BR112012006872B1

BR112012006872B1 - Composição, promotor de lipólise oral, inibidor de enzima de conversão de angiotensina oral, e, alimento ou bebida

Info

Publication number: BR112012006872B1
Application number: BR112012006872-5A
Authority: BR
Inventors: Shanhua Xu
Original assignee: Final Future International, Inc
Priority date: 2009-10-02
Filing date: 2010-09-28
Publication date: 2020-05-26
Also published as: IN2012DN02486A; US9399043B2; WO2011039999A1; TWI520741B; EP2484370B1; HK1169306A1; JP2011074051A; BR112012006872B8; CN102573885B; EP2484370A1; JP4493725B1; TW201119660A; BR112012006872A2; EP2484370A4; US20120244236A1; CN102573885A; KR20120080580A; KR101761112B1

Abstract

composição, promotor de lipílise oral, inibidor de enzima de conversão de angiotensina oral, e, alimento ou bebida. a presente invenção descrevê uma composição que tem um efeito promotor de lipólise e um efeito inibidor d eenzima de conversão de angiotensina (ace), é livre de qualquer problema em segurança como um alimento relacionando a, por exemplo efeito colateral e toxicidade e pode ser tomado oralmente, e alimentos, bebidas e suplementos contendo a composição acima mencionada. como os resultados de estudos intensivos em vários materias de alimento para fornecer uma composição para alimentos tendo um efeito promotor d elipólise e um efeito inibidor de ace, foi descoberto que uma extraryo de levedura de cerveja, um extrato d efolha d ecervada jovem, e colágeno de frango teve um excelente efeito promotor de lipólise e um excelente efeito d eatividade inibidora de ace. pelo uso da composição acima mencionada como o ingrediente ativo, alimentos, bebidas e suplementos tendo um efeito promotor de lipólise e um efeito inibidor de ace pode ser provido.

Description

“COMPOSIÇÃO, PROMOTOR DE LIPÓLISE ORAL, INIBIDOR DE ENZIMA DE CONVERSÃO DE ANGIOTENSINA ORAL, E, ALIMENTO OU BEBIDA”

Campo Técnico

A presente invenção refere-se a uma composição tendo um efeito promotor de lipólise, em que um preparado péptico e tríptico da mesma apresenta um efeito inibidor da enzima de conversão de angiotensina (ACE). De um modo mais específico, a presente invenção refere-se a uma composição, que consiste de um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, um extrato de folha de cevada jovem, e colágeno de frango, um promotor de lipólise para a ingestão oral contendo a composição, e um inibidor de ACE para a ingestão oral contendo a composição.

Arte Antecedente

As gorduras resultam a partir do acúmulo de energias redundantes a partir de alimentos ingeridos nos tecidos adiposos brancos. Os tecidos adiposos brancos excessivamente acumulados conduzem à obesidade, o que consequentemente causa, não apenas várias doenças relacionadas ao estilo de vida, mas também problemas estéticos. Recentemente, a evidência científica demonstrou que, de um modo particular, o aumento nos tecidos adiposos brancos periviscerais (mesentéricos) produz hipertensão, resistência à insulina, tolerância à glicose anormal ou hiperlipidemia, e, deste modo, causa a síndrome metabólica. Deste modo, a prevenção e o aperfeiçoamento dos mesmos têm sido socialmente desejados.

A hipertrofia das células adiposas atribuída às gorduras acumuladas diminui a secreção de boas adipoquinas partir das células adiposas e, por sua vez, causa a secreção de várias más adipoquinas (por exemplo, TNFa e resistina), resultando em resistência à insulina (isto é, sensibilidade à insulina reduzida). Como um resultado, o nível de glicose do sangue é insuficientemente reduzido. Deste modo, a insulina é

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 9/27 excessivamente secretada para controlar o nível de glicose do sangue, causando a hiperinsulinemia. Mediante o início da hiperinsulinemia, o efeito da insulina excessiva sobre o metabolismo dos lipídeos, por exemplo, causa a síndrome metabólica.

A adiponectina, uma boa adipoquina, promove a combustão dos ácidos graxos e a absorção do açúcar e melhora a resistência à insulina (documento não-patente 1). O efeito de combustão da adiponectina sobre os ácidos graxos não é produzido pelas células adiposas, mas é atribuído à ativação da proteína quinase ativada por AMP (AMPK) no fígado e nos músculos esqueléticos. A adiponectina inibe a gluconeogênese e estimula a combustão de ácidos graxos no fígado, ao mesmo tempo em que estimula a absorção de açúcar e a combustão de ácidos graxos nos músculos esqueléticos.

A expressão de adiponectina é induzida junto com a diferenciação de células precursoras adiposas no interior das células adiposas. A adiponectina é ativamente secretada a partir das células adiposas nãohipertrofiadas. Em contraste, a adiponectina a partir das células adiposas hipertrofiadas apresenta um efeito atenuado, devido ao TNFa, ou aos similares. De um modo adicional, a transcrição da adiponectina é inibida nas células adiposas hipertrofiadas, e a deficiência de adiponectina resultante causa a anormalidade metabólica (documento não-patente 1).

O carotenóide derivado de fruta ou de vegetal tem sido relatado como sendo capaz de inibir a diferenciação das células precursoras adiposas em células adiposas durante a indução de insulina (documento de patente 1). Se a diferenciação das células precursoras adiposas em células adiposas for inibida, a expressão de adioponectina é também inibida, tal como acima descrito. Deste modo, é duvidoso se a diferenciação inibida no interior das células adiposas conduz diretamente a um efeito antiobesidade.

Vários estudos foram previamente conduzidos sobre a

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 10/27 prevenção e a melhora da obesidade por meio de limitações sobre as energias ingeridas, tal que através da restrição dietética, o retardo e a inibição de energias excessivas, ou quanto a busca quando a inibidores de absorção de carboidrato, que funcionem nos tratos gastrointestinais. As limitações quanto à ingestão de energia, no entanto, também servem como fatores que reduzem a taxa metabólica basal e nem sempre melhoram a obesidade. Desta forma, de um modo ideal, as gorduras acumuladas são agressivamente metabolizadas e digeridas e são então desprendidas como energias térmicas, de um modo a diminuir a obesidade. A partir destes pontos de vista, materiais alimentares têm sido ativamente buscados quanto a ingredientes funcionais tendo um efeito promotor de lipólise em anos recentes, e muitos promotores de lipólise e alimentos ou bebidas têm sido propostos.

Os ingredientes ativos conhecidos em promotores de lipólise de ocorrência natural incluem plantas da família Rutaceae (documento de patente 2), plantas do gênero Cirsium (documento de patente 3), plantas da família Piperaceae (documento de patente 4), folhas de laranja, flores de laranja, folhas de unha-de-cavalo, e raízes de cálamo (documento de patente 5), e cevadinha, cevada, sementes de cássia, goiaba, e chá de pu-ehr (documento de patente 6). Além disso, exemplos de promotores de lipólise que foram recentemente encontrados, podem incluir um promotor de lipólise, que compreende Nelumbo nucifera ou um extrato do mesmo como um ingrediente ativo (documento de patente 7), um promotor de lipólise contendo pelo menos qualquer um de um extrato de bétula branca da família Betulaceae e de um extrato de Kumazasa da família Poaceae (documento de patente 8), e um inibidor de acúmulo de gordura e um promotor contendo um hidrolisado de uma proteína de trigo (documento de patente 9).

No entanto, a hipertensão é um sintoma típico da síndrome metabólica e tem afetado um número crescente de pacientes, ano após ano. A hipertensão é conhecida como sendo causadora de várias complicações, tais

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 11/27 que a hemorragia cerebral, hemorragia subaracnóide, enfarte cerebral, enfarte do miocárdio, angina pectoris, e nefroesclerose. Vários estudos foram conduzidos quanto ao mecanismo patogênico da hipertensão, e quanto ao sistema renina- angiotensina envolvido no aumento da pressão sanguínea e quanto ao sistema calicreína- quinina envolvido no decréscimo da pressão sanguínea, que são conhecidos como tendo um papel importante neste caso. No sistema renina-angiotensina, a angiotensina secretada a partir do fígado é principalmente convertida à angiotensina I através da renina produzida nos rins e é, de um modo adicional, convertida à angiotensina II através de uma enzima de conversão de angiotensina (ACE). Esta angiotensina II contrai os músculos lisos vasculares e eleva a pressão sanguínea. Por um outro lado, a calicreína no sistema hipotensivo age sobre o quininogênio de um modo a produzir a bradiquinina. Esta bradiquinina possui o efeito de diminuir a pressão sanguínea através de vasodilatação, enquanto que a ACE age para digerir esta bradiquinina. Foi, deste modo, revelado que a ACE está envolvida em um aumento da pressão sanguínea através de dois efeitos: a produção da angiotensina de peptídeo hipertensiva II e a inativação da bradiquinina de peptídeo hipotensiva. Deste modo, a inibição da atividade enzimática desta ACE possibilita com que seja evitado um aumento na pressão sanguínea. Por exemplo, o captopril ou o enalapril, que é um derivado de prolina desenvolvido como uma substância tendo uma atividade inibitória da ACE, é amplamente usado no tratamento da hipertensão.

Além disso, os peptídeos obtidos através da digestão enzimática de proteínas do material alimentar foram recentemente relatados como tendo uma atividade inibitória da ACE. Existem muitos relatórios sobre, por exemplo, um peparado de colagenase de gelatina (documento de patente 10), um preparado tríptico de caseína (documentos de patente 11 a 16), um preparado de termolisina de γ-caseína (documento de patente 17), um preparado péptico de um músculo de sardinha (documento de patente 18), um

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 12/27 preparado de termolisina de aparas de atum seco (documento de patente 19), um preparado de termolisina de proteína de sésamo (documento de patente

20), e preparados pépticos e outros de κ-caseína (documento de patente 21).

Documentos da Arte Antecedente

Documentos de Patente

Documento de Patente 1: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 2003-95930

Documento de Patente 2: Publicação de Pedido de Patente Não-examinado Japonês N° 8-81382

Documento de Patente 3: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 8-301780

Documento de Patente 4: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 8-245410

Documento de Patente 5: Publicação de Pedido de Patente Não-examinado Japonês N° 11-228431

Documento de Patente 6: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 2002- 275078

Documento de Patente 7: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 2004-307365

Documento de Patente 8: Publicação de Pedido de Patente Não-examinado Japonês N° 2006-045120

Documento de Patente 9: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 2007-106683

Documento de Patente 10: Publicação de Pedido de Patente Não-examinado Japonês N° 52-148631

Documento de Patente 11: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 58-109425

Documento de Patente 12: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 59-44323

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 13/27

Documento de Patente 13: Publicação de Pedido de Patente Não-examinado Japonês N° 60-23086

Documento de Patente 14: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 60-23087

Documento de Patente 15: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 61-36226

Documento de Patente 16: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 61-36227

Documento de Patente 17: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 61-32127

Documento de Patente 18: Publicação de Pedido de Patente Não-examinado Japonês N° 3-11097

Documento de Patente 19: Publicação de Pedido de Patente Não-examinado Japonês N° 4-144696

Documento de Patente 20: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 8-231588

Documento de Patente 21: Publicação de Pedido de Patente

Não-examinado Japonês N° 8-269088

Documentos Não-patente

Documento Não-patente 1: Takashi Kadowaki et al., “Adiponectin and Molecular Mechanisms of Diabetes Mellitus/

Cardiovascular Disease”, Proceedings of the 128 th Symposium of the

Japanese Asociation of Medical Sciences “Diabetes Mellitus and Arteriosclerosis”, Dec. 2, 2004, págas. 34-45.

Sumário da Invenção

Objeto a ser Solucionado pela Invenção

Um objeto da presente invenção é o de prover uma composição, que pode ser ingerida oralmente, que apresenta um efeito promotor de lipólise e um efeito inibidor de ACE, e que não apresenta

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 14/27 problemas com relação à segurança como um alimento ou como efeitos colaterais de toxicidade.

Meios para Solucionar o Objeto

Como um resultado de estudos diligentes sobre vários materiais alimentares quando a seus efeitos promotores de lipólise e atividades inibitórias de ACE, o presente inventor verificou que: uma mistura preparada através do uso de um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, um extrato de folha de cevada jovem, e um colágeno de frango, de um modo combinado, apresenta um excelente efeito de promoção de lipólise; e uma mistura digerida, obtida através do tratamento de uma mistura de uma folha de cevada jovem, um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, e colágeno de frango com as enzimas digestivas pepsina e tripsina exibe uma atividade inibitória de ACE. A presente invenção foi completada com base nestas descobertas.

De um modo específico, a presente invenção refere-se a:

(1) uma composição, que compreende um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, um extrato de folha de cevada jovem, e colágeno de frango, em que a composição apresenta um efeito de promoção de lipólise e em que um preparado péptico e tríptico do mesmo apresenta um efeito inibidor de enzima de conversão de angiotensina (ACE);

(2) a composição de acordo com (1), em que a composição compreende de 14,0 a 14,5 partes, em peso, de extrato de esperma de salmão,

2,8 a 3,2 partes, em peso, de extrato de levedura de cerveja, e de 5,7 a 6,2 partes, em peso, de colágeno de frango por 100 partes, em peso, de extrato de folha de cevada jovem;

(3) a composição de acordo com (1) ou (2), em que o extrato de esperma de salmão é um extrato, que compreende componentes de baixo peso molecular digeridos em um oligonucleotídeo e um oligopeptídeo obtido através do tratamento enzimático de um esperma de salmão;

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 15/27 (4) a composição de acordo com (1) ou (2), em que o extrato de levedura de cerveja é um extrato, que compreende um componente de RNA de baixo peso molecular, obtido através do tratamento enzimático de levedura de cerveja;

(5) a composição de acordo com (1) ou (2), em que o extrato de folha de cevada jovem compreende 30% de dextrina não digerível;

(6) um promotor de lipólise oral, que compreende uma composição de acordo com qualquer um de (1) a (5);

(7) um inibidor de enzima de conversão de angiotensina oral (ACE), que compreende uma composição de acordo com qualquer um de (1) a (5); e (8) um alimento ou bebida, que compreende uma composição de acordo com qualquer um de (1) a (5).

Efeito da Invenção

A presente invenção possibilitou que fosse provida uma composição tendo um excelente efeito promotor de lipólise, em que um produto digerido da mesma apresenta um efeito inibidor de ACE. A composição da presente invenção não apresenta problemas, tais que efeitos colaterais ou toxicidade como um alimento. Deste modo, a composição da presente invenção pode ser ingerida, de um modo contínuo, durante um longo período e de um modo conveniente, e é muito útil para a prevenção ou a melhora de doenças de adulto, tais que a obesidade e a hipertensão.

Breve Descrição dos Desenhos

[Figura 1] A Figura 1 é um diagrama, que mostra que a quantidade de glicerol no sobrenadante da cultura de células adiposas cultivadas na presença de uma composição da presente invenção é significativamente aumentado, comparado com aquele no sobrenadante da cultura de células adiposas, cultivadas na presença de um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, um extrato de folha de cevada

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 16/27 jovem, ou colágeno de frango isoladamente. A ordenada do diagrama representa um valor em percentual, com base na quantidade de glicerol no sobrenadante da cultura de um grupo não-suplementado.

[Figura 2] A Figura 2 é um diagrama, que mostra que não foi observada diferença significativa entre a viabilidade de células adiposas, cultivadas na presença da composição da presente invenção e aquela de células adiposas cultivadas na presença de um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, um extrato de folha de cevada jovem, ou apenas de um colágeno de frango. A ordenada do diagrama representa um valor, em percentual, com base na viabilidade de células adiposas em um grupo não- suplementado.

[Figura 3] A Figura 3 é um diagrama, que mostra que um produto tratado com pepsina e tratado com tripsina da composição da presente invenção apresenta uma atividade inibitória de ACE significativamente excelente, comparada com aquele de um extrato de esperma de salmão tratado com pepsina e tratado com tripsina, extrato de levedura de cerveja, extrato de folha de cevada jovem, ou apenas de colágeno de frango.

Modo de Executar a Invenção

Uma composição da presente invenção, que apresenta um efeito promotor de lipólise e apresenta um efeito inibidor de enzima de conversão de angiotensina (ACE), após ser digerida com pepsina e tripsina, não está particularmente limitado, desde que a composição compreenda um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, um extrato de folha de cevada jovem, e colágeno de frango. É particularmente preferível que a composição compreenda de 14,0 a 14,5 partes, em peso, do extrato de esperma de salmão, de 2,8 a 3,2 partes, em peso, do extrato de levedura de cerveja, e de 5,7 a 6,2 partes, em peso, de colágeno de frango, por 100 partes, em peso, do extrato de folha de cevada jovem.

O extrato de esperma de salmão não está particularmente

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 17/27 limitado, desde que ele possa ser usado para alimentos. É preferível que o extrato de esperma de salmão compreenda componentes de baixo peso molecular digeridos em um oligonucleotídeo e um oligopeptídeo, através de tratamento enzimático de um esperma de salmão. Um extrato do esperma de salmão contendo de 20 a 50% de um oligonucleotídeo e de um oligopeptídeo tendo um peso molecular de 1000 a 3000 é particularmente preferível. Um tal extrato de esperma de salmão está disponível de, por exemplo, Nissei Bio Co., Ltd.

O extrato de levedura de cerveja não está particularmente limitado, desde que ele possa ser usado para alimentos. É preferível que o extrato de levedura de cerveja compreenda um RNA de baixo peso molecular através do tratamento enzimático de levedura de cerveja. Um extrato de levedura de cerveja contendo de 20 a 50% de RNA tendo um peso molecular de 1000 a 3000 é particularmente preferível. Um tal extrato de levedura de cerveja está disponível de, por exemplo, Nissei Bio Co., Ltd.

O extrato de folha de cevada jovem não está particularmente limitado, e um extrato de folha de cevada jovem secado por pulverização em uma baixa temperatura para alimentos pode ser preferivelmente usado. O extrato de folha de cevada jovem, que pode ser usado, pode compreender dextrina não- digerível. Exemplos preferíveis do extrato de folha de cevada jovem, que compreende dextrina não- digerível, pode incluir um extrato de folha de cevada jovem (manufaturado por Laxon Corp.) contendo de 20 a 30% de dextrina não- digerível.

O colágeno de frango não está particularmente limitado, e o colágeno de frango para alimentos pode ser preferivelmente usado. Exemplos preferíveis dos mesmos podem incluir o colágeno de frango manufaturado por L S Factory Co., Ltd.

A composição da presente invenção pode ser usada como um promotor de lipólise, do mesmo modo que como um inibidor de acúmulo de

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 18/27 gordura oral ou como um agente para a prevenção ou para a melhora da obesidade. A composição da presente invenção pode ser também usada como um inibidor de ACE oral, do mesmo modo que como um agente antihipertensivo ou como um agente para a prevenção ou para a melhora da hipertensão, sem ou com um efeito colateral excessivamente pequeno após ser ingerida, diferentemente de drogas sintéticas, tais que o captopril. Além disso, a composição da presente invenção pode ser misturada em um alimento ou em uma bebida para o uso, deste modo conferindo um efeito promotor de lipólise e um efeito inibidor de ACE ao alimento ou à bebida. Tal como abaixo descrito nos Exemplos, a composição da presente invenção exibe um excelente efeito inibidor de ACE após ser digerida com as enzimas digestivas pepsina e tripsina. Deste modo, a composição da presente invenção ingerida oralmente como um alimento pode exercer um efeito de prevenção ou de melhora da hipertensão. Para a mistura da composição da presente invenção em um alimento ou bebida para o uso, uma quantidade eficaz do ingrediente ativo é adicionada e misturada a esta, por exemplo, uma matéria prima para a produção do alimento ou da bebida ou um produto de alimento ou bebida produzido. Neste contexto, a “quantidade efetiva do ingrediente ativo” significa um conteúdo do ingrediente ativo ingerido como um alimento ou bebida individual, tomado em uma quantidade usual, e pode ser determinada dependendo da idade e do peso corpóreo de um receptor, sintomas, períodos de tempo de administração, formas de dosagem, métodos de administração, da combinação de drogas, etc.

O alimento ou a bebida da presente invenção não está particularmente limitado, desde que ele contenha a composição da presente invenção. Exemplos específicos dos mesmos podem incluir um alimento ou uma bebida ou um suplemento diretamente preparado a partir da composição da presente invenção, a composição da presente invenção sendo adicionalmente misturada com várias proteínas, açúcares, gorduras, elementos

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 19/27 traço, vitaminas, etc, uma tal composição sendo preparada em um estado líquido, semi-líquido ou sólido, e um alimento ou bebida em geral suplementado ou misturado com a composição da presente invenção.

Além disso, o alimento ou a bebida da presente invenção pode ser um alimento saudável, um alimento funcional, ou um alimento para um uso de saúde especificado, ou um alimento para inválidos. O promotor de lipólise oral, o inibidor de ACE oral, e o alimento ou bebida da presente invenção pode ser produzido com o uso de aditivos ou de ingredientes de composição usualmente empregados, por exemplo, auxiliares, tais que excipientes, expansores, aglutinantes, agentes de desintegração, lubrificantes, dispersantes, conservantes, agentes de umectação, solubilizadores, antissépticos, estabilizadores, bases de cápsula, e materiais alimentícios. Exemplos específicos nos auxiliares podem incluir lactose, frutose, glicose, amido, gelatina, carbonato de magnésio, silicato de magnésio sintético, talco, estearato de magnésio, carbonato de cálcio, metil celulose, carboximetil celulose ou sais dos mesmos, goma arábica, polietileno glicol, ácido cítrico, cloreto de sódio, sulfito de sódio, fosfato de sódio, pululano, carragenano, dextrina, palatinose reduzida, sorbitol, xilitol, estévia, adoçantes sintéticos, ácido cítrico, ácido ascórbico, acidulantes, bicarbonato de sódio, éster de sacarose, gorduras e óleos de planta hidrogenados, cloreto de potássio, óleo de açafrão, cera de abelhas, lecitina de soja e aromatizantes.

A seguir, a presente invenção será descrita, de um modo específico, com referência aos Exemplos. No entanto, o escopo técnico da presente invenção não está limitado a estes exemplos.

Exemplo 1 (1) Preparação das amostras

Nos exemplos da presente invenção, as amostras usadas nas avaliações foram preparadas através do uso de um extrato de esperma de salmão (manufaturado por Nissei Bio Co., Ltd.), um extrato de levedura de

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 20/27 cerveja (manufaturado por Nissei Bio CO., Ltd.), um extrato de folha de cevada jovem (manufaturado por Laxon Corp.; contendo 30% de dextrina não- digerível), e colágeno de frango (manufaturado por L S Factory Co., Ltd.), de um modo isolado ou combinado. A concentração de cada componente usado na preparação das amostras é apresentada na Tabela 1.

[Tabela 1]

Material	Amostra 1	Amostra 2	Amostra 3	Amostra 4
1) Extrato de folha de cevada jovem	405 ug/ml	810 μ g/ml	4,05 mg/ml	8,1 mg/ml
2) Extrato de líquido fecundante de salmão	58 jtig/ml	116 ju g/ml	580 μ g/inl	1.16 mg/ml
3) Extrato de levedura de cerveja	12 μ g/iul	24 μ g/ml	120 jug/ml	240 μ g/ml
4) Colágeno de frango	24 μ g/ml	48 μ g/ml	240 μ g/inl	480 μg/ml
5) Mistura (φ + ® + ®4-@)	500 μ g/ftil	1 tng/ml	5 mg/ml	10 mg/ml

(2) Diferenciação em células adiposas e ensaio de atividade lipolítica.

Células 3T3-L1 de linhagem de célula precursora adiposa de camundongo foram inoculadas em uma concentração de 3 x 10⁴ células/ 250 μΐ/ reservatório em uma placa de cultura de 96 reservatórios, previamente incubadas durante 2 dias usando um meio DMEM contendo 10% de CS (10% CS/ DMEM), e cultivadas até a confluência (dia 0). Um indutor de diferenciação de célula adiposa [isobutil metil xantina (IBMX) 0, 5 mM, dexametasona 1 μΜ (DEX), e 10 μg/ ml de insulina) foram ainda adicionados ao meio, e as células foram ainda cultivadas durante 3 dias, de um modo a que fosse induzida a sua diferenciação em células adiposas. As células assim induzidas para a diferenciação foram cultivadas durante 3 dias em um meio de 10% de FBS/ DMEM contendo 10 pg/ ml de insulina e então cultivadas durante 6 dias em um meio básico. Durante este período de cultura de 6 dias, o meio foi substituído, a cada dois dias, de um modo a que fossem acumuladas gotículas de gordura. Então, a mistura descrita na Tabela 1 ou o extrato de esperma de salmão, o extrato de levedura de cerveja, o extrato de folha de cevada jovem, ou o colágeno de frango isoladamente foi adicionado

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 21/27 a esta, e as células foram a seguir cultivadas durante 48 horas. Após ser completada a cultura, cada sobrenadante foi coletado, e a quantidade de glicerol no sobrenadante da cultura foi determinada com o uso do kit de ensaio de Adipólise. Esta quantidade de glicerol no sobrenadante da cultura foi usada como um índice para a lipólise. A taxa de liberação de glicerol é um valor relativo ao valor de um controle como 100%.

Taxa de % de promoção de lipólise = [A / B] x 100

A: quantidade de glicerol livre em uma amostra suplementada com o(s) extrato(s).

B: quantidade de glicerol livre em uma amostra não-suplementada com qualquer extrato.

(3) Resultados de Teste

Como acima descrito, o efeito promotor de lipólise foi determinado com o valor medido da quantidade de glicerol formada pela lipólise como um índice. Um gráfico dos resultados é apresentado na Figura 1, e os valores numéricos do mesmo são apresentados na Tabela 2. Os grupos suplementados com a mistura (amostra) contendo o extrato de folha de cevada jovem exibiram valores de 208,67 % e de 504,17% em relação ao controle em suas concentrações de 1 mg/ ml e de 5 mg/ ml, respectivamente. Em contraste, os grupos suplementados com cada componente isoladamente exibiram taxas de lipólise de 141,57% no grupo suplementado com 810 pg/ ml de extrato de cevada, 155,22% no grupo suplementado com 4,05 mg/ ml de extrato de cevada, 95% no grupo suplementado com 116 pg/ ml de esperma de salmão, 95,44 % no grupo suplementado com 580 pg/ ml de esperma de salmão, 85% no grupo suplementado com 24 pg/ ml de levedura de cerveja, 81,6% no grupo suplementado com 120 pg/ ml de extrato de levedura, 87,67% no grupo suplementado com 48 pg/ ml de colágeno de frango, e 116,7% no grupo suplementado com 240 pg/ ml de colágeno de frango. Estes resultados demonstraram que o efeito promotor de lipólise

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 22/27 significativo exibido pelas amostras preparadas através do uso dos componentes extrato de folha de cevada jovem, extrato de esperma de salmão, extrato de levedura de cerveja, e colágeno de frango, de um modo combinado, não foi confirmado nas amostras preparadas pelo uso de cada componente isoladamente, e demonstrou que um efeito sinérgico significativo foi confirmado através do uso dos componentes extrato de folha de cevada jovem, extrato de esperma de salmão, extrato de levedura de cerveja, e colágeno de frango, de um modo combinado.

[Tabela 2]

Controle		10 0 0
.......................... Extrato de folha de cevada jovem	4 0 5 # g / m I	117,1
8 10# g / m l	141,6
4 .0 5 tn g / m 1	2 5 5 ,2
Extrato de líquido fecundante de salmão	5 8 # g / m 1	9 5,8
1 1 β # g / m 1	9 5,0
5 8 0 # g / m i	9 5 ,4
Extrato de levedura de cerveja	1 2 y g / m 1	8 1 ,5
2 4# g / m l	9 5 0
í 2 0 # g / m 1	8 1 6
Colágeno de frango	2 4 /1 g / m 1	9 5,6
4 8# g / m J 2 4 0 # g7 m í	87,7 1 í S, 7““
Mistura	500# g / m t	1 3 8 ,7
t m g / m 1	2 0 8 ,7
5 m g / m 1	5 0 4,2

(4) Ensaio de viabilidade das células

Após a coleta do sobrenadante, a viabilidade das células em cada amostra foi adicionalmente testada usando o Kit-8 de Contagem Celular (manufaturado por Dojindo). Os resultados apresentados na Figura 2 demonstram que não foi confirmada diferença na viabilidade entre os grupos suplementados com a mistura de cada componente.

Exemplo 2 (1) Preparação de preparados pépticos e trípticos da amostra e de cada componente

Uma solução a 10% da mistura apresentada na Tabela 1 ou cada componente foi preparada usando HC1. KC1 0,1 M (pH 2,5). Pepsina foi

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 23/27 adicionada a cada solução, de um modo a efetuar o tratamento enzimático a 37°C durante 2,5 horas. A solução assim tratada foi aquecida a 90°C durante 10 minutos em um banho de água fervente, de um modo a inativar a pepsina. Esta solução tratada foi diluída 5 vezes usando um tampão de fosfato de potássio 0,1 M (pH 7, 5). Tripsina foi adicionada a esta, de um modo a efetuar adicionalmente o tratamento enzimático a 37°C durante 24 horas. A solução assim tratada foi aquecida a 90°C durante 10 minutos em um banho de água fervente, de um modo a inativar a tripsina. Esta solução tratada foi então centrifugada, e o sobrenadante foi secado por congelamento e usado no experimento subsequente.

(2) Ensaio de atividade inibitória de enzima de conversão de angiotensina (ACE)

A atividade inibitória de ACE foi testada com base em uma modificação de um ensaio de Lieberman. Cada amostra testada por congelamento assim enzimaticamente tratada foi preparada em uma concentração apresentada na Tabela 1, que foi a mesma que aquela antes do tratamento enzimático. A esta solução preparada (30 gl), uma solução do substrato Hip-His- Leu (250 gl) diluída a 5 mM com um tampão de borato (pH de 8,3) contendo NaCl 400 mM foi adicionada, e a mistura foi incubada em um banho d'água à temperatura constante de 37°C, durante 5 minutos. Uma solução de 600 mu/ ml de ACE (6 mU) (100 gl) foi adicionada a esta, e a mistura foi inteiramente agitada e então reagida a 37°C, durante 60 minutos. A reação foi interrompida através da adição de ácido clorídrico 1 N (250 gl) e agitação. Então, acetato de etila (1,5 ml) foi adicionado à solução da reação, e a mistura foi suficientemente agitada, de um modo a liberar o ácido hipúrico. Após a centrifugação a 3.000 rpm durante 10 minutos, 1,0 ml da camada de acetato de etila foi coletada como a camada superior e evaporada até a secura, usando um evaporador. O resíduo foi adicionalmente secado durante 60 minutos, em um dessecador de pressão reduzida. Então, 3 ml de água

Petição 870190096525, de 26/09/2019, pág. 24/27 ultrapura foram adicionados a este, e a absorção da solução resultante foi medida a 228 nm. A atividade inibitória foi calculada como a taxa de inibição (%) de acordo com a equação que se segue:

Taxa de inibição (%) = { (Ec - Es) / (Ec - Eb) } x 100

Na equação, Es representa a absorção de uma solução suplementada com a solução da amostra; Ec representa a absorção de uma solução suplementada com água ultrapura, em vez da solução da amostra; e Eb representa a absorção de uma solução reagida através da adição de ácido clorídrico 1 N, em avanço.

(3) Resultados de teste

Os resultados de teste apresentados na Figura 3 demonstraram que o grupo suplementado com a mistura de 1 mg/ml ou 10 mg/ ml exibiram uma atividade inibitória de ACE significativamente mais alta, comparada com o grupo suplementado com cada composição isoladamente na concentração correspondente. Deste modo, o efeito sinérgico foi confirmado.

Exemplo 3

1687 mg de um extrato de folha de cevada jovem, 240 mg de um extrato de esperma de salmão, 50 mg de um extrato de levedura de cerveja, 100 mg de colágeno de frango, 723 mg de dextrina não digerível, e 500 mg de dextrina por bastão foram misturados, de um modo a preparar suplementos tipo bastão.

Claims

1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um extrato de esperma de salmão, um extrato de levedura de cerveja, um extrato de folha de cevada, e colágeno de frango, em que a composição apresenta um efeito promotor de lipólise e um preparado péptico e tríptico da mesma apresenta um efeito inibidor de enzima de conversão de angiotensina (ACE), e a composição compreende 14,0 a 14,5 partes, em peso, do extrato de esperma de salmão, 2,8 a 3,2 partes, em peso, do extrato de levedura de cerveja, e 5,7 a 6,2 partes, em peso, do colágeno de frango por 100 partes, em peso, do extrato de folha de cevada.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o extrato de esperma de salmão é um extrato que compreende componentes digeridos em um oligonucleotídeo e em um oligopeptídeo, obtidos através do tratamento enzimático de um esperma de salmão.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o extrato de levedura de cerveja é um extrato que compreende um componente de RNA obtido através do tratamento enzimático de levedura de cerveja.

4. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o extrato de folha de cevada compreende 30% de dextrina não digerível.

5. Promotor de lipólise oral, caracterizado pelo fato de que compreende uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.

6. Inibidor de enzima de conversão de angiotensina oral (ACE), caracterizado pelo fato de que compreende uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.

7. Alimento ou bebida, caracterizada pelo fato de que compreende uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.