CN114250230B - 大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30-2在调控植物耐逆性中的应用 - Google Patents
大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30-2在调控植物耐逆性中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30‑2在调控植物耐逆性中的应用。本发明通过采用发根农杆菌侵染法获得过量表达GmJMJ30‑2的转基因大豆毛状根。实验证明：在盐和干旱胁迫下，过量表达GmJMJ30‑2的转基因大豆毛状根的嵌合体叶片水含量显著高于对照。说明GmJMJ30‑2蛋白质具有调控植物耐逆性的功能，尤其是提高植物的耐盐性和耐旱性，为培育耐逆植物品种奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30-2在调控植物耐逆性中的应用。
背景技术
环境中物理、化学因素的变化，例如干旱、盐碱、冷害、冻害、水涝等胁迫因素是造成农作物严重减产的原因之一。美国在1939年-1978年的40年间，保险业对作物减产的赔付统计数据表明，由于盐害及干旱引起减产的赔付比例约占40.8％，高于涝(16.4％)、低温(13.8％)、冰雹(11.3％)和风(7.0％)，更是远高于虫灾(4.5％)、病害(2.7％)和其他因素。因此，培育耐盐/旱性作物是种植业的主要目标之一。提高作物的耐盐/旱性，除了利用传统的育种方法，目前，分子遗传育种已经成为科技工作者所关注的领域之一。
组蛋白甲基化是一种重要的表观遗传修饰方式。2004年发现了组蛋白去甲基化酶，说明组蛋白甲基化是一个可逆的过程。组蛋白的氨基末端结构域位于核小体核心结构以外，富含能被共价修饰的氨基酸残基，可发生许多翻译后修饰。组蛋白的共价修饰，包括甲基化修饰在基因转录调节、基因组稳定性维持及表观调控等方面起作用。组蛋白被甲基化的位点是赖氨酸和精氨酸。可脱去组蛋白甲基化的去甲基化酶，主要有两类，LSD1和JmjC家族。2004年,哈佛医学院的施扬教授发现了第一个组蛋白去甲基化酶LSD1(lysinespecific demethylase 1)。2006年，北卡罗来纳大学教堂山分校的张毅教授发现了一类含有JmjC结构域的去甲基化酶，JMJ家族可以去掉赖氨酸的三甲基化修饰。已有的研究显示，植物中此类蛋白与多种生理过程相关，例如，参与调控昼夜节律的拟南芥JMJD5和JMJ30；与生物胁迫的防御应答相关的水稻JMJ705；调控生长/开花的JMJ30和JMJ32；与低温应答相关的截叶苜蓿JMJC5等等。目前大豆中此类蛋白的功能研究相对较少。
发明内容
本发明的目的是提供大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30-2及其相关生物材料在调控植物耐逆性中的应用。
为了实现上述目的，本发明首先提供了GmJMJ30-2蛋白质的新用途。
本发明提供了GmJMJ30-2蛋白质在调控植物耐逆性中的应用；
所述GmJMJ30-2蛋白质来源于大豆[Glycine max(L.)Merrill]，为如下A1)或A2)或A3)或A4)任一所示蛋白质：
A1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
A2)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；
A3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白质；
A4)与A1)-A3)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质。
其中，序列表中序列2由413个氨基酸残基组成。
所述标签具体如表1所示。
表1标签的序列
| 标签 | 残基 | 序列 |
| Poly-Arg | 5-6(通常为5个) | RRRRR |
| Poly-His | 2-10(通常为6个) | HHHHHH |
| FLAG | 8 | DYKDDDDK |
| Strep-tag II | 8 | WSHPQFEK |
| c-myc | 10 | EQKLISEEDL |
| HA | 9 | YPYDVPDYA |
上述A1)-A4)任一所示的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
为了实现上述目的，本发明还提供了与GmJMJ30-2蛋白质相关的生物材料的新用途。
本发明提供了与GmJMJ30-2蛋白质相关的生物材料在调控植物耐逆性中的应用；
所述生物材料为下述B1)-B8)中的任一种：
B1)编码GmJMJ30-2蛋白质的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；
B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；
B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物。
上述应用中，B1)所述核酸分子为如下C1)-C3)中任一所示：
C1)序列表中序列1所示的DNA分子；
C2)与C1)限定的DNA分子序列至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性，且编码GmJMJ30-2蛋白质的DNA分子；
C3)在严格条件下与C1)或C2)限定的DNA分子杂交，且编码GmJMJ30-2蛋白质的DNA分子。
其中，序列表中序列1由1242个核苷酸组成。
本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的编码GmJMJ30-2蛋白质的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有编码GmJMJ30-2蛋白质的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码GmJMJ30-2蛋白质且具有相同功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。
这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。
上述应用中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。
上述应用中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。
所述重组载体是将上述核酸分子插入表达载体中，得到表达上述蛋白质的重组载体。使用所述核酸分子构建重组载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用所述核酸分子构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。在本发明的具体实施例中，所述重组载体为将序列1所示的DNA片段克隆到载体pBIN438的BamHI和KpnI酶切位点间得到的重组载体。
上述应用中，所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌，如农杆菌。所述重组微生物为含有上述重组载体的微生物。本发明的具体实施例中，所述重组微生物为含有上述重组载体的发根农杆菌K599。
本发明还提供了上述GmJMJ30-2蛋白质或上述生物材料在培育耐逆性提高的转基因植物中的应用。
本发明还提供了上述GmJMJ30-2蛋白质或上述生物材料在植物育种中的应用。所述育种的目的为选育耐逆性高的植物品种(如耐盐和/或耐旱大豆品种)。
进一步的，所述调控为提高。
更进一步的，所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。
所述调控植物耐逆性具体体现在：当植物中的GmJMJ30-2蛋白质的含量和/或活性降低时，所述植物耐旱性和/或耐盐性降低；当植物中的GmJMJ30-2蛋白质的含量和/或活性提高时，所述植物耐旱性和/或耐盐性提高。
为实现上述目的，本发明最后提供了一种培育耐逆性提高的转基因植物的方法。
本发明提供的培育耐逆性提高的转基因植物的方法包括提高受体植物中GmJMJ30-2蛋白质的含量和/或活性，得到转基因植物的步骤；所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物。
进一步的，所述提高受体植物中GmJMJ30-2蛋白质的含量和/或活性的方法为在受体植物中过表达GmJMJ30-2蛋白质。所述过表达的方法为将GmJMJ30-2蛋白质的编码基因导入受体植物。
更进一步的，所述GmJMJ30-2蛋白质的编码基因的核苷酸序列为上述C1)-C3)中的任一种。在本发明的具体实施例中，所述GmJMJ30-2蛋白质的编码基因通过上述重组载体导入受体植物。
所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。
所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物具体体现在：在干旱或盐胁迫条件下，所述转基因植物的叶片水含量高于所述受体植物。所述干旱胁迫具体为甘露醇胁迫。所述盐胁迫具体为氯化钠胁迫。
上述任一所述应用或方法中，所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。进一步的，所述双子叶植物可为豆科植物。更进一步的，所述豆科植物具体为大豆(如大豆品种大豆科丰1号)。
本发明提供了一种与植物耐逆性相关的GmJMJ30-2蛋白质，通过采用发根农杆菌侵染法获得过量表达GmJMJ30-2的转基因大豆毛状根。实验证明：在盐和干旱胁迫下，过量表达GmJMJ30-2的转基因大豆毛状根嵌合体的叶片水含量显著高于对照。说明GmJMJ30-2蛋白质具有调控植物耐逆性的功能，尤其是提高植物的耐盐性和耐旱性，为培育耐逆植物品种奠定基础。
附图说明
图1为植物表达载体pBin438-GmJMJ30-2的结构示意图。
图2为转GmJMJ30-2大豆毛状根的分子鉴定结果。
图3为转GmJMJ30-2大豆毛状根及嵌合体的耐逆表型。
图4为转GmJMJ30-2大豆嵌合体在胁迫条件下的水含量统计结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中所用引物均由三博生物公司合成。
下述实施例中的大豆科丰1号记载于文献“Glycinemax L.Merr.Kefeng 1)记载在W.K.Zhang,Y.J.Wang,G.Z.Luo,J.S.Zhang,C.Y.He,X.L.Wu,J.Y.Gai,S.Y.Chen,QTLmapping of ten agronomic traits on the soybean(Glycine max L.Merr.)geneticmap and their association with EST markers,Theor.Appl.Genet,2004,108:1131-1139”中，公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的大豆[Glycine max(L.)Merr]南农1138-2记载于文献“JY Gai,ZYZhang,DW Hui,SY Chen,RAPD and RFLP markers linked with the gene resistant toa SMV strain in China,Soybean Genetic News Letter,1997,24,75-7”中，公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的植物双元表达载体pBin438记载于文献“李太元,田颖川,秦晓峰,等.高效抗虫转基因烟草的研究[J].中国科学(B辑),1994,24(3):276-282”中，公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所和黑龙江省农业科学院耕作栽培研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的发根农杆菌K599记载于文献“Attila Kereszt,et al.,Agrobacteriumrhizogenes-mediaded transformation of soybean to study of rootbiology,Nature Protocols,2007,2(4),549-552”中，公众可从Peter M Gressnon教授(The University of Queensland,St Lucia,Queensland 4072,Australia)获得，或经Peter M Gressnon教授同意(书面同意书)后由中科院遗传与发育生物学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
实施例1、转GmJMJ30-2大豆毛状根的获得及耐逆性鉴定
一、转GmJMJ30-2大豆毛状根的获得
1、大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30-2编码基因GmJMJ30-2的cDNA克隆
1)将大豆耐逆品种南农1138-2光照培养，生长2个星期后取幼苗分别提取RNA。具体提取方法如下：将1g新鲜幼苗在液氮中研碎，悬于4mol/L硫氢酸胍中，混合物用酸性苯酚、氯仿抽提，上清中加入无水乙醇沉淀总RNA，然后溶于水，得到总RNA。
2)用逆转录酶反转录合成cDNA。
3)以反转录得到的cDNA为模板，采用引物JMJ30-2L：ATGTCGACCACAACTGTATC和引物JMJ30-2R：TTAGGATGCATCCGAACTTTC进行PCR扩增，得到PCR产物。
4)对PCR产物进行0.8％琼脂糖凝胶电泳检测，片段大小约为1.2kb，与预期结果相符。用琼脂糖凝胶回收试剂盒(TIANGEN)回收该片段。将该回收片段与pGEM-T Easy(Promega)连接，参照Cohen等的方法，将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，根据pGEM-T Easy载体上的羧卞青霉素抗性标记筛选阳性克隆，得到含有回收片段的重组质粒。
5)以重组质粒载体上的T7和SP6启动子序列为引物对其进行核苷酸序列测定，测序结果表明该PCR产物具有序列表中的序列1的核苷酸序列，该PCR产物的基因命名为GmJMJ30-2，其ORF为序列1自5’末端起第1-1239位核苷酸。GmJMJ30-2编码的蛋白质的氨基酸序列为序列表的序列2，序列表中的序列2由413个氨基酸残基组成。
2、大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30-2的植物表达载体pBIN438-GmJMJ30-2的构建
1)以南农1138-2的cDNA为模板，采用引物对NF438-J302F和NF438-J302R进行PCR扩增，获得PCR产物，并用琼脂糖凝胶回收试剂盒(TIANGEN)回收该片段。引物序列如下：
NF438-J302F：
TTTACAATTACTGCAGATGGACTACAAAGACCATGATGGAGACTATAAGGATCACGACATCGATTACA AGGACGATGACGATAAGATGTCGACCACAAC；
NF438-J302R：GTAATCGGTACCCTCGAGTTAGGATGCATCCGAACT。
2)用限制性内切酶BamHI和KpnI对pBIN438进行双酶切，采用同源重组法将步骤1)回收片段连入pBIN438载体的BamHI和KpnI酶切位点间，得到重组表达载体pBIN438-GmJMJ30-2(图1)。
上述构建的载体均经过测序，验证构建无误后进行下一步实验。
3、转GmJMJ30-2大豆毛状根的获得
采用发根农杆菌侵染法获得转GmJMJ30-2大豆毛状根。发根农杆菌侵染法根据Attila Kereszt等方法(Attila Kereszt,et al.,Agrobacterium rhizogenes-mediadedtransformation of soybean to study of root biology,Nature Protocols,2007,2(4),549-552)略加改进，可参考文献“Wang,Fang；Chen,Hao-Wei；Li,Qing-Tian；Wei,Wei；Li,Wei；Zhang,Wan-Ke；Ma,Biao；Bi,Ying-Dong；Lai,Yong-Cai；Liu,xin-Lei；Man,Wei-Qun；Zhang,Jin-Song；Chen,Shou-Yi,GmWRKY27 interacts with GmMYB174 to reduceexpression of GmNAC29 for stress tolerance in soybean plants,2015,The PlantJournal,83,224–236”或发明名称为植物耐逆性相关转录因子GmWRKY78及其编码基因与应用，授权号为ZL201110053083.7，授权日为2013.10.09的发明专利。具体步骤如下：
1)重组农杆菌的获得
将上述得到的重组表达载体pBIN438-GmJMJ30-2通过电击法导入发根农杆菌K599，得到重组农杆菌。将含有上述质粒的重组农杆菌命名为K599/pBIN438-GmJMJ30-2。
2)毛状根转化
用注射器将上述重组农杆菌K599/pBIN438-GmJMJ30-2接种生长6天含两片真叶的大豆科丰1号幼苗，具体方法见上述引文，保湿生长：光照16小时，温度25℃，湿度50％。2周后，长出的毛状根即为转基因毛状根(转K599/pBIN438-GmJMJ30-2毛状根，简称转GmJMJ30-2毛状根)，共获得127个转GmJMJ30-2毛状根根系，可进一步作转基因鉴定和耐逆性检测。
以相同的方法将含空载体pBIN438的发根农杆菌K599/pBIN438转入大豆科丰1号幼苗，得到123个转空载体毛状根根系，作为实验对照。
3)转基因毛状根的分子鉴定
提取转基因毛状根和转空载体毛状根的总RNA，将其反转录为cDNA。以cDNA为模板，采用引物JMJ30-2L：ATGTCGACCACAACTGTATC和JMJ30-2R：TTAGGATGCATCCGAACTTTC进行GmJMJ30-2基因表达量分析。大豆GmTubulin基因为内标，所用引物为Primer-TF：5’-AACCTCCTCCTCATCGTACT和Primer-TR：5’-GACAGCATCAGCCATGTTCA。实验重复三次，结果取平均值±标准差。
结果如图2所示，结果表明：GmJMJ30-2在转K599/pBIN438-GmJMJ30-2毛状根(JMJ-OE)中的相对表达量约为12，转空载体毛状根中的相对表达量约为0.5(K599)，转K599/pBIN438-GmJMJ30-2毛状根中的相对表达量明显高于转空载体毛状根。
二、转GmJMJ30-2大豆毛状根的嵌合体植株耐逆性鉴定
实验样本为步骤一制备的转空载体毛状根和转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株。
将转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株和转空载体毛状根的嵌合体植株各分成4组，每组10棵植株。一组经100mM NaCl水溶液25℃处理3天，即浸入100mM NaCl溶液中25℃处理3天；第二组，经150mM甘露醇水溶液25℃处理2天，即浸入150mM甘露醇水溶液中25℃处理2天；第三、四组浸入水中分别作为NaCl和甘露醇处理的对照。实验重复三次，结果取平均值±标准差。100mM NaCl水溶液处理3天及150mM甘露醇处理2天后拍照观察。
结果如图3所示，结果表明：从转空载体毛状根和转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株及叶片表型可以看出，在水处理(正常条件)条件下，转空载体毛状根和转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株无明显差异，在150mM甘露醇处理2天后，对照叶片明显萎蔫，而转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株叶片尚好，在100mM NaCl处理3天后，对照叶片已经枯萎，转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株的叶萎蔫程度显著低于转空载体毛状根对照。
对逆境和对照处理后植株叶片的含水量(％)进行统计。含水量百分数测量方法具体如下：将大豆幼苗的所有三出复叶剪下来，秤鲜重，然后60℃以上烘干72小时，使其彻底干燥后秤干重，并计算叶片水含量。水含量(％)＝【(鲜重-干重)/鲜重】×100％。
结果如图4所示，结果表明：在甘露醇模拟的干旱处理实验中，正常条件下，对照叶片水含量约为85％，转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株叶片水含量约为81％，150mM甘露醇处理2天后，对照叶片水含量降至约55％，转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株叶片水含量约为72％。在耐盐测试实验中，正常条件下，对照叶片水含量约为81％，转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株叶片水含量约为83％，100mM NaCl处理3天后，对照叶片水含量降至约为44％，转GmJMJ30-2毛状根的嵌合体植株叶片水含量约为71％。上述结果表明，GmJMJ30-2的过表达提高了大豆植株的耐盐、耐旱性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所
<120> 大豆组蛋白去甲基化酶GmJMJ30-2在调控植物耐逆性中的应用
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1242
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
atgtcgacca caactgtatc cggcggcgac cctccttctc gcggttttga tacgccgacg 60
ctggaccggg aggcggcggc gctgctccac gcgatctccg agcatggcgg gtacgcgtac 120
gtgagcatgg cggtgctggc ttccggcggc gacattcgcg cggcggaggc ggctcgggag 180
atggcgtggg agcagctgca ctcgggtccg tggcactcgg tgctgccggt gtggcgcgac 240
gcctactcca tggcgtgcct ccacgtggcg cgccaccact acggcaacgg tgagttcttg 300
gacgcactta gggttttgga tttgggaatc atcatgggag gcacgctcct ccgcaaggat 360
ttggactccg ccatcgagaa agtgtcggaa caaacacgga ggagcgttag ggtttctgat 420
ttggggaact ccgaacaccg actcgtcgat cgcgaatttg atatggcaga ggtgctccaa 480
cttttacctg tgaagtctct ttctacgaaa cttgtggtga agaaatcggc gctgtccttg 540
gagaaattcc tgaaggatca ttacctgtct ggctgcccgg ttattatcag tgattgtatg 600
tctcactggc cagccaagat gaaatggaat gacgaagatt acttgctgag agttgccgga 660
gaccgtacag ttccagttga ggttgggaaa aactatttat gtactgagtg gaagcaagag 720
ctaattactt tttcagagtt tcttcagcgg ataaagtctg atagctgttc tcctggtggt 780
cctacatatc ttgctcagca tccattattt gatcagataa atgagcttcg gaaagatatc 840
tttattcctg actattgttt tactggtgga ggggagctac gatctctcaa tgcttggttt 900
ggtccagcag gaacagtaac accgttacac catgatccac atcataacat actagctcag 960
gttgttggaa agaaatacat taggctatac tcttcgtctt tatctgagga actttccccc 1020
cactctggta ccatgctcca caactccagc caggttgatt tagatgatat ggatgaaaag 1080
aagtttccga aggtgcaaga cttggaattt gtagactgta ttttagagga aggcgaaatg 1140
ttatatatcc cgccaaaatg gtggcactat gtgcggtctt tgactaccag tttttcggtt 1200
agcttttggt ggagtgaggg tgaaagttcg gatgcatcct aa 1242
<210> 2
<211> 413
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 2
Met Ser Thr Thr Thr Val Ser Gly Gly Asp Pro Pro Ser Arg Gly Phe
1 5 10 15
Asp Thr Pro Thr Leu Asp Arg Glu Ala Ala Ala Leu Leu His Ala Ile
20 25 30
Ser Glu His Gly Gly Tyr Ala Tyr Val Ser Met Ala Val Leu Ala Ser
35 40 45
Gly Gly Asp Ile Arg Ala Ala Glu Ala Ala Arg Glu Met Ala Trp Glu
50 55 60
Gln Leu His Ser Gly Pro Trp His Ser Val Leu Pro Val Trp Arg Asp
65 70 75 80
Ala Tyr Ser Met Ala Cys Leu His Val Ala Arg His His Tyr Gly Asn
85 90 95
Gly Glu Phe Leu Asp Ala Leu Arg Val Leu Asp Leu Gly Ile Ile Met
100 105 110
Gly Gly Thr Leu Leu Arg Lys Asp Leu Asp Ser Ala Ile Glu Lys Val
115 120 125
Ser Glu Gln Thr Arg Arg Ser Val Arg Val Ser Asp Leu Gly Asn Ser
130 135 140
Glu His Arg Leu Val Asp Arg Glu Phe Asp Met Ala Glu Val Leu Gln
145 150 155 160
Leu Leu Pro Val Lys Ser Leu Ser Thr Lys Leu Val Val Lys Lys Ser
165 170 175
Ala Leu Ser Leu Glu Lys Phe Leu Lys Asp His Tyr Leu Ser Gly Cys
180 185 190
Pro Val Ile Ile Ser Asp Cys Met Ser His Trp Pro Ala Lys Met Lys
195 200 205
Trp Asn Asp Glu Asp Tyr Leu Leu Arg Val Ala Gly Asp Arg Thr Val
210 215 220
Pro Val Glu Val Gly Lys Asn Tyr Leu Cys Thr Glu Trp Lys Gln Glu
225 230 235 240
Leu Ile Thr Phe Ser Glu Phe Leu Gln Arg Ile Lys Ser Asp Ser Cys
245 250 255
Ser Pro Gly Gly Pro Thr Tyr Leu Ala Gln His Pro Leu Phe Asp Gln
260 265 270
Ile Asn Glu Leu Arg Lys Asp Ile Phe Ile Pro Asp Tyr Cys Phe Thr
275 280 285
Gly Gly Gly Glu Leu Arg Ser Leu Asn Ala Trp Phe Gly Pro Ala Gly
290 295 300
Thr Val Thr Pro Leu His His Asp Pro His His Asn Ile Leu Ala Gln
305 310 315 320
Val Val Gly Lys Lys Tyr Ile Arg Leu Tyr Ser Ser Ser Leu Ser Glu
325 330 335
Glu Leu Ser Pro His Ser Gly Thr Met Leu His Asn Ser Ser Gln Val
340 345 350
Asp Leu Asp Asp Met Asp Glu Lys Lys Phe Pro Lys Val Gln Asp Leu
355 360 365
Glu Phe Val Asp Cys Ile Leu Glu Glu Gly Glu Met Leu Tyr Ile Pro
370 375 380
Pro Lys Trp Trp His Tyr Val Arg Ser Leu Thr Thr Ser Phe Ser Val
385 390 395 400
Ser Phe Trp Trp Ser Glu Gly Glu Ser Ser Asp Ala Ser
405 410
Claims (7)
1.如下A1）或A2）任一所示蛋白质在调控植物耐逆性中的应用：
A1）由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
A2）在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；
所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性；
所述植物为大豆。
2.与权利要求1中所述的蛋白质相关的生物材料在调控植物耐逆性中的应用；
所述生物材料为下述B1）-B8）中的任一种：
B1）编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子；
B2）含有B1）所述核酸分子的表达盒；
B3）含有B1）所述核酸分子的重组载体；
B4）含有B2）所述表达盒的重组载体；
B5）含有B1）所述核酸分子的重组微生物；
B6）含有B2）所述表达盒的重组微生物；
B7）含有B3）所述重组载体的重组微生物；
B8）含有B4）所述重组载体的重组微生物；
所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性；
所述植物为大豆。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：B1）所述核酸分子为）编码序列是序列表中序列1所示的DNA分子。
4.权利要求1中所述的蛋白质或权利要求2或3中所述的生物材料在培育耐逆性提高的转基因植物中的应用；所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性；所述植物为大豆。
5.一种培育耐逆性提高的转基因植物的方法，包括提高受体植物中权利要求1中所述的蛋白质的含量和/或活性，得到转基因植物的步骤；所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物；所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性；所述植物为大豆。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述提高受体植物中权利要求1中所述的蛋白质的含量和/或活性的方法为在受体植物中过表达权利要求1中所述的蛋白质。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述过表达的方法为将权利要求1中所述的蛋白质的编码基因导入受体植物。
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