JP2007330177A - 腸内細菌賦活剤 - Google Patents

Abstract

【課題】ビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を選択的に増加させ、有害細菌であるバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制する腸内細菌賦活剤の提供。
【解決手段】セロビオース含量が７０質量％以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースから選ばれる１種以上を０．１〜３０質量％含み、グルコース含量が２質量％以下である腸内細菌賦活剤。
【選択図】なし

Description

本発明は、食品、医薬品分野において、腸内細菌賦活剤を提供するものであり、さらに詳しくは、腸内の有害細菌に資化されず、選択的に有用細菌を賦活する腸内細菌賦活剤に関するものである。

セロオリゴ糖は、セロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースの総称であり、グルコピラノース単位１〜６個が、β−１，４結合した少糖類であり、ヒトの消化管では、ほとんど分解されない。
セロオリゴ糖は、低カロリー甘味料として有用であるのに加え、一般食品、機能性食品、化粧品、医薬品およびその添加剤、その他化学変換原料、発酵原料としても有用である。
また、近年、セロオリゴ糖は、他のオリゴ糖と同様に、その生理機能が明らかになりつつあり、機能性食品の新素材としても期待されている（非特許文献１）。

近年、腸内細菌叢が、ヒトの健康と密接に関わることが知られてきた。例えば、ビフィズス菌や乳酸菌等は、ヒトに健康をもたらす有用細菌であるが、加齢とともに減少するため、プレバイオティクス（腸内細菌の栄養源となり、それらを増やす働きをもつもの）等の機能性食品で腸内細菌叢（腸内フローラ）を改善する試みがなされ、ビフィズス菌、乳酸菌を増殖させる既存の機能性食品は多い。
特に、上述のプレバイオティクスとしては、腸内の有用細菌のみを賦活し、有害細菌を賦活しない選択賦活性が高いほど効率がよい。例えば、既存の試みとしては、有用細菌を賦活しつつ、腸内の有害細菌としてウェルシュ菌であるクロストリジム パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）を増殖抑制するものがある。
上述の、ビフィズス菌、乳酸菌を増加させ、且つウェルシュ菌を抑制する試みにおいて、β結合性のオリゴ糖に関するものを以下に記載する。

特許文献１には、β−グルコシド結合からなるグルコオリゴ糖及び／又はその還元物を有効成分とする腸内フローラ改善物質が記載されている。該文献に記載される、グルコオリゴ糖は、セロビオース、ソフォロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ゲンチオオリゴシル−Ｄ−グルコースから選ばれた１種又は２種以上である。該オリゴ糖は、確かに、ビフィズス菌及び乳酸菌等の有用細菌の増殖を促進しつつ、ウェルシュ菌の増殖を抑制する効果を有する。

しかしながら、ウェルシュ菌以外の有害細菌であるバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）等を少なからず増加させる問題があった。尚、バクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）は、嫌気性無芽胞グラム陰性桿菌であり、好気性菌との混合感染の形で、各種膿瘍形成性感染症、菌血症等に関連する有害細菌である。上記文献の腸内フローラ改善剤は、本発明の如く、ビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を増加しつつ、有害細菌であるバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制する腸内細菌賦活剤とは全く異なる。

従って、セロオリゴ糖の糖組成を特定の範囲に制御し、ビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を増加しつつ、有害細菌であるバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制する腸内細菌賦活剤は全く知られていなかった。

Cellulose Communications,5, No 2,91-97(1998) 特開平３−２６２４６０号公報

本発明の課題は、ビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を選択的に増加させ、有害細菌であるバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制する腸内細菌賦活剤を提供することである。

本発明者らは、特定組成のセロオリゴ糖を有効成分とする腸内細菌叢賦活剤が、腸内の有用細菌を選択的に増加させ、有害細菌の増加を抑制できることを見出し、本発明をなすに至った。
すなわち、本発明は、下記の通りの腸内細菌賦活剤である。

（１）セロビオース含量が７０質量％以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースから選ばれる１種以上を０．１〜３０質量％含み、グルコース含量が２質量％以下である腸内細菌賦活剤。
（２）セロビオース含量が９５質量％以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースから選ばれる１種以上を０．１〜３質量％含むことを特徴とする（１）の腸内細菌賦活剤。
（３）ビフィドバクテリウム アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｂｒｅｖｅ）、ラクトバチルス アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｇａｓｓｅｒｉ）から選ばれる１種以上を増加させ、バクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）またはユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制する（１）または（２）の腸内細菌賦活剤。
（４）（１）〜（３）の腸内細菌賦活剤を含有する医薬品。
（５）（１）〜（３）の腸内細菌賦活剤を含有する食品。

本発明の腸内細菌賦活剤は、腸内のビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を選択的に賦活し、有害細菌であるバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制するため、腸内細菌叢を改善する効果が得られる。

本発明について、特にその好ましい態様を中心に、以下具体的に説明する。
本発明は、腸内のビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を選択的に賦活し、有害細菌であるバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制する腸内細菌賦活剤であり、それを達成する為、セロオリゴ糖中のセロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースの組成、ならびにグルコース含量を特定範囲に制御されたものである。

本発明のセロオリゴ糖は、セロビオースを７０質量％以上含む必要がある。セロビオースは、ビフィズス菌、乳酸菌に分類される有用細菌を増加させる効果があり、クロストリジウム属、エシェリキア属、バクテロイデス属、ユーバクテリウム属に属する有害細菌を増加させない。ここでいう、ビフィズス菌とは、ビフィドバクテリウム属に属する有用細菌のことであり、例えば、ビフィドバクテリウム アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）である。乳酸菌とは、ラクトバチルス属に属する有用細菌のことであり、例えば、ラクトバチルス アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）である。

また、ここでいう、クロストリジウムとは、クロストリジウム属に属する有害細菌のことであり、例えば、クロストリジウム パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｏｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、別名ウェルシュ菌、以下Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）である。エシェリキアとは、エシェリキア属に属する有害細菌のことであり、例えば、エシェリキア コライ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ、別名大腸菌、以下Ｅ．ｃｏｌｉ）である。バクテロイデスとは、バクテロイデス属に属する有害細菌のことであり、例えば、バクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、以下Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）である。ユーバクテリウムとは、ユーバクテリウム属に属する有害細菌のことであり、例えば、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｅｒｏｆａｎｃｅｓ、Ｓ−１２株、Ｅ．ａｅｒｏｆａｎｃｅｓ）である。

セロビオースは、特に、これらのうちＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓに資化されない特徴がある。セロビオース含量が高いほど、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｆｒａｇｉｌｉｓの増加を抑制しつつ、ビフィズス菌、乳酸菌を賦活できるため好ましい。セロビオース含量の好ましい範囲としては８０質量％以上であり、９５質量％以上が特に好ましい。セロビオース含量が高いほど、上述の効果が大きくなる為、その上限は特に設定されないが、簡便な操作で得られる範囲としては、９９．９質量％以下である。

本発明のセロオリゴ糖は、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースから選ばれる１種以上を０．１〜３０質量％含む必要がある。これらのセロオリゴ糖類は、ビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を賦活する点で、セロビオースと同等の効果を有する。但し、有害細菌の資化性については、セロビオースと異なり、特に、Ｅ．ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓに資化されにくい特長がある。セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースから選ばれる１種以上の含量が高いほど、Ｅ．ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓの増加を抑制し、且つ、ビフィズス菌、乳酸菌を賦活できるため好ましい。但し、この含量が高いと、Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓの増加抑制の効果が小さくなる。従って、ビフィズス菌、乳酸菌を選択的に賦活し、ウェルシュ菌、大腸菌に加え、バクテロイデス、ユーバクテリウム等、いずれの有害細菌の増加を抑制するには、上述の含量範囲を満たす必要がある。好ましい範囲としては、０．１〜２０質量であり、より好ましい範囲としては０．１〜５質量％であり、特に好ましい範囲としては、０．１〜３質量％である。

本発明のセロオリゴ糖は、グルコース含量が２質量％以下である。グルコースは、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｅ．ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓを増加させるため、有用細菌のみ選択賦活するには、グルコース含量は上述の範囲を満たす必要がある。グルコース含量は、小さいほど選択賦活の効果が促進され、好ましい範囲としては１．５質量％以下であり、より好ましい範囲としては１質量％以下である。下限は特に設定されないが、簡便な操作で得られる範囲としては、０．１質量％以上である。

以下に、本発明の腸内細菌賦活剤におけるセロオリゴ糖、グルコース含量の分析法を記す。本発明のセロオリゴ糖は、純水に１質量％濃度で溶解させた後、高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーシステム：島津製作所（株）製 商品名 ＳＣＬ−１０Ａ、カラム：島津製作所製 商品名 Ａｓａｈｉｐａｋ ＮＨ_２Ｐ−５０、移動相：アセトニトリル／水＝７５／２５（容積比））で分析できる。セロオリゴ糖の糖組成は、上述の方法で得られたクロマトグラムにおけるセロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオース、グルコースのピーク面積を質量換算し、総質量に占める、それぞれの質量百分率で表される。

本発明のセロオリゴ糖の腸内細菌叢改善効果は、以下の方法で確認できる。
まず、Ｐｅｐｔｏｎｅ−Ｙｅａｓｔ−Ｆｉｌｄｅｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＰＹＦ 日本製薬製）培地に、本発明のセロオリゴ糖を０．５質量％添加した滅菌培地（ｐＨ７．２）１．５ｍＬを作成し、予め、Ｆｉｌｄｅｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ添加ＧＡＭブイヨン培地（日本製薬製 製品名ＧＡＭブイヨンにＦｉｌｄｅｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ０．４体積％を添加）に、ビフィズス菌、乳酸菌、Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｅ．ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓを別々に前培養しておいた供試菌液０．０３ｍＬを接種し、３７℃で９６時間嫌気培養した後、ｐＨを測定し資化性を判断する。該ｐＨが、５．５未満に下がっている状態で、該菌株がセロオリゴ糖を資化したと判断できる。なお、ｐＨは低いほど、該菌株の増殖が進むことを意味する。

次に、本発明のセロオリゴ糖の製造方法について説明する。
本発明のセロオリゴ糖の起源には、特に制限はなく、セルロース系物質の加水分解で製造されたもの、グルコース等の単糖類またはその誘導体を縮合または糖転移させ製造されたものでもよいが、酵素分解法で得られたものが、安全性の点で好ましい。

酵素分解に使用するセルロース系物質としては、植物性でも、動物性でもよく、例えば、木材、竹、コットン、ラミー、ホヤ、バガス、ケナフ、麦、稲、バクテリアセルロース等の含有する天然物由来の繊維質物質、またそれらを一旦溶剤に溶解させ再生させた再生セルロースでも、それらの化学処理を施しセルロース誘導体としたものでもよく、上記のうち、１種または２種以上を併用してもよい。これらの中でも、溶解または化学処理を経ない、天然セルロース系物質を用いると、得られたセロオリゴ糖に人体に有害な溶剤または化学物質が含まれないため好ましい。また、セルロース系物質は精製パルプの状態で使用することが好ましく、パルプの精製方法には特に制限はなく、サルファイトパルプ、クラフトパルプ、ＮＢＫＰパルプ等のいずれのパルプを使用してもよい。

また、セルロース系物質を酵素分解する場合には、使用するセルロース系物質としては、一旦加水分解し、平均重合度を７００以下に部分加水分解したセルロース系物質を用いると、セロオリゴ糖の収率を向上させる上で好ましい。さらに、該特定の重合度を有するセルロース系物質は、平均粒子径を１００μｍ以下、コロイド状セルロース成分含有量を１０質量％以上に制御したものを用いることが、酵素分解速度の向上、セロオリゴ糖選択率が向上するため好ましい。

本発明では、セルロース系物質の加水分解に用いる酵素をセルラーゼといい、本発明で使用するセルラーゼとは、セルロースを分解する酵素の総称であり、セルロースへの分解活性を有していれば、本発明でいうセルラーゼに含まれる。セルラーゼ酵素源としては、例えば、セルラーゼ産生生菌体そのもの、セルラーゼ産生菌が分泌する酵素を精製したもの、精製酵素を賦形剤、安定化剤等の添加剤ともに製剤化したもの等が挙げられる。セルラーゼ製剤品の場合、それに添加される添加剤にも特に制限はなく、その剤形は、粉末、顆粒、液体等いずれでもよい。

セルラーゼの起源についても、特に制限はないが、例えば、公知のセルラーゼを生産する微生物としては、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ）属、アクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎｕｓ）属、イルペックス（Ｉｒｐｅｘ）属、スポロトリクム（Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕｍ）属、フミコーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属、セロビブリオ（Ｃｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ）属等の「セルラーゼ」（講談社サイエンティフィック発行（１９８７））、「セルロースの事典」（朝倉書店発行（２０００））に記載される菌が生産するセルラーゼを挙げることができるが、セルロースを分解する酵素であれば、上記公知の菌由来の酵素に限らず、新規の菌由来の酵素も、本発明のセルラーゼに含まれる。

酵素分解方法は、公知の方法を使用すればよく、特に制限されるものではないが、一例としては、セルロース系物質を水性媒体中に懸濁させ、セルラーゼを添加し、攪拌または振とうしながら、加温して糖化反応を行う方法が挙げられる。
上記方法において、懸濁方法、攪拌方法、セルラーゼ・基質の添加方法・添加順序、それらの濃度等の反応条件は、セロオリゴ糖がより高収率で得られるよう適宜調整されるものである。その際の、反応液のｐＨ及び温度は、酵素が失活しない範囲内であればよく、一般的には、常圧で反応を行う場合、温度は５〜９５℃、ｐＨは１〜１１の範囲でよい。また、この圧力、温度、ｐＨについても、上記同様、セロオリゴ糖がより高収率で得られるよう適宜調整されるものである。

上述の酵素分解により得られたセロオリゴ糖水溶液は、必要に応じて、脱色、脱塩、酵素除去等の精製処理を施すことができる。精製方法は、公知の方法であれば特に制限されないが、例えば、活性炭処理、イオン交換樹脂処理、クロマトグラフィー処理、精密ろ過、限外ろ過、逆浸透ろ過等の濾過処理、晶析処理等を使用してもよく、これらを単独で使用しても、２種以上を組み合わせてもよい。セロオリゴ糖の精製方法の中でも、晶析処理は、セロオリゴ糖の組成を制御しやすいため好ましい。

次に、本発明の腸内細菌賦活剤を用いた食品／医薬品について説明する。
本発明の腸内細菌叢賦活剤は、そのまま食品／医薬品として利用することも可能であり、ビフィズス菌、乳酸菌、バクテロイデス、ユウバクテリウム、嫌気性レンサ球菌、腸球菌、大腸菌等のうち、人体に有用な菌と併せて製剤として利用してもよい。ここでいう有用細菌をより詳細に説明する。
有用細菌としては、例えば、ビフィドバクテリウム アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム パルバロラム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｌｏｒｕｍ）、ラクトバチルス アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス サルバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｂａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ストレプトコッカス ファエカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス パイロジェンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、シュードモナス アエラジノサ（Ｐｓｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、バクテロイデス デスタソニス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｅｓｔａｓｏｎｉｓ）、バクテロイデス オバタス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｏｖａｔｕｓ）、バクテロイデス セタイオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）、バクテロイデス バルファタス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｆａｔｕｓ）、バクテロイデス ユニフォルミス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バクテロイデス メラニノジェニカス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）、フソバクテリウム バリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｒｉｕｍ）、フソバクテリウム ネクロフォラム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ）、マエガモナス ハイパーメガス（Ｍａｅｇａｍｏｎａｓ ｈｙｐｅｒｍｅｇａｓ）、ミツオケラ マルチアシダス（Ｍｉｔｓｕｏｋｅｌｌａ ｍｕｌｔｉａｃｉｄｕｓ）、ユーバクテリウム リモサム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｍｏｓｕｍ）、ユーバクテリウム ニトリトジェネス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｉｔｒｉｔｏｇｅｎｅｓ）、ユーバクテリウム レクテール（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｅｃｔａｌｅ）、ユーバクテリウム レンタム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｎｔｕｍ）、エンテロバクター アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロコッカス ファエカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、クロストリジウム ビガルメンタンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｉｇｅｒｍｅｎｔａｎｓ）、クロストリジウム ブチリカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）、クロストリジウム クロストリジフォルメ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｉｆｏｒｍｅ）、クロストリジウム コッコイデス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム パラプトリフィカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐａｒａｐｕｔｒｉｆｉｃｕｍ）、クロストリジウム ラモサム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｒａｍｏｓｕｍ）、クロストリジウム イノキューム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｉｎｎｏｃｕｕｍ）、クロストリジウム スポロゲネス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）、プロピオニバクテリウム アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）、ペプトコッカス プレボッチ（Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｒｅｖｏｔｉｉ）、ペプトコッカス アナエロバイアス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ａｎａｅｒｏｂｉｕｓ）、ペプトストレプトコッカス パルバラス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペプトストレプトコッカス プロダクタス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ）、ペプトストレプトコッカス アサキャロリチカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ａｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ペプトストレプトコッカス マグナス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｍａｇｎｕｓ）、ペプトストレプトコッカス プレボーリ（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｐｒｅｖｏｌｌｉ）、ベイロネラ アルカエス（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ａｌｃａｅｓｃｅｓ）、ベイロネラ パルンラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｕｎｌａ）、クレブシエラ ピューモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、メガスファエラ エルスデニ（Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ ｅｌｓｄｅｎｉｉ）等が挙げられ、これらの有用細菌を１種単独で使用しても、２種以上を併用してもよい。

ここでいう有用細菌とは、摂取することで、ヒトに何らかの生理的有用性をもたらすものであり、本発明の有用細菌は、上に挙げる公知の腸内細菌、公知の腸内細菌を改良したものに加え、新規に発見された菌種も含まれる。また、本発明の腸内細菌賦活剤として使用する際には、生菌そのものを使用しても、凍結乾燥、複合化等の公知の方法で製剤したものを使用することも自由である。

また、本発明のセロオリゴ糖を、食品素材、医薬品薬効成分、それらで使用される添加物、または上述の有用細菌の中から選択される１種以上の構成成分に含有させ、食品／医薬品として利用することも自由である。
本発明のセロオリゴ糖を、上述の如く、食品／医薬品とする場合のセロオリゴ糖の添加量は、０．１質量％以上である。本発明のセロオリゴ糖の添加量が０．１質量％未満であると、充分な腸内細菌叢の改善効果が得られないため好ましくない。本発明のセロオリゴ糖の添加量は、多いほど腸内細菌叢の改善効果が得られるが、服用性等を向上させる等の理由で他成分を添加する場合には、セロオリゴ糖の添加量は９９．９９質量％以下である。

ここで使用される構成成分としては、例えば以下のものが挙げられる。本発明でいう構成成分とは、食品素材、医薬品薬効成分、または賦形剤、崩壊剤、結合剤、流動化剤、滑沢剤、矯味剤、香料、着色剤、甘味剤、溶剤、油脂、界面活性剤、増粘剤、ゲル化剤等の添加剤のことであり、粉体状、結晶状、油状、液状、半固形状などいずれの形態でもよく、例えば「食品添加物公定書」、「日本薬局方」（いずれも廣川書店発行）、「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）に記載されるものを用いることが可能である。また、それらは、種々の目的でコーティングを施したものであってもよい。これらの構成成分は単独で使用しても、複数を併用してもよい。構成成分の添加量としては、０．０１質量％−９９．９質量％である。

例えば医薬品薬効成分としては、解熱鎮痛消炎薬、催眠鎮静薬、眠気防止薬、鎮暈薬、小児鎮痛薬、健胃薬、制酸薬、消化薬、強心薬、不整脈用薬、降圧薬、血管拡張薬、利尿薬、抗潰瘍薬、整腸薬、骨粗鬆症治療薬、鎮咳去痰薬、抗喘息薬、抗菌剤、頻尿改善剤、滋養強壮剤、ビタミン剤など、経口で投与されるものが対象となる。薬効成分は、それを単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

賦形剤としては、アクリル酸デンプン、Ｌ−アスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸、アミノ酢酸、あめ（粉）、アラビアゴム、アラビアゴム末、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルファー化デンプン、イノシトール、エチルセルロース、エチレン・酢酸ビニルコポリマー、塩化ナトリウム、オリーブ油、カオリン、カカオ脂、カゼイン、果糖、軽石粒、カルメロース、カルメロースナトリウム、含水二酸化ケイ素、乾燥酵母、乾燥水酸化アルミニウムゲル、乾燥硫酸ナトリウム、乾燥硫酸マグネシウム、カンテン、カンテン末、キシリトール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、グリセリン、グリセロリン酸カルシウム、グルコン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン、クレー、クレー粒、クロスカルメロースナトリウム、クロスポリビニルピロリドン、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、軽質流動パラフィン、ケイヒ末、結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、結晶セルロース（粒）、ゲンマイコウジ、合成ケイ酸アルミニウム、合成ヒドロタルサイト、ゴマ油、小麦粉、コムギデンプン、小麦胚芽粉、コメコ、コメデンプン、酢酸カリウム、酢酸カルシウム、酢酸フタル酸セルロース、サフラワー油、サラシミツロウ、酸化亜鉛、酸化チタン、酸化マグネシウム、β―シクロデキストリン、ジヒドロキシアルミニウムアミノアセテート、２，６−ジ−ブチル−４−メチルフェノール、ジメチルポリシロキサン、酒石酸、酒石酸水素カリウム、焼セッコウ、ショ糖脂肪酸エステル、水酸化アルミナマグネシウム、水酸化アルミニウム・ゲル、水酸化アルミニウム・炭酸水素ナトリウム共沈物、水酸化マグネシウム、スクラワン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、ステアリン酸マグネシウム、ステロテックスＨＭ、精製ゼラチン、精製セラック、精製白糖、精製白糖球状顆粒、セトステアリルアルコール、セトポリエチレングリコール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、Ｄ−ソルビトール、第三リン酸カルシウム、ダイズ油、大豆不ケン化物、大豆レシチン、脱脂粉乳、タルク、炭酸アンモニウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、中性無水硫酸ナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、デキストリン、天然ケイ酸アルミニウム、トウモロコシデンプン、トラガント末、二酸化ケイ素、乳酸カルシウム、乳糖、白色ワセリン、白糖、白糖・デンプン球状顆粒、ハダカムギ緑葉エキス末、裸麦芽葉青汁乾燥粉末、ハチミツ、パラフィン、バレイショデンプン、半消化体デンプン、人血清アルブミン、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、フィチン酸、ブドウ糖、ブドウ糖水和物、部分アルファー化デンプン、プルラン、プロピレングリコール、粉末還元麦芽糖水飴、粉末セルロース、ペクチン、ベントナイト、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリスチレンスルホン酸ナトリウム、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリエチレングリコール、マルチトール、マルトース、Ｄ−マンニトール、水アメ、ミリスチン酸イソプロピル、無水乳糖、無水リン酸水素カルシウム、無水リン酸カルシウム造粒物、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、メチルセルロース、綿実粉、綿実油、モクロウ、モノステアリン酸アルミニウム、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、薬用炭、ラッカセイ油、硫酸アルミニウム、硫酸カルシウム、粒状トウモトコシデンプン、流動パラフィン、ｄｌ−リンゴ酸、リン酸−水素カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸水素カルシウム造粒物、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素カルシウム、リン酸二水素ナトリウム等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に賦形剤として分類されるものが挙げられ、それを単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

崩壊剤としては、クロスカルメロースナトリウム、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース類、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、コメデンプン、コムギデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、部分アルファー化デンプン等のデンプン類、クロスポリビニルピロリドン、クロスポリビニルピロリドンコポリマー等の合成高分子等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に崩壊剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

結合剤としては、白糖、ブドウ糖、乳糖、果糖等の糖類、マンニトール、キシリトール、マルチトール、エリスリトール、ソルビトール等の糖アルコール類、ゼラチン、プルラン、カラギーナン、ローカストビーンガム、寒天、グルコナンナン、キサンタンガム、タマリンドガム、ペクチン、アルギン酸ナトリウム、アラビアガム等の水溶性多糖類、結晶セルロース、粉末セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース等のセルロース類、アルファー化デンプン、デンプン糊等のデンプン類、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール等の合成高分子類、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム、合成ヒドロタルサイト、ケイ酸アルミン酸マグネシウム等の無機化合物類等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に結合剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

流動化剤としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸等のケイ素化合物類等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に流動化剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ショ糖脂肪酸エステル、タルク等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に滑沢剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

矯味剤としては、グルタミン酸、フマル酸、コハク酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酒石酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、塩化ナトリウム、１−メントール等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に矯味剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

香料としては、オレンジ、バニラ、ストロベリー、ヨーグルト、メントール、ウイキョウ油、ケイヒ油、トウヒ油、ハッカ油等の油類、緑茶末等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に着香剤、香料として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

着色剤としては、食用赤色３号、食用黄色５号、食用青色１号等の食用色素、銅クロロフィンナトリウム、酸化チタン、リボフラビン等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に着色剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

甘味剤としては、アスパルテーム、サッカリン、グリチルリチン酸二カリウム、ステビア、マルトース、マルチトール、水飴、アマチャ末等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に甘味剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ばれる１種を単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

溶剤としては、医薬品に使用されるものであれば、特に制限されるものではないが、例えばメタノール、エタノールなどのアルコール類、アセトンなどのケトン類等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に溶剤として分類されるものが挙げられ、それを単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

油脂としては、例えば、ステアリン酸モノグリセリド、ステアリン酸トリグリセリド、ステア リン酸ショ糖エステル、流動パラフィン等のパラフィン類、カルナウバロウ，硬化ヒマシ油等の硬化油類、ヒマシ油、ステアリン酸、ステアリルアルコール、ポリエチレングリコール等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に記載される油脂が挙げられ、それを単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

増粘剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、デンプン糊等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に記載される増粘剤が挙げられ、それを単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

界面活性剤としては、例えば、リン脂質、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンサンモノラウレート、ポリソルベート、モノオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸グリセリド、モノオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、モノオキシエチレンソルビタンモノステアレート、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、ラウリル硫酸ナトリウム等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に界面活性剤として分類されるものが挙げられ、それを単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

ゲル化剤としては、例えば、ゼラチン等の動物性ゲル化剤、寒天、キサンタンガム、グアーガム、アラビアガム、カードラン、ローカストビーンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、セルロース、微結晶セルロース、微結晶セルロース等植物性多糖類、ポリビニルピロリドン等の化学合成高分子等の「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行）、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（廣川書店発行）にゲル化剤として分類されるものが挙げられ、それを単独で使用しても、２種以上を併用することも自由である。

以下に本発明のセロオリゴ糖と、食品素材、医薬品薬効成分、腸内有用細菌、またはそれらで使用される添加物の中から選択される１種以上の構成成分を含む食品／医薬品の製造方法について記述するが、本発明の効果は、以下の方法に制限されるものではない。
各成分の添加方法は、通常行われている方法であれば特に制限はないが、１）セロオリゴ糖と構成成分を同時に添加し、混合／分散しても、２）セロオリゴ糖と特定の構成成分を予め混合／分散した後に、別の構成成分を添加し、混合／分散しても、３）２種以上の構成成分を予め混合／分散した後、セロオリゴ糖を添加し、混合／分散しても、これらの添加方法を組み合わせた方法でもよい。添加する構成成分が溶液、懸濁液、乳化液の場合には、それらをセロオリゴ糖または他の添加剤に噴霧する方法を採用することで、最終製品中の成分濃度ばらつきが小さくなるので好ましい。

ここで用いる装置としては、小型吸引輸送装置、空気輸送装置、バケットコンベヤ、圧送式輸送装置、バキュームコンベヤ、振動式定量フィーダー、スプレー、漏斗等を用いて連続的に添加しても、一括投入してもよい。また、各成分の混合方法は、通常行われている方法であれば特に制限はないが、Ｖ型、Ｗ型、ダブルコーン型、コンテナタック型混合機などの容器回転式混合機、あるいは高速撹拌型、万能撹拌型、リボン型、パグ型、ナウター型混合機などの撹拌式混合機、高速流動式混合機、ドラム式混合機、流動層式混合機を使用してもよい。またシェーカー等の容器振とう式混合機を使用することもできる。

分散方法としては、通常行われる分散方法であれば特に制限はないが、ポータブルミキサー、立体ミキサー、側面ミキサーなどの１方向回転式、多軸回転式、往復反転式、上下移動式、回転＋上下移動式、管路式等の撹拌翼を使用する撹拌混合方法、ラインミキサー等の噴流式撹拌混合方法、気体吹き込み式の撹拌混合方法、高剪断ホモジナイザー、高圧ホモジナイザー、超音波ホモジナイザー等を使用する混合方法でも、シェーカーを使用する容器振とう式混合方法等を用いてもよく、これらを組み合わせた方法でもよい。

また、上述の混合、分散において、水又は水／有機溶剤に必要に応じて界面活性剤、増粘剤、ゲル化剤を添加した水系媒体を添加する順序には特に制限はないが、１）セロオリゴ糖に予め水系媒体を添加し、溶解／分散させた後に、他の構成成分を添加しても、２）構成成分に予め水系媒体を添加し、溶解／分散させた後に、セロオリゴ糖を添加しても、３）セロオリゴ糖と構成成分を予め混合／分散させた後に、水系媒体を添加してもよく、これらを組み合わせた方法でもよい。ここで得られた水溶液、分散体、ペースト、乳液等の各液状、半固形状の食品／化粧品／医薬品は必要に応じて乾燥され、造粒、コーティング、成型等の加工が施される。

造粒・コーティング方法としては、公知の方法であれば特に制限はないが、攪拌式または流動層式のいずれもよく、それらを組み合わせた方法でもよい。攪拌式造粒機としては、例えばポータブルミキサー、立体ミキサー、側面ミキサーなどの１方向回転式、多軸回転式、往復反転式、上下移動式、回転＋上下移動式の攪拌機、流動層式としては上部噴霧式、中央噴霧式、下部噴霧式、攪拌併用式、中央缶噴流式、ワースター式等が挙げられる。また、ローラーコンパクタを使用した乾式造粒を施してもよい。

コーティングについては、予め造粒物を得、それに公知のコーティングを施してもよく、コーティングを施した後、さらに別のコーティングを施し多層状としてもよい。コーティング剤の噴霧方法としては、圧力ノズル、二流体ノズル、四流体ノズル、回転ディスク、超音波ノズル等を使用し構成成分溶液／分散液を噴霧する方法、管状ノズルから構成成分溶液／分散液を滴下する方法のいずれでもよい。構成成分溶液／分散液を添加する際には、セロオリゴ糖粒子表面に構成成分を積層させるようなレイヤリング、コーティングを施しても、セロオリゴ糖粒子内部に担持させてもよく、構成成分溶液／分散液を結合液としてセロオリゴ糖粒子またはセロオリゴ糖と他の構成成分の混合物をマトリックス状に造粒させてもよい。レイヤリング、コーティングは湿式であっても、乾式であっても効果は同様である。

本発明のセロオリゴ糖は、液状成分の保持性にも優れ、それを核粒子として使用した場合には、レイヤリング、コーティング時の粒子の凝集を抑制できる。
また、構成成分が溶液、懸濁液、乳化液の場合には、セロオリゴ糖粒子またはセロオリゴ糖と他の添加剤の混合物を担体としたディッピングの如く、構成成分溶液、懸濁液、乳化液に浸漬させ、構成成分を保持させる方法がとれる。成分種、濃度等の条件によるが、かかるディッピング等の液浸漬方法でも、実用的に成分濃度の均一性が保たれ、また、上記噴霧に比べ、工程が簡略である点で優れている。

さらに、構成成分が溶液、懸濁液、乳化液の場合には、セロオリゴ糖粒子またはセロオリゴ糖粒子と他の添加剤の混合物を担体として、構成成分溶液、懸濁液、乳化液に浸漬させた後、その分散液を噴霧乾燥し、複合体とする方法をとってもよい。
構成成分溶液／分散液を添加前後のセロオリゴ糖粒子または、セロオリゴ糖粒子と他の添加剤の混合物は、それぞれの単位粒子が個々に分散した状態であっても、凝集した造粒物の形態をとっていてもよい。

成型方法としては、通常行われている方法であれば特に制限はないが、型枠を用いてもよく、圧縮、溶融、射出、圧延等の公知の成型方法が適用でき、これらを組み合わせた方法でもよい。ここで用いられる成型機としては、圧縮成型機、溶融成型機、射出成型機、圧延成型機等が挙げられ、製菓用／化粧品／医薬品用成型機、米飯成型機、コンプレスド成型機、包あん機、蒲鉾製造装置、餃子・包子成型機、ファンデーション基材用圧縮成型機等の公知の成型機が使用できる。特に圧縮成型に関しては、型枠を使用し所望の形状に圧縮成形する方法、予めシート状に圧縮成形した後所望の形状に割断する方法でもよい。圧縮成形機としては、例えば、静圧プレス機、ブリケッティングローラー型プレス機、平滑ローラー型プレス機等のローラー式プレス機、シングルパンチ打錠機、ロータリー打錠機等の圧縮機を使用できる。
上述の方法で得られた成型体は、公知の方法でコーティングを施してもよく、成型体が錠剤の場合には、糖をコーティングし、糖衣錠としてもよい。特に、本発明のセロオリゴ糖は、上述糖衣錠における糖衣層に配合してもよい。

本発明のセロオリゴ糖含有食品の例としては、例えば、ゼリー、プリン、ヨーグルト等のゲル、マヨネーズ、ドレッシング、ソース類、たれ類、スープ、野菜加工品等の調味料、カレー、ハヤシ、ミートソース、シチュー、スープ等のレトルト食品、チルド食品、ハンバーグ、ベーコン、ソーセージ、サラミソーセージ、ハム類等の畜産加工品、蒲鉾、ちくわ、魚肉ハム・ソーセージ、揚げ蒲鉾等の水練製品、パン、生麺、乾麺、マカロニ、スパゲッティ、中華饅頭の皮、ケーキミックス、プレミックス、ホワイトソース、餃子・春巻等の皮類などの小麦加工食品、カレー、ソース、スープ、佃煮、ジャムなどの缶詰、瓶詰類、キャンデー、トローチ、錠菓、チョコレート、ビスケット、クッキー、米菓、和洋菓子、洋生菓子、スナック菓子、砂糖菓子、プリンなどの菓子類、フライ類、コロッケ、餃子、中華饅頭等の調理加工品、野菜ペースト、肉のミンチ、果実ペースト、魚介類のペースト等のペースト類である。また、アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、ホイップクリーム、練乳、バター、ヨーグルト、チーズ、ホワイトソース等の乳製品、マーガリン、ファットスプレッド、ショートニング等の油脂加工品等がある。さらに、コーラ等の炭酸飲料、炭酸入り、アルコール入り、乳製品と混合した果実飲料、果汁又は、果実入り飲料、乳性飲料等の飲料、コーヒー、牛乳、豆乳、ココア牛乳、フルーツ牛乳、ヨーグルト等の乳酸／乳性飲料等、煎茶、ウーロン茶、抹茶、紅茶等の茶飲料等に使用してもよい。

本発明のセロオリゴ糖含有医薬品の例としては、例えば、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、エキス剤、丸剤の固形製剤が挙げられる。

本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
［製造例１］
普通寒天培地にトリコデルマ リーセイ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）を接種し、３７℃で７日間培養後、その培地表面から胞子を１白金耳取り、ポリペプトン１ｇ、酵母エキス０．５ｇ、リン酸１カリウム２ｇ、硫酸アンモニウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム０．３ｇ、塩化カルシウム０．３ｇ、トレースエレメント１ｍL（硼酸６ｍｇ、モリブデン酸アンモニウム４水和物２６ｍｇ、塩化鉄（３）６水和物１００ｍｇ、硫酸銅５水和物４０ｍｇ、硫酸マンガン４水和物８ｍｇ、硫酸亜鉛７水和物２００ｍｇを全量１００ｍＬの精製水に溶解させたもの）、アデカノール１ｍL、結晶セルロース（旭化成ケミカルズ製 商品名ＰＨ−１０１）１０ｇを全量１Ｌの精製水に懸濁および溶解させた培地に植菌し、２８℃で５日間通気攪拌培養した。培養中は、水酸化ナトリウム水溶液を用いて、培地のｐＨを２．８−４．７となるように調節した。培養後の液を遠心分離し、上澄みを目開き０．４６μｍの精密ろ過膜で除菌し、ろ液を分画分子量１３０００の限外ろ過膜（旭化成ケミカルズ製 商品名マイクローザペンシル型モジュール ＡＣＰ−００１３）で体積比で１０倍濃縮し粗酵素を得た。

次に、市販針葉樹由来の溶解パルプを使用し、加水分解条件を塩酸濃度０．４％塩酸水溶液、１２０℃、１時間として、加水分解し、酸不溶性残渣を洗浄、ろ過し、ウェットケークを得た。このウェットケークをセルロース１０％濃度の水分散体とし、超高性能分散機・湿式微粉砕機（アシザワ（株）製、商品名 パールミルＲＬ φ１ｍｍジルコニアビーズ使用 充填率８０％）を使用し、圧密・摩砕処理を施し、セルロース微粒子分散体を得た（平均重合度２２０、ジエチルエーテル可溶物含有率０．７％、平均粒子径０．７μｍ、コロイド状成分含有率５１．５％）。

この摩砕セルロースが２質量％、粗酵素をタンパク質濃度０．２５％になるように５０ｍＭ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）に懸濁溶解させ、全量１０００ｍＬとし、ガラス製フラスコに仕込んだ。このガラス製フラスコを、５５℃の水槽に仕込み、内部を攪拌しながら４時間反応させた。反応終了後、反応液を懸濁状態で３００μＬ分注し、限外ろ過モジュール（分画分子量１００００）を使用し、酵素、未分解セルロースを取り除いた後、高速液体クロマトグラフィーで糖濃度を分析した。該反応液の糖濃度は、セロトリオース〜セロヘキサオース０．２質量％、セロビオース１．５質量％、グルコース０．３質量％であった。
該反応液を、分画分子量１３０００の限外ろ過膜（旭化成ケミカルズ製 商品名マイクローザペンシル型モジュール ＡＣＰ−００１３）でろ過し、得られたろ液を陽・陰イオン交換樹脂で脱イオン処理し、７０℃、減圧下で蒸留し、２０倍の糖濃度の水溶液を得た。

［製造例２］
製造例１で得られたセロオリゴ糖水溶液１００ｍＬを、２００ｍＬのガラス製フラスコに導入し、攪拌しながら、毎時１０℃の速度で、７０℃から５℃まで冷却した。２５℃で水溶液中に晶出したセロオリゴ糖を、減圧ろ過し、４０℃の通風式乾燥機で乾燥し、乳鉢で粉砕後、目開き１５０μｍの篩いで篩下し、篩下粉末を目開き４５μｍの篩いで微粉を除去し、セロオリゴ糖粉末ＣＥ−１を得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表１に記す。

［製造例３］
製造例１で得られたセロオリゴ糖水溶液１００ｍＬを、２００ｍＬのガラス製フラスコに導入し、攪拌しながら、毎時１０℃の速度で、７０℃から５℃まで冷却した後、エタノールを水に対し７０質量％となるよう、毎分１０ｇの速度で加え晶析した。水溶液中に晶出したセロオリゴ糖を、製造例２と同様に、減圧ろ過、乾燥、粉砕、篩下し、セロオリゴ糖粉末ＣＥ−２を得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表１に記す。

［製造例４］
製造例１の菌株を、セロビブリオ ギルバス（Ｃｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ ｇｉｌｖｕｓ）に代え、培養時のｐＨを４〜１０に変更し、酵素反応時の緩衝液をｐＨ６．５のリン酸緩衝液に変更する以外は、製造例１と同様の方法でセロオリゴ糖水溶液を作成した。
得られたセロオリゴ糖水溶液を、活性炭を充填したカラムに通してセロビオースリッチの画分を除去し、製造例３と同様の操作でセロオリゴ糖粉末ＣＥ−３を得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表１に記す。

［製造例５］
製造例１のセロオリゴ糖水溶液を一旦、製造例２の方法で晶析し、得られたセロオリゴ糖を水溶液として、製造例４に記す活性炭処理でセロトリオース以上の分子量画分をカットした。製造例３と同様の操作で粉末化し、セロオリゴ糖粉末ＣＥ−４した。

［製造例６］
製造例４の活性炭によるカラム分画において、グルコースリッチの画分を採取し、６０℃の通気オーブン中で、１６ｈｒ乾燥し、製造例２と同様の操作で粉末化し、セロオリゴ糖粉末ＣＥ−５を得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表１に記す。

［製造例７］
製造例４の活性炭によるカラム分画において、セロトリオース〜セロヘキサオースリッチの画分の画分を採取し、６０℃の通気オーブン中で、１６ｈｒ乾燥し、製造例３と同様の操作で粉末化し、セロオリゴ糖粉末ＣＥ−６を得た。得られたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表１に記す。

［実施例］
製造例２〜４で得られたＣＥ−１〜３を使用し、以下の方法で各菌株の資化テストを実施した。
Ｐｅｐｔｏｎｅ−Ｙｅａｓｔ−Ｆｉｌｄｅｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＰＹＦ 日本製薬製）培地に、本発明のセロオリゴ糖を０．５質量％添加した滅菌培地（ｐＨ７．２）１．５ｍＬを作成し、予め、Ｆｉｌｄｅｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ添加ＧＡＭブイヨン培地（日本製薬製 製品名ＧＡＭブイヨンにＦｉｌｄｅｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ０．４体積％を添加）に、以下の各種菌株を前培養しておいた供試菌液０．０３ｍＬを接種し、３７℃で９６時間嫌気培養した後、ｐＨを測定し資化性を判断する。該ｐＨが、５．５未満に下がっている状態で、該菌株がセロオリゴ糖を資化したと判断できる。なお、ｐＨは低いほど、該菌株の増殖が進むことを意味する。結果を表２に記す。

［比較例］
セロオリゴ糖をＣＥ−４〜６に代えて、実施例の方法と同様に、資化性の評価を行った。
［参考例］
セロオリゴ糖の代わりに、ゲンチオオリゴ糖（日本食品化工製 商品名ゲントース♯８０Ｐ）、フラクトオリゴ糖（明治製菓製 商品名メイオリゴＰ）を用いて、実施例と同様に評価した。

＜使用した菌株＞
１）ビフィドバクテリウム アドレセンティス
（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）
２）ビフィドバクテリウム ビフィダム
（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）
３）ビフィドバクテリウム ブレーベ
（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）
４）ビフィドバクテリウム インファンティス
（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）
５）ビフィドバクテリウム ロンガム
（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）
６）ラクトバチルス アシドフィルス
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）
７）ラクトバチルス カゼイ
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）
８）ラクトバチルス サルバリウス
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｂａｒｉｕｓ）
９）ラクトバチルス ガセリ
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）
１０）ラクトバチルス ファーメンタム
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）
１１）ストレプトコッカス パイオジェネス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）
１２）バクテロイデス デスタソニス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）
１３）バクテロイデス フラジリス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）
１４）バクテロイデス オバタス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｏｖａｔｕｓ）
１５）バクテロイデス セタイオタオミクロン
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ）
１６）バクテロイデス バルファタス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｆａｔｕｓ）
１７）バクテロイデス ユニフォルミス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ）
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）
１８）フソバクテリウム バリウム
（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｒｉｕｍ）
１９）フソバクテリウム ネクロフォラム
（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ）
２０）マエガモナス ハイパーメガス
（Ｍａｅｇａｍｏｎａｓ ｈｙｐｅｒｍｅｇａｓ）
２１）ミツオケラ マルチアシダス
（Ｍｉｔｓｕｏｋｅｌｌａ ｍｕｌｔｉａｃｉｄｕｓ）
２２）ユーバクテリウム リモサム
（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｍｏｓｕｍ）
２３）ユーバクテリウム アエロファシエンス
（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）
２４）ユーバクテリウム ニトリトジェネス
（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｉｔｒｉｔｏｇｅｎｅｓ）
２５）ユーバクテリウム レンタム
（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｎｔｕｍ）
２６）エンテロバクター アエロゲネス
（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）
２７）エンテロコッカス ファエカリス
（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）
２８）クロストリジウム ブチリカム
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）
２９）クロストリジウム クロストリジファルメ
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｉｆｏｒｍｅ）
３０）クロストリジウム ディフィシレ
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）
３１）クロストリジウム パーフリンジェンス
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）
３２）クロストリジウム パラプトリフィカム
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐａｒａｐｕｔｒｉｆｉｃｕｍ）
３３）クロストリジウム ラモサム
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｒａｍｏｓｕｍ）
３４）クロストリジウム イノキューム
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｉｎｎｏｃｕｕｍ）
３５）クロストリジウム スポロゲネス
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）
３６）プロピオニバクテリウム アクネス
（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）
３７）ペプトストレプトコッカス パルバラス
（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｐａｒｖｕｌｕｓ）
３８）ペプトストレプトコッカス アサキャロリチカス
（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ａｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）
３９）ペプトストレプトコッカス マグナス
（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｍａｇｎｕｓ）
４０）ペプトストレプトコッカス プレボーリ
（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｐｒｅｖｏｌｌｉ）
４１）エシェリキア コライ
（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）
４２）クレブシエラ ピューモニアエ
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）

＜評価基準＞
−：ｐＨが≧６．０
±：ｐＨが６．０未満〜５．５
＋：ｐＨが５．５未満〜５．０
＋＋：ｐＨが５．０未満〜４．５
＋＋＋：ｐＨが＜４．５

表２に示すように、セロビオース含量を高く、グルコース濃度を低く、セロトリオース〜セロヘキサオース含量を適正範囲にすることで、ビフィズス菌、乳酸菌を選択賦活し、クロストリジウム パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、エシェリキア コライ（Ｅｓｃｈａｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の増殖抑制に加え、バクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増殖を抑制できた。

本発明の腸内細菌賦活剤は、腸内の有害細菌に資化されず、選択的に有用細菌を賦活し、腸内細菌叢を改善する為、通常の食品素材に加え、機能性食品素材、食品・医薬品用の添加剤、医薬品として食品／医薬品分野で好適に利用できる。

Claims (5)

1. セロビオース含量が７０質量％以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースから選ばれる１種以上を０．１〜３０質量％含み、グルコース含量が２質量％以下である腸内細菌賦活剤。
2. セロビオース含量が９５質量％以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースから選ばれる１種以上を０．１〜３質量％含むことを特徴とする請求項１記載の腸内細菌賦活剤。
3. ビフィドバクテリウム アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｂｒｅｖｅ）、ラクトバチルス アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｇａｓｓｅｒｉ）から選ばれる１種以上を増加させ、バクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｆｒａｇｉｌｉｓ）またはユーバクテリウム アエロファシエンス（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ）の増加を抑制する請求項１または２記載の腸内細菌賦活剤。
4. 請求項１〜３のいずれかに記載の腸内細菌賦活剤を含有する医薬品。
5. 請求項１〜３のいずれかに記載の腸内細菌賦活剤を含有する食品。