WO2007037249A1 - セロオリゴ糖含有組成物 - Google Patents

Abstract

　セロビオースと、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセロヘキサオースからなる群から選ばれる１種以上とからなるセロオリゴ糖を主成分とし、平均Ｌ／Ｄが３．０以下、嵩密度が０．８０ｇ／ｍＬ以下、安息角が６０°以下の粉末であるセロオリゴ糖組成物。

Description

明 細 書

セロオリゴ糖含有組成物

技術分野

[0001] 本発明は、食品、医薬品の内用剤の分野においては、糖組成が制御され、血中ァ ディポネクチン濃度の低下が抑制された、セロオリゴ糖を含有することで、経口摂取 により、肝臓内の中性脂肪、総コレステロール濃度を低下させる生活習慣病の予防 又は改善用のセロオリゴ糖含有組成物を提供するものである。本発明はまた、腸内 の有害細菌に資化されず、選択的に有用細菌を賦活する腸内細菌賦活性のセロォ リゴ糖含有組成物を提供するものである。本発明はまた、ピロリ菌の増殖を抑制又は 静菌するピロリ菌抑制性のセロオリゴ糖含有組成物を提供するものである。

[0002] また、本発明は、化粧品、医薬品、医薬部外品の分野においては、保湿効果が優 れ、荒れ肌、敏感肌、乾燥肌等のダメージ肌を改善する外用剤において、経皮水分 蒸散量の回復を促し、かつ使用感が良好で、取り扱い性が優れる皮膚バリヤ機能改 善性のセロオリゴ糖含有組成物を提供するものである。本発明はまた、表皮の有害 細菌に資化されず、選択的に有用細菌を賦活する皮膚常在菌叢改善性のセロオリ ゴ糖含有組成物を提供するものである。

[0003] さらに、本発明は、高流動性のセロオリゴ糖粉末、該セロオリゴ糖粉末含有組成物 に関し、食品、化粧品、医薬品、医薬部外品の分野において、粉体流動性、均一分 散性に加え、油分保持性に優れ、吸湿し難ぐ圧縮成形性、耐熱耐酸性、澱粉の老 化防止性、蛋白質の変性防止性等の取り扱い性が優れた高流動性セロオリゴ糖粉 末を提供するものである。本発明はまた、それを含有することで、セロオリゴ糖の凝集 がなぐ分散度が改善され、圧縮成形性、耐熱耐酸性に優れ、澱粉の老化、蛋白質 の変性が防止された食品 Z化粧品 Z医薬品 Z医薬部外品を提供するものである。 背景技術

[0004] セロオリゴ糖は、セロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、 セ口へキサオースの総称であり、 1分子内に、ダルコビラノース単位 1〜6個が、 β—1 , 4結合した少糖類である。 本明細書においては、これらセロオリゴ糖に加え他の成分、例えばグルコースを含 む組成物を「セロオリゴ糖組成物」と称することにする。

また、本明細書においては、この「セロオリゴ糖組成物」を有効成分として含有し、 他の添加剤等を含有してもよい組成物を、「セロオリゴ糖含有組成物」（又は「薬剤組 成物」）と称することにする。

[0005] セロオリゴ糖は、ヒトには消化吸収され難ぐ低カロリー甘味料として有用であるのに 加え、一般食品、機能性食品、化粧品、医薬品及びその添加剤、その他化学変換原 料、発酵原料としても有用である (非特許文献 1)。

[0006] 本発明は、糖尿病、動脈硬化、肝硬変等の成人病態の要因となりうる肝臓内脂質 に着目し、特定の糖組成を有するセロオリゴ糖組成物を含有する組成物が、血中ァ ディポネクチン濃度の低下を抑制し、肝臓内脂質を低減する効果を有するため、生 活習慣病予防又は改善剤として用いることができる。

[0007] 非特許文献 2には、セロビオースが 92. 9%、重合度 3以上のセロオリゴ糖が 3. 3% 、グルコースが ₃. 8%のセロオリゴ糖組成物を使用し、健常なヒト (女性）に摂取させ た際の、摂取カロリー及び血糖値、血中インスリン濃度等の生体利用性が開示されて いる。かかる文献は、セロオリゴ糖組成物の消化性を確認するため血糖値、インスリン 濃度を測定したに過ぎず、また正確な摂取カロリーを求めるためにヒトに経口投与し たのみである。また、該文献は、セロオリゴ糖組成物の摂取と、肝臓内の中性脂肪濃 度については全く記載がなぐ示唆もない。従って、該文献は、本発明のように特定 の糖組成、且つ血中アディポネクチン低下率が小さいセロオリゴ糖組成物を、経口摂 取し、肝臓内の中性脂肪濃度の低下に効果がある生活習慣病又は改善剤として使 用するものとは全く異なるものである。

[0008] これまでのセロオリゴ糖による脂質代謝への試みについては、以下の報告がある。

非特許文献 1、 3、及び 4には、糖組成として、セロビオース 85. 7質量％、セロトリオ ース 3. 7質量⁰ /₀、及びグルコース 9. 3質量⁰ /₀であるセロオリゴ糖糸且成物を用い、高シ ョ糖食 (ショ糖 64. 7質量部、カゼイン 25質量部、コーン油 5質量部、ミネラル 4質量 部、ビタミン 1質量部、塩酸コリン 0. 2質量部及びビタミン EO. 05質量部）の 1又は 2. 5質量％を、該セロオリゴ糖組成物で置換し、 SD系雄性ラットを 4週間飼育した結果 が記載されている。該文献によると、上記糖組成のセロオリゴ糖組成物の摂取で、無 添カ卩系に対し、血清総コレステロール、 HDL—コレステロール、トリダリセライド、及び 体脂肪率が低下している。しかしながら、該文献のセロオリゴ糖は、血清脂質の低減 効果を有するものの、肝臓等の内臓重量には変化がなぐ内臓脂質についても低減 効果が認められていない。それに対し、本発明は、特定の糖組成を有し、血中アディ ポネクチン濃度の低下が抑制され、セロオリゴ糖組成物を含有し、肝臓内の脂質低 減効果に優れる生活習慣病の予防又は改善剤である。従って、該文献の血清脂質 低下性のセロオリゴ糖とは全く異なる。

[0009] また、特許文献 1には、乳酸菌（Lactbacillus rahamnosus)菌体とセロビオース を配合比で、 1 : 2. 5〜8含有せしめたことを特徴とする整腸及び脂質代謝促進用食 '飼料添加物が記載されている。かかる文献では、基本食 (カゼイン 20. 0部、 DL— メォチニン 0. 3質量部、ミネラル 3. 5質量部、ビタミン 1. 0質量部、大豆油 7. 0質量 部）の 10質量％をセロビオースに置換し、 Wister系雄性ラットを 14日間飼育した結 果が記載されている。該文献では、セロビオース単独添加系は、無添カ卩に対し、血清 、内臓の脂質代謝への効果はなぐセロビオースと上記乳酸菌を併用すると初めて、 上記の脂質量が低減している。従って、本発明のような、糖組成が高度に制御された セロオリゴ糖を含有し、セロオリゴ糖単独で、肝臓内の脂肪量を低減する生活習慣病 予防又は改善剤とは本質的に異なる。また、該文献の脂質代謝促進食は、セロピオ ースと生菌を同時摂取する必要があるため、製剤とした場合の生菌の安定が悪ぐ服 用するまでに、少な力もず効果が低下するという問題があった。

[0010] 従って、特定の糖組成を有し、血中アディポネクチン濃度の低下が抑制された、ィ ンスリン非上昇性のセロオリゴ糖組成物を有効成分とし、これを服用することで、肝臓 内脂質を低減する生活習慣病予防又は改善剤は知られていなカゝつた。

[0011] 次に、本発明に係るセロオリゴ糖組成物、又は本発明のセロオリゴ糖含有組成物の 腸内細菌叢賦活について述べる。近年、腸内細菌叢が、ヒトの健康と密接に関わるこ とが知られてきた。例えば、ビフィズス菌ゃ乳酸菌等は、ヒトに健康をもたらす有用細 菌である力 加齢とともに減少するため、プレバイオテイクス (腸内細菌の栄養源となり 、それらを増やす働きをもつもの)等の機能性食品で腸内細菌叢 (腸内フローラ)を改 善する試みがなされ、ビフィズス菌、乳酸菌を増殖させる既存の機能性食品は多い。

[0012] 特に、上述のプレノィォテイクスとしては、腸内の有用細菌のみを賦活し、有害細 菌を賦活しないという選択賦活性が高いほど効率がよい。例えば、既存の試みとして は、有用細菌を賦活しつつ、腸内の有害細菌としてウエルシュ菌であるクロストリジム パーフリンジエンス (Clostridium perfringens)を増殖抑制するものがある。

[0013] 上述の、ビフィズス菌、乳酸菌を増加させ、且つウエルシュ菌を抑制する試みにお いて、 β結合性のオリゴ糖に関するものを以下に記載する。

[0014] 特許文献 2には、 β—ダルコシド結合力 なるダルコオリゴ糖及び Ζ又はその還元 物を有効成分とする腸内フローラ改善物質が記載されている。該文献に記載される、 ダルコオリゴ糖は、セロビオース、ソフォロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、 ゲンチォオリゴシル—D—グルコース力も選ばれた 1種又は 2種以上である。該オリゴ 糖は、確かに、ビフィズス菌及び乳酸菌等の有用細菌の増殖を促進しつつ、ゥエルシ ュ菌の増殖を抑制する効果を有する。

[0015] し力しながら、ウエルシュ菌以外の有害細菌であるバタテロイデス フラジリス（Bact eroides Fragilis)、ユーノ クテリゥム ァエロファシエンス (Eubacterium Aerofa ciens)等を少な力もず増加させる問題があった。なお、バタテロイデス フラジリス（B acteroides Fragilis)、ユーノ クテリゥム ァエロファシエンス (Eubacterium Aer ofaciens)は、嫌気性無芽胞グラム陰性桿菌であり、好気性菌との混合感染の形で、 各種膿瘍形成性感染症、菌血症等に関連する有害細菌である。上記文献の腸内フ ローラ改善剤は、本発明の如ぐビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を増加しつつ、 有害細菌であるバタテロイデス フラジリス（Bacteroides Fragilis)、ユーバクテリウ ム ァエロファシエンス（Eubacterium Aerofaciens)の増加を抑制する腸内細菌 賦活剤とは全く異なる。従って、セロオリゴ糖の糖組成を特定の範囲に制御し、ビフィ ズス菌、乳酸菌等の有用細菌を増加しつつ、有害細菌であるパクテロイデス フラジ リス（Bacteroides Fragilis)、ユーバタテリゥム ァエロファシエンス（Eubacterium Aerofaciens)の増加を抑制する腸内細菌賦活剤は全く知られて 、なかった。 次に、本発明のセロオリゴ糖組成物又はセロオリゴ糖含有組成物のピロリ菌の抑制 又は静菌について述べる。ピロリ菌（ヘリコバクタ一'ピロリ、又は Helicobacter ' Pylo ri)は、グラム陰性の微好気性の桿菌である。ピロリ菌は、それが有するゥレアーゼ活 性により、尿素からアンモニアを生成することで、胃酸を中和して胃内の強酸性環境 で生息していると考えられている。このピロリ菌により生成したアンモニアが、胃粘膜 に障害を与え、胃炎、潰瘍、胃ガン、リンパ腫等の胃疾患と関連することが明らかとな つており、ピロリ菌の抑制、静菌が、これらの疾患に対する有効な予防又は改善策と して認知されている。

従来のピロリ菌の抑制方法としては、抗生物質の投与が試みられてきた。この方法 は、確かに、ピロリ菌の抑制効果はある。し力しながら、抗生物質の抑制作用が、ピロ リ菌のみならず、人体に有用な腸内細菌にも影響する問題があった。また、副作用と して下痢を生じるなど、少な力もず人体に影響を及ぼす問題もあった。従って、人体 に安全、かつピロリ菌に選択的に作用する抑制剤が求められてきた。従来技術として 、糖類を有効成分とするピロリ菌の予防剤としては、以下のものがある。

特許文献 3には、フコィダンを有効成分とする抗腫瘍剤が開示されている。該文献 の抗腫瘍剤は、フコィダンによる、ピロリ菌の胃壁への定着阻害を利用し、ピロリ菌の 感染予防に効果がある。それに対し、本発明のセロオリゴ糖を有効成分とするピロリ 菌抑制剤は、胃壁への定着に関わらず、ピロリ菌を直接抑制するため、予防に加え て、改善効果もあり、該文献の予防剤とは全く異なるものである。

本発明は、特定の糖組成のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有する組成物 であり、それを経口摂取することで、ヘリコバクタ一'ピロリ（Helicobacter ' Pylori)の 増加を抑制する、人体に安全なピロリ菌の抑制又は静菌剤は知られていな力つた。

[0016] 次に、本発明に係るセロオリゴ糖組成物、又は本発明のセロオリゴ糖含有組成物の 皮膚バリヤ機能改善性について述べる。人間の皮膚の中でも、角層は生体の外界環 境に対する障壁 (バリヤ）として機能している。皮膚のバリヤ機能は、皮膚の経皮水分 蒸散量と密接に関係し、この経皮水分蒸散を抑えることが、皮膚の柔軟性、潤いを保 つ上で重要である (非特許文献 5、 6参照)。これまで、糖類又はオリゴ糖類を有効成 分とし、角層のラメラ構造の再生に着目した発明がなされている。

[0017] 特許文献 4には、グルコース及び Z又はラフイノースを含有する皮膚の角層細胞に おけるラメラ構造再生剤、及びグルコースと少糖類を含有することを特徴とする皮膚 の角層細胞におけるラメラ構造再生剤が記載されている。

[0018] 力かる文献には、ラメラ構造再生剤として、グルコースを必須成分として含み、少糖 類としてラフイノース、メリビオース、トレノヽロース、スクロース、マルトース、セロビ才ー ス、ゲンチアノース、スタキオース、及びシクロデキストリン力 なる群力 選ばれる 1種 以上を含む外用剤の記載がある。該文献によると、確かに、ラフイノース、メリビオース 、トレハロース、スクロース、及びシクロデキストリンについて、ラメラ構造の再生効果が 認められ、さらにグルコースとラフイノースを併用することで、「ベたつき」を低減する効 果が認められている。し力しながら、該文献には、セロビオースを含む上記セロオリゴ 糖類の経皮水分蒸散量の回復についての記載がない。特にセロオリゴ糖が、ダルコ ースを含まずとも、使用感に優れ、かつ経皮水分蒸散量の回復促進に優れ、皮膚バ リャ機能が向上することについては全く知られていない。また、該文献のラメラ構造改 善剤は、グルコースを、ラフイノース又は少糖類に対し 7. 4モル％以上と多量に含む 必要があるため、アミノ酸、蛋白質等のアミノ基含有成分と併用し、加熱工程を経た 場合、メイラード反応により褐変 ·変色が生じ、商品価値を著しく低下させるという問題 があった。本発明は、グルコースを必須成分とせずとも、「ベたつき」、褐変が少なぐ 肌のバリヤ機能を改善できる点で、上述の発明と本質的に異なるものである。従って 、本発明の如ぐ特定範囲のセロビオース含量を有するセロオリゴ糖を有効成分とし 、グルコースを併用せずとも、使用感が良好で、褐変が少なぐ経皮水分蒸散量の回 復を促進する皮膚バリヤ機能改善剤は知られていなカゝつた。

[0019] 次に、本発明のセロオリゴ糖、又はセロオリゴ糖組成物の皮膚常在菌叢改善性に ついて述べる。

[0020] 健常な人間の皮膚は、表皮の pHを弱酸性に維持し、抵抗力を高める作用を持つ 有益な皮膚常在菌により保護されている。しかしながら、乾燥肌やアトピー性皮膚炎 など、傷つきやすい肌を持っている人の場合、有害菌である黄色ブドウ球菌や緑膿 菌は、皮膚表面にある傷から内部に感染し、人間の皮膚状態を、さらに損なう原因に なる。たとえ見えないような小さい傷でも、内部の組織が露出していれば、黄色ブドウ 球菌や緑膿菌は、そこにとりつき、しみ出てくる体液をえさにして増殖する。アトピー 性皮膚炎の人の肌は、実際に、黄色ブドウ球菌数が、多く検出されると言われている 。従って、人の皮膚上で、皮膚有益菌の菌数を維持し、同時に、有害菌である黄色 ブドウ球菌や緑膿菌の菌数を抑えることが、極めて重要である。

[0021] また、同じ皮膚でも、髪の毛の密生する頭皮は、他の部位よりも、多数の皮膚常在 菌が存在し、その生存数バランスも重要であり、併せて官能的にも乾いた時の髪感 触として、さつぱり感や滑り感を付与することも重要である。

[0022] 黄色ブドウ球菌又は緑膿菌に対して、静菌作用を持つ薬剤や化粧品原料成分は、 数多く開示されてきた。 N—ァシルグルタミン酸含有洗浄剤（特許文献 5)、鉄結合型 ラタトフエリン含有剤 (特許文献 6)、様々な植物抽出物 (特許文献 7、 8、 9、 10、 11) などである。し力しながら、これらは、同じスタフイロコッカスに属する有益な皮膚常在 菌に対しても同等以上に静菌作用を持っために、皮膚常在菌叢改善剤には成り得 なかった。

また、二ガリとローズマリー抽出物、又はカンゾゥ抽出物を混合することによる皮膚 常在菌の生存数バランス調整剤が開示されている (特許文献 12)が、その効果は充 分で無ぐ緑膿菌に対する静菌性については記載がなぐさらには乾いた時の感触と してさっぱり感ゃ滑り感を付与するものではなぐ高価で、現実的には、極めて使用し 難いものであった。

[0023] さらに、イソマルトオリゴ糖含有皮膚常在菌叢改善剤 (特許文献 13)が開示されて いる。該文献によると、イソマルトオリゴ糖及び Z又はイソマルトオリゴ糖を還元して得 られる糖アルコールを含有する皮膚常在菌叢改善剤は、特定の pH及び添加量範囲 においては、表皮ブドウ球菌に作用せず、黄色ブドウ球菌を抑制する効果を有する。 しかしながら、本願の比較例に示すように、肌の保湿性改善や化粧水の感触改善等 が得られる、糖質添加量が高い範囲においては、その効果は充分ではない。また、 該文献には、緑膿菌に対する静菌性については記載がなぐさらには乾いた時の感 触としてさっぱり感ゃ滑り感を付与するものではな力つた。

[0024] 従って、該文献の皮膚細菌叢改善剤は、本発明の如ぐ皮膚有益菌である表皮ブ ドウ球菌（Staphylococcus epidermidis：スタフイロコッカス ·ェピデミデス菌）に対 しては静菌作用を示さず、有害菌である黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus ：スタフイロコッカス ·ァゥレウス菌）及び有害菌である緑膿菌（Pseudomonas aerug inosa；シユードモナス ·ァエルギノーザ菌）に対しては静菌作用又は増殖抑制作用を 示し、さらに乾いた時の髪感触として、さっぱり感ゃ滑り感を付与する皮膚常在菌叢 改善剤に関するものとは根本的に異なるものである。

[0025] 最後に、本発明の粉体流動性、均一分散性に加え、油分保持性に優れ、吸湿し難 ぐ圧縮成形性、耐熱耐酸性、澱粉の老化防止性、蛋白質の変性防止性等の取り扱 V、性が優れた高流動性セロオリゴ糖粉末にっ 、て述べる。

[0026] 特許文献 14には、セロビオースを主成分とした重合度 2ないし 7のセロオリゴ糖を賦 形剤として含有する固形製剤が記載されている。このセロオリゴ糖賦形剤は、確かに 、水分活性がショ糖と同等であり、低カロリー甘味剤としては有用であるが、該特許文 献によると、セルロースの酵素分解により得られるセロオリゴ糖溶液を粉末ィ匕する際 に凍結乾燥を経るため、セロオリゴ糖粉末が軽質になり、粉体流動性が必ずしも満足 いくものではなかった。また、該特許文献には、セロオリゴ糖粉末の結晶形態、粉体 流動性、均一分散度等のハンドリング性については、記載も示唆もなぐ本発明の如 ぐセロオリゴ糖の結晶形態及び粉体物性を高度に制御し、粉体流動性が優れ、均 一分散性を高めたセロオリゴ糖粉末とは本質的に異なるものである。

[0027] 非特許文献 3、 4には、サルファイトパルプを酵素分解し、得られたセロオリゴ糖溶 液を限外ろ過、珪藻土、イオン交換樹脂で精製した後、エタノール及びイソプロピル アルコールで結晶化させたセロオリゴ糖粉末が記載されている。し力しながら、該文 献の貧溶媒による結晶化処理は、セロビオースの高純度化のみを目的とするもので あり、セロオリゴ糖の結晶形態については全く記載がなぐ本発明のようなセロオリゴ 糖粉末の粉体流動性、均一分散性を向上させるための結晶形態、粉体物性の制御 技術とは、全く異なるものである。

[0028] 従って、本発明の如ぐセロオリゴ糖の糖組成及び結晶形態を高度に制御し、粉体 流動性、均一分散性に加え、油分保持性に優れ、吸湿し難ぐ圧縮成形性、耐熱耐 酸性、澱粉の老化防止性、蛋白質の変性防止性等の取り扱い性が優れた高流動性 セロオリゴ糖粉末、及び該粉末の製造方法は知られて 1、なかった。

[0029] 非特許文献 1 :ウッドケミカルズの最新技術，シーエムシー出版発行， 66- 72 (2000 ) 非特許文献 2 : Nutrition, 20, 979- 983 (2004)

非特許文献 3 :日本栄養'食糧学会誌， 49, No 3, 143- 148 (1998)

非特許文献 4: Cellulose Communications, 5, No 2, 91 97 (1998) 非特許文献 5 :「化粧品の有用性 評価技術の進歩と将来展望」薬事日報社発行， 8

2- 101 (2001)

非特許文献 6 :「機能性化粧品」日本化粧品科学会編 株式会社ジスク発行， 235- 252 (1991)

特許文献 1：特開 2004— 321068号公報

特許文献 2：特開平 3 - 262460号公報

特許文献 3：特開平 7— 138166号公報

特許文献 4:特開 2006— 45186号公報

特許文献 5：特開平 11― 80781号公報

特許文献 6：特開平 11― 279076号公報

特許文献 7：特開平 6— 116162号公報

特許文献 8：特開平 8 - 73368号公報

特許文献 9：特開平 8 - 73372号公報

特許文献 10：特開平 11—43443号公報

特許文献 11：特開 2001— 226280号公報

特許文献 12 :特開 2005— 139075号公報

特許文献 13 :特開 2005— 89355号公報

特許文献 14:特開昭 62— 273921号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

本発明は、経口摂取により肝臓内の脂質代謝性に優れ、腸内の有用細菌を選択 的に賦活し、ピロリ菌の増殖を抑制又は静菌し、さらに経皮塗布により皮膚のノリャ 機能を高め、皮膚常在菌叢を改善し、さらに、糖組成及び結晶形態を高度に制御さ れ、粉体流動性、均一分散性に加え、油分保持性に優れ、吸湿し難ぐ圧縮成形性 、耐熱耐酸性、澱粉の老化防止性、蛋白質の変性防止性等の取り扱い性が優れた 高流動性セロオリゴ糖組成物を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段

[0031] 本発明者らは、糖組成、及び Z又は結晶形態を特定範囲に制御されたセロオリゴ 糖が、経口摂取により肝臓内の脂質代謝性に優れ、腸内の有用細菌を選択的に賦 活し、ピロリ菌の増殖を抑制又は静菌し、さらに経皮塗布により皮膚のノ リャ機能を 高め、皮膚常在菌叢を改善し、さらに、粉体流動性、均一分散性に加え、油分保持 性に優れ、吸湿し難ぐ圧縮成形性、耐熱耐酸性、澱粉の老化防止性、蛋白質の変 性防止性等の取り扱い性が優れることを見出し本発明をなすに至った。

[0032] すなわち、本発明は、下記の通りである。

(1)セロビオースと、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ口へ キサオース力もなる群力も選ばれる 1種以上とからなるセロオリゴ糖を主成分とし、平 均 LZDが 3. 0以下、嵩密度が 0. 80gZmL以下、安息角が 60° 以下の粉末であ るセロオリゴ糖組成物。

(2)平均 LZDが 2. 5以下、嵩密度が 0. 55gZmL以下である、（1)に記載のセロォ リゴ糖組成物。

(3)安息角が 45° 以下である、（1)又は（2)に記載のセロオリゴ糖組成物。

(4)油分保持量が 0. 9gZg以上である、（1)〜（3)のいずれか一項に記載のセロォ リゴ糖組成物。

(5)相対湿度 75%、 40°Cの環境下で、 18時間放置された際の、吸湿度が 1質量％ 以下である、（1)〜 (4)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物。

(6) 200mgを、 8. Ommの円形平面臼杵により、 10kNで圧縮した成型体硬度が 、 60N以上である、（1)〜（5)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物。

(7) 100°C以上、 pH7以下、 10分以上加熱処理された後、セロオリゴ糖残存率が 90 %以上である、（1)〜（6)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物。

(8)セロビオース含量が 70質量％以上であり、セロトリオース、セロテトラオース、セロ ペンタオース、及びセ口へキサオースからなる群から選ばれる 1種以上が 0〜30質量 %である、 (1)〜（7)のいずれかに記載のセロオリゴ糖組成物。

(9)セロオリゴ糖に対し、グルコースを 9質量 %以下含む、（8)に記載のセロオリゴ糖組 成物。

(10)セロビオース含量が 90質量％以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペン タオース、及びセ口へキサオース力 なる群力 選ばれる 1種以上が 0. 1〜10質量 %、グルコース含量が 3. 5質量％以下である、（8)又は（9)に記載のセロオリゴ糖組 成物。

(11)セロビオース含量が 95質量％以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペン タオース、及びセ口へキサオース力 なる群力 選ばれる 1種以上が 0. 5〜5質量％ 、グルコース含量が 3. 5質量％以下である、（10)に記載のセロオリゴ糖組成物。

(12)グルコースが 2質量 %以下である、 (11)に記載のセロオリゴ糖組成物。

(13)セロビオース含量が 50質量％以上であり、セロトリオース、セロテトラオース、セ 口ペンタオース、及びセ口へキサオースからなる群力 選ばれる 1種以上が 0〜50質 量％であるセロオリゴ糖を、水又は水 Ζ有機溶剤の混合液に、分散又は溶解されて いるセロオリゴ糖組成物。

(14) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、経口摂取による血中アディポネクチン濃度の低下率が 30%以下に抑制された 、生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

(15)前記セロオリゴ糖組成物が、経口摂取による肝臓内の中性脂肪濃度の低下率 が 15%以上である、（14)に記載のセロオリゴ糖含有組成物。

(16)前記セロオリゴ糖組成物が、経口摂取による血中アディポネクチン濃度の低下 率が 25%以下に抑制された、（14)又は（15)に記載のセロオリゴ糖含有組成物。

(17) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、腸内有用細菌に資化され、腸内有害細菌に資化されない腸内細菌叢の賦活 性を有し、腸内有用細菌として、ビフイドバタテリゥム ァドレセンティス（Bifidobacter ium Adolescentis)、ビフィドノくクテリゥム ブレーべ（Bifidobacterium Breve八 ラクトバチルス ァシドフィルス（Lactobacillus Acidophilus)、ラタトバチルス カゼ ィ (Lactobacillus Casei)、及びラクトノくチノレス ガセリ (Lactobacillus Gasseri) 力 なる群力 選ばれる 1種以上を増加させ、腸内有害細菌として、パクテロイデス フラジリス（Bacteroides Fragilis)又はユーバタテリゥム ァエロファシエンス（Euba cterium Aerofaciens)の増加を抑制する腸内細菌叢賦活剤として用いるための セロオリゴ糖含有組成物。

(18) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、腸内有用細菌に資化され、腸内有害細菌に資化されない腸内細菌叢の賦活 性を有し腸内有害細菌として、クロストリジゥム パーフリンジエンス（Clostridium p erfringens)の増加を抑制する腸内細菌叢賦活剤として用いるためのセロオリゴ糖 含有組成物。

(19) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、へリコパクター ピロリ（Helicobacter Pylori)の増加抑制率が 1%以上であ る、ピロリ菌増加抑制剤又は静菌剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

(20) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、カルシウムと経口摂取することで、大腿骨中のカルシウム濃度増加率が 5%以 上である、骨中カルシウム濃度増強剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

(21) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、皮膚への塗布による経皮水分蒸散量の回復促進率が 10%以上である、皮膚 ノ リャ機能改善剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

(22) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、該有効成分力 表皮ブドウ球菌（Stapylococcus epidermidis :スタフイロコッ カス ·ェピデミデス菌）を静菌せず、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus：スタ フイロコッカス ·ァゥレウス菌）、及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユード モナス.ァエルギノーザ菌）を静菌する皮膚常在菌叢改善剤として用いるためのセロ オリゴ糖含有組成物。

(23) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、澱粉と共存下で保存された際の澱粉老化率が 20%以下である、澱粉老化防 止剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

(24) (1)〜（13)のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含 有し、蛋白質と共存下で保存された際の蛋白質変性率が 10%以下である、蛋白質 変性防止剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。 (25)前記セロオリゴ糖組成物が、食品素材、化粧品素材、医薬品薬効成分、又はそ れらで使用される添加物の中から選択される 1種以上の構成成分に含有され、顆粒

、成型体、水溶液、水分散体、ペースト、又はゲル状である、（14)〜（24)のいずれ か一項に記載のセロオリゴ糖含有組成物。

(26)前記水溶液、水分散体、ペースト、又はゲル状のセロオリゴ糖含有組成物が界 面活性剤、増粘剤、又はゲル化剤のいずれか 1種以上を含有する、（25)のセロオリ ゴ糖含有組成物。

(27) (25)又は（26)に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有食品

(28) (25)又は（26)に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有化粧

P

PPo

(29) (25)又は（26)に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有医薬

P

PPo

(30) (25)又は（26)に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有医薬 部外品。

発明の効果

[0033] 本発明に係るセロオリゴ糖組成物又は本発明のセロオリゴ糖含有組成物を、経口 摂取すると肝臓内の脂質代謝性が向上し、腸内の有用細菌を選択的に賦活し、ピロ リ菌の増殖を抑制又は静菌し、さらに経皮塗布すると皮膚のバリヤ機能を高め、皮膚 常在菌叢を改善できる。

[0034] また、本発明に係るセロオリゴ糖組成物は、その糖組成及び結晶形態を高度に制 御され、粉体流動性、均一分散性に加え、油分保持性に優れ、吸湿し難ぐ圧縮成 形性、耐熱耐酸性、澱粉の老化防止性、蛋白質の変性防止性に優れるので、各種 添加物と併せて組成物とすると、取り扱い性に優れた食品、化粧品、医薬品、医薬部 外品が得られる。

発明を実施するための最良の形態

[0035] 本発明について、特にその好ましい態様を中心に、以下具体的に説明する。

本発明のセロオリゴ糖組成物は、セロビオースと、セロトリオース、セロテトラオース、 セロペンタオース、及びセ口へキサオース力 なる群力 選ばれる 1種以上からなるセ 口オリゴ糖を主成分とする必要がある。ここでいう主成分とは、セロオリゴ糖組成物中 に、上記のセロオリゴ糖を、 50質量％以上含有することを表す。本発明のセロオリゴ 糖組成物が、セロオリゴ糖を主成分とすることで、肝臓内の脂質代謝性、腸内有用細 菌の選択的賦活性、ピロリ菌の増殖抑制又は静菌性に優れたセロオリゴ糖含有組成 物が得られる。また、本発明のセロオリゴ糖組成物が、セロオリゴ糖を主成分とするこ とで、皮膚のバリヤ機能改善性、皮膚常在菌叢の改善性に優れたセロオリゴ糖含有 組成物が得られる。

また、本発明のセロオリゴ糖組成物が、セロオリゴ糖を主成分とすることで、結晶形 態を高度に制御され、粉体流動性、均一分散性に加え、油分保持性に優れ、吸湿し 難ぐ圧縮成形性、耐熱耐酸性に優れたものとなる。

さらに、本発明のセロオリゴ糖組成物が、セロオリゴ糖を主成分とすることで、澱粉 の老化防止性、蛋白質の変性防止性に優れるセロオリゴ糖組成物又はセロオリゴ糖 含有組成物となるので、各種添加物と併せて組成物とすると、取り扱い性に優れたセ 口オリゴ糖含有組成物、又はセロオリゴ糖含有食品、化粧品、医薬品、医薬部外品が 得られる。

[0036] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物の平均 LZDは 3. 0以下である。平均 LZDは 、セロオリゴ糖組成物の粉体流動性に密接に関係するものである。平均 LZDが 3. 0 以下のセロオリゴ糖組成物を粉末の構成成分とすることで、粉体流動性が優れた粉 末が得られる。ここでいう平均 LZDは、該セロオリゴ糖組成物の長径 Z短径比の平 均値であり、セロオリゴ糖組成物をエタノール中に分散させ、マイクロスコープ (KEY ENCE (株)製 商品名 VH— 7000型)で拡大倍率 500倍の像を撮影し、長径 50— 100 mの結晶の長径 Z短径比を画像解析装置（商品名 Image Hyper)で測定 し、試料数 50個以上の数平均値で表される。この平均 LZDは、好ましくは 2. 5以下 であり、より好ましくは 2. 2以下であり、 1. 8以下が特に好ましい。平均 LZDは小さ いほど、セロオリゴ糖組成物の流動性が向上するため好ましぐその下限は特に制限 されるものではないが、通常得られる平均 LZDの範囲としては 1. 0以上である。

[0037] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物の嵩密度は、 0. 80gZmL以下である。セロォ リゴ糖組成物の嵩密度が上述の範囲にあると、上述の粉体流動性に加え、圧縮成形 性が良好である。ここでいう嵩密度は、二重円筒法（lOOmLのメスシリンダーに試料 粉体 5. Ogを定量フィーダ一で 1分かけて粗充填し、粉体層上面を筆様の刷毛で水 平にならし、その容積を試料質量で割り返し、見力け比容積を測定する方法)で得ら れた見かけ比容積の逆数で表される。嵩密度は、 0. 55gZmL以下が好ましぐ 0. 5 OgZmL以下がより好ましぐ 0. 45gZmL以下が特に好ましぐ粉体流動性に優れ たセロオリゴ糖組成物の嵩密度の下限としては 0. 05gZmL以上が好ましぐ 0. 20g ZmL以上がより好ましぐ 0. 30gZmL以上が特に好ましい。

[0038] 本発明におけるセロオリゴ糖糸且成物の安息角は、 60° 以下である。この安息角とは 、粉体の流動性を表す指標である。安息角が 60° 以下であると、セロオリゴ糖組成 物の流動性が優れて 、るため、該セロオリゴ糖組成物をセロオリゴ糖以外の構成成 分と混合'製剤化する際の均一分散性が向上する。また、該セロオリゴ糖組成物を成 型する際には、成型機への充填量のばらつきが低減するため好ましい。ここでいう安 息角は、杉原式安息角測定器に粉体を、 15gZ分の一定速度で流した際の動的安 息角のことである。安息角は、 55° 以下がより好ましぐ 45° 以下が特に好ましい。 安息角は小さければ小さいほど、より上述の効果が得られるため、その下限は特に制 限されないが、簡便な操作で得られる範囲としては、 10° 以上である。

[0039] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物は、セロオリゴ糖結晶、及び Z又は該セロオリ ゴ糖結晶の造粒体であることが好ましい。ここでいう結晶とは、セロオリゴ糖組成物を 粉末広角 X線回折法 (理学電機 (株)製、商品名 ロータフレックス RU— 300)で測 定し、得られる回折パターンにおいて、セロビオース、セロトリオース、セロテトラオ一 ス、セロペンタオース、セ口へキサオース等のセロオリゴ糖の結晶回折が認められるも のであり、回折強度、結晶化度については特に制限はない。また、ここでいう造粒体 とは、 2個以上の上記のセロオリゴ糖結晶が物理的 Z化学的に結合した造粒物のこ とである。この粉末広角 X線回折測定に供するセロオリゴ糖組成物は、乾燥状態であ れば公知の方法で粉末化し測定に用いればよぐ湿潤状態であれば、公知の方法 で乾燥後、粉末ィ匕し測定に用いることができる。

[0040] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物は、平均粒子経が 5— 1000 μ mであることが 好ましい。平均粒子経は、セロオリゴ糖組成物の粉体流動性、混合均一性に関わる ものであり、平均粒子経が 5— 1000 mであると、セロオリゴ糖組成物を他の成分と 混合、製剤化する際の混合均一性が向上するため好ましい。ここでいう平均粒子経 は、ロータップ式篩振とう器 (平工作所 (株)製 商品名シーブシェーカー A型）、 JIS 標準篩（品番号 Z8801— 1987)を用いて、試料 10gを 20分間篩分することにより 質量頻度粒度分布を測定し、累積質量 50%の粒子経として表したものである。上述 の混合均一性等の効果を得るためには、平均粒子経は 10— 500 mがより好ましく 、 20— 400 m力特に好まし!/ヽ。

[0041] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物の成型体硬度は、 60N以上であることが好まし い。ここでいう成型体硬度とは、セロオリゴ糖組成物単独、又はセロオリゴ糖組成物と 他成分と混合し、加圧下で成型体とする操作において、成型体に力学強度を与える 性質のことであり、本発明のセロオリゴ糖組成物 200mgを、 8. 0mmの鋼鉄製円 柱状臼に充填し、 8. 0mmの鋼鉄製平面杵で、 10kNの圧縮力で、 10秒間加圧し 、得られた円柱状成型体を、抜圧後 2時間放置し、硬度計 (フロイント産業 (株)製 商 品名シュロインゲル 6D型）を用いて成型体の直径方向に荷重を加え、破壊したとき の荷重を読みとり、試料 3個の平均値で表される。セロオリゴ糖組成物単独、又はセ 口オリゴ糖組成物と他成分の組成物に、充分な圧縮成形性を付与するには、上述の 成型体硬度は、 75N以上がより好ましぐ 100N以上が特に好ましい。

[0042] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物の油分保持量は、 0. 9gZgであることが好まし い。ここでいう油分保持量とは、セロオリゴ糖組成物 2gをガラス版上に置いて、粉末 状からピペットでナタネ油（日清製 キャノーラ油）を滴下しながら、スパチュラで混鍊 し、粉体表面に油分が染み出した点を終点として測定した粉末 lg当たりの吸油量の ことであり、

油分保持量 (gZg) =吸油量 (g) Zセロオリゴ糖組成物量 (g)

で表される。この値が大きいほど、油分を含む処方、又は、常温で半固形、液状物を 含む処方において、食品、化粧品、医薬品、医薬部外品を製造する際の、油分又は 半固形、液状物の分離、染み出しを防止できるため好ましい。より好ましい範囲として は 1. OgZg以上であり、特に好ましくは 1. lgZg以上である。 [0043] 本発明のセロオリゴ糖組成物の耐熱耐酸性としては、 100°C以上、 pH7以下、 1分 以上加熱された後、残存率として 90%以上であることが好ましい。この残存率が高い ほど、有効成分であるセロオリゴ糖が酸性下で加熱処理されても組成物中に残存し ており、加熱後も上述のセロオリゴ糖の効果が維持されるため好ましい。この耐熱耐 酸性は、加熱処理後のセロビオース残存率であり、以下の方法で表される。本発明 のセロオリゴ糖組成物を、 1質量％で、 _PH3の 0. 1M酢酸 Z酢酸ナトリウム緩衝液に 溶解し、密栓の上、 120°C、 20分間加熱し、加熱後の水溶液を上述の高速液体クロ マトグラフィ一法で測定し、加熱前後のセロビオース濃度により残存率 (加熱後のセロ ビオース濃度 Z加熱前のセロビオース濃度 X 100%)を計算する。この残存率は、 9 5%以上がより好ましぐ 97. 5%以上が特に好ましい。

[0044] 次に本発明における生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖含 有組成物につ!ヽて説明する。

本発明における生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖組成物 は、セロビオースを 70質量⁰ /₀以上含有することが好ましい。セロビオース含量が高い ほど、セロオリゴ糖組成物の水溶解度が向上し、服用時の生体利用率が高まるため 好ましい。このセロビオース含量は、 86質量％以上がより好ましぐ 90質量％以上が さらに好ましぐ 95質量％以上が特に好ましい。

[0045] 本発明における生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖組成物 におけるセロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ口へキサオース 力 なる群力 選ばれる 1種以上の含量は、 0〜30質量％が好ましい。これらを含有 することで、肝臓脂質の低下効果が高められる。但し、含量が高すぎると、溶解度が 低くなり、上述の生体利用率が低減する。従って、この含量は上述の範囲を満たす 必要がある。より好ましい範囲は、 0. 1〜14質量％であり、 0. 1〜10質量％がさらに 好ましく、 0. 1〜5質量％がさらにより好ましぐ 0. 5〜5質量％が特に好ましい。

[0046] 本発明における生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖組成物 のグルコース含量は、 9質量⁰ /₀以下が好ましい。グルコース含量が低いことで、血中 インスリン濃度の上昇を抑え、特に肝臓内の脂質代謝を高めることができる。ダルコ ース含量は、 3. 8質量％以下が好ましぐ 3. 5質量％以下がより好ましぐ 2質量％ 以下が特に好ましい。グルコース含量は、低いほど、上述の効果が大きくなるため、 その下限値は特に制限されるものではない。

[0047] 以下に、本発明の生活習慣病予防又は改善剤における各種セロオリゴ糖及びダル コース含量の分析法を記す。本発明のセロオリゴ糖組成物は、純水に 1質量％濃度 で溶解させた後、高速液体クロマトグラフィー（クロマトグラフィーシステム：島津製作 所 (株)製 商品名 SCL— 10A、カラム：島津製作所製 商品名 Asahipak NH

2

P— 50、移動相：ァセトニトリル又は水 = 75/25 (容積比））で分析できる。セロオリゴ 糖の糖組成は、上述の方法で得られたクロマトグラムにおけるセロビオース、セロトリ オース、セロテトラオース、セロペンタオース、セ口へキサオースのピーク面積を質量 換算し、総質量に占める、それぞれの質量百分率で表される。グルコースの含有率も 、同様の方法で求められ、セロビオースとグルコースのピーク面積力 算出される総 質量に対するグルコースの質量の百分率で表される。

[0048] 本発明の生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は 、経口摂取時の血中アディポネクチン濃度の低下率が 30%以下であることが好まし い。血中アディポネクチン濃度は、脂質代謝異常の指標であり、この低下率が小さい と、糖尿病、動脈硬化等の生活習慣病を生じないため好ましい。ここでいう、血中ァ ディポネクチン濃度とは、血液を用いて ELISA法 (大塚製薬製 血中アディポネクチ ン ELISAキット）で測定したアディポネクチン濃度（ μ gZmL—血液）のことである。 その低下率とは、セロオリゴ糖含有組成物の摂取と非摂取の血液を用い測定したァ ディポネクチン濃度から、以下の式で求められる。低下率（％) = ( (セ口オリゴ糖含有 組成物非摂取時の濃度） - (セロオリゴ糖含有組成物摂取時の濃度)） Z (セロオリゴ 糖含有組成物非摂取時の濃度）（％)。アディポネクチン低下率は小さいほど、上述 の効果が大きくなるため、 25%以下がより好ましい。

[0049] 本発明の生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は 、肝臓内の中性脂肪濃度の低下率が 15%以上であることが好ましい。この肝臓内の 中性脂肪濃度の低下率が高いほど、糖尿病、動脈硬化、肝不全、肝硬変等の生活 習慣病の予防 Z改善効果が高い。ここでいう、中性脂肪濃度とは、肝臓の単位量当 たりに存在する中性脂肪量 (mgZg— Wetliver)のことである。その低下率とは、セロ オリゴ糖の摂取と非摂取の肝臓内の中性脂肪濃度から、以下の式で求められる。 低下率 (％) = ( (セ口オリゴ糖含有組成物非摂取時の濃度） （セロオリゴ糖含有組 成物摂取時の濃度) ) / (セロオリゴ糖含有組成物非摂取時の濃度） (%)。

中性脂肪濃度の低下率は大きいほど、上述の効果が大きくなる。従って、 20%以上 力 り好ましい。

[0050] 本発明の生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は 、肝臓内の総コレステロール濃度の低下率が 10%以上であることが好ましい。この肝 臓内の総コレステロールの低下率が高いほど、糖尿病、動脈硬化、肝不全、肝硬変 等の生活習慣病の予防 Z改善効果が高い。ここでいう、総コレステロール濃度も、上 述の中性脂肪濃度と同様に、肝臓の単位量当たりに存在する総コレステロール量（ mgZg—Wetliver)のことである。その低下率とは、セロオリゴ糖の摂取と非摂取の 肝臓内の総コレステロール濃度から、以下の式で求められる。

低下率 (％) = ( (セ口オリゴ糖含有組成物非摂取時の濃度） （セロオリゴ糖含有組 成物摂取時の濃度) ) / (セロオリゴ糖含有組成物非摂取時の濃度） (%)。

総コレステロール濃度の低下率は大きいほど、上述の効果が大きくなる。従って、 15

%以上がより好ましい。

[0051] 本発明の生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は 、インスリン非上昇性であることが好ましい。インスリン非上昇性とは、セロオリゴ糖含 有組成物を経口摂取した後の血中インスリン濃度が、経口摂取前のインスリン濃度に 対し、上昇しないことを意味し、以下の方法で測定される。生後 7週齢の SDラットを 1 週間 AIN— 93G (オリエンタル酵母工業製)の自由摂取で、 1週間予備飼育後、 16 時間絶食させ、表 1の各セロオリゴ糖水溶液を、ゾンデを用いて 1500mgZkgを投 与した。投与前及び投与後、 30分後に無麻酔下で、骸外静脈より採血し、インスリン 濃度 (ngZmL、シバヤギ製 レビインスリンキット使用）を測定した。ここでいうインスリ ン非上昇性とは、上記のインスリン濃度の上昇率力 30%以下となることである。より 好ましくは、インスリン濃度の上昇率が 25%以下であり、特に好ましくは、 20%以下 である。

[0052] 本発明における生活習慣病予防とは、本発明におけるセロオリゴ糖組成物を有効 成分とする予防剤を経口摂取することで、高糖質、高脂質、高カロリー等の食事を摂 取した場合も、血中及び内臓脂質の上昇を抑制し、糖尿病、動脈硬化、肥満、肝不 全、肝硬変等の生活習慣病を予防できることをいう。

[0053] 一方、本発明における生活習慣病改善とは、上述の生活習慣病を発病した状態か ら、本発明のセロオリゴ糖含有組成物を摂取することで、血中及び内臓脂質を低減し 、上述の生活習慣病を改善することをいう。本発明のセロオリゴ糖含有組成物を有効 成分とする生活習慣病予防 Z改善剤を経口摂取すると、上述の予防と改善の効果 が得られる。

[0054] 本発明の生活習慣病予防 Z改善剤としてのセロオリゴ糖含有組成物は、肝臓内の 中性脂肪濃度及び総コレステロール濃度の低下作用を有するものである力 経口摂 取により、血中脂質、肝臓以外の内臓脂質についても低下効果を有するものである。

[0055] 本発明における血中脂質とは、血中の中性脂肪、 HDL、 LDL—コレステロール、リ ン脂質のことであり、血清又は血漿を用い公知の測定方法で求められるものである。 血中脂質の低下とは、上記の血中脂質の濃度を測定し、セロオリゴ糖含有組成物の 投与前の値、又はセロオリゴ糖含有組成物非投与状態力 低下して 、ることを 、う。

[0056] また、本発明における内臓脂質とは、上述の肝臓内の中性脂肪、総コレステロール 濃度に加え、肝臓内の HDL、 LDL—コレステロール、リン脂質濃度、精巣上体の副 睾丸脂質、腎臓周囲の腹腔内に存在する上述の脂質のことをいう。これらについても 、血中脂質と同様に脂質濃度、又は質量で表され、内臓脂質濃度の低下とは、セロ オリゴ糖の投与前、又はセロオリゴ糖非投与状態から脂質濃度、又は質量が低下し ていることを意味する。

[0057] 次に本発明における腸内細菌賦活剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物について 説明する。

本発明の腸内細菌叢賦活剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は、腸内のビフィ ズス菌、乳酸菌等の有用細菌を選択的に賦活し、有害細菌であるパクテロイデス フ ラジリス（Bacteroides Fragilis)、ユーバタテリゥム ァエロファシエンス（Eubacteri urn Aerofaciens)の増加を抑制する腸内細菌賦活剤の効果も有する。それを達成 するため、セロオリゴ糖中のセロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペン タオース、及びセ口へキサオースの糸且成、並びにグルコース含量を以下に記す特定 範囲に制御されることが好ましい。

[0058] 本発明における腸内細菌叢賦活剤として用いるセロオリゴ糖組成物は、セロビオー スを 70質量⁰ /₀以上含むことが好ましい。セロビオースは、ビフィズス菌、乳酸菌に分 類される有用細菌を増カロさせる効果があり、クロストリジゥム属、ェシエリキア属、パク テロイデス属、ユーパクテリゥム属に属する有害細菌を増カロさせない。ここでいう、ビ フィス、ス菌とは、ビフイドバタテリゥム属に属する有用細菌のことであり、例えば、ビフィ ドバクテリゥム ァドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis)、ビフイドバクテ リウム ブレーべ（Bifidobacterium breve)である。乳酸菌とは、ラクトバチルス属 に属する有用細菌のことであり、例えば、ラクトバチルス ァシドフィルス（Lactobacill us acidophilus)、ラクトノくチノレス カゼィ (Lactobacillus casei)、ラクトノくチノレス ガセリ (Lactobacillus gasseri)である。

[0059] また、ここでいうクロストリジゥムとは、クロストリジゥム属に属する有害細菌のことであ り、例えば、クロストリジゥム パーフリンジエンス（Clostoridium perfringens、別名 ウエルシュ菌、以下 C. perfringens)である。ェシエリキアとは、ェシエリキア属に属す る有害細菌のことであり、例えば、ェシエリキア コライ（Escherichia Coli、別名大 腸菌、以下 E. coli)である。ノ クテロイデスとは、ノ クテロイデス属に属する有害細菌 のことであり、例えば、バタテロイデス フラジリス（Bacteroides fragilis、以下 B. fr agilis)である。ユーバタテリゥムとは、ユーバタテリゥム属に属する有害細菌のことで あり、例えば、ユーバタテリゥム ァエロファシエンス（Eubacterium aerofances、 S —12株、 E. aerofances)である。

[0060] セロビオースは、特に、これらのうち B. fragilisに資化されないという特徴がある。セ ロビオース含量が高いほど、 C. perfringens, E. coli及び B. fragilisの増加を抑制 しつつ、ビフィズス菌、乳酸菌を賦活できるため好ましい。セロビオース含量のより好 ましい範囲としては 80質量％以上であり、 95質量％以上が特に好ましい。セロピオ ース含量が高いほど、上述の効果が大きくなる為、その上限は特に設定されないが、 簡便な操作で得られる範囲としては、 99. 9質量％以下である。

[0061] 本発明の腸内細菌叢賦活剤として用いるセロオリゴ糖は、セロトリオース、セロテトラ オース、セロペンタオース、及びセ口へキサオースからなる群から選ばれる 1種以上を 0〜30質量％含む必要がある。これらのセロオリゴ糖類は、ビフィズス菌、乳酸菌等 の有用細菌を賦活する点で、セロビオースと同等の効果を有する。但し、有害細菌の 資化性については、セロビオースと異なり、特に、 E. aerofaciensに資化されにくい という特徴がある。セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ口へキ サオースからなる群から選ばれる 1種以上の含量が高いほど、 E. aerofaciensの増 加を抑制し、且つ、ビフィズス菌、乳酸菌を賦活できるため好ましい。但し、この含量 が高いと、 B. fragilisの増加抑制の効果が小さくなる。従って、ビフィズス菌、乳酸菌 を選択的に賦活し、ウエルシュ菌、大腸菌に加え、ノ クテロイデス、ユーバタテリゥム 等、いずれの有害細菌の増加も抑制するには、上述の含量範囲を満たす必要があ る。好ましい範囲としては、 0. 1〜20質量であり、 0. 1〜10質量％がより好ましぐ 0 . 1〜5質量％がさらに好ましぐ特に好ましい範囲としては、 0. 1〜3質量％である。

[0062] 本発明における腸内細菌叢賦活剤として用いるセロオリゴ糖組成物は、グルコース 含量が 9質量％以下であることが好ましぐ 3. 8質量％以下であることがより好ましぐ 2質量⁰ /₀以下であることが特に好ましい。グルコースは、 C. perfringens、 E. coli、 B . fragilis, E. aerofaciensを増加させるため、有用細菌のみ選択賦活するには、グ ルコース含量は上述の範囲を満たす必要がある。グルコース含量は、小さいほど選 択賦活の効果が促進され、さらにより好ましい範囲としては 1. 5質量％以下であり、 特に好ましい範囲としては 1質量％以下である。下限は特に設定されないが、簡便な 操作で得られる範囲としては、 0. 1質量％以上である。本発明の腸内細菌賦活剤に おけるセロオリゴ糖、グルコース含量の分析法は上述の通りである。

[0063] 本発明のセロオリゴ糖含有組成物の腸内細菌叢改善効果は、以下の方法で確認 できる。

[0064] まず、 Peptone— Yeast— Fildes solution (PYF 日本製薬製）培地に、本発明 のセロオリゴ糖含有組成物を 0. 5質量％添加した滅菌培地 (pH7. 2) 1. 5mLを作 成し、予め、 Fildes solution添カ卩 GAMブイヨン培地（日本製薬製 製品名 GAM ブイヨン〖こ Fildes solutionO. 4体積⁰ /₀を添加）に、ビフィズス菌、乳酸菌、 C. perfri ngens、 E. coli、 B. fragilis, E. aerofaciensを別々に前培養しておいた供試菌液 0. 03mLを接種し、 37°Cで 96時間嫌気培養した後、 pHを測定し資化性を判断する

。該 pHが、 5. 5未満に下がっている状態で、該菌株がセロオリゴ糖を資化したと判断 できる。なお、 pHは低いほど、該菌株の増殖が進むことを意味する。

次に本発明におけるピロリ菌の抑制剤又は静菌剤として用いるセロオリゴ糖含有組 成物について説明する。

本発明のピロリ菌の抑制剤又は静菌剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は、セ 口ビオースを 70質量⁰ /₀以上含むことが好ましい。セロビオースは、水性媒体中で、ピ 口リ菌の増殖を抑制する効果がある。従って、セロビオース含量が高いほど、ピロリ菌 の増殖が抑制されるため好ましい。好ましい含有量としては、 90質量％以上であり、 95質量％以上がより好ま U、。

本発明のピロリ菌の抑制剤又は静菌剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は、セ 口トリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ口へキサオースから選ばれ る 1種以上を 0〜30質量％含むことが好ましい。これらの糖類も、セロビオースと同様 に、ピロリ菌の増殖抑制効果がある。し力しながら、グルコース残基が増えるとともに、 水性媒体への溶解度が低くなるため、セロオリゴ糖として、本発明の効果を得るには 、これらの含量は上述の範囲を満たす必要がある。好ましい含量範囲としては 0〜10 質量％であり、より好ましくは 0〜5質量％であり、特に好ましくは、 0. 5〜5質量％で ある。

本発明のピロリ菌の抑制剤又は静菌剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は、グ ルコース含量が 30質量％以下であることが好ましい。グルコースは、ピロリ菌を増加 させるため、多量に含有すると、セロオリゴ糖のピロリ菌の抑制効果小さくなる。従って 、グルコース含量は上述の範囲を満たす必要がある。グルコース含量は、小さいほど ピロリ菌の抑制効果が促進され、好ましい範囲としては 20質量％以下であり、より好 ましい範囲としては 10質量％以下であり、特に好ましくは、 5質量％以下である。下 限は特に設定されないが、簡便な操作で得られる範囲としては、 0. 1質量％以上で ある。

本発明のピロリ菌の抑制剤又は静菌剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物により 増殖抑制されるピロリ菌とは、へリコパクター 'ピロリとして分類されるものが該当し、例 えば、 Helicobacter ' Pylori ATCC 43504株、 43526株等の保存菌株、及び臨 床分離株が含まれる。本発明のセロオリゴ糖含むピロリ菌の抑制又は静菌剤のへリコ バクタ一'ピロリ（Helicobacter ' Pylori)の増加抑制率は 1%以上であることが好まし い。ここでいう増加抑制率とは、ピロリ菌を、セロオリゴ糖を添加した状態で培養した 際の生菌数 (生菌数 1)の、セロオリゴ糖無添加の状態で培養した際の生菌数 (生菌 数 2)に対する百分率であり、以下の式で表されるものである。

増加抑制率 (％) = (生菌数 2—生菌数 1)Z生菌数 2 X 100

この増加抑制率が、高いほど、ピロリ菌の抑制又は静菌効果が大きくなるため、好ま しい範囲としては 10%以上であり、 40%以上がより好ましぐ 50%以上が特に好まし い。

本発明でいうへリコパクタ^ ~·ピロリ（Helicobacter ' Pylori)の生菌数は、以下の方 法で測定できる。試験菌株（Helicobacter ' Pylori ATCC 43504)を羊血液寒天 培地 K (BBL)を用いて、 35°C、 3日間微好気培養後、滅菌生理食塩液で McFarla nd No. 2 (約 10⁷〜： L0⁸CFU/mL)となるよう調製する。これを滅菌生理食塩液で 100倍希釈し、添加用菌液とする。水で 1Z10に希釈したブルセラブロス (栄研ィ匕学 )に 5%のゥマ血清を加えたものをセロオリゴ糖無添加の被験液とし、これに所定濃度 のセロオリゴ糖を添加したものをセロオリゴ糖添加被験液とする。各被験液 9mLに添 加用菌液を lmL加え、 35°C、微好気条件下で振盪培養し、これを検液とする。培養 48時間後に各検液を採取し、滅菌生理食塩液で 10倍希釈系列液を作製する。原 液及び各希釈系列液を 50 Lずつ羊血液寒天培地 Kにコンラージ塗抹し、微好気 条件下で 35°C、 4〜5日間培養する。なお、 0時間後は被験液のみ定量を実施する。 培養後発育した菌数を計測し、 lmL当たりの生菌数を求める。

以下に、骨中カルシウム濃度増強剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物について 説明する。

本発明の骨中カルシウム濃度増強剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物は、カル シゥムと経口摂取した後の大腿骨中のカルシウム濃度の増加率が 5%以上であること が好ましい。この大腿骨中のカルシウム濃度の増加率が高いほど、骨粗鬆症等の予 防又は改善の効果が得られるため好ましぐより好ましくは 10%以上であり、特に好ま しくは 15%以上である。

ここでいう、大腿骨中のカルシウム濃度増加率は、大腿骨中の単位量当たりに存在 する総カルシウム量 (mgZg—乾燥大腿骨）のことである。その増加率とは、セロオリ ゴ糖の摂取と非摂取の大腿骨中の総カルシウム濃度から、以下の式で求められる。 増加率 (％) = ( (セ口オリゴ糖含有組成物摂取時の濃度）―（セロオリゴ糖含有組成 物非摂取時の濃度) ) / (セロオリゴ糖含有組成物非摂取時の濃度） (%)

次に本発明における皮膚バリヤ機能改善剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物 について説明する。

[0066] 本発明の皮膚バリヤ機能改善剤としてのセロオリゴ糖含有組成物は、セロビオース 含量が 70質量⁰ /₀以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ 口へキサオース力 なる群力 選ばれる 1種以上を 0〜30質量⁰ /₀含み、グルコース含 量が 3. 5質量％以下であるセロオリゴ糖組成物を含有することが好ましい。上述のセ 口オリゴ糖組成物を含有することで、ダメージ肌の経皮水分蒸散量の回復率が高めら れ、グルコースを併用せずとも、「ベたつき」がなぐ「滑り（なめらか)」感を有し、使用 感が良好なバリヤ機能改善剤が得られる。

[0067] 本発明におけるセロオリゴ糖のセロビオース含量は 70質量⁰ /₀以上であることが好ま しい。このセロビオース含量が高いほど、経皮水分蒸散量の回復促進率が向上する 。従って、該セロビオース含有量は、 80質量％以上がより好ましぐ 90質量％以上が さらに好ましぐ 95質量％以上が特に好ましい。セロビオース含量が高いほど、上述 の効果が大きくなるため、その上限は特に設定されないが、簡便な操作で得られる範 囲としては、 99. 9質量％以下である。

[0068] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物は、セロトリオース、セロテトラオース、セロペン タオース、及びセ口へキサオース力 なる群力 選ばれる 1種以上を 0〜30質量％含 むことが好ましい。セロオリゴ糖組成物が、上述の範囲のセロトリオース、セロテトラオ ース、セロペンタオース、及びセ口へキサオース力 なる群から選ばれる 1種以上を含 有することで、経皮水分蒸散量の回復に優れ、かつ、「滑り（なめら力さ）」に優れ、「 ベたつき」が少なくなる。但し、これらの成分の含有率が高すぎると、バリヤ機能改善 剤の「滑り（なめらか)」感が低減するため、その含有率は 0. 1— 10質量％がより好ま しく、 0. 1— 5質量％以下がさらに好ましぐ 0. 1— 3質量％以下が特に好ましい。

[0069] 本発明のノリャ機能改善剤としてのセロオリゴ糖含有組成物におけるグルコース含 量は 3. 5質量％以下であることが好ましい。グルコースは、アミノ酸、蛋白質糖のアミ ノ基を揺する構成成分と反応し、皮膚バリヤ機能改善剤の褐変、及び有効成分の失 活の原因となる。従って、このグルコース含量は、低い程、上述の褐変及び有効成分 の失活を抑制できるため好ましい。グルコース含量は、 3. 0質量％以下がより好まし ぐ 2質量％以下が特に好ましい。下限は特に設定されないが、簡便な操作で得られ る範囲としては、 0. 1質量⁰ /₀以上である。本発明のノリャ機能改善剤におけるセロォ リゴ糖、グルコース含量の分析法は上述の通りである。

[0070] 次に、本発明におけるバリヤ機能は、経皮水分蒸散量の回復促進率で表され、本 発明のバリヤ機能改善剤における経皮水分蒸散量の回復促進率は 10%以上である ことが好ましい。ここでいう回復促進率とは、荒れ肌にセロオリゴ糖水溶液を塗布した 2時間後の相対経皮水分蒸散量と、精製水により得られた相対経皮水分蒸散量を用 V、、精製水の相対経皮水分蒸散量に対するセロオリゴ糖含有組成物の相対経皮水 分蒸散量の低下率で表される。この値は以下の式で求められるものである。

回復促進率 (％) = [ (水の相対経皮水分蒸散量） - (セロオリゴ糖含有組成物の相 対経皮水分蒸散量) ] Z (水の相対経皮水分蒸散量） X 100

[0071] この回復促進率は高いほど、上述のバリヤ機能改善への効果が高ぐ 20%以上が 好ましぐ 25%以上がより好ましい。

[0072] また、上記の経皮水分蒸散量の相対値 (相対経皮水分蒸散量）は、荒れ肌におけ る経皮水分蒸散量 (TEWL)により測定できる。測定方法は、まず、ヒトの前腕内側（ 被検部位)を 70%エタノールでふき取った後、恒温恒湿室（室温 22°C、湿度 45%) で 15分間馴化し、被検部位を 2チャンネル水分蒸散モニター (アサヒバイオメッド社 製 TW— AS型）で測定し、初期 TEWL値 (TEWLO)を求める。初期 TEWLの測定 後、被検部位を水洗し、フィンチャンバ一 (Epitest社製)を用いて、 2質量％のドデシ ル硫酸ナトリウム (SDS)を被検部位に閉塞貼付塗布し、水洗後、上述と同様に TE WLを測定 (TEWL荒れ肌)する。次に、同部位に、精製水又は本発明のセロオリゴ 糖水溶液を塗布し、塗布の²時間後に、同部位を上述の方法で TEWL測定 (TEWL 2)を行う。荒れ肌を 100とした TEWL相対値は、以下の式で求められる。 相対経皮水分蒸散量（％) = (TEWL2— TEWLO)Z(TEWL荒れ肌 TEWLO) X 100

[0073] 次に本発明における皮膚常在菌叢改善剤として用いるセロオリゴ糖含有組成物に ついて説明する。

[0074] 乾 、た時の髪感触としてさつぱり感や滑り感を付与するためには、セロビオース含 有量が 70質量⁰ /₀以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ 口へキサオース力もなる群力 選ばれる 1種以上が 0〜30質量％であるセロオリゴ糖 であることが好ましい。さらには、セロビオース含有量が 95質量⁰ /₀以上で 99. 5質量 %未満、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ口へキサオース 力 なる群力も選ばれる 1種以上が 0. 1〜5質量％であるセロオリゴ糖を含有すること 力 り好ましい。セロビオースの含有量力 70質量％に達しないと、乾いた時の髪感 触としてさっぱり感ゃ滑り感を付与できない。また、セロビオースを、単糖であるダルコ ースにまで分解してしまうと、遊離したグルコースは、有害菌に容易に資化されてしま うし、乾いた時の髪感触としてさっぱり感ゃ滑り感が減じてしまう。よって、遊離したグ ルコース含有量は、セロオリゴ糖に対し、 0. 1質量％から 5質量％以下であることが 好ましい。より好ましくは 4質量％以下、さらに好ましくは 3. 5質量％以下、特に好まし くは 2質量⁰ /₀以下である。本発明のノリャ機能改善剤におけるセロオリゴ糖、ダルコ ース含量の分析法は上述の通りである。

[0075] 本発明の皮膚常在菌叢改善剤としてのセロオリゴ糖含有組成物は、本発明におけ るセロオリゴ糖組成物を含有することで、皮膚外用剤や毛髪用剤として使用すると、 皮膚有益菌である表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis：スタフイロコッ カス'ェピデミデス菌）に対しては静菌作用を示さないで、有害菌である黄色ブドウ球 菌（Staphylococcus aureus：スタフイロコッカス ·ァゥレウス菌）及び有害菌である 緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモナス ·ァエルギノーザ菌）に対して は静菌作用又は増殖抑制作用を示し、さらに乾いた時の髪感触としてさっぱり感ゃ 滑り感を付与することができる。

[0076] 本発明でいう表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis：スタフイロコッカス · ェピデミデス菌）や黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus：スタフイロコッカス' ァゥレウス菌）及び有害菌である緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモナ ス.ァエルギノーザ菌）は、下記の方法で、その数を測定することができる。まず、表 皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis :スタフイロコッカス'ェピデミデス菌） や黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus :スタフイロコッカス'ァウレウス菌）及 び有害菌である緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモナス ·ァエノレギノ 一ザ菌）をそれぞれ、普通ブイヨン培地で 35°C、 24時間培養し、滅菌蒸留水で 10⁷ ZmL程度になるように希釈し、添加用菌液とする。糖類等の供試物質を、所定濃度 になるように滅菌蒸留水で希釈して、それぞれの希釈液 9mLに、添加用菌液を lmL をカロえて攪拌する。この検液を卵黄加マンニット食塩寒天培地に滴下し、 35°Cで 48 時間培養後、菌数を測定する (初期値)。また、検液を 35°Cに保持し、作成から 1日 後及び 2日後に同様の操作を行って、菌数測定に供した。ブランクとして、滅菌蒸留 水を用いて上記と同じ操作を行う。

[0077] ブランクとしての菌数測定値と、糖類等の供試物質を含有した検液の菌数測定値 を比較して、糖類の表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis：スタフイロコッ カス ·ェピデミデス菌）や黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus：スタノイロコッ カス ·ァゥレウス菌）及び有害菌である緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユー ドモナス ·ァエルギノーザ菌）に及ぼす静菌効果ゃ菌増殖効果を評価することができ る。

[0078] 本発明のセロオリゴ糖の澱粉老化防止性は、澱粉の老化率で 20%以下が好ましい 。ここでいう澱粉の老化率とは、本発明のセロオリゴ糖が、澱粉との共存下で、その老 化を抑制した程度を示す指標であり、この老化率が低いほど澱粉の老化防止効果が 大きい。この老化率は、以下の方法で測定される。まず、馬鈴薯澱粉 (三和澱粉製） を 1質量％濃度の水分散液として、 100°Cで 1時間加熱して、澱粉水溶液とする。こ の澱粉水溶液に、本発明のセロオリゴ糖組成物を 6質量％となるように、常温で溶解 し、密栓で、 4°Cにて 12時間保存する。次に、保存後の水溶液を、常温で、波長 660 nmにお ヽて濁度 (透過率)を測定し、冷蔵保存前の水溶液の濁度からの増加率（ ( 保存後の濁度 保存前の濁度) Z保存前の濁度 X 100%)を求める。この老化率は 低いほど澱粉の老化防止効果が大きぐ 15%以下がより好ましぐ 10%以下が特に 好ましい。

[0079] 本発明のセロオリゴ糖の蛋白変性防止性は、蛋白質の変性率で 10%以下が好ま しい。ここでいう蛋白の変性率とは、本発明におけるセロオリゴ糖組成物が、蛋白質と の共存下で、その変性を抑制した程度を示す指標であり、この変性率が低いほど蛋 白質の変性抑制効果が大きい。この変性率は、以下の方法で測定される。まず、卵 白に、本発明のセロオリゴ糖の 10質量％水溶液を等量常温で混合し、密栓で、—2 0°Cにて 5日間保存する。次に、保存後の水溶液を、常温で、波長 660nmにおいて 濁度 (透過率)を測定し、冷蔵保存前の水溶液の濁度からの増加率（ (保存後の濁度 保存前の濁度) Z保存前の濁度 X 100%)を求める。この変性率は低いほど効果 が大きぐ 7. 5%以下がより好ましぐ 5%以下が特に好ましい。

[0080] 次に、本発明におけるセロオリゴ糖の製造方法について説明する。

[0081] 本発明のセロオリゴ糖の起源には、特に制限はなぐセルロース系物質の加水分解 で製造されたもの、グルコース等の単糖類又はその誘導体を縮合又は糖転移させて 製造されたものでもよいが、酵素分解法で得られたものが、安全性の点で好ましい。

[0082] 酵素分解に使用するセルロース系物質としては、植物性でも、動物性でもよぐ例 えば、木材、竹、コットン、ラミー、ホヤ、バガス、ケナフ、麦、稲、ノ クテリアセルロース 等の含有する天然物由来の繊維質物質、またそれらを一旦溶剤に溶解させ再生さ せた再生セルロースでも、それらに化学処理を施しセルロース誘導体としたものでも よぐ上記のうち、 1種又は 2種以上を併用してもよい。これらの中でも、溶解又は化学 処理を経ない、天然セルロース系物質を用いると、得られたセロオリゴ糖に人体に有 害な溶剤又は化学物質が含まれないため好ましい。また、セルロース系物質は精製 パルプの状態で使用することが好ましぐノ レブの精製方法には特に制限はなぐサ ルファイトパルプ、クラフトパルプ、 NBKPパルプ等のいずれのパルプを使用してもよ い。

[0083] また、セルロース系物質を酵素分解する場合には、使用するセルロース系物質とし ては、ー且加水分解し、平均重合度を 700以下に部分加水分解したセルロース系物 質を用いると、セロオリゴ糖の収率を向上させる上で好ましい。さらに、該特定の重合 度を有するセルロース系物質は、平均粒子径を 100 m以下、コロイド状セルロース 成分含有量を 10質量％以上に制御したものを用いることが、酵素分解速度の向上、 セロオリゴ糖選択率が向上するため好ましい。

[0084] 本発明では、セルロース系物質の加水分解に用いる酵素をセルラーゼと 、、本 発明で使用するセルラーゼとは、セルロースを分解する酵素の総称であり、セルロー スへの分解活性を有していれば、本発明でいうセルラーゼに含まれる。セルラーゼ酵 素源としては、例えば、セルラーゼ産生生菌体そのもの、セルラーゼ産生菌が分泌 する酵素を精製したもの、精製酵素を賦形剤、安定化剤等の添加剤ともに製剤化し たもの等が挙げられる。セルラーゼ製剤品の場合、それに添加される添加剤にも特 に制限はなぐその剤形は、粉末、顆粒、液体等いずれでもよい。

[0085] セルラーゼの起源についても、特に制限はないが、例えば、公知のセルラーゼを生 産する微生物としては、トリコデルマ（Tricoderma)属、アクレモ -ゥム（Acremoniu m)属、ァスペルギルス（Aspergillus)属、バチルス（Bacillus)属、シユードモナス（P seudomonas)腐、へニシリウム (Penicillium)属、ァエロモナス (Aeromonus)属、 ィノレペックス (Irpex)属、スポロトリクム (Sporotrichum)属、フミコーラ (Humicola) 属、セロビブリオ (Cellovibrio)属等の「セルラーゼ」（講談社サイエンティフィック発 行（1987) )、 「セルロースの事典」（朝倉書店発行 (2000) )に記載される菌が生産 するセルラーゼを挙げることができる力 セルロースを分解する酵素であれば、上記 公知の菌由来の酵素に限らず、新規の菌由来の酵素も、本発明のセルラーゼに含ま れる。

[0086] 酵素によるセルロース系物質の分解方法は、公知の方法を使用すればよぐ特に 制限されるものではないが、一例としては、セルロース系物質を水性媒体中に懸濁さ せ、セルラーゼを添加し、攪拌又は振とうしながら、加温して糖化反応を行う方法が 挙げられる。

[0087] 上記方法において、懸濁方法、攪拌方法、セルラーゼ'基質の添加方法'添加順 序、それらの濃度等の反応条件は、セロオリゴ糖がより高収率で得られるよう適宜調 整されるものである。その際の反応液の pH及び温度は、酵素が失活しない範囲内で あればよぐ一般的には、常圧で反応を行う場合、温度は 5〜95°C、 pHは 1〜： L 1の 範囲であればよい。また、この圧力、温度、 pHについても、上記同様、セロオリゴ糖 がより高収率で得られるよう適宜調整されるものである。

[0088] 上述の酵素分解により得られたセロオリゴ糖水溶液は、必要に応じて、脱色、脱塩

、酵素除去等の精製処理を施すことができる。精製方法は、公知の方法であれば特 に制限されないが、例えば、活性炭処理、イオン交換榭脂処理、クロマトグラフィー処 理、精密ろ過、限外ろ過、逆浸透ろ過等の濾過処理、晶析処理等を使用してもよぐ これらを単独で使用しても、 2種以上を組み合わせてもよ 、。

[0089] セロオリゴ糖の精製方法の中でも、晶析処理は、セロオリゴ糖の組成を制御しやす いため好ましい。

[0090] 酵素分解法の一例としては、例えば、 WO2006/011479A1公報に開示される方 法で製造されたセロオリゴ糖を使用することが好まし 、。

[0091] セロオリゴ糖の精製方法の中でも、晶析処理は、セロオリゴ糖結晶の平均 LZDと純 度を同時に制御できるため好ましい。

[0092] 本発明の晶析においては、セロオリゴ糖水溶液に、 1種又は 2種以上の溶剤を混合 し、 Hildebrandの溶解度パラメータ δが 8. 0-22. 2の状態から、セロオリゴ糖を晶 祈させる。この溶解度パラメータ δ 1S 本発明の範囲を満たすことで、得られるセロォ リゴ糖結晶又は結晶凝集体の平均 LZDを制御でき、セロオリゴ糖組成物の流動性 が向上する。この溶解度パラメータは、 10〜20が好ましぐ 12〜18がより好ましい。

[0093] 本発明で!/、う溶解度パラメータは、 Hildebrandの溶解度パラメータ δであり、下記 の式（1)で表される。

δ = ( Δ Ε^ν/ν) ^1/2 (1)

ここで、 Δ Ε^νは、 25°Cにおける溶媒の蒸発熱 (calZmol)、 Vは溶剤のモル容積 (c m³Zmol)である。 Δ Ε^νは、下記の式（2)で計算される。

A E^v(cal/mol) = - 3. 542 + 23. 7T +0. 020T (2)

b b

ここで、 Tは絶対温度で表した溶媒の沸点である。

b

[0094] また、混合溶媒の溶解度パラメータ δ は、各溶媒の溶解度パラメータより下記の

mix

式 (3)で計算される。

δ = (X V δ +X V δ +X V δ Η hX V δ ) (3) ここで Xは各溶媒のモル分率 (mol%)であり、 V(cmVmol)は各溶媒のモル容積を 表す。

[0095] 本発明の晶析で用いる溶媒は、溶解度パラメータが 8. 0-22. 2のものであればそ の種類には特に制限はない。ここで用いる溶媒としては、例えば、水、メタノール、ェ タノ一ノレ、 n—プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、 2- メチルブチルアルコール、ベンジルアルコールなどのアルコール類、アセトン、メチル ェチルケトン、ジェチルケトン、メチルプロピルケトン等のケトン類、ァセトニトリルの- トリル類等が挙げられる。特に、有機溶剤は、医薬品、食品及びそれらの添加剤を製 造する工程で使用されるものが好ましぐ「医薬品添加物事典」（薬事日報社 (株)発 行)、「日本薬局方」、「食品添加物公定書」（いずれも廣川書店発行)に溶剤として分 類されるものが挙げられる。水、有機溶剤は、それらを単独で使用しても、 2種以上を 併用することも自由であり、 1種の媒体で一旦分散させた後、その媒体を除去し、異 なる媒体に分散させてもょ ヽ。

[0096] ここで用いる晶析法には、特に制限はないが、好ましい方法としては、溶媒蒸発濃 縮晶析法 (濃縮晶析法)、冷却晶析法、貧溶媒添加晶析法 (抽出晶析法)、加圧晶 析法、反応晶析法が挙げられ、これらのうち 1種又は 2種以上を組み合わせたもので もよぐ母液として使用する溶媒、晶析装置、晶析条件は、セロオリゴ糖結晶が本発 明の平均 LZDの範囲を満たすよう適宜調整されるものである。特に、水系での濃縮 晶析法、冷却晶析法、又はそれらを組み合わせた方法は、セロオリゴ糖の結晶化速 度、平均 LZDを制御しやすいため好ましい。

[0097] ここで用いる晶析装置にも、特に制限はないが、静置式晶析装置、通常攪拌型晶 析装置、ドラフトチューブ攪拌型晶析装置、オスロ型晶析装置、間接冷却式晶析装 置、搔取式晶析装置、カランドリア型晶析装置、ブローディー型晶析装置、連続溶融 精製式晶析装置等のいずれの装置も使用でき、これらは単独又は 2種以上を組み合 わせたものを使用してもよい。特に水系で濃縮、冷却晶析を行い、結晶径を大きぐ 平均 LZDを小さく制御する場合は、静置式が好ましぐ攪拌式を使用する場合は、 攪拌速度は極力小さい方ことが好ましい。また、冷却晶析で上記を制御する場合は、 冷却速度を小さくすることが好ましい。抽出晶析を行う場合は、貧溶媒の添加速度を 小さくすることが好ましい。

[0098] 次に本発明のセロオリゴ糖組成物を有効成分とするセロオリゴ糖含有組成物につ いて説明する。

[0099] 本発明のセロオリゴ糖組成物を有効成分とするセロオリゴ糖含有組成物は、本発明 におけるセロオリゴ糖組成物を粉末状で、単独で使用しても、水溶液又は分散液とし て使用しても、本発明におけるセロオリゴ糖組成物に加え、食品素材、化粧品素材、 医薬品薬効成分、又はそれらで使用される添加物の中から選択される 1種以上の構 成成分と共に、顆粒、成型体、水溶液、水分散体、ペースト、ゲル状の食品 Z医薬品 として使用してもよい。

[0100] 本発明におけるセロオリゴ糖組成物におけるセロオリゴ糖の配合量は、 0. 01〜10 0質量％が好ましい。ここでいぅセロオリゴ糖の配合量とは、本発明の生活習慣病予 防/改善剤に含有されるセロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタ オース、及びセ口へキサオースの総量であり、このセロオリゴ糖の配合量力 0. 01質 量％未満では、生活習慣病の予防又は改善、腸内細菌叢の賦活、皮膚バリヤ機能 の改善、皮膚常在菌叢の改善にぉ 、て充分な効果が得られな 、ため好ましくな 、。 セロオリゴ糖配合量は高いほど、上述の効果が促進されるため好ましぐより好ましい 範囲としては 0. 6質量％以上であり、特に好ましくは、 0. 75質量％以上である。

[0101] 本発明のセロオリゴ糖含有組成物は、本発明におけるセロオリゴ糖組成物に加え、 少糖類又は高甘味度甘味料を含んでもよい。セロオリゴ糖と少糖類、又は高甘味度 甘味料の配合比は、本発明の効果が得られる範囲であれば、特に制限されるもので はないが、例えばセロオリゴ糖又は少糖類の質量比で、 0. 1/99. 9〜99. 9/0. 1 である。

[0102] 特に、難消化性の少糖類を添加することで、セロオリゴ糖の脂質代謝に加え、腸内 有用細菌の賦活又は整腸作用も得られるため好ましい。さらに、本発明のセロオリゴ 糖に、高甘味度甘味料を添加すると、セロオリゴ糖のカロリーを増加させずに、味質 を調整できるため好まし 、。

[0103] この少糖類としては、例えば、ガラクトース、フラクトース、マンノース、ァラビノース、 ラムノース、リボース、キシロース、ソルボース等の単糖類及びそれらの還元物、スクロ ース、メリビオース、トレノヽロース、ラタトース、マルトース、ゲンチオビオース、ラミナリ ビオース、ラクチュロース、キシロビオース等の二糖類及びそれらの還元物、ラタトスク ロース、ラフイノース、マノレトトトリオース、イソマノレトース、パラチノース、ケストース、ゲ ンチオシルセロビオース等の三糖類及びそれらの還元物、マルトテトラオース、ゲン チオシルセ口トリオース、ニストース等の四糖類及びそれらの還元物、マルトペンタォ ース、マルトへキサオース等の五又は六糖類及びそれらの還元物、 βーシクロデキス トリン、 7—シクロデキストリン、デキストラン等の環状少糖類、難消化性デキストリン、 ポリデキストロース、アラビアガム、カルボキシメチルセルロース、グァーガム、カードラ ン等の水溶性多糖類及びそれらの還元物、ソルビトール、キシリトール、マルチロー ル、マン-トール、ラタチトール等の糖アルコール等の「食品添加物公定書」（廣川書 店発行）に甘味料として分類されるものが含まれる。これらの少糖類は、少糖類その ままであっても、溶解性等を改善する目的で、その化学構造の一部を、カルボキシル ィ匕、ェチル化、メチル化、硫酸エステル化等の化学処理を施し、誘導体としたものを 使用してちょい。

[0104] 高甘味度甘味料としては、サッカリン、甘草 (ダリチルリチン）、ステビア、ァスバルテ ーム、スクラロース、アセスルファムカリウム等の「食品添加物公定書」（廣川書店発行 )に高甘味度甘味料として分類されるものが含まれる。これらの高甘味度甘味料も、 甘味料そのままであっても、その化学構造の一部を他の置換機に置き換え、誘導体 としたものを使用してもよい。

[0105] 本発明でいう構成成分とは、セロオリゴ糖以外の少糖類、高甘味度甘味料、食品素 材、化粧品素材、医薬品薬効成分、色素、香料、金属、セラミックス又は賦形剤、崩 壊剤、結合剤、流動化剤、滑沢剤、矯味剤、着色剤、甘味剤、溶剤、油脂、界面活 性剤、増粘剤、ゲル化剤等の添加剤のことであり、粉体状、結晶状、油状、液状、半 固形状などいずれの形態でもよぐ例えば「食品添加物公定書」（廣川書店発行)、「 化粧品原料基準」、「化粧品種別配合成分規格」（いずれも薬事日報社発行)、「日 本薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添加剤事典」（薬事日報社発行)に記載のもの を用いることが可能である。

[0106] また、それらは種々の目的でコーティング、リボソーム化等の加工を施したものであ つてもよい。これらの構成成分は単独で使用しても、複数を併用してもよい。本発明 の生活習慣病予防又は改善剤は、溶解、混合、分散、造粒、溶融 ·固化、圧縮、乾 燥等の公知の方法でカ卩ェできる。

[0107] 以下に、本発明のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有する組成物（セロオリ ゴ糖含有組成物)と、食品素材、化粧品素材、医薬品薬効成分、又はそれらで使用 される添加物の中から選択される 1種以上の構成成分を含む食品、化粧品、医薬品 、医薬部外品の製造方法について記述する。

[0108] 各成分の添加方法は、通常行われている方法であれば特に制限はないが、 1)セロ オリゴ糖と構成成分を同時に添加し、混合又は分散しても、 2)セロオリゴ糖と特定の 構成成分を予め混合又は分散した後に、別の構成成分を添加し、混合又は分散し ても、 3) 2種以上の構成成分を予め混合又は分散した後、セロオリゴ糖を添加し、混 合又は分散しても、これらの添加方法を組み合わせた方法でもよ 、。

[0109] ここで用いる装置としては、小型吸引輸送装置、空気輸送装置、バケツトコンべャ、 圧送式輸送装置、バキュームコンペャ、振動式定量フィーダ一、スプレー、漏斗等を 用いて連続的に添加しても、一括投入してもよい。また、各成分の混合方法は、通常 行われている方法であれば特に制限はないが、 V型、 W型、ダブルコーン型、コンテ ナタック型混合機などの容器回転式混合機、又は高速撹拌型、万能撹拌型、リボン 型、バグ型、ナウター型混合機などの撹拌式混合機、高速流動式混合機、ドラム式 混合機、流動層式混合機を使用してもよい。またシェーカー等の容器振とう式混合機 を使用することちできる。

[0110] 分散方法としては、通常行われる分散方法であれば特に制限はないが、ポータブ ルミキサー、立体ミキサー、側面ミキサーなどの一方向回転式、多軸回転式、往復反 転式、上下移動式、回転 +上下移動式、管路式等の撹拌翼を使用する撹拌混合方 法、ラインミキサー等の噴流式撹拌混合方法、気体吹き込み式の撹拌混合方法、高 剪断ホモジナイザー、高圧ホモジナイザー、超音波ホモジナイザー等を使用する混 合方法でも、シェーカーを使用する容器振とう式混合方法等を用いてもよぐこれらを 組み合わせた方法でもよ!/、。

[0111] また、上述の混合、分散において、水又は有機溶剤に、必要に応じて界面活性剤 、増粘剤、ゲル化剤を添加した水系媒体を添加する順序には特に制限はないが、 1) セロオリゴ糖に予め水系媒体を添加し、溶解又は分散させた後に、他の構成成分を 添加しても、 2)構成成分に予め水系媒体を添加し、溶解又は分散させた後に、セロ オリゴ糖を添加しても、 3)セロオリゴ糖と構成成分を予め混合又は分散させた後に、 水系媒体を添加してもよぐこれらを組み合わせた方法でもよい。ここで得られた水溶 液、分散体、乳液等の各液状、ペースト、ゲル等の各半固形状の食品又は医薬品は 、必要に応じて乾燥し、造粒、コーティング、成型等の加工を施してもよい。

[0112] 造粒'コーティング方法としては、公知の方法であれば特に制限はないが、攪拌式 又は流動層式のいずれでもよぐそれらを組み合わせた方法でもよい。攪拌式造粒 機としては、例えばポータブルミキサー、立体ミキサー、側面ミキサーなどの一方向回 転式、多軸回転式、往復反転式、上下移動式、回転 +上下移動式の攪拌機、流動 層式としては上部噴霧式、中央噴霧式、下部噴霧式、攪拌併用式、中央缶噴流式、 ワースタ一式等が挙げられる。また、ローラーコンパクタを使用した乾式造粒を施して ちょい。

[0113] コーティングについては、予め造粒物を得、それに公知のコーティングを施してもよ ぐコーティングを施した後、さらに別のコーティングを施し多層状としてもよい。コー ティング剤の噴霧方法としては、圧力ノズル、二流体ノズル、四流体ノズル、回転ディ スク、超音波ノズル等を使用し活性成分溶液又は分散液を噴霧する方法、管状ノズ ルから活性成分溶液又は分散液を滴下する方法の!/、ずれでもよ!ヽ。活性成分溶液 又は分散液を添加する際には、セロオリゴ糖粒子表面に活性成分を積層させるよう なレイヤリング、コーティングを施しても、セロオリゴ糖に担持させてもよぐ構成成分 溶液又は分散液を結合液としてセロオリゴ糖と他の構成成分の混合物をマトリックス 状に造粒させてもよい。レイヤリング、コーティングは湿式であっても、乾式であっても 効果は同様である。

[0114] 成型方法としては、通常行われている方法であれば特に制限はないが、型枠を用 いてもよぐ圧縮、溶融、射出、圧延等の公知の成型方法が適用でき、これらを組み 合わせた方法でもよい。ここで用いられる成型機としては、圧縮成型機、溶融成型機 、射出成型機、圧延成型機等が挙げられ、製菓用又は化粧品又は医薬品用成型機 、米飯成型機、コンプレスド成型機、包あん機、蒲鋅製造装置、餃子，包子成型機、 ファンデーション基材用圧縮成型機等の公知の成型機が使用できる。特に圧縮成型 に関しては、型枠を使用し所望の形状に圧縮成形する方法、予めシート状に圧縮成 形した後所望の形状に割断する方法でもよい。圧縮成形機としては、例えば、静圧 プレス機、ブリケッティングローラー型プレス機、平滑ローラー型プレス機等のローラ 一式プレス機、シングルパンチ打錠機、ロータリー打錠機等の圧縮機を使用できる。

[0115] 次に、上述のセロオリゴ糖組成物において使用される構成成分の一例を記す。

[0116] 例えば、食品素材又はそこで使用される添加剤としては、本発明のセロオリゴ糖に 加え、必要に応じて、保存料，日持向上剤、酸化防止剤、甘味料、着色料、乳化剤、 増粘剤、品質改良剤、調味料、酸味料、強化剤、スパイス，ハーブ、食品香料、酵素 等を添加してもよい。これらの食品素材又は添加剤は、それを単独で使用しても、 2 種以上を併用することも自由である。

[0117] 保存料'日持向上剤としては、例えば、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸、 安息香酸ナトリウム、パラォキシ安息香酸エステル、デヒドロ酢酸ナトリウム、プロピオ ン酸、プロピオン酸塩、酢酸、酢酸ナトリウム、グリシン、エチルアルコール、ポリリジン 、プロタミン、リゾチーム、ぺクチン分解物、ァラニン、チアミンラウリル硫酸塩、ユッカ フォーム抽出物、キトサン、プロピレングリコール等の「食品添加物公定書」（廣川書 店発行)に保存料'日持向上剤として分類されるものが挙げられる。

[0118] 酸化防止剤としては、例えば、ブチルヒドロキシァ-ソール、ブチルヒドロキシトルェ ン、ビタミン C、ァスコルビン酸ナトリウム、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、ビ タミン E等の「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に酸化防止剤として分類されるも のが挙げられる。

[0119] 甘味料としては、例えば、サッカリン、甘草、ステビア、アスパルテーム、スクラロース 、アセスルファムカリウム、果糖、パノース、トレハロース、キシリトール、エリスリトール、 ソルビトール、ラタチトール、マルチトール、還元パラチノース、還元みずあめ、マンニ トール、カップリングシュガー、フラタトオリゴ糖、ガラタトオリゴ糖、乳化オリゴ糖、 -ゲ 口オリゴ糖、キシロオリゴ糖、マルトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、パラ チノース、ノ ラチノースオリゴ糖、ラフイノース等の「食品添加物公定書」（廣川書店発 行）に甘味料として分類されるものが挙げられる。

[0120] 着色料としては、例えば、赤色 2号、赤色 3号、赤色 40号、赤色 102号、赤色 105 号、赤色 106号、黄色 4号、黄色 5号、青色 1号、青色 2号、赤色 3号レーキ、赤色 40 号レーキ、黄色 4号レーキ、黄色 5号レーキ、青色 1号レーキ、青色 2号レーキ等の食 用タール類、カロチン色素、アナトー色素、パプリカ色素、コチニール色素、クチナシ 色素、ベ-バナ色素、ベニコウジ色素、ビートレッド、ァカネ色素、スピルリナ色素、ァ ントシァニン色素、カラメル等の「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に、着色料と して分類されるものが挙げられる。

[0121] 乳化剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビ タン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、サポニン、レシチン等の 「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に乳化剤として分類されるものが挙げられる。

[0122] 増粘剤としては、例えば、グァーガム、ローカストビーンガム、カラギーナン、寒天、 ぺクチン、キサンタンガム、ジエランガム、アラビアガム、ダルコマンナン、アルギン酸、 サイリウムシードガム、ゼラチン、メチルセルロース、カードラン、結晶セルロース、力 ルポキシメチルセルロース、タマリンドガム、難消化性デキストリン等の「食品添加物 公定書」（廣川書店発行)に増粘剤として分類されるものが挙げられる。

[0123] 品質改良剤としては、大豆蛋白質、小麦蛋白質、カゼイン、カゼィネート、乳タンパ ク濃縮物、乳糖、リン酸塩等の「食品添加物公定書」（廣川書店発行)に品質改良剤 として分類されるものが挙げられる。

[0124] 調味料としては、例えば、グルタミン酸ソーダ、核酸系調味料、畜産エキス、水産系 エキス、野菜エキス、酵母エキス、アミノ酸系調味料、魚醤調味料、コク味調味料、シ ーズユングオイル等の「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に調味料として分類さ れるものが挙げられる。

[0125] 酸味料としては、例えば、クェン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、フマル酸、コハク酸、 アジピン酸、ダルコン酸等の「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に酸味料として分 類されるものが挙げられる。

[0126] 強化剤としては、例えば、ビタミン A、ビタミン B群、ビタミン D、ビタミン K、カロチノィ ド、牛骨カルシウム、卵殻カルシウム、炭酸カルシウム、真珠貝、真珠末、蛎殻、ホタ テ貝殻カルシウム、珊瑚末、魚骨末、ドロマイト、塩化マグネシウム、酵母ミネラル、へ ム鉄、深層水、塩水湖水ミネラル、海草'植物由来ミネラル等の「食品添加物公定書」 (廣川書店発行)に強化剤として分類されるものが挙げられる。

[0127] スノ イス'ノヽーブとしては、例えば、胡椒、唐辛子、ピメンタ、バニラ豆、桂皮、丁子、 肉くず、肉くずの花、カルダモン、ァニス '大ウイキヨウ、コリアンダー、クミン、力ラウエ ィ、ういきよう'ジュ-パー、しょうが、サフラン、うこん、ローレル 'タイム、カレー等の「食 品添加物公定書」（廣川書店発行）にスパイス ·ハーブとして分類されるものが挙げら れる。

[0128] 食用香料としては、例えば、ピーチフレーバー、オレンジフレーバー、レモンフレー バー等のフルーツフレーバー類、ァロマフレーバー類、マルトール、フラネオール等 のシュガーフレーバー類、ソトロン等のフレーバーェンハンサ一類、フラボノイド類、 カカオマス等のポリフエノール類、プリカーサ一フレーバー類、ミートフレーバー類、コ 一ヒーフレーバー類、ミルクフレーバー、メントール類、デカラクトン類等の「食品添カロ 物公定書」（廣川書店発行）に食用香料として分類されるものが挙げられる。

[0129] 酵素としては、例えば、 (X アミラーゼ、 /3 アミラーゼ、グルコースイソメラーゼ、 プロテアーゼ、レンネット、パンクレアチン、パパイン、リパーゼ、セノレラーゼ、ブロメラ イン、ぺクチナーゼ、リゾチーム、ヘスペリジナーゼ、プノレラナ一ゼ、トランスグルタミ ナーゼ、へミセノレラーゼ、 13 ガラクタナーゼ、ラタターゼ、デキストラナーゼ、インべ ノレターゼ、カタラーゼ、デァミナーゼ、ゥレアーゼ、タンナーゼ、リポキシゲナーゼ、ァ デニルアミナーゼ等の「食品添加物公定書」（廣川書店発行）に酵素として分類され るものが挙げられる。

[0130] 次に、医薬品薬効成分又はそれらで使用される添加剤の一例を示す。

[0131] 医薬品薬効成分としては、例えば、解熱鎮痛消炎薬、催眠鎮静薬、眠気防止薬、 鎮暈薬、小児鎮痛薬、健胃薬、制酸薬、消化薬、強心薬、不整脈用薬、降圧薬、血 管拡張薬、利尿薬、抗潰瘍薬、整腸薬、骨粗鬆症治療薬、鎮咳去痰薬、抗喘息薬、 抗菌剤、頻尿改善剤、滋養強壮剤、ビタミン剤など、経皮又は経口で投与されるもの が対象となる。薬効成分は、それを単独で使用しても、 2種以上を併用することも自由 である。 [0132] また、医薬品で使用される添加剤としては、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、流 動化剤、滑沢剤、矯味剤、香料、着色剤、甘味剤、溶剤、油脂、増粘剤、界面活性 剤、ゲル化剤等があり、これらは、単独で使用しても、 2種以上を併用することも自由 である。

[0133] 賦形剤としては、アクリル酸デンプン、 L—ァスパラギン酸、アミノエチルスルホン酸 、ァミノ酢酸、あめ（粉）、アラビアゴム、アラビアゴム末、ァノレギン酸、ァノレギン酸ナトリ ゥム、アルファ一化デンプン、イノシトール、ェチルセルロース、エチレン.酢酸ビュル コポリマー、塩ィ匕ナトリウム、ォリーブ油、カオリン、カカオ脂、カゼイン、果糖、軽石粒 、カルメロース、カルメロースナトリウム、含水二酸化ケイ素、乾燥酵母、乾燥水酸ィ匕 アルミニウムゲル、乾燥硫酸ナトリウム、乾燥硫酸マグネシウム、カンテン、カンテン末 、キシリトール、クェン酸、クェン酸ナトリウム、クェン酸ニナトリウム、グリセリン、グリセ 口リン酸カルシウム、ダルコン酸ナトリウム、 L グルタミン、クレー、クレー粒、クロス力 ルメロースナトリウム、クロスポリビュルピロリドン、ケィ酸アルミン酸マグネシウム、ケィ 酸カルシウム、ケィ酸マグネシウム、軽質無水ケィ酸、軽質流動パラフィン、ケィヒ末、 結晶セルロース、結晶セルロース 'カルメロースナトリウム、結晶セルロース（粒）、ゲン マイコウジ、合成ケィ酸アルミニウム、合成ヒドロタルサイト、ゴマ油、小麦粉、コムギデ ンプン、小麦胚芽粉、コメコ、コメデンプン、酢酸カリウム、酢酸カルシウム、酢酸フタ ル酸セルロース、サフラワー油、サラシミツロウ、酸化亜鉛、酸化チタン、酸化マグネ シゥム、 13—シクロデキストリン、ジヒドロキシアルミニウムァミノアセテート、 2, 6 ジ ーブチルー 4 メチルフエノール、ジメチルポリシロキサン、酒石酸、酒石酸水素カリ ゥム、焼セッコゥ、ショ糖脂肪酸エステル、水酸ィ匕アルミナマグネシウム、水酸化アルミ -ゥム 'ゲル、水酸ィ匕アルミニウム '炭酸水素ナトリウム共沈物、水酸ィ匕マグネシウム、 スクラワン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン 酸ポリオキシル、ステアリン酸マグネシウム、ステロテックス HM、精製ゼラチン、精製 セラック、精製白糖、精製白糖球状顆粒、セトステアリルアルコール、セトポリエチレン グリコール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、 D ソルビトール、第三リン酸カル シゥム、ダイズ油、大豆不ケンィ匕物、大豆レシチン、脱脂粉乳、タルク、炭酸アンモ- ゥム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、中性無水硫酸ナトリウム、低置換度ヒドロキ シプロピルセルロース、デキストラン、デキストリン、天然ケィ酸アルミニウム、トウモロコ シデンプン、トラガント末、二酸化ケイ素、乳酸カルシウム、乳糖、白色ワセリン、白糖 、白糖'デンプン球状顆粒、ハダカムギ緑葉エキス末、裸麦芽葉青汁乾燥粉末、ハチ ミツ、パラフィン、バレイショデンプン、半消化体デンプン、人血清アルブミン、ヒドロキ シプロピノレスターチ、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル口 ースフタレート、フィチン酸、ブドウ糖、ブドウ糖水和物、部分アルファ一化デンプン、 プルラン、プロピレングリコール、粉末還元麦芽糖水飴、粉末セルロース、ぺクチン、 ベントナイト、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオ キシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリ スチレンスノレホン酸ナトリウム、ポリビニノレアセターノレジェチノレアミノアセテート、ポリエ チレングリコール、マルチトール、マルトース、 D—マン-トール、水ァ入ミリスチン酸 イソプロピル、無水乳糖、無水リン酸水素カルシウム、無水リン酸カルシウム造粒物、 メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、メチルセルロース、綿実粉、綿実油、モクロウ、モ ノステアリン酸アルミニウム、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、 薬用炭、ラッカセィ油、硫酸アルミニウム、硫酸カルシウム、粒状トウモロコシデンプン 、流動パラフィン、 dl—リンゴ酸、リン酸一水素カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン 酸水素カルシウム造粒物、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素 カルシウム、リン酸二水素ナトリウム等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添 加剤事典」（薬事日報社 (株)発行）に賦形剤として分類されるものが挙げられ、それ を単独で使用しても、 2種以上を併用することも自由である。

崩壊剤としては、クロスカルメロースナトリウム、カルメロース、カルメロースカルシゥ ム、カルメロースナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース類 、カルボキシメチルスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、コメデンプン、コ ムギデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、部分アルファ一化デンプン 等のデンプン類、クロスポリビュルピロリドン、クロスポリビュルピロリドンコポリマー等 の合成高分子等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添加物事典」（薬事日 報社 (株)発行）に崩壊剤として分類されるものを挙げることができる。上記から選ば れる 1種を単独で使用しても、 2種以上を併用することも自由である。 [0135] 結合剤としては、白糖、ブドウ糖、乳糖、果糖等の糖類、マン-トール、キシリトール 、マルチトール、エリスリトール、ソルビトール等の糖アルコール類、ゼラチン、プルラ ン、カラギーナン、ローカストビーンガム、寒天、ダルコナンナン、キサンタンガム、タ マリンドガム、ぺクチン、アルギン酸ナトリウム、アラビアガム等の水溶性多糖類、結晶 セノレロース、粉末セノレロース、ヒドロキシプロピノレセノレロース、メチノレセノレロース等の セルロース類、アルファ一化デンプン、デンプン糊等のデンプン類、ポリビュルピロリ ドン、カルボキシビュルポリマー、ポリビュルアルコール等の合成高分子類、リン酸水 素カルシウム、炭酸カルシウム、合成ヒドロタルサイト、ケィ酸アルミン酸マグネシウム 等の無機化合物類等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添加剤事典」（薬 事日報社 (株)発行）に結合剤として分類されるものを挙げることができる。上記から 選ばれる 1種を単独で使用しても、 2種以上を併用することも自由である。

[0136] 流動化剤としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケィ酸等のケィ素化合物類等の「 医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行)に流動化剤として分類されるものを挙げ ることができる。上記カゝら選ばれる 1種を単独で使用しても、 2種以上を併用することも 自由である。

[0137] 滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、 ショ糖脂肪酸エステル、タルク等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添加剤 事典」（薬事日報社 (株)発行)に滑沢剤として分類されるものを挙げることができる。 上記カゝら選ばれる 1種を単独で使用しても、 2種以上を併用することも自由である。

[0138] 矯味剤としては、グルタミン酸、フマル酸、コハク酸、クェン酸、クェン酸ナトリウム、 酒石酸、リンゴ酸、ァスコルビン酸、塩ィ匕ナトリウム、 1—メントール等の「日本薬局方」 (廣川書店発行)、「医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行)に矯味剤として分 類されるものを挙げることができる。上記カゝら選ばれる 1種を単独で使用しても、 2種 以上を併用することも自由である。

[0139] 香料としては、オレンジ、バニラ、ストロベリー、ヨーグルト、メントール、ウイキヨゥ油、 ケィヒ油、トウヒ油、ハツ力油等の油類、緑茶末等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、 「医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行)に着香剤、香料として分類されるもの を挙げることができる。上記カゝら選ばれる 1種を単独で使用しても、 2種以上を併用す ることも自由である。

[0140] 着色剤としては、食用赤色 3号、食用黄色 5号、食用青色 1号等の食用色素、銅ク ロロフインナトリウム、酸化チタン、リボフラビン等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「 医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行)に着色剤として分類されるものを挙げる ことができる。上記カゝら選ばれる 1種を単独で使用しても、 2種以上を併用することも 自由である。

[0141] 甘味剤としては、アスパルテーム、サッカリン、ダリチノレリチン酸二カリウム、ステビア 、マルトース、マルチトール、水飴、アマチヤ末等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、 「医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行)に甘味剤として分類されるものを挙げ ることができる。上記カゝら選ばれる 1種を単独で使用しても、 2種以上を併用することも 自由である。

[0142] 溶剤としては、医薬品に使用されるものであれば、特に制限されるものではないが、 例えばメタノール、エタノールなどのアルコール類、アセトンなどのケトン類等の「日本 薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行)に溶剤とし て分類されるものが挙げられ、それを単独で使用しても、 2種以上を併用することも自 由である。

[0143] 油脂としては、例えば、ステアリン酸モノグリセリド、ステアリン酸トリグリセリド、ステア リン酸ショ糖エステル、流動パラフィン等のパラフィン類、カルナウパロウ、硬化ヒマシ 油等の硬化油類、ヒマシ油、ステアリン酸、ステアリルアルコール、ポリエチレングリコ ール等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株） 発行）に記載される油脂が挙げられ、それを単独で使用しても、 2種以上を併用する ことも自由である。

[0144] 増粘剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセ ルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビュルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビ ニノレアノレコーノレ、ポリビニノレピロリドン、メチノレセノレロース、ェチノレセノレロース、ァラビ ァゴム、デンプン糊等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「医薬品添加剤事典」（薬 事日報社 (株)発行）に記載される増粘剤が挙げられ、それを単独で使用しても、 2種 以上を併用することも自由である。 [0145] 界面活性剤としては、例えば、リン脂質、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレング リコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ 油、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリ ォキシエチレンノニルフエニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリ コール、ポリオキシエチレンソルビタンサンモノラウレート、ポリソルベート、モノォレイ ン酸ソルビタン、モノステアリン酸グリセリド、モノォキシエチレンソルビタンモノパルミ テート、モノォキシエチレンソルビタンモノステアレート、モノォレイン酸ポリオキシェチ レンソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、ラウリル硫酸ナトリウム等の「日本薬局方 」（廣川書店発行)、「医薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行)に界面活性剤とし て分類されるものが挙げられ、それを単独で使用しても、 2種以上を併用することも自 由である。

[0146] ゲル化剤としては、例えば、ゼラチン等の動物性ゲル化剤、寒天、キサンタンガム、 グァーガム、アラビアガム、カードラン、ローカストビーンガム、カノレボキシメチノレセノレ ロース、ヒドロキシェチルセルロース、セルロース、微結晶セルロース等植物性多糖類 、ポリビニルピロリドン等の化学合成高分子等の「日本薬局方」（廣川書店発行)、「医 薬品添加剤事典」（薬事日報社 (株)発行）にゲル化剤として分類されるものが挙げら れ、それを単独で使用しても、 2種以上を併用することも自由である。

[0147] 例えば、化粧品素材又はそこで使用される添加剤としては、本発明におけるセロォ リゴ糖組成物に加え、必要に応じて、保湿剤、アミノ酸、ビタミン類、炭化水素、高級 脂肪酸、エステル類、シリコーン、界面活性剤、 pH調整剤、水を添加してもよい。こ れらの化粧品素材又は添加剤は、それを単独で使用しても、 2種以上を併用すること も自由である。

[0148] 例えば、保湿剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン 、 1, 3—ブチレングリコーノレ、ソノレビトーノレ、マノレチトーノレ、コンドロイチン硫酸、コラ 一ゲン、乳酸ナトリウム、 dl—ピロリドンカルボン酸、ョクイニン抽出物、大豆レシチン 等の「化粧品原料基準」、「化粧品種別配合成分規格」（いずれも薬事日報社発行） に保湿剤として分類されるものが挙げられる。

[0149] アミノ酸としては、例えば、グリシン、ァラニン、ノ リン、ロイシン、イソロイシン、セリン 、スレオニン、トリプトファン、シスチン、メチォニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、グル タミン、ァスパラギン等の中性アミノ酸、ァスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ 酸、アルギニン、ヒスチジン、リジン、ヒドロキシリジン等の塩基性アミノ酸等の「ィ匕粧品 原料基準」、「化粧品種別配合成分規格」 ( ヽずれも薬事日報社発行)にアミノ酸とし て分類されるものが挙げられる。

[0150] ビタミン類としては、例えば、ビタミン A、ビタミン D、ビタミン E、ビタミン K、ビタミン Β 、ビタミン Β、ビタミン Β、ビタミン Β 、葉酸、ナイァシン、パントテン酸、ビォチン、ビ

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タミン Cを使用することができる。ビタミン Αとしては、レチノール、レチナール、レチノ イン酸、 3—デヒドロレチノール、 3—デヒドロレチナール、 3—デヒドロレチノイン酸、 β—カテキンが挙げられ、ビタミン Dとしては、ェルゴカルシフエロール（D2)、コレカ ルシフエロール（D3)、エルゴステロール、 7—ヒドロコレステロールが挙げられ、ビタミ ン Eとしては α—トコフエロールが挙げられ、ビタミン Κとしては、フイロキノン (K1)、メ ナキノン (Κ2)、メナジオン (Κ3)が挙げられ、ビタミン Βとしてはチアミン（ァノィリン） が挙げられ、ビタミン Βとしてはリボフラビンが挙げられ、ビタミン Βとしてはピリドキシ

2 6

ン、ピリドキサール、ピリドキサミンが挙げられ、ビタミン Β としてはコバラミンが挙げら

12

れ、葉酸としてはプテロィルグルタミン酸が挙げられ、ナイァシンとしてはニコチン酸、 ニコチンアミド（ニコチン酸アミド）が挙げられ、ビタミン cとしてはァスコルビン酸が挙 げられる。これらのビタミンは、 1種を単独で用いても、 2種以上を併用することも自由 である。また、これらのビタミンは、脂溶性であっても、水溶性であってもよぐ通常、化 粧品、医薬品、医薬部外品、食品に用いられるものを使用することが好ましい。「日本 薬局方」（廣川書店発行)、「化粧品原料基準」（薬事日報社発行)に分類されるもの を用いることが好ましい。

[0151] 炭化水素としては、例えば、流動パラフィン、パラフィン、スクラワン、ワセリン等の「 化粧品原料基準」、「化粧品種別配合成分規格」 ( ヽずれも薬事日報社発行)に炭化 水素として分類されるものが挙げられる。

[0152] 高級脂肪酸としては、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸 、ベへリン酸、ォレイン酸、ヒドロキシステアリン酸、ゥンデシレン酸、イソステアリン酸、 リノール酸、リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサへキサェン酸等の「ィ匕粧品原料 基準」（薬事日報社発行）に高級脂肪酸として分類されるものが挙げられる。

[0153] エステル類としては、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オタ チルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸プチル、ラウリン酸へキシル、 ミスチリン酸ミリスチル、ォレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸へキシルデシル、乳酸 セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソ セチル、ヒドロキシステアリン酸コレステリル、ジ 2—ェチルへキシル酸エチレングリ コール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸 N—アルキルグ リコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジー 2— へプチルゥンデカン酸グリセリン、トリー 2—ェチルへキシル酸グリセリン、トリイソステ アリン酸トリメチロールプロパン、セチル 2—ェチルへキサノエート、 2—ェチルへキシ ルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリン、トリ— 2—へプチルゥンデカン酸グリセライ ド、ミリスチン酸 2—へキシルデシル、パルミチン酸 2—へキシルデシル、アジピン酸 2 一へキシルデシル、セバシン酸ジイソプロピル、コハク酸 2—ェチルへキシル、クェン 酸トリェチル等の「化粧品原料基準」、「化粧品種別配合成分規格」（いずれも薬事日 報社発行）にエステルとして分類されるものが挙げられる。

[0154] シリコーンとしては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフエ-ルポリシロキサン 等の鎖状ポリシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロへキ サシロキサン等の環状シロキサン、架橋した編み目構造のシリコーン榭脂等の「ィ匕粧 品原料基準」、「化粧品種別配合成分規格」 ( ヽずれも薬事日報社発行)に記載され るシリコーン類が挙げられる。

[0155] 界面活性剤としては、例えば、ァシルグルタミン酸塩等のァシルアミノ酸塩、ラウリン 酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸カリウム等 の高級アルキル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンラウリル硫酸トリエタノールアミ ン、ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム等のアルキルエーテル硫酸エステル塩 、ラウロイルサルコシンナトリウム等の N ァシルサルコシン酸塩等のァ-オン性界面 活性剤に加え、塩化ステアリルトリメチルアンモ-ゥム、塩ィ匕ラウリルトリメチルアンモ -ゥム等のアルキルトリメチルアンモ -ゥム塩、塩化ジステアリルジメチルアンモ -ゥム ジアルキルジメチルアンモ -ゥム塩、塩化（N, N，—ジメチル—3, 5—メチレンピペリ ジ-ゥム）、塩化セチルビチジュゥム等のアルキルピリジ-ゥム塩、アルキル 4級アン モ -ゥム塩、ポリオキシエチレンアルキルアミン等のアルキルアミン塩、ポリアミン脂肪 酸誘導体、ァミルアルコール脂肪酸誘導体等のカチオン性界面活性剤、 2—ゥンデ シルー N, N, N—(ヒドロキシェチルカルボキシメチル） 2—イミダゾリンナトリウム、 2 —ココイル一 2—イミタゾリ-ゥムヒドロキサイド一 1—カルボキシェチロキシ 2ナトリウム 塩等のイミダゾリン系両性界面活性剤、 2 -ヘプタデシル -N-カルボキシメチル - N ヒドロキシェチルイミダゾリ-ゥムベタイン、ラウリルジメチルァミノ酢酸べタイン、ァ ルキルべタイン、アミドべタイン、スルホバタイン等のベタイン系両性界面活性剤等の 両性界面活性剤、ソルビタンノモォレエート、ソルビタンモノモイソステアレート、ソル ビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビ タンセスキォレエート、ソルビタントリオレエート、パンター 2—ェチルへキシル酸ジグリ セロールソルビタン、テトラ 2—ェチルへキシル酸ジグリセロールソルビタン等のソ ルビタン脂肪酸エステル類、モノステアリン酸グリセリン、 α , α '—ォレイン酸ピログ ルタミン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリンリンゴ酸等のグリセリンポリグリセリン 脂肪酸類、モノステアリン酸プロピレングリコール等のプロピレングリコール脂肪酸ェ ステル類、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンーソルビタンモノォレエート、ポリオキ シエチレン ソルビタンテトラオレエート等のポリオキシエチレン ソルビタン脂肪酸 エステル類、ポリオキシエチレン ソルビットモノラウレート、ポリオキシエチレン ソル ビットモノォレエート、ポリオキシエチレン ソルビットペンタォレエート、ポリオキシェ チレン ソルビットモノステアレート、ポリオキシエチレン グリセリンモノイソステァレ ート、ポリオキシエチレン グリセリントリイソステアレート等のポリオキシエチレンーグ リセリン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンモノォレエート、ポリオキシエチレンジ ステアレート、ポリオキシエチレンモノジォレエート、システアリン酸エチレングリコール 等のポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオ キシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油モノイソステアレート、ポリオ キシエチレン硬化ヒマシ油トリイソステアレート、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油モノ ピログルタミン酸モノイソステアリン酸ジエステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油マ レイン酸等のポリオキシエチレンヒマシ油硬化ヒマシ油誘導体等の非イオン性界面活 性剤等の「化粧品原料基準」、「化粧品種別配合成分規格」（いずれも薬事日報社発 行）に界面活性剤として分類されるものが挙げられる。

[0156] pH調整剤としては、乳酸—乳酸ナトリウム、クェン酸—クェン酸ナトリウム、リン酸— リン酸ナトリウム、酢酸 酢酸ナトリウム、 Mclvine試薬等の「化粧品原料基準」、「ィ匕 粧品種別配合成分規格」 ( ヽずれも薬事日報社発行)に記載される緩衝剤が挙げら れる。

[0157] 本発明のセロオリゴ糖含有食品の例としては、例えば、ゼリー、プリン、ヨーグルト等 のゲル、マヨネーズ、ドレッシング、ソース類、たれ類、スープ、野菜加工品等の調味 料、カレー、ハヤシ、ミートソース、シチュー、スープ等のレトルト食品、チルド食品、ハ ンバーグ、ベーコン、ソーセージ、サラミソーセージ、ハム類等の畜産加工品、蒲鋅、 ちくわ、魚肉ハム'ソーセージ、揚げ蒲鋅等の水練製品、パン、生麵、乾麵、マカロニ 、スパゲッティ、中華饅頭の皮、ケーキミックス、プレミックス、ホワイトソース、餃子.春 卷等の皮類などの小麦カ卩ェ食品、カレー、ソース、スープ、佃煮、ジャムなどの缶詰、 瓶詰類、キャンデー、トローチ、錠菓、チョコレート、ビスケット、クッキー、米菓、和洋 菓子、洋生菓子、スナック菓子、砂糖菓子、プリンなどの菓子類、フライ類、コロッケ、 餃子、中華饅頭等の調理加工品、野菜ペースト、肉のミンチ、果実ペースト、魚介類 のペースト等のペースト類である。また、アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、ホ イツプクリーム、練乳、バター、ヨーグルト、チーズ、ホワイトソース等の乳製品、マーガ リン、フアットスプレッド、ショートニング等の油脂加工品等がある。さらに、コーラ等の 炭酸飲料、炭酸入り、アルコール入り、乳製品と混合した果実飲料、果汁又は、果実 入り飲料、乳性飲料等の飲料、コーヒー、牛乳、豆乳、ココア牛乳、フルーツ牛乳、ョ 一ダルト等の乳酸又は乳性飲料等、煎茶、ウーロン茶、抹茶、紅茶等の茶飲料等に 使用してちょい。

[0158] 本発明のセロオリゴ糖含有医薬品 Z医薬部外品の例としては、例えば、錠剤、散剤 、細粒剤、顆粒剤、エキス剤、丸剤の固形製剤が挙げられ、上記の固形製剤以外で も、菓子、健康食品、食感改良剤、食物繊維強化剤等の食品、固形ファンデーション 、浴用剤、動物薬、診断薬、農薬、肥料、セラミックス触媒等に利用されるものも本発 明に含まれる。

[0159] 化粧品 Z医薬部外品の例としては、例えば、香油、ヘアオイル、つや出し油、スキ 油、びん油、セットローション、ヘアスティック、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、 ヘアリキッド等の整髪料、ヘアトニック、ヘアトリートメント、ヘアローション等の養毛料 、カラースプレー、カラーリンス等の毛髪着色料、頭皮料、髪洗粉、シャンプー等の洗 髪料、ヘアリンス、オイルリンス、クリームリンス、ボディリンス、フェイシャルリンス等のリ ンス、クレンジングクリーム、洗顔クリーム、クレンジングミルク、クレンジングローション 、洗粉等の洗顔料、ノ ック、油性クリーム、中性クリーム、弱酸性クリーム等のクリーム 、ミルクローション、スキンミルク等の乳液、乾性肌用化粧水、普通肌用化粧水、脂肌 用化粧水、男性用化粧水、男性ローション、アフターシェーブローション等の化粧水 、メイクアップベース、ファンデーション、おしろい、 口紅、リップスティック、リップル一 ジュ、リップダロス、リップクリーム等の口紅類、アイシャドー、アイライナー、アイクリー ム、眉墨、まつげ化粧料、アイメイクアップリムーバー、アイメイクアップ、頰紅、ァイブ ロウペンシル、ァイブロウブラッシュ、マスカラ等の眉目頰化粧料、ネイルエナメル、ネ イルクリーム、マ-キュア、ペディキュア、エナメルリムーバー、除光液等の美爪料、香 水、オーデコロン、パヒュームコロン、オードトワレ等のオーデコロン、ノ スソルト、バス オイル等の浴用化粧品、ォリーブ油、椿油、ベビーオイル等を配合した化粧油、 日焼 け用化粧品、コールドクリーム、 日焼けどめ化粧品、ひげそりクリーム、シェービングフ オーム等のシェービングクリーム、プレシエーブ化粧品、タルカムパウダー、ボディパ ウダ一、バスパウダー、ノ化ユームパウダー等の打粉等の「ィ匕粧品科学ガイドブック」 ( 日本化粧品技術者会編、薬事日報社発行）に記載される化粧品が挙げられ、これら に分類されるものに使用してもよい。

[0160] 本発明のセロオリゴ糖含有組成物は、腸内細菌叢改善、乳酸菌、乳酸かん菌等の 活性化、血中糖濃度、血中インシュリン濃度の低減、血中コレステロールの低減、体 脂肪率の低減、脂質'糖質代謝促進機能、便通'便臭改善、杭う触性等の各種生理 活性が期待できるため、上記の通常食品用途に加え、生理活性物質として、機能性 食品、健康食品、ダイエット食品、医薬品、医薬部外品等の用途で使用してもよい。 また、本発明のセロオリゴ糖組成物は、皮膚バリヤ機能の改善、皮膚常在菌叢の改 善効果があるため、皮膚炎、乾燥肌等のダメージ肌の予防または改善用の機能性ィ匕 粧品、医薬部外品、医薬品等の用途で使用してもよい。

実施例

本発明を実施例に基づいて説明する力 本発明はこれらに限定されるものではな い。

[製造例 1]

普通寒天培地に Tricoderma reeesei NBRC31329を接種し、 37°Cで 7日間 培養後、その培地表面力 胞子を 1白金耳取り、ポリペプトン lg、酵母エキス 0. 5g、 リン酸 1カリウム 2g、硫酸アンモ -ゥム 1. 5g、硫酸マグネシウム 0. 3g、塩化カルシゥ ム 0. 3g、トレースエレメント lmL (硼酸 6mg、モリブデン酸アンモ-ゥム 4水和物 26m g、塩化鉄（3) 6水和物10011^、硫酸銅 5水和物 40mg、硫酸マンガン 4水和物 8mg 、硫酸亜鉛 7水和物 200mgを全量 lOOmLの精製水に溶解させたもの）、アデカノー ル lmL、結晶セルロース（旭化成ケミカルズ製 商品名 PH—101) 10gを全量 1Lの 精製水に懸濁及び溶解させた培地に植菌し、 28°Cで 5日間通気攪拌培養した。培 養中は、水酸ィ匕ナトリウム水溶液を用いて、培地の pHを 2. 8-4. 7となるように調節 した。培養後の液を遠心分離し、上清を目開き 0. 46 μ mの精密ろ過膜で除菌し、ろ 液を分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイクローザべ ンシル型モジュール ACP— 0013)で体積比で 10倍濃縮し粗酵素を得た。

次に、市販針葉樹由来の溶解パルプを使用し、加水分解条件を塩酸濃度 0. 4% 塩酸水溶液、 120°C、 1時間として、加水分解し、酸不溶性残渣を洗浄、ろ過し、ゥェ ットケークを得た。このウエットケークをセルロース 10%濃度の水分散体とし、超高性 能分散機 ·湿式微粉砕機 (ァシザヮ (株)製、商品名 パールミル RL φ lmmジルコ 二ァビーズ使用 充填率 80%)を使用し、圧密 ·摩砕処理を施し、セルロース微粒子 分散体を得た（平均重合度 220、ジェチルエーテル可溶物含有率 0. 7%、平均粒 子径 0. 7 m、コロイド状成分含有率 51. 5%)。

この摩砕セルロースが 2質量⁰ /₀、粗酵素をタンパク質濃度 0. 25%になるように 50 mM酢酸 酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 5)に懸濁溶解させ、全量 lOOOmLとし、ガ ラス製フラスコに仕込んだ。このガラス製フラスコを、 55°Cの水槽に仕込み、内部を攪 拌しながら 4時間反応させた。反応終了後、反応液を懸濁状態で 300 Lを分注し、 限外ろ過モジュール (分画分子量 10000)を使用し、酵素、未分解セルロースを取り 除いた後、高速液体クロマトグラフィーで糖濃度を分析した。該反応液の糖濃度は、 セロトリオース 0. 1質量⁰ /₀、セロビオース 1. 5質量⁰ /₀、グルコース 0. 3質量⁰/。であつ た。

該反応液を、分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイ クローザペンシル型モジュール ACP— 0013)でろ過し、得られたろ液を陽'陰ィォ ン交換樹脂で脱イオン処理し、 70°C、減圧下で蒸留し、 20倍の糖濃度の水溶液を 得た。

[0162] [実施例 1]

製造例 1で得られたセロオリゴ糖水溶液 lOOmLを、 200mLのガラス製フラスコに 導入し、攪拌しながら、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 25°Cまで冷却した (溶媒の溶 解度パラメータ δは 22. 2)。 25°Cで水溶液中に晶出したセロオリゴ糖を、減圧ろ過 し、 40°Cの通風式乾燥機で乾燥し、乳鉢で粉砕後、 目開き 150 mの篩いで篩下し 、篩下粉末を目開き 45 μ mの篩 、で微粉を除去し、セロオリゴ糖粉末を得た。得た れたセ口オリゴ糖粉末 500mgを φ ΐ. 1mmの鋼鉄製円柱状臼に導入し、 1. lmm の平面杵で、 150MPa、 10秒間の加圧を施し、得られた成型体の硬度を測定した。 (平均 L/D1. 7、嵩密度 0. 43gZmL、セロビオース含量 99質量⁰ /₀、セロトリオース 〜セ口へキサオース含量 0. 1質量％、グルコース含量 0. 9質量％、粉体安息角 43 ° 、晶析収率 50質量％、成型体硬度 67N)

[0163] [実施例 2]

市販のセロビオース（アルドリッチ製 純度 98質量％)を使用し、 200mLのガラス製 フラスコ中で 70°Cの水中に 30質量％濃度で全量 lOOmLになるよう溶解し、毎時 10 °Cの速度で、 70°Cから 25°Cまで冷却した後、体積混合比 50Z50のイソプロピルァ ルコール Zエタノール溶液を水に対し、 50質量％になるよう、毎分 10gの速度でカロえ 、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 25°Cまで冷却した (溶媒の溶解度パラメータ δは 1 6. 6)。水溶液中に晶出したセロオリゴ糖を、実施例 1と同様に、減圧ろ過、乾燥、粉 砕、篩下し、セロオリゴ糖粉末を得た。得られたセロオリゴ糖について実施例 1と同様 に成型体硬度を測定した。（平均 LZD2. 3、嵩密度 0. 54gZmL、セロビオース含 量 99質量⁰ /₀、セロトリオース〜セ口へキサオース含量 0. 5質量⁰ /₀、グルコース含量 0 . 5質量％、粉体安息角 48° 、晶析収率 89量％、成型体硬度 107N)

[0164] [実施例 3]

製造例 1で得られたセロオリゴ糖水溶液 lOOmLを、 200mLのガラス製フラスコに 導入し、攪拌しながら、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 25°Cまで冷却した後、ェタノ ールを水に対し 75体積％となるよう、毎分 10gの速度で加え晶析した (溶媒の溶解 度パラメータ δは 14. 5)。水溶液中に晶出したセロオリゴ糖を、実施例 1と同様に、 減圧ろ過、乾燥、粉砕、篩下し、セロオリゴ糖粉末を得た。得られたセロオリゴ糖につ いて実施例 1と同様に成型体硬度を測定した。（平均 LZD2. 5、嵩密度 0. 51g/m L、セロビオース含量 99. 9質量％、グルコース含量 0. 1質量％、粉体安息角 55° 、 晶析収率 92質量％、成型体硬度 115N)

[0165] 〔実施例 4〕

実施例 1〜3で使用したセロオリゴ糖粉末 lgを、ガラス板上に置いて、ビュレットで ナタネ油（日清キャノーラ油）を適下し、滴下の度に、混練しながら、常温で油分保持 量を測定した。終点 (飽和吸油量）は、粉体表面に油が染み出した点として、 油分保持量 =飽和吸油量 (g) Zセロオリゴ糖粉末量 (g)

とした。実施例 1のセロオリゴ糖粉末の油分保持量は、 1. Og/g,実施例 2は 1. lg ん実施例 3は 0. 95gZgであり、いずれの粉末も、高い吸油性を示した。

[0166] 〔比較例 1〕

市販の D—セロビオース粉末 (シグマアルドリッチ製)を用いて、実施例 4と同様に、 油分保持量を測定した。巿販 D—セロビオースの油分保持量は、 0. 85であった。

[0167] 〔実施例 5〕

実施例 1〜3のセロオリゴ糖粉末を、相対湿度 75%、 40°Cの環境下で、 18時間放 置された際の、吸湿度を測定した。

吸湿度 =放置後の重量増加 (g) Zセロオリゴ糖粉末量 (g) X 100 (質量％) いずれの粉末も吸湿度は、 1質量％未満であり、粉体のブロッキング、及び安息角の 増加は全く認められな力つた。 [0168] 〔実施例 6〕

実施例 1〜3のセロオリゴ糖粉末を、 pH3. 0の Mcllvine緩衝液中に、 1質量⁰ /₀濃 度で溶解し、オートクレープで 121°C、 20分間加熱した後の、糖組成を測定すること で、加熱後の残存率を測定した。いずれのセロオリゴ糖粉末も、加熱後のセロオリゴ 糖残存率は 90%以上であり、高 、耐熱 ·耐酸性を示した。

[0169] 〔実施例 7〕

市販の馬鈴薯澱粉を純水中に 2質量％で懸濁し、 95°Cで 2時間加熱することで澱 粉水溶液を得た。次に、実施例 1〜3で得られたセロオリゴ糖粉末を純水中に 6質量 %溶解させたセロオリゴ糖水溶液を作製した。これらの澱粉水溶液と、各セロオリゴ糖 水溶液を等量混合し、 4°Cにて、 12時間保存し、保存前後の濁度 (波長 660nm)を 測定することで、澱粉の変性率を求めた。

澱粉変性率 = (保存後の濁度 保存前の濁度) Z (保存後の濁度） X 100 (%) 実施例 1〜3のセロオリゴ糖粉末の澱粉変性率は、それぞれ 5%、 17%、 9%であり、 セロオリゴ糖無添加の澱粉変性率 31%に対し、澱粉の変性防止効果が認められた。

[0170] 〔実施例 8〕

市販の卵白に、実施例 1〜3で得られたセロオリゴ糖粉末 2をそれぞれ 5質量％溶 解させ、卵白一セロオリゴ糖溶液を作製した。これらの卵白一セロオリゴ糖溶液を、 - 20°Cにて、 5日間保存し、保存前後の濁度 (波長 660nm)を測定することで、蛋白質 の変性率を求めた。

蛋白質変性率 = (保存後の濁度 保存前の濁度) Z (保存後の濁度） X 100 (%) 実施例 1〜3のセロオリゴ糖粉末の蛋白質変性率は、それぞれ 3%、 9%、 7%であり 、セロオリゴ糖無添加の澱粉変性率 62%に対し、蛋白質の変性防止効果が認めら れた。

[0171] [実施例 9]

実施例 1で得られたセロオリゴ糖粉末を用い、以下の方法で食品組成物を作成した まず、局方コーンスターチ（平均粒径は 9 /z m) 675. 6g、タルク（和光純薬 (株)製) 15gをポリエチレン袋に入れて、 3分間手で振とうした後、その混合粉体に、実施例 1 のセロオリゴ糖粉末 195gを秤りとり（全量 900g)、容量 5リットルの V型混合機 (ダルト ン社製）に投入し、 30分間混合した。ランダムに 10力所の粉体層から、粉体を 0. 5g ずつ採取し、粉体中のセロオリゴ糖濃度を測定した。このときのセロオリゴ糖濃度の変 動係数は 0. 9%であり、この混合粉体を目開き 150 mの篩いで篩った後、篩い上 部には凝集物が見られな力つた。

ここでいう変動係数とは、上記のセロオリゴ糖の濃度分析において、 10点の粉体サ ンプルにおけるセロオリゴ糖濃度の標準偏差と平均値から、以下の式で表される。 変動係数 (％) =標準偏差 Z 平均濃度 X loo

[製造例 2]

普通寒天培地にトリコデルマ リーセィ（Tricoderma reesei) GL— 1株（独立行 政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター、受領番号 FERM ABP- 1 0323)を接種し、 37°Cで 7日間培養後、その培地表面力も胞子を 1白金耳取り、ポリ ペプトン lg、酵母エキス 0. 5g、リン酸 1カリウム 2g、硫酸アンモ-ゥム 1. 5g、硫酸マ グネシゥム 0. 3g、塩化カルシウム 0. 3g、トレースエレメント lmL (硼酸 6mg、モリブ デン酸アンモニゥム 4水和物 26mg、塩化鉄（3) 6水和物10011^、硫酸銅 5水和物 4 0mg、硫酸マンガン 4水和物 8mg、硫酸亜鉛 7水和物 200mgを全量 lOOmLの精製 水に溶解させたもの）、アデ力ノール lmL、結晶セルロース（旭化成ケミカルズ製 商 品名 PH— 101) 10gを全量 1Lの精製水に懸濁及び溶解させた培地に植菌し、 28 °Cで 5日間通気攪拌培養した。培養中は、水酸ィ匕ナトリウム水溶液を用いて、培地の pHを 2. 8〜4. 7となるように調節した。培養後の液を遠心分離し、上澄みを目開き 0 . 46 mの精密ろ過膜で除菌し、ろ液を分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成 ケミカルズ製 商品名マイクローザペンシル型モジュール ACP— 0013)で体積比 で 10倍濃縮し粗酵素を得た。

次に、市販針葉樹由来の溶解パルプを使用し、加水分解条件を塩酸濃度 0. 4% 塩酸水溶液、 120°C、 1時間として、加水分解し、酸不溶性残渣を洗浄、ろ過し、ゥェ ットケークを得た。このウエットケークをセルロース 10%濃度の水分散体とし、超高性 能分散機 ·湿式微粉砕機 (ァシザヮ (株)製、商品名 パールミル RL φ lmmジルコ 二ァビーズ使用 充填率 80%)を使用し、圧密 ·摩砕処理を施し、セルロース微粒子 分散体を得た（平均重合度 220、ジェチルエーテル可溶物含有率 0. 7%、平均粒 子径 0. 7 m、コロイド状成分含有率 51. 5%)。

この摩砕セルロースが 2質量⁰ /₀、粗酵素をタンパク質濃度 0. 25%になるように 50 mM酢酸 酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 5)に懸濁溶解させ、全量 lOOOmLとし、ガ ラス製フラスコに仕込んだ。このガラス製フラスコを、 55°Cの水槽に仕込み、内部を攪 拌しながら 4時間反応させた。反応終了後、反応液を懸濁状態で 300 L分注し、限 外ろ過モジュール (分画分子量 10000)を使用し、酵素、未分解セルロースを取り除 いた後、高速液体クロマトグラフィーで糖濃度を分析した。該反応液の糖濃度は、セ 口トリオース〜セ口へキサオース 0. 2質量⁰ /₀、セロビオース 1. 5質量⁰ /₀、グルコース 0 . 3質量％であった。

該反応液を、分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイ クローザペンシル型モジュール ACP— 0013)でろ過し、得られたろ液を陽'陰ィォ ン交換樹脂で脱イオン処理し、 70°C、減圧下で蒸留し、 20倍の糖濃度の水溶液を 得た。

[0173] [製造例 3]

製造例 2で得られたセロオリゴ糖水溶液 lOOmLを、 200mLのガラス製フラスコに 導入し、攪拌しながら、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 5°Cまで冷却した。 25°Cで水 溶液中に晶出したセロオリゴ糖を、減圧ろ過し、 40°Cの通風式乾燥機で乾燥し、乳 鉢で粉砕後、 目開き 150 /z mの篩いで篩下し、篩下粉末を目開き 45 /z mの篩いで 微粉を除去し、セロオリゴ糖粉末 CE— 1Aを得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組 成を表 1に記す。

[0174] [製造例 4]

製造例 2の菌株を、セロビブリオ ギルバス（Cellovibrio gilvus)に代え、培養時 の pHを 4〜10に変更し、酵素反応時の緩衝液を pH6. 5のリン酸緩衝液に変更する 以外は、製造例 1と同様の方法でセロオリゴ糖水溶液を作成した。

得られたセロオリゴ糖水溶液を、活性炭を充填したカラムに通して、セロビオースリ ツチの画分を除去し、製造例 2と同様の操作でセロオリゴ糖粉末 CE— 2Aを得た。得 たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表 1に記す。 [0175] [製造例 5]

製造例 3のセロオリゴ糖の製造方法にぉ 、て、セロオリゴ糖水溶液に常温でェタノ ールを重量比で 2. 5倍加え、製造例 1と同様に冷却晶析し、セロオリゴ糖粉末 CE— 3Aを得た。

[0176] [製造例 6]

製造例 4で得られたセロオリゴ糖水溶液を、そのまま噴霧乾燥 (東京理ィ匕製 噴霧 乾燥機 出口温度 72°C)し、セロオリゴ糖粉末 CE— 4Aを得た。

[表 1]

■ G1：クルコース、 GE2 :セロヒ "オース、 CE3 :セロトリオース、

CE4 :セロテトラオース、 CE5 :セ口へ。ンタオース、 CE6 :セ口へキサ才一ス くインスリン非上昇性についての確認試験 >

生後 7週齢の SDラットを 1週間 AIN— 93G (オリエンタル酵母工業製)の自由摂取 で、 1週間予備飼育後、 16時間絶食させ、表 1の各セロオリゴ糖水溶液を、ゾンデを 用いて 1500mgZkgを投与した。投与前及び投与後、 30分後に無麻酔下で、骸外 静脈より採血し、インスリン濃度 (ngZmL シバヤギ製 レビインスリンキット使用）を 測定した。インスリン濃度の上昇率は、 CE— 1A〜3Aで 30%未満であり、これらのセ 口オリゴ糖がインスリン非上昇性であることを確認した。

<自然発症 2型糖尿病マウスにおける生活習慣病改善 >

[0177] [実施例 10〜12]

実験動物として、 5週齢の雄 KK— A^yマウス（日本クレア製 TaZjcl)を用いた。マ ウスは、個別のステンレスケージに入れて、室温 23± 5°C、湿度 40〜70%、明暗各 12時間 (照明午前 7時〜午後 7時)、換気 12回 Z時 (フィルターにより除菌した新鮮 空気）に維持された飼育室で動物を飼育した。 まず、 5日間の予備飼育を行い、予備飼育中は、粉末飼料 (CRF— 1 オリエンタル 酵母工業製)を給餌器に入れ、自由摂取させた。また、飲水として水道水を用い、飼 育期間中は自由摂取させた。

予備飼育の後、コンピューターを用いた無作為法により、各群の群分け前の血糖値 、体重がほぼ等しくなるように、 1群 10匹構成で群分けを行った。群分け後、粉末飼 料を標準食 (AIN— 93G オリエンタル酵母工業製）に代え、同様に飼育した。セロ オリゴ糖の添加効果は、上述の標準食中のショ糖を固定し、ショ糖以外の成分の内、 2. 5又は 5質量％を表 1に示す CE— 1A〜3Aの各セロオリゴ糖粉末に代えて比較し た。 30日飼育及び、 60日飼育の結果を表 2に示す。

[0178] [比較例 2、 3]

セロオリゴ糖として CE— 3A、 CE— 4Aを用いる以外は、実施例 10〜12と同じ条件 で飼育を行った。結果を表 2に示す。

[0179] [比較例 4]

コントロールとして、セロオリゴ糖を添加せず、標準食単独で飼育を行った。結果を 表 2に示す。摂餌量及び体重は、試験を通し、実施例と比較例で有意差はな力つた く飼料組成〉

カゼイン 20. 0質量⁰ /₀

L—システィン 0. 3質量⁰ /₀

コーンスターチ 39. 7質量％

α化コーンスターチ 13. 2質量％

ショ糖 10. 0質量％

大豆油 7. 0質量％

セルロースパウダー 5. 0質量⁰ /₀

ΑΙΝ— 93ミネラル混合 3. 5質量⁰ /₀

ΑΙΝ— 93ビタミン混合 1. 0質量⁰ /₀

重酒石酸コリン 0. 25質量％

第三ブチルヒドロキノン 0. 0014質量⁰ /₀ ※セロオリゴ糖添加系は、上述のショ糖量 10. 0質量％を固定し、その他の成分を 混合物として、飼料総量に対し、 5. 0質量％をおきかえた。

<試験項目及び方法 >

(体重測定）

群分け後 30日、 60日後において、各マウスの体重を測定した。

(摂餌量測定）

群分け後 8、 15、 30、 60日後に、各マウスのその日の摂餌量を測定した。

(採血及び血液分析）

群分け後、 15日、 30日、 60日後に、へノ リン処理したキヤピラリーを用いて、尾静 脈力も約 100 Lの血液を採血した。得られた血液は、遠心機（日立工機 (株)製 商 品名 CF8DL)で、 4°C、 1972G、 15分間の条件で遠心分離し、血漿について以下 の項目の測定を行った。

•血中アディポネクチン濃度（大塚製薬製 アディポ ELISAキットを使用）

'血漿中性脂肪 (和光純薬製 トリグリセライド Έ—テストヮコーを使用）

'血漿総コレステロール（和光純薬製 コレステロール E テストヮコーを使用）

(摘出器官についての測定）

投与 60日後に、塩酸ケタミン 50mgZkg及びキシラジン 2mgZkgの腹腔内投与麻 酔下で、肝臓及び副睾丸脂肪を摘出後、重量を測定し、液体窒素で凍結した。肝臓 内の脂質は、上記の肝臓カゝら脂質をへキサン抽出し、肝臓内の総コレステロール濃 度及び中性脂肪濃度を測定した。

[表 2]

※表中の *は、同一飼育期間における セロオリ 添 糸の、コント口一ルに る Sutudentの Τ に ける の 果を示す。

* :有意水準 10%で有意差あり。

**:有意水準 5%で有意差有り。

つた。それに対し、比較例 2、 3は血中アディポネクチン低下率、肝臓の中性脂肪濃 度低下率ともに、本発明の範囲になかった。

また、実施例 10〜12のセロオリゴ糖添加系は、比較例 4に対し、血漿、腹腔内脂質 において有意な低下を示した。実施例 10と実施例 11とを比較すると、飼料中のセロ オリゴ糖含量が増加すると、短期間で効果が発現し、長期投与では、絶対値が低下 した。実施例 11と 12の比較により、セロトリオース〜セ口へキサオースの含量が高い と、血中の効果発現は遅いが、肝臓脂質の低下が促進された。

また、比較例 2と、実施例 10〜12を比べると、飼料中のグルコース含量が多くとも、 副睾丸脂質の低下作用を有するが、血中脂質への効果発現が遅れ、肝臓脂質には 有意差はみられなかった。

さらに、比較例 3は、セロビオース含量が 70質量％未満であり、本発明の範囲にな い為、実施例及び比較例 2に対し、副睾丸脂質量、血中脂質への効果が小さくなつ た。

<健常ラットにおける生活習慣病改善 >

[実施例 13、 14]

実験動物として、 5週齢の雄 SDラット（日本クレア製)を用いた。ラットは、個別のス テンレスケージに入れて、室温 23± 5°C、湿度 40〜70%、明暗各 12時間（照明午 前 7時〜午後 7時)、換気 12回 Z時 (フィルタ一により除菌した新鮮空気）に維持され た飼育室で動物を飼育した。

まず、 5日間の予備飼育を行い、予備飼育中は、粉末飼料 (CRF— 1 オリエンタル 酵母工業製)を給餌器に入れ、自由摂取させた。また、飲水として水道水を用い、飼 育期間中は自由摂取させた。

予備飼育の後、コンピューターを用いた無作為法により、各群の群分け前の血糖値 、体重がほぼ等しくなるように、 1群 10匹構成で群分けを行った。群分け後も、粉末 飼料代えることなぐ同様に飼育した。

セロオリゴ糖は、上述の CE—1 Aを精製水に溶解又は懸濁し、 160、 1000mg/k gを、ゾンデを用いて、 1回 Z日、 13週間投与した。投与後、ペントバルビタール'ナト リウム 30mgZkgを腹腔内に投与して麻酔した後、後大静脈腹部より血液を 2. 0〜2 . 5mL採血し、 3. 8wZv%クェン酸ナトリウム 0. ImLを入れた試験管に血液 0. 9m Lを分注し、 1870Gで 15分間遠心分離した。遠心後の血漿を用い、上述と同様に、 血中アディポネクチン濃度、血漿及び肝臓内の中性脂肪濃度を測定した。

[比較例 5]

セロオリゴ糖を投与しない以外は、実施例 13、 14と同様の操作で、飼育し、血中ァ ディポネクチン濃度、血漿及び肝臓内の中性脂肪濃度を測定した。

摂餌量及び体重は、試験を通し、実施例と比較例で有意差はなかった。

[表 3]

※ 中の *は、同一飼 W 間における セロオリ：糖添加系の、

コントロールに対する Studentの T検定における有意差検定の結果を示す。

*:有意水準 10%で有意差有り。

**：有意水準 5%で有意差有り。

有意水準 1 %で有意差有り。 表 3より、実施例は、比較例に対し、アディポネクチン濃度低下率が 30%以下であ り、肝臓内中性脂肪濃度の低下率が 15%以上であり、本発明の範囲にあった。また 、セロオリゴ糖投与系は、用量依存的に、血中及び肝臓の脂質濃度が低下し、高用 量系では肝臓重量も、低減する傾向がある。この試験により、健常ラットにおいても、 セロオリゴ糖を摂取することで、摂餌量を変えずとも、血中及び肝臓内脂質濃度を低 減できた。

<腸内細菌叢の賦活 >

[製造例 7]

普通寒天培地にトリコデルマ リーセィ（Tricoderma reesei)を接種し、 37°Cで 7 日間培養後、その培地表面力 胞子を 1白金耳取り、ポリペプトン lg、酵母エキス 0. 5g、リン酸 1カリウム 2g、硫酸アンモ-ゥム 1. 5g、硫酸マグネシウム 0. 3g、塩化カル シゥム 0. 3g、トレースエレメント lmL (硼酸 6mg、モリブデン酸アンモ-ゥム 4水和物 26mg、塩化鉄（3) 6水和物10011^、硫酸銅 5水和物 40mg、硫酸マンガン 4水和物 8mg、硫酸亜鉛 7水和物 200mgを全量 lOOmLの精製水に溶解させたもの）、アデ 力ノール lmL、結晶セルロース（旭化成ケミカルズ製 商品名 PH— 101) 10gを全量 1Lの精製水に懸濁及び溶解させた培地に植菌し、 28°Cで 5日間通気攪拌培養した 。培養中は、水酸ィ匕ナトリウム水溶液を用いて、培地の _PHを 2. 8-4. 7となるように 調節した。培養後の液を遠心分離し、上清を目開き 0. 46 μ mの精密ろ過膜で除菌 し、ろ液を分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイクロ一 ザペンシル型モジュール ACP— 0013)で体積比で 10倍濃縮し粗酵素を得た。 次に、市販針葉樹由来の溶解パルプを使用し、加水分解条件を塩酸濃度 0. 4% 塩酸水溶液、 120°C、 1時間として、加水分解し、酸不溶性残渣を洗浄、ろ過し、ゥェ ットケークを得た。このウエットケークをセルロース 10%濃度の水分散体とし、超高性 能分散機 ·湿式微粉砕機 (ァシザヮ (株)製、商品名 パールミル RL φ lmmジルコ 二ァビーズ使用 充填率 80%)を使用し、圧密 ·摩砕処理を施し、セルロース微粒子 分散体を得た（平均重合度 220、ジェチルエーテル可溶物含有率 0. 7%、平均粒 子径 0. 7 m、コロイド状成分含有率 51. 5%)。

この摩砕セルロースが 2質量⁰ /₀、粗酵素をタンパク質濃度 0. 25%になるように 50 mM酢酸 酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 5)に懸濁溶解させ、全量 lOOOmLとし、ガ ラス製フラスコに仕込んだ。このガラス製フラスコを、 55°Cの水槽に仕込み、内部を攪 拌しながら 4時間反応させた。反応終了後、反応液を懸濁状態で 300 L分注し、限 外ろ過モジュール (分画分子量 10000)を使用し、酵素、未分解セルロースを取り除 いた後、高速液体クロマトグラフィーで糖濃度を分析した。該反応液の糖濃度は、セ 口トリオース〜セ口へキサオース 0. 2質量⁰ /₀、セロビオース 1. 5質量⁰ /₀、グルコース 0 . 3質量％であった。

該反応液を、分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイ クローザペンシル型モジュール ACP— 0013)でろ過し、得られたろ液を陽'陰ィォ ン交換樹脂で脱イオン処理し、 70°C、減圧下で蒸留し、 20倍の糖濃度の水溶液を 得た。

[0183] [製造例 8]

製造例 7で得られたセロオリゴ糖水溶液 lOOmLを、 200mLのガラス製フラスコに 導入し、攪拌しながら、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 5°Cまで冷却した。 25°Cで水 溶液中に晶出したセロオリゴ糖を、減圧ろ過し、 40°Cの通風式乾燥機で乾燥し、乳 鉢で粉砕後、 目開き 150 /z mの篩いで篩下し、篩下粉末を目開き 45 /z mの篩いで 微粉を除去し、セロオリゴ糖粉末 CE— 1Bを得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組 成を表 4に記す。

[0184] [製造例 9]

製造例 7で得られたセロオリゴ糖水溶液 lOOmLを、 200mLのガラス製フラスコに 導入し、攪拌しながら、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 5°Cまで冷却した後、エタノー ルを水に対し 70質量％となるよう、毎分 10gの速度で加え晶析した。水溶液中に晶 出したセロオリゴ糖を、製造例 8と同様に、減圧ろ過、乾燥、粉砕、篩下し、セロオリゴ 糖粉末 CE— 2Bを得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表 4に記す。

[0185] [製造例 10]

製造例 7の菌株を、セロビブリオ ギルバス（Cellovibrio gilvus)に代え、培養時 の pHを 4〜10に変更し、酵素反応時の緩衝液を pH6. 5のリン酸緩衝液に変更する 以外は、製造例 1と同様の方法でセロオリゴ糖水溶液を作成した。

得られたセロオリゴ糖水溶液を、活性炭を充填したカラムに通してセロビオースリツ チの画分を除去し、製造例 9と同様の操作でセロオリゴ糖粉末 CE— 3Bを得た。得た れたセ口オリゴ糖粉末の糖組成を表 4に記す。

[0186] [製造例 11]

製造例 7のセロオリゴ糖水溶液を一旦、製造例 2の方法で晶析し、得られたセロオリ ゴ糖を水溶液として、製造例 4に記す活性炭処理でセロトリオース以上の分子量画分 をカットした。製造例 9と同様の操作で粉末ィ匕し、セロオリゴ糖粉末 CE— 4Bを得た。

[0187] [製造例 12]

製造例 10の活性炭によるカラム分画において、グルコースリッチの画分を採取し、 60°Cの通気オーブン中で、 16時間乾燥し、製造例 8と同様の操作で粉末ィ匕し、セロ オリゴ糖粉末 CE— 5Bを得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表 4に記す。

[0188] [製造例 13]

製造例 10の活性炭によるカラム分画において、セロトリオース〜セ口へキサオースリ ツチの画分を採取し、 60°Cの通気オーブン中で、 16時間乾燥し、製造例 9と同様の 操作で粉末化し、セロオリゴ糖粉末 CE— 6Bを得た。得られたセロオリゴ糖粉末の糖 組成を表 4に記す。

[表 4]

※G1：グルコース、 CE2 :セロビォ一ス、 CE3 :セロトリオ一ス

CE4 :セロテトラオース、 CE5 :セロペンタオース、 CE6 :セ口へキサォ一ス

[0189] [実施例 15]

製造例 7〜： L0で得られた CE— 1B〜3Bを使用し、以下の方法で各菌株の資化テ ストを実施した。

Peptone - Yeast - Fildes solution (PYF 日本製薬製）培地に、本発明のセロ オリゴ糖を 1. 0質量％添カ卩した滅菌培地（pH7. 2) 1. 5mLを作成し、予め、 Fildes solution添カ卩 GAMブイヨン培地（日本製薬製 製品名 GAMブイヨンに Fildes s olutionO. 4体積％を添加）に、以下の各種菌株を前培養しておいた供試菌液 0. 0 3mLを接種し、 37°Cで 96時間嫌気培養した後、 pHを測定し資化性を判断する。該 pHが、 6. 0未満に下がっている状態で、該菌株がセロオリゴ糖を資化したと判断で きる。なお、 pHは低いほど、該菌株の増殖が進むことを意味する。結果を表 5に記す

[0190] [比較例 6]

セロオリゴ糖を CE— 4B〜6Bに代えて、実施例の方法と同様に、資化性の評価を 行った。

[0191] [参考例 1]

セロオリゴ糖の代わりに、ゲンチォオリゴ糖（日本食品化工製 商品名ゲントース 8 0P)、フラ外オリゴ糖 (明治製菓製 商品名メイオリゴ P)を用いて、実施例と同様に 評価した。

<使用した菌株 >

1) Biiidobactenum adlescentis

2) Biiidobactenum bindum

3) Biiidobactenum breve

4) Bifidobacterium infantis

5) Bifidobacterium longum

6) Lactobacillus acidophilus

Ϊ ) Lactobacillus casei

8) Lactobacillus salibarius

9) Lactobacillus gasseri

10) Lactobacillus fermentum

丄 1) Streptococcus pyogenes

12) Bacteroides destasonis

13) Bacteroides fragilis

14) Bacteroides ovatus ) Bacteroides thetaiotaomicron) Bacteroides vulfatus

) Bacteroides uniformis

) Bacteroides meraninogenicus) Fusobacterium varium

) Fusobacterium necrophorum

) Maegamonas hypermegas

) Mitsuokella multiacidus

) Eubacterium limosum

) Eubacterium aerofacience

) Eubacterium nitritogenes

) Eubacterium lentum

) Enterobacter aerogenes

) Enterococcus faecalis

) Clostridium butyricum

) Clostridium clostridiiforme

) Clostridium coccoides

) Clostridium difficile

) Clostridium perfringens

) Clostridium paraputrificum

) Clostridium ramosum

) Clostridium innocuum

) Clostridium sporogenes

) Propionibacterium acnes

) Peptostreptcoccus parvulus

) Peptostreptcoccus asaccharolyticus) Peptostreptcoccus magnus

) Peptostreptcoccus prevolli 43) Escherichia coli

44) Klebsiella pneumoniae

<評価基準 >

一： pHが 6.0以上

士： pHが 6.0未満〜 5. 5 + :pHが 5. 5未満〜 5.0 + + :pHが 5.0未満〜 4. 5 + + + :pHが 4. 5未満

[表 5]

菌名 実施例 比較例 参考例

CE-1 B CE-2B CE-3B CE-4B CE-5B CE-6B GO FO

Bifidobacterium adolescentis + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + bifidum ― ― ― 土 ― ― + + + ― breve + + + + + + + + + + + + + + + + + in antis ― ― ― 士 ― ― + + + + + + longum ― ― ― ± ― ― + + + + +

Lactobacillus acidophilus + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + casei + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + ― salibarius ― ― + + ― ― ― + + gasseri + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + fermntum ― ― ― ― ― ― ―

Streptococcus pyogenes 士 土 + 土 士 ―

Staphylogcoccus aureus ― ― ― ± ― +

Bateroides distasonis 士 ± ± +

liagilis ― ― 丄 + ― + + ovatus + + + + + + + + + + thetaiotaomicron 士 士 + + 士 + + + + vulgatus ― ― ― ― ― ― + + uniformis + + + + + + + +

Fsobacterium varium ― ― ― ± ― ― necrophorum ― ― ― ― ― ― ―

Megamonas hypermegas ― ― ― + ― ― + +

Mitsuokella multiacidus + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

Eubacterium limosum ― ― ― + ― ― ― aerofaciens 士 ± ;疆 + + + 土 ― ± nitritogenes + 士 士 + + ± ± ± lentum

Enterobacter aerogenes + + + + + + ―

Enterococcus faecalis + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

Clostridium butyricum + + + + + + + + + + + + + + + + clostridiiforme 士 土 ± 土 土 士 ― difficile ― ― ― - 一 ― ― perfringens ― ― ― + + + ± paraputrificum + + + + + + + + + + + + + ― ramosum + + + + + + + + ± innocuum + + + + + + 土 土 sporogenes ― ― ― ― ― ― ―

Propionibacterium acnes ― ― ― + ― ― ― ―

Peptostreptcoccus parvulus + + + + + + + + + + asaccharolyticus ― ― ― ― ― ― magnus ― ― ― ― ― ― ― prevolli 土 土 士 ― ± 土 土

Escharichia coli ― + + + ― 士 一

Klebsiella pneumoniae + + + + + + 土

※表中の GOはゲ チォォリゴ ¥、 FOはフラクトォリコ糖を表す。 表 5に示すように、セロビオース含量を高ぐグルコース濃度を低ぐセロトリオース 〜セ口へキサオース含量を適正範囲にすることで、ビフィズス菌、乳酸菌を選択賦活 し、 Clostridium perfringens^ Escharichia coliの増殖抑制にカロ 、 Bacteroid es iragilis、 Eubacterium aerofanciensの増 抑制でさた。

<ピロリ菌の抑制又は改善剤 >

[製造例 14] 普通寒天培地にトリコデルマ リーセィ（Tricoderma reesei)を接種し、 37°Cで 7 日間培養後、その培地表面力 胞子を 1白金耳取り、ポリペプトン lg、酵母エキス 0. 5g、リン酸 1カリウム 2g、硫酸アンモ-ゥム 1. 5g、硫酸マグネシウム 0. 3g、塩化カル シゥム 0. 3g、トレースエレメント lmL (硼酸 6mg、モリブデン酸アンモ-ゥム 4水和物 26mg、塩化鉄（3) 6水和物10011^、硫酸銅 5水和物 40mg、硫酸マンガン 4水和物 8mg、硫酸亜鉛 7水和物 200mgを全量 lOOmLの精製水に溶解させたもの）、アデ 力ノール lmL、結晶セルロース（旭化成ケミカルズ製 商品名 PH— 101) 10gを全量 1Lの精製水に懸濁及び溶解させた培地に植菌し、 28°Cで 5日間通気攪拌培養した 。培養中は、水酸ィ匕ナトリウム水溶液を用いて、培地の _PHを 2. 8-4. 7となるように 調節した。培養後の液を遠心分離し、上清を目開き 0. 46 μ mの精密ろ過膜で除菌 し、ろ液を分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイクロ一 ザペンシル型モジュール ACP— 0013)で体積比で 10倍濃縮し粗酵素を得た。 次に、市販針葉樹由来の溶解パルプを使用し、加水分解条件を塩酸濃度 0. 4% 塩酸水溶液、 120°C、 1時間として、加水分解し、酸不溶性残渣を洗浄、ろ過し、ゥェ ットケークを得た。このウエットケークをセルロース 10%濃度の水分散体とし、超高性 能分散機 ·湿式微粉砕機 (ァシザヮ (株)製、商品名 パールミル RL φ lmmジルコ 二ァビーズ使用 充填率 80%)を使用し、圧密 ·摩砕処理を施し、セルロース微粒子 分散体を得た（平均重合度 220、ジェチルエーテル可溶物含有率 0. 7%、平均粒 子径 0. 7 m、コロイド状成分含有率 51. 5%)。

この摩砕セルロースが 2質量⁰ /₀、粗酵素をタンパク質濃度 0. 25%になるように 50 mM酢酸 酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 5)に懸濁溶解させ、全量 lOOOmLとし、ガ ラス製フラスコに仕込んだ。このガラス製フラスコを、 55°Cの水槽に仕込み、内部を攪 拌しながら 4時間反応させた。反応終了後、反応液を懸濁状態で 300 L分注し、限 外ろ過モジュール (分画分子量 10000)を使用し、酵素、未分解セルロースを取り除 いた後、高速液体クロマトグラフィーで糖濃度を分析した。該反応液の糖濃度は、セ 口トリオース〜セ口へキサオース 0. 2質量⁰ /₀、セロビオース 1. 5質量⁰ /₀、グルコース 0 . 3質量％であった。

該反応液を、分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイ クローザペンシル型モジュール ACP— 0013)でろ過し、得られたろ液を陽'陰ィォ ン交換樹脂で脱イオン処理し、 70°C、減圧下で蒸留し、 20倍の糖濃度の水溶液を 得た。

[0194] [製造例 15]

製造例 14で得られたセロオリゴ糖水溶液 lOOmLを、 200mLのガラス製フラスコに 導入し、攪拌しながら、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 5°Cまで冷却した後、エタノー ルを水に対し 70質量％となるよう、毎分 10gの速度で加え晶析した。水溶液中に晶 出したセロオリゴ糖を、減圧ろ過、乾燥、粉砕、篩下し、セロオリゴ糖粉末 CE— 1Cを 得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成を表 6に記す。

[0195] [製造例 16]

製造例 14の菌株を、セロビブリオ ギルバス（Cellovibrio gilvus)に代え、培養時 の pHを 4〜10に変更し、酵素反応時の緩衝液を pH6. 5のリン酸緩衝液に変更する 以外は、製造例 14と同様の方法でセロオリゴ糖水溶液を作成した。

得られたセロオリゴ糖水溶液を、活性炭を充填したカラムに通してグルコースリッチ の画分を採取し、 60°Cの通気オーブン中で、 16時間乾燥し、製造例 2と同様の操作 で粉末化し、セロオリゴ糖粉末 CE— 2Cを得た。得たれたセロオリゴ糖粉末の糖組成 を表 6に記す。

[表 6]

糖組成 製造例 15 製造例 1 6

CE- 1 C CE- 2C

G 1含量 質量％ 1.8 26.2

C02含量 質量％ 96.5 71.2

C〇3〜

質量％ 1.7 2.6

C06含量

※表中の各表示は以下の糖質を示す。

G1 :グルコース、 C02 :セロビオース、 C03 :セロトリオース、 C04 :セロテトラオース、 C05 :セロペンタオース、 C06 :セ口へキサオース

[実施例 16]

セロオリゴ糖として CE— 1Cを用いて、以下の被検液を作製し、ピロリ菌の増加抑制 率を測定した。結果を表 7に示す。

<被検液 >

(0)セロオリゴ糖無添カ卩の 5%ゥマ血清カロ 1Ζ10加ブルセラブロス

(1) CE— 1Cを 2%溶解させた 5%ゥマ血清加 1Z10ブルセラブロス

(2) CE— 1Cを 5%溶解させた 5%ゥマ血清加 1Z 10ブルセラブロス

(3) CE— 1Cを 10 %溶解させた 5 %ゥマ血清加 1 Z 10ブルセラブロス

<培養方法 >

試験菌株（Helicobacter 'Pylori ATCC 43504)を羊血液寒天培地 K(BBL) を用いて、 35°C、 3日間微好気培養後、滅菌生理食塩液で McFarland No. 2 (約 10⁷〜： L0⁸CFU/mL)となるよう調製する。これを滅菌生理食塩液で 100倍希釈し、 添加用菌液とする。各被験液 9mLに添加用菌液を ImLカ卩え、 35°C、微好気条件下 で振盪培養し、これを検液とする。培養 72時間後に各検液を採取し、滅菌生理食塩 液で 10倍希釈系列液を作製する。原液及び各希釈系列液を 50 Lずつ羊血液寒 天培地 Kにコンラージ塗抹し、微好気条件下で 35°C、 4〜5日間培養する。なお、 0 時間後は被験液のみ定量を実施する。培養後発育した菌数を計測し、 ImL当たりの 生菌数を求める。増加抑制率は以下の式で求めた。

増加抑制率 (％) = (生菌数 2—生菌数 1)Z生菌数 2 X 100

[0197] [実施例 17]

実施例 16からセロオリゴ糖を CE— 2Cに代えて、被検液中のセロオリゴ糖の添加量 を 2%として、実施例 1と同様にピロリ菌の増加抑制率を求めた。結果を表 7に示す。

[0198] [比較例 7]

実施例 13から、セロオリゴ糖の代わりに、 D—グルコース (和光純薬製)を用いて、 被検液中の添加量を 2%として、実施例 13と同様に、ピロリ菌の増加抑制率を求めた 。結果を表 7に示す。

[表 7]

実施例 16、 17から、セロオリゴ糖にピロリ菌の抑制効果があった。さらに、実施例 1 6からは、セロオリゴ糖の添カ卩量が増えるほど、ピロリ菌の増加抑制率は向上し、ピロ リ菌の抑制効果が高 、ことが分力る。

また、実施例 17に対し、実施例 16は、セロビオース含量が高ぐセロトリオース〜セ 口へキサオース含量、及びグルコース含量低いが、同一添加量でピロリ菌の生菌数 が少なぐセロオリゴ糖中のセロビオース含量が高い程、抑制効果が高い。

さらに、比較例 7より、グルコースには、ピロリ菌の抑制効果はな力つた。

[実施例 18]

セロオリゴ糖として CE— 1Cを使用し、添加量を 5%、 10%として、実施例 16と同様 の操作で培養した。培養時間を 48〜96時間に振って、無添加と生菌数を比較した。 結果を図 1に示す。

<皮膚バリヤ機能改善剤 >

[製造例 17]

普通寒天培地にトリコデルマ リーセィ（Tricoderma reesei)を接種し、 37°Cで 7 日間培養後、その培地表面力 胞子を 1白金耳取り、ポリペプトン lg、酵母エキス 0. 5g、リン酸 1カリウム 2g、硫酸アンモ-ゥム 1. 5g、硫酸マグネシウム 0. 3g、塩化カル シゥム 0. 3g、トレースエレメント lmL (硼酸 6mg、モリブデン酸アンモ-ゥム 4水和物 26mg、塩化鉄（3) 6水和物10011^、硫酸銅 5水和物 40mg、硫酸マンガン 4水和物 8mg、硫酸亜鉛 7水和物 200mgを全量 lOOmLの精製水に溶解させたもの）、アデ 力ノール lmL、結晶セルロース（旭化成ケミカルズ製 商品名 PH— 101) 10gを全量 1Lの精製水に懸濁及び溶解させた培地に植菌し、 28°Cで 5日間通気攪拌培養した 。培養中は、水酸ィ匕ナトリウム水溶液を用いて、培地の _PHを 2. 8-4. 7となるように 調節した。培養後の液を遠心分離し、上清を目開き 0. 46 μ mの精密ろ過膜で除菌 し、ろ液を分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイクロ一 ザペンシル型モジュール ACP— 0013)で体積比で 10倍濃縮し粗酵素を得た。 次に、市販針葉樹由来の溶解パルプを使用し、加水分解条件を塩酸濃度 0. 4% 塩酸水溶液、 120°C、 1時間として、加水分解し、酸不溶性残渣を洗浄、ろ過し、ゥェ ットケークを得た。このウエットケークをセルロース 10%濃度の水分散体とし、超高性 能分散機 ·湿式微粉砕機 (ァシザヮ (株)製、商品名 パールミル RL φ lmmジルコ 二ァビーズ使用 充填率 80%)を使用し、圧密 ·摩砕処理を施し、セルロース微粒子 分散体を得た（平均重合度 220、ジェチルエーテル可溶物含有率 0. 7%、平均粒 子径 0. 7 m、コロイド状成分含有率 51. 5%)。

この摩砕セルロースが 2質量⁰ /₀、粗酵素をタンパク質濃度 0. 25%になるように 50 mM酢酸 酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 5)に懸濁溶解させ、全量 lOOOmLとし、ガ ラス製フラスコに仕込んだ。このガラス製フラスコを、 55°Cの水槽に仕込み、内部を攪 拌しながら 4時間反応させた。反応終了後、反応液を懸濁状態で 300 L分注し、限 外ろ過モジュール (分画分子量 10000)を使用し、酵素、未分解セルロースを取り除 いた後、高速液体クロマトグラフィーで糖濃度を分析した。該反応液の糖濃度は、セ 口トリオース〜セ口へキサオース 0. 2質量⁰ /₀、セロビオース 1. 5質量⁰ /₀、グルコース 0 . 3質量％であった。

該反応液を、分画分子量 13000の限外ろ過膜 (旭化成ケミカルズ製 商品名マイ クローザペンシル型モジュール ACP— 0013)でろ過し、得られたろ液を陽'陰ィォ ン交換樹脂で脱イオン処理し、 70°C、減圧下で蒸留し、 20倍の糖濃度の水溶液を 得た。

[0201] [製造例 18]

製造例 17で得られたセロオリゴ糖水溶液 lOOmLを、 200mLのガラス製フラスコに 導入し、攪拌しながら、毎時 10°Cの速度で、 70°Cから 5°Cまで冷却した後、エタノー ルを水に対し 60質量％となるよう、毎分 10gの速度で加え晶析した。水溶液中に晶 出したセロオリゴ糖を、製造例 2と同様に、減圧ろ過、乾燥、粉砕、篩下し、セロオリゴ 糖粉末 CE— 1Dを得た。 CE— 1Dの糖組成は、セロビオース含有率が 94. 9質量⁰ /₀ 、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セ口へキサオースを併せた含 有率が 2. 6質量％、グルコース含有率が 2. 5質量％であった。

[0202] [製造例 19]

製造例 18で得られた CE— 1Dを、固形分 25質量％の水溶液として、製造例 18の セロオリゴ糖水溶液の代わりに用い、製造例 18と同様の操作を繰り返し、 CE— 2Dを 得た。 CE— 2Dの糖組成は、セロビオース含有率が 96. 3質量⁰ /₀、セロトリオース、セ ロテトラオース、セロペンタオース、セ口へキサオースを併せた含有率が 1. 7質量⁰ /₀、 グルコース含有率が 2. 0質量％であった。

[0203] [製造例 20]

製造例 18で得られた CE— 1Dを、固形分 25質量％の水溶液として、製造例 18の セロオリゴ糖水溶液の代わりに用い、製造例 18と同様の操作を繰り返し、 CE— 3Dを 得た。 CE— 3Dの糖組成は、セロビオース含有率が 99. 1質量⁰ /。、セロトリオース、セ ロテトラオース、セロペンタオース、セ口へキサオースを併せた含有率が 0. 9質量⁰ /₀ であった。 CE— 3Dに、市販のグルコース（和光純薬製 特級を粉砕したもの）を CE — 3Dに対し 2. 0質量％分追カ卩し、 CE— 4Dを得た。 [0204] [製造例 21]

CE— IDに、市販のグルコース（和光純薬製 特級を粉砕したもの）を、セロビオー ス、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セ口へキサオースの総量に 対し 11. 5質量％となるよう追カ卩し、 CE— 5Dを得た。

[0205] [製造例 22]

製造例 17の菌株を、セロビブリオ ギルバス（Cellovibrio gilvus)に代え、培養時 の pHを調整せず、酵素反応時の緩衝液を pH6. 5のリン酸緩衝液に変更する以外 は、製造例 17と同様の方法でセロオリゴ糖水溶液を作成した。

得られたセロオリゴ糖水溶液を、活性炭を充填したカラムに通してセロビオースリツ チの画分を除去し、製造例 18と同様の操作でセロオリゴ糖粉末 CE— 6Dを得た。 C E— 6Dの糖糸且成は、セロビオース含有率が 74. 5質量⁰ /₀、セロトリオース、セロテトラ オース、セロペンタオース、セ口へキサオースを併せた含有率が 21. 8質量％、グル コース含有率が 3. 7質量％であった。

[0206] [実施例 19〜23]

製造例 17〜22で得られた CE—1D、 2D、 4D、 5D、 6Dを用い、セロオリゴ糖水溶 液として表 1に示す組成の水溶液を用いて以下の試験を行った。

男性 3名、女性 2名（平均年齢 36歳)の被験者による経皮水分蒸散量回復試験を 行った。まず、各被験者が、前腕内側 (被検部位)を 70%エタノールでふき取った後 、恒温恒湿室（室温 22°C、湿度 45%)で 15分間馴化した後、被検部位を 2チャンネ ル水分蒸散モニター（アサヒバイオメッド社製 TW— AS型)で 3回測定し、その平均 値で初期 TEWL値 (TEWL0)を求めた。次に、初期 TEWLの測定後、被検部位を 水洗し、フィンチャンバ一（Epitest社製）を用いて、 2質量％のドデシル硫酸ナトリウ ム（SDS)を被検部位に閉塞貼付塗布し、水洗後、上述と同様に TEWL (TEWL荒 れ肌)を測定した。さら〖こ、同部位に、精製水又は本発明のセロオリゴ糖水溶液を塗 布し、塗布の 2時間後に、同部位を上述の方法で TEWL (TEWL2)を測定した。荒 れ肌を 100とした TEWL相対値を、以下の式（1)で求めた。また、上記の TEWL相 対値に基づき、経皮水分蒸散量の回復率を以下の式 (2)により求めた。得られた結 果は表 8に示す。 [数 1]

^_Ia ^ _f 、 水の相対蒸敢量ーセロオリゴ糖の相対蒸散量 ― _f 、 回復促進率 (％) = X ι οο(%)

水の相対蒸散量

[0207] [比較例 8]

セロオリゴ糖水溶液の代わりに、糖を添加しない精製水を使用し、実施例 19 23と 同様に評価した。結果を表 8に示す。

[0208] [比較例 9]

セロオリゴ糖水溶液の代わりに、ラフイノース (旭化成ケミカルズ製 オリゴ GGF)を 用い、結晶水を省いた糖質が固形分 5%となるよう水溶液を使用し、実施例 19 23 と同様に評価した。結果を表 1に示す。

表 8の結果より、本発明のセロオリゴ糖を用いることで、 TEWLの相対値が低減し、 経皮水分蒸散量の回復促進率が高くなり、皮膚のバリヤ機能が改善していることが 分かる。

また、ラフイノースは、精製水に対し TEWL相対値が悪ぐ回復率はマイナスを示し た。

[表 8]

[実施例 24〜26、比較例 10〜13]

実施例 24〜26、比較例 10、 11は、セロオリゴ糖及びグルコースを表 9に示す処方 で水溶液 (全糖濃度 5質量％)とし、「ベたつき」、「滑り（なめらかさ）」、及び褐変性を 評価した。比較例 12は、 5質量％のワセリン水溶液を作成し、比較例 13は、 5質量％ のラフイノース水溶液を作成し、上述と同様に評価した。（尚、比較例 12について、実 施例 19〜23と同様に測定した TEWL相対値は、 26. 4%であった。比較例 13の TE WL相対値は、 42. 1%であった。 )

<評価方法 >

実施例及び比較例で得たサンプルについて、 1)ベたつき、 2)滑り及び 3)褐変性 についての評価を行った。なお、 1)ベたつき及び 2)滑りについては、年齢 24〜55 歳の健常者 (男 6名、女 6名）に、実施例 24〜26、比較例 10〜 13の水溶液及び水を 内腕部に塗布し、以下の評価基準でアンケートをとつた。

1)「ベたつき」の評価方法

(ベたつき）

1点：ベたつく

2点：ややべたつく

3点、：どちらともいえない

4点：ややべたつかない

5点：ベたつかない

※判断基準は全て水に対してのものである。

2)滑り（なめらかさ）の評価方法

1点：悪い

2点：やや悪い

3点、：どちらともいえない

4点：やや良い

5点：良い

• 判断基準は全て水に対してのものである。

3)褐変性の評価方法 表 3の実施例 24〜26、比較例 12、 13の糖組成で全糖濃度が 10質量％であり、さ らにグリシンを 0. 5質量％含み、 pHが 7になるよう Mclvine水溶液を作成した。作成 した各水溶液を 100°Cで 1時間加熱し、 20°Cに冷却後、 λ =480nmの吸光度を測 £した。

[表 9]

評価基準

* 1：アンケートの結果、評価平均が 3. 5以上のものを〇とし、 3. 5未満を Xとした。

* 2 :アンケートの結果、評価平均が 4. 0以上を◎にした以外は、 * 1と同様に評価した。

* 3 :褐変試験の結果、吸光度が 0. 40以下のものを〇。0. 40を越えるものを Xとした。

表 9より、実施例 24〜26を比較すると、セロオリゴ糖中のセロビオース含量が高い ほど「滑り（なめら力さ）」が良くなつた。また、実施例と比較例 11を比較するとセロオリ ゴ糖中のセロトリオース〜セ口へキサオースの高分子量成分が増加すると、「滑り（な めらかさ）」が悪ィ匕した。褐変性については、実施例と比較例 10を比較すると、評価 サンプルの吸光度が顕著に増加し、溶液の変色は増した。尚、今回の評価系では、 グルコース量に関わらず、「ベたつき」に変化はな力つた。

実施例と比較例を比較すると、ワセリンは、 TEWL相対値がセロオリゴ糖並であるが 、「ベたつき」、「なめらかさ」等の感触が悪ぐ比較例 13では、ラフイノースは単独で は、 TEWL相対値、感触がいずれも、セロオリゴ糖に至らない結果を示した。

[0211] [処方例 1]

ビューティースキンローションの処方例を以下の表 10に記す。

[表 10]

※ にて 100 る。

[0212] [処方例 2]

ホワイトスキンローションの処方例を以下の表 11に記す,

[表 11]

[0213] [処方例 3]

スキンローションジエルの処方例を以下の表 12に記す, [表 12]

※ にて 量を 100と る。

[0214] [処方例 4]

ボディフレッシュローションの処方例を以下の表 13に記す, [表 13] No 成分 配合量％

1 セロオリゴ糖 0.1—40

2 ァミノコート （旭化成ケミカルズ製） 3.0

3 グリチルリチン酸ジカリゥム 0.1

4 1 , 3—ブチレングリコール 1.0

5ポリエチレングリコール ' 6000 2.0

6ポリオキシエチレンメチルダルコシド · 10 EO 1.0

7ポリオキシエチレンセチルエーテル · 30 EO 0.3

8ローズマリーエキス 3.0

9エタノーレ 95% (v/v) 23.0

10香料 (スキンケア用） 適直

11防腐剤 適量

※； にて全量を looとする。 なお、上述の処方例 1〜4のセロオリゴ糖は、上述の処方を作成するときに同時に 添加してもよぐセロオリゴ糖以外の成分を混和後、セロオリゴ糖を添加してもよく。セ 口オリゴ糖分散体に、その他成分を添加してもよい。また、感触改善、保湿性改善等 の目的で、必要に応じ上述の少糖類を添加してもよい。

<皮膚常在菌叢の改善剤 >

1)表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌についての試験

(菌数変化の測定方法）

表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis :スタフイロコッカス'ェピデミデス 菌）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus :スタフイロコッカス'ァウレウス菌） 及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモナス ·ァエルギノーザ菌）は、 下記の方法で、その数を測定した。

まず、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis：スタフイロコッカス ·ェピデ ミデス菌）や黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus :スタフイロコッカス · ,ウレゥ ス菌）及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモナス ·ァエルギノーザ菌 )をそれぞれ、普通ブイヨン培地で 35°C24時間培養し、滅菌蒸留水で 10⁷ZmL程 度になるように希釈し、添加用菌液とする。糖類等の供試物質を、一定濃度 (例えば 1. 0%、0. 3%、0. 1%)になるように滅菌蒸留水で希釈して、それぞれの希釈液 9 mLに、添加用菌液 lmLを加えて攪拌する。この検液を卵黄加マンニット食塩寒天 培地に滴下し、 35°Cで 48時間培養後、菌数を測定する (初期値)。

また、検液を 35°Cに保持し、作成から 1日後及び 2日後に同様の操作を行って、菌 数測定に供した。

ブランクとして、滅菌蒸留水を用いて上記と同じ操作を行う。

ブランクとしての菌数測定値と、糖類等の供試物質を含有した検液の菌数測定値 を比較して、糖類の表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis：スタフイロコッ カス ·ェピデミデス菌）や黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus：スタノイロコッ カス ·ァゥレウス菌）及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモナス ·ァェ ルギノーザ菌）に静菌効果ゃ菌増殖効果と比較評価した。

[0216] [実施例 27〜32]

実施例として供試したサンプルの糖類組成、糖濃度を表 14に示す。

これらのサンプルを用いて表皮ブドウ球菌及び黄色ブドウ球菌にっ 、て試験した結 果を表 15に示す。

[0217] [比較例 14〜16]

実施例 27〜32と同様の試験方法で、化粧品原料として使用されるマルチトール（ 和光純薬 (株)製試薬特級)の糖濃度を、 0. 1%、 0. 3%、 1. 0%として供試したサン プルを、順に比較例 14、 15、 16とした。これらのサンプルを用いて同様に試験した 結果を表 15に示す。

[0218] [比較例 17〜19]

実施例 27〜32と同様の試験方法で、化粧品原料として使用されるラフイノース (和 光純薬 (株)製試薬特級)の糖濃度を、 0. 1%、 0. 3%、 1. 0%として供試したサンプ ルを、順に比較例 17, 18, 19とした。これらのサンプルを用いて同様に試験した結 果を表 15に示す。

[0219] [比較例 20〜22]

実施例 27〜32と同様の試験方法で、イソマルトオリゴ糖 (和光純薬 (株)製試薬特 級）の糖濃度を、 0. 1%、 0. 3%、 1. 0%として供試したサンプルを、順に比較例 20 , 21, 22とした。これらのサンプルを用いて同様に試験した結果を表 15に示す。 [0220] [比較例 23〜25]

実施例 27〜32と同様の試験方法で、グルコース (和光純薬 (株)製試薬特級)の糖 濃度を、 0. 1%、 0. 3%、 1. 0%として供試したサンプルを、順に比較例 23, 24, 25 とした。これらのサンプルを用 、て同様に試験した結果を表 15に示す。

[0221] [比較例 26〜28]

実施例 27〜32と同様の試験方法で、マルトース (和光純薬 (株)製試薬特級)の糖 濃度を、 0. 1%、 0. 3%、 1. 0%として供試したサンプルを、順に比較例 26, 27, 28 とした。これらのサンプルを用 、て同様に試験した結果を表 15に示す。

[表 14]

SS0222I

表皮ブドウ球菌の 黄色ブドウ球菌の

菌数変化

糖種類 全糖濃度 菌数変化

初期値 2曰 初期値 2曰 ブランク ― 一 + + + + + + + + + + + + 実施例 27 ク"ルコース 0.1 % + + + + + + + + + + +

/3 1.4結合

実施例 28 糖類 0.3% + + + + + + + + + - セロヒ 'オース

実施例 29 97.3% 1.0% + + + + + + + + + - 実施例 30 ゲルコ-ス 0.1% + + + + + + + + + + +

1 ,4結合

実施例 31 糖類 0.3% + + + + + + + + + 一

セロヒ "オース

実施例 3,2 65.5% 1.0% + + + + + + + + + - 比較例 1 4 0.1% + + + + + + + + + + + + 比較例 1 5 マルチトール 0.3% + + + + + + + + + + + + 比較例 1 6 1.0% + + + + + + + + + + + + + 比較例 1 7 0.1 % + + + + + + + + + + + + 比較例 1 8 ラフィノース 0.3% + + + + + + + + + + + + 比較例 1 9 1.0% + + + + + + + + + + + + 比較例 20 0.1% + + + + + + + + + + + + 比較例 21 イソマルトォリコ'糖 0.3% + + + + + + + + + + 比較例 22 1.0% + + + + + + + + + + 比較例 23 0.1 % + + + + + + + + + + + + 比較例 24 ゲルコ―ス 0.3% + + + + + + + + + + + + 比較例 25 1.0% + + + + + + + + + + + + 比較例 26 0.1% + + + + + + + + + + + + 比較例 27 マルトース 0.3% + + + + + + + + + + + + 比較例 28 1.0% + + + + + + + + + + + + 実施例 27〜32の結果より、複数のグルコースが Β 1—4ダルコシド結合した水溶性 糖類を含有する濃度が高いほど、有害菌である黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus :スタフイロコッカス'ァウレウス菌）に対しては静菌作用又は増殖抑制作用を 示すことがわかる。また、皮膚有益菌である表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epid ermidis :スタフイロコッカス'ェピデミデス菌）に対しては、静菌作用を示さないで、菌 数を維持して ヽることがわかる。

比較例 14〜20及び 23〜28では、皮膚有益菌である表皮ブドウ球菌（Staphyloc occus epidermidis :スタフイロコッカス'ェピデミデス菌）に対しても、有害菌である 黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus：スタフイロコッカス'ァウレウス菌）に対し ても静菌作用を示さない。

比較例 21〜22では、皮膚有益菌である表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epid ermidis :スタフイロコッカス.ェピデミデス菌）に対しても、有害菌である黄色ブドウ球 菌（Staphylococcus aureus :スタフイロコッカス 'ァウレウス菌）に対しても、静菌作 用又は増殖抑制作用を示している。

2)緑膿菌についての試験

次に、実施例 28, 29, 31, 32と比較例 15, 16で用いたサンプノレについて緑膿菌 に対する効果を試験した。表 16に、その試験結果を示す。実施例 28, 29, 31, 32よ り、複数のグルコースが j8 1— 4ダルコシド結合した水溶性糖類を含有する濃度が高 V、ほど、有害菌である緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモナス ·ァエル ギノーザ菌）に対しては、静菌作用又は増殖抑制作用を示す。

比較例 15, 16では、有害菌である緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa ;シユード モナス 'ァエルギノーザ菌）に対しては、静菌作用又は増殖抑制作用を示さない。

[表 16]

<髪の感触につ 、ての試験 >

次に、本発明の改善剤を髪の毛につけて乾かした後の感触 (さっぱり感及び滑り感

)を評価するために、上記実施例 28、 31及び比較例 15、 18、 24のサンプルについ て試験を行った。試験方法は次の通りである。

また、評価結果を表 17に示す。

(試験方法）

年齢 28〜50歳の健常者 (男 4名、女 3名）で、上記サンプルの水溶液 3mLと蒸留 水 3mLを髪の毛にまんべんなくつけて、乾力した後の感触を評価した。サンプルと蒸 留水は、ハーフヘッド法で評価し、試験者には前もって、試験液の内容を明らかにし なかった。また、以下の評価基準でアンケートをとつた。

(さっぱり感）

1点：さっぱり感がない

2点：ややさっぱり感がない

3点：どちらともいえない

4点：ややさっぱり感がある

5点：さっぱり感がある

※判断基準は全て蒸留水に対してのものである。

(滑り感）

1点：悪い

2点：やや悪い

3点：どちらともいえない

4点：やや良い

5点：良い

※判断基準は全て蒸留水に対してのものである。

[表 17] 乾いた髪の 乾いた髪の

さっぱり感 滑リ感 ゲルコ-ス 1 -4結合糖類

実施例 28

(セロヒ'才一ス 97. 3%) ◎ ©

ク'ルコ—ス 1 -4結合糖類

実施例 31 〇

(セロヒ'才一ス 65. 5%) ◎

比較例 1 5 マルチ! ル 〇 〇 比較例 1 8 ラフイノ一ス Δ 〇 比較例 24 グルコース X △

◎: 評価平均 4. 0以上 〇： 評価平均 3. 5以上

△: 評価平均 3. 5未満 X： 評価平均 2. 0未満 表 17より、複数のグルコースが 13 1—4結合した水溶性糖類を含有する試験液が、 乾いた時の髪感触としてさっぱり感ゃ滑り感を付与することができることが判った。ま た、実施例 28と 31を比較すると、セロオリゴ糖中のセロビオース含量が高いほど、さ つばり感が良くなることが判った。

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[0226] [実施例 33]

セロオリゴ糖として CE— 1Cを使用し、以下の処方 Αにより酸性スポーツ飲料を作製 した。作製方法は、処方 Aの原料を予め、混合し、水に溶解させ、オートクレープで 1 21°C、 20分加熱殺菌し、試作した (pHは 3. 2)。殺菌前後で、セロオリゴ濃度を測定 したところ、セロオリゴ糖の残存率は 99%であった。

<処方 A：酸性スポーツ飲料 >

1)ショ糖 4. 0質量％

2)クェン酸（水和物） 0. 1質量％

3)ァスコルビン酸 0. 1質量⁰ /₀

4)グレープフルーツストレート果汁 1. 0質量⁰ /₀

5)セロオリゴ糖 CE—1 10. 0質量⁰ /₀

6)水 83. 8質量％

[0227] [実施例 34]

セロオリゴ糖として CE— 1を使用し、以下の処方 Bによりオレンジジュースを作製し た。作製方法は、処方 Bの原料を予め混合し、水に溶解させ、オートクレープで 121 °C、 20分加熱殺菌し、試作した (pHは 3. 2)。殺菌前後で、セロオリゴ濃度を測定し たところ、セロオリゴ糖の残存率は 99%であった。

<処方 B：オレンジジュース >

1)ショ糖 7. 5質量％

2)クェン酸（水和物） 0. 1質量％

4)オレンジ 4倍濃縮果汁 5. 0質量％

5)セロオリゴ糖 CE—1 10. 0質量⁰ /₀

6)水 76. 9質量％

[0228] [実施例 35]

実施例 34で得たオレンジジュース 98部に、市販のゼラチン 2. 0部を加え、 90°Cで 攪拌しながら溶解した。溶解後、 lOOmLのプラスチック容器に封入し、 5°Cで 18時間 保存し、セロオリゴ糖配合ゼリーを作製した。セロオリゴ糖は均一に分散され、この操 作後も 99%以上残存していた。

[0229] [実施例 36]

実施例 35の方法において、ゼラチンを、市販の寒天に代えて、セロオリゴ糖配合寒 天を作製した。セロオリゴ糖は均一に分散され、この操作後も 99%以上残存していた

[0230] [実施例 37]

セロオリゴ糖として CE— 1Cを使用し、以下の処方 Cで、焼き菓子を試作した。 <処方 C :焼き菓子 >

1)小麦粉 50. 8質量部

2)炭酸水素ナトリウム 0. 93質量部

3)マーガリン 23. 1質量部

4)砂糖 10. 4質量部

5)食塩 0. 46質量部

6)全卵 4. 63質量部

7)セロオリゴ糖 5. 0質量部

8)水 4. 63質量部 試作方法は、マーガリン、全卵、水を除ぐ粉末成分をポリ袋中に秤量し、 3分間混 合した。混合粉末に、マーガリン、全卵、水を加え、プラネタリーミキサーに導入した。 プラネタリーミキサーで、フック翼を使用し、 126RPMで、 2分間、混練した。

混連で得られたドウを、 lOOmLのポリ容器に入れ、 5°Cで 2日間保存した。 2日後に 、ドウを観察したところ、常温にて、油分の染みだしがな力つた。また、レオメータ (フド 一製)で測定したドウの押し込み荷重は、 1. 2kgZcm²であり、引っ張り荷重は、 0. 3 lkg/cm² ( ヽずれも 11数= 10の平均値）であった。

上記のドウを、 3cm X l. 5cmX l . 5cm (底面積 =4. 5cm²)の直方体状に成型し 、オーブン中 160°Cで、 20分間加熱した。加熱後もセロオリゴ糖は、 60%以上残存 していた。また、加熱後の、底面積膨張率は 50%未満であり、変形は小さかった (い ずれも n数 = 10の平均値)。

[0231] [比較例 29]

実施例 37の処方 Cのセロオリゴ糖をショ糖に代えて、実施例 37と同様に焼き菓子 を作製した。実施例 37と同様にドウを観察した結果、表面に油分の染みだしが見ら れた。また、ドウの押し込み荷重は、 0. 8kgZcm²であり、引っ張り荷重は、 0. 24kg Zcm²であった。この無添加系は、油分の染みだしが抑制されず、ドウの押し込み、 引っ張り荷重も小さかった。

さらに、実施例 37と同様に成型した後、オーブンで加熱した。加熱後の焼き菓子の 底面積膨張率は、 50%以上であり、セロオリゴ糖添加系に対し、加熱による変形は 大きかった。

産業上の利用可能性

[0232] 本発明のセロオリゴ糖組成物、又は本発明のセロオリゴ糖粉末含有組成物は、粉 体流動性、均一分散性に加え、油分保持性に優れ、吸湿し難ぐ圧縮成形性、耐熱 耐酸性、澱粉の老化防止性、蛋白質の変性防止性等の取り扱い性に優れるため、 食品、化粧品、医薬品、医薬部外品分野において、高流動性セロオリゴ糖粉末とし て利用できる。また、それを含有することで、セロオリゴ糖の凝集がなぐ分散度が改 善され、圧縮成形性、耐熱耐酸性に優れ、澱粉の老化、蛋白質の変性が防止された 食品 Z化粧品 Z医薬品 Z医薬部外品として利用できる。 本発明のセロオリゴ糖組成物は、食品、医薬品分野の内用剤においては、糖組成 を制御することで、血中アディポネクチン濃度の低下が抑制され、経口摂取により、 肝臓内の中性脂肪、総コレステロール濃度を低下させるため、生活習慣病の予防又 は改善剤として利用できる。

本発明のセロオリゴ糖組成物は、腸内の有害細菌に資化されず、選択的に有用細 菌を賦活するため、腸内細菌賦活剤として利用できる。

本発明のピロリ菌の増殖を抑制又は静菌するため、ピロリ菌の増殖抑制剤又は静 菌剤として利用できる。

特に、化粧品、医薬品、医薬部外品分野においては、本発明のセロオリゴ糖組成 物は、保湿効果が優れ、荒れ肌、敏感肌、乾燥肌等のダメージ肌を改善する外用剤 において、経皮水分蒸散量の回復を促し、かつ使用感が良好で、取り扱い性が優れ る皮膚バリヤ機能改善剤、又は、表皮の有害細菌に資化されず、選択的に有用細菌 を賦活する皮膚常在菌叢改善剤として利用できる。

図面の簡単な説明

[図 1]実施例 18においてセロオリゴ糖を添加した場合と無添加の場合とで培養時間と 生菌数との関係を比較したグラフ。

Claims

請求の範囲

[I] セロビオースと、セロトリ才ース、セロテトラオース、セロペンタオース、及びセ口へキ サオース力もなる群力 選ばれる 1種以上とからなるセロオリゴ糖を主成分とし、平均 LZDが 3. 0以下、嵩密度が 0. 80gZmL以下、安息角が 60° 以下の粉末であるセ 口オリゴ糖組成物。

[2] 平均 LZDが 2. 5以下、嵩密度が 0. 55gZmL以下である、請求項 1に記載のセロ オリゴ糖組成物。

[3] 安息角が 45° 以下である、請求項 1又は 2に記載のセロオリゴ糖組成物。

[4] 油分保持量が 0. 9gZg以上である、請求項 1〜3のいずれか一項に記載のセロォ リゴ糖組成物。

[5] 相対湿度 75%、 40°Cの環境下で、 18時間放置された際の、吸湿度が 1質量％以 下である、請求項 1〜4の 、ずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物。

[6] 200mgを、 8. Ommの円形平面臼杵により、 10kNで圧縮した成型体硬度が、 6

ON以上である、請求項 1〜5のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物。

[7] 100°C以上、 pH7以下、 10分以上加熱処理された後、セロオリゴ糖残存率が 90% 以上である、請求項 1〜6のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物。

[8] セロビオース含量が 70質量％以上であり、セロトリオース、セロテトラオース、セロぺ ンタオース、及びセ口へキサオース力もなる群力も選ばれる 1種以上が 0〜30質量⁰ /₀ である、請求項 1〜7のいずれかに記載のセロオリゴ糖組成物。

[9] セロオリゴ糖に対し、グルコースを 9質量 %以下含む、請求項 8に記載のセロオリゴ糖 組成物。

[10] セロビオース含量が 90質量⁰ /₀以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタォ ース、及びセ口へキサオース力 なる群力 選ばれる 1種以上が 0. 1〜10質量％、グ ルコース含量が 3. 5質量％以下である、請求項 8又は 9に記載のセロオリゴ糖組成 物。

[II] セロビオース含量が 95質量⁰ /₀以上、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタォ ース、及びセ口へキサオース力 なる群力 選ばれる 1種以上が 0. 5〜5質量％、グ ルコース含量が 3. 5質量％以下である、請求項 10に記載のセロオリゴ糖組成物。

[12] グルコースが 2質量 %以下である、請求項 11に記載のセロオリゴ糖組成物。

[13] セロビオース含量が 50質量⁰ /₀以上であり、セロトリオース、セロテトラオース、セロぺ ンタオース、及びセ口へキサオースからなる群から選ばれる 1種以上が 0〜50質量％ であるセロオリゴ糖を、水又は水/有機溶剤の混合液に、分散又は溶解されている セロオリゴ糖組成物。

[14] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、経口摂取による血中アディポネクチン濃度の低下率が 30%以下に抑制された、 生活習慣病の予防剤又は改善剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

[15] 前記セロオリゴ糖組成物が、経口摂取による肝臓内の中性脂肪濃度の低下率が 1 5%以上である、請求項 14に記載のセロオリゴ糖含有組成物。

[16] 前記セロオリゴ糖組成物力 経口摂取による血中アディポネクチン濃度の低下率が 25%以下に抑制された、請求項 14又は 15に記載のセロオリゴ糖含有組成物。

[17] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、腸内有用細菌に資化され、腸内有害細菌に資化されない腸内細菌叢の賦活性 を有し、腸内有用細菌として、ビフイドバタテリゥム ァドレセンティス（Bifidobacteriu m Adolescentis)、ビフィドノくクテリゥム ブレーべ（Bifidobacterium Breve)、ラ タトバチルス ァシドフィルス（Lactobacillus Acidophilus)、ラタトバチルス カゼィ (Lactobacillus Casei)、及びラクトノくチノレス ガセリ (Lactobacillus Gasseri)力 らなる群力も選ばれる 1種以上を増カロさせ、腸内有害細菌として、パクテロイデス フ ラジリス（Bacteroides Fragilis)又はユーバタテリゥム ァエロファシエンス（Eubac terium Aerofaciens)の増加を抑制する腸内細菌叢賦活剤として用いるためのセ 口オリゴ糖含有組成物。

[18] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、腸内有用細菌に資化され、腸内有害細菌に資化されない腸内細菌叢の賦活性 を有し腸内有害細菌として、クロストリジゥム パーフリンジエンス（Clostridium perf ringens)の増加を抑制する腸内細菌叢賦活剤として用いるためのセロオリゴ糖含有 組成物。

[19] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、へリコパクター ピロリ（Helicobacter Pylori)の増加抑制率が 1%以上である、 ピロリ菌増加抑制剤又は静菌剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

[20] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、カルシウムと経口摂取することで、大腿骨中のカルシウム濃度増加率が 5%以上 である、骨中カルシウム濃度増強剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

[21] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、皮膚への塗布による経皮水分蒸散量の回復促進率が 10%以上である、皮膚バリ ャ機能改善剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

[22] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、該有効成分が、表皮ブドウ球菌（Stapylococcus epidermidis :スタフイロコッカ ス ·ェピデミデス菌）を静菌せず、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus：スタフ イロコッカス .ァゥレウス菌）、及び緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa；シユードモ ナス'ァエルギノーザ菌）を静菌する皮膚常在菌叢改善剤として用いるためのセロォ リゴ糖含有組成物。

[23] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、澱粉と共存下で保存された際の澱粉老化率が 20%以下である、澱粉老化防止 剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

[24] 請求項 1〜13のいずれか一項に記載のセロオリゴ糖組成物を有効成分として含有 し、蛋白質と共存下で保存された際の蛋白質変性率が 10%以下である、蛋白質変 性防止剤として用いるためのセロオリゴ糖含有組成物。

[25] 前記セロオリゴ糖組成物が、食品素材、化粧品素材、医薬品薬効成分、又はそれ らで使用される添加物の中から選択される 1種以上の構成成分に含有され、顆粒、 成型体、水溶液、水分散体、ペースト、又はゲル状である、請求項 14〜24のいずれ か一項に記載のセロオリゴ糖含有組成物。

[26] 前記水溶液、水分散体、ペースト、又はゲル状のセロオリゴ糖含有組成物が界面 活性剤、増粘剤、又はゲル化剤のいずれか 1種以上を含有する、請求項 25のセロォ リゴ糖含有組成物。

[27] 請求項 25又は 26に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有食品。

[28] 請求項 25又は 26に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有ィ匕粧

P

PPo

[29] 請求項 25又は 26に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有医薬

P

PPo

[30] 請求項 25又は 26に記載のセロオリゴ糖含有組成物を含むセロオリゴ糖含有医薬 部外品。