KR101888871B1 - 차전초 잎 추출물을 포함하는 비만 또는 대사성 질환의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, 본 발명의 최적 추출 조건으로 제조된 차전초 잎 물 추출물은 지방세포의 지방 축적을 억제하고, 비만이 유발된 마우스 모델에서 간 조직 내 콜레스테롤 및 중성지질 함량을 감소시키고, 비만 관련 단백질의 발현을 조절하는 효과를 나타냄으로써, 비만 등 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

차전초 잎 추출물을 포함하는 비만 또는 대사성 질환의 예방 및 치료용 조성물{Composition for preventing and treating of obesity or metabolic disease comprising extract from leaf of Plantago asiatica}
본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
현대의 우리나라는 사회 및 경제적 발전으로 인하여 식생활이 점차 서구화 되어가고, 생활환경 변화에 따른 영양소의 과다 섭취와 신체활동량의 감소로 인한 비만 인구가 점차 증가하고 있는 추세이다. 비만은 에너지 섭취와 소비의 불균형으로 인하여 단순히 몸무게가 증가하는 현상을 넘어 체내에 지방이 과도하게 축적 되는 현상을 의미한다. 특히 비만은 당뇨, 고지혈증, 심혈관계 질환 및 동맥경화증 등, 각종 대사성 질환의 원인이 될 뿐만 아니라, 외형적인 변화로 인한 정신적 스트레스 증가, 우울감의 증가로 삶의 질도 저하시키는 것으로 나타났다.
체내의 지방 축적은 전지방세포 (preadipocyte)에서 지방세포 (adipocyte)로 분화되는 과정에서 지방세포 크기가 커지고 지방세포의 수가 증가함으로 인하여 지방조직의 축적이 일어난다. 특히, 본 실험에서 사용된 3T3-L1은 적절한 배양 조건에서 전지방세포에서 지방세포로 분화하는 지방세포형성 (adipogenesis) 과정이 잘 알려져 있는 세포주로서 지방세포의 분해과정을 이해하는 항비만 활성의 비교 모델로 널리 사용되고 있다.
MPK-activated protein kinase(AMPK)는 serine/threonine protein kinase로써, 세포의 대사와 에너지 균형을 유지하는데 중요한 역할을 한다. AMPK는 α, ß 및 γ의 3개의 소단위로 구성된 heterotrimeric 단백질로 모든 조직에 존재한다. 각각의 소단위는 α1, α2,ß1, ß2, γ1, γ2 및 γ3의 여러 유전자가 존재하며, 조직 특이적 방식으로 표현되는 12개의 heterotrimer 조합의 표현이 가능하다. 이중 α 소단위의 N-말단에 있는 촉매부위에172번 threonine (Thr-172)가 인산화 되는 것이 활성화되는 것으로 알려져있다. 지질 대사 측면에서 AMPK 활성화는 지방산 합성을 유도하는 acetyl CoA carboxylase(ACC) 인산화를 통해 불활성화시킴으로써 HMG-CoA reductase(HMGCR)및 CPT-1을 억제시키기 때문에 비만 환자에서 AMPK 활성화는 중요하다.
HMG-CoA reductase(HMGCR)는 콜레스테롤 생합성 제한 효소로써 3-hydroxy methyl glutaryl coenzyme A (HMG-CoA)가 mevalonate로 전환되는 반응을 촉매 함으로써 콜레스테롤 생합성 경로를 조절한다. Carnitine palmitoyl transferase 1 (CPT-1)은 미토콘드리아 내막에 존재하며, 에너지원으로 쓰일 지방산을 다른 조직으로 이동시켜 지방산의 β-oxidation을 촉진시키는데 필수적인 carinitine을 미토콘드리아 내막으로 이동시켜 지방축적을 예방한다.
Sterol regulatory element binding proteins (SREBPs)는 helix-loop-helix 계열 전사인자로써 1a, 1c 및 2의 세 가지 종류가 있다. SREBP-1a 및 SREBP-1c는 지방산과 중성지방 합성에 관여하며, SREBP-2는 콜레스테롤 대사에 관여한다. 특히, SREBP-1c는 간 조직에서 발현이 우세한 것으로 알려져 있기 때문에 SREBP-1c의 발현 감소는 지방간의 치료에 핵심적인 역할을 하게 된다. 또한, 지방산 분해에 관여하는 유전자들의 발현을 조절하는 전사인자인 peroxisome proliferator-activated receptors(PPARs)는 핵 호르몬 수용체의 구성원으로써 α, ß 및 γ의 세 가지 아형이 존재하며, 특히, PPAR-γ는 주로 지방조직에서 발현되어 adipogenesis와 lipogenesis를 자극하여 지방전구세포가 지방세포로 분화하는 것과 지질 저장 및 포도당 대사에 관여하는 유전자의 조절에 중요한 역할을 한다. 따라서 PPAR-γ의 발현 억제는 비만 치료에 중요한 억제요소로 작용한다.
한편, 차전초(車前草, Plantago asiatica L.)는 질경이과(Plantaginaceae)에 속하는 다년생 초본식물로써 부이, 차과로초라고도 한다. 차전초는 우리나라를 비롯하여 중국과 일본에 흔히 볼 수 있는 식물로 전국에 야생하며 풀밭이나 길가 또는 빈터 등에서 흔히 자란다. 차전초는 6월~8월에 백색 꽃이 피며, 10월에는 6~8개 정도의 흑색종자 열매를 맺는다. 민간에서는 차전초의 어린잎은 식용으로 사용하고 한방에서는 잎을 차전초(車前), 종자를 차전자(車前子) 라는 약재로 사용한다. 다양한 생리적 활성으로 인하여 예로부터 잎은 청열, 양혈, 이뇨, 건위, 부인병, 늑막염 등을 치료하는 약재로 사용되어 왔고, 종자인 차전자는 소염 및 이뇨작용의 치료를 위해 오랫동안 사용되었다.
위와 같이 차전초는 안전하며 한방 및 민간 요법에서 꾸준히 이용되어 왔으나 아직까지 항비만 활성에 대한 연구는 미흡한 실정이다.
한국등록특허 제10-1534142호
이에, 본 발명자들은 차전초 잎 추출물의 생리활성에 대한 연구를 진행하던 중, 차전초 잎 추출물이 지방 축적 및 생성을 억제할 수 있음을 확인하였고, 이러한 효과를 향상시킬 수 있는 최적 추출 용매, 시간 및 온도를 규명함으로써, 차전초 잎 추출물을 비만 등 대사성 질환 예방, 개선 및 치료 용도로 사용할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은, 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방, 치료 또는 개선용 약학적, 건강기능식품 및 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 최적 추출 조건으로 제조된 차전초 잎 물 추출물은 지방세포의 지방 축적을 억제하고, 비만이 유발된 마우스 모델에서 간 조직 내 콜레스테롤 및 중성지질 함량을 감소시키고, 비만 관련 단백질의 발현을 조절하는 효과를 나타냄으로써, 비만 등 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 차전초 잎 추출물의 추출 용매에 따른 3T3-L1 전지방세포의 세포생존율(%)을 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 차전초 잎 추출물의 추출 용매에 따른 3T3-L1 지방세포의 지방축적정도(%)를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 차전초 잎 추출물의 추출 용매 및 추출 시간에 따른 3T3-L1 지방세포의 지방축적정도(%)를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 차전초 잎 물 추출물의 추출 온도에 따른 3T3-L1 지방세포의 지방축적정도(%)를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 정상식이군(ND), 대조군(HFD), 양성대조군(PC) 및 차전초 잎 물 추출물(70℃에서 6시간 추출) 시료처리군(PAF100, PAF300)의 간 조직의 (a) 중성지질(triglyceride) 및 (b) 콜레스테롤(cholesterol) 함량을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 정상식이군(ND), 대조군(HFD), 양성대조군(PC) 및 차전초 잎 물 추출물(70℃에서 6시간 추출) 시료처리군(PAF100, PAF300)의 췌장 리파아제 활성을 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 정상식이군(ND), 대조군(HFD), 양성대조군(PC) 및 차전초 잎 물 추출물(70℃에서 6시간 추출) 시료처리군(PAF100, PAF300)의 간 조직에서의 비만 관련 인자 (a) SREBP-1, (b) PPARγ, (c) AMPK, (d) ACC, (e) HMGCR 및 (f) CPT-1의 발현을 western blot을 통해 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "추출물(extract)"은 추출 대상을 적절한 침출액으로 수득하고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 차전초 물 추출물은 통상의 기술분야에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다. 본 발명에서는 추출 용매로서 물을 이용하여 차전초 잎을 추출하여 '차전초 잎 물 추출물(Plantaginis asiaticae Folium water extract)'을 수득하였다. 본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 상기 차전초 잎 물 추출물은 에탄올 용매를 사용하여 추출한 추출물보다 더 우수한 지방생성 억제 효과를 갖는다(실험예 3 참조).
본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 차전초 잎 물 추출물은 50 내지 95℃의 온도에서 3 내지 8시간, 60 내지 80℃의 온도에서 5 내지 7시간, 더 바람직하게는 68 내지 72℃의 온도에서 5 내지 7시간 추출하는 것일 수 있다. 본 발명의 일실시예에 따르면, 추출 조건이 상기 범위를 벗어날 경우, 차전초 잎 물 추출물의 지질 축적 억제 효과가 저하됨을 확인하였다(실험예 4 참조).
본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 대사성 질환은 비만, 당뇨병, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 동맥경화증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 바람직하게는 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 더 바람직하게는 비만일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명에 따른 차전초 잎 물 추출물은 지방세포의 지방 축적을 억제하고, 비만이 유발된 마우스 모델에서 간 조직 내 콜레스테롤 및 중성지질 함량을 감소시키고, 리파아제 활성을 저해하며, 간 조직에서 SREBP-1c 및 PPAR-γ 전사인자의 발현을 억제시키고, AMPK 및 ACC 인산화를 유의적으로 증가시킴으로써 HMG-CoA reductase 억제 및 CPT-1 활성 증가를 나타냄으로써, 비만 등 대사성 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있음을 확인하였다(실험예 3 내지 5 참조).
본 발명의 차전초 잎 물 추출물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 왕불류행 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 차전초 잎 물 추출물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.01-1000 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.1-500 mg/kg/일 수 있고, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 유효성분으로서 차전초 잎 물 추출물 이외에 공지된 대사성 질환 치료제를 추가로 포함할 수 있고, 이들 질환의 치료를 위해 공지된 다른 치료와 병용될 수 있다.
대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 및 건강식품 조성물
본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 차전초 잎 물 추출물은 50 내지 95℃의 온도에서 3 내지 8시간, 60 내지 80℃의 온도에서 5 내지 7시간, 더 바람직하게는 68 내지 72℃의 온도에서 5 내지 7시간 추출하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 대사성 질환은 비만, 당뇨병, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 동맥경화증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 바람직하게는 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 더 바람직하게는 비만일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 통상의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 통상의 기술분야에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한없이 제조될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 대사성 질환 치료제의 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
또한, 본 발명은 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 건강식품 조성물에 있어서, 상기 차전초 잎 물 추출물은 50 내지 95℃의 온도에서 3 내지 8시간, 60 내지 80℃의 온도에서 5 내지 7시간, 더 바람직하게는 68 내지 72℃의 온도에서 5 내지 7시간 추출하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 건강식품 조성물에 있어서, 상기 대사성 질환은 비만, 당뇨병, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 동맥경화증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 바람직하게는 비만, 고지혈증, 고콜레스테롤증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 더 바람직하게는 비만일 수 있다.
본 발명의 조성물을 건강기능식품 조성물 또는 건강식품 조성물로 사용하는 경우, 상기 차전초 잎 물 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있으며, 유효성분의 혼합량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품 또는 건강식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 건강기능식품 또는 건강식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 차전초 잎 물 추출물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 건강기능식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 차전초 잎 물 추출물은 천연 식물을 원료로 하므로 약학적 조성물 또는 식품 조성물로 사용할 경우에도 일반적인 합성 화합물에 비하여 부작용이 덜할 수 있으므로, 안전하게 약학적 조성물, 건강기능식품 및 건강식품에 포함되어 유용하게 사용될 수 있다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 차전초 잎 추출물의 제조
본 실험에 사용된 차전초 잎(leaf of Plantago asiatica L., Plantaginis asiaticae Folium, PAF)의 산지는 영천산으로 농업회사법인 ㈜이비채(영천, 대한민국)에서 제공받은 것을 사용하였다. 추출 용매별로 차전초의 효능을 확인하기 위해 차전초 잎을 증류수로 깨끗하게 세척한 후 이물질을 제거한 다음, 차전초 50g당 용매 1L를 첨가하였고, 용매는 물(H2O), 50% 에탄올(50% Ethanol) 또는 95% 에탄올(95% Ethanol)을 이용하였다. 상온, 60℃, 70℃, 80℃ 또는 95℃의 온도 및 6시간 또는 72시간으로 추출 온도와 시간을 달리하여 추출하였으며, 이를 여과 및 감압농축하여 차전초 물 추출물(W), 차전초 50% 에탄올 추출물(50%E) 및 차전초 95% 에탄올 추출물(95% E)을 수득하였다. 각 추출물의 추출 조건은 하기 표 1에 나타난 바와 같다.
추출 용매 추출 시간 추출 온도
W 6시간 70℃
W80℃ 6시간 80℃
W90℃ 6시간 90℃
50%E 에탄올 6시간 60℃
95%E 에탄올 6시간 60℃
95%E(72hr) 에탄올 72시간 상온
< 실험예 1> 실험 준비
1-1. 실험재료의 준비
3T3-L1 세포 배양을 위해 사용된 배지는 bovine calf serum(BCS), fetal bovine serum(FBS) 및 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM)을 사용하고 Hyclone사(Logan, UT, USA)에서 제품을 구입하였다. 3T3-L1 세포 분화를 유도하기 위한 penicillin/streptomycin(P/S), insulin, dexamethasone(DEX), 3-isobutyl-1-methylanthine(IBMX) 및 cacodylate는 Sigma Aldrich사(St. Louis, MO, USA)로부터 구입하여 사용하였다. 세포 독성 측정을 위한 3-[4,5-dimethyl thiazolyl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) 및 지방구 염색에 사용된 시약인 Oil red-O 용액은 Sigma Aldrich사(St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였다. 또한, dimethyl sulfoxide(DMSO), CaCl2는 덕산약품(안산, 경기도, 한국) 제품을 사용하였으며, formaldehyde, isopropyl alcohol은 Junsei chemical(Tokyo, Japan) 제품을 사용하였다.
1-2. 세포배양 및 분화유도
3T3-L1 세포주는 American Type Culture Collection(ATCC, CL-173TM)에서 구입하여 본 실험에 사용하였으며, 세포는 1%의 P/S가 포함된 10%의 BCS을 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2배양기(MCO-15AC, SANYO, Japan)에서 8일간 배양시킨 후, 배양액을 분화유도 배양액(10% FBS, 5㎍/ml insulin, 2uM DEX, 111 ㎍/ml IBMX)으로 바꾸고 2일간 배양하였다. 2일 후, 분화유도 배양액(10% FBS, 5㎍/ml insulin)이 포함된 DMEM 배지로 교환해 주어 2일간 배양시킨 뒤, 마지막으로 insulin을 첨가하지 않은 10% FBS가 포함된 DMEM 배지로 배양하였다. 차전초 잎 추출물의 각각의 농도는 0.1mg/ml, 0.2mg/ml 및 0.4mg/ml로 배지 교체시기마다 함께 처리하였다.
1-3. 실험동물의 준비
5주령의 C57BL/6 수컷 마우스를 ㈜오리엔트(Orient bio Co., Seoul)로부터 분양받아 사용하였다. 실험은 대구한의대학교 동물실험윤리위원회의 승인(DHU2016-093)을 얻었으며 동물 관리 과정을 준수하였다. 실험동물의 사육은 12시간 간격의 light/dark cycle과 온도 23±2℃, 상대습도 50±10%를 유지하면서 사육하였다. 1주간 적응기를 거친 후 정상식이군(normal diet, ND), 대조군(High fat diet, HFD), 양성대조군(positive control, PC), 70℃의 온도에서 6시간 동안 추출한 차전초 잎 물 추출물(Plantaginis asiaticae Folium water extract, PAF) 투여농도별 2개의 시료처리군(PAF100, PAF300)을 포함한 5군으로 난괴법(randomized block design)에 따라 분류하고 각 군별로 15마리씩 배정하여 6주 동안 실험을 진행하였으며, 물과 식이는 자유급식하였다.
1-4. 비만 마우스 모델 제작 및 차전초 물 추출물의 투여
정상식이군(ND)에는 정상 식이(AIN-76A, D10001, Research Diets, USA)를 투여하였고, 정상식이군(ND)을 제외한 대조군(HFD), 양성대조군(PC), 차전초 잎 물 추출물(70℃에서 6시간 추출) 시료처리군(PAF)에는 하기 표 2와 동일 조성의 고지방식이(45%kcal high fat diet, D12451, Research Diets, USA)를 6주간 급여하면서 고지방 식이 유도형 비만 모델을 만들어 실험을 수행하였다.
정상식이군(ND)과 대조군(HFD)은 증류수에 용해한 0.9%의 saline을 경구(PO) 투여하고, 양성대조군(PC)에는 Garcinia cambogia(Korea) 500mg/kg을 증류수에 녹여 경구(PO) 투여하였으며, 시료처리군(PAF)에는 차전초 잎 물 추출물 분말을 실험군별 100mg/kg 및 300mg/kg을 증류수에 녹여 경구(PO)로 투여하였고, 매일 일정한 시간에 1일 1회 6주간 경구로 투여하였다.
Ingredient (g%) ND HFD PC PAF
Nutrients Protein 20.3 24 24 24
Carbohydrate 66 41 41 41
Fat 5 24 24 24
Diet compositon Casein, 30 Mesh 200 233 233 233
DL-Methionine 3 - - -
L-Cystine - 3 3 3
Corn Starch 150 84.8 84.8 84.8
Maltodextrin 10 - 117 117 117
Sucrose 500 201.4 201.4 201.4
Cellulose, BW 200 50 58 58 58
Soybean Oil - 29 29 29
Lard* - 206.8 206.8 206.8
Corn Oil 50 - - -
Mineral Mix S10026 - 12 12 12
DiCalcium Phosphate - 15 15 15
Calcium Carbonate - 6.4 6.4 6.4
Potassium Citrate, 1 H2O - 19.5 19.5 19.5
Mineral Mix S10001 35 - - -
Vitamin Mix V10001 10 12 12 12
Choline Bitartrate 2 2 2 2
FD&C Red Dye #40 - 0.06 0.06 0.06
Total(g) 1000 1000 1000 1000
*cholesterol in lard = 0.811mg/gram.
Cholesterol (mg)/4728 kcal = 167.8
6주 후 실험동물을 12시간 동안 절식시키고 isoflurane (JW pharmaceytical, Korea)를 사용하여 흡입 마취시킨 후 분석에 필요한 간 조직 및 췌장을 적출하였다. 적출 즉시 생리식염수로 수차례 헹군 후 표면의 수분을 제거한 뒤 액체질소로 급속 냉동시킨 후 실험분석 전까지 -80℃에 보관하였다.
1-5. 통계처리
3T3-L1 세포에 대한 세포 생존율 및 지방 억제 효과 분석 결과의 통계처리는 IBM SPSS Statistics 22(Statistical package for the social sciences, SPSS Inc., Chicago)를 사용하여 산출하였고 Student's t-test로써 차전초 잎 추출물의 군간 차이를 분석하였다. 각 군당 평균의 통계적 유의성은 Duncan's multiple range test를 사용하여 검증하였고 유의수준은 0.05 이하로 정하였다.
비만 유도 동물에서의 지질 개선 효과 및 간 기능 개선 효과 분석 결과의 통계처리는 SPSS package program(v. 23.0)을 이용하여 산출되었다. 각 군 간의 평균차이에 대한 유의성 검정은 one-way analysis of variance (ANOVA)를 실시하였고 다군간의 차이는 Ducan's multiple range test에 의해 p<0.05 이상의 수준에서 사후검 정을 실시하였다. 모든 결과는 mean±S.E. (standard error)로 표시하였다.
<실험예 2> 차전초 잎 추출물이 세포 생존율에 미치는 영향 분석
차전초 잎 추출물이 세포의 독성에 영향을 미치는지 확인하기 위하여, 실시예 1에서 물(W), 50% 에탄올(50%E) 및 95% 에탄올(95%E)의 서로 다른 용매로 추출한 차전초 잎 추출물 시료 각각을 96 well plate에서 3T3-L1 전지방세포에 0.1 또는 0.2mg/ml의 농도로 처리하였다. 본 실험에서 양성대조군으로 35μM의 농도의 finofibrate(FF)를 3T3-L1 전지방세포에 처리하였다.
각 시료들을 처리한 세포 생존율은 MTT 분석법을 이용하여 측정하였다. 구체적으로, 각 세포에 차전초 잎 추출물을 처리하고 24시간 배양 후, MTT 용액 60㎕를 넣어서 암실에서 2시간 반응시킨 뒤, DMSO를 200㎕를 가하였다. 흡광도는 ELISA reader(Sunrise, TECAN, Grodig, Austria)에, 570nm에서 흡광도를 측정하였으며, 모두 3개의 well의 평균값을 이용하여 평가하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
그 결과, 차전초의 95% 에탄올 추출물에서는 시료의 농도에 의존적으로 세포 생존율이 감소하는 것으로 나타났고, 모든 군에서 세포 생존률이 80% 이상을 나타내었다.
<실험예 3> 차전초 잎 추출물이 3T3-L1 세포의 지방 축적에 미치는 영향 분석
3-1. 차전초 잎 추출물의 추출 용매에 따른 영향
추출 용매에 따른 차전초 잎 추출물이 3T3-L1 세포의 지방축적에 미치는 효과를 확인하기 위하여, 물(W), 50% 에탄올(50%E) 및 95% 에탄올(95%E)의 용매로 차전초를 추출한 시료를 각각의 농도 0.1 및 0.2mg/ml로 각 군에 처리한 후, Oil-red-O 염색을 통해 지방 함량의 정도를 확인하였다.
구체적으로, 3T3-L1 세포의 세포분화 중에서 차전초 잎 추출물을 각각의 농도(0.1mg/ml 및 0.2mg/ml)로 이틀에 한번씩 배지를 교환하며 처리 하였다. 양성대조군으로는 35μM의 농도의 finofibrate(FF)를 처리하였다. 8일 후 세포배양액 제거 후 DPBS로 3회 세척하고 cacodylate buffer(pH 7.2)로 4℃에서 세포를 2시간 고정시킨 후, 증류수로 세척하여 지방구를 Oil-red-O 염색시약으로 염색하였다. 40% Isopropyl alcohol로 3회 세척을 하고 현미경(CK2, Olympus, Japan)으로 관찰하였다. 염색된 지방세포를 지방함량 측정을 위해 건조시킨 후, 100% isopropyl alcohol로 지방을 추출하여 510nm 파장에서 분광광도계(Sunrise, TECAN, Grodig, Austria)로 흡광도를 측정한 다음, 대조군(무처리군) 대비 처리군의 지방 함량(%)을 측정하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 50%E 추출물의 시료군 0.2 mg/ml의 농도를 제외한 나머지 군에서 모두 지방 축적의 정도가 대조군에 대해 감소한 것으로 관찰되었다. 특히, 차전초 물 추출물을 처리한 군에서 지방 축적의 정도가 가장 낮게 나타났으며 농도에 따른 지방함량은 대조군에 대하여 58% 및 63%가 감소한 것으로 나타나, 차전초 물 추출물 0.2mg/ml의 농도에서 가장 지방억제효능이 효과적으로 나타났다.
3-2. 차전초 잎 추출물의 추출 시간에 따른 영향
추출 시간에 따른 차전초 잎 추출물이 3T3-L1 세포 지방축적에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 W, 50%E, 95%E의 각 용매를 이용하여 6시간 동안 추출한 차전초 잎 추출물을 3T3-L1 세포 각 군마다 처리하였고, 95%E의 용매를 이용하여 72시간 동안 추출한 차전초 잎 추출물을 3T3-L1 세포에 처리하여, 상기 실험예 3-1과 마찬가지로 Oil-red-O 염색을 통해 결과를 확인하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 6시간 추출한 차전초 잎 추출물을 처리한 대부분의 군에서 72시간 추출한 차전초 잎 추출물을 처리한 군보다 3T3-L1의 세포에서 축적된 지방 함량이 더 적어 지방 억제 효과가 우수함을 확인하였다.
3-3. 차전초 물 추출물의 추출 온도에 따른 영향
상기 실험예 3-1 및 3-2에서 추출 용매별, 추출 시간별 실험 결과를 통해 지방축적 억제 효과가 가장 좋게 나타난 차전초를 6시간 물로 추출한 추출물을 사용하여 추출 온도의 차이에 따른 3T3-L1의 세포의 지방축적에 미치는 영향을 상기 실험예 3-1과 마찬가지로 Oil-red-O 염색을 통해 관찰하였다. 추출 온도는 70℃(W70℃), 80℃(W80℃) 및 95℃(W95℃)로 서로 다르게 하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 3가지 추출 온도별 차전초 물 추출물을 처리한 대부분 군에서 대조군에 대하여 지방 축적의 정도가 낮게 나타났다. 추출 온도 70℃에서 추출한 차전초 물 추출물이 가장 좋은 지방억제 효과를 보였으며, 처리 농도는 0.2mg/ml에서 지방 축적 억제 정도가 가장 뛰어났다.
< 실험예 4> 차전초 물 추출물의 최적 추출 조건 분석
4-1. 차전초 물 추출물의 최적 추출 시간
상기 실험예 3-2와 동일한 방법을 사용하여, 차전초 잎을 추출 용매(물) 및 추출 온도(70℃)는 고정시키고 추출 시간을 2 내지 10시간으로 달리하여, 추출 시간에 따른 차전초 물 추출물의 지방 축적 억제 효과를 확인하였다. 0.2mg/ml 농도의 각 추출물 처리에 따른 지방 축적 정도를 측정한 결과는 하기 표 3에 나타난 바와 같다.
추출시간(hr) 2 3 4 5 6 7 8 10
지방 축적 정도 (% of control) 83% 68% 66% 45% 37% 43% 60% 75%
그 결과, 다른 차전초 물 추출물 대비 5시간 내지 7시간 추출한 차전초 물 추출물이 지방 축적 억제 효과가 우수한 것으로 나타났고, 특히 6시간 동안 추출한 차전초 물 추출물의 지방 축적 정도가 가장 낮은 것으로 확인되었다.
4-2. 차전초 물 추출물의 최적 추출 온도
상기 실험예 3-3와 동일한 방법을 사용하여, 차전초 잎을 추출 용매(물) 및 추출 시간(6시간)은 고정시키고 추출 온도를 50 내지 90℃로 달리하여, 추출 온도에 따른 차전초 물 추출물의 지방 축적 억제 효과를 확인하였다. 0.2mg/ml 농도의 각 추출물 처리에 따른 지방 축적 정도를 측정한 결과는 하기 표 4에 나타난 바와 같다.
추출온도(℃) 50℃ 60℃ 65℃ 70℃ 75℃ 80℃ 90℃
지방 축적 정도 (% of control) 71% 46% 44% 37% 42% 45% 58%
그 결과, 다른 차전초 물 추출물 대비 60 내지 80℃의 온도에서 추출한 차전초 물 추출물이 지방 축적 억제 효과가 우수한 것으로 나타났고, 특히 70℃에서 추출한 차전초 물 추출무의 지방 축적 정도가 가장 낮게 나타남을 확인하였다.
<실험예 5> 차전초 잎 추출물이 비만 마우스 모델의 지질 개선에 미치는 영향 분석
5-1. 간 조직의 지질함량에 미치는 영향
간 조직의 총 중성지질(triglyceride) 및 콜레스테롤(cholesterol) 함량 측정을 위하여, 상기 실험예 1-3 및 1-4에서 준비된 정상식이군(ND), 대조군(HFD), 양성대조군(PC) 및 차전초 잎 물 추출물(70℃에서 6시간 추출) 시료처리군(PAF100, PAF300)으로부터 간 조직을 적출하였다. Folch 등(1957)의 방법을 수정 및 보완하여, 간 조직 0.1g을 잘게 자른 후 2ml phosphate buffer(pH 74) 용액으로 균질화 시킨 후 chloroform:methanol(1:1, v/v, Duksan, Korea) 용매로 추출하였다. 추출액을 37℃에서 질소 가스로 휘발시켜 isopropanol(Sigma, USA)로 희석한 후 지질 정량을 위해 유화제인 3mM cholic acid(sodium salt, Sigma, USA)와 발색시 일어나는 탁도를 제거하기 위해 0.5% Triton X-100(Sigma, USA)을 혼합하여 지질 성분을 추출하였다. 간 조직 내 총콜레스테롤(total cholesterol, TC)은 C Allain 1의 효소법(Allain C et al, Enzymatic determination of total serum cholesterol, Clin Chem 20(4), pp470-475, 1974)에 따라 분석시약(L-type GHO M, Wako, 일본)을 사용하여 함량을 측정하였고, 중성지질(triglyceride, TG) 함량은 Van Handel등의 효소법(Van Handel E et al, Micromethod for the direct determination of serum triglycerides, J Lab Clin Med 50(1), pp152-157, 1957)에 의하여 검사시약(L-type TG M, Wako, 일본)을 사용하여 측정하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 간 조직 내 중성 지질(TG) 함량은 정상식이군(ND)의 경우 313±334mg/g liver으로 나타났으며, 이에 비해 고지방식이를 섭취한 대조군(HFD)에서는 17.49±1.65mg/g liver으로 약 133% 증가하였다. 반면 차전초 잎 물 추출물(PAF)을 투여한 시료처리군(PAF100 및 PAF300)에서는 각 처리농도 100mg/kg 및 300mg/kg에서 각각 13.46±1.5mg/g liver 및 12.61±1.94mg/g liver로 대조군(HFD)에 비해 유의적으로로 감소하였다. 또한, 간 조직 내 총 콜레스테롤(TG) 함량은 정상식이군(ND)의 경우 2.42±0.3mg/g liver로 나타났으며, 고지방식이를 섭취한 대조군(HFD)은 2.54±0.18mg/g liver로 정상식이군보다 유의적으로 증가하였으며, 차전초 잎 물 추출물(PAF)을 투여한 시료처리군(PAF100 및 PAF300)의 경우 각 농도에서 1.73±0.33mg/g liver 및 1.76±0.31mg/g liver로 고지방식이군에 비해 유의적으로 감소하였다.
5-2. 췌장 리파아제 활성에 미치는 영향
췌장 리파아제(lipase) 저해 활성은 lipoprotein lipase assay kit (KA4538, Abnova, Taiwan)을 이용하여 측정하였다. 마우스 모델로부터 적출된 췌장 50㎎을 분쇄하여 1000rpm, 10분, 4℃에서 원심분리 한 다음 상층액을 취해 assay protocol에 따라 측정하였다.
그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 췌장 리파아제 활성은 HFD군에서는 1.83±0.18mU/㎖으로 ND군(1.66±0.10mU/㎖)에 비해 활성이 증가되었으나, PAF100 및 PAF300군에서 lipase 활성은 각각 1.26±0.26, 0.98±0.47mU/㎖으로 HFD군에 비해 유의적으로 감소되었다.
췌장 리파아제는 지방을 가수분해하는 소화효소로 지방은 췌장 리파아제에 의해 분해되어 글리세롤과 지방산을 생성한다. 분해된 글리세롤과 지방산은 에너지원으로 쓰이며, 쓰이고 남은 지방은 중성지방으로 합성되어 체내에 축적된다. 따라서 리파아제 효소활성의 저해는 체내 지방흡수를 억제시켜, 지방을 대변으로 배출 한다. 따라서, 상기와 같은 결과로부터, 차전초 잎 물 추출물이 리파아제 활성을 저해하여 체내 중성지방의 배출을 증가시킬 수 있음을 확인하였다.
5-3. 지방 생성 관련 단백질의 발현 양상에 미치는 영향
상기 실험예 1-3 및 1-4에서 준비된 정상식이군(ND), 대조군(HFD), 양성대조군(PC) 및 차전초 잎 물 추출물(70℃에서 6시간 추출) 시료처리군(PAF100, PAF300)의 간 조직에서 비만 관련 인자인 AMPK, ACC, SREBP-1, PPAY-γ, HMGCR 등의 단백질 발현 양상을 Western blot 실험을 통해 확인하였다. 먼저, 실험동물에서 적출한 간 조직 0.1g을 RIPA buffer 1ml을 넣어 균질화하고, 13,000 rpm, 4℃에서 20분간 원심분리하여 상층액을 분리하였다. 분리한 추출액을 Bradford 법을 사용하여 단백질을 정량하여 25㎍의 단백질을 12% sodium dodecyl sulfate(SDS)-PAGE(BIO-RAD, USA)에 분리한 후, PVDF membrane(0.45mm, Millipore, USA)으로 전이시키고 단백질이 전이된 membrane을 5% skim milk 처리하여 비특이적인 단백질에 대한 blocking을 실시하고, SREBP-1, PPARγ, pACC, ACC, pAMPK, AMPK(1:1000, dilution, Cell Signaling, USA), β-actin, HMGCR(HMG-CoA reductase), CPT-1 등의 단백질 항체를 4℃에서 각각 overnight 반응 처리하여 P-BST로 세척 후 각각의 단백질 항체에 알맞은 2차 항체로 1시간 동안 반응시켰다. 그 후 ECL(GE Healthcare, UK) 시약을 처리하여 membrane을 두 장의 OHP film 사이에 넣어 공기방울이 생기지 않도록 하고 LugenSensi-Q2000 Chemidoc (Lugen Scim Inc., Korea)을 이용해 western band를 검출하였다.
그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 지방산 및 콜레스테롤 합성 관련 인자인 SREBP-1c의 단백질 발현도를 분석한 결과, ND군에 비해 HFD군에서 SREBP-1c의 단백질 발현이 크게 증가하였고, PAF군 모두에서 HFD군에 비해 SREBP-1c의 단백질 발현도가 유의적으로 감소하였다(도 7a).
지방세포에서 지방세포 분화 조절에 크게 관여하는 전사인자인 PPAR-γ(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ)의 단백질 발현도는 ND군에 비해 HFD군에서 크게 증가하였으며, PAF 모든 군에서 HFD군에 비해 PPAY-γ의 발현도가 유의적으로 감소하였다(도 7b).
지질과 포도당 대사의 조절인자이며, 에너지 항상성을 유지하는 핵심인자인 AMPK(AMP-activated protein kinase)의 활성을 측정하기 위해, AMPK 단백질의 인산화 수준을 조사한 결과, ND군에 비해 HFD군에서 AMPK단백질 인산화 수준이 감소하였으며, PAF군에서 HFD군에 비해 AMPK의 인산화 수준이 증가하였다(도 7c).
지방산 합성을 유도하는 효소인 ACC(acetyl CoA carboxylase)의 인산화 수준은 HFD군에서 ND군에 비해 감소하였고, ACC 인산화는 HFD군에 비해 PAF군에서 유의하게 증가하였다(도 7d). 또한, 콜레스테롤 생합성 제한 효소인 HMGCR(HMG-CoA reductase)의 발현은 PAF300군에서 유의하게 억제되었으며, 지방산 산화에 관여하는 CPT-1(carnitine palmitoyl transferase-1) 단백질 발현은 HFD군에 비해 PAF 모든 군에서 유의적으로 증가하였다(도 7e 및 7f).
따라서, 본 발명의 차전초 잎 물 추출물은 비만 관련 인자의 발현을 조절하여 체내 지방 형성 축적을 억제하고 항비만 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (12)

  1. 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 차전초 잎 물 추출물은 60 내지 80℃의 온도에서 5 내지 7시간 추출하는 것을 특징으로 하는, 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 차전초 잎 물 추출물은 68 내지 72℃의 온도에서 5 내지 7시간 추출하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만, 당뇨병, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 동맥경화증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  7. 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 차전초 잎 물 추출물은 60 내지 80℃의 온도에서 5 내지 7시간 추출하는 것을 특징으로 하는, 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만, 당뇨병, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 동맥경화증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
  10. 차전초(Plantago asiatica L.) 잎 물 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 차전초 잎 물 추출물은 60 내지 80℃의 온도에서 5 내지 7시간 추출하는 것을 특징으로 하는, 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만, 당뇨병, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 동맥경화증 및 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만인 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
KR1020180040070A 2018-04-06 2018-04-06 차전초 잎 추출물을 포함하는 비만 또는 대사성 질환의 예방 및 치료용 조성물 KR101888871B1 (ko)

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KR1020180040070A KR101888871B1 (ko) 2018-04-06 2018-04-06 차전초 잎 추출물을 포함하는 비만 또는 대사성 질환의 예방 및 치료용 조성물

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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RU2763348C2 (ru) * 2020-02-07 2021-12-28 Общество с ограниченной ответственностью «Микронутриенты» (ООО «Микронутриенты») Композиция для профилактики и лечения ожирения и ассоциированных метаболических нарушений
KR20230019285A (ko) 2021-07-29 2023-02-08 한국식품연구원 시계꽃 추출물을 포함하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120124975A (ko) * 2011-05-06 2012-11-14 주식회사 엔자임바이오 질경이 추출물을 함유하는 항산화 및 지질대사개선용 식품조성물
KR101534142B1 (ko) 2013-07-08 2015-07-07 대구한의대학교산학협력단 혼합 생약 추출물을 이용한 대사성질환 예방 및 치료용 조성물

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