CN109879947B

CN109879947B - 毛竹转录因子PheDof 2基因及应用

Info

Publication number: CN109879947B
Application number: CN201910338156.3A
Authority: CN
Inventors: 李雪平; 刘俊
Original assignee: International Center for Bamboo and Rattan
Current assignee: International Center for Bamboo and Rattan
Priority date: 2018-05-10
Filing date: 2019-04-25
Publication date: 2021-03-02
Anticipated expiration: 2039-04-25
Also published as: CN109879947A

Abstract

本发明涉及毛竹转录因子PheDof 2基因及应用。所述PheDof 2基因及其编码蛋白质的序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。本发明首次从毛竹中克隆得到PheDof 2基因并通过在拟南芥中过表达该基因验证了其生物学功能。PheDof 2基因具有调控植物抗逆性的功能，能够为毛竹转基因研究提供有力工具，为毛竹抗性分子育种提供有价值的候选基因。

Description

毛竹转录因子PheDof 2基因及应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，涉及毛竹转录因子PheDof 2基因及应用。

背景技术

毛竹Phyllostachys edulis是禾本科Gramminales竹亚科Bambusoideae刚竹属Phyllostachys散生竹种，是我国分布面积最大、范围最广、开发利用程度最高的笋材两用竹种，对竹产区地方经济、竹农收入具有深远影响，长期以来产生了巨大的经济、生态和社会效益。由于气候和土壤环境的差异，北方大部分地区干旱低温，毛竹的分布受到了很大的限制。进行竹种改良，扩大竹林的种植范围，培育具有高抗逆性的毛竹新品种已经成为发展竹产业的重要物质基础，而研究逆境条件下毛竹体内相关基因的功能则是进行新品种培育的分子基础工作，对于揭示竹子的抗逆分子机制，进而突破常规育种的局限性，加快竹子育种进程具有重要的现实意义。

转录因子通过与顺式作用元件结合调控下游基因表达，是许多基因表达调控方式之一。Dof蛋白是植物体内特有的一类转录因子，一般由200-400个氨基酸残基组成，因含有一个独特的Cys残基的单锌指保守DNA结构域，命名为Dof结构域。Dof蛋白受多基因共同调控，其在植物生长发育、信号转导、非生物胁迫、光周期调节、胚胎发育等多种表达调控途径中都发挥了重要作用。如拟南芥Arabidopsis thaliana中，CDFs响应干旱和盐胁迫处理，并且参与光周期开花调控，DAG1和DAG2促进种子萌发；在水稻中，OsDof-8(AKl01321)调控花序形成基因的表达，OsDof 3参与赤霉素调控表达。Dof转录因子参与多种代谢调控途径，但是，在毛竹中还未有相关报道，因此，对Dofs基因的识别和功能研究，特别是在竹子抗性调控方面，需要进一步的探索和挖掘。

发明内容

本发明的目的是提供毛竹转录因子PheDof 2基因及其编码的蛋白质。

本发明的另一目的是提供毛竹转录因子PheDof 2基因的应用。

为了实现本发明目的，本发明提供的毛竹转录因子PheDof 2基因，是编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)SEQ ID NO:2所示序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(a)衍生的蛋白质。

本发明PheDof 2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明采用如下方法克隆得到PheDof 2基因：

⑴以毛竹叶片为材料提取总RNA，并将提取得到的总RNA反转录为cDNA。在本发明中，毛竹总RNA的提取采用本领域常用的提取细胞总RNA的技术方案即可，本发明的实施例中具体的可采用Trizol法。

⑵在提取得到毛竹总RNA后，将所述总RNA反转录合成cDNA。在本发明中，所述的cDNA的合成采用本领域常规的cDNA的合成方法即可，无其他特殊要求；具体的本发明实施例中采用Promega公司的cDNA合成试剂盒完成cDNA的合成。

⑶在得到cDNA之后，进行PheDof 2基因PCR扩增，得到目的片段。在本发明中，所述PheDof 2基因PCR扩增的体系优选为30μL体系，包括10×Taq Buffer 3.0μL，2.5mM dNTPs4.8μL，10μM上、下游引物各0.6μL，cDNA模板3.0μL，5U/μL LA Taq聚合酶0.3μL，25mM MgCl₂3.0μL，ddH₂O 14.7μL。在本发明中，所述基因的PCR扩增的反应程序优选为：94℃预变性1min；94℃变性30s；63℃退火30s；72℃延伸80s，30个循环；72℃10min；4℃保存。

用Oligo7软件设计引物扩增PheDof 2。引物序列如下：

上游引物PheDof 2-F:5′-ATGTCGGATCAGAAGGATCCGGGTT-3′

下游引物PheDof 2-R:5′-TTAAGAGCTCTCCTGGAACAACTGC-3′

⑷在PCR扩增得到目的片段后，将所述目的片段进行测序，得到PheDof 2基因。本发明在所述的PCR扩增后优选的对目的片段进行纯化，所述纯化的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的DNA纯化试剂盒进行即可。

⑸纯化完成后，优选将所述纯化后的目的片段连接到pGEM-T Easy载体，导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，经菌落PCR验证为阳性克隆后进行测序。

本发明还提供含有所述PheDof 2基因的生物材料，所述生物材料为表达盒、表达载体、克隆载体、工程菌或转基因细胞系。

本发明还提供所述PheDof 2基因或含有该基因的生物材料在植物抗逆调控中的应用。

本发明所述植物包括但不限于拟南芥、毛竹。

本发明还提供所述PheDof 2基因或含有该基因的生物材料在制备转基因植物中的应用。

本发明还提供所述PheDof 2基因或含有该基因的生物材料在植物育种中的应用。

所述育种的目的是为了提高植物抗旱胁迫能力。PheDof 2参与毛竹干旱胁迫应答，干旱胁迫诱导该基因的表达。

优选地，将所述PheDof 2基因转入到拟南芥植株中，使PheDof2基因超量表达。更优选地，采用农杆菌介导法将毛竹转录因子PheDof 2基因转入到拟南芥植株中，获得PheDof 2基因过表达的转基因植株。更优选地，将PheDof 2基因构建到植物表达载体pCAMBIA2300上，转化农杆菌，然后浸染拟南芥花序，筛选转基因植株。

在本发明的一个具体实施方式中，植物表达载体pCAMBIA2300-PheDof 2的构建方法如下：

以反转录的cDNA为模板，进行PCR反应，在PheDof 2基因的上、下游分别引入Kpn I和Sal I酶切位点；将扩增产物连接到pGEM-T Easy载体，转化DH5α感受态细胞，进行序列测定；提取质粒，经KpnI和SalI双酶切的PheDof 2基因片段与pCAMBIA2300-CaMV35S连接，转化，提取质粒，进行序列测定，植物表达载体pCAMBIA2300-PheDof 2构建完成。

转基因拟南芥的制备方法如下：

将构建的植物表达载体pCAMBIA2300-PheDof 2转化农杆菌菌株GV3101感受态；选取阳性克隆摇菌，花序侵染及纯合子种子筛选；提取拟南芥阳性苗叶片RNA，反转录成cDNA，用引物PheDof2-F、PheDof 2-R进行PCR鉴定。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明提供的毛竹PheDof 2是一个新的Dof转录因子，通过构建毛竹PheDof 2植物表达载体，结合农杆菌介导的遗传转化法，异源转化拟南芥，检测PheDof 2对转基因拟南芥抗逆性的影响，并同时检测PheDof 2对毛竹干旱胁迫的响应，为毛竹转基因研究提供有力工具，为毛竹抗性分子育种提供有价值的候选基因。

附图说明

图1为本发明实施例2中PheDof 2基因克隆PCR产物电泳图(A)以及PCAMBIA2300-PheDof 2酶切产物电泳图(B)；其中，泳道1-2为PheDof 2PCR产物，泳道3为PCAMBIA2300-PheDof2酶切产物，M为DNA Marker。

图2为构建本发明植物重组表达载体pCAMBIA2300-PheDof 2的流程图。

图3为本发明实施例4中PheDof 2在干旱胁迫的毛竹根中的相对表达量。

图4为本发明实施例4中PheDof 2在干旱胁迫的毛竹茎中的相对表达量。

图5为本发明实施例4中PheDof 2在干旱胁迫的毛竹叶中的相对表达量。

图6为本发明实施例5中转PheDof 2基因拟南芥和野生型拟南芥在干旱和盐胁迫下的表型差异。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1毛竹转录因子PheDof 2基因的克隆

以毛竹叶片为材料，按照Trizol RNA提取试剂盒(TaKaRa)说明书方法提取叶片总RNA，取1μg RNA按照反转录试剂盒(Promega，USA)反转录成cDNA，用RNase消化cDNA产物。根据毛竹基因组数据库http://www.forestrylab.org/db/PhePacBio/ExtractSeq/phe/index.php下载PheDof 2基因核苷酸序列，根据PheDof 2的核苷酸序列，用Oligo7软件设计引物扩增PheDof 2。

上游引物PheDof 2-F:5′-ATGTCGGATCAGAAGGATCCGGGTT-3′

下游引物PheDof 2-R:5′-TTAAGAGCTCTCCTGGAACAACTGC-3′

聚合酶链式反应：

30μL反应体系：10×Taq Buffer 3.0μL，2.5mM dNTPs 4.8μL，10μM上、下游引物各0.6μL，cDNA模板3.0μL，5U/μL LA Taq聚合酶0.3μL，25mM MgCl₂ 3.0μL，ddH₂O 14.7μL。

PCR程序：94℃预变性1min；94℃变性30s；63℃退火30s；72℃延伸80s，30个循环；72℃10min；4℃保存。

回收产物连接到pGEM-T Easy载体，转化DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆进行菌斑PCR检测，阳性克隆进行测序(上海生工生物工程公司)，测序结果准确无误。PheDof 2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

实施例2植物表达载体pCAMBIA2300-PheDof 2的构建

设计引物进行聚合酶链式反应，在目的基因PheDof 2的上下游分别引入KpnI和Sal I双酶切位点，产物连接到pGEM-T Easy载体Promega公司，下同，转化DH5α感受态细胞，进行序列测定，提取质粒，经KpnI和Sal I双酶切的PheDof 2基因片段与经同样的酶酶切的pCAMBIA2300-CaMV35S载体连接，转化，提取质粒，进行序列测定。

上游引物PheDof 2-F:5′-GGGTACC ATGTCGGATCAGAAGGATCCGGGTT-3′

下游引物PheDof 2-R:5′-GCGTCGACTTAAGAGCTCTCCTGGAACAACTGC-3′

⑴以毛竹叶片cDNA为模板进行PCR反应

⑵扩增产物回收及连接

回收片段连接到pGEM-T Easy载体，转化DH5α感受态细胞，进行序列测定，测序结果准确无误。

⑶表达载体pCAMBIA2300-CaMV35S-PheDof 2构建

用KpnI和Sal I双酶切连接有PheDof 2片段的pGEM-T Easy(图1)，与KpnI和Sal I双酶切的表达载体pCAMBIA2300-CaMV35S Promega公司，美国)构建重组质粒。

酶切体系20μL：

37℃反应3h；产物经过琼脂糖凝胶电泳，用凝胶回收试剂盒(Axygen)回收质粒pCAMBIA2300-CaMV35S大片段和PheDof 2小片段。用T4连接酶连接两个回收产物，连接反应体系20μL：

4℃过夜连接反应，将连接产物全部转化DH5α感受态细胞。37℃过夜培养，挑选单克隆，菌落PCR验证后，扩大培养，提取质粒pCAMBIA2300-PheDof 2，进行测序和酶切验证(图1)，植物重组表达质粒构建成功。植物重组表达载体pCAMBIA2300-PheDof 2构建流程见图2。

实施例3植物表达载体pCAMBIA2300-PheDof 2转化拟南芥

⑴电击转化农杆菌GV3101菌株

将10mL pCAMBIA2300-PheDof 2连接液，加入到100μL感受态细胞中，冰浴30分钟后，电击转化，将电击液转移至已灭菌的2mL试管中，加入1 mL YEP液体培养基，28℃培养箱震荡培养(160rpm)45min后，在YEP固体培养基上进行涂板(50μg/mL利福平+100μg/mL卡那霉素)，28℃培养箱黑暗培养12h，挑取单克隆菌落PCR检测后，选取阳性克隆摇菌培养。

⑵拟南芥花序浸染

将上述阳性克隆接种于10mL YEP(50μg/mL利福平+100μg/mL卡那霉素)液体培养基中，28℃培养箱震荡培养(160rpm)12小时，取2mL培养液转移至200mL YEP(50μg/mL利福平+100μg/mL卡那霉素)中，进行大量培养，28℃培养箱震荡培养(160rpm)12h，培养液浓度OD600达到1.8-2.2μg/mL，取50mL培养液，用50mL离心管，4℃离心5000rpm5min，用转化液(MS 2.2g，5％蔗糖，调节pH值5.8，加0.2％SilwetL-77混合)剧烈悬浮，将沉淀稀释至1.0μg/mL。制备200mL左右，以备浸染拟南芥。将刚开花的拟南芥地上部浸泡于转化液中3min，用保鲜膜包裹植株，暗培养12-16h后，去除保鲜膜，将植株放置于培养箱中培养，待采收种子。

⑶纯合子筛选

将T0代拟南芥种子放于离心管中，加1mL 70％的酒精消毒5min后，再用浓度为2.6％的次氯酸钠溶液1mL，消毒10min，然后用无菌水清洗5遍。将种子均匀播种于筛选培养基上1/2MS+100mg/L卡那霉素，经4℃低温春化2d后放置于人工气候培养箱中培养至长出4片子叶，将绿色的、正常生长的阳性植株移栽至土壤中栽培，待成熟后分单株收取T1代种子，应用同样的方法筛选T1代幼苗，统计T1代各株系阳性植株与非阳性植株的比例，并将比例约为3:1的株系的阳性植株移栽至土壤中培养，获得T2代种子。应用同样方法筛选T2代幼苗，获得T3代种子。

⑷阳性植株的PCR鉴定

提取阳性拟南芥叶片RNA，反转录成cDNA，用引物PheDof2-F、PheDof 2-R进行PCR鉴定。发现阳性植株中均含有PheDof 2，由此说明PheDof 2成功转入拟南芥。

实施例4干旱胁迫下毛竹PheDof 2基因表达量分析

⑴材料处理

毛竹种子采集于广西壮族自治区，置于恒温光照培养箱中，昼夜温度是25℃/18℃，光周期为光/暗16h/8h，培养至三个月左右，进行干旱胁迫处理，利用20％PEG8000，对毛竹实生苗进行浇灌处理，分别取处理后0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h的根、茎、叶组织，在液氮中迅速冷冻，–80℃冷冻保存。

⑵cDNA模板的合成

利用Trizol Reagent试剂提取毛竹实生苗根、幼茎及叶片中的总RNA，使用无RNA酶的DNase I(TIANDZ)去除基因组DNA，用紫外分光光度计测量A260与A280的比值及RNA浓度，并用1％琼脂糖凝胶电泳检测28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA扩增条带的亮度和完整性，通过Promega公司的反转录试剂盒合成cDNA的第一条链，合成产物置于–20℃冰箱保存。

⑶实时荧光定量PCR

通过实时荧光定量PCR(qRT–PCR)，检测目的基因表达情况。TIP41基因作为内参基因，TIP41-F：5′-AAAATCATTGTAGGCCATTGTCG-3′，TIP41-R：5′-ACTAAATTAAGCCAGCGGGAGTG-3′；PheDof 2-F:5′-CCGGGTTTAAAGCTCTTCGGA-3′，PheDof 2-R:5′-TTCCTTGTGCTGGTCCTTAT-3′。

20μL反应体系：

反应程序：

其他的反应参数为系统默认设置，每个反应设置三个生物学重复，用Roche

480仪分析数据，利用2^-ΔΔCT法分析3次生物学实验数据，Excel进行作图。

⑷实验结果与分析

干旱胁迫处理后，分别检测PheDof 2基因在毛竹实生苗根、茎和叶片中的表达情况，结果如图3～图5所示：在根中，PheDof 2的表达受到明显诱导，均高于未处理时的表达，在处理6h时表达水平达到峰值，为对照的20.1倍，随后逐渐下降，由此说明，PheDof 2可能在毛竹干旱胁迫的根中发挥正调控作用。在茎和叶片中，PheDof 2的转录水平均呈现先降低后升高的趋势，在茎中，表达水平迅速降低，处理1h时，仅为对照的1/7，在叶中，在处理6h时，PheDof 2转录水平降为最低值，仅为对照的1/14，随后逐渐升高。由此说明，PheDof 2参与毛竹干旱胁迫应答过程。

实施例5转PheDof 2基因拟南芥抗逆性分析

对转PheDof 2基因拟南芥T3代幼苗和野生型幼苗进行不同浓度的干旱和盐胁迫处理，观察植株的表型差异。与野生型幼苗相比较，转PheDof 2基因的幼苗在不同浓度的干旱和盐胁迫处理中有明显的胁迫响应特征。转基因幼苗均能在含100mM甘露醇培养基或含100mM NaCl培养基中正常生长，均比野生型幼苗长势好，表现在主根长度更长、侧根数目更多、叶片更大和叶片颜色更绿；在含200mM甘露醇培养基中，转PheDof 2基因的幼苗的生长并未受到明显抑制，野生型幼苗则不能正常生根长叶。说明转基因拟南芥的抗旱和抗盐性均比野生型增强(图6)。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 国际竹藤中心

<120> 毛竹转录因子PheDof 2基因及应用

<130> KHP171117415.8

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1614

<212> DNA

<213> 毛竹(Phyllostachys edulis)

<400> 1

atgtcggatc agaaggatcc gggtttaaag ctcttcggac gggtgatccc gttggttcct 60

gaggccgcgc ctgggccgcc ggaagcggag gcgacggccg gccccgacca gccgccaacg 120

ccgccgccgg agttgcagcc accggtgccg gccgacgcgg agctggaggc tgataaggac 180

cagcacaagg aaacagaaga caaagaggat aatgaaatga aggttgatgt gccacaagaa 240

aaagaaaata gcgaaatgat ggttgatgca ccacgagaaa aagaagataa tatgaaggtt 300

gatgcaccac aagcgaaaga aaatgcagaa caagatagtt catccacctc ggaccataag 360

aaagaggatc aggatcagat aagcaacgct gaagataaag cagcatcaga ctcaaaggag 420

gagaatggga agacagcaaa tgacgaatca ggccaggata agatacttaa gaagccagat 480

aagattctac cttgccctcg gtgcaacagc atggatacaa agttttgtta ttacaacaac 540

tacaatgtta atcaacctag gcacttctgt aaaaattgcc aaaggtattg gactgcaggg 600

gggactatga ggaatgtacc tgttggtgct gggaggcgca aaagtaagaa ttcatcgttg 660

cactaccgcc acttgttgat ggcccctgat tgtatgatgg ggtccagagt ggacatctct 720

aagacagtga tccctgaagc ccttgcgtct tcgcgttcta tcccgataca accaataagt 780

agaaatgaaa cagttctcaa atttgggcct gaggtgccac tttgtgcgtc gatggcatca 840

gcgctgaaca ttgaggagca gaatgtaacc aatgttggat cagtaccaag aattgaaaac 900

agggaggata actcttgtgc ttcttctatc acatcataca acgggttacc agaaaacgca 960

gtccacactg ataaggacga aacaccggtt tattgtaatg gagttggccc agtgcctcag 1020

tattaccttg gagctccttt catgtaccct tggagcatag gatggaacaa cctccctgta 1080

acggttccag gtagaggtat gcccgagtct gcttctccgt cagaaagctg cagtcctagt 1140

tcagccccat ggatgaattc tcccatgatg caagcctcga gattttctgc accagcattt 1200

ccatatcctc ttgtgccacc tgccctttgg ggttgcttgt caagctggcc agccacggca 1260

tggagcagaa cgaacggatg cataacacca tcatcgtcaa gcaacagcag ctgttcaggc 1320

aatgggtctc ctactctggg gaaacattcc agagactcca atccgctgaa agaggaaaag 1380

aaggagaaat cattgtgggt tcccaagacg ctccggatcg atgatcctga tgaggcagca 1440

aagagttcaa tatgggccac tctcggcata aaacctgggg accctggcat cttcaagcca 1500

ttccaatcca agggtaagag caagggccag acgtcagatg ctcatcctgc tcttgtttta 1560

caggcgaatc cagcagcctc atctcgctcg cagttgttcc aggagagctc ttaa 1614

<210> 2

<211> 537

<212> PRT

<213> 毛竹(Phyllostachys edulis)

<400> 2

Met Ser Asp Gln Lys Asp Pro Gly Leu Lys Leu Phe Gly Arg Val Ile

1 5 10 15

Pro Leu Val Pro Glu Ala Ala Pro Gly Pro Pro Glu Ala Glu Ala Thr

20 25 30

Ala Gly Pro Asp Gln Pro Pro Thr Pro Pro Pro Glu Leu Gln Pro Pro

35 40 45

Val Pro Ala Asp Ala Glu Leu Glu Ala Asp Lys Asp Gln His Lys Glu

50 55 60

Thr Glu Asp Lys Glu Asp Asn Glu Met Lys Val Asp Val Pro Gln Glu

65 70 75 80

Lys Glu Asn Ser Glu Met Met Val Asp Ala Pro Arg Glu Lys Glu Asp

85 90 95

Asn Met Lys Val Asp Ala Pro Gln Ala Lys Glu Asn Ala Glu Gln Asp

100 105 110

Ser Ser Ser Thr Ser Asp His Lys Lys Glu Asp Gln Asp Gln Ile Ser

115 120 125

Asn Ala Glu Asp Lys Ala Ala Ser Asp Ser Lys Glu Glu Asn Gly Lys

130 135 140

Thr Ala Asn Asp Glu Ser Gly Gln Asp Lys Ile Leu Lys Lys Pro Asp

145 150 155 160

Lys Ile Leu Pro Cys Pro Arg Cys Asn Ser Met Asp Thr Lys Phe Cys

165 170 175

Tyr Tyr Asn Asn Tyr Asn Val Asn Gln Pro Arg His Phe Cys Lys Asn

180 185 190

Cys Gln Arg Tyr Trp Thr Ala Gly Gly Thr Met Arg Asn Val Pro Val

195 200 205

Gly Ala Gly Arg Arg Lys Ser Lys Asn Ser Ser Leu His Tyr Arg His

210 215 220

Leu Leu Met Ala Pro Asp Cys Met Met Gly Ser Arg Val Asp Ile Ser

225 230 235 240

Lys Thr Val Ile Pro Glu Ala Leu Ala Ser Ser Arg Ser Ile Pro Ile

245 250 255

Gln Pro Ile Ser Arg Asn Glu Thr Val Leu Lys Phe Gly Pro Glu Val

260 265 270

Pro Leu Cys Ala Ser Met Ala Ser Ala Leu Asn Ile Glu Glu Gln Asn

275 280 285

Val Thr Asn Val Gly Ser Val Pro Arg Ile Glu Asn Arg Glu Asp Asn

290 295 300

Ser Cys Ala Ser Ser Ile Thr Ser Tyr Asn Gly Leu Pro Glu Asn Ala

305 310 315 320

Val His Thr Asp Lys Asp Glu Thr Pro Val Tyr Cys Asn Gly Val Gly

325 330 335

Pro Val Pro Gln Tyr Tyr Leu Gly Ala Pro Phe Met Tyr Pro Trp Ser

340 345 350

Ile Gly Trp Asn Asn Leu Pro Val Thr Val Pro Gly Arg Gly Met Pro

355 360 365

Glu Ser Ala Ser Pro Ser Glu Ser Cys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Trp

370 375 380

Met Asn Ser Pro Met Met Gln Ala Ser Arg Phe Ser Ala Pro Ala Phe

385 390 395 400

Pro Tyr Pro Leu Val Pro Pro Ala Leu Trp Gly Cys Leu Ser Ser Trp

405 410 415

Pro Ala Thr Ala Trp Ser Arg Thr Asn Gly Cys Ile Thr Pro Ser Ser

420 425 430

Ser Ser Asn Ser Ser Cys Ser Gly Asn Gly Ser Pro Thr Leu Gly Lys

435 440 445

His Ser Arg Asp Ser Asn Pro Leu Lys Glu Glu Lys Lys Glu Lys Ser

450 455 460

Leu Trp Val Pro Lys Thr Leu Arg Ile Asp Asp Pro Asp Glu Ala Ala

465 470 475 480

Lys Ser Ser Ile Trp Ala Thr Leu Gly Ile Lys Pro Gly Asp Pro Gly

485 490 495

Ile Phe Lys Pro Phe Gln Ser Lys Gly Lys Ser Lys Gly Gln Thr Ser

500 505 510

Asp Ala His Pro Ala Leu Val Leu Gln Ala Asn Pro Ala Ala Ser Ser

515 520 525

Arg Ser Gln Leu Phe Gln Glu Ser Ser

530 535

Claims

1.毛竹转录因子 PheDof 2 基因，其特征在于，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQID NO:2所示。

2.根据权利要求 1 所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1 所示。

3.含有权利要求 1 或 2 所述基因的表达盒。

4.含有权利要求 1 或 2 所述基因的表达载体或克隆载体。

5.含有权利要求 1 或 2 所述基因的工程菌。

6.权利要求 1 或 2 所述基因、权利要求 3 所述表达盒、权利要求 4 所述表达载体或克隆载体或者权利要求 5 所述工程菌在植物抗逆调控中的应用。

7.根据权利要求 6 所述的应用，其特征在于，所述植物包括拟南芥、毛竹。

8.权利要求 1 或 2 所述基因、权利要求 3 所述表达盒、权利要求 4 所述表达载体或克隆载体或者权利要求 5 所述工程菌在制备转基因植物中的应用。

9.权利要求 1 或 2 所述基因、权利要求 3 所述表达盒、权利要求 4 所述表达载体或克隆载体或者权利要求 5 所述工程菌在植物育种中的应用。

10.如权利要求 9 所述的应用，其特征在于，所述育种的目的是为了提高植物抗旱能力。

11.根据权利要求 9 所述的应用，其特征在于，使拟南芥过表达PheDof 2 基因。

12.根据权利要求 11 所述的应用，其特征在于，采用农杆菌介导法将毛竹转录因子PheDof 2 基因转入到拟南芥植株中，获得 PheDof 2 基因过表达的转基因植株。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，将 PheDof 2 基因构建到植物表达载体pCAMBIA2300上，转化农杆菌，然后浸染拟南芥花序，筛选转基因植株。