CN113388622A - 火龙果HubHLH93基因及其编码蛋白在抗盐胁迫中的应用 - Google Patents

火龙果HubHLH93基因及其编码蛋白在抗盐胁迫中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了火龙果HubHLH93基因及其编码的转录因子在提高植物抗盐胁迫中的应用，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；其转录因子的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明通过转基因的方法对HubHLH93基因进行过表达，伴随着HubHLH93基因的表达量提高，拟南芥对盐的抗性也相应得到提高，因此可将火龙果HubHLH93基因和相应的编码蛋白应用于农作物的基因工程遗传育种，培育耐盐的作物品种，降低盐渍地对粮食作物带来的安全危害等都具有重要的参考意义。

Description

火龙果HubHLH93基因及其编码蛋白在抗盐胁迫中的应用
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，特别是涉及一种火龙果HubHLH93基因、火龙果HubHLH93基因编码的转录因子、插入火龙果HubHLH93基因的过表达载体，在提高植物抗盐胁迫中的应用，以及在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用。
背景技术
火龙果(Hylocereus spp.)是仙人掌科、量天尺属一种多年生肉质攀援植物，同时也是一种热带、亚热带的重要果树。火龙果原产于墨西哥及美洲大陆等地，后传入越南、泰国等东南亚国家和我国的台湾省，随后我国大陆的南方也进行了引种种植。火龙果具有较高的经济价值，火龙果的花、茎、果实皆具有食用性和观赏性，且果实具有丰富的营养价值，是具有水果、花卉、蔬菜、保健等特色为一体的植物，具有巨大的经济价值和广阔的发展潜力。
bHLH转录因子是含有高度保守的碱性螺旋-环-螺旋转录因子(basic/helix-loop-helix，bHLH)结构域的超级转录因子家族，广泛存在于真核及非真核生物中，在生命活动中具有重要的作用。bHLH转录因子通过形成同源二聚体或者与其他转录因子形成异源二聚体与双链DNA结合，从而调控基因的转录。bHLH转录因子在植物的生长发育，次生代谢物质合成和响应生物胁迫及非生物胁迫中具有重要作用。苹果中MdbHLH93通过ABA途径影响叶片衰老，超表达MdbHLH93导致黑暗诱导产生的衰老症状增强。bHLH93参与植物脂质代谢，bHLH93突变体植株中甾醇物质含量减少，质体类异戊二烯含量增加。番茄中bHLH93可以增强植株的抗病性，bHLH93通过与茄青枯菌效应子RipI相互作用诱导宿主防御反应。
土壤盐渍化是限制全世界农业发展的主要非生物胁迫之一。全世界有7％的土地土壤盐渍化严重，盐渍化土壤严重影响农作物的生长，从而影响全世界农作物的产量。因此，研究植物耐盐机制和培育耐盐品种具有重要的意义。火龙果抗逆性强，具有较强的耐盐，耐热，耐旱性，可以作为一种挖掘植物抗逆性遗传资源的研究对象进行深入研究。
发明内容
基于此，本发明的目的之一是提供一种火龙果HubHLH93基因、及其编码的转录因子在提高植物抗盐胁迫中的应用，该基因和其编码的转录因子可以提高植物抗盐胁迫。
实现上述发明目的的具体技术方案如下：
火龙果HubHLH93基因在提高植物抗盐胁迫中的应用，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
火龙果HubHLH93基因编码的转录因子在提高植物抗盐胁迫中的应用，所述转录因子的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸，但蛋白活性相同。
本发明的另一目的是提供一种火龙果HubHLH93基因、及其编码的转录因子在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用，火龙果HubHLH93基因、及其编码的转录因子可以用于培育耐盐的植物品种。
实现上述发明目的的具体技术方案如下：
火龙果HubHLH93基因在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQID NO.2所示的核苷酸序列。
火龙果HubHLH93基因编码的转录因子在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用，所述转录因子的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸，但蛋白活性相同。
本发明的另一目的是提供一种过表达载体，该过表达载体在提高植物抗盐胁迫，以及改良植物对盐的耐受性。
实现上述发明目的的具体技术方案如下：
插入有火龙果HubHLH93基因的过表达载体，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
在其中一些实施例中，所述过表达载体为pCAMBIA1302-HubHLH93。
本发明还提供了一种提高植物抗盐胁迫的生物制剂。
实现上述发明目的的具体技术方案如下：
一种提高植物抗盐胁迫的生物制剂，所述生物制剂的活性成分来源于插入有火龙果HubHLH93基因的过表达载体，或其活性成分含有调控火龙果HubHLH93基因表达的生物制品，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
本发明还提供了一种调控植物抗盐胁迫的方法。
实现上述发明目的的具体技术方案如下：
一种调控植物抗盐胁迫的方法，该方法包括调控火龙果HubHLH93基因的表达，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
在其中一些实施例中，所述抗盐胁迫中的盐浓度为100mM～600mM。
在其中一些实施例中，所述植物为拟南芥或火龙果。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
在本发明中，我们获得的一个火龙果HubHLH93基因及其编码的转录因子，并进行应用性探索，阐述了该基因以下的应用方式：
1、本发明通过转基因的方法对HubHLH93基因进行过表达，伴随着HubHLH93基因的表达量提高，拟南芥对盐的抗性也相应得到提高，表明该基因具有盐胁迫应答的基本功能，可以将该基因应用于植物针对盐胁迫的遗传育种，改良植物对盐的耐受性，培育耐盐的作物品种，降低盐渍地对粮食作物带来的安全危害等都具有重要的参考意义；
2、本发明的发明人发现火龙果HubHLH93基因通过表达植物的碱性螺旋-环-螺旋转录因子，来参与盐胁迫应答，对于全面理解植物中碱性螺旋-环-螺旋转录因子的生物学功能具有重要的意义，对该基因的研究为进一步丰富bHLH家族的抗逆性研究提供依据，为植物抗盐分子育种提供更为丰富的基因遗传资源。
附图说明
图1为本发明实施例1中构建表达载体所用的pCAMBIA1302的载体图谱；
图2为本发明实施例1中对过表达火龙果HubHLH93基因的阳性转基因植株的检测结果，其中，1-24泳道为阳性转基因拟南芥植株，25泳道为野生型拟南芥；
图3为本发明实施例1中野生型和HubHLH93转基因拟南芥的定量检测结果，其中WT为：WildType，HubHLH93-OX3为：HubHLH93-Overexpress line 3，HubHLH93-OX8为：HubHLH93-Overexpress line 8，HubHLH93-OX13为：HubHLH93-Overexpress line 13；
图4为本发明实施例2中不同NaCl浓度处理过表达拟南芥和野生型拟南芥的种子萌发率比较图，其中WT为：WildType，HubHLH93-OX3为：HubHLH93-Overexpress line 3，HubHLH93-OX8为：HubHLH93-Overexpress line 8，HubHLH93-OX13为：HubHLH93-Overexpress line 13；
图5为本发明实施例2中200mM NaCl处理过表达拟南芥和野生型拟南芥的长势比较结果，其中WT为：WildType，HubHLH93-OX3为：HubHLH93-Overexpress line 3，HubHLH93-OX8为：HubHLH93-Overexpress line 8，HubHLH93-OX13为：HubHLH93-Overexpress line13；
图6为本发明实施例3中火龙果在450mM高盐NaCl处理下，HubHLH93基因在不同时间点的表达水平。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
本发明中的火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其编码的转录因子的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。过表达HubHLH93基因的载体pCAMBIA1302- HubHLH93的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
SEQ ID NO.1
ATGGAGATGAATGAAGATGGATTCTTAGAAGAGCTGCTAGCACTAAGAAGAGTACAAGCATGGGAAACAAATCCAACAGCCATATCAGCCGAAATCAACGGCTTCTTTTCGGCCACCACTTGGGGCTTCGACGGGCTAGATTCAGTCCCGCCGCCGCCGCAACCACCGCCGTCAGTCACCACCGGCCCCATTTTACCCAACTCAACTTCCTACGAGTCCTTCTCTTCTTCCTGCTCCTTCCCTGCTGACTTCTATGTCAACGCCACCTCCTCCGCCGCCCTAATCTCGCCGGACTCGGCCTTCCCTGTGGCGCTGGTGGAGGGTGACTGCGGCGGAATGGGTCACTTGTCCGGCACATGCAAGCCGGAGCCGGCGTTGTCCGGGGAGATTCCGGCGACCCCCTCCACGTTTAACATGGGGATGTGCATGGAGAATAATGCTAATAGCAGCAATGGCGGGGGTAGCAGTGGCAGTAGTATCAAGAGTAAGGTCAAGAAGATTGGAGGCCAACCCTCTAAGAATCTCATGGCTGAGCGGAGGAGGAGGAAGAGATTGAATGATCGCTTGTCTATGCTTAGATCGGTCGTCCCCAAGATTAGCAAGATGGATAGGACATCTATTCTGGGAGACACAATTGATTACATGAAGGAGCTGGTAGAGAGGATCAAGAGGTTGCAAGAGGAAATAGATGTGGGGGGTTCAAATCAGCTGAATGTGATGAGCATCTTCAAGGACGAGAAACCCAATGATGTCTTGGTCAGAAATTCACCAAAGTTTGATGTGGAAAGGAGAAACGTGGATACGAGGGTTGAGATCTGTTGTGCTGGAAAACCAGGACTTCTATTGTCAACTGTGACAACACTGGAAGCATTGGGCCTAGAAGTTCAACAATGTGTTATTAGTTGCTTCAATGATTTCTCCCTACAAGCTTCCTGCTCAGAGGAAATGGAGCAGAGAACCCTCATAAGCTCTGAAGAAATAAAGCAAGCATTGTTCAGGAATGCAGGGTATGGAGGAAGGTGTTTGTAG
SEQ ID NO.2
MEMNEDGFLEELLALRRVQAWETNPTAISAEINGFFSATTWGFDGLDSVPPPPQPPPSVTTGPILPNSTSYESFSSSCSFPADFYVNATSSAALISPDSAFPVALVEGDCGGMGHLSGTCKPEPALSGEIPATPSTFNMGMCMENNANSSNGGGSSGSSIKSKVKKIGGQPSKNLMAERRRRKRLNDRLSMLRSVVPKISKMDRTSILGDTIDYMKELVERIKRLQEEIDVGGSNQLNVMSIFKDEKPNDVLVRNSPKFDVERRNVDTRVEICCAGKPGLLLSTVTTLEALGLEVQQCVISCFNDFSLQASCSEEMEQRTLISSEEIKQALFRNAGYGGRCL
SEQ ID No.3
ATGGAGATGAATGAAGATGGATTCTTAGAAGAGCTGCTAGCACTAAGAAGAGTACAAGCATGGGAAACAAATCCAACAGCCATATCAGCCGAAATCAACGGCTTCTTTTCGGCCACCACTTGGGGCTTCGACGGGCTAGATTCAGTCCCGCCGCCGCCGCAACCACCGCCGTCAGTCACCACCGGCCCCATTTTACCCAACTCAACTTCCTACGAGTCCTTCTCTTCTTCCTGCTCCTTCCCTGCTGACTTCTATGTCAACGCCACCTCCTCCGCCGCCCTAATCTCGCCGGACTCGGCCTTCCCTGTGGCGCTGGTGGAGGGTGACTGCGGCGGAATGGGTCACTTGTCCGGCACATGCAAGCCGGAGCCGGCGTTGTCCGGGGAGATTCCGGCGACCCCCTCCACGTTTAACATGGGGATGTGCATGGAGAATAATGCTAATAGCAGCAATGGCGGGGGTAGCAGTGGCAGTAGTATCAAGAGTAAGGTCAAGAAGATTGGAGGCCAACCCTCTAAGAATCTCATGGCTGAGCGGAGGAGGAGGAAGAGATTGAATGATCGCTTGTCTATGCTTAGATCGGTCGTCCCCAAGATTAGCAAGATGGATAGGACATCTATTCTGGGAGACACAATTGATTACATGAAGGAGCTGGTAGAGAGGATCAAGAGGTTGCAAGAGGAAATAGATGTGGGGGGTTCAAATCAGCTGAATGTGATGAGCATCTTCAAGGACGAGAAACCCAATGATGTCTTGGTCAGAAATTCACCAAAGTTTGATGTGGAAAGGAGAAACGTGGATACGAGGGTTGAGATCTGTTGTGCTGGAAAACCAGGACTTCTATTGTCAACTGTGACAACACTGGAAGCATTGGGCCTAGAAGTTCAACAATGTGTTATTAGTTGCTTCAATGATTTCTCCCTACAAGCTTCCTGCTCAGAGGAAATGGAGCAGAGAACCCTCATAAGCTCTGAAGAAATAAAGCAAGCATTGTTCAGGAATGCAGGGTATGGAGGAAGGTGTTTG
应当理解，考虑到密码子的简并性，在不改变氨基酸序列的前提下，对以下实施例中涉及到的碱基序列进行修改，也属于本发明的保护范围。
以下结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细的说明。
实施例1火龙果HubHLH93基因的过表达载体的构建和转基因材料的获得
本实施例中，通过pCAMBIA1302载体(其图谱如图1所示)构建过表达载体pCAMBIA1302-HubHLH93，并得到转基因材料，具体步骤如下：
1、过表达载体pCAMBIA1302-HubHLH93的构建
(1)、扩增目的基因
以火龙果HubHLH93基因的cDNA作为模板，以上游引物：5’-TGACCATGGTAGATCTGATGGAGATGAATGAAGATGG-3’(SEQ ID NO.4)和下游引物5’-CTTCTCCTTTACTAGTCAAACACCTTCCTCCATACC-3’(SEQID NO.5)作为引物，PCR扩增得到1026bp的目的片段。
其中，PCR反应体系为：
Figure BDA0003169944420000091
Max DNA Polymerase 10μL，10μM上游/下游引物各0.5μL，cDNA模板1μL，ddH2O 8μL。各种成分混匀后置于PCR仪上进行反应。
PCR反应程序如下：98℃5min；98℃10s，55℃15s，72℃20s，38个循环；72℃5min；电泳检测并回收条带大小正确的产物。
(2)、线性化载体pCAMBIA1302
用BglⅡ和SpeⅠ同时酶切载体质粒pCAMBIA1302。20μL双酶切反应体系为：质粒模板5μL，10×FastDiest Buffer 2μL，BglⅡ1μL，SpeⅠ1μL，ddH2O 11μL。酶切反应条件：37℃酶切60min。反应结束后，以琼脂糖凝胶DNA试剂盒回收酶切产物。
(3)、载体连接
用In-Fusion克隆(同源重组)方法将目的基因片段连接于酶切后线性化的pCAMBIA1302载体上。5μL连接体系为：5×In-Fusion HD Enzyme Premix 0.5μL，pCAMBIA1302 Vector 3.5μL，目的片段1μL。混匀后，置于50℃保温45min，进行连接，得到过表达载体pCAMBIA1302-HubHLH93，其核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示。
2、转基因材料的获得
(1)、连接产物转化大肠杆菌
将步骤3获得的5μl连接产物(即过表达载体pCAMBIA1302-HubHLH93)转化大肠杆菌DH5α，混匀后冰浴30min；42℃水浴热激90s；置于冰上，冰浴2min；加700ml液体LB培养基，37℃复苏40min，涂于含Kan(卡那霉素)的LB平板37℃过夜。挑取单克隆，于含有Kan的液体LB培养基中扩增培养，测序鉴定，并提取质粒。
(2)、阳性克隆转化农杆菌
将步骤(1)获得的阳性克隆提取质粒转化农杆菌，挑选阳性农杆菌。
(3)、侵染野生型拟南芥花序
采用根瘤农杆菌介导的遗传转化方法，将步骤(2)获得的阳性农杆菌浸染野生型拟南芥花序，同时以未转入HubHLH93基因的野生型拟南芥作为对照。
(4)、转基因T0代的阳性植株的筛选及检测
将T0代种子进行表面消毒，平铺在含有kan抗性的MS固体培养基平板上。将萌发的幼苗长至2片叶大小时，转移至营养土进行培养。待其快开花时取其叶片提取DNA，使用hpt-F/R引物(北京擎科生物有限公司广州分公司)进行PCR检测，PCR反应体系为：2×Taq Mix 5μL，10μM上游/下游引物各0.25μL，DNA模板0.5μL，ddH2O 4μL。各种成分混匀后置于PCR仪上进行反应。PCR反应程序如下：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃30s，36个循环，72℃5min；电泳检测并回收条带大小正确的产物。结果如图2所示，1-24泳道为转基因拟南芥植株，全部具有500bp左右的条带，25泳道为野生型拟南芥，无条带。
(5)、超表达HubHLH93的转基因植株的表达量检测
通过qRT-PCR技术检测转基因拟南芥中HubHLH93基因的表达水平。使用荧光定量试剂盒HieffTM qPCR
Figure BDA0003169944420000111
Green Master Mix(No Rox)进行qRT-PCR，qRT-PCR反应体系为：2×SYBR Green Master Mix 5μL，10μM正向/反向引物各0.2μL，稀释后的cDNA 1μL，ddH2O 3.6μL。qRT-PCR采用384孔，仪器为RoChe公司的Light Cycler480，采用如下程序为：95℃预变性5min；95℃变性10s，60℃退火及延伸30s，45个循环；95℃15s，60℃60s，95℃15s，1个循环进行溶解曲线的制作；最后，50℃降温30s。选取拟南芥Actin为内参基因进行定量分析。
结果如图3所示，转基因拟南芥植株中HubHLH93基因的表达量远远高于野生型拟南芥植株中HubHLH93基因的表达量，说明HubHLH93基因在转基因拟南芥中超表达成功。
实施例2 HubHLH93基因过表达拟南芥植株在盐胁迫下的种子萌发率和表型
本实施例考察了HubHLH93基因过表达的拟南芥植株在盐胁迫下的种子萌发情况，以及过表达植株在盐胁迫下的表型。
将野生型拟南芥种子和T2代纯合体过表达拟南芥种子进行表面消毒，播种到含有0mM、200mM、220mM NaCl MS培养基上，4℃放置三天进行春化，然后将其放到22℃、16h白光(50μmol/m2s)/8h黑暗循环的温室中，7天后统计萌发率，结果如图4所示，200mM NaCl浓度下，过表达HubHLH93基因的转基因拟南芥株系HubHLH93-OX3、HubHLH93-OX8、HubHLH93-OX13的萌发率为93-98％，而野生型的萌发率为77％-80％，显著比野生型拟南芥株系的萌发率高；220mM NaCl浓度下，过表达HubHLH93基因的转基因拟南芥株系HubHLH93-OX3、HubHLH93-OX8、HubHLH93-OX13的萌发率为70％-81％，野生型植株的萌发率为15％-28％，明显比野生型拟南芥株系WT的萌发率高。
将野生型拟南芥种子和HubHLH93基因过表达植株播种到MS培养基上，室温培养7天后移苗至装有蛭石的小钵中，室温条件下生长20天，浇200mM NaCl进行高盐处理，观察处理后的表现，结果如图5所示，200mM NaCl浓度下，过表达HubHLH93基因的转基因拟南芥植株HubHLH93-OX3、HubHLH93-OX8、HubHLH93-OX13明显比野生型拟南芥株系WT长势好。
本实施例结果说明，HubHLH93基因过表达株系的种子萌芽率和长势明显比野生型株系好，表明过表达HubHLH93基因的植株更抗盐。
实施例3高盐处理下火龙果中HubHLH93基因表达模式
本实施例通过qRT-PCR技术检测火龙果HubHLH93基因在盐胁迫下不同时间点的表达水平，来研究火龙果中HubHLH93基因对盐胁迫响应的模式。
使用荧光定量试剂盒HieffTM qPCR
Figure BDA0003169944420000121
Green MasterMix(No Rox)进行qRT-PCR，qRT-PCR反应体系为：2×SYBR Green MasterMix 5μL，10μM正向/反向引物各0.2μL，稀释后的cDNA 1μL，ddH2O 3.6μL。
qRT-PCR采用384孔，仪器为RoChe公司的Light Cycler480，采用如下程序为：95℃预变性5min；95℃变性10s，60℃退火及延伸30s，45个循环；95℃15s，60℃60s，95℃15s，1个循环进行溶解曲线的制作；最后，50℃降温30s。选取火龙果中eEF为内参基因进行定量分析，结果如图6所示。
从图6可以看出，火龙果受到盐胁迫时HubHLH93基因的表达量上升，表明受盐胁迫HubHLH93基因被诱导表达。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 中国科学院华南植物园
<120> 火龙果HubHLH93基因及其编码蛋白在抗盐胁迫中的应用
<130> 1
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1029
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggagatga atgaagatgg attcttagaa gagctgctag cactaagaag agtacaagca 60
tgggaaacaa atccaacagc catatcagcc gaaatcaacg gcttcttttc ggccaccact 120
tggggcttcg acgggctaga ttcagtcccg ccgccgccgc aaccaccgcc gtcagtcacc 180
accggcccca ttttacccaa ctcaacttcc tacgagtcct tctcttcttc ctgctccttc 240
cctgctgact tctatgtcaa cgccacctcc tccgccgccc taatctcgcc ggactcggcc 300
ttccctgtgg cgctggtgga gggtgactgc ggcggaatgg gtcacttgtc cggcacatgc 360
aagccggagc cggcgttgtc cggggagatt ccggcgaccc cctccacgtt taacatgggg 420
atgtgcatgg agaataatgc taatagcagc aatggcgggg gtagcagtgg cagtagtatc 480
aagagtaagg tcaagaagat tggaggccaa ccctctaaga atctcatggc tgagcggagg 540
aggaggaaga gattgaatga tcgcttgtct atgcttagat cggtcgtccc caagattagc 600
aagatggata ggacatctat tctgggagac acaattgatt acatgaagga gctggtagag 660
aggatcaaga ggttgcaaga ggaaatagat gtggggggtt caaatcagct gaatgtgatg 720
agcatcttca aggacgagaa acccaatgat gtcttggtca gaaattcacc aaagtttgat 780
gtggaaagga gaaacgtgga tacgagggtt gagatctgtt gtgctggaaa accaggactt 840
ctattgtcaa ctgtgacaac actggaagca ttgggcctag aagttcaaca atgtgttatt 900
agttgcttca atgatttctc cctacaagct tcctgctcag aggaaatgga gcagagaacc 960
ctcataagct ctgaagaaat aaagcaagca ttgttcagga atgcagggta tggaggaagg 1020
tgtttgtag 1029
<210> 2
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Glu Met Asn Glu Asp Gly Phe Leu Glu Glu Leu Leu Ala Leu Arg
1 5 10 15
Arg Val Gln Ala Trp Glu Thr Asn Pro Thr Ala Ile Ser Ala Glu Ile
20 25 30
Asn Gly Phe Phe Ser Ala Thr Thr Trp Gly Phe Asp Gly Leu Asp Ser
35 40 45
Val Pro Pro Pro Pro Gln Pro Pro Pro Ser Val Thr Thr Gly Pro Ile
50 55 60
Leu Pro Asn Ser Thr Ser Tyr Glu Ser Phe Ser Ser Ser Cys Ser Phe
65 70 75 80
Pro Ala Asp Phe Tyr Val Asn Ala Thr Ser Ser Ala Ala Leu Ile Ser
85 90 95
Pro Asp Ser Ala Phe Pro Val Ala Leu Val Glu Gly Asp Cys Gly Gly
100 105 110
Met Gly His Leu Ser Gly Thr Cys Lys Pro Glu Pro Ala Leu Ser Gly
115 120 125
Glu Ile Pro Ala Thr Pro Ser Thr Phe Asn Met Gly Met Cys Met Glu
130 135 140
Asn Asn Ala Asn Ser Ser Asn Gly Gly Gly Ser Ser Gly Ser Ser Ile
145 150 155 160
Lys Ser Lys Val Lys Lys Ile Gly Gly Gln Pro Ser Lys Asn Leu Met
165 170 175
Ala Glu Arg Arg Arg Arg Lys Arg Leu Asn Asp Arg Leu Ser Met Leu
180 185 190
Arg Ser Val Val Pro Lys Ile Ser Lys Met Asp Arg Thr Ser Ile Leu
195 200 205
Gly Asp Thr Ile Asp Tyr Met Lys Glu Leu Val Glu Arg Ile Lys Arg
210 215 220
Leu Gln Glu Glu Ile Asp Val Gly Gly Ser Asn Gln Leu Asn Val Met
225 230 235 240
Ser Ile Phe Lys Asp Glu Lys Pro Asn Asp Val Leu Val Arg Asn Ser
245 250 255
Pro Lys Phe Asp Val Glu Arg Arg Asn Val Asp Thr Arg Val Glu Ile
260 265 270
Cys Cys Ala Gly Lys Pro Gly Leu Leu Leu Ser Thr Val Thr Thr Leu
275 280 285
Glu Ala Leu Gly Leu Glu Val Gln Gln Cys Val Ile Ser Cys Phe Asn
290 295 300
Asp Phe Ser Leu Gln Ala Ser Cys Ser Glu Glu Met Glu Gln Arg Thr
305 310 315 320
Leu Ile Ser Ser Glu Glu Ile Lys Gln Ala Leu Phe Arg Asn Ala Gly
325 330 335
Tyr Gly Gly Arg Cys Leu
340
<210> 3
<211> 1026
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atggagatga atgaagatgg attcttagaa gagctgctag cactaagaag agtacaagca 60
tgggaaacaa atccaacagc catatcagcc gaaatcaacg gcttcttttc ggccaccact 120
tggggcttcg acgggctaga ttcagtcccg ccgccgccgc aaccaccgcc gtcagtcacc 180
accggcccca ttttacccaa ctcaacttcc tacgagtcct tctcttcttc ctgctccttc 240
cctgctgact tctatgtcaa cgccacctcc tccgccgccc taatctcgcc ggactcggcc 300
ttccctgtgg cgctggtgga gggtgactgc ggcggaatgg gtcacttgtc cggcacatgc 360
aagccggagc cggcgttgtc cggggagatt ccggcgaccc cctccacgtt taacatgggg 420
atgtgcatgg agaataatgc taatagcagc aatggcgggg gtagcagtgg cagtagtatc 480
aagagtaagg tcaagaagat tggaggccaa ccctctaaga atctcatggc tgagcggagg 540
aggaggaaga gattgaatga tcgcttgtct atgcttagat cggtcgtccc caagattagc 600
aagatggata ggacatctat tctgggagac acaattgatt acatgaagga gctggtagag 660
aggatcaaga ggttgcaaga ggaaatagat gtggggggtt caaatcagct gaatgtgatg 720
agcatcttca aggacgagaa acccaatgat gtcttggtca gaaattcacc aaagtttgat 780
gtggaaagga gaaacgtgga tacgagggtt gagatctgtt gtgctggaaa accaggactt 840
ctattgtcaa ctgtgacaac actggaagca ttgggcctag aagttcaaca atgtgttatt 900
agttgcttca atgatttctc cctacaagct tcctgctcag aggaaatgga gcagagaacc 960
ctcataagct ctgaagaaat aaagcaagca ttgttcagga atgcagggta tggaggaagg 1020
tgtttg 1026

Claims (10)

1.火龙果HubHLH93基因在提高植物抗盐胁迫中的应用，其特征在于，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQID NO.2所示的核苷酸序列。
2.火龙果HubHLH93基因在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用，其特征在于，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
3.火龙果HubHLH93基因编码的转录因子在提高植物抗盐胁迫中的应用，其特征在于，所述转录因子的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸，但蛋白活性相同。
4.火龙果HubHLH93基因编码的转录因子在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用，其特征在于，所述转录因子的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸，但蛋白活性相同。
5.插入有火龙果HubHLH93基因的过表达载体，其特征在于，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的过表达载体，其特征在于，所述过表达载体为pCAMBIA1302-HubHLH93。
7.权利要求5或6所述的插入有火龙果HubHLH93基因的过表达载体在提高植物抗盐胁迫中的应用。
8.权利要求5或6所述的插入有火龙果HubHLH93基因的过表达载体在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用。
9.一种提高植物抗盐胁迫的生物制剂，其特征在于，所述生物制剂的活性成分来源于权利要求5或6所述的过表达载体，或其活性成分含有调控火龙果HubHLH93基因表达的生物制品，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
10.一种调控植物抗盐胁迫的方法，其特征在于，该方法包括调控火龙果HubHLH93基因的表达，所述火龙果HubHLH93基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列完全互补配对的核苷酸序列；或为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，且能编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
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