BRPI0613313A2 - alimento fermentado contendo bactérias bifidobacterium e método para produzir o mesmo - Google Patents

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BRPI0613313A2
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bifidobacterium
viability
lee
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Nobuhiro Ogasawara
Masaki Yoshikawa
Tatsuyuki Kudo
Ryoichi Akahoshi
Susumu Mizusawa
Haruyuki Kimizuka
Takao Suzuki
Ryotaro Hoshi
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Yakult Honsha Kk
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Abstract

ALIMEIITO FERMENTADO CONTENDO BACTéRIAS BIFIDOBACTERIUM E MéTODO PARA PRODUZIR O MESMO. é provido um alimento fermentado contendo um extrato de pelo menos um material de planta selecionado do grupo consistindo de cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb., Eucommia ulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui, perila, cravo- da-índia, canela e Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) e bactérias do gênero Bifidobacterium. O alimento fermentado contém um material excelente e novo por meio do qual a viabilidade das bactérias do gênero Bifidobacterium pode melhorar durante a armazenagem do produto, e mesmo quando usada em produtos tais como bebidas ou alimentos, não deteriora o aroma do produto, portanto a bactéria do gênero Bifidobacterium pode estar contida em concentração elevada, o que provê vários efeitos fisiológicos.

Description

"ALIMENTO FERMENTADO CONTENDO BACTÉRIASBIFIDOBACTERIUM E MÉTODO PARA PRODUZIR O MESMO"
CAMPO TÉCNICO
A presente invenção se refere a alimentosfermentados que incluem bactérias do gênero Bifidobacterium, emais especificamente a alimentos fermentados que contêm bactériasviáveis do gênero Bifidobacterium em alta concentração, e também aum método de preparo destes alimentos fermentados.
HISTÓRICO DA TÉCNICA
Bactérias do gênero Bifidobacterium sãoamplamente conhecidos por terem vários efeitos tais como melhoriada flora intestinal, melhoria da defecação, melhoria da funçãointestinal, prevenção de infecção, imunoestimulação e prevenção decânceres, similarmente às bactérias de ácido láctico representadaspelas bactérias do gênero Lactobacillus e similares. É consideradoque estes microorganismos melhoram o ambiente intestinal,contribuindo, dessa maneira, para a saúde humana.
Para obter os efeitos descritos acima combactérias do gênero Bifidobacterium, é requerido manter um grandenúmero de contagem de células viáveis da bactéria dentro dosprodutos tais como leites fermentados. Visto que, entretanto, asbactérias do gênero Bifidobacterium são geralmente bactériasanaeróbicas, elas têm uma viabilidade pequena e morremrapidamente, especialmente na presença de oxigênio.
São propostos, portanto, métodos para aumentar aviabilidade de bactérias do gênero Bifidobacterium em produtostais como leites fermentados preparados por meio do uso dasbactérias. Exemplos de métodos incluem aqueles que usam sacaroseOU sorbitol (D-glucitol) (Documento de Patente 1), eritritol(Documento de Patente 2) e lactitol (Documento de Patente 3).
Adicionalmente, para prover bactérias do gêneroBifidobacterium em seu estado ativo para os consumidores, estãosendo tomadas medidas tais como a colocação de produtos defermentação contendo bactérias do gênero Bifidobacteriumimediatamente após a preparação em um recipiente feito de ummaterial impermeável a oxigênio de modo a bloquear completamente ocontato de oxigênio os produtos. Neste método, entretanto, o usode recipientes impermeáveis a oxigênio envolve muitos problemas emtermos de descarte e custo, e, dessa maneira, a utilidade dorecipiente é limitada.
Portanto, estão sendo realizados estudos sobremétodos de manutenção da viabilidade de bactérias do gêneroBifidobacterium mesmo sob condições aeróbicas e vários métodosforam relatados. Especificamente, foi relatado um método que usaácido N-acetilglicosamina pantotênico, pantetina, panteteína,peptídeos e lactulose. Neste método, entretanto, os materiaisusados têm, eles mesmos, custos relativamente elevados, e quandoeles são usados em alimentos, o aroma e o sabor dos alimentos sãoprofundamente afetados. Portanto, considerando também os efeitosna viabilidade das bactérias, existe um desejo de um material maisconveniente.
É considerado que a viabilidade de bactérias dogênero Bifidobacterium seja influenciada pelas cepas usadas, pelopH dos produtos (bebidas, alimentos e similares), pelos açúcaresadicionados como adoçantes, pela quantidade de oxigêniodissolvida, e similares. De modo a melhorar isto, está sendoconsiderada a adição de fermento ou bactérias de ácido láctico, ouso combinado de vitamina C, o material do recipiente do produto esimilares. Entretanto, para atender a preferência do consumidorque atualmente está se tornando diversificada, e para atender aorequerimento para melhorar adicionalmente a viabilidade dasbactérias, existe um desejo de um material que possa ser usadopara melhoria da viabilidade.
[Documento de Patente 1] JP-A-57-004291
[Documento de Patente 2] JP-B-2577692
[Documento de Patente 3] JP-B-3261571
REVELAÇÃO DA INVENÇÃO
Problemas a serem solucionados pela Invenção
Um objetivo da presente invenção é, portanto,encontrar um material excelente e novo com o uso do qual possamser obtidos vários efeitos fisiológicos, enquanto a viabilidadedas bactérias do gênero Bifidobacterium é mantida na armazenagemde um produto tal como uma bebida ou alimento contendo asbactérias sem o desenvolvimento de problemas no aroma do produto,e usar o material para provisão de um alimento fermentado contendobactérias viáveis do gênero Bifidobacterium em alta concentração,a viabilidade das bactérias sendo melhorada com o uso do material.
Um outro objetivo da presente invenção é prover, na preparação deum alimento fermentado contendo bactérias do gêneroBifidobacterium, um método para melhorar a viabilidade dasbactérias durante a armazenagem do alimento fermentado.
Meios para solucionar os problemas
Para atingir os objetivos descritos acima, ospresentes inventores conduziram pesquisas extensivas. Como umresultado, foi descoberto que por meio da adição de um extrato deuma planta específica, a contagem de células viáveis das bactériasdo gênero Bifidobacterium contidas em um alimento fermentado podeser mantida de forma estável mesmo após armazenagem do alimento,conduzindo ao término da presente invenção.
Em um aspecto da presente invenção, dessamaneira, é provido um alimento fermentado que compreende umextrato de pelo menos um material de planta selecionado do grupoconsistindo de cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb., Eucommiaulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia, canela e Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) e bactériasdo gênero Bifidobacterium.
Em um outro aspecto da presente invenção, étambém provido um alimento fermentado que compreende um extrato depelo menos um material de planta selecionado do grupo consistindode cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb., Eucommia ulmoides Oliv.,farelo de arroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia, canela eRubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) e bactérias do gêneroBifidobacterium, o extrato sendo obtido por extração ácida,preferivelmente sob uma condição ácida não superior a um pH de4,0.
Em um aspecto adicional da presente invenção, étambém provido um método para preparar um alimento fermentadocompreendendo bactérias do gênero Bifidobacterium, que compreendea adição de um extrato de pelo menos um material de plantaselecionado do grupo consistindo de cúrcuma, Houttuynia cordataThunb., Eucommia ulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui,perila, cravo-da-índia, canela e Rubus suavissimus S. Lee(Rosaceae) em um estágio arbitrário.
Em ainda um aspecto adicional da presenteinvenção, é também provido um método para melhorar a viabilidadede bactérias do gênero Bifidobacterium, compreendendo a adição deum extrato de pelo menos um material de planta selecionado dogrupo consistindo de cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb., Eucommiaulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia, canela e Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
Os extratos contidos nos alimentos fermentados dapresente invenção e derivados de pelo menos um material de plantaselecionado do grupo consistindo de cúrcuma, Houttuynia cordataThunb., Eucommia ulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui,perila, cravo-da-índia, canela e Rubus suavissimus S. Lee(Rosaceae) , provêem excelentes efeitos de melhoria de viabilidadepara as bactérias do gênero Bifidobacterium e, além do mais,praticamente não possuem efeito no aroma. Um alimento fermentadoda presente invenção, que é obtido pelo uso do extrato, portanto,tem aroma satisfatório sem diminuição representativa da contagemde células viáveis das bactérias, mesmo após armazenagem doalimento por um longo período de tempo, e é excelente para apromoção da saúde.
MELHOR MANEIRA PARA EXECUTAR A INVENÇÃO
O alimento fermentado da presente invenção contémum extrato de pelo menos um material de planta selecionado dogrupo consistindo de cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb., Eucommiaulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia, canela e Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) (doravante,ele pode simplesmente ser denominado de "um extrato").Entre os materiais de planta que podem, cada um,serem usados como uma matéria-prima para o extrato acimamencionado, cúrcuma é a raiz de Curcuma longa L. ou Curcumaaromatica Salisb. Na presente invenção, Curcuma longa L. éespecialmente preferida entre as plantas pertencentes à Cúrcuma.
Curcuma longa L. é conhecida por ter efeitos tais como efeitos demelhoria de função hepática, efeitos que previnem ressaca, efeitosgástricos anti-secretórios e efeitos de melhoria de disfunçãogastrintestinal.
Houttuynia cordata Thunb. é uma plantapertencente à Houttuynia cordata. Para obter um extrato deHouttuynia cordata Thunb., partes aéreas de grama e partes decaules podem ser usadas, com o uso das partes de grama sendoespecialmente preferido. Houttuynia cordata Thunb. é conhecida porter efeitos supressores de inflamação na mucosa.
Eucommia ulmoides Oliv. é uma planta pertencenteà Eucommia ulmoides. Para obter um extrato de Eucommia ulmoidesOliv., folhas e caules podem ser usados, com o uso das folhassendo especificamente preferido. Eucommia ulmoides Oliv. éconhecida por ter efeitos tais como controle de pressão arterial,alívio de estresse e prevenção de doenças relacionadas com oestilo de vida.
Farelo de arroz é uma mistura de pericarpos,camadas de aleurona e germes de sementes (arroz integral)disponíveis de Oryza Sativa sem a palha de arroz. Este farelo dearroz é conhecido por ter efeitos tais como aumento de imunidade,prevenção de gordura no fígado e similares.
Folhas de caqui incluem folhas da planta deDiospyros Kaki Thunb., Diospyros lotus L., ou Diospyros lotus L.var. glabra Makino. Na presente invenção, Diospyros Kaki Thunb. éespecialmente preferida entre as plantas do gênero Diospyrosdevido ao fato das folhas serem conhecidas por terem efeitos taiscomo supressão de espirros, congestão nasal, coriza e similares.
Perila inclui Perilla frutescens (L.) Brittonvar. acuta Kudo, Perilla frutescens (L.) Britton var. acuta Kudoforma viridis Makino, Perilla frutescens (L.) Britton var. crispa(Thunb) Decne. Na presente invenção, Perilla frutescens (L.)Britton var. acuta Kudo é especialmente preferida. Para obter umextrato de perila, folhas, caules e sementes podem ser usados, como uso de folhas sendo especialmente preferido. Perila é conhecidapor ter efeitos tais como efeitos antialérgicos, efeitoshipoglicêmicos e de rejuvenescimento da pele.
Cravo-da-índia é o broto de Syzygiumaromaticum(L.) Merr. et Perry ou Eugenia caryophyllata Thunb. Ocravo-da-índia é conhecido por ter efeitos de preservação,atividades de contração uterina, efeitos de redução de dorodontológica, e similares.
Canela é a casca de Cinnamomum zeylanicum Nees ouCinnamomum cassia Blume. Cinnamomum zeylanicum Nees éespecialmente preferida entre estas plantas de cinnamomum. Canelaé conhecida por ter efeitos tais como atividades antibacterianas,efeitos de aquecimento do corpo, efeitos antipiréticos, efeitos deativação do sistema digestivo, efeitos de alívio para váriossintomas da gripe, alívio de indigestão, alívio de diarréia ealívio de náusea.
Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) é uma plantapertencente à Rubus. Para obter um extrato de Rubus suavissimus S.Lee (Rosaceae), suas folhas e caule podem ser usados, com o uso desuas folhas sendo especialmente preferido. Rubus suavissimus S.Lee (Rosaceae) está atraindo a atenção nos últimos anos devido asuas atividades antiinflamatórias e efeitos antialérgicos.
Para obter um extrato de um ou mais dentre osmateriais de planta descritos acima, é necessário apenas extraircom um solvente o material ou materiais da planta tanto em seuestado natural quanto apôs aplicação opcional de processamentostais como lavagem, descascamento, secagem e/ou amassamento. Estesextratos podem ser usados tanto sozinhos quanto combinados. Umextrato misto pode também ser usado, o qual é obtido pela misturade uma pluralidade de materiais de plantas e extração dos mesmos.
Entre estes extratos, é preferido um extrato de folhas de caqui eum extrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae).
Solventes úteis na preparação dos extratosincluem água e solventes orgânicos tais como álcoois mais baixostendo de 1 a 5 átomos de carbono, por exemplo, etanol, acetato deetila, glicerol e propilenoglicol. Dois ou mais destes solventespodem ser usados em conjunto como um solvente misto. Entre estessolventes, água e solventes aquosos tais como álcoois mais baixose água são especialmente preferidos.
Nenhuma limitação específica é imposta ao métodode extração que faz uso do solvente acima mencionado, mas extraçãoácida é preferida, visto que ela pode extrair eficientementeextrato do material de planta ou componentes materiais queaumentam a viabilidade das bactérias do gênero Bifidobacterium epodem, também, fazer surgir efeitos suficientes mesmo quando oextrato é adicionado em uma quantidade pequena. A extração ácidapode, preferivelmente, ser executada sob uma condição ácida de umpH de 4,0 ou menor, especialmente um pH de 3,0 a 4,0. Nenhumalimitação específica é imposta ao ingrediente ácido adaptado pararegular o pH do solvente nesta extração ácida, e qualqueringrediente pode ser usado contanto que seja ácido. Entre estesingredientes ácidos, são preferidos ácidos orgânicos tais comoácido cítrico, ácido málico, ácido tartárico, ácido succínico,ácido láctico e ácido acético.
Além do mais, as condições de extração para oextrato com o uso do solvente acima mencionado não sãoespecificamente limitadas, e o processamento de extração pode serexecutado, por exemplo, por tratamento durante 3 0 a 60 minutos,preferivelmente de 60°C a 120°C, mais preferivelmente de 80°C a100°C.
O extrato obtido conforme descrito acima pode serusado em sua forma natural, ou como uma solução conforme obtidoimediatamente após a extração, ou como um extrato concentradoobtido por purificação e concentração do extrato obtido por meiosde ultrafiltração, centrifugação ou similares, ou como um extratoem pó obtido por secagem adicional do extrato concentrado por meiode secagem por pulverização, secagem por congelamento ousimilares.
A quantidade do extrato acima mencionado a serusada no alimento fermentado pode, preferivelmente, serdeterminada após uma verificação experimental, visto que osefeitos resultantes podem diferir dependendo das espécies dasbactérias do gênero Bifidobacterium e similares. Uma quantidadepreferível do extrato obtido por extração com água (doravante,referido como "extrato de extração com água") é de aproximadamente0,01 a 10% em peso (doravante, simplesmente referido como "%"),mais preferivelmente de aproximadamente 0,1% a 5% em peso conformecalculado em termos de um extrato tendo 10 graus Brix (teor deaçúcar). Uma quantidade preferível do extrato obtido por extraçãoácida (doravante, referido como "extrato de extração ácida") é de0,001% a 10% em peso, mais preferivelmente de aproximadamente0,01% a 1,0% em peso, conforme calculado em termos de um extratotendo 10 graus Brix (teor de açúcar).
Na preparação do produto de fermentação dapresente invenção, o extrato de extração com água ou extrato deextração ácida pode ser adicionado em uma quantidade maior que 10%ou mais. Entretanto, os efeitos de melhoria da viabilidade podemnão ser proporcionais à quantidade adicionada. Por outro lado, umaquantidade excessivamente grande do extrato pode afetar o aroma doalimento fermentado. Não é preferido, portanto, adicionar oextrato em uma quantidade excessivamente grande. Uma quantidade deextrato de extração com água menor que 0,01% ou extrato deextração ácida menor que 0,001%, por outro lado, pode não resultarem efeitos de melhoria de viabilidade suficientes para asbactérias do gênero Bifidobacterium e, portanto, não sãopreferidas.
Entretanto, nenhuma limitação específica éimposta nas espécies de bactérias do gênero Bifidobacterium, quesão usadas na preparação do produto de fermentação da presenteinvenção e estão contidas no alimento fermentado, contanto queeles sejam microorganismos que pertencem às bactérias do gêneroBifidobacterium. São preferidas aquelas conhecidas como asbactérias principais da flora intestinal humana tal comoBifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacteriuminfantis, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobaeterium bifidum,Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium pseudocatenulatum eBifidobacterium angulatum, as bactérias derivadas dos intestinoshumanos tais como Bifidobaeterium gallicum, as bactérias usadas emalimentos tais como Bifidobacterium lactis e Bifidobacteriumanimalis e similares. Entre estas bactérias do gêneroBifidobacterium, especificamente preferidas são Bifidobacteriumbreve, Bifidobacterium bifidum e Bifidobacterium longum em termosde efeitos de melhoria de viabilidade obtidos quando as bactériassão usadas em combinação com o(s) extrato(s) descrito(s) acima.
É possível obter os efeitos de melhoria deviabilidade para as bactérias do gênero Bifidobacterium com o usode extrato contido no alimento fermentado da presente invenção,quando vários microorganismos diferentes das bactérias do gêneroBifidobacterium estão contidos no alimento fermentado. Bactériasde ácido láctico podem ser providas como um exemplo de outrosvários microorganismos. Exemplos destes incluem bactérias dogênero Lactobacillus tais como Lactobacillus casei, Lactobacillusacidophilus, Lactobacillus helvetieus, Lactobacillus salivarius,Lactobacillus gasseri, Lactobacillus fermentum, Lactobacillusreuteri, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus delbrueckiisubesp. bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii subesp. delbrueckiie Lactobacillus johnsonii, bactérias do gênero Streptococcus taiscomo Streptococcus thermophilus, bactérias do gênero Lactococcustais como Lactococcus lactis subesp. lactis, Lactococcus lactissubesp. cremoris, Lactococcus plantarum e Lactococcusraffinolactis e bactérias do gênero Enterococcus tais comoEnterococcus faecalis.
Em especial, os efeitos de melhoria deviabilidade para as bactérias do gênero Bifidobacterium obtidascom o uso de extrato no alimento fermentado da presente invenção,podem ser notavelmente exibidos quando a contagem de células dasbactérias do gênero Bifidobacterium contidas no alimentofermentado é 1 χ IO7 /mL ou mais, preferivelmente 1 χ IO8 /mL oumais.
O alimento fermentado da presente invenção queusa as bactérias do gênero Bifidobacterium (e bactérias de ácidoláctico, conforme necessário) pode ser preparado de acordo com ummétodo conhecido para preparar um produto de fermentação que fazuso de bactérias do gênero Bifidobacterium, exceto pela adição doextrato descrito acima em um estágio arbitrário do procedimento depreparação. Por exemplo, o extrato pode ser adicionado antes ouapós esterilização de uma solução contendo leite em pó desnatado,seguido por inoculação e cultura das bactérias desejadas do gêneroBifidobacterium e similares. O resultado é, então, homogeneizadopara obter um leite fermentado para servir como uma base, seguidopela adição e mistura de uma solução de xarope que é preparadaseparadamente. Então, aromatizantes e similares podem ser aindaadicionados para preparar um produto final. Alternativamente, auma solução esterilizada contendo leite em pó desnatado, bactériasdesejadas do gênero Bifidobacterium e similares são inoculadas ecultivadas. O resultado é homogeneizado para obter um leitefermentado para servir como uma base. Então, uma solução de xaropeque é preparada separadamente e o extrato descrito acima podem seradicionados e misturados ao mesmo, e aromatizantes e similarespodem, ainda, ser adicionados para preparar um produto final.
O termo -alimentos fermentados» na presenteinvenção inclui leites fermentados, produtos de laticínio, bebidastais como bebidas de bactérias de ácido lâctico, iogurte S6Iido,iogurte mole, iogurte natural e, adicionalmente, -Xefir-. queijo,etc., que são definidos pelo Decreto Ministerial I"MinisterialOrdinance-], com referência a PadrSes de Composição, etc. paraLeite e produtos de Leite. Alimentos fermentados da presenteinvenção, portanto, incluem várias bebidas e alimentos c^e fazemuso de várias bactérias de ácido lâctico, por exemplo, leitesfermentados, bebidas de bactérias de ácidos lácticos, kefir,queijo e similares, que podem ser do tipo natural, do tipoaromatizado, do tipo de fruta, do tipo adoçado, do tipo pastoso,do tipo para beber, do tipo sólido (rígido, ou do tipo congelado.
Estes alimentos fermentados são obtidos pelaadição aos mesmos de um adoçante tal como xarope de amido e váriosoutros materiais de alimentos, por exemplo, ingredientes opcionaistal como vários carboidratos, espessantes, emulsificantes e váriasvitaminas, conforme necessário. Exemplos específicos destesmateriais de alimento incluem carboidratos tais como sacarose,glicose, frutose, palatinose, trealose, lactose, xilose e «lto«,álcoois glicõlicos tais como sorbitol, Ilitol. eritritol,lactitol, palatinato, xarope de amido reduzido e xarope de maltosereduzida,, adoçantes de alta intensidade de doçura tais comoaspartame, taumatina, sucralose, acesulfame K e estévia,· váriosespessantes ,estabilizadores, tais como ágar, gelatina, carragena.goma guar, goma xantana, pectina, goma de alfarrobeira, gomagelana, carboximetilcelulose, polissacarídeos de soja e alginatode propilenoglicol; emulsificantes tais como sacarose, ésteres deácidos graxos, ésteres de ácido graxo de glicerina, ésteres deácido graxo de poliglicerina, ésteres de ácido graxo de sorbitan elecitina; gorduras de leites tais como creme; manteiga e cremeazedo; temperos azedos tais como ácido cítrico, ácido láctico,ácido acético, ácido málico, ácido tartárico e ácido glicônico;várias vitaminas tais como vitamina A, vitamina Bs, vitamina C evitamina E; minerais tais como cálcio, magnêsio, zinco, ferro emanganês; e aromatizantes tais como de iogurte, cereja, laranja,marmelo chinês, perila, cítrico, maçã, menta, uva, damasco, pêra,creme "custard", pêssego, melão, banana, fruto tropical, erva, chápreto e café.
Nos alimentos fermentados da presente invençãoque foram descritos acima, a viabilidade de bactérias do gêneroBifidobacterium contidas nos alimentos é melhorado na armazenagemdos alimentos pela adição e mistura dos extratos, comparado com aviabilidade em alimentos fermentados conhecidos contendo bactériasdo gênero Bifidobacterium. Embora a razão para isto ainda nãoesteja esclarecida, é presumido que os extratos obtidos de cada umdos materiais de planta contêm grandes quantidades de minerais quecontribuem para os efeitos de melhoria de viabilidade para asbactérias do gênero Bifidobacterium.
EXEMPLOS
A presente invenção será, doravante, descrita emdetalhes adicionais com base nos Exemplos. Deveria, entretanto,ser mantido em mente que a presente invenção não é, de maneiraalguma, limitada aos exemplos a seguir.
Exemplo 1
<Preparação do Extrato 1>
Cúrcuma (a raiz de Curcuma longa L.) , a parteaérea de grama de Houttuynia cordata Thunb., folhas de Eucommiaulmoides Oliv., farelo de arroz (uma mistura de pericarpos,camadas de aleurona e germes de sementes (arroz integral)disponível de Oryza Sativa sem a palha de arroz), folhas de caqui(folhas de Diospyros kaki Thunb.), folhas de Perilla frutescens(L.) Britton var. acuta Kudo, cravo-da-índia (o broto de Syzygiumaramaticum (L.) Merr. et Perry) e canela (a casca de Cinnamomumzeylanium Nees) foram submetidos, cada um separadamente, aprocessamentos tais como descascamento e amassamentos, e entãoextraídos durante 60 minutos com água quente de 9 O0C (em umaquantidade 10 vezes aquela do peso da matéria-primacorrespondente) para preparar extratos de cúrcuma, Houttuyniacordata Thunb., farelo de arroz, Eucommia ulmoides 01iv.( folhasde caqui, perila, cravo-da-índia e canela, respectivamente. Osextratos foram concentrados, cada um separadamente, a 10 grausBrix em um evaporador.
Exemplo 2
<Comparação na Viabilidade de Bactérias do gêneroBifidobacterium>
Como um meio basal, solução de leite em pódesnatado a 12% foi provida. Os extratos de cúrcuma, Houttuyniacordata Thunb., Eucommia ulmoides Oliv., farelo de arroz, folhasde caqui, perila, cravo-da-índia e canela, que haviam sidopreparados e ajustados a 10 graus Brix no Exemplo 1, foramadicionados a 1% era alíquotas do meio basal, respectivamente,seguido por esterilização para preparar meios esterilizados. Acada um destes meios, um iniciador da cepa de Bifidobacteriumbreve foi inoculado a 1%, e a cepa de bactéria foi cultivada a37°C até o pH atingir aproximadamente 4,8.
A contagem de células viáveis das bactérias emcada meio foi determinada ao término da cultura e após armazenagema 10°C durante 14 dias usando meio TOS (produto da YakultPharmaceutical Ind. Co., Ltd.). Com base na contagem de célulasviáveis assim determinada, a taxa de viabilidade das bactérias deBifidobacterium foi calculada de acordo com a fórmula 1 a seguir.Adicionalmente, a taxa de melhoria de viabilidade em cada meiocontendo o extrato foi calculada com base na taxa de viabilidadeno meio basal de acordo com a fórmula 2 a seguir. Os resultadossão mostrados abaixo na Tabela 1.
Taxa de
[Fórmula 1]
<formula>formula see original document page 17</formula>
[Fórmula 2]
<formula>formula see original document page 17</formula>
[Tabela 1]<table>table see original document page 18</column></row><table>Como fica claro por meio da Tabela 1, foiconfirmado que a viabilidade das bactérias do gêneroBifidobacterium melhorou em um meio com um extrato de cúrcuma,Houttuynia cordata Thunb., Eucommia ulmoides Oliv.. farelo dearroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia ou canelaadicionados no mesmo, comparada àquela do meio basal.
Exemplo 3
<Verificação de Efeitos de Extrato de ExtraçãoÁcida nos Efeitos de melhoria de Viabilidade para Bactérias dogênero Bifidobacterium >
Sob condições similares como na preparação deextrato no Exemplo 1, exceto para o uso de água e soluçõesaquosas, os pHs das quais haviam sido ajustados para 3,0, 4,0 e5,0, respectivamente, com ácido cítrico ao invés de água quente,folhas de caqui foram tratadas. Em alíquotas de um meio de leiteem pó desnatado a 12%, ao qual os extratos assim obtidos haviamsido adicionados a 1%, respectivamente, o iniciador deni f-Mobacterium breve YIT10001 foi inoculado a 1%. A cepa debactéria foi, então, cultivada a 37°C até o PH atingiraproximadamente 4,8. A contagem de células viáveis das bactériasem cada meio foi determinada ao término da cultura e apósarmazenagem da cultura a 10 «C durante 14 dias de uma maneirasimilar àquela do Exemplo 2. A taxa de viabilidade e a taxa demelhoria de viabilidade foram respectivamente calculadas da mesmamaneira como no Exemplo 2. Os resultados são mostrados abaixo na
Tabela 2.
<table>table see original document page 19</column></row><table><table>table see original document page 20</column></row><table>
Conforme mostrado na Tabela 2, foi confirmado queos efeitos de melhoria de viabilidade para a bactéria do gêneroBifidobacterium tendem a se tornarem notáveis com um extratoobtido pelo ajuste do pH de um solvente de extração a 5,0 oumenos, preferivelmente 4,0 ou menos.
Exemplo 4
<Preparação do Extrato 2>
Cúrcuma (a raiz de Curcuma longa L.) , a parteaérea de grama de Houttuynia cordata Thunb., folhas de Eucommiaulmoides Oliv., farelo de arroz (uma mistura de pericarpos,camadas de aleurona e germes de semente (arroz integral)disponíveis de Oryza Sativa sem a palha de arroz), folhas de caqui(folhas de Diospyros kaki Thunb.), folhas de Perilla frutescens(L.) Britton var. acuta Kudo, cravo-da-índia (o broto de Syzygiumaromaticum (L.)Merr. et Perry) e canela (a casca de Cinnamomumzeylanium Nees), foram submetidos, cada um separadamente, aprocessamentos tais como descascamento e amassamento, e entãoextraídos sob condições similares como no Exemplo 1, exceto para ouso de água e solução aquosa, o pH do qual foi ajustado a um pH de4,0 com ácido cítrico, (em quantidades 10 vezes àquela do peso damatéria-prima correspondente) para preparar extratos de cúrcuma,Houttuynia cordata Thunb., Eucommia ulmoides Oliv., farelo dearroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia e canela,respectivamente. Eles foram concentrados, cada um separadamente, a10 graus Brix, em um evaporador.
Exemplo 5
<Verificação de Efeitos de Extrato nos efeitos deMelhoria de Viabilidade para Bactéria do gênero Bifidobacterium>
Como um meio basal, leite em pó desnatado a 15%foi provido. 0 extrato de cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb.,Eucommia ulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui, perila,cravo-da-índia e canela, que havia sido ajustado a 10 graus Brixno Exemplo 4, foi adicionado a 1% a alíquotas do meio basal parapreparar meios, respectivamente. Em cada um daqueles meios, osiniciadores de várias bactérias do gênero Bifidobacterium foraminoculados a 1%, e aquelas cepas de bactéria foram cultivadas a37°C durante 48 horas. A contagem de células viáveis das bactériasem cada meio foi determinada ao término da cultura e apósarmazenagem da cultura a 10°C durante 14 dias de uma maneirasimilar àquela do Exemplo 2. A taxa de viabilidade e a taxa demelhoria de viabilidade foram respectivamente calculadas da mesmamaneira do Exemplo 2. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela 3.
Para as bactérias do gênero Bifidobacterium aserem cultivadas, cepas de Bifidobacterium breve, cepas deBifidobacterium bifidum e cepas de Bifidobaeterium longum foramusadas.[Tabela 3]
<table>table see original document page 22</column></row><table>Taxa de Viabilidade
Como é claramente mostrado na Tabela 3, osefeitos destes extratos na viabilidade de várias bactérias dogênero Bifidobacterium foram confirmados com substancialmentetodas as cepas, embora eles variem dependendo das espécies dascepas. Efeitos notáveis foram confirmados especificamente com osextratos de cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb., Eucommia ulmoidesOliv. e folhas de caqui.
Exemplo 6
<Preparação de Produto de Laticínio 1>
Um meio de leite em pó desnatado a 15% foiprovido como um meio basal. Os vários extratos preparados noExemplo 4 foram adicionados a 0,1% a alíquotas do meio basal paraprover meios de teste, respectivamente. Após esterilizaçãodaqueles meios sob aquecimento, o iniciador de Bifidobacteriumbreve YIT10001 foi inoculado a 1%, e os iniciadores de Lactococcuslactis YIT2027 e de Streptococcus thermophilus YIT2021 foraminoculados, cada um, a 0,1% nos respectivos meios, e as cepas debactérias foram cultivadas a 3 50C durante 24 horas para obter asrespectivas culturas. Cada cultura foi homogeneizada a 15 MPa, e a40 partes em peso daquela cultura, foram adicionadas 60 partes empeso de uma solução de açúcar a 10%, que foi esterilizado a IOO0Cdurante 5 minutos, e um aromatizante de iogurte (produto da YakultMaterial Co., Ltd.) foi ainda adicionado a 0,1% para preparar umproduto de laticínio. Um teste de sabor foi conduzido por cincoavaliadores bastante experimentes em cada um dos produtos delaticínio obtido conforme descrito acima. Nenhuma diferença foiconfirmada entre qualquer um dos produtos de laticínio e o produtode controle que continha a cultura obtida com o uso do meio basal.
Adicionalmente, os vários extratos foramavaliados de modo a não prover efeitos relacionados comaroma ao meio basal e de modo a corresponderem bem. Foi,portanto, confirmado, também, que seu uso em culturaspara bebidas ou alimentos, tais como produtos delaticínio, não conduz a deteriorações em seus aromas.
Exemplo 7
<Efeitos da Quantidade Adicionada deExtrato de Folhas de Caqui no Aroma e Efeitos de Melhoriade Viabilidade>
(1) Preparação de Extratos de Folha deCaqui
Usando água e uma solução, o pH do qualfoi ajustado a 4,0 com ácido citrico, em quantidades de10 vezes a quantidade das folhas de caqui, extratos defolhas de caqui foram preparados sob condições similarescomo no Exemplo 1. Aqueles extratos foram concentrados,cada um separadamente, a 10 graus Brix em um evaporador.
(2) Determinação de uma quantidade a seradicionada
À alíquotas de um meio de leite em pódesnatado a 15%, os extratos de folhas de caquipreparados acima em (D foram adicionados emconcentrações na faixa de 0,001 a 10%, respectivamente,seguido pela esterilização a IOO=C durante 60 minutospara preparar meios para cultivar bactérias de ácidoláctico. Àqueles meios, o iniciador de Bifidobacteriumbreve YIT10001 foi inoculado a 1%, e o iniciador deLactococcus laetis YIT2027 e o iniciador de StreptococcusthermophiIus YIT2021 foram inoculados, cada um, a 0,1%, eas cepas de bactérias foram cultivadas a 35°C durante 24horas para obter as respectivas culturas. Cada culturafoi homogeneizada a 15 MPa, e a 40 partes em peso dacultura homogeneizada, foram adicionadas 60 partes empeso de uma solução de açúcar a 10%, que foi esterilizadaa 100°C durante 5 minutos, e um aromatizante de iogurte(produto da Yakult Material Co., Ltd.) foi aindaadicionado a 0,1%, para preparar um produto de laticínio.Com relação a estes produtos de laticínio, uma avaliaçãode aroma foi conduzida por cinco avaliadoresorganolépticos treinados com base nos padrões a seguir. Acontagem de células viáveis das bactérias em cada meiofoi determinada imediatamente após preparação do produtoe após armazenagem do produto a IO0C durante 14 dias deuma maneira similar àquela do Exemplo 2. Os resultadossão mostrados na Tabela 4.
<Padrões de Avaliação>
(Classificação) (Descrição)
A: Médio
D: Ruim
E: Muito ruim
[Tabela 4]<table>table see original document page 26</column></row><table>Foi confirmado por meio da Tabela 4, que aadição de um extrato de folhas de caqui a 0,01% ou umaquantidade próxima, prove efeitos de melhoria deviabilidade para as bactérias do gênero Bifidobacterium.Foi também confirmado que a adição de um extrato defolhas de caqui mesmo em quantidade de 10% a um meio podenão resultar em quaisquer efeitos excelentes adicionaisproporcionais às quantidades adicionadas, mas, docontrário, o aroma derivado do extrato tende a afetar oaroma do produto preparado. Foi também confirmado que osefeitos de melhoria de viabilidade do extrato de folha decaqui são exibidos de forma mais notável com um extratoobtido por extração ácida do que com um extrato obtidopor extração com água.
Exemplo 8
<Efeitos de Método de Adição de Extrato defolha de Caqui no Aroma e Efeitos de Melhoria deViabilidade>
(1) Preparação de Extratos de Folhas deCaqui
Usando água e uma solução, o pH da qualfoi ajustado a 4,0 com ácido cítrico, em quantidades 10vezes àquela das folhas de caqui, extratos de folha decaqui foram preparados sob condições similares àquelas doExemplo 1. Aqueles extratos foram concentrados, cada umseparadamente, a 10 graus Brix em um evaporador.
(2) Determinação de método de adição
Um meio de leite em pó desnatado a 15% foiesterilizado a IOO0C durante 60 minutos, ao qual oiniciador de Bifidobacterium breve YIT10001 foi inoculadoa 1%, e o iniciador de Lactococcus laetis YIT2027iniciador de Streptococcus thermophilus YIT2021 forinoculados, cada um, a 0,1%, e as cepas de bactériasforam cultivadas a 35°C durante 24 horas para obter asrespectivas culturas. A contagem de células de bactériasde ácido láctico em cada cultura foi medida de umamaneira similar àquela do Exemplo 2. Cada cultura foi,então, homogeneizada a 15 MPa, e a 40 partes em peso dacultura homogeneizada, foram adicionadas 60 partes empeso de uma solução de açúcar a 10%, que havia sidoesterilizada a IOO0C durante 5 minutos, ou uma solução,que havia sido obtida pela adição e mistura de umasolução contendo os extratos de folha de caqui preparadosacima em (1) a 0,1% a uma solução de açúcar a 10% eesterilizando a IOO0C durante 5 minutos, e umaromatizante de iogurte (produto da Yakult Material Co.,Ltd.) foi ainda adicionado a 0,1% para preparar umproduto de laticínio. Com relação a estes produtos delaticínio, uma avaliação de aroma foi conduzida por cincoavaliadores organolépticos treinados com base nos padrõeno Exemplo 7. A contagem de células viáveis das bactériaem cada meio foi determinada imediatamente apóspreparação do produto e após armazenagem do produto a10°C durante 14 dias de uma maneira similar àquela doExemplo 2. A taxa de viabilidade e a taxa de melhoria deviabilidade foram calculadas respectivamente da mesmado Exemplo 2. Os resultados são mostradona Tabela 5.
[Tabela 5]
<table>table see original document page 29</column></row><table>
Foi confirmado por meio da Tabela 5, que efeitosde melhoria de viabilidade para as bactérias do gêneroBifidobacterium são exibidos mesmo quando um extrato de folhas decaqui é adicionado após a cultura, ao invés de ser adicionadoantes da cultura. É também confirmado que o aroma de um produto delaticínio não é deteriorado mesmo quando o extrato é adicionadoapós cultura.
Exemplo 9
<Preparação do Extrato 3>Folhas de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae)foram submetidas a processamentos tais como descascamento,amassamento e torrefação, e então extraídas durante 60 minutos comágua quente a 90°C (em uma quantidade 10 vezes àquela do peso dasfolhas de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae)), para preparar umextrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae). 0 extratoresultante foi concentrado a 10 graus Brix em um evaporador.
Exemplo 10
<Verificação dos Efeitos de Extrato nas Bactériasdo gênero Bifidobacterium>
Como um meio basal, uma solução de leite em pódesnatado a 12% foi provida. 0 extrato de Rubus suavissimus S. Lee(Rosaceae) , que havia sido preparado e ajustado a 10 graus Brix noExemplo 9, foi adicionado a 1% ao meio basal, seguido poresterilização para preparar um meio esterilizado. Naquele meioesterilizado, o iniciador da cepa Bifidobaeterium breve foiinoculado a 1%, e a cepa de bactéria foi cultivada a 37°C até o pH atingir aproximadamente 4,8.
A contagem de células viáveis das bactérias nomeio foi determinada ao término da cultura e após armazenagem dacultura a 10 durante 14 dias usando meio TOS (produto da YakultPharmaceutical Ind. Co., Ltd.). Com base na contagem de célulasviáveis assim determinada, a taxa de viabilidade das bactérias deBifidobacterium foi calculada de acordo com a fórmula 3 a seguir.Adicionalmente, a taxa de melhoria de viabilidade no meio contendoo extrato foi calculada com base na taxa de viabilidade no meiobasal de acordo com a fórmula 4 a seguir. Os resultados sãomostrados abaixo na Tabela 6.[Fórmula 3]
<formula>formula see original document page 31</formula>
[Formula 4]
<formula>formula see original document page 31</formula>
[Tabela 6]
<table>table see original document page 31</column></row><table>
Como confirmado na Tabela 6, um meio adicionadocom um extrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) provêmelhores efeitos de melhoria de viabilidade para a bactéria dogênero Bifidobacterium se comparado a um meio basal.
Exemplo 11
<Verificação de Extrato de Extração Ácida 1>
Sob condições similares como na preparação doextrato no Exemplo 9, exceto para o uso de água e soluçõesaquosas, os pHs das quais foram ajustados para 3,0, 4,0 e 5,0,respectivamente, com ácido cítricô ao invés de água quente, Rubussuavissimus S. Lee (Rosaceae) foram tratados. A alíquotas de ummeio de leite em pó desnatado a 12%, ao qual os extratos assimobtidos haviam sido adicionados a 1%, respectivamente, o iniciadorde Bifidobacterium breve YIT10001 foi inoculado a 1%. A cepa debactéria foi, então, cultivada a 37°C até o pH atingiraproximadamente 4,8. A contagem de células viáveis das bactériasem cada meio foi determinada ao término da cultura e apósarmazenagem da cultura a IO0C durante 14 dias de uma maneirasimilar àquela do Exemplo 10. A taxa de viabilidade e a taxa demelhoria de viabilidade foram, respectivamente, calculadas damesma maneira do Exemplo 10. Os resultados são mostrados abaixo naTabela 7.
[Tabela 7]
<table>table see original document page 32</column></row><table>
Foi confirmado por meio da Tabela 7, que osefeitos de melhoria de viabilidade para as bactérias do gêneroBifidobacterium tendem a ser notáveis quando é usado um solventeadicionado com um extrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae)que tem um pH mais elevado.
Exemplo 12
<Preparação do Extrato 4>
Folhas de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae)foram submetidas a processamentos tais como descascamento,amassamento e torrefação, e então extraídos sob condiçõessimilares àquelas do Exemplo 9 com uma solução aquosa de ácidocítrico ajustada a um pH de 4,0 (em uma quantidade 10 vezes àquelado peso das folhas de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae)) parapreparar um extrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae). 0extrato assim obtido foi concentrado a 10 graus Brix em umevaporador.
Exemplo 13
<Verificação de Extrato de Extração Ácida 2>
Como um meio basal, um meio de leite em pódesnatado a 15% foi provido. 0 extrato de Rubus suavissimus S. Lee(Rosaceae), que havia sido ajustado para 10 graus Brix no Exemplo12, foi adicionado a 1,0% em alíquotas do meio basal para prepararmeios, respectivamente. Em cada um daqueles meios, os iniciadoresde várias bactérias do gênero Bifidobacterium foram inoculados a1%, e aquelas cepas de bactérias foram cultivadas a 3 7°C até o pHatingir aproximadamente 4. A contagem de células viáveis dasbactérias em cada meio foi determinada ao término da cultura eapós armazenagem da cultura a IO0C durante 14 dias de uma maneirasimilar àquela do Exemplo 10. A taxa de viabilidade e taxa demelhoria de viabilidade foram, respectivamente, calculadas damesma maneira que no Exemplo 10. Os resultados são mostradosabaixo na Tabela 8.
Para as bactérias do gênero Bifidobacterium aserem cultivadas, cepas de Bifidobacterium breve, cepas deBifidobacterium bifidum e cepas de Bifidobacterium longum foram usadas.[Tabela 8]
<table>table see original document page 34</column></row><table>Como fica claro na Tabela 8, os efeitos deextrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) na melhoria daviabilidade das bactérias do gênero Bifidobacterium foramconfirmados com substancialmente todas as cepas, embora elesvariem dependendo das espécies das cepas. Foi também confirmado oefeito observado em algumas culturas, onde a duração da culturafoi reduzida.
Exemplo 14
<Preparação de Produto de Laticínio 2>
Um meio de leite em pó desnatado a 20% foiprovido como um meio basal. 0 extrato de Rubus suavissimus S. Lee(Rosaceae) preparado no Exemplo 12 foi adicionado a 0,1% aalíquotas do meio basal para prover meios de teste,respectivamente. Após esterilização daqueles meios sobaquecimento, o iniciador de Bifidobacterium breve YIT10001 foiinoculado a 1%, e o iniciador de Lactococcus lactis YIT2027 e oiniciador de Streptococcus thermophilus YIT2021 foram inoculados,cada um, a 0,1% nos respectivos meios, e as cepas de bactériasforam cultivadas a 35°C durante 24 horas para obter as culturasrespectivas. Cada cultura foi homogeneizada a 15 MPa, e a 40partes em peso daquela cultura, foram adicionadas 60 partes empeso de uma solução de açúcar a 10%, que havia sido esterilizada aIOO0C durante 5 minutos, e um aromatizante de iogurte (produto daYakult Material Co., Ltd.) foi ainda adicionado a 0,1% parapreparar um produto de laticínio. Um teste de aroma foi conduzidopor cinco avaliadores bastantes experimentes em cada um dosprodutos de laticínio obtido conforme descrito acima. Nenhumadiferença foi confirmada entre qualquer um dos produtos delaticínio e o produto de controle, que continha a cultura obtidacom o uso do meio basal.
Adicionalmente, o extrato de Rubus suavissimus S.Lee (Rosaceae) foi avaliado e não resultava em efeitosrelacionados ao aroma ao meio basal e correspondia bem. Foi,portanto, confirmado também que seu uso nas culturas para bebidasou alimentos, tais como produtos de laticínio, não conduz adeteriorações em seus aromas.
Exemplo 15
<Efeitos da Quantidade Adicionada de Extrato deο (Rnqaceae) no Aroma, Proliferação eRubus suavissimus S. Lee (Kosaceaej n<-> /
Efeitos de Melhoria de Viabilidade>
(1) Preparação de Extratos de Rubus suavissimusS. Lee (Rosaceae)
Usando água e uma solução, o pH da qual foiajustado a 4,0 com ácido cítrico, em quantidades 10 vezes àquelade Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), extratos de Rubussuavissimus S. Lee (Rosaceae) foram preparados sob condiçõessimilares àquelas do Exemplo 9. Aqueles extratos foramconcentrados, cada um separadamente, a 10 graus Brix em umevaporador.
(2) Determinação de uma quantidade a seradicionada
A alíquotas de um meio de leite em pó desnatado a20%, extratos de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) preparadosacima em (1) foram adicionados em concentrações na faixa de 0,001a 10%, respectivamente, seguido por esterilização a 100°C durante60 minutos para preparar meios de cultura. Naqueles meios, oiniciador de Bifidobacterium breve YIT10001 foi inoculado a 1%, eo iniciador de Lactococcus lactis YIT2027 e iniciador deStreptococcus thermophilus YIT2021 foram inoculados, cada um, a0,1%, e as cepas de bactérias foram cultivadas a 35°C durante 24horas para obter as respectivas culturas. A contagem de célulasdas bactérias de ácido láctico em cada cultura foi medida de umamaneira similar àquela do Exemplo 10. Cada cultura foihomogeneizada a 15 MPa, e a 40 partes em peso da culturahomogeneizada, foram adicionadas 60 partes em peso de uma soluçãode açúcar a 10%, que havia sido esterilizada a 100-C durante 5minutos, e um aromatizante de iogurte (produto da Yakult MaterialCo., Ltd.) foi ainda adicionado a 0,1% para preparar um produto delaticínio. Com relação a estes produtos de laticínio, umaavaliação de aroma foi conduzida por cinco avaliadoresorganolépticos treinados com base nos padrões a seguir. A contagemde células viáveis das bactérias em cada meio foi determinadaimediatamente apôs a preparação do produto e após armazenagem doproduto a 10°C durante 14 dias de uma maneira similar àquela doExemplo 10. A taxa de viabilidade e a taxa de melhoria deviabilidade foram respectivamente calculadas da mesma maneira queno Exemplo 10. Os resultados são mostrados na Tabela 9.
<Padrões de Avaliação>
(Classificação) (Descrição)A: Muito bom
B. Bom
q. Médio
D. Ruim
E: Muito ruim[Tabela 9]
<table>table see original document page 38</column></row><table>Foi confirmado por meio da Tabela 9 que a adiçãode um extrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) a 0,01% ouquantidade similar, provê efeitos de melhoria de viabilidade paraas bactérias do gênero Bifidobacterium. Foi também confirmado quea adição de um extrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) a ummeio, mesmo em uma quantidade grande como 10%, pode não resultarem quaisquer efeitos excelentes proporcionais à quantidadeadicionada, mas pelo contrário, o aroma do produto preparado foiafetado. Foi também confirmado que os efeitos de melhoria deviabilidade do extrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) sãoexibidos de forma mais marcante com um extrato obtido por extraçãoácida do que com um extrato obtido por extração com água quente.
Exemplo 16
<Verificação de Efeitos do Método de Adição deExtrato de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaeeae) na melhoria daViabilidade para Bactérias do gênero Bifidobacterium>
(1) preparação de Extratos de Rubus suavissimusS. Lee (Rosaceae)
Usando água e uma solução, o pH da qual foiajustado a 4,0 com ácido cítrico, em quantidades até 10 vezes aquantidade de Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae), extratos deRubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) foram preparados sob condiçõessimilares como no Exemplo 9. Aqueles extratos foram concentrados,cada um separadamente, a 10 graus Brix em um evaporador.
(2) Determinação do método de adição
Um meio de leite em pó desnatado a 20% foiesterilizado a 100°C durante 60 minutos, ao qual o iniciador deBifidobacterium breve YIT10001 foi inoculado a 1%, e osiniciadores de Lactococcus laetis YIT2027 e de StreEtoeoeeusthermophilus YIT2021 foram inoculados, eada um, a 0,1%, e as eepasde baetérias foram eultivadas a 35°C durante 24 horas para obteras respectivas eulturas. Cada eultura foi, então, homogeneiza a15 MPa, e a 40 partes em peso da eultura homogeneizada, foramadicionadas 60 partes em peso de uma solução de açúcar a 10%, quehavia sido esterilizada a 100°C durante 5 minutos, ou uma solução,ue havia sido obtida pela adição β mistura de uma soluçãocontendo os extratos de folhas de caqui preparados acima em (1) a0,1% durante 5 minutos, e um aromatizante de iogurte (produto daYakult Material Co., Ltd.) foi ainda adicionado a 0,1%, parapreparar um produto de laticínio. Com relação a estes produtos delaticínio, a contagem de células viáveis das bactérias em cadameio foi determinada ao término da cultura e apôs armazenagem a10"C durante 14 dias de uma maneira similar àquela do Exemplo 2. Ataxa de viabilidade e a taxa de melhoria de viabilidade foram,respectivamente, calculadas da mesma maneira que no Exemplo 10. Osresultados são mostrados abaixo na Tabela 10.
[Tabela 10]
<table>table see original document page 40</column></row><table><table>table see original document page 41</column></row><table>
Como pode ser entendido por meio da Tabela 10, osefeitos de melhoria de viabilidade para a bactéria do gêneroBifidobacterium provida com o uso de extrato de Rubus suavissimusS. Lee (Rosaceae) podem ser exibidos independente do momento daadição do extrato.
APLICABILIDADE INDUSTRIAL
O alimento fermentado da presente invenção contémbactérias do gênero Bifidobacterium e não sofre deterioraçãosignificativa no sabor e, ainda, mantém a contagem de células dasbactérias mesmo após armazenagem do alimento durante um longoperíodo de tempo. Conseqüentemente, este produto fermentado podeser usado adequadamente na promoção da saúde.

Claims (6)

1. Alimento fermentado caracterizado pelo fato de quecompreende um extrato de pelo menos um material de planta selecionado dogrupo consistindo de cúrcuma, Houttuynia cordata Thunb., Eucommia ulmoidesQiiv., farelo de arroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia, canela eRubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) e bactérias do gênero Bifidobacterium.
2. Alimento fermentado, de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que o extrato foi obtido por extração ácida.
3. Alimento fermentado, de acordo com a reivindicação- 2, caracterizado pelo fato de que o extrato foi obtido por extração ácidasob uma condição ácida não superior a um pH de 4,0.
4. Alimento fermentado, de acordo com qualquer uma dasreivindicações de 1 a 3, caracterizado pelo fato de que compreende aindabactérias de ácido láctico.
5. Método para preparar um alimento fermentadocaracterizado pelo fato de que compreende bactérias do gêneroBifidobacterium, que compreende a adição de um extrato de pelo menos ummaterial de planta selecionado do grupo consistindo de cúrcuma, Houttuyniacordata Thunb., Eucommia ulmoides Oliv., farelo de arroz, folhas de caqui,perila, cravo-da-Índia, canela e Rubus suavissimus S. Lee (Rosaceae) em umestágio arbitrário.
6. Método para melhorar a viabilidade de bactérias dogênero Bifidobacterium, caracterizado pelo fato de que compreende a adiçãode um extrato de pelo menos um material de planta selecionado do grupoconsistindo de cúrcuma Houttuynia cordata Thunb., Eucommia ulmoides Oliv^,farelo de arroz, folhas de caqui, perila, cravo-da-índia, canela e Rubussuavissimus S. Lee (Rosaceae).
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