KR101059308B1 - 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 또는알러지 질환의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증 또는 항알러지 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 불가사리 추출 분획물이 염증 및 알러지 반응에 관련이 있는 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2; COX-2) 의존적인 프로스타글란딘 D₂ (Prostaglandin D₂, PGD₂) 생성을 억제하고, 5-리폭시게나제 (5-lipoxygenase; 5-LOX) 의존적인 류코트리엔 C₄ (LTC₄) 생성을 억제하며, 동시에 비만세포로부터 탈과립 반응 억제작용을 나타내고, 또한 대식세포로부터 산화질소 (nitric oxide; NO) 생성을 억제하는 바, 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강기능식품에 유용하게 사용될 수 있다.

불가사리, 염증질환, 알러지 질환

Description

불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 조성물{Composition comprising the fraction of starfishes having anti-inflammatory or anti-allergic activity}

본 발명은 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

[문헌 1] Murakami M et al, Phospholipase A₂ enzymes. Prostaglandins Other Lipid Mediat, 68-69, pp.3-58, 2002

[문헌 2] Reid RC, Inhibitors of secretory phospholipase A₂ group IIA. Curr. Med. Chem. 12, pp.3011-3026, 2005

[문헌 3] Loewen PS, Review of the selective COX-2 inhibitors celecoxib and rofecoxib: focus on clinical aspects. CJEM. 4, pp.268-75, 2002

[문헌 4] Ueno A, Inflammation-allergy and prostanoids. (1). Prostanoids in experimental inflammatory reaction. Nippon Yakurigaku Zasshi. 117, pp.255-61, 2001

[문헌 5] The 5-lipoxygenase pathway in arterial wall biology and atherosclerosis. Biochim Biophys Acta, 1736(1), pp.30-7, 2005

[문헌 6] Leukotrienes: potential therapeutic targets in cardiovascular diseases. Bull Acad Natl Med, 190(7), pp.1511-1518; discussion pp.1518-1521, 2006

[문헌 7] Heiss, E. et al., Nuclear factor kappa B is a molecular target for sulforaphane-mediated anti-inflammatory mechanisms. J Biol Chem 276, p.32008, 2001

[문헌 8] Kristof et al., Role of inducible nitric oxide synthase in endotoxin-induced acute lung injury, Am J Respir Crit Care Med 158, p.1883, 1998

[문헌 9] Arber N, Cyclooxygenase-2 inhibitors in colorectal cancer prevention: point. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 17, pp.1852-7, 2008

[문헌 10] Smith Cj, Diabetes, colorectal cancer and cyclooxygenase-2 inhibition. Int J Clin Pract. 62, pp.810-5, 2008

[문헌 11] Inhibitor of cyclooxygenase-2 protects against amyloid beta peptide-evoked memory impairment in mice. Pharmacol Rep. 59, pp.164-72, 2007

[문헌 12] Mayer, B., and B. Hemmens, Biosynthesis and action of nitric oxide in mammalian cells. Trends Biochem Sci 22, p.477, 1997

[문헌 13] Batra J, Inducible nitric oxide synthase (iNOS): role in asthma pathogenesis. Indian J Biochem Biophys. 44, pp.303-9, 2007

[문헌 14] Maniscalco M, Nitric oxide in upper airways inflammatory diseases. Inflamm Res. 56, pp.58-69, 2007

[문헌 15] Struben VM, Nasal nitric oxide and nasal allergy. Allergy. 61, pp.665-70, 2006

[문헌 16] 조사분석2팀 장지수, 불가사리의 기술에 대한 특허 동향, 한국특허정보원

[문헌 17] 한국특허공개 제2003-64189호 (2003. 7. 31 공개)

[문헌 18] Chang HW et al.. Planta. Medica., 70(5), pp.474-476, 2004

[문헌 19] Y.M. Lin et al., Planta Med. 55, pp.166-168. 1989

[문헌 20] Katayama S, Shionoya H and Ohtake S, Microbiol Immunol, 22, pp.89-101, 1978

염증이란 신체 국소에 일어나는 상해에 대하여 생체조직의 방어반응이다. 즉, 각종의 유해한 자극 (stressor)에 응답하여, 자극에 의한 상해를 제거하여 원래의 상태로 회복하려는 생체방어 반응이 염증반응이다. 염증의 자극에는, 감염 혹은 화학적, 물리적 자극 등이 있다. 염증반응에 관련된 생체구성인자는 자유라디칼 (free radical), 단백질, 당질, 지질 등의 저분자나 고분자의 화학물질과, 혈장, 혈구, 혈관 및 결합조직 등이 있다. 염증의 과정은 보통 2가지로 나누며, 급성 및 만성 염증으로 나눌 수 있다. 급성염증은 수일이내의 단기적인 반응이며, 혈장성분이나 혈구 등이 미소순환계를 개재하여 이물 제거에 관련한다. 만성염증은 지속시간이 길며, 조직의 증식 등이 나타난다.

알러지성 질환은 대부분이 항원-항체 반응에 의해 활성화된 조직의 비만세포 및 혈액의 호염기성 세포 및 호산구에서 유리되는 매개체들 (주로 히스타민 (histamine), 류코트리엔 (leukotrienes), 종양괴사요인α(TNFα), 사이토카인 (cytokines) 등)에 의해서 야기된다. 현재 사용되는 알러지 치료 약물들의 용도는 증상완화에 머무르고 있기 때문에 보다 근본적인 치료 약물의 개발이 절실히 요구된다.

염증 및 알러지성 질환을 유도하는 핵심적인 매개물질은 프로스타글란딘류 (prostaglandindes), 류코트리엔류 (leukotriens), 혈소판활성화인자 (PAF) 등은 포스포리파제 A₂ (phospholipase A₂, PLA₂) 및 사이클로옥시게나제 (cyclooxygenase) 및 리폭시게나제 (lipoxygenase)에 의하여 전구체인 아라키돈산 (arachidonic acid)으로부터 생성된다. 아라키돈산 대사계 율속효소인 PLA₂는 세포내 분포위치에 따라 세포내성 (cPLA₂) 및 세포외성 (분비성 PLA₂, sPLA₂)으로 나누며, sPLA₂의 동종효소 (isozyme)는 10종류가 있으며, 이 효소중에서 특히 sPLA₂-IIA, sPLA₂-V는 각종 염증질환, 알러지 반응에 직접 및 간접적으로 관여함이 알려져 있다 (Murakami M et al, Phospholipase A₂ enzymes. Prostaglandins Other Lipid Mediat, 68-69, pp.3-58, 2002; Reid RC, Inhibitors of secretory phospholipase A₂ group IIA. Curr. Med. Chem. 12, pp.3011-3026, 2005).

프로스타글란딘류 (prostaglandines)는 특이한 세포표면 수용체와 결합하여 환식 아데노신모노포스페이트 (cyclic Adenosine MonoPhosphate, cAMP ;경우에 따라서는 환식 구아노신모노포스페이트, cGMP)의 세포내 농도를 증가시키는 작용을 한다. 환식 아데노신모노포스페이트의 증가에 의한 효과는 세포 종류에 따라 다르며 프로스타글란딘 A₂ (Prostaglandin A₂, PGA₂), 프로스타글란딘 B₂ (Prostaglandin B₂, PGB₂), 프로스타글란딘 C₂ (Prostaglandin C₂, PGC₂)는 혈압을 강하시키고, 프로스타글란딘 D₂ (Prostaglandin D₂, PGD₂), 프로스타글란딘 E₁ (Prostaglandin E₁, PGE₁)은 혈소판 응집을 억제하고 동통, 발열 등의 염증과정에 관여한다고 알려져 있 다. 프로스타글란딘 D₂는 특히 기관지 천식환자의 평활근을 수축하여 천식을 악화시키는 주범으로 알려져 있다(Loewen PS, Review of the selective COX-2 inhibitors celecoxib and rofecoxib: focus on clinical aspects. CJEM. 4, pp.268-75, 2002; Ueno A, Inflammation-allergy and prostanoids. (1). Prostanoids in experimental inflammatory reaction. Nippon Yakurigaku Zasshi. 117, pp.255-61, 2001).

류코트리엔은 아라키돈산 (arachidonic acid)으로부터 생체에서 생성되는 국소 작용성 호르몬 그룹을 구성하며, 중요한 류코트리엔으로는 류코트리엔 B₄ (LTB₄), 류코트리엔 C₄ (LTC₄), 류코트리엔 D₄ (LTD₄) 및 류코트리엔 E₄ (LTE₄)가 있다. 이들 류코트리엔의 생합성은 효소 5-리폭시게나제가 아라키돈산에 대하여 작용하여 류코트리엔 A₄로서 알려진 에폭시드 (epoxide)를 생성시킴으로써 시작되며, 이것은 연속적인 효소 반응 단계에 의해 다른 류코트리엔 (LTB₄, LTC₄, LTD₄, LTE₄) 으로 전환된다. 류코트리엔은 폐동맥질환, 예를 들면, 천식, 만성 기관지염 및 관련 폐쇄성 기도 질환, 상기도염 및 알러지성 비염, 접촉성 피부염, 알러지성 결막염 등의 알러지 및 알러지 반응, 관절염 또는 염증성 장 질환, 통증, 아토피성피부염 등의 염증 및 동맥경화 (The 5-lipoxygenase pathway in arterial wall biology and atherosclerosis. Biochim Biophys Acta, 1736(1), pp.30-7, 2005) 및 심장병질환 (Leukotrienes: potential therapeutic targets in cardiovascular diseases. Bull Acad Natl Med, 190(7), pp.1511-1518; discussion pp.1518-1521, 2006)을 유발 시킨다고 보고되어있다. 최근 알러지성 천식 치료제로서 주목을 받고 있는 약물들은 히스타민 유리억제, 류코트리엔 C₄ 생성억제, 혈소판 활성화인자 생성억제 활성을 동시에 가지는 약물들이다.

한편 산화질소 (Nitric Oxide; NO) 를 유도하는 유도형 산화질소 합성효소 (inducible forms of nitric oxide synthase; iNOS)와 프로스타글란딘 D₂ (PGD₂) 를 유도하는 사이클로옥시게나제-2 (COX-2) 는 다발성 경화증, 파킨슨씨 병, 알쯔하이머 병, 결장암 등을 비롯한 각종 만성 질병에 관여하는 효소로써 잘 알려져 있다 (Heiss, E. et al., Nuclear factor kappa B is a molecular target for sulforaphane-mediated anti-inflammatory mechanisms. J Biol Chem 276, p.32008, 2001). 이런 효소들을 생산하는 대표적인 것이 대식세포 (macrophage)이다. 엘-아르기닌 (L-arginine)으로부터 생산되어지는 산화질소는 활성화된 대식세포에 있는 유도형 산화질소 합성효소에 의해서 만들어지고 이것은 염증매개물질에 있어서 가장 중요한 것 중의 하나이다. 신체적으로, 이러한 활성은 조직손상, 폐혈증 (septic shock), 동맥경화를 포함한 다양한 자극에 의해 일어난다 (Kristof et al., Role of inducible nitric oxide synthase in endotoxin-induced acute lung injury, Am J Respir Crit Care Med 158, p.1883, 1998). 비유발성 산화질소 합성효소(constitutive NOS; cNOS)에 의해 생산되어지는 산화질소는 세포기능 유지에 있어서 중요한 역할을 하고, 반면에 유도형 산화질소 합성효소 (iNOS)에 의해 생산 되어지는 산화질소는 급성, 만성 염증에 있어서 중요한 매개체 역할을 한다 (Arber N, Cyclooxygenase-2 inhibitors in colorectal cancer prevention: point. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 17, pp.1852-7, 2008; Smith Cj, Diabetes, colorectal cancer and cyclooxygenase-2 inhibition. Int J Clin Pract. 62, pp.810-5, 2008; Inhibitor of cyclooxygenase-2 protects against amyloid beta peptide-evoked memory impairment in mice. Pharmacol Rep. 59, pp.164-72, 2007). 따라서 유도형 산화질소 합성효소의 발현을 억제하여 과잉 산화질소생산을 억제하는 것은 산화질소와 관련된 각종 염증성 질환을 치료하는데 유용한 것이다(Mayer, B., and B. Hemmens, Biosynthesis and action of nitric oxide in mammalian cells. Trends Biochem Sci 22, p.477, 1997; Batra J, Inducible nitric oxide synthase (iNOS): role in asthma pathogenesis. Indian J Biochem Biophys. 44, pp.303-9, 2007; Maniscalco M, Nitric oxide in upper airways inflammatory diseases. Inflamm Res. 56, pp.58-69, 2007; Struben VM, Nasal nitric oxide and nasal allergy. Allergy. 61, pp.665-70, 2006).

불가사리는 몸이 편평한 별모양으로 연안에서 우리가 가장 흔하게 접할 수 있는 해양동물 중의 하나로서, 전국 연안에 30여종의 불가사리가 서식하고 있으며, 번식률은 대단히 높아서 마리당 200만∼300만개를 산란하며, 극피동물문의 바다나리강, 불가사리아강, 거미불가사리아강, 성게강, 해삼강에 포함되는 해산 무척추동물이다. 우리나라에는 불가사리류 47종이 보고되어 있으며 남쪽에 비해 북방계의 종이 풍부하다. 특히 아무르 불가사리 (Asterias amurensis (Lutken), 불가사리과) 는 캄챠카나 홋카이도로부터 유입된 외래종으로서 우리나라의 전역에 퍼져 있으며 어민들에게는 가장 악명 높은 육식성 불가사리이다. 토속종인 별불가사리에 비해서 다리가 가늘고 길며, 크기는 보통 20㎝ 정도이며 큰 것은 40㎝가 넘게 자라기도 한다. 이 종은 엄청난 포식력과 강인한 생명력을 자랑하는데, 멍게, 전복, 홍합, 고둥, 조개 가리지 않고 닥치는대로 먹어치운다. 그리고 조사에 의하면, 하루에 멍게 4개, 전복 2개, 홍합 10개를 거뜬히 먹어치운다. 이들은 1미터 이하의 단거리의 경우에는 관족을 이용하여 이동하지만, 장거리를 이동할 때는 주로 몸에 가스를 채워서 집단으로 부유하여 이동을 한다. 특히 알에서 깨어난 비핀나리아일 때 물속을 떠다니며 살기에 적합한 곳을 찾는다고 한다. 주로 5~7월이 산란기인데, 이때 암놈은 거의 하루에 200만개의 알을 뿌려대는 것으로 알려져 있으며, 재생력이 강해, 팔을 잘라도 다시 개체로 자라는 특성을 지니고 있다. 현재 “해적생물”로 인식되어 각 나라 어민들의 골칫덩어리 중 하나이다(조사분석2팀 장지수, 불가사리의 기술에 대한 특허 동향, 한국특허정보원).

불가사리의 특허에 대한 기록을 보면, 본격적인 연구가 이루어지지 않은 1990년대 중반까지는 불가사리의 몸을 구성하는 주요 성분인 칼슘 성분을 염두에 두고, 단순히 파쇄하여 사료, 비료의 첨가제로서 사용하는데 그치는 출원이었다. 하지만 2000년도가 넘어가는 시점에서 구제된 불가사리에 대한 이용에 대한 연구가 활발해지기 시작하면서, 사람이 먹을 수 있는 건강식품, 그리고 의약품, 공업용 성분 물질 등으로 그 출원의 범위가 확장되고 있는 중이다. 특히 의약품에 대한 연구는 가장 활발한 분야로서 2001년에 불가사리를 이용한 총 17건의 출원 중 거의 절 반을 차지하고 있으며, 불가사리의 칼슘성분을 이용한 칼슘보충제에서, 추출방법을 다양화한 항콜레스테롤제, 항균조성물 등 연구가 활발히 진행되고 있다.

한편, 불가사리를 이용한 알레르기 질환치료제로서의 용도발명에 대한 특허로는 “아무르 불가사리 열수 추출물의 항알레르기 소재로의 용도” (출원번호 2002-0004701, 2002.01.26 출원)가 이미 개시된 바 있으나, 본 발명은 폐자원인 불가사리의 재활용 및 새로운 기능성 소재의 발굴을 위하여 상기 불가사리 열수 추출물을 대상으로 보다 더 분획공정을 수행하여 열수 추출물보다 항염 활성 또는 항알레르기 활성 효과가 보다 탁월한 분획물들을 검색한 결과, 불가사리 추출물의 일부 분획물들이 아라키돈산 대사계 효소인 사이클로옥시게나제-2 의존적인 프로스타글란딘 D₂ 생성을 억제하고, 5-리폭시게나제 의존적인 류코트리엔C₄ 생성을 억제하며, 동시에 비만세포로부터 탈과립 반응 억제작용을 나타내고, 또한 대식세포로부터 산화질소 생성을 억제하는 효능이 탁월함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명은 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명은 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 불가사리는 아무르 불가사리(Asterias amurensis (Lutken)), 별 불가사리(Asterina pectinifera (Muller et Troschel)), 거미 불가사리(Ophioplocus japonicus) 또는 빨강 불가사리 (Certonardoa semiregularis), 바람직하게는 아무르 불가사리임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 추출 분획물은 불가사리의 극성용매 가용 추출 분획물 또는 비극성용매 가용 추출 분획물임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 상기 극성용매 가용 추출 분획물은 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 물, 메탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출 분획물, 보다 바람직하게는 부탄올 가용 추출 분획물을 포함한다.

본원에서 정의되는 상기 비극성 용매 가용 추출 분획물은 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드 또는 에틸아세테이트, 바람직하게는 헥산 또는 에틸아세테이트에 가용한 추출 분획물을 포함한다.

본원에서 정의되는 염증 질환은 급성 또는 만성 염증질환, 만성 기관지염 및 관련 폐쇄성 기도 질환, 상기도염 및 비염, 관절염 또는 염증성 장 질환, 통증, 동맥경화, 심장병 질환, 다발성 경화증, 파킨슨씨 병, 알쯔하이머 병, 결장암 등을 비롯한 질환, 바람직하게는, 급성 또는 만성 염증질환, 관절염 또는 염증성 장 질 환을 포함한다.

본원에서 정의되는 알러지 질환은 천식, 접촉성 피부염, 알러지성 결막염 등의 알러지 및 알러지 반응, 아토피성 피부염 등의 알러지성 질환, 바람직하게는 천식, 접촉성 피부염 또는 아토피성 피부염을 포함한다.

이하, 본 발명의 추출 분획물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본 발명의 추출 분획물은 신선한 불가사리를 세척 및 세절한 후, 추출용매로서 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 메탄올 혼합 용매를 건조된 불가사리 중량의 약 1 내지 5배, 바람직하게는 2 내지 4배를 가하여, 5 내지 100℃, 바람직하게는 20 내지 90℃에서, 더 바람직하게는 실온 또는 90℃에서 20시간 내지 30시간, 바람직하게는 24시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 또는 가열추출 바람직하게는 냉침 추출 또는 열수추출법으로 추출한 후 여과하고 감압 농축하여 본 발명의 불가사리 조추출물을 수득할 수 있다.

상기 단계에서 얻은 불가사리 조추출물, 바람직하게는 불가사리의 메탄올 조추출물을 중량의 1 내지 5배, 바람직하게는 2 내지 4배 부피(v/v)의 물에 현탁시킨 후, 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 물과 동량 부피를 가하여 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획하여 헥산, 에틸아세테이트 등의 비극성 용매에 가용한 비극성 용매 가용 추출 분획물; 및 부탄올, 물 등의 극성용매에 가용 한 극성 용매 가용 추출 분획물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법으로 얻어진 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 제조방법으로 얻어진 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

상기한 불가사리 추출 분획물들이 이미 한국특허공개 제2003-64189호 (2003. 7. 31 공개)에 당업계에 개시된 아무르 불가사리 열수 추출물보다 항염 활성 및 항알레르기 활성 효과가 보다 탁월함을 아라키돈산 대사계에 관여하는 사이클로옥시게나제-2 의존적인 프로스타글란딘 D₂ 생성 억제실험; 5-리폭시게나제 의존적인 류코트리엔C₄ 생성 억제실험; 비만세포로부터 탈과립 반응 억제작용실험; 대식세포로부터 산화질소 생성 억제실험 등의 효능실험 및 알러지 동물모델 실험을 통하여 본 발명에서 확인하였다.

본 발명의 분획물을 함유하는 약학조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출 분획물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 분획물 자체는 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담 체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 분획물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.5 g/kg 내지 5 g/kg으로, 바람직하게는 1 g/kg 내지 3 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 불가사리 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 분획물을 포함하는 조성물은 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 분획물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합 제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 또는 음료 중의 상기 분획물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 1 내지 5 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 불가사리 분획물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절 제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 불가사리 추출 분획물이 염증 및 알러지 반응에 관련이 있는 사이클로옥시게나제-2 의존적인 프로스타글란딘 D₂ 생성을 억제하고, 5-리폭시게나제 의존적인 류코트리엔 C₄ 생성을 억제하며, 동시에 비만세포로부터 탈과립 반응 억제작용을 나타내고, 또한 대식세포로부터 산화질소 생성을 억제하는 효능이 있음을 확인함으로써, 염증 또는 알러지 질환의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물 및 건강기능식품에 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 참고예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

비교예 1. 아무르 불가사리 열수추출물의 제조 (한국특허공개 제2003-64189호 개시 추출물)

동해안에서 채취한 아무르 불가사리 950g을 세척 및 세절한 후, 90℃에서 24시간에 걸쳐 1L의 증류수를 가하여 열수추출한 후, 감압, 농축 및 건조하여 아무르 불가사리 열수 추출물 69g을 얻었다(이하, “AS-HW"라 함).

실시예 1. 아무르 불가사리 메탄올 조추출물의 제조

동해안에서 채취한 신선한 아무르 불가사리 1.4㎏을 세척 및 세절한 후, 100% 메탄올 2ℓ, 1.5ℓ, 1.5ℓ를 넣고 60℃에서 24시간 침지시킨 후, 실온에서 3회 추출한 후, 감압, 농축 및 건조하여 아무르 불가사리 메탄올 조추출물 40g(수율; 2.88%)을 얻었다(이하, "AS-M"이라 함).

실시예 2. 아무르 불가사리 비극성용매 가용 추출 분획물의 제조

2-1. 아무르 불가사리 헥산 추출 분획물의 제조

상기 실시예 1의 AS-M 중 33g을 200mL의 증류수에 현탁시킨 후, 200mL의 분획 깔대기에 부은 다음, 동량의 헥산을 넣어 잘 섞이도록 흔들어 물층과 헥산층으로 분리하였으며, 이 과정을 3회 반복하였다. 감압, 농축 및 건조하여 아무르 불가사리의 헥산 추출 분획물 5.3g(수율: 16%, 이하, "AS-H"라 함) 및 수가용성 분획물을 수득하였고, 하기 실험예의 시료로 사용하였다.

2-2. 아무르 불가사리 에틸아세테이트 추출 분획물의 제조

상기 실시예 2-1의 수가용성 분획물에 에틸아세테이트 200 mL를 넣어 3회 반복 추출하는 점만 제외하고, 실시예 2-1과 동일한 공정을 수행하여 아무르 불가사리 에틸아세테이트 추출 분획물 0.31g(수율: 1.12%, 이하, "AS-E"라 함)와 수가용성 분획물을 수득하였고, 하기 실험예의 시료로 사용하였다.

실시예 3. 아무르 불가사리 극성용매 가용 추출 분획물의 제조

상기 실시예 2-2의 수가용성 분획물에 부탄올 200 mL를 넣어 3회 반복 추출하는 점만 제외하고, 실시예 2-1과 동일한 공정을 수행하여 아무르 불가사리의 부탄올 추출 분획물 2.47g(수율: 9%, 이하, "AS-B"라 함)와 수가용성 분획물 19.6g(수율: 78.65%, 이하, "AS-W"라 함)을 수득하였고, 하기 실험예의 시료로 사용하였다.

참고예 1. 실험재료의 준비

세포 배양액인 RPMI-1640, Modified Eagle Medium(MEM), non-essential amino acids solution, 우태혈청 (fetal bovine serum; FBS), 스트렙토마이신 (streptomycin), 페니실린 (penicillin) 등의 세포배양용 시약들은 Gibco BRL사 (Grand Island, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 시약 중 SCF, LPS, IL-10, 오브알부민 (ovalbumin, OVA), 알룸 (Alum), PBS, KL 등은 Sigma사 (St. Louis, USA) 에서 구입하였다. 프로스타글란딘 D₂ 및 류코트리엔 C₄의 EIA 키트는 Cayman사 (Ann Arbor, USA)에서 구입하였다.

참고예 2. 실험용 세포 배양

쥐 골수 유래 비만세포(BMMC, mouse bone marrow-derived mast cells)를 BALB/C 마우스로부터 골수에서 분리하여, 10% FBS, 100U/ml 페니실린, 100㎍/ml 스트렙토마이신을 포함한 RPMI-1640 배지와 IL-3(쥐의 비장세포에 포크위드 마이토겐(pokeweed mitogen)으로 자극하여 얻은 상층액을 최종 20% 되도록 넣은 배양액)로 약 3주 정도 배양하여 95%이상의 균질한 BMMC를 얻었다.

참고예 3. 대식세포주인 RAW264.7 세포 배양

식세포 유래의 세포주인 RAW264.7 세포(한국세포주은행, 5×10⁵ cells)를 혈청이 포함된 RPMI 1640 배지 (pH 7.6)에서 배양하였다.

실험예 1. 사이클로옥시게나제-2 의존적인 프로스타글란딘D ₂ 생성 억제 측정

상기 비교예 및 실시예에서 수득한 아무르 불가사리 추출물 및 분획물의 각종 염증성질환에 대한 저해정도를 확인하기 위해 프로스타글란딘D₂ EIA 키트 (Cayman, PGD₂-MOX EIA kit, product no. 512011)를 사용하여 프로스타글란딘 D₂ (PGD₂)의 생성량을 측정하였다.

상기 참고예 2의 쥐 골수 유래 비만세포(BMMC) 배양 3주 후, 세포농도 2×10⁵cells/well에 상기 비교예 및 실시예에서 수득한 불가사리 추출물 및 분획물(최종농도 125μg/ml)을 30분간 전 처리한 후, 100ng/ml의 KL (c-kit ligand, 비만세포증식인자), 100ng/ml의 LPS (비만세포활성화제)및 100 U/ml의 IL-10(비만세포활성화제) 혼합자극제를 처리한 다음, 세포 자극 8시간 후 상층액의 프로스타글란딘 D₂를 프로스타글란딘 D₂ 분석 키트 (Cayman 사)를 이용하여 EIA (Enzyme linked immuno assay)로 측정하였다. 이때 사이클로옥시게나제-1에 의해서 생성되는 프로스타글란딘 D₂의 생성을 억제시키기 위하여 쥐 골수 유래 비만세포에 아스피린 10㎍/㎖을 1시간 전에 미리 전 처리한 후 사용하였다. 세정 완충용액 (washing buffer)으로 4회 세정하고, 기질용액 (substrate solution)을 200㎕씩 처리하여 5-20분간 반응시킨 후, 50㎕의 반응정지 용액 (stop solution)을 처리한 후에 450nm에서 흡광도를 ELx800 (BIO-TEK, Instrument, Inc, USA)으로 측정하였다.

실험결과, 하기 표 1에서 보이는 바와 같이 비교예의 AS-HW는 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)의존적인 프로스타글란딘 D₂생성을 약 160% 증가시켜서 (생성량 8 ng/well)항염증작용과는 반대로 염증을 유발시킬 가능성을 나타내었다. 반면 AS-B는 약 55% 프로스타그란딘 D₂ 생성을 억제하였기(생성량 2.3 ng/well) 때문에 강한 항염증을 나타내었다. 대조군은 BMMC에 자극제를 처리했을 때 유도되는 COX-2 의존적인 프로스타글란딘 D₂ 량은 약 5 ng/well 이었다.

실험예 2. 류코트리엔 생성에 대한 영향 분석 실험

상기 비교예 및 실시예에서 수득한 아무르 불가사리 추출물 및 분획물이 류코트리엔 C₄ 생성에 미치는 영향을 확인하기 위해, 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같은 방법으로 실험을 실시하였다 (Chang HW et al.. Planta. Medica., 70(5), pp.474-476, 2004).

상기 참고예 2의 쥐 골수 유래 비만세포 배양 3주 후 비만세포(2×10⁵cells/well)에 상기 비교예 및 실시예에서 수득한 아무르 불가사리 추출물 및 분획물을 일정농도(12.5, 25, 50, 100 μg/ml)로 미리 30분간 전처리 한 후 KL자극제 (Sigma 사, S9915) 100 ng/ml를 15분 처리하였다. 세포 자극 후 상층액의 류코트리엔 C₄ 정량은 류코트리엔 C₄ EIA 키트 (Enzyme linked immuno assay, Cayman 사, product no. 520211)를 이용하여 측정하였다.

실험 결과, 하기 표 1 및 도 2에 도시된 바와 같이 비교예의 AS-HW는 5-리폭시게나제 (5-LOX)의존적인 류코트리엔C₄ 생성을 약 180% 증가시켜서 (생성량 8.3 ng/well)생체에 알러지 반응을 유발시킬 가능성을 나타내었다. AS-B는 이에 반하여 약 74% 류코트리엔C₄ 생성을 억제하였기(생성량 1.2 ng/well) 때문에 AS-B는 강한 항알러지 효과를 나타내었다. 대조군은 BMMC에 자극제를 처리했을 때 유도되는 5- LOX의존적인 류코트리엔C₄ 생성량은 4.6 ng/well 이었다. 또한 류코트리엔C₄ 생성에 AS-B가 미치는 저해효과를 검토한 결과, 50% 류코트리엔C₄ 생성억제에 필요한 농도 (IC₅₀값)는 22.15 μg/ml로, 강한 저해활성을 나타냄을 확인할 수 있었다.

아무르 불가사리 추출물 및 분획물이 프로스타글란딘 D₂ 및 류코트리엔 C₄ 생성에 미치는 영향

아무르 불가사리	PGD 2 생성 억제율 (%)	LTC 4 생성억제율(%)
	최종농도 (125 ㎍/ml)	최종농도 (125 ㎍/ml)
AS-HW	-157.9	-62.1
AS-M	25.5	-400
AS-H	-3.4	-345.2
AS-B	54.8	74.4
AS-E	-12.4	-200
AS-W	-113.4	-180.7
대조군: PGD2생성량: 5 ng/2×105cells, LTC4생성량: 4.6 ng/2×105cells

실험예 3. 비만세포에서 탈과립 억제반응 측정

상기 참고예 2의 쥐 골수 유래 비만세포 배양 3주 후, 세포농도 2Ｘ10⁵cells에 상기 비교예 및 실시예에서 수득한 아무르 불가사리 추출물 및 분획물을 처리하여 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 30분동안 전배양 (preincubation)한 후, KL (c-kit ligand, 100ng/ml)로 자극하여 15분간 배양하고 3000rpm, 4℃에서 5분간 원심분리 하였다. 상층액을 β-hex기질 [100mM citrate buffer (citric acid 0.955%, sodium citrate dihydrate 1.478%, pH 4.5), 1.3mg/ml p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide]와 1:2 비율로 혼합 시키고 37℃에서 1시간 동안 반응 시킨 후, 0.2 M 글리신 (pH 10.7)으로 반응을 정지시켜 ELISA(BIO-TECK INSTRUMENTS, INC, ELx800)를 사용하여 405nm 파장에서 흡광도를 측정하고 그 측정값을 하기 수학식에 따라 계산하였다.

release% = [배양상층액 중 유리된 β-hex 활성/(배양상층액 중 유리된 β-hex 활성+세포내β-hex활성)]X100

그 결과, 표 2에 도시된 바와 같이 AS-B 및 AS-E에서 비교예의 AS-HW는 탈과립반응의 지표인 β-hex유리반응이 대조군에 비하여 약 5% 정도 더 유리시켜 오히려 알러지 반응을 유발시킬 가능성 있었으나 (자극제를 처리하지 않은 세포에서 배양상층액에 β-hex가 약 3% 유리되었으며, 자극제를 처리한 세포에서는 β-hex가 약 30%정도 유리되었음), AS-B는 이에 반하여 약 50%정도 탈과립반응을 억제하여 항염증 및 항알러지 효능이 있음을 확인할 수 있었다.

아무르 불가사리 추출물 및 분획물이 비만세포에서 탈과립 반응에 미치는 영향

아무르 불가사리	β-Hex release억제율 (%)
	최종농도 (125 ㎍/ml)
AS-HW	-4.8
AS-M	31.7
AS-H	14.4
AS-B	48.3
AS-E	48.3
AS-W	-8.3

실험예 4. 대식세포주인 RAW264.7세포에서 산화질소생성 억제반응 측정

상기 참고예 3에서 배양한 식세포 유래의 세포주인 RAW264.7 세포 (5×10⁵ cells)에 상기 비교예 및 실시예에서 수득한 아무르 불가사리 추출물 및 분획물 125μg/ml를 가하여 30분간 전처리한 후 리포폴리사카라이드 (lipopolyssacharide; LPS, 200ng/ml)를 가하여 24시간 배양하였다. 배양 후, 산화된 농도는 그리에스법(Y.M. Lin et al., Planta Med. 55, pp.166-168. 1989)을 이용하여 측정하였다. 산화질소 양은 배양된 상층액에서 아질산염을 분석함으로써 확인하였다. 배양액을 100㎕ Griess 시약 (1% 설파닐아미드 (sulfanilamide), 0.1% 나프틸에틸렌디아민 디하이드로클로라이드 (naphthylethylenediamine dihydrochloride), 2.5% 인산 (phosphoric acid))과 1:1로 혼합하여 상온에서 10분 반응하였다. 반응 후 발색된 흡광도는 ELISA(BIO-TECK INSTRUMENTS, INC, ELx800)를 사용하여 570nm 파장에서 측정하였다. 아질산염의 농도는, 질산나트륨 (NaNO₂)반응으로부터 얻어진 표준 곡선으로부터 환산하였다.

실험결과, 표 3에 나타낸 바와 같이 비교예의 AS-HW는 각종 염증성질환에 관여하는 NO생성을 대조군에 비하여 약 20% 정도 더 생성을 촉진시켜 항염증작용과는 반대로 염증을 유발시킬 가능성을 나타내었다. 반면 AS-B는 약 70%정도 NO 생성을 억제하여 항염증, 항알러지 효능이 있음을 확인할 수 있었다.

아무르 불가사리 추출물 및 분획물이 RAW264.7 세포에서 산화질소 생성에 미치는 영향

아무르 불가사리	Nitric oxide (NO) 생성억제율 (%)
	최종농도 (125 ㎍/ml)
AS-HW	-21.4
AS-M	-3.2
AS-H	1.6
AS-B	69.9
AS-E	63.3
AS-W	93.9

실험예 5. 동물모델에서의 알러지 억제 효과

상기 실시예 3에서 수득한 아무르 불가사리 부탄올 분획물의 생체 내(in vivo)에서의 항알러지 효과를 확인하기 위해, 문헌에 개시된 수동피부 감작 아나필락시스 (passive cutaneous anaphylaxis)법을 응용하여 하기와 같은 방법으로 실험을 실시하였다(Katayama S, Shionoya H and Ohtake S, Microbiol Immunol, 22, pp.89-101, 1978).

스프라그-도올리 랫트에 단일클론 항 DNP 마우스 IgE(Sigma 사)를 1000배 희석하여 48시간 전에 100㎕ 투여한 후, 항원(DNP, Sigma 사) 투여 30분 전에 AS-B(CMC(Carboxymethylcellulose)에 녹임) 200㎎/㎏/100㎕를 경구 투여하였다. 그 다음 1mg DNP-BSA(항원용액)/1% 에반스 블루(Evans blue)용액을 꼬리 정맥으로 주사하였다. 30분 후 피부에 유출된 색소를 측정하였다. 대조군으로 CMC(Carboxymethylcellulose)만 200㎎/㎏/100㎕를 경구 투여하였다.

실험 결과, 도 3에 도시된 바와 같이, 실시예 3의 아무르 불가사리 부탄올 분획물(100 mg/kg 농도)은 생체내 알러지 모델에서 약 26%의 알러지 반응 억제효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

실험예 6. In vivo 급성 독성 시험

상기 실시예 3에서 수득한 AS-B의 독성을 측정하기 위하여 실험을 실시하였다. 하기와 같이, 본 발명의 AS-B를 암수의 ICR 마우스 및 SD계 렛트에 0.1 ㎎/㎏ body weight에서 2g/kg body weight까지 5배씩 용량을 증가시키며 단회 경구 투여하였다. 시험물질 투여 후 2주동안 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.

시험결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 그 결과는 이들은 모두 2 g/㎏ body weight까지 어떠한 급성독성도 보이지 않았기 때문에 본 발명의 AS-B 상용량에서 무독하다고 판정하였다. 임상에서 이들은 50∼500 ㎎/㎏ body weight 에서 유효하고, 경구뿐만 아니라 주사제, 피부연고제 등으로 사용할 수 있다.

하기에 본 발명의 아무르 불가사리 추출 분획물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

AS-B 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

AS-B 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

AS-B 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

AS-B 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na2HPO4,12H2O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

AS-B 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

AS-B 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

AS-B 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

[이 발명을 지원한 국가연구개발사업]

[과제고유번호]

20070008

[부처명]

한국해양수산기술진흥원

[연구사업명]

수산특정개발사업

[연구과제명]

해면 및 극피동물로부터 만성질환 치료제 산업화 기술개발

[주관기관]

영남대학교 산학협력단

[연구기간]

2007년 09월 20일 ~ 2010년 09월 19일

도 1은 불가사리 추출 분획물의 추출과정을 나타내는 도이고,

도 2는 아무르 불가사리 부탄올 추출 분획물의 5-리폭시게나제(5-LOX) 의존적인 류코트리엔C₄(LTC₄)생성에 대한 용량의존성을 나타내는 도이며,

도 3는 아무르 불가사리의 부탄올 추출 분획물에 대한 생체 내(in vivo)에서의 항알러지 효과를 알기 위하여 대표적인 Ⅰ형 알러지 모델인 렛트에 대한 수동피부 감작 아나필락시스 (passive cutaneous anaphylaxis) 억제반응을 나타내는 도이다.

Claims (12)

1. 아무르 불가사리(Asterias amurensis (Lutken))의 메탄올 조추출물을 증류수에 현탁한 후에 부탄올로 분획하여 수득된 부탄올 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 급성 또는 만성 염증 질환의 예방 및 치료용 약학조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제
9. 아무르 불가사리(Asterias amurensis (Lutken))의 메탄올 조추출물을 증류수에 현탁한 후에 부탄올로 분획하여 수득된 부탄올 추출 분획물을 유효성분으로 함유하는 급성 또는 만성 염증 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제

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