CN101272794B - 含有纤维寡糖的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供含有纤维寡糖的组合物,其中的纤维寡糖组合物以由纤维二糖和选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖所构成的纤维寡糖为主要成分,该纤维寡糖组合物是平均L/D为3.0以下、堆积密度为0.80g/mL以下、安息角为60°以下的粉末。
Description
技术领域
在食品、药品的内服药的领域中,本发明提供用于预防或改善生活习惯病的含有纤维寡糖的组合物,该组合物由于含有调节糖的组成、抑制血中脂联素浓度的降低的纤维寡糖,通过口服能够降低肝脏内中性脂肪和总胆固醇的浓度。本发明还提供一种具有不被肠内的有害细菌同化而选择性地活化有用细菌的肠内细菌活化性的含有纤维寡糖的组合物。本发明还提供一种具有对幽门菌的增殖起抑制或制菌作用的幽门菌抑制性的含有纤维寡糖的组合物。
此外,在化妆品、药品、准药品的领域中,本发明提供具有皮肤屏障功能改善性的含有纤维寡糖的组合物,其保湿效果优异,是用于改善粗糙皮肤、敏感皮肤、干燥皮肤等受损皮肤的外用药,其促进经皮水分蒸散量的恢复,并且使用感觉良好,操作性优异。本发明还提供一种具有不被表皮的有害细菌同化而选择性地活化有用细菌的皮肤正常菌群改善性的含有纤维寡糖的组合物。
进而,关于高流动性的纤维寡糖粉末、含有该纤维寡糖粉末的组合物,在食品、化妆品、药品、准药品的领域中,本发明提供一种高流动性纤维寡糖粉末,其不仅粉体流动性、均匀分散性优异,且保油性也优异,不易吸湿,压缩成型性、耐热耐酸性、淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性等操作性优异。并且,本发明还提供食品/化妆品/药品/准药品,其含有上述纤维寡糖粉末,从而不会出现纤维寡糖的聚集,改善了分散度,压缩成型性和耐热耐酸性优异,防止了淀粉的老化和蛋白质的变性。
背景技术
纤维寡糖是纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖的总称,是1个分子内通过β-1,4键连结1~6个吡喃葡糖单元的低聚糖类。
本说明书中,将除了含有这些纤维寡糖外还含有例如葡萄糖等其他成分的组合物称为“纤维寡糖组合物”。
并且,本说明书中,将含有该“纤维寡糖组合物”作为有效成分并且可以含有其他添加剂等的组合物称为“含有纤维寡糖的组合物”(或“药剂组合物”)。
纤维寡糖难以被人消化吸收,作为低能量甜味剂是有用的,而且,其作为普通食品、功能性食品、化妆品、药品及其添加剂、其他化学转换原料、发酵原料也是有用的(非专利文献1)。
本发明着眼于作为糖尿病、动脉硬化、肝硬化等成人病的主要原因的肝脏内脂质,由于含有具有特定的糖组成的纤维寡糖组合物的组合物具有抑制血中脂联素浓度的降低并降低肝脏内脂质的效果,因而可以用作生活习惯病预防或改善剂。
非专利文献2中公开了在使用含有92.9%的纤维二糖、3.3%的聚合度为3以上的纤维寡糖和3.8%的葡萄糖的纤维寡糖组合物让健康人体(女性)摄取后的热量摄入量和血糖值、血中胰岛素浓度等生物利用性。这些文献只不过是测定了用于确认纤维寡糖组合物消化性的血糖值和胰岛素浓度,并且为了求出精确的热量摄入量而仅进行了对人体的口服给药。并且,该文献中对于纤维寡糖组合物的摄取和肝脏内中性脂肪的浓度完全没有任何记载或启示。因此,该文献与本发明完全不同,本发明是将具有特定的糖组成且血中脂联素的降低率小的纤维寡糖组合物经口摄取,作为具有降低肝脏内中性脂肪的浓度的效果的生活习惯病预防或改善剂来使用。
对于至今为止利用纤维寡糖进行脂质代谢的尝试,有以下的报告。
非专利文献1、3和4中记载了如下内容,使用纤维二糖为85.7质量%、纤维三糖为3.7质量%、葡萄糖为9.3质量%作为糖组成的纤维寡糖组合物,用该纤维寡糖组合物取代高蔗糖食物(蔗糖64.7质量份、酪蛋白25质量份、玉米油5质量份、矿物质4质量份、维生素1质量份、盐酸胆碱0.2质量份和维生素E 0.05质量份)的1质量%或2.5质量%,喂养SD系雄性大鼠4周,文献中记载了喂养的结果。根据该文献的记载,通过摄取具有上述糖组成的纤维寡糖组合物,相对于无添加体系,血清总胆固醇、HDL-胆固醇、甘油三酯以及体脂肪率得到了降低。但是,该文献的纤维寡糖虽然具有血清脂质的降低效果,但肝脏等内脏的重量未发生变化,未发现对内脏脂质也具有降低效果。与此相对,本发明的生活习惯病的预防或改善剂具有特定的糖组成,能抑制血中脂联素浓度的降低,含有纤维寡糖组合物,肝脏内的脂质降低效果优异。因此,与该文献中的具有血清脂质降低性的纤维寡糖完全不同。
此外,专利文献1中记载了一种用于整肠和促进脂质代谢的食品-饲料添加物,该添加物的特征在于其中以1∶2.5~8的配比含有乳酸菌(Lactbacillus rahamnosus)菌体和纤维二糖。该文献中记载了以纤维二糖取代10质量%的基本食物(酪蛋白20.0份、DL-蛋氨酸(メオチニン)0.3质量份、矿物质3.5质量份、维生素1.0质量份、大豆油7.0质量份)来喂养Wister系雄性大鼠14天后的结果。根据该文献,与未添加的体系相比,单独添加纤维二糖的体系在血清、内脏的脂质代谢方面并无效果,合用纤维二糖和上述乳酸菌后才使上述脂质量降低。因此该专利文献中的添加物与本发明有本质上的不同,本发明的生活习惯病预防或改善剂含有对糖组成进行了高度调节的纤维寡糖,仅凭纤维寡糖就能降低肝脏内的脂肪量。并且,由于该文献中的脂质代谢促进食物需要同时摄取纤维二糖和活菌,制成制剂时活菌的稳定性差,存在到服用时效果会降低很多的问题。
因此,以具有特定的糖组成、抑制血中脂联素浓度的降低且为胰岛素非上升性的纤维寡糖组合物作为有效成分且通过服用可降低肝脏内脂质的生活习惯病预防或改善剂在过去是未知的。
下面,对本发明的纤维寡糖组合物或本发明的含有纤维寡糖的组合物对肠内细菌群的活化进行说明。近年来,人们开始知道肠内细菌群与人体健康密切相关。例如,双尾菌和乳酸菌等是给人体带来健康的有用细菌,由于其随着年龄的增长会在体内减少,因此人们尝试着用益生元(prebiotics,肠内细菌的营养源,具有增加肠内细菌的作用)等功能性食品来改善肠内细菌群(肠内菌群),现有用来增殖双尾菌、乳酸菌的功能性食品较多。
特别地,作为上述益生元,仅活化肠内的有用细菌而不活化有害细菌的这种选择活化性越高则效率越好。例如,作为已有的尝试,有活化有用细菌而对作为肠内有害细菌的产气荚膜梭菌(即Clostridiumperfringens)的增殖起抑制作用的益生元。
在上述增加双尾菌和乳酸菌并抑制产气荚膜梭菌的尝试中,关于β键合寡糖有如下记载。
专利文献2中,记载了以由β-葡糖苷键构成的葡萄糖寡糖和/或其还原物为有效成分的肠内菌群改善物质。该文献中记载的葡萄糖寡糖是从纤维二糖、槐糖、昆布二糖、龙胆二糖、龙胆寡糖基-D-葡萄糖(龙胆寡糖基:gentiooligosyl)中选出的1种或2种以上的寡糖。该寡糖确实具有促进双尾菌和乳酸菌等有用细菌的增殖、抑制产气荚膜梭菌的增殖的效果。
但是,其存在使产气荚膜梭菌以外的有害细菌即脆弱拟杆菌(Bacteroides Fragilis)和产气真杆菌(Eubacterium Aerofaciens)等大量增加的问题。需要说明的是,脆弱拟杆菌、产气真杆菌是厌氧性无芽胞革兰氏阴性杆菌,是通过与好氧性细菌混合感染的形式引起各种脓肿形成性感染症、菌血症等的有害细菌。上述文献中的肠内菌群改善剂与本发明的肠内细菌活化剂完全不同,本发明的肠内细菌活化剂增加双尾菌、乳酸菌等有用细菌,抑制作为有害细菌的脆弱拟杆菌、产气真杆菌的增加。因此,将纤维寡糖的糖组成调节至特定的范围,增加双尾菌、乳酸菌等有用细菌并抑制作为有害细菌的脆弱拟杆菌、产气真杆菌的增加的肠内细菌活化剂在过去是完全未知的。
下面,对本发明的纤维寡糖组合物或含有纤维寡糖的组合物对幽门菌的抑制或制菌作用进行说明。幽门菌(幽门螺杆菌、或者HelicobacterPylori)是革兰氏阴性的微好氧性杆菌。据认为,幽门菌利用其所具有的脲酶活性将脲分解成氨水,从而中和胃酸而在胃内的强酸性环境中生存。已经表明,通过该幽门菌产生的氨水给胃粘膜带来障碍,与胃炎、胃溃疡、胃癌、淋巴瘤等胃疾病相关,人们认识到,对幽门菌的抑制和制菌是对这些疾病有效的预防或改善方法。
作为现有的幽门菌的抑制方法,人们尝试了抗生素的给药。该方法的确具有抑制幽门菌的效果。但是其存在的问题是抗生素的抑制作用不仅针对幽门菌而且会影响到对人体有用的肠内细菌。并且,还存在作为副作用会引起腹泻等会对人体产生不小的影响的问题。因此,需要一种对人体安全且能选择性地作用于幽门菌的抑制剂。作为现有技术,以糖类为有效成分的幽门菌的预防剂如下所示。
专利文献3中公开了一种以岩藻依聚糖为有效成分的抗肿瘤药。该文献的抗肿瘤药利用岩藻依聚糖对幽门菌向胃壁的附着的阻断作用,具有预防幽门菌感染的效果。与此相对,以本发明的纤维寡糖为有效成分的幽门菌抑制剂与幽门菌向胃壁的附着无关,而是直接抑制幽门菌,不仅具有预防效果,还有改善效果,因而本发明与该文献的预防剂完全不同。
本发明的幽门菌抑制或制菌剂是含有具有特定的糖组成的纤维寡糖组合物为有效成分的组合物,该组合物通过口服抑制幽门螺杆菌的增加,对人体安全,这在过去是未知的。
下面,对本发明的纤维寡糖组合物或本发明的含有纤维寡糖的组合物对皮肤屏障功能的改善性进行说明。人类的皮肤中,角质层起到生物体与外界环境的屏障(barrier)的作用。皮肤的屏障功能与皮肤的经皮水分蒸散量密切相关,抑制该经皮水分蒸散在皮肤的柔软性、保湿方面来说是重要的(参见非专利文献5、6)。至今为止,有以糖类或寡糖类为有效成分、着眼于角质层片层结构的再生的发明。
专利文献4中记载了含有葡萄糖和/或棉子糖的皮肤角质层细胞中的片层结构再生剂、以及以含有葡萄糖和低聚糖类为特征的皮肤角质层细胞中的片层结构再生剂。
该文献中记载了一种外用药,作为片层结构再生剂,其含有葡萄糖作为必要成分,并含有选自由棉子糖、蜜二糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、龙胆三糖、水苏糖以及环糊精组成的组中的1种以上的糖作为低聚糖类。根据该文献的记载,棉子糖、蜜二糖、海藻糖、蔗糖以及环糊精确实具有片层结构的再生效果,并且,通过合用葡萄糖和棉子糖,具有降低“发粘”的效果。但是,该文献中没有关于含有纤维二糖的上述纤维寡糖类对经皮水分蒸散量的恢复的记载。特别地,对于纤维寡糖来说,即使不含有葡萄糖其使用感也优异、并且在经皮水分蒸散量的恢复促进方面优异、使皮肤屏障功能得到改善这样的内容是完全未知的。并且,对于该文献中的片层结构改善剂,相对于棉子糖或低聚糖类,需要大量含有多达7.4摩尔%以上的葡萄糖,因而在与氨基酸、蛋白质等含有氨基的成分合用并经过加热工序时,由于美拉德反应而褐变/变色,从而存在商品价值显著降低的问题。本发明即使不以葡萄糖为必需成分,也少有“发粘”、褐变,能够改善皮肤的屏障功能,从这一点来说,与上述发明有本质上的不同。因此,像本发明那样的皮肤屏障功能改善剂以具有特定范围的纤维二糖含量的纤维寡糖为有效成分,即使不合用葡萄糖其使用感也良好、褐变较少,且促进经皮水分蒸散量的恢复,这在过去是未知的。
下面,对本发明的纤维寡糖或含有纤维寡糖的组合物对皮肤正常菌群的改善性进行说明。
健康人的皮肤受到有益的皮肤正常菌的保护,这种皮肤正常菌具有维持表皮的pH为弱酸性和提高抵抗力的作用。但是,对于具有干燥皮肤、特应性皮炎等容易受伤的皮肤的人群,作为有害细菌的金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌由皮肤表面上的伤口感染内部,导致人体的皮肤状态进一步受损。即使是不易发现的小伤口,只要内部的组织暴露在外,金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌就会附着在上面,以渗出的体液为食物来进行增殖。据说特应性皮炎的人的皮肤中实际上会检测出大量的金黄色葡萄球菌数。因此,在人的皮肤上维持皮肤有益菌的菌数,同时抑制作为有害菌的金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌的菌数,这一点是非常重要的。
此外,同样是皮肤,毛发丛生的头皮与其他部位相比,存在大量的皮肤正常菌,其生存数的平衡也是重要的,并且,在感官方面,赋予作为干燥时头发的触感的干爽感和光滑感也是重要的。
已经公开了很多对于金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌具有制菌作用的药物或化妆品原料成分。其中有含有N-酰基谷氨酸的清洗剂(专利文献5)、含有铁结合型乳铁蛋白制剂(专利文献6)、各种植物提取物(专利文献7、8、9、10、11)等。但是,由于这些对同样属于葡萄球菌属的有益的皮肤正常菌也具有同等以上的制菌作用,而不能成为皮肤正常菌群改善剂。
并且,有文献公开了通过混合卤水和迷迭香提取物或甘草提取物来调整皮肤正常菌群的生存数的平衡的调整剂(专利文献12),但其效果不充分,没有关于针对绿脓杆菌的制菌性的记载,并且也不能赋予作为干燥时的触感的干爽感和光滑感,而且价格还高,在现实中非常难以使用。
进而有文献公开了含有低聚异麦芽糖的皮肤正常菌群改善剂(专利文献13)。根据该文献,含有低聚异麦芽糖和/或通过还原低聚异麦芽糖所得到的糖醇的皮肤正常菌群改善剂在特定的pH和添加量范围中具有不作用于表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)而抑制金黄色葡萄球菌的效果。但是,如本申请的比较例所示,在能够获得皮肤保湿性的改善和化妆水触感的改善等的高糖质添加量的范围中,其效果变得不充分。并且,该文献中没有关于针对绿脓杆菌的制菌性的记载,并且也不能赋予作为干燥时的触感的干爽感和光滑感。
因此,该文献的皮肤细菌群改善剂与本发明的皮肤正常菌群改善剂根本不同,本发明的皮肤正常菌群改善剂对作为皮肤有益菌的表皮葡萄球菌不显示制菌作用,而对作为有害菌的金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和作为有害菌的绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)显示制菌作用或增殖抑制作用,并且能够赋予作为干燥时的触感的干爽感和光滑感。
最后,对本发明的高流动性纤维寡糖粉末进行说明,该高流动性纤维寡糖粉末不仅粉体流动性、均匀分散性优异,保油性也优异,不易吸湿,压缩成型性、耐热耐酸性、淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性等操作性优异。
专利文献14中记载了以纤维二糖为主要成分、含有聚合度为2~7的纤维寡糖作为赋形剂的固体制剂。对于该纤维寡糖赋形剂,的确,其水分活性等同于蔗糖,作为低能量的甜味剂是有用的,但根据该专利文献,将通过纤维素的酶分解所得到的纤维寡糖溶液粉末化时要经过冷冻干燥,而纤维寡糖粉末为轻质,粉体流动性未必能够满足条件。并且,该专利文献中对于纤维寡糖粉末的结晶形态、粉体流动性、均匀分散度等操作性方面的内容既没有记载也没有启示,与本发明这种对纤维寡糖的结晶形态和粉体物性进行了高度调节、粉体流动性优异、均匀分散性得到提高的纤维寡糖粉末有本质上的不同。
非专利文献3、4中记载了一种如下得到的纤维寡糖粉末:对亚硫酸盐浆粕(sulphite pulp)进行酶解,对所得到的纤维寡糖溶液进行超滤,用硅藻土、离子交换树脂进行精制后,利用乙醇和异丙醇结晶化,从而得到纤维寡糖粉末。但是,该文献中利用不良溶剂进行的结晶化处理仅仅是为了提高纤维二糖的纯度,对纤维寡糖的结晶形态没有任何记载,其与本发明这种用于提高纤维寡糖粉末的粉体流动性、均匀分散性的对结晶形态和粉体物性进行调节的技术截然不同。
因此,像本发明这种对纤维寡糖的糖组成和结晶形态进行了高度调节、不仅粉体流动性和均匀分散性优异且保油性也优异、不易吸湿、并且压缩成型性、耐热耐酸性、淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性等操作性优异的高流动性纤维寡糖粉末以及该粉末的制造方法在过去是未知的。
非专利文献1:木材化学的最新技术(ウツドケミカルズの最新技術),CMC出版发行,66-72(2000)
非专利文献2:Nutrition,20,979-983(2004)
非专利文献3:日本营养-粮食学会会刊(日本栄養·食糧学会誌),49,No3,143-148(1998)
非专利文献4:Cellulose Communications,5,No2,91-97(1998)
非专利文献5:《化妆品的有用性评价技术的进步与未来展望(化粧品の有用性 評価技術の進步と将来展望)》药事日报社发行,82-101(2001)
非专利文献6:《功能性化妆品(機能性化粧品)》日本化妆品科学会编,株式会社ジスク发行,235-252(1991)
专利文献1:日本特开2004-321068号公报
专利文献2:日本特开平3-262460号公报
专利文献3:日本特开平7-138166号公报
专利文献4:日本特开2006-45186号公报
专利文献5:日本特开平11-80781号公报
专利文献6:日本特开平11-279076号公报
专利文献7:日本特开平6-116162号公报
专利文献8:日本特开平8-73368号公报
专利文献9:日本特开平8-73372号公报
专利文献10:日本特开平11-43443号公报
专利文献11:日本特开2001-226280号公报
专利文献12:日本特开2005-139075号公报
专利文献13:日本特开2005-89355号公报
专利文献14:日本特开昭62-273921号公报
发明内容
本发明的目的在于提供一种高流动性纤维寡糖组合物,该组合物通过进行口服,对肝脏内的脂质代谢性优异,选择性地活化肠内的有用细菌,对幽门菌的增殖具有抑制或制菌作用;并且该组合物通过透皮涂布,提高皮肤的屏障功能,改善皮肤正常菌群;进而,该组合物对糖组成和结晶形态进行高度调节,不仅粉体流动性、均匀分散性优异,其保油性也优异,不易吸湿,压缩成型性、耐热耐酸性、淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性等操作性也优异。
本发明人发现,对于将糖组成和/或结晶形态调节至特定范围的纤维寡糖,其通过口服对肝脏内的脂质代谢性优异,选择性地活化肠内的有用细菌,对幽门菌的增殖具有抑制或制菌作用;并且通过透皮涂布提高皮肤的屏障功能,改善皮肤正常菌群,进而,不仅粉体流动性、均匀分散性优异,其保油性也优异,不易吸湿,压缩成型性、耐热耐酸性、淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性等操作性也优异,基于这些发现完成了本发明。
即,本发明的技术方案如下。
(1)一种纤维寡糖组合物,该组合物以由纤维二糖和选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖所构成的纤维寡糖为主要成分,其是平均L/D为3.0以下、堆积密度为0.80g/mL以下、安息角为60°以下的粉末。
(2)如(1)所述的纤维寡糖组合物,其中,其平均L/D为2.5以下,堆积密度为0.55g/mL以下。
(3)如(1)或(2)所述的纤维寡糖组合物,其中,其安息角为45°以下。
(4)如(1)~(3)任意一项所述的纤维寡糖组合物,其中,其保油量为0.9g/g以上。
(5)(1)~(4)任意一项所述的纤维寡糖组合物,其中,将该组合物在相对湿度为75%、40℃的环境下放置18小时后的吸湿度为1质量%以下。
(6)如(1)~(5)任意一项所述的纤维寡糖组合物,将200mg所述组合物利用Φ8.0mm的圆形平面臼杵以10kN进行压缩后所形成的成型体的硬度为60N以上。
(7)如(1)~(6)任意一项所述的纤维寡糖组合物,其中,将所述组合物以100℃以上、pH7以下的条件加热处理10分钟以上之后,纤维寡糖的残存率为90%以上。
(8)如(1)~(7)任意一项所述的纤维寡糖组合物,其中,纤维二糖的含量为70质量%以上,选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0~30质量%。
(9)如(8)所述的纤维寡糖组合物,其中,所述组合物含有相对于纤维寡糖为9质量%以下的葡萄糖。
(10)如(8)或(9)所述的纤维寡糖组合物,其中,纤维二糖的含量为90质量%以上,选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0.1~10质量%,葡萄糖的含量为3.5质量%以下。
(11)如(10)所述的纤维寡糖组合物,其中,纤维二糖的含量为95质量%以上,选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0.5~5质量%,葡萄糖的含量为3.5质量%以下。
(12)如(11)所述的纤维寡糖组合物,其中,葡萄糖为2质量%以下。
(13)一种纤维寡糖组合物,该组合物为在水或水/有机溶剂的混合液中分散或溶解有纤维寡糖的纤维寡糖组合物,所述纤维寡糖中,纤维二糖的含量为50质量%以上,选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0~50质量%。
(14)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作生活习惯病的预防剂或改善剂,口服该组合物所致的血中脂联素浓度的降低率被抑制在30%以下。
(15)如(14)所述的含有纤维寡糖的组合物,其中,口服该组合物所致的肝脏内的中性脂肪浓度的降低率为15%以上。
(16)如(14)或(15)所述的含有纤维寡糖的组合物,其中,口服该组合物所致的血中脂联素浓度的降低率被抑制在25%以下。
(17)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作肠内细菌群的活化剂,具有被肠内有用细菌同化而不被肠内有害细菌同化的肠内细菌群的活化性,使作为肠内有用细菌的选自由青春双歧杆菌(BifidobacteriumAdolescentis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium Breve)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus Acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus Casei)以及加氏乳杆菌(Lactobacillus Gasseri)组成的组中的1种以上的细菌增加,并抑制作为肠内有害细菌的脆弱拟杆菌或产气真杆菌的增加。
(18)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作肠内细菌群活化剂,具有被肠内有用细菌同化而不被肠内有害细菌同化的肠内细菌群的活化性,抑制作为肠内有害细菌的产气荚膜梭菌的增加。
(19)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作幽门菌的增加抑制剂或制菌剂,对于幽门螺杆菌的增加抑制率为1%以上。
(20)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作骨中钙浓度增强剂,通过与钙一起口服使大腿骨中的钙浓度增加率为5%以上。
(21)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作皮肤屏障功能改善剂,通过涂布在皮肤上使经皮水分蒸散量的恢复促进率为10%以上。
(22)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作皮肤正常菌群改善剂,所述有效成分对表皮葡萄球菌没有制菌作用、对金黄色葡萄球菌以及绿脓杆菌具有制菌作用。
(23)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作淀粉抗老化剂,在与淀粉共存的条件下进行保存时,淀粉老化率为20%以下。
(24)一种含有纤维寡糖的组合物,其含有(1)~(13)任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作蛋白质变性防止剂,在与蛋白质共存的条件下进行保存时,蛋白质变性率为10%以下。
(25)如(14)~(24)任意一项所述的含有纤维寡糖的组合物,其为颗粒、成型体、水溶液、水分散体、糊状或凝胶状,所述纤维寡糖组合物包含在从食品材料、化妆品材料、药品药效成分、或它们所使用的添加物中选出的1种以上的构成成分中。
(26)如(25)所述的含有纤维寡糖的组合物,其中,所述水溶液、水分散体、糊状、或凝胶状的含有纤维寡糖的组合物含有表面活性剂、增稠剂或胶凝剂中的任意1种以上。
(27)一种含有纤维寡糖的食品,其含有(25)或(26)所述的含有纤维寡糖的组合物。
(28)一种含有纤维寡糖的化妆品,其含有(25)或(26)所述的含有纤维寡糖的组合物。
(29)一种含有纤维寡糖的药品,其含有(25)或(26)所述的含有纤维寡糖的组合物。
(30)一种含有纤维寡糖的准药品,其含有(25)或(26)所述的含有纤维寡糖的组合物。
本发明的纤维寡糖组合物或本发明的含有纤维寡糖的组合物口服后会提高肝脏内的脂质代谢性,选择性地活化肠内的有用细菌,对幽门菌的增殖起到抑制或制菌作用,并且能够通过透皮涂布提高皮肤的屏障功能,改善皮肤正常菌群。
此外,对于本发明的纤维寡糖组合物的糖组成和结晶形态得到高度的调节,不仅粉体流动性、均匀分散性优异,保油性也优异,不易吸湿,压缩成型性、耐热耐酸性、淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性优异,与各种添加物合用制成组合物时,能够获得操作性优异的食品、化妆品、药品和准药品。
附图说明
图1是在实施例18中对添加纤维寡糖和不添加纤维寡糖的情况下的培养时间与活菌数的关系进行比较的曲线图。
具体实施方式
对于本发明,特别围绕其优选方式如下进行具体说明。
本发明的纤维寡糖组合物需要以由纤维二糖和选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖构成的纤维寡糖为主要成分。此处所说的主要成分表示纤维寡糖组合物中含有50质量%以上的上述纤维寡糖。由于本发明的纤维寡糖组合物以纤维寡糖为主要成分,从而能够获得在肝脏内的脂质代谢性、对肠内有用细菌的选择性活化性、对幽门菌的增殖抑制或制菌性方面优异的含有纤维寡糖的组合物。并且,由于本发明的纤维寡糖组合物以纤维寡糖为主要成分,从而能够获得在皮肤的屏障功能改善性、皮肤正常菌群的改善性方面优异的含有纤维寡糖的组合物。
并且,由于本发明的纤维寡糖组合物以纤维寡糖为主要成分,从而使结晶形态得到高度调节,不仅粉体流动性、均匀分散性优异,保油性也优异,不易吸湿,压缩成型性、耐热耐酸性也优异。
进而,由于本发明的纤维寡糖组合物以纤维寡糖为主要成分,从而成为淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性优异的纤维寡糖组合物或含有纤维寡糖的组合物,因而在与各种添加物合用制成组合物时,能够得到操作性优异的含有纤维寡糖的组合物、或含有纤维寡糖的食品、化妆品、药品、准药品。
本发明的纤维寡糖组合物的平均L/D为3.0以下。平均L/D与纤维寡糖组合物的粉体流动性密切相关。通过以平均L/D为3.0以下的纤维寡糖组合物作为粉末的构成成分,能够得到粉体流动性优异的粉末。此处所说的平均L/D是该纤维寡糖组合物的长径/短径的比的平均值,其如下进行表示:将纤维寡糖组合物分散在乙醇中,利用显微镜(KEYENCE株式会社制造,商品名VH-7000型)拍摄放大倍数为500倍的图像,利用图像解析装置(商品名Image Hyper)测定长径为50~100μm的结晶的长径/短径的比,以50个以上试样的数均值来表示平均L/D。该平均L/D优选为2.5以下,更优选为2.2以下,特别优选为1.8以下。平均L/D越小,纤维寡糖组合物的流动性越好而越优选,对其下限没有特别限制,作为通常得到的平均L/D的范围为1.0以上。
本发明的纤维寡糖组合物的堆积密度为0.80g/mL以下。纤维寡糖组合物的堆积密度在上述范围时,不仅上述粉体流动性良好,压缩成型性也良好。此处所说的堆积密度是以利用二重圆筒法(测定表观比容的方法,利用定量加料器,用1分钟的时间将5.0g试样粉体松散地填充进100mL的量筒中,用毛笔状的刷毛将粉体层上面扫平,用该容积除以试样质量,测定表观比容)得到的表观比容的倒数表示的。堆积密度优选为0.55g/mL以下,更优选为0.50g/mL以下,特别优选为0.45g/mL以下,作为粉体流动性优异的纤维寡糖组合物的堆积密度的下限,优选为0.05g/mL以上,更优选为0.20g/mL以,特别优选为0.30g/mL以上。
本发明的纤维寡糖组合物的安息角为60°以下。该安息角是表示粉体流动性的指标。安息角为60°以下时,纤维寡糖组合物的流动性优异,从而使该纤维寡糖组合物与纤维寡糖以外的构成成分混合并制剂化时的均匀分散性得到提高。并且,将该纤维寡糖组合物成型时,会降低在成型机中填充时填充量的不均匀程度,因而优选。此处所说的安息角是将粉体在杉原式安息角测定器中以15g/分钟的恒定速度流动时的动态安息角。安息角更优选为55°以下,特别优选为45°以下。安息角越小就越能够获得上述效果,因而对其下限不特别限制,但作为能够通过简单的操作获得的范围,为10°以上。
本发明的纤维寡糖组合物优选为纤维寡糖结晶和/或该纤维寡糖结晶的造粒体。对于此处所说的结晶,是指利用粉末广角X射线衍射法(理学电机株式会社制造,商品名Rotaflex RU-300)测定纤维寡糖组合物来得到衍射图案,在得到的衍射图案中可确认纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖等纤维寡糖的结晶衍射的结晶,对于衍射强度和结晶度没有特别限制。并且,此处所说的造粒体是2个以上的上述纤维寡糖结晶通过物理/化学的方法结合而成的造粒物。对于该粉末广角X射线衍射测定中所用的纤维寡糖组合物来说,干燥状态下,可以用公知的方法进行粉末化后进行测定,湿润状态下,可以利用公知的方法干燥后进行粉末化,然后进行测定。
本发明的纤维寡糖组合物优选平均粒径为5~1000μm。平均粒径与纤维寡糖组合物的粉体流动性、混合均匀性相关,平均粒径为5~1000μm时,将纤维寡糖组合物与其他成分混合并制剂化时的混合均匀性得到提高,所以是优选的。此处所说的平均粒径如下表示:使用Roll&Tap式振动筛(平工作所株式会社制造,商品名Sieve ShakerA型)、JIS标准筛(产品编号Z8801-1987)对10g试样进行20分钟筛分,由此测定质量频率粒度分布,将累积质量50%的粒径表示为平均粒径。为了获得上述混合均匀性等效果,更优选平均粒径为10~500μm,特别优选为20~400μm。
本发明的纤维寡糖组合物的成型体硬度优选为60N以上。此处所说的成型体硬度是指,在单独使用纤维寡糖组合物或是将纤维寡糖组合物与其他成分混合并于加压下制成成型体的操作中,对成型体赋予力学强度的性质;其如下进行表示:将200mg本发明的纤维寡糖组合物填充到Φ8.0mm的钢制圆柱状臼中,使用Φ8.0mm的钢制平面杵以10kN的压缩力加压10秒,将所得到的圆柱状成型体在去除压力(抜圧)后放置2小时,使用硬度计(Freund产业株式会社制造,商品名シユロィンゲル6D型)向成型体的直径方向施加负荷,读出毁坏时的负荷,以3个试样的平均值来表示该硬度。为了使单独的纤维寡糖组合物或纤维寡糖组合物与其他成分的组合物具有充分的压缩成型性,上述成型体硬度更优选为75N以上,特别优选为100N以上。
本发明的纤维寡糖组合物的保油量优选为0.9g/g以上。此处所说的保油量是指,将2g纤维寡糖组合物置于玻璃板上,一边用移液管滴加菜籽油(日清制,油料菜籽油(キャノ一ラ油)),一边用刮勺搅拌,以粉体表面渗出油分的时刻为终点,将测定得到的由粉末状至该终点的过程中1g粉末的吸油量设为保油量,以保油量(g/g)=吸油量(g)/纤维寡糖组合物量(g)来表示保油量。该值越大,则在含有油分的配方或是常温下含有半固形、液态物的配方中,在制造食品、化妆品、药品、准药品时,越能够防止油分或半固形、液态物的分离和渗出,因而是优选的。更优选的范围是1.0g/g以上,特别优选为1.1g/g以上。
作为本发明的纤维寡糖组合物的耐热耐酸性,优选在100℃以上、pH7以下的条件下加热1分钟以上后的残存率为90%以上。该残存率高时,作为有效成分的纤维寡糖即使在酸性下受到加热处理也会残留在组合物中,在加热后也会维持上述纤维寡糖的效果,因而是优选的。该耐热耐酸性是加热处理后的纤维二糖残存率,用以下的方法表示。将本发明的纤维寡糖组合物以1质量%溶解于pH为3的0.1M乙酸/乙酸钠缓冲液中,密封后于120℃加热20分钟,利用上述的高效液相色谱法对加热后的水溶液进行测定,由加热前后的纤维二糖浓度计算残存率(加热后的纤维二糖浓度/加热前的纤维二糖浓度×100%)。更优选该残存率为95%以上,特别优选为97.5%以上。
下面对本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的含有纤维寡糖的组合物进行说明。
本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的纤维寡糖组合物优选含有70质量%以上的纤维二糖。纤维二糖含量越高,纤维寡糖组合物的水溶解度越高,服用时的生物利用率也越高,因而是优选的。该纤维二糖含量更优选为86质量%以上,进一步优选为90质量%以上,特别优选为95质量%以上。
本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的纤维寡糖组合物中的选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖的含量优选为0~30质量%。通过含有这些糖来提高降低肝脏脂质的效果。但是若其含量过高时会降低溶解度,使上述生物利用率降低。因此,该含量需要满足上述范围。更优选的范围是0.1~14质量%,进一步优选0.1~10质量%,进而更优选0.1~5质量%,特别优选0.5~5质量%。
本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的纤维寡糖组合物中的葡萄糖含量优选为9质量%以下。葡萄糖含量低时能够抑制血中胰岛素浓度的上升,尤其可以提高肝脏内的脂质代谢。葡萄糖含量优选为3.8质量%以下,更优选为3.5质量%以下,特别优选为2质量%以下。由于葡萄糖含量越低上述效果越大,所以对其下限值没有特别限制。
下面对本发明的生活习惯病的预防或改善剂中各种纤维寡糖和葡萄糖含量的分析方法进行介绍。将本发明的纤维寡糖组合物以1质量%的浓度溶解在纯水中后,可以利用高效液相色谱法(色谱系统:岛津制作所制造,商品名SCL-10A;柱:岛津制作所制造,商品名Asahipak NH2P-50;流动相:乙腈或水=75/25(容积比))进行分析。对于纤维寡糖的糖组成,对利用上述方法得到的色谱图中纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖的峰面积进行质量换算,以各自在总质量中所占的质量百分率表示所述糖组成。葡萄糖的含量也以相同方法求出,以葡萄糖的质量相对于由纤维二糖和葡萄糖的峰面积求出的总质量的百分率来表示葡萄糖含量。
对于本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的含有纤维寡糖的组合物,优选其口服时血中脂联素浓度的降低率为30%以下。血中脂联素浓度是脂质代谢异常的指标,其降低率小时不会引起糖尿病、动脉硬化等生活习惯病,因而优选。此处所说的血中脂联素浓度是使用血液利用ELISA法(大塚制药制,血中脂联素ELISA试剂盒)测定出的脂联素浓度(μg/mL-血液)。其降低率通过利用摄入和未摄入含有纤维寡糖的组合物的血液测定出的脂联素浓度以下式求出。降低率(%)=((未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)-(摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度))/(未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)(%)。脂联素降低率越小,上述效果越强,因而更优选为25%以下。
本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的含有纤维寡糖的组合物优选使肝脏内中性脂肪浓度的降低率为15%以上。该肝脏内中性脂肪浓度的降低率越高,对糖尿病、动脉硬化、肝衰、肝硬化等生活习惯病的预防/改善效果越高。此处所说的中性脂肪浓度是指每单位重量的肝脏中存在的中性脂肪量(mg/g湿肝重)。其降低率通过摄入和未摄入纤维寡糖的肝脏内的中性脂肪浓度以下式求出。
降低率(%)=((未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)-(摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度))/(未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)(%)。中性脂肪浓度的降低率越大,上述效果越大。因而更优选为20%以上。
本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的含有纤维寡糖的组合物优选使肝脏内总胆固醇浓度的降低率为10%以上。该肝脏内总胆固醇的降低率越高,则对糖尿病、动脉硬化、肝衰、肝硬化等生活习惯病的预防/改善效果越高。此处所说的总胆固醇浓度与上述中性脂肪浓度相同,也是指每单位重量的肝脏中存在的总胆固醇量(mg/g湿肝重)。其降低率通过摄入和未摄入纤维寡糖的肝脏内的总胆固醇浓度以下式求出。降低率(%)=((未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)-(摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度))/(未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)(%)。总胆固醇浓度的降低率越大,则上述效果越大。因而更优选为15%以上。
本发明的用作生活习惯病的预防剂或改善剂的含有纤维寡糖的组合物优选为胰岛素非上升性。胰岛素非上升性是指口服含有纤维寡糖的组合物后血中的胰岛素浓度相对于口服前的胰岛素浓度没有上升,其通过以下方法测定。对出生后7周龄的SD大鼠进行1个星期的预备喂养,令其自由摄入1个星期的AIN-93G(Oriental酵母工业制造),然后使其绝食16小时,接着使用导管给予1500mg/kg表1中的各纤维寡糖水溶液。在给药前和给药后、以及给药30分钟后,在无麻醉状态下由骸外静脉采血,测定胰岛素浓度(ng/mL,使用Shibayagi生产的Lbis胰岛素试剂盒)。此处所说的胰岛素非上升性是指上述胰岛素浓度的上升率为30%以下。更优选胰岛素浓度的上升率为25%以下,特别优选为20%以下。
本发明中的生活习惯病预防是指,通过口服以本发明的纤维寡糖组合物为有效成分的预防剂,即使在摄入高糖、高脂肪、高热量等的食物后,也能抑制血中和内脏脂质的上升,能够预防糖尿病、动脉硬化、肥胖、肝衰、肝硬化等生活习惯病。
另一方面,本发明中的生活习惯病改善是指,从上述生活习惯病的发病状态起始,通过摄入本发明的含有纤维寡糖的组合物,降低血中和内脏的脂质,改善上述生活习惯病。通过口服以本发明的含有纤维寡糖的组合物为有效成分的生活习惯病预防/改善剂,能够获得上述预防和改善的效果。
本发明的用作生活习惯病预防/改善剂的含有纤维寡糖的组合物具有降低肝脏内中性脂肪浓度和总胆固醇浓度的作用,还具有通过口服降低血中脂质、肝脏以外的内脏脂质的效果。
本发明中的血中脂质是指血中的中性脂肪、HDL、LDL-胆固醇、磷脂质,可以使用血清或血浆以公知的测定方法求得。血中脂质的降低是指,测定上述血中脂质的浓度,其与给予含有纤维寡糖的组合物之前的值、或是未给予含有纤维寡糖的组合物的状态相比有所降低的情况即为血中脂质的降低。
此外,本发明中的所谓内脏脂质,除上述的肝脏内的中性脂肪、总胆固醇浓度外,还包括肝脏内的HDL、LDL-胆固醇、磷脂质浓度、精巢上体的副睾丸脂质、存在于肾脏周围的腹腔内的上述脂质。这些也与血中脂质同样地以脂质浓度或质量表示,所谓内脏脂质浓度的降低是指与给予纤维寡糖之前或未给予纤维寡糖的状态相比脂质浓度或质量降低的情况。
下面对本发明的用作肠内细菌活化剂的含有纤维寡糖的组合物进行说明。
本发明的用作肠内细菌群活化剂的含有纤维寡糖的组合物还具有选择性地活化肠内的双尾菌、乳酸菌等有用细菌并抑制作为有害细菌的脆弱拟杆菌、产气真杆菌的增加的肠内细菌活化剂的效果。为了实现这一点,优选将纤维寡糖中纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖的组成以及葡萄糖含量调节至如下所述的特定范围内。
本发明中的用作肠内细菌群活化剂的纤维寡糖组合物优选含有70质量%以上的纤维二糖。纤维二糖具有使被分类为双尾菌、乳酸菌的有用细菌增加的效果,而不使属于梭菌属、埃希氏菌属、拟杆菌属、真细菌属的有害细菌增加。此处所说的双尾菌是属于双歧杆菌属的有用细菌,例如青春双歧杆菌、短双歧杆菌。乳酸菌是属于乳杆菌属的有用细菌,例如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、加氏乳杆菌。
此外,此处所说的梭菌是属于梭菌属的有害细菌,例如产气荚膜梭菌(Clostoridium perfringens,以下表示为C.perfringens)。埃希氏菌是属于埃希氏菌属的有害细菌,例如大肠杆菌(Escherichia Coli,以下表示为E.coli)。拟杆菌是属于拟杆菌属的有害细菌,例如脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis,以下表示为B.fragilis)。真细菌是属于真细菌属的有害细菌,例如产气真杆菌(Eubacterium aerofances,S-12株,E.aerofances)。
纤维二糖具有尤其不被这些之中的B.fragilis同化的特征。纤维二糖含量越高,越能抑制C.perfringens、E.coli和B.fragilis的增加,并活化双尾菌、乳酸菌,因而优选。更优选的纤维二糖含量范围为80质量%以上,特别优选为95质量%以上。纤维二糖含量越高,上述效果越大,因而对其上限没有特别限定,作为可通过简单的操作获得的范围,为99.9质量%以下。
本发明的用作肠内细菌群活化剂的纤维寡糖中需要含有0~30质量%的选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖。这些纤维寡糖类在活化双尾菌、乳酸菌等有用细菌的方面具有等同于纤维二糖的效果。但是,这些纤维寡糖类在有害细菌的同化性方面不同于纤维二糖,具有尤其难以被E.aerofaciens同化的特征。选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖的含量越高,越能抑制E.aerofaciens的增加,并且能够活化双尾菌、乳酸菌,因而优选。但是,其含量高时,抑制B.fragilis增加的效果变小。因此,为了选择性地活化双尾菌、乳酸菌,并且除了抑制产气荚膜梭菌、大肠杆菌外还抑制拟杆菌、真细菌等每一种有害细菌的增加,需要满足上述的含量范围。优选的范围是0.1~20质量,更优选0.1~10质量%,进一步优选0.1~5质量%,特别优选的范围是0.1~3质量%。
本发明的用作肠内细菌群活化剂的纤维寡糖组合物优选葡萄糖含量为9质量%以下,更优选为3.8质量%以下,特别优选为2质量%以下。由于葡萄糖会使C.perfringens、E.coli、B.fragilis、E.aerofaciens增加,为了仅选择性地活化有用细菌,葡萄糖含量需要满足上述的范围。葡萄糖含量越小,则越能促进选择活化的效果,进而优选的范围为1.5质量%以下,特别优选的范围为1质量%以下。对下限没有特别限定,作为能通过简单的操作获得的范围,为0.1质量%以上。本发明的肠内细菌活化剂中纤维寡糖、葡萄糖含量的分析方法如上所述。
本发明的含有纤维寡糖的组合物对肠内细菌群的改善效果可以通过以下的方法来确认。
首先,在蛋白胨-酵母-法尔兹(Fildes)溶液(PYF日本制药制造)培养基中添加0.5质量%本发明的含有纤维寡糖的组合物,制成1.5mL无菌培养基(pH7.2),预先在添加有法尔兹溶液的GAM肉汤培养基(日本制药制,产品名GAM,在肉汤中添加有0.4体积%的法尔兹溶液)中对双尾菌、乳酸菌、C.perfringens、E.coli、B.fragilis、E.aerofaciens分别进行前培养,得到供试菌液,将0.03mL供试菌液接种在上述1.5mL无菌培养基中,于37℃厌氧培养96小时后,测定pH,判断同化性。可以将该pH降低至不足5.5的状态判断为该菌株同化了纤维寡糖。另外,pH越低,越说明该菌株的增殖得到了促进。
下面对本发明的用作幽门菌的抑制剂或制菌剂的含有纤维寡糖的组合物进行说明。
本发明的用作幽门菌的抑制剂或制菌剂的含有纤维寡糖的组合物优选含有70质量%以上纤维二糖。纤维二糖在水性介质中具有抑制幽门菌增殖的效果。因此,纤维二糖含量越高,幽门菌的增殖越会受到抑制,从而优选。优选的含量是90质量%以上,更优选95质量%以上。
本发明的用作幽门菌的抑制剂或制菌剂的含有纤维寡糖的组合物优选含有0~30质量%的从纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖中选出的1种以上的糖。这些糖类也与纤维二糖同样地具有幽门菌的增殖抑制效果。但是,随着葡萄糖残基的增加,其在水性介质中的溶解度降低,因而为了获得本发明的效果,作为纤维寡糖,需要它们的含量满足上述范围。优选的含量范围是0~10质量%,更优选为0~5质量%,特别优选为0.5~5质量%。
本发明的用作幽门菌的抑制剂或制菌剂的含有纤维寡糖的组合物优选葡萄糖含量为30质量%以下。由于葡萄糖会使幽门菌增加,所以大量含有时会使纤维寡糖对幽门菌的抑制效果降低。因此,葡萄糖含量需要满足上述范围。葡萄糖含量越低越能促进对幽门菌的抑制效果,优选的范围是20质量%以下,更优选的范围是10质量%以下,特别优选5质量%以下。对下限没有特别限定,作为能通过简单的操作获得的范围,为0.1质量%以上。
对于被本发明的用作幽门菌的抑制剂或制菌剂的含有纤维寡糖的组合物抑制了增殖的幽门菌,分类为幽门螺杆菌的菌株就属于其中,例如包括幽门螺杆菌ATCC 43504株、43526株等保藏菌株以及临床分离菌株。优选含有本发明的纤维寡糖的幽门菌的抑制或制菌剂对幽门螺杆菌的增加抑制率为1%以上。此处所说的增加抑制率是指,将幽门菌在添加纤维寡糖的状态下培养时的活菌数(活菌数1)相对于将其在不添加纤维寡糖的状态下培养时的活菌数(活菌数2)的百分比,其以下式表示。
增加抑制率(%)=(活菌数2-活菌数1)/活菌数2×100
该增加抑制率越高,对幽门菌的抑制或制菌效果越强,因此优选的范围是10%以上,更优选40%以上,特别优选50%以上。
本发明所说的幽门螺杆菌的活菌数可以通过以下方法测定。使用羊血液琼脂培养基K(BBL)将试验菌株(幽门螺杆菌ATCC 43504)于35℃进行3天微好氧培养后,用无菌生理食盐水进行调制以使麦氏浊度为No.2(约107~108CFU/mL)。用无菌生理食盐水将其稀释100倍,制成添加用菌液。在用水稀释至1/10的布氏肉汤(荣研化学)中添加5%的马血清,将其作为未添加纤维寡糖的被测液,将向其中添加有预定浓度纤维寡糖的溶液作为添加纤维寡糖的被测液。向各9mL的被测液中添加1mL添加用菌液,于35℃在微好氧条件下振荡培养,以此作为检测液。培养48小时后,采集各检测液,用无菌生理食盐水制成10倍稀释的梯度液。用接种环将原液和各稀释梯度液各50μL涂布在羊血液琼脂培养基K上,在微好氧条件下于35℃培养4~5天。此外,0小时后仅对被测液实施定量。培养后测出繁殖的菌数,求出每1mL中的活菌数。
下面对用作骨中钙浓度增强剂的含有纤维寡糖的组合物进行说明。
对于本发明用作骨中钙浓度增强剂的含有纤维寡糖的组合物,优选将其与钙一起口服后,大腿骨中的钙浓度增加率为5%以上。该大腿骨中的钙浓度增加率越高,越能获得对骨质疏松症等的预防或改善效果,因而优选,该增加率更优选为10%以上,特别优选为15%以上。
此处所说的大腿骨中的钙浓度增加率是指单位量的大腿骨中存在的总钙量(mg/g-干燥大腿骨)。其增加率可以通过摄入和未摄入纤维寡糖的大腿骨中的总钙浓度以下式求出。
增加率(%)=((摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)-(未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度))/(未摄入含有纤维寡糖的组合物时的浓度)(%)
下面对本发明的用作皮肤屏障功能改善剂的含有纤维寡糖的组合物进行说明。
本发明的作为皮肤屏障功能改善剂的含有纤维寡糖的组合物优选含有纤维寡糖组合物(该纤维寡糖组合物中,纤维二糖含量为70质量%以上,选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖的含量为0~30质量%,葡萄糖含量为3.5质量%以下)。含有上述纤维寡糖组合物时,受损皮肤的经皮水分蒸散量的恢复率得到提高,即使不合用葡萄糖,也能得到不“发粘”、有“光滑(顺滑)”感、使用感良好的屏障功能改善剂。
本发明的纤维寡糖中纤维二糖含量优选为70质量%以上。该纤维二糖含量越高,越能提高经皮水分蒸散量的恢复促进率。因此,该纤维二糖含量更优选为80质量%以上,进一步优选为90质量%以上,特别优选为95质量%以上。纤维二糖含量越高,上述效果越大,因而对其上限没有特别限定,作为可通过简单的操作获得的范围,为99.9质量%以下。
本发明的纤维寡糖组合物优选含有0~30质量%选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖。纤维寡糖组合物含有上述的范围的选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖时,在经皮水分蒸散量的恢复方面变得优异,并且“光滑(顺滑)”优异,“发粘”较少。但是,这些成分的含量过高时,会降低屏障功能改善剂的“光滑(顺滑)”感,因而更优选其含量为0.1~10质量%,进一步优选为0.1~5质量%以下,特别优选为0.1~3质量%以下。
本发明的作为屏障功能改善剂的含有纤维寡糖的组合物中优选葡萄糖含量为3.5质量%以下。葡萄糖与氨基酸、蛋白质等具有氨基的构成成分反应,成为导致皮肤屏障功能改善剂褐变以及有效成分失活的原因。因此,该葡萄糖含量越低就越能抑制上述的褐变和有效成分的失活,因而优选。葡萄糖含量更优选为3.0质量%以下,特别优选为2质量%以下。对于下限没有特别限定,作为能够通过简单的操作获得的范围,为0.1质量%以上。本发明的屏障功能改善剂中的纤维寡糖、葡萄糖含量的分析方法如上所述。
接着,本发明的屏障功能以经皮水分蒸散量的恢复促进率表示,优选本发明的屏障功能改善剂对经皮水分蒸散量的恢复促进率为10%以上。此处所说的恢复促进率如下进行表示:使用在粗糙皮肤上涂布纤维寡糖水溶液2小时后的相对经皮水分蒸散量和利用精制水得到的相对经皮水分蒸散量,以含有纤维寡糖的组合物的相对经皮水分蒸散量相对于精制水的相对经皮水分蒸散量的降低率表示恢复促进率。该值可以利用下式求出。
恢复促进率(%)=[(水的相对经皮水分蒸散量)-(含有纤维寡糖的组合物的相对经皮水分蒸散量)]/(水的相对经皮水分蒸散量)×100
该恢复促进率越高,对上述屏障功能的改善效果越好,优选恢复促进率为20%以上,更优选为25%以上。
此外,上述的经皮水分蒸散量的相对值(相对经皮水分蒸散量)可以通过粗糙皮肤中的经皮水分蒸散量(TEWL)来测定。测定方法为,首先,用70%乙醇擦拭人的手腕内侧(被测部位)后,在恒温恒湿室(室温22℃、湿度45%)中适应15分钟,用双槽水分蒸散监视器(Asahi Biomed社制造TW-AS型)对被测部位进行测定,求出初期TEWL值(TEWL0)。测定初期TEWL后,用水清洗被测部位,使用斑试器(Finn Chamber)(Epitest社制造),将2质量%的十二烷基硫酸钠(SDS)密闭式敷裹涂布在被测部位,清洗后,与上述同样地测定TEWL(TEWL粗糙皮肤)。接着,在同一部位涂布精制水或本发明的纤维寡糖水溶液,涂布后2小时,利用上述方法对同一部位进行TEWL测定(TEWL2)。粗糙皮肤为100时的TEWL相对值利用下式求出。
相对经皮水分蒸散量(%)=(TEWL2-TEWL0)/(TEWL粗糙皮肤-TEWL0)×100
下面对本发明的用作皮肤正常菌群改善剂的含有纤维寡糖的组合物进行说明。
作为干燥时头发的触感,为了赋予干爽感和光滑感,优选纤维二糖含量为70质量%以上且选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0~30质量%的纤维寡糖。进而,更优选含有纤维二糖含量为95质量%~小于99.5质量%且选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0.1~5质量%的纤维寡糖。纤维二糖的含量不足70质量%时,作为干燥时头发的触感,无法赋予干爽感和光滑感。并且,将纤维二糖分解成作为单糖的葡萄糖后,游离出的葡萄糖容易被有害菌同化,作为干燥时头发的触感,会降低干爽感和光滑感。因此,优选游离出的葡萄糖含量相对于纤维寡糖为0.1质量%~5质量%。更优选为4质量%以下,进一步优选为3.5质量%以下,特别优选为2质量%以下。本发明的屏障功能改善剂中的纤维寡糖、葡萄糖含量的分析方法如上所述。
本发明的作为皮肤正常菌群改善剂的含有纤维寡糖的组合物含有本发明的纤维寡糖组合物,用作皮肤外用剂或毛发用剂时,对于作为皮肤有益菌的表皮葡萄球菌不显示制菌作用,而对作为有害菌的金黄色葡萄球菌和作为有害菌的绿脓杆菌显示制菌作用或增殖抑制作用,进而,作为干燥时头发的触感,能够赋予干爽感和光滑感。
本发明所说的表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和作为有害菌的绿脓杆菌可以利用下述方法对其菌数进行测定。首先,将表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和作为有害菌的绿脓杆菌分别在普通肉汤培养基中于35℃培养24小时,用无菌蒸馏水稀释到107/mL的程度,作为添加用菌液。用无菌蒸馏水将糖类等供试物质稀释至预定浓度,在9mL各稀释液中添加1mL添加用菌液并搅拌。将该检测液滴加到蛋黄加甘露醇食盐琼脂培养基中,于35℃培养48小时后测定菌数(初期值)。并且,将检测液保持在35℃,在制作完1天后和2天后进行相同的操作,用于菌数测定。作为空白,使用无菌蒸馏水进行与上述相同的操作。
将作为空白的菌数测定值与含有糖类等供试物质的检测液的菌数测定值进行比较,从而能够评价糖类针对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和作为有害菌的绿脓杆菌的制菌效果或细菌增殖效果。
本发明的纤维寡糖的淀粉抗老化性以淀粉的老化率表示优选为20%以下。此处所说的淀粉的老化率是显示本发明的纤维寡糖在与淀粉共存的条件下抑制其老化的程度的指标,该老化率越低,淀粉的老化防止效果越强。该老化率用以下方法测定。首先,将马铃薯淀粉(三和淀粉制造)制成1质量%浓度的水分散液,于100℃加热1小时,制成淀粉水溶液。在该淀粉水溶液中于常温下溶解本发明的纤维寡糖组合物,使其浓度为6质量%,密封下于4℃保存12小时。接着,在常温下对保存后的水溶液测定波长660nm时的浊度(透过率),求出其与冷藏保存前的水溶液的浊度相比较的增加率((保存后的浊度-保存前的浊度)/保存前的浊度×100%)。该老化率越低,淀粉的老化防止效果越大;所述老化率更优选为15%以下,特别优选为10%以下。
本发明的纤维寡糖的蛋白变性防止性以蛋白质的变性率表示优选为10%以下。此处所说的蛋白的变性率是显示本发明的纤维寡糖组合物在与蛋白质共存的条件下抑制其变性的程度的指标,该变性率越低,蛋白质的变性抑制效果越大。该变性率用以下方法测定。首先,常温下将蛋清与本发明的纤维寡糖的10质量%水溶液等量混合,密封下于-20℃保存5天。接着,在常温下对保存后的水溶液测定波长660nm时的浊度(透过率),求出其与冷藏保存前的水溶液的浊度相比较的增加率((保存后的浊度-保存前的浊度)/保存前的浊度×100%)。该变性率越低则效果越强;所述变性率更优选为7.5%以下,特别优选为5%以下。
下面对本发明的纤维寡糖的制造方法进行说明。
对于本发明的纤维寡糖的来源没有特别限制,可以是通过纤维素类物质的水解制造出的产物、通过对葡萄糖等单糖类或其衍生物进行缩合或糖转移制造出的产物,但从安全性方面考虑,优选通过酶解法得到的产物。
作为用于酶解的纤维素类物质,既可以是植物性的,也可以是动物性的,例如可以是含有木材、竹子、棉、苎麻、海鞘、蔗渣、洋麻、麦子、稻子、细菌纤维素等的源自天然的纤维质物质,也可以是将这些暂且溶解在溶剂中对其进行了再生的再生纤维素,还可以是对这些实施化学处理而制成的纤维素衍生物,上述物质之中,可以使用1种或合用2种以上。其中,优选使用未经过溶解或化学处理的天然纤维素类物质,因为这样所得到的纤维寡糖中不含有对人体有害的溶剂或化学物质。并且,纤维素类物质优选以精制浆料的状态来使用,对于浆料的精制方法没有特别限制,可以使用亚硫酸盐浆粕、硫酸盐浆粕、NBKP浆(漂针浆)等任意的浆料。
此外,对纤维素类物质进行酶解的情况中,作为所使用的纤维素类物质,优选使用经过暂且水解使平均聚合度为700以下的部分水解纤维素类物质,因为这样会提高纤维寡糖的收率。进而,对于该具有特定聚合度的纤维素类物质,优选使用平均粒径调节至100μm以下、胶体状纤维素成分含量调节至10质量%以上的纤维素类物质,因为这样可以提高酶解速度,提高纤维寡糖选择率。
本发明中,将用于纤维素类物质的水解的酶称为纤维素酶,本发明中使用的所谓纤维素酶是分解纤维素的酶的总称,只要对纤维素具有分解活性,就包括在本发明所说的纤维素酶中。作为纤维素酶的酶源,例如可以举出:产生纤维素酶的活菌体本身、将产生纤维素酶的菌体所分泌出的酶精制后的产物、将提纯酶与赋形剂、稳定剂等添加剂一起制剂化后的产物等。在酶源为纤维素酶制剂品的情况下,对添加于其中的添加剂也没有特别限制,其剂型可以是粉末、颗粒、液体等任意形式。
对于纤维素酶的起源也没有特别限制,例如,作为公知的产生纤维素酶的微生物,可以举出木霉(Tricoderma)属、顶孢霉(Acremonium)属、曲霉(Aspergillus)属、芽孢杆菌(Bacillus)属、假单胞杆菌(Pseudomonas)属、青霉菌(Penicillium)属、气单胞菌(Aeromonus)属、耙齿菌(Irpex)属、侧孢霉(Sporotrichum)属、腐质霉(Humicola)属、纤维弧菌(Cellovibrio)属等在《纤维素酶》(讲谈社Scientific发行(1987))、《纤维素的事典》(セルロ一スの事典,朝仓书店发行(2000))中记载的菌所产生的纤维素酶,但只要是分解纤维素的酶,就不限于源自上述公知的菌的酶,源自新型菌的酶也包括在本发明的纤维素酶中。
利用酶分解纤维素类物质的方法可以使用公知的方法而没有特别限制,作为一个例子可以举出如下方法:将纤维素类物质悬浮在水性介质中,添加纤维素酶,加热下搅拌或振荡,进行糖化反应。
在上述方法中,可以适当调整悬浮方法、搅拌方法、纤维素酶-底物的添加方法-添加顺序、其浓度等反应条件,从而以更高的收率获得纤维寡糖。此时反应液的pH和温度只要是不使酶失活的范围即可,通常情况下,在常压进行反应的情况中,温度为5~95℃、pH为1~11的范围即可。并且,与上述同样地,为了以更高的收率获得纤维寡糖,对于该压力、温度和pH也可以进行适当调整。
根据需要,可以对通过上述酶解得到的纤维寡糖水溶液实施脱色、脱盐、去除酶等精制处理。精制方法为公知的方法即可而不受特别限制,例如可以使用活性炭处理、离子交换树脂处理、层析处理、微滤、超滤、反渗透过滤等过滤处理、晶析处理等,这些既可以单独使用,也可以组合2种以上使用。
纤维寡糖的精制方法中优选晶析处理,因为这样易于调节纤维寡糖的组成。
作为酶解法的一个例子,优选使用例如以WO2006/011479A1号公报中公开的方法所制造出的纤维寡糖。
纤维寡糖的精制方法中,还因为能够同时调节纤维寡糖结晶的平均L/D和纯度而优选晶析处理。
本发明的晶析中,在纤维寡糖水溶液中混合1种或2种以上的溶剂,由Hildebrand的溶解度参数δ为8.0~22.2的状态对纤维寡糖进行晶析。通过该溶解度参数δ满足本发明的范围,能够对所得到的纤维寡糖结晶或结晶凝集体的平均L/D进行调节,改善纤维寡糖组合物的流动性。该溶解度参数优选为10~20,更优选为12~18。
本发明中所说的溶解度参数是Hildebrand的溶解度参数δ,其以下述式(1)表示。
δ=(ΔEv/V)1/2 (1)
此处,ΔEv是25℃的溶剂的蒸发热(cal/mol),V是溶剂的摩尔容积(cm3/mol)。ΔEv通过下述式(2)来计算。
ΔEv(cal/mol)=-3.542+23.7Tb+0.020Tb (2)
此处,Tb为以绝对温度表示的溶剂的沸点。
此外,混合溶剂的溶解度参数δmix利用各溶剂的溶解度参数通过下述式(3)来计算。
δmix=(X1V1δ1+X2V2δ2+X3V3δ3+...+XnVnδn) (3)
此处的X为各溶剂的摩尔分率(mol%),V(cm3/mol)表示各溶剂的摩尔容积。
对本发明的晶析中使用的溶剂的种类没有特别限制,只要溶解度参数为8.0~22.2即可。作为此处使用的溶剂,例如可以举出水、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇、2-甲基丁醇、苯甲醇等醇类;丙酮、丁酮、二乙基甲酮、甲基丙基酮等酮类;乙腈等腈类等。特别地,有机溶剂优选为在制作药品、食品及其添加剂的工序中使用的有机溶剂,可以举出在《药品添加物事典》(药事日报社(株)发行)、《日本药局方》、《食品添加物公定书》(均为广川书店发行)中分类为溶剂的有机溶剂。对于水和有机溶剂来说,可以自由地单独使用或合用2种以上,还可以暂且分散在1种介质中后,去除该介质,然后分散在其他介质中。
对于此处使用的晶析法没有特别限制,作为优选的方法可以举出溶剂蒸发浓缩晶析法(浓缩晶析法)、冷却晶析法、不良溶剂添加晶析法(提取晶析法)、加压晶析法、反应晶析法,可以使用其中1种或组合2种以上,可以对用作母液的溶剂、晶析装置、晶析条件进行适当调整,以使纤维寡糖结晶满足本发明的平均L/D的范围。特别地,,在水性体系中的浓缩晶析法、冷却晶析法、或是将它们组合在一起的方法由于易于调节纤维寡糖的结晶速度和平均L/D因而优选。
对于此处使用的晶析装置也没有特别限制,可以使用静置式晶析装置、通常的搅拌型晶析装置、通风管搅拌型晶析装置、Oslo型晶析装置、间接冷却式晶析装置、刮取式晶析装置、排管式晶析装置、Brodie型晶析装置、连续熔融精制式晶析装置等任意的装置,这些装置可以单独使用或组合使用2种以上。特别是在水性体系中进行浓缩和冷却晶析以增大结晶径、减小平均L/D的情况下,优选静置式,在使用搅拌式的情况下,优选搅拌速度尽可能小。并且,通过冷却晶析对上述进行调节的情况下,优选降低冷却速度。进行提取晶析的情况下,优选减慢不良溶剂的添加速度。
下面对以本发明的纤维寡糖组合物为有效成分的含有纤维寡糖的组合物进行说明。
对于以本发明的纤维寡糖组合物为有效成分的含有纤维寡糖的组合物来说,可以将本发明的纤维寡糖组合物以粉末形式单独使用,也可以以水溶液或分散液的形式使用,本发明的纤维寡糖组合物还可以与由食品材料、化妆品材料、药品药效成分、或者这些中使用的添加物中选出的1种以上构成成分一起以颗粒、成型体、水溶液、水分散体、糊、凝胶状的食品/药品的形式使用。
本发明的纤维寡糖组合物中的纤维寡糖的混合量优选为0.01~100质量%。此处所说的纤维寡糖的混合量是本发明的生活习惯病预防/改善剂中含有的纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖的总量,若该纤维寡糖的混合量不足0.01质量%,则在生活习惯病的预防或改善、肠内细菌群的活化、皮肤屏障功能的改善、皮肤正常菌群的改善方面无法获得充分的效果而不优选。纤维寡糖的混合量越高,越能促进上述效果而越优选,更优选的范围为0.6质量%以上,特别优选为0.75质量%以上。
对于本发明的含有纤维寡糖的组合物来说,除了本发明的纤维寡糖组合物,还可以含有低聚糖类或高甜度甜味剂。对于纤维寡糖与低聚糖类或高甜度甜味剂的混合比没有特别限制,只要在能够获得本发明的效果的范围即可,例如,纤维寡糖或低聚糖类的质量比为0.1/99.9~99.9/0.1。
特别优选添加难消化性的低聚糖类,因为这样除了获得纤维寡糖的脂质代谢作用外,还能够获得肠内有用细菌的活化或整肠作用。进而,优选在本发明的纤维寡糖中添加高甜度甜味剂,因为这样能够调整味质而不增加纤维寡糖的热量。
作为该低聚糖类,例如包括半乳糖、果糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖、山梨糖等单糖类及其还原物;蔗糖、蜜二糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、龙胆二糖、昆布二糖、乳果糖、木二糖等二糖类及其还原物;低聚乳果糖、棉子糖、麦芽三糖、异麦芽糖、帕拉金糖、蔗果三糖、龙胆糖基纤维二糖等三糖及其还原物;麦芽四糖、龙胆糖基纤维三糖、蔗果四糖等四糖类及其还原物;麦芽五糖、麦芽六糖等五糖或六糖类及其还原物;β-环糊精、γ-环糊精、葡聚糖等环状低聚糖类;难消化性糊精、聚右旋糖、阿拉伯胶、羧甲基纤维素、瓜尔豆胶、热凝胶等水溶性多糖类及其还原物;山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、甘露醇、乳糖醇等糖醇;等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中分类为甜味剂的物质。这些低聚糖类可以使用低聚糖类本身,也可以使用为了改善溶解性等而对其部分化学结构实施了羧基化、乙基化、甲基化、硫酸酯化等化学处理的衍生物。
作为高甜度甜味剂,包括糖精、甘草(甘草甜素)、甜菊糖、阿斯巴甜、三氯蔗糖、安赛蜜等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中分类为高甜度甜味剂中的甜味剂。这些高甜度甜味剂也可以直接使用甜味剂或使用将其部分化学结构置换为其他取代基的衍生物。
本发明所说的构成成分是指纤维寡糖以外的低聚糖类、高甜度甜味剂、食品材料、化妆品材料、药品药效成分、色素、香料、金属、陶瓷或赋形剂、崩解剂、粘合剂、流动化剂、滑润剂、矫味剂、着色剂、甜味剂、溶剂、油脂、表面活性剂、增稠剂、胶凝剂等添加剂,可以是粉体状、结晶状、油状、液状、半固体形状等任意的形态,例如可以使用记载于《食品添加物公定书》(广川书店发行)、《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)、《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社发行)中的添加剂。
此外,这些还可以根据各种目的实施包衣、脂质体化等加工。这些构成成分可以单独使用,也可以合用两种以上。本发明的生活习惯病预防或改善剂可以通过溶解、混合、分散、造粒、熔融-固化、压缩、干燥等公知的方法加工。
下面,对包含含有本发明的纤维寡糖组合物作为有效成分的组合物(含有纤维寡糖的组合物)和从食品材料、化妆品材料、药品药效成分或其所使用的添加物中选出的1种以上构成成分的食品、化妆品、药品、准药品的制造方法进行说明。
对各成分的添加方法没有特别限制,只要是通常实施的方法即可,可以是如下方法:1)同时添加纤维寡糖和构成成分,然后混合或分散;2)预先混合或分散纤维寡糖和特定的构成成分后,添加另外的构成成分,然后混合或分散;3)预先混合或分散2种以上的构成成分后添加纤维寡糖,然后混合或分散;还可以组合这些添加方法。
作为此处使用的装置,可以使用小型吸引传输装置、空气传输装置、斗式传送机、加压式传输装置、真空传送机、振动式定量进料器、喷雾器、漏斗等连续地添加,也可以一次性投入。并且,对于各成分的混合方法没有特别限制,采用通常实施的方法即可,可以使用V型、W型、双锥型、挤压模型(コンテナタツク)混合机等容器旋转式混合机;或高速搅拌型、万能搅拌型、带型、揉捏型、诺塔型混合机等搅拌式混合机;高速流动式混合机、鼓式混合机、流化床式混合机。并且,还可以使用振荡器等容器振荡式混合机。
对于分散方法没有特别限制,只要是通常实施的分散方法即可,可以是使用便携式搅拌机、立体搅拌机、侧面搅拌机等的使用单方向旋转式、多轴旋转式、往返反转式、上下移动式、旋转+上下移动式、管路式等搅拌桨的搅拌混合方法;管线搅拌器等喷流式搅拌混合方法;气体鼓入式的搅拌混合方法;使用高剪切匀化器、高压匀化器、超声波匀化器等的混合方法,也可以是使用振荡器的容器振荡式混合方法等,还可以是组合这些的方法。
此外,在上述的混合分散中,对于水性介质(其中根据需要在水或有机溶剂中添加有表面活性剂、增稠剂、胶凝剂)的添加顺序没有特别限制,可以是如下方法:1)预先在纤维寡糖中添加水性介质,溶解或分散后添加其他构成成分;2)预先在构成成分中添加水性介质,溶解或分散后,添加纤维寡糖;3)预先将纤维寡糖和构成成分混合或分散后,添加水性介质;还可以是组合这些的方法。此处得到的水溶液、分散体、乳液等各液态;糊、凝胶等各半固态的食品或药品可以根据需要进行干燥,然后实施造粒、包衣、成型等加工。
对于造粒-包衣方法没有特别限制,使用公知的方法即可,既可以是搅拌式或流化床式中的任一种,也可以是将这些组合的方法。作为搅拌式造粒机,可以举出例如便携式搅拌机、立体搅拌机、侧面搅拌机等的单方向旋转式、多轴旋转式、往返反转式、上下移动式、旋转+上下移动式的搅拌机;作为流化床式可以举出上部喷雾式、中央喷雾式、下部喷雾式、搅拌并用式、中央缶喷流式、Wurster式等。并且,还可以实施使用碾压机(roller compactor)的干式造粒。
至于包衣,预先得到造粒物,然后既可以对其实施公知的包衣,也可以在实施包衣后再实施另外的包衣以制成多层状。作为包衣剂的喷雾方法,可以是使用高压喷嘴、二流体喷嘴、四流体喷嘴、转盘、超声波喷嘴等的对活性成分溶液或分散液实施喷雾的方法,也可以是由管状喷嘴滴加活性成分溶液或分散液的方法。添加活性成分溶液或分散液时,可以实施在纤维寡糖颗粒表面层积活性成分那样的分层、包衣,也可以将其负载在纤维寡糖上,还可以将构成成分溶液或分散液作为结合液使纤维寡糖和其他构成成分的混合物造粒为基质状。分层、包衣为湿式和干式皆可,效果相同。
对于成型方法没有特别限制,采用通常实施的方法即可,既可以使用模板,也可以使用压缩、熔融、注射、压延等公知的成型方法,还可以是组合这些的方法。作为此处使用的成型机,可以举出压缩成型机、熔融成型机、注射成型机、压延成型机等,可以使用糕点用或化妆品或药品用成型机、米饭成型机、压缩成型机、包馅机、鱼糕制造装置、饺子-包子成型机、粉饼基材用压缩成型机等公知的成型机。尤其作为压缩成型,可以是使用模板压缩成型为所期望的形状的方法;预先压缩成型为片状后切割成所期望的形状的方法。作为压缩成型机,可以使用例如静压压力机、压块辊型压力机(briquetting roller press)、平滑辊型压力机等辊式压力机;单冲压片机、旋转式压片机等压缩机。
下面,对上述纤维寡糖组合物中使用的构成成分的一例进行说明。
例如,作为食品材料或其中所使用的添加剂,可以根据需要在本发明的纤维寡糖中添加保存剂-耐存改善剂、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、乳化剂、增稠剂、品质改良剂、调味剂、酸味剂、强化剂、香辛料-草药、食品香料、酶等。这些食品材料或添加剂可以单独使用或合用2种以上,可自由选择。
作为保存剂-耐存改善剂,可以举出例如山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸酯、脱氢乙酸钠、丙酸、丙酸盐、乙酸、乙酸钠、甘氨酸、乙醇、聚赖氨酸、鱼精蛋白、溶菌酶、果胶分解物、丙胺酸、硫胺素月桂基硫酸盐、丝兰提取物、壳聚糖、丙二醇等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为保存剂-耐存改善剂的物质。
作为抗氧化剂,可以举出例如丁羟基苯甲醚、丁羟基甲苯、维生素C、抗坏血酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠、维生素E等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为抗氧化剂的物质。
作为甜味剂,可以举出例如糖精、甘草、甜菊糖、阿斯巴甜、三氯蔗糖、安赛蜜、果糖、潘糖、海藻糖、木糖醇、赤藓醇、山梨糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、还原帕拉金糖、还原糖稀、甘露醇、偶联糖、果寡糖、半乳寡糖、低聚乳果糖、黑曲霉低聚糖、木寡糖、麦芽寡糖、低聚异麦芽糖、大豆寡糖、帕拉金糖、帕拉金寡糖、棉子糖等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为甜味剂的物质。
作为着色剂,可以举出例如红色2号、红色3号、红色40号、红色102号、红色105号、红色106号、黄色4号、黄色5号、蓝色1号、蓝色2号、红色3号色淀、红色40号色淀、黄色4号色淀、黄色5号色淀、蓝色1号色淀、蓝色2号色淀等食用焦油类、胡萝卜素色素、胭脂树红色素、辣椒色素、胭脂虫红色素、栀子黄色素、红花色素、红曲色素、甜菜红、茜色素、螺旋藻色素、花色素苷色素、焦糖等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为着色剂的物质。
作为乳化剂,可以举出例如甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、皂甙、卵磷脂等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为乳化剂的物质。
作为增稠剂,可以举出例如瓜尔豆胶、刺槐豆胶、卡拉胶、琼脂、果胶、黄原胶、结冷胶、阿拉伯胶、葡甘聚糖、藻酸、车前籽胶、明胶、甲基纤维素、热凝胶、结晶纤维素、羧甲基纤维素、罗望子胶、难消化性糊精等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为增稠剂的物质。
作为品质改良剂,可以举出大豆蛋白、小麦蛋白、酪蛋白、酪蛋白酸盐、乳蛋白浓缩物、乳糖、磷酸盐等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为品质改良剂的物质。
作为调味剂,可以举出例如谷氨酸钠、核酸类调味剂、畜产提取物、水产类提取物、蔬菜提取物、酵母提取物、氨基酸类调味剂、鱼酱调味剂、浓味调味剂、调味油(Seasoning Oil)等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为调味剂的物质。
作为酸味剂,可以举出例如柠檬酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、葡萄糖酸等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为酸味剂的物质。
作为强化剂,可以举出例如维生素A、维生素B族、维生素D、维生素K、类胡萝卜素、牛骨钙、蛋壳钙、碳酸钙、珍珠贝、珍珠粉末、牡蛎壳、扇贝壳钙、珊瑚粉末、鱼骨粉末、白云岩、氯化镁、酵母矿物质、血红素铁、深层水、盐水湖水矿物质、源自海草-植物的矿物质等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为强化剂的物质。
作为香辛料-草药,可以举出例如胡椒、辣椒、多香果、香草豆、桂皮、丁香、肉豆蔻、肉豆蔻花、豆蔻、大茴香(anise)、芫荽、孜然、香菜、茴香-杜松、生姜、藏红花、郁金、月桂-百里香、咖喱等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为香辛料-草药的物质。
作为食用香料,可以举出例如桃子香精、橙子香精、柠檬香精等水果香精类;芳香香精类;麦芽酚、呋喃酮等糖香精类;葫芦巴内酯等香精增强剂类;类黄酮类、可可糖膏等聚苯酚类;前体香精类;肉味香精类;咖啡香精类;牛奶香精;薄荷醇类;癸内酯类等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为食用香料的物质。
作为酶,可以举出例如α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖异构酶、蛋白酶、粗制凝乳酶、胰酶、木瓜蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、菠萝蛋白酶、果胶酶、溶菌酶、橙皮苷酶、普鲁兰酶、反式谷氨酰胺酶、半纤维素酶、β-半乳糖酶、乳糖酶、葡聚糖酶、转化酶、过氧化氢酶、脱氨酶、脲酶、单宁酶、脂氧合酶、腺苷氨基酶等在《食品添加物公定书》(广川书店发行)中被分类为酶的物质。
下面,对药品药效成分或其中所使用的添加剂的一例进行说明。
作为药品药效成分,其对象为例如解热镇痛消炎药、催眠镇静药、抗瞌睡药、抗晕药、小儿镇痛药、健胃药、抑酸药、消化药、强心药、心律不齐用药、降压药、血管扩张药、利尿药、抗溃疡药、整肠药、骨质疏松症治疗药、镇咳祛痰药、抗哮喘药、抗生素、尿频改善剂、滋养强壮剂、维生素剂等通过透皮或口服给药的物质。药效成分可以自由地单独使用或合用2种以上。
此外,作为药品中使用的添加剂,包括例如赋形剂、崩解剂、粘合剂、流动化剂、滑润剂、矫味剂、香料、着色剂、甜味剂、溶剂、油脂、增稠剂、表面活性剂、胶凝剂等,这些可自由地单独使用或合用2种以上。
作为赋形剂,可以举出丙烯酸淀粉、L-天冬氨酸、氨基乙基磺酸、氨基乙酸、糖(粉)、阿拉伯胶、阿拉伯胶粉末、藻酸、藻酸钠、α化淀粉、肌醇、乙基纤维素、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、氯化钠、橄榄油、高岭土、可可脂、酪蛋白、果糖、浮石粒、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、含水二氧化硅、干酵母、干燥氢氧化铝凝胶、干燥硫酸钠、干燥硫酸镁、琼脂、琼脂粉末、木糖醇、柠檬酸、柠檬酸钠、柠檬酸二钠、甘油、甘油磷酸钙、葡萄糖酸钠、L-谷氨酰胺、粘土、粘土颗粒、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯基吡咯烷酮、硅酸铝酸镁、硅酸钙、硅酸镁、轻质无水硅酸、轻质液体石蜡、桂皮粉末、结晶纤维素、结晶纤维素-羧甲基纤维素钠、结晶纤维素(颗粒)、糙米曲、合成硅酸铝、合成水滑石、芝麻油、面粉、小麦淀粉、小麦胚芽粉、米粉、米淀粉、乙酸钾、乙酸钙、乙酸邻苯二甲酸纤维素、红花油、白蜂蜡、氧化锌、氧化钛、氧化镁、β-环糊精、二羟基氨基乙酸铝、2,6-二丁基-4-甲基苯酚、二甲基聚硅氧烷、酒石酸、酒石酸氢钾、熟石膏、蔗糖脂肪酸酯、氢氧化铝镁(水酸化アルミナマグネシウム)、氢氧化铝-凝胶、氢氧化铝-碳酸氢钠共沉淀物、氢氧化镁、角鲨烷、硬脂醇、硬脂酸、硬脂酸钙、聚氧硬脂酸、硬脂酸镁、Sterotex HM、精制明胶、精制虫胶、精制白糖、精制白糖球状颗粒、十六醇十八醇混合物、十六烷基聚乙二醇(cetopolyethylene glycol)、明胶、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、D-山梨糖醇、磷酸钙、豆油、大豆不皂化物、大豆卵磷脂、脱脂粉乳、滑石、碳酸铵、碳酸钙、碳酸镁、中性无水硫酸钠、低取代度羟丙基纤维素、葡聚糖、糊精、天然硅酸铝、玉米淀粉、黄芪树胶粉末、二氧化硅、乳酸钙、乳糖、白色凡士林、白糖、白糖-淀粉球状颗粒、大麦绿叶提取物粉末、大麦芽叶青汁干燥粉末、蜂蜜、石蜡、马铃薯淀粉、半消化体淀粉、人血清白蛋白、羟基丙基淀粉、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、植酸、葡萄糖、葡萄糖水合物、部分α化淀粉、支链淀粉、丙二醇、粉末还原麦芽糖糖稀、粉末纤维素、果胶、膨润土、聚丙烯酸钠、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯聚氧丙二醇、聚苯乙烯磺酸钠、聚乙烯醇缩乙醛二乙基氨基乙酸酯、聚乙二醇、麦芽糖醇、麦芽糖、D-甘露醇、糖稀、十四酸异丙酯、无水乳糖、无水磷酸氢钙、无水磷酸钙造粒物、偏硅酸铝酸镁、甲基纤维素、棉籽粉、棉籽油、日本蜡、单硬脂酸铝、单硬脂酸甘油、单硬脂酸脱水山梨糖醇、药用炭、花生油、硫酸铝、硫酸钙、粒状玉米淀粉、液体石蜡、dl-苹果酸、磷酸一氢钙、磷酸氢钙、磷酸氢钙造粒物、磷酸氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钙、磷酸二氢钠等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为赋形剂的物质,这些可以自由地单独使用或合用2种以上。
作为崩解剂,可以举出交联羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、低取代度羟基丙基纤维素等纤维素类;羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、米淀粉、小麦淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、部分α化淀粉等淀粉类;交联聚乙烯基吡咯烷酮、交联聚乙烯基吡咯烷酮共聚物等合成高分子等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加物事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为崩解剂的物质。可以单独使用从上述中选出的1种或合用2种以上,这可自由选择。
作为粘合剂,可以举出白糖、葡萄糖、乳糖、果糖等糖类;甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇、赤藓醇、山梨糖醇等糖醇类;明胶、支链淀粉、卡拉胶、刺槐豆胶、琼脂、葡甘聚糖、黄原胶、罗望子胶、果胶、藻酸钠、阿拉伯胶等水溶性多糖类;结晶纤维素、粉末纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素等纤维素类;α化淀粉、淀粉糊等淀粉类;聚乙烯基吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、聚乙烯醇等合成高分子类;磷酸氢钙、碳酸钙、合成水滑石、硅酸铝酸镁等无机化合物类等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为粘合剂的物质。可以单独使用从上述中选出的1种或合用2种以上,这可自由选择。
作为流动化剂,可以举出含水二氧化硅、轻质无水硅酸等硅化合物类等在《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为流动化剂的物质。可以自由地使用单独从上述中选出的1种或合用2种以上。
作为滑润剂,可以举出硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、蔗糖脂肪酸酯、滑石等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为滑润剂的物质。可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为矫味剂,可以举出谷氨酸、富马酸、琥珀酸、柠檬酸、柠檬酸钠、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、氯化钠、1-薄荷醇等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为矫味剂的物质。可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为香料,可以举出橙、香草、草莓、酸奶、薄荷醇、茴香油、桂皮油、橙皮油、薄荷油等油类;绿茶粉末等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为芳香剂、香料的物质。可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为着色剂,可以举出食用红色3号、食用黄色5号、食用蓝色1号等食用色素;叶绿素铜钠盐、氧化钛、核黄素等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为着色剂的物质。可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为甜味剂,可以举出阿斯巴甜、糖精、甘草酸二钾、甜菊糖、麦芽糖、麦芽糖醇、糖稀、甜茶粉末等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为甜味剂的物质。可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
对于溶剂没有特别限制,只要是可在药品中使用的溶剂即可,例如可以举出甲醇、乙醇等醇类;丙酮等酮类等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为溶剂的物质,可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为油脂,可以举出例如硬脂酸单甘油酯、硬脂酸三甘油脂、硬脂酸蔗糖酯、液体石蜡等链烷烃类;巴西棕榈蜡、氢化蓖麻油等硬化油类;蓖麻油、硬脂酸、硬脂醇、聚乙二醇等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中记载的油脂,可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为增稠剂,可以举出例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚丙烯酸、羧基乙烯基聚合物、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯胶、淀粉糊等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中记载的增稠剂,可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为表面活性剂,可以举出例如磷脂质、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯硬脂基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇酸单月桂酸酯、聚山梨醇酯、单油酸脱水山梨糖醇酯、单硬脂酸甘油酯、单氧化乙烯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、单氧化乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、单油酸聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、单棕榈酸脱水山梨糖醇酯、月桂基硫酸钠等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为表面活性剂的物质,可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
作为胶凝剂,可以举出例如明胶等动物性胶凝剂;琼脂、黄原胶、瓜尔豆胶、阿拉伯胶、热凝胶、刺槐豆胶、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、纤维素、微晶纤维素等植物性多糖类;聚乙烯基吡咯烷酮等化学合成高分子等在《日本药局方》(广川书店发行)、《药品添加剂事典》(药事日报社(株)发行)中被分类为胶凝剂的物质,可以自由地使用从上述中选出的单独1种或合用2种以上。
例如,作为化妆品材料或其中所使用的添加剂,可以根据需要在本发明的纤维寡糖组合物中添加保湿剂、氨基酸、维生素类、烃、高级脂肪酸、酯类、硅酮、表面活性剂、pH调节剂、水。这些化妆品材料或添加剂可以自由地单独使用或合用2种以上。
例如,作为保湿剂,可以举出聚乙二醇、丙二醇、甘油、1,3-丁二醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、硫酸软骨素、胶原质、乳酸钠、dl-吡咯烷酮羧酸、薏苡仁提取物、大豆卵磷脂等在《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)中被分类为保湿剂的物质。
作为氨基酸,可以举出例如,甘氨酸、丙胺酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺等中性氨基酸;天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸;精氨酸、组氨酸、赖氨酸、羟基赖氨酸等碱性氨基酸等在《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)中分类为氨基酸的物质。
作为维生素类,可以使用例如维生素A、维生素D、维生素E、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、泛酸、生物素、维生素C。作为维生素A可以举出视黄醇、视黄醛、视黄酸、3-脱氢视黄醇、3-脱氢视黄醛、3-脱氢视黄酸、β-儿茶素,作为维生素D可以举出麦角骨化醇(D2)、胆骨化醇(D3)、麦角固醇、7-羟基胆固醇,作为维生素E可以举出α-生育酚,作为维生素K可以举出植物甲萘醌(K1)、甲基萘醌(K2)、甲萘醌(Menadione)(K3),作为维生素B1可以举出硫胺素(维生素B1),作为维生素B2可以举出核黄素,作为维生素B6可以举出吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺,作为维生素B12可以举出氰钴胺,作为叶酸可以举出蝶酰谷氨酸,作为烟酸(niacin)可以举出烟酸、烟碱酰胺(烟酰胺),作为维生素C可以举出抗坏血酸。这些维生素可以自由地单独使用1种或合用2种以上。并且,这些维生素可以是脂溶性或水溶性,优选使用通常用于化妆品、药品、准药品、食品的维生素。优选使用在《日本药局方》(广川书店发行)、《化妆品原料基准》(药事日报社发行)中被分类为维生素的物质。
作为烃,可以举出例如液体石蜡、链烷烃、角鲨烷、凡士林等在《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)中被分类为烃的物质。
作为高级脂肪酸,可以举出例如月桂酸、十四酸、棕榈酸、硬脂酸、山萮酸、油酸、羟基硬脂酸、十一碳烯酸、异硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等在《化妆品原料基准》(药事日报社发行)中被分类为高级脂肪酸的物质。
作为酯类,可以举出十四酸异丙酯、辛酸十六烷基酯、十四酸辛基十二烷基酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、十四酸肉豆寇酯、油酸癸酯、二甲基辛酸己基癸酯、乳酸十六烷基酯、乳酸肉豆寇酯、乙酸羊毛酯、硬脂酸异十六烷基酯、异硬脂酸异十六烷基酯、羟基硬脂酸胆固醇酯、二-2-乙基己酸乙二醇酯、二季戊四醇脂肪酸酯、单异硬脂酸N-烷基二醇酯、二癸酸新戊基二醇酯、苹果酸二异硬脂酯、二-2-庚基十一酸甘油酯、三-2-乙基己酸甘油酯、三异硬脂酸三羟甲基丙烷、十六烷基2-乙基己酸酯、2-乙基己基棕榈酸酯、三(十四酸)甘油酯、三-2-庚基十一酸甘油酯、十四酸2-己基癸酯、棕榈酸2-己基癸酯、己二酸2-己基癸酯、癸二酸二异丙酯、琥珀酸2-乙基己酯、柠檬酸三乙酯等在《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)中被分类为酯的物质。
作为硅酮,可以举出例如二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷等链状聚硅氧烷;十甲基环五硅氧烷、十二甲基环六硅氧烷等环状硅氧烷;经交联的网状结构的有机硅树脂等在《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)中记载的硅酮类。
作为表面活性剂,可以举出例如酰基谷氨酸盐等酰基氨基酸盐;月桂酸钠、棕榈酸钠、月桂基硫酸钠、月桂基硫酸钾等高级烷基硫酸酯盐;聚氧乙烯月桂基硫酸三乙醇胺、聚氧乙烯月桂基硫酸钠等烷基醚硫酸酯盐;月桂酰肌氨酸钠等N-酰基肌氨酸盐等阴离子型表面活性剂,此外还可以举出硬脂基三甲基氯化铵、月桂基三甲基氯化铵等烷基三甲基铵盐;氯化二硬脂基二甲基铵二烷基二甲基铵盐;氯化(N,N’-二甲基-3,5-亚甲基哌啶鎓);氯化十六烷基吡啶鎓等烷基吡啶鎓盐;烷基季铵盐、聚氧乙烯烷基胺等烷基胺盐;多元胺脂肪酸衍生物、戊醇脂肪酸衍生物等阳离子型表面活性剂;2-十一烷基-N,N,N-(羟基乙基羧甲基)2-咪唑啉钠、2-椰油基-2-氢氧化咪唑啉鎓-1-羧基乙氧基2钠盐等咪唑啉类两性表面活性剂;2-十七烷基-N-羧甲基-N-羟乙基咪唑啉鎓甜菜碱、月桂基二甲氨基乙酸甜菜碱、烷基甜菜碱、酰胺甜菜碱、磺基甜菜碱等甜菜碱类两性表面活性剂等两性表面活性剂;脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、脱水山梨糖醇三油酸酯、五-2-乙基己酸双甘油脱水山梨糖醇、四-2-乙基己酸双甘油脱水山梨糖醇等脱水山梨糖醇脂肪酸酯类;单硬脂酸甘油酯、α,α’-油酸焦谷氨酸甘油酯、单硬脂酸甘油苹果酸酯等甘油聚甘油脂肪酸酯类;单硬脂酸丙二醇酯等丙二醇脂肪酸酯类;氢化蓖麻油衍生物、甘油烷基醚、聚氧乙烯-脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯-脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯-脱水山梨糖醇四油酸酯等聚氧乙烯-脱水山梨糖醇脂肪酸酯类;聚氧乙烯-山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯-山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯-山梨糖醇五油酸酯、聚氧乙烯-山梨糖醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯-甘油单异硬脂酸酯、聚氧乙烯-甘油三异硬脂酸酯等聚氧乙烯-甘油脂肪酸酯类;聚氧乙烯单油酸酯、聚氧乙烯二硬脂酸酯、聚氧乙烯单二油酸酯、二硬脂酸乙二醇酯等聚氧乙烯脂肪酸酯类;聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油单异硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油三异硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油单焦谷氨酸单异硬脂酸二酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油马来酸等聚氧乙烯蓖麻油氢化蓖麻油衍生物等非离子型表面活性剂等在《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)中被分类为表面活性剂的物质。
作为pH调节剂,可以举出乳酸-乳酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠、磷酸-磷酸钠、乙酸-乙酸钠、Mclvine试剂等在《化妆品原料基准》、《化妆品类别配合成分规格》(均为药事日报社发行)中记载的缓冲剂。
作为含有本发明的纤维寡糖的食品的例子,包括例如果冻、布丁、酸奶等凝胶;蛋黄酱、调味汁(dressing)、沙司类、蘸料类、汤、蔬菜加工品等调味剂;咖喱、牛肉盖浇饭(hashed meat and rice)、肉沙司、炖肉(stew)、汤等软罐头食品、冷藏食品、牛肉饼、培根、香肠、萨拉米香肠、火腿类等畜产加工品;鱼糕、筒状烤鱼卷、鱼肉火腿-香肠、炸鱼糕等鱼肉加工食品;面包、生面、干面、通心粉、意大利面、包子皮、蛋糕粉、预拌粉(Prepared Mix)、牛奶沙司、饺子-春卷等的皮类等小麦加工食品;咖喱、沙司、汤、佃煮(甜烹海味)、果酱等铁皮罐头、瓶装罐头类;糖果、含片、糖块、巧克力、饼干、曲奇、米饼、日式西式点心、西式带馅点心、简易点心、砂糖点心、布丁等点心类;油炸类;炸肉饼、饺子、包子等半成品;蔬菜糊、肉馅、果肉糊、鱼类贝类的糊等糊类。并且,还包括冰激凌、牛奶冰激凌、冰果、搅打奶油、炼乳、黄油、酸奶、奶酪、白沙司等乳制品;人造黄油、涂抹脂肪、起酥油等油脂加工品等。进而,还可以在可乐等碳酸饮料、含碳酸饮料、含酒精饮料、与乳制品混合的果肉饮料、果汁或含果肉饮料、乳饮料等饮料;咖啡、牛奶、豆浆、可可牛奶、水果牛奶、酸奶等乳酸或乳饮料等;煎茶、乌龙茶、抹茶、红茶等茶饮料等中使用。
作为含有本发明的纤维寡糖的药品/准药品的例子,可以举出例如片剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、浸膏剂、丸剂等固体制剂,除上述固体制剂以外,用于点心、健康食品、口感改良剂、食物纤维增强剂等食品;固体粉饼、洗浴剂、兽药、诊断药、农药、肥料、陶瓷催化剂等中的物质也包括在本发明中。
作为化妆品/准药品的例子,可以举出例如头油、发油、上光油、梳头油、鬓发油、梳整水、发蜡条、发泡(定型泡沫)、润发油、发胶、整发液等整发剂;生发液、护发液、洗发液等育毛剂;彩色发胶、彩色润丝等染发剂;去屑剂、洗发粉、香波等洗发剂;润发素、润丝油、润丝乳、身体润丝(body rinse)、面部润丝(facial rinse)等润丝剂;洁面霜、洗面奶、洁面乳、卸妆乳、洗粉等洗面剂;面膜、油性霜剂、中性霜剂、弱酸性霜剂等霜剂;乳剂、护肤乳等乳液;干性皮肤用化妆水、普通皮肤用化妆水、油性皮肤用化妆水、男性用化妆水、男士化妆水、须后水等化妆水;上妆基底、粉底、香粉、口红、唇膏、唇彩、亮唇膏、唇霜等口红类;眼影、眼线笔、眼霜、描眉膏、睫毛膏、眼部卸妆剂、眼部上妆剂、腮红、眉笔、眉刷、睫毛油等眉眼类化妆剂;指甲油、指甲霜、修甲霜、修脚霜、洗甲液、除光液等美甲剂;香水、古龙水、古龙香水、淡香水等古龙水;浴盐、浴油等浴用化妆品;添加有橄榄油、椿油、婴儿润肤油等的化妆油;日晒用化妆品、冷霜、防晒化妆品、剃须霜、剃须膏等剃须霜剂、剃须前化妆品;滑石粉、爽身粉、痱子粉、香粉等扑粉;等在《化妆品科学指南》(日本化妆品技术者会编,药事日报社发行)中记载的化妆品,可以在分类于其中的化妆品中进行使用。
本发明的含有纤维寡糖的组合物在肠内细菌群改善、乳酸菌、乳杆菌等的活化;血中糖浓度、血中胰岛素浓度的降低;血中胆固醇的降低;体脂肪率的降低;脂质-糖质代谢促进功能;通便-改善便臭;抗龋齿性等各种生理活性方面值得期待,因而除了上述的一般食品用途外,还可以作为生理活性物质在功能性食品、健康食品、减肥食品、药品、准药品等用途中使用。
并且,由于本发明的纤维寡糖组合物具有皮肤屏障功能的改善、皮肤正常菌群的改善效果,所以也可以在皮炎、干燥皮肤等受损皮肤的预防或改善用的功能性化妆品、准药品、药品等用途中使用。
实施例
下面根据实施例来说明本发明,但本发明并不限于这些实施例。
[制造例1]
在普通琼脂培养基中接种里氏木霉(Tricoderma reesei)NBRC31329,于37℃培养7天后,从该培养基表面取1接种环的孢子,接种到通过在总量为1L的精制水中悬浮并溶解1g聚胨、0.5g酵母提取物、2g磷酸二氢钾、1.5g硫酸铵、0.3g硫酸镁、0.3g氯化钙、1mL微量元素(将6mg硼酸、26mg钼酸铵4水合物、100mg氯化铁6水合物、40mg硫酸铜5水合物、8mg硫酸锰4水合物、200mg硫酸锌7水合物溶解在总量为100mL的精制水中的溶解物)、1mL ADEKANOL(一种增稠剂)和10g结晶纤维素(旭化成化学制,商品名PH-101)而得到的培养基中,于28℃进行5天的通气搅拌培养。培养过程中使用氢氧化钠水溶液将培养基的pH调节至2.8~4.7。对培养后的液体进行离心分离,上清液用网孔为0.46μm的微孔过滤膜进行除菌,将所得滤液用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)进行以体积比表示为10倍的浓缩,得到粗酶。
然后,使用市售的源自针叶树的溶解浆粕,在水解条件(盐酸浓度为0.4%盐酸水溶液、120℃、1小时)下进行水解,对酸不溶性残渣进行清洗、过滤,得到湿滤饼。将该湿滤饼制成纤维素浓度为10%的水分散体,使用超高性能分散机-湿式微粉碎机(Ashizawa株式会社制造,商品名PearlMill RL,使用Φ1mm氧化锆珠,填充率为80%),进行压紧-磨碎处理,得到纤维素微粒分散体(平均聚合度为220,乙醚可溶物含量为0.7%,平均粒径为0.7μm,胶体状成分含量为51.5%)。
在50mM乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4.5)中悬浮溶解该磨碎纤维素以使浓度为2质量%、溶解粗酶以使蛋白质浓度为0.25%,并使总量为1000mL,装入玻璃制烧瓶中。将该玻璃制烧瓶放入55℃的水槽中,搅拌内部同时进行4小时的反应。反应完毕后,在悬浮状态下将反应液分注为300μL,使用超滤组件(截留分子量10000)去除酶和未分解的纤维素后,用高效液相色谱法分析糖浓度。该反应液的糖浓度为,纤维三糖0.1质量%、纤维二糖1.5质量%、葡萄糖0.3质量%。
用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)过滤该反应液,所得到的滤液用阳离子交换树脂-阴离子交换树脂进行脱离子处理,于70℃在减压下蒸馏,得到20倍糖浓度的水溶液。
[实施例1]
将100mL制造例1中得到的纤维寡糖水溶液导入200mL的玻璃制烧瓶中,搅拌下以每小时10℃的速度从70℃冷却至25℃(溶剂的溶解度参数δ为22.2)。对在25℃从水溶液中晶析出的纤维寡糖进行减压过滤,用40℃的通风式干燥机干燥,用研钵粉碎后,使用网孔为150μm的筛子筛分,过筛粉末用网孔为45μm的筛子除去微粉,得到纤维寡糖粉末。将500mg所得到的纤维寡糖粉末导入Φ1.1mm的钢制圆柱状臼中,使用Φ1.1mm的平面杵以150MPa加压10秒,对所得到的成型体的硬度进行测定。(平均L/D为1.7,堆积密度为0.43g/mL,纤维二糖含量为99质量%,纤维三糖~纤维六糖含量为0.1质量%,葡萄糖含量为0.9质量%,粉体安息角为43°,晶析收率为50质量%,成型体硬度为67N)
[实施例2]
使用市售的纤维二糖(Aldrich制,纯度为98质量%),在200mL的玻璃制烧瓶中以30质量%的浓度溶解于70℃的水中,使总量为100mL,以每小时10℃的速度从70℃冷却至25℃后,以每分钟10g的速度添加体积混合比为50/50的异丙醇/乙醇溶液以使其相对于水的浓度为50质量%,以每小时10℃的速度从70℃冷却至25℃(溶剂的溶解度参数δ为16.6)。与实施例1同样地对水溶液中晶析出的纤维寡糖进行减压过滤、干燥、粉碎、筛分,得到纤维寡糖粉末。对于所得到的纤维寡糖,与实施例1同样地测定成型体硬度。(平均L/D为2.3,堆积密度为0.54g/mL,纤维二糖含量为99质量%,纤维三糖~纤维六糖含量为0.5质量%,葡萄糖含量为0.5质量%,粉体安息角为48°,晶析收率为89量%,成型体硬度为107N)
[实施例3]
将100mL制造例1中得到的纤维寡糖水溶液导入200mL的玻璃制烧瓶中,搅拌下以每小时10℃的速度从70℃冷却至25℃后,以每分钟10g的速度添加乙醇以使其相对于水为75体积%,从而进行晶析(溶剂的溶解度参数δ为14.5)。对于水溶液中晶析出的纤维寡糖,与实施例1同样地进行减压过滤、干燥、粉碎、筛分,得到纤维寡糖粉末。对于所得到的纤维寡糖,与实施例1同样地测定成型体硬度。(平均L/D为2.5,堆积密度为0.51g/mL,纤维二糖含量为99.9质量%,葡萄糖含量为0.1质量%,粉体安息角为55°,晶析收率为92质量%,成型体硬度为115N)
[实施例4]
将1g实施例1~3中使用的纤维寡糖粉末置于玻璃板上,用滴定器滴加菜籽油(日清油料菜籽油),滴加时,一边搅拌,一边在常温下测定保油量。设终点(饱和吸油量)为粉体表面有油渗出的时刻,如下定义保油量:保油量=饱和吸油量(g)/纤维寡糖粉末量(g)。实施例1的纤维寡糖粉末的保油量为1.0g/g,实施例2为1.1g/g,实施例3为0.95g/g,每种粉末都表现出高吸油性。
[比较例1]
使用市售的D-纤维二糖粉末(SigmaAldrich制造),与实施例4同样地测定保油量。市售的D-纤维二糖的保油量为0.85。
[实施例5]
将实施例1~3的纤维寡糖粉末在相对湿度75%、40℃的环境下放置18小时,测定此时的吸湿度。
吸湿度=放置后的重量增加(g)/纤维寡糖粉末量(g)×100(质量%)
每种粉末的吸湿度都小于1质量%,都完全没有发现粉体的结块和安息角的增加。
[实施例6]
以1质量%的浓度将实施例1~3的纤维寡糖粉末溶解在pH3.0的Mcllvine缓冲液中,在高压釜中于121℃加热20分钟后,测定糖组成,由此测定加热后的残存率。每种纤维寡糖粉末在加热后的纤维寡糖残存率均为90%以上,显示出高耐热-耐酸性。
[实施例7]
以2质量%将市售的马铃薯淀粉悬浮在纯水中,于95℃加热2小时,从而得到淀粉水溶液。然后,以6质量%将实施例1~3中得到的纤维寡糖粉末溶解在纯水中,制成纤维寡糖水溶液。将淀粉水溶液和各纤维寡糖水溶液等量混合,于4℃保存12小时,测定保存前后的浊度(波长660nm),由此求出淀粉的变性率。
淀粉变性率=(保存后的浊度-保存前的浊度)/(保存后的浊度)×100(%)
实施例1~3的纤维寡糖粉末的淀粉变性率分别为5%、17%、9%,相对于纤维寡糖无添加时的淀粉变性率31%,确认到淀粉的变性防止效果。
[实施例8]
分别以5质量%的浓度在市售的蛋清中溶解实施例1~3中得到的纤维寡糖粉末2,制作出蛋清-纤维寡糖溶液。将这些蛋清-纤维寡糖溶液在-20℃保存5天,测定保存前后的浊度(波长660nm),由此求出蛋白质的变性率。
蛋白质变性率=(保存后的浊度-保存前的浊度)/(保存后的浊度)×100(%)
实施例1~3的纤维寡糖粉末的蛋白质变性率分别为3%、9%、7%,相对于纤维寡糖无添加时的淀粉变性率62%,确认到蛋白质的变性防止效果。
[实施例9]
使用实施例1中得到的纤维寡糖粉末,用以下方法制成食品组合物。
首先,将675.6g药典玉米淀粉(平均粒径为9μm)、15g滑石(和光纯药株式会社制造)装入聚乙烯袋中,用手振动3分钟后,称取195g实施例1的纤维寡糖粉末加入该混合粉体中(总量900g),投入容量为5升的V型混合机(DALTON社制造)中,混合30分钟。随机从10处的粉体层中各采集0.5g粉体,测定粉体中的纤维寡糖浓度。此时纤维寡糖浓度的变动系数为0.9%,该混合粉体用网孔为150μm的筛子筛分后,未在筛子上部发现凝集物。
此处所说的变动系数如下来表示:在上述的纤维寡糖的浓度分析中,由10处的粉体样品的纤维寡糖浓度的标准偏差和平均值以下式来表示变动系数。
变动系数(%)=标准偏差/平均浓度×100
[制造例2]
在普通琼脂培养基中接种里氏木霉GL-1株(独立行政法人产业技术综合研究所,特许生物保藏中心,保藏号FERM ABP-10323),于37℃培养7天后,从该培养基表面取1接种环的孢子,接种到通过在总量为1L的精制水中悬浮并溶解1g聚胨、0.5g酵母提取物、2g磷酸二氢钾、1.5g硫酸铵、0.3g硫酸镁、0.3g氯化钙、1mL微量元素(将6mg硼酸、26mg钼酸铵4水合物、100mg氯化铁6水合物、40mg硫酸铜5水合物、8mg硫酸锰4水合物、200mg硫酸锌7水合物溶解在总量为100mL的精制水中而得到的溶解物)、1mL ADEKANOL和10g结晶纤维素(旭化成化学制,商品名PH-101)而得到的培养基中,于28℃进行5天的通气搅拌培养。培养过程中使用氢氧化钠水溶液将培养基的pH调节至2.8~4.7。对培养后的液体离心分离,上清液用网孔为0.46μm的微孔过滤膜进行除菌,将所得滤液用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)进行以体积比表示为10倍的浓缩,得到粗酶。
然后,使用市售的源自针叶树的溶解浆粕,在水解条件(盐酸浓度为0.4%盐酸水溶液、120℃、1小时)下进行水解,对酸不溶性残渣进行清洗、过滤,得到湿滤饼。将该湿滤饼制成纤维素浓度为10%的水分散体,使用超高性能分散机-湿式微粉碎机(Ashizawa株式会社制造,商品名PearlMill RL,使用Φ1mm氧化锆珠,填充率为80%),进行压紧-磨碎处理,得到纤维素微粒分散体(平均聚合度为220,乙醚可溶物含量为0.7%,平均粒径为0.7μm,胶体状成分含量为51.5%)。
在50mM乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4.5)中悬浮溶解该磨碎纤维素以使浓度为2质量%、溶解粗酶以使蛋白质浓度为0.25%,并使总量为1000mL,装入玻璃制烧瓶中。将该玻璃制烧瓶放入55℃的水槽中,搅拌内部同时进行4小时的反应。反应完毕后,在悬浮状态下将反应液分注为300μL,使用超滤组件(截留分子量10000)去除酶和未分解的纤维素后,用高效液相色谱法分析糖浓度。该反应液的糖浓度为,纤维三糖~纤维六糖0.2质量%、纤维二糖1.5质量%、葡萄糖0.3质量%。
用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)过滤该反应液,所得到的滤液用阳离子交换树脂-阴离子交换树脂进行脱离子处理,于70℃在减压下蒸馏,得到20倍糖浓度的水溶液。
[制造例3]
将100mL制造例2中得到的纤维寡糖水溶液导入200mL的玻璃制烧瓶中,搅拌下以每小时10℃的速度从70℃冷却至5℃。对在25℃从水溶液中晶析出的纤维寡糖进行减压过滤,用40℃的通风式干燥机干燥并用研钵粉碎后,使用网孔为150μm的筛子筛分,过筛粉末用网孔为45μm的筛子除去微粉,得到纤维寡糖粉末CE-1A。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表1。
[制造例4]
将制造例2的菌株改为红黄纤维弧菌(Cellovibrio gilvus),将培养时的pH改为4~10,将酶反应时的缓冲液换为pH6.5的磷酸缓冲液,除此以外,用与制造例1相同的方法制作出纤维寡糖水溶液。
使所得到的纤维寡糖水溶液通过填充有活性炭的柱子,除去富含纤维二糖的组分,用与制造例2相同的操作得到纤维寡糖粉末CE-2A。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表1。
[制造例5]
在制造例3的纤维寡糖的制造方法中,常温下,在纤维寡糖水溶液中添加以重量比计为2.5倍的乙醇,与制造例1同样地进行冷却晶析,得到纤维寡糖粉末CE-3A。
[制造例6]
对制造例4中得到的纤维寡糖水溶液直接进行喷雾干燥(东京理化制,喷雾干燥机,出口温度72℃),得到纤维寡糖粉末CE-4A。
[表1]
※G1:葡萄糖,CE2:纤维二糖,CE3:纤维三糖,
CE4:纤维四糖,CE5:纤维五糖,CE6:纤维六糖
<对胰岛素非上升性的确认试验>
对出生后7周龄的SD大鼠进行1个星期的预备喂养,令其自由摄入1个星期的AIN-93G(Oriental酵母工业制造),然后使其绝食16小时,接着使用导管给予1500mg/kg表1中的各纤维寡糖水溶液。在给药前和给药后、以及给药30分钟后,在无麻醉状态下由骸外静脉采血,测定胰岛素浓度(ng/mL,使用Shibayagi生产的Lbis胰岛素试剂盒)。CE-1A~3A中的胰岛素浓度的上升率不足30%,由此确认了这些纤维寡糖为胰岛素非上升性。
<对于自然发病2型糖尿病小鼠的生活习惯病的改善>
[实施例10~12]
作为实验动物使用5周龄的雄性KK-Ay小鼠(CLEA Japan Inc.制,Ta/Jcl)。将小鼠装进单独的不锈钢笼子中,在保持室温23±5℃、湿度40~70%、明暗各12小时(照明为上午7点~下午7点)、换气12次/小时(经过滤器除菌的新鲜空气)的喂养室内喂养动物。
首先,进行5天的预备喂养,预备喂养过程中,在喂食器中加入粉末饲料(CRF-1,Oriental酵母工业制造),令其自由摄入。并且,饮用水使用自来水,在喂养期间令其自由摄入。
预备喂养后,利用计算机随机分组,每组10只,并使各组在分组前的血糖值、体重大致相等。分组后,将粉末饲料换成标准食物(AIN-93G,Oriental酵母工业制造),进行同样的喂养。对于纤维寡糖的添加效果,保持上述标准食物中的蔗糖不变,将蔗糖以外的成分中的2.5质量%或5质量%替换为表1所示的CE-1A~3A的各纤维寡糖粉末,从而进行比较。30天喂养和60天喂养的结果列于表2。
[比较例2、3]
作为纤维寡糖使用CE-3A、CE-4A,除此以外,在与实施例10~12相同的条件下进行喂养。结果列于表2。
[比较例4]
作为对照,不添加纤维寡糖,仅用标准食物进行喂养。结果列于表2。通过试验,摄食量和体重在实施例和比较例中没有显著差异。
<饲料组成>
酪蛋白 20.0质量%
L-半胱氨酸 0.3质量%
玉米淀粉 39.7质量%
α化玉米淀粉 13.2质量%
蔗糖 10.0质量%
大豆油 7.0质量%
纤维素粉末 5.0质量%
AIN-93混合矿物质 3.5质量%
AIN-93混合维生素 1.0质量%
重酒石酸胆碱 0.25质量%
叔丁基对苯二酚 0.0014质量%
※对于纤维寡糖添加体系,保持上述的蔗糖量为10.0质量%不变,将其他成分制成混合物后的饲料总量的5.0质量%替换成纤维寡糖。
<试验项目和方法>
(体重测定)
分组后30天、60天后测定各小鼠的体重。
(摄食量测定)
分组后8、15、30、60天后,测定各小鼠当日的摄食量。
(采血和血液分析)
分组后15天、30天、60天后,使用经肝素处理的毛细管,由尾静脉采集约100μL的血液。所得到的血液用离心机(日立工机株式会社制造,商品名CF8DL)在4℃、1972G、15分钟的条件下离心分离,对血浆进行如下项目的测定。
■血中脂联素浓度(使用大塚制药生产的ADIPO ELISA试剂盒)
■血浆中性脂肪(使用和光纯药生产的甘油三酯E-test Wako)
■血浆总胆固醇(使用和光纯药生产的胆固醇-E-test Wako)
(对摘除的器官的测定)
给予60天后,在腹腔内给药50mg/kg盐酸氯胺酮和2mg/kg甲苯噻嗪进行麻醉的条件下摘除肝脏和副睾丸脂肪后,测定重量,在液氮中冷冻。对于肝脏内的脂质,用己烷由上述肝脏中提取脂质,测定肝脏内的总胆固醇浓度和中性脂肪浓度。
表2的结果表明,在同样的喂养期间内,每个实施例的血中脂联素的降低率均被抑制在30%以下,肝脏内的中性脂肪浓度降低率也都为15%以上。与此相对,比较例2、3的血中脂联素降低率和肝脏内的中性脂肪浓度降低率均不在本发明的范围内。
并且,实施例10~12的纤维寡糖添加体系相对于比较例4在血浆、腹腔内脂质方面显示出有意义的降低。对实施例10和实施例11进行比较表明,在饲料中增加纤维寡糖含量,在短时间内会产生效果,在长期给药时绝对值会降低。通过实施例11和12的比较可知,纤维三糖~纤维六糖的含量高时,血中的效果表达变迟缓,肝脏脂质的降低得到了促进。
并且,将比较例2与实施例10~12进行比较可知,饲料中的葡萄糖含量较多时,虽具有副睾丸脂质的降低作用,但对血中脂质的效果表达变得迟缓,对肝脏脂质没有显著差异。
进而,比较例3中,纤维二糖含量小于70质量%,不在本发明的范围内,相对于实施例和比较例2,其对于副睾丸脂质量和血中脂质的效果变小。
<对于健康大鼠的生活习惯病的改善>
[实施例13、14]
作为实验动物使用5周龄的雄性SD大鼠(CLEA Japan Inc.制)。将大鼠装进单独的不锈钢笼子中,在保持室温23±5℃、湿度40~70%、明暗各12小时(照明为上午7点~下午7点)、换气12次/小时(经过滤器除菌的新鲜空气)的喂养室内喂养动物。
首先,进行5天的预备喂养,预备喂养过程中,在喂食器中加入粉末饲料(CRF-1,Oriental酵母工业制造),令其自由摄入。并且,饮用水使用自来水,在喂养期间令其自由摄入。
预备喂养后,利用计算机随机分组,每组10只,并使各组在分组前的血糖值、体重大致相等。分组后,并不更换粉末饲料,进行同样的喂养。
对于纤维寡糖,将上述CE-1A溶解或悬浮在精制水中,使用导管给予160mg/kg、1000mg/kg,1次/日,给药13周。给药后,将30mg/kg戊巴比妥钠通过腹腔内给药实施麻醉后,由后大静脉经腹部采集血液2.0~2.5mL,向盛有0.1mL的3.8w/v%柠檬酸钠的试管中分注0.9mL血液,以1870G离心分离15分钟。使用离心后的血浆,与上述同样地测定血中脂联素浓度、血浆和肝脏内的中性脂肪浓度。
[比较例5]
除了不给予纤维寡糖以外,用与实施例13、14相同的操作进行喂养,测定血中脂联素浓度、血浆和肝脏内的中性脂肪浓度。
通过试验,摄食量和体重在实施例和比较例中没有显著差异。
[表3]
※表中的*表示相同喂养期间中各纤维寡糖添加体系
相对于对照的ST检验(Student’s T检验)的显著性差异的检验结果。
*:具有10%的显著性差异。
**:具有5%的显著性差异。
***:具有1%的显著性差异。
表3表明,相对于比较例,实施例的脂联素浓度降低率为30%以下,肝脏内中性脂肪浓度的降低率为15%以上,在本发明的范围内。并且,纤维寡糖给予体系中,血中和肝脏中的脂质浓度表现出用量依赖性的降低,在高用量的体系中肝脏重量也趋于降低。该试验表明,对于健康大鼠,即使不改变摄食量,通过摄入纤维寡糖也能够降低血中和肝脏内脂质浓度。
<肠内细菌群的活化>
[制造例7]
在普通琼脂培养基中接种里氏木霉,于37℃培养7天后,从该培养基表面取1接种环的孢子,接种到通过在总量为1L的精制水中悬浮并溶解有1g聚胨、0.5g酵母提取物、2g磷酸二氢钾、1.5g硫酸铵、0.3g硫酸镁、0.3g氯化钙、1mL微量元素(将6mg硼酸、26mg钼酸铵4水合物、100mg氯化铁6水合物、40mg硫酸铜5水合物、8mg硫酸锰4水合物、200mg硫酸锌7水合物溶解在总量为100mL的精制水中的溶解物)、1mLADEKANOL(一种增稠剂)和10g结晶纤维素(旭化成化学制,商品名PH-101)而得到的培养基中,于28℃进行5天的通气搅拌培养。培养过程中使用氢氧化钠水溶液将培养基的pH调节至2.8~4.7。对培养后的液体离心分离,上清液用网孔为0.46μm的微孔过滤膜进行除菌,将所得滤液用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)进行以体积比表示为10倍的浓缩,得到粗酶。
然后,使用市售的源自针叶树的溶解浆粕,在水解条件(盐酸浓度为0.4%的盐酸水溶液、120℃、1小时)下进行水解,对酸不溶性残渣进行清洗、过滤,得到湿滤饼。将该湿滤饼制成纤维素浓度为10%的水分散体,使用超高性能分散机-湿式微粉碎机(Ashizawa株式会社制造,商品名Pearl Mill RL,使用Φ1mm氧化锆珠,填充率为80%),进行压紧-磨碎处理,得到纤维素微粒分散体(平均聚合度为220,乙醚可溶物含量为0.7%,平均粒径为0.7μm,胶体状成分含量为51.5%)。
在50mM乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4.5)中悬浮溶解该磨碎纤维素以使浓度为2质量%、溶解粗酶以使蛋白质浓度为0.25%,并使总量为1000mL,装入玻璃制烧瓶中。将该玻璃制烧瓶放入55℃的水槽中,搅拌内部并同时进行4小时的反应。反应完毕后,在悬浮状态下将反应液分注为300μL,使用超滤组件(截留分子量10000)去除酶和未分解的纤维素后,用高效液相色谱法分析糖浓度。该反应液的糖浓度为,纤维三糖~纤维六糖0.2质量%、纤维二糖1.5质量%、葡萄糖0.3质量%。
用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)过滤该反应液,所得到的滤液用阳离子交换树脂-阴离子交换树脂进行脱离子处理,于70℃在减压下蒸馏,得到20倍糖浓度的水溶液。
[制造例8]
将100mL制造例7中得到的纤维寡糖水溶液导入200mL的玻璃制烧瓶中,搅拌下以每小时10℃的速度从70℃冷却至5℃。对在25℃从水溶液中晶析出的纤维寡糖减压过滤,用40℃的通风式干燥机干燥并用研钵粉碎后,使用网孔为150μm的筛子筛分,过筛粉末用网孔为45μm的筛子除去微粉,得到纤维寡糖粉末CE-1B。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表4。
[制造例9]
将100mL制造例7中得到的纤维寡糖水溶液导入200mL的玻璃制烧瓶中,搅拌下以每小时10℃的速度从70℃冷却至5℃后,以每分钟10g的速度添加乙醇使其相对于水为70质量%,进行晶析。用与制造例8相同的方法对水溶液中晶析出的纤维寡糖进行减压过滤、干燥、粉碎、筛分,得到纤维寡糖粉末CE-2B。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表4。
[制造例10]
将制造例7的菌株改为红黄纤维弧菌,将培养时的pH改为4~10,将酶反应时的缓冲液换为pH6.5的磷酸缓冲液,除此以外,用与制造例1相同的方法制作出纤维寡糖水溶液。
使所得到的纤维寡糖水溶液通过填充有活性炭的柱子,除去富含纤维二糖的组分,用与制造例9相同的操作得到纤维寡糖粉末CE-3B。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表4。
[制造例11]
暂且用制造例2的方法对制造例7的纤维寡糖水溶液进行晶析,将所得到的纤维寡糖制成水溶液,利用制造例4所述的活性炭处理截留纤维三糖以上的分子量成分。用与制造例9相同的操作进行粉末化,得到纤维寡糖粉末CE-4B。
[制造例12]
在制造例10的利用活性炭获得的柱馏分中,采集富含葡萄糖的馏分,在60℃的通气烘箱中干燥16小时,用与制造例8相同的操作进行粉末化,得到纤维寡糖粉末CE-5B。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表4。
[制造例13]
在制造例10的利用活性炭得到的柱馏分中,采集富含纤维三糖~纤维六糖的馏分,在60℃的通气烘箱中干燥16小时,用与制造例9相同的操作进行粉末化,得到纤维寡糖粉末CE-6B。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表4。
[表4]
※G1:葡萄糖,CE2:纤维二糖,CE3:纤维三糖,
CE4:纤维四糖,CE5:纤维五糖,CE6:纤维六糖
[实施例15]
使用制造例7~10中得到的CE-1B~3B,利用以下方法进行各菌株的同化测试。
在蛋白胨-酵母-法尔兹溶液(PYF日本制药制造)培养基中添加1.0质量%本发明的纤维寡糖,制成1.5mL无菌培养基(pH7.2),预先在添加有法尔兹溶液的GAM肉汤培养基(日本制药制,产品名GAM,在肉汤中添加有0.4体积%的法尔兹溶液)中对以下各种菌株进行前培养,得到供试菌液,将0.03mL供试菌液接种在上述1.5mL无菌培养基中,于37℃厌氧培养96小时后,测定pH,判断同化性。可以将该pH降低至不足6.0的状态判断为该菌株同化了纤维寡糖。另外,pH越低,越说明该菌株的增殖得到了促进。结果列于表5。
[比较例6]
将纤维寡糖替换为CE-4B~6B,与实施例的方法同样地进行同化性的评价。
[参考例1]
使用龙胆寡糖(日本食品化工制,商品名Gentose 80P)、果寡糖(明治制果制,商品名Meioligo P)代替纤维寡糖,与实施例同样地评价。
<使用的菌株>
1)青春双歧杆菌
2)两歧双歧杆菌
3)短双歧杆菌
4)婴儿双歧杆菌
5)长双歧杆菌
6)嗜酸乳杆菌
7)干酪乳杆菌
8)唾液乳杆菌
9)加氏乳杆菌
10)发酵乳杆菌
11)化脓性链球菌
12)吉氏拟杆菌
13)脆弱拟杆菌
14)卵形拟杆菌
15)多形拟杆菌
16)普通拟杆菌
17)单形拟杆菌
18)产黑素拟杆菌
19)可变梭杆菌
20)坏死梭杆菌
21)趋巨巨单胞菌
22)多酸光冈菌
23)粘液真杆菌
24)产气真杆菌
25)产亚硝酸真杆菌
26)迟缓真杆菌
27)产气肠杆菌
28)粪肠球菌
29)丁酸梭菌
30)梭形梭菌
31)球形梭菌
32)艰难梭菌
33)产气荚膜梭菌
34)类腐败梭菌
35)多枝梭菌
36)无害梭菌
37)生孢梭菌
38)痤疮丙酸杆菌
39)短小消化链球菌
40)不解糖消化链球菌
41)大消化链球菌
42)普氏消化链球菌
43)大肠杆菌
44)肺炎克雷白菌
<评价标准>
-:pH为6.0以上
±:pH为5.5~不足6.0
+:pH为5.0~不足5.5
++:pH为4.5~不足5.0
+++:pH不足4.5
[表5]
※表中的GO表示龙胆寡糖,FO表示果寡糖。
如表5所示,通过提高纤维二糖含量、降低葡萄糖浓度并使纤维三糖~纤维六糖含量在适当的范围内,可以选择性地活化双尾菌、乳酸菌,不仅抑制产气荚膜梭菌、大肠杆菌的增殖,还能抑制脆弱拟杆菌、产气真杆菌的增殖。
<幽门菌的抑制或改善剂>
[制造例14]
在普通琼脂培养基中接种里氏木霉,于37℃培养7天后,从该培养基表面取1接种环的孢子,接种到通过在总量为1L的精制水中悬浮并溶解1g聚胨、0.5g酵母提取物、2g磷酸二氢钾、1.5g硫酸铵、0.3g硫酸镁、0.3g氯化钙、1mL微量元素(将6mg硼酸、26mg钼酸铵4水合物、100mg氯化铁6水合物、40mg硫酸铜5水合物、8mg硫酸锰4水合物、200mg硫酸锌7水合物溶解在总量为100mL的精制水中的溶解物)、1mLADEKANOL和10g结晶纤维素(旭化成化学制,商品名PH-101)而得到的培养基中,于28℃进行5天的通气搅拌培养。培养过程中使用氢氧化钠水溶液将培养基的pH调节至2.8~4.7。对培养后的液体离心分离,上清液用网孔为0.46μm的微孔过滤膜进行除菌,滤液用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)进行以体积比表示为10倍的浓缩,得到粗酶。
然后,使用市售的源自针叶树的溶解浆粕,在水解条件(盐酸浓度为0.4%盐酸水溶液、120℃、1小时)下进行水解,对酸不溶性残渣进行清洗、过滤,得到湿滤饼。将该湿滤饼制成纤维素浓度为10%的水分散体,使用超高性能分散机-湿式微粉碎机(Ashizawa株式会社制造,商品名PearlMill RL,使用Φ1mm氧化锆珠,填充率为80%),进行压紧-磨碎处理,得到纤维素微粒分散体(平均聚合度为220,乙醚可溶物含量为0.7%,平均粒径为0.7μm,胶体状成分含量为51.5%)。
在50mM乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4.5)中悬浮溶解该磨碎纤维素以使浓度为2质量%、溶解粗酶以使蛋白质浓度为0.25%,并使总量为1000mL,装入玻璃制烧瓶中。将该玻璃制烧瓶放入55℃的水槽中,搅拌内部,进行4小时的反应。反应完毕后,在悬浮状态下将反应液分注为300μL,使用超滤组件(截留分子量10000)去除酶和未分解的纤维素后,用高效液相色谱法分析糖浓度。该反应液的糖浓度为,纤维三糖~纤维六糖0.2质量%、纤维二糖1.5质量%、葡萄糖0.3质量%。
用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)过滤该反应液,所得到的滤液用阳离子交换树脂-阴离子交换树脂进行脱离子处理,于70℃在减压下蒸馏,得到20倍糖浓度的水溶液。
[制造例15]
将100mL制造例14中得到的纤维寡糖水溶液导入200mL的玻璃制烧瓶中,搅拌下以每小时10℃的速度从70℃冷却至5℃后,以每分钟10g的速度添加乙醇使其相对于水为70质量%,进行晶析。对水溶液中晶析出的纤维寡糖进行减压过滤、干燥、粉碎、筛分,得到纤维寡糖粉末CE-1C。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表6。
[制造例16]
将制造例14的菌株改为红黄纤维弧菌,将培养时的pH改为4~10,将酶反应时的缓冲液换为pH6.5的磷酸缓冲液,除此以外,用与制造例14相同的方法制作出纤维寡糖水溶液。
使所得到的纤维寡糖水溶液通过填充有活性炭的柱子,采集富含葡萄糖的馏分,在60℃的通气烘箱中干燥16小时,用与制造例2相同的操作进行粉末化,得到纤维寡糖粉末CE-2C。所得到的纤维寡糖粉末的糖组成列于表6。
[表6]
※表中各符号表示以下的糖质。
G1:葡萄糖、CO2:纤维二糖、CO3:纤维三糖、CO4:纤维四糖、CO5:纤维五糖、CO6:纤维六糖
[实施例16]
作为纤维寡糖使用CE-1C,制作如下的被测液,对幽门菌的增加抑制率进行了测定。结果列于表7。
<被测液>
(0)未添加纤维寡糖的5%马血清加1/10加布氏肉汤
(1)溶解有2%CE-1C的5%马血清加1/10布氏肉汤
(2)溶解有5%CE-1C的5%马血清加1/10布氏肉汤
(3)溶解有10%CE-1C的5%马血清加1/10布氏肉汤
<培养方法>
使用羊血液琼脂培养基K(BBL)于35℃对试验菌株(幽门螺杆菌ATCC 43504)进行3天微好氧培养后,用无菌生理食盐水进行调制以使麦氏浊度为No.2(约107~108CFU/mL)。用无菌生理食盐水将其稀释100倍,制成添加用菌液。向各9mL的被测液中添加1mL添加用菌液,于35℃在微好氧条件下振荡培养,以此作为检测液。培养72小时后,采集各检测液,用无菌生理食盐水制成10稀释倍的梯度液。用接种环将原液和各稀释梯度液各50μL涂布在羊血液琼脂培养基K上,在微好氧条件下于35℃培养4~5天。此外,0小时后仅对被测液实施定量。培养后测出繁殖的菌数,求出每1mL中的活菌数。增加抑制率以下式求出。
增加抑制率(%)=(活菌数2-活菌数1)/活菌数2×100
[实施例17]
将实施例16中的纤维寡糖改为CE-2C,并使被测液中纤维寡糖的添加量为2%,与实施例1同样地求出幽门菌的增加抑制率。结果列于表7。
[比较例7]
使用D-葡萄糖(和光纯药制造)替代实施例13中的纤维寡糖,并使其在被测液中的添加量为2%,与实施例13同样地求出幽门菌的增加抑制率。结果列于表7。
[表7]
由实施例16、17可知,纤维寡糖具有抑制幽门菌的效果。进而,由实施例16可知,纤维寡糖的添加量越多,对幽门菌的增加抑制率越高,对幽门菌的抑制效果越强。
并且,相对于实施例17,实施例16中纤维二糖含量高、纤维三糖~纤维六糖含量以及葡萄糖含量低,在同一添加量下,越是幽门菌的活菌数少、纤维寡糖中纤维二糖的含量高的情况,抑制效果越强。
进而,由比较例7可知,葡萄糖不具有对幽门菌的抑制效果。
[实施例18]
作为纤维寡糖使用CE-1C,并使添加量为5%、10%,用与实施例16相同的操作进行培养。以48~96小时的培养时间进行振荡,与未添加的情况比较活菌数。结果见图1。
<皮肤屏障功能改善剂>
[制造例17]
在普通琼脂培养基中接种里氏木霉,于37℃培养7天后,从该培养基表面取1接种环的孢子,接种到通过在总量为1L的精制水中悬浮并溶解1g聚胨、0.5g酵母提取物、2g磷酸二氢钾、1.5g硫酸铵、0.3g硫酸镁、0.3g氯化钙、1mL微量元素(将6mg硼酸、26mg钼酸铵4水合物、100mg氯化铁6水合物、40mg硫酸铜5水合物、8mg硫酸锰4水合物、200mg硫酸锌7水合物溶解在总量为100mL的精制水中的溶解物)、1mL
ADEKANOL和10g结晶纤维素(旭化成化学制,商品名PH-101)而得到的培养基中,于28℃进行5天的通气搅拌培养。培养过程中使用氢氧化钠水溶液将培养基的pH调节至2.8~4.7。对培养后的液体离心分离,上清液用网孔为0.46μm的微孔过滤膜进行除菌,滤液用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)进行以体积比表示为10倍的浓缩,得到粗酶。
然后,使用市售的源自针叶树的溶解浆粕,在水解条件(盐酸浓度为0.4%盐酸水溶液、120℃、1小时)下进行水解,对酸不溶性残渣进行清洗、过滤,得到湿滤饼。将该湿滤饼制成纤维素浓度为10%的水分散体,使用超高性能分散机-湿式微粉碎机(Ashizawa株式会社制造,商品名PearlMill RL,使用Φ1mm氧化锆珠,填充率为80%),进行压紧-磨碎处理,得到纤维素微粒分散体(平均聚合度为220,乙醚可溶物含量为0.7%,平均粒径为0.7μm,胶体状成分含量为51.5%)。
在50mM乙酸-乙酸钠缓冲液(pH4.5)中悬浮溶解该磨碎纤维素以使浓度为2质量%,溶解粗酶以使蛋白质浓度为0.25%,并使总量为1000mL,装入玻璃制烧瓶中。将该玻璃制烧瓶放入55℃的水槽中,搅拌内部,进行4小时的反应。反应完毕后,在悬浮状态下将反应液分注为300μL,使用超滤组件(截留分子量10000)去除酶和未分解的纤维素后,用高效液相色谱法分析糖浓度。该反应液的糖浓度为,纤维三糖~纤维六糖0.2质量%、纤维二糖1.5质量%、葡萄糖0.3质量%。
用截留分子量为13000的超滤膜(旭化成化学制,商品名Microza束型组件ACP-0013)过滤该反应液,所得到的滤液用阳离子交换树脂-阴离子交换树脂进行脱离子处理,于70℃在减压下蒸馏,得到20倍糖浓度的水溶液。
[制造例18]
将100mL制造例17中得到的纤维寡糖水溶液导入200mL的玻璃制烧瓶中,搅拌下以每小时10℃的速度从70℃冷却至5℃后,以每分钟10g的速度添加乙醇使其相对于水为60质量%,进行晶析。用与制造例2相同的方法对水溶液中晶析出的纤维寡糖进行减压过滤、干燥、粉碎、筛分,得到纤维寡糖粉末CE-1D。CE-1D的糖组成为:纤维二糖含量为94.9质量%,纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖的总含量为2.6质量%,葡萄糖含量为2.5质量%。
[制造例19]
将制造例18中得到的CE-1D制成固体成分为25质量%的水溶液,使用其代替制造例18的纤维寡糖水溶液,重复进行与制造例18相同的操作,得到CE-2D。CE-2D的糖组成为:纤维二糖含量为96.3质量%,纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖的总含量为1.7质量%,葡萄糖含量为2.0质量%。
[制造例20]
将制造例18中得到的CE-1D制成固体成分为25质量%的水溶液,使用其代替制造例18的纤维寡糖水溶液,重复进行与制造例18相同的操作,得到CE-3D。CE-3D的糖组成为:纤维二糖含量为99.1质量%,纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖的总含量为0.9质量%。在CE-3D中追加相对于CE-3D为2.0质量%的市售的葡萄糖(和光纯药制,将特级品粉碎后的粉碎物),得到CE-4D。
[制造例21]
在CE-1D中追加相对于纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖的总量为11.5质量%的市售的葡萄糖(和光纯药制,将特级品粉碎后的粉碎物),得到CE-5D。
[制造例22]
将制造例17的菌株改为红黄纤维弧菌,不对培养时的pH进行调整,将酶反应时的缓冲液换为pH6.5的磷酸缓冲液,除此以外,用与制造例17相同的方法制作出纤维寡糖水溶液。
使所得到的纤维寡糖水溶液通过填充有活性炭的柱子,去除富含纤维二糖的馏分,用与制造例18相同的操作得到纤维寡糖粉末CE-6D。CE-6D的糖组成为:纤维二糖含量为74.5质量%,纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖、纤维六糖的总含量为21.8质量%,葡萄糖含量为3.7质量%。
[实施例19~23]
使用制造例17~22中得到的CE-1D、2D、4D、5D、6D,使用表1所示组成的水溶液作为纤维寡糖水溶液,进行如下的试验。
对3名男性和2名女性(平均年龄36岁)的被测试者进行经皮水分蒸散量恢复试验。首先,各被测试者用70%乙醇擦拭手腕内侧(被测部位)后,在恒温恒湿室(室温22℃、湿度45%)中适应15分钟,用双槽水分蒸散监视器(Asahi Biomed社制造TW-AS型)对被测部位进行3次测定,以其平均值求出初期TEWL值(TEWL0)。然后,测定初期TEWL后,清洗被测部位,使用斑试器(Epitest社制造),将2质量%的十二烷基硫酸钠(SDS)密闭式敷裹涂布在被测部位,清洗后,与上述同样地测定TEWL(TEWL粗糙皮肤)。接着,在同一部位涂布精制水或本发明的纤维寡糖水溶液,涂布后2小时,利用上述方法对同一部位进行TEWL测定(TEWL2)。粗糙皮肤为100时的TEWL相对值利用下式(1)求出。并且,根据上述的TEWL相对值,利用下式(2)求出经皮水分蒸散量的恢复率。所得结果于表8列出。
[比较例8]
使用不添加糖的精制水代替纤维寡糖水溶液,与实施例19~23同样地进行评价。结果列于表8。
[比较例9]
使用棉子糖(旭化成化学制,oligo GGF)代替纤维寡糖水溶液,使用去掉了结晶水后的糖质的固体成分为5%的水溶液,与实施例19~23同样地进行评价。结果列于表1。
由表8的结果可知,通过使用本发明的纤维寡糖,能降低TEWL的相对值,提高经皮水分蒸散量的恢复促进率,改善皮肤的屏障功能。
并且,棉子糖与精制水相比,其TEWL相对值较差,恢复率显示为负数。
[表8]
[实施例24~26、比较例10~13]
实施例24~26、比较例10、11中,以表9所示的配方将纤维寡糖和葡萄糖制成水溶液(全糖浓度5质量%),对“发粘”、“光滑(顺滑)”以及褐变性进行了评价。比较例12中制作5质量%的凡士林水溶液,比较例13中制作5质量%的棉子糖水溶液,与上述同样地进行了评价。(另外,对于比较例12,与实施例19~23同样地测定出的TEWL相对值为26.4%。比较例13的TEWL相对值为42.1%。)
<评价方法>
对于在实施例和比较例中得到的样品,针对1)发粘、2)光滑和3)褐变性进行了评价。另外,对于1)发粘和2)光滑,在年龄为24~55岁的健康者(男6名、女6名)的内腕部涂布实施例24~26、比较例10~13的水溶液和水,按照如下的评价标准进行了问卷调查。
1)对“发粘”的评价方法
(发粘)
1分:发粘
2分:稍发粘
3分:一般
4分:不太发粘
5分:不发粘
※判断标准均相对于水。
2)光滑(顺滑)的评价方法
1分:差
2分:稍差
3分:一般
4分:稍好
5分:好
■判断标准均相对于水。
3)褐变性的评价方法
制作Mclvine水溶液,使表3的实施例24~26、比较例12、13的糖组成中全糖浓度为10质量%,还含有0.5质量%甘氨酸,并使pH为7。将制成的各水溶液在100℃加热1小时,于20℃冷却后,测定λ=480nm的吸光度。
根据表9对实施例24~26进行比较可知,纤维寡糖中纤维二糖含量越高,则“光滑(顺滑)”变好。并且,对实施例和比较例11进行比较可知,纤维寡糖中纤维三糖~纤维六糖的高分子量成分增加时,“光滑(顺滑)”变差。对于褐变性,对实施例和比较例10进行比较可知,评价样品的吸光度明显增加,溶液的变色增大。另外,这次的评价体系中,无论葡萄糖量多少,在“发粘”方面没有变化。
对实施例和比较例进行比较的结果显示,凡士林的TEWL相对值虽与纤维寡糖差不多,但“发粘”、“顺滑”等触感较差,比较例13中,单独使用棉子糖时,TEWL相对值和触感都不及纤维寡糖。
[配方例1]
美肤水的配方例于以下表10中列出。
[表10]
No | 成分 | 混合量% |
12345678910111213 | 纤维寡糖Aminocoat(氨基酸保湿剂,旭化成化学制)甘草酸二钾浓甘油透明质酸钠山梨糖醇液70%聚氧乙烯十六烷基醚80%液体石蜡角鲨烷芦荟提取物(4)玫瑰香水乙醇95%(v/v)防腐剂 | 0.1~404.00.13.00.12.00.50.60.12.015.04.0适量 |
※利用精制水使总量为100。
[配方例2]
美白爽肤水的配方例于以下表11中列出。
[表11]
No | 成分 | 混合量% |
12345678910111213 | 纤维寡糖Aminocoat(氨基酸保湿剂,旭化成化学制)甘草酸二钾浓甘油透明质酸钠山梨糖醇液70%聚氧乙烯十六烷基醚80%液体石蜡角鲨烷芦荟提取物(4)玫瑰香水乙醇95%(v/v)防腐剂 | 0.1~404.00.13.00.12.00.50.60.12.015.04.0适量 |
※利用精制水使总量为100。
[配方例3]
护肤液啫哩(skin lotion gel)的配方例于以下表12中列出。
[表12]
No | 成分 | 混合量% |
1234567891011121314 | 纤维寡糖Aminocoat(氨基酸保湿剂,旭化成化学制)甘草酸二钾羧基乙烯基聚合物氢氧化钾羟基乙二胺三乙酸三钠液40%1,3-丁二醇聚氧乙烯甲基葡糖苷·10EO浓甘油水溶性胎盘提取物洋甘菊提取物乙醇95%(v/v)透明质酸钠溶液1%防腐剂 | 0.1~404.00.030.30.030.022.02.02.01.00.55.05.0适量 |
※利用精制水使总量为100。
[配方例4]
爽身水的配方例于以下表13中列出。
[表13]
No | 成分 | 混合量% |
1234567891011 | 纤维寡糖Aminocoat(氨基酸保湿剂,旭化成化学制)甘草酸二钾1,3-丁二醇聚乙二醇·6000聚氧乙烯甲基葡糖苷·10EO聚氧乙烯十六烷基醚·30EO迷迭香提取物乙醇95%(v/v)香料(护肤用)防腐剂 | 0.1~403.00.11.02.01.00.33.023.0适量适量 |
※利用精制水使总量为100。
另外,对于上述配方例1~4中的纤维寡糖,既可以在制成上述配方的同时进行添加,也可以在混合纤维寡糖以外的成分后再添加纤维寡糖。纤维寡糖分散体中也可以添加其他成分。并且,为了改善触感和改善保湿性等,必要时也可以添加上述低聚糖类。
<皮肤正常菌群的改善剂>
1)针对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的试验
(菌数变化的测定方法)
对于表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌,以下述方法对其菌数进行测定。
首先,分别在普通肉汤培养基中于35℃对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌培养24小时,用无菌蒸馏水稀释到107/mL程度,制成添加用菌液。用无菌蒸馏水稀释糖类等供试物质至恒定浓度(例如1.0%、0.3%、0.1%),在9mL的各个稀释液中添加1mL添加用菌液并进行搅拌。将该检测液滴加到蛋黄加甘露醇食盐琼脂培养基中,于35℃培养48小时后测定菌数(初期值)。
并且,将检测液保持在35℃,在制作完1天后和2天后进行相同的操作,供于菌数测定。
作为空白,使用无菌蒸馏水进行与上述相同的操作。
将作为空白的菌数测定值与含有糖类等供试物质的检测液的菌数测定值进行比较,比较评价出糖类对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌带来的制菌效果和细菌增殖效果。
[实施例27~32]
作为实施例供试样品的糖类组成和糖浓度于表14列出。
使用这些样品对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌进行试验的结果于表15列出。
[比较例14~16]
使用与实施例27~32相同的试验方法,将用作化妆品原料的麦芽糖醇(和光纯药株式会社制造的试剂特级)的糖浓度调为0.1%、0.3%、1.0%,制成供试样品,依次为比较例14、15、16。使用这些样品同样地进行试验,结果于表15列出。
[比较例17~19]
使用与实施例27~32相同的试验方法,将用作化妆品原料的棉子糖(和光纯药株式会社制造的试剂特级)的糖浓度调为0.1%、0.3%、1.0%,制成供试样品,依次为比较例17、18、19。使用这些样品同样地进行试验,结果于表15列出。
[比较例20~22]
使用与实施例27~32相同的试验方法,将低聚异麦芽糖(和光纯药株式会社制造的试剂特级)的糖浓度调为0.1%、0.3%、1.0%,制成供试样品,依次为比较例20、21、22。使用这些样品同样地进行试验,结果于表15列出。
[比较例23~25]
使用与实施例27~32相同的试验方法,将葡萄糖(和光纯药株式会社制造的试剂特级)的糖浓度调为0.1%、0.3%、1.0%,制成供试样品,依次为比较例23、24、25。使用这些样品同样地进行试验,结果于表15列出。
[比较例26~28]
使用与实施例27~32相同的试验方法,将麦芽糖(和光纯药株式会社制造的试剂特级)的糖浓度调为0.1%、0.3%、1.0%,制成供试样品,依次为比较例26、27、28。使用这些样品同样地进行试验,结果于表15列出。
[表14]
[表15]
由实施例27~32的结果可知,2个以上的葡萄糖通过β1-4糖苷键合而成的水溶性糖类所含有的浓度越高,越能显示出针对作为有害菌的金黄色葡萄球菌的制菌作用或增殖抑制作用。并且,针对作为皮肤有益菌的表皮葡萄球菌,不显示制菌作用,保持菌数不变。
比较例14~20和23~28中,对于作为皮肤有益菌的表皮葡萄球菌和作为有害菌的金黄色葡萄球菌均不显示制菌作用。
比较例21~22中,对于作为皮肤有益菌的表皮葡萄球菌和作为有害菌的金黄色葡萄球菌均显示出制菌作用或增殖抑制作用。
2)针对绿脓杆菌的试验
下面,对于实施例28、29、31、32和比较例15、16中使用的样品,测试其针对绿脓杆菌的效果。表16给出该试验结果。实施例28、29、31、32表明,含有2个以上的葡萄糖通过β1-4糖苷键合而成的水溶性糖类时,其浓度越高,越能显示出针对作为有害菌的绿脓杆菌的制菌作用或增殖抑制作用。
比较例15、16中,对于作为有害菌的绿脓杆菌不显示制菌作用或增殖抑制作用。
[表16]
<对头发的触感的试验>
将本发明的改善剂涂在头发上,为评价干燥后头发的触感(干爽感和光滑感),下面对上述实施例28、31和比较例15、18、24的样品进行试验。试验方法如下。
并且,评价结果于表17列出。
(试验方法)
对于年龄28~50岁的健康者(男4名、女3名),将3mL上述样品的水溶液和3mL蒸馏水均匀地涂抹在头发上,对干燥后的触感进行评价。通过半头法对样品和蒸馏水进行评价,事先没有向试验者告知试验液的信息。并且,按照以下的评价标准进行了问卷调查。
(干爽感)
1分:没有干爽感
2分:稍微没有干爽感
3分:一般
4分:稍有干爽感
5分:有干爽感
※判断标准均相对于蒸馏水。
(光滑感)
1分:差
2分:稍差
3分:一般
4分:稍好
5分:好
※判断标准均相对于蒸馏水。
[表17]
干燥头发的干爽感 | 干燥头发的光滑感 | ||
实施例28 | 葡萄糖β1-4键合糖类(纤维二糖97.3%) | ◎ | ◎ |
实施例31 | 葡萄糖β1-4键合糖类(纤维二糖65.5%) | ○ | ◎ |
比较例15 | 麦芽糖醇 | ○ | ○ |
比较例18 | 棉子糖 | △ | ○ |
比较例24 | 葡萄糖 | × | △ |
◎:评价平均分4.0以上 ○:评价平均分3.5以上
△:评价平均分不足3.5 ×:评价平均分不足2.0
由表17可知,作为干燥后的头发的触感,含有2个以上的葡萄糖通过β1-4键合而成的水溶性糖类的试验液能够赋予干爽感和光滑感。并且,对实施例28和31比较可知,纤维寡糖中纤维二糖含量越高,干爽感越好。
<一般食品>
[实施例33]
使用CE-1C作为纤维寡糖,按照以下配方A制作酸性运动饮料。制作方法为:预先混合配方A的原料,使其溶解于水中,在高压釜中于121℃中加热灭菌20分钟,从而试制出饮料(pH为3.2)。在灭菌前后对纤维寡糖的浓度进行测定,结果纤维寡糖的残存率为99%。
<配方A:酸性运动饮料>
1)蔗糖 4.0质量%
2)柠檬酸(水合物) 0.1质量%
3)抗坏血酸 0.1质量%
4)葡萄柚纯果汁 1.0质量%
5)纤维寡糖CE-1 10.0质量%
6)水 83.8质量%
[实施例34]
使用CE-1作为纤维寡糖,按照以下配方B制作橙汁。制作方法为:预先混合配方B的原料,使其溶解于水中,在高压釜中于121℃中加热灭菌20分钟,从而试制出橙汁(pH为3.2)。在灭菌前后对纤维寡糖的浓度进行测定,结果纤维寡糖的残存率为99%。
<配方B:橙汁>
1)蔗糖 7.5质量%
2)柠檬酸(水合物) 0.1质量%
4)橙子4倍浓缩果汁 5.0质量%
5)纤维寡糖CE-1 10.0质量%
6)水 76.9质量%
[实施例35]
在98份实施例34中得到的橙汁中添加2.0份市售的明胶,于90℃搅拌下溶解。溶解后封入100mL的塑料容器中,于5℃保存18小时,制作出添加有纤维寡糖的果冻。纤维寡糖均匀地分散开,在此操作后也残留99%以上。
[实施例36]
在实施例35的方法中,使用市售的琼脂代替明胶,制作出添加有纤维寡糖的琼脂。纤维寡糖均匀地分散开,在此操作后也残留99%以上。
[实施例37]
使用CE-1C作为纤维寡糖,按照以下配方C试制出烘焙点心。
<配方C:烘焙点心>
1)面粉 50.8质量份
2)碳酸氢钠 0.93质量份
3)人造黄油 23.1质量份
4)砂糖 10.4质量份
5)食盐 0.46质量份
6)全蛋 4.63质量份
7)纤维寡糖 5.0质量份
8)水 4.63质量份
试制方法为,将除人造黄油、全蛋和水以外的粉末成分称量装至塑料袋中,混合3分钟。在混合粉末中添加人造黄油、全蛋和水,装入行星式混合机中。在行星式混合机中,使用搅拌桨(フツク翼)在126RPM下混合2分钟。
将通过混合得到的生面团装入100mL的塑料容器中,于5℃保存2天。2天后观察生面团,常温下没有油分渗出。并且,利用流变仪(Fudow制造)测定出的生面团的挤压负荷为1.2kg/cm2,拉伸负荷为0.31kg/cm2(均是n数=10的平均值)。
将上述生面团成型为3cm×1.5cm×1.5cm(底面积=4.5cm2)的长方体,在烘箱中于160℃加热20分钟。加热后,纤维寡糖也残留60%以上。并且,加热后的底面积膨胀率小于50%,变形较小(均是n数=10的平均值)。
[比较例29]
用蔗糖代替实施例37的配方C中的纤维寡糖,与实施例37同样地制作烘焙点心。与实施例37同样地观察生面团,结果发现表面有油分渗出。并且,生面团的挤压负荷为0.8kg/cm2,拉伸负荷为0.24kg/cm2。该未添加体系中,油分的渗出没有得到抑制,生面团的挤压负荷、拉伸负荷也较小。
进而,与实施例37同样地成型后,在烘箱中加热。加热后的烘焙点心的底面积膨胀率为50%以上,相对于添加有纤维寡糖的体系,加热导致的变形较大。
工业实用性
本发明的纤维寡糖组合物或本发明的含有纤维寡糖粉末的组合物不仅粉体流动性、均匀分散性优异,保油性也优异,不易吸湿,压缩成型性、耐热耐酸性、淀粉的抗老化性、蛋白质的变性防止性等操作性优异,因此可以在食品、化妆品、药品、准药品领域中作为高流动性纤维寡糖粉末来利用。并且,通过含有上述组合物,能够作为不发生纤维寡糖的凝集、分散度得到改善、压缩成型性和耐热耐酸性优异、淀粉的老化和蛋白质的变性得到了防止的食品/化妆品/药品/准药品来利用。
对于本发明的纤维寡糖组合物来说,在食品、药品领域的内服药中,通过调节糖的组成,能够抑制血中脂联素浓度的降低,经口服能够降低肝脏内中性脂肪和总胆固醇的浓度,因而可以作为生活习惯病的预防或改善剂来利用。
本发明的纤维寡糖组合物不被肠内的有害细菌同化而选择性地活化有用细菌,因而可以作为肠内细菌活化剂来利用。
本发明的纤维寡糖组合物能够对幽门菌的增殖起抑制或制菌作用,因而可以作为幽门菌的增殖抑制剂或制菌剂来利用。
特别地,在化妆品、药品、准药品领域,本发明的纤维寡糖组合物的保湿效果优异,是用于改善粗糙皮肤、敏感皮肤、干燥皮肤等受损皮肤的外用药,其可以作为促进经皮水分蒸散量的恢复、且使用感觉良好、操作性优异的皮肤屏障功能改善剂来利用,或者作为不被表皮的有害细菌同化而选择性地活化有用细菌的皮肤正常菌群改善剂来利用。
Claims (27)
1.一种纤维寡糖组合物,该组合物以由纤维二糖和选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖和纤维六糖组成的组中的1种以上的糖所构成的纤维寡糖为主要成分,其是平均L/D为2.5以下、堆积密度为0.55g/mL以下、安息角为55°以下的粉末,其中,纤维二糖的含量为90质量%以上,选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0.1~10质量%,葡萄糖的含量为3.5质量%以下。
2.如权利要求1所述的纤维寡糖组合物,其中,其安息角为45°以下。
3.如权利要求1所述的纤维寡糖组合物,其中,其保油量为0.9g/g以上。
4.如权利要求1所述的纤维寡糖组合物,其中,将该组合物在相对湿度为75%、40℃的环境下放置18小时后的吸湿度为1质量%以下。
5.如权利要求1所述的纤维寡糖组合物,其中,将200mg所述组合物利用Φ8.0mm的圆形平面臼杵以10kN进行压缩后所形成的成型体的硬度为60N以上。
6.如权利要求1所述的纤维寡糖组合物,其中,将所述组合物以100℃以上、pH7以下的条件加热处理10分钟以上之后,纤维寡糖的残存率为90%以上。
7.如权利要求6所述的纤维寡糖组合物,其中,纤维二糖的含量为95质量%以上,选自由纤维三糖、纤维四糖、纤维五糖以及纤维六糖组成的组中的1种以上的糖为0.5~5质量%,葡萄糖的含量为3.5质量%以下。
8.如权利要求7所述的纤维寡糖组合物,其中,葡萄糖为2质量%以下。
9.一种含有纤维寡糖的组合物在制备药物中的用途,所述含有纤维寡糖的组合物含有权利要求1~8中任一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,所述药物用于以下用途中的任意一个以上:
(i)生活习惯病的预防剂或改善剂,所述预防剂或改善剂通过口服使血中脂联素浓度的降低率被抑制在30%以下;
(ii)肠内细菌群活化剂,其具有被肠内有用细菌同化而不被肠内有害细菌同化的肠内细菌群的活化性,所述肠内细菌群活化剂使作为肠内有用细菌的选自由青春双歧杆菌、短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌以及加氏乳杆菌组成的组中的1种以上的细菌增加,并抑制作为肠内有害细菌的脆弱拟杆菌或产气真杆菌的增加;
(iii)肠内细菌群活化剂,其具有被肠内有用细菌同化而不被肠内有害细菌同化的肠内细菌群的活化性,抑制作为肠内有害细菌的产气荚膜梭菌的增加;
(vi)皮肤屏障功能改善剂,该改善剂通过涂布在皮肤上使经皮水分蒸散量的恢复促进率为10%以上;
(vii)皮肤正常菌群改善剂,其中,该有效成分对表皮葡萄球菌没有制菌作用、对金黄色葡萄球菌以及绿脓杆菌具有制菌作用。
10.一种含有纤维寡糖的组合物在制备药物中的用途,所述含有纤维寡糖的组合物含有权利要求1~8中任一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,所述药物用于以下用途(iv):
(iv)幽门菌的增加抑制剂或制菌剂,该抑制剂或制菌剂对于幽门螺杆菌的增加抑制率为1%以上。
11.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作生活习惯病的预防剂或改善剂,通过口服使血中脂联素浓度的降低率被抑制在30%以下。
12.如权利要求11所述的含有纤维寡糖的组合物,其中,所述纤维寡糖组合物通过口服使肝脏内的中性脂肪浓度的降低率为15%以上。
13.如权利要求11所述的含有纤维寡糖的组合物,其中,所述纤维寡糖组合物通过口服使血中脂联素浓度的降低率被抑制在25%以下。
14.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作肠内细菌群的活化剂,具有被肠内有用细菌同化而不被肠内有害细菌同化的肠内细菌群的 活化性,使作为肠内有用细菌的选自由青春双歧杆菌、短双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌以及加氏乳杆菌组成的组中的1种以上的细菌增加,并抑制作为肠内有害细菌的脆弱拟杆菌或产气真杆菌的增加。
15.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作肠内细菌群活化剂,具有被肠内有用细菌同化而不被肠内有害细菌同化的肠内细菌群的活化性,抑制作为肠内有害细菌的产气荚膜梭菌的增加。
16.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物被用作幽门菌的增加抑制剂或制菌剂,对于幽门螺杆菌的增加抑制率为1%以上。
17.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作骨中钙浓度增强剂,通过与钙一起口服使大腿骨中的钙浓度增加率为5%以上。
18.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作皮肤屏障功能改善剂,通过涂布在皮肤上使经皮水分蒸散量的恢复促进率为10%以上。
19.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作皮肤正常菌群改善剂,所述有效成分对表皮葡萄球菌没有制菌作用、对金黄色葡萄球菌以及绿脓杆菌具有制菌作用。
20.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作淀粉抗老化剂,在与淀粉共存的条件下进行保存时,淀粉老化率为20%以下。
21.一种含有纤维寡糖的组合物,其含有权利要求1~8任意一项所述的纤维寡糖组合物作为有效成分,该组合物用作蛋白质变性防止剂,在与蛋白质共存的条件下进行保存时,蛋白质变性率为10%以下。
22.如权利要求11~21任意一项所述的含有纤维寡糖的组合物,其为颗粒、成型体、水溶液、水分散体、糊状或凝胶状,所述纤维寡糖组合物包含在选自食品材料、化妆品材料、药品药效成分、或它们所使用 的添加物中的1种以上的构成成分中。
23.如权利要求22所述的含有纤维寡糖的组合物,其中,所述水溶液、水分散体、糊状、或凝胶状的含有纤维寡糖的组合物含有表面活性剂、增稠剂或胶凝剂中的任意1种以上。
24.一种含有纤维寡糖的食品,其含有权利要求22或23所述的含有纤维寡糖的组合物。
25.一种含有纤维寡糖的化妆品,其含有权利要求22或23所述的含有纤维寡糖的组合物。
26.一种含有纤维寡糖的药品,其含有权利要求22或23所述的含有纤维寡糖的组合物。
27.一种含有纤维寡糖的准药品,其含有权利要求22或23所述的含有纤维寡糖的组合物。
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