BRPI0810703A2 - mÉtodo para intensificar traÇos relacionados com rendimento em plantas com relaÇço Ás plantas de controle, molÉcula de Ácido nucleico isolada, polipeptÍdeo isolado, mÉtodo para a produÇço de uma planta transgÊnica, planta ou parte da mesma, construÇço, e, uso de um polipeptÍdeo ou de um Ácido nucleico - Google Patents

mÉtodo para intensificar traÇos relacionados com rendimento em plantas com relaÇço Ás plantas de controle, molÉcula de Ácido nucleico isolada, polipeptÍdeo isolado, mÉtodo para a produÇço de uma planta transgÊnica, planta ou parte da mesma, construÇço, e, uso de um polipeptÍdeo ou de um Ácido nucleico Download PDF

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Yves Hatzfeld
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Lalitree Darnielle
Bryan Mckersie
Valerie Frankard
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Abstract

MÉTODO PARA INTENSIFICAR TRAÇOS RELACIONADOS COM O RENDIMENTO EM PLANTAS COM RELAÇçO ÀS PLANTAS DE CONTROLE, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, POLIPEPTÍDEO ISOLADO, MÉTODO PARA A PRODUÇçO DE UMA PLANTA TRANSGÊNICA, PLANTA OU PARTE DA MESMA, CONSTRUÇçO, E, USO DE UM POLIPEPTÍDEO OU DE UM ÁCIDO NUCLEICO. A presente invenção diz respeito a, no geral, ao campo da biologia molecular e diz respeito a um método para intensificar traços relacionados com o rendimento e/ou melhorar várias características do desenvolvimento da planta modulando-se a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um GRP (Proteína Reguladora do Desenvolvimento). O GRP é selecionado de um domínio LOB que compreende proteína (LOB: Fronteiras de àrgão Lateral), abreviadas aqui como polipeptídeo LBD, um polipetídeo JMJC (JUMONJI-C), um polipeptídeo CKI (Caseína quinase 1), uma proteína semelhante à bHLHí 1 (Hélice-Laço-Hélice básico 11), um polipeptídeo de prolongamento- homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDF-HD), um polipeptídeo ASR (abscísico induzido por ácido, tensão e maturação) e/ou um polipeptídeo de fator de transcrição semelhante à proteína de ligação do promotor Squamosa 11 (SPL 11). A presente invenção também diz respeito à plantas tendo expressão modulada de um ácido nucleico que codifica um GRP, cujas plantas tem características de desenvolvimento melhoradas com relação às plantas do tipo selvagem ou outras plantas de controle. A invenção também fornece novos ácidos nucleicos GRP e polipeptídeos GRP bem como construções úteis nos métodos da invenção.

Description

"MÉTODO PARA INTENSIFICAR TRAÇOS RELACIONADOS COM O RENDIMENTO EM PLANTAS COM RELAÇÃO ÀS PLANTAS DE CONTROLE, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, POLIPEPTÍDEO ISOLADO, MÉTODO PARA A PRODUÇÃO DE UMA PLANTA TRANSGÊNICA, PLANTA OU PARTE DA MESMA, CONSTRUÇÃO, E, USO DE UM POLIPEPTÍDEO OU DE UM ÁCIDO NUCLEICO"
A presente invenção diz respeito, no geral, ao campo da biologia molecular e diz respeito a um método para intensificar traços relacionados com o rendimento e/ou fornecer a melhora de várias características do desenvolvimento de plantas modulando-se a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um GRP (Proteína Reguladora do Desenvolvimento). O GRP é selecionado de um domínio LOB que compreende proteína (LOB: Fronteiras de Órgão Lateral), aqui abreviado como polipeptídeo LBD, um polipeptídeo JMJC (JUMONJI-C), um polipeptídeo CKI (Caseína quinase I), uma proteína semelhante à bHLHl 1 (Hélice-Laço-Hélice 11 básico), um polipeptídeo de prolongamento- homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD), um polipeptídeo ASR (abscísico induzido por ácido, tensão e maturação) e/ou um polipeptídeo de fator de transcrição semelhante à proteína de ligação de promotor Squamosa 11 (SPL11). A presente invenção também diz respeito a plantas tendo expressão modulada de um ácido nucleico que codifica um GRP, cujas plantas têm características de desenvolvimento melhoradas com relação às plantas do tipo selvagem correspondentes ou outras plantas de controle. A invenção também fornece novos ácidos nucleicos GRP e polipeptídeos GRP bem como construções úteis nos métodos da invenção.
A população mundial sempre crescente e o fornecimento decrescente de terra arável disponível para a pesquisa de combustíveis agrícolas com relação a aumentar a eficácia agrícola. Meios convencionais para as melhoras de lavoura e horticultura utilizam técnicas de criação seletivas para identificar plantas tendo características desejáveis. Entretanto, tais técnicas de criação seletivas têm diversas desvantagens, isto é, aquelas técnicas são tipicamente trabalho intensivo e resulta em plantas que freqüentemente contém componentes genéticos heterogêneos que podem não resultar sempre no traço desejado sendo passado de plantas precursoras. Avanços na biologia molecular têm permitido que a humanidade modifique o germplasm de animais e plantas. A engenharia genética de plantas vincula o isolamento e a manipulação de material genético (tipicamente na forma de DNA ou RNA) e a introdução subsequente de material genético em uma planta. Tal tecnologia tem a capacidade de liberar lavouras ou plantas tendo vários traços econômicos, agronômicos ou de horticultura melhorados.
Um traço de interesse econômico particular é o rendimento aumentado. O rendimento é normalmente definido como a produção mensurável de valor econômico de uma lavoura. Isto pode ser definido em termos de quantidade e/ou qualidade. O rendimento é diretamente dependente de diversos fatores, por exemplo, o número e o tamanho dos órgãos, arquitetura da planta (por exemplo, o número de galhos), produção de semente, senescência de folha e mais. O desenvolvimento de raiz, absorção de nutrientes, tolerância à tensão e vigor precoce também podem ser fatores importantes na determinação do rendimento. A otimização dos fatores mencionados acima podem, portanto, contribuir com o aumento do rendimento da lavoura.
O rendimento de semente é um traço particularmente importante, visto que as sementes de muitas plantas são importantes para a nutrição humana e animal. As lavouras, tais como milho, arroz, trigo, canola e soja respondem por mais da metade da absorção calórica humana total, através do consumo direto das sementes por si só ou através do consumo de produtos de carne unidos em sementes processadas. Estas também são uma fonte de açúcar, óleos e muitos tipos de metabólitos usados em processos industriais. As sementes contém um embrião (a fonte de novos brotos e raízes) e um endosperma (a fonte de nutrientes para o desenvolvimento de embrião durante a germinação e durante o desenvolvimento precoce de mudas). O desenvolvimento de uma semente envolve muitos genes e requer a transferência de metabólitos a partir das raízes, folhas e caules no desenvolvimento de semente. O endosperma, em particular, assimila os precursores metabólicos de carboidratos, óleos e proteínas e os sintetiza em macromoléculas de armazenagem para encher o grão.
Um outro traço importante para muitas lavouras é o vigor precoce. A melhora do vigor precoce é um objetivo importante de programas modernos de criação de arroz tanto em cultivares de arroz temperados quanto tropicais. As raízes longas são importantes para a ancoragem em solo apropriado em arroz semeado na água. Quando o arroz é semeado diretamente em campos alagados e quando as plantas devem emergir rapidamente através da água, raízes mais longas estão associadas com o vigor. Quando a semeadura em sulcos é praticada, mesocotilas e coleoptilas mais longas são importantes para a boa emergência de muda. A capacidade de projetar vigor precoce em plantas deve ser de grande importância na agricultura. Por exemplo, o vigor precoce deficiente foi uma limitação para a introdução de híbridos de milho (Zea mays L.) com base em germplasm do Cinturão do Milho no Atlântico europeu.
Um outro traço importante é aquele de tolerância à tensão abiótica melhorada. A tensão abiótica é uma causa primária de perdas de lavoura mundiais, redução dos rendimentos médios para a maioria das plantas de cultivo principais por mais do que 50 % (Wang et al., Plant (2003) 218: 1- 14). As tensões abióticas podem ser causadas por secura, salinidade, extremos de temperatura, toxicidade química e tensão oxidativa. A capacidade de melhorar a tolerância da planta à tensão abiótica deve ser de vantagem econômica grande para o fazendeiros do mundo todo e deve permitir o cultivo de lavouras durante condições adversas e em territórios onde o cultivo de lavouras pode, de outra maneira, não ser possível.
Portanto, o rendimento da lavoura pode ser portanto, aumentado pela otimização de um dos fatores mencionados acima.
Dependendo do uso final, a modificação de certos traços de rendimento pode ser favorecido sobre outros. Por exemplo, para aplicações, tais como produção de forragem ou de madeira ou recurso de biocombustível, um aumento nas partes vegetativas de uma planta pode ser desejável e para aplicações, tais como produção de farinha de amido ou óleo, um aumento em parâmetros de semente pode ser particularmente desejável. Mesmo entre os parâmetros de semente, alguns podem ser favorecidos sobre os outros, dependendo da aplicação. Vários mecanismos podem contribuir para aumentar o rendimento de semente, se aquela estiver na forma de tamanho de semente aumentado ou número de semente aumentado.
Um método para aumentar o rendimento (rendimento de semente e/ou biomassa) em plantas pode ocorrer através da modificação dos mecanismos de desenvolvimento inerentes de uma planta, tal como o ciclo celular ou vários caminhos de sinalização envolvidos no desenvolvimento da planta ou em mecanismos de defesa.
Surpreendentemente, foi observado agora que a modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo GRP selecionado de um domínio LOB que compreende proteína (LOB: Fronteiras de Órgão Lateral), aqui abreviado como polipeptídeo LBD, um polipeptídeo JMJC (JUMONJI-C), um polipeptídeo de caseína quinase, um polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD), uma proteína semelhante a bHLHll (básico Hélice-Laço-Hélice 11), um polipeptídeo ASR (abscícico induzido por ácido, tensão e maturação) e/ou um polipeptídeo de fator de transcrição semelhante à proteína de ligação de promotor Squamosa 11 (SPLll) dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento e/ou várias características de desenvolvimento de planta melhoradas com relação às plantas de controle.
De acordo com uma forma de realização, é fornecido um método para melhorar ou intensificar traços relacionados com o rendimento e/ou melhorar várias características de desenvolvimento de planta de uma planta com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo GRP selecionado de um domínio LOB que compreende proteína (LOB: Fronteiras de Órgão Lateral), aqui abreviado como polipeptídeo LBD, um polipeptídeo JMJC (JUMONJI-C), um polipeptídeo de caseína quinase, um polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD), uma proteína semelhante a bHLHll (básico Hélice-Laço-Hélice 11), um polipeptídeo ASR (abscícico induzido por ácido, tensão e maturação) e/ou um polipeptídeo de fator de transcrição semelhante à proteína de ligação de promotor Squamosa 11 (SPL11) em uma planta. FUNDAMENTOS
I. Proteína que compreende o domínio LOB (LOB: Fronteiras de Órgão Lateral)
As proteínas LBD (ou proteínas de domínio LOB) todas dividem um domínio conservado na região de terminal N, conhecida como o domínio LOB. As proteínas do domínio LOB (Shuai et al., Plant Physiol. 129, 747-761, 2002) são observadas em várias espécies vegetais e constituem uma família genética grande: Arabidopsis é relatada possuir mais do que 40 genes que codificam as proteínas do domínio LOB, pelo menos 35 genes são encontrados no arroz e pelo menos 15 genes no milho. Os polipeptídeos LBD podem ser reguladores de fatores de transcrição (entre os quais os fatores de transcrição KNOX) são postulados desempenhar um papel na ramificação de capelo e da espiga no milho (Bortiri et al., Plant Cell 18, 574-587, 2006), formação de raízes adventícias (Liu et al, Plant J. 43, 47-56, 2005; Inukai et al, Plant Cell 17, 1387-1396, 2005), proliferação dos gametófitos femininos (Evans et al., Plant Cell 19, 46-62, 2007), padronização proximal-distal em pétalas (Chalfim-Junior et al, Plant Mol. Biol. 57, 559-575, 2005);
morfologia de folha e venação (Iwakawa et al, Plant Cell Physiol. 43, 467- 478, 2002). Yang et al. (Molecular Phylogenetics and Evolution 39, 248-262, 2006) três classes diferenciadas de proteínas LBD em arroz, com base na classificação de Iwakawa et al. (2005) e Shuai et al. (2002). Modulação de expressão de gene LOB de classe I (super ou sub-regulação de expressão) freqüentemente resulta em efeitos pleiotrópicos, que levam à forma de planta anormal e infertilidade. Por exemplo, o US20060218674 divulga um método para aumentar o tamanho do endosperma em uma semente de planta pela expressão de um polipeptídeo LOB de classe I, entretanto, o tamanho do embrião diminuiu proporcionalmente. Surpreendentemente, foi observado agora que a modular a
expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, em particular, biomassa aumentada e rendimento de semente, com relação às plantas de controle.
De acordo com uma forma de realização, é fornecido um
método para melhorar traços relacionados com o rendimento de uma planta com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD em uma planta. Os traços melhorados relacionados com o rendimento compreenderam biomassa aumentada e rendimento aumentado de semente. II. polipeptídeo JMJC (JUMONJI-C)
O primeiro gene JUMONJI relatado (que significa cruciforme em japonês) foi identificado pelo aprisionamento do gene em camundongos onde este desempenha um papel essencial no desenvolvimento de tecidos múltiplos. Até hoje, os polipeptídeos JUMONJI constituem uma classe distinta de proteínas encontradas em procariotas bem como em eucariotas incluindo bactérias, fungos e plantas.
A maioria dos membros da família do polipeptídeo JUMONJI é caracterizada pela presença de um domínio JmjC ou JUMONJI-C. é hipotetizado que durante a evolução, as proteínas antigas que compreende apenas o domínio JmjC adquiriram domínios adicionais que aumentam o espectro dos polipeptídeos JMJC encontrados na natureza. De interesse particular são aqueles polipeptídeos JMJC que adquiriram domínios conservados envolvidos no DNA, RNA e ligação de proteína, tais como dedos de zinco, a proteína de dedo RING rica em FY e os domínios F-box, sugerindo que os polipeptídeos da família JUMONJI podem regular a transcrição, função de cromatona e/ou rotação de proteína. Consequentemente, muitas proteínas JUMONJI em animais foram relatadas afetar o desenvolvimento pelo controle da expressão genética e atividade de cromatina. Por exemplo, um gene JUMONJI de camundongo atua para reprimir a ciclina Dl em embriões e sua atividade é requerida para a cardiogênese normal (Toyoda et al. 2003 Dev Cell. 5(l):85-97.).
Muito progresso foi feito o entendimento do modo de ação das proteínas contendo o domínio jmjC. Cruciais para a sua função biológica podem ser algumas das atividades enzimáticas recentemente reveladas em polipeptídeos JMJC, por exemplo, JHDMl, um polipeptídeo JMJC de origem humana (Tsukada, Nature. 2006; 439(7078):811-6) tem atividade de histona dimetilase e atividade de asparaginil hidroxilase foi relatada em FIH (Fator de Inibição HIF-I alfa), um fator de transcrição envolvido na resposta celular à hipoxia, (Linke et al. (2004) J. Biol. Chem., Vol. 279, 14391-14397).
Os domínios JmjC tipicamente têm estruturas semelhantes àquelas encontradas em algumas metaloenzimas. A análise estrutural recente do domínio JmjC presente na proteína JUMONJI FIH revelou os resíduos de aminoácido envolvidos na ligação aos cofatores 2-oxoglutarato e ferro Fe (II) (Dann et al; Proc Natl Acad Sei USA. 2002; 99(24): 15351-15356). O FIH tem o motivo de ligação de ferro HXD/E característico da maioria das 2- oxoglutarato oxigenases. Além disso e consistente com a atividade de hidrolase, a estrutura secundária de FIH é composta de um núcleo de rocambole de filamento beta que circunda o local de ligação de Fe(II). Estas características são conservadas entre as proteínas contendo domínio JmjC (Trewick et al. EMBO Rep. 2005 (4):315-20).
Em plantas, dois polipeptídeos JMJC estão relatadamente envolvidas no controle do tempo de florescimento. Ambos atuam como repressores dos caminhos de florescimento em Arabidopsis thaliana (Noh et al. Plant Cell. 2004. 16(10):2601-13). A atividade enzimática para as proteínas vegetais ainda não foi experimentalmente determinada.
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um JUMONJI-C ou polipeptídeo JMJC dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, em particular, rendimento aumentado com relação às plantas de controle.
De acordo com uma forma de realização, é fornecido um método para melhorar traços relacionados com o rendimento de uma planta com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC em uma planta. Os traços melhorados relacionados com o rendimento compreende um ou mais de peso de semente total aumentado por planta, peso de semente milhar (1000 sementes), taxa de enchimento de sementes, índice de colheita, vigor precoce e índice de raiz/broto, ambos sob condições de desenvolvimento ótimas e subótimaa, condições de secura brandas. III. Caseína quinase I
As proteína quinases representam uma superfamília e os membros desta superfamília catalisam a transferência reversível de um grupo fosfato de ATP às cadeias secundárias de aminoácido de serina, treonina e tirosina em polipeptídeos alvos. Em particular, a família Caseína quinase 1 (CKI) (EC 2.7.11.1) de função de proteína quinases como reguladores de caminhos de transdução de sinal na maioria dos organismos eucarióticos. Na levedura, a CK I está envolvida na regulação de reparo de DNA e progressão do ciclo celular (Hoekstra MF et al., Science 253: Brockman JL et al., Proc. Natl Acad Sei. USA 89: 9454-9458,1992; Dhillon N and Hoekstra MF, EMBO J 13: 2777-2788,1994). As proteínas de Caseína quinase I são proteína quinases do tipo serina/treonina monomérica que contém um domínio de quinase altamente conservado. Os membros desta família têm extensões de terminal N e terminal C divergentes. A região de terminal N é responsável pelo reconhecimento do substrato e da extensão do terminal C é importante para a interação da quinase com os substratos. A extensão de terminal C também é pensada ser importante para mediar a regulação através da auto- fosforilação (Gross and Anderson, 1 998 Cell Signal 10:699-71 1; Craves and Roach, 1 995, J Biol Chem 270:21689-21694).
Em plantas, diversos membros da família de proteína foram clonados e caracterizados bioquimicamente (Klimczak and Cashmore AR, 1993. Biochem. J. 293: 283-288; Liu et at. 2003, Plant Journal. 36, 189-202; Lee et at. 2005 Plant Cell. 17(10): 2817-2831. O genoma de Arabidopsis foi observado conter pelo menos 14 genes semelhantes à caseína quinase I (CKL). Dentro dos domínios de quinase conservados, os polipeptídeos dividiram 89 % de similaridade de seqüência no nível de aminoácido. As 14 isoformas de Arabidopsis CKL ainda foram classificadas nos três grupos com base na localização subcelular. O Grupo 1 localizado predominantemente na periferia celular; grupo 2 no grupo de núcleo 3 o citoplasma. Um CKI de Nicotiana tabacum foi localizado no plasmodesmata e propõe desempenhar um papel na comunicação célula a célula (Lee et al. 2005). Outros papéis propostos para o CKI vegetal é a transdução de sinal em resposta aos estímulos ambientais, o desenvolvimento de raiz e a sensibilidade hormonal vegetal (Liu et al.).
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle.
De acordo com uma forma de realização, é fornecido um método para melhorar traços relacionados com o rendimento de uma planta com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI em uma planta. Os traços melhorados relacionados com o rendimento compreenderam um ou mais de biomassa aumentada, vigor de emergência aumentado e rendimento aumentado de semente.
IV. Polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD)
Os fatores de transcrição são usualmente definidos como as proteínas que mostram afinidade de ligação de DNA específicas de seqüência e que são capazes de ativar e/ou reprimir a transcrição. O genoma de Arabidopsis thaliana codifica quanto a pelo menos 1533 reguladores de transcrição, considerando -5.9 % de seu número total estimado de genes (Riechmann et al. (2000) Science 290: 2105-2109). Os bancos de dados de Fatores de Transcrição Arroz (DRTF) é uma coleção de fatores de transcrição conhecidos e preditos de Oryza sativa L. ssp. indica e Oryza sativa L. ssp. Japonica e correntemente contém 2.025 modelos genéticos de fatores de transcrição putativos (TF) em indica e 2.384 em japonica, distribuído em 63 famílias (Gao et al. (2006) Bioinformatics 2006, 22(10): 1286-7).
Uma destas famílias é a superfamília de fatores de transcrição de homeodomínio (HD) envolvidos em muitos aspectos de processos de desenvolvimento. Os fatores de transcrição HD são caracterizados pela presença de um homeodomínio (HD), que é um domínio de ligação de DNA de 60 aminoácidos (BD). Arabidopsis thaliana e arroz contém aproximadamente 100 fatores de transcrição HD, que ainda podem ser classificados em subfamílias com base na identidade de seqüência de aminoácido (Richardt et al. (2007) Plant Phys 143(4): 1452-1466). Algumas destas são caracterizadas pela presença de domínios conservados adicionais que facilitam a ligação de DNA e/ou as interações de proteína-proteína.
Um destes domínios é o dedo PHD, denominado prolongamento de homeodomínio de planta (PHDf) devido à sua associação em um mesmo polipeptídeo com um HD de ligação de DNA, que foi originalmente identificado pela identidade de seqüência de aminoácido entre um fator de transcrição de homeobox de milho ZmHOXla (Bellman & Werr (1992) EMBO J 11:3367-3374) e eu ATHAT3.1 relativo à Arabidopsis (Schindler et al. (1993) Plant J 4: 137-150). O PHDf é um motivo semelhante ao motivo de dedo de zinco Cys4-His-Cys3 capaz de realizar a quelação de dois íons de zinco. Os PHDfs são encontrados em proteínas nucleares e são pensados estarem envolvidos na regulação transcripcional mediado por cromatina (Halbach et al. (2000) Nucleic Acid Res 28(18): 3542-3550). Os fatores de transcrição que combinam um PHDf e um HD
são portanto denominados PHDf-HDs (Halbach et al. (2000) supra). Em plantas, tais PHDf-HDs ainda são caracterizados pela presença de uma leucina per (ZIP) a montante do PHDf. Ambos os domínios (o ZIP e o PHDf) juntos formam uma região de 180 aminoácidos altamente conservada denominada o domínio ZIP/PHDf (Halbach et al. (2000) supra).
As plantas de tabaco transgênico que, fortemente, superexpressam cada um dos dois PHDf-HDs de polipeptídeo de milho (ZmHOXl a ou ZmHOXl b) usando-se um promotor 35S de vírus mosaico de couve-flôr combinado com um intensificador ômega, mostrou mudanças morfológicas idênticas: redução de tamanho, formação de raiz adventícia e transformações florais homeóticas (Uberlacker et al. (1996) Plant Cell 8: 349- 362). As plantas transgênicas de arroz e de tabaco super-expressam fortemente o polipeptídeo HAZl PHDF-HD de Oryza sativa usando-se o promotor 35 S do vírus mosaico de couve-flôr não apresentaram desenvolvimento anormal ou mudança fenotípica em comparação com os tipos selvagens (Ito et al. (2004) Gene 331: 9-15).
Na patente US 7.196.245, um polipeptídeo de Arabidopsis thaliana PHDf-HD (identificado como G416) foi transformado em Arabidopsis e mostrado promover o florescimento precoce nas plantas transgênicas em comparação com as plantas de controle, sem impacto no rendimento de semente.
Surpreendentemente, foi observado agora que modular, preferivelmente aumentar, a expressão de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle.
De acordo com uma forma de realização, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento, preferivelmente intensificar traços de sementes relacionados com o rendimento, em plantas com relação às plantas de controle, que compreende modular, preferivelmente aumentar, a expressão de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD em uma planta. Os traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, compreende um ou mais de: número aumentado de panícula primárias, rendimento de semente aumentado total por planta, número aumentado de sementes (enchidas), peso de semente milhar aumentado (TKW), índice de colheita aumentado. V. Proteína semelhante a bHLHll (Hélice-Laço-Hélice 11 básico)
Os fatores de transcrição são usualmente definidos como proteínas que mostram a ligação de DNA específica de semente e que são capazes de ativar e/ou reprimir a transcrição. A família do fator de transcrição Hélice-Laço-Hélice básica é uma das famílias maiores de fatores de transcrição que foram caracterizadas em Arabidopsis thaliana (Toledo-Ortiz et al., Plant Cell 15, 1749-1770, 2003; Bailey et al., Plant Cell 15, 2497-2501, 2003) e em arroz (Li et al Plant Physiol. 141, 1167-1184, 2006). A característica de distinção da família do fator de transcrição bHLH é a presença de um domínio bipartido que consiste de aproximadamente 60 aminoácidos. Este domínio bipartido é compreendido de uma região básica de ligação de DNA, que liga-se a um E-box de hexanucleotídeo de consenso e duas α-hélices separadas por uma região de arco variável, localizado no terminal Cdo domínio básico. As duas α-hélices promovem a dimerização, permitindo a formação de formação de homo e heterodímeros entre os membros de famílias diferentes. Enquanto o domínio bHLH é evolucionariamente conservado, existe pouca similaridade de seqüência entre os ciados além do domínio. Li et al. (2006) classifica os fatores de transcrição de arroz e Arabidopsis bHLH em 22 subfamílias, com base na seqüência dos domínios bHLH.
Pouco é conhecido sobre a função dos polipeptídeos semelhantes à bHLHll em plantas. Até agora, apenas um polipeptídeo semelhante à bHLHll, OsPTFl de arroz, foi caracterizdo. O OsPTFl é relatado estar envolvido na tolerância à inanição por fosfato (Yi et al., Plant Physiol. 138, 2087-2096). As plantas de arroz que super-expressam o gene sob o controle do promotor 35S não mostra qualquer fenotipo diferente em comparação com as plantas de controle quando desenvolvidas sob condições normais, mas sob condições de limitação de fosfato, as plantas tiveram uma absorção de fosfato melhorada. Sob a limitação de fosfato, as plantas transgênicas mostraram um aumento na biomassa, teor de fosfato, brotação aumentada e rendimento aumentado de semente.
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão I de uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHll dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, em particular, rendimento aumentado com relação às plantas de controle. Estes efeitos foram mostrados sob condições de desenvolvimento onde o fosfato não foi limitante.
De acordo com uma forma de realização, é fornecido um método para melhorar traços relacionados com o rendimento de uma planta com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 em uma planta. Os traços melhorados relacionados com o rendimento compreenderam rendimento aumentado de semente.
VI. Pantas tendo traços relacionados com o rendimento intensificados e um método para fabricar as mesmas
Os polipeptídeos ASR (abscísico induzido por ácido, tensão e maturação) foram primeiro identificados em tomate (lusem et al 1993 Plant Physiol 102: 1353-1354) com proteínas hidrofílicas altamente carregadas pequenas localizadas nos núcleos de células e ligado à cromatina. A família do gene Asr que codifica polipeptídeos ASR é encontrada disseminada em plantas superiores e os homólogos de ASR foram clonados a partir de um grande número de plantas dicotiledôneas e monocotiledôneas (Carrai et at. 2004 Trends Plant Sci 9: 57-59). A maioria dos genes Asr são super- regulados sob condições de tensão ambiental diferentes, durante a maturação de fruto e no tratamento celular com o hormônio ABA. Os polipeptídeos ASR mostram um alto grau de conservação de seqüência (Frankel et at. 2006. Gene Pages 74-83). All known Asr genes contain two highly conserved regions. The first region contains a stretch of His residues at the N-terminus, possessing sequence-specific Zn2+-dependent atividade de ligação de DNA (Kalifa et al., 2004a Biochem J 381: 373-378). A segunda região é uma parte grande da seqüência de terminal C, freqüentemente contendo um NLS de sinal de localização nuclear (Cakir et al., 2003 Plant Cell 15: 2165-2180). A proteína ASRl de tomate é uma proteína intrínsecamente não estruturada que, na ligação de íons de zinco, torna-se ordenada (dobrada) e forma dímeros (Goldgur et al. Plant Physiol. 2007 Feb;143(2):617-28)
Um papel putativo de polipeptídeos ASR na regulação de transcrição genética foi sugerido. Relatadamente, experimentos híbridos de uma levedura revelaram que uma uva ASR liga-se ao promotor de um gene transportador de hexose (VvHTl). Consistentemente, um papel de Asrl no controle de absorção de hexose em órgãos heterotróflcos, tais como tubérculos de batata foi sugerido (Frankel et al. Plant Mol Biol. 2007 Mar;63(5):719-30).A atividade de ligação de DNA dependente de zinco de um membro de proteína da família ASR foi relatado (Kalifa et al. 2004 Biochem J. 2004 Jul 15;381(Pt 2):373-8).
Os domínios de ligação de DNA e zinco de proteína ASRl foram mapeados (Rom et al. 2006. Biochimie. 88(6):621-8; Goldgur et al. 2007. Plant Physiol. Feb;143(2):617-28). O uso de polipeptídeos ASR para melhorar os traços
agronômicos em plantas foi divulgado, como métodos para intensificar a tolerância de planta a tensões abióticas particulares. Por exemplo, super- expressão em Arabidopsis (Arabidopsís thaliana) do gene ortólogo ASRl LLA23 de lírios (Lilium longiflorum) aumenta a tolerância da planta à secura e à salinidade (Yang et al. 2005. Plant Physiol 139: 836-846). Além disso, a patente US 7.154.025 divulga métodos para aumentar a resistência à tensão por déficit de água aumentando-se a quantidade de proteínas ASR em uma planta.
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento sob condições de desenvolvimento sem tensão, com relação às plantas de controle. De acordo com uma primeira forma de realização, a presente invenção fornece um método para intensificar traços relacionados com o rendimento sob condições de desenvolvimento sem tensão em plantas com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR. VII. 11 semelhante à proteína de ligação do promotor Squamosa (SPLll) Os polipeptídeos do fator de transcrição são usualmente
definidos como proteínas que mostram a afinidade de ligação de DNA específica de seqüência e que são capazes de ativar e/ou reprimir a transcrição. Os polipeptídeos de fator de transcrição semelhantes à proteína de ligação do promotor Squamosa (SPL) são proteínas estruturalmente diveras que dividem um domínio de ligação de DNA altamente conservado (DBD) de cerca de 80 resíduos de aminoácido de comprimento (Klein et al. (1996) Mol Gen Genet 259: 7-16; Cardon et al. (1999) Gene 237: 91-104). O local de ligação de seqüência de consenso de DNA de fator de transcrição SPL no promotor de genes alvos é 5'-TNCGTACAA-3' onde N representa qualquer base. Dentro do SPL DBD são dez resíduos de cisteína (Cys) ou histidina (His) conservados (ver Figure 28) dos quais oito são resíduos coordenantes de zinco que ligam dois íons de zinco necessários para a formação de estrutura terciária de dedo de zinco específico de SPL (Yamasaki et al. (2004) J Mol Biol 337: 49-63). Uma segunda característica conservada dentro do SPL DBD é um sinal de localização nuclear bipartido. Fora do DBD, um motivoalvo de micro RNA (miRNA), especialmente alvejado pela família miR156 de miRNAs é encontrado na maioria das seqüências de ácido nucleico que codificam os polipeptídeos do fator de transcrição SPL (na região codificadoraou o 3' UTR) por todo o reino vegetal (Rhoades et al. (2002) Cell 110: 513-520). A expressão do gene SPL que controla miRNAs pós- transcripcionalmente alvejando mRNAs que codificam SPL para a degradação ou pela repressão translacional.
O genoma de Arabidopsis codifica pelo menos quanto aos 1533 reguladores transcripcionais, levando em conta -5,9 % de seu número total estimado de genes (Riechmann et al. (2000) Science 290: 2105-2109). Os autores relatam 16 polipeptídeos de fator de transcrição SPL em Arabidopsis thaliana, compouca similaridade de seqüência entre eles (a parte das características mencionadas acima), o tamanho do polipeptídeo SPL deduzido que varia de 131 a 927 aminoácido. Entretanto, os pares de polipeptídeos de fator de transcrição SPL que dividem homologia de seqüência mais alta foram detectados dentro da família SPL desta planta (Cardon et al. (1999)).
Os polipeptídeos de fator de transcrição SPL (encontrados apenas em plantas) caracterizados até hoje mostraram-se funcionar no desenvolvimento da planta, em particular, no desenvolvimento de flôr. As plantas transgênicas que super expressam um polipeptídeo de fator de transcrição SPL3 foram relatadas florescer mais cedo (Cardon et al. (1997) Plant J 12: 367-377). No pedido de patente europeu EP1033405, o ácido nucleico e as seqüências de polipeptídeo deduzadas do polipeptídeo de fator de transcrição SPLl 1 são divulgadas.
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão I de uma planta de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1 dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, em particular, rendimento aumentado com relação às plantas de controle.
De acordo com uma forma de realização, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento de uma planta com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPL11 em uma planta. Os traços intensificados relacionados com o rendimento compreende um ou mais de vigor de emergência aumentado (vigor precoce de muda aumentado), rendimento de semente total (peso de semente), taxa de enchimento de semente (taxa de enchimento de semente), número de sementes enchidas, número de flores (sementes) por panícula, índice de colheita e peso de semente milhar (1000 sementes), tal aumento ocorrendo tanto sob condições ótimas quanto subótimas de desenvolvimento, preferivelmente condições de secura brandas.
De acordo com uma forma de realização, são fornecidos novos ácidos nucleicos SPLll e polipeptídeos SPLll bem como construções que compreendem ácidos nucleicos que codifiquem SPLl 1, úteis na realização dos métodos da invenção Definições
PolipeptídeofsVProteína (s)
Os termos "polipeptídeo" e "proteína" são usados de maneira intercambeável aqui e referem-se a aminoácidos em uma forma polimérica de qualquer comprimento, ligados juntos por ligações de peptídeo.
Polinucleotídeo(sVÁcido(s) nucleico(sVSequência(s)_de_ácido
nucleico/Sequênciafs) de nucleotídeo
Os termos "polinucleotídeo(s)", "sequência(s) de ácido nucleico", " sequência(s) de nucleotídeo", "ácido(s) nucleico(s)", "molécula de ácido nucleico" são usados de maneira intercambeável neste e referem-se a nucleotídeos, ribonucleotídeos ou desóxirribonucleotídeos ou uma combinação de ambos, em uma forma não ramificada polimérica de qualquer comprimento. Planta(s) de controle
A escolha de plantas de controle adequadas é de um projeto experimental e pode incluir plantas do tipo selvagem correspondentes ou plantas correspondentes sem o gene de interesse. A planta de controle é tipicamente das mesmas espécies de plantas ou ainda da mesma variedade como a planta a ser avaliada. A planta de controle também pode ser um nulizigoto da planta a ser avaliada. Os Nulizigotos são indivíduos que perdem o transgene por segregação. Uma "planta de controle" como usada neste refere-se não apenas às plantas otais, mas também à partes de planta, incluindo sementes e partes de sementes. Homólogofs)
Os "homólogos" e uma proteína abrange peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos, proteínas e enzimas tendo substituições, anulações e/ou inserções de aminoácido com relação à proteína não modificada em questão e tendo atividade biológica e funcional similar à proteína não modificada a partir da qual estes são derivados.
Uma anulação refere-se à remoção de um ou mais aminoácidos de uma proteína.
Uma inserção refere-se a um ou mais resíduos de aminoácido
sendo introduzidos em um local predeterminado em uma proteína. As inserções podem compreender fusões de terminal N e/ou terminal C bem como inserções intra-seqüência de aminoácidos simples ou múltiplos. No geral, as inserções dentro da seqüência de aminoácido serão menores do que as fusões de terminal N ou C, da ordem de cerca de 1 a 10 resíduos. Os exemplos de proteínas de fusão ou peptídeos de terminal N ou C incluem o domínio de ligação ou o domínio de ativação de um ativador de transcrição como usado no sistema de dois híbridos de levedura, proteínas de revestimento de fago, (histidina)-ó-tag, glutationa S-transferase-tag, proteína A, proteína de ligação de maltose, diidrofolato redutase, epítopo Tag-100, epítopo c-myc, FLAG®-epítopo, IacZ, CMP (peptídeo de ligação de calmodulina), epítopo HA, epítopo de proteína C e epítopo VSV.
Uma substituição refere-se à troca de aminoácidos da proteína por outros aminoácidos tendo propriedades similares (tais como hidrofobicidade similar, hidrofilicidade, antigenicidade, propensão a formar ou quebrar estruturas α-hélicas ou estruturas de 8 lâminas). As substituições de aminoácido são, tipicamente, de resíduos simples, mas podem ser agrupadas dependendo das restrições funcionais colocadas no polipeptídeo; as inserções serão, usualmente da ordem de cerca de 1 a 10 resíduos de aminoácido. As substituições de aminoácido são preferivelmente substituições de aminoácido conservativas. As tabelas de substituição conservativas são bem conhecidas na técnica (ver, por exemplo, Creighton (1984) Proteins. W.H. Freeman and Company (Eds) e Tabela 1 abaixo).
Tabela 1: Exemplos de substituições de aminoácido conservadas
resíduo substituições conservativas resíduo substituições conservativas Ala Ser Leu lie; Val Arg Lys Lys Arg; Gln Asn Gln; His Met Leu; Ile Asp Glu Phe Met; Leu; Tyr Gln Asn Ser Thr; Gly Cys Ser Thr Ser; Val Glu Asp Trp Tyr Gly Pro Tyr Trp; Phe His Asn; Gin Val lie; Leu Ile Leu, Val
As substituições, anulações e/ou inserções de aminoácido podem ser feitas facilmente usando-se técnicas sintéticas de peptídeo bem conhecidas na técnica, tais como síntese de peptídeo de fase sólidae outros ou pela manipulação de DNA recombinante. Os métodos para a manipulação de seqüências de DNA para a produção de variantes de substituição, inserção ou anulação de uma proteína são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, as técnicas para a realização de mutações de substituição em locais predeterminados no DNA são bem conhecidos por aqeueles habilitados na técnica e incluem a mutagênese de Ml3, mutagênese in vitro de T7-Gen (USB, Cleveland, OH), mutagênese direcionada ao local QuickChange (Stratagene, San Diego, CA), mutagênese direcionada ao local mediada por PCR ou outros protocolos de mutagênese direcionados ao local. Derivados
Os "derivados" incluem peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos que podem, em comparação com a seqüência de aminoácido da forma de ocorrência natural da proteína, tal como a proteína de interesse, compreende substituições de aminoácidos com resíduos de aminoácido que não ocorrem de maneira natural ou adições de resíduos de aminoácido que não ocorrem de maneira natural. Os "derivados" de uma proteína também abrangem peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos que compreendem resíduos de aminoácido anterados de ocorrência natural (glicosilados, acilados, prenilados, fosforilados, miristoilados, sulfatados etc.) ou alterados que não ocorem de maneira natural em comparação com a seqüência de aminoácido de uma forma de ocorrência natural do polipeptídeo. Um derivado também pode compreender um ou mais substituintes que não de aminoácido ou adições em comparação com a seqüência de aminoácido a partir da qual este é derivado, por exemplo, uma molécula repórter ou oturo ligando, covalentemente ou não covalentemente ligado à seqüência de aminoácido, tal como uma molécula repórter que é ligaa para facilitar sua detecção e resíduosd e aminoácido que não ocorrem de maneira natural com relação à seqüência de aminoácido de uma proteína de ocorrência não natural. Além disso, os "derivados" também incluem fusões da forma de ocorrência natural da proteína com peptídeos de rotulação, tal como FLAG, HIS6 ou tioredoxina (para uma revisão de peptídeos de rotulação, ver Terpe, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60, 523-533, 2003). Ortólogo(s)/Parálogos(s)
Os ortólogos e parálogos abrangem conceitos evolucionários usados para descrever as relações ancestrais de genes. Os parálogos são genes /
dentro da mesma espécie que se originaram através da duplicação de um gene ancestral; os ortólgos são genes de organismos diferentes que se originaram através da especialização e também são derivados de um gene ancestral comum. Domínio
O termo "domínio" refere-se a uma série de aminoácidos
conservados em posições específicas junto com o alinhamento de seqüências de proteínas evolucionariamente relacionadas. Enquanto os aminoácidos em outras posições podem variar entre os homólogos, os aminoácidos que são altamente conservados em posições específicas indicam aminoácidos que são provavelmente essenciais na estrutura, estabilidade ou função de uma proteína. Identificado por seu alto grau de conservação em seqüências alinhadas de uma família de homólogos de proteína, estes podem ser usados como identificadores para determinar se qualquer polipeptídeo em questão pertene a uma família de polipeptídeo previamente identificada. Motivo/S equência de Consenso/Assinatura
O termo "motivo" ou "seqüência de consenso" ou "assinatura" refere-se a uma região conservada curta na seqüência de proteínas evolutionariamente relacionadas. Os motivos são freqüentemente partes altamente conservadas de domínios, mas também podem incluir apenas parte do domínio ou estarem localizados fora do domínio conservado (se todos os aminoácidos do motivo estiverem fora de um domínio definido). Hibridização
O termo "hibridização" como definido neste é um processo em que as seqüências de nucleotídeo complementares substancialmente homólogas fortalecem umas às oturas. O processo de hibridização pode ocorrer totalmente na solução, isto é, ambos os ácidos nucleicos complementares estão na solução. O processo de hibridização também pode ocorrer com um dos ácidos nucleicos complementares imobilizados a uma matriz, tal como gotas magnéticas, gotas de Sepharose ouqualquer outra resina. Além disso, o processo de hibridização pode ocorrer com um dos ácidos nucleicos complementares imobilizados em um suporte sólido, tal como uma nitro-celulose ou membrana de náilon ou imobilizado, por exemplo, por fotolitografia, por exemplo, a um suporte de vidro siliceoso (o último conhecido como séries ou microsséries de ácido nucleico ou como aparas de ácido nucleico). A fim de permitir que a hibridização ocorra, as moléculas de ácido nucleico são, no geral, térmica ou quimicamente denaturadas para a fusão de um filamento duplo em dois filamentos simples e/ou para remover grampos de cabelo ou outras estruturas secundárias de ácidos nucleicos de filamento simples.
O termo "estringência" refere-se às condições sob as quais uma hibridização acontece. A estringência de hibridização é influenciada pelas condições, tais como temperatura, concentração de sal, força iônica e composição de tampão de hibridização. No geral, as condições de estringência baixa são selecionadas serem de cerca de 30° C menor do que o ponto de fusão térmico (Tm) para a seqüência específica em uma força iônica e pH definidos. As condições de estringência médias ocorrem quando a temperatura está 20° C abaixo da Tm e as condições de estringência alta ocorrem quando a temperatura alta está 10° C abaixo da Tm. As condições de hibridização de estringência alta são tipicamente suadas para o isolamento de seqüências de hibridização que têm similaridade de seqüência alta com a seqüência de ácido nucleico alvo. Entretanto, os ácidos nucleicos podem desviar na seqüência e ainda codificar um polipeptídeo substancialmente idêntico, devido à degeneração do código genético. Portanto, as condições de hibridização de estringência média podem ser, algumas vezes, necessárias para identificar tais moléculas de ácido nucleico.
A Tm é a temperatura sob a força iônica definida e o pH em que 50 % da seqüência alvo hibridiza-se a uma sonda perfeitamente equiparada. A Tm é dependente das condições de solução e a composição de base e o comprimento da sonda. Por exemplo, as seqüências mais longas hibridizam-se especificamente em temperaturas mais altas. A taxa máxima de hibridização é obtida em torno de 16° C até 32° C abaixo da Tm. A presença de cátions monovalentes na solução de hibridização reduz a repulsão eletrostática entre os dois filamentos de ácido nucleico, desse modo, promovendo a formação de híbrido; este efeito é visível para as concentrações de sódio de até 0,4 M (para concentrações mais altas, este efeito pode ser ignorado). A formamida reduz a temperatura de fusão de duplexes de DNA- DNA e de DNA-RNA com 0,6 a 0,7° C para cada percentual de formamida e adição de 50 % de formamida permite que a hibridização seja realizada de 30 a 45° C, embora a taxa de hibridização seja diminuída. As má combinações de pares de base reduzem a taxa de hibridização e a estabilidade térmica dos duplexes. Em média e para as sondas grandes, a Tm diminui cerca de Io C por % de má combinação de base. A Tm pode ser calculada usando-se as seguitnes equações, dependendo dos tipos de híbridos:
1) híbridos de DNA-DNA (Meinkoth and Wahl, Anal. Biochem., 138: 267-284, 1984):
Tm= 81,5° C + 16,6xlogio[Na+]a + 0,41x %[G/Cb] - SOOxtLc]-1 — 0,6Ix % de formamida 2) híbridos de DNA-RNA ou RNA-RNA:
Tm= 79,8 + 18,5 (log10[Na+]a) + 0,58 (%G/Cb) + 11,8 (%G/Cb)2 - 820/Lc
3) híbridos de oligo-DNA ou oligo-RNAd: para <20 nucleotídeos: Tm = 2 (In) para 20 a 35 nucleotídeos: Tm = 22 + 1,46 (In)
a ou para outro cátion monovalente, mas apenas preciso na faixa de 0,01 a 0,4 M.
b apenas preciso para % de GC na faixa de 30 % a 75 %. cL = Comprimento de duplex em pares de base. d oligo, oligonucleotídeo; In, = comprimento eficaz de iniciador = 2 χ (n° de G/C) + (n° de A/T).
A ligação não específica pode ser controlada usando-se qualquer uma de diversas técnicas conhecidas tais como, por exemplo, O bloqueio de membrana com soluções contendo proteína, adições de RNA, DNA e SDS heterólogos ao tampão de hibridização e tratamento com Rnase. Para sondas não homólogas, uma série de hibridizações pode ser reealizada pela variação de um de (i) diminuir progressivamente a temperatura de recozimento (por exemplo, de 68° C a 42° C) ou (ii) diminuir progressivamente a concentração de formamida (por exemplo, de 50 % a 0 %). O técnico habilitado estará ciente de vários parâmetros que podem ser alterados durante a hibridização e que manterão ou mudarão as condições de estringência.
Além das condições de hibridização, a especificidade de hibridização tipicamente também dependerá da função de lavagens pós- hibridização. Para remover fudnamento que resultam de hibridização não específica, as amostras são lavadas com soluções salinas diluídas. Os fatores críticos de tais lavagens incluem a força iônica e a temperatura da solução de lavagem final: quanto menor a concentração de sal mais alta a temperatura de lavagem, mais alta a estringência da lavagem. As condições de lavagem são tipicamente realizadas em ou abaixo da estringência de hibridização. Uma hibridização positiva dá dá um sinal que é pelo menos duas vezes aquele dos fundamentos. No geral, as condições de estringência adequadas para os ensaios de hibridização de ácido nucleico ou procedimentos de detecção de amplificação do gene são apresentadas acima. Condições mais ou menos estringentes também podem ser selecionadas. O técnico habilitado está ciente de vários parâmetros que podem ser alterados durante a lavagem e que manterá ou mudará as condições de estringência.
Por exemplo, as condições de hibridização de alta estringência típicas para os híbridos de DNA mais longas do que 50 nucleotídeos abrange a hibridização a 65° C em 1 χ SSC ou em 42° C em 1 χ SSC e 50 % de formamida, seguido pela lavagem a 65° C em 0,3 χ SSC. Os exemplos de condições de hibridização de estringência média para híbridos de DNA mais longos do que 50 nucleotídeos abrange a hibridização a 50° C em 4 χ SSC ou em 40° C em 6 χ SSC e 50 % de formamida, seguido pela lavagem a 50° C em 2 χ SSC. O comprimentodo híbrido é o comprimento antecipado para a hibridização de ácido nucleico. Quando os ácidos nucleicos de seqüência conhecida são hibridizados, o comprimento do híbrido pode ser determinado pelo alinhamento das seqüências e identificação das regiões conservadas descritas neste. 1 χ SSC é 0,15 M de NaCl e 15 mM de citrato de sódio; a solução de hibridização e as soluções de lavagem podem, adicionalmente, incluir 5x reagente de Denhardt, 0,5 a 1,0 % de SDS, 100 μ^ιηΐ de DNA de esperma de salmão fragmentado desnaturado, 0,5 % de pirofosfato de sódio. Para os propósitos de definir o nível de estringência, referência
pode ser feita a Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: a laboratory manual, Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York ou a Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989 e atualizações anuais). Variante de união
O termo "variante de união" como usado neste abrange variantes de uma seqüência de ácido nucleico em que os íntrons e/ou os exons selecionados foram excisados, trocados, substituídos ou adicionados ou em que os íntrons foram encurtados ou alongados lengthened. Tais variantes serão umas em que a atividade biológica da proteína é substancialmente retida; isto pode ser atingido retendo-se seletivamente os segmentos funcionais da proteína. Tais variantes de união podem ser encontradas em estado natural ou pode ser feito pelo homem. Os métodos para predizer e isolar tais variantes de união são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Foissac and Schiex (2005) BMC Bioinformaties 6: 25). Variante alélica
Os alelos e as variantes alélicas são formas alternativas de um dado gene, localizado na mesma posição cromossômica. As variantes alélicas abrangem Polimorfismos de Nucleotídeo Simples (SNPs), bem como Polimorfismos de Inserção/Anulação pequenos (INDELs). O tamanho de INDELs é usualmente menor do que 100 bp. SNPs e INDELs formam op grupo maior de variantes de seqüência em cepas polimorficas de ocorrência natural of most organisms. Embaralhamento de gene/Evolução direcionada
O embaralhamento de gene ou a evolução direcionada consistem de interações de embaralhamento de DNA seguido pela avaliação e/ou seleção apropriadas para gerar variantes de ácidos nucleicos ou porções destes que codificam proteínas tendo uma atividade biológica modificada (Castle et al., (2004) Science 304(5674): 1151-4; Patentes US 5.811.238 e 6.395.547).
Elemento regulador/Sequência de controle/Promotor
Os termos "elemento regulador", "seqüência de controle" e "promotor" são todos usados de maneira intercambeável aqui e devem ser entendidos no contexto amplo para referir-se às seqüências de ácido nucleico reguladoras capazes de realizar a expressão das seqüências às quais estes estão ligados. O termo "promotor" tipicamente refere-se a uma seqüência de controle de ácido nucleico localizada a montante do início de transcrição de um gene e que está envolvido no reconhecimento e ligação da RNA polimerase e outras proteínas, desse modo direcionando a transcrição de um ácido nucleico operacionalmente ligado. Abrangidos pelos termos já mencionados estão as seqüências reguladoras de transcrição derivadas de um gene genômico eucariótico clássico (incluindo a caixa TATA que é requerida para a iniciação de transcrição precisa, with or without a CCAAT box I
sequence) e elementos reguladores adicionais (isto é, seqüências ativadoras a montante, intensificadores e silenciadores) que altera a expressão genética em resposta aos estímulos de desenvolvimento e/ou externos ou de um maneira específica de tecido. Também incluído dentro do termo está uma seqüência reguladora de transcrição de um gene procariótico clássico, em cada caso este pode incluir uma seqüência de -35 compartimentos e/ou seqüências reguladoras de transcrição de -10 compartimentos. O termo "elemento regulador" também abrange uma molécula de fusão sintética ou derivado que confere, ativa ou intensifica a expressão de uma molécula de ácido nucleico em uma célula, tecido ou órgão.
A "promotor vegetal" compreende elementos reguladores, que mediam a expressão de um segmento de seqüência codificadora em células de planta. Consequentemente, um promotor vegetal não necessita ser de origem vegetal, mas pode originar-se de vírus ou micro-organismos, por exemplo, de vírus que atacam células de planta. O "promotor vegetal" também pode originar-se de uma célula de planta, por exemplo, da planta que é transformada com a seqüência de ácido nucleico a ser expressada no processo inventivo e descrita neste. Isto também aplica-se a outros sinais reguladores de "planta", tais como terminadores de "planta". Os promotores a montante das seqüências de nucleotídeo úteis nos métodos da presente invenção podem ser modificados por uma ou mais substituições, insersões e/ou anulações de nucleotídeo sem interferir com a functionalidade ou atividade dos promotores, a estrutura de leitura aberta (ORF) ou a região reguladora 3', tal como terminadores ou outras regiões reguladoras 3' que estão localizadas além do ORF. Além disso, é possível que a atividade dos promotores seja aumentada por modificação de sua seqüência ou que seja completamente substituído por promotores mais ativos, mesmo promotores de organismos heterólogos. Para a expressão em plantas, a molécula de ácido nucleico, como descrito acima, deve ser ligado operacionalmente ou compreender um promotor adequado que expressa o gene no ponto certo no tempo e com o padrão de expressão espacial requerido.
Para a identificação de promotores funcionalmente equivalentes, a força do promotor e/ou o padrão de expressão de um promotor candidato pode ser analisada, por exemplo, ligando-se operacionalmente o promotor a um gene repórter e analisando-se o nível de expressão e o padrão do gene repórter em vários tecidos da planta. Os genes repórteres bem conhecidos adequados inclue, por exemplo, beta-glucuronidase ou beta- galactosidase. A atividade de promotor analisada medindo-se a atividade enzimática da beta-glucuronidase ou beta-galactosidase. A força do promotor e/ou padrão de expressão podem ser então comparadas àquela de um promotor de referência (tal como o usado nos métodos da presente invenção). Alternativamente, a força do promotor pode ser estimada quantifincando-se os níveis de mRNA ou comparando-se os níveis de mRNA do ácido usado nos métodos da presente invenção, com os níveis de mRNA de genes de manutenção, tais como 18S rRNA, usando-se os métodos conhecidos na técnica, tais como Northern blotting com análise densitométrica de autorradiogramas, PCR em tempo real quantitativo PCR ou RT-PCR (Heid et at., 1996 Genome Methods 6: 986-994). No geral, por "promotor fraco" é pretendido que um promotor conduza a expressão de uma seqüência codificadora em um nível baixo. Por "nível baixo" são pretendidos níveis de cerca de 1/10.000 transcrições a cerca de 1/100.000 transcrições a cerca de 1/500.0000 transcrições por célula. Inversamente, um "promotor forte" conduz a expressão de uma seqüência codificadora em nível alto ou em torno de 1/10 transcrições a cerca de 1/100 transcrições a cerca de 1/1000 transcrições por célula. No geral, por "promotor de força média" é pretendido um promotor que conduza a expressão de uma seqüência codificadora em um nível menor do que um promotor forte, em particular, em um nível que está em todos os exemplos abaixo daqueles obtidos quando sob o controle de um promotor 35S CaMV.
Operacionalmente ligado
O termo "operacionalmente ligado" como usado neste refere- se à ligação funcional entre a seqüência de promotor e o gene de interesse, tal que a seqüência de promotor seja capaz de iniciar a transcrição do gene de interesse.
Promotor constitutivo
Um "promotor constitutivo" refere-se a um promotor que é trasncripcionalmente ativo durante a maioria, mas não necessariamente, todas as fases de crescimento e desenvolvimento e sob a maioria das condições ambientais, em pelo menos uma célula, tecido ou órgão. A Tabela 2a abaixo dá exemplos de promotores constitutivos.
Tabela 2a: Exemplos de promotores constitutivos_
Fonte de Gene Referência Actina MeElroy et al, Plant Cell, 2: 163-171, 1990 HMGP WO 2004/070039 CAMV 35S Odell et al, Nature, 313: 810-812, 1985 CaMV 19S Nilsson et al., Physiol. Plant. 100:456-462, 1997 GOS2 de Pater et al, Plant J Nov;2(6):837-44, 1992, WO 2004/065596 Ubiquitina Christensen et al, Plant Mol. Biol. 18: 675-689, 1992 Ciclofilina de arroz Buehholz et al, Plant Mol Biol. 25(5): 837-43, 1994 Hidtona de milho H3 Lepetit et al, Mol. Gen. Genet. 231:276-285, 1992 Histona de alfafa H3 Wu et al. Plant Mol. Biol. 11:641-649, 1988 Aetina 2 An et al, Plant J. 10(1); 107-121, 1996 34S FMV Sanger et al., Plant. Mol. Biol., 14, 1990: 433-443 Rubiseo small subunit US 4,962,028 OCS Leisner (1988) Proc Natl Aead Sei USA 85(5): 2553 SADl Jain et al., Crop Science, 39 (6), 1999: 1696 SAD2 Jain et al., Crop Science, 39 (6), 1999: 1696 nos Shaw et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12(20):7831-7846 V-ATPase WO 01/14572 Super promotor WO 95/14098 Proteínas G-box WO 94/12015 Promotor ubíquo
Um promotor ubíquo é ativo substancialmente em todos os tecidos ou celuals de um organismo. Promotor regulado por desenvolvimento Um promotor regulado por desenvolvimento é ativo durante
certos estágios de desenvolvimento ou em partes da planta que sofrem mudanças de desenvolvimento. Promotor indutível
Um promotor indutível induziu ou aumentou a iniciação de transcrição em resposta a um estímulo químico, ambiental ou físico (para uma revisão ver Gatz 1997, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 48:89- 108), ou pode ser "indutível por tensão", isto é, ativado quando a planta é exposta a várias condições de tensão ou uma "indutível por patogênio" isto é, ativado quando uma planta é exposta a vários patogênios. Promotor específico de órgão/específico de tecido
Um promotor específico de órgão ou específico de tecido é um que é capaz de iniciar preferivelmente a transcrição em certos órgãos ou tecidos, tais como as folhas, raízes, tecido de semente etc. por exemplo, um "promotor específico de raiz" é um promotor que é transcripcionalmente ativo predominantemente em raízes vegetais, substancialmente para a exclusão de quaisquer outras partes de uma planta, enquanto ainda permite-se qualquer expressão fraca nestas outras partes de plantas. Os promotores capazes de iniciar a transcrição em certas células apenas são referidas neste como "específico de célula". Os exemplos de promotores específicos de raiz são listadas na
Tabela 2b abaixo:
Tabela 2b: Exemplos de promotores específicos de raiz
Fonte de Gene Referência RCc3 Plant Mol Biol. 1995 Jan;27(2):237-48 Arabidopsis PHTl Kovama et al., 2005; Mudge et al. (2002, PlantJ 31:341) Transportador de fosfato de Medicago Xiao et al., 2006 Arabidopsis PyklO Nitz et al. (2001) Plant Sci 161(2): 337-346 genes expressiveis em raiz Tingey et al., EMBO J. 6: 1, 1987. genes indutíveis por auxina de tabaco Van der Zaal et al., Plant Mol. Biol. 16, 983, 1991. -tubulina Oppenheimer, et al., Gene 63: 87, 1988. Genes específicos da raiz de tabaco Conkling, et al., Plant Physiol. 93: 1203, 1990. Gene Gl-3 b de B. napus United States Patent No. 5, 401, 836 SbPRPl Suzukietal., Plant Mol. Biol. 21: 109-119, 1993. LRXl Baumberger et al. 2001, Genes & Dev. 15:1128 BTG-26 Brassica napus US 20050044585 LeAMTl (tomate) Lauteret al. (1996, PNAS 3:8139) The LeNRTl-I (tomate) Lauteret al. (1996, PNAS 3:8139) gene de patatina classe I (batata) Liuetal., Plant Mol. Biol. 153:386-395, 1991. KDC1 (Daucus carota) Downey et al. (2000, J. Biol. Chem. 275:39420) Gene TobRB7 W Song (1997) PhD Thesis, North Carolina State University, Raleigh, NC USA OsRAB 5 a (Arroz) Wang et al. 2002, Plant Sei. 163:273 ALF5 (Arabidopsis) Dieneret al. (2001, Plant Cell 13:1625) NRT2; 1 Np (N. plumbaginifolia) Quesada et al. (1997, Plant Mol. Biol. 34:265)
Um promotor específico de semente é transcricionalmente
ativo predominantemente no tecido da semente, mas não exclusivamente necessário no tecido da semente (em casos de expressão fraca). O promotor específico de semente pode ser ativo durante o desenvolvimento e/ou durante a germinação de semente. O promotor específico de semente pode ser específico de endosperma/aleurona/embrião. Os exemplos de promotor específico de sementes (específico de endosperma/aleurona/embrião) sãom ostrados na Tabela 2d, 2e, 2f. Ainda, os exemplos de promotores específicos de semente são dados em Qing Qu and Takaiwa (Plant Biotechnol. J. 2, 113- 125, 2004), cuja divulgação é incorporada por referência neste como se totalmente apresentado.
Tabela 2c: Exemplos de promotor específico de sementes
gene semelhante à catepsina β - cevada Ltp2 - milho B-Peru Selinger et at., Genetics 149;1125-38,1998
Fonte de Gene Referência genes específicos de semente Simon et al., Plant Mol. Biol. 5: 191, 1985; Scofield et al., J. Biol. Chem. 262: 12202, 1987.; Baszczynski et al., Plant Mol. Biol. 14: 633, 1990. albumina de castanha-do- Pearson et al., Plant Mol. Biol. 18: 235-245, 1992. pará legumina Ellis et al., Plant Mol. Biol. 10: 203-214, 1988. glutelina (arroz) Takaiwa et al., Mol. Gen. Genet. 208: 15-22, 1986; Takaiwa et al., FEBS Letts. 221: 43-47, 1987. zeína Matzke et al Plant Mol Biol, 14(3):323-32 1990 napA Stalberg et al, Planta 199: 515-519, 1996. trigo LMW e HMW glutenin-1 Mol Gen Genet 216:81-90, 1989; NAR 17:461-2, 1989 trigo SPA Albani et al, Plant Cell, 9: 171-184, 1997 α, β, γ-gliadinas de trigo EMBO J. 3:1409-15, 1984 promotor Itrl de cevada Diaz et al. (1995) Mol Gen Genet 248(5):592-8 cevada BI, C, D, hordeína TheorAppl Gen 98:1253-62, 1999; Plant J 4:343-55, 1993; Mol Gen Genet 250:750-60, 1996 cevada DOF Mena et al, The Plant Journal, 116(1): 53-62, 1998 blz2 EP99106056.7 promotor sintético Vicente-Carbajosa et al., Plant J. 13: 629-640, 1998. prolamina de arroz NRP33 Wu et al, Plant Cell Physiology 39(8) 885-889, 1998 a-globulina de arroz Glb-I Wu et al, Plant Cell Physiology 39(8) 885-889, 1998 arroz OSHl Sato et al, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 93: 8117-8122, 1996 a-globulina de arroz REB/OHP-1 Nakase et al. Plant Mol. Biol. 33: 513-522, 1997 ADP-glicose pirofosforilase de arroz Trans Res 6:157-68, 1997 família do gene ESR do milho PlantJ 12:235-46, 1997 α-cafírina de sorgo DeRose etal., Plant Mol. Biol 32:1029-35, 1996 KNOX Postma-Haarsma et al, Plant Mol. Biol. 39:257-71, 1999 oleosina de arroz Wu et al, J. Biochem. 123:386, 1998 oleosina de girassol Cummins et al., Plant Mol. Biol. 19: 873-876, 1992 proteína ribossômica 40S de arroz putativo WO 2004/070039 alanina aminotransferase de arroz não publicado inibidor de tripsina ITRl (cevada) não publicado PROO151, WSIl 8 de arroz WO 2004/070039 PROO175, RAB21 de Arroz WO 2004/070039 PR0005 WO 2004/070039 PR00095 WO 2004/070039 α-amilase (Amy32b) Lanahan et al, Plant Cell 4:203-211, 1992; Skriver et al, Proc Natl Acad Sci USA 88:7266-7270, 1991 cathepsin R-Iike gene Cejudo et al, Plant Mol Biol 20:849-856, 1992 Barley Ltp2 Kalla et al., Plant J. 6:849-60, 1994 Chi26 Leah et al., Plant J. 4:579-89, 1994 Maize B-Peru Selinger et al., Genetics 149;1125-38,1998 Tabela 2d: exemplos de promotores específicos de endosperma
Fonte de Gene Referência glutelina (arroz) Takaiwa et al. (1986) Mol Gen Genet 208:15-22; Takaiwa et al. (1987) FEBS Letts. 221:43-47 zeína Matzke et al., (1990) Plant Mol Biol 14(3): 323-32 trigo LMW e HMW gluteriin-1 Colot et al. (1989) Mol Gen Genet 216:81-90, Anderson et al. (1989) NAR 17:461-2 trigo SPA Albani et al. (1997) Plant Cell 9:171-184 gliadinas de trigo Rafalski et al. (1984) EMBO 3:1409-15 promotor Itrl de cevada Diaz et al. (1995) Mol Gen Genet 248(5):592-8 cevada BI, C, D, hordeína Cho et al. (1999) Theor Appl Genet 98:1253-62; Muller et al. (1993) Plant J 4:343-55; Sorenson et al. (1996) Mol Gen Genet 250:750-60 cevada DOF Mena et al, (1998) Plant J 116(1): 53-62 blz2 Onate et al. (1999) J Biol Chem 274(14):9175-82 promotor sintético Vicente-Carbajosa et al. (1998) Plant J 13:629-640 prolamina de arroz NRP33 Wu et al, (1998) Plant Cell Physiol 39(8) 885-889 rice globulin Glb-1 Wu et al. (1998) Plant Cell Physiol 39(8) 885-889 globulina de arroz REB/OHP-1 Nakase et al. (1997) Plant Molec Biol 33: 513-522 ADP-glicose pirofosforilase de arroz Russell et al. (1997) Trans Res 6:157-68 família do gene ESR do milho Opsahl-Ferstad et al. (1997) Plant J 12:235-46 cafirina de sorgo DeRose et al. (1996) Plant Mol Biol 32:1029-35
Tabela 2e: Exemplos de promotores específicos de embrião:
Fonte de Gene Referência arroz OSHl Sato et al, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 93: 8117-8122, 1996 KNOX Postma-Haarsma et al, Plant Mol. Biol. 39:257-71, 1999 PROOl 51 WO 2004/070039 PROO175 WO 2004/070039 PR0005 WO 2004/070039 PR00095 WO 2004/070039
Tabela 2f: Exemplos de promotores específicos de aleurona:
Fonte de Gene Referência α-amilase (Amy32b) Lanahan et al, Plant Cell 4:203-211, 1992; Skriver et al, Proc Natl Acad Sci USA 88:7266- 7270, 1991 gene semelhante à catepsina β Cejudo et al, Plant Mol Biol 20:849-856, 1992 cevada Ltp2 Kalla et al., Plant J. 6:849-60, 1994 Chi26 Leah et al., Plant J. 4:579-89, 1994 milho B-Peru Selinger et al., Geneties 149;1125-38,1998
Um promotor específico de tecido verde como definido aqui é
um promotor que é transcricionalmente ativo predominantemente em tecido verde, substancialmente para a inclusão de quaisquer outras partes de uma planta, enquanto ainda permite-se qualquer expressão fraca nestas outras partes de planta.
Os exemplos de promotores específicos de tecido verde que podem ser usados para realizar ps métodos da invenção são mostrados na Tabela 2g.
Tabela 2g: Exemplos de promotores específicos de tecido verde
Gene Expressão Referência Ortofosfato diquinase de milho específico de folha Fukavama et al., 2001 Fosfoenolpiruvato carboxilase de milho específico de folha Kauschetal., 2001 Fosfoenolpiruvato carboxilase de arroz específico de folha Liu et al., 2003 subunidade pequena de arroz Rubisco específico de folha Nomura et al., 2000 beta expansina de arroz EXBP9 específico de broto WO 2004/070039 subunidade pequena de Pigeonpea Rubisco específico de folha Panguluri et al., 2005 Ervilha RBCS3A específico de folha
Um outro exemplo de um promotor específico de tecido é um
promotor específico de meristema, que é transcricionalmente ativo predominantemente em tecido meristemático, substancialmente para a xclusão de quaisquer outras partes de uma planta, enquanto ainda permite-se qualquer expressão fraca nestas outras partes vegetais. Os exemplos de específicos de meristema verde que podem ser usados para realizar os métodos da invenção são mostrados na Tabela 2h abaixo.
Tabela 2h: Exemplos de promotores específicos de meristema
Fonte de Gene Padrão de expressão Referência arroz OSHl Meristema apical de broto, de estágio globular de broto ao estágio de muda Sato et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 93: 8117-8122 Metalotioneína de arroz Específico de meristema BAD87835.1 WAKl & WAK 2 Meristemas apicais de broto e raiz apical e na expansão de folhas e sépalas Wagner & Kohorn (2001) Plant Cell 13(2): 303-318
Terminador
O termo "terminador" abrange uma seqüência de controle que
é uma seqüência de DNA no final de uma unidade transcripcional cujo processamento dos sinais 3' e a poliadenilação de uma transcrição primária e terminação de transcrição. O terminador pode ser derivado do gene natural, de uma variedade de outros genes vegetais ou de T-DNA. O terminador a ser adicionado pode ser derivado, por exemplo, dos genes de nopalina sintase ou octopina sintase ou alternativamente de um outro gene vegetal ou menos preferivelmente de qualquer outro gene eucariótico. Modulação
O termo "modulação" significa em relação à expressão ou
expressão genética, um processo em que o nível de expressão é mudado pela dita expressão de gene em comparação com a planta de controle, o nível de expressão pode ser aumentado ou diminuído. A expressão não modulada original pode ser de qualquer tipo de expressão de um RNA (rRNA, tRNA) ou mRNA estruturais com tradução subsequente. O termo "modular a atividade" deve significar qualquer mudança da expressão das seqüências de ácido nucleico ou proteínas codificadas inventivas, que leva ao rendimento aumentado e/ou desenvolvimento aumentado das plantas. Expressão
O termo "expressão" ou "expressão de gene" significa a
transcrição de um gene específico ou genes específicos ou construção genética específica. O termo "expressão" ou "expressão de gene" em particular, significa a transcrição de um gene ou genes ou construção genética em RNA (rRNA, tRNA) ou mRNA estruturais com ou sem a tradução subsequente do último em uma proteína. O processo inclui a transcrição de DNA e processamento do produto de mRNA resultante. Expressão aumentada/superexpressão
O termo "expressão aumentada" ou "superexpressão" como usado neste significa qualquer forma de expressão que seja adicional ao nível de expressão do tipo selvagem original.
Os métodos para aumentar a expressão de genes ou produtos de gene são bem documentados na técnica e incluem, por exemplo, a superexpressão conduzida pelos promotores apropriados, o uso de intensificadores de transcrição ou intensificadores de tradução. Os ácidos nucleicos isolados que servem como elementos promotores ou intensificadores podem ser introduzidos em uma posição apropriada (tipicamente a montante) de uma forma não heteróloga de um polinucleotídeo a fim de super-regular a expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo de interesse. Por exemplo, os promotores endógenos podem ser alterados in vivo por mutação, anulação e/ou substituição (ver, Kmiec, US 5,565,350; Zarling et al., W09322443) ou promotores isolados podem ser introduzidos em uma célula de planta na orientação apropriada em distância de um gene da presente invenção a fim de cotnrolar a expressão do gene. Se a expressão polipeptídeo for desejada, é, no geral, desejável
incluir uma região de poliadenilação na extremidade 3' de uma região codificadora de polinucleotídeo. A região de poliadenilação pode ser derivada do gene natural, de uma variedade de outros genes vegetais ou de T-DNA. A seqüência de extremidade 3' a ser adicionada pode ser derivada, por exemplo, aos genes nopalina sintase ou octopina sintase ou, alternativamente de um outro gene vegetal ou menos preferivelmente de qualquer outro gene eucariótico.
Uma seqüência de íntron também pode ser adicionada à região não traduzida 5' (UTR) ou à seqüência codificadora da seqüência codificadora parcial coding sequence para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula-se no citosol. A inclusão de um íntron unível na unidade de transcrição tanto nas construções de expressão vegetal ou animal foi mostrada aumentar a expressão genética tanto nos níveis de mRNA quanto de proteína de atpe 1000 vezes (Buchman and Berg (1988) Mol. Cell biol. 8: 4395-4405; Callis et al. (1987) Genes Dev 1:1183-1200). Tal intensificação de íntron de expressão genética é tipicamente maior do que quando colocada próximo à extremidade 5' da unidade de transcrição. O uso de íntrons de milho, íntron Adhl-S 1, 2, e 6, o íntron Bronze-I são conhecidos na técnica. Para informação geral ver: The Maize Handbook, Capítulo 116, Freeling and Walbot, Eds., Springer, Ν. Υ. (1994). Gene endógeno
Referência neste, um gene "endógeno" não refere-se apenas ao gene em questão como observado em uma planta em sua forma natural (isto é, sem haver qualquer intervenção humana), mas também refere-se àquele mesmo gene (ou um ácido nucleico/gene substancialmente homólogo) em uma forma isolada subseqüentemente (re)introduzida em uma planta (um transgene). Por exemplo, a planta transgênica contendo um tal transgene pode encontrar uma redução substancial da expressão de transgene e/ou redução substancial de expressão do gene endógeno. O gene isolado pode ser isolado de um organismo ou pode ser feito pelo homem, por exemplo, pela síntese química.
Expressão diminuída
Referência aqui a "expressão diminuída" ou "redução ou eliminação substancial" de expressão é entendida significar uma diminuição na expressão do gene endógeno e/ou níveis de polipeptídeo e/ou atividade de polipeptídeo com relação às plantas de controle. A redução ou eliminação substancial está na ordem crescente de preferência pelo menos 10 %, 20 %, %, 40 % ou 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais reduzido em comparação com aqueles de plantas de controle.
Para a redução ou eliminação substancial de expressão de um gene endógeno em uma planta, um comprimento suficiente de nucleotídeos substancialmente contíguos de uma seqüência de ácido nucleico é requerido. A fim de realizar o silencimento de gene, isto pode ser tão pouco quanto 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10 ou menos nucleotídeos, alternativamente isto pode ser tanto quanto o gene total (incluindo o 5' e/ou 3' UTR, em parte em todo). A extensão de nucleotídeo substancialmente contíguo pode ser derivada do ácido nucleico que codifica a proteína de interesse (gene alvo) ou de qualquer ácido nucleico capaz de codificar um ortólogo, parálogo ou homólogo da proteína de interesse. Preferivelmente, a tensão de nucleotídeos substancialmente contíguos é capaz de formar ligações de hidrogênio com o gene alvo (filamento sentido ou anti-sentido), mais preferivelmente, a tensão de nucleotídeos substancialmente contíguos tem, na ordem crescente de preferência, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 100 % de identidade de seqüência ao gene alvo (filamento sentido ou anti-sentido). Uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo (funcional) não é um requerimento para os vários métodos debatidos neste para a redução ou eliminação substancial de expressão de um gene endógeno.
Esta redução ou eliminação substancial de expressão pode ser atingida usando-se ferramentas e técnicas de rotina. Um método preferido para a redução ou eliminação substancial de expressão de gene endógeno ocorre pela introdução e expressão em uma planta para a construção genética em que o ácido nucleico (neste caso, uma extensão de nucleotídeos substancialmente contíguos derivados do gene de interesse ou de qualquer ácido nucleico capaz de codificar um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer da proteína de interesse) é clonado como uma repetição invertida (em parte ou completamente), separado por um espaçador (DNA não codificador).
Em um tal método preferido, a expressão do gene endógeno é reduzida ou substancialmente eliminada através do silenciamento mediado por RNA usando-se uma repetição invertida de um ácido nucleico ou uma parte destes (neste caso uma extensão de nucleotídeos substancialmente contíguos derivados do gene de interesse ou de qualquer ácido nucleico capaz de codificar um ortólogo, parálogo ou homólogo da proteína de interesse), preferivelmente capaz de formar uma estrutura de grampo de cabelo. A repetição invertida é clonada em um vetor de expressão que compreende seqüências de controle. Uma seqüência de DNA não codificadora de ácido nucleico (um espaçador, por exemplo, um fragmento de região de ligação de matriz (MAR), um íntron, um poliligador etc.) está localizado entre os dois ácidos nucleicos invertidos que formam a repetição invertida. After transcription of the inverted repeat, a chimeric RNA com a self- complementary structure is formed (partial or complete). Esta estrutura de RNA de filamento duplo é referida como o RNA grampo de cabelo (hpRNA). O hpRNA é processado pela planta em siRNAs que são incorporados em um complexo de silenciamento induzido por RNA (RISC). O RISC ainda cliva as transcrições de mRNA, desse modo reduzindo substancialmente o número de transcrições de mRNA a serem traduzidas em polipeptídeos. Para detalhes gerais adicionais ver, por exemplo,, Grierson et ai. (1998) WO 98/53083; Waterhouse et al. (1999) WO 99/53050).
O desempenho dos métodos da invenção não contam com a introdução e com a expressão em uma planta para a construção genética em que o ácido nucleico é clonado como uma repetição invertida, mas qualquer um ou mais de diversos métodos "silenciadores de gene" bem conhecidos podem ser usados para atingir os mesmos efeitos.
Um tal método para a redução da expressão de gene endógeno é o silenciamento mediado por RNA de expressão genética (sub-regulação). O silenciamento neste caso é disparado em uma planta por uma seqüência de RNA de filamento duplo (dsRNA) que é substancialmente similar ao gene endógeno alvo. Este dsRNA ainda é processado pela planta de cerca de 20 a cerca de 26 nucleotídeos denominados RNAs de interferência curta (siRNAs). Os siRNAs são incorporados em um complexo silenciador induzido por RNA (RISC) que cliva a transcrição de mRNA do gene alvo endógeno, desse modo redunzindo substancialmente o número de transcrições de mRNA a serem traduzidas em um polipeptídeo. Preferivelmente, a seqüência de RNA de filamento duplo corresponde a um gene alvo.
Um outro exemplo de um método de silenciamento de RNA envolve a introdução de seqüências de ácido nucleico ou partes destes (neste caso uma extensão de nucleotídeos substancialmente contíguos derivados do gene de interesse ou de qualquer ácido nucleico capaz de codificar um ortólogo, parálogo ou homólogo da proteína de interesse) em uma orientação sentido em uma planta. A "orientação sentido" refere-se à seqüência de DNA que é homóloga a uma transcrição de mRNA desta. Introduzido em uma planta deve ser, portanto, pelos menos uma cópia da seqüência de ácido nucleico. A seqüência de ácido nucleico adicional reduzirá a expressão do gene endógeno, dando origem a um fenômeno conhecido como co-supressão. A redução de expressão de gene será mais pronunciada se diversas cópias adicionais de uma seqüência de ácido nucleico forem introduzidas na planta, como existe uma correlação positiva entre níveis de transcrição altos e o disparo de co-supressão.
Um outro exemplo de método silenciador de RNA envolve o uso de seqüências de ácido nucleico anti-sentido. Uma seqüência de ácido nucleico "anti-sentido" compreende uma seqüência de nucleotídeo que é complementar a uma seqüência de ácido nucleico "sentido" que codifica um proteína, isto é complementar ao filamento codificador de uma molécula de cDNA de filamento duplo ou complementar a uma seqüência de transcrição de mRNA. A seqüência de ácido nucleico anti-sentido é preferivelmente complementar ao gene endógeno a ser silenciado. A complementaridade pode estar localizada na "região codificadora" e/ou na "região não codificadora" de um gene. O termo "região codificadora" refere-se a uma região da seqüência do nucleotídeo que compreende códons que são traduzidos em resíduos de aminoácido. O termo "região não codificadora" refere-se às seqüências 5' e 3' que flanqueiam a região codificadora que são transcritas mas não traduzidas em aminoácidos (também referidos como regiões não traduzidas 5' e 3').
As seqüências anti-sentido de ácido nucleico podem ser projetadas de acordo com as regras da formação de pares de base de Watson 10
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and Crick. A seqüência de ácido nucleico anti-sentido pode ser complementar à seqüência de ácido nueleico total (neste caso uma extensão de nucleotídeos substancialmente contíguos derivados do gene de interesse ou de qualquer ácido nucleico capaz de codificar um ortólogo, parálogo ou homólogo da • proteína de interesse), mas também pode ser um oligonucleotídeo que é antisense a pelo menos uma parte da seqüência de ácido nucleico (incluindo o mRNA 5' e 3' UTR). Por exemplo, a seqüência de oligonucleotídeo anti- sentido pode ser complementar à região que circunda o local de início de tradução de uma transcrição de mRNA que codifica um polipeptídeo. O comprimento de uma seqüência de oligonucleotídeoanti-sentido adequada é conhecido na técnica e pode começar a partir de cerca de 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15 ou 10 nucleotídeos de comprimento ou menos. Uma seqüência de' ácido nucleico anti-sentido de acordo com a invenção pode ser construída usando-se a síntese química e as reações de ligação enzimática usando-se métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, uma seqüência de ácido nucleico anti-sentido (por exemplo, uma seqüência de oligonucleotídeo anti- sentido) pode ser quimicamente sintetizada usando-se nucleotídeos de ocorrência natural ou nucleotídeo variadamente modificados para aumentar a estabilidade biológica das moléculas ou para aumentar a estabilidade física do duplex formado entre as seqüências de ácido nucleico anti-sentido e sentido por exemplo, derivados de fosforotioato e nucleotídeos substituídos de acndina podem ser usados. Os exemplos de nucleotídeos que podem ser usados para as seqüências seqüências de ácido nucleico anti-sentido são bem conhecidos na técnica. As modificações de nucleotídeo conhecidas incluem metilação, ciclização e 'coberturas· e substituição de um ou mais dos nucleotídeos de ocorrência natural com uma análogo tal como inosina. Outras modificações de nucleotídeos são bem conhecidas na técnica.
A seqüência de ácido nucleico anti-sentido pode ser produzida biologicamente usando-se um vetor de expressão em que uma seqüência de ácido nucleico foi subclonada em uma orientação anti-sentido (isto é, o RNA transcrito a partir do ácido nucleico inserido será de uma orientação anti- sentido a um ácido nucleico alvo de itneresse). Preferivelmente, a produção de seqüências de ácido nucleico anti-sentido em plantas ocorre por meio de construção de ácido nucleico estavelmente integrada que compreende um promotor, um oligonucleotídeo anti-sentido operacionalmente ligado e um terminador.
As moléculas de ácido nucleico usadas para o silenciamento no método da invenção (se introduzidas em uma planta ou geradas in situ) hibridizam-se ou ligam-se com as transcrições de mRNA e/ou DNA genômico que codifica um polipeptídeo para, desse modo, inibir a expressão da proteína, por exemplo, pela inibição da transcrição e/ou tradução. A hibridização pode ocorrer pela complementaridade de nucleotídeo convencional para formar um duplex estável ou, por exemplo, no caso de uma molécula de ácido nucleico anti-sentido que liga-se aos duplexes de DNA, através de interações específicas no sulco principal da hélice dupla. As seqüências anti-sentido de ácido nucleico podem ser introduzidas pela transformação ou pela injeção direta em um local de tecido específico. Alternativamente, as seqüências de ácido nucleico anti-sentido podem ser modificadas paa alvejar células selecionadas e então administradas sistemicamente. Por exemplo, para a administração sistêmica, as seqüências de ácido nucleico anti-sentido podem ser modificadas tal que estas liguem-se especificamente aos receptores ou antígenos expressados em uma superfície celular selecionada, por exemplo, pela ligação da seqüência de ácido nucleico anti-sentido a peptídeos ou anticorpos que ligam-se aos receptores de superfície ou antígenos. As seqüências anti-sentido de ácido nucleico também podem ser liberadas às células usando-se os vetores descritos neste.
De acordo com um outro aspecto, a seqüência de ácido nucleico anti-sentido é uma seqüência de ácido nucleico α-anomérica. Uma seqüência de ácido nucleico α-anomérica forma híbridos de filamento duplo específicos com RNA complementar em que, ao contrário das b-unidades usuais, os filamentos correm em paralelo um ao outro (Gaultier et al. (1987) Nucl Ac Res 15: 6625-6641). A seqüência de ácido nucleico antisentido também pode compreender compreende um 2'-o-metilribonucleotídeo (Inoue et al. (1987) Nucl Ac Res 15, 6131-6148) ou um análogo de RNA-DNA quimérico (Inoue et al. (1987) FEBS Left. 215, 327-330).
A redução ou a eliminação substancial da expressão de gene endógeno também pode ser realizado usando-se ribozimas. As ribozimas são moléculas de RNA catalíticas com atividade de ribonuclease que são capazes de clivar uma seqüência de ácido nucleico de filamento simples, tal como um mRNA, ao qual estes têm uma região complementar. Desta maneira, as ribozimas (por exemplo, ribozimas cabeça de martelo (descrito em Haselhoff and Gerlach (1988) Nature 334, 585-591) podem ser usadas para clivar cataliticamente as transcrições de mRNA que codificam um polipeptídeo, desse modo reduzindo substancialmente o número de transcrições de mRNA a serem traduzidas em um polipeptídeo. Uma ribozima tendo especificidade quanto a uma seqüência de ácido nucleico pode ser designada (ver, por exemplo, Cech et al. Patente U. S. N0 4.987.071 e Cech et al. Patente U. S. N0 5.116.742). Alternativamente, as transcrições de mRNA que correspondem a uma seqüência de ácido nucleico podem ser usadas para selecionar um RNA catalítico tendo uma atividade de ribonuclease específica de um grupo de moléculas de RNA (Bartel and Szostak (1993) Science 261, 1411-1418). O uso de ribozimas para o silenciamento de gene em plantas é conhecido na técnica (por exemplo, Atkins et al. (1994) WO 94/00012; Lenne et al. (1995) WO 95/03404; Lutziger et al. (2000) WO 00/00619; Prinsen et al. (1997) WO 97/13865 e Scott et al. (1997) WO 97/38116).
O silenciamento de gene também pode ser atingido pela mutagênese de inserção (por exemplo, inserção de T-DNA ou inserção de transposon) ou por estratégias descritas por, entre outros, Angell and Baulcombe ((1999) Plant J 20(3): 357-62), (Amplicon VIGS WO 98/36083) ou Baulcombe (WO 99/15682).
O silenciamento do gene também pode ocorrer se houver uma mutação em um gene andógeno e/ou uma mutação em um gene/ácido nucleico isolados subseqüentemente introduzido em uma planta. A redução ou a eliminação substancial podem ser causadas por um polipeptídeo não funcional. Por exemplo, o polipeptídeo pode ligar-se a várias proteínas de interação uma ou mais mutações e/ou truncações podem, portanto, fornecer um polipeptídeo que ainda é capaz de ligar-se às proteínas de interação (tais como proteínas receptoras) mas que não podem apresentar sua função normal (tal como ligando de sinalização).
Um método adicional para o silenciamento de gene é o
alvejamento de seqüências de ácido nucleico complementares à região
reguladora do gene (por exemplo, o promotor e/ou intensifícadores) para
formar estruturas hélicas triplas que evitam a transcrição do gene em células
alvo. Ver Helene, C., Anticancer Drug Res. 6, 569-84, 1991; Helene et al.,
Ann. N.Y. Acad. Sei. 660, 27-36 1992 e Maher, L.J. Bioassays 14, 807-15, 1992.
Outros métodos, tal como o uso de anticorpos direcionados a um polipeptídeo endógeno para inibir sua função na planta ou interferência no caminho de sinalização em que um polipeptídeo está envolvido, será bem conhecido pela pessoa habilitada. Em particular, pode ser considerado que as moléculas feitas pelo homem podem ser úteis para a inibição da função biológica de um polipeptídeo alvo ou para interferir com o caminho de sinalização em que o polipeptídeo alvo está envolvido.
Alternativamente, um programa de avaliação pode ser ajustado para identificar em uma população vegetal variantes naturais de um gene, cujas variantes codificam polipeptídeos com atividade reduzida. Tais variantes naturais também podem ser usadas, por exemplo, para realziar a recombinação homóloga.
Os microRNAs artificiais e/ou naturais (miRNAs) podem ser usados para nocautear a expressão e/ou a tradução de mRNA. Os miRNAs endógenos são RNAs pequenos de filamento simples de tipicamente 19 a 24 nucleotídeos de comprimento. Estes funcionam primariamente para regular a expressão genética e/ou a tradução do mRNA. A maioria dos microRNAs vegetais (miRNAs) tem complementaridade perfeita ou quase perfeita com suas seqüências alvo. Entretanto, existem alvos naturais com até cinco más combinações. Estes são processados a partir de RNAs não codificadores mais longo com estruturas de redobra características por RNases específicas de filamento duplo da família Dicer. No processamento, estes são incorporados no complexo de silenciamento induzido por RNA (RISC) pela ligação ao seu componente principal, uma proteína Argonaute. Os MiRNAs servem como os componentes de especificidade de RISC, visto que estes pares de base alvejam os ácidos nucleicos, a maioria dos mRNAs, no citoplasma. Os eventos reguladores subsequentes incluem clivagem de mRNA alvo e destruição e/ou inibição de tradução. Os efeitos da super-expressão de miRNA são, desta maneira, freqüentemente refletidos em níveis de mRNA diminuídos de genes alvo.
Os microRNAs artificiais (amiRNAs), que são, tipicamente, 21 nucleotídeos de comprimento, podem ser geneticamente projetados especificamente para regular negativamente a expressão enética de genes simples ou múltiplos de interesse. Os determinantes de seleção alvo de microRNA vegetal são bem conhecidos na técnica. Os parâmetros empíricos para o reconhecimento alvo foram definidos e podem ser usados para auxiliar no projeto de amiRNAs específicos, (Schwab et ai., Dev. Cell 8, 517-527, 2005). As ferramentas convenientes para o projeto e geração de amiRNAs e seus precursores também estão disponíveis ao público (Schwab et al., Plant Cell 18, 1121-1133,2006).
Para o desenpenho ótimo, as técnicas de silenciamento de gene usadas para reduzir a expressão em uma planta de um gene endógeno requer o uso de seqüências de ácido nucleico de plantas monocotiledôneas para a transformação de plantas monocotiledôneas e de plantas dicotiledôneas para a transformação de plantas dicotiledôneas. Preferivelmente, uma seqüência de ácido nucleico de uma dada espécie vegetal é introduzida naquela mesma espécie. Por exemplo, uma seqüência de ácido nucleico de arroz é transformada em uma planta de arroz. Entretanto, não é um requerimento absoluto que a seqüência de ácido nucleico a ser introduzida origine-se a partir das mesmas espécies vegetais como a planta em que este será introduzido. É suficiente que exista homologia substancial entre o gene alvo endógeno e o ácido nucleico a ser introduzido.
São descritos acima os exemplos de vários métodos para a redução ou eliminação de expressão em uma planta de um gene endógeno. Uma pessoa habilitada na técnica deve ser facilmente capaz de se adaptar os métodos já mencionados para o silenciamento a fim de atingir a redução da expressão de um gene endógeno em uma planta total ou em partes destes através do uso de um promotor apropriado, por exemplo. Marcador Selecionável TgeneVGene repórter
"Marcador selecionável", "gene de marcador selecionável" or "gene repórter" inclui qualquer gene que confira um fenotipo em uma célula em que esta é expressada para facilitar a identificação e/ou a seleção de células que são transfectadas ou transformadas com uma construção de ácido nucleico da invenção. Estes genes marcadores permitem a identificação de uma transferência bem sucedida das moléculas de ácido nucleico por intermédio de uma série de diferentes princípios. Os marcadores adequados podem ser selecionados de marcadores que conferem resistência antibiótica ou herbicida, que introduz um novo traço metabólico ou que permite a seleção visual. Os exemplos de genes marcadores selecionáveis incluem genes que conferem resistência a antibióticos (tal como nptll que fosforila neomicina e canamicina ou hpt, que fosforila higromicina ou genes que conferem resistência a, por exemplo, bleomicina, estreptomicina, tetraciclina, cloranfenicol, ampicilina, gentamicina, geneticina (G418), espectinomicina ou blasticidina), a herbicidas (por exemplo, bar que fornece resistência a Basta®; aroA ou gox que fornece resistência contra glifosato ou os genes que conferem resistência a, por exemplo, imidazolinona, fosfinotricina ou sulfoniluréia) ou genes que fornecem um traço metabólico (tal como manA que permite que as plantas usem manose como a fonte de carbono única ou xilose isomerase para a utilização de xilose ou marcadores antinutritivos, tais como a resistência à 2-desoxiglicose). A expressão de genes marcadores resulta na formação de cor (por exemplo, β-glucuronidase, GUS ou β- galactosidase com seus substratos coloridos, por exemplo, X-Gal), luminescência (tal como o sistema de luciferina/luciferase) ou fluorescência (Proteína Fluorescente Verde, GFP e seus derivados). Esta lista representa apenas um número pequeno de marcadores possíveis. O trabalhador habilitado está familiarizado com tais marcadores. Os marcadores diferentes são preferidos, dependendo do organismo e do método de seleção. É conhecido que na integração estável ou transitória de ácidos
nucleicos em células de planta, apenas uma minoria das células absorve o DNA estranho e, se desejado, integra-o em seu genoma, dependendo do vetor de expressão usado e a técnica de transfecção usada. Para identificar e selecionar estes integrantes, um gene que codifica quanto a um marcador selecionável (tal como os descritos acima) é usualmente introduzido nas células hospedeiras junto com o gene de interesse. Estes marcadores pode, por exemplo, ser usados em mutantes em que estes genes são não funcionais, por exemplo, pela anulação por métodos convencionais. Além disso, as moléculas de ácido nucleico que codificam um marcador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hospedeira no mesmo vetor que compreende a seqüência que codifica os polipeptídeos a invenção ou usados nos métodos da invenção ou ainda em um vetor separado. As células que foram estavelmente transfectadas com o ácido nucleico introduzido podem ser identificadas, por exemplo, por seleção (por exemplo, as células que integraram o marcador selecionável sobrevivem, visto que as outras células morrem).
Visto que os genes marcadores, particularmente, genes para a resistência a antibióticos e herbicidas, não são mais requeridos ou são indesejados na célula hospedeira transgênica uma vez que os ácidos nucleicos foram introduzidos de maneira bem sucedida, o processo de acordo com a invenção para a introdução dos ácidos nucleicos vantajosamente utilizam técnicas que permitem a remoção ou excisão destes genes marcadores. Um tal método é aquele que é conhecido como co-transformação. O método de co- transformação utiliza dois vetores de maneira simultânea par a transformação, uma vez que o vetor carrega o ácido nucleico de acordo com a invenção e uma segunda safra dos genes marcadores. Uma porção grande de transformantes recebe ou, no caso de plantas, compreende (até 40 % ou mais dos transformantes) ambos os vetores. No caso de transformação com Agrobacteria, os transformantes usualmente recebem apenas uma parte do vetor, isto é, a seqüência flanqueada pelo T-DNA, que usualmente representa o cassete de expressão. Os genes marcadores, podem ser subseqüentemente removidos a partir da planta transformada realizando-se cruzamentos. Em um outro método, os genes marcadores integrados em um transposon são usados para a transformação junto com o ácido nucleico desejado (conhecido como tecnologia Ac/Ds). Os transformantes podem ser cruzados com uma fonte de transposase ou os transformantes são transformados com uma construção de ácido nucleico que confere a expressão de uma transposase, de maneira transitória ou estável. Em alguns casos (aproximadamente 10 %), o transposon sai do genoma da célula hospedeira uma vez que a transformação aconteceu de maneira bem sucedida e é perdida. Em diversos outros casos, o transposon vai para um local diferente. Nestes casos o gene marcador deve ser eliminado realizando-se cruzamentos. Na microbiologia, as técnicas foram desenvolvidas tornando-se possível ou facilitando-se a detecção de tais eventos. Um método vantajoso adicionai conta com o que é conhecido como sistemas de recombinação; cuja vantagem é que a eliminação pelo cruzamento pode ser dispensada. O sistema melhor conhecido deste tipo é aquele que é conhecido como o sistema Cre/lox. A Crel é uma recombinase que remove as seqüências localizadas entre as seqüências IoxP. Se o gene marcador for integrado entre as seqüências IoxP, este é removido uma vez que a transformação aconteceu de maneira bem sucedida, pela expressão da recombinase. Outros sistemas de recombinação adicionais são os sistemas HIN/HIX, FLP/FRT e REP/STB system (Tribble et al., J. Biol. Chem., 275, 2000: 22255-22267; Velmurugan et al., J. Cell Biol., 149, 2000: 553-566). Uma integração específica de local no genoma vegetal das seqüências de ácido nucleico de acordo com a invenção é possível. Naturalmente, estes métodos também podem ser aplicados a microorganisms tais como levedura, fungos ou bactérias. Transgênico/Transgene/Recombinante Para os propósitos da invenção, "transgênico", "transgene" ou
"recombinante" significa com respeito a, por exemplo, uma seqüência de ácido nucleico, um cassete de expressão, construção de gene ou um vetor que compreende a seqüência de ácido nucleico ou um organismo transformado com as seqüências de ácido nucleico, cassetes ou vetores de expressão de acordo com a invenção, todas aquelas construções realizadas pelos métodos recombinantes em que
(a) as seqüências de ácido nucleico que codificam proteínas úteis nos métodos da invenção ou
(b) seqüências de controle genético que estão operacionalmente ligadas com a seqüência de ácido nucleico de acordo com a invenção, por exemplo um promotor ou (c) a) e b)
não estão localizados em seu ambiente genético natural ou foram modificados por métodos recombinantes, sendo possível para a modificação tomar a forma de, por exemplo, uma substituição, adição, anulação, inversão ou inserção de um ou mais resíduos de nucleotídeo. O ambiente genético natural é entendido como significando o local genômico ou cromossômico natural na planta original ou na presença em uma biblioteca genômica. No caso de uma biblioteca genômica, o ambiente genético natural da seqüência de ácido nucleico é preferivelmente retido, pelo menos em parte. O ambiente flanqueia a seqüência de ácido nucleico pelo menos de um lado e tem um comprimento de seqüência de pelo menos 50 bp, preferivelmente pelo menos 500 bp, especialmente preferível de pelo menos 1000 bp, mais preferivelmente pelo menos 5000 bp. Um cassete de expressão de ocorrência natural - por exemplo, a combinação de ocorrência natural do promotor natural das seqüências de ácido nucleico com a seqüência de ácido ácido nucleico correspondente que codifica um polipeptídeo útil nos métodos da presente invenção, como definido acima - torna-se um cassete de expressão transgênico quando este cassete de expressão é modificado pelos métodos não naturais sintéticos ("artificiais"), tais como, por exemplo, tratamento mutagênico. Os métodos adequados são descritos, por exemplo, no US 5.565.350 ou WO 00/15815.
A planta transgênica para os propósitos da invenção é, desta maneira entendida como significando, como acima, que os ácidos nucleicos usados nos métodos da invenção não estão em seu local no genoma da dita planta, sendo possível para os ácidos nucleicos serem expressados de maneira homóloga ou heteróloga. Entretanto, como mencionado, transgênico também significa que enquanto os ácidos nucleicos de acordo com a invenção ou usados nos métodos inventivos estão em sua posição natural no genoma de uma planta, a seqüência foi modificada com respeito à seqüência natural e/ou que as seqüências reguladoras das seqüências naturais foram modificadas. Transgênico é preferivelmente entendido como significando a expressão dos ácidos nucleicos de acordo com a invenção em um local não natural no genoma, isto é, a expressão homóloga ou preferivelmente, heteróloga dos ácidos nucleicos acontece. As plantas transgênicas preferidas são mencionadas neste. Transformação
O termo "introdução" ou "transformação" como referido neste
abrange a transferência de um polinucleotídeo exógeno em uma célula hospedeira, sem consideração ao méodo usado para a transferência. O tecido vegetal capaz de propagação clonal subsequente, por organogênese ou embriogênese, pode ser transformado com uma construção genética da presente invenção e uma planta total regenerada a partir deste. O tecido particular escolhido variará dependendo dos sistemas de propagação clonal disponíveis e melhor adaptadas às espécies particulares sendo transformadas. Os alvos de tecido exemplares incluem discos de folhas, pólen, embriões, cotilédones, hipocotilas, megagametófitos, tecido de calo, tecido meristemático existente (por exemplo, meristema apical, botões axilares e meristemas de raiz) e tecido de meristema induzido (por exemplo, meristema de cotiledônea e meristema de hipocotila). O polinucleotídeo pode ser transitória ou estavelmente introduzido em uma célula hospedeira e pode ser mantido não integrado, por exemplo, como um plasmídeo. Alternativamente, este pode ser itnegrado no genoma
hospedeiro. A célula de planta transformada resultante pode ser então usada para a regeneração de uma planta transformada de uma maneira conhecida pelas pessoas habilitadas na técnica.
A transferência de genes estranhos no genoma de uma planta é denominada transformação. A transformação de espécies de plantas é agora uma técnica de rotina.vantajosamente, qualquer um de diversos métodos de transformação podem ser usados para a introdução do gene de interesse em uma célula ancestral adequada. Os métodos descritos para a transformação ou regeneração de plantas a partir de tecidos vegetais ou células de planta podem ser utilizados para a transformação estável ou transitória. Os métodos de transformação incluem o uso de lipossomas, eletroporação, produtos químicos que aumentam a entrada de DNA livre, injeção do DNA diretamente na planta, bombardeio de pistola de partículas, transformação usando-se vírus ou pólen e microprojeção. Os métodos podem ser selecionados do método de cálcio/polietileno glicol para protoplastos (Krens, F. A. et al., (1982) Nature 296, 72-74; Negrutiu I et at. (1987) Plant Mol Biol 8: 363-373); eletroporação de protoplastos (Shillito R.D. et al. (1985) Bio/Technol 3, 1099-1102); microinjeção em material vegetal (Crossway A et al., (1986) Mol. Gen Genet 202: 179-185); bombardeio de partícula revestido por DNA ou RNA (Klein TM et al., (1987) Nature 327: 70) infecção com vírus (non-integrativos) e outros. As plantas transgênicas, incluindo plantas de cultivo transgênicas, são preferivelmente produzidas por intermédio da transformação mediada por Agrobacterium. Um método de transformação vantajoso é a transformação in planta. Para este fim, é possível, por exemplo, permitir que as agrobactérias atuem em sementes de plantas ou para inocular o meristema da planta com as agrobactérias. Foi mostrado particularmente conveniente de acordo com a invenção permitir que uma suspensão agrobactérias transformadas atuem na planta intacta ou pelo menos nos primórdios do florescimento. A planta é subseqüentemente desenvolvidas até as sementes da planta tratada serem obtidas (Clough and Bent, Plant J. (1998) 16, 735-743). Os métodos para a transformação mediada por Agrobacterium do arroz incluem os métodos bem conhecidos para a transformação do arroz, tais como aqueles descritos em qualquer um dos seguintes: Pedido de patente europeu EP 1198985 Al, Aldemita and Hodges (Planta 199: 612-617, 1996); Chan et al. (Plant Mol Biol 22 (3): 491-506, 1993), Hiei et at. (Plant J 6 (2): 271-282, 1994), cujas divulgações são incorporadas neste por referência como se totalmente apresentado. No caso da transformação do milho, o método preferido é como descrito em Ishida et al. (Nat. Biotechnol 14(6): 745-50, 1996) ou Frame et al. (Plant Physiol 129(1): 13-22, 2002), cujas divulgações são incorporadas por referência neste como se totalmente apresentado. Os ditos métodos ainda são descritos por meio de exemplo em B. Jenes et al., Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic Plants, Yol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press (1993) 128-143 and in Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225). Os ácidos nucleicos ou a construção a ser expressada são preferivelmente clonados em um vetor, que é adequado para a trnsformação de Agrobacterium tumefaciens, por exemplo, pBinl9 (Bevan et at., Nucl. Acids Res. 12 (1984) 8711). As agrobactérias transformadas por um tal vetor podem ser então usadas de maneira conhecida para a transformação de plantas, tais como plantas usadas como um modelo, como Arabidopsis (Arabidopsis thaliana está dentro do escopo da presente invenção não considerado como uma planta de cultivo) ou plantas de cultivo, tal como, por meio de exemplo, plantas de tabaco, por exemplo, pelas folhas danificadas por imersão ou folhas cortadas em uma solução agrobacteriana e então cultivando-as em meio adequado. A transformação de plantas por meio de Agrobaeterium tumefaciens é descrita, por exemplo, por Hofgen and Willmitzer in Nucl. Acid Res. (1988) 16, 9877 ou é conhecido inter alia de F. F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; em Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38.
Além da transformação de células somáticas, quando então devem ser regeneradas em planta sintactas, também é possível transformar as células de meristemas vegetais e, em particular, aquelas células que se desenvolvem em gametas. Neste caso, os gametas transformados seguem o desenvolvimento natural da planta, dado origem a plantas transgênicas. Desta maneira, por exemplo, as sementes de Arabidopsis são tratadas com agrobactérias e as sementes são obtidas a partir do desenvolvimento de plantas que em certa proporção é transformada e, desta maneira, transgênica [Feldman, KA and Marks MD (1987). Mol Gen Genet 208:274-289; Feldmann K (1992). In: C Koncz, N-H Chua and J Shell, eds, Methods in Arabidopsis Research. Word Scientific, Singapore, pp. 274-289]. Os métodos alternativos são fundamentados na remoção repetida das inflorescências e incubação do local de corte no centro da roseta com as agrobactérias transformadas, desse modo, as sementes transformadas também podem ser obtidas em um ponto posterior no tempo (Chang (1994). Plant J. 5: 551-558; Katavic (1994). Mol Gen Genet, 245: 363-370). Entretanto, um método especialmente eficaz é o método de infiltração a vácuo com suas modificações tais como o método de "imersão floral". No caso de infiltração a vácuo de Arabidopsis, as plantas intactas sob pressão reduzida são tratadas com uma suspensão agrobacteriana [Bechthold, N (1993). C R Acad Sci Paris Life Sei, 316: 1194-1199], enquanto no caso do método de "imersão floral", o desenvolvimento de tecido floral é incubado brevemente com uma suspensão bacteriana tratada com tensoativo [Clough, SJ and Bent AF (1998) The Plant J. 16, 735-743]. Uma certa proporção de sementes transgênicas é coletada em ambos os casos e estas sementes podem ser distinguidas a partir de sementes não transgênicas desenvolvendo-as sob as condições seletivas descritas acima, além da transformação estável de plastídeos é de vantagem porque os plastídeos são maternalmente herdados e a maioria das lavouras reduzindo ou eliminando o risco do fluxo de transgene através do pólen. A transformação do genoma de cloroplasto é, no geral, atingido por um processo que foi esquematicamente apresentado em Klaus et al., 2004 [Nature Biotechnology 22 (2), 225-229], Resumidamente, as seqüências a serem transformadas são clonadas junto com um gene de marcador selecionável entre as seqüências de flanqueamento homólogas ao genoma de cloroplasto. Estas seqüências flanqueadoras homólogas direcionam a integração específica de local no plastoma.
A transformação plastidal foi descrita para muitas espécies
vegetais diferentes e uma visão geral é dada em Bock (2001) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology. J Mol Biol. 2001 Sep 21; 312 (3):425-38 ou Maliga, P (2003) Progress towards commercialization of plastid transformação technology. Trends Biotechnol. 21, 20-28. Progresso biotecnológico adicional foi recentemente relatado na forma de transformantes de plastídeo de livre de marcador, que pode ser produzido por um gene marcador co-integrado transitório (Klaus et al., 2004, Nature Biotechnology 22(2), 225-229). Rotulação de ativação de DNA A rotulação de ativação de T-DNA (Hayashi et al. Science
(1992) 1350-1353), envolve a inserção de T-DNA, usualmente cotnendo um promotor (também pode ser um intensificador de tradução ou um), na região genômica do gene de interesse ou 10 kb até ou a jusante da região codificadora de um gene em uma configuração tal que o promotor direcione a expressão do gene alvejado. Tipicamente, a regulação da expressão do gene alvejado por seu promotor natural é interrompida e o gene cai sob o controle do promotor novamente introduzido. O promotor está tipicamente embutido em um T-DNA. Este T-DNA está aleatoriamente inserido no genoma da planta, por exemplo, através da infecção com Agrobacterium e leva à expressão modificada de genes próximos ao T-DNA inserido. As plantas transgênicas resultantes mostram fenotipos dominantes devido à expressão modificada de genes próximos ao promotor introduzido. TILLING
O termo "TILLING" é uma abreviação de "Lesões Locais Induzidas Alvejadas nos Genomas" e refere-se a uma tecnologia de mutagênese útil para a geração e/ou identificação de ácidos nucleicos que codificam proteínas com a expressão e/ou a atividade modificada. TILLING também permite a seleção de plantas que carregam tais variantes mutantes. Estas variantes mutantes podem apresentar expressão modificada, em comprimento ou em localização ou em tempo (se as mutações afetarem o promotor, por exemplo). Estas variantes mutantes podem apresentar atividade mais alta do que aquela apresentada pelo gene em sua forma natural. TILLING combina mutagênese de densidade alta com métodos de avaliação de resposta alta. As etapas tipicamente seguindas em TILLING são: (a) mutagênese por EMS (Redei GP and Koncz C (1992) In Methods in Arabidopsis Research, Koncz C, Chua NH, Schell J, eds. Singapore, World Scientific Publishing Co, pp. 16-82; Feldmann et al., (1994) In Meyerowitz EM, Somerville CR, eds, Arabidopsis. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp 137-172; Lightner J and Caspar T (1998) In J Martinez-Zapater, J Salinas, eds, Methods on Molecular Biology, Vol. 82. Humana Press, Totowa, NJ, pp 91-104); (b) preparação de DNA e união de indivíduos; (c) amplificação de PCR de uma região de interesse; (d) desnaturação e recozimento para permitir a formação de heteroduplexes; (e) DHPLC, onde a presença de um heteroduplex em um grupo é detectada como um pico extra no cromatograma; (f) identificação do indivíduo mutante e (g) sequenciamento do produto de PCR mutante. Os métodos para TILLING são bem conhecidos na técnica (McCallum et al., (2000) Nat Biotechnol 18: 455- 457; revisto por Stemple (2004) Nat Rev Genet 5(2): 145-50). Recombinação Homóloga
A recombinação homólogapermite a introdução em um genoma de um ácido nucleico selecionado em uma posição selecionada definida. A recombinação homóloga é uma tecnologia padrão usada de maneira rotineira em ciências biológicas para organismos inferiores, tais como levedura ou o musgo Physcomitrella. Os métodos para realizar a recombinação homóloga em plantas foi descrita não apenas para plantas modelos (Offringa et al. (1990) EMBO J 9(10): 3077-84) mas também para plantas de cultivo, por exemplo, arroz (Terada et al. (2002) Nat Biotech 20(10): 1030-4; lida and Terada (2004) Curr Opin Biotech 15(2): 132-8) e os métodos que existem são, no geral, aplicáveis com respeito ao organismo alvo (Miller et al, Nature Biotechnol. 25, 778-785, 2007). Rendimento
O termo "rendimento", no geral, significa uma produção mensurável de valor econômico, tipicamente relacioando com uma lavoura, a uma área e a um período de tempo especificados. As partes vegetais individuais contribuem diretamente com o rendimento com base em seu número, tamanho e/ou peso ou o rendimento real é o rendimento por metro quadrado para uma lavoura e ano, que é determinadodividindo-se a produção total (inclui tanto produção coletada quanto estimada) por metros quadrados plantados. O termo "rendimento" de uma planta pode se relacionar com a massa vegetativa (raiz e/ou biomassa de broto), para órgãos reprodutivos e/ou aos propagules (tal como sementes) daquela planta. Vigor precoce
"Vigor precoce" refere-se ao desenvolvimento bem
equilibrado saudável ativo durante os estágios precoces do desenvolvimento da planta e pode resultar da aptidão vegetal aumentada devido, por exemplo, às plantas serem melhores adapatadas a seu ambiente (isto é, optimização do uso de recursos de energia e divisão entre broto e raiz). As plantas tendo vigor precoce também apresenta sobrevivência de muda aumentada e um melhor estabelecimento da lavoura, que freqüentemente resulta em campos altamente uniformes (com a lavoura desenvolvendo-se de uma maneira uniforme, isto é, com a maioria das plantas atingindo os vários estágiosde desenvolvimento substancialmente ao mesmo tempo) e freqüentemente rendimento melhor e mais alto. Portanto, o vigor precoce pode ser determinado medindo-se vários fatores, tais como peso de semente milhar, porcentagem de germinação, porcentagem de emergência, desenvolvimento de muda, altura da muda, comprimento da raiz, biomassa de broto e de raiz e muito mais. Aumento/Melhora/Intensifícação
Os termos "aumento", "melhora" or "intensificação" são intercambeáveis e devem significar no sentido da aplicação pelo menos a 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 %, preferivelmente pelo menos 15 % ou %, mais preferivelmente 25 %, 30 %, 35 % ou 40 % mais rendimento e/ou desenvolvimento em comparação com as plantas de controle como definido aqui.
Rendimento de semente
O rendimento aumentado de semente pode manifestar-se por si só como um ou mais do seguinte: a) um aumento na biomassa de semente (peso de semente total) que pode estar em uma base de semente individual e/ou por planta e/ou por metro quadrado; b) número aumentado de flores por planta; c) número aumentado de sementes (enchidas); d) taxa de enchimento de semente aumentada (que é expressada como a razão entre o número de sementes enchidas dividido pelo número total de sementes); e) índice de colheita aumentado, que é expressado como a taxa do rendimento de partes colhíveis, tais como sementes, dividido pela biomasa total e f) peso de semente milhar aumentado (TKW), que é extrapolado a partir do número de sementes enchidas contadas em seu peso total. Um TKW aumentado pode resultar de um tamanho de semente aumentado e/ou peso de semente, e pode resultar de um aumento no tamanho de embrião e/ou endosperma.
Um aumento in rendimento de semente também pode ser manifestado como um aumento no tamanho de semente e/ou volume de semente. Além disso, um aumento no rendimento de semente também pode manifestar-se por si só como um aumento na área de semente e/ou comprimento de semente e/ou largura de semente e/ou perímetro de semente. O rendimento aumentado também pode resultar na arquitetura modificada ou pode ocorrer por causa da arquitetura modificada.
r
índice de Verdor
O "índice de verdor" como usado neste é calculado a partir de imagens imagens digitais de plantas. Para cada pixel que pertence ao objeto vegetal na imagem, a razão do valor verde versus o valor vermelho (no modelo RGB para codificar a cor) é calculado. O índice de verdor é expressado como a porcentagem de pixels para os quais a razão verde-para- vermelho excede um dado limiar. Sob condições de de desenvolvimento normais, sob condições de desenvolvimento com tensão por sal e sob condições de desenvolvimento com disponibilidade de nutriente reduzida, o índice de verdor das plantas é medido na última formação de imagem antes do florescimento. Em contraste, sob condições condições de desenvolvimento com tensão por secura, o índice de verdor das plantas é medido na primeira formação de imagem após a secura. Planta
O termo "planta" como usado neste abrange plantas totais, ancestrais e progênie das plantas e partes de plantas, incluindo sementes, brotos, caules, folhas, raízes (incluindo tubérculos), flores e tecidos e órgãos, em que cada um dos já mencionados compreendem o gene/ácido nucleico de interesse. O termo "planta" também abrange células de planta, culturas de suspensão, tecido de calo, embriões, regiões meristemáticas, gametófitos, esporófitos, pólen e microesporos, again em que cada um dos já mencionados compreendem o gene/ácido nucleico de interesse.
As plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertencem à superfamília Viridiplantae, em particular, plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas incluindo forragem ou legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimentos, árvores ou arbustos selecionados da lista que compreende Acer spp., Actinidia spp., Abelmoschus spp., Agave sisalana, Agropyron spp., Agrostis stolonifera, Allium spp., Amaranthus spp., Ammophila arenaria, Ananas eomosus, Annona spp., Apium graveolens, Araehis spp, Artoearpus spp., Asparagus offieinalis, Avena spp. (por exemplo, Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantina, Avena fatua var. sativa, Avena hybrida), Averrhoa carambola, Bambusa sp., Benineasa hispida, Bertholletia exeelsea, Beta vulgaris, Brassiea spp. (por exemplo, Brassiea napus, Brassica rapa ssp. [canola, óleo de semente de colza, nabo]), Cadaba farinosa, Camellia sinensis, Canna indica, Cannabis sativa, Capsicum spp., Carex a/ata, Carica papaya, Carissa macrocarpa, Carya spp., Carthamus tinetorius, Castanea spp., Ceiba pentandra, Cichorium endivia, Cinnamomum spp., Citrullus lanatus, Citrus spp., Cocos spp., Coffea spp., Colocasia esculenta, Cola spp., Corchorus sp., Coriandrum sativum, Corylus spp., Crataegus spp., Crocus sativus, Cueurbita spp., Cueumis spp., Cynara spp., Daueus carota, Desmodium spp., Dimoearpus longan, Dioseorea spp., Diospyros spp., Eehinochloa spp., Elaeis (por exemplo, Elaeis guineensis, Elaeis oleifera), Eleusine eoraeana, Eragrostis tef Erianthus sp., Eriobotrya japoniea, Eucalyptus sp., Eugenia uniflora, Fagopyrum spp., Fagus spp., Festuea arundinaeea, Fieus cariea, Fortunella spp., Fragaria spp., Ginkgo biloba, Glyeine spp. (por exemplo, Glyeine max, Soja hispida ou Soja max), Gossypium hirsutum, Helianthus spp. (por exemplo, Helianthus annuus), Hemerocallis fulva, Hibiseus spp., Hordeum spp. (por exemplo, Hordeum vulgare), Ipomoea batatas, Juglans spp., Laetuea sativa, Lathyrus spp., Lens culinaris, Linum usitatissimum, Litehi chinensis, Lotus spp., Luffa acutangula, Lupinus spp., Luzula sylvatica, Lycopersicon spp. (por exemplo, Lycopersicon eseulentum, Lycopersicon lyeopersieum, Lyeopersieon pyriforme), Macrotyloma spp., Malus spp., Malpighia emarginata, Mammea americana, Mangifera indica, Manihot spp., Manilkara zapota, Medicago sativa, Melilotus spp., Mentha spp., Miscanthus sinensis, Momordiea spp., Morus nigra, Musa spp., Nieotiana spp., Olea spp., Opuntia spp., Omithopus spp., Oryza spp. (por exemplo, Oryza sativa, Oryza latifolia), Panicum miliaeeum, Panieum virgatum, Passiflora edulis, Pastinaea sativa, Pennisetum sp., Persea spp., Petroselinum erispum, Phalaris arundinaeea, Phaseolus spp., Phleum pratense, Phoenix spp., Phragmites australis, Physalis spp., Pinus spp., Pistacia vera, Pisum spp., Poa spp., Populus spp., Prosopis spp., Prunus spp., Psidium spp., Puniea granatum, Pyrus eommunis, Quereus spp., Raphanus sativus, Rheum rhabarbarum, Ribes spp., Rieinus eommunis, Rubus spp., Saeeharum spp., Salix sp., Sambueus spp., Seeale eereale, Sesamum spp., Sinapis sp., Solanum spp. (por exemplo, Solanum tuberosum, Solanum integrifolium ou Solanum lyeopersicum), Sorghum bicolor, Spinaeia spp., Syzygium spp., Tagetes spp., Tamarindus indica, Theobroma eaeao, Trifolium spp., Tripsaeum daetyloides, Triticoseeale rimpaui, Tritieum spp. (por exemplo, Tritieum aestivum, Tritieum durum, Tritieum turgidum, Tritieum hybernum, Tritieum macha, Tritieum sativum, Tritieum monoeoeeum ou Tritieum vulgare), Tropaeolum minus, Tropaeolum majus, Vaeeinium spp., Vicia spp., Vigna spp., Viola odorata, Vitis spp., Zea mays, Zizaniapalustris, Ziziphus spp., entre outros. Descrição Detalhada da Invenção
I. Proteína que compreende o domínio LOB (LOB:
β r
Fronteiras de Órgão Lateral) Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle. De acordo com uma primeira forma de realização, a presente invenção fornece um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD. Um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD.
Qualquer referência a seguir a uma "proteína útil nos métodos
da invenção" é determinada entender um polipeptídeo LBD como definido neste. Qualquer referência a seguir a um "ácido nucleico útil nos métodos da invenção" é determinada entender um ácido nucleico capaz de codificar um tal polipeptídeo LBD. O ácido nucleico a ser introduzido em uma planta (e, portanto, útil na realização dos métodos da invenção) é qualquer ácido nucleico que codifica o tipo de proteína que será descrito agora, a seguir também denominado "ácido nucleico LBD" ou "gene LBD".
A "polipeptídeo LBD" como definido neste refere-se a qualquer polipeptídeo que compreenda um domínio DUF260 (número de acessão Pfam PF03195, número de acessão Interpro IPR004883, ver Figura 1). Preferivelmente, a seqüência de polipeptídeo LBD, quando usada na construção de uma árvore filogenética tal como a descrita na Figura 3 (ou como definido por Yang et al., 2006, usando-se o método HKY (Hasegawa et al., J. Mol. Evol. 22, 160-174, 1985)), agrupamentos com o grupo de polipeptídeos de domínio LOB de classe II que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 2 em vez de qualquer outro grupo.
Ainda preferivelmente, a proteína LBD compreende pelo menos um dos seguintes motivos conservados:
Motivo 1: MSCNGCRXLRKGCX (SEQ ID N°: 5); em que X na posição 8 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente V ou I e em que X na posição 14 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente é
um de S, G ou N.
Motivo 2: QXXATXFXAKFXGR (SEQ ID N°: 6), em que X na posição 2 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de A, S, ou G; em que X na posição 3 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de N, Q ou H; em que X na posição 6 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de V, L ou I; em que X na posição 8 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de L, V, A ou I e em que X na posição 12 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de Y ou F.
Motivo 3: FXSLLXEAXG (SEQ ID N°: 7); em que X na posição 2 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de R, S, K ou Q; em que X na posição 6 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de Υ, H ou F e em que X na posição 9 pode ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente C ou A.
Ainda preferivelmente, a proteína LBD compreende mais do que sete, mais preferivelmente pelo menos do que nove resíduos Cys e não compreende a assinatura DP(V/I)YG (SEQ ID N°: 8).
O domínio DUF260 é caracterizado pela presença de um motivo C-x(2)-C-x(6)-C-x(3)-C (SEQ ID N°: 9), em que X pode ser qualquer aminoácido.
O termo "domínio" e "motivo é definido na seção "definições" aqui. Bancos de dados especialistas existem para a identificação de domínios, por exemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244, InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318, Prosite (Bucher and Bairoch (1994), uma sintaxe de perfil generalizado para motivos de seqüências biomoleculares e sua função na interpretação de seqüência automática. (In) ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004) ou Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002). Uma série de ferramentas para a análise ίη silico de seqüências de proteínas está disponível no servidor ExPASy proteomics (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al., ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). Os domínios também são identificados usando-se técnicas de rotina, tal como pelo alinhamento de seqüência.
Os métodos para o alinhamento de seqüências para comparação são bem conhecidos na técnica, tais métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA. GAP usa o algoritmo de Needleman and Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) para encontrar o alinhamento global (isto é, medindo-se as seqüências completas) de duas seqüências que maximizam o número de equiparações e minimiza o número de fendas. O algoritmo BLAST (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403-10) calcula a identidade de seqüência percentual e realiza uma análise estatística da similaridade entre as duas seqüências. O software para realizar a análise BLAST está publicamente disponível através do National Centre for Biotechnology Information (NCBI). os homólogos podem ser facilmente identificados usando-se, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de seqüência múltipla ClustalW (versão 1.83), com os parâmetros de alinhamento default e um método de registro em porcentagem. As porcentagens globais de similaridade e de identidade também podem ser determinados usando-se um dos métodos disponíveis no pacote de software MatGAT (Campanella et al, BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando-se proteína ou seqüências de DNA). A edição manual menor pode ser realizada para otimizar o alinhamento entre os motivos conservados, como deve estar evidente para uma pessoa habilitada na técnica. Além disso, em vez de usar seqüências de comprimento total para a identificação de homólogos, domínios específicos também podem ser usados. Os valores de identidade de seqüência podem ser determinados sobre o aminoácido inteiro ou seqüência de aminoácido ou em domínios selecionados ou motivos conservados, usando-se os programas mencionados acima usando-se os parâmetros default.
Além disso, os polipeptídeos LBD (pelo menos em sua forma natural), como fatores de transcrição, tipicamente têm atividade de ligação de DNA. Ferramentas e técnicas para medir a atividade de ligação de DNA são bem conhecidas na técnica e incluem por exemplo ensaios de retardo de gel. Os métodos experimentais para caracterizar a atividade fatores de transcrição podem ser encontrados, por exemplo, em Sambrook et ai. (2001) Molecular Cloning: a laboratoiy manual, 3o Edição Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York ou nos Volumes 1 e 2 de Ausubel et al. (atualizado anualmente), Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols.
A presente invenção é ilustrada transformando-se as plantas com a seqüência de ácido nucleico representada pela SEQ ID N°: 1, que codifica a seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 2. Entretanto, o desempenho da invenção não está restrito a estas seqüências; os métodos da invenção podem ser vantajosamente realizados usando-se qualquer ácido nucleico que codifica LBD ou polipeptídeo LBD como definido neste.
Os exemplos de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos LBD são dadas na Tabela Al do Exemplo 1 neste. Tais ácidos nucleicos são úteis na realização dos métodos da invenção. As seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1 são seqüências de exemplos de ortólogos e parálogos do polipeptídeo LBD representado pela SEQ ID N°: 2, os termos "ortólogos" e "parálogos" sendo como definido neste. Ortólogos e parálogos adicionais podem ser facilmente definidos pela realização de uma denominada pesquisa blast recíproca. Tipicamente, isto envolve um primeiro BLAST que envovle submeter uma seqüência em dúvida ao BLAST (por exemplo, usando-se qualquer uma das seqüências listadas na Tabela Al do Exemplo 1) contra qualquer banco de dados de seqüência, tais como os bancos de dados NCBI publicamente disponíveis. BLASTN ou TBLASTX (usando-se os valores default padrão) são, no geral, usados quando começa-se a partir de uma seqüência de nucleotídeo e BLASTP ou TBLASTN (usando- se os valores default padrão) quando começa-se a partir de uma seqüência de proteína. Os resultados de BLAST podem ser opcionalmente filtrados. As seqüências de comprimento total de cada um dos resultados filtrados ou resultados não filtrados são então submetidos ao BLAST novamente (segundo BLAST) contra seqüências do organismo a partir do qual a seqüência em questão é derivada (quando a seqüência em questão é a SEQ ID N°: 1 ou SEQ ID N°: 2, o segundo BLAST portanto, deve ser contra seqüências de Arabidopsis). os resultados do primeiro e segundo BLASTs são então comparados, um parálogo é identificado se um acerto de classificação alta do primeiro blast for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada, submetendo-se ao BLAST novamente então resulta idealmente na seqüência em questão entre os acertos mais altos; um ortólogo é identificado se um acerto de classificação alta no primeiro BLAST não for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada e preferivelmente resulta no BLAST novamente na seqüência em questão estando entre os acertos mais altos.
Os acertos de classificação alta são aqueles tendo um valor E baixo. Quanto mais baixo o valor E, mais significante o registro (ou, em outras palavras, menor a chance que o acerto seja encontrado por chance). A computação do valor E é bem conhecido na técnica. Além dos valores E, as comparações são registradas pela identidade de porcentagem. A Identidade de porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácidos nucleicos comparadas (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. No caso de famílias grandes, o ClustalW pode ser usado, seguido por uma árvore de união próxima, para ajudar a visualizar o agrupamento de genes relacionados e para identificar ortólogos e parálogos.
As variantes de ácido nucleico também podem ser úteis na prática dos métodos da invenção. Os exemplos de tais variantes incluem ácidos nucleicos que codificam homólogos e derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1, os termos "homólogo" e "derivado" sendo como definido neste. Também são úteis nos métodos da invenção os ácidos nucleicos que codificam homólogos e derivados de ortólogos ou parálogos de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1. Os homólogos e derivados úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica e funcional como a proteína não modificada da qual estes são derivados.
As Variantes de ácido nucleico adicionais úteis na prática dos métodos da invenção incluem porções de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD, ácidos nucleicos que hibridizam-se a ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD, variantes de união de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD, variantes alélicas de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD e variantes de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD obtidos pelo embaralhamento de gene. Os termos seqüência de hibridização, variante de união, variante alélica e embaralhamento de gene são como descritos neste.
Vantajosamente, a presente invenção fornece até agora seqüências de ácido nucleico LBD e polipeptídeo desconhecidas.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, é fornecido uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 69;
(ii) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar a qualquer uma das SEQ ID N0 dadas em (i); (iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência a SEQ ID N0: 70;
(iv) um ácido nucleico capaz de hibridizar sob condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dados em (i), (ii) ou (iii) acima.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, portanto, é fornecido um polipeptídeo isolado que compreende:
(i) uma seqüência de aminoácido tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 70.
(ii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácido
dadas em (i).
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD não necessitam ser ácidos nucleicos de comprimento total, visto que o desempenho dos métodos da invenção não contam com o uso de seqüências de comprimento total de ácido nucleico. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma porção de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Al do Exemplo 1 ou uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1.
Uma porção de um ácido nucleico pode ser preparada, por exemplo, realizando-se uma ou mais anulações no ácido nucleico. As porções podem ser usadas na forma isolada ou estas podem ser fundidas a outras seqüências codificadoras (ou não codificadoras) a fim de, por exemplo, produzir uma proteína que combine diversas atividades. Quando fundido a outras seqüências codificadoras, o polipeptídeo resultante produzido na tradução pode ser maior do que aquele predito para a porção de proteína.
As porções úteis nos métodos da invenção, codificam um polipeptídeo LBD como definido neste têm substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1. Preferivelmente, a porção é uma porção de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Al do Exemplo 1 ou é uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1. Preferivelmente a porção é de pelo menos 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 nucleotídeos consecutivos de comprimento, os nucleotídeos consecutivos sendo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Al do Exemplo 1 ou de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1. Mais preferivelmente, a porção é uma porção do ácido nucleico da SEQ ID N°: 1. Preferivelmente, a porção codifica uma seqüência de aminoácido que quando usada na construção de uma árvore filogenética tal como a descrita na Figura 3 (ou como definido por Yang et al., 2006, usando-se o método HKY(Hasegawa et al., J. Mol. Evol. 22, 160-174, 1985)), agrupamentos com o grupo de polipeptídeos de domínio LOB de classe II que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 2 em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é um ácido nucleico capaz de hibridizar, sob condições de estringência reduzida, preferivelmente sob condições estringentes, com um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido neste ou com uma porção como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Al do Exemplo 1 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Al do Exemplo 1.
As seqüências de hibridização úteis nos métodos da invenção codificam um polipeptídeo LBD como definido neste e têm substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1. Preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Al do Exemplo 1 ou a uma porção de qualquer destas seqüências, uma porção sendo como definida acima ou em que a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1. Mais preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a um ácido nucleico como representado pela SEQ ID N°: 1 ou a uma porção deste.
Preferivelmente, a seqüência de hibridização codifica uma seqüência de aminoácido que quando usada na construção de uma árvore filogenética tal como a descrita na Figura 3 (ou como definido por Yang et al., 2006, usando-se o método HKY (Hasegawa et al., J. Mol. Evol. 22, 160-174, 1985)), agrupamentos com o grupo de polipeptídeos de domínio LOB de classe II que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 2 em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma variante de união que codifica um polipeptídeo LBD como definido neste acima, a variante de união sendo como definido neste. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta a variante de união de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Al do Exemplo 1 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1.
As variantes de união preferidas são variantes de união de um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 1 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 2. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante de união, quando usado na construção de uma árvore filogenética tal como a descrita na Figura 3 (ou como definido por Yang et al., 2006, usando-se o método HKY (Hasegawa et al., J. Mol. Evol. 22, 160-174, 1985)), agrupamentos com o grupo de polipeptídeos de domínio LOB de classe II que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 2 em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil na realização dos métodos da invenção é uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido neste acima, uma variante alélica sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante alélica de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Al do Exemplo 1 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1.
As variantes alélicas úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica como o polipeptídeo LBD da SEQ ID N°: 2 qualquer um dos aminoácidos descritos na Tabela Al do Exemplo 1. As variante alélicas que existem em estado natural e abrangidas dentro dos métodos da presente invenção são o uso destes alelos naturais. Preferivelmente, a variante alélica é uma variante alélica da SEQ ID N°: 1 ou uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 2. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante alélica, quando usada na construção de uma árvore filogenética tal como a descrita na Figura 3 (ou como definido por Yang et al, 2006, usando-se o método HKY (Hasegawa et al., J. Mol. Evol. 22, 160-174, 1985)), agrupamentos com o grupo de polipeptídeos de domínio LOB de classe II que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 2 em vez de qualquer outro grupo.
Mistura de gene e a evolução direcionada podem ser usadas para gerar variantes de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD como definido acima; o termo "mistura de gene" sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Al do Exemplo 1 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Al do Exemplo 1, cujo ácido nucleico variante é obtido pelo embaralhamento de gene.
Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pelo ácido nucleico variante obtido pelo embaralhamento de gene, quando usado na construção de uma árvore filogenética tal como a descrita na Figura 3 (ou como definido por Yang et al., 2006, usando-se o método HKY (Hasegawa et al., J. Mol. Evol. 22, 160-174, 1985)), agrupamentos com o grupo de polipeptídeos de domínio LOB de classe II que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 2 em vez de qualquer outro grupo.
Além disso, as variantes de ácido nucleico também podem ser obtidas por mutagênese direcionada ao local. Diversos métodos estão disponíveis para atingir a mutagênese direcionada ao local, o mais comum sendo Métodos com base em PCR (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds.).
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD podem ser derivados de qualquer fonte natural ou artificial. O ácido nucleico pode ser modificado a partir de sua forma natural na composição e/ou ambiente genômico através da manipulação humana deliberada. Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica o polipeptídeo LDB é de uma planta, ainda preferivelmente de uma planta dicotiledônea, mais preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente o ácido nucleico é de Arabidopsis thaliana.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento. Em particular, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo rendimento aumentado, especialmente rendimento aumentado de semente com relação às plantas de controle. Os termos "rendimento" e "rendimento de semente" são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste.
Referência neste a traços intensificados relacionados com o rendimento é determinada entender um aumento na biomassa (peso) de uma ou mais partes de uma planta, que pode incluir partes (coletáveis) acima do solo e/ou partes (coletáveis) abaixo do solo. Em particular, tais partes colhíveis acima do solo são biomassa de broto e sementes, and desempenho dos métodos da invenção resulta em plantas tendo biomassa aumentada de broto e rendimento de semente com relação à biomassa de broto e rendimento de semente de plantas de controle. Tomando o milho como um exemplo, um aumento no rendimento pode ser manifestado como um ou mais do seguinte: aumento no número de plantas estabelecido por hectare ou acre, um aumento no número de espigas por planta, um aumento no número de fileiras, número de sementes por fileira, peso de semente, peso de semente milhar, comprimento/diâmetro de espiga, aumento na razão de enchimento de semente (que é o número de sementes enchidas dividido pelo número total de sementes e multiplicado por 100), entre outros. Tomando-se o arroz como um exemplo, um aumento no rendimento pode manifestar-se por si só como um aumento em um ou mais do seguinte: número de plantas por hectare ou acre, número de panículas por planta, número de espigas por panícula, número de flores (flósculos) por panícula (que é expressado como uma razão do número de sementes enchidas no número de panícula primárias), aumento na razão de enchimento de semente (que é o número de sementes enchidas dividido pelo número total de sementes e multiplicado por 100), aumento em peso de semente milhar, entre outros.
A presente invenção fornece um método para aumentar o rendimento, especialmente rendimento de biomassa de broto e rendimento de semente de plantas, com relação às plantas de controle, cujo método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar a expressão, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido neste.
Visto que as plantas transgênicas de acordo com a presente invenção têm rendimento aumentado, é provável que estas plantas apresentem uma taxa de desenvolvimento aumentada (durante pelo menos parte do seu ciclo de vida), com relação à taxa de desenvolvimento de plantas de controle em um estágio correspondente em seu ciclo de vida.
A taxa de desenvolvimento aumentada pode ser específica para uma ou mais partes de uma planta (incluindo sementes) ou pode ser substancialmente por toda a planta. As plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada pode ter um ciclo de vida mais curto, o ciclo de vida de uma planta pode ser tomado significar o tempo necessário para o desenvolvimento de uma semente madura seca até o estágio onde a planta produziu sementes maduras secas, similar ao material de partida. Este ciclo de vida pode ser influenciado por fatores tais como vigor precoce, taxa de desenvolvimento, índice de verdor, tempo de florescimento e velocidade de maturação de semente. O aumento em taxa de desenvolvimento pode acontecer em um ou mais estágios no ciclo de vida de uma planta ou substancialmente durante o ciclo de vida de planta total. A taxa de desenvolvimento aumentada durante os estágios precoces no ciclo de vida de uma planta pode refletir o vigor intensificado. O aumento na taxa de desenvolvimento pode alterar o ciclo de coleta de uma planta permitindo que as plantas sejam semeadas depois e/ou coletadas mais cedo do que seria de outra maneira possível (um efeito similar pode ser obtido com tempo de florescimento precoce). Se a taxa de desenvolvimento for suficientemente aumentada, isto pode permitir a semeadura adicional de sementes das mesmas espécies vegetais (por exemplo, semeadura e coleta de plantas de arroz seguido pela semeadura e coleta de outras plantas de arroz tudo dentro de um período de desenvolvimento convencional). Similarmente, se a taxa de desenvolvimento for suficientemente aumentada, isto pode permitir a semeadura adicional de sementes de espécies de plantas diferentes (por exemplo a semeadura e a coleta de plantas de milho seguido por, por exemplo, a semeadura e a coleta opcional de soja, batata ou qualquer outro vegetal adequado). Os Períodos de coleta adicionais a partir do mesmo estoque de raiz no caso de algumas plantas de cultivo também pode ser possível. A alteração do ciclo de coleta de uma planta pode levar a um aumento na produção de biomassa anual por acre (devido a um aumento no número de vezes (diz-se em um ano) que qualquer planta particular pode ser desenvolvida e coletada). Um aumento na taxa de desenvolvimento também pode permitir o cultivo de plantas transgênicas em uma área geográfica mais ampla do que suas contrapartes do tipo selvagem, visto que as limitações territoriais para o desenvolvimento de uma lavoura são freqüentemente determinados pelas condições ambientais adversas no período de plantio (estação precoce) ou no período de coleta (estação posterior). Tais condições adversas podem ser evitadas se o ciclo de coleta for encurtado. A taxa de desenvolvimento pode ser determinada derivando-se vários parâmetros de curvas de desenvolvimento, tais parâmetros podem ser: T-Mid (o tempo levado pelas plantas para atingir 50 % de seu tamanho máximo) e T-90 (tempo levado pelas plantas para atingir 90 % de seu tamanho máximo), entre outros.
De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada com relação às plantas de controle. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método for aumentar a taxa de desenvolvimento de plantas, cujo método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar a expressão, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido neste. Em particular, um aumento na taxa de desenvolvimento foi observada durante os estágios de desenvolvimento precoce da planta (vigor precoce).
Um aumento no rendimento e/ou taxa de desenvolvimento ocorre se a planta estiver sob condições sem estresse ou se a planta for exposta a várias tensões em comparação com as plantas de controle. As Plantas tipicamente respondem à exposição à tensão desenvolvendo-se mais lentamente. Em condições de tensão grave, a planta pode ainda parar de se desenvolver completamente. A tensão branda por outro lado é definida neste como sendo qualquer tensão à qual uma planta é exposta que não resulta na planta parando de se desenvolver completamente sem sem a capacidade de retomar o crescimento. A tensão branda no sentido da invenção da invenção leva a uma redução no desenvolvimento das plantas submetidas à tensão de menos que 40 %, 35 % ou 30 %, preferivelmente menor do que 25 %, 20 % ou 15 %, mais preferivelmente menor do que 14 %, 13 %, 12 %, 11 % ou 10 % ou menor em comparação com a planta de controle sob condições sem estresse. Devido aos avanços nas práticas agrícolas (irrigação, fertilização e tratamentos com pesticidas) tensões graves não são freqüentemente encontradas em plantas de cultivo cultivadas. Como uma conseqüência, o desenvolvimento comprometido induzido pela tensão branda é freqüentemente uma característica indesejada para a agricultura. As tensões brandas são as tensões (ambientais) bióticas e/ou abióticas diárias às quais a planta é exposta. As tensões abióticas podem ocorrer devido à secura ou excesso de água, tensão anaeróbica, tensão ao sal, toxicidade química, tensão oxidativa e calor, frio ou temperaturas congelantes. A tensão abiótica pode ser uma tensão osmótica causada por uma tensão a água (particularmente devido à secura), tensão ao sal, tensão oxidativa ou uma tensão iônica. As Tensões bióticas são tipicamente aquelas tensões causadas por patogênio, tais como bactérias, vírus, fungos e insetos.
Em particular, os métodos da presente invenção podem ser realizados sob condições sem estresse ou sob condições de secura branda para dar plantas tendo rendimento aumentado com relação às plantas de controle. Como relatado em Wang et al. (Plant (2003) 218: 1-14), a tensão abiótica leva a uma série de mudanças morfológicas, fisiológica, bioquímicas e moleculares que afetam adversamente o desenvolvimento e produtividade da planta. Secura, salinidade, temperaturas extremas e tensão oxidativa são conhecidas serem interconectadas e podem induzir o desenvolvimento e o dano celular através de mecanismos similares. Rabbani et al. (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767) descreve um grau particularmente alto de "cruzamento" de estresse por secura e tensão por salinidade alta. Por exemplo, seca e/ou desalinização são manifestadas primariamente como tensão osmótica, resultando na interrupção da homeostase e a distribuição de íon na célula. Tensão oxidativa, que freqüentemente acompanha temperatura alta e baixa, tensão por salinidade ou secura, pode causar a desnaturação de de proteínas funcionais e estruturais. Como uma conseqüência, estas diversas tensões ambientais freqüentemente ativam caminhos de sinalização celular e respostas celulares similares, tais como a produção de proteínas de tensão, super-regulação do acúmulo de anti-oxidantes, acúmulo dos solutos compatíveis e interrupção do desenvolvimento. O termo condições "sem tensão" como usado aqui são aquelas condições ambientais que permitem o desenvolvimento ótimo de planta de plantas. As pessoas habilitadas na técnica estão cientes das condições de solo normais e condições climáticas para uma dada localização. As plantas com condições de desenvolvimento ótimas, (desenvolvem-se sob condições sem estresse) tipicamente, o rendimento na ordem crescente de preferência pelo menos 90 %, 87 %, 85 %, 83 %, 80 %, 77 % ou 75 % da produção média de tal planta em um dado ambiente. A produção média pode ser calculada com base na coleta e/ou na estação. As pessoas habilitadas na técnica estão cientes das produções de rendimento médio de uma lavoura.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas com rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar o rendimento em plantas que se desenvolvem sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas, cujo método compreende aumentar expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições de deficiência de nutriente, particularmente sob condições de deficiência de nitrogênio, vigor precoce aumentado e rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método for aumentar vigor precoce e rendimento em plantas desenvolvidas sob condições de deficiência de nutriente, cujo método compreende aumentar a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD. A Deficiência de nutriente pode resultar de uma perda ou de um excesso de nutrientes tais como nitrogênio, fosfatos e outros compostos contendo fósforo, potássio, cálcio, cádmio, magnésio, manganês, ferro e boro, entre outros.
A presente invenção abrange plantas ou partes destas (incluindo sementes) obteníveis pelos métodos de acordo com a presente invenção. As plantas ou partes destas compreende um ácido nucleico transgene que codifica um polipeptídeo LBD como definido acima.
A invenção também fornece contruções genéticas e vetores para facilitar a introdução e/ou expressão em plantas de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD. A construção de genes pode ser inserida em vetores, que pode estar comercialmente disponível, adequada para a transformação em plantas e adequado para a expressão do gene de interesse nas células transformadas. A invenção também forence o uso da construção de gene como definido neste nos métodos da invenção.
Mais especificamente, a presente invenção fornece uma construção que compreende:
(a) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido acima;
(b) uma ou mais seqüências de controle capazes de conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico de (a) e opcionalmente
(c) uma seqüência de terminação de transcrição.
Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD é como definido acima. O termo "seqüência de controle" e "seqüência de terminação" são como definidos neste.
As Plantas são transformadas com um vetor que compreende qualquer um dos ácidos nucleicos descritos acima. O técnico habilitado estará bem ciente dos elementos genéticos que devem estar presentes no vetor na ordem para transformar, selecionar e propagar de maneira bem sucedida as células hospedeiras contendo a seqüência de interesse. A seqüência de interesse é operacionalmente ligada a uma ou mais seqüências de controle (pelo menos a um promotor).
Vantajosamente, qualquer tipo de promotor, se natural ou sintético, pode ser usado para conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico. Um promotor constitutivo é particularmente útil nos métodos. Ver a seção "definições" neste para definições dos vários tipos de promotores.
Deve estar claro que a aplicabilidade da presente invenção não está restrita ao ácido nucleico que codifica o polipeptídeo LBD representado pela SEQ ID N°: 1, nem é a aplicabilidade da invenção restrita à super- expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo LBD quando conduzida por um promotor constitutivo.
O promotor constitutivo é preferivelmente um promotor GOS2, preferivelmente um promotor GOS2 de arroz. Ainda preferivelmente o promotor constitutivo é representado por uma seqüência de ácido nucleico substancialmente similar à SEQ ID N°: 10, mais preferivelmente o promotor constitutivo é como representado pela SEQ ID N°: 10. Ver a seção "definições" neste para exemplos adicionais de promotores constitutivos.
Opcionalmente, uma ou mais seqüências terminadoras podem ser usadas na construção introduzida em uma planta. Os Elementos reguladores adicionais podem incluir elementos de transcrição bem como de tradução. Aqueles habilitados na técnica estarão cientes de seqüências terminadoras e intensificadoras que podem ser adequados para o uso na realização da invenção. Uma seqüência de íntron também pode ser adicionada à região 5' não traduzida (UTR) ou na seqüência codificadora para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula-se no citosol, como descrito na seção de definições. Outras seqüências de controle (além do promotor, intensificador, silenciador, seqüências de íntron, regiões 3'UTR e/ou 5'UTR) podem ser elementos estabilziadores de proteína e/ou RNA. Tais seqüências devem ser conhecidas ou podem ser facilmente obtidas por uma pessoa
habilitada na técnica.
As construções genéticas da invenção ainda podem incluir uma origem de seqüência de replicação que é requerida para a manutenção e/ou replicação em um tipo celular específico. Um exemplo ocorre quando a construção genética é requerida ser mantida em uma célula bacteriana como um elemento genético epissômico (por exemplo, molécula de plasmídeo ou cosmídeo). As origens preferidas de replicação incluem, mas não são
limitadas a fl-ori e colEl.
Para a detecção da transferência bem sucedida das seqüências de ácido nucleico como usado nos métodos da invenção e/ou seleção de plantas transgênicas que compreendem estes ácidos nucleicos, é vantajoso usar genes marcadores (ou genes repórteres). Portanto, a construção genética pode conter opcionalmente um gene de marcador selecionável. Os marcadores selecionáveis são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste.
É conhecido que na integração estável ou transitória de ácidos nucleicos em células de planta, apenas uma minoria das células absorve o DNA estranho e, se desejado, integra-o em seu genoma, dependendo do vetor de expressão usado e da técnica de transfecção usada. Para identificar e selecionar estes integrantes, um gene codificador para um marcador selecionável (tal como os descritos acima) é usualmente introduzido nas células hospedeiras junto com o gene de interesse. Por exemplo,estes marcadores podem ser usados em mutantes em que estes genes não são funcionais, por exemplo, pela anulação pelos métodos convencionais. Além disso, moléculas de ácido nucleico que codificam um marcador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hospedeira no mesmo vetor que compreende a seqüência que codifica os polipeptídeos da invenção ou usadas nos métodos da invenção ou ainda em um vetor separado. As células que foram estavelmente transfectadas com o ácido nucleico introduzido podem ser identificadas, por exemplo, pela seleção (por exemplo, células que integraram o marcador selecionável sobrevivem visto que as outras células morrem). Os genes marcadores podem ser removidos ou excisados da célula transgênica uma vez que estes não são mais necessários. As técnicas para a remoção do gene marcador são bem conhecidas na técnica, as técnicas úteis são descritas acima na seção de definições.
A invenção também fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle, que compreende introdução e expressão em uma planta de qualquer ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido neste acima.
Mais especificamente, a presente invenção fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços aumentados intensificados relacionados com o rendimento, particularmente biomassa aumentada de broto e rendimento aumentado de semente, cujo método compreende:
(i) introduzir e expressar em uma planta ou célula de planta um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo LBD e (ii) cultivar a célula de planta sob condições que promovam
crescimento e desenvolvimento de planta.
O ácido nucleico de (i) pode ser qualquer um dos ácidos nucleicos capazes de codificar um polipeptídeo LBD como definido neste.
O ácido nucleico pode ser introduzido diretamente em uma célula de planta ou na planta por si só (incluindo introdução em um tecido, órgão ou qualquer outra parte de uma planta). De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o ácido nucleico é preferivelmente introduzido em uma planta por transformação. O termo "transformação" é descrito em mais detalhes na seção "definições" neste.
As células de planta geneticamente modificadas podem ser regeneradas por intermédio de todos os métodos com os quais o trabalhador habilitado está familiarizado. Os métodos adequados podem ser encontrados nas publicações mencionadas acima por S.D. Kung e R. Wu, Potrykus ou Hofgen e Willmitzer.
No geral após a transformação, as as células de planta ou os agrupamentos de célula são selecionados quanto à presença de um ou mais marcadores que são codificados por genes expressíveis em plantas co- transferidas com o gene de interesse, seguindo que o material transformado é regenerado em uma planta total. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, como uma regra, submetido à condições seletivas de modo que as plantas transformadas possam ser distinguidas das plantas não transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas da maneira descrita acima podem ser plantadas e, após um período de desenvolvimento, submetido a uma seleção adequada por pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no desenvolvimento de sementes, se apropriado após a esterilização, em placas de ágar usando-se um agente de seleção adequado de modo que apenas as sementes transformadas possam se desenvolver em plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são avaliadas quanto à presença de um marcador selecionável tal como os
descritos acima.
Seguindo a transferência e a regeneração de DNA, as plantas putativamente transformadas também podem ser avaliadas, por exemplo, usando-se análise de Southern, quanto à presença do gene de interesse, número de cópias e/ou organização genômica. Alternativa ou adicionalmente, os níveis de expressão do DNA recentemente introduzido pode ser monitorado usando-se análise de Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecidas pelas pessoas tendo habilidade comum na técnica.
As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por
uma variedade de meios, tais como pela propagação clonal ou técnicas de criação clássicas. Por exemplo, uma planta transformada de primeira geração (ou Ti) podem ser tornadas independentes e transformantes de segunda geração homozigotos (ou T2) selecionados e as plantas T2 aidna podem ser propagadas através de técnicas de criação clássicas. Os organismos gerados podem tomar uma variedade de formas. Por exemplo, estes podem ser quimeras de células transformadas e de células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas contém o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um estoque de raiz transformado a um descendente não transformado).
A presente invenção claramente estende-se a qualquer célula de planta ou planta produzida por qualquer um dos métodos descritos neste e a todas as partes de plantas e seus propagules. A presente invenção estende-se ainda para abranger a progênie de uma célula, tecido, órgão ou planta total transformadas ou transfectadas primárias que foram produzidos por qualquer um dos métodos mencionados acima, o único requerimento sendo que a progênie apresente as mesmas características genotípicas e/ou fenotípicas como aqueles produzidos pelo precursor nos métodos de acordo com a invenção.
A invenção também inclui células hospedeiras contendo um ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo LBD como definido neste acima. As células hospedeiras preferidas de acordo com a invenção são células de planta. As plantas hospedeiras para os ácidos nucleicos ou para o vetor usadas no método de acordo com a invenção, o cassete de expressão ou construção ou vetor são, em princípio, vantajosamente todas as plantas, que são capazes de sintetizar os polipeptídeos usados no método inventivo.
Os métodos da invenção são vantajosamente aplicáveis a qualquer planta. As plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertencem à superfamília Viridiplantae, em particular, plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas incluindo forragem e legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimentos, árvores ou arbustos. De acordo com a forma de realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta de cultivo. Os exemplos de plantas de cultivo incluem soja, girassol, canola, alfafa, semente de colza, algodão, tomate, batata e tabaco. Ainda preferivelmente, a planta é uma planta monocotiledônea. Os exemplos de plantas monocotiledôneas incluem cana de açúcar. Mais preferivelmente a planta é um cereal. Os Exemplos de cereais incluem arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
A invenção também estende-se a partes colhíveis de uma planta tais como mas não limitadas a sementes, folhas, frutas, flores, caules, rizomas, tubérculos e bulbos. A invenção, além disso, diz respeito a produtos derivados, preferivelmente, derivados diretamente de uma parte coletável de uma tal planta, tais como grânulos ou pós secos, óleo, gorura e ácidos graxos ou proteínas.
De acordo com uma característica preferida da invenção, a expressão modulada é a expressão aumentada. Os métodos para aumentar a expressão de ácidos nucleicos ou genes ou produtos de gene, são bem documentados na técnica e os exemplos são fornecidos na seção de definições.
Como mencionado acima, um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD; entretanto os efeitos de realizar o método, isto é, intensificado os traços relacionados com o rendimento também pode ser atingido usando-se outras técnicas bem conhecidas, que incluem mas não limitado a rotulação de ativação de T-DNA, TILLING, recombinação homóloga. Uma descrição destas técnicas é fornecida na seção de definições.
A presente invenção também abrange o uso de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos LBD como descrito neste e uso destes polipeptídeos LBD na intensificação de qualquer um dos traços relacionados já mencionados com o rendimento em plantas.
Ácidos nucleicos que codificam polipeptídeo LBD descritos neste ou os polipeptídeos LBD por si só, podem encontrar uso nos programas de criação em que um marcador de DNA é identificado podendo estar geneticamente ligado a um gene que codifica o polipeptídeo LBD. Os ácidos nucleicos/genes ou os polipeptídeos LBD por si sós podem ser usados para definir um marcador molecular. Este DNA ou marcador de proteína podem ser então usados nos programas de criação para selecionar plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento como definido neste acima nos métodos da invenção. As variantes alélicas de um ácido nucleico que codifica o
polipeptídeo LBD/gene também podem encontrar uso em programas de criação auxiliados por marcador. Tais programas de criação algumas vezes requerem a introdução de variação alélica pelo tratamento mutagênico das plantas, usando-se por exemplo mutagênese por EMS; alternativamente, o programa pode iniciar com uma coleção de variantes alélicas da denominada origem "natural" não intencionalmente. A identificação de variantes alélicas então acontece, por exemplo, por PCR. Isto é seguido por uma etapa para a seleção de variantes alélicas superiores da seqüência em questão e que dão rendimento aumentado. A seleção é tipicamente realizada pelo monitoramento do desempenho de desenvolvimento de plantas contendo variantes alélicas da seqüência em questão. O desempenho de desenvolvimento pode ser monitorado em uma estufa ou no campo. As etapas opcionais adicionais incluem o cruzamento de plantas em que a variante alélica foi identificada com uma planta. Isto pode ser usado, por exemplo, para fabricar uma combinação de características fenotípicas interessantes.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos LBD também podem ser usados como sondas para mapear genética e fisicamente os genes que estes são uma parte de e como marcadores para traços ligados àqueles genes. Tal informação pode ser útil na criação de plantas a fim de desenvovler linhas com fenotipos desejados. Tal uso de ácido nucleico que codifica os polipeptídeos LBD requer apenas uma seqüência de ácido nucleico de pelo menos 15 nucleotídeos de comprimento. O ácido nucleico que codifica os polipeptídeos LBD pode ser usado como marcadores de polimorfismo de comprimento de fragmento (RFLP). Southern blots (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) de DNA genômico de planta digerida por restrição pode ser sondada com os ácidos nucleicos que codificam LBD. Os padrões de formação de banda resultantes podem ser então submetidos a análises genéticas usando-se programas de computador, tais como MapMaker (Lander et al. (1987) Genomics 1: 174-181) a fim de construir um mampa genético. Além disso, os ácidos nucleicos podem ser usados para Southern blots de sonda contendo DNAs genômicos tratados com endonuclease de restrição de uma série de indivíduos que representam precursores e progênie de um cruzamento genético definido. A segregação dos polimorfismos de DNA é observado e usado para calcular a posição do ácido nucleico que codifica o polipeptídeo LBD no mapa genético previamente obtido usando-se esta população (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331).
A produção e o uso de sondas derivadas de gene vegetal para o uso no mapeamento genético são descritos em Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Repórter 4: 37-41. As numerosas publicações descrevem o mapeamento genético de clones de cDNA específicos usando-se a metodologia resumida acima ou variações desta. Por exemplo, populações intercruzamento F2, populações de retrocruzamento, populações aleatoriamente comparadas, linhas isogênicas próximas e outras séries de indivíduos podem ser usado para o mapeamento. Tais metodologias são bem conhecidas por aqueles habilitados na técnica.
As sondas de ácido nucleico também podem ser usadas para o mapeamento físico (isto é, colocação de seqüências em mapas físicos; ver Hoheisel et al. em: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346 e referências citadas neste).
Em uma outra forma de realização, as sondas de ácido nucleico pode ser usadas no mapeamento de hibridização por fluorescência direta in situ (FISH) (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Embora os métodos correntes de mapeamento FISH favoreçam o uso de clones grandes (diversos kb a diversas centenas de kb; see Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), melhoras na sensibilidade podem permitir o desempenho do mapeamento FISH usando-se sondas mais curtas. Uma variedade de métodos com base na amplificação de ácido
nucleico para o mapeamento genético e físico pode ser realizada usando-se o ácido nucleicos. Os exemplos incluem a amplifícação específica de alelo (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), polimorfísmo de fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et al. (1993) Genomics 16:325-332), ligação específica de alelo (Landegren et al. (1988) Science 241:1077-1080), reações de extensão de nucleotídeo (Sokolov (1990) Nucleic Acid Res. 18:3671), Mapeamento Híbrido por Radiação (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) e Mapeamento Happy (Dear and Cook (1989) Nucleic Acid Res. 17:6795-6807). Para estes métodos, a seqüência de um ácido nucleico é usada para projetar e produzir pares de iniciador para o uso na reação de amplificação ou nas reações de extensão de iniciador. O projeto de tais iniciadores é bem conhecido por aqueles habilitados na técnica. Em métodos que utilizam mapeamento genético com base em PCR, pode ser necesário identificar diferenças de seqüência de DNA entre os precursores do mapeamento do cruzamento na região que corresponde à presente seqüência de ácido nucleico. isto, entretanto, não é necessário para os métodos de mapeamento.
Os métodos de acordo com a presente invenção resultam em plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, como descrito anteriormente. Estes traços também podem ser combinados com outros traços vantajosamente econômicos, tais como traços de intensificação de rendimento adicionais, tolerância a outras tensões bióticas ou abióticas, traços que modificam várias características arquitetônicas e/ou características bioquímicas e/ou fisiológicas. II. polipeptídeo JMJC (JUMONJI-C)
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle. De acordo com uma primeira forma de realização, a presente invenção fornece um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC.
Um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC.
Qualquer referência a seguir a uma "proteína útil nos métodos da invenção" é determinada entender um polipeptídeo JMJC como definido neste. Qualquer referência a seguir a um "ácido nucleico útil nos métodos da invenção" é determinada entender um ácido nucleico capaz de codificar um tal polipeptídeo JMJC. O ácido nucleico a ser introduzido em uma planta (e, portanto, útil na realização dos métodos da invenção) é qualquer ácido nucleico que codifica o tipo de proteína, que será descrito agora, a seguir também denominado "JMJC ácido nucleico" ou "gene JMJC".
Um polipeptídeo JMJC como definido neste refere-se a um polipeptídeo que compreende pelo menos um domínio JmjC. O domínio JmjC é uma seqüência conservada encontrada em
proteínas de organismo procarióticos e eucarióticos. Os domínios JmjC têm em média 111 aminoácidos de comprimento. Tipicamente, o comprimento de um domínio JmjC pode variar entre 25 e 200 aminoácidos embora versões mais curtas e mais longas possam ser possíveis. Os domínios JmjC são preditos serem metaloenzimas que adotam a dobra de cupina e são candidatos para enzimas que regulam a remodelagem de cromatina (Clissold et al. Trends Biochem Sei. 2001 Jan;26(l):7-9).
Os polipeptídeos JMJC podem ser observados em bancos de dados especialziados, tais como Pfam, (Finn et al. Nucleic Acids Research (2006) Database Issue 34:D247-D251). O Pfam compila uma grande coleção de alinhamentos de seqüência múltiplos e modelos de Markov escondidos (HMM) que cobrem os domínios e famílias de muito comuns e está disponível através do Sanger Institute no Reino Unido.
O limiar de corte de união do domínio JmjC no Pfam modelo HMM fs é de 16,0 e de -8,0 no modelo HMM_Is. Comparações de confiança como consideradas no banco de dados Pfam são aquelas de registro mais alto do que o limiar de corte de união. Entretanto, comparações potenciais, que compreendem domínios JmjC verdadeiros, ainda podem estar sob o corte de união. Preferivelmente um polipeptídeo JMJC é uma proteína tendo um o mais domínios em sua seqüência que excede o corte de união da família de domínio de proteína Pfam PF02373, jumonji, jmjC.
Alternativamente, um domínio JmjC em um polipeptídeo pode ser identificado pela realização de uma comparação de seqüência com polipeptídeos conhecidos que compreendem um domínio JmjC e que estabelece a similaridade na região do domínio JmjC. As seqüências podem ser alinhadas usando-se qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica, tais como algoritmos Blast e a probabilidade para o alinhamento ocorrer com uma dada seqüência é tomada como base para a identificação de polipeptídeos similares. Um parâmetro que é tipicamente usado para a representação de tal probabildade nas comparações em pares é denominado valor e. O valor e descreve como freqüentemente, é esperado que um dado registro ocorra de maneira aleatória. O corte do valor e pode ser tão alto quanto 1,0. Tipicamente os alinhamentos com probabilidade alta de ocorrer têm um valor e menor do que 0,1, 0,01, 0,001, l.e-05, l.e-10, l.e-15, l.e-20, l.e-25, l.e-50, l.e-75, l.e-100 e l.e-200. Preferivelmente, os polipeptídeos JMJC da invenção compreendem uma seqüência tendo na ordem crescente de preferência um valor e menor do que 0,1, 0,01, 0,001, l.e-05, l.e-10, l.e-15, l.e-20, l.e-25, l.e-50, l.e-75, l.e-100 e l.e-200 para um alinhamento com o domínio JmjC observado em um polipeptídeo JMJC conhecido.
Os exemplos de polipeptídeos JMJC são dados na Tabela B1. As coordenadas de aminoácido para os domínios JmjCs como presente nos polipeptídeos JMJC representativos de origem de dicotiledônea são dadas na Tabela B4. Um exemplo de domínio JmjC é dado dada na SEQ ID N°: 78. Uma identidade de seqüência entre os domínios domínio JmjC
é tipicamente bixa, em média 23 % e pode ser tão baixo quanto tão baixo quanto 10 %. Os polipeptídeos JMJC preferidos da invenção são aqueles tendo na ordem crescente de preferência pelo menos 50%, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, ou mais identidade de seqüência a SEQ ID Ν°: 78 ou a qualquer um dos domínios JmjC compreendidos nos polipeptídeos JMJC representado pela SEQ ID N°: 84; SEQ ID N°: 86; SEQ ID N°: 96; SEQ ID N°: 98; SEQ ID N°: 104; SEQ ID N°: 108; SEQ ID N°: 110; SEQ IDN°: 112; SEQIDN0: 114; SEQ IDN0: 116; SEQ IDN°: 118;
SEQ ID N°: 120; SEQ ID N°: 122; SEQ ID N°: 124; SEQ ID N°: 128; SEQ ID N°: 130; SEQ ID N°: 132; e SEQ ID N°: 134, cujas coordenadas de aminoácido são dadas na Tabela B4.
Além do domínio JmjC, os polipeptídeos JMJC podem compreender opcionalmente outros motivos de seqüência altamente conservados, tais como aqueles representados SEQ ID N°: 79, SEQ ID N°: 80, SEQ ID N°: 81, que são encontrados na SEQ ID N°: 74. Além disso, os polipeptídeos da invenção podem compreender uma seqüência conservada encontradas em oxigenases que estavam envolvidas na coordenação de cátions de ferro, aqui representado por HXD(V) ou EXnH (SEQ ID N°: 82), em que "X" representa qualquer aminoácido e "n" representa o número de X- resíduos que variam entre 1 e 5, ambos incluídos.
Um polipeptídeo JMJC preferido da invenção refere-se a qualquer polipeptídeo que compreenda um domínio JmjC e opcionalmente tendo na ordem crescente de preferência pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou mais identidade de seqüência a qualquer um ou mais dos motivos de seqüência conservados como representado pela SEQ ID N°: 79, SEQ ID N°: 80, SEQ ID N°: 81 e SEQ ID N°: 82.
Evidência de domínio trocando na família JUMONJI de proteínas foi relatado, (Balciunas and Ronne. Trends Biochem Sci 2000;25:274-276). Consequentemente, além do domínio JmjC, os polipeptídeos JMJC tipicamente contém um ou mais diferentes tipos de outros domínios conservados conhecidos. Relevantes aos polipeptídeos da invenção são os polipeptídeos JMJC que além do domínio JmjC compreende outros domínios conservados, que estão presumivelmente envolvidos na ligação de DNA e atividades de transcrição, tais como dedos de zinco e/ou na interação de proteína e revoluçõesde proteína, tais como F-box e domínios tipo dedo- RING de zinco.
Portanto o polipeptídeo JMJC útil nos métodos da invenção
compreende um domínio JmjC e opcionalmente um ou mais dos seguintes domínios conservados: JmJN (número de acessão pfam PF02375); dedo de zinco C5HC2 (número de acessão pfam: PF02928), domínio rico em FY, terminal N (número de acessão InterPro: IPR003888) e domínio rico em FY, terminal C (número de acessão InterPro: IPR003889), um dedo de zinco tipo FYVE/PHD-Zn (Dedo de zinco InterPro: IPROl 1011), um dedo de zico tipo C2H2 (número de acessão pfam: PF00096), um dedo de zinco - tipo RING (zf-C3HC4) (número de acessão pfam PF00097) e um domínio F-box (número de acessão pfam: PF00646). Preferivelmente o polipeptídeo JMJC da invenção compreende
uma seqüência tendo na ordem crescente de preferência de 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 60 %, 85 %, 90 %, 92 %, 94 %, 96 %, 98 % ou mais identidade de seqüência a SEQ ID N°: 74, SEQ ID N°: 86, SEQ ID N°: 94, SEQ ID N°: 104, SEQ ID N°: 122, SEQ ID N°: 134, SEQ ID N°: 136, SEQ ID N°: 140, SEQ ID N°: 142 e SEQ ID N°: 148.
Preferivelmente, a seqüência de polipeptídeo que quando usada na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 8, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos JMJC (Takeuchi et al. Dev Dyn. 2006 235(9): 2449-59) que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 74 em vez de qualquer outro grupo.
O termo "domínio" e "motivo" é definido na seção "definições" neste. Bancos de dados especialistas existem para a identificação de domínios, por exemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242- 244, InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318, Prosite (Bucher and Bairoch (1994), Uma sintaxe de perfil generalizada para motivos de seqüências biomoleculares e sua função em interpretação de seqüência automática. (In) ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004) ou Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002). Uma série de ferramentas para a análise in silico de seqüências de proteínas está disponível no servidor ExPASy proteomics (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al., ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). Os domínios também podem ser identificados usando-se técnicas de rotina, tal como pelo alinhamento de seqüência.
Os métodos para o alinhamento de seqüências para
comparação são bem conhecidos na técnica, tais métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA and TFASTA. GAP usa o algoritmo de Needleman and Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) para encontrar o alinhamento global (isto é medindo-se as seqüências completas) de duas seqüências que maximizam o número de equiparações e minimiza o número de fendas. o algoritmo BLAST (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403- 10) calcula a identidade de seqüência percentual e realiza uma análise estatística da similaridade entre as duas seqüências. O software para realizar análise BLAST está publicamente disponível através do National Centre for Biotechnology Information (NCBI). Os homólogos podem ser facilmente identificados usando-se, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de seqüência múltipla ClustalW (versão 1.83), com os parâmetros de alinhamento default e um método de registro em porcentagem. As porcentagens globais de similaridade e de identidade também podem ser determinadas usando-se um dos métodos disponíveis no pacote de software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando-se proteína ou seqüências de DNA.). A edição manual menor pode ser realizada para otimizar o alinhamento entre os motivos conservados, como deve estar evidente para uma pessoa habilitada na técnica. Além disso, em vez de usar seqüências de comprimento total para a identificação de homólogos, domínios específicos também podem ser usados. Os valores de identidade de seqüência podem ser determinadas no aminoácido inteiro ou seqüência de aminoácido ou em domínios selecionados ou motivos conservados, usando-se os programas mencionados acima usando-se os parâmetros default.
Além disso, os polipeptídeos JMJC podem ter tipicamente atividade de hidroxilases de proteína, em particular, atividade de peptídeo- aspartate beta-dioxigenase (PABD) (EC 1.14.11.16). a reação catalisada é: peptídeo L-aspartato + 2-oxoglutarato + 0(2) <=> peptídeo 3-hidróxi-L- aspartato + succinato + CO(2). Os cofatores na reação são ferro e 2- Oxogluatarato. As ferramentas e técnicas para medir a atividade de PABD são bem conhecidas na técnica (ver, por exemplo, Lavaissiere et al. J Clin Invest. 1996;98(6): 1313-23; Linke et al. J Biol Chem. 2004;279(14): 14391-7; Lee, et al. J. Biol. Chem. 278:7558-7563; 2003; Lando et al. Genes Dev. 16:1466- 1471; 2002). As oxigenases dependentes de ferro (II)/2-oxoglutarato (2-OG) catalsiam as reações oxidativas em várias reações metabólicas. Recentemente foi proposto que os polipeptídeos JMJC também possam ter atividade de histona desmetilase (Trewick et al. 2005). A presente invenção é ilustrada transformando-se as plantas
com a seqüência de ácido nucleico representada pela SEQ ID N°: 73, que codifica a seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 74. Entretanto, o desempenho da invenção não está restrito a estas seqüências; os métodos da invenção podem ser vantajosamente realizados usando-se qualquer ácido nucleico que codifica JMJC ou polipeptídeo JMJC como definido neste.
Os exemplos de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC são dadas na Tabela Bl do Exemplo 12 neste. Tais ácidos nucleicos são úteis na realização dos métodos da invenção. As seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12 são seqüências de exemplos de ortólogos e parálogos do polipeptídeo JMJC representado pela SEQ ID N°: 74, os termos "ortólogos" e "parálogos" sendo como definido neste. Ortólogos e parálogos adicionais podem ser facilmente definidos pela realização de uma denominada pesquisa blast recíproca. Tipicamente, isto envolve um primeiro BLAST que envovle submeter uma seqüência em dúvida ao BLAST (por exemplo usando-se qualquer uma das seqüências listadas na Tabela Bl do Exemplo 12) contra qualquer banco de dados de seqüência, tal como os bancos de dados NCBI publicamente disponíveis. BLASTN ou TBLASTX (usando-se os valores default padrão) são, no geral, usados quando começa-se a partir de uma seqüência de nucleotídeo e BLASTP ou TBLASTN (usando- se os valores default padrão) quando começa-se a partir de uma seqüência de proteína. Os resultados de BLAST podem ser opcionalmente filtrados. As seqüências de comprimento total de cada um dos resultados filtrados ou resultados não filtrados são então submetidos ao BLAST novamente (segundo BLAST) contra seqüências do organismo a partir do qual a seqüência em questão é derivada (quando a seqüência em questão é SEQ ID N°: 73 ou SEQ ID N°: 74, o segundo BLAST portanto, deve ser contra seqüências de Arabidopsis). Os resultados do primeiro e segundo BLASTs são então comparados. Um parálogo é identificado se um acerto de classificação alta do primeiro blast for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada, submetendo-se ao BLAST novamente depois idealmente resulta na seqüência em questão entre os acertos mais altos; um ortólogo é identificado se um acerto de classificação alta no primeiro BLAST não for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada e preferivelmente resulta no BLAST novamente na seqüência em questão estando entre os acertos mais altos.
Os acertos de classificação alta são aqueles tendo um valor E baixo. Quanto mais baixo o valor E, mais significante o registro (ou, em outras palavras, menor a chance que o acerto seja encontrado por chance).A computação do valor E é bem conhecida na técnica. Além dos valores E, comparações são registradas pela identidade de porcentagem. Identidade de porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácidos nucleicos comparadas (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. No caso de famílias grandes, ClustalW pode ser usado, seguido por uma árvore de união próxima, para ajudar a visualizar o agrupamento de genes relacionados e para identificar ortólogos e parálogos.
As variantes de ácido nucleico também podem ser úteis na prática dos métodos da invenção. Os exemplos de tais variantes incluem ácidos nucleicos que codificam homólogos e derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12, os termos "homólogo" e "derivado" sendo como definido neste. Também são úteis nos métodos da invenção os ácidos nucleicos que codificam homólogos e derivados de ortólogos ou parálogos de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12. Homólogos e derivados úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica e funcional como a proteína não modificada da qual estes são derivados.
As variantes de ácido nucleico adicionais úteis na prática dos métodos da invenção incluem porções de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC, ácidos nucleicos que hibridizam-se a ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC, variantes de união de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC, variantes alélicas de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC e variantes de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC obtidos pelo embaralhamento de gene. Os termos seqüência de hibridização, variante de união, variante alélica e embaralhamento de gene são como descritos neste.
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC não necessitam ser ácidos nucleicos de comprimento total, visto que o desempenho dos métodos da invenção não contam com o uso de seqüências de comprimento total de ácido nucleico. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma porção de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Bl do Exemplo 12 ou uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12.
Uma porção de um ácido nucleico pode ser preparada, por exemplo, realizando-se uma ou mais anulações no ácido nucleico. As porções podem ser usadas na forma isolada ou estas podem ser fundidas a outras seqüências codificadoras (ou não codificadoras) a fim de, por exemplo, produzir uma proteína que combine diversas atividades. Quando fundido a outras seqüências codificadoras, o polipeptídeo resultante produzido na tradução pode ser maior do que aquele predito para a porção de proteína.
As porções úteis métodos da invenção, codificam um polipeptídeo JMJC como definido neste têm substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dadas na Tabela B1 do Exemplo 12. Preferivelmente, a porção é uma porção de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Bl do Exemplo 12 ou é uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12. Preferivelmente a porção is pelo menos 100, 200, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000 nucleotídeos de comprimento consecutivo, os nucleotídeos consecutivos sendo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela B1 do Exemplo 12 ou de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela B1 do Exemplo 12. Mais preferivelmente a porção é uma porção do ácido nucleico da SEQ ID N°: 73. Preferivelmente, a porção codifica uma seqüência de aminoácido que quando usada na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 8, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos JMJC (Takeuchi et al. Dev Dyn. 2006 235(9):2449-59) que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 74 em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é um ácido nucleico capaz de hibridizar, sob condições de estringência reduzida, preferivelmente sob condições estringentes, com um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido neste ou com uma porção como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Bl do Exemplo 12 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Bl do Exemplo 12. As seqüências de hibridização úteis nos métodos da invenção
codificam um polipeptídeo JMJC como definido neste têm substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12. Preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Bl do Exemplo 12 ou a uma porção de qualquer destas seqüências, uma porção sendo como definida acima; or em que a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela B1 do Exemplo 12. Mais preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a um ácido nucleico como representado pela SEQ ID N°: 73 ou a uma porção deste.
Preferivelmente, a seqüência de hibridização codifica uma seqüência de aminoácido que quando usada na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 8, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos JMJC (Takeuchi et al. Dev Dyn. 2006 235(9):2449-59) que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 74 em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma variante de união que codifica um polipeptídeo JMJC como definido neste acima, a variante de união sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta a variante de união de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Bl do Exemplo 12 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12. um exemplo de uma variante unida do gene que codifica SEQ ID N°: 74 é representado pela SEQ ID N°: 73 e SEQ ID N°: 83 (que codifica a SEQ ID N°: 84).
As variantes de união preferidas são variantes de união de um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 73 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 74. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante de união, quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 8, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos JMJC (Takeuchi et at. Dev Dyn. 2006 235(9):2449-59) que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 74 qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil na realização dos métodos da invenção é uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido neste acima, uma variante alélica sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante alélica de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Bl do Exemplo 12 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12.
As variantes alélicas úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica como o polipeptídeo JMJC da SEQ ID N°: 74 qualquer um dos aminoácidos descritos na Tabela Bl do Exemplo 12. As Variante alélicas existem em estado natural e abrangidas dentro dos métodos da presente invenção são o uso destes alelos naturais. Preferivelmente, a variante alélica é uma variante alélica da SEQ ID N°: 73 ou uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N0: 74. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante alélica, quando usada na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 8, agrupa-se com os polipeptídeos JMJC (Takeuchi et al. Dev Dyn. 2006 235(9):2449-59) que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 74 em vez de qualquer outro grupo.
A mistura de gene e a evolução direcionada podem ser usadas para gerar variantes de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC como definido acima; o termo "mistura de gene" sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela B1 do Exemplo 12 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela Bl do Exemplo 12, cujo ácido nucleico variante é obtido pelo embaralhamento de gene.
Vantajosamente, a presente invenção fornece até agora seqüências de ácido nucleico e de polipeptídeo JMJ desconhecidas.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, é fornecida uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 169;
(ii) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar à SEQ ID N°: 169;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85
%, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 170;
(iv) um ácido nucleico capaz de hibridizar sob condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dados em (i), (ii) ou (iii)
acima.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, portanto, é fornecido um polipeptídeo isolado que compreende:
(i) uma seqüência de aminoácido tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 170;
(ii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácido
dadas em (i).
Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pelo ácido nucleico variante obtidos pelo embaralhamento de gene, quando usado na construção de uma árvore filogenética tal como a descrita na Figura 8, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos JMJC (Takeuchi et al. Dev Dyn. 2006 235(9):2449-59) que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 74 em vez de qualquer outro grupo.
Além disso, as variantes de ácido nucleico também podem ser obtidas por mutagênese direcionada ao local. Diversos métodos estão disponíveis para atingir mutagênese direcionada ao local, o mais comum sendo os métodos com base em PCR (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds.).
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC podem ser derivados de qualquer fonte natural ou artificial. O ácido nucleico pode ser modificado a partir de sua forma natural na composição e/ou ambiente genômico através da manipulação humana deliberada. Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica o polipeptídeo JMJC é de uma planta, ainda preferivelmente de uma planta dicotiledônea, mais preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente o ácido nucleico é de Arabidopsis thaliana.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento. Em particular, desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo rendimento aumentado, especialmente rendimento aumentado de semente com relação às plantas de controle. Os termos "rendimento" e "rendimento de semente" são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste. Referência neste a traços intensificados relacionados com o rendimento é determinada entender um aumento na biomassa (peso) de uma ou mais partes de uma planta, que pode incluir partes (coletáveis) acima do solo e/ou partes (coletáveis) abaixo do solo. Em particular, tais partes colhíveis são sementes e o desempenho dos métodos da invenção resulta em plantas tendo rendimento aumentado com relação ao rendimento de plantas de controle.
Tomando o milho como um exemplo, um aumento no rendimento pode ser manifestado as um ou mais do seguinte: aumento no número de plantas estabelecido por hectare ou acre, um aumento no número de espigas por planta, um aumento no número de fileiras, número de sementes por fileira, peso de semente, peso de semente milhar, comprimento/diâmetro de espiga, aumento na razão de enchimento de semente (que é o número de sementes enchidas dividido pelo número total de sementes e multiplicado por 100), entre outros. Tomando-se o arroz como um exemplo, um aumento no rendimento pode manifestar-se por si só como um aumento em um ou mais do seguinte: número de plantas por hectare ou acre, número de panículas por planta, número de espigas por panícula, número de flores (flósculos) por panícula (que é expressado como uma razão do número de sementes enchidas no número de panícula primárias), aumento na razão de enchimento de semente (que é o número de sementes enchidas dividido pelo número total de sementes e multiplicado por 100), aumento em peso de semente milhar, entre outros.
A presente invenção fornece um método para aumentar o rendimento, especialmente rendimento de semente de plantas, com relação às plantas de controle, cujo método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar a expressão, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido neste.
Visto que as plantas transgênicas de acordo com a presente invenção têm rendimento aumentado, é provável que estas plantas apresentem uma taxa de desenvolvimento aumentada (durante pelo menos parte do seu ciclo de vida), com relação à taxa de desenvolvimento de plantas de controle em um estágio correspondente em seu ciclo de vida.
A taxa de desenvolvimento aumentada pode ser específica para uma ou mais partes de uma planta (incluindo sementes) ou pode ser substancialmente por toda a planta. As plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada podem ter um ciclo de vida mais curto. O ciclo de vida de uma planta pode ser tomado significar o tempo necessário para o desenvolvimento de uma semente madura seca até o estágio onde a planta produziu sementes maduras secas, similar ao material de partida. Este ciclo de vida pode ser influenciado por fatores tais como vigor precoce, taxa de desenvolvimento, índice de verdor, tempo de florescimento e velocidade de maturação de semente. O aumento em taxa de desenvolvimento pode acontecer em um ou mais estágios no ciclo de vida de uma planta ou substancialmente durante o ciclo de vida de planta total. A taxa de desenvolvimento aumentada durante os estágios precoces no ciclo de vida de uma planta pode refletir o vigor intensificado. O aumento na taxa de desenvolvimento pode alterar o ciclo de coleta de uma planta permitindo que as plantas sejam semeadas depois e/ou coletadas mais cedo do que seria de outra maneira possível (um efeito similar pode ser obtido com tempo de florescimento precoce). Se a taxa de desenvolvimento for suficientemente aumentada, isto pode permitir a semeadura adicional de sementes das mesmas espécies vegetais (por exemplo semeadura e coleta de plantas de arroz seguido pela semeadura e coleta de outras plantas de arroz tudo dentro de um período de desenvolvimento convencional). Similarmente, se a taxa de desenvolvimento for suficientemente aumentada, isto pode permitir a semeadura adicional de sementes de espécies de plantas diferentes (por exemplo a semeadura e a coleta de plantas de milho seguido por, por exemplo, a semeadura e a coleta opcional de soja, batata ou qualquer outro vegetal adequado). Os períodos de coleta adicionais a partir do mesmo estoque de raiz no caso de algumas plantas de cultivo também pode ser possível. Alteração do ciclo de coleta de uma planta pode levar a um aumento na produção de biomassa anual por acre (devido a um aumento no número de vezes (diz-se em um ano) que qualquer planta particular pode ser desenvolvida e coletada). Um aumento na taxa de desenvolvimento também pode permitir o cultivo de plantas transgênicas em uma área geográfica mais ampla do que suas contrapartes do tipo selvagem, visto que as limitações territoriais para o desenvolvimento de uma lavoura são freqüentemente determinados pelas condições ambientais adversas no período de plantio (estação precoce) ou no período de coleta (estação posterior). Tais condições adversas podem ser evitadas se o ciclo de coleta for encurtado. A taxa de desenvolvimento pode ser determinada derivando-se vários parâmetros de curvas de desenvolvimento, tais parâmetros podem ser: T-Mid (o tempo levado pelas plantas para atingir 50 % de seu tamanho máximo) and T-90 (tempo levado pelas plantas para atingir 90 % de seu tamanho máximo), entre outros.
De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada com relação às plantas de controle. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método for aumentar a taxa de desenvolvimento de plantas, cujo método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar a expressão, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido neste.
Um aumento no rendimento e/ou taxa de desenvolvimento ocorre se a planta estiver sob condições sem estresse ou se a planta for exposta a várias tensões em comparação com as plantas de controle. Plantas tipicamente respondem à exposição à tensão desenvolvendo-se mais lentamente. Em condições de tensão grave, a planta pode ainda parar de se desenvolver completamente. Tensão branda por outro lado é definida neste como sendo qualquer tensão à qual uma planta é exposta que não resulta na planta parando de se desenvolver completamente sem sem a capacidade de retomar o crescimento. Tensão branda no sentido da invenção da invenção leva a uma redução no desenvolvimento das plantas submetidas à tensão de menos que 40 %, 35 % ou 30 %, preferivelmente menor do que 25 %, 20 % ou 15 %, mais preferivelmente menor do que 14 %, 13 %, 12 %, 11 % ou 10 % ou menor em comparação com a planta de controle sob condições sem estresse. Devido aos avanços nas práticas agrícolas (irrigação, fertilização e tratamentos com pesticidas) tensões graves não são freqüentemente encontradas em plantas de cultivo cultivadas. Como uma conseqüência, o desenvolvimento comprometido induzido pela tensão branda é freqüentemente uma característica indesejada para a agricultura. Tensões brandas são as tensões (ambientais) bióticas e/ou abióticas diárias às quais a planta é exposta. Tensões abióticas podem ocorrer devido à secura ou excesso de água, tensão anaeróbica, tensão ao sal, toxicidade química, tensão oxidativa e calor, frio ou temperaturas congelantes. A tensão abiótica pode ser uma tensão osmótica causada por uma tensão a água (particularmente devido à secura), tensão ao sal, tensão oxidativa ou uma tensão iônica. Tensões bióticas são tipicamente aquelas tensões causadas por patogênio, tal como bactérias, vírus, fungos e insetos.
Em particular, os métodos da presente invenção podem ser realizados sob condições sem estresse ou sob condições de secura branda para dar plantas tendo rendimento aumentado com relação às plantas de controle. Como relatado em Wang et al. (Plant (2003) 218: 1-14), tensão abiótica leva a uma série de mudanças morfológicas, fisiológica, bioquímicas e moleculares que afetam adversamente o desenvolvimento e produtividade da planta. Secura, salinidade, temperaturas extremas e tensão oxidativa são conhecidas serem interconectadas e podem induzir o desenvolvimento e o dano celular através de mecanismos similares. Rabbani et al. (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767) descreve um grau particularmente alto de "cruzamento" tensão por secura e tensão por salinidade alta. Por exemplo, seca e/ou desalinização são manifestadas primariamente como tensão osmótica, resultando na interrupção da homeostase e a distribuição de íon na célula. Tensão oxidativa, que freqüentemente acompanha temperatura alta e baixa, tensão por salinidade ou secura, pode causar a desnaturação de de proteínas funcionais e estruturais. Como uma conseqüência, estas diversas tensões ambientais freqüentemente ativam caminhos de sinalização celular e respostas celulares similares, tal como a produção de proteínas de tensão, super-regulação do acúmulo de anti-oxidantes, acúmulo dos solutos compatíveis e interrupção do desenvolvimento. O termo condições "sem tensão" como usado aqui são aquelas condições ambientais que permitem o desenvolvimento ótimo de planta de plantas. As pessoas habilitadas na técnica estão cientes de condições de solo normais e condições climáticas para uma dada localização. Plantas com condições de desenvolvimento ótimas, (desenvolvimento sob condições sem estresse) tipicamente, o rendimento na ordem crescente de preferência pelo menos 90 %, 87 %, 85 %, 83 %, 80 %, 77 % ou 75 % da produção média de tal planta em um dado ambiente. A produção média pode ser calculada com base na coleta e/ou na estação. As pessoas habilitadas na técnica estão cientes das produções de rendimento médio de uma lavoura.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas com rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar o rendimento em plantas que se desenvolvem sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas, cujo método compreende aumentar expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições de deficiência de nutriente, particularmente sob condições de deficiência de nitrogênio, rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar o rendimento em plantas desenvolvidas sob condições de deficiência de nutriente, cujo método compreende aumentar expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC. A deficiência de nutriente pode resultar de uma perda ou de um excesso de nutrientes tais como nitrogênio, fosfatos e outros compostos contendo fósforo, potássio, cálcio, cádmio, magnésio, manganês, ferro e boro, entre outros.
A presente invenção abrange plantas ou partes destas (incluindo sementes) obteníveis pelos métodos de acordo com a presente invenção. As plantas ou partes destas compreende um ácido nucleico transgene que codifica um polipeptídeo JMJC como definido acima.
A invenção também fornece contruções genéticas e vetores para facilitar a introdução e/ou expressão em plantas de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC. A construção de genes pode ser inserida em vetores, que pode estar comercialmente disponível, adequada para a transformação em plantas e adequado para a expressão do gene de interesse nas células transformadas. A invenção também forence o uso da construção de gene como definido neste nos métodos da invenção.
Mais especificamente, a presente invenção fornece uma construção que compreende:
(a) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido acima;
(b) uma ou mais seqüências de controle capazes de conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico de (a) e opcionalmente (c) uma seqüência de terminação de transcrição.
Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC é como definido acima. O termo "seqüência de controle" e "seqüência de terminação" são como definidos neste.
As plantas são transformadas com um vetor que compreende
qualquer um dos ácidos nucleicos descritos acima. O técnico habilitado estará bem ciente dos elementos genéticos que devem estar presentes no vetor na ordem para transformar, selecionar e propagar de maneira bem sucedida as células hospedeiras contendo a seqüência de interesse. A seqüência de interesse é operacionalmente ligada a uma ou mais seqüências de controle (pelo menos a um promotor).
Vantajosamente, qualquer tipo de promotor, se natural ou sintético, pode ser usado para conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico. Um promotor constitutivo é particularmente útil nos métodos. Ver a seção "definições" neste para definições dos vários tipos de promotores.
Deve estar claro que a aplicabilidade da presente invenção não está restrita ao polipeptídeo ácido nucleico que codifica JMJC representado pela SEQ ID N°: 73, nem é a aplicabilidade da invenção restrita à super- expressão de um polipeptídeo ácido nucleico que codifica JMJC quando conduzida por um promotor constitutivo.
O promotor constitutivo é preferivelmente um promotor GOS2, preferivelmente um promotor GOS2 de arroz. Ainda preferivelmente o promotor constitutivo é representado por uma seqüência de ácido nucleico substancialmente similar à SEQ ID N°: 75, mais preferivelmente o promotor constitutivo é como representado pela SEQ ID N°: 75. Ver a seção "definições" neste para exemplos adicionais de promotores constitutivos.
Opcionalmente, uma ou mais seqüências terminadoras podem ser usadas na construção introduzida em uma planta. Elementos reguladores adicionais podem incluir elementos de transcrição bem como de tradução. Aqueles habilitados na técnica estarão cientes de seqüências terminadoras e intensificadoras que podem ser adequados para o uso na realização da invenção. Uma seqüência de íntron também pode ser adicionada à região 5' não traduzida (UTR) ou na seqüência codificadora para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula-se no citosol, como descrito na seção de definições. Outras seqüências de controle (além do promotor, intensificador, silenciador, seqüências de íntron, regiões 3'UTR e/ou 5'UTR) podem ser elementos estabilziadores de proteína e/ou RNA. Tais seqüências devem ser conhecidas ou podem ser facilmente obtidas por uma pessoa habilitada na técnica.
As construções genéticas da invenção ainda podem incluir uma origem de seqüência de replicação que é requerida para a manutenção e/ou replicação em um tipo celular específico. Um exemplo ocorre quando a construção genética é requerida ser mantida em uma célula bacteriana como um elemento genético epissômico (por exemplo, molécula de plasmídeo ou cosmídeo). As origens preferidas de replicação incluem, mas não são limitadas a fl-ori e colEl.
Para a detecção da transferência bem sucedida das seqüências de ácido nucleico como usado nos métodos da invenção e/ou seleção de plantas transgênicas que compreendem estes ácidos nucleicos, é vantajoso usar genes marcadores (ou genes repórteres). Portanto, a construção genética pode conter opcionalmente um gene de marcador selecionável. Marcadores selecionáveis são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste.
r
E conhecido que na integração estável ou transitória de ácidos nucleicos em células de planta, apenas uma minoria das células absorve o DNA estranho e, se desejado, integra-o em seu genoma, dependendo do vetor de expressão usado e da técnica de transfecção usada. Para identificar e selecionar estes integrantes, um gene codificador para um marcador selecionável (tal como os descritos acima) é usualmente introduzido nas células hospedeiras junto com o gene de interesse. Por exemplo,estes marcadores podem ser usados em mutantes em que estes genes não são funcionais, por exemplo, pela anulação pelos métodos convencionais. Além disso, moléculas de ácido nucleico que codificam um marcador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hospedeira no mesmo vetor que compreende a seqüência que codifica os polipeptídeos da invenção ou usados nos métodos da invenção ou ainda em um vetor separado. As células que foram estavelmente transfectadas com o ácido nucleico introduzido podem ser identificadas, por exemplo, pela seleção (por exemplo, células que integraram o marcador selecionável sobrevivem visto que as outras células morrem). Os genes marcadores podem ser removidos ou excisados da célula transgênica uma vez que estes não são mais necessários. As técnicas para a remoção do gene marcador são bem conhecidos na técnica, técnicas úteis são descritas acima na seção de definições. A invenção também fornece um método para a produção de
plantas transgênicas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle, que compreende introdução e expressão em uma planta de qualquer ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido neste acima. Mais especificamente, a presente invenção fornece um método
para a produção de plantas transgênicas tendo traços aumentados intensificados relacionados com o rendimento, particularmente rendimento aumentado (semente), cujo método compreende:
(i) introduzir e expressar em uma planta ou célula de planta um polipeptídeo ácido nucleico que codifica JMJC e
(ii) cultivar a célula de planta sob condições que promovam crescimento e desenvolvimento de planta.
O ácido nucleico de (i) pode ser qualquer um dos ácidos nucleicos capazes de codificar um polipeptídeo JMJC como definido neste. O ácido nucleico pode ser introduzido diretamente em uma célula de planta ou na planta por si só (incluindo introdução em um tecido, órgão ou qualquer outra parte de uma planta). De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o ácido nucleico é preferivelmente introduzido em uma planta por transformação. O termo "transformação" é descrito em mais detalhes na seção "definições" neste.
As células de planta geneticamente modificadas podem ser regeneradas por intermédio de todos os métodos com os quais o trabalhador habilitado está familiarizado. Os métodos adequados podem ser encontrados nas publicações mencionadas acima por S.D. Kung and R. Wu, Potrykus ou Hofgen e Willmitzer.
No geral após a transformação, as células de planta ou os agrupamentos de célula são selecionados quanto à presença de um ou mais marcadores que são codificados por genes expressíveis em plantas co- transferidas com o gene de interesse, seguindo que o material transformado é regenerado em uma planta total. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, como uma regra, submetido à condições seletivas de modo que as plantas transformadas possam ser distinguidas de plantas não transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas da maneira descrita acima podem ser plantadas e, após um período de desenvolvimento, submetido a uma seleção adequada por pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no desenvolvimento de sementes, se apropriado após a esterilização, em placas de ágar usando-se um agente de seleção adequado de modo que apenas as sementes transformadas possam se desenvolver em plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são avaliadas quanto à presença de um marcador selecionável tal como os descritos acima.
Seguindo a transferência e a regeneração de DNA, as plantas putativamente transformadas também podem ser avaliadas, por exemplo, usando-se análise de Southern, quanto à presença do gene de interesse, número de cópias e/ou organização genômica. Alternativa ou adicionalmente, os níveis de expressão do DNA recentemente introduzido pode ser monitorado usando-se Análise de Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecidas pelas pessoas tendo habilidade comum na técnica.
As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma variedade de meios, tais como pela propagação clonal ou técnicas de criação clássicas. Por exemplo, uma planta transformada de primeira geração (ou Ti) podem ser tornadas independentes e transformantes de segunda geração homozigotos (ou T2) selecionados e as plantas T2 aidna podem ser propagadas através de técnicas de criação clássicas. Os organismos gerados podem tomar uma variedade de formas. Por exemplo, estes podem ser quimeras de células transformadas e de células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas contém o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um estoque de raiz transformado a um descendente não transformado).
A presente invenção claramente estende-se a qualquer célula de planta ou planta produzida por qualquer um dos métodos descritos neste e a todas as partes de plantas e seus propagules. A presente invenção estende-se ainda para abranger a progênie de uma célula, tecido, órgão ou planta total transformadas ou transfectadas primárias que foram produzidos por qualquer um dos métodos mencionados acima, o único requerimento sendo que a progênie apresente as mesmas características genotípicas e/ou fenotípicas como aqueles produzidos pelo precursor nos métodos de acordo com a invenção.
A invenção também inclui células hospedeiras contendo um ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo JMJC como definido neste acima. As células hospedeiras preferidas de acordo com a invenção são células de planta. As plantas hospedeiras para o ácidos nucleicos ou para o vetor usadas no método de acordo com a invenção, o cassete de expressão ou construção ou vetor são, em princípio, vantajosamente todas as plantas, que são capazes de sintetizar os polipeptídeos usados no método inventivo.
Os métodos da invenção são vantajosamente aplicáveis a qualquer planta. Plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertencem à superfamília Viridiplantae, em particular, plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas incluindo forragem e legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimentos, árvores ou arbustos. De acordo com a forma de realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta de cultivo. Exemplos de plantas de cultivo incluem soja, girassol, canola, alfafa, semente de colza, algodão, tomate, batata e tabaco. Ainda preferivelmente, a planta é uma planta monocotiledônea. Exemplos de plantas monocotiledôneas incluem cana de açúcar. Mais preferivelmente a planta é um cereal. Exemplos de cereais incluem arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
A invenção também estende-se a partes colhíveis de uma planta tais como mas não limitadas a sementes, folhas, frutas, flores, caules, raízes, rizomas, tubérculos e bulbos. A invenção além disso diz respeito a produtos derivados, preferivelmente derivados diretamente de uma parte coletável de uma tal planta, tais como grânulos ou pós secos, óleo, gorura e ácidos graxos ou proteínas.
De acordo com uma característica preferida da invenção, a expressão modulada é a expressão aumentada. Métodos para aumentar a expressão de ácidos nucleicos ou genes ou produtos de gene, são bem documentados na técnica e os exemplos são fornecidos na seção de definições.
Como mencionado acima, um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC; entretanto os efeitos de realizar o método, isto é, intensificado os traços relacionados com o rendimento também pode ser atingido usando-se outras técnicas bem conhecidas, que incluem mas não limitado a rotulação de ativação de T-DNA, TILLING, recombinação homóloga. Uma descrição destas técnicas é fornecida na seção de definições.
A presente invenção também abrange o uso de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC como descrito neste e uso destes polipeptídeos JMJC na intensificação de qualquer um dos traços relacionados já mencionados com o rendimento em plantas.
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC descritos neste ou os polipeptídeos JMJC por si sós, podem encontrar uso nos programas de criação em que um marcador de DNA é identificado podendo estar geneticamente ligado a um gene que codifica o polipeptídeo JMJC. Os ácidos nucleicos/genes ou os polipeptídeos JMJC por si sós podem ser usados para definir um marcador molecular. Este DNA ou marcador de proteína podem ser então usados nos programas de criação para selecionar plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento como definido neste acima nos métodos da invenção.
As variantes alélicas de um polipeptídeo ácido nucleico que codifica JMJC/gene também podem encontrar uso em programas de criação auxiliados por marcador. Tais programas de criação algumas vezes requerem a introdução de variação alélica pelo tratamento mutagênico das plantas, usando-se por exemplo Mutagênese por EMS; alternativamente, o programa pode iniciar com uma coleção de variantes alélicas da denominada origem "natural" não intencionalmente. A identificação de variantes alélicas então acontece, por exemplo, por PCR. Isto é seguido por uma etapa para a seleção de variantes alélicas superiores da seqüência em questão e que dão rendimento aumentado. Seleção é tipicamente realizada pelo monitoramento do desempenho de desenvolvimento de plantas contendo variantes alélicas da seqüência em questão. Desempenho de desenvolvimento podem ser monitorados em uma estufa ou no campo. As etapas opcionais adicionais incluem o cruzamento de plantas em que a variante alélica foi identificada com uma planta. Isto pode ser usado, por exemplo, para fabricar uma combinação de características fenotípicas interessantes.
Ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC também podem ser usados como sondas para mapear genética e fisicamente os genes que estes são uma parte de e como marcadores para traços ligados àqueles genes. Tal informação pode ser útil na criação de plantas a fim de desenvovler linhas com fenotipos desejados. Tal uso de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC requer apenas uma seqüência de ácido nucleico de pelo menos 15 nucleotídeos de comprimento. The ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos JMJC pode ser usado como marcadores de polimorfismo de comprimento de fragmento (RFLP). Southern blots (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) de DNA genômico de planta digerida por restrição pode ser sondada com o ácido nucleico que codifica JMJCs. Os padrões de formação de banda resultantes podem ser então submetidos a análises genéticas usando-se programas de computador, tais como MapMaker (Lander et ai. (1987) Genomics 1: 174- 181) a fim de construir um mampa genético. Além disso, os ácidos nucleicos podem ser usados para Southern blots de sonda contendo DNAs genômicos tratados com endonuclease de restrição de uma série de indivíduos que representam precursores e progênie de um cruzamento genético definido. Segregação dos Polimorfismos de DNA é observado e usado para calcular a posição do polipeptídeo ácido nucleico que codifica JMJC no mapa genético previamente obtido usando-se esta população (Botstein et ai. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331). A produção e o uso de sondas derivadas de gene vegetal para o uso no mapeamento genético são descritos em Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Repórter 4: 37-41. Numerosas publicações descrevem o mapeamento genético de clones de cDNA específicos usando-se a metodologia resumida acima ou variações desta. Por exemplo, Populações intercruzamento F2, populações de retrocruzamento, populações aleatoriamente comparadas, linhas isogênicas próximas e outras séries de indivíduos pode ser usado para o mapeamento. Tais metodologias são bem conhecidas por aqueles habilitados na técnica.
As sondas de ácido nucleico também podem ser usadas para o mapeamento físico (isto é, colocação de seqüências em mapas físicos; see Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346 e referências citadas neste).
Em uma outra forma de realização, as sondas de ácido nucleico podem ser usadas no mapeamento de hibridização por fluorescência direta in situ (FISH) (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Embora os métodos correntes de Mapeamento FISH favoreçam o uso de clones grandes (diversos kb a diversas centenas de kb; ver Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), melhoras na sensibilidade podem permitir o desempenho do mapeamento FISH usando-se sondas mais curtas.
Uma variedade de métodos com base na amplifícação de ácido nucleico para o mapeamento genético e físico pode ser realizada usando-se o ácido nucleicos. os exemplos incluem a amplifícação específica de alelo (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), polimorfísmo de fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et al. (1993) Genomics 16:325-332), ligação específica de alelo (Landegren et al. (1988) Science 241:1077-1080), reações de extensão de nucleotídeo (Sokolov (1990) Nucleic Acid Res. 18:3671), mapeamento híbrido por radiação (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) e Mapeamento Happy (Dear and Cook (1989) Nucleic Acid Res. 17:6795-6807). Para estes métodos, a seqüência de um ácido nucleico é usada para projetar e produzir pares de iniciador para o uso na reação de amplificação ou nas reações de extensão de iniciador. O projeto de tais iniciadores é bem conhecido por aqueles habilitados na técnica. Em métodos que utilizam Mapeamento genético com base em PCR, pode ser necesário identificar diferenças de seqüência de DNA entre os precursores do mapeamento do cruzamento na região que corresponde à presente seqüência de ácido nucleico. Isto, entretanto, não é necessário para os métodos de mapeamento.
Os métodos de acordo com a presente invenção resultam em plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, como descrito anteriormente. Estes traços também podem ser combinados com outros traços vantajosamente econômicos, tais como traços de intensificação de rendimento adicionais, tolerância a outras tensões bióticas ou abióticas, traços que modificam várias características arquitetônicas e/ou características bioquímicas e/ou fisiológicas. III. Polipeptídeos CKI (Caseína quinase I)
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle. De acordo com uma primeira forma de realização, a presente invenção fornece um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI.
Um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI. Qualquer referência a seguir a um "proteína útil nos métodos da invenção" é determinada entender um polipeptídeo CKI como definido neste. Qualquer referência a seguir a um "ácido nucleico útil nos métodos da invenção" é determinada entender um ácido nucleico capaz de codificar um tal polipeptídeo CKI. O ácido nucleico a ser introduzido em uma planta (e, portanto, útil na realização dos métodos da invenção) é qualquer ácido nucleico que codifica o tipo de proteína que será descrito agora, a seguir também denominado "CKI ácido nucleico" ou "gene CKI".
Um "polipeptídeo CKI" como definido neste refere-se às proteínas representadas pela SEQ ID N°: 174 e a homólogos (ortólogos e parálogos) destes. Preferivelmente, os homólogos da SEQ ID N°: 174 têm um domínio de caseína quinase.
O termo "domínio" e "motivo" é definido na seção "definições" neste. Os bancos de dados especialistas existem para a identificação de domínios, por exemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244), InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318), Prosite (Bucher and Bairoch (1994), Uma sintaxe de perfil generalizada para motivos de seqüências biomoleculares e sua função em interpretação de seqüência automática. (In) ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004)) ou Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002)). Uma série de ferramentas para a análise in silico de seqüências de proteínas está disponível no servidor ExPASy proteomies (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al., ExPASy: the proteomies server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). Os domínios eos motivos também podem ser identificados usando-se técnicas de rotina, tais como pelo alinhamento de seqüência.
Os métodos para o alinhamento de seqüências para comparação são bem conhecidos na técnica, tais métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA. O GAP usa o algoritmo de Needleman and Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) para encontrar o alinhamento global (isto é medindo-se as seqüências completas) de duas seqüências que maximizam o número de equiparações e minimiza o número de fendas. O algoritmo BLAST (Altschul et at. (1990) J Mol Biol 215: 403- 10) calcula a identidade de seqüência percentual e realiza uma análise estatística da similaridade entre as duas seqüências. O software para realizar análise BLAST está publicamente disponível através do National Centre for Biotechnology Information (NCBI). Os homólogos podem ser facilmente identificados usando-se, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de seqüência múltipla ClustalW (versão 1.83), com os parâmetros de alinhamento default e um método de registro em porcentagem. As Porcentagens globais de similaridade e de identidade também podem ser determinadas usando-se um dos métodos disponíveis no pacote de software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando-se proteína ou seqüências de DNA.). a edição manual menor pode ser realizada para otimizar o alinhamento entre os motivos conservados, como deve estar evidente para uma pessoa habilitada na técnica. Além disso, em vez de usar seqüências de comprimento total para a identificação de homólogos, domínios específicos também podem ser usados. Os valores de identidade de seqüência podem ser determinados sobre o aminoácido inteiro ou seqüência de aminoácido ou em domínios selecionados ou motivos conservados, usando-se os programas mencionados acima usando-se os parâmetros default.
Além disso, polipeptídeos CKI, tanto quanto SEQ ID N°: 174 e seus homólogos são considerados, as proteínas CKI úteis nos métodos nos métodos da presente invenção tipicamente têm atividade de quinase. Os métodos para medir a atividade de quinase são bem conhecidos na técnica.
A presente invenção é ilustrada transformando-se as plantas com a seqüência de ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 173, que codifica a seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 174 respectivamente. Entretanto, o desempenho da invenção não está restrito a estas seqüências; os métodos da invenção podem ser vantajosamente realizados usando-se qualquer ácido nucleico que codifica CKI ou polipeptídeo CKI como definido neste.
Os exemplos de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI podem ser encontrados em bancos de dados conhecidos na técnica, tais ácidos nucleicos são úteis na realização dos métodos da invenção. Ortólogos e parálogos, os termos "ortólogos" e "parálogos" sendo como definido neste, podem ser facilmente identificados pela realização de uma denominada pesquisa blast recíproca. Tipicamente, isto envolve um primeiro BLAST que envovle submeter uma seqüência em dúvida ao BLAST (por exemplo usando- se SEQ ID N°: 174) contra qualquer banco de dados de seqüência, tal como os bancos de dados NCBI publicamente disponíveis. BLASTN or TBLASTX (usando-se os valores default padrão) são, no geral, usados quando começa-se a partir de uma seqüência de nucleotídeo, and BLASTP or TBLASTN (usando-se os valores default padrão) quando começa-se a partir de uma seqüência de proteína. Os resultados de BLAST podem ser opcionalmente filtrados. As seqüências de comprimento total de cada um dos resultados filtrados ou resultados não filtrados são então submetidos ao BLAST novamente (segundo BLAST) contra seqüências do organismo a partir do qual a seqüência em questão é derivada (quando a seqüência em questão é SEQ ID N°: 173 ou SEQ ID N°: 174, o segundo BLAST portanto, deve ser contra seqüências de Nicotiana tabacum). Os resultados do primeiro e segundo BLASTs são então comparados, um parálogo é identificado se um acerto de classificação alta do primeiro blast for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada, submetendo-se ao BLAST novamente então resulta idealmente na seqüência em questão entre os acertos mais altos; um ortólogo é identificado se um acerto de classificação alta no primeiro BLAST não for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada e preferivelmente resulta no BLAST novamente na seqüência em questão estando entre os acertos mais altos.
Os acertos de classificação alta são aqueles tendo um valor E baixo. Quanto mais baixo o valor E, mais significante o registro (ou, em outras palavras, menor a chance que o acerto seja encontrado por chance). Computação do valor E é bem conhecido na técnica. Além dos valores E, comparações são registradas pela identidade de porcentagem. Identidade de porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácidos nucleicos comparadas (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. No caso de famílias grandes, ClustalW pode ser usado, seguido por uma árvore de união próxima, para ajudar a visualizar o agrupamento de genes relacionados e para identificar ortólogos e parálogos.
As variantes de ácido nucleico que codificam homólogos e derivados da SEQID N°: 174 também podem ser úteis na prática dos métodos da invenção, os termos "homólogo" e "derivado" sendo como definido neste. Também são úteis nos métodos da invenção os ácidos nucleicos que codificam homólogos e derivados de ortólogos or paralogues da SEQ ID N°: 174. Homólogos e derivados úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica e funcional como a proteína não modificada da qual estes são derivados.
As variantes de ácido nucleico adicionais úteis na prática dos métodos da invenção incluem porções de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI, ácidos nucleicos que hibridizam-se a ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI, variantes de união de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI, variantes alélicas de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI e variantes de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI obtidos pelo embaralhamento de gene. Os termos seqüência de hibridização, variante de união, variante alélica e embaralhamento de gene são como descritos neste.
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI não necessitam ser ácidos nucleicos de comprimento total, visto que o desempenho dos métodos da invenção não contam com o uso de seqüências de comprimento total de ácido nucleico. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma porção da SEQ ID N°: 173 ou uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 174.
Uma porção de um ácido nucleico pode ser preparada, por exemplo, realizando-se uma ou mais anulações no ácido nucleico. As porções podem ser usadas na forma isolada ou estas podem ser fundidas a outras seqüências codificadoras (ou não codificadoras) a fim de, por exemplo, produzir uma proteína que combine diversas atividades. Quando fundido a outras seqüências codificadoras, o polipeptídeo resultante produzido na tradução pode ser maior do que aquele predito para a porção de proteína.
As porções úteis métodos da invenção, codificam um polipeptídeo CKI como definido neste têm substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dada na SEQ ID N°: 174. Preferivelmente, a porção é uma porção de qualquer um dos ácidos nucleicos dada na SEQ ID N°: 173 ou é uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dada na SEQ ID N°: 173. Preferivelmente a porção is pelo menos 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1200, 1300, 1400 nucleotídeos de comprimento consecutivo, os nucleotídeos consecutivos sendo da SEQ ID N°: 173 ou de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 174. Mais preferivelmente a porção é uma porção do ácido nucleico da SEQ ID N0: 173.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é um ácido nucleico capaz de hibridizar, sob condições de estringência reduzida, preferivelmente sob condições estringentes, com um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido neste ou com uma porção como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capable de hibridizar-se à SEQ ID N°: 173 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 173.
As seqüências de hibridização úteis nos métodos da invenção codificam um polipeptídeo CKI como definido neste, tendo substancialmente a mesma atividade biológica as seqüências de aminoácido dada na SEQ ID N°: 174. Preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar à SEQ ID N°: 173 ou a uma porção de qualquer destas seqüências, uma porção sendo como definida acima ou a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ IDN°: 174.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma variante de união que codifica um polipeptídeo CKI como definido neste acima, a variante de união sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta a variante de união da SEQ ID N°: 173 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 174.
Uma outra variante de ácido nucleico útil na realização dos métodos da invenção é uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido neste acima, uma variante alélica sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante alélica da SEQ ID N°: 173 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo das seqüências de aminoácido representado pela SEQ ID N0: 174.
As variantes alélicas úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica como o polipeptídeo CKI da SEQ ID N°: 174. As variante alélicas existem em estado natural e abrangidas dentro dos métodos da presente invenção são o uso destes alelos naturais. Mistura de gene e a evolução direcionada podem ser usadas para gerar variantes de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI como definido acima; o termo "mistura de gene" sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta a variante da SEQ ID N°: 173 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta uma variante de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 174, cujo ácido nucleico variante é obtido pelo embaralhamento de gene.
Além disso, as variantes de ácido nucleico também podem ser obtidas por mutagênese direcionada ao local. Os diversos métodos estão disponíveis para atingir mutagênese direcionada ao local, o mais comum sendo métodos com base em PCR (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds.).
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI podem ser derivados de qualquer fonte natural ou artificial. O ácido nucleico pode ser modificado a partir de sua forma natural na composição e/ou ambiente genômico através da manipulação humana deliberada. Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica o polipeptídeo CKI é de uma planta. No caso SEQ ID N°: 173, os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeo CKI é preferivelmente de uma planta dicotiledônea, mais preferivelmente da família Solanaceae, mais preferivelmente o ácido nucleico é de Nicotiana tabacum.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento. Em particular, desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo vigor precoce aumentado e rendimento aumentado, especialmente biomassa aumentada e rendimento aumentado de semente com relação às plantas de controle. Os termos "rendimento" e "rendimento de semente" são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste.
Referência neste a traços intensificados relacionados com o rendimento é determinada entender um aumento em vigor precoce e/ou na biomassa (peso) de uma ou mais partes de uma planta, que pode incluir partes (coletáveis) acima do solo e/ou partes (coletáveis) abaixo do solo. Em particular, tais partes colhíveis são biomassa e/ou sementes e desempenho dos métodos da invenção resulta em plantas tendo vigor precoce aumentado, biomassa e/ou rendimento de semente com relação à vigor precoce, biomassa ou rendimento de semente de plantas de controle.
Tomando o milho como um exemplo, um aumento no rendimento pode ser manifestado as um ou mais do seguinte: aumento no número de plantas estabelecido por hectare ou acre, um aumento no número de espigas por planta, um aumento no número de fileiras, número de sementes por fileira, peso de semente, peso de semente milhar, comprimento/diâmetro de espiga, aumento na razão de enchimento de semente (que é o número de sementes enchidas dividido pelo número total de sementes e multiplicado por 100), entre outros. Tomando-se o arroz como um exemplo, um aumento no rendimento pode manifestar-se por si só como um aumento em um ou mais do seguinte: número de plantas por hectare ou acre, número de panículas por planta, número de espigas por panícula, número de flores (flósculos) por panícula (que é expressado como uma razão do número de sementes enchidas no número de panícula primárias), aumento na razão de enchimento de semente (que é o número de sementes enchidas dividido pelo número total de sementes e multiplicado por 100), aumento em peso de semente milhar, entre outros.
A presente invenção fornece um método para aumentar o rendimento, especialmente biomassa e/ou rendimento de semente de plantas, com relação às plantas de controle, cujo método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar a expressão, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido neste.
Visto que as plantas transgênicas de acordo com a presente invenção têm rendimento aumentado, é provável que estas plantas apresentem uma taxa de desenvolvimento aumentada (durante pelo menos parte do seu ciclo de vida), com relação à taxa de desenvolvimento de plantas de controle em um estágio correspondente em seu ciclo de vida.
A taxa de desenvolvimento aumentada pode ser específica para uma ou mais partes de uma planta (incluindo sementes) ou pode ser substancialmente por toda a planta. Plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada pode ter um ciclo de vida mais curto. O ciclo de vida de uma planta pode ser tomado significar o tempo necessário para o desenvolvimento de uma semente madura seca até o estágio onde a planta produziu sementes maduras secas, similar ao material de partida. Este ciclo de vida pode ser influenciado por fatores tais como vigor precoce, taxa de desenvolvimento, índice de verdor, tempo de florescimento e velocidade de maturação de semente. O aumento em taxa de desenvolvimento pode acontecer em um ou mais estágios no ciclo de vida de uma planta ou substancialmente durante o ciclo de vida de planta total. A taxa de desenvolvimento aumentada durante os estágios precoces no ciclo de vida de uma planta pode refletir o vigor intensificado. O aumento na taxa de desenvolvimento pode alterar o ciclo de coleta de uma planta permitindo que as plantas sejam semeadas depois e/ou coletadas mais cedo do que seria de outra maneira possível (um efeito similar pode ser obtido com tempo de florescimento precoce). Se a taxa de desenvolvimento for suficientemente aumentada, isto pode permitir a semeadura adicional de sementes das mesmas espécies vegetais (por exemplo semeadura e coleta de plantas de arroz seguido pela semeadura e coleta de outras plantas de arroz tudo dentro de um período de desenvolvimento convencional). Similarmente, se a taxa de desenvolvimento for suficientemente aumentada, isto pode permitir a semeadura adicional de sementes de espécies de plantas diferentes (por exemplo a semeadura e a coleta de plantas de milho seguido por, por exemplo, a semeadura e a coleta opcional de soja, batata ou qualquer outro vegetal adequado). Os períodos de coleta adicionais a partir do mesmo estoque de raiz no caso de algumas plantas de cultivo também pode ser possível. Alteração do ciclo de coleta de uma planta pode levar a um aumento na produção de biomassa anual por acre (devido a um aumento no número de vezes (diz-se em um ano) que qualquer planta particular pode ser desenvolvida e coletada). Um aumento na taxa de desenvolvimento também pode permitir o cultivo de plantas transgênicas em uma área geográfica mais ampla do que suas contrapartes do tipo selvagem, visto que as limitações territoriais para o desenvolvimento de uma lavoura são freqüentemente determinados pelas condições ambientais adversas no período de plantio (estação precoce) ou no período de coleta (estação posterior). Tais condições adversas podem ser evitadas se o ciclo de coleta for encurtado. A taxa de desenvolvimento pode ser determinada derivando-se vários parâmetros de curvas de desenvolvimento, tais parâmetros podem ser: T-Mid (o tempo levado pelas plantas para atingir 50 % de seu tamanho máximo) e T-90 (tempo levado pelas plantas para atingir 90 % de seu tamanho máximo), entre outros.
De acordo com uma característica preferida da presente invenção, desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada com relação às plantas de controle. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a taxa de desenvolvimento de plantas, cujo método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar a expressão, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido neste. Em uma forma de realização particular, desempenho dos métodos da presente invenção dá plantas com vigor precoce aumentado.
Um aumento no rendimento e/ou taxa de desenvolvimento ocorre se a planta estiver sob condições sem estresse ou se a planta for exposta a várias tensões em comparação com as plantas de controle. Plantas tipicamente respondem à exposição à tensão desenvolvendo-se mais lentamente. Em condições de tensão grave, a planta pode ainda parar de se desenvolver completamente. A tensão branda por outro lado é definida neste como sendo qualquer tensão à qual uma planta é exposta que não resulta na planta parando seu desenvolvimento completamente sem a capacidade de retomar o crescimento. Tensão branda no sentido da invenção da invenção leva a uma redução no desenvolvimento das plantas submetidas à tensão de menos que 40 %, 35 % ou 30 %, preferivelmente menor do que 25 %, 20 % ou 15 %, mais preferivelmente menor do que 14 %, 13 %, 12 %, 11 % ou 10 % ou menor em comparação com a planta de controle sob condições sem estresse. Devido aos avanços nas práticas agrícolas (irrigação, fertilização e tratamentos com pesticidas) tensões graves não são freqüentemente encontradas em plantas de cultivo cultivadas. Como uma conseqüência, o desenvolvimento comprometido induzido pela tensão branda é freqüentemente uma característica indesejada para a agricultura. As tensões brandas são as tensões (ambientais) bióticas e/ou abióticas diárias às quais a planta é exposta. As tensões abióticas podem ocorrer devido à secura ou excesso de água, tensão anaeróbica, tensão ao sal, toxicidade química, tensão oxidativa e calor, frio ou temperaturas congelantes. A tensão abiótica pode ser uma tensão osmótica causada por uma tensão a água (particularmente devido à secura), tensão ao sal, tensão oxidativa ou uma tensão iônica. Tensões bióticas são tipicamente aquelas tensões causadas por patogênio, tal como bactérias, vírus, fungos e insetos.
Em particular, os métodos da presente invenção podem ser realizados sob condições sem estresse ou sob condições de secura branda para dar plantas tendo rendimento aumentado com relação às plantas de controle. Como relatado em Wang et al. (Plant (2003) 218: 1-14), tensão abiótica leva a uma série de mudanças morfológicas, fisiológica, bioquímicas e moleculares que afetam adversamente o desenvolvimento e produtividade da planta. Secura, salinidade, temperaturas extremas e tensão oxidativa são conhecidas serem interconectadas e podem induzir o desenvolvimento e o dano celular através de mecanismos similares. Rabbani et al. (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767) descreve um grau particularmente alto de "cross talk" tensão por secura e tensão por salinidade alta. Por exemplo, seca e/ou desalinização são manifestadas primariamente como tensão osmótica, resultando na interrupção da homeostase e a distribuição de íon na célula. Tensão oxidativa, que freqüentemente acompanha temperatura alta e baixa, tensão por salinidade ou secura, pode causar a desnaturação de de proteínas funcionais e estruturais. Como uma conseqüência, estas diversas tensões ambientais freqüentemente ativam caminhos de sinalização celular e respostas celulares similares, tal como a produção de proteínas de tensão, super-regulação do acúmulo de anti- oxidantes, acúmulo dos solutos compatíveis e interrupção do desenvolvimento. O termo condições "sem tensão" como usado aqui são aquelas condições ambientais que permitem o desenvolvimento ótimo de planta de plantas. As pessoas habilitadas na técnica estão cientes de condições de solo normais e condições climáticas para uma dada localização. Plantas com condições de desenvolvimento ótimas, (desenvolvimento sob condições sem estresse) tipicamente, o rendimento na ordem crescente de preferência pelo menos 90 %, 87 %, 85 %, 83 %, 80 %, 77 % ou 75 % da produção média de tal planta em um dado ambiente. A produção média pode ser calculada com base na coleta e/ou na estação. As pessoas habilitadas na técnica estão cientes das produções de rendimento médio de uma lavoura.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas rendimento aumentado e/ou vigor precoce aumentado, com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar o rendimento e/ou vigor precoce em plantas que se desenvolvem sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas, cujo método compreende aumentar expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições de deficiência de nutriente, particularmente sob condições de deficiência de nitrogênio, rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar o rendimento em plantas desenvolvidas sob condições de deficiência de nutriente, cujo método compreende aumentar expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI. Deficiência de nutriente pode resultar from a Iack of nutrients tais como nitrogênio, fosfatos e outros compostos contendo fósforo, potássio, cálcio, cádmio, magnésio, manganês, ferro e boro, entre outros.
A presente invenção abrange plantas ou partes destas (incluindo sementes) obteníveis pelos métodos de acordo com a presente invenção. As plantas ou partes destas compreende um ácido nucleico transgene que codifica um polipeptídeo CKI como definido acima.
invenção também fornece contruções genéticas e vetores para facilitar a introdução e/ou expressão em plantas de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI. A construção de genes pode ser inserida em vetores, que pode estar comercialmente disponível, adequada para a transformação em plantas e adequado para a expressão do gene de interesse nas células transformadas. A invenção também forence o uso da construção de gene como definido neste nos métodos da invenção.
Mais especificamente, a presente invenção fornece uma construção que compreende:
(a) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido acima;
(b) uma ou mais seqüências de controle capazes de conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico de (a) e opcionalmente
(c) uma seqüência de terminação de transcrição.
Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica um
polipeptídeo CKI é como definido acima. O termo "seqüência de controle" e "seqüência de terminação" são como definidos neste.
As plantas são transformadas com um vetor que compreende qualquer um dos ácidos nucleicos descritos acima. O técnico habilitado estará bem ciente dos elementos genéticos que devem estar presentes no vetor na ordem para transformar, selecionar e propagar de maneira bem sucedida as células hospedeiras contendo a seqüência de interesse. A seqüência de interesse é operacionalmente ligada a uma ou mais seqüências de controle (pelo menos a um promotor).
Vantajosamente, qualquer tipo de promotor, se natural ou sintético, pode ser usado para conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico. Um promotor específico de semente é particularmente útil nos métodos da invenção, preferivelmente, o promotor é um promotor específico de embrião. Ver a seção "definições" neste para definições dos vários tipos de promotores. Também úteis nos métodos da invenção is a promotor constitutivo.
Deve estar claro que a aplicabilidade da presente invenção não está restrita ao ácido nucleico que codifica o polipeptídeo CKI representado pela SEQ ID N°: 173, nem é a aplicabilidade da invenção restrita à super- expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo CKI quando conduzida por um promotor específico de semente ou quando conduzida por um promotor constitutivo.
O promotor específico de semente é preferivelmente um promotor WSI18, preferivelmente um promotor WSI18 de arroz. Ainda preferivelmente o promotor específico de semente é representado por uma seqüência de ácido nucleico substancialmente similar à SEQ ID N°: 175, mais preferivelmente o promotor específico de semente é como representado pela SEQ ID N°: 175. Ver a seção "definições" neste para exemplos adicionais de promotor específico de sementes.
Opcionalmente, uma ou mais seqüências terminadoras podem ser usadas na construção introduzida em uma planta. Elementos reguladores adicionais podem incluir elementos de transcrição bem como de tradução. Aqueles habilitados na técnica estarão cientes de seqüências terminadoras e intensificadoras que podem ser adequados para o uso na realização da invenção. Uma seqüência de íntron também pode ser adicionada à região 5' não traduzida (UTR) ou na seqüência codificadora para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula-se no citosol, como descrito na seção de definições. Outras seqüências de controle (além do promotor, intensificador, silenciador, seqüências de íntron, regiões 3'UTR e/ou 5'UTR) podem ser elementos estabilziadores de proteína e/ou RNA. Tais seqüências devem ser conhecidas ou podem ser facilmente obtidas por uma pessoa habilitada na técnica.
As construções genéticas da invenção ainda podem incluir uma origem de seqüência de replicação que é requerida para a manutenção e/ou replicação em um tipo celular específico. Um exemplo ocorre quando a construção genética é requerida ser mantida em uma célula bacteriana como um elemento genético epissômico (por exemplo, molécula de plasmídeo ou cosmídeo). As origens preferidas de replicação incluem, mas não são limitadas a fl-ori e colEl.
Para a detecção da transferência bem sucedida das seqüências de ácido nucleico como usado nos métodos da invenção e/ou seleção de plantas transgênicas que compreendem estes ácidos nucleicos, é vantajoso usar genes marcadores (ou genes repórteres). Portanto, a construção genética pode conter opcionalmente um gene de marcador selecionável. Os marcadores selecionáveis são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste. Os genes marcadores podem ser removidos ou excisados da célula transgênica uma vez que estes não são mais necessários. As técnicas para a remoção de marcador são bem conhecidas na técnica, as técnicas úteis são descritas acima na seção de definições.
A invenção também fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle, que compreende introdução e expressão em uma planta de qualquer ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido neste acima. Mais especificamente, a presente invenção fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços aumentados intensificados relacionados com o rendimento, particularmente vigor precoce aumentado e/ou rendimento aumentado, cujo método compreende:
(i) introduzir e expressar em uma planta ou célula de planta um polipeptídeo ácido nucleico que codifica CKI e
(ii) cultivar a célula de planta sob condições que promovam crescimento e desenvolvimento de planta.
O ácido nucleico de (i) pode ser qualquer um dos ácidos nucleicos capazes de codificar um polipeptídeo CKI como definido neste.
O ácido nucleico pode ser introduzido diretamente em uma célula de planta ou na planta por si só (incluindo introdução em um tecido, órgão ou qualquer outra parte de uma planta). De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o ácido nucleico é preferivelmente introduzido em uma planta por transformação. O termo "transformação" é descrito em mais detalhes na seção "definições" neste.
As células de planta geneticamente modificadas podem ser regeneradas por intermédio de todos os métodos com os quais o trabalhador habilitado está familiarizado. Os métodos adequados podem ser encontrados nas publicações mencionadas acima por S.D. Kung and R. Wu, Potrykus ou Hofgen e Willmitzer.
No geral após a transformação, as células de planta ou os agrupamentos de célula são selecionados quanto à presença de um ou mais marcadores que são codificados por genes expressíveis em plantas co- transferido com o gene de interesse, seguindo que o material transformado é regenerado em uma planta total. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, como uma regra, submetido à condições seletivas de modo que as plantas transformadas possam ser distinguidas das plantas não transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas da maneira descrita acima podem ser plantadas e, após um período de desenvolvimento, submetido a uma seleção adequada por pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no desenvolvimento de sementes, se apropriado após a esterilização, em placas de ágar usando-se um agente de seleção adequado de modo que apenas as sementes transformadas possam se desenvolver em plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são avaliadas quanto à presença de um marcador selecionável tal como os descritos acima.
Seguindo a transferência e a regeneração de DNA, as plantas putativamente transformadas também podem ser avaliadas, por exemplo, usando-se análise de Southern, quanto à presença do gene de interesse, número de cópias e/ou organização genômica. Alternativa ou adicionalmente, os níveis de expressão do DNA recentemente introduzido pode ser monitorado usando-se Análise de Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecidas pelas pessoas tendo habilidade comum na técnica.
As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma variedade de meios, tais como pela propagação clonal ou técnicas de criação clássicas. Por exemplo, uma planta transformada de primeira geração (ou TI) podem ser tornadas independentes e transformantes de segunda geração homozigotos (ou T2) selecionados e as plantas T2 ainda podem ser propagadas através de técnicas de criação clássicas. Os organismos gerados podem tomar uma variedade de formas. Por exemplo, estes podem ser quimeras de células transformadas e de células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas contém o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um estoque de raiz transformado a um descendente não transformado).
A presente invenção claramente estende-se a qualquer célula de planta ou planta produzida por qualquer um dos métodos descritos neste e a todas as partes de plantas e seus propagules. A presente invenção estende-se ainda para abranger a progênie de uma célula, tecido, órgão ou planta total transformadas ou transfectadas primárias que foram produzidos por qualquer um dos métodos mencionados acima, o único requerimento sendo que a progênie apresente as mesmas características genotípicas e/ou fenotípicas como aqueles produzidos pelo precursor nos métodos de acordo com a invenção.
A invenção também inclui células hospedeiras contendo um ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo CKI como definido neste acima. As células hospedeiras preferidas de acordo com a invenção são células de planta. As plantas hospedeiras para o ácidos nucleicos ou para o vetor usadas no método de acordo com a invenção, o cassete de expressão ou construção ou vetor são, em princípio, vantajosamente todas as plantas, que são capazes de sintetizar os polipeptídeos usados no método inventivo.
Os métodos da invenção são vantajosamente aplicáveis a qualquer planta. As plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertencem à superfamília Viridiplantae, em particular, plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas incluindo forragem e legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimentos, árvores ou arbustos. De acordo com a forma de realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta de cultivo. Os exemplos de plantas de cultivo incluem soja, girassol, canola, alfafa, semente de colza, algodão, tomate, batata e tabaco. Ainda preferivelmente, a planta é uma planta monocotiledônea. Os exemplos de plantas monocotiledôneas incluem cana de açúcar. Mais preferivelmente a planta é um cereal. Os exemplos de cereais incluem arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
A invenção também estende-se a partes colhíveis de uma planta tais como mas não limitadas a sementes, folhas, frutas, flores, caules, raízes, rizomas, tubérculos e bulbos. A invenção além disso diz respeito a produtos derivados, preferivelmente derivados diretamente de uma parte coletável de uma tal planta, tais como grânulos ou pós secos, óleo, gorura e ácidos graxos ou proteínas.
De acordo com uma característica preferida da invenção, a expressão modulada é a expressão aumentada. Métodos para aumentar a expressão de ácidos nucleicos ou genes ou produtos de gene, são bem documentados na técnica e os exemplos são fornecidos na seção de definições.
Como mencionado acima, um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI; entretanto os efeitos de realizar o método, isto é, intensificado os traços relacionados com o rendimento também pode ser atingido usando-se outras técnicas bem conhecidas, que incluem mas não limitado a rotulação de ativação de T-DNA, TILLING, recombinação homóloga. Uma descrição destas técnicas é fornecida na seção de definições.
A presente invenção também abrange o uso de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI como descrito neste e uso destes polipeptídeos CKI na intensificação de qualquer um dos traços relacionados já mencionados com o rendimento em plantas.
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeo CKI descritos neste ou os polipeptídeos CKI por si sós, podem encontrar uso nos programas de criação em que um marcador de DNA é identificado podendo estar geneticamente ligado a um gene que codifica o polipeptídeo CKI. O ácido nucleicos/genes ou os polipeptídeos CKI por si sós podem ser usados para definir um marcador molecular. Este amrcador de DNA ou proteína podem ser então usados nos programas de criação para selecionar plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento como definido neste acima nos métodos da invenção.
As variantes alélicas de um ácido nucleico/gene que codifica o polipeptídeo CKI também podem encontrar uso em programas de criação auxiliados por marcador. Tais programas de criação algumas vezes requerem a introdução de variação alélica pelo tratamento mutagênico das plantas, usando-se por exemplo mutagênese por EMS; alternativamente, o programa pode iniciar com uma coleção de variantes alélicas da denominada origem "natural" não intencionalmente. A identificação de variantes alélicas então acontece, por exemplo, por PCR. Isto é seguido por uma etapa para a seleção de variantes alélicas superiores da seqüência em questão e que dão rendimento aumentado. A seleção é tipicamente realizada pelo monitoramento do desempenho de desenvolvimento de plantas contendo variantes alélicas da seqüência em questão. O desempenho de desenvolvimento pode ser monitorado em uma estufa ou no campo. As etapas opcionais adicionais incluem o cruzamento de plantas em que a variante alélica foi identificada com uma planta. Isto pode ser usado, por exemplo, para fabricar uma combinação de características fenotípicas interessantes.
Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos CKI também podem ser usados como sondas para mapear genética e fisicamente os genes que estes são uma parte de e como marcadores para traços ligados àqueles genes. Tal informação pode ser útil na criação de plantas a fim de desenvovler linhas com fenotipos desejados. Tal uso de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeo CKI requer apenas uma seqüência de ácido nucleico de pelo menos 15 nucleotídeos de comprimento. Os ácidos nucleicos que codificam polipeptídeo CKI codificam ácidos nucleicos pode ser usado como marcadores de polimorfismo de comprimento de fragmento (RFLP). Southern blots (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) de DNA genômico de planta digerida por restrição pode ser sondada com os ácidos nucleicos que codificam CKI. Os padrões de formação de banda resultantes podem ser então submetidos a análises genéticas usando-se programas de computador, tais como MapMaker (Lander et al. (1987) Genomics 1: 174-181) a fim de construir um mampa genético. Além disso, os ácidos nucleicos podem ser usados para Southern blots de sonda contendo DNAs genômicos tratados com endonuclease de restrição de uma série de indivíduos que representam precursores e progênie de um cruzamento genético definido. Segregação dos Polimorfismos de DNA é observado e usado para calcular a posição do ácido nucleico que codifica o polipeptídeo CKI no mapa genético previamente obtido usando-se esta população (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331).
A produção e o uso de sondas derivadas de gene vegetal para o uso no mapeamento genético são descritos em Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mot. Biol. Repórter 4: 37-41. Numerosas publicações descrevem o mapeamento genético de clones de cDNA específicos usando-se a metodologia resumida acima ou variações desta. Por exemplo, Populações intercruzamento F2, populações de retrocruzamento, populações aleatoriamente comparadas, linhas isogênicas próximas e outras séries de indivíduos pode ser usado para o mapeamento. Tais metodologias são bem conhecidas por aqueles habilitados na técnica.
As sondas de ácido nucleico também podem ser usadas para o mapeamento físico (isto é, colocação de seqüências em mapas físicos; see Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346 e referências citadas neste).
Em uma outra forma de realização, as sondas de ácido nucleico pode ser usadas no mapeamento de hibridização por fluorescência direta in situ (FISH) (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Embora os métodos correntes de Mapeamento FISH favoreçam o uso de clones grandes (diversos kb a diversas centenas de kb; ver Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), melhoras na sensibilidade podem permitir o desempenho do mapeamento FISH usando-se sondas mais curtas.
Uma variedade de métodos com base na amplificação de ácido nucleico para o mapeamento genético e físico pode ser realizada usando-se o ácido nucleicos. Os exemplos incluem a amplificação específica de alelo (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), polimorfismo de fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et at. (1993) Genomics 16:325-332), ligação específica de alelo (Landegren et al. (1988) Science 241:1077-1080), reações de extensão de nucleotídeo (Sokolov (1990) Nucleic Acid Res. 18:3671), mapeamento híbrido por radiação (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) e Mapeamento Happy (Dear and Cook (1989) Nucleic Acid Res. 17:6795-6807). Para estes métodos, a seqüência de um ácido nucleico é usada para projetar e produzir pares de iniciador para o uso na reação de amplificação ou nas reações de extensão de iniciador. O projeto de tais iniciadores é bem conhecido por aqueles habilitados na técnica. Em métodos que utilizam mapeamento genético com base em PCR, pode ser necessário identificar diferenças de seqüência de DNA entre os precursores do mapeamento do cruzamento na região que corresponde à presente seqüência de ácido nucleico. Isto, entretanto, não é necessário para os métodos de mapeamento.
Os métodos de acordo com a presente invenção resultam em plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, como descrito anteriormente. Estes traços também podem ser combinados com outros traços vantajosamente econômicos, tais como traços de intensificação de rendimento adicionais, tolerância a outras tensões bióticas ou abióticas, traços que modificam várias características arquitetônicas e/ou características bioquímicas e/ou fisiológicas.
IV. Polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomíno de planta (PHDf-HD)
Surpreendentemente, foi observado agora que modular, preferivelmente aumentar, expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle. De acordo com uma primeira forma de realização, a presente invenção fornece um método para intensificar traços relacionados com o rendimento, preferivelmente enhancing traços de sementes relacionados com o rendimento, em plantas com relação às plantas de controle, que compreende modular, preferivelmente aumentar, expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD.
Um método preferido para modular, preferivelmente aumentar, a expressão de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD ocorre pela introdução e expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD.
Qualquer referência a seguir a um "proteína útil nos métodos da invenção" é determinada entender um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste. Qualquer referência a seguir a uma "seqüência de ácido nucleico útil nos métodos da invenção" é determinada entender uma seqüência de ácido nucleico capaz de codificar um tal polipeptídeo PHDf-HD. A seqüência de ácido nucleico a ser introduzido em uma planta (e, portanto, útil na realização dos métodos da invenção) é qualquer seqüência de ácido nucleico que codifica o tipo de polipeptídeo, que será descrito agora, a seguir também denominado "seqüência de ácido nucleico PHDf-HD" ou "gene PHDf-HD".
Um "polipeptídeo PHDf-HD" como definido neste refere-se a qualquer polipeptídeo que compreende: (i) um domínio tendo pelo menos 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüência de aminoácido a um domínio zíper de leucina/prolongamento de homeodomínio de planta (ZIP/PHDf) como representado pela SEQ ID N°: 233; e (ii) um domínio tendo pelo menos 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüência de aminoácido a um homeodomínio (HD) como representado pela SEQ ID N°: 234.
Alternativa ou adicionalmente, um "polipeptídeo PHDf-HD" como definido neste refere-se a qualquer polipeptídeo que compreende: (i) um domínio PHD como representado pela PFAM00628; e (ii) um HD como representado pela PFAM00046.
Alternativa ou adicionalmente, um "polipeptídeo PHDf-HD" como definido neste refere-se a qualquer seqüência de polipeptídeo que quando usada na construção de uma árvore filogenética HD, tal como o descrito na Figura 13, agrupa-se com os grupo PHDf-HD de polipeptídeos que compreende a seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180, em vez de qualquer outro grupo HD.
Alternativa ou adicionalmente, um "polipeptídeo PHDf-HD" como definido neste refere-se a qualquer polipeptídeo tendo na ordem crescente de preferência pelo menos 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüência de aminoácido ao polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N0: 180 ou a qualquer uma das seqüências de polipeptídeos dadas na Tabela Dl neste.
O termo "domínio" e "motivo" é definido na seção "definições" neste. Os bancos de dados especialistas existem para a identificação de domínios, por exemplo, SMART (Schultz et at. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95, 5857-5864; Letunic et at. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244, InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318, Prosite (Bucher and Bairoch (1994), Uma sintaxe de perfil generalizada para motivos de seqüências biomoleculares e sua função em interpretação de seqüência automática. (In) ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hula et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004) ou Pfam (Bateman et at., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002). Uma série de ferramentas para a análise in silico de seqüências de proteínas está disponível no servidor ExPASy proteomics (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et at., ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). Os domínios também podem ser identificados usando-se técnicas de rotina, tais como pelo alinhamento de seqüência. A análise da seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 180 é apresentada abaixo nos Exemplos 30 e 32 neste. Por exemplo, um polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180 compreende um dedo de PHD com uma entrada Pfam PF00628 e um HD com a entrada Pfam PF00046.
Os métodos para o alinhamento de seqüências para comparação são bem conhecidos na técnica, tais métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA. O GAP usa o algoritmo de Needleman and Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) para encontrar o alinhamento global (isto é medindo-se as seqüências completas) de duas seqüências que maximizam o número de equiparações e minimiza o número de fendas. O algoritmo BLAST (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403- 10) calcula a identidade de seqüência percentual e realiza uma análise estatística da similaridade entre as duas seqüências. O software para realizar análise BLAST está publicamente disponível através do National Centre for Biotechnology Information (NCBI). Os homólogos podem ser facilmente identificados usando-se, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de seqüência múltipla ClustalW (versão 1.83), com os parâmetros de alinhamento default e um método de registro em porcentagem. As porcentagens globais de similaridade e de identidade também podem ser determinados usando-se um dos métodos disponíveis no pacote de software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando-se proteína ou seqüências de DNA.). edição manual menor pode ser realizada para otimizar o alinhamento entre os motivos conservados, como deve estar evidente para uma pessoa habilitada na técnica. Além disso, em vez de usar seqüências de comprimento total para a identificação de homólogos, domínios específicos também podem ser usados. Os valores de identidade de seqüência podem ser determinados sobre a seqüência de aminoácido inteira ou a seqüência de polipeptídeo ou em domínios selecionados ou motivos conservados, usando-se os programas mencionados acima usando-se os parâmetros default. Example 31 herein describes in Table D2 the identidade de porcentagem between the ZIP/PHDf como representado pela SEQ ID N°: 233 and ZIP/PHDf do polipeptídeos PHDf-HD listadas na Tabela Dl, and in Table D3 the identidade de porcentagem between the HD como representado pela SEQ ID N°: 234 and the HD do polipeptídeos PHDf-HD listadas na Tabela Dl do Exemplo 29.
Além disso, as seqüências de aminoácido enriquecidas em aminoácidos básicos (Lys e Arg) ou ácidos (Glu e Asp), respectivamente denominados extensões básicas e ácidas, também podem ser facilmente identificadas simplesmente pela inspeção ocular (Figura 17). Alternativamente, a composição de aminoácido primária (em %) podem ser calculada spara determinar se um domínio de polipeptídeo é rico em aminoácidos específicos usando-se programas de software do servidor ExPASy, em particular, a ferramenta ProtParam (Gasteiger E et al. (2003) ExPASy: o servidor proteomics para o conhecimento de proteína em profundidadee análise. Nucleic Acids Res 31:3784-3788). A composição da proteína de interesse pode ser então comparada com a composição de aminoácido média (in %) no banco de de Seqüência de Proteína Swiss-Prot.
As espirais enroladas são importantes para a identificação de interações de proteína-proteína, tais como oligomerização, de proteínas idênticas, de proteínas da mesma família ou de proteínas não relacionadas. Um polipeptídeo PHDf-HD representa pelo menos uma região de espiral enrolada predita. Recentemente muito progresso foi feito na predição computacional de espirais enroladas dos dados de sequncia. Entre os algoritmos bem conhecidos por uma pessoa habilitada na técnica estão disponíveis nas ferramentas ExPASy Proteomics COILS, PAIRCOIL, PAIRCOIL2, MULTICOIL ou MARCOIL, hospedadas pelo Swiss Institute for Bioinformatics. No exemplo 33 e Figura 16, são conhecidos respectivamente os resultados numéricos e gráficos da SEQ ID N°: 180 como produzido pela análise de algoritmo COILS. Dois domínios de espiral enrolada preditos no terminal N são identificados em uma seqüência de polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, com uma probabilidade forte. Uma espiral enrolada de terminal C também é predita, com uma probalidade menor.
A tarefa da predição de localização subcelular de proteína é importante e bem estudada. O conhecimento de uma localização de proteína ajuda a elucidar a sua função. Os métodos experiemntais para a localização de proteína variam a partir da imunolocalização para a rotulação de proteínas usando-se proteína fluorescente verde (GFP). Tais métodos são precisos embora trabalho intensivo comparado com os métodos computacionais. Recentemente, muito progresso foi feito na predição computacional de localização de proteína a partir de dados de seqüências. Entre os algoritmos bem conhecidos por uma pessoa habilitada na técnica estão disponíveis nas ferramentas ExPASy Proteomics hospedados pelo Swiss Institute for Bioinformatics, por exemplo, PSort, TargetP, ChloroP, LocTree, Predotar, LipoP, MITOPROT, PATS, PTS1, SignalP e outros. A identificação da localização subcelular do polipeptídeo da invenção é mostrado no Exemplo 34. Em particular, a SEQ ID N°: 180 da presente invenção é designada ao compartimento nuclear de células eucarióticas.
Além disso, os polipeptídeos PHDf-HD úteis nos métodos da presente invenção (pelo menos em sua forma natural) tipicamente, mas não necessariamente, têm atividade reguladora transcripcional e capacidade para interagir com outras proteínas. Portanto, os polipeptídeos PHDf-HD com atividade reduzida, sem atividade reguladora transcripcional, com capacidade de interação proteína-proteína reduzida ou sem nenhuma capacidade de interação proteína-proteína, pode ser igualmente útil nos métodos da presente invenção. A atividade de ligação de DNA e as interações proteína-proteína podem ser facilmente determinadas in vitro ou in vivo usando-se técncias bem conhecidas na técnica (por exemplo in Current Protocols in Molecular Biology, Volumes 1 e 2, Ausubel et al. (1994), Current Protocols). Para determinar a atividade de ligação de DNA de polipeptídeos PHDf-HD, diversos ensaios são disponíveis, tais como ensaios de mudança de gel de ligação de DNA (ou ensaios de retardo de gel; Korfhage et al. (1994) Plant C 6: 695-708), ensaios de ligação de DNA in vitro (Schindler et al. (1993) Plant J 4(1): 137-150) ou ativação transcripcional de polipeptídeos PHDf-HD em levedura, células animais ou vegetais (Halbach et al. (2000) Nucleic Acid Res 28(18): 3542-3550). As seqüências de ligação de DNA específicas podem ser determinadas usando-se a técnica de seleção de oligonucleotídeo aleatória (Viola & Gonzalez (May 26, 2007) Biochemistry).
A presente invenção é ilustrada transformando-se as plantas com a seqüência de ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 179, que codifica a seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 180. Entretanto, o desempenho da invenção não está restrito a estas seqüências; os métodos da invenção podem ser vantajosamente realizados usando-se qualquer ácido nucleico sequence que codificam PHDf-HD ou polipeptídeo PHDf-HD como definido neste.
Os exemplos de seqüências de ácido nucleico que codificam polipeptídeos PHDf-HD são dados na Tabela Dl do Exemplo 29 neste. Tais seqüências de ácido nucleico são úteis na realização dos métodos da invenção. As seqüências de polipeptídeo dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 são seqüências de exemplos de ortólogos e parálogos do polipeptídeo PHDf-HD representado pela SEQ ID N°: 180, os termos "ortólogos" e "parálogos" sendo como definido neste. Ortólogos e parálogos adicionais podem ser facilmente definidos pela realização de uma denominada pesquisa blast recíproca. Tipicamente, isto envolve um primeiro BLAST que envovle submeter uma seqüência em dúvida ao BLAST (por exemplo usando-se qualquer uma das seqüências listadas na Tabela Dl do Exemplo 29) contra qualquer banco de dados de seqüência, tal como os bancos de dados NCBI publicamente disponíveis. BLASTN ou TBLASTX (usando-se os valores default padrão) são, no geral, usados quando começa-se a partir de uma seqüência de nucleotídeo e BLASTP ou TBLASTN (usando-se os valores default padrão) quando começa-se a partir de uma seqüência de proteína.
Os resultados de BLAST podem ser opcionalmente filtrados. As seqüências de comprimento total de cada um dos resultados filtrados ou resultados não filtrados são então submetidos ao BLAST novamente (segundo BLAST) contra seqüências do organismo a partir do qual a seqüência em questão é derivada (quando a seqüência em questão é SEQ ID N°: 179 ou SEQ ID N°: 180, o segundo BLAST portanto, deve ser contra as seqüências de arroz). Os resultados do primeiro e segundo BLASTs são então comparados. Um parálogo é identificado se um acerto de classificação alta do primeiro blast for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada, submetendo-se ao BLAST novamente então resulta idealmente na seqüência em questão entre os acertos mais altos; um ortólogo é identificado se um acerto de classificação alta no primeiro BLAST não for da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada e preferivelmente resulta no BLAST novamente na seqüência em questão estando entre os acertos mais altos.
Os acertos de classificação alta são aqueles tendo um valor E baixo. Quanto mais baixo o valor E, mais significante o registro (ou, em outras palavras, menor a chance que o acerto seja encontrado por chance). A computação do valor E é bem conhecido na técnica. Além dos valores E, comparações são registradas pela identidade de porcentagem. A identidade de porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácidos nucleicos comparadas (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. No caso de famílias grandes, ClustalW pode ser usado, seguido por uma árvore de união próxima, para ajudar a visualizar o agrupamento de genes relacionados e para identificar ortólogos e parálogos. Qualquer agrupamento de seqüência dentro do grupo que compreende SEQ ID N°: 180 (circulado na Figura 29) deve ser considerado estar dentro da definição já mencionada de um polipeptídeo PHDf-HD e deve ser considerado adequado para o uso nos métodos da invenção.
As variantes de ácido nucleico também podem ser úteis na prática dos métodos da invenção. Os exemplos de tais variantes incluem seqüências de ácido nucleico que codificam homólogos e derivados de qualquer um de uma seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29, os termos "homólogo" e "derivado" sendo como definido neste. Também úteis nos métodos da invenção are seqüências de ácido nucleico que codificam homólogos e derivados de ortólogos ou parálogos de qualquer um de a seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29. Os homólogos e derivados úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica e funcional como a proteína não modificada da qual estes são derivados. As variantes de ácido nucleico adicionais úteis na prática dos métodos da invenção incluem porções de seqüências de ácido nucleico que codificam polipeptídeos PHDf-HD, seqüências de ácido nucleico que hibridizam-se a seqüências de ácido nucleico que codificam polipeptídeos PHDf-HD, variantes de união de seqüências de ácido nucleico que codificam polipeptídeos PHDf-HD, variantes alélicas de seqüências de ácido nucleico que codificam polipeptídeos PHDf-HD e variantes de seqüências de ácido nucleico que codificam polipeptídeos PHDf-HD obtidos pelo embaralhamento de gene. Os termos seqüência de hibridização, variante de união, variante alélica e embaralhamento de gene são como descritos neste.
As seqüências de ácido nucleico que codificam polipeptídeos PHDf-HD não necessitam ser seqüências de comprimento total de ácido nucleico, visto que o desempenho dos métodos da invenção não contam com o uso de seqüências de comprimento total de ácido nucleico. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar traços relacionados com o rendimento, preferivelmente que intensificam traços de sementes relacionados com o rendimento, em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma porção de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou uma porção de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer de uma seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29.
Uma porção de uma seqüência de ácido nucleico pode ser preparada, por exemplo, realizando-se uma ou mais anulações em uma seqüência de ácido nucleico. As porções podem ser usadas na forma isolada ou estas podem ser fundidas a outras seqüências codificadoras (ou não codificadoras) a fim de, por exemplo, produzir uma proteína que combine diversas atividades. Quando fundido a outras seqüências codificadoras, o polipeptídeo resultante produzido na tradução pode ser maior do que aquele predito para a porção de proteína.
As porções úteis nos métodos da invenção, codificam um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste têm substancialmente a mesma atividade biológica como seqüências de polipeptídeo dadas na Tabela Dl do Exemplo 29. Preferivelmente, a porção é uma porção de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou é uma porção de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer um de a seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29. Preferivelmente a porção está, na ordem crescente de preferência pelo menos 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800, 2000, 2200, 2400, 2600, 2800 nucleotídeos de comprimento consecutivo, os nucleotídeos consecutivos sendo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer um de uma seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29. Mais preferivelmente a porção é uma porção da a seqüência de ácido nucleico de SEQ ID N°: 179. Preferivelmente, a porção codifica uma seqüência de polipeptídeo que quando usada na construção de uma árvore filogenética HD, tal como o descrito na Figura 13, os agrupamentos com o grupo de polipeptídeos PHDf-HD que compreende a seqüência de polipeptídeo representado pela SEQ ID N0: 180 em vez de qualquer outro grupo HD.
Uma outra variante de seqüência de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma seqüência de ácido nucleico capaz de hidridizar, sob as condições de estringência reduzida, preferivelmente sob condições estringentes, com uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste ou com uma porção como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, preferivelmente itensificando os traços de sementes relacionados com o rendimento, que compreende introduzir e expressar em uma seqüência de ácido nucleico vegetal capaz de hibridizar a qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou que compreende introduzir e expressar em uma seqüência de ácido nucleico vegetal capaz de hibridizar a uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29.
As seqüências de hibridização úteis nos métodos da invenção codificam um polipeptídeo PHDf-HD como definido nestee têm substancialmente a mesma atividade biológica como uma seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29. Preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hidridizar a qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou a uma porção de qualquer uma destas seqüências, uma porção sendo como definido acima ou em que a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29. Mais preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a uma seqüência de ácido nucleico como representado pela SEQ ID N°: 179 ou a uma porção deste.
Preferivelmente, a seqüência de hibridização codifica uma seqüência de polipeptídeo que quando usada na construção de uma árvore filogenética HD, tal como o descrito na Figura 13, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos PHDf-HD que compreendem a seqüência de polipeptídeo representado pela SEQ ID N°: 180 em vez de qualquer outro grupo HD.
Uma outra variante de seqüência de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma variante de união que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste acima, a variante de união sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, preferivelmente itensificando os traços de sementes relacionados com o rendimento, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de união de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou a variante de união de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma da seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29.
As variantes de união preferidas são as variantes de união de uma seqüência de ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 179 ou a variante de união de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 180. Preferivelmente, a seqüência de polipeptídeo codificada pela variante de união, quando usado na construção de uma árvore filogenética HD, tal como o descrito na Figura 13, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos PHDf-HD que compreende a seqüência de polipeptídeo representado pela SEQ ID N°: 180 em vez de qualquer outro grupo HD.
Uma outra variante de seqüência de ácido nucleico útil na realização dos métodos da invenção é uma variante alélica de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste acima, uma variante alélica sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, preferivelmente itensificando os traços de sementes relacionados com o rendimento, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante alélica de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante alélica de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma da seqüência de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29.
As variantes alélicas úteis nos métodos da presente invenção tem substancialmente a mesma atividade biológica como o polipeptídeo da SEQ ID N°: 180 e qualquer uma da seqüência de polipeptídeos descritos na Tabela Dl do Exemplo 29. As variantes alélicas existem na natureza, e abrange dentro dos métodos da presente invenção é o uso destes alelos naturais. Preferivelmente, a variante alélica é uma variante alélica da SEQ ID N°: 179 ou uma variante alélica de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 180. Preferivelmente, a seqüência de polipeptídeo codificada pela variante alélica, quando usado na construção de uma árvore filogenética HD, tal como o descrito na Figura 13, agrupa-se com os polipeptídeos PHDf-HD que compreende a seqüência de polipeptídeo representado pela SEQ ID N°: 180 em vez de qualquer outro grupo HD.
A mistura do gene ou evolução direcionada também pode ser usada para gerar variantes das seqüências de ácido nucleico codificadas por polipeptídeos PHDf-HD como definido acima; o termo "a mistura do gene" sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, preferivelmente itensificando os traços de sementes relacionados com o rendimento, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela Dl do Exemplo 29 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de polipeptídeos dadas na Tabela Dl do Exemplo 29, que a seqüência da variante do ácido nucleico é obtida pelo embaralhamento de gene. Vantajosamente, a presente invenção fornece até agora ácido nucleico PHDf-HD não conhecido e seqüências de polipeptídeos.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, é fornecido uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 242;
(ii) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar à SEQ ID N°: 242;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 243;
(iv) um ácido nucleico capaz de hibridizar sob condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dadas em (i), (ii) ou (iii) acima.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, portanto, é fornecido um polipeptídeo isolado que compreende:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 242;
(ii) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar à SEQID N°: 242;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 243;
(iv) um ácido nucleico capaz de hibridizar sob condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dadas em (i), (ii) ou (iii) acima.
Preferivelmente, a seqüência de polipeptídeo codificada pela seqüência variante do ácido nucleico obtido pelo embaralhamento de gene, quando usado na construção de uma árvore filogenética HD, tal como o descrito na Figura 13, agrupamentos com o grupo de polipeptídeos PHDf-HD que compreende a seqüência de polipeptídeo representado pela SEQ ID N°: 180 antes do que com qualquer outro grupo HD.
Além disso, as variantes da seqüência de ácido nucleico
também podem ser obtidas pela mutagênese direcionada ao local. Diversos métodos são disponíveis para atingir a mutagênese direcionada ao local, o mais comum sendo PCR com base em métodos (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds.). As seqüências de ácido nucleico codificadas por polipeptídeos
PHDf-HD podem ser derivadas a partir de qualquer fonte artificial ou natural. A seqüência de ácido nucleico pode ser modificada a partir da forma natural na composição e/ou ambiente genômico através da consideração da manipulação humana. Preferivelmente a seqüência de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo PHDf-HD é a partir de uma planta, ainda preferivelmente de uma planta monocotiledônea, mais preferivelmente da família Poaceae, mais preferivelmente a seqüência de ácido nucleico é de Oryza sativa.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento. Em particular, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo rendimento aumentado, especialmente rendimento aumentado de semente com relação às plantas de controle. Os termos "produção" e "rendimento de semente" são descritos em mais detalhes na seção de "definições" neste. A referência neste aos traços intensificados relacionados com
o rendimento é determinada entender um aumento na biomassa (peso) por uma ou mais partes de uma planta, que pode incluir partes acima do solo (coletáveis) e/ou partes abaixo do solo (coletáveis). Em particular, tais partes colhíveis são sementes, e o desempenho dos métodos da invenção resultam em plantas tendo rendimento aumentado de semente relativo ao rendimento de semente de plantas de controle.
Tomando o milho como um exemplo, um aumento da produção pode ser manifestada como um ou mais do seguinte: aumento no número de plantas estabelecidas por hectare ou acre, um aumento no número de espigas por planta, um aumento no número de séries, número de grãos por série, peso dos grãos, peso dos grãos milhar, comprimento/diâmetro da espiga, aumento da taxa de enchimento da semente (que é o número de sementes enchidas dividida pelo número total de sementes e multiplicadas por 100), entre outros. Tomando o arroz como um exemplo, um aumento da produção pode manifestar por si mesmo como um aumento em um ou mais do seguinte: número de plantas por hectare ou acre, número de panículas por planta, número de espigas por panículas, número de flores (florzinhas) por panícula (que é expressado como uma razão do número de sementes enchidas no número de panícula primárias), aumento da taxa de enchimento da semente (que é o número de sementes enchidas dividida pelo número total de sementes e multiplicadas por 100), aumento no peso dos grãos milhar, entre outros.
A presente invenção fornece um método para aumentar a produção, especialmente rendimento de semente de plantas, com relação às plantas de controle, que o método compreende modular, preferivelmente aumentar, expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste.
Visto que as plantas transgênicas de acordo com a presente invenção têm traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, é igualmente que estas plantas exibam uma taxa de desenvolvimento aumentado (durante pelo menos parte de seu ciclo de vida), relativo à taxa de desenvolvimento de plantas de controle em um estágio correspondente no seu ciclo de vida. A taxa de desenvolvimento aumentada pode ser específica por uma ou mais partes de uma planta (incluindo sementes) ou pode estar em toda parte substancialmente de uma planta total. As plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada pode ter um ciclo de vida mais curto. O ciclo de vida de uma planta pode ser levado significar um período necessário para o desenvolvimento a partir da semente madura seca até o estágio onde a planta tem produzido as sementes maduras secas, similar ao material de partida. Este ciclo de vida pode ser influenciado pelos fatores tal como vigor precoce, taxa de desenvolvimento, índice de viço, período e velocidade de florescência do amadurecimento da semente. O aumento na taxa de desenvolvimento pode acontecer em um ou mais estágios no ciclo de vida de uma planta ou durante substancialmente ao ciclo de vida total da planta. A taxa aumentada de desenvolvimento durante os estágios precoces no ciclo de vida de uma planta pode refletir o vigor itensificado (precoce). O aumento na taxa de desenvolvimento pode alter o ciclo de coleta de uma planta permitindo as plantas serem semeadas depois e/ou mais cedo coletadas do que de outra maneira seria possível (um efeito similar pode ser obtido com o período de florescência precoce). Se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, este pode deixar para a semeadura adicional de sementes das mesmas espécies de plantas (por exemplo semeadura e coletagem de plantas de arroz seguido pela semeadura e coletagem das plantas de arroz adicionais todas dentro de um período de desenvolvimento convencional). Similarmente, se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, este pode deixar para a semeadura adicional de sementes de espécies de plantas diferentes (por exemplo a semeadura e coletagem de plantas de milho seguido pela, por exemplo, a semeadura e coletagem opcional de soja, batata ou qualquer outra planta adequada). Os períodos de coletagem adicional do mesmo rizoma no caso de algumas plantas de cultivo também pode ser possível. Alterando o ciclo de coleta de uma planta pode levar a um aumento na produção da biomassa anual por acre (devido a um aumento no número de vezes (dito em um ano) que qualquer planta particular pode ser desenvolvida e coletada). Um aumento na taxa de desenvolvimento também pode permitir o cultivo de plantas transgênicas em uma ampla área geográfica do que suas contrapartes de tipo selvagem, visto as limitações territoriais para o desenvolvimento de uma lavoura são freqüentemente determinados pelas condições ambientais adversas no período do plantio (temporada precoce) ou no período de coletagem (temporada tardia). Tais condições adversas podem ser evitadas se o ciclo de coleta seja mais curto. A taxa de desenvolvimento pode ser determinação pela derivação de vários parâmetros a partir de curvas de desenvolvimento, tais parâmetros podem ser: T-Mid (o período de retirada para as plantas atingirem 50 % do seu tamanho máximo) e T-90 (período de retirada para as plantas atingirem 90 % do seu tamanho máximo), entre outros. A taxa de desenvolvimento como definido neste não é levado significar à florescência precoce.
De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentado com relação às plantas de controle. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a taxa de desenvolvimento das plantas, que o método compreende modular, preferivelmente aumentar, expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste.
Os traços itensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, ocorre se a planta está sob condições sem estresse ou se a planta está exposta a várias tensões comparadas ao desenvolvimento de plantas de controle sob condições comparáveis. As plantas tipicamente respondem à exposição à tensão pelo crescimento mais lentamente. Em condições de diversas tensões, a planta ainda pode interromper o desenvolvimento completamente. A tensão branda de outra maneira é definida neste como sendo qualquer tensão que qual a planta é exposta que não resulta no interrompimento da planta a desenvolver-se completamente sem a capacidade de recuperar o desenvolvimento. A tensão branda no sentido da invenção leva a uma redução no desenvolvimento das plantas submetidas à tensão de menos do que 40 %, 35 % ou 30 %, preferivelmente menos do que 25 %, 20 % ou 15 %, mais preferivelmente menos do que 14 %, 13 %, 12 %, 11 % ou 10 % ou menos em comparação à planta de controle sob condições sem estresse. Devido as vantagens nas práticas da agricultura (irrigação, fertilização, tratamentos com pesticidas) diversas tensões não são freqüentemente encontradas em plantas de cultivos cultivadas. Como uma conseqüência, o desenvolvimento compromissado induzido pela tensão branda é freqüentemente uma característica indesejável para a agricultura. As tensões brandas são as tensões abióticas e/ou bióticas (ambientais) que a planta é exposta. As tensões abióticas podem ser devido à aridez ou excesso de água, tensão anaeróbica, tensão salina, toxicidade química, tensão oxidativa e temperaturas de frio, calor e congelamento. A tensão abiótica pode ser uma tensão osmótica causa pela tensão à água (particularmente devido à aridez), tensão salina, tensão oxidativa ou uma tensão iônica. As tensões bióticas são tipicamente aquelas tensões causadas pelos patogênios, tal como bactérias, vírus, fungos, nematóides e insetos. O termo condições de "não tensão" como usado neste são aquelas condições ambientais que permitem o ótimo desenvolvimento das plantas. As pessoas habilitadas na técnica são atentas das condições do solo normal e condições climáticas para uma localização dada.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas, que o método compreende modular, preferivelmente aumentar, expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD. As plantas com ótimas condições de desenvolvimento, cultivadas como condições sem estresse, tipicamente produzem na ordem crescente de preferência pelo menos 90 %, 87 %, 85 %, 83 %, 80 %, 77 % ou 75 % da produção média de tal planta em um dado ambiente. A produção média pode ser calculada na base da coleta e/ou temporada em uma localização dada. As pessoas habilitadas na técnica estão atentas das produções de rendimento médio de uma lavoura.
O desempenho dos métodos de acordo com a presente invenção resultam em plantas desenvolvidas sob condições de estresse abiótico tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições de tensão comparáveis. Como relatado em Wang et al. (Planta (2003) 218: 1- 14), tensão abiótica leva a uma sére de mudanças moleculares, bioquímicas, fisiológicas e morfológicas que afetam adversamente o desenvolvimento da planta e produtividade. Aridez, salinidade, temperaturas extremas e tensão oxidativa são conhecidas serem interconectadas e podem induzir o desenvolvimento e dano celular através de mecanismos similares. Rabbani et al. (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767) descreve particularmente um alto grau de "cruzamento" entre a tensão de aridez e alta tensão por salinidade. Por exemplo, a aridez e/ou salinização são manifestados principalmente como tensão osmótica, resultando no rompimento da homeostase e distribuição de íon na célula. A tensão oxidativa, que freqüentemente acompanha temperatura alta ou baixa, salinidade ou tensão de aridez, pode causar a desnaturação de
proteínas estruturais e funcionais. Como uma conseqüência, estas diversas
tensões ambientais freqüentemente ativam os caminhos de sinalização celular
similares e respostas celulares, tal como a produção de proteínas de tensão,
super regulação de anti-oxidantes, acúmulo de solutos compatíveis e
suspensão do desenvolvimento. Visto que diversas tensões ambientais ativam
os caminhos similares, a exemplificação da presente invenção com a tensão
de aridez não deve ser visto como uma limitação da tensão de aridez, mas
maé como uma avaliação para indicar o envolvimento dos polipeptídeos
PHDf-HD como definido acima, na itensificação de traços relacionados com
o rendimento, preferivelmente itensificando os traços de sementes
relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle
desenvolvidas em condições de tensão comparáveis, nas tensões abióticas no geral.
O termo "tensão abiótica" como definido neste é determinada entender qualquer um ou mais de: tensão à água (devido à aridez ou excesso de água), tensão anaeróbica, tensão salina, tensão à temperatura (devido as temperaturas de calor, frio ou congelamento), tensão de toxicidade química e tensão oxidativa. De acordo com um aspecto da invenção, a tensão abiótica é uma tensão osmótica, selecionado de tensão à água, tensão salina, tensão oxidativa e tensão iônica. Preferivelmente, a tensão à água é tensão de aridez. O termo tensão salina não é restrito ao sal comum (NaCl), mas pode ser qualquer tensão causada por um ou mais de: NaCl5 KCl, LiCl, MgC12, MgC12, entre outros.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, sob condições de estresse abiótico com relação às plantas de controle desenvolvidas em condições de tensão comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento, preferivelmente itensificando os traços de sementes relacionados com o rendimento, em plantas desenvolvidas sob condições de estresse abiótico, que o método compreende modular, preferivelmente aumentar, expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD. De acordo com um aspecto da invenção, a tensão abiótica é uma tensão osmótica, selecionado de um ou mais do seguinte: tensão à água, tensão salina, tensão oxidativa e tensão iônica.
Um outro exemplo de tensão ambiental abiótica é a disponibilidade reduzida de um ou mais nutrientes que necessitam ser assimilados pelas plantas para o crescimento e desenvolvimento. Por causa da forte influência da eficiência da utilização da nutrição na produção da planta e qualidade do produto, uma imensa quantidade de fertilizador é vertido em campos para otimizar o desenvolvimento o qualidade vegetal. A produtividade de plantas de origem comum é limitada pelos três nutrientes primários, fósforo, potássio e nitrogênio, que é usualmente o elemento de limitação da taxa no desenvolvimento da planta deste três. Portanto o maior elemento nutricional requerido para o desenvolvimento é nitrogênio (N). Este é um constituinte de composto importantes numerosos observados em células vivas, incluindo aminoácidos, proteínas (enzimas), ácidos nucleicos, e clorofila. 1,5 % a 2 % da origem da planta seca é nitrogênio e aproximadamente 16 % da proteína total da planta. Deste modo, a disponibilidade do nitrogênio é um maior fator limitante para o desenvolvimento e produção da planta de cultivo (Frink et al. (1999) Proc Natl Acad Sci USA 96(4): 1175-1180), e tem bem como um maior impacto no acúmulo da proteína e composição de aminoácido. Portanto, o maior interesse são as plantas de cultivo com traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, quando desenvolvidos sob condições de limitação de nitrogênio.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições de deficiência do nutriente, particularmente sob condições de deficiência de nitrogênio, traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento, preferivelmente itensificando os traços de sementes relacionados com o rendimento, em plantas desenvolvidas sob condições de deficiência do nutriente, que o método compreende modular, preferivelmente aumentar, expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD. Deficiência do nutriente pode resultar a partir da perda ou excesso de nutrientes tal como nitrogênio, fosfatos e outros compostos contendo fósforo, potássio, cálcio, cadmío, magnésio, manganês, ferro e boro, entre outros.
A presente invenção abrange plantas ou partes destas (incluindo sementes) ou células destas obtidas pelos métodos de acordo com a presente invenção. As plantas ou partes destas ou células destas compreende um transgene de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido acima.
A invenção também fornece as construções genéticas e vetores para facilitar a introdução e/ou expressão modulada, preferivelmente aumentada em plantas das seqüências de ácido nucleico codificadas por polipeptídeos PHDf-HD. A construção de genes pode ser inserida nos vetores, que pode ser comercialmente disponível, adequado para a transformação em plantas e para a expressão do gene de interesse nas células transformadas. A invenção também fornece o uso de uma construção de gene como definido neste nos métodos da invenção. Mais especificamente, a presente invenção fornece uma construção que compreende:
(a) uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido acima;
(b) uma ou mais seqüências de controle capazes de modular, preferivelmente aumentar, a expressão da seqüência de ácido nucleico de (a) e opcionalmente
(c) uma seqüência de terminação de transcrição.
Preferivelmente, a seqüência de ácido nucleico que codifica
um polipeptídeo PHDf-HD é como definido acima. O termo "seqüência de controle" e "seqüência de terminação" são como definidos neste.
Preferivelmente, uma das seqüências de controle de uma construção é um promotor constitutivo isolado a partir do genoma da planta. Um exemplo de um promotor constitutivo da planta é um promotor GOS2, preferivelmente um promotor GOS2 de arroz, mais preferivelmente um promotor GOS2 como representado pela SEQ ID N°: 235.
As plantas são transformadas com um vetor que compreende qualquer uma das seqüências de ácido nucleico descritas acima. O técnico habilitado é bem atento aos elementos genéticos que devem estar presentes no vetor a fim de transformar sucessivamente, selecionar e propagar as células hospedeiras contendo a seqüência de interesse. A seqüência de interesse é operacionalmente ligada a uma ou mais seqüências de controle (pelo menos a um promotor).
Vantajosamente, qualquer tipo de promotor, se natural ou sintético, pode ser usado para modular, preferivelmente aumentar a expressão da seqüência de ácido nucleico. Um promotor constitutivo é particularmente útil nos métodos, preferivelmente um promotor constitutivo isolado a partir do genoma da planta. O promotor constitutivo de planta conduz a expressão de uma seqüência codificadora em um nível que é em todos os exemplos abaixo que obtido sob o controle de um promotor 35S CaMV.
Outros promotores específicos pelo órgão, por exemplo pela expressão preferida em folhas, hastes, tubérculos, meristemas, sementes (embrião e/ou endosperma), são úteis na realização dos métodos da invenção. Ver a seção "Definições" neste pelas definições de vários tipos de promotores.
Deve ser claro que a aplicabilidade da presente invenção não é restrito a uma seqüência de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo PHDf- HD representado pela SEQ ID N°: 179, ou é a aplicabilidade da invenção restrita à expressão de uma seqüência de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo PHDf-HD quando conduzido por um promotor constitutivo.
Opcionalmente, uma ou mais seqüências terminadoras podem ser usadas na construção introduzida em uma planta. Os elementos reguladores adicionais podem incluir os itensificadores de transcrição bem como tradução. Aqueles habilitados na técnica serão atentos das seqüências itensificadoras e terminadoras que podem ser adequado para o uso na realização da invenção. Uma seqüência de íntron também pode ser adicionado à região de não tradução de 5' (UTR) ou na seqüência codificadora para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula no citosol, como descrito na seção das definições. Outra seqüência de controles (perto do promotor, itensificador, silenciador, seqüências de íntron, regiões 3'UTR e/ou 5'UTR) pode ser elementos de estabilização de RNA e/ou proteína. Tais seqüências seria conhecida ou já pode ser obtida por uma pessoa habilitada na técnica.
As construções genéticas da invenção ainda podem incluir uma origem da seqüência de replicação que é requerida pela manutenção e/ou reprodução em um tipo celular específico. Um exemplo é quando uma construção genética é requerida ser mantida em uma células bacteriana como um elemento genético epissomal (por exemplo, moléculas de plasmídio e cosmídio). As origens preferidas da reprodução incluem, mas não são limitadas a, o fl-ori e colEl.
Para a detecção da transferência sucessível das seqüências de ácido nucleico como usado nos métodos da invenção e/ou seleção de plantas transgênicas que compreende estas seqüências de ácido nucleico, é vantajoso para o uso dos genes marcadores (ou genes repórter). Portanto, a construção genética pode opcionalmente compreender um gene de marcador selecionável. Os marcadores selecionáveis são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste.
E conhecido que na integração transiente ou estável das seqüências de ácido nucleico em células de planta, apenas uma maioria das células absorvem o DNA estranho e, se desejado, integram neste genoma, dependendo do vetor de expressão usado na técnica de trasnfecção usada. Para identificar e selecionar estes integrantes, um gene codificador para um marcador selecionável (tal como um descrito acima) é usualmente introduzido nas células hospedeiras junto com o gene de interesse. Estes marcadores podem ser por exemplo usados em mutantes em que estes genes não são funcionais por, por exemplo, anulação pelos métodos convencionais. Além disso, as moléculas da seqüência de ácido nucleico que codifica um marcador selecionável pode ser introduzida em uma célula hospedeira no mesmo vetor que compreende a seqüência codificadora dos polipeptídeos da invenção ou usados nos métodos da invenção ou senão em um vetor separado. As células que foram estavelmente transfectadas com a seqüência do ácido nucleico introduzida pode ser identificada por exemplo pela seleção (por exemplo, células que tem integrado o marcador selecionável que sobrevive considerando a outras células mortas). Os genes marcadores podem ser removidos ou taxados a partir da célula transgênica uma vez que estes não são necessariamente mais longos. As técnicas para a remoção do gene marcador são conhecidas na técnica, técnicas úteis são descritas acima na seção definições.
A invenção também fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle, que compreende introdução e a expressão em uma planta de qualquer seqüência do ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido neste acima.
Mais especificamente, a presente invenção fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, com relação às plantas de controle, que o método compreende:
(i) introduzir e expressar em uma planta, parte de planta ou células de planta uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD, sob o controle de promotor constitutivo de planta; e
(ii) cultivar a célula de planta sob condições que promovam o crescimento e desenvolvimento de planta.
A seqüência de ácido nucleico de (i) pode ser qualquer uma das seqüências de ácido nucleico capaz de codificar um polipeptídeo PHDf- HD como definido neste.
A seqüência de ácido nucleico pode ser introduzido diretamente em uma célula de planta ou na própria planta (incluindo a introdução em um tecido, órgão ou qualquer outra parte de uma planta). De acordo com uma característica preferida da presente invenção, a seqüência de ácido nucleico é preferivelmente introduzido em uma planta pela transformação. O termo "transformação" é descrito em mais detalhes na seção "definições" neste.
As células de planta geneticamente modificadas podem ser regenerados por intermédio de todos os métodos com que o trabalhador habilitado seja familiar. Os métodos adequados podem ser observados nas publicações anteriomente mencionadas por S.D. Kung and R. Wu, Potrykus or Hofgen and Willmitzer.
No geral após a transformação, as células de planta ou agrupamentos celulares são selecionados pela presença de um ou mais marcadores que são codificados pelos genes expressíveis das plantas co- transferidos com o gene de interesse, seguindo que o material transformado é regenerado em um total da planta. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, como uma regra, submetido às condições seletivas de modo que as plantas transformadas podem ser distinguidas das plantas transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas na maneira descrita acima pode ser plantada e, após um período de crescimento inicial, submetido a uma seleção adequada pela pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no crescimento das sementes, se apropriado após a esterilização, em placas ágar usando um agente de seleção adequado de modo que apenas as sementes transformadas podem desenvolver-se nas plantas.
Alternativamente, as plantas transformadas são avaliadas pela presença de um marcador selecionável tal como um descrito acima.
Seguindo a transferência e regeneração de DNA, as plantas putativamente transformadas também podem ser avaliadas, por exemplo usando a análise Southern, pela presença do gene de interesse, número de cópia e/ou organização genômica. Alternativamente ou adicionalmente, os níveis de expressão do DNA introduzido novamente pode ser monitorado usando a análise Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecidas às pessoas tendo habilidades comuns na técnica.
As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma variedade de meios, tal como pela propagação clonal ou técnicas de geração clássica. Por exemplo, uma primeira geração de planta transformada (ou Tl) pode ser por si mesmo e transformantes da segunda geração de homozigotos (ou T2) selecionados, e as plantas T2 ainda podem ser então propagado através de técnicas de geração clássicas. Os organismos transformados gerados podem tornar-se uma variedade de formas. Por exemplo, estes podem ser quimeras de células transformadas e células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas por conter o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um rizoma transformado enxertado em uma muda não transformada).
A presente invenção claramente estende-se a qualquer célula da planta ou planta produzida por qualquer um dos métodos descritos neste, e por todas partes da planta e propagules destes. A presente invenção estende-se ainda por abranger a progênie de uma célula transfectada ou transformada primária, tecido, órgão ou planta total que foi produzida por qualquer um dos métodos anteriomente mencionados, apenas o requerimento sendo que a progênie exibe as mesmas características fenotípicas e/ou genotípicas como aquelas produzidas pelo padrão nos métodos de acordo com a invenção.
A invenção também inclui as células hospedeiras contendo uma seqüência do ácido nucleico isolada que codifica um polipeptídeo PHDf- HD como definido neste acima, operavelmente ligado a um promotor constitutivo de planta. As células hospedeiras preferidas de acordo com a invenção são células de planta. As plantas hospedeiras pelas seqüências de ácido nucleico ou o vetor usado no método de acordo com a invenção, o cassete de expressão ou construção ou vetor são, à princípio, vantajosamente todas as plantas, que são capazes de sintetizar os polipeptídeos usados no método inventivo.
Os métodos da invenção são vantajosamente aplicáveis por qualquer planta. As plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas, que pertencem à super família Viridiplantae, em particular, plantas monocotiledônias e dicotiledônias incluindo forragem ou legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimento, árvores e arbustos. De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta de cultivo. Exemplos de plantas de cultivo incluem soja, girassol, canola, alfafa, colza, algodão, tomate, batata e tabaco. Ainda preferivelmente, a planta é uma planta monocotiledônia. Exemplos de plantas monocotiledônias incluem cana de açúcar. Mais preferivelmente a planta é um cereal. Exemplos de cereais incluem arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias. A invenção também estende-se as partes colhíveis de uma
planta que compreendem uma seqüência do ácido nucleico isolada que codifica um PHDf-HD (como definido neste acima) operacionalmente ligado a um promotor constitutivo de planta, tal como, mas não limitado a sementes, folhas, frutos, flores, hastes, rizomas, tubérculos e bulbos. A invenção além disso relata os produtos derivados, preferivelmente diretamente derivados, a partir da parte coletável de uma tal planta, tal como grânulos e pós secos, óleo, gordura e ácidos graxos, amido ou proteínas.
De acordo com uma característica preferida da invenção, a expressão modulada é a expressão aumentada. Os métodos para aumentar a expressão das seqüências de ácido nucleico ou genes ou produtos dos genes, são bem documentados na técnica e exemplos são fornecidos na seção de definições.
Como mencionado acima, um método preferido para modular, preferivelmente aumentar, a expressão de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD é pela introdução e expressão em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD; entretanto os efeitos da realização do método, isto é itensificando os traços relacionados com o rendimento, também podem ser atingido usando outras técnicas bem conhecidas, incluindo mas não limitado a rotulação de ativação de T-DNA, TILLING, recombinação homóloga. Uma descrição destas técnicas são fornecidas na seção de definições.
A presente invenção também abrange o uso das seqüências de ácido nucleico codificadas por polipeptídeos PHDf-HD como descrito neste e uso destes polipeptídeos PHDf-HD na itensificação de qualquer um dos traços mencionados acima relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de sementes relacionados com o rendimento, em plantas.
As seqüências de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo PHDf-HD descrito neste ou os polipeptídeos PHDf-HD por si mesmos, pode observar nos programas de geração em que um marcador de DNA é identificado que pode ser geneticamente ligado a um gene que codifica o polipeptídeo PHDf-HD. Os genes/ seqüências de ácido nucleico ou os polipeptídeos PHDf-HD por si mesmos podem ser usados para definir um marcador molecular. Este marcador de DNA ou proteína então podem ser usados nos programas da geração para selecionar as plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, como definido neste acima nos métodos da invenção.
As variantes alélicas de um gene/sequência do ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD também podem ser observado em programas de geração assistidos pelo marcador. Tais programas de geração algumas vezes requerem a introdução da variação alélica pelo tratamento mutagênico de plantas, usando por exemplo a mutagênese EMS; alternativamente, o programa pode comerçar com uma coleção de variantes alélicas denominadas de origem "natural" causadas não itensionalmente. A identificação das variantes alélicas então acontece, por exemplo, por PCR. Este é seguido por uma etapa para a seleção de variantes alélicas superiores da seqüência em questão e que dá traços intensificados relacionados com o rendimento. A seleção é tipicamente realizada pelo desempenho do desenvolimento do monitoramento de plantas contendo variantes alélicas diferentes da seqüência em questão. O desempenho do desenvolvimento pode ser monitorado em uma estufa ou no campo. As etapas opcionais adicionais incluem cruzamento de plantas em que a variante alélica superior foi indetifícada com uma outra planta. Esta deve ser usada, por exemplo, para fabricar uma combinação de características fenotípicas interessantes.
As seqüências de ácido nucleico codificadas por polipeptídeos PHDf-HD também podem ser usadas como sondas para o mapeamento físico e genético dos genes que estes estão a parte de, e como marcadores para traços ligados aqueles genes. Tal informação pode ser útil na geração de planta a fim de desenvolver as linhas com fenotipos desejados. Tal uso das seqüências de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD requer apenas uma seqüência de ácido nucleico de pelo menos 15 nucleotídeos de comprimento. As seqüências de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD pode ser usado como marcadores de polimorfismo de comprimento do fragmento de restrição (RFLP). Southern blots (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) de DNA genômico da planta digerido por restrição pode ser sondado com as seqüências de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD. Os padrões de grupos resultantes podem então ser submetidos à análise genética usando programas de computador tal como MapMaker (Lander et al. (1987) Genomics 1: 174-181) a fim de construir um mapa genético. Além disso, as seqüências de ácido nucleico podem ser usadas para sondar Southern blots contendo DNA genômico tratado por endonuclease por restrição de uma série de indivíduos que representam o padrão e progênie de um cruzamento genético definido. A segregação do polimorfismo de DNA é notado e usado para calcular a posição de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD no mapa genético previamente obtido usando esta população (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32: 314-331). A produção e uso de sondas derivadas do gene vegetal para o uso no mapeamento genético é descrito em Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Repórter 4: 37-41. Numerosas publicações descrevem o mapeamento genético dos clones de cDNA específicos usando a metodologia resumida acima ou variações destas. Por exemplo, as populações intercruzadas F2, populações cruzadas novamente, populações aleatoriamente auxiliares, linhas isogênicas próximas, e outras séries de indivíduos podem ser usados para o mapeamento. Tais metodologias são bem conhecidas àqueles habilitados na técnica.
As sondas da seqüência de ácido nucleico também podem ser usadas para o mapeamento físico (isto é, disposição das seqüências nos mapas físicos; ver Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346, e referências citadas neste).
Em uma outra forma de realização, as sondas da seqüência de ácido nucleico podem ser usadas na fluorescência direta no mapeamento da hibridização in situ (FISH) (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Embora os métodos correntes do mapeamento FISH favorece o uso de amplos clones (diversos kb à diversas centenas de kb; ver Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), melhoramento na sensibilidade pode permitir o desempenho do mapeamento FISH usando sondas mais curtas.
Uma variedade da amplificação da seqüência do ácido nucleico com base em métodos para o mapeamento físico e genético pode ser realizado usando as seqüências de ácido nucleico. Exemplos incluem amplificação específica por alelos (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95- 96), polimorfismo dos fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et al. (1993) Genomics 16:325-332), ligação específica por alelos (Landegren et al. (1988) Science 241:1077-1080), reações de extensão por nucleotídeos (Sokolov (1990) Nucleic acid sequence Res. 18:3671), mapeamento híbrido de radiação (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) e mapeamento Happy (Dear and Cook (1989) Nucleic acid sequence Res. 17:6795-6807). Para estes métodos, a seqüência de uma seqüência de ácido nucleico é usada para projetar e produzir pares de iniciadores para o uso na reação de amplificação ou nas reações da extensão iniciadora. O projeto de tais iniciadores é bem conhecido àqueles habilitados na técnica. Em métodos que utilizam mapeamento genético com base em PCR, este pode ser necessário para identificar as diferenças da seqüência de DNA entre os padrões do cruzamento do mapeamento na região correspondente à seqüência do ácido nucleico imediata. Este, entretanto, não é necessário no geral para os métodos de mapeamento.
Os métodos de acordo com a presente invenção resultam em plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, preferivelmente traços de semente intensificados relacionados com o rendimento, como descrito anteriormente acima. Estes traços também podem ser combinados com outros traços economicamente vantajosos, tal como traços que itensificam a produção adicional, tolerância a outras tensões bióticas e abióticas, traços que modificam várias características arquiteturais e/ou características bioquímicas e/ou fisiológicas. V. Semelhante à bHLHl 1 (hélice 11-arco-hélice básica)
Surpreendentemente, foi observado agora que modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle. De acordo com uma primeira forma de realização, a presente invenção fornece um método para itensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas com relação às plantas de controle, que compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1.
Um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1.
Qualquer referência à seguir a uma "proteína útil nos métodos da invenção" é determinada entender um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido neste. Qualquer referência à seguir a um "ácido nucleico útil nos métodos da invenção" é determinada entender um ácido nucleico capaz de codificar um tal polipeptídeo semelhante à bHLHl 1. O ácido nucleico a ser introduzido em uma planta (e, portanto, útil na realização dos métodos da invenção) é qualquer ácido nucleico que codifica o tipo de proteína que será descrito agora, à seguir também denominado "ácido nucleico semelhante à bHLHl 1" ou "gene semelhante à bHLHl 1".
Um "polipeptídeo semelhante à bHLHl 1" como definido neste refere-se a qualquer polipeptídeo que compreende um domínio básico seguido por um domínio HLH (HMMPFam PF00010, ProfileScan PS50888, SMART SM00353) neste formando um domínio Hélice-Laço-Hélice básico (bHLH) (Interpro IPR001092). Preferivelmente, o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 compreende pelo menos um, preferivelmente dois, mais preferivelmente três, mais preferivelmente quatro ou mais dos seguintes motivos: Motivo 1 (SEQID N°: 246): (E/D)(D/S/E)(F/M)(L/F)(D/E/Q/L)(Q/H/E)
Motivo 2 (SEQ ID N°: 247):
RA(R/I/Q)RG(Q/H)ATDPHSIAER
Motivo 3 (SEQ ID N°: 248):
(M/I/V /L)(K/R)(A/S/Q/D/N)LQ(E/DA^)LVP
Motivo 4 (SEQ ID N°: 249):
(M/I)(L/I)DEI(I/V /L)(D/E/G) Y(V/L/I)(K/R)FL(Q/R)LQ(V/I)
K
Motivo 5 (SEQ ID N°: 250): (V/I)LSMSR(L/V)G Motivo 6 (SEQ ID N°: 251):
V(A/V/L/I)(m)(L/M)(M/L)(E/D)(E/D/S/K/T)(D/N/S)(MAA/I )(G/T/I)XAMQ(Y/L/F)L
em que X podem ser qualquer aminoácido, mas, preferivelmente um de S, Τ, A, Μ, Κ, N
Motivo 7 (SEQ ID N°: 252): (M/V)(P/S)(W)(S/T/A)LA
Alternativamente, o homólogo de uma proteína semelhante bHLHl 1 tem, na ordem crescente de preferência pelo menos 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 %, 30 %, 31 %, 32 %, 33 %, 34 %, 35 %, 36 %, 37 %, 38 %, 39 %, 40 %, 41 %, 42 %, 43 %, 44 %, 45 %, 46 %, 47 %, 48 %, 49 %, 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61 %, 62 %, 63 %, 64 %, 65 %, 66 %, 67 %, 68 %, 69 %, 70 %, 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % da identidade da seqüência total ao aminoácido representado pela SEQ ID N°: 245, fornecido que a proteína homóloga compreende os motivos conservados como resumido acima. A identidade da seqüência total é determinada usando um algoritmo de alinhamento global, tal como o algoritmo Needleman Wunsch no programa GAP (GCG Wisconsin Package, Accelrys), preferivelmente com parâmetros default. Em comparação com a identidade da seqüência total, a identidade de seqüência no geral será mais alta quando apenas os domínios conservados ou motivos são considerados. A conservação da seqüência é muito maior na região do domínio bHLH (ver Tabela E3 no Exemplo 45 e Figura 21). Portanto o domínio bHLH é um bom critério para a definição do grupo das proteínas semelhantes bHLHl 1. Preferivelmente, o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 compreende as seqüências do motivo 8 (SEQ ID N°: 253):
SIAERLRRERIAERMRALQELVPNTNKTDRAVMLDEILD YVKFLRLQVKVL, ou uma seqüência que tem, na ordem crescente de preferência, pelo menos 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de seqüência à SEQ ID N°: 253. O domínio HLH como determinado por SMART estende-se sobre os resíduos 132 a 181 na SEQ ID N°: 245 e é compreendido no motivo 8.
Preferivelmente, a seqüência de polipeptídeo que quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 22, os grupos dentro do grupo das proteínas semelhantes bHLHll, antes do que com outras proteínas bHLH. Similarmente, as proteínas semelhante à bHLHl 1 de escolha agrupará dentro do subgrupo C quando uma árvore é construída de acordo com Figura 6 em Li et al. (2006), em vez de qualquer outro grupo.
Os termos "domínio", "sinal" e "motivo" são definidos na seção de "definições" neste. Os bancos de dados especializados existem para a identificação de domínios, por exemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244), InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318), Prosite (Bucher and Bairoch (1994), A generalized profile syntax for biomolecular sequences motifs and its funetion in automatic sequence interpretation. (In) ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004)) ou Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002)). Uma série de ferramentas para a análise in silico de seqüências de proteínas está disponível no servidor proteômico ExPASy (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al., ExPASy: the proteomies server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). Os domínios ou motivos também podem ser identificados usando técnicas de rotina, tal como pelo alinhamento da seqüência.
Os métodos para o alinhamento de seqüências para comparação são bem conhecidos na técnica, tais métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA. GAP usa o algoritmo de Needleman and Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) para encontrar o alinhamento global (isto é medindo-se as seqüências completas) de duas seqüências que maximizam o número de equiparações e minimiza o número de fendas. O algoritmo BLAST (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403-10) calcula a identidade de seqüência percentual e realiza uma análise estatística da similaridade entre as duas seqüências. O software para realizar análise BLAST está publicamente disponível através do National Centre for Biotechnology Information (NCBI). Os homólogos podem ser facilmente identificados usando-se, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de seqüência múltipla ClustalW (versão 1.83), com os parâmetros de alinhamento default e um método de registro em porcentagem. As porcentagens globais de similaridade e de identidade também podem ser determinadas usando-se um dos métodos disponíveis no pacote de software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando-se proteína ou seqüências de DNA.). A edição manual menor pode ser realizada para otimizar o alinhamento entre os motivos conservados, como deve estar evidente para uma pessa habilitada na técnica. Além disso, em vez de usar as seqüências de comprimento total para a identificação de homólogos, domínios específicos também podem ser usados. Os valores de identidade de seqüência podem ser determinados sobre o aminoácido inteiro ou seqüência de aminoácido ou em domínios selecionados ou motivos conservados, usando-se os programas mencionados acima usando-se os parâmetros default. Para os alinhamentos locais, o algoritmo Smith-Waterman é particularmente útil (Smith TF, Waterman MS (1981) J. Mol. Biol 147(l);195-7).
Além disso, os polipeptídeos semelhantes à bHLHll (pelo menos em sua forma natural) tipicamente têm atividade de ligação de DNA. As ferramentas e técnicas para medir a atividade de ligação de DNA são bem conhecidas na técnica. Além disso, como mostrado na presente invenção, uma proteína semelhante à bHLHll, tal como a SEQ ID N°: 245, quando super expressadas em arroz, dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, em particular, taxa de enchimento aumentado. Detalhes adicionais são fornecidos na seção de Exemplos.
A presente invenção é ilustrada transformando-se as plantas com a seqüência de ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 244, que codifica a seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 245. Entretanto, o desempenho da invenção não está restrito a estas seqüências; os métodos da invenção podem ser vantajosamente realizados usando-se qualquer ácido nucleico semelhante à bHLHl 1 ou polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido neste.
Exemplos de ácidos nucleicos que codificam o polipeptídeo semelhante à bHLHll são dados na Tabela El do Exemplo 43 neste. Tais ácidos nucleicos são úteis na realização dos métodos da invenção. As seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43 são seqüências de exemplos de ortólogos e parálogos do polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 representado pela SEQ ID N°: 245, os termos "ortólogos" e "parálogos" sendo como definido neste. Ainda os ortólogos e parálogos já podem ser identificados pela realização de uma denominada pesquisa blast recíproca. Tipicamente, isto envolve um primeiro BLAST que envolve o submetro de uma seqüência em dúvida ao BLAST (por exemplo usando-se qualquer uma das seqüências listadas na Tabela El do Exemplo 43) contra qualquer banco de dados de seqüência, tal como os bancos de dados NCBI publicamente disponíveis. BLASTN ou TBLASTX (usando-se os valores default padrão)
são, no geral, usados quando começa-se a partir de uma seqüência de
nucleotídeo, e BLASTP ou TBLASTN (usando-se os valores default padrão)
quando começa-se a partir de uma seqüência de proteína. Os resultados de
BLAST podem ser opcionalmente filtrados. As seqüências de comprimento
total de cada um dos resultados filtrados ou resultados não filtrados são então
submetidos ao BLAST novamente (segundo BLAST) contra as seqüências do
organismo a partir do qual a seqüência em questão é derivada (quando a
seqüência em questão é SEQ ID N°: 244 ou SEQ ID N°: 245, o segundo
BLAST portanto, deve ser contra as seqüências Triticum aestivum). Os
resultados do primeiro e segundo BLAST são então comparados. Um
parálogo é identificado se um acerto de classificação alta do primeiro blast da
mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada,
submetendo-se ao BLAST novamente então resulta idealmente na seqüência
em questão entre os acertos mais altos; um ortólogo é identificado se um
acerto de classificação alta no primeiro BLAST não da mesma espécie como a
partir da qual a seqüência em questão é derivada e preferivelmente resulta no
BLAST novamente na seqüência em questão estando entre os acertos mais altos.
Os acertos de classificação alta são aqueles tendo um valor E baixo. Quanto mais baixo o valor E, mais significante o registro (ou, em outras palavras, menor a chance que o acerto seja encontrado por chance). A computação do valor E é bem conhecido na técnica. Além dos valores E, as comparações são registradas pela identidade de porcentagem. A identidade de porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácidos nucleicos comparados (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. No caso de famílias grandes, ClustalW pode ser usado, seguido por uma árvore de união próxima, para ajudar a visualizar o agrupamento de genes relacionados e para identificar ortólogos e parálogos. As variantes de ácido nucleico também podem ser úteis na prática dos métodos da invenção. Exemplos de tais variantes incluem ácidos nucleicos que codificam os homólogos e derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43, os termos "homólogo" e "derivado" sendo como definido neste. Também são úteis nos métodos da invenção os ácidos nucleicos que codificam os homólogos e derivados de ortólogos ou parálogos de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43. Os homólogos e derivados úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica e funcional como a proteína não modificada da qual estes são derivados.
As variantes de ácido nucleico adicionais úteis na prática dos métodos da invenção incluem as porções de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll, ácidos nucleicos que hibridizam-se ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll, variantes de união de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll, variantes alélicas de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHl 1 e variantes de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll obtidos pelo embaralhamento de gene. Os termos seqüência de hibridização, variante de união, variante alélica e embaralhamento de gene são como descritos neste.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll não necessitam ser os ácidos nucleicos de comprimento total, visto que o desempenho dos métodos da invenção não contam com o uso de seqüências de comprimento total de ácido nucleico. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma porção de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela El do Exemplo 43 ou uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43.
Uma porção de um ácido nucleico pode ser preparada, por exemplo, realizando-se uma ou mais anulações no ácido nucleico. As porções podem ser usadas na forma isolada ou estas podem ser fiindidas a outras seqüências codificadoras (ou não codificadoras) a fim de, por exemplo, produzir uma proteína que combine diversas atividades. Quando fundido a outras seqüências codificadoras, o polipeptídeo resultante produzido na tradução pode ser maior do que aquele predito para a porção de proteína.
As porções úteis nos métodos da invenção, codificam um polipeptídeo semelhante à bHLHll como definido nestee têm substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43. Preferivelmente, a porção é uma porção de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela El do Exemplo 43 ou é uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43. Preferivelmente a porção é pelo menos 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500 nucleotídeos consecutivos de comprimento, os nucleotídeos consecutivos sendo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela El do Exemplo 43 ou de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43. Mais preferivelmente a porção é uma porção do ácido nucleico da SEQ ID N°: 244. Preferivelmente, a porção codifica um fragmento de uma seqüência de aminoácido que, quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 22, os grupos dentro do grupo das proteínas semelhantes bHLHll, antes do que com outras proteínas bHLH. Similarmente, as proteínas semelhante à bHLHl 1 de escolha agrupará dentro do subgrupo C quando uma árvore é construída de acordo com Figura 6 em Li et al. (2006), em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é um ácido nucleico capaz de hibridizar, sob condições de estringência reduzida, preferivelmente sob condições estringentes, com um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido neste ou com uma porção como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar a qualquer um dos ácidos nucleicos dadas na Tabela El do Exemplo 43 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela El do Exemplo 43.
As seqüência de hibridização úteis nos métodos da invenção codificam um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido neste, tendo substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43. Preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar o complemento de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela El do Exemplo 43 ou a uma porção de qualquer uma destas seqüências, uma porção sendo como definido acima ou a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar o complemento de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43. Mais preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar o complemento de um ácido nucleico como representado pela SEQ ID N°: 244 ou a uma porção deste.
Preferivelmente, a seqüência de hibridização codifica um polipeptídeo com uma seqüência de aminoácido que, quando o comprimento total e a construção usada de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 22, os grupos dentro do grupo das proteínas semelhantes bHLHll, antes do que com outras proteínas bHLH. Similarmente, as proteínas semelhante à bHLHl 1 de escolha agrupará dentro do subgrupo C quando uma árvore é construída de acordo com Figura 6 em Li et al. (2006), em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma variante de união que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido neste acima, a variante de união sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de união de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela El do Exemplo 43 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43.
As variantes de união preferidas são as variantes de união de um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 244 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 245. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante de união, quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 22, os grupos dentro do grupo das proteínas semelhantes bHLHll, antes do que com outras proteínas bHLH. Similarmente, as proteínas semelhante à bHLHl 1 de escolha agrupará dentro do subgrupo C quando uma árvore é construída de acordo com Figura 6 em Li et al. (2006), em vez de qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil na realização dos métodos da invenção é uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHll como definido neste acima, uma variante alélica sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante alélica de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela El do Exemplo 43 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de
qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43.
Os polipeptídeos codificados pelas variantes alélicas úteis nos métodos da presente invenção tem substancialmente a mesma atividade biológica como o polipeptídeo semelhante à bHLHll da SEQ ID N°: 244 e qualquer um dos aminoácidos descritos na Tabela El do Exemplo 43. As variantes alélicas existem na natureza, e abrangem dentro dos métodos da presente invenção é o uso destes alelos naturais. Preferivelmente, a variante alélica é uma variante alélica da SEQ ID N°: 244 ou uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 245. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante alélica, quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 22, os grupos dentro do grupo das proteínas semelhantes bHLHl 1, antes do que com outras proteínas bHLH. Similarmente, as proteínas semelhante à bHLHl 1 de escolha agrupará dentro do subgrupo C quando uma árvore é construída de acordo com Figura 6 em Li et al. (2006), em vez de qualquer outro grupo.
A mistura do gene ou evolução direcionada também pode ser usada para gerar variantes dos ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll como definido acima; o termo "a mistura do gene" sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de qualquer uma das seqüências de ácido nucleico dadas na Tabela El do Exemplo 43 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas na Tabela El do Exemplo 43, que a variante do ácido nucleico é obtido pelo embaralhamento de gene.
Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante ácido nucleico obtido pelo embaralhamento de gene, quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como o descrito na Figura 22, os grupos dentro do grupo das proteínas semelhantes bHLHl 1, antes do que com outras proteínas bHLH. Similarmente, as proteínas semelhante à bHLHl 1 de escolha agrupará dentro do subgrupo C quando uma árvore é construída de acordo com Figura 6 em Li et al. (2006), em vez de qualquer outro grupo.
Além disso, as variantes do ácido nucleico também podem ser
obtidos pela mutagênese direcionada ao local. Diversos métodos são
disponíveis para atingir a mutagênese direcionada ao local, o mais comum
sendo PCR com base em métodos (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds.).
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHl 1 podem ser derivados a partir de qualquer fonte artificial ou natural. O ácido nucleico pode ser modificado a partir da forma natural na composição e/ou ambiente genômico através da consideração manipulação humana. Preferivelmente o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 que codifica o ácido nucleico é a partir de uma planta, ainda preferivelmente de uma planta monocotiledônea, mais preferivelmente da família Poaceae, mais preferivelmente o ácido nucleico é de Triticum aestivum.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento. Em particular, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo rendimento aumentado, especialmente rendimento aumentado de semente com relação às plantas de controle. Os termos "produção" e "rendimento de semente" são descritos em mais detalhes na seção de "definições" neste.
A referência neste aos traços intensificados relacionados com o rendimento é determinada entender um aumento na biomassa (peso) por uma ou mais partes de uma planta, que pode incluir partes acima do solo (coletáveis) e/ou partes abaixo do solo (coletáveis). Em particular, tais partes colhíveis são sementes, e o desempenho dos métodos da invenção resultam em plantas tendo rendimento aumentado de semente relativo ao rendimento de semente de plantas de controle.
Tomando o milho como um exemplo, um aumento da produção pode ser manifestada como um ou mais do seguinte: aumento no número de plantas estabelecidas por metro quadrado, um aumento no número de espigas por planta, um aumento no número de séries, número de grãos por série, peso dos grãos, peso dos grãos milhar, comprimento/diâmetro da espiga, aumento da taxa de enchimento da semente (que é o número de sementes enchidas dividida pelo número total de sementes e multiplicadas por 100), entre outros. Tomando o arroz como um exemplo, um aumento da produção pode manifestar por si mesmo como um aumento em um ou mais do seguinte: número de plantas por metro quadrado, número de panículas por planta, número de espigas por panículas, número de flores (florzinhas) por panícula (que é expressado como uma razão do número de sementes enchidas no número de panícula primárias), aumento da taxa de enchimento da semente (que é o número de sementes enchidas dividida pelo número total de sementes e multiplicadas por 100), aumento no peso dos grãos milhar, entre outros. A presente invenção fornece um método para aumentar a produção, especialmente rendimento de semente de plantas, com relação às plantas de controle, que o método compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHll como definido neste.
Visto que as plantas transgênicas de acordo com a presente invenção tem um rendimento aumentado, é igualmente que estas plantas exibam uma taxa de desenvolvimento aumentado (durante pelo menos parte de seu ciclo de vida), relativo à taxa de desenvolvimento de plantas de controle em um estágio correspondente no seu ciclo de vida.
A taxa de desenvolvimento aumentada pode ser específica por uma ou mais partes de uma planta (incluindo sementes) ou pode estar em toda parte substancialmente de uma planta total. As plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentado pode ter um ciclo de vida mais curto. O ciclo de vida de uma planta pode ser levado significar um período necessário para o desenvolvimento a partir da semente madura seca até o estágio onde a planta tem produzido as sementes maduras secas, similar ao material de partida. Este ciclo de vida pode ser influenciado pelos fatores tal como vigor precoce, taxa de desenvolvimento, índice de viço, período e velocidade de florescência do amadurecimento da semente. O aumento na taxa de desenvolvimento pode acontecer em um ou mais estágios no ciclo de vida de uma planta ou durante substancialmente ao ciclo de vida total da planta. A taxa aumentada de desenvolvimento durante os estágios precoces no ciclo de vida de uma planta pode refletir no vigor itensificado. O aumento na taxa de desenvolvimento pode alterar o ciclo de coleta de uma planta permitindo as plantas serem semeadas depois e/ou mais cedo coletadas do que de outra maneira seria possível (um efeito similar pode ser obtido com período de florescência precoce). Se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, este pode deixar para a semeadura adicional de sementes das mesmas espécies de plantas (por exemplo semeadura e coletagem de plantas de arroz seguido pela semeadura e coletagem das plantas de arroz adicionais todas dentro de um período de desenvolvimento convencional). Similarmente, se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, este pode deixar para a semeadura adicional de sementes de espécies de plantas diferentes (por exemplo a semeadura e coletagem de plantas de milho seguido pela, por exemplo, a semeadura e coletagem opcional de soja, batata ou qualquer outra planta adequada). Os períodos de coletagem adicional do mesmo rizoma no caso de algumas plantas de cultivo também podem ser possível. Alterando o ciclo de coleta de uma planta pode levar a um aumento na produção da biomassa anual por metro quadrado (devido a um aumento no número de vezes (dito em um ano) que qualquer planta particular pode ser desenvolvida e coletada). Um aumento na taxa de desenvolvimento também pode permitir o cultivo de plantas transgênicas em uma ampla área geográfica do que suas contrapartes de tipo selvagem, visto que as limitações territoriais para o desenvolvimento de uma lavoura são freqüentemente determinados pelas condições ambientais adversas no período do plantio (temporada precoce) ou no período de coletagem (temporada tardia). Tais condições adversas podem ser evitadas se o ciclo de coleta seja mais curto. A taxa de desenvolvimento pode ser determinação pela derivação de vários parâmetros a partir de curvas de desenvolvimento, tais parâmetros podem ser: T-Mid (o período de retirada para as plantas atingirem 50 % do seu tamanho máximo) e T-90 (período de retirada para as plantas atingirem 90 % do seu tamanho máximo), entre outros.
De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentado com relação às plantas de controle. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a taxa de desenvolvimento de plantas, que o método compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido neste.
Um aumento na produção e/ou taxa de desenvolvimento ocorre se a planta está sob condições sem estresse ou se a planta está exposta a várias tensões em comparação à plantas de controle. As plantas tipicamente respondem à exposição à tensão pelo crescimento mais lentamente. Em condições de diversas tensões, a planta ainda pode interromper o desenvolvimento completamente. A tensão branda de outra maneira é definida neste como sendo qualquer tensão que qual a planta é exposta que não resulta no interrompimento da planta desenvolver-se completamente sem a capacidade recuperar o desenvolvimento. A tensão branda no sentido da invenção leva a uma redução no desenvolvimento das plantas submetidas à tensão de menos do que 40 %, 35 % ou 30 %, preferivelmente menos do que %, 20 % ou 15 %, mais preferivelmente menos do que 14 %, 13 %, 12 %, 11 % ou 10 % ou menos em comparação à planta de controle sob as condições sem estresse. Devido as vantagens nas práticas da agricultura (irrigação, fertilização, tratamentos com pesticidas) diversas tensões não são freqüentemente encontradas em plantas de cultivos cultivadas. Como uma conseqüência, o desenvolvimento compromissado induzido pela tensão branda é freqüentemente uma característica indesejável para a agricultura. As tensões brandas são as tensões abióticas e/ou bióticas (ambientais) que a planta é exposta. As tensões abióticas podem ser devido à aridez ou excesso de água, tensão anaeróbica, tensão salina, toxicidade química, tensão oxidativa e temperaturas de frio, calor e congelamento. A tensão abiótica pode ser uma tensão osmótica causa pela tensão à água (particularmente devido à aridez), tensão salina, tensão oxidativa ou uma tensão iônica. As tensões bióticas são tipicamente aquelas tensões causadas pelos patogênios, tal como bactérias, vírus, fungos, nematóides e insetos.
Em particular, os métodos da presente invenção podem ser realizados sob condições sem estresse ou sob condições de aridez branda para dar plantas tendo rendimento aumentado com relação às plantas de controle. Como relatado em Wang et al. (Planta (2003) 218: 1-14), tensão abiótica leva a uma sére de mudanças moleculares, bioquímicas, fisiológicas e morfológicas que adversamente afeta o desenvolvimento da planta e produtividade. A aridez, salinidade, temperaturas extremas e tensão oxidativa estão conhecidas serem interconectadas e podem induzir o desenvolvimento e dano celular através de mecanismos similares. Rabbani et al. (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767) descreve particularmente um alto grau de "cruzamento" entre a tensão de aridez e alta tensão por salinidade. Por exemplo, aridez e/ou salinização são manifestados principalmente como tensão osmótica, resultando no rompimento da homeostase e distribuição de íon na célula. A tensão oxidativa, que freqüentemente acompanha temperatura alta ou baixa, salinidade ou tensão de aridez, pode causar a desnaturação de proteínas estruturais e funcionais. Como uma conseqüência, estas diversas tensões ambientais freqüentemente ativam os caminhos de sinalização celular similares e respostas celulares, tal como a produção de proteínas de tensão, super regulação de anti-oxidantes, acúmulo de solutos compatíveis e suspensão do desenvolvimento. O termo condições de "não tensão" como usado neste são aquelas condições ambientais que permitem o ótimo desenvolvimento das plantas. As pessoas habilitadas na técnica são atentas das condições do solo normal e condições climáticas para uma localização dada. As plantas com ótimas condições de desenvolvimento, (desenvolvimento sob condições sem estresse) tipicamente produzem na ordem crescente de preferência pelo menos 90 %, 87 %, 85 %, 83 %, 80 %, 77 % ou 75 % da produção média de tal planta em um dado ambiente. A produção média pode ser calculada na base da coleta e/ou temporada. As pessoas habilitadas na técnica estão atentas das produções de rendimento médio de uma lavoura. O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a produção em plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas, que o método compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições de deficiência do nutriente, particularmente sob condições de deficiência de nitrogênio, rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a produção em plantas desenvolvidas sob condições de deficiência do nutriente, que o método compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1, fornecido que a deficiência do nutriente não é uma deficiência de fosfato. A deficiência do nutriente pode resultar a partir da perda de nutrientes tal como nitrogênio, fosfatos e outros compostos contendo fósforo, potássio, cálcio, cadmío, magnésio, manganês, ferro e boro, entre outros. Entretanto, o termo "deficiência do nutriente" como usado no contexto da presente invenção não abrange uma deficiência em fosfato.
A presente invenção abrange plantas ou partes destas (incluindo sementes) obtidas pelos métodos de acordo com a presente invenção. As plantas ou partes destas compreendem um transgene de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido acima.
A invenção também fornece construções genéticas e vetores para facilitar introdução e/ou expressão em plantas de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll. A construção de genes podem ser inseridos nos vetores, que podem ser comercialmente disponíveis, adequados para a transformação em plantas e adequados para a expressão do gene de interesse nas células transformadas. A invenção também fornece o uso de uma construção de gene como definido neste nos métodos da invenção.
Mais especificamente, a presente invenção fornece uma construção que compreende:
(a) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido acima;
(b) uma ou mais seqüências de controle capazes de conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico de (a) e opcionalmente
(c) uma seqüência de terminação de transcrição.
Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica um
polipeptídeo semelhante à bHLHll é como definido acima. O termo "seqüência de controle" e "seqüência de terminação" são como definidos neste.
As plantas são transformadas com um vetor que compreende qualquer um dos ácidos nucleicos descritos acima. O técnico habilitado é bem atento aos elementos genéticos que devem estar presentes no vetor a fim de transformar sucessivamente, selecionar e propagar células hospedeiras contendo a seqüência de interesse. A seqüência de interesse é operacionalmente ligada a uma ou mais seqüências de controle (pelo menos a um promotor).
Vantajosamente, qualquer tipo de promotor, se natural ou sintético, pode ser usado para conduzir a expressão de uma seqüência de ácido nucleico, mas, preferivelmente o promotor é de origem vegetal. Um promotor constitutivo é particularmente útil nos métodos. Preferivelmente o promotor constitutivo também é um promotor ubíquo de força média. Ver a seção de "Definições" neste para as definições de vários tipos de promotores.
Deve ser claro que a aplicabilidade da presente invenção não é restrita ao ácido nucleico que codifica o polipeptídeo semelhante à bHLHll representado pela SEQ ID N°: 1, ou é a aplicabilidade da invenção restrita à expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 quando conduzido por um promotor constitutivo.
O promotor constitutivo é preferivelmente de um promotor de força média, tal como um promotor GOS2, preferivelmente o promotor é um promotor GOS2 de arroz. Ainda preferivelmente o promotor constitutivo é representado por uma seqüência de ácido nucleico substancialmente similar à SEQ ID N°: 256, mais preferivelmente o promotor constitutivo é como representado pela SEQ ID N°: 256. Ver a seção das "Definições" neste por exemplos adicionais de promotores constitutivos.
Opcionalmente, uma ou mais seqüências terminadoras podem ser usadas na construção introduzida em uma planta. Preferivelmente, a construção compreende um cassete de expressão que compreende o promotor GOS2 substancialmente similar à SEQ ID N°: 256 e o ácido nucleico que codifica o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1.
Os elementos reguladores adicionais podem incluir a transcrição bem como os itensificadores de tradução. Aqueles habilitados na técnica serão atentos das seqüências itensificadoras e terminadoras que podem ser adequados para o uso na realização da invenção. Uma seqüência de íntron também podem ser adicionado à região de não tradução de 5' (UTR) ou na seqüência codificadora para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula no citosol, como descrito na seção de definições. Outra seqüência de controle (perto do promotor, itensificador, silenciador, seqüências de íntron, regiões 3'UTR e/ou 5'UTR) pode ser elementos de estabilização de RNA e/ou proteína. Tais seqüências seria conhecida ou já pode ser obtida por uma pessoa habilitada na técnica. As construções genéticas da invenção ainda podem incluir uma origem da seqüência de replicação que é requerida pela manutenção e/ou reprodução em um tipo celular específico. Um exemplo é quando uma construção genética é requerida ser mantida em uma células bacteriana como um elemento genético epissomal (por exemplo, moléculas de plasmídio e cosmídio). As origens preferidas da reprodução incluem, mas não são limitadas a, o fl-ori e colEl.
Para a detecção da transferência sucessível das seqüências de ácido nucleico como usado nos métodos da invenção e/ou seleção de plantas transgênicas que compreende estes ácidos nucleicos, é vantajoso para o uso dos genes marcadores (ou genes repórter). Portanto, a construção genética pode opcionalmente compreender um gene de marcador selecionável. Os marcadores selecionáveis são descritos em mais detalhes na seção de "definições" neste. Os genes marcadores podem ser removidos ou taxados a partir da célula transgênica uma vez que estes não são necessariamente mais longos. As técnicas para a remoção do marcador são conhecidas na técnica, técnicas úteis são descritos acima na seção de definições.
A invenção também fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle, que compreende introdução e expressão em uma planta de qualquer ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 como definido neste acima.
Mais especificamente, a presente invenção fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados aumentados relacionados com o rendimento, particularmente produção aumentada (semente), que o método compreende:
(i) introduzir e expressar em uma planta ou célula de planta um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1; e
(ii) cultivar a célula de planta sob condições que promovam o crescimento e desenvolvimento de planta.
O ácido nucleico de (i) pode ser qualquer um dos ácidos nucleicos capazes de codificar um polipeptídeo semelhante à bHLHll como definido neste.
O ácido nucleico pode ser introduzido diretamente em uma célula de planta ou na própria planta (incluindo introdução em um tecido, órgão ou qualquer outra parte de uma planta). De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o ácido nucleico é preferivelmente introduzido em uma planta pela transformação. O termo "transformação" é descrito em mais detalhes na seção de "definições" neste.
As células de planta geneticamente modificadas podem ser regeneradas por intermédio de todos os métodos com que o trabalhador habilitado seja familiar. Os métodos adequados podem ser observados nas publicações anteriomente mencionadas por S.D. Kung and R. Wu, Potrykus or Hofgen and Willmitzer.
No geral após a transformação, as células de planta ou agrupamentos celulares são selecionados pela presença de um ou mais marcadores que são codificados pelos genes expressíveis das plantas co- transferidos com o gene de interesse, seguindo que o material transformado é regenerado em um total da planta. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, como uma regra, submetido às condições seletivas de modo que as plantas transformadas podem ser distinguidas das plantas transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas na maneira descrita acima podem ser plantada e, após um período de crescimento inicial, submetido a uma seleção adequada pela pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no crescimento das sementes, se apropriado após a esterilização, em placas ágar usando um agente de seleção adequado de modo que apenas as sementes transformadas podem desenvolver-se nas plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são avaliadas pela presença de um marcador selecionável tal como um descrito acima.
Seguindo a transferência e regeneração de DNA, as plantas putativamente transformadas também podem ser avaliadas, por exemplo usando a análise Southern, pela presença do gene de interesse, número de cópia e/ou organização genômica. Alternativamente ou adicionalmente, os níveis de expressão do DNA introduzido novamente pode ser monitorado usando análise Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecidas às pessoas tendo habilidades comuns na técnica.
As plantas transformadas geradas pode ser propagadas por uma variedade de meios, tal como pela propagação clonal ou técnicas de geração clássica. Por exemplo, uma primeira geração da planta transformada (ou TI) pode ser por si mesma e transformantes de segunda geração de homozigoto (ou T2) selecionados, e as plantas T2 ainda podem ser então propagadas através de técnicas de geração clássicas. Os organismos transformados gerados podem tornar-se uma variedade de formas. Por exemplo, estes podem ser quimeras de células transformadas e células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas por conter o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um rizoma transformado enxertado em uma muda não transformada).
A presente invenção claramente estende-se a qualquer célula da planta ou planta produzida por qualquer um dos métodos descritos neste, e por todas partes da planta e propagules destes. A presente invenção estende-se ainda por abranger a progênie de uma célula transfectada ou transformada primária, tecido, órgão ou planta total que foi produzida por qualquer do métodos anteriomente mencionados, apenas o requerimento sendo que a progênie exibe a mesma características fenotípicas e/ou genotípicas como aquelas produzidas pelo padrão nos métodos de acordo com a invenção.
A invenção também inclui células hospedeiras contendo um ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1
como definido neste acima. As células hospedeiras preferidas de acordo com
a invenção são células de planta. As plantas hospedeiras para os ácidos
nucleicos ou o vetor usado nos métodos de acordo com a invenção, o cassete
de expressão ou construção ou vetor são, à princípio, vantajosamente todas as
plantas, que são capazes de sintetizar os polipeptídeos usados no método inventivo.
Os métodos da invenção são vantajosamente aplicáveis por qualquer planta. As plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertencem à super família Viridiplantae, em particular, plantas monocotiledônias e dicotiledônias incluindo forragem ou legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimento, árvores e arbustos. De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta de cultivo. Exemplos de plantas de cultivo incluem soja, girassol, canola, alfafa, colza, linhaça, algodão, tomate, batata e tabaco. Ainda preferivelmente, a planta é uma planta monocotiledônia. Exemplos de plantas monocotiledônias incluem cana de açúcar. Mais preferivelmente a planta é um cereal. Exemplos de cereais incluem arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo, espécie de trigo, espelta, secale, einkorn, teff, milo e aveias.
A invenção também estende-se partes colhíveis de uma planta tal como, mas não limitado a sementes, folhas, frutos, flores, hastes, raízes, nzomas, tubérculos e bulbos, que as partes colhíveis compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1. A invenção além disso relata os produtos derivados, preferivelmente diretamente derivados, a partir da parte coletável de uma tal planta, tal como grânulos e pós secos, óleo, gordura e ácidos graxos, amido ou proteínas.
De acordo com uma característica preferida da invenção, a expressão modulada é a expressão aumentada. Os métodos para aumentar a expressão dos ácidos nucleicos ou genes ou produtos dos genes, são bem documentados na técnica e exemplos são fornecidos na seção de definições.
Como mencionado acima, um método preferido para modular a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHl 1; entretanto os efeitos da realização do método, isto é itensificando os traços relacionados com o rendimento também podem ser atingido usando outras técnicas bem conhecidas, incluindo mas não limitado a rotulação de ativação de T-DNA, TILLING, recombinação homóloga. Uma descrição destas técnicas é fornecida na seção de definições.
A presente invenção também abrange o uso dos ácidos
nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHl 1 as descrito
neste e uso destes polipeptídeo semelhante à bHLHl Is na itensificação de
qualquer um dos traços mencionados acima relacionados com o rendimento em plantas.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhante à bHLHl 1 descritos neste ou o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 por si mesmo, pode observar nos programas de geração que um marcador de DNA é identificado que pode ser geneticamente ligado a um gene que codifica o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1. Os ácidos nucleicos/genes ou os polipeptídeos semelhantes à bHLHl 1 por si mesmos podem ser usados para definir um marcador molecular. Este marcador de DNA ou proteína então podem ser usados nos programas da geração para selecionar as plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento como definido neste acima nos métodos da invenção.
As variantes alélicas de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo semelhante à bHLHl l/gene também podem ser observado em programas de geração assistidos pelo marcador. Tais programas de geração algumas vezes requerem a introdução da variação alélica pelo tratamento
mutagênico das plantas, usando por exemplo a mutagênese EMS;
alternativamente, o programa pode comerçar com uma coleção de variantes
alélicas denominadas de origem "natural" causadas não itensionalmente. A
identificação das variantes alélicas então acontece, por exemplo, por PCR.
Este é seguido por uma etapa para a seleção de variantes alélicas superiores
da seqüência em questão e que dá rendimento aumentado. A seleção é
tipicamente realizada pelo desempenho do desenvolimento do monitoramento
de plantas contendo variantes alélicas diferentes da seqüência em questão. O
desempenho do desenvolvimento pode ser monitorado em uma estufa ou no
campo. As etapas opcionais adicionais incluem o cruzamento de plantas que
uma variante alélica superior foi indetificada com uma outra planta. Este deve
ser usado, por exemplo, para fabricar uma combinação de características fenotípicas interessantes.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos semelhantes à bHLHll também podem ser usados como sondas para o mapeamento físico e genético dos genes que estes estão a parte de, e como marcadores para traços ligados aqueles genes. Tal informação pode ser útil na geração de planta a fim de desenvolver as linhas com fenotipos desejados. Tal uso dos ácidos nucleicos que codificam o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 requer apenas uma seqüência de ácido nucleico de pelo menos 15 nucleotídeos de comprimento. Os ácidos nucleicos que codificam o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 pode ser usados como polimorfismo de comprimento do fragmento de marcadores de restrição (RFLP). Southern blots (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) de DNA genômico da planta digerido por restrição pode ser sondado com os ácidos nucleicos semelhantes à bHLHll. Os padrões de grupos resultantes podem então ser submetidos à análise genética usando programas de computador tal como MapMaker (Lander et al. (1987) Genomics 1: 174-181) a fim de construir um mapa genético. Além disso, os ácidos nucleicos podem ser usados para sondar Southern blots contendo DNA genômico tratado por endonuclease por restrição de uma série de indivíduos que representam o padrão e progênie de um cruzamento genético definido. A segregação do polimorfismo de DNA é notado e usado para calcular a posição do ácido nucleico que codifica o polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 no mapa genético previamente obtido usando esta população (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331).
A produção e uso de sondas derivadas do gene vegetal para o uso no mapeamento genético é descrito em Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Repórter 4: 37-41. Numerosas publicações descrevem o mapeamento genético dos clones de cDNA específicos usando a metodologia resumida acima ou variações destas. Por exemplo, populações intercruzadas F2, populações cruzadas novamente, populações aleatoriamente auxiliares, linhas isogênicas próximas, e outras séries de indivíduos podem ser usados para o mapeamento. Tais metodologias são bem conhecidas àqueles habilitados na técnica.
As sondas do ácido nucleico também podem ser usadas para o mapeamento físico (isto é, disposição das seqüências nos mapas físicos; ver Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346, e referências citadas neste).
Em uma outra forma de realização, as sondas dos ácido nucleico podem ser usados na fluorescência direta no mapeamento da hibridização in situ (FISH) (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Embora os métodos correntes do mapeamento FISH favorece o uso de amplos clones (diversos kb à diversas centenas de kb; ver Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), melhoramento na sensibilidade pode permitir o desempenho do mapeamento FISH usando sondas mais curtas.
Uma variedade da amplificação de ácido nucleico com base em métodos para o mapeamento físico e genético pode ser realizado usando os ácidos nucleicos. Exemplos incluem a amplificação específica por alelos (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), polimorfismo dos fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et al. (1993) Genomics 16:325-332), ligação específica por alelos (Landegren et al. (1988) Science 241:1077- 1080), reações de extensão por nucleotídeos (Sokolov (1990) Nucleic Acid Res. 18:3671), mapeamento híbrido de radiação (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) e mapeamento Happy (Dear and Cook (1989) Nucleic Acid Res. 17:6795-6807). Para estes métodos, a seqüência de um ácido nucleico é usada para projetar e produzir pares de iniciadores para o uso na reação de amplificação ou nas reações da extensão iniciadora. O projeto de tais iniciadores é bem conhecido àqueles habilitados na técnica. Em métodos que utilizam o mapeamento genético com base em PCR, este pode ser necessário para identificar as diferenças da seqüência de DNA entre os padrões do cruzamento do mapeamento na região correspondente à seqüência do ácido nucleico imediata. Este, entretanto, não é necessário no geral para os métodos de mapeamento.
Os métodos de acordo com a presente invenção resultam em plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, como descrito anteriormente acima. Estes traços também podem ser combinados com outros traços economicamente vantajosos, tal como traços que itensificam a produção adicional, tolerância a outras tensões bióticas e abióticas, traços que modificam várias características arquiteturais e/ou características bioquímicas e/ou fisiológicas.
VI. Polipeptídeo ASR (ácido abscísico-, tensão-, e maturativo induzido)
Um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR. Qualquer referência à seguir a uma "proteína útil nos métodos da invenção" é determinada entender um polipeptídeo ASR como definido neste. Qualquer referência à seguir a um "ácido nucleico útil nos métodos da invenção" é determinada entender um ácido nucleico capaz de codificar um tal polipeptídeo ASR. O ácido nucleico a ser introduzido em uma planta (e, portanto, útil na realização dos métodos da invenção) é qualquer ácido nucleico que codifica o tipo de proteína que será descrito agora, à seguir também denominado "ácido nucleico ASR" ou "gene ASR".
Um "polipeptídeo ASR" como definido neste refere-se às proteínas representadas pela SEQ ID N°: 397 e pelos homólogos (ortólogos e parálogos) destes.
Preferivelmente, os homólogos da SEQ ID N°: 397 tem um domínio ABA WDS (entrada Pfam PF02496).
Preferivelmente os polipeptídeos ASR adicionais da invenção são aqueles tendo a ordem crescente de preferência pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 83 %, 85 %, 87 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou mais identidade de seqüência a qualquer um dos polipeptídeos dados na Tabela Fl.
O termo "domínio" e "motivo" é definido na seção de "definições" neste. Os bancos de dados especializados existem para a identificação de domínios, por exemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244), InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318), Prosite (Bucher and Bairoch (1994), A generalized profile syntax for biomolecular sequences motifs and its fiinction in automatic sequence interpretation. (In) ISMB-94; Proceedings 2o International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004)) ou Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002)). Uma série de ferramentas para a
análise in silico de seqüências de proteínas está disponível no servidor
proteômico ExPASy (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al.,
ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis,
Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). Os domínios ou motivos também
podem ser identificados usando técnicas de rotina, tal como pelo alinhamento da seqüência.
Os métodos para o alinhamento de seqüências para comparação são bem conhecidos na técnica, tais métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA. GAP usa o algoritmo de Needleman and Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) para encontrar o alinhamento global (isto é medindo-se as seqüências completas) de duas seqüências que maximizam o número de equiparações e minimiza o número de fendas. O algoritmo BLAST (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403-10) calcula a identidade de seqüência percentual e realiza uma análise estatística da similaridade entre as duas seqüências. O software para realizar análise BLAST está publicamente disponível através do National Centre for Biotechnology Information (NCBI). Os homólogos podem ser facilmente identificados usando-se, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de seqüência múltipla ClustalW (versão 1.83), com os parâmetros de alinhamento default e um método de registro em porcentagem. As porcentagens globais de similaridade e de identidade também podem ser determinadas usando-se um dos métodos disponíveis no pacote de software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando-se proteína ou seqüências de DNA.). A edição manual menor pode ser realizada para otimizar o alinhamento entre os motivos conservados, como seria aparente à pessoa habilitada na técnica. Além disso, em vez de usar as seqüências de comprimento total para a identificação de homólogos, domínios específicos também podem ser usados. Os valores de identidade de seqüência podem ser determinados sobre o aminoácido inteiro ou seqüência de aminoácido ou em domínios selecionados ou motivos conservados, usando-se os programas mencionados acima usando-se os parâmetros default.
Além disso, os polipeptídeos ASR (pelo menos em sua forma natural), tão perto quanto da SEQ ID N°: 397 e estes homólogos são interessados, tipicamente têm a capacidade para aumentar a resistência da tensão salina de plantas. As ferramentas e técnicas para a expressão de ASR em plantas e teste para a resistência da tensão salina aumentada são bem conhecidos na técnica.
A presente invenção é ilustrada transformando-se as plantas com a seqüência de ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 396, que codifica a seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 397. Entretanto, desempenho da invenção não está restrito a estas seqüências; os métodos da invenção podem ser vantajosamente realizados usando-se qualquer ácido nucleico que codifica ASR ou polipeptídeo ASR como definido neste.
Exemplos de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR podem ser observados em banco de dados conhecidos na técnica. Tais ácidos nucleicos são úteis na realização dos métodos da invenção. Ortólogos e parálogos, os termos "ortólogos" e "parálogos" sendo como definido neste, já podem ser identificados pela realização de uma denominada pesquisa blast recíproca. Tipicamente, isto envolve um primeiro BLAST que envolve o submetro de uma seqüência em dúvida ao BLAST (por exemplo usando SEQ ID N°: 397) contra qualquer banco de dados de seqüência, tal como os bancos de dados NCBI publicamente disponíveis. BLASTN ou TBLASTX (usando- se os valores default padrão) são, no geral, usados quando começa-se a partir de uma seqüência de nucleotídeo, e BLASTP ou TBLASTN (usando-se os valores default padrão) quando começa-se a partir de uma seqüência de proteína. Os resultados de BLAST podem ser opcionalmente filtrados. As seqüências de comprimento total de cada um dos resultados filtrados ou resultados não filtrados são então submetidos ao BLAST novamente (segundo BLAST) contra as seqüências do organismo a partir do qual a seqüência em questão é derivada (quando a seqüência em questão é SEQ ID N°: 396 ou SEQ ID N°: 397, o segundo BLAST portanto, deve ser contra as seqüências de Oryza sativa). Os resultados do primeiro e segundo BLAST são então comparados. Um parálogo é identificado se um acerto de classificação alta do primeiro blast da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada, submetendo-se ao BLAST novamente então resulta idealmente na seqüência em questão entre os acertos mais altos; um ortólogo é identificado se um acerto de classificação alta no primeiro BLAST não da mesma espécie como a partir da qual a seqüência em questão é derivada e preferivelmente resulta no BLAST novamente na seqüência em questão estando entre os acertos mais altos.
Os acertos de classificação alta são aqueles tendo um valor E baixo. Quanto mais baixo o valor E, mais significante o registro (ou, em outras palavras, menor a chance que o acerto seja encontrado por chance).
A computação do valor E é bem conhecido na técnica. Além dos valores E, as comparações são registradas pela identidade de porcentagem. A identidade de porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácidos nucleicos comparadas (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. No caso de famílias grandes, ClustalW pode ser usado, seguido por uma árvore de união próxima, para ajudar a visualizar o agrupamento de genes relacionados e para identificar ortólogos e parálogos.
As variantes de ácido nucleico que codifica os homólogos e derivados da SEQ ID N°: 397 também podem ser úteis na prática dos métodos da invenção, os termos "homólogo" e "derivado" sendo como definido neste. Também são úteis nos métodos da invenção os ácidos nucleicos que codificam homólogos e derivados de ortólogos ou parálogos da SEQ ID N°: 397. Homólogos e derivados úteis nos métodos da presente invenção têm substancialmente a mesma atividade biológica e funcional como a proteína não modificada da qual estes são derivados.
As variantes de ácido nucleico adicionais úteis na prática dos métodos da invenção incluem as porções de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR, ácidos nucleicos que hibridizam-se a ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR, variantes de união de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR, variantes alélicas de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR e variantes de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR obtidos pelo embaralhamento de gene. Os termos seqüência de hibridização, variante de união, variante alélica e embaralhamento de gene são como descritos neste.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR não necessitam ser ácidos nucleicos de comprimento total, visto que o desempenho dos métodos da invenção não contam com o uso de seqüências de comprimento total de ácido nucleico. De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta uma porção da SEQ ID N°: 396 ou uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 397.
Uma porção de um ácido nucleico pode ser preparada, por exemplo, realizando-se uma ou mais anulações no ácido nucleico. As porções podem ser usadas na forma isolada ou estas podem ser fundidas a outras seqüências codificadoras (ou não codificadoras) a fim de, por exemplo, produzir uma proteína que combine diversas atividades. Quando fundido a outras seqüências codificadoras, o polipeptídeo resultante produzido na tradução pode ser maior do que aquele predito para a porção de proteína.
As porções úteis nos métodos da invenção, codificam um polipeptídeo ASR como definido nestee têm substancialmente a mesma
atividade biológica como as seqüências de aminoácido dada na SEQ ID N°:
397. Preferivelmente, a porção é uma porção de qualquer um dos ácidos
nucleicos dada na SEQ ID N°: 396 ou é uma porção de um ácido nucleico que
codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das seqüências de
aminoácido dada na SEQ ID N0: 396. Preferivelmente a porção é pelo menos
400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750 nucleotídeos consecutivos de
comprimento, os nucleotídeos consecutivos sendo da SEQ ID N°: 396 ou de
um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 397.
Mais preferivelmente a porção é uma porção do ácido nucleico da SEQ ID N°: 396.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é um ácido nucleico capaz de hibridizar, sob condições de estringência reduzida, preferivelmente sob condições estringentes, com um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido neste ou com uma porção como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar à SEQ ID N°: 396 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 396.
As seqüências de hibridização úteis nos métodos da invenção codificam um polipeptídeo ASR como definido neste, tendo substancialmente a mesma atividade biológica como as seqüências de aminoácido dada na SEQ ID N°: 397. Preferivelmente, a seqüência de hibridização é capaz de hidridizar à SEQ ID N°: 396 ou a uma porção de qualquer uma destas seqüências, uma porção sendo como definido acima ou a seqüência de hibridização é capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 397.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma variante de união que codifica um polipeptídeo ASR como definido neste acima, a variante de união sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de união da SEQ ID N°: 396 ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 397.
Uma outra variante de ácido nucleico útil na realização dos métodos da invenção é uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica
um polipeptídeo ASR como definido neste acima, uma variante alélica sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método
para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que
compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante alélica da
SEQ ID N°: 396 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta de
uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo
ou homólogo das seqüências de aminoácido representado pela SEQ ID N°: 397.
As variantes alélicas úteis nos métodos da presente invenção tem substancialmente a mesma atividade biológica como o polipeptídeo ASR da SEQ ID N°: 397. As variantes alélicas existem na natureza, e abrange dentro dos métodos da presente invenção é o uso destes alelos naturais. A mistura do gene ou evolução direcionada também pode ser usada para gerar variantes dos ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR como definido acima; o termo "a mistura do gene" sendo como definido neste.
De acordo com a presente invenção, é fornecido um método para intensificar os traços relacionados com o rendimento em plantas, que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante da SEQ ID N°: 396 ou que compreende introduzir e expressar em uma planta de uma variante de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo da SEQ ID N°: 397, que a variante do ácido nucleico é obtido pelo embaralhamento de gene.
Além disso, as variantes do ácido nucleico também podem ser
obtidas pela mutagênese direcionada ao local. Diversos métodos são
disponíveis para atingir a mutagênese direcionada ao local, o mais comum
sendo PCR com base em métodos (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds.).
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR podem ser derivados a partir de qualquer fonte artificial ou natural. O ácido nucleico pode ser modificada a partir da forma natural na composição e/ou ambiente genômico através da consideração manipulação humana. Preferivelmente o ácido nucleico que codifica o polipeptídeo ASR é a partir de uma planta. No caso da SEQ ID N°: 396, o ácido nucleico que codifica o polipeptídeo ASR é preferivelmente de uma planta monocotiledônea, mais preferivelmente da família Poaceae, mais preferivelmente o ácido nucleico é de Oryza sativa.
A invenção também fornece até agora ácidos nucleicos que codificam ASR não conhecidos e polipeptídeos ASR.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, portanto, é fornecido uma molécula de ácido nucleico isolado selecionado de:
(i) um ácido nucleico representado por qualquer uma da SEQ ID N°: 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413, 415 e 417;
(ii) o complemento de um ácido nucleico representado por qualquer uma da SEQ ID N°: 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413, 415 e 417;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 «/o, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido representada por qualquer uma da SEQ ID N°: 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418.
De acordo com uma outra forma de realização da presente invenção, também existe fornecido um polipeptídeo isolado selecionado de:
(i) uma seqüência de aminoácido representada por qualquer uma da SEQ ID N°: 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418;
(ii) uma seqüência de aminoácido tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85
%, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido representado por qualquer uma da SEQ ID N°: 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418.
(iii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas em (i) ou (ii) acima.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento. Em particular, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo vigor precoce aumentado e rendimento aumentado, especialmente biomassa aumentada e rendimento aumentado de semente com relação às plantas de controle. Os termos "produção" e "rendimento de semente" são descritos em mais detalhes na seção de "definições" neste.
A referência neste aos traços intensificados relacionados com o rendimento é determinada entender um aumento no vigor precoce e/ou na biomassa (peso) por uma ou mais partes de uma planta, que pode incluir partes acima do solo (coletáveis) e/ou partes abaixo do solo (coletáveis). Em particular, tais partes colhíveis são biomassa e/ou sementes, e o desempenho dos métodos da invenção resultam em plantas tendo o vigor precoce aumentado, biomassa e/ou rendimento de semente relativo ao vigor precoce, biomassa ou rendimento de semente de plantas de controle.
Tomando o milho como um exemplo, um aumento da produção pode ser manifestada como um ou mais do seguinte: aumento no número de plantas estabelecidas por hectare ou acre, um aumento no número de espigas por planta, um aumento no número de séries, número de grãos por série, peso dos grãos, peso dos grãos milhar, comprimento/diâmetro da espiga, aumento da taxa de enchimento da semente (que é o número de sementes enchidas dividida pelo número total de sementes e multiplicadas por 100), entre outros. Tomando o arroz como um exemplo, um aumento da produção pode manifestar por si mesmo como um aumento em um ou mais do seguinte: número de plantas por hectare ou acre, número de panículas por planta, número de espigas por panículas, número de flores (florzinhas) por panícula (que é expressado como uma razão do número de sementes enchidas no número de panícula primárias), aumento da taxa de enchimento da semente (que é o número de sementes enchidas dividida pelo número total de sementes e multiplicadas por 100), aumento no peso dos grãos milhar, entre outros.
A presente invenção fornece um método para aumentar a produção, especialmente biomassa e/ou rendimento de semente de plantas, com relação às plantas de controle, que o método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar a expressão, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido neste.
Visto que as plantas transgênicas de acordo com a presente invenção tem o rendimento aumentado, é igualmente que estas plantas exibam uma taxa de desenvolvimento aumentado (durante pelo menos parte de seu ciclo de vida), relativo à taxa de desenvolvimento de plantas de controle em um estágio correspondente no seu ciclo de vida.
A taxa de desenvolvimento aumentada pode ser específica por uma ou mais partes de uma planta (incluindo sementes) ou pode estar em toda parte substancialmente de uma planta total. As plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentado pode ter um ciclo de vida mais curto. O ciclo de vida de uma planta pode ser levado significar um período necessário para o desenvolvimento a partir da semente madura seca até o estágio onde a planta tem produzido as sementes maduras secas, similar ao material de partida. Este ciclo de vida pode ser influenciado pelos fatores tal como vigor precoce, taxa de desenvolvimento, índice de viço, período e velocidade de florescência do amadurecimento da semente. O aumento na taxa de desenvolvimento pode acontecer em um ou mais estágios no ciclo de vida de uma planta ou durante substancialmente ao ciclo de vida total da planta. A taxa aumentada de desenvolvimento durante os estágios precoces no ciclo de vida de uma planta pode refletir o vigor itensificado. O aumento na taxa de desenvolvimento pode alterar o ciclo de coleta de uma planta permitindo as plantas serem semeadas depois e/ou mais cedo coletadas do que de outra maneira seria possível (um efeito similar pode ser obtido com período de florescência precoce). Se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, este pode deixar para a semeadura adicional de sementes das mesmas espécies de plantas (por exemplo semeadura e coletagem de plantas de arroz seguido pela semeadura e coletagem das plantas de arroz adicionais todas dentro de um período de desenvolvimento convencional). Similarmente, se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, este pode deixar para a semeadura adicional de sementes de espécies de plantas diferentes (por exemplo a semeadura e coletagem de plantas de milho seguido pela, por exemplo, semeadura e coletagem opcional de soja, batata ou qualquer outra planta adequada). Os períodos de coletagem adicional do mesmo rizoma no caso de algumas plantas de cultivo também podem ser possível. Alterando o ciclo de coleta de uma planta pode levar a um aumento na produção da biomassa anual por acre (devido a um aumento no número de vezes (dito em um ano) que qualquer planta particular pode ser desenvolvida e coletada). Um aumento na taxa de desenvolvimento também pode permitir o cultivo de plantas transgênicas em uma ampla área geográfica do que suas contrapartes de tipo selvagem, visto as limitações territoriais para o desenvolvimento de uma lavoura são freqüentemente determinados pelas condições ambientais adversas no período do plantio (temporada precoce) ou no período de coletagem (temporada tardia). Tais condições adversas podem ser evitadas se o ciclo de coleta seja mais curto. A taxa de desenvolvimento pode ser determinação pela derivação de vários parâmetros a partir de curvas de desenvolvimento, tais parâmetros podem ser: T-Mid (o período de retirada para as plantas atingirem 50 % do seu tamanho máximo) e T-90 (período de retirada para as plantas atingirem 90 % do seu tamanho máximo), entre outros.
De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o desempenho dos métodos da invenção dá plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentado com relação às plantas de controle. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a taxa de desenvolvimento de plantas, que o método compreende a expressão modular, preferivelmente aumentar expression, em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido neste. Em uma forma de realização particular, o desempenho dos métodos da presente invenção dá plantas com o vigor precoce aumentado.
Um aumento na produção e/ou taxa de desenvolvimento ocorre se a planta está sob condições sem estresse ou se a planta está exposta a várias tensões em comparação à plantas de controle. As plantas tipicamente respondem à exposição à tensão pelo crescimento mais lentamente. Em condições de diversas tensões, a planta ainda pode interromper o desenvolvimento completamente. A tensão branda de outra maneira é definida neste como sendo qualquer tensão que qual a planta é exposta que não resulta no interrompimento da planta para desenvolver completamente sem a capacidade de recuperar o desenvolvimento. A tensão branda no sentido da invenção leva a uma redução no desenvolvimento das plantas submetidas à tensão de menos do que 40 %, 35 % ou 30 %, preferivelmente menos do que %, 20 % ou 15 %, mais preferivelmente menos do que 14 %, 13 %, 12 %, 11 % ou 10 % ou menos em comparação à planta de controle sob condições sem estresse. Devido as vantagens nas práticas da agricultura (irrigação, fertilização, tratamentos com pesticidas) diversas tensões não são freqüentemente encontradas em plantas de cultivos cultivadas. Como uma conseqüência, o desenvolvimento compromissado induzido pela tensão branda é freqüentemente uma característica indesejável para a agricultura. As tensões brandas são as tensões abióticas e/ou bióticas (ambientais) que a planta é exposta. As tensões abióticas podem ser devido à aridez ou excesso de água, tensão anaeróbica, tensão salina, toxicidade química, tensão oxidativa e temperaturas de frio, calor e congelamento. A tensão abiótica pode ser uma tensão osmótica causa pela tensão à água (particularmente devido à aridez), tensão salina, tensão oxidativa ou uma tensão iônica. As tensões bióticas são tipicamente aquelas tensões causadas pelos patogênios, tal como bactérias, vírus, fungos e insetos.
Em particular, os métodos da presente invenção podem ser realizados sob condições sem estresse ou sob condições de aridez branda para dar plantas tendo rendimento aumentado com relação às plantas de controle. Como relatado em Wang et al. (Planta (2003) 218: 1-14), tensão abiótica leva a uma sére de mudanças moleculares, bioquímicas, fisiológicas e morfológicas que afetam adversamente o desenvolvimento da planta e produtividade. A aridez, salinidade, temperaturas extremas e tensão oxidativa estão conhecidas serem interconectadas e podem induzir o desenvolvimento e dano celular através de mecanismos similares. Rabbani et al. (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767) descreve particularmente um alto grau de "cruzamento" entre a tensão de aridez e alta tensão por salinidade. Por exemplo, aridez e/ou salinização são manifestados principalmente como tensão osmótica, resultando no rompimento da homeostase e distribuição de íon na célula. A tensão oxidativa, que freqüentemente acompanha temperatura alta ou baixa, salinidade ou tensão de aridez, pode causar a desnaturação de proteínas estruturais e funcionais. Como uma conseqüência, estas diversas tensões ambientais freqüentemente ativam os caminhos de sinalização celular similares e respostas celulares, tal como a produção de proteínas de tensão, super regulação de anti-oxidantes, acúmulo de solutos compatíveis e suspensão do desenvolvimento. O termo de condições de "não tensão" como usado neste são aquelas condições ambientais que permitem o ótimo desenvolvimento das plantas. As pessoas habilitadas na técnica são atentas das condições do solo normal e condições climáticas para uma localização dada. As plantas com ótimas condições de desenvolvimento, (desenvolvimento sob condições sem estresse) tipicamente produzem na ordem crescente de preferência pelo menos 90 %, 87 %, 85 %, 83 %, 80 %, 77 % ou 75 % da produção média de tal planta em um dado ambiente. A produção média pode ser calculada na base da coleta e/ou temporada. As pessoas habilitadas na técnica estão atentas das produções de rendimento médio de uma lavoura.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas rendimento aumentado e/ou vigor precoce aumentado, com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a produção e/ou vigor precoce em plantas desenvolvidas sob condições sem estresse ou sob condições de secura brandas, que o método compreende aumentar expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR.
O desempenho dos métodos da invenção dá plantas desenvolvidas sob condições de deficiência do nutriente, particularmente sob condições de deficiência de nitrogênio, rendimento aumentado com relação às plantas de controle desenvolvidas sob condições comparáveis. Portanto, de acordo com a presente invenção, é fornecido um método para aumentar a produção em plantas desenvolvidas sob condições de deficiência do nutriente, que o método compreende aumentar expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR. Deficiência do nutriente pode resultar a partir da perda de nutrientes tal como nitrogênio, fosfatos e outros compostos contendo fósforo, potássio, cálcio, cadmío, magnésio, manganês, ferro e boro, entre outros.
A presente invenção abrange as plantas ou partes destas (incluindo sementes) obtidas pelos métodos de acordo com a presente invenção. As plantas ou partes destas compreende um transgene de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido acima.
A invenção também fornece as construções genéticas e vetores para facilitar a introdução e/ou expressão em plantas dos ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR. A construção de genes pode ser inserida nos vetores, que pode ser comercialmente disponível, adequado para a transformação em plantas e adequado para a expressão do gene de interesse nas células transformadas. A invenção também fornece o uso de uma construção de gene como definido neste nos métodos da invenção.
Mais especificamente, a presente invenção fornece uma construção que compreende:
(a) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido acima;
(b) uma ou mais seqüências de controle capazes de conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico de (a) e opcionalmente
(c) uma seqüência de terminação de transcrição.
Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica um
polipeptídeo ASR é como definido acima. O termo "seqüência de controle" e "seqüência de terminação" são como definidos neste.
As plantas são transformadas com um vetor que compreende qualquer um dos ácidos nucleicos descritos acima. O técnico habilitado é bem atento aos elementos genéticos que devem estar presentes no vetor a fim de transformar sucessivamente, selecionar e propagar as células hospedeiras contendo a seqüência de interesse. A seqüência de interesse é operacionalmente ligada a uma ou mais seqüências de controle (pelo menos a um promotor).
Vantajosamente, qualquer tipo de promotor, se natural ou sintético, pode ser usado para conduzir a expressão de uma seqüência de ácido nucleico. Um promotor constitutivo é particularmente útil nos métodos da invenção. Ver a seção de "Definições" neste pelas definições de vários tipos de promotores.
Deve ser claro que a aplicabilidade da presente invenção não é restrito ao ácido nucleico que codifica o polipeptídeo ASR representado pela SEQ ID N°: 396, ou é a aplicabilidade da invenção restrita à expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo ASR quando conduzido por um promotor constitutivo específico.
O promotor constitutivo é preferivelmente um promotor GOS2, preferivelmente um promotor GOS2 de arroz. Ainda preferivelmente o promotor constitutivo é representado por uma seqüência de ácido nucleico substancialmente similar à SEQ ID N°: 398, mais preferivelmente o promotor constitutivo é como representado pela SEQ ID N°: 398. Ver a seção das "Definições" neste pelos exemplos adicionais de promotores constitutivos.
Opcionalmente, uma ou mais seqüências terminadoras podem ser usadas na construção introduzida em uma planta. Os elementos reguladores adicionais podem incluir a transcrição bem como os itensificadores de tradução. Aqueles habilitados na técnica serão atentos das seqüências itensificadoras e terminadoras que pode ser adequado para o uso na realização da invenção. Uma seqüência de íntron também podem ser adicionada à região de não tradução da extremidade final 5' (UTR) ou na seqüência codificadora para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula no citosol, como descrito na seção de definições. Outras seqüências de controles (perto do promotor, itensificador, silenciador, seqüências de íntron, região 3' UTR e/ou 5' UTR) podem ser elementos de estabilização de RNA e/ou proteína. Tais seqüências seria conhecida ou já pode ser obtida por uma pessoa habilitada na técnica.
As construções genéticas da invenção ainda podem incluir uma origem da seqüência de replicação que é requerida pela manutenção e/ou reprodução em um tipo celular específico. Um exemplo é quando uma construção genética é requerida ser mantida em uma células bacteriana como um elemento genético epissomal (por exemplo, moléculas de plasmídio e cosmídio). As origens preferidas da reprodução incluem, mas não são limitadas a, o fl-ori e colEl.
Para a detecção da transferência sucessível das seqüências de ácido nucleico como usado nos métodos da invenção e/ou seleção de plantas transgênicas que compreendem estes ácidos nucleicos, é vantajoso para o uso dos genes marcadores (ou genes repórter). Portanto, a construção genética pode opcionalmente compreender um gene de marcador selecionável. Os marcadores selecionáveis são descritos em mais detalhes na seção de "definições" neste. Os genes marcadores podem ser removidos ou taxados a partir da célula transgênica uma vez que estes não são necessariamente mais longos. As técnicas para a remoção do marcador são conhecidas na técnica, as técnicas úteis são descritas acima na seção de definições.
A invenção também fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle, que compreende introdução e a expressão em uma planta de qualquer ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido neste acima.
Mais especificamente, a presente invenção fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo traços intensificados aumentados relacionados com o rendimento, particularmente o vigor precoce aumentado e/ou rendimento aumentado, que o método compreende:
(i) introduzir e expressar em uma planta ou célula de planta de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo ASR; e
(ii) cultivar a célula de planta sob condições que promovam o crescimento e desenvolvimento de planta.
O ácido nucleico de (i) pode ser qualquer um dos ácidos nucleicos capaz de codificar um polipeptídeo ASR como definido neste.
O ácido nucleico pode ser introduzido diretamente em uma célula de planta ou na própria planta (incluindo introdução em um tecido, órgão ou qualquer outra parte de uma planta). De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o ácido nucleico é preferivelmente introduzido em uma planta pela transformação. O termo "transformação" é descrito em mais detalhes na seção das "definições" neste.
As células de planta geneticamente modificadas podem ser regeneradas por intermédio de todos os métodos com que o trabalhador habilitado seja familiar. Os métodos adequados podem ser observados nas publicações anteriomente mencionadas por S.D. Kung and R. Wu, Potrykus or Hofgen and Willmitzer.
No geral após a transformação, as células de planta ou agrupamentos celulares são selecionadas pela presença de um ou mais marcadores que são codificados pelos genes expressíveis das plantas co- transferidos com o gene de interesse, seguindo que o material transformado é regenerado em um total da planta. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, como uma regra, submetido às condições seletivas de modo que as plantas transformadas podem ser distinguidas das plantas transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas na maneira descrita acima podem ser plantada e, após um período de crescimento inicial, submetido a uma seleção adequada pela pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no crescimento das sementes, se apropriado após a esterilização, em placas ágar usando um agente de seleção adequado de modo que apenas as sementes transformadas podem desenvolver-se nas plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são avaliadas pela presença de um marcador selecionável tal como um descrito acima.
Seguindo a transferência e regeneração de DNA, as plantas putativamente transformadas também podem ser avaliadas, por exemplo usando a análise Southern, pela presença do gene de interesse, número de cópia e/ou organização genômica. Alternativamente ou adicionalmente, os níveis de expressão do DNA introduzido novamente pode ser monitorado usando a análise Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecidas às pessoas tendo habilidades comuns na técnica.
As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma variedade de meios, tal como pela propagação clonal ou técnicas de geração clássica. Por exemplo, uma primeira geração de planta transformada (ou TI) pode ser por si mesma e transformantes da segunda geração de homozigoto (ou T2) selecionados, e as plantas T2 ainda podem ser então propagadas através de técnicas de geração clássicas. Os organismos transformados gerados podem tornar-se uma variedade de formas. Por exemplo, estes podem ser quimeras de células transformadas e células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas por conter o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um rizoma transformado enxertado em uma muda não transformada).
A presente invenção claramente estende-se a qualquer célula da planta ou planta produzida por qualquer um dos métodos descrito neste, e por todas partes da planta e propagules destes. A presente invenção estende-se ainda por abranger a progênie de uma célula transfectada ou transformada primária, tecido, órgão ou planta total que foi produzida por qualquer do métodos anteriomente mencionados, apenas o requerimento sendo que a progênie exibe a mesma características fenotípicas e/ou genotípicas como aquelas produzidas pelo padrão nos métodos de acordo com a invenção.
A invenção também inclui as células hospedeiras contendo um ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo ASR como definido neste acima. As células hospedeiras preferidas de acordo com a invenção são células de planta. As plantas hospedeiras pelos ácidos nucleicos ou o vetor usados no método de acordo com a invenção, o cassete de expressão ou construção ou vetor são, à princípio, vantajosamente todas as plantas, que são capazes de sintetizar os polipeptídeos usados no método inventivo.
Os métodos da invenção são vantajosamente aplicáveis por qualquer planta. As plantas que são particularmente útil nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertencem à super família Viridiplantae, em particular, plantas monocotiledônias e dicotiledônias incluindo forragem ou legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimento, árvores e arbustos. De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta de cultivo. Exemplos de plantas de cultivo incluem soja, girassol, canola, alfafa, colza, algodão, tomate, batata e tabaco. Ainda preferivelmente, a planta é uma planta monocotiledônia. Exemplos de plantas monocotiledônias incluem cana de açúcar. Mais preferivelmente a planta é um cereal. Exemplos de cereais incluem arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
A invenção também estende-se as partes colhíveis de uma planta tal como, mas não limitado a sementes, folhas, frutos, flores, hastes, raízes, rizomas, tubérculos e bulbos. A invenção além disso relata os produtos derivados, preferivelmente diretamente derivados, a partir da parte coletável de uma tal planta, tal como grânulos e pós secos, óleo, gordura e ácidos graxos, amido ou proteínas.
De acordo com uma característica preferida da invenção, a expressão modulada é a expressão aumentada. Os métodos para aumentar a expressão de ácidos nucleicos ou genes ou produtos dos genes, são bem documentados na técnica e exemplos são fornecidos na seção de definições.
Como mencionado acima, um método preferido para modular (preferivelmente, aumentar) a expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR; entretanto os efeitos da realização do método, isto é itensificando os traços relacionados com o rendimento também podem ser atingido usando outras técnicas bem conhecidas, incluindo mas não limitado a rotulação de ativação de T-DNA, TILLING, recombinação homóloga. Uma descrição destas técnicas é fornecida na seção de definições.
A presente invenção também abrange o uso dos ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR como descrito neste e uso destes polipeptídeos ASR na itensificação de qualquer um dos traços mencionados acima relacionados com o rendimento em plantas.
Os ácidos nucleicos que codificam o polipeptídeo ASR descrito neste ou os polipeptídeos ASR por si mesmos, podem observar nos programas de geração em que um marcador de DNA é identificado que pode ser geneticamente ligado a um gene que codifica o polipeptídeo ASR. Os ácidos nucleicos/genes ou os polipeptídeos ASR por si mesmos podem ser usados para definir um marcador molecular. Este marcador de DNA ou proteína então pode ser usado nos programas da geração para selecionar as plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento como definido neste acima nos métodos da invenção.
As variantes alélicas de um ácido nucleico/gene que codifica o polipeptídeo ASR também podem ser observadas em programas de geração assistidas pelo marcador. Tais programas de geração algumas vezes requerem a introdução da variação alélica pelo tratamento de mutagênese das plantas, usando por exemplo a mutagênese EMS; alternativamente, o programa pode comerçar com uma coleção de variantes alélicas denominadas de origem "natural" causadas não itensionalmente. A identificação das variantes alélicas então acontece, por exemplo, por PCR. Este é seguido por uma etapa para a seleção de variantes alélicas superiores da seqüência em questão e que dá rendimento aumentado. A seleção é tipicamente realizada pelo desempenho do desenvolimento do monitoramento de plantas contendo variantes alélicas diferentes da seqüência em questão. O desempenho do desenvolvimento pode ser monitorado em uma estufa ou no campo. As etapas opcionais adicionais incluem o cruzamento de plantas em que a variante alélica superior foi indetificada com uma outra planta. Esta deve ser usada, por exemplo, para fabricar uma combinação de características fenotípicas interessantes.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR também podem ser usados como sondas para o mapeamento físico e genético dos genes que estes estão a parte de, e como marcadores para traços ligados aqueles genes. Tal informação pode ser útil na geração de planta a fim de desenvolver as linhas com os fenotipos desejados. Tal uso dos ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR requerem apenas uma seqüência de ácido nucleico de pelo menos 15 nucleotídeos de comprimento. Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos ASR podem ser usados como polimorfismo de comprimento do fragmento de marcadores de restrição (RFLP). Southern blots (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) de DNA genômico da planta digerido por restrição pode ser sondado com os ácidos nucleicos que codificam ASR. Os padrões de grupos resultantes podem então ser submetidos à análise genética usando os programas de computador tal como MapMaker (Lander et al. (1987) Genomics 1: 174-181) a fim de construir um mapa genético. Além disso, os ácidos nucleicos podem ser usados para sondar Southern blots contendo o DNA genômico tratado por endonuclease por restrição de uma série de indivíduos que representam o padrão e progênie de um cruzamento genético definido. A segregação do polimorfismo de DNA é notado e usado para calcular a posição do ácido nucleico que codifica o polipeptídeo ASR no mapa genético previamente obtido usando esta população (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331).
A produção e uso das sondas derivadas do gene vegetal para o uso no mapeamento genético é descrito em Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Repórter 4: 37-41. Numerosas publicações descrevem o mapeamento genético dos clones de cDNA específicos usando a metodologia resumida acima ou variações destas. Por exemplo, populações intercruzadas F2, populações cruzadas novamente, populações aleatoriamente auxiliares, linhas isogênicas próximas, e outras séries de indivíduos podem ser usados para o mapeamento. Tais metodologias são bem conhecidas àqueles habilitados na técnica.
As sondas de ácido nucleico também podem ser usadas para o mapeamento físico (isto é, disposição das seqüências nos mapas físicos; ver Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346, e referências citadas neste).
Em uma outra forma de realização, as sondas de ácido podem ser usadas na fluorescência direta do mapeamento da hibridização in situ (FISH) (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Embora os métodos correntes do mapeamento FISH favorece o uso de amplos clones (diversos kb à diversas centenas de kb; ver Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), melhoramento na sensibilidade pode permitir o desempenho do mapeamento FISH usando as sondas mais curtas.
Uma variedade da amplifícação do ácido nucleico com base em métodos para o mapeamento físico e genético pode ser realizado usando o ácidos nucleicos. Exemplos incluem a amplificação específica por alelos (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), polimorfismo dos fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et al. (1993) Genomics 16:325-332), ligação específica por alelos (Landegren et al. (1988) Science 241:1077- 1080), reações de extensão por nucleotídeos (Sokolov (1990) Nucleic Acid Res. 18:3671), mapeamento híbrido de radiação (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) e Mapeamento Happy (Dear and Cook (1989) Nucleic Acid Res. 17:6795-6807). Para estes métodos, a seqüência de um ácido nucleico é usada para projetar e produzir pares de iniciadores para o uso na reação de amplificação ou nas reações da extensão iniciadora. O projeto de tais iniciadores é bem conhecido àqueles habilitados na técnica. Em métodos que utilizam o mapeamento genético com base em PCR, este pode ser necessário para identificar as diferenças da seqüência de DNA entre os padrões do cruzamento do mapeamento na região correspondente à seqüência do ácido nucleico imediata. Este, entretanto, não é necessário no geral para os métodos de mapeamento.
Os métodos de acordo com a presente invenção resultam em plantas tendo traços intensificados relacionados com o rendimento, como descritos anteriormente acima. Estes traços também podem ser combinados com outros traços economicamente vantajosos, tal como traços que itensificam a produção adicional, tolerância a outras tensões bióticas e abióticas, traços que modificam várias características arquiteturais e/ou características bioquímicas e/ou fisiológicas.
VII. Polipeptídeo de fator de transcrição 11 (SPLll) semelhante à proteína promotora Squamosa
Surpreendentemente, tem sido agora observado que a a expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll dão plantas tendo os traços relacionados a produção itensificada relativos às plantas de controle. De acordo com a primeira forma de realização, a presente invenção fornece um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas relativos às plantas de controle, que compreende uma expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1.
A presente invenção também fornece ácidos nucleicos que codificam SPLll até agora não conhecidos e polipeptídeos SPLl 1. Estas seqüências também sendo úteis na realização de métodos da invenção.
Portanto de acordo com uma forma de realização adicional da presente invenção aqui é fornecido uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 448;
(ii) o complemento de um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 448;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 449 e tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80
%, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à SEQ ID N0: 465:
SYCQVEGCRTDLSSAKDYHRKHRVCEPHSKAPKVVVA GLERJRFCQQCSRFHGLAEFDQKKKSCRRRLNDHNARRRKPQPEAL
(que representa o domínio SBP na SEQ ID N°: 449);
um ácido nucleico que hidrodiza sob as condições estringentes à SEQ ID N°: 448.
Além disso, aqui também é fornecido um polipeptídeo isolado que compreende:
(i) uma seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID Ν°: 449;
(ii) uma seqüência de aminoácido tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 449 e tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à SEQ ID N°: 465:
SYCQVEGCRTDLSSAKDYHRKHRVCEPHSKAPKVVVA GLERRFCQQCSRFHG LAEFDQKKKSCRRRLNDHNARRRKPQPEAL (que representa o domínio SBP na SEQ ID N°: 449).
(iii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácidos dados no (i) ou (ii) acima.
Um método preferido para a expressão modulação (preferivelmente, aumentada) de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1 é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1.
Qualquer referência à seguir a uma "proteína úteis nos métodos da invenção" é deixada significar um polipeptídeo SPLll como definido neste. Qualquer referência à seguir a um "ácido nucleico úteis nos métodos da invenção" é deixado significar um ácido nucleico capaz de codificar um tal polipeptídeo SPLl 1. O ácido nucleico será introduzido na planta (e portanto útil na realização de métodos da invenção) é qualquer ácido nucleico que codifica o tipo de proteína que agora será descrita, também neste nomeada "ácido nucleico SPLl 1" ou "gene SPLl 1".
Um polipeptídeo SPLll como definido neste refere-se a um polipeptídeo que compreende um domínio de proteína de ligação Squamosa (SBP), tal domínio tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 % ou mais identidades de seqüências por qualquer um dos domínios SBP como representado pela SEQ ID Ν°: 456 a SEQ ID N0: 468 ou SEQ ID N°: 478.
Um "polipeptídeo SPLl 1" como definido neste compreende a proteína representada pela SEQ ID N°: 448 que eqüivale a SEQ ID N°: 172 e aos homólogos (ortólogos e paralógos) destes. Preferivelmente, os homólogos da SEQ ID N°: 172 tem um domínio de ligação de DNA. Os polipeptídeos SPL11 podem ser observados em bancos de dados especializados tal como Pfam, (Finn et al. Nucleic Acids Research (2006) Bancos de dados Issue 34:D247-D251). Pfam coleciona uma ampla coleção de alinhamentos de seqüência múltipla e modelos Markov secretos (HMM) que cobrem muitos dos domínios de proteína comuns e famílias e é disponível através do Sanger Institute in the United Kingdom.
O corte de ajuntamento limiar do domínio SBP nos modelos Pfam HMM fs e Pfam HMMJs é de 25,0. Os pontos curados como considerado nos bancos de dados Pfam são aquelas contagens de seqüências mais altas do que o corte de ajuntamento limiar. Entretanto os pontos potenciais, que compreendem os domínios SBP verdadeiros, ainda podem cair sob o corte de ajuntamento. Preferivelmente um polipeptídeo SPLll é uma proteína tendo um ou mais domínios em sua seqüência que excede o corte de ajuntamento da família do domínio de proteína Pfam PF03110, conhecido como domínio SBP.
Alternativamente, um domínio SBP em um polipeptídeo pode ser identificado pela realização de uma comparação de seqüência com polipeptídeos conhecidos que compreendem um domínio SBP e estabelecem uma similaridade na região do domínio SBP. As seqüências podem ser alinhadas usando qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica tal como algoritmos Blast. A probabilidade para o alinhamento para ocorrer com uma seqüência dada é tirado como base para a identificação dos polipeptídeos similares. Um parâmetro que é tipicamente usado ára representar tal probabilidade é denominado valor e. O valor E é uma medida de confiabilidade da contagem S. A contagem S é uma medida de similaridade em questão à seqüência mostrada. O valor E descreve o quanto freqüentemente uma contagem dada S é esperado ocorrer aleatoriamente. O corte do valor E pode ser tão alto quanto 1,0. O limiar típico para um bom valor e de uma produção de busca BLAST usando um polipeptídeo SPLll como seqüência em questão pode ser menor do que e"5(=10"5) l.e"10, l.e"15, l.e" 20, l.e"25, l.e"50, l.e75, Le"100, l.e"200, l.e"300, Le"400, Le'500, l.e"600, l.e"700 e l.e 800. Preferivelmente os polipeptídeos SPLll da invenção compreendem uma seqüência tendo uma ordem aumentada de preferência de um valor e inferio do que e"5(=10"5), l.e"10, l.e"15, l.e"20, l.e-25 l.e"50 l.e"75, l.e"100 l.e 200, l.e"300,
1 ρ"400 1 ρ"500 1 £,"600 , -700 β , -800 r , ^ , .
1,e ' L-G > A-e > Le e l.e em um alinhamento com um domínio SBP observado em um polipeptídeo SPLl 1 conhecido.
Exemplos de polipeptídeos SPLll úteis nos métodos da invenção são dados na Tabela Gl. As coordenadas do aminoácido do domínio SBP na proteína SPLl 1 representativa da Tabela Gl são dadas na Tabela G4 é a seqüência de domínio é representado pela SEQ ID N°: 456 a SEQ ID N°: 468. Uma seqüência de consenso dos domínios SBP presentes nos polipeptídeos SPLl 1 é dado na SEQ ID N°: 478.
Os polipeptídeos SPLll preferidos da invenção são aqueles tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, ou mais identidades de seqüências por qualquer um dos polipeptídeos dados na Tabela G2.
Tipicamente, os polipeptídeos SPLll podem compreender em adição ao domínio SBP um ou mais dos seguintes motivos conservados em posições conservadas na seqüência relativa ao domínio SBP: (i) Motivo 1 como representado pela SEQ ID N°: 469, (ii) Motivo 2 é uma região rica em serina tipicamente observada na extremidada do terminal N do domínio SBP e pode ser representado pela SEQ ID N°: 470; (iii) Motivo 3 como apresentado pela SEQ ID: 471 que é tipicamente codificada pelos nucleotídeos compreendidos dentro da região de polipeptídeo SPLll alvejada pelos membros da família de microRNA miR156; (iv) Motivo 4 como representado pela SEQ ID N°: 472. Figura 27 mostra os motivos conservados e sua posição relativa na seqüência de polipeptídeo SPLll representado pela SEQ ID N°: 428.
Portanto, os polipeptídeos SPLll preferidos úteis no método da invenção, que compreende em adição ao domínio SBP qualquer um ou mais dos seguintes motivos conservados:
(i) Motivo 1 como representado pela SEQ ID N°: 469 em que qualquer substituição de aminoácido conservativo e/ou 1 ou 2 substituições não conservativas são permitidas,
(ii) Motivo 2 como representado pela SEQ ID N°: 470 em que qualquer substituição de aminoácido é permitida, fornecido que em pelo menos 4 aminoácidos tem uma cadeia secundária polar, preferivelmente serina ou treonina, e fornecido que este motivo é localizado na extremidade do terminal N do domínio SBP;
(iii) Motivo 3 como representado pela SEQ ID: 471, em que 1 ou 2 más combinações são permitidas;
(iv) Motivo 4 como representado pela SEQ ID: 472, em que 1, 2 ou 3 más combinações são permitidas.
Exemplos de substituições de aminoácidos conservativos são dados na seção de fundamento. Tipicamente, os aminoácidos compreendidos em polipeptídeos são aminoácidos alfa tendo uma amina e um grupo carboxila ligado ao mesmo carbono, o carbono alfa, o qual as moléculas de aminoácidos freqüentemente compreendem uma cadeia secundária ligada ao carbono alfa. Tabela 3 mostra a classificação dos aminoácidos com base nas propriedades físicas e bioquímicas da cadeia secundária. Tabela 3. Classificação de aminoácidos de acordo com as propriedades da
cadeia secundária.
Aminoácido 3 letras 1 letra Polaridade da cadeia secundária Acidez ou basicidade da cadeia secundária índice de hidropatia Arginina Arg R polar básico -4,5 Asparagina Asn N polar neutro -3,5 Acido aspártico Asp D polar ácido -3,5 Cisteína Cys C polar neutro 2,5 Acido glutâmico Glu E polar ácido -3,5 Glutamina Gln Q polar neutro -3,5 Histidina His H polar básico -3,2 Lisina Lys K polar básico -3,9 Serina Ser S polar neutro -0,8 Treonina Thr T polar neutro -0,7 Tirosina Tyr Y polar neutro -1,3 Alanina Ala A Não polar neutro 1,8 Glicina Gly G Não polar neutro -0,4 Isoleucina Ile I Não polar neutro 4,5 Leucina Leu L Não polar neutro 3,8 Metionina Met M Não polar neutro 1,9 Fenilalanina Phe F Não polar neuto 2,8 Prolina Pro P Não polar neutro -1,6 Triptofano Trp W Não polar neutro -0,9 Valina Val V Não polar neutro 4,2
Exemplos de polipeptídeos SPLll que compreendem um ou
mais dos motivos conservados do Motivo 1 ao Motivo 4 são dados no Exemplo 62. Figura 28 mostra a posição dos motivos conservados naqueles polipeptídeos SPLl 1.
Preferivelmente, o polipeptídeo SPLll da invenção quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como um descrito na Figura 29, os grupos dentro do grupo S3 que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 428 (nomeada AtSPLl 1 na Figura 29) antes do que com qualquer outro grupo.
O termo "domínio" e "motivo" é definido nas seções de "definições" neste. Os bancos de dados especializados existem para a identificação dos domínios, por exemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244, InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318, Prosite (Bucher and Bairoch (1994), Uma sintaxe de perfil generalizada for biomolecular sequences motivos e sua função em interpretação de seqüência automática. (In) ISMB-94; Proceedings 2o International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D. eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004), ou Pfam (Bateman et al., Nucleic Aeids Research 30(1): 276-280 (2002). Uma série de ferramentaspara análise ín silico das seqüências de proteínas é disponível no servidor proteômico ExPASy (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al. exPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). Os domínios também podem ser identificados usando as técnicas de rotina, tal como pelo alinhamento da seqüência.
Os métodos para o alinhamento das seqüências em comparação são bem conhecidos na técnica, tais métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA. O uso de GAP do algoritmo de Needleman and Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) observam o alinhamento global (isto é medido-se as seqüências completas) de duas seqüências que maximizam o número de pontos e minimizam o número de fendas. O algoritmo BLAST (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403-10) calcula o percentual da identidade de seqüência e realiza uma análise estatística da similaridade entre as duas seqüências. O software para a realização da análise de BLAST é publicamente disponível através de National Centre for Biotechnology Information (NCBI). Os homólogos podem ser prontamente identificados usando, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de seqüência múltipla ClustalW (versão 1.83), com os parâmetros de alinhamento em pares default, er um método de contagem em porcentagem. As porcentagens globais de similaridade e identidade também podem ser determinadas usando um dos métodos disponíveis na embalagem do software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando protein or DNA sequences). Uma edição menor do manual pode ser realizada para otimizar o alinhamento entre motivos conservados, como deve ser evidente a uma pessoa habilitada na técnica. Além disso, em vez do uso das seqüências de comprimento total para a identificação de homólogos, domínios específicos também podem ser usados. Os valores da identidade de seqüência podem ser determinados no a cido nucleico inteiro ou seqüência de aminoácido ou em domínios selecionados ou motivos conservados, usando os programas mencionados acima usando os parâmetros default.
Além disso, os polipeptídeos SPLll (em pelo menos na sua forma natural) pode ter tipicamente a atividade de ligação de DNA, em particular estes podem ligar os fragmentos de DNA que compreendem a caixa de ligação do DNA do domínio SBP como representado pela SEQ ID N°: 49. Tipicamente a caixa de ligação do DNA do domínio SBP é observada nos promotores de genes de origem vegetal tal como o gene SQUAMOSA. Os fragmentos que compreendem a caixa de ligação do DNA do domínio SBP são preferivelmente mais do que 10, 15, 20, 25, 100, 200, 500, 1000, 2000 longos pares de bases. Os métodos para determinar a ligação de DNA do domínio SBP contendo as proteínas são aplicáveis aos polipeptídeos SPLll e são conhecidos na técnica (Klein at al. Mol Gen Genet. 1996, 15;250(1):7-16; Yamasaki et al. 2004 J Mol Biol. 2004, 12;337(l):49-63).
Os polipeptídeos SPLll preferidos da invenção são aqueles tendo a atividade de ligação de DNA, mais preferivelmente aquela ligação de um fragmento de DNA que compreende a SEQ ID N°: 475.
A presente invenção é ilustrada pela transformação das plantas com a seqüência do ácido nucleico representada pela SEQ ID N°: 427, que codifica a seqüência de polipeptídeo da SEQ ID N°: 428. Entretanto, o desempenho da invenção não é restrito a estas seqüências; os métodos da invenção podem ser vantajosamente realizados usando qualquer SPLll que codifica o ácido nucleico ou polipeptídeo SPLl 1 como definido neste.
Exemplos de ácidos nucleicos que codifica os polipeptídeos SPLll são dados na Tabela Gl do Exemplo 62 neste. Tais ácidos nucleicos são úteis na realização de métodos da invenção. A seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62 são as seqüências exemplo de ortólogos e paralógos do polipeptídeo SPLll representado pela SEQ ID N°: 428, os termos "ortólogos" e "parálogos" sendo como definido neste. Ainda os ortólogos e paralógos podem ser prontamente identificados pela realização de uma busca blast recíproca denominada. Tipicamente, este envolve um primeiro BLAST que envolve uma seqüência em questão BLASTing (por exemplo usando qualquer uma das seqüências listadas na Tabela Gl do Exemplo 62) contra qualquer base de dados da seqüência, tal como publicamente disponível pelos bancos de dados NCBI. BLASTN ou TBLASTX (usando valores default padrões) são geralmente usados quando começa-se a partir de uma seqüência de nucleotídeo, e BLASTP ou TBLASTN (usando valores default padrões) quando começa-se a partir de uma seqüência de proteína. Os resultados BLAST podem ser opcionalmente filtrados. As seqüências de comprimento total dos resultados filtrados ou resultados não filtrados são então novamente submetidos ao BLAST (segundo BLAST) contra a seqüência de organismo de que a seqüência em questão é derivada (onde a seqüência em questão é a SEQ ID N°: 427 ou SEQ ID N°: 428, o segundo BLAST portanto seria contra as seqüências de Arabidopsis). Os resultados dos primeiros e segundos BLAST são então comparados. Um parálogo é identificado se um acerto de classificação alto a partir do primeiro blast é as mesmas espécies como de que a seqüência em questão é derivada, um BLAST, novamente, então resultam de maneira ideal na seqüência em questão entre os acertos mais altas; um ortólogo é identificado se um acerto de classificação alto no primeiro BLAST não é das mesmas espécies como de que a seqüência em questão é derivada, e preferivelmente resultam no BLAST novamente na seqüência em questão sendo entre os acertos mais altos.
Os acertos de classificações altos são aqueles tendo um valor E baixo. O valor E inferior, a contagem mais significante (ou em outras palavras a possibilidade inferior que o acerto foi observado pela possibilidade). A computação do valor e é bem conhecido na técnica. Além disso aos valores E, em comparação são também contados pela identidade de porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácido nucleico comparado (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. No caso de amplas famílias, ClustalW pode ser usado, seguido por uma árvore de ligação próxima, para ajudar a visualizar o agrupamento dos genes relacionados e para identificar ortólogos e paralógos.
As variantes do ácido nucleico também pode ser útil na prática dos métodos da invenção. Exemplos de tais variantes incluem ácidos nucleicos que codificam os homólogos e derivados de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, os termos "homólogo" e "derivado" sendo como definido neste. Também úteis nos métodos da invenção são os ácidos nucleicos que codificam os homólogos e derivados de ortólogos ou parálogos de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62. Homólogos e derivados úteis nos métodos da presente invenção tem substancialmente a mesma atividade funcional e biológica como a proteína não modificada de que estes são derivados.
Ainda as variantes do ácido nucleico útil na prática dos métodos da invenção incluem as porções dos ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLl 1, ácidos nucleicos que hibridizam aos ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLl 1, variantes de união de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLl 1, variantes alélicas de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLll e variantes de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLl 1 obtido pela mistura do gene. Os termos que hidridiza a seqüência, variante de união, variante alélica e mistura do gene são como descritos neste.
Uma variante de ácido nucleico preferido útil na prática dos métodos da invenção é um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1, que é microRNA insensível, ainda preferivelmente o ácido nucleico é insensível às propriedades de microRNAs à família miR156. Ácidos nucleicos alvos MicroRNA (RNA em particular) para a destruição tipicamente causando uma redução ou inibição do acúmulo do RNA alvejado. O alvejamento requer a hibridização entre o microRNA e o ácido nucleico alvejado (RNA) em um local alvo da região muito específica, denominado o miR microRNA), que compreende uma seqüência complementar a uma porção do gene microRNA maduro. Tipicamente os ácidos nucleicos microRNA insensíveis compreendem uma seqüência tendo uma ordem aumentada de preferência 1, 2, 3, 4, 5 ou mais más combinações em um alinhamento à molécula microRNA relevante no local alvo miR. Os ácidos nucleicos insensíveis ao MicroRNA podem acumular em uma célula aos níveis em uma ordem aumentada de preferência 5, 10, 20, 30, 40, 50 vezes ou mais altas do que o ácido nucleico correspondente alvejado pelo MicroRNA relevante, que tipicamente compreende 100 % da seqüência complementar no local alvo miR.
A família miR156 foi descrita precoce e uma compilação dos microRNA incluindo uma família de membros miR156 pode ser observado em bancos de dados miRBase (Griffiths-Jones et al. 2006 Nucleic Acids Research, 2006, Vol. 34, Database issue D140-D144). Os bancos de dados miRBase é mantido pelo The Wellcome Trust Sanger Institute, in Cambridge, UK. O local alvo miR156 em um ácido nucleico SPLll é complementar à seqüência madura de miR156 microRNAs. Um exemplo das seqüências maduras de uma família de membros miR156 de arroz e seus locais alvos correspondentes em ácidos nucleicos SPL de arroz é dado na Figura 30 A. Figura 31 B mostra um alinhamento dos ácidos nucleicos SPLll representativos (na forma de DNA), em que o local alvo de miR156 nos riboácidos nucleicos correspondentes é indicado. Um exemplo de um ácido nucleico SPLll insensível miR156 que codifica a SEQ ID N°: 428 é representado pela SEQ ID N°: 431. Ainda os exemplos de ácido nucleico SPLl 1 insensível miR156s são representados pela SEQ ID 440 e SEQ ID N°: 454, o último necessitado do local alvo miR156.
Preferivelmente um ácido nucleico SPLll útil nos métodos da invenção tem 1, 2, 3, 4 ou mais más combinações no local alvo miR156 ou perda do local alvo do gene miR156. Exemplos de tais ácidos nucleicos SPLl 1 são dados na Figura 31 B. Ainda preferivelmente é um ácido nucleico como representado pela SEQ ID N°: 431, SEQ ID 440 e SEQ ID N°: 454.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLll necessitam ser os ácidos nucleicos de comprimento total, visto que o desempenho dos métodos da invenção não confiam no uso das seqüências de ácido nucleico de comprimento total. De acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas, que compreende a introdução e expressão em uma planta de uma porção de qualquer uma da seqüência dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62.
Uma porção de um ácido nucleico pode ser preparada, por exemplo, pela fabricação de um ou mais anulações ao ácido nucleico. As porções podem ser usadas na forma isolada ou este pode ser fundida a outras seqüências codificadoras (ou não codificadoras) a fim de, por exemplo, produzir uma proteína que combina de diversas atividades. Quando fundido a outras seqüências codificadoras, o polipeptídeo resultante produzido na produção pode ser maior do que predito para a porção de proteína.
As porções úteis nos métodos da invenção codificam um polipeptídeo SPLll como definido neste, e tem substancialmente a mesma atividade biológica como uma seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62. Preferivelmente, a porção é uma porção de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou é uma porção de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62. Preferivelmente a porção é em pelo menos 70, 100, 200, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000 de nucleotídeos consecutivos em comprimento, os nucleotídeos consecutivos sendo de qualquer uma da seqüência dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62. Preferivelmente a porção codifica em pelo menos um domínio SBP. Mais preferivelmente a porção é uma porção do ácido nucleico da SEQ ID N°: 427. Preferivelmente, a porção codifica uma seqüência de aminoácido o qual quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como um descrito na Figura 29, os grupos com o grupo de polipeptídeos SPLll que compreendem a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 428 (AtSPLll) antes do que com qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é um ácido nucleico capaz de hibridizar, sob condições de estringência reduzida, preferivelmente sob condições estringentes, com um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll como definido neste, ou com uma porção como definido neste.
De acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas, que compreende a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico capaz da hidridização a qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou que compreende a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma da seqüência dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62.
A hibridização da seqüências útil nos métodos da invenção codificam um polipeptídeo SPLll como definido neste, e tem substancialmente a mesma atividade biológica como uma seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62. Preferivelmente, a hidridização da seqüência é capaz de hibridizar a qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou a uma porção de qualquer uma destas seqüências, uma porção sendo como definido acima, ou em que a hidridização da seqüência é capaz de hibridizar a um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62. Mais preferivelmente, a hidridização da seqüência é capaz de hibridizar a um ácido nucleico como representado pela SEQ ID N°: 427 ou a uma porção destes.
Preferivelmente, a hidridização da seqüência codifica uma seqüência de aminoácido o qual quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como um descrito na Figura 29, os grupos com o grupo de polipeptídeos SPLll que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 428 (AtSPLll) antes do que com qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil nos métodos da invenção é uma variante de união que codifica um polipeptídeo SPLl 1 como definido anteriormente acima, a variante de união sendo como definido neste.
De acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas, que compreende a introdução e expressão em uma planta de uma variante de união de qualquer uma da seqüência dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62. Exemplos de variantes de união do gene que codifica a SEQ ID N°: 428 são representados pela SEQ ID N°: 427; SEQ ID N°: 429 e SEQID N°: 430.
As variantes de união preferidas são as variantes de união de um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 427, ou a variante de união de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 428. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante de união, quando usado na construção de uma árvore filogenética, tal como um descrito na Figura 29, os grupos com o grupo de polipeptídeos SPLll que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 428 (AtSPLl 1) antes do que com qualquer outro grupo.
Uma outra variante de ácido nucleico útil na realização de métodos da invenção é uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll como definido anteriormente acima, de uma variante alélica sendo como definido neste.
De acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas, que compreende a introdução e expressão em uma planta de uma variante alélica de qualquer um dos ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou que compreende a introdução e expressão em uma planta de uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou
homólogo de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl do Exemplo 62.
As variantes alélicas úteis nos métodos da presente invenção tem substancialmente a mesma atividade biológica como o polipeptídeo SPLl 1 da SEQ ID N°: 428 e qualquer um dos aminoácidos descrito na Tabela Gl do Exemplo 62. As variantes alélicas existem na natureza, e abrage dentro dos métodos da presente invenção é o uso destes alelos naturais. Preferivelmente, a variante alélica é uma variante alélica da SEQ ID N°: 427 ou uma variante alélica de um ácido nucleico que codifica um ortólogo ou parálogo da SEQ ID N°: 428. Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante alélica, quando usada na construção de uma árvore filogenética, tal como um descrito na Figura 29, os grupos com os polipeptídeos SPLll que compreendem a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 428 (AtSPLll) antes do que com qualquer outro grupo.
A mistura do gene ou evolução direcionada também pode ser usada para gerar as variantes de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLll como definido acima; o termo "a mistura do gene" sendo como definido neste.
De acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas, que compreende a introdução e expressão em uma planta de uma variante de qualquer uma das seqüências de ácidos nucleicos dados na Tabela Gl do Exemplo 62, ou que compreende a introdução e expressão em uma planta de uma variante de um ácido nucleico que codifica um ortólogo, parálogo ou homólogo de qualquer uma da seqüência de aminoácidos dados na Tabela Gl
do Exemplo 62, no qual da variante do ácido nucleico é obtido pela mistura do gene.
Preferivelmente, a seqüência de aminoácido codificada pela variante de ácido nucleico obtido pela mistura do gene, quando usado na construção de uma árvore filogenética tal como um descrito na Figura 29, os grupos com o grupo de polipeptídeos SPLl 1 que compreende a seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 428 (AtSPLl 1) antes do que com qualquer outro grupo.
Além disso, as variantes do ácido nucleico também podem ser
obtidos pela mutagênese direcionada ao local. Diversos métodos são
disponíveis para atingir a mutagênese direcionada ao local, a mais comum
sendo métodos com base em PCR (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds.).
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLll podem ser derivados de qualquer fonte natural ou artificial. O ácido nucleico pode ser modificada a partir da forma natural na composição e/ou ambiente genômico através da consideração da manipulação humana. Preferivelmente o ácido nucleico que codifica o polipeptídeo SPLll é a partir de uma planta, ainda preferivelmente de uma planta dicotiledônia, mais preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente o ácido nucleico é de Arabidopsis thaliana.
O desempenho dos métodos da invenção dão plantas tendo os traços relacionados a produção itensificada. Em particular o desempenho dos métodos da invenção dão plantas tendo a produção aumentada especialmente a produção da semente aumentada relativa às plantas de controle. Os termos "produção" e "produção de semente" são descritos em mais detalhes na seção "definições" neste.
A referência neste à traços relacionados a produção itensificada é deixada significar um aumento na biomassa (peso) de um ou mais partes de uma planta, que pode incluir partes acima do solo (coletáveis) e/ou partes abaixo do solo (coletáveis). Em particular, tais partes colhíveis são semeadas, e o desempenho dos métodos da invenção resultam em plantas tendo a produção aumentada relativa à produção de plantas de controle.
A retirada de milho como um exemplo, uma produção aumentada pode ser manifestada como um ou mais dos seguintes: aumento no número de plantas estabelecido por hectare ou acre, um aumento no número
de espigas por plantas, um aumento no número de séries, number de núcleos
por célula, peso do núcleo, comprimento/diâmetro do núcleo da espiga de mil
pesos, aumento na taxa de enchimento da semente (que é o número de
sementes enchidas dividas pelo número total de sementes e multiplicadas por
100), entre outros. A retirada do arroz como um exemplo, uma produção
aumentada pode manifestar por si própria como um aumento em um ou mais
dos seguintes: número de plantas por hectare ou acre, número de panículas
por planta, número de espigas por panículas, número de flores (florzinhas) por
panícula (que é expressado como uma razão do número de sementes enchidas
no número de panículas primárias), aumento na taxa de enchimento da
semente (que é o número de sementes enchidas dividas pelo número total de
sementes e multiplicadas por 100), aumento em peso de núcleo milhar, entre outros.
A presente invenção fornece um método para a produção aumentada especialmente a produção de semente de plantas, relativa às plantas de controle, que o método compreende uma expressão de modulação, preferivelmente a expressão aumentada em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1 como definido neste.
Visto que as plantas transgênicas de acordo com uma presente invenção tem a produção aumentada, é igualmente que estas plantas exibem uma taxa de desenvolvimento aumentada (durante pelo menos parte de sei cuclo de vida), relativo à taxa de desenvolvimento de plantas de controle em um estágio correspondente em seu ciclo de vida.
A taxa de desenvolvimento aumentada pode ser específica por uma ou mais partes de uma planta (incluindo sementes), ou pode ser por toda parte substancialmente do total da planta. As plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada podem ter um ciclo de vida mais curto. O ciclo de vida de uma planta pode ser levado significar o período necessário para o desenvolvimento a partir da semente madura seca até o estágio onde a planta tem produzido sementes maduras secas, similar ao material de partida. Este ciclo de vida pode ser influenciado pelos fatores tal como vigor precoce, taxa de desenvolvimento, índice de verdor, período e velocidade de florescência do amadurecimento da semente. O aumento na taxa de desenvolvimento pode acontecer em um ou mais estágios no ciclo de vida de uma planta ou durante substancialmente o ciclo de vida total da planta. A taxa de desenvolvimento aumentada durantes os estágios precocemente no ciclo de vida de uma planta pode refletir o vigor itensificado. O aumento na taxa de desenvolvimento pode alterar o ciclo de coleta de uma planta permitindo que as plantas sejam semeadas por último e/ou coletadas mais cedo do que seria possível de outra maneira (um efeito similar pode ser obtido com o período de florescência precoce). Se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, pode permitir a semeadura adicional das sementes das mesmas espécies de plantas (por exemplo semeadura e coletagem de plantas de arroz seguido pela semeadura e coletagem de plantas de arroz adicionais todas dentro de um período de desenvolvimento convencional). Similarmente, se a taxa de desenvolvimento é suficientemente aumentada, pode permitir a semeadura adicional das sementes de espécies de plantas diferentes (por exemplo a semeadura e coletagem de plantas de milho seguidas, por exemplo, pela semeadura e coletagem opcional de soja, batata ou qualquer outra planta adequada). Os períodos adicionais de coletagem a partir do mesmo rizoma no caso de algumas de plantas de cultivo também podem ser possíveis. A alteração do ciclo de coleta de uma planta pode levar a um aumento na produção de biomassa anual por acre (devido a um aumento no número de vezes (dito em um ano) que qualquer planta particular pode ser desenvolvida e coletada). Um aumento na taxa de desenvolvimento também pode permitir para o cultivo de plantas transgênicas em uma área geográfica extensa do que sua contra-parte de tipo selvagem, visto que as limitações territoriais para o desenvolvimento de uma lavoura são freqüentemente determinados pelas
condições ambientais adversas no período do plantio (temporada antecipada)
ou no período de coleta (temporada tardia). Tais condições adversas podem
ser evitadas se o ciclo coletado é encurtado. A taxa de desenvolvimento pode
ser determinado pela derivação de vários parâmetros a partir das curvas de
desenvolvimento, tais parâmetros podem ser: T-Mid (o período de retirada
para as plantas para atingir 50 % de seu tamanho máximo) e T-90 (período de
retirada para as plantas para atingir 90 % de seu tamanho máximo), entre outros.
De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o desempenho dos métodos da invenção dão plantas tendo uma taxa de desenvolvimento aumentada relativas às plantas de controle. Portanto, de acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a taxa de desenvolvimento aumentada das plantas, que o método compreende uma expressão de modulação, preferivelmente a expressão aumentada em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll como definido neste.
Um aumento na produção e/ou taxa de desenvolvimento ocorre se a planta está sob as condições de não tensão ou se a planta é exposta à várias tensões em comparação as plantas de controle. As plantas tipicamente respondem a exposição da tensão pelo desenvolvimento mais lentamente. Em condição de diversa tensão, a planta ainda pode interromper completamente o desenvolvimento. A branda tensão em outras palavras é definida neste como sendo qualquer tensão pelo que uma planta é exposta que não resulta no interromper da planta para desenvolver completamente sem a capacidade para resumir o desenvolvimento. A branda tensão no sentido da invenção leva a uma redução no desenvolvimento das plantas submetidas à tensão de menos do que 40 %, 35 % ou 30 %, preferivelmente menos do que 25 %, 20 % ou 15 %, mais preferivelmente menos do que 14 %, 13 %, 12 %, 11 % ou 10 % ou menos em comparação à planta de controle sob as condições de não tensão. Devido aos avanços nas práticas da agricultura (irrigação, fertilização, tratamentos com pesticidas) diversas tensões não são freqüentemente encontradas nas plantas de controle cultivadas. Como uma conseqüência, o desenvolvimento compromissado induzido pela branda tensão é freqüentemente uma característica indesejável para a agricultura. As tensões brandas são as tensões (mabientais) bióticas e/ou abióticas todos os dias pelo qual uma planta é exposta. As tensões abióticas podem ser devido a aridez ou excesso de água, tensão anaeróbica, tensão ao sal, toxicidade química, tensão oxidativa e temperaturas quentes, frias ou de congelamento. A tensão abiótica pode ser uma tensão osmótica causada por uma tensão à água (particularmente devido a aridez), tensão ao sal, tensão oxidativa ou uma tensão iônica. As tensões bióticas são tipicamente aquelas tensões causadas por patogênios, tal como bactéria, vírus, fungos e insetos.
Em particular, os métodos da presente invenção podem ser realizados sob as condições de não tensão ou sob as condições de branda aridez para dar as plantas tendo a produção aumentada relativa às plantas de controle. Como relatado em Wang et al. (Plant (2003) 218: 1-14), as tensões abióticas levam a uma série de mudanças moleculares, bioquímicas, fisiológicas ou morfológicas que adversamente afetam o desenvolvimento e produtividade da planta. Aridez, temperaturas de salinidade extremas e tensão oxidativa são conhecidos serem interconectados o podem induzir o desenvolvimento e dano celular através dos mecanismos similiares. Rabbani et al. (Plant Physiol (2003) 133: 1755-1767) descreve um alto grau particularmente de "cruzamento" entre tensão à aridez e tensão de alta salinidade. Por exemplo, aridez e/ou salinização são manifestados principalmente como tensão osmótica, resultando no rompimento de homeostase e distribuição de íon na célula. A tensão oxidativa, que freqüentemente acompanha a alta e baixa temperatura, salinidade ou tensão à aridez, pode causar desnaturação de proteínas estruturais e funcionais. Como uma conseqüência, estas diversas tensões ambientais freqüentemente ativam os caminhos de sinalização celular similares e respostas celulares, tal como a produção de proteínas de tensão, super regulação de anti oxidantes, acúmulo de solutos compatíveis e impede o desenvolvimento. O termo condições de "não tensão" como usado neste são aquelas condições ambientais que permitem o ótimo desenvolvimento das plantas. As pessoas habilitadas na técnica são atentas as condições normais do solo e condições climáticas para uma dada localização. As plantas com ótima condições de desenvolvimento, (desenvolvimento sob as condições de não tensão) tipicamente produzido em uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 90 %, 87 %, 85 %, 83 %, 80 %, 77 % ou 75 % da produção média de tal planta em um dado ambiente. A produção média pode ser calculada na base de coleta e/ou temporada. As pessoas habilitadas na técnica são atentas as porduções de rendimento médios de uma lavoura.
O desempenho dos métodos da invenção dão as plantas o desenvolvimento sob as condições de não tensão ou sob a produção das condições de branda aridez aumentada relativa às plantas de controle desenvolvidas sob as condições comparáveis. Portanto, de acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a produção aumentada no desenvolvimento das plantas sob as condições de não tensão ou sob as condições de branda aridez, que o método compreende uma expressão aumentada em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1.
O desempenho dos métodos da invenção dão o desenvolvimento das plantas sob condições de deficiência de nutriente, particularmente sob condições de deficiência de nitrogênio, produção aumentada relativa às plantas de controle desenvolvidas sob as condições comparáveis. Portanto, de acordo com uma presente invenção, aqui é fornecido um método para a produção aumentada no desenvolvimento das plantas sob condições de deficiência de nutriente, que o método compreende uma expressão aumentada em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1. A deficiência de nutriente pode resultar a partir de uma perda ou excesso de nutrientes tal como nitrogênio, fosfatos e outros compostos contendo fósforos, potássio, cálcio, cádmio, magnésio, manganês, ferro e boro, entre outros.
A presente invenção abrange plantas ou partes destas (incluindo sementes) obtidas pelos métodos de acordo com uma presente invenção. As plantas ou partes destas compreendem um transgene de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1 como definido acima.
invenção também fornece as construções genéticas e vetores para facilitar a introdução e/ou expressão em plantas de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLl 1. As construções dos genes podem ser inseridos em vetores, que podem ser comercialmente disponíveis, adequados para a transformação em plantas e adequados para a expressão do gene de interesse nas células transformadas. A invenção também fornece o uso de uma construção do gene como definido neste nos métodos da invenção.
Mais especificamente, a presente invenção fornece uma construção que compreende:
(a) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll como definido acima;
(b) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (a); e opcionalmente
(c) uma seqüência de terminal de transcrição.
Preferivelmente, o ácido nucleico que codifica um
polipeptídeo SPLll é como definido acima. O termo "seqüência de controle" e "seqüência de terminação" são como definidos neste.
As plantas são transformadas com um vetor que compreende qualquer um dos ácidos nucleicos descritos acima. O técnico habilitado está bem atento dos elementos genéticos que devem estar presentes no vetor a fim de transformar sucessivamente, selecionar e propagar as células hospedeiras contendo a seqüência de interesse. A seqüência de interesse é operavelmente ligada a uma ou mais seqüências de controle (em pelo menos a um promotor).
Vantajosamente, qualquer tipo de promotor, se natural ou sintético, pode ser usado para conduzir a expressão da seqüência do ácido nucleico. Um promotor constitutivo é particularmente útil nos métodos. Ver a seção de "Definições" neste para as definições de vários tipos de promotores.
Será claro que a aplicabilidade da presente invenção não é restrita ao ácido nucleico que codifica o polipeptídeo SPLll representado pela SEQ ID N°: 427, ou é a aplicabilidade da invenção restrita a expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo SPLll quando conduzido por um promotor constitutivo.
O promotor constitutivo é preferivelmente um promotor GOS2, preferivelmente um promotor GOS2 de arroz. Ainda preferivelmente o promotor constitutivo é representado por uma seqüência de ácido nucleico substancialmente similar a SEQ ID N°: 476, mais preferivelmente o promotor constitutivo é como representado pela SEQ ID N°: 476. Ver a seção de "Definições" neste ainda pelos exemplos de promotores constitutivos.
Em uma forma de realização alternativa, um promotor específico de semente é usado. O promotor específico de semente é preferivelmente ABA (ácido abcísico) induzível, é preferivelmente o promotor WSIl 8, preferivelmente o WSI18 de arroz. Ainda preferivelmente o promotor constitutivo é representado por uma seqüência de ácido nucleico substancialmente similar a SEQ ID N°: 477. Ver a seção de "Definições" neste ainda pelos exemplos de promotores específicos de sementes.
Deve ser claro que os promotores úteis nos métodos da invenção não são limitados aqueles especificados nas formas de realização anteriormente mencionadas.
Opcionalmente, uma ou mais seqüências terminadoras podem ser usadas na construção introduzida em uma planta. Os elementos reguladores adicionais podem incluir transcripcionais tão bem quanto itensificadores de tradução. Aqueles habilitados na técnica serão atentos as seqüências itensificadoras e terminadoras que podem ser adequadas para o uso na realização da invenção. Uma seqüência íntron também pode ser adicionada à região não traduzida 5' (UTR) ou na seqüência codifícadora para aumentar a quantidade da mensagem madura que acumula no citosol, como descrito na seção de definições. Outra seqüência de controle (além do itensifícador promotor, silenciador, seqüências de íntron, regiões 3'UTR e/ou 5'UTR) pode ser elementos que estabilizam o RNA e/ou proteína. Tais seqüências devem ser conhecidas ou podem ser prontamente obtidas por uma pessoa habilitada na técnica.
As construções genéticas da invenção ainda podem incluir uma origem da seqüência de replicação que é requerida para a manutenção e/ou replicação em um tipo de célula específica. Um exemplo é quando uma construção genética é requerida ser mantida em uma célula bacteriana como um elemento genético epissomal (por exemplo molécula de plasmídeo ou cosmídeo). As origens preferidas de replicação incluem, mas não são limitadas a, a fl-ori e colEl.
Para a detecção da transferência sucessível da seqüência dos ácidos nucleicos como usado nos métodos da invenção e/ou seleção de plantas transgênicas que compreendem estes ácidos nucleicos, é vantajoso o uso de genes marcadores (ou genes repórteres). Portanto, a construção genética pode opcionalmente compreender um gene marcador selecionável. Os marcadores selecionáveis são descritos em mais detalhes na seção de "definições" neste.
É conhecido que na integração transiente ou estável de ácidos nucleicos em células de planta, apenas uma minoria de células absorve o DNA estranho e, se desejado, integra-se a este genoma, dependendo vetor de expressão usado e a técnica de transfecção usada. Para identificar e selecionar estes integrantes, um gene codificador para um marcador selecionável (tal como um descrito acima) é usualmente introduzido nas células hospedeiras junto com o gene de interesse. Estes marcadores podem ser por exemplo usados nos mutantes em que estes genes não são funcionais por, por exemplo, anulação por métodos convencionais. Além disso, as moléculas de ácido nucleico que codificam um marcador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hospedeira no mesmo vetor que compreende a seqüência que codifica os polipeptídeos da invenção ou usados nos métodos da invenção, ou além disso em um vetor separador. As células que foram transfectadas estáveis com o ácido nucleico introduzido podem ser identificadas por exemplo pela seleção (por exemplo, as células que tem integrado os marcadores selecionáveis sobrevivem considerando as outras células mortas). Os genes marcadores podem ser removidos ou taxados de células transgênicas uma vez que estas não são mais necessárias. As técnicas para a remoção do gene marcador são conhecidas na técnica, as técnicas úteis são descritas acima na seção de definições.
A invenção também fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo os traços relacionados a produção itensificada relativas às plantas de controle, que compreende a introdução e expressão em uma planta de qualquer ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll como definido anteriormente acima.
Mais especificamente, a presente invenção fornece um método para a produção de plantas transgênicas tendo os traços aumentados relacionados a produção itensificada, particularmente produção itensificada (semente), que o método compreende:
(i) a introdução e expressão em uma planta ou célula de planta de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo SPLl 1; e
(ii) cultivo da célula de planta sob condições que promovem o o desenvolvimento e crescimento vegetal.
O ácido nucleico de (i) pode ser qualquer um dos ácidos nucleicos capazes que codifica um polipeptídeo SPLl 1 como definido neste.
O ácido nucleico pode ser introduzido diretamente em uma célula de planta ou na planta por si própria (incluindo a introdução em um tecido, orgão ou qualquer outra parte de uma planta). De acordo com uma característica preferida da presente invenção, o ácido nucleico é preferivelmente introduzido em uma planta pela transformação. O termo "transformação" é descrito em mais detalhes na seção "definições" neste.
As células de planta modificadas geneticamente podem ser regeneradas por intermédio de todos os métodos com que os trabalhadores habilitados sejam familiares. Os métodos adequados podem ser observados nas publicações anteriormente mencionadas por S.D. Kung and R. Wu, Potrykus ou Hofgen and Willmitzer.
Geralmente após a transformação, células de plantas ou disposições celulares são selecionados pela presença de um ou mais marcadores que são codificados pelos genes expressíveis às plantas co- transferidos com o gene de interesse, seguido que o material transformado é regenerado em um total da planta. Para selecionar as plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, como uma regra, submetido às condições seletivas de modo que as plantas transformadas podem ser distinguidas de plantas não transformadas. Por exemplo, as sementes obtidas na maneira descrita acima pode ser plantada e, após um período de desenvolvimento inicial, submetido a uma seleção adequada por pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no desenvolvimento das sementes, se apropriado após a esterilização, nas placas ágar usando um agente de seleção adequado de modo que apenas as sementes transformadas pode desenvolver em plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são avaliadas pela presença de um marcador selecionável tal como um descritos acima.
Seguindo a transferência e regeneração de DNA, putativamente as plantas trasnformadas também podem ser avaliadas, por exemplo usando a análise Southern, pela presença do gene de interesse, número de cópia e/ou organização genômica. Alternativamente ou adicionalmente os níveis de expressão de novos DNA introduzidos podem ser monitorados usando a análise Northern e/ou Western, ambas as técnicas sendo bem conhecida às pessoas tendo habilidades comum na técnica.
As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma variedade de meios, tal como pelas técnicas de geração clássica ou propagação clonal. Por exemplo, uma primeira geração de planta transformada (ou TI) pode ser auto produzida e transformantes da segunda geração homozigotos (ou T2) selecionados, e as plantas T2 podem ser então propagadas através de técnicas de geração clássica. Os organismos transformados gerados podem obter uma variedade de formas. Por exemplo, estas podem ser quimeras das células transformadas e células não transformadas; transformantes clonais (por exemplo, todas as células transformadas por conter o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um rizoma transformado enxertado a uma muda não transformada).
A presente invenção claramente estende-se a qualquer célula de planta ou planta produzida por qualquer um dos métodos descritos neste, e por todas as partes das plantas e propagules destes. A presente invenção ainda estende-se para abranger a progênie de uma célula transfectada ou transformada primária, tecido, órgão ou total da planta que foi produzida por qualquer um dos métodos anteriormente mencionados, apenas o requerimento sendo que a progênie exibe as mesmas características genotípicas e/ou fenotípicas como aquelas produzidas pela origem dos métodos de acordo como a invenção.
A invenção também incluem células hospedeiras contendo um
ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo SPLll como definido
anteriormente acima. As células hospedeiras preferidas de acordo como a
invenção são células de planta. As plantas hospedeiras pelos ácidos nucleicos
ou o vetor usado no método de acordo como a invenção, o cassete de
expressão ou construção ou vetor são, à princípio, vantajosamente em todas as
plantas, que são capazes de sintetizar os polipeptídeos usados no método da invenção.
Os métodos da invenção são vantajosamente aplicáveis a qualquer planta. As plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertence a superfamília Viridiplantae, em particular plantas monocotiledônias e dicotiledônias incluindo forragem ou legumes de forragem, plantas ornamentais, lavouras de alimento, árvores ou arbustos. De acordo com uma forma de realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta de cultivo. Exemplos de plantas de cultivo incluem soja, girassol, canola, alfafa, colza, algodão, tomate, batata e tabaco. Ainda preferivelmente, a planta é uma planta mocotiledônia. Exemplos de planta mocotiledônia incluem cana de açúcar. Mais preferivelmente a planta é um cereal. Exemplos de cereais incluem arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
A invenção também estende-se à partes colhíveis de uma planta tal como, mas não limitada a sementes, folhas, frutos, flores, talos, raízes, rizomas, tubérculos e bulbos. A invenção além disso relata os produtos derivados, preferivelmente diretamente derivados, a partir de partes colhíveis de uma tal planta, tal como grânulos ou pós secos, óleo, gordura ou ácidos graxos, amido ou proteínas.
De acordo com uma característica preferida da invenção, a expressão modulada é a expressão aumentada. Os métodos para a expressão aumentada de ácidos nucleicos ou genes, ou produtos dos genes, são bem documentados na técnica e exemplos são fornecidos na seção de definições.
Como mencionado acima, um método preferido para a expressão de modulação (preferivelmente, aumentada) de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll é pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1; entretanto os efeitos da realização do método, isto é intensificação de traços relacionados à produção também podem ser atingidos usando outras técnicas bem conhecidas, incluindo mas não limitada a etiquetagem de ativação de T-DNA, TILLING, recombinação homóloga. Uma descrição desta técnica é fornecida na seção de definições.
A presente invenção também abrange o uso de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLll como descrito neste e o uso destes polipeptídeos SPLll na intensificação de qualquer um dos traços relacionados na produção anteriormente mencionadas em plantas.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLll descritos neste, ou os polipeptídeos SPLl 1 por si mesmos, podem observar o uso nos programas de geração em que um marcador de DNA é identificado, que pode ser geneticamente ligado a um polipeptídeo SPLll que codifica o gene. Os ácidos nucleicos/genes, ou os polipeptídeos SPLll por si mesmos podem ser usados para definir um marcador molecular. Este DNA ou marcador de proteína pode ser então usado nos programas de geração para selecionar as plantas tendo os traços relacionados a produção itensificada como definido anteriormente acima nos métodos da invenção.
As variantes alélicas de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo SPLl l/gene também pode observar o uso em programas de geração assitidos pelos marcadores. Tais programas de geração algumas vezes requerem a introdução de variação alélica pelo tratamento mutagênico das plantas, usando por exemplo mutagênese EMS; alternativamente, o programa pode iniciar com uma coleção de variantes alélicas denominadas origem "natural" causadas não intencionalmente. A identificação das variantes alélicas então acontece, por exemplo, por PCR. Este é seguido pela etapa para a seleção de variantes alélicas superiores da seqüência em questão e que dão a produção aumentada. A seleção é tipicamente realizada pelo monitoramento do desempenho do desenvolvimento de plantas contendo diferentes variantes alélicas da seqüência em questão. O desempenho do desenvolvimento pode ser monitorado em uma estufa ou no campo. Ainda as estapas opcionais incluem o cruzamento de plantas em que a variante alélica superior foi identificada com uma outra planta. Esta pode ser usada, por exemplo, para fabricar uma combinação de características fenotípicas de interesse.
Os ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos SPLll também podem ser usados como sondas para o mapeamento genético e físico dos genes que estes são uma parte de, e como marcadores para os traços ligados aqueles genes. Tal informação pode ser útil na geração de plantas a fim de desenvolver as linhas com fenotipos desejados. Tal uso de polipeptídeo SPLll que codifica os ácidos nucleicos requer apenas uma seqüência de ácido nucleico em pelo menos 15 nucleotídeos em comprimento. O polipeptídeo SPLl 1 que codifica os ácidos nucleicos podem ser usados como restrição dos marcadores de poliformismo do comprimento do fragmento (RFLP). Southern blots (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) do DNA genômico de planta digerindo a restrição e podem ser sondados com os ácidos nucleicos que codificam o SPLl 1. Os padrões de ligação resultantes podem ser então submetidos à análise genética usando os programas de computador tal como MapMaker (Lander et.al. (1987) Genomics 1: 174-181) a fim de construir um mapa genético. Além disso, os ácidos nucleicos podem ser usado para sondar Southern blots contendo a restrição do DNA genômico tratado por endonuclease de uma série de indivíduos que representam a origem e progênie de uma cruzada genética definida. A segregação do polimorfismo do DNA é notado e usado para calcular a posição do ácido nucleico que codifica o polipeptídeo SPLll no mapa genético previamente obtido usando esta população (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331).
A produção e uso de sondas derivadas de genes de plantas para o uso no mapeamento genético é descrito em Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Repórter 4: 37-41. As publicações numerosas descrevem o mapeamento genético de clones de cDNA específicos usando a metodologia resumida acima ou variações destes. Por exemplo, as populações intercruzadas F2, populações cruzadas novamente, aleatoriamente popualções auxiliares, linhas isogênicas próximas, e outras séries de indivíduos podem ser usados para o mapeamento. Tais metodologias são bem conhecidas àqueles habilitados na técnica.
As sondas de ácido nucleico também podem ser usadas para o mapeamento físico (isto é, disposição das seqüências em mapas físicos; ver Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346, e refer-encias citadas neste).
Em uma outra forma de realização, as sondas de ácido nucleico podem ser usadas em fluorescência direta no mapeamento de hibridização in situ (FISH) (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Embora os métodos correntes do mapeamento FISH favorecem o uso de amplos clones (diversos kb à diversos centos de kb; ver Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), melhoramento na sensibilidade pode permitir o desempenho do mapeamento FISH usando sondas mais curtas.
Uma variedade de métodos com base na amplificação do ácido nucleico para o mapeamento físico e genético pode ser realizado usando os ácidos nucleicos. Exemplos incluem amplificação específica por alelos (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), polimorfismo de fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et al. (1993) Genomics 16:325-332), ligação específica por alelo (Landegren et al. (1988) Science 241:1077-1080), reações de extensão de nucleotídeo (Sokolov (1990) Nucleic Acids Res. 18:3671), mapeamento híbrida de radiação (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) e mapeamento de Happy (Dear and Cook (1989) Nucleic Acids Res. 17:6795-6807). por estes métodos, a seqüência de um ácido nucleico é usado para projetar e produzir pares imiciadores para o uso na reação de amplificação ou nas reações de extensão do iniciador. o projeto de tais iniciadores é bem conhecido àqueles habilitados na técnica. Em métodos que utilizam o mapeamento genético com base em PCR, pode ser necessário para identificar as diferenças da seqüência de DNA entre os padrões do mapeamento cruzado na região correspondente ao exemplo da seqüência de ácido nucleico. Este, entretanto, não é no geral necessário para os métodos do mapeamento.
Os métodos de acordo com uma presente invenção resultam nas plantas tendo os traços relacionados a produção itensificada, como descrito anteriormente mencionadas. Estes traços também podem ser combinados com outros traços vantajosamente econômico, tal como ainda traços que intensificam a produção adicional, tolerância a outras tensões bióticas e abióticas, traços que modificam várias características arquiteturais e/ou características fisiológicas e/ou bioquímicas.
A presente invenção agora será descrita em referência aos aseguintes itens:
1. Um método para a intensificação dos traços relacionados à produção em plantas relativos às plantas de controle, que compreende uma expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica um
polipeptídeo LBD, em que o dito polipeptídeo LBD compreende um domínio DUF206.
2. O método de acordo com o item 1, em que o dito polipeptídeo LBD compreende um ou mais dos seguintes motivos: (i) Motivo 1: MSCNGCRXLRKGCX (SEQ ID N°: 5),
(ii) Motivo 2: QXXATXFXAKFXGR (SEQ ID N°: 6),
(iii) Motivo 3: FXSLLXEAXG (SEQ ID N°: 7)
3. O método de acordo com o item 1 ou 2, em que a dita expressão modulada é efetuada pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD.
4. O método de acordo com qualquer item antecedente, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD que codifica qualquer uma das proteínas listadas na Tabela Al ou é uma porção de um tal ácido nucleico, ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico.
5. O método de acordo com qualquer item antecedente, em que a dita seqüência de ácido nucleico codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dados na Tabela Al.
6. O método de acordo com qualquer item antecedente, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende a produção aumentada, preferivelmente a biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle.
7. O método de acordo com qualquer um dos itens 1 a 6, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob as condições de não tensão.
8. O método de acordo com qualquer um dos itens 1 a 6, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob condições de deficiência de nitrogênio.
9. O método de acordo com qualquer um dos itens 3 a 8, em que o dito ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor constitutivo, preferivelmente a um promotor GOS2, mais preferivelmente a um promotor GOS2 de arroz.
10. O método de acordo com qualquer item antecedente, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta dicotiledônia, ainda preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente do gênero Arabidopsis, mais preferivelmente de Arabidopsis thaliana.
11. Uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende qualquer uma das seguintes características:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 69;
(ii) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar a qualquer uma das SEQ ID N°s dados no (i);
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à SEQ ID N°: 70;
(iv) um ácido nucleico capaz da hibridização sob condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dados no (i), (ii) ou (iii) acima.
12. Um polipeptídeo isolado que compreende:
(i) uma seqüência de aminoácido tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % da identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 70.
(ii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácidos
dados no (i).
13. Plantas ou partes destas, incluindo sementes, obtidas pelo método de acordo com qualquer item antecedente, em que as ditas plantas ou partes destas compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo LBD.
14. Construção que compreende:
(i) ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido nos itens 1, 2 ou 12;
(ii) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (a); e opcionalmente
(iii) uma seqüência de terminal de transcrição.
15. Construção de acordo com o item 14, em que uma dita seqüência de controle é um promotor constitutivo, preferivelmente um promotor GOS2, mais preferivelmente um promotor GOS2 de arroz.
16. Uso de uma construção de acordo com o item 14 ou 15 em um método para a fabricação das plantas tendo a produção aumentada, particularmente biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle.
17. Planta, parte da planta ou célula da planta transformada como uma construção de acordo com o item 14 ou 15.
18. Método para a produção de uma planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente a biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle, que compreende:
(i) a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido no item 1, 2 ou 12; e
(ii) cultivo da célula de planta sob condições que promovem o desenvolvimento e crescimento vegetal.
19. Planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente a biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente, relativas às plantas de controle, resultando da expressão aumentada de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido no item 1, 2 ou 12, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
20. Planta transgênica de acordo com o item 13, 17 ou 19, ou uma célula da planta transgênica derivada deste, em que a dita planta é uma planta de cultivo ou uma monocotiledônia ou um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
21. Partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 19, em que as ditas partes colhíveis são preferivelmente biomassa de broto e/ou sementes.
22. Produtos derivados de uma planta de acordo com o item 19 e/ou de partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 20.
23. Uso de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD na produção aumentada, particularmente na produção aumentada de semente e/ou biomassa de broto em plantas, relativas às plantas de controle.
24. Um método para a intensificação dos traços relacionados
de produção em plantas relativos às plantas de controle, que compreende uma
expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica um
polipeptídeo JMJC, em que o dito polipeptídeo JMJC compreende um domínio JmjC.
25. O método de acordo com o item 24 em que o dito domínio JmjC é representado pela seqüência tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, ou mais identidades de seqüências a:
(i) SEQ ID N0: 78; e/ou
(ii) um dos domínios JmjC compreendidos nos polipeptídeos JMJC representado pela SEQ ID N°: 84; SEQ ID N°: 86; SEQ ID N°: 96; SEQ ID N°: 98; SEQ ID N°: 104; SEQ ID N°: 108; SEQ ID N°: 110; SEQ ID N°: 112; SEQ ID N°: 114; SEQ ID N°: 116; SEQ ID N°: 118; SEQ ID N°: 120; SEQ ID N°: 122; SEQ ID N°: 124; SEQ ID N°: 128; SEQ ID N°: 130;
SEQ ID N°: 132; e SEQ ID N°: 134, aqueles aminoácidos coordenados são dados na Tabela B4
26. O método de acordo com o item 24 e item 25, em que o dito polipeptídeo JMJC que compreende um motivo tendo uma ordem 10
aumentada de preferência em pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75
%, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou mais identidades de seqüências de qualquer uma das:
(i) SEQ ID N°: 79,
(ii) SEQID N0: 80,
(iii) SEQ ID N°: 81,
(iv) SEQ ID N°: 82;
27. O método de acordo com o item 24 ou 26, em que a dita expressão modulada é efetuada pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC.
28. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 27, em que a dito expressão de modulação é um aumento na expressão.
29. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 28,
em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC que codifica
qualquer uma das proteínas listadas na Tabela Bl ou é uma porção de um tal
ácido nucleico, ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico.
30. O método de acordo com um dos itens 24 a 29, em que a dita seqüência de ácido nucleico codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dadas na Tabela B1.
31. O método de acordo com o item 30, em que o dito ácido nucleico codifica a SEQ ID N°: 74.
32. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 31, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende a produção aumentada, preferivelmente índice de colheita aumentada e/ou produção de semente relativas às plantas de controle.
33. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 32, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende o vigor da planta precocemente relativas às plantas de controle. 34. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 33, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob as condições de não tensão.
35. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 33, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob brandas condições de desenvolvimento da tensão à aridez.
36. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 33, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob condições de desenvolvimento da deficiência de nitrogênio.
37. O método de acordo com qualquer um dos itens 27 a 36, em que o dito ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor constitutivo, preferivelmente a um promotor GOS2, mais preferivelmente a um promotor GOS2 de arroz.
38. O método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 37, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta dicotiledônia, ainda preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente do gênero Arabidopsis, mais preferivelmente de Arabidopsis thaliana.
39. Plantas ou partes destas, incluindo sementes, obtidas pelo
método de acordo com qualquer um dos itens 24 a 38, em que as ditas plantas
ou partes destas compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo JMJC.
40. Construção que compreende:
(i) ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido nos itens 24 a 26;
(11) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (i); e opcionalmente
(iii) uma seqüência de terminal de transcrição.
41. Construção de acordo com o item 40, em que uma dita seqüência de controle é um promotor constituitivo, preferivelmente um promotor GOS2, mais preferivelmente um promotor GOS2 de arroz.
42. Uso de uma construção de acordo com o item 40 ou 41 em um método para a fabricação das plantas tendo a produção aumentada dos traços relacionados, particularmente o vigor da planta precocemente e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle.
43. Planta, parte da planta ou célula da planta transformada como uma construção de acordo com o item 40 ou 41.
44. Método para a produção de uma planta transgênica tendo a produção aumentada dos traços relacionados, particularmente o vigor da planta precocemente e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle, que compreende:
(ι) a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido no item 24 a 26; e
(11) cultivo da célula de planta sob condições que promovem o desenvolvimento e crescimento vegetal.
45. Planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente o vigor das mudas de plantas aumentadas e/ou produção aumentada de semente, relativas às plantas de controle, resultando da expressão aumentada de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC como definido no item 24 a 26, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
46. Planta transgênica de acordo com o item 39, 43 ou 45, ou uma célula da planta transgênica derivada deste, em que a dita planta é uma planta de cultivo ou uma monocotiledônia ou um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
47. Partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 46, em que as ditas partes colhíveis são preferivelmente a biomassa de broto e/ou sementes.
48. Produtos derivados de uma planta de acordo com o item 46 e/ou de partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 47.
49. Uso de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC na produção aumentada, particularmente na produção aumentada de semente e/ou biomassa de broto em plantas, relativas às plantas de controle.
50. Uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende qualquer uma das seguintes características:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 169;
(n) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar a SEQ ID N°: 169;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80
%, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 170;
(iv) um ácido nucleico capaz da hibridização sob as condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dados no (i), (ii) ou (iii) acima.
51. Uma molécula de polipeptídeo isolado que compreende:
(ι) uma seqüência de aminoácido tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97
%, 98 %, 99 % ou 100 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido dada na SEQID N°: 170;
(ii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácidos
dados no (i).
52. Um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas relativos às plantas de controle, que compreendem uma expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica uma caseína quinase I (CKI) em que o dito CKI é selecionado da SEQ ID Ν°: 174 ou um ortólogo ou parálogo destes.
53. O método de acordo com o item 52, em que a dita expressão modulada é efetuada pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica o o dito polipeptídeo CKI.
54. O método de acordo com o item 52 ou 53, em que o dito ácido nucleico que codifica o dito polipeptídeo CKI é uma porção da SEQ ID N°: 173, ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico.
55. O método de acordo com qualquer um dos itens 52 a 54, em que a dita seqüência de ácido nucleico codifica a SEQ ID N°: 174.
56. O método de acordo com qualquer um dos itens 52 a 55,
em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende o
vigor precoce aumentado e/ou produção aumentada, preferivelmente a
biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle.
57. O método de acordo com qualquer um dos itens 52 a 56, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob as condições de não tensão.
58. O método de acordo com qualquer um dos itens 52 a 56, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob as condições de tensão abiótica.
59. O método de acordo com o item 58, em que as condições de tensão abiótica são selecionados de um ou mais de: conditions de tensão à aridez, condições de tensão ao sal, e condições da deficiência de nitrogênio.
60. O método de acordo com qualquer um dos itens 53 a 59, em que o dito ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor específico por semente.
61. O método de acordo com qualquer um dos itens 53 a 60, em que o dito promotor específico por semente é um promotor WSIl8, preferivelmente a um promotor WSI18 de arroz. 62. O método de acordo com qualquer um dos itens 52 a 61, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI é de origem vegetal.
63. O método de acordo com qualquer um dos itens 52 a 62, em que a dita origem da planta é de preferivelmente uma planta dicotiledônia, ainda preferivelmente da família Solanaceae, mais preferivelmente do gênero Nicotiana tabacum.
64. Plantas ou partes destas, incluindo sementes, obtidas pelo método de acordo com qualquer um dos itens 52 a 63, em que as ditas plantas ou partes destas compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo CKI.
65. Construção que compreende:
(i) ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido no item 52;
(ii) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (a); e opcionalmente
(iii) uma seqüência de terminal de transcrição.
66. Construção de acordo com o item 65, em que uma dita seqüência de controle é um promotor específico de semente, preferivelmente um promotor WSIl 8.
67. Construção de acordo com o item 65, em que um dito promotor específico de semente é um promotor WSIl 8, mais preferivelmente um promotor WSI18 de arroz.
68. Uso de uma construção de acordo com qualquer um dos itens 65 a 67 em um método para a fabricação das plantas tendo a produção dos traços relacionadas aumentadas, particularmente o vigor precoce aumentado, biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle.
69. Planta, parte da planta ou célula da planta transformada como uma construção de acordo com qualquer um dos itens 65 a 67.
70. Método para a produção de uma planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente a biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle, que compreende:
(ι) a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido no item 52; e
(ii) cultivo da célula de planta sob as condições que promovem o desenvolvimento e crescimento vegetal.
71. Planta transgênica tendo a produção dos traços relacionados aumentados, particularmente o vigor precoce aumentado, a biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente, relativas às plantas de controle, resultando da expressão aumentada de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI como definido no item 52, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
72. Planta transgênica de acordo com o item 64, 69 ou 71, ou uma célula da planta transgênica derivada deste, em que a dita planta é uma planta de cultivo ou uma monocotiledônia ou um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
73. Partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 72, em que as ditas partes colhíveis são preferivelmente a biomassa de broto e/ou sementes.
74. Produtos derivados de uma planta de acordo com o item 72 e/ou de partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 73.
75. Uso de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI na produção dos traços relacionadas aumentados, particularmente no aumento de um ou mais do vigor precoce, produção de semente e biomassa de broto em plantas, relativos às plantas de controle.
76. Um método para a intensificação dos traços relacionados de produção, preferivelmente intensificando os traços relacionados à produção de semente em plantas relativas às plantas de controle, que compreende a modulação, preferivelmente a expressão aumentada em uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD), que o polipeptídeo PHDf-HD compreende: (i) um domínio tendo em pelo menos %, 30 «/o, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais da identidade de aminoácidos de seqüência a um domínio de prolongamento-homeodomínio de planta / zíper de leucina como representado pela SEQ ID N°: 233; e (ii) um domínio tendo em pelo menos 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 «/o, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % 0u mais da identidade de aminoácidos de seqüência a um homeodomínio (HD) como representado pela SEQ ID N°: 234, e opcionalmente a seleção pelas plantas tendo os traços relacionados a produção itensificada.
77. O método de acordo com o item 76, em que o dito polipeptídeo PHDf-HD compreende: (i) um domínio PHD como representado por PFAM00628; e (ii) um HD como representado por PFAM00046.
78. O método de acordo com o item 76 ou 77, em que o dito polipeptídeo PHDf-HD, quando usado na construção de uma árvore filogenética HD, tal como um descrito na Figura 13, os grupos com o grupo PHDf-HD dos polipeptídeos que compreendem a seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180, antes do que com qualquer outro grupo HD.
79. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 78, em que o dito polipeptídeo PHDf-HD tem uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 o/o, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências ao polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180 ou qualquer um da seqüência de polipeptídeos dados na Tabela Dl neste. 80. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 79, em que a dita seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD é representado por qualquer uma da seqüência do ácido nucleico SEQ ID N0 dado na Tabela Dl ou uma porção deste, ou uma seqüência capaz de hibridizar com qualquer uma da seqüência dos ácidos nucleicos SEQ ID N0 dados na Tabela Dl.
81. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 80, em que a dita seqüência de ácido nucleico codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma da SEQID N0 dada na Tabela Dl.
82. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 81, em que o dito modulado, preferivelmente a expressão aumentada é efetuada por qualquer um ou mais de: Etiquetagem de ativação de T-DNA, TILLING, ou recombinação homóloga.
83. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 82,
em que a dita expressão aumentada é efetuada pela introdução e expressão em
uma planta de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD.
84. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 83, em que os ditos traços relacionados à produção são os traços relacionados à semente de produção, que compreendem um ou mais de: (i) número aumentado de panícula primária; (ii) peso da semente total aumentado por planta; (iii) número aumentado de sementes (enchidas); (iv) TKW aumentado; ou (v) índice de colheita aumentada.
85. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 84, em que a dita seqüência de ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor constitutivo, preferivelmente a um promotor constitutivo de planta, mais preferivelmente a um promotor GOS2, mais preferivelmente a um promotor GOS2 de arroz.
86. O método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 85, em que a dita seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD é de origem vegetal, preferivelmente a partir de uma planta mocotiledônia, ainda preferivelmente da família Poacae mais preferivelmente do gênero Oiyza, mais preferivelmente de Oryza sativa.
87. Plantas, partes destas (incluindo sementes), ou células de planta obtidas pelo método de acordo com qualquer um dos itens 76 a 86, em que a dita planta, parte ou célula destas compreendem um transgene do ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo PHDf-HD operavelmente ligado a um promotor constitutivo de planta.
88. Construção que compreende:
(i) a seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido em qualquer um dos itens 76 a 81;
(ü) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (i); e opcionalmente
(iii) uma seqüência de terminal de transcrição.
em que em pelo menos uma da seqüência de controle é um promotor constitutivo de planta, preferivelmente um promotor GOS2.
89. Uso de uma construção de acordo com o item 87 em um método para a fabricação das plantas tendo os traços relacionados a produção itensificada relativos às plantas de controle, no qual os traços relacionados a produção itensificada, preferivelmente os traços relacionados à semente da produção itensificada, são um ou mais de: (i) número aumentado de panícula primária; (ii) peso da semente total aumentado por planta; (iii) número aumentado de sementes (enchidas); (iv) TKW aumentado; ou (v) índice de colheita aumentada.
90. Planta, parte da planta ou célula da planta transformada como uma construção de acordo com o item 87 ou 88.
91. O método para a produção de plantas transgênicas tendo os traços relacionados a produção itensificada relativos às plantas de controle, que compreende:
(i) a introdução e expressão em uma planta, parte da planta ou célula de planta, uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido em qualquer um dos itens 76 a 81, sob o controle do promotor constitutivo de planta; e
(ii) cultivo da célula de planta sob as condições que promovem o desenvolvimento e crescimento vegetal.
92. Planta transgênica tendo os traços relacionados a produção itensifícada, preferivelmente os traços relacionados à semente da produção itensifícada, relativos às plantas de controle, resultando da modulação, preferivelmente a expressão aumentada de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido em qualquer um dos itens 76 a 81, operavelmente ligado a um promotor constitutivo de planta, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
93. Planta transgênica de acordo com o item 87, 90 ou 92, em
que a dita planta é uma planta de cultivo ou uma monocotiledônia ou um
cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e
aveias, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
94. Partes colhíveis que compreendem uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD de uma planta de acordo com o item 93, em que as ditas partes colhíveis são preferivelmente sementes.
95. Produtos derivados de uma planta de acordo com o item 93 e/ou de partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 94.
96. Uso de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como definido em qualquer um dos itens 76 a 81 em intensificação de traços relacionados à produção em plantas, preferivelmente na intensificação dos traços relacionados à semente da produção, que compreende um ou mais de: (i) número aumentado de panículas primárias; (ii) peso da semente total aumentado por planta; (iii) número aumentado de
sementes (enchidas); (iv) TKW aumentado; ou (v) índice de colheita aumentada.
97. Uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende qualquer uma das seguintes características:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 242;
(ü) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar a SEQ ID N°: 242;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 «/o, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 243;
(iv) um ácido nucleico capaz da hibridização sob as condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dados no (i), (ii) ou (iii) acima.
98. Uma molécula de polipeptídeo isolado que compreende:
(i) uma seqüência de aminoácido tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97
%, 98 %, 99 % ou 100 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 243;
(ii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácidos
dados no (i).
99. Um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas relativas às plantas de controle, que compreendem uma expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11, em que o dito polipeptídeo semelhante ao bHLH-11 compreende um Domínio Hélice-Laço-Hélice.
100. O método de acordo com o item 99, em que o dito polipeptídeo semelhante ao bHLH-11 compreende um ou mais dos seguintes motivos:
(i) Motivo 1 (SEQ ID N°: 246);
(ii) Motivo 2 (SEQ ID N°: 247);
(iii) Motivo 3 (SEQ ID N°: 248);
(iv) Motivo 4 (SEQ ID N°: 249);
(v) Motivo 5 (SEQ ID N°: 250);
(vi) Motivo 6 (SEQ ID N°: 251);
(vii) Motivo 7 (SEQ ID N°: 252).
101. O método de acordo com o item 99 ou 100, em que a dita expressão modulada é efetuada pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11.
102. O método de acordo com qualquer um dos itens 99 a 101, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11 que codifica qualquer uma das proteínas listadas na Tabela El ou é uma porção de um tal ácido nucleico, ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico.
103. O método de acordo com qualquer um dos itens 99 a 102, em que a dita seqüência de ácido nucleico codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dadas na Tabela El.
104. O método de acordo com qualquer um dos itens 99 a 103, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende a produção aumentada, preferivelmente produção aumentada de semente relativos às plantas de controle.
105. O método de acordo com qualquer um dos itens 99 a 104, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob as condições de não tensão.
106. O método de acordo com qualquer um dos itens 101 a 105, em que o dito ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor constitutivo, preferivelmente a um promotor GOS2, mais preferivelmente a um promotor GOS2 de arroz.
107. O método de acordo com qualquer um dos itens 99 a 106,
em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao
bHLH-11 é de origem vegetal, preferivelmente a partir de uma planta
mocotiledônia, ainda preferivelmente da família Poaceae, mais
preferivelmente do gênero Triticum, mais preferivelmente de Triticum aestivum.
108. Plantas ou partes destas, incluindo sementes, obtidas pelo método de acordo com qualquer um dos itens 99 a 107, em que as ditas plantas ou partes destas compreende um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11.
109. Construção que compreende:
(i) ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11 como definido nos itens 99 ou 100;
(ü) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (i); e opcionalmente
(iii) uma seqüência de terminal de transcrição.
110. Construção de acordo com o item 109, em que uma dita seqüência de controle é um promotor constitutivo, preferivelmente um promotor GOS2, mais preferivelmente um promotor GOS2 de arroz.
111. Uso de uma construção de acordo com o item 109 ou 110
em um método para a fabricação das plantas tendo a produção aumentada,
particularmente a produção aumentada de semente relativas às plantas de controle.
112. Planta, parte da planta ou célula da planta transformada como uma construção de acordo com o item 109 ou 110.
113. Método para a produção de uma planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente a produção aumentada de semente relativas às plantas de controle, que compreende: (i) a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11 como definido no item 99 ou 100; e
(ii) cultivo da célula de planta sob as condições que promovem o desenvolvimento e crescimento vegetal.
114. Planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente a produção aumentada de semente, relativas às plantas de controle, resultando da expressão modulada de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11 como definido no item 99 ou 100, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
115. Planta transgênica de acordo com o item 108, 112 ou 114, ou uma célula da planta transgênica derivada deste, em que a dita planta é uma planta de cultivo ou uma monocotiledônia ou um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo, espécie de trigo, espelta, secale, einkorn, teff, milo e aveias.
116. Partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 115, em que as ditas partes colhíveis são preferivelmente sementes.
117. Produtos derivados de uma planta de acordo com o item 115 e/ou de partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 116.
118. Uso de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante ao bHLH-11 na produção aumentada, particularmente na produção aumentada de semente em plantas, relativos às plantas de controle.
119. Um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas relativos às plantas de controle, que compreende uma expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica um ASR, em que o dito ASR é representado pela SEQ ID N°: 397 ou um ortólogo ou parálogo destes.
120. O método de acordo com o item 119, em que a dita expressão modulada é efetuada pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica o dito polipeptídeo ASR.
121. O método de acordo com o item 119 ou 120, em que o dito ácido nucleico que codifica o dito polipeptídeo ASR é uma porção da
SEQ ID N°: 396, ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico.
122. O método de acordo com qualquer um dos itens 119 a
121, em que a dita seqüência de ácido nucleico codifica a SEQ ID N°: 397, ou um ortólogo ou parálogo destes.
123. O método de acordo com qualquer um dos itens 119 a
122, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende a produção aumentada, preferivelmente a produção aumentada de semente relativas às plantas de controle.
124. O método de acordo com qualquer um dos itens 119 a
123, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidas sob as condições de não tensão.
125. O método de acordo com qualquer um dos itens 120 a
124, em que o dito ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor constitutivo, preferivelmente a um promotor GOS2, mais preferivelmente a um promotor GOS2 de arroz.
126. O método de acordo com qualquer um dos itens 119 a
125, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta dicotiledônia, ainda preferivelmente da família Poaceae, mais preferivelmente do gênero Oryza, mais preferivelmente de Oryza sativa.
127. Plantas ou partes destas, incluindo sementes, obtidas pelo método de acordo com qualquer um dos itens 119 a 126, em que as ditas plantas ou partes destas compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo ASR. 128. Construção que compreende:
(i) ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido no item 119 ou qualquer um da SEQ ID N°: 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413, 415 e 417;;
(ii) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (a); e opcionalmente
(iii) uma seqüência de terminal de transcrição.
129. Construção de acordo com o item 128, em que uma dita seqüência de controle é um promotor constitutivo, preferivelmente um promotor GOS2, mais preferivelmente um promotor GOS2 de arroz.
130. Uso de uma construção de acordo com qualquer um dos itens 128 ou 129 em um método para a fabricação das plantas tendo a produção dos traços relacionadas aumentadas, particularmente a produção aumentada de semente relativos às plantas de controle.
131. Planta, parte da planta ou célula da planta transformada como uma construção de acordo com qualquer um dos itens 128 ou 129.
132. Método para a produção de uma planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente a biomassa aumentada e/ou produção aumentada de semente relativas às plantas de controle, que compreende:
(i) a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido no item 119; e
(ii) cultivo da célula de planta sob as condições que promovem o desenvolvimento e crescimento vegetal.
133. Planta transgênica tendo a produção dos traços relacionados aumentados, particularmente a produção aumentada de semente, relativos às plantas de controle, resultando da expressão aumentada de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR como definido no item 119, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
134. Planta transgênica de acordo com o item 127, 131 ou 133, ou uma célula da planta transgênica derivada deste, em que a dita planta é uma planta de cultivo ou uma monocotiledônia ou um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
135. Partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 134, em que as ditas partes colhíveis são preferivelmente sementes.
136. Produtos derivados de uma planta de acordo com o item 134 e/ou de partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 135.
137. Uso de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR nos traços relacionados à produção aumentada, particularmente na produção aumentada de semente em plantas, relativos às plantas de controle.
138. Uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende qualquer uma das seguintes características:
(i) um ácido nucleico representado pela qualquer um da SEQ ID N°: 401, 403, 405, 407; 409, 411, 413, 415 e 417;
(ii) o complemento de um ácido nucleico representado pela qualquer um da SEQ ID N°: 401, 403, 405, 407, 409, 411,413,415e417;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido representada pela qualquer um da SEQ ID N°: 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418.
139. Um polipeptídeo isolado que compreende:
(i) uma seqüência de aminoácido representada pela qualquer um da SEQ ID N°: 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418;
(ii) uma seqüência de aminoácido tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido representado por qualquer uma da SEQ ID N°: 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418. (iii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácidos dados no (i) ou (ii) acima.
140. Um método para a intensificação dos traços relacionados de produção em plantas relativos às plantas de controle, que compreende uma expressão de modulação em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1, em que o dito polipeptídeo SPLll compreende um domínio SBP tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 % ou mais identidades de seqüências a qualquer uma das SEQ ID N°s: 456 a SEQ ID N°: 468 e SEQ ID N°: 478.
141. O método de acordo com o item 140 em que o dito polipeptídeo SPLll em adição ao domínio SBP compreende qualquer um ou mais dos seguintes motivos conservados:
(i) Motivo 1 como representado pela SEQ ID N°: 469 em que qualquer substituição de aminoácido conservativo e/ou 1 ou 2 substituição não conservativa são permitidas;
(ii) Motivo 2 como representado pela SEQ ID N°: 470 em que qualquer mudança é permitida, fornecida que em pelo menos 4 aminoácidos tem uma cadeia secundária polar, preferivelmente serina ou treonina, e fornecido que o domínio é localizado na extremidade do terminal N do domínio SBP;
(iii) Motivo 3 como representado pela SEQ ID: 471 em que 1 ou 2 más combinações são permitidas;
(iv) Motivo 4 como representado pela SEQ ID: 472 em que 1, 2 ou 3 más combinações são permitidas.
142. O método de acordo com o item 140 ou 141, em que a dita expressão modulada é efetuada pela introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll como definido no item 140 ou 141.
143. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 142, em que a dita expressão modulada é a expressão aumentada.
144. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a
143, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll que codifica qualquer uma das proteínas listadas na Tabela Gl ou é uma porção de um tal ácido nucleico, ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico.
145. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a
144, em que a dita seqüência de ácido nucleico codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dados na Tabela Gl.
146. O método de acordo com o item 145, em que o dito ácido nucleico codifica a SEQ ID N0: 428.
147. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a
146, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende a produção aumentada, preferivelmente o peso da semente total aumentado, número de sementes enchidas, número de sementes ou florzinhas por panícula, peso de núcleo milhar, taxa de enchimento da semente, e/ou índice de colheita relativos às plantas de controle.
148. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a
147, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada compreende o vigor vegetal (mudas) precocemente relativos às plantas de controle.
149. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 147, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob as condições de não tensão.
150. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 147, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob brandas condições de desenvolvimento da tensão à aridez.
151. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 147, em que os ditos traços relacionados a produção itensificada são obtidos sob as condições de desenvolvimento da deficiência de nitrogênio. 152. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 151, em que o dito ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor constitutivo, preferivelmente a um promotor GOS2, mais preferivelmente a um promotor GOS2 de arroz.
153. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 151, em que o dito ácido nucleico é operavelmente ligado a um promotor específico de semente, preferivelmente a um promotor WSIl 8, mais preferivelmente a um promotor WSIl 8 de arroz.
154. O método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 153, em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1 é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta dicotiledônia, ainda preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente do gênero Arabidopsis, mais preferivelmente de Arabidopsis thaliana.
155. Plantas ou partes destas, incluindo sementes, obtidas pelo método de acordo com qualquer um dos itens 140 a 154, em que as ditas plantas ou partes destas compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo SPLl 1.
156. Uma molécula de ácido nucleico isolada que compreende:
(i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 448;
(ii) o complemento de um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 448;
(iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 449 e tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80
%, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à SEQ ID N°: 465:
S YCQVEGCRTDLS S AKDYHRKHRVCEPHSKAPKVVVA GLERRFCQQC SRFHG LAEFDQKKKSCRRRLNDHNARRRKPQPEAL;
(iv) um ácido nucleico que hidrodiza sob as condições estringentes à SEQ ID N°: 448.
157. Um polipeptídeo isolado que compreende:
(i) uma seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID
N°: 449;
(ü) uma seqüência de aminoácido tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 449 e tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüências à SEQ ID N°: 465:
S YCQ VEGCRTDL S S AKD YHRKHRVCEPHSKAPKV V VA GLERRFCQQC SRFHGL AEFDQKKKSCRRRLNDHNARRRKPQPE AL.
(iii) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácidos dados no (i) ou (ii) acima.
158. Construção que compreende:
(i) ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1;
(ii) uma ou mais seqüências de controle capazes da expressão de condução da seqüência do ácido nucleico de (i); e opcionalmente
(iii) uma seqüência de terminal de transcrição
159. Construção de acordo com o item 158 em que o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll é um ácido nucleico de acordo com o item 156.
160. Construção de acordo com o item 158 ou 159 em que uma dita seqüência de controle é um promotor constitutivo, preferivelmente um promotor GOS2, mais preferivelmente um promotor GOS2 de arroz.
161. Construção de acordo com o item 158 ou 159 em que uma dita seqüência de controle é um promotor específico de semente, preferivelmente um promotor WSI18, mais preferivelmente um promotor WSI18 de arroz.
162. Uso de uma construção de acordo com o item 158 to 161 em um método para a fabricação das plantas tendo a produção aumentada dos traços relacionados; particularmente a produção aumentada de semente relativos às plantas de controle e/ou vigor de mudas ou plantas precocemente.
163. Planta, parte da planta ou célula da planta transformada como uma construção de acordo com o item 158 a 161.
164. Método para a produção de uma planta transgênica tendo a produção aumentada dos traços relacionados, particularmente a produção aumentada de semente e/ou vigor de mudas ou plantas precocemente relativos às plantas de controle, que compreende:
(i) a introdução e expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLl 1; e
(ii) cultivo da célula de planta sob as condições que promovem o desenvolvimento e crescimento vegetal.
165. Planta transgênica tendo a produção aumentada, particularmente o vigor das mudas de plantas aumentadas e/ou produção aumentada de semente, relativos às plantas de controle, resultando da expressão aumentada de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo
SPLl 1, ou uma célula da planta transgênica derivada da dita planta transgênica.
166. Planta transgênica de acordo com o item 155, 163 ou 165, ou uma célula da planta transgênica derivada deste, em que a dita planta é uma planta de cultivo dicotiledônia tal como soja, algodão ou canola ou uma planta de cultivo monocotiledônia ou um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
167. Partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 166, em que as ditas partes colhíveis são preferivelmente biomassa de broto, flores e/ou sementes.
168. Produtos derivados de uma planta de acordo com o item 166 e/ou de partes colhíveis de uma planta de acordo com o item 167.
169. Uso de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll na produção aumentada, particularmente na produção aumentada de semente e/ou biomassa de broto em plantas, relativos às plantas de controle. Descrição das figuras
A presente invenção será descrita com referência às seguintes figuras em que:
I. Domínio LOB que compreende a proteína (LOB: Fronteiras orgânicas laterais)
Figura 1 representa uma seqüência da SEQ ID N°: 2, com o domínio DUF260 mostrado em negrito, os motivos conservados 1, 2 e 3 são sublinhados e os resíduos Cys conservados (Motivo da SEQ ID N°: 9) são mostrados em itálico.
Figura 2 representa um alinhamento múltiplo da seqüências de várias proteínas LBD úteis nos métodos da presente invenção.
Figura 3 mostra uma árvore filogenética de classe II e classe I das proteínas LBD. A seqüência da SEQ ID N°: 2 é representada pela AtLBD37.
Figura 4 representa o vetor binário para a expressão aumentada na Oryza sativa de um ácido nucleico que codifica LBD sob o controle de um promotor GOS2 de arroz (pGOS2)
Figura 5 detalha os exemplos das seqüências LBD úteis na realização de métodos de acordo com uma presente invenção. II. Polipeptídeo JMJC (JUMONJI-C)
Figura 6 representa uma seqüência de aminoácido e estrutura de domínio da SEQ ID N°: 74. Motivos conservados e domínios são indicados. O domínio JmjC é indicado em negrito. Motivos conservados da SEQ ID Ν°: 79, SEQ ID N0: 80 e SEQ ID Ν°: 81 são indicados por retângulos de linha simples, duplos e triplos respectivamente. Sublinhados são os resíduos de aminoácidos T (Treonina) e K (Lisina) que tipicamente participam na coordenação de 2-Oxogutarato. A letra H indica o resíduo de aminoácido de Histidina que coordena o íon ferroso.
Figura 7 representa um alinhamento múltiplo de proteínas JMJC. A origem da proteína é indicada pelos dois dígitos alfa numéricos no nome, At: Arabidopsis thaliana, Pp: Populus trichocarpa, Os: Oryza sativa, Ot: streococcus tauri, Ce: Caenorhabditis elegans, Hs: Homo sapiens. A posição dos resíduos de aminoácidos conservados e domínios correspondentes aqueles descritos na Figura 6 é indicado. Uma seqüência de consenso é dada. Os aminoácidos altamente conservados nas seqüências de consenso são dados; espaços em branco representam qualquer aminoácido.
Figura 8 mostra uma árvore filogenética de polipeptídeos JMJC. A seta mostra a SEQ ID N°: 74. Outros polipeptídeos JMJC são nomeados usando o Número de Acessão Genbank. O grupo I (GI) compreende as proteínas de origem vegetal; o grupo II (GII) compreende as proteínas de origem não vegetal.
Figura 9 representa o vetor binário para a expressão aumentada em Oryza sativa da SEQ ID N0: 73 sob o controle de um promotor GOS2 de arroz (pGOS2).
Figura 10 detalha os exemplos das seqüências JMJC úteis na realização de métodos de acordo com uma presente invenção. III. Caseína de quinase I
Figura 11 representa o vetor binário para a expressão aumentada em Oryza sativa de um ácido nucleico que codifica GRP sob o controle de um promotor WSIl8 de arroz (pWS118::GRP)
Figura 12 detalha os exemplos das seqüências GRP úteis na realização de métodos de acordo com uma presente invenção. IV. Polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD)
Figura 13 representa uma árvore de ligação próxima construída após um alinhamento de todos os fatores de transcrição pertencentes à família HD (baixados a partir dos bancos de dados TFDB de arroz hospedado no servidor da University of Potsdam) e todos da seqüência de polipeptídeos da Tabela Dl (quando o comprimento total), realizado usando o algoritmo Clustal (1,83) do alinhamento progressivo, usando valores default. O grupo de interesse, que compreende os dois parálogos de arroz (SEQ ID N°: 180 ou 0s02g05450.1, e a SEQ ID N°: 202 ou 0s06gl2400.1) foram circulados. Qualquer polipeptídeo diminuído dentro deste grupo HD (após uma nova etapa de alinhamento múltiplo como descrito anteriomente acima) é considerado ser útil na realização de métodos da invenção como descrito neste.
Figura 14 representa um desenho de um polipeptídeo PHDf- HD como representado pela SEQ ID N°: 180, que compreende uma ou mais das seguintes características: um sinal de localização nuclear predito (NLS), um zíper de leucina (ZIP), um dedo PHD (PHDf, Pfam00628), uma extensão ácida, duas extensões básicas, um homeodomínio (HD, Pfam00046).
Figura 15 mostra os logotipos da seqüência do homeodomínio (HD) dos polipeptídeos PHDf-HD da Tabela Dl, onde a altura total das pilhas indicam uma conservação de seqüência em que posição, enquanto a altura dos símbolos dentro da pilha indica a freqüência relativa de cada amino ou ácido nucleico em que posição. O HD como representado pela SEQ ID N°: 234, e compreendido na SEQ ID N°: 180, é de acordo com um logotipo da seqüência como representado nesta Figura.
Figura 16 mostra a produção dos gráficos do algoritmo COILS que prediz os dois domínios do espiral enrolado na metade do terminal N do polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180. O eixo X representa as coordenadas do resíduo de aminoácido, a probabilidade do eixo Y (variando de 0 a 1) que um domínio de espiral enrolado está presente, e as três linhas, as três janelas (14, 21, 28) examinadas.
Figura 17 mostra um alinhamento da seqüência múltipla do CLUSTAL W (1,83) dos polipeptídeos PHDf-HD a partir da Tabela Dl (quando o comprimento total), onde um número de características são identificadas. A partir do terminal N ao terminal C dos polipeptídeos são: (i) um sinal de localização nuclear predito (NLS); (ii) um zíper de leucina (ZIP), com quatro heptads (em compartimentos, em que usualmente uma leucina (ocasionalmente uma isoleucina, uma valina, ou uma metionina) aparece a cada sétimo aminoácido); (iii) um dedo PHD (PHDf), com o C4HC3 típico (quatro cisteínas, uma histidina, três cisteínas) com um espaçamento de cisteína característico; (iv) uma extensão ácida (rico em aminoácidos ácidos D e E); (v) extensões básicas (rica em aminoácidos básicos K e R); (vi) um homeodomínio (HD).
Figura 18 mostra o vetor binário para o modulado, preferivelmente a expressão aumentada em Oryza sativa de uma seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD sob o controle de um promotor GOS2 de arroz (pGOS2)
Figura 19 detalha os exemplos das seqüências PHDf-HD úteis na realização de métodos de acordo com uma presente invenção. V. Proteína semelhante ao bHLHl 1(11 Hélice-Laço-Hélice básico)
Figura 20 representa a estrutura de domínio da SEQ ID N°: 245 com os motivos conservados indicados pelo sublinhado e seu número. Do domínio HLH (Motivo 8) como determinado por SMART é mostrado sublinhado em negrito.
Figura 21 representa um alinhamento múltiplo de várias proteínas semelhantes à bHLHl 1. Um ponto indica os resíduos conservados, um cólon indica altamente os resíduos conservados e um ponto no asterisco para os resíduos perfeitamente conservados. O mais alto grau da conservação
da seqüência é observado na região do domínio bHLH. A parte do terminal C
de AT2G24260 que extende-se além de outras proteínas no alinhamento é anulado.
Figura 22 O cladograma circular das proteínas bHLH selecionadas. As proteínas semelhantes à bHLH 11 e uma proteína Arabidopsis que representa cada uma das outras classes definidas por Heim 2003 foram usados. O alinhamento foi gerado usando "CLUSTALX", e a árvore de ligação próxima foi calculada. O cladograma circular foi tirado usando Dendroscope (Huson et al. BMC Bioinformatics 2007). Os resultados Bootstrap para as 100 cópias é indicado para alguns maiores nós; o valor dos compartimentos bootstrap mostra que o grupo de proteínas semelhantes à bHLHl 1 é claramente delineado a partir de outras proteínas bHLH.
Figura 23 representa o vetor binário para a expressão aumentada em Oryza sativa de um ácido nucleico que codifica o bHLHl 1 semelhante sob o controle de um promotor GOS2 de arroz (pGOS2).
Figura 24 detalha os exemplos das seqüências semelhantes à bHLHl 1 úteis na realização de métodos de acordo com uma presente invenção.
VI. Proteína ASR (ácido abscísico, tensão, e maturativo induzido) Figura 25 representa o vetor binário para a expressão aumentada em Oryza sativa de um ácido nucleico que codifica GRP sob o controle de um promotor GOS2 de arroz (pGOS2::GRP).
Figura 26 detalha os exemplos das seqüências GRP úteis na realização de métodos de acordo com uma presente invenção.
VII. Proteína semelhante 11 de ligação do promotor Squamosa (SPL11)
Figura 27 representa uma seqüência de aminoácido e a estrutura de domínio da SEQ ID N°: 428. Motivos conservados e os domínios são indicados. O domínio SBP é sublinhado por uma linha interrompida; Motivo 1 é indicado em negrito; Motivo 2 é indicado em negrito e sublinhado; Motivo 3 está em letras maiúsculas em negrito e sublinhado e Motivo 4 está em negrito e sublinhado com uma linha dupla.
Figura 28 representa um alinhamento de seqüência múltipla dos polipeptídeos SPLl 1. A posição dos resíduos de aminoácidos conservados e os domínios correspondentes aqueles descritos na Figura 27 é indicado. Uma seqüência de consenso representativa dos polipeptídeos SPLl 1 é dado. Na seqüência de consenso os aminoácidos altamente conservados são fornecidos e os espaços em branco entre estes representam qualquer aminoácido.
Figura 29 mostra uma árvore fílogenética dos polipeptídeos SPLl 1. A árvore fílogenética é como presente no Xie et al. Plant Physiology, 2006, Vol. 142, pp. 280-293, que é incoporado neste por referência como se totalmente apresentado. O grupo de polipeptídeos SPLll no mesmo grupo
como AtSPLll (idêntico a SEQ ID N°: 2) dentro da classe nomeada Classe S3.
Figura 30 fornece uma análise da seqüência dos genes miR156 de arroz (OsmiR156) e suas seqüências alvos nos polipeptídeos SPL de arroz (Figura 30 A) tão bem quanto um alinhamento múltiplo dos ácidos nucleicos SPLl 1 (Figura 30 Β). A Figura 30 A mostra um alinhamento da seqüência das seqüências OsmiRl 56 maduras com seqüências complementares dos genes OsSPL. A seqüência conservada de aminoácido codificada pelas seqüências alvos é mostrada na parte inferior. Os pontos entre miR156 e as seqüências OsSPL alvejadas indicam más combinações. A Figura 4B mostra um alinhamento múltiplo do ácido nucleico SPLl 1 onde altamente os resíduos de ácido nucleico conservado são indicados na seqüência de consenso. A posição do local alvo miR156 altamente conservado é indicado em negrito na seqüência de consenso. A SEQ ID N°: 431, SEQ ID N°: 440 e SEQ ID N°: 454 representativas dos ácidos nucleicos SPLll que são miR156 insensíveis não tem o local alvo miR156 conservado ou mostra uma boa divergência na sua seqüência naquela posição.
Figura 31 representa o vetor binário para a expressão aumentada em Oryza sativa da SEQ ID N°: 427 sob o controle de um promotor GOS2 de arroz (pGOS2) (Figura 3 IA) ou sob um promotor WSIl8 de arroz (Figura 31 B).
Figura 32 detalha os exemplos das seqüências SPLll úteis na realização de métodos de acordo com uma presente invenção. Exemplos
A presente invenção será descrita com referência aos seguintes exemplos, que são por meio apenas da ilustração. Os seguintes exemplos não são pretendidos completamente definir ou de outra maneira limitar o escopo da invenção.
Manipulação de DNA: a não ser outra maneira estado, as técnicas de DNA recombinante são realizados de acordo com os protocolos padrões descritos em Sambrook (2001) Molecular Cloning: a laboratoiy manual, 3o Edition Cold Spring Harbor Laboratoiy Press, CSH, New York, or in Volumes 1 and 2 of Ausubel et al. (1994), Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols.
Materiais padrões e métodos para o trabalho molecular vegetal são descritos em Plant Molecular Biology Labfax (1993) by R.D.D. Croy, publicado por BIOS Scientific Publications Ltd (UK) e Blackwell Scientific Publications (UK).
I. Domínio LOB que compreende a proteína (LOB: Fronteiras orgânicas laterais)
Exemplo 1: A identificação das seqüências relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção
As seqüências (cDNA eSTs de comprimento total ou genômico) relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção onde identificados entre aqueles mantidos nos bancos de dados Entrez Nucleotides no National Center for Biotechnology Information (NCBI) usando ferramentas de seqüência de banco de dados, tal como a ferramenta de alinhamento local básica (BLAST) (Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; e Altschul et al (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402). O programa foi usado para observar as regiões da similaridade local entre as seqüências em comparação com o ácido nucleico ou seqüências de polipeptídeos de um banco de dados da seqüência e pelo cálculo da significância estatística de pontos. Por exemplo, o polipeptídeo codificado pelo ácido nucleico usado na presente invenção foi usado pelo algoritmo TBLASTN, com ajustes default e o filtro para ignorar a baixa complexidade da seqüência apresentada. A produção da análise foi examinada pela comparação em pares, e classificada de acordo com as contagens de probabilidade (valor E), onde a contagem reflete a probabilidade que um alinhamento particular ocorra pela possibilidade (o valor E inferior, quanto mais significante o acerto). Além disso aos valores E, em comparações onde também as contagens pela identidade da porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácido nucleico comparado (ou polipeptídeo) em um comprimento particular.
Tabela Al fornece uma lista das seqüências de ácidos nucleicos relacionados à seqüência LBD de ácido nucleico usados nos métodos da presente invenção. Tabela Al: Exemplos de polipeptídeos LBD: seqüências de DNA
Fonte vegetal* SEQ ID N°. do ácido nucleico SEQ ID N°. da proteína Arabidopsis thaliana Proteína LBD 1 2 OsOl g03890, Oryzasativa 59 11 OsOl g32770, Oryzasativa 60 12 0s03g33090, Oryzasativa 61 13 0s03g41330, Oryzasativa 62 14 0s07g40000, Oryzasativa 63 15 TC9404, Nicotiana benthamiana 16 TC227562, Glyeine max 17 1C216138, Glyeine max 18 TC147776, Hordeum vulgare 19 TCl 04758, Sorghum bicolor 20 TC18561, Aquilegia sp. 21 TC60668, Vitis vinifera 22 TC15459, Lotusjaponicus 23 TC30552, Gossypium hirsutum 24 TC235711, Tritieum aestivum 71 25 TC133081, Solanumtuberosum 26 TC107091, Medieago truncatula 27 TC147808, Hordeum vulgare 28 TC559315Vitis vinifera 29 TC162239, Solanum tuberosum 30 TC69225, Pinus taeda 31 TC67269, Pinus taeda 32 TC220806, Glyeine max 33 TC270332, Triticum aestivum 34 TC18329, Aquilegia sp. 35 TC137193, Solanumtuberosum 36 1C133385, Solanum tuberosum 37 TC140088, Solanum tuberosum 38 TC14656, Pieea alba 39 TC59178, Pinus taeda 40 TC67974, Pinus taeda 41 10
I Cl 78827, Lycopersicon eseulentum 42 Pt-111.589, Populus tremuloides 43 Pt-V.543, Populus tremuloides 44 Pt-XIV.94, Populus tremuloides 45 Pt-11105, Populus tremuloides 46 Pt-123.86, Populus tremuloides 47 Pt-Xl80, Populus tremuloides 48 Pt-XI 1.481, Populus tremuloides 49 DQ787782, Caragana korshinskii 50 AAP37970, Brassiea napus 51 ABE82505, Medicago truncatula 72 52 ABE78739, Medieago truncatula 53 Q9SN23, Arabidopsis thaliana 64 54 Q9SZE8, Arabidopsis thaliana 65 55 Q9ZW96, Arabidopsis thaliana 66 56 Q9M886, Arabidopsis thaliana 67 57 Q9CA30, Arabidopsis thaliana 68 58 LsJLBD, Linum usitatissimum 69 70
15
-------------------ví^v^ vj^iiijd.ijv vju owiaajriui sau iuineciuos onae
disponíveis, os códigos TC são a partir de TIGR TIGR.
Exemplo 2: Alinhamento das seqüências LBD de polipeptídeo
O alinhamento das seqüências de polipeptídeos foi realizado
usando o programa AlignX a partir do vetor NTI (Invitrogen) que é baseado
no algoritmo Clustal W popular do alinhamento progressivo (Thompson et al.
(1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al. (2003). Nucleie Aeids
Res 31:3497-3500). Os valores default foram pela penalidade aberta de fenda
de 10, pela penalidade de extensão de fenda de 0,1 e a matriz do peso
selecionado é Blosum 62. A menor edição do manual foi feita ainda para
otimizar o alinhamento. A conservação da seqüência entre os polipeptídeos
LBD foi essencialmente nos domínios dos polipeptídeos DUF260 do terminal
N, a região do terminal C usualmente sendo mais variável no comprimento da
seqüência e composição. Os polipeptídeos LBD são alinhados na Figura 2.
A uma árvore filogenética de polipeptídeos LBD (Figura 3) foi construído usando um algoritmo de ajustamento de ligação próxima como fornecido no programa AlignX a partir do vetor NTI (Invitrogen). As seqüências das proteínas LBD de classe I usado nas construção de três são publicados disponíveis e são indicados com seus números de Acessão GenBank ou SwissProt.
Exemplo 3: Cálculo da identidade global da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos úteis na realização dos métodos da invenção
As porcentagens globais de similaridade e identidade entre as seqüências de polipeptídeos de comprimento total úteis na realização de métodos da invenção foram determinados usando um dos métodos disponíveis na técnica, o software MatGAT (Ferramenta de alinhamento global de matriz) (BMC Bioinformatics. 2003 4:29. MatGAT: uma aplicação que gera as matrizes de similaridade/identidade usando as seqüências de DNA ou proteínas. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; software hospedado por Ledion Bitincka). Software MatGAT gera as matrizes de similaridade/identidade para seqüência de proteínas ou DNA sem necessariamento o pré-alinhamento dos dados. O programa realiza uma série de alinhamento em pares usando o algoritmo de alinhamento global Myers and Miller (com uma penalidade de abertura de fenda de 12, e a penalidade de extensão de fenda de 2), calcula a similaridade e identidade usando por exemplo Blosum 62 (para os polipeptídeos), e então coloca os resultados em uma matriz de distância. A similaridade da seqüência é mostrada na metada da parte inferior da linha de divisão e a identidade de seqüência é mostrada na metada da parte superior da linha de divisão diagonal.
Parâmetros usados na comparação foram: Matriz de contagem: Blosum62
Primeira fenda: 12
Extensão da fenda: 2
Os resultados da análise do software são mostrados na Tabela 10
B pela similiaridade e identidade global no comprimento total de uma
seqüência de polipeptídeos. A identidade da porcentagem é dada acima em
diagonal em negrito e a porcetagem da similaridade é dada abaixo em diagonal (face normal).
A identidade da porcentagem entre as seqüências LBD de polipeptídeo úteis na realização de métodos da invenção podem ser tão baixo quanto 30,2 % da identidade de aminoácido comparado a SEQ ID N°: 2 (representado pela At-LBD37, linha 44). A % de identidade será igualmente mais altas onde apenas as seqüências do domínio DUF206 são comparados. Para identificar o domínio DUF260 (como delineado na Figura 1) em outras proteínas LBD, o alinhamento múltiplo da Figura 2 pode ser usado. Tabela A2: Resultados MatGAT para a similaridade e identidade global no comprimento total das seqüências LBD de polipeptídeo.
3. Qs-0s03g33090
1. Os-OsOl gQ3890
2. Os-OsOl g32770
4.Qs-0s03g41330
S.0s-0s07g40000
6. Nb-TC9404
7. Gm-TC227562
8. Gm-TC216138
9. Hv-TC147776
10. Sb-TC104758
11. Aq-TCl 8561
12. Vv-TC60668
13. Lj-TC 15459
14. Gh-TC30552
15. Ta-TC235711
16. St-TC133081
17. Mt-TC107091
18. Hv-TC147808
19. Vv-TC55931
20. St-TC162239
21. Pta-TC69225
22. Pta-TC67269
23. Gm-TC220806
24. Ta-TC270332
25. Aq-TC 18329
26. St-TC 137193
27. St-TC133385
55,5
46,9
46,3
45,9
45,9
45,0
47,2
45,9
45,3
47,2
45,0
45,6
46,3
56,7
43,2
40,3
35,8
31,0
43,0
40,9
42,4
44,5
41,5
41,5
40,6
43,3
43,3
40,9
43,0
61.5
59,0
58,6
59,0
57,0
49,5
53,0
51,8
45,9
41,4
62,5
55,8
60,0
64,8
55,2
48,2
50,0
52,7
46,1
40,6
45,6
28. St-TC140088
29. Pa-TC14656
30. Pta-TC59178
31. Pta-TC67974
32. Le-TCl78827
45,6
44,3
48,5
47,7
48,2
45,9
61,5
42,1
41,8
42,1
45,2
45,2
45,2
60,3
73,0
66,5
65,2
63,3
76,1 77,0
61,5
65,4
64,1 66,8 42,9
34,5
31,1
48,3
59,9
60,3
59,1
58,8
58,6
59,6
56,9
59,1
59,1
34,4
31,5
65,0
48,3
67,7
65,2
62,1
79,6
71,1
62,3
66,7
64,1
63,4
47.4
45.5
42,1
49,4
50,4
38,9 39,6
56,4
56.5
46.6
68.7
70,8 64,5 47,7
40,5
41,8
50.0
43,2
48,5
46,2
42,1
47,8
52,6 41,6
41,4
64,7
46,3
47,1
43,5
44,7
46,2 51,7
40,4
49,1
84,5
47,9
57,3
56,9 51,3 46,9
40,2
48,2
39,3
51,3
59,1
44,1
65,9
66,4
61,5
48,4
43,5
46,4
68,31 57,8 66,8
32,9
30,3 56,7
43,0
53,0
75,2
70,4
69,2 63,0
67,5
79,4
72,2 75,9 46,7
50,7 46,5
44,4
53,0 54,7
44,9
42,6
54,5
61,3
50,0 89,3 87,9
33,0
32,4
53,9
43,2
50,6
60,7
79,6
67,4
62,6
69,7
77,4
81,4
78,4
46,3
49,6
46,2
46,7
51,4
54,7
44,9
42,9
52,6
59,1
50,7
72,6
71,3
71,0
51,6
44,1
52,5
89,7
35,5
30,7
52,1
41,2
49,6
60,3
73,7
63,8 58,8
63,8
77,1
88,8
75,4
47,4
47,4
47,2
46,0
49,8
55,0
43,1
41,4 51,7
57,1
47,6
70,4
68,3
52,7 43,3
52,2
73,9
68,3 65,8 52,7
44,6
54,3
71,7
35,2
30,6
66,7
46,4
68,0
51,7
50,6
50,0
68,5
67,1
66,2
67,5
66,8 47,0
10
34,5
30,9
71,3
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51.7 54,1 57,1 57,1 55,3
44.8 39,1 46,7 32. Le-TCl78827 72,6 75,4 46,7 48,9 48,2 43,7 53,0 52,1 42,5 43,2 56,9 58,3 33. Pt-111.589 78,6 81,9 50,5 51,5 48,5 47,0 55,3 57,1 44,3 44,6 53,4 58,0 34. Pt-V.543 76,9 79,8 49,1 52,2 49,2 48,0 53,0 56,2 45,2 45,5 53,3 57,0 35. Pt-XIV.94 59,9 62,5 44,9 45,6 42,5 44,0 48,2 51,7 41,6 41,4 56,3 57,8 36. Pt l 1105 61,6 62,5 43,9 47,4 43,5 42,1 47,4 55,1 38,9 40,8 56,7 55,2 37. Pt-123.86 47,6 48,3 56,1 67,2 75,4 55,3 61,8 54,7 53,3 51,5 55,1 43,9 38. Pt-X 180 56,0 56,8 53,0 56,6 55,1 51,0 66,4 59,8 48,8 47,6 60,2 49,8 39. Pt-Xl 1.481 48,4 50,2 52,3 58,0 53,8 49,7 58,2 54,6 45,5 49,1 51,3 44,0 40. Ck-LOB- DQ787782 80,2 79,3 49,1 51,8 46,5 47,0 53,0 54,3 43,7 44,9 53,2 58,0 41. Bn-AAP37970 47,0 51,1 58,9 65,7 67,4 56,0 60,2 57,6 47,6 48,5 56,8 47,3 42. Mt-ABE82505 78,9 77,7 50,2 50,7 47,8 48,7 54,2 54,3 44,9 45,8 52,8 61,8 43. Mt-ABE78739 53,6 50,4 59,2 66,9 71,8 60,3 64,4 54,0 52,4 49,7 56,5 46,4 44. At-LBD37- Q9FN11 67,6 75,2 48,8 54,0 49,5 47,0 54,9 55,6 45,2 44,6 52,0 56,4 45. At-LBD38- Q9SN23 63,6 73,7 48,4 51,1 48,8 47,0 51,8 55,1 46,4 46,1 52,2 53,0 46. At-LBD39- Q9SZE8 73,8 70,0 48,8 50,4 47,8 47,4 52,6 53,8 45,2 43,8 51,7 61,7 47. At-LBD40- Q9ZW96 53,2 56,2 54,4 61,7 62,1 51,3 60,9 61,5 48,5 48,2 62,2 52,8 48. At-LBD41- Q9M886 49,8 52,1 56,8 67,5 67,4 57,0 61,2 58,9 49,1 49,1 57,4 46,0 49. At-LBD42- Q9CA30 56,1 54,5 54,0 54,7 54,5 51,3 60,5 64,5 47,0 45,8 62,7 51,1
25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 1. Os-OsOl g03890 44,0 32,9 33,6 32,2 32,4 32,5 32,1 33,5 33,7 33,7 33,2 33,2 2. Os-OsOl g32770 46,3 30,0 29,4 29,7 28,1 29,4 30,4 30,9 30,6 29,1 30,0 31,5 3. 0s-0s03g33090 33,3 61,0 60,2 50,0 35,7 33,9 38,7 60,0 52,9 52,9 50,2 51,7 4. 0s-0s03g41330 31,7 44,0 44,0 39,0 36,7 30,2 36,1 44,7 41,0 41,0 41,0 39,7 5. 0s-0s07g40000 34,1 52,6 52,5 46,8 35,3 33,3 37,5 51,9 49,6 48,6 46,5 46,0 6. Nb-TC9404 36,6 83,2 82,3 57,5 38,9 36,9 41,9 83,2 64,2 64,9 50,2 49,1 7. Gm-TC227562 35,2 61,1 60,3 51,0 39,8 36,6 41,1 62,1 65,3 64,5 48,5 48,5 8. Gm-TC216138 34,1 61,4 60,2 51,7 38,2 34,9 40,2 61,7 67,2 66,8 47,5 46,9 9. Hv-TC147776 32,8 54,2 54,6 50,2 33,8 32,7 35,7 53,6 50,0 49,8 46,2 47,3 10. Sb-TC104758 31,4 51,7 51,5 46,7 35,6 33,1 37,5 49,0 52,5 50,2 43,8 45,1 11. Aq-TC18561 35,5 59,3 58,8 52,8 38,3 36,4 40,5 58,0 56,8 59,4 52,6 48,5 12. Vv-TC60668 35,1 67,1 67,2 54,5 39,6 36,6 42,3 66,5 69,4 66,7 50,9 50,4 13. L.j-TC15459 33,4 59,7 59,2 51,0 37,4 37,6 39,2 60,7 65,6 64,9 47,9 47,9 14. Gh-TC30552 35,2 63,9 63,4 57,3 39,4 37,2 41,6 64,2 71,4 70,9 50,0 50,0 15. Ta-TC235711 50,3 33,8 32,8 32,4 29,5 31,0 30,8 34,5 36,2 34,8 33,4 34,5 16. St-TC133081 57,4 33,2 34,7 32,5 30,9 32,1 32,6 35,4 36,4 36,0 35,0 34,2 17. Mt-TC107091 56,8 34,2 33,6 33,1 31,5 32,0 31,0 33,9 33,8 35,2 29,6 30,8 18. Hv-TC147808 50,6 34,4 31,5 29,1 31,4 31,6 30,3 33,1 34,8 34,8 32,1 32,5 19. Vv-TC55931 56,3 37,5 39,2 36,6 33,8 31,2 34,9 38,4 37,3 35,5 36,8 35,9 20. St-TC 162239 41,8 36,3 37,2 35,0 35,6 32,0 35,7 37,6 39,0 37,3 37,6 37,9 21. Pta-TC69225 36,9 30,5 31,6 29,6 30,5 30,7 31,2 29,9 31,7 31,8 31,1 30,2 22. Pta-TC67269 43,1 30,1 29,2 29,2 28,5 30,0 32,2 31,5 29,5 31,0 29,8 29,8 23. Gm-TC220806 50,0 43,4 42,1 38,4 34,7 28,1 35,5 42,8 39,6 38,5 40,5 41,9 24. Ta-TC270332 32,1 45,5 43,5 39,2 35,7 30,3 36,8 43,3 41,3 40,9 40,9 39,7 25. Aq-TC18329 35,5 35,2 31,4 30,2 33,1 31,5 34,8 33,4 35,5 33,4 34,1 26. St-TC 137193 48,6 96,8 58,4 38,8 36,1 41,9 95,0 64,3 62,5 50,2 50,2 27. St-TC133385 48,6 96,8 59,7 38,1 35,8 40,1 92,8 63,9 60,9 50,7 50,9 28. St-TC140088 47,9 72,4 71,9 38,8 33,2 39,8 58,7 54,1 53,8 46,3 45,6 29. Pa-TC14656 49,7 51,6 51,6 54,2 38,6 88,1 38,7 42,1 40,3 33,5 33,5 30. Pta-TC59178 46,0 44,9 44,6 43,3 54,3 39,4 36,9 36,4 38,4 32,5 31,4 31. Pta-TC67974 49,3 52,2 51,4 52,9 92,8 53,2 41,7 42,5 42,8 35,0 36,1 32. Le-TC178827 48,3 97,2 95,0 71,6 50,9 45,2 51,4 64,6 62,2 49,5 49,5 33.Pt-lll.589 49,7 73,5 72,3 65,5 54,2 44,9 56,5 75,2 83,3 50,4 48,7 34. Pt-V.543 50,3 73,6 71,5 64,0 54,2 46,8 56,2 73,1 88,8 50,8 48,3 35. Pt-XIV.94 47,9 63,1 63,2 62,7 47,7 39,7 51,1 61,0 63,4 62,0 86,1 36. Pt-11105 47,2 63,1 64,6 60,4 48,4 39,4 51,8 61,5 62,2 59,9 91,8 37. Pt-123.86 70,9 48,0 46,6 48,6 49,7 47,1 50,7 46,6 49,0 50,0 43,9 42,9 38. Pt-X180 61,0 51,9 51,9 53,5 46,2 41,6 46,7 53,5 58,5 58,3 50,2 48,5 39. Pt-Xl 1.481 60,0 50,5 49,5 46,9 49,5 41,6 50,0 50,9 49,5 49,5 45,1 42,1 40. Ck-LOB- DQ787782 47,2 72,3 71,4 68,8 53,4 44,1 54,7 71,9 79,4 78,9 60,6 62,3 41. Bn-AAP37970 65,2 52,3 50,8 47,0 47,7 44,1 50,0 50,8 49,6 51,5 50,4 49,2 42. Mt-ABE82505 50,3 70,4 69,1 67,0 57,4 46,8 55,1 71,2 76,9 78,9 62,7 62,2 43. Mt-ABE78739 67,2 50,0 50,0 50,7 54,7 43,3 53,2 48,2 49,6 48,6 50,0 48,9 44. AÍ-LBD37- Q9FN11 51,4 66,8 65,6 64,4 54,2 47,9 52,9 67,2 76,0 74,0 60,8 60,4 45. At-LBD38- Q9SN23 49,7 65,6 64,4 60,3 52,3 44,9 53,6 66,0 75,3 72,1 58,7 61,5 46. At-LBD39- Q9SZE8 51,0 66,3 64,6 62,1 54,5 46,8 53,3 67,9 71,7 71,1 59,6 60,8 47. At-LBD40- Q9ZW96 61,7 56,7 55,4 54,9 49,1 41,0 49,6 55,8 55,9 55,4 50,6 51,5 48. AÍ-LBD41- Q9M886 66,9 50,6 49,8 48,7 50,5 45,5 49,3 52,1 48,7 51,3 49,0 47,1 49. At-LBD42- Q9CA30 58,3 53,6 54,1 55,4 47,7 41,3 48,2 54,5 54,6 56,2 54,9 54,5
37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 1. Os-OsOl g03890 44,0 39,2 34,8 35,5 44,4 34,9 40,5 31,9 33,3 32,4 2. Os-OsOl g32770 45,3 38,5 32,3 32,1 42,7 33,9 44,8 30,2 32,1 29,7 3. 0s-0s03g33090 34,7 36,9 32,7 53,0 36,4 54,9 35,1 50,0 51,2 49,6 4. 0s-0s03g41330 33,7 35,2 31,2 43,6 36,2 44,6 32,6 43,9 42,4 40,7 5. 0s-0s07g40000 32,8 35,7 31,9 49,8 32,6 51,3 33,1 49,2 47,4 48,1 6. Nb-TC9404 33,8 37,3 32,6 58,6 32,5 61,1 35,1 56,9 54,0 56,3 7. Gm-TC227562 32,8 36,4 32,4 76,6 34,7 74,9 37,1 56,2 57,8 57,3 8. Gm-TC216138 31,6 36,7 31,6 74,3 36,0 74,0 34,9 53,9 55,0 54,1 9. Hv-TC147776 31,1 38,2 33,5 50,6 34,3 50,6 34,5 49,2 48,6 45,8 10. Sb-TC104758 33,1 35,2 31,3 48,7 33,7 50,2 33,1 50,6 48,2 46,7 11. Aq-TC18561 33,4 36,2 32,5 56,7 36,0 57,8 36,0 51,6 55,6 57,1 12. Vv-TC60668 33,4 39,7 34,3 65,3 33,7 66,8 36,0 54,2 57,4 58,8 13. Lj-TC15459 32,1 35,9 31,0 70,4 32,8 70,7 35,3 52,8 53,0 54,8 14. Gh-TC30552 33,7 38,6 33,7 66,2 35,2 69,0 32,9 62,4 63,5 58,7 15. Ta-TC235711 45,3 42,7 36,2 35,4 46,0 38,3 46,6 34,1 35,9 33,7 16. St-TC133081 55,7 45,6 37,3 36,5 55,8 37,2 54,9 37,1 35,8 36,5 17. Mt-TC107091 63,7 43,0 37,3 34,2 54,3 33,9 60,6 33,4 37,2 34,2 18. Hv-TC147808 45,0 41,9 34,3 34,3 45,2 37,4 46,8 32,4 35,4 32,8 19. Vv-TC55931 52,0 51,4 40,9 36,8 49,8 38,7 48,9 37,4 34,9 36,7 20. St-TC162239 41,6 45,1 39,7 36,3 41,8 36,0 42,9 35,4 35,7 35,0 21. Pta-TC69225 37,6 33,4 29,4 33,4 34,7 32,3 38,0 31,7 31,1 32,5 22. Pta-TC67269 38,8 36,8 31,2 30,4 35,7 31,2 38,1 31,3 32,3 31,3 23. Gm-TC220806 48,7 48,8 40,1 39,7 48,1 37,9 51,3 36,5 38,0 38,4 24. Ta-TC270332 31,8 33,3 29,3 42,5 32,5 44,2 32,4 41,5 40,4 43,7 25. Aq-TC 18329 61,1 48,3 40,6 33,4 51,2 36,6 55,9 35,1 32,8 34,4 26. St-TC137193 34,1 37,3 35,7 60,9 33,0 60,0 34,4 57,3 55,7 54,1 27. St-TC133385 34,0 37,3 36,4 60,1 34,5 59,6 33,8 56,5 54,9 53,1 28. St-TC 140088 33,3 36,9 33,5 53,0 31,4 51,9 31,9 48,8 47,0 49,6 29. Pa-TC 14656 32,1 33,3 33,2 41,1 29,3 41,7 32,8 39,0 40,0 39,9 30. Pta-TC59178 34,0 30,3 28,3 37,4 32,8 38,4 30,2 36,5 35,7 37,6 31. Pta-TC67974 33,2 34,2 34,1 42,2 31,9 41,9 34,2 40,9 42,6 40,4 32. Le-TCl78827 33. Pt-II1.589 34. Pt-V.543 35. Pt-XIV. 94 32,8 34.7 34,3 31.8 38,9 37,9 36,6 35,8 36,5 33,5 33.3 30.4 60,8 67,1 67,4 49,4 34,1 35,5 34,5 36,0 60,7 65,7 66,7 51,7 33,1 32,7 32.0 37.1 56.5 64,1 62.6 45,0 55,5 63,9 62,9 45,3 55,3 57,5 59,3 46 5 36. Pt l 1105 32,4 35,0 30,4 48,5 36,7 51,1 35,6 43,6 45,7 48 1 37. Pt-123.86 45,8 39,3 33,1 56,2 34,3 55,9 34,8 34,1 33 0 38. Pt-X 180 39. Pt-Xl 1.481 56,4 55 4 Sfi 8 43,1 34,6 42,3 34,9 44,1 37,2 37,3 39,9 40. Ck-LOB- DQ787782 49,0 53,9 47,3 JZi J S 7,5 35,5 33,6 80,9 37,4 33,8 31,9 54,0 30,5 55,8 29,9 57,8 41. Bn-AAP37970 70,3 56,8 55,7 51,5 37,7 51,6 33,2 34,1 34 3 42. Mt-ABE82505 47,0 55,2 47,3 87,1 51,9 36,7 55,6 57,3 56,7 43. Mt-ABE78739 67,6 57,9 55,4 50,7 64,7 51,4 31,9 32,7 34 3 44. At-LBD37- Q9FN11 53,0 53,2 48,0 69,2 50,4 66,8 50,0 76,9 55,3 45. At-LBD38- Q9SN23 47,0 55,9 49,5 70,0 51,5 69,2 48,6 86,4 56,8 46. At-LBD39- Q9SZE8 49,0 57,3 49,1 72,5 53,8 71,3 51,1 67,2 68,8 47. At-LBD40- Q9ZW96 65,5 62,7 52,0 55,8 68,9 56,2 66,2 55,2 55,5 56,3 48. At-LBD41- Q9M886 70,9 58,6 57,1 47,9 90,5 50,2 65,5 53,2 51,7 52,1 49. At-LBD42- Q9CA30 55,4 62,7 52,0 58,4 56,8 55,8 57,2 53,6 52,6 52,9
47 48 49 1. 0s-0s01g03890 41,5 41,3 38,2 2. Os-OsOl g32770 41,5 44,8 39,0 3. 0s-0s03g33090 40,4 35,0 40,8 4.0s-0s03g41330 38,2 33,7 36,0 S.0s-0s07g40000 40,2 33,8 36,3 6. Nb-TC9404 39,4 34,6 40,7 7. Gm-TC227562 40,8 35,7 39,8 8. Gm-TC216138 36,5 34,0 35,5 9. Hv-TC147776 38,2 34,6 37,7 10. Sb-TC104758 36,2 34,5 38,6 11. Aq-TC18561 42,1 37,2 36,6 12. W-TC60668 40,2 36,1 38,2 13. L j-TC 15459 38,1 35,1 36,4 14. Gh-TC30552 39,8 34,6 36,6 15. Ta-TC235711 44,3 44,3 41,0 16. St-TC133081 50,7 55,9 45,7 17. Mt-TC 107091 52,6 56,1 40,2 18. Hv-TC147808 42,1 46,5 39,7 19. W-TC55931 49,2 49,3 47,3 20. St-TC162239 46,5 44,5 47,5 21. Pta-TC69225 36,4 36,2 34,1 22. Pta-TC67269 36,0 36,3 33,3 23. Gm-TC220806 52,8 50,8 49,8 24. Ta-TC270332 39,2 30,4 36,3 25. Aq-TC18329 49,8 53,2 43,7 26. St-TC137193 39,2 34,2 38,6 27. St-T C 133385 40,1 34,1 38,4 28. St-TC140088 37,8 35,7 36,6 29. Pa-TC14656 33,8 30,4 31,3 30. Pta-TC59178 30,2 32,5 27,2 31. Pta-TC67974 34,8 31,8 33,0 32. Le-TC178827 39,0 34,6 38,5 33. Pt-111.589 36,6 35,0 35,3 34. Pt-V.543 38,2 35,4 39,2 35. Pt-XIV.94 37,8 33,8 38,3 36. Pt-11105 40,2 35,7 37,4 37. Pt-123.86 53,8 59,1 43,6 38. PÍ-X180 46,8 41,5 49,6 39. Pt-Xl 1.481 38,5 37,6 36,4 40. Ck-LOB-DQ787782 40,2 31,6 38,2 41. Bn-AAP37970 55,5 83,5 42,1 42. Mt-ABE82505 40,3 33,8 36,8 43. Mt-ABE78739 53,3 51,6 43,8 44. At-LBD37-Q9FN11 37,5 34,5 34,9 45. At-LBD38-Q9SN23 40,5 33,5 34,8 46. At-LBD39-Q9SZE8 38,3 35,0 37,1 47. At-LBD40-Q9ZW96 56,7 46,5 48. At-LBD41-Q9M886 68,4 42,6 49. At-LBD42-Q9CA30 61,8 56,3
Exemplo 4: A identificação dos domínios compreendidos nas seqüências de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
O recurso integrado das famílias de proteínas, bancos de dados de locais e domínios (InterPro) é uma interface integrada para os bancos de dados assinados comumente usados para as buscas com base em texto e seqüências. O banco de dado InterPro combina estes bancos de dados, que usam metodologias diferentes e variam os graus de informação biológica sobre proteínas bem caracterizadas para derivar os sinais da proteína. A colaboração dos bancos de dados incluem SWISS-PROT, PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom e Pfam, Smart e TIGRFAMs. O Pfam é uma ampla coleção de alinhamentos de seqüência múltipla e modelos Markov secretos que cobrem muitos dos domínios de proteína comuns e famílias. O Pfam é hospedado no servidor Sanger Institute in the United Kingdom. Interpro é hospedado no European Bioinformatics Institute in the United Kingdom.
Os resultados da avaliação InterPro de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 2 são apresentados na Tabela A3. Tabela A3: Resultados de avaliação InterPro (maiores números de acessão) de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 2.
Bancos de dados Número de acessão Nome de acessão Coordenadas de ácido nucleico na SEQ ID N0 PFAM PF03195 DUF260 2-107 PROFILE PS50891 LOB 1-107
Exemplo 5: Predição da topologia de uma seqüência de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
O TargetP 1.1 prediz a localização subcelular das proteínas eucarióticas. A indicação da localização é com base na presença predita de qualquer uma das pré-sequências do terminal N: peptídeo de transição de cloroplasto (cTP), peptídeo de alvejamento mitocrondrial (mTP) ou peptídeo de sinal de caminho secretório (SP). As contagens em que a predição final não são baseados nas reais probabilidades, e estes não são necessariamente adicionado a um. Entretanto, a localização com a contagem mais alta é igualmente de acordo com o TargetP, e a conexão entre as contagens (a classe de confiabilidade) pode ser uma indicação de que certas predições são. A clsse de confiabilidade (RC) varia de 1 a 5, onde 1 indica a predição mais forte. TargetP é mantido no servidor da Technical University of Denmark.
Para as seqüências preditas por conter uma pré-sequência de terminal N e um local de clivagem potencial também pode ser predito.
Um número de parâmetros foram selecionados, tal como grupo de organismos (vegetal ou não vegetal), séries de cortes (nenhum, série pré- definida de cortes, ou série especificadas pelo uso de cortes), e o cálculo da predição dos locais de clivagem (sim ou não).
Os resultados da análise TargetP 1.1 de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 2 são apresentados na Tabela A4. O grupo de organismos "vegetal" foi selecionado, nos cortes definidos, e o comprimento predito do peptídeo de transição requerido. Tabela A4: Análise TargetP 1.1 de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 2
Comprimento (AA) 250 Peptídeo de transição de cloroplástico 0,026 Peptídeo de transição mitocondrial 0,401 Peptídeo de sinal do caminho secretório 0,019 Outro alvejamento subcelular 0,573 Localização predita / Classe de confiabilidade 5 Comprimento de peptídeo de transição predita /
A localização subcelular de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 2 pode ser o citoplasma ou núcleo, nenhum peptídeo de transição predito. SubLoc (Hua & Sun, Bioinformatics 17, 721 - 728, 2001) prediz uma localização nuclear (índice de confiabilidade: 2, precisão: 74 %); esta predição está em entendimento com os dados de Liu et al (2005).
Muitos outros algoritmos podem ser usados para realizar tais análises, incluindo:
• ChloroP 1.1 hospedado no servidor da Technical University
of Denmark;
• Protein Prowler Subcellular Localisation Predictor versão 1.2 hospedado no servidor do Institute for Molecular Bioscience, University of Queensland, Brisbane, Australia;
• PENCE Proteome Analyst PA-GOSUB 2.5 hospedado no servidor da University of Alberta edmonton, Alberta, Canada;
• TMHMM, hospedado no servidor da Technical University of
Denmark
Exemplo 6: Clonagem da seqüência LBD de ácido nucleico usado nos métodos da invenção
A seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção foi amplificado por PCR usando como modelo uma biblioteca de cDNA de mudas feitas comumente de Arabidopsis thaliana (em pCMV Sport 6.0; Invitrogen, Paisley, UK). O PCR foi realizado usando polimerase Hifi Taq DNA em condições padrões, usando 200 ng do modelo em uma mistura de PCR a 50 μΐ. Os iniciadores usados foram prm009067 (SEQ ID N°: 3; sentido, códon de partida em negrito):
5'-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttaaacaatgagctgcaatggttgc-3' e prm009068 (SEQ ID N°: 4; reverso, complementar):
5'-ggggaccactttgtacaagaaagctgggtactaactctgagaaaaccgcc-3',
que incluem os locais AttB para a recombinação Gateway. O fragmento de
PCR amplificado também foi purificado usando métodos padrões. A primeira
etapa do procedimento Gateway, a reação BP, foi então realizada, durante o
qual fragmento PCR recombina in vivo com o plasmídio pDONR201 para
produzir, de acordo com a terminologia Gateway, um "clone de entrada",
pLBD. O plasmídio pDONR201 foi adquirido de Invitrogen, como partes da tecnologia Gateway®.
O clone de entrada que compreende SEQ ID N°: 1 foi então
usado na reação LR com um vetor de destino usado para a transformação
Oryza sativa. Este vetor contido como elementos funcionais dentro dos
limites de T-DNA: um marcador selecionável vegetal; um cassete de
expressão marcador avaliável; e um cassete Gateway pretendido pela
recombinação LR in vivo com uma seqüência do ácido nucleico de interesse
já clonado no clone de entrada. Um promotor GOS2 de arroz (SEQ ID N°:
10) para a expressão específica da raiz foi localizada a montante deste cassete Gateway.
Após a etapa de recombinação LR, o vetor de expressão resultante pGOS2::LBD (Figura 4) foi transformado na cepa Agrobacterium LBA4044 de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica. Exemplo 7: Transformação da planta Transformação de arroz
A Agrobaeterium contendo o vetor de expressão foi usado para transformar as plantas Oryza sativa. As sementes secas maduras de japonica cultiva de arroz Nipponbare foram descascados. A esterilização foi realizada
pela incubação em um minuto em 70 % de etanol, seguido por 30 minutos em
0,2 % de HgCl2, seguido por 6 vezes de 15 minutos lavado com água
destilada estéril. As sementes estéreis foram então germinadas em um meio
contendo 2,4-D (meio de indução de calos). Após a incubação no escuro por
quatro semanas calos derivados de escutelo embriogênico foram taxados e
propagados no mesmo meio. Após duas semanas, os calos foram
multiplicados ou propagados pela subcultura no mesmo meio por outras 2
semanas. Os pedaços de calos embriogênicos foram sub-culturados em meio
fresco 3 dias antes da co-cultivação (para intensificar a atividade de divisão celular).
A cepa da Agrobacterium LBA4404 contendo o vetor de expressão foi usado para a co-cultivação. A Agrobaeterium foi inoculado no meio AB com os antibióticos apropriados e cultivados por 3 dias a 28° C. As bactérias foram então coletadas e submetida à suspensão no meio de co- cultivação líquido a uma densidade (OD600) de cerca de 1. A suspensão foi então transferida a um disco Petri e os calos sumetidos à imersão na suspensão por 15 minutos. Os tecidos dos calos foram então manchados secos em um papel de filtro e transferidos para solidificar-se, o meio de co- cultivação e incubados por 3 dias no escuro a 25° C. Os calos co-cultivados foram desenvolvidos em meio contendo 2,4-D por 4 semanas no escuro a 28° C na presença de um agente de seleção. Durante este período, os calos resistentes rapidamente ao desenvolvimento foram ilhas desenvolvidas. Após a transferência deste material material a um meio de regeneração e incubação na luz, o potencial embriogênico foi liberado e os brotos desenvolvidos nas próximas quatro ou cinco semanas. Os brotos foram taxados dos calos e incubados por 2 a 3 semanas em um meio contendo auxina de que estes foram transferidos ao solo. Os brotos endurecidos foram desenvolvidos sob alta umidade e dias curtos em uma estufa para plantas. Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados por uma construção. Os primeiros transformantes foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para plantas. Após uma análise PCR quantitativa para verificar o número de cópias da inserção de T-DNA, apenas uma simples cópia de planta transgênica que exibe a tolerância ao agente de seleção foi mantida para a coleta da semente Tl. As sementes foram então coletadas três a cinco meses após a transplantação. O método produzido de transformantes de local simples em uma taxa acima de 50 % (Aldemita and Hodges 1996, Chan et al. 1993, Hiei et al. 1994). Transformação do milho
Transformação do milho (Zea mays) é realizado com uma modificação do método descrito por Ishida et al. (1996) Nature Biotech 14(6): 745-50. A transformação é dependente do genotipo em milho e apenas os genotipos específicos são responsáveis pela transformação e regeneração. A linha inata A188 (University of Minnesota) ou híbridos com Al 88 como um padrão são boas fontes de material doador para a transformação, mas outros genotipos podem ser usados sucessivamente também. As espigas são coletadas a partir da planta do milho aproximadamente 11 dias após a polinização (DAP) quando o comprimento do embrião imaturo é de cerca de 1 a 1,2 mm. Os embriões imaturos são co-cultivados com Agrobacterium tumefaciens contendo o vetor de expressão, e as plantas transgênicas são recuperadas através de organogênese. Os embriões taxados são desenvolvidos no meio de indução de calos, então o meio de regeneração do milho, contendo o agente de seleção (por exemplo imidazolinona mas vários marcadores de seleção podem ser usados). As placas de Petri são incubadas na luz a 25° C por 2 a 3 semanas, ou até o desenvolvimento dos brotos. Os brotos verdes são transferidos de cada embrião ao meio enraizado do milho e incubado a 25° C por 2 a 3 semanas, até o desenvolvimento das raízes. Os brotos enraizados são transplantados no solo na estufa para plantas. As sementes Tl são produzidas a partir de plantas que exibem a tolerância ao agente de seleção e que contém uma cópia simples da inserção T-DNA. Transformação do trigo
A transformação de trigo é realizada com o método descrito por Ishida et al. (1996) Nature Biotech 14(6): 745-50. O cultivo Bobwhite (disponível de CIMMYT, México) é comumente usado na transformação, os embriões imaturos são co-cultivados com Agrobacterium tumefaciens contendo o vetor de expressão, e as plantas transgênicas são recuperadas através de organogênese. Após a incubação com Agrobacterium, os embriões são desenvolvidos in vitro em meio de indução de calos, então o meio de regeneração, contendo o agente de seleção (por exemplo imidazolinona mas vários marcadores de seleção podem ser usados). As placas de Petri são incubadas na luz a 25° C por 2 a 3 semanas, ou até o desenvolvimento dos brotos. Os brotos verdes são transferidos de cada embrião ao meio enraizado e incubado a 25° C por 2 a 3 semanas, até o desenvolvimento das raízes. Os brotos enraizados são transplantados no solo na estufa para plantas. As sementes Tl são produzidas a partir de plantas que exibem a tolerância ao agente de seleção e que contém uma cópia simples da inserção T-DNA. Transformação da soja
A soja é transformada de acordo com uma modificação do método descrito no Texas A&M Patente U.S. 5.164.310. Diversas variedades de soja comerciais são responsáveis pela transformação deste método. O cultivo Jack (disponível de Illinois Seed foundation) é comumente usado para a transformação. As sementes de soja são esterilizadas por semeadura in vitro. A hipocotila, a radícula e uma cotiledônia são taxadas a partir das mudas do sétimo dia de idade. A epicotila e a cotiledônia remanescente ainda são desenvolvidas para desenvolver os nós auxiliares. Estes nós auxiliares são taxados e incubados com Agrobacterium tumefaciens contendo o vetor de expressão. Após o tratamento da co-cultivação, os explantes são lavados e transferidos para o meio de seleção. Os brotos regenerados são taxados e colocados em um meio de alongamento de brotos. Os brotos não mais longos do que 1 cm são colocados em um meio enraizado até o desenvolvimento das raízes. Os brotos enraizados são transplantados no solo na estufa para plantas. As sementes Tl são produzidas a partir de plantas que exibem a tolerância ao agente de seleção e que contém uma cópia simples da inserção T-DNA. Transformação de colza/canola
Os pecíolos cotiledônios e hipocotilas das mudas de 5 a 6 dias de idade são usadas como explantes para a cultura de tecido e transformada de acordo com o Babic et al. (1998, Plant Cell Rep 17: 183-188). O cultivo comercial Westar (Agriculture Canada) é a variedade padrão usada para a transformação, mas outras variedades também podem ser usadas. As sementes de canola são esterilizadas pela superfície para a semeadura in vitro. Os explantes de pecíolo cotiledônia com uma cotiledônia ligada são taxados a partir da semadura in vitro, e inoculado com Agrobacterium (contendo o vetor de expressão) pela imersão da expremidade do corte do explante de pecíolo na suspensão bacteriana. Os explantes são então cultivados por 2 dias em meio MSBAP-3 contendo 3 mg/l de BAP, 3 % de sacarose, 0,7% de Fitagar a 23° C, 16 horas de luz. Após dois dias de co-cultivo com Agrobacterium, os explantes de pecíolo são transferidos ao meio MSBAP-3 contendo 3 mg/l de BAP, cefotaxima, carbenicilina, ou timentina (300 mg/l) por 7 dias, e então cultivado em meio MSBAP-3 com cefotaxima, carbenicilina, ou timentina e agente de seleção até a regeneração dos brotos. Quandos os brotos são 5 a 10 mm em comprimento, estes são cortados e transferidos ao meio de alongamento de brotos (MSBAP-0,5, contendo 0,5 mg/l de BAP). Os brotos de cerca de 2 cm em comprimento são transferidos ao meio de enraizamento (MSO) para a introdução da raiz. Os brotos enraizados são transplantados no solo na estufa para plantas. As sementes Tl são produzidas a partir de plantas que exibem a tolerância ao agente de seleção e que contém uma cópia simples da inserção T-DNA. Transformação da Alfalfa
Um clone de regeneração da alfafa (Medicago sativa) é transformada usando o método de (McKersie et al., 1999 Plant Physiol 119: 839-847). A regeneração e transformação da alfafa é o genotipo independente e portanto uma regeneração da planta é requerida. Os métodos para obter a regeneração das plantas foram descritos. Por exemplo, estes podem ser selecionados a partir do cultivo Rangelander (Agriculture Canada) ou qualquer outra variedade de alfafa comercial como descrito por Brown DCW e A Atanassov (1985. Plant Cell Tissue Organ Culture 4: 111-112). Alternativamente, a variedade RA3 (University of Wisconsin) foi selecionada para o uso na cultura do tecido (Walker et al., 1978 Am J Bot 65:654-659). Os explantes de pecíolo são co-cultivados com uma cultura durante a noite de Agrobacterium tumefaciens C58C1 pMP90 (McKersie et al., 1999 Plant Physiol 119: 839-847) ou LBA4404 contendo o vetor de expressão. Os explantes são co-cultivados por 3 dias no escuro em meio de indução SH contendo 288 mg/L de Pro, 53 mg/ L de tioprolina, 4,35 g/L de K2S04, e 100 μπι de acetosiringinona. Os explantes são lavados em meio Murashige-Skoog com metade do comprimento (Murashige and Skoog, 1962) e colocado no mesmo meio de indução SH sem acetosiringinona mas com um agente de seleção adequada e antibiótico adequado para inibir o desenvolvimento da Agrobacterium. Após diversas semanas, os embriões somáticos são transferidos ao meio de desenvolvimento BOÍ2Y contendo nenhum regulador de desenvolvimento, nenhum antibiótico, e 50 g/ L de sacarose. Os embriões somáticos são subseqüentemente germinados no meio Murashige-Skoog de comprimento médio. As mudas enraizadas foram trasnplantadas em potes e o desenvolvimento em uma estufa para plantas. As sementes Tl são produzidas a partir de plantas que exibe a tolerância ao agente de seleção e que contém uma cópia simples da inserção T-DNA. Transformação do algodão
A transformação do algodão (Gossypium hirsutum L.) é realizado usando Agrobacterium tumefaciens, em explantes hipocotilas. O cultivo comercial tal como Coker 130 ou Coker 312 (SeedCo, Lubbock, TX) são variedades padrões usadas para a transformação, mas outras variedades também podem ser usadas. As sementes tem a superfície esterilizada e germinadas no escuro. Os explantes de hipocotiledônia são cortados a partir das mudas germinadas aos comprimentos de cerca de 1 a 1,5 centímetro. O explante de hipocotila é submetido à imersão no inóculo de Agrobacterium tumefaciens contendo o vetor de expressão, por 5 minutos então co-cultivados a cerca de 48 horas em MS +1,8 mg/l de KN03 + 2 % de glicose a 24° C, no escuro. Os explantes são transferidos o mesmo meio contendo bactéria apropriada e planta dos marcadores selecionáveis (diversas vezes repetido), até os calos embriogênicos ser visto. Os calos são separados e subcultivados até os embriões somáticos aparecerem. As plantinhas derivadas dos embriões somáticos são maduras em meio de enraizamento até o desenvolvimento das raízes. Os brotos enraizados são transportados ao solo em potes nas estufas. As sementes Tl são produzidas a partir de plantas que exibem a tolerância ao agente de seleção e que contém uma cópia simples da inserção T-DNA. Exemplo 8: Procedimento de avaliação fenotípica 8.1 Apresentação da avaliação
Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados. Os primeiros transformantes foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para plantas para o desenvolvimento e coletado da semente TI. Seis eventos, de que a progênie Tl segregada 3:1 para a presença/ausência do transgene, foram retidos. Para cada um destes eventos, aproximadamente 10 mudas Tl contendo o transgene (hetero e homozigotos) e aproximadamente 10 mudas Tl perderam o transgene (nulizigotos) foram selecionados pela expressão marcadora visual do monitoramento. As plantas transgênicas e os nulizigotos correspondentes foram desenvolvidos lado a lado em posições aleatórias. As condições da estufa foram de dias curtos (12 horas de luz), 28° C na luz e 22° C no escuro, e uma umidade relativa de 70 %. As plantas em desenvolvimento sob as condições de não tensão são fornecidos com água em intervalos regulares para garantir que a água e nutrientes não são limitantes para satisfazer as necessidades da planta para completar o crescimento e desenvolvimento. Avaliação da eficiência do uso de nitrogênio
As plantas de arroz das sementes T2 foram desenvolvidas no solo em potes sob condições normais exceto para a solução do nutriente. Os potes foram submetidos à água a partir da transplantação do amadurecimento com uma solução de nutriente específico contendo teor de nitrogênio N reduzido (N), usualmente entre 7 a 8 vezes menor. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) foi a mesma como para as plantas não desenvolvidas sob a tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. 8.2 Análise estatística: Teste F
Dois fatores ANOVA (análise de variantes) foi usado como um modelo estatístico para a avaliação total das características fenotípicas das plantas. Um teste F foi realizado em todos os parâmetros medidos de todas as plantas de todos os eventos transformados com o gene da presente invenção. O teste F foi realizado para checar por um efeito do gene em todos os eventos de transformação e para verificar por um total do efeito do gene, também conhecido como um efeito do gene global. O limiar para a significância por um efeito verdadeiro do gene global foi apresentado em uma probabilidade de % do nível para o teste F. Um ponto de valor do teste F significante por um efeito do gene, significando que este não é apenas uma mera presença ou posição do gene que está causando as diferenças no fenotipo. 8.3 Parâmetros medidos
Medição do parâmetro relacionado à biomassa
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo as imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
Uma área da planta acima do solo (ou biomassa da folha) foi determinado pela contagem do número total de píxeis nas imagens digitais a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras retiradas do mesmo ponto de tempo a partir de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os experimentos mostram que à área da planta acima do solo medida desta maneira correlaciona com a biomassa das partes das plantas trituradas acima. À área triturada acima é a área medida no ponto de tempo em que a planta tem atingido esta biomassa máxima da folha. O vigor precoce foi determinado pela contagem do número total de píxeis a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelos desenhos retirados do mesmo ponto de tempo de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os resultados descritos abaixo são para as plantas com três semanas pós-germinação. Medições dos parâmetros relacionados à semente
As panículas primárias maduras foram coletadas, contadas, ensacadas, rotuladas com código de barra e então secadas por três dias em um forno a 37° C. As panículas foram então limiadas e todas as sementes foram coletadas e contadas. As cascas enchidas foram separadas a partir de um vazio usando um dispositivo de sopro de ar. As cascas vazias foram descartadas e a fração remanescente foi contada novamente. As cascas enchidas foram pesadas em uma balança analítica. O número de sementes enchidas foi determinado pela contagem do número de cascas enchidas que permanece depois da etapa de separação. A produção total de semente foi medida pela pesagem de todas as cascas enchidas coletadas a partir da planta. O número total de semente por planta foi medido pela contagem do número de cascas coletadas a partir da planta. Peso de núcleo milhar (TKW) é extrapolado a partir do número de sementes enchidas contadas e seu peso total. O índice de colheita (HI) na presente invenção é definida como a razão entre a produção total de semente e a área triturada acima (mm2), multiplicada por um fator IO6. A taxa de abastecimento da semente como definido na presente invenção é a proporção (expressado como uma %) do número de sementes enchidas no total do número de sementes (ou florzinhas).
Exemplo 9: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas que compreendem a SEQ ID N°: 1
A avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressa um ácido nucleico LBD sob as condições de não tensão mostrou que aqui foi um aumento maior do que 5 % para a biomassa acima do solo (AreaMax), produção total de semente, número de sementes enchidas, taxa de abastecimento, índice de colheita, e mais do que 3 % por peso de núcleo milhar.
A avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam um ácido nucleico LBD na avaliação da eficiência do uso de nitrogênio revelado um aumento maior do que 5 % para o vigor de emergência (vigor precoce).
Exemplo 10: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas que compreendem a SEQ ID N°: 71
A região codificada compreendida na SEQ ID N°: 71 foi clonada sob o controle do promotor GOS2 de arroz no vetor de trasnformação do arroz como descrito no Exemplo 6. As plantas transgênicas de arroz que compreendem a região codificadora da SEQ ID N°: 71 foram gerados seguindo os procedimentos do Exemplo 7. As plantas foram avaliadas de acordo com os procedimentos descritos no Exemplo 8. SEQ ID N°: 71 codifica a proteína LBD representada pela SEQ ID N°: 25.
A avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam a SEQ ID N°: 71 sob as condições de não tensão mostrou que aqui foi um aumento maior do que 5 % para a biomassa acima do solo (AreaMax)5 o número de flores por panícula, o número total de sementes por planta, e mais do que 3 % por peso de núcleo milhar.
Exemplo 11: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas que compreendem a SEQ ID N°: 72
A região codificada compreendida na SEQ ID N°: 72 foi clonada sob o controle do promotor GOS2 de arroz no vetor de trasnformação do arroz como descrito no Exemplo 6. As plantas transgênicas de arroz que compreendem uma região codificadora da SEQ ID N°: 72 foram geradas seguindo os procedimentos do Exemplo 7. As plantas foram avaliadas de acordo com os procedimentos descritos no Exemplo 8. A SEQ ID N°: 72 codifica uma proteína LBD representada pela SEQ ID N°: 52.
A avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam a SEQ ID N0:.72 sob as condições de não tensão mostrou que aqui foi um aumento maior do que 5 % para a biomassa acima do solo (AreaMax), peso da semente por planta, número de sementes enchidas, o número de flores por panícula, o número total de sementes por planta, índice de colheita e mais do que 3 % por peso de núcleo milhar.
A avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam a SEQ ID N°: 72 na avaliação da eficiência do uso de nitrogênio revelado um aumento maior do que 5 % para a biomassa acima do solo (AreaMax). II. Polipeptídeo JMJC (JUMONJI-C) Exemplo 12: A identificação das seqüências relacionadas à seqüência JMJC de ácido nucleico usado nos métodos da invenção
As seqüências (cDNA eSTs de comprimento total ou genômico) relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção onde identificados entre aqueles mantidos no bancos de dados Entrez Nucleotides no National Center for Biotechnology Information (NCBI) usando ferramentas de seqüência de banco de dados, tal como a ferramenta de alinhamento local básica (BLAST) (Altschul et al. (1990) J. Mot Biol. 215:403-410; e Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402). O programa é usado para observar as regiões da similaridade local entre seqüências em comparação ácido nucleico ou seqüências de polipeptídeos de um banco de dados da seqüência e pelo cálculo da significância estatística de pontos. Por exemplo, o polipeptídeo codificado pelo ácido nucleico usado na presente invenção foi usado pelo algoritmo TBLASTN, com ajustes default e o filtro para ignorar baixa complexidade seqüência apresentada. A produção da análise foi examinada pela comparação em pares, e classificada de acordo com as contagens de probabilidade (valor E), onde a contagem reflete uma probabilidade que um alinhamento particular ocorra pela possibilidade (o valor E inferior, quanto mais significante o acerto). Além disso, os valores E, em comparação também foram contados pela identidade de porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácido nucleico comparado (ou polipeptídeo) em um comprimento particular.
Tabela Bl fornece uma lista das seqüências de ácidos nucleicos relacionados à seqüência JMJC de ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção. Os polipeptídeos com uma acessão estende-se por um ponto e um dígito que representa as variantes de união. Tabela BI: Exemplos de polipeptídeos JMJC
fonte vegetal número de acessão Genbank (ou local) SEQ ID N0 do ácido nucleico SEQ ID N0 da proteína Arabidopsis thaliana AT3G20810 73 74 Arabidopsis thaliana AT3G20810 83 84 Arabidopsis thaliana AT5G19840 85 86 Arabidopsis thaliana AT3G45880 87 88 Medicago truncatula ABE92082 89 90 Brachypodium sylvaticum CAJ26373 91 92 Oryza sativa 0s09g0483600 93 94 Arabidopsis thaliana AT1G08620 95 96 Arabidopsis thaliana ATl G09060 97 98 Arabidopsis thaliana ATl G09060 99 100 Arabidopsis thaliana ATl G09060 101 102 Arabidopsis thaliana AT 1 G 11950 103 104 Arabidopsis thaliana ATl G30810 105 106 Arabidopsis thaliana AT1G62310 107 108 Arabidopsis thaliana AT1G63490 109 110 Arabidopsis thaliana AT1G78280 111 112 Arabidopsis thaliana AT2G34880 113 114 Arabidopsis thaliana AT2G38950 115 116 Arabidopsis thaliana AT3G07610 117 118 Arabidopsis thaliana AT3G48430 119 120 Arabidopsis thaliana AT4G00990 121 122 Arabidopsis thaliana AT4G20400 123 124 Arabidopsis thaliana AT4G20400 125 126 Arabidopsis thaliana AT5G04240 127 128 Arabidopsis thaliana AT5G06550 129 130 Arabidopsis thaliana AT5G46910 131 132 Arabidopsis thaliana AT5G63080 133 134 Oryza sativa OsOl g36630 135 136 Oryza sativa OsOl g67970 137 138 Oryza sativa 0s02g01940 139 140 Oryza sativa 0s02g58210 141 142 Oryza sativa 0s02g58210 143 144 Oryza sativa 0s03g05680 145 146 Otyza sativa 0s03g22540 147 148 Oryza sativa 0s03g27250 149 150 Oryza sativa 3s03g31594 151 152 Oryza sativa 3s03g31594 153 154 Oryza sativa )s05g 10770 155 156 Oryza sativa )s05g23670 157 158 Otyza sativa 0s09g22540 159 160 Oryza sativa 0sl0g42690 161 162 Oryza sativa Osllg36450 163 164 Oryza sativa Os 12g 18149 165 166 Oryza sativa Os Ug 18150 167 168 Glycine max GmJMJl 169 170
Em alguns exemplos, as seqüências relacionadas tem sido
como tentativa reunido e publicado descoberto pelas instituições de busca, tal como The Institute for Genomic Research (TIGR). Os bancos de dados Eukaryotic Gene Orthologs (EGO) podem ser usados para identificar tais seqüência relacionadas pela busca de palavra chave ou pelo uso de algoritmo BLAST com o ácido nucleico ou seqüência de polipeptídeo de interesse. Exemplo 13: Alinhamento das seqüências de polipeptídeos JMJC
O alinhamento das seqüências de polipeptídeos foi realizado usando o programa AlignX a partir do vetor NTI (Invitrogen) que é baseado no algoritmo Clustal W popular do alinhamento progressivo (Thompson et al. (1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al. (2003). Nucleic Acids Res 31:3497-3500). Os valores default são pela penalidade aberta de fenda de 10, pela penalidade de extensão de fenda de 0,1 e a matriz do peso selecionado é Blosum 62 (se os polipeptídeos são alinhados). Uma edição menor do manual pode ser feita ainda para otimizar o alinhamento. A conservação da seqüência entre os polipeptídeos JMJC é a maior no domínio JmjC dos polipeptídeos. A região correspondente aos motivos representados pela SEQ ID N°: 79 e pela SEQ ID N°: 81 é mais conservados do que do Motivo 8. Uma seqüência de consenso é dada. Os resíduos de aminoácidos nas seqüências de consenso são altamente conservados. Os brancos nas seqüências conservadas representam qualquer aminoácido. Os polipeptídeos JMJC são alinhados na Figura 7.
Exemplo 14: Cálculo da identidade global da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos JMJC úteis na realização de métodos da invenção
As porcentagens globais de similaridade e identidade entre as seqüências de polipeptídeos de comprimento total úteis na realização de métodos da invenção foram determinados usando um dos métodos disponíveis na técnica, o software MatGAT (Ferramenta de alinhamento global de matriz) (BMC Bioinformatics. 2003 4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando seqüências de DNA ou proteínas. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; software hospedado por Ledion Bitincka). O software MatGAT gera as matrizes de similaridade/identidade para seqüência de proteínas ou DNA sem necessariamento o pré-alinhamento dos dados. O programa realiza uma série de alinhamento em pares usando o algoritmo de alinhamento global Myers and Miller (com uma penalidade de abertura de fenda de 12, e a penalidade de extensão de fenda de 2), calcula a similaridade e identidade usando por exemplo Blosum 62 (para os polipeptídeos), e então coloca os resultados em uma matriz de distância. A similaridade da seqüência é mostrada na metada da parte inferior da linha de divisão e a identidade de seqüência é mostrada na metada da parte superior da linha de divisão diagonal.
Parâmetros usados na comparação foram: Matriz de contagem: Blosum62 219
Primeira fenda: 12
Extensão da fenda: 2
Os resultados da análise do software são mostrados na Tabela B2 pela similiaridade e identidade global no comprimento total de uma seqüência de polipeptídeos. A identidade da porcentagem é dada acima em diagonal em negrito e a porcetagem da similaridade é dada abaixo em diagonal (face normal).
A identidade da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos JMJC úteis na realização de métodos da invenção podem ser tão baixo quanto 15 % da identidade de aminoácido comparado a SEQ ID N°: 74. Tabela B2: Resultados MatGAT para a similaridade e identidade global no comprimento total de uma seqüência de polipeptídeos.
SEQID NO: 74 SEQID NO: 84 SEQID N0:86 SEQED NO: 90 SEQID NO: 92 SEQID NO: 94 SEQID NO: 136 AT3G20810.1 SEQ ID NO: 74 97,4 16,1 15,5 16,9 17,3 15,5 AT3G20810.2 SEQ ID NO: 84 97,4 15,5 14,5 17,5 17,1 14,9 AT5G19840 SEQ ID NO: 86 30,3 30,7 16,9 17 16,9 16,9 ABE92082 SEQ ID NO: 90 28,2 27,7 28,5 51,8 51,7 17,3 CAJ26373 SEQ ID NO: 92 30,1 29,6 27,7 67,6 82,5 12,4 0s09g0483600 SEQ ID NO: 94 30,1 30,1 27,5 67,3 89,6 16,1 0s01g36630 SEQ ID NO: 136 33,7 31,2 32,9 34,2 29,1 29,6
Exemplo 15: A identificação dos domínios compreendidos nas seqüências de
polipeptídeos JMJC úteis na realização de métodos da invenção
O recurso integrado das famílias de proteínas, os bancos de
dados de locais e domínios (InterPro) é uma interface integrada para os
bancos de dados assinados comumente usados para as buscas com base no
texto e seqüência. O banco de dado InterPro combina estes bancos de dados,
que usam as metodologias diferentes e variam os graus de informação
biológica sobre as proteínas bem caracterizadas para derivar os sinais da
proteína. A colaboração dos bancos de dados incluem SWISS-PROT,
PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom e Pfam, Smart e TIGRFAMs. O
Pfam é uma ampla coleção de alinhamentos de seqüência múltipla e modelos
Markov secretos que cobrem muitos dos domínios de proteína comuns e
famílias. O Pfam é hospedado no servidor Sanger Institute in the United
Kingdom. O Interpro é hospedado no European Bioinformatics Institute in the United Kingdom.
A Tabela B3 mostra os ajustamentos (corte Gathering, corte de
confiança e corte de ruído) como descrito nos bancos de dados Pfam foram usados para produzir o HMMs fs pelos diferentes domínios. Tabela B3: Ajustamentos de HMMs fs.
Domínio Corte Gathering Corte de confiança Corte de ruído PF02373 16 16,1 15,9 PF02375 15 16,8 13,8 PF02928 25 44,4 21,1 PF00646 17,7 17,7 17,6 PF00096 22,5 22,5 22,4 PF04967 15,4 15,4 3 Os resultados da avaliação Pfam para os polipeptídeos
representativos JMJC de origem vegetal são apresentados na Tabela B4. As
coordenadas do aminoácido para cada domínio na seqüência de referência é
indicado nas colunas de inicio e fim. O valor E do alinhamento também é
dado. O número de acessão InterPro ID de cada domínio identificado também é fornecido.
Tabela B4: Resultados de avaliação Pfam (maiores números de acessão) de polipeptídeos representativos JMJC de origem vegetal.
SEQ ID N0 d proteína Número (nome) d acessão GenbanJ (local) ebanco kde dados entrada ValorE início fim InterPro ID descrição InterPro 96 AT1G08620 Pfam PF02373 1.10E-62 368 484 1PR00334' Fator de transcrição jumonji JmjC 96 ATl G08620 Pfam PF02375 1.50E-16 127 165 IPR003349 Fator de transcrição jumonji JmjN 96 ATl G08620 Pfam PF02928 9.10E-22 591 644 IPR004198 Dedo de Zn, tipo C5HC2 96 AT1G08620 SMART SM00541 1.10E-17 962 1006 1PR003888 FY-rich domain, N-terminal 96 AT1G08620 SMART SM00542 1.30E-43 1012 1106 IPR003889 Domínio rico em FY, terminal N 98 ATl G09060 Pfam PF02373 6.80E-06 644 856 IPR003347 Fator de transcrição jumonji JmjC 104 ATlGl 1950 Pfam PF02373 1.00E-23 645 825 1PR003347 Fator de transcrição jumonji jmjC 106 AT1G30810 Pfam PF02373 5.00E-30 294 378 1PR003347 Fator de transcrição jumonji jmjC 106 AT1G30810 Pfam PF02375 3.10E-24 58 104 1PR003349 Fator de transcrição umonji jmjN 106 \T1G30810 Pfam PF02928 1.50E-30 487 540 1PR004198 Dedo de Zn, tipo C5HC2 106 \T1G30810 SMART SM00541 1.30E-17 526 S70 IPR003888 domínio rico :m FY, erminal N 106 VT1G30810 5 SMARTS 5M00542 .20E-39 >76 ?62 PR003889 Domínio rico ;m FY, erminal N 108 t- mG62310 F >fam F 'F02373 2 .OOE-27 1 '33 8 46 I PR003347 t j "ator de ranscrição umonji jmjC 108 LT1G62310 [P roSite F 'S50089 1 0.173 2 09 2 56 1 PROO1841 ί Γ 'n-fínger, UNG 110 U.T1G63490 Pfam PF00628 5.40E-08 1009 1053 !Semelhante a 1PR001965 dedo de zinco, dedo de PHD 110 U.T1G63490 Pfam PF02373 3.10E-60 66 182 (Fator de lPR003347rtranscrição IjumonjijmjC HO IAT1G63490 Pfam PF02928 W.80E-33 276 329 FPR004198 Γ^^® Z"' Itipo C5HC2 112 IAT1G78280 Pfam PF00646 0.00012 15 62 FPR001810FyclÍn-1ÍkeF- |box 112 LT1G78280 Pfam PF02373 |4. IOE-12 249 362 [Fator de IPR003347 b-anscrição IjumonjijmjC 112 IAT1G78280 ProSite PS50181 9.603 14 60 |F box IPR001810 semelhante à Iciclina 114 LAT2G34880 Pfam PF02373 1.50E-67 294 410 IFator de 1PR003347 transcrição jumonji jmjC 114 U.T2G34880 Pfam PF02375 3.70E-29 60 106 IFator de 1PR003349 transcrição Ijumonji jmjN 114 U.T2G34880 Pfam PF02928 1.40E-23 514 567 lPR004198lDed° Td® Zn' Itipo C5HC2 114 U.T2G34880 SMART SM00541 9.90E-17 643 687 iDomínio rico 1PR003888 em FY, |terminal N 114 U.T2G34880 SMART SM00542 W.60E-39 693 781 IDominio rico 1PR003889 em FY, (terminal N 116 UT2G38950 Pfam PF02373 W.60E-47 321 437 IFator de 1PR003347 transcrição jumonji jmjC 116 U.T2G38950 Pfam PF02375 9.30E-28 107 153 IFator de 1PR003349 transcrição IjumonjijmjN 116 IAT2G38950 Pfam PF02928 5.90E-27 544 597 lPR004198Ped° bpo C5HC2 118 U.T3G07610 Pfam PF02373 3.40E-15 726 B43 IFator de 1PR003347 transcrição IjumonjijmjC 120 U.T3G48430 5fam ^00096 0.014 243 1268 IPR007087ped° de Zn' ppo C2H2 120 UT3G48430 >fam F >F00096 0.0022 296 320 PR007087 Pedo de Zn' bpo C2H2 120 IAT3G48430 F 'fam E 'F00096 0.00026 326 352 PR007087 Pedo de Zn' bpo C2H2 120 U.T3G48430 F fam F 'F02373 9.00E-52 2 33 3 52 1 IFator de PR003347 transcrição jumonji jmjC 120 U.T3G48430 P fam P F02375 1.30E-07 1 9 6 2 1 |Fator de PR003349 transcrição jumonji jmjN 120 L\T3G48430 P roSite P S00028 0.00008 1 268 1 290 1 PR007087r?edo de Zn' bpo C2H2 122 AT4G00990 P fam P F02373 p.80E-16 6 07 7 81 Π nmjC 3R003347 ÍTranscription factor jumonji. 124 AT4G20400 P fam P F02373 4.60E-68 2 39 3 55 1 PR003347Fator . de !transcrição jumonji jmjC 124 AT4G20400 Pfam PF02375 9.60E-11 7 44 1PR00334! Fator de ) transcrição jumonji jmjN 124 AT4G20400 Pfam PF02928 5.70E-30 462 515 1PR00419Í Dedo de Zn, tipo C5HC2 124 AT4G20400 SMAR' Γ SM0054 4.40E-15 683 727 IPR003888 Domínio rico em FY, terminal N 124 AT4G20400 SMARl rSM00542 7.40E-41 733 830 1PR003889 Domínio rico em FY, terminal N 128 AT5G04240 Pfam PF00096 0.41 1228 1253 1PR007087 Dedo de Zn, tipo C2H2 128 AT5G04240 Pfam PF00096 0.0028 1281 1305 1PR007087 Dedo de Zn, tipo C2H2 128 AT5G04240 Pfam PF00096 0.0016 1311 1337 1PR007087 Dedo de Zn, tipo C2H2 128 AT5G04240 Pfam PF02373 1.10E-48 292 411 1PR003347 Fator de transcrição jumonji jmjC 128 AT5G04240 Pfam PF02375 1.00E-09 15 58 1PR003349 Fator de transcrição jumonji jmjN 130 AT5G06550 Pfam PF00646 0.0013 81 128 1PR001810 F box semelhante à ciclina 130 AT5G06550 Pfam PF02373 3.20E-07 311 422 IPR003347 Fator de transcrição jumonji jmjC 130 AT5G46910 Pfam PF02373 1.00E-49 199 322 1PR003347 7ator de transcrição umonji jmjC 132 4T5G46910 Pfam PF02375 2.90E-09 21 52 [PR003349 Fator de ranscrição umonji jmjN 134 \T5G63080 3fam •Ψ02373 5.90E-16 L 64 no PR003347 j "ator de ranscrição umonji jmjC 74 ^T3G20810 3fam I 5F02373 C ).00013 . 2 !78 Í09 PR003347 1 t j •ator de ranscrição umonji jmjC 84 IT5G19840 F »fam E 'F02373 C .036 1 73 2 1 81 PR003347F ti j 'ator de ranscrição umonji jmjC 86 ' lT5G 19840 P fam P F04967 0 .47 2 95 3 07 1 PR007050 b ITH DNA inding domain 170 C imJMJl ρ fam P 1 F02373. 9 1 .70E-06 2 97 04 I] PR003347 d omínio JmjC
Exemplo 16: Clonagem da seqüência JMJC de ácido nucleico usado nos métodos da invenção
A seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção foi amplificado por PCR usando como modelo uma biblioteca de cDNA de mudas feitas comumente de Arabidopsis thaliana (em pCMV Sport 6.0; Invitrogen, Paisley, UK). O PCR foi realizado usando a polimerase Hifi Taq
DNA em condições padrões, usando 200 ng do modelo em uma mistura de
PCR a 50 μΐ. Um iniciador a montante e a jusante como representado pela
SEQ ID N°: 75 e SEQ ID N°: 76 respectivamente foram usados para
amplificar por PCR (Reação de cadeia de polimerase) a região codificadora
de JMJC como representado pela SEQ ID N°: 73. Os iniciadores incluem os
locais AttB para a recombinação Gateway para facilitar a clonagem do
fragmento de DNA de PCR amplificado no vetor de clonagem Gateway.
O fragmento de PCR amplificado também foi purificado
usando métodos padrões. A primeira etapa do procedimento Gateway, a
reação BP, foi então realizada, durante o qual fragmento PCR recombina in
vivo com o plasmídio pDONR201 para produzir, de acordo com a
terminologia Gateway, um "clone de entrada", pJMJC. O plasmídio
pDONR201 foi adquirido de Invitrogen, como partes da tecnologia Gateway®.
O clone de entrada que compreende a SEQ ID N°: 73 foi então usado em uma reação LR com um vetor de destino usado pela transformação Oryza sativa. Este vetor contido como os elementos funcionais dentro dos limites de T-DNA: um marcador selecionável vegetal; um cassete de expressão marcador avaliável; e um cassete Gateway pretendido pela recombinação LR in vivo com a seqüência do ácido nucleico de interesse já clonado no clone de entrada. Um promotor GOS2 de arroz (SEQ ID N°: 77) para a expressão constitutiva foi localizada a montante deste cassete Gateway.
Após a etapa de recombinação LR, o vetor de expressão resultante pGOS2::JMJC (Figura 9) foi trasnformado na cepa da
Agrobacterium LBA4044 de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica.
Exemplo 17: Transformação da planta
A transformação das plantas foi realizada de acordo com os procedimentos resumidos no Exemplo 7 Exemplo 18: Procedimento de avaliação fenotípica 18.1 Apresentação da avaliação
Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados. Os transformantes primários foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para o desenvolvimento e coletado da semente TL Oito eventos, de que uma progênie Tl segregada 3:1 para a presença/ausência do transgene, foi retida. Para cada um destes eventos, aproximadamente 10 mudas Tl contendo o transgene (hetero e homozigotos) e aproximadamente 10 mudas Tl perderam o transgene (nulizigotos) foram selecionadas pela expressão marcadora visual do monitoramento. As plantas transgênicas e os nulizigotos correspondentes foram desenvolvidos lado a lado em posições aleatórias. As condições da estufa foram de dias curtos (12 horas de luz), 28° C na luz e 22° C no escuro, e uma umidade relativa de 70 %. O desenvolvimento das plantas sob as condições de não tensão são fornecidos com água em intervalos regulares para garantir que a água e nutrientes não são limitantes para satisfazer a necessidade da planta para completar o crescimento e desenvolvimento.
Quatro eventos Tl ainda foram avaliados na geração T2 seguindo o mesmo procedimento de avaliação como para a geração Tl mas com mais indivíduos por evento. A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo as imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes. Avaliação da aridez
As plantas a partir das sementes T2 foram desenvolvidas no solo em potes sob condições normais até estes aproximarem do estágio superior. Estes foram então transferidos à seção "seca" onde a irrigação foi retida. As sondas de umidade foram inseridas em potes escolhidos aleatoriamente para monitorar o teor de água no solo (SWC). Quando o SWC está abaixo de certos limiares, as plantas foram automaticamente novamente submetidas à água continuamente até um nível normal foi atingido novamente. As plantas foram então re-transferidas novamente a condições normais. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) foi o mesmo para as plantas não desenvolvidas sob as condições de tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. Avaliação da eficiência do uso de nitrogênio
As plantas de arroz das sementes T2 são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais exceto para a solução do nutriente. Os potes são submetidos à água a partir da transplantação do amadurecimento com uma solução de nutriente específico contendo o teor de nitrogênio N reduzido (N), usualmente entre 7 a 8 vezes menor. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob a tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. 18.2 Análise estatística: Teste F
Dois fatores ANOVA (análise de variantes) foi usado como um modelo estatístico para a avaliação total das características fenotípicas das plantas. Um teste F foi realizado em todos os parâmetros medidos de todas as plantas de todos os eventos transformados com o gene da presente invenção. O teste F foi realizado para checar por um efeito do gene em todos os eventos de transformação e para verificar por um total do efeito do gene, também conhecido como um efeito do gene global. O limiar para a significância por um efeito verdadeiro do gene global foi apresentado em uma 5 % do nível de probabilidade para o teste F. Um ponto de valor do teste F significante por um efeito do gene, significando que este não é apenas uma mera presença ou posição do gene que está causando as diferenças no fenotipo.
Por causa de dois experimentos com os eventos de sobreposição foram realizados, uma análise combinada foi realizada. Este é útil para checar a consistência dos efeitos nos dois experimentos, e se este é o caso, para acumular a evidência de ambos experimentos a fim de aumentar a confidência da conclusão. O método usado foi um método modelo misturado que leva em conta a estrutura multinível dos dados (isto é experimento - evento - segregantes). Os valores P obtidos em comparação ao teste de razão de probabilidade para distribuições quadradas chi. 18.3 Parâmetros medidos Medição do parâmetro relacionado à biomassa
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período das imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
Uma área da planta acima do solo (ou biomassa da folha) foi determinado pela contagem do número total de píxeis nas imagens digitais a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelos desenhos retirados do mesmo ponto de tempo de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os experimentos mostram que à área da planta acima do solo medida desta maneira correlaciona com a biomassa das partes das plantas trituradas acima. À área triturada acima é a área medida no ponto de tempo em que a planta tem atingido esta biomassa máxima da folha. O vigor precoce é à área das planta (mudas) acima do solo três semanas pós-germinação. O aumento na biomassa da raiz é expressado como um aumento no total da biomassa da raiz (medido como biomassa máxima de raízes observadas durante a vida toda de uma planta); ou como um aumento na raiz/índice de broto (medido como a razão entre massa de raiz e massa de broto no período de desenvolvimento ativo da raiz e broto).
O vigor precoce foi determinado pela contagem do número total de píxeis a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras tiradas no mesmo tempo de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os resultados descritos abaixo são para as plantas com três semanas pós-germinação. Medições dos parâmetros relacionados à semente
As panículas primárias maduras foram coletadas, contadas, ensacadas, rotuladas com código de barra e então secadas por três dias em um forno a 37° C. As panículas foram então limiadas e todas as sementes foram coletadas e contadas. As cascas enchidas foram separadas a partir de um vazio usando um dispositivo de sopro de ar. As cascas vazias foram descartadas e a fração remanescente foi contada novamente. As cascas enchidas foram pesadas em uma balança analítica. O número de sementes enchidas foi determinado pela contagem do número de cascas enchidas que permanece depois da etapa de separação. A produção total de semente foi medida pela pesagem total das cascas enchidas coletadas a partir da planta. O número total de semente por planta foi medida pela contagem do número de cascas coletadas a partir da planta. Peso de núcleo milhar (TKW) é extrapolado do número de sementes enchidas contadas e seu peso total. O índice de colheita (HI) na presente invenção é definida como a razão entre a produção total de semente e à área triturada acima (mm2), multiplicada por um fator IO6. O número total de flores por panícula como definido na presente invenção é a razão entre o número total de sementes e o número de panículas primárias maduras. A taxa de abastecimento da semente como definido na presente invenção é a proporção (expressado como uma %) do número de sementes enchidas no número total de sementes (ou florzinhas). Exemplo 19: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas
Os resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam o ácido nucleico JMJC como representado pela SEQ ID N°: 73 sob as condições de não tensão são apresentadas abaixo. Um aumento em pelo menos 5 % foi observado para o vigor de emergência (vigor precoce), índice de broto/raiz, total da produção de semente, índice de colheita, e em pelo menos 3 % por peso de núcleo milhar nas plantas transgênicas quando comparados ao controle de plantas nulizigotos.
Os resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam a SEQ ID N°: 73 sob condições de tensão-aridez são apresentadas abaixo. Um aumento em pelo menos 5 % foi observado para o índice de broto/raiz, total peso da semente, número de sementes enchidas, taxa de abastecimento, índice de colheita e em pelo menos 3 % por peso de
núcleo milhar nas plantas transgênicas quando comparados ao controle de plantas nulizigotos. III. Caseína de quinase I
Exemplo 20: A identificação das seqüências relacionadas à seqüência CKI de ácido nucleico usado nos métodos da invenção
As seqüências (cDNA eSTs de comprimento total ou genômico) relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usadas nos métodos da presente invenção são identificados entre estes mantidos nos bancos de dados Entrez Nucleotides at the National Center for Biotechnology Information (NCBI) usando as ferramentas de seqüência de banco de dados, tal como a ferramenta de alinhamento local básica (BLAST) (Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; e Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402). O programa é usado para observar as regiões da similaridade local entre as seqüências em comparação ao ácido nucleico ou seqüências de polipeptídeos de um banco de dados da seqüência e pelo cálculo da significância estatística de pontos. Por exemplo, o polipeptídeo codificado pelos ácidos nucleicos usado na presente invenção são usados pelo algoritmo TBLASTN, com ajustes default e o filtro para ignorar baixa complexidade da seqüência apresentada. A produção da análise é revisada pela comparação em pares, e classificada de acordo com as contagens de probabilidade (valor E), onde a contagem reflete a probabilidade que um alinhamento particular ocorra pela possibilidade (o valor E inferior, quanto mais significante o acerto). Além disso os valores E, em comparação são também contados pela identidade de porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácido nucleico comparado (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. Em alguns exemplos, os parâmetros default podem ser ajustados para modificar a estringência da busca. Por exemplo o valor E pode ser aumentado para mostrar menores pontos estringentes. Desta maneira, os pontos curtos próximos exatos podem ser identificados.
Em alguns exemplos, as seqüências relacionadas podem ser tentativamente reunidas e publicadas, descobertas pelas instituições de busca, tal como The Institute for Genomic Research (TIGR). Os banco de dados Eukaryotic Gene Orthologs (EGO) podem ser usados para identificar tais seqüência relacionadas pela busca de palavra chave ou pelo uso de algoritmo BLAST com o ácido nucleico ou seqüência de polipeptídeo de interesse. Exemplo 21: Alinhamento das seqüências GRP de polipeptídeos
O alinhamento das seqüências de polipeptídeos é realizado usando o programa AlignX a partir da embalagem do vetor NTI (Invitrogen) que é baseado no algoritmo Clustal W popular do alinhamento progressivo (Thompson et at. (1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al. (2003). Nucleic Acids Res 31:3497-3500). Os valores default são pela penalidade aberta de fenda de 10, pela penalidade de extensão de fenda de 0,1 e a matriz do peso selecionado é Blosum 62 (se os polipeptídeos são alinhados). Uma edição menor do manual pode ser feita ainda para otimizar o alinhamento.
A uma árvore fílogenética de polipeptídeos GRP é construído usando um algoritmo de ajustamento de ligação próxima como fornecido no programa AlignX do vetor NTI (Invitrogen).
Exemplo 22: Cálculo da identidade global da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
As porcentagens globais de similaridade e identidade entre as seqüências de polipeptídeos de comprimento total úteis na realização de métodos da invenção são determinadas usando um dos métodos disponíveis na técnica, o software MatGAT (Ferramenta de alinhamento global de matriz) (BMC Bioinformatics. 2003 4:29. MatGAT: uma aplicação que gera as matrizes de similaridade/identidade usando seqüências de DNA ou proteínas. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; software hospedado por Ledion Bitincka). O software MatGAT gera as matrizes de similaridade/identidade para as seqüência de proteínas ou DNA sem necessariamento o pré- alinhamento dos dados. O programa realiza uma série de alinhamento em pares usando o algoritmo de alinhamento global Myers and Miller (com uma penalidade de abertura de fenda de 12, e a penalidade de extensão de fenda de 2), calcula a similaridade e identidade usando por exemplo Blosum 62 (para os polipeptídeos), e então coloca os resultados em uma matriz de distância. A similaridade da seqüência é mostrada na metada da parte inferior da linha de divisão e a identidade de seqüência é mostrada na metada da parte superior da linha de divisão diagonal.
Parâmetros usados na comparação foram: Matriz de contagem: Blosum62 Primeira fenda: 12
Extensão da fenda: 2
A Tabela MATGAT para o alinhamento local de um domínio específico, ou dados em % da identidade/similarity entre os domínios específicos também podem ser gerados.
Exemplo 23: A identificação dos domínios compreendidos nas seqüências de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
O recurso integrado das famílias de proteínas, bancos de dados de locais e domínios (InterPro) é uma interface integrada para os bancos de dados assinados comumente usados para as buscas com base no texto e seqüência. O banco de dado InterPro combina este banco de dados, que usam as metodologias diferentes e variam os graus de informação biológica sobre as proteínas bem caracterizadas para derivar os sinais da proteína. A colaboração dos bancos de dados incluem SWISS-PROT, PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom e Pfam, Smart e TIGRFAMs. O Pfam é uma ampla coleção de alinhamentos de seqüência múltipla e modelos Markov secretos que cobrem muitos dos domínios de proteína comuns e famílias. O Pfam é hospedado no servidor do Sanger Institute in the United Kingdom. O Interpro é hospedado no European Bioinformatics Institute in the United Kingdom.
A seqüência de proteínas que representam o GRP são usadas como questão para buscar o banco de dado InterPro.
Exemplo 24: Predição da topologia de uma seqüência de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
O TargetP 1.1 prediz a localização subcelular das proteínas eucanóticas. A indicação da localização é com base na presença predita de qualquer uma das pré-sequências do terminal N: peptídeo de transição de cloroplasto (cTP), peptídeo de alvejamento mitocondrial (mTP) ou peptídeo de sinal de caminho secretório (SP). As contagens em que a predição final não são baseados nas reais probabilidades, e estes não são necessariamente adicionado a um. Entretanto, a localização com a contagem mais alta é igualmente de acordo com o TargetP, e a conexão entre as contagens (a classe de confiabilidade) pode ser uma indicação de que certas predições são. A classe de confiabilidade (RC) varia de 1 a 5, onde 1 indica a predição mais forte. O TargetP é mantido no servidor da Technical University of Denmark.
Para as seqüências preditas por conter uma pré-sequência de terminal N e um local de clivagem potencial também pode ser predito.
Um número de parâmetros foram selecionados, tal como grupo de organismos (vegetal ou não vegetal), séries de cortes (nenhum, série pré- definida de cortes, ou série especificadas pelo uso de cortes), e o cálculo da predição dos locais de clivagem (sim ou não).
A seqüência de proteínas que representam o GRP são usadas para questionar o TargetP 1.1. O grupo de organismos "vegetal" é selecionado, nos cortes definidos, e o comprimento predito do peptídeo de transição requerido.
Muitos outros algoritmos podem ser usados para realizar tais análises, incluindo:
• ChloroP 1.1 hospedado no servidor da Technical University
of Denmark;
• Protein Prowler Subcellular Localisation Predictor versão 1.2 hospedado no servidor do Institute for Molecular Bioscience, University of Queensland, Brisbane, Australia;
• PENCE Proteome Analyst PA-GOSUB 2.5 hospedado no servidor da University of Alberta edmonton, Alberta, Canada;
• TMHMM, hospedado no servidor da Technical University of
Denmark
Exemplo 25: Clonagem da seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção
Clonagem da SEQID N°: 171:
A seqüência do ácido nucleico da SEQ ID N°: 171 usada nos métodos da invenção foi amplificado por PCR usando como modelo uma feitas comumente das biblioteca de cDNA de mudas Arabidopsis thaliana (em pCMV Sport 6.0; Invitrogen, Paisley, UK). O PCR foi realizado usando a polimerase Hifi Taq DNA em condições padrões, usando 200 ng do modelo em uma mistura de PCR a 50 μΐ. Os iniciadores usados foram prm8667 (SEQ ID N°: 177; sentido, códon de partida em negrito):
5'-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttaaacaatggactgcaacatggtatct-
I
3
e prm8668 (SEQ ID N°: 178; reverso, complementar):
'-ggggaccactttgtacaagaaagctgggtcacattacttactcatctattttgg-3',
que incluem os locais AttB para a recombinação Gateway. O fragmento de PCR amplificado também foi purificado usando métodos padrões. A primeira etapa do procedimento Gateway, a reação BP, foi então realizada, durante o qual fragmento PCR recombina in vivo com o plasmídio pDONR201 para produzir, de acordo com a terminologia Gateway, um "clone de entrada". O plasmídio pDONR201 foi adquirido de Invitrogen, como partes da tecnologia Gateway®.
Clonagem da SEQ ID N°: 173:
Um experimento cDNA-AFLP foi realizado em uma cultura celular BY2 de tabaco sincronizado (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow- 2), e rótulos de seqüência expressados BY2 que foram modulados pelo ciclo celular e foram eleitos para a clonagem adicional. Os rótulos de seqüência expressados foram usados para avaliar uma biblioteca de cDNA de tabaco e para isolar o cDNA de comprimento total de interesse, nomeado um codificador para a SEQ ID N0: 173.
Uma suspensão celular cultivada de tabaco BY2 (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow-2) foi sincronizada pelas células que bloqueiam na fase S precocimente como afidicolina como seguem. A suspensão celular de Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow 2 foi mantida como descrito (Nagata et al. Int. Rev. Cytol. 132, 1-30, 1992). Para a sincronização, uma cultura estacionária de 7 dias de idade foi diluída 10 vezes em meio fresco suplementado com afidicolina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO; 5 mg/l). Após 24 horas, as células foram liberadas do bloqueio por diversas lavagens com meio fresco após ter o seu ciclo celular de progressão resumido.
O RNA total foi preparado usando a precipitação LiCI e RNA poli(A+) foi extraído de 500 μg do RNA total usando colunas Oligotex (Qiagen, Hilden, Germany) de acordo com as instruções do fabricante. Partida de 1 μg de RNA poli(A+), primeiro cDNA de filamento foi sintetizado pela transcrição reversa com um iniciador oligo-dT25 biotinilado (Genset, Paris, France) e Superscript II (Life Technologies, Gaithersburg, MD). A segunda síntese de filamento foi feita pelo deslocamento do filamento com ligase Escherichia coli (Life Technologies), polimerase de DNA I (USB, Cleveland, OH) e RNAse-H (USB).
Quinhentos ng de cDNA filamentado duplo foi usado pela análise AFLP como descrito (Vos et al., Nucleic Acids Res. 23 (21) 4407- 4414, 1995; Bachem et al., Plant J. 9 (5) 745-53, 1996) com modificações. As enzimas de restrição usadas foram BstYl e Msel (Biolabs) e a digestão foi feita em duas etapas separadas. Após a primeira restrição da digestão com uma das enzimas, os fragmentos da extremidade final 3' foram presos naas pérolas Dyna (Dynal, Oslo, Norway) por meio de sua calda biotinilada, enquanto os outros fragmentos foram logo lavados. Após a digestão com a segunda enzima, os fragmentos de restrição liberados foram coletadas e usados como modelos nas etapas AFLP subsequentes. Para as pré- amplificações, um iniciador Msel sem nucleotídeo seletivos foi combinado com um iniciador BstYl contendo um T ou um C como mais nucleotídeos 3'. As condições PCR foram como descritos (Vos et al., 1995). As misturas de amplificação obtida foram diluídas 600 vezes e 5 μΐ foi usado para as amplificações seletivas usando um iniciador BstYl rotulado por P33 a polimerase Amplitaq-Gold (Roche Diagnostics, Brussels, Belgium). Os produtos de amplificação foram separados em 5 % de géis poliacrilamidas usando o sistema Sequigel (Biorad). Géis secos foram expostos às películas Kodak Biomax bem como escaneadas em um PhosphorImager (Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, UK).
Os bandos correspondentes aos transcriptos diferentemente expressados, entre o qual o transcripto correspondente (parcial) da SEQ ID N°: 173, foram isolados a partir de gel e DNA eluído foi amplificado novamente sob as mesmas condições como para a amplificação seletiva. A informação da seqüência foi obtida pelo sequenciamento direto da reação amplificada novamente de cadeia de produto de polimerase com o iniciador BstYI seletivo ou após a clonagem do fragmento em pGEM-T leve (Promega, Madison, WI) e sequenciamento de clones individuais. As seqüências obtidas foram comparadas contra os nucleotídeos e as seqüências de proteínas presentes nos bancos de dados publicamente disponíveis pelos alinhamento de seqüência BLAST (Altschul et ai, Nucleic Acids Res. 25 (17) 3389-3402 1997). Quando disponível, as seqüências de rótulo foram substituídas com EST mais longos ou seqüências de cDNA isolados para aumentar a chance de observar a homologia significante. O clone cDAN físico correspondente a SEQ ID N0 173 foi subseqüentemente amplificado a partir de uma biblioteca de cDNA de tabaco comercial como seguem:
Uma biblioteca de c-DNA com um tamanho médio de inserções de 1.400 bp foi preparado de RNA poli(A+) isolado da divisão ativamente, nas células de tabaco BY2 não sincronizadas. Estas inserções na biblioteca foram clonadas no vetor pCMVSPORTÓ.O, que compreende um cassete Gateway attB (Life Technologies). A partir desta biblioteca, 46.000 clones foram selecionados, submetidos ao ensaio em pias microtituladoras de 384 reservatórios, e subseqüentemente manchadas em reprodução em filtro de náilon. Os clones submentidos ao ensaio foram avaliados usando grupos de diversas centenas de rótulos rotulados radioativamente como sondas (incluindo o BY2-tag correspondente a uma seqüência SEQ ID N°: 173). Os clones positivos foram isolados (entre o qual o clone correspondente a SEQ ID N°: 173), sequenciado, e alinhado com a seqüência do rótulo. Onde a hidridização com o rótulo falha, o cDNA de comprimento total correspondente ao rótulo foi selecionado pela amplificação de PCR: iniciadores específico de rótulo foram projetados usando software comumente disponível e usado em combinação com um iniciador de vetor comum para amplificar as inserções de cDNA parciais. Os grupos de DNA de 50.000, 100.000, 150.000, e 300.000 clones de cDNA foram usados como modelos nas amplificações de PCR. Os produtos de amplificação foram então isolados a partir dos géis de agarose, clonado, sequenciado e sua seqüência alinhada com aqueles dos rótulos. Próximo, o cDNA de comprimento total correspondente à seqüência de nucleotídeo da SEQ ID N0 173 foi clonada a partir do vetor da biblioteca pCMVsportó.O em pDONR201, um vetor doador de Gateway® (Invitrogen, Paisley, UK) por intermédio de uma reação LR, resultando em um clone de entrada.
O clone de entrada que compreende a SEQ ID N°: 171 ou SEQ ID N°: 173 foi então usado em uma reação LR com um vetor de destino usado pela transformação de Oryza sativa. Este vetor contido como os elementos funcionais dentro dos limites de T-DNA: um marcador selecionável vegetal; um cassete de expressão marcador avaliável; e um cassete Gateway pretendido pela recombinação LR in vivo com uma seqüência do ácido nucleico de interesse já clonado no clone de entrada. Um promotor WSI18 de arroz (SEQ ID N°: 175) para a expessão específica da semente foi localizada a montante deste cassete Gateway.
Após a etapa de recombinação LR, o vetor de expressão resultante pWSI18::GRP (Figura 11) foi transformado na cepa de Agrobacterium LBA4044 de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica.
Em uma construção alternativa do promotor GOS2 de arroz (SEQ ID N°: 176) foi usado, resultando no vetor de expressão pGOS2::GRP. Exemplo 26: Transformação da planta
A transformação das plantas foi realizada de acordo com os procedimentos resumidos no Exemplo 7.
Exemplo 27: Procedimento de avaliação fenotípica 27.1 Apresentação da avaliação
Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados. Os primeiros transformantes foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para o desenvolvimento e coletado da semente TL Seis eventos, de que uma progênie Tl segregada 3:1 para a presença/ausência do transgene, foram retidas. Para cada um destes eventos, aproximadamente 10 mudas Tl contendo o transgene (hetero e homozigotos) e aproximadamente 10 mudas Tl perderam o transgene (nulizigotos) foram selecionadas pela expressão marcadora visual do monitoramento. As plantas transgênicas e os nulizigotos correspondentes foram desenvolvidos lado a lado em posições aleatórias. As condições da estufa foram de dias curtos (12 horas de luz), 28° C na luz e 22° C no escuro, e uma umidade relativa de 70 %. O desenvolvimento das plantas sob as condições de não tensão são fornecidos com água em intervalos regulares para garantir que a água e nutrientes não são limitantes para satisfazer a necessidade das plantas para completar o crescimento e desenvolvimento.
Quatro eventos Tl ainda foram avaliados na geração T2 seguindo o mesmo procedimento de avaliação como para a geração Tl mas com mais indivíduos por evento. A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes. ) 343
Avaliação da aridez
As plantas das sementes T2 foram colocadas em solo em potes sob condições normais até estas aproximarem do estágio superior. Estas foram então transferidas a uma seção "seca" onde a irrigação foi retida. As sondas de umidade foram inseridas em potes escolhidos aleatoriamente para monitorar o teor de água no solo (SWC). Quando SWC está abaixo de certos limiares, as plantas foram atutomaticamente novamentes submetidas à água continuamente até um nível normal ser atingido novamente. As plantas foram então re-transferidas novamente a condições normais. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) foi a mesma como para as plantas não desenvolvidas sob as condições de tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. Avaliação da eficiência do uso de nitrogênio
As plantas de arroz das sementes T2 são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais exceto para a solução do nutriente. Os potes são submetidos à água a partir da transplantação do amadurecimento com uma solução de nutriente específico contendo o teor de nitrogênio N reduzido (N), usualmente entre 7 a 8 vezes menor.
O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob a tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. 27.2 Análise estatística: Teste F
Dois fatores ANOVA (análise de variantes) foram usados como um modelo estatístico para a avaliação total das características fenotípicas das plantas. Um teste F foi realizado em todos os parâmetros medidos de todas as plantas de todos os eventos transformados com o gene da presente invenção. O teste F foi realizado para checar por um efeito do gene em todos os eventos de transformação e para verificar por um total do efeito do gene, também conhecido como um efeito do gene global. O limiar para a significância por um efeito verdadeiro do gene global foi apresentado em uma % do nível de probabilidade para o teste F. Um ponto de valor do teste F significante por um efeito do gene, significando que este não é apenas uma mera presença ou posição do gene que está causando as diferenças no fenotipo.
Por causa de dois experimentos com os eventos de sobreposição foram realizados, uma análise combinada foi realizada. Este é útil para checar a consistência dos efeitos nos dois experimentos, e se este é o caso, para acumular a evidência de ambos experimentos a fim de aumentar a confidência da conclusão. O método usado foi um método modelo misturado que leva em conta à estrutura multinível dos dados (isto é experimento - evento - segregantes). Os valores P obtidos em comparação ao teste de razão de probabilidade para distribuições quadradas chi. 27.3 Parâmetros medidos Medição do parâmetro relacionado à biomassa
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
Uma área da planta acima do solo (ou biomassa da folha) foi determinado pela contagem do número total de píxeis nas imagens digitais a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras retiradas do mesmo ponto de tempo a partir de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os experimentos mostram que à área da planta acima do solo medida desta maneira correlaciona com a biomassa das partes das plantas trituradas acima. A área triturada acima é a área medida no ponto de tempo em que a planta tem atingido esta biomassa máxima da folha.
O vigor precoce é à área das planta (mudas) acima do solo três semanas pós-germinação. O vigor precoce foi determinado pela contagem do número total de píxeis a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras tiradas no mesmo ponto de tempo de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os resultados descritos abaixo são para as plantas com três semanas pós- germinação.
Medições dos parâmetros relacionados à semente
As panículas primárias maduras foram coletadas, contadas, ensacadas, rotuladas com código de barra e então secadas por três dias em um forno a 37° C. As panículas foram então limiadas e todas as sementes foram coletadas e contadas. As cascas enchidas foram separadas a partir de um vazio usando um dispositivo de sopro de ar. As cascas vazias foram descartadas e a fração remanescente foi contada novamente. As cascas enchidas foram pesadas em uma balança analítica. O número de sementes enchidas foi determinado pela contagem do número de cascas enchidas que permanece depois da etapa de separação. A produção total de semente foi medida pela pesagem total das cascas enchidas coletadas a partir da planta. O número total de semente por planta foi medido pela contagem do número de cascas coletadas a partir da planta. Peso de núcleo milhar (TKW) é extrapolado do número de sementes enchidas contadas e seu peso total. O índice de colheita
(HI) na presente invenção é definida como a razão entre a produção total de
2 t ^ semente e à área triturada acima (mm ), multiplicada por um fator 10°. O
número total de flores por panícula como definido na presente invenção é a
razão entre o número total de sementes e o número de panículas primárias maduras. A taxa de abastecimento da semente como definido na presente invenção é a proporção (expressado como uma %) do número de sementes enchidas no número total de sementes (ou florzinhas). Exemplo 28: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas
As plantas transgênicas de arroz que expressam o ácido nucleico GRP representado pela SEQ ID N°: 171 sob o controle do promotor WSI18 mostrando um aumento de mais do que 5 % para a biomassa, peso total das sementes, número de sementes enchidas, taxa de abastecimento, e índice de colheita, quando desenvolvidos sob condições de tensão à aridez. Quando o desenvolvimento sob as condições de não tensão, existe um aumento de mais do que 5 % observado para a biomassa, número de sementes enchidas, peso total das sementes, e número das primeiras panículas.
Para a construção com a SEQ ID N°: 171 sob o controle do promotor GOS2, ujm aumento foi observado nas plantas transgênicas para o vigor precoce e para as flores por panícula, e para cada um destes parâmetros, o aumento foi maior do que 5 %.
As plantas transgênicas que expressam a SEQ ID N°: 173 sob o controle do promotor WSIl 8 e desenvolvidos sob as condições de tensão à aridez, mostrando um aumento no peso total das sementes, número de sementes enchidas, número de flores por panícula, índice de colheita, e peso de núcleo milhar.
Por peso de núcleo milhar o aumento observado foi em pelo menos 3,5 % e para os outros parâmetros o aumento foi maior do que 5 %. IV. Polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD)
Exemplo 29: A identificação das seqüências relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção
As seqüências (cDNA eSTs de comprimento total ou genômico) relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção onde identificados entre aqueles mantidos no banco de dados Entrez Nucleotides at the National Center for Biotechnology Information (NCBI) usando as ferramentas de seqüência de banco de dados, tal como a ferramenta de alinhamento local básica (BLAST) (Altschul et at. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; e Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402). O programa é usado para observar as regiões da similaridade local entre as seqüências em comparação a seqüência de ácido nucleico ou as seqüências de polipeptídeos de um banco de dados da seqüência e pelo cálculo da significância estatística de pontos. Por exemplo, o polipeptídeo codificado por uma seqüência do ácido nucleico da presente invenção foi usado pelo algoritmo TBLASTN, com ajustes default e o filtro para ignorar baixa complexidade seqüência apresentada. A produção da análise foi examinada pela comparação em pares, e classificada de acordo com as contagens de probabilidade (Valor e), onde a contagem reflete a probabilidade que um alinhamento particular ocorra pela possibilidade (o valor E inferior, quanto mais significante o acerto). Além disso aos valores E, as comparações também foram contadas pela identidade de porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências comparadas de seqüências de ácido nucleico (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. Em alguns exemplos, os parâmetros default podem ser ajustados para modificar a estringência da busca. Por exemplo o valor E pode ser aumentado para mostrar os menores pontos estringentes. Desta maneira, os pontos curtos próximos exatos podem ser identificados.
A Tabela Dl fornece uma lista das seqüências de ácidos nucleicos relacionados à seqüência de ácido nucleico PHDf-HD usados nos métodos da presente invenção. Tabela Dl; Exemplos dos polipeptídeos PHDf-HD:
Nome fonte de organismo SEQ ID N0 dc ácido nucleico 3 SEQ ID N0 dt polipeptídeo :acessão do bancc de dados # condição Orysa PHDf HD Oryza sativa 179 180 0s02g05450.1 NM 001052422 FL Arath PHDf HD PRH A Arabidopsis thaliana 181 182 At4g029940 NM 119140 FL Eucgr PHDf HD Eucalyptus grandis 183 184 ADW17964 FL Medtr PHDf HD Medicago truncatula 185 186 AC123547 FL PinraPHDfHD Pinus radiata 187 188 ADW18458 FL Poptr PHDf HD Populus tremuloides 189 190 scaff VI.625 FL SacofPHDfHD Saecharin offieinarum 191 192 CA157855.1, CA261734.1, CA253314.1, CA220753.1, CA201958.1 FL VitviPHDf HD Vitis vinifera 193 184 AM477372.2, AM488059.1 FL ZeamaPHDf HD Zea mays 185 186 EE162310, DN204182, CF057937 FL Arath PHDf HD HA T3.1 Arabidopsis thaliana 187 188 AT3G19510 NMl 12838 FL Lotja PHDf HD Lotus japonicus 189 190 AP006117.1 FL Orysa PHDf HD HA Zl Oryza sativa 191 192 AB081340 0s06g 12400.1 FL Petcr PHDf HD PRHP Petroselinum erispum 193 194 L21975 FL Zeama PHDf HD H OXla Zea mays 195 196 X67561 FL Zeama PHDf HD H OXlb Zeamays 197 198 X92428 FL Zeama PHDf HD H OX2a Zea mays 199 200 X89760.1 FL Zeama PHDf HD HOX2b Zea mays 201 202 X89761 FL Vitvi PHDfHD II Vitis vinifera 203 204 AM464161.2 AM478203.2 FL Poptr PHDf HD II Populus tremuloides 205 206 scaff IX.730 FL Poptr PHDf HD III Populus tremuloides 207 208 LG 1002624 FL Poptr PHDf HD IV Populus tremuloides 209 210 LG XVIII1192 FL OsttaPHDfHD Ostreoeoecus tauri 211 212 CR954214.4 FL AquforPHDf HD parcial Aquilegia formosa χ Aquilegia pubescens 213 214 DR914726.1, DR941696.1, DR943570.1 Parcial GlymaPHDfHD Glyeine max 215 216 Contig GM06LC25006 Parcial Lotco PHDfHD Lotus comiculatus 217 218 AP004517 Parcial Sorpr PHDf HD 3' Sorghum propinquum 219 220 BF656332 Parcial Sorpr PHDfHD 5' Sorghum propinquum 221 222 BF704605 Parcial Phypa PHDf HD Physcomitrella 238 239 XM 001762483 FL patens Phypa PHDf HD Physcomitrella patens 240 241 XM_001779822 FL Zeama PHDf HD Zea mays 242 243 FL
Exemplo 30: Alinhamento das seqüências PHDf-HD de polipeptídeos
A University of Potsdam, Germany, tem criado banco de
dados do fator de transcripção da planta, incluindo pela Orysa sativa nomeada TFDB de arroz. As seqüências de polipeptídeos correspondentes aos fatores de transcripção pertencentes à família HD (120 modelos de genes (91 loci) identificado próximo) foram todos carregados, incluindo os dois polipeptídeos PHDf-HD (0s02g05450.1 e 0s06gl2400.1) identificado aos dados. As seqüências de polipeptídeos da Tabela Dl da presente aplicação foram adicionados (quando o comprimento total, isto é 21 seqüências de polipeptídeos) à série da família HD.
O alinhamento de todas as seqüência de polipeptídeos foi realizado o algoritmo Clustal (1.83) do alinhamento progressivo, usando valores default (Thompson et al. (1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al. (2003). Nucleic Acids Res 31:3497-3500). A árvore de ligação próxima foi construída depois, e é representada na Figura 13 da presente aplicação. O grupo de interesse, que compreende os dois parálogos de arroz (0s02g05450.1 e 0s06gl2400.1) foram circulados. Qualquer polipeptídeo diminuído dentro deste grupo HD (após uma nova etapa de alinhamento múltiplo como descrito anteriomente acima) é considerado ser útil na realização de métodos da invenção como descrito neste.
Em um alinhamento de seqüência múltipla dos polipeptídeos PHDf-HD de comprimento total da Tabela Dl, um número de características podem ser identificadas, e são marcadas na Figura 17. A partir do terminal N ao terminal C dos polipeptídeos são: (i) um sinal de localização nuclear predito (NLS); (ii) um zíper de leucina (ZIP), com quatro heptads (em compartimentos em que usualmente uma leucina (ocasionalmente uma isoleucina, uma valina, ou uma metionina)) aparece a cada sétimo aminoácido; (iii) um dedo PHD (PHDf), com o C4HC3 típico (quatro cisteínas, uma histidina, três cisteínas) com um espaçamento da cisteína característica; (iv) uma extensão ácida (rico em aminoácidos ácidos D e E); (v) extensões básicas (rica em aminoácidos básicos K e R); (vi) um homeodomínio (HD).
Exemplo 31: Cálculo da identidade global da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
As porcentagens globais de similaridade e identidade entre as seqüências de polipeptídeos de comprimento total úteis na realização de métodos da invenção foram determinados usando um dos métodos disponíveis na técnica, o software MatGAT (Ferramenta de alinhamento global de matriz) (BMC Bioinformatics.2003 4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando seqüências de proteína ou DNA. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; software hospedado por Ledion Bitincka). O software MatGAT gera as matrizes de similaridade/identidade para seqüência de proteínas ou DNA sem necessidade do pré-alinhamento dos dados. 0 programa realiza uma série de alinhamento em pares usando o algoritmo de alinhamento global Myers and Miller (com uma penalidade de abertura de fenda de 12, e a penalidade de extensão de fenda de 2), calcula a similaridade e identidade usando por exemplo Blosum 62 (para os polipeptídeos), e então coloca os resultados em uma matriz de distância. A similaridade da seqüência é mostrada na metada da parte inferior da linha de divisão e a identidade de seqüência é mostrada na metada da parte superior da linha de divisão diagonal.
Parâmetros usados na comparação foram: Matriz de contagem: Blosum62 Primeira fenda: 12
Extensão da fenda: 2
Os resultados da análise do software são mostrados na Tabela D2 pela similiaridade e identidade global no comprimento total de uma seqüência de polipeptídeos (excluindo as seqüências parciais de polipeptídeos). A identidade da porcentagem é dada acima em diagonal e a porcetagem da similaridade é dada abaixo em diagonal.
A identidade da porcentagem entre as seqüências PHDf-HD de polipeptídeo úteis na realização de métodos da invenção podem ser tão baixo quanto 15 % da identidade de aminoácido comparado a SEQ ID N°: 180. Tabela D2: Resultados MatGAT para a similaridade e identidade global no
comprimento total de uma seqüência de polipeptídeos.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 ?ft 71 1. Arath PHDfHD PRHA 25 31 40 19 38 26 17 32 40 20 19 40 30 40 23 31 25 25 18 19 2. Arath PHDf-HD HAT3 44 23 27 33 26 34 28 27 26 34 35 27 23 28 34 24 36 35 18 20 3. Orysa PHDf HD 46 39 35 18 34 20 18 31 34 17 18 33 56 36 21 57 21 73 15 15 4. Eucgr PHDf HD 57 45 51 21 47 27 20 36 50 22 21 51 32 52 25 32 26 27 17 17 5. Lotja PHDf-H D 36 47 31 35 22 29 32 23 20 39 40 20 18 21 34 18 31 32 20 22 6. Medtr P H DfH D 55 44 51 64 36 26 19 35 50 20 20 49 30 50 25 32 27 26 17 17 7. Orysa PHDf- HD HAZl 42 50 35 47 45 43 26 25 25 29 29 26 21 26 32 21 50 46 29 30 8. PetcrPHDfHDPRHP 31 39 28 32 48 31 38 22 20 32 33 20 18 20 30 18 26 25 19 ^I 9. PinraPHDfHD 53 44 47 51 42 50 44 39 36 23 23 37 28 39 26 30 25 27 19 19 10. Poptr PHDf HD I 58 45 52 67 36 66 45 33 52 20 21 84 30 55 25 31 25 25 17 17 11. Poptr PHDf HD III 36 47 30 34 56 35 44 46 41 36 80 21 19 22 37 18 31 31 70 70 12. Poptr PHDf HD II 36 49 31 34 57 34 46 47 42 35 86 21 18 22 38 18 30 30 70 71 13. Poptr PHDf HD IV 59 46 51 68 37 67 44 33 54 91 35 35 30 57 25 32 25 25 17 17 14. SaeofPHDfHD 48 43 69 51 31 50 38 29 45 51 34 33 51 34 22 83 21 22 15 16 15. VitviPHDfHDI 58 47 52 69 36 67 43 32 52 74 36 35 75 52 23 34 27 25 16 17 16. Vitvi PHDfHD II 39 47 36 39 56 39 45 47 43 40 56 57 40 36 41 22 32 31 73 74 17. Zeama PHDfHD 48 41 70 51 32 52 38 30 45 54 33 32 53 87 53 34 2? 72 15 15 18. Zeamahox 1 a 43 54 39 44 43 44 53 38 43 44 44 43 45 42 43 46 42 83 74 74 19.Zeamahox 1 b 42 53 40 44 44 42 50 36 43 44 44 43 45 41 44 45 41 «8 73 73 2 O. Zeamahox2a η 27 24 25 32 25 36 31 31 26 30 31 η 25 26 34 7.4 31 30 RI 21. Zeama Hox2b 29 28 23 27 53 27 37 34 51 27 52 33 26 25 27 35 25 32 30 Í6
A identidade da porcentagem pode ser substancialmente
aumentada se o cálculo da identidade é realizada entre o domínio ZIP/PHDf conservado (zíper de leucina conservado/domínio de dedo homeodomínio de planta, que compreende os domínios Zip e PHDf) da SEQ ID N°: 180 (como representado pela SEQ ID N°: 233) e o domínio ZIP/PHDf conservado dos polipeptídeos utéis na realização da invenção. O ZIP/PHDf conservado da SEQ ID N°: 233 é um total de 180 aminoácidos contígos de comprimento. A identidade da porcentagem no domínio ZIP/PHDf conservado entre a 2. ZIP/PHDf ArathPHDf-HD HAT3
seqüência de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção que
variam entre 30 % e 75 % da identidade de aminoácido, como mostrado na Tabela D3.
Tabela D3: Resultados MatGAT para a similaridade e identidade global no domínio ZIP/PHDf conservado entre uma seqüência de polipeptídeos.
1. ZIP/PHDf Arath PHDf HD PRHA
ZIP/PHDf Orysa PHDf HD
ZIP/PHDf Eucgr PHDf HD
5. ZIP/Lotia PHDf-HD
6. ZIP/Medtr PHDf HD
ZIP/PHDf Orysa PHDf-HD HAZl
8. ZIP/PHDf Peter PHDf HD PRHP
9. ZIP/PHDf Pinra PHDfHD
10. ZIP/PHDf Poptr PHDfHDJ
11. ZIP/PHDf Poptr PHDf HD~ III
87
16. ZIP/PHDf Vitvi PHDfHD II
12. ZIP/PHDf Poptr PHDf HD II
13. ZIP/PHDf Poptr PHDf HD IV
14. ZIP/PHDf SacofPHDf HD
15. ZIP/PHDf Vitvi PHDfHD I
17. ZIP/PHDf Zeama PHDf HD
18. ZIP/PHDf Zeama hoxla
19. ZIP/PH DfZeama hoxlb
20. ZIP/PHDf Zeama hox2a
21. ZIP/PHDf Zeama Hox2b
70
69
60
90
67
86
69
67
52
70
89
70
83
82
86
71
89
67
74
67
67 82
80
74
70
72
87
70
60
71
61
84
84
80
50
44
73
59
72
54
54
72
83
57
56
72
82
73
58
83
59
58
77
48
52
73
56
39
69
87
67 83
66 83
52
68
92
67
66
91
73
57
90
69
73
71
69
67
66_
73
82
69
90
90
69
70
91
58
85
85
83
83
74
54
52
68
65
65
65
88
69
68
70
70
68
67
67 90
53
70
37
48
64
52
78
70
69
67
66
82
81
67
55
67
84
56
88
89
89
48
69
39
49
64
83
82
84
66
57
64
84
58
79
79
76
77 71
56
71
52
66
51
53
66
70
69
82
70
84
73
69
74
74
70
53
82
47
47
48
67
66
97
72
91
69
73
72
70
67
66
11 12
48
75
39
51
76
49
68
71
53
52
47
96
67
56
67
90
57
83
84
80_ 80
46
49
76
48
67
73
93
93
66
55
66
93
55
82
83
79
79 67
13 14
72
51
47
75
47
45
67
53
48
46
72
89
67
72
71
70
66
51
43
37
50
35
39
52
82
36
35
52
73
57
96
61
60
54
53 67
16
76
53
59
79
147
48
73
50
51
49
82
57
69
73
70
70
66
50
78
41
71
56
38
51
68
42
82
83
48
39
51
57
85
17 18
53
37
54
53
55
49
39
38
54
92
58
42
62
85
60
82
82 55
56
37
48
48
64
62
67
67
47
35
48
65
38
98
87
1*9 20 21
50
67
38
34
66
51
52
80
82
63
62
53
49
70
35
67
37
94
87
53
64
49
61
52
84
62
52
49
65
33
48
65
35
74
75
97
53
65_ 33
48
61
64
64
47
33
48
64
34
76
78
92
A identidade da porcentagem também pode ser calculado entre o HD conservado da SEQ ID N0: 180 (como representado pela SEQ ID N°: 234) e o HD conservado dos polipeptídeos utéis na realização da invenção. A identidade da porcentagem no HD conservado entre a seqüência de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção que variam entre 25 % e 70 % da identidade de aminoácido, como mostrado na Tabela D4.
Tabela D4: Resultados MatGAT para a similaridade e identidade global HD conservado entre uma seqüência de polipeptídeos.
I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 9] 1· HD Arath PHDfHD PRHA 34 54 72 36 72 38 36 58 68 38 36 70 54 70 34 54 36 33 99 97 2. HD Arath PHDf-HD HAT3 56 28 32 54 34 40 58 30 32 54 58 32 28 37. 58 78 47 39 40 39 3. HD Orysa PHDfHD 76 60 68 42 58 42 36 46 64 38 40 66 94 67 4? 9? 18 35 35 33 4. HD Eucgr PHDfHD 86 58 78 42 72 44 42 60 82 38 38 84 66 76 4? 66 44 41 35 33 5. HD Lotja PHDf-HD 60 72 66 64 38 52 58 36 42 64 68 42 42 40 68 40 56 55 50 16 6. HD Medtr PHDf HD 78 60 70 82 66 36 36 62 68 38 36 70 58 66 36 58 40 37 77 97 7. HD Orysa PHDf-HD HAZl 56 54 64 62 66 58 44 26 44 50 48 44 42 40 46 47 70 65 73 71 8. HD Peter PHDf HD PRHP 58 74 58 56 66 58 58 36 42 54 58 42 36 38 6? 36 50 45 40 39 9. HD PinraPHDfHD 74 54 64 72 58 72 50 52 58 30 32 60 44 56 36 44 78 ">8 71 19 10. HD PoptrPHDfHD I 86 56 78 92 64 84 64 56 74 36 36 98 64 72 47 64 47 39 35 33 11. HD Poptr PHDf HD III 54 72 62 60 82 58 66 66 54 58 88 36 38 38 7? 38 57 49 46 44 12. HD Poptr PHDf HD II 56 72 64 62 82 60 68 66 56 60 100 36 40 38 78 40 50 47 46 44 13. HD Poptr PHDf HD IV 88 56 80 94 64 86 64 56 76 98 58 60 66 77 4? 66 4? 39 35 33 14. HD SacofPHDf HD 74 60 94 76 64 72 62 56 62 76 60 62 78 64 42 98 36 33 35 33 15. HDVitvi PHDfHDI 82 50 SO 86 70 30 60 58 74 88 52 54 88 82 Í8 54 40 37 99 97 16. HD Vitvi PHDfHD II 34 76 56 56 |82 58 54 74 56 56 84 84 56 54 58 I 40 48 |43 44 44 17. HD Zeama PHDf HD 74 60 94 76 64 72 62 56 62 76 60 6? 78 100 64 36 33 35 33 18. HD Zeama hoxla 56 60 62 60 66 60 78 60 52 62 62 64 67 58 60 68 56 86 60 56 19. HD Zeama hoxl b 57 63 61 61 69 61 80 63 51 63 67 69 63 57 61 71 55 9? 59 53 20. HD_Zeama_hox2a 58 60 60 60 65 64 89 60 52 62 64 64 6? Rn R? 64 77 81 90 21. HD_Zeama_Hox2b 56 56 56 56 62 58 85 54 48 58 60 60 58 56 58 62 54 71 77 92
Exemplo 32: A identificação dos domínios compreendidos nas seqüências de
polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
O recurso integrado das famílias de proteínas, banco de dados de locais e domínios (InterPro) é uma interface integrada para os bancos de dados assinados comumente usados para as buscas com base no texto e seqüência. O banco de dado InterPro combina este banco de dados, que usam as metodologias diferentes e variam os graus de informação biológica sobre as proteínas bem caracterizadas para derivar os sinais da proteína. A colaboração dos bancos de dados incluem SWISS-PROT, PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom e Pfam, Smart e TIGRFAMs. Interpro é hospedado no European Bioinformatics Institute in the United Kingdom.
Os resultados da avaliação InterPro de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180 são apresentados na Tabela D5.
Tabela D5: Resultados de avaliação InterPro de uma seqüência de
polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180
Número de acessão InterPro nome do banco de dados integrado número de acessão do banco de dados integrado nome de acessão do banco de dados integrados coordenadas de aminoácidos na SEQ IS N°: 180 IPR0013556 Homeobox ProDom PDOOOO10 PRH ARATH P48785 439-497 IPR0013556 Homeobox PFAM PF00046 Homeobox 439-495 IPR0013556 Homeobox SMART SM00389 HOX 438-500 IPR0013556 Homeobox perfil PS50071 Homeobox 2 436-496 IPROO195 dedo de Zn, tipo PHD PFAM PF00628 PHD 197-251 IPROO195 dedo de Zn, tipo PHD SMART SM00249 PHD 197-249 IPROO195 perfil PS50016 ZF PHD 2 195-251 dedo de Zn, tipo PHD IPRO12287 Gene3D G3DSA:1.10.10.60 nenhuma descrição 436-501 homeodomínio relacionado IPR013256 SMART SM00784 nenhuma descrição 78-154 cromatina SPT2 IPR não integrado PANTHER PTHRl 9418 proteína Homeobox 397-414 431-590
Os resultados da avaliação InterPro claramente indentificam as
características essenciais de um polipeptídeo PHDf-HD, isto é, um dedo de zinco PHDf e homeobox, como representado por exemplo respectivamente pelas entradas Pfam PF00628 e PF00046.
Os HD são conhecidos por ter resíduos canônicos. O HD dos
polipeptídeos PHDf-HD é altamente divergente ainda em seqüências nas posições que são quase invariáveis entre os homeodomínios. A seqüência logo do HD dos polipeptídeos PHDf-HD da Tabela Dl, é mostrado na Figura 15. os logos da seqüência são uma representação gráfica por um alinhamento da seqüência múltipla de ácido nucleico ou aminoácido. cada logo consiste de pilhas de símbolos, uma poilha para cada posição na seqüência. A altura total da pilha indica uma conservação de seqüência em que posição, enquanto a altura dos símbolos dentro da pilha indica a freqüência relativa de cada amino ou ácido nucleico em que posição. No geral, um logo de seqüência fornece uma descrição mais rica e precisa de; por exemplo, um local de ligação, do que seria uma seqüência de consenso. O algoritmo (WebLogo) para produzir tal logo é disponível no servidor da University of Califórnia, Berkeley. O HD como representado pela SEQ ID N°: 234, e compreendido na SEQ ID N°: 180, é de acordo com um logotipo da seqüência como representado na Figura 15. Os polipeptídeos úteis na realização de métodos de acordo como a invenção compreende um HD compreendido na logo de seqüência como mostrado na Figura 15.
Exemplo 33: Predição das características da estrutura secundária de uma 10
15
20
25
seqüência de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
Os espirais enrolados usualmente contém um padrão de resíduos de sete aminoácidos repetidos denominado repetições heptad. Os espirais enrolados são importantes para identificar para as interações proteína- proteína, tal como oligomerização de proteínas idênticas, of de proteínas da mesma família, ou de proteínas não relacionadas. Recentemente muitos progressos foram feitos na predição computacional do espiral enrolado dos dados de seqüência. Muitos algoritmos bem conhecidos a uma pessoa habilitada na técnica estão disponíveis; as ferramentas ExPASy Proteomics. Um destes, COILS, é um programa que compara uma seqüência 1 aos bancos de dados de espirais enrolados de dois paralelos filamentados de deriva-se de uma contagem de similaridade. Em comparação a esta contagem às distribuições de contagens nas proteínas de espiral enrolado e globular, o programa então calcula a probabilidade que uma seqüência adotará de uma configuração do espiral enrolado
O polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, tem dois domínios de espiral enrolado prodito no terminal N, com uma alta probabilidade, em todas as três janelas (14, 21 e 28) examinadas. Na Tabela D6, as coordenadas dos resíduos, resíduos, como as três janelas e valores de probabilidades correspondentes são mostrados. Na Figura 16, é a produção gráfica do algoritmo COILS no polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180, onde os dois espirais enrolados preditos em visível claridade na metade do terminal N do polipeptídeo, em todas as três janelas (como representado pelas tr~es linhas).
Tabela D6: Produção numérica do algoritmo COILS no polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180. As coordenadas dos resíduos (#), resíduos, as três janelas e valores de probabilidades correspondentes são mostrados. As probabilidades acima de 0,09 são mostrados em cinza.
Resíduo
87_ 88
Janela=14
Prob 0,001 0,063
Janela=21
Prob 0,001 0,274
Janela=28
Probab1 0,001 0,099 89 R f 0,063 S 0,567 G 0,099 90 R S 0,063 a 0,567 A 0,099 91 K b 0,066 b 0,642 B 0,188 92 H C 0,066 C 0,642 C 0,188 93 K d 0,069 d 0,642 D 0,591 94 Q e 0,178 e 0,642 E 0,672 95 κ f 0,335 f 0,642 F 0,672 96 R S 0,335 g 0,642 G 0,772 97 K a 0,335 a 0,642 A 0,772 98 N b 0,347 b 0,642 B 0,772 99 D C 0,347 C 0,642 C 0,772 100 E d 0,347 d 0,642 D 0,772 101 S e 0,347 e 0,642 E 0,808 102 D f 0,347 f 0,642 F 0,808 103 E g 0,347 g 0,642 o 0,808 104 V a 0,347 a 0,642 a 0,808 105 S b 0,347 b 0,642 b 0,808 106 R C 0,347 C 0,642 C 0,808 107 M d 0,347 d 0,642 d 0,808 108 E e 0,347 e 0,642 e 0,808 109 K f 0,347 f 0,642 F 0,808 110 R CT & 0,347 cr B 0,642 o 0,808 111 A a 0,347 a 0,642 a 0,808 112 R b 0,307 b 0,514 b 0,808 113 Y C 0,066 C 0,503 C 0,808 114 L d 0,262 d 0,503 d 0,808 115 L e 0,262 e 0,503 e 0,808 116 I f 0,262 f 0,503 F 0,808 117 K g 0,262 g 0,503 o 0,808 118 I a 0,262 a 0,503 a 0,808 119 K b 0,262 b 0,503 b 0,808 120 Q C 0,262 C 0,503 C 0,808 121 E d 0,262 d 0,503 d 0,808 122 Q e 0,262 e 0,503 e 0,808 123 N f 0,262 f 0,503 F 0,808 124 L σ 6 0,262 g 0,434 σ 0,808 125 L a 0,262 a 0,434 a 0,808 126 D b 0,262 b 0,434 b 0,808 127 A C 0,262 C 0,304 C 0,808 128 Y d 0,145 d 0,304 d 0,808 129 S e 0,145 S 0,044 e 0,808 130 G f 0,119 f 0,009 F 0,367 131 D S 0,078 l 0,007 g 0,136 132 α à 0,002 i 0,001 a 0,005 133 W b 0 1 0,001 a 0,001 134 V D 0,001 J 3,045 b 0,057 135 α : 3,001 3,045 I 0,057 136 ί i 3,003 i 3,07 i 3,219 137 3,008 3,132 ; 3,231 138 I 3,025 3,357 F 3,231 139 l 3,025 3,357 ? 3,231 140 C 3,025 3,357 1 3,231 141 I ),028 3,357 3,231 142 I C ),07 3,357 3,462 143 ί > C ),07 ),357 1 3,462 144 I ι e ),998 ),997 3,974 145 C ( ),998 f ( ),997 ),974 146 |Ε ),998 ( >,997 ),974 147 L a 0,998 a 0,997 a 0,974 148 Q b 0,998 b 0,997 b 0,974 149 R C 0,998 C 0,997 C 0,974 150 A d 0,998 d 0,997 d 0,974 151 K e 0,998 e 0,997 e 0,974 152 K f 0,998 f 0,997 f 0,974 153 Q g 0,998 o & 0,997 g 0,974 154 I a 0,998 a 0,997 à 0,974 155 M b 0,998 b 0,997 b 0,974 156 K C 0,998 C 0,'997 C 0,974 157 Y d 0,998 d 0,997 d 0,974 158 K e 0,989 e 0,997 e 0,974 159 I f 0,896 f 0,997 f 0,974 160 A p 5 0,486 g 0,997 g 0,974 161 I a 0,409 a 0,997 a 0,974 162 R b 0,274 b 0,997 b 0,974 163 D C 0,255 C 0,997 C 0,974 164 V d 0,095 d 0,997 d 0,974 165 I e 0,025 e 0,871 e 0,974 166 H f 0,025 f 0,622 f 0,974 167 Q § 0,025 g 0,496 y 0,974 168 L a 0,025 a 0,496 a 0,974 169 D b 0,025 b 0,468 b 0,974 170 L D,005 0,111 0,974 171 i 0,002 i 0,02 d 0,974 172 0,001 0,007 0,719 173 0,001 0,003 f 0,482 174 5 y 0,001 J 0,001 3 0,066 175 ( j ) 0,001
Um outro espiral enrolado é predito na metade do terminal C do polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, com uma probabilidade inferior do que os dois domínios enrolados compreendidos na metade do terminal N do polipeptídeo.
Exemplo 34: Predição de localização subcelular de uma seqüência de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
LOCtree é um algoritmo que pode predizer uma localização subcelular e propensão de ligação de DNA de proteínas de nenhuma membrana em plantas eucariotas e nenhuma planta tão bem quanto procariotas. LOCtree classifica as proteínas animais eucarióticas em uma das cinco classes subcelulares, enquanto as proteínas vegetais são classificadas em um a seis classes e proteínas procarióticas são classificadas em um a três classes.
Quando disponível, o LOCtree também diz respeito às predições com base nos seguintes: 1) Sinais de localização nuclear observados pelo algoritmo PredictNLS, 2) Localização inferida usando os motivos Prosite e domínios Pfam observados na proteína, e 3) palavra chave SWISS-PROT associada com a proteína. A localização é inferida nos últimos dois casos usando o algoritmo LOCkey com base em entropia. O software é hospedado na University of Columbia, USA.
Motivo e palavra chave com base na predição da localização
subcelular de um polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, usando LOCkey:
Localização predita Confiança Predição alternativa Palavra chave SWISS-PROT usada para determinar a localização Nuclear 100 --- -- Homeobox, ligação de DNA, regulamento de transcrição, proteína nuclear, transcrição, dedo de zinco.
A predição de um sinal de localização nuclear (NLS) é feita
usando o algoritmo PredictNLS, por exemplo. O algoritmo também é
hospedado pelo servidor na University of Columbia, USA. Na Tabela abaixo,
a predição de NLS no polipeptídeo da SEQ ID N°: 180 usando o algoritmo PredictNLS, é mostrado.
motivo generalizado ([KR] {3,5} entre 3 e 5 vezes Kou R) acerto no polipeptídeo da SEQ ID N°: 180 coordernadas no polipeptídeo da SEQIDN0: 180 K[RK]{3,5}x{11,18}[RK]Kx{2,3}K krrrgsdaatgksatgptrrkhkqk 71-95 [KR]{4}x{20,24}K{1,4}xK KRRRGSDAATGKSATGPTRRKHKQKRK 71-97
Na seqüência de polipeptídeo abaixo (SEQ ID N°: 180), posição do NLS predito é mostrado em negrito e sublinhado duas vezes: MNTPEKKPLCYTSRRALQQRTESSSELISVSKRATRQNTPRKPDSPPKRTTRSSANLAKC
IENKHHSSPLKRRRGSDAATGKSATGPTRRKHKOKRKNnRSn^V.qRMFyRapvT.T τ^τ^
EQNLLDAYSGDGWNGHSREKIKPEKELQRAKKQIMKYKIAIRDVIHQLDLCSSSGSKDDS VIPPDGCHESVNPEHTICSRCKSHESFPDNNIIFCEGGCKLACHQKCLEPPFDKILPTTR HGRLCKHCSSKMKILDAINAHLGTSFTVKCPSSDIFKEAAEHFNSDDGLGQDWLSEYSGD EDYDPEENEASSSGEENKSADSNCSGSPLYSPNDDIPDFISADFNDAEGFCRESSNLGID FGEDGLAEILTHQRPRRDVDYTQLNEQMFGEPIGNDEQSEDEDWGLNKRKKRRTGSTGVG TNSVEGRSDVKSNKKAQPRRKLFRIPPAAVEVLRKAFAENELPARSVKENLSTELGISFE KIDKWFKNTRCAALRDRKGESRYSGPSKRSRTSIEKAETSAKVDQMDNSCFLPLSEIINV PTRLQKGLDKKPKSINSPPRPQDNETCLSPTDKTKEGTPPTIKPSITDSSQLMNNDIGTE ETAVSWVDTWAS DALH FLDVSDDEHFFDVIEKVCGLENRLQRLKENMLS SSS STDNNVAA ESGLQNEWLVPAAELKDKAS Muitos outros algoritmos podem ser usados para realizar tais análises, incluindo:
• ChloroP 1.1 hospedado no servidor da Technical University
of Denmark;
• Protein Prowler Subcellular Localisation Predietor versão 1.2 hospedado no servidor do Institute for Molecular Bioscience, University of Queensland,. Brisbane, Australia;
• PENCE Proteome Analyst PA-GOSUB 2.5 hospedado no servidor da University of Alberta edmonton, Alberta, Canada;
• TMHMM, hospedado no servidor da Technical University of
Denmark
Exemplo 35: Clonagem da seqüência de ácido nucleico como representado pela SEQIDN0: 179
A não ser outra maneira estado, as técnicas de DNA recombinante foram realizados de acordo com os protocolos padrões descritos em (Sambrook (2001) Molecular Cloning: a laboratory manual, 3o Edition Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York) ou in Volumes 1 and 2 of Ausubel et at. (1994), Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols. Os materiais padrões e métodos para o trabalho molecular vegetal são descritos em Plant Molecular Biology Labfax (1993) by R.D.D. Croy,
publicado por BIOS Scientific Publications Ltd (UK) e Blackwell Scientific Publications (UK).
O gene de Oryza sativa PHDf-HD foi amplificado por PCR usando como modelo um banco de DNA de arroz sintetizado do mRNA extraído a partir de tecidos das plantas. O iniciador prm09687 (SEQ ID N°: 236; sentido,: 5'-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttaaacaatgaataccccagaaaa gaaa-3*) e iniciador prm09688 SEQ ID N°: 237; reverso, complementar,: 5'- ggggaccactttgtacaagaaagctgggtgatgcaaggttaagatgcttt-3'), que incluem os locais AttB para a recombinação Gateway, foram usados pela amplificação PCR. O PCR foi realizado usando a polimerase Hifi Taq de DNA em condições padrões. Um fragmento de PCR do comprimento esperado (incluindo locais attB) foi amplificado e purificado também usando os métodos padrões. A primeira etapa do procedimento Gateway, a reação BP, foi então realizada, durante o qual o fragmento PCR recombinado in vivo com o plasmídio pDONR201 para produzir, de acordo com a terminologia Gateway, um "clone de entrada". O plasmídio pDONR201 foi adquirido de Invitrogen, como partes da tecnologia Gateway®.
Exemplo 36: Construção do vetor de expressão usando a seqüência do ácido nucleico como representado pela SEQ ID N°: 179
O clone de entrada que compreende a SEQ ID N°: 179 foi subseqüentemente usado em uma reação LR com um vetor de destino usado para a transformação da Oryza sativa. Este vetor contido como elementos funcionais dentro dos limites de T-DNA: um marcador selecionável vegetal; um cassete de expressão marcador avaliável; e um cassete Gateway pretendido pela recombinação LR in vivo com uma seqüência do ácido nucleico de interesse já clonado no clone de entrada. Um promotor GOS2 de
arroz (SEQ ID N°: 235) para a expressão constitutiva foi localizada a montante deste cassete Gateway.
Após a etapa de recombinação LR, o vetor de expressão resultante pGOS2::PHDf-HD e (Figura 18) foi transformado na cepa da
Agrobacterium LBA4044 de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica.
Exemplo 37: Transformação da planta Transformação de arroz
A Agrobacterium contendo os vetores de expressão foram usados independentemente para transformar as plantas Oryza sativa. As sementes secas maduras de japonica cultiva de arroz Nipponbare foram descascadas. A esterilização foi realizada pela incubação em um minuto em 70 % de etanol, seguido por 30 minutos em 0,2 % de HgCl2, seguido por 6 vezes de 15 minutos lavada com água destilada estéril. As sementes estéreis foram então germinadas em um meio contendo 2,4-D (meio de indução de calos). Após a incubação no escuro por quatro semanas calos derivados de escutelo embriogênico foram taxados e propagados no mesmo meio. Após duas semanas, os calos foram multiplicados ou propagados pela subcultura no mesmo meio por outras 2 semanas. Os pedaços de calos embriogênicos foram sub-culturados em meio fresco 3 dias antes da co-cultivação (para intensificar a atividade de divisão celular).
A cepa de Agrobacterium LBA4404 contendo cada vetor de expressão individual foi usado independentemente para a co-cultivação. A Agrobaeterium foi inoculada no meio AB com os antibióticos apropriados e cultivados por 3 dias a 28° C. As bactérias foram então coletadas e submetidas à suspensão no meio de co-cultivação líquido a uma densidade (OD600) de cerca de 1. A suspensão foi então transferida a um disco Petri e os calos sumetidos à imersão na suspensão por 15 minutos. Os tecidos dos calos foram então manchados secos em um papel de filtro e transferidos para solidificar-se, meio de co-cultivação e incubados por 3 dias no escuro a 25° C. Os calos co-cultivados foram desenvolvidos em meio contendo 2,4-D por 4 semanas no escuro a 28° C na presença de um agente de seleção. Durante este período, os calos resistentes rapidamente ao desenvolvimento foram ilhas desenvolvidas. Após a transferência deste material material a um meio de regeneração e incubação na luz, o potencial embriogênico foi liberado e os brotos desenvolvidos nas próximas quatro ou cinco semanas. Os brotos foram taxados dos calos e incubados por 2 a 3 semanas em um meio contendo auxina de que estes foram transferidos ao solo. Os brotos endurecidos foram desenvolvidos sob alta umidade e dias curtos em uma estufa.
Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados para cada construção. Os primeiros transformantes foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa. Após uma análise PCR quantitativa para verificar o número de cópias da inserção de T-DNA, apenas uma simples cópia da planta transgênica que exibe a tolerância ao agente de seleção foi mantida para a coleta da semente Tl. As sementes foram então coletadas três a cinco meses após a transplantação. O método produzido de transformantes de local simples em uma taxa acima de 50 % (Aldemita and Hodgesl996, Chan et al. 1993, Hiei et al. 1994).
Exemplo 38: Procedimento de avaliação fenotípica 38.1 Apresentação da avaliação
Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados. Os primeiros transformantes foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para o desenvolvimento e coletado da semente TI. Seis eventos, de que uma progênie Tl segregada 3:1 para a presença/ausência do transgene, foram retidos. Para cada um destes eventos, aproximadamente 10 mudas Tl contendo o transgene (hetero e homozigotos) e aproximadamente 10 mudas Tl perderam o transgene (nulizigotos) foram selecionados pela expressão marcadora visual do monitoramento. As plantas transgênicas e os nulizigotos correspondentes foram desenvolvidos lado a lado em posições aleatórias. As condições da estufa foram de dias curtos (12 horas de luz), 28° C na luz e 22° C no escuro, e uma umidade relativa de 70 %. O desenvolvimento das plantas sob as condições de não tensão são
fornecidos com água em intervalos regulares para garantir que a água e nutrientes não são limitantes para satisfazer a necessidade das plantas para completar o crescimento e desenvolvimento.
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
38.2 Análise estatística: teste F
Dois fatores ANOVA (análise de variantes) foi usado como um modelo estatístico para a avaliação total das características fenotípicas das plantas. Um teste F foi realizado em todos os parâmetros medidos de todas as plantas de todos os eventos transformados com o gene da presente invenção. O teste F foi realizado para checar por um efeito do gene em todos os eventos de transformação e para verificar por um total do efeito do gene, também conhecido como um efeito do gene global. O limiar para a significância por um efeito verdadeiro do gene global foi apresentado em uma 5 % do nível de probabilidade para o teste F. Um ponto do valor do teste F significante por um efeito do gene, significando que este não é apenas uma mera presença ou posição do gene que está causando as diferenças no fenotipo. 38.3 Parâmetros medidos Medição do parâmetro relacionado à biomassa
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
Uma área da planta acima do solo (ou biomassa da folha) foi determinado pela contagem do número total de píxeis nas imagens digitais a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras retiradas do mesmo ponto de tempo a partir de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os experimentos mostram que à área da planta acima do solo medida desta maneira correlaciona com a biomassa das partes das plantas trituradas acima. À área triturada acima é a área medida no ponto de tempo em que a planta tem atingido esta biomassa máxima da folha. O vigor precoce é à área das planta (mudas) acima do solo três semanas pós-germinação. O aumento na biomassa da raiz é expressado como um aumento no total da biomassa da raiz (medido como biomassa máxima de raízes observadas durante a vida toda de uma planta); ou como um aumento na raiz/índice de broto (medido como a razão entre massa de raiz e massa de broto no período de desenvolvimento ativo da raiz e broto). Medições dos parâmetros relacionados à semente
As panículas primárias maduras foram coletadas, contadas, ensacadas, rotuladas com código de barra e então secadas por três dias em um forno a 37° C. As panículas foram então limiadas e todas as sementes foram coletadas e contadas. As cascas enchidas foram separadas a partir de um vazio usando um dispositivo de sopro de ar. As cascas vazias foram descartadas e a fração remanescente foi contada novamente. As cascas enchidas foram pesadas em uma balança analítica. O número de sementes enchidas foi determinado pela contagem do número de cascas enchidas que permanece depois da etapa de separação. O peso total da semente por planta foi medida pela pesagem total das cascas enchidas coletadas a partir de uma planta. O número total de semente por planta foi medido pela contagem do número de cascas coletadas a partir da planta. Peso de núcleo milhar (TKW) é extrapolado do número de sementes enchidas contadas e seu peso total. O índice de colheita (HI) na presente invenção é definida como a razão entre o peso total da semente por planta e à área triturada acima (mm2), multiplicada por um fator IO6. O número total de flores por panícula como definido na presente invenção é a razão entre o número total de sementes e o número de panículas primárias maduras. A taxa de abastecimento da semente como definido na presente invenção é a proporção (expressado como uma %) do número de sementes enchidas no número total de sementes (ou florzinhas). Avaliação da disponibilidade do nutriente reduzido (nitrogênio) As plantas de arroz das sementes T2 foram desenvolvidas no solo em potes sob condições normais exceto para a solução do nutriente. Os potes foram submetidos à água a partir da transplantação do amadurecimento com uma solução de nutriente específico contendo teor de nitrogênio N reduzido (N), usualmente entre 7 a 8 vezes menor. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) foi a mesma como para as plantas não desenvolvidas sob a tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento foram registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais.
Exemplo 39: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas de arroz
Os resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam uma seqüência do ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, sob o controle do promotor GOS2 para a expressão constitutiva, são apresentadas abaixo.
Há um aumento significante no número de panículas, na produção total de semente por planta, no número total de sementes enchidas, no número total de sementes, nos peso de núcleo milhar (TKW), e no índice de colheita das plantas transgênicas comparados aos nulizigotos correspondentes (controles), como mostrado na Tabela D7.
Tabela D7: Resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam uma seqüência do ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, sob o
controle do promotor GOS2 para a expressão constitutiva.
Média da % do aumento em 3 eventos na geração Tl Número das primeiras panículas 22% Produção da semente total por planta 30% Número total de sementes enchidas 24% Número total de sementes 24% TKW 4% Índice de colheita 17%
Exemplo 40: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas do desenvolvimento de arroz sob a disponibilidade do nutriente reduzido
Os resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam uma seqüência do ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, sob o controle do promotor GOS2 para a expressão constitutiva, e desenvolvimento sob a disponibilidade do nutriente reduzido, são apresentadas abaixo.
Há um aumento significante na biomassa, no vigor emergido, na produção total de semente por planta, no número total de sementes enchidas, na taxa de enchimento da semente, no número total de sementes, nos peso de núcleo milhar (TKW), e no índice de colheita das plantas transgênicas comparados aos nulizigotos correspondentes (controls), como mostrado na Tabela D8.
Tabela D8: Resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam uma seqüência do ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180, sob o
controle do promotor GOS2 para a expressão constitutiva, e desenvolvimento sob a disponibilidade do nutriente reduzido.
% de aumento médio total (6 eventos na geração T2) Biomassa 8% Vigor emergente 20% Produção de semente total por planta 17% Número total de sementes enchidas 12% Taxa de enchimentos da sementes 3 % Número total de sementes 9%
Exemplo 41: Exemplos de transformação de outras lavouras
A transformação de milho, trigo, soja, colza/canola, alfafa e
algodão foi realizado como resumido no Exemplo 7 Exemplo 42: Exemplos de avaliações de tensão abiótica Avaliação da aridez
As plantas foram selecionadas de número de eventos e são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais até estes aproximarem do estágio superior. Estas são então transferidos à seção "seca" onde a irrigação é retida. As sondas de umidades são inseridas em potes escolhidos aleatoriamente para monitorar o teor de água no solo (SWC). Quando o SWC está abaixo de certos limiares, as plantas são automaticamente novamente submetidas à água continuamente até um nível normal ser atingido novamente. As plantas são então re-transferidas às condições normais. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob as condições de tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. Avaliação da tensão do sal
As plantas são desenvolvidas em um substrato feito de fibras de coco e argex (razão de 3 para 1). Uma solução de nutriente normal é usado durante as primeiras duas semanas após a transplantação das plantinhas nas estufas. Após as primeiras duas semanas, 25 mM de sal (NaCl) é adicionado à solução de nutriente, até as plantas serem coletadas. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. VIII. Proteína semelhante à bHLHl 1 (hélice 11-arco-hélice básico) Exemplo 43: A identificação das seqüências relacionadas à seqüência de ácido nucleico semelhante à bHLHl 1 usado nos métodos da invenção
As seqüências (cDNA eSTs de comprimento total ou genômico) relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção onde identificados entre aqueles mantidos no banco de dados Entrez Nucleotides at the National Center for Biotechnology Information (NCBI) usando as ferramentas de seqüência de banco de dados, tal como a ferramenta de alinhamento local básica (BLAST) (Altschul et al. (1990) J. Mot. Biol. 215:403-410; e Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402). O programa é usado para observar as regiões da similaridade local entre as seqüências em comparação ácido nucleico ou seqüências de polipeptídeos de um banco de dados da seqüência e pelo cálculo da significância estatística de pontos. Por exemplo, o polipeptídeo codificado pelo ácido nucleico usado na presente invenção foi usado pelo algoritmo TBLASTN, com ajustes default e o filtro para ignorar a baixa complexidade da seqüência apresentada. A produção da análise foi examinada pela comparação em pares, e classificada de acordo com as contagens de probabilidade (valor E), onde a contagem reflete a probabilidade que um alinhamento particular ocorra pela possibilidade (o valor E inferior, quanto mais significante o acerto). Além disso aos valores E, as comparações também foram contadas pela identidade de porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácido nucleico comparado (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. Em alguns exemplos, os parâmetros default podem ser ajustados para modificar a estringência da busca. Por exemplo o valor e pode ser aumentado para mostrar os menores pontos estringentes. Desta maneira, os pontos curtos próximos exatos podem ser identificados. Tabela El fornece uma lista das seqüências de ácidos nucleicos relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção. Tabela El: Exemplos de polipeptídeo semelhante aos bHLHl 1:
fonte da planta ácido nucleico da SEQ ID N°: proteína da SEQ BD N0:. Triticum aestivum 244 245 Allium cepa 258 327 Arabidopsis thaliana 259 328 Arabidopsis thaliana 260 329 Arabidopsis thaliana 261 330 Arabidopsis thaliana 262 331 Arabidopsis thaliana 263 332 Aquilegia vulgaris 264 333 Aquilegia vulgaris 265 334 Brassica napus 266 335 Citrus Clementina 267 336 jCurcuma longa 268 337 Vlitrus paridisi hybrid 269 338 ICitrus sinensis 270 339 \Euealyptus grandis 271 340 ]Eucalyptus grandis 272 341 IGossypium hirsutum 273 342 ^Gossypium hirsutum 274 343 \Gossypium hirsutum 275 344 IGossypium hirsutum 276 345 IGossypium hirsutum 277 346 iGossypium hirsutum 278 347 IGlycine max 279 348 IGlycine max 280 349 \Glycine max 281 350 IGlyeine max 282 351 IGossypium raimondii 283 352 IHelianthus petiolaris 284 353 IHordeum vulgare 285 354 [Lactuca perennis 286 355 INicotiana benthamiana 287 356 INicotiana benthamiana 288 357 INieotiana benthamiana 289 358 INieotiana benthamiana 290 359 Wieotiana tabacum 291 360 I Oryza sativa 292 361 \Oryza sativa 293 362 IOryza sativa 294 363 I Oryza sativa 295 364 IOryza sativa 296 365 I Oryza sativa 297 366 IOryza sativa 298 367 IPicea abies 299 368 jPopulus deltoides 300 369 IPinus radiata 301 370 IPicea sitehensis 302 371 Pinus taeda 303 372 Populus trichocarpa 304 373 Populus trichocarpa 305 374 Populus trichocarpa 306 375 Populus trichocarpa 307 376 Populus trichocarpa 308 377 Poncirus trifoliata 309 378 Ricinus communis 310 379 Ricinus communis 311 380 Sorghum bicolor 312 381 Solanum lyeopersicum 313 382 Solanum lyeopersicum 314 383 Solanum lyeopersicum 315 384 Solanum tuberosum 316 385 Solanum tuberosum 317 386 Solanum tuberosum 318 387 Solanum tuberosum 319 388 Triticum aestivum 320 389 Vitis vinifera 321 390 Vitis vinifera 322 391 Vitis vinifera 323 392 Vitis vinifera 324 393 Zea mays 325 394 Zea mays 326 395
Em alguns exemplos, as seqüências relacionadas tem sido como tentativa reunida e publicada descobertas pelas instituições de busca, tal como The Institute for Genomic Research (TIGR). Os bancos de dados Eukaryotic Gene Orthologs (EGO) podem ser usados para identificar tais seqüências relacionadas pela busca de palavra chave ou pelo uso de algoritmo BLAST com o ácido nucleico ou seqüência de polipeptídeo de interesse. Exemplo 44: Alinhamento das polipeptídeo semelhante às seqüências bHLHll
O alinhamento das seqüências de polipeptídeos foi realizado usando o programa AlignX a partir do vetor NTI (Invitrogen) que é baseado
no algoritmo Clustal W popular do alinhamento progressivo (Thompson et al
(1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al. (2003). Nucleic Acids
Res 31:3497-3500). Os valores default são pela penalidade aberta de fenda de
10, pela penalidade de extensão de fenda de 0,1 e a matriz do peso
selecionada é Blosum 62 (se os polipeptídeos são alinhados). Uma edição
menor do manual foi feita ainda para otimizar o alinhamento. A conservação
da seqüência entre os polipeptídeos semelhante aos bHLHl 1 é essencialmente
no domínio bHLH do domínio do terminal C dos polipeptídeos, o domínio do
terminal N usualmente sendo mais variável no comprimento da seqüência e
composição. O polipeptídeo semelhante aos bHLHl 1 são alinhados na Figura 21.
Uma árvore filogenética de polipeptídeo semelhante aos
bHLHl 1 (Figura 22) foi construído usando "CLUSTALX", é uma árvore
próxima foi calculada. O cladograma circular foi tirado usando Dendroscope (Huson et al., 2007).
Exemplo 45: Cálculo da identidade global da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
As porcentagens globais de similaridade e identidade entre as seqüências de polipeptídeos de comprimento total úteis na realização de métodos da invenção foram determinados usando um dos métodos disponíveis na técnica, o software MatGAT (Ferramenta de alinhamento global de matriz) (BMC Bioinformatics. 2003 4:29. MatGAT: uma aplicação que gera as matrizes de similaridade/identidade usando as seqüências de DNA ou proteínas. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; software hospedado por Ledion Bitincka). O software MatGAT gera as matrizes de similaridade/identidade para seqüência de proteínas ou DNA sem necessariamento o pré-alinhamento dos dados. O programa realiza uma série de alinhamento em pares usando o algoritmo de alinhamento global Myers and Miller (com uma penalidade de abertura de fenda de 12, e a penalidade de extensão de fenda de 2), calcula a similaridade e identidade usando por exemplo Blosum 62 (para os polipeptídeos), e então coloca os resultados em uma matriz de distância. A similaridade da seqüência é mostrada na metada da parte inferior da linha de divisão e a identidade de seqüência é mostrada na metada da parte superior da linha de divisão diagonal.
Parâmetros usados na comparação foram: Matriz de contagem: Blosum62
Primeira fenda: 12
Extensão da fenda: 2
Os resultados da análise do software são mostrados na Tabela E2 pela similiaridade e identidade global no comprimento total de uma seqüência de polipeptídeos. A identidade da porcentagem é dada acima em diagonal e a porcetagem da similaridade é dada abaixo em diagonal. A SEQ ID N°: 245 é representada como TabHLHl 1.
A identidade da porcentagem entre o polipeptídeo semelhante às seqüências bHLHl 1 úteis na realização de métodos da invenção podem ser tão baixo quanto 20 % da identidade de aminoácido comparado a SEQ ID N°:
245. A identidade é entretanto muito mais alta quando os domínios HLH são comparados (Tabela E3). 'Cd
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ATl G03040 3. AT4G02590 4. AT2G24260 5. AT4G30980 6. AT5G58010 7. TC15501 8. TC19278 9. TC10015 part 10. DY268946 tt t m r< < H 12. TA3392 13. TA12416 14. W0051050seglD77 15. W0051050segID1671 16. TA55042 17. TC207545 18. TA13791 19. C0123623 20. DT543504 21. TC60118 22. TC60119 23. TC61833 24. TC67603 25. TC229602 26. TC205173 27. TAl 140 28. TC140470 29. TA3490 part 30. CK293938 31. TC8633 I 32. TC7102 I IO u-Γ 54,9 I CO cn m" OO o" rn 39,7 51,0 37,7 55,2 50,8 49,7 50,2 53,6 50,8 39,7 54,2 55,9 |54,0 m CN IO CN Tt to 52,6 Γ—· ON" Tf 156,2 σ\ tn o" IO CS Tt" •O CS Tt •o CN Tf V» Tt Tt OO On" io o" IO 56,2 OOiv m" Tf 53,4 Tt to" t O^ oo" Tt 150,0 I MD OO to" on CN Oi oC CSv vo" Oi oC O Tt On •o" to" Oi CSiv vo" r- Tt" OO1 vo" o CN OO vo on m (N VO On o" Vp Tt oo" VO IO cs" VO CN CN VO VO1 o" VO rn io" vP o CN vp oC O1 to" ^ vo o" ^P IO rn 1O on vo" cn <r. 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O recurso integrado das famílias de proteínas, o banco de dados de locais e domínios (InterPro) é uma interface integrada para os bancos de dados assinados comumente usados para as buscas com base no texto e seqüência. O banco de dado InterPro combina estes bancos de dados, que usam as metodologias diferentes e variam os graus de informação biológica sobre as proteínas bem caracterizadas para derivar os sinais da proteína. A colaboração dos bancos de dados incluem SWISS-PROT, PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom e Pfam, Smart e TIGRFAMs. O Pfam é uma ampla coleção de alinhamentos de seqüência múltipla e modelos Markov secretos que cobrem muitos dos domínios de proteína comuns e famílias. O Pfam é hospedado no Sanger Institute server in the United Kingdom. O Interpro é hospedado no European Bioinformatics Institute in the United Kingdom.
Os resultados da avaliação InterPro de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQID N°: 245 são apresentados na Tabela E4. Tabela E4: Resultados de avaliação InterPro (maiores números de acessão) de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 245.
banco de dados
InterPro
HMMPfam
HMMSmart
ProflleScan
InterPro
superfamília
número de acessão
IPROO1092
PFOOO10.14
SM00353
PS50888
IPROl 1598
SSF47459
nome de acessão
dimerização da região bHLH de Hélice-Laço-Hélice básico
domínio de ligação de DNA de Hélice-Laço-Hélice
nenhuma descrição
HLH
ligação de DNA de Hélice-Laço- Hélice
domínio de ligação de DNA de Hélice-Laço-Hélice
coordenadas de aminoácido na SEQ ID N°: 245; valor E
T[127-176] 1.6e-06
T[132-1811 l.Se-09
T[120-176] 12.451
T[122-195] 1.8e-14
Exemplo 47: Predição da topologia de uma seqüência de polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção
O TargetP 1.1 prediz a localização subcelular das proteínas eucarióticas. A indicação da localização é com base na presença predita de qualquer uma das pré-sequências do terminal N: peptídeo de transição de cloroplasto (cTP), peptídeo de alvejamento mitocrondrial (mTP) ou peptídeo de sinal de caminho secretório (SP). As contagens em que a predição final não são baseados nas reais probabilidades, e estas não são necessariamente adicionadas a um. Entretanto, a localização com a contagem mais alta é igualmente de acordo com o TargetP, e a conexão entre as contagens (a classe de confiabilidade) pode ser uma indicação de como certas predições são. A classe de confiabilidade (RC) varia de 1 a 5, onde 1 indica a predição mais forte. O TargetP é mantido no servidor da Technical University of Denmark.
Para as seqüências preditas por conter uma pré-sequência de terminal N e um local de clivagem potencial também pode ser predito.
Um número de parâmetros foram selecionados, tal como grupo de organismos (vegetal ou não vegetal), séries de cortes (nenhum, série pré- definida de cortes, ou série especificadas pelo uso de cortes), e o cálculo da predição dos locais de clivagem (sim ou não).
Os resultados da análise TargetP 1.1 de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQID N°: 245 são apresentados na Tabela E5. O grupo de organismos "vegetal" foi selecionado, nos cortes definidos, e o comprimento predito do peptídeo de transição requerido. A localização subcelular de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 245 pode ser o citoplasma ou núcleo, nenhum peptídeo de transição predito. Tabela E5: Análise TargetP 1.1 de uma seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 245
Comprimento (AA) 281 Peptídeo de transição cloroplástica 0,094 Peptídeo de transição mitocondrial 0,166 Peptídeo de sinal do caminho secretório 0,034 Outro alvejamento subcelular 0,855 Localização predita / Classe de confiabilidade 2 Comprimento de peptídeo de transição predita / Quando analisado com PLOC (Park and Kanehisa, Bioinformatics, 19, 1656-1663, 2003) ou com PSORT (URL: psort.org), a proteína é predita ter uma localização nuclear.
Muitos outros algoritmos podem ser usados para realizar tais análises, incluindo:
• ChloroP 1.1 hospedado no servidor da Technical University
of Denmark;
• Protein Prowler Subcellular Localisation Predictor versão 1.2 hospedado no servidor do Institute for Molecular Bioscience, University of Queensland, Brisbane, Australia;
• PENCE Proteome Analyst PA-GOSUB 2.5 hospedado no servidor da University of Alberta edmonton, Alberta, Canada;
• TMHMM, hospedado no servidor da Technical University of
Denmark;
Exemplo 48: Ensaio funcional para o polipeptídeo semelhante ao bHLHl 1
Um ensaio de ligação de DNA para AtbHLH6 é fornecido em Dombrecht et al. (2007), este método pode ser usado por qualquer proteína semelhante à bHLHl 1. Brevemente, um fragmento 1000-bp da seqüência codificadora AtbHLH6 abrange os códons 285 a 623 foi amplificada a partir do DNA genômico e clonado no vetor pTacLCELD6.His digerido por Nhel- BamHl (Xue, Plant J. 41, 638-649, 2005). A construção resultante codificado pelos últimos 338 aminoácidos de AtbHLH6 (incluindo a região bHLH) na estrutura com uma proteína repórter CeID e um rótulo 6xHis. A amplificação e clonagem correta foram verificadas pelo sequenciamento de DNA.
A determinação da seqüência de consenso do motivo de ligação de DNA MYC2 e a afinidade de ligação relativa destes locais foi feito de acordo com o Xue (2005), em que uma fusão de uma proteína de ligação de DNA (DBP) à celulase 6-His-tagged D (CELD) serve ambos para os meios pela purificação por afinidade do complexo DBP-DNA na seleção dos locais de ligação a partir do grupo de oligonucleotídeos da seqüência aleatória
biontinilada e como um repórter para a medição da atividade de ligação de DNA.
Para a seleção de locais de ligação usando o papel celulose
como uma matriz de afinidade, a DBP-CELD foi incubada em temperatura
ambiente por 1 hora com 20 ng de um Bio-RS-Oligo rotulado por biotina em
40 μΐ do tampão de ligação/lavagem (descrito cima) contendo 1 mM de
EDTA, 0,25 μβ μΙ"1 poli d(AC-TG), 1 mg de ml"1 de BSA e 10 % de glicerol.
Uma quantidade apropriada de DBP-CELD bruto usado para a seleção do
local de ligação foi o que atingiu 20 a 30 % da eficiência da ligação de
celulose relativa (porcentagem de ligação da atividade celulose à lavagem
após a celulose). As misturas DBP-CELD/Bio-RS-Oligo foram transferidss
aos reservatórios de microplacas de 96 reservatórios contendo papel de filtro
Whatman 1 (4 mm2) que foi pré-embebido com 10 μΐ da solução de bloqueio
[tampão ligação/lavagem contendo 0,5 μg μΓ1 poli d(AC-TG) e 10 % de
glicerol]. Após a incubação a 0o C por 1 hora com agitação moderada, o papel
celulose foi lavado seis vezes com o tampão ligação/lavagem contendo 1 mM
de EDTA e 0,1 mg ml"1 de BSA. O uso da lavagem extensiva na seleção do
alvo local foi baseado nas observações da estabilidade relativamente alta do
complexo de oligonucleotídeo DBP imobilizado me matriz sólida. Os locais
de ligação alvo realizaram DBP-CELD foram eluídos a 40° C por 15 minutos
com 40 μΐ de celulase eluindo-se o tampão [10 mM de HEPES, pH7, 50 mM
de KCl, 0,2 mM de EDTA, 4 mM de celobiose, 0,05 mg ml"1 de BSA e 10 μ§
ml"1 de um iniciador específico da seqüência sentido SP-S]. O eluído foi
usado pela amplificação PCR dos oligonucleotídeos selecionados. O produto
PCR (0,1 de μΐ) sem purificação foi usado para o próximo ciclo de seleção do local.
Alternativamente, 6-His tagged DBP-CELD (10 a 25 μg de proteína bruta) foi incubada em 60 μΐ de tampão PNT (50 mM de fosfato de sódio, pH 8.0, 300 mM de NaCl e 0,05 % de Tween 20) contendo 10 mM de ímidazol e 350 de pérolas de agarose magnéticas Ni-NTA (Qiagen) em temperatura ambiente por 45 a 60 minutos com a agitação moderada em um misturados de microtubo (Tomy Seiko Co., Tokyo, Japan). As perólas magnéticas Ni-NTA foram coletadas no local do tubo pela posição dos tubos em um magneto de 12 tubos (Qiagen). Proteínas de não ligação foram removidas pela lavagem duas vezes com 150 a 200 μΐ de PNT contendo 20 mM de imidazol e uma vez com 60 μΐ do tampão ligação/lavagem contendo 2 mM de MgCl2, 1 mg ml'1 de BSA e 10 % de glicerol. As perólas lavadas foram recolocadas em suspensão em 40 μΐ do tampão ligação/lavagem contendo 2 mM de MgCl2, 0,25 μβ μΓ1 poli d(AC-TG), 1 mg ml"1 de BSA, 0,0025 % de Nonidet P-40, 10 % de glicerol e oligonucleotídeos rotulados por biotina (50 ng de Bio-RS-Oligo ou 1 μΐ do produto PCR amplificado por oligonucleotídeos previamente selecionados). A suspensão foi incubada em temperatura ambiente por 1,5 horas com a agitação moderada no misturado de microtubo. Após a lavagem, quatro vezes (3 a 4 minutos cada lavagem) com 150 a 200 μΐ de tampão ligação/lavagem contendo 2 mM de MgCl2, 0,1 mg ml"1 de BSA e 0,0025 % de Nonidet P-40, as pérolas realizaram a ligação de local alvo BDP-CELD r foram recolocadas em suspensão em 8 μΐ de 5mM de Tris-Cl (pH 8.0)/0,5 mM de EDTA contendo 5 μg ml"1 de um iniciador específico da seqüência sentido (SP-S) e a suspensão foi transferida ao tubo limpo e usada para a amplificação de PCR dos oligonucleotídeos selecionados. O produto PCR (1 μΐ) sem purificação foi usado para o próximo ciclo de seleção do local.
Para os ensaios EMSA, as proteínas 6-His-tagged DBP-CELD foram purificadas usando as pérolas de agarose magnéticas Ni-NTA usando um alto tampão de ligação estringente (50 mM de fosfato de sódio, pH8.0, IM de NaCl, 10 % de glicerol, 1 % de Tween 20 e 10 mM de imidazol) e o restante do procedimento seguindo as instruções dos fabricantes. Oligonucleotídeos sintéticos filamentados duplos (30 a 45 fmol) rotulados com digoxigenina na extremida final 3' foram foram incubados com um DBP purificado (30 a 75 ng) em 15 μΐ do tampão de ligação [25 mM de HEPES/KOH, pH 7.0, 50 mM de KCl, 0,5 mM de DTT, 2 mM de MgCl2, 0,2 ^xS μΐ"1 Poli d(AC-TG), 0,3 mg m"1 de BSA e 10 % de glicerol]. Após a incubação em temperatura ambiente por 30 minutos, os complexos DBP/DNA foram separados a partir de sondas livres em um gel de poliacrilamida a 6 % em um tampão de Tris-acetato a 40-mM (pH 7.5) contendo 5 mM de acetato de Na, 0,5 mM de EDTA e 5 % de glicerol. Os complexos DBP/DNA e as sondas livres nos géis após a eletroforese foram transferidos a uma membrana Hybond Np. O anticorpo anti-dioxigenina conjugado por fosfatase alcalina e um substrato quimioluminescente, CDP-Star (Roche Diagnostics) foi usado para a detecção de digoxigenina de acordo com as instruções do fabricante.
Detalhes adicionais são fornecidos em Xue (2005).
Exemplo 49: Clonagem da seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção
A seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção e que compreendem a SEQ ID N°: 244 foi amplificado por PCR usando como modelo uma feitas comumente da biblioteca de cDNA de mudas Triticum aestivum (em pCMV Sport 6.0; Invitrogen, Paisley, UK). O PCR foi realizado usando polimerase de DNA Hifi Taq em condições padrões, usando 200 ng do modelo em uma mistura de PCR a 50 μΐ. Os iniciadores usados foram prm009718 (SEQ ID N°: 254; sentido, códon de partida em negrito):
'-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttaaacaatggcggggcanccg-3'
e prm009719 (SEQ ID N°: 255; reverso, complementar):
I
-ggggaccactttgtacaagaaagctgggtatgggtgttgcagctgctgtt-3',
que incluem os locais AttB para a recombinação Gateway. O fragmento de PCR amplificado também foi purificado usando métodos padrões. A primeira etapa do procedimento Gateway, a reação BP, foi então realizada, durante o qual fragmento PCR recombina in vivo com o plasmídio pDC)NR201 para produzir, de acordo com a terminologia Gateway, um "clone de entrada", semelhante ao pbHLHl 1. O plasmídio pDONR201 foi adquirido de Invitrogen, como partes da tecnologia Gateway®.
O clone de entrada que compreende a SEQ ID N°: 244 foi então usado em uma reação LR com um vetor de destino usado para a transformação de Oryza sativa. Este vetor contido como os elementos funcionais dentro dos limites de T-DNA: um marcador selecionável vegetal; um cassete de expressão marcador avaliável; e um cassete Gateway pretendido pela recombinação LR in vivo com uma seqüência do ácido nucleico de interesse já clonado no clone de entrada. Um promotor GOS2 de
arroz (SEQ ID N°: 256) para a expressão constitutiva foi localizada a montante deste cassete Gateway.
Após a etapa de recombinação LR, o vetor de expressão
resultante pGOS2:.-semelhante à bHLHll (Figura 23) foi transformado na
cepa da Agrobacterium LBA4044 de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica.
Exemplo 50: Transformação da planta
A transformação das plantas foi realizado de acordo com os procedimentos resumidos no Exemplo 7.
Exemplo 51: Procedimento de avaliação fenotípica 51.1 Apresentação da avaliação
Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados. Os transformantes primários foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para o desenvolvimento e coletado da semente TI. Seis eventos, de que uma progênie Tl segregada 3:1 para a presença/ausência do transgene, foram retidos. Para cada um destes eventos, aproximadamente 10 mudas Tl contendo o transgene (hetero e homozigotos) e aproximadamente 10 mudas Tl perderam o transgene (nulizigotos) foram selecionados pela expressão marcadora visual do monitoramento.As plantas transgênicas e os nulizigotos correspondentes foram desenvolvidos em posições aleatórias lado a lado. As condições da estufa foram de dias curtos (12 horas de luz), 28° C na luz e22° C no escuro, e uma umidade relativa de 70 %. O desenvolvimento das plantas sob as condições de não tensão são submetidas à água em intervalos regulares para garantir que a água e nutrientes não são limitantes para satisfazer a necessidade das plantas para completar o crescimento e desenvolvimento.
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes. Avaliação da aridez
As plantas das sementes T2 são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais até o método do estágio da parte superior. Estes são então transferidos à seção "seca" onde a irrigação é retida. As sondas de umidade são inseridas em potes escolhidos aleatoriamente para monitorar o teor de água no solo (SWC). Quando SWC estão abaixo de certos limiares, as plantas são automaticamente novamente submetidas à água continuamente até um nível normal ser atingido novamente. As plantas são então re-transferidas novamente a condições normais. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob as condições de tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais.
Avaliação da eficiência do uso de nitrogênio
As plantas de arroz das sementes T2 são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais exceto para a solução do nutriente. Os potes são submetidos à água a partir da transplantação do amadurecimento com uma solução de nutriente específico contendo teor de nitrogênio N reduzido (N), usualmente entre 7 a 8 vezes menor. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob a tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. Avaliação da tensão do sal
As plantas são desenvolvidas em um substrato feito de fibras de coco e argex (razão de 3 para 1). Uma solução de nutriente normal são usados durante as primeiras duas semanas após a transplantação das plantinhas nas estufas. Após as primeiras duas semanas, 25 mM de sal (NaCl) é adicionado à solução de nutriente, até as plantas serem coletadas. Os parâmetros relacionados às sementes são então medidos. 51.2 Análise estatística: Teste F
Dois fatores ANOVA (análise de variantes) foram usados como um modelo estatístico para a avaliação total das características fenotípicas das plantas. Um teste F foi realizado em todos os parâmetros medidos de todas as plantas de todos os eventos transformados com o gene da presente invenção. O teste F foi realizado para checar por um efeito do gene em todos os eventos de transformação e para verificar por um total do efeito do gene, também conhecido como um efeito do gene global. O limiar para a significância por um efeito verdadeiro do gene global foi apresentado em uma % do nível de probabilidade para o teste F. Um ponto de valor do teste F significante por um efeito do gene, significando que este não é apenas uma mera presença ou posição do gene que está causando as diferenças no fenotipo.
51.3 Parâmetros medidos
Medição do parâmetro relacionado à biomassa A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
Uma área da planta acima do solo (ou biomassa da folha) foi determinado pela contagem do número total de píxeis nas imagens digitais a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras retiradas do mesmo ponto de tempo a partir de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os experimentos mostram que à área da planta acima do solo medida desta maneira correlaciona com a biomassa das partes das plantas trituradas acima. À área triturada acima é a área medida no ponto de tempo em que a planta tem atingido esta biomassa máxima da folha. O vigor precoce é à área das planta (mudas) acima do solo três semanas pós-germinação. O aumento na biomassa da raiz é expressado como um aumento no total da biomassa da raiz (medido como biomassa máxima de raízes observadas durante a vida toda de uma planta); ou como um aumento na raiz/índice de broto (medido como a razão entre massa de raiz e massa de broto no período de desenvolvimento ativo da raiz e broto).
O vigor precoce foi determinado pela contagem do número total de píxeis a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras retiradas do mesmo ponto de tempo de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração: Os resultados descritos abaixo são para as plantas com três semanas pós-germinação. Medições dos parâmetros relacionados à semente
As panículas primárias maduras foram coletadas, contadas, ensacadas, rotuladas com código de barra e então secadas por três dias em um forno a 37° C. As panícuias foram então limiadas e todas as sementes foram coletadas e contadas. As cascas enchidas foram separadas a partir de um vazio usando um dispositivo de sopro de ar. As cascas vazias foram descartadas e a fração remanescente foi contada novamente. As cascas enchidas foram pesadas em uma balança analítica. O número de sementes enchidas foi determinado pela contagem do número de cascas enchidas que permanece depois da etapa de separação. A produção total de semente foi medida pela pesagem total das cascas enchidas coletadas a partir da planta. O número total de semente por planta foi medido pela contagem do número de cascas coletadas a partir da planta. Peso de núcleo milhar (TKW) é extrapolado do número de sementes enchidas contadas e seu peso total. O índice de colheita (HI) na presente invenção é definida como a razão entre a produção total de semente e à área triturada acima (mm2), multiplicada por um fator IO6. O número total de flores por panícula como definido na presente invenção é a razão entre o número total de sementes e o número de panículas primárias maduras. A taxa de abastecimento da semente como definido na presente invenção é a proporção (expressado como uma %) do número de sementes enchidas no número total de sementes (ou florzinhas).
Exemplo 52: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas
Os resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam um ácido nucleico semelhante ao bHLHl 1 sob as condições de não tensão são apresentadas abaixo. Um aumento de mais do que 5 % em pelo menos 2 linhas foi observado pela produção total de semente, número de sementes enchidas, taxa de abastecimento, índice de colheita, número das primeiras panículas e em pelo menos 3 % por peso de núcleo milhar. Os dados no aumento total (medido em todas as linhas do teste) para cada parâmetro são apresentados na Tabela E6: Tabela E6:
Parâmetro Aumento total (%) Peso total das sementes (produção total da semente 20 Número de sementes enchidas 20 Taxa de enchimento 18 Índice de colheita 21
VI. Proteína ASR (ácido abscísico-, tensão-, e maturativo induzido) Exemplo 53: A identificação das seqüências relacionadas à seqüência de ácido nucleico ASR usado nos métodos da invenção
As seqüências (cDNA eSTs de comprimento total ou genômico) relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usadas nosos métodos da presente invenção onde identificados entre aqueles mantidos no banco de dados Entrez Nucleotides at the National Center for Biotechnology Information (NCBI) usando as ferramentas de seqüência de banco de dados, tal como a ferramenta de alinhamento local básica (BLAST) (Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; e Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402). O programa foi usado para observar as regiões da similaridade local entre as seqüências em comparação com o ácido nucleico ou seqüências de polipeptídeos de um banco de dados da seqüência e pleo cálculo da significância estatística de pontos. Por exemplo, o polipeptídeo codificado pelo ácido nucleico usado na presente invenção foram usados pelo algoritmo TBLASTN, com ajustes default e o filtro para ignorar baixa complexidade seqüência apresentada. A produção da análise foi resumida em comparação aos pares, e classificada de acordo com as contagens de probabilidade (valor E), onde a contagem reflete a probabilidade que um alinhamento particular ocorra pela possibilidade (a parte inferior do valor E, quanto mais significante o acerto). Além disso aos valores E, as comparações também foram contadas pela identidade de porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácido nucleico comparado (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. Tabela Fl fornece uma lista de ácido nucleico e seqüências de polipeptídeos relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção.
Tabela Fl: Exemplos de ácidos nucleicos ASR e polipeptídeos._
nome origem da planta ácido nucleico da SEQ ID N°: proteína da SEQ ID N°: OrysaASRl Oryza sativa 396 397 ZeamaASRl Zea mays 401 402 Zeama_ASR_2 Zea mays 403 404 Zeama_ASR_3 Zea mays 405 406 Zeama_ASR_4 Zea mays 407 408 ZeamaASR_5 Zea mays 409 410 Zeama_ASR_6 Zea mays 411 412 Zeama_ASR_7 Zea mays 413 414 Zeama_ASR_8 Zea mays 415 416 Zeama_ASR_9 Zea mays 417 418 LycesASRl Lycopersicon esculentum 419 420 Lyces_ASR_2 Lilium longiflorum 421 422 SaeofASR 1 Saccharum officinarum 423 424 ZeamaASRl 0 Zea mays 425 426
Exemplo 54: Alinhamento das seqüências de polipeptídeos ASR
O alinhamento das seqüências de polipeptídeos é realizado usando o programa AlignX a partir da embalagem do vetor NTI (Invitrogen) que é baseado no algoritmo Clustal W popular do alinhamento progressivo (Thompson et al. (1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al.
(2003). Nucleic Acids Res 31:3497-3500). Os valores default são pela penalidade aberta de fenda de 10, pela penalidade de extensão de fenda de 0,1 e a matriz do peso selecionado é Blosum 62 (se os polipeptídeos são alinhados). Uma edição menor do manual pode ser feita ainda para otimizar o alinhamento.
Uma árvore filogenética de polipeptídeos GRP é construído
usando um algoritmo de agrupamento próximo como fornecido no programa AlignX do vetor NTI (Invitrogen).
Exemplo 55: Cálculo da identidade global da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos ASR úteis na realização de métodos da invenção
As porcentagens globais de similaridade e identidade entre as seqüências de polipeptídeos de comprimento total útil na realização de métodos da invenção são determinadas usando um dos métodos disponíveis na técnica, o software MatGAT (Ferramenta de alinhamento global de matriz) (BMC Bioinformatics. 2003 4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando seqüências de DNA ou proteínas. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; software hospedado por Ledion Bitincka). O software MatGAT gera as matrizes de similaridade/identidade para seqüência de proteínas ou DNA sem necessariamento o pré-alinhamento dos dados. O programa realiza uma série de alinhamento em pares usando o algoritmo de alinhamento global Myers and Miller (com uma penalidade de abertura de fenda de 12, e a penalidade de extensão de fenda de 2), calcula a similaridade e identidade usando por exemplo Blosum 62 (para os polipeptídeos), e então coloca os resultados em uma matriz de distância. A similaridade da seqüência é mostrada na metada da parte inferior da linha de divisão e a identidade de seqüência é mostrada na metada da parte superior da linha de divisão diagonal.
Parâmetros usados na comparação foram: Matriz de contagem: Blosum62 Primeira fenda: 12
Extensão da fenda: 2
Tabela MATGAT para o alinhamento local de um domínio específico, ou dados em % da identidade/similaridade entre os domínios específicos também podem ser gerados.
Exemplo 56: A identificação dos domínios compreendidos nas seqüências de polipeptídeos ASR úteis na realização de métodos da invenção O recurso integrado das famílias de proteínas, os bancos de dados de locais e domínios (InterPro) é uma interface integrada para os bancos de dados assinados comumente usados para as buscas com base no texto e seqüência. O banco de dado InterPro combina estes bancos de dados, que usam as metodologias diferentes e variam os graus de informação biológica sobre as proteínas bem caracterizadas para derivar os sinais da proteína. A colaboração dos bancos de dados incluem SWISS-PROT, PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom e Pfam, Smart e TIGRFAMs. O Pfam é uma ampla coleção de alinhamentos de seqüência múltipla e modelos Markov secretos que cobrem muitos dos domínios de proteína comuns e famílias. O Pfam é hospedado no servidor Sanger Institute in the United Kingdom. O Interpro é hospedado no European Bioinformatics Institute in the United Kingdom.
As seqüências de proteínas que representam o GRP são usadas como questão para buscar o banco de dado InterPro.
Exemplo 57: Predição da topologia das seqüências de polipeptídeos ASR úteis na realização de métodos da invenção
O TargetP 1.1 prediz a localização subcelular das proteínas eucarióticas. A indicação da localização é com base na presença predita de qualquer uma das pré-sequências do terminal N: peptídeo de transição de cloroplasto (cTP), peptídeo de alvejamento mitocrondrial (mTP) ou peptídeo de sinal de caminho secretório (SP). As contagens em que a predição final não são baseados nas reais probabilidades, e estes não são necessariamente adicionado a um. Entretanto, a localização com a contagem mais alta é igualmente de acordo com o TargetP, e a conexão entre as contagens (a classe de confiabilidade) pode ser uma indicação de que certas predições são. A classe de confiabilidade (RC) varia de 1 a 5, onde 1 indica a predição mais forte. O TargetP é mantido pela Technical University of Denmark.
Para as seqüências preditas por conter uma pré-sequência de terminal N e um local de clivagem potencial também pode ser predito.
Um número de parâmetros foram selecionados, tal como grupo de organismos (vegetal ou não vegetal), séries de cortes (nenhum, série pré- definida de cortes, ou série especificadas pelo uso de cortes), e o cálculo da predição dos locais de clivagem (sim ou não).
As seqüências de proteínas que representam o GRP são usados para questionar o TargetP 1.1. O grupo de organismos "vegetal" é selecionado, nos cortes definidos, e o comprimento predito do peptídeo de transição requerido.
Muitos outros algoritmos podem ser usados para realizar tais análises, incluindo:
• ChloroP 1.1 hospedado no servidor da Technical University
of Denmark;
• Protein Prowler Subcellular Localisation Predictor versão 1.2 hospedado no servidor do Institute for Molecular Bioscience, University of Queensland, Brisbane, Australia;
• PENCE Proteome Analyst PA-GOSUB 2.5 hospedado no servidor da University of Alberta edmonton, Alberta, Canada;
• TMHMM, hospedado no servidor da Technical University of
Denmark
Exemplo 58: Clonagem de uma seqüência de ácido nucleico ASR usado nos métodos da invenção Clonagem da SEQ ID N°: 396:
A seqüência do ácido nucleico SEQ ID N°: 396 usada nos métodos da invenção foi amplificado por PCR usando como modelo uma feitas comumente na biblioteca de cDNA de mudas de Oryza sativa (em pCMV Sport 6.0; Invitrogen, Paisley, UK). PCR foi realizado usando a polimerase de DNA Hifi Taq em condições padrões, usando 200 ng do modelo em uma mistura de PCR de 50 μΐ. Os iniciadores usados foram prm06442 (SEQ ID N°: 399; sentido, códon de partida em negrito):
-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttaaacaatggcggaggagaagca-3' e prm06443 (SEQ ID N°: 400; reverso, complementar): 5'-ggggaccactttgtacaagaaagctgggtcggcgacgttgtgatga-3', que incluem os locais AttB para a recombinação Gateway. O fragmento de PCR amplificado também foi purificado usando métodos padrões. A primeira etapa do procedimento Gateway, a reação BP, foi então realizada, durante o qual fragmento PCR recombina in vivo com o plasmídio pDONR201 para produzir, de acordo com a terminologia Gateway, um "clone de entrada". O plasmídio pDONR201 foi adquirido de Invitrogen, como partes da tecnologia Gateway®.
O clone de entrada que compreende SEQ ID N°: 396 foi então usado em uma reação LR com um vetor de destino usado para a transformação de Oryza sativa. Este vetor contido como os elementos funcionais dentro dos limites de T-DNA: um marcador selecionável vegetal; um cassete de expressão marcador avaliável; e um cassete Gateway pretendido pela recombinação LR in vivo com uma seqüência do ácido nucleico de interesse já clonado no clone de entrada. Um promotor GOS2 de arroz (SEQ ID N°: 398) para a expessão específica da semente foi localizada a montante deste cassete Gateway.
Após a etapa de recombinação LR, o vetor de expressão resultante pGOS2::GRP (Figura 25) foi transformado na cepa da Agrobacterium LBA4044 de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica.
Exemplo 59: Transformação da planta
A transformação das plantas foi realizado de acordo com os procedimentos resumidos no Exemplo 7 Exemplo 60: Procedimento de avaliação fenotípica 60.1 Apresentação da avaliação Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados. Os primeiros transformantes foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para o desenvolvimento e coletado da semente TI. Seis eventos, de que uma progênie Tl segregada 3:1 para a presença/ausência do transgene, foram retidos. Para cada um destes eventos, aproximadamente 10 mudas Tl contendo o transgene (hetero e homozigotos) e aproximadamente 10 mudas Tl perderam o transgene (nulizigotos) foram selecionados pela expressão marcadora visual do monitoramento. As plantas transgênicas e os nulizigotos correspondentes foram desenvolvidos lado a lado em posições aleatórias. As condições da estufa foram de dias curtos (12 horas de luz), 28° C na luz e 22° C no escuro, e uma umidade relativa de 70 %.
Quatro eventos Tl ainda foram avaliados na geração T2 seguindo o mesmo procedimento de avaliação como para a geração Tl mas com mais indivíduos por evento.
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período de tempo imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
Avaliação da aridez
As plantas das sementes T2 são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais até estes aproximarem do estágio superior. Estes são então transferidos à seção "seca" onde a irrigação é retida. As sondas de umidade são inseridas em potes escolhidos aleatoriamente para monitorar o teor de água no solo (SWC). Quando SWC estão abaixo de certos limiares, as plantas são automaticamente novamente submetidas à água continuamente até um nível normal ser atingido novamente. As plantas são então re-transferidas novamente a condições normais. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob as condições de tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. O desenvolvimento das plantas sob as condições de não tensão são fornecidos com água em intervalos regulares para garantir que a água e nutrientes não são limitantes para satisfazer a necessidade das plantas para completar o crescimento e desenvolvimento. Avaliação da eficiência do uso de nitrogênio
As plantas de arroz das sementes T2 são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais exceto para a solução do nutriente. Os potes são submetidos à água a partir da transplantação do amadurecimento com uma solução de nutriente específico contendo teor de nitrogênio N reduzido (N), usualmente entre 7 a 8 vezes menor. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob a tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. 60.2 Análise estatística: Teste F
Dois fatores ANOVA (análise de variantes) foram usados como um modelo estatístico para a avaliação total das características fenotípicas das plantas. Um teste F foi realizado em todos os parâmetros medidos de todas as plantas de todos os eventos transformados com o gene da presente invenção. O teste F foi realizado para checar por um efeito do gene em todos os eventos de transformação e para verificar por um total do efeito do gene, também conhecido como um efeito do gene global. O limiar para a significância por um efeito verdadeiro do gene global foi apresentado em uma % do nível de probabilidade para o teste F. Um ponto de valor do teste F significante por um efeito do gene, significando que este não é apenas uma mera presença ou posição do gene que está causando as diferenças no fenotipo.
Por causa de dois experimentos com os eventos de sobreposição foram realizada, uma análise combinada é realizada. Este é útil para checar a consistência dos efeitos nos dois experimentos, e se este é o caso, para acumular a evidência de ambos experimentos a fim de aumentar a confidência da conclusão. O método usado é um método modelo misturado que leva em conta a estrutura multinível dos dados (isto é experimento - evento - segregantes). Os valores P obtidos em comparação ao teste de razão de probabilidade para distribuições quadradas chi. 60.3 Parâmetros medidos Medição do parâmetro relacionado à biomassa
Uma área da planta acima do solo (ou biomassa da folha) foi determinado pela contagem do número total de píxeis nas imagens digitais a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras retiradas do mesmo ponto de tempo a partir de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os experimentos mostram que à área da planta acima do solo medida desta maneira correlaciona com a biomassa das partes das plantas trituradas acima. À área triturada acima é a área medida no ponto de tempo em que a planta tem atingido esta biomassa máxima da folha.
Medições dos parâmetros relacionados à semente
As panículas primárias maduras foram coletadas, contadas, ensacadas, rotuladas com código de barra e então secadas por três dias em um forno a 37° C. As panículas foram então limiadas e todas as sementes foram coletadas e contadas. As cascas enchidas foram separadas a partir de um vazio usando um dispositivo de sopro de ar. As cascas vazias foram descartadas e a fração remanescente foi contada novamente. As cascas enchidas foram pesadas em uma balança analítica. O número de sementes enchidas foi determinado pela contagem do número de cascas enchidas que permanece depois da etapa de separação. A produção total de semente foi medida pela pesagem total das cascas enchidas coletadas a partir da planta. O número total de semente por planta foi medido pela contagem do número de cascas coletadas a partir da planta. Peso de núcleo milhar (TKW) é extrapolado do número de sementes enchidas contadas e seu peso total. O índice de colheita (HI) na presente invenção é definida como a razão entre a produção total de semente e à área triturada acima (mm2), multiplicada por um fator IO6. O número total de flores por panícula como definido na presente invenção é a razão entre o número total de sementes e o número de panículas primárias maduras. A taxa de abastecimento da semente como definido na presente invenção é a proporção (expressado como uma %) do número de sementes enchidas no número total de sementes (ou florzinhas). Exemplo 61: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas
As plantas transgênicas de arroz que expressam o ácido nucleico GRP representado pela SEQ ID N°: 396 sob o controle do promotor GOS2 mostrando um aumento de mais do que 5 % para o peso total das sementes, número de sementes enchidas, e índice de colheita, quando o desenvolvimento sob as condições de não tensão. VII. Proteína semelhante 11 de ligação do promotor Squamosa (SPL11) Exemplo 62: A identificação das seqüências relacionadas à seqüência de ácido nucleico SPLl 1 usados nos métodos da invenção
As seqüências (cDNA eSTs de comprimento total ou genômico) relacionadas a uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção onde identificados entre aqueles mantidos no banco de dados Entrez Nucleotides at the National Center for Biotechnology Information (NCB!). As seqüências também buscam serem realizadas em outro banco de dados públicos e privados. As ferramentas de busca da seqüência foram usadas, tal como a ferramenta de alinhamento local básica (BLAST) (Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; e Altschul et al. (1997) Nueleic Aeids Res. 25:3389-3402). O programa é usado para observar as regiões da similaridade local entre as seqüências em comparação ácido nucleico ou seqüências de polipeptídeos de um banco de dados da seqüência e pelo cálculo da significância estatística de pontos. Por exemplo, o polipeptídeo codificado pelo ácido nucleico usado na presente invenção foi usado pelo algoritmo TBLASTN, com ajustes default e o filtro para ignorar baixa complexidade seqüência apresentada. A produção da análise foi examinada pela comparação em pares, e classificada de acordo com as contagens de probabilidade (valor E), onde a contagem reflete a probabilidade que um alinhamento particular ocorra pela possibilidade (o valor E inferior, quanto mais significante o acerto). Além disso aos valores E, as comparações também foram contadas pela identidade de porcentagem. A identidade da porcentagem refere-se ao número de nucleotídeos idênticos (ou aminoácidos) entre as duas seqüências de ácido nucleico comparado (ou polipeptídeo) em um comprimento particular. Em alguns exemplos, os parâmetros default podem ser ajustados para modificar a estringência da busca. Por exemplo o valor E pode ser aumentado para mostrar menores pontos estringentes. Desta maneira, os pontos curtos próximos exatos podem ser identificados.
Tabela Gl fornece uma lista das seqüências de ácidos nucleicos relacionadas à uma seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da presente invenção. Os polipeptídeos com uma acessão estende-se por um ponto e um dígito que representa as variantes de união.
Tabela Gl: Exemplos de ácidos nucleicos SPLl 1 e polipeptídeos.
Nome nome alternativo origem da planta ácido nucleico da SEQED N°: proteína da SEQ ID N°: ArathSPLl Ia Atlg27360 Arabidopsis thaliana 427 428 ArathSPLl Iaa NM 202191 (splicing variant) Arabidopsis thaliana 429 428 ArathSPLl Iaaa NMOO1084135 Arabidopsis thaliana 430 428 Arath SPLl Iaaa a SEQID NO: 1 Variant MÍR156 insensitive Synthetie 431 428 Arath SPLl Ib Atlg27370 Arabidopsis thaliana 432 433 Arath SPLl Ic At5g43270 Arabidopsis thaliana 434 435 Oiysa SPLll a LOC 0s02g04680 Oryza sativa 436 437 Orysa SPLll b LOC 0s06g49010 Oryza sativa 438 439 Popth SPLlla Populus SPLlla Populus Species 440 441 Popth SPLll b Populus SPLll b Populus Species 442 443 Popth SPLllc Populus SPLllc Populus Speeies 444 445 Brara SPLlla Br AC189413 Brassiea rapa 446 447 Zeama SPLl1 a ZM 60752693 Zea mays 448 449 Zeama SPLllb ZM SPLll b Zea mays 450 451 Triae SPLlla Ta SPLl Ia Tritieum aestivum 452 453 Vitvi SPLlla VvSPLlla Vitis vinifera 454 455
Exemplo 63: Alinhamento das seqüências de polipeptídeos SPLl 1
O alinhamento das seqüências de polipeptídeos foi realizado usando o programa AlignX a partir do vetor NTI (Invitrogen) que é baseado no algoritmo Clustal W popular do alinhamento progressivo (Thompson et al. (1997) Nucleic Acids Res 25:4876-4882; Chenna et al. (2003). Nucleic Aeids Res 31:3497-3500). Os valores default são pela penalidade aberta de fenda de 10, pela penalidade de extensão de fenda de 0,1 e a matriz do peso selecionado é Blosum 62 (se os polipeptídeos são alinhados). Uma edição menor do manual foi feita ainda para otimizar o alinhamento. Uma seqüência de consenso que compreende altamente conservados de aminoácidos representativos em cada posição é dada; o vazio é dado entre os aminoácidos na seqüência de consenso representam qualquer aminoácido. A alta conservação da seqüência entre os polipeptídeos SPLll é mais observada entre o domínio SBP dos polipeptídeos. A posição de outros motivos da seqüência conservada fora do domínio SBP neste representado pelo Motivo 1 a Motivo 4 (SEQ ID N°: 466 a SEQ ID N°: 472) é indicado na seqüência de consenso.
Figura 28 fornece um alinhamento de polipeptídeos representativos SPLl 1.
Exemplo 64: Cálculo da identidade global da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos SPLl 1 úteis útil na realização de métodos da invenção
As porcentagens globais de similaridade e identidade entre as seqüências de polipeptídeos de comprimento total úteis na realização de métodos da invenção foram determinados usando um dos métodos disponíveis na técnica, o software MatGAT (Ferramenta de alinhamento global de matriz) (BMC Bioinformatics. 2003 4:29. MatGAT: uma aplicação que gera matrizes de similaridade/identidade usando seqüências de DNA ou proteínas. Campanella JJ, Bitincka L, Smalley J; software hospedado por Ledion Bitincka). O software MatGAT gera as matrizes de similaridade/identidade para seqüência de proteínas ou DNA sem necessariamento o pré-alinhamento dos dados. O programa realiza uma série de alinhamento em pares usando o algoritmo de alinhamento global Myers and Miller (com uma penalidade de abertura de fenda de 12, e a penalidade de extensão de fenda de 2), calcula a similaridade e identidade usando por exemplo Blosum 62 (para os polipeptídeos), e então coloca os resultados em uma matriz de distância. A similaridade da seqüência é mostrada na metada da parte inferior da linha de divisão e a identidade de seqüência é mostrada na metada da parte superior da linha de divisão diagonal.
Parâmetros usados na comparação foram: Matriz de contagem: Blosum62 Primeira fenda: 12
Extensão da fenda: 2
Os resultados da análise do software são mostrados na Tabela G2 pela similiaridade e identidade global no comprimento total de uma seqüência de polipeptídeos e a Tabela G3 para a similaridade no domínio SBP. A identidade da porcentagem é dada acima em diagonal em negrito e a porcetagem da similaridade é dada abaixo em diagonal (face normal).
A identidade da porcentagem entre as seqüências de polipeptídeos SPLll úteis na realização de métodos da invenção podem ser tão baixo quanto 20 % da identidade de aminoácido comparado a SEQ ID N°: 428. Tipicamente, polipeptídeos SPLll tem uma identidade de seqüência global (entre uma seqüência do polipeptídeo inteiro) na faixa de 40 %.
A identidade da porcentagem entre os domínios SBP compreendidos nas seqüências de polipeptídeos SPLll úteis na realização de métodos da invenção podem ser tão baixo quanto 30 % da identidade de aminoácido comparado a SEQ ID N°: 456 (domínio SBP compreendido em Arath SPL 11 ou na SEQ ID N0: 428). Os domínios SBP compreendidos nos polipeptídeos SPLl 1 dados na Tabela Gl e tem uma identidade de seqüência na faixa de 31 a 93,6 %.
Tabela G2: Resultados MatGAT para a similaridade e identidade global no
comprimento total de uma seqüência de polipeptídeos.
nome da seqüência 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1. Arath SPLll a 75,3 37,2 31,2 30,9 38,4 34,3 29,9 31 27,5 30,7 31,4 31,5 2. Arath SPLll b 82,3 36,6 33,2 32,1 37,9 36,4 29,7 31,3 29,5 30,7 31,2 33,2 3. Arath SPLllc 52,5 52 33,6 34,9 40,4 38,6 33,7 48,5 32,9 31,8 32,4 34,4 4. Orysa SPLll a 46,5 44,6 46,7 54,3 36,6 38,9 38,1 25,6 46,9 49,2 66,2 34,5 5. Orysa SPLll b 43,8 43,4 47,8 68,2 35,4 36,7 38,4 25,2 44,3 55,1 55,2 32,6 6. Popth SPLlla 54,5 52 54,7 49 49,1 66,5 35,4 36,4 30 32,3 35,4 44,1 7. Popth SPLllb 46,7 48,6 52,3 55,9 53,9 71,2 37,7 32,7 30,7 34,7 37 42,5 8. Popth SPLllc 44,7 44,7 50,4 55,9 55,6 m,9 55,7 25,8 33,3 34,2 35,7 37,6 9. Brara SPLll a 41,7 42,4 55,6 34,1 34,3 46,6 40 35,2 22,2 24,1 24,8 29,4 10. Zeama SPLlla 42,1 42,5 44,6 61,4 58,3 42,7 45,9 51 31,5 41,6 49,4 28,6 11. Zeama SPLll b 44,2 44,4 46,7 60,6 66,7 47,6 50,5 50,4 35,1 53,1 49,5 32,1 12. Triae SPLll a 44 44 46,3 77 69,5 48 52 53,9 33,2 62,2 61,1 32,8 13. Vitvi SPLlla 44,6 43,5 47,2 50,2 50,4 53,8 55,8 55,8 36,7 46,4 46,4 50,2
Tabela G3: Resultados MatGAT para a similaridade e identidade no domínio
SBP das seqüências de polipeptídeos.
nome da seqüência 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1. Arath SPLll a 93,7 77,2 73,4 75,9 58,3 62,2 49,5 46,6 73,4 73,4 68,2 2. Arath SPLll b 96,2 79,7 73,4 73,4 59,3 63,3 49,5 48,9 75,9 77,2 71,8 3. Arath SPLllc 86,1 88,6 81 77,2 63 66,3 54,2 59,1 81 78,5 74.1 4. Orysa SPLl 1 a 84,8 86,1 89,9 84,8 61,5 66,3 53,3 50 88,6 83,5 80 5. Orysa SPLl 1 b 88,6 91,1 91,1 91,1 59,3 64,3 50,5 47,7 87,3 83,5 78,8 6. Popth SPLlla 64,8 67,6 68,5 65,7 66,7 60,6 52 45,4 62,4 57,4 60,2 7. Popth SPLllb 69,4 72,4 72,4 70,4 72,4 71,3 45,2 41,3 66,3 62,2 61,5 8. Popth SPLllc 63,3 64,3 65,3 64,3 66,3 66,7 65,3 31 53,3 50,5 56,1 9. Brara SPLll a 62 64,6 68,4 63,3 64,6 56,5 55,1 43,9 51,1 51,2 46,8 10. Zeama SPLll a 86,1 88,6 91,1 93,7 96,2 66,7 70,4 67,3 63,3 88,6 84,7 11. Zeama SPLll b 88,6 91,1 89,9 88,6 93,7 63,9 69,4 64,3 64,6 92,4 90,6 12. Triae SPLll a 82,4 84,7 84,7 84,7 88,2 67,6 72,4 71,4 60 88,2 90,6 13. Vitvi SPLll a 90,1 93,8 90,1 87,7 90,1 70,4 75,5 67,3 64,2 88,9 87,7 87,1
Exemplo 65: A identificação dos domínios compreendidos nas seqüências de
polipeptídeos úteis na realização de métodos da invenção O recurso integrado das famílias de proteínas, os bancos de dados de locais e domínios (InterPro) é uma interface integrada para os bancos de dados assinados comumente usados para as buscas com base no texto e seqüência. O banco de dado InterPro combina estes bancos de dados, que usam as metodologias diferentes e variam os graus de informação biológica sobre as proteínas bem caracterizadas para derivar os sinais da proteína. A colaboração dos bancos de dados incluem SWISS-PROT, PROSITE, TrEMBL, PRINTS, ProDom e Pfam, Smart e TIGRFAMs. O Pfam é uma ampla coleção de alinhamentos de seqüência múltipla e modelos Markov secretos que cobrem muitos dos domínios de proteína comuns e famílias. O Pfam é hospedado no servidor Sanger Institute in the United Kingdom. O Interpro é hospedado no European Bioinformatics Institute in the United Kingdom.
Tabela G4 mostra os ajustamentos (corte de União, corte de confiança e corte de ruído) como descrito nos bancos de dados Pfam que foram usados para construir os HMMs fs para os domínios diferentes SBP.
Tabela G4: Informação de HMMs construção em bancos de dados do domínio Pfam Versão 21.0
informação de construção HMMER Pfam Is ΓΗΜΜ carregado! Pfam fs [HMM carregado] corte União 25.0 25.0; 25.0 25.0 corte de confiança 41.4 41.4; 26.2 54.1 corte de ruído 20.8 20.8; 18.0 11.2 método de construção de HMM hmmbuild -F HMM Is SEED hmmbuild -f-F HMM fs SEED hmmcalibrate --seed 0 HMM Is limmcalibrate -seed 0 HMM fs
Os resultados da avaliação Pfam para os polipeptídeos
representativos SPLll de origem vegetal são apresentados na Tabela G5. As coordenadas do aminoácido para o domínio SBP na seqüência de referência é indicado na coluna correspondente. O valor E do alinhamento também é dado. Tabela G5: Resultados da avaliação Pfam para o domínio SBP (Pfam referência PF03110) de polipeptídeos representativos SPLl 1 como realizados em Pfam Versão 21.0.
nome da seqüência coordenadas de aminoácido valor E do do domínio SBP alinhamento Arath SPLll a 174-252 1.10E-50 Arath SPLll b 175-253 1.61E-47 Arath SPLllc 168-246 1.90E-52 Orysa SPLll a 181-259 5.10E-50 Orysa SPLll b 179-257 3.90E-47 Popth SPLll a 170-277 170-277 Popth SPLll b 180-277 1.50E-41 Popth SPLll c 171-249 7.80E-52 Brara SPLll a 180-279 5.20E-44 Zeama SPLl Ia 161-239 2.20E-51 Zeama SPLll b 159-237 1.10E-48 Triae SPLll a 184-262 2.90E-52 Vitvi SPLlla 171-249 7.80E-52
Exemplo 66: Clonagem da seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção
A seqüência do ácido nucleico usado nos métodos da invenção foi amplificado por PCR usando como modelo uma feitas comumente na biblioteca de cDNA de mudas Arabidopsis thaliana (em pCMV Sport 6.0; Invitrogen, Paisley, UK). O PCR foi realizado usando a polimerase de DNA Hifi Taq em condições padrões, usando 200 ng do modelo em uma mistura de PCR a 50 μΐ. Um iniciador a montante e a jusante como representado pela SEQ ID N°: 473 e SEQ ID N°: 474 respectivamente foram usados para amplificar por PCR (Reação de cadeia de polimerase) a região codificadora de um ácido nucleico SPLll como representado pela SEQ ID N°: 427. Os iniciadores incluem os locais AttB para a recombinação Gateway para facilitar a clonagem do fragmento de DNA de PCR amplificado no vetor de clonagem Gateway.
O fragmento de PCR amplificado também foi purificado usando métodos padrões. A primeira etapa do procedimento Gateway, a reação BP, foi então realizada, durante o qual o fragmento PCR recombina in vivo com o plasmídio pDONR201 para produzir, de acordo com a terminologia Gateway, um "clone de entrada", pSPLll. O plasmídio pDC)NR201 foi adquirido de Invitrogen, como partes da tecnologia Gateway®.
O clone de entrada que compreende SEQ ID N°: 427 foi então usado em uma reação LR com um vetor de destino usado para a transformação de Oryza sativa. Este vetor contido como os elementos funcionais dentro dos limites de T-DNA: um marcador selecionável vegetal; um cassete de expressão marcador avaliável; e um cassete Gateway pretendido pela recombinação LR in vivo com uma seqüência do ácido nucleico de interesse já clonado no clone de entrada. Um promotor GOS2 de arroz (SEQ ID N°: 476) para a expressão constitutiva foi localizada a montante deste cassete Gateway no vetor pGOS2::SPLl 1. A seqüência codificadora SPLll também foi clonada em um vetor de expressão que compreende um promotor WSI18 de arroz (SEQ ID N°: 477) para a expressão específica de semente (ABA induzível) (pWSI18::SPLl 1).
Após a etapa de recombinação LR, o vetor de expressão resultante pGOS2::SPLll e pWSI18::SPLl 1 (Figura 31) foram transformados em cepa de Agrobacterium LBA4044 de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica. Exemplo 67: Transformação da planta
A transformação das plantas foi realizada de acordo com os procedimentos resumidos no Exemplo 7 Exemplo 68: Procedimento de avaliação fenotípica 68.1 Apresentação da avaliação
Aproximadamente 35 transformantes de arroz TO independentes foram gerados. Os primeiros transformantes foram transferidos a partir de uma câmera de cultura de tecido de uma estufa para o desenvolvimento e coletado da semente TI. Seis eventos, de que uma progênie Tl segregada 3:1 para a presença/ausência do transgene, foram retidos. Para cada um destes eventos, aproximadamente 10 mudas Tl contendo o transgene (hetero e homozigotos) e aproximadamente 10 mudas Tl perderam o transgene (nulizigotos) foram selecionados pela expressão marcadora visual do monitoramento. As plantas transgênicas e os nulizigotos correspondentes foram desenvolvidos lado a lado em posições aleatórias. As condições da estufa foram de dias curtos (12 horas de luz), 28° C na luz e 22° C no escuro, e uma umidade relativa de 70 %. O desenvolvimento das plantas sob as condições de não tensão são fornecidos com água em intervalos regulares para garantir que a água e nutrientes não são limitantes para satisfazer a necessidade das plantas para completar o crescimento e desenvolvimento.
Quatro eventos Tl ainda foram avaliados na geração T2 seguindo o mesmo procedimento de avaliação como para a geração Tl mas com mais indivíduos por evento. A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período das imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes. Avaliação da aridez
As plantas das sementes T2 foram desenvolvidas no solo em potes sob condições normais até estes aproximarem do estágio superior. Estes foram então transferidos à seção "seca" onde a irrigação foi retida. As sondas de umidade foram inseridas em potes escolhidos aleatoriamente para monitorar o teor de água no solo (SWC). Quando o SWC está abaixo de certos limiares, as plantas foram automaticamente novamente submetidas à água continuamente até um nível normal foi atingido novamente. As plantas foram então re-transferidas novamente a condições normais. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) foi o mesmo para as plantas não desenvolvidas sob as condições de tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. Avaliação da eficiência do uso de nitrogênio As plantas de arroz das sementes T2 são desenvolvidas no solo em potes sob condições normais exceto para a solução do nutriente. Os potes são submetidos à água a partir da transplantação do amadurecimento com uma solução de nutriente específico contendo teor de nitrogênio N reduzido (N), usualmente entre 7 a 8 vezes menor. O resto do cultivo (amadurecimento da planta, coleta da semente) é o mesmo como para as plantas não desenvolvidas sob a tensão abiótica. Os parâmetros de produção e desenvolvimento são registrados como detalhado para o desenvolvimento sob as condições normais. 68.2 Análise estatística: Teste F
Dois fatores ANOVA (análise de variantes) foram usados como um modelo estatístico para a avaliação total das características fenotípicas das plantas. Um teste F foi realizado em todos os parâmetros medidos de todas as plantas de todos os eventos transformados com o gene da presente invenção. O teste F foi realizado para checar por um efeito do gene em todos os eventos de transformação e para verificar por um total do efeito do gene, também conhecido como um efeito do gene global. O limiar para a significância por um efeito verdadeiro do gene global foi apresentado em uma % do nível de probabilidade para o teste F. Um valor significante do teste F por um efeito do gene, significando que este não é apenas uma mera presença ou posição do gene que está causando as diferenças no fenotipo.
Quando dois experimentos com os eventos de sobreposição foram realizados, uma análise combinada foi realizada. Este é útil para checar a consistência dos efeitos nos dois experimentos, e se este é o caso, para acumular a evidência de ambos experimentos a fim de aumentar a confidência da conclusão. O método usado foi um método modelo misturado que leva em conta a estrutura multinível dos dados (isto é experimento - evento - segregantes). Os valores P obtidos em comparação ao teste de razão de probabilidade para distribuições quadradas chi. 68.3 Parâmetros medidos Medição do parâmetro relacionado à biomassa
A partir do estágio de semeadura até o estágio de maturidade das plantas foram passados diversas vezes através de um gabinete de imagem digital. Em cada período das imagens digitais (2048x1536 píxeis, 16 milhões de cores) foram tiradas de cada planta em pelo menos 6 ângulos diferentes.
Uma área da planta acima do solo (ou biomassa da folha) foi determinado pela contagem do número total de píxeis nas imagens digitais a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras tiradas no mesmo tempo a partir de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os experimentos mostram que à área da planta acima do solo medida desta maneira correlaciona com a biomassa das partes das plantas trituradas acima. À área triturada acima é a área medida no período em que a planta tem atingido esta biomassa máxima da folha. O vigor precoce é à área das planta (mudas) acima do solo três semanas pós-germinação. O aumento na biomassa da raiz é expressado como um aumento no total da biomassa da raiz (medido como biomassa máxima de raízes observadas durante a vida toda de uma planta); ou como um aumento na raiz/índice de broto (medido como a razão entre massa de raiz e massa de broto no período de desenvolvimento ativo da raiz e broto).
O vigor emergente foi determinado pela contagem do número total de píxeis a partir das partes de plantas acima do solo discriminadas a partir do fundamento. Este valor foi medido pelas figuras tiradas no mesmo tempo de ângulos diferentes e foi convertido a um valor de superfície física expressada em quadrado mm pela calibração. Os resultados descritos abaixo são para as plantas com três semanas pós-germinação. Medições dos parâmetros relacionados à semente
As panículas primárias maduras foram coletadas, contadas, ensacadas, rotuladas com código de barra e então secadas por três dias em um forno a 37° C. As panículas foram então limiadas e todas as sementes foram coletadas e contadas. As cascas enchidas foram separadas a partir de um vazio usando um dispositivo de sopro de ar. As cascas vazias foram descartadas e a fração remanescente foi contada novamente. As cascas enchidas foram pesadas em uma balança analítica. O número de sementes enchidas foi determinado pela contagem do número de cascas enchidas que permanece depois da etapa de separação. A produção total de semente foi medida pela pesagem total das cascas enchidas coletadas a partir da planta. O número total de semente por planta foi medido pela contagem do número de cascas coletadas a partir da planta. Peso de núcleo milhar (TKW) é extrapolado do número de sementes enchidas contadas e seu peso total. O índice de colheita (HI) na presente invenção é definida como a razão entre a produção total de semente e à área triturada acima (mm2), multiplicada por um fator IO6. O número total de flores por panícula como definido na presente invenção é a razão entre o número total de sementes e o número de panículas primárias maduras. A taxa de abastecimento da semente como definido na presente invenção é a proporção (expressado como uma %) do número de sementes enchidas no número total de sementes (ou florzinhas). Exemplo 69: Resultados da avaliação fenotípica das plantas transgênicas
Os resultados da avaliação das plantas transgênicas de arroz que expressam um ácido nucleico SPLll correspondente à construção de pGOS2::SPLl 1 e pWSI18::SPLl 1 se sob a tensão da aridez ou condições de não tensão são dados neste. Um aumento em pelo menos 5 % foi observado pela um ou mais dos seguintes parâmetros de vigor emergente (mudas com vigor precoce), produção total da semente (peso da semente), a taxa de abastecimento da semente (taxa de enchimento da semente), o número de sementes enchidas, o número de flores (sementes) por panícula e o índice de colheita, e em pelo menos 3 % por mil grãos em peso nas plantas transgênicas (1000 sementes) quando comparados ao controle de plantas nulizigotos em pelo menos uma das condições de desenvolvimento. MSCNGCRVLRKGCSENCILRPCIQWIETADAQGHATVFVAKFFGRAttl MSFISAY/Pnc
QRPALFQSLLYEACGRTVNPVNGAIGMLWTGNWNICQAAVETVLRGGSLRPIPELLTH
3
GGGFAGFPSPTSEEASEICTEMLNLQQNDSTDRNIYHHSRFSSSRSRSTMDSSSPTKRK
RLSSEDQPSSELDLSLIPNFPIKQATPSSTRRRSVTPSMNSEDSGTTTTTTAFCDKGDVY
GNGGGETTKLLNLFV
FIGURA 1 CLUSTAL W (1.83)
0s-0s01g03890
St-TCl62239
Ta-TC235711
Hv-TC147808
Os-Os01g32770
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Pt-X180
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St-TC137193
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Gm-TC216138
Lj-TC15459
Gm-TC227562
Ck-LOB-DQ787782
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Pt-III. 589
Pt-V.543
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Gh-TC30552
At-LBD37-Q9FN11
At-LBD38-Q9SN23
At-LBD39-Q9SZE8
Aq-TC18561
Pta-TC59178
St-TC140088
Pa-TC14656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
Alinamento de seqüência múltiplo
MRMSCNGCRVLRKGCSDN MRMSCNGCRVLRKGCSEN MRLSCNGCRVLRKGCSED MRLSCNGCRVLRKGCSED MRMSCNGCRVLRKGCSEG
scngcrvlrkgcnqd
MRMSCNGCRVLRKGCSEN MRMSCNGCRVLRKGCSEN MRMSCNGCRVLRKGCSDD MRMSCNGCRVLRKGCSED MRMSCNGCRVLRKGCSEN MRMSCNGCRVLRKGCSKS MRMSCNGCRVLRKGCSED MRMSCNGCRVLRKGCSED MRMSCNGCRVLRKGCSDD MRMSCNGCRVLRKGC SEN MSCNGCRVLRKGCNDN
MPFSALSFSSLPHRIILLLIGFLNSSPSLSRHFSISFRTEYTMRMSCNGCRILRKGCGDN
MRMSCNGCRVLRKGCSET MRVSCNGCRVLRKGCSDS MSCNGCRVLRKGCSDG MSCNGCRVLRKGCSEA MSCNGCRVLRKGCSEG MSCNGCRVLRKGCNDA MSCNGCRVLRKGC S DA MSCNGCRVLRKGCSDA MSCNGCRVLRKGC S DN MSCNGCRVLRKGCSDN MSCNGCRVLRKGCSDN MSCNGCRVLRKGCSEN MSCNGCRVLRKGCSES MSCNGCRVLRKGCSES MSCNGCRVLRKGCSES MSCNGCRVLRKGCSES MSCNGCRVLRKGCSES MSCNGCRVLRKGCSEN MSCNGCRVLRKGCSEN MSCNGCRVLRKGCSES MSCNGCRVLRKGCSES MSCNGCRVLRKGCSEN MSCNGCRVLRKGCSEN MSCNGCRVLRKGCSET MSCNGCRVLRKGCSES
---------------MTATTGAGNSGRDLSVFIQRKQEADGRKRMSCNGCRVLRKGCSDT
MSCNGCRILRKGCNEN
---------------------------MSATDKNITERKEQQRKMSCNGCRVLRKGCSDN
---------------------------MSATENHITERKEQERKMSCNGCRVLRKGCSEN
MSCNGCRVLRKGCSET MSCNGCRVLRKGCSET .****** . *****
FIGURA 2 0s-0s01g03890
St-TCl62239
Ta-TC235711
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Pa-TC14 656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
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CSLRPSLQWIKSPDSQANATVFLAKFYGRAGLINLINAG-PDHLRPAIFRSLLYEACGRI
CSIRPCLQWIKSPEAQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGTDDSLRPGIFRSLLYEACGRI
CSIRPCLQWIKSPEAQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGTDDSLRPGIFRSLLYEACGRI
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CELRPCLQWIKTSESQAQATVFLAKFYGRSGLMNLIKSG-PEFLRPTLFRSLLYEACGRI
CVLRPCLQWIDAADAQGHATVFVAKFFGRAGLLSFISAV-PEAQRPALFQSLLYEAAGRT
CVLRPCLQWIDAADAQGHATVFVAKFFGRAGLLSFISAV-PDAQRPALFQSLLYEAAGRT CVLRPCLQWIDGAEAQGHATVFVAKFFGRAGLMS FLTAV-PEPQRAA VFQSLL YEAAGRT CMLRPCLLWIEGADAQGHATIFAAKFFGRAGLMSFLTAV-PESQRPAVFQSLLYEAAGRT CVLRPSIEWIDGAQPQANATVFVAKFFGRAGLVASLAAV-PLHHRPALFRSLLYEACGRT CVLRPSIEWIDGAQPQANATVFVAKFFGRAGLVASLAAV-PLHHRPALFRSLLYEACGLT CILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PENQRPALFQSLLYEAAGRT CILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PENQRPALFQSLLYEAAGRT CILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PENQRPALFQSLLYEAAGRT CILRPCLQWIETAESQGHATVFVAKFFGRAGLTSFISAV-PENQRPSLFQSLLYEAAGRT CILRPCLQWIDTPEAQGHATVFVAKFFGRADLMSFISNV-PEPQRPALFQSLLFEACGRT CILRPCLQWIDTAEAQGHATVFVAKFFGRADLMSFISNV-PQPQRPSLFQSLLFEACGRT CILRPCLQWIETAEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISNV-PENQRPALFQSLLFEACGRT CILRPCLQWLENPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFLSNV-PETQRPALFQSLLFEACGRT CILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISNV-PEPQRPALFQSLLFEACGRT CILRPCLQWIES PEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PENQRPSLFQS LLFEACGRT CILRPCLQWIESPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISSV-PÉDQRPSLFQSLLFEACGRT
CILRPCLQWIESAE SQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PENQRPALFRS LLYEACGRT CILRPCLQWIESPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PESQRPALFQSLLFEACGRT
CILRPCIQWIETADAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PDSQRPALFQSLLYEACGRT
CILRPCIQWIES PEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PESQC PALFQSLLYEACGRT CILRPCLQWIESAESQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISSV-PELQRPALFQSLLFEACGRT CILRPCLQWIESPEAQGHATVFIAKFFGRAGLMSFISSV-PESQRPALFQSLLFEACGRT CILRPCLQWIESPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAV-PDHQRPALFQSLLYEACGRT CILRQSLQGIESPHAQANATVFVAKFFGRAGLMSFLTSV-SESQRPALFQSLLFEACGRT CILRQSLQWIESPQSQAHATVFVAKFFGRAGLMTFIATV-SEPERPDLFKSLLYEACGRT CILRQSLQWIESPQSQAHATVFVAKFFGRAGLMTFIAAV-SEPERPALFKSLLYEACGRT CVLRSCLHWIPTPEAQGNATLFLAKFFGRSDLISLISAV-PESQRPVLFQSLLFEACGRT CVLRSCLHWITNPEAQGNATLFLAKFFGRSDLMSLISAV-PEAQRPALFQSLLFEACGRT * ·· + .**.* **♦.**. ^
* *+* ** *
FIGURA 2 CONT. 0s-0s01g03890
St-TC162239
Ta-TC235711
Hv-TC147808
0s-0s01g3277 0
At-LBD42-Q9CA30
Pt-123.86
At-LBD40-Q9ZW96
Bn-AAP37970
At-LBD41-Q9M886
Mt-TC107091
St-TC133081
Gm-TC220806
Mt-ABE78739
Vv-TC55931
Aq-TC18329
Pt-X180
Pt-XII.481
Pta-TC67269
Pta-TC69225
0s-0s03g33090
Sb-TC104758
0s-0s07g40000
Hv-TC147776
0s-0s03g41330
Ta-TC270332
St-TC137193
St-TC133385
Le-TC178827
Nb-TC9404
Gm-TC216138
Lj-TC15459
Gm-TC227562
Ck-LOB-DQ787782
Mt-ABE82505
Pt-III.589
Pt-V.543
Vv-TC60668
Gh-TC30552
At-LBD37-Q9FN11
At-LBD38-Q9SN23
At-LBD39-Q9SZE8
Aq-TCl8561
Pta-TC59178
St-TC140088
Pa-TC14656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
LNPVYGSVGLLWSGNWQLCQSAVESVLRGMPIAQPPPS----------------------
INPVNGSVGLMCSGNWQRCQEAVESVLKGSTIMQVPINNDDDNN----------------
VNPIYGSVGLLWSNNWQMCQAAVEAVLSGKPIVQVS S-----------------------
VN PIYG SVGL LW S NNWQMCQAAVEAVL SGKPIVQVS S-----------------------
VNPIYGSVGLLWSGQWQACQAAVEAVLKGDPWQVSS-----------------------
VNPVDGSVGLMWSGNWAQCQAAVDAVLNGLPITHTPLP----------------------
VNPIYGSVGLMWSGSWQLCQAAVEAVLKGAPITPINSEAA--------------------
VNPIYGSVGLLWSGNWHLCQAAVEAVMRGSPVTPIACDAA--------------------
VNPIYG SVGLLWSGNWQLCQ SAVEAVMKGEPITEMATDAA--------------------
VNPIYGSVGLLWSGNWQLCQDAVEAVMKGE PVKEIATDAA--------------------
VN PIYGSVGLLWSGS WQLCQAAVEAVLKGAPITPITSEAA--------------------
VNPIYGSVGLLWSGNWQLCQNAVEAVLKGTPITPIASEIA--------------------
VNPIYGSVGLLWSGSWQLCQAAVEAVLKGEPITPITSEAA--------------------
VNPIYGSVGLLWSGSWHLCQAAVEAVLKGEPITPIDSEAD--------------------
VNPIYGSVGLLWSGNWNHCQNAVDAVLGGSQIMEVPCDTA--------------------
VNPIYGSVGLLWSGSWQLCQAAVEAVLKGTPIMQISSEVA--------------------
VN PVYG SVGMLW S GNWAQCQAAVDAVLKGL P11SIPS S DVPT P-----------------
VNPVSGSVGLLSTGSWQQCQAAVEAVLKGEPITQIASTDQLT----------'________
VNPIFGSVGLLCSGNWQLCQAAVESILKGCPIHPILVDSSGTQM----------------
VNPIFGSVGLIWSGNWHICQAAVESVLKGYPLQPLHPLNSLEIA----------------
INPVHGAVGLLWTGNWPLCQAAVETVLRGGAIGPLP------------------------
INPVHGAVGLLGTGNWHLCQAAVDTVLRGGAIGPLP------------------------
INPVGGAVGLLSGGSWHLCQAAVDTVLRGGGIQPLP------------------------
INPVGGAVGLLWAG SWHLCEAAVQTVLRGGAIRPLP------------------------
INPVSGAIGLMWTGNWDLCQAAADAVLRGDSLRALS------------------------
INPVSGAIGLMWTSNWDLCQAAAEAVLRGDSLRSLS------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGALRPIS------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGALRPIS------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGALRPIS------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGALRPIP------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTVRPMP------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLKPLP------------------------
VN PVNGAVG LLWTGNWHVCQAAVE TVLRGGT LRPMP------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLQGGTLRPLP------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLRPLP------------------------
VNPVNGAAGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLQPMP------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLRPMP------------------------
VNPVNGAVGLLGTGNWHVCQAAMETVLRGGTLRAMP------------------------
VN PVNGAVGLLWNGNWHVCQAAVETVLRGGSLRSMP------------------------
VNPVNGAIGMLWTGNWNICQAAVETVLRGGSLRPIP------------------------
VNPVNGAVGLLWTGNWNVCQAAVETVLRGGSLKPIP------------------------
VNPVNGAVGMLWTRNWHVCQAAVETVLRGGTLRPIS------------------------
VN PVNGAVGLLWTGNWHICQAAVETVLRGGTLRPIN------------------------
VNPVNGAVGLLWNGNWQLCQAAVETVLKGGTLRPPQSSSVIPTCSTRPSLMNSFSANFRV
VNPVHGAVGLLWTGNWHVCQSAVETVLKGGVLRPLP------------------------
VNPVHGAVGLMWTGKWQICQAAVQTVLSGGSLDRTPAS----------------------
VN PVHGAVG LLWTGKWQICQAAVQTVLSGGSLDRTPAG----------------------
VNPVNGAVGLLWSGNWHVCQAAVESVLAGETLRPLPG-----------------------
VNPVNGWGLLWSGNWHMCQEAVETVLSGGALQPLPG-----------------------
FIGURA 2 CONT. 0s-0s01g038 90
St-TC162239
Ta-TC235711
Hv-TC14 7808
0s-0s01g32770
At-LBD42-Q9CA30
Pt-123.86
At-LBD40-Q9ZW96
Bn-AAP37970
At-LBD41-Q9M886
Mt-TC107091
St-TC133081
Gm-TC220806
Mt-ABE78739
Vv-TC55931
Aq-TC18329
Pt-X180
Pt-XII.481
Pta-TC67269
Pta-TC69225
0s-0s03g33090
Sb-TC104758
0s-0s07g4 0000
Hv-TC147776
0s-0s03g41330
Ta-TC270332
St-TC137193
St-TC133385
Le-TC178827
Nb-TC9404
Gm-TC216138
Lj-TC15459
Gm-TC227562
Ck-LOB-DQ787782
Mt-ABE82505
Pt-III.589
Pt-V .-543
Vv-TC60668
Gh-TC30552
At-LBD37-Q9FN11
At-LBD38-Q9SN23
At-LBD39-Q9SZE8
Aq-TC18561
Pta-TC59178
St-TC140088
Pa-TC14 656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
-------A
-NNNNNNT
—EDAAAD
—EDAAAD
—EAAAAA
—SASASH
-VNGHGP-
-VTGQAP-
-TSGQGP-
-TIGQGP-
-ANGRGPP
-VNNNGP-
-ANGRAP-
■ ENERGP-
AIRPIL-
•AISPSP-
PTERSNT SPPPAAA
-EF -EF -EF -DF -EL -EL -EL -EH -EL ■EL DL EL ■EL EL EL DL
NSNVNNINSSGSRLSLEVGKARPVNEMREMYTVKPEVDFPLNRPQESCNPHQPWAAKVKS
rrnrimii ef
___~ PWFPLTDAN
TCFPSTDAN
FIGURA 2 CONT. 0s-0s01g03890
St-TC162239
Ta-TC235711
HV-TC147808
0s-0s01g32770
At-LBD42-Q9CA30
Pt-123.86
At-LBD40-Q9ZW96
Bn-AAP37970
At-LBD41-Q9M886
Mt-TC107091
St-TC133081
Gm-TC220806
Mt-ABE78739
Vv-TC55931
Aq-TC18329
Pt-X180
Pt-XII.481
Pta-TC67269
Pta-TC69225
Os-Os03g33O90
Sb-TC104758
0s-0s07g40000
Hv-TC147776
0s-0s03g41330
Ta-TC270332
St-TC137193
St-TC133385
Le-TC178827
Nb-TC9404
Gm-TC216138
Lj-TC15459
Gm-TC227562
Ck-L0B-DQ787782
Mt-ABE82505
Pt-III.589
Pt-V.543
Vv-TC60668
Gh-TC30552
At-LBD37-Q9FN11
At-LBD38-Q9SN23
At-LBD39-Q9SZE8
Aq-TC18561
Pta-TC59178
St-TC140088
Pa-TC14656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
TAVPPLPTCDIRHVGARRGDVHGAAAGPVADLHRLDISSRAKFKRPGGGAAAAHRSDHAA
dqivplkgcdirhvsknnstns--------dnqqviktrkgrlkrkgtfdsvas______
r-tpplkaydirhvstspaadg--------rlhkvakpgrtrfkrassasshhn------
r-tpplkaydirhvstspaadg--------rlhkvakpgrtrfkrassasshhn------
otto™ídirhvskdaeadaaa------nllrvarggrtrfkrassssnskhgaklag
qiipphrtydirhvakdpttggds------senlatrvnanksktqtgrfkres---— -
— PLK-VYDIRHVSKEENSAASNDANRARTRCRVRRWKPKASKRACFGNGL_______
—pfnnklcdirhvssrdenvkrrsrgackeernvr------------------------
— -plk-mydirhiakdenspaaaaaagstdrkrgktrrakrvaavakpaes________
— plk-1y dirhiskddns — aaaatgstdlklaktrrakrvstvaiqaes________
LK AYDIRHVSKEENSAASTELTQQRVKPRSRKRSSLAKLKIQEEEKSSNDNKGVE
—PLKLPYDIRHINKDENSTKSSELHRVRTRCRFKRSGANTKATKSNPACSG_______
----PLKAYDIRHVSKDQNSANETPKTKTRSRFKRTSGTLIKPKASKGTGFVP_______
----PFKAYDIRHVSKDEN-LEETKQVRTRSRFRRAMKPKPSKEVGSGSGSSS-------
plkaydirhlskdan sphdlhkaktrsrfkrcgarskphldsaefcn------
PLKAYDIRHVSKDENSSAASQELHKVKTRSRFKRSGAGKAANNKQVNESNK_____
HLISSLNTYDIRHVSRDQ—NSPELNKVKSRTRCKRSIGTRPSSLAEPTGRLN______
LGGSDTRHVSREEDWSASDQPRKIKSKRQFNRSTSKRKPSRTEAEHTCF______
N—PSVRSTLMETITNELHKVKTKGRFKRRKSTVKDVSLNNSDAEDLGASOVFN______
A PQSMKA VADKLRNVRSQGRFKRPLYRKPSRDVKNLNLHALKDEEAAGILTGSQAYN---
elggacggaggd-lyg-----------aakrnggwstfstakrvrk------
ELG-ITGSAGD-LYGPPGAGTGHGGGGGKRAGGWSTFSTAKRVRK------
dqvdaaaaggrd-vfas---------tarramggcstfstakrstt------
elaggvpeggvg-gsdlfas------ssrrawgcstysmakrvtp------
avpaaftdrdmaglygnvgaaagtsssspdndnssasaaprrkrpr------
--------AVPAAFTERDMAGLYGNVGTNTGSSSSLHSSPENSTSAPARKRS--------
lg----------asveidevsdc-----
LG------
■TDVFKLQDPSLN----------------
TDVFKLQDP-------------------
TDVFKLQDPSLN----------------
TDIFKLQHPSQNN---------------
TDKWRVRDPNPNFRFPGSRSDK------
YDTWRIRDPNPNARLTNSRS--------
TDTWRIRNPNTNCRFTSSRSSS------
TGIWRIRDPNPNCRPNGSRSNN------
------ASVEIDEVSDC------
LG----------ASVEIDEVSDC------
LG----------ASLDIDESSEC------
FGLDAP--TPTTDDAS-EGEVTC------
LGLDAPSHVPTAADDA-SEGEVT------
MGLDAAAAAAAAADETSEAEVGC------
TLLDAP---PAATDEASEAEDAC------
TLLDAP—LTATDEASEAEDGG---------ADA>MKIR-EPNFGLASSRSSN
LTGGGG-S PS PSSDEASEVEVAC---------TDIWKLQDPNPN—HHPRFSIS-
LTGGGS PSSS PPSDEASEFEVAC---------TDIWKLQDPNPNPIHHSRFSNS-
LN----GVSTPECDEASEAEVTC---------T DMFKLRD PN S S-----------
MA--------PTPAS DEASEATC---------TDMWKLRETSTNLNSNCRFSNS-
LTHGGGFAGFPSPTSEEASEICTEMLNLQQND-STDRNIYHHSRFSSSRSRSTM- LNGGG-FAGFPSPTSDEASEICTEMLNLRKADDSGDRNIYHHCRFSSSRSRSRS-
LESPSLMISCDESSEIWHQDVS--------------RNQTHHCRFSTSRS-TTE-
EVLGASLMMMPESADEMSEVITTTQDPTYSRPKVMHIKKK________________
EPHDLTLCEAFEAVRHSQTIIHSPPSEIAAAPRRVRQRIEGINEVNYRDLSNSN- --------------------------------------------------------
GDRNRMSAGDQWPNETDVGNYPGDDDVCKIYELDACVDSRRVRQKIDGSNNNNN- GDRNGMSDGDQWPNEMDG-NFPGDDDVCKIYELGACDDSRRVRQKIDGNNNNIN-- ΓΙΙΖΙΓ ILTGVLAPNCDESSDSFSAAAYAVH—
ILTGVLAPNCDES S DRFSAAAYAVH- -
FIGURA 2 CONT. 0s-0s01g03890
St-TC162239
Ta-TC235711
Hv-TC147808
0s-0s01g32770
At-LBD42-Q9CA30
Pt-123.86
At-LBD40-Q9ZW96
Bn-AAP37970
At-LBD41-Q9M886
Mt-TC107091
St-TC133081
Gm-TC220806
Mt-ABE78739
Vv-TC55931
Aq-TCl8329
Pt-X180
Pt-XII.481
Pta-TC67269
Pta-TC69225
0s-0s03g33090
Sb-TC104758
Os-OsO7g4OOOO
Hv-TC147776
0s-0s03g41330
Ta-TC270332
St-TC137193
St-TC133385
Le-TC178827
Nb-TC94 04
Gm-TC216138
Lj-TC15459
Gm-TC227562
Ck-LOB-DQ787782
Mt-ABE82505
Pt-IIX.589
Pt-V.543
Vv-TC60668
Gh-TC30552
At-LBD37-Q9FN11
At-LBD38-Q9SN23
At-LBD39-Q9SZE8
Aq-TC18561
Pta-TC59178
St-TC140088
Pa-TC14 656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
f elvfskpaaamavdvirqaqplnwapgalshesashdaappeseghsn asaeaeaaeeyllknqpplkfsiagwdqfeeiddelikraashds pssdsnnkpkpkpqpqtraptaeeerdrqhrkemeegafqra pSS dsnnkp kpqprp----ptaeeeldrqhrkemeegafqra
---------aaaakRaaspsssspthetepeavvwgdhdddhhhpalshevheesa
vnqlgecshdmwqlpsssathgygh —asiavdtlsardeltrctshessvshqselavldgdskesdesmvsvetaeasllfp
slshesslshespvsseettteepk----------------
--------------ggg-eashhsslshqsewvaphegeskes---------------
--------------egksdeashdsslshqseivaahe-geskes---------------
sgs teptgsvepveevmnrsvshessishqseavawdgeskdses-------etsmilf
-------sgdefahekvngstshesslshqseeeaaaaaavalnvece------------
---------------------vepemanpdces---------------------------
akevdrsksqesslsqpgkdsesgvsvetsilfhdesef pgwnqfspvdynrapshdssliqqetdsmfsvetveaslatpp
------------vhtyldrapshessvshqtelnngegcsretesmfsvetveaslvnra
qgelgfepvreswlghlgngdsrikdedsilaaenve
efmigfdglrsvsp-------dsvlswrpslgsdnee
lrwrrcy pgesqtpalegipnhlvss dssceslehfddlrnhkeadm lrwrrcypkefqlinaqpvnnflsidsssdsddlirlktgfesvks
aevpeap---------------scdlglclspgs------ppav
aaatgappp-----ppaaepeascdlrlcllspgsp---pppag
----------------ttttknpgtphdaaaaapqpepscdlglwlspgs-----ppapg
rktwapeaas-------hhqepscdlglfltpgs------aaaa
nngagagvgqqqlphavaavlqsceldlcltpvs------ppav
knncgaavgqqvklpgpgpvlqsceldlcltpls------spla
mrpkmqkrrrfpeets---mladldlsltpgfnqkv----ynsh
rkmqkrrrfpeets---mladldlsltpgfnqkv----ynsh
mrpkmqkrrrspeet------smldlsltpgfnqkv----ynsh
iqptmqkrrrfpeeasnvlqladldlsltpgfqsqk----vfnh
gssggkrkrfeelaklq-tattdlnlrltpsflqna-----anf
sagkrqrpeelaklq-ttt-dlnlrltpgflqnv-----ssy
gggggkrkrseelaklq-eqqpnldlrltpvflq----------
kvstggkrkrseelvki-paatnldlrltpiflqk---------
kvcsgskrrrseefvkv-paainldlrltpifqqk---------
rsrls pkrkrtee pvavkvqhndldlglt p-------s fs lkg f
rsrvs skrkgtee pmwnmrh ddldlllt p-------stsqk__
srskvpkrkrleeaskvqctdldlrltpgltgkissrglgam
----------------rsrvs pkrkr-veee fkklqpsdldlgltpsftg----------
----------------dsssptkrkrlssedqpsseldlslipnfpikqatp-----sst
-----------------tasppkrkrlsseqqpsseldlslipiypiktlp---------
----------------mkdslvnrkrlksdsdldlqvnhgltltapa vpvpf-----lpp
eiihenvnkimihdldlsltsgssspr--------
----------------s ddvkclgvfdihpnntmemkanldltlnfeas sss--------
snfqskrkiidevsedldlgltsglstmvtg---gkl
----------------eiastdadklgqrgsgidgqkndikldlslncssks-------k
----------------elmstdgeklgqrgsgidgqkndlkldlslncpsks-------k
---------------smtwnqskpfdkennnqwsdhhvnlclargrggrd--------
---------------nmarnqsrsfakennkewsdhrinlclargkggrd--------
FIGURA 2 CONT. Os-OsOlg038 90
St-TCl62239
Ta-TC235711
Hv-TC147808
0s-0s01g3277 0
At-LBD42-Q9CA30
Pt-123.86
At-LBD40-Q9ZW96
Bn-AAP37970
At-LBD41-Q9M886
Mt-TC107091
St-TC133081
Gm-TC220806
Mt-ABE78739
Vv-TC55931
Aq-TC18329
Pt-X180
Pt-XII.481
Pta-TC67269
Pta-TC69225
0s-0s03g33090
Sb-TC104758
0s-0s07g40000
Hv-TC147776
0s-0s03g41330
Ta-TC270332
St-TC137193
St-TC133385
Le-TC178827
Nb-TC94 04
Gm-TC216138
Lj-TC15459
Gm-TC227562
Ck-LOB-DQ787782
Mt-ABE82505
Pt-III.589
Pt-V.543
Vv-TC60668
Gh-TC30552
At-LBD37-Q9FN11
At-LBD38-Q9SN23
At-LBD39-Q9SZE8
Aq-TC18561
Pta-TC59178
St-TC140088
Pa-TCl4656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
DTADTVDGSHVSQSEPEPRATSAATEVHDAGLDLTLGLPPPPPPVQKTEPADSDGGSQQQ
FSVETVELTLLGEPG---------------------------------------------
PSHESSDSRHEDPVEPHCQQEASADTEAEAGSHVSQAEQEQ--STEPAAEHAEEVEKEDE PSHESSDSRHEDPVEPHSQQEASADTEAEAGSHVSQAEQEQEQSTEPAADHAEEVEKDDE GSHDHDDDDHVDDGDNNDMAIADVTPPRAGSEDTEVETGSHVSQAEQSPVPVEHEEGEEE
FTLENVESRREAPFN------------------------------QSSPNLGFDDQVDIN
PNPESKNDCKAHDVASNGISGLELGLDLTLGLEPVSR-AHHWPVKKRRVEAYGSG-DVD
TWIGLELTLGLEPLARGNHVWPMKKRKLERCGTSEDED —ESNNSEVMTFSPPAVQGSGEIKLDLTLGLEPVSR-ADHWPVKKRKMGVFSTWQEES
---ESNVSEVLAFSPPAVKGSGEIKLDLTLRLEPVSR-AYHWPVKKRRIGVFGTCQKES
RDEPELDRKMKPADRTGENGEEKVGLELTLGLEPVSR-VYHWPVKKRRWLKDCGVGSW -------S PEMAE VEDSAKA DGEVE LELTLGFSSLGT--VEGK PKETKRNKGVQLVDGAG
EPESQAKVKGRAEGRAEEGLSDGVGLELRLGIEPVSREEFMVPIKKRKIVLKDCSASSKV
KPNQLLKSD-------GQTDKTEAGLELTLGFYPISR-----------------PHACKL
DPEPVPKFDNFNGSDADDNNNDDVELELTLGFEPSRREKSMSPKKWRDEINNSYTDTCKI
DSLWSRVEPDQVFKFNGQSDDSDLSLELTLALVSE-------------------------
TDSIGSVETVEASKLDEPAEGSDLDLDLTLGHY---------------------------
EGHMS KAM DMGPVNIKCCS DQNDHKA TMESVPEVSYTQAPDLEDMQAIKHE YESISSDVT DCNPIENRETRALSEGISEGPALSEGIENQNECPLQNLFQQNDNNWVENNIMRTELTDER
GERKP ALRPGTPSMS S DE S GTTT---------GGERDPV--------LLNLFV_______
DRRAPFMRPGTPSITSDDDSVTTTTTTTTTGGGGDREPV--------LLNLFA_______
DRRS GGRRADTPSMNSEGS VTTCG-----WGDGEREPE--------LLNLFV_______
EGERRARRAGTPSMSSDGSVTTTAG----AGADGDKEPE--------LLNLFV_______
QLVGGGGGASDEHSTTTCEEASDGD--------GAGAPT--------LLNLFS_______
GGRRGGASDEYSTTTCCEEASGDAA--------EAGAPP--------LLNLFN_______
PLAENHRRPGTPSMNSEESGTTTCFESTAVIGEE-----------PKLLSLFN_______
PLPENHRRPGTPSMNSEESGTTTCFESTAVIGEE-----------PKLLSLFN_______
PLPENHRRPGTPSMNSEESGTTTCFESSAVIGDHQGKE-------PKLLSLFN-------
ALPE-NRRPATPSMNSEESGTTTCFESGTVIGNHQGNE-------PKLLSLFN-------
GCRQEIRWPGSPSMNSEESGTTTACLESGIGDH YAPDGD------RKVLNLFI-------
GCKREARRPGSPSMNSEESVTTTACLGSGIGDHCSRDED------RKVLKLFV-------
—KEESRRPESPSMTSEESGTTTENRFG------DQWSH------WKVLNLFI_______
--ESESRRPGSPSMNTEESVTTTATGLG---DSWGHGGE------RKVLNLFI_______
—AVEERRHGSPSMTSEESVTTTACLETGIGDRWSHGGD------RKVLNLFI-------
PYKQQIRRPGTPSMNSAESVTTNTACFDSAGLGDEGG-------ETKLLNLFL_______
-GFAEICRPGTPSMNSEESVTTNATCFDSAGFGDQYGNGG---GETKLLNLFL-------
SYLPETRRPGTPSMNSEESVTTTCFETPHSPEG-----------ERKLLNLFL_______
KRVTDNRRPGTPSMNSEESVTTTCFESVFADQQGQGSRG----TDKKLLKLFV_______
R-----RRSVTPSMNSEDSGTTTTTTAFCD---KGDVY GNGGGETTKLLNLFV-------
------FKEDTPSMYSEESVTTVSFQNNNAGDRYVRCGGGGGGATTKLLNLFA-------
S S FCKWKGDRPGS PSEE S VTTSC WENGMR----G DNKQKRNKG EKKLLNL FV-------
KTTKRSTTPSTEESVTTSLDSGAGVWRDDHYLRRGSGEDNNNNGDQKLLNLFV_______
HIKRRVSSP----SIVSVNSEGSVTSLESGSLRVPNQKDSSAAKEHKVLDLFP-------
NRRTEKRRAATPSLNSDESDTTTLESGWYHQNPQQGNE------TKLLRLFF_______
SSNLKQQRVSSPSTNSVHSEGSVNRLKISNPLPSSTMASQ-----QKFLDLL________
SSNLKQQRVSSPSTNSVHSEGSVNRLKSSSPPPSSTMAAE-----QKLLDLL________
----KRGRDA VS FYTGGESETTSFESSGADK--------------NKLLNL FV_______
----KRGRDAVSFYTGGESETISFESSGGDK--------------KRLLNLFV_______
FIGURA 2 CONT. St-TC162239
Ta-TC235711
Hv-TC147808
Os-OsOlg32770
At-LBD42-Q9CA30
Pt-123.86
At-LBD40-Q9ZW96
Bn-AAP37970
At-LBD41-Q9M886
Mt-TC107091
St-TC133081
Gm-TC220806
Mt-ABE78739
Vv-TC55931
Aq-TC18329
Pt-X180
Pt-XII.481
Pta-TC67269
Pta-TC69225
0s-0s03g33090
Sb-TC104758
0s-0s07g40000
Hv-TC14 7776
0s-0s03g41330
Ta-TC270332
St-TC137193
St-TC133385
Le-TC178827
Nb-TC9404
Gm-TC216138
Lj-TC15459
Gm-TC227562
Ck-L0B-DQ787782
Mt-ABE82505
Pt-III.589
Pt-V.543
Vv-TC60668
Gh-TC30552
At-LBD37-Q9FN11
At-LBD38-Q9SN23
At-LBD39-Q9SZE8
Aq-TC18561
Pta-TC59178
St-TC140088
Pa-TC14656
Pta-TC67974
Pt-XIV.94
Pt-II105
E LGLE LTLGFAPVAARPAE FT----------------------------
ELGLELTLGFAPVAARPAGCHLSVRTAAEPAFVGLRFL-----------
EVGLELTLGFQPLWRASRRPSSAEARCDLSGLSAESSRIGLRLELPA-
EVGLELRLG----------------------------------------
TCKME LRLE----------------------------------------
TCKIELGLVCSE-------------------------------------
SCKTDPVL-----------------------------------------
TCKTELML-----------------------------------------
NVELGLQYPA---------------------------------------
ECKIELGLH----------------------------------------
ELGLELSA
ELGP-----
EVGIDYAV-
DVKLELTLSSQGSATHAAEKHHTNLHWNSCMEHSDEPTITYLGLGLTQA NLGLELTLGSSMGETTQSHRKQLGSNCMDRPPLYRSLDLSLSQ------
FIGURA 2 CONT. -AT-LBD12-Q8LBW3 -AT-LBD4-Q9SHE9 -AT-LBD25-Q8L8Q3 —AT-LOB-Q9FML4 —AT-LBD6-004479 —AT-LBD13-Q9AT61 —AT-LBD20-Q9S RV3 — AT-LBD16-Q9SLB7
-AT-LBD7-Q9SSM9
-AT-LBD2-Q9LNB9
—AT-LBD35-Q9FFL3 —AT-LBD26-Q9LIJO
Λ
V LBD classe I
—AT-LBD5-Q9C8V8
1
classe I
- OS-OS07G40000 Λ
- OS-OS03G33090 ,ST-TC133385 1-ST-TC137193 -GM-TC216138
- GM-TC227562 —AT-LBD39-Q9SZE8 —AT-LBD37-Q9FN11 —AT-LBD38-Q9SN23 -ST-TC140088 —OSOS03G41330 -TA-TC270332
J
classe Il
—OS-OSOl G03890 -ST-TC162239
LBD classe Il
- GM-TC220806
-AT-LBD42-Q9CA30
- OS-OSO1G32770 —TA-TC235711
- BN-AAP37970
- AT-LBD41-Q9 M886
- AT-LB D40-Q9ZW96 -ST-TC133081
J
FIGURA 3 Terminador
FIGURA 4 SEQ ID NO: 1, Seqüência codificadora de proteína LBD de Arabidopçis thaliana
ATGAGCTGCAATGGTTGCCGTGTTCTCCGGAAAGGTTGCAGCGAGAATTGTATCCTCCGGCCATGT ATTCAATGGATTGAAACCGCCGATGCTCAAGGCCACGCCACCGTCTTCGTCGCTAAATTCTTCGGC CGTGCTGGTCTCATGTCCTTTATCTCCGCTGTTCCGGATTCTCAACGTCCTGCTTTGTTTCAGTCG TTGCTCTACGAAGCTTGTGGAAGAACTGTCAATCCAGTTAACGGAGCAATCGGAATGTTATGGACT GGAAACTGGAATATCTGTCAAGCGGCTGTTGAAACAGTGCTTCGCGGCGGTTCTTTAAGACCGATC CCGGAGCTTCTCACTCACGGCGGCGGTTTCGCTGGCTTTCCTTCGCCTACATCTGAAGAAGCATCT GAGATCTGCACCGAAATGTTGAATCTCCAGCAAAATGATTCCACCGATCGTAACATCTATCATCAT TCACGATTCTCAAGCTCTAGATCTAGATCTACTATGGATTCTTCTTCTCCGACGAAACGTAAGAGA TTATCATCGGAAGACCAACCATCTTCGGAGCTTGATCTATCTCTCATCCCTAATTTTCCCATTAAG CAAGCAACACCTTCTTCTACACGGCGGCGATCAGTAACACCGTCGATGAACTCAGAGGACTCCGGG ACGACGACGACTACGACGGCGTTTTGTGACAAGGGTGATGTGTACGGTAACGGAGGAGGAGAAACG ACCAAGTTGCTTAACCTTTTTGTTTAA
SEQ ID NO: 2, seqüência de proteína LBD de Arabidopsis thaliana , Q9FN11
MSCNGCRVLRKGCSENCILRPCIQWIETADAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPDSQRPALFQS LLYEACGRTVNPVNGAIGMLWTGNWNICQAAVETVLRGGSLRPIPELLTHGGGFAGFPSPTSEEAS EICTEMLNLQQNDSTDRNIYHHSRFSSSRSRSTMDSSSPTKRKRLSSEDQPSSELDLSLIPNFPIK QATPSSTRRRSVTPSMNSEDSGTTTTTTAFCDKGDVYGNGGGETTKLLNLFV
SEQ ID NO: 3, prm009067 (iniciadoravançado)
GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAAACAATGAGCTGCAATGGTTGC
SEQ ID NO: 4, prm009068 (Iniciadorreverso)
GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTACTAACTCTGAGAAAACCGCC
SEQ ID NO: 5, motivo conservado 1
MSCNGCRXLRKGCX
SEQ ID NO: 6, motivo conservado 2
QXXATXFXAKFXGR
SEQ ID NO: 7, motivo conservado 3
FXSLLXEAXG
SEQ ID NO: 8, DP(V/I)YG assinatura
DP(V/I)YG
SEQ ID NO: 9, motivo Cys conservado
cxxcxxxxxxcxxxc
SEQ ID NO: 10, seqüência de promotor GOS2
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA
FIGURA 5 CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA
CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG
ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT
ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC
TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAATAATTTT
ACAGAATAGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT
TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA
GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG
GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAAGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA
ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG
GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT
CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT
ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC
TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT
ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT
TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC
GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC
CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT
AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGCTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA
AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT
TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG
CTTTTATAGCGTTATCCTAGCTGTAGTTCAGTTAATAGGTAATACCCCTATAGTTTAGTCAGGAGA
AGAACTTATCCGATTTCTGATCTCCATTTTTAATTATATGAAATGAACTGTAGCATAAGCAGTATT
CATTTGGATTATTTTTTTTATTAGCTCTCACCCCTTCATTATTCTGAGCTGAAAGTCTGGCATGAA
CTGTCCTCAATTTTGTTTTCAAATTCACATCGATTATCTATGCATTATCCTCTTGTATCTACCTGT
AGAAGTTTCTTTTTGGTTATTCCTTGACTGCTTGATTACAGAAAGAAATTTATGAAGCTGTAATCG
GGATAGTTATACTGCTTGTTCTTATGATTCATTTCCTTTGTGCAGTTCTTGGTGTAGCTTGCCACT
TTCACCAGCAAAGTTC
SEQ ID NO: 11: 0s-0s01g03890, Oryza sativa
MRMSCNGCRVLRKGCSDNCAIRPCLQWIRSPDAQANATVFLAKFYGRAGLINLITAGPEHVRPAIF RSLLYEACGRMLNPVYGSVGLLWSGNWQLCQSAVESVLRGMPIAQPPPSATAVPPLPTCDIRHVGA RRGDVHGAAAGPVADLHRLDISSRAKFKRPGGGAAAAHRSDHAAFELVFSKPAAAMAVDVIRQAQP LNWAPGALSHESASHDAAPPESEGHSNDTADTVDGSHVSQSEPEPRATSAATEVHDAGLDLTLGLP PPPPPVQKTEPADSDGGSQQQHDHRKEKPVELGLAISTKVAAQ
SEQ ID NO: 12, 0s-0s01g32770, Oryza sativa
MRMSCNGCRVLRKGCSEGCTIRPCLQWIKTPEAQANATVFLAKFYGRAGLLNLLAAGPDHLRPAVF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGQWQACQAAVEAVLKGDPWQVSSEAAAAAQATPPLRAYDIR HVSKDAEADAAANLLRVARGGRTRFKRASSSSNSKHGAKLAGAAAAKRAASPSSSSPTHETEPEAV WVGDHDDDHHHPALSHEVHEESAGSHDHDDDDHVDDGDNNDMAIADVTPPRAGSEDTEVETGSHV SQAEQS PVPVEHEEGEEEEVGLELTLG FQPLWRASRRPSS AE ARCDLSGLSAESSRIGLRLELPA
SEQ ID NO: 13, 0s-0s03g33090, Oryza sativa
MSCNGCRVLRKGCSDGCVLRPCLQWIDAADAQGHATVFVAKFFGRAGLLSFISAVPEAQRPALFQS LLYEAAGRTINPVHGAVGLLWTGNWPLCQAAVETVLRGGAIGPLPELGGACGGAGGDLYGAAKRNG GWSTFSTAKRVRKAEVPEAPSCDLGLCLSPGSPPAVGERKPALRPGTPSMSSDESGTTTGGERDPV
LLNLFV
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 14, 0s-0s03g41330, Oryza sativa
MSCNGCRVLRKGCSDACVLRPSIEWIDGAQPQANATVFVAKFFGRAGLVASLAAVPLHHRPALFRS LLYEACGRTINPVSGAIGLMWTGNWDLCQAAADAVLRGDSLRALSAVPAAFTDRDMAGLYGNVGAA AGTSSSSPDNDNSSASAAPRRKRPRNNGAGAGVGQQQLPHAVAAVLQSCELDLCLTPVSPPAVQLV GGGGGASDEHSTTTCEEASDGDGAGAPTLLNLFS
SEQ ID NO: 15, 0s-0s07g40000, Oryza sativa
MSCNGCRVLRKGCSEGCVLRPCLQWIDGAEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFLTAVPEPQRAAVFQS LLYEAAGRTINPVGGAVGLLSGGSWHLCQAAVDTVLRGGGIQPLPDQVDAAAAGGRDVFASTARRA MGGCSTFSTAKRSTTTTTTKNPGTPHDAAAAAPQPEPSCDLGLWLSPGSPPAPGDRRSGGRRADTP SMNSEGS VTTCG WGDGEREPELLNLFV
SEQ ID NO: 16, Nb-TC9404, Nicotiana benthamiana
MSCNGCRVLRKGCSENCILRPCLQWIETAESQGHATVFVAKFFGRAGLTSFISAVPENQRPSLFQS LLYEAAGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGALRPIPDFLGASLDIDESSECTDIFKL QHPSQNNIQPTMQKRRRFPEEASNVLQLADLDLSLTPGFQSQKVFNHALPENRRPATPSMNSEESG TTTCFESGTVIGNHQGNEPKLLSLFN
SEQ ID NO: 17, Gm-TC227562, Glycine max
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWIETAEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISNVPENQRPALFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLRPMPELMGLDAAAAAAAAADETSEA EVGCTDTWRIRNPNTNCRFTSSRSSSGGGGGKRKRSEELAKLQEQQPNLDLRLTPVFLQKEESRRP ESPSMTSEESGTTTENRFGDQWSHWKVLNLFI
SEQ ID NO: 18, Gm-TC216138, Glycine max
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWIDTPEAQGHATVFVAKFFGRADLMSFISNVPEPQRPALFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTVRPMPELFGLDAPTPTTDDASEGEVT CTDKWRVRDPNPNFRFPGSRSDKGSSGGKRKRFEELAKLQTATTDLNLRLTPSFLQNAANFGCRQE IRWPGSPSMNSEESGTTTACLESGIGDHYAPDGDRKVLNLFI
SEQ ID NO: 19, Hv-TC147776, Hordetun vulgare
MSCNGCRVLRKGCNDACMLRPCLLWIEGADAQGHATIFAAKFFGRAGLMSFLTAVPESQRPAVFQS LLYEAAGRTINPVGGAVGLLWAGSWHLCEAAVQTVLRGGAIRPLPELAGGVPEGGVGGSDLFASSS RRAWGCSTYSMAKRVTPRKTWAPEAASHHQEPSCDLGLFLTPGSAAAAEGERRARRAGTPSMSSD GSVTTTAGAGADGDKEPELLNLFV
SEQ ID NO: 20, Sb-TC104758, Sorghxom bicolor
MSCNGCRVLRKGCSEACVLRPCLQWIDAADAQGHATVFVAKFFGRAGLLSFISAVPDAQRPALFQS LLYEAAGRTINPVHGAVGLLGTGNWHLCQAAVDTVLRGGAIGPLPELGITGSAGDLYGPPGAGTGH GGGGGKRAGGWSTFSTAKRVRKAAATGAPPPPPAAEPEASCDLRLCLLSPGSPPPPAGDRRAPFMR PGTPSITSDDDSVTTTTTTTTTGGGGDREPVLLNLFA
SEQ ID NO: 21, Aq-TC18561, Aquilegia sp.
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWIESPEAQGHATVFIAKFFGRAGLMSFISSVPESQRPALFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHICQAAVETVLRGGTLRPINEVLGASLMMMPESADEMSEVI TTTQDPTYSRPKVMHIKKKEIIHENVNKIMIHDLDLSLTSGSSSPRKTTKRSTTPSTEES VTTSLD SGAGVWRDDHYLRRGSGEDNNNNGDQKLLNLFV
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 22, Vv-TC60668, Vitis vinifera
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWIESAESQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPENQRPALFRS LLYEACGRTVNPVNGAVGLLGTGNWHVCQAAMETVLRGGTLRAMPELLNGVSTPECDEASEAEVTC TDMFKLRDPNSSSRSKVPKRKRLEEASKVQCTDLDLRLTPGLTGKISSRGLGAMSYLPETRRPGTP SMNSEESVTTTCFETPHSPEGERKLLNLFL
SEQ ID NO: 23, Lj-TC15459, Lotus japonicus
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWIDTAEAQGHATVFVAKFFGRADLMSFISNVPQPQRPSLFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLKPLPELLGLDAPSHVPTAADDASEG EVTYDTWRIRDPNPNARLTNSRSSAGKRQRPEELAKLQTTTDLNLRLTPGFLQNVSSYGCKREARR PGSPSMNSEESVTTTACLGSGIGDHCSRDEDRKVLKLFV
SEQ ID NO: 24, Gh-TC30552, Gossypium hirsutum
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWIESPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPESQRPALFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWNGNWHVCQAAVETVLRGGSLRSMPELMAPTPASDEASEATCTDMW KLRETSTNLNSNCRFSNSRSRVSPKRKRVEEEFKKLQPSDLDLGLTPSFTGKRVTDNRRPGTPSMN SEESVTTTCFESVFADQQGQGSRGTDKKLLKLFV
SEQ ID NO: 25, Ta-TC235711, Triticum aestivum
MRLSCNGCRVLRKGCSEDCSIRPCLQWIKSPEAQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGTDDSLRPGI FRSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSNNWQMCQAAVEAVLSGKPIVQVSSEDAAADRTPPLKAYDIR HVSTSPAADGRLHKVAKPGRTRFKRASSASSHHNPSSDSNNKPKPKPQPQTRAPTAEEERDRQHRK EMEEGAFQRAPSHESSDSRHEDPVEPHCQQEASADTEAEAGSHVSQAEQEQSTEPAAEHAEEVEKE DEELGLELTLGFAPVAARPAEFT
SEQ ID NO: 26, St-TC133081, Solanum tuberosum
MRMSCNGCRVLRKGCSKSCSIRPCLQWIKTPDSQSNATVFLAKFYGRAGLMNLINAGPDHLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGNWQLCQNAVEAVLKGTPITPIASEIAVNNNGPPLKLPYDIR HINKDENSTKSSELHRVRTRCRFKRSGANTKATKSNPACSGSGDEFAHEKVNGSTSHESSLSHQSE EEAAAAAA VALNVECESPEMAEVEDSAKADGEVELELTLGFSSLGTVEGKPKETKRNKGVQLVDGA GECKIELGLH
SEQ ID NO: 27, Mt-TC107091, Medicago truncatula
MRMSCNGCRVLRKGCSENCSIRPCLQWIKSPESQANATVFLAKFYGRAGLMNLVNAGPEHLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGSWQLCQAAVEAVLKGAPITPITSEAAANGRGPPLKAYDIRH VSKEENSAASTELTQQRVKPRSRKRSSLAKLKIQEEEKSSNDNKGVESGSTEPTGSVEPVEEVMNR SVSHESSISHQSEAVAWDGESKDSESETSMILFRDEPELDRKMKPADRTGENGEEKVGLELTLGL EPVSRVYHWPVKKRRWLKDCGVGSWNVELGLQYPA
SEQ ID NO: 28, Hv-TC147808, Hordeum vulgare
MRLSCNGCRVLRKGCSEDCSIRPCLQWIKSPEAQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGTDDSLRPGI FRSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSNNWQMCQAAVEAVLSGKPIVQVSSEDAAADRTPPLKAYDIR HVSTSPAADGRLHKVAKPGRTRFKRASSASSHHNPSSDSNNKPKPQPRPPTAEEELDRQHRKEMEE GAFQRAPSHESSDSRHEDPVEPHSQQEASADTEAEAGSHVSQAEQEQEQSTEPAADHAEEVEKDDE ELGLELTLGFAPVAARPAGCHLSVRTAAEPAFVGLRFL
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 29, Vv-TC55931, Vitis vinifera
MRMSCNGCRVLRKGCSDDCSLRPCLEWIKTPESQANATVFLAKFYGRAGLMNLLNAGPEHLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGNWNHCQNAVDAVLGGSQIMEVPCDTAAIRPILPLKAYDIRH LSKDANSPHDLHKAKTRSRFKRCGARSKPHLDSAEFCNPGWNQFSPVDYNRAPSHDSSLIQQETDS MFSVETVEASLATPPKPNQLLKSDGQTDKTEAGLELTLGFYPISRPHACKLELGP
SEQ ID NO: 30, St-TC162239, Solanum tuberosum
MRMSCNGCRVLRKGCSENCSLRPSLQWIKSPDSQANATVFLAKFYGRAGLINLINAGPDHLRPAIF RSLLYEACGRIINPVNGSVGLMCSGNWQRCQEAVESVLKGSTIMQVPINNDDDNNNNNNNNTDQIV PLKGCDIRHVSKNNSTNSDNQQVIKTRKGRLKRKGTFDSVASASAEAEAAEEYLLKNQPPLKFSIA GWDQFEEIDDELIKRAASHDSFSVETVELTLLGEPG
SEQ ID NO: 31, Pta-TC69225, Pinus taeda
MRVSCNGCRVLRKGCSDSCELRPCLQWIKTSESQAQATVFLAKFYGRSGLMNLIKSGPEFLRPTLF RSLLYEACGRIVNPIFGSVGLIWSGNWHICQAAVESVLKGYPLQPLHPLNSLEIASPPPAAAAPQS MKAVADKLRNVRSQGRFKRPLYRKPSRDVKNLNLHALKDEEAAGILTGSQAYNLRWRRCYPKEFQL INAQPVNNFLSIDSSSDSDDLIRLKTGFESVKSDCNPIENRETRALSEGISEGPALSEGIENQNEC PLQNLFQQNDNNWVENNIMRTELTDERNLGLELTLGSSMGETTQSHRKQLGSNCMDRPPLYRSLDL
SLSQ
SEQ ID NO: 32, Pta-TC67269, Pinus taeda
MRMSCNGCRVLRKGCSETCIIRPCLQWIKNEESQANATVFLAKFYGRAGLMNLISAGPEHLRPAIF KSLLYEACGRMVNPIFGSVGLLCSGNWQLCQAAVESILKGCPIHPILVDSSGTQMPTERSNTNPSV RSTLMETITNELHKVKTKGRFKRRKSTVKDVSLNNSDAEDLGASQVFNLRWRRCYPGESQTPALEG IPNHLVSSDSSCESLEHFDDLRNHKEADMEGHMSKAMDMGPVNIKCCSDQNDHKATMESVPEVSYT QAPDLEDMQAIKHEYESISSDVTDVKLELTLSSQGSATHAAEKHHTNLHWNSCMEHSDEPTITYLG
LGLTQA
SEQ ID NO: 33, Gta-TC220806, máxima glicina
MRMSCNGCRVLRKGCSEDCSIRPCLQWIKNPESQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGPENLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGSWQLCQAAVEAVLKGEPITPITSEAAANGRAPPLKAYDIRH VSKDQNSANETPKTKTRSRFKRTSGTLIKPKASKGTGFVPVEPEMANPDCES
SEQ ID NO: 34, Ta-TC270332, Triticum aestivum
MSCNGCRVLRKGCSDACVLRPSIEWIDGAQPQANATVFVAKFFGRAGLVASLAAVPLHHRPALFRS LLYEACGLTINPVSGAIGLMWTSNWDLCQAAAEAVLRGDSLRSLSAVPAAFTERDMAGL YGNVGTN TGSSSSLHSSPENSTSAPARKRSKNNCGAAVGQQVKLPGPGPVLQSCELDLCLTPLSSPLAGGRRG
GASDEYSTTTCCEEASGDAAEAGAPPLLNLFN
SEQ ID NO: 35, Aq-TC18329, Aquilegia sp.
MRMSCNGCRVLRKGCSENCSIRPCLQWIKTPESQANATVFLAKFYGRAGLMNLINSGPEHLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGSWQLCQAAVEAVLKGTPIMQISSEVAAISPSPPLKAYDIRH VSKDENSSAASQELHKVKTRSRFKRSGAGKAANNKQVNESNKVHTYLDRAPSHESSVSHQTELNNG EGCSRETESMFSVETVEASLVNRADPEPVPKFDNFNGSDADDNNNDDVELELTLGFEPSRREKSMS PKKWRDEINNSYTDTCKIEVGIDYAV
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 36, St-TC137193, Solanum tuberosum
MSCNGCRVLRKGCSDNCILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPENQRPALFQS LLYEAAGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGALRPISEFLGASVEIDEVSDCTDVFKL QDPSLNMRPKMQKRRRFPEETSMLADLDLSLTPGFNQKVYNSHPLAENHRRPGTPSMNSEESGTTT
CFESTAVIGEEPKLLSLFN
SEQ ID NO: 37, St-TC133385, Solanum tuberosum
MSCNGCRVLRKGCSDNCILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPENQRPALFQS LLYEAAGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGALRPISEFLGASVEIDEVSDCTDVFKL QDPRKMQKRRRFPEETSMLADLDLSLTPGFNQKVYNSHPLPENHRRPGTPSMNSEESGTTTCFEST
AVIGEEPKLLSLFN
SEQ ID NO: 38, St-TC140088, Solanum tuberosum
MSCNGCRILRKGCNENCILRQSLQGIESPHAQANATVFVAKFFGRAGLMSFLTSVSESQRPALFQS LLFEACGRTVNPVHGAVGLLWTGNWHVCQSAVETVLKGGVLRPLPEFSGVTASPEFDSEANDVDLF RSQSSNFQSKRKIIDEVSEDLDLGLTSGLSTMVTGGKLNRRTEKRRAATPSLNSDESDTTTLESGV
VYHQNPQQGNETKLLRLFF
SEQ ID NO: 39, Pa-TCl4656, Picea alba
MSATDKNITERKEQQRKMSCNGCRVLRKGCSDNCILRQSLQWIESPQSQAHATVFVAKFFGRAGLM TFIATVSEPERPDLFKSLLYEACGRTVNPVHGAVGLMWTGKWQICQAAVQTVLSGGSLDRTPASPW FPLTDANGDRNRMSAGDQWPNETDVGNYPGDDDVCKIYELDACVDSRRVRQKIDGSNNNNNEIAST DADKLGQRGSGIDGQKNDIKLDLSLNCSSKSKSSNLKQQRVSSPSTNSVHSEGSVNRLKISNPLPS
STMASQQKFLDLL
SEQ ID NO: 40, Pta-TC59178, Pinus taeda
MTATTGAGNSGRDLSVFIQRKQEADGRKRMSCNGCRVLRKGCSDTCILRPCLQWIESPEAQGHATV FVAKFFGRAGLMSFISAVPDHQRPALFQSLLYEACGRTVNPVNGAVGLLWNGNWQLCQAAVETVLK GGTLRPPQSSSVIPTCSTRPSLMNSFSANFRVNSNVNNINSSGSRLSLEVGKARPVNEMREMYTVK PEVDFPLNRPQESCNPHQPWAAKVKSEPHDLTLCEAFEAVRHSQTIIHSPPSEIAAAPRRVRQRIE GINEVNYRDLSNSNSDDVKCLGVFDIHPNNTMEMKANLDLTLNFEASSSSHIKRRVSSPSIVSVNS EGSVTSLESGSLRVPNQKDSSAAKEHKVLDLFP
SEQ ID NO: 41, Pta-TC67974, Pinus taeda
MSATENHITERKEQERKMSCNGCRVLRKGCSENCILRQSLQWIESPQSQAHATVFVAKFFGRAGLM TFIAAVSEPERPALFKSLLYEACGRTVNPVHGAVGLLWTGKWQICQAAVQTVLSGGSLDRTPAGTC FPSTDANGDRNGMSDGDQWPNEMDGNFPGDDDVCKIYELGACDDSRRVRQKIDGNNNNINELMSTD GEKLGQRGSGIDGQKNDLKLDLSLNCPSKSKSSNLKQQRVSSPSTNSVHSEGSVNRLKSSSPPPSS
TMAAEQKLLDLL
SEQ ID NO: 42, Le-TC178827, Lycopersicon esculentum
MSCNGCRVLRKGCSDNCILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPENQRPALFQS LLYEAAGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVE TVLRGGALRPISE FLGASVEIDEVS DCTDVFKL QDPSLNMRPKMQKRRRSPEETSMLDLSLTPGFNQKVYNSHPLPENHRRPGTPSMNSEESGTTTCFE
SSAVIGDHQGKEPKLLSLFN
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 43, Pt-III.589, Populus tremuloides
MSCNGCRVLRKGCSENCILRPCLQWIESPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPENQRPSLFQS LLFEACGRTVNPVNGAAGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLQPMPELLTGGGGSPSPSSDEASEVE VACTDIWKLQDPNPNHHPRFSISRSRLSPKRKRTEEPVAVKVQHNDLDLGLTPSFSLKGFPYKQQI RRPGTPSMNSAESVTTNTACFDSAGLGDEGGETKLLNLFL
SEQ ID NO: 44, Pt-V.543, Populus tremuloides
MSCNGCRVLRKGCSENCILRPCLQWIESPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISSVPEDQRPSLFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLRPMPDLLTGGGS PS S SPPS DEASEF EVACTDIWKLQDPNPNPIHHSRFSNSRSRVSSKRKGTEEPMWNMRHDDLDLLLTPSTSQKGFAEI CRPGTPSMNSEESVTTNATCFDSAGFGDQYGNGGGETKLLNLFL
SEQ ID NO: 45, Pt-XIV.94, Populus tremuloides
MSCNGCRVLRKGCSETCVLRSCLHWIPTPEAQGNATLFLAKFFGRSDLISLISAVPESQRPVLFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWSGNWHVCQAA VES VLAGETLRPLPGILTGVLAPNCDES S DSFSAA AYAVHSMTWNQSKPFDKENNNQVVSDHHVNLCLARGRGGRDKRGRDAVSFYTGGESETTSFESSGA
DKNKLLNLFV
SEQ ID NO: 46, Pt-II105, Populus tremuloides
MSCNGCRVLRKGCSETCVLRSCLHWITNPEAQGNATLFLAKFFGRSDLMSLISAVPEAQRPALFQS LLFEACGRTVNPVNGWGLLWSGNWHMCQEAVETVLSGGALQPLPGILTGVLAPNCDESSDRFSAA AYA VHNMARNQSRSFAKENNKEWSDHRINLCLARGKGGRDKRGRDAVSFYTGGESETISFES SGG
DKKRLLNLFV
SEQ ID NO: 47, Pt-123.86, Populus tremuloides
MRMSCNGCRVLRKGCSENCSIRPCLQWIKSSESQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGPEHLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLMWSGSWQLCQAAVEAVLKGAPITPINSEAAVNGHGPPLKVYDIRH VSKEENSAASNDANRARTRCRVRRWKPKASKRACFGNGLASIAVDTLS ARDELTRCTSHES SVSH QSELA VL DGDSKES DESMVS VETAEASLLFPPNPESKNDCKAHDVASNGISGLELGLDLTLGLE PV SRAHHWPVKKRRVEAYGSGDVDTCKMELRLE
SEQ ID NO: 48, Pt-X180, Populus tremuloides
MSCNGCRVLRKGCNDNCTIRPCLQWIKSTDSQANATLFLAKFYGRAGLINLIEAAPQRLRPAIFSS LLYEACGRIVNPVYGSVGMLWSGNWAQCQAAVDAVLKGLPIISIPS SDVPTPHLISSLNT YDIRHV SRDQNS PELNKVKSRTRCKRSIGTRPS SLAE PTGRLNQGELGFE PVRESWLGHLGNGDSRIKDEDS ILAAENVEDSLWSRVEPDQVFKFNGQSDDSDLSLELTLALVSE
SEQ ID NO: 49, Pt-XII.481, Populus tremuloides
MPFSALSFSSLPHRIILLLIGFLNSSPSLSRHFSISFRTEYTMRMSCNGCRILRKGCGDNCSIKPC LQWIETPDSQANATLFLAKFYGRAGLMNLINACPQHLRPDTFKSLLYEACGRIVNPVSGS VGLLST GSWQQCQAAVEAVLKGEPITQIASTDQLTLGGSDTRHVSREEDWSASDQPRKIKSKRQFNRSTSKR KPSRTEAEHTCFEFMIGFDGLRSVSPDSVLSWRPSLGSDNEETDSIGSVETVEASKLDEPAEGSDL DLDLTLGHY
SEQ ID NO: 50, Ck-LOB-DQ787782, Caragana korshinskii
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWLENPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFLSNVPETQRPALFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNW HVCQAA VE TVLQGGTLRPLPEHTLLDAPPAATDEASEAEDA CTGIWRIRDPNPNCRPNGSRSNNKVSTGGKRKRSEELVKIPAATNLDLRLTPIFLQKESESRRPGS PSMNTEESVTTTATGLGDSWGHGGERKVLNLFI _
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 51, Bn-AAP37970, Brassica napus
MRMSCNGCRVLRKGCSDDCSIRPCLGWIKSPEAQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGPDHLRPGIF RSLLHEACGRIVNPIYGSVGLLWSGNWQLCQSAVEAVMKGEPITEMATDAATSGQGPPLKMYDIRH IAKDENSPAAAAAAGSTDRKRGKTRRAKRVAAVAKPAESGGGEASHHSSLSHQSEVWAPHEGESK ESESNNSEVMTFSPPAVQGSGEIKLDLTLGLEPVSRADHWPVKKRKMGVFSTWQEESSCKTDPVL
SEQ ID NO: 52, Mt-ABE82505, Medicago truncatula
MSCNGCRVLRKGCSESCILRPCLQWIETPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISNVPEPQRPALFQS LLFEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNWHVCQAAVETVLRGGTLRPLPELTLLDAPLTATDEASEAEDG GADAMWKIREPNFGLASSRSSNKVCSGSKRRRSEEFVKVPAAINLDLRLTPIFQQKAVEERRHGSP SMTSEESVTTTACLETGIGDRWSHGGDRKVLNLFI
SEQ ID NO: 53, Mt-ABE78739, Medicago truncatula
MRMSCNGCRVLRKGCSEDCSIRPCLEWIKCPQSQANATLFLAKFYGRAGLINLINSGSENLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGSWHLCQAAVEAVLKGEPITPIDSEADENERGPPFKAYDIRH VSKDENLEETKQVRTRSRFRRAMKPKPSKEVGSGSGSSSAKEVDRSKSQESSLSQPGKDSESGVSV ETSILFHDESEFEPESQAKVKGRAEGRAEEGLSDGVGLELRLGIEPVSREEFMVPIKKRKIVLKDC
SAS SKVELGLELSA
SEQ ID NO: 54, At-LBD38-Q9SN23, Arabidopsis thaliana
MSCNGCRVLRKGCSENCILRPCIQWIESPEAQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISAVPESQC PALFQS LLYEACGRTVNPVNGAVGLLWTGNWNVCQAAVETVLRGGSLKPIPELLNGGGFAGFPSPTSDEASE ICTEMLNLRKADDSGDRNIYHHCRFSSSRSRSRSTASPPKRKRLSSEQQPSSELDLSLIPIYPIKT LPFKEDTPSMYSEESVTTVSFQNNNAGDRYVRCGGGGGGATTKLLNLFA
SEQ ID NO: 55, At-LBD39-Q9SZE8, Arabidopsis thaliana
MSCNGCRVLRKGCSETCILRPCLQWIESAESQGHATVFVAKFFGRAGLMSFISSVPELQRP^Tiroo
LLFEACGRTVNPVNGAVGMLWTRNWHVCQAAVETVLRGGTLRPIS DLLES PSLMISCDESS DVSRNQTHHCRFSTSRSTTEMKDSLVNRKRLKSDSDLDLQVNHGLTLTAPAVPVPFLPPSS KGDRPGSPSEESVTTSCWENGMRGDNKQKRNKGEKKLLNLFV
SEQ ID NO: 56, At-LBD40-Q9ZW96, Arabidopsis thaliana
MRMSCNGCRVLRKGCSENCSIRPCLQWIKS AE SQANATVFLAKFYGRAGLMNLLNTGPDHLRPAIF RSLLYEACGRIVNPIYGSVGLLWSGNWHLCQAAVEAVMRGSPVTPIACDAAVTGQAPPFNNKLCDI
RHVSSRDENVKRRSRGACKEERNVRSLSHESSLSHESPVSSRRTTTTTTvPTf TMτr:T TTT ΦΤ ^T cot
SEQ ID NO: 57, At-LBD41-Q9M886, Arabidopsis thaliana
MRMSCNGCRVLRKGCSEDCSIRPCLAWIKSPEAQANATVFLAKFYGRAGLMNLINAGPNHLRPGIF RSLLHEACGRIVNPIYGSVGLLWSGNWQLCQDAVEAVMKGEPVKEIATDAATIGQGPPLKIYDIRH ISKDDNSAAAATGSTDLKLAKTRRAKRVSTVAIQAESEGKSDEASHDSSLSHQSEIVAAHEGESKE SESNVSEVLAFSPPAVKGSGEIKLDLTLRLEPVSRAYHWPVKKRRIGVFGTCQKESTCKTELML
SEQ ID NO: 58, At-LBD42-Q9CA30, Arabidopsis thaliana
MRISCNGCRVLRKGCNQDCTIRPCLQWIKSADSQANATLFLAKFYGRAGLLNLIESGPDHLRPAIF RSLLYEACGRIVNPVDGSVGLMWSGNWAQCQAAVDAVLNGLPITHTPLPSASASHQIIPPHRTYDI RHVAKDPTTGGDSSENLATRVNANKSKTQTGRFKRESVNQLGECSHDMWQLPSSSATHGYGHFTLE NVESRREAPFNQSSPNLGFDDQVDINEVGLELRLG
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 59, Os-OS01G03890
ATGCGGATGAGCTGCAACGGGTGCCGCGTGCTGCGCAAGGGGTGCAGCGACAACTGCGCCATCCGC CCCTGCCTGCAGTGGATTCGCAGCCCCGATGCGCAGGCCAACGCCACCGTCTTCCTCGCCAAGTTC TACGGCCGCGCCGGCCTCATCAACCTCATCACCGCCGGCCCCGAGCACGTCCGTCCTGCCATATTC CGGTCGCTGCTGTACGAGGCTTGCGGGCGGATGCTGAACCCGGTGTACGGATCCGTCGGCCTCCTC TGGTCGGGGAACTGGCAGCTTTGCCAGTCCGCCGTCGAGTCCGTCCTCCGCGGCATGCCCATCGCG CAGCCGCCGCCGTCCGCCACCGCCGTGCCCCCGCTCCCCACCTGCGACATCCGCCACGTCGGCGCC AGGAGAGGCGACGTCCATGGCGCCGCGGCCGGCCCGGTTGCCGACCTCCACCGGCTTGACATCAGC TCGCGCGCCAAGTTCAAGAGGCCCGGCGGCGGCGCCGCCGCCGCCCACAGGTCCGACCATGCCGCC TTCGAGCTCGTCTTCTCCAAGCCCGCCGCCGCCATGGCCGTCGATGTGATAAGGCAGGCGCAGCCG CTCAACTGGGCGCCCGGGGCGCTCAGCCACGAGTCGGCGAGCCACGACGCCGCGCCGCCGGAGAGC GAGGGCCACAGCAACGACACGGCCGACACCGTGGACGGCTCCCACGTCAGCCAGTCGGAGCCGGAG CCGAGAGCGACGTCGGCGGCGACCGAGGTGCACGACGCCGGCCTAGACCTCACATTAGGTCTACCG CCGCCGCCGCCGCCGGTGCAAAAGACCGAGCCGGCGGACAGCGACGGCGGCAGCCAGCAGCAACAC GATCATCGGAAGGAGAAGCCGGTGGAGCTCGGCTTGGCGATCTCAACTAAAGTAGCAGCTCAATGA
SEQ ID NO: 60, Os-OS01G32770
ATGCGGATGAGTTGCAACGGTTGCCGGGTGCTGCGCAAGGGATGCAGCGAAGGGTGCACCATCCGT CCGTGCCTGCAGTGGATCAAGACCCCCGAGGCGCAGGCCAACGCCACCGTCTTCCTCGCCAAGTTC TACGGCCGCGCCGGGCTTCTCAACCTGCTCGCTGCCGGGCCTGACCACCTCCGCCCCGCCGTCTTC CGCTCGCTCCTCTACGAGGCCTGCGGCCGCATCGTCAACCCGATCTACGGCTCCGTCGGCCTGCTC TGGTCGGGCCAGTGGCAGGCGTGCCAGGCCGCCGTCGAGGCCGTCCTCAAGGGCGACCCCGTCGTG CAGGTCTCCTCTGAGGCCGCCGCCGCCGCCCAGGCCACCCCGCCGCTCAGGGCCTACGACATCCGC CACGTCTCCAAGGACGCCGAGGCCGACGCCGCCGCCAACCTGCTCCGCGTCGCGCGCGGCGGCCGC ACCCGCTTCAAGCGCGCCTCCTCCAGCTCCAACTCCAAGCACGGCGCCAAGCTTGCCGGAGCAGCC GCCGCCAAGCGCGCCGCGTCCCCCAGCAGCAGCAGCCCGACGCACGAGACGGAGCCGGAGGCGGTG GTCGTCGTCGGTGACCATGACGACGACCACCACCACCCTGCGCTGAGCCACGAGGTCCACGAGGAG TCGGCTGGCAGCCATGACCACGACGACGACGACCATGTGGACGACGGTGACAACAACGACATGGCC ATCGCCGACGTGACGCCGCCGCGGGCGGGATCGGAGGATACCGAGGTCGAGACCGGCTCACACGTG AGCCAGGCCGAGCAGAGCCCCGTGCCGGTGGAGCACGAAGAGGGGGAGGAGGAGGAGGTCGGGCTG GAGCTCACGCTCGGGTTCCAGCCGCTCGTCGTGCGCGCCTCGAGGAGGCCTTCGTCGGCGGAGGCG CGCTGCGACCTTAGCGGCTTGAGCGCGGAGTCGAGTCGCATCGGCCTGCGGCTCGAGCTGCCAGCG
TGA
SEQ ID NO: 61, Os-OS03G33090
ATGAGCTGCAACGGTTGCCGGGTGCTGCGGAAGGGGTGCAGTGACGGCTGCGTGCTGCGGCCATGC CTGCAGTGGATCGACGCCGCCGACGCGCAGGGCCACGCCACCGTCTTCGTCGCCAAGTTCTTCGGC CGCGCCGGACTCCTCTCCTTCATCTCCGCTGTCCCCGAGGCGCAGCGACCTGCGTTGTTCCAGTCG CTGCTGTACGAAGCAGCGGGGCGAACCATCAATCCGGTGCACGGCGCGGTGGGCCTCCTCTGGACG GGGAACTGGCCCCTCTGCCAGGCCGCTGTCGAGACCGTGCTGCGTGGAGGCGCCATCGGCCCTCTG CCGGAGCTCGGCGGGGCCTGCGGCGGCGCTGGCGGGGACCTCTACGGCGCCGCCAAGCGCAACGGC GGCTGGTCTACCTTCTCCACTGCGAAGCGGGTGAGGAAGGCCGAGGTACCTGAAGCCCCGTCGTGC GACCTAGGCCTGTGCCTCAGCCCCGGCTCTCCGCCGGCGGTGGGGGAGAGGAAACCAGCACTGCGG CCGGGGACGCCGTCAATGAGCTCCGATGAGTCCGGCACCACAACCGGAGGCGAAAGGGATCCTGTG CTGCTCAACCTTTTTGTCTGA
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 62, Os-C>S03G41330
ATGAGCTGCAACGGGTGCCGCGTGCTGCGGAAGGGGTGCAGCGACGCGTGCGTGCTGCGGCCGAGC ATCGAGTGGATCGACGGCGCGCAGCCGCAGGCCAACGCCACCGTCTTCGTCGCCAAGTTCTTCGGC CGCGCCGGCCTCGTCGCCTCCCTCGCCGCCGTCCCTCTCCACCATCGTCCAGCGCTGTTCCGGTCG CTTCTGTACGAGGCGTGCGGGCGGACGATAAACCCGGTGAGCGGCGCCATCGGGCTCATGTGGACG GGCAACTGGGACCTCTGCCAGGCCGCCGCCGACGCCGTCCTCCGCGGCGACTCCCTCCGCGCCCTC TCGGCCGTGCCAGCCGCCTTCACCGACCGCGACATGGCCGGCCTCTACGGCAACGTCGGCGCCGCC GCCGGGACCTCCTCCTCCTCGCCCGACAACGACAACTCCTCCGCCTCCGCCGCGCCCCGGAGGAAG CGGCCCAGGAATAACGGCGCCGGCGCCGGCGTCGGTCAGCAGCAGCTGCCGCACGCGGTGGCTGCG GTGCTCCAGTCCTGCGAGCTGGACCTCTGCCTCACGCCCGTCTCACCGCCGGCCGTGCAGCTGGTG GGTGGGGGCGGCGGCGCGTCGGACGAGCACTCGACGACGACGTGCGAGGAAGCCAGCGACGGGGAT GGCGCCGGGGCGCCCACGCTGCTGAACCTCTTCAGCTGA
SEQ ID NO: 63, Os-OS07G40000
ATGAGCTGCAACGGCTGCCGCGTGCTGCGGAAGGGGTGCAGCGAGGGGTGCGTGTTGCGGCCGTGC CTGCAGTGGATCGACGGCGCCGAGGCGCAGGGCCACGCCACCGTGTTCGTCGCCAAGTTCTTTGGC CGCGCCGGCCTCATGTCCTTCCTCACCGCCGTCCCCGAGCCGCAGCGCGCAGCGGTGTTCCAGTCG CTGCTGTACGAGGCGGCGGGGAGGACGATCAACCCGGTGGGCGGCGCGGTCGGGCTGCTCTCCGGC GGGAGCTGGCACCTCTGCCAGGCGGCGGTCGACACCGTGCTGCGCGGCGGAGGCATCCAACCGCTG CCGGACCAGGTCGACGCCGCCGCCGCCGGTGGCCGCGACGTGTTCGCCTCCACGGCGAGGCGCGCC ATGGGCGGGTGCTCCACGTTCTCGACGGCGAAGCGGTCGACGACGACGACGACGACCAAGAACCCC GGTACTCCGCATGACGCCGCCGCCGCGGCGCCCCAGCCGGAACCGTCGTGCGACCTCGGCCTGTGG CTCAGCCCCGGCTCCCCGCCGGCGCCCGGGGACCGGCGATCCGGCGGCAGGCGGGCCGACACGCCG TCGATGAACTCCGAGGGATCCGTCACGACGTGCGGCGTCGTCGGCGACGGCGAGAGGGAGCCCGAG CTGCTGAATCTTTTTGTCTAG
SEQ ID NO: 64, At-LBD38-BT002449
AAACATTGAAACACTTTGTCCCACTCTCTCTCTTTCTCTTTCTTGTACCAAAAGCTTTTTGAATCT CCAAGATTATAGCAAAACCAAAGATAAAATACTAACTTAAAAAGATTTCTGAAAATAATGAGTTGC AATGGTTGTCGAGTTCTACGAAAAGGTTGCAGTGAGAATTGCATCCTCCGTCCATGTATTCAATGG ATCGAATCACCTGAAGCTCAAGGCCACGCCACCGTCTTCGTCGCTAAGTTCTTCGGCCGTGCCGGT TTAATGTCTTTCATCTCCGCCGTACCGGAATCTCAATGCCCTGCTTTGTTTCAGTCTTTGCTATAC GAAGCTTGTGGGAGAACTGTGAATCCGGTGAACGGAGCCGTCGGATTGTTGTGGACGGGGAATTGG AATGTTTGTCAAGCGGCGGTTGAGACGGTGCTTCGTGGTGGTTCTTTAAAACCAATACCGGAGCTT CTTAACGGCGGTGGATTCGCCGGGTTTCCGTCTCCTACTTCCGACGAAGCTTCGGAGATCTGTACG GAAATGTTGAATCTACGAAAAGCTGATGATTCCGGTGATCGGAACATTTATCATCACTGCCGATTC TCAAGCTCTAGATCTAGATCAAGATCAACAGCTTCTCCGCCGAAACGGAAACGATTATCGTCGGAA CAACAACCTTCGTCGGAGCTTGATCTCTCTCTTATTCCTATTTATCCGATTAAAACCTTGCCGTTT AAGGAAGATACACCGTCGATGTACTCGGAGGAGTCTGTTACCACGGTTTCGTTTCAAAACAACAAC GCCGGTGATCGGTACGTACGCTGCGGCGGAGGAGGAGGAGGAGCAACGACAAAGTTGCTCAATCTC TTCGCTTGAACGGCGTCGTTTTTGTTATGAGGGTTAAAAATGTAATTTCGAGTAACTTTTTGTTGT GGCCTTTTTTGGATTAATAGCCCTTAATATTTTGTGAAATGTAGCAAATTACGTGATTTATTTCTC TCTTTAATTATGAGAAATTATCCAAAGTAATAGAGAATAATGATAT
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 65, At-LBD39-AY072144
gttttttCtttcccttcttcaatcaaaacctatttgcatgctctcaaacccgaattaaatcgacac
ttttcagtttttgttttaacaagtagagtttcccaaaatattggatatatttctttttcaaatttc ggaaaagaaatgagttgcaatggatgtagagttcttcgaaaaggttgcagtgaaacatgcatcctt cgtccttgccttcaatggatcgaatccgccgagtcacaaggccacgccaccgtcttcgtcgctaaa ttctttggtcgtgctggtctcatgtctttcatctcctccgtacctgaactccaacgtcctgctttg tttcagtcgttgttgtttgaagcgtgtgggagaacggtgaatccggttaacggagcggttggtatg ttgtggaccaggaactggcacgtatgccaagcggcggttgagactgttcttcgcggcggaacttta cgaccgatatcagatcttcttgaatctccgtcgttgatgatctcctgtgatgagtcttcagagatt tggcatcaagacgtttcaagaaaccaaacccaccattgtcgcttctccacctccagatccacgacg gagatgaaagactctctggttaaccgaaaacgattgaagtccgattcggatcttgatctcc aagtg aaccacggtttaaccctaaccgctccggctgtaccggttccttttcttcctccgtcgtcgttttgt aaggtggttaagggtgatcgtccgggaagtccatcggaggaatctgtaacgacgtcgtgttgggaa aatgggatgagaggagataataaacaaaaaagaaacaaaggagagaaaaagttattgaaccttttt gtttaaaaccgacgacgcaaaacactcaaagattttgaggctctcttttttagggttttgagtggg aatggatatttagttaatgatttttctctatcgagaaatatgataaaattttggggaaaaaaaaaa
AAAAAA
SEQ ID NO: 66, At-LBD40-BT010943
ctcaaacccaaaacacattttgttttttgtttcccatctaaaatgcgtatgagttgtaacggatgt cgagttctacgaaaaggctgcagtgaaaactgtagcataagaccttgtcttcaatggatcaaatcc gctgaatctcaagccaacgccaccgtcttcctcgccaagttttatggccgtgcggggctcatgaac ctcctcaacaccggtcctgaccacctccgtcctgcgatatttagatcattgttgtacgaagcatgc gggaggattgtgaatccgatatacggatccgtggggttattgtggtcaggaaactggcatctttgt caagcggccgttgaggcagtaatgagaggctcacccgtgactccgatcgcatgcgacgcagcggtt actggtcaagcacctccttttaacaacaagctttgcgacataagacacgtgtcaagcagggacgag aacgttaagagacggagccgtggtgcatgcaaggaagagagaaacgtgaggtctttgagtcatgag tcgtcactgagtcacgagtcaccggtgtcttctgaggagacgacgacggaggaaccaaagacttgg atcgggcttgagctgactttggggttggagcctttagcacgtggaaatcacgtggtggtaccgatg aagaaaagaaagttagagaggtgtggcacgtctgaggatgaggacacgtgtaagattgagcttgga ctggtgtgcagtgagtgaatggttctttttttgtggctggtcttaattacaagttttggtgttgag ttttaggtgtac
SEQ ID NO: 67, At-LBD41-AF447895
ctctctccgcttcccccaaaaatccaggggcttcttacacgcacacaatcctttaaagctatcgtc tttcttatataatcagtgaatcttcattaacacctcccacaaaatctcagaaataactttcacaac agagtcaaagagttccaaatcgtttgtttgtattttgtacgatcaaagttgttggtacttgtaaga taatcgaaaccaaagatgcggatgagctgtaatggatgcagagttcttcggaaagggtgtagtgag gattgtagtataaggccgtgtttggcttggatcaaatcgcctgaagcgcaagctaacgcaactgtc tttctcgccaagttctatggccgtgctggactcatgaacctcatcaacgccggtcccaatcacctt cgtcctgggattttccgatcgttgttgcacgaagcttgtgggaggattgtgaatccgatctatggt tcggtgggtttgttgtggtcggggaattggcagctttgtcaagacgccgtggaggctgtgatgaaa ggagaaccggtcaaagagatcgccacagacgctgcgacgatcggccaaggtccgcctcttaagatc tacgacatccgacatatctccaaggatgataactctgccgccgcggctactggctcaaccgatttg aaacttgcgaaaactcgccgtgctaagcgggtctccaccgtcgcgatacaggcggaatcggaggga aagtctgacgaggctagtcacgattcgtcgttgagtcatcagtctgaaatagtggctgctcatgaa ggagagagcaaggaatccgagagcaatgtctctgaggttttggcattctcgcctccggctgtgaag ggctccggcgagataaagcttgacctaactttaaggctcgaaccggtgtcacgtgcgtatcatgtg
FIGURA 5 CONT. GTACCTGTTAAGAAGAGAAGGATCGGCGTGTTTGGCACGTGTCAGAAGGAGAGCACGTGTAAGACT GAGCTTATGCTCTAAGCTCCGTTTTAGCTATACTCAGAAGTTTTGCCCCCATCAGCTCTATTCGGC TCGGCTCTGATGATCTTCAAGTCGAGCCGGTAACTTTTTTTTAATATATAGTTCTCTATTTCCCCC TTTAATGTTCACTTTCCATTTGTGACAAAAGAATAGAGTATATGTACAAAATTATTTACAGAGATT AATTCAAGAATTGGCTGAGATATTATCTA
SEQ ID NO: 68, At-LBD42-AF447896
CAAAAGTTGAAAAATACCAGCTCATTCACTTATGACTCATGAGTAACTTCTTCCTTATAAATTCAA ATTGTTCACAACTTCCTTGAGTTCCATTTCCGAACACAAACACACATCATACGTATATTTGTCACT AATAAACATATAAAGGAATATGAGAATCAGCTGCAACGGGTGTAGGGTTCTACGCAAAGGTTGCAA CCAAGATTGCACCATTCGACCATGCCTTCAATGGATCAAATCCGCAGACTCTCAAGCCAATGCTAC ACTCTTCCTTGCTAAGTTCTACGGTCGAGCCGGTCTTCTTAACCTCATCGAATCCGGTCCTGATCA CCTTCGTCCCGCAATATTTAGGTCACTTCTGTACGAGGCTTGTGGTCGGATCGTGAACCCTGTAGA TGGTTCGGTTGGTTTGATGTGGTCAGGGAACTGGGCTCAGTGCCAAGCAGCTGTTGACGCCGTGCT CAACGGCTTACCCATAACTCACACACCTCTTCCAAGTGCATCCGCGTCGCACCAGATCATTCCTCC CCACAGGACTTACGATATACGCCACGTGGCTAAAGATCCAACAACCGGCGGCGACAGTTCGGAGAA TCTGGCCACACGTGTAAACGCTAACAAGAGCAAGACGCAAACTGGCCGATTCAAACGTGAATCCGT GAACCAACTAGGTGAATGTAGTCATGACATGTGGCAACTCCCAAGTTCTAGTGCTACGCATGGTTA TGGCCACTTCACGTTGGAGAATGTGGAGAGCCGAAGGGAAGCTCCATTTAATCAAAGTTCTCCAAA TCTTGGGTTTGATGATCAAGTCGATATCAACGAGGTTGGCTTAGAGCTCAGACTTGGTTAGAACCA GAAGATTGCATTATTATTATCATAATTCTGTCTTTTTAATTAATAATTTCACTTTCTATATAAAAG GAGAAAAAAAAACTAAAGCAAATCAAATTTAGTATTATTGTCAATCATTAGGTTATCAT
SEQ ID NO: 69, Linum usitatissimum
GTCTCCAACCCCCAAACACTCAAAAAATTATAGAAAATTACCAGCCGCCGGAAGCAGAGGTGATCG GAGGATGAGCTGCAACGGTTGCAGAGTACTGAGGAAAGGATGTGGAGAGAATTGCGTGCTGAGGTC ATCCCTCCGATGGATTCCCACTCCTCAAGCACAAGGCAACCCACTTTGTTCCTCGCCAAATTCTTC GGCCGCAGCGACCTCCTCTCCTTTATCTCCTCCGTCCCCGATCCTCAACGCCCCGCTCTGTTCCAG TCGCTGCTATTTGAAGCGTGTGGGAGGACGGTGAACCCGGTTAACGGGGCGGTGGGGCTGCTGTGG AGCCGCAATTGGCACGTGTGTCAGGCTGCGGTCGAGACCGTTCTCGCCGGAGGATCACTGC ATCCG CTTCCGGGAATTGCGGCAGGGGTTGCGCCGCCGAATTTCGACGAGTCGGATGACAGCTGCTCCGCC GCCGGATTCGCTGCTAATCAGCTCCGCCCGGCGATTTTGGCGATTACTGGCGGGAATCGGAATCTA TCATCGTCCTCCTCCACCTCGGAGTATCGÀCGTCGTCATAATGCTGCTCTGGTCGGTGGTGGGAAT GAGAGGAGGATTAATAACAGAGATGCGAGGGCGTCGTTTTTTGCGGAGGAATCGGAAACGACGACA TTCGAGAGCACCGGCGGCGATCGGAAGAAGCTGCTGAATCTTTTTGTTTGAGTAGAGAGGAGGAAA GAAAAAAGAGAAGCCGAGTTTTTGTCGGCAAAGGAAAGAACAAGACTTGAATGCGGTTACTGGAAT GTGAACTGTACTTTGGGTTTCTGTGTTTTGTTTCTTATGAACTTTATATGATAATATATATACATA AGAGAGAGAAAGAAAGAACGCCGGAATGACAGTCCGGCGAGTTTTGGGGGAAAAAAAAAAAAAAAA A
SEQ ID NO: 70, Linum usitatissimum
MWRELRAEVIPPMDSHS SSTRQPTLFLAKFFGRS DLLS FISSVPDPQRPALFQSLLFEACGRTVNP VNGAVGLLWSRNWHVCQAAVETVLAGGSLHPLPGIAAGVAPPNFDESDDSCSAAGFAANQLRPAIL AITGGNRNLSS SSSTSE YRRRHNAALVGGGNERRINNRDARASFFAEESETTTFESTGGDRKKLLN LFV
FIGURA 5 CONT. SEQ ID NO: 71, Triticum aestivtim - TC235711
atgcggcttagctgcaacggctgccgcgtgctgcggaagggctgcagcgaggactgcagcatccgc
ccctgcctgcagtggatcaagagccccgaggcgcaggccaacgccaccgtcttcctcgccaagttc tacggccgcgcggggctcatgaacctcatcaacgccggcacggacgacagcctccgccccggcatc ttccgctcgctcctctacgaggcctgcggccggatcgtcaaccccatctacggctccgtcggcctg ctctggtccaacaactggcagatgtgccaggccgccgtcgaggccgtcctcagcggcaagcccatc gtccaggtctcctccgaggatgccgccgccgaccggacaccgccgctcaaggcgtacgacatccgc cacgtctccacctcgccagccgccgacgggaggctccacaaggtcgccaagccgggtcgcacccgc ttcaagcgcgcgtcctccgcctcgtcccaccacaacccgtccagcgactccaacaacaagcccaag cccaagccgcagcctcagacgcgggcgcccacggcggaggaggagcgggatcgtcaacaccgcaag gagatggaggagggcgcgttccagcgtgctccgagccacgaatcctccgacagccgacacgaggac cccgtggagccacactgccagcaagaggcgtccgcggacacggaggccgaggcggggtcgcacgtc agccaggcagagcaggagcagagcacagagccggccgcagagcacgcggaggaggtcgaaaaggag gacgaagaactagggctcgagctcacgcttggattcgctcccgtcgcagcacggcctgccgaattc
acctgaccgtccgaaccggggggagcggctttcgcg
SEQ ID NO: 72, Medicago truncatula - ABE82505
atgagttgcaatgggtgccgagttcttcgaaaaggttgcagtgagtcgtgtattttacgaccttgt
ttgcaatggatcgaaactccagaagctcaaggccacgctactgttttcgtagcaaaattctttggt
cgggctggtctcatgtccttcatttccaacgtccctgaaccacagagaccagctctgtttcagtct
ctactgtttgaagcgtgtgggagaacggttaaccctgtgaacggtgctgttggacttctttggact
ggaaactggcacgtgtgtcaagcagcagttgagacggttcttcgcggtggcacgctaaggccttta
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SP/SMr LB Ti C58
T-OCS Nopalina de repetição de LB
Marcador selecionável
FIGURA 9 SEQ ID NO: 73, DNA - Arabidops±s tha.lia.na.
ATGTCAGGAGCTACCACCGCTTCCTCCGGAGACCACAACAACCTCCGTCTCCCAACTCCGACGCTT GACGCCGAATCGCAAACTCTGCTGCAATCGATTTCTGCTGAAGGGGGTTACGCTTATGCTCGCATG GCGGTGTTAGCGGTGGCCGGTGACCAAAGCGCGGCGGAGGCGGCGCGTGATATGGCTTGGGAGCAA CTTCACTCTGGTCCGTGGCACTCGGTTCTCCCCGTTTGGCGCGACGCTTACTCAATGGCTTGTCTC CACGTAGCTAAAATCCATTTCGCCGCCGGCGAGTTTGGTGAGGCGCTTGGTGCGCTTGATATGGGT CTTATCATGGGAGGTATGCTTCTCCGCAAGGATCTTCATGATTCTGTTTTGTTGGTCTCCTCTGAA GCTCGTAAGATGACGAAGAGTCTTGAAGAAGCTTCTGGAGATTTCAAAGGTGAGAGATTGGTCCCG GAAGTTCCCGTCGACGTCAATGAGGTCCTTAAGATTCTACCTTGCAGGTCTTTAACTTGTAAAAGA GTAGAGAAGAGGTCTGGTTTATCTTTGGAGGGGTTTCTGCGTGATTATTATCTGCCAGGTACACCA GTTGTTATAACCAATTCTATGGCTCATTGGCCAGCCAGGACCAAGTGGAATCACTTGGACTACCTC AATGCTGTTGCTGGTAACCGCACCGTTCCCGTGGAGGTGGGGAAAAACTATTTGTGTTCTGATTGG AAGCAAGAGCTTGTGACATTTTCTAAGTTCCTTGAACGGATGCGGACCAATAAATCGTCTCCAATG GAGCCTACTTATCTTGCCCAGCATCCTTTGTTTGATCAGATAAATGAACTGAGAGATGAT ATATGT ATTCCTGATTACTGTTTTGTCGGTGGTGGGGAACTCCAATCACTTAATGCATGGTTTGGCCCGGCT GGGACAGTTACTCCGTTACACCATGATCCACATCATAATATACTTGCTCAGGTTGTTGGCAAGAAG TATATAAGGCTTTACCCATCCTTCCTGCAAGACGAACTTTACCCTTACTCTGAGACAATGCTCTGC AACTCTAGTCAGGTTGATCTAGACAATATCGACGAAACCGAGTTCCCAAAGGCCATGGAGTTGGAG TTTATGGATTGTATTCTAGAAGAAGGTGAAATGTTGTACATCCCTCCCAAATGGTGGCACTATGTC AGGTCCTTAACAATGAGTCTCTCGGTTAGCTTCTGGTGGAGCAATGAAGCAGAATCTTCTAGCTCG TAG
SEQ ID NO: 74, proteína - AraJbidopsis thaliana
MSGATTASSGDHNNLRLPTPTLDAESQTLLQSISAEGGYA YARMAVLA VAGDQS AAEAARDMAWEQ LHSGPWHSVLPVWRDAYSMACLHVAKIHFAAGEFGEALGALDMGLIMGGMLLRKDLHDSVLLVSSE ARKMTKSLEEASGDFKGERLVPEVPVDVNEVLKILPCRSLTCKRVEKRSGLSLEGFLRDYYLPGTP WITNSMAHWPARTKWNHLDYLNAVAGNRTVPVEVGKNYLCSDWKQÈLVTFSKFLERMRTNKSSPM EPTYLAQHPLFDQINELRDDICIPDYCFVGGGELQSLNAWFGPAGTVTPLHHDPHHNILAQWGKK YIRLYPSFLQDELYPYSETMLCNSSQVDLDNIDETEFPKAMELEFMDCILEEGEMLYIPPKWWHYV RS LTMS L SVS FWWSNEAE SSSS
SEQ ID NO: 75, DNA - Oryza sativa
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAATAATTTT ACAGAATAGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAAGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG
FIGURA 10 GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGCTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG CTTTTATAGCGTTATCCTAGCTGTAGTTCAGTTAATAGGTAATACCCCTATAGTTTAGTCAGGAGA AGAACTTATCCGATTTCTGATCTCCATTTTTAATTATATGAAATGAACTGTAGCATAAGCAGTATT CATTTGGATTATTTTTTTTATTAGCTCTCACCCCTTCATTATTCTGAGCTGAAAGTCTGGCATGAA CTGTCCTCAATTTTGTTTTCAAATTCACATCGATTATCTATGCATTATCCTCTTGTATCTACCTGT AGAAGTTTCTTTTTGGTTATTCCTTGACTGCTTGATTACAGAAAGAAATTTATGAAGCTGTAATCG GGATAGTTATACTGCTTGTTCTTATGATTCATTTCCTTTGTGCAGTTCTTGGTGTAGCTTGCCACT TTCACCAGCAAAGTTC
SEQ ID NO: 76, DNA - seqüência artificial - iniciador- 1
GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAAACAATGTCAGGAGCTACCACCG
SEQ ID NO: 77, DNA - seqüência artificial - iniciador - 2
GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTAAAATAAATCCATTCGCTACG
SEQ ID NO: 78, Proteína - Sequencia artificial-c
domínio de JIVIJ-C da SEQ ID N°: 74
TYLAQHPLFDQINELRDDICIPDYCFVGGGELQSLNAWFGPAGTVTPLHHDPHHNILAQWGKKYI RLYPSFLQDELYPYSETMLCNSSQVDLDNIDETEFPKAMELEFMDCILEEGEMLYIPPKWWHYVRS LTMSLSVSFWWSNEAESSSS
SEQ ID NO: 79, Proteína - Sequencia artificial-caixa conservada em domínio
JMJ-C da SEQ ID N°: 74
CILEEGEMLYIPPKWWHYVRSLTMSL SVS FWW
SEQ ID NO: 80, Proteína - Sequencia artificial - Domínio DUF 335
RKMTKSLEEASGDFKGERLVPEV
SEQ ID NO: 81, Proteína - Sequencia artificial - motivo conservado
ALDMGLIMGGXLLRKDL
SEQ ID NO: 82, Proteína - Sequencia artificial -seqüência de consenso
de ligação de Fe(II)
HX(D/V)
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 83, DNA - Arabidopsxs thaliana
ATGTCAGGAGCTACCACCGCTTCCTCCGGAGACCACAACAACCTCCGTCTCCCAACTCCGACGCTT GACGCCGAATCGCAAACTCTGCTGCAATCGATTTCTGCTGAAGGGGGTTACGCTTATGCTCGCATG GCGGTGTTAGCGGTGGCCGGTGACCAAAGCGCGGCGGAGGCGGCGCGTGATATGGCTTGGGAGCAA CTTCACTCTGGTCCGTGGCACTCGGTTCTCCCCGTTTGGCGCGACGCTTACTCAATGGCTTGTCTC CACGTAGCTAAAATCCATTTCGCCGCCGGCGAGTTTGGTGAGGCGCTTGGTGCGCTTGATATGGGT CTTATCATGGGAGGTATGCTTCTCCGCAAGGATCTTCATGATTCTGTTTTGTTGGTCTCCTCTGAA GCTCGTAAGATGACGAAGAGTCTTGAAGAAGCTTCTGGAGATTTCAAAGGTGAGAGATTGGTCCCG GAAGTTCCCGTCGACGTCAATGAGGTGAGACATGTTTTGGCTAATCTACAATTACTTGTCCTTAAG ATTCTACCTTGCAGGTCTTTAACTTGTAAAAGAGTAGAGAAGAGGTCTGGTTTATCTTTGGAGGGG TTTCTGCGTGATTATTATCTGCCAGGTACACCAGTTGTTATAACCAATTCTATGGCTCATTGGCCA GCCAGGACCAAGTGGAATCACTTGGACTACCTCAATGCTGTTGCTGGTAACCGCACCGTTCCCGTG GAGGTGGGGAAAAACTATTTGTGTTCTGATTGGAAGCAAGAGCTTGTGACATTTTCTAAGTTCCTT GAACGGATGCGGACCAATAAATCGTCTCCAATGGAGCCTACTTATCTTGCCCAGCATCCTTTGTTT GATCAGATAAATGAACTGAGAGATGATATATGTATTCCTGATTACTGTTTTGTCGGTGGTGGGGAA CTCCAATCACTTAATGCATGGTTTGGCCCGGCTGGGACAGTTACTCCGTTACACCATGATCCACAT CATAATATACTTGCTCAGGTTGTTGGCAAGAAGTATATAAGGCTTTACCCATCCTTCCTGCAAGAC GAACTTTACCCTTACTCTGAGACAATGCTCTGCAACTCTAGTCAGGTTGATCTAGACAATATCGAC GAAACCGAGTTCCCAAAGGCCATGGAGTTGGAGTTTATGGATTGTATTCTAGAAGAAGGTGAAATG TTGTACATCCCTCCCAAATGGTGGCACTATGTCAGGTCCTTAACAATGAGTCTCTCGGTTAGCTTC TGGTGGAGCAATGAAGCAGAATCTTCTAGCTCGTAG
SEQ ID NO: 84, Proteína ~ Arabidopsis thaliana
MSGATTASSGDHNNLRLPTPTLDAESQTLLQSISAEGGYAYARMAVLAVAGDQSAAEAARDMAWEQ LHSGPWHSVLPVWRDAYSMACLHVAKIHFAAGEFGEALGALDMGLIMGGMLLRKDLHDSVLLVSSE ARKMTKSLEEASGDFKGERLVPEVPVDVNEVRHVLANLQLLVLKILPCRSLTCKRVEKRSGLSLEG FLRDYYLPGTPWITNSMAHWPARTKWNHLDYLNAVAGNRTVPVEVGKNYLCSDWKQELVTFSKFL ERMRTNKSSPMEPTYLAQHPLFDQINELRDDICIPDYCFVGGGELQSLNAWFGPAGTVTPLHHDPH HNILAQWGKKYIRLYPSFLQDELYPYSETMLCNSSQVDLDNIDETEFPKAMELEFMDCILEEGEM LYIPPKWWHYVRSLTMSLSVSFWWSNEAESSSS
SEQ ID NO: 85, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGCCGACGGGATGCGAGTTTCCGATGATCAAAACCTTCGAGAATGCTCTTACTGCCGCCGACTTC GAGTCTACCGTCGAGCTCACCAACTTCCCAGCAGTTTTTCGGGGATGTGCTAGTGTCTGGGATGCG TATTCTAAGTGGAATCCATTCAACAGTGGCCTCGATTATCTGGAGGAACGTGCAGGTTCAGTTGAA GTGGAGGCAATGCTTTCGAGGACGGCTCCAGTTTTCAATGGTGATATCAGAAGCCATGAGAGGGTG TCATTGCCTTTCTCGGATTTTATCAGATTCTGCAAGCAGCATATGAGAGGCAAAGGGAATGGTTCT GGTGTTGATGCTAAGTCTGCAGATTTAAATCCTATGTGTGAGGACTATAGACCTGGACAAATATAC CTAGCACAGTTTCCAATTCTGAATGATGAGAAAGAAGAGAAGGTTCTACTTAAGATTCTGAGACAA GATATCCAGACGCCCACATTTTTAGACGCAAAGTCACTTTCTTCTATCAACTTTTGGATGAATTCT GCAGAAGCTCGATCAAGTACCCACTATGATCCACATCATAACCTTCTATGCGTAGTCTCAGGGCGT AAAAAAGTTGTATTGTGGCCCCCTTCCGCCAGTCCCTCGCTCTACCCGATGCCTATATACGGAGAA GCATCAAACCATAGTTCGGTTGGTCTAGAAAATCCAAATTTATCAGATTATCCAAGAGCAGAGCAT TCACTGAAGCAGTCACAGGAGATTACTCTTAACGCTGGTGATGCAGTATTCATTCCTGAAGGTTGG TTCCATCAGGTGGATAGTGATGAACTGACTGTTGCTGTCAACTTTTGGTGGCAATCAAACTATATG TCTAACATGCCTGAACACATGGATTCGTATTATCTGCGTCGAATCACAAGAAGATTGATAGACAGA GAAATGAGCCTGTTAGTCTCGAAGCCTTCTTCAACTGATTTAAGGCACCTGTCTGAGCATATTGAC CAATCTCGCATTGAGATGGCAGAAGGTGGGAATGATAATATAGGCAATGAAAGCATTAAAAAGGGC
FIGURA 10 CONT. CTCAGCACATTGCATGAAAAAGCGTCGCTGCACGATCTAGATCCTTCTGCTTCCCAGGCGCTTCAT GATCTTATTTCTTTAGTCCATGACCACGTTAATGCTGTTGATACAAAAGATGATCGCGTTGCCCAT TTGCTTTGGAATCTTGAAGCCTCTAGACTTCGGGATGTTCTCCTTGCAATGGCACGTTATTTCCCA AGAACTTTAGAAGCATTAATACTCCACATGCTCTCACCCATTGCTGCGGAAGTTCTAACACAGAAG TTTGATGAGATTGACCAACAGACTGGTGAAGAAGATAGGACCCAGTTCTTTCGGGAATTTTATAGT GCATTCGATGATGAAGCAGCTGCGATGGATATAATTTTAAGTAGGAAAGAGGCTTTTGCATTTCAG GCATTTAAGAATGTACTAGACAAGTTTTTGGGGGTCAACATTGCTTCACCAACAACAAACATTTGA
SEQ ID NO: 86, Proteína - Axabidopsis thaliana
MPTGCEFPMIKTFENALTAADFESTVELTNFPAVFRGCASVWDAYSKWNPFNSGLDYLEERAGSVE VEAMLSRTAPVFNGDIRSHERVSLPFSDFIRFCKQHMRGKGNGSGVDAKSADLNPMCEDYRPGQIY LAQFPILNDEKEEKVLLKILRQDIQTPTFLDAKSLSSINFWMNSAEARSSTHYDPHHNLLCWSGR KKWLWPPSASPSLYPMPIYGEASNHSSVGLENPNLSDYPRAEHSLKQSQEITLNAGDAVFIPEGW FHQVDSDELTVAVNFWWQSNYMSNMPEHMDSYYLRRITRRLIDREMSLLVSKPSSTDLRHLSEHID QSRIEMAEGGNDNIGNESIKKGLSTLHEKASLHDLDPSASQALHDLISLVHDHVNAVDTKDDRVAH LLWNLEASRLRDVLLAMARYFPRTLEALILHMLSPIAAEVLTQKFDEIDQQTGEEDRTQFFREFYS AFDDEAAAMDIILSRKEAFAFQAFKNVLDKFLGVNIAS PTTNI
SEQ ID NO: 87, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGCTAAAGAGATAGAGAATTTATGGAGAGAAGTGAGAGAATTGAGCTTAGGAACTAAAATCGAT CGTTTTGATTCTCAACCGTCTCCGGTGAAGTTTCTCCGAAACTACGTGTCTCAGAGCAAGCCTTGT GTAATCTCCAAAGCTATTACTCATTGGCCGGCGTTAAAACTCTGGTCAGATCCGGCTTACCTCACC GGAGCTTTGTCAGATGACGTTGTCTCGCTACATCTCACTCCTAACGGCTGCGCAGACGCCGTCACC GGAGATAGTGATCTTTGTTTCGCTTCGGCTCATGTTGAGAAAGTTCTGTTCCCGGAGGCTCTTAAG GTTGTTCAATCGTCGTGTAAAGGACTGAAGGTTGGGTATTTGCAACAGCAAAACGATTGTTTTAGA ACGGAGTATTCGACGGTTGCGTTAGACTGCGACGGTGATATTGAGTGGGCTACGGAGGCATTTGGT TGTTCGCCGGAAGCTGTGAACCTTTGGATTGGTACTGATGACTCCGTGACTTCATTTCATAAAGAT CACTATGAGAATCTTTACGCTGTTGTTTCAGGGGAGAAACATTTCCTTCTTCTTCCTCCGACTGAT GTTCACCGTCTCTATATCGAACAGTATCCGGCAGCTAATTACTCTTACCACCGAGATACTGATGCG TTCAAGCTTGAGGTTGAGGAGCCGGTTAGGCATGTACCTTGGTCTAGTGTTGATCCATACCCTTCG CCAGAGAAGGAAGCAAGCGAGAGATTGAAATTTCCGTTGTTCTTTGATGGCCCGAAGCCGTTTCAT TGTACTGTCAAGGCTGGCGAGGTTCTTTACCTGCCAAGCATGTGGTTTCACCATGTTAGTCAAACC CCAGGAGATGGAGGTTATACCATTGCAGTGAACTATTGGTATGACATGCAGTTTGACATCAAGTAT GCTTATTTTAACTTCTTGCAATCTTTATTATACAAGTCATCTTCACTCAATCCAGTTCTTTCTTGG AGAGAAGACGAAGATTCAGAATCCAGTGATGCAGAGATTGCTCCCTGA
SEQ ID NO: 88,proteína ~ Arabidopsis thaliana
MAKEIENLWREVRELSLGTKIDRFDSQPSPVKFLRNYVSQSKPCVISKAITHWPALKLWS DPAYLT GALSDDWSLHLTPNGCADAVTGDSDLCFASAHVEKVLFPEALKWQSSCKGLKVGYLQQQNDCFR TEYSTVALDCDGDIEWATEAFGCSPEAVNLWIGTDDSVTSFHKDHYENLYAWSGEKHFLLLPPTD VHRLYIEQYPAANYSYHRDTDAFKLEVEEPVRHVPWSSVDPYPSPEKEASERLKFPLFFDGPKPFH CTVKAGEVL YLPSMWFHHVSQTPGDGGYTIAVNYWY DMQFDIKYAYFNFLQSLLYKS S SLNPVLSW REDEDSESSDAEGSKFTPSATNLYLSSTYVSDGARFWKRVHVNSIKLGFESNGLIQSGLIDMYRKY RLVINAEKVFRAMEGQTVLTVGGYGFEYYAEWFSH
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 89, DNA - Medicago truncatula
ATGAATGAGAAGATAGAAGAACTATGGAGAGAAGTACGAGAATTAAGTCTAGGAAGCAAAAGAAGC ATAGAACGTTTAGAATCAGCACCAACACCACTCCAATTCCATAGAAACTTCATCACTCCAAACAAA CCTTGCATCATCTCCAACTCCATCTCCCATTGGCCCTCCCTCTCTCTCTGGTCCCACCCTTCTTAC CTCACTCAATCCCTCTCTTCCACCACCGTCTCCCTCCATCTCACCCCCACCGGCTCCGCCGACTCT TTAACCCCTCTCCCCTCTTCCCCCTCCTCCCTCTGCTTCGCCTCTGCCCATGTCCAAAACCTCCCT TTCCCCGAAGCCCTCCGTCTCATCAACTCCTCTAACCCTTCCCAATGTGTCGCCTACGCGCAGCAA CAGAACGATTGTTTTCGTTCAGAGTATGATTCCATTGTTAAAGATTGTGATCAACATATTGCTTGG GCTACTGAAGCATTTGGTTTAGAGCCTGAAGCTGTTAATCTTTGGATTGGAAACAAACATTCATCT ACTTGGTTTCATAAGGATCATTATGAGAATCTTTATGCTGTTGTTACTGGTCAAAAACACTTTCTT TTGTTTCCTCCTACTGATGTTCATCGCTTTTATATTCGGAATTACCCTGCTGCTACTTATAAATAT TACATGGAAACTGGAGAGTTTGATTTGGAACTTGACAAGCCAACTAGGTATGTGCCTTGGTGTAGT GTGAACCCTTTTCCTTCTCCGGAGAACTTGGAGGACGAGATTTCAAAGTTTCCTTTATACTTCAAT GGCCCTCCACCGTTTGAGTGTACTGTCAAGGCTGGGGAGATTCTTTACTTGTATGATTCTCTTCTT TTGCATTGCATCATGCCAAGCATGTGGTTTCATCATGTTAGACAAAGTGGGGATGATGGAGAATTA ACTATTGCAGTAAATTATTGGTATGATATGCAATTTGACATTAAGTATGCTTATTTCAACTTTTTA CAATCTATTGATTACCGATCTCCTACGAGTCCAATGATGCCTGAGAAATTGTGTGAGGAGATAGAT TTTGGTCCTGATGACGATGAGACTAGATGAATTATCATTTCTCAGTCGGTGATATTCGGCAATGTG GTCCTTCGATCGAATGCTGA
SEQ ID NO: 90, Proteína - Medicago truncatula
MNEKIEELWREVRELSLGSKRSIERLESAPTPLQFHRNFITPNKPCIISNSISHWPSLSLWSHPSY LTQSLSSTTVSLHLTPTGSADSLTPLPSSPSSLCFASAHVQNLPFPEALRLINSSNPSQCVAYAQQ QNDCFRSEYDSIVKDCDQHIAWATEAFGLEPEAVNLWIGNKHSSTWFHKDHYENLYAWTGQKHFL LFPPTDVHRF YIRNYPAATYKY YMETGEFDLELDKPTR YVPWCS VNPFPS PENLEDEISKFPLYFN GPPPFECTVKAGEILYLYDSLLLHCIMPSMWFHHVRQSGDDGELTIAVNYWY DMQFDIKYAYFNFL QSIDYRSPTSPMMPEKLCEEIDFGPDDDETR
SEQ ID NO: 91, DNA - Brachypodium sylvaticum
TCAATCGTTCTTCTCCTCAAGATCACCTTCCAAGGCAGCATCTTTGTTGTCCAGCGGAGAATTACT GATCTCCAGTGACCTCAGGAAGTTAAAGTACGCATACTTGATGTCAAACTGCATGTCATACCAGTA ATTCACAGCAATGGTGAGCCCGTTAGGCCCGGGGCTCTGGCTGACATGGTGAAACCACATGCTCGG CAAGTAGAGCACCTCGCCAGCACGGACGGTGCACCGTATCGGCCTGGGCCCCTCGAAGTAGAGCGG GAAGGATGAGACCTGCGCCGCCATCTCCTCCGGCGACGACGGGTTCGGGTCCACGCTGCTCCACGG CACGATCCTCTCGGGCTCTTCCATCTCCAGCTTAAGCCCCGTCAGCTCCTCCTCTCCTTCGTTCTC CGTGACGTAGCGGGCGGCGGGGTAGTCGCGGACGTAGAGGCGGTGGTGCTCGGTGGGGGGCAAGAG GAGGAAATGCTTCTCGCCGGAGAGGACGGCGTAGACGTTGTCGTAGTGGTCCTTGTGGAAGGAGGT GACGGAGCAGGAGTTGCCGATCCAGAGGTTGACGGCCTCCGGGAGGCAGCCGAGCGCCTCGCTGGC CCAGGGCACGTGCGCGTCCACGTCGCCGGCCACCGCCGCGTACTCCCCGCGCAGGCAGTCGTCCTG CTGCTGCGCGTACGCCACCAGGCCGCCAGCGGCCGCCCGGTCGGAGCCCCTGATGAGCCGCACGGC GGTAGGGAAGTCGACCCGGCGGACGTGCGCGGACGCGAAGCACCTGGCGCCGGGGAGGCACGGGTG AGGGGCGAGGGCGTCGGCGCGGCCGTCGGGGGTGAGGTGGACGGAGACGTCGGTGGAGCGGAGCGC GTCGGTGAGGTAGGATTCGGTGGGCCAGAGGGAGGCGGCGGGCCAGTGGCGGGTGGCGGCGGCGGA GACGAGGAGCGGGCGGCCCGGGGAGACGTGGTCGCGGAGGAAGGCGAGCGGGGTCGGGGGCAGGTC GGCGCGCGGCACGGCCTCCGGAGAGTGGAGACCCAGCAGGTCCCGTGATTCCGCCCACAGCTCCCG CACCGCGCGCTCCAT
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 92, Proteína - Brachypodiwn sylvaticvm
MERAVRELWAESRDLLGLHSPEAVPRADLPPTPLAFLRDHVSPGRPLLVSAAATRHWPAASLWPTE SYLTDALRSTDVSVHLTPDGRADALAPHPCLPGARCFASAHVRRVDFPTAVRLIRGSDRAAAGGLV AYAQQQDDCLRGEYAAVAGDVDAHVPWASEALGCLPEAVNLWIGNSCSVTSFHKDHYDNVYAVLSG EKHFLLLPPTEHHRLYVRDYPAARYVTENEGEEELTGLKLEMEEPERIVPWSSVDPNPSSPEEMAA QVSSFPLYFEGPRPIRCTVRAGEVLYLPSMWFHHVSQSPGPNGLTIAVNYWYDMQFDIKYAYFNFL RSLEISNSPLDNKDAALEGDLEEKND
SEQ ID NO: 93, DNA - Oryza sativa
ATGGAGCGCGCAGTGCGGGAGCTGTGGGCGGAGTCGCGGGACCTGCTGGGCCTCCACTCCCCGGAC GACGCCGCCGCCGCCGACGCCGCGATGCCCCGCGCCGAGATGCCCCCGACGCCGCTCGCGTTTCTC CGCGACCACGTCTCGCCGGGGCGCCCTCTCCTCGTGTCCTCCGCCGCCACCAGCCACTGGCCGGCC GCCTCGCTGTGGCCGACCGACTCCTACCTCACCGACGCGCTCCGCTCCACCGCCGTCTCGCTCCAC CTCACCCCCGACGGCCGCGCCGACGCCCTCGCCCCGCACCCGCGCCCGAGCCACCCCGGCGCCAAG TGCTTCGCCTCCGCGCACGTCCGCCAGGTCGACTTCCCCACCGCCGTGCGCCTCATCCGGAGCTCC GATCCGGCCTCCGGCCTGGTGGCCTACGCGCAGCAGCAGGACGACTGCCTGCGCGGGGAGTACGCC GCCGTCGCCGGCGACGTGGACGCGCACGTGCCCTGGGCCAGCGACGCGCTCGGCTGCCTCCCCGAG GCCGTCAACCTCTGGATCGGCAGCGCCTGCTCCCAGACCTCCTTCCACAAGGACCACTACGACAAC ATCTACGTCGTCGTCTCCGGCGAGAAGCACTTCCTCCTCTTGCCCCCCACCGAGCACCACCGCCTC TACGTCCGCGACTACCCCGCCGCCCACTACGCCGCGGAAGATGAAGCGGAGCTGAGGCTTAAGCTG GAGCTGGAGGAGCCCGAGAGGATCGTGCCATGGAGCAGCGTTGACCCCTACCCGCCGTCGCCGGAG GAGGCGGCCGCGCAGGCGTCATCCTTCCCGCTCTACTTCGAGGGGCCGAGGCCGATCCGCTGCACG GTGCGCGCCGGCGAGATGCTCTACTTGCCGAGCATGTGGTTTCACCATGTGAGCCAGAGCCCCGGG CCGAACGGGCTCACCATTGCAGTGAACTACTGGTATGACATGCAGTTTGACATTAAGTATGCCTAC TTCAACTTCTTGAGGTCATTGGAGATCGATGGTAGTTCGTCGAAAAAGACGGATGCTTTGGAAGAC GATCTCGAGGAGACGAATGATTGA
SEQ ID NO: 94, Proteína - Oryza sativa
MERAVRELWAESRDLLGLHSPDDAAAADAAMPRAEMPPTPLAFLRDHVSPGRPLLVSSAATSHWPA ASLWPTDSYLTDALRSTAVSLHLTPDGRADALAPHPRPSHPGAKCFASAHVRQVDFPTAVRLIRSS DPASGLVAYAQQQDDCLRGEYAAVAGDVDAHVPWASDALGCLPEAVNLWIGSACSQTSFHKDHYDN IYVWSGEKHFLLLPPTEHHRLYVRDYPAAHYAAEDEAELRLKLELEEPERIVPWSSVDPYPPSPE EAAAQASSFPLYFEGPRPIRCTVRAGEMLYLPSMWFHHVSQSPGPNGLTIAVNYWYDMQFDIKYAY FNFLRSLEIDGSSSKKTDALEDDL
SEQ ID NO: 95, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGGGACAGAGCTAATGAGAATCTGTGTGAAAGAAGATAGTGATGATTTGCCATCTGTTCCTCCT GGTTTTGAATCATATGCAACTTTTACCTTAAAAAGAGTAGTCCCTGCTACTACTTCTGATAAAGCC AAGACTCCTGCAATTGAAAGTGTTTCTGCAACCGAACAAGCTAAGATGGAAGTTGAATCTGATGAA GCCAAAGCTGCTCGGGCTCTACGCCGTAGACCTTGGATTAATCATAGCGGATGTGATGATGATGGT GATTGTGCTGCAAACAATGACAATGCTGCATCTCAAAATCCTGATCAAAATTGTGATGTGAAGCCA GCTCTTCCAAAGGGTGTGGTCAGGGGATGTGAAGAATGTAAAGATTGTCAGAAGGAGTTTGAAGAC ACTTTAAATTATATCGCTAAAATAAGACCGGAGGCTGAAAAGTATGGAATCTGTCGCATTGTTCCT CCTCCTTCCTGGAAACCGCCGTGCCCACTGAAAGAAAAGCAAGTATGGGAGGGTTCTAAATTTACA ACACGTGTCCAAAGAGTTGATAAACTTCAGAATCGGAGTTCAATGAAGAAGATTTCAAAGCTTCCT AATCAAATGAGAAAGAAGAAAAGAAAGTGCATGAAAATGGGAATGGATTCTGTCACTAATGGTATG GGCGATCCCTGTTCTGCAAGCACTGGAATGAATGAACTTGAGACGTTTGGGTTTGAACCTGGTCCA GGGTTCACACTAAAAGACTTCCAAAAATATGCTGATGAGTTCAAGGCTCAGTACTTTAAAAAGAGT
FIGURA 10 CONT. GAAACTTCTACAGACGATAAATGTAAAGTTGATAATTCAATAGACTGCTGGGAGCCAGCACTTGAG GATGTTGAAGGTGAATATTGGCGGATAGTAGATAAAGCAACTGAAGAGATAGAGGTGCTATATGGT GCTGACCTTGAAACTGGGGTATTTGGTAGCGGATTCCCCAAGATATCATCAAGTCACAATGCTTCT TCTTCAGAAGATAAATATGCAAAATCAGGCTGGAACTTAAATAACTTTCCAAGGCTTCCGGGATCC CTCCTTAAGTACGAGGGCAGTGATATTTCCGGTGTCCTTGTGCCGTGGCTGTATATTGGGATGTGC TTTTCTTCTTTCTGCTGGCATGTTGAAGATCACCACTTGTATTCGTTGAATTATATGCACTGGGGT GCACCGAAATTGTGGTATGGTGTTGGGGGGAAGGATGCTGTTAAACTCGAGGAGGCAATGAGGAAG CATTTGCCTGACCTTTTTGAAGAACAGCCTGACTTACTTCATAAGCTAGTTACACAACTCTCCCCG TCAAAACTGAAAACCGCAGGAGTACCTGTGCACCGTTGCGTCCAGCATGCTGGAGAGTTTGTCTTG ACTTTTCCTCGGGCATATCATGCTGGATTTAATTCTGGTTTCAACTGTGCTGAAGCTGTGAATGTA GCACCCGTTGACTGGTTACCTCATGGGCAGATTGCCATAGAGTTATACTGTCAACAGGGTAGAAAA ACGTCCATCTCGCATGATAAATTGTTGCTTGGGGCAGCAAGGGAAGTAGTGAAAGCCGACTGGGAG CTGAACTTACTAAGGAAAAATACTGTAGATAACTTAAGGTGGAAAGCATTCAGTGCGAAGGATGGA ATTTTGGCAAAAACATTAAAGGCACGCATTGACATGGAACGTACGAGAAGAGAATTTCTGTGCAAC TCTTCACTTGCATTGAAAATGCACAGTAATTTCGATGCTACCAACGAGAGAGAGTGCTGTATATGC TTCTTTGATTTGCACCTGTCTGCTGCTGGCTGTCGTTGTTCCCCGGAGAAGTATTCATGTTTGACT CATGTGAAGGAGTTGTGTTCATGTCCATGGGTTACTAAATATTTTCTATTTCGCTATGATATCGAT GAACTGAATGTTCTTGTTGAGGCAGTGGAAGGAAAACTGAGTTCTGTATATAGATGGGCGCGTCAA GATTTAGGATTGGCATTAAGTACAGACGTCTCAGGAAGCAAGATGGAGATAGATGAAGAAGGAAAA GTCCACAAGGACCCGACTCCACAAACAACTGCACTTTCAGGGAAGGATTTGCAGTTGAAAGTAACA TCGAAAGAAGTAAGTAAAGAGTTAGAAAAGACTAGTAAATTATCTCATGTTAATTTACTTCTGAAA GAAAAGGAGGAGCAAATAACGTCAAGTCACTGTATGAAGCCTGTCAAAGAAGAAACTGTTTGTGAT TCTTCTGATCCAAACGTTTCAGCTTGCCAACCATCTGAAGGAGGCATAATCTGTATGACAGCTGTT AAGTCCGCAAGTGGTAAAAAGAATTCACAGAGTCTACCCAATGATGTGATACTCCTCAGCGATGAT GAGTATGACATACCTAGGAAACGAGGTTCTGTGAGAAGAGATGCAATTTCTTCTGGCAAGAAATTA GAAATACGAGAGAGACCGACCCACGTTTTGGCGTTAGAAGCTTCTGCCAAAATTGCTGCTCCAATT TGCCAAAGGGAAGGAGATTCGCTGCGTGATACACGAAACACTATATCATTGCCTACTAATGACCAA AAAACAATGAGAAGGGATGTACCGAGTTCTACTTCGCACGCGGAAGTTAATGCGGAGGCTACTGGG CTTACTCAAGATATATGTAACAGAATGGCAACTAACAGCCACGGTGGTGGAAAACCTACTAGTTGT AAATCCAAAAACTCTGGAGGTTTGGCTATAGTGGATGTTGTGGATGGGACAAGAAGTAGTTCAGGT ACACCGTCTTGTTCGCAAAATAATAGTCCGGATAGGTTCATCCGCCAAAAGGGTCCCCGCATTGCA AAGGTCGTGAGGAGAATCAATTGCAATGTAGAGCCTTTAAGTTATGGATGTGTGCTGTÇTGGAAAA TCATGGTGCAGCCGGCGAGCAATTTTTCCTAAAGGATTTCGTAGCCGGGTTAAGTACATAAACATT TTGGATCCAACAAATATGTGCTTCTACATTTCAGAAATTCTGGATGCTGGACGCAACAGTCCATTG TTCATGGTTTACTTGGAGAGTAATCCCAGTGAGGTGTTCGTTCATATGTCGCCTACAAGATGCTGG GAGATGGTAAGAGAGAGAGTAAATCAAGAGATAACTAAGCAGCACAAAGCTGGAAAATCAGATCTT CCTCCTTTGCAACCCTCTGGGAGTCCCGACGGTTTTGAAATGTTTGGATATTCGTCACCCGCAATC GTACAGGCTATCGAAGCATTAGACGTGAATCGAGTTTGCACAGACTATTGGGATTCCAGGCCTTAT TCCCGGCCACAAGTTCAGTTCCCTGCAAATCCTCTTCTCAGAGAAGCCAACACAAGTGGCAGATCG AATGTGGGAAATCTCCAGCTAAACCCTGGACACCATATATCGCCTACTGGAATAAATTCTATTCTT AAAGTTCTGTTCAAGAAAGCTAGCATGGAGGAACTAAGCTCACTTCAAGAGGTTTTAAGTGAGACT AACTCAGATATGGTGACCGAACTTGTGAAGGAAGAGATCCAGAACCGTCGCTGA
SEQ ID NO: 96, Proteína ~ Arabidopsis thaliana
MGTELMRICVKEDSDDLPSVPPGFESYATFTLKRWPATTSDKAKTPAIESVSATEQAFCMEVESDE AKAARALRRRPWINHSGCDDDGDCAANNDNAASQNPDQNCDVKPALPKGWRGCEECKDCQKEFED TLNYIAKIRPEAEKYGICRIVPPPSWKPPCPLKEKQVWEGSKFTTRVQRVDKLQNRSSMKKISKLP NQMRKKKRKCMKMGMDSVTNGMGDPCSASTGMNELETFGFEPGPGFTLKDFQKYADEFKAQYFKKS
FIGURA 10 CONT. ETSTDDKCKVDNSIDCWEPALEDVEGEYWRIVDKATEEIEVLYGADLETGVFGSGFPKISSSHNAS SSEDKYAKSGWNLNNFPRLPGSLLKYEGSDISGVLVPWLYIGMCFSSFCWHVEDHHLYSLNYMHWG APKLWYGVGGKDAVKLEEAMRKHLPDLFEEQPDLLHKLVTQLSPSKLKTAGVPVHRCVQHAGEFVL TFPRAYHAGFNSGFNCAEAVNVAPVDWLPHGQIAIELYCQQGRKTSISHDKLLLGAAREVVKADWE LNLLRKNTVDNLRWKAFSAKDGILAKTLKARIDMERTRREFLCNSSLALKMHSNFDATNERECCIC FFDLHLSAAGCRCSPEKYSCLTHVKELCSCPWVTKYFLFRYDIDELNVLVEAVEGKLSSVYRWARQ DLGLALSTDVSGSKMEIDEEGKVHKDPTPQTTALSGKDLQLKVTSKEVSKELEKTSKLSHVNLLLK EKEEQITSSHCMKPVKEETVCDSSDPNVSACQPSEGGIICMTAVKSASGKKNSQSLPNDVILLSDD EYDIPRKRGSVRRDAISSGKKLEIRERPTHVLALEASAKIAAPICQREGDSLRDTRNTISLPTNDQ KTMRRDVPSSTSHAEVNAEATGLTQDICNRMATNSHGGGKPTSCKSKNSGGLAIVDWDGTRSSSG T PSCSQNNS PDRFIRQKG PRIAKWRRINCNVEPLSYGCVLSGKSWCSRRAIFPKGFRSRVKYINI LDPTNMCFYISEILDAGRNSPLFMVYLESNPSEVFVHMSPTRCWEMVRERVNQEITKQHKAGKSDL PPLQPSGSPDGFEMFGYSSPAIVQAIEALDVNRVCTDYWDSRPYSRPQVQFPANPLLREANTSGRS NVGNLQLNPGHHISPTGINSILKVLFKKASMEELSSLQEVLSETNSDMVTELVKEEIQNRR
SEQ ID NO: 97, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGAATGCTAATGAGCAAACTCGATCCGCCAATGGCATTGGCAATGGCAATGGTGAGTCTATTCCC GGGATTCCAGATGACTTACGGTGCAAGAGATCGGATGGTAAACAGTGGAGATGCACTGCAATGTCC ATGGCTGATAAGACTGTTTGTGAGAAGCACTACATCCAAGCAAAGAAGCGGGCGGCTAATTCTGCT TTCAGGGCGAACCAGAAGAAAGCGAAAAGGCGATCATCGTTAGGCGAAACAGATACGTATTCGGAA GGGAAGATGGATGATTTCGAGTTACCAGTCACCAGCATTGACCACTATAATAACGGTCTTGCCTCT GCTTCCAAGAGTAATGGTAGACTAGAGAAGAGACATAATAAAAGCCTGATGCGGTACTCGCCCGAG ACACCGATGATGAGGAGTTTCTCTCCACGTGTTGCAGTGGATTTGAATGATGACTTGGGTAGAGAT GTTGTAATGTTTGAAGAGGGCTACAGATCTTATAGGACACCACCATCTGTTGCTGTTATGGATCCG ACACGAAACAGATCACACCAAAGCACCAGTCCTATGGAATACTCAGCAGCAAGCACAGATGTGTCT GCAGAGTCTTTGGGGGAAATCTGCCATCAATGCCAGAGAAAAGATAGAGAGAGAATCATTTCTTGC CTCAAATGCAATCAAAGAGCCTTCTGCCACAATTGTCTATCGGCAAGGTACTCGGAGATATCACTT GAAGAAGTCGAGAAAGTTTGCCCTGCATGTCGTGGCTTGTGTGATTGCAAATCTTGCCTGCGTTCA GATAATACAATAAAGGTTCGGATCCGGGAAATACCCGTTTTGGACAAGTTGCAGTATCTTTATCGT CTATTATCAGCTGTCCTACCAGTCATAAAGCAGATCCATCTTGAACAATGTATGGAAGTTGAACTA GAGAAGAGGCTTCGTGAAGTTGAGATTGATCTTGTCAGGGCAAGATTGAAAGCAGATGAGCAGATG TGCTGCAACGTGTGTCGGATACCAGTTGTTGACTACTACCGTCACTGTCCGAACTGCTCATATGAC CTTTGCCTGAGATGCTGTCAAGATCTACGGGAAGAGTCTTCAGTGACGATTAGTGGGACTAACCAA AACGTACAAGATAGAAAAGGAGCTCCCAAACTAAAACTAAACTTTTCATACAAGTTTCCTGAGTGG GAAGCCAACGGTGATGGGAGCATCCCTTGCCCTCCTAAGGAGTATGGAGGCTGCGGTTCACATTCT TTGAATCTTGCCCGCATTTTCAAGATGAATTGGGTTGCAAAGCTTGTGAAAAATGCTGAGGAGATT GTTAGTGGCTGCAAATTATCTGATCTTCTGAACCCTGATATGTGTGATTCAAGATTCTGCAAATTT GCTGAGAGAGAAGAGAGCGGTGACAACTACGTGTACAGCCCGTCGCTTGAAACGATTAAAACTGAT GGAGTAGCTAAGTTTGAGCAACAATGGGCAGAGGGTCGGCTTGTTACTGTGAAAATGGTACTTGAT GACTCATCTTGCTCTAGATGGGATCCTGAGACTATTTGGAGGGATATAGACGAGCTTTCGGACGAG AAACTGAGAGAACATGATCCATTCTTGAAGGCCATTAATTGCTTGGATGGTTTAGAGGTTGATGTA AGACTTGGGGAGTTTACAAGAGCATATAAAGATGGAAAGAACCAAGAGACAGGTCTTCCGCTATTG TGGAAGTTAAAGGACTGGCCGAGCCCAAGTGCTTCCGAGGAGTTCATTTTCTACCAAAGACCTGAG TTTATCAGAAGTTTTCCGTTTCTCGAGTACATTCATCCCCGGTTAGGCCTTCTGAATGTTGCAGCC AAGTTACCTCATTACTCGCTCCAAAACGATTCAGGTCCAAAGATTTATGTGTCTTGTGGGACGTAC CAAGAAATCAGTGCTGGCGATTCATTGACTGGTATTCACTACAACATGCGTGACATGGTATACCTA TTGGTGCACACGTCTGAAGAAACAACATTCGAAAGGGTGAGAAAAACAAAACCTGTTCCAGAGGAA CCTGACCAGAAGATGAGCGAAAATGAGTCACTTCTTAGCCCTGAGCAGAAATTAAGGGACGGAGAG
FIGURA 10 CONT. TTACATGATCTATCACTTGGTGAAGCCAGTATGGAGAAGAATGAACCTGAGTTGGCGTTGACTGTG AATCCAGAGAACTTAACGGAAAACGGTGACAACATGGAATCTTCTTGCACATCTTCATGTGCAGGA GGAGCCCAGTGGGATGTCTTTCGACGCCAAGACGTCCCAAAGTTGTCCGGGTATTTGCAGAGAACA TTCCAGAAGCCTGATAATATCCAGACTGATTTTGTGTCACGCCCGTTGTATGAAGGATTGTTCTTA AATGAACACCACAAGAGACAACTAAGAGACGAGTTTGGAGTTGAGCCATGGACATTTGAGCAACAT CGTGGTGAGGCTATCTTCATTCCGGCTGGATGTCCGTTCCAAATCACTAATCTTCAGTCGAATATT CAGGTGGCACTTGACTTCTTGTGCCCTGAAAGCGTTGGAGAGTCAGCAAGACTAGCTGAAGAAATC CGGTGTTTACCAAACGACCACGAGGCAAAACTTCAGATTCTAGAGATTGGAAAGATATCATTATAC GCAGCTAGCTCAGCCATTAAAGAGGTTCAGAAACTGGTCTTGGATCCAAAGTTTGGAGCAGAGCTT GGATTTGAAGACTCTAACTTAACCAAAGCAGTCTCTCACAACTTAGACGAGGCAACCAAGCGGCCG CAGCAAAACAGCTGCACTTAA
SEQ ID NO: 98, Proteína - Ajcabidopsis thaliana
MNANEQTRSANGIGNGNGESIPGIPDDLRCKRSDGKQWRCTAMSMADKTVCEKHYIQAKKRAANSA FRANQKKAKRRSSLGETDTYSEGKMDDFELPVTSIDHYNNGLASASKSNGRLEKRHNKSLMRYSPE TPMMRSFSPRVAVDLNDDLGRDWMFEEGYRSYRTPPSVAVMDPTRNRSHQSTSPMEYSAASTDVS AESLGEICHQCQRKDRERIISCLKCNQRAFCHNCLSARYSEISLEEVEKVCPACRGLCDCKSCLRS DNTIKVRIREIPVLDKLQYLYRLLSAVLPVIKQIHLEQCMEVELEKRLREVEIDLVRARLKADEQM CCNVCRIPWDYYRHCPNCS YDLCLRCCQDLREES SVTISGTNQNVQDRKGAPKLKLNFS YKFPEW EANGDGSIPCPPKEYGGCGSHSLNLARIFKMNWVAKLVKNAEEIVSGCKLSDLLNPDMCDSRFCKF AEREESGDNYVYSPSLETIKTDGVAKFEQQWAEGRLVTVKMVLDDSSCSRWDPETIWRDIDELSDE KLREHDPFLKAINCLDGLEVDVRLGEFTRAYKDGKNQETGLPLLWKLKDWPSPSASEEFIFYQRPE FIRSFPFLEYIHPRLGLLNVAAKLPHYSLQNDSGPKIYVSCGTYQEISAGDSLTGIHYNMRDMVYL LVHTSEETTFERVRKTKPVPEEPDQKMSENESLLSPEQKLRDGELHDLSLGEASMEKNEPELALTV NPENLTENGDNMESSCTSSCAGGAQWDVFRRQDVPKLSGYLQRTFQKPDNIQTDFVSRPLYEGLFL NEHHKRQLRDE FGVE PWTFEQHRGEAIFIPAGC PFQITNLQSNIQVALDFLCPE SVGE SARLAEEI RCLPNDHEAKLQILEIGKISLYAASSAIKEVQKLVLDPKFGAELGFEDSNLTKAVSHNLDEATKRP QQNSCT
SEQ ID NO: 99, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGAATGCTAATGAGCAAACTCGATCCGCCAATGGCATTGGCAATGGCAATGGTGAGTCTATTCCC GGGATTÇCAGATGACTTACGGTGCAAGAGATCGGATGGTAAACAGTGGAGATGCACTGCAATGTCC ATGGCTGATAAGACTGTTTGTGAGAAGCACTACATCCAAGCAAAGAAGCGGGCGGCTAATTCTGCT TTCAGGGCGAACCAGAAGAAAGCGAAAAGGCGATCATCGTTAGGCGAAACAGATACGTATTCGGAA GGGAAGATGGATGATTTCGAGTTACCAGTCACCAGCATTGACCACTATAATAACGGTCTTGCCTCT GCTTCCAAGAGTAATGGTAGACTAGAGAAGAGACATAATAAAAGCCTGATGCGGTACTCGCCCGAG ACACCGATGATGAGGAGTTTCTCTCCACGTGTTGCAGTGGATTTGAATGATGACTTGGGTAGAGAT GTTGTAATGTTTGAAGAGGGCTACAGATCTTATAGGACACCACCATCTGTTGCTGTTATGGATCCG ACACGAAACAGATCACACCAAAGCACCAGTCCTATGGAATACTCAGCAGCAAGCACAGATGTGTCT GCAGAGTCTTTGGGGGAAATCTGCCATCAATGCCAGAGAAAAGATAGAGAGAGAATCATTTCTTGC CTCAAATGCAATCAAAGAGCCTTCTGCCACAATTGTCTATCGGCAAGGTACTCGGAGATATCACTT GAAGAAGTCGAGAAAGTTTGCCCTGCATGTCGTGGCTTGTGTGATTGCAAATCTTGCCTGCGTTCA GATAATACAATAAAGGTTCGGATCCGGGAAATACCCGTTTTGGACAAGTTGCAGTATCTTTATCGT CTATTATCAGCTGTCCTACCAGTCATAAAGCAGATCCATCTTGAACAATGTATGGAAGTTGAACTA GAGAAGAGGCTTCGTGAAGTTGAGATTGATCTTGTCAGGGCAAGATTGAAAGCAGATGAGCAGATG TGCTGCAACGTGTGTCGGATACCAGTTGTTGACTACTACCGTCACTGTCCGAACTGCTCATATGAC CTTTGCCTGAGATGCTGTCAAGATCTACGGGAAGAGTCTTCAGTGACGATTAGTGGGACTAACCAA AACGTACAAGATAGAAAAGGAGCTCCCAAACTAAAACTAAACTTTTCATACAAGTTTCCTGAGTGG
FIGURA 10 CONT. GAAGCCAACGGTGATGGGAGCATCCCTTGCCCTCCTAAGGAGTATGGAGGCTGCGGTTCACATTCT TTGAATCTTGCCCGCATTTTCAAGATGAATTGGGTTGCAAAGCTTGTGAAAAATGCTGAGGAGATT GTTAGTGGCTGCAAATTATCTGATCTTCTGAACCCTGATATGTGTGATTCAAGATTCTGCAAATTT GCTGAGAGAGAAGAGAGCGGTGACAACTACGTGTACAGCCCGTCGCTTGAAACGATTAAAACTGAT GGAGTAGCTAAGTTTGAGCAACAATGGGCAGAGGGTCGGCTTGTTACTGTGAAAATGGTACTTGAT GACTCATCTTGCTCTAGATGGGATCCTGAGACTATTTGGAGGGATATAGACGAGCTTTCGGACGAG AAACTGAGAGAACATGATCCATTCTTGAAGGCCATTAATTGCTTGGATGGTTTAGAGGTTGATGTA AGACTTGGGGAGTTTACAAGAGCATATAAAGATGGAAAGAACCAAGAGACAGGTCTTCCGCTATTG TGGAAGTTAAAGGACTGGCCGAGCCCAAGTGCTTCCGAGGAGTTCATTTTCTACCAAAGACCTGAG TTTATCAGAAGTTTTCCGTTTCTCGAGTACATTCATCCCCGGTTAGGCCTTCTGAATGTTGCAGCC AAGTTACCTCATTACTCGCTCCAAAACGATTCAGGTCCAAAGATTTATGTGTCTTGTGGGACGTAC CAAGAAATCAGTGCTGGCGATTCATTGACTGGTATTCACTACAACATGCGTGACATGGTATACCTA TTGGTGCACACGTCTGAAGAAACAACATTCGAAAGGGTGAGAAAAACAAAACCTGTTCCAGAGGAA CCTGACCAGAAGATGAGCGAAAATGAGTCACTTCTTAGCCCTGAGCAGAAATTAAGGGACGGAGAG TTACATGATCTATCACTTGGTGAAGCCAGTATGGAGAAGAATGAACCTGAGTTGGCGTTGACTGTG AATCCAGAGAACTTAACGGAAAACGGTGACAACATGGAATCTTCTTGCACATCTTCATGTGCAGGA GGAGCCCAGTGGGATGTCTTTCGACGCCAAGACGTCCCAAAGTTGTCCGGGTATTTGCAGAGAACA TTCCAGAAGCCTGATAATATCCAGACTGATTTTGTGTCACGCCCGTTGTATGAAGGATTGTTCTTA AATGAACACCACAAGAGACAACTAAGAGACGAGTTTGGAGTTGAGCCATGGACATTTGAGCAACAT CGTGGTGAGGCTATCTTCATTCCGGCTGGATGTCCGTTCCAAATCACTAATCTTCAGTCGAATATT CAGGTGGCACTTGACTTCTTGTGCCCTGAAAGCGTTGGAGAGTCAGCAAGACTAGCTGAAGAAATC CGGTGTTTACCAAACGACCACGAGGCAAAACTTCAGATTCTAGAGATTGGAAAGATATCATTATAC GCAGCTAGCTCAGCCATTAAAGAGGTTCAGAAACTGGTCTTGGATCCAAAGTTTGGAGCAGAGCTT GGATTTGAAGACTCTAACTTAACCAAAGCAGTCTCTCACAACTTAGACGAGGCAACCAAGCGGCCG CAGCAAAACAGC TGCAC TTAA
SEQ ID NO: 100, Proteína - Arabidopsis thaliana
MNANEQTRSANGIGNGNGESIPGIPDDLRCKRSDGKQWRC TAMSMADKTVCEKHYIQAKKRAANSA FRANQKKAKRRSSLGETDTYSEGKMDDFELPVTSIDHYNNGLASASKSNGRLEKRHNKSLMRYSPE TPMMRSFSPRVAVDLNDDLGRDWMFEEGYRSYRTPPSVAVMDPTRNRSHQSTSPMEYSAASTDVS AESLGEICHQCQRKDRERIISCLKCNQRAFCHNCLSARYSEISLEEVEKVCPACRGLCDCKSCLRS DNTIKVRIREIPVLDKLQYLYRLLSAVLPVIKQIHLEQCMEVELEKRLREVEIDLVRARLKADEQM CCNVCRIPWDYYRHCPNCSYDLCLRCCQDLREESSVTISGTNQNVQDRKGAPKLKLNFSYKFPEW EANGDGSIPCPPKEYGGCGSHSLNLARIFKMNWVAKLVKNAEEIVSGCKLSDLLNPDMCDSRFCKF AEREESGDNYVYSPSLETIKTDGVAKFEQQWAEGRLVTVKMVLDDSSCSRWDPETIWRDIDELSDE KLREHDPFLKAINCLDGLEVDVRLGEFTRAYKDGKNQETGLPLLWKLKDWPSPSASEEFIFYQRPE FIRSFPFLEYIHPRLGLLNVAAKLPHYSLQNDSGPKIYVSCGTYQEISAGDSLTGIHYNMRDMVYL LVHTSEETTFERVRKTKPVPEEPDQKMSENESLLSPEQKLRDGELHDLSLGEASMEKNEPELALTV NPENLTENGDNMESSCTSSCAGGAQWDVFRRQDVPKLSGYLQRTFQKPDNIQTDFVSRPLYEGLFL NEHHKRQLRDEFGVEPWTFEQHRGEAIFIPAGCPFQITNLQSNIQVALDFLCPESVGESARLAEEI RCLPNDHEAKLQILEIGKIS LYAAS SAIKEVQKLVLDPKFGAELGFE DSNLTKAVSHNLDEATKRP QQNSCT
SEQ ID NO: 101, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGCAGGTCAATTTTGATGAAACTTGTGATTCAGTGATTAGAATGAATGCTAATGAGCAAACTCGA TCCGCCAATGGCATTGGCAATGGCAATGGTGAGTCTATTCCCGGGATTCCAGATGACTTACGGTGC AAGAGATCGGATGGTAAACAGTGGAGATGCACTGCAATGTCCATGGCTGATAAGACTGTTTGTGAG AAGCACTACATCCAAGCAAAGAAGCGGGCGGCTAATTCTGCTTTCAGGGCGAACCAGAAGAAAGCG
FIGURA 10 CONT. AAAAGGCGATCATCGTTAGGCGAAACAGATACGTATTCGGAAGGGAAGATGGATGATTTCGAGTTA CCAGTCACCAGCATTGACCACTATAATAACGGTCTTGCCTCTGCTTCCAAGAGTAATGGTAGACTA GAGAAGAGACATAATAAAAGCCTGATGCGGTACTCGCCCGAGACACCGATGATGAGGAGTTTCTCT CCACGTGTTGCAGTGGATTTGAATGATGACTTGGGTAGAGATGTTGTAATGTTTGAAGAGGGCTAC AGATCTTATAGGACACCACCATCTGTTGCTGTTATGGATCCGACACGAAACAGATCACACCAAAGC ACCAGTCCTATGGAATACTCAGCAGCAAGCACAGATGTGTCTGCAGAGTCTTTGGGGGAAATCTGC CATCAATGCCAGAGAAAAGATAGAGAGAGAATCATTTCTTGCCTCAAATGCAATCAAAGAGCCTTC TGCCACAATTGTCTATCGGCAAGGTACTCGGAGATATCACTTGAAGAAGTCGAGAAAGTTTGCCCT GCATGTCGTGGCTTGTGTGATTGCAAATCTTGCCTGCGTTCAGATAATACAATAAAGGTTCGGATC CGGGAAATACCCGTTTTGGACAAGTTGCAGTATCTTTATCGTCTATTATCAGCTGTCCTACCAGTC ATAAAGCAGATCCATCTTGAACAATGTATGGAAGTTGAACTAGAGAAGAGGCTTCGTGAAGTTGAG ATTGATCTTGTCAGGGCAAGATTGAAAGCAGATGAGCAGATGTGCTGCAACGTGTGTCGGATACCA GTTGTTGACTACTACCGTCACTGTCCGAACTGCTCATATGACCTTTGCCTGAGATGCTGTCAAGAT CTACGGGAAGAGTCTTCAGTGACGATTAGTGGGACTAACCAAAACGTACAAGATAGAAAAGGAGCT CCCAAACTAAAACTAAACTTTTCATACAAGTTTCCTGAGTGGGAAGCCAACGGTGATGGGAGCATC CCTTGCCCTCCTAAGGAGTATGGAGGCTGCGGTTCACATTCTTTGAATCTTGCCCGCATTTTCAAG ATGAATTGGGTTGCAAAGCTTGTGAAAAATGCTGAGGAGATTGTTAGTGGCTGCAAATTATCTGAT CTTCTGAACCCTGATATGTGTGATTCAAGATTCTGCAAATTTGCTGAGAGAGAAGAGAGCGGTGAC AACTACGTGTACAGCCCGTCGCTTGAAACGATTAAAACTGATGGAGTAGCTAAGTTTGAGCAACAA TGGGCAGAGGGTCGGCTTGTTACTGTGAAAATGGTACTTGATGACTCATCTTGCTCTAGATGGGAT CCTGAGACTATTTGGAGGGATATAGACGAGCTTTCGGACGAGAAACTGAGAGAACATGATCCATTC TTGAAGGCCATTAATTGCTTGGATGGTTTAGAGGTTGATGTAAGACTTGGGGAGTTTACAAGAGCA TATAAAGATGGAAAGAACCAAGAGACAGGTCTTCCGCTATTGTGGAAGTTAAAGGACTGGCCGAGC CCAAGTGCTTCCGAGGAGTTCATTTTCTACCAAAGACCTGAGTTTATCAGAAGTTTTCCGTTTCTC GAGTACATTCATCCCCGGTTAGGCCTTCTGAATGTTGCAGCCAAGTTACCTCATTACTCGCTCCAA AACGATTCAGGTCCAAAGATTTATGTGTCTTGTGGGACGTACCAAGAAATCAGTGCTGGCGATTCA TTGACTGGTATTCACTACAACATGCGTGACATGGTATACCTATTGGTGCACACGTCTGAAGAAACA ACATTCGAAAGGGTGAGAAAAACAAAACCTGTTCCAGAGGAACCTGACCAGAAGATGAGCGAAAAT GAGTCACTTCTTAGCCCTGAGCAGAAATTAAGGGACGGAGAGTTACATGATCTATCACTTGGTGAA GCCAGTATGGAGAAGAATGAACCTGAGTTGGCGTTGACTGTGAATCCAGAGAACTTAACGGAAAAC GGTGACAACATGGAATCTTCTTGCACATCTTCATGTGCAGGAGGAGCCCAGTGGGATGTCTTTCGA CGGCAAGACGTCCCAAAGTTGTCÇGGGTATTTGCAGAGAACATTCCAGAAGCCTGATAATATCCAG ACTGATTTTGTGTCACGCCCGTTGTATGAAGGATTGTTCTTAAATGAACACCACAAGAGACAACTA AGAGACGAGTTTGGAGTTGAGCCATGGACATTTGAGCAACATCGTGGTGAGGCTATCTTCATTCCG GCTGGATGTCCGTTCCAAATCACTAATCTTCAGTCGAATATTCAGGTGGCACTTGACTTCTTGTGC CCTGAAAGCGTTGGAGAGTCAGCAAGACTAGCTGAAGAAATCCGGTGTTTACCAAACGACCACGAG GCAAAACTTCAGATTCTAGAGATTGGAAAGATATCATTATACGCAGCTAGCTCAGCCATTAAAGAG GTTCAGAAACTGGTCTTGGATCCAAAGTTTGGAGCAGAGCTTGGATTTGAAGACTCTAACTTAACC AAAGCAGTCTCTCACAACTTAGACGAGGCAACCAAGCGGCCGCAGCAAAACAGCTGCACTTAA
SEQ ID NO: 102, Proteína - Arabidopsis thaliaoa
MQ VNFDETCDSVIRMN ANEQTRS ANGIGNGNGESIPGIPDDLRCKRSDGKQWRCTAMSMADKTVCE KHYIQAKKRAANSAFRANQKKAKRRSSLGETDTYSEGKMDDFELPVTSIDHYNNGLASASKSNGRL EKRHNKSLMRYSPETPMMRSFSPRVAVDLNDDLGRDWMFEEGYRSYRTPPSVAVMDPTRNRSHQS TSPMEYSAASTDVSAESLGEICHQCQRKDRERIISCLKCNQRAFC HNCLS ARYSEISLEEVE KVC P ACRGLCDCKSCLRSDNTIKVRIREIPVLDKLQYLYRLLSAVLPVIKQIHLEQCMEVELEKRLREVE IDLVRARLKADEQMCCNVCRIPWDYYRHCPNCSYDLCLRCCQDLREESSVTISGTNQNVQDRKGA PKLKLNFSYKFPEWEANGDGSIPCPPKEYGGCGSHSLNLARIFKMNWVAKLVKNAEEIVSGCKLSD
FIGURA 10 CONT. LLNPDMCDSRFCKFAEREESGDNYVYSPSLETIKTDGVAKFEQQWAEGRLVTVKMVLDDSSCSRWD PETIWRDIDELSDEKLREHDPFLKAINCLDGLEVDVRLGEFTRAYKDGKNQETGLPLLWKLKDWPS PSASEEFIFYQRPEFIRSFPFLEYIHPRLGLLNVAAKLPHYSLQNDSGPKIYVSCGTYQEISAGDS LTGIHYNMRDMVYLLVHTSEETTFERVRKTKPVPEEPDQKMSENESLLSPEQKLRDGELHDLSLGE ASMEKNEPELALTVNPENLTENGDNMESSCTSSCAGGAQWDVFRRQDVPKLSGYLQRTFQKPDNIQ TDFVSRPLYEGLFLNEHHKRQLRDEFGVEPWTFEQHRGEAIFIPAGCPFQITNLQSNIQVALDFLC PESVGESARLAEEIRCLPNDHEAKLQILEIGKISLYAASSAIKEVQKLVLDPKFGAELGFEDSNLT
KAVSHNLDEATKRPQQNSCT
SEQ ID NO: 103, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGAGGGTGAAGTTGCTACTAACGGAGTGATTCTCAAGCATAATGGTGTAAAGGATATTTCTTTA
GAAACTTGTTGGCCAGAGAAGAAGAAACCGGTTGAGGCAACGAGTCTTAGCAGTGGTTCATCAGAC
ATAGAAGAAGAGATTAGTGTGGAATGTCCTAAGCGAGTGGCTAATCAAAGACGGAAACGGTCTAAA
GCTGATGAGATTAAAACGAAATCTTCAAGAAAGAGGAAATGTGATGATGAGAACAAGTGTGAAGAG
AATGAGAAGAAGCAGAGGAGCTCTGTTAAAAAGAGAGCAACTACATGGAAAGAAGAAGAAGTTGTT
GTTGATGATGAAAAGAAATGCGAACAACAACTCCAACTAGTTCCTTCCAGCAAGGCAACATCTCGA
AGCAGGAGCAAGAAATCAGTCAGTGTGGATACTTGGTTGGTTAACAACGAGATTGATGTTAGCGCT
TTGAGTTCGCGTTCTGAGTCTGAACTTTCGGATTCTTATCTGAAAACCGAGTACTTTAATGACTGC
AGAAGCATGACAAGGAGTTTAAAGGCAAATTTGGGAGAGCTTGCAATTTGCCATCAATGCTCTAAA
GGGGAAAGAAGATATCTTTTCATTTGCACCTTTTGTGAAGTGAGGTTGTATTGTTTTCCATGCATA
AAGAAATGGTATCCCCATTTGTCCACGGATGATATCCTTGAAAAATGTCCCTTTTGCCGAGGAACT
TGCAACTGCTGCACATGTTTGCACTCTAGTGGTTTAATCGAGACATCTAAGAGAAAGCTCGATAAA
TACGAAAGATTTTATCATCTTCGCTTCTTGATTGTGGCGATGCTTCCTTTCCTGAAAAAGTTATGC
AAAGCACAAGATCAAGAAATCGAAACCGAGGCTAAGGTTCAAGATTCAATGGCTTCTCAAGTTGAT
ATATCCGAGAGTCTATGCTCAAATGAAGAGCGTGTCTTCTGTAACCACTGTGCAACATCAATTGTT
GACTTGCATCGAAGCTGTCCAAAGTGTTCATATGAATTGTGTCTGAACTGTTGCCAAGAGATCCGT
GGAGGTTGGCTTTCTGACCGCCCGGAATGTCAGCTACAATTCGAGTACAGAGGGACCCGGTATATA
CATGGCGAAGCTGCAGAACCGAGCTCTTCTTCTGTTTCCGAGGATGAAACTAAAACTCCATCCATC
AAGTGGAATGCTGATGAAAATGGAAGCATACGGTGTGCGCCAAAAGAGCTAGGAGGTTGCGGGGAC
TCTGTGCTGGAGCTTAAGCGAATCTTACCAGTGACTTGGATGTCAGATTTGGAGCAAAAGGCAGAA
ACATTCTTAGCCTCTTATAGTATCAAACCGCCAATGTCATATTGTAGATGTTCTTCTGATATGAGT
AGTATGAAGAGGAAGGCAGCTTCGAGGGACGGATCTAGTGACAATTACCTTTATTCTCCTGATTCT
TTGGATGTCCTGAAGCAAGAAGAACTTCTGCATTTCCAAGAGCATTGGTCCAAAGGTGAACCAGTG
ATTGTTCGAAATGCTCTTAACAACACAGCTGGTTTAAGCTGGGAGCCAATGGTGATGTGGCGGGCT
TTATGTGAGAATGTTGATTCAGCAATTAGCTCTAATATGTCTGATGTCAAAGCTATCGATTGTTTA
GCTAATTGTGAGGTGAAGATAAATACTCTATGTTTCTTTGAAGGATATAGCAAAGGAAGAACATAT
GAAAACTTCTGGCCTGAGATGCTGAAGCTGAAGGATTGGCCTCCTTCAGACAAGTTTGAAAACCTT
TTACCTCGTCACTGCGATGAGTTCATTTCCGCATTACCATTTCAAGAATACAGCGATCCTAGATCA
GGAATTCTCAACATTGCTACAAAACTTCCTGAAGGACTTCTTAAACCAGATCTTGGTCCAAAAACT
TATGTTGCATATGGGACTTCAGATGAGCTCGGTAGAGGAGATTCAGTCACTAAGCTTCACTGTGAT
ATGTCAGATGCTGTAAGTTTCAGAATTGTTAATATTCTGATGCATACTGCTGAAGTAACACTAAGT
GAGGAGCAAAGGTCTGCAATTGCAGATTTGAAACAGAAACATAAGCAACAGAATGAGAAAGAGCTT
CAGGAGCAAAATGGTTTAGAGGAAGAAGAGGTTGTGAGTGATGAGATTGTGGTTTATGATGAAACA
AGTGGTGCACTTTGGGACATCTTTAAAAGAGAAGATGTTCCTAAGCTTGAAGAGTATCTAAGGAAG
CATTGCATAGAATTCAGACATACTTATTGCTCTCGTGTTACAAAGGTGTATCATCCAATACATGAT
C AGTCAT ATTTCTTAACCGTGGAGCATAAAAGAAAACTCAAGGCAGAATTTGGGATTGAGCCATGG
ACATTTGTGCAAAAGCTAGGAGAAGCAGTGTTTATTCCAGCAGGTTGTCCTCATCAAGTTCGGAAT
FIGURA 10 CONT. CTCAAGTCGTGCACAAAGGTAGCTGTTGATTTTGTTTCCCCTGAAAACATCGATGAGTGTCTCCGT TTGACTGATGAGTTTCGACAACTCCCTAAGAACCATAAAGCCAGAGAAGACAAACTTGAGATAAAA AAGATGGTGATCTATGCAGTTGAACAAGCTCTGAAAGAAGTGGAGACATTATTGCTAGATCGCAGC TAA
SEQ ID NO: 104, Proteína " Acabidopsis thaliana
MEGEVATNGVILKHNGVKDISLETCWPEKKKPVEATSLSSGSSDIEEEISVECPKRVANQRRKRSK ADEIKTKS SRKRKCDDENKCEENEKKQRSSVKKRATTWKEEEVWDDEKKCEQQLQLVPSSKATSR SRSKKSVSVDTWLVNNEIDVSALSSRSESELSDSYLKTEYFNDCRSMTRSLKANLGELAICHQCSK GERRYLFICTFCEVRLYCFPCIKKWYPHLSTDDILEKCPFCRGTCNCCTCLHSSGLIETSKRKLDK YERFYHLRFLIVAMLPFLKKLCKAQDQEIETEAKVQDSMASQVDISESLCSNEERVFCNHCATSIV DLHRSCPKCSYELCLNCCQEIRGGWLSDRPECQLQFEYRGTRYIHGEAAEPSSSSVSEDETKTPSI KWNADENGSIRCAPKELGGCGDSVLELKRILPVTWMSDLEQKAETFLASYSIKPPMSYCRCSSDMS SMKRKAASRDGSSDNYLYSPDSLDVLKQEELLHFQEHWSKGEPVIVRNALNNTAGLSWEPMVMWRA LCENVDSAISSNMSDVKAIDCLANCEVKINTLCFFEGYSKGRTYENFWPEMLKLKDWPPSDKFENL LPRHCDEFISALPFQEYSDPRSGILNIATKLPEGLLKPDLGPKTYVAYGTSDELGRGDSVTKLHCD MSDAVSFRIVNILMHTAEVTLSEEQRSAIADLKQKHKQQNEKELQEQNGLEEEEWSDEIWYDET SGALWDIFKREDVPKLEEYLRKHCIEFRHTYCSRVTKVYHPIHDQSYFLTVEHKRKLKAEFGIEPW TFVQKLGEAVFIPAGCPHQVRNLKSCTKVAVDFVSPENIDECLRLTDEFRQLPKNHKAREDKLEIK KMVIYAVEQALKEVETLLLDRS
SEQ ID NO: 105, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGAAAATCCTCCATTAGAATCTGAGATCAAAGAGGATATGTCTTTGAAGAATCATCCTCCAGAC
AAGGATAAGGACAAAGACACTATCATGGAACAACCTAGTAGTCCACGTCATCGGAAGGTTGTTGCT
AGATGGTTACCTGATGAAGCACAGAGGCCAATTATCAATGACGCTCCCGTATTCACTCCATCACTA
GAGGAGTTTGTAGATCCACTTGCGTATATCGAGAAGATACGTCCACTAGCAGAGCCGTATGGTATC
TGTCGAATCATCCCACCATCGACATGGAAGCCTCCTTGCCGGCTTAAGGAGAAGAGTATATGGGAG
CAGACAAAGTTTCCTACTCGGATTCAAACCGTAGACCTGCTTCAGAACCGTGAGCCGATGAAGAAG
AAACCGAAGAGTAGAAAGCGGAAACGGAGAAGAAACTCGAGAATGGGTTCGTCTAAGAGACGATCT
GGTTCTTCTCCCGCTGAATCGACTTCATCACCCGAGGCTGAGGAGAAGTTTGGTTTCAATTCTGGT
TCAGACTTCACTCTTGATGAGTTTGAGAAATATGCTCTGCATTTTAAAGACTCGTACTTTGAAAAG
AAAGACTCTGGTGGAGATATAGTAAAATGGACACCGTCTGTGGATGATATAGAAGGGGAATACTGG
CGGATAGTTGAGCAACCAACAGATGAAGTGGAGGTTTACTATGGAGCTGACTTGGAGAATGGGGTG
CTTGGAAGCGGGTTTTATAAAAGAGCCGAGAAGTTTACCGGTAGCGATATGGAGCAGTACACATTA
TCTGGCTGGAACTTGAATAACTTACCACGGCTTCCTGGCTCTGTACTCTCTTTTGAAGATTGTGAC
ATATCCGGAGTTCTAGTTCCATGGCTATATGTGGGAATGTGTTTTTCATCATTTTGTTGGCATGTG
GAGGACCATCATTTATATTCACTTAACTATCATCACTTTGGGGAGCCAAAAGTATGGTATGGTGTT
CCAGGAAGCAATGCAACCGCTCTCGAGAAGGCGATGAGGAAACATTTACCTGACTTGTTCGAAGAC
AGCCTGATCTACTACATGGCCTGGGCGTATCATGCTGGATTCAACTGCGGTTTCAACTGCGCAGAA
GCGGTTAATGTGGCTCCGGTTGATTGGTTGGCTCATGGACAGAACGCTGTGGAACTATATAGTAAA
GAGACAAGGAAGACTTCTCTGTCTCACGACAAGCTTCTTCTTGGAGCAGCTTATGAAGCGGTGAAG
GCTCTTTGGGAACTCTCAGCTTCTGAGGGAAAGGAAAATACAACAAATTTGAGATGGAAGAGTTTC
TGTGGGAAGAACGGGACACTTACCAACGCGATACAAGCTCGGTTACAAATGGAAGAGGGGAGAATT
ACAGCTCTTGGTAGGGATTCTTCAAGCTTGAAGAAGATGGAGAAGGACTTTGATTCAAACTGTGAA
AGGGAATGTTTCTCATGCTTTTATGATTTGCATCTCTCGGCTTCTGGCTGCAAGTGCTCTCCCGAA
GAATACGCGTGCCTTAAACATGCAGATGATCTTTGTTCATGTGATGTGAAAGATGGATTTATTCTT
CTCCGGTACACAATGGATGAGTTAAGCTCGTTGGTCAGAGCATTGGAAGGGGAATCAGATGATTTA
AAGATATGGGCTTCCAAGGTTTTAGGCATTGAACATAGTGATGAAGATCAGACAAAGACTAGTTCA
FIGURA 10 CONT. GTTATCAGTGAGGAGAAGAAGTTAAAGGAAGGTTCTTTTGATCTGAACATTGACTTAGAGATGGAT TATCAAGAAGACGTTAAAGAAGAAGCCAGCACTAGTGGCGGCGAGTTAACCGCCTCAGAGAACCTT GGTGTATCGGTCGAGCCTATAAACCTCGGGTTCTTGATTTTTGGAAAGCTTTGGTGCAATAAGTAT GCTATATTCCCAAAAGGATTCAGGAGTCGTGTCAAGTTCTACAATGTTCTTGATCCAACAAGAATG AGCAATTACATCTCTGAGGTTTTGGATGCAGGACTCATGGGTCCATTGTTCAGGGTTACTCTGGAA GAATCTCCAGACGAGAGCTTCTTCAATGTCTCTGCACAACAATGCTGGGAAATGGTGATGCGGAGA GTTAAAGATACATCAACAAGTCTTGGTCTTCCTATTTTACCACAGTTTGAGAGTATCAACGGGCTT CAAATGTTTGGTTTCCTCTCACCCTCTATAGTTCAGGCCATTGAAGCTCTTGACCCAAACCATCGA CTAGTTGAGTACTGGAACCACAAGAACCAAACTTCATCAGACTCAAAAGATCACTTCATATCATCA AACTGTTCCGCAAGTTTAACCAAAGGAAAACTTTTCGGAGTAGATTTGATGTAA
SEQ ID NO: 106, Proteína - Arabidopsis thaliana
MENPPLESEIKEDMSLKNHPPDKDKDKDTIMEQPSSPRHRKWARWLPDE AQRPIINDAPVFTPSL EEFVDPLAYIEKIRPLAEPYGICRIIPPSTWKPPCRLKEKSIWEQTKFPTRIQTVDLLQNREPMKK KPKSRKRKRRRNSRMGSSKRRSGSSPAESTSSPEAEEKFGFNSGSDFTLDEFEKYALHFKDSYFEK KDSGGDIVKWTPSVDDIEGEYWRIVEQPTDEVEVYYGADLENGVLGSGFYKRAEKFTGSDMEQYTL SGWNLNNLPRLPGSVLSFEDCDISGVLVPWLYVGMCFSSFCWHVEDHHLYSLNYHHFGEPKVWYGV PGSNATALEKAMRKHLPDLFEDSLIYYMAWAYHAGFNCGFNCAEAVNVAPVDWLAHGQNAVELYSK ETRKTSLSHDKLLLGAAYEAVKALWELSASEGKENTTNLRWKSFCGKNGTLTNAIQARLQMEEGRI TALGRDSSSLKKMEKDFDSNCERECFSCFYDLHLSASGCKCSPEEYACLKHADDLCSCDVKDGFIL LRYTMDELSSLVRALEGESDDLKIWASKVLGIEHSDEDQTKTSSVISEEKKLKEGSFDLNIDLEMD YQEDVKEEASTSGGELTASENLGVSVEPINLGFLIFGKLWCNKYAIFPKGFRSRVKFYNVLDPTRM SNYISEVLDAGLMGPLFRVTLEESPDESFFNVSAQQCWEMVMRRVKDTSTSLGLPILPQFESINGL QMFGFLSPSIVQAIEALDPNHRLVEYWNHKNQTSSDSKDHFISSNCSASLTKGKLFGVDLM
SEQ ID NO: 107, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGATTCTGGAGTTAAATTGGAGCATATGAATTGTTTCCAATTATCTTATCAATATTCGTGGACG ACTAGGAAGAAGAGAACTCTGAAACCATTCATGTCAAAAGGTTCTAGCCCTAGTAGTAGTAGTGAT AGTAGGAAACGGAAGCTTTCGAGAGCTGAAGATAGCGATGATTCAGCGGTTAAACGGAATGCGAAA CGAAGGAGAAAGATATGCAAAGTAGAAGAATATTATGAAGATGATGATTGCATATTAAGTGATTGG GTTCAGAGGAATACTGCGAAAAGGATTGATAAGCGCAACGAAGAAGTTGAAGTTATGGTTAAGATA GAGTCAGGTGATGATTGCACAATAGGTAAGTGGTTTTCTGATGTTAGTAGTAAAAGGAAAGATAAA CGACAAGTAGAAGTTGATGAAGATGAGGAATGGGAAGAAGAAGTTACACTGTGTTCTAAGATCAAG GCAACGTCGTCGCGAAGCAGAACCCATAGTTTAAGTGCTAACAGTCCAGAAAATGTTACAGATGTT ATTAGTCCTTGTCGTTCACGGTCTCCAGCTTCTAATGTATCAGATTCCATTCAGAAAAATGACTGC ACCAGTAGTAGAAAACAGAGTGGCCCAATTTGTCATCAGTGCTTGAAAGGGGAAAGGATAACACTT CTCATTTGTAGTGAATGTGAGAAGACAATGTTTTGTCTTCAATGTATAAGGAAATGGTATCCAAAT CTATCTGAGGATGATGTTGTTGAGAAATGTCCTTTATGCCGTCAAAATTGTAATTGTAGCAAATGC TTGCATTTGAATGGTTTAATTGAGACATCGAAGAGGGAACTCGCGAAATCTGAAAGACGTCATCAT CTCCAGTATTTGATTACGTTGATGCTTCCTTTTCTGAATAAGTTATCCATATTCCAGAAGCTAGAG ATTGAATTTGAGGCAACTGTTCAAGGAAAACTGCCTTCTGAAGTTGAAATAACTGCGGCTATAAGC TACACTGATGAACGTGTATACTGTGATCATTGTGCAACTTCAATTGTTGACTTGCATCGAAGCTGT CCAAAGTGCTCTTATGAACTTTGTTTGAAGTGCTGTCAAGAGATTCGTGAAGGATCGCTTTCTGAA CGCCCTGAAATGAAGTTCCATTATGTTGATAGAGGACATCGATATATGCATGGTTTAGATGCTGCG GAACCGAGCTTGTCTTCCACTTTTGAAGACGAAGAAGCTAACCCATCTGACGCTAAGTGGAGCCTT GGTGAAAATGGAAGCATCACTTGTGCACCAGAAAAGCTAGGTGGTTGTGGTGAACGGATGCTAGAG CTTAGGCGGATCCTACCACTCACGTGGATGTCAGATTTAGAGCACAAAGCAGAGACTTTCTTATCA TCATACAATATAAGCCCTAGAATGTTGAACTGTAGGTGTTCTTCTTTGGAGACAGAGCTGACAAGG
FIGURA 10 CONT. AAATCAGCTTCGAGGACAACATCAAGTGACAACTACCTTTTCTGTCCTGAATCTCTCGGTGTCTTG AAGGAAGAAGAGCTTCTTCATTTTCAAGAGCATTGGGCAAAAGGCGAACCAGTAATCGTTAGGAAC GCTCTTGACAACACACCTGGTTTAAGCTGGGAGCCGATGGTTATGTGGCGGGCTTTATGCGAAAAT GTGAATTCAACATCAAGCTCTGAGATGTCCCAAGTCAAAGCAATTGATTGCTTAGCTAATTGTGAG GTGGAGATCAATACTCGTCAGTTCTTTGAAGGTTATAGCAAAGGAAGAACATATGAAAATTTCTGG CCTGAGATGTTGAAGCTTAAGGACTGGCCTCCTTCTGATAAGTTTGAAGATCTTCTACCTCGTCAC TGTGATGAGTTCATATCCGCGTTACCTTTCCAGGAATATAGTGATCCTAGAACTGGAATTCTTAAC ATTGCAACAAAGCTTCCTGAAGGATTTATCAAACCAGATTTAGGTCCAAAAACTTACATCGCCTAT GGGATTCCAGATGAGCTTGGTAGAGGCGATTCCGTGACTAAGCTTCACTGCGATATGTCAGACGCG GTGAATATTCTAACGCATACGGCCGAAGTGACCCTAAGTCAAGAACAAATATCCTCAGTCAAAGCA CTGAAACAGAAACACAAGTTACAGAATAAGGTCGATAAACAGAGTACTGAAGACTGTAACGAAAAG GAAGAAGAAGAAGAAGAAGAATTGAACATGCCAGAGATTTCGAGCAATGAAAATGAAGAAACGGGC AGTGCTCTTTGGGACATATTTAGGAGAGAAGACGTTCCCAAGTTAGAAGAGTATCTAAGAAAGCAT TGCAAAGAATTTAGACACACTTATTGTAGTCCAGTTACAAAGGTTTATCATCCGATACATGACCAA TCATGCTATTTAACCTTAGAGCACAAAAGAAAACTCAAGGCGGAATATGGGATCGAGCCATGGACA TTTGTGCAAAAGCTAGGTGAAGCGGTGTTTATTCCCGCGGGTTGTCCTCATCAAGTTCGGAATCTA AAGTCGTGCACAAAAGTCGCAGTTGACTTTGTGTCACCAGAGAACATCCATGAGTGTCTGCGTTTG ACCGAAGAGTTTCGCCAACTTCCCAAAAACCACAAGGCCAGAGAGGACAAACTCGAGGCAAGTCTT TTATCTCTTTGA
SEQ ID NO: 108, Proteína - Arabidopsis thaliana
MDSGVKLEHMNCFQLSYQYSWTTRKKRTLKPFMSKGSSPSSSSDSRKRKLSRAEDSDDSAVKRNAK RRRKICKVEEYYEDDDCILSDWVQRNTAKRIDKRNEEVEVMVKIESGDDCTIGKWFSDVSSKRKDK RQVEVDEDEEWEEEVTLCSKIKATSSRSRTHSLSANSPENVTDVISPCRSRSPASNVSDSIQKNDC TSSRKQSGPICHQCLKGERITLLICSECEKTMFCLQCIRKWYPNLSEDDWEKCPLCRQNCNCSKC LHLNGLIETSKRELAKSERRHHLQYLITLMLPFLNKLSIFQKLEIEFEATVQGKLPSEVEITAAIS YTDERVYCDHCATSIVDLHRSCPKCSYELCLKCCQEIREGSLSERPEMKFHYVDRGHRYMHGLDAA EPSLSSTFEDEEANPSDAKWSLGENGSITCAPEKLGGCGERMLELRRILPLTWMSDLEHKAETFLS SYNISPRMLNCRCSSLETELTRKSASRTTSSDNYLFCPESLGVLKEEELLHFQEHWAKGEPVIVRN ALDNTPGLSWEPMVMWRALCENVNSTSSSEMSQVKAIDCLANCEVEINTRQFFEGYSKGRTYENFW PEMLKLKDWPPSDKFEDLLPRHCDEFISALPFQEYSDPRTGILNIATKLPEGFIKPDLGPKTYIAY GIP DELGRGDSVTKLHCDMS DAVNILTHTAEVTLSQEQIS SVKALKQKHKLQNKVDKQ S TEDCNEK EEEEEEELNMPEISSNENEETGSALWDIFRREDVPKLEEYLRKHCKEFRHTYCSPVTKVYHPIHDQ SCYLTLEHKRKLKAEYGIEPWTFVQKLGEAVFIPAGCPHQVRNLKSCTKVAVDFVSPENIHECLRL TEEFRQLPKNHKAREDKLEASLLSL
SEQ ID NO: 109, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGTATGGTAATGACTTGGATACTTCTGTTTACGGGAGTGGTTTTCCTCGAATAGGCGACCAAAGA CCAGAATCAGTTGAGGCAGATATATGGGATGAGTATTGTGGTAGCCCCTGGAATCTCAATAACATG CCTAAGTTGAAAGGATCTATGCTTCAGGCCATTCGACATAACATTAATGGTGTTACAGTGCCTTGG CTATATCTTGGAATGCTCTTCTCTTCTTTTTGTTGGCATTTTGAGGACCATTGTTTTTACTCTGTC AATTATCTACACTGGGGAGAGGCAAAATGTTGGTATGGTATTCCAGGCAGTGCTGCTAGTGCTTTT GAAAAGGTCATGCGAAAAACCCTACCCGATCTCTTTGATGCTCAGCCAGATTTGCTCTTTCAACTA GTTACCATGTTGAGTCCGACTGTTTTACAAGAAAATAAAGTCCCGGTCTACACAGTATTACAGGAG CCAGGAAACTTCGTGATCACATTTCCAAAATCCTTTCATGCTGGATTCAATTTTGGTCTAAATTGT GCAGAGGCCGTCAACTTTGCTACTGCTGATTGGCTACCTTATGGTGGTTCTGGGGCGGAGCTGTAT CGGCTGTACCGGAAACCTTCAGTCATATCTCATGAAGAGCTTCTCTGCGTGGTAGCTAAGGGAAAC TGCTGCAATAACGAAGGGTCAATACATTTGAAGAAAGAATTGCTCAGAATATACAGCAAGGAAAAA
FIGURA 10 CONT. ACCTGGAGAGAGCAGCTCTGGAAAAGTGGTATTTTGAGATCTTCTCCTATGTTTGTGCCTGAATGC
GCTGATTCTGTGGGCATCGAAGAGGATCCAACATGCATCATATGCCAGCAGTTTCTTCATCTTTCT
GCTATCGTCTGCAATTGCAGGCCATCTGTTTTTGCATGCTTAGAGCACTGGAAGCATCTTTGTGAA
TGTGAACCTACGAAGTTGCGACTTGAATATCGTTATACCCTTGCCGAGTTAGATATGATGGTACAA
GAAGTTGAAAAGTTTGGTGGGTGCAAAACACAAGAAACCAAAATCTCACAACGGCCGAGTTCAGGC
ACCAAACGATCTATTGCTTTAAATAAAAAGCAGGAGGGAATGCAAGTGAGTCAGGCACGGCCAGCA
GACAAATGGCTTCTTAGAGCATCAAAGGTTCTTGACGCTGCGTTTTCTAGTGTTGAATATGCCACC
CTTTTGAAGGAATCAGAACAGTTTCTTTGGGCTGGATCAGAAATGGACCGTGTACGAGATGTTACA
AAAAGTTTGAACAAAGCAAAGATATGGGCTGAAGCTGTTAGTGACTGTCTTTCAAAAGTCGAAGGT
GAAGTCAACGATGATTCAATGAAAGTTCACTTGGAATTTATTGATGAGTTGCTGAGAGTTAATCCT
GTTCCTTGCTTTAATTCTGGTTATCTGAAACTAAAGGACTATGCTGAAGAAGCTAGAAAATTGTCC
GAGAAAATCGATTCAGCTCTCTCGAGTAGCCCAACTATCACCCAGCTGGAGCTATTGCATTCTGAA
GTCTCCAGATCGCCAATCTCCCTAAAAAAACACGAGATCTTGTCAAAGAAAATCTCTTCCGCAAAG
ATGTTAGCTAAAAGGGCGAAACGCTATCTCACAGACGCTAAACCTCCAGGAATTGAAATGGATGCA
CTTTTCAAGCTAAATTCAGAGATGTTAGAGCTTCATGTTCAACTTCCAGAAACAGAAGGGATTCTG
GATTTGGTAAAGAAATCAGAATCAGCCCGTGATAAAAGTAACAAAGTTTTGACTGGTTCTTTATCT
CTCGAGAATGTGGAAGAGTTGCTTCATGAATTCGATAGTTTCAGCATTAACGTTCCTGAGTTGAAT
ATCCTGAGGCAGTATCATGTTGACACTTTGTCTTGGATTTCACGCTTTAATGATGTAATGGTTGAT
GTTCGTGAAGGCAAGGACCAACGAAAGCTAATTAGTGACCTCAGTTCCCTTCTACGGGATGGAGCA
TCCTTAGGCATTCAAGTTGAAGGACTCCCTCTTGTTGAAGTTGAATTGAAGAAGGCATCTTGCCGG
GAAAAAGCTCGAACGGTTTATACTGCAAGAAAATCTCTGGATTTCATTGAGCAACTGCTCTCGGAA
GCTGTTATACTACACATCGAAGAGGAGGAGATATTTGTTGAGATCTCGGGAATTTTGTCAACAGCA
CGGTGTTGGGAGGAAAGAGCAAGCACTATCCTTGAAAATGAAACTCAGATGTACGAGCTTAAAGAT
CTCGTAAGGATGTCAGTCAACATTGATGCGGTTTTACCTACTCTGCAAGGCATAGAGAACACAATC
TCGTCGGCTGAAACTTGGCTTCAGAAATCTGAGCCTTTTCTATCAGCCACTTCCTCTATGGCATCA
TCTCCATGTTCTATGCTTGAACTTCCTGTATTAAAGGATCTAGTTACTCAGGCTAAATTGCTCAAT
GTTCAGCTTCAAGAGCCACGAATTCTTGAAACATTGTTGCTTAACTGCGAGAGGTGGCAGTGTGAT
AATCATCAGCTCTTGCAAGAAACTGAAGATTTGTTGGACAATGCGAAAATAGATGATGGCACGCAT
AGCAATATCCTTCCGAAGATAATGGATTTGATAACCAGAGTGGACTCCGCTAGGAGATCTGGTCTG
GCCCTTGGTCTCAATTTCGATGAACTTCCCAAACTTCGAACTGCAAGTCTAAAACTAGGATGGTGT
TGTAAGACCATCACGTTAAGCTCTAGCTCACCTACCTCTGAGTTGCTAGAAGATGTTGGAAAGCCC
TCGTTACAGCATATTCAGCAGCACTTAAAAGAGGGACAAACACTTGAAATATTACCTGAAGAGTAT
TACTTAGGCAAGAGACTCATGGAGTTAAAAGACACTGGACTGGAGTGGGCAAAACGAGCTAGAAAG
GTGGTAACAGACTCAGGTGCTCTTGCCTTGGAAGATGTTTTCGAGCTTATTTCTGAGGGTGAAAAC
TTACCTGTTCATGCAGAGCAGGAACTTCAGTCTTTACGAGCTCGGAGTATGTTACACTGCATTTGT
CTAAAGCCATACAACTCAAGATCCATGGTTTCTTGTAGTCAATGTGGCGAATGGTATCACACCTAT
TGTTTAAAGCTTCATTGGCGGCCTAAGGCTTATGTCTGCTCCGCTTGCTGTCCACTGGCAGAAACC
ACTCCACAGATCGATCCCGCCAGAGCAACAGAGCCAGAGAGACCGTCTCTGAACCAAAGACGGACA
AGAATGGTCGCGACTGATGCAGCAGTTAATGACTTAAAGTGGAAAACCCGAAAACACATCAAACGG
ACAACTAAACGGAGTCCTCAGGTTCATATTCTTCCCTGGTTTTTCACTTAA
SEQ ID NO: 110, Proteína ~ Arabidopsis thaliana
MYGNDLDTS VYGSGFPRIGDQRPESVEADIWDEYCGS PWNLNNMPKLKGSMLQAIRHNINGVTVPW LYLGMLFSSFCWHFEDHCFYSVNYLHWGEAKCWYGIPGSAASAFEKVMRKTLPDLFDAQPDLLFQL VTMLSPTVLQENKVPVYTVLQEPGNFVITFPKSFHAGFNFGLNCAEAVNFATADWLPYGGSGAELY RLYRKPSVISHEELLCWAKGNCCNNEGSIHLKKELLRIYSKEKTWREQLWKSGILRSSPMFVPEC ADSVGIEEDPTCIICQQFLHLSAIVCNCRPSVFACLEHWKHLCECEPTKLRLEYRYTLAELDMMVQ EVEKFGGCKTQETKISQRPSSGTKRSIALNKKQEGMQVSQARPADKWLLRASKVLDAAFSSVEYAT
FIGURA 10 CONT. LLKESEQFLWAGSEMDRVRDVTKSLNKAKIWAEAVS DCLSKVEGEVNDDSMKVHLEFIDELLRVNP VPCFNSGYLKLKDYAEEARKLSEKIDSALSSSPTITQLELLHSEVSRSPISLKKHEILSKKISSAK MLAKRAKRYLTDAKPPGIEMDALFKLNSEMLELHVQLPETEGILDLVKKSESARDKSNKVLTGSLS LENVEELLHEFDSFSINVPELNILRQYHVDTLSWISRFNDVMVDVREGKDQRKLISDLSSLLRDGA SLGIQVEGLPLVEVELKKASCREKARTVYTARKSLDFIEQLLSEAVILHIEEEEIFVEISGILSTA RCWEERASTILENETQMYELKDLVRMSVNIDAVLPTLQGIENTISSAETWLQKSEPFLSATSSMAS SPCSMLELPVLKDLVTQAKLLNVQLQEPRILETLLLNCERWQCDNHQLLQETEDLLDNAKIDDGTH SNILPKIMDLITRVDSARRSGLALGLNFDELPKLRTASLKLGWCCKTITLSSSSPTSELLEDVGKP SLQHIQQHLKEGQTLEILPEEYYLGKRLMELKDTGLEWAKRARKWTDSGALALEDVFELISEGEN LPVHAEQELQSLRARSMLHCICLKPYNSRSMVSCSQCGEWYHTYCLKLHWRPKAYVCSACCPLAET TPQIDPARATEPERPSLNQRRTRMVATDAAVNDLKWKTRKHIKRTTKRS PQVHILPWFFT
SEQ ID NO: 111, DNA - Acahidopsis thaliana
ATGACGACGTTAGGACAAAGAGATCGCCGACCAGATGCTCTCGGTAGTCTCAGTGTTCTACCAGAT
GAGACCATCTGTGTTCTTCTCGAATACCTTGCTCCCCGAGATATTGCTCACCTCGCTTGTGTCAGC
AGTGTGATGTATATTCTATGTAATGAAGAACCATTGTGGATGAGTTTGTGTCTCAGAAGAGCAAAA
GGTCCTCTTGAATACAAAGGTTCTTGGAAAAAAACAACATTGCATCTAGAAGGAGTTACTCAAGAA
AATGACGCATACAGAAAATGTTTTCATTTTGATGGATTCATGTCGTTGTACTTGTATAAACGATTC
TATAGGTGTAATACATCTCTTGACGGGTTCTCTTTTGATAATGGGAATGTGGAACGTAGGAGAAAT
ATCTCCTTGGATGAGTTTTCTAAGGAATACGACGCCAAGAAACCTGTTTTGCTTTCTGGCCTTGCT
GATTCTTGGCCAGCCAGTAATACGTGGACTATCGACCAACTCTCAGAGAAATATGGTGAAGTCCCG
TTTAGAATATCTCAGAGGAGCCCCAACAAAATTTCCATGAAGTTCAAGGATTACATCGCATATATG
AAAACTCAGCGGGATGAAGATCCTCTATACGTTTTCGATGACAAGTTTGGAGAAGCTGCTCCAGAA
TTATTGAAAGACTATAGTGTGCCCCATTTGTTTCAAGAAGATTGGTTTGAGATCTTAGACAAGGAA
AGTCGTCCTCCATACAGATGGCTTATAGTTGGTCCGGAGAGGTCTGGTGCATCTTGGCATGTTGAC
CCAGCTCTTACCAGCGCCTGGAACACCCTGCTTTGCGGTCGGAAAAGGTGGGCATTGTATCCCCCT
GGAAAAGTGCCTCTAGGTGTTACAGTCCATGTCAATGAAGATGAGGGTGATGTCAGCATTGATACA
CCCTCATCTCTGCAGTGGTGGCTAGACTATTATCCCCTTCTTGCGGACGAAGACAAACCGATTGAG
TGCACACTACTACCTGGCGAAACGATTTATGTTCCAAGTGGTTGGTGGCACTGTATCCTTAATCTT
GAACCAACAGTGGCTGTTACCCAGAATTTTGTGAACAAAGAAAACTTTGGGTTCGTGTGCTTGGAT
ATGGCGCCTGGTTACCATCACAAAGGAGTTTGCCGTGCTGGGCTTCTTGCTCTTGATGATGAAAAT
TCTGAAGATTTGGAAGAAGAAACACACGATGAAGAAGATAATACTTTGAGCTATTCAGACCTTACC
AGGAAAGAGAAGAGGACACGGATGAATGGAGGTGGAGAGACTGAAAACCGCGAAGAGGÁTGTGAAT
GGAGT ATCGAAGAGATAT AAT ATGTGGAAGAATGGATTTTCATATGATATCGATTTCCTCGCTTCA
TTTCTTGATAAAGAAAGAGATCATTACAATTTCCCATGGTCAATGGGGAACTCTGTAGGCCAACGA
GAAATGAGAGCCTGGCTATCCAAGCTTTGGGTTCTGAAGCCTGAGATGAGAGAACTAATATGGAAG
GGAGCATGCATTGCTTTAAATGCTGAGAAATGGTTGCGATGCCTAGAGGAAGTATGTACTTTCCAC
AACTTGCCGTTGGTTACCGAAGATGAAAAGCTTCCAGTTGGAACTGGCAGCAACCCTCTTGAGTTT
TATGACATTCTTGGCCGGGCTGATTCTCCTTTGAAAACACATATTCCTGAAGTTCTAGCAAGCGGG
ATTCTTTTCTTCGAAAAAGGATCTTACAAAGTTGTCCCTTGGGATGGCAAGAGAATCCCAGATATT
ATCTCTAGCTCCAGTTTCGATTTTGATGCATCCATGTTAAACAGCGAATTCCCATTTGGTATTTGG
AATAAAACGCTACGTGAACATAAAAACCAGGGGAAGCCAGCACCCGATTCTTTTGGTTCATTGAGT
TCACATGTTTGGCCATATATTATAACCAAAAGATGCAAAGGGAAGATTTTTGCCCAACTAAGAGAT
GATCTAACCTGGAAÇGACGCTCAGAACCTGGCTTTCTTTCTCGGACAACAACTACGCAACCTTCAT
CTACTTCCATATCCACCGGTCACACGTCCGGAGTTGTTGAATGTGAATGCTGTTCATGAGGAGTTG
AACATTCCAGCAGAATGGAAAGTTTTTGTCGATGCTCTGTGCCAAAAGAAGAAGGACGTCACTAGT
CGTCTGGAAAACTGGGGAAATCCGATACCTCGGGCTCTGATGACCAAGATAGACGAATACATTCCC
GATGACTTTTTTGTAGATTTACTCCACGTCTTCAAGGAGACAAATGGTGGAGATGAAATCAAGCCC
FIGURA 10 CONT. TGCACCTGGATACACTCAGACGTAATGGATGACAACATTCACATGGAACCATACGCAGATGATTCA GTTGATGGTCAACACAACTCATGGCGTCCCAGTCATATTCTTGACTTCAGCGATTTAACCATAGGA GATCCCATCTGCGACTTGATACCAATATACTTGGACT3TCTTTAGAGGAGACGCTGATCTTCTTAAG AAGCTTCTAGAAAATTATGGACTTCCATTAATCAGAAGTAGATCTTCAGAGAACGGAACAACAAAA ACAGCAGACAGTACGAGGAAGAAAGTATTGTCTCCATCCTACCGTACAATGTGTTACTGTATATTA CATGAAGAAAATGTGTTGGGTTCAATATTCAGTATTTGGGACGAACTTCGGACTGCTGAATCATGG GAACAAGTTGAGCAAACTGTTTGGAGTCTACTTAACACCTACTAA
SEQ ID NO: 112, Proteína - Arabidopsis thaliana
MTTLGQRDRRPDALGSLSVLPDETICVLLEYLAPRDIAHLACVSSVMYILCNEEPLWMSLCLRRAK GPLEYKGSWKKTTLHLEGVTQENDAYRKCFHFDGFMSLYLYKRFYRCNTSLDGFSFDNGNVERRRN ISLDEFSKEYDAKKPVLLSGLADSWPASNTWTIDQLSEKYGEVPFRISQRSPNKISMKFKDYIAYM KTQRDEDPLYVFDDKFGEAAPELLKDYSVPHLFQEDWFEILDKESRPPYRWLIVGPERSGASWHVD PALTSAWNTLLCGRKRWALYPPGKVPLGVTVHVNEDEGDVSIDTPSSLQWWLDYYPLLADEDKPIE CTLLPGETIYVPSGWWHCILNLEPTVAVTQNFVNKENFGFVCLDMAPGYHHKGVCRAGLLALDDEN SEDLEEETHDEEDNTLSYSDLTRKEKRTRMNGGGETENREEDVNGVSKRYNMWKNGFSYDIDFLAS FLDKERDHYNFPWSMGNSVGQREMRAWLSKLWVLKPEMRELIWKGACIALNAEKWLRCLEEVCTFH NLPLVTEDEKLPVGTGSNPLEFYDILGRADS PLKTHIPEVLASGILFFEKGSYKWPWDG KRIPDI ISSSSFDFDASMLNSEFPFGIWNKTLREHKNQGKPAPDSFGSLSSHVWPYIITKRCKGKIFAQLRD DLTWNDAQNLAFFLGQQLRNLHLLPYPPVTRPELLNVNAVHEELNIPAEWKVFVDALCQKKKDVTS RLENWGNPIPRALMTKIDEYIPDDFFVDLLHVFKETNGGDEIKPCTWIHSDVMDDNIHMEPYADDS VDGQHNSWRPSHILDFSDLTIGDPICDLIPIYLDVFRGDADLLKKLLENYGLPLIRSRSSENGTTK TADSTRKKVLSPSYRTMCYCILHEENVLGSIFSIWDELRTAESWEQVEQTVWSLLNTY
SEQ ID NO: 113, DNA - Acabidopsxs thaliana
ATGGAGCCTTTCAGTGCTGCTCAGAACAAAGAGGACAAGGACACTAGCGTAGAACCTCCTCGTAGG
CGTTGTCATCGAAAGAACAAGGGCACTAATGTAGAACCTCCTAGTAGTCCGTATCATCCGAAGGTT
CTTGCTAGATGGGATCCGGCTAATGAAAAGAGGCCAGACATTGGTGAAGCTCCAGTATTCCACCCT
ACATCAGAGGAGTTTGAAGATACGCTTGCTTACATAGAAAAAATACGTCCCTTAGCTGAATCATTT
GGTATTTGTCGAATCGTGCCACCGTCGAATTGGTCTCCTCCTTGCCGGCTTAAAGGGGATAGTATA
TGGAAGAATAAAAATTTCCCAACCCGTGTTCAGTTTGTTGACCTGCTTCAGAACAGAGGACCCGTG
AAGAAGAAGACACCTAAAGGAAGGAAACGGAAACGAGGAAAATACTCAAGAACCGTCGCCCCCAAG
AAACGAAATGGCTCTGTTTCTAAATCAGTTTCTACCCCCAAGGCGACCGAAGAAGAGAATTTTGGT
TTCGAATCTGGTCCAGAATTTACTCTTGAGAAGTTTGAGAAATACGCTCAAGATTTCAAAGACTCC
TACTTTGAAAGAAAAGACAATGTTGGAGATCCATCTGTTGAGGAGATCGAAGGAGAGTACTGGAGA
ATCATTGAGAAAGAAACAAATGAAGTTAAGGTATTGTATGGGACGGATTTGGAGAATCCCATACTT
GGAAGCGGTTTCTCCAAAGGGGTAAAAATTCCAACCAGAAGAAATGATATGGATAAATACATATCT
TCTGGTTGGAATTTGAACAACCTCGCCCGTCTGCAGGGATCTCTACTATCCTTTGAGGATTGTGAG
ATCTCAGGGGTTCAGGTGCCATGGCTCTATGTGGGCATGTGCTTTTCAACGTTTTGTTGGCATGTT
GAGGACAATCATCTATATTCACTGAACTATCATCACTTTGGCGAGCCAAAAGTATGGTACGGAGTT
CCGGGAAGCCATGCAACTGGGCTAGAGAAGGCAATGAGAAAACATCTACCAGATTTGTTCGATGAA
CAACCTGATCTACTTCATGAACTGGTTACTCAGTTTTCTCCAACGATTTTGAAAAATGAGGGAGTC
CCGGTTTATCGAGCTGTTCAGAATGCAGGGGAGTATGTTCTAACATTCCCTAGAGCATATCATTCG
GGTTTCAACTGCGGATTCAACTGTGCAGAAGCGGTGAATGTGGCTCCGGTTGATTGGCTGGCTCAT
GGACAGAATGCTGTGGAAATATATAGCCAAGAGACTCGGAAAACGTCTCTATCTCATGACAAAATT
CTCCTTGGAGCAGCTTTTGAAGCTGTTAAGTCCCTCTCAGCACATGGGGAAGATAATACAAAAAGG
TTCAGCTGGAAGAGATTCTGTGGGAAGGACGGTATCATAACTAAGGCCATCGAGGCACGGTTACGG
FIGURA 10 CONT. ATGGAAGAAAAAAGAATTGAGGCTCTTGGAAATGGTTTCAGCTTGGTAAAGATGGATAAAGACTTT GATTCAAACTGTGAAAGGGAATGCATCTCTTGCTTTAGTGACTTGCATCTCTCTGCTACTGGCTGC AAGAATTGCTCATCTCTCGAAGAATATGGTTGCACGAAACACGATATTTGTTCATGTGAAGGGAAA GACCGTTTCATTTTTCTTCGTTACACCATAGATGAGTTAAGCTCATTGGTAAGAGCATTGGAAGGT GAATCAGATGATCTAAAAGCTTGGCTTTCCAAAGTCATGGAAGGTTGTTCAGAGACTCAGAAGGGA GAATCTAGTGGGATTATCGTTAAGGAAAAGCAGGTACAAGAAGAATGTTTTGATCTGAATGGTGAG TGTAATAAATCTTCTGAGATATGTGAGGATGCATCCATCATGGACTTAGCTGCTTATCATGTTGAA CCTATAAATCTTGGGTTCTTGGTCGTGGGAAAGCTTTGGTGTAACAAGCATGCTATATTTCCAAAA GGGTTTAAGAGTCGTGTTAAGTTCTATAACGTGCAAGATCCAATGAGAATAAGCTATTACGTCTCT GAGATTGTAGATGCAGGACTTCTGGGTCCACTCTTCAAGGTTACTTTGGAAGAATCTCAAGACGAG AGCTTCTCTTATGCCTCACCTCAGAAGTGCTGGGAAATGGTGTTGCTTAGAGTTAAGGAAGAGATC ATGAGACGCAGCAACCAAAAACAAGATGTCCATATGTTGGAAAGCATCGATGGGTTAAAAATGTTT GGCTTTCGCTCTCCGTTTATTGTTCAGGCCACTGAGGCTCTTGACCCGAACCATGGCCAAGTGGAG TATTGGAACCATAAGAATGAGAAGGATTCGCTGGAAATGAAAGATTGCTTCATGTCAAATTCTTCC CAGAGCTTAAGCAAAGCAAGACTTTTTGGGGTTGATTTGAATTGA
SEQ ID NO: 114, Proteína - Arabidopsis thaliana
MEPFSAAQNKEDKDTSVEPPRRRCHRKNKGTNVEPPSSPYHPKVLARWDPANEKRPDIGEAPVFHP TSEEFEDTLAYIEKIRPLAESFGICRIVPPSNWSPPCRLKGDSIWKNKNFPTRVQFVDLLQNRGPV KKKTPKGRKRKRGKYSRTVAPKKRNGSVSKSVSTPKATEEENFGFESGPEFTLEKFEKYAQDFKDS YFERKDNVGDPSVEEIEGEYWRIIEKETNEVKVLYGTDLENPILGSGFSKGVKIPTRRN DMDKYIS SGWNLNN LARLQGSLLSFE DCEISGVQVPWLYVGMCFSTFCWHVEDNHLYSLNYHHFGEPKVWYGV PGSHATGLEKAMRKHLPDLFDEQPDLLHELVTQFSPTILKNEGVPVYRAVQNAGEYVLTFPRAYHS GFNCGFNCAEAVNVAPVDWLAHGQNAVEIYSQETRKTSLSHDKILLGAAFEAVKSLSAHGEDNTKR FSWKRFCGKDGIITKAIEARLRMEEKRIEALGNGFSLVKMDKDFDSNCERECISCFSDLHLSATGC KNCSSLEEYGCTKHDICSCEGKDRFIFLRYTIDELSSLVRALEGESDDLKAWLSKVMEGCSETQKG ESSGIIVKEKQVQEECFDLNGECNKSSEICEDASIMDLAAYHVEPINLGFLWGKLWCNKHAIFPK GFKSRVKFYNVQDPMRISYYVSEIVDAGLLGPLFKVTLEESQDESFSYASPQKCWEMVLLRVKEEI MRRSNQKQDVHMLESIDGLKMFGFRSPFIVQATEALDPNHGQVEYWNHKNEKDSLEMKDCFMSNSS
QSLSKARLFGVDLN
SEQ ID NO: 115, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGGCATTGAAGGTGTATCAACGTATTTGAAATCTGGAAATATGGACACAATTTCTGCTCCGCCA GGTTTTGTATCTCAAACATCGTTTGTGCTGAGGAATGTACCCCGAGACAAAGAAAGTCCCAGGTCC GTGTCGAGACAAGAGCAGACAACTGGATTCGGCACAGATGATAAAGATAGTTGCAATATGTTTCTT AAAAGCCGACCGTGGATAGTGCATGGTCACACAATTCCCAGCTCAGAGGCCTTAAGGCCGAAAAAA ACTGAGGTACGGAGAAGACGGCCCCTCAAAGTGTCTGAGACCAAAGTCCTTGAGGAAGCTCCTGTG TTCAACCCAACCGAAGAGGAATTCAGGGACACACTCTCATATATATCAAGCTTGCGTGACAGAGCT GAGCCGTATGGAATCTGTTGTGTTGTTCCTCCACCTTCATGGAAACCTCCATGTCTTCTCAAGGAG AAACAAATATGGGAGGCTTCTACATTTTTCCCTCAAGTTCAGCTCTTTGGAATTCAGACCGAGAAC CGAAAGATTAAAAAGGAGGTTGATGCAGATAGTAATGATGCTGCATCTGAAGGGGTTCAGTTATGT AGAGTAGAACGTGGTCCTGGGTATACTTTGAAGTCCTTTAAAAACTTTGCAGATACATACAAGAAG AGTCATTTTGGCATGAAGGATGAGGTTTTGGGTTCAGAGAACTCATCTCCATCACTTAAACCAAAT GAGCTAATTGTGGCAGACATTGAAAAAGAGTACAGACAAATTGTTGAGAGTCCACTTATTGAAATT GGGGTGCTTTATGGCAATGATTTAGACACTGCAACGTTTGGAAGTGGATTTCCCTTATCTGCACCA TCTGAATCTAGCAAATATTCATCAGGTTGGAATCTGAACAGTACGGCTAAGCTTCCTGGTTCTCTT CTATCATTAGAAGACTGCGAATCAGTTTGTGTTCCTCGTCTAAGTGTAGGAATGTGCTTGTCTTCC CAGTTCTGGAAATCTGAGAAGGAGAGACTCTACTCTCTCTGCTATTTGCATGTGGGCGCTCCTAGA
FIGURA 10 CONT. GTGTGGTATTCCGTAGCAGGATGTCATCGATCAAAGTTTAAGGCTGCCATGAAAAGCTTCATCCTT GAGATGTCAGGAGAACAGCCAAAGAAGAGTCATAATCCTGTGATGATGATGTCTCCATATCAATTG AGCGTGGAGGGTATACCAGTGACCCGCTGTGTCCAGCACCCTGGCCAGTATGTTATTATATTTCCA GGGTCGTATTACTCTGCCTTTGACTGTGGCTTCAACTGTTTGGAGAAAGCAAACTTTGCTCCCCTT GATTGGTTGCCCCATGGGGATATTGCTGTTCAGGTGAATCAAGAGATGAGTAAAACGTCGCTGATA TCGTATGATAAGCTATTATTTAGTGCTGCAAGGGAAGCTGTAAAATGTCTTAAGGAATATGGGTTG TCGAAGAAAAACACAGCATGTTACACGAGATGGAATGATTCTTGTGGGACGGATGGGTTGTTCTCC AACATAATCAAGTCACGGATCAAACTGGAGAAAAATAGACGTGAATTTCTTATCAGTTCACTAGAA TCGCAAAGGATGGACAAGAGTTATGATGCTGTGAACAAAAGGGAATGCTGTGTATGTCTTGGGGAT TTGTATCTTTCCGCGGTTAACTGTTCATGCTCTGCTAATCGTTACTCGTGTCTGAACCACATGAGG AAGCTCTGTGCATGTCCGTGTGACAGAAAGAGTTTTCTCTATAGGTACACTATGGATGAGTTGAAT CTTCTCGTTGAAGCCCTGGAAGGTAAAAAGCTCAGCTCTATGTTCAGATGGGCAGGCATAGATCAA AAATTCTGTGCTTCTCCAGCCACCACAAGTTCAAAACCCGAAGAAGACAAAGGCAAGGAAACAGAT GAGGTTACACCCTGTAATATCACGAGGAAAGATGTCGCAGCTGGAACTAAGGACCAGACAAGAGTG AAGGCGAGATCTTTGGCTGATATACTGAATGTTAAAGATGGAAACAATGATGCAAAGGAGACTTTA GAATCTTGTTCTAAGAAATCAAACAGGCCATGCGATAACGATTCCTCTGAGGCCAACGCGCCAAAG
AAACAGAAGCAGTGA
SEQ ID NO: 116, Proteína - Arabidopsis thaliana
MGIEGVSTYLKSGNMDTISAPPGFVSQTSFVLRNVPRDKESPRSVSRQEQTTGFGTDDKDSCNMFL KSRPWIVHGHTIPSSEALRPKKTEVRRRRPLKVSETKVLEEAPVFNPTEEEFRDTLSYISSLRDRA EPYGICCWPPPSWKPPCLLKEKQIWEASTFFPQVQLFGIQTENRKIKKEVDADSNDAASEGVQLC RVERGPGYTLKSFKNFADTYKKSHFGMKDEVLGSENSSPSLKPNELIVADIEKEYRQIVESPLIEI GVLYGNDLDTATFGSGFPLSAPSESSKYSSGWNLNSTAKLPGSLLSLEDCESVCVPRLSVGMCLSS QFWKSEKERLYSLCYLHVGAPRVWYSVAGCHRSKFKAAMKSFILEMSGEQPKKSHNPVMMMSPYQL SVEGIPVTRCVQHPGQYVIIFPGSYYSAFDCGFNCLEKANFAPLDWLPHGDIAVQVNQEMSKTSLI SYDKLLFSAAREAVKCLKEYGLSKKNTACYTRWNDSCGTDGLFSNIIKSRIKLEKNRREFLISSLE SQRMDKSYDAVNKRECCVCLGDLYLSAVNCSCSANRYSCLNHMRKLCACPCDRKSFLYRYTMDELN LLVEALEGKKLSSMFRWAGIDQKFCASPATTSSKPEEDKGKETDEVTPCNITRKDVAAGTKDQTRV KARSLADILNVKDGNNDAKETLE SCSKKSNRPCDNDS SEANAPKKQKQ
SEQ ID NO: 117, DNA - Acabidopsis thaliana
ATGGATTCTGTGGAGGAAGAAGGTGTTGTTAGGGTTGAAGAAGAGAACGGACGCGGTGGTCTCCGT AGGCATCGGAGGGTTTCTACGAAGCTGGCGAATTACGTAGATCCTCCGACTGACGACGAAGAAGAT GGAGGACCCAAGCGAAAGGGCAAAAGGGGTGGAAATAGGGCTCCGAAAAAGACACCGAAGAAAGAC GAGGAGATGCAAAAGAACGAAATTGATGAAGCAAACCGAGTCACTGGTCTGGTGAAGGAAAAAAGA GCCGCGACTAAGATTCTGAATCGCAAAGACTCCATTATTGAAGTAGGAGAAGCTTCTGGAAGCATG CCCAAGGAAGTAAAGGGAATTAGGATTGGGAAAAGGAAGGGAGAAATCGATGGTGAGATTCCAACT AAGCCGGGCAAGAAGCCAAAGACTACAGTAGACCCGAGAATCATTGGTTACAGACCGGACAATATG TGCCATCAATGTCAAAAGAGCGATAGGATTGTTGAACGGTGTCAGACCTGCAATAGTAAGCGTTAT TGTCATCCATGCTTGGACACTTGGTACCCCCTTATAGCAAAAGAAGATGTTGCCAAGAAATGCATG TTCTGCTCTAGTACTTGCAATTGCAGAGCATGCTTGCGTCTAGATACTAAATTGAAAGGGATAAAT TCGAACCTCATAGTCAGCGAGGAAGAAAAGGTCCAAGCCTCTAAGTTTATTCTGCAGAGCCTTCTC CCACATCTGAAAGGAATAAATGATGAACAAGTTGCTGAGAAGGAAGTTGAGGCCAAAATATACGGA CTGAAGTTTGAAGAGGTGAGGCCCCAAGACGCTAAAGCTTTCCCTGATGAAAGACTATACTGTGAT ATCTGCAAGACTTCTATCTATGATCTCCATAGGAATTGCAAGTCCTGTAGTTTTGATATCTGCCTT AGCTGTTGCCTTGAGATCCGCAATGGAAAGGCTCTGGCATGTAAGGAGGATGTGTCTTGGAATTAT
FIGURA 10 CONT. ATTAACCGAGGTTTAGAGTATGAACATGGACAAGAAGGAAAAGTGATTGAAAAGCCGGCGAATAAG
CTAGATGATAAGTTGAAAGATAAGCTGGATGGTAAGCCGGATGATAAGCCGAAGGGTAAGCCAAAG
GGTAGGCCAAAGGGTAAGCCGGATGATAAGCCGAAGGGTAAACTGAAGGGTAAGCAGGATGATAAA
CCGGATGATAAGCCAGATGAGAAGCCGGTTAATACAGACCATATGAAGTACCCTTCTCTGTGGAAA
GCAAATGAAGCTGGGATCATTACTTGTTGTTGTGGTGCTGGGGAGTTAGTGCTGAAACGACTACTT
CCGGATGGTTGGATATCTGAGTTGGTCAACAGAGTTGAAAAAACTGCTGAAGCTGGCGAGCTTTTG
AATTTACCTGAAACGGTTTTGGAGCGATGCCCTTGTTCTAACTCTGACAGACATATTGACATAGAC
AGCTGTAATTTGTTAAAAGCTGCTTGTCGAGAAGGTTCAGAAGACAATTATCTTTACTCTCCAAGT
GTATGGGATGTTCAACAAGATGATTTGAAGCATTTTCAGCACCATTGGGTAAAAGGCGAGCCTGTG
ATTGTGAGAAATGTGCTTGAAGCTACATCTGGTTTAAGCTGGGAACCAATGGTAATGCATCGTGCC
TGCCGCCAGATAAGCCATGTCCAGCATGGATCACTTAAGGATGTTGTTGCTGTTGATTGTTTGGAC
TTCTGTGAGGTAAAAGTTAATCTTCATGAATTTTTTACTGGATACACGGATGGCCGATATGATCGA
ATGGGTTGGCCACTAGTTCTGAAACTGAAAGATTGGCCTCCAGCTAAAGTCTTCAAAGATAACTTG
CCACGTCATGCTGAGGAGTTCTTATGTAGTTTGCCTTTGAAGCATTACACTCATCCGGTTAATGGA
CCTTTGAATCTCGCTGTCAAGCTTCCCCAAAATTGCTTGAAGCCAGACATGGGACCAAAGACGTAC
GTTGCTTCTGGATTTGCTCAAGAATTAGGCCGTGGAGATTCTGTTACTAAGCTCCACTGCGACATG
TCTGATGCGGTGAATATTTTGACGCACATATCTGAAGTGCCCAATATGCAACCTGGAATTGGAAAT
CTGAAAAAGAAGCATGCCGAACAAGATCTCAAGGAGCTGTATAGCTCAGTAGCTAACAAGGAGGAA
ATGATGGAGATTCTTGAAAATTCCAGACAACAAGTCCAAAATGTTGAAACTGATGATGGAGCTCTT
TGGGACATTTTCCGTAGAGAAGATATTCCTAAATTAGAAAGTTACATTGAGAAACATCACAAGGAG
TTCAGACATCTCTACTGCTGTCCTGTGTCTCAGGTTGTTCATCCTATACATGACCAGAACTTCTAT
CTGACGCGGTATCATATAATGAAGCTGAAAGAAGAATATGGCATTGAACCTTGGACCTTCAATCAG
AAGCTTGGTGATGCTGTTTTGATACCTGTAGGTTGCCCTCATCAAGTTAGAAATTTGAAGTCCTGC
AATAAGGTAGCGCTTGACTTCGTCTCACCTGAAAATGTCAGCGAGTGTTTACGCTTGACAAAACAG
TATCGTCTACTTCCACCAAATCATTTTGCAAAAGAAGACAAGTTAGGGGTTAAGAAGATGATAGTC
CATGCAGTTGATAAAGCTCTCAGAGACTTAAGTGGAGAGAAGTCTCCAGAACCTGAAGAGAAGAAA
CAAAATATGAGAGGGCCGAAGAAGGGGGCAGCCAAGGCAGTTGCCAAGGCTCTCAAAGACTTATCT
CCAAGTGAAAAGAAGTCTTCGGAAGCAGCTGAAGAGGAGATATCAAATGGGATAGTCAATGCAATC
GATAAGGGTCTCAAAGACTTACCTCCAAGTGAAGAGAAGTCTTCCGAAGCCAAAGTGGAGATATCA
AATGGGATAGTCAGTGCAATGGATAAGGATCTCGAACACATATCTTCAAGCGAAAAGAAGTCTACG
GAAGAGGAAGGGGTGAAAAGACCAAATATTGTGAGGACATATGAGCGGAGAAAAAAGCTGGGAAGT
GAAGTAACCAACGCATACATTGACAGATTAGAAATGGAGAAGATGTAG
SEQ ID NO: 118, Proteína - Arabidopsis thaliana
MDSVEEEGWRVEEENGRGGLRRHRRVSTKLANYVDPPTDDEEDGGPKRKGKRGGNRAPKKTPKKD EEMQKNEIDEANRVTGLVKEKRAATKILNRKDSIIEVGEASGSMPKEVKGIRIGKRKGEIDGEIPT KPGKKPKTTVDPRIIGYRPDNMCHQCQKSDRIVERCQTCNSKRYCHPCLDTWYPLIAKEDVAKKCM FCSSTCNCRACLRLDTKLKGINSNLIVSEEEKVQASKFILQSLLPHLKGINDEQVAEKEVEAKIYG LKFEEVRPQDAKAFPDERLYCDICKTSIYDLHRNCKSCSFDICLSCCLEIRNGKALACKEDVSWNY INRGLEYEHGQEGKVIEKPANKLDDKLKDKLDGKPDDKPKGKPKGRPKGKPDDKPKGKLKGKQDDK PDDKPDEKPVNTDHMKYPSLWKANEAGIITCCCGAGELVLKRLLPDGWISELVNRVEKTAEAGELL NLPETVLERCPCSNSDRHIDIDSCNLLKAACREGSEDNYLYSPSVWDVQQDDLKHFQHHWVKGEPV IVRNVLEATSGLSWEPMVMHRACRQISHVQHGSLKDWAVDCLDFCEVKVNLHEFFTGYTDGRYDR MGWPLVLKLKDWPPAKVFKDNLPRHAEEFLCSLPLKHYTHPVNGPLNLAVKLPQNCLKPDMGPKTY VASGFAQELGRGDSVTKLHCDMSDAVNILTHISEVPNMQPGIGNLKKKHAEQDLKELYSSVANKEE MMEILENSRQQVQNVETDDGALWDIFRREDIPKLESYIEKHHKEFRHLYCCPVSQWHPIHDQNFY LTRYHIMKLKEEYGIEPWTFNQKLGDAVLIPVGCPHQVRNLKSCNKVALDFVSPENVSECLRLTKQ YRLLPPNHFAKEDKLGVKKMIVHAVDKALRDLSGEKSPEPEEKKQNMRGPKKGAAKAVAKALKDLS PSEKKSSEAAEEEISNGIVNAIDKGLKDLPPSEEKSSEAKVEISNGIVSAMDKDLEHISSSEKKST EEEGVKRPNIVRTYERRKKLGSEVTNAYIDRLEMEKM
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 119, DNA - AxabicLopsis thaliana
ATGGCGGTTTCAGAGCAGAGTCAAGATGTGTTTCCATGGCTTAAATCGTTACCGGTTGCTCCAGAG
TTCAGACCTACTCTAGCAGAGTTTCAAGATCCGATCGCTTACATTTTGAAGATTGAAGAAGAAGCT
TCTAGATATGGAATCTGTAAAATTCTGCCTCCACTGCCTCCTCCTTCCAAAAAAACCTCGATTTCT
AATCTCAACCGTTCTCTGGCGGCAAGAGCGGCGGCGAGGGTTCGTGACGGCGGCTTTGGCGCGTGT
GATTATGACGGTGGTCCCACATTCGCCACGCGCCAGCAGCAGATCGGGTTTTGCCCTAGGAAACAG
CGTCCAGTGCAGAGACCTGTGTGGCAGAGTGGAGAGGAGTACTCTTTTGGTGAGTTCGAGTTTAAA
GCTAAGAACTTTGAGAAGAATTATCTCAAGAAATGTGGTAAAAAGAGTCAACTCTCTGCCCTTGAA
ATTGAAACACTTTACTGGAGAGCCACTGTGGATAAACCCTTCTCTGTTGAGTATGCCAATGACATG
CCTGGCTCGGCTTTTATCCCTCTGAGTCTGGCTGCTGCGAGGAGGAGAGAGTCTGGTGGTGAAGGA
GGAACAGTTGGTGAGACCGCTTGGAACATGAGGGCAATGTCTAGAGCCGAAGGATCATTGCTTAAG
TTCATGAAGGAAGAGATCCCTGGAGTTACATCACCAATGGTGTATGTTGCTATGATGTTTAGTTGG
TTTGCTTGGCATGTGGAGGACCATGACCTTCATAGTCTCAATTACTTGCATATGGGTGCTGGTAAG
ACTTGGTACGGTGTGCCAAAGGATGCTGCTCTGGCTTTTGAGGAGGTTGTTAGGGTTCATGGTTAC
GGTGAAGAGCTCAATCCTCTTGTGACATTTTCTACTCTTGGTGAGAAGACAACTGTGATGTCTCCT
GAAGTATTTGTTAAAGCCGGAATACCGTGTTGCAGGTTAGTGCAAAATCCTGGAGAGTTTGTCGTC
ACCTTTCCGGGAGCTTATCATTCGGGATTTAGTCATGGATTTAATTTTGGAGAAGCATCTAACATT
GCCACTCCCGAATGGTTGAGAATGGCTAAAGATGCTGCTATCCGGCGAGCTGCTATAAATTACCCT
CCAATGGTTTCTCATCTCCAGCTACTTTATGACTTTGTATTGGCTCTAGGTTCTAGAGTGCCAACA
AGCATCAATCCCAAACCACGGAGTTCTAGATTAAAAGATAAGGCAAGAAGCGAAGGAGAAAGATTG
ACCAAAAAGCTATTTGTGCAAAACATTATCCACAACAACGAATTGCTTTCTTCTCTCGGAAAAGGA
TCCCCAGTGGCCCTTCTCCCACAGAGTTCCTCAGATATATCAGTTTGTTCTGACCTGCGAATTGGA
TCCCATTTGATAACCAACCAGGAAAACCCAATCCAGTTAAAGTGTGAGGACTTAAGTTCTGATAGT
GTTGTGGTTGATCTCAGTAACGGTTTAAAGGATACAGTTTCAGTGAAAGAAAAATTTACATCTTTA
TGTGAAAGGAGCAGAAATCACCTAGCAAGCACGGAGAAGGACACTCAAGAAACTCTGTCTGATGCT
GAAAGGAGGAAGAATGATGCAGCTGTTGCGCTTTCGGATCAAAGGCTTTTCTCTTGTGTTACATGT
GGAGTCTTAAGCTTTGATTGTGTAGCTATCGTTCAACCTAAAGAAGCAGCTGCTAGATATCTCATG
TCTGCAGATTGTAGCTTCTTCAATGATTGGACAGCTGCTTCTGGATCTGCAAATCTTGGTCAGGCT
GCAAGATCACTTCATCCTCAAAGCAAAGAGAAGCATGATGTAAATTACTTCTACAATGTTCCTGTT
CAAACTATGGATCATTCAGTGAAGACTGGCGATCAAAAAACTTCAACAACTTCCCCGACAATAGCG
CATAAAGATAATGATGTTCTTGGGATGTTAGCTTCAGCATATGGAGACTCTTCTGATTCCGAGGAA
GAAGATCAAAAAGGCTTAGTTACCCCTAGTTCCAAAGGGGAAACAAAAACGTATGATCAAGAAGGT
TCAGÁTGGCCATGAGGAGGCTAGAGATGGTAGAACTTCTGATTTTAACTGCCAGAGACTAACCAGC
GAACAGAATGGGTTAAGCAAAGGCGGAAAATCATCACTTCTGGAAATAGCTTTACCATTTATTCCA
AGATCTGATGACGATTCATGTCGGTTGCACGTGTTTTGTCTTGAGCATGCTGCGGAAGTGGAACAG
CAACTTCGTCCTTTTGGGGGGATTAACTTAATGTTACTGTGCCATCCAGAGTACCCCAGGATAGAG
GCTGAAGCAAAGATAGTTGCCGAAGAGCTCGTCATCAATCACGAATGGAATGATACTGAATTCAGG
AATGTGACCCGAGAGGATGAGGAAACGATTCAGGCAGCGTTGGATAATGTTGAAGCTAAGGGTGGG
AACAGTGATTGGACCGTAAAATTGGGTGTTAACCTTTCTTACAGCGCTATTCTCAGTCGCTCTCCT
CTGTACAGTAAGCAGATGCCGTATAACTCCATCATATACAAGGCGTTCGGTCGCAGCTCTCCAGTA
GCGAGCTCACCCTCGAAACCCAAAGTCTCTGGTAAAAGATCGTCCAGACAGAGGAAATATGTTGTT
GGAAAATGGTGTGGTAAGGTTTGGATGTCACATCAGGTGCATCCCTTTTTGCTGGAGCAGGACTTA
GAGGGGGAAGAATCTGAAAGAAGTTGTCATCTTCGAGTTGCTATGGATGAGGATGCCACTGGAAAG
AGATCGTTTCCTAATAATGTTTCCAGGGATTCGACAACAATGTTTGGAAGAAAGTATTGTAGGAAG
AGAAAGATAAGAGCAAAGGCGGTGCCACGCAAGAAGCTTACTTCTTTTAAGAGGGAAGATGGAGTT
TCTGATGACACATCAGAAGATCATTCTTATAAGCAGCAATGGAGGGCTTCCGGGAATGAGGAAGAG
TCTTATTTTGAGACAGGGAACACAGCTTCTGGTGATTCATCAAATCAAATGTCTGATCCGCACAAG
GGAATTATCAGACATAAAGGTTATAAAGAATTTGAGTCAGATGATGAGGTTTCAGACCGTTCACTT
FIGURA 10 CONT. GGGGAAGAGTATACTGTACGGGCATGTGCAGCTTCAGAGAGCTCAATGGAGAATGGCTCTCAGCAT TCAATGTATGACCATGATGATGATGATGATGATATCGACAGGCAGCCTAGGGGGATTCCAAGGAGC CAACAGACAAGAGTTTTTAGGAATCCAGTTTCATATGAGTCAGAAGATAATGGCGTTTATCAGCAA AGCGGAAGAATATCCATAAGTAATAGGCAAGCTAATCGAATGGTTGGTGAATATGATTCAGCAGAG AATTCTTTGGAGGAACGAGGCTTTTGCAGTACAGGGAAAAGGCAAACCAGGTCAACAGCCAAACGA ATAGCAAAAACCAAGACAGTTCAGAGTTCGAGAGACACAAAAGGTCGCTTTTTGCAAGAATTTGCA TCTGGAAAGAAGAATGAAGAATTGGATTCATACATGGAGGGACCTAGCACACGGCTTAGGGTGAGA CATCAGAAGCCGTCGAGAGGGTCTTTAGAAACAAAACCAAAGAAGATTGGTAAGAAGAGAAGTGGT AATGCTTCCTTCTCCAGAGTTGCAACTGAAAAAGATGTGGAGGAAAAAGAAGAAGAAGAAGAAGAA GAAGAGAATGAGGAAGAGGAATGTGCAGCATACCAATGTAACATGGAGGGTTGCACGATGAGTTTC AGTTCGGAAAAACAGTTGATGTTACACAAAAGAAACATATGCCCAATTAAAGGCTGTGGTAAAAAC TTCTTCTCACACAAGTATTTGGTTCAACACCAGCGTGTTCACTCAGACGACCGTCCTCTGAAATGT CCATGGAAGGGATGTAAGATGACGTTCAAGTGGGCTTGGTCTAGAACCGAGCACATAAGGGTTCAC ACAGGCGCTAGGCCTTATGTTTGCGCTGAACCGGATTGTGGTCAAACATTCAGGTTTGTCTCTGAC TTCAGCCGGCATAAAAGGAAGACCGGTCATTCGGTTAAGAAGACCAACAAAAGGTGA
SEQ ID NO: 120, Proteína - Arabidopsis thaliana
MAVSEQSQDVFPWLKSLPVAPEFRPTLAEFQDPIAYILKIEEEASRYGICKILPPLPPPSKKTSIS
NLNRS LAARAAARVRDGGFGAC D YDGG PT FATRQQQIG FC PRKQRPVQRPVWQS GEE Y S FGE FE FK
AKNFEKNYLKKCGKKSQLSALEIETLYWRATVDKPFSVEYANDMPGSAFIPLSLAAARRRESGGEG
GTVGETAWNMRAMSRAEGSLLKFMKEEIPGVTSPMVYVAMMFSWFAWHVEDHDLHSLNYLHMGAGK
TWYGVPKDAALAFEEWRVHGYGEELNPLVTFSTLGEKTTVMSPEVFVKAGIPCCRLVQNPGEFW
TFPGAYHSGFSHGFNFGEASNIATPEWLRMAKDAAIRRAAINYPPMVSHLQLLYDFVLALGSRVPT
SINPKPRSSRLKDKARSEGERLTKKLFVQNIIHNNELLSSLGKGSPVALLPQSSSDISVCSDLRIG
SHLITNQENPIQLKCEDLSSDSVWDLSNGLKDTVSVKEKFTSLCERSRNHLASTEKDTQETLSDA
ERRKNDAAVALSDQRLFSCVTCGVLSFDCVAIVQPKEAAARYLMSADCSFFNDWTAASGSANLGQA
ARSLHPQSKEKHDVNYFYNVPVQTMDHSVKTGDQKTSTTSPTIAHKDNDVLGMLASAYGDSSDSEE
EDQKGLVTPSSKGETKTYDQEGSDGHEEARDGRTSDFNCQRLTSEQNGLSKGGKSSLLEIALPFIP
RSDDDSCRLHVFCLEHAAEVEQQLRPFGGINLMLLCHPEYPRIEAEAKIVAEELVINHEWNDTEFR
NVTREDEETIQAALDNVEAKGGNSDWTVKLGVNLSYSAILSRSPLYSKQMPYNSIIYKAFGRSSPV
ASSPSKPKVSGKRSSRQRKYWGKWCGKVWMSHQVHPFLLEQDLEGEESERSCHLRVAMDEDATGK
RSFPNNVSRDSTTMFGRKYCRKRKIRAKAVPRKKLTSFKREDGVSDDTSEDHSYKQQWRASGNEEE
SYFETGNTASGDSSNQMSDPHKGIIRHKGYKEFESDDEVSDRSLGEEYTVRACAASESSMENGSQH
SMYDHDDDDDDIDRQPRGIPRSQQTRVFRNPVSYESEDNGVYQQSGRISISNRQANRMVGEYDSAE
NSLEERGFCSTGKRQTRSTAKRIAKTKTVQSSRDTKGRFLQEFASGKKNEELDSYMEGPSTRLRVR
HQKPSRGSLETKPKKIGKKRSGNASFSRVATEKDVEEKEEEEEEEENEEEECAAYQCNMEGCTMSF
SSEKQLMLHKRNICPIKGCGKNFFSHKYLVQHQRVHSDDRPLKCPWKGCKMTFKWAWSRTEHIRVH
TGARPYVCAEPDCGQTFRFVSDFSRHKRKTGHSVKKTNKR
SEQ ID NO: 121, DNA - Axabidopsis thaliana
ATGGAGAAAATGAGAGGGAAGCGAATCAGACCAAGAGATTCCGGCGAGTTAGTCGAAGATGGGAGA TCTGAAAGCGAGCGTAAGACGAGGAAGAAAGAGAATGATGTTGTGAGCAAAGGAAGAATCGGAAGA GGAAGAGGAAGAGGAGAGGTTTCGAAGCGATCTATTGAAATAGACATTTCTAATCCCGAGAAGGAT ATTAAGCCTGACGGAAGCAGAAAGTGTTTGGGTTCGACGTGTCATCATTGTAAGATCTTGACGAGT GAGAGTGATCTTATCTTCTGTTCAAAGTGTAACAAGAAGTGTTATTGCTTTGACTGCATCAAGAGA TCGTATTCAGAAAGAACACATGAGGAAGTTAGAGCTGCTTGTCCATTCTGTATGATGACTTGCATT TGCAGAGCTTGTTTGCGGTTGCCTTTGGTTATCAAGCCTCCAAGTGAAAAAGATACAGATGTCAAG CTTAAGCAGCTGCAGTATCTGTTAGTCAAAGTTCTCCCAGTTCTTAAGGATATTTATACGGAGCAG
FIGURA 10 CONT. aaccgtôaactagagattgaatcaacaattagaggacaccctgtgacagaagctaatatcaagagg tgcaaacttgacccaagcgaacgcatatactgtgatctctgccgcacatccattgccaattttcac agaagctgtccgaacaaaaattgttcagtcgatatatgtctttcttgctgcaaggaactaagtgag ggcttccatcaagagagagatgggaagaaaaatgcagaagggaaaggatatgaatgtcgaatccca gcaggtcaaggaaaagactcggacgcatatgttccactgcatttctcgacttggaagcttaactca gacagtagcattccatgccctccaaaagagtgtggtggttgtggtacttcaacactggagttgaga cgcttatggaaaagagattgggttgaaaaattaataacgaatgccgagaaatgtactctgaatttt aggccaacagatgtggatattgttcatgaatgttcctcatgctctaccaattctgattccattaga aggcaggcagcttttaggaagaatgctcatgataatttcttatactccccaaatgctgttgatctg
gctgaagacgatattgctcattttcagtttcattggatgaaggcagaacctgtgatagtcagaaat
gttctcgagaagacatctggactaagttgggaaccaatggttatgtggagggcttgtagggaaatg gatccaaagcgtaaaggtacagaagaagagacaacaaaagtgaaagctttggattgcttggactgg tgtgaggttgaaataaatctgcatcagttttttgagggctacttagaaggccgcatgcataaaaac ggttggccagaaatgttgaaattgaaggactggcctccctcagatttatttgaaaagcgccttcca aggcataatgctgagtttattgccgcattgcctttctttgattacactgacccaaagtctggtatc ctaaatctcgcaacaagatttccggaaggatccttgaagccagatcttggacccaagacatacatt gcgtacggtttccatgaagagcttaatagaggagattcggtgacaaaacttcattgtgacatttct gacgcggtcaatgtgttgacacacacagctaaagtggaaatccctcccgtcaaataccaaaacata aaagtacatcagaaaaaatatgcagaagccatgttgcagaaacaacaatacagtggtcaagtgaaa gaagccagcgaacttgaaaacaagtcaatgaaagaagtggatgaaagtaaaaaggatttaaaagac aaggcagctaacgaagaacaatcaaataacagttcaagaccgtcgggctcaggagaagctgagaaa gtaattatttcaaaagaggataatcccacacaacctgctgtgagtacaagtgtggaatccatacaa gaacagaagctggatgctccaaaagaaactgatggcaataccaatgagaggtcaaaggctgtgcat ggtggtgctgtctgggatatctttcgaagagaggatgttccaaaacttattcagtttttgaaaagg cacgagcatgagtttcgtcacttcaataacgaacccctggaatccgttattcacccaattcatgac cagactatgttcttgagtgatagccagaagaaacagctgaaagaagaatttgatatagaaccatgg acctttgagcaacacctcggcgaagcagtcttcatacctgcaggttgtcctcaccaagtgaggaat agacagtcttgcataaaggtggcactagactttgtggctcctgaaagcgtcgaagaatgccttagg ctaacacaggagttccggagattgcctaaagaccacagttctagcgaggataaattggagcttaag aaaattgcactgtatgctgcgagttcagccataagagaggtaaaagggctaatgcaaagctcccga cgcagtgatacctaa
SEQ ID NO: 122, Proteína - Arabidopsis thaliana.
mekmrgkrirprdsgelvedgrseserktrkkendwskgrigrgrgrgevskrsieidisnpekd
ikpdgsrkclgstchhckiltsesdlifcskcnkkcycfdcikrsysertheevraacpfcmmtci craclrlplvikppsekdtdvklkqlqyllvkvlpvlkdiyteqnreleiestirghpvteanikr ckldpseriycdlcrtsianfhrscpnkncsvdiclscckelsegfhqerdgkknaegkgyecrip agqgkdsdayvplhfstwklnsdssipcppkecggcgtstlelrrlwkrdwveklitnaekctlnf rptdvdivhecsscstnsdsirrqaafrknahdnflyspnavdlaeddiahfqfhwmkaepvivrn vlektsglswepmvmwracremdpkrkgteeettkvkaldcldwceveinlhqffegylegrmhkn gwpemlklkdwppsdlfekrlprhnaefiaalpffdytdpksgilnlatrfpegslkpdlgpktyi aygfheelnrgdsvtklhcdisdavnvlthtakveippvkyqnikvhqkkyaeamlqkqqysgqvk easelenksmkevdeskkdlkdkaaneeqsnnssrpsgsgeaekviiskednptqpavstsvesiq eqkldapketdgntnerskavhggavwdifrredvpkliqflkrhehefrhfnneplesvihpihd qtmflsdsqkkqlkeefdiepwtfeqhlgeavfipagcphqvrnrqscikvaldfvapesveeclr ltqefrrlpkdhsssedklelkkialyaassairevkglmqssrrsdt
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 123, DNA - Axabidopsis thaliana
ATGGATCAGCTTGCATCTCTAGCAGAGTCTGTGGCTATGGAGGAAGATTCTGAGAAACAATCGATT
AAAGGAGAGAGTAGTCTTGAACCTGACTCTACTCCTTCTAGTCCTAAAATAACTGCTAGGTGGAAT
CCATCAGAAGCTTGCAGGCCTTTGGTTGATGACGCTCCCATCTTTTATCCCACTAATGAGGATTTT
GATGATCCACTTGGTTACATAGAGAAGTTGCGCTCTAAAGCAGAATCATATGGCATATGTCGAATT
GTGCCGCCTGTTGCATGGAGGCCCCCTTGCCCTCTGAAGGAGAAAAAAATATGGGAGAATTCTAAA
TTTCCCACCCGGATTCAGTTCATTGACTTGCTTCAAAACCGAGAACCGATTAAAAAATCTACTAAA
ACCAAGAAGAGAAAACGGAGAAGAATCTCTAAAATTGGATACACAAGAAGAAAAAGAGATTCAGGC
TGTGATACGGCTTCCTCTGGCTCTAGTGATAGTGAAGGAAAATTTGGTTTTCAGACTGGGCCAGAT
TTTACCCTGGAAGAATTTCAGAAGTATGATGAATACTTTAAGGAATGCTATTTTCAGTCAGAGGAT
CATCCTGGTTCCAAAGCGTCTGAAAATAAGAAATTTAAACCTAAGGTTAAGGACCTTGAAGGTGAA
TATTGGCGGATAGTGGAGCAGGCAACTGATGAAGTAGAGGTGTACTATGGAGCTGACTTGGAAACA
AAGAAATTTGGAAGTGGTTTCCCAAAGTATAAACCGGGGTATCCTATAAGTGAAGCAGATCAATAC
TCTCAATGTGGTTGGAACCTAAATAATTTGTCCCGTCTGCCCGGATCAGTTCTAGCTTTTGAGAGC
TGCGATATCTCAGGAGTCATTGTGCCATGGCTTTATGTTGGAATGTGCTTTTCAACTTTTTGTTGG
CATGTTGAAGATCATCACCTTTATTCCATGAACTACTTACACACAGGTGATCCAAAAGTTTGGTAT
GGGATCCCTGGAAACCATGCTGAGTCTTTTGAAAATGTAATGAAAAAGCGTCTTCCAGATTTGTTT
GAAGAACAGCCTGACTTGCTACATCAACTGGTCACTCAGTTATCTCCAAGAATCTTAAAAGAGGAG
GGAGTACCTGTCTATCGAGCTGTCCAGCGCAGTGGAGAATTCATTCTAACCTTCCCTAAGGCCTAT
CATTCTGGGTTTAATTGTGGTTTCAACTGTGCGGAAGCAGTAAATGTTGCACCAGTTGATTGGCTG
GTTCATGGACAGAATGCAGTGGAAGGCTATAGCAAGCAGCGGCGAAAGAGTTCATTGTCACATGAC
AAGCTGCTTCTTGGAGCTGCTATGGAAGCTACTTATTGCCTCTGGGAGCTTTCACTTTCAAAGAAG
AAGACTCCTGTGATTGCGAGATGGAAAAGGGTTTGTAGTGAGGATGGATTGCTTACGAAGGCAGTC
AAGAAGCGTGTGCAGATGGAAGAAGAAAGACTAAATCACCTTCAAGATGGTTTTAGCTTGCGAAAG
ATGGAGGGTGATTTCGACAATAAGAGAGAACGGGAGTGCTTCTTGTGCTTCTATGATTTGCATATG
TCTGCTTCAAGCTGCAAGTGTTCCCCCAACCGGTTTGCATGTCTTATCCACGCTAAGGATCTGTGT
TCATGTGAAAGTAAGGATAGATATATCCTAATTCGCCACACCTTGGATGAGTTATGGGCACTGGTC
AGAGCTCTAGAAGGGGATCTTGATGCCATAGACCTATGGGCAAGTAAATGTCGTGACCAGTATCCT
TCACAGCATCCAAGAGCAAGAGAATATGCTTACCTCAAGTCTGCCCCATGTATAAAGAGCCGTGGT
TCATCAAAAGTACAGCAGCGAGAACAAAACAATCTTCAGTTAGTGTCTGAACGCTTACAAAGTGAT
CTAACCTCAAACAAGGAAGTTCAGTTGAAACAAGATGGTGATTCAGATGTAAATCGCCATGGTCAT
GAAAGCGAAAGAAATCATGTACATGGGATCACTGATAAGTCAGCTGTCACGGATGTAAAACTTGGT
GTGGGAGGTAAGTTTGATGAGAAGAAGATTTCGGTTGAATCTCAAAACCCACATTCAGTTTCAGAT
GTAGGGTGTAGCGAGCTGGCGAAGAAAGTGGATGGTTGTTTAGGAGGGAAGGACCAAAATGCTGCA
ACCAATAGGTTAAGTCTCTCTGTTGAGCTTTTGAGTTCTGGATCTCTCGTTGTTAAAAAGCTGTGG
TGCAGTAAACAGGCCATATACCCAAAAGGGTTCAAGAGCCGTGTTAAGTTCTTAAGTGTGCTTGAC
CCAACAAACCTAACCAACTACATCTCAGAGGTTCTGGATGCAGGGCTTCTTGGTCCATTGTTCAGG
GTCTCAGTAGAAGATTACCCCACTGAGAATTTCTCGAATGTATCTGCTGAAAAGTGCTGGCAAATG
GTGACACAAAGGCTCAAACTCGAAATCATCAAGAAATGTGATCAACCAGTTAGCTCTTTGACCTCT
TTACAACCTTTGGAGAGTATAAATGGGCTTGAAATGTTTGGATTTCTCTCCCCGCACGTAATTAAG
GTGGTTGAGGCTCTTGATCCAAAGCATCAATTGGAGGAGTATTGGAACCAAAAAGCAGTGAAACTG
TTTGGTGCTGAACCAATAAAGGAAGGAGAAAAGGATGATACAGAGAAAGGAGGGGCTTCAGATCCC
TCTTTGGACCGGGACACAAGGCTTCTGCGTGGACTGTTGAAGAAGGCGACACCTGAAGAATTAGTA
ATGATGCATGGACTTCTGTGTGGTGAGACTCGCAACACCGAGCTCAAGGAAGAGCTCTCTACTTTG
GTTGATAAGATGGAGATAAGTCCTTAA
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 124, Proteína - Arabidopsis thaliana
MDQLASLAESVAMEEDSEKQSIKGESSLEPDSTPSSPKITARWNPSEACRPLVDDAPIFYPTNEDF DDPLGYIEKLRSKAESYGICRIVPPVAWRPPCPLKEKKIWENSKFPTRIQFIDLLQNREPIKKSTK TKKRKRRRISKIGYTRRKRDSGCDTASSGSSDSEGKFGFQTGPDFTLEEFQKYDEYFKECYFQSED HPGSKASENKKFKPKVKDLEGEYWRIVEQATDEVEVYYGADLETKKFGSGFPKYKPGYPISEADQY SQCGWNLNNLSRLPGSVLAFESCDISGVIVPWLYVGMCFSTFCWHVEDHHLYSMNYLHTGDPKVWY GIPGNHAESFENVMKKRLPDLFEEQPDLLHQLVTQLSPRILKEEGVPVYRAVQRSGEFILTFPKAY HSGFNCGFNCAEAVNVAPVDWLVHGQNAVEGYSKQRRKSSLSHDKLLLGAAMEATYCLWELSLSKK KTPVIARWKRVCSEDGLLTKAVKKRVQMEEERLNHLQDGFSLRKMEGDFDNKRERECFLCFYDLHM SASSCKCSPNRFACLIHAKDLCSCESKDRYILIRHTLDELWALVRALEGDLDAIDLWASKCRDQYP SQHPRAREYAYLKSAPCIKSRGSSKVQQREQNNLQLVSERLQSDLTSNKEVQLKQDGDSDVNRHGH ESERNHVHGITDKSAVTDVKLGVGGKFDEKKISVESQNPHSVSDVGCSELAKKVDGCLGGKDQNAA TNRLSLSVELLSSGSLWKKLWCSKQAIYPKGFKSRVKFLSVLDPTNLTNYISEVLDAGLLGPLFR VSVEDYPTENFSNVSAEKCWQMVTQRLKLEIIKKCDQPVSSLTSLQPLESINGLEMFGFLSPHVIK WEALDPKHQLEEYWNQKAVKLFGAEPIKEGEKDDTEKGGASDPSLDRDTRLLRGLLKKATPEELV MMHGLLCGETRNTELKEELSTLVDKMEISP
SEQ ID NO: 125, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGATACTGCTTCATGGTCAGGATTTTGATGATCCACTTGGTTACATAGAGAAGTTGCGCTCTAAA
GCAGAATCATATGGCATATGTCGAATTGTGCCGCCTGTTGCATGGAGGCCCCCTTGCCCTCTGAAG
GAGAAAAAAATATGGGAGAATTCTAAATTTCCCACCCGGATTCAGTTCATTGACTTGCTTCAAAAC
CGAGAACCGATTAAAAAATCTACTAAAACCAAGAAGAGAAAACGGAGAAGAATCTCTAAAATTGGA
TACACAAGAAGAAAAAGAGATTCAGGCTGTGATACGGCTTCCTCTGGCTCTAGTGATAGTGAAGGA
AAATTTGGTTTTCAGACTGGGCCAGATTTTACCCTGGAAGAATTTCAGAAGTATGATGAATACTTT
AAGGAATGCTATTTTCAGTCAGAGGATCATCCTGGTTCCAAAGCGTCTGAAAATAAGAAATTTAAA
CCTAAGGTTAAGGACCTTGAAGGTGAATATTGGCGGATAGTGGAGCAGGCAACTGATGAAGTAGAG
GTGTACTATGGAGCTGACTTGGAAACAAAGAAATTTGGAAGTGGTTTCCCAAAGTATAAACCGGGG
TATCCTATAAGTGAAGCAGATCAATACTCTCAATGTGGTTGGAACCTAAATAATTTGTCCCGTCTG
CCCGGATCAGTTCTAGCTTTTGAGAGCTGCGATATCTCAGGAGTCATTGTGCCATGGCTTTATGTT
GGAATGTGCTTTTCAACTTTTTGTTGGCATGTTGAAGATCATCACCTTTATTCCATGAACTACTTA
CACACAGGTGATCCAAAAGTTTGGTATGGGATCCCTGGAAACCATGCTGAGTCTTTTGAAAATGTA
ATGAAAAAGCGTCTTCCAGATTTGTTTGAAGAACAGCCTGACTTGCTACATCAACTGGTCACTCAG
TTATCTCCAAGAATCTTAAAAGAGGAGGGAGTACCTGTCTATCGAGCTGTCCAGCGCAGTGGAGAA
TTCATTCTAACCTTCCCTAAGGCCTATCATTCTGGGTTTAATTGTGGTTTCAACTGTGCGGAAGCA
GTAAATGTTGCACCAGTTGATTGGCTGGTTCATGGACAGAATGCAGTGGAAGGCTATAGCAAGCAG
CGGCGAAAGAGTTCATTGTCACATGACAAGCTGCTTCTTGGAGCTGCTATGGAAGCTACTTATTGC
CTCTGGGAGCTTTCACTTTCAAAGAAGAAGACTCCTGTGATTGCGAGATGGAAAAGGGTTTGTAGT
GAGGATGGATTGCTTACGAAGGCAGTCAAGAAGCGTGTGCAGATGGAAGAAGAAAGACTAAATCAC
CTTCAAGATGGTTTTAGCTTGCGAAAGATGGAGGGTGATTTCGACAATAAGAGAGAACGGGAGTGC
TTCTTGTGCTTCTATGATTTGCATATGTCTGCTTCAAGCTGCAAGTGTTCCCCCAACCGGTTTGCA
TGTCTTATCCACGCTAAGGATCTGTGTTCATGTGAAAGTAAGGATAGATATATCCTAATTCGCCAC
ACCTTGGATGAGTTATGGGCACTGGTCAGAGCTCTAGAAGGGGATCTTGATGCCATAGACCTATGG
GCAAGTAAATGTCGTGACCAGTATCCTTCACAGCATCCAAGAGCAAGAGAATATGCTTACCTCAAG
TCTGCCCCATGTATAAAGAGCCGTGGTTCATCAAAAGTACAGCAGCGAGAACAAAACAATCTTCAG
TTAGTGTCTGAACGCTTACAAAGTGATCTAACCTCAAACAAGGAAGTTCAGTTGAAACAAGATGGT
GATTC AGATGTAAATCGCCATGGTCATGAAAGCGAAAGAAATCATGTACATGGGATCACTGATAAG
TCAGCTGTCACGGATGTAAAACTTGGTGTGGGAGGTAAGTTTGATGAGAAGAAGATTTCGGTTGAA
TCTCAAAACCCACATTCAGTTTCAGATGTAGGGTGTAGCGAGCTGGCGAAGAAAGTGGATGGTTGT
FIGURA 10 CONT. TTAGGAGGGAAGGACCAAAATGCTGCAACCAATAGGTTAAGTCTCTCTGTTGAGCTTTTGAGTTCT GGATCTCTCGTTGTTAAAAAGCTGTGGTGCAGTAAACAGGCCATATACCCAAAAGGGTTCAAGAGC CGTGTTAAGTTCTTAAGTGTGCTTGACCCAACAAACCTAACCAACTACATCTCAGAGGTTCTGGAT GCAGGGCTTCTTGGTCCATTGTTCAGGGTCTCAGTAGAAGATTACCCCACTGAGAATTTCTCGAAT GTATCTGCTGAAAAGTGCTGGCAAATGGTGACACAAAGGCTCAAACTCGAAATCATCAAGAAATGT GATCAACCAGTTAGCTCTTTGACCTCTTTACAACCTTTGGAGAGTATAAATGGGCTTGAAATGTTT GGATTTCTCTCCCCGCACGTAATTAAGGTGGTTGAGGCTCTTGATCCAAAGCATCAATTGGAGGAG TATTGGAACCAAAAAGCAGTGAAACTGTTTGGTGCTGAACCAATAAAGGAAGGAGAAAAGGATGAT ACAGAGAAAGGAGGGGCTTCAGATCCCTCTTTGGACCGGGACACAAGGCTTCTGCGTGGACTGTTG AAGAAGGCGACACCTGAAGAATTAGTAATGATGCATGGACTTCTGTGTGGTGAGACTCGCAACACC GAGCTCAAGGAAGAGCTCTCTACTTTGGTTGATAAGATGGAGATAAGTCCTTAA
SEQ ID NO: 126, Proteína - Arabidopsis thaliana
MILLHGQDFDDPLGYIEKLRSKAESYGICRIVPPVAWRPPCPLKEKKIWENSKFPTRIQFIDLLQN REPIKKSTKTKKRKRRRISKIGYTRRKRDSGCDTASSGSSDSEGKFGFQTGPDFTLEE FQKYDE YF KEC YFQSEDHPGSKASENKKFKPKVKDLEGE YWRIVEQATDE VE VYYGADLETKKFGSGFPKYKPG YPISEADQYSQCGWNLNNLSRLPGSVLAFESCDISGVIVPWLYVGMCFSTFCWHVEDHHL YSMNYL HTGDPKVWYGIPGNHAESFENVMKKRLPDLFEEQPDLLHQLVTQLSPRILKEEGVPVYRAVQRSGE FILTFPKAYHSGFNCGFNCAEAVNVAPVDWLVHGQNAVEGYSKQRRKSSLSHDKLLLGAAMEATYC LWELSLSKKKTPVIARWKRVCSEDGLLTKAVKKRVQMEEERLNHLQDGFSLRKMEGDFDNKREREC FLCFYDLHMSASSCKCSPNRFACLIHAKDLCSCESKDRYILIRHTLDELWALVRALEGDLDAIDLW ASKCRDQYPSQHPRAREYAYLKSAPCIKSRGSSKVQQREQNNLQLVSERLQSDLTSNKEVQLKQDG DSDVNRHGHESERNHVHGITDKSAVTDVKLGVGGKFDEKKISVESQNPHSVSDVGCSELAKKVDGC LGGKDQNAATNRLSLSVELLSSGSLWKKLWCSKQAIYPKGFKSRVKFLSVLDPTNLTNYISEVLD AGLLGPLFRVSVEDYPTENFSNVSAEKCWQMVTQRLKLEIIKKCDQPVSSLTSLQPLESINGLEMF GFLSPHVIKWEALDPKHQLEEYWNQKAVKLFGAEPIKEGEKDDTEKGGASDPSLDRDTRLLRGLL KKATPEELVMMHGLLCGETRNTELKEELSTLVDKMEISP
SEQ ID NO: 127, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGGTAATGTTGAAATTCCGAATTGGCTTAAAGCTTTGCCATTGGCACCTGTGTTTAGACCTACA
GACACTGAATTTGCAGATCCCATTGCTTACATATCGAAAATCGAAAAGGAAGCTAGTGCCTTTGGG
ATTTGCAAGATCATTCCTCCTTTACCCAAGCGATCGAAAAAGTATGTTTTCTACAACTTGAACAAG
TCTCTTTTGAAGTGTCCCGAATTGGTTTCAGATGTTGACATTTCGAAGGTGTGTAAAGAGGATAGA
GCTGTATTCACCACTAGGCAGCAAGAGTTAGGCCAAACTGTGAAAAAAAACAAAGGAGAGAAGGGT
AAGAGTAATTCTCAAAGGAGTGGTGTTAAGCAGGTTTGGCAAAGTGGAGGCGTTTATACATTGGAT
CAGTTTGAAGCTAAGTCGAAAGCTTTCTACAAAACCCAATTAGGAACGGTTAAGGAACTGGCACCA
GTTGTCATTGAGGCATTGTTCTGGAAAGCGGCTTTAGAGAAGCCTATATATATAGAGTATGCTAAT
GACGTGCCTGGCTCTGCTTTCGGTGAGCCAGAGGATCATTTCAGGCATTTCCGGCAGAGGAAGAGG
AGGGGCAGGGGATTTTATCAGAGGAAGACAGAAAATAATGATCCATCAGGTAAGAACGGTGAAAAG
TCATCGCCTGAGGTAGAAAAGGCACCCCTTGCTTCTACAAGTTTATCATCTCAGGATTCGTCCAAG
CAGAAGAACATGGATATTGTTGATGAAATGGAAGGTACTGCAGGCTGGAAGCTCTCCAACAGTTCG
TGGAACCTTCAGATGATTGCACGTTCACCTGGTTCTGTTACACGTTTCATGCCAGATGACATTCCT
GGTGTTACATCTCCCATGGTTTATATCGGTATGTTGTTCAGTTGGTTTGCCTGGCACGTTGAGGAT
CATGAGCTTCACAGTATGAATTATCTTCACACTGGCTCACCAAAGACTTGGTACGCTGTCCCTTGT
GATTATGCGCTTGACTTTGAAGAGGTTATCCGCAAAAATTCTTATGGCAGGAACATTGACCAACTG
GCTGCTCTCACCCAACTAGGCGAAAAGACAACTCTTGTATCACCTGAGATGATAGTTGCATCTGGC
ATTCCCTGCTGTAGGTTGGTACAAAATCCTGGTGAATTTGTTGTGACTTTTCCGAGGTCTTATCAT
GTAGGATTCAGCCACGGTTTTAACTGTGGGGAAGCCGCTAATTTTGGAACCCCACAGTGGCTCAAC
FIGURA 10 CONT. GTAGCAAAGGAAGCTGCTGTGCGTCGGGCAGCCATGAATTATCTACCCATGCTGTCCCATCAGCAG
CTGCTATATCTCTTGACTATGTCCTTTGTTTCAAGAGTGCCACGATCATTGCTACCAGGTGGTCGT
AGCTCCCGACTAAGAGATCGGCAGAGAGAAGAAAGAGAGTTCCTTGTGAAAAGAGCTTTTGTAGAA
GATATATTGAACGAAAACAAGAATTTATCTGTTCTTCTTCGAGAACCAGGCTCTCGTTTGGTGATG
TGGGACCCTGATTTACTTCCGCGTCATAGCGCACTGGCTCTTGCAGCTGCTGGAGTTGCTGGTGCT
TCTGCTGTTTCACCTCCAGCAGTGGCAAAAAAAGAACTTGAGGAGGGTCATTCTGAATTGCAGAAT
AAAGAAAAGACTTCTCTTTTAGAGGAATTGAGCTTGTTCATGGAGAAGCTGAATGATGTATACTAC
GACGATGATGATGGTCTGCTTAACGATTTCCAAGTTGATACTGGAACCTTGCCATGTGTGGCTTGT
GGCGTTCTTGGCTTCCCCTTTATGTCTGTGGTACAGCCTTCTGAAAAAGCATTAAAAGATCTCTCA
GAGAGACAAGGAGAGACAGATGCTCAGGAAATTATGACACTGTCATCAGAAAAGTCTGACTGCGAA
TGGAAAACGTCTTCTAGATATATAAGACCTCGCATTTTCTGCCTCGAACACACTATTGAACTTCAG
AGACTGCTGCAATCAAGAGGTGGATTGAAATTCCTTGTTATTTGCCATAAAGACTTTCAA AAATTC
AAGGCACÀTGCGGCTATAGTGGCAGAGGAGGTCAAAGTCCCTTTCAGCTATGATGATGTCCTGTTA
GAGAGTGCATCTCAGGAAGAGTTGAGTCTAATTGATCTTGCAATTGAAGATGAAGAAAAATACGAA
CACAGTGTAGACTGGACCTCAGAACTTGGCATCAATTTACGGTACTGTGTGAAAGTGAGGAAAAAT
TCCCCTACTAAGAAAATTCAGCATGCACTGTCACTAGGTGGCTTGTTCTCCGATACAAGCCAGATG
CTAGATTTTACAACTATCAGATGGCTGCAGAGAAAATCACGCTCAAAAGCTAAACCCAGTTCTACC
TCAAGTTTCACACCTTGTGAACATCTTGAAGTAAAAGCAGATGGAAAATTAAGGGATAATTTGGAT
TCTCAGACCGGAAAAAAGGAAGAAAAGATCATCCAGTACTCGAGAAAGAAAAAGTTGAATCCAAAG
CCTTCAGCAGAACAAGTTCAGGAGCTAGCTACCCTAGCTAAATCAAAAGATTTTGATAAGACATGT
AAAAATTTTAGCAGTAGGTCACATCTGGATAGTGCAATTCGTTCTGAGATGAACAGTGAGATTGGA
GACTCTGGAAGGGTCATTGGGGTATCATTTTCCATAAATCCTTGTAGCTCATCTTTCACTGTGGGA
CATGGGCAAGAACATCCCGAGATCACTGTCAAGTTTGGTTCAGATTTAGATGGGAATGTCACAAAT
AGTTTGAGTATGGTGAATGGAGACTCTGCTGACCTAACCTTAACCTCCATATCCAGAGAGCAGCAC
CAAGGACACTCTATGACCAGCAATAATAATGGCTCCAACTCAGGTAGTCATGTTGTGGCAAGCCAG
ACCATACTTGTTTCTACAGGTGATAATCATGACGGACCAAGAAAATTGTCTGGTGATTATGTCTGC
AGTGATGTGTCTGTACGTGGTATTCAGGAAGCGGTTGAAATGAGTGACCAAGAGTTTGGAGAACCT
AGGTCTACTGTCACTAATATTGAGGATGAACAGCAATCACAGATTGTGAAACCAACCCAAAGAGAA
GCTGTATTTGGTGATCACGAACAGGTGGAGGGAGCAGAAGCTGTGTCTACCAGAGAAAACTTGTGC
TCTGAAATAATTCTGCACACTGAGCATTCTTCAGCTCATGTGGGTATGGAAATTCCTGACATAAAC
ACGGCCAGTGAGAACTTAGTTGTTGACATGACCCATGATGGTGAACCTTTGGAAAGTAGCGATATA
TTAAGTTCGAGCAATGGTGATGAAGCTTCTTCAAATGGATTGCAAGTTCTAAATGATGAGCTTAGC
ATGGAGAGTGAAGTTTCAAGCTCAGAAAACACCGAAGTTATTGAGGCTCCCAATTCTATGGGAGAA
GCAAAGAAGAAGCGGAAAATAGAATCAGAGTCTGAGACAAATGATAATCCAGAGAGTAGCATTGGT
TTCATAAGGAGTCCTTGTGAAGGGTTGAGGTCAAGGGGCAAGAGGAAAGCAACATGTGAAACTTCA
TTAAAGCACACTGAAACGAGTGATGAAGAGAAGAAACCCATTGCGAAAAGGCTGAAGAAAACACCA
AAGGCTTGCTCAGGGAGTCGTCAGCAAGAAGTCCCCACGACAACTCACCCCAACCGTTGTTACCTA
GAGGGATGCAAGATGACTTTTGAGAGTAAAGCGAAATTACAAACTCACAAGAGAAACCGTTGCACT
CACGAAGGGTGTGGAAAGAAATTCAGGGCTCACAAATATCTGGTGCTTCATCAACGTGTGCATAAG
GATGAAAGACCTTTCGAGTGCTCTTGGAAAGGATGTTCAATGACTTTCAAATGGCAATGGGCGAGG
ACAGAACATTTGCGTCTGCACACGGGAGAGCGACCATACATATGCAAGGTCGATGGATGTGGATTG
TCGTTTAGGTTTGTATCTGACTATAGTCGCCACAGACGTAAAACCATGCACTATGTCACATAG
SEQ ID NO: 128, Proteína - Arabxdopsis thaliana
MGNVEIPNWLKALPLAPVFRPTDTEFADPIAYISKIEKEASAFGICKIIPPLPKPSKKYVFYNLNK SLLKCPELVSDVDISKVCKEDRAVFTTRQQELGQTVKKNKGEKGKSNSQRSGVKQVWQSGGVYTLD QFEAKSKAFYKTQLGTVKELAPWIEALFWKAALEKPIYIEYANDVPGSAFGEPEDHFRHFRQRKR RGRGFYQRKTENNDPSGKNGEKSSPEVEKAPLASTSLSSQDSSKQKNMDIVDEMEGTAGWKLSNSS
FIGURA 10 CONT. WNLQMIARSPGSVTRFMPDDIPGVTSPMVYIGMLFSWFAWHVEDHELHSMNYLHTGSPKTWYAVPC DYALDFEEVIRKNSYGRNIDQLAALTQLGEKTTLVSPEMIVASGIPCCRLVQNPGEFWTFPRSYH VGFSHGFNCGEAANFGTPQWLNVAKEAAVRRAAMNYLPMLSHQQLLYLLTMSFVSRVPRSLLPGGR SSRLRDRQREEREFLVKRAFVEDILNENKNLSVLLREPGSRLVMWDPDLLPRHSALALAAAGVAGA SAVSPPAVAKKELEEGHSELQNKEKTSLLEELSLFMEKLNDVYYDDDDGLLNDFQVDTGTLPCVAC GVLGFPFMSVVQPSEKALKDLSERQGETDAQEIMTLSSEKSDCEWKTSSRYIRPRIFCLEHTIELQ RLLQSRGGLKFLVICHKDFQKFKAHAAIVAEEVKVPFSYDDVLLESASQEELSLIDLAIEDEEKYE HSVDWTSELGINLRYCVKVRKNSPTKKIQHALSLGGLFSDTSQMLDFTTIRWLQRKSRSKAKPSST SSFTPCEHLEVKADGKLRDNLDSQTGKKEEKIIQYSRKKKLNPKPSAEQVQELATLAKSKDFDKTC KNFSSRSHLDSAIRSEMNSEIGDSGRVIGVSFSINPCSSSFTVGHGQEHPEITVKFGSDLDGNVTN SLSMVNGDSADLTLTSISREQHQGHSMTSNNNGSNSGSHVVASQTILVSTGDNHDGPRKLSGDYVC SDVSVRGIQEAVEMSDQEFGEPRSTVTNIEDEQQSQIVKPTQREAVFGDHEQVEGAEAVSTRENLC SEIILHTEHSSAHVGMEIPDINTASENLWDMTHDGEPLESSDILSSSNGDEASSNGLQVLNDELS MESEVSSSENTEVIEAPNSMGEAKKKRKIESESETNDNPESSIGFIRSPCEGLRSRGKRKATCETS LKHTETSDEEKKPIAKRLKKTPKACSGSRQQEVPTTTHPNRCYLEGCKMTFESKAKLQTHKRNRCT HEGCGKKFRAHKYLVLHQRVHKDERPFECSWKGCSMTFKWQWARTEHLRLHTGERPYICKVDGCGL
S FRFV S DY S RHRRKTMHYVT
SEQ ID NO: 129, DNA - Arabidopsxs thaliana
ATGCCAAAGTGCAAGAATCTGTTGCTAACCTCGAAGCGACGTAAATCCAAATCCAAAAGACTAAAG
CTCCATCAGCATGAACCTGAGTCTCTGTTTCCAGAGAAGGAGGTAGAAGAGGAAGATGAAGATGAA
GGAGGCTTCAAGCTGAAAATTGCAGCTCCTTCTCAAGAGCATGGAGTTCAACCTCTGGGAAACCTA
TATTTCAATCCTGGTGCGGTCAATGTGCGAAACACTGGATTAGGTAATCTCCAGATACTCTCAGAT
GAGCTCGTTTTGGATATTCTAGGTCTTCTTGGCGCCAATCATTTGGGTGTTTTGGCTACTGTAACT
AAGTCATTCTATATATTTGCTAATCATGAGCCTCTCTGGAGAAATCTTGTGTTAGAGGAGTTAAAA
GGAGATTTTTTGTTTAATGGGTCGTGGAGATCTACCTATGTAGCTGCTTACCATCCGAAATTCAAG
TTTGCTGGAGATGGTGAATCGAATTTGAAGATTATAGATTTCTATTCTGATTATCTGTTTCAGAGC
TGGTTATGTGCGAATCTTGAAATGAAACCGAAATGGCTTAGAAGAGATAATATCACACGGGTGAGA
GGCATTTCTGTTGAAGACTTCATTACAAAGTTTGAGGAGCCGAATAAGCCAGTTTTGTTGGAGGGA
TGTTTGGATGGTTGGCCTGCTATTGAGAAATGGTCAAGAGATTATCTGACTAAGGTGGTTGGTGAT
GTCGAATTCGCGGTAGGTCCAGTGGAAATGAAGCTCGAGAAGTATTTTAGGTATTCTGATGGAGCT
AGGGAAGAAAGGCCTTTGTAGTTGTTTGATCCAAAGTTTGGAGAGAAAGTTCCGGTTTTGGATTCG
GAGTATGATGTTCCTGTCTATTTCAGAGAGGACTTGTTTGGTGTTTTAGGAAACGAGCGACCTGAT
TATAGATGGATCATAATTGGTCCAGCCGGATCAGGATCGTCTTTCCATATTGATCCTAACTCAACA
TCAGCTTGGAATGCGGTGATCACAGGGTCGAAGAAATGGGTTTTGTTCCCACCTGATGTGGTTCCT
CCGGGTGTGCATCCAAGTCCTGATGGAGCAGAAGTGGCCTGTCCTGTTTCCATAATAGAATGGTTC
ATGAACTTTTATGATGATACTAAGGATTGGGAGAAGAAACCTATTGAGTGTATATGCAAAGCCGGG
GAGGTGATGTTTGTACCTAATGGATGGTGGCATCTGGTGATTAACCTGGAGGAATCGATTGCTATT
ACTCAGAATTATGCTAGCAGGAGTAATTTGTTGAATGTGTTAGAATTTCTGAAGAAACCAAATGCT
AAAGAACTTGTCTCCGGGACAACTGACAGAGAGAATTTGCATGACAAATTCAAGAAAGCCATTGAA
GAAGCTTACCCGGGGACTATCCAAGAGTTAGAAAAGAAAGCAGAAGAAGCAAAAAGAGCCGAAGAA
CAAAGAGTTTCTTTCTGGGACTCTGCCAAAACTGATACTTTCAAGTTTTCTTTCTAA
SEQ ID NO: 130, Proteína - Arabidopsis thaliana
MPKCKNLLLTSKRRKSKSKRLKLHQHEPESLFPEKEVEEEDEDEGGFKLKIAAPSQEHGVQPLGNL YFNPGAVNVRNTGLGNLQILSDELVLDILGLLGANHLGVLATVTKSFYIFANHEPLWRNLVLEELK GDFLFNGSWRSTYVAAYHPKFKFAGDGESNLKIIDFYSDYLFQSWLCANLEMKPKWLRRDNITRVR GISVEDFITKFEEPNKPVLLEGCLDGWPAIEKWSRDYLTKWGDVEFAVGPVEMKLEKYFRYSDGA
FIGURA 10 CONT. REERPLYLFDPKFAEKVPVLDSEYDVPVYFREDLFGVLGNERPDYRWIIIGPAGSGSSFHIDPNST S AWNAVITGSKKWVLFPPDWPPGVHPS PDGAEVAC PVSIIEWFMNFYDDTKDWE KKPIECICKAG EVMFVPNGWWHLVINLEESIAITQNYASRSNLLNVLEFLKKPNAKELVSGTTDRENLHDKFKKAIE EAYPGTIQELEKKAEEAKRAEEQRVSFWDSAKTDTFKFSF
SEQ ID NO: 131, DNA - Acabidopsis thaliana
ATGAAGGAAAAAGTGGAGAAGCTTGAGACAGATGATCTAAAATGGACCGAGAGGCTTCCAGAATGT
CCTGTCTACAGACCAACAAAGGAGGAGTTTGAGGATCCTCTGACTTATTTGCAGAAGATTTTCCCA
GAAGCTTCAAAATATGGTATTTGCAAGATTGTATCTCCTTTGACAGCAACAGTTCCTGCTGGCGCT
GTGTTGATGAAAGAGAAATCAAACTTTAAGTTCACTACCAGAGTACAACCCCTTCGACTTGCTGAG
TGGGATTCTGATGATAAAGTTACATTCTTCATGAGTGGGAGGACCTATACATTTCGCGACTATGAG
AAAATGGCGAACAAGGTATTTGCACGCAGATATTGCAGTGGTGGCTCTTTGCCCGACTCATTCTTG
GAGAAAGAATTCTGGAAGGAAATTGCGTGTGGCAAGACTGAAACAGTTGAGTATGCGTGTGATGTA
GATGGTAGCGCATTTTCATCTGCACCAGGTGACCCACTAGGAAGCAGCAAATGGAACTTGAATAAA
GTTTCAAGGCTTCCTAAGTCTACCCTGCGCCTTCTTGAAACATCCATTCCGGGAGTCACAGAACCC
ATGCTTTACATCGGAATGCTTTTCAGTATGTTTGCCTGGCATGTTGAGGACCATTATTTGTACAGC
ATTAATTACCAACATTGTGGAGCATCAAAAACTTGGTATGGGATTCCAGGTTCCGCAGCTCTAAAA
TTTGAAAAGGTGGTTAAAGAGTGTGTGTACAATGATGATATTCTATCAACTAATGGAGAAGATGGT
GCCTTTGACGTGCTTCTGGGGAAGACAACTATATTCCCCCCAAAGACTCTGTTGGATCATAATGTG
CCAGTGTATAAAGCTGTGCAAAAACCTGGAGAATTTGTTGTCACATTCCCCAGGGCTTATCATGCT
GGTTTCAGCCACGGTTTTAATTGTGGTGAGGCAGTGAACTTTGCGATGGGTGATTGGTTTCCATTT
GGAGCTATTGCCAGTTGCCGGTATGCTCATCTTAACCGAGTACCGTTGCTTCCTCATGAAGAATTG
ATTTGTAAAGAGGCAATGCTCTTGAACTCAAGTTCCAAATCCGAGAATCTGGATCTTACACCTACA
GAATTGTCAGGACAACGAAGCATCAAGACTGCATTTGTACACCTGATTCGTTTTCTTCATCTTGCT
CGATGGTCTCTAATGAAGTCAGGATTATGCACAGGCCTTGTTTCGAATACATATGGAACCATAGTC
TGCAGTTTGTGTAAACGGGATTGCTATTTGGCATTTATCAACTGCGAGTGTTACTCACACCCCGTT
TGTCTACGTCATGATGTTAAAAAGCTTGACCTTCCATGTGGGACAACGCATACTCTTTACTTGAGA
GACAACATTGAAGACATGGAAGCTGCTGCAATGAAGTTTGAGAAGGAAGATGGAGTTTCAGATTTG
ATTACAACTGATGAAGATTTATATAAGTATCCATCATCGATTACACTTCCAGCTGCGAAAGAAGAC
GGATATACACCGTATTCCACTATATACTTTGATTTCTATACTGAGGTAGAGATGACATCTCATGAC
CAGTTGCAATCGGGAAATCCCGTCATGAGTTATGAGGCAAACGCTTCATGTATCTCCTCAGTTGCT
GATGATTATGAATGCTCTGATTACCAGGTAAÂTAGACGAGCTAACTGTAGCAGCAGTAGTGATTCA
AAGCTCTCGGAAGAAGTAGCATGCAGCAGTAGCAAAAAAACTCGGTTCTTCCCTGTGGTTCAAGAT
GAACAACTAGTTGCGGATCAGGAAAGTGATGGATCTGATTCCGAGTGTTTTÁGAGTCAAACGCCGT
TCTTCATTGAAGTTTGAGAACCGAACAGTTGTTCTAGACACAAGAGAGTCTGACCATCATCAGGAA
CTTAAGAGACTGAAGAAATCGCATCATCACGAAGGAAGATATAGTAGTAGCAGTAGTGTTAGTAGG
CAAGAAGAAGAAGAAGATGAGTTAGTAATTTCAAACAGGAAAGAAACTCAGCAACAAAGTGACGTG
AAGATGCAGAAGAAGAGGATCGAGAATCATTTTGGTGGCTTTAAACGTCTGAAAGTGAAAGGGCTA
ATAAAGCCGTAA
SEQ ID NO: 132, Proteína - Arabidopsis thaliana
MKEKVEKLETDDLKWTERLPECPVYRPTKEEFEDPLTYLQKIFPEASKYGICKIVSPLTATVPAGA VLMKEKSNFKFTTRVQPLRLAEWDSDDKVTFFMSGRTYTFRDYEKMANKVFARRYCSGGSLPDSFL EKEFWKEIACGKTETVEYACDVDGSAFSSAPGDPLGSSKWNLNKVSRLPKSTLRLLETSIPGVTEP MLYIGMLFSMFAWHVEDHYLYSINYQHCGASKTWYGIPGSAALKFEKWKECVYNDDILSTNGEDG AFDVLLGKTTIFPPKTLLDHNVPVYKAVQKPGEFWTFPRAYHAGFSHGFNCGEAVNFAMGDWFPF GAIASCRYAHLNRVPLLPHEELICKEAMLLNSSSKSENLDLTPTELSGQRSIKTAFVHLIRFLHLA RWSLMKSGLCTGLVSNTYGTIVCSLCKRDCYLAFINCECYSHPVCLRHDVKKLDLPCGTTHTLYLR
FIGURA 10 CONT. DNIEDMEAAAMKFEKEDGVSDLITTDEDLYKYPSSITLPAAKEDGYTPYSTIYFDFYTEVEMTSHD QLQSGNPVMSYEANASCISSVADDYECSDYQVNRRANCSSSSDSKLSEEVACSSSKKTRFFPWQD EQLVADQESDGSDSECFRVKRRSSLKFENRTWLDTRESDHHQELKRLKKSHHHEGRYSSSSSVSR QEEEEDELVISNRKETQQQSDVKMQKKRIENHFGGFKRLKVKGLIKP
SEQ ID NO: 133, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGGAATACAGATTATAGGTCAAATTGAGAGAATCAATGGTAAAGAGCTGAGTTACGGCGATTTT GCAGAGAGATACTTAGCTAAGAACCAGCCAGTGGTAATATCCGATCTCACTGAAGATTGGCGAGCT CGGGAAGATTGGGTCAGTGAGAATGGAAACCCTAATCTCCACGTATTTGCCACTCACTTTGGAAAA TCCAGAGTTCAGGTTGCAGATTGTGATACGAGAGAATTTACAGATCAGAAAAGATTAGAAATGTCT GTTACTGAATTTGTGGAGCAATGGACTAATAAGGATTCTATTGAGGAATCTGTTTTGTATCTGAAA GATTGGCACTTTGTGAAGGAGTATCCAGACTATACAGCTTACCAAACACCGCCGTTGTTTTCTGAT GATTGGCTTAACGTGTATCTAGACAATTACCAAATGCATGAGGATAGAGATAGTTTCCAGAAGTAT GATCAAATAAGCTGCTCTGATTATCGGTT.TGTTTATATGGGTGGGAAAGGATCTTGGACACCTCTA CATGCTGATGTATTTAGATCTTATAGTTGGTCAGCTAATGTCTGTGGTAAAAAAAGATGGCTTTTC CTTCCTCCTCCTCAAAGTCATCTTGTTTATGACAGGTACATGAAAAATTGCGTTTATGACATTTTT GAAGAGGTGAATGAAACTAAATTCCCTGGTTTTAAGAAGACCACCTGGCTTGAGTGCATTCAAGAA CCCGGTGAAATTATCTTTGTTCCCAGTGGATGGCATCATCAAGTATATAACTTGGAAGACACAATA TCTATTAACCACAATTGGCTCAACGCATACAACCTATCTTGGGTGTGGGATCTACTGTGGAAGGAC TACAAGGACACTGAAGAGTCAATAGAAGACATAAGAGACATATGTGATGATTTTGAAGCTATCTGC CAACGTAATCTTGCTGCCAACACAGGAATGAATTTAAATGATTTCTTCCTCTTCATGTCACGGTTC TCTTTGGGGAACATGGTTCTACTGCAATCTTACTCTGACAAACACAAAAACCTGAATTCGTGTTCA TTAGCAATGGCCCAAAACCTGTTAATGAATCTCTCAACTATACTGAAAGTCATGATGAAGATGATA TCTGCAGGCGGTGTAACTGCAGAGGAAGTGTATCTGGACTTGCGAGAAACACTGGAGGATCCACAG TTTCTCAGATTTGTCAGAGACATGGGAAGAACTTATGCAAGGATTCACATGGAGGAAGAGGATCAG TTTCTTTCTTCGAAAGAATTATTACAAAAGCTCAGTGGTCTTGCAGGTCCAAATATGCAAATATGT TCTCCAAAGGATCTTGTTGAAATGATAAACCATCACAATACTTTTTCCTCCCAAATCTATTTTATT TAG
SEQ ID NO: 134, Proteína - Arabidopsis thaliana
MGIQIIGQIERINGKELSYGDFAERYLAKNQPWISDLTEDWRAREDWVSENGNPNLHVFATHFGK SRVQVADCDTREFTDQKRLEMSVTEFVEQWTNKDSIEESVLYLKDWHFVKEYPDYTAYQTPPLFSD DWLNVYLDNYQMHEDRDSFQKYDQISCSDYRFVYMGGKGSWTPLHADVFRSYSWSANVCGKKRWLF LPPPQSHLVYDRYMKNCVYDIFEEVNETKFPGFKKTTWLECIQEPGEIIFVPSGWHHQVYNLEDTI SINHNWLNAYNLSWVWDLLWKDYKDTEESIEDIRDICDDFEAICQRNLAANTGMNLNDFFLFMSRF SLGNMVLLQSYSDKHKNLNSCSLAMAQNLLMNLSTILKVMMKMISAGGVTAEEVYLDLRETLEDPQ FLRFVRDMGRTYARIHMEEEDQFLSSKELLQKLSGLAGPNMQICSPKDLVEMINHHNTFSSQIYFI
SEQ ID NO: 135, DNA - Oryza sativa
ATGTCGATGCGGGAGTTTGTCGACCACTGGGCTGCGAGTTCGAGCAATGGGGATTCTGATGGTTCC CTGCTGTACCTGAAAGATTGGCATTTTGTGAAGGAGTACCCTGGTTATGTTGCATACACCACACCA ACATTCTTTGCCGATGATTGGCTCAACATGTATCTTGATAGTCATCCTATACATCGAGATTCTGAC ATTGCCAACCATACAAATGAAATAAACTGTGCTGACTATCGGTTTGTTTACATGGGACCAAAAGGA ACTTGGACTCCTCTTCATGCTGATGTTTTTAGGTCATACAGCTGGTCGGCAAATGTATGCGGCAGA AAACTATGGCTCTTTCTACCACCATCACAAAGTCATTTTGTATTTGATAGGAACCTACGATCTTCG GTCTATAACATAAATGATGATGTTTCTGAAAAGCAGTTTCCTGAATTCAATAATACTAAATGGCTA GAGTGCACTCAGGAGCAGAATGAAATCATTTTTGTGCCTAGTGGGTGGTATCACCAAGTCCATAAC CTGGAGGATACTATATCAATAAACCATAATTGGTTTAATGGCTACAACCTTCATTGGGTGTGGAAC
FIGURA 10 CONT. TTGCTTCATGAAGATTACAAGGTAGCAAAAGATTATATTGAAGACATTCGGGACATATGTGACGAT TTTGAGGGACTATGTCAACGCAACTTAGCAGCAAATACAGGCATGAACTTCTATGACTTCTTCGTC TTCATAACACGTTTTGCTTTAGCCAATATAGTTGAGCTTTACCATATTCAGAATCCAAAAGATACT GACTTCATTTCAGCCGAAACTGCTAACCACTTTGTCTATAATCTCATGTCGATCCGTGATGTTGCA TCAAAAATGGTATCTACAGAAGCTTTCAATACCGAGAATATTTGTAATATCTCAGAACAAAACCGG AGTGCTTTCTCTGATATCATAAAAATATTGGAAGAAGAGAGTTTCAGAAGGTTATTGGTGGCGTTG TCAAAGGCATATAATTACATAGACAGAGGACAAAAAGATTGTCTCAAAATGAAGGATTCAAGTCAG AAGGGTTGTTTGTCAGTAACCTGCTTAAAACCTGACTGTAATGTTGTTGGTGACATTATTTCTTTC ATGCGTGAGATTCATGGACCTATGGATTTGGTAACACTAATTGATAGTGCTCTCTCTGATAGATAG
SEQ ID NO: 136, Proteína - Oryza sativa
MSMREFVDHWAASSSNGDSDGSLLYLKDWHFVKEYPGYVAYTTPTFFADDWLNMYLDSHPIHRDSD IANHTNEINCADYRFVYMGPKGTWTPLHADVFRSYSWSANVCGRKLWLFLPPSQSHFVFDRNLRSS VYNINDDVSEKQFPEFNNTKWLECTQEQNEIIFVPSGWYHQVHNLEDTISINHNWFNGYNLHWVWN LLHEDYKVAKDYIEDIRDICDDFEGLCQRNLAANTGMNFYDFFVFITRFALANIVELYHIQNPKDT DFISAETANHFVYNLMSIRDVASKMVSTEAFNTENICNISEQNRSAFSDIIKILEEESFRRLLVAL SKAYNYIDRGQKDCLKMKDSSQKGCLSVTCLKPDCNWGDIISFMREIHGPMDL VTLIDS ALSDR
SEQ ID NO: 137, DNA - Oryza sativa
ATGAGGCCCTCGCCGCCTCCCGCCGCCCCGGCGGCGGAACCGGTGCCCCCGTGGCTGAGATCGCTG
CCCGTCGCGCCCGAGTTCCGCCCCACCGCCGCCGAGTTCGCCGATCCCGTCTCCTACATCCTCAAG
ATCGAGCCCGCCGCGGCGCCGTACGGCATCTGCAAGGTCGTGCCGCCGTTGCCCCCGCCGCCGAAG
AAGGCCACCTTCTCCAACCTCTCCCGCTCCTTCGCCGCGCTCCACCCGGACGACCGCTCGCCGTCC
TTCCCCACCCGCCACCAGCAGGTCGGCCTCTGCCCGCGCCGCACGCGCCCGGGGCTCAAGCCCGTG
TGGCGGTCCTCCCACCGCTACACGCTCCCGCAGTTCGAGTCCAAGGCCGGCGCCACCCGCAAGTCG
CTCCTCGCCGGCCTCAACTTCCCTGCCTCCAGGCAACTCACCCCGCTCGACCACGAGGTGCTCTTC
TGGCGCGCATCGGCCGACCGCCCCATCGTGGTCGAGTATGGCAGCGACATGTCGGGCTCGGGATTC
TCCCCTTGCGCCGCGCAGCCGCAGCCGCCGCCGCAGCAGCAACCGACGGCGCGGGCGGCGGCGCAC
CTTGGGGAGACGGCGTGGAACATGCGCGGCGTGGCTAGGAGCCCCGGATCGCTGCTGCGGTTCATG
CCGGAGGATGTCCCCGGGGTCACCACGCCGATGCTCTACGTCGGGATGATGTTCAGTTGGTTCGCG
TGGCACGTCGAGGACCACGACCTGCACAGCCTCAACTACATGCACCTCGGGGCCGCCAAGACGTGG
TACGGCGTGCCGCGCGACGCCGCGCTCGCGTTCGAGGACGTGGTGCGCGAACATGGCTACGGCGGG
GAGGTGAACCCCCTAGAAACCTTCGCTACATTGGGGCAGAAAACAACAGTGATGTCCCCTGAAGTG
CTTGTGGAGTCGGGTATCCCCTGCTGCAGATTGGTGCAGAATGCAGGGGAATTTGTGGTCACTTTT
CCAGGATCTTATCACTGCGGTTTCAGTCATGGATTCAACTGTGGGGAAGCATCAAATATAGCTACT
CCTGAATGGTTGAGAATAGCAAAAGAGGCAGCAATCCGAAGAGCTTCAATCAATCGTCCTCCCATG
GTTTCGCACTATCAATTACTTTACGATCTCGCACTGTCTATGCGTTTTAGGGAACCATCCAATGGT
GAAATGGAGACACGGAGCTCTCGAATAAAGGAGAAGAAGAAATGCGAAGGGGAACAACTGGTCAAG
AAGATGTTCATCCAAAATGTTATTGAAGATAATGAACTGCTTAGTCATCTTCTAAATGACGGATCA
TCTTGTATTATTCTTCCAGCAAATGCCCATGATGGTCCTGGTCTTTCTACTTTGCGCTCAACAGAT
CAATCAAATATGAATTCCAGAATATCACATAACCTATGCAGTAGGGAAGAAGCTCCAGAAGCCTCA
GGATGCTTATCGCCGAACAGGAATGGTGATACCAGAAATTGTATTTCATCAGATACGCATAACATG
GAAGGTGATAAGGGAGATATAATGAGCGCTACTGGATTGTTAGATCAGGGTCTATTATCATGTGTC
ACTTGTGGAATTTTAAGTTTTTCATGTGTGGCTGTACTCAAACCAAGAGATTCTACAGCACGATAC
TTGATGTCTGCTGATTCTAATTCAATTAATAACCAGCTTTCTATTTCTGGAGGGAGTATTCTGGCA
GATGCGCCAACAAATGAAAGGAATGGTGTCATTTCTCGTCCATATTCTGAACACTGTTGCAACGAA
ATAATGGCCGATGATGCAGAAATCGATAAGAATTCTGCTCTTGATCTCTTGGCATTTGCTCATGGG
GGTCAACCAGATCCTGAAGAAGATCCACTGGAGAAAATACTGAAGATTGCACATGGCATTAACAAA
FIGURA 10 CONT. TCACAACCTAATAGTTCAAATAATGTTGGTTGTGTTGGAACAAAGCTGTCCTCAAGTAGCACAGAG
CGCCAAGAAAGACCATCTTCCCAGAACGCTCATTGTAATGGTAGCTCAGTTATTTCAAATGGACCG
AAAGGTGTTCGCACGAGAAATAAGTATCAACTTAAGATGGTACTTTCTGAAGGTTTTCAGGCAAAG
GATATCTATTCTGCGAAGGAAAAGAAGGTTCAATCAGAACCATCAAGCTCAAAAGGGGATGTTAAG
GAGACAATTGATGTTAGTGGCACAGAGAACGATGTCGGATGTAAAAGCACTACAATCTCTGTCAGT
GAACACAGGGGTTCTACAAAGAATATGTATTCAGTGAAGGAAAAGAAGGTTCAATCGAAACCATCA
AGCTTAAAGGGGACTGTTAAAGAGACAGTTGATGTCAGTGGCACAGAGAACGATGCTAGATGTAAA
AGCATTACAATCTCTGTCAGTGAACACAGGGGTTCTACACCTATGACCAATAGTTTAGCTGCATCA
ATCGTGAAACCTGACAAGGATTCATCAAGAATGCATGTATTTTGTCTTGAGCATGCTATTGAGGTT
GAGAAGCAACTGCATGCTATAGGTGGTTCTAATATTATGCTTATATGTCGTCCAGAATATCCCAAA
ATAGAAGCGGAAGCAAGATTGTTGGGTGAAGAAATGGGACTGGTATATGACTGGAAGGGCATTCAT
TTCAAGGAGGCCAACATGGAGGACAGGCAGAAGATACAGGAAGTTCTGCGGGATGAGGAAGCAATA
CCTACAAGCAGTGATTGGGCTGTAAAATTGGGTATTAACCTTTATTATAGTGCAAATCTGGCCAAA
TCTCCTTTATATAACAAACAAATGCCATACAACAGAGTCATTTATAGGGCATTTGGCTGTGATTCT
CCTAATGACTCGCCAGTAATGTTCAATACTTGCGAAAGGAAACAAAGCCACCAGAAGAAAATAGTG
GTTGCTGGCCGGTGGTGTGGGAAAGTATGGATGTCAAAACAGGTCCATCCATACTTGGCTCACAGA
GTTGAAAGCCAGGAAGCGGAAGAAGCAGATAGAATCTGTTCTTATCATTTTGATGAGAAGCACAAA
GCTGAGCCAGTTGGGAATTCTAGTAGAGTGGAAGCCTCCAAAAGAAAGAGTAGCAGTTTGACAGAC
GTAACAGAATCAAGCAATAGAAGGGGGGAAATACCTGGTGAGGAAACAAACACCAAGAGGCCCAAA
CATTCTCAAGAGAACAATCTCAGAGCTTTGGAAACCGCTGCTGAAGTTGTGGTGCCCTCACCAGCT
GGAACAGGTCTCCGCGTTAGCTCCAGGATTGCCAACAGGGCAAACAAGCTAAAATCAAAGATGGAA
AAGGAGGATGTCCCTTCTAGCCGTCCAAAGTCTAACATAAAGGAGAAAAGCAGTCATGCTAGCGGT
CAGAAATCAAATGTTCAAGAGGCGAATGCTAATTCTGCTAGCCATTTGAGAGCAATGCCACCAAAA
CAGAAGGCTGAAGCAGAAGCAAAGAAGCAAATAAGAACTCCAAAACCTCCAAAGCAAGCAGTGGAG
TACTCGTGCGATATTGAGGGTTGTTCTATGAGTTTTCGTACAAAGCGGGACTTGTCTCTGCACAAG
AGTGATATCTGCCCAGTGAAAGGCTGCGGGAAGAAGTTCTTCTCGCACAAGTATCTGCTGCAGCAT
CGCAAGGTTCACACAGATGACCGTCCGCTAACATGCCCATGGAAGGGCTGCAACATGGCATTCAAG
TGGCCATGGGCAAGGACTGAACATCTCAGGGTTCATACAGGCGACAGGCCCTATGTTTGCCATGAG
CCAGGTTGCGCACAGACATTCAGGTTTGTCTCAGATTTCAGCCGTCACAAGCGCAAGACAGGTCAT
TCTGTCAAGAAGAAGAAGAAAGCAAAGAGTTGA
SEQ ID NO: 138, Proteína - Oryza sativa
MRPSPPPAAPAAEPVPPWLRSLPVAPEFRPTAAEFADPVSYILKIEPAAAPYGICKWPPLPPPPK KATFSNLSRSFAALHPDDRSPSFPTRHQQVGLCPRRTRPGLKPVWRSSHRYTLPQFESKAGATRKS LLAGLNFPASRQLTPLDHEVLFWRASADRPIWEYGS DMSGSGFSPCAAQPQPPPQQQPTARAAAH LGETAWNMRGVARSPGSLLRFMPEDVPGVTTPMLYVGMMFSWFAWHVEDHDLHSLNYMHLGAAKTW YGVPRDAALAFEDWREHGYGGEVNPLETFATLGQKTTVMS PEVLVE SGIPCCRLVQNAGEFWTF PGSYHCGFSHGFNCGEASNIATPEWLRIAKEAAIRRASINRPPMVSHYQLLYDLALSMRFREPSNG EMETRSSRIKEKKKCEGEQLVKKMFIQNVIEDNELLSHLLNDGSSCIILPANAHDGPGLSTLRSTD QSNMNSRISHNLCSREEAPEASGCLSPNRNGDTRNCISSDTHNMEGDKGDIMSATGLLDQGLLSCV TCGILSFSCVAVLKPRDSTARYLMSADSNSINNQLSISGGSILADAPTNERNGVISRPYSEHCCNE IMADDAEIDKNSALDLLAFAHGGQPDPEEDPLEKILKIAHGINKSQPNSSNNVGCVGTKLSSSSTE RQERPSSQNAHCNGSSVISNGPKGVRTRNKYQLKMVLSEGFQAKDIYSAKEKKVQSEPSSSKGDVK ETIDVSGTENDVGCKSTTISVSEHRGSTKNMYSVKEKKVQSKPSSLKGTVKETVDVSGTENDARCK SITISVSEHRGSTPMTNSLAASIVKPDKDSSRMHVFCLEHAIEVEKQLHAIGGSNIMLICRPEYPK IEAEARLLGEEMGLVYDWKGIHFKEANMEDRQKIQEVLRDEEAIPTSSDWAVKLGINLYYSANLAK SPLYNKQMPYNRVIYRAFGCDSPNDSPVMFNTCERKQSHQKKIWAGRWCGKVWMSKQVHPYLAHR VESQEAEEADRICSYHFDEKHKAEPVGNSSRVEASKRKSSSLTDVTESSNRRGEIPGEETNTKRPK
FIGURA 10 CONT. HSQENNLRALETAAEVWPSPAGTGLRVSSRIANRANKLKSKMEKEDVPSSRPKSNIKEKS SH ASG QKSNVQEANANSASHLRAMPPKQKAEAEAKKQIRTPKPPKQAVEYSCDIEGCSMSFRTKRDLSLHK SDICPVKGCGKKFFSHKYLLQHRKVHTDDRPLTCPWKGCNMAFKWPWARTEHLRVHTGDRPYVCHE PGCAQTFRFVSDFSRHKRKTGHSVKKKKKAKS
SEQ ID NO: 139, DNA - Oryza sativa
ATGCCGCCCAAGAGGAAGCGCGGTGGCGGGAGGCCGCGCAAGGCCCCGGAGGACGCCGCCGCCAAG
GAAAACGGTGAGAAGACAAACAAGGAGGAGGAAACGCAGGCTTCTCCTGAGGAGAATGGCGCAGGG
CAGACTCAGGCCTCGAGAACCGCAAGAAAGCGCAGGAAGGGTCCTGTTGCTGATCCCTCTTCGACT
GAACTTCCACCCAGGAAGCTCAGGGACAGGCGGAACGTTCCAGCGGTAGACTACAAGGAGAATAAG
CACACAAAAAAGATGGATGGAACTTCAACCATGTGCCATCAGTGCCAAAGGAAGGACAGTGGAAGA
GTTGTGAGGTGCCGGAATGGTGCTGAAAAAAACAGGAGGCACAGATATTGTGTCAAGTGCATCAAA
CGCTGGTACCCGCATCTAACAGAGGACGATTTTGAGAACTGCTGTCCAGTTTGTCACAATAACTGC
AATTGTAAGACTTGTCTGCGGACAAATGTAATAAATAAGGGTGACAAGGAGTTTGCCGATGGTAAG
AACAAAATTAAATACTCTCTGCGTATTGCACGCTTTTTGCTCCCTTGGTTGAAACAACTTCACCAA
GAGCAGATGCTAGAGAAAAGTGTTGAGGCCACAATTAAAGGGATCGATGTAACTGACTTGGAGGTT
CCTCAAGCTCAGTTTAATAATGATGAGCGGATTTACTGTGATAACTGCAGAACATCCATTGTTGAC
TTCCACAGAAGTTGTAAAAGTGGTCACTATGATCTCTGCCTCAGCTGCTGCCAGGAGTTGCGTCAA
GGTCTTACTACTGGTACTGTTGTCACTTGTGACACAGCTGTTGATGTACCTGAAATAGAAGGCAAG
GAAGGTTTGCAAGAGGGAAGTAGTCATAGCAGTGCTGTAGGTCAAGGGGCTTCTGATCAACAGAAT
GACAGGTTGATAGGTAGTGCAGCTCCTTCAGAGGATTGCACTCCTAGTTTGATATGGAGGGCAAAA
AGCAACGGAAGCATACCATGCCCACCTAATGCAGGTGGTTGCGGGGATTGTCTTCTCGAACTTAGG
TGTTTGTTTAAGGAGAACTTTATTTCTGATTTACTGGATAAAGTCAATTCAGTGGTCAATAAGGAA
ACAGAGCAGGAGTTGGGAGGCTCTAGATGTTCCTGCTTCACTGAATCCGGTGAAGTGAACAATGAA
ACATCACGGAAATCAGCTTGCAGAGAGGACTCCAATGATAACTACATATATTGTCCAACTGCTAGA
GAAGTTCAAAGTGGAGCTTTAGATCATTTTCAGCAGCATTGGTTGAATGGTCAGCCAGTCATTGTT
CGTGACGTGCTTGAGCTAACTTCTGGACTGAGCTGGGAGCCAATGGTTATGTGGCGGGCCTTACGG
GAAAAGAGAGACAAGAAAGAGCATGAACGGCTCTCAGTTATAGCTCTTGATTGTCTGACATGGTTT
GAGTTTATGTACCACCAGGATGTGTTGGTGGTGCCAGTTTCATATCTGGGGTTCAACAGCACCATT
GAAACTACTTTATATTTCAAACTGGTTGATATAAATATTCACATGTTTTTTGAGGGGTATTCCCGT
GGAGCTGTTGGTTCGGAGGATTTGCCTGTGCTACTTAAGCTTAAAGATTGGCCACAACATAGTTCC
TTTGAGGAGCGCCTGCCGCGGCATGGTGCTGAGTTCATGTCTGCACTACCATTTCGTGAGTATACA
GATCCAAAATCTGGTCCCCTTAATCTGGCAGTGAAGCTTCCAAAACATGTTAAAAAGCCAGATCTT
GGTCCAAAGACATACATTGCTTATGGTGTCGCCCAAGAGTTGGGAATAGGTGATTCTGTTACGAAG
ATCCATTGCGACATGTCTGATGCGGTTAATATTCTCATGCATACTGATGAGGTAGAACTCAAAGCT
GAAAGGATTACAGCAATAGAGAAAAAGAAAGAGAGCTTACGTAAAGATGGCAAGAATCTTCATGTT
CTGCGACCAGACCATGACGATGATACATCAATAGCTCTCAGTGAATCAACTGAAGTGCCAAGATCT
CGAGGACTTGAAAATGGCTCAAGCATTAAGCAGCCAGCACCAAATGTTGCTGTAATGGACCAGGGA
GGTGTTCATACAGATATGGTAGCTGATGAAGCTGAGGGAAACTTGAGTCTGTCTAATGGGCAATCA
CCCAATCAAAGTGATGCACATAATATGGATATTACTTTCTCCAAGGGGGAAACAGACCATTCTATC
TGCACAATTAATGGGGGAGAGGAGATGGGCAATGGCTTTGGGAGGGAAGATAAATGTAAATCTTCT
CATGGTGTAGGATCATCTGAATCTTCTGATTGTCAAAGACGCAGTAGGCGACGTGATGCTTGCTCT
TCCAGTGCAACAGGGGAAATAAACGAAACCAGCATGGAGACTAACAAATTTACCATATCTATTGAG
CCCAAAGATGATCACCCATTTGTTGAGGGAAATCAGACAGAGGGTGGTGCATTGTGGGATATCTTC
CGACGTGAAGATGTCAGCAAATTGCATGATTATCTGATGAAGCATGCAGAAGAGTTTAGACATTAT
AATTATGAAACAGTCAAACAGGTTTCTCATCCTATTCACGATCAATGCTTTTATCTAACAAATGAG
CACAAGAGAAAGCTCAAGGAAGAACATGGAATTGAGCCTTGGACATTTGAACAGAAACTTGGTGAG
GCTGTGTTTATCCCAGCAGGATGTCCCCACCAAGTCAGAAATTTGAAGTCATGTATAAAGGTTGCA
FIGURA 10 CONT. cttgactttgtttctccggaaaatgtgcaagagtgcatcaggctgacagaagaatttcgcttgctt ccgaagggtcatagggtgaatgaagataaactagaggttaagaagatagctctatatgcacttgat caagccattgacgatatcacaggcaaaagttgcaatgaaaggacaaaggatgaaggggaagaggag gcgtctgccccaagtgttagttaa
SEQ ID NO: 140. Proteína - Oryza sativa
mppkrkrgggrprkapedaaakengektnkeeetqaspeengagqtqasrtarkrrkgpvadpsst elpprklrdrrnvpavdykenkhtkkmdgtstmchqcqrkdsgrwrcrngaeknrrhrycvkcik rwyphlteddfenccpvchnncncktclrtnvinkgdkefadgknkikyslriarfllpwlkqlhq eqmleksveatikgidvtdlevpqaqfnnderiycdncrtsivdfhrscksghydlclsccqelrq glttgtwtcdtavdvpeiegkeglqegsshssavgqgasdqqndrligsaapsedctpsliwrak sngsipcppnaggcgdcllelrclfkenfisdlldkvnswnketeqelggsrcscftesgevnne tsrksacredsndnyiycptarevqsgaldhfqqhwlngqpvivrdvleltsglswepmvmwralr ekrdkkeherlsvialdcltwfefmyhqdvlwpvsylgfnstiettlyfklvdinihmffegysr gavgsedlpvllklkdwpqhssfeerlprhgaefmsalpfreytdpksgplnlavklpkhvkkpdl gpktyiaygvaqelgigdsvtkihcdmsdavnilmhtdevelkaeritaiekkkeslrkdgknlhv lrpdhdddtsialsestevprsrglengssikqpapnvavmdqggvhtdmvadeaegnlslsngqs pnqsdahnmditfskgetdhsictinggeemgngfgredkcksshgvgssessdcqrrsrrrdacs ssatgeinetsmetnkftisiepkddhpfvegnqteggalwdifrredvsklhdylmkhaeefrhy nyetvkqvshpihdqcfyltnehkrklkeehgiepwtfeqklgeavfipagcphqvrnlkscikva ldfvspenvqecirlteefrllpkghrvnedklevkkialyaldqaidditgkscnertkdegeee
asapsvs
SEQ ID NO: 141, DNA - Oryza sativa
atggcggcggaggaggtggaggcggcggcgatcgacggatccggcgaggaggcgaagcggaagagt ggtaagcagaggggatcgggcgccaaggggaggcgccggaacggcgaccgggctttccgcccgccg gcgatgaggccggaggaagaagggcgcggtgttgcgacgaggcccggggcgctcagggaaaggaag ccgccgcccaacgccttcaacgcgccagacgatgatgaggatgtcgagaaaactgatcaacttctc gagcctctcaacaagcccaaaagacgtgatgcagggaagaagagaggacccagaaaaaagaaagtg gatcaagagaacatcaaaacccacaggcataacgcaaatgcagtaaaaggcaagatgttagtcaat gataaggtttcgaagactgaaaagaagcgtaagagaggagacacaggagcggcagaaaat aatggg aaagggaagaaaatgttgacaggtgaaaacgccttaatgtgtcaccaatgccagagaaatgacaaa gggagagtggtctggtgcaagacttgcaacaataagcgcttttgtgtgccatgcattaatcaatgg tatcctgatttgcctgaaaatgaatttgctgcaaaatgcccttattgtcgcaagaattgtaattgc
aaggcatgcctgcgaatgagaggtgtcgaagagcctccaagaaaggaaatttctaaagaaaatcag
attcgttatgcgtgtcatgtgttacgcttgttgcgtccttggctgatagaactgcgacaggagcag atggcagagaaggaattagaggctaagatacaaggtgtttcagttgatcaaataaaggtggaacaa gctgtgtgtgatctagatgagcgtgtctattgcaatagatgcagcacttctatagttgattttcat agaagctgcaagcactgtttctatgacttgtgcttgacctgctgccaggagcttcgcaaaggtgag atccctggaggagaagaggtggaaattttggatcctgaagaaagagacaaggattatgcttttggt aagattc tgtcagatggtgagaaccaaagggactctttgaagtgtcgcagcgacacccaaaacagt gagtcaaacaaaggcatggcttctgacgaaaaccaaaagaaggctctgttactttggaaagcaaac agtaatggtagcataccttgcccacgaaaggaaaaggaagactgcagtttttcatctctagatctg aaatgcttgtttccagagaagttgctccctgaattagaagatagatctgagaaggtcttctggagt gaaacatttgcaaaagaactaggtagaacaagtgagctgtgcccttgttttgatcactcaggcaag ataagaagtgacagcaagaaattacgtcaggctgcaaatagggaggactcgagtgataactactta tactgtccggtggccactgatatccaggacgctgacctgttgcactttcagatgcattgggcaaag ggcgaaccagttgttgtttcagacactcttaagctaacttctggtcttagctgggagccgatggtt
FIGURA 10 CONT. atgtggcgggcagtacgagaacgaaccaaagggaaggcagaagatgagcagtttgctgtgagggca
gtagAttgcctcgactggtgtgaggtggaaattaacatacacatgttttttatgggatatacaagg
ggcagaactcatcccaggacctactggcctgagatgcttaagctaaaggactggcccccttctagc
tcatttgatcagcgattgcctcgccatggtgctgaatttatcagtgcattgccatttccggagtat
actgatccacgatatggtccgctaaatcttgcagtgaagcttcctggtggtgtcctgaagccagat
cttgggccaaaaacttacattgcctatggattttctgaagagttgggcaggggtgactctgtaacc
aaacttcactgtgacatgtctgatgcagtaaacatcttaacacacacagcggaagtgccctgtgag
acttatgatgctgttcagattaaaaacacgcagaaaaagatgaaaatgcaagatgacatggaaata
tatgggatgatagaatcaggcagtgaactcaagccatcagcatgcccagttgaattggggaacaaa
gctgttggtgaagcaccaaaggcctcatgcagcaaagaaaatgttcataccttgaaagacaagtct
aatggtttggatataaacgcttcaccacctgatgatgctggaggtgatgccagggatgaagcattg
tcctatgaatctgtggtacatagtgatgtagctcagtgtccaaaccataaccatgagaccaataat
tctgatgatgcacgtattggagctcagagatgtcaaaagaaagctaaaggtcgtcctccgaagaca
ggttcaggggtatcagagcaccaggaaagtggtggtgctttgtgggatattttccgaagagaggac
tctgagaaattacaagacttccttaggaagcatgcgccagaatttcggcacatccactgcaatcca
gtgaaacaggttattcatccaattcatgatcaagctttctatttaactgcggagcataaaagaaag
ctgaaggaagaatatggtgttgaaccttggacctttgaacaaaagcttggcgaagcagttttgatt
cctgccggatgtcctcaccaagtcaggaatttgaagtcctgcatcaaggttgcactggactttgtt
tcccccgagaatgttggtgagtgtgttaggctgaccaaggaatttagacgacttccatcttcccac
agggctaaagaagataagctagagatcaagaagatggctttccatgctctgaatgaagttctaaac
tttctggatcctccttcctcagaagggtcgaaagaagcggcggagaagcctcgaagggggcgtggt
cgcccaagaaaacactag
SEQ ID NO: 142 Proteína - Oryza sativa
maaeeveaaaidgsgeeakrksgkqrgsgakgrrrngdrafrppamrpeeegrgvatrpgalrerk pppnafnapdddedvektdqlleplnkpkrrdagkkrgprkkkvdqenikthrhnanavkgkmlvn dkvsktekkrkrgdtgaaenngkgkkmltgenalmchqcqrndkgrwwcktcnnkrfcvpcinqw ypdlpenefaakcpycrkncnckaclrmrgveepprkeiskenqiryachvlrllrpwlielrqeq maekeleakiqgvsvdqikveqavcdldervycnrcstsivdfhrsckhcfydlcltccqelrkge
ipggeeveildpeerdkdyafgkils dgenqrds lkcrs dtqnse snkgmas denqkkalllwkan sngsipcprkekedcsfssldlkclfpekllpeledrsekvfwsetfakelgrtselcpcfdhsgk irsdskklrqaanredssdnylycpvatdiqdadllhfqmhwakgepvwsdtlkltsglswe pmv mwravrertkgkaedeqfavravdcldwceveinihmffmgytrgrthprtywpemlklkdwppss sfdqrlprhgaefisalpfpeytdprygplnlavklpggvlkpdlgpktyiaygfseélgrgdsvt klhcdmsdavnilthtaevpcetydavqikntqkkmkmqddmeiygmiesgselkpsacpvelgnk
avgeapkas c skenvh tlkdksngldinas ppddaggdardeals ye swh s dvaqc pnhnhe tnn sddarigaqrcqkkakgrppktgsgvsehqesggalwdifrredseklqdflrkhapefrhihcnp vkqvihpihdqafyltaehkrklkeeygvepwtfeqklgeavlipagcphqvrnlkscikvaldfv spenvgecvrltkefrrlpsshrakedkleikkmafhalnevlnfldppssegskeaaekprrgrg
rprkh
SEQ ID NO: 143, DNA - Oryza sativa
atgttagtcaatgataaggtttcgaagactgaaaagaagcgtaagagaggagacacaggagcggca gaaaataatgggaaagggaagaaaatgttgacaggtgaaaacgccttaatgtgtcaccaatgccag agaaatgacaaagggagagtggtctggtgcaagacttgcaacaataagcgcttttgtgtgccatgc attaatcaatggtatcctgatttgcctgaaaatgaatttgctgcaaaatgcccttattgtcgcaag aattgtaattgcaaggcatgcctgcgaatgagaggtgtcgaagagcagcctccaagaaaggaaatt tctaaagaaaatcagattcgttatgcctgtcatgtgttacgcttgttgcgtccttggctgatagaa
FIGURA 10 CONT. CTGCGACAGGAGCAGATGGCAGAGAAGGAATTAGAGGCTAAGATACAAGGTGTTTCAGTTGATCAA
ATAAAGGTGGAACAAGCTGTGTGTGATCTAGATGAGCGTGTCTATTGCAATAGATGCAGCACTTCT
ATAGTTGATTTTCATAGAAGCTGCAAGCACTGTTTCTATGACTTGTGCTTGACCTGCTGCCAGGAG
CTTCGCAAAGGTGAGATCCCTGGAGGAGAAGAGGTGGAAATTTTGGATCCTGAAGAAAGAGACAAG
GATTATGCTTTTGGTAAGATTCTGTCAGATGGTGAGAACCAAAGGGACTCTTTGAAGTGTCGCAGC
GACACCCAAAACAGTGAGTCAAACAAAGGCATGGCTTCTGACGAAAACCAAAAGAAGGCTCTGTTA
CTTTGGAAAGCAAACAGTAATGGTAGCATACCTTGCCCACGAAAGGAAAAGGAAGACTGCAGTTTT
TCATCTCTAGATCTGAAATGCTTGTTTCCAGAGAAGTTGCTCCCTGAATTAGAAGATAGATCTGAG
AAGGTCTTCTGGAGTGAAACATTTGCAAAAGAACTAGGTAGAACAAGTGAGCTGTGCCCTTGTTTT
GATCACTCAGGCAAGATAAGAAGTGACAGCAAGAAATTACGTCAGGCTGCAAATAGGGAGGACTCG
AGTGATAACTACTTATACTGTCCGGTGGCCACTGATATCCAGGACGCTGACCTGTTGCACTTTCAG
ATGCATTGGGCAAAGGGCGAACCAGTTGTTGTTTCAGACACTCTTAAGCTAACTTCTGGTCTTAGC
TGGGAGCCGATGGTTATGTGGCGGGCAGTACGAGAACGAACCAAAGGGAAGGCAGAAGATGAGCAG
TTTGCTGTGAGGGCAGTAGATTGCCTCGACTGGTGTGAGGTGGAAATTAACATACACATGTTTTTT
ATGGGATATACAAGGGGCAGAACTCATCCCAGGACCTACTGGCCTGAGATGCTTAAGCTAAAGGAC
TGGCCCCCTTCTAGCTCATTTGATCAGCGATTGCCTCGCCATGGTGCTGAATTTATCAGTGCATTG
CCATTTCCGGAGTATACTGATCCACGATATGGTCCGCTAAATCTTGCAGTGAAGCTTCCTGGTGGT
GTCCTGAAGCCAGATCTTGGGCCAAAAACTTACATTGCCTATGGATTTTCTGAAGAGTTGGGCAGG
GGTGACTCTGTAACCAAACTTCACTGTGACATGTCTGATGCAGTAAACATCTTAACACACACAGCG
GAAGTGCCCTGTGAGACTTATGATGCTGTTCAGATTAAAAACACGCAGAAAAAGATGAAAATGCAA
GATGACATGGAAATATATGGGATGATAGAATCAGGCAGTGAACTCAAGCCATCAGCATGCCCAGTT
GAATTGGGGAACAAAGCTGTTGGTGAAGCACCAAAGGCCTCATGCAGCAAAGAAAATGTTCATACC
TTGAAAGACAAGTCTAATGGTTTGGATATAAACGCTTCACCACCTGATGATGCTGGAGGTGATGCC
AGGGATGAAGCATTGTCCTATGAATCTGTGGTACATAGTGATGTAGCTCAGTGTCCAAACCATAAC
CATGAGACCAATAATTCTGATGATGCACGTATTGGAGCTCAGAGATGTCAAAAGAAAGCTAAAGGT
CGTCCTCCGAAGACAGGTTCAGGGGTATCAGAGCACCAGGAAAGTGGTGGTGCTTTGTGGGATATT
TTCCGAAGAGAGGACTCTGAGAAATTACAAGACTTCCTTAGGAAGCATGCGCCAGAATTTCGGCAC
ATCCACTGCAATCCAGTGAAACAGGTTATTCATCCAATTCATGATCAAGCTTTCTATTTAACTGCG
GAGCATAAAAGAAAGCTGAAGGAAGAATATGGTGTTGAACCTTGGACCTTTGAACAAAAGCTTGGC
GAAGCAGTTTTGATTCCTGCCGGATGTCCTCACCAAGTCAGGAATTTGAAGTCCTGCATCAAGGTT
GCACTGGACTTTGTTTCCCCCGAGAATGTTGGTGAGTGTGTTAGGCTGACCAAGGAATTTAGACGA
CTTCCATCTTCCCACAGGGCTAAAGAAGATAAGCTAGAGATCAAGAAGATGGCTTTCCATGCTCTG
AATGAAGTTCTAAACTTTCTGGATCCTCCTTCCTCAGAAGGGTCGAAAGAAGGGGCGGAGAAGCCT
CGAAGGGGGCGTGGTCGCCCAAGAAAACACTAG
SEQ ID NO: 144, Proteína - Oryza sativa
MLVNDKVSKTEKKRKRGDTGAAENNGKGKívMLTGENALMCHQCQRNDKGRWWCKTCNNKRFCVPC INQWYPDLPENEFAAKCPYCRKNCNCKACLRMRGVEEQPPRKEISKENQIRYACHVLRLLRPWLIE LRQEQMAEKELEAKIQGVSVDQIKVEQAVCDLDERVYCNRCSTSIVDFHRSCKHCFYDLCLTCCQE LRKGEIPGGEEVEILDPEERDKDYAFGKILSDGENQRDSLKCRSDTQNSESNKGMASDENQKKALL LWKANSNGSIPCPRKEKEDCSFSSLDLKCLFPEKLLPELEDRSEKVFWSETFAKELGRTSELCPCF DHSGKIRSDSKKLRQAANREDSSDNYLYCPVATDIQDADLLHFQMHWAKGEPVWSDTLKLTSGLS WEPMVMWRAVRERTKGPCAEDEQFA VRAVDCLDWCEVEINIHMF FMGYTRGRTHPRTYWPEMLKLKD WPPSSSFDQRLPRHGAEFISALPFPEYTDPRYGPLNLAVKLPGGVLKPDLGPKTYIAYGFSEELGR GDSVTKLHCDMSDAVNILTHTAEVPCETYDAVQIKNTQKKMKMQDDMEIYGMIESGSELKPSACPV ELGNKAVGEAPKASCSKENVHTLKDKSNGLDINASPPDDAGGDARDEALSYESWHSDVAQCPNHN HETNNSDDARIGAQRCQKKAKGRPPKTGSGVSEHQESGGALWDIFRREDSEKLQDFLRKHAPEFRH IHCNPVKQVIHPIHDQAFYLTAEHKRKLKEEYGVEPWTFEQKLGEAVLIPAGCPHQVRNLKSCIKV ALDFVSPENVGECVRLTKEFRRLPSSHRAKEDKLEIKKMAFHALNEVLNFLDPPSSEGSKEAAEKP
RRGRGRPRKH
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 145, DNA - Ozyza sativa
ATGCCGCCCCAGCCTCCGCCGGCGGCGTCGGCGTCGGCCAGTGCCCCGGATCCCGCCGTCCCGGCT TGGCTCAGGGGGCTCCCCCGCGCGCCCGAGTACCGCCCGACGGAGTCCGAGTTCGCCGACCCCATC GCCTTCCTCTCCCGCGTGGAGCGCGAGGCCGCCGCCTACGGCATCTGCAAGGTCATCCCGCCCCAC CCGCGCCCTTCCCGCCGCTTCGTCTTCGCCCACCTCAACCGCTCCCTCGTCTCCTCCTGCGACGCC CCCGCGCCCTCTCCCGCCGCCGCCTCCGACTCGTCCATTCCTCCATCCTCCTCCTCGCCGCCGCCG GTCTCCGCCGCGGTGTTCACGACACGGCACCAGGAGCTCGGCAACCCGCGGCGTGGACGCCCGACG CCGCAGGTGCTTAAGCAGGTGTGGCAGAGTGGGGAGCGGTACACGCTCGACCAGTTTGAGTCCAAG TCCCGCGCCTTCTCAAAGACGCACCTCGCTGGACTCCACGAACCGACTGCGCTCGCGGTGGAATCA CTCTTCTGGAAGGCGTCGGCGGACCGTCCTATCTATATTGAGTACGCCAATGATGTCCCTGGCTCT GGGTTTGCTGCACCCGTGCAGTTGCAACGCAAGAAGAAGCAGAAAAGAGAGACTGCCCCGATGGAC GAATGGGAGAAGAGTTCAGGCTGGAGGCTGTCAAATAGCCCATGGAACCTGCAAGCAATTGCGCGG GCTCCTGGTTCGCTCACACGGTTTATGCCTGACGATGTTCCTGGGGTGACTTCTCCAATGGTTTAC ATTGGCATGCTGTTCAGCTGGTTTGCGTGGCATGTGGAGGATCATGATCTGCATAGTCTCAACTTC CTCCACACTGGCGCACCTAAGACGTGGTATGCGGTTCCTGGTGATAGGGCTGTTGAGCTTGAGGAA GTTATCCGTGTACATGGCTATGGAGGCAACACTGATCGGATCGCGTCACTAGCAGTGCTTGGTGAG AAAACAACACTAATGTCCCCAGAGGTCCTTATAGACAATGATTGGTGCAATATCCTGGTGAGTTTG
TGGTGA
SEQ ID NO: 146, Proteína - Oryza sativa
MPPQPPPAASASASAPDPAVPAWLRGLPRAPEYRPTESEFADPIAFLSRVEREAAAYGICKVIPPH PRPSRRFVFAHLNRSLVSSCDAPAPSPAAASDSSIPPSSSSPPPVSAAVFTTRHQELGNPRRGRPT PQVLKQVWQSGERYTLDQFESKSRAFSKTHLAGLHEPTALAVESLFWKASADRPIYIEYANDVPGS GFAAPVQLQRKKKQKRETAPMDEWEKSSGWRLSNSPWNLQAIARAPGSLTRFMPDDVPGVTSPMVY IGMLFSWFAWHVEDHDLHSLNFLHTGAPKTWYAVPGDRAVELEEVIRVHGYGGNTDRIASLAVLGE KTTLMSPEVLIDNDWCNILVSLW
SEQ ID NO: 147, DNA - Oryza sativa
ATGGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCGCCGTGCCGGAGGAGCTGCGGTGCAAGCGCTCCGACGGCAAG
CAGTGGCGATGCAGCGCGCCCTCCATGCCCGACAAGACCGTCTGCGAGAAGCACTACGTCCAGGCC
AAGAAGCGCGCCGCCTCCTCCGCGCTCCGGGCCTCCCTCCGCAGGTCCTCCGCCTCCGCCTCCGCC
GCGCGGGGCACGACCCCGCCTGCGCGGATGGCGGTCGCGAGGCCCATCTACGGCAGGGTCGCGGGG
GAGCCGGTGTACGTGGCGGAGCCGGCGCTGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCACGGAGGAGGCAGCCG
GTCCACGGGCTGCCCATGGGCAATGCTGCCGGCGCGCGCACCGCGGCGGAGCTGGTCGGGAGGGGC
TCGGCGGGGCTGGTTGCCTGCAGCTCGGCGGCGGGGGCGGCAGCGGCCGCAACCTGCCATCAGTGC
CGGAGGGTCGCTAATACCATTTGTTGTACAAGCTGCGACAGAAGGGGGTACTGCACCAACTGCATC
TCGAGATGGTACTCTGATATCCCAATTGATGATGTTCGAAAGGTTTGTCCAGCATGTCGTGGCATT
TGTAACTGCAGAGTTTGCTTACTAGGAGATAATGTAATAAAGGCAAGGGTTCAGGAGATATCTGCT
GTAGATAAGTTGGAATATCTTCATAGCATTCTGGCATCTGTCCTTCCAGTATTAAAGCAGATTTAT
TCTGATCAATGTTTCGAAATTGGTGTTGATACAAAAGCTTATGGACTTAGGACAGATATAATCAGG
GCGAAGGTCAATCCTGATGAGCAAATGTGCTGTGACTTCTGCAAAGTGCCAGTATTTGATTATCAC
CGACACTGCCCAAGGTGTTTGTATGACTTATGTCTTGACTGTTGTCGAGACATAAGGCGATCTAGG
ACCAGTGTTGCAAGAGGAGAATATGCTGAAGGTCGTGTGGTAGATAGAAGTAAAGATACTTCGAAT
AAAAGAGCAAGAATGGAACCATCTGCAGAAAGTGCAAATGATAAGTCAGTCCCACAACGAAGGGAC
ATAAAAAATATTGACATTAGATCTTTATTCCCTACATGGAGAGTCAATAATGATGGAAGCATTACT
TGTGGGCCTCATGAGGCTGGTGGTTGTGGCTCCTCGAAGTTAGTGTTAAGGCGAATATTCAAAATA
AACTGGATTAGTAAGCTTGTAAAAAATTCTGAGGAAATGGTCAATGGTTGTAAAGTACATGTTCTT
GAGAATGGATGCTCATCCTGCAATGATGGCAGAACATTAGAGTTAACTGGTCATCGTAACTTTGGT
FIGURA 10 CONT. GTCTCAACATGTTCAAATAATGGTGGTATTGATCGGTTCTGTGTGTTCTCTCCTGTATTAGAGGAC
TTGAAATCTGAAGGTATTATTCATTTTCGTAAACACTGGATAAAAGGAGAACCTGTAGTTATCAGG
AATGCGTTTGAGCCTTCTCTGTCATCAAGCTGGGACCCACTAAATATTTGGCGAGGAATCCAGGAA
ATCATGGATGAAGAAGTGGATGACGATGTCATTGTCAAAGCTGTGGATTGCTCAAACCAAGCAGAG
GTGGATATTGAGCTGAAACAGTTTATCAAAGGTTATTCAGATGGTCACAAGGGGGAAGATGGGGAA
TTGATGATGCTGAAATTGAAAGAGTGGCCCCCACCCAGTGTATTGGAGGAGTTTCTGCTATGCCAA
AGACCAGAATTTATTGTCAATTTTCCATTAGTTGATTTTATACATTCCAGGTGGGGGCTCCTAAAT
CTTTCTGCTAAATTGCCCCCAGACACCCTACAACCTGAAGTTGGCTTGAAGCTGTTAATTGCATAT
GGAAGACATCAAGAAGCTGGTAAAGGTGATTCAGTGACAAATCTAATGATTAACATGGCTGATGTG
GTGCATATGCTAATGCATACAGCCAAAGGGCATGACGTATGTCCAAAGAGGCTACAACCTGAGCGA
TCTGAAAAGATTGCCAATGGAATGACAATGCATGTAAATGCTCATGCACCTGTTCAAAATTTGAAT
GTGGATATGGGGGAACAATCACCTGACCATGTAAGCTCAAAGTTTGATGAAAGAGCGCATGCGTCT
GCCTTGCGATTACAAGAGAAGTCTTCAGATGCCAAACTTAATTGTGGTTTCGAAGGCTCTTCAACT
GAGTTATCTTGCTCGTCACATTCAGAGGAACCAAAAGTTAATGGTTCAGAAAGAAGTCAGGCTGGT
TCTGTTTGGGATGTGTTCCGCAGGCAGGATATTTCAAAGCTGAATGAATATTTAACTGCTAACTGG
GAAGAACTGGCAGCTAGTAGTCAGGTTAAGAATCCTATTTATGAACAATCTATATATCTCAACAAG
TATCATAAAAGGATACTGAAGGATCAATATGGAATTGAACCCTGGACATTCCAACAACATATCGGT
GAGGCTGTATTTGTTCCTGCTGGCTGCCCATTCCAAGTGAAAAATCTCCAGTCTACGGTTCAATTG
GCTCTTGATTTCCTGTCACCGGAAAGTTTGGGGGAGTCGGCCCGAATGGCCCAGGAGATTCGCTGC
CTACCAAATGATCATGATGCAAAACTGAAGATGCTCGAGATTGGAAAAATCTCTTTATATGCAGCT
AGTTCTGCTGTCAGAGAAATTCAGAGAATAACCCTCGATCCCAAGTTTAATCTAGACCTTAAATTC
GAGGATCAGAATCTAACTCAGGCGGTTTCTGAGAACTTGGCTAGAGTCACCAAACAACGGAATGTA
CCATGCAGCTGA
SEQ ID NO: 148, Proteína - Oryza sativa
ME AAAAAAAVPEELRCKRSDGKQWRCSAPSMPDKTVCEKHYVQAKKRAASSALRASLRRSS ASASA ARGTTPPARMAVARPIYGRVAGEPVYVAEPALPPPPPPPRRRQPVHGLPMGNAAGARTAAELVGRG SAGLVACSSAAGAAAAATCHQCRRVANTICCTSCDRRGYCTNCISRWYSDIPIDDVRKVCPACRGI CNCRVCLLGDNVIKARVQEISAVDKLEYLHSILASVLPVLKQIYSDQCFEIGVDTKAYGLRTDIIR AKVNPDEQMCCDFCKVPVFDYHRHCPRCLYDLCLDCCRDIRRSRTSVARGEYAEGRWDRSKDTSN KRARMEPSAESANDKSVPQRRDIKNIDIRSLFPTWRVNNDGSITCGPHEAGGCGSSKLVLRRIFKI NWISKLVKNSEEMVN.GCKVHVLENGCSSCNDGRTLELTGHRNFGVSTCSNNGGIDRFCVFSPVLÈD LKSEGIIHFRKHWIKGEPWIRNAFEPSLSSSWDPLNIWRGIQEIMDEEVDDDVIVKAVDC SNQAE VDIELKQFIKGYSDGHKGEDGELMMLKLKEWPPPSVLEEFLLCQRPEFIVNFPLVDFIHSRWGLLN LSAKLPPDTLQPEVGLKLLIAYGRHQEAGKGDSVTNLMINMADWHMLMHTAKGHDVCPKRLQPER SEKIANGMTMHVNAHAPVQNLNVDMGEQSPDHVSSKFDERAHASALRLQEKSSDAKLNCGFEGSST ELSCSSHSEEPKVNGSERSQAGSVWDVFRRQDISKLNEYLTANWEELAASSQVKNPIYEQSIYLNK YHKRILKDQYGIEPWTFQQHIGEAVFVPAGCPFQVKNLQSTVQLALDFLSPESLGESARMAQEIRC LPNDHDAKLKMLEIGKISLYAAS SAVREIQRITLDPKFNLDLKFE DQNLTQAVSENLARVTKQRNV PCS
SEQ ID NO: 149, DNA - Oryza sativa
ATGGCGGCGGGGAACGGCCGGATGGAGGCGGCGCTGGGCTGCCTCGCGGCGCTCCCCGACGAGGTG CTCTGCGCCGTCGTCGACCTCCTCCCGCCCACCGACGTCGGCCGCCTCGCCTGCGTCAGCAGTGTC ATGTACATACTTTGCAATGAGGAGCCTCTCTGGATGAGCAAGTGTCTTTCAGTTGGGGGTCTTCTT GTGTAT AGAGGTTCTTGGAAGAAAACAGCATTGTCTAGACTTAATCTTTGTTCAGAAAATGATGAG ATTTACCAGAAGCCTCGCCATTTTGATGGGTTCAATTCCATGCACTTATACAGGAGATGGTACAGA TGTTTTACTAATTTGAGTAGCTTTTCCTTTGATAATGGGCACGTTGAAAGGAAAGATGACCTTTCT
FIGURA 10 CONT. CTAGACCAATTTCGCGCTCAGTATGATGGAAAATGTCCAGTTTTGCTTACTAAACTGGCTGAAACC
TGGCCAGCAAGGACTAAATGGACAGCGCAGCAACTGACACATGATTATGGTGAAGTTCCCTTTAGG
ATATCTCAGAGAAGCCCTCAAAAGATAAAAATGAAACTAAAAGATTATGTTTTTTACATGGAACTC
CAGCATGACGAAGATCCACTTTACATATTTGATGATAAGTTTGGAGAATCAGCACCTACACTATTG
GAAGATTACAGTGTCCCTCATCTATTTCAAGAAGATTTCTTTGAAATCATGGATTACGACCAACGA
CCAGCTTTCAGATGGCTTATTATTGGACCAGAGAGATCAGGTGCTTCTTGGCATGTTGATCCAGGG
TTGACCAGTGCCTGGAATACTCTTCTTTGTGGCCGAAAAAGGTGGGCAATGTACCCTCCTGGAAGA
GTACCAGGTGGTGTCACAGTACATGTCAGTGATGAAGATGGTGATGTTGACATTGAAACTCCTACA
TCTTTGCAGTGGTGGCTAGATATCTACCCAAATCTTGCTGAGCATGAGAAACCACTGGAATGCACA
CAATTACCAGGAGAGACCATATTTGTTCCTAGTGGGTGGTGGCATTGTGTTTTGAACCTTGACATG
ACAATTGCTGTCACGCAAAATTTTGTCAACCAATCAAATTTTAAGCATGTATGTTTGGACATGGCA
CCTGGTTACTGTCACAAAGGAGTTTGCCGTGCTGGCTTACTTGCTGCTCCAGACAAATCTATTAGA
GATATTGAAAATCTTCCTAGTATAACGAGTAGATTGAACCACTCTGACATGGCCTGTAAGGAAAAA
AGACTGAAAAGTTCAGAGCCTATAAGAACTTCAAATAATGCAAATCAGTGTTCTGCATTTGAGTTC
TCAGATGTTCATGAAAACTTGGGGGACCAAGTTTTTTCGTATGATATAGATTTCTTATCCCAATTC
CTTGAGAAAGAAAAGGATCACTATTCTTCTGTCTGGAGCCCTACTAATTCAATTGGCCAGAGAGAA
GCAAGAGAATGGCTACGTAGGCTATGGGTTCTTAAACCTGAATTGAGAGAACTAATATGGAAGGGT
GCATGTCTAGCAATTAATGTAGACAAGTGGTATTCATGCTTAGAGGAAATAAGTGCATGCCATAGT
TTACCACCAGCTTCTGAAGATGAGAAGCTTCCTGTTGGCACAGGTAGCAACCCAGTCTTCATTGTT
TCTGGCAATGTGATCAAAATTTATGCTGAAGGAGGGTTGGGTTATTCTATACATGGTTTGGGCACA
GAGCTTGAGTTCTATGATCTTCTGCAAAAACTTGGCTCGCCATTGATCAACCATGTCCCTGAGATC
ATTGCAAGTGGCTTTCTTGTGTACCTGGATGGTGTCTACAAGACAGTTCCATGGGATGGAAACGGA
ATACCAGATGTTCTAGCTAAATACTACTCTTTGGAGGTGTCTTATGCAAACGGCTCTTTTCCTCTT
GGATTATGGAGCAAGCAACTGTTTGGATTGAGTAATTCAACTGATGCTCCAGACAGACCAATTTGT
CCTTACATGGTTACCAGAAAATGCAAAGGGGATATTTTTGCTCGCATACGTGATAAATTGACCAAG
ACTGATGTTTTGAATCTTGCATCATCCTTGGGAGTTCAAATGCGAAATATTCATCAATTACCCCTT
CCACATGTGGAACACATATCCAAATCTGGGAACGAAGATATCAAAGCAAAGGAAAATTCAATTTCT
GATGTCACTCATGTTCCGCCTGAATGGAAACAAGTAGTTTCTACTCTAGACAGGAGAAAGAAAAGT
ATAAAGAAGCATCTAAGTAACTGGGGTGGTTCAATTCCACAGGTTCTAATTGAGAAGGCTGAAGAA
TATCTCCCTGACGACATCCGCTTTCTTATCAAGTTTGTTAAGGACGATGATGGTGATTCAGTCTAT
GTGGTACCTTCTTGGATACATTCAGATATAATGGATGATAACATTCTCATTGAGGGGACCACAGAA
CCAGGAACTTCCACTGATTGCATTGCCGTTGAAGATCTGAACAAAATGGATGCAATTCATATCATT
GATTTCAGTGATCTGTCCATTGGGGATCCTCTATGTGACTTAATTCCACTGCACTTGGATGTATTC
CGTGGTGATATTGATCTTCTCAGGCAGTTTTTACGAAGCTATCAGCTTCCTTTTCTGAGAGCAGAA
TCAAATAAAGATATATACAAGTCAATACAAAATTCTAAATTCAGCAGGGCATCGTATCGTGCGATG
TGCTACTGCATACTTCACGAGGACAACGTCCTGGGAGCCATATTTAGCCTGTGGAAGGATCTGGGC
ACCGCGACGTCATGGGAAGATGTTGAACACTTGGTTTGGGGAGAGCTGAATCAATACCAGCAGTCA
TGCAGCGTGGGCGAAATTAACTGA
SEQ ID NO: 150, Proteína - Oryza sativa
MAAGNGRMEAALGCLAALPDEVLCAWDLLPPTDVGRLACVSSVMYILCNEEPLWMSKCLSVGGLL VYRGSWKKTALSRLNLCSENDEIYQKPRHFDGFNSMHLYRRWYRCFTNLSSFSFDNGHVERKDDLS LDQFRAQYDGKCPVLLTKLAETWPARTKWTAQQLTHDYGEVPFRISQRSPQKIKMKLKDYVFYMEL QHDEDPLYIFDDKFGESAPTLLEDYSVPHLFQEDFFEIMDYDQRPAFRWLIIGPERSGASWHVDPG LTSAWNTLLCGRKRWAMYPPGRVPGGVTVHVSDEDGDVDIETPTSLQWWLDIYPNLAEHEKPLECT QLPGETIFVPSGWWHCVLNLDMTIAVTQNFVNQSNFKHVCLDMAPGYCHKGVCRAGLLAAPDKSIR DIENLPSITSRLNHSDMACKEKRLKSSEPIRTSNNANQCSAFEFSDVHENLGDQVFSYDIDFLSQF LEKEKDHYSSVWSPTNSIGQREAREWLRRLWVLKPELRELIWKGACLAINVDKWYSCLEEISACHS
FIGURA 10 CONT. LPPPSEDEKLPVGTGSNPVFIVSGNVIKIYAEGGLGYSIHGLGTELEFYDLLQKLGSPLINHVPEI IASGFLVYLDGVYKTVPWDGNGIPDVLAKYYSLEVSYANGSFPLGLWSKQLFGLSNSTDAPDRPIC PYMVTRKCKGDIFARIRDKLTKTDVLNLASSLGVQMRNIHQLPLPHVEHISKSGNEDIKAKENSIS DVTHVPPEWKQVVSTLDRRKKSIKKHLSNWGGSIPQVLIEKAEEYLPDDIRFLIKFVKDDDGDSVY WPSWIHS DIMDDNI LIEGTTEPGTSTDCIAVEDLNíCMDAIHI IDFS DLSIGDPLCDLIPLHLDVF RGDIDLLRQFLRSYQLPFLRAESNKDIYKSIQNSKFSRASYRAMCYCILHEDNVLGAIFSLWKDLG TATSWEDVEHLVWGELNQYQQSCSVGEIN
SEQ ID NO: 151, DNA - Oryza sativa
ATGGAGATGGAGGAGGCGGTAGACGGCAAGCACCCGAAGCGTGGGAGGGGCAGGCCGAGGGGACGA
CGGGGCAGGGGCAGGGGCAGGGGGAGGGGCGGCCGCTCCCTCGCGTCGCCGGCGGCGGGGCCCGGA
GACCAAGGGCCGCGGCGGCGGCGCGGGGTCGTCCCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGGGGAAGGGCG
CTGAGGGAGAGGAGGCCGGCGCCTGGTGCCTACCGCGAGAGCGGAGCTGATAATGACGATGATGGC
GGCGGCGACGATGAGCACGACGAGCAGAATGATGATGGTGCTGAAAAATCGGATAATCAAGTTGTG
GATTCTCTTAATGAACCCAACAGAAGTAATACAGGGAAGAAGCGGGGAAGACCAAAGAAAGTGAAA
GCAGAGCAGGAGGACAGTAACCAACTCTCCAACGGGAAACACCTTGGCGAAAACAATGGGAATGAT
GAAGCGATAATGATGAAGCCTTCAAAAGAATCGAAGAAAAGAGGTGCAGGAAAGAAACAAGAGGAA
GAAGAGAATAATACCATATCCATTGAGGATGAAATGTGTGATGCGAACAATAAGAAGGGGAAGAAG
ATGCTCACTGGGGAAAATGCTTTGATGTGCCACCAGTGTCAAAGAAATGACAAAGGGAGGGTGATT
TGGTGTAAATCATGCAACAATAAGCGCTTCTGTGAGCCATGCATGAAACGATGGTACCCAGGTTTG
TCAGAAGTTGATTTTGCTGCAAAATGCCCATATTGTAGAAAGAACTGTAATTGCAAGGCATGCCTA
AGAATGATAGGAGTTGAAAAGCCCCCTGAAAAGAAGATTTCTGAGGAAAATCAACGACGTTATGCT
TTTCGTATTGTAGACTTGTTGCTTCCTTGGTTGAAAGAACTTCAACAGGAGCAGATGAAGGAGAAG
GAATTAGAGGGTAGATTACAAGGTGTTTCTATGGATGAAGTAAAGTTGGAACAAGCTGATTGTGAT
ATGGATGAGCGTGTTTATTGTGATAGGTGCAAAACTTCGATAGTTGATTTTCATAGAAGCTGCAAG
GCTTGTTCGTATGACTTGTGCCTTGCATGCTGCTGGGAGCTTCGCAAAGGTGAGATTCCAGGAGGA
GAAGAGGCAAAGAGTGTGCAGTGGGAAGAGAGAGGTCAGAAGTATGTTTTTGGTAATATTTCCAAG
GATGAGAAGAAAAGGGTATCTTCGAAGAGGCACATGGAGACCCCCAGTACTGAAACTTGCAATGAC
ATGGCTGTTGCTGGGGACCCAAATAACCCTTTGTTACTGTGGAAAGCTAATAGTGATGGCAGTATA
CCTTGTCCACCAAAGGAAATAGGGGGCTGCGGTGCTTCATCTTTGGTACTCAGATGCTTATTACCA
GAAATTATGCTTTCTGAGTTAGAACACAGGGCTAACAAAGTTATTAAGAGAGAAGCATTTGATAAA
GCAATAAACGAAACAAGTGATCAGTGCCCTTGCTTTTATCACACAAGCAAGATAAGAACAAATGCT
ACTCGAGAGGCAGCAAACAGAAAGGGCTCAAGTGATAACTACTTGTACTGTCCAGATGCCAATAAT
ATCCAGGAGGATGACCTGTCGCACTTTCAGATGCATTGGTCAAAAGGTGAACCGGTTATTGTTTCT
GATGCTCTTCGGTTAACATCTGGTCTGAGCTGGGAGCCATTGGTTATGTGGCGGGCATTGCGAGAG
AAGAAAACCAATGGTGATGTTGAAGATGAGCACTTTGCTGTTAAGGCAGTGGATTGCCTTGATTGG
AATGAGGTGGAAATTAACATACACATGTTCTTTATGGGGTATATGAGAGGTAGAAGACATCCGATG
ACCTTTTGGCCTGAGATGCTTAAGCTAAAAGATTGGCCACCATCTAGTATGTTTGACCAGAGGTTA
CCTCGCCATGGTGCTGAGTTTATAACTGCATTGCCATTTCCCGAGTATACTGATCCACGATATGGC
CCGCTAAATCTTGCTGTCAGGCTTCCTGCTGGTGTACTGAAGCCTGATCTTGGGCCAAAAACTTAT
ATTGCTTATGGATGTTATGAAGAGTTAGGCAGGGGTGACTCTGTGACCAAGCTTCATTGCGACATG
TCTGATGCGGTAAATATCTTGATGCACACAGCTGAAGTGTCCTATGACACTGAACAGCTTGACAAG
ATAGCAAAAATTAAAATGAAAATGAGAGAACAAGATCTTCATGAACTGTTTGGGGTTTCAGAATCA
GGCGCCAAGGGTAAAGCTGATGATGAAGCATCGAAAATCTCATGTAACATGGAAAACAAACACACC
TCTAACCAAAGTACTAAGGGTTTGGACATTAATGCTTTACCACCTGATGATTCTGGAAGTGATATT
GGGGATAAACCATCATTTTGTCAATCTGAGGTAGAAAGTGAATTAACACAATGTTCAAAACACAAT
CACGAGGTTAATAGTTCTGTCAAGATGCATGCTGGAGCTCATTGTACTTCAGACAACCAAGGATAC
ATTGACAGGAGTGGATTCAAACGCAAAGATTCAGACTGTTCAGACCAACAGAAAACTGGTGGCGCT
FIGURA 10 CONT. TTGTGGGATATTTTCCGAAGAGAAGATTCTGAGAAGTTACAAGATTATCTTCGGAAGCATGCCTCA GAATTTCGGCACATACACTGCAATCCAGTGAAAAATGTTTCTCACCCAATTCATGACCAGACTTTC TATTTAACTGTGGAGCATAAGAGAAAGCTCAAGGAAGAACACGGTGTTGAACCATGGACATTCGAG CAGAAGCTAGGCGATGCAGTTTTCATTCCTGCTGGATGTCCACACCAAGTGAGAAATTTAAAGTCT TGCATCAAGGTTGCTCTAGACTTTGTTTCCCCTGAAAATGTTGGTGAGTGTGTTAAGCTGACCGGA GAGTTTAGACGTCTTCCATCTGATCACAGGGCTAAAGAAGATAAACTAGAGATTAAGAAGATTGCT CTCAATGCTCTTAAAGAAGTCGTAAATTTCTTAGATCCTTTACCAAAAGGGTCAAAGAACAGGGAT GAAGTGGTAGAAGTGACCAAACCAAAAAGGAAATACGGTAACCGAAGAGGTGACCTGAAGAGTGGG GAAGACCAACCCATTGATGAATCCATAGAAGAAAGGAAGCCTAAAAAGCGAGGGAGATCTAAACGG
TGA
SEQ ID NO: 152, Proteína - Oryza satxva
MEMEEAVDGKHPKRGRGRPRGRRGRGRGRGRGGRSLASPAAGPGDQGPRRRRGWPAAAAAAGGRA LRERRPAPGAYRESGADNDDDGGGDDEHDEQNDDGAEKSDNQWDSLNEPNRSNTGKKRGRPKKVK AEQEDSNQLSNGKHLGENNGNDEAIMMKPSKESKKRGAGKKQEEEENNTISIEDEMCDANNKKGKK MLTGENALMCHQCQRNDKGRVIWCKSCNNKRFCEPCMKRWYPGLSEVDFAAKCPYCRKNCNCKACL RMIGVEKPPEKKISEENQRRYAFRIVDLLLPWLKELQQEQMKEKELEGRLQGVSMDEVKLEQADCD MDERVYCDRCKTSIVDFHRSCKACSYDLCLACCWELRKGEIPGGEEAKSVQWEERGQKYVFGNISK DEKKRVSSKRHMETPSTETCNDMAVAGDPNNPLLLWKANSDGSIPCPPKEIGGCGASSLVLRCLLP EIMLSELEHRANKVIKREAFDKAINETSDQCPCFYHTSKIRTNATREAANRKGSSDNYLYCPDANN IQEDDLSHFQMHWSKGEPVIVSDALRLTSGLSWEPLVMWRALREKKTNGDVEDEHFAVKAVDCLDW NEVEINIHMFFMGYMRGRRHPMTFWPEMLKLKDWPPS SMFDQ RL PRH GAEFITALPFPE YTDPRYG PLNLAVRLPAGVLKPDLGPKTYIAYGCYEELGRGDSVTKLHCDMSDAVNILMHTAEVSYDTEQLDK IAKIKMKMREQDLHELFGVSESGAKGKADDEASKISCNMENKHTSNQSTKGLDINALPPDDSGSDI GDKPSFCQSEVESELTQCSKHNHEVNSSVKMHAGAHCTSDNQGYIDRSGFKRKDSDCSDQQKTGGA LWDIFRREDSEKLQDYLRKHASEFRHIHCNPVKNVSHPIHDQTFYLTVEHKRKLKEEHGVEPWTFE QKLGDAVFIPAGCPHQVRNLKSCIKVALDFVSPENVGECVKLTGEFRRLPSDHRAKEDKLEIKKIA LNALKEWNFLDPLPKGSKNRDEWEVTKPKRKYGNRRGDLKSGEDQPIDESIEERKPKKRGRSKR
SEQ ID NO: 153, DNA - Oryza sativa
ATGGAGATGGAGGAGGCGGTAGACGGCAAGCACCCGAAGCGTGGGAGGGGCAGGCCGAGGGGACGA CGGGGCAGGGGCAGGGGCAGGGGGAGGGGCGGCCGCTCCCTCGCGTCGCCGGCGGCGGGGCCCGGA GACCAAGGGCCGCGGCGGCGGCGCGGGGTCGTCCCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGGGGAAGGGCG CTGAGGGAGAGGAGGCCGGCGCCTGGTGCCTACCGCGAGAGCGGAGCTGATAATGACGATGATGGC GGCGGCGACGATGAGCACGACGAGCAGAATGATGATGGTGCTGAAAAATCGGATAATCAAGTTGTG GATTCTCTTAATGAACCCAACAGAAGTAATACAGGGAAGAAGCGGGGAAGACCAAAGAAAGTGAAA GCAGAGCAGGAGGACAGTAACCAACTCTCCAACGGGAAACACCTTGGCGAAAACAATGGGAATGAT GAAGCGATAATGATGAAGCCTTCAAAAGAATCGAAGAAAAGAGGTGCAGGAAAGAAACAAGAGGAA GAAGAGAATAATACCATATCCATTGAGGATGAAATGTGTGATGCGAACAATAAGAAGGGGAAGAAG ATGCTCACTGGGGAAAATGCTTTGATGTGCCACCAGTGTCAAAGAAATGACAAAGGGAGGGTGATT TGGTGTAAATCATGCAACAATAAGCGCTTCTGTGAGCCATGCATGAAACGATGGTACCCAGGTTTG TCAGAAGTTGATTTTGCTGCAAAATGCCCATATTGTAGAAAGAACTGTAATTGCAAGGCATGCCTA AGAATGATAGGAGTTGAAAAGCCCCCTGAAAAGAAGATTTCTGAGGAAAATCAACGACGTTATGCT TTTCGTATTGTAGACTTGTTGCTTCCTTGGTTGAAAGAACTTCAACAGGAGCAGATGAAGGAGAAG GAATTAGAGGGTAGATTACAAGGTGTTTCTATGGATGAAGTAAAGTTGGAACAAGCTGATTGTGAT ATGGATGAGCGTGTTTATTGTGATAGGTGCAAAACTTCGATAGTTGATTTTCATAGAAGCTGCAAG GCTTGTTCGTATGACTTGTGCCTTGCATGCTGCTGGGAGCTTCGCAAAGGTGAGATTCCAGGAGGA GAAGAGGCAAAGAGTGTGCAGTGGGAAGAGAGAGGTCAGAAGTATGTTTTTGGTAATATTTCCAAG
FIGURA 10 CONT. GATGAGAAGAAAAGGGTATCTTCGAAGAGGCACATGGAGACCCCCAGTACTGAAACTTGCAATGAC ATGGCTGTTGCTGGGGACCCAAATAACCCTTTGTTACTGTGGAAAGCTAATAGTGATGGCAGTATA CCTTGTCCACCAAAGGAAATAGGGGGCTGCGGTGCTTCATCTTTGGTACTCAGATGCTTATTACCA GAAATTATGCTTTCTGAGTTAGAACACAGGGCTAACAAAGTTATTAAGAGAGAAGCATTTGATAAA GCAATAAACGAAACAAGTGATCAGTGCCCTTGCTTTTATCACACAAGCAAGATAAGAACAAATGCT ACTCGAGAGGCAGCAAACAGAAAGGGCTCAAGTGATAACTACTTGTACTGTCCAGATGCCAATAAT ATCCAGGAGGATGACCTGTCGCACTTTCAGATGCATTGGTCAAAAGGTGAACCGGTTATTGTTTCT GATGCTCTTCGGTTAACATCTGGTCTGAGCTGGGAGCCATTGGTTATGTGGCGGGCATTGCGAGAG AAGAAAACCAATGGTGATGTTGAAGATGAGCACTTTGCTGTTAAGGCAGTGGATTGCCTTGATTGG AATGAGGTGGAAATTAACATACACATGTTCTTTATGGGGTATATGAGAGGTAGAAGACATCCGATG ACCTTTTGGCCTGAGATGCTTAAGCTAAAAGATTGGCCACCATCTAGTATGTTTGACCAGAGGTTA CCTCGCCATGGTGCTGAGTTTATAACTGCATTGCCATTTCCCGAGTATACTGATCCACGATATGGC CCGCTAAATCTTGCTGTCAGGCTTCCTGCTGGTGTACTGAAGCCTGATCTTGGGCCAAAAACTTAT ATTGCTTATGGATGTTATGAAGAGTTAGGCAGGGGTGACTCTGTGACCAAGCTTCATTGCGACATG TCTGATGCGGTAAATATCTTGATGCACACAGCTGAAGTGTCCTATGACACTGAACAGCTTGACAAG ATAGCAAAAATTAAAATGAAAATGAGAGAACAAGATCTTCATGAACTGTTTGGGGTTTCAGAATCA GGCGCCAAGGGTAAAGCTGATGATGAAGCATCGAAAATCTCATGTAACATGGAAAACAAACACACC TCTAACCAAAGTACTAAGGGTTTGGACATTAATGCTTTACCACCTGATGATTCTGGAAGTGATATT GGGGATAAACCATCATTTTGTCAATCTGAGGTAGAAAGTGAATTAACACAATGTTCAAAACACAAT CACGAGGTTAATAGTTCTGTCAAGATGCATGCTGGAGCTCATTGTACTTCAGACAACCAAGGATAC ATTGACAGGAGTGGATTCAAACGCAAAGATTCAGACTGTTCAGACCAACAGAAAACTGGTGGCGCT TTGTGGGATATTTTCCGAAGAGAAGATTCTGAGAAGTTACAAGATTATCTTCGGAAGCATGCCTCA GAATTTCGGCACATACACTGCAATCCAGTGAAAAATGTTTCTCACCCAATTCATGACCAGACTTTC TATTTAACTGTGGAGCATAAGAGAAAGCTCAAGGAAGAACACGGTGTTGAACCATGGACATTCGAG CAGAAGCTAGGCGATGCAGTTTTCATTCCTGCTGGATGTCCACACCAAGTGAGAAATTTAAAGTCT TGCATCAAGGTTGCTCTAGACTTTGTTTCCCCTGAAAATGTTGGTGAGTGTGTTAAGCTGACCGGA GAGTTTAGACGTCTTCCATCTGATCACAGGGCTAAAGAAGATAAACTAGAGATTAAGAAGATTGCT CTCAATGCTCTTAAAGAAGTCGTAAATTTCTTAGATCCTTTACCAAAAGGGGATGAAGTGGTAGAA GTGACCAAACCAAAAAGGAAATACGGTAACCGAAGAGGTGACCTGAAGAGTGGGGAAGACCAACCC ATTGATGAATCCATAGAAGAAAGGAAGCCTAAAAAGCGAGGGAGATCTAAACGGTGA
SEQ ID NO: 154, Proteína - Oryza sativa
MEMEEAVDGKHPKRGRGRPRGRRGRGRGRGRGGRSLASPAAGPGDQGPRRRRGWPAAAAAAGGRA LRERRPAPGAYRESGADNDDDGGGDDEHDEQNDDGAEKSDNQWDSLNEPNRSNTGKKRGRPKKVK AEQEDSNQLSNGKHLGENNGNDEAIMMKPSKESKKRGAGKKQEEEENNTISIEDEMCDANNKKGKK MLTGENALMCHQCQRNDKGRVIWCKSCNNKRFCEPCMKRWYPGLSEVDFAAKCPYCRKNCNCKACL RMIGVEKPPEKKISEENQRRYAFRIVDLLLPWLKELQQEQMKEKELEGRLQGVSMDEVKLEQADCD MDERVYCDRCKTSIVDFHRSCKACSYDLCLACCWELRKGEIPGGEEAKSVQWEERGQKYVFGNISK DEKKRVSSKRHMETPSTETCNDMAVAGDPNNPLLLWKANSDGSIPCPPKEIGGCGASSLVLRCLLP EIMLSELEHRANKVIKREAFDKAINETSDQCPCFYHTSKIRTNATREAANRKGSSDNYLYCPDANN IQEDDLSHFQMHWSKGEPVIVSDALRLTSGLSWEPLVMWRALREKKTNGDVEDEHFAVKAVDCLDW NEVE INIHMFFMGYMRGRRHPMTFWPEMLKLKDWPPSSMFDQ RLPRH GAEFITALPFPEYTDPRYG PLNLA VRLPAGVLKPDLGPKTYIAYGC YEELGRGDS VTKLHCDMS DA VNILMHTAEVSYDTEQLDK IAKIKMKMREQDLHELFGVSESGAKGKADDEASKISCNMENKHTSNQSTKGLDINALPPDDSGSDI GDKPSFCQSEVESELTQCSKHNHEVNSSVKMHAGAHCTSDNQGYIDRSGFKRKDSDCSDQQKTGGA LWDIFRREDSEKLQDYLRKHASEFRHIHCNPVKNVSHPIHDQTFYLTVEHKRKLKEEHGVEPWTFE QKLGDAVFIPAGCPHQVRNLKSCIKVALDFVSPENVGECVKLTGEFRRLPSDHRAKEDKLEIKKIA LNALKEWNFLDPLPKGDEWEVTKPKRKYGNRRGDLKSGEDQPIDESIEERKPKKRGRSKR
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 155, DNA - Oryza sativa
ATGATGGGGGTTACCACCACGCTCAACGAGGACACTGAACCCTCTATTCCACCTGGATTTGGACCT
TTTGCTACCCTTCCGTTATGGGGAATCCACAATGATGCCAAACCTGCTGTTACTCATTCTACTCCT
GTTCAAGCATTGCAAAGCATTAGAAAAGACAGCGAAGAATGCCAACCCAGTGCGGCTGTGTCTCGG
AGTGATACACCTTGCAGCACTTCCGGAACCCAGACATGCAGAAAATCACTGCGTAACAGACCCCCA
ATAGACTATAGCCGCTTTGAACATATATCGGATGAAGATTCTGATGTCGAAATAGTGGAAAAGGAT
GTAAGTTCAACGAGACGCAGACAACAGCTACCGAAAGGAGTACTTCGAGGATGTGCAGAATGCAGT
GACTGTCAAAAGGTTATCGCAAAATGGAATCCAGCTGGTGCACGCAGGCCTGTTCTTGATGAGGCT
CCTGTTTTCTATCCAACAGAGGAGGAATTTGAAGACACTCTAAAATACATTGAGAGTATACGGCCA
ATGGCGGAACCATATGGTATTTGCCGTATTGTCCCACCATCTTCTTGGAAGCCTCCATGCCTTCTT
AAAGATAAAAGCATATGGGAAGGATCAAAATTCTCTACTCGGGTACAAAAGGTTGACAAGCTCCAA
AACCGTAAATCATCAAAAAAGGGCAGAAGAGGTGGAATGATGAAGAGGAGAAAGCTTGCAGAGTCA
GAGGAGAACAGTGCCACTGCTCACACTCAGACAGGGATGCAGCAAAGTCCAGAGAGATTTGGATTT
GAACCTGGGCCAGAGTTCACGTTACAGACATTTCAGAAATATGCAGATGATTTCAGTAAGCAGTAC
TTTAGGAAAGATACATCGATGGATTCAGTACCATCAGTGGAAGATATTGAAGGTGAGTACTGGCGC
ATCGTTGAGGTTCCCACAGAAGAGATAGAGGTGATATATGGTGCTGATCTGGAGACTGGAACTTTC
GGCAGTGGTTTTCCAAAATTATCTCCTGAGACAAAATCTGATGCTGAGGATAAATATGCACAATCT
GGTTGGAATCTAAATAACTTGCCTAGACTACAAGGTTCAGTTCTTTCTTTCGAGGGCGGTGACATT
TCTGGTGTTCTAGTGCCTTGGGTGTATGTTGGCATGTGTTTTTCATCATTCTGCTGGCATGTTGAA
GACCATCATTTATACTCACTAAACTACATGCATTGGGGTGCCCCAAAGTTGTGGTATGGAGTTCCA
GGAAAGGATGCTGTGAATTTGGAATCTGCAATGAGGAAACATCTACCTGAATTATTTGAGGAGCAA
CCTGATTTGCTACACAACCTTGTTACCCAGTTTTCACCATCGCTGCTGAAATCTGAAGGAGTACAT
GTATACCGTTGTGTTCAGCATGAGGGCGAGTTTGTCTTGACATTCCCAAGGGCGTACCATGCTGGT
TTCAATTGTGGCTTCAATTGTGCCGAAGCTGTTAATGTGGCTCCTATTGATTGGTTACCGATTGGA
CATAATGCTGTAGAGCTTTATCGTGAGCAAGCTAGGAAAATAACCATTTCTCATGATAAGTTGTTG
TTGGGGGCTGCAAGAGAAGCAATAAGAGCTCAGTGGGATATCCTATTCCTCAAGAGGAATACTGCT
GATAATATGAGGTGGAAGAGTATATGCGGAGCTGATAGCACTATATTCAAGGCTCTTAAGGCACGA
ATTGAGACAGAGTTGGTGCAAAGGAAAACTCTAGGTGTTCCAGCTCAATCAAGGAAAATGGATGCT
GAATTCGATTCCATTGATAGGGAATGTGCCTTGTGCTACTATGATTTACATCTTTCTGCTTCTGGC
TGTCCATGCTGCCCAGAGAAATATGCTTGCCTTGTACATGCAAAGCAACTTTGCTCATGTGACTGG
GACAAAAGGTTTTTCCTATTCCGCTATGATGTCAATGAGCTAAATATCTTAGCTGATGCTTTAGGG
GGGAAATTAAGTGCCATTCATAGATGGGGCGTCTCTGATCTTGGATTAAGTTTGAGTTCATGTGTC
AAACGAGAAAAGGTCCAAGATTCCAAGACTGTTCGCAGATTAACTGATGGTCCAAGAAGGTCTTAC
ATGTCACAGGCATCAGCAGTATCCTTGGTTTCTTCTTCTACTTCCAATGAACAGAAAGATGAAGGA
AATAAGATCATGAAGATAGCTAGCCCACAGACAAATAATGTGTGCCCTTCTGTCGAGCAAAGGAAA
TCAGAGAATATTTCACCATTGAAGGAGCCATGTGTAAGGAATGAGTTGTCATGTACAACAAATTCT
GATAGTAACGGATTGCAATATAATGGAGGACTTGGAGGCCATAAAGGATCTGCACCAGGCTTGCCA
GTTTCTTCTAGCCCATCATTTTCTTCCAACGTTGCAACAAGGCCCATTAGTACTTCAAGTGTATCC
ATGAAAATTGTGCAAGGCTTGGTGGCATCTAAAAGTTGTATACAAGCTTCCTCTCGAACTGGAGAC
AGTAGATCATTGCTTGGTGAGCATCATAACAGATCACCGGCAATGATTCATGATGGAACCAACATG
AAGTCCAGTTTGGAAAGCTCAAACAATTCTTGCAGGTTGATTGCATCTGACTATAATGCAACTCCG
TGTCATTCATCCAAGGATCAGGTATTAGTAACACCAGGGACTAATGCCTCAGTAGTGACTCTGAAA
GATAGCAGCCAGGTCCATAGTGCGTCAAGTCAGCAGTTTGTCAGAACTGGCCCATGGACACAAAGT
GCTTCTCATGAAGCATCATCACCTAGTACCTCTGCTTTGAAGCCTTCTTTAGATCCCCCTGCCATG
AAAAATCTGTATGGGGGTTTTACTCAAGGCAGTGCCCATCCTGGACCTCCAAGTTTCAGTAATCAG
CAACCAAATGATGGGCGTCTTCAAAGAACATCTGAATCTCTACCAGGTGTGGAAGCTAGAGCTAGG
GGACATCCAACTGTCACGGCACAGCCTGCACTAGAAATTCACAGCAGGAATGGAGGTGCACAGAAG
GGTCCTCGCATAGCCAATGTTGTGCATCGTTTCAAGTGCTCTGTTGAACCTCTCGAAATTGGTGTT
FIGURA 10 CONT. GTGCTATCAGGGAGGCTGTGGTCTTCAAGCCAAGCAATCTTCCCGAAAGGGTTTAGAAGCAGAGTG AAATACTTCAGCATTGTGGATCCAATCCAAATGGCATACTACATATCGGAAATACTGGATGCTGGG ATGCAGGGGCCTCTGTTTATGGTAAAATTAGAGAACTGTCCAGGTGAAGTTTTCATTAACTTATCT CCAACCAAGTGTTGGAACATGGTCCGTGAAAGGCTGAACATGGAAATAAGGAGGCAACTTAATATG GGAAAATCAAATCTTCCTACATTGCAGCCTCCAGGATCAGTTGATGGTCTTGAAATGTTTGGTTTA TTATCACCACCAATAGTTCAGGCAATTTGGGCGCGGGACAGAGATCACATCTGTACAGAGTACTGG AGATCAAGGCCCCATGTTCTCATTGAGGATCCAAACAATCGGCATATGTTATCTCAGGGTCCACCT CTCCTTGCCCTGAGGGGTCTCATCCAAAGGGCTAACCGGGATGAATTGCAAGTCCTGCGGAGTTTG ATGACGAACAGCAACAATTTGGATGATAGCTCCAGGCAACAGGCCGCGCACATTATCGAAGAGGAG ATTGCGAAGCAATTGTGCTGA
SEQ ID NO: 156, Proteína - Oryza sativa
MMGVTTTLNEDTEPSIPPGFGPFATLPLWGIHNDAKPAVTHSTPVQALQSIRKDSEECQPSAAVSR
SDTPCSTSGTQTCRKSLRNRPPIDYSRFEHISDEDSDVEIVEKDVSSTRRRQQLPKGVLRGCAECS
DCQKVIAKWNPAGARRPVLDEAPVFYPTEEEFEDTLKYIESIRPMAEPYGICRIVPPSSWKPPCLL
KDKSIWEGSKFSTRVQKVDKLQNRKSSKKGRRGGMMKRRKLAESEENSATAHTQTGMQQSPERFGF
EPGPEFTLQTFQKYADDFSKQYFRKDTSMDSVPSVEDIEGEYWRIVEVPTEEIEVIYGADLETGTF
GSGFPKLSPETKSDAEDKYAQSGWNLNNLPRLQGSVLSFEGGDISGVLVPWVYVGMCFSSFCWHVE
DHHLYSLNYMHWGAPKLWYGVPGKDAVNLESAMRKHLPELFEEQPDLLHNLVTQFSPSLLKSEGVH
VYRCVQHEGEFVLTFPRAYHAGFNCGFNCAEAVNVAPIDWLPIGHNAVELYREQARKITISHDKLL
LGAAREAIRAQWDILFLKRNTADNMRWKSICGADSTIFKALKARIETELVQRKTLGVPAQSRKMDA
EFDSIDRECALCYYDLHLSASGCPCCPEKYACLVHAKQLCSCDWDKRFFLFRYDVNELNILADALG
GKLSAIHRWGVSDLGLSLSSCVKREKVQDSKTVRRLTDGPRRSYMSQASAVSLVSSSTSNEQKDEG
NKIMKIASPQTNNVCPSVEQRKSENISPLKEPCVRNELSCTTNSDSNGLQYNGGLGGHKGSAPGLP
VSSSPSFSSNVATRPISTSSVSMKIVQGLVASKSCIQASSRTGDSRSLLGEHHNRSPAMIHDGTNM
KSSLESSNNSCRLIASDYNATPCHSSKDQVLVTPGTNASWTLKDSSQVHSASSQQFVRTGPWTQS
ASHEASSPSTSALKPSLDPPAMKNLYGGFTQGSAHPGPPSFSNQQPNDGRLQRTSESLPGVEARAR
GHPTVTAQPALEIHSRNGGAQKGPRIANWHRFKCSVEPLEIGWLSGRLWSSSQAIFPKGFRSRV
KYFSIVDPIQMAYYISEILDAGMQGPLFMVKLENCPGEVFINLSPTKCWNMVRERLNMEIRRQLNM
GKSNLPTLQPPGSVDGLEMFGLLSPPIVQAIWARDRDHICTEYWRSRPHVLIEDPNNRHMLSQGPP
LLALRGLIQRANRDELQVLRSLMTNSNNLDDSSRQQAAHIIEEEIAKQLC
SEQ ID NO: 157, DNA - Oryza sativa
ATGGTTTCCTCCCGCGACCCCGGCGAGGAGGCCAGCGCGCCGCCGCCCCCGCCCCCGCGCCGCGGC GAGAAGCGGCGAATGCGCGGCCGCACCCCGTCGCCGGAGCCGGCCTCCGCGCCGCAGGATCTCTGC CCATCAGGAGCTTGCGGGGACAATGTTGCTGGAGCTACAACTACAAATGGAAAGTGGCATCCACAT GAATCGTACAGACCTGAAATTGATGATGCCCCTGTTTTCACTCCAACGGAAGAGGAGTTTAAAGAT CCAATTAGATATATTACGAGCATTCGTCCCCAAGCAGAAAAGTATGGAATTTGTCGTATTGTTCCA CCATCTTCTTGGCGACCGCCTTGTTCTCTGAAGGAGAAGAACTTCTGGGAATGTACAGAGTTCAAT ACCCGTGTTCAACAAGTTGACAAGCTTCAAAACCGGGAACCCACAAAGAAAAAATCACAACCTCGA GTTCAGAAGAAGAGGAAGAGGAGAAAGAGACTGAGATTTGGGATGACTCACAGGCGTCCTAGTGCA AATACATCAGAAGACTGCGCAGATGCAGACGAGAAGTTTGGCTTTCAATCTGGCTCAGATTTCACA CTAGATGAGTTTCAGAAATATGCAGATGAGTTTAAGCAGCAGTATTTTGGAATAAAGGGAAGTGAC GAAATCCCTCTTTCTGAAATTAAAAAGAAGAAAAAAAATTGGCAACCATCGGTCGATGAAATAGAG GGAGAATATTGGCGGATAGTTGTATGCCCCACTGACGAAGTTGAGGTGGATTATGGTGCTGATTTG GACACTTCAATGTTCAGTAGTGGATTCTCTAAATTATCTTCAGATTCAAATAGACGAGATCCATAT GGTTTATCTTGTTGGAATTTGAACAATCTTCCACGTATTCCTGGGTCTGTACTGTCATTTGAAACT GAGGATATATCTGGCGTCGTAGTCCCTTGGCTTTATGTAGGGATGTGCTTCTCATCATTCTGTTGG
FIGURA 10 CONT. CACGTGGAAGATCATTTCCTTTATTCTATGAATTACATGCATTTTGGTGAACCAAAAGTATGGTAT
GGTGTTCCTGGTGCTGATGCAGTGAAGCTGGAAGAAGCTATGAGAAAGAACTTACCAAGATTGTTT
GAAGAACAGCCTGATCTCCTACATGAGCTGGTTACGCAATTATCTCCTTCTGTTCTTAAATCAGAA
GGAGTTCCTGTTTATCGTGTTGTTCAGAATCCAGGCGAGTTTGTTCTAACGCTACCGCGAGCTTAC
CATTCTGGGTTCAACTGTGGCTTCAACTGTGCGGAGGCAGTAAATGTCGCACCTGTGGATTGGCTG
CCTCACGGACAATGTGCTGTTGAGCTCTACAGGGAGCAGCGGCGCAAGACATCCATATCACATGAC
AAATTATTACTAAAAACTGCAAATGAAGCTGTCAGACAGCTTTGGATGAACCTTAGCGACTGCAAA
AGTGAACAAGGAGTATACAGATGGCAGGATACTTGCGGAAAGGACGGAATGCTGACAAGTGCAATT
AAGACAAGGGTTAAAATGGAGAAGGCAGCACGGGGAGGGAATATGGCACTGCGATATAAGAAAATG
GATGGGGATTATGATTCAGCTGACCGGGAATGCTTTTCATGTTTTTATGATCTCCATTTGTCAGCT
GTCAGCTGCCAATGCTCCCCAAATCGTTTTGCTTGCTTAAACCATGCAAACATTCTATGTTCATGT
GAAATGGACAGAAAAACCGCGTTGTTGCGGTATACCATAGAGGAGCTCCATACTCTTGTTGCAGCT
CTAGAGGGTGATCCAACTGCGGTCTACCAGTGGGGACAGAATGATTTAGGTTTAGTCTGCCCATCT
GGTTCTACTCAGTACAAGAAGATGGACTTGGGTGAAAACACGGAATTTCCGGATTCAGCAACCAAC
GTCAATCATGGCTGCAGCTTAGGAAGTCAAGATCAATATCACTATGACCCCGCAAAGCCAGCAGGA
TACCAGCAAGAGAAGGGAATCCAGATTGCTTCAGAAAAACATGATAAGAACAAGATGGTTGTCAAT
CTTGAGTCTCCAGCAACAGCTAGTAATCCAAGCAGGTCAAAGTCTGACTGCAGTGGCTCACTGTCC
TTGAATCATTCATCTGAGTTACCATCTTCAAGAATTCAAACAGGAAATTCTACGCTAGCTTCCATT
ACCACAGAGAAACTGTTTGGTGTTGACATTAAATCCAATTTAGCACAGTCTTCTGATGGCCAAGTT
AGTCAATTGGCCAAGCCTTCCTCGAGCCAAACTGATGAAGTCTCTAAGCCAGCAATAGCTAAGTAT
ACGGTTGAGCTGCTAGACAGTGGAACAATGATGATTGGTAAAAAGTGGTGCAATCAGCAAGCTATA
TTCCCCAAAGGATTTAAGAGTCGAGTTACATTTCATAGTGTACTAGATCCAACAAGGACATGCTGC
TACATCTCCGAAGTTCTTGATGCTGGGCTTCTTGGACCATTGTTTAGGGTGACTGTCGAAGGTCTT
CCAGAAGTTTCGTTTACTCACACATCACCAATGCAATGTTGGGACAGTGTAAGAGACAGAGTAAAT
GAAGAAATAGCAAAACAAATAAGTTTTGGAAAATCTGGCCTTCCTGATTTTCTATCCTGCAATTCT
TTGAATGGACTTGAAATGTTTGGGTTCTTATCCTCCCCTATAATTAAGGAAATCGAGGCTCTAGAT
CCCTGTCACCAATGCTTGGACTATTGGTTGTCAAGGGTTTCTTCTGTTGGAACTGAACTCCCCTCG
GAATCTGTGATGGCAGCAATGGTTAATGACTCCACTAACCCCCCAATAAAGTTGCTCGGGATTGAG
ATTAACCGGAGGGAATCAGAACAATCAAGTAGCTTCAATAATTCCTGTGTGAGGAGGTCACACTTG
GCAGGTTGCTGA
SEQ ID NO: 158, Proteína - Oryza sativa
MVSSRDPGEEASAPPPPPPRRGEKRRMRGRTPSPEPASAPQDLCPSGACGDNVAGATTTNGKWHPH ESYRPEIDDAPVFTPTEEEFKDPIRYITSIRPQAEKYGICRIVPPSSWRPPCSLKEKNFWECTEFN TRVQQVDKLQNRE PTKKKS Q PRVQKKRKRRKRLRFGMTHRRPSANT S E DCADADEK FGFQS GSDFT LDEFQKYADEFKQQYFGIKGSDEIPLSEIKKKKKNWQPSVDEIEGEYWRIWCPTDEVEVDYGADL DTSMFS SGFSKLSSDSNRRDPYGLSCWNLNNLPRIPGSVLSFETEDISGVWPWLYVGMCFS S FCW HVEDHFLYSMNYMHFGEPKVWYGVPGADAVKLEEAMRKNLPRLFEEQPDLLHELVTQLSPSVLKSE GVPVYRWQNPGEFVLTLPRAYHSGFNCGFNCAEAVNVAPVDWLPHGQCAVELYREQRRKTSISHD KLLLKTANEAVRQLWMNLSDCKSEQGVYRWQDTCGKDGMLTSAIKTRVKMEKAARGGNMALRYKKM DGDYDSADRECFSCFYDLHLSAVSCQCSPNRFACLNHANILCSCEMDRKTALLRYTIEELHTLVAA LEGDPTAVYQWGQNDLGLVCPSGSTQYKKMDLGENTEFPDSATNVNHGCSLGSQDQYHYDPAKPAG YQQEKGIQIASEKHDKNKMWNLESPATASNPSRSKSDCSGSLSLNHSSELPSSRIQTGNSTLASI TTEKLFGVDIKSNLAQSSDGQVSQLAKPSSSQTDEVSKPAIAKYTVELLDSGTMMIGKKWCNQQAI FPKGFKSRVTFHSVLDPTRTCCYISEVLDAGLLGPLFRVTVEGLPEVSFTHTSPMQCWDSVRDRVN EEIAKQISFGKSGLPDFLSCNSLNGLEMFGFLSSPIIKEIEALDPCHQCLDYWLSRVSSVGTELPS ESVMAAMVNDSTNPPIKLLGIEINRRESEQSSSFNNSCVRRSHLAGC
FIGURA 10 CONT. SEQ ID NO: 159, DNA - Oryza sativa
ATGTCATGTTTGAGTTGGGAGCCACCAGATATGTGGTCTAAAGTACATGGCACCGGCACTAGTCCT
GAGATGAAAAACGTGAAGGCTATTGATTGTTTATCTTGCTGTGAGGTCGAGATATGCACTCAAGAC
TTCTTCAATGGGTATTATGAAGGTCGGATGTATCAAAATCTATGGCCTGAAATGCTTAAATTGAAG
GACTGGCCTACATCAAATCATTTTGAAGAGCTTTTGCCTTCCCATGGAGTTAAATACATGAATTCT
TTACCTTTTCAACCATACACAAACTTGAAGTCTGGTTTGCTGAATGTCTCAACCTTGCTTCCTGAT
GACATCTTAAAGCTTGACATGGGCCCAAAATCATATATAGCTTATGGCTATGCACAGGAACTTGGT
AGAGGAGATTCTGTTACAAAGCTTCACTGCGATTTGTCTGATGCAGTTAACGTTTTGATGCATACT
GCTGAAGTTGACCCTTCCGAGGAACAAATAGATGCAATAAAAAGTTTGAAAAGAAGACATACAGCG
CAAAATGAAAAGGAGTGTTCTGGGAATGCAGACGGAAATTATACATCTCCTAAAATCTGTGGGGAT
GCAAATGAGTTGTCCTGTCCTATAAACAGTGAGACCAACAAGGGAGGTGCTTTATGGGATATTTTT
AGGAGGGAAGATGTTCCAAAACTGAAATTGTATCTCGACAAGCATTCTAAGGAATTTCGCCATATA
TACTGTTCTGCAGTTCAAAAGGTATGTAACCCTGTACATGATGAAACATTTTATCTAACAGAAGAA
CACAAGAGAAAACTCAAGGAGGAGCATGGAATTGAGCCTTGGACATTTGTACAAAAACTTGGGGAG
GCAGTATTCATTCCTGCTGGGTGTCCTCATCAAGTACGGAATCTTAAGTCCTGCACCAAGATTGCC
TTGGATTTTGTATCACCCGAGAATGTTAAGGAGTGTCTCAGCTTAACCGAGGACTTCCGAAGACTT
CCTAAGAACCACAGGGCCAAAGAAGACAAATTAGAGCTAGGTGTGGTTCAAAATGGACCCAAGCCC
ACATACCCTCGAGAAACTATTCTAAACTCTCAATGGGACATCTTGTTGTTTGCATATCATCCAAAT
AGTTATGACAAAGTTTAA
SEQ ID NO: 160, Proteína - Oryza sativa
MSCLSWEPPDMWSKVHGTGTSPEMKNVKAIDCLSCCEVEICTQDFFNGYYEGRMYQNLWPEMLKLK DWPTSNHFEELLPSHGVKYMNSLPFQPYTNLKSGLLNVSTLLPDDILKLDMGPKSYIAYGYAOELG RGDSVTKLHCDLSDAVNVLMHTAEVDPSEEQIDAIKSLKRRHTAQNEKECSGNADGNYTSPKICGD ANELSCPINSETNKGGALWDIFRREDVPKLKLYLDKHSKEFRHIYCSAVQKVCNPVHDETFYLTEE HKRKLKEEHGIEPWTFVQKLGEAVFIPAGCPHQVRNLKSCTKIALDFVSPENVKECLS LTE DFRRL PKNHRAKEDKLELGWQNGPKPTYPRETILNSQWDILLFAYHPNSYDKV
SEQ ID NO: 161, DNA - Oryza sativa
ATGCAACAGGTGGAGGGCAGGAACTGTCTTCCTGCGGAGGTCAGGATTGGCCTCGAGACGCTCAAG
AGGCGCCGGCTTGAGAGGATGCGTTTGACTGCTCAGAACAATGCCGGCGACGGTCCTCCGGTGCCC
GCAAGGAGCGGTGGGGATGCGCTAAGGACTCCCGCAAACTGCGGGGTCAGGTTGCATGCTAACAAT
GGCACAGCTCTACCTAGCAGAACCACCCAGAACAAGGACCCTTTTGCAAAGCGCAGGGTGGACAAG
TTTGATATGTCTAGCCTAGAATGGATTGACAAGATCGAAGAATGCCCTGTGTACTATCCTACCAAG
GAGGAGTTCGAGGATCCCATTGGTTATATACAGAAGATTGCACCTGTGGCTTCGAAATACGGAATT
TGCAAAATCGTATCTCCAGTAAGCGCTTCTGTTCCTGCTGGTGTCGTGTTGATGAAGGAACAGCCT
GGTTTCAAGTTCATGACCAGGGTTCAGCCGCTTCGCCTCGCCAAATGGGCTGAAGATGACACGGTC
ACTTTCTTCATGAGCGAAAGAAAGTACACTTTCCGGGATTATGAGAAAATGGCCAACAAGGTGTTC
GCCAAGAAATACTCAAGTGCTAGTTGTCTCCCAGCTAAGTACGTGGAGGAGGAATTCTGGCGCGAA
ATTGCTTTTGGTAAAATGGATTTTGTTGAATATGCCTGTGATGTTGATGGTAGTGCTTTCTCCTCT
TCTCCTCATGATCAACTTGGGAAAAGCAACTGGAACTTGAAGAATTTTTCACGGCTTTCCAATTCT
GTGCTTAGACTTCTGCAGACACCAATTCCAGGAGTAACAGATCCAATGCTTTATATCGGGATGCTC
TTCAGCATGTTTGCTTGGCATGTGGAAGATCATTATTTGTACAGCATCAATTACCATCATTGTGGG
GCATTTAAGACATGGTATGGCATACCGGGTGATGCTGCTCCTGGGTTTGAAAAGGTGGCTAGCCAG
TTTGTATACAACAAGGATATTTTGGTTGGTGAAGGAGAGGATGCAGCATTTGATGTTCTCTTGGGG
AAGACAACAATGTTCCCCCCAAATGTCTTGTTAGACCACAACGTTCCTGTTTATAAAGCTGTGCAA
AAACCTGGGGAGTTTGTCATTACTTTCCCTCGTTCCTACCACGCGGGTTTCAGCCACGGCTTCAAT
TGTGGCGAGGCTGTCAACTTTGCTATCAGTGACTGGTTTCCTCTGGGTTCTGTGGCCAGCAGACGC
FIGURA 10 CONT. TACGCGCTTCTGAACAGAACACCCTTGCTTGCACACGAGGAGTTACTTTGCCGTTCTGCAGTGCTT CTGTCCCACAAACTGTTAAACAGCGACCCAAAATCCCTCAATAAATCTGAGCATCCACATTCACAG CGTTGTTTGAAGTCTTGCTTTGTGCAGTTGATGCGATTCCAGAGAAACACACGTGGCCTACTTGCT AAAATGGGCTCTCAGATACATTATAAGCCAAAAACATACCCGAATCTCTCATGTAGCATGTGTCGG CGTGATTGCTACATTACACATGTGTTGTGTGGATGCAACTTTGACCCAGTCTGTCTTCATCACGAA CAAGAACTCCGGAGCTGCCCTTGTAAATCTAACCAGGTTGTCTACGTTAGGGAGGACATACAGGAG CTAGAAGCTCTATCAAGAAAATTTGAGAAGGATATTTGCTTGGATAAGGAAATAAGTGGTTTTGAC TCATACAAGCAGGCCGAAAAGAATGAGCCATTTTTTGAGATAACTCGGAACCTCAGGAACACTGAA GTAAATTTGATAGAGGATGCCTTCTCAGGAGCAACTGCTGCTGATGCTGCAAAGAGTTCTCCTGCA ACGTCAACACTGACATCTTTTGCACAACATGATGTGCCTGTTCTTGCTGAAGCAATTGTCTGTGCT AATCAAGCCGACCAATTATACTCCACCACCGAGCAAACCATCAGCTCACCTTTAGTCAAAGGAACT GATGCTGTGGGTGCAAATTCATCCAGCATGGCTGATGCTAATAACGGAACTGGTTCTTGTAATGCT TCAGCTGTGGAATACAGTGGAAATTCAGATTCTGAATCTGAAATATTTCGAGTCAAGCGCAGGTCT GGCGTATCAGTAAAGCCTGCATCTGATGCCAAGACATCAAACTTGTCTGATCAACAGGTTCTCAGG CGGTTGAAGAAGGTGCGCCCTGAAATACAACAGCACAATAAGCGACCAGAAGACTATGGTCACTGT TCAGTTCCCTCAGGTCGTATGAGTATGAAGAATTTGAATTCATCCTCCTCATGTGGTGAAGAACAC TGGAGGATGAAGCGGCGGCAGTTGGAGACTCAGCAGGATGAGAGCAGTTATTCTGCAAAGCAGAAG TCGTACTCGTATCCATCCACCAGCTATTCTTTCCGAGGAGAGTTTGTGGAAATGAGTAGAGATGCT GCTGCAGAAGTCCGACCAAAGCGACTGAAAATCCGGCTACCTTCTTCTAGCACGAACAGAGTGGTT GAGCAGGGCAGTTCAGGGCAAAGATTTACAAGGGATGACAAGTCGCTTGGTTGTTGGCCTGCAATT TAG
SEQ ID NO: 162, Proteína - Oryza sativa
MQQVEGRNCLPAEVRIGLETLKRRRLERMRLTAQNNAGDGPPVPARSGGDALRTPANCGVRLHANN GTALPSRTTQNKDPFAKRRVDKFDMSSLEWIDKIEECPVYYPTKEEFEDPIGYIQKIAPVASKYGI CKIVSPVSASVPAGWLMKEQPGFKFMTRVQPLRLAKWAEDDTVTFFMSERKYTFRDYEKMANKVF AKKYSSASCLPAKYVEEEFWREIAFGKMDFVEYACDVDGSAFSSSPHDQLGKSNWNLKNFSRLSNS VLRLLQTPIPGVTDPMLYIGMLFSMFAWHVEDHYLYSINYHHCGAFKTWYGIPGDAAPGFEKVASQ FVYNKDILVGEGEDAAFDVLLGKTTMFPPNVLLDHNVPVYKAVQKPGEFVITFPRSYHAGFSHGFN CGEAVNFAISDWFPLGSVASRRYALLNRTPLLAHEELLCRSAVLLSHKLLNSDPKSLNKSEHPHSQ RCLKSCFVQLMRFQRNTRGLLAKMGSQIHYKPKTYPNLSCSMCRRDCYITHVLCGCNFDPVCLHHE QELRSCPCKSNQWYVREDIQELEALSRKFEKDICLDKEISGFDS YKQAEKNEPFFEITRNLRNTE VNLIEDAFSGATAADAAKSSPATSTLTSFAQHDVPVLAEAIVCANQADQLYSTTEQTISSPLVKGT DAVGANSSSMADANNGTGSCNASAVEYSGNSDSESEIFRVKRRSGVSVKPASDAKTSNLSDQQVLR RLKKVRPEIQQHNKRPEDYGHCSVPSGRMSMKNLNSSSSCGEEHWRMKRRQLETQQDESSYSAKQK S YS YPSTS YSFRGE FVEMSRDAAAEVRPKRLKIRLPSSSTNRWEQGSSGQRFTRDDKSLGCWPAI
SEQ ID NO: 163, DNA - Oryza sativa
ATGCCGAGCGCCTTCCACTCCCTCCTCCTCCCCGCCATTCGCAACCCCAAACCTAGCCGTCGCCGC GGCCGCGGCCGCGGCGGCAGCAAACGCCCCAAGAAGACCACCAAATCCAAGAACCGCCTCGCCGAC GCCGCCGCCGGAGACGCCACCGCCTTCCACCTGAAGACCTCCGCGCGCGCCGGTCCGGGGGGTGCC GGGAGCGGCCGGCGAGGCGATGGGGGATGCCTCGTGCAGCCGCTCGGCAACCTCCTCCTCCTCGGC GGCGGCGGCAACCTCCGCGACGCGGGGCTCGGCGCGCTCCGCCCGCTCCCCGACGACGTCCTCCTC GACGTGCTCGGCCTGCTCGCGGCGCGCGACCTCGCTAGGCTCTCCGCGGCGTCGAGGGCGCTCTAC GTCGTCGCCTCCCACGACCCGCTCTGGCGGGCGCTCGTCCTCGACGAGCTCGGCGGGGACTTCGCC TTCTCGGGCTCGTGGCGCGCCACCTACATCGCCGCCGCGTCGGGCGGCCGCGCCCACCTCCCCCCG CGGGGCCTAGAGATCAGGGGGTTCTACTCCGACTACCTCTTCCAGAGCTGGCTCTGCGCCAACATG GAGATGCGGCCGGAGTGGCTCCACCGGGACACCATCGATCGCCGCCGCGGCATGTCCGTCGAGCAA
FIGURA 10 CONT. TTCGTCTCCGAATTCGAGGAGCCCAATAGGCCGGTGCTTCTGGAAGGCTGCCTCGAGAGCTGGCCA GCATTGCAGAAGTGGACCAGGGAGCACTTGCTGAAGGTCTCGGCCGGGAAGGAGTTCGCCGTCGGG CCGGTGAGCATGACGCTGGATAGGTACCTCCÀGTATGCCGACAATGTGCAGGAGGAGAGGCCATTG TACCTGTTCGATGCCAAGTTCACCGAGAAGGTGCCGGAGATGGGGAGGGACTATGAGGTGCCGGCG TACTTCCGAGAGGACCTATTCGGGGTGCTTGGGGAGGAAAGGCCGGACCACCGATGGGTTATCATT GGGCCGGCAGGTTCAGGGTCGTCGTTTCATGTTGATCCAAACTCGACATCGGCGTGGAATGCTGTG ATCAAGGGAGCCAAGAAGTGGGTGATGTTCCCACCGGAGGTGGTGCCGCCAGGAGTTCATCCAAGT GCGGATGGAGCAGAAGTCACTAGCCCTGTATCTATCATGGAATGGTTCATGAATTTTTATGGGGCA TGTAAGACCTGGGAAAAGAGGCCTGTTGAGTGTATATGCCGGGCTGGAGAGGTGGTTTTTGTGCCT AATGGATGGTGGCATTTGGTTATCAATCTGGAGGAATCTATTGCGATTACTCAGAATTATGTGAGC AGGAGGAATCTGTTGAATGTTCTTGACTTTCTCAAGAGGCCCAATGCAAGTGAACTTGTATCAGGG ACTACAGACAGGGTAAACCTGCATGACAAGTTCCGCAATGCCATCGATATGACTTATCCTGGGATG ATTAAACAGCTTGAACTTGAAGCTCAGCAGAAGGCTGCTGCTCGCAAGAAGAAAGTCTCGTTCTGG GAATCTGCGGTAGATGCCAATACTGGAGGATTCAAGTTCTCATTCTGA
SEQ ID NO: 164, Proteína - Oryza sativa
MPSAFHSLLLPAIRNPKPSRRRGRGRGGSKRPKKTTKSKNRLADAAAGDATAFHLKTSARAGPGGA GSGRRGDGGCLVQPLGNLLLLGGGGNLRDAGLGALRPLPDDVLLDVLGLLAARDLARLSAASRALY WASHDPLWRALVLDELGGDFAFSGSWRATYIAAASGGRAHLPPRGLEIRGFYSDYLFQSWLCANM EMRPEWLHRDTIDRRRGMSVEQFVSEFEEPNRPVLLEGCLESWPALQKWTREHLLKVSAGKEFAVG PVSMTLDRYLQYADNVQEERPLYLFDAKFTEKVPEMGRDYEVPAYFREDLFGVLGEERPDHRWVII GPAGSGSSFHVDPNSTSAWNAVIKGAKKWVMFPPEWPPGVHPSADGAEVTSPVSIMEWFMNFYGA CKTWEKRPVECICRAGEWFVPNGWWHLVINLEESIAITQNYVSRRNLLNVLDFLKRPNASELVSG TTDRVNLHDKFRNAIDMTYPGMIKQLELEAQQKAAARKKKVSFWESAVDANTGGFKFSF
SEQ ID NO: 165, DNA - Oryza sativa
ATGGTGGCAGACAGCGCGGTCGGCGTGCACGGCAGTGCGGCCGACAGTGGGTCGGTGCGGTCGGCG CGGACGGCGGCAGAGAGGGACGCGGAGGCGGAGGCTACGCGGGACACAAAGGCAGCGGCGGTGGAG CCGCCAGAGTGGCTGCAGACCCTGCCCGTGGCGCCGGAGTACCACCCGACGCTGGTGGAGTTCGCC GACCCCATCGCCTACATCCTCAGGATCAAGCCCGAGGCGTCCCGCAACGGCATTTGCAAGATCCAG GTCGGCCTCTCCACCAAGAACCGCCGTGCCGCCAGCCGCCGAGTGTGGGAGAGCGGGGAGCGCTAC ACCCTGGAGGCGTTCTGCGCCAAGGTGCCCGAGTTCGAGCCCTCGAGGCACGCCGCACTGCCCAAG AACCCCÁCCCACCTCCAGCTCAAGGCCCTCTTCTAG
SEQ ID NO: 166, Proteína - Oryza sativa
MVADS AVGVHGS AADSGS VRSARTAAERDAEAEATRDTKAAAVEPPEWLQTLPVAPEYHPTLVEFA DPIAYILRIKPEASRNGICKIQVGLSTKNRRAASRRVWESGERYTLEAFCAKVPEFEPSRHAALPK NPTHLQLKALF
SEQ ID NO: 167, DNA - Oryza sativa
ATGTCGCTGCAGCCGCCGGCGGTGGAGCCGCCGGAGTGGCTGCGGACGCTGCCCGTGGCGCCGGAG TACCACCCGACGCTGGCGGAGTTCGCCGACCCCATCGCCTACATCCTCAGGATCGAGCCGGAGGCG TCCCGCTACGGCATCTGCAAGATCGTGCCCCCGCTCCCGCGGCCCCCCGAGGACGACACCTTCCGC CGCCTCCAGGCCGCCTTCGCCGCCGCGGCCTCCTCCAATGGCGACCCCTCCCCGACCTTCCCCACG CGGCTCCAGCAGGTCGGCCTCTCCGCCAGGAACCGCCGCGCCGCCAGCCGCCGGGTGTGGGAGAGC GGGGAGCGCTACACCCTGGAGGCGTTCCGCGCCAAGGCGGCCGAGTTCGAGCCCCCGAGGCACGCC GCGCCGCCCAGGAACCCCACCCACCTCCAGCTCGAGGCCCTCTTCTGGGCCGCCTGCGCCTCCAGG CCCTTCAGCGTCGAGTACGGCAACGACATGCCCGGCTCCGGCTTCGCCTCCCCCGACGAGCTCCCC
FIGURA 10 CONT. GACGCCGCCAATGCCACCGACGTCGGGGAGACGGAGTGGAACATGCGGGTGGCGCCCCGCGCCCGG
GGGTCGCTGCTCCGCGCCATGGCCCGCGACGTGGCGGGCGTCACCACCCCGATGCTGTACGTGGCC
ATGCTCTACAGCTGGTTCGCCTGGCACGTGGAGGACCACGAGCTCCACAGCCTCAACTTCCTCCAC
TTCGGCAAGGCCAAGACCTGGTACGGCGTCCCCCGCGACGCCATGCTCGCCTTCGAGGAGACGGTG
CGCGTCC ACGGCTACGCCGACGACCTCAACGCCATCATGGCCTTTCAAACGTTAAATGAGAAGACA
ACTGTCTTATCTCCTGAGGTGCTTCTTTCTGCTGGTGTTCCCTGCTGCAGATTGGTTCAAAAAGCG
GGAGAATTTGTTATCACATTCCCTGGAGCTTATCATTCAGGCTTTAGCCATGGATTTAATTGTGGG
GAAGCATCAAATATTGCAACTCCCCATTGGTTACAAGTGGCTAAAGAAGCTGCAATCCGGAGGGCT
TCAACTAATTGTGGTCCGATGGTGTCTCATTATCAGCTGCTTTATGAGCTAGCACTCTCATTGCGT
CCAAGGGAGCCTAAGAATTTCTATTCTGTTCCAAGAAGCTCACGTTTAAGGGACAAGAATAAGAAT
GAAGGTGATATAATGGTCAAAGAAAATTTTGTTGGAAGTGTAACCGAAAACAACAATTTGCTTAGC
GCCCTTCTGGATAAGAATTCTTGTATAATTGTTCCAAACGCTGATTTCTTCGTTCCATCCTTTCCT
GTTGCACTGGAATCTGAAGTTACTGTTAAACAAAGGTTTACAGCTGGTCCCTGCAGTATTAGCCAG
CAAGGAGCAGAAAATATGGCTGCTGATCATGTGGCTGTAGACAAGGTTACAGAGATTCAGGACATG
AGTGGATCCTTATATCCTTGTGAAACCAGTCTTGTGGGCTGTAGCAATAGAAAACTTTATGAAACA
AAATATGGCCAACGGGATGCTGCTGCTTTGTGCTTATCTACTTCAGAGATTCAGAGCAGAGGAATT
GATACAGCAAGATCACATCCAGCAGGCGGGATCTTAGATCAAGGACGGTTGCCATGTGTACAGTGC
GGAAT ACTAAGCTTTGCATGTGTAGCCATCATTCAACCTAGAGAAGCAGCAGTACAGTTTATCATG
TCTAAAGAGTGCATCTCATCGAGTGCAAAACAAGGAGGAATTGGTGCATCTGATGATACCTCAAAC
TGGATTGACCAGAGTCATGAGATTAGTCCTCCACCAGGTCCAGCATCTGGAACAGATGATAATGTA
AAGCATGCCGTAAGTTTGGCCCATGTCTCTGATCGGTGTAGAGAACTATATGCCAGCAATACAGAT
GGATGCACCTCTGCTCTTGGGCTTCTAGCTTCTGCATATGACTCATCAGACTCTGATGATGAAACA
ACTGAGGATGTTTCAAAACATAGCAAGAAAAATGATTCAGTAAACCAAAGCACGGATCCTCAAATC
TTGGAAACATCAGCTAGCTGTTCCAGTACAGTTCAGTGTCAAAAGACAAATTCACACTTGCATGAA
GAGGAATGTGAGGCAAGAGCCACATCATTGATGAAACCTGTAAGCCATAATAGTAGGCCCATTAGT
CAGTCTAACAGGGATACAGATATCGACCATTTTATAGAACTGGGAAAGTCAGGAACACAGTGTTCA
GGTTATCTTGATTTGGTTGATGATCTAACTACATCAGTTTTAAAATCCTCTTCAGATACTTGTGTA
AGTGCAGCTAAAGCCTCAATGGATCCAGATGTTTTGACCATGCTCAGGTACAATAAAGACTCTTGC
AGAATGCATGTGTTTTGTCTTGAACATGCTTTGGAAACATGGACACAGCTTCAACAAATCGGTGGT
GCTAATATTATGCTTTTGTGCCATCCAGAATACCCTAGAGCAGAGTCAGCAGCAAAAGTCATAGCA
GAAGAACTTGGTATCAAGCATGATTGGAAAGATATCACTTTCAAAGAAGCAACTGAAGAGGACGTT
AAAAAGATTCAGTTGGCTTTACAGGATGAAGATGCTGAACCCACTGGCAGTGACTGGGCAGTCAAA
ATGGGTATCAACATATATTACAGTGCCAAACAGAGCAAATCACCACTTTACAGCAAGCAGATACCA
TACAATTCCATCATTTATAAGGCATTTGGCCAAGAAAACCCAGACAGTTTGACAGATTATGGATGT
CAAAAGTCAGGCTCAACAAAGAAAAAGGTGGCTGGGTGGTGGTGTGGGAAAGTTTGGATGTCAAAT
CAAGTTCATCCACTTCTAGCTCGTGAGCGTGAAGAACAGAACAGTAGCGTAGTGTACGGCAAAGCA
ATGTTCACTACTATTTCCCATGGCAAAGTACAAGATGAAGCGTCAACAAGATGCAATACAAGCAAC
CGAACCCCATCAAGAAGAACATCAAGAAGAAAAAAGGGGGTATCTGCTGAGAAATCTAAACCAAAA
AACAAGAGATCCACTGCTTCTGATGAAGCTAGTATGCTTTGCAGTGGCCTTGGAATGAACTCTGGA
GTTATCCATGACCAAACTGAAAACTCTGATGATTATGACAAACATGGCAATGGAGATGAAATTGAG
GAAGGAACAAATCCTCAGAAATATCAACAACGTAAATTGCAAAACGTGACCAGGAAATCAAGTTCT
AAGAAGCGGAAGGATGAGAAAAGAACAGATAGTTTTCATGAACTATATGACGAGGATAATGGTGTG
GATTATTGGCTTAACATGGGTAGTGGAGATGATGCCACACTAGGTAACTCTCGACAACAAAGTCCT
GATCCAGTGAAAGTGAAATCTGGAGGCAAATTGCAAGGTAAGAGAAAATCTAGCAAGTACAAGTCC
AATGATGATTTGTTGAATGAAGAAAATAAGTTACAAAAGATGAACAAAAAATCAAGCTCTAAGAAG
CAAAAGAATGATAAGATAAATAGACAACTTCAAGAAGATCAAACCGAAGATGACCATATGGACCAC
TTAGTTGACGTAGCGGTTGCAGATGAAGTCACACTAGACAATGAGGATAAAATTACAGAAGACAAA
ATTGATGACGTGAAAGTGAAATCTAGAGGAAAATCGCAAAATGGTAAGAGAAAAGGCAGCAAACAT
FIGURA 10 CONT. CAGGCTACCGATGGTTTGCGCGCTGGAAATAAAGTGGCCAAATTTCCGTGTGATATAGAAGGATGT GACATGAGCTTCAGTACCCAGCAGGACTTGTTATTGCATAAGCGTGACATTTGTCCTGTCAAAGGA TGCAAGAAGAAGTTCTTCTGCCACAAGTACTTGCTTCAGCACCGGAAGGTGCATATAGATGAAAGG CCACTTAAGTGTACATGGAAGGGGTGTAAGAAGGCATTCAAGTGGCCATGGGCGAGGACGGAGCAC ATGAGAGTCCATACGGGGGTAAGACCTTACGAGTGCCAGGAACCTGGCTGTGGTCAGACATTCCGA TTCGTTTCAGATTTCAGCCGCCACAAGAGAAAGACTGGCCATTCCTCTGATAAGAGAAGAAAGAAC AGTACATAA
SEQ ID NO: 168, Proteína - Oryza sativa
MSLQPPAVEPPEWLRTLPVAPEYHPTLAEFADPIAYILRIEPEASRYGICKIVPPLPRPPEDDTFR
RLQAAFAAAASSNGDPSPTFPTRLQQVGLSARNRRAASRRVWESGERYTLEAFRAKAAEFEPPRHA
APPRNPTHLQLEALFWAACASRPFSVEYGNDMPGSGFASPDELPDAANATDVGETEWNMRVAPRAR
GSLLRAMARDVAGVTTPMLYVAMLYSWFAWHVEDHELHSLNFLHFGKAKTWYGVPRDAMLAFEETV
RVHGYADDLNAIMAFQTLNEKTTVLSPEVLLSAGVPCCRLVQKAGEFVITFPGAYHSGFSHGFNCG
EASNIATPHWLQVAKEAAIRRASTNCGPMVSHYQLLYELALSLRPREPKNFYSVPRSSRLRDKNKN
EGDIMVKENFVGSVTENNNLLSALLDKNSCIIVPNADFFVPSFPVALESEVTVKQRFTAGPCSISQ
QGAENMAADHVAVDKVTEIQDMSGSLYPCETSLVGCSNRKLYETKYGQRDAAALCLSTSEIQSRGI
DTARSHPAGGILDQGRLPCVQCGILSFACVAIIQPREAAVQFIMSKECISSSAKQGGIGASDDTSN
WIDQSHEISPPPGPASGTDDNVKHAVSLAHVSDRCRELYASNTDGCTSALGLLASAYDSSDSDDET
TEDVSKHSKKNDSVNQSTDPQILETSASCSSTVQCQKTNSHLHEEECEARATSLMKPVSHNSRPIS
QSNRDTDIDHFIELGKSGTQCSGYLDLVDDLTTSVLKSSSDTCVSAAKASMDPDVLTMLRYNKDSC
RMHVFCLEHALETWTQLQQIGGANIMLLCHPEYPRAESAAKVIAEELGIKHDWKDITFKEATEEDV
KKIQLALQDEDAEPTGSDWAVKMGINIYYSAKQSKSPLYSKQIPYNSIIYKAFGQENPDSLTDYGC
QKSGSTKKKVAGWWCGKVWMSNQVHPLLAREREEQNSSWYGKAMFTTISHGKVQDEASTRCNTSN
RTPSRRTSRRKKGVSAEKSKPKNKRSTASDEASMLCSGLGMNSGVIHDQTENSDDYDKHGNGDEIE
EGTNPQKYQQRKLQNVTRKSSSKKRKDEKRTDSFHELYDEDNGVDYWLNMGSGDDATLGNSRQQSP
DPVKVKSGGKLQGKRKSSKYKSNDDLLNEENKLQKMNKKSSSKKQKNDKINRQLQEDQTEDDHMDH
LVDVAVADEVTLDNEDKITEDKIDDVKVKSRGKSQNGKRKGSKHQATDGLRAGNKVAKFPCDIEGC
DMSFSTQQDLLLHKRDICPVKGCKKKFFCHKYLLQHRKVHIDERPLKCTWKGCKKAFKWPWARTEH
MRVHTGVRPYECQEPGCGQTFRFVSDFSRHKRKTGHSSDKRRKNST
SEQ ID NO: 169, DNA - Glycine max
ATGTTGACGACAACTGTATCCGGCGGCGACCCTCCTTCTCGCGGTTTTGATACGCCGACGCTGGAC CGGGAAGCGGCGGCGCTGCTCCACGCGATCTCCGAGCATGGCGGGTACGCGTACGTGAGCATGGCG GTGCTGGCTTCCGGCGGCGACATTCGCGCGGCGGAGGCGGCGTGGGAGATGGCGTGGGAGCAGCTG CACTCGGGTCCGTGGCACTCGGTGCTGCCGGTGTGGCGCGACGCTTACTCCATGGCGTGCCTCCAC GTGGCGCGCCACCACTACGGCAACGGTGAGTTCTTGGACGCACTTAGGGTTTTGGATTTGGGAATC ATCATGGGAGGCACGCTCCTCCGCAAGGATTTGGACTCCGCCATCGAGAAAATGTCGGAACAAACG AGGAAGACCGTTAGGGTTTCTGATTTGGGGAACTCCGAGCACCGACTCGTCGATCGCGAATTTGAT ATGGCAGAGGTGCTCCAACTTTTACCTGTGAAGTCTCTTTCAACGAAACTTGTGGTGAAGAAATCG GCGCTGTCCTTGGAGAAATTCCTGAAGGATCATTACCTGTCTGGCTGCCCGGTTATTATCAGTGAT TGTATGTCTCACTGGCCAGCCAAGATGAAATGGAATGACGAAGATTACTTGCTGAGAGTTGCCGGA GACCGTACAGTTCCAGTTGAGGTTGGGAAAAACTATTTATGTACTGAGTGGAAGCAAGAGCTAATT ACTTTTTCAGAGTTTCTTCAGCGGATAAAGTCTGATAGCTGTTCTCCTGGTGGTCCTACATATCTT GCTCAGCATCCATTATTTGATCAGATAAATGAGCTTCGGAAAGATATCTTTATTCCTGACTATTGT TTTACTGGTGGAGGGGAGCTACGATCTCTCAATGCTTGGTTTGGTCCAGCAGGAACAGTAACACCG TTACACCATGATCCACATCATAACATACTAGCTCAGGTTGTTGGAAAGAAATACATTAGGCTATAC
FIGURA 10 CONT. TCTTCGTCTTTATCTGAGGAACTTTCCCCCCACTCTGGTACCATGCTCCACAACTCCAGCCAGGTT GATTTAGATGATATGGATGAAAAGAAGTTTCCGAAGGTGCAAGACTTGGAATTTGTAGACTGTATT TTAGAGGAAGGCGAAATGTTATATATCCCGCCAAAATGGTGGCACTATGTGCGGTCTTTGACTACC AGTTTTTCGGTTAGCTTTTGGTGGAGTGAGGGTGAAAGTTCGGATGCATCCTAA
SEQ ID NO: 170, Proteína - Glycine max
MLTTTVSGGDPPSRGFDTPTLDREAAALLHAISEHGGYAYVSMAVLASGGDIRAAEAAWEMAWEQL HSGPWHSVLPVWRDAYSMACLHVARHHYGNGEFLDALRVLDLGIIMGGTLLRKDLDSAIEKMSEQT RKTVRVS DLGNSEHRLVDREFDMAEVLQLLPVKSLSTKLWKKSALSLEKFLKDHYLSGC PVIISD CMSHWPAKMKWNDEDYLLRVAGDRTVPVEVGKNYLCTEWKQELITFSEFLQRIKSDSCSPGGPTYL AQHPLFDQINELRKDIFIPDYCFTGGGELRSLNAWFGPAGTVTPLHHDPHHNILAQWGKKYIRLY SSSLSEELSPHSGTMLHNSSQVDLDDMDEKKFPKVQDLEFVDCILEEGEMLYIPPKWWHYVRSLTT SFSVSFWWSEGESSDAS
FIGURA 10 CONT. Cassete marcador selecionável de planta
FIGURA 11 SEQ ID NO: 171, DNA - Axabidopsis thaliana
CTTAGTCAATAGCATCTTCTCCGATCATCGACGTCCGGAGATTTCTTCGGCCCTCTCATACTTGAG
TTGTTGTAGGATTTGTTGCTCTGGCTCTGGTGGTAGGTCTATGAAATCAACCCATATCGTGAATGG
ACTGCAACATGGTATCTTCGTCCCAGTGGGATTGGGAGCATTTGATCATGTCCAATCCGTCAAGGA
CTGAAGATGACAGCAAACAGCTACCTACTGAGTGGGAAATTGAAAAAGGTGAAGGAATTGAATCTA
TAGTTCCACATTTCTCAGGCCTTGAGAGAGTCAGTAGTGGCTCTGCCACCAGCTTCTGGCACACTG
CTGTATCGAAAAGCTCACAGTCGACCTCTATCAACTCATCATCTCCCGAAGCCAAACGATGCAAGC
TTGCATCAGAAAGTTCCCCTGGAGATTCTTGCAGCAACATAGACTTTGTCCAGGTGAAGGCTCCCA
CAGCTCTCGAGGTATCCGTTGCCTCAGCTGAATCAGATCTTTGTTTAAAACTAGGAAAGCGGACAT
ACTCTGAAGAATACTGGGGTAGAAACAATAATGAAATTTCAGCGGTTTCTATGAAGTTGTTAACTC
CATCTGTTGTCGCTGGGAAATCCAAATTGTGTGGTCAGAGCATGCCAGTCCCGCGTTGCCAAATTG
ATGGCTGTGAACTGGATCTCTCATCTGCTAAGGGTTATCATCGTAAGCACAAAGTCTGCGAAAAGC
ATTCAAAGTGCCCAAAAGTTAGCGTGAGTGGCCTGGAACGTCGGTTCTGCCAACAGTGTAGCAGGT
TCCATGCTGTCTCTGAATTTGATGAGAAGAAACGAAGCTGCCGAAAACGTCTTTCTCATCATAATG
CGAGGCGTCGTAAGCCACAAGGAGTATTTTCAATGAATCCCGAGAGGGTGTATGATCGAAGACAGC
ATACAAATATGTTGTGGAATGGGGTGTCCCTTAACGCGAGATCTGAAGAAATGTATGAATGGGGTA
ATAACACTTATGATACAAAGCCTAGACAAACGGAAAAAAGCTTTACTCTGAGCTTCCAGAGAGGTA
ATGGCTCTGAGGACCAGCTGGTTGCTAGTAGCAGCCGTATGTTCTCTACATCTCAAACCTCAGGTG
GGTTCCCAGCAGGAAAGTCCAAGTTTCAACTTCATGGCGAAGATGTGGGAGAATACTCAGGAGTCC
TCCATGAATCTCAAGATATCCACCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAACCTCTTCGGATCCCCTGGCCC
AACCACATGTGCAGCCATTTTCTCTACTCTGTTCATATGATGTTGTACCAAAATAGATGAGTAAGT
AATGTGTAATTTGTAAACCTGTTACTCAGTTGGTGGATACTTTTCCAAACCTATGATAAAAACCTC
GTCCTAGATCCCGTTAAATGCCAAACTTTCGGCTACTATAACTATGTTATCGTTATCATTATCATT
GTTTAACACCCT
SEQ ID NO: 172, Proteína - Arabidopsis thaliana
MDCNMVS S SQWDWEHLIMSNPSRTEDDSKQLPTEWEIEKGEGIESIVPHFSGLERVS SGSATS FWH TAVSKSSQSTSINSSSPEAKRCKLASESSPGDSCSNIDFVQVKAPTALEVSVASAESDLCLKLGKR TYSEEYWGRNNNEISAVSMKLLTPSWAGKSKLCGQSMPVPRCQIDGCELDLSSAKGYHRKHKVCE KHSKCPKVSVSGLERRFCQQCSRFHAVSEFDEKKRSCRKRLSHHNARRRKPQGVFSMNPERVYDRR QHTNMLWNGVSLNARSEEMYEWGNNTYDTKPRQTEKSFTLSFQRGNGSEDQLVASSSRMFSTSQTS GGFPAGKSKFQLHGEDVGEYSGVLHESQDIHRALSLLSTSSDPLAQPHVQPFSLLCS YDWPK
SEQ ID NO: 173, DNA - Nicotiana tabacvm
GTACAAAAAAGCAGGCTGGTACCGGTCCGGAATTCCCGGGATATCGTCGACCCACGCGTCCGCCGT GATGTAATCTTGGTGATGCTACTTATTCCCTTTTCCCTTCTTGAGCCCAAACTCAAGAAGGTCAAA AACAAAAAAATTACAAAAAGCTGGAATCTTGCAGTTTTTTTATTTAATTTATTTATCCTATGTTGA ATTAATTTTTGGGGTCAATATTTCCCAATTTGTAGTCTCCAATGGAGCCTCGTGTTGGTAATAAGT TCCGGCTTGGCCGGAAAATCGGTAGCGGTTCTTTTGGAGAGATCTATCTCGGCGCTAATGTTCAAA CTAACGAAGAGGTTGCAATTAAGCTGGAAAATGTGAAAACAAAGCATCCTCAACTATTATACGAAG CAAAGTTGTATAAAATACTACAAGGAGGAACTGGAATCCCCAATTTAAAATGGTTTGGAGTTGAAG GAGATTATAATGCCCTTGTGATGGATTTGCTGGGGCCTAGTCTTGAAGATCTCTTCAACTTCTGCA GTAGGAAGCTGTCTTTAAAGACCGTTCTCATGCTCGCAGATCAGATGATTAATCGGGTTGAATTTG TTCATGCCAAATCTTTTCTTCATCGAGATATAAAACCTGACAACTTTCTTATGGGATTAGGAAGAC GTGCAAATCAGGTCTATATGATTGATTTTGGGCTGGCCAAGAAGTATAGAGACTCATCAACTCATC AGCATATTCCGTATAGAGAAAACAAAAATTTGACAGGAACTGCTAGATACGCAAGCATGAATACTC ATCTTGGCATTGAACAAAGTCGAAGGGATGATTTGGAATCGCTGGGTTATGTTTTAATGTACTTCT TAAGAGGAAGTCTCCCTTGGCAGGGGCTGAAAGCAGGCACTAAGAAACAGAAGTATGAGAAGATCA
FIGURA 12 GTGAGAAGAAAGTATCAACATCAATAGAGACCTTGTGTAGGGGATATCCTGCAGAGTTTGCATCAT ATTTTCATTACTGTCGATCACTAAGATTTGATGATAAACCAGATTATGCTTATCTGAAGAGAATTT TCCGTGATCTTTTCATTCGTGAAGGGTTTCAATTTGATTATATATTTGACTGGACCATTTTGAAAT ATCAGCAATCACAGCTTGCCAATCCTCCATCTCGTGCTCTTGGTGGTACTGCTGGGCCAAGCTCAG GGATGCCTCATGCTCTTGTTAATGTTGAGAGGCAATCAGGTGGAGATGAAGGTCGACCAACTGGTT GGTCTTCATCAAATCTTACACGTAATAAGAGCACGGGGCTGCATTTCAATTCTGGAAGCTTATTGA AGCAAAAAGGCACAGTTGCTAATGATTTATCCATGGGTAAAGAGTTATCCAGTTCTAATTTTTTCC GGTCAAGTGGACCATTGAGGCGTCCAGTTGTCTCTAGCATCCGAGACCCAGTGATTGCAGGGGGTG AACCTGACCCCTCCGGCACTCTGACAAAAGATGCAAGCCCGGGACCATTGCGTAAAGTATCCAGTG CTGCACGGAGGAGTTCACCAGTTGTGTCCTCAGATCACAAGCGCAGCTCCTCTATCAAAAATGCCA ACATAAAGAATTTAGAGTCCACCGTCAAGGGAATAGAGGGTTTAAGTTTTCGATGATGAGGGACTG CATTAGTAGCTGTGCTTTGTCTCAGTTCTCCGTTCACTGTAAATTTTGGCACACCAACTTGGGGAG TAAGAGTTCTGATATTAGTTGCTGTCAGGAAGTACCATAAAGCTGAATTATACAATTAAAATTTGG GATCCAATCGCAAAAGCACATTAAGGATATGATGGGGTTGCAGATCCAAACTCACAGATTCCAGTT TATGCTCGTCCATACAGTTATAGGCACTTTCCATATTCTTTTCTTTAATCTCTGTCTCTTGCTTGT TATTGTTATGTCGTGGTATTCTTGTTGAGGTCATGTTTGTGAATTGCGAAGATGGTCATGTATAAT TGCCGAGAAATCATGTACTAGTTTGTTTTAAACATGAGCAAACTGTTATTTTGTTCAAGCTACTTT AATATCAAAAAAAAAAAAAAAAGGGCGGCCGCTCTAGAGTATCCCTCGAGGGGCCCAAGCTTACGC
GTACCCAGCTTT
SEQ ID NO: 174, Proteína - Nicotiana tabacum
MEPRVGNKFRLGRKIGSGSFGEIYLGANVQTNEEVAIKLENVKTKHPQLLYEAKLYKILQGGTGIP NLKWFGVEGDYNALVMDLLGPSLEDLFNFCSRKLSLKTVLMLADQMINRVEFVHAKSFLHRDIKPD NFLMGLGRRANQVYMIDFGLAKKYRDSSTHQHIPYRENKNLTGTARYASMNTHLGIEQSRRDDLES LGYVLMYFLRGSLPWQGLKAGTKKQKYEKISEKKVSTSIETLCRGYPAEFASYFHYCRSLRFDDKP DYAYLKRIFRDLFIREGFQFDYIFDWTILKYQQSQLANPPSRALGGTAGPSSGMPHALWVERQSG GDEGRPTGWSSSNLTRNKSTGLHFNSGSLLKQKGTVANDLSMGKELSSSNFFRSSGPLRRPWSSI RDPVIAGGEPDPSGTLTKDASPGPLRKVSSAARRSSPWSSDHKRSSSIKNANIKNLESTVKGIEG
LSFR
SEQ ID NO: 175, Oryza sativa - seqüência de promotor de WSH8
gcttgagtcatagggagaaaacaaatcgatcatatttgactcttttccctccatctctcttaccgg caaaaaaagtagtactggtttatatgtaaagtaagattctttaattatgtgagatccggcttaatg
atagcaactcaagaatggattgatatatcccctattactaatctagacatgttaaggctgagttgg gcagtccatcttcccaacccaccaccttcgtttttcgcgcacatacttttcaaactactaaatggt gtgttttttaaaaatattttcaatacaaaagttgctttaaaaaattatattgatccatttttttaa aaaaaatagctaatacttaattaatcacgtgttaaaagaccgctccgttttgcgtgcaggagggat aggttcacatcctgcattaccgaacacagcctaaatcttgttgtctagattcgtagtactggatat attaaatcatgttctaagttactatatactgagatgaatagaataagtaaaattagacccacctta agtcttgatgaagttactactagctgcgtttgggaggacttcccaaaaaaaaaagtattagccatt agcacgtgattaattaagtactagtttaaaaaacttaaaaaataaattaatatgattctcttaagt AACTCTCCTATAGAAAACTTTTACAAAATTACACCGTTTAATAGTTTGGAAAATATGTCAGTAAAA AATAAGAGAGTAGAAGTTATGAAAGTTAGAAAAAGAATTGTTTTAGTAGTATACAGTTATAAACTA TTCCCTCTGTTCTAAAACATAAGGGATTATGGATGGATTCGACATGTACCAGTACCATGAATCGAA TCCAGACAAGTTTTTTATGCATATTTATTCTACTATAATATATCACATCTGCTCTAAATATCTTAT ATTTCGAGGTGGAGACTGTCGCTATGTTTTTCTGCCCGTTGCTAAGCACACGCCACCCCCGATGCG GGGACGCCTCTGGCCTTCTTGCCACGATAATTGAATGGAACTTCCACATTCAGATTCGATAGGTGA
FIGURA 12 CONT. CCGTCGACTCCAAGTGCTTTGCACAAAACAACTCCGGCCTCCCGGCCACCAGTCACACGACTCACG GCACTACCACCCCTGACTCCCTGAGGCGGACCTGCCACTGTTCTGCATGCGAAGCTATCTAAAATT CTGAAGCAAAGAAAGCACAGCACATGCTCCGGGACACGCGCCACCCGGCGGAAAAGGGCTCGGTGT GGCGATCTCACAGCCGCATATCGCATTTCACAAGCCGCCCATCTCCACCGGCTTCACGAGGCTCAT CGCGGCACGACCGCGCACGGAACGCACGCGGCCGACCCGCGCGCCTCGATGCGCGAGCCCATCCGC CGCGTCCTCCCTTTGCCTTTGCCGCTATCCTCTCGGTCGTATCCCGTTTCTCTGTCTTTTGCTCCC CGGCGCGCGCCAGTTCGGAGTACCAGCGAAACCCGGACACCTGGTACACCTCCGCCGGCCACAACG CGTGTCCCCCCTACGTGGCCGCGCAGCACATGCCCATGCGCGACACGTGCACCTCCTCATCCAAAC TCTCAAGTCTCAACGGTCCTATAAATGCACGGATAGCCTCAAGCTGCTCGTCACAAGGCAAGAGGC AAGAGGCAAGAGCATCCGTATTAACCAGCCTTTTGAGACTTGAGAGTGTGTGTGACTCGATCCAGC GTAGTTTCAGTTCGTGTGTTGGTGAGTGATTCCAGCCAAGTTTGCG
SEQ ID NO: 176, Oryza sativa - seqüência promotora de GOS2
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT
AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT
TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT
GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG
AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT
AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA
CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA
CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG
ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT
ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC
TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAATAATTTT
ACAGAATAGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT
TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA
GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG
GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAAGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA
ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG
GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT
CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT
ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC
TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT
ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT
TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC
GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC
CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT
AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGCTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA
AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT
TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG
CTTTTATAGCGTTATCCTAGCTGTAGTTCAGTTAATAGGTAATACCCCTATAGTTTAGTCAGGAGA
AGAACTTATCCGATTTCTGATCTCCATTTTTAATTATATGAAATGAACTGTAGCATAAGCAGTATT
CATTTGGATTATTTTTTTTATTAGCTCTCACCCCTTCATTATTCTGAGCTGAAAGTCTGGCATGAA
CTGTCCTCAATTTTGTTTTCAAATTCACATCGATTATCTATGCATTATCCTCTTGTATCTACCTGT
AGAAGTTTCTTTTTGGTTATTCCTTGACTGCTTGATTACAGAAAGAAATTTATGAAGCTGTAATCG
GGATAGTTATACTGCTTGTTCTTATGATTCATTTCCTTTGTGCAGTTCTTGGTGTAGCTTGCCACT ■
TTCACCAGCAAAGTTC
FIGURA 12 CONT. SEQ ID NO: 177, Seqüência artificial - prm86687
GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAAACAATGGACTGCAACATGGTATCT
SEQ ID NO: 178, Seqüência artificial - prm8668
GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCACATTACTTACTCATCTATTTTGG
FIGURA 12 CONT. LOC: 0s02g05450.1 _11972m058
Orysa_PHDf_HD
- Sacof_PHDf_HD Zeama_PHDf_HD
- Poptr_PHDf_HD_l Poptr_PH Df_H D_l V
L Vitvi_PHDf_HD I
Eucgr_PHDf_HD
Medtr_PHDf_HD
Arath_PHDf_HD_PRHA Pinra_PHDf_HD
LOC: 0s06g12400.1 _11976m059
Orysa_P H Df_H D_HAZ 1
- Zeama_PH Df_H D_H OX2A Zea m a_PH Df_H D_H 0X2 B Zeama_PHDf_HD_HOX1A
L Zeama_PHDf_HD_HOX1 B
- Arath_PHDf_HD_HAT3.1 Lotja_PHDf_HD Poptr_P H Df_H D_l 11 Poptr_PHDf_H D_l I Vitvi_PHDf_HD Il
Petcr PHDf HD PRHP Espiral enrolada Espiral enrolada
PHDf Pfam 00628
NLS
HD Pfam 00046
Extensão de ácido
Extensão básica
FIGURA 14
FIGURA 15
Saída de espirais para desconhecido
I - --> ----,— I vi ndov*M vindow*£l windou«26 - I ■ N A- I Q a -
<eo see «ea ?ee
FIGURA 16 mrrrrOrrrrrnrnifl*ri-rl<lr
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FIGURA 17
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FIGURA 17 Terminador Orysa_PHDf_HD / RB
Promotor constitutivo da plantas
Cassete marcador selecionável de planta
vetor de expressão de planta
Cassete marcador selecionável de planta
marcador
selecionável
bacteriano
FIGURA 18 SEQ ID NO: 179, seqüência de ácido nucléico de PHfDJHD de Oryza sativa 0s02g0147800 NM_001052422.1
ATGAATACCCCAGAAAAGAAACCACTGTGCTATACTTCTAGAAGAGCACTGCAACAGAGGACAGAA
TCCTCTTCGGAATTGATCTCTGTATCAAAAAGAGCAACCCGCCAGAATACTCCACGCAAGCCGGAT
TCTCCTCCCAAACGAACAACAAGAAGTAGCGCTAACCTGGCGAAATGTATAGAGAACAAACACCAT
AGCAGTCCTCTGAAGCGGCGGCGGGGTTCAGATGCGGCTACCGGAAAGTCTGCAACAGGGCCAACA
AGGAGGAAGCATAAACAGAAAAGGAAAAATGATGAGAGTGATGAGGTCAGTCGCATGGAAAAAAGA
GCAAGATATTTACTTATCAAAATAAAACAGGAGCAGAATTTGCTAGATGCATACTCTGGAGATGGT
TGGAATGGGCACAGTCGAGAGAAAATAAAGCCAGAGAAGGAGCTACAGCGTGCTAAGAAACAGATC
ATGAAATACAAAATCGCTATCCGTGACGTCATTCACCAACTTGATTTGTGTAGTTCCAGTGGGAGC
AAGGATGACTCTGTGATTCCACCAGATGGGTGTCACGAGTCTGTCAATCCTGAACATACAATATGT
TCAAGGTGCAAATCCCACGAGTCATTTCCTGACAATAACATTATATTCTGTGAGGGGGGCTGCAAA
CTGGCGTGTCATCAGAAATGTTTGGAGCCTCCTTTTGATAAAATTCTTCCAACTACCCGCCATGGG
CGGCTTTGCAAACACTGTTCTTCCAAGATGAAAATTTTAGACGCCATTAATGCCCATCTGGGGACA
AGTTTTACAGTGAAGTGTCCCTCCAGTGATATTTTCAAGGAAGCAGCTGAACATTTCAACTCTGAT
GATGGACTGGGCCAAGATTGGCTATCTGAGTATTCAGGTGATGAGGACTATGACCCTGAAGAAAAT
GAGGCCAGCAGCAGTGGTGAAGAGAATAAATCTGCCGATTCCAATTGTTCAGGGAGTCCACTTTAT
TCTCCAAATGATGATATTCCAGACTTCATATCAGCAGATTTCAATGATGCTGAAGGATTCTGTCGT
GAAAGTTCAAATCTAGGAATCGATTTTGGTGAAGATGGTTTGGCTGAGATTCTTACCCACCAAAGG
CCAAGAAGAGATGTTGACTATACACAACTTAATGAGCAAATGTTTGGAGAGCCTATTGGCAATGAC
GAACAGAGTGAAGATGAAGATTGGGGTCTTAACAAGAGAAAGAAAAGAAGAACTGGTTCAACTGGT
GTTGGGACTAATTCCGTAGAGGGTCGATCAGATGTCAAATCCAATAAGAAAGCCCAACCTCGGAGA
AAACTTTTCAGGATTCCTCCTGCGGCAGTTGAGGTGCTCCGTAAAGCTTTTGCTGAAAATGAGCTT
CCTGCCCGGAGTGTCAAAGAAAATCTCTCAACAGAGCTGGGTATTTCTTTTGAAAAGATTGATAAG
TGGTTCAAAAATACACGGTGTGCTGCTCTCAGGGATAGGAAGGGTGAAAGTCGTTATTCTGGTCCC
AGCAAAAGGTCAAGAACAAGCATAGAAAAGGCTGAAACTTCAGCTAAAGTGGATCAAATGGACAAC
TCATGCTTTCTTCCCTTATCTGAAATAATCAACGTGCCCACACGTCTGCAGAAAGGTCTTGATAAG
AAGCCAAAATCAATTAACAGCCCTCCAAGACCTCAGGACAATGAAACTTGCTTGTCGCCAACTGAT
AAAACCAAGGAGGGTACACCGCCTACGATCAAGCCTTCCATCACAGATTCTAGTCAACTGATGAAT
AACGACATCGGCACTGAGGAGACTGCTGTTTCTTGGGTGGACACTTGGGCCTCTGACGCTCTGCAT
TTCTTGGACGTGAGCGATGATGAACATTTCTTCGATGTGATCGAGAAGGTGTGCGGTCTCGAGAAT
CGGÇTGCAGCGGTTGAAGGAGAACATG.CTATCATCGTCATCGTCAACTGACAACAATGTGGCTGCT
GAGAGTGGCTTGCAAAACGAAGTTGTGCTTGTACCAGCTGCTGAGCTCAAGGATAAAGCATCTTAA
SEQ ID NO: 180, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDfJHD Oryza sativa
MNTPEKKPLCYTSRRALQQRTESSSELISVSKRATRQNTPRKPDSPPKRTTRSSANLAKCIENKHH SSPLKRRRGSDAATGKSATGPTRRKHKQKRKNDESDEVSRMEKRARYLLIKIKQEQNLLDAYSGDG WNGHSREKIKPEKELQRAKKQIMKYKIAIRDVIHQLDLCSSSGSKDDSVIPPDGCHESVNPEHTIC SRCKSHESFPDNNIIFCEGGCKLACHQKCLEPPFDKILPTTRHGRLCKHCSSKMKILDAINAHLGT SFTVKCPSSDIFKEAAEHFNSDDGLGQDWLSEYSGDEDYDPEENEASSSGEENKSADSNCSGSPLY SPNDDIPDFISADFNDAEGFCRESSNLGIDFGEDGLAEILTHQRPRRDVDYTQLNEQMFGEPIGND EQSEDEDWGLNKRKKRRTGSTGVGTNSVEGRSDVKSNKKAQPRRKLFRIPPAAVEVLRKAFAENEL PARSVKENLSTELGISFEKIDKWFKNTRCAALRDRKGESRYSGPSKRSRTSIEKAETSAKVDQMDN SCFLPLSEIINVPTRLQKGLDKKPKSINSPPRPQDNETCLSPTDKTKEGTPPTIKPSITDSSQLMN NDIGTEETAVSWVDTWASDALHFLDVSDDEHFFDVIEKVCGLENRLQRLKENMLSSSSSTDNNVAA E SGLQNE WLVPAAELKDKAS
FIGURA 19 ^Ρ^^,^ΝΓ^^Γ ^ áCÍd° nüC'éíC° de PHDf-HD_PRHA de
GGTcIS TGCSScSggAPÍ^^
AAATGCCTTrArrSoi:AATGATAT^TACTTTGTGATGrAa™JI GTGCAGAATGCAATTCT TTTTG^G^
=KffiKSF=SaKsS^=EB
mmmms
SEQ ID NO:
aII,"· Seqüência de polipeptídeo de PHDf Hn ρο.λ GSEDEDWGPNDRRKRKRF
ssissss^^s^s^^ss^ss^
sEQ XD NO: ia*
ADW17964 seqüência de ácido η,,^ι ■
^CATr«AGMAGSATCTT nUC,e'C° dB PH<*-«D * Eucalyptus 9randis
^^CAAAACACCGATGArt^T^^^^^^^GAA^
ACCCTTACATTTCAGTrrzr~^AGCTArGTAAAATTAGA^ JÍCGCAGCCAGTGAGGGATTACGA
pIGURA 19 CONT. TraJs ΗΟ: 184' secIu^nc'3 de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD de Eucalyptus
KHFSKLDEASRLQRRTRYLlIKMKLEQNLrM?q^r^^fNVQNTDEDVKVNKLRRKRKKKMR
^ssssss^sss^^^^sssss^
SLNTEKVIQQKSTKPIHGKGSPMVPEHSYMENFEFDDNM^^nT^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
E™-CKIRSRIDSLRKRTI.TfSSL^
Ic?23547 °: 185' Sequência de ácid° nucléico de PHD,.HD de Medicago truncatu.a
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CTGAAATCAAAATCTCATAAAPTrrrar^^ CACA^CACCA^GGAAGAAACACAGA
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GATCTTGATGATACTGTAC^cS^ CAGAATCTTATCGATGCTTACGCTGGA^
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^CTCTGTGATGGCACATGCAATCG^^^ GAAGACATTCCTCCTC^GA^ GAGGCAACAAACGCGCATCTTGGGAScg^^ g^gaagctgctattcctgacggcgatgct^
GATCCTGAAGACGATGACTATAATCCAGAGAGrA^r^^^GAAGAAGAATGGCCGTCAGAT
tgctctctgttagatgaaggcatcaaS^
TCCGGGGAAATAGCATGCGGTCGTArrrIr™IiTTATTCTAACGACCACATAGATTC
SSSSST
FIGURA 19 CONT. SEQ ID NO: 186, Medicago truncatula seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD
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hqldslssvgsiegsviatdgsvshehifcanckinevspdndiilcdgtcnrafhqrcldpplet edippedqgwfckycdckieileatnahlgtrfpldstwqdvfkeeaaipdgdaallnoeeewpsd
kypnnkmwtot^mccr^^^^^^^^^^^^^^^^ i-^1g prkrrrreke se avntlmtlhe sen zvmm^f^ssgikrpcfrfsheaveklrqvfaenelppksvkdalskelgldaakvnkwf
firklqeggqqlqsitsktskdstSqhvqedevlnpksakitvisslkkcenvtgkek tkassnplkkkrpeippclgengnkdsmevsddvslmkllqdrkkkvsfafegdseaaeleferlq kvktkidrlkqrltgvqncrskgsdevhlnepsimyvpiaelrekvk
ADWl8458 ' ^' SequênCÍa de ácido nucléico de PHDf-HD de Pinus radiata
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aatggggaagaatggccatcagatgattcagaagatgatgactatgatccagagaScaagaga?? agagatgaaacgggctatgagaataatatgagtgattctggaaagtcaagtgga^^g^cI tat^tgaaactgacaatgaatcagatgcttccttaacagataatctaaatgaatacas^g ggaaagaagaggagcagagacactgatgaaaaaaacggacaagaagctataatagatttagatact gatgagaatgatggctcagacatgccagtttcagggagaaggcagcgaag^g^gS?a^
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FIGURA 19 CONT. aatgagttgccttcaatgtcctgtaaaatggcattatcaaagcagttggatctaccttatcggcag gtgcatatgtggttcaaaaatgctcgttatatgtctttgaagaagaaaaagatgaaccgtttaaaa gaatcagctcccgttatttcctcacataccagaagacttgaagtagaaagtagcaaacccaatcca caaatcaaagagccagatgatgctggcaattcatacttaacagagatggaaaaattgggtaatatt gagttgaaacttgaaaatatgagaaagattttagaaacagtctgtcctaaaagaggtactgatttt tccaatgataagaatcaagaaggaatcgccaaccttcttagtgaggagcttcttgtgtatgtacca gtggtggagttgagggagaagagcttacaggttgctcctgtcaggtga
SEQ ID NO: 188, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD de Pinus radiata
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SEQ ID NO: 189, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD de Populus tremuloides
atgggtgattctggaaagacgtcaaagctgcaagactcgcacaaatgttcaccttctgacacagtg
actgggtcgttgctgattaaatcattgaagataaagaaggacagcaaaatatctcctagaaaaggc
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aggagagacaacatcatgagtgaagcgggtactgatgatgatgcatctgatgacatcagcagttca
accagcttgggttggtcttcagatggtgaggtttttttgggatccaggaggtgggagatgcatggc
ttggacttcagaaacaattctatttatagcagtttagattctgatgaaaccagtgatggggaaatt
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FIGURA 19 CONT. CCTGATGCAGTTGAGAAACTTCGCCAAGTATTTGTAGAAAATGAACTTCCATCTAGAACTGTCAAG GAGAATCTGTCAAAAGAATTGGGCCTTGAACCTGGGAAGGTTAGCAAATGGTTCAAGAATTCCCGT TATTTAGCTCTGAAGTCCCGGAAGGTAGAGAAAGGAGAACAACTTCATAACTCTAGTTCCAAAGTC TCTGCTGAACCCACATTAAATGTCATGGAGGGCAAAACTGCTGATCTTTCACAGGATTCTTGGGAA GAAACTGAGGTATGTATCCCAAAGAATTTGAAAAGGATCCTTCAGAGGAAGAAGCTGAAGTCAATA AGCAGAAGTTTAAGGAAAAATGAACAGAAAAGAGGTTCCTACGAATCACCTACTAAAAGCAATGAG ATGAATGCTGAGTGCAGTGATGATGTGAGCTTGAAGAAGTTGTTAAAAGCAAAACCAAAGGGAGTA AAGAAAAAGGTTAATCCTATTTCAGTAGCGGCTGAATATGATATGGAGAGACTCTGTAGAGCGAAG GCTATATTAGAGAAGATGAAGCAGAAAGTGGTGAAGCTACAAAATGGCAAAGCTAGGAAGTCATCC AAAACCCGTCCACTTGAAGAATTTATCGTTTACATTCCCATTGCTGAGTTGAGGGGAAAAAATTGA
SEQ ID NO: 190, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD de Populus trem u Io ides
MGDSGKTSKLQDSHKCSPSDTVTGSLLIKSLKIKKDSKISPRKGQKTKTKSKPKPIPHLKTIISSA VSKRKVSPKGIGNGSTSRKLIHRKILHKALDKKASRKGASSGLQLSTIDSKGNGKNGDEGAIKKLK KRKPKKRQRDKVKLDEPSRLQRRARYLMIKMKLDQNLIDAYSGEGWKGQSREKIRPEKELLRARKQ ILKCKLGLRDIIRQVDSLSTVGCIEETVMAPDGS VSHEHIFCAKCKLNEVSPDNDIVLCDGTCNCA FHQKCLEPPLDTESIPPGDQGWFCKFCECRMDIIEAMNAHLGTHFSEDS SWQDIFTEEAAIPDAGN VLLNPEEEWPSDDSEDDNYDPERRDNIMSEAGTDDDAS DDISS STSLGWSSDGEVFLGSRR WEMHG LDFRNNSIYSSLDSDETS DGEIVCGRRQ RRAIDYKKL YDEVFGKDAPAHEQASEDEDWGPGKRKRR EKESNAASTLMTLCESKKKSKSDETIEGMMNLPPQTRRPIFRLPPDAVEKLRQVFVENELPSRTVK ENLSKELGLEPGKVSKWFKNSRYLALKSRKVEKGEQLHNSSSKVSAEPTLNVMEGKTADLSQDSWE ETEVCIPKNLKRILQRKKLKSISRSLRKNEQKRGSYESPTKSNEMNAECSDDVSLKKLLKAKPKGV KKKVNPISVAAEYDMERLCRAKAILEKMKQKWKLQNGKARKSSKTRPLEEFIVYIPIAELRGKN
SEQ ID NO: 191, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD de Saccharum officinarum contíguo de CA157855.1, CA261734.1, CA253314.1, CA220753.1, CA201958.1
ATGCATTCTTCGGAAAATAAACTGGTATGCTCCAACTCGGGAAGATCATCAAAAGGGAATGAGACC
TCTATGGAGTTGGTTCCTGTACCAAAAAGACCAACTAGACATGATGCTTCCCGCCAATGCAAATCT
GATTCTCCTTTGAAGCGATCACCAAGGAAAGCTAGAAATGCTACTCTGGCAAAAAGCATAAAGAAT
AAATATCATTGTAGTCCCCTCAAACAGCGGAGGGCTTCAGATTCTGTTTCTGGAAAAGTTGCGACA
GGACTAACTGTGAGGAGGAGGAAGAAAAGAAAAATGCAAAATACTGATGAGGCAACTCGCTTGGAA
CGAAGAGCGAGATATTTTCTAATCAAGATAAAATTGGAGCAGAATTTGCTAGATGCTTACTCTGGA
GATGGATGGAATGGGCAAAGCCGGGAAAAAATAAAGCCAGATAAGGATCTGCGGCGTGCCAGGAAA
CAAATCA TAAAATGCAAAATTGCTATACGTGATATCATTCGCCAACTTGGTTTGTATACTTCTACT
GGGAGTCTTAATGACCCAGCAATGCCTCCAGATCAGTCTACCAATCCGGAACATACCATGTGCTCA
ACATGCAAGTCTCATGAATCATTTCCCAGCAATAAATTTATCTTCTGTGAAGGGCCCTGCAAAAGG
GCATATCATGAGAAATGTTTGGAACCTCCCTTAAACAAAAGCGTACTTCCAACAAGTAGCCATGGA
TGGCTTTGCAAATTCTGTTTGTGCAAAGTGAAAATTTTAGAAACTATTAATGCACATCTÀGGAACA
AGTTTTACAGTGAAGTGCCCCTTCGAAGATATATTCAAGGAAGCAACGGAACAAATAGACTCCGAG
GATGCACTAGATGAAGATTGGCTTTCTGAGTATTCAGGTGATGAGGACTATGATCCTGATGAAAAT
GAGGACAGCGGCAACTGTATGGACAGCGGGGAGGAAATTATGTCTGATGATTCCGATGGTTCAGGA
AGCCCCCTTTATTCTCCAAATGACGATATTCCTGACTTCATATCAGCAGACTTAAATGACGTGGAA
GGGTTTTGTCACACCAATTTAGACTTAGGCATTGATGCCGTTGAAGATGATTTGGCACAGATCCTT
ACCTACCAAAGGCCAAGAAGAGATGTTGATTATAGAAGGCTTAATGAGGAAATGTTTGGAAAAATA
ATAGGAAATGAAGGACAGAGTGAGGATGAAGATTGGGGCCATGAAAGGAGAAAGAAAAGGACTTGT
TCAGGTGGTGCTGGGGATAATTCTGTGGGTTTCTCAAATGTTATATCTGAGGAAAAGAGCCAAAAG
FIGURA 19 CONT. AAGGGGAGAAAACTTTTCAGGATTCCTCCTGCAGCTGTCGAGGTACTTCGCAAAGCTTTTGCTGAA AATGAGCTTCCACCCCGGGATGTCAAAGAAAATCTCTCAAGAGAATTGGGAATTTCTTTTGAAAAG ATTGATAAATGGTTCAAAAATACACGGTGTGCTGCTCTCAGAGATCGCAAGGCTGAAGGGAACAGT CATAATACGGCTCCCAGCAAAAGCTCAAGAAATAAAGGAAAAGCTGGAATCTCAAGCCAGGCTGAA AGGAATGGTCATGTTACTGGTCCCTGCAATAACTCGAGAACAAATGAAGAAAAATCGTTGACACTA GCTCCTAATGCCCAGGGAGAGAAGAATGGGATTGCAGCAGATTATGTCTTACAAAAATCTGGTATA TCGGGGAAGGTTGATTCAGTAGACAACTCTTGCTTGGTTCCCTTGTCTGAAAGCATCAATGTGCAT ACACGATTGCAACAGAATCTTGAGATGAGGAAGATGGAATCAACTAGCAGTCCTGTGTGGCTGCAC AATAAAGGAGGTTGCTTGTTTCCAACAGGCCAAGCCAAGGAGAGTACATTACCTACAGGCAAGCCT TGTTTGCAGTCAGAAATAACCCATTCAACAATTAATGAAGTGAGCACTTTAGTGCAAGCTACTTCT TGGATGGATGCTGGGTCGTGCGCTGAGGTGCAAGAAGCCACTCCTTGGGTGGACATCGGGGCCTCA GATTACCAGCCTTTCCTGGACGTGATCGATGAGATGTGCGGACTTGAGTGCAGGCTGCAGAGACTG AAGGAGAACATGCTCTCATCTGGCATAGACGGCAAAACCACAGGTGAGAGTGACATGGGAAACCAG GCTGTGGTGCTCGTGCCGACCGCCGAGCTCAAGGAAAAAGCGCCGCATGGCAGTTTTTTTGGGCAT TATTGCCCATAG
SEQ ID NO: 192, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD de Saccharum officinarum
MHSSENKLVCSNSGRSSKGNETSMELVPVPKRPTRHDASRQCKSDSPLKRSPRKARNATLAKSIKN KYHCSPLKQRRASDSVSGKVATGLTVRRRKKRKMQNTDEATRLERRARYFLIKIKLEQNLLDAYSG DGWNGQSREKIKPDKDLRRARKQIIKCKIAIRDIIRQLGLYTSTGSLNDPAMPPDQSTNPEHTMCS TCKSHESFPSNKFIFCEGPCKRAYHEKCLEPPLNKSVLPTSSHGWLCKFCLCKVKILETINAHLGT SFTVKCPFEDIFKEATEQIDSEDALDEDWLSEYSGDEDYDPDENEDSGNCMDSGEEIMSDDSDGSG SPLYSPNDDIPDFISADLNDVEGFCHTNLDLGIDAVEDDLAQILTYQRPRRDVDYRRLNEEMFGKI IGNEGQSEDEDWGHERRKKRTCSGGAGDNSVGFSNVISEEKSQKKGRKLFRIPPAAVEVLRKAFAE NELPPRDVKENLSRELGISFEKIDKWFKNTRCAALRDRKAEGNSHNTAPSKSSRNKGKAGISSQAE RNGHVTGPCNNSRTNEEKSLTLAPNAQGEKNGIAADYVLQKSGISGKVDSVDNSCLVPLSESINVH TRLQQNLEMRKMESTSSPVWLHNKGGCLFPTGQAKESTLPTGKPCLQSEITHSTINEVSTLVQATS WMDAGSCAEVQEATPWVDIGASDYQPFLDVIDEMCGLECRLQRLKENMLSSGIDGKTTGESDMGNQ AWLVPTAELKEKAPHGSFFGHYCP
SEQ ID NO: 193, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD de Vitis vinifera AM477372.2, AM488059.1
ATGCGTGGAACTGGAAAGAAAGCAGGACATCAGGAATCTGGAAAGTCTTGCTTTCCTAAAAGAAAT ATCGGGCCTAAGCTGAATGCAGCATTGCAGATTAAAAATGGTAGTAAAATATCTCAGACCAGGAAA TGCAAGCCAAAATCAAAATCTCATGCAAAGACAATTGGTGCAATCCTGTCTAAGAGAACAACTACT GACTCTCCAAGCAAGGGAAGCAGGAGTGGATCCACAACCAGAAAACTGATTCACAAGAAAACCCTG CATAAAGCCATTGATACTGAGTCTTCCAAGAAGGAGTCTTCATCAAAGCTTAAAGGTGAGAAGCCC CCACAAATTAGCACAAACAAAAATGGGGAAACTGTGGACAAGAATGTTAAACCTCAAAAATTAAAG AAAAGAGGAAAGCGGAAGCGGCGAAAGGATAATTCAGAGCTAGATGAAGCTTCTCGCTTGCAAAGA AGAACCAGGTACCTCTTGATCAAAATGAAACTGGAGCAGAATCTTATTGATGCTTACTCTGGGGAA GGTTGGAAAGGTCATAGTCGAGAAAAGATCAGGCCAGAGAAGGAACTACAAAGAGCTACGAAGCAA ATATTGAAATGTAAACTTGGGATCCGTGATGCAATTCGCCAGCTGGAGTCACTGAGCTCCATAGGA TGTATTGAAGATACTGCAATTGCTTCAGATGGATCTGTTTATCATGAACACATAATCTGTGCAAAG TGCAAGTTGCGGGAGGCTTTCCCAGATAATGATATTATACTCTGTGATGGGACGTGCAATTGTGCT TTCCACCAGAAATGTCTTGATCCTCCATTGGAAACTGAAAATATTCCTCCGGGAGACCAAGGTTGG TTTTGCAAGTTCTGCGAGTGTAAGATGGAAATACTAGAAGCAATGAATGCACATCTTGGAACCCGC TTCTCTGTGGACAGTACTTGGCAGGATATTTTCAAAGAAGAAGCTGCTTTGCCTGATGGTGGGAGT
FIGURA 19 CONT. GCACTGCCCTATCCAGAGGAAGATTGGCCTTCTGATGATTCACAAGATCATGATTATGATCCTGAA AGAAATGAAAATAGCTGCAGCATCAGCACTGCTGGCACTGAAGGAAATGCTTCAGATGATACAAAT AGTTCTTTAAGCTTGAGTTGGTCGTTTGAAGACGAAATCCTTTCTGGATCCAAAAGATCAGGGATT ATCAGTGCAGATTCTGATGAAACATCTGATTGTGAAATCATAAGTGGTCGTAGGCAACGAAGAGCT GTTGATTATAGAAAGTTATATGATGAAATGTTTGGAAAGGATGCTCATGCAAATGAACAAGTTAGT GAAGATGAAGACTGGGGTCCTGCTAACAAAAGGCGGAGAGAAAAGGAGTCTGATGCAGCCAGCACC CTCATAACTCTATATGAAGGTGAGAAAAAGTTACCTAATGTGGAAACCATGGAAGCCAAACAAAAA ATTTCTTCAGATCCACAAACTAAAAGGCCATTTTCCAGAATTCCACTTGATGCGGTTGAGAAGCTT CGCCAAGCATTTGGGGAGAATGAACTTCCCTCTAGAGATGTGAGGGAGAATCTTGCAAAGCAGTTG GGTCTTGATTATGAGAAGGTGAACAAATGGTTCAAAAATGCACGATATATAGCGCTAAAAACAAGA AAGGCAGAAAGAGCAAAACAACTTCAGACTTCTCCCAGAATCTCCAAGGAATCCAGATCAGAAATC GTGAAGGACAAAACTGTTGATCTAGTGGCATCAAGGGATAACTCATCAGCATCACTGGTCCGTGCA CTAAAGAATTTGAAAAAGGTGCGGAGGAGAAAAAATCCAAAGCCAATAATGACCAGCCCTGTAAAG AAAAAGCATCATAGAAGGGCTTTACTTGAGTCACCTACAAATGACAAGGTTACTATGGAGTTTGAC GATGATGTGAGCTTGAAGAAACAACTGAAGCTTTTGAAAGAAAAAAGTAAGAGGGACAAGCAAAGG GTCGACTTCAAGGAGGGAACTGGTGTACAAGATGCAGAGAAGGAGATGGAGAGACTCTGCCAAATT AAGGATAAGATAGAGAAGTTGAAGCAGGTAATACTGAGACTTCAATGTGACAAAACTAATCAATGG CAAGACCAGTCAGTGATCTATGTTCCTGTGGCAGAGCTAAGGGAGAAAGGTCGATTTTGCATCACA TCT
SEQ ID NO: 194, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDfJHD de Vitis vinifera
MRGTGKKAGHQESGKSCFPKRNIGPKLNAALQIKNGSKISQTRKCKPKSKSHAKTIGAILSKRTTT DSPSKGSRSGSTTRKLIHKKTLHKAIDTESSKKESSSKLKGEKPPQISTNKNGETVDKNVKPQKLK KRGKRKRRKDNSELDEASRLQRRTRYLLIKMKLEQNLIDAYSGEGWKGHSREKIRPEKELQRATKQ ILKCKLGIRDAIRQLESLSSIGCIEDTAIASDGSVYHEHIICAKCKLREAFPDNDIILCDGTCNCA FHQKCLDPPLETENIPPGDQGWFCKFCECKMEILEAMNAHLGTRFSVDSTWQDIFKEEAALPDGGS ALPYPEEDWPSDDSQDHDYDPERNENSCSISTAGTEGNASDDTNSSLSLSWSFEDEILSGSKRSGI ISADSDETSDCEIISGRRQRRAVDYRKLYDEMFGKDAHANEQVSEDEDWGPANKRRREKESDAAST LITLYEGEKKLPNVETMEAKQKISSDPQTKRPFSRIPLDAVEKLRQAFGENELPSRDVRENLAKQL GLDYEKVNKWFKNARYIALKTRKAERAKQLQTSPRISKESRSEIVKDKTVDLVASRDNSSASLVRA LKNLKKVRRRKNPKPIMTSPVKKKHHRRALLESPTNDKVTMEFDDDVSLKKQLKLLKEKSKRDKQR VDFKEGTGVQDAEKEMERLCQIKDKIEKLKQVILRLQCDKTNQWQDQSVIYVPVAELREKGRFCIT S
SEQ ID NO: 195, seqüência de ácido_nucléico de PHDf_HD de Zea mays contíguo de EE162310, DN204182,CF057937
ATGCATTCTTCGGAAAATAAACTGGGTTGGAATGAGACCTCTATGGGGTTGGTTCCTGTACCAAAA AGACCAGCTAGACCTGATGCTTCCCACCAATGCAAATCTGATTCCTTTATGAAGCGATCACCAAGG AAAGTTAGAAATGCTACTCTGGCAAAAAGCATAAAGAGCAAATACCACTATAGTCCCCTCAAACAG CGGAAGGGTTCAGATTCTGTTCCTGGGAAAATCGTAACAGGACTAACCGCAAGGAAAAAGAAGAAA AGGAAAATCCAAATTACAGACGAGGCAACTCGTTTGGAACGAAGAGCGAGATATTTTCTAATCAAG ATAAAACTGGAGCAGAATTTGCTAGATGCTTACTCTGGAGATGGATGGAATGGGCAAAGCCGAGAG AAAATAAAGCCAGAGAAGGAACTGCAACGTGCCAGGAAACAAATCATAAAATGCAAAATTGCTATA CGTGATATCATCCGCCAACTTGATTTGTATACTTCTACTGGGAGTGTTGATGACCCACTAATGCCT ACAGATCAGTCCACCAATCCCGAACATACCATGTGCTCAACATGCAAGTCTCATGAATCATTTCCC AGCAATAAAATTATCTTCTGCAAAGGGCCCTGCAAAAGGGCATGTCATGAGAAATGTTTGGAACCT CCCTTAAACAAAAGCGTACTTCCAACAAGTAGCCATGGGTGGCTTTGCAAATTCTGTTTGTGCAAG
FIGURA 19 CONT. GTGAGGATTTTAGAAACTATTAATGCACATCTAGGGACGAGTTTTACAGTGAAGTGCCACTTTGAA
GATATATTCAAGGAAACTACTGAACTAATAGACTCTGAGGATGCACTAGATGAAGATTGGCTTTCT
GAGTATTCAGGTGATGAGGACTATGATCCTGATGAAAATGAGGCCAGTGGCGACTGTATGGACAGC
GGGGAGAAGATTATGTCTGATGATTCCAATGGTTCAGGAAGCCCCCTTTATTCTCCAAATGACGAT
ATTCCTGACTTCATATCAGCAGACTTAAATGTTGTGGAAGGGTTTTGTCATACCAATTTAGATTTA
GGCATTGATGCCGTTGAAGATGATTTTGCACAGATCCTCACCTACCAAAGGCCAAGAAGAGATGTT
GATTATAGAAGGCTTAACGAGGAAATGTTTGGGAAAATAACCGGGAATGAAGAACAGAGCGAGGAC
GAAGATTGGGGCCATGAAAGGAGAAAGAAAAGGACGCATTCAGGTGTTGCTGGGGATAATTCTGTT
GGTTTCTTGAACGTTATATCTGATGAAAAGAGCCAGAAGAAGGGGAGAAAACTTTTCAGGATTCCT
CCTGCAGCTGTTGAGGTACTTCGCAGAGCTTTTGCTGAAAATGAGCTTCCACCCCGGGATGTTAAA
GAAAATCTCTCAAGAGAATTGGGAATTTCTTTTGAAAAGATTGATAAATGGTTCAAAAATACACGG
TGTGCTGCTCTCAGAGATCGGAAGGCTGAAGGAAACAGTCATAATACAGCTCCCAGCAAAAGCTCA
AAAAATAAAGGAAAAGCTGGAATCTCAGGCAAGACTGGAAGGAATGGTCATGTTACTGGTCCCTGC
AATAATTTGAGAACAAATGAAGAAAAAACAGGTATATCGGGGAAGTTTGATTCAGGAGACAACTCT
TGTTTGGTTCCCTTCTCTGAAGTCATCAATGTGCCTACGCGATTGCCACACAACTTTGAGATGAGG
AAGATGGAATCAACTAGAAGTCCTGCGAGGCTACACAATAAAGGAGGGTTCCTGTCTGCAACAGTC
CAAATTAAGGAGAGTACGTTGTTACCCACAGGCAAGCCTTGTTGGCAGTCAGAAATGAGCCATCCA
ACAACTAATGAAGTGAGCACTTCAGCGCAAGCTACTACTTGGATCGACGCGGGGGCGTGTGCCGAG
GAGCAAGAACCTACTCCTTGGGTGGACATCGGGGTCTCAGACTACCAGCCTTTCCTGGATGTGATC
GACGACATGTGCGGACTTGAGTGGAGGCTGCAGAGACTGAAGGAGAACATGCTCTCATCTAGCATA
GACGGCCAAACCGCCGCCAGTGAGAGTGACAAAAGAAACCAGACCGTGGTGCTAGTGCCAACCGCC
GAGCTCAAGGAAAAGCTGCCGCATGACGGTTTATTCGGGCATTATTGCCCATAG
SEQ ID NO: 196, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD de Zea mays
MHSSENKLGWNETSMGLVPVPKRPARPDASHQCKSDSFMKRSPRKVRNATLAKSIKSKYHYSPLKQ RKGSDSVPGKIVTGLTARKKKKRKIQITDEATRLERRARYFLIKIKLEQNLLDAYSGDGWNGQSRE KIKPEKELQRARKQIIKCKIAIRDIIRQLDLYTSTGSVDDPLMPTDQSTNPEHTMCSTCKSHESFP SNKIIFCKGPCKRACHEKCLEPPLNKSVLPTSSHGWLCKFCLCKVRILETINAHLGTSFTVKCHFE DIFKETTELIDSEDALDEDWLSEYSGDEDYDPDENEASGDCMDSGEKIMSDDSNGSGSPLYSPNDD IPDFISADLNWEGFCHTNLDLGIDAVEDDFAQILTYQRPRRDVDYRRLNEEMFGKITGNEEQSED EDWGHERRKKRTHSGVAGDNSVGFLNVISDEKSQKKGRKLFRIPPAAVEVLRRAFAENELPPRDVK ENLSRELGISFEKIDKWFKNTRCAALRDRKAEGNSHNTAPSKSSKNKGKAGISGKTGRNGHVTGPC NNLRTNEEKTGISGKFDSGDNSCLVPFSEVINVPTRLPHNFEMRKMESTRSPARLHNKGGFLSATV QIKESTLLPTGKPCWQSEMSHPTTNEVSTSAQATTWIDAGACAEEQEPTPWVDIGVSDYQPFLDVI DDMCGLEWRLQRLKENMLSSSIDGQTAASESDKRNQTWLVPTAELKEKLPHDGLFGHYCP
SEQ ID NO: seqüência de ácido nucléico de Arabidopsis thaliana de PHDf HD HAT3 1 NM_112838 At3gl9510 ~ ~
ATGTATAAAGCAGTAAGTAAGCGGGTAACTAGAAGTAGTGGATCTGGTTTGAAGCAGACAAATGTA GATAATGGAGGAGAGATTAGTCCAACTGTTGACAGAGTATCTGAACAAGGCAAATCATCAGAGGCA GGGAGTCACATGCCAACTGATGCAAACGGAAATGGACATTTGCATCATGAGATTATGGATCATGGA AAGGGGAATGAAGAACAGAAACCAACCCCTCAAACCGTGAAGAAGGATTCTAATACCAATACCAAA TTTTCAGGGTCTCATCGTGAGCTTGTCATCGGTCTTCCTTGCCGTGGACAATTTGAAATCCACAAC CGGTCCAGGGCATCTACGAGTTCGAAGAGGTTAGGAGGAGGTGGAGAAAGGAATGTGTTGTTTGCA AGTCACAAGAGAGCTCAGAGATCTAAGGAAGATGCTGGACCATCTTCGGTTGTTGCTAATTCCACA CCTGTAGGTCGACCAAAGAAAAAGAATAAGACTATGAACAAAGGACAAGTTAGAGAAGATGATGAG TACACAAGAATCAAAAAGAAACTTCGATACTTTCTAAACCGGATTAACTATGAGCAAAGCCTAATT GACGCCTATTCGTTAGAAGGCTGGAAAGGTTCAAGCCTGGAAAAGATAAGGCCAGAGAAAGAGCTT
FIGURA 19 CONT. GAACGAGCCACAAAGGAAATTTTGCGGCGCAAGCTTAAAATTAGAGATCTTTTTCAGCACCTTGAC
ACACTCTGTGCTGAAGGAAGCCTTCCAGAGTCTTTATTTGATACTGATGGAGAGATTTCTAGCGAG
GATATCTTCTGTGCAAAATGTGGTTCAAAGGACTTGTCTGTTGATAATGATATCATACTATGCGAT
GGGTTTTGCGATCGAGGCTTTCACCAATACTGTCTTGAACCACCTCTGCGGAAAGAAGATATTCCT
CCGGATGATGAGGGTTGGCTATGCCCCGGATGTGATTGCAAAGATGACAGCTTGGACTTGCTTAAT
GATTCTTTAGGGACAAAATTTTCGGTCAGCGACAGTTGGGAGAAAATATTTCCTGAGGCAGCAGCA
GCGCTGGTTGGTGGAGGTCAAAATCTTGACTGTGATCTTCCTTCAGATGATTCTGATGATGAAGAG
TATGATCCAGATTGTTTGAATGATAATGAAAATGATGAAGATGGCAGTGATGACAATGAAGAATCT
GAGAACGAAGATGGTAGTTCTGATGAAACTGAATTCACATCTGCATCTGACGAAATGATTGAGTCA
TTTAAAGAAGGGAAAGATATAATGAAAGATGTAATGGCCCTTCCATCTGATGATTCTGAGGATGAT
GACTATGATCCTGATGCCCCGACTTGTGATGATGATAAAGAAAGTTCAAATTCTGATTGTACATCA
GACACTGAAGATCTTGAAACTTCCTTCAAAGGAGATGAGACTAATCAGCAAGCTGAAGATACACCA
CTTGAGGATCCTGGCAGACAGACGTCTCAGCTCCAAGGTGATGCAATTTTAGAGTCAGATGTTGGG
CTTGATGATGGTCCTGCCGGTGTATCCAGAAGGAGGAATGTTGAAAGGCTGGATTACAAAAAGTTG
TATGATGAGGAATATGACAATGTTCCGACTTCGTCAAGTGATGATGACGATTGGGATAAAACTGCA
AGAATGGGAAAAGAAGATTCCGAGTCGGAAGATGAAGGGGACACTGTACCTCTGAAACAGTCTTCA
AATGCAGAAGATCATACTTCTAAGAAACTTATACGGAAGTCGAAAAGGGCAGATAAAAAGGATACC
TTAGAAATGCCACAAGAAGGTCCTGGAGAAAATGGTGGTTCTGGTGAAATTGAAAAAAGCAGCTCT
TCAGCATGTAAACAGACAGATCCCAAAACTCAGAGACTGTACATATCTTTTCAAGAGAATCAATAT
CCAGACAAAGCCACGAAGGAGAGCTTAGCCAAAGAGCTACAAATGACAGTTAAGCAAGTTAATAAC
TGGTTTAAGCATAGGCGTTGGTCGATAAACAGCAAACCTTTAGTTTCAGAGGAAAATGTCGAGAAG
TTAAAAACAGGCAAGGAAGGTGAATGTGAGACATCTGTTGCTGGAAGTAGCAAACAAACTATGGAA
ACCGAGTCAGTTGCAGAGAAACCAACCAATACTGGATCACGGAAAAGAAGAAGAAAGTAG
SEQ ID NO: 198, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD_HAT3.1 de Arabidopsis thaliana
MYKAVSKRVTRSSGSGLKQTNVDNGGEISPTVDRVSEQGKSSEAGSHMPTDANGNGHLHHEIMDHG KGNEEQKPTPQTVKKDSNTNTKFSGSHRELVIGLPCRGQFEIHNRSRASTSSKRLGGGGERNVLFA SHKRAQRSKEDAGPSSWANSTPVGRPKKKNKTMNKGQVREDDEYTRIKKKLRYFLNRINYEQSLI DAYSLEGWKGSSLEKIRPEKELERATKEILRRKLKIRDLFQHLDTLCAEGSLPESLFDTDGEISSE DIFCAKCGSKDLSVDNDIILCDGFCDRGFHQYCLEPPLRKEDIPPDDEGWLCPGCDCKDDSLDLLN DSLGTKFSVSDSWEKIFPEAAAALVGGGQNLDCDLPSDDSDDEEYDPDCLNDNENDEDGSDDNEES ENEDGSSDETEFTSASDEMIESFKEGKDIMKDVMALPSDDSEDDDYDPDAPTCDDDKESSNSDCTS DTEDLETSFKGDETNQQAEDTPLEDPGRQTSQLQGDAILESDVGLDDGPAGVSRRRNVERLDYKKL YDEEYDNVPTSSSDDDDWDKTARMGKEDSESEDEGDTVPLKQSSNAEDHTSKKLIRKSKRADKKDT LEMPQEGPGENGGSGEIEKSSSSACKQTDPKTQRLYISFQENQYPDKATKESLAKELQMTVKQVNN WFKHRRWSINSKPLVSEENVEKLKTGKEGECETSVAGSSKQTMETESVAEKPTNTGSRKRRRK
SEQ ID NO: 199, seqüência de ácido nucléico de PHDf HD de Lotus japonicus AP006117.1
ATGATTAGTTCAACTGGAGAATTGACAAGCCATAACAACAGTAGCATTGAGCACATGGAAACTGAG CAACCTGAATTGTCTGAAAAAACACCTCAGATAGGCTCTGAATGTCTGGACGGTGAACAAAGGGTG CTTGGTACTGTGTCAACCAGTTCTGTTAATAATGAAAATTCAAATCAAGTTTCTGCCAATGTGACC GAGAATTCTGTTTTTCAACTACCAGCAACACCTCAACATTGCTTAGAAAAGAGTGGTCAGACTGTA ACAAGTCCACCCCTGGAAGAAAGCACCTTGAAACAAGTTGCTACTAATGTATCTAATGGTAAATCA GAAAACAAATGTCAGACATCCTCTCAAGATGTTCAAAACGAACTTGTGGAAGCAAGTGATGTAATA ACTGGCTCTTTTGTTGCGGACCAAACACAATCCATTCCTGCTCAAGTGAATACGAGTTCTGTGAAT GAACTATTGGATATTCCTTCCGGAGATGTTGCAGTAGAAGTTGGTTCTGATAGTTTAGAAAAAAAG
FIGURA 19 CONT. TCTAAAGGGTGCTTGGTAGACAGCGAACAAAGGGTACTTGGTACTGTGTTAACCAATTCTATTAAT GATGGAAATTCAAATCAAGTTTCTGCCAATGTGACCGAGAATTCTGTTATTCAACTGCCAGCACCA CCTCAACATTGCTTTGAAAAGAGTGGACAGACTGTAAAAAGTTCATCTCTGGAAGAAAGTACCTTA AAACAAGTCTCCACTAATTTATCTAACAGTAAATCAGAAAACATATGTCAGACATCCTCTCAAGAT GTTCAAAACGAACTTGTGGAAACAAGTGATGCAGTAACTGGCTCTGTTGTTGCAGACAAAACACAA TCCATTCCTGCTCAAGTGAATACAAGTTCTGTGAATGAACTATTGGATATTCCTTCCAGAGATGTT GCAGAAGAAGTTGGTTCTGATAGTTCAGAAAGGAAGTCTAAAAGCACAACTCCTTCACAATTGAGA CATATAGGTAAAAGTAACTCAAAGTTATCGAAAAAGAAGTATATCCTAAGGTCGTTAGGAAGCAGT GACAGAGCTTTGCGGTCCAGGACAAAAGAAAAACCTAAAGCGCCTGAACCAAGTAGTAACTCAGTT GACGTTAATAATGATGGAGTGAAGAAGGAAAAAAGGAGGAAGAAGAAAAAAACAGGAGGGGAGGAA AAGAAGGATCAATTTTATAAAATCAAAGCTCACCTAAGATATTTATTAAACAGAGTAAGCTATGAG CAAAACTTAATTGATGCTTACTCTGGTGACGGCTGGAAAGGATACAGTATGGACAAGTTAAAGCCT GATAAGGAGATTCAACGGGCTAAATCTGAAATTCTTCGACGTAAATTGAAAATTAGGGATCTATTT CAAAACTTGGATTCCTTGTGTGCTGAAGGAAAGTTTCCAGAATCTTTGTTTGATTCTGAGGGAGAG ATTGACAGTGAGGATATATTCTGTTCAATTTGCCAGACCAAAGAGTTGAGCACTGATAATGATATA ATTCTCTGTGATGGTGCTTGTGACCGTGGATTTCACCAGCACTGCTTGGATCCTCCATTGTTAACT GAAGACATTCCACCTGGCGATGAGGGTTGGTTATGCCCCGGATGTGATTGCAAAGATGACTGCGTT GACCTTCTTAACGACTCCTTAGGAACACGTCTCTCTCTTAGTGACACCTGGGAGAAGGTTTTTCCT GAAGCAGCAGCTGTTACTGGAAATAATATGGATCAGGGACTTCCTTCTGATGATTCTGATGATGAT GATTATAACCCTAATGGTAAAGAGGATGTGGAGGTTGAAGGAGGTGAATCAAGTTCTGATGAATCT » GAATATGCTTCTGCTTCTGAGAAATTGGAAGATTCACACCATGAGGATCCATACTTAGGCCTTCCT
TCTGAAGATTCAGAGGACAATGATTATGATCCTAGTGCTCCAGATCTTGACAATAAAGTCACAGAA GAAAGTTCAAGCTCTGATTTCACATCTGACTCTGAGGATCTTGCTGCTGCTATTGAGGATAACACG TCCCCTGGACATGTTAAACAGACTAAAAGCAGACAAAAAAGTAAAGTTGGTAAGAACCCATCAATG GTTGATGAAGTGTCATCTTTACGAGAGCCAGAACTTGAGGAAGAGGGTTTCACTCCAGTTTCTGGG AAAAGAAATGTGGAAAGGCTGGACTACAAAAAGCTGTATGATGAGACATACAAAAGTGATACTAGT GAAGATGAAGAATGGACTGCCAGTGCCACTCCAAGTAGAAAAAAGAAACTCTGTGGCAAAATGACT CCAGTGTCATCAGATGGAAAGGCCTCAAATAATTCTAGACATACTCCTGAAAGGAACACCCAACAA GATAAAGTTGAAAATACAAATAATTCACCCACTAAATCACTTGAAGGCTGTCTGGAATCTGGCTCA AGGGATAAAAAGCCTAGGTCTTCAACACGTCAAAGACTTGGAGACGTTGTAGTGCAGAGACTTCAC AAATCTTTTAAAGACAATCAGTATCCGGATCGAGCCACAAAAGAAAGCTTGGCAGAAGAACTGGGG CTCACTTTTTTCCAGGTTGACAAATGGTTTGGCAATGCTCGATGGGGCTTTCGGCGTTCATCGCGT ATGGGAGCTAGTCCAGGCGAATATGCTTCGCCACAGGCCACTGGCAGCGGACCTGAAAATACTGGG GAGAGGGAACGCGAATTAGCTTCCCAGGAAGTCGGTGAAGAAAAATTGAAAACCCCCAGTCCTAGA AAAAGGAAGCATTTGTCTGAACCGCAGGCATCTGAAGCACCGCAGATTATTGTTCTTGGCTTAGCA GCATCTCCTGGCTCACCACGGGCTCATGCAGGCAATAAAAAGAAGACAGTGAAAAGGAAATGA
SEQ ID NO: 200, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD de Lotus japonicus
MISSTGELTSHNNSSIEHMETEQPELSEKTPQIGSECLDGEQRVLGTVSTSSVNNENSNQVSANVT ENSVFQLPATPQHCLEKSGQTVTSPPLEESTLKQVATNVSNGKSENKCQTSSQDVQNELVEASDVI TGSFVADQTQSIPAQVNTSSVNELLDIPSGDVAVEVGSDSLEKKSKGCLVDSEQRVLGTVLTNSIN DGNSNQVSANVTENSVIQLPAPPQHCFEKSGQTVKSSSLEESTLKQVSTNLSNSKSENICQTSSQD VQNELVETSDAVTGSWADKTQSIPAQVNTSSVNELLDIPSRDVAEEVGSDSSERKSKSTTPSQLR HIGKSNSKLSKKKYILRSLGSSDRALRSRTKEKPKAPEPSSNSVDVNNDGVKKEKRRKKKKTGGEE KKDQFYKIKAHLRYLLNRVSYEQNLIDAYSGDGWKGYSMDKLKPDKEIQRAKSEILRRKLKIRDLF QNLDSLCAEGKFPESLFDSEGEIDSEDIFCSICQTKELSTDNDIILCDGACDRGFHQHCLDPPLLT EDIPPGDEGWLCPGCDCKDDCVDLLNDSLGTRLSLSDTWEKVFPEAAAVTGNNMDQGLPSDDSDDD
FIGURA 19 CONT. DYNPNGKEDVEVEGGESSSDESEYASASEKLEDSHHEDPYLGLPSEDSEDNDYDPSAPDLDNKVTE ESSSSDFTSDSEDLAAAIEDNTSPGHVKQTKSRQKSKVGKNPSMVDEVSSLREPELEEEGFTPVSG KRNVERLDYKKLYDETYKSDTSEDEEWTASATPSRKKKLCGKMTPVSSDGKASNNSRHTPERNTQQ DKVENTNNSPTKSLEGCLESGSRDKKPRSSTRQRLGDVWQRLHKSFKDNQYPDRATKESLAEELG LTFFQVDKWFGNARWGFRRSSRMGASPGEYASPQATGSGPENTGERERELASQEVGEEKLKTPSPR
KRKHLSEPQASEAPQIIVLGLAASPGSPRAHAGNKKKTVKRK
SEQ ID NO: 201, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD_HAZ1 de Oryza sativa AB081340
ATGGATAAGACAACTACTTCTGATCTTGTTTTGGACAACGACAACATTGGGAGTAATGCTGGTTCT
GCACAGGAGCCTCTTACTACCAATGGTAAGACTAGTGGGGTCAGAAATAGATACAAACAAACTGTT
AAAAGGGGAAGGAAAGGCTCCCAAATATCACCAAGTAAAACATATCCCCTGAGATCTTCACATAGT
AATGTCAGGGTGCTTCGCTCTGCCTCAAAAAAGAAGAATGAGACACCTATTGTGCCCACAAATGAT
AATACTGCTGTTCAACGAGTTGCGAAGAAAAGGAAAAGAAGCAAACCCTTGAGACCTGCACCTAGC
AGGGTGCTTCGCTCTACCTCGGAAAAGAAGAATAAGGCACATAATGAGCTTCTAAATGATGGTGCT
GGTGTTCAACCAGCCGAAAAGAAAAGAAAGGTAGGCAGACCCCCAAAAGGAGGAACTCCCAAGGAC
GATTACCTCATGATCCGAAAGCGAGTTAGATATGTTTTGAATCGAATGAACTATGAACAAAGTTTA
ATTCAAGCCTATGCCAGTGAAGGTTGGAAAGGTCAAAGCTTGGAAAAAATAAGACCTGAGAAGGAG
CTTGAACGAGCCAAGGTGGAAATTCTGCGATGCAAGTCAAGAATACGGGAAGCTTTTCGGAATTTG
GATTCCCTCCTATCTGAGGGAAAGCTGGATGAATCTATGTTTGATTCTGCTGGAGAAATATCTAGT
GAAGATATTTTCTGTGCTGCATGTGGTTCAAAGGATGTTACATTAAAAAATGACATAATTCTTTGT
GATGGAATCTGCGACAGAGGGTTCCACCAGTATTGTTTAAACCCTCCTTTGCTTGCTGAAGATATT
CCACAGGGGGATGAAGGATGGCTTTGCCCTGCATGTGATTGCAAAATTGACTGCATAGATGTATTA
AATGAACTCCAAGGGGTCAAACTCTCTATCCATGACTCTTGGGAGAAAGTTTTTCCTGAGGCAGCA
TCCTTTTTGAATGGTTCTAAGCAAATTGATGCGTCCGATCTTCCATCAGATGATTCAGCAGACAAT
GATTATGACCCTACTTTGGCTCAAGGGCACAAGGTGGATGAAGAAAAATCTTCTGGAGAAGATGGT
GGTGAAGGATTAGATTCTGATGACTCATCTTCTGAGGATTCTGAATCTTCTGAGAAGGAAAAGTCT
AAAACTTCACAGAATGGAAGGACAGTTGATGATCTTGGTTTGCCTTCTGAGGATTCAGAGGATGGT
GACTTTGATCCAGCAGGTCCAGATTCCGACAAAGAACAAAATGATGAATCAAACTCAGATCAGTCA
GATGAATCAGATTTTACATCTGACTCTGATGATTTTTGTGCTGAGATTGCTAAATCCTGTGGTCAG
GATGAAATCTCAGGCCCTTCATCATCACAAATCAGAACAGTCGATCGCACCGATGGAAGTGGTTTT
GATGGTGAGCCTAATGCAGAAAATTCGAATCTTGCATTTATGGAGACAGAGCTAGAGCAAGACATG
GTGCTACCAATTTCTAGTAAACGACAAGTTGAACGTTTGGATTACAAAAAACTGTATAATGAGGCT
TATGGTAAAGCATCATCTGATTCAAGTGACGATGAAGAGTGGTATGGAAATAGTACACCCGAAAAA
GGTAATTTAGAAGACAGTGAAACAGATTCGCTTGCTGAATCACCTCAGGGTGGAAAAGGATTCTCT
AGAAGAGCACCAGTTAGGTACCATAATAATGAACATACTCCACAGAATGTAAGGCCCGGTGGTTCA
GTAAGCGACCAGCAAACTGAAGTACTTTGCTCCAATAGCAATGGTAGCACAGCCAAAAACAGACAT
TTTGGTCCTGCAATTAATCAGAAACTGAAGGCACATTTCAAGGAAGATCCATACCCTAGTCGTGCA
ACAAAAGAAAATCTGGCACAAGAGTTAGGCCTCACATTTAATCAGGTCACTAAATGGTTTTCCAGT
ACTCGTCATTACGCAAGAGTGGCAGCCACAAAAAAGGAGAACAACATTGAAAATCATACGGCTGAG
AATAATAACAATACCAACACTGTTGATAGCATACAACTGAGAGGATCCAATGATATTGTTAGTGTA
GATAGAAATGATATGGTCTCCGAGGAAAGGACAGGACAAAGTAATCTCAATGAAGGTACTCCATTA
AGATCAGATACCAGCTGTGGGCAGAGTGTGGCTGTGACTCCTATGGTACACCCAGAAAACCAGGGC
AATGATTCCTCAAGTAATGTTAGAACACCAAATGCTAAGTCTGCGGAGAAATTGATCCCTGGACTG
GAAAATTCAGATGAGGCTAGGCGAAAGGCGGTACAACGGGAACTGAGAAAGATGAAGACTGGCAGG
TGA
FIGURA 19 CONT. SEQ ID NO: 202, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD_HAZ1 de Oryza sativa
MDKTTTSDLVLDNDNIGSNAGSAQEPLTTNGKTSGVRNRYKQTVKRGRKGSQISPSKTYPLRSSHS NVRVLRSASKKKNETPIVPTNDNTAVQRVAKKRKRSKPLRPAPSRVLRSTSEKKNKAHNELLNDGA GVQPAEKKRKVGRPPKGGTPKDDYLMIRKRVRYVLNRMNYEQSLIQAYASEGWKGQSLEKIRPEKE LERAKVEILRCKSRIREAFRNLDSLLSEGKLDESMFDSAGEISSEDIFCAACGSKDVTLKNDIILC DGICDRGFHQYCLNPPLLAEDIPQGDEGWLCPACDCKIDCIDVLNELQGVKLSIHDSWEKVFPEAA SFLNGSKQIDASDLPSDDSADNDYDPTLAQGHKVDEEKSSGEDGGEGLDSDDSSSEDSESSEKEKS KTSQNGRTVDDLGLPSEDSEDGDFDPAGPDSDKEQNDESNSDQSDESDFTSDSDDFCAEIAKSCGQ DEISGPSSSQIRTVDRTDGSGFDGEPNAENSNLAFMETELEQDMVLPISSKRQVERLDYKKLYNEA YGKASSDSSDDEEWYGNSTPEKGNLEDSETDSLAESPQGGKGFSRRAPVRYHNNEHTPQNVRPGGS VSDQQTEVLCSNSNGSTAKNRHFGPAINQKLKAHFKEDPYPSRATKENLAQELGLTFNQVTKWFSS TRHYARVAATKKENNIENHTAENNNNTNTVDSIQLRGSNDIVSVDRNDMVSEERTGQSNLNEGTPL RSDTSCGQSVAVTPMVHPENQGNDSSSNVRTPNAKSAEKLIPGLENSDEARRKAVQRELRKMKTGR
SEQ ID NO: 203, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD_PRHP de Petroseiinum crispum L21975
ATGGAAGAGATCTCAGACCCTAAACCAAATGCATTAGAGCAAGTACTTCCTACTGTCCCAAATGGT AAATGTACTGCACCGGTGCAAATGGAAAGTTTGGCTGTTGATGTTCAAAAAGTATCAGGTGAAGCA AAGGTGAGGATATGTTCCTGTTGGTGCGAGATAGTACGTTCTCCAGAAGATTTAACTAAACTTGTG CCTTGTAATGATTTTGCAGAAGATATAAAATTGTTTGATTCTGATCCCATGCAACAAGAAGCTGAA AGCTCCATTGGAATACCATTGATCCCTAAACAAGTTACAATGTCCCATAACCATGACCATGAATCT GGTTCTGAAATGGTCAGTAACGAAGTAATGCAAGAAAACCATGTAATTGCCACAGAAAATACTTAC CAGAAATCTGATTTTGACCGTATAAATATGGGACAAAAAGAAACCATGCCAGAAGAAGTGATCCAT AAGTCTTTCTTGGAATCCTCAACTTCCTCGATAGATATACTATTAÂATAATCATAACAGTTATCAA TCAGGACTGCCACCAGAGAATGCAGTAACAGATTGCAAGCAAGTCCAATTGGGACACCGAAGTGAT GATGCTATAAAGAATTCTGGTCTTGTGGAATTGGTAATAGGTCAGAAAAATGTTGCCAAGAGTCCT AGCCAGTTGGTAGAAACGGGGAAAAGAGGTCGTGGTCGGCCCAGGAAAGTACAAACTGGCCTTGAG CAATTGGTAATAGGTCAGAAAACTGCTGCCAAGAGCTCTAGCCAGTTAGGTGACACAGGGAAAAGA TCTCGTGGTCGGCCCAGAAAAGTACAAAATTCTCCAACTTCTTTCTTGGAGAATATAAATATGGAA CAAAAAGAAACAATACCAGAACAAGTGACCCAAAATTCTATCTTGGAGTCCTTGACTATCCCGACA GACAATCAGTCAAGAACTTATAACAGTGATCAATCAGAACTGCCACCAGAGAATGCAGCAAAAAAT TGCAATCACGCCCAATTTGGACATCAAAGTGATGATACTACAAAGATTTCTGGATTCAAGGAATTG GTAATAGGTCAGGAAACAGTTGCAAAGAGTCCTAGCCAGTTGGTAGACGCAGGAAAAAGAGGTCGT GGTCGGCCCAGAAAAGTACAAACTGGTCTTGAGCAATTGGTACCAGTTCAGGAAACTGCGGCCAAG AGCTCTAGCCAGTTGGGAGACACAGGGAAAAGATCTCGCGGCCGGCCCAGGAAAGTACAAGATTCT CCAACTTCTTTAGGGGGTAATGTTAAAGTGGTACCAGAGAAAGGAAAAGATTCTCAGGAATTGTCG GTAAACAGCAGCAGATCATTGCGCTCAAGGTCACAAGAGAAATCTATCGAACCCGATGTCAATAAT ATTGTGGCAGATGAAGGTGCTGACAGAGAAAAACCAAGGAAGAAGAGGAAAAAGCGAATGGAGGAA AATAGGGTTGATGAATTCTGTAGAATAAGGACACACCTAAGGTACTTACTACACAGAATAAAATAC GAGAAGAATTTCCTTGATGCTTACTCTGGGGAGGGATGGAAGGGACAAAGCCTAGACAAAATAAAA CCTGAGAAGGAGCTTAAACGAGCAAAAGCTGAAATTTTTGGACGCAAATTGAAAATTAGAGATCTA TTTCAGCGCTTAGATTTAGCACGTTCCGAGGGAAGGCTTCCAGAAATTCTATTTGATTCTCGAGGA GAAATTGACAGCGAGGATATATTCTGCGCGAAATGTGGATCCAAGGATGTGACACTCAGTAATGAT ATCATCCTTTGCGATGGTGCATGTGATCGTGGATTTCACCAATTTTGTTTGGACCCACCATTGCTG AAAGAATATATTCCTCCTGACGACGAGGGTTGGCTTTGCCCGGGATGCGAGTGCAAAATTGACTGC ATCAAGTTACTTAATGATTCCCAAGAGACAAATATTTTACTCGGTGACAGCTGGGAGAAAGTTTTT GCTGAGGAGGCAGCAGCAGCAGCTTCCGGAAAAAATCTAGATGATAATTCTGGACTGCCTTCAGAT
FIGURA 19 CONT. GATTCCGAGGATGATGATTATGATCCTGGGGGCCCTGATTTGGATGAGAAGGTGCAGGGAGATGAT TCGAGTACGGATGAATCTGATTATCAGTCGGAATCAGATGATATGCAAGTTATACGTCAAAAAAAT TCGCGCGGGCTTCCTTCAGATGATTCCGAAGATGATGAATACGATCCTAGTGGCTTAGTTACTGAT CAGATGTATAAGGACAGCTCATGTTCTGATTTTACATCTGATTCTGAGGATTTTACAGGTGTGTTT GACGATTATAAGGATACTGGTAAAGCTCAAGGGCCACTGGCATCGACCCCAGATCACGTCAGGAAC AATGAGGAAGGGTGTGGGCATCCTGAGCAAGGTGATACTGCCCCCCTGTATCCGAGAAGACAAGTA GAGAGTTTGGACTACAAAAAGCTAAATGATATTGAGTTCTCTAAAATGTGTGACATCCTTGATATT CTTTCAAGTCAACTTGATGTAATTATTTGTACTGGTAACCAGGAAGAGTATGGGAACACATCTTCT GATTCAAGTGATGAAGATTATATGGTTACTTCTTCACCAGATAAAAATAATTCTGATAAAGAAGCT ACAGCAATGGAGCGTGGAAGAGAGAGCGGTGATTTGGAGCTAGACCAAAAAGCGAGAGAATCCACT CATAATAGGAGATATATAAAGAAGTTTGCTGTTGAAGGCACAGATTCTTTTCTTTCTAGATCGTGT GAAGACTCTGCAGCACCTGTTGCTGGTAGTAAAAGTACTTCAAAAACATTGCACGGGGAACATGCA ACTCAGAGACTCCTCCAATCCTTCAAGGAAAATCAATACCCTCAACGAGCTGTGAAAGAGAGTTTG GCTGCAGAATTAGCACTTTCAGTCCGACAGGTTAGCAACTGGTTTAATAATAGACGTTGGAGCTTT CGCCACTCATCACGTATTGGATCGGATGTAGCTAAATTTGATTCAAACGATACTCCCCGTCAGAAA AGCATTGACATGTCTGGACCCAGCTTGAAATCGGTCTTGGACAGTGCTACTTACAGTGAAATTGAA AAGAAGGAACAAGATACGGCAAGCCTTGGTTTGACAGAAGGTTGTGACAGATACATGACGCTGAAT ATGGTTGCAGATGAAGGCAATGTGCACACTCCTTGTATTGCAGAAACTAGGGAAGAAAAAACCGAA GTCGGTATAAAGCCACAACAGAACCCACTATAA
SEQ ID NO: 204, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD_PRHP de Petroselinum crispum
MEEISDPKPNALEQVLPTVPNGKCTAPVQMESLAVDVQKVSGEAKVRICSCWCEIVRSPEDLTKLV PCNDFAEDIKLFDSDPMQQEAESSIGIPLIPKQVTMSHNHDHESGSEMVSNEVMQENHVIATENTY QKSDFDRINMGQKETMPEEVIHKSFLESSTSSIDILLNNHNSYQSGLPPENAVTDCKQVQLGHRSD DAIKNSGLVELVIGQKNVAKSPSQLVETGKRGRGRPRKVQTGLEQLVIGQKTAAKSSSQLGDTGKR SRGRPRKVQNSPTSFLENINMEQKErIPEQVTQNSILESLTIPTDNQSRTYNSDQSELPPENAAKN CNHAQFGHQS DDTTKISGFKELVIGQETVAKS PSQL VDAGKRGRGRPRKVQTGLEQLVPVQETAAK SSSQLGDTGKRSRGRPRKVQDSPTSLGGNVKWPEKGKDSQELSVNSSRSLRSRSQEKSIEPDVNN IVADEGADREKPRKKRKKRMEENRVDEFCRIRTHLRYLLHRIKYEKNFLDAYSGEGWKGQSLDKIK PEKELKRAKAEIFGRKLKIRDLFQRLDLARSEGRLPEILFDSRGEIDSEDIFCAKCGSKDVTLSND IILCDGACDRGFHQFCLDPPLLKEYIPPDDEGWLCPGCECKIDCIKLLNDSQETNILLGDSWEKVF AEEAAAAASGKNLDDNSGLPS DDSEDDDYDPGGPDLDEKVQGDDS STDES DYQSESDDMQVIRQKN SRGLPSDDSEDDEYDPSGLVTDQMYKDSSCSDFTSDSEDFTGVFDDYKDTGKAQGPLASTPDHVRN NEEGCGHPEQGDTAPLYPRRQVESLDYKKLNDIEFSKMCDILDILSSQLDVIICTGNQEEYGNTSS DS S DEDYMVTSS PDKNNS DKEATAMERGRESGDLELDQKARESTHNRRYIKKFAVEGTDS FLSRSC EDSAAPVAGSKSTSKTLHGEHATQRLLQSFKENQYPQRAVKESLAAELALSVRQVSNWFNNRRWSF RHSSRIGSDVAKFDSNDTPRQKSIDMSGPSLKSVLDSATYSEIEKKEQDTASLGLTEGCDR YMTLN MVADEGNVHTPCIAETREEKTEVGIKPQQNPL
SEQ ID NO: 205, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD_HOX1 a de Zea mays X67561
ATGGAAAAAAATATAGCTCACTGTCCTGTTGAGGGCAATGGTGAGATTGAAAATGGTGCGAGCTCT AGTCAGAATCCTGAGTCTCTTGAGCATTCAGTTTTGCTGTCTACATCTCAAACGATGCCAAATAAC TTGGGGATAAGGAAAAACTATAAAAGGGCAGCAAACAGAGGTAAAAAAGGTTCCCAAGGACTAACA GGCCAAGCATATACTTTGATGTCATCTAATAGTGATGTCAGGGTGCTTCGCTCCACATCAAGTTCA AAGACAACATCTACTGAGCATGTTCAGGCTCCAGTACAACCGGCTGCCAAGAGAAGAAAAATGAGC AGAGCCTCAAACAAAAGTTCGACTGATGAGTTTTCACAAATTCGTAAACGAGTTAGATATATTTTG
FIGURA 19 CONT. AACCGAATGAATTATGAGCAAAGCCTAATTGAAGCTTATGCTAGCGAAGGCTGGAAAAATCAAAGT
TTGGATAAGATAAGACCTGAGAAGGAGCTTGAACGAGCCAAATCAGAAATCTTACGATGCAAATTG
AGAATACGAGAAGTCTTCCGGAATATTGATTCTCTTCTCTCCAAGGGGAAAATTGACGAAACTTTA
TTTGATTCTGAAGGAGAAATATCTTGCGAAGATATCTTTTGTTCCACTTGTGGTTCGAATGACGCT
ACATTGGGTAATGATATCATTCTCTGCGATGGAGCTTGTGACAGAGGGTTCCACCAGAACTGTTTA
AATCCTCCCCTGCGTACTGAAGATATCCCCATGGGAGATGAAGGATGGCTCTGCCCAGCATGTGAT
TGCAAGATAGATTGTATAGATCTAATAAATGAACTCCATGGGAGTAACATCTCCATTGAGGACTCT
TGGGAGAAAGTTTTTCCAGATGCAGCTGCTATGGCAAATGACTCTAAACAAGATGACGCATTTGAT
CTTCCATCAGATGACTCAGACGACAATGACTTTGACCCCAATATGCCTGAAGAGCATGTGGTTGGT
AAGGATGAAGAATCGTCTGAAGAGGATGAGGATGGAGGATCAGACTCTGATGACTCAGACTTTTTG
ACATGTTCTGATGATTCGGAACCTTTGATAGACAAGAAGGTTGATGACCTCAGATTACCTTCTGAA
GATTCAGAGGATGATGACTATGATCCAGCAGGTCCTGATTCAGATAAAGATGTCGAAAAGAAGTCA
AGTTCTGATGAATCTGACTTCACATCTGACTCAGATGATTTTTGTAAGGAGATTTCAAAATCTGGA
CATGATGAAGTTTCATCACCTCTATTACCCGATGCCAAGGTGGGTGATATGGAAAAGATTACTGCT
CAAGCTAAAACAACAAGTTCTGCTGACGACCCTATGGAGACTGAAATAGACCAGGGTGTGGTTTTA
CCAGATTCAAGGAGACGGCAAGCTGAACGGTTGGACTACAAAAAGTTGTATGATGAGGCATATGGT
GAAGCATCATCTGATTCTAGTGATGATGAAGAATGGTCTGGGAAGAACACGCCAATAATAAAAAGC
AATGAAGAGGGTGAAGCCAATTCTCCTGCGGGAAAAGGCTCCAGAGTTGTGCACCATAATGATGAA
CTGACTACACAAAGCACTAAAAAAAGCTTGCATTCTATTCATGGTTCAGTAGATGAGAAACCTGGA
GACCTTACTTCTAATGGCAGCAACAGCACAGCCAGGAAAGGACATTTTGGCCCAGTAATTAATCAG
AAGCTACATGAACATTTTAAGACACAACCATACCCTAGTCGTTCTGTTAAAGAAAGTCTGGCAGAA
GAACTAGGGTTAACATTTCGTCAGGTTAACAAATGGTTTGAAACTAGGCGTCATTCCGCAAGGGTA
GCTTCTTCCAGGAAAGGCATCAGTCTAGATAAGCATAGCCCCCAAAATACTAATAGTCAAGTGACA
GCTAGTATGGAACCTAAAGAACCTGAGGGGACTGTGGTGGAAGAATCTAATGTATGCCTAAATGGG
GGTACTACCATCTCTAAAGAAGCAGTGTCTTCAAAAGTTGGATCAAGAACCCCTGGAAGTGATGTG
GGAGGGTCAAAAGTTGATTCTGCTGAGGATCAGAATCCGGGGCCTGATCTTGCAGAGAAGGCAAGG
CAAAAGGCAATACAGCAGGAGTTGAGGAAGAAAAAAATGGGACGATGA
SEQ ID NO: 206, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf HD HOXIa de Zea mays ~ -
MEKNIAHCPVEGNGEIENGAS SSQNPE SLEHSVLLSTSQTMPNNLGIRKN YKRAANRGKKGSQGLT GQAYTLMSSNSDVRVLRSTSSSKTTSTEHVQAPVQPAAKRRKMSRASNKSSTDEFSQIRKRVRYIL NRMNYEQSLIEAYASEGWKNQSLDKIRPEKELERAKSEILRCKLRIREVFRNIDSLLSKGKIDETL FDSEGEISCEDIFCSTCGSNDATLGNDIILCDGACDRGFHQNCLNPPLRTEDIPMGDEGWLCPACD CKIDCIDLINELHGSNISIEDSWEKVFPDAAAMANDSKQDDAFDLPSDDSDDNDFDPNMPEEHWG KDEESSEEDEDGGSDSDDSDFLTCSDDSEPLIDKKVDDLRLPSEDSEDDDYDPAGPDSDKDVEKKS SSDESDFTSDSDDFCKEISKSGHDEVSSPLLPDAKVGDMEKITAQAKTTSSADDPMETEIDQGWL PDSRRRQAERLDYKKLYDEAYGEASSDSSDDEEWSGKNTPIIKSNEEGEANSPAGKGSRWHHNDE LTTQSTKKSLHSIHGSVDEKPGDLTSNGSNSTARKGHFGPVINQKLHEHFKTQPYPSRSVKESLAE ELGLTFRQVNKWFETRRHSARVASSRKGISLDKHS PQNTNSQVTASMEPKEPEGTWEESNVCLNG GTTISKEAVSSKVGSRTPGSDVGGSKVDSAEDQNPGPDLAEKARQKAIQQELRKKKMGR
SEQ ID NO: 207, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD HOXIbdeZeamays X92428
ATGGAAAAAAAGACAGTTCACGTTCTGGCTGAGGGTAATGGTGAGATTGAAAATGGTACGAGCTCT AGTCAGAATCCTGAGACCCTTGAGCATCCAGTTTTGCTGTCTGCATCTCAAACTGTGCCAAATAAC TTGGGGATAAGGAAAAACTATAAAAGGGCAGCAAACAGAGGTAAAAAGGGTTCCCAAGGACTAACA GGTCAGGCATATACATTGAGGTCATCTGATATTGATGTCAGGGTGCTTCGCTCTACATCAGGTTCA
FIGURA 19 CONT. AAGACAACATCTACTGAGCATGTGCAGCCTCCAGGACAACCAGCTGCCAAGAGAAGAAAAAGGAGC
AGAGCCTCAAACAAAAATTCGACAGATGAGTTCTCACAAATTCGTAAACGGGTTAGATACATTTTG
AACCGAATGAATTATGAGCAAAGCCTAATTGAAGCTTATGCTAGTGAAGGCTGGAAAAATCAAAGT
TTGGATAAGATAAGACCTGAGAAGGAGCTTGAACGAGCCAAATCAGAAATCTTACGATGCAAATTG
AGAATACGGGAAGTCTTCCAAAATATTGATTCTCTTCTGTCCAAAGGGAAAATTGACGAATCTTTA
TTTGATTCTGAAGGAGAAATATCTTGTGAAGATATCTTTTGTGCTACTTGTGGTTCGAAAAATGCT
ACATTGGGTAATGATATCATTCTCTGTGATGGAGCTTGTGACAGAGGGTTCCACCAGAACTGTCTA
AATCCTCCTCTGCGTACTGAAGATATTCCCATGGGAGATGAAGGATGGCTCTGCCCAGCATGTGAT
TGCAAGTTAGACTGTATAGATCTAATAAATGAACTCCAGGGCAGTGACATCTCCATTGAGGACCCT
TGGGAGAAAGTTTTTCCAGAGGCAGCTGCTATGACCAATGGCTCTAAGCAAGATGAACGATTTGAT
CTTCCATCTGATGATTCGGATGACAATGATTTTGACCCCAATATGCCTGAAGAGCATGTGGCTAGT
AAGGAAGAAGGATCTTCTGAAGAGGAAGAGGATGATGACGGAGGATCAGACTCTGACGACTCTGAC
TTCTTAACCTGTTCTGATGATTTGGAACCTTTGATAGATAAAAAGAAGGTTGATGACCTGGGATTA
TCTTCTGAAGATTCAGAGGATGATGACTATGATCCAGCAGGTCCTGATTCGGATAAAGATGTCGAA
AAGAAGTCAAATTCTGATGAGTCTGATTTCACGTCTGACTCGGATGATTTTTGTAAGGAGATTAAA
AAATCTGGTGGACATGATGAAGTTTCATCGCCTCCATTACCCGATGTCAAGGTGGGTGATATGGAA
AAGAACACTGCTCAGTCTAACACAACAAGTTCTGCTGACGACCCTATGGAGACTGAAATAGACCAG
AGTGTGGTTTTACCAGTATCAAGGAGACGTCAAGCTGAACGGTTGGACTACAAAAGGCTGTATGAT
GAGGCATATGGTGAAGCATCATCTGATTCTAGTGATGAAGAAGAATGGTCTGGGAÀGAACACACCA
ATAAAAAGCAATGAAGAGGGTGAAGTTGGTTCTCCTGCAGGAAAAGGCTCTAGAGTTGCGCACCAT
AATGAACTGACTACACAAAACACTAAAGAAAGCTTGCATTCTCTTCATGGTTCAGTAGATGAGAAA
CATGGAGATCTTACTTCTAATGGCAGCAATATCAAAGATAGGAAAGGACATTTTGGTCCAGTGATT
AGTCAGAAGCTACATGAACATTTTAAGACACAACCATACCCTAGTCGTTCTCTTAAAGAAAGCTTG
GCAGAAGAACTAGGGCTAACATTTCATCAGGTCAACAGATGGTTTGAAAATAGGCGTCATTTTGCA
AGGTTAGCTTCTTCCAGGAAAGGCATCAGTCCAGATAAGCATAGCCCCCAAAATACTAATAGCCCA
GTGACACCTAGTATGCAACCTAAAGAACCAGAGGGGACTGTGATGGAAGAATCTAATGTATGCATA
AACAGGGATGCTACCATCTCTAAAAAAGCGGTTTCTTCAAAAGTCGGATCAAGAAAGAACCTTAGC
AAGAGTTCCCCTAAAAGCCGGGTCAAAAGTTGA
SEQ ID NO: 208, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD_HOX1b de Zea mays
MEKKTVHVLAEGNGEIENGTSSSQNPETLEHPVLLSASQTVPNNLGIRKNYKRAANRGKKGSQGLT GQAYTLRSSDIDVRVLRSTSGSKTTSTEHVQPPGQPAAKRRKRSRASNKNSTDEFSQIRKRVRYIL NRMNYEQSLIEAYASEGWKNQSLDKIRPEKELERAKSEILRCKLRIREVFQNIDSLLSKGKIDESL FDSEGEISCEDIFCATCGSKNATLGNDIILCDGACDRGFHQNCLNPPLRTEDIPMGDEGWLCPACD CKLDCIDLINELQGSDISIEDPWEKVFPEAAAMTNGSKQDERFDLPSDDSDDNDFDPNMPEEHVAS KEEGSSEEEEDDDGGSDSDDSDFLTCSDDLEPLIDKKKVDDLGLSSEDSEDDDYDPAGPDSDKDVE KKSNSDESDFTSDSDDFCKEIKKSGGHDEVSSPPLPDVKVGDMEKNTAQSNTTSSADDPMETEIDQ SWLPVSRRRQAERLDYKRLYDEAYGEASSDSSDEEEWSGKNTPIKSNEEGEVGSPAGKGSRVAHH NELTTQNTKESLHSLHGSVDEKHGDLTSNGSNIKDRKGHFGPVISQKLHEHFKTQPYPSRSLKESL AEELGLTFHQVNRWFENRRHFARLASSRKGISPDKHSPQNTNSPVTPSMQPKEPEGTVMEESNVCI NRDATISKKAVSSKVGSRKNLSKSSPKSRVKS
SEQ ID NO: 209, seqüência de ácido nucléico de PHDf HD HOX2a de Zea mavs X89760 ~ ~
ATGGGAAGGAAAGGGTCAGAAGTATCACCAAGCAAAAGGTATCCCTTGAGGTCTGCACACAGTAGT GGTAGAGTTCTTCGCTCTGCCTTAGCCAATAATAATAAGGACAGTGAGCCTCTGAATGCGGCTGCT GCTACCCAAGCAGCTGTGAAAAAAAGAAGTGGCAACCAGCTAGATAGTCCTAATAGCACTGTCAGG
FIGURA 19 CONT. CTACTTCGTTCTACGTCAAAAAATAAGGACGAGGCACATAGCGGGCCTCTTAATGACAGGATCATT
GATAAGCCAGCTGCAAATAAAAGAAAACATGCCAATCCCTCACAGGTTGGAAGTCCCAGCAGCAGT
GTCAGGGTGCTTCGCTCTGCAATAAAAAATAAAGATATGGCGCGCAGTGAGCCTCAAAGTGACAGG
ACCGCTGGTGAGGCAGCTACAAATAAAAGAAAAAACGCCAATTCCTCAAAGGTGGGGAGTCTGAGC
TCTGGTCTCAGTGTGCTTCGGTCTGCTTCAAAAGCTAAGGATGAGACATGTATCAAACCTTTAAAT
GATAGTCCTGCTGTTGAACCAGCTTCAAGTAAAAGAAAATGCACCAGTCCGTCAAAGGTGGGAAGT
CCCAGCAACAGTGTCAGGGTGCTTCGATCTACTTCAAAATATAAGAATGAGACATGTACCGAGCCT
TTAAATGATAGTGGTGCTGTTGAACCAGCTGCAAATAGAAGGAAAGGTGTCAGTCGTTCAAAGGAG
GGAAGTCCCAATAGCAGTGTCAGGGTGCTTCGCTCTGCCTCAAATAATAAGATTGATGTATCTATT
GAGCCACTGAATAATAGTACTACTGGTCAACCGGCTGCGAAAAGAAGAAAAAATGGCAGTTCCTTT
AAGAGCAGTGCCAGGGTGCTTTGCTCTACCTCAGAAAGGAAAAATGAGGCATCTAGTGAGCCTTTA
AATGATAGTACTGCTGCTCAGCCAGCTGCGAGGAAAAAGAAAGGTGGTGCAATGCCAAAGACTGAT
AACCCAAAGATTGGTGTCAGGGTTCTTCGCTCTGCCTCAGGAAAGAAGAATGAGACATGTACTGAG
CCTGTAAATCGGAGTACTTCTCGTGAACCAACTGTGACAAAAAAAAGAAATTGCAAGCCTTCAAAG
GATCGCGGTCCCAAGAAGGACTACTTAAAAATTTGTCAAAGAATTAAATATATTTTGAATCGAATG
AAGTATGAACAAGCCTTTATTCAGGCTTATGCAAGTGAAGGTTGGAAAGGCCAAAGTTTGGAAAAA
ATAAGACCCGAGAAGGAGCTTGAACGAGCCAAGGCAGAAATCCTTCAATGCAAGTTAAGAATCCGG
GAAGCTTTTCGAAATATGGACTCTCTTTTATCGAAGGGGAAGCTTGAAGAATCTTTGTTTGATTCA
GCAGGACAAATTTCAAGCGAAGATATATTTTGTGCCATATGTGGCTCAAAGGATGTTACTTCACAA
AATGACATCATTCTTTGTGATGGAGCCTGTGACAGAGGATTCCACCAGAATTGTTTGAGCCCTCCT
TTGCTAACTGAAGAAATTCCTCCGGGGGATGAAGGATGGCTTTGCCCTGCATGTGTGTGCAAAGCA
GACTATA TAGATGCGTTAAATGAACTTCAAGGAAGCAAACTCTCCATTCATGACTCATGGGTGAAA
GTTTTCCCTGAGGCAGCTTCAACTGCCAATGGTTCTAAACAAGTTGATGCTTCTGATCTGCTGCCA
GATCATATAAAGGACAGTGCTAACCTTGCATTGGTTGGAACACACATGGTGAATGAAATCAGGTTT
TCTGAAGAGGATGATAGCAAAGCGGATGACCTCGGCTTGCCTTCGGAGGACTCAGGGGATGGTGAC
TTCGATCCAGCAGGTCCAGATTCTAGTGAAGACCAAAATGATGGATTGAACTCAGAAGAGTCAGAT
TTCACATCTGACTCTGATTATTTTTGTGCTGAGATTGCTAAATCTTGCGGCCAGGATGAAGTCTCG
GCATCTCCATTATCAAATGTGATAAACCGTACTGATAGAATGAAACTCAGGGCCTACAGTAGACGC
TCTAATGAAGAAAACCACAATCATGCATTTATGGACATGGAGCTAGAGCAAGACATAGTGCTACCA
GTTCCAAGCAGGCGGCAGGTTGAACGGTTGGATTACAAAAAACTATACGATGAGGCATATGAGGAA
GAATCATCTAATTCAAGTGATGAAGAAGAGTGGTCTGGAAAAGAACTCTTAGAAGGCAGTGGAACA
GATTCACTTGATGAGCCTTCGTCCTGTAAAAGGCTCTCTAGAAGAGCACCAGCAGGGCAGCAGAAT
AATGAACTTACACCACAGAGCCGGCCTCATGGTTCTAACAGTGAGCAGAAAACTGAAGTTCTTCGC
TCCAATGGCAGTAGTAGCACAGGACGGAAGTATGATCCTGAAGTTACCCAGAAATTGAAGGTGCAT
TTTGAGAAAGATCCATATCCTAGCCGTGAAACAAAAGAAAATCTATCAGAAGAACTAGGCTTGACA
TTTAATCAGGTCTCCAAATGGTTCTCTAGTACTCGTCACTATTCAAGGGTTGCTTCTGCCAAAAAA
GAAATGCATCCTGACAGCCATACTTGTGAGAATAATGATGAGACAACTGTAGACAGCATGCAAGCA
AAACAACCCAATGCTGGGGTGATGGAAAAGTTGACGGGGGATAGAAATGGCATTGTTCCTGAGAAA
CCGATGGTGCAGGACAATCTTAACCAAGGAGCGATGGAAAAGTTAACTAGGGATAAAAATGACATT
GTTCCTGAGAAACCGGTGATGCAGAGCAGTCTTAACCAATGTAATAATGAAGATATACCGCTTTCT
GGAACAGAAATTGAGATGGAGTCTTACGAACAAGAATCATCTGACTCAAGTGATGAAGAGTGGTCC
ATACTTAGCACACCACGAAAAACAAGATTACAAGACCATGGAAAATCATCAGTTACTGAATCACTT
CGTTCTGCAAAACGGTGTTCCAGAAGAGCACCAGCTAGGGAGCAGAATAATGAACGTATTCAGAGT
GAGCAGCTTCATGGTTCTGCAAGTGAGCAGCAAACTGAATTTCTTCGCTCCAATGTCAGCAGTGGC
AAGGTCTCAAAATATCATTTTGGCCCTATAGTTAGTCAGAAGCTTAAGGAACATTTTGAAAAAGAT
CCATATCCTTGCCGTGCAACAAAAGAGAGTCTGGCACAAGAGCTAGGACTGACATTTAATCAGATC
AGTAAGTGGTTCTCTGGCACTCGTCATTATTCAAGAGATGCTGTTGCCAAGAATCAGAAACGCCCG
GGAGAAAATACTACTGTGAATAATAATAGCACAACCTTTGATGACATACAAGTAATAGAACCCAAT
FIGURA 19 CONT. GTTGGGTTGATAGATAAACCAGCTGCAGATGTAAATGACATGATTTCTGAAAAGTTGATGGTCCAA
ATAAATCTTAACGAAGGCATTGAAGAAGATATCCCACCGAGCCAATATGCCAGGTGTGAAGAGAAA
ATAACTATGACTCCAGCTGCCATCTCAAGGGAAGCTGGTCTTCCAGGATATGGTCCTGGTCCTGGA
GAAAACTTTCTTCAGGTCAGTTCAAGGAATACTAGCTGTGAGCAGAGTGTGATACTGGCTCCTACC
GCTATCGCAAGAGAAGTTGGTCCACCAGGATATGCGACTGGAGAAAACCAGGGCAATGGGGCTCCA
TGGAATACAAGTTATGAGCGAAGACTATTTATGAATCCTGTGACCAGCTCAAGAGCAGTCAGTCCT
CCAGGATATGGGCCTGAAGAAAGCCGAGGCAGTGGCATTTCCTGGAATACAAGCAGTGAACAAATA
TTGTTTATGAGTCCTACAACCATCTCAAGAGAACTTGGTCCACCAGGATATGGGCCTAGAGAAGAC
CAGTGCAGTGGCACTTCATGGAATGCAAGCTGCGAGTTGGGAGTATTTATGAGTCCTGTGACCACC
TCAAGAGAAGACAGTCCGCCAGGATATGGGCCTCGAGAAAACCAGGAGAATGACAATATGAGATGC
GAGTTGAGAATGTTTACAAGTCCTACAACCATCTCCAGAGAAGTTGGCCCACCAGGATATGAGCTT
ACTGGAAAAAACAAGGGCAACGGCGCTTCATGTACTACGAATTACCAGCAGGGAGCGTTTACGAGT
CCTGAAGCCTTCCCAAGAGAAGCCTGTCCTCCAGGATTTGTGTCTGGAGAGAACCAGGGTAACGAC
ACTCCATGGTATATGAGCAGCAAACAGATGGCGTTTACGAGTCCTACGACCAACCCTAGAGTAGGT
CCGCCAGGGTATGGACAGGAAAACCAGGGCAGTCGTGTTTCTTGGAATACGAGTTATGAGCAGGGA
GTGTTTATGAGTTCTACAAACATCTCAAGAGAAGCCGGTCCGCCAGGTTATGGGCCTGGGGAAAGT
CAGGGCAATATCACTTCATGGATTTCGACAGGCGGGCAGAGAATGTTTACAGGTCCTTCAACTATC
CCGAACGAAGTCGGGCAGCAAGGATATGGCCCTTCAGGAATCCCGGGAACGGATGGCTCAAGGAGT
ATGGACTTGAAAGCCTTTCCACCAGGATATGGACCTGCTGGAGAAAACCAGGGCGGTGGTGCTTCA
GGGAGCGTCATAAGCCCCCATGCTCGGTCTGCAGAGAACGTAGAGTTTTCAGACGACGCTAGAAAA
AAGGCTATACAGCGGGAGCTGAGACGGCGGCAGAAGTTCAGGTGA
SEQ ID NO: 210, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf HD HOX2a de Zea mays ~~ ~
MGRKGSEVSPSKRYPLRSAHS SGRVLRS ALANNNKDSEPLNAAAATQAAVKKRSGNQLDSPNSTVR
LLRSTSKNKDEAHSGPLNDRIIDKPAANKRKHANPSQVGSPSSSVRVLRSAIKNKDMARSEPQSDR
TAGEAATNKRKNANSSKVGSLSSGLSVLRSASKAKDETCIKPLNDSPAVE PAS SKRKCTS PSKVGS
PSNSVRVLRSTSKYKNETCTEPLNDSGAVEPAANRRKGVSRSKEGSPNSSVRVLRSASNNKIDVSI
EPLNNSTTGQPAAKRRKNGSSFKSSARVLCSTSERKNEASSEPLNDSTAAQPAARKKKGGAMPKTD
NPKIGVRVLRSASGKKNETCTEPVNRSTSREPTVTKKRNCKPSKDRGPKKDYLKICQRIKYILNRM
KYEQAFIQAYASEGWKGQSLEKIRPEKELERAKAEILQCKLRIREAFRNMDSLLSKGKLEESLFDS
AGQISSEDIFCAICGSKDVTSQNDIILCDGACDRGFHQN.CLSPPLLTEEIPPGDEGWLCPACVCKA
DYIDALNELQGSKLSIHDSWVKVFPEAASTANGSKQVDASDLLPDHIKDSANLALVGTHMVNEIRF
SEEDDSKADDLGLPSEDSGDGDFDPAGPDSSEDQNDGLNSEESDFTSDSDYFCAEIAKSCGQDEVS
ASPLSNVINRTDRMKLRAYSRRSNEENHNHAFMDMELEQDIVLPVPSRRQVERLDYKKLYDEAYEE
ESSNSSDEEEWSGKELLEGSGTDSLDEPSSCKRLSRRAPAGQQNNELTPQSRPHGSNSEQKTEVLR
SNGSSSTGRKYDPEVTQKLKVHFEKDPYPSRETKENLSEELGLTFNQVSKWFSSTRHYSRVASAKK
EMHPDSHTCENNDETTVDSMQAKQPNAGVMEKLTGDRNGIVPEKPMVQDNLNQGAMEKLTRDKNDI
VPEKPVMQSSLNQCNNEDIPLSGTEIEMESYEQESSDSSDEEWSILSTPRKTRLQDHGKSSVTESL
RSAKRCSRRAPAREQNNERIQSEQLHGSASEQQTEFLRSNVSSGKVSKYHFGPIVSQKLKEHFEKD
PYPCRATKESLAQELGLTFNQISKWFSGTRHYSRDAVAKNQKRPGENTTVNNNSTTFDDIQVIEPN
VGLIDKPAADVNDMISEKLMVQINLNEGIEEDIPPSQYARCEEKITMTPAAISREAGLPG YGPGPG
ENFLQVSSRNTSCEQS VILAPTAIAREVGPPGYATGENQGNGAPWNTS YERRL FMNPVTS SRAVSP
PGYGPEESRGSGISWNTSSEQILFMSPTTISRELGPPGYGPREDQCSGTSWNASCELGVFMSPVTT
SREDSPPGYGPRENQENDNMRCELRMFTSPTTISREVGPPGYELTGKNKGNGASCTTNYQQGAFTS
PEAFPREACPPGFVSGENQGNDTPWYMSSKQMAFTSPTTNPRVGPPGYGQENQGSRVSWNTSYEQG
VFMSSTNISREAGPPGYGPGESQGNITSWISTGGQRMFTGPSTIPNEVGQQGYGPSGIPGTDGSRS
MDLKAFPPGYGPAGENQGGGASGSVISPHARSAENVEFSDDARKKAIQRELRRRQKFR
FIGURA 19 CONT. SEQ ID NO: 211, seqüência de ácido nucléico de PHDf HD HOX2b de Zea mavs X89761 ~ ~
ATGGGAAGGAAAGGCTCAGAAATGTCACCAAGTAAAAGGTATCCCTTGAGGTCTCCACATAGTAGT
GGTAGAGTTCTTCGCTCTGCCTTAGCCAATGATAATAAGGACAGTGAGCCTCTGAATGCTGCTGCT
GCTACCCAAGCCGCTGTGAAAAAAAGAAGTGGCAGTCAGTTGGATAGTCCTAATAGCAGTGTCAGG
TTGCTTCACTCTACATCAAAAAATAAGAACGAGGTATGTAGCGGGCCTCTAAATGACAGGATCCCT
GATAAGCCAGCTGCAAATAAAAGAAAACGTGCCAGTCCTTCACAGGTGGGAAGTTCCAGCAACAGT
GTCAGGGTCGTTCGCTCTGCAATAAAAAATAAAGATGAGGCATGCAGTAAATCTCTAAGTGACAGG
ACCGCTGGTGAGCCAGCTGCAAATAAAAGAAAAAACGTCAATCGCTCAAAGACGGGGAGTCTGAGC
TGTGGTGTCAGGGTGCTTCTATCTGCTTCAAAAGCTAAGGATGAGACATCTACCAAGCCTTTAAAT
GATAGTGCTACTGTTGAACCAGCTTCAGGTAAAAGGAAAGGCACCAGTCCGTCAAAGGTGGGAAGT
GCCAGCAATAGTGTCAGGGTGCTTCGATCTACTTCAAAATATAAGAATGAGACATGTACTGAGCCT
TTAAATGATAGTGGTGCTGTTGAACCAGCTGCAAATAAAAGGAAAGGTGTCAGTCGTTCAAAGGAG
AGAAGTCTCAATAGCAGTGTCAGGGTCGTTGCTCTGGCCTCAAATAATAAGATTGAGGTATCTATT
AAGCCTCTAGGTAATAGTACTGCTGGGGAACCAGCTGCGAAAAGAAGAAAAAGCGGCAGTTCCTTC
GAGGCAGGAAGCCCTGTGAGCAGTGCCAGGGTGCTTCGCCCTACCTCAGAAAGGAAGAATGAGGCA
TCTAAGCCTTTAAATGAAAGTACTGCTGCTCAACCAGCTGCGAGGAAAAAAAAAGCTGGGGTAATT
TCAAAGACCGACAATCCAAAGATTGGTCTCAGGGTTCTTCGCTCTGCCTCAGGAAAGAAGAATGAA
GCATGTATTGGGCATGTAAATGATAGTACTTCTGCTGAACCAACTGTGACAAAAAGAAACCGCAAG
CCTTCAATGGATCGCAGTCCCAAGAAGGACTACTTAAAAATTTGTCAAAGAGTTAGATATATTTTG
AATCGAATGAACTATCAACAAACCTTTATTCAAGCTTATGCAAGTGAAGGTTGGAAAGGCCAAAGT
TTGGAAAAAATAAGACCTGAAAAGGAGCTTGAACGAGCCAAGGCAGAAATCCTCCAATGCAAGTTA
AGAATCCGTGAAGCTTTTCGAAATATGGACTCTCTTTTATCCAAGGGGAAGCTTGAAGAATCTTTG
TTTGATTCCGCAGGAGAAATTTCAAGCGAAGATATATTTTGTGCTGTATGTGGCTCAAAGGATGTT
ACTTTACAAAATGACATCATTCTTTGTGATGGAGCCTGTGACAGAGGATTCCACCAGAACTGTTTG
AACCCTCCTTTGCTAACTGAAGATATACCTCCGGGGGATCAAAGATGGCTTTGCCCTGCATGTGTC
TGCAAAGCAGACTCTATAGATGCACTAAATGAACTTCAAGGGAGCAAGCTCTCCATTCATGACTCA
TGGGAGAAAGTTTTCCCTGAGGCAGCTTCAATTGCCAACGGTTCTAAACAAGTTGATACTTCTGAT
CTGCTGCCAGATCATATAAAGCACAGTGACAACCCTGCATTGGTTGAAGGGCTGATGGTGGATGAA
GTCAGGCTTTCTGCAGAGGATGACAGCAAAGCGGATGACCTTCGCTTGTCTTCGGAGGACTCAGGG
GATGGTGACTTCGATCCGTCAGGTCCAGATTCTAGTGAAGACCAAAAAGATGGATTGAACTCAGAA
GAGTCAGATTTCACATCAGACTCTGATGATTTTTGTGCTGAGATTGCCAAATCTTGTGGCCAGGAT
GAAGTCTCGGCATCTCCATTATCAAATGTGATAAACGATACTTATAGAATGAAACTCAGGGCCAGC
AACAACCGCTCTAATGAAGAAAACCATGATCATGTATTTATGGACATGGAGCTAGGGCAAGACATG
GTGCTACCAGTTTCAAGCAGGCGGCAGGTGGAACGGTTGGATTACAAAAAACTATATGATGAGGCA
TATGGGAAAGAATCATCTAATTCAAGTGATGACAAAGAGTGGTCTGGAAAAGAACTATTAGAAGGC
AGTGAAACAGATTCACTTAGTGAGCGACCTCATCCTGTAAAACGGTGCTCTAGAAGAGCACAAGCA
GAGCAGCAGAATAATGAACATACACCACAGAGGGAGCGCCTTCATGGTTCTGAAAGTGAGCAGAAA
ACTGGAATTCTTCGATCCAATGGCAGCAGTAGCACAGGACGGAAGTTTGGTCCTGTAGCTACCCAG
AAATTGAAGGTACATTTTGAGAAAGATCCATATCCTAGCCGTGAAACGAAAGAGAATATATCAGAA
GAACTAGGCTTGACATTTAATCAGGTCTCCAGATGGTTCTCTAGCACTCGTCACTATTCAAGGGTT
GCTTCTGCCAGAAAAGAAATGCATCCTGACGGCCATACTAGCGAGAATAATGATACCACGACTGTA
GATAGCATGCAAGCAAGGCAACCCAACACTGTGGTGATGGAAAAGTTGACTGGGAATAGAAATGAC
ATTGTTTCTGAGAAACCGATGGTGCAGAACAATCTTAACCAAGGGGTGGCAGAAAAGTTGACTAGG
GAT AGAAATGACATTGTTCCTGAGAAACAGGTGGTGCAGAGCAATCTTAACCAATGTAAT AATGAA
GATATCCCGCTTTCTGGAACAGAAATTGAGATGGAGTCTTACGAACAAGAATCATCTGAAAGCAGT
GATGAAGAGTGGTCCACACTTAGCACACCACGAAAAACAAAATTACAAGGCAACGAAAAAGTATCA
CTTACTGAATCACTACGTTCTGCAAAACGGTGTTCTAGAAGAGCACCAGCTAGGGAGCAGAATAAT
FIGURA 19 CONT. GAACATACTCAGAGTGAGCAACTTCATGGTTCTGTAAGTAAACAGCAAACTGAAGTTCTTCGCTCC
AATGTCAGCAGTGGCGATGCCTCAAAATGTCATTTTGGCCCTATAGTTACTCAGAAGCTGAAGGAA
CATTTTGAAAAAGATCCATATCCTTGCCGTGCAACAAAAGAGGGTCTGGCACAAGAGCTAGGACTG
ACATTTAATCAGATCAGTAAGTGGTTCTCTGCCACCCATCATTATTCAAGAGATGCTGTTGCCAAG
AACCAAAAATACCCAGGAGAAAATACTACTGAGAATAATAGTAGCACAATCTTTGATGGTATACAA
GTAAT AGAACCCAATTTTGGTTTGATAGATAAACCAGATGCAGATACAAATGACATGATTTCTGAA
AAGTTGATGGTACAAATTAATCTTAACGAAGGCATTGAAGAGGATATCCCACCGAGCCAATATACT
ACCAGGTGTGAAGAGAAATTAACTATGACTCAAGCTGCCATCTCAAGGGAAGCTGGACCTCCAGGT
TATGGTCCTGGAGAAAACTTTCTTCAGGTCAGTTCAAGGATTACTAGCTGTGAGCAGAGTGTGATA
ATGGCTCCTAGCGCTATCGCAAGAGGAGTTGGTCCACCAGGATATACGCCTGGAGAACACCAGGGC
AATGGGGCTCCATGGAATACAAGCTATGAGCGAAGACCGTTTACGAGTCCTGCGACTAGCTCAAGA
GAAGTCGGACCTCCAGGATATGGGCCTGAAGAAAACCAAGGCAGTGGCATTTCCTGTAATACAAGC
AGAGAGCAAATATTGTTTATGAGCCCTACAACCATCTCGAGAGAACTTGGTCCACCAGGATATTTG
CCCAGAGAAAACCAGCGCAGTGACACTTCATGGAATACAAGCTGCGAGTCGGGACTATTTATGAGT
CCTGCGACCACCTCAATAGAACATGGTCCACCAGGATATGGGCCTGGAGAAAACCAGGAGAATGAC
AGTACAAGCTGCGAGTTGAGAATGTTTACCAGTCCTACAATCGTCTCCAGAGAAGTTGGCCCACCA
GGATACCAGCAGGGAGTGTTTATGAGTCCTAAAACCATCTCAAGAGAAGTCTGTCCTCCAGGATTT
GGGTCTGGAGAGAACCAGGGCAACGACACTACATGGTACAAACAGAGCGCGTTTACAAGTCCTACA
ACCATCTCGAGAGAAGTCGGTCCGCCAGGGTATGGACAGGAAGATCAGGGCAATGGTGGTTCTTGG
AACACGAGTTGTGAGCAGGGAGTGTTTACGAGTCCTACTAGAGGCATCTCAAGAGAAGTCGGTCCG
CCAGGATACGGGCCCGGGGAAAGTCAGGGCAATACCACTTCGTGGATTTCGACCTGCCAGCAGAGA
ATGCTTGCAGGAATCCAGAGAACTGGTGGCTCAAGGAGTATGGACTTGGAAGCCTTTCCACCGGGA
TACGGACCTGGTGGTGCTTCAGGGAGTGTCATAAGCCCCCAAGCTCGGTCTGCAGAGAATGTAGAA
TTTTCGGACGAGGCTAGAAAAAAGGCTATACAGCGGGAGCTGAGACGGCGGCAGAAGTTCAGGTGA
SEQ ID NO: 212, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf HD HOX2b de Zea mays ~~ ~
MGRKGSEMSPSKRYPLRSPHSSGRVLRSALANDNKDSEPLNAAAATQAAVKKRSGSQLDSPNSSVR
LLHSTSKNKNEVCSGPLNDRIPDKPAANKRKRASPSQVGSSSNSVRWRSAIKNKDEACSKSLSDR
TAGEPAANKRKNVNRSKTGSLSCGVRVLLSASKAKDETSTKPLNDSATVEPASGKRKGTSPSKVGS
ASNSVRVLRSTSKYKNETCTEPLNDSGAVEPAANKRKGVSRSKERSLNSSVRWALASNNKIEVSI
KPLGNSTAGEPAAKRRKSGSSFEAGSPVSSARVLRPTSERKNEASKPLNESTAAQPAARKKKAGVI
SKTDNPKIGLRVLRSASGKKNEACIGHVNDSTSAEPTVTKRNRKPSMDRSPKKDYLKICQRVRYIL
NRMNYQQTFIQAYASEGWKGQSLEKIRPEKELERAKAEILQCKLRIREAFRNMDSLLSKGKLEESL
FDSAGEISSEDIFCAVCGSKDVTLQNDIILCDGACDRGFHQNCLNPPLLTEDIPPGDQRWLCPACV
CKADSIDALNELQGSKLSIHDSWEKVFPEAASIANGSKQVDTSDLLPDHIKHSDNPALVEGLMVDE
VRLSAEDDSKADDLRLSSEDSGDGDFDPSGPDSSEDQKDGLNSEESDFTSDSDDFCAEIAKSCGQD
EVSASPLSNVINHTYRMKLRASNNRSNEENHDHVFMDMELGQDMVLPVSSRRQVERLDYKKLYDEA
YGKESSNSSDDKEWSGKELLEGSETDSLSERPHPVKRCSRRAQAEQQNNEHTPQRERLHGSESEQK
TGILRSNGSSSTGRKFGPVATQKLKVHFEKDPYPSRETKENISEELGLTFNQVSRWFSSTRHYSRV
ASARKEMHPDGHTSENNDTTTVDSMQARQPNTWMEKLTGNRNDIVSEKPMVQNNLNQGVAEKLTR
DRNDIVPEKQWQSNLNQCNNEDIPLSGTEIEMES YEQES SESSDEEWSTLSTPRKTKLQGNEKVS
LTESLRS AKRCSRRAPAREQNNEHTQSEQLHGSVSKQQTEVLRSNVSSGDASKCHFGPIVTQKLKE
HFEKDPYPCRATKEGLAQELGLTFNQISKWFSATHHYSRDAVAKNQKYPGENTTENNSSTIFDGIQ
VIEPNFGLIDKPDADTNDMISEKLMVQINLNEGIEEDIPPSQYTTRCEEKLTMTQAAISREAGPPG
YGPGENFLQVSSRITSCEQSVIMAPSAIARGVGPPGYTPGEHQGNGAPWNTSYERRPFTSPATSSR
EVGPPGYGPEENQGSGISCNTSREQILFMSPTTISRELGPPGYLPRENQRSDTSWNTSCESGLFMS
FIGURA 19 CONT. PATTSIEHGPPGYGPGENQENDSTSCELRMFTSPTIVSREVGPPGYQQGVFMSPKTISREVCPPGF GSGENQGNDTTWYKQSAFTSPTTISREVGPPGYGQEDQGNGGSWNTSCEQGVFTSPTRGISREVGP PGYGPGESQGNTTSWISTCQQRMLAGIQRTGGSRSMDLEAFPPGYGPGGASGSVISPQARSAENVE FSDEARKKAIQRELRRRQKFR
SEQ ID NO: 213, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD_ll de Vitis vinifera contíguo de AM464161.2, AM478203.2
ATGGATGCTTCCCCTGCCCAAGAGAGTAATCGGACTAGGAAAAGTTCTAGTCCTAAACAGAATATT
TTAGAAGAGGCCAGAAAACTTTCTGAAAGTGTGTGTAGCGAATCGTCAGAGCAGAAACGTCCCTCT
GAAAATGGACAGCATGAGCCAGCAGAAATCAGCCCTGTGCTATCCAATTGTATTGTTACTGAACAG
TCAGAACTGCCTCCAGAAGATGTGGGTGATACAATATTAGGATTGCCTCCAGCAGATGTGACCAAG
AATTCTCTTACTGAACATTTGGGATTGCCTCCAGAAGATGCAATCAAGAATGATGGAACTGAACAA
TTGGGGTTTTTTCCTGAAGTTGTGACCAAGAGTTCTATTATTGAAAAATTAGGACAATCAGAGCCA
CCTCCTGAAAATGTGGCCCGGTATTCTGGTCTTGACCAGTCAGGGTCAGCACCCAAAGATTTGGCC
AATAAAAGAACTGCAAAACTAGTTAAAAGAAAATATAAATTGAGATCTTCAGTAAGCGGTTCCCGG
GTTTTACGCTCAAGGTCACAAGAGAAACCTAAAGCTTCACAGCCAAGTGATAATTTTGTAAATGCC
AGTGCTAGCAGAGAAAGGAAAGGAAGAAAGAAGAAAAGGATGAATAAAACAACTGCAGATGAATTT
GCGAGAATCAGGAAACATCTTAGATATTTACTGAACAGAATGAGCTATGAGCAAAATCTGATTGAT
GCTTATTCTGCCGAAGGTTGGAAAGGACAAAGTGTGGAAAAATTAAAGCCAGAGAAGGAACTTCAA
CGTGCCTCATCTGAAATTTCTCGTCGCAAACTGMAAATACGTGATCTATTTCAACATCTTGATTCA
TTATGTGCTGAAGGAAGGTTTCCAGAATCTTTATTTGATTCTGAAGGGCAGATTGACAGTGAGGAT
ATATTCTGTGCTAAATGTGAGTCCAAAGACATGTCTGCTGATAATGACATAATACTCTGTGACGGT
GCTTGTGATCGTGGATTTCACCAGTTTTGTCTGGAACCGCCATTGTTAAAAGAAGAAATTCCTCCT
GATGACGAGGGTTGGCTGTGCCCTGCATGTGATTGCAAAGTTGACTGCATGGACCTGCTTAATGAC
TCTCAAGGAACAAAACTTTCTGTAATTGATAGCTGGGAGAAGGTTTTTCCTGAGGCAGCTGCAGCT
GGGAATAACCAGGATAACAACTCTGGATTTTCATCAGATGATTCTGAGGATAATGATTATGACCCC
GATTGTCCAGAGGTTGATGAGAAGGGTCAGGGAGATAAGTCAAGTTCTGATAAATTTGATGAATCT
GATGAATTTGACGAATCTGATGAATCTGATTTCACTTCTGCATCTGATGATATGGTGGTCTCACCR
AATAATGAGCAGTGTTTGGGGCTTCCTTCTGATGATTCAGAGGATGATGATTTTGATCCTGATGCT
CCAGAAATTGATGAACAGGTTAATCAGGGGAGTTCAAGTTCTGATTTTACATCTGACTCCGAGGAT
TTTACTGCCACTTTAGATCGCAGAAACTTCTCTGACAACGAGGATGGTCTTGATGAGCAAAGAAGA
TTTGGTAGGAAGAAGAAAGATACTTTAAAGGATGAGCTCTTATCCGTGTTAGAGTCAAATTCTGGT
CAAGATAATGCACCTCTGTCTGCAAAGAGAGATGTAGAAAGGCTGGATTACAAAAAGCTGCATGAT
GAGGCATATGGAAATGTTTCTTCTGATTCAAGTGATGATGAAGACTGGACAGAGAATGTTATACCA
AGAAAGAGGAAGAATCTTAGTGGTAATGTTGCCTCAGTGTCACCAAATGGAAACACTTCAATCACT
GAGAATGGGACAAATACCAAGGACATAAAGCACGACTTGGAAGCAGCTGGATGCACTCCCAAGCGA
AGAACTCGTCAGAAGCTGAACTTTGAAAGCACAAATAATTCACTTGCTGAGTCACATAAAGGTTCT
CGAAGTCCTGGTTCTACTGGTGAAAAAAGTGGGCAATCATCATATAAAAAACTTGGAGAAGCTGTA
ACTGAGAGACTCTACAAATCCTTCCAGGAAAATCAGTACCCTGATCGTGCTATGAAAGAAAAATTG
GCAGAAGAGCTGGGAATAACGAGCCGGCAGGTTAGCAAATGGTTTGAGAATGCCCGTTGGAGCTTT
CGCCATCGACCACCCAAGGAAGCCAGTGCGGGTAAAAGTGCTGTGAAAAAGGATGCATCCACGTCT
CAAACAGATCAAAAGCCTGAGCAAGAAGTGGTTCTTAGAGAAAGTTCTCACAATGGAGTGGGAAAA
AAGGAGTCGCCCAAAGCAGGTGCTTCGAAGGTAGACCGCAGCAAGGAAGCCAATGCAGGTAAAAGT
GCTGTGAAAAAGGATGCATCCACGTCTCAAACAGATCAAAAGCCTGAGCAAGAAGTGGTTATTAAA
GAAAGTTCTCACAATGGAGTGGGAAAAAAGGAGTCGACCAAAGCAGGTGCTTCGAAGGTAGACCGC
TGCAGTGGAGCTAAGAGGAGAAGGAAATTGGCAACTGATGGAAGCCATAGACAGAAATCTTCAACT
CCCAACTCTACAAGACAAAAGACAAAGTCAAATCATGAAGCATCTGAGGCAACCAATGGAAGCAGA
AGGCAGAATTCTTCTACTCCCAAGTCTAGAAGGCAAAAGACTAAGTTAGCTGGTGAAGCGTCTGAA
FIGURA 19 CONT. ηϊ^ι^ΐrggaagcagtagacagaattcgtcaaccccaaattctaaaaggcgaaaaaccaagtca
gatcatgaagcatctaatcccgtccttagcggtaagaagatagcaaagacggcaaagagctcatct ggcacaccaaaaacaaaggaaaagctaagtgacagaatccaaacaagaagtaggaaatctattgct
tga
SEQ ID NO: 214, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD_ll de Vitis vinifera
mdaspaqesnrtrkssspkqnileearklsesvcsesseqkrpsengqhepaeispvlsncivteq
selppedvgdtilglppadvtknsltehlglppedaikndgteqlgffpewtkssiieklgqsep
ppenvarysgldqsgsapkdlankrtaklvkrkyklrssvsgsrvlrsrsqekpkasqpsdnfvna
sasrerkgrkkkrmnkttadefarirkhlryllnrmsyeqnlidaysaegwkgqsveklkpekelq
rasseisrrklxirdlfqhldslcaegrfpeslfdsegqidsedifcakceskdmsadndiilcdg
acdrgfhqfcleppllkeeippddegwlcpacdckvdcmdllndsqgtklsvidswekvfpeaaaa
gnnqdnnsgfssddsedndydpdcpevdekgqgdksssdkfdesdefdesdesdftsasddmwsp
nneqclglpsddsedddfdpdapeideqvnqgssssdftsdsedftatldrrnfsdnedgldeqrr
fgrkkkdtlkdellsvlesnsgqdnaplsakrhverldykklhdeaygnvssdssddedwtenvip
rkrknlsgnvasvspngntsitengtntkdikhdleaagctpkrrtrqklnfestnnslaeshkgs
rspgstgeksgqssykklgeavterlyksfqenqypdramkeklaeelgitsrqvskwfenarwsf
rhrppkeasagksavkkdastsqtdqkpeqewlresshngvgkkespkagaskvdrskeanagks
avkkdastsqtdqkpeqewikesshngvgkkestkagaskvdrcsgakrrrklatdgshrqksst
pnstrqktksnheaseatngsrrqnsstpksrrqktklageaseatggssrqnsstpnskrrktks
dheasnpvlsgkkiaktaksssgtpktkeklsdriqtrsrksia
SEQ ID NO: 215, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HD_ll de Populus tremuloides scaffJX. 730
atgtctgaggctgaüaacatügütutttutccatcacaagttagttctcaaactaaaagttactca
tgcccttcacaaactaaactggaaaatactcatggatttactgctgaatacaactgtggtggatat
tcggaagagaaacataagcttgagtctgaaatcatacaaactgaagccggagatagcggtactgca
gttctccaatctggtgctggggaaactgtggaaccatctactgaagatgtaacaaacaattctttt
actgatttggatccacctcccgaagatgccaggggtgctacttttgatgaaagttcaagacctata
ctaactgctatagatcagaaactcgagccaggtgctagaagtgtgaatactgcgtgtacgcatggt
gaatcatcaaaagcaactgactctggtattctacaggatgaacctggaaataccaatgctgcatca
tcaagctgcattgctaatgaaacctcácaagcatcacttgaaaatctagccaataattcttgtact
gaagatgtgggtccgccgtatggagatgcaagcaagggtaaccagattgataaaagttcataccct
caacaaactatatctggacatacacttgagttactttctgacagagcttgttgtgaacgatcagaa
gaaagacagaagcctggatctgaactttcagaaaatgaatcaacgggaattgacactgaattatat
agtggcattgctatcgagaattcagagccgcttactcaactagtgaccaagagttctcctatcaaa
catgtaggcttgcttcctggtgacagcatcatcattcctgcaaatgaacaaacaagaccaactcat
gatgatgaggacaaaggcccagatcatgaacatttggaaacaccatctagagttgcgattggtatt
actagacgcggtagacctagaggtaagagtgcttcaagattgtcaaggaagatatatatgttaaga
tctttgagaagtagtgatagagttctccggtcaagatcacaagagaaacctaaagctcctgaatca
agtaataattcaggtaatgttaattccactggtgataaaaaagggaaaagaaggaaaaagagaaga
ggaaagaatattgtggctgatgaatattccaaaatcagggcacatcttaggtacttattgaatcgg
atgagctatgagcaaagcttgatcactgcttattctggggaaggctggaaaggacttagcctagaa
aagttaaagcccgagaaggagttgcagcgagccacatctgaaattaccagacgcaaagtgaaaata
agggatttatttcaacatattgattctctgtgcagcgaaggaaggttcccatcatctttatttgat
tctgaaggacagattgacagtgaggatgtattctgtgcaaaatgtgggtccaaagatttgaatgct
gataatgatattatactatgtgatggtgcttgtgacagaggatttcatcagttctgtttgatacca
FIGURA 19 CONT. CCATTGTTAAGAGAAGACATTCCTCCTGATGATGAGGGCTGGTTATGCCCTGGATGTGATTGCAAA
GTTGACTGCATTGGTTTGCTTAACGATTCTCAAGGAACAAATATATCTATCAGTGATAGCTGGGAG
AAAGTTTTCCCTGAGGCTGCCGCCACAGCGTCTGGACAAAAACTGGATCACAACTTTGGACCATCT
TCTGATGATTCTGATGATAATGATTATGAACCTGATGGTCCAGATATTGATAAGAAGAGTCAGGAG
GAGGAATCGAGCTCTGACGAATCTGACTTCACTTCTGCATCTGATGAATTCAAGGCTCCCCCGGAT
GGCAAAGAGTACTTGGGGCTCTCTTCTGATGATTCAGAGGATGATGACTATGATCCTGATGCTCCA
GTTCTTGAGGAGAAGCTGAAGCAGGAAAGTTCAAGTTCTGATTTTACATCAGACTCTGAGGATCTT
GCTGCAACTATTAATGGTGATGGGTTGTCTTTAGAAGATGAATGCCACATGCCTATTGAACCTCGT
GGAGTTTCTAATGGGAGGAAATCTAAATTTGATGGAAAGAAGATGCAGTCTTTAAACAGCGAGCTT
TTATCCATGCTAGAACCAGATCTGTGCCAAGATGAGTCAGCAACTGTTTCTGGAAAAAGAAATGTT
GACAGATTGGACTACAAGAAGCTCTATGATGAAACGTATGGAAACATTTCTACTTCAAGTGATGAT
GATTACACTGATACTGTTGGGCCAAGGAAGAGGAGGAAAAATACTGGAGATGTTGCTACAGTGACA
GCAAACGGAGATGCCTCTGTTACCGAGAATGGAATGAATAGCAAGAATATGAACCAGGAATTAAAG
GAGAACAAACGTAATCCTGAGAGAGGAACTTGCCAAAACTCGAGCTTTCAAGAAACAAATGTTTCC
CCGGCTAAATCATATGTTGGTGCATCTCTATCTGGTTCTAGTGGTAAAAGCGTTAGGCCCTCTGCT
TATAAAAAACTTGGAGAAGCTGTAACTCAGAGACTGTACAGTTACTTCAGGGAAAATCAGTATCCA
GACCGAGCTGCAAAAGCAAGCTTGGCAGAAGAGCTAGGAATTACTTTTGAGCAGGTTAACAAGTGG
TTTGTGAATGCCCGTTGGAGCTTCAACCATTCATCATCTACAGGTACAAGTAAAGCTGAAAGTGCT
TCTGGAAAAGGTAGCTGTGATGGCCAAGTGAGGGATAGTGAATCGAAGAACCGAAAGAGCAATAAA
CAAAAAACTAACACCCCGAAATCTAGGAGATAA
SEQ ID NO: 216, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD_ll de Populus tremuloides
MSEAENMGVSPSQVSSQTKSYSCPSQTKLENTHGFTAEYNCGGYSEEKHKLESEIIQTEAGDSGTA VLQSGAGETVEPSTEDVTNNSFTDLDPPPEDARGATFDESSRPILTAIDQKLEPGARSVNTACTHG ESSKATDSGILQDEPGNTNAASSSCIANETSQASLENLANNSCTEDVGPPYGDASKGNQIDKSSYP QQTISGHTLELLSDRACCERSEERQKPGSELSENESTGIDTELYSGIAIENSEPLTQLVTKSSPIK HVGLLPGDSIIIPANEQTRPTHDDEDKGPDHEHLETPSRVAIGITRRGRPRGKSASRLSRKIYMLR SLRSSDRVLRSRSQEKPKAPESSNNSGNVNSTGDKKGKRRKKRRGKNIVADEYSKIRAHLRYLLNR MSYEQSLITAYSGEGWKGLSLEKLKPEKELQRATSEITRRKVKIRDLFQHIDSLCSEGRFPSSLFD SEGQIDSEDVFCAKCGSKDLNADNDIILCDGACDRGFHQFCLIPPLLREDIPPDDEGWLCPGCDCK VDCIGLLNDSQGTNISISDSWEKVFPEAAATASGQKLDHNFGPSSDDSDDNDYEPDGPDIDKKSQE EES SS DES DFTSASDEFPCAPPDGKEYLGLSSDDSEDDDYDPDAPVLEEKLKQES SS SDFTS DSEDL AATINGDGLSLEDECHMPIEPRGVSNGRKSKFDGKKMQSLNSELLSMLEPDLCQDESATVSGKRNV DRLDYKKLYDETYGNISTSSDDDYTDTVGPRKRRKNTGDVATVTANGDASVTENGMNSKNMNQELK ENKRNPERGTCQNSSFQETNVSPAKSYVGASLSGSSGKSVRPSAYKKLGEAVTQRLYSYFRENQYP DRAAKASLAEELGITFEQVNKWFVNARWSFNHSSSTGTSKAESASGKGSCDGQVRDSESKNRKSNK
QKTNTPKSRR
SEQ ID NO: 217, seqüência de ácido nucléico de PHDf_HDJII de Populus tremuloides LGJ002624
ATGTCCGAGGCTGAGCACATGGGTGTTTCTCCATCAAAAGTTTCTCATACTAAAAGTTATTCATGC CCTGCACAAACTACACTGGAAAATACGCATGAACCCAGTGCTGAATACAAGTTTGGTGGATATCCG GAAGAGAGACATAAGCTTGAGTGTGAAATCATACAAACTGAAGCTGGAGATAACAGGGCTGCAGTT CTCCAATCTTGTTCTGGTGAAGTTGTGCAACCATCTACTGACGATTTAACAAAAAGTCCTCTTATT GATTTGGACCCACCTCCTGACGATGCAAGGAGTGCTCTGTTTGATAATAGTCCAAGACCTATATCA ACCGCTATGGATCAGAAACTTGAGCCAGGTGCTACAAGTGTGAATACTGCTTGTGTGCATAGTGAA TCATCAAAAGCAATTGACTCTAGTATTCTACTGGATGAACCTAGGAATAGCAACACAGAATTGTCA
FIGURA 19 CONT. agctgcattgcaaatgaaacctcacaagcatcacttgaaggtctagccaatgattctcgtgctgaa
gatgcaggactgtcacttgtagaggcaagcaatagtgacctgattgatgaaagttcatactctcaa
caaactacatctggacagacacgtgagtttcattctgacagagcttgttgtaaaccattggaagaa
agacagaagcccggctctgaacttgcagaaaatgaatcaatggaaattggcattggattacccagt
ggtattgctattgagaatttggagccgcttactgaacttgtgaccaagagttgtcctatcaaacat
ataggcttgcctcctggtgatgacatcagcattcctgcaaatgaacaaataagacctactcatgat
aaggagtccaaataccctgattgtgaacatttggaaaaactatctggaattgtgattggtattact
agtcaaggtgtacccagtgttaagagaacttcaaaattgtcagggaagaaatatacaagttcttcg
agaaaaagtgatagagttctccggtcaaattcacaagagaaacctaaagctcccgagccgagtaat
aattctactaatgttaattccactggtgaggaaaaagggaaaaggaggaaaaagagaagagggaaa
agtatagtggctgatgaatattccagaatcagggcacgtcttaggtacttgttgaatcggatgagc
tatgagcaaagcttgatcactgcttattccggggaaggctggaaaggacttagtctagaaaagtta
aaacctgagaaggagttgcaacgggccacatctgaaatcatcagacgcaaagtgaaaataagggat
ttatttcaacatattgattcactatgcggtgaaggaaggttcccagcatctttgtttgattctgaa
ggacaaattgacagtgaggatatattctgtgcaaaatgtggatccaaagatttgactgctgataat
gatattatactatgtgatggtgcttgcgaccgagggtttcatcaattctgtttggtaccaccattg
ttaagagaagacattcctcctggtgatgagggctggttatgccctggatgtgattgcaaagttgac
tgcattgacttgcttaatgactctcaaggaacaaatatatctatcagtgacagatgggataatgtt
ttccccgaggcagctgcagtagcatctggacaaaaactcgactacaactttggattgtcttctgat
^^tgatgataatgattatgatcctgatggtccagatattgacgagaagagtcaggaggaatca
agctctgacgaatctgacttcagttctgcgtctgatgaatttgaggctccacctgatgataaacag
tacttggggctcccttctgatgattcagaggatgatgactatgatcctgatgctccagttctcgag
gagaagctgaagcaggaaagttccagttctgattttacttcggactctgaggatcttgatgccact
cttaatggtgatgggttgtctttaggagatgaataccacatgcctattgaacctcatgaagattct
aatgggcgaagatcgagatttggtggaaagaagaatcattctttaaacagcaagcttttatccatg
ctagaaccagattctcaccaagaaaagtctgcacctgtttctggaaaaagaaatattgaaagattg
gactacaagaagctctatgatgaaacatatggaaacatttgtacttcaagtgatgatgatttcact
gatactgttgcaccaaggaagaggaggaaaaacactggagatgttgctatggggatagcaaatgga
gatgcttctgttactgagaatggattgaatagcaagaatatgaatcaggaattaaagaagaatgaa
catacttctgggagaactcaccaaaactcgagctttcaagatacaaatgtttccccagcaaaaaca
catgttggcgaatctctctctggttctagcagtaaaagagttaggccctctgcttataaaaaactt
ggagaagctgtaactcagaaactgtacagtttcttcaaggaaaatcggtatcctgaccaagctgca
aaggcaagtttggcagaagagctaggaattacttttgagcaggttaacaagtggttcatgaatgct
cgttggagcttcaaccattcatcacctgaaggtacaagtaaagctgaaagtgcttcaggaaagggt
agctgtgatgggcatgtgagggatagtgaatcgaagaaccaaaagagcaataaacaaaaaactagt
accccaaaatctaggagatag
SEQ ID NO: 218, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf HD Ill de Populus tremuloides ~ ~
mseaehmgvspskvshtksyscpaqttlenthepsaeykfggypeerhkleceiiqteagdnraav lqscsgewqpstddltksplidldpppddarsalfdnsprpistamdqklepgatsvntacvhse sskaidssilldeprnsntelsscianetsqasleglandsraedaglslveasnsdlidessysq qttsgqtrefhsdracckpleerqkpgselaenesmeigiglpsgiaienlepltelvtkscpikh iglppgddisipaneqirpthdkeskypdcehleklsgivigitsqgvpsvkrtsklsgkkytsss rksdrvlrsnsqekpkapepsnnstnvnstgeekgkrrkkrrgksivadeysrirarlryllnrms yeqslitaysgegwkglsleklkpekelqratseiirrkvkirdlfqhidslcgegrfpaslfdse gqidsedifcakcgskdltadndiilcdgacdrgfhqfclvppllredippgdegwlcpgcdckvd cidllndsqgtnisisdrwdnvfpeaaavasgqkldynfglssddsddndydpdgpdideksqees
FIGURA 19 CONT. SSDESDFSSASDEFEAPPDDKQYLGLPSDDSEDDDYDPDAPVLEEKLKQESSSSDFTSDSEDLDAT LNGDGLSLGDEYHMPIEPHEDSNGRRSRFGGKKNHSLNSKLLSMLEPDSHQEKSAPVSGKRNIERL DYKKLYDETYGNICTSSDDDFTDTVAPRKRRKNTGDVAMGIANGDASVTENGLNSKNMNQELKKNE HTSGRTHQNSSFQDTNVSPAKTHVGESLSGSSSKRVRPSAYKKLGEAVTQKLYSFFKENRYPDQAA KASLAEELGITFEQVNKWFMNARWSFNHSSPEGTSKAESASGKGSCDGHVRDSESKNQKSNKQKTS
SEQ ID NO: 219, seqüência de ácido nucléico de PHDf HD IV de Populus tremuloides LG_XVIII1192
ATGGGTGATTCTGGAAAGAAATCAAAGCAGCAAGACTTGCACGAATCTTCACCATCTGACACAGTG
AATGGGTCGTTGCTGATTAAATCATTGAAGATAAAGAAGGGTGGCAAATTATCTCATAGAAAAAGC
GAAAAACCTAAAACTAAACCTCATCTGAAAACTATCATTAATTCATCTGTATCAAAGAAAAAGGTT
ACTCCTAAGAAGGGCATCAGGAATGGCTCTACCAGTAGAAGATTGATTCACAGGAAAATTCTGCAT
AAAGCACTTGATAAGAAGGCCTCAAGAAATGGGGCTTCCTCAGAGCTCCAAGGCAAACAGTTGTCA
ACTATTGATTCTGAGGGGAATGGAAAAAATGCCGATGAAGGTGCAATTAAAAAAGTCAAGAAGAGG
AAGCCTAAGAAAAGGCAAAAGGACAAGGTAAAGCTAGATGAACCACCACGCTTGCAGAGGAGAGCA
AGGTACTTGATGATTAAAATGAAGCTGGAGCAGAATCTTATAGATGCTTACTCTGGAGAAGGTTGG
AAAGGTAAAAGTCGAGAGAAGATTCGGCCAGAAAAGGAACTACTGAGAGCCAGGAAACAGATTTTG
AAATGTAAACTTGGATTACGTGAAATAATTCGGCAGGTGGATTCTCTAAGTACAGTAGGATGTATT
GAAGATGCTGTTATGGCTCCAGATGGATCTGTTTCCCATGAACATATATTCTGTGCGAAGTGCAAA
TTGAATGAAGTTTCCCAAGATAATGATATTGTACTCTGTGATGGGACATGCAACTGTGCCTTCCAC
CAAAAATGCCTTGATCCTCCTTTGGATACTGAAAATATACCTCCAGGAGATCAGGGATGGTTTTGC
AAGTTCTGTGACTGTAGGATGGAAATTATAGAAGCCATGAATGCTCATTTGGGGACCCACTTCTCA
GAGGACAGCGGTTGGCAGGATATTTTCAAAGAAGAAGCAGCAGTTCCAGATGGTGGAAATATGCTA
TTAAATCCAGAAGAAGAATGGCCTTCTGATGATTCTGAAGATGATGATTATGATCCAGAGAGGAGA
GAGAACGTCATGAGTGGAGCAGGTACTGATGATGATGCATCTGATGACACCAGCAATTCAACCCGC
TTGAGTTGGTCTTCAGATGGTGAGGTTTTTTCAGGATCCAGGAGGTGGGAGGTGGACGGCTTGGAC
TTCAGAAACAATTCTATTTATAGCAGTTTAGATTCTGATGAAACCAGTGATGGGGAAATTATTTGT
GGCCGTAGGCAGAGAAGAGCGGTTGATTATAAGAAGTTATACAATGAGATGTTTGGAAAGGACGCT
CCTGCACATGAGCAACCCAGCGAAGATGAAGATTGGGGTCCTAGCAAAAGAAAGCGACGAGAGAAG
GAGTCAGATGCAGCCAGCACCCTAATGACTCTATATGAAAGTAAAAGAAGATGTAAAAATGATGCA
ACCATTGAAGGCATGATGAAGCTTCCACGAGATCCTCAAATTCGAAGGCCAATTTTCAGGCTCCCC
CCTGATGCTGTTGAGAAACTTCGCCAAGTATTTGCAGAGAATGAACTTCCATCTAGAACTGTCAAG
GAGAATCTATCAAAAGAATTGGGCCTTGAACCTGGGAAGGTTAGCAAATGGTTCAAGAATTCCCGT
TATTTAGCTCTGAAGTCTAGAAAGGTAGAGAAGGGAGAACAAGTTCATTATTCTAGTTCCAAAGTC
TCTGCTGAACCCACTTTAAATGTCATGAAGGACAAAACTGCTGATCTTTCACTGTTAAAGGATAGC
CAGGCAGAAACTGGGGTGTGTACCCCAGAGAATTTGAAAAGGATCTTGCAGAGGAAGAAGCCGAGG
TCAAT AAGTAAAAGTTTAAAGAAAAATGAACAGAAAAGAGGTTCCTTCGAATCACCTACTAAAAGC
AATGAGATGAATGTTGAGCACAATGATGATCTGAGCTTGAAGAAGCTGTTAAAAGCAAAAACAAAG
GGAGTAAAGAAAAAGGGTAATCGTATTTCAGCAGCTGCTGAATCTGATATGGAGAAACTTTGTAGA
GCAAAGACGAGAGTAGAGAATCTGAAGCAGAAACTGGTGAAACTACAAACTGGCAAAGCTAGGAAG
TCTTCCAAAATCCGTCCGCTAGACGAATCTGTTGTCTACGTTCCTATTGCTGAGCTAAGAGAAAAG
AAATGA
SEQ ID NO: 220, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf_HD_IV de Populus tremuloides
MGDSGKKSKQQDLHESSPSDTVNGSLLIKSLKIKKGGKLSHRKSEKPKTKPHLKTIINSSVSKKKV TPKKGIRNG STSRRLIHRKILHKALDKKASRNGASSELQGKQLSTIDSEGNGKNADEGAIKKVKKR
FIGURA 19 CONT. KPKKRQKDKVKLDEPPRLQRRARYLMIKMKLEQNLIDAYSGEGWKGKSREKIRPEKELLRARKQIL KCKLGLREIIRQVDSLSTVGCIEDAVMAPDGSVSHEHIFCAKCKLNEVSQDNDIVLCDGTCNCAFH QKCLDPPLDTENIPPGDQGWFCKFCDCRMEIIEAMNAHLGTHFSEDSGWQDIFKEEAAVPDGGNML LNPEEEWPSDDSEDDDYDPERRENVMSGAGTDDDASDDTSNSTRLSWSSDGEVFSGSRRWEVDGLD FRNNSIYSSLDSDETSDGEIICGRRQRRAVDYKKLYNEMFGKDAPAHEQPSEDEDWGPSKRKRREK ESDAASTLMTLYESKRRCKNDATIEGMMKLPRDPQIRRPIFRLPPDAVEKLRQVFAENELPSRTVK ENLSKELGLEPGKVSKWFKNSRYLALKSRKVEKGEQVHYSSSKVSAEPTLNVMKDKTADLSLLKDS QAETGVCTPENLKRILQRKKPRSISKSLKKNEQKRGSFESPTKSNEMNVEHNDDLSLKKLLKAKTK GVKKKGNRISAAAESDMEKLCRAKTRVENLKQKLVKLQTGKARKSSKIRPLDESWYVPIAELREK
SEQ ID NO: 221, seqüência de ácido nucléico de PHDf HD de Ostreococcus tauri CR954214.4
ATGAATGAGGTGCGCGACGCGGAGGAACGATGTAAACGTCGTGTGCGAGCGGTCGCGGACGCGGTG
CGGAAGGGAGGCGTGGTGTGGGCGATCGTGGGGTGGAAAGATAGTCAATGCGCGCGCGCGGCGTCC
GACGCGCGCGTTGTTGGAGATTGGGCGCGCGCGATGTGTGTGAGANGACTGACGATGCATCGATCG
GTGGTTGATGATACGNAGTTTGCGCTCGCGCGATCGCGGATACAGTCGCAGTTCGCGACGATTCGA
AGACATCAGGCGTTGGTGGAAGCGTACGCGAGCGACGGCTGGCGCGGACAGGCGGCTCAAAAGCCG
AAACCAGTCAGGGAGATTGAAAAGGCGCGCGAGAAGATATTCGAGGGTAAATTGAAGATACGGGAG
TATTTTAAGGTTTTGGAGTTCGATGAGCGCGAGCGCGAGATCACGACGGTGGCGGACGAGTTTGGG
GAGTGCGACGCCGCGGATATTTTTTGTAGCAAGTGCACCCTCGCAGACGACAGGCATGACGACGAT
ATTTTGCTCTGCGATGGCTTCTGCGATCGTGCGTATCATCAATCATGCGTGGCTCCACCGGTTTTG
GCGGAAGACATTCCGCCCGAGGACGAAGGTTGGCTCTGTCCGAGATGCGACGCGCGAGTGGACGTC
ATTTACGTCTTGAACGACGAGTACGATCAAAATTTGGGCCAGAGGTGTGTTTCAGCGGATATTTTC
GTTGCAGAGGCGGACATGCGAGATAAAGGGATCGTTCCAGGAACGGCGCAGTTCAAACACGCGCAC
GAAGAGGATTGGCCGAGCGATGAGAGCGATGACGAGGACTTCGATCAGGGCGGACACAGCGACGAT
GGGCGAGACGACGAGCACGAGGCGCTGAGCGGAAGCGCACAGTCATCGAGCGATGAATCGAGCAGC
GAATCAGAGTCTGATCTCATCATCGAGGGCCCACGAAGGCGCACGAAGGTTGATTACGTCGCCCTG
AACAACGCCATGTTCGGCGACAGCGAGGCGTACGAGGGCGAAGCTGAGGAGCTCGGTTGGAAACGC
AGCAACAAAACCAAGGCGGAGATGCTCGCGGCGCTCAAGGGTGAGAGCGCGAACGGGATAACGAAC
GGTGCCACGAAGAAGGATCCAAAATCAAAACGCTCGAAGCGAGAGCGCGTGGATGAGAAATCTCCC
GCACCGCGCGTCAGGTTCACTCCCGATCAAAAACTTGAGCTCGAGCGTGTCTTCTCCGAGTGCGCG
TCGCTCGACATTGACGCGCGCGACGCCCTCGCGAAGCGACTCGGGATACCCGGCGGCGCAAATTCG
ATTAAAATATGGTTCATGAATCGCCGTCGTAGGGCTAAGATTTTGGGTGAGAGGNAATACNGACAG
CACGATAATCCACGTCCCGCTCGCTCGTTCGACGCCTCGTCACAAACAACCTCTGAAAAACCTTCA
AGTCACCTCAGAAGCTCACGCGCGTCTCAAACATGTCGATCGCCCCTAAACGCGCCCCCAAACTCA
TATACTTCTCCGCGTGGTTCTGCCCGTTCGCCCATCGAGCGACGCTCGCGTTGGAGCATTACGCGC
ACGGCGGAGAGATTTCCTACGAGTGGAAGGAATCGCTCGGTGAGGTCACGCTTCGTTGACATTNGA
CGCTCGAATGCGACGAAACTTGAGCGCCTCGACNGACCGGAGACGAATCGCCGCGTAGGATGGGAA
AAACGCAAGTCAACCTCGAGTGAGGTGAAGACGAAACACGAGAATTGGTACCATTACAAGTCCCCA
GAGCTACTGAGACACAACCCGCTGGGCATGGTGCCGACACTCGTGACGCCGGCGACGTATGAGGAT
AAAGATGGAGATCCATCGCGGAACGTGGTGACGGAGAGCTTGGTGTGCGTACAGTTTATCGATGAA
CTCGTTCGGGGAAACGCGTACGCCGGGGAGACGGCGGCGATCATGCCGAGCGACCCGTACGCGCGC
GCGAAGGCGAGAGTGGACGCCGACTGGGTGAACAAAAACGTATGCTCGAGGTATTATCACGTCCTG
GTGCGACAAGAGGCGAGCGAGCAGAGAGAAGCGTTTGAAAAGCTCGTGGAGGGGCTGGAGACATTC
GCGGCGTGGTGCGGCAGCGGAGAAGGGAAGTTCTATGGTGGACAAACGACGCCCGGATTGGTGGAC
TACGCGCTCTTTCCATGGGCGTGGCGCCTCCCGGTGTTCGAGCACTACCGCGGGATGGATTTCAAG
FIGURA 19 CONT. ATTCCTCGCACCGCGGCACTGAAATCGTATCACGATTGGATGGAAGCCATGCTCGCGCGAGAGCAA GTTCGCAAGACGCTTCCACCGTGGGACGATTACTTGGAACACATTGGACGATACGCCGACGGGAGC GCGCGATCGAAAGTCGCCAACGCAGTCCGCAGCGGCCGTGCGGCGCACGATTACGACGACAAGGAG GACAACACCGATAGTTGA
SEQ ID NO: 222, seqüência de polipeptídeo traduzida de PHDf HD de Ostreococcus tauri ~~
MNEVRDAEERCKRRVRAVADAVRKGGWWAIVGWKDSQCARAASDARWGDWARAMCVRXLTMHRS WDDTXFALARSRIQSQFATIRRHQALVEAYASDGWRGQAAQKPKPVREIEKAREKIFEGKLKIRE YFKVLEFDEREREITTVADEFGECDAADIFCSKCTLADDRHDDDILLCDGFCDRAYHQSCVAPPVL AEDIPPEDEGWLCPRCDARVDVIYVLNDEYDQNLGQRCVSADIFVAEADMRDKGIVPGTAQFKHAH EEDWPSDESDDEDFDQGGHSDDGRDDEHEALSGSAQSSSDESSSESESDLIIEGPRRRTKVDYVAL NNAMFGDSEAYEGEAEELGWKRSNKTKAEMLAALKGESANGITNGATKKDPKSKRSKRERVDEKSP APRVRFTPDQKLELERVFSECASLDIDARDALAKRLGIPGGANSIKIWFMNRRRRAKILGERXYXQ HDNPRPARSFDASSQTTSEKPSSHLRSSRASQTCRSPLNAPPNSYTSPRGSARSPIERRSRWSITR TAERFPTSGRNRSVRSRFVDIXRSNATKLERLDXPETNRRVGWEKRKSTSSEVKTKHENWYHYKSP ELLRHNPLGMVPTLVTPATYEDKDGDPSRNWTESLVCVQFIDELVRGNAYAGETAAIMPS DPYAR AKARVDADWVNKNVCSRYYHVLVRQEASEQREAFEKLVEGLETFAAWCGSGEGKFYGGQTTPGLVD YALFPWAWRLPVFEHYRGMDFKIPRTAALKSYHDWMEAMLAREQVRKTLPPWDDYLEHIGRYADGS ARSKVANÀVRSGRAAHDYDDKEDNTDS
seqüência de ácido nucléico parcial Aquilegia formosa χ SEQ ID N°: 223, Aquilegia pubescens de PHDf_HD contíguo de DR914726.1, DR941696 l' DR943570.1 " '
ATGCAAGATGGTGGGAACCTTGGTTTTCCAAAGAAACGTGTTGGATCCCAAATAAATACCTCATTT CAGAAGAAGAATAGTTGCAAAAATCCGCATATTAGGAGATGGAAACCAAAGCCAAGATCTCATGTC AAGACAATTGCTTCGTTCTTGTCGAAGAGAAAGACATCTGAGCTCTCAAGCAACAGAGCCAGAAAT AAATGTTCCAATGGAAAACCTTTTAGAAGAAGAGCGTCACAGAAACCCAATGATACCAGTCCTTCT GATAGGCCACTTTCATCAATGCTTAAAGATTTCAAATCGTTAAGCAATAAATGTCAGGGACGTGAA AAGACAACTGACAAGGATCTTGGAAGTCAAAAGGCTCACAGAAGGAGAAGGAGCAAGAAGAGGAAG AATGAGGAGTTAGATGAAGCCGCTCGAGTCCAAAGAAGAACAAGGTACCTCCTGATTAAAATGAAG CTGGAGCAGAACCTTATTGAGGCTTACTCTGGGGAGGGTTGGAAAGGCCAGAGTCGTGAGAAAATT AAGCCAGAAAAGGAACTGCAAAGAGCCAAGAAGCAGATATTGAAGTGCAAACTTGGAATTCGTGAT GCTATTCGTCAGCTGGAATCTCTTAGTTCTGAGGGAAGCATTGAAGATTCTGTGATAGGTTCAGAT GGATCTGTTTTCCATGAACATATTTTCTGTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAGCATTTCCAGAT AATGACATTATACTGTGTGATGGAGCATGCAATTGTGCTTTCCACCAGAAATGCCTGGAGCCTCCA TTAGCCACTGAAAATATTCCTCCTGGTGATCAAGGGTGGTATTGCAAATTTTGTGAGTGC AAGATG GCAATACTTGATGCAATCAATGCACATCTTGGGACTCAGTTTTCTCTAGACAGTAAATGGCAAGAT ATTTTCATGGAAGCAGCTAATGCACGCGATAATGAGGATATCTCAATTCATCCTGATGGTGACTGG CCATCTGATGACTCTGAAGATGTTGATTATGACCCAGAAAAATATGAAATTGATTGCAGCTATAGC AGAATGGGCTCGGAGCACAACGTGTCTGACGATGCAAGTAGTTCCGGCACCTTGTATTGGACTTCC GAAGAAGATGATGGTTTGCATTCTGAGCGATTCAGAACTGATGGTAGTCTGGAGGGGGGATTTTAT GGGGATAAAACTAAAATCCAGAGTTCTGATAGCATAGATTCCAATGACAGTACTGATGGTATGGCA TTTCATCGTAGGCAGCGAAGAGATGTTGATTATAAGAAACTGCATGATGAAATGTTTGGTAAAGAT ATGCCTGAAAGTGAAGAAATCAGTGAAGATGAAGATTGGGGACCTAGAAGAAGAAAGCGCAGAAGA AATGAGTCTAATGCAGCCACTACTTTAGTATCTTCGTGTGGTACTGAGAATGAATTTTCGAATGTG GCACTTNNNNTACCATCAAGAGTGGTCAGGGAGAGTCTCTCGAAGCAATTGGGTATTGCAATTGAG AAGATCAACAAGTGGTTCAAGAATGCTCGGTATACAGCTTTAAAAATTAGAAAGGCAGAAAAGACT
FIGURA 19 CONT. GAACAATCCCCTGGAGGTGGCAAGATGCAAAGTGCTGACGTATTAACATCAAAGGAAAACCATTAT TTGGTCTCAACAGGAACAGCAGTCCAAAGATCCAAAGTTTCGAGTGTCCATAGAAGTAAAAACCGT AAATTGACAACCACACCCTCAAGGGAAGTACAAGAGAAAGTGTCTGCTGTTGCACCATCCGCTACT GCAAATGAGGTGAGTGTACAGTTAAGAAAAGCAGTGAGCGTAGAGAAGGAAATGGGCAGTGTAAAA AGAAAATCTGCACAAGTAAAGAGGATCAAGCGCACATGCTCCACTAAGGAGCAGCAGCTATACATG ATTGAGTTGGAGAGAATTTGCCGTCTTGAGGAGAAGCTTGAAAAGATGAAGAAGGTATTGCTTAGT ATAGATGACAATCATAGTAATGTATCAGATGGACCCCATATGAACGAACAGTCTGCCGTATACATT CCAGTTGCAGAGCTAAGAGAAAAGATGTGA
SEQ ID NO: 224, seqüência de polipeptídeo traduzida parcial de PHD HDde Aquilegia formosa χ Aquilegia pubescens
MQDGGNLGFPKKRVGSQINTSFQKKNSCKNPHIRRWKPKPRSHVKTIASFLSKRKTSELSSNRARN KCSNGKPFRRRASQKPNDTSPSDRPLSSMLKDFKSLSNKCQGREKTTDKDLGSQKAHRRRRSKKRK NEELDEAARVQRRTRYLLIKMKLEQNLIEAYSGEGWKGQSREKIKPEKELQRAKKQILKCKLGIRD AIRQLESLSSEGSIEDSVIGSDGSVFHEHIFCXXXXXXXXAFPDNDIILCDGACNCAFHQKCLEPP LATENIPPGDQGWYCKFCECKMAILDAINAHLGTQFSLDSKWQDIFMEAANARDNEDISIHPDGDW PSDDSEDVDYDPEKYEIDCSYSRMGSEHNVSDDASSSGTLYWTSEEDDGLHSERFRTDGSLEGGFY GDKTKIQSSDSIDSNDSTDGMAFHRRQRRDVDYKKLHDEMFGKDMPESEEISEDEDWGPRRRKRRR NESNAATTLVSSCGTENEFSNVALXXPSRVVRESLSKQLGIAIEKINKWFKNARYTALKIRKAEKT EQSPGGGKMQSADVLTSKENHYLVSTGTAVQRSKVSSVHRSKNRKLTTTPSREVQEKVSAVAPSAT ANEVSVQLRKAVSVEKEMGSVKRKSAQVKRIKRTCSTKEQQLYMIELERICRLEEKLEKMKKVLLS IDDNHSNVSDGPHMNEQSAVYIPVAELREKM
SEQ ID NO: 225, seqüência de ácido nucléico parcial de PHD HDdeGIvcinemax Contig GM06LC25006 ~ '
AAGAAGAAAAGACAAAGGAATAACATAGATGTTGATGATGCTTCACGCTTGCGAAGGAGAACAAGG
TACCTCTTAATCAAAATGAAGCTAGAGCAGAACCTTATTGATGCTTACTCTGGAGAAGGTTGGAAA
GGTCAAAGTCGGGAAAAGATTAGGCCAGAAAAGGAGCTACTACGAGCAAAAAAGCAGATTTTAAAA
TGTAAACTTAGTATTCGCGATGCCATACACCAGCTGGATTCTCTTAGTTCTGTGGGTAGCATNGAA
GATTCTGCCATTGCTCCAGATGGATCTGTTTATCATGAAAATATATTCTGTGCCAATTGCAAACTA
CATGAAGCTTTCCCAGATAATGATATTATACTCTGTGATGGCACTTGCAATCGTGCTTTTCACCAA
AGATGTCTCAATCCTCCTTTGGATACTGAAAATATTCCTCCTGGAGATCAAGGCTGGTTTTGCAAG
TTTTGTGAATGTAAGATAGAAATACTAGAGGCAACAAATGCCCATCTTGGGACTCAATTCTCCCTA
GACAGTAATTGGCAGGATGTATTCAAGGAAGAGGCTGCTATGCCTGATGGTGACATTGCATTACTA
AATCCTGAAGAAGAATGGCCATCAGACGATCCTGAAGATGATGATTACAATCCAGAGAGGAAAGAA
GACAACCACAACTTTGACACAGAAGGAGCTGATGAAAATGCATCCAATGATTCAACCAGTTGTTCC
AGTCTGTTGTCTTTGAATGGCGAATGTCCTCCAGTAGATGAAGGCATCTGTCATGAATATTATTCT
GTTAATAGCTGCTTAGATTCTGATGAATCTGGGGAAATAGCATGTGGTCCTAGGCAGCGTAAAGCT
GTTGACTACAAGAAACTCTATGATGAAATGTATGGGAAGGATGCTCCACCTTGTGAACAAATGAGT
GAAGATGAAGACTGGGGTCCTGGCAAAAGAAAGCGAAGAGAAAAGGAGTCTGATGCTGTTGATTCT
CTTATGACTTTGCATGAAAGTGAGAATAGGCATCCCAATAATGAGCACAACATGACAAGTAAAGAT
TCTTCAAGCATAAAGATCAAAAGGCATTGTTTTAGGATTCCACGTGATGCAGTTGAGAGGCTTCGC
CAAGTTTTTGCTGAGAACGAACTTCCTCCAAGATCTATAAGAGAGGGTCTTTCAAAAGAGCTGGGC
CTTGACACCGAGAAGGTCAGCAAATGGTTCAAAAATGCACGTTACTTAGCACTTAAAAACAGAAAG
CATCAAGCAGAAGGAGGAGCAGATCAGCTTCAGAGTATCACTTCTACAAAGAACAGATTACAAAAA
CAGGAGAATGTCGATCCTTTGAAATCAAAGACCCCAAAAATTACTAGGACACATTCCCAGAAGGAT
GTTAAAAATGTCAATGGAAGAAAGAAAATGAAGTCATCTAACAAGAAAAGACAACCAGAAATTCCT
CCACCTCCAGGAGAAAATGGCAAGAAGGACTTTATGGAGATCAGTGATGATGTGAGCTTGAAGAAA
FIGURA 19 CONT. CTGTTGAAGAAAAGAAAGAAGAGGTTGATAAATTTTACGTTTGGAGGAGACTCTCAGTTGGCAGAG TTGGAATTTGAAAGACTAAGCGAATTGAAGACTAAAGTAGATAGTATGAAGCAAAAATTAACTGCA ATTCAAAATTACAGAGTTAAGGGTTCACCCTATTCGAATGAACCATCCATTGTATATGTACCCACA GCTGTGTTAAGGGAAAAGGTTGAATGA
SEQ ID NO: 226, seqüência de polipeptídeo traduzida parcial de PHD HDde Glycine max -
KKKRQRNNIDVDDASRLRRRTRYLLIKMKLEQNLIDAYSGEGWKGQSREKIRPEKELLRAKKQILK CKLSIRDAIHQLDSLSSVGSXEDSAIAPDGSVYHENIFCANCKLHEAFPDNDIILCDGTCNRAFHO RCLNPPLDTENIPPGDQGWFCKFCECKIEILEATNAHLGTQFSLDSNWQDVFKEEAAMPDGDIALL NPEEEWPSDDPEDDDYNPERKEDNHNFDTEGADENASNDSTSCSSLLSLNGECPPVDEGICHEYYS VNSCLDSDESGEIACGPRQRKAVDYKKLYDEMYGKDAPPCEQMSEDEDWGPGKRKRREKESDAVDS LMTLHESENRHPNNEHNMTSKDSSSIKIKRHCFRIPRDAVERLRQVFAENELPPRSIREGLSKELG LDTEKVSKWFKNARYLALKNRKHQAEGGADQLQSITSTKNRLQKQENVDPLKSKTPKITRTHSQKD VKNVNGRKKMKSSNKKRQPEIPPPPGENGKKDFMEISDDVSLKKLLKKRKKRLINFTFGGDSQLAE LEFERLSELKTKVDSMKQKLTAIQN YRVKGSPYSNEPSIVYVPTAVLREKVE
SEQ ID NO: 227, seqüência de ácido nucléico parcial de PHD_HD de Lotus corniculatus AP004517
ATGCAGGGTACTGAGAAGTTAAATGGCACAGGATCTACAAAATCCAGTAACTCAGAGGAACATGCT
GAGTCAAAGGTAGATTCATTGAGATACAGAACAAATATAACAAAATGCCGAGGGAAGAAACAAAAA
CTGAAATCAAAATCTCATAAACTCAGCGGTTGCTTAAGTGCATCAGGGAGGACAGTTACCAATTCT
TCCATCAAGAGACAAGTAAAGGATTCTTCTAATAAAAAGATTATTAGACAAAGTCTACATAAAACT
GATGGCAAATCTTCACGGATGCTGTCTTCAACAATGATACAAGGAGGAAAATCTTCTCTTGGTTCT
AGAAAGGAGGGCAAAGATGTTGATGGGGAGGTAATGGTTCAAAAAGTTAAAAGAAAGAGAAAGAAG
AAAAGGAGACAGGATGATGTTGATCTTGATGATGCTTCACGCTTACTGAGAAGAACAAGGTACCTC
TTAATCAAAATGAAGCTAGAGCAGAATCTTATTGATGCTTACTCTGGAGAAGGTTGGAAAGGTCAA
AGTCGAGAGAAGATTAGGCCAGAAAAGGAGCTACAAAGAGCCAAGAAGCAGATTTTGAATTGTAAA
CTTAGTATTCGGGATGCCATTCGCCAGTTAGATTCTCTTAGCTCATTGGGCAGCATTGAAGATTCT
GTCATTGATCCAGATGGATCTGTTTATCATGAACATATATTCTGTGCAAATTGCAAGTTGCGTGAA
GCTTTCCCAGATAATGATATAATACTCTGTGATGGCACATGCAATCGTGCTTTTCACCAACGGTGT
CTCAACCCTCCTTTGGATACTGAAAATATTCCTCCTGGAGACCAAGGCTGGTTCTGCAATTTTTGT
GAATGTAAGATAGAAATATTGGAGGCAACAAATGCCCATCTTGGGACTCAAATCTCCTTGGACAGT
ACTTGGCAGGATGTATTCAAGGAGGAGGCTGCTATACCCGATGGTGATAATGCATTACTGAATCCA
GAAGAAGAATGGCCATCAGATGATCCTGAAGACGATGATTATTATCCAGAGAGGAAAGAAGACAAC
CACAGCATCAAAGCAGAAGGAACTGATGATAATGCATCCAATGATTTAAGCAGTTCTTCCAGTCTA
GGGTCTTTGAATGGTGAATGTTCTCCAGTAGATGAAGGCACGGGTCTTGAATATTATTCTGTTAAT
TGCTGCATAGATTCTGATGATTCTGGGGAAATAGCATGTGGCCGTAGGCAGCGTAAATCTGTTGAC
TACAAGAAACTATATGATGAAATGTTTGGGAAGGATGCTCCTCCATGTGAACTAGTGAGTGAAGAT
GAAGACTGGGGTACTGGCAAAAGAAAGCGAAGAGAAAAAGAGTCTGATGCTGTTAATACTCTCATG
ACTATGCATGAAAGTGAGAACAAAAATCCCAATAATGAGAATAGTGATGGAATAAGAGAGGGTTCT
TCAGGCAAACCAATAAGAAGGTCTTGTTTCAGGATTCCACATGATGCACTTGAGAAGCTTCGCCAA
GTTTTTGCGGAGAATGAGCTTCCTCCAAGATCTGTCAAAGAAGGTCTTTCGAAAGAGTTGGGAATT
GATGCTGCGAAGGTTATGCCTTACAACCTC
FIGURA 19 CONT. SEQ ID NO: 228 , seqüência de polipeptídeo traduzida parcial de PHD HDde Lotus corniculatus
MQGTEKLNGTGSTKSSNSEEHAESKVDSLRYRTNITKCRGKKQKLKSKSHKLSGCLSASGRTVTNS SIKRQVKDSSNKKIIRQSLHKTDGKSSRMLSSTMIQGGKSSLGSRKEGKDVDGEVMVQKVKRKRKK KRRQDDVDLDDASRLLRRTRYLLIKMKLEQNLIDAYSGEGWKGQSREKIRPEKELQRAKKQILNCK LSIRDAIRQLDSLSSLGSIEDSVIDPDGSVYHEHIFCANCKLREAFPDNDIILCDGTCNRAFHQRC LNPPLDTENIPPGDQGWFCNFCECKIEILEATNAHLGTQISLDSTWQ DVFKEEAAIPDGDNALLNP EEEWPSDDPEDDDYYPERKEDNHSIKAEGTDDNASNDLSSSSSLGSLNGECSPVDEGTGLEYYSVN CCIDSDDSGEIACGRRQRKSVDYKKLYDEMFGKDAPPCELVSEDEDWGTGKRKRRE KES DA VNTLM THHESENKNPNNENSDGIREGSSGKPIRRSCFRIPHDALEKLRQVFAENELPPRSVKEGLSKELGI
daakvmpynl
SEQ ID NO: 229, seqüência de ácido nucléico parcial de PHD_HD de Sorghum propinquum BF656332
AACTCGAGAACAAATGAAGAAAAATCTGGTATATCAGGGAAGATTGATTCAGTAGACAACTCTTGC TTGGTTCCCTTGTCTGAAATCATCAATGTGCATACACGAGTGCACCACAATCTTGAGATGAGGAAG
atggaatcaactagcagtcctgtgtggctgcacaatgaaggagfíftnrttfttttma -λ
xx^üiiuuuTrbXUTüAAATCATCAATGTGCATACACGAGTGCACCACAATCTTGAGATGAGGAAG ATGGAATCAACTAGCAGTCCTGTGTGGCTGCACAATGAAGGAGGCTGCTTGTTTCCAACACTCCAA GCCAAGGAGAGTACATTACCTACAAGCAAGCCTTGTTTGCCGTCAGAAATAACCCATCCAACAACT AATGAAGTGAGCACTTTAGTGCAAGCTACTTCTTGGATGGATGCTGGGGCGTGCATTGAGCAGCAA GAAACCACTCCTTGGGTGGATACCGGGGCCTCAGGTTACCAGCCTTTCCTGGACGTGATTGATGAG ATGTGCGGACTTGAGTGCAGGCTGCAGAGGCTGAAGGAGAACATGTTCTCATCTGGCATGGACGGC AGAACCGCCGGTGTGAGTGACATGGGAAACCAGGCTGTGGTGCTTGTGCCGACTGCTGAGCTCAAG GAAAAAGCGCCGCATGGCGGTTTATTTGGGCACTATTGCCCATAG
SEQ ID NO: 230, seqüência de polipeptídeo traduzida parcial de PHD HDde Sorghum propinquum ~
NSRTNEEKSGISGKIDSVDNSCLVPLSEIINVHTRVHHNLEMRKMESTSSPVWLHNEGGCLFPTLQ AKESTLPTSKPCLPSEITHPTTNEVSTLVQATSWMDAGACIEQQETTPWVDTGASGYQPFLDVIDE MCGLECRLQRLKENMFSSGMDGRTAGVSDMGNQAWLVPTAELKEKAPHGGLFGHYCP
SEQ ID NO: 231, seqüência de ácido nucléico parcial de PHD HDdeSorqhum propinquum BF704605 - a
piupmifuuiii driu4du3
AAGAT AAAATTGGAGCAGAATCTACTAGATGCTTACTCTGGAGATGGATGGAATGGGCAAAGCCGG GAGAAAA TAAAGCCAGAGAAGGAACTGCAGCGTGCCAGGAAACAAATCATAAAATGCAAAATTGCT ATACGTGATATCATTCGCCAACTTTGTTTGTATACTTCTACTGGGAGTGTTGATGACCCAGCAATG CCTCCAGATCAGTTTACCAATCCCGAACATACCATGTGCTCAACATGCAAGTCTCATGAATCATTT CCCAGCAATAAATTTATCTTCTGTGAAGGGCCCTGCAAAAGGGCATATCATGAGAAATGTTTGGAA CCTCCCTTAAACAAAGGTGTACTTCCAACAAGTAGCCATGGATGGCTTTGCAAATTCTGTTTGTGC AAGGTGAAAATTTTAGAAACTATTAATGCACATCTAGGAACAAGTTTTACAGTGATGTGCTCCTTT GAAGATATATTCAAGGAAGCAACAGAACAAATAGACTCCGAGGATGCACTAGATGAAGATTGGCTC
tctg
SEQ ID NO: 232, seqüência de polipeptídeo traduzida parcial de PHD_HD de Sorghum propinquum
KIKLEQNLLDAYSGDGWNGQSREKIKPEKELQRARKQIIKCKIAIRDIIRQLCL YTS TGSVDDPAM PPDQFTNPEHTMCSTCKSHESFPSNKFIFCEGPCKRAYHEKCLEPPLNKGVLPTSSHGWLCKFCLC KVKILETINAHLGTSFTVMCSFEDIFKEATEQIDSEDALDEDWLS
FIGURA 19 CONT. SEQ ID NO: 233, domínio de dedo de homeodomínio de zíper/planta (ZIP/PHDf) compreendido na SEQ ID N°: 180
DEVSRMEKRARYLLIKIKQEQNLLDAYSGDGWNGHSREKIKPEKELQRAKKQIMKYKIAIRDVIHQ LDLCSSSGSKDDSVIPPDGCHESVNPEHTICSRCKSHESFPDNNIIFCEGGCKLACHQKCLEPPFD KILPTTRHGRLCKHCSSKMKILDAINAHLGTSFTVKCPSSDIFKEAAE
SEQ ID NO: 234, homeodomínio, compreendido em SEQ ID N°- 180
RIPPAAVEVLRKAFAENELPARSVKENLSTELGISFEKIDKWFKNTRCAA
SEQ ID NO: 235, promotor GOS2 de Oryza sativa
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT
AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT
TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT
GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG
AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT
AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA
CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA
CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG
ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT
ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC
TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAATAATTTT
ACAGAATAGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT
TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA
GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG
GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAAGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA
ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG
GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT
CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT
ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC
TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT
ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT
TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC
GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC
CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT
AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGCTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA
AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT
TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG
CTTTTATAGCGTTATCCTAGCTGTAGTTCAGTTAATAGGTAATACCCCTATAGTTTAGTCAGGAGA
AGAACTTATCCGATTTCTGATCTCCATTTTTAATTATATGAAATGAACTGTAGCATAAGCAGTATT
CATTTGGATTATTTTTTTTATTAGCTCTCACCCCTTCATTATTCTGAGCTGAAAGTCTGGCATGAA
CTGTCCTCAATTTTGTTTTCAAATTCACATCGATTATCTATGCATTATCCTCTTGTATCTACCTGT
AGAAGTTTCTTTTTGGTTATTCCTTGACTGCTTGATTACAGAAAGAAATTTATGAAGCTGTAATCG
GGATAGTTATACTGCTTGTTCTTATGATTCATTTCCTTTGTGCAGTTCTTGGTGTAGCTTGCCACT
TTCACCAGCAAAGTTC
SEQ ID NO: 236, prm09687
GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAAACAATGAATACCCCAGAAAAGAAA
FIGURA 19 CONT. SEQ ID NO: 237, prm09688
GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTGATGCAAGGTTAAGATGCTTT
SEQ ID NO: 238, seqüência de ácido nucléico de Phypa_PHD-HD XM de Physcomitrella patens XM_001762483.1 ~
ATGATGAAGAATTACCGTCCTCCATCACCACTTCCAAGTGCTCGCCAAGCTTTCTTACAAGACCCG
GCGTCGTCATTCCAAATGACAGGACGACATTGGGCAGACCCAGAGGGAGGTGGAGAACGGAAGCTT
CACACACACTCTCACTCACACTCACTCACTCACGAAGGAAACGAAGGGCAAAGGAAGGGGAGCCCC
GCCGTGAGCCGAGAGCGGAGAGCAAGCATTCCCAACGGAAGTCTCCGTCAATGCGGTGCCGGAGCC
GACGACGACGACGATGATGGGCTGAGCCTGTCATCGCAATGGATGCATTGCCCTGTAAGTGGGAAG
GTGGAGGAAGGATTGGGGAAGAGGTTGAGGAAGAGAAAGAGAAAGAGAAAGAGTTTGTTGTTGTTG
TTGGGGAAGGGGAGGGGGCGACGGATGATGCCCATGGGCGTAGTCCGCGACGATGAGTCCCAGGCC
GCTGCTGGCTCGCCGCCTGCGCCCACCCCTCCCCCAATCGCCAAGCCGACGCTGCGATCCCACTCG
CGCTCCAGGGCGCACAAGGCGCGCTCCCAACACCCGCCGCTGGGCGATGGCGATGCGCCCTTGCCC
CCACCGCAAGGAACAGCAACACCAGGAGGAGGAGGAGCAGCAGCAGTGGGCGCACCAGGGGCCATG
GATGCCGAGGCTATGGCGGCGGGGCAGCGGCGGCGTCGACGACGCCGACGACAGCGGGGCAAGAAC
TCGGATGTGCCGCTTGACAATCGCACGCGAATTAAGAGGCGTGTCAAGTACTTGCTCATGAAAATG
CGAGTCGACCAGAACCTGCTGGATGCGTACTCCGGGGAGGGTTGGAAGGGGCAGAGGAATTCTCTT
TTTGGCATATCCAGTCGGGAAAAGATCAGGCCGGAGCAAGAACTACAGCGTGCTGAAGCGCAGATC
CTGCATTCGAAATTGGCCATACGGGAGGCTATTCATGAATTGGATAACTTGGGGTTAGAAGGCTCG
CTCGACGAAAATGCATTTGATGCTGAAGGCCGTGTTTACCATGAAGAGATATTTTGTGCCAAGTGC
CGATCTCAAGATGCTCTACCTGACAACGACATTATTTTATGTGACGGCGCATGCAACAGAGGCTTC
CATCAGTACTGTTTAGACCCACCTTTAGCTACGATCAACATTCCTCCTGGAGACGAAGGGTGGTTG
TGTCCTGTATGTGAGTGCAAGATGGAGTGCATTGAAGTTATTAATGCATACTTGGGCACACACTTT
GAGGTGGAGAATAGTTGGGAGGAGTTGTTTTCTGAAGAAGCTCTCGTGGCTGCGGGCGGTAGAACT
CAAGGGGTCACAGATGGTGATTTTCCTTCCTCAGACTCAGAAGACGACGATTATAACCCTGAAGGA
GCGGAGAAGCGGACAGACAGTGAAAGCGAAGGCGAAAGTGATGAAGGTGGGGGAGATAGTGATTCA
GGAAGCGATTTTAGGGAAAATGAAGCGTCTGGTAGTGACAAAGATGAGCAAGATCCAATGCAGGCA
ACTAATTTAGAGAGACTTGCGAGAACAGCAAAGCGGACCAGCAAGGAAGGAAGTGGAGGTCCAGAA
TCTTCAGGCAGTGATGACTCAGAAGTTTTTCTTGTTGATGGGTTTACGGATGGTGGAGTCAAATTA
GGTTTAAGACGTAGAGACTCACAAGCAGAAGAATCAGCTTCAGACGAGGAAACCATGGTTATAGCA
GGAAAAAGACATCGAAAAGCAGTAGACTACAAGAGATTACATGATGAAATGTTTGGGAACATGGAG
ATTGATGTGGACGATATCATATCCGAAGATGAGGATTGGGGTCCGAAACGCCGTCGGAGAAGAACC
ATTCCTGATGACCCAAGCAGGTCTAGACCTCCTCGAGTTCGACGGAGAAAGGCGCGAACCTCAACT
GGAGATGCTTTAAAAGAAGTTGATGCAGATGGGGTACCATCAGATTTACCCTCTGGGTCACAAGGC
GAGGGAGCAGCCGATACTCTTGAAGCTGTTAGAGACAAACGAATGTGGAGGAAGTTGCCTGATTCT
GCTGTTGAGACGTTACGACTGGCTGCGGCAGTGACGACACTGCCCTCAAAATCCCGTAAAGAGGAG
TTGGCGACACAGCTTGGCTTGAGTTTTTCACAAGTCCATGGATGGTTTAAAAATCAGCGGTATTTA
GCTCTCAGAAATGGGTTGGCGATTTCAAAGCGACCAGCAGCTGGGCGGATGGCGGCCACTGTAACC
ATACAATCGGAACACGACAACAATTCAAGTGCCTATTTAACTGAGAAGTTGGATGAAGTCCAAATG
CGACTTTTTGAACTGAAGCAAACTTTGGAAGATTTCGCTAAGAATTCATCTGGTTTAGGCGGTGGA
GAATCAGATAACAGTTTTGAAAATGGAGGAATTGGACTTCCTGCAAATGGGAAACGGATTATCTAT
GTCCCAGTGGCTGAGGTTAGAGAACGGCCTTCTCTTTTCTCTGACAGCTGTCCGCTTTCATTATTA
GCAGTGTTAAATTGCGAGGTGAATTACAAGAGGAATCTACGTATATTCATGTGTTCATGGCCTAGC
TGCTTAGCGTACGGGGTTTTGCATGCCAACTGCCCTTGTCATATTGGATCATGTTTCGAAGGAATA
GGTGGGTGA
FIGURA 19 CONT. SEQ ID NO: 239, seqüência de polipeptídeo traduzida de Phypa_PHD-HD de Physcomitrella patens
MMKNYRPPSPLPSARQAFLQDPASSFQMTGRHWADPEGGGERKLHTHSHSHSLTHEGNEGQRKGSP AVSRERRASIPNGSLRQCGAGADDDDDDGLSLSSQWMHCPVSGKVEEGLGKRLRKRKRKRKSLLLL LGKGRGRRMMPMGWRDDESQAAAGSPPAPTPPPIAKPTLRSHSRSRAHKARSQHPPLGDG DAPLP PPQGTATPGGGGAAAVGAPGAMDAEAMAAGQRRRRRRRRQRGKNSDVPLDNRTRIKRRVKYLLMKM RVDQNLLDAYSGEGWKGQRNSLFGISSREKIRPEQELQRAEAQILHSKLAIREAIHELDNLGLEGS LDENAFDAEGRVYHEEIFCAKCRSQDALPDNDIILCDGACNRGFHQYCLDPPLATINIPPGDEGWL CPVCECKMECIEVINAYLGTHFEVENSWEELFSEEALVAAGGRTQGVTDGDFPSSDSEDDDYNPEG AEKRTDSESEGESDEGGGDSDSGSDFRENEASGSDKDEQDPMQATNLERLARTAKRTSKEGSGGPE SSGSDDSEVFLVDGFTDGGVKLGLRRRDSQAEESASDEETMVIAGKRHRKAVDYKRLHDEMFGNME IDVDDIISEDEDWGPKRRRRRTIPDDPSRSRPPRVRRRKARTSTGDALKEVDADGVPSDLPSGSQG EGAADTLEAVRDKRMWRKLPDSAVETLRLAAAVTTLPSKSRKEELATQLGLSFSQVHGWFKNQRYL ALRNGLAISKRPAAGRMAATVTIQSEHDNNSSAYLTEKLDEVQMRLFELKQTLEDFAKNSSGLGGG ESDNSFENGGIGLPANGKRIIYVPVAEVRERPSLFSDSCPLSLLAVLNCEVNYKRNLRIFMCSWPS CLAYGVLHANCPCHIGSCFEGIGG
SEQ ID NO: 240, seqüência de polipeptídeo traduzida de Phypa_PHD-HD Il de Physcomitrella patens XM_001779822.1
ATGGTGCCGACGGGCGTGGTGGAGCGGGAGGACCAGCCTGAGCCTGCTGCTGCCCCCCCAGTGCCG
GTGATTACACCCAAGACGCTTCGATCGCACTCTATCAGGACGCAGACCACGCCAGGTGATGGCGAT
GCTGGTGCGGATCATGCTCCTGGAGCAGTGGCAGCAGCAGCAGCATCAGCAGGAGGAGGAGGAGCA
GCGGATGTCATGCAAGGTAACGATGCGGGGCAGGAACGGCGAGGACGACGGCGCGGGCGACGGAAG
AAGTCAGACGTGCCGCTCGATAATCCCACGCGAATCCTAAAGCATGTCAAGTACTTGCTCATTAAA
ATGCGAGTCCACCAGAACCTGCTCGATGCGTACACAGGGGAGGGTTGGAAGGGTCAGAGTCGCGAG
AAGATCAGGCCGGAGCAAGAACTACAACGTGCGAAGGCGCAGATACTGCGATCTAAGTTGGCCATA
CGGGAGGCTATTCATGAACTCGATGACGTGGGTTTAGAAGGTTCTCTCGACAAAAACGCTTTTGAT
TCTGAAGGTCGTATTTACCATGAAGAGATTTTTTGTGCGAAGTGCAAATCCCAAGAAGCTCTTCCT
GACAACGACATTATCTTGTGCGACGGGGCGTGCAACAGAGGCTTCCATCAGTATTGCTTAGACCCA
CCTTTAGCTACGGAAGACATTCCTCCTGGAGATGAAGGATGGTTATGCCCTGTATGCGACTGCAAG
ATGGAGTGTATTGAAGCGATAAATTCATATTTTGGCACCAGTTTTGAGGTCGAGAATAGTTGGGAG
AGCTTTTTTTCGAACGAAGCTGGTATAGCTGCAGGCGGTGGAACGCAAGAAGGGGCTGGTGGTGAT
TGGCCTTCCTCAGGCGATGAAGATGATGAGTATGATCCAGAAACAGCGGAAGGGCCTTCTTCAGCT
TCTGAAAGTGGAGCTCAAGTAATAGGGCTTGCTGTTGACTGGCCGTCCTCAGACGACGAAGATCAC
GACTATGATCCGGAAGCAGCGGAAGAACCTCCTGGAGCTTCTGGGAGTGGAACTCAAACAGTAGGT
CTTGACGTTGATTGGCCTTCCACAGACGATGAAGATGACGACTTTGATCCAGAAGGTATCAGAAAG
CAGGCAAACAGTGACGAAGAAAGTAGTAGTGATGAAAGTGAGGAGGACGGGGAGGATAGTGGTTCT
GTAAGCGGCTTCAGGGAAAATGAGGCGTCTTCAGGTGTAAGTGACAAAGATGAGCAGGAGCCTAGT
GAAAAACATAATCTGGAGCTAACTGCTGTCACTAACATCAAGAAACTTGCAAGAAAAGGAAAACGT
AACAT AATCAGCAACAAAGGAAAAAGTGAATATTTAGAGTCTTCAGACAGTGATGATTCTGATGTC
TCTCTTTTTGACGAGTTCAAGGGTGGTAATGCCAATTTAGGCTTAAGACGTGGGGATCCACAGGCA
GCAGTATCAGCAGCAGACGAGGAAGCCGTGATTATTGCTGGGAAAAGACATCGGAAAGCTGTGGAC
TACAAAAGACTACATGATGAAATGTATGGTAAAGCGGAGGCCGATAACGATGACGACGTTATCTCT
GAGGATGAAGATTGGGGTCCTGAACGTCGCCGAAGACGAACCATTCCTGATGATCCTAACTCGCCA
AGGTCCCGAATTCGAGGTAGGAAAGTGAGAACTCCAAGTGGAGATATTTCTAAAGGAGCCGATGCA
GATTTACCCTCTGGATTACCAGATATGCCATCCCACTTTCCCACTGGTTCACAAGGTGAAGTAGGC
TCACCACAAGACATTCCAGCACTAGATGGAGCAGCTGACAGTCCTGGAGGAGAAAAGCGGATGTGG
CGGCGATTGCCTGATTCCGCAGTCGAGGCATTACGGTGTATTCTTGATGTTAATAGGCTGCCCTCA
FIGURA 19 CONT. ^r^^gaaggaag^ttagc^tt^gcttgggttgagcttttcacaggttcatggatggttt ^^fCGGCATCAAGCTCTGAGGAAAGGGTTGGCATGTCCTAAGGGGATACATCCAGTAGCA
ctcctcgaattgaagcaagcgttggacgattttaccaagaatgcagcagtggttgcggatggcgga agtattgaattggataacaacgtggaaaacggaggaattggacttcctgaaaatggaaaacgtgtt
gtctatgtgccagttgtggccgacgttagggaacaatcaccaatgagt^^^
SEQ ID NO: 241, seqüência de ácido nucléico proprietária de Zeama PHD HD de Zea mays ~~ _
^^redqpepaaappvpvitpktlrshsirtqttpgdgdagadhapgavaaaaasagggga advmqgndagqerrgrrrgrrkksdvpldnptrilkhvkyllikmrvhqnlldaytgegwkgosre
nMnxT?^h^KAQILRSKLAIREAIHELDDVGLEGSLDKNAFDSEGRIYHEEIFCAKCKSQEALP
^^m^™cnrgfhqycldpplatedippgdegwlcpvcdckmecieainsyfgtsfevenswe sffsneagiaagggtqegaggdwpssgdeddeydpetaegpssasesgaqviglavdwpssddedh ppgasgsgtqtvgldvdwpstddedddfdpegirkQansdeesssdeseedgedsgs 3sgvsdkdeqepsekhnleltavTnikklarkgkrniisnkgkseylessdsddsdv
slfdefkggnanlglrrgdpqaavsaadeeaviiagkrhrkavdykrlhdemygkaeadndddvis spqdipaldgaadspggekrmwrrlpdsavealrcildvnrlpsksrkeelaiklglsfsqvhgwf
™^LRKGLACPKRIHPVASSSRDFNTVESPSSVATLTESTLPQKENAPNSILTEKLDEVQVR
llelkqalddftkn aa wadggsieldnnvenggiglpengkr wyvp wadvreqs pms thtsac SEQ ID NO: 242, seqüência de ácido nucléico proprietária de Zeama PHD HD
de Zea mays ~~ -
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Í^^TAGACCTGATGCTTCCCACCAATGCAAATCTGATTCCTTTATGAAGCGATCACCAAGG ^™G^TGCTACTCTGGCAA^^
a gg^gggttgagattctgttcctgggaaaatcgtaagaggactaaccgcaaggaa^ aggaaaatccaaattacagacgaggcaactcgtttggaacgaagagcgagatattttctaatcaag
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gatatattcaaggaaactactgaactaatagactctgaggatgcactagatgaagattggctttct
gagtattcaggtgatgaggactatgatcctgatgaaaatgaggccagtggcgactgtatggacagc
ggggagaagattatgtctgatgattccaatggttcaggaagccccctttattctccaaatgacgat
attcctgacttcatatcagcagacttaaatgttgtggaagggttttgtcataccaatttagattta
ggcattgatgccgttgaagatgattttgcacagatcctcacctaccaaaggccaagaagagatgtt
gattatagaaggcttaacgaggaaatgtttgggaaaataaccgggaatgaagaacagagcgaggac
gaagattggggccatgaaaggagaaagaaaaggacgcattcaggtgttgctggggataattctgtt
ggtttcttgaacgttatatctgatgaaaagagccagaagaaggggagaaaacttttcaggattcct
cctgcagctgttgaggtacttcgcagagcttttgctgaaaatgagcttccaccccgggatgttaaa
gaaaatctctcaagagaattgggaatttcttttgaaaagattgataaatggttcaaaaat acacgg
FIGURA 19 CONT. TGTGCTGCTCTCAGAGATCGGAAGGCTGAAGGAAACAGTCATAATACAGCTCCCAGCAAAATCTCA AAAAATAAAGGAAAAGCTGGAATCTCAGGCAAGGCTGGAAGGAATGGTCATGTTACTGGTCCCTGC AATAATTTGAGAATAAATGAAGAAAAAACAGGTATATCGGGGAAGTTTGATTCAGGAGACAACTCT TGTTTGGTTCCCTTCTCTGAAGTCATCAATGTGCCTACGCGATTGCCACACAACTTTGAGATGAGG AAGATGGAATCAACTAGAAGTCCTGCGAGGCTACACAATAAAGGAGGGTGCCTGTCTGCAACAATC CAAATTAAGGAGAGTACATTGTTACCCACAGGCAAGCCTTGTTGGCAGTCAGAAATGAGCCATCCA ACAACTAATGAAGTGAGCACTTCAGCGCAAGCTACTACTTGGATCGACGCGGGGGCGTGTGCCGAG GAGCAAGAACCTACTCCTTGGGTGGACATCGGGGCCTCAGACTACCAGCCTTTCCTGGATGTGATC GACGACATGTGCGGACTTGAGTGGAGGCTGCAGAGACTGAAGGAGAACATGCTCTCATCTAGCATA GACGGCCAAACCGCCGCCAGTGAGAGTGACAAAAGAAACCAGACCGTGGTGCTCGTGCCAACTGCC GAGCTCAAGGAAAAACTGCCGCATGACGGTTTATTCGGGCATTATTGCCCATAG
SEQ ID NO: 243, seqüência de polipeptídeo traduzida proprietária de Zeama_PHD_HD de Zea mays
MHSSENKLGWNETSMGLVPVPKRPARPDASHQCKSDSFMKRSPRKVRNATLAKSIKSKYHYSPLKQ RKGSDSVPGKIVTGLTARKKKKRKIQITDEATRLERRARYFLIKIKLEQNLLDAYSGDGWNGQSRE KIKPEKELQRARKQIIKCKIAIRDIIRQLDLYTSTGSVDDPLMPTDQSTNPEHTMCSTCKSHESFP SNKIIFCKGPCKRACHEKCLEPPLNKSVLPTSSHGWLCKFCLCKVRILETINAHLGTSFTVKCHFE DIFKETTELIDSEDALDEDWLSEYSGDEDYDPDENEASGDCMDSGEKIMSDDSNGSGSPLYSPNDD IPDFISADLNWEGFCHTNLDLGIDAVEDDFAQILTYQRPRRDVDYRRLNEEMFGKITGNEEQSED EDWGHERRKKRTHSGVAGDNSVGFLNVISDEKSQKKGRKLFRIPPAAVEVLRRAFAENELPPRDVK ENLSRELGISFEKIDKWFKNTRCAALRDRKAEGNSHNTAPSKISKNKGKAGISGKAGRNGHVTGPC NNLRINEEKTGISGKFDSGDNSCLVPFSEVINVPTRLPHNFEMRKMESTRSPARLHNKGGCLSATI QIKESTLLPTGKPCWQSEMSHPTTNEVSTSAQATTWIDAGACAEEQEPTPWVDIGASDYQPFLDVI DDMCGLEWRLQRLKENMLSSSIDGQTAASESDKRNQTWLVPTAELKEKLPHDGLFGHYCP
FIGURA 19 CONT. magqppqgpeddfldqffsltnslsaagrpsgdqpfsla lsldaasdasgsrggigddagnaaerdgvqlpglfppvf
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21 CONT.
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FIGURA 21 CONT. FIGURA 22 bHLH11-Iike pGOS2
Terminador RB
Marcador selecionável de planta
Origem bacteriana de replicação
Cassete marcador selecionável de planta
Marcador selecionável bacteriano
FIGURA 23 SEQ ID NO: 244, seqüência codificadora de TabHLH11, Triticum aestivum
ATGGCGGGGCAGCCGCCGCAGGGCCCGGAGGACGACTTCCTCGACCAGTTCTTCTCCCTCACCAAC TCCCTCTCCGCCGCCGGCCGCCCCTCCGGCGACCAGCCCTTCTCCCTCGCCCTCAGCCTCGACGCC GCCTCGGACGCCTCCGGCAGCAGGGGCGGCATCGGCGACGACGCCGGCAACGCCGCGGAGCGGGAC GGCGTGCAGCTCCCCGGCCTCTTCCCGCCGGTGTTCGGCGGTGGCCTCCAGCCGCCGCACCTTCGC CCCAGCCACCCTCCCCCACAGATGTTCCACGCGCAGCAGCCGAAGCAGGGCGGGCCGGCTGGAGGG CCGCAGCCGCCGGCGCCGAGGCCGAAGGTGCGGGCGCGTCGCGGTCAGGCGACTGATCCCCACAGC ATCGCGGAGAGGCTAAGAAGAGAGAGGATAGCGGAAAGGATGAGGGCCCTACAGGAATTGGTCCCC AATACGAACAAGACAGATAGGGCAGTTATGCTAGATGAGATCCTGGATTATGTGAAGTTCCTTAGG CTTCAAGTAAAGGTGTTAAGCATGAGCAGATTGGGTGGTGCTGGTGCTGTTGCACAGCTGGTTTCT GACATTCCACTTTCAGTTAAGGGGGAAGCAAGCGATGGTGGGAGCAAACAGCAGATATGGGAAAAG TGGTCAACGGATGGCACGGAAAAACAGGTTGCGAAGCTGATGGACGAGGACATCGGTGCCGCAATG CAATTTGTCCAATCAAAGGCTCTCTGCATGATGCCAGTCTCCCTTGCCATGGCTATCTATGACACA CAACATTCACAGGACGGCCAACCAGTGAAGCCTGAACCCAACAACACTGCCTAG
SEQ ID NO: 245, TabHLHll, Triticvun aestivum
MAGQPPQGPEDDFLDQFFSLTNSLSAAGRPSGDQPFSLALSLDAASDASGSRGGIGDDAGNAAERD GVQLPGLFPPVFGGGLQPPHLRPSHPPPQMFHAQQPKQGGPAGGPQPPAPRPKVRARRGQATDPHS IAERLRRERIAE RMRALQELVPNTNKTDRAVMLDEILDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAQLVS DIPLSVKGEASDGGSKQQIWEKWSTDGTEKQVAKLMDEDIGAAMQFLQSKALCMMPVSLAMAIYDT
QHSQDGQPVKPEPNNTA
SEQ ID NO: 246, Motivol
(E/D) (D/S/E) (F/M) (L/F) (D/E/Q/L) (Q/H/E)
SEQ ID NO: 247, Motivo 2
RA(R/I/Q)RG(Q/H)ATDPHSIAER
SEQ ID NO: 248, Motivo 3
(M/I/V/L)(K/R)(A/S/Q/D/N)LQ(E/D/V)LVP SEQ ID NO: 249, Motivo 4
(M/I)(L/I)DEI(I/V/L)(D/E/G)Y(V/L/I)(K/R)FL(Q/R)LQ(V/I)K
SEQ ID NO: 250, Motivo 5
(V/I) LSMSR (L/V) G
SEQ ID NO: 251, Motivo 6
V(A/V/L/I)(K/R)(L/M)(M/L)(E/D)(E/D/S/K/T)(D/N/S)(M/V/I)(G/T/I)XAMQ (Y/L/F) L
SEQ ID NO: 252, Motivo 7
(M/V)(P/S)(I/V)(S/T/A)LA
SEQ ID NO: 253, Motivo 8
SIAERLRRERIAERMRALQELVPNTNKTDRAVMLDEILDYVKFLRLQVKVL
FIGURA 24 SEQ ID NO: 254, prm009718 (fwd):
GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAAACAATGGCGGGGCANCCG SEQ ID NO: 255, prm009719 (rev):
GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTATGGGTGTTGCAGCTGCTGTT SEQ ID NO: 256, Promotor Gos2 de arroz
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAATAATTTT ACAGAATAGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAAGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGÇTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG CTTTTATAGCGTTATCCTAGCTGTAGTTCAGTTAATAGGTAATACCCCTATAGTTTAGTCAGGAGA AGAACTTATCCGATTTCTGATCTCCATTTTTAATTATATGAAATGAACTGTAGCATAAGCAGTATT CATTTGGATTATTTTTTTTATTAGCTCTCACCCCTTCATTATTCTGAGCTGAAAGTCTGGCATGAA CTGTCCTCAATTTTGTTTTCAAATTCACATCGATTATCTATGCATTATCCTCTTGTATCTACCTGT AGAAGTTTCTTTTTGGTTATTCCTTGACTGCTTGATTACAGAAAGAAATTTATGAAGCTGTAATCG GGATAGTTATACTGCTTGTTCTTATGATTCATTTCCTTTGTGCAGTTCTTGGTGTAGCTTGCCACT
TTCACCAGCAAAGTTC
SEQ ID NO: 257, cassete de expressão
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG
FIGURA 24 CONT. AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAATAATTTT ACAGAATAGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAAGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGCTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG CTTTTATAGCGTTATCCTAGCTGTAGTTCAGTTAATAGGTAATACCCCTATAGTTTAGTCAGGAGA AGAACTTATCCGATTTCTGATCTCCATTTTTAATTATATGAAATGAACTGTAGCATAAGCAGTATT CATTTGGATTATTTTTTTTATTAGCTCTCACCCCTTCATTATTCTGAGCTGAAAGTCTGGCATGAA CTGTCCTCAATTTTGTTTTCAAATTCACATCGATTATCTATGCATTATCCTCTTGTATCTACCTGT AGAAGTTTCTTTTTGGTTATTCCTTGACTGCTTGATTACAGAAAGAAATTTATGAAGCTGTAATCG GGATAGTTATACTGCTTGTTCTTATGATTCATTTCCTTTGTGCAGTTCTTGGTGTAGCTTGCCACT TTCACCAGCAAAGTTCATTTAAATCAACTAGGGATATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAA ACAATGGCGGGGCAGCCGCCGCAGGGCCCGGAGGACGACTTCCTCGACCAGTTCTTCTCCCTCACC AACTCCCTCTCCGCCGCCGGCCGCCCCTCCGGCGACCAGCCCTTCTCCCTCGCCCTCAGCCTCGAC GCCGCCTCGGACGCCTCCGGCAGCAGGGGCGGCATCGGCGACGACGCCGGCAACGCCGCGGAGCGG GACGGCGTGCAGCTCCCCGGCCTCTTCCCGCCGGTGTTCGGCGGTGGCCTCCAGCCGCCGCACCTT CGCCCCAGCCACCCTCCCCCACAGATGTTCCACGCGCAGCAGCCGAAGCAGGGCGGGCCGGCTGGA GGGCCGCAGCCGCCGGCGCCGAGGCCGAAGGTGCGGGCGCGTCGCGGTCAGGCGACTGATCCCCAC AGCATCGCGGAGAGGCTAAGAAGAGAGAGGATAGCGGAAAGGATGAGGGCCCTACAGGAATTGGTC CCCAATACGAACAAGACAGATAGGGCAGTTATGCTAGATGAGATCCTGGATTATGTGAAGTTCCTT AGGCTTCAAGTAAAGGTGTTAAGCATGAGCAGATTGGGTGGTGCTGGTGCTGTTGCACAGCTGGTT TCTGACATTCCACTTTCAGTTAAGGGGGAAGCAAGCGATGGTGGGAGCAAACAGCAGATATGGGAA AAGTGGTCAACGGATGGCACGGAAAAACAGGTTGCGAAGCTGATGGACGAGGACATCGGTGCCGCA ATGCAATTTCTCCAATCAAAGGCTCTCTGCATGATGCCAGTCTCCCTTGCCATGGCTATCTATGAC ACACAACATTCACAGGACGGCCAACCAGTGAAGCCTGAACCCAACAACACTGCCTAG
SEQ ID NO: 258, A. cepa_TC3698
MASNNNPQPPSDGLNDDFFDQIFSMPSAFAASSASTDATEALNYADSSTTGVTPMFSLGLSLDQQP KSDSSQSEREHPVQFACLFPQYGHNNQVHQTRPNLSPPQVLHGQAMQSSMAATPQPTGPRPRVRAR RGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSTNKTDRAVMLDEIVEYVKFLRLQVKVLSMSRLGG AGAVAQLVADIPMSSSVEGDSSESGKTSYQGWEKWSTDGTERQVAKLMEEDVGAAMQFLQSKALCI MPISLAAAICQTNPSTEISFM
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 259, A. thaliana_bHLH007-ll-ATlG03040
mannnniphdsisdpsptddffeqilglsnfsgssgsglsgiggvgpppmmlqlgsgnegnhnhmg aiggggpvgfhnqmfplglsldqgkghgflkpdetgkrfqddvldnrcssmkpifhgqpmsqpapp mphqqstirprvrarrgqatdphsiaerlrreriaerirslqelvptvnktdraamideivdyvkf lrlqvkvlsmsrlggagavaplvtemplsssvedetqavwekwsndgterqvaklmeenvgaamql
lqskalcimpislamaiyhsqppdtsssivkpemnppp
SEQ ID NO: 260, A. thaliana_bHLH059-ll-AT4G02590
masnnphdnlsdqtpsddffeqilglpnfsassaaglsgvdgglgggappmmlqlgsgeegshmgg lggsgptgfhnqmfplglsldqgkgpgflrpegghgsgkrfsddvvdnrcssmkpvfhgqpmqqpp psaphqptsirprvrarrgqatdphsiaerlrreriaeriralqelvptvnktdraamideivdyv kflrlqvkvlsmsrlggagavaplvtdmplsssvedetgeggrtpqpawekwsndgterqvaklme envgaamqllqskalcmmpislamaiyhsqppdtsswkpennppq
SEQ ID NO: 261, A. thaliana_bHLH066-ll-AT2G24260
mmnsslltpsssssshiqtpsttfdhedfldqifssapwpswddahplpsdgfhghdvdsrnqpi mmmplndgssvhalyngfsvagslpnfqipqgsggglmnqqgqtqtqtqpqasastatggtvaapp qsrtkirarrgqatdphsiaerlrreriaermkalqelvpngnktdkasmldeiidyvkflqlqvk vlsmsrlggaasvssqiseaggshgnassamvggsqtagnsndsvtmtehqvaklmeedmgsamqy lqgkglclmpislataistatchsrnplipgavadvggpsppnlsgmtiqststkmgsgngklngn gvtersssiavkeavsvskaatgmqfdesdarvwiwfeirreddivellwqsgqwgtnqthrqsy dpppilrgsgsgrgeenaplsqppphlhqqnlfiqegemyswlhhsyrqnyfcsellnstpathpq ssislaprqtiatrraenfmnfswlrgniftggrvdeagpsfswresmqvgsnttppsssatesc vipategtasrvsgtlaahdlgrkgkavaveaagtpssgvcícaetepvqiqpatesklkareethg teeargstsrkrsrtaemhnlaerrrrekinekmktlqqliprcnkvesdsvstlisllkfqrwmm lsstsnryrakykyalqnrmcfkpmvqhgkssyvssfvemmstgqgmmspmmnagntqqfmphmam dmnrpppfipfpgtsfpmpaqmagvgpsypaprypfpniqtfdpsrvrlpspqpnpvsnqpqfpay mnpysqfagphqlqqpppppfqvtlyhgihcwagnpyv
SEQ ID NO: 262, A. thaliana_bHLH069-ll-AT4G30980
mnssslltpssspsphlqspatfdhddflhhifsstpwpssvlddtppptsdcapvtgfhhhdads rnqitmiplshnhpndalfngfstgslpfhlpqgsggqtqtqsqatasattggataqpqtkpkvra rrgqatdphsiaerlrreriaermkslqelvpngnktdkasmldeiidyvkflqlqvkvlsmsrlg gaasassqisedaggshentsssgeakmtehqvaklmeèdmgsamqylqgkglclmpislattist atcpsrspfvkdtgvplspnlsttivangngsslvtvkdapsvskp
SEQ ID NO: 263, A. thaliana_bHLH082-ll-AT5G58010
mengngegkgefinqnndffldsmsmlsslppcwdpslpppppppqslfhalavdapfpdqfhhpq esggptmgsqeglqpqgtvsttsapwrqkprvrarrgqatdphsiaerlrreriaermkslqelv pntnktdkasmldeiieyvrflqlqvkvlsmsrlggagsvgprlnglsaeaggrlnaltapcngln gngnatgssneslrsteqrvaklmeedmgsamqylqgkglclmpislataissstthsrgslfnpi ssavaaedsnvtatavaapeasstmddvsaska
SEQ ID NO: 264, A. vulgaris_TC15501
mannnnptegltddfldqilsygahegnlagndvnlagtttpggsmalqlsssggditgsggyhhh hqhqhhhqlsgggggfplglsleqsgkggffkpdeasgsgkrfrddfvdlkavsstnndnndrgds vhlnnlfpafghvqqqqqahsvrppshqnqinqpflghptpgavawphppairprvrarrgqatd phsiaerlrreriaermkalqelvpssnktdraamldeivdyvkflrlqvkvlsmsrlggagavaq lvadiplssaeggaseggsnqpawekwstdgtehqvaklmeedvgaamqflqskalcimpislasa
iyhdqppdastmikpepnaps
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 265, A. vulgaris_TC19278
MKNLQELVPNSNKTDKASMLDEIIEYVRFLQLQVKVLSMSRLGATGAWPLITENQPEGSTSHFLS QS AGRDVKHIES PNTLTFEQEWKLMESNMTKAMQFLQRKGLCLMPIALAAAISGSKAPPASLSTE GKKSILTNGFVHHNSGQSNIGPGQISSDGETRSEENIIGIHSREDFSSNSCSGTSIKKEGTNTTNF TREMNQE
SEQ ID NO: 266, B. napus_TC10015_part
HASETPSDDFFEQILGLPNFSASSSDGGLGGGGAPPMMLQLGSGEEGGHMGGLGGGSGFHNQMFPL GLSLEQGKGQGFLRPEGGSLGTGKRFSDDVMKPVFHGQPMQQQPAPAAPHQPTSIRPRVRARRGQA TDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPTVNKTDRAAMIDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAG APLVTDMPLSSSVEDESGEGGRAPQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQLLSSKALCMMPIS LAMAIYHSQPPDTT
SEQ ID NO: 267, C. clementina_DY268946
MFLQLGSGGPSPGAGGGATSAADIRSLAMGISMGMMPLGLNLEHSFLRQHEDHNSNHNNNNNTNAS SSSPNNSSATSGINERDSVHMPSLFPAFGQLQSQSARPPLPRPPQVQQFQSQPAAAPQPPAVRPRV RARRGQATDPHSIAERLRRERIADRMRALQELVPSCNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSR LGAAGAVAQLVADVPLSSALEGESIDGGSSQPEWEKWSNDGTEQQVAKLMEEDIGAAMQFLQSKAL CIMPISLASAIYRTRQPDAPAFVKPESSTPSYCLNNNWSQQLAHNDSKYLITGTYSYRILLVLLSN QIIQIPMQRSHSSFP
SEQ ID NO: 268, C. longa_TA2544
MQPSSKETERMAQSHAALQLELQNGGGGAQNDDFFEQTMSGFSTAAWAPELGTPRSLFGARSSEES PDDEGLNYAPPYGGSSLLASRHRMHLGTSPADSSMFLQLGGQILLHPTAGASGGESGGFLRLPLSL GSGGSGVSTSAIFGDRSRGEIDPPFESSNPTEAEVLYNDGFTGSLPRAVQASLHQQLLRQPQNYGA ATLTGQALAITATASGTAGAGTAPPKPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMKALQELVPNAN KTDKASMLDEIIDYLKFLQLQVKVLSMSRLGGAAAVAPLVADMSSESGGGAGTPRSNNDGLTAAEQ QVAKLLEEDMGSAMQYLQGKGLCLMPISLASAISSATCRPRPPPGVNLRYPAAGDAPPSPSISALT VQSSNAGSAGADAS
SEQ ID NO: 269, C. paradisi hybrid_TA3392
MANNPNEASSTDDFLEQILGIPNFGSAE SGLAAS DGGLAAGSPMMLQLS SGDGS SHISALGGGVS S GYHGQVFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSGKRFPEEHAIKNVFHGQPLPSPVPAAPHPPAMRPRVR ARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRV GAPGA VAPLVTTDLPLSSVEDESGEGVRNQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQFLQSKALC IMPISLATAIYHSQPPE
SEQ ID NO: 270, C. sinesis TA12416
MQPCSSGGEMQGISSLLSNGSHEQQSQIHQSATFDPTSQDDFLEQMLSSLPSCSWTDLKSPWGWD LNPNNNNNNINNKQPRDLSDETAPSTTQENNVPAGFQFDESMILASKMRQHQISGNTGSGNNNSAA AKFMMQQQQQQIMMAAARGGIGLPLSLGNGGDNDIVDVSSFKSQQGGDGSVQALYNGFTGSLHGST QPQHFHHLQGGSMPGQTFGAPGPVMNQTQAQASGSTGGGGGGGNTPAQQPKQRVRARRGQATDPHS IAERLRRERIAERMKALQELVPNANKTDKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAAVAPLVA DMSSEGGGGDCIQANGRNPNGAQTTSANDSLTVTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLCLMPISLA TAISTATCHSRNPIISTSNNNNNNGNPHHNPLLQSNGEGPTSPSMSVLTVQSATMGNGGADGSVKD AASVSKP
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 271, Ε. grandis W02005001050 seqID77
MAGSNPQEGLGDEFFEQILAVPPGAYSGGSTPMVLQLGSGRGGVEDGGGRGGGGGLRGMGVMMPLG LNLEQGGLFRHEDVENSTSASSTTSAINMEREAGVHHGNNMTSCLFPAFGQFQTHQSVQPPPPHPP PPQLHPAFLNQPAVGSPNQPAIRPRARARRGQATDPHSIAERLRRERINERMKALQELVPSCNKTD RAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAQLVADVPLSSAEGEIIEGGNNQPAWEKWLTDG TEQQVAKLMEEDVGAAMQFLQSKTLCIMPISLASAIFRTSQPDMPRSIKPESSAPS
SEQ ID NO: 272, E. grandis W02005001050 seqIDl671
MANNPSDGASDEFLEHLLGLPNFAAAAEAGLAPGDGTGLSVTAATPMMLQLGSGDGSGGHGHGHGH GHGQGHLSALGGGGAGAGGGGGGGGGGYHGAVFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSGKRYPEEVVDG RASTVKNLHSPLPNFPDVSQMASFRNRDVFHGQPVPNPVPAAPHPPAMRPRVRARRGQATDPHSIA ERLRRERIAERIRQLQDLVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGAAGAVAPLVTDI PLSSVEEEGGEGGRNQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQFLQSKALCIMPISLATAIYQTQ
PPDTSSLVKSESNPPS
SEQ ID NO: 273, G. hirsutum C0123623
DSGGGGFRGIGMMPLGLNLEHGFLRHEDGVWDNNNNNASCSAASAVSGISERDSMHMVSLFPPFG QMQTQQIRASPPPPQPPPQLHQPFHSQPTSGPVAAAPHPPAVRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRE RIAERMKALQELVPSCNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGAAGAVAQLVADVPLLSVE GDGAGGGTQPPWEKWSNDGTEQQVAKLMEEDIGAAMQFLQSQALCIVPISLASAIFPAHQPDAPTI
V
SEQ ID NO: 274, G. hirsutum DT543504
MISNGGESSEFRRSFTGLETLSPIPQLWHLQPYDSVSSLPTLVGQTIVDDEGNINRFIEIDEILQP ENLSASINSKGQQDMQNSFCSSFPADHPITKTMIGLPSLVQGASPNLNNGSDRTVKPRVRARRGQA TDPHSIAERLRREKIAERMKNLQELVPNSNKTDKASILDEIIGYVKFLQLQVKVLSMSRLGAAAAV VPLITDGRAEVSNGLSLAPLAGQGVDFSPSPDQWFEQEWKLMESNMTMAMQYLQSKGFCLMPVA
LAAAISNVKSSTSSSSSSVPASDESKKLGLHQQYSNQQHLQQ SEQ ID NO: 275, G. hirsutum TC60118
MANNPNESPADDFLEQILGLSHFAPTETGLAGPDGRLSGNATTAGAPMLLQLSSGGGTGHIGAIGG GGGGAFHGQVFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSSKRFRNEWDGRAFSVKNVF.HGQPVPATVAAGP HPPAMHPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRL QVKVLSMSRLGAAGAVAPLVTDLPLSSVEDESGEGGRSQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEEDVGAAM QFLQSKALCVMPISLATAIYHTQS PDTSSWKPETNPPS
SEQ ID NO: 276, G. hirsutum TC60119
MANNTNEAPAADDFLEQILGLPNFAPSETGLAGSDAGLAATAAGAGAPMFLQLSSGDGAAHIGGIG GGGGGAFHGQVFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSGKRFRNGWDDRASSVKNVFHGQPMQATVSAA PHPPTMRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERITERIRALQELVPSVNKTDRAVMLDEIVDYVKFLR LQVKVLSMSRLGGAGAVAPLVTDIPLSSVEYESGEGGRSQPAWEKWSNDGTEQQVAKLMEENVGAA MQFLQSKSLCIMPISLATAIYHTQVPDTS S WKPETNPPA
SEQ ID NO: 277, G. hirsutum TC61833
MANNPNEASADDFLEQILGFPNFAPSETGLAGPDGGLTGTTAGAGTPMFLQLSSGDGASHLGGIGG GGGGAFPGQVFPLGLSLDQGKSGGFLKPEEGSGGSSRRFRDEWDGRASSVKNVFHGSPMPATVAP SPHPPTMRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAVMLDEIVDYVKFL RLQVKVLSMSRLGGAGAVAPLVTDIPLSSVEDESGDGGRNQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGA AMQFLKSKALCIMPISLATAIYHSQPLDTSSIVKPETDPPP
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 278, G. hirsutum TC67603
MQPCSREMQAMNSLLNPTQQIPLQDLQINGNRHHHQQIHVPSSSQFQYPTPTSTTHHDDSFLEQIL S STT S FPWS DETGPPNPE DNNNAGFNYDEMVLASKLRQHQINGGAAGNP FAAMKMMLMMQQQQQQQ QMMLAGRPTVASAAAGGGITTNHQGGEGSMQALYNVFGDGSLHGTMQAKSFVGANSATEMTQSQGS GPTAGEAVTAPEKPKQRVRARRGQATDPHSIAERLRRVRIAERMKALQELVPNANKTDKASMLDEI IDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAAVAPLVSEGGGDCIQTSANGGSHPRNSNGDQTPSANDRLTMTE HQVAKLMEEDMGSAMQYLQEKGLCLMPISLATAISSATSRSRNPMINHENPANGSHLLIQSSGGDG PSSPSMSVLTVQSATMGNGGLEGGAASVSKP
SEQ ID NO: 279, G. max TC229602
MKPDEASASGKRFRDDWDNRAKHVFHGQPMPTTMPAAPHPPAIRPRVRAIRGQATDPHSIAERLR RERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAPLVTDIPLSS VEEEGGEGARNRPAWDKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQFLQSKALCIMPISLASAIYQSQPPDT
SSIVKPETNPPS
SEQ ID NO: 280, G. max TC205173
MLQHQLLRDSGLLNMPLSLPGNDVWDASTFESPNPSGKASVQTLYNGFAGSLHGVGQSSNQTQHF QHPQGSSNPMQGQNFGAVPAGGGSATNQAPASGAAAGGAPAQPRQRVRARRGQATDPHSIAERLRR ERIAERMKALQELVPNANKTDKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAAVAPLVADMSSEGG GDCIQANGKSNGGGAQASTTNTNTNQTTATTTSNDSLTMTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLCL MPISLATAISTATCPTRNVNVNPLINAAAGATHFPTAANPAGEGPSSPSMSVLTVQSAIAGNDGAA
SVSKP
SEQ ID NO: 281, G. max ΓΑ55042
MAGNSGSEGLGDDFFEQILAVPEAGTVGMLQLGSTTGAFRGASGLMPLGLNLEQAAFLRHQVNVDD DWHVNVDDATIHQHHLTLHNNNNSSSPSSTAPITDRDSMHMRGLFSAFGQLHTPIRPTLPLPPPP RQPQLHLHHHNQFQGQAAAAPASMAAMPQPPGIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMKAL QELVPSINKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAQLVADVPLSAVEGDQDIEGGA NEQAWDKWSNDGTEQQVAKLMEEDVGAAMQFLQSKALCIMPISLASAIFRMPQSEASTGIKPESNS
H
SEQ ID NO: 282, G. max TC207545
MMLQLNSGDAATHLASFHAPPYQLGLSLDQGEGPFLTPEDASGSGKRFRDDAVDTRPNNVFDGQPM PTTVPTAPHPPAVRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIV DYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAPLVTDIPLSSVEEEGGEGRNQPAWEKWSNDGTERQVAKLME ENVGAAMQFLQSKALCIMPVSLASAIYQSQPSGTSSIVKPETNPPS
SEQ ID NO: 283, G. raimondii TA13791
MANNPNESPADDFLEQILGLSHFAPTETGLAGPDGRLSGNATTAGAPMLLQLSSGGGTGHIGAIGG GGGGAFHGQVFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSSKRFRNEWDGRAFSVKNVFHGQPVPATVAAGP HPPAMRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRL QVKVLSMSRLGAAGAVAPLVTDLPLSSVEDESGEGGRSQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEEDVGAAM QFLQSKALCVMPISLATAIYHTQSPDTS SWKPE TNPPS
SEQ ID NO: 284, H. petiolaris TA1140
MSTDPPEGYGDDFLEQILAIPSYNITGCLPVNTADSTGSETVSVHHQQQQPQQQLQPQKFPLGLSL DNGRETIGGAFAGQQQQLQQQQQRERGGSMNMSGLFPQFENLQSHSLLHTVPQGFQGQPTSSTAVT VPHPPTIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMRALQELVPSCNKTDKAAMLDEILDYVKFL RLQ VKVLSMSRLGGAGAVAQLVS DVPLQS VEGDGSENGYNNQQQGQAAWENWSNDDTEREVAKLME EDVGAAMQFLQSKALCIMPISLASLIYPNHQPDVKPEPSAPS
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 285, Η. vulgare TC140470
MNYSDGSFFPSWPGNSASENYSFVDGSVESYTEEGSMPTTGYFRARSNQNLTFDEHEQNPAMLANG CLPYNTQTDLLSGEILSDDKPSNSLVELSQLQNNVCLQNNLIPPGTLQCNSTPGTFDLQLDTPGLL ELPHALSSSIESNGSEVSAFLADVQAVSSASTLCSTFQNVPSYMEPVSLEAFSFQGMQNAAMFNNA SHSNGNLSVFDEATMASLHDSKEFLNGSISSLGTGQQSQLAGGGLKAEQQEQNTMCNIPLPSFVSA SQMAVSEAQGALIPSKTTSITHNNKSE YPIPISHSADVQHKANSGNGNSASAKPRARARRGQATDP HSIAERLRREKISERMKNLQDLVPNSNKADKSSMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGAPGAVLPL LAESQTEGRSNSPLSSPTTSQGLLDVAGPEDSLVFEQEVIKLMETSITNAMQYLQNKGLCLMPIAL ASAISNQKGTSAAAIPPER
SEQ ID NO: 286, L. perenis TA3490 part
MATDPPEGYGDDFLEQILAIPSYNIAGCLPGNTTDANASETVSVHRQQQQQQPVFPLGLSLDNGRE TIGAFAGQQQQRERGGSMNMTGLFPSFENLQSHSLLHSVPQAFQGQSTTSTAVTVPHPPSIRPRVR ARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMRALQELVPSCNKTDKAAMLDEILDYVKFLRLQVKVLSMSRL GGAGA VAQLVSDVPLQSVEGDTSENGYNQPAWENWSNDDTEREVAKLMEEDVGAAMQFLQSKALCI MPISLASLIYPPQTPDSNSHVKPETV
SEQ ID NO: 287, N. benthamiana CK293938
MATNQPEGYADDFLEQILAIPSYAGLPPVADVGTSSETTSFTSASAAGLQQPLFPLGLSLENGRDD VSDAGAYAVKHEREGINIGNLYAGLEHLQSHAVRHAVPPVHHIQSFQGQPTTSTTMTVPHSPAIRP RVRARRGQATDPHSIAERLRRERISERIKALQELVPSCNKTDRAAMLDEILDYVKFLRLQVKVLSM SRLGGASAVAQLVADIPLQSMEGDSAESKSNQHIWEKWSNVDTEQEVAKLMEEDVGAAMQYLQSKS LCIMPISLAALIYPTQQPDDMSMVKPEPAAPS
SEQ ID NO: 288, N. benthamiana TC7102
MQAMNQYDPTSSHDDFLDQILSSVPSSSLCWPDLSKSWDPHHHHLSPPLPPNPSSGDDHQLPPSNP LQHFQYDDQSSSFLAAKLRQHQITGGGGGGGDAVAAAKALLLQQQLLLSRTLAGNGLRSPTGASGD NGFLNMLGNGDQNDSVGNPANDSSVQALFNGFTGSLGQNSSQPQHFLHPQGGRMQAQSFGAPATAP AMNQTPAASGSAGGGTTPAAQPKQQRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMKALQELVPNANKT DKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAAVAPLVADMSSEGRGEGNGGRGGNGTASSSNNDS MTVTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLCLMPISLATAISTATCHSRNPMIPNGNGGNNPLLGGGG GLATNGGGGEAGGPSSPKLSVLTVQSATIGNGGIDPSVKDATSVFEA
SEQ ID NO: 289, N. benthamiana TC7103
MQAMNSQMSLQEENGASSGQNMSHSHFDPTSSHDDFLQQILSSVPSSSPWPDLSSGGDGHFDDQSI FVASKLRQNQITGGGGGGAAAKALMLQQQLLLSRGLLAGNGDQNDDVGNPENEISVQAL YNGFAGS LGQTSNQPQHFHHAQGGSMQAQS FGAPAS STMNQTPAASGGS AGGGQ PKQQKVRARRGQATDPHSI AERLRRERIAE RMKSLQELVPNANKTDKASMLDEIIDYVRFLQLQVKVLSMSRLGGAAA VAPLVAD RSSEGGGGDCAQANGGGRGSNGTTSLANNDSMTMTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLCLMPISL ATAISTATCHSMKLNNPLLHGGGSGGSAAINGGGGGPSSPSLSASTVQSATMGNGGA
SEQ ID NO: 290, N. benthamiana TC8633
MANNPSEGPDDFFDQILGFPAYNGAETNLAGSDAGAIPPAMLLQLNSGDASGQFSGMGLGVGLGGG GGFHHPSQSGSFPLGLSLEGGKSGFMKMDDVPAVPGRRFRDDWDSRASSSVKPGFHGQPMPSMPH PPAIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPNVNKTDRAIMLDEIVDYVKFLRLQ VKVLSMSRLGGAAAVAPLVTEIPISSVEEEIS E GGNNQ PAWE KW S S DGTERQVAKLMEENVGSAMQ FLQSKALCIMPISLASAIYHSQPPDTSSLIKPETNPPS
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 291, Ν. tabacum TC12771
MATNQPGGYADDFLEQILAIPSYAGLPPVADVGTSSETTSFTSSSVAAAGLQQPLFPLGLSLDNGR DDVSDAGAYAVKHEREGINIGNLYAGLEHLQSHAVRHAVPPVHHIQPFQGQPTTSTTVTVPHPPAI RPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERISERIKALQELVPSCNKTDRAAMLDEILDYVKFLRLQVKVL SMSRLGGASAVAQLVADIPLQSVEGDSAESRSNQHIWEKWSNVDTEQEVAKLMEEDVGAAMQYLQS KSLCIMPISLAALIYPTQQPDDPSMVKPEPAAPS
SEQ ID NO: 292, O. sativa 0s02g35660
MGGFAYPFTPSPAWSRDAVFAGSPWAAGGVSSLADALVSYGAVDDEEAAFLGKTAASSPSTARLHE QQQLLLEAELLRHGDGLGFAAMDDDGGAAMLGALEPCAMPLTDSGGPPVICSSSSNDSSGSEHSAA MPAGGGFLVGEQQQHVPPAAYAAGGVLPSMAAGEETPQSFGFGSLFNGDLLQEATVSKYHHHQQQQ QLGWPS SQPHHLNDDIDFNTGKLMSFASGQQHVTPSIDSLQIDQKEFS SGLHHLNLSSLISGPLA SFNATQSHRQPAEACGGKNGGAAPFVNLSEVLPKGNGSGSAGNGAPKPRVRARRGQATDPHSIAER LRREKISDRMKDLQELVPNSNKTNKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGAAEAWPLLTETQT ES PGFLLS PRSSSGERQAGAGAVTGGLPGDQPELLDGGAMFEQEWKLMEDNMTTAMQYLQSKGLC LMPVALASAISAQKGTSSAAVRPEKKKNGDGDGGGDEEDVKGEFDAPRRPPVGRPKEMRSRV
SEQ ID NO: 293, O. sativa 0s02g55250
MQPNARQMRGGGGGGGGGQDDFFDQMLSTLPAVWSELGSGKPAWDLTAGAVGGGGGASDDHSAAAF DDSALLASRLRQHQIDGGGDKPIMLQLSDLHRHHGLAAGDDSGGAAGFLPLSLFADRSQDDIDAAF KSPNGARGDHALYNGFGAAGMHGAAAMQPPPFGQGGSMPAQSFGGGAAASGGGGGGSASAAAAAGA SSGGGAAAPPRQRQRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMKALQELVPNANKTDKASMLDEIIDYV KFLQLQVKVLSMSRLGGASAVAPLVANMSSESNGNGNATSSSGNGEAANGSSNGDNNGGGTLRVTE QQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLCLMPISLATAISSATSSSLLPRTGGGAGGSLHEGGNGTSPPLV NGTATGCDDAGVFFSVKFWELSFLLLNEDCRGKEESKLLVQKGP
SEQ ID NO: 294, O. sativa 0s03g58330
MAGQQPQQQGPPEDDFFDQFFSLTSSFPGAAPGGRAAGDQPFSLALSLDAAAAAEASGSGKRLGVG DDAEGGGSKADRETVQLTGLFPPVFGGGGVQPPNLRPTPPTQVFHPQQSKQGGAAVGPQPPAPRPK VRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMRALQELVPNTNKTDRAAMLDEILDYVKFLRLQVKVLSMS RLGGAGAVAQLVADIPLS VKGEAS DSGGNQQIWEKWSTDGTERQVAKLMEEDIGAAMQFLQSKALC MMPISLAMAIYDTQQTQDGQPVKHEPNTPS
SEQ ID NO: 295, O. sativa 0s06g08500
MQPSSRDTVAGGGGEGTQDDFFDQMLSTLPSAWADLGGGGGGAAGKSPWEVDPAAAAAASQVFDES ALLASRLRHHQIGGAGGGGGEKPVMLQLSELHRQAGGGEEDGSGAFSPLPLFTDRTNVPPREEMEG GFKSPNAAAGGEHALFNGFGVHGGSGGAGQPPFGQLRRERIAERMKSLQELVPNANKTDKASMLDE IIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAGMAPLVASMSSEGNSNGSSNGGGGKASKGGTGGEGGGGGGGG GGGGTGGGMR VTEQQVAKMMEEDMGTAMQYLQGKGLCLMPISLASAISS ATSSASLLSRPSIRHAG APPQTMLDAAGPTSPAAMSNGDDPRHAKADGGAGGTQ
SEQ ID NO: 296, O. sativa 0s06g09370
MDYSAGSYMWPGNSGSENYNFVDGSSESYAEEGSLPPSGYFMGAGSDRSLKITENERNPTMLANGC LPYNTQAHPLSGQILPKGELPNNLLDLQQLQNSSNLRSNSIPPGVLQCNSTSGTFDAKLDTPGLAE LPHALSSSIDSNGSDISAFLADVHAVSSAPTLCSAFQNVSSFMEPVNLDAFGFQGAQNVAMLNKTS LPNGNPSLFDNAAIASLHDSKEFLNGGSIPSFGTVLQALGAGGLKAAQQEQNIRNIPLPTFTSGSH LAVTDAQGPPLPSKIPPLIHDHNSEYPINHSSDVEPQANSAPGNSANAKPRTRARRGQATDPHSIA ERLRREKISERMKNLQVLVPNSNKADKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGAPGAVLPLLRES QTECHSNPSLSASTISQGPPDMPDSEDSSAFEQEWKLMETSIISAMQYLQNKGLCLMPIALASAI SNQKGMAAAAAIPPEK
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 297, O. sativa 0s09g25040
maaaaaagqislddlrngggvaanagggggvhddfldqmlsslppsawpdlaagkaaeddaegmhh hhhqqqqqfggpydesamlasrlrqhqisgggggggggaaavkqmvlqqladlrqghhmmlqglgg
rspagggggggdgglllpltlgsggsggdvqallkaaaansagggdaggvygggfagslhqoqqhf qphpqtaptiptqsfggggggggggtasgggaaqpqagaagggapapprqrvrarrgqatdphsia erlrreriaermkalqelvpnanklmqtdkasmldeiidyvkflqlqvkastytkllihvlsmsrl ggaaavaplvadmssegrgggaanggapaaagsdsltvteqqvaklmeedmgtamqylqgkglclm pislasaissatchlrppwaaaqqfpaglgaaaaaahhhqlsaaaaaaamrghlpglnadgsvpa spsmsvltaqsamanggggaadgegsqlkdaasvskp
SEQ ID NO: 298, O. sativa 0s07g08440
magqqpptggaeddffdhffsipsaaaagaggvggfgsgdhhpfplalsldaegagaarrlldggh dggrtdrdpvqlaglfapvfgaaagvqpphlrappppqvfhaqpkpgegamaapqpqqppaprpkv rarrgqatdphsiaerlrreriaermralqdlvpntnktdraamldeildyvkflrlqvkvlsmsr lggagavaqlvadipisvkgeasdsgskqqiwekwstdgtekqvaklmeedigaamqfloskalcm
mpislamaiydtqhsqdghsvkpepntps ^ "
SEQ ID NO: 299, P. abies DV982110
mlplplslgqagksgdmnepgsreeieasfksvnnardsnlgglfqpfavsprgvrptgqnfhaop gqvplqgyggmpqpqhqnppptgvgaappvrprvrarrgqatdphsiaerlrreriaermkalqel vpnsnktdkasmldeiidyvkflqlqvkvlsmsrlggagavaplvadipaeganapqgtrtngsqn ^^^terqvaklmeedmgtamqylqgkglclmpislasainnsgsrpqapstpsxxxllasn
SEQ ID NO: 300, P. deltoides TA3263
mannpteppaddflqeilgmpnfasaeaglvgadaglagaaaaqasmmlqlssgdgsghisdlgga pgggsagfhgfplglsleqgkggflkpeeasgsgkrfrdeivdgraknvfhgqpmpttvaiaphpp amrprvrarrgqatdphsiaerlrreriaeriralqelvpsvnktdratmldeivdyvkflrlqvk vlsmsrlggagavaplvtdipls svedetgeggrnq pawe kwsndgterqvaklmeenvgaamqfl qskalcimpislataiyhtqppdttsivkpetnpqs
SEQ ID NO: 301, P. radiata W02005001050 seqID516
msllppgiggqglnsqendpypyddsqflanrlrqhqlsgnssmnqtpnqasqginetntspgrsm vlqlstgsasasqllasmgnsprgtavmtqspstggscngsdggmlplplslgqagksgdinesrs rdeieasfksanhardsnlgglfppfaasprgvrptgqnfhtqsgqvpmqvyggmpqpqhqnpspt gvgaappvrprvrarrgqatdphsiaerlrreriaermkalqelvpnsnktdkasmldeiidyvkf lqlqvkvlsmsrlggagavaplvadipaeganapqgtrtnssqnsspdglalterqvaklmeedmg samqylqgkglclmpislasainnsgarpqapst.pslqgllppnandrqilepsnsalsaltstsm tiqssisspgsgiteqgdnahkavngtrnpkdsreansvtksngiggpalsknavkgedepqrrtg
SEQ ID NO: 302, P. sitchensis TA14134
mddifdqllssswedingadrssldssaggptnclpgdsmgtlqassrvstmsvtpsshmspnleg qaqnndvqnssssviagentpyllkellvcsqatdphsiaererreriaknlkslqelvpnanktd kasmldeiidyvkflqlqvkvlsmsrlggagavapliadvpaegsgslasaalgqaggslsqdgla feqnwklmekdmtaamqylqnkglclmpialataissstgkpllgsgvtns vdsts drqs sgnqp asltvdscsgalgmgsagfgsdfllkentvekrgrelvptaesngaefgiisslpklrkke
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 303, Ρ. taeda TC68930
MLARENRSGDTEHDDLQGTLLTSYTGPQGGQTVLPRTPGAQSHQQNLSTQTIQSGEGTSLQQYGNH SAVSQLQSGAGGGNAANGAARPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMKSLQELVPNSNKTDKA SMLDEIIEYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAGAVAPLIADVPSQGSGGVMSTALGQASGPLTLSQDGLA FEQÈVARLMESNMTSAMQYLQNKGLCLMSIALATAISSSSGKPVLATVPGTGVDSSEKQNSDMQSI VLPFS S SSTTMGLRATASGSDAPINENSINKASIEKWAEKSNGISPGLSSDVPKVGSQSREELLK
RAQ
SEQ ID NO: 304, P. trichocarpa scaff II. 416
MANNPTEPPTDDFLQEILGMPNFASAEAGLVGADAGLAGTASVQAPMMLQLSSGDGSGHISALGGA PGGGGAGFHGFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSGNRFRDDIVDGRVRNVFHGQPMPTTVTAATHPP AMRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVK ILSMSRLGGAGAVAPLVTDIPLSPVEDETGEGGRNQLAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQFL QSKALCIMPITLATAIYHTQPPDTTTIVKPETNPPS
SEQ ID NO: 305, P. trichocarpa scaff 70. 65
MAGNPPPEGLGDDFFEQILAGQPPGYGGEAVGSTSLPMMGLQLGSSAANVGLMRSSANNNMGMMPL GLNLEHHGFLRQQQDDGSSSLDTNNSNNINNASPFSITSAGFLGRDSVHMTSLFPTFGQLQIHSSI RSAPPPLGPPQIHQFNSQPTSGAVSAVPQPPGIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRVRITERVKAL QELVPTCNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGAAGAVAQLVADVPLSSVQGEGIEGGAN QQAWENWSNDGTEQEVAKLMEEDVGAAMQLLQSKALCIMPVSLASAIFRARPPNAPTLVKPESNPP
SEQ ID NO: 306, P. trichocarpa scaff XIII. 403
MAGNPPPEGLGDDFLEQILAAQPPGYGGGGEVMGSTSLPMMGLQLGSCAGNVGLLRSNANNNMGMM PLGLNLEHHGFLRQQQDDSGSSLDTNNSNNINNTPPSIKSARILGRDSVHMTSLFPTFGHLQIHSS IRPTPPPPGPPQIHQINSHPNPGAVSAVPQPPGIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRVRITERVKA LQELVPTCNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQIKVLSMSRLGAAGAVAQLVADVPLSSVQIKGEGNEG GANQQSWENWSNDDTEQEVAKLMEEDVGAAMQFLQSKALCIMPISLASAIFRARPPNASTLINTES
NTPS
SEQ ID NO: 307, P. trichocarpa scaff28. 86
MISSNQSVESLATQDTSSWLGSESDYAVDKVLISEQARLQNDCQNCNGNPSPDGMARGNLKFGNT GLQCNGILPTLSSLNYPNQLPIVGDLTSYLSFSEASNAGCNGREQSEYLRSLKNLQNLSSIPQLWP SQSYEGVSSLPPLMGQDRIEGSGLRGGNLDDDMHIMGKGYMGMDEILRLDKLSASPTTEGKEDLQS CPFSSGIAEPNVNMSMNQLSSMPQTTSAAPVEGCNGTGKTRVRARRGHATDPHSIAERLRREKIAE RMKNLQELVPNSNKVDKASMLDEIIEYVKFLQLQVKVLSMSRLGAAGAVIPLLTDGQPEGHNSLSL SPSAGLGIDISPSADQIAFEQEVLKLLESDVTMAMQYLQSKGLCLMPIALAAAISSVKASLSGTTS EEilKNNGYTSGL VSSSSSITGIDTHPMSNDNNIATGTLSSKGMIVNGCNE WKQEVLKNT
SEQ ID NO: 308, P. trichocarpa TC63334
MANNPTEPPTDDFLQEILGMPNFASAEAGLVGADAGLAGAAAAQASMMLQLSSGDGSGHISDLGGA PGGGSAGFHGFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSGKRFRDEIVDGRAKNVFHGQPMPTTVAIAPHPP AMRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVTKTDRATMLDEIVDYVKFLRLQVK VLSMSRLGGAGAVAPLVTDIPLSSVEDETGEGGRNQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQFL QSKALCIMPISLATAIYHTQPPDTTTIVKPETNPPS
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 309, Ρ. trifoliata TA5414
MQPCS SGGEMQGISSLLSNGSHEQQSQIHQSATFDPTSQDDFLEQMLSSLPSCSWTDLKSPWGWD LNPNNNNNNINNKQPRDLSDETAPSTTQENNVPAGFQFDESMILASKMRQHQISGNTGSGNNNSAA AKFMMQQQQQQQIMMAAARGGIGLPLSLGNGGDNDIVDASSFKSQQGGDGSVQALYNGFTGSLHGS TQPQHFHHLQGGSMPGQTFGAPGPVMNQTQAQASGSTGGGGNTPAQQPKQRVRARRGQATDPHSIA ERLRRERIAERMKALQELVPNANKTDKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAAVAPLVADM SSEGAGGGDCIQANGRNPNGAQTTSANDSLTVTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLCLMPISLAT AISSATCHSRNPIISTSNNNNNNGNPHHNPLFQSNGEGPTSPSMSVLTVQSATMGNGGADGSVKDA
ASVSKP
SEQ ID NO: 310, R. communis TAl616
MAGNPPPEGLGDDFFEQILAVQPGYGGGDGGGGGDWGSTMPMMGLQLGSASSGGGGLRTNNMGMM PLGLNLEFLRQQEDGSGALDNNNHTNNNNNNVSSSTTSVINDRDSVHMASLFPTFGQLQTQTLRPP PPPHLHQPFHGQPTPGWSAASQPPAIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMKALQELVPT ANKTDRAAMIDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGAAGAVAQLVADVPLASVEGESIDGAAANQQTWE KWSNDGTEQQVAKLMEEDIGAAMQFLQSKALCIMPISLASAILRTHPPDAPSIIKPESNTPS
SEQ ID NO: 311, R. communis TA2825
MANNPTEPPADDFLQEILGLPNFASADAAGLVGADGALATPMMLQLSSGDGSNHITALGGGGGGGG GAGFHGFPLGLSLEQGKGGFLKPEEASGSGKRFRDDWDGRANTVKNVFHGQPMPTTMAAAPHPPT MRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKV LSMSRLGGAGAVAPLVTDIPLSSVEDETGEGGRNQPAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQFLQ SKALCIMPISLATAIYHTQAPDTSTIVKPETNPPS
SEQ ID NO: 312, S. bicolor TC104646
MAGQPPPPGGSEDDFLEHFFAFPSAASAAAGGHAGAGAGGDHPFPLALSLDAAAEPKPDRDPVQLA GLFPPVFAGAGGVQQPHLRGPPPPQMFQAQPKPGEGGMAPQPPAPRPKVRARRGQATDPHSIAERL RRERIAERMRALQELVPNTNKTDRAAMLDEILDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAQLVADIPLS VKGEASDSGSTQHIWEKWSTDGTEKQVAKLMEEDIGAAMQFLQSKALCMMPISLAMAIYDTQHSQD GHSLMKPEPNTSS
SEQ ID NO: 313, S. lycopersicum AK247217
MANNPSEGPSDDFFDQILGFPAYNGAEPNLAGNDAGAIPPAMMLQLNSGDGSSQFTGVGLGVGLGG GGFHGHGGGGSFPLGLSLEQGKGGFLKMDDVSAPGRRFRDDWDSRASSSVKPGFHGQPMPSMPHP PAIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRA VMLDEIVDYIKFLRLQV KVLSMSRLGGAGAVAPLVTDIPISSVEEESSEGGNNNQPAWEKWSSDGTERQVAKLMEENVGAAMQ FLQSKALCIMPISLASAIYHSQPPDTSSLVKPETNPPS
SEQ ID NO: 314, S. lycopersicum TA21665
MADNPPEVYAADDFLEQILAIPSYASLPVTDLTAGASSENSTSGVSQLQQQPLFPLGLSLDNGFAD ANNTGGFQVKTERE AMNMGNLYPGLEHLQSHA VCLS VPQVHQVQPFQGHPTS SAIVTIPHQPAIRP RVRAQRGQATDPHSIAERLRRERISERIKALQELVPSCNKTDRAAMLDEILDYVKFLRLQVKVLSM SRLGGTSAAAQWADIPLQSVEGDTCESHSNQHVWEKWSDSETEQEVAKLMEEDVGTAMQYLQSKS LCIMPISLAALIYPTQQSDNQSMVKPEQAAPL
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 315, S. Iycopersicum TC172581
MAANQPEGYADDFLEQILAIPPYSGLPVADVGTPSETTSFTSASAVSHLNSAAAAGLQQPLFPLGL SLDNGRDDVGDAGPYAVKHERDGMNIGNLYAGLEHLQSHAVRHSVPSVHHVQPFQGPPTTSTTVTV PHPPSIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERISERIKALQELVPSCNKTDRAAMLDEILDYVKFLR LQVKVLSMSRLGGASAVAQLVADIPLNLWEGDSGESRSNQHIWDKWSNVDTEREVAKLMEEDVGAA MQYLQSKSLCIMPISLAALIYPTQQPDDQSLVKPEAAAPS
SEQ ID NO: 316, S. tuberosum TA30646
MANNPSEGPSDDFFDQIMGFPAYNGAETNLAGNDAGAIPPAMMLQLNSGDGSGQFTGVGLGVGLGG GGFHGHGGGASFPLGLSLEQGKGGFLKMDDVSAPGRRFRDDWDSRASSSVKPGFHGQPMPSMPHP PAIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRA VMLDEIVDYVKFLRLQV KVLSMSRLGGAGAVAPLVTDI PIS SVEEESSEGGNNNQ PAWEKWS SDGTERQVAKLMEENVGAAMQ FLQSKALCIMPISLASAIYHSQPPDTSSLVKPETNPPS
SEQ ID NO: 317, S. tuberosum TA28621
MAANQPEAYADDFLEQILAIPSYSGLPVADVGTPSETTSFTSASAVSHLNSAAAAGLQQPLFPLGL SLDNGRDDVSEAGAYAVKHERDGMNIGNLYAGLEHLQSHAVRHSVPSIHHVQPFQGPPTTSTTVTV PHPPSIRPRVRARRGQATDPHSIAERLRRERISERIKALQELVPSCNKTDRAAMLDEILDYVKFLR LQVKVLSMSRLGGASAVAQLVADIPLQSVEGDSGESRSNQHIWDKWSNVDTEQEVAKLMEEDVGAA MQYLQSKSLCIMPISLAALIYPTQQPDDQSLVKPEAAAPS
SEQ ID NO: 318, S. tuberosum TA34455
MQAMNSLLSQQQQSQMSLQDLQNGGNGGSTGGVGGLGQHNMGHFHFDPTSSHDDFLEQILSSVPSS SPWPDLSKSWDPHHHLSSPPHNPSSGEDQPPSNPLHSQFHYDDQASSLLASKLRQHQITGGGAAAA AKALMLQQQLLLSRTLAGNGLRSPNGASGDNGLLSLPLNLSNNGDQNDGVANPANDNSVQALFNGF TGSLGQTSNQPQHFHHPQGGSMQSQSFGAPAMNQTPAASGSAGGGGGSTPAAQPKQQRVRARRGQA TDPHSIAERLRRERIAERMKALQELVPNANKTDKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAAV APLVADMSSEGRGEGNVGRGGNGTAASSSNKETMTVTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLCLMPI SLATAISTSTRIPLLSPEAGRPASPTLSALTVQSATIGNAAGKDATSLFEA
SEQ ID NO: 319, S. tuberosum TA37666
MQAMNSFQSTGENGASSGEHISHSHFDPSSSHDDFLQQILSSVPSSSPWPEISGDGHPYNFDDHQS TLLASKLRQHQlNGGSSAAAAAKALMLQQQLLLSRGIAGNGGDQNDDGLNPGNDISVQALYNGFAG SLGQTSNQSQHFHHSQAQSFGAPAASLTMNQTPAASGSAGGAQPKQQKVRARRGQATDPHSIAERL RRERIAERMKSLQELVPNANKTDKASMLDEIIDYVRFLQLQVKVLSMSRLGGAAAVAPLVADRSSE GGGDCVQGNGGRGGSNGTTSSANNDSSMTMTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQGKGLSLMPISLATAI STSTCHSMKPNNPLLLGGGSAINGGGETGGGPSSPTLSASTVQSATMGNGGT
SEQ ID NO: 320, T. aestivum TC253044
MLLCSTIQVIQMGNLSVFDEATMASLHDSKEFLSGSISSFGTAEQSQLAGSGLPCAEQQEQNAMCNI PLPFASGSQMAVSEAQGAMIPSKISSTIHNNKSEYPVPISHSADAQNKANSANGNSASAKPRARAR RGQATDPHSIAERLRREKISERMKNLQDLVPNSNKADKSSMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGA PGAVLPLLAESQTEGRSNSPLSSPTASQGLLDAAGPEDSLVFEQEVIKLMETSITNAMQYLQNKGL CLMPIALASAISNQKGTSAAAIPPER
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 321, V. vinifera GSVIVT00016367001
MDEYLDHLFSSTSWSDVNVKEGSSWICGEPSQTNGMLSDSIGIYEGDKKNSPVGMTNSNLMIEGLV TQDTSSIVLGGESDHGLGKGLLLEEAPRQQDLQNTEGNSSLNGAVNGSSEVGYVGLQLNTPTSTPC SLDLGSPKQLSLIGGMSRSSRPFTELDHVGCNGNEPSDFQRSVGNFQALPPIPQLWSQPSYGGGSS LSPVMGEYKMQGFGLQGEYVDNEMDIMRNRYVGDEILQLDNISSAIPIKGKEEQHTHPFSPSAVGP HMTMTASGLQSLPQTTVGTASGGCNGTGKPRVRARRGQATDPHSIAERLRREKIAERMKNLQELVP NSNKTDKASMLDEIIEYVKFLQLQVKVLSMSRLGAAEAWPLITDGQAEGSKGLSLSPSAGQAEDI CQSPDQIAFEQEWKLMESNVTMAMQYLQSKGLCLMPIALATAISSGKAASSGTGSDEGKNAATPV AATPVATAYLALGHIIHLLMAMF
SEQ ID NO: 322, V. vinifera GSVIVT00017237001
MLSTLPSWSDLPANPKSPWELNASNPISMPSNKSRDLSDDTTPSNPDNVQFAFDESAMLASKLRQH QISGNSSAAKSALMLQQQLLLSRGVAMGRSPSNGSGAGESGLLQLPLSLSNGDSCLVDRSQNDWD G S S S FKS PNQGGDGSVQALYNGFAGALHG S GQASNQAQNFHH PQGGSMQAQNYGAPATRVRARRGQ
ATDPHSIAERLRRERIAERMKALQELVPNANKTDKASMLDEIIDYVKFLQLQVKVLSMSRLGGAAA VAPLVADMSSEGGGDCIQASGTSGPTGGRATNGTQTTTSNDSLTVTEHQVAKLMEEDMGSAMQYLQ GKGLCLMPISLATAISTTTCHSRNPMVAAAAVAASNINNGSHTHPLLPNSNADGPSSPSMSVLTVO
SATMGNGLADAPVKDAASVSKP
SEQ ID NO: 323, V. vinifera TA46156
MASNPSEAPADDFLEQILGIPTYPAADPNLAANDVNLAAPMVLQLGSGEGSGHIAGGYQGTMFPLG LRLEQGKSSFLKPEDASGSGKRFREEVIDGRASTVKNAFHGQPMQATVAAAPHPPAIRPRVRARRG QATDPHSIAERLRRERIAERIRALQELVPSVNKTDRAAMLDEIVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAG AVAPLVTDIPLASVEEEASEGGRNEPAWEKWSNDGTERQVAKLMEENVGAAMQFLQSKALCIMPIS
LASAIYHSQQPDTTPLIKPQTNPPS
SEQ ID NO: 324, V. vinifera TA46194
MATNPPEGYADDFLEQILAIPSYPGHDPNMVGTGSTMVLQLSSGDGSGHVAGGGFQGPVFPLGLSL ESGIPATQVAPGSGERFRDDVDARGSSGRSERESVHLDGLFPAYGHVQSLSVRPAVPQVHQAFHGQ PTPVPITAAPHPPAIRPKVRARRGQATDPHSIAERLRRERIAERMKALQELVPSSNKTDRAAMLDE IVDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAQLVADIPLPAVEGETGEGGSNQQAWDKWSNDGTEREVAK LMEEDVGAAMQFLQSKALCIMPISLAAAIYPAHQTDTPTLIKPEPNAPS
SEQ ID NO: 325, Z. mays TA139285
MAGQPPPQGPEDDFFDQFFSMTAGGSYPGATAGGGRAPGDQPFSLALSLDAAAAEASGSGKHADGG KADREAIQLPGLFPPAFGGGVQPPHLRATPPTQVFHAQQPKQGGAAVGPQPPAPRPKVRARRGQAT DPHSIAERLRRERIAERMRALQELVPNTNKTDRAAMLDEILDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVA QLVADIPLSVKGEASDSGSKQQIWEKWSTDGTERQVAKLMEEDIGAAMQFLQSKALCMMPISLAMA IYDTQHSQDGQPVKPEPNTPS
SEQ ID NO: 326, Z. mays TA126400
MAGQPPPSGASEDDFLEHFFAFPSAASAGAAGGHAGAGVGGDHPFPLALSLDAAAEAKPDRDPVQL AGLFPPVFAGAGGVHQPHLRGPPPPQMFQAQPKPGEGGMAPQPPAPRPKVRARRGQATDPHSIAER LRRERIAERMRALQELVPNTNKTDRAAMLDEILDYVKFLRLQVKVLSMSRLGGAGAVAQLVADIPL SVKGEAGDGGGAPQQQQQQHVWEKWSTDGTEKQVAKLMEEDIGAAMQFLQSKALCMMPVSLAMAIY DTQHPLDGHGHSLKPEPNASS
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 327, A. cepa TC3698
cacttcacttcccctttcttcatttcttcaatacctacaaaccctagcttcactttactatttaaa aatggcgtctaataacaacccgcaacctccttccgatggactcaacgacgacttcttcgaccaaat tttttccatgccttccgccttcgccgcctcctcagcctctactgacgccaccgaagctctcaacta tgctgattcctccaccactggggttaccccgatgttctcacttggcctcagcttggatcagcagcc taagtctgattcgtcccaatcggaaagagagcatccggttcagtttgcttgcttgtttccacagta tgggcacaataatcaagttcatcaaacccggcctaatctttctcctcctcaagttcttcatggaca agcaatgcagagcagtatggctgcaacaccacaacctacaggtccacggccaagggttagggctag gagaggccaagctaccgatcctcatagtatagctgagcgattgaggagggaaagaatagcagaaag gattagagctttgcaggaattggtgcccagcactaataagaccgatagagctgtgatgctggatga aattgtagagtatgtgaaattcttgaggcttcaagtaaaggtactaagcatgagtagactaggtgg tgctggtgctgttgcacagctggtagccgatatccctatgtcttcttcagttgagggtgattcaag tgaaagtgggaagacaagctaccaagggtgggaaaaatggtcaaccgacggcaccgagcgtcaggt ggcaaaactaatggaagaagatgtaggggctgcaatgcaatttctccaatcaaaagccctctgcat catgcccatatctttagcagctgcaatttgtcaaacgaatccctcaaccgaaatctctttcatg
SEQ ID NO: 328, A. thaliana bHLH007-ll-ATlG03040
gtctgtgtctcttcgtcctcattagcttaagcatcatcattctctcacctaacaactccacacaag
attcttcgcatggaaagttgttcttcgacttctcttctctaactcgctatcttttaactcacccag
ctccactgagtcgaaaatttcaaacctttactcgtttccttcatggctaataacaacaacatccca
catgatagcatctccgatccatctcctaccgacgatttcttcgagcagatcctcgggctttccaac
ttctccggttcttcaggttctggtctctctggaatcggcggcgtgggtccacctccgatgatgctt
cagcttggttcaggcaacgaagggaatcataatcatatgggtgccattggaggaggtggacctgta
gggtttcataatcagatgtttccgttgggattaagtctcgatcaagggaaaggacatggctttctt
aaacctgatgaaactggtaaacgtttccaagacgatgttcttgataatcgatgttcctctatgaaa
cctattttccatgggcagccaatgtcacagccagctccaccaatgccgcatcaacagtctactatt
cggcctagagttagggctaggcgaggtcaagctaccgatccacatagcatcgctgagaggctccga
agggaaagaatagcagaacggatcaggtcgttgcaggaacttgtacctaccgttaacaagacagat
agggctgctatgatcgacgagattgtcgattatgtaaagtttctcaggctccaagttaaggtcctg
agcatgagccgtcttggtggagccggtgctgtcgcaccactagtcactgaaatgccattatcttca
tcagttgaggatgagacgcaggccgtgtgggagaaatggtcaaacgatgggacagagaggcaagtg
gctaagctgatggaagaaaacgttggagcagcgatgcaacttttgcaatcaaaggctctttgcata
atgccgatctcattggcaatggcgatttaccattctcagccaccagacácatcttcttcaatcgtc
aaaccagagatgaatcctccaccgtagatttttgttcatccaacggtccccagctgatgattgaca
ttttgctctgtttcccactactagacttttgtgactcatgaaaggtaagtaaaaaggcattggaga
tggaatctaagtaggatttgtgcagtaaagaagtaaaacgggatctgtcaaaagaaggaaaaagct
ctcgcttgcttggctagtatttatcattttgatgaaagtaactcttttttgttcaaagactttagt
gtgattttcaggaccaagggctttgagggtagtgctagctgtagtaatagtaatgaaggtgtggga
tcgtgtttctgaattatgtaaaaaaggaagaaaaaacaaatgttggtattatattatggttttgcc
tctc
SEQ ID NO: 329, A. thaliana bHLH059-ll-AT4G02590
gctcctttctcgtctctgtcttcttcgtcctcattcgttttaaagcatcaaaatttcatcaaccca aaatagattaaaaaaatctgtagctttcgcatgtaaatctctctttgaaggttcctaactcgttaa tcgtaactcacagtgactcgttcgagtcaaagtctctgtctttagctcaaaccatggctagtaaca accctcacgacaacctttctgaccaaactccttctgatgatttcttcgagcaaatcctcggccttc ctaacttctcagcctcttctgccgccggtttatctggagttgacggaggattaggtggtggagcac cgcctatgatgctgcagttgggttccggagaagaaggaagtcacatgggtggcttaggaggaagtg
FIGURA 24 CONT. GACCAACTGGGTTTCACAATCAGATGTTTCCTTTGGGGTTAAGTCTTGATCAAGGGAAAGGACCTG GGTTTCTTAGACCTGAAGGAGGACATGGAAGTGGGAAAAGATTCTCAGATGATGTTGTTGATAATC GATGTTCTTCTATGAAACCTGTTTTCCACGGGCAGCCTATGCAACAGCCACCTCCATCGGCCCCAC ATCAGCCTACTTCAATCCGTCCCAGGGTTCGAGCTAGGCGTGGTCAGGCTACTGATCCACATAGCA TCGCTGAGCGGCTACGTAGAGAAAGAATAGCAGAACGGATCAGGGCGCTGCAGGAACTTGTACCTA CTGTGAACAAGACCGATAGAGCTGCTATGATCGATGAGATTGTCGATTATGTAAAGTTTCTCAGGC TCCAAGTCAAGGTTTTGAGCATGAGCCGACTTGGTGGAGCCGGTGCGGTTGCTCCACTTGTTACTG ATATGCCTCTTTCATCATCAGTTGAGGATGAAACGGGTGAGGGTGGAAGGACTCCGCAACCAGCGT GGGAGAAATGGTCTAACGATGGGACTGAACGTCAAGTGGCTAAACTGATGGAAGAGAACGTTGGAG CCGCGATGCAGCTTCTTCAATCAAAGGCTCTTTGTATGATGCCAATCTCATTGGCAATGGCAATTT ACCATTCTCAACCTCCGGATACATCTTCAGTGGTCAAGCCTGAGAACAATCCTCCACAGTAGGATT TCTGCAATAAAGAGTTTGTACAGCTAATCCAACTGTCCAACATGGGTTTTTCTTCTGCTCTAATGA CTCTGGTTTCTTCTCTCCTCTCTCACCCACTTGAAAGGTAAAAAAGTGAAAAAGGCTTTGTAGATG GAATCAATGTAGGATTTGCAGTAGAGGGAAAAAAAATGTCAAAAAGCTCAATTGATCAAGTATTAT TGTAATCATTGTACCTTTATTTTAGGTGGACTTTGATGAAAGCAACTTTTTGTTTTCAAGACTTTA GTGGGAGGTTGAGGAAGGAGCTTGAAGGGTGTTATTTATTAGTAGTAGTAGTAGTGGGAAGTTGTG GGACCTTGTTGAGTTGTGTTCAAATTGAAGAAAAAACAAGTATTTGTAATTTGTCACCCCTTGTAT TATTATTTATTTTGTATGACTTTGGAGTAGTATAATTAATTATCAAATAATATTATTAGTTTGATC
TAGT
SEQ ID NO: 330, A. thaliana bHLH066-ll-AT2G24260
TCTTCCCAAAAAAAAGTGTAGAAGCAGAAGAAACCCATCATCATCATGATGAACTCTTCTCTTCTA
ACTCCTTCTTCTTCATCTTCTTCCCATATCCAAACTCCATCAACAACTTTCGACCACGAAGACTTC
CTCGATCAAATCTTTTCCTCGGCCCCGTGGCCCTCCGTCGTCGATGATGCTCATCCTCTTCCCTCC
GATGGCTTCCACGGCCACGATGTCGACTCAAGGAATCAGCCGATCATGATGATGCCTTTGAATGAT
GGCTCCTCCGTCCACGCTCTTTATAATGGCTTCTCCGTCGCCGGATCTCTTCCTAACTTTCAAATC
CCTCAGGGATCGGGAGGAGGATTGATGAACCAACAAGGACAAACGCAAACGCAAACGCAACCTCAG
GCGAGCGCGTCTACAGCTACTGGTGGTACGGTGGCGGCTCCGCCGCAGAGTAGGACTAAAATCCGA
GCTAGGAGAGGTCAAGCAACTGATCCTCATAGTATCGCCGAAAGGTTACGAAGAGAGAGAATTGCG
GAAAGAATGAAAGCTCTTCAAGAACTCGTTCCTAACGGCAATAAGACAGACAAGGCATCGATGCTC
GATGAGATCATAGATTATGTCAAGTTTTTACAACTCCAAGTCAAGGTACTGAGCATGAGCAGATTG
GGAGGTGGTGCTTCCGTTTCTTCTCAAATCTCCGAGGCTGGTGGATCCCACGGGAACGCATCCTCC
GCCATGGTCGGCGGTAGCCAGACGGCCGGAAACTCCAACGACAGCGTTACAATGACGGAACATCAA
GTGGCCAAACTAATGGAAGAAGACATGGGCTCGGCCATGCAÃTATCTTCAAGGGAAAGGTCTTTGT
CTCATGCCAATCTCTTTAGCCACCGCCATCTCAACCGCCACGTGTCACTCCCGTAACCCTTTGATC
CCTGGAGCTGTTGCCGACGTCGGAGGTCCTTCCCCTCCCAATCTTTCTGGCATGACCATACAGTCG
ACGAGTACAAAAATGGGTAGCGGTAATGGGAAATTAAACGGTAACGGCGTGACCGAGAGGTCGTCT
TCTATCGCCGTTAAAGAGGCCGTATCCGTTTCGAAAGCGTGATAACGGCCGTTTACTTTTGGGGTT
AGGCAGAGAGATACCAAAAACAAAGAGAAAGTGGGGTGAAGTGGGAGATAAAGTCAAAGTCTACGA
AGAATGAGGTTGAGGTTGTTTGATGTGTTCTCTGAACGAAGCCATATTTTTCGTAGAGTTTTGGTT
CTTTTACCTACGCACTACAAAACCATTCAAGGGACATTTCTTTTTCTTTTTTAAATATATGGTTGC
AATATGTTTTATTTTTATTAAATAAAGTTGGTATCGTTGATCTGAATATTAGGCTAGAAAAAGAAA
AAAATAGTATATTGGTTTTTC
SEQ ID NO: 331, A. thaliana bHLH069-ll-AT4G30980
AACATTCATTTTCATTCTCACTCCCCACCAAAAAAAAAAAAAACAGAAGCCATGAACTCCTCGTCT CTTCTAACTCCTTCATCATCTCCTTCTCCACATCTTCAATCTCCTGCAACATTCGACCACGATGAT TTCCTCCACCACATCTTCTCCTCCACTCCTTGGCCCTCATCCGTTCTCGACGACACTCCTCCACCA
FIGURA 24 CONT. ACTTCCGATTGTGCCCCCGTCACTGGATTCCACCACCACGACGCCGATTCAAGAAACCAGATCACT ATGATTCCTTTGTCACATAACCATCCTAATGACGCTCTCTTCAATGGCTTCTCCACCGGATCTCTC CCTTTCCACCTCCCTCAAGGATCGGGAGGTCAAACGCAAACGCAGTCGCAGGCGACGGCGTCAGCC ACCACCGGTGGTGCAACGGCGCAACCTCAGACAAAGCCTAAAGTCCGAGCTAGGAGAGGTCAAGCC ACTGATCCTCACAGTATCGCCGAACGGTTACGGAGAGAGAGGATAGCGGAAAGAATGAAATCTCTT CAAGAACTTGTCCCTAATGGTAACAAGACAGACAAAGCATCAATGCTCGATGAGATTATCGATTAT GTCAAGTTCTTACAGCTCCAAGTCAAGGTACTAAGCATGAGTAGACTGGGCGGTGCTGCTTCTGCT TCTTCTCAAATCTCTGAGGATGCCGGTGGATCCCACGAAAACACCTCCTCCTCCGGCGAGGCGAAG ATGACGGAGCACCAAGTTGCAAAGCTAATGGAAGAGGACATGGGATCAGCCATGCAATATCTACAA GGCAAAGGTCTTTGCCTCATGCCCATCTCGTTAGCCACCACCATCTCCACCGCCACGTGTCCTTCT CGTAGCCCCTTCGTTAAAGATACCGGCGTTCCTTTGTCTCCTAACCTATCCACTACAATAGTTGCT AACGGTAATGGCTCATCGTTGGTCACCGTTAAAGACGCTCCCTCCGTTTCCAAGCCGTGATAACGG CCATTTGTCCATTTCATTTTCCCTTTTTTGGGTGGGAAAGAGAGAAAAÁAGTTTAGAAGACAAAGA CAAGTGGGATAGGTGGTTTTGGTCAAAGTTTAGAAAGAATAAGGTCGTGTTTTCGGATACGACACC GTATTTGCGTACACTTTGGTTTTCTGTCTTTACCTACTACAAACCACCCATAAGCACACTCATGTT ATCATGTTTTTTTTTTTTTGGTTTATAAAGTTATATCCTTAA
SEQ ID NO: 332, A. thaliana bHLH082-ll-AT5G58010
ATGGAAAATGGAAATGGAGAAGGAAAAGGAGAATTCATAAACCAAAACAATGACTTCTTCCTTGAT TCCATGTCAATGCTCTCCTCTCTCCCTCCTTGTTGGGATCCATCTCTTCCTCCTCCTCCTCCTCCG CCACAATCTCTTTTCCACGCTCTAGCCGTCGACGCCCCCTTCCCCGACCAGTTCCATCATCCTCAG GAGTCAGGAGGTCCAACAATGGGTAGCCAAGAAGGGTTACAGCCACAAGGTACAGTGTCGACCACG AGCGCACCTGTTGTTCGTCAAAAGCCAAGAGTTCGAGCCAGGAGAGGCCAAGCCACCGATCCTCAC AGTATCGCTGAGAGGCTTAGAAGGGAACGCATCGCAGAGCGTATGAAGTCTCTCCAAGAACTGGTT CCCAACACCAACAAGACGGATAAGGCATCAATGTTGGACGAGATCATCGAGTATGTTAGGTTCCTT CAGCTTCAAGTCAAAGTACTAAGCATGAGCAGATTGGGAGGTGCAGGATCAGTTGGTCCACGCCTC AATGGTCTCTCCGCAGAGGCAGGAGGACGGCTCAATGCCCTCACTGCACCGTGCAATGGCTTAAAT GGGAATGGAAACGCTACAGGATCGTCCAATGAGAGCCTAAGGTCAACAGAACAAAGAGTGGCGAAA CTGATGGAGGAAGACATGGGATCAGCAATGCAATACCTTCAAGGGAAGGGGCTTTGCTTAATGCCA ATATCTCTCGCAACCGCGATATCATCATCAACTACTCACTCTCGTGGATCCCTCTTTAACCCCATC TCCAGTGCTGTAGCAGCAGAGGATTCAAATGTAACAGCAACTGCAGTTGCTGCACCTGAAGCCTCG TCTACTATGGATGATGTATCTGCTTCCAAGGCCTGAACCATAGAATACTCATGTGTTTCGTTTTCT CAGTTTAAGTCAAACGCTAATCTCCCTATCTTTTTACTATTTTCTCTGCTAAGCAACAATAATATA AAACAGTTGCAACAAAGAACAAAACCGAC
SEQ ID NO: 333, A. vulgaris TC15501
CACTTTCAAAACTCTCTCTCTCTTTCTCTTCCCGAAACTCAAAATTTCTCCGGTTTATCGGGTATC GGATCTGTAACTTGTTTCGCCGACAACCTCGTTTTTCGATTTTCTCTCATAAACCCAAAACAAAAC CCTTTGTCTATTTCTATGTTTAATGTTCTTCAAAAACCCTAACACTTCAATCAAACACGCATACAC TCTTACTCTCTTCTTTCTCACAACATGGCTAATAATAATAATCCTACAGAAGGATTAACAGATGAT TTCCTTGATCAGATCTTATCTTATGGTGCTCACGAAGGTAATTTGGCGGGAAATGATGTTAATTTG GCGGGAACAACTACACCTGGAGGTTCGATGGCCTTGCAGTTGAGTTCTTCTGGAGGTGATATTACC GGTAGTGGTGGGTATCATCATCATCATCAGCATCAACATCATCATCAGTTAAGTGGTGGTGGTGGT GGTTTTCCGTTAGGGTTAAGTTTAGAACAAAGTGGTAAAGGTGGTTTTTTTAAACCAGATGAAGCT TCTGGAAGTGGTAAGCGGTTTCGTGACGATTTCGTTGATTTGAAAGCTGTTTCTTCTACTAACAAC GATAACAACGATAGAGGAGACTCTGTACATTTGAATAATTTGTTTCCAGCATTTGGACATGTGCAA CAACAGCAACAGGCTCACTCTGTTCGACCTCCTTCACATCAAAATCAAATCAACCAGCCTTTCCTT GGGCATCCAACACCTGGGGCTGTTGCTGTTGTACCACATCCACCTGCCATTCGGCCTAGAGTGCGA
FIGURA 24 CONT. GCAAGAAGGGGGCAAGCCACTGATCCTCACAGTATTGCAGAGAGGTTACGTAGAGAAAGAATAGCT GAAAGAATGAAGGCACTACAGGAACTGGTTCCTAGTTCCAACAAGACTGATAGGGCAGCTATGCTT GATGAAATTGTTGATTATGTTAAATTTCTAAGGCTCCAGGTCAAGGTTTTGAGCATGAGCAGACTG GGAGGAGCTGGTGCAGTAGCACAGCTTGTGGCTGACATTCCACTTTCATCAGCTGAGGGCGGAGCC AGTGAAGGTGGCAGTAATCAGCCAGCATGGGAGAAATGGTCTACAGATGGCACAGAACATCAAGTA GCAAAGCTCATGGAAGAAGATGTTGGAGCTGCCATGCAATTCCTCCAATCTAAAGCACTTTGCATC ATGCCCATTTCACTTGCCTCTGCAATATACCACGACCAACCACCCGATGCCTCCACAATGATCAAA CCCGAACCTAATGCACCTTCATAAAATGAAAAGGATACATGCAATTGGACGTGCCCATGAACAACT CCAAACTTACAACTATCCCACCTTCCATTTGTTCCCCCCACGTCAGACTTAGTCAACTCCCCTCAG CATTGCAATCAAAGTCAGATGCCATATTATTCGTTCTGCCTTTCATTTTTTTCGTCAAATAGGTTG TAATGTGATGCCTAGAAAAATAATCATAGGTACTCCTGATGTGGTGTGGGATAGTGGTGGATAGCC AGAACACTTTCCGGTGGGGACCCTTCTTTTGGATAGTGGAGGGTGGGGCATTTTTAAAGGGGGAAG ATGGGTACATAGACATGATTAATGTATTAGAAGGAAACTGAAAAGGGAATTGAAATGGATATTGGA TAGTTGTTGGTCGCTTAAAAAAGTTGTGTTGGAAGGTTGCACTACTCGGTTTTGAGTGGGTTGTGT TTTTTGTAAAGTGCTTGATTTATTTTTCTCAAGTATCTCTGAGTCAT
SEQ ID NO: 334, A. vulgarxs TC19278
TCAACTGCTGTTGGCAGTTGTAATGGGGCTGTGAAGCTCGTGTGAGAGCTCGCAGGGGTCAAGCAA CGGATCCACACAGTATTGCTGAAAGGCTTCGAAGAGAGAAAATAGCAGAGAGGATGAAGAATCTAC AAGAACTTGTTCCAAACTCTAATAAGACGGATAAAGCATCTATGCTTGATGAAATCATTGAGTATG TCAGGTTTCTTCAGCTTCAAGTCAAGGTTCTAAGCATGAGCAGGCTGGGGGCAACAGGGGCAGTTG TTCCCCTCATTACAGAAAATCAGCCTGAGGGATCTACTAGTCATTTTCTGTCGCAGTCAGCTGGTC GAGATGTTAAACATATTGAATCTCCTAACACCCTTACATTTGAGCAAGAAGTAGTGAAGCTGATGG AATCCAACATGACCAAAGCTATGCAATTTCTGCAGAGAAAAGGCCTCTGCCTAATGCCTATTGCCC TTGCAGCTGCCATTTCCGGTAGTAAAGCACCACCCGCCTCTCTTTCTACTGAGGGAAAGAAGTCTA TTTTGACCAATGGCTTTGTTCATCATAACAGTGGGCAATCTAACATTGGGCCAGGTCAGATATCAT CTGATGGAGAGACTAGATCAGAGGAAAACATAATTGGGATTCACAGCAGAGAAGACTTTTCAAGCA ACAGCTGCAGTGGGACCAGCATTAAAAAAGAGGGAACAAACACCACAAACTTCACCAGAGAAATGA ATCAAGAGTAGACATAGTTTTGCCGGTCTCAATCTTTGTGGCTTCATACCTGGTCTCCAATTCTCA AGTTTCAGTAACCTAGCAAGTAGATAAGTAGCAGAGTCTGGGACTGTTTTGTTTTTTTTTTCTCGC TTCAAAGATGAGAATGTGGTATAGATTTCTAATTATACGTTATAGGTTTCATTGTACATGCACACA
TATATGC
SEQ ID NO: 335, B. napus TC10015 part
CCCACGCGTCCGAAACACCTTCCGATGACTTCTTCGAGCAAATCCTCGGTCTCCCCAACTTCTCAG CCTCTTCATCCGACGGCGGGTTAGGCGGAGGAGGAGCACCGCCGATGATGCTGCAGCTGGGCTCCG GCGAGGAAGGAGGTCACATGGGTGGGCTAGGAGGAGGAAGTGGGTTTCACAACCAGATGTTTCCTC TAGGTTTGAGTCTTGAACAAGGCAAAGGACAAGGCTTTCTTAGACCCGAAGGTGGTAGTCTTGGAA CTGGGAAACGTTTCTCTGATGACGTCATGAAACCCGTTTTTCATGGGCAGCCAATGCAACAACAGC CAGCTCCAGCGGCGCCGCATCAGCCTACATCGATCCGTCCCAGGGTTCGAGCTAGGCGTGGTCAGG CTACTGACCCACATAGCATAGCTGAAAGGCTTCGTAGGGAAAGAATAGCGGAGCGGATCAGGGCGT TGCAAGAGCTTGTACCTACTGTTAACAAGACAGATAGAGCTGCTATGATTGATGAGATTGTGGATT ATGTAAAGTTTCTCAGGCTCCAAGTTAAGGTTTTGAGCATGAGTCGTCTTGGTGGAGCCGGTGCAG GTGCTCCACTTGTTACTGATATGCCTTTGTCATCATCAGTTGAGGATGAATCTGGTGAAGGTGGAA GGGCACCACAACCTGCGTGGGAGAAATGGTCTAACGATGGCACTGAACGCCAAGTCGCTAAACTGA TGGAAGAAAACGTTGGAGCAGCGATGCAGCTTCTTTCATCTAAGGCGCTTTGTATGATGCCAATCT CATTGGCTATGGCTATTTACCATTCTCAGCCTCCAGATACAACTTC
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 336, C. Clementina DY268946
CAACCGTGTTACACCGACCCATCTGCTGCTGCTTCAAACTCCGCTGATGACATACCCATGTTCCTA
CAGCTGGGCTCCGGCGGCCCTTCTCCTGGTGCCGGAGGAGGCGCCACCAGTGCTGCTGACATAAGA
AGTTTGGCTATGGGAATCAGCATGGGAATGATGCCTCTAGGGTTAAATTTGGAGCATAGCTTCTTA
AGGCAGCATGAAGATCATAATAGTAACCATAACAACAACAACAACACTAATGCTTCTTCTTCTTCT
CCTAATAATTCTTCTGCCACTTCTGGAATCAACGAGAGAGATTCCGTGCACATGCCAAGTTTGTTT
CCAGCGTTTGGACAGTTGCAAAGTCAATCAGCCCGGCCGCCGCTGCCACGTCCTCCTCAAGTACAG
CAGTTTCAGAGCCAACCAGCAGCCGCACCGCAGCCTCCAGCTGTCCGTCCAAGGGTGCGAGCAAGA
CGAGGGCAAGCCACGGATCCTCACAGCATTGCCGAGCGGTTGCGTAGGGAAAGAATTGCGGATAGA
ATGAGGGCTCTGCAAGAGCTGGTTCCTAGCTGCAACAAGACGGATAGGGCAGCCATGCTTGATGAA
ATCGTGGATTACGTGAAGTTTCTAAGGCTTCAGGTCAAGGTTTTGAGCATGAGTAGACTGGGTGCA
GCTGGTGCCGTGGCTCAGCTTGTAGCTGATGTTCCTGTGTCATCAGCTCTTGAGGGAGAGAGCATT
GATGGTGGAAGCAGTCAGCCAGAATGGGAGAAATGGTCAAATGACGGAACTGAACAACAAGTAGCC
AAGCTAATGGAAGAAGACATTGGAGCTGCTATGCAGTTCCTTCAATCCAAGGCACTTTGCATCATG
CCCATATCACTTGCCAGTGCAATCTATCGCACCCGTCAACCGGATGCCCCAGCATTCGTCAAGCCT
GAATCGAGCACCCCTTCATATTGTCTAAACAACAATTGGAGTCAGCAGTTGGCTCACAATGACTCA
AAATATTTAATCACGGGTACCTATTCCTATAGAATACTTTTGGTCCTCTTATCCAACCAAATAATT
CAAATTCCAATGCAACGTTCCCATTCTTCTTTCCCTTAATTAACCTAGGGCAAAAAAGGGAAATGA
AAAGAAGGCAATGGGCAATGGCAAGGGGGAAAAAGGGGAATTTTTTTCCAAAGTTTTTTTTTTTTA
TAAAAACTCCCCTTTTCAAAAAAAATTATAAAGGGGGGGGGGGGGTTTTTTAGGGGGGGGGGAAAA
AACCCCCAAAAAAGGTTTTCGGGGGGTGTTTTATATG
SEQ ID NO: 337, C. longa TA2544
GCACCCGTTGAGACCTAACCTTCCCCGGGAAACTGGCGGCTGTGCCTATGCAACCGAGCAGCAAAG
AGACGGAAAGGATGGCGCAGTCCCACGCCGCCCTCCAGCTGGAGCTCCAGAACGGCGGCGGAGGCG
CCCAGAACGACGATTTCTTCGAGCAGACGATGTCCGGCTTCTCCACCGCCGCCTGGGCACCGGAGT
TGGGGACCCCCAGGTCGCTTTTCGGGGCGCGGTCTTCGGAGGAGTCGCCGGACGACGAGGGATTGA
ACTACGCCCCACCGTACGGTGGGTCGTCTCTTCTCGCCTCGCGGCACCGGATGCACCTCGGCACCT
CGCCGGCGGATTCGTCGATGTTTCTCCAGCTCGGTGGGCAGATTCTGTTACATCCTACGGCCGGCG
CCTCCGGGGGCGAGTCCGGGGGCTTCCTCCGGTTGCCCCTCTCCCTCGGTAGCGGAGGCTCTGGGG
TCTCGACTTCTGCCATCTTCGGCGACAGATCCCGAGGAGAAATCGACCCGCCGTTCGAATCGTCCA
ATCCCACCGAGGCTGAGGTGTTGTATAACGACGGATTCACCGGATCGCTTCCACGGGCGGTGCAAG
CGTCCCTTCATCAGCAACTCCTCCGACAACCCCAGAACTACGGAGCTGCTACGCTGACCGGACAGG
CTCTTGCGATAACAGCAACGGCTTCAGGTACCGCCGGCGCAGGTACTGCGCCACCCAAGCCGAGGG
TGAGGGCCAGAAGAGGTCAAGCGACCGATCCCCATAGCATTGCCGAAAGACTTCGGAGGGAGAGAA
TCGCAGAGCGTATGAAAGCTCTGCAGGAATTGGTGCCCAACGCTAACAAGACGGACAAGGCGTCGA
TGCTGGACGAGATCATCGACTACCTTAAATTTCTCCAGCTCCAAGTCAAGGTCTTGAGCATGAGCA
GATTGGGCGGAGCAGCCGCCGTCGCCCCGCTCGTCGCTGACATGTCTTCAGAGAGCGGCGGCGGAG
CGGGAACGCCGAGGAGTAATAACGATGGCCTGACGGCGGCGGAGCAGCAGGTGGCGAAGTTGCTGG
AGGAGGACATGGGTTCAGCGATGCAGTACCTGCAGGGGAAAGGCCTCTGCCTCATGCCCATCTCCC
TCGCCTCCGCCATCTCCTCCGCCACCTGCCGTCCTCGGCCTCCCCCCGGTGTCAACCTCCGCTACC
CGGCAGCCGGCGACGCGCCTCCGTCGCCGAGCATATCGGCGCTGACAGTCCAATCGTCCAACGCCG
GCAGCGCCGGCGCCGACGCCAGCTAGGATGGAGCTGTTCGTTAAGATCGCTGTCCAAAAAGTGCTT
GGAATTGGAATTTCAATCCTTAGT
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 338, C. paradisi híbrido_TA3392
CGACTTTGCCGAGTCAAACTCATGGCGAACAACCCGAACGAAGCCTCCTCGACTGACGATTTCCTC
GAGCAAATCCTCGGAATTCCTAATTTCGGTTCTGCGGAGTCCGGCTTGGCGGCTAGCGATGGCGGC
TTGGCTGCAGGCTCGCCGATGATGCTGCAGCTGAGCTCCGGCGACGGCTCCAGCCACATCTCGGCT
CTCGGAGGCGGAGTAAGTAGTGGGTATCATGGGCAGGTGTTTCCGTTAGGCTTGAGCTTGGAGCAA
GGTAAAGGAGGATTTTTGAAGCCCGAGGAAGCCTCTGGAAGCGGAAAGCGGTTTCCTGAAGAACAT
GCTATAAAAAATGTTTTTCATGGCCAACCACTGCCCTCACCTGTTCCTGCAGCTCCACATCCACCA
GCAATGCGCCCCAGGGTGCGAGCTAGAAGAGGACAGGCCACTGATCCACACAGCATTGCTGAACGT
CTACGAAGAGAAAGAATAGCAGAAAGAATTAGGGCACTGCAGGAGCTGGTCCCTAGTGTCAACAAG
ACTGATCGAGCAGCCATGCTTGATGAAATTGTGGATTATGTGAAGTTTTTGAGGCTTCAAGTGAAG
GTTTTGAGTATGAGTAGAGTGGGCGCTCCTGGCGCTGTGGCTCCACTGGTAACAACCGACCTCCCA
CTATCATCAGTCGAGGATGAATCTGGTGAAGGGGTAAGAAACCAACCAGCCTGGGAGAAATGGTCA
AATGATGGCACAGAGCGACAGGTAGCTAAGCTCATGGAAGAAAATGTTGGGGCTGCCATGCAGTTC
CTTCAATCAAAGGCTCTTTGCATAATGCCGATCTCACTGGCCACGGCAATTTACCATTCGCAGCCA
CCGGAATGAAGAGGTAGGATGGATAATGGTTGGTTGTTTGAAAATGCTTAGTGTTTTCCCAGTCCA
ACATAAAATGATAGTGCTTGCTTTGTCGAGGAGGCGTGGGCTTTGTTTTCAAAAAGTAATTTGACT
TCTTTCTCATTTTCTCCTGAGTCATTCATTATTGGAGGGCGACGGGGCTGCTGACGATGGCTGATG
GCTGATGGCATTGGTATTGGTGGACTGCGTTTGGTATAAATTACTTACGTATTTGAACTTAACCTG
ATTTTCAATTCTAAAGTCATTTACTGCGGTACAAAATTTGAAAAATCTATTACTGAATTTAGTTGA
TAATAACCAACTTAGCGTGTTCCTTTCGGGGATCATCCATCCAACTC
SEQ ID NO: 339, C. sinesis TA12416
GGGGAAACACCAAATTCCTTCTCTCCCTCTCTCTCCCTCTCTCTCTCTCTTCTTCCTGTTCTCACC
TATTTAGTATTTAACATCCATCAGAAGAATGGTTTCCATTCTCTTGAAGAAACTCTTGACTCTTCA
AACTTAAATTTCCATATCGTAAAGACTTATTCTCAAGAAATTAAGATGCAGCCCTGCAGCAGCGGC
GGAGAAATGCAAGGAATCAGCTCGCTCTTGAGCAACGGAAGCCACGAGCAGCAGTCGCAGATCCAT
CAAAGCGCGACGTTTGATCCAACTTCGCAAGACGACTTCTTAGAGCAAATGCTATCCTCTCTCCCA
TCGTGTTCTTGGACTGACTTGAAGTCTCCCTGGGGGGTTGTTGACCTTAACCCTAATAACAATAAT
AATAATATTAACAACAAGCAGCCCAGAGACTTATCCGACGAAACGGCGCCGTCCACTACTCAAGAG
AATAATGTCCCTGCAGGGTTTCAGTTCGACGAGTCCATGATTTTAGCTTCCAAGATGAGACAGCAT
CAGATCAGCGGGAATACTGGGAGTGGGAATAATAATTCTGCTGCAGCAAAGTTTATGATGCAGCAG
CAGCAGCAACAAATCATGATGGCTGCTGCTAGAGGTGGCATCGGGTTGCCTTTATCACTTGGAAAT
GGTGGCGATAACGACATCGTTGATGTCTCGTCATTCAAGTCCCAACAGGGAGGAGATGGCTCAGTG
CAAGCACTCTACAATGGCTTCACTGGATCTTTGCATGGCTCAACCCAGCCTCAACATTTTCATCAT
CTTCAGGGAGGATCGATGCCCGGGCAGACCTTTGGGGCACCAGGGCCGGTTATGAACCAGACGCAG
GCTCAGGCAAGTGGGTCAACCGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGAAACACACCCGCTCAGCAGCCTAAA
CAAAGGGTTAGGGCTAGGAGAGGTCAAGCTACTGACCCTCACAGCATAGCTGAAAGATTGC GCAGA
GAGAGAATTGCAGAGAGAATGAAAGCTCTTCAAGAACTTGTACCTAATGCCAACAAGACAGATAAG
GCTTCGATGCTGGATGAGATCATTGACTATGTCAAATTCCTCCAGCTGCAAGTGAAGGTCCTGAGC
ATGAGTAGATTGGGCGGTGCTGCTGCTGTCGCACCCCTTGTTGCTGATATGTCCTCAGAGGGAGGA
GGAGGTGATTGTATCCAAGCAAACGGGCGGAACCCTAACGGAGCTCAGACGACGTCAGCTAACGAC
AGCTTAACTGTGACGGAACACCAAGTGGCTAAGCTGATGGAAGAAGATATGGGGTCAGCCATGCAG
TACTTACAAGGCAAAGGGCTTTGTCTAATGCCCATCTCACTTGCAACTGCTATATCGACTGCCACG
TGTCACTCTAGGAACCCCATCATCAGCACCAGCAACAACAACAATAACAACGGCAATCCCCACCAC
AATCCTTTGCTTCAGTCCAATGGTGAGGGCCCGACCTCACCTAGCATGTCAGTGCTGACTGTCCAG
TCAGCAACTATGGGTAACGGTGGGGCTGACGGCTCCGTCAAAGATGCTGCTTCCGTTTCCAAGCCT
TGATCAACGGCGTCGACCGACTTTATGATGCGGCTCGTCCAAAGTCTACGAAAATAAGGCGTCACT
AGATGTTGGACCTTCACGACGTCGTATTTGTGTAGACTTTGTGACTGAATCTAACAAACAACAAAA
FIGURA 24 CONT. AAGCAAGAAAGAAGCCAATCCCAAGAACAAAAACCTTATTTTATGTTATTATTATTATTTTAATTT GCGGGTTAGGTTTTGTTAATTTTACTATTATTAAATTTTTAATTTCTCAGATGGGATATCTCCCTC TTTTTCTTTTATTTAATATTCTCTGTCATGATTCTCTATTAAATAATTATTTACAAAAGCCTTTAA TC
SEQ ID NO: 340, Ε. grandis W02005001050 seqID77
AGCACTTTCACTTATCAGAGGCCGAAAGCAAAACCCCCTGAACACTTCAAAGAAAAGAGGTTTTTT
CAGACACCCTCTCGCCCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTGAGCTGAGAGACAATACCAGCTTATAAAAC
CCGAGACCCATAAAACCTCCCATCGGAATTCCCGAATCACGTTACCGGGTCATCGGGTTTCGGATC
TGCCACCCAGTTCACCAACACCACCACCACCACCTTCCTTCCCCCCCTCCTTTTTGGGTTTCCCAA
TGAGCACATCTCACCTCCACTTCCTCCCTCCCCTTCCCTTAAACATTCTCTCCCACCAATAATTTC
CACATTGGCAACCAATTTCTTATTCATCATCCCCTCCCCGAGTCCCACCAACCTTAGGCTCTCTCT
CTCTCTCTCTCTCTGCCACTCAATCTTTCCACTTAGAAAGAAACCAACTTTTTGCTGGGTTTCGCA
TAGAGCAGAAAACCCATCGTAGACTTTGATCTCCAGTTGACACTTCTATAGAGAAAGGGAGATAGA
GTGGAGAGAGAGAGAGAGAGTTTATAATCATCGGCTTATGGCAGGCTCAAATCCGCAGGAAGGACT
GGGGGATGAGTTCTTTGAGCAGATCTTGGCCGTGCCGCCCGGAGCTTACTCCGGTGGCTCCACGCC
CATGGTCTTGCAACTCGGCTCCGGCCGCGGCGGCGTGGAAGATGGCGGCGGCAGAGGAGGCGGCGG
GGGGCTGAGGGGCATGGGGGTGATGATGCCCCTGGGGCTGAATTTGGAGCAAGGTGGATTGTTTAG
GCACGAGGATGTTGAGAACAGTACTAGTGCATCTTCCACCACTTCTGCCATCAATATGGAGAGAGA
AGCAGGAGTCCACCACGGCAACAACATGACAAGCTGCTTGTTTCCAGCATTTGGACAGTTCCAGAC
TCATCAGTCAGTCCAGCCACCTCCTCCCCATCCACCCCCTCCTCAACTTCACCCGGCCTTCTTGAA
TCAGCCCGCAGTGGGATCGCCGAACCAGCCGGCGATACGCCCAAGGGCACGAGCTAGACGAGGGCA
AGCCACGGATCCTCACAGCATCGCTGAGCGGTTGCGCCGAGAAAGAATTAATGAAAGAATGAAGGC
GTTGCAGGAGTTGGTTCCCAGTTGCAACAAGACGGATAGAGCAGCCATGCTTGATGAAATCGTGGA
TTACGTGAAGTTCTTGAGACTCCAAGTCAAGGTCCTAAGCATGAGTAGATTGGGCGGAGCTGGTGC
TGTGGCTCAACTTGTAGCTGATGTACCCCTCTCATCAGCTGAGGGCGAGATCATCGAAGGCGGGAA
CAATCAACCGGCGTGGGAGAAGTGGTTGACAGACGGCACAGAGCAGCAAGTGGCTAAGCTGATGGA
AGAAGATGTTGGGGCTGCAATGCAGTTCCTCCAGTCCAAGACGCTCTGCATCATGCCCATTTCGCT
CGCCTCCGCAATCTTCCGCACAAGCCAACCAGACATGCCCCGGTCCATCAAGCCCGAATCCAGCGC
CCCTTCCTGAAGCACCCTGAACAAGTTCCTGGCGACATCATAGTTGCAACAATGCCTAGGTTTCTC
AGGTCTGACCGGTTCGAGGTTGTCCCCAAGTCGACGTAACTCCTTTGCCAACCAAGTTGCTTAGTG
CCCTCTGTTCATAGTTCACTGTCGCTGTCTTAGAGTGGGTGTGAACTTGTGGTTCTCATGCCTTAA
TTACAACCTAAAAAAATGCATCAGTTTCATGTTTTTTCCAATTCATCCAAGGAAAAGTCAAAAGCA
ACTTTATTCCAAATTCAGCTTATTAAAACCTATCTTCTGATGAAAAAAAAAAA
SEQ ID NO: 341, E. grandis W02005001050 seqID1671
•CCTCCTCGCGTCCCTCTGCGTTCCGCCAGCTAACCGAAATTCCGGCCACCCCCGCCGGAGCTCCGC CGTGAAACCCTCTCTCCGTCTCCGCCTCCGCCTCCGCCTCCGTCTCCGTCGCTTCCTTCCGCCGTC GCGACCGTAGATAGATGCCCTTCCCGCCCGCTCATGGCGAACAACCCGAGTGACGGCGCCAGCGAC GAGTTCCTGGAGCACCTCCTCGGCCTCCCCAACTTCGCTGCCGCGGCGGAGGCCGGCCTCGCCCCG GGCGACGGGACCGGCCTGTCCGTCACCGCGGCCACCCCGATGATGCTCCAGCTCGGCTCCGGCGAC GGCTCCGGCGGCCACGGCCACGGCCACGGCCACGGCCATGGCCAAGGCCACTTGTCGGCCCTCGGC GGCGGGGGAGCGGGGGCGGGGGGCGGCGGTGGCGGCGGTGGCGGGGGGTACCATGGGGCGGTGTTC CCGCTGGGGCTGAGCTTGGAGCAGGGGAAGGGAGGGTTCCTGAAGCCCGAGGAGGCGTCCGGGAGC GGCAAGCGGTACCCCGAGGAGGTCGTCGACGGCAGAGCTTCGACTGTGAAAAACCTGCACTCCCCG TTGCCCAACTTCCCAGATGTTTCGCAAATGGCTTCTTTTAGGAACCGAGATGTGTTTCATGGACAA CCAGTGCCCAACCCTGTTCCTGCAGCACCACATCCACCAGCAATGCGCCCGAGAGTAAGGGCTAGA CGAGGACAAGCTACAGATCCCCACAGCATCGCTGAACGATTGCGGAGAGAGAGAATAGCAGAAAGG
FIGURA 24 CONT. ^τγγτρρ^Ϊ^3aagttCctgaggctccaagttaaggttttaagcatgagcagattgggcgca γγΪγγΙλρ™™??=cacttgtgaccgacatcccaCtatcatcagtcgaggaagaaggcggtgaa
atctctctagccaccgcgatctaccaaactcaaccgcccgacacctcctcccttgtcaagtctgaa agcaatccaccatcctagaccagccacaacacaggcacctcccctttttccaggtcccaccaaagg ctcaagacttaaatgctccttggtccccgctttagtttgtcccgtttctacaccttcaaaaaccag
ttgatggcccttcttccttcctcaaattgcaatcaaagtcagatgccatagcccSg^ttcÍgc
tcatgtcttgccaagttcaactaaaggagagatattcaaaccctcacttgatatgctctctctctc tctctctctctctctctctctctctctctctctctctctctctctctctctctaccaatagSa? gcttagtggagaatgatgtgagcgactttatagtgggtgggggctcttgtttttcttggtagtggg tcgtgggaccttgtaaaagggattggttgtgtaaágtaccatttgtataatgtaatgcgt^ctg
ttcgatgagggggaatggattgcttggtagaaaattgagaaaaaaaaaa ^iaaigcgtaatgtg
SEQ ID NO: 342, G. hirsutum C0123623
attcttaagacatgaagatggagttgtagttgacaacaacaacaacaatgcttcttgttcagctgc Lt?t?ctgtttctggaatcagtg^^
acaaatgcaaactcagcaaatccgcgcttcaccgccacctcctcagcctccaccgcagctcca?ca gccatttcacagccagccaacatcaggtccagttgctgctgcaccgcacccacctgccgtccgtrr
cgctatgcttgatgaaattgtggattatgtgaagtttcttagacttcaagttaaggttctgagcat
gagcagactcggtgcagcaggtgcggtggctcagcttgttgccgatgtaccc^actatccg?ÍgI
gggtgAtggtgcaggaggtggaacccagcctccttgggagaaatggtc^
gcaagtcgctaagctgatggaagaagacatcggagctgccatgcagtttcttcagtcccaggcact
ttgcatcgtgccgatatcactggcatctgcgatcttccctgcacatcaacctgatgcac^
SEQ ID NO: 343, G. hirsutum DT543504
?pGA^GC^TGGAGGTGAATCTT^
ccaattccacaattatggcatctacaaccttatgactctgtttcttcccttcccactttgrtrrra c^ccatagtagatgatgaaggcaatatt^^
gagaacttatctgcttccatcaattcaaagggacaacaggacatgcaaaattccttttgctcttct tttcccgctgaccaccctataacaaagaccatgattgggttgccatctctggtgcagggtgcatcg cct^cctgaacaatggttccgaccgaactgtgaagcctcgagtaagggcacgtcgaggtca^ actgatccacacagcattgcagagaggcttcgaagagagaagattgctgaaagaatgaaaaacctg
^^Sn^ACCT^TTCCAATAAGACAGACAAAGCCTCTATACTTGATGAAATCATAGGGTAT
gtcaagtttcttcaactccaagtcaaggtactaagcatgagcaggcttggggcagcagctgcagtt gttcctctcatcactgatggtcgagctgaggtatctaatggtttatcacttgcaccattagcgggt c^Sgggttgatttttcaccatctcctgatcaagttgttttcgaacaagaagtggtgaagctcatg gaatccaatatgacaatggccatgcaatatctacaaagtaaaggtttctgtcttatgcctgttgca cttgctgctgccatatccaatgttaagtcatccacatcctcatcgtcatcatcagttcctgcttct gatgagagtaagaaacttgggcttcaccaacagtactctaatcaacaacacctgcagcag
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 344, G. hirsutum TC60118
aaa aacccaacactctttttcattcctctgtttttctctctcccactttccgtttctctttcagaa
aaaggaaagttcaagctaagctaaaactctgaactttccccttctcagtctcctcagggacagaga
aagattaaacgaaaggaaaagaaaaagacttcttctttttttccctaaaagaaaagttgatctttt
tttgtttggttcgattctctttagccatttcctttttgcatgtagatgctctttggtagccttaac
tcgccacttcgactcacttcaatccatggctaataaccccaacgagtcccccgctgatgatttcct
^^a^tcctcggactctcccactttgcgcctactgagactggcttagcggggcccgacggtag
attgtctggaaacgccacgacggctggagcgccaatgcttctgcagctcagctccggcggtggcac
cggacacatcggcgctataggcggcggtggaggcggtgcgtttcacggacaggtttttccattggg
attgagcttggagcaaggaaaaggtgggtttttgaagcccgaggaagcatccggtagcagcaagcg
cttccgcaacgaggtcgttgatggcagagctttttctgttaaaaacgttttccatggacaaccagt
gccagctactgttgctgctggaccacatccaccagcaatgcatccgagggtgagggctagacgagg
acaggccacagatccacatagcattgctgagcggttgcgcagggagagaattgccgaaagaatccg
ggcattgcaggaacttgttcctagtgttaacaagactgatagagcagccatgcttgatgaaattgt
agattatgtgaagttcctgaggctccaagttaaggtcttgagcatgagtaggttgggcgcagctgg
tgcagtggcaccactcgtaacggacctcccactatcgtcagttgaggatgaaagtggtgagggagg
aagaagccaaccagcctgggagaaatggtcaaatgatggcacagagagacaagtagctaagctgat
ggaagaagatgtcggagctgccatgcaattccttcaatcaaaggctctttgcgtcatgccaatttc
actggccaccgcaatttaccatacgcaatctccggatacctcctctgttgttaagccggaaacaaa
tcctccttcatagacacctcacatgagaaaaagaggaaaagaaaacggtgtatcatatggtggggg
agactgtggacaaagacggaagcacttttcttgtgtagtgatggggcatggatttttgggtttggt
gggatgagggacccgcaaaaggagatggatgagatgagtatatttacatattataacaataaaata
ttacaatattgatagtgttagtgtaagtaacagtgtaatttcacaggaaagggctaaagtagaaga
agggataatggttggctgattttataaaatgctgattcaataaaatagatggattggttcacgttt
caaaaaaaacct
SEQ ID NO: 345, G. hirsutum TC60119
aaaaaaagaagaggaaagccaaaactccaaactttctattttgcttttatattatatttttttttg
gttcaattcagtttcgccatttcctttgcatgtagatgctctttggttagtccctaacgccgctac
ttggactcactttccgctgctatcttttttccggctttctcatggctaataacaccaacgaggccc
ccgccgccgatgatttcctcgagcaaatcctcggcctccctaactttgcgccctccgaaacgggct
tagctggatccgacgctggattggctgcaaccgctgctggagctggagctccaatgtttttgcagc
tcagctccggtgatggcgccgctcatatcggtggaatcggcggcggtggaggcggtgcgtttcatg
ggcaggttttccccttgggcttgagcttggagcaagggaaaggcgggtttttgaaacccgaggaag
cttccggtagtgggaagcggtttcggaacggggtcgttgatgaccgagcttcttctgtaaaaaatg
ttttccatggccaacccatgcaagcaactgtttctgcagcaccacatccaccgacaatgcgtccaa
gggtgcgcgctagacgaggacaggccacggatcctcacagcattgctgaacggttgcgcagggaga
gaattactgaaagaatcagggcattgcaggaacttgttcctagtgttaacaagactgatagggcag
tcatgcttgatgaaattgtagattatgtcaagttcctgaggcttcaagttaaggttttgagcatga
gtaggttgggcggagctggtgcagtggcaccgcttgtaacagacattccactatcatcagtagagt
atgaaagcggtgagggtggaagaagccagccagcatgggagaagtggtcaaatgatggcacagagc
aacaggtagctaagctgatggaagaaaacgttggagctgccatgcaattcctccaatcaaagtctc
tttgcattatgcctatctcactagccactgcaatttaccacacacaggtaccagatacctcctctg
ttgttaagccagaaacaaatcctcctgcatagacctgaggggaaaaaaagggtaggcatcccacag
tccatccttcatcccgccttttatttgtcctattctaacacacccactccctccctctctggcttg
aaaatgccatcaaagtcagatgccatagctcttgctttttgccttcctttccagctctttttcgat
ttttcaaaacagggtttgatgtcaatgccttaaaaaaatcagagacaggcaattgatgtctcgaca
FIGURA 24 CONT. AGTTCGAGTAAAGGGGAAGAATTGTCAAATTTCACTTGATATGCTCTTCTTTTTTGTATCAAAATG GGATAGTGGACAATGATGGGAGCACTTTTGTAGTGGGGCTCTGATTTTGTGGTTAGTGGATTGTGG GACCTGCAAAAAAAAAAAAAAGGATAGAGATGATCCAGGGTATAATATTGTTATTGTAACAATGTA TTTTGAAGATAAAATCGAATGCAAAAGTAGAAGAATTGATATT
SEQ ID NO: 346, G. hirsutum TC61833
AAAAAATCCCTTTGAAAAAAAAAATTCCCTCTTTTCCTTTCTGTTACTTTCACAGAGCTGAAAGTA
CAGAACAGAAAAGAAACCCCAAACCTCAAAATTTTCTCTTTCTCACGTTGATAGAAGGATTTAAGC
TAGAACGGCAAAGATATGAAATAATATCGTGTTTTTTGTCTATAAATATTTTGTTGGGTTTTCAAT
TCTTTTTTCGCCATTTCTTTTGCATGTTGATGATCTTTGGTGGCTTTAACTCGGTACTTGGACTCA
CTTCCGCTACTACTTCTTCGGGTTTCACATGGCTAATAACCCCAACGAGGCTTCCGCTGATGATTT
CCTCGAGCAAATÇCTCGGATTCCCTAACTTCGCGCCTTCTGAGACGGGTTTGGCGGGACCCGACGG
TGGAGTGACAGGAACAACTGCTGGTGCCGGAACGCCAATGTTTCTACAGCTCAGCTCTGGTGATGG
AGCCAGTCATCTCGGCGGAATCGGCGGCGGTGGAGGCGGCGCGTTTCCCGGACAGGTTTTTCCGTT
GGGGTTGAGCTTAGACCAAGGGAAAAGCGGCGGGTTCTTGAAGCCGGAGGAAGGTTCTGGTGGTAG
CAGCAGGCGGTTTCGCGATGAAGTCGTTGATGGCAGGGCTTCCTCAGTTAAAAACGTTTTCCATGG
TTCACCAATGCCGGCTACCGTTGCTCCATCACCGCATCCACCAACAATGCGTCCAAGGGTGCGGGC
TAGACGAGGACAGGCCACGGACCCGCATAGCATTGCTGAACGGTTGCGGAGGGAAAGAATTGCCGA
AAGAATCCGAGCATTACAGGAACTTGTTCCTAGTGTTAACAAGACTGATAGAGCGGTCATGCTTGA
TGAAATTGTAGATTATGTCAAGTTCCTGAGGCTCCAAGTTAAGGTTTTGAGTATGAGTAGGTTAGG
CGGGGCGGGGGCAGTGGCACCGCTTGTTACAGACATCCCATTATCATCGGTCGAGGACGAAAGCGG
CGACGGTGGAAGGAACCAACCGGCATGGGAGAAATGGTCAAACGACGGCACCGAGCGACAAGTAGC
CAAGCTCATGGAAGAAAACGTAGGAGCTGCCATGCAATTCCTTAAATCAAAAGCTCTTTGCATTAT
GCCAATCTCACTAGCCACCGCCATCTACCACTCGCAACCACTGGATACCTCTTCTATCGTCAAGCC
CGAAACAGATCCCCCACCATAACTCTAACAAACAAAAAATAAGGGTATGCATCCCACACAGCCCAT
CCTATATGTCCAACACTATGAGGAAAAAAAAAGGAAGGGGGGGCCTTCATGTCCGGATTTGTCAAT
GGTGATCTCTTTTGTAGTCAATGGTGGGGGTAGGGGATAATGATGGAAGAAGAGGGGCACTCTCAT
AGTGGGGGCTTTAAATTTTTTTGTT
SEQ ID NO: 347, G. hirsutum TC67603
CAAAAAGAAAAAAAGAGAAACTCGTCCCTTCATCTTCAATCTCATTCATCATCAAAGCAAAAAAAA
AACCCTAATTATGCAGCCTTGTAGTCGTGAAATGCAAGCAATGAACTCTCTCTTAAACCCGACCCA
ACAAATCCCTCTCCAAGACCTTCAAATCAACGGTAACAGACACCACCATCAACAGATCCACGTCCC
ATCATCATCGCAGTTCCAGTATCCCACACCCACTTCAACAACCCACCATGACGACAGCTTCTTAGA
ACAGATACTCTCCTCCACCACGTCCTTCCCGTGGTCCGACGAAACGGGTCCTCCCAACCCCGAGGA
TAACAATAACGCCGGCTTCAACTACGATGAGATGGTTCTAGCTTCCAAGCTTCGACAGCATCAAAT
CAACGGCGGAGCTGCTGGTAACCCTTTTGCCGCTATGAAGATGATGTTGATGATGCAACAACAACA
ACAGCAACAGCAGATGATGTTAGCGGGAAGACCCACGGTTGCCTCCGCCGCCGCCGGAGGC GGAAT
CACCACCAATCATCAGGGTGGAGAGGGTTCCATGCAAGCTTTGTATAATGTTTTTGGCGATGGATC
TTTGCATGGAACTATGCAGGCGAAAAGCTTTGTGGGGGCTAATTCAGCAACAGAGATGACCCAAAG
TCAGGGAAGTGGTCCGACGGCCGGAGAAGCGGTGACGGCGCCGGAAAAGCCTAAACAAAGAGTTAG
GGCAAGGAGGGGTCAAGCTACTGACCCCCACAGTATCGCGGAAAGACTACGTAGAGTTAGAATTGC
AGAGAGAATGAAAGCTCTTCAAGAACTGGTTCCCAACGCCAACAAGACAGATAAAGCTTCAATGCT
TGATGAGATCATCGACTATGTCAAATTCCTCCAGCTCCAAGTGAAGGTTCTGAGTATGAGCAGATT
GGGTGGTGCTGCTGCTGTTGCTCCCCTTGTTTCTGAGGGAGGTGGCGATTGTATTCAAACAAGTGC
CAATGGTGGGTCCCATCCACGAAATTCCAACGGCGACCAAACGCCGTCGGCCAACGACAGACTGAC
GATGACGGAGCACCAAGTGGCCAAGCTTATGGAAGAGGACATGGGCTCCGCCATGCAGTATCTGCA
AGAGAAGGGTCTGTGCCTCATGCCGATCTCTCTCGCCACCGCCATCTCAAGCGCCACGTCTCGTTC
FIGURA 24 CONT. AAGGAACCCCATGATCAACCATGAAAACCCGGCCAACGGCAGCCACCTTTTGATTCAATCAAGCGG CGGCGATGGACCTTCCTCGCCTAGCATGTCCGTGTTGACAGTCCAGTCAGCCACCATGGGTAACGG TGGCCTTGAAGGTGGCGCAGCCTCGGTTTCCAAGCCCTGATAACGGCGGTGACTGACATACGTAGA GAGGAATTGAAGGGAAACAGCTTTTAGTCTATGAGAATAAGGCGGTCTTCTTCCCAAGTATTTTCT TAAAAGTACGAAACGACGCCGTATTTGACGTAGACTTATAAGCTAACCCCTAAGACTGACCTCATC
CAATCAAC
SEQ ID NO: 348, G. max TC229602
GGATTCATGAAGCCCGACGAAGCCTCCGCTAGCGGAAAGCGCTTTCGCGACGACGTCGTTGATAAT AGAGCTAAGCATGTTTTTCATGGGCAACCCATGCCTACTACTATGCCTGCTGCTCCTCATCCTCCA GCAATACGTCCTAGGGTGCGGGCCATAAGAGGACAGGCTACAGATCCACACAGCATAGCTGAACGA TTGCGCAGAGAAAGAATAGCAGAAAGAATCAGGGCATTGCAAGAACTGGTTCCAAGTGTCAACAAG ACAGATAGAGCTGCCATGTTAGATGAAATTGTGGATTATGTCAAGTTCTTAAGGCTTCAAGTGAAG GTTTTGAGCATGAGTAGACTGGGTGGAGCCGGTGCAGTGGCACCACTGGTAACTGACATCCCATTA TCATCAGTCGAGGAAGAAGGTGGTGAAGGTGCGCGAAACCGGCCAGCATGGGACAAGTGGTCAAAT GATGGCACAGAAAGACAGGTAGCTAAGCTTATGGAAGAAAACGTTGGGGCTGCCATGCAGTTTCTT CAATCAAAGGCTCTCTGCATCATGCCAATCTCACTGGCATCGGCAATATACCAGTCACAACCACCG GACACTTCTAGCATAGTCAAGCCTGAAACTAATCCTCCTTCATAGACCTAATTCACATGTTGCACA ATCTATTATTATTGGTCCCATCCCAGGCTCACCTAATACTTGCTGGGACCCACACCTAACGCGTTA TTTGTCTGTTCCAAATCCCCCCCCATAAAATAAGTCATTGGCAAGCATCAAGTTGCAATCAAAGTC AGATGCCATAATTCTTCCTTTTTTTGCCTTTCTTTCAGCTTTTGTCAATACAGGGTTCGATATCAA TGCCTTGGAAAAGACAAGCAAACCCCTATATCATGTCTTGCCGTATTTCAAGTAGAGAGGAAGACA TTGTCAAAAGTTCAATTGATATGCGCTTCTTTTCTAGTGTCAAATGGGTGGGGGTAGTGGACCATG ATGTAGGCGCTTTTATAGTGGGGCTTAGTTTTTGTAGTGGGCTGTGGGACCTTCTAAAAGGT
SEQ ID NO: 349, G. max TC205173
GTCCAACAACAACAACGACGCTACTACTAATGTCGCATCTTTTTCCTCCTTCGATGAGCACTCCAC
CTTAGCCTCCAAGTTCCGCAACCACCAGATCAGCTCCAATAACAACGCGCCCAAAAACGCCGCGGC
GGCGGCTCTCATGCTCCAACACCAACTCCTCAGAGACTCTGGTCTTCTCAACATGCCTCTTTCCTT
GCCCGGAAACGACGTCGTGGTTGACGCTTCTACCTTCGAATCCCCCAATCCGAGTGGTAAAGCTTC
AGTCCAAACTCTCTACAACGGGTTCGCCGGATCTCTGCATGGCGTAGGCCAATCCTCGAACCAGAC
TCAACATTTTCAACACCÇTCAGGGAAGTTCGAATCCGATGCAAGGGCAAAATTTTGGGGCGGTGCC
AGCTGGTGGTGGTAGCGCGACGAATCAGGCTCCAGCGAGTGGCGCTGCCGCGGGTGGCGCGCCGGC
TCAGCCGAGGCAGAGGGTTCGAGCGAGGAGAGGTCAAGCCACGGACCCACACAGCATCGCTGAAAG
GTTACGTAGGGAGAGAATCGCCGAGAGAATGAAGGCCCTACAAGAACTGGTTCCCAATGCCAACAA
GACAGACAAGGCATCCATGCTAGATGAGATCATCGATTACGTGAAGTTCCTGCAGCTCCAAGTCAA
GGTTCTGAGCATGAGCAGATTGGGCGGTGCTGCTGCTGTCGCTCCCCTTGTTGCTGATATGTCCTC
TGAGGGAGGCGGAGACTGCATTCAAGCCAACGGCAAGAGTAACGGCGGTGGGGCCCAGGCTTCAAC
CACCAACACCAACACCAACCAAACGACAGCGACAACAACCTCAAACGATAGCCTAACGATGACGGA
GCACCAGGTCGCGAAACTAATGGAAGAAGACATGGGTTCGGCTATGCAGTATCTTCAAGGAAAAGG
TCTTTGCCTCATGCCAATTTCACTTGCCACTGCAATCTCCACTGCCACGTGTCCCACCAGGAACGT
TAACGTTAACCCCTTGATCAACGCCGCCGCCGGAGCCACCCATTTTCCGACCGCAGCCAACCCCGC
CGGCGAAGGGCCGTCGTCTCCGAGCATGTCCGTACTGACGGTGCAGTCCGCCATCGCAGGCAACGA
CGGCGCCGCCTCCGTTTCGAAGCCGTGATGACGGTGTTTGAGTGACTTTATAGGAAAAAGAAGAAA
AAAACAAAGTGAACAAAGGACAGAAAATGACGTGTGTTTTTTTTTCTTAAAAAAAAAGGAGCCGTT
AAAGTCTACGAAAATAAGGCGTCAGGGATACGGAGGACTCGACGACGCCGTATTTACCTAGACTTT
GTTTGGCTGATGCTAACTTTCAACCAACCAATTACAAACTCCACCATGCCAATTACCTACTTCTTC
GTCTTCTTTTTCTTTATTATTATTGTTAATTGTTAACTGTCGCTTTGGGTTTCTTCTGTTCATTGT
TTTTAAAAATCTGGAGTGGAATTTCTCTTTTTGGTGTT
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 350, G. max TA55042
TTTTCTTCTTCCTTTTCGTGCTCTCTCTCAAATTCAACACGAGAGACACAAAACAAAACATTCTCG
GGAAGCGTAACCGCCCAGAATTCCGACCATTTTCACAGACCTTGTTTTCTGCTCTTGATGTTTTTC
ACCCCCCAAATGTGGCAATAAAAAACGGGTGGCTTAATTTGACACAATCGGTGGTTATTGCAAAGT
TGAGATGGCAGGTAATAGTGGTTCAGAGGGGTTGGGCGATGATTTCTTCGAACAGATCTTAGCAGT
GCCTGAAGCCGGCACAGTGGGAATGTTGCAATTGGGGTCCACAACTGGTGCTTTCAGAGGAGCTTC
TGGGTTAATGCCTCTGGGCTTGAATTTGGAACAAGCTGCCTTCCTAAGACACCAAGTTAACGTTGA
CGACGACGTTGTTCATGTTAATGTTGATGATGCCACCATCCACCAACATCACCTCACTCTCCATAA
CAACAACAACTCCTCATCACCCTCTTCCACTGCACCAATCACCGATAGGGATTCTATGCATATGAG
GGGTTTATTTTCCGCGTTTGGACAACTGCATACTCCTATCCGCCCCACGCTGCCATTGCCTCCACC
ACCTCGTCAGCCACAACTCCACCTCCACCATCATAACCAATTTCAGGGCCAGGCAGCTGCAGCTCC
AGCGTCAATGGCTGCTATGCCACAACCACCTGGGATCCGCCCTCGTGTGAGAGCAAGAAGAGGGCA
AGCTACAGATCCTCACAGTATTGCTGAGCGGTTGCGTCGTGAAAGAATCGCTGAAAGAATGAAGGC
ATTGCAGGAATTAGTTCCCAGCATCAATAAGACGGACAGAGCGGCGATGCTTGATGAAATTGTGGA
CTATGTGAAGTTCCTTAGGCTTCAGGTTAAGGTCCTGAGCATGAGTAGACTGGGTGGAGCTGGTGC
TGTTGCTCAGCTTGTGGCTGATGTTCCCCTTTCTGCAGTGGAGGGGGATCAGGACATAGAAGGTGG
AGCCAATGAGCAAGCCTGGGACAAGTGGTCCAATGATGGCACAGAACAACAGGTGGCTAAGCTTAT
GGAAGAAGATGTGGGAGCAGCTATGCAATTTCTTCAGTCCAAGGCACTTTGTATCATGCCCATATC
TCTAGCCTCAGCCATTTTTCGTATGCCTCAATCAGAAGCATCAACAGGCATCAAGCCTGAATCTAA
CAGTCACTGATATTAGCGATAGAACCGAAACAAAAAGTATCATGACAGACACTAGATAATTAAATT
TCTTCATCCTTAATTTATGACAAGGGTAATATTCTACTTTCTTGTATAATTTAATTTTCCTGATTG
GATGGAGAAGGATCTAGTCGGTGCAGCAGCTGGTTCACTCTTCTCAAGTTTTGTCAAAGAAGGAGT
AATTGTTATTCCTATTAAGTAAAATCGGAGGAGCCAAGCAAATGTCCTTTTCATGGTGAAGATTAA
TATTTTCAATGGCCTTATTCAAGTTTTTCTTGCAAATATCTGTGGTGGGGTTGGTGGTGGATGACC
AAAATATTTGTAGTGGAACCTCTTTTCTTGGTTTAGTATTTTTAGTCAGTGGGGAGTGGGACCATT
TAAAAGGAAAGGATGGTTACGAATGATGTATCGGGAGAAAACTTTAATACAAGTTGAATTATAATA
TGGTTAGTTACCTTGTAAAGATGTTTTGGAAGCATCTGACCATTGGAAAAGCTAAAGATATTTTAA
AATAATCACACATTTTGAGTCTTGTTTGCTTCTAAAACAAGTGATTTCCAGCACAAAATTAGGTGA
GAGTACTGAACCGACTGCTTGCTGAGAAAGTGGAAAATGACAGTTTGTTAATTTACTGAACAAAAA
SEQ ID NO: 351, G. max TC207545
CGCGTCCGCTCCGCCGACGCCTCTCCGATGATGCTTCAGCTCAACTCCGGCGACGCCGCCACCCAC
CTAGCCTCCTTCCACGCGCCGCCCTACCAGCTCGGCCTCAGCCTGGACCAAGGTGAGGGACCCTTC
CTCACGCCTGAGGACGCTTCTGGAAGCGGCAAGCGCTTCCGCGACGACGCCGTTGATACCAGACCT
AACAACGTTTTTGATGGGCAACCCATGCCTACAACTGTTCCTACTGCTCCACATCCACCAGCAGTG
CGACCTAGAGTGCGGGCTAGAAGAGGACAGGCTACAGATCCACATAGTATAGCTGAAAGGTTGCGC
AGAGAGAGAATAGCAGAAAGAATCAGGGCTTTGCAAGAACTGGTCCCTAGTGTCAACAAGACAGAT
AGAGCTGCCATGCTGGACGAAATTGTGGATTATGTCAAGTTCTTGAGGCTTCAAGTGAAGGTTTTG
AGCATGAGTAGATTGGGTGGAGCTGGTGCAGTGGCACCACTGGTAACTGATATCCCATTATCGTCA
GTCGAGGAAGAAGGCGGTGAGGGAAGAAACCAGCCAGCCTGGGAGAAGTGGTCAAATGATGGCACA
GAAAGACAGGTAGCCAAGCTTATGGAAGAAAATGTGGGTGCTGCCATGCAGTTTCTTCAATCAAAA
GCACTCTGCATCATGCCCGTCTCACTAGCTTCAGCAATATACCAGTCACAACCCTCAGGCACTTCT
AGTATAGTTAAGCCTGAAACTAATCCTCCTTCATAATCATAGTCAGAACTCTGGCACAGATGCACC
ATCCAGTGGTCCCATCAAGGGCTCACCTAACACTGCTAGGACCCACGTGTAATTTGCCTGTTTCAA
ACCCCCTTAACCTTAGTCATTGGTTCGCATCAAGTTGCATTCAAGGTTGGATGCCATAGTCTTTCC
TTTTTGTCGTTCTTTCAACTTTTTTGTCTAGACAGGGTTTGATGTCAATGCCCTTCAAAACACAAG
CAAACCCCATCTTGATAAATTTCATGTAAAGGGAAAGAAATTGTCGAAGTTCACTTGATATGCTCT
FIGURA 24 CONT. tcctttttgtatcaattagtgggggttagtggaacgtgatggaagcgcttttatagtggggcttgg ttttttgtagtgggcagtgggaccttctaaaaggttagggtggtgtgtatattttattagtgatgt aactcttagggaatttgaattgcagagctgaaatggataatgattgctttaacaatgctgggtgct gctagtccaccagaaaatgatattgctttttttttttttatttcaggtgtgctctagttagttatt taaaagtactttcgaccccttttttctcatgcagggagagatggaaggagagtatggtgctatttt
AAACCA
SEQ ID NO: 352, G. raimondii TA13791
ttcctttgtttttctttctctcacttcccgtttctctttcagaaaaaggaaagttcaagctaagct
aaaactctgaactttccccttctcagtctcctcagggacagagaaagattaaacgaaaggaaaaga
aaaagacttcttctttttttccctaaaagaaaagttgatctttttttgtttggttcgattctcttt
agccatttcctttttgcatgtagatgctctttggtagccttaactcgccacttcgactcacttcaa
tccatggctaataaccccaacgagtcccccgctgacgatttcctcgagcaaatcctcggactctcc
cactttgcgcctactgagactggcttagcggggcccgacggtagattgtctggaaacgccacgacg
gctggagcgccaatgcttctgcagctcagctccggcggtggcaccggacacatcggcgctataggc
ggcggtggaggcggtgcgtttcacggacaggtttttccattgggattgagcttggagcaaggaaaa
ggtgggtttttgaagcccgaggaagcatccggtagcagcaagcgcttccgcaacgaggtcgttgat
ggcagagctttttctgttaaaaacgttttccatggacaaccagtgccagctactgttgctgctgga
ccacatccaccagcaatgcgtccgagggtgagggctagacgaggacaggccacagatccacatagc
attgctgagcggttgcgcagggagagaattgccgaaagaatccgggcattgcaggaacttgttcct
agtgttaacaagactgatagagcagcaatgcttgatgaaattgtagattatgtgaagttcctgagg
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?^^cccactatcgtcagttgaggatgaaagtgg^agggaggaagaagccaaccagcctgggag
aaatggtcaaatgatggcacagagagacaagtagctaagctgatggaagaagatgtcggagctgcc
atgcaattccttcaatcaaaggctctttgcgtcatgccaatttcactggccactgcaatttaccac
acgcaatctccggatacctcctctgttgttaagccggaaacaaatcctccttcatagacacctcac
atgagaaaaagaggaaaagaaaacggtgtatcatatggtgggggagactgtggacaaagacggaag
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SEQ ID NO: 353, H. petiolaris TA1140
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SEQ ID NO: 354, Η. vulgare TC140470
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SEQ ID NO: 355, L. perenis TA3490 part
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SEQ ID NO: 356, N. benthamiana CK293938
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SEQ ID NO: 357, Ν. benthamiana TC7102
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SEQ ID NO: 358, N. benthamiana TC7103
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FIGURA 24 CONT. ctgcagctgttgctcccctagttgctgatcggtcctctgaggggggaggaggtgattgtgcacaag caaatggaggagggaggggcagtaatggaacgacgtcgttagctaacaatgacagcatgacgatga cggaacaccaggtggcaaagctaatggaggaggatatgggatcagccatgcaatacttacaaggaa aaggcttatgtcttatgccaatttctttagccacagctatttccaccgccacgtgtcactccatga
aactcaacaacccactactacacggcggcggaagcggaggctctgccgccatcaacggcggtggtg gtggaccatcctctcctagcttgtcggcttccactgtccagtcagccacgatgggtaacgggggcg cttgagtttgttgaaatatacttcgtaatttacgacgttgactgtttcaattatcttttcttagaa aaataccggaaaaatgtgaaaaaagtggtgaaaatttcgttattttagagctgaaatttcaaggcc ttttcacatgggacaaaaaagaaaaagaaaagaaaaaaggggtaattgaaatgtttagctctaaat
attattggtaatttctgattttagttcgtgtgatattttattaattgtatttaacattgaattaat
gataatatgggtgtttttgtttatttacatat .
SEQ ID NO: 359, Ν. benthamiana TC8633
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ttggtgacaccatttgctttttattttcttcatcgctctcactgttctatagaaagtagcagcaac
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SEO ID NO· 360, N. fcabacum TC12771
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FIGURA 24 CONT. GTGAAGTTCTTAAGGCTTCAAGTTAAGGTATTGAGCATGAGTAGGCTGGGAGGAGCCAGTGCAGTG GCACAACTGGTTGCTGACATTCCGTTGCAATCTGTGGAGGGGGACAGTGCCGAAAGTAGATCCAAC CAGCATATCTGGGAAAAGTGGTCCAATGTCGACACAGAACAAGAGGTCGCTAAGCTCATGGAGGAA GATGTTGGAGCAGCCATGCAATACCTTCAGTCCAAATCACTCTGCATCATGCCCATATCACTTGCT GCACTTATCTATCCTACTCAGCAACCGGATGACCCGTCAATGGTCAAGCCGGAACCGGCAGCCCCG TCATAGACCTCCAATTTGTTGCACGTGCCTCTGAGAACTCCTAATAGCCTTGTGTCTTACCCTCCT TTGTATCCTTACCTACTATCACTTGTATTTTCCTCTGCAATTGGTGGCAATGCAATCAATGTCAGA TGCCACAATTTTTGCTTTTAGCCCAACCATTGGCCCCTTTTATTACCTTTCCGGAGTTTTCGTCAA ACAAGGCATGATGTCATACCTTGGGCAAAGGTAAACGTCTGAAAGCACCCAATCCATTATCATCAT TTTGGATGAGGTGAGCAGCTTTTTCAAAGTTATCTATGATTAGCTGCTCTTCTGCCATTTTGTTTG TGGGATAGTGGGGACTCCTTTATCTTTTGCATAGTGGATTGGTGGGGCGATGTAAAAGTAATCAAC TGGTTGTTGTAAAGTGTAATGTAATTTAAGTATATTATTGCAATGGATAGTTGATGTGGCTCTCC
SEQ ID NO: 361, O. sativa 0s02g35660
GACGCGAGTCGAGAGACGGGAGAGCAGTGCAGTGCAGTGCAGTGCCGCCTCGTCTTCCTTCCCTCC CTCCTCATACTCTCTCTCCTCCCGGTCTTCTCCTCCCCCGCCCAAAGCGGAGCGCGGCGGTTATAT ATATATATATATATACAGCACTTCCTCCTCCTTCCTCGCCGCACGTCGCCCTCCGACTTCGCCTCG TCAGCCGTCGTCACCGCCCCCACCCGTGGATTGCACCGGAGATCGGAATGGGCGGCTTCGCCTACC CCTTCACGCCGTCGCCGGCGTGGTCGCGGGACGCCGTGTTCGCTGGCTCGCCGTGGGCCGCAGGCG GCGTCTCCTCCCTCGCCGACGCTTTGGTGAGCTACGGTGCCGTCGACGACGAGGAGGCCGCGTTCC TCGGCAAGACCGCCGCGTCGTCTCCCAGTACGGCGAGGCTGCACGAGCAGCAGCAGCTGCTGCTGG AGGCTGAGCTGCTGCGCCACGGCGACGGCCTCGGCTTCGCCGCGATGGACGACGACGGCGGCGCCG CGATGCTCGGCGCGCTGGAGCCGTGCGCCATGCCGCTCACCGACAGCGGCGGCCCCCCGGTCATCT GCAGCAGCAGCTCCAACGACAGCAGCGGGAGCGAGCACTCCGCCGCCATGCCTGCAGGAGGCGGCT TCCTCGTCGGAGAGCAGCAGCAGCACGTGCCGCCGGCGGCCTACGCCGCGGGAGGTGTACTCCCGT CCATGGCCGCGGGAGAAGAAACGCCGCAGAGCTTCGGCTTTGGCAGCCTCTTCAATGGCGATCTCC TGCAGGAGGCGACCGTGAGCAAGTATCATCATCATCAGCAGCAGCAGCAGCTGGGCGTTGTGCCTT CGTCGCAGCCGCATCATCTGAATGATGACATCGATTTCAACACTGGAAAATTGATGTCTTTTGCTT CTGGACAGCAGCACGTTACCCCCAGCATTGACAGCCTGCAGATCGACCAGAAGGAATTCAGCAGTG GCCTGCACCACCTCAATCTCTCCTCGCTGATTTCTGGACCACTCGCATCATTCAATGCAACACAGA GCCATAGACAGCCTGCTGAAGCTTGCGGTGGCAAAAATGGCGGCGCCGCTCCATTTGTGAACCTAT CTGAGGTGCTACCAAAGGGCAATGGGAGTGGTAGTGCTGGGAATGGAGCACCCAAGCCTCGTGTCA GGGCTCGCCGAGGCCAGGCCACCGATCCCCACAGCATCGCAGAGAGGCTCCGGAGGGAGAAGATCT CTGACAGGATGAAGGATTTACAGGAGCTTGTCCCAAACTCAAACAAGACTAACAAGGCATCCATGC TCGATGAGATCATCGACTATGTGAAATTTCTCCAATTACAAGTCAAGGTCCTTAGCATGAGCAGGC TTGGAGCGGCCGAAGCCGTTGTCCCTCTTCTGACAGAAACACAAACCGAGAGCCCCGGGTTTCTCC TGTCCCCAAGATCATCATCAGGAGAAAGGCAGGCAGGAGCAGGAGCAGTAACAGGAGGGCTCCCCG GCGATCAGCCGGAGCTCCTGGACGGCGGCGCCATGTTCGAGCAGGAGGTGGTGAAGCTGATGGAGG ACAACATGACGACGGCGATGCAGTACCTGCAGAGCAAGGGGCTCTGCCTCATGCCGGTGGCGCTGG CGTCGGCGATATCGGCACAGAAGGGGACGTCCTCGGCCGCCGTCCGACCGGAGAAGAAGAAGAACG GTGATGGCGATGGCGGCGGCGACGAGGAGGACGTGAAGGGAGAGTTTGACGCACCGAGGAGGCCTC CTGTCGGCCGGCCGAAGGAGATGAGGTCCAGAGTCTAAGCTAGAACCTCTGCTTTGTTCAGGAGAG ATGGAGCTTAATTTAGATCCTAACACTTTGCTACTTATATGTTTATTATTATGAAATTTTAATTGC AAGTTGCAACTGGTGATCTCGAACTACATTTTGCCGGTGATTAGAAAATTGTTATATGGAGGTTAG TTATTAAATCATATATAATTATATTTTGTATTGTTGCGGTCCTTGCGGACAATGCCATTCAGTACC TTGATATTTG
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 362, O. sativa 0s02g55250
ATGCAACCCAACGCCCGCCAAATGCGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGCAGGACGACTTC
TTCGACCAGATGCTGTCCACGCTGCCGGCGGTGTGGTCCGAGCTCGGCTCCGGCAAGCCCGCCTGG
GACCTCACGGCCGGCGCCGTAGGAGGAGGAGGAGGAGCCTCCGATGACCACTCCGCCGCGGCGTTC
GACGACTCCGCGCTCCTCGCCTCCCGCCTCCGCCAGCACCAGATCGACGGTGGAGGCGACAAGCCC
ATCATGCTCCAACTCAGCGACCTCCACCGTCATCACGGCCTCGCCGCCGGCGATGACAGCGGCGGC
GCTGCCGGGTTCCTTCCCCTGTCGCTGTTCGCTGACCGGTCGCAGGACGACATCGACGCCGCCTTC
AAGTCCCCCAATGGCGCTAGAGGTGACCATGCGCTGTACAATGGGTTCGGGGCCGCCGGAATGCAT
GGCGCCGCCGCCATGCAGCCGCCGCCGTTCGGGCAGGGAGGATCAATGCCGGCGCAGAGCTTCGGT
GGCGGAGCGGCCGCGAGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGTCGGCGTCGGCGGCAGCGGCGGCTGGGGCA
TCGTCGGGCGGAGGGGCGGCGGCGCCGCCGCGGCAGCGGCAGCGGGCGAGGAGAGGGCAAGCCACT
GACCCACACAGCATCGCCGAACGTCTCCGGAGGGAGAGGATAGCTGAGAGGATGAAGGCGTTGCAG
GAGCTGGTCCCAAATGCCAACAAGACCGACAAGGCATCGATGCTCGACGAGATCATTGATTATGTG
AAGTTCCTCCAGCTCCAAGTCAAGGTTCTCAGCATGAGCAGATTGGGGGGAGCTTCTGCAGTCGCG
CCTCTAGTGGCTAACATGTCATCAGAGAGTAATGGGAATGGCAATGCCACCAGCAGCAGCGGGAAC
GGCGAGGCGGCCAATGGCAGCAGCAACGGCGACAACAATGGTGGCGGCACACTGCGGGTGACGGAG
CAGCAGGTGGCGAAGCTGATGGAGGAGGACATGGGCTCCGCCATGCAGTACCTGCAGGGGAAGGGG
CTATGCCTGATGCCGATCTCTCTCGCAACGGCCATCTCCTCCGCCACCTCCTCGTCGCTCCTCCCC
CGCACTGGGGGAGGCGCTGGAGGGTCCCTACATGAAGGTGGTAATGGTACATCACCACCATTGGTG
AATGGCACCGCCACCGGATGTGACGACGCCGGAGTATTCTTTTCTGTTAAATTTGTCGTGGAGCTG
TCGTTTCTCCTGCTGAATGAAGACTGTAGAGGTAAGGAGGAATCGAAATTATTGGTCCAGAAGGGA
CCCTGA
SEQ ID NO: 363, O. sativa 0s03g58330
ACCTCGCTTCACACTAGCCGAGGAGACGCGAGCGCGAGCTGCTCTCCTCTCCTCCCGCCCCGCGTC
GCCGACGTCGAGGCGGCGGTCGACGTCGACGTCGCCGGGGATGGCCGGGCAGCAGCCGCAGCAGCA
GGGCCCACCGGAGGACGACTTTTTCGACCAGTTCTTCTCCCTGACCAGCTCCTTCCCTGGCGCCGC
GCCGGGCGGCCGCGCCGCCGGTGACCAGCCCTTCTCCCTCGCGCTCAGCCTCGACGCCGCCGCGGC
GGCCGAGGCGTCCGGGAGCGGGAAGAGGCTCGGGGTCGGCGATGACGCCGAGGGTGGCGGCAGCAA
GGCGGATCGGGAGACCGTGCAGCTCACCGGACTCTTCCCGCCGGTGTTCGGCGGCGGCGGCGTGCA
GCCGCCGAACCTCCGCCCCACCCCGCCTACCCAGGTGTTCCACCCGCAGCAGTCGAAGCAGGGCGG
AGCAGCCGTCGGGCCGCAGCCGCCGGCGCCGAGGCCGAAGGTGCGAGCGCGGCGTGGGCAGGCGAC
CGACCCCCACAGCATCGCGGAGAGGCTÂAGAAGAGAGAGAATAGCAGAAAGGATGAGGGCCCTACA
GGAATTGGTCCCCAATACAAACAAGACAGATAGGGCAGCTATGCTAGATGAGATCCTTGATTATGT
GAAATTCCTGAGGCTGCAAGTAAAGGTTTTAAGCATGAGCAGGCTGGGTGGCGCGGGTGCTGTTGC
ACAGCTGGTTGCTGATATTCCACTTTCAGTTAAGGGGGAAGCAAGCGATAGTGGGGGCAACCAACA
GATTTGGGAAAAGTGGTCAACGGATGGCACAGAAAGACAGGTAGCGAAGCTGATGGAAGAAGACAT
CGGGGCAGCGATGCAATTTCTCCAATCCAAAGCACTCTGCATGATGCCAATCTCGCTCGCCATGGC
AATCTATGACACACAACAAACACAGGATGGACAACCAGTGAAGCACGAACCCAACACTCCTTCCTA
GTATAGTAATAGCAACTGTAAGTCTGTAACATGAATCGTTACAACCCCTAGTAGACATCAACCTAT
CAAAGTGTAAGATAAAACAGCTCGTTTTGATTCACTAACAAGGAGGCAGGAAAAGACCTAAGAGAT
CCTCTCCACTTGAAGTTGTACCAATGGTATATGATGTCACCTTTCGTTATCATCTTTTGTTCAAAG
GTGCTTTGATTGCAAGGATATGGTAAGCAATAGCCTGCTCATCCTCCTACACCTTTCAATGCCCCT
ATGAGCGCGGGTGATTGAGAGAGCTACTAAAGAGTCTGGCATGCTCTCACATTGTCTCTTTTCGAG
TCTGTAGTGCACCAACCATACACTTTGTGGTGGGGACTGCTTTTTTGGTAGTGGGTGTTTGGACTA
ATCAAAAGGGATTGATGTATGCCTGTGTCTGCAGCCTGCACAATGGTTGACGGAATTTGAACACAA
GATGAAATGGAAGATGATTTTGATGGTGATGTTCATTTATCTCCATTTTTCCAAAGTGGAGGCGGA
GGCTTTGGTCAATGGAGGCTGAGCGTGCGCTAAGCTGATCGCTAGTGGGTCTGCTATCTACATCTA
FIGURA 24 CONT. CATGCACTACTGTTGTATCTATTGTGACATACTCTTGATAAGAAACTGCGGTATAAAGTTTAATCT TTCTATTGGCGATTAATCCATAGAATTACTTTGTATTTTCTGCCATGAGTTCTCAACTACCCACAT TATTTGTGAAGAACAGCTGTTCTTGTACTGTTCACTGCCCTCTACCACAGGGTTTCCTGAGTTTGT GGACAAATTGTGAGAATCTACAGCAAGGACTATTGAGTTTTTTTTTGTC
SEQ ID NO: 364, O. sativa 0s06g08500
ATGCAGCCGAGCAGCCGCGACACGGTCGCCGGCGGCGGCGGCGAGGGGACGCAGGATGACTTCTTC GACCAGATGCTCTCCACGCTGCCGTCGGCGTGGGCCGACCTGGGGGGCGGCGGCGGCGGCGCGGCG GGGAAGTCGCCGTGGGAGGTCGATCCGGCAGCGGCGGCGGCGGCGTCGCAGGTGTTCGACGAGTCG GCGCTGCTCGCGTCCCGCCTCCGGCATCACCAGATCGGTGGGGCTGGCGGCGGCGGGGGAGAGAAG CCGGTGATGCTGCAGCTGAGCGAGCTGCACCGGCAGGCCGGCGGCGGCGAGGAGGACGGGAGCGGC GCGTTCTCGCCGCTGCCGCTGTTCACGGACCGGACGAACGTGCCGCCGCGGGAGGAGATGGAGGGC GGCTTCAAGTCGCCCAATGCCGCCGCCGGAGGCGAGCACGCGCTGTTCAACGGGTTCGGCGTGCAC GGCGGCAGCGGCGGCGCCGGGCAGCCGCCGTTCGGCCAGCTTCGGAGGGAGAGGATAGCGGAGCGG ATGAAATCGCTGCAGGAGCTAGTCCCAAACGCCAACAAGACGGACAAGGCGTCGATGCTGGACGAG ATCATCGACTACGTCAAGTTCCTGCAGCTCCAAGTCAAGGTTCTCAGCATGAGCCGGCTCGGCGGC GCCGCCGGCATGGCGCCGCTGGTGGCGAGCATGTCGTCGGAGGGGAACAGCAACGGGAGCAGCAAT GGCGGCGGTGGCAAGGCGAGCAAGGGCGGCACCGGCGGCGAGGGCGGCGGCGGCGGCGGAGGAGGA GGAGGAGGTGGCACCGGTGGTGGGATGCGGGTGACGGAGCAGCAGGTGGCGAAGATGATGGAGGAG GACATGGGCACGGCGATGCAGTACCTGCAGGGGAAGGGGCTCTGTCTGATGCCGATCTCCCTCGCC TCCGCCATCTCGTCGGCGACCTCATCGGCGTCGCTCCTCTCCCGCCCGTCCATCCGCCACGCCGGC GCGCCGCCGCAGACGATGCTCGATGCCGCCGGCCCGACCTCGCCGGCGGCGATGTCTAACGGCGAT GACCCACGGCACGCAAAGGCGGACGGCGGCGCCGGCGGGACGCAATGA
SEQ ID NO: 365, O. sativa 0s06g09370
AGAAGGGGTGTACTAGTAAACAAAACAAAAAGAATAGGTTGAGACTTTCCTGCTATCGTCAGCATT
TTCAGCCCCCCTCCCCTGGGCTGGCTCTGCATCATCATTCATCATCAGCAGCAGTCAGTCCATCCA
ACGCGTCTTCAGTCCTCACCCGCAGCAAGAAAGCCACACTTTTCCTCCTCCTCCTCCTCCTCCTCC
TCCGCCTCTTCCTCTTCCTCCCCCTTCGTTCTCCACACCCACTCTCGGGCTGCGGCTTCTCCGGCT
TCCGCGCCTCTTCCTCTGTCGGGTTAACAAAGTTACTTTCAGCGTCAGAGGGTATTTCGTACAAAA
AGGAACTGCTGTTGGTACAGGATTATCAGCTGTGAACACTTTCTGTTTCTAGAGGCCATTCTCTGT
AACAÇTTTGGAGCATCAATTTTGTAGCGTGCTATCATGGACTACTCTGCTGGTTCCTACATGTGGC
CTGGCAATTCAGGTTCTGAGAACTATAATTTTGTTGACGGTTCGTCGGAATCATATGCAGAAGAAG
GAAGCCTACCACCTTCAGGCTATTTCATGGGAGCTGGATCAGATCGCAGTTTAAAGATCACGGAGA
ATGAAAGGAACCCCACTATGCTTGCAAATGGATGCTTGCCATACAACACCCAGGCTCATCCATTAT
CTGGCCAGATTCTACCTAAGGGTGAGCTCCCTAACAATCTTCTGGATCTTCAACAGCTACAGAACA
GCAGCAATCTGCGAAGCAATTCAATTCCCCCAGGGGTTCTTCAGTGCAATTCAACATCTGGAACAT
TTGATGCGAAATTGGATACACCTGGTCTTGCAGAACTGCCTCATGCTTTGTCCAGTTCAATTGATA
GCAATGGTAGTGACATTTCTGCTTTTCTTGCTGATGTGCATGCCGTTTCTTCAGCCCCGACGTTGT
GTTCAGCATTCCAAAACGTTTCCTCCTTCATGGAACCAGTAAATCTAGATGCTTTCGGTTTCCAAG
GGGCACAAAATGTTGCTATGTTGAACAAAACAAGTCTTCCAAATGGGAATCCCTCGCTGTTTGATA
ATGCTGCCATAGCATCACTACATGATAGCAAAGAGTTTCTCAATGGTGGTTCCATCCCTTCGTTTG
GTACTGTCCTGCAGGCACTAGGAGCGGGTGGTTTGAAGGCTGCTCAACAGGAGCAAAATATCCGGA
ATATACCTCTCCCTACATTCACATCTGGTAGTCATTTGGCAGTTACTGATGCACAAGGGCCACCAC
TTCCTTCAAAGATACCACCATTGATCCATGACCATAATAGTGAGTACCCTATTAACCATTCTTCTG
ATGTGGAACCCCAAGCAAATTCAGCTCCTGGAAATAGTGCCAATGCGAAGCCACGTACAAGGGCTC
GCCGTGGACAGGCAACTGATCCTCACAGTATTGCTGAACGGCTTCGCCGAGAGAAAATTTCAGAAA
GGATGAAAAATCTCCAAGTCCTTGTCCCAAACTCCAATAAGGCAGATAAGGCATCAATGCTTGATG
FIGURA 24 CONT. AAATAATTGATTATGTGAAATTTCTTCAGCTTCAGGTCAAGGTATTGAGCATGAGCAGGCTAGGAG CTCCTGGAGCAGTTCTTCCCCTTCTTAGGGAATCTCAAACCGAGTGCCATAGTAATCCATCTCTAT CAGCTTCAACCATTTCACAAGGGCCACCAGACATGCCAGACTCAGAAGACAGCTCTGCCTTTGAGC AAGAGGTAGTGAAGCTGATGGAAACGAGCATCATCAGCGCGATGCAGTATCTTCAGAACAAGGGTC TCTGCCTGATGCCCATTGCTCTCGCTTCGGCCATATCCAACCAGAAAGGCATGGCTGCTGCTGCTG CAATCCCTCCTGAAAAATGAAAAAAAAAATGAAATCGGAAAAATATGGGGGGAACAACTGCAGAAG ACATAAT AACTCAACGGCTGCAGAAATGTGCTGGACACTGCAGGTTTTGTGAATGAAGTGAAATCC AATCCAGGGGGTCATAAAACATAGGAAGTTATCTGACTAATTCAGGCTTATGACACAATCTACTCT ATAGTCTATAGCTATTGTGTGCCTGTTGCACATCAGTTGATGTGTATTCTTTTGTTTTTTTTGTAT TGCATCCGGATGCTAATTAGGTAGTAGTGTTTCCTTTGATGTACATGAGTATTATCTATGCGGTTT TATCTAATGTGCATATAAAGTAAAATCTGGTATGTTGCTGCTA
SEQ ID NO: 366, O. sativa 0s09g25040
ATGGCTGCGGCGGCGGCGGCGGGCCAGATCTCCCTGGACGACCTCCGCAACGGCGGCGGGGTCGCC
GCCAATGCCGGCGGCGGCGGCGGCGTCCACGACGACTTCCTCGACCAGATGCTCAGCAGCCTGCCG
CCCTCGGCGTGGCCCGACCTCGCCGCCGGGAAGGCGGCCGAGGACGACGCCGAGGGGATGCATCAC
CACCACCACCAGCAGCAGCAGCAGTTTGGTGGGCCGTACGACGAGTCGGCGATGCTGGCGTCGCGG
CTCCGGCAGCACCAGATCAGCGGCGGCGGAGGAGGAGGCGGCGGTGGCGCGGCCGCCGTGAAGCAG
ATGGTGCTGCAGCAGCTCGCCGATCTGAGGCAGGGGCACCACATGATGCTCCAGGGCTTGGGGGGA
CGGTCGCCGGCGGGGGGCGGCGGCGGCGGCGGCGACGGGGGCCTTCTCCTCCCGCTCACCCTCGGC
AGCGGCGGATCGGGCGGCGACGTGCAGGCGTTGCTCAAGGCCGCCGCGGCCAATTCCGCCGGAGGA
GGAGACGCCGGCGGCGTCTACGGCGGCGGATTCGCCGGCTCGCTCCATCAACAGCAGCAACATTTC
CAGCCACATCCACAGACGGCGCCGACGATTCCGACGCAGAGCTTCGGCGGCGGCGGCGGCGGAGGA
GGAGGAGGAACCGCGTCAGGCGGCGGGGCGGCGCAGCCTCAGGCCGGCGCGGCTGGAGGAGGCGCG
CCGGCGCCGCCGCGGCAGCGGGTGCGGGCACGGCGAGGCCAGGCCACCGACCCCCACAGCATCGCC
GAGCGGCTTCGGAGGGAGAGGATCGCCGAGAGGATGAAGGCACTGCAAGAACTGGTTCCCAACGCC
AACAAGTTGATGCAGACGGACAAGGCTTCCATGCTGGACGAGATCATCGACTACGTCAAGTTCCTA
CAACTCCAAGTCAAGGCAAGCACGTACACTAAATTACTAATACATGTTTTGAGCATGAGCCGGTTA
GGTGGCGCCGCAGCCGTCGCGCCGCTCGTGGCCGACATGTCCTCGGAGGGGCGAGGCGGCGGCGCG
GCGAACGGCGGAGCACCGGCGGCGGCGGGGAGCGATAGCCTGACGGTGACGGAGCAGCAGGTGGCC
AAGCTGATGGAGGAGGACATGGGCACCGCCATGCAGTACCTGCAGGGGAAGGGCCTCTGCCTCATG
CCGATCTCCCTCGCGTCCGCCATCTCCTCGGCGACGTGCCATCTCCGGCCGCCGGTGGTCGCCGCC.
GCGCAGCAGTTCCCGGCCGGGCTCGGCGCCGCCGCTGCCGCCGCGCACCACCACCAACTGAGCGCG
GCGGCGGCGGCGGCGGCCATGCGCGGACACCTGCCCGGCCTGAACGCCGACGGCTCCGTGCCGGCC
TCGCCGAGCATGTCGGTGCTCACGGCGCAGTCGGCCATGGCCAACGGCGGCGGGGGCGCCGCCGAC
GGCGAGGGGTCGCAGCTCAAGGACGCCGCCTCCGTCTCCAAGCCGTGA
SEQ ID NO: 367, O. sativa 0s07g08440
ATGAGGGCCCTGCAGGACTTGGTCCCCAACACAAACAAGACAGACAGGGCAGCTATGCTAGACGAA ATCCTTGATTATGTGAAGTTTCTTCGGCTTCAAGTAAAGGTTCTGAGTATGAGCAGGCTGGGTGGT GCTGGTGCAGTTGCGCAGCTGGTTGCTGATATTCCAATCTCAGTTAAGGGGGAGGCAAGTGACAGT GGGAGCAAACAACAGATTTGGGAAAAGTGGTCAACCGATGGCACAGAAAAGCAGGTAGCGAAGCTG ATGGAAGAAGACATCGGAGCAGCAATGCAATTCCTCCAATCCAAAGCACTATGCATGATGCCAATC TCTCTTGCGATGGCGATCTATGACACACAGCATTCGCAGGACGGACACTCAGTGAAGCCTGAACCC AACACTCCTTCATAG
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 368, Ρ. abies DV982110
CACAGGAGGCAGCTGTAACGGCAGCGACGGAGGAATGCTTCCTCTTCCTCTCAGTCTTGGTCAGGC TGGAAAGTCCGGCGACATGAACGAGCCCGGATCGCGGGAAGAAATTGAAGCTTCTTTCAAGTCGGT AAATAATGCCCGAGATTCGAACGTCGGAGGGCTATTCCAGCCGTTCGCCGTATCACCGCGGGGCGT TCGACCGACCGGTCAAAACTTCCATGCGCAGCCCGGACAAGTGCCATTGCAAGGGTATGGTGGAAT GCCCCAACCTCAGCATCAGAATCCACCTCCGACCGGAGTTGGTGCTGCACCACCTGTTCGACCTAG AGTAAGGGCACGCCGTGGACAGGCTACAGATCCCCACAGTATTGCAGAACGATTGCGTAGGGAGAG GATTGCAGAGAGAATGAAGGCTCTGCAAGAACTGGTTCCTAATTCCAATAAGACGGATAAGGCTTC TATGCTGGATGAAATAATTGATTACGTCAAGTTTCTTCAGCTGCAAGTGAAGGTTCTAAGCATGAG TCGACTGGGAGGTGCAGGAGCAGTTGCTCCCCTTGTGGCTGATATACCTGCTGAGGGTGCCAACGC CCCACAAGGCACAAGAACCAACGGTAGCCAGAACTCTTCTCCGGACGGTCTAGCATTAACAGAACG CCAAGTAGCAAAGCTAATGGAAGAAGACATGGGAACGGCCATGCAGTATCTTCAGGGAAAAGGTCT CTGTCTGATGCCTATATCTCTGGCCTCTGCCATTAATAACTCCGGTTCGAGACCCCAGGCTCCTTC CACCCCTTCTCNNNNNNGACTATTGGCATCTAATGTTAACGACAGGCAGGTACTCGAACCCTCCTN NNNNTCGGCACTATCTNNNNNNNNCTCNNNNNNNNATGACATACAGCCATCCATC
SEQ ID NO: 369, P. deltoides TA3263
ATTACGGCCGGGGGGTACTCCTCACTAGTCACTGGCTACCTGTGCTCGTATTAGAAAGCAAACCAA
AGCAAAGCGAAAAGCTGAAACCTTGAAAGCCGAAGTACTTAGCTATAAAGAAAAAGAGAAAAAGAA
AGAAAGAAGAAGGTAACCCAACAGTCCTTAACTCTCTCAATTAAAACGATTTTGCATGTAAATTGA
TGCTATTTTGTATCCCCAACTCTCTATCTCAACTCACTTCGACTCCTCCGAGTCCAACTCCAAATG
GCCAATAATCCAACCGAACCTCCAGCCGACGATTTCCTCCAGGAAATCCTCGGGATGCCTAACTTT
GCTTCGGCTGAAGCCGGGTTGGTTGGAGCCGATGCTGGCCTGGCTGGCGCCGCTGCTGCTCAAGCT
TCTATGATGCTTCAGCTTAGCTCTGGTGATGGTTCCGGCCACATCTCCGACCTTGGCGGTGCTCCT
GGAGGAGGAAGCGCCGGGTTTCACGGCTTTCCCTTGGGGCTTAGCTTGGAGCAAGGGAAGGGAGGG
TTTCTGAAGCCCGAGGAGGCGTCTGGGAGTGGAAAAAGGTTCCGTGATGAGATTGTTGATGGTAGA
GCGAAAAATGTTTTTCATGGTCAACCAATGCCGACAACGGTTGCTATAGCACCGCATCCACCAGCA
ATGCGCCCAAGGGTACGGGCTAGACGAGGTCAAGCCACAGATCCACACAGTATTGCTGAACGGTTG
CGCAGAGAAAGAATAGCCGAAAGAATCAGGGCATTGCAGGAGCTGGTTCCTAGTGTCAACAAGACG
GATCGAGCCACCATGCTTGATGAAATTGTGGATTATGTGAAGTTTTTAAGGCTTCAAGTAAAGGTA
TTAAGCATGAGTAGACTGGGCGGAGCTGGTGCTGTCGCACCACTTGTAACAGACATCCCACTATCA
TCAGTTGAGGATGAAACTGGCGAAGGAGGAAGAAACCAGCCAGCTTGGGAGAAGTGGTCGAATGAT
GGCACTGAACGGCAGGTAGCTAAGCTAATGGAGGAAAATGTTGGCGCTGCCATGCAATTTdTTCAA
TCGAAGGCTCTTTGCATCATGCCCATCTCACTAGCGACGGCCATTTACCATACACAACCACCAGAT
ACCACTAGTATTGTCAAGCCAGAAACAAATCCCCAATCATAGAACCGTTGAAAGGTGGGGGAGCAT
CCCATGGTCCTGTCTAAAAGAGTAAAGTCCAAATGCTTAGGGTCCCACGTCTTATTTGTCACGTTT
CACCCCCACAAT
SEQ ID NO: 370, P. radiata W02005001050 seqID516
GTTGCAAAGCAATACCCAGAAATTATTCACAATGTCATTGCTGCCTCCCGGGATAGGAGGCCAGGG CTTGAACTCTCAGGAGAACGACCCGTATCCGTACGACGATTCCCAGTTCCTAGCTAACAGGCTAAG GCAGCATCAACTGAGCGGTAATTCTTCGATGAATCAGACGCCAAACCAGGCCTCGCAAGGGATTAA TGAAACCAATACGTCTCCGGGCCGATCCATGGTTTTGCAGCTAAGCACAGGAAGTGCAAGCGCTTC ACAGCTGCTGGCCTCCATGGGAAATTCGCCTCGCGGCACCGCGGTAATGACGCAGTCGCCCAGTAC AGGAGGCAGCTGTAATGGCAGCGACGGAGGAATGCTTCCTCTTCCTCTCAGTCTCGGCCAGGCGGG TAAATCAGGCGACATCAACGAGTCCCGCTCGCGGGATGAAATTGAAGCTTCCTTCAAGTCGGCAAA TCATGCCCGAGATTCGAACCTCGGAGGGCTATTTCCGCCGTTCGCCGCATCACCACGGGGCGTTCG ACCGACAGGCCAAAACTTCCATACGCAGTCCGGACAAGTGCCAATGCAAGTGTATGGTGGAATGCC
FIGURA 24 CONT. CCAACCTCAGCATCAGAATCCATCTCCGACCGGAGTTGGTGCTGCACCACCTGTTCGACCTCGAGT AAGGGCACGCCGTGGACAGGCTACAGATCCCCACAGTATTGCAGAAAGATTGCGTCGGGAGAGGAT TGCAGAGAGAATGAAGGCTCTGCAAGAACTGGTTCCTAATTCCAATAAGACGGATAAGGCTTCGAT GCTGGATGAGATAATTGATTACGTCAAGTTTCTTCAGCTGCAAGTTAAGGTTCTAAGCATGAGTCG ACTGGGAGGTGCAGGAGCAGTTGCTCCCCTTGTGGCTGATATACCTGCTGAGGGTGCCAACGCCCC ACAAGGTACAAGAACCAACAGTAGCCAGAACTCTTCTCCAGACGGTCTAGCATTAACAGAACGCCA AGTAGCAAAGCTAATGGAGGAAGACATGGGATCAGCCATGCAGTATCTTCAAGGCAAAGGTCTCTG TCTGATGCCCATATCTCTGGCCTCAGCCATTAATAACTCCGGTGCGAGACCCCAGGCACCATCCAC CCCTTCTCTTCAAGGGCTATTGCCACCTAATGCCAACGACAGGCAGATACTGGAACCCTCGAACTC GGCACTCTCTGCCCTCACGTCCACCTCCATGACCATACAGTCTTCCATCAGCTCGCCTGGGAGCGG AATAACGGAGCAAGGTGATAATGCACACAAGGCAGTGAACGGAACAAGGAATCCAAAGGATTCCAG AGAAGCCAATTCCGTTACGAAGTCCAACGGGATAGGAGGCCCAGCTCTTTCCAAGAACGCCGTTAA AGGAGAGGACGAACCTCAAAGGAGGACGGGCCAGTAAACAGCACCACCTTGCTAACGGAAACTGTA CCATACTTCTATTAACGCCAGATTGCATGAAATTGTTCAAGCATACGAAATTTACTTTTCACATGC TTCAACAATTTCTAAATAGTCGTAGTCGCAGTCGCAGTCGCTCTATGGGAGAGCATTCATTCAAAA ATCCCAAAAACACACTTCAAATTTTCCTTTCTCCTGAAGTTTGGTGTTTATTTTTATTGAATGGGT AAAAGAATCGAGCAAGTCTATCAAAATAAGGCACGCGCCCCACTTTGATGATGCCTTATTTAAATA GACTTGCATAAATATGACATTATGTATGGTTGACCCAAGCGCTTTGTTAATCACTACGTAAGTTAT ATCTTAAGTTGGATAATAATTATTGCTCATGTCAGCTACACTACGAAATTCTTGTTTATTTAAAAA AAAAA
SEQ ID NO: 371, Ρ. sitchensis TA14134
CAGGTAAAAAGAAACTTTCTTTTTGATTCGGAATAAAATTCACACAATGTGTGAAAATTCCAAAAC
TCTCACGGTAAACGTTTTAGAATGTAACATTGACTTGCATGGGAAGGATGTGAATAATTAAAAATC
CTTCCCACACTAAAACCCACTTGATCTTTATATGCTTAATACTAATCCCGGAAGCTCTTAAACCAG
AAGATTGTACAATTGAATCTTCATACTCGAATAAAAACAACTATTTCTGGTTAAACAAAAATCGAG
AAAAGACGGACGGCCATGTTACAACCACGGCAGTTTCTCTCCTCTGGTTCTTGTTAGAAAGTGGTC
AATTATTATGCTATTTGCAGAGAACTAAGATTGCCAACAAACAGCTAGTTCATTGTAGCTGGGAGA
TTTCAGTTTAAGATGACAGGCAAAATCAACATTGCAAAAAACTCCATAAGAGATGGCTCCTAACCC
ACGTCTTTTCGTATGTGAGCCACCAGTATACTTTCCATATATTCGAGAATCCTTGAAGTTAGAAGC
AACCTTTTTTGGCCTCGGATATCTTCCCTATTCCTTTTTCCTAAGTTTCGGCAAGCTAGAT ATTAT
CCCAAATTCTGCTCCATTTGACTCAGCGGTGGGAACTAATTCTCTTCCTCTCTTTTCAACTGTGTT
TTCCTTTAAAAGGAAATCACTGCCAAATCCAGCAGATCCCATTCCAAGAGCACCTGAGCAACTATC
GACAGTTAATGAAGCAGGCTGATTGCCTGAGCTTTGCCTGTCACTAGTACTGTCAACAGAATTTGT
TACCCCAGAACCCAACAGTGGCTTTCCAGTTGAACTCGATATAGCAGTTGCCAGTGCAATTGGCAT
CAAACAAAGCCCTTTATTTTGCAAATACTGCATGGCTGCAGTCATATCCTTCTCCATGAGCTTCAC
AACATTTTGCTCGAAGGCTAGACCATCCTGCGATAGTGAGCCGCCAGCTTGACCCAGAGCCGCTGA
TGCCAGGCTGCCAGATCCCTCAGCTGGAACATCAGCAATTAGAGGCGCAACTGCGCCTGCACCACC
AAGCCTACTCATACTCAAAACCTTTACTTGCAGTTGTAGAAATTTGACATAGTCAATGATTTCATC
CAGCATGGACGCTTTGTCTGTCTTATTAGCGTTTGGAACAAGCTCCTGCAAGGATTTCAAATTTTT
TGCAATCCTTTCCCTGCGTTCCCGCTCAGCTATACTGTGTGGATCAGTAGCTTGACTACAAACTAA
TAGCTCCTTCAAAAGATACGGTGTGTTTTCGCCAGCAATGACACTAGAAGAACTATTCTGAACATC
ATTATTTTGAGCCTGGCCTTCTAAGTTCGGACTCATATGACTTGACGGTGTTACTGACATTGTTGA
GACTCTTGAGCTCGCTTGAAGTGTTCCCATAGAATCACCAGGCAAGCAATTTGTTGGTCCTCCAGC
ACTACTATCCAAAGATGATCTGTCGGCACCATTTATGTCTTCCCATGAAGATGATAGTAATTGATC
AAAAATGTCATCCATTACAGAACTCAAGAGCTCCACTCACTTGCAAAACAATTGCTATGAAATTGC
CCTTTGTCCAGCAATAAACTAGCTGAAACAGCCTTAGCTGATAGATTTCATTTCTTGTTGCTCTCA
FIGURA 24 CONT. AAAATCCAAAATCAGGCTTTCCCCTCAGCACCTACATTAACCGCTAGCAGCAGCCATGTCCGCCTA TAAAATAGCAGAATTTAACCAAAGAACGATTTCTCCGTTTCCAATTTAGCCTTCTTTAATGTCGCG GCTTGGCAAAACTGCAACCAACATGTGCCGGCATTGAACGTTAACAGGAGAGCAGAGCAGAGCAGC CACATTAGCATAACGTTATCAGAATTTCA
SEQ ID NO: 372, P. taeda TC68930
TTTTGGGCAAAGGTCTCACTCTGAAGACAAAATGCTAGCCAGAGAAAATAGATCTGGAGATACTGA GCATGATGATCTTCAAGGGACCCTTTTGACATCTTATACAGGACCACAAGGAGGTCAGACAGTGCT ACCTAGAACTCCAGGGGCACAATCCCATCAACAGAATCTTAGCACACAAACTATACAATCAGGTGA AGGAACTTCTCTACAGCAGTATGGAAACCATTCAGCTGTTTCTCAGCTGCAGTCTGGGGCTGGTGG TGGCAATGCTGCAAATGGAGCTGCAAGGCCACGTGTCAGGGCACGTCGAGGTCAAGCTACCGATCC ACACAGTATTGCTGAGCGGCTTCGCAGGGAGAGGATTGCAGAAAGGATGAAATCTTTACAAGAACT TGTTCCAAACTCTAACAAGACAGACAAAGCATCCATGCTTGATGAGATCATAGAGTATGTCAAGTT TTTGCAGCTGCAAGTGAAGGTTTTGAGCATGAGTAGGCTTGGGGGTGCTGGTGCAGTTGCACCTCT GATTGCTGATGTTCCATCTCAGGGATCAGGTGGTGTCATGTCAACAGCCTTGGGCCAAGCAAGTGG GCCCTTGACTCTGTCACAGGATGGTCTTGCTTTTGAACAGGAAGTTGCAAGACTCATGGAATCGAA CATGACCTCAGCTATGCAATATTTACAAAATAAAGGACTTTGTTTGATGTCCATTGCACTTGCAAC AGCTATATCAAGTTCAAGTGGAAAGCCTGTACTGGCTACTGTGCCAGGAACAGGTGTTGATAGTAG TGAGAAGCAAAATTCTGACATGCAATCCATTGTCTTACCTTTTAGTAGCAGTTCAACAACCATGGG ACTCAGAGCTACTGCATCTGGCAGTGACGCCCCTATAAATGAGAATTCAATAAATAAAGCTAGCAT AGAAAAAGTTGTGGCAGAAAAATCAAATGGCATTTCACCTGGGCTATCATCTGATGTGCCCAAGGT TGGATCACAGAGCAGGGAAGAACTCTTGAAGCGAGCACAATGATTTCTATCTGCAAGTGTGTCTGA TTTCGGTATTCAGGAGTGAGCCTCAATGCTAAGGCGGTTGGTGAGATTTTCTAGTACGCAATTTTT TAACAGATAGGTTATATACCACTGATTATGGTTCACACATCTGGGATCGTGTGAGATTTCAATAGG AGCAAAATGTGTAATGTATAAGTGAACCCCTGTTTTAATGAGAAATATTGGTGGAACTCTGTTGGT GCAAGGTTGCCAACCTTTTTATTTCCACTTTCCTTTTAGGCAAATTTAAGGTTACCAAGTATTTAT TCTAACTTGAACATGACTGGTGCTGACCATACTAGGGTCCTGCTACTGAGATACCAAGATGGCTCA GGCATCCATTTTCCTGTTTCCCTTAGTTTTGATTTGTGGATAAGTGGATATTTATCCAAACTTTAA ACAATTGGATGATCTTATTTCAATTTGCTTCAACAAATGTTAAATGCAATGTTCTCAATACCAAGG TAAGTATTACCACTGGGTTGTTTTCTGTTT
SEQ ID NO: 373, P. trichocarpa scaff II. 416
TCÁCTTTGACTCCTCCCAGACCTACTCCAAATGGCCAATAACCCAACCGAACCTCCAACCGATGAT TTCCTGCAGGAAATTCTTGGGATGCCTAATTTTGCTTCAGCTGAAGCTGGCTTGGTTGGAGCTGAC GCTGGCTTGGCTGGCACTGCTTCTGTTCAAGCTCCTATGATGCTTCAGCTTAGCTCCGGTGATGGT TCCGGCCACATCTCCGCACTCGGCGGTGCTCCTGGAGGCGGAGGCGCGGGATTTCACGGGTTTCCG CTGGGGCTTAGCTTGGAGCAGGGGAAGGGAGGGTTTCTGAAGCCCGAGGAGGCGTCCGGGAGTGGG AATCGGTTCCGTGATGATATTGTTGATGGTAGAGTTAGAAATGTTTTTCATGGTCAACCAATGCCC ACAACAGTCACTGCAGCTACACATCCACCAGCAATGCGCCCAAGGGTACGGGCTAGGCGAGGCCAG GCCACAGATCCTCACAGTATTGCTGAACGGTTGCGCAGAGAAAGAATAGCCGAAAGAATCAGGGCA TTGCAGGAGCTGGTTCCTAGCGTGAACAAGACGGATCGAGCCGCCATGCTTGATGAAATTGTGGAT TATGTGAAGTTTTTAAGGCTTCAAGTAAAGATATTAAGCATGAGTAGACTGGGCGGAGCTGGTGCT GTTGCGCCACTTGTAACGGACATCCCACTATCACCAGTTGAGGATGAAACTGGCGAAGGCGGAAGA AACCAACTGGCGTGGGAGAAGTGGTCAAATGATGGCACTGAAAGACAGGTAGCTAAGCTAATGGAG GAAAATGTTGGTGCTGCCATGCAGTTTCTCCAATCAAAGGCTCTTTGCATCATGCCCATCACACTA GCCACTGCAATTTACCACACACAACCACCAGATACCACTACTATTGTGAAACCAGAAACTAACCCC CCGTCATAGAACCGTGGAAAGGGGGGAGCATCCCGCGGTCCCGTTTAAAAGTCACCAAATGCTTAG GGTCCCACTCCTTATTTGTCCCG
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 374, Ρ. trichocarpa scaff 70. 65
AGTAGTATTTTGTGTCATATATTTGCATGCATGGCAGGAAATCCCCCACCTGAAGGGTTAGGAGAT GATTTCTTTGAGCAGATCTTGGCAGGGCAGCCACCTGGTTATGGTGGTGAGGCTGTGGGGTCCACC AGCCTGCCCATGATGGGGTTGCAGTTAGGGTCTAGTGCTGCTAATGTTGGATTAATGAGGAGTAGT GCTAATAATAATATGGGAATGATGCCTTTAGGGTTAAACTTGGAGCATCATGGGTTTTTAAGGCAA CAACAAGATGATGGCAGTAGTTCTTTAGATACCAACAACAGCAATAATATCAATAATGCTTCTCCT TTTTCTATCACTTCTGCTGGATTCTTGGGGAGAGATTCTGTACACATGACTAGCTTGTTCCCAACG TTTGGACAATTGCAGATTCATTCATCAATCCGGTCTGCACCACCACCACTTGGACCACCTCAGATT CACCAGTTTAATAGCCAGCCAACATCAGGAGCAGTTTCAGCTGTACCACAACCACCTGGCATTCGA CCAAGGGTGCGAGCAAGACGGGGCCAAGCTACAGATCCGCACAGTATTGCTGAGAGGTTGCGAAGA GTAAGAATCACGGAGAGGGTGAAGGCGTTGCAGGAATTGGTTCCCACTTGCAACAAGACAGATAGG GCAGCCATGCTGGATGAAATTGTGGATTATGTGAAGTTTCTTAGACTCCAAGTCAAGGTTTTGAGT ATGAGCAGACTCGGTGCGGCGGGCGCTGTGGCTCAGCTTGTAGCTGATGTACCACTGTCATCAGTT CAGGGAGAAGGCATTGAAGGAGGGGCCAATCAGCAAGCTTGGGAGAATTGGTCAAACGATGGCACT GAACAGGAAGTAGCTAAGTTGATGGAAGAAGATGTTGGAGCTGCCATGCAGCTCCTTCAGTCCAAG GCACTCTGCATCATGCCTGTATCACTTGCTTCAGCAATCTTCCGAGCACGCCCACCGAATGCTCCA ACACTGGTCAAGCCCGAATCGAACCCCCCCTCATAAACCTAAGCAAGAACGTGCAAGCTTTGCATA CACATCGATCATTCCAGGGGGCATCTGTTTCCCAAATTAAAAACTGCTCT
SEQ ID NO: 375, P. trichocarpa scaff XIII. 403
GTAGTATTTTGGTGTCATATATTTGCATGCATGGCAGGAAATCCTCCACCTGAAGGGTTGGGAGAT GATTTCCTCGAGCAGATCTTGGCAGCGCAGCCACCTGGTTACGGTGGTGGTGGGGAGGTTATGGGG TCCACTAGCCTGCCCATGATGGGGCTGCAGTTAGGGTCTTGTGCTGGTAATGTTGGATTACTGAGG AGTAATGCTAATAATAACATGGGAATGATGCCTTTAGGGCTGAACTTGGAGCATCATGGGTTTTTA AGGCAACAGCAAGATGATAGTGGTAGTTCCTTAGATACCAACAACAGCAATAATATCAATAACACT CCTCCTTCTATAAAATCTGCTCGAATCTTGGGGAGAGATTCGGTGCACATGACAAGCTTGTTTCCA ACATTTGGACATCTGCAGATTCATTCATCAATCCGGCCTACACCACCTCCTCCTGGACCACCTCAA ATTCACCAGATTAATAGCCATCCAAACCCAGGAGCAGTTTCAGCTGTACCACAACCGCCTGGCATA CGGCCAAGGGTGCGAGCAAGACGGGGCCAAGCCACGGATCCACACAGTATTGCTGAGAGGCTGCGA AGAGTAAGAATCACGGAGAGGGTGAAGGCGTTGCAAGAATTGGTTCCCACTTGCAACAAGACAGAT AGGGCAGCCATGCTTGATGAAATTGTGGACTATGTGAAGTTTCTAAGACTCCAAATCAAGGTTCTG AGCATGAGCAGACTAGGTGCAGCAGGCGCTGTGGCTCAGCTTGTAGCCGATGTACCATTGTCATCA GTTCAGATTAAGGGAGAGGGCAATGAAGGAGGAGCCAATCAGCAATCTTGGGAAAATTGGTCAAAT GATGACACTGAACAAGAAGTAGCTAAGTTAATGGAAGAAGACGTTGGAGCTGCCATGCAATTCCTT CAGTCGAAGGCACTCTGCATCATGCCCATATCACTTGCTTCAGCAATCTTCCGAGCACGCCCACCT AACGCATCAACACTCATCAACACCGAATCGAACACCCCTTCATAAACCTAAGCAAGAAAGTGCATA CTTCGTGTGCTCGTCGATCATTCCAGCAGGCATCTGGGTCCCAAATCTTGTTCTTGTCC
SEQ ID NO: 376, P. trichocarpa scaf2f8. 86
CAAGACGACAAAAAAAATTCACCTGTAAGCATGATAAGTTCAAATCAAAGTGTGGAGTCCTTGGCC ACTCAAGACACTTCATCTGTAGTTCTTGGCAGTGAGTCAGATTATGCTGTTGATAAAGTCTTAATT TCTGAACAAGCTCGATTGCAAAATGATTGCCAGAATTGCAATGGAAACCCCTCCCCTGATGGAATG GCACGTGGAAACTTAAAATTTGGAAACACAGGCCTGCAATGCAATGGAATTCTTCCTACCCTGAGT TCTCTGAACTATCCAAATCAGCTTCCAATAGTTGGTGATTTGACATCGTATCTCTCTTTTTCTGAG GCAAGCAATGCTGGATGCAATGGAAGGGAACAATCTGAGTACCTGAGATCCTTAAAAAATCTGCAA AACTTATCATCAATCCCACAATTGTGGCCTTCACAATCTTATGAGGGTGTTTCTTCTCTCCCTCCT TTGATGGGACAAGACAGAATAGAGGGATCTGGTCTTCGAGGAGGGAACTTGGATGATGATATGCAT ATTATGGGGAAGGGATACATGGGCATGGATGAAATTCTCCGACTTGATAAGTTATCTGCATCACCT
FIGURA 24 CONT. ACTACAGAGGGGAAAGAAGATTTGCAAAGTTGTCCTTTCTCATCTGGCATAGCTGAGCCCAATGTA AACATGTCAATGAATCAATTATCATCTATGCCTCAGACTACATCAGCTGCTCCAGTAGAAGGCTGC AATGGAACTGGAAAAACTCGTGTAAGAGCACGACGTGGCCATGCCACTGACCCACATAGTATAGCT GAAAGGCTTCGAAGAGAGAAAATTGCTGAAAGGATGAAGAATCTGCAAGAACTTGTACCTAATTCC AATAAGGTTGACAAGGCATCTATGCTTGATGAGATCATAGAGTATGTCAAATTTCTTCAGCTCCAA GTCAAGGTGCTAAGCATGAGCAGGTTAGGGGCAGCCGGAGCAGTCATTCCTCTCCTCACAGATGGT CAACCTGAGGGTCATAATAGTTTGTCGCTCTCTCCATCAGCTGGTCTAGGAATTGATATTTCTCCA TCTGCTGATCAGATTGCCTTTGAGCAAGAAGTACTTAAGCTACTGGAATCCGATGTGACCATGGCC ATGCAATATCTTCAAAGCAAAGGTCTCTGCCTCATGCCCATTGCTCTTGCTGCTGCCATATCCAGT GTTAAGGCATCGTTATCAGGTACAACTTCTGAGGAGAGGAAGAACAATGGCTACACCAGTGGTCTT GTTAGCAGCAGCAGCAGCATAACTGGCATTGACACCCATCCAATGTCCAATGATAACAATATTGCA ACCGGTACACTTAGCAGCAAAGGCATGATTGTCAATGGCTGCAATGAGGTTGTCAAGCAAGAAGTG CTGAAGAACACTTGATGCATTTCTAGAGCACGGAAAGTAAAGATGTAATTTCATTATTTTAGATGG GGTTTCATTTTTCAAGCTGAGGCAGATAA
SEQ ID NO: 377, Ρ. trichocarpa TC63334
GGGTCTCTCCGCTCTCAGTACTCCTCACTAGTCACTGGCTACCTGTGCTAGTATTAGAAAGCAAAC CAAAGCAAAGCGAAAAGCTGAAACCTTGAAAGCCGAAGTACTTAGCTATAAAGAAAAAGAGGAAAA AGAAAGAAAGAAGAAGGTAACCAAACAGTCCTTAACTCCCTCAATTAAAACGATTTTGCATGTAAA TTGATGCTATTTTGTATCCCCAACTCGCTATCTCAACTCACTTCGACTCCTCCGAGTCCAACTCCA AATGGCCAATAATCCAACCGAACCTCCAACCGACGATTTCCTCCAGGAAATCCTCGGGATGCCTAA CTTTGCTTCGGCTGAAGCCGGTTTGGTTGGAGCCGATGCTGGCCTGGCTGGCGCCGCTGCTGCTCA AGCTTCTATGATGCTGCAGCTTAGCTCCGGTGATGGTTCCGGCCACATCTCCGACCTTGGCGGTGC TCCTGGAGGAGGAAGCGCCGGGTTTCACGGCTTTCCCTTGGGGCTTAGCTTGGAGCAAGGGAAGGG AGGGTTTCTGAAGCCCGAGGAGGCGTCTGGGAGTGGAAAAAGGTTCCGTGATGAGATTGTTGATGG CAGAGCGAAAAATGTTTTTCATGGTCAACCAATGCCCACAACCGTTGCTATAGCACCGCATCCACC AGCAATGCGCCCAAGGGTACGGGCTAGACGAGGTCAAGCCACAGATCCACACAGTATTGCTGAACG GTTGCGCAGAGAAAGAATAGCCGAAAGAATCAGGGCATTGCAGGAGCTGGTTCCTAGTGTCACCAA GACGGATCGAGCCACCATGCTTGATGAAATCGTGGATTATGTGAAGTTTTTAAGGCTTCAAGTAAA GGTATTAAGCATGAGTAGACTGGGCGGAGCTGGTGCTGTCGCACCACTTGTAACAGACATCCCACT ATCATCAGTTGAGGATGAAACTGGCGAAGGAGGAAGAAACCAACCAGCTTGGGAGAAGTGGTCGAA TGATGGCACTGAACGGCAGGTAGCTAAGCTAATGGAGGAAAATGTTGGCGCTGCCATGCAATTTCT TCAATCGAAGGCTCTTTGCATCATGCCCATCTCACTAGCCACGGCCATTTACCATACACAACCACC AGATACCACTACTATTGTCAAGCCAGAAACAAATCCCCCATCATAGAACCGTTGAAAGGGGGGGGA GCATCCCATGGTCCTGTCTAAAAGAGTAAAGTCACCAAATGCTTAGGGTCCCACGTCTTATTTGTC ACGTTTCAACCCCCACAATCAAATGTTCCCCTAGTTTCAAATTGCAATCAAAGTCAGATGCCATAG TTCTTGCTTTTGCCTTTTCTTTCCAGCCTTTTTTTTTTCAAACGGGGTTCGATGTCAATGCCTAAA AAAATGCAGGCAGGCCCTTGGTGTCCTGCCAAGTCCAAGTGAGAGGAGAATTTTCAAAGCTTACTC GATATGCTCTTCTTTTGGAATCAGTGGTGGGGAAGTGGAAAATGATGGAAGCGCTTTTGTAATGGG GCTCTAATTTTTCGTAGTGGGTTGTGGGACCTTGTAAAAGAGGCAAGACTGACGGGTTATATAAAT ATATCATTATTGTAATAGTGTATTCAGCGTAAATGGAATGCAAAGGTAGAATTGAATAATGGCTGG TTGTTTCAATATGCTGGGTGTTTCAAGTCCAACAGAAAATGATAGCAGTGCTACTTTGTTC
SEQ ID NO: 378, P. trifoliata TA5414
CTCTCTCTCTTCTTCCTGTTCTCACCTATTTAGTATTTAACATCCATCAGAAGAATGGTTTCCATT CTCTTGAAGAAATTCTTGACTCTTCAAATTTAAATTTCCATATATCATAAAGACTTGTTCTCAAGA AATTAAGATGCAGCCTTGCAGCAGCGGCGGTGAAATGCAAGGAATCAGCTCGCTCTTGAGCAACGG AAGCCACGAGCAGCAGTCGCAGATCCATCAAAGCGCGACGTTTGATCCAACTTCGCAAGACGACTT
FIGURA 24 CONT. CTTAGAGCAAATGCTATCCTCTCTCCCATCGTGTTCTTGGACTGACTTGAAGTCTCCCTGGGGGGT TGTTGACCTTAACCCTAATAACAATAATAATAATATTAACAACAAGCAGCCCAGAGACTTATCTGA CGAAACGGCGCCGTCCACTACTCAAGAGAATAATGTCCCTGCAGGGTTTCAGTTCGATGAGTCCAT GATCTTAGCTTCCAAGATGAGACAGCATCAGATCAGCGGGAATACTGGGAGTGGGAATAATAATTC TGCTGCAGCAAAGTTTATGATGCAGCAGCAGCAGCAACAACAAATCATGATGGCTGCTGCTAGAGG TGGCATCGGGTTGCCTTTATCACTTGGAAATGGTGGCGATAACGACATCGTTGATGCCTCATCATT CAAGTCCCAACAGGGAGGAGATGGCTCAGTGCAAGCACTCTACAATGGCTTCACTGGATCTTTGCA TGGCTCAACCCAGCCTCAACATTTTCATCATCTTCAGGGAGGATCGATGCCCGGGCAGACCTTTGG GGCACCAGGGCCGGTGATGAACCAGACGCAGGCTCAGGCAAGTGGGTCAACCGGTGGTGGTGGAAA CACACCCGCTCAGCAGCCTAAACAAAGGGTTAGGGCTAGGAGAGGTCAAGCTACTGACCCTCACAG CATAGCTGAAAGATTGCGCAGAGAGAGAATTGCAGAGAGAATGAAAGCTCTTCAAGAACTTGTTCC CAATGCCAACAAGACAGATAAGGCTTCGATGCTGGATGAGATCATTGACTATGTCAAATTCCTCCA GCTGCAAGTGAAGGTCCTGAGCATGAGTAGATTGGGCGGTGCTGCTGCTGTCGCACCCCTTGTTGC TGATATGTCCTCAGAGGGGGCAGGAGGAGGTGATTGTATCCAAGCAAACGGGCGGAACCCTAACGG AGCTCAGACGACGTCAGCTAACGACAGCTTAACTGTGACGGAACACCAAGTGGCTAAGCTGATGGA AGAAGATATGGGGTCAGCCATGCAGTACTTACAAGGCAAAGGGCTTTGTCTAATGCCCATCTCACT TGCAACTGCTATATCGTCTGCCACGTGTCACTCTAGGAACCCCATCATCAGCACCAGCAACAACAA CAATAACAACGGCAATCCCCACCACAATCCTTTGTTTCAGTCCAATGGGGAAGGCCCGACCTCACC TAGCATGTCAGTGCTGACTGTCCAGTCAGCAACTATGGGTAACGGTGGGGCTGACGGCTCCGTCAA AGATGCTGCTTCCGTTTCCAAGCCCTGATCAACGGACGTCGACTGACTTTATGATGAGGCTCGTCC AAAGTCTACGAAAATAAGGCGTCACTAGATGTTGGACCTTCACGACGTCGTATTTGTGTAGACTTT GTG AC TGAATC T AAC AAAC AAC AAGAAAGC AAGAAAGAAGCC AATCCC AAGAAC AAAAACC TT AT T TTATGTTGTTATTATTATTTTAATTTGCGGGTTAGGTTTTGTTAATTTTACTATTATTAAAATTTT AATTTCTCTGATGGGATATCTCCCTCTTTTTCTTTTATTTAATATTCTCTGTCATGATTCTCTATT AAATAATTATTTATAAAAGCCTTTAATAATTAGATTATAATT
SEQ ID NO: 379, R. communis TAl616
CCCAACGCTGCATTTTCAGGATTTCTCTCTCTACACTACAAGAACTTGAAGCCAGTACCCATAAAA CCATATACCATCTTGGATTCCACAACCCCTTTCCTGGTTATTGGGCTGTGGATCTGCCACCCAATT CACCAACACTTTCTTTTTCTCGGGTTTCGCATACTTCAATTCCCCTCTTCTCTCGTCTCTTCTATT TGTCTCTCTAAAAACATACTCTCTCCCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCCTCAGCTAATTGAAA CATCAAAAAGGAAAAAGCATTACCATATTTTTTACACTCTAAAACATCAAACTTTATCACTAATAC TACGACTGCTACTGCTACTCTAAAACTACTTTTGCAATATTATTGCATGGCGGGAAATCCCCCACC TGAGGGATTAGGAGATGATTTCTTTGAGCAGATCTTGGCAGTGCAGCCAGGGTATGGAGGCGGTGA TGGTGGTGGCGGTGGAGACGTGGTGGGGTCCACCATGCCTATGATGGGTCTACAGTTGGGGTCTGC CAGTAGTGGTGGTGGTGGATTGAGAACTAATAATATGGGCATGATGCCTTTAGGGTTAAACTTAGA GTTCTTGAGGCAACAAGAAGATGGTAGTGGTGCTTTAGATAACAACAACCATACCAATAACAACAA TAATAATGTTTCATCTTCTACAACTTCTGTTATCAATGATAGAGATTCTGTTCACATGGCGAGTTT GTTCCCAACGTTTGGACAGTTGCAAACCCAGACGCTCCGGCCTCCACCACCACCTCACCTCCACCA GCCATTTCATGGTCAGCCAACACCAGGAGTGGTTTCTGCTGCATCACAGCCACCTGCCATTCGCCC AAGGGTGCGAGCAAGACGAGGACAAGCCACTGATCCTCACAGCATTGCTGAACGGCTGCGTAGAGA GAGGATTGCAGAGAGAATGAAGGCTTTGCAGGAGTTGGTTCCTACAGCCAACAAGACGGACAGGGC AGCCATGATTGATGAGATTGTGGACTATGTTAAGTTTCTAAGGCTTCAAGTGAAGGTATTGAGCAT GAGTAGACTGGGAGCAGCAGGTGCAGTGGCTCAGCTTGTAGCTGATGTACCGCTAGCATCAGTTGA GGGAGAGAGCATTGACGGAGCAGCAGCAAATCAGCAGACTTGGGAGAAGTGGTCAAATGATGGTAC TGAGCAACAAGTAGCTAAGTTGATGGAAGAAGACATAGGAGCTGCTATGCAATTCCTCCAGTCCAA GGCACTTTGCATCATGCCTATATCACTTGCTTCAGCAATCCTTCGAACACACCCCCCTGATGCACC ATCAATTATCAAGCCTGAATCAAACACCCCATCATAAACCTAACCAAGAAATTAATCTCCTTTCAC
FIGURA 24 CONT. GTGCAGATGAATTGCTACCAGCAGACATCTGGGCCCCAAGTGCTGGTATAGTCCCATATAACTCAT TCTAACTCCTCATTATAAATATATATATATATATAATAAAGAAACAATATCCAGTTGGTGCAGCTG TTCATTTTCTTTAGGAGGAGTCATTTTCATGTCAAGTAAGAAGAATCACGGGGCACTTGATGTTTA TAATGCTATGGTCAAGGCAAATCCAAAATATTCAAAAAGCTCCATTGATGTGCTTCTATTTCTTGT ATCTGTGGTGGGGTTAGTGGAGAATGACCAAAAAATTAATAGATAGTGCTAAGAAACTCTTCTGTT TCATTTCTCTTTTGGATAGTGGAAGTGTAGGGCCATCAAAAAGGGGGTTGATAGGCAGTGTGCATG ATGTATTTGAAAAATTTGTGTGGAAGTTGAATCGGATAAATGTAGGTTTGTCGTGTAAATCCATGT TGGAAACTTCATGCTTGACAAT
SEQ ID NO: 380, R. communis TA2825
CTCCTCTCAGGCCGACTCCTGCAAATGGCAAACAATCCCACAGAACCTCCAGCCGACGATTTCCTC CAAGAAATACTCGGCCTACCTAACTTCGCTTCGGCTGACGCAGCCGGCTTGGTCGGAGCCGACGGT GCCTTGGCTACTCCGATGATGCTGCAGCTTAGCTCTGGAGACGGCTCCAACCACATCACTGCCCTA GGTGGAGGGGGAGGAGGAGGAGGAGGCGCTGGATTTCACGGGTTTCCGTTGGGGCTAAGCTTGGAG CAAGGAAAAGGAGGGTTTTTAAAGCCTGAGGAAGCTTCGGGAAGTGGAAAGAGGTTTCGTGATGAC GTTGTCGATGGCAGAGCTAATACTGTTAAGAACGTTTTTCATGGTCAACCAATGCCCACAACTATG GCTGCAGCCCCACATCCTCCCACAATGCGCCCCAGGGTGCGGGCTAGACGAGGACAAGCCACAGAT CCACACAGCATTGCTGAGCGGTTGCGCAGAGAAAGAATAGCTGAAAGAATTAGGGCATTGCAGGAG CTGGTTCCTAGTGTCAACAAGACAGATAGAGCTGCCATGCTTGATGAAATTGTGGATTATGTGAAG TTTCTAAGGCTCCAAGTGAAGGTATTAAGCATGAGTAGATTGGGCGGAGCTGGTGCAGTCGCACCA CTTGTAACGGACATCCCACTATCATCAGTTGAGGATGAAACTGGGGAAGGTGGGAGAAACCAACCA GCATGGGAGAAGTGGTCGAACGATGGCACAGAACGACAAGTGGCTAAACTGATGGAAGAAAATGTG GGTGCTGCCATGCAGTTTCTGCAATCAAAGGCTCTTTGCATCATGCCCATCTCACTGGCCACAGCA ATTTACCATACACAAGCACCGGATACCTCAACTATTGTAAAACCAGAAACAAATCCCCCATCATAG ACCGTACAAACGGGTAAGCATCCCATGGTCCCATCTAAAAAGGTCGCCTAAGTGCTTGGGGTCCCA CATTTTGTTTGTCCCGTT
SEQ ID NO: 381, S. bicolor TC104646
TACTGGACTTCCCCTTCCCCAGCAGAGCAGAGCAGACCAACCGCTTGTCGCGAGCCGCCCGAAGCT TCGGGCCCTGACGCGTGGGCCCCGACCGCGCCCGCCCCCGCCCCCGCGTCGCCGGGCATGGCGGGG CAGCCGCCGCCGCCCGGGGGCTCCGAGGACGACTTCCTCGAGCACTTCTTCGCCTTCCCCTCCGCG GCCTCCGCCGCCGCCGGGGGACACGCGGGCGCCGGTGCCGGCGGGGACCACCCCTTCCCCCTCGCC CTCAGCCTCGACGCCGCCGCCGAGCCCAAGCCGGACCGTGACCCCGTGCAGCTCGCCGGCCTCTTC CCGCCGGTGTTCGCTGGCGCCGGCGGCGTGCAGCAACCGCACCTCCGCGGCCCACCGCCTCCGCAG ATGTTCCAGGCGCAGCCGAAGCCGGGCGAGGGAGGCATGGCGCCGCAGCCGCCAGCCCCACGGCCC AAGGTGCGCGCGCGGCGGGGGCAGGCCACCGATCCCCACAGTATCGCGGAGAGGCTAAGGAGAGAG AGAATTGCAGAAAGGATGAGGGCATTGCAGGAATTGGTCCCCAACACAAACAAGACAGATAGGGCA GCTATGCTAGATGAGATCCTTGATTACGTGAAGTTTCTTAGGCTTCAAGTAAAGGTTTTGAGTATG AGCAGACTTGGTGGTGCTGGTGCAGTTGCACAGCTGGTTGCTGATATTCCACTCTCAGTTAAGGGT GAGGCAAGCGACAGTGGGAGCACACAGCACATATGGGAAAAGTGGTCAACTGATGGCACAGAAAAG CAGGTAGCGAAGCTGATGGAAGAAGACATCGGGGCAGCGATGCAGTTCCTTCAATCCAAAGCGCTA TGCATGATGCCGATCTCGCTTGCAATGGCAATCTACGACACCCAACATTCCCAGGATGGCCACTCA CTGATGAAGCCTGAGCCCAACACATCCTCGTAGTATAGTAACATCAACCCTAGCGTGCATTTCAAC CCCCTAATACTATTAGGCACCGATATATCCAAAAAAAAAAAGTGTATGATATACGGAGCGTTCCAA TGTGCTAACCGTGAGATAGGAAAGGACCTTAAATTGGTATATGATGTAGCCTCCCCTTTCCCTATT TTATTTCAAATCAGAGCAG
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 382, S. Iycopersicum AK247217
AGCAAAGCTTTAGGTGACTCCCTTTCCTTTATTTTCTTCATGGCTCTCACTGCTCTTTAGAAAGTA GCAAAACACACACACAAACAACCCAAAACACACACTTCCATTTCCATTTTTTGCCTATATATATAT ATATATATGTAACAAGTACTTGTTAGAGTACTAATTTGTACACCCTCTTATCAATTCCGTTGTAAA GAACACTTTTTTAACTAGTATTTGTTCAATTGAATGCTTTTCTGAGGAATTAAGGTGGTCGAAAAC AGCTCCGATCCAAGAAAGATTGAATCTTTATAGTTTCTGCTATGGCTAACAACCCTTCTGAGGGAC CTTCTGATGATTTCTTTGACCAAATCTTGGGATTTCCTGCTTACAATGGAGCAGAACCTAATTTGG CGGGAAATGATGCCGGAGCTATACCGCCGGCGATGATGCTCCAGCTTAACTCTGGTGATGGGTCAA GTCAGTTTACTGGAGTGGGTCTTGGGGTTGGTTTAGGTGGTGGGGGGTTCCATGGTCATGGTGGGG GTGGTTCTTTTCCTTTAGGGTTGAGTTTAGAACAAGGGAAAGGTGGGTTCTTGAAGATGGATGATG TTTCAGCACCTGGAAGGAGGTTTAGAGATGATGTTGTTGATAGCAGAGCTTCTTCTTCTGTCAAAC CTGGTTTTCATGGACAACCGATGCCTTCAATGCCGCATCCCCCTGCAATACGTCCAAGGGTGAGAG CTAGGCGAGGACAAGCTACTGATCCACATAGCATAGCGGAGAGGTTACGTAGAGAGAGGATAGCAG AAAGAATTAGAGCATTGCAAGAGTTGGTTCCCAGTGTCAATAAGACTGATAGAGCTGTAATGCTTG ATGAAATTGTAGATTATATCAAATTCCTACGGCTGCAAGTGAAGGTGTTGAGCATGAGTAGGTTAG GAGGAGCTGGTGCAGTAGCACCACTTGTTACAGACATTCCAATATCATCAGTAGAGGAAGAGAGCA GTGAAGGTGGAAATAATAACCAACCAGCTTGGGAAAAGTGGTCAAGTGATGGCACAGAAAGGCAAG TGGCTAAACTCATGGAAGAAAATGTTGGTGCTGCAATGCAATTTCTTCAGTCTAAAGCACTATGTA TAATGCCTATTTCTCTTGCATCAGCAATTTATCACTCTCAGCCACCAGATACATCAAGTCTTGTTA AGCCAGAAACAAATCCTCCTTCATAGATGAACACCCTTATAGAAAAAGGTGACATAACATGCTAAT GACCTTAAAGAATTTTCTTGCAGTGGATGGTTCCTACTTTTATCTATTCAAGTAATATTTAGCTTT TTGTTGAAAAAACAGGGTTCTTTTTTAAAAATATTTATGTATAAAGTAAACCATTTTCTATCATTT ATATATTTGAGTAGTTTTGTTCT
SEQ ID NO: 383, S. lyeopersieum TA21665
GCTCATTTTCCGTTCCTCTTAAAGCTCAATAAACCTATACGCCGGCAAACTCCGGCATGGCGGACA ACCCACCGGAGGTATATGCTGCCGATGATTTTCTCGAGCAAATTCTGGCGATTCCCTCTTATGCTA GCCTGCCGGTAACTGATTTAACCGCCGGTGCCTCATCGGAGAATTCAACATCTGGTGTCTCTCAGC TCCAGCAGCAGCCGTTGTTCCCATTGGGGTTAAGTTTGGATAATGGCTTTGCTGACGCCAACAACA CTGGAGGTTTTCAAGTGAAGACTGAAAGAGAAGCAATGAACATGGGGAATTTGTATCCAGGTCTAG AACATTTGCAATCTCATGCTGTTTGCCTAAGTGTTCCTCAAGTTCACCAAGTCCAGCCTTTTCAAG GCCACCCTACATCAAGCGCAATAGTAACAATACCACACCAACCTGCAATTCGTCCTAGGGTTCGGG CACAAAGAGGACAGGCCACTGATCCACATAGTATTGCTGAGCGGTTAAGGAGAGAAAGGATATCAG AACGAATAAAGGCTTTACAGGAACTTGTCCCCAGCTGCAATAAGACCGACAGGGCAGCAATGCTTG ATGAGATTCTGGACTATGTGAAGTTCTTAAGGCTTCAAGTTAAGGTACTGAGCATGAGTAGGTTGG GAGGAACTAGCGCGGCGGCACAAGTTGTTGCTGATATTCCATTGCAGTCTGTTGAGGGAGACACCT GTGAAAGTCATTCCAACCAGCACGTCTGGGAGAAGTGGTCTGATTCTGAAACAGAGCAAGAGGTAG CAAAGCTCATGGAGGAAGATGTTGGAACAGCCATGCAGTACCTTCAATCCAAATCACTCTGCATCA TGCCTATTTCACTTGCTGCACTTATCTATCCGACTCAGCAAAGTGACAACCAATCAATGGTCAAGC CAGAACAAGCGGCCCCATTGTAGACTTCTAAATTACTGCAGGTGCAATCAAGAACTCCTAATTTCT TTTAGGCCCATCCGTCTATATATCCTTACCTATTTTCTCTTGAATCACCCTCTGAAATCCTTGGTA ATGCAATCAAACTCAGATGACACAATTTTTGCTTTTAGCTCAATCATTGGCCCCTTTATCAACTTT CTTGAGTTCAGTCACACCTTGAACAATGGCAACACTTAAGAAAGCAACCAATCCATCTATCTATAT CATTGTAGGGAGGAGTGTATATTTTTTTTTCCAAACTCTCTGTTATTAGCTGCTTGTTTCCCCCTC ACTCTTGTGGGTTGGTTGTGACTCCTTGTATCTTTTTTATAGTGGATAGCTAGCGATGTATTATAA AAGAAAATTGTCCCAGCTTGCATTTGGTGGACTGTGCGGGGAGAAAGAAACCAAGTTTGTTTGAAG ACAAAGCCATTAGTATACAGAAACTAAAGATGGAATGTTTAGGGCTTTTCTTTTTTTGGTGTAACC ATAGCTTAATGGATGATTTAGAATCAACTTATGATGTACTAGATTCCTTGTGAGAAGATTAAGGAT TAGGAGCTTCTTCATTTCTTTATTTCTGTTCTTTTGCTCATCTGGATGTATATATGGGGGATTACA CACCCTTTGTGTAGTTTGTTATTAATACACAAAAATGTTACCTGTTCC
FIGURA 24 CONT. SEQ ID NO: 384, S. Iycopersicum TC172581
TTCCATTTCAGTTCCTCAAAACCCTTAACTTCTTCTCGCCGGGAAAAAAATTAATTTCGCCGGATA AATCTCCGGCATGGCAGCAAACCAACCGGAAGGCTATGCCGACGATTTCCTCGAGCAAATTCTCGC TATTCCTCCCTACTCTGGCTTGCCGGTTGCTGATGTTGGCACTCCATCAGAGACGACGTCGTTTAC CTCGGCGTCTGCCGTATCTCATCTTAACTCTGCCGCTGCTGCTGGCCTACAGCAACCTTTGTTTCC GCTGGGATTAAGCTTGGATAACGGCCGTGATGACGTCGGCGATGCAGGTCCTTATGCAGTGAAGCA TGAAAGAGATGGAATGAATATCGGAAATCTATATGCAGGTCTAGAACACTTGCAATCTCATGCAGT TCGTCACTCTGTGCCTTCTGTTCACCATGTCCAGCCTTTTCAAGGCCCACCAACAACGAGCACAAC AGTAACTGTGCCACACCCACCTTCAATTCGTCCTAGGGTTCGAGCTCGGAGGGGACAAGCCACAGA TCCACATAGCATTGCTGAGAGGCTGAGAAGAGAGAGGATATCAGAAAGAATAAAGGCTTTGCAGGA ACTGGTACCCAGCTGCAATAAGACAGATAGGGCCGCAATGCTTGATGAGATTCTGGACTATGTGAA GTTCTTAAGGCTTCAAGTTAAGGTACTGAGCATGAGTAGGCTGGGAGGAGCCAGTGCAGTGGCACA ACTTGTTGCTGACATTCCATTACAATCTGTGGGAGGGGGACAGTGGTGAAAGTAGATCCAACCAGC ATATATGGGATAAGTGGTCCAATGTTGACACAGAACGAGAGGTTGCTAAGCTCATGGAGGAAGACG TCGGTGCAGCCATGCAATACCTTCAGTCTAAATCACTCTGCATCATGCCCATATCACTTGCTGCAC TCATCTATCCTACTCAACAACCGGATGACCAGTCCCTGGTCAAGCCTGAAGCAGCAGCCCCATCAT AGACCTTCAATTCGTTGCACGTGCCTCTAAGAACTCCCAATAGCCTTGTGTCCCCCCTCCTTTGTA TCCTTACCTACCATCCATTTGTATTTTCCTGTGTAATTGGTGGCAATGCAATCAATGTCAGATGCC ACAACTTTTGCTT
SEQ ID NO: 385, S. tuberosum TA30646
TTAGAAAGTAGCAACACACACAAACACCCAAAACACACACTTCCATTTCCATTTTTTTGCCTATAT ATATATATATATGTAACAAGTACTTGTGAGAGTACTAATTTGTACACCATCTTATCATTTTACTTG TAAAGAACACTTTTTTAAGTAGTATTTGTTCAATTGAATGCTTTTCTGAGAAATTAAGGTGGTCGA AAACAGCTCCGATCCAAGAAAGATTGAATCTTTATAGTTCTGCTATGGCTAACAACCCTTCTGAGG GACCTTCTGATGATTTCTTTGACCAAATCATGGGATTTCCTGCTTACAATGGAGCAGAAACTAATT TGGCGGGAAATGATGCCGGAGCTATACCGCCGGCGATGATGCTCCAGCTTAACTCCGGTGATGGGT CGGGTCAATTTACTGGAGTGGGTCTTGGGGTTGGGTTAGGTGGTGGGGGGTTCCATGGTCATGGTG GGGGTGCTTCTTTTCCTTTAGGGTTGAGTTTAGAACAAGGGAAAGGTGGGTTCTTGAAGATGGATG ATGTTTCAGCACCTGGAAGGAGGTTTAGAGATGATGTTGTTGATAGCAGAGCTTCTTCTTCTGTCA AACCTGGTTTTCATGGACAACCCATGCCTTCAATGCCGCATCCCCCTGCAATACGTCCAAGGGTGA GAGCTAGGCGAGGACAAGCTACTGATCCACACAGCATTGCGGAGAGGTTACGTAGAGAGAGGATAG CAGAAAGAATTAGAGCATTGCAAGAGTTGGTTCCCAGTGTCAATAAGACTGATAGAGCTGTAATGC TCGATGAAATTGTAGATTATGTCAAATTCCTACGGCTGCAAGTGAAGGTGTTGAGCATGAGTAGGT TAGGAGGAGCTGGTGCAGTAGCACCACTTGTTACAGACATTCCAATATCATCTGTAGAGGAAGAGA GCAGTGAAGGTGGAAATAATAACCAACCAGCTTGGGAAAAGTGGTCAAGTGATGGCACAGAAAGGC AAGTGGCTAAACTTATGGAAGAAAATGTTGGTGCTGCAATGCAATTTCTTCAGTCTAAGGCACTAT GTATAATGCCTATTTCTCTTGCATCAGCAATTTATCACTCTCAACCACCAGATACATCAAGTCTTG TTAAGCCAGAAACAAATCCTCCTTCATAGATGACACCCTTATAGAAAAAGGTGACATAACATGCTA ATGACCTTAAGAATTTTCTTGAAGTGGATGGTTCCTACTTTTATCTATTTAAGTAATTTTTAGCTT TTTGTTGAAAGAAACAGGGTTTTTTTTTTTTATGTTTATGTATAAATTAAACCATTTTCTATCATT GATATATTCAAGTAGTTTTGTTTTCAGC
SEQ ID NO: 386, S. tuberosum TA28621
GATTTCAGTTCCTCAAAACCCTTAACTTCTTCTCGCCGGAAATTTTTTTTAATTTCGCCGGGTAAA TCTCCGGCATGGCAGCAAACCAACCGGAAGCCTATGCCGATGATTTCCTCGAGCAAATTCTCGCTA TTCCTTCCTACTCTGGCTTGCCGGTAGCTGATGTTGGCACTCCATCAGAGACGACGTCGTTTACCT CGGCGTCTGCCGTATCTCATCTTAACTCTGCCGCTGCTGCTGGCCTACAGCAACCTTTGTTCCCGT
FIGURA 24 CONT. TGGGATTGAGCTTGGATAACGGCCGTGATGACGTCAGCGAAGCTGGTGCTTATGCAGTGAAGCATG AAAGAGATGGAATGAATATCGGAAATTTATATGCAGGTCTAGAACACTTGCAATCTCATGCAGTTC GTCACTCTGTGCCTTCTATTCACCATGTCCAGCCTTTTCAAGGCCCACCAACAACGAGCACAACAG TAACTGTACCTCACCCACCTTCAATTCGTCCTAGGGTTCGAGCTCGGAGGGGACAAGCCACAGATC CACATAGCATTGCTGAGAGGCTGAGAAGAGAGAGGATATCTGAAAGAATAAAGGCTTTGCAGGAAC TGGTACCCAGCTGCAATAAGACAGATAGGGCAGCAATGCTTGATGAGATTCTGGACTATGTGAAGT TCTTAAGGCTTCAAGTTAAGGTACTGAGCATGAGTAGGCTGGGAGGAGCCAGTGCAGTGGCACAAC TTGTTGCTGACATTCCATTGCAATCTGTGGAGGGGGACAGTGGTGAAAGTAGATCCAACCAGCATA TATGGGATAAATGGTCCAATGTAGACACAGAACAAGAGGTTGCTAAGCTCATGGAGGAAGACGTCG GTGCAGCCATGCAATACCTTCAGTCTAAATCACTCTGCATCATGCCCATATCACTTGCTGCACTCA TCTATCCTACTCAGCAACCGGATGACCAGTCACTGGTCAAGCCTGAAGCGGCAGCCCCATCATAGA CCTTCAATTCGTTGCACGTGCCTCTGAGAACTCCTAATAGCCTTGTGTCCCCCCTCCTTTGTATCC TTACCTACCATCCATTTGTATTTTCCTGTGTAATTGGTGGCAATGCAATCAATGTCAGATGCCACA ACTTTTGCTTTTATCCCAACCATTGGCCCTTTTTTTTTAATTACCTTTCTGGAGTTTCGTCAAACA AGGCATGATGTCATCATACCTTGGAGAAAGGTAAACGTATGAAAGCACCCAATCAATTAGCATCAT TTTCGGATGAGGTGAGCTTCTTTTTCAAAGTTATCTATGATTAGCTGCTCTTCTTCCACCATTTTG TTGTGGGATTGTGGGGACTCCCTTTATCCTTTGCATAGTGGATGGTGGGGCTTTGTAAAAGTAACC AACTGGTTGTTGGAAAGTATATTGTAATTTTAGTATATTATTGTAATGGGTAGTTGAAGTTGCTCT CCCTCCAAAAAGTTTTG
SEQ ID NO: 387, S. tuberosum TA34455
CTTCTATCTTTCTCTCTTCTCCTTTTAGAACCAAACTTTCACACACAAAGCTACTGAAGAAAAAAT TTCTCTCTGCAAAATCTCAGAGAGGAAAAAAAAAATGCAAGCCATGAATTCACTTCTAAGTCAACA ACAGCAGTCACAGATGTCACTGCAAGACCTTCAAAATGGCGGAAATGGCGGTTCTACCGGTGGTGT TGGTGGTTTAGGTCAACACAATATGGGTCACTTTCACTTTGATCCGACGTCGTCTCACGACGATTT TCTCGAACAGATTCTCTCTTCTGTTCCTTCTTCTTCTCCTTGGCCTGACCTTTCCAAATCCTGGGA CCCACATCACCATCTCTCATCGCCGCCGCATAACCCTAGCTCCGGCGAAGATCAACCTCCTTCTAA TCCACTTCACTCACAGTTCCATTACGACGACCAGGCTTCTTCTCTACTAGCCTCAAAGCTCCGTCA GCATCAGATCACTGGCGGCGGCGCGGCTGCAGCTGCTAAAGCACTTATGCTACAACAGCAGCTTTT GCTTTCTAGAACACTCGCCGGAAACGGACTCAGGTCTCCTAATGGAGCTTCCGGCGATAACGGCCT CCTTTCCCTACCTCTAAACCTCAGTAATAATGGTGACCAAAACGATGGCGTCGCTAACCCGGCTAA TGACAATTCCGTTCAAGCTCTTTTCAATGGATTCACCGGATCTCTTGGTCAAACCTCCAATCAACC TCAACATTTTCATCATCCTCAGGGAGGATCGATGCAATCGCAGAGT ·
SEQ ID NO: 388, S. tuberosum TA37666
GAAAGAAAAAAACAATGCAAGCTATGAACTCATTTCAAAGCACCGGCGAAAATGGTGCTTCGTCCG GCGAACACATCAGTCATTCCCATTTCGATCCGTCGTCGTCACACGACGACTTCCTCCAACAGATTC TCTCTTCCGTTCCTTCTTCTTCTCCCTGGCCTGAAATCTCCGGCGACGGTCACCCCTACAATTTCG ACGACCATCAGTCAACTCTCTTGGCTTCCAAGCTCCGGCAGCATCAGATCAACGGCGGCAGCTCTG CTGCCGCAGCTGCTAAAGCGTTGATGCTTCAGCAGCAGCTTCTGCTTTCTAGAGGAATCGCCGGTA ATGGCGGCGATCAAAACGACGACGGTTTAAATCCGGGGAATGATATTTCAGTTCAAGCTCTTTACA ATGGATTCGCTGGATCTCTTGGTCAAACCTCAAATCAATCTCAGCATTTTCACCATTCTCAGGCGC AGAGTTTCGGAGCTCCGGCGGCGTCGTTGACGATGAATCAAACGCCGGCGGCGAGTGGTTCAGCTG GTGGAGCGCAGCCAAAGCAACAGAAAGTTAGGGCTCGAAGAGGACAAGCAACTGATCCTCACAGCA TTGCTGAAAGATTACGGAGAGAGAGAATTGCAGAGAGAATGAAGTCTTTGCAGGAGCTGGTACCTA ATGCCAATAAGACAGACAAGGCTTCAATGTTAGATGAGATCATCGACTATGTCAGGTTCCTCCAGC TCCAAGTCAAAGTTCTGAGTATGAGCAGATTGGGTGGTGCTGCAGCTGTTGCTCCCCTAGTTGCTG ATAGATCCTCTGAGGGAGGAGGTGATTGTGTACAAGGAAATGGAGGTCGGGGTGGCAGTAATGGAA
FIGURA 24 CONT. CGACGTCGTCTGCAAACAATGACAGCAGCATGACGATGACGGAGCACCAGGTAGCTAAGCTAATGG AAGAAGA TATGGGATCAGCAATGCAGTATCTTCAAGGAAAAGGCTTATCCCTTATGCCAATTTCCT TAGCCACTGCTATTTCCACCTCCACGTGTCACTCCATGAAACCCAACAACCCACTACTACTCGGCG GAGGCTCCGCTATCAACGGCGGTGGTGAGACCGGCGGTGGACCGTCTTCTCCTACCTTGTCAGCTT CCACTGTTCAGTCAGCTACGATGGGCAATGGCGGGACTTGAGTTAGTCCTCCTATCCCAATGTGAC TCACTGTTTTTATTTAGAATCAATTTGATTTTATATTTCTCGTTTTATACTATTATGGAATTATTT ATAGTCATATTAATATTGATGACTTGTTTTTAGAAA
SEQ ID NO: 389, Τ. aestivum TC253044
CACGAGGGCAAGCCAAAGCCTCCGCCTCTCTCCTCCTTTTCCGCCCAAACAAACCGCCCCCTCCCC TCCCGTCGCCCTCACCTCCGCCCTCGCCGGCAGTAGTATACGCCCGCCACCAGCTCCGACGACCCG CGCCTTCCCCCCCGCTCGCCCGCCGTCGTCTCCCCTGCCCGCTCCCCCGTCCCTCCGCCGCGGGTT TGTTCTAGAGGGTGTATCTGAAGTTCTCTCAGCATCCGAGTGCGCAGCTTTGTACAAAAGGAACCA TTCAGGCCATCTCAGATTGTCTTCATGGATGAATGATAGGATCACCAGTTGCTGTCACTTTAAGTA TCTACAAGTCACTCTTTTCATAATATTTCTGAGCAGAGGTTGGGGAGTCAAGTTGTAAGGGTGTAA AGATGGACTACTCTAATGGTTCTTTCTTTCCTTCATGGCCTGGCAATTCCGCTTCCGAGAATTATA GCTTTGTTGATGGTTCAGTGGAATCATATGCAGAAGAAGGAAGTATGCCACCTACAGGCTATTTCA GAGCTAGATCAAATCAGAATTTAACATTTGATGAGCATGAACAGAACCCTGCTATGCTTGCAAATG GGTGCTTGCCGTACAACACCCAGACTGATCTATTATCTGGTGAGATTCTGTCAGAGGACAAACATT CCAACAGCCTTATGGAGCTTTCCACAACTTCAGAACAATGGCAGTCTGCAAAGTAATTTAATCCCA CCAGGGACTCTTCAGTGCACTTCAACACCTGGAACATTTGACCCGCAGTTGGATACCCCTGGCCTT CTAGAACTTCCTCATGCCTTGTCCAGTTCAATTGAAAGCAATGGTAGTGAAGTTTCAGCTTTTCTT GCTGATGTACATGCTGTTTCTTCAGCCTCAACTCTCTGTTCGACATTCCAAAATGTTCCTTCCTAC ATGGAGCCAGTAAGCCTAGAAGCTTTCAGTTTTCAAGGGATACAAAATGCTCCTATGTTCAACAAT ACAAGTCATTCAAATGGGAAACCTGTCAGTATTTGATGAGGCAACCATGGCATCACTACATGATAG CAAAGAATTTCTCAGTGGTAGCATCTCATCTTTTGGTACGGCCGAGCAGTCACAACTAGCTGGTAG TGGTTTGAAGGCTGAACAACAGGAACAAAATGCGATGTGCAATATTCCACTCCCTTTCGCTTCTGG TAGTCAGATGGCAGTGAGTGAAGCACAAGGGGCAATGATTCCTTCAAAGATAAGCTCAACGATCCA TAACAATAAAAGTGAGTACCCTGTCCCTATCAGCCATTCTGCTGATGCGCAGAACAAGGCAAATTC AGCTAATGGAAACAGTGCCAGTGCTAAGCCACGAGCAAGGGCTCGTCGTGGACAGGCAACTGACCC TCATAGTATTGCTGAACGGCTTCGCAGAGAGAAGATCTCAGAGAGGATGAAAAATCTCCAAGACCT TGTACCAAACTCÁAATAAGGCAGATAAATCATCAATGCTCGATGAAATAATTGATTATGTGAAATT TCTTCAGCTTCAGGTGAAGGTCTTAAGCATGAGTAGGCTAGGAGCTCCCGGGGCÀGTTCTTCCCCT CCTTGCAGAATCTCAAACTGAGGGCCGTAGCAATTCACCTCTATCATCTCCAACCGCTTCACAAGG GCTTCTGGATGCAGCAGGCCCAGAAGACAGCTTGGTCTTTGAGCAAGAAGTTATAAAGCTGATGGA AACAAGCATCACAAATGCAATGCAGTACCTTCAGAACAAGGGCCTCTGCCTGATGCCTATCGCTCT TGCTTCAGCCATATCCAACCAGAAAGGCACTTCTGCAGCTGCAATCCCTCCTGAAAGGTGAAAACA GAAAGCACATCATGCTCCTCCCATCGGCCCGCGGAAACAACTGTCGAAATGTGCTAGAGTTCATAG AAGTTGTGAGAAAACAAAAATCCGAGGCTGAAGGATAGGAAGTTATGCGACTAATAGTACAAGCTT ATGGTATAATCTAGTAGCTTACTCCAAGAAACCTATACTTTTTCTCTTCTCTGTTGCACATCGGTT GGTGTGTATTCTTTTGTTTTTTGGACGGCATTCTAACTGGGTACAAGTGTCTGGCACCTTGGGTTG TACATGGATCTATGAGGGTTATTACCGACTGTTCATGATGTTATATGATGATCAAAGCAGACCTAG GAAAACTCGGTTGCTTTGGGTTTCACTTGGTT
SEQ ID NO: 390, V. vinifera GSVIVT00016367001
ATGGATGAGTATCTGGATCACTTGTTTTCATCCACATCATGGTCAGATGTGAATGTGAAGGAGGGA TCATCTTGGATTTGTGGTGAGCCTAGCCAAACAAATGGGATGCTTTCAGATTCAATTGGAATATAT GAAGGTGATAAAAAAAACTCACCTGTTGGCATGACTAATTCAAACCTTATGATCGAGGGCTTGGTT
FIGURA 24 CONT. ACTCAAGATACTTCATCTATTGTTCTTGGTGGAGAGTCTGATCATGGTCTTGGCAAGGGCTTACTT TTGGAAGAAGCTCCACGGCAGCAAGACCTTCAAAACACTGAAGGCAATTCCTCCTTGAATGGAGCA GTGAATGGCAGCTCAGAAGTTGGATACGTGGGCCTGCAACTAAATACTCCTACTTCAACCCCATGC TCACTGGATCTTGGCTCTCCCAAGCAGCTTTCGCTGATTGGTGGCATGTCTAGGTCATCTCGTCCT TTCACTGAGCTGGATCATGTTGGGTGCAATGGTAATGAGCCATCTGATTTTCAGAGATCAGTTGGA AATTTTCAAGCATTGCCTCCAATTCCACAGTTGTGGTCTCAACCATCTTACGGGGGTGGTTCCTCC TTGTCTCCTGTTATGGGAGAATACAAGATGCAGGGCTTTGGTCTGCAAGGAGAATATGTGGATAAT GAAATGGATATCATGAGGAACAGATACGTTGGGGATGAAATTCTGCAACTTGATAACATTTCTTCA GCAATCCCCATAAAGGGGAAAGAAGAGCAGCACACTCATCCTTTCTCTCCTTCTGCGGTTGGGCCC CACATGACAATGACAGCATCTGGATTACAGTCTTTGCCACAGACTACGGTAGGTACTGCTTCTGGT GGCTGTAATGGAACTGGAAAGCCGCGTGTAAGGGCTCGTCGAGGCCAGGCCACTGATCCTCACAGT ATTGCTGAAAGGCTTCGGAGAGAGAAAATTGCTGAAAGGATGAAGAACCTGCAAGAACTTGTTCCC AATTCCAATAAGACGGACAAAGCATCTATGCTCGACGAAATCATTGAGTACGTCAAATTTCTTCAG CTCCAGGTCAAGGTACTAAGCATGAGTAGGCTGGGGGCAGCAGAGGCAGTTGTTCCTCTCATCACA GATGGCCAAGCTGAGGGCTCTAAGGGTCTGTCACTTTCACCCTCGGCTGGTCAAGCTGAAGATATT TGTCAATCTCCTGATCAAATTGCCTTTGAGCAAGAAGTAGTGAAGTTGATGGAGTCCAACGTGACC ATGGCCATGCAATATCTTCAAAGCAAAGGTCTCTGCCTTATGCCAATTGCTCTTGCTACAGCCATA TCCAGTGGAAAGGCAGCATCATCAGGTACTGGGTCCGATGAGGGAAAGAACGCAGCAACACCAGTA GCAGCAACACCAGTAGCAACAGCTTACCTGGCATTGGGACACATCATACATCTTCTGATGGCAATG TTCTGA
SEQ ID NO: 391, V. vinifera GSVIVT00017237001
ATGCTCTCTACTCTCCCTTCTTGGTCTGACCTCCCCGCAAACCCTAAATCTCCCTGGGAACTCAAT GCTTCCAACCCTATCTCCATGCCTTCCAACAAGTCTAGGGATTTGTCCGACGATACCACGCCGTCT AATCCGGACAACGTTCAGTTCGCTTTCGACGAGTCCGCCATGTTGGCCTCCAAGCTCCGCCAGCAC CAGATCAGCGGGAACTCGTCGGCGGCCAAGTCGGCGTTGATGCTTCAGCAGCAGTTGCTTTTGTCA CGAGGCGTCGCCATGGGTAGGTCCCCGTCGAATGGGTCCGGCGCCGGTGAGTCCGGCCTTCTTCAA CTGCCTTTGTCACTTAGCAACGGGGATTCTTGCCTCGTTGACCGATCACAAAACGACGTCGTTGAT GGGTCCTCCTCCTTCAAATCCCCCAATCAGGGAGGAGACGGTTCAGTTCAAGCTCTCTACAATGGC TTCGCCGGAGCTCTTCACGGCTCCGGTCAAGCCTCCAACCAAGCTCAGAATTTCCACCATCCTCAG GGTGGATCAATGCAGGCACAGAACTACGGAGCTCCGGCGACTAGGGTGAGGGCAAGAAGGGGTCAG GCAACTGACCCACACAGCATCGCTGAGAGATTACGTAGAGAGAGAATTGCAGAGAGAATGAAGGCA CTGCAGGAACTGGTTCCCAATGCCAACAAGACGGACAAGGCTTCAATGCTGGATGAGATCATTGAC TATGTCAAATTCCTGCAGCTCCAAGTGAAGGTACTCAGCATGAGCAGGTTGGGCGGTGCCGCAGCT GTTGCTCCCCTCGTTGCTGATATGTCCTCTGAGGGAGGTGGTGACTGTATACAGGCTAGTGGGACA AGCGGCCCTACAGGAGGAAGGGCAACGAACGGAACACAAACAACCACATCAAACGACAGCCTCACA GTGACGGAGCACCAGGTGGCCAAACTCATGGAGGAGGACATGGGTTCCGCCATGCAGTATCTTCAA GGCAAAGGCTTATGCCTTATGCCCATCTCCCTCGCCACTGCCATCTCCACCACTACCTGCCACTCC AGGAACCCCATGGTGGCTGCTGCCGCCGTCGCCGCCTCCAACATCAACAACGGCAGCCACACTCAC CCACTCCTACCTAATTCCAACGCCGATGGCCCCTCCTCCCCCAGCATGTCCGTCCTGACCGTGCAG TCAGCCACCATGGGGAACGGCCTGGCCGACGCGCCCGTAAAAGACGCTGCCTCCGTTTCCAAGCCC TGA
SEQ ID NO: 392, V. vinifera TA46156
TCTTCCTTCTCACGGAAGCTGAGAGGCCGAGAGCTGAGACTTCACTCCAATCAAGGCCATCTCTTC CATCTCCGAAACCCTAACCCACCTTCCGTACGGTTCCGACTCGTCCGAGTTTGAGTGATGGCGAGC AATCCCTCGGAAGCTCCAGCGGACGATTTTCTCGAGCAAATCCTCGGAATTCCCACCTACCCCGCA GCTGACCCTAATTTGGCTGCTAATGACGTGAATTTGGCCGCTCCTATGGTGCTTCAGCTCGGCTCC
FIGURA 24 CONT. GGCGAAGGCTCTGGCCACATCGCCGGCGGGTACCAGGGAACCATGTTTCCGTTAGGGTTGAGGTTG GAGCAGGGAAAGAGCAGCTTTCTGAAGCCCGAAGACGCGTCTGGCAGTGGCAAGCGCTTTCGTGAG GAGGTTATTGATGGTAGAGCTTCTACCGTGAAAAATGCTTTCCATGGTCAACCAATGCAGGCTACC GTTGCTGCAGCACCACATCCTCCTGCAATTCGCCCAAGGGTGCGGGCGAGACGTGGACAGGCCACA GATCCACACAGCATTGCTGAGCGGTTACGCAGAGAAAGAATAGCAGAGAGAATTAGAGCACTGCAG GAACTAGTTCCTAGTGTCAACAAGACGGATAGAGCTGCAATGCTTGATGAAATTGTGGATTATGTG AAATTCCTAAGGCTCCAAGTAAAGGTCTTGAGCATGAGTAGATTGGGCGGAGCTGGTGCAGTTGCA CCACTTGTAACAGACATTCCATTAGCATCAGTCGAGGAAGAAGCAAGTGAAGGGGGAAGAAATGAA CCGGCATGGGAGAAATGGTCAAATGACGGTACAGAACGACAAGTTGCTAAGCTCATGGAAGAGAAT GTTGGGGCTGCAATGCAGTTCCTTCAGTCCAAGGCACTCTGCATCATGCCCATCTCTCTCGCATCA GCCATTTACCACTCTCAGCAGCCGGACACAACTCCACTGATCAAGCCCCAGACAAATCCCCCATCG TAAAACCTCTCCCCACTCCC
SEQ ID NO: 393, V. vinifera TA46194
GGGAGCAAGGAAACCGAAGCAGGGCATTTCCCAAACATCTCTTACCGATTTATCGGACGACCTCTC TGTGACCTCTTTCTCCAACAATTTGACCTTTTTGCTAAACCCGAAAACAATCCTCATCTCTTCTTT GCTTCTCGCTGGAAAATCTATTTTCCGTTCCCGTCCATTCTCTAGCCATGGCCACCAACCCGCCCG AAGGTTACGCCGATGATTTCCTGGAACAAATCCTCGCAATTCCCTCCTATCCTGGACACGACCCTA ATATGGTGGGAACGGGTTCTACCATGGTGCTGCAGCTGAGTTCAGGCGACGGCTCAGGCCACGTCG CCGGAGGTGGCTTCCAGGGGCCGGTCTTTCCGTTAGGTCTGAGCTTGGAGAGCGGGATTCCGGCGA CACAGGTGGCGCCAGGAAGTGGCGAGCGGTTTCGAGATGACGTTGATGCCAGAGGTTCTTCAGGGA GGAGCGAGAGAGAGTCGGTGCATTTGGATGGTTTGTTTCCGGCGTATGGACATGTACAGTCTCTCT CCGTCCGACCCGCCGTTCCTCAAGTTCACCAGGCTTTTCATGGCCAGCCAACCCCTGTCCCAATTA CTGCTGCGCCACACCCGCCAGCTATCCGCCCAAAGGTGCGTGCTCGGCGCGGACAAGCCACTGATC CTCACAGCATTGCTGAGCGGCTACGTAGAGAGAGGATAGCAGAAAGAATGAAGGCTTTGCAAGAAC TTGTCCCTAGCTCCAACAAGACGGATAGGGCTGCAATGCTTGATGAAATTGTGGACTATGTGAAGT TCCTAAGGCTCCAAGTCAAGGTTTTGAGCATGAGTAGACTGGGAGGTGCTGGTGCAGTGGCACAAC TCGTGGCTGACATCCCATTGCCAGCAGTTGAGGGAGAAACGGGTGAAGGTGGAAGCAACCAGCAAG CCTGGGATAAATGGTCAAATGATGGCACAGAACGAGAAGTAGCAAAGCTCATGGAAGAAGATGTTG GAGCTGCTATGCAGTTCCTCCAATCCAAAGCACTGTGCATCATGCCCATATCACTTGCCGCAGCAA TATACCCTGCACACCAAACTGATACCCCCACGCTCATCAAGCCTGAGCCAAATGCTCCATCCTAGA CCCCTCGAAAATGCACGTGCCTGTTGACAACTCCCATTGACCCCTAGTTGGCTAATCCCAAATTCC TTAGTATCCTGAATCCATATCCTAAAGTGTTCCTCACTATCCCTTTTGGCAATGCAATCA TAGTCA GAAGCCATAGTCTTGCTTTTGCCTCTTTTTATTCTGAGTTTTGTCAAAGAAAGAGTGAATCATGCT TTGGGAAAAAAGAAAAGGCACTTTCATCACTTCTTGCCATGCTCGAGTGAAGGGGGAAAATTTTCA AAGCTATATTGATATGCTACTCCTTTTCATTTGTGCTGCTTGCTGGATGGCCAGAACACTTGTGGT GGGGACTCTCTTTGGTTGATGCTGTGGTCTTGTAAAGCGGATGGGATGACTACGATTCCATGTAAT TAAAATGAATTTGAAGAAAGCTGAAATGGATAATGGAAAGTCAATTTCAATGTTATATTGCATTAT TTCCAGTCTTGGAGG
SEQ ID NO: 394, Z. mays TA139285
GTCGGCGGCAGCTGGAGAGCGAGGCCGAGCGACCAGTTACAGTTGCCGGCGGGCAAAGTGGGCCAC TTGGTGCCAGGACATGGCCGGGCAACCGCCACCGCAGGGCCCCGAAGACGATTTCTTCGACCAGTT CTTCTCCATGACGGCCGGCGGCTCCTACCCCGGCGCAACCGCGGGCGGCGGCCGCGCACCGGGTGA CCAGCCGTTTTCCCTTGCGCTCAGCCTCGACGCCGCGGCCGCTGAGGCTTCCGGAAGCGGGAAGCA CGCCGACGGTGGCAAGGCGGACCGGGAGGCTATACAGCTCCCTGGGCTCTTCCCGCCGGCGTTCGG CGGCGGTGTGCAGCCACCCCACCTCCGCGCCACCCCGCCTACACAGGTGTTCCACGCGCAGCAGCC GAAGC AAGGCGGTGCGGCAGTCGGGCCACAACCGCCGGCACCGAGGCCAAAGGTGCGGGCGCGGCG
FIGURA 24 CONT. TGGGCAGGCGACCGACCCCCACAGCATCGCGGAGAGGCTAAGAAGAGAGAGAATAGCAGAAAGGAT GAGGGCCCTACAGGAATTGGTGCCCAATACAAACAAGACAGATAGAGCAGCTATGCTAGATGAGAT CCTAGATTATGTGAAGTTTCTGAGGCTTCAAGTCAAGGTTCTAAGCATGAGCAGGCTGGGTGGTGC TGGTGCTGTGGCACAGCTGGTTGCTGATATCCCACTTTCAGTTAAGGGGGAAGCAAGTGATAGTGG GAGCAAACAGCAGATTTGGGAGAAGTGGTCAACGGACGGCACAGAAAGACAGGTCGCAAAGCTGAT GGAAGAAGACATTGGGGCAGCGATGCAATTCCTCCAGTCCAAAGCACTCTGCATGATGCCCATCTC GCTCGCCATGGCAATCTATGACACGCAACATTCGCAGGACGGACAACCAGTAAAACCAGAACCCAA CACTCCTTCCTAGTATAGTGGCAGCAAGCGTAACTTGCATCCTTTCGGGGCTGTTAGCAGGCGTTA ACCTACCAATCAAAGCGTAAGATAGAAATGCCGGCTTCGATTCACTAACAAGGAGGAGGCAGGGAA AAAAGACCTAAAAGATCCTCTCCACTTGAAGTTGTACCAAATGGTATATGATATCGCCTTTCCCTT TCCGATCTTTTGTTCAAAGGTGCTTTAATTGCAAGGATATGGTAAGCAATAACCTGCTCATGCTCC TCCATCTTTCAATGCCCCCTATGAGTGTGAGTGATGGAGAGAGGGAGCTGCTAAAAGAGTCTGGCA TGCTCTCATAATGTTTCTTTCCGGGTCTGTAGTGCACTAGCTAGCCATACACTTTGTGGTGGGGGG GCTGCTGCTTTTCTGGTAGTGGGTGTATATGGACTAATCAAAAGGGACTGATGTATGAGTGTGTCT GCGGCCTGCGCAAATGGTTGACAAAGTTTAGATACAGGATGAAATGGAAGATGATGTTGATAGCGA TGTTCTTCCTTCTCCATTTTTCCAAAGTGGAGGTCCGAGGCAGGCTTTGGTCAATGGAGGCTGAGC GTGCGTTTCAGCGTTGCTAGTGGATCTGCTATCTGCGTTGAATACTTTATTTATATATGGATCCAC ACTCTTGATAAGAACATTCG
SEQ ID NO: 395, Ζ. mays TA126400
GCTTCACACTTCCCCAGCAGAGCAGGCAAACCGCTCCCAGTCCCAGTCTCTCACCTGAGGTGACTG GCGTCTCTTGTCGCAAGCCGCCAGAAGCTTCGGCCCCTGACGCGTGGGGGCCCCGTCCGCCCCCGC CCCCGTCCCCACGTTGCCGGCCATGGCGGGGCAGCCACCGCCGTCCGGGGCCTCCGAGGACGACTT CCTCGAGCACTTCTTCGCCTTCCCCTCCGCGGCCTCCGCCGGCGCTGCCGGGGGCCACGCGGGCGC CGGTGTTGGCGGGGACCACCCCTTCCCCCTCGCCCTCAGCCTCGACGCCGCCGCCGAGGCCAAGCC GGACCGTGATCCCGTGCAGCTCGCCGGCCTCTTCCCGCCGGTGTTCGCTGGCGCCGGCGGCGTGCA CCAGCCGCACCTCCGCGGCCCACCGCCTCCGCAGATGTTCCAGGCGCAGCCGAAGCCGGGCGAGGG AGGCATGGCGCCGCAGCCGCCAGCCCCGCGGCCCAAGGTGCGCGCGCGGCGGGGGCAGGCCACCGA TCCCCACAGTATTGCGGAGAGGCTAAGGAGAGAGAGAATTGCAGAAAGGATGAGGGCATTGCAGGA ATTAGTCCCCAACACAAACAAGACAGATAGGGCAGCCATGCTAGATGAGATCCTTGATTATGTGAA GTTTCTTAGGCTTCAAGTAAAGGTTCTGAGTATGAGCAGACTGGGCGGTGCTGGCGCGGTTGCGCA GCTGGTTGCTGATATTCCACTCTCAGTTAAGGGCGAGGCAGGCGACGGCGGGGGGGCGCCGCAGCA GCAGCAGCAGCAGCACGTGTGGGAGAAGTGGTCGACGGACGGCACGGAGAAGCAGGTGGCGAAGCT GATGGAGGAGGACATCGGGGCGGCAATGCAGTTCCTCCAGTCCAAGGCGCTGTGCATGATGCCGGT CTCGCTCGCGATGGCGATTTACGACACCCAGCACCCCCTGGACGGCCACGGCCACTCGCTGAAGCC CGAGCCCAACGCGTCATCCTAGTACAGTAACGTCGTCCTTAGCGTGCCTTCCAATTCCAACACCCA CCCCCCTTCTCCCTAAAAAGTACTGTTAGGCGCCGATATTATCCGGAAGAAAAAAAGAAGTGTATG ATATACCGAGCGTGCGTTTCCAGTGTGCTGACCCGTGGGATAGGAAAGGACCGAAAATTGTTGGTA TATGATGATTATGTAGCCTCCTGTTTGCCTGTTCTGTTTCAAATCAAAGCAATGCTCATGCATCCA GGTTTC
FIGURA 24 CONT. FIGURA 25 SEQ ID NO: 396, DNA - Oryza sativa
ATGGCGGAGGAGAAGCACCACCACCACCTGTTCCACCACAAGAAGGACGACGAGCCGGCCACCGGA GTAGACTCCTACGGCGAGGGCGTCTACACGTCGGAGACGGTGACCACCGAGGTGGTCGCCGGCGGC CAGGACGAGTACGAGAGGTACAAGAAGGAGGAGAAGCAGCACAAGCACAAGCAGCACCTCGGCGAG GCCGGCGCCCTCGCCGCCGGCGCCTTCGCCCTGTATGAGAAGCACGAGGCGAAGAAGGACCCGGAG AACGCGCACAGGCACAAGATCACGGAGGAGATCGCGGCCACGGCGGCGGTCGGCGCCGGCGGCTAC GCCTTCCACGAGCACCACGAGAAGAAGAAGGACCACAAGAGCGCCGAGGAGTCCACCGGCGAGAAG AAGCACCACCTCTTCGGCTGA
SEQ ID NO: 397, proteína - Oryza sativa
MAEEKHHHHLFHHKKDDEPATGVDSYGEGVYTSETVTTEWAGGQDEYERYKKEEKQHKHKQHLGE AGALAAGAFALYEKHEAKKDPENAHRHKITEEIAATAAVGAGGYAFHEHHEKKKDHKSAEESTGEK KHHLFG
SEQ ID NO: 398, DNA - Oryza sativa - seqüência de promotor GOS2
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT
AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT
TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT
GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG
AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT
AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA
CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA
CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG
ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT
ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC
TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAATAATTTT
ACAGAAT AGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT
TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA
GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG
GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAAGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA
ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG
GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT
CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT
ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC
TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT
ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT
TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC
GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC
CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT
AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGCTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA
AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT
TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG
GTGCAAATCAGGTCTATATGATTGATTTTGGGCTGGCCAAGAAGTATAGAGACTCATCAACTCATC
AGCATATTCCGTATAGAGAAAACAAAAATTTGACAGGAACTGCTAGATACGCAAGCATGAATACTC
ATCTTGGCATTGAACAAAGTCGAAGGGATGATTTGGAATCGCTGGGTTATGTTTTAATGTACTTCT
TAAGAGGAAGTCTCCCTTGGCAGGGGCTGAAAGCAGGCACTAAGAAACAGAAGTATGAGAAGATCA
GTGAGAAGAAAGTATCAACATCAATAGAGACCTTGTGTAGGGGATATCCTGCAGAGTTTGCATCAT
ATTTTCATTACTGTCGATCACTAAGATTTGATGATAAACCAGATTATGCTTATCTGAAGAGAATTT
FIGURA 26 TCCGTGATCTTTTCATTCGTGAAGGGTTTCAATTTGATTATATATTTGACTGGACCATTTTGAAAT ATCAGCAATCACAGCTTGCCAATCCTCCATCTCGTGCTCTTGGTGGTACTGCTGGGCCAAGCTCAG GGATGCCTCATGCTCTTGTTAATGTTGAGAGGCAATCAGGTGGAGATGAAGGTCGACCAACTGGTT GGTCTTCATCAAATCTTACACGTAATAAGAGCACGGGGCTGCATTTCAATTCTGGAAGCTTATTGA AGCAAAAAGGCACAGTTGCTAATGATTTATCCATGGGTAAAGAGTTATCCAGTTCTAATTTTTTCC GGTCAAGTGGACCATTGAGGCGTCCAGTTGTCTCTAGCATCCGAGACCCAGTGATTGCAGGGGGTG AACCTGACCCCTCCGGCACTCTGACAAAAGATGCAAGCCCGGGACCATTGCGTAAAGTATCCAGTG CTGCACGGAGGAGTTCACCAGTTGTGTCCTCAGATCACAAGCGCAGCTCCTCTATCAAAAATGCCA ACATAAAGAATTTAGAGTCCACCGTCAAGGGAATAGAGGGTTTAAGTTTTCGATGATGAGGGACTG CATTAGTAGCTGTGCTTTGTCTCAGTTCTCCGTTCACTGTAAATTTTGGCACACCAACTTGGGGAG TAAGAGTTCTGATATTAGTTGCTGTCAGGAAGTACCATAAAGCTGAATTATACAATTAAAATTTGG GATCCAATCGCAAAAGCACATTAAGGATATGATGGGGTTGCAGATCCAAACTCACAGATTCCAGTT TATGCTCGTCCATACAGTTATAGGCACTTTCCATATTCTTTTCTTTAATCTCTGTCTCTTGCTTGT TATTGTTATGTCGTGGTATTCTTGTTGAGGTCATGTTTGTGAATTGCGAAGATGGTCATGTATAAT TGCCGAGAAATCATGTACTAGTTTGTTTTAAACATGAGCAAACTGTTATTTTGTTCAAGCTACTTT AATATCAAAAAAAAAAAAAAAAGGGCGGCCGCTCTAGAGTATCCCTCGAGGGGCCCAAGCTTACGC GTACCCAGCTTT
SEQ ID NO: 399, Seqüência artificial _ prm06442
GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAAACAATGGCGGAGGAGAAGCA
SEQ ID NO: 400, Seqüência artificial - prm06443
GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCGGCGACGTTGTGATGA
SEQ ID NO: 401, DNA - Zea Mays ZM06MC07637 58832771
ATGGCCGACTACTACCACGGCGGCAGGGCCATGTACTCCAACACTGACGAGTGCTATGACGCCGGC AGGCACGGCGGCAGCGTGAGGGCGTACTCGCGCACCGACGAGTACTACGACAACGTGGACGACCGC ATGAGGAGGCCCGCGTACGGCGCCGACGACTGCGGCTACGGCGGCAGGCAGACCGCCGTGTACGCC GACGAGTACTCCCGCGGCGGCCGCTACGAAGGCTACGGCGTCGAGCAGGAGCACTTCAAGAGGGAG GAGAAGGAGCATAAGCACAAGGAGCGCCTCGGCGAGGTGGGCGCCCTCGCGGGCGGCGCCTTTGCT CTGTACGAGGGGCACCGTGCGAAGAAGGACCCGGCGAACGCGCAGAGGCACAAGATCGAGGCCGGC GTGGCAACGGCGGCGGCGCTGGGCGCCGGCGGCTACGCGTACCACGAGCACCGCGAGCAGAAGGAG GCCCACTACGAGAGCAGGCAGCAGGAGCACAGGGTGCCGCACGGGCACGGGCACGGGCACGGCTAC TCCTACTACTGCGACTGA
SEQ ID NO: 402, proteína - Zea Mays ZM06MC07637 58832771
MADYYHGGRAMYSNTDECYDAGRHGGSVRAYSRTDEYYDNVDDRMRRPAYGADDCGYGGRQTAVYA DEYSRGGRYEGYGVEQEHFKREEKEHKHKERLGEVGALAGGAFALYEGHRAKKDPANAQRHKIEAG VATAAALGAGGYAYHEHREQKEAHYESRQQEHRVPHGHGHGHGYSYYCD
SEQ ID NO: 403, DNA - Zea Mays ZM06MC16908 TD146065794
TAGATAAATCGACGGTCGGTGCATATATATGAGCAAGACTGCCAGGCGCGCCCGGTAACAAATGAG AATGGAAGCCGTCAGTAACTAGTGGTGATGGTGTCCACGGTGGCGGTGCTTCTTGGCGTCTTTCTT CTGGTGATGCTCGTGGAAGGCAAAGCCGGCGCTGCCCACGGCGGCGGCGGCGGCGACCCCTTCCTT GATCTTGTGCGAGTGCGCGTGCTCCGGGTCCTTCTTCGCCTTCTGCTTCTCGTGCATAGCGTAGGC TCCTGCAGCGACGGCGCCGAGCTGGCCGAGCTGCTCCATGTGCTTGTGGTGCTTCTCCTCCTTGCG CCAGTCGGTCACCTTGGCCGCCTCTCCTCCATGGTGCTTGTTGCCCAGGAAGTGGTGCGCCATTGT TTCAGTCGTTGGAGATGCGCTAGTCGACGGCCGGTTGTGTCTTGGGGTTCGTTCGATCTGCTTGAT GATGAT
FIGURA 26 CONT. SEQ ID NO: 404, proteína - Zea Mays ZM06MC16908 TD146065794
MAHHFLGNKHHGGEAAKVTDWRKEEKHHKHMEQLGQLGAVAAGAYAMHEKQKAKKDPEHAHSHKIK
EGVAAAAAVGSAGFAFHEHHQKKDAKKHRHRGHHHH
SEQ ID NO: 405, DNA - Zea Mays ZM06MC35104 62124878
ATGGAGCAGCTCGGCCAGCTCGGCGCCATCGCCGCCGGCGCGTACGCTCTGGTGAGACCAAAAAAA CCCAACCTCCATCCCTTTGGTCGCCTGATCGATGCATGCCATGGTCCAGCTCTTGATCTGTGTGTG TCTGTGCGTGTGCATCGACGTGTGGCTGCAGCACGAGAAGCACAAGGCCAAGAAGGACCCGGAGAA CGAGCACGGCCACCGGGTCAAGGAGGAGGTGGCCGCCGTCGCCGCCGTGGGCTCCGCCGGGTTCGC CTTCCACGAGCATCACGAGAAGAAGGACGCCAAGAAGCACGCCGACAACTGATCCGTCGCAGGCTG CCTCAGCCGAAGCAGCAGCACATCGTCGCGGTTGCTGTTTCATCTGTTCTCCCAGCCTCGTCTTCG TCTACTGTGTGCCGGGCAGGCCTTGATTTGAGGCTTTG
SEQ ID NO: 406, proteína - Zea Mays ZM06MC35104 62124878
MEQLGQLGAIAAGAYALVRPKKPNLHPFGRLIDACHGPALDLCVSVRVHRRVAAAREAQGQEGPGE RARPPGQGGGGRRRRRGLRRVRLPRASREEGRQEARPQLIRRRLPQPKQQHIVAVAVSSVLPASSS
STVCRAGLDLRL
SEQ ID NO: 407, DNA - Zea Mays ZM06MC38573 59496278
ATGGCGGAGGAGAAGCACCACCACCACCACCTGTTCCACCACAAGAAGGACGAGGAGCAGCTCGCC GCCGGCGGGTACGGCGAGTCCGCCGAGTACACGGAGGCCACGGTGACGGAGGTGGTGTCCACGGGC GAGAACGAGTACGACGAGTACAAGAAGGAGGAGAAGGAGCACAAGCACAAGCAGCACCTCGGCGAG GCCGGCGCCATCGCCGCCGGCGCCTTCGCACTCTACGAGAAGCACGAGGCGAAGAAGGACCCGGAG CACGCGCACCGCCACAAGATCGAGGAGGAGGTCGCGGCGGCGGCGGCCGTCGGCTCCGGCGGCTTC GCCTTCCACGAGCACCACGAGAAGAAGAAGGACCACAAGGAGGCCGAGGAGGCCGGCGGCGAGAAG AAGCACCACTTCTTCGGCTGA
SEQ ID NO: 408, proteína - Zea Mays ZM06MC38573 59496278
MAEEKHHHHHLFHHKKDEEQLAAGGYGESAEYTEATVTEWSTGENEYDEYKKEEKEHKHKQHLGE AGAIAAGAFALYEKHEAKKDPEHAHRHKIEEEVAAAAAVGSGGFAFHEHHEKKKDHKEAEEAGGEK KHHFFG
SEQ ID NO: 409, DNA - Zea Mays ZMO6MC39332 62040304
atgtcggaggagaagcaccaccacttcttcaaccaccacaagaaggacgaggagcagcccgccggc gagtacgggtactccgagaccgaggtggtcaccgccaccggcgagggcgagtacgagaggtacaag aaggaggagaaggagcacaagcacaagcagcacctcggcgaggccggcgccatcgccgccggcgcc ttcgcactctacgagaagcacgaggcgaagaaggaccccgagcacgcgcacaggcacaagatcacg gaggaggtcgctgccgcggcggccgtcggcgccggcggctacgtattccacgagcaccacgagaag aagaaggaccacaaggacgccgaggaggccagcggcgagaagaagcaccaccacctcttcggctga
SEQ ID NO: 410, proteína - Zea Mays ZM06MC39332 62040304
MSEEKHHHFFNHHKKDEEQPAGEYGYSETEWTATGEGEYERYKKEEKEHKHKQHLGEAGAIAAGA FALYEKHEAKKDPEHAHRHKITEEVAAAAAVGAGGYVFHEHHEKKKDHKDAEEASGEKKHHHLF
SEQ ID NO: 411, DNA - Zea Mays ZM06MC39358 61988082
ATGGAGAAGCTCGGCGAGCTCGGCGCCATCGCCGCCGGCGCGTACGCCCTGCACGAGAAGCACAAG GCCAAGAAGGACCCAGAGAACGAGCACGGGCACCGGGTCAAGGAGGAGGTGGCCGCCGTCGCCGCC GTGGGCTCCGCCGGCTTCGCTTTCCACGAGCACCACGAGAAGAAGGACGCCAAGAAGCACGCCCAC AACTGA
FIGURA 26 CONT. SEQ ID NO: 412, proteína - Zea Mays ZM06MC39358 61988082 I ZM06MC39358 61988082|MAIZE
MEKLGELGAIAAGAYALHEKHKAKKDPENEHGHRVKEEVAAVAAVGSAGFAFHEHHEKKDAKKHAH N
SEQ ID NO: 413, DNA - Zea Mays ZM06MC42566 TD99014611
TTGTCACTTGCTCTCCCTCCAACAAGCTAATTAAGGCCGGTCATCCCTCTTCTAGCTCGTTTCATT ATCCATGGCGGAGGAGAAGCACCACCACCACCACCTGTTCCACCACAAGAAGGACGAGGAGCAGCT CGCCGCCGGCGGGTACGGCGAGTCCGCCGAGTACACGGAGGCCACGGTGACGGAGGTGGTGTCCAC GGGCGAGAACGAGTACGACGAGTACAAGAAGGAGGAGAAGGAGCACAAGCACAAGCAGCACCTCGG CGAGGCCGGCGCCATCGCCGCCGGCGCCTTCGCACTCGTACGTAGTCCGATCGATCCGATCCTCCT TGAGTAGTATATATATATACATACATGAACGAGAAAGAATAATATATATATTAATCGAACGAACTG AATGACGGTCACCTCGTGTGACGTGGACATGCACAGTACGAGAAGCACGAGGCGAAGAAGGACCCG GAGCACGCGCACCGCCACAAGATCGAGGAGGAGGTCGCGGCGGCGGCGGCCGTCGGCTCCGGCGGC TTCGCCTTCCACGAGCACCACGAGAAGAAGAAGGACCACAAGGAGGCCGAGGAGGCCGGCGGCGAG AAGAAGCACCACTTCTTCGGCTGATTGATCCTCCCGTATCGTCGTCCCTCCCCGTGTGCTACGCGT GCGTGTGAGAGTGATATCGAGCGCCCGCCGTGTTGTGCGCGCGTACGTATGTATGCGCTCGTGTGA TGCACGAATAAGCGTGGCTACGTAATCTATCGTATGTATACGTGTGTGTATGCATGTGCTTGTGTA TGATCGTGGTACGAGGACCGAAAAAATGTATGCAACTCTGATTTACTTACATGTTTAGTTGTTTAC GTTTCTCCAAAAGTATTAGTACCCATTATGTTATATTTTACTATATTATATTTTATTGATTATTAA ACTATGTATGGATGAAATTACTATTTCAAGCTGGTAGCTAGACCGAGATAAAACTCGTCCGTGTTT TTTAACGGGTGTATTATT
SEQ ID NO: 414, proteina - zea Mays ZM06MC42566 TD99014611
MAEEKHHHHHLFHHKKDEEQLAAGGYGESAEYTEATVTEWSTGENEYDEYKKEEKEHKHKQHLGE AGAIAAGAFALVRSPIDPILLE
SEQ ID NO: 415, DNA - Zea Mays ZM06MS58275860. r021
AGAAGGAGCATAAGCACAAGGAGCGCCTCGGCGAGGTGGGCGCCCTCGCGGGCGGCGCCTTTGCTC TGGTAATATATATAATACAGTTACCATATATATATGTGCATGCACGATCTATATATGTGGTGATGT GTTGTTGATGGAATATAATATGTGGAAATTAGTACGAGGGGCACCGTGCGAAGAAGGACCCGGCGA ACGCGCAGAGGCACAAGATCGAGGCCGGCGTGGCAACGGCGGCGGCGCTGGGCGCCGGCGGCTACG CGTACCACGAGCACCGCGAGCAGAAGGAGGCCCACTACGAGAGCAGGCAGCAGGAGCACAGGGTGC CGCACGGGCACGGGCACGGGCACGGCTACTCCTACTACTGCGACTGAAACGACTGATCATCCCATC GATCGAGATATGCATGCAGAACTCGATATATATACGGCCCCTAGCGCCGTACACGTGCGTGCGTGT AAGTAAATAAGAGCAAACGTCGTCACGTGTGTGTTGCTCGATCACTACTCCATCGATCTACTTATT ATCGTCTGCAAATAACGACTAAGCGCATGCTTCTGCAGCGTGTAACGATCAAAAAAAAAA
SEQ ID NO: 416, proteína - Zea Mays ZM06MS58275860. r021
MEYNMWKLVRGAPCEEGPGERAEAQDRGRRGNGGGAGRRRLRVPRAPRAEGGPLREQAAGAQGAAR ARARARLLLLLRLKRL11PSIEICMQN SIYIRPLAP YTCVRVSK
SEQ ID NO: 417, DNA - Zea Mays ZM06MC07637 58832771
GGTCGACGATTTCGTCGGCCCAACACTAGTAGCGTAGCTGAGAGCCTGAGACGATGGCCGACTACT ACCACGGCGGCAGGGCCATGTACTCCAACACTGACGAGTGCTATGACGCCGGCAGGCACGGCGGCA GCGTGAGGGCGTACTCGCGCACCGACGAGTACTACGACAACGTGGACGACCGCATGAGGAGGCCCG CGTACGGCGCCGACGACTGCGGCTACGGCGGCAGGCAGACCGCCGTGTACGCCGACGAGTACTCCC GCGGCGGCCGCTACGAAGGCTACGGCGTCGAGCAGGAGCACTTCAAGAGGGAGGAGAAGGAGCATA
FIGURA 26 CONT. AGCACAAGGAGCGCCTCGGCGAGGTGGGCGCCCTCGCGGGCGGCGCCTTTGCTCTGTACGAGGGGC ACCGTGCGAAGAAGGACCCGGCGAACGCGCAGAGGCACAAGATCGAGGCCGGCGTGGCAACGGCGG CGGCGCTGGGCGCCGGCGGCTACGCGTACCACGAGCACCGCGAGCAGAAGGAGGCCCACTACGAGA GCAGGCAGCAGGAGCACAGGGTGCCGCACGGGCACGGGCACGGGCACGGCTACTCCTACTACTGCG ACTGAAACGACTGATCATCCCATCGATCGAGATATGCATGCAGAACTCGATATATATACGGCCCCT AGCGCCGTACACGTGCGTGCGTGTAAGTAAATAAGAGCAAACGTCGTCACGTGTGTGTTGCTCGAT CACTACTCCATCGATCTACTTATTATCGTCTGCAAATAACGACTAAGCGCATGCTTCTGCAGCGTG TAACGATCCATCACTGTTACTATATCTAATGATGCATGCATGCAATTAAGCTATATATGTAAAAAA CTATGCGTGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAANCCAACCTAAA AAAAAAAAAAAAAAA
SEQ ID NO: 418, proteina - Zea Mays ZM06MC07637 58832771
MADYYHGGRAMYSNTDECYDAGRHGGSVRAYSRTDEYYDNVDDRMRRPAYGADDCGYGGRQTAVYA DEYSRGGRYEGYGVEQEHFKREEKEHKHKERLGEVGALAGGAFALYEGHRAKKDPANAQRHKIEAG VATAAALGAGGYAYHEHREQKEAHYESRQQEHRVPHGHGHGHGYSYYCD
SEQ ID NO: 419, DNA - Lycopersicon esculentum
ATGGAGGAGGAGAAACACCACCACCACCACCTGTTCCACCACAAGGACAAGGCGGAGGAGGGCCCC GTCGACTACGAAAAAGAAATCAAACACCATAAACATCTCGAGCAAATCGGTAAACTTGGCACTGTT GCTGCCGGTGCCTACGCCTTGCATGAGAAACATGAGGCAAAGAAAGATCCAGAACATGCACACAAA CACAAGATAGAGGAAGAGATAGCAGCAGCTGCTGCAGTTGGGGCAGGTGGATTTGCATTCCATGAG CATCATGAGAAAAAAGATGCCAAGAAAGAAGAAAAAAAAAAGCTGAGGGGGGACACCACCATCTCT TCTAAATTGTTATTTTAG
SEQ ID NO: 420, proteína - Lycopersicon esculentum
MEEEKHHHHHLFHHKDKAEEGPVDYEKEIKHHKHLEQIGKLGTVAAGAYALHEKHEAKKDPEHAHK HKIEEEIAAAAAVGAGGFAFHEHHEKKDAKKEEKKKLRGDTTISSKLLF
SEQ ID NO: 421, DNA - ASR Lilium longiflorum
ATGGCCGAGGAGCACCACAAGCACCACCTCTTCCATCACAACAAGGAGAGCAACCCGGAGGTGGTC GTCTCCGAGACCAACTACATCACCGACGGCTTAAACTCCACCTACAGCACATCCAGCGATGTATAC GGTGGCAACCAGTCACAGGCCAACTACGAGGACTACGAGAAAGAGAAGAAGCAGATCAAGCATAAG GAGCATCTCGGCGAGATGGCCACGGCCGGCGCCGGTGCTTTTGCCCTTTACGAGAAGCACGAGGCA AAGAAGGACCCCGAGCACGCCCACAGGCACAAATTGGAGGAGGAGATTGCCGCAGCTGCAGCTGCG GGGGCTGGAGGGTACACCTTCCATGAGCACCACGAGAAGAAAACCTTGAAGAAGGAGAATGAGGAA GTCGAGGGGAAGAAGCACCACTTCTTCGGTTAA
SEQ ID NO: 422, proteina - ASR Lilium longiflorum
MAEEHHKHHLFHHNKESNPEVWSETNYITDGLNSTYSTSSDVYGGNQSQANYEDYEKEKKHIKHK EHLGEMATAGAGAFALYEKHEAKKDPEHAHRHKLEEEIAAAAAAGAGGYTFHEHHEKKTLKKENEE VEGKKHHFFG
SEQ ID NO: 423, DNA - giM5667622:130-558 Saccharum officinarum SoDip22 mRNA para proteína de 22 kD indutível por secura, cds completos
ATGGCGGAGGAGAAGCACCACCACCACCTGTTCCACCACAAGAAGGACGAGGAGGAGCAGGTGGAG CAGCCCGCCGGCGGCGGCGGGTACGGCGAGGCCGCCGAGTACACGGAGACCACGGTGACGGAGGTG GTGTCCACGGGCGAGGACGAGTACGACAAGTACAAGAAGGAGGAGAAGGAGCACAAGCACAAGCAG CACCTCGGCGAGGCCGGCGCCATCGCCGCCGGCGCCTTCGCACTCTACGAGAAGCACGAGGCGAAG
FIGURA 26 CONT. AAGGACCCGGAGCACGCGCACCGCCACAAGATCGAGGAGGAGGTCGCGGCCGCGGCGGCCGTGGGA TCCGGCGGCTTCGCGTTCCACGAGCACCACGAGAAGAAGAAGGACCACAAGGAGGCCGAGGAGGCC GGCGGCGAGAAGAAGCACCACTTCTTCGGCTGA
SEQ ID NO: 424, proteína - gill5667622:130-558 Saccharum officinarum SoDip22 mRNApara proteína de 22 kD indutível por secura, cds completos
MAEEKHHHHLFHHKKDEEEQVEQPAGGGGYGEAAEYTETTVTEVVSTGEDEYDKYKKEEKEHKHKQ HLGEAGAIAAGAFALYEKHEAKKDPEHAHRHKIEEEVAAAAAVGSGGFAFHEHHEKKKDHKEAEEA GGEKKHHFFG
SEQ ID NO: 425, DNA - gi 117128027|emb|AX297905.11 Seqüência de DNA da Patente W00183756
TGTCGATCCAATTGTCACTTGCTCTCCCTCCAACAAGCTAATTAAGGCCGGTCGTCATCCCTCTTC TAGCTCGTTTTATTATCCATGGCGGAGGAGAAGCACCACCACCACCACCTGTTCCACCATAAGAAG GACGAGGAGCAGGAGGAGCAGCTCGCCGGCGGCGGGTACGGCGAGTCCGCCGAGTACACGGAGGCC ACGGTGACGGAGGTGGTGTCCACGGGCGAGAACGAGTACGACGAGTACAAGGAGGAGAAGCAGCAT AAGCACAAGCAGCACCTCGGCGAGGCCGGCGCCATCGCCGCCGGCGCCTTCGCACTCTACGAGAAG CACGAGGCAAAGAAGGACCCGGAGCACGCGCACCGCCACAAGATCGAGGAGGAGGTCGCGGCGGCG GCGGCCGTCGGCTCCGGCGGCTTCGCCTTCCACGAGCACCACGAGAAGAAGAAGGACCACAAGGAC GCCGAGGAGGCCGGCGGCGAGAAGAAGCACCACTTCTTCGGCTGATTGATCCCTCCCGTATCGTCG TCCCTCCCCGTGTGCTACGCGTGCGTGTGTGAGAGTGATATCGAGCGCCCGCCGTGTTGTGCGCGC GTACGTATGTATGCGCTCGTGTGATGCACGAATAAGCGTGGCTACGTAATCTATCGTATGTATACG TGTGTGTATGCATGTGCTTGTGTATGATCGTGGTACGAGGACCGAAAAAATGTATGCAACTCTGAT TTACTTACATGTTTAGTTGTTTACGTTTCTCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
SEQ ID NO: 426, protein - gi 117128027 |emb|AX297905.11 Seqüência de DNA 1 da Patente W00183756
MAEEKHHHHHLFHHKKDEEQEEQLAGGGYGESAEYTEATVTEWSTGENEYDEYKEEKQHKHKQHL GEAGAIAAGAFALYEKHEAKKDPEHAHRHKIEEEVAAAAAVGSGGFAFHEHHEKKKDHKDAEEAGG EKKHHFFG
FIGURA 26 CONT. mdcnmvsssqwdwehlimsnpsrteddskqlpteweiekgegiesivph fsgle rvs sgsats FVItiTAV SKS SQSTSINS SS pe akrckl a s e s s p g d scsnidfvqvkaptalevsvasaesdlcucxgkrtyseeywgrnnneis AVSMKLLTPSVVAGKSKLCGQSMPVPRCQIDGCELDLSSAKGYHRKHKV CEKHS KCPKVS VS GLERR FCOOC S R FHA ΥΞΈΡΊ^^Κ^Γ^^Ι^ΗΗΜΆ^ RRKPQGVFSMNPER VYDRROHTNML WNGVS ln ars e e m yf1wgnn tydtk
prqteksftlseo^ngsÊdqlvÃÍsÍrmfstsqtsggfpagkskfqlh
gedvgeysgvlhesqdihralsxistssdplaqphvqpfsllcs ydvvp K
FIGURA 27
SEQID455 SEQID4 53 SEQID451 SEQID44 9 SEQID447 SEQID445 SEQID443 SEQID441 SEQID439 SEQID4 37 SEQID4 35 SEQID433 SEQID428 consenso
50
1) MDA WLTGLEESGVR VR WNFIQGGREMAFLLESVQEEDLGRNI IGST^S
1) -----------------------------------------MGSFG|g|||
----------------------------------------MGSFGMNWNj
(1) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (D (1) (1)
-MGSFGMDi
-MS S VSLjjj -MASFGjNgi
—mgsfgSIwI
MDWN
51 __100
SEQID455 (51) T WG RKDNRY PSLKG DKE FPFC GMW DIWE-NiBD IFNAKS T^I^RK^- OS§WÊI
SEQID4 53 (10) ----------------O^SSMLWiWÊ^FP PIG----§NjgKNAMQA|PRF
SEQID4 51 (10) ----------------QRDPgjVplllHji^PSVSNAVTR-----------
SEQID44 9 (12) ---------------OÍÍSSPL LW Di^NtBP PAAAN G SÍS-----------
SEQID4 4 7 (5) ----------------A!KE^Q^WÍÍ]!jia^SFGTSSAll^^QRP^WÊN
SEQID4 4 5 (5) -----------------S!#ÍEGN^^pAGLSAKASEllBK<^PLAYHlT
SEQID443 (5) ----------------G^PHBoMlWES Sii^MFN GI TTiBNSKOHS PtBlIt
SEQID441 (11) ----------------QKPHBoS&ENtBiaMFNAITN^sÍoHSLTBl.ÍT
SEQID4 3 9 (10) ----------------QÜP^FÜÊ^PPAP FG PNTI^NllS^PH PgPRG
SEQID4 35 (5) ----------------A§PPFQ^LE-M!illjlSFGTSTAÍv^KlKPMgWÊI
SEQID433 (5) ----------------MVgFP^^^^MSNQSKTENEpKQQS IQWIF
SEQID4 2 8 (5) ----------------MV^SO^^H^MSNPSRTÍDDSKOLPTgwÍl
consenso (51) kssv [wdweni^i ε pk l de
FIGURA 28 101
SEQID455 SEQID4 53 SEQID451 SEQID44 9 SEQID447 SEQID445 SEQID443 SEQID441 SEQID439 SEQID437 SEQID435 SEQID433 SEQID428 consenso
150 IjS-KVGI
. S-KL1
a^vag|tmgneplh||s(
--------hgsan|sc
------------HRTI
IgDGil dkaITY s|----GGGL^SPLWHC S s|Í1IsVSp'sÍd's1l-KgG I
gTDSGFFYSjGS^RSGGg^lDLELASFiÜC^SKSisWslS-^iEV
I-—TLglN!^ELlHlSÍS.'RSS!I.S:gsÍDS;PSGVlNS
_ _ JDSGFFYS^GSVplSRG|lÍDLELASF^^SKSlSiTN;SlS-ÜEV
VWAgAN -hgs TNgjS gg---T FffiSiSrSE L^Ngs1IsKssksIgFDsgis KL§?NS
alvgvdighesgh^sgl— -TFSsSjgSiE IIyISÍÍ^SÍiIs^SÍIDSPSKVÍÍNT
|||FDCTSLYSSSF§YA|||S-----G^D llHÍFtÉ^s'KSTsBs!SÜ—pjjEV
jjKGEllESIVPDFLGFEKVSSGÍ^ÉFWHTÍv|^s|dsÍTSyS|j—gPED
ÍkgeÍiesivphf^glervssg^^fwht|\^^sos|t'sÍnís|--|pea
DG G S GS SSSS G A (SKSS SASI SS| AG
seqid4 55 seqid4 53 seqid451 seqid44 9 seqid447 seqid445 seqid443 seqid441 seqid4 3 9 seqid4 37 seqid435 seqid433 seqid428 consenso
(149) (88) (71) (73) (86) (82) (87) (93)
(89)
(90) (81) (86) (86)
(151)
151
SffTSjtpTFEg
MEFRgAPVKNPDRNTSKNTELGKVDNTRKG
LEFgAfVERHVKNTGTN-----GgVDD|GN^gSM^-N^J-® SLR
gNK^----------N---MELISFAPAKAPDKDTGSVÉs^fflpvl ÍLR
§TY|gT|E||GESVPPGEL-GSSEEFAMGIDA§^
K<TY-----11
es
Btsi
gág
K<TSí
asa»
LEFI
ADG F PGV11RK DLT| [SKANPSDYN-KKEI |SKTNPSDYN-KEEL GHGKNMCKDGE—A'
ígRC^L KRCKL K NF
EEHDKNMDK----
IETGESLP-----G---E FAKGI ~ ^w,. _
|SPGDS------SSNID F LQ VKPiT^^P^SfeE- S D-SOLK
[SPGDS------CSNI DFVOVKAPTAlãV/SSsaS-S DICLR
A RT SPSLEVSVGSGE PVLGEK
201
seqid4 55 seqid4 53 seqid451 seqid4 4 9 seqid447 seqid445 seqid4 4 3 seqid4 41 seqid439 seqid437 seqid435 seqid433 seqid428 consenso
(198) (137) (115) (109)
(134) (126)
(135) (141)
(134)
(135) (122) (129) (129) (201)
LGKRlYgEgVSl
Gj- GgpKGBVF-EV I P|| Éiaviilijps g||as apn:
___—UjAS
LGKKÜYgElG^LGlsIS^gS^ALGTAS" LGK^Y|{Ej§FWEV-
250
:|nahv---
_ phn---
||NAKN---
j-pvsl,
LGKRI1YgEij "" -=—'=«»="- ----'
lgkr|y|e1
LGKRtEYiBENV^TeM-I LG KRgYBE^Vfij^-te LGKRgYgEgFWEV-E! LGKR^YSDlFWpR-"1
[LGKR|TYFÉD CGG QNAKSSA
jiSiPSGVSVATP ^GLGL-PVTL, DLl
FIGURA 28 CONT 251
300
SEQID455 SEQID453 SEQID451 SEQID4 4 9 SEQID447 SEQID4 4 5 SEQID443 SEQID441 SEQID439 SEQID437 SEQID4 35 SEQID433 SEQID428 consenso
242) 183)
158)
159) 179) 170)
179) 185) 178)
180) 167) 174) 173) 251)
__:ÊS|H|KC|KV|y|GlERRFCQQCS-
-^cq^gc^dl?WY"iI^H^CW;hikatkvív1G1ERRFCQQCS1 Ks|cQ^GC^T:DL^^gY|R|f^C|P«|KA|Kv|v|G|ERRFCQQCS| -fflCQ^GC^DL!^^^Y!BRiRíScÍN^kElKVlvlÍGÍERRFCOOCsÍ
BCE-NHSKFiK |§Hj^CEKH§KS||KV@y®
G^ERRFCQQCSg ÈRRFCQQCS-
-S|CQpG_C, _____ =__
"PCQ^GC^dlI^YI^H^CINIHIKFI^
SGOElDLgSgpGYiHRKF
|g|errfcqqcs|
|GÍERRFCQQCs|
EKV1S*
PfYCQVEGCNLDLSSAKDYHRKHRVCE HSK PKVIVAGLERRFCQQCSRj
301
350
SEQID4 55 SEQID453 SEQID451 SEQID449 SEQID4 4 7. SEQID4 4 5 SEQID4 4 3 SEQID4 41 SEQID439 SEQID437 SEQID435 SEQID433 SEQlD428 consenso
(290)
(232) (207) (209) (228) (218) (228)
(233) (227) (229) (216) (223) (222) (301ÍÍ
KSSRYWFIQKPLFLIVFGLQRFHG
-RiFHEPSEF
KIIPSFY—DCIDNLGFGCQRFHi --------------------RiF:
ígS C KgSR LpjBHNiSRRRWF
|K|SCR|rl||H^RÍ
SCRgRL^Hl· BSEFDEgKKSCRgRL^HNARRRK-l
'EFD^^SCRSRL^HNIrrrM
""" iSSfc
SEQID455 SEQID4 53 SEQID451 SEQID4 4 9 SEQID4 4 7 SEQID4 4 5 SEQID443 SEQID4 41 SEQID439 SEQID4 37 SEQID435 SEQID4 33 SEQID428 consenso
(320) (261) (236) (238) (277) (248) (275) (262) (256) (258) (244) (252) (251) (351)
400
GGjKjjpjMSj^ZLS SVgIVHTiPAVNP MFg-lAE^SPNEfeGQAEYVQMRgCjS S
i~------------TM§Y|T^RTN^F^sqplygqv§N§GS
PFGlH----------LsAMiYlTiRiAsPBGEGiYGQMRgciss
NiPGETY-----------------------------
^REIgSS
hlíj:_
|s FGÜSj—RLA--------τ:
^SLSlgli-ST--------LLi
------ÉpgIFydg
__JPgVD
•GVFPL|pE||]FDR--------------^HT S|
-GVFSMJPEjggJYDR--------------§HT!
.1 NSSRL F D RQQ
NRVgFLAG----NS
pRAjgLVHAlp DKAgLVHSlPi
IGQSgFGQVÜNlI S
qa|ygqmg|c|ss
RFALIHP^EEKF GLSLNTR-ÜEEKY GVSLNAR-j§EEMY LLF P RS A
FIGURA 28 CONT 401 450
SEQID455 (359) IpgjG--TCS--KFTQTKG—LVjgGNT^ggRQgHgPGS---E0QNGl|T
SEQID4 53 (301) IjjfjD—PGG- FfrjVfflH T^A P W l1§T TApIlH G -Bh@S S O---QMSDNIMP
SEQID451 (273) ||W||N--LGG—L^FMETpHPPVHgjTKlSsPSE-^HFSAL---^TS-A§A
SEQID4 4 9 (278) W^SPGAGGGGF|ÍFAET|GAPWLKPAF&AÍGISP0SGQQQQ^WNDSIP
SEQID447 (283) --------------------------------------------------
SEQID4 4 5 (2 94) ÜQS—ECG-EgvgHAGDFFI^AKAgBHRCBSYPCN™ E|PDAA|T
SEQID443 (314) TYI-SgF^IT^DYIA^AElggKlgKOFHgpriF---D|TNGIDI
SEQID441 (302) TST-S|F^IT|EYIA§|AEl||s|RRgH|PGI---E^TNSI^I
SEQID439 (296) içgN—LGG-ERE®EA|LPWM^lKTI^gD-gNFSTL---QgPGNVVS
SEQID4 3 7 (299) -^NPVPGG--F1E1BATÍAPWSP!TIA^^G-THÉSNO---QASGNVLP
SEQID435 (274) l|PS—SKH-VPSRVLMPQPA|TEISDTEHNRF(^LDP---KTKTAR|ÍE
SEQID4 3 3 (286) gWG-----------§TYETKPTQMESGFTjj|SFQRGNGSE---DQLFTGigT
SEQID428 (285) EWGN----------NTYDTKPRQTEKSFT|SFQRGNGSE---DQLVASgS
consenso (401) swd κ τ κ kp agld l l l s
SEQID4 55 SEQID4 53 SEQID4 51 SEQID44 9 SEQID447 SEQID4 4 5 SEQID443 SEQID441 SEQID439 SEQID437 SEQID435 SEQID4 33 SEQID428 consenso
(400) (343) (314) (328) (283)
(337) (357) (345)
(338) (342) (317) (322) (322) (451)
451 500
LCHDSSR-----LLHSÍ^AIAEB-^VSQGMLH§T--------------
HGApHG-FD-GFMA^MTCTKFP-^^VQASAV^Dgs—Gl^LOHjlg HTGÍHHDLD—GFMA^gTSTK^-^gVEAWAA^S|N-NG^gG(^pj
H VAlQE DFDGFTVTA^il S PK1§DH^AGVEAC^V|
IPTDSDK----
QHHÍKSNSS —
qhhíksngf— htvIhhdfd— hgaIhs-fd— lfskekvt---
LSFSAFQT—
RMFSTSQT---
H
-IISj
L PS KGjgjigT AAE| LPSKA^TAGEl GLIPMNTPKE1· G LMA|||jE TNAK| _
-isshm^asqdíd
-SGGpS^GKSNgQ -SGG§}pj§GKSKFQ· FKG VL
(ΙΕ—V^^L^J
JS—QLLH-----
IggVDPACAVV SjÉ _ _
-^gMEASAVgG|A- -RGj||FEH| -GALSLLSNSTTWVS—SgDQPRj|FT
-lpdkgvgec|gglh—eIhIfysí
-LH§EDVGEY0GVLH—E|Q| NQG AS S APD
501
SEQID4 55 SEQID4 53 SEQID4 51 SEQID4 4 9 SEQID447 SEQID445 SEQID443 SEQID4 41 SEQID439 SEQID4 37 SEQID4 35 SEQID433 SEQID428 consenso
550
(430) (387) (360)
(378) (283)
(379) (402) (385)
(385)
(386) (360) (365) (365) (501)
fjSgMSgSNPVi-------------AANLQ PS PQMH S G VAAIAG APN PAMHAL
SflBfôjDGgiWSSS--------S--AVIQQPTSHADAGALLPPLATVAVSNAA
Í#lÍNSPApGGGTNTNHPPPPPAAELHHHRAAPSSCLAAGSVSVLOEASS
EHGSTSLDQLMLANQTSMTQPMINAELQNCP EPQSISFEQPVHTN—HTTQSVLQVIPQNSP
iSjjjgjgSiS pgwl- #
LDHH PS|§-
|SLLS| S G
-PADVQAGSQVHPGGVMPPLAVAAATVTA
-AANLQPGSQIHPGVTAIAGTSNPVMMPS ---------------------------NL
---------------------------DS
---------------------------DP
FIGURA 28 CONT 551 600
SEQID4 55 (430)---SEHWRTELPSTDSRVHILPSQGDGNTHFQEFKLFKAPYESGFSSGYS
SEQID4 53 (424) GSSTGLWLDGSQPLDDHPRFQVFERLG—DHDSELQLPKPSYDHASHFDR
SEQID4 51 (400)----AAAGHPLDPSPGR--FWPQDDHPPLVDGPATQIPELAHLRIW----
SEQID4 4 9 (428) PGLWQDGGGSAALGHHAHARLQALDAAMATAQELLQLPRPPPS YGGS SSH
SEQID447 (283) --------------------------------------------------
SEQID4 45 (421) VASSENARMEQASLESRVHSLDLHDNGNVQLQEFQLLKAPYATGCFYSNQ
SEQID4 43 (442) LASSEYWRTEQPSTDSQVHTLTSH--------------------------
SEQID4 41 (385) --------------------------------------------------
SEQID4 39 (422) PTNPVSVMHALHPSTGGGGFWQDGDDPPPLD-HASQAQAFMHPGNGSSSG
SEQID4 37 (423)---PAIWQGG-LSLDQQAQFQAFDRLGNDDDEDHLQLPKPSYDNS-HYDQ
SEQID435 (369) QPVAHRSAAQLNSVSGYWQPDPPAVEGPTALHRNGVGQFNENYFSLNQFY
SEQID4 33 (374) QGIKHTPVAEPPPIFGTFPSHFI---------------------------
SEQID4 2 8 (374) LAQPHVQPFSLLCS YDWPK------------------------------
consenso (551)
601 620
SEQID455 (477) EYRE LRYPIPRSNARVMKQT
SEQID4 53 (472) MH------------------
SEQID4 51 (440) --------------------
SEQID4 4 9 (478) YDLMR---------------
SEQID4 4 7 (283) --------------------
SEQID445 (471) FS------------------
SEQID443 (466) --------------------
SEQID441 (385) --------------------
SEQID439 (471) YGHLH---------------
SEQID437 (468) MN------------------
SEQID4 35 (419) N-------------------
SEQID4 33 (397) --------------------
SEQID428 (394) --------------------
consenso (601)
FIGURA 28 CONT S5
OsSPLS Os SPL1&
ZmQ 9 Sful ia
QOSMI7
ZmQQSMI 6 AiSPLB
S2
FIGURA 29
3' aua
3* aca
·*»·*··. · ·
ca
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y cau
S' gau 5r ugu
U£U
5' ü5li 5f ugu 5' ugu 5' c Su S1 ceu cgu
Sr 2 S. U
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cga cga
ΠΙ
gcu gcu
gcu gcu gcu gcu gcu gcu gcu gcu gcu
gugaga gaa
ga g aga gaa gugaga gaa
M Ill Ill
CCC UCU CUU CCC UCU CUll
CUC UCU CtlU CUC UCU CUU CU C UCUCUU CUC UCU CUU CUC UCUCUU CUC OCU CUU CUC UCU CUU CUC UCU CUU CUC- UCU CUU
gaa
gaq gac
Ill
CUg CUg
CUg CUg CUg OJg
CUg CUSl CUg CUg
eus:
age
agu agu
Ill
uca
uca
uca uca uca uca uca uca uca uca uca
5' osmiR156!
y osmiRJSúk 5' osmiflf56(a
3*
3r 3' 3'
Λ I ->
3'
I
J> !>1 J
3'-
J
3l
h· S X L
OsSPLi OcSPU OsSPU OsSPLl4 OsSPLJó OsSPU 7 OsSPL 18 OsSPL4* OsSPLU OsSPLJ2 OsSPL 1
Aminoácido
FIGURA 20A SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 Ctouneene®
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID4 52 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID4 4 0 SEQID4 42 SEQID444 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
1 50
(D --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(1) --------------------------------------------------
d) --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(1) --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
{1) --------------------------------------------------
(1) --------------------------------------------------
(1) -------------------------------ATGGATGCTGTTGTTTTGA
(1) --------------------------------------------------
{1) CTGGGTGAAACATAGAAAAGTTTCTCTTGCTCAAGTTAATGATAAAAGGG
(!) --------------------------------------------------
(1) ---------------------------------------------------
(1) --------------------------------------------------
(1)
51 100
(D --------------------------------------------------
(!) --------------------------------------------------
(!) --------------------------------------------------
(1) --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
d) --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(!) --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(20) CAGGTTTGGAAGAATCTGGGGTAAGAGTAAGGGTGGTTAATTTTATACAG
(!) -----------------------------------CTTAGTCAATAGCAT
(51) TGAGAGCAATAAACGCTGATAAGCCTTGTCTGGTCCTTGGAATTTTGAAT
(!) --------------------------------------------------
(!) ----------------------GCCCTTTTTGTTGGTCTGGGTGAAACAT
(!) --------------------------------------------------
(51)
101 150
d) --------------------------------------------------
d) --------------------------------------------------
(!) --------------------------------------------------
(!) --------------------------------------------------
(1, --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
d) --------------------------------------------------
d) --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(D --------------------------------------------------
(70) GG—CGGGCGAGAAATGGCATTTTTGTTGGAATCTGTGCAAGAAGAGGAC
(16) CTTCTCCGATCATCGACGTCCGGAGATTTCT—TCGGCCCTCTCATACTT
(101) TTTCTTTTTCTATCTTACTTATAGTATTGGTAGTTGAGGGTGTCGTCGAT
(!) --------------------------------------------------
(29) AG-CAAGGTTTCTCTTGCTGAGGTTATTGATAAACGGGTGAGTTAAATAA
(D --------------------------------------------------
(101)
FIGURA 30B 151
200
SEQID427 (1) SEQID436 (1) SEQID438 (1) SEQID440 (1) SEQID442 (1) SEQID4 4 4 (1) SEQID44 6 (1) SEQID448 (1) SEQID450 (1) SEQID452 (1) SEQID454 (118) SEQID429 (64) SEQID430 (151) SEQID431 (1) SEQID432 (78) SEQID434 (1) consenso (151)
ttgggtagaaacatcatcggttctacttggtcgacttggggaagaaagga ga—gttgttgtaggatttgttgctctggctctggtggt—aggtctatg aa—gttgttgtaggatttgttgctctggctctggtggt—aggtctatg
aaacgttgatcagcagtgtgtggtgcttggaattgata---aggtctatg
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID446 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID4 54 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID4 34 consenso
201 _ 250
(1) -------------------ÃTGGAÇmcS^- - CAT^TÍ8T§|jT§- -gjCC
(1)----ATGGGTTCTjTTGjGATGGkgTi^lATCAgA^-lG^aGGl^fete
(1) -ATGAGTTCTGTc|cACTGA^^^g<^--l&CAAÍc&ÍA—c|l§G
d) -------------------MgSGBQGgA--T1gcaaÍC|CPA--C§A
(1) -------------------À|GGAGg!gGÍALCTCCgCTGCA^TGAgG^-
(1) -------------------SSS®1®!-- 1ic|AAGCp^—A&
(ι) —agccgcttcggca^CSAÍT^GGACGKGGAIC^CIG^^AGAI
(1)----ATGGGTTClgTTGGGAlSAp^GG^TC^A^-GÍ
(1)----ATGGGCTCfáTCGyGA^^^^G^CC^A^-gcggGG']
(168) CAATCGATATCCT§CTCTAj^^GGAI^A--(gfigTTTC^^TC] (110) AAATCAAÇCCATAaCGllAAg^^gÍclA--CAT^T^T^l1Í--HlCC (197) AAATCAACCCATAlCGTgAÀfGG^gTgC^A-- CATGglgT^TB—fggCC
d,-------------—ι- ,^ΐιιίφ^- -c Ατ#§βΐ- -Wkc
(125) AAATCAACCCACAgCTTgAj^^^g^--CATgT^iyr^--^g (201) TG ATGGACTG AA G AG A CTCC GTT
251 300
SEQID427 (28) j§§---^GGpT.rjGGGÃGC^--OfGMC^GÍCgl^CpSTCp
SEQID436 (4 6) ----
SEQID438 (46) ____ _______
SEQID440 (46) --C^^/^^^^fB^AATSSSAHAffi SEQID442 (28) H---
SEQID444 (29) -------feGAAgTGGGAlSSc - -A^GC
SEQID446 (28) H---^GGgA'GTGG.GA^^ã--Cg^^ATC^pTGG§AlTTCg^A(§
SEQID448 (4 8) ggatccgeggcaít|gcaactggcapsggctcg^tggga^gac^tggac
SEQID450 (46) ------|GG|ATTgC^AAC^—CTAC^ACC----G-gjCTfl---------
SEQID4 52 (4 6) ------h&ggagtg(^jG^Sn- - tgcccgc^affiagg------------c
SEQID454 (216)
SEQID429 (156) P- - - pGG&AT.TgÇ^Ajcp- - T|TGÃTÇ}ATG^^|cÍGTC^gteG^
SEQID430 (243) M~~~ÜG(^ATTgGÍA|c^--Tg^èc^^C^mfec^GG^
SEQID431 (28) §35— |§GGgATTj|G§Ãgcj|§-- if^C^ÜCl^^d^TC^Gg^p
SEQID432 (171) gC---^GGgAgT,GGgA^^--
SEQID434 (28) j|§---AfEGGgAAT.TGjgAAj|ÉjjC—T|l|^EATCl^^TGGCA^TTCT^^AG^B
consenso (251) ca gtgggactgggàgaat tgat atgttcaat cg aac act
FIGURA 30B CONT. JUl
seqid427 seqid436 seqid438 seqid440 seqid442 seqid444 seqid446 seqid448 seqid450 seqid452 seqid454 seqid429 seqid430 seqid431 seqid432 seqxd434 consenso
GAAG TftgGTOGAaaGC - GAAAATCCCAA AA
gc acc ac ga tggga aattgaag a
351
seqid427 seqid436 seqid438 seqid440 seqid442 seqid4 4 4 seqid44 6 seqid448 seqid450 seqid452 seqid454 seqid429 seqid430 seqid431 seqid432 seqid434 consenso
(118) (133) (130) (136) (118) (114) (118) (148) (85) (121) (304) (246) (333) (118) (261) (118) (351)
hr-i
400
m i u*m
-gT^GGfiTTGACAl
^ggccaltegtt—^ggtggta
,gga^-jtgl^^ggt^ttct^cagtea&^gtaa- - lGGASC - Cg|C^^GGG™gT TC A^feTggGACT|CAA - -
----ttga^sa^^at^cp^ai^ggt—^ggtggtg
t ttlscyccactllt^ctcgsseigcbtgctgcagaagcagctt Cl C^CfflACC^C^GlGiGAgCCA^ÍGGACGA^^---^GCCgCGC
-ittgcggct1accargggg___
-SaaggIãggaat-ítgSca^ggttcíttc
SGTGAAGGgAT -fTGA -íg.tgmggãat ,
M BiI--SlIi f I
-EGTGAAGGAAT-rrC" μ wanu^ τ! l *
-ggggaagç^at
-tt^^ti^^cc^ctcgc^gtc^i^gcgtgc^-------ta—
g tgaaggaa tgaatctat gttcca att tcagg cttg g
401
seqid427 seqid436 seqid438 seqid440 seqid442 seqid444 seqid446 seqid448 seqid450 seqid452 seqid454 seqid429 seqid430 seqid431 seqid432 seqid434 consenso
-CgjTTCTC
|GieCpA®CAGC—
|csp\.í3stmaefig---.
_ Et'j. Fs í-^amST >ssãs _ ______
------CGTTCAOTSCffiAGG-TSGGKG---ClAGCCA&TGG
^^,^,EÜS__íbí^HPSÍJB ^SMs^f =s™
gcaga^ccgtiggas cpattet^sggac---^agaaetitgol
Bfj1 Ittffiflf . 'FW MM t^g&aSs
GCAGA&GC C^TGGTf CgAGCTGTGAT---^gGGAAgTfTGeTTj
450
,ggs^ca^tg^g^lcg tg^GTffiTGG---Jn
1 ""ticg CA IGA
j^stgctcgicgcc sa^stca-a^^kbcajct S-ATjSA---ACCGGCG
a^^g—ã|jc^gcc
SEiGG---CfflCTjECC
iwjggca ílcg js335flllecg hpcg a^gicg^ca
; 'I "I ι
- ikasaaascflict TT TGGCATGCT CTTTATC
FIGURA 30B CONT. SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
(211) (217) (214) (229) (211) (196) (211) (236) (160) (211) (397) (339) (426) (211) (354) (196) (451)
451^________ 500
llft^Tc^g^T^^ —cjgd^Siccãj
ι---G§GGA®
■—gggga!
5tgtc^gcgtc'gt! I^MGTCG^ITCIgcttcc,^,
ga&Sl»''"tgjg? 1 fê^âS · ^gU I-J ; » M l
^TC,Gg^lTOSGlGfTpCiCH
rC1TTC A;|TGAAG||G--HGSGGAT
_____ _ LCTjTCiC^aaGqTCgTCMGA---|||lf|pGTGAG
CCTTCTiTQCGTATCiCTpGpCjA^^B^^TC^TGC^AGI^^^^^G^ ^^^TqTgTTjTCiGCfiTcIcgTC^TCAC^^ rGGAGT--"^ÉIGGAS
S»TCt|ifTc;cGeGTC ^^ETC^^^T.CSgctÍTCL
......Bf
jTC@M^AAA(gGÍ(^ÃTA!^ tca^^HT—(mwssgccpm
λ gssa W >.im..i:.ii s,.....-
'Γ TãKSwKu "
T-GG AG QTGmS
...... ............■ ' » l·--! Iv^
gSTOS-
Ml. Kl P r, / fe..·-·- I-*· I i A
AAGAGCTCAAAGTCA C TC ATCAATTCTTCATC GC GAAG AA
501
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID4 4 4 SEQID446 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
(258) (264) (261) (279) (261) (243) (258) (286) (207) (258) (447) (386) (473) (258) (401) (243) (501)
550
ITqg^Aiggg---------KGgrccKgffl—®g&GKas
C^CCATAGAgCj^AWT^TlT—-|CGGAAGA(^^GATAA^EA
---gTC®AAGGGg^lGGCAAGA®CA
-- rr|_ _ TCTAAAfCAAAI^A---TCffSijsrffi
»CMCgA^ji^p^l^T(^^GlcTCTAAAGCAAATgA---TCl|||Í||
CffiGACTTATAGgg------CTG§A---|ATG|gTTlÍ^GGA|TTATCA
CSAGAAgp^AA^A-----C||T-----|GAGCgCATfiA-GTTTCGC|CC
ckgc^tagaí3ttçaa^tc|ccg|t—ettgagaggs^ttaagaSca <^CATGGAy^^^TT&GC#r---iTCjAAAAC^GAT^G^CA GgcScIlA^g^S^TT^G^TTTCCAAGA.iTTTT®---Ci
IcgI
JCGg [TGjgfyASM---------MggjTCC
gCGÉ ildSScAcfc---------SSiTCC
: AAGCgTC
BwqlgjTTi pG^gCApll----
IT^BC C^Paítgg
AA AT CAAGTTCACAT GAA C G
AGT
CCT GGAGATT
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID44 4 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
551 __ __600
-------Gg--------|GG||
tg^Bgggt-aS5-----T^ÃtSffiTGATGAj^C------CfeA^S
TGT^^^gTG^^GGCC|G^^S§TGAAG^TC------GjG^pl
A—T AAG AbáGC-----
j§-CqH-------CgAG-----GA§|Sc------{çf—
,.JiGGC---------KGAteSCGATGA^TC-----
C|^Gl&G|rGATAAgcGAGAActóG
TTAíe^SG®-TÍ^GA^GGCTGAGCSC-----É^^SMÜ
CT®fe«Tg:TCCfG|--------------
CTl^^GC^^TlliCTiMCSTCC^qg-------Gjg--------ÍGG|g
C T TjG^GCggqgT^gC TrTtTGT C CAGGiTj-------d§--------®GG^
CTT^^GC^pamijTTigCTCCgGfT,-------gí--------ISAC^A
τ------------------fgcaKaggg-------d^T-----pGlblCl
GCAA AACA AGA TTG AAGGT CAA TGA ACT
FIGURA 30B CONT. 601
650
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID4 4 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
TCTCCA CTCT GAGGTATC GTTGGCTCTGGTGA CC GT CTTGGTTT
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID44 6 SEQID44 8 SEQID450 SEQID4 52 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
651
aaSaStaggaíããí
700
GAAGCTTGG AAGCGGACATACTTTGAAGA GTTTGTGGT
GG AGC
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID446 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
701 ______750
^pAJ^GAj^Tf Tg^slGiGzTrTTtB------^^^CTrTGTTAjg^gg-A-T-g
^^GTÇgAgfg|TÍTCpATC--TGG----gG^^G T (^S^TK^C^^^
aGTC^Ap^^lSCTgTiGC---AG---^TCAGGTG^GAiSTI^USSri-
^CTjC^TC^r^TEAA^Ag------^ACgS—j^CTGT-^gTjí
^^GT^CAGTCGT^mATrTTTtTi------pSACAG—^CCTGT- ~---
i^GC^AATC A1TgGTgTTC ---------ATCT®TTG®TT@C^$i
------^GS^GCçfe^TpATpI^
G^PCCm^-^T—I^T^C---AG—
gfflÍ-T^3TCmpÃ^CTpGC^ATC---GGGTC
^^Ç^AlGGCT^^TGTpVTrTi------EgjGggg!- -pBCC^AT-ATpg^g
""j^gGAAKraT^^j^fTrTTTi------^AfRlgASKRGT TPMÕÍSSÊ^M.
~ ' 15GAAÍlf ------^A^^AGÍKRG.T TP^^MkmB
^GAA^TpT^ji^G^ã------^A^^AC^GTTA^^SpA^e
jgBAASiGAC CKET^^GSppT.------^A^^ATgrRGTTGA^^pHp
^^GC^AA (^TTGgGACIgEC------pA^ESc TCiTvGC^TTgATgmg
AATG TAAGAGTTCAGC GTTT CT TGA TTG C ACTCCATC
FIGURA 30B CONT. seqid427 seqid436 seqid438 seqid440 seqid442 seqid444 seqid44 6 seqid448 seqid450 seqid452 seqid454 seqid429 seqid430 seqid431 seqid432 seqid434
consenso
(471) (489) (484) (504) (486) (459)
(486)
(487) (424) (498) (675) (599) (686) (471) (614) (450) (751)
751
Et N ! ESíteSf ι SM
-TCpAjS^GTGgTCAAGMGATGAkGC ÍT8»lci
SCA1AAGAAAiGTC
„L
800
ι----------cAGjesiaA®
CAGC|g||gg AApÇ^^^
^CAAAGAAffBTGAMGaiCCACffl-------
____* I ISSSieeiSWeU-* t „, |. UM
vc^SrmiSAACAAAGAGATSTAGGGCATtca-------
-........- kf^tíbi ss _ ,_'·, «auissiíssj ■"*
pCMCgGg^AAfeA^^AiAACACTC -íccagcgtffitcaas^ga®tako5íg®cffl----------cagg at
gCCgGgTiTTGgGCAAg^G^AA^GCpGAA
GCAAAgAY^gCAGgip i|GGjGAA—KTCCASAP
TGjGgAA1---KÍCCASaTÍPG!I
TgQSAAi---ATCCA&M|gQ
ITCG^ AAGÃAIãccaÍA®^
^CgCgT^AAGAAATgGAKAgCCA1 tgttgct c g gaagaaatc aagttgt t
GGlsGjffl GC
ccigiigigr TCAGAGC
850
seqid427 seqid436 seqid438 seqid440 seqid442 seqid444 seqid446 seqid448 seqid450 seqid452 seqid454 seqid429 seqid430 seqid431 seqid432 seqid434 consenso
(508) (529) (523) (544) (526) (499) (526) (537) (463) (536) (715) (636) (723) (508) (654) (490) (801)
IPC
J-L-L WttjEaqpuri (JjM^HJÜtt. í 11'ljrt J-1 is^p^gjb^^gg^g
caag cccgcgctgccaagttgàaggctgtaa ct gatctctca
seqid427 seqid436 seqid438 seqid440 seqid442 seqid444 seqid446 seqid448 seqid450 seqid452 seqid454 seq1d429 seqid430 seqid431 seqid432 seqid434
consenso
gCg.G^^AaGSC^T A^gATSG TAKGCAgHA^G Tg T G CGfflSSA GCAfKEfe^AA fficml^A^d^pTAgSATgGgA^CAT^^TgTGCG^^CGCA^^AA
ffCA^TAS^GgCTAgíSA TjSGGA^ACATgGGATTrTG;
tctgctaaagattatcatcgcaagcacagagtctgtgaaa
CATTCAAA
FIGURA 30B CONT. 901
950
SEQID427 (606) SEQID436 (627) SEQID438 (621) SEQID4 40 (642) SEQID4 42 (624) SEQID444 (597) SEQID446 (624) SEQID448 (637) SEQID4 50 (561) SEQID452 (636) SEQID454 (813) SEQID429 (734) SEQID430 (821) SEQID431 (606) SEQID432 (752) SEQID434 (588) consenso (901) SEQID427 (656) SEQID436 (677) SEQID438 (671) SEQID440 (692) SEQID442 (674) SEQID44 4 (647) SEQID44 6 (674) SEQID4 4 8 (687) SEQID450 (611) SEQID452 (686) SEQID454 (863) SEQID429 (784) SEQID430 (871) SEQID431 (656) SEQID432 (802) SEQID434 (638) consenso (951) SEQID427 (665) SEQID4 36 (686) SEQID438 (680) SEQID440 (699) SEQID442 (721) SEQID444 (656) SEQID446 (724) SEQID448 (696) SEQID450 (620) SEQID452 (695) SEQID4 54 (872) SEQID429 (793) SEQID430 (880) SEQID431 (665) SEQID432 (811) SEQID434 (647) consenso (iooi)
γτγ·7νrrr?7\ λpr^wnhirtmmr-jnrrmrii
GTGCCCAAAAGTTATTGT GGTGGCCTGGAGCG CGGTTTTGCCAACAGT
951
1000
w
JGgiAG^GTAAGATTATTCCTAGCTTTTATGATTGCATTGACAATTTG-
Ismi
,gIagIgII-
1001
1050
(724) TAATGACTTTTTTTAATTGTTTTTGGTCTTCAAAGGTTTCAC^pC.TCgC
ÍTlCAg|gACTGGC -TTCA3ÍGjSjSBTTAGC
=Sc
-.TjCCATGCp^3TC|TjC
-TlCCACTpf1CTC^C TCCÃTGGT T TC
FIGURA 30B CONT. 1051
1100
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID446 SEQID4 48 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
TGAGTTTGATGAGAAGAAACGAAGCTGCCGCAGGCGTCTTTCTGATCATA
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
1101 _ _ _ 1150
«GSggígtIGTÃSGCW------------------
AggCCCGC AGAÍGGA^C^gAÜ---------------
|A^6Çlcg;AAgAAÍGGj^At:i(5Gp5AgA----jgGAGgSA&T§-----------
A^C^GA|GC|GCAÍACA^K-------KGgfflI^GTC-----------
^^^mc&sd^i^m:-------Ic&pcèfc-----------
Ag^cSGG€GA|GGAGpCt§^aA^----TjGA^lggTC-----------
----CGAiÃGgGCTC-----------
^pclC^G^AGG^pC^g^g'---------------
Iffyitg----ÍG'A@GG^TC-----------
__ SlS-------IGjgaG-EMTffi-----------
f SS-^-^^,jGTgc^^-------B^PHi^-----------
-------la-Él-----------
-----------
ATGCAAG CG CG AAGCCACA CC AGGAGCTATT
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID4 4 2 SEQID444 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
1151 1200
(759) ~l^pA|G------gj||cgCG----------------------------
(784)---Sl^gft------ÍG^^GTC---------------------------
(796)---SSStgaat—cS-----------------------------
(835)----!SMgjTAAA-----^plS-----------------------------
(874) GATIT^^TCTCTCT^ffiqSTATATATTAAATCTAAATTTTTAGTTATAT
(794)---«ra^C------GGOflIgTC---------------------------
(718)---gpyjãgC------^^ffi^TC---------------------------
(793)---^T^C------^GffigflTC---------------------------
(970)---]jgfc§BC-----mdmsGGc---------------------------
(887) --TffiSflAgG--- --------1—
(974) -T^gAgG---
(759) —T^pAgG---
(905) --Tc|§qBG--- -
(749) ----------------------
(1151) TCATT AATTCA
FIGURA 30B CONT. SEQID427
SEQID436
SEQID438
SEQID440
SEQID442
SEQID444
SEQID446
SEQID448
SEQID450
SEQID452
SEQID454
SEQID42 9
SEQID430
SEQID431
SEQID432
SEQID434
consenso
1250
1201_
(773)----figSÇfiGg----------------------------Giggl-----Ε
(798)-----jGSgfiCíT,CgjCTA----------------CATTACTC|SI|g--TgÍ
GCCA----------------CGATGTTT§||cp-----l|
ITCA---TCATTA---------------ggyg-____gj
TCA---TCATTA---------------M-----1
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SEQID427
SEQID436
SEQID438
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SEQID442
SEQID4 44
SEQID44 6
SEQID448
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SEQID454
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SEQID430
SEQID431
SEQID432
SEQID434
consenso
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consenso
(866) (916) (904) (923) (959) (894) (1061) (926) (835) (919) (1094) (994) (1081) (866) (1010) (837) (1351)
1400
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(885) (957) (945) (963) (999) (939) (1094) (976) (876) (960) (1128) (1013) (1100) (885) (1028) (870) (1401)
1401 __1450
^G^C^^Gg^AA^C^TT^CIp^---------!SGjE-TTgCAGAgAte
AlGAmS^TgCC^T G TTg^G C^^C ATG T^C T^ATC A§C Ag- -GC TTp^GATglGAAT TTCjC T^^CgGCÃG- -KjT gG^^^TASGT^I^GT^^C^G^CTCCAC^-T^^^C^T^T
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consenso
(926) (1005) (993) (1012) (1048) (984) (1138) (1026) (924) (1008) (1177) (1054) (1141) (926) (1069) (905) (1451)
1451
^lAgTgGCgCTGpCg---SCC---AGgTGG-:
MgCGGGC----A^ÉTACTG---
SCC^GGC----Zsk-------
1500
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FIGURA 30B CONT. 1501
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(969) (1045) (1036) (1062) (1098) (1024) (1184) (1076) (964) (1048) (1224) (1097) (1184) (969) (1112) (951) (1501)
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1550
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consenso
(992) (1077) (1068) (1091) (1127) (1056) (1234) (1114) (996) (1080) (1247) (1120) (1207) (992) (1135) (962) (1551)
1551_
GTQ3GTTC;-CClC^GGAA-AGTÍÇ,g^GTWjC A---ACTTCA'
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(1037) (1102) (1094) (1113) (1149) (1081) (1284) (1148) (1021) (1105) (1293) (1165) (1252) (1037) (1180) (965) (1601)
1601 IItIIc
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FIGURA 30B CONT. 1651
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(1084) (1147) (1144) (1153) (1195) (1126) (1331) (1193) (1069) (1150) (1338) (1212) (1299) (1084) (1227) (1009) (1651)
1700
Re^s^&T^s^SrTiame-KaTc—GATÜAGTÜ____
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(1117) (1184) (1183) (1156) (1242) (1168) (1378) (1234) (1112) (1187) (1381) (1245) (1332) (1117) (1271) (1059) (1701)
1701 __1750
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SEQID427 SEQID4 36 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID44 4 SEQID446 SEQID448 SEQID4 50 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
(1151) (1214) (1211) (1156) (1291) (1208) (1427) (1281) (1145) (1217) (1418) (1279) (1366) (1151) (1319) (1108) (1751)
_ _ 1800
STAffiMiGTTiT-HcBaiM—Ag-------------
A§1----CgGGTGj-------C|C|GCC^TGCC^GCACC^CAACCC
ATi-pCiC"*..... ............ ~ _ _ _ _ -
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CC C GTTCA TGAT G AC AAAT G G TCC
FIGURA 30B CONT. 1801 1850 SEQID427 (1183) --------------------------------------------------
SEQID436 (1251) TGT----!ATÉ!!—-GCCA—t|TCCA|GCAA-- TClfGCAAGGAGGCTT
SEQID438 (1260) CGC----gccfjgc--- G-AA|CCTGTCAÍtGT—GAT&CATGCTCTGCAC
SEQID44 0 (1156) ----------------------------_--------1T____________
SEQID442 (1341) TTGGAGGACT^GCAACCGTfÀAITGACTCTCAAGTGCATACCTTGACGT
SEQID444 (1255) TGT---CÍAGTTG-------|γί|αΤ0ΑΒαΑ---AAlfCACGGATGGAAC
SEQID44 6 (1474) CTGGCAGgCG^SCCCACCAC^AGgTGAG^GCTCAACCGCTTTGACTAGGA
SEQID448 (1330) CGTGCTCÍAC^G---GCCT|GT|GCCGHGC--TGI|GCAGGACGGCGG
SEQID450 (1194) CGC--§GC----------|GC|GCC-®----G---CATCCTCTGGAC
SEQID452 (1254) cgcgatg^c^cgctgggat|at|gacg^gc--tctggctagacggcag
SEQID454 (1463) GTAACGC^CGTGTCATGAAC^AAACATA®-____________________
SEQID429 (1324) gtgtaatttglfaacctgttactfagtlfetg-gatacttttccaaacct
SEQID430 (1411) gtgtaatttgt|aacctgttaclfagtlffitg-gatacttttccaaacct
SEQID431 (1183) _________________________________________________
SEQID432 (1367) aagtcgggtlfcatcatccgatggagttlfacagtttfttttcaaataaa
SEQID4 3 4 (1155) ttggca(^c(^cccacccg|agttgaa^cccgacc|ctctgcatagaa
consenso (íeoi) c ga c c gg g
1851 1900 SEQID427 (1183) --------------------------------------------------
SEQID436 (1290) ---------GTfc-CgTGATCjgGCAGGCGCA------GTTlfgSGGCTTTC
SEQID438 (1300) CC-------GTgCACCGGAGGiGGAGGATTCT----GGCAAGSCGGCGAC
SEQID440 (1156) --------------------------------------------------
SEQID442 (1391) CTCACTGA------------------------------------------
SEQID444 (1292) AAGC-----Algc-CjgTGAGTCTCGGGTGCAT-----TCTTTGGATTTAC
SEQID446 (1524) ATGGGGTAGGC^AGIgTAATGSGAACTAC---AACTTGAAlgGTTTTAT
SEQID448 (1375) CGGCAGCGCG(^C-CfGGGCCÍcCACGCGCACGCGCGGCTC^GGCTCTC
SEQID450 (1222) CC-------Gl|C-CCGG-----GAAGGTTCT----GGCCGÜSA—GAC
SEQID452 (1302) CCA------GCgC-CSCGATG-^TCACCCGCG------GTTC&SGTCTTC
SEQID454 (14 92) ------------------------------------------------
SEQID429 (1373) ATGATAAAAAC|TC^CCTAG|TCCCGTT—AAATGCCAAA@TTTCGGCT SEQID430 (14 60) ATGATAAAAAC^TC(^CTAG|TCCCGTT--AAATGCCAAAÍTTTCGGCT SEQID431 (1183) -----------------------------------------Γ________
SEQID432 (1417) ataaaaatgtgsaacatccattgctcaag—ctaaaccag1®ctcggtt SEQID434 (1205) atggggtaggc§aglftaatgíaaactacttcagcttgaac&ttttat consenso (1851) c τ a ca
1901 1950
SEQID427 (1183) --------------------------------------------------
SEQID436 (1324) gac--cg§cttggcaacgacgacgacgaagatcatctccagctcccaaag
SEQID438 (1339) GAC-CCGjgCTCCG----CTCGATCATGCCTCGCAGGCTCAGGCGTTCATG
SEQID44 0 (1156) --------------------------------------------------
SEQID442 (1399) --------------------------------------------------
SEQID444 (1331) ATG A-jlAATGGAAACGTCCAGTTGCAAGAGT---TTCAGCTGCTCAAA
SEQID446 (1571) AACTGAAAGTGTGTTGCTTTTAAAATCATAATAAGATATTTTGTGTAAGG
SEQID448 (1424) GACGCCGpCATGG---CGACGGCGCAGGAGCTC--CTCCAGCTCCCCAGG
SEQID450 (1252) GAT-CAlicCCCG----CTCG--------TCG ACGGACCCGCCACGCA—
SEQID452 (1339) GAG-CG|TTGGG---GGACCATGACAGCGAGC---TCCAGCTCCCAAAG
SEQID454 (1492) --------------------------------------------------
SEQID429 (1421) actataaítatg-ttatcgttatcattatcattgtttaacaccct-----
SEQID430 (1508) actataagtatg-ttatcgttatcattatcattgtttaacaccct-----
SEQID431 (1183) --------------------------------------------------
SEQID432 (14 65) agctcaggttttcttatacatttccaaacatattgtcaatttccttctgg
SEQID434 (1255) AACTGA--------------------------------------------
consenso (1901) c
FIGURA 30B CONT. 1951 2000
SEQID427 (1183) --------------------------------------------------
SEQID436 (1372) CCT------TCCTATGACAACTCC------CACTATGATCAGATGAACTG
SEQID438 (1384) CATCCTGGCAATGGCAGCAGCTCC—G----GCTATGGCCATCTGCACTG
SEQID4 4 0 (1156) —------------------------------------------------
SEQID4 4 2 (1399) --------------------------------------------------
SEQID4 44 (1375) GCACCCTATGCTACCGGCTGCTTTT------ATTCCAATCAATTCAGCTA
SEQID4 4 6 (1621) ATCAGGTGAGCCTAGTGGTAACGTTTAAATAGGAGCTGTGAAACTTGCTA SEQID44 8 (14 69) CCGCCGCCATCGTACGGCGGCTCCTCGTCCCACTACGACCTGATGCGCTG
SEQID450 (1287) GATTCCGGAGCTGGC-GCACCTCC—G----GATATGGTGA---------
SEQID452 (1381) CCT------TCCTACGACCATGCCTCG---CACTTCGACCGGATGCACTG
SEQID454 (1492) --------------------------------------------------
SEQID429 (1465) --------------------------------------------------
SEQID430 (1552) --------------------------------------------------
SEQID431 (1183) --------------------------------------------------
SEQID4 32 (1515) ATTCTGTTGGTATGACAACTTTGTTACTCTGTCAAACATGTCTACGACTA
SEQID4 34 (1261) --------------------------------------------------
consenso (1951)
2001 2050
SEQID427 (1183) --------------------------------------------------
SEQID436 (1410) A---------------------------------------------:----
SEQID438 (1428) A--------------------------------------------------
SEQID440 (1156) --------------------------------------------------
SEQID442 (1399) --------------------------------------------------
SEQID444 (1419) A---------------:----------------------------------
SEQID44 6 (1671) AAGACATCAACTCCTCTCGTCTTTCTTTTGTCCATTGATTTTCTTGGGTT SEQID4 48 (1519) ATGCTTCCTTCCTTGTGGATTGTGGTGGAGAACTGGAGATGGAGCGGGAG
SEQID450 (1321) --------------------------------------------------
SEQID4 52 (1422) A-------------------------------------------------
SEQID454 (1492) --------------------------------------------------
SEQID429 (1465) --------------------------------------------------
SEQID430 (1552) --------------------------------------------------
SEQID431 (1183) --------------------------------------------------
SEQID432 (1565) TTTTAAAACCATTTCAGAGATT----------------------------
SEQID434 (1261) --------------------------------------------------
consenso (2001)
2051 2100
SEQID427 (1183) --------------------------------------------------
SEQID436 (1411) --------------------------------------------------
SEQID438 (1429) --------------------------------------------------
SEQID44 0 (1156) --------------------------------------------------
SEQID442 (1399) --------------------------------------------------
SEQID444 (1420) --------------------------------------------------
SEQID44 6 (1721) AGGGAGAGTTGTGACAGTTAAGTATTATAAATCATCTTGTCAAATTATTT SEQID4 48 (1569) CGCCGCCGTGCCCCCGGTTGGCGCGTGGAAATCAGTCAGACGTGGCTTCT
SEQID450 (1321) --------------------------------------------------
SEQID452 (1423) --------------------------------------------------
SEQID454 (1492) --------------------------------------------------
SEQID429 (1465) --------------------------------------------------
SEQID430 (1552) --------------------------------------------------
SEQID431 (1183) --------------------------------------------------
SEQID432 (1587) --------------------------------------------------
SEQID434 (1261) --------------------------------------------------
consenso (2051)
FIGURA 30B CONT. SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID446 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID4 2 9 SEQID430 SEQID4 31 SEQID432 SEQID434 consenso
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID446 SEQID448 SEQID4 50 SEQID4 52 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID44 6 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
2101 2150
1183) --------------------------------------------------
1411) --------------------------------------------------
1429) --------------------------------------------------
1156) --------------------------------------------------
1399) --------------------------------------------------
1420) --------------------------------------------------
1771) ATACATTAGAATTTTCAGATATTGATGGTGTAGCAACTGAAAAATTGATC
1619) GTGGCGTCGTCTCTGCAACGCGGGAGCGGGATTTTGCTTGTGTTCTGAAC
1321) --------------------------------------------------
1423) --------------------------------------------------
1492) --------------------------------------------------
1465) --------------------------------------------------
1552) --------------------------------------------------
1183) --------------------------------------------------
1587) --------------------------------------------------
1261) --------------------------------------------------
2101)
' 2151 2200
1183) --------------------------------------------------
1411) --------------------------------------------------
1429) --------------------------------------------------
1156) --------------------------------------------------
1399) --------------------------------------------------
1420) --------------------------------------------------
1821) AAACGCATCATAATATACGTATGATAAGGTTATTTGCATCTGAACTTTTT
1669) GAACAGAAAAAAAAAA----------------------------------
1321) --------------------------------------------------
1423) --------------------------------------------------
1492) --------------------------------------------------
1465) --------------------------------------------------
1552) ----------------------------------------------'----
1183) --------------------------------------------------
1587) --------------------------------------------------
1261) --------------------------------------------------
2151)
2201 2250
1183) --------------------------------------------------
1411) --------------------------------------------------
1429) --------------------------------------------------
1156) --------------------------------------------------
1399) --------------------------------------------------
1420) --------------------------------------------------
1871) TTATATTCGCATTAGTCAGCATTTTGTGTTATACTAGATTTGGATCCGTG
1685) --------------------------------------------------
1321) --------------------------------------------------
1423) --------------------------------------------------
1492) --------------------------------------------------
1465) --------------------------------------------------
1552) --------------------------------------------------
1183) --------------------------------------------------
1587) --------------------------------------------------
1261) --------------------------------------------------
2201)
FIGURA 30B CONT. SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID4 4 6 SEQID4 4 8 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID446 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID42 9 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434
consenso
SEQID427 SEQID436 SEQID438 SEQID440 SEQID442 SEQID444 SEQID446 SEQID448 SEQID450 SEQID452 SEQID454 SEQID429 SEQID430 SEQID431 SEQID432 SEQID434 consenso
2251 2300
1183) --------------------------------------------------
1411) --------------------------------------------------
1429) --------------------------------------------------
1156) --------------------------------------------------
1399) --------------------------------------------------
1420) --------------------------------------------------
1921) CGTTGCAACAGGTTTTATTTGATATTACCATCCATTGATTTTTTTTTTTT
1685) --------------------------------------------------
1321) --------------------------------------------------
1423) --------------------------------------------------
1492) --------------------------------------------------
1465) --------------------------------------------------
1552) --------------------------------------------------
1183) --------------------------------------------------
1587) --------------------------------------------------
1261) --------------------------------------------------
2251)
2301 2350
1183) --------------------------------------------------
1411) --------------------------------------------------
1429) --------------------------------------------------
1156) --------------------------------------------------
1399) --------------------------------------------------
1420) --------------------------------------------------
1971) TTTGCAAACAAATAATTTGGTAATTCCATTAACCGCCACAGTCGTTTTCT
1685) --------------------------------------------------
1321) --------------------------------------------------
1423) --------------------------------------------------
1492) --------------------------------------------------
1465) --------------------------------------------------
1552) --------------------------------------------------
1183) --------------------------------------------------
1587) --------------------------------------------------
1261) --------------------------------------------------
2301)
1183) 1411) 1429) 1156) 1399) 1420) 2021) 1685) 1321) 1423) 1492) 1465) 1552) 1183) 1587) 1261) 2351)
2351 2372
GAGCAAAACCATGTTAAAATCT
FIGURA 30B CONT. T-rbcS-deltaGA nopalina de repetição LB pGOS2 (3' exon) SPL11 T_zeína RB Ti C58
GOS2 intron 1
pGOS2 pGOS2 (5' exon
T-nos
marcador selecionável
promotor constitutivo marcador avaliável - cassete tnos
promotor constitutivo
pOSubi
pBR322 (ori + bom)
SP/SMr
LB Ti C58
pOSubi - marcador selecionável -
cassete toes . . T-nr<; nopalina de repetição LB
marcador selecionável 1 u^s r
FIGURA 31A T-rbcS-deltaGA nopalina de repetição RB
T-zeína
RB Ti C58
pWSI18
T-nos
marcador selecionável
promotor constitutivo - marcador avaliável - cassete tnos
promotor constitutivo
SPL11
pBR322 (ori + bom)
SP/SMr
pOSubi - marcador selecionável - cassete toes
LB Ti C58
marcador selecionável T-ocs nopalina de repetição LB
FIGURA 31B SEQ ID NO: 427, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGACTGCAACATGGTATCTTCGTCCCAGTGGGATTGGGAGCATTTGATCATGTCCAATCCGTCA AGGACTGAAGATGACAGCAAACAGCTACCTACTGAGTGGGAAATTGAAAAAGGTGAAGGAATTGAA TCTATAGTTCCACATTTCTCAGGCCTTGAGAGAGTCAGTAGTGGCTCTGCCACCAGCTTCTGGCAC ACTGCTGTATCGAAAAGCTCACAGTCGACCTCTATCAACTCATCATCTCCCGAAGCCAAACGATGC AAGCTTGCATCAGAAAGTTCCCCTGGAGATTCTTGCAGCAACATAGACTTTGTCCAGGTGAAGGCT CCCACAGCTCTCGAGGTATCCGTTGCCTCAGCTGAATCAGATCTTTGTTTAAAACTAGGAAAGCGG ACATACTCTGAAGAATACTGGGGTAGAAACAATAATGAAATTTCAGCGGTTTCTATGAAGTTGTTA ACTCCATCTGTTGTCGCTGGGAAATCCAAATTGTGTGGTCAGAGCATGCCAGTCCCGCGTTGCCAA ATTGATGGCTGTGAACTGGATCTCTCATCTGCTAAGGGTTATCATCGTAAGCACAAAGTCTGCGAA AAGCATTCAAAGTGCCCAAAAGTTAGCGTGAGTGGCCTGGAACGTCGGTTCTGCCAACAGTGTAGC AGGTTCCATGCTGTCTCTGAATTTGATGAGAAGAAACGAAGCTGCCGAAAACGTCTTTCTCATCAT AATGCGAGGCGTCGTAAGCCACAAGGAGTATTTTCAATGAATCCCGAGAGGGTGTATGATCGAAGA CAGCATACAAATATGTTGTGGAATGGGGTG.TCCCTTAACGCGAGATCTGAAGAAATGTATGAATGG GGTAA TAACACTTATGATACAAAGCCTAGACAAACGGAAAAAAGCTTTACTCTGAGCTTCCAGAGA GGTAATGGCTCTGAGGACCAGCTGGTTGCTAGTAGCAGCCGTATGTTCTCTACATCTCAAACCTCA GGTGGGTTCCCAGCAGGAAAGTCCAAGTTTCAACTTCATGGCGAAGATGTGGGAGAATACTCAGGA GTCCTCCATGAATCTCAAGATATCCACCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAACCTCTTCGGATCCCCTG GCCCAACCACATGTGCAGCCATTTTCTCTACTCTGTTCATATGATGTTGTACCAAAATAG
SEQ ID NO: 428, proteína - Arabidopsis thaliana
MDCNMVSSSQWDWEHLIMSNPSRTEDDSKQLPTEWEIEKGEGIESIVPHFSGLERVS SGS ATSFWH TAVSKSSQSTSINSSSPEAKRCKLASESSPGDSCSNIDFVQVKAPTALEVSVASAESDLCLKLGKR TYSEEYWGRNNNEISAVSMKLLTPSWAGKSKLCGQSMPVPRCQIDGCELDLSSAKGYHRKHKVCE KHSKCPKVSVSGLERRFCQQCSRFHAVSEFDEKKRSCRKRLSHHNARRRKPQGVFSMNPERVYDRR QHTNMLWNGVSLNARSEEMYEWGNNTYDTKPRQTEKSFTLS FQRGNGSE DQLVASS SRMFSTSQTS GGFPAGKSKFQLHGEDVGEYSGVLHESQDIHRALSLLSTSSDPLAQPHVQPFSLLCSYDWPK
SEQ ID NO: 429, DNA - Arabidopsis thaliana
CTTAGTCAATAGCATCTTCTCCGATCATCGACGTCCGGAGATTTCTTCGGCCCTCTCATACTTGAG TTGTTGTAGGATTTGTTGCTCTGGCTCTGGTGGTAGGTCTATGAAATCAACCCATATCGTGAATGG ACTGC AACATGGTATCTTCGTCCCAGTGGGATTGGGAGCATTTGATCATGTCCAATCCGTCAAGGA CTGAAGATGACAGCAAACAGCTACCTACTGAGTGGGAAATTGAAAAAGGTGAAGGAATTGAATCTA TAGTTCCACATTTCTCAGGCCTTGAGAGAGTCAGTAGTGGCTCTGCCACCAGCTTCTGGCACACTG CTGTATCGAAAAGCTCACAGTCGACCTCTATCAACTCATCATCTCCCGAAGCCAAACGATGCAAGC TTGCATCAGAAAGTTCCCCTGGAGATTCTTGCAGCAACATAGACTTTGTCCAGGTGAAGGCTCCCA CAGCTCTCGAGGTATCCGTTGCCTCAGCTGAATCAGATCTTTGTTTAAAACTAGGAAAGCGGACAT ACTCTGAAGAATACTGGGGTAGAAACAATAATGAAATTTCAGCGGTTTCTATGAAGTTGTTAACTC CATCTGTTGTCGCTGGGAAATCCAAATTGTGTGGTCAGAGCATGCCAGTCCCGCGTTGCCAAATTG ATGGCTGTGAACTGGATCTCTCATCTGCTAAGGGTTATCATCGTAAGCACAAAGTCTGCGAAAAGC ATTCAAAGTGCCCAAAAGTTAGCGTGAGTGGCCTGGAACGTCGGTTCTGCCAACAGTGTAGCAGGT TCCATGCTGTCTCTGAATTTGATGAGAAGAAACGAAGCTGCCGAAAACGTCTTTCTCATCATAATG CGAGGCGTCGTAAGCCACAAGGAGTATTTTCAATGAATCCCGAGAGGGTGTATGATCGAAGACAGC ATACAAATATGTTGTGGAATGGGGTGTCCCTTAACGCGAGATCTGAAGAAATGTATGAATGGGGTA ATAACACTTATGATACAAAGCCTAGACAAACGGAAAAAAGCTTTACTCTGAGCTTCCAGAGAGGTA ATGGCTCTGAGGACCAGCTGGTTGCTAGTAGCAGCCGTATGTTCTCTACATCTCAAACCTCAGGTG GGTTCCCAGCAGGAAAGTCCAAGTTTCAACTTCATGGCGAAGATGTGGGAGAATACTCAGGAGTCC TCCATGAATCTCAAGATATCCACCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAACCTCTTCGGATCCCCTGGCCC
FIGURA 32 AACCACATGTGCAGCCATTTTCTCTACTCTGTTCATATGATGTTGTACCAAAATAGATGAGTAAGT AATGTGTAATTTGTAAACCTGTTACTCAGTTGGTGGATACTTTTCCAAACCTATGATAAAAACCTC GTCCTAGATCCCGTTAAATGCCAAACTTTCGGCTACTATAACTATGTTATCGTTATCATTATCATT GTTTAACACCCT
SEQ ID NO: 430, DNA - Arabidopsis thaliana
CTGGGTGAAACATAGAAAAGTTTCTCTTGCTCAAGTTAATGATAAAAGGGTGAGAGCAATAAACGC
TGATAAGCCTTGTCTGGTCCTTGGAATTTTGAATTTTCTTTTTCTATCTTACTTATAGTATTGGTA
GTTGAGGGTGTCGTCGATAAGTTGTTGTAGGATTTGTTGCTCTGGCTCTGGTGGTAGGTCTATGAA
ATCAACCCATATCGTGAATGGACTGCAACATGGTATCTTCGTCCCAGTGGGATTGGGAGCATTTGA
TCATGTCCAATCCGTCAAGGACTGAAGATGACAGCAAACAGCTACCTACTGAGTGGGAAATTGAAA
AAGGTGAAGGAATTGAATCTATAGTTCCACATTTCTCAGGCCTTGAGAGAGTCAGTAGTGGCTCTG
CCACCAGCTTCTGGCACACTGCTGTATCGAAAAGCTCACAGTCGACCTCTATCAACTCATCATCTC
CCGAAGCCAAACGATGCAAGCTTGCATCAGAAAGTTCCCCTGGAGATTCTTGCAGCAACATAGACT
TTGTCCAGGTGAAGGCTCCCACAGCTCTCGAGGTATCCGTTGCCTCAGCTGAATCAGATCTTTGTT
TAAAACTAGGAAAGCGGACATACTCTGAAGAATACTGGGGTAGAAACAATAATGAAATTTCAGCGG
TTTCTATGAAGTTGTTAACTCCATCTGTTGTCGCTGGGAAATCCAAATTGTGTGGTCAGAGCATGC
CAGTCCCGCGTTGCCAAATTGATGGCTGTGAACTGGATCTCTCATCTGCTAAGGGTTATCATCGTA
AGCACAAAGTCTGCGAAAAGCATTCAAAGTGCCCAAAAGTTAGCGTGAGTGGCCTGGAACGTCGGT
TCTGCCAACAGTGTAGCAGGTTCCATGCTGTCTCTGAATTTGATGAGAAGAAACGAAGCTGCCGAA
AACGTCTTTCTCATCATAATGCGAGGCGTCGTAAGCCACAAGGAGTATTTTCAATGAATCCCGAGA
GGGTGTATGATCGAAGACAGCATACAAATATGTTGTGGAATGGGGTGTCCCTTAACGCGAGATCTG
AAGAAATGTATGAATGGGGTAATAACACTTATGATACAAAGCCTAGACAAACGGAAAAAAGCTTTA
CTCTGAGCTTCCAGAGAGGTAATGGCTCTGAGGACCAGCTGGTTGCTAGTAGCAGCCGTATGTTCT
CTACATCTCAAACCTCAGGTGGGTTCCCAGCAGGAAAGTCCAAGTTTCAACTTCATGGCGAAGATG
TGGGAGAATACTCAGGAGTCCTCCATGAATCTCAAGATATCCACCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAA
CCTCTTCGGATCCCCTGGCCCAACCACATGTGCAGCCATTTTCTCTACTCTGTTCATATGATGTTG
TACCAAAATAGATGAGTAAGTAATGTGTAATTTGTAAACCTGTTACTCAGTTGGTGGATACTTTTC
CAAACCTATGATAAAAACCTCGTCCTAGATCCCGTTAAATGCCAAACTTTCGGCTACTATAACTAT
GTTATCGTTATCATTATCATTGTTTAACACCCT
SEQ ID NO: 431, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGACTGCAACATGGTATCTTCGTCCCAGTGGGATTGGGAGCATTTGATCATGTCCAATCCGTCA AGGACTGAÁGATGACAGCAAACAGCTACCTACTGAGTGGGAAATTGAAAAAGGTGAAGGAATTGAA TCTATAGTTCCACATTTCTCAGGCCTTGAGAGAGTCAGTAGTGGCTCTGCCACCAGCTTCTGGCAC ACTGCTGTATCGAAAAGCTCACAGTCGACCTCTATCAACTCATCATCTCCCGAAGCCAAACGATGC AAGCTTGCATCAGAAAGTTCCCCTGGAGATTCTTGCAGCAACATAGACTTTGTCCAGGTGAAGGCT CCCACAGCTCTCGAGGTATCCGTTGCCTCAGCTGAATCAGATCTTTGTTTAAAACTAGGAAAGCGG ACATACTCTGAAGAATACTGGGGTAGAAACAATAATGAAATTTCAGCGGTTTCTATGAAGTTGTTA ACTCCATCTGTTGTCGCTGGGAAATCCAAATTGTGTGGTCAGAGCATGCCAGTCCCGCGTTGCCAA ATTGATGGCTGTGAACTGGATCTCTCATCTGCTAAGGGTTATCATCGTAAGCACAAAGTCTGCGAA AAGCATTCAAAGTGCCCAAAAGTTAGCGTGAGTGGCCTGGAACGTCGGTTCTGCCAACAGTGTAGC AGGTTCCATGCTGTCTCTGAATTTGATGAGAAGAAACGAAGCTGCCGAAAACGTCTTTCTCATCAT AATGCGAGGCGTCGTAAGCCACAAGGAGTATTTTCAATGAATCCCGAGAGGGTGTATGATCGAAGA CAGCATACAAATATGTTGTGGAATGGGGTGTCCCTTAACGCGAGATCTGAAGAAATGTATGAATGG GGTAATAACACTTATGATACAAAGCCTAGACAAACGGAAAAAAGCTTTACTCTGAGCTTCCAGAGA GGTAATGGCTCTGAGGACCAGCTGGTTGCTAGTAGCAGCCGTATGTTCTCTACATCTCAAACCTCA GGTGGGTTCCCAGCAGGAAAGTCCAAGTTTCAACTTCATGGCGAAGATGTGGGAGAATACTCAGGA GTCCTCCATGAATCTCAAGATATCCACCGCGCCCTATCGCTGCTATCGACCTCTTCGGATCCCCTG GCCCAACCACATGTGCAGCCATTTTCTCTACTCTGTTCATATGATGTTGTACCAAAATAG
FIGURA 32 CONT. SEQ ID NO: 432, DNA - Arabidopsis thaliana
GCCCTTTTTGTTGGTCTGGGTGAAACATAGCAAGGTTTCTCTTGCTGAGGTTATTGATAAACGGGT GAGTTAAATAAAAACGTTGATCAGCAGTGTGTGGTGCTTGGAATTCATAAGGTCTATGAAATCAAC CCACATCTTGAATGGACTGCAACATGGTATCTTCGTTCCCGTGGGACTGGGAGAATTTGATCATGT CCAATCAGTCGAAGACTGAAAATGAAAAAAAACAGCAATCTACTGAGTGGGAATTTGAAAAAGGTG AAGGAATTGAATCTATAGTTCCAGATTTCTTAGGCTTTGAGAAAGTCAGTAGTGGCTCTGCTACTA GTTTCTGGCACACTGCCGTATCAAAAAGCTCGCAGTCGACCTCTATCAACTCATCATCTCCCGAGG ACAAACGATGCAATCTTGCATCACAAAGTTCCCCTGGAGATTCTTCCAGCAACATAGATTTTCTCC AGGTGAAACCATCCACAGCTCTCGAGGTACCTATTGCCTCAGCTGAATCAGATCTTTGTTTGAAAC TAGGAAAGCGGACATACTCTGAAGAATTTTGGGGTAGGAACAATAATGACCTTTCAGCGGTTTCTA TGAATTTGTTGACTCCATCTGTTGTTGCTCGGAAGAAAACCAAATCGTGTGGTCAGAGCATGCAAG TTCCGCGTTGCCAAATTGATGGCTGTGAGCTGGATCTCTCATCTTCTAAGGATTATCATCGCAAGC ATAGAGTCTGCGAAACGCATTCAAAGTGCCCAAAAGTTGTTGTGAGTGGCCTGGAACGTCGTTTCT GCCAACAGTGTAGCAGGTTCCATGCTGTCTCAGAATTTGATGAAAAGAAACGAAGCTGCCGCAAAC GTCTTTCTCATCATAATGCAAGGCGTCGCAAGCCACAAGGAGTATTTCCACTGAATTCAGAGAGGG TGTTCGATCGAAGACAGCATACAAGTATGTTGTGGAATGGGTTGTCCCTTAACACGAGATCTGAAG AAAAGTATACATGGGGTACCACTTATGAGACAAAGCCTACACAGATGGAAAGCGGCTTTACTCTGA GCTTCCAGAGAGGTAATGGCTCTGAGGACCAACTGTTTACTGGTAGCACCCTCTCTTTCTCTGCGT TTCAAACATCTGGTGGGTTCTCAGCAGGGAAATCCAACATTCAACTTCCAGACAAAGGTGTGGGAG AATGCTCAGGAGGCCTCCATGAATCTCATGATTTCTACAGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAACTACTT CGGATTCACAAGGGATCAAACACACTCCCGTGGCCGAACCACCGCCAATATTTGGCACTTTCCCTA GTCATTTCATCTGAAAGAGTTAAAAAATGCGAAGTCACTCCATAAAAAGTCGGGTTGCATCATCCG ATGGAGTTTGACAGTTTGTTTTCAAATAAAATAAAAATGTGCAACATCCATTGCTCAAGCTAAACC AGTCACTCGGTTAGCTCAGCTTTTCTTATACATTTCCAAACATATTGTCAATTTCCTTCTGGATTC TGTTGGTATGACAACTTTGTTACTCTGTCAAACATGTCTACGACTATTTTAAAACCATTTCAGAGA TT
SEQ ID NO: 433, proteína - Arabidopsis thaliana
MDCNMVSSFPWDWENLIMSNQSKTENEKKQQSTEWEFEKGEGIESIVPDFLGFEKVSSGSATSFWH TAVSKSSQSTSINSSSPEDKRCNLASQSSPGDSSSNIDFLQVKPSTALEVPIASAESDLCLKLGKR TYSEEFWGRNNNDLSAVSMNLLTPSWARKKTKSCGQSMQVPRCQIDGCELDLSSSKDYHRKHRVC ETHSKCPKVWSGLERRFCQQCSRFHAVSEFDEKKRSCRKRLSHHNARRRKPQGVFPLNSERVFDR RQHTSMLWNGLSLNTRSEEKYTWGTTYETKPTQMESGFTLSFQRGNGSEDQLFTGSTLSFSAFQTS GGFSAGKSNIQLPDKGVGECSGGLHESHDFYSALSLLSTTSDSQGIKHTPVAEPPPIFGTFPSHFI
SEQ ID NO: 434, DNA - Arabidopsis thaliana
ATGGAGTGTAATGCAAAGCCACCGTTTCAATGGGAATTGGAAAACTTGATATCTTTTGGCACTTCT ACAGCTGAAGTTCCTAGAAAGCTAAAACCAATGGAGTGGGAAATTGATGGATTTGATTGCACCTCT CTGTATTCTTCAAGCTTTGCCTATGCTGGTAGTTCAGGTTCTGATATAGCTCATGCTTTCTCTAAA AGCTCAAAGTCAACTTCCATTAGCTCTTCATCAGCTGAAGTAAGAACACACAATTTTACATCCGAA ACTGGTGAAAGTCTTCCTGGAGAATTTGCAAAGGGGATTGATACTTCTCCAAGTCTTGAACTTTCT TTTGGCTCTGGTGATCCGGTTCTCGGTTTAAAGCTTGGTAAACGAACGTACTTTGAAGACTTTTGG GAAGTGGAGAATGCTAAAGGTTTGGGACTTCCAGTGACTCTGGCTTCATCTTCTGTTTCTCCCGTG AAGAAATCGAAATCCATTCCTCAGAGGTTACAAACTCCTCACTGTCAAGTTGAAGGCTGTAATCTT GATCTTTCATCAGCTAAAGACTATCATCGGAAACATAGGATTTGTGAAAATCATTCAAAGTTTCCT AAAGTCGTTGTGAGTGGCGTAGAGCGTCGGTTCTGCCAACAATGTAGCAGGTTCCACTGTCTCTCT GAGTTTGATGAGAAGAAACGTAGCTGTCGCCGACGTCTCTCAGATCACAATGCAAGACGTCGCAAG CCAAATCCTGGAAGGACATATGATGGGAAACCACAGGTGGATTTTGTATGGAACAGATTTGCACTT
FIGURA 32 CONT. ATCCATCCAAGAAGTGAGGAAAAGTTTATATGGCCAAGTTCGAAGCACGTACCATCAAGAGTGTTA ATGCCGCAACCTGCAAAGACTGAGATTTCCGATACCGAGCACAATAGATTTGGATTGTTGGACCCC AAAACCAAAACCGCAAGAGCCGAGTTATTCAGTAAAGAAAAGGTCACAATCTCTTCACACATGGGT GCTTCTCAAGATCTTGATGGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAAATTCAACAACATGGGTTTCTTCCTCT GACCAACCAAGGCGTTTTACCCTTGATCACCATCCCTCAAGCAACCTCCAACCCGTAGCTCACCGG TCTGCGGCTCAACTCAATTCAGTTTCCGGCTATTGGCAGCCGGACCCACCCGCAGTTGAAGGCCCG ACCGCTCTGCATAGAAATGGGGTAGGCCAGTTTAATGAAAACTACTTCAGCTTGAACCAGTTTTAT
AACTGA
SEQ ID NO: 435, proteína - Axabidopsis thaliana
MECNAKPPFQWELENLISFGTSTAEVPRKLKPMEWEIDGFDCTSLYSSSFAYAGSSGSDIAHAFSK SSKSTSISSSSAEVRTHNFTSETGESLPGEFAKGIDTSPSLELSFGSGDPVLGLKLGKRTYFEDFW EVENAKGLGLPVTLASSSVSPVKKSKSIPQRLQTPHCQVEGCNLDLSSAKDYHRKHRICENHSKFP KVWSGVERRFCQQCSRFHCLSEFDEKKRSCRRRLSDHNARRRKPNPGRTYDGKPQVDFVWNRFAL IHPRSEEKFIWPSSKHVPSRVLMPQPAKTEISDTEHNRFGLLDPKTKTARAELFSKEKVTISSHMG ASQDLDGALSLLSNSTTWVSSSDQPRRFTLDHHPSSNLQPVAHRSAAQLNSVSGYWQPDPPAVEGP TALHRNGVGQFNENYFSLNQFYN
SEQ ID NO: 436, DNA - Oryza sativa
ATGGGTTCTTTTGGGATGGACTGGAATCAGAAGAGCTCGGTGTTGTGGGATTGGGAGAATATGCCG
CCGATAGGAAATAGCGCGAACGAGAATCCCAAGAATGTGATGCTGGCTGAATCAAAACTTGCAGGT
GTTGGGGTTGACATAGGCCATGAATCAGGCCATTCTTCTGGTGGTACTTTCTCTTCTAGCTCAGAG
ATTGGGTATGGTTCATCCAAGAGTTCCATATCCGCGTCGATCGATTCTCCGTCCAAAGTGGGGAAC
ACCATAGAGCTCAATTTTGCATCTGCGGAAGAGCATGATAAGAACATGGACAAGGGTAAGAGTAAA
GTTGATGACACCGGAACTTCTCGATCACCGGTGGTAGCAGCCAATCGTGTAGAGCCCTTGATTGGC
CTGAAGCTTGGCAAGAGAACCTATTTTGAAGATGTCTGTGGAGGGCAGAATGTCAAGAGTTCTCCA
TCTGGTGTGAGTGTGGCTACCCCATCTCCTGGTCTGGCCAAGAAGGTGAAGGTGGCTCAGCAGAAC
ACTCAGAACCCACACTGTCAAGTTGAAGGCTGCAATGTTGATCTCTCTTCTGCTAAACCTTACCAT
CGAAAGCACCGAGTCTGTGAACCTCACAGCAAGACTCTTAAAGTCATCGTTGCGGGTCTTGAGCGA
CGCTTTTGCCAACAGTGTAGTCGGTTTCACGGTTTAGCTGAGTTCGACCAGAAAAAACGAAGCTGT
CGCAGGCGCCTCCATGATCACAATGCCCGCAGACGGAAGCCACAACCAGAAGCAATTTCCTTAAGT
TCGTCGAGGCTCTCTACATTACTCTATGGTGATGCAAGGCAACAGGCAAGTTTTCTATTTGGTCAA
GCTCCTTATGGTCÂGATGGGAAGCTGTGCAAGTTCTTGGGATAACCCAGTACCAGGAGGCTTCAAA
TTTACAGCAACAAAAGCTCCTTGGTCAAGGCCAACAATAGCTGCCGGTGTTGATGGGACGCATGTA
TCTAATCAGCAGGCATCGGGCAATGTACTGCCACATGGAGCACATCATAGTTTTGATGGTCTCATG
GCGTTCAAAGAAACCAACGCGAAGGTCCTTAACCAAGGCATGGAAGCTTCTGCTGTCGCTTCCGGC
TCCGCTAGAGGCCCAGACTTTGAGCATGCTCTCTCTCTTCTGTCAATCGATTCAGTGGGTGCTGCA
AACCTTCAGCCAGGTTCTCAGATTCACCCTGGTGTCACCGCCATTGCCGGCACCTCCAACCCTGTC
ATGATGCCATCTCCAGCAATCTGGCAAGGAGGCTTGTCCCTTGATCAGCAGGCGCAGTTTCAGGCT
TTCGACCGCCTTGGCAACGACGACGACGAAGATCATCTCCAGCTCCCAAAGCCTTCCTATGACAAC
TCCCACTATGATCAGATGAACTGA
SEQ ID NO: 437, proteína - Oryza sativa
MGSFGMDWNQKSSVLWDWENMPPIGNSANENPKNVMLAESKLAGVGVDIGHESGHSSGGTFSSSSE IGYGSSKSSISASIDSPSKVGNTIELNFASAEEHDKNMDKGKSKVDDTGTSRSPWAANRVEPLIG LKLGKRTYFEDVCGGQNVKSSPSGVSVATPSPGLAKKVKVAQQNTQNPHCQVEGCNVDLSSAKPYH RKHRVCEPHSKTLKVIVAGLERRFCQQCSRFHGLAEFDQKKRSCRRRLHDHNARRRKPQPEAISLS
FIGURA 32 CONT. SSRLSTLLYGDARQQASFLFGQAPYGQMGSCASSWDNPVPGGFKFTATKAPWSRPTIAAGVDGTHV SNQQASGNVLPHGAHHSFDGLMAFKETNAKVLNQGMEASAVASGSARGPDFEHALSLLSIDSVGAA NLQPGSQIHPGVTAIAGTSNPVMMPSPAIWQGGLSLDQQAQFQAFDRLGNDDDEDHLQLPKPSYDN SHYDQMN
SEQ ID NO: 438, DNA - Oryza sativa
ATGGCTTCTTTTGGGATGAACTGGAATCAGAAGAGCCCTGTGTTTTGGGACTGGGAAAATCCAGCG CCTTTCGGTCCGAATACAATGGAAAATCCCAAGAGCATACCTCACCCTGAACCAAGAGGTGTAGTT GTCGCGGCCGCAAATCATGGATCCACCAATTCATCCGGTGGCACGTTCACTTCTAGCTCGGAGCTA GCCAATGGTTCATCGAAGAGCTCCTTGTCAGCGTCGTTCGATTCCTCATCCAAGCTGGGGAACAGC TTAGAGTTCAGGTTTGCTTCTGTCAAAGGGCATGGCAAGAACATGTGCAAGGATGGCGAGGCCGGT AGAGTTGAAGACTCGGGCACTTCTCCAGCTGTGGCAGTTAGCCATGGTGAGCCGGTAATAGGACTC AAGTTAGGGAAGAGAACTTACTTTGAAAATGTTTGTGGAGGGCAGAATGTCAAGAGCTCCTCTGCA GCTTCAGGTGTGACTTGTCCATCTACTGTGGTCAAGAAGATGAAGGTGTCTCAGCAGAGCACACAA AGCTCATACTGCCAAGTTGAAGGCTGCAAAGTCGATCTGTCCTCCGCAAGAGAATACCATCGCAAG CACAAAGTTTGTGAAGCTCATTCTAAGGCACCAAAGGTTATTGTTTCTGGTCTGGAGCGCCGTTTT TGCCAACAGTGTAGTCGGTTTCATGGTTTAGCTGAATTTGACCAGAAAAAGAAAAGTTGCCGCAGG CGTCTATCTGATCATAATGCACGAAGAAGGAAACCGCAACAAGAGGCAATTTCATTTGGTTCATCA AGGCTCGCCACGATGTTTTACGATGCAAGGCAGCAGACAGATATTTACTTTGGCCAATCTCCTTTT GGCCAAGTGAGAAGCAATGCAATTTCTTCATGTGACAACCTGGGAGGCTTCAAATTTACAGAAGCA AAACTCCCCTGGATGAAGCCAATGAAAACTATAGGCCTTGAGGATCTGAATTTCTCTACCCTGCAG ATGCCAGGCAATGTTGTGTCGCATACGGTGCATCATCATGATTTTGATGGGCTCATACCATTCAAG GGAAACACCCCGAAGGTCCTCAACCAAGGTGTGGATCCAGCCTGTGCCGTCGTGTCCTCCAACTCG AATGGAGCCCCGGATCTTCGGCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAAGCGATTCCTGGGGCCCGGCCGAC GTTCAGGCCGGCTCCCAGGTGCATCCCGGTGGAGTGATGCCGCCCCTCGCCGTTGCCGCCGCCACC GTCACCGCCCCGACGAACCCTGTCAGTGTGATGCATGCTCTGCACCCGTCCACCGGAGGAGGAGGA TTCTGGCAAGACGGCGACGACCCGCCTCCGCTCGATCATGCCTCGCAGGCTCAGGCGTTCATGCAT CCTGGCAATGGCAGCAGCTCCGGCTATGGCCATCTGCACTGA
SEQ ID NO: 439, proteína - Oryza sativa
MASFGMNWNQKSPVFWDWENPAPFGPNTMENPKSIPHPEPRGVWAAANHGSTNSSGGTFTSSSEL ANGSSKSSLSASFDSSSKLGNSLEFRFASVKGHGKNMCKDGEAGRVEDSGTSPAVAVSHGEPVIGL KLGKRTYFENVCGGQNVKSSSAASGVTCPSTWKKMKVSQQSTQSSYCQVEGCKVDLSSAREYHRK HKVCEAHSKAPKVIVSGLERRFCQQCSRFHGLAEFDQKKKSCRRRLSDHNARRRKPQQEAISFGSS RLATMFYDARQQTDIYFGQSPFGQVRSNAISSCDNLGGFKFTEAKLPWMKPMKTIGLEDLNFSTLQ MPGNWSHTVHHHDFDGLIPFKGNTPKVLNQGVDPACAWSSNSNGAPDLRRALSLLSSDSWGPAD VQAGSQVHPGGVMPPLAVAAATVTAPTNPVSVMHALHPSTGGGGFWQDGDDPPPLDHASQAQAFMH PGNGSSSGYGHLH
SEQ ID NO: 440, DNA - Populus spp.
ATGAGTTCTGTCTCACTGATGGAGTGGAATGGCAAACCCCACTTGCAGTGGGACTGGGAAAACCTG ATAATGTTCAATGCAATAACAAATGAAAATTCAAAGCAGTTAAGCCTAACAGATTTGGAAACTGAT GGAGAAAAAGGAAATGATTCTGGGTTTTTCTATTCATCTGGGAGTGTAAGCAGAAGCCGTGGATCT ATCTCTGACTTAGAACTTGCTTCTTTCTCAAAGAGCTCGAAGTCAGCTTCCACCAATTCTTCATCA GCTGGGGAAGTTAAAACATCCAAATTCACTTTGGGGGCCTCTAAAACAAATCCATCAGATTACAAT AAGGAAGAACTTGTGAAGGCTAAGGCAACTGATACTTCTCCCACGCTTGAAGCTTCAGTTGGTTCA GGTGACCAGCTGCTTGGTTTGAAGCTTGGTAAAAGAACTTACTTTGAAGATGCTTGTGCTGGGAGC AATGCTCAGTCTTCATCAATATCTACGATTCCTGTGCCTTCTTTTACTCCAGCAAAGAAATTGAAG
FIGURA 32 CONT. TCCAGTAATCATAGTCAGCGTGCTCCACGCTGTCAAGTAGAAGGCTGTAACCTTGACCTCTCATCA GCTAAAGATTACCATCGCAAACATAGAGTTTGTGAAAGCCATTCAAAGTGCCCAAAGGTCATTGTA GCTGGTTTGGAACGCAGGTTTTGCCAGCAGTGTAGCAGGTTCCATGGTCTGTCAGAGTTTGATGAA AAGAAGAAAAGCTGCCGCAGGCGACTTTCTGATCACAATGCAAGACGCCGCAAACAGCCAGGATCT GTCCATTTGAATCCTTCAAGACTTTCTTCATCATTATATGATGAGAGGCAACAGATGAGTCATGTT TGGGACAAGGCGCCACTTGTTCATTCCAGGCCCAATGCAAATTTGACATGGGAAAGCACATCCACC TCCAAGTTCACAATAACAAAAGAGTATATAGCAAAGCCTGCAGAAATAGGTGGTAGTGATAGGAGG CTCCACTTGCCTGGCATTGATCTGACAAATAGCATTGCTATTCAGCACCATCATAAGTCTAATGGC TTCTTACCATCCAAGGCCAAGGGCACTGCAGGTGAGGTTCTCAACCAAGGTTTGTTTTGTCTTCAT TTTGAGAAACAAGCCTCACAATTATTGCATTGA
SEQ ID NO: 441, proteína - Populus spp.
MSSVSLMEWNGKPHLQWDWENLIMFNAITNENSKQLSLTDLETDGEKGNDSGFFYSSGSVSRSRGS ISDLELASFSKSSKSASTNSSSAGEVKTSKFTLGASKTNPSDYNKEELVKAKATDTSPTLEASVGS GDQLLGLKLGKRTYFEDACAGSNAQSSSISTIPVPSFTPAKKLKSSNHSQRAPRCQVEGCNLDLSS AKDYHRKHRVCESHSKCPKVIVAGLERRFCQQCSRFHGLSEFDEKKKSCRRRLSDHNARRRKQPGS VHLNPSRLSSSLYDERQQMSHVWDKAPLVHSRPNANLTWESTSTSKFTITKEYIAKPAEIGGSDRR LHLPGIDLTNSIAIQHHHKSNGFLPSKAKGTAGEVLNQGLFCLHFEKQASQLLH
SEQ ID NO: 442, DNA - Populus spp.
ATGGAGTGGAATGGCAAACCCCACTTACAGTGGGACTGGGAGAGCCTGATAATGTTCAATGGAATA
ACAACTGAAAATTCTAAGCAGTTAAGCCCAACAGATTTGGAAACTGATGGAGAAAAAGGAACCGAC
TCTGGGTTTTTCTATTCATCTGGGAGTGCAAGCAGAAGCGGTGGTTCTAGCTCTGATTTGGAACTT
GCTTCTTTCTCAAAGTGCTCGAAGTCAGCTTCCATCAATTCTTCATCAGCTGGGGAAGTTAAAACA
TCCAAATTCACTTTGGAGGCCTCTAAAGCAAATCCATCTGATTACAATAAGAAAGAAATTGGAAAG
GCTAAGACAGCTAGTATGTCTTCCACAATTGAGGCTGCAGGTGGTTCAGGTGACCAGCTGCTTGGT
TTGAAGCTTGGTAAACGAATATACTTTGAAGATGCTTGTGCTGGCAACAATGTTCAGTCGTCATCA
TTTTCTACAGTTCCTGTGCCCTCTTTTACTTCAGCAAAGAAATTGAAGTCCACTATTCAGAGTCAG
CGTGCTCCATGCTGTCAAGTGGAAGGCTGTAACCTTGACCTCTCATCAGCTAAAGATTATCATCGC
AAACATAGAGTTTGTGAAAGCCATTCAAAGTGCCAGAAGGTCATTGTAGCTGGTTTGGAACGCAGG
TTTTGCCAGCAGTGTAGCAGTAAGATTATTCCTAGCTTTTATGATTGCATTGACAATTTGGGTTTT
GGATGTCAAAGGTTCCATGGCCTGTCAGAGTTCGATGAAAAGAAGAAAAGCTGTCGCAGGCGACTT
TCTGATCACAATGCAAGACGCCGCAAACAACCAGGATCGGTCCÁTTTAAATTCAAGAGTGTCTTCA
TCATTATATGATGAAAGGCAACAGATGAGTCTTGCTTGGGACAGGGCACCACTTGTTCATGCCAGG
CCTAATGCAAATTTGACGTGGGAAGGCACATACATCTCCAAGTTCACAATAACAAAAGATTATATA
GCAAAGCCTGCAGAAATAGGTGGTAATGATGGGCAGTTTCACTTGCCTGGCTTTGATCTGACAAAT
GGCATTGATATTCAGCACCATCATAAGTCTAATAGCTCCTTACCATCTAAAGGTAAGGGCACTGCA
GCTGAGATTCTCAACCAAGGTTTGGAAGAATACATCATTCCTTCCAAAGCGGAAGCAGCACCAGAA
TCTCATCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAAACAATTCATGGGGTTCACGTGAGCCGCAATCTATTTCA
TTTGAACAACCCGTGCATACAAATCACACCACTCAGTCTGTGCTGCAAGTTATACCCCAAAACTCA
CCACTTGCTTCATCAGAGTATTGGAGGACTGAGCAACCGTCAACTGACTCTCAAGTGCATACCTTG
ACGTCTCACTGA
SEQ ID NO: 443, proteína - Populus spp.
MEWNGKPHLQWDWESLIMFNGITTENSKQLSPTDLETDGEKGTDSGFFYSSGSASRSGGSSSDLEL ASFSKCSKSASINSSSAGEVKTSKFTLEASKANPSDYNKKEIGKAKTASMSSTIEAAGGSGDQLLG LKLGKRIYFEDACAGNNVQSSSFSTVPVPSFTSAKKLKSTIQSQRAPCCQVEGCNLDLSSAKDYHR KHRVCESHSKCQKVIVAGLERRFCQQCSSKIIPSFYDCIDNLGFGCQRFHGLSEFDEKKKSCRRRL
FIGURA 32 CONT. SDHNARRRKQPGSVHLNSRVSSSLYDERQQMSLAWDRAPLVHARPNANLTWEGTYISKFTITKDYI AKPAEIGGNDGQFHLPGFDLTNGIDIQHHHKSNSSLPSKGKGTAAEILNQGLEEYIIPSKAEAAPE SHRALSLLSNNSWGSREPQSISFEQPVHTNHTTQSVLQVIPQNSPLASSEYWRTEQPSTDSQVHTL
TSH
SEQ ID NO: 444, DNA - Populus spp.
ATGGACTGGAACTCCACTGCATCTGAGGGGAACTGGGAGAACATAGCAGGGTTAAGTGCCAAGGCT
AGTGACATTCCAAAACAAGTACCATTGGCATACCATGAGACAGAGGGAGATGGAGCAATTGATAAA
GCAATAACTTATTCGTCTGGTGGTGGTTTATCAAGCTCTGATTTGTGGCATTGCTCTTCATCCAAG
AGCTCAGTTTCACCCTCTGTCGACTCTTCATTGAAGGGGGGGATCAAGACTTATAGCACTGCAGAT
GGTTTTCCTGGAGTTATCATTAGAAAGGACTTGACTAGGGTAGAAAGTACTGAGAATATTCCATCT
CTGGGTGCTTCTGCTAGCTCTGGTGAACCAGTAATTGGCTTGAAGCTTGGTAAACGGATGTACTTT
GAAGACATTTGTACTACCAGCACTGCCAAATCATCGTCTTCATCTATTGTTTCCACTTCCTGTACT
GCTACAACAAAGAGATCTAGGGCATCATATCCAAGTACACAGTCTCCACGTTGCCAAGTGGAAGGA
TGCAACCTTGATCTCAAGTCAGCTAAAGATTACCATCGCAGGCATAGAATCTGTGAAAAACATTCC
AAAAGCCCAAAGGTTATTGTTGCTGGCATGGAACGCCGATTTTGCCAACAGTGCAGCAGGTTCCAT
GAATTATCAGAGTTTGATGACAAGAAGCGAAGCTGTCGTAGACGTCTCTCTGATCACAATGCAAGG
CGACGGAGGCCACAACCTGAGGCAATCCGGTTCAATTCAGCAAGGCCATCATCATCACCATCATCA
TTTTATGGTTGTCATTTCAATTTCAAAGATGGTAGACAGCAGATGAATGTTGTATTGAATAGGGTG
CCTTTCCTGGCAGGAAATTCAACTTGGCAAAGCGAGTGCGGCTTTAAAGTCACTCACGCCGGAGAT
TTTTTTATTAGGCCTGCAAAAGCAGGGGGCATCCATAGGCAGCTTAGCTATCCCTGCAATGAAGTG
CCAGATGCAGCTTCAACAATACCAACAGACTCGGATAAAATTATCTCTTTTGAGAGAAGTACACCC
CAGGTCTTTAGTCAAGGTTTCGAGGGGTCTGCATTAACTTCTAACATTGAGGTAGCACCAGATCTT
CGGCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAACCACTTCTTGGGGCTCGAATGAGCATGGATCCACCTCTCTG
GATCAACTGATGCTTGCAAACCAAACAAGCATGACACAGCCAATGATAAATGCTGAACTCCAAAAT
TGTCCAGTTGCTTCATCAGAAAATGCACGGATGGAACAAGCATCCCTTGAGTCTCGGGTGCATTCT
TTGGATTTACATGACAATGGAAACGTCCAGTTGCAAGAGTTTCAGCTGCTCAAAGCACCCTATGCT
ACCGGCTGCTTTTATTCCAATCAATTCAGCTAA
SEQ ID NO: 445, proteína - Populus spp.
MDWNSTASEGNWENIAGLSAKASDIPKQVPLAYHETEGDGAIDKAITYSSGGGLSSSDLWHCSSSK SSVSPSVDSSLKGGIKTYSTADGFPGVIIRKDLTRVESTENIPSLGASASSGEPVIGLKLGKRMYF EDICTTSTAKSSSSSIVSTSCTATTKRSRASYPSTQSPRCQVEGCNLDLKSAKDYHRRHRICEKHS KSPKVIVAGMERRFCQQCSRFHELSEFDDKKRSCRRRLSDHNARRRRPQPEAIRFNSARPSSSPSS FYGCHFNFKDGRQQMNWLNRVPFLAGNSTWQSECGFKVTHAGDFFIRPAKAGGIHRQLSYPCNEV PDAASTIPTDSDKIISFERSTPQVFSQGFEGSALTSNIEVAPDLRRALSLLSTTSWGSNEHGSTSL DQLMLANQTSMTQPMINAELQNCPVASSENARMEQASLESRVHSLDLHDNGNVQLQEFQLLKAPYA TGCFYSNQFS
SEQ ID NO: 446, DNA - Brassica rapa
ATGGAGTGTAATGCAAAGCCATCATTGCAGTGGGAGTGGGATAATCTAATATCTTTTGGTACTTCA TCAGCTGAAATTCCTAAAAAGCAACGACCAATGGATTGGGAAAATGATGGGTTTGATTGCACCACT TTTTACTCGTCCAGCTTTGCTACAGAAGCAGCTTATGGTGGTGGTAGTTCAGGTTCTGATCTAGCT CATGCTTTCTCTAAAAGCTCAAAGTCAACTTCCATAAGCTCTTCATCAGCTGAAGTGAGAACATAC AATTTCACATCAGAAGCTGGTGAAAGTGTTCCTCCTGGAGAATTGGGGAGCAGTGAAGAGTTTGCA ATGGGAATTGATGCTTCTCCAAGTCTTGAACTCTCCTTCGGCTCTGGTGATCCGGTTCTTGGTTTG AAGCTTGGTAAGAGGACATACTTTGAAGACTTTTGGGAAGTGGAGAATGCTAAAGGTTCAGCACTT CCGGTGAGCCTGGCGTCATCTTCTGCTTCTCCGGTGAAGAAATCCAAAACACTCTCTCAGAAATTA
FIGURA 32 CONT. CAAACTCCTCACTGCCAAGTTGAAGGCTGTAACCTCGATCTCTCCTCAGCTAAGGACTATCATAGG AAACACAGGATTTGTGAAAACCATTCAAAGTTCCCTAAAGTCGTTGTCAGTGGCGTAGAGCGCCGG TTCTGCCAACAATGTAGCAGGTAGAAAAGCTAGTCTTAGAGATATTGGTTTATACAAAAGCCTTAA TGACTTTTTTTAATTGTTTTTGGTCTTCAAAGGTTTCACTGTCTCTCTGAGTTTGATGAGAAGAAA CGTAGCTGTCGCCGGCGTCTCTCAGATCACAATGCAAGACGTCGCAAGCCAAATCCCGGGAGGACA TATGGTAATATACTAGATTCACTTCTCTCTAATCCTATATATTAAATCTAAATTTTTAGTTATATA ATTAGTAGGTTTCCCTTTTCTAAGATAAATATCATTCTGTATGTGCAGATGGGAAGCAACAGATGG ATTTTGTATGGAACAGATTTGCACTTATCCATCCAAGAAGTGAAGAAAATTTTCTGTGGCCAAATC CGAAGCCTGTATCATCAAGAGGGTTATTGCAGGAACCTGCAAAGACCGAGATGCCCAATAAGCTTT TCACCGAGCATTGTGGATTTGGATTGTTGGACCCCAAAACGAAAACCACCAGAGCTGAGTTATTCA GTAAAGGTTTGTGTTTTTCTTTGCTGTTTAATATATTTTCTCTTGTTGTATTCATGATCTTGATGA TTGCTTGTTTTATGCAGATTTGTTAGAAAAGGTCACAATCTCTTCTTCACACATGGGTGCTTCTCA AGATCTTGATGGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAAATTCAACACCATGGGTTTCCTCGAACCAGCCAAC ACGGTTTTCCCTTAACCACCATTCCACAAGCAACCTCCAACCCGTGGTTCACGGGTCTGTGACTCA ACTCAGTTCAGTGTCCAGCTACTGGCAGCCGGACCCACCAGCAGCTGAGGGCTCAACCGCTTTGAC TAGGAATGGGGTAGGCCAGTTTAATGAGAACTACAACTTGAATCAGTTTTATAACTGAAAGTGTGT TGCTTTTAAAATCATAATAAGATATTTTGTGTAAGGATCAGGTGAGCCTAGTGGTAACGTTTAAAT AGGAGCTGTGAAACTTGCTAAAGACATCAACTCCTCTCGTCTTTCTTTTGTCCATTGATTTTCTTG GGTTAGGGAGAGTTGTGACAGTTAAGTATTATAAATCATCTTGTCAAATTATTTATACATTAGAAT TTTCAGA TATTGATGGTGTAGCAACTGAAAAATTGATCAAACGCATCATAATATACGTATGATAAG GTTATTTGCATCTGAACTTTTTTTATATTCGCATTAGTCAGCATTTTGTGTTATACTAGATTTGGA TCCGTGCGTTGCAACAGGTTTTATTTGATATTACCATCCATTGATTTTTTTTTTTTTTTGCAAACA AATAATTTGGTAATTCCATTAACCGCCACAGTCGTTTTCTGAGCAAAACCATGTTAAAATCT
SEQ ID NO: 447, proteína - Brassica rapa
MECNAKPSLQWEWDNLISFGTSSAEIPKKQRPMDWENDGFDCTTFYSSSFATEAAYGGGSSGSDLA HAFSKSSKSTSISSSSAEVRTYNFTSEAGESVPPGELGSSEEFAMGIDASPSLELSFGSGDPVLGL KLGKRTY FEDFWEVENAKGSALPVSLASS SAS PVKKSKTLSQKLQTPHCQVEGCNLDLSSAKDYHR KHRICENHSKFPKVWSGVERRFCQQCSRKSSRYWFIQKPLFLIVFGLQRFHCLSEFDEKKRSCRR RLS DHNARRRKPNPGRTY
SEQ ID NO: 448, DNA - Zea mays
AGCCGCTTCGGCAGGCAAGTAGGACGAGGAGCAGCAGCTCAGATTTCGGATCCTGGCACTGGCAAC TGGCATGGGCTCGTTTGGGATGGACATGGACTGGAACCAGAAGGCCTCCGTGCTGCTGTGGGACTG GGAGAACCTGCCGCCCGCAGCCGCAAACGGGAGCGAGAGCCACAGGACGACCGCTGCCGCGCCTCA GTTCGCGGGCCTTGAGGCCACAGGGCATGAACCGGCGCCTTCTTCCGTATCCTCGTCAATCCATTC TCTGCCCAGTGCCAAGGGGAACAAGAACAAGAACAACATGGAGCTCATCAGTTTCGCACCTGCCAA AGCGCCCGACAAGGACACTGGTTCGGTGCTCAGCAGCGGAGAGCCGGTGGTGCTAGGCCTGAAGCT TGGCAAGAGAACGTATTTCGAAGATGGTTGTGGACTAGGGCAGAGCGGCAAGAGTTCGGCGGCGTT AGGCACTGCCAGTGCAGCGACCCCTCCGGGTCCTGCGAAGAAGGCGAAGGCGGCGGCGGCGGCTCC AACCGCGCAGCAGCAGAAATCGTACTGCCAGGTTGAAGGCTGCAGGACCGATCTGTCCTCTGCTAA AGACTATCATCGCAAGCACAGAGTCTGCGAGCCCCATTCCAAGGCGCCCAAGGTGGTCGTCGCTGG CCTGGAGCGGCGCTTCTGCCAGCAGTGCAGCCGGTTCCATGGACTGGCCGAGTTCGACCAGAAGAA GAAGAGCTGCCGCAGGCGACTCAACGACCACAACGCGCGCAGGCGGAAGCCCCAGCCCGAAGCGCT CCCTTTCGGCTCATCGAGGCTGTCGGCGATGTTCTATGACACGAGGCGCCAGGCGAGCCTCCTGTT TGGTGAAGGTCCCTACGGTCAGATGAGAAGCTGTGCGAGTTCTTGGTGGGATAGCCCAGGAGCAGG AGGAGGAGGCTTCAAATTCGCGGAGACGAGAGGAGCTCCTTGGTTGAAGCCGGCGAGAGCTGCTGC TGATGGGCTGCTGCCTTTGTCAGGTCAGCAGCAGCAGCAGGTGTGGAATGACTCGATTCCGCATGT
FIGURA 32 CONT. TGCCCATCAGGAGGATTTCGATGGGTTCACGGTCACGGCGTTCAAAGGAATCAGTCCAAAGACCCT TGATCATCAAGGCGCAGGCGTTGAAGCCTGTGCGGCCGTCTCCAGCCCGGACGGCGCCCCGGACCT TCAGCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAAACAGTCCGGCCGGTGGCGGCGGCACCAACACCAACCACCC GCCGCCGCCGCCGGCGGCTGAGCTGCACCACCACCGCGCTGCCCCGAGCAGCTGCCTCGCCGCCGG CTCCGTCTCCGTGCTGCAGGAGGCCTCGTCGCCGGGGCTGTGGCAGGACGGCGGCGGCAGCGCGGC CCTGGGCCACCACGCGCACGCGCGGCTCCAGGCTCTCGACGCCGCCATGGCGACGGCGCAGGAGCT CCTCCAGCTCCCCAGGCCGCCGCCATCGTACGGCGGCTCCTCGTCCCACTACGACCTGATGCGCTG ATGCTTCCTTCCTTGTGGATTGTGGTGGAGAACTGGAGATGGAGCGGGAGCGCCGCCGTGCCCCCG GTTGGCGCGTGGAAATCAGTCAGACGTGGCTTCTGTGGCGTCGTCTCTGCAACGCGGGAGCGGGAT TTTGCTTGTGTTCTGAACGAACAGAAAAAAAAAA
SEQ ID NO: 449, proteína - Zea mays
MGSFGMDMDWNQKASVLLWDWENLPPAAANGSESHRTTAAAPQFAGLEATGHEPAPSSVSSSIHSL PSAKGNKNKNNMELISFAPAKAPDKDTGSVLSSGEPWLGLKLGKRTYFEDGCGLGQSGKS SAALG TASAATPPGPAKKAKAAAAAPTAQQQKSYCQVEGCRTDLSSAKDYHRKHRVCEPHSKAPKVWAGL ERRFCQQCSRFHGLAEFDQKKKSCRRRLNDHNARRRKPQPEALPFGSSRLSAMFYDTRRQASLLFG EGPYGQMRSCASSWWDSPGAGGGGFKFAETRGAPWLKPARAAADGLLPLSGQQQQQVWNDSIPHVA HQEDFDGFTVTAFKGISPKTLDHQGAGVEACAAVSSPDGAPDLQRALSLLSNSPAGGGGTNTNHPP PPPAAELHHHRAAPSSCLAAGSVSVLQEASSPGLWQDGGGSAALGHHAHARLQALDAAMAT AQELL QLPRPPPSYGGSSSHYDLMR
SEQ ID NO: 450, DNA - Zea mays
ATGGGTTCTTTTGGGATGAACTGGAATCAGAAGGACCCCATGGTGTGGGATTGGGAACATCTAGTA
CCGTCTGTCTCAAATGCAGTTACAAGGCACGGATCTGCTAATTCATCTGGTGGTACTCTTACTTCT
AACTCAGAGCTAGGGCATGGTTCATCCAAGAGCTCTATTTCAGCGTCCATTGATTCACCCTCTGGA
GTAGGGAACAGCTTAGAGTTCAACTTCGCCGCTGTTGAGAGGCATGTTAAGAACACGGGCACGAAC
GGCAGAGTCGATGACTCGGGGAATTCTCCATCGTCAATGATAGCTTTCAACCAAGGAGAGCCATTA
ATCAGCCTGAAACTTGGGAAGAGGGCTTACTTCGAAAACGCCTGCGGAGGACAGGATGCCAAGGTT
TCTGCAGCTTCAGACGTTACTTCTGCAGCCAGCGTGGTCAAGAAGACTAAGGTGTCTCAGCAGAAT
GCAAAGAACTGGTACTGTCAGGTTGAAGGGTGCAAAGTTGACCTGTCTTCTGCTAAAGATTACAAT
CGCAAGCACAAGGTCTGTGTAGTCCATTCTAAAGCTACCAAGGTGGTTGTTGCTGGTCTAGAGCGT
CGGTTTTGTCAACAGTGTAGCCGTTTTCATGGTTTAGCGGAGTTTGATCAGAACAAACGAAGCTGT
CGTAGGCGTCTGATGCATCATAATGCACGGAGGAGGAAACCTCAGGCAGACACAATTTCATTCAAT
TCATCGACAATGTTTTATGATACAAGGCAGCGGACAAATCTTTTCTTTAGTCAACCACTTTATGGC
CAAGTGAGGAGCAATGCAGGGTCTTCATGGGATAACTTGGGAGGCTTAAAATTCATGGAGACGAAA
CATCCGCCAGTGCATCCAACAAAAACAGCATCCCCTGATGAACTGCATTTCTCAGCCCTCCAGATA
ACTAGTGCTGCGGCTCACACCGGACATCATCATGATCTCGATGGGTTCATGGCGTTCAAGGGAACC
AGCACAAAGGTCCTTAACCAAGGCGTGGAGGCTTGGGCGGCCGCTTCCAGCTCGAACAACGGAGGC
CCAGAAGGTGGGCGTGCTCTCTCTCTTCTGTCAGACGGCTCGTGGGGCTCGAGTTCAGCCGTCATC
CAGCAGCCCACATCTCACGCGGACGCCGGTGCATTGCTGCCGCCCCTCGCCACCGTTGCCGTCTCC
AACGCCGCCGCCGCCGCCGGGCATCCTCTGGACCCGTCCCCGGGAAGGTTCTGGCCGCAAGACGAT
CATCCCCCGCTCGTCGACGGACCCGCCACGCAGATTCCGGAGCTGGCGCACCTCCGGATATGGTGA
SEQ ID NO: 451, proteína - Zea mays
MGSFGMN WNQKDPMVWDWEHLVPSVSNAVTRHGSANSSGGTLTSNSELGHGSSKSSISASIDSPSG VGNSLEFNFAAVERHVKNTGTNGRVDDSGNSPSSMIAFNQGEPLISLKLGKRAYFENACGGQDAKV SAASDVTSAASWKKTKVSQQNAKNWYCQVEGCKVDLSSAKDYNRKHKVCWHSÍCATKVWAGLER RFCQQCSRFHGLAEFDQNKRSCRRRLMHHNARRRKPQADTISFNSSTMFYDTRQRTNLFFSQPLYG
FIGURA 32 CONT. QVRSNAGSSWDNLGGLKFMETKHPPVHPTKTASPDELHFSALQITSAAAHTGHHHDLDGFMAFKGT STKVLNQGVEAWAAASSSNNGGPEGGRALSLLSDGSWGSSSAVIQQPTSHADAGALLPPLATVAVS NAAAAAGHPLDPSPGRFWPQDDHPPLVDGPATQIPELAHLRIW
SEQ ID NO: 452, DNA - Triticvaa aestivum
ATGGGCTCGTTCGGGATGGAGTGGAACCAGAGGAGCTCGGTGCTGTGGGACTGGGAGAATTTCCCG CCGATAGGCGAGAACCCCAAGAACGCGATGCAGGCCGATCCAAGATTTGCCGCCGTTGCGGCTACC ATGGGGAATGAACCGCTCCATTCTTCTGGCGGTAGCGGCACCTTCTCTTCCAGCTCAGAGATGGGG TATGGCTCTTCCAAGAGCTCCATGTCCGCGTCGATCGATTCTTCGAACAGGGCTGGGAACAACATG GAGTTCAGATTTGCGCCTGTCAAAAACCCTGATAGGAACACGAGCAAGAACACCGAGCTGGGTAAA GTTGATAACACGAGAACTGGAACATCTCCGTCGCCTGTGGTGGCAGTGAGCAGTGGAGAGCCGGTG ATCGGCCTGAAGCTTGGCAAGAGAACTTACTTCGAGGATGTCTGTGGAGGGCAGAATGTCAAGAGC TCGCCATCGGGTGCTGCGAGCGCGCCAAACAAATCTCCTGCTTTGGGCAAGAAGGCAAAGGCGGAA CAACAGAAGCCACATAACTCGTACTGTCAGGTTGAAGGCTGCAAAGTCGACCTCTCTTCTGTTAAA GATTACCATCGAAAGCACAGAGTCTGTGAACTTCACTCTAAGGCTCCGAAAGTTGTTGTCGCTGGT CTGGAGCGACGCTTTTGCCAACAGTGCAGCCGGTTTCATGCTTTAGCTGAGTTTGACCAGAAAAAG CGAAGCTGCCGTAGGCGTCTCAATGATCATAATTCCCGCAGGCGGAAGCCACAGCCAGAAGCAATT TCTTTCAGTTCATCAAGGATGTCTACGATGTTTTATGATGCAAGGCAACAGCCAAATTTCCTATTT GGTCAGGCTCCTTATGTTCAAATGAGAAGCTGTGGAAGTTCTTCATGGGATGACCCAGGAGGCTTC AAAGTTACACACACAAAAGCTCCTTGGTTAAAACCAACAACTGCTGCAGGTGTTCATGGGATACAT TTATCTAGTCAGCAGATGTCGGACAATATTATGCCACATGGTGCACATCATGGTTTCGATGGGTTC ATGGCATTCAAGGGAACTTGTACAAAGTTCCCTAATCAAGGTGTCCAAGCTTCTGCTGTTGCTTCC GACTCCAGTGGAGCCCCGGATCTTCAGCATGCTCTCTCTCTTCTGTCAAGCAACCCAGTGGGTGCT GCCAACCTCCAGCCAAGTCCCCAGATGCACTCTGGGGTGGCAGCCATTGCCGGCGCCCCCAACCCC GCGATGCACGCGCTGGGATCATCGACGGGGCTCTGGCTAGACGGCAGCCAGCCCCTCGATGATCAC CCGCGGTTCCAGGTCTTCGAGCGCTTGGGGGACCATGACAGCGAGCTCCAGCTCCCAAAGCCTTCC TACGACCATGCCTCGCACTTCGACCGGATGCACTGA
SEQ ID NO: 453, proteína - Triticum aestivum
MGSFGME WNQRS SVLWDWENFPPIGENPKNAMQADPRFAAVAATMGNEPLHSSGGSGTFSSSSEMG YGSSKSSMSASIDSSNRAGNNMEFRFAPVKNPDRNTSKNTELGKVDNTRTGTSPSPWAVSSGEPV IGLKLGKRTYFEDVCGGQNVKSS PSGAAS APNKS PALGKKAKAEQQKPHNSYCQVEGCKVDLSSVK DYHRKHRVCELHSKAPKVWAGLERRFCQQCSRFHALAEFDQKKRSCRRRLNDHNSRRRK PQPEAI SFSSSRMSTMFYDARQQPNFLFGQAPYVQMRSCGSSSWDDPGGFKVTHTKAPWLKPTTAAGVHGIH LSSQQMSDNIMPHGAHHGFDGFMAFKGTCTKFPNQGVQASAVASDSSGAPDLQHALSLLSSNPVGA ANLQPSPQMHSGVAAIAGAPNPAMHALGSSTGLWLDGSQPLDDHPRFQVFERLGDHDSELQLPKPS Y DHAS H F DRMH
SEQ ID NO: 454, DNA - Vitis vinifera
ATGGATGCTGTTGTTTTGACAGGTTTGGAAGAATCTGGGGTAAGAGTAAGGGTGGTTAATTTTATA CAGGGCGGGCGAGAAATGGCATTTTTGTTGGAATCTGTGCAAGAAGAGGACTTGGGTAGAAACATC ATCGGTTCTACTTGGTCGACTTGGGGAAGAAAGGACAATCGATATCCTTCTCTAAAAGGGGATAAG GAATTTCCTTTCTGTGGCATGTGGGACTGGGAGAACCTTGACATTTTCAATGCAAAATCAACTGAA ATTCCAAAAAAGTTACAATCAGACTGGGAAATTGAAGGAGAAGGAGGAATTGACACTGGTTCTTTC TATTCATCTGGATGTGGTGCTGGTAGTGGTGGTTCTGGCTCTGATTTGGGACATGCATATTCATCA AAGAGCTCAAAATCAGCTTCAATTGATTCTTCATCAAAGGTGGGAATAAAGACATCCAACTTCACT TTTGAGGCTTTCCAAGATTTTTCTCAAGATTTTAACAAGAAGAGAGATTTGGAGAGGGCTGAGCCA ACTGGAAGTTCTCCAAACCTTGAAGCCTCGATTGGCTCTGGTGAACCTTTAATTGGTCTAAAGCTT
FIGURA 32 CONT. GGTAAAAGGACATACTTCGAGGATGTTTCTGCAGGGGGCAATGCTAAGGGCTCAGTGTTTTCTGTG ATTCCCATATCATCTGATACCACAGCAAAGAGATCCAGGTTATCTTGTCAGAATGCACATGTCTCG CGCTGCCAAGTTGAAGGATGCAACCTTGACCTTTCAACAGCCAAAGATTACCATCGCAAACATAGA GTTTGTGAAAGTCATACCAAATGCCCAAAGGTCATTGTAGGTGGTCTGGAGCGCCGTTTTTGCCAA CAGTGTAGCAGGTTCCATAGTTTGTCAGAGTTTGATGAAAAGAAGAGAAGCTGTCGCAGGCGTCTT TCTGATCACAATGCACGCCGGCGCAAACCACAACCAGAAGGGATCCAGTCAAATTCGGCGAGGCTT TCATCATTCTATGGTGGGAAGCAGCAAATGAGTCTTGTGTTGAGCTCGGTCCCCATTGTTCATACA AGGCCTGCTGTAAATCCTTCATGGGAAGGCACATGCAGCAAGTTCACACAAACAAAAGGGTTAGTA AGGCCTGGTAACACAGGAGGTATCGACCGGCAGCTGCATTTGCCTGGCAGTGAGCTGCAGAATGGC ATTAGTACGCTTTGTCATGATTCCAGTAGGCTTTTGCACTCTAAGGGCGCAATAGCTGAGGTTCTC AATCAAGTGTCCCAAGGTATGTTACATTCAACCTCAGAACACTGGAGGACCGAGCTTCCCTCAACT GATTCCCGGGTGCATATCTTGCCTTCACAAGGCGATGGTAACACCCACTTTCAAGAGTTCAAGCTG TTCAAAGCGCCATACGAGTCTGGCTTTTCTTCTGGATATTCAGAGTATAGGGAATTGAGATATCCG ATTCCTAGGAGTAACGCCCGTGTCATGAAGCAAACATAG
SEQ ID NO: 455, proteína - Vitis vinifera
MDAWLTGLEESGVRVRWNFIQGGREMAFLLESVQEEDLGRNIIGSTWSTWGRKDNRYPSLKGDK EFPFCGMWDWENLDIFNAKSTEIPKKLQSDWEIEGEGGIDTGSFYSSGCGAGSGGSGSDLGHAYSS KSSKSASIDSSSKVGIKTSNFTFEAFQDFSQDFNKKRDLERAEPTGSSPNLEASIGSGEPLIGLKL GKRTYFEDVSAGGNAKGSVFSVIPISSDTTAKRSRLSCQNAHVSRCQVEGCNLDLSTAKDYHRKHR VCESHTKCPKVIVGGLERRFCQQCSRFHSLSEFDEKKRSCRRRLSDHNARRRKPQPEGIQSNSARL SSFYGGKQQMSLVLSSVPIVHTRPAVNPSWEGTCSKFTQTKGLVRPGNTGGIDRQLHLPGSELQNG ISTLCHDSSRLLHSKGAIAEVLNQVSQGMLHSTSEHWRTELPSTDSRVHILPSQGDGNTHFQEFKL FKAPYESGFSSGYSEYRELRYPIPRSNARVMKQT
SEQ ID NO: 456, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 428
RCQIDGCELDLSSAKGYHRKHKVCEKHSKCPKVSVSGLERRFCQQCSRFHAVSEFDEKKRSCRKRL
SHHNARRRKPQGV
SEQ ID NO: 457, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 433
RCQIDGCELDLSSSKDYHRKHRVCETHSKCPKVWSGLERRFCQQCSRFHAVSEFDEKKRSCRKRL
SHHNARRRKPQGV
SEQ ID NO: 458, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 435
HCQVEGCNLDLSSAKDYHRKHRICENHSKFPKVWSGVERRFCQQCSRFHCLSEFDEKKRSCRRRL S DHNARRRKPNPG
SEQ ID NO: 459, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 437
HCQVEGCNVDLSSAKPYHRKHRVCEPHSKTLKVIVAGLERRFCQQCSRFHGLAEFDQKKRSCRRRL HDHNARRRKPQPE
SEQ ID NO: 460, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 439
YCQVEGCKVDLSSAREYHRKHKVCEAHSKAPKVIVSGLERRFCQQCSRFHGLAEFDQKKKSCRRRL
S DHNARRRK PQQE
SEQ ID NO: 461, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 441
TPAKKLKSSNHSQRAPRCQVEGCNLDLSSAKDYHRKHRVCESHSKCPKVIVAGLERRFCQQCSRFH GLSEFDEKKKSCRRRLSDHNARRRKQPGSVHLNPSRLSSSLY
FIGURA 32 CONT. SEQ ID NO: 462, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 443
CCQVEGCNLDLSSAKDYHRKHRVCESHSKCQKVIVAGLERRFCQQCSSKIIPSFYDCIDNLGFGCQ RFHGLSEFDEKKKSCRRRLSDHNARRRKQPGS
SEQ ID NO: 463, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 445
DLKSAKDYHRRHRICEKHSKSPKVIVAGMERRFCQQCSRFHELSEFDDKKRSCRRRLSDHNARRRR PQPEAIRFNSARPSSSPSSFYGCHFNFKDGRQ
SEQ ID NO: 464, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 447
TLSQKLQTPHCQVEGCNLDLSSAKDYHRKHRICENHSKFPKWVSGVERRFCQQCSRKSSRYWFIQ KPLFLIVFGLQRF
SEQ ID NO: 465, proteína _ domínio sbp da SEQ ID NO: 449
SYCQVEGCRTDLSSAKDYHRKHRVCEPHSKAPKVWAGLERRFCQQCSRFHGLAEFDQKKKSCRRR LN DHNARRRK PQ PEAL
SEQ ID NO: 466, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 451
CQVEGCKVDLSSAKDYNRKHKVCWHSKATKVWAGLERRFCQQCSRFHGLAEFDQNKRSCRRRLM
HHNARRRKP
SEQ ID NO: 467, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 453
YCQVEGCKVDLSSVKDYHRKHRVCELHSKAPKVWAGLERRFCQQCSRFHALAEFDQKKRSCRRRL NDHNSRRRKPQPEAISFSS
SEQ ID NO: 468, proteína - domínio sbp da SEQ ID NO: 455
RCQVEGCNLDLSTAKDYHRKHRVCESHTKCPKVIVGGLERRFCQQCSRFHSLSEFDEKKRSCRRRL SDHNARRRKPQPEGI
SEQ ID NO: 469, proteína - motivo 1
WDWENL
SEQ ID NO: 470, proteína - motivo 2
SKSSQSTSINSS
SEQ ID NO: 471, proteína - motivo 3
ALSLLST
SEQ ID NO: 472, proteína - motivo 4
LKLGKR
SEQ ID NO: 473, DNA - iniciador 1
ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttaaacaatggactgcaacatggtatct
SEQ ID NO: 474, DNA - iniciador 2
ggggaccactttgtacaagaaagctgggtcacattacttactcatctattttgg
SEQ ID NO: 475, DNA - seqüência promotora
TNCGTACAA
FIGURA 32 CONT. SEQ ID NO: 476, DNA - Oryza sativa
AATCCGAAAAGTTTCTGCACCGTTTTCACCCCCTAACTAACAATATAGGGAACGTGTGCTAAATAT
AAAATGAGACCTTATATATGTAGCGCTGATAACTAGAACTATGCAAGAAAAACTCATCCACCTACT
TTAGTGGCAATCGGGCTAAATAAAAAAGAGTCGCTACACTAGTTTCGTTTTCCTTAGTAATTAAGT
GGGAAAATGAAATCATTATTGCTTAGAATATACGTTCACATCTCTGTCATGAAGTTAAATTATTCG
AGGTAGCCATAATTGTCATCAAACTCTTCTTGAATAAAAAAATCTTTCTAGCTGAACTCAATGGGT
AAAGAGAGAGATTTTTTTTAAAAAAATAGAATGAAGATATTCTGAACGTATTGGCAAAGATTTAAA
CATATAATTATATAATTTTATAGTTTGTGCATTCGTCATATCGCACATCATTAAGGACATGTCTTA
CTCCATCCCAATTTTTATTTAGTAATTAAAGACAATTGACTTATTTTTATTATTTATCTTTTTTCG
ATTAGATGCAAGGTACTTACGCACACACTTTGTGCTCATGTGCATGTGTGAGTGCACCTCCTCAAT
ACACGTTCAACTAGCAACACATCTCTAATATCACTCGCCTATTTAATACATTTAGGTAGCAATATC
TGAATTCAAGCACTCCACCATCACCAGACCACTTTTAATAATATCTAAAATACAAAAAAT AATTTT
ACAGAATAGCATGAAAAGTATGAAACGAACTATTTAGGTTTTTCACATACAAAAAAAAAAAGAATT
TTGCTCGTGCGCGAGCGCCAATCTCCCATATTGGGCACACAGGCAACAACAGAGTGGCTGCCCACA
GAACAACCCACAAAAAACGATGATCTAACGGAGGACAGCAAGTCCGCAACAACCTTTTAACAGCAG
GCTTTGCGGCCAGGAGAGAGGAGGAGAGGCAAAGAAAACCAÁGCATCCTCCTTCTCCCATCTATAA
ATTCCTCCCCCCTTTTCCCCTCTCTATATAGGAGGCATCCAAGCCAAGAAGAGGGAGAGCACCAAG
GACACGCGACTAGCAGAAGCCGAGCGACCGCCTTCTCGATCCATATCTTCCGGTCGAGTTCTTGGT
CGATCTCTTCCCTCCTCCACCTCCTCCTCACAGGGTATGTGCCTCCCTTCGGTTGTTCTTGGATTT
ATTGTTCTAGGTTGTGTAGTACGGGCGTTGATGTTAGGAAAGGGGATCTGTATCTGTGATGATTCC
TGTTCTTGGATTTGGGATAGAGGGGTTCTTGATGTTGCATGTTATCGGTTCGGTTTGATTAGTAGT
ATGGTTTTCAATCGTCTGGAGAGCTCTATGGAAATGAAATGGTTTAGGGATCGGAATCTTGCGATT
TTGTGAGTACCTTTTGTTTGAGGTAAAATCAGAGCACCGGTGATTTTGCTTGGTGTAATAAAGTAC
GGTTGTTTGGTCCTCGATTCTGGTAGTGATGCTTCTCGATTTGACGAAGCTATCCTTTGTTTATTC
CCTATTGAACAAAAATAATCCAACTTTGAAGACGGTCCCGTTGATGAGATTGAATGATTGATTCTT
AAGCCTGTCCAAAATTTCGCAGCTGGCTTGTTTAGATACAGTAGTCCCCATCACGAAATTCATGGA
AACAGTTATAATCCTCAGGAACAGGGGATTCCCTGTTCTTCCGATTTGCTTTAGTCCCAGAATTTT
TTTTCCCAAATATCTTAAAAAGTCACTTTCTGGTTCAGTTCAATGAATTGATTGCTACAAATAATG
CTTTTATAGCGTTATCCTAGCTGTAGTTCAGTTAATAGGTAATACCCCTATAGTTTAGTCAGGAGA
AGAACTTATCCGATTTCTGATCTCCATTTTTAATTATATGAAATGAACTGTAGCATAAGCAGTATT
CATTTGGATTATTTTTTTTATTAGCTCTCACCCCTTCATTATTCTGAGCTGAAAGTCTGGCATGAA
CTGTCCTCAATTTTGTTTTCAAATTCACATCGATTATCTATGCATTATCCTCTTGTATCTACCTGT
AGAAGTTTCTTTTTGGTTATTCCTTGACTGCTTGATTACAGAAAGAAATTTATGAAGCTGTAATCG "
GGATAGTTATACTGCTTGTTCTTATGATTCATTTCCTTTGTGCAGTTCTTGGTGTAGCTTGCCACT
TTCACCAGCAAAGTTC
SEQ ID NO: 477, DNA - Oryza sativa
GCTTGAGTCATAGGGAGAAAACAAATCGATCATATTTGACTCTTTTCCCTCCATCTCTCTTACCGG CAAAAAAAGTAGTACTGGTTTATATGTAAAGTAAGATTCTTTAATTATGTGAGATCCGGCTTAATG CTTTTCTTTTGTCACATATACTGCATTGCAACAATTGCCATATATTCACTTCTGCCATCCCATTAT ATAGCAACTCAAGAATGGATTGATATATCCCCTATTACTAATCTAGACATGTTAAGGCTGAGTTGG GCAGTCCATCTTCCCAACCCACCACCTTCGTTTTTCGCGCACATACTTTTCAAACTACTAAATGGT GTGTTTTTTAAAAATATTTTCAATACAAAAGTTGCTTTAAAAAATTATATTGATCCATTTTTTTAA AAAAAATAGCTAATACTTAATTAATCACGTGTTAAAAGACCGCTCCGTTTTGCGTGCAGGAGGGAT AGGTTCACATCCTGCATTACCGAACACAGCCTAAATCTTGTTGTCTAGATTCGTAGTACTGGATAT ATTAAATCATGTTCTAAGTTACTATATACTGAGATGAATAGAATAAGTAAAATTAGACCCACCTTA AGTCTTGATGAAGTTACTACTAGCTGCGTTTGGGAGGACTTCCCAAAAAAAAAAGTATTAGCCATT AGCACGTGATTAATTAAGTACTAGTTTAAAAAACTTAAAAAATAAATTAATATGATTCTCTTAAGT
FIGURA 32 CONT. AACTCTCCTATAGAAAACTTTTACAAAATTACACCGTTTAATAGTTTGGAAAATATGTCAGTAAAA AATAAGAGAGTAGAAGTTATGAAAGTTAGAAAAAGAATTGTTTTAGTAGTATACAGTTATAAACTA TTCCCTCTGTTCTAAAACATAAGGGATTATGGATGGATTCGACATGTACCAGTACCATGAATCGAA TCCAGACAAGTTTTTTATGCATATTTATTCTACTATAATATATCACATCTGCTCTAAATATCTTAT ATTTCGAGGTGGAGACTGTCGCTATGTTTTTCTGCCCGTTGCTAAGCACACGCCACCCCCGATGCG GGGACGCCTCTGGCCTTCTTGCCACGATAATTGAATGGAACTTCCACATTCAGATTCGATAGGTGA CCGTCGACTCCAAGTGCTTTGCACAAAACAACTCCGGCCTCCCGGCCACCAGTCACACGACTCACG GCACTACCACCCCTGACTCCCTGAGGCGGACCTGCCACTGTTCTGCATGCGAAGCTATCTAAAATT CTGAAGCAAAGAAAGGACAGCACATGCTCCGGGACACGCGCCACCCGGCGGAAAAGGGCTCGGTGT GGCGATCTCACAGCCGCATATCGCATTTCACAAGCCGCCCATCTCCACCGGCTTCACGAGGCTCAT CGCGGCACGACCGCGCACGGAACGCACGCGGCCGACCCGCGCGCCTCGATGCGCGAGCCCATCCGC CGCGTCCTCCCTTTGCCTTTGCCGCTATCCTCTCGGTCGTATCCCGTTTCTCTGTCTTTTGCTCCC CGGCGCGCGCCAGTTCGGAGTACCAGCGAAACCCGGACACCTGGTACACCTCCGCCGGCCACAACG CGTGTCCCCCTACGTGGCCGCGCAGCACATGCCCATGCGCGACACGTGCACCTCCTCATCCAAACT CTCAAGTCTCAACGGTCCTATAAATGCACGGATAGCCTCAAGCTGCTCGTCACAAGGCAAGAGGCA AGAGGCAAGAGCATCCGTATTAACCAGCCTTTTGAGACTTGAGAGTGTGTGTGACTCGATCCAGCG TAGTTTCAGTTCGTGTGTTGGTGAGTGATTCCAGCCAAGTTTGCG
SEQ ID NO: 478, proteína - domínio sbp de consenso de polipeptídeos SPL11
HCQVEGCNLDLSSAKDYHRKHRVCEXHSKXPKVIVAGLERRFCQQCSRXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXFHGLSEFDEKKRSCRRRLSDHNARRRKPQPE
FIGURA 32 CONT.

Claims (32)

1. Método para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas com relação às plantas de controle, caracterizado pelo fato de que compreende modular a expressão em uma planta de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo selecionado de a. um polipeptídeo LBD, em que o dito polipeptídeo LBD compreende um domínio DUF206; ou b. um polipeptídeo JMJC, em que dito polipeptídeo JMJC compreende um domínio Jmj C; ou c. uma caseína quinase I (CKI) em que dito CKI é selecionado de SEQ ID NO: 174 ou um ortólogo ou parálogo do mesmos; ou d. um polipeptídeo de prolongamento-homeodomínio de homeodomínio de planta (PHDf-HD), cujo polipeptídeo de PHDf-HD compreende: (i) um domínio tendo pelo menos 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüência de aminoácido a um domínio zíper de leucina/prolongamento de homeodomínio de planta (ZIP/PHDf) como representado pela SEQ ID N°: 233; e (ii) um domínio tendo pelo menos 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %,90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais identidades de seqüência de aminoácido a um homeodomínio (HD) como representado pela SEQ ID N°: 234; ou e. um polipeptídeo semelhante à bHLHll, em que dito polipeptídeo semelhante à bHLHll compreende um domínio hélice-laço- hélice; ou f. um ASR, em que dito ASR é representado por SEQ ID NO: 397 ou um ortólogo ou parálogo do mesmo; ou g. um polipeptídeo SPLl 1, em que dito polipeptídeo SPLll compreende um domínio SBP tendo uma ordem aumentada de preferência em pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 % ou mais identidades de seqüências à qualquer uma dentre SEQ ID N°: 456 a SEQ ID N°: 468 e SEQ ID N°: 478; e opcionalmente selecionar para plantas tendo traços relacionados com o rendimento.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a. dito polipeptídeo LBD compreende um ou mais motivos representados pela SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 e SEQ ID NO: 7; ou b. dito polipeptídeo JMJC compreende um motivo tendo em ordem crescente de preferência de pelo menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou mais de identidade de seqüência à qualquer uma dentre SEQ ID N°: 79, SEQ ID N°: 80, SEQ ID N°: 81, SEQ ID N°: 82, e/ou dito domínio JmjC é representado por uma seqüência tendo em ordem crescente de preferência de pelo menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%,80%, 85%, 90%, 95% ou mais de identidade de seqüência à SEQ ID N°: 78; ou c. dito polipeptídeo PHDf-HD compreende (i) um domínio PHD como representado por PFAM00628 e (ii) um HD como representado pela PFAM00046; ou d. dito polipeptídeo semelhante à bHLHl 1 compreende um ou mais dos motivos representados por SEQ ID N°: 246, SEQ ID N°: 247, SEQ ID N°: 248, SEQ ID N0: 249, SEQ ID N0: 250, SEQ ID N0: 251, SEQ ID N°: 252; ou e. dito polipeptídeo SPLl 1 além do domínio SBP compreende qualquer um ou mais dos seguintes motivos conservados: (i) Motivo 1 como representado pela SEQ ID N°: 469 em que qualquer substituição de aminoácido conservativa e/ou 1 ou 2 na substituição conservativa são permitidos; (ii) Motivo 2 como representado pela SEQ ID N°: 470 em que qualquer mudança é permitida, contanto que pelo menos 4 aminoácidos tenham uma cadeia secundária polar, preferivelmente serina ou treonina e contanto que o domínio esteja localizado na extremidade do terminal N do domínio SBP; (iii) Motivo 3 como representado pela SEQ ID: 471 em que 1 ou 2 más combinações são permitidas; (iv) Motivo 4 como representado pela SEQ ID: 472 em que 1, 2 ou 3 más combinações são permitidas.
3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a. dito um dos domínios JmjC compreendido nos polipeptídeos JMJC é representado pela SEQ ID N°: 84; SEQ ID N°: 86; SEQ ID N°: 96; SEQ ID N°: 98; SEQ ID N0: 104; SEQ ID N°: 108; SEQ ID N°: 110; SEQ ID N°: 112; SEQ ID N°: 114; SEQ ID N°: 116; SEQ ID N°: 118; SEQ ID N°: 120; SEQ ID N°: 122; SEQ ID N°: 124; SEQ ID N°: 128; SEQ ID N°: 130; SEQ ID N°: 132 e SEQ ID N0: 134, cujas coordenadas de aminoácido são dadas na Tabela B4; ou b. dito polipeptídeo PHDf-HD, quando usado na construção de uma árvore filogenética HD, tal como o descrito na Figura 13, os agrupamentos com o grupo PHDf-HD de polipeptídeos que compreende a seqüência de polipeptídeo como representado pela SEQ ID N°: 180, em vez de qualquer outro grupo HD; ou c. dito polipeptídeo PHDf-HD tem, na ordem crescente de preferência pelo menos 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência ao polipeptídeo PHDf-HD como representado pela SEQ ID N°: 180 ou a qualquer uma das seqüências de polipeptídeos dadas na Tabela Dl neste.
4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dita expressão modulada é realizada pela introdução e expressão em uma planta, de um ácido nucleico.
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a dita expressão modulada é expressão modulada aumentada.
6. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que: a. o dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD codifica qualquer uma das proteínas listadas na Tabela Al ou é uma porção de um tal ácido nucleico ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico; ou dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC codifica qualquer uma das proteínas listadas na Tabela B1 ou é uma porção de um tal ácido nucleico ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico; ou b. dito ácido nucleico que codifica o dito polipeptídeo CKI é uma porção da SEQ ID N°: 173 ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico; ou c. dita seqüência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD é representado por qualquer uma das seqüências de ácido nucleico SEQ ID N0 dadas na Tabela Dl ou uma porção destes ou uma seqüência capaz de hibridização com qualquer uma das seqüências de ácido nucleico SEQ ID N0 dadas na Tabela Dl; ou d. dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHll codifica qualquer uma das proteínas listadas na Tabela El ou é uma porção de um tal ácido nucleico ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico; ou e. dito ácido nucleico que codifica o dito polipeptídeo ASR é uma porção da SEQ ID N°: 396 ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico; ou f. dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll codifica qualquer uma das proteínas listadas na Tabela Gl ou é uma porção da um tal ácido nucleico, ou um ácido nucleico capaz de hibridizar com um tal ácido nucleico.
7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que: a. dita seqüência de ácido nucleico codificando um polipeptídeo LBD codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dados na Tabela Al; ou b. a dita seqüência de ácido nucleico codificando um polipeptídeo JMJC codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dadas na Tabela B1; ou c. dita seqüência de ácido nucleico codificando um polipeptídeo CKI codifica a SEQ ID N°: 174; d. dita seqüência de ácido nucleico codificando um polipeptídeo PHDf-HD codifica um ortólogo ou parálogo de acordo com qualquer uma das SEQID N0 dadas na Tabela Dl; e. dita seqüência de ácido nucleico codificando um polipeptídeo semelhante a bHLHll codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dadas na Tabela El; f. dita seqüência de ácido nucleico codificando um polipeptídeo ASR codifica SEQ ID N°: 397 ou um ortólogo ou parálogo destes; g. dita seqüência de ácido nucleico codificando um polipeptídeo SPLll codifica um ortólogo ou parálogo de qualquer uma das proteínas dadas na Tabela Gl.
8. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o dito ácido nucleico codificando um polipeptídeo JTMJC codifica uma SEQ ID N°: 74.
9. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o dito ácido nucleico codificando um polipeptídeo SPLl 1 codifica uma SEQ ID N°: 428.
10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que os ditos traços intensificados relacionados com o rendimento compreendem vigor precoce aumentado e/ou rendimento aumentado, preferivelmente biomassa aumentada e/ou rendimento de semente aumentado com relação às plantas de controle, em que dito rendimento de semente aumentado compreende um ou mais de número aumentado de panícula primária; peso de semente total aumentado; número de sementes (enchidas); números de sementes ou flósculos por panícula, peso de semente milhar, taxa de enchimento de semente e/ou índice de colheita.
11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizado pelo fato de que os ditos traços intensificados relacionados com o rendimento são obtidos sob condições sem estresse.
12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizado pelo fato de que os ditos traços intensificados relacionados com o rendimento são obtidos sob condições de estresse abiótico.
13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que os ditos traços intensificados relacionados com o rendimento são obtidos sob condições de deficiência de nitrogênio.
14. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que os ditos traços intensificados relacionados com o rendimento são obtidos sob condições de crescimento sob estresse por secura (suave).
15. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que os ditos traços intensificados relacionados com o rendimento são obtidos sob condições de estresse por sal.
16. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 15, caracterizado pelo fato de que dito ácido nucleico codificando um polipeptídeo LBD5 um polipeptídeo JMJC, um polipeptídeo PHDf-HD, um polipeptídeo semelhante a bHLHll, um polipeptídeo ASR ou um polipeptídeo SPLl 1 está operacionalmente ligado a um promotor constitutivo, preferivelmente a um promotor GOS2, mais preferivelmente a um promotor GOS2 de arroz.
17. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 4 a 15, caracterizado pelo fato de que dito ácido nucleico codificando um polipeptídeo CKI ou um polipeptídeo SPL11 está operacionalmente ligado a um promotor específico de semente, preferivelmente a um promotor WSIl 8, mais preferivelmente a um promotor WSIl 8 de arroz.
18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 16, caracterizado pelo fato de que dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD, um polipeptídeo JMJC é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta dicotiledônea, ainda preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente do gênero Arabidopsis, mais preferivelmente de Arabidopsis thaliana.
19. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 16, caracterizado pelo fato de que dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PHDf-HD ou um polipeptídeo ASR é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta monocotiledônea, ainda preferivelmente da família Poacae mais preferivelmente do gênero Oryza, mais preferivelmente de Oryza sativa.
20. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 16, caracterizado pelo fato de que dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo semelhante à bHLHll é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta monocotiledônea, ainda preferivelmente da família Poaceae, mais preferivelmente do gênero Triticum, mais preferivelmente de Triticum aestivum.
21. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 15 e reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo CKI é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta dicotiledônea, ainda preferivelmente da família Solanaceae, mais preferivelmente do gênero Nicotiana, mais preferivelmente de Nicotiana tabacum.
22. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que dito ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll é de origem vegetal, preferivelmente de uma planta dicotiledônea, ainda preferivelmente da família Brassicaceae, mais preferivelmente do gênero Arabidopsis, mais preferivelmente de Arabidopsis thaliana.
23. Molécula de ácido nucleico isolada caracterizada pelo fato de que compreende qualquer uma das seguintes características: (i) um ácido nucleico representado pela SEQ ID N°: 69, 169, 242, 401, 403, 405, 407, 409, 411, 413, 415, 417 e 448; (ii) um ácido nucleico ou fragmento do mesmo que é complementar a qualquer uma das SEQ ID N0 dadas em (i); (iii) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à SEQ ID N°: 70; (iv) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo SPLll tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N°: 449, e tendo na ordem crescente de preferência pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência a SEQID N°: 465; (v) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo ASR tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido representada por qualquer um de SEQ ID N°: 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418; (vi) um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo JMJC tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N°: 243; (vii) um ácido nucleico capaz de hibridizar sob condições estringentes a qualquer um dos ácidos nucleicos dados em (i) a (vi) acima.
24. Polipeptídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) uma seqüência de aminoácido representada por SEQ ID N°: 70, 170, 243, 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416, 418 e 449; (ii) uma seqüência de aminoácido tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de seqüência à seqüência de aminoácido dada na SEQ ID N0: 70, 170, 243, 402, 404, 406, 408, 410, 412, 414, 416 e 418; (iii) uma seqüência de aminoácido tendo, na ordem crescente de preferência, pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência à seqüência de aminoácido representada pela SEQ ID N0: 449, e tendo na ordem crescente de preferência pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais identidade de seqüência a SEQID N°: 465; (iv) derivados de qualquer uma das seqüências de aminoácido dadas em (i).
25. Método para a produção de uma planta transgênica tendo traços relacionados com o rendimento intensificados com relação às plantas de controle, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) introduzir e expressar em uma planta, um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo LBD como definido na reivindicação 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 ou 24; e (ii) cultivar a célula de planta sob condições que promovam crescimento e desenvolvimento de planta.
26. Planta ou parte da mesma, incluindo sementes, caracterizada pelo fato de ser obtenível por um método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 22 e reivindicação 25, em que a dita planta ou parte da mesma compreende um ácido nucleico recombinante que codifica um polipeptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1,2,3,6, 7, 8, 9 ou 24.
27. Construção, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) ácido nucleico que codifica um polipeptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 ou 24; (ii) uma ou mais seqüências de controle capazes de conduzir a expressão da seqüência de ácido nucleico de (i) e opcionalmente (iii) uma seqüência de terminação de transcrição.
28. Construção de acordo com a reivindicação 27, caracterizada pelo fato de que uma das ditas seqüências de controle é um promotor constitutivo, preferivelmente um promotor GOS2, mais preferivelmente um promotor G0S2 de arroz.
29. Construção de acordo com a reivindicação 27, caracterizada pelo fato de que uma das ditas seqüências de controle é um promotor específico de semente, preferivelmente um promotor WSIl8, mais preferivelmente um promotor WSI18 de arroz.
30. Planta ou parte da mesma de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de ser uma planta transgênica tendo traços relacionados com o rendimento intensificados com relação às plantas de controle, resultando de expressão aumentada de um ácido nucleico codificando um polipeptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 ou 24.
31. Planta ou parte da mesma de acordo com a reivindicação 26 ou reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que dita planta é uma planta de cultivo ou uma monocotiledônea ou um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, painço, centeio, triticale, sorgo e aveias.
32. Uso de um polipeptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 ou 24 ou de um ácido nucleico codificando tal polipeptídeo, caracterizado pelo fato de ser para intensificar traços relacionados com o rendimento com relação às plantas de controle, em particular para intensificar rendimento e/ou vigor precoce, em eu dito rendimento compreende rendimento de semente e/ou biomassa.
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