pyXS Wq '	735,9694
221	^.J3p£r.	853,0774
222	χχχ?,--. 1 4ό	809,0862
223	y pyHX Χ'''· ο X * Ýťů	749,9965
224	v <) V ° α€ CH,	612,7703

- 190CZ 303213 B6

225	OH S-uA ,λ, . -4	598,7432
226	X o X | ιΥ · γ ος	753,9638
227	> ’γ l4 Γ o^» «« X	684,8401
228	44 4 v A θ' γ rS+. <Ί s v	758,9638
229	X 4 γΑ Ó ' 0 FA ? X* xA	753,9638
230	vA«,Q o -—4;	795,0404
231	4¾¼^	795,0404

- 191

232	> o O X	624,7315
233	HjC XX- r’	610,7544
234	h,= £ ,/X X* fY><TvA»zYx'»s e 3 0 X	77G,9749
235	_χ· a ,-Λ r XV κ,ιΧη o 3	612,7703 i
236	XxXP V X X *ic CH,	722,8369
237	CH Ά o, r\ xv ? V °γΧό □s	593,7432
238	‘^Χή^ό ·*ί·*· 0 0+χ,.-γγ% • ·ό	795,0592

- 192CZ 303213 B6

239	Αχ A O ,Λ . Cr· w	753,9633
240	eó Χτχαχ -Q	339,0414
241	Q o JvAAX A ‘ v *	729,3375
2d2	.jCC Vc X' 0 -	756,0*43
243	Ί£ ' ,-Χ C Ά a- , Cr· γΑό ^c’>	701,9518 I
244	r™ X - rO^i-os 0 V α Υιό ’^t>	724,0159
245	X . 3X w	715,9789

- 193CZ 303213 B6

246	-)/· *,c ^P-Cis 0 0	715,9789
247	Γ™ λ Xo Ά-» , <Jn> ΥΛά	741,9951
2*8	QuS/?/; ° β^»χχΡ'κ'^γ'·γ^*3 ’ ‘0	821,0786
249	PS p Λ *\c p 0 -^_N XPÁ °s	626,7974
250	Ot 0M X X r o sa “i ϊ v	612,7703
251	^Y-.· < = V °S s^os	698,8672
252	Ά O 0^ OS X	674,842

- 194CZ 303213 B6

253	Οϊ^λν X	534,7162
254	*5 \jO> A u II	735,9694
256	ο ρ* -ή =u^= Ο Γ Α Α ο.	772,9909
256	η C βς ° χ ο σ V 3 •V	776,9383
257	KC 7 ^'· <>, \-Α Κ(ΥΧ ο Χ_»ί VjM vbtXa,, OS 0^,	526,7974
253	Η oAvA v4· ’ S ’ 'V	835,0139
259	0 <Y 1 !1 * j”T—> » l ♦ « A V* k <·	835,0189

- 195CZ 303213 B6

250	Λ Λ A A β 0	□12,7703
261		536,855
252	«γ-νθγ^ f. 'S.-·*	686,853
253	Ajfccf-	686,856
254	°S ’ i*Sr-ySz«Y-s^e	636,353
265	ssV*.· v °r x X	742,9236
263	Ύ^Λ,-νγ s „ ss-*'·	738,9325

- 196CZ 303213 B6

267	“5^ «. ° —!*>a • 4ó I	733,9325
268	7*» r1	817,0444
269	rb-^ L β οί^-·γ·Α>χ-νΖ*'^<*ίο γ	738,9325
270	, ’·^γο η:Ύ ο άΜ <η	772,9909
271	.„Χςγ·. -,. U, 0	795,0592 I i
272	γ ο <-> ; ν ί τ „ „ ^'''fYrYY—'^ν ^Ύ*·’ V V Α ť Λ.ί·^Ό\	758,9638
273	ϊΎ··· γ v Υ ζ’ Zs.	810,9966

- 197 CZ 303213 B6

274	ot , .TT O %^-í· °	610,7544
275	o 3 T^o □ ς CH	596,7273
276	«* * *Ά o 3yJ 0 o\	756,9479
277	vr <X *-/ ťw, 'i -^- o ,Λ , >· ΎΆ5	756,9479
278	O r\7 yTT ’ o %-J * ΎΤ'ό ot>	744,9799
279	ΐ>γΧ·' <Ů “ϋγ «*> rs	698,8672
280	b s I*??' '9 °s ) r°	698,8672

- 198CZ 303213 B6

281	KjX?’· A\ ž v 5	709,8471
282	q r~\ O 0 «. γν X>=“ S' v X	598,7432
283	T i 9s>/YYVs/^z^Ý*? ibXs. o lo e Oj^Z <3, r° •Sť^at,	810,5966
284	x o ;?ν*ο o < s V X S^--*\	753,9633
285	-Ύ y-°*> o V, C o X .- 2<V*’ > 3 ''as X	742,9236
286	->CX • ?sQvvS^-^-'*>x'v’>C’ <. ZX· - ’ •y <>- r	817,0444
237	Ά XyXX1^ < -X-,	817,0444

- 199CZ 303213 B6

288	-X p o V'') o °<X α =*.	759,9526
2S9	Xys ° S ° O^N A ^c-<O jCH. W,C	494,6367
290	Q ,-O vu·'··· X o ~X%	719,9263
291	f Q ’ S * “V X s> I	731,938
292	o r-X/ o °^í e rú n4r q	677,8887
293	ζΑ 2>γ·»ο0 < ° V A X	612,7703
294	X q AAp·' v x 1	612,7703

-200CZ 303213 B6

295	a, ’ γ A °<y* X	716,9261
296	X . ,9 .-ο····' °vN A r° k,c^*o\	717,9109
I 297	„.AV <y « Cr “v* k«, .z	950,0684
298	y~. \ %-ρ· O Γ - Z g v* Ύ,	729,9221
299	^v0*· Ί » χΟφ^ °γ 7x°	578,712
300	Vy<x xlApA^X ° s ° X I *>%χα	564,5649
301	X/X· Ογ* X	703,3838

201CZ 303213 B6

302	X	553,7021
303	X	703,8838
304	n ADA Αγγ CH r° κ,ε^ος	552,7173
3C5	X AV V X Yz= X	523,6756
306	X ,αλΧ $X S4 %✓* CH X	731,9783
307	Ύ XyY a γ	509,6435
308	MP «,ζ/νΎγ*1 XA sT Y A X	508,6638

-202CZ 303213 B6

309	4%° s° <n r°	731,9783
310	X+o“ v O^H CH, f r° rt.cr^Os	657,8503
311	*eA S í i T χΑχΧΧ/Χ χ+x v <V* es X	657,8503
312	XV- c t c A 4-n * ' / X,	567,7292
313	fp XXXů >“ v ;x *1*: w,	724,9054
314	«,^ΧαλΧ^ rx<%s <’ v X X	724,3054
315	'X . Ω a^y, °S rs .e-^es	762,3736

-203CZ 303213 B6

316	Ά ~ H.’ lY* •y S, X	764,5896
317	Xy-WAA £>-X3 “ < 0 γ X ra	764,9896
318	A O CMJ^ťXa' ^ΟΤϊ - X	764,9896
319	X AA Ω srA·· S? ”	908,0734
320	X , X „AXA JXXα * Ο^χ '< * °s	724,9054
321	*Ά RXX H.eX i T 1 lt Η,’^γΧ 0 S c A	508,3638
322	aa O,yN =*,	522,6909

-204CZ 303213 B6

323	κ>γ% ° S 0 OS CH,	522,6909
324	Χ··.χ Y X 1 ι-,ιΧ'ςΜ,	731,938
325	\ P' /Ά vX θ V* 3 V“ ’ ’γνΡ> V‘^r~\_£s	744,9367
325	X -&Γ Χστχ-ν·- V *,= ΪΥ4 CH.	727,9102
	VA X+X γ “v’ Sx r° KC^^CH,	567,7292

-205CZ 303213 B6

328	cXý” X	584,8029
329	X	726,9214
330	X X	726,9214
331	~r . .O. ,--<r, ·.·· · ·- ov“ X X	726,9214
332	„ _ “ i R T il ii ° k 0 ’Υ X re	740,9484
333	vx rx ,c. V^o χχ a v* ° yX>	688,8284
334	AA o o „r· £Ύ*„· S' O*, -sX	564,6849

-206CZ 303213 B6

335	V χχ v °γΝ Ot ►XX	550,6578
336	“Ό	320,9918
337	'Χλΐ,γΡϊ, >! °^-ί’ ;χ	710,8784
338	X ΐ%°	746,9089
339	'V· Γ*! ί γ« «I χχ	710,8784
340	χ ? jT*ts^ÁSz'a’ *>+.* ο «.c-S* ~	530,6823
341	γ X	716,9261

-207CZ 303213 B6

342	-A X v* x	539,675
343	X X' O ζρ t ca	772,9473
344	X ) X O Γ» °s	731,938
345	X> yA“ b a » °yj ’ λΑ S	731,938
346	X ’Χό Τ AA i ? γ* “υ^-Άλ <*»	731,938
347	sÁA °YM AA «>C Oí,	546,7132
343	Ap /ΤΑυ'-Ύ'-'“' AA · S ’ ’ °y S. Ά *SC ex,	606,7662

-208CZ 303213 B6

349	γ a?	573,712
350	°Y* Y > CH,	534,7722
351	V* Y Yc	548,7291
352	H>C =«, ,vu Λ . j? „ Λ řW γ A 5X° OS	562,7562
353	V γ* Y κμ:-^3 ·<	642,8432
354	Yy qA * Y^° z <> 2	536/18
355	if γ A	574,7673

-209CZ 303213 B6

356	βίγ··*	726,9214
357	X · A x£yťr Ά 0^·« 0*1 M CM,	726,9214
358	ν' A v * Ο«γΖΜ Η,Χ V a.	530,7279
359	o g *SC o\	639,799
360	Η.=ν°«> ϊΧΤά'·'·' v %» $<	538,6902
361	v «<	562,7552
362	v/4 AA/a v £Y° OS	556/444

-210CZ 303213 B6

Tabulka 4

Struktura	Název	Rozmezí Kí*
X r . AW-T s- X . »o	iBoc-G(Chx)-P(4í- NHiSoc)-nV-(CO)- G-G{Ph)-Am	A
CCO 1 1 <.OA> ° Xx o · 'O	(2-CO2)PhCO- G(Chx)-P(4t- MeNHCOPh(3- OPh)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	A
CX,*a AA u · Ό	iSoc-G(Chxj-P(4í- NHSO2Pti)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	A
9. **s^> XCý?, -x f} Mí^yV- U . -o	iBoc-G(Chx)-P(4t- UresPh)-r>V-(CO)- G-G(Ph)-Am	A
O 1 e e<^ ° ' X	iBoc-G(Chx)-P(4t- MeNHCOPh)-nV- (CO)-G-G{Ph)-Am	A
2 o “AvY~22i JL u ’ Ό	iBoc«G(Ctíx)-P(4t- MeNHSO2Ph)-nV- {CO)’G-G(Ph)-Am	A
qfb • ·.'	i8oc-G{Chx)-P{4t- MeNHCOPh<3- OPh))-nV-{COX3- G(Ph)-Am	8

-211CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
O (	(2-CO2)PhČO- G(chx)-P(4t- UrsaPh)-nV-(CO)- G-G(ph)-Am	C
XV cťl JX^Lrí r' u · ’Ó '	iBcc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(4Me)Ph)~ nV{C0)-G-G{Ph)- Am	B
4- ^^XX&Y P í 51 U · !Ď '	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(3Cí)Ph)- nV<C0)-G-G(Ph)- Am	B
'ΎΤν #x u ° ‘0	íáoC’G(Chx)-P(4t- NHS02-{4- NHAc)Ph)-nV- (C0)-G-G(Ph)-Am	A
'Ax ’ aó	iBcc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-{3,4- díCl)Ph)-nV-(CO)- G-G(Ph)«Am	B
co 1 X4 .ΛγΟό'Λ , 9 Áj ^χΑ-χ^Χ'·u . ·ο	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-l-Np)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	B
v <»« L /—ť ΐ1 -A-Xr* r~~ γ r s s * Aj ααα-χτύΑ·’ . -o	iBac-G(Chx)-P(4t- NHSO2-2-Np)-nV- (C0)A3-G(Ph)-Am	B

- 212 CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
X-·	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-(4CI)Ph)- nV-(CO)-G-G(Ph)- Am	8
X- r a /—\ j*. ^Á γ-Χ.., Ό	iBac-G(Chx)-P(4l· NHSO2-5(2,3- dihydrabenzofuran ))-nV-(CG)-G- G(Ph)-Am	B
ΥΏ “Ar’ ° Ó	ÍBcc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-6(4- OMe)Courmarin)- nV-(CO)-G-G(Ph}- Am	3
9 X · ·ο	iSoc-G(Chx)-P{4t- Urea-Ph(4-OMe))- nV-{CO)-G-G(Ph)- Am	A
Č> V .,.X,.v.p-O'X J L ’9	iBoc-G(Chx)-P(4í- Urea-Ph(4-Cí))-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	s
9 v - r-s X.-9·.—vA··· x . o	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-Ph(4-CQ)-nV- (CQ)-G-G(Ph)-Am	č
“’sre 9. T .^-Μν'-γΧ, 1 ó	iBcc-G(Chx)-P(4t- Ure3-Ph(4-Ac)b nV-{CO)-G-G(Ph)- Am	B

-213CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
-•γ»· C, β __,<* »», Ó	i6oc-G(Cřix)-P(4t- Urea-Ph(4-Ac))- nV-{CO)-G-G(Ph)- Am	B
?*· AXy • 0 AýAX».	íBcc-G(Chx)-P(4t- NKSO2-Ph(4- OMe))-nV-(CO}-G- G(Ph)-Am	B
Qr .ΧγΑ>, ξ Λ Ν X «jC cMfTV yY'γ* 0 °ó '	iBoc-V-P(4t- NHSC2-Ph)-nV- (C3>G-G(Ph>Am	B
&, 0*1 **	iBcc-G(Chx;-P(4t- NHSO2-1No)-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	B
rDi OC 3*1 Λ»( O j—< ČMa >Λγ Yy X · | Y . .Q	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHSO2-3- Quinclir.e}-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	B
c H)C-0 A· 0 XXy^a,,, O	(2.5-áÍF-o- C02)PhC0- G(Chx)-?(4t-NH- íBcc;-nV-'CO)-G- G(Ph)-Am	A
n 1 A“ ΑΎτΎj? 9 1 0 . Λ0”~Ϊ0 '	[2,5-diF-o- C02)PhC0- 3(Chx)-P(4t- MHSO2-Ph)-nV- 'CO)-G-G(Ph)-Am	A

-214CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
Xo«o A ΑχγΡ'ν'Λ., · Ó	(3,4-diCP6- CO2)PhCO- G(Chx)-P(4t-NH- íBoc)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	A
o Άώ, ά ° Ó	(3,4-dfČl-6- CQ2)PhCQ- G(Chx)-P(4t' UresPh)-nV(CO)- G-G(Ph)-Am	A
X T” Γ- } r~\ J’ ϊ Ó A-A-xrX. ιχ . .o	iBoc-G(Chx)-P(4t- Ures-(3-Cl)Ph)-nV· (C0)-G-G(Ph)-Am	B
, X· 7 o< Ρ'ό Χ'Ύγ	(3.4-díČl-6- C02)PhC0- G(Chx)-P(4t- NHS02-Ph}-nV- (C0)*G-G(Ph)*Am	A
Pt (Ί U Xvví rYX Ό C	iBoc-G{Chx)-P(3,4 iPr)-nV-(CO)-G- G(Ph)-OH	A
qQ 0 ČH, 0 0 Y 0 0 f <=S	iBoc-G(Chx)-P(4l· Chx)-nV-(C0)-G- G(Ph)-Am	B
pQλ ? ?9 γΧΧΧνΧΧ OS Q 0 L 0 0 01	iBoc-G(Chx)-P(4- diMe)-nV-(CO)-G- G(P.h)-Am	A

-215CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
,χί^ w, o o L o o ctt	iBoc-G{Ctix)-P(4- Bnt4-.VIe)-nV-(C0) G-G(Ph)-Am	B
CH, 0 O L 0 0 CH	iBoc-G(Chx)-P(4- spirocycfopentane )-nV-(C0)-G- G(Ph)-OH	A
Λ . OS ° ° °ó'	i6oc-G{Chx)-2- Azabicycíoí2.2.2Jo cíane-3-C0-nV- (CO)-G-G(Ph)-Am	B
□ 0 L o 0 <*>	iPrOCO-G(Chx)- P(4-0íBu)-nV- (CO)-G-G\Ph)-OH	A
oy„ 0 o S/ ZY o o ΥΓ Y^ÁApVPA“ □t 0 0 L 0 0 os	Neopentcxy(CO)- | G(Chx)-P(4-0tSu)nV- (CO)-G-G(Ph)· OH	B
.99 . »0 ČH, 0 0^0 i, os	Neopentoxy(CO)- G(Chx)-P(OH)-nV- (CO)-G-G(Ph)- OH	B
„99 „ „o ^ΑΑγγ^γΑ/γ» ;	Elhoxy(CO)- <3{Chx)-P(0H)-nV- (C0H3-G(Ph)- OH	B

-216CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
Ή 0 0 0^ °Á γ ) O M· (J 0 0	i3ac-G(Chx}-P(4,4 diMe)-nV-{CQ)- GG(Fh)-N(Me)2	A
- íi i?ΛηΤψΑγ* CJ.	iBoc-G(Chx)-Pí3,4 iPr)-nV-<CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	Á
0A CH, O >~.H O 0 CH,	iBoc-G(Cnx)-P(4spirocyclopeníane )- nV-(C0)-GG(Ph)-N(Me)2	A
. x H-Z vz· -~Y+Q VV 1 J kč> «ρ o ( γ	iBoc-G(Chx)-P(4c- Me,4í-Pr)- nV(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	A
o Λ^'Υ'^ϊΧ <Vn ,ηΗ i Λ S? > *Vh (j M,CW O θ	iBoc-G(Chx)-P(4,4 □iMe)-tiV-(CO)- GG(Ph)-0Me f	A
xjx. X Ó $ ° X	ÍSoc-G(Chx)-P(4spirocycíopentane )- nV-(C0)-GG(Ph)-OMe	A
XyXwX' Ό '	íBoc-G(Chx)-P(3tMe)-nV-(CO)- GG(Ph)-N(Me)2	A

-217CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
ct o o J o 0 CM, CH,	iBoc-G(Chx)-P(4t4 diMe)-nV-(CO)- S(Me)-G(Ph)-OH	l· A
s ψ v w,	iBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-{CG)-S- G(Ph)-OH	B
CH, OQ^O 3 <*,	)Boc-G(Chx)-P(4,4 d<Me)-nV-{CO)- G(Ac)-G(Pb)-OH	C
9'X . . 9 ^Χ'κνγγκΧΧ-0Η ° 0 J 0 0 CH,	N-Me-G(Čhx)- P(4,4-diMe)-nV(CO)-G- G(Ph)C02H	G
“ o o f b b	;Boc-G(iBu)-P(4,4- diMe)-rV-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
XAUX a o l o o Th, 1	iBoc-G(Chx)-P(3,4 (diMe- cycloprcpyl))- G((S.S)-Me- cyciooropyí)-(CO)- G-G(Ph>N(Me)	A
Ú ^°H 0 ° y fjf ? ? jp ' cm, o o ) a q r	iBoc-G{Chx)-P(6S- CEM)-nV-(CO)-G- 3(Pft)-N(Me)2	A

-218CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
			A	iPoc-G(tBu)-P(4,4-	A
o. X	£	f* S o o	r	dtMe)-nV-(CO)-G-
ΧΛΛ	r	Ay^ULíkA	Ark-’	G(Ph)-N(Me)2
	O ) O	c
		t CH,
				iEac-G(Chx)-P(6R·	A
		cw°		C5M>nV-(C0)-G-
0 1		7 ® ?	T	G(Pft)-N(Me)2
		fl \ T	ϊ'η^'Όι
I <^S	a	o ) o	o
		°S
	kc **Š -		iEoc-G(tBu)-P(4t4-	A
	xov	' V°S \ 0	0	diMe>L-{CO)-G-
				G(Ph)-N(Me)2
	6	O 0 O(	0
		U£		((R)-1-Me-iBúc)-	A
,°SG (	Π o	T* -Λ-L λΓίΧ ° ΤΪ	!l i T ?* -Λ4 0	G(Chx)-P(4,4- diMe)-nV-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2
		»S
		c1		iBoc-G(Chx)-P(5-	A
	X	--\ ( o	a	ďt-Me)-nV-<C0)-
		4/ X JL ιϊ***^ i ÍÍ	•sA.	G-G(Ph)-C02H
OS	a	O 0 o	ό
				icoc-G(Cřix)-P{5-	B
A	ή	o k	ř	c:s-Ph)-nV-{CO)- G-G{Ph)-C02H
y^Q^-tr	Y 0	Q 0 0
4.	-X			iBoc-G(4,4-	A
Y~<ÁJ		0 ) 0		dÍMeChx)-P(4,4- diMej-nV-{CO)-G-
Y	/γ*' 0	G(Ph)-N<Me)2

-219CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
1 0 0 Ϋ o	iBcc-G(1-MeChx)- P(4,4-diMe)-nV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
	iBoc-G<Chx)-P<3,4 CH2)-nV-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
a e<S	iBcc-Chg-Píp-nV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	C
0 °/ □ '	íBoc-G(Chx)-P(4,4 ciMe)-L-{CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
aaXXJ/yX,/0 □ 0 0^1	iPcc-G(t8upP(4,4- diMe)-L-iCO)-G- G(Ph}-N(Me)2	A
ααΧ-Χυυ ” · “ Ó	(Foc-G(tBu)-P(5- c;t-Me)-nV-{CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	Á
γ Α	((R)-1-Me-iBac)- G(tBuhP(4,4- diMe)-nV-{CO)-G- G<PhbN(Me)2	A

-220CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
1 0 o l o a	{S)-1-MeiBcc- G(Chx)-P(4,4- diMe)-nV-(CO)-G' G(Ph)-N(Me)2	A
X/áX	iBoc-G(tBubP(4- cís-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
ó ° 7 °	iBoc-G(Cíix)-?(4- cis-Me)-nV-(CQ)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
\Λ γ °	i3oc-G(tBu)-P(5- cřs-We)-nV-(CO)- G-G{Ph)-N(Me)2	A
YvwjV 0° r ° °	iBoc-G(Chx)-P(5' cis-Me)-nV-(CO)’ G-G{Ph)-N(Me)2	A
Xggšluíg 1 0 0 \ 0 0	i5oc-G(Chx)-P(t- 3Ph)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me}2	3
0 0^0 0	iBoc-aito(He)-P(4,4 diMe}-nV-(CO)-G- G(Ph/N(Me)2	A

-221 CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
0 0 t 0 ό	i3cc-G(Chx)-Pip(4 morpholino)-nV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	B
	iBoc-G(l-MeCbx)- P[3,4-(diMe- cycfoprcpyí)]-nV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
Ϋ	iBcc-G(l-MeChx)- r[3,4-{diMe- cyciopropyl)]-L- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
Q 0	iBac-G{tBu)-P[3,4' (díMe- cyclopropyl)]-L- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
	íBoc-eryrhra-O.L- F(beta-Me)-P(4,4- diMe)- nV-<C0)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
o° v ° °	((R)-1-Me)iBoc- Gít-MeChx)-P[3,4· {ciMe- cyclorproDyl)]-n\/- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
«AA 0 /YYYáY oo^o 0 CM,	iPoc-G(tBu)-P(3,4- (diMe- cyetopropyí)J-nV- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A

-222CZ 303213 B6

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
™ L? A p ř nj ř ř I ΑΛΑΑτττΧΧ 0 0 > 0 o ΗΡΊ Ol	iPoc-G(tBu)-P’*3,4- (diMe- cyciopropyl}]<- (CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
o o o OS	iSoc-G(íSuj-P(3,4- CH2)-nV-{C0)-G- G(Fh)-N{Me)2	A
CH, OO^O <*»	iBoc-G(Chx)-P(3.4 CH2)-nV-{C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
σ,, '·γΆ ° ’ Q °1 AWYVMi,, 0 0/0 0 <*>	iPoc-G(tBu)-P{3.4- CH2)-nV-{C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
ΛαΑ OS oo^/o O.	(íR)-1-Me)iBoc- G(tSu)-P(3,4* CH2)-nV-íC0)-G- G(Pft)-N(Me)2	A
CH, 0 0^0 ®S	((R}-1-«Me)iBcc* G(1-MeChx)-P(3,4 CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A ..

-223CZ 303213 B6

Tabulka 5

Struktura	Mh Rozmezí Ki
<Y~ X X	507	9
χΧχ* 1 __ i	431	B
A“’ c h, CA ASr^ Hi HAA 5 k 5 CH,	473	C
^v CMl tx, 'tr >< ;?A* <, o oV AA	586	3
AA	497	C
0 Φ	433	C
XvV AY 1 ° A	431	C

-224CZ 303213 B6

Ά°’ AÁ C^N	479	B
HíVM’ c fM.PSr'VV’,H' Ά%° k° Ύ“ Δ Η,Ο^Ο H^S	507	A
X O^.í< l Η-Χ'Π en,	521	A
AC ch, A„° | **7- |	512	A
”.CVCM’ cXX M,C-T 1 «*,	533	A
«,= CH, p\^íí V V XÍh,	569	A
XXy v X	557	5

-225CZ 303213 B6

A	521	C
A	553	A
A o a	457	C
o/rtV v X	569	B
Ax v ς- “X * »·	533	3
	519	C
*ΎΥ'	621	B

-226CZ 303213 B6

HPg‘ A	392	C
T 1¾. O \0 o°	418	C
»\C « >4 V o,	509	B
y x°	493	C
</Wr Y X	507	Θ
ΟίχΥ'Τ^' X	567	A
XXr v £Y CH,	519	A

-227CZ 303213 B6

X	519	B
®γ »fi X O*,	535	B
M,CyCH, í.PvyS''' 0 „X °YM ** HC i 1 CH,	523	C
Ά ./Xv ;x ”'C CH,	493	8
νχ hX Ch.	547	B
v Μ;γ.ο Ch.	519	A
•Vy“. V °	505	C

-228CZ 303213 B6

3γ-Μ CH, K^-<N /Yh, HP	494	B
Η*X Á o x ιΥΎχ £S+·0 v q^M CH, Ay* W>	430	B
HACM’ za o z <x s v °Ύ^ CM’ r CH,	483	C
ÁÝ Y tV^-0 t °s	493	B
v A	5C5	3
V* oÝÁ Oy« V HY°	491	B
rt,cx&M’ 9χ2γψ“’ o^M «*» M*y-° CH,	541	B

-229CZ 303213 B6

	Qy·* CWj	473	C
v1 X	555	Β
X Ι>Τ^1Ύ X	554	Β
Κ,β^Η, «.,ΟγΥ/γ*’ Η,βΑτΛ,β ο °*γ-« *ί 1 CM, - -	465	C
V οΥχτ γΥ «s Η^-Τ =*>	520	Α
	«ν“· nCVv ď	555	Α
	V. η ?γγγ~ ^Αο0 ^0 X	532	Α

-230CZ 303213 B6

-231 CZ 303213 B6

γ 'ΐ tf	507	8
V ®S Kj''	522	B
fřgVěr J <Y« OS	606	C ! i
“*v e· 'ÍS^M^Z Ύ Ch,	4S3	B
„j+rgr’ °<γ-* t CH,	467	C
YM( q^yXy- °γ·« ΜηΎ3 «,	507	B
Y s4+sg Ύ	572	A

-232CZ 303213 B6

Αχ O/OUr o	718	C
cxyvf X X	547	A
-AS	636	S
ojfv	540	c
X' X'	554	B
XÝ Ογ-.Ν ‘ 1	540	B
Q/rX	632	B

-233CZ 303213 B6

Υ σ	580	Β
Υ	552	Α
γ! r	592	Α
(β&Ν v i c»s	518	Α
V ;AŤ Υ χ CK,	506	Α
MpyOS Ač Υ σ	532	Α
Α	581	Β

-234CZ 303213 B6

θ	566	C
CxJoA V' «	533	B
Y	£53	3
o/ycv	568	B
QjJXf V Y	556	A
QxXcV A	563	A
Xx Ύ1 Y	644	A

-235CZ 303213 B6

ροΧ v	543	C
X '1	574	A
Ογ^γ	534	C
cXý Ύ	543	S
o|Jt'	562	A
	662	A
	563	B

-236CZ 303213 B6

oÁA (ΚχΜ OS v	513	B
H,ys W Cřl v	4S2	B
ajXv τ	533	A
V S^x« «7 «7- os	510	C
AÁ~ HpV X	504	A
H,VKj cAÁ' Q^H Ύ	530	B
c&t v A	516	B

-237CZ 303213 B6

A	574	B
Yx	561	B
Až A	533	B
tXa	493	C
	546	A
oX X	561	A
xt	505	B

-238CZ 303213 B6

	490	9
x- •AX v β^*Χ Xx, ι M’C'X° CH c«t	539	C
οΧχ X V	532	Α
-ν' η Ογ-ΧΑ V ° KC <Κ	551	Α
X	573	Α
χΧζγ	567	I Α
	531	Α

-239CZ 303213 B6

X	608	A
	587	B
X ' X	561	B
At A	581	A
v X	573	A
cfx X	624	A
	547	A

-240CZ 303213 B6

X X	533	A
v r	545	S
	609	C
Gi	549	C
X# r	575	C
C^J3 oXX cr	613	A
xJCa	573	A

-241 CZ 303213 B6

c/cy/r X	561	A
oJT/f __y XT	625	A
X	666	C
v‘ xl	563	A
x ď	599	A
cšnÝ V X	573	A
CX^a*, · o x X	587	A

-242CZ 303213 B6

Xý -v	615	A
'SX ΐVJ V y ry3 βΛ CH,	535	B
xr Cit	531	A
v qM* v V CH,	531	A
Xý yy	651	A
Xs ‘Ύ V	506	A
X·' XVÝ»· ‘ a	520	A

-243CZ 303213 B6

Η cr	546	A
1 ”Ó	602	A
CW «Kz* V !> r	549	Ξ
V , oAX' V1 KC k	537	A
HH *c 1 'T	561	A
:,X9/ 1 v’	517	3
-X- v	491	8

-244CZ 303213 B6

χΧτχχ v X,	533	5
Η - CH,	507	Α
ς/' ''	598	Α
Χχ ν X	535	Α
οΧχ· V X	561	Α
	633	Α
*γβΗ, 'ΧτΧ 'X ί. Λ	497	C

-245CZ 303213 B6

αΎα ΟχΤτΎ X	607	Α
Αχ	574	Β
γΑχ I	518	Β
Αχ V ΊΟ	580	C
Αχ ο	544	Β
Αν X‘ Ί X	£52	Α
χΧΧ X X	561	Α

-246CZ 303213 B6

-247CZ 303213 B6

‘«V í X	546	A
X Á rx	546	3
ο,,ζΑΧγ-'*: :?γ? γ 1 X	523	3
'X' ? Y+· i X .,T . Ά A”·	663	C
ϊΑΤ V - ?x* ΣϊΥ Ύ “ fi CM ,	637	C
--v^’ CM, ** τ V Ογ.« C«, X *!«	521	3
X A «γ^< * AT	573	a

-248CZ 303213 B6

„A f-	559	A
Hr=v ÍM' /X «.CVyV:řUJ V -x	533	A
i=yCK* Cr’ 1 C»1	573	B
Y1 H,C CH,	595	S
“,cxe' apč' r.^ 1 * H;c o n.Z· - CH,	575	A
“V’ H,= CH,	560	B
M)CyCM» Χφ V •f-K H,C CH,	534	C

-249CZ 303213 B6

Λ yj 1 Ύ x°	727	A
=VN *	727	A
jďr$r γΑχν / o xz 1 °ΛΛΛ^λΛ	753	C
^ψίΒ, <\ ° ao	753	a
H^CK, A cm, α Γ ^-í , as ίΑΓ,<ΐ* l 0 ^Sy-01' • ž	745	A
0-, 0 1 ΓΛ ! QS i ll 1 í >0 J ~ ►pWyY S 0 HC Lil L Ά^γ», • ž	7^3	A
λΓΑ * AMy 0 Ό	759	c

-250CZ 303213 B6

ΧΑΧΑ0//1 * f Α-νΧχ ° °0	759	8
	639	8
rpA	639	A
ΡφΡ	554	C
jXA, '-V-· P	610	8
V’ 7 1 » °S	711	A
7	713	A

-251 CZ 303213 B6

AAo° k o 0 %v	713	A
v X	732	A
, ydLUtíCk >γ\Λ γ * Z	733	A
<γ k G	733
;ΥΛγγ 'V’' XZ 1 Δ	737	A
H-xx 0; /4 C O Y^ <H, £*Á ° kx ΟγΝ V °S	667	A
V* Q •4k	612	C

-252CZ 303213 B6

α-t ** ° (Átf^A!Ar<Ao ° Ό	745	C
hA&h XY ας α f Ή /os ^Λ«νγγ o ν' c «AíTyAyyx ‘0	745	c
os oAXfc 1 ’ II 1 Z >OJ ur .-v, W7T\f^<Y*y < o Xj-X “c X-V/v 3 Ό 1	745 1	c
04, JmW — “ ’ó	753	c
Λ XY ί'ίΓοΧ' «z os «ry/Af o	759	c
ΓΗ. o,;Axx “ vAvA • ’ó	759	c
QyO * OS	668	c

-253 CZ 303213 B6

X = =9.	636	B
7¼ oko o ΟγΝ \ X	733	A
ι Gr χ γ 0γ« < V	737	3
ΚχΑ. <Υγ O \ o o H£	626	3
A ° »9t Vy YŠf ^AřTyk XíW\° o	715	C
XY-vSa γ Y °	715	A
^>γΥγ><Λχ k χγ·ν °	69S	6

-254CZ 303213 B6

γ ”	725	Α
X Á 3 ϊ Y 7· ď	781	S
Λ Ύ· X Cfs o Γ ,—-\ CK_ 3 σΧΧΧ'.^-^γ'γΧϊ 0	743 ϊ i	S I
rt£ ~ρ»Γ avXY'; 0 Αγ·ζγ\% ’ Ό	743	C
*Α y-en; Η - ? í*Vý γϊ ++ ’ο-ΜγΑζγγ^ ’ Ό	I 743	Α
«, V +S-CH» .’ οι, ο ι /—: ό. °ΛΛΛ/γ^0 bó	757	Β
<*, ,χχχ <°s ^ΑΑ/Ρ Ζί Ύ· ««A-ÁjA^y-yX, 0 Ό	757	C

-255 CZ 303213 B6

α ΛΛΧχΑ “ Ό	757	B
y/sAi0 \_° ° α X '	715	A
x y s ° y- 0 xTx 7 l	715	A
XjAa V°y*S+o ® η 0 “ • 1	701	C
Ά O θ i[ 1 ζΧ.ΜγΧγ-ΧΛχΤ y/A y 4	701	Λ π
	713	A
Αχ Αδ	739	A

-256CZ 303213 B6

γγγ*. = γ ό	741	C
	715	c
Ý ο χ’	337	3
ΧΥ Xb	751	A
yf	725	i c
	711	c
ý> '	737	A

-257CZ 303213 B6

X	775	A
X. 0 0 V , . ζγΥγΐ<ΛΑ,»< ΗΗ Υ 4 A <	729	A
Λ I 7?’ i QyvXC Λ·νΥ° L° ° A '	729	A
'''X □ G kJ* . 'ΥγΎο4 ή4 °	715	A
jzx ΑΠαλα lu>V T 2‘	775	A
jH	739	A
X-V-prXr 3 -5	713	A

-258CZ 303213 B6

Ύ Q γ X CTS o')_os «Α	719	A
KcY*o ° XX %* CH> α'Ύ HjC	719	A
p Π p . ί V a pA X Y X* os Y-OS H£	719	A
X o oO . χχ	773	A
x . . Q .^XrvSr^^X’ v>v*· ’ S ’ -^=-- ajsyH «*, h.í^-0 *,I='>SC1I,	727	A
„ δνχχέ- 4 X $5 X- 3^í<	727	A
«,€ £*i {P** :JX*. · μ 5 .^„, O^^J* CK1	727	A

-259CZ 303213 B6

v	737	A
°Ai X Ý	809	C
JLvD XA oka = Υ	709	A
Q^,Ň X	769	B
V* 0 /~\ ? G °** Oy+XXv^ v ’ •sp ' Λ,	723	C
£ Φ XáaA&. γ·γ · C 'Ύ	713	A ΛΆ
Ο^γ^ί r	723	A

-260CZ 303213 B6

Ý	723	B
v X	771	C
’v X	741	A
v ι /0 οχιχτΆ'' V 5Pr* o\	725	A
XrVAV	745	A
A	716	A
pr/AA' \	733	A

-261 CZ 303213 B6

Ý’	713	A
γ- σ	753	A
^$yVy-A^. A*·· s· v	726	A
Y' A Ύ	712	A
-^TÝř^^'-'·’· V > X'	771	3
	SQ4	A
.u& XV v y	726	A

-262CZ 303213 B6

y- < α	746	A
Ύ k- σ'	752	A
ΧΧ r \ X < C*.	741	A
^*r*o ’ S · · βγ·*< **> X.	727	A
ySr ϊ^Χ β β e CM, ”*r’ CM,	699	A
XA W*.· S ’ ’ Ογ*' °s σ’	73S	A
Jv^X -í	712	A

-263CZ 303213 B6

X' 61«	! 1 í 698 i 1 i	A
1^ j— O* Λ	1 757 i i	3
. v >Yr'	790 !	A
Y	i 712 I	A
z*s S+X · - ! *' V σ’	í | 722	A
A-tW^A Y a	728	A
V Π n y aV kz\z^* 3 X. 0 C V ’ ' X3	36S	A

-264CZ 303213 B6

<A /A xÝ	785	A
ΑχΑ A v x1	785	A
ofχΆ γ X X'	735	A
ΑχΑ <Y* k X°	735	A
Αχ v * 1 X'	781	A
ΑχΑ A	730	A
x o cXX- v '‘X n,e cm,	S97	C

-265CZ 303213 B6

V .o H4:-< Ηΐ W,	671	C
app-X ΎΥ	780	A
f' <?- 'V	884	A
«<. X	855	A
^<J f^· χγ° γ Sm, ÍH,	757	3
1 J CM, CM,	741	B
Ύ η CsyyA^A Y xT OS	779	e

-266CZ 303213 B6

α-αΆ XLzZ, C < o 0 Y	725	A
v v	787	A
$	7S5	A
4γΧ C^í* P>	737	A
ΑγΆ v xl	737	A
0γ« □ Y	739	A
X c a<x 1 X' __ -_ --	855	A

-267CZ 303213 B6

v X	326	Α
	857	Α
9?	826	Α
X Ο X ί	ί 7S5	Α
X · ·° OYťfX V X“	7S2	Α
ΥαγΧ X χ	799	Α
qA-W-a^ γ χ;	784	Α

-268CZ 303213 B6

χ· . τλ, οΑγ · Ύ' · V	750	Α
Λ Ο —( Ο 0 >Γ Μβ YYŽfV^^Ar1’'5» - Α-Λ ’ Μ	771	Α
.. AxwSA -·>Α ” X Μ·Ώ>Χ Α,,	771	1 Α

-269CZ 303213 B6

•γ^Οι Ύ* χ«, X“ *»«	553	C
X-Á- βγ'*' ‘χ. X	503	3
=Α Á ο :χΛ s X ϋ ξΐ^® 1 α ο°Χ V- ; m-A '«-'Α 1	SG1	C !
Υ> = * ,Í^J ι “ ΐ ϊ *Χ*· β > C^. SX, 0 i η.Χ'Χ'χ Υ’''':*,	=37	a
V* ΓΛ „ H . V* ÍZ • Ά	454	c
YjL·, Yy X S 0 φ Y	512	c
{	538	c

-270CZ 303213 B6

/vW	538	C
χχχ	522	c
ΎΎ^ίψ	495 i	c
44 QyN	522	c
Υϊ4” 1	540	c
A-X© Ab	5S8	c
V . „. AX“ v Sf	480	c

-271 CZ 303213 B6

-272CZ 303213 B6

	407	C
HX CH, χ SYxVH A v hxAck, CH,	3S3	r*
Η * CH, μά z *.
ώ' '	433	c
U - CH, 'V X~\ ° WyÝ” yA	1 41S	c
A γ	534	c
H^V=»S Q !? h A CM,	520	3
y AA <V ) xs	534	c

-273 CZ 303213 B6

οΥγ Υ	520	3
cHH °V* Ητ\/= CH.	550	C
ΥοΥ” χ-'·'' ”’s :·;Υ	526	C
/Λ Μ ? „ ϊΧζΤΌΓ··' ”) Η Ο^χΝ CH; Η,C O ηΗΓ CM,	538	γ*
οΛη Υ	563	3
ν Υ	532	'w
Υ	570	c

-274CZ 303213 B6

-275CZ 303213 B6

CÁČ CH,	520	C
V ΑχΆ·· H,C 5	506	C
w A CH	540	C 1
AA v s O«z	552	c
-•ex“- Ηλ'Χ =*.· ' =M,	548	3
ρτγ^Μ». <\\· <- o 3^yN «je lCMi	480	C
v Y M„X MJC CH,	466	c

-276CZ 303213 B6

Ύ> QCČ ČH,	563	C
-cyCH’ AoA Η,ϋ^γ-ό CH,	554	s
y yXtVX XXo ° X ’ CH,	5C8	6
«γΎ Y 1 H-C^-3 4=\ =W,	482	C
n^CH, dcmtV‘b· V !řr* CH,	4S6	C
HsCy^ aSD' Q^H 1 H'C~Y° HjPT CM,	522	c
Av Xg v	535	c

-277CZ 303213 B6

Χύ «yi k Y	539 1	5
γ X I a ° | Y kx, <*:	563	3
*Y=H> mYyY Y Y CH,	Γ j 557	Z-* k-
a	i 561	c
CH VVJcX /YL-O\ HC 0 ί ’-Υ 1 CX ‘'iii k°J ^/vyV < o °Á\W 0	5S7	c
<X, η X “Ai^cx AxL-Ot 'ΙΙΓ \Λ°Γ ' 0	531	c
YY °/p	495	c

-278CZ 303213 B6

x-V y X	654	B
v Λ„ X I 1 Τ Η ^s+.“ γ V X ÍY	549	C
. . - rx Wí~ fi UJ- „ , Η^Υ,οή, '^-χΥ—Ι Χί$,„ ό	567 i	C
CH. X5 HtLLxh, CA 0 1 ΓΆ 1 <cy ί ι 1 i >°y ΗΡΤ'ί'ιΖνγ r ? 'Λγ»^ 0	581	C
A ,? m Χζϊ-Χϊ^-Ο G^N	654	c
JSya0 *5<a hC CH	626	s
Y	654	A

-279CZ 303213 B6

ΑηΑ V V	535	C
γΥ ° u/ X	535	O
γγΥ	523	C í
Υτ'Χ*-'· AYvV γ	523	c
ΫΧ C<,N CH, A os	561	s
Vy^Ay YyA° v ' X	511	c
ζΥΥγ-Κχ^ ΥϊΑΎ	537	c

-280CZ 303213 B6

T X	654	S
X O 0 ,	654	A
,XV^ Ά»’ s° o »>A -Ά,	1 625	Θ
\°s qSaX 0 aV -AS	652	S
X «.ΡγΥτ“'^ XV <<✓··* OS 1	525	c
V’ i ΫΫ o$	539	c
>s\X XX” ί3γ* «S	549	c

-281 CZ 303213 B6

'VN	641	S
	630	C
7 y, > ^ζΐΤΐ^Ο C^N <% X	653	£
JŽVro <y % x°	653	3
ív/r*“^ X < °	5=3	C
Λ o o Q ^/vsÁr^A-T tYa^° S°	655	c
/,./.^9 x/T	629	c

-282CZ 303213 B6

-283CZ 303213 B6

QyM A x°	641	6
v λ'”’ XX ) 0,1 o	565	C
H,Cv r, ^·9-5Λ 0	579	<*>
Vry^0 )-°	644	c
^JxWrx 1 0 Á	I ££7	I c
c^* k Xi	654	B
λ · -9 y/XX 9T	716	S

-284CZ 303213 B6

χ 0 ’ X	663	3
φ-ΧΧχγ v 1 X	570	A
X ° ° , </S'YS++Yy%i >υ*ο° γ Ο^Ν 11 X	636 j 1 I i 1 1	l I [
X - ° YY+co X	366	c
χ ΟγΌχΧ^ ΧχΖ υ ι X	630	! 5
Ρ 'ΟγγΥ'·^ ΧΑ0° L ο V χ°	531	C
Χ,χ^ χύΧ° υ	563	c

-285CZ 303213 B6

Χφ’ i	537	C
B<XÍ S1 «γ» os sr	575	E
V XY-rScsY»· s° OS OS	591	B
»?Ύ«11 S ° A ( 'S^V'3 Λ^ίΊ • <A	5S6	C
ii o „,ΟγγΧγΥΑ I?Y= ° > ° Ογ* °S 3< • «S	£36	c
'T ^Qy«X«jO χαν γ,/Η ot kaX Xď» «,	535	s
v ř Ογ* OS Sr* OS ~ .. - — .—	563	B

-286CZ 303213 B6

V Δ «.	54“	3
V ΧΑΑ'* (SX··0 ° v	519	C
A™ ΟγΝΗ v ΜΛ- CH	S40	3
í Ay X	546	3
>Yy	646	3
V .r ί 0 Q íS<tv Oy* ->S h,c^^o h.s<T O*í	594	C
ΗχΓ ΧτΎ^* cy* ch.	5S2	B

-287CZ 303213 B6

A/*1 S’ cx, CH,	533	C
,A >γγΧ X X	545	C
• Lc tUTV Λ' 0 Λ	359	B
Yy χΊ	609	A
, ^ΥκΛτ’^ΧΥ ?γΜ y 0 xi	635	S
Χϊ-ΛΆ·· Q^N “ 0 X*	635	8
Aa X*	519	C

-288CZ 303213 B6

Υ γ χ°	621	6
Η,γΚ, ^rvó’ v	521	6
X Ο&Ύ V •X	547 ί	5
α^τ’χΡ' *ΧΝ	573	3
KC ««ι Αχ L L JL ο Ιο 0γ« Χ° Κ· «,	609	Ξ
Αύ Ρ k X4	1 547	5
Υγ-χ ΟγΝ X0	719	S

-289CZ 303213 B6

CWrH v·' Υ	719	C I
χ Qsj-iyřyH.---Αχ >Ao° ° v Y	□53	9
Ηγγ C	597	ο
Y x’	697	Α I
YnY1-' x— i*» Y	619	Β
\s Λ θ ι <^ΥγΥΥ^ρ·, A-Aj = <0 U V 9 χ°	651	C
Υ'ύ y Υ	592	Β

-290CZ 303213 B6

	αΜχ X	587	C
	b/*’ 1 4V v *4/ A	553	ε
A· 41 β AXy^ Ox Q A *αΑ	539	c
MX 1 X	621	c
XA v v 1	519	c . .
Γ-Χ·-' 1 i A	597 1 t	B
AA^““ W·1 \‘ OS A os	549	C

-291CZ 303213 B6

γ ΑΧ'’’ ιΧτ ” η,<τΤ =»>	535	C
A Αγ%ο y Cčft^* Ol, A O<	521	3
V λ 9yA^~ aay S0 °S	519	C
AýA X3	639	I C
XV X v X4	611	c
Axv A ‘ X	l 600	c
Qx^yvy^ Y ¥	595	3

-292CZ 303213 B6

H r CM, X O CH, AA, « k ’ »ř- . o | CH, >—e*, HíS	541	C
X’ H c CX ify i w» ! __.a f CH,	54S	6
^δγγγ— X	£53	C
X α^τγ^σχ v X	sao	3
ppX xS'	559	C
X·	559	j c
cJpX- X 1 x	573	3

-293CZ 303213 B6

	644	C
WA0 S° Λ% i	537	C
YJaY v χ·	1 627	r>
X	609	3
x» i YvYy^-^Y yv v v Y s.· X3	634	3
Y yaa <Y* S x°	650 .	C
X AA Y k X	661	3

-294CZ 303213 B6

Αχ	571	C
A”	661	3
x°	607	3
Aa° χΎ	625	C
-x‘” ΟχΧΡ a>£ CM, H’CY°	575	3
»,SY· ογΧ— ΟγΛ C, HlC O H1C cHi	575	3
X/’ οόΑΑ— γ r° - c ·*ν^β«. ' CM,	575	3

-295CZ 303213 B6

>βχβ“’ r’ M.cY ‘‘«Mi	575	B
'X' · C H ,	559	B
w C CH, 1 y o^ny—· CH, <Z	573	3
·*/*	637	B
Oa^Y	473	C
ΧυίΥ x1	559 .	B
_ Xp Y v Λ,	549	C

-296CZ 303213 B6

x .	587	C
ΟΧ' Υ X'	ks.
χ Τ X	<r	547	c
	547	3
ΟγΓ	Ά. a	573	C
W’ X
X' Υ X		573	c
Ϋ X		607	c
Ογ Ύ Υ X'	Trr^ n» i < ) *· >	595	3

-297CZ 303213 B6

ύ’’	531	3
γ+Ζχ	609	3
ΟίγΥφΧ Ύ < Ο	629	C
γ ι ΫΥΫτ^ ~γχ· γ %	694	C
Ολχίγ^· ď	605	C
qZZxX X	579	C
ΟχχΎγ'^ Ο	627	C

-298CZ 303213 B6

V cy =κ·. CK	563	C
\x ΥΊ ΓιΤΎη γν	571	C
λ, φγ Y X	572	S
ί ^τΫτ^ Y 1	551	C
γ r Y	503	c
ογγ Y f	593	s
CA 7 V	593	c

-299CZ 303213 B6

>»-· ď	613	C
T 1 X	593	8
qAtX c 1	581	C
/7 X * CH,	571	B
“Ύ .= XťX ;aV v > ch/	577	C
k^oS QyvV'^' yy '	615	C
MjC ΓΜ • yOS Ά *£ CM,	571	C

-300CZ 303213 B6

H.-yOS ογΉ HP CH,	571	C
A o A ° v ° KC^-O V οχ	545	c
At n Ή+=° γ a -’ v Sx V «,	633	c
/Ά » ^«Υγ'νΑγ,^:*ΐί, χ-1 C “X *7- O\	525	6
HC°s ο/χςν^ X= αχ	5S7	1 δ
qHY* v C X	647	δ
Yšu, Η’ V	512	c

301CZ 303213 B6

! Γ0*, 1 SX5	575	r· <w
Čkp>	653	c
/X ? ι Ογγχ-'Χ /-^ΟγΚγ^οΟ <° = χ 0 '	521	Λ* K-/
X » ΧΓ·γΧ<^ Ζνγο° k° X 0	565	c
V . ,:Z!' Y kt Y	572	A
V*· οΥΥ''' v GG Hř OS	587	A
A ?
ΥχΑΫ^ v Y, £r°	587	8

-302 CZ 303213 B6

-303CZ 303213 B6

V Oi, CH	600	8
Hl-y-as r> oy μ «4 A	628	A
V*· °A Y *í	556	t 5
aJcrÁř^'·’ -* 1 Λ~ °r·	674	8
*6 sAY y* ®\ X	579	C
Y- - X 'f	637	C
'Y< **	671	c

-304CZ 303213 B6

;Χτ X	533	C
Υ v S X OS	5S7	B
gřY X	601 i	S
Af AAAxxY' xYa ° ~- Qs^< =* x-<°	623	3
Y°S οΰχχ* V s »Vkz’	621	A
<Č^''O	645	C
Vy=»S CpTp Y X F	664	B

- 305 CZ 303213 B6

z\ ο/τ	0 v ®	573	C
X .	559	C
„ «V X í	347	B
h,vcM*	π	1
1 J j li Ογ^ο * v X	* - *; 0 i:m.	651	8
A /	'X	547	C
l cA z -r	ji yT-	561	3
OŽO V A	»	561	S

-306CZ 303213 B6

	546	C
.yk A χ1	545	c
oX-Á—TV Ý Y	533	s
X · QyorÝY^Y γ 1 ¥	531	c
¥	551	c
ν' n ΟγγΆ^ Y ’ \ O	598	s
Sy ¥yA λ	533	c

-307CZ 303213 B6

	567	-- C
- bo	539	C
Yy Ά	519	C
X' r - /γ Y1 V *- «··· A Y Ύ)	708	B
Χγ-ΎΎ Ά	649	c
H^CH, Ύύ^ο ° S 3 Y Y *Ύ3 CK,	561	3
XY v	461	C

-308CZ 303213 B6

	531	C
οΥ/τ'’* ’γγ* Y X1	606	A
QxaXxV^ v X	606	i A
	5S2	A
y ,	666	C
QY^yPy^ Yp · Y Cr	625	3
QpXXxY^ X o	640	5

-309CZ 303213 B6

-310CZ 303213 B6

Y	621	Α
Z'	607	Β
QXnX %χ·* Y> 'U'	627	Β
H,S-*kyAfe 0 0 *γΜ Y, Ό	566	α I
γχχ·' %χ··* Ύ	534	3
V «,	560	C
V*'* α	621	Α

-311 CZ 303213 B6

A	SIS	B
Ks ~J Ύ KC (ΧυΛα^^* χΜ V v Y X	572	A
Ά γχ v ot	547	C
Ύ ΑΛ»° G ÍP? °S	561	C
VyC% XX- v A .	521	C
Ax ύ 1 i xl	620	3
Ax Y	578	e

-312CZ 303213 B6

Za -,Υ Υ Ά	560	A
Χ<Α ν vX	620	A
Α^^Α c/	61S	B
AAA cr	632	c
Α' V	662	B
ΟΧχΧνφΑ A' X 1 z	552	B
z v	590	B

-313CZ 303213 B6

	690	Β
pA'	609	Β
Ύ CpU Ρ . ί L v x 4γΝ Sh.	749	Β
<5ί=*-·'* γ I	648	Α
~ρο<, cp*n~X Ογ U Ί^Γ	783	3
γ Π ΥύΧ'-'Χ Υ- X Α	783	Β
cXróY Υ χ·	634	C

-314CZ 303213 B6

x X	648	C
oJbÁp X k X	634	C
X X	649	C
ΟχπΧ X X	629	c
X ί Jp ΑΧΧχ-- X X'	657	c
X · cAA^ ΑΧ X x°	614	A
ar^Sf Αχ QsyN A x°	702	B

-315CZ 303213 B6

A x· X	702	A
A“ CH,	675	B
A041 </ κ ° ’ cuav i, v > A.3 H- W,	647	3
HAyH, Λ « „ y^xyv4·^'^“’ ΑΛΟ ® v ° a A A O*f °S hX^ch,	563	C
*y«, cYy v A nyo H£ (H,	619	C
X	482	c
'•Τχ Ογ-Ό ’ \ ’	576	c

-316CZ 303213 B6

	617	Θ
γ	651	C
*4 .ý-~.	637	c I
	634	3
fe	635	6
Ογ5> Τγ'^' Y fe	698	B
οιΡΎ' X	605	8

-317CZ 303213 B6

Y’ k A	620	3
ΟχΑτΑ	672	C
A^A A	620	Ξ
r	594	3
ΥγΧ''^· Y 1 A'	606	3
Ύ	530	C
5 V T	532	3

-318CZ 303213 B6

y o	572	5
Ύ	738	A
Υγ X‘	718	8
ΥΥ v Λ-	654	8
YYY' Cy« Y x°	614	σ
ojk+Y Y P	624	S
<Yvy Λ Y cr-	558	3

-319CZ 303213 B6

cJ	633	Β
-χ- . ? “γ” ^“· γ	770	C
χν-φτ·'''··· π,ο^ο M',C CH,	535	C
γγγ. Μ	533	C
γ οΑύ'Ά“'“· **» ϊ :::Υ e»i	577	C
Ύ» ΑΑγΑ5 ° γ □ θ3γΝ CK, Μ-Χ^> η,Ϊ-Α CM,	5S3	Β
<γ* k V Υ	651	Α

-320CZ 303213 B6

ΑγΫχγγ; ^Λ,· γ ’ γ X Ύ Υ	634	Α
X οΥφ-'-· Ύ -<	706	C
χ . 0 γ Α	757	Α
γ®, αΥΥ Ρ Α Α	662	I Á
οΥΧ» γ >, κγ CH,	660	Α
V Α	648	Α
X 0 γ* **> χ°	648	C

-321 CZ 303213 B6

x1	66S	□
χι	618	A
V X	660	3 .
QxaXA 1 Y	601	8
v X	673	3
X ’ v ° X X’	662	A
Ax,^ χΧ X	602	A

-322CZ 303213 B6

OxAo ° hA f ’ SH, γ Y ΜΎ AC CH,	681	A
o V =A >V «S	631	C
·*/&. o > kc^9yVyXT^ ΐΑΧ’ v 5 · XjA OS ί*Χ° Ht CHj	655	c
z\ ° v ’ ·**’ KC CH,	689	6
X ° CuCrYí^Y v Y •χ.	660	A
A	538	C
Ύ$ Ařx Yr	754	A

-323CZ 303213 B6

	815	C
Xr	780	β
χίχ~~' % k	560	c
iM™· X'	602	c
h^ch, ~5W+-+a £5<Ae° k?O 0 ft| CH, ** CH,	625	0
H^OS XXXre %✓ ÓS CH,	685	8
CuW^ u 1 X	537	A

-324CZ 303213 B6

Υ	537	Α
V Ή	601	Α
1 ζ-β ř ο	625	5
χγτότ^ ’ϋχΓ **> 1 χ·	I 601	I Α
C* - xSj ΤΗ Ύ ** σ'	627	δ ι
σΉ~ F	679	Α
%Μγ* X	628	Α

-325CZ 303213 B6

4	557	A
oJXXr— A %	641	A
A CxsA0 * v V HC y	659 i	A
by oJaXr/ V’ ^CK Ά *.C CH,	674	A
X Xf/ryo 0-γ.Ν k, x°	515	3
X cXýyo	641	3
V oXo O^M < x°	641	a

-326CZ 303213 B6

V v	527	A
4'	665	A
ΡΗ“' 1	514	A
HC -Μ οΧΑχο X s*, ΡΡ H.C os	737	□
tS=^,os ° η ° Ύ* ν, V «7« W,	655	A
Α·’ ν 0 <^γ-» S». H,C CM.	660	A
οΧχ^	591	C

-327CZ 303213 B6

γχ ΟγΝ \ χ°	615	C
Vy®* η Ύ· γ γγ 4 * Α	754	3
ν *>=Α	577	C t ι
χΛ· ί' \ φ qJmA 4λ. y S, ν Ύ KC X	694	Α
X 9 5 G ΧΥ V X’	702	Α
Αχ^ X	701	Α
V' χχ Ά H.C «,	546	Β

- 328 CZ 303213 B6

*>CA o Y «.V H.C W,	520	Θ
A -A“’ k A	546	B
«Υ* K.C CM,	723	B
ΗΆ ο/γχ·' ψ* %< X	675	A
Ύ0* cčYXcq X	771	3
Ci Λ f ? ' YÝ°° u Y Sqt	347	I C
ofx Y	641	A

-329CZ 303213 B6

o3Xa y* v X'	613	A
Zr1	631	C
xc	700	A
QyXX A X	569	A
vy Χϊχ Xr	755	8
V** D Xr	786	A
oaXXV^ A* X- ?	669	8

-330CZ 303213 B6

X\	601	Α
Υ X 1	601	Β
ΡίΥ X	683	Α
X	673	Α
ΧΧΧ γ V Η,Ο,Η KYw,	680	Α
ογΥ Υ X	602	Α
X i Οφ'γγτΧ X	735	Α

-331CZ 303213 B6

Y	743	A
tVX. · V · χ- Y X	6Ξ5	3
K£ CM ’X αΥΥγ γ VU Ύ Y CK,	692	A
ΧγΫ «y* Q4' X Y CH,	□39	A
Y- pí A\ o o y* γχγ cy X X/ JV	639	A
ΥΛ0 X	675	A
Y ”'	521	A

-332 CZ 303213 B6

X	668	Λ Λ
x4	642	A
xxY X*	654	A
XX Sy °s X	601	C
V1 XA <y* os os	653	B
χχχ' v xM	541	A
cAa^ x	702	A

- 333 CZ 303213 B6

v T X	7C1	A
’ Ttt °<γ Ss. X’	538	8
cÁX Ϋ X	638	A ΓΛ
X”’ αγγχ X K X	630	A
9x>^· S X’	697	A
ry.XA. (ργΧΥΧΥ^ T ' 1 <Y	521	A
Ζγ! ’ X	608	B

-334CZ 303213 B6

Υ X	es2	A
οΧϋχ yM 041 H,y *,<= CH,	667	3
V ρΤγγΥ'^0·' X° S° y* °*> ' os	520	S
^v-os X/>o O X α OKA »1 γ A W h/: ch,	645	3
K^°S f-fc oXl y “s >Az° K.C CH,	669	C
HY cXý- X Y' ·*<” H£ CH,	575	A
xy >V= os	709	Θ

-335CZ 303213 B6

Υ p k - X X ch,	652	3
VYOS nQvX^ γ-χ 'ό X CM,	714	A
Ύ* V Μ.; , o η Y °t V H,C	561	3
Ύ osCkyv^x £<V= φ V” °s	561	3
Η,Υ» y·* ^7 Y X X	635	B

-336CZ 303213 B6

HaCycH^ A-λ O H Ox oO ° A ° OyNH jC° h3c ch3	580	A
H3Q.CHs Qi nYún'cH! ΟγΝΗ X,	606	i i I 1 A j i i
HjCyCHj CAxNH h3<\I h3ctT ch3	653	i 1 1 1 A i r i i
H3CyCH3 oo Oi^NH CH3 <X,	667	i A

-337-

Claims (17)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Bicyklička sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu viru hepatitidy C, kde tato sloučenina má strukturu:

   \ /

   X

   VX ,NHj včetně všech jejích stereo izomerů, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1, kde tato sloučenina má strukturu:

   ^XY

   NH, io

   Y' /

   ^{H H} I Q ‘‘i-/

   H nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
3. 3. Sloučenina podle nároku 1, kde tato sloučenina má strukturu

   V _u o
4. 4 Y ¹ o nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

   Η Η γ N_ X X O O ° γ nh₂

   -338CZ 303213 B6

   4. Sloučenina podle nároku 1, kde tato sloučenina má strukturu v

   O nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
5. 5. Sloučenina podle nároku 1, kde tato sloučenina má strukturu:

   ZA

   H ,N,

   LJ
6. 6. Sloučenina podle nároku l, kde tato sloučenina má strukturu:
7. 7. Sloučenina podle nároku 1, kde toto sloučenina má strukturu:

   -339CZ 303213 B6
8. 8, Sloučenina podle nároku 1, kde tato sloučenina má strukturu:
9. 9. Směs s inhibiční aktivitou na proteázu viru hepatitidy C, vyznačující se tím, že tato směs obsahuje první sloučeninu podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl se

   5 strukturou

   NH₂ a druhou sloučeninu podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl se strukturou
10. 10. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1 až 8 nebo směs podle nároku 9 a farmaceuticky přijatelný nosič.
11. 11. Použití sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 8 nebo směsi podle nároku 9 pro výrobu léčiva pro léčení infekce virem hepatitidy C.

    15
12. 12. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 8 nebo směs podle nároku 9 pro použití pro léčení infekce virem hepatitidy C.
13. 13. Použití kombinace (i) sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 8 nebo směsi podle nároku 9 a (ii) interferonu nebo antivirové látky pro výrobu léčiva pro léčení infekce virem hepatitidy

    20 C.
14. 14. Použití kombinace (i) sloučeniny podle kteréhokoli z nároků 1 až 8 nebo směsi podle nároku 9, (ii) interferonu a (iii) antivirové látky pro výrobu léčiva pro léčení infekce virem hepatitidy

    -340CZ 303213 B6
15. 15. Použití podle nároku 13 nebo 14, kde uvedená antivirová látka je ribavirin.
16. 16. Použití podle nároku 13 nebo 14, kde uvedený interferon je a-interferon.
17. 17. Použití podle nároku 16, kde uvedený α-interferon je PEG-interferon.