KR101682489B1 - 대사성 증후군의 조절을 위한 스파란터스 인디커스 및 가르시니아 망고스타나 유래의 조성물 - Google Patents

대사성 증후군의 조절을 위한 스파란터스 인디커스 및 가르시니아 망고스타나 유래의 조성물 Download PDF

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키란 부파티라주
크리쉬아누 센굽타
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Abstract

본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 약학적/식이 보조제/식품 첨가제(들) 및 이들의 조성물, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된 조성물에 관한 것이다. 상기 성분 및 조성물(들)은 포유동물에 있어서, 비만, 대사성 증후군, 당뇨병 및 다른 대사성 장애의 조절, 예방 및 치료를 위해 사용될 수 있으며, 또한 에너지 소모를 조절하고, 관상 동맥 및 복부동맥 내 죽상경화 플라크를 방지하고, 인슐린 감수성을 증진시키고, 글루코오즈 내성을 증진시키고, 트리글리세라이드 수준을 감소시키고 또한 글루코오즈 수준을 균형화하기 위하여 사용될 수 있다.

Description

대사성 증후군의 조절을 위한 스파란터스 인디커스 및 가르시니아 망고스타나 유래의 조성물{COMPOSITION FROM SPHAERANTHUS INDICUS AND GARCINIA MANGOSTANA FOR THE CONTROL OF METABOLIC SYNDROME}
본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들), 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들), 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 1종 이상의 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 희석제, 비이클, 담체, 및 활성성분 또는 이들의 혼합물을 포함하는, 신규의 약학적 또는 식이 보조제 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들), 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 또는 이들의 조성물, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들), 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된 조성물의 대사성 증후군 또는 비만, 및/또는 대사성 증후군 및 대사성 장애와 관련되거나 연관된 하나 이상의 질환 증상의 조절, 예방 및 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 성분(들) 또는 이들의 조성물에 의한, 대사성 증후군, 비만 및 다른 관련되거나 연관된 질환 상태와 관련된 하나 이상의 바이오마커 단백질 또는 대사 과정의 개선에 관한 것이다.
스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)는 국화과(Asteraceae)에 속한다. 이것은 또한 고라크문디(Gorakhmundi)로서 알려져 있다. 이것은 날개달린 줄기(winged stem) 및 톱니모양의 날개(toothed wings)를 갖는 가지가 많고, 강한-향기가 나는 한해살이 식물이다. 잎은 도난형-장타원형(obovate-oblong)이며, 기부가 좁고, 치상(齒狀)(dentate)이고, 또한 톱니모양(serrate)이다. 꽃은 두상화(compound heads)이며, 구형(globose) 난형(ovoid)이다. 개화시기는 인도 조건에서 11월 내지 1월경이다. 의약적으로 유용한 부분은 뿌리, 껍질, 잎, 꽃, 및 씨이다.
상기 식물 즉 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 개화 및 결과 머리(flowering and fruiting heads)는 3a-히드록시-5a,9-디메틸-3-메틸렌-3a,4,5,5a,6,7,8,9b-옥타히드로-3H-나프토[l,2-b]퓨란-2-온 (7-α-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드 또는 7-히드록시프룰라놀라이드)를 주요 화합물로서 함유한다. 이것은 전구-염증성 사이토카인을 강하게 억제한다.
주요 성분으로서 메틸 카비콜(methyl chavicol), α-이오논(α-ionone), δ-카디넨(δ-cadinene), p-메톡시신남알데히드 및 필수 오일의 비-주요 성분으로서 α-테르피넨(α-terpinene), 시트랄 제라니올(citral geraniol), 제라닐 아세테이트(geranyl acetate), β-이오논(β-ionone), 스파렌(sphaerene), 인디쿠센(indicusene) 및 스파란톨(sphaeranthol)(Perfum. Essent. Oil Record. 1959, 50, 765; Chem. Abstr. 1960, 54, 798Og); 7α-히드록시유데스므-4엔-6,12-올라이드, 그의 β-이성체, 디히드로락톤, 신규의 세스퀴테르펜산, 2-히드록시코스틱산, β-유데스몰 및 일리식산(illicic acid) (Jayant S. Sohoni et al, J. Chem . Soc , Perkin Trans . 1, 1988, 157 - 160); 11-α-13-디히드로-3α,7α-디히드록시-4,5-에폭시-6β,7-유데스마놀라이드, 11α,13-디히드로-7α-아세톡시-3β-히드록시-6베타,7-유데스므-4-에놀라이드) 및 3-케토-β-유데스몰(Pujar PP et al, Fitoterapia. 2000 Jun;71(3):264-8) 및 세스퀴테르펜 글리코사이드(Shekhani MS et al, 1990; Phytochemistry 29, 2573-2576)와 같은 몇가지 다른 화합물들이 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 보고된 바 있다.
스파란터스 인디커스의 몇몇의 비-특허 문헌은 아래와 같이 인용된다:
루비아 코르디폴리아(Rubia cordifolia), 커큐마 롱가(Curcuma longa), 헤미데스무스 인디커스(Hemidesmus indicus), 아자디라키타 인디카(Azadirachta indica) 및 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 항-염증 효과를 평가한 연구에서, 스파란터스(Sphaeranthus)는 다형핵 백혈구(PMNL) 및 단핵세포 중에서 여드름균(Propionibacterium acnes)의 배양 상등액에 의해 유도시킨 전구염증성 사이토카인인 인터루킨-8(IL-8) 및 종양괴사인자 α(TNF α)를 억제하는네 있어서 더 강력하다는 것이 발견되었다 [Jain A et. al.; Phytomedicine. 2003 Jan;10(l):34-8].
스파란터스 인디커스 린(Sphaeranthus indicus Linn)의 꽃머리(flower heads)로부터의 석유 에테르 추출물은, 마우스에서 시험되었을 때, 식균세포 활성, 적혈구응집 항체 역가 및 지연성 과민반응을 증가시키는데 효과적임이 발견되었다. 상기 석유 추출물은 용량-반응 관계를 나타내었다. 200 mg/kg 용량이 최적의 용량임이 발견되었다. 스파란터스는 식균세포 기능뿐만 아니라 체액성 및 세포성 면역 모두를 자극함으로써, 면역조절제로서 작용한다. [Bafna AR et. al; J Herb Pharmacother. 2007;7(l):25-37].
어떤 연구에서, 랫트에서 덱사메타손(10mg/kg/day, s.c)으로 유도시킨 지질 프로파일에 있어서의 변화에 대하여, 스파란터스 인디커스의 수성 추출물(300 mg/kg/day, i.p)의 효과가 연구되었다. S. 인디커스는 혈청 총 콜레스테롤, 트리글리세라이드, LDL, VLDL에 있어서 유의성 있는 감소를 나타내었고, HDL 수준에 있어서는 유의성 있는 변화가 없었다. 죽상경화지수(Atherogenic index) 또한 S. 인디커스 처리 후에 유의성 있게 감소하였으며, 이는 S. 인디커스가 잠재적인 지질 저하 효과를 갖는다는 것을 나타낸다 [Tenpe CR et al; Biomed. Vol. 02 (4), 2008; 400-403].
최근, 다른 연구에서, 니코틴아미드[120 mg/kg i.p.] 및 스트렙토조토신(STZ) [60 mg/kg i.p]에 의해 당뇨병을 유발시킨 랫트에서 스파란터스 인디커스의 항-고혈당 효과가 연구되었다. 15일 동안 S. 인디커스의 경구투여는 혈당 수준에 있어서 유의성 있는 감소를 나타냈고, 간 글리코겐 및 혈장 인슐린 수준에 있어서 증가를 나타냈다. S. 인디커스의 알콜 추출물로 처리된 절식시킨 정상 랫트는 경구 당 부하 검사(oral glucose tolerance test)에서 유의성 있는 개선을 나타내었다. 글리벤클라미드(Glibenclamide)가 대조 표준물질로서 사용되었다 [Prabhu KS et al; J Pharm Pharmacol . 2008; 60(7): 909-16].
상기 문헌 어느 것도 스파란터스 인디커스에 의한 대사성 증후군 또는 대사성 증후군과 연관된 질환 상태에 대한 대사성 증후군 관련 바이오마커의 개선 또는 그의 치료학적 효과를 기술하고 있지 않다.
스파란터스 인디커스의 수성 추출물은 Tenpe CR 등의 연구에서 사용된 바 있으며, 상기 추출물은 유의한 양의 7-히드록시프룰라놀라이드를 포함하지 않는 반면, 본 발명의 조성물은 7-히드록시프룰라놀라이드를 활성 화합물로서 포함하는 친유성 추출물을 포함한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 Tenpe CR 등의 연구에서 사용된 것과 상이하다. 유사하게, 뿌리 및 주근(stolons)의 알콜 추출물이 Prabhu KS 등의 연구에서 사용된 바 있다. 그러나, 본 발명의 조성물은 꽃머리로부터 유래되고, 이는 7-히드록시프룰라놀라이드를 주로 함유하며, 따라서 Prabhu KS 등의 연구에서 사용된 것과 상이하다.
스파란터스의 몇몇의 특허 문헌은 아래와 같이 인용된다:
PCT 공개 WO 07036900A2는 바이오활성 마커로서 3a-히드록시-5a,9-디메틸-3-메틸렌-3a,4,5,5a,6,7,8,9b-옥타히드로-3H-나프토[l,2-b]퓨란-2-온 (7-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드)를 함유하는 식물, 즉 스파란터스 인디커스의 개화 및 결과 머리(flowering and fruiting heads)의 추출물을 포함하는 신규의 생약 조성물에 관한 것이다. 상기 발명은 또한 상기 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
일본 특허공개 JP07138180A2는 아자디라키타 인디카(Azadirachta indica), 심보포곤 나르두스(Cymbopogon nardus), 무라야 코에니기이(Murraya koenigii), 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus), 오시뭄 산크툼(Ocimum sanctum), 티노스포라 코리디폴리아(Tinospora cordifolia) 및 필란투스 누리리(Phyllanthus nuriri)로 이루어진 군으로부터 적어도 1종 선택된 생약으로부터 분리된 추출물을 함유하는 히알루로니다아제의 저해제, 및 노화를 방지하고 또한 피부의 미세 주름 및 건조를 방지할 수 있는 화장료로서의 그의 용도에 관한 것이다.
PCT 공개 WO 06134609A2는 식물 스파란터스 인디커스의 추출물 또는 상기 식물 스파란터스 인디커스로부터 얻어진 화합물 군을 포함하는 생약 항암제를 개시하고 있다. 이것은 또한 상기 항암제를 포함하는 약학 조성물. 상기 조성물의 제조방법, 인간을 포함한 포유동물에서의 모든 종류의 암을 치료하는 방법, 상기 식물 추출물의 제조방법, 및 활성 성분들을 얻는 방법을 개시하고 있다.
PCT 공개 WO 06016228A2는 종양 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 약학적 제제 또는 식품 보조제의 제조를 위한, 스파란터스 종의 식물로부터 유래된 활성 성분에 존재하는 화합물 또는 화합물 군에 관한 것이다. 상기 발명은 또한 암의 예방 및/또는 치료에 유효한 스파란터스 식물 부위로부터 활성 성분의 신규의 단리 방법에 관한 것이다.
U.S. 특허 US7344738은 2가지 생약이 조합된 조성물을 포함하는 약학적 또는 의약적 제제를 제공하며, 이는 하기 생약들 즉 모린가 올레이페라(Moringa oleifera), 보에르하비아 디퓨사(Boerhavia diffusa), 오노스마 브락데아툼(Onosma bracteatum), 바우히니아 바리에가타(Bauhinia variegata), 스페란터스 인디커스(Spheranthus indicus), 테코멜라 운둘라타(Tecomella undulata), 클로로피툼 보리빌리아눔(Chlorophytum borivilianum), 피쿠스 라세모사(Ficus racemosa), 및 시페루스 로툰두스(Cyperus rotundus)의 혼합물로부터 선택된 1종 또는 상기 생약들로부터 추출되거나 화학적으로 합성된 활성성분들의 혼합물을 포함한다. 상기 생약 제제는 약해지거나 혹은 저하하는 면역 시스템으로부터 야기되는 인체에 있어서의 광범위한 생리학적 및 병리학적 상태를 치료하는데 유효하다.
본 발명에 또한 사용되는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)는 물레나물과(Guttiferae)에 속한다. 가르시니아는 남아메리카(이곳에서는 리히디아(Rheedia)로도 칭해진다), 아프리카, 마다가스카르, 및 동남 아시아에 분포된 대략 300종의 자웅이체 나무 및 관목(shrubs)으로 구성된다. 속(genus)에 있어서 대부분의 종 다양성은 말레이지아에 집중되어 있으며, 상기 속 중 2/3 이상의 종이 그곳에서 발견되고 있다 [http://www.mobot.org/MOBOT/Research/mangosteen/].
망고스틴은 가르시니아 망고스타나에서 주요한 화합물이다. 망고스틴의 구조는 Peter Yates 등에 의해 입증되었다 [Peter Yates, George H. Stout; J. Am. Chem. Soc; 1958; 80(7); 1691-1700].
항염증 [Gopalakrishnan C et al., Indian J Exp Biol . 1980 Aug;18(8):843-6], 히스타민 및 세로토닌 수용체 차단제 [Chairungsrilerd N et al., Planta Med . 1996 Oct;62(5):471-2], 항-암제 [Ee GC et al., J Asian Nat Prod Res . 2008 May;10(5):481-5], 항균 [Sundaram B.M., et al.; Planta Med. 1983; 48:59-60], 등과 같은 몇가지 약리학적 활성들이 망고스틴에 대하여 보고된 바 있으며, 많은 연구가 새로운 활성들을 탐색하기 위하여 수행되고 있다.
가르시니아의 몇몇의 비-특허 문헌은 다음과 같이 기술된다:
분석을 통한 분획화 연구에서, 조합된 용매 추출 및 앰버라이트 XAD2 (Amberlite XAD2) 흡착 크로마토그래를 사용하여 친유성 내지 친수성의 상이한 분획들이 연구되었다. 망고스틴 과피 추출물이 알파-아밀라아제 억제 활성에 대하여 시험되었으며, 산톤류(xanthones)는 억제 활성을 갖지 않는 것으로 결론지었으나, 친수성 분획 유래의 올리고머성 프로안토 시아니딘류는 알파-아밀라아제 억제에 있어서 56배 더 효과적인 것으로 보고되었다. [Eng Kiat Loo A, Huang D.; J Agric Food Chem . 2007 Nov 28;55(24):9805-10].
상기 언급한 연구[Eng Kiat Loo et al, 2007]에서, 알파-아밀라아제 억제 활성이 올리고머성 프로안토 시아니딘류에 기인하였다는 것을 인식하는 것은 중요하다. 이는 또한 산톤 분획이 어떠한 알파-아밀라아제 억제 활성도 갖지 않았다고 기술하고 있다. 따라서, 상기 선행기술 문헌의 추출물 또는 분획의 활성의 원인이 되는 활성 화합물(들)은 본 발명의 활성 화합물과 상이하다.
다른 연구에서, 연구자들은 G. 망고스타나의 알도오즈 환원효소(Aldose Reductase, ALR2) 억제 효과를 측정하였다. α-망고스틴은 ALR2를 강력히 억제한다는 것이 발견되었다. α-망고스틴은 당뇨병성 합병증을 예방하는데 유용할 수 있다고 결론지어졌다 [Sri Fatmawatia et al., Biology, Chemistry, Pharmacology and Clinical Studies of Asian Plants April 9-11, 2007, Surabaya, Indonesia].
선행기술의 대략적인 검토는 대사성 증후군의 치료 또는 대사성 마커 단백질의 개선을 위한, 스파란터스 인디커스 및 가르시니아 망고스타나를 포함하는 조성물의 용도와 관련된 지식은 존재하지 않음을 드러내었다.
증후군 X, 인슐린 저항 증후군 및 대사부전 증후군(DysMetabolic Syndrome)으로도 알려져 있는 대사성 증후군은, 죽상경화증, 뇌졸중 및 당뇨병을 증가시키는 상태, 질환 상태들의 군(group of diseased states)이다.
대사성 증후군은 비만, 인슐린 저항성, 포도당 못견딤(glucose intolerance), 고혈압, 및 이상지질혈증을 포함한 서로 관련된 임상적 장애들의 클러스터(cluster)로서, Reaven에 의해 1988년에 최초로 기술되었다[Reaven, (1988) Diabetes 37; 1595-1607].
대사성 증후군의 진단 기준은 2001년 미국 콜레스테롤 교육 프로그램(National Cholesterol Education Program)의 성인 치료 위원회-III(Adult Treatment Panel-III)에 의해 확립되었다 [JAMA (2001),285; 2486-2497]. 대사성 증후군을 갖는 환자를 확인하기 위하여, 복부 비만, 공복혈당장애(impaired fasting glucose), 고 트리글리세라이드(TG), 저 HDL 콜레스테롤((HDL-C) 농도 및 증가된 혈압을 포함한 5가지 기준이 상기 위원회에 의해 선택되었다. 이들 중 3가지가 환자에 존재할 경우, 대사성 증후군으로 진단된다.
대사성 증후군 조절제를 개발하기 위하여 10년 이상 많은 연구가 수행되어 왔다. 이 증후군의 조절을 위한 대사성 마커의 적용이 또한 시도되었다.
대사성 증후군을 갖는 사람들은 관상 동맥성 심장 질환(coronary heart disease), 동맥 벽에 플라크(plaque) 축적과 관련된 다른 질환들(예를 들어, 뇌졸중 및 말초 혈관 질환) 및 제2형 당뇨병에 걸릴 위험성이 높다.
일부의 생물학적 조건들이 대사성 증후군의 마커로서 또한 간주되며, 이는 고요산혈증(hyperuricemia)[Vuorinen-Markkola H et al; J Clin Endocrinol Metab . 1994;78(l):25-9.]; 고중성지방혈증(hypertriglyceridemia) [Grundy SM.; Am J Cardiol . 1998; 81(4A):18B-25B]; 고아디포넥틴증(hypoadiponectinemia) [Stern N et al; J Cardiometab Syndr . 2007; 2(4): 288-94]; 미세알부민뇨증(microalbuminuria)[Brahimi M et al; Arch MaI Coeur Vaiss . 2007; 100(8):673-6.]을 포함한다.
대사성 증후군의 치료 및 치유를 언급하는 몇몇의 특허는 아래와 같이 인용된다.
PCT 공개 WO 08086403A1은, 지방세포에 의한 아디포넥틴 생성을 촉진하고 또한 지방산 생합성에 관련된 유전자를 조절하는데 효과적인, 식물 유래의 크로몬류(chromones) 및 신규의 크로몬 조성물의 동정 및 분리를 기술하고 있다. 상기 발명은 또한 인슐린 저항성, 포도당 못견딤, 고혈당, 대사성 증후군, 이상지질혈증, 및 고중성지방혈증을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 질환 및 조건들의 예방 및 치료방법을 포함한다.
PCT 공개 WO 08074935A2는 대사성 장애, 비만, 및/또는 X 증후군(대사성 증후군), 제2형 당뇨병과 같은 이들과 연관된 질환의 예방 또는 치료에 유용하거나, 혹은 인간 또는 동물용 식품 첨가제를 제공하기 위한 추출물, 분획물 및/또는 분자들과 같은 식물로부터 얻어질 수 있는 조성물 및 생성물에 관한 것이다.
PCT 공개 WO 08093848A1는 염증 마커의 증가에 의해 유도되는 물리적 기능에 있어서의 장애를 예방하거나 개선할 수 있고, 대사성 증후군의 발병 또는 질환 및 대사성 증후군의 위험을 감소시킬 수 있고, 또한 건강한 상태를 유지하거나 촉진시킬 수 있는, 대두 유래의 포스파티딜콜린을 함유하는, 경구투여 혹은 구강적용을 위한 의약품, 기능성 식품 및 경구용 조성물을 개시하고 있다.
상기에서 인용된 정보 및 몇가지 다른 문헌들에 근거하여, 본 발명의 발명자들은 대사성 증후군의 조절 및 몇몇의 다른 연관되고 관련된 질환에 효과적으로 사용될 수 있는 효과적인 천연물 조성물에 대한 필요성을 인식하였다.
본 발명자들이 아는 한, 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애와 연관되거나 관련된 질환을 개선하거나 혹은 조절, 예방, 및 치료하기 위한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물, 분획물, 활성 화합물, 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물, 분획물, 활성 화합물, 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 성분과 조합된 조성물의 용도에 관한 선행문헌은 존재하지 않는다.
발명의 요약
주요한 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(phytochemicals) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 1종 이상의 약학적으로 및 식이적으로 허용가능한 식품활성화학물질(phytochemical actives), 희석제, 비이클, 담체, 및 활성성분 또는 이들의 혼합물을 포함하는, 신규의 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 주요한 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 성분 또는 이들의 조성물, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된 조성물의 대사성 증후군 또는 비만, 및/또는 대사성 증후군과 관련되거나 연관된 하나 이상의 질환 증상의 조절, 예방 및 치료를 위한 용도를 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(Matrix Metalloproteinase-1, MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(Matrix Metalloproteinase-3, MMP-3), 퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체 감마(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ), 지방분화관련 단백질(Adipose Differentiation Related Protein, ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(Monocyte Chemotactic protein, MCP-1), 산화된 LDL(Ox-LDL), 지방세포 지방산-결합 단백질(adipocyte fatty-acid-binding protein, aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3AR), 페릴리핀, 아디포넥틴, 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(Protein tyrosine phosphatase-1B, PTP-1B)를 포함하나 이에 제한되지 않는, 대사성 증후군, 비만, 및 대사성 증후군과 연관된 다른 질환 증상과 관련되거나 혹은 연관된 하나 이상의 생물학적 마커 단백질의 발현 또는 생성의 개선을 위한, 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 성분(들) 또는 이들의 조성물, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된 조성물을 제공한다.
또다른 태양에서 본 발명은 지질분해(lipolysis)의 촉진 및 지방생성(adipogenesis), 알파-아밀라아제 효소와 알파-글루코시다아제 효소의 억제와 같은 대사 과정들의 개선을 위한, 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 성분(들) 또는 이들의 조성물, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된 조성물을 제공한다.
본 발명의 중요한 태양에서, 대사성 증후군 또는 비만, 및/또는 대사성 증후군과 관련되거나 연관된 하나 이상의 질환 증상을 조절, 예방, 치료하기 위한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 순수한 화합물들 또는 식물화학물질들 또는 이들의 혼합물을 포함하는 약학적/식이 보조제/식품 첨가제(들) 또는 상기 성분을 포함하는 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 주요한 태양에서, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 상기 추출물들 혹은 풍부화된 분획들 혹은 순수한 화합물들 혹은 이들의 혼합물들은, 대사성 증후군 또는 비만, 및/또는 이와 관련되거나 연관된 하나 이상의 질환 상태를 조절, 예방, 치료하기 위하여, 단독으로 또는 하나 이상의 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 비히클 또는 담체 또는 희석제 또는 이들의 혼합물과 조합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 또다른 태양에서, 대사성 증후군 및 비만 및 다른 관련되고 연관된 상태의 예방, 조절, 및 치료를 위한 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 활성을 위한 활성 화합물은 7-히드록시프룰라놀라이드(7-hydroxyfrullanolide); 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시-4,5-에폭시-6β,7-유데스마놀라이드(1lα,13-dihydro-3α,7α-dihydroxy-4,5-epoxy-6β,7-eudesmanolide); 11α,13-디히드로-7α-아세톡시-3β-히드록시-6β,7-유데스므-4-에놀라이드(11α,13-dihydro-7α-acetoxy-3β-hydroxy-6β,7-eudesm-4-enolide); 3-케토-β-유데스몰(3-keto-β-eudesmol); 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시유데스-4-엔-6α,12-올라이드(11α,13-dihydro-3α,7α-dihydroxyeudes-4-en-6α,12-olide); 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시프룰라놀라이드(11α,13-dihydro-3α,7α-dihydroxyfrullanolide); 11α,13-디히드로-7α,13-디히드록시프룰라놀라이드(11α,13-dihydro-7α,13-dihydroxyfrullanolide); 11α,13-디히드로-7α-히드록시-13-메타옥시프룰라놀라이드(11α,13-dihydro-7α-hydroxy-13-methaoxyfrullanolide); 2α,7α-디히드록시-4-엔-11,13-디히드로유데스느-6,12-올라이드(2α,7α-dihydroxy-4-en-11,13-dihydroeudesn-6,12-olide); 2α-히드록시코스틱 산(2α-hydroxycostic acid); 3케토,7α-히드록시유데스므-4-엔-6,12-올라이드(크립토메리디올)[3keto,7α-hydroxyeudesm-4-en-6,12-olide (cryptomeridiol)]; 4-에피크립토메리디올(4-epicryptomeridiol); 스파란타놀라이드(Sphaeranthanolide); 2α-히드록시스파란톨라이드(2α-hydroxysphaerantholide); 2α-아세톡시스파란톨라이드(2α-acetoxysphaerantholide); 2α,7α-디히드록시스파란톨라이드(2α,7α-dihydroxysphaerantholide); 2α-아세톡시-7α-히드록시스파란톨라이드(2α-acetoxy-7α-hydroxysphaerantholide); 2α-아세톡시-5α-히드록시이소스파란톨라이드(2α-acetoxy-5α-hydroxyisosphaerantholide) 등, 바람직하게는 7-히드록시프룰라놀라이드 또는 관련 화합물 또는 그의 유사체 또는 이들의 혼합물을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 태양에서, 본 발명에 사용되는 7-α-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드(7-히드록시프룰라놀라이드)의 원료는 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 또는 임의의 식물 원료이거나 합성품일 수 있다.
본 발명의 다른 태양에서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 성분 및 이들의 조성물은 대사성 증후군, 비만, 죽상경화증, 당뇨병, 인슐린 저항(이에 제한되는 것은 아니다)으로부터 선택된 하나 이상의 상태를 예방, 치료, 및 조절하기 위하여 효과적으로 사용될 수 있으며, 포유동물에서 에너지 소모를 조절하고, 관상동맥 및 복부대동맥의 중상경화 플라크를 예방하고, 인슐린 감수성을 증가시키고, 포도당 견딤(glucose tolerance)을 개선하고, 트리글리세라이드 수준을 낮추고, 또한 포도당 수준의 균형을 유지할 수 있다.
다른 태양에서, 본 발명은 대사성 증후군 또는 대사성 증후군과 연관된 질환 상태를 예방 또는 조절 또는 치료하기 위하여 또한 대사성 증후군 또는 대사성 증후군과 연관된 질환 상태와 연관된 상이한 생물학적 마커 단백질들의 생성을 개선하기 위하여 상승적 효과를 제공하는, 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 대사성 증후군, 비만, 및 대사성 증후군과 연관되거나 관련된 다른 질환 상태, 특히 포유동물에서 인슐린 저항성에 의해 매개되는 질환 및 상태의 예방, 치료 및 조절방법을 제공하며, 상기 방법은 선택적으로 약학적으로 또는 식이적으로 허용가능한 비히클, 담체, 희석제, 활성물질(actives) 및 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 하나의 성분을 함유하는, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 약학적 또는 식이 보조제의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
다른 태양에서, 본 발명은 대사성 증후군, 비만, 및 대사성 증후군과 연관되거나 관련된 다른 질환 상태, 특히 포유동물에서 인슐린 저항성에 의해 매개되는 질환 및 상태의 예방, 치료 및 조절방법을 제공하며, 상기 방법은 선택적으로 약학적으로 또는 식이적으로 허용가능한 비히클, 담체, 희석제, 활성물질(actives) 및 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 하나의 성분을 함유하는, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 풍부화된 분획물(들), 또는 순수 화합물(들)로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 약학적 또는 식이 보조제의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
도 1: 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)에 의해 얻어진 A2058 인간 흑색종 세포 배양 상등액 중의 MMP-1의 퍼센트 감소를 보여주는 막대 그래프. A2058 세포는 24시간 동안 표시된 바와 같이 상이한 농도의 LI/DD-II/054A/01의 존재 또는 비존재하에서 50 nM PMA와 함께 배양하였다. 세포가 없는 배양 상등액 중의 분비된 MMP-1 농도는 MMP-1 ELISA 전개 키트(R&D System, Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 측정하였다. 배양 상등액 중 MMP-1 농도는 기지 농도의 MMP-1을 사용하여 생성시킨 표준곡선으로부터 정량적으로 측정하였다. 시험 화합물의 각 농도에서의 MMP-1 억제 퍼센트는 다음 식으로부터 계산하였다: {(PMA로 유도시킨 웰 중의 MMP-1의 농도 - 시험 웰 중의 MMP-1의 농도) x 100} ÷ PMA로 유도시킨 웰 중의 MMP-1의 농도.
도 2: 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)에 의해 얻어진 A549 인간 폐 종양 세포 배양 상등액 중의 MMP-3의 퍼센트 감소를 보여주는 막대 그래프. A549 세포는 24시간 동안 표시된 바와 같이 상이한 농도의 LI/DD-II/054A/01의 존재 또는 비존재하에서 10 ng/ml 인간 IL-1β와 함께 배양하였다. 세포가 없는 배양 상등액 중 분비된 MMP-3 농도는 MMP-3 ELISA 전개 키트(R&D System, Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 측정하였다. 배양 상등액 중의 MMP-3 농도는 기지 농도의 MMP-3을 사용하여 생성시킨 표준곡선으로부터 정량적으로 측정하였다. 시험 화합물의 각 농도에서의 MMP-3 억제 퍼센트는 다음 식으로부터 계산하였다: {(IL-1β로 유도시킨 웰 중의 MMP-3의 농도 - 시험 웰 중의 MMP-3의 농도) x 100} ÷ IL-1β로 유도시킨 웰 중의 MMP-3의 농도.
도 3은 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)에 의한 3T3-L1 지방세포에서 지방생성 및 지질분해 과정의 마커 단백질의 조절을 설명한다. 대표적인 면역 블롯은 PPARγ (A), ADRP (B), CD36 (C), aP2 (D), β3AR(E) 및 페릴리핀 (F)과 같은 다양한 마커 단백질의 억제-조절을 나타낸다. 상기 3T3-L1 마우스 전구-지방세포는 나타낸 바와 같이 다양한 농도의 LI/DD-II/054A/01 또는 LI054A01의 존재 또는 비존재하에서 분화시켰다. 비히클 대조군 배양은 유사한 농도의 DMSO 만을 처리하였다. 액틴 단백질의 발현을 내부 콘트롤로서 각 블롯에서 평가하였다. 각 단백질의 발현은 밀도분석방법으로(densitometrically) 측정하였으며, 액틴 발현을 사용하여 보정하였다. 비교 수준은 막대 그래프(우측 패널)로서 나타낸다.
도 4는 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)에 의한 대식세포 중의 고-글루코오즈로 유도시킨 CD36 발현의 억제-조절을 설명한다. 상기 J774 마우스 대식세포는 표시된 바와 같이 다양한 농도의 LI/DD-II/054A/01 또는 1 ㎍/ml의 LI054A01의 존재 또는 비존재하에서 5일 동안 고 글루코오즈(600 mg/dL)에 노출시켰다. 대조군 배양은 저 글루코오즈(100 mg/dL)를 처리하였다. 대표적인 면역 블롯 분석은 CD36 단백질의 억제 조절을 입증해준다. 액틴 단백질의 발현을 내부 콘트롤로서 간주한다. 막대 그래프는 액틴 단백질로 보정된 CD36 발현을 나타낸다 (하부 패널).
도 5. 표시된 바와 같이 가르시니아 망고스타나의 메탄올 추출물(AR 933)로 처리된 3T3-L1 지방세포 중 PPARγ (A), ADRP (B), aP2 (C), CD36 (D), 페릴리핀 (E) 및 β3AR (F)의 조절을 보여주는 대표적인 면역 블롯. 단백질의 발현은 밀도분석방법으로 분석하였으며, 액틴 발현을 사용하여 보정하였다. 각 패널의 막대 그래프는 임의 단위(arbitrary units)의 보정된 단백질 발현을 보여준다. 막대 그래프에서, 막대는 각각 비히클 대조군 (a), 2.5 ㎍/ml의 AR 933 (b) 및 5.0 ㎍/ml의 AR 933 (c)로 처리된 세포 중의 단백질 발현을 나타낸다.
도 6. 대표적인 면역 블롯은 표시된 바와 같이 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 또는 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(AR 933) 또는 이들 2개의 추출물을 포함하는 조성물 1B로 처리된 3T3-L1 지방세포 중의 PPARγ (A), ADRP (B), aP2 (C), CD36 (D), 페릴리핀 (E) 및 β3AR (F) 단백질 발현의 조절을 보여준다. 단백질의 발현은 밀도분석방법으로 분석하였으며, 액틴 발현을 사용하여 보정하였다. 각 패널의 막대 그래프는 임의 단위(arbitrary units)의 보정된 단백질 발현을 보여준다. 막대 그래프에서, 막대는 비히클 대조군 (a), LI/DD-II/054A/01 (b), AR 933 (c) 및 조성물 1B (d)로 처리된 세포 중의 단백질 발현을 나타낸다.
도 7. 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 또는 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(AR 933) 또는 조성물 1B로 처리된 고-글루코오즈로 유도된 대식세포 중의 죽상경화 마커의 억제-조절을 보여주는 대표적인 면역블롯. 면역블롯은 CD36 (A), MCP-1 (B) 및 Ox-LDL (C) 단백질 발현의 억제 조절을 보여준다. 액틴 단백질의 발현을 로딩 콘트롤로서 간주하였다. 각각의 패널의 막대 그래프는 보정된 단백질 발현을 보여준다. 막대는 a, 글루코오즈 100 mg/dL; b, 글루코오즈 600 mg/dL; c, LI/DD-II/054A/01 (5 ㎍/ml); d, AR 933 (5 ㎍/ml), 및 e, 조성물 1B (5 ㎍/ml)에 대한 발현 수준을 나타낸다.
도 8. 5 ㎍/ml의 LI/DD-II/054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B로 처리된 3T3-L1 지방세포 중의 아디포넥틴의 과발현을 보여주는 대표적인 면역블롯. 단백질 발현은 밀도분석방법으로 분석하였으며, 액틴 발현을 사용하여 보정하였다. 각 패널의 막대 그래프는 임의 단위(arbitrary units)의 보정된 단백질 발현을 보여준다. 막대 그래프에서, 막대는 비히클 대조군 (a), LI/DD-II/054A/01 (b), AR 933 (c) 및 조성물 1B (d)로 처리된 세포 중의 단백질 발현을 나타낸다.
도 9. 5 ㎍/ml의 LI/DD-II/054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B로 처리된 3T3-L1 지방세포 중의 PTP-1B 단백질 발현의 억제 조절을 보여주는 대표적인 면역블롯. 단백질 발현은 밀도분석방법으로 분석하였으며, 액틴 발현을 사용하여 보정하였다. 각 패널의 막대 그래프는 임의 단위(arbitrary units)의 보정된 단백질 발현을 보여준다. 막대 그래프에서, 막대는 비히클 대조군 (a), LI/DD-II/054A/01 (b), AR 933 (c) 및 조성물 1B (d)로 처리된 세포 중의 단백질 발현을 나타낸다.
도 10A: 제1주 내지 제8주까지 LI/DD-II/054A/01를 비처리(1) 또는 처리(2)한, HFD로 유도시킨 대사성 증후군 SD 랫트 모델의 평균 체중증가량을 나타내는 막대 그래프. 각 막대는 평균 ± SD (*p < 0.05)를 나타낸다.
도 10B: LI/DD-II/054A/01를 처리(2) 또는 비처리(1)한, 식이(diet)로 유도시킨 대사성 증후군 SD 랫트 모델의 체중을 나타내는 선 그래프. 각 선은 8주 처리 기간 동안 평균 체중 증가량의 변화를 나타낸다.
도 11: 식이로 유도시킨 대사성 증후군 스프라그 도울리 랫트 모델의 혈청 아디포넥틴 농도의 증가를 나타내는 막대 그래프. 그래프에 표시된 바와 같이, 각 막대는 비히클 (1) 또는 LI/DD-II/054A/01 (2)로 처리 후 0일 및 56일 후의 혈청 아디포넥틴 농도의 평균 ± SD를 나타낸다. N=6, *는 통계적 유의성을 나타낸다(t-테스트, 8 주 대 0 주).
도 12: LI/DD-II/054A/01를 공급한 스프라그 도울리 랫트의 대사성 증후군 모델의 HOMA 지표의 감소를 나타내는 막대 그래프. 각 막대는 비히클(1) 또는 250 mg/kg의 LI/DD-II/054A/01 (2)로 처리 후 0주 및 8주에서의 HOMA 지표(임의 단위)의 평균 ± SD를 나타낸다. N=6; *는 통계적 유의성을 나타낸다(t-테스트, 8 주에서의 LI/DD-II/054A/01 군 대 대조군).
도 13: 식이로 유도시킨 스프라그 도울리 랫트의 비만 모델에서 체중의 % 감소를 나타내는 막대 그래프. 막대 1 내지 5는 각각 LI/DD-II/054A/03 (100 mg/kg), LI/DD-II/054A/03 (250 mg/kg), AR 933 (250 mg/kg), 조성물 1D (250 mg/kg) 및 시부트라민 (7 mg/kg)으로 공급된 처리군에 있어서 체중의 % 감소를 나타낸다.
발명의 상세한 설명
비만은 에너지 섭취 및 에너지 소모 사이의 불균형에 기인한 특정 나이, 성, 키에 대한 과체중이다. 비만의 주요 원인은 과식, 부적절한 활동 또는 섭식 장애, 몇몇의 유전적 장애, 내재적인 질병(예를 들어, 갑상선기능저하증), 특정 약물치료 또는 좌식 생활 때문이다. 비만은 고혈압, 이상지질혈증(예를 들어, 높은 총 콜레스테롤 또는 높은 수준의 트리글리세라이드), 제2형 당뇨병, 관상 동맥성 심장 질환, 뇌졸중, 담낭 질환, 골관절염, 수면장애, 호흡 곤란, 종양(자궁내막암, 유방암, 및 대장암), 동맥경화증 및 심부전과 같은 많은 질환 및 건강 상태의 위험을 증가시킨다.
대사성 증후군은 심장 질환의 위험을 증진시키는 장애군(set of disorders)을 포함하는 상태이다. 대사성 증후군의 주요 요소는 과체중, 심혈관 파라미터(고혈압, 이상지질혈증, 혈중의 높은 수준의 트리글리세라이드 및 낮은 수준의 HDL), 죽상경화증, 당뇨병, 및 인슐린 저항성이다. 몇가지 이러한 요소를 갖는 환자, 즉 대사성 증후군 환자는, 각각의 요소가 위험인자일지라도, 심장 질환이 발생하기 쉽다.
지방세포 및 대식세포는 대사성 증후군 및 이와 연관된 질환 요소의 발병에 있어서 중요한 역할을 한다. 이들은 모두, 미생물을 포식(phagocytize) 및 사멸시키는 능력과 종양괴사인자(TNF) 및 인터루킨-1(IL-I)을 분비하는 능력을 포함하여, 많은 공통적인 특징들을 갖는다. 사이토카인의 발현, 염증 분자, 및 지방산 수송체를 조절하는데 관여하는 지방세포내 특정 전사인자들이 또한 대식세포에서 발현되며, 유사한 생물학적 역할을 갖는다. 예를 들어, 리간드-활성화된 전사인자의 핵-수용체 상위그룹(super-family)에 속하는 PPAR의 활성화는 이들 형태의 세포 모두의 분화와 연관된다. 지방세포에서, PPAR은 지방세포 성장 및 글루코오즈 항상성을 조절한다. 대식세포에서 PPAR은 염증 유전자의 발현을 조절하고, 죽상경화 병변(atherosclerotic lesions)의 성장에 관여한다.
대식세포는 대사성 증후군과 연관된 특정 질환 상태에서 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(Matrix Metalloproteinase-1, MMP-1) 및 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(Matrix Metalloproteinase-3, MMP-3)를 과발현한다. 유사하게, 비만 진행 과정에서 지방을 축적하는 것에 추가하여, 지방세포는 인체 전체적으로 강력한 효과를 갖는 몇몇의 저-분자량의 생물학적으로 활성인 단백질 분자를 생성하고 순환시킨다. 이러한 단백질 마커들은 대사성 증후군의 상이한 요소들과 관련된다. PPAR-γ, 지방 분화 관련 단백질(Adipose Differentiation Related Protein, ADRP), CD36, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3-AR), 아디포넥틴 및 페릴리핀을 포함하나 이에 제한되는 것은 아닌, 몇몇의 이러한 대사성 마커들의 발현 및 생성은 비만 및 대사성 증후군 및 대사성 증후군과 연관된 다른 질병 상태의 과정에서 비정상적으로 된다.
관상 동맥성 심장 질환(coronary heart disease, CHD)로도 알려져 있는 죽상경화증은 주요 혈관 합병증 중 하나이며, 인간의 건강에 막대한 충격을 가하는 대사성 증후군의 중요한 요소이다. 이는 변형된 지질단백질, 주로 산화된 저-밀도 지질단백질(Ox LDL)에 대한 만성 염증 반응이다. 죽상경화증은 거품상 세포(foam cells)의 성장으로 이어지는 혈관벽 대식세포에 의한 지방 섭취 및 평활근 세포 증식을 야기하는 사이토카인 및 케모카인의 동화(elaboration)에 의해 나타나는 것으로 생각된다 (Berliner, J.A., Circulation, 91: 2488-2496, 1995, Boring, L., et. al., Nature, 394: 894-897, 1998). 분화집단 36(Cluster of Differentiation 36, CD36) 단백질이 죽상경화증의 과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 입증된 바 있다.
몇몇의 대사성 바이오마커 분자들의 간단한 설명, 소화 효소, 및 발병에 관여하는 대사 과정, 및 대사성 증후군의 조절, 및 관련된 질환 상태들을 아래에 요약한다:
1. 매트릭스 메탈로프로티나아제:
매트릭스 메탈로프로티나아제(MMPs)는 아연 의존성 엔도펩티다아제이며, 콜라겐과 같은 모든 종류의 세포외 기질 단백질을 분해할 수 있으며, 조직내 세포들 사이의 공간에서 통상 발견된다. MMPs는 주로 세가지 주요한 그룹, 즉, 콜라게나아제들을 형성하는 섬유아세포 콜라게나아제-1(MMP-1), 젤라티나아제 A (MMP-2) 및 젤라티나아제 B (MMP-9)를 포함한 젤라티나아제들, 및 스트로멜리신-1 (MMP-3) 및 마트릴리신 (MMP-7)을 포함한 스트로멜리신들로 나누어진다. 과량의 메탈로프로티아나제는 콜라겐, 프로테오글리콘 및 젤라틴과 같은 생분자들의 분해로 이어지며, 표피에 치명적인 결과를 가져올 수 있고 또한 연골 질환, 염증 등을 야기할 수 있다.
MMPs는 관상동맥질환(CAD)의 발병, 특히 급성 관상동맥 증후군(ACS)의 발병에 관여하는 것으로 생각된다. 연구들은 MMPs의 발현 및 조절과 이들의 조직 저해제(tissue inhibitors, TIMPs)가 조기 CAD 에서 평가되었음을 보여준다. 80명의 환자(ACS 환자 49명, 안정 CAD 환자 31명) 및 40명의 대조군에서 MMP-2, MMP-3 및 MMP-9, TIMP-1, 및 TIMP-2의 혈장 농도/활성이 임상시험으로 평가되었으며, 미성숙(premature) CAD에 있어서 MMP 및 TIMP 혈장 수준이 유전적 다형성 보다는 염증 및 대사성 장애의 임상 증상 및 마커와 관련된다고 결론지어졌다. 유사하게, 대식세포-활성(단핵세포 화학주성 단백질-1, 네오프테린), 조직-재형성 (매트릭스 매탈로프로티나아제-9) 및 혈전 (조직-인자) 관련 바이오마커들이 안정 관상동맥 질환(stable coronary artery disease, CAD)과 비교하여 급성 관상동맥 증후군(Acute Coronary Syndrome, ACS)에서 지속적으로 상승되어 있다는 것이 발견되었다.
비만 및 지방 조직의 형성에 있어서 MMPs의 역할[양성 및 음성]이 몇몇의 연구자에 의해 연구된 바 있다. 몇가지를 인용하면 다음과 같다:
한 연구에서, 연구자들은 비만의 2가지 유전적 모델(ob/ob 및 db/db 마우스) 및 식이-유도된 비만 모델(AKR 마우스)에서 노던 블롯 및 실시간 PCR에 의해 MMPs 및 TIMPs의 상이한 발현을 연구하였다. 그들은 MMP-2, MMP-3, MMP-12, MMP-14, MMP-19, 및 TIMP-1의 mRNA 수준이 체지방 조직(lean tissues)에 비하여 비만 지방 조직에서 강하게 유도된다고 결론내린 바 있다 [Chavey C et al., J Biol Chem. 2003; 278(14): 11888-96].
영양적으로 유도시킨 비만 마우스에 대한 유사한 연구에서, MMP-3, -11, -12, -13, 및 -14 및 TIMP-1 mRNAs의 발현이 표준 식이 마우스와 비교할 때 증가-조절된다는 것이 발견되었다. 합성 MMP 저해제의 존재하에서 지방형성이 감소된다는 것이 시험관내 연구에서 또한 관찰되었다[Maquoi E et al., Diabetes. 2002; 51(4): 1093-101].
2. 퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체(PPAR)-γ(Peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-γ):
퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체 γ (PPAR γ)는 비만 및 당뇨병에서 중추적인 역할을 하는 핵 수용체이다. 지방 조직 중량의 증가는 지방생성 과정 및 세포당 증가된 양의 세포질 트리글리세라이드 혹은 지질 액적(lipid droplets)의 축적을 통하여, 새로운 지방 세포의 생성의 결과일 수 있다. 지방생성 과정에 있어서, 지방전구세포(preadipocytes) 혹은 전구 지방 세포(precursor fat cells)가 증식한 후, 이러한 세포들은 성숙한 지방세포 표현형으로 분화한다. PPAR γ은 지방 조직에서 주로 발현되며, 지방세포 분화 및 지방 축적에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
한편, PPAR γ의 활성화는 인슐린 작용의 개선으로 이어진다. PPAR γ은 트로글리타존(Rezulin), 로지글리타존(Avandia), 및 피오글리타존(Actos)와 같은 티아졸리딘디온(thiazolidinedione, TZD) 계열의 항당뇨병 약물의 분자적 표적이다. 지방 조직 성장 및 인슐린 감수성은 PPAR γ2 결핍 마우스(PPAR γ2 knockout mice)에서 크게 손상된다는 것이 발견되었으며, 이는 비만 및 당뇨병에서 그의 역할을 나타낸다. PPAR γ은 지방 저장 및 대사에 필요한 효소의 생성에 대한 영향을 통하여, 지방 세포 분화뿐만 아니라, 지방산 섭취 및 지방생성의 핵심 조절자이다(Zhang, J., Proceedings of National Academy Sciences 2004; 101; 10703-10708, 2004).
3. 지방 분화 관련 단백질(Adipose differentiation related protein, ADRP):
ADRP은 50 kD의 단백질이며, 이의 mRNA (ADRP mRNA)는 1.7 Kb 크기이고 지방 조직에서 높은 수준으로 발현된다. ADRP의 발현은 미분화된 지방세포에서는 매우 낮으나, ADRP mRNA는 지방 분화 과정의 시작 후 몇 시간 내에 50 내지 100-배에 도달한다. ADRP는 또한 지방을 축적하고 합성하는 많은 다른 종류의 세포 및 조직에서도 발견된다. 따라서, 이는 지방세포 및 다른 세포에서 지질 액적의 형성 또는 안정화에 있어서 ADRP의 가능한 역할을 나타낸다. ADRP은 지방 조직에 의한 장쇄 지방산의 섭취를 특이적으로 증진시킨다. 따라서, ADRP은, ADRP의 발현 조절을 통하여 비만 및 당뇨병을 잠재적으로 조절할 수 있는 화합물을 동정하기 위한 중요한 표적이다.
4. 지방세포 CD36:
CD36은 지방세포 및 대식세포 모두에 의해 발현되는 공통의 단백질 마커이다. 지방세포에서 발현된 CD36은 지방산 수송체(fatty acid transporter, FAT)로서 기능하는 것으로 알려져 있다. 지방세포에 관한 연구는 CD36 mRNA가 지방세포 분화의 마커임을 보여주었다. 이는 대식세포에서 산화된 LDL (Ox LDL)과 결합하고 내재시키는 스캐빈저 수용체이다. CD36은 장쇄 지방산(long-chain fatty acid, LCFA) 수송체로서도 기능하여 지방세포에서 LCFAs의 섭취를 촉진한다. CD36 발현은 지방세포 및 대식세포 형태 모두의 분화 과정에서 PPAR에 의해 상승-조절된다. 지방세포는, CD36에 의해 주로 매개되어, Ox LDL을 흡수(endocytose) 및 라이소좀적으로(lysosomally) 분해할 수 있다는 것이 또한 밝혀졌다. CD36이 없는 동물은 산화된 저밀도 지질단백질의 결합 및 섭취에 있어서 유의성 있는 감소를 나타내었으며, 콜레스테롤, 비-에스테르화된 유리 지방산, 및 트리아실그리세롤의 절식시 수준에 있어서 유의성 있는 증가를 나타내었다.
5. 대식세포 CD36:
CD36은 B군(class B) 스케빈저 수용체군의 원형 단백질(prototypic member)이다. 세포 표면 상의 이러한 다중-리간드 수용체의 내인성 (예를 들어, 대식세포, 지방세포, 혈소판, 미세혈관 내피세포, 및 특정 내피세포) 및 이소성(ectopic) (예를 들어, 흑색종 세포 및 섬유아세포) 발현은 자멸 세포(apoptotic cells)의 탐식을 위한 식균 활성을 부여한다. CD36은 다양하게 발현되며, 트롬보스폰딘-1(thrombospondin-1, TSP- 1), 장쇄 유리 지방산(FFAs), 변형된(산화된) 저-밀도 지질단백질(Ox-LDL), 최종 당화산물(advanced glycation end (AGE) products), 콜라겐 I 및 콜라겐 IV를 포함한 다중의 세포외기질 리간드와 상호작용할 수 있다 [PLoS Medicine, 2: 152-161, 2005]. CD36은 단핵세포 및 대식세포의 표면에서 발현되며, 산화된 저-밀도 지질단백질(Ox-LDL)의 섭취를 매개할 뿐만 아니라[Nozaki, S., J. Clin. Invest. 96 : 1859-1865, 1995], 거품상 세포 형성, 지방산 수송, 노화세포의 탐식 및 제거, 혈관신생의 억제, 및 세포-기질 상호작용을 포함한 다양한 세포적 과정에서 중요한 역할을 한다. Ox-LDL의 CD36-의존적 섭취는 콜레스테롤 축적 및 이어지는 거품상 세포의 형성에 대하여 중요한 것으로 밝혀졌으며; 그 활성은 죽종발생(atherogenesis)의 마우스 모델에서 관찰된 CD36의 관여에 기인하는 것으로 추정된다 [Michael E et al, J. Exp. Med., 203: 2613-25, 2006].
CD36은 죽상경화 병변을 개시할 수 있으며, 심혈관 질환의 중요한 위험 인자일 수 있다. CD36 수용체를 결여하는 마우스에서, 거품상-세포 형성 및 혈관 병변 성장이 실제로 차단되었다 [Febbraio M., et. al., J Clin Invest 105:1049-1056, 2000]. 대식세포에서 고혈당으로 유도시킨 CD36의 합성은 대식세포에 의한 Ox-LDL의 증가된 섭취와 연관되어 있으며, 당뇨병 환자의 죽상경화 병변에서 거품상 세포 형성과 연관되어 있다(PLoS Medicine, 2: 152-161, 2005]. 고 글루코오즈 수준에 대한 응답으로 얻어진 증가된 퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체-γ (PPAR-γ)은 대식세포에서 CD36의 증가된 발현으로 이어지며, 가속화된 죽상경화증에 기여하게 된다.
따라서, 상기 데이터는 죽상경화 혈관 병변에서 상승된 CD36 발현 및 고혈당증 사이의 관련성을 입증해 주며, 따라서 죽상경화증의 잠재적인 마커로서 CD36을 사용하는 잠재적인 기회 및 장점을 제공한다.
6. 렙틴:
렙틴은 식품 섭취에 대하여 에너지 소모를 조절하는데 있어서 중요한 역할을 한다. 렙틴은 지방 조직의 중요한 지방사이토카인(adipocytokine)이며, 상기 지방 조직은 아디포넥틴, 종양괴사인자-알파(TNF-alpha), 인터루킨-6(IL-6), 레시스틴, 플라스미노오겐-활성화 저해제-I(PAI-I), 및 안지오텐시노오겐과 같은 저- 및 중간 분자량 단백질들을 추가로 함유한다. 이러한 사이토카인들은 함께 지방 조직 생리에 있어서 중요한 역할을 하며, 비만, 인슐린 저항성 및 혈관내피세포 기능장애와 연결된 것으로 믿어진다.
피하 지방 조직에서 렙틴, 지방산 전위효소(Fatty acid translocase, FAT/CD36), PPAR-감마2, 비커플링 단백질(Uncoupling protein, UCP)-2, UCP-3, 및 TNF-알파의 생체내 유전자 발현은 인슐린과 독립적으로 지질을 순환시킴으로써 조절된다. 따라서, 장기간의 고지혈증은 이들 단백질들의 증가된 발현에 의해 증가된 지방 대사 및 저장에 기여할 수 있다. [Nisoli E et al.; Diabetes. 2000 Mar; 49(3):319-24].
7. 산화된 LDL:
나쁜 콜레스테롤로서 알려져 있는 LDL 콜레스테롤은 산화될 때 더욱 위험하게 된다. 산화된 LDL은 혈액을 다양한 기관 및 조직에 공급하는 동맥에 염증을 생성할 수 있다. 이는 죽상경화증으로 이어지며 또한 심장마비 또는 뇌졸중의 위험을 증가시킨다.
Holvoet 등은 대사성 증후군이 더 높은 비율의 산화된 LDL과 관련되어 있으며, 따라서 더 높은 수준의 순환하는 산화된 LDL과 연관된다는 것을 처음으로 보여주었다. 이 연구에서, 산화된 LDL은 단일클론항체에 근거한 효소-연결된 면역흡착 분석으로 측정되었다. 이들은 증가된 농도의 산화된 LDL이 복부 비만, 고혈당, 및 고트리글리세라이드증의 요소뿐만 아니라 전체적으로 대사성 증후군의 증가된 출현과 연관되어 있음을 입증하였다. [Holvoet P et al., JAMA. 2008 May 21;299(19):2287-93.].
다낭성 난소 증후군(PCOS)을 갖는 여성에 대하여 수행된 시험은, 산화된 OxLDL 및 ApoE (아디포넥틴)과 비-에스테르화된 지방산의 인슐린 저항성과의 직접적인 관련성이 이러한 여성에서 조기 죽상경화증에 대한 위험을 증가시켰음을 입증해 주었다.
8. 단핵세포 화학주성 단백질(Monocyte Chemotactic protein, MCP-1):
단핵세포 화학주성 단배질-1(MCP-1)은 작은 유도성 유전자(small inducible gene, SIG) 군 중 하나로서, 상해 및 감염 부위에 단핵세포를 불러모으는데 있어 중요한 역할을 한다. MCP-1은 또한 작은 유도성 사이토카인 A2(small inducible cytokine A2, SCYA2) 및 단핵세포 화학주성 및 활성 인자(monocyte chemotactic and activating factor, MCAF)로 칭해진 바 있다. MCP-1은 류마티스 관절염 환자의 관절에서 발견되며, 대식세포를 불러모으고 또한 관절에서 염증을 지속시키는데 기여할 수 있다. MCP-1은 또한, 신장의 염증에 대한 경고징후로서, 낭창(lupus) 환자의 뇨에서 상승된 것으로 발견되었다. [http://www.medterms.com/script/main/art.asp?articlekey=33740].
최근, MCP-1은 비만과 연관된 인슐린 저항성 및 죽상경화증의 성장에 관여된 신규의 지방사이토카인으로 보고된 바 있다. [Kawada T, et.al., Asia Pac J Clin Nutr. 2008;17 (l): 126-30]. 렙틴, 아디포넥틴, 종양괴사인자-알파 등을 포함한 많은 다른 지방사이토카인과 함께, MCP-1은 염증 및 염증 반응에 연결되어 있다. 비만은, 증가된 순환 수준의 염증 마커 및 발현과 함께, 만성의 중증도 염증 상태를 특징으로 한다. 염증-관련 지방사이토카인의 이러한 증가된 생성은 비만, 특히 제2형 당뇨병 및 대사성 증후군과 연결된 질환들의 성장에 중요한 것으로 점차 간주되고 있다. [Trayhurn P. and Wood I. S., Biochem Soc Trans. 2005; 33(Pt 5):1078-81].
9. 지방산 결합 단백질(aP2/FABP4):
FABPs는 대사 및 염증 경로에 연결된 분자 샤페론(molecular chaperones)이다. FABP 군의 상이한 종들은 조직 발현/분포의 독특한 패턴을 나타내며, 활성 지질 대사에 관여된 조직에서 가장 풍부하게 발현된다. FABPs는 많은 기능을 수행한다. 예를 들어, 지질 샤페론으로서, FABPs는 저장을 위한 지질 액적과 같은 세포에서 특정 컴프트먼트로의; 신호전달, 상호교환(trafficking) 및 막 합성을 위한 소포체로의; 산화를 위한 미토콘드리아 혹은 퍼옥시좀으로의 지질 수송을 활발하게 촉진할 수 있다 [Masato, F et al, Nature Reviews/Drug Discovery, Vol. 7: 489 - 503, 2008]. A-FABP는 성숙 지방세포 및 대식세포에서 주로 발현되는 지방산 결합 단백질이다. 이는 FABP-4 및 aP2로서 더욱 친숙하게 알려져 있다. 그러나, 지방세포는, 각각 전구-지방세포 및 단핵세포로부터 분화시에, 대식세포에 비하여 유의성 있게 더 높은 수준(약 10000-배)의 A-FABP를 발현한다.
A-FABP는 인간 혈청에 풍부하게 존재하며, 지방세포 및 대식세포의 구분되는 작용 및 대사와 염증 반응을 통합하는 능력을 통하여, 비만, 제2형 당뇨병 및 심혈관 질환과 같은 대사성 증후군의 주요 요소들의 성장에 중요한 역할을 할 수 있다 [Masato, F et al, Nature Reviews/Drug Discovery, Vol. 7: 489 - 503, 2008]. 지방세포에서 발현된 aP2는 전신 글루코오즈 및 지질 대사를 조절한다. aP2 기능의 차단은 비만, 심장 질환(tracking heart disease), 대사성 증후군 및 다른 대사성 증후군의 요소를 치료하기 위한 치료 전략에 대한 새로운 접근법이다.
10. β3-아드레날린 수용체(β3AR):
인체의 아드레날린 시스템은 에너지 소모 및 지질분해를 조절하는데 있어서 중요한 역할을 한다. 이 과정에서, 카테콜아민은 지방 세포에서의 지질분해 및 갈색 지방 조직 및 골격근에서의 열발생(thermogenesis)를 자극함으로써, 에너지가 풍부한 지질을 소모한다. β3AR은 갈색 지방 조직에서 카테콜아민으로 자극된 열발생을 매개하는 주요한 수용체이며, 인체에서 흉곽 및 복부의 큰 혈관(great vessel)에 분포되어 있다 [Thomas, GN, International Journal of Obesity, 545-551, 24, 2000]. β3AR는 또한 인간을 포함한 몇가지 종의 백색 지방 세포에서 카테콜아민에 의한 지질분해의 자극을 매개하는데 있어서 중요하다. 갈색 지방 조직은 소위 비-커플링 단백질을 함유하는 다수의 미토콘드리아를 갖는다는 점에서 백색 지방 조직과 상이하며, 산화적 인산화를 자극할 수 있고, 이에 의해 대사 속도를 증가시킨다. 갈색 지방 조직의 역할은 지질을 산화시켜 열을 생성하고 초과 지방을 인체로부터 제거하는 것이다. 백색 지방 조직은 피하 및 내장 지방 조직을 포함하며, 더욱 풍부하다. 이는 지방을 저장하는데 기여하고, 다른 조직에 의해 사용되기 위하여 유리 지방산을 생성시키는 지질분해에 의해 동원될 수 있다. β3ARs의 선택적 효능제는 비만을 치료하는데 매우 유용하며, 이는 βl- 혹은 β2-아드레날린 부작용이 거의 없이 에너지 소모를 증가시킬 수 있기 때문이다. 많은 β3-아드레날린 효능제가 개발되고 실험실적으로 시험되어 왔다. 따라서, β3-선택적 효능제를 사용한 치료는 에너지 소모를 크게 증가시키고 또한 비만을 감소시킬 수 있다.
11. 페릴리핀:
페릴리핀은 지방세포로 칭해지는, 지방 조직 중 지방-저장 세포에서 지질 액적 주위에 코팅을 형성하는 단백질이다. 페릴리핀은, 지질분해로 칭해지는 과정에 의해 트리글리세라이드를 글리세롤 및 지방산으로 분해하는, 호르몬-민감성 라파아제와 같은 인체의 천연 리파아제에 대하여 보호 코팅으로서 작용한다. 어떤 연구에서, 페릴리핀 군[PLIN]인 아디포필린 및 TIP47 단백질이 비만에 있어서 중요한 역할을 할 수 있음이 시사되었다. PLIN은 체중 및 대사성 증후군의 위험을 감소시키기 위한 치료법에 대하여, 식이 반응의 조절제뿐만 아니라 인간에서 비만 위험에 대한 후보 유전자이다. [Tai ES et al; Curr Opin Lipidol. 2007; 18(2): 152-6].
β-아드레날린 수용체 활성화에 따라, 프로틴 키나아제 A(protein kinase A, PKA)는 지질 액적의 표면에 편재화된 페릴리핀을 과인산화시킨다. 인산화된 페릴리핀은 형태가 변화하고, 지질 액적으로부터 전위되어(translocate), 저장된 지질을 트리글리세라이드의 호르몬-민감성 라파아제-매개된 가수분해에 노출시켜 비에스테르화된 지방산((NEFA)을 유리시킨다. 따라서, 페릴리핀은 지방 저장, 지질분해, 및 에너지 균형의 중요한 조절제이다. 페릴리핀 발현은 비만 동물 및 인간에서 상승되어 있다. 연구들은 페릴리핀 발현과 비만 사이에 유의성 있는 양성의 관련성을 입증하였다 (P < 0.01, 페릴리핀 mRNA 대 퍼센스 체지방). 비만 및 인슐린 저항성에 대한 지방세포 지질분해의 잠재적인 중요성 때문에, 페릴리핀은 항-비만 약물을 개발하기 위한 중요한 표적이다. 페릴리핀을 불활성화하거나 억제하는 약물은 잠재적인 항-비만 약물치료로서의 적응을 발견할 수 있다.
12. 아디포넥틴:
아디포넥틴은 중요한 지방사이토카인이며, 아디포넥틴의 낮은 수준은 비만, 당뇨병, 및 심혈관 질환과 같은 질병 상태와 연관되어 있다는 것이 입증되었다. 아디포넥틴의 투여는 당뇨병, 비만, 및 죽상경화증의 동물모델에서 유익한 것으로 입증되었다.
혈중 아디포넥틴 수준은 비만에서 감소되고, 이는 항-당뇨병 및 항-중상경화 효과를 갖는 것으로 간주되는 반면, 비만에서 혈중의 증가된 렙틴은 식욕, 에너지 소모, 지질 및 탄수화물 대사, 세포 분화의 조절과 연관된다. 비만 군의 80명의 환자(43명의 여성 및 37명의 남성)에 대하여 수행된 연구에서, 렙틴(Elisa), 아디포넥틴(Elisa) 및 본 빌레브란드 인자(Elisa) 리포도그램(lipidogram)이 수행되었다. 혈중의 렙틴 대 아디포넥틴 비율(Lep/AdipoR)이 정상 BMI를 갖는 사람에 비하여 비만 환자에서 유의성 있게 더 높다는 것이 발견되었다. 상대 수행 특성(Relative Operating Characteristic, ROC)은 비만에 대하여 Lep/AdipoR가 가장 높은 특징 값(discriminatory value)을 가짐을 보여주었다. Lep/AdipoR의 측정은 인슐린 저항성 및 혈관내피세포 기능장애와 같은 비만 합병증의 평가에 있어서 추가적인 지표로서 사용될 수 있다.
아디포넥틴의 높은 혈장 농도는 인간에서 심근경색의 더 낮은 위험도와 연관된다는 것이 또한 입증되었다. [Pischon T et al., JAMA. 2004 Apr 14; 291(14): 1730-7]. 따라서, 아디포넥틴 수준을 증가시키는 식물화학 추출물 또는 분획물 또는 화합물은 비만, 당뇨병, 심혈관 시스템 및 대사성 증후군, 및 대사성 증후군과 연관돤 다른 질환 요소에 있어서 유익한 효과를 가질 수 있다.
13. 단백질 타이로신 포스파타아제 1B (PTP-1B):
호르몬 인슐린에 대한 저항성은 제2형 당뇨병 및 비만의 특징이다. 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(PTP-1B)는 지방세포, 근육세포, 및 간세포와 같은 인슐린 민감성 세포에서 인슐린 신호 전달의 음성 조절자로서 간주된다. 인슐린 저항성 당뇨병 및 비만에 있어서, PTB-1B는 과발현되며, 그의 효소 활성은 증가된다. PTP1B의 과발현은 인슐린 수용체 및 IRS-1 인산화를 감소시키며, 따라서 인슐린 저항성을 생성한다 (Theodore O. J., et al., Nature Reviews Drug Discovery, 1; 696-709, 2002; Carol L. V., et. al., J. Biol. Chem. 275: 18318-18326, 2000.). 그러므로, PTP-1B 억제를 제공하는 물질(들)은 비만 및 제2형 당뇨병 위험을 갖는 환자에게 떠오르는 치료학적인 기대가 되고 있다.
14. 지방생성:
지방생성은 전구-지방세포의 주요 지방세포(adipocytes) 또는 지방 세포(fat cells)로의 분화 및 증식이며, 세포 분화 중 가장 활발히 연구되는 모델 중 하나이다. 지방생성 과정에서, 전구지방세포 또는 전구체 지방 세포의 증식은 이러한 세포들의 성숙한 지방 표현형으로의 분화가 이어진다. 핵 수용체 PPAR γ은, 지방세포 분화 및 지방 저장에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있는, 지방 조직에서 현저하게 발현된다. 그러나, 제2형 당뇨병의 치료를 위하여 시판되는 많은 약물들은 PPAR γ의 과발현 및 지방생성의 촉진을 포함한다. 지방세포는 유익한(렙틴, 아디포넥틴) 또는 해로운 효과(안지오텐시노오겐)를 나타내는 단백질들을 분비한다. 대식세포 유래의 분비 생성물들(사이토카인들)의 효과와 연관된, 이러한 다양한 분비된 인자들 사이의 균형에 있어서의 장애는 대사성 증후군의 전개로 이어진다.
15. 지질분해(Lipolysis):
지질분해는 지방세포에 저장된 지질의 분해이다. β3-아드레날린 효능제들은 백색 지방 조직에서 지질분해를 자극할 수 있고, 갈색 지방 조직에서 열발생(thermogenesis)을 자극할 수 있다. 지질분해 활성을 갖는 식물화학물질들은 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 질환의 치료에 유용할 수 있다. 지방 조직 지질분해는 지방 세포에 저장된 트리글리세라이드의 분해 및 지방산과 글리세롤의 유리로 이어지는 이화 작용(catabolic process)이다. 상기 지질분해 과정에 관여하는 단백질들은 비만 및 대사성 증후군의 치료를 위한 약물 표적을 구성한다.
16. 알파-아밀라아제(α-아밀라아제):
α-아밀라아제는 전분과 같은 복잡한 탄수화물을 당으로 전환하는 효소이다. 전분은 소화 효소 아밀라아제 및 다른 2차 효소에 의해 먼저 분해되지 않으면 흡수될 수 없다. 탄수화물이 소모될 때, 소화관 내의 효소들은 이들 큰 분자를 더 작은 당 분자들로 분해하며, 상기 더 작은 당 분자들은 장관을 통하여 흡수된다. 최근, 전분 차단체가 비만의 조절을 위한 효과적인 치료임이 입증된 바 있다. 그러므로, 아밀라아제 저해제는 당뇨병 및 비만의 치료를 도울 수 있는 위장관적 및 대사적 효과를 갖는다.
식물은 또한 방어 전략으로서 α-아밀라아제 저해제를 사용한다. 이러한 저해제들은 곤충 소화관내 α-아밀라아제 및 프로티나아제의 소화 작용을 방해함으로써, 곤충 항-먹이제(anti-feedants)로서 작용한다. 식물로부터 단리된 알파-아밀라아제 저해제는 전분 차단제로서 사용되어 식이에 존재하는 전분 유래의 글루코오즈 양을 크게 감소시킬 수 있고, 또한 반독 투여 후에 식욕을 감소시킬 수 있다.
17. 알파-글루코시다아제 (α-글루코시다아제):
알파-글루코시다아제는 복잡한 탄수화물의 글루코오즈로의 분해를 촉매하는 효소이다. 그 작용은 α-아밀라아제와 유사하다. 이 효소를 저함함으로써, 탄수화물이 효율적으로 분해되지 않고 장관으로부터 글루코오즈 흡수가 지연되어, 전일에 걸쳐, 특히 식사 바로 직후에, 혈중 글루코오즈의 더 느리고 더 낮은 상승을 야기한다. 아카보오즈, 미글리톨 및 보글리보오즈와 같은 소수의 α-글루코시다아제 저해제는 제2형 당뇨병의 치료 및 조절을 위하여 시장에서 상업적으로 판매되는 경구용 항-당뇨병 약물이다. 따라서, α-글루코시다아제 억제를 갖는 식물 추출물, 분획물 또는 순수한 화합물은 제2형 당뇨병, 특히 식후 고혈당증에서 고혈당에 대한 더욱 우수한 당 조절을 달성하는데 유용할 수 있다.
대사성 증후군은, 비만, 당뇨병 및 죽삭경화증과 같이, 단일의 질환 상태이거나 혹은 질환 상태들의 집합일 수 있는 중요한 질환으로서 간주되며, 치료하지 않고 방치된다면 몇가지 합병증으로 이어지게 된다. 몇가지 분류의 약물들이 대사성 증후군의 상이한 요소들의 치료를 위하여 시장에서 판매되고 또한 이들의 다수가 많은 부작용과 연관되어 있을 지라도, 대사성 증후군의 치료를 위하여 극소수의 의약품들만이 사용가능하며, 이들의 어떤 것도 모든 연관된 질환에 응답하는데 있어서 포괄적이지 않다. 따라서, 특히 안전하고 유익한 천연 화합물을 사용하여, 대사성 증후군, 비만, 당뇨병 및 죽상경화증에 대한 예방 및 치료법을 개발할 커다란 의약적 필요성이 존재한다.
지난 10년간 비만 연구에 있어서 핵심 개발 사항 중 하나는 비만이 만성의 저-수준의 염증이라는 일반적인 인식이었다. 비만과 염증 간의 연결은 비만 환자에서 사이토카인(TNFα, IL-6) 및 C-반응성 단백질(C-reactive protein, CRP)과 같은 급성 상 단백질을 포함한 몇가지 염증 마커의 증가된 혈장 수준으로부터 명백하다(Stienstra R., et. al., 2007, article ID 95974). 따라서, 대사성 증후군의 다른 요소뿐만 아니라 비만, 당뇨병 및 죽상경화증은 뜻밖에 염증과 연결되었다. 비만과 관련된 만성의, 저-등급의 조직 염증이 제2형 당뇨병의 주요 원인인 인슐린 저항성에 기여한다는 가설이 근년 들어 세워졌다 (Science News, Science Daily , U.S., November 7, 2007).
대사성 장애 분야에서의 연구 활동은, 대체적 해답 특히, 식물 유래의 생성물들은 합성 유래의 상업적 약물에 비하여 자연적이고 안전한 것으로 간주되기 때문에 식물 유래의 생성물에 기초한 해답을 찾는데 특별한 관심을 가진 전세계의 많은 과학자에 대하여 높은 우선적인 표적이 되어 왔다. 이를 감안하고 또한 대사성 증후군, 비만, 당뇨병, 죽상경화증 및 혈관내피세포 기능장애 및 다른 대사성 장애의 예방, 조절, 및 치료에 대한 급박한 필요성과 연계하여, 본 발명자들은 식물 추출물, 분획물, 및 순수한 화합물에 대한 시험관내 및 생체내 실험을 포함한 광범위한 연구를 수행하였으며, 세포에 기초한 연구에서 치료학적으로 유효한 양의 생약 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물, 분획물, 활성 화합물의 투여가 지방생성의 억제 및 지방분해(adipolysis)[지질분해(lipolysis)]의 촉진을 포함한 대사 과정을 강력하게 개선한다는 것을 우연히 발견하였다. 본 발명자들은 또한 세포에 기초한 연구에서 치료학적으로 유효한 양의 생약 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물, 분획물, 활성 화합물로부터 선택된 하나 이상의 성분(들)의 투여가 대사성 증후군, 비만, 당뇨병, 죽상경화증, 혈관내피세포 기능장애 및 대사성 증후군과 연관된 다른 질환 상태의 과정에서 변형된 특정 바이오마커 분자 또는 생물학적 단백질의 수준을 강력히 개선한다는 것을 예기치 못하게 발견하였다.
스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 꽃머리의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)에 의한 분화된 지방세포에서의 지질 축적의 억제를 3T3-L1 마우스 전구-지방세포에서 평가하였다. 처리된 세포에서 지방 축적의 억제를 모의-처리된(mock treated) 분화된 지방세포를 사용하여 비교하였으며, % 억제를 측정하였다. 예기치 못하게, 표 1에 요약된 바와 같이, 상기 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)은 10 ㎍/ml에서 지질축적의 지방생성 65.9% 억제를 나타내었다.
유사하게, 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)의 전구-지질분해 활성을 3T3-L1 전구-지방세포를 사용하여 분화된/성숙 지방세포에서 평가하였다. 지질분해 활성은 배양 배지 중으로 분비된 유리 글리세롤을 Adipolysis Assay Kit (Chemicon International, USA)의 방법에 따라 측정하여 성숙 지방세포에서 평가하였다. 기지 농도의 글리세롤을 함유한 대조군과 비교하여 샘플 용액 중의 글리세롤 농도의 퍼센트 증가는 스파란터스 인디커스의 추출물 LI/DD-II/054A/01에 의해 나타나는 지질분해의 퍼센트 촉진(percentage acceleration)에 대응된다. 예기치 못하게, LI/DD-II/054A/01은 표 2에 요약된 바와 같이 25 ㎍/ml에서 26.7%의 지질분해 증가로, 지질분해/지방분해(lipolysis/adipolysis)의 적당한 증가를 나타내었다.
활성 화합물을 동정하기 위하여 생-분석에 기초한 정제(Bio-assay guided purification)를 LI/DD-II/054A/01에 대하여 수행하였으며, 7-히드록시프룰라놀라이드로도 알려져 있는 7-α-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드(LI054A01; 1)가 상기 활성에 대한 원인이라는 것이 예기치 못하게 밝혀졌다. 7-히드록시프룰라놀라이드로도 알려져 있는 상기 활성 화합물 7-α-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드는 더욱 우수한 활성을 나타내었으며, 표 1 및 2에 요약된 바와 같이, 0.5 ㎍/ml 농도에서 68.7%의 지질 축적(지방생성) 억제및 5 ㎍/ml 농도에서 47.8%의 지질분해 증가를 나타내었다.
Figure 112011068261920-pct00001
또한, 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)은 PMA로 유도시킨 A2058 인간 흑색종 세포에서 강력한 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(MMP-1) 억제 활성(도 1)을 가진다는 것이 놀랍게도 발견되었다. 포볼 미리스테이트 아세테이트(Phorbol myristate acetate, PMA)는 강력한 공지의 세포간(intracellular) 산화적 스트레스-유도제이다. 죽상경화증과 같은 심혈관 징후에 있어서, 산화적 스트레스 마커의 과생성은 중요한 인자이다. 추가적으로, LI/DD-II/054A/01은 또한 인터루킨-1β로 유도시킨 A549 인간 폐 종양 세포에서 강력한 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3) 억제(도 2)를 나타내었다. 죽상경화증에 있어서, IL-lβ과 같은 전구-염증성 사이토카인의 영향 하에서 MMP-3, MMP-9, MMP-13과 같은 전구-염증성 프로티나아제의 과생성은 죽상경화 병변 및 동맥류(aneurysm) 형성의 전개 및 진행에 대하여 매우 중요하다.
본 발명자들은 이들은 주로 지방생성 과정, 제2형 당뇨병에서 인슐린 저항성, 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애의 원인이 되는 대사성 바이오마커의 조절을 평가하였으며, 면역 블롯 분석을 사용하여 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)에 의한 3T3-L1 지방세포에서의 지방생성 과정에서, 퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체 감마(PPARγ), CD36, 지방세포 지방산 결합 단백질 4 (FABP4 혹은 aP2), 페릴리핀, 및 베타-3 아드레날린 수용체(β3AR)와 같은 대사성 바이오마커의 조절을 평가하였다. 둘베코의 변형된 이글스 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, DMEM) 하에서 마우스 전구-지방세포 3T3-L1 세포를 상이한 농도의 LI/DD-II/054A/01로 2 시간 동안 전처리한 다음, 500 nM 인슐린, 1.0 μM 덱사메타손, 및 0.5 mM 이소부틸메틸산틴(IBMX)을 함유하는 분화 배지를 48 시간 동안 가하였다. 이후, 세포를 후-분화 배지(100 nM 인슐린을 함유하는 DMEM)와 함께 LI/DD-II/054A/01 또는 LI054A01의 존재 혹은 비존재하에서, 추가로 8일 동안 인큐베이션하였다. 최종적으로, 상기 세포를 가공하고 용해 완충액(lysis buffer)으로 용해시켰다. 단백질 추출물들을 면역블롯 분석으로 평가하였고, 면역-반응성 밴드를 West-pico 화학발광 기질로 전개시키고, Kodak Image Station에 포획하고, 액틴 발현을 사용하여 보정하였다.
놀랍게도, 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 활성 화합물 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01) 모두 포옥시좀 증식제-활성화 수용체 감마(PPARγ), CD36, 지방산 결합 단백질 4 (aP2/FABP4) 및 세포간 지질 액적 표면 연관 단백질(페릴리핀)과 같은 몇가지 지방세포 분화 마커의 수준을 용량 의존적으로 강력히 개선하는 것이 발견되었다(도 3). LI/DD-II/054A/01이 처리된 지방세포에서의 몇가지 마커 단백질의 억제 조절은 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물이 지방 분화 과정을 조절하는데 있어서 다중적인 유익한 역할을 한다는 것을 시사한다: (1) 세포 분화, 성장, 및 대사의 조절을 위한 전사 인자로서 기능하는 핵 수용체 단백질인 PPARγ를 억제조절하여, 세포 분화를 억제함으로써, (2) 지질 섭취에 관여하는 분류 B 스캐빈저 수용체인 CD36을 억제하여 콜레스테롤 에스테르 섭취를 제한함으로써, (3) 장쇄 지방산에 대한 수송 단백질로서 작용하는 FABP4/aP2 수준을 낮춰 세포간 지방과다(adiposity) 및 세포간 지질수송을 낮춤으로써. 나아가, LI/DD-II/054A/01 처리된 지방세포에서 페릴리핀 단백질의 억제 조절은 세포질 중에 감소된 지방 저장을 강력히 나타낸다. 페릴리핀은 지방세포에서 지질 액적을 코팅하는 단백질이다. 이는, 대사 또는 지질분해에 사용하기 위하여 트리글리세라이드를 글리세롤과 지방산으로 분해하는, 호르몬-민감성 리파아제의 작용으로부터 보호를 제공한다. 그러므로, 이는 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물이, 지질로 채워진 소포 주위의 페릴리핀 코팅을 얇게 함으로써, 저장된 지질이 글리세롤과 지방산으로의 효소적 분해에 더욱 민감한 상태를 제공한다는 것을 나타낸다.
또한, 3T3-L1 지방세포에서 베타-3 아드레날린 수용체(β3AR) 발현/생성은 도 3에 나타낸 바와 같이 LI/DD-II/054A/01에 의해 용량 의존적으로 유의성 있게 증가되었다. 이는 세포간 cAMP의 증가 및 지방 조직에서 미토콘드리아성 비-커플링 단백질 1의 활성화에 의한 에너지 소모의 증가를 통한 체중 감소를 나타낸다.
대식세포에서, CD36은 산화된 저-밀도 지질단백질(OxLDL)의 섭취 및 이어서 거품상-세포 성장을 매개하는 스캐빈저 수용체이다. 그러므로, 대식세포에서 CD36의 증가된 수준은 죽상경화증 진행에 대한 예측 마커로서 간주되어 왔다. LI/DD-II/054A/01 및 LI054A01의 존재 또는 비존재하에서 고-글루코오즈로 유도시킨 J774 대식세포에서의 CD36 단백질 발현의 억제를 면역블롯 분석을 사용하여 평가하였다. 즉, LI/DD-II/054A/01 또는 LI054A01로 세포를 처리한 후 얻어진 동일한 양의 세포 용해물 단백질을 7.5% SDS-PAGE에서 분리(resolve)한 후; 단백질들을 니트로셀룰로오즈 막에 전사하였다. 비-특이적 부위를 블록킹한 후, 상기 막을 CD36 항체(R&D Systems, Minneapolis, MN)와 함께 인큐베이션하였다. 최종적으로, 특이적 면역-반응성 밴드를 West-pico 화학발광 기질(Pierce Biotechnology, IL, USA)을 사용하여 전개시키고, 면역블롯 이미지를 Kodak Image Station (Kodak, USA)에 기록하였다. 밴드 강도를 밀도분석방법으로(densitometrically) 계산하고, 각 샘플에서 액틴의 발현으로 보정하였다. 결과를 도 4에 요약한다. 대표적인 면역블롯 이미지는 LI/DD-II/054A/01가 고-글루코오즈로 유도된 J774 대식세포에서 CD36 단백질 발현을 용량의존적으로 억제하였음을 나타내었다. 그러나, 활성 화합물 LI054A01은 LI/DD-II/054A/01에 나타난 것에 비하여 10배 우수한 CD36 억제를 나타내었다. 이러한 예기치 못한 관찰은 또한 스파란터스 인디커스의 추출물 및 화합물의 항-죽상경화증 성질에 대한 뒷받침을 제공한다.
에틸 아세테이트 추출물 (LI/DD-II/054A/01)이 또한 고-글루코오즈로 유도된 대식세포에서 단핵세포 화학주성 단백질-1(Monocyte Chemotactic protein-1, MCP-1) 및 산화된 LDL을 강력하게 억제한다는 것을 주목하는 것은 또한 흥미롭다. 이러한 마커들은 죽상경화 플라크를 성장시키는 거품상 세포로의 분화를 위하여 매우 중요하며, 죽상경화증의 성장 및 진행을 위한 잠재적인 생물학적 마커로서 간주된다(도 7).
유사하게, 3T3-L1 지방세포에서 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)에 의한 아디포넥틴 단백질의 조절을 웨스턴 면역블롯 분석으로 평가하였다. 세포배양, 처리 프로토콜 및 면역블롯 분석 방법은 표준 프로토골에 따랐으며, 상기에서 간단히 설명한 바와 같이, 대사성 마커에 대하여 수행하였다. 추출물 LI/DD-II/054A/01은 또한 도 8에 도시된 바와 같이 3T3-L1 성숙 지방세포에서 아디포넥틴 단백질 발현의 적당한 상승조절을 나타내었다. 아디포넥틴은 지방세포에 의해 분비되는 호르몬이다. 이는 세포간 트리글리세라이드 함량을 낮추고 인슐린 신호를 강화하여 글루코오즈 섭취를 조절하고, 따라서 지방생성 및 인슐린 저항성 당뇨병 즉 제2형 당뇨병으로부터 보호를 제공한다. 그러므로, 우리의 발견은 스파란터스 인디커스의 추출물이 비만, 인슐린 저항성 즉 제2형 당뇨병의 발병에 대하여 보호를 제공하고, 또한 혈관내피세포 기능장애를 약하게 하는데 도움을 준다는 것을 나타낸다. 이들 추출물은 따라서 상기 대사성 장애의 예방, 치료 및 조절에 유용할 수 있다.
인슐린 저항성에 미치는 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)의 효과를 LI/DD-II/054A/01에 의한 3T3-L1 전구지방세포에서의 단백질 타이로신 포스파타아제-1B(Protein Tyrosine Phosphatase-1B, PTP-1B) 활성의 조절을 시험함으로써 평가하였다. 상기 3T3-L1 전구지방세포는 둘베코의 변형된 이글스 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, DMEM)에서 표준 프로토콜에 따라 배양하였으며, LI/DD-II/054A/01로 48시간 동안 처리하였다 상기 세포를 세포 용해 완충액으로 용해시키고, 세포 용해물을 14,000 x g로 5분 동안 4℃에서 정제하였다. PTP-1B 활성은 10 mM 4-니트로페닐포스페이트(pNPP, Sigma Chemical Co., MO, USA)를 함유하는 기질 용액을 사용하여 표준 프로토콜에 따라 평가하였으며, 발색 반응을 마이크로플레이트 ELISA reader (BioRad, USA)로 읽어냈다. 그 결과는 LI/DD-II/054A/01이 3T3-L1 전구지방세포에서 PTP-1B 활성의 강력한 억제제일 수 있음을 예기치 못하게 보여주었다 (도 9).
단백질-타이로신 포르파타아제(PTP)-1B(Protein-tyrosine phosphatase(PTP)-1B)는 인슐린 수용체 및 인슐린 수용체-기질 복합체 1(Insulin receptor-substrate complex 1, IRS-1)의 포스포타이로신 잔기를 탈인산화함으로써 인슐린 신호전달의 생리학적 음성 조절제로서 작용한다. 이전의 동물 연구에서 PTP-1B 유전자의 결핍(silencing)은 놀랍게도 제2형 당뇨병의 진전에 대하여 저항성을 제공하였다. 그러므로, PTP-1B의 억제는 최근 제2형 당뇨병을 치료하기 위한 잠재적인 표적으로서 부상되고 있다. 흥미롭게도, 본 발명에서 LI/DD-II/054A/01은 지방세포에서 PTP-1B 활성의 유의성 있는 억제를 나타내었다 (도 9). 이러한 관찰결과는 따라서 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 추출물이 제2형 당뇨병을 치료하기 위한 잠재적인 치료학적 조절제로서 사용될 수 있음을 나타낸다.
스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 단일의 성분이 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애와 연관된 많은 질환 상태에 관련된 마커 단백질을 조절할 수 있다는 것은 예기치 못한 것이고 또한 놀라운 것이다. 이러한 예기치 못한 결과는 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 추출물(들), 분획물(들) 및 화합물(들)이 동물 및 인간에서 대사성 증후군, 비만, 당뇨병, 죽상경화증, 혈관내피세포 기능장애, 만성 신장 질환(chronic kidney disease, CKD) 및 다른 대사성 장애들을 예방, 치료, 및 조절하기 위한 잠재적인 치료제일 수 있음을 시사한다.
시험관내 모델에서 LI/DD-II/054A/01에 의해 나타난 강력한 항-대사성 증후군 효과를 또한 생체내 대사성 증후군 모델에서 평가하였다. 고-지방, 고-콜레스테롤, 고-염, 및 고-수크로오즈 식이를 랫트에 8주 동안 먹임으로써, 웅성 스프라그 도울리 랫트에서 대사성 증후군 증상을 실험실적으로 유도시켰다. 8주의 유도기간 후에, 상기 랫트를 각 군에 6마리씩 무작위로 2 군으로 나누고, 처리군 동물은 0.5% CMC 수용액 10 mL 중 LI/DD-II/054A/01 250 mg/kg 체중으로 추가의 8주 동안 경구로 공급하였다. 대조군 동물은 이 기간 동안 비히클(0.5% CMC 수용액 10 mL/kg)만을 공급하였다. 각 동물의 체중을 전체 시험기간 동안 매주 기록하였다. 처리군 및 대조군에 대한 평균 체중을 결정하였다. 체중 증가는 처리 시작 후 1번째 주, 4번째 주, 8번째 주에, 최초 체중과 비교하여 계산하였다. 250 mg/kg의 용량에서 LI/DD-II/054A/01는 대조군에 비하여 매우 강력하고 통계적으로 유의성 있는(p<0.01) 체중 증가에 있어서의 감소(66.04%)를 나타내었다. 처리군 및 대조군에서 체중 증가의 결과를 도 10A 및 10B에 요약한다.
혈청 아디포넥틴의 평가: 아디포넥틴은 유일하게 지방 조직으로부터 분비되는 단백질 호르몬이며, 글루코오즈 항상성 및 지질 대사를 포함한 많은 대사 과정을 조절한다. 순환하는 아디포넥틴 농도는 체지방과 역으로 관련된다. 낮은 수준의 아디포넥틴은 비만, 심혈관 장애 및 인슐린 저항성과 관련된다. 그러므로, 이러한 단백질 호르몬은 대사성 증후군 및 대사성 증후군과 연관된 질환 상태의 유망한 마커로서 확립되어 있다. 처리군 및 대조군 동물에서 혈청 아디포넥틴 농도를 2중 항체에 근거한 샌드위치 랫트 아디포넥틴 ELISA 키트를 사용하여 평가하였다. 데이터는, 도 11에 요약된 바와 같이, 8주 동안 250 mg/kg 체중으로 LI/DD-II/054A/01의 매일 공급은, 기저선과 비교할 때, 혈청 아디포넥틴 농도에 있어서 유의성 있는(p=0.00618) 개선을 야기하였음을 보여주었다. 그러나, 대조군은 혈청 아디포넥틴 농도에 있어서 개선을 나타내지 않았다. 따라서, LI/DD-II/054A/01는 비만, 심혈관 장애, 인슐린 저항성 제2형 당뇨병, 대사성 증후군, 및 대사성 증후군의 다른 관련 장애와 같은 증상을 개선하는데 잠재적인 이익을 갖는다.
250 mg/kg로 LI/DD-II/054A/01의 공급은 혈청 콜레스테롤, LDL, 및 트리글리세라이드에 있어서 각각 15.3, 12.7 및 22.9 퍼센트 감소를 가지며, 지방 프로파일에 있어서 개선을 가져왔다. 이는 아디포넥틴 수준의 개선에서 관찰된 효능과 잘 일치된다.
항상성 모델 평가(Homeostasis Model Assessment, HOMA):
다음 식을 사용하여 혈청 인슐린 및 글루코오즈 수준에 근거하여 HOMA 지표를 계산하였다: 절식시 인슐린 농도(μU/mL) x 절식시 글루코오즈 농도(mmol/L)/22.5. 도 12에 나타낸 데이터는 대조군에 비하여 8주 동안 250 mg/kg의 1일 용량의 LI/DD-II/054A/01의 공급이 HOMA 지표의 유의성 있는 감소를 야기하였음을 입증해 주었다. 상기 항상성 모델 평가(HOMA)는 임상 연구에서 인슐린 저항성 및 베타-세포 기능의 측정치로서 널리 간주된다. 상기 데이터는 LI/DD-II/054A/01이 인슐린 민감성 및 β-세포 기능을 개선하는 치료제일 수 있음을 나타낸다.
상기 동물 시험에 근거하여, LI/DD-II/054A/01은 비만을 감소시킬 뿐만 아니라 체중 증가, 장내(visceral) 및 기관(organ) 지방 저장을 포함한 대사성 증후군의 다양한 증상을 개선하고 또한 지질 프로파일, 글루코오즈 항상성, β-세포 기능 등을 개선한다는 것은 명백하다. LI/DD-II/054A/01 처리에 의해 얻어진 체중 증가에 있어서의 감소는 통계적으로 유의성이 있었다. 추가적으로, 지방 조직 중량 또한 LI/DD-II/054A/01 처리군에서 유의성 있게 감소되었다. 결론적으로, LI/DD-II/054A/01은 비만, 대사성 증후군 및 다른 관련된 대사성 장애의 효과적인 치료제일 수 있다.
또한, 무작위 선별 시험(random screening studies)은 놀랍게도 가르시니아 망고스타나의 메탄올 추출물(AR 933)이 효소적 연구에서 강력한 α-아밀라아제 및 α-글루코시다아제 억제 활성을 가지며, 3T3-L1 세포에서의 세포에 기초한 시험관내 분석에서 강력한 항-지방생성 활성을 나타낸다는 것으로 나타났다. 가장 활성이 있는 화합물은 상기 메탄올 추출물의 생-분석에 기초한 분리과정에서 α-망고스틴 (2) 및 γ-망고스틴 (3)인 것으로 밝혀졌다. α-망고스틴 및/또는 γ-망고스틴을 포함하는 상기 메탄올 추출물은 또한 강력한 전구-지질분해 및 항-지방생성 활성을 나타내었다. 상기 메탄올 추출물은 또한 대사성 증후군 및 대사성 증후군과 연관된 질환 상태에서, 주로 지방생성 또는 지질 분해 과정, 제2형 당뇨병에서 인슐린 저항성의 원인이 되는 다양한 핵심 바이오마커 분자 또는 생물학적 단백질의 수준을 유의성 있게 개선하였다. 이들은 PPARγ, ADRP, 지방세포 CD36, aP2/FABP4/A-FABP, β3AR, 아디포넥틴, 페릴리핀 및 PTP-1B를 포함한다 (도 5, 8, 및 9). AR 933이 또한 고-글루코오즈로 유도된 대식세포에서 대식세포 CD36, MCP-1, 및 산화된 LDL을 강력하게 억제한다는 것을 주목하는 것은 또한 흥미롭다 (도 7). 전체적으로, 이들은 AR 933이 비만, 죽상경화증, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애와 같은 심혈관 징후를 치료하기 위한 잠재적인 후보로서 사용될 수 있음을 시사한다.
본 발명자들은 대사과정을 개선하고 대사성 증후군과 연관된 바이오마커 분자의 발현 또는 생성에 있어서 더욱 우수한 효능을 나타낼 수 있는 조성물을 찾아내기 위하여, 또한 비만, 대사성 증후군 및 대사성 증후군과 대사성 장애와 연관된 질환 상태를 조절, 치료 및 예방하기 위한 더욱 우수한 물질을 동정해내기 위하여, 몇가지 식물 추출물과 조합된 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 추출물을 포함하는 몇가지 조성물을 무작위로 제조하고 시험하였다. 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 풍부화된 분획물 또는 화합물로부터 선택된 적어도 하나의 식물화학물질 성분과 조합된, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들) 또는 분획물 또는 풍부화된 분획물(들) 또는 화합물(들)로부터 선택된 적어도 하나의 식물화학물질 성분을 포함하는 조성물이 특정 대사 과정의 개선 및 대사 과정에 관여하는 몇가지 중요한 대사성 바이오마커의 조절에 있어서 매우 효과적일 수 있음이 우연히 발견되었다.
상기 조성물에 의해 조절되는 대사 과정은 항-지방생성 및 전구-지질분해, 및 α-아밀라아제와 α-글루코시다아제 효소 억제를 포함한다. 상기 조성물에 의해 개선되는 바이오마커는 MMP-1, MMP-3, PPARγ, ADRP, 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, MCP-1, Ox-LDL, aP2/FABP4/A-FABP, β3AR, 아디포넥틴, 페릴리핀 및 PTP-1B를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
더욱 중요하게는, 특정 대사 과정의 개선 및 상기 대사 과정에 관여하는 몇몇의 중요한 대사성 바이오마커의 조절에 있어서, 각각의 성분들을 별도로 사용한 것에 비하여 이들이 조합되었을 때, 이들 두가지 생약의 추출물 사이에 상승적인 억제 효과가 존재한다는 것이 우연히 관찰되었다. 예를 들어, 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(AR 933)의 단위 용량을 1:3의 비율로 조합함으로써 얻어진 조성물 1B는 도 6, 7, 및 9에 나타낸 바와 같이 지방세포 3T3-L1 세포에서 ADRP, aP2, 페릴리핀 및 PTP-1B 및 마우스 대식세포에서 CD36, MCP-1 및 Ox-LDL과 같은 선택된 바이오바커 단백질의 상승적인 억제를 나타내었다. 추가적으로, 조성물 1B는 또한 지방세포에서 아디포넥틴 생성의 상승적인 증가를 나타내었다 (도 13). 상기 조성물에 의해 나타난 효능은 각각의 성분들에 의해 나타나는 효과에 비하여 더욱 우수하다.
시험관내 모델에서 스파란터스 인디커스 및 가르시니아 망고스타나의 추출물 및 이들의 조성물에 의해 나타난 강력한 항-비만 성질 및 상승적 효과를 생체내 비만 모델에서 추가로 평가하였다. 비만은 고지방 식이를 8주 동안 랫트에 제공함으로써 웅성 스프라그 도울리 랫트에서 유도시켰다. 8주의 유도기간 후에, 랫트를 각 군당 7마리씩 다양한 군에 무작위로 할당하고, 처리군에 속하는 동물은 각각 0.5% CMC 수용액 10 mL 중에 스파란터스 인디커스의 메탄올 추출물(LI/DD-II/054A/03)을 100 혹은 250 mg/kg 체중으로, 또는 AR 933을 250 mg/kg 체중으로, 또는 LI/DD-II/054A/03 및 AR 933을 3:1의 비율로 함유하는 조성물 1D를 250 mg/kg 체중으로, 추가로 8주 동안 매일 경구로 공급하였다. 대조군의 동물은 비히클(0.5% CMC 수용액 10 mL)만을 공급하였다. 각 동물의 체중을 매주 기록하였으며, 각 군의 동물의 평균 체중을 결정하였다. 체중 증가는 처리 시작 후 1번째 주, 4번째 주, 8번째 주에, 최초 체중과 비교하여 계산하였다. LI/DD-II/054A/03은 처리군의 랫트에서 체중 증가를 용량 의존적으로 억제하였다. LI/DD-II/054A/03을 100 mg/kg 체중으로 공급한 랫트는 대조군 동물에 비하여 체중 증가에 있어서 46.3% 감소를 나타내었다. 유사하게, 250 mg/kg의 1일 용량의 AR 933 및 LI/DD-II/054A/03은 각각 체중 증가에 있어서 41.3% 및 80.1% 감소를 나타내었다. 흥미롭게도, 동일한 용량 수준(250 mg/kg)의 조성물 1D는 비히클 처리된 대조군에 비하여 체중 증가에 있어 더욱 강력하고 유의성 있는 감소(89%)를 나타내었다. 처리군 및 대조군의 체중 증가의 결과를 도 13에 요약한다.
상기로부터, 스파란터스 인디커 메탄올 추출물(LI/DD-II/054A/03) 및 가르시니아 망고스타나의 메탄올 추출물(AR 933)을 3:1의 비율로 포함하는 조성물 1D에 의해 나타난 체중증가에 있어서의 감소는 각각의 성분 LI/DD-II/054A/03 및 AR 933에 의해 나타난 효과보다 더 우수하다는 것은 명백하며, 이는 이들 두 성분들 사이에 상승 효과를 입증해 준다.
소수의 선택된 추출물들이 본 연구에 사용되었을 지라도, 본 발명은 스파란터스 인디커스의 모든 추출물, 활성 분획물 및 활성 화합물을 포함하며, 이는 활성 성분 7-히드록시프룰라놀라이드 또는 다른 활성 성분(들)을 0.1% 내지 99.9%의 범위로 포함한다. 바람직하게는, 스파란터스 인디커스의 유기용매 추출물 또는, 7-히드록시프룰라놀라이드로의 표준화와 함께 혹은 표준화 없이, 상기 추출물로부터 유래된 분획물 또는 순수한 화합물이 사용될 수 있다. 활성 추출물을 얻기 위한 매질은 유기용매 또는 물 또는 유기용매와 물의 혼합물로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 유기용매일 수 있다. 용기용매의 예는 헥산, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸 아세테이트, 아세톤, 메탄올, 에탄올, n-부탄올, 이소프로판올, 메틸 이소부틸 케톤 등 또는 이들의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 조(crude) 조출물이 약제로서 혹은 조성물을 제조하기 위하여 사용될 수 있다. 선택적으로, 상기 추출물은 본 발명의 원하는 건강 제품을 위하여 혹은 상기 조성물을 제조하기 위하여 이들을 직접 적용하기 전에, 용매 분배 또는 세척 또는 유기 혹은 수성 용매 혹은 이들의 혼합물울 사용한 실리카 혹은 역상 실리카 혹은 수지 컬럼 상에서의 컬럼 크로마토그래피 또는 결정화 또는 이들의 조합을 사용하여, 0.1 % 내지 99.9%의 범위에서 소정 농도의 7-히드록시프룰라놀라이드 또는 하나 이상의 활성 성분으로 풍부화시킬 수 있다.
유사하게, 가르시니아 망고스타나의 메탄올 추출물이 본 발명을 입증하는데 사용되었다. 그러나, 임의의 유기용매 추출물 또는 혼합 유기용매 추출물 또는 물 추출물 또는 물과 수혼화성 유기용매를 포함한 혼합용매로 추출하여 얻어진 추출물이 또한 사용될 수 있다.
본 발명의 신규의 조성물은 아래와 같이 상이한 태양의 발명을 포함한다:
본 발명의 명세서 및 청구항에서 널리 사용되는 용어 "성분(component)"은 생약 분말(herb powders), 추출물, 분획물, 풍부화된 분획물, 활성 화합물 또는 식물화학물질(phytochemicals) 및 식품활성화학물질(phytochemical actives)을 말한다. 용어 "성분(component)"은 본 명세서에서 이하에서 이들 용어에 대한 대체용어로서 사용된다.
스파란터스 인디커스로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들), 식물화학물질 또는 이들의 혼합물은 비만, 당뇨병, 죽상경화증, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애의 예방, 치료, 및 조절을 위한 약학적/식이 보조제/식품 첨가제로서 사용될 수 있다.
본 발명에서 언급된 약학적/식이 보조제/식품 첨가제는 스파란터스 인디커스로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들), 식물화학물질 또는 이들의 혼합물을 말한다.
중요한 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상을 포함하는, 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공한다.
다른 중요한 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는, 비만, 체중 감소, 당뇨병, 죽상경화증, 동맥경화증, 심혈관 질환, 신경 질환(neurological disorders), 알츠하이머 질환, 인지 장애(cognitive disorders), 산화적 스트레스(oxidative stress), 피부 질환환(skin disorders), 피부 노화, UV 조사에 의한 손상, 고혈압, 고콜레스테롤혈증(LDL, HDL, VLDL), 고지혈증(트리글리세라이드), 면역 결핍, 암, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 질환 상태를 조절, 예방 및 치료하기 위한, 약학적/식이 보조제/식품 첨가제를 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상과 조합된, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는, 비만, 체중 감소, 당뇨병, 죽상경화증, 동맥경화증, 심혈관 질환, 신경 질환, 알츠하이머 질환, 인지 장애, 산화적 스트레스, 피부 질환, 피부 노화, UV 조사에 의한 손상, 고혈압, 고콜레스테롤혈증(LDL, HDL, VLDL), 고지혈증(트리글리세라이드), 면역 결핍, 암, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 질환 상태를 조절, 예방 및 치료하기 위한, 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상을 포함하는, 비만, 체중 감소, 당뇨병, 죽상경화증, 동맥경화증, 심혈관 질환, 신경 질환, 알츠하이머 질환, 인지 장애, 산화적 스트레스, 피부 질환, 피부 노화, UV 조사에 의한 손상, 고혈압, 고콜레스테롤혈증(LDL, HDL, VLDL), 고지혈증(트리글리세라이드), 면역 결핍, 암, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 질환 상태를 조절, 예방 및 치료하기 위한, 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상을 포함하는, 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(Matrix Metalloproteinase-1, MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3), C-반응성 단백질(C-reactive protein, CRP), PPAR-γ, 지방분화관련 단백질(Adipose Differentiation Related Protein, ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(Monocyte Chemotactic protein, MCP-1), 산화된 LDL, 지방세포 지방산-결합 단백질(Adipocyte Fatty-acid-Binding Protein, aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(beta-3 adrenergic receptor, β3-AR), 아디포넥틴(adiponectin), 페릴리핀(Perilipin) 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(Protein tyrosine phosphatase 1B, PTP 1B)로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 적어도 하나의 바이오마커 단백질의 발현 혹은 생성을 개선하기 위한, 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3), C-반응성 단백질(CRP), PPAR-γ, 지방분화관련 단백질(ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(MCP-1), 산화된 LDL, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3-AR), 아디포넥틴, 페릴리핀 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(PTP 1B)로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 대사성 증후군, 비만, 및 다른 대사성 장애와 관련되거나 연관된 적어도 하나의 바이오마커 단백질의 발현 혹은 생성을 개선하기 위한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 및 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상과 조합된 적어도 하나의 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 성분을 포함하는 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 지질분해(lipolysis)의 촉진, 지방생성(adipogenesis)의 억제, 알파-아밀라아제의 억제 및 알파-글루코시다아제의 억제로부터 선택된 하나 이상의 대사 과정을 조절하기 위한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 및 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상과 조합된 이들의 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는, 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물로서, 상기 조성물 중 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 성분의 백분율이 0.01% 내지 99.9%의 범위이고, 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 성분의 백분율이 99.9% 내지 0.01%의 범위인 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상과 조합된, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물로서, 상기 조성물 중 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 성분의 백분율이 0.01% 내지 99.9%의 범위인 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 상기 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물은 프룰라놀라이드(frullanolides), 7-히드록시프룰라놀라이드(7-hydroxyfrullanolide); 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시-4,5-에폭시-6β,7-유데스마놀라이드(1lα,13-dihydro-3α,7α-dihydroxy-4,5-epoxy-6β,7-eudesmanolide); 11α,13-디히드로-7α-아세톡시-3β-히드록시-6β,7-유데스므-4-에놀라이드(11α,13-dihydro-7α-acetoxy-3β-hydroxy-6β,7-eudesm-4-enolide); 3-케토-β-유데스몰(3-keto-β-eudesmol); 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시유데스므-4-엔-6α,12-올라이드(11α,13-dihydro-3α,7α-dihydroxyeudesm-4-en-6α,12-olide); 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시프룰라놀라이드(11α,13-dihydro-3α,7α-dihydroxyfrullanolide); 11α,13-디히드로-7α,13-디히드록시프룰라놀라이드(11α,13-dihydro-7α,13-dihydroxyfrullanolide); 11α,13-디히드로-7α-히드록시-13-메타옥시프룰라놀라이드(11α,13-dihydro-7α-hydroxy-13-methaoxyfrullanolide); 2α,7α-디히드록시-4-엔-11,13-디히드로유데스므-6,12-올라이드(2α,7α-dihydroxy-4-en-11,13-dihydroeudesm-6,12-olide); 2α-히드록시코스틱 산(2α-hydroxycostic acid); 3-케토-7α-히드록시유데스므-4-엔-6,12-올라이드(크립토메리디올)[3-keto-7α-hydroxyeudesm-4-en-6,12-olide (cryptomeridiol)]; 4-에피크립토메리디올(4-epicryptomeridiol); 스파란타놀라이드(sphaeranthanolide); 2α-히드록시스파란톨라이드(2α-hydroxysphaerantholide); 2α-아세톡시스파란톨라이드(2α-acetoxysphaerantholide); 2α,7α-디히드록시스파란톨라이드(2α,7α-dihydroxysphaerantholide); 2α-아세톡시-7α-히드록시스파란톨라이드(2α-acetoxy-7α-hydroxysphaerantholide); 2α-아세톡시-5α-히드록시이소스파란톨라이드(2α-acetoxy-5α-hydroxyisosphaerantholide) 또는 이들의 혼합물로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 적어도 1종의 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 프룰라놀라이드/유데스마노이드 세스퀴테르펜 화합물을 포함하며, 바람직하게는 7-히드록시프룰라놀라이드로 알려져 있는 7-α-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드(7-α-hydroxy-4,11(13)-eudesmadien-12,6-olide) 또는 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 관련 화합물 또는 그의 유사체를 포함한다.
다른 태양에서, 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상과 조합된, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물은 프룰라놀라이드, 7-히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시-4,5-에폭시-6β,7-유데스마놀라이드; 11α,13-디히드로-7α-아세톡시-3β-히드록시-6β,7-유데스므-4-에놀라이드; 3-케토-β-유데스몰; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시유데스므-4-엔-6α,12-올라이드; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-7α,13-디히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-7α-히드록시-13-메타옥시프룰라놀라이드; 2α,7α-디히드록시-4-엔-11,13-디히드로유데스므-6,12-올라이드; 2α-히드록시코스틱 산; 3-케토-7α-히드록시유데스므-4-엔-6,12-올라이드(크립토메리디올); 4-에피크립토메리디올; 스파란타놀라이드; 2α-히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시스파란톨라이드; 2α,7α-디히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시-7α-히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시-5α-히드록시이소스파란톨라이드 또는 이들의 혼합물로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 적어도 1종의 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 프룰라놀라이드/유데스마노이드 세스퀴테르펜 화합물을 포함하며, 바람직하게는 7-히드록시프룰라놀라이드로 알려져 있는 7-α-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드 또는 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 관련 화합물 또는 그의 유사체를 포함한다.
다른 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 성분(들) 및 상기한 바와 같은 이들의 조성물을 제공하며, 여기에서 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애의 예방, 치료 및 조절을 위한 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 성분 중 상기 활성 화합물은 프룰라놀라이드/유데스마노이드 세스퀴테르펜, 바람직하게는 7-히드록시프룰라놀라이드로 알려져 있는 7-α-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애의 예방, 치료 및 조절을 위하여 또는 본 발명의 조성물을 제조하기 위하여 사용되는 상기 7-히드록시프룰라놀라이드 또는 그의 관련 화합물은 천연적으로 유래될 수 있거나 혹은 합성 또는 반합성을 통하여 제조될 수 있다.
다른 태양에서, 본 발명은 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애의 예방, 치료 및 조절을 위하여 또는 본 발명의 조성물을 제조하기 위하여 사용되는 추출물, 분획물, 활성 화합물, 및 식물화학물질, 또는 이들이 혼합물로부터 선택된 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 성분을 제공하며, 여기서 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 및 분획물 중의 활성 화합물인 7-히드록시프룰라놀라이드/다른 프룰라놀라이드/유데스마노이드 세스퀴테르펜(들)/다른 식물화학물질들의 농도는 0.001% 내지 100%의 범위, 바람직하게는 0.01 내지 99%의 범위이다.
다른 태양에서, 상기 구현예에서 기술된 바와 같은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 유래의 성분을 포함하는 조성물 중의 활성 화합물인 7-히드록시프룰라놀라이드/다른 프룰라놀라이드/유데스마노이드 세스퀴테르펜(들)/다른 식물화학물질들의 농도는 0.001 중량% 내지 99 중량%의 범위, 바람직하게는 0.01 내지 95 중량%의 범위이다.
다른 태양에서, 본 발명은 비만, 대상성 증후군 및 다른 대사성 장애의 조절, 예방, 및 치료를 위한 가르시니아 종, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 성분을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 상기 활성 화합물은 산톤류(xanthones), 바람직하게는 α-망고스틴 및 γ-망고스틴을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 기술된 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물, 분획물, 풍부화된 분획물, 화합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana) 유래의 추출물(들) 또는 분획물(들) 중의 활성 화합물 α-망고스틴 및 γ-망고스틴의 농도는, 각각 혹은 함께, 0.001% 내지 99.9%의 범위이다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 기술된 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물, 분획물, 풍부화된 분획물, 화합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물 중의 활성 화합물 α-망고스틴 및 γ-망고스틴의 농도는, 각각 혹은 함께, 0.001% 내지 99%의 범위, 바람직하게는 0.01 내지 95%의 범위이다.
다른 태양에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는, 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3), C-반응성 단백질(CRP), PPAR-γ, 지방분화관련 단백질(ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(MCP-1), 산화된 LDL, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3-AR), 아디포넥틴, 페릴리핀 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(PTP 1B)로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 적어도 하나의 대사성 바이오마커 분자의 발현 또는 생성을 개선하기 위한, 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 원하는 건강상 이익(health benefits)을 얻기 위한 대사 과정의 개선이 지질분해, 지방생성, 지방 분해(fat breakdown), 지방 세포 재생으로부터 선택될 수 있거나 혹은 이들과 연관되거나 관련된 다른 메커니즘에 의한 것으로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않는, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 또는 이들의 조성물을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 비만, 체중 감소, 당뇨병, 죽상경화증, 대사성 증후군 및 기타 대사성 장애로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 질환 상태를 조절, 예방 및 치료하기 위한, 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된, 프룰라놀라이드/유데스마놀라이드 및 관련 화합물, 바람직하게는 7-히드록시프룰라놀라이드 혹은 이의 유사체 또는 상기 화합물들을 포함하는 조성물을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3), C-반응성 단백질(CRP), PPAR-γ, 지방분화관련 단백질(ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(MCP-1), 산화된 LDL, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3-AR), 아디포넥틴, 페릴리핀 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(PTP 1B)로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 적어도 하나의 대사성 바이오마커 분자의 발현 또는 생성을 개선하기 위한, 프룰라놀라이드/유데스마놀라이드 및 관련 화합물, 바람직하게는 7-히드록시프룰라놀라이드 또는 그의 유사체, 또는 상기한 바와 같이 상기 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질들 또는 이들의 혼합물이 알파-아밀라아제 및 알파-글루코시다아제를 포함하나 이에 제한되지 않는 탄수화물 흡수 억제 효소에 대하여 억제활성을 나타내고, 지방생성의 억제 활성을 나타내는, 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana) 유래의 성분을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 태양에서, 상기 구현예에 기술된 조성물을 제조하기 위하여 사용되는 생물학적으로 활성인 성분은 항-당뇨병 활성, 항-고혈당 활성, 저지혈증 활성(hypolipidemic activity), 항-비만 활성, 항-고혈압 활성, 항-혈소판응집 활성, 항-감염 활성, 항-죽상경화 활성 및 항염증 활성, 항-산화제(들) 및 생-증진(bio-enhancing) 활성으로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 건강상 이익을 갖는, 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 추출물 혹은 분획물 혹은 순수한 화합물 혹은 식물화학물질 혹은 분말로부터 선택될 수 있다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 기술된 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 약학적/식이 보조제/식품 첨가제를 제공하며, 여기서 상기 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물은 잎, 꽃머리(flower heads), 줄기, 껍질, 뿌리, 전체 식물(whole plant) 또는 이들의 혼합물로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 식물 부위 중 적어도 하나로부터, 바람직하게는 꽃머리로부터 유래된다.
본 발명의 다른 태양에서, 상기 구현예에 기술된 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 및 이들의 조성물이 제공되며, 여기서 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물은 1종 이상의 유기용매, 알코올, 히드로알코올, 물 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 용매를 사용한 추출을 통하여 얻어진다.
본 발명의 다른 태양에서, 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성화합물(들) 또는 식물화학물질들 또는 이들의 혼합물은 가르시니아(Garcinia) 종, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)의 전체 과실 혹은 과실 껍질 혹은 과실 펄프(fruit pulp)로부터 유래된다.
다른 구현예에서, 상기 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성화합물(들) 또는 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus), 스파란터스 아마란토이데스(Sphaeranthus amaranthoides), S. 아프리카누스(S. africanus), S. 볼젠시스(S. volgensis), S. 코취이(S. kotchyi), S. 수아베올렌스(S. suaveolens)로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 스파란터스 종으로부터 유래될 수 있으며, 원하는 건강 제품을 위해 혹은 본 발명에서 특허청구된 성분 또는 조성물을 제조하기 위하여 사용될 수 있다.
다른 구현예에서, 상기 조성물을 제조하기 위하여 사용되는 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성화합물(들) 또는 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물은 가르시니아 캄보기아(Garcinia cambogia), G. 한부리이이(G. hanburyii), G. 스콤부르그키아나(G. schomburgkiana), G. 듈시스(G. dulcis), G. 토렐리이(G. thorelii), G. 산토키무스(G. xanthochymus), G. 코와(G. cowa), G. 브락테아타(G. bracteata), G. 피리페라(G. pyrifera) 및 G. 네르보사(G. nervosa)를 포함하나 이에 제한되지 않는 다른 가르시니아 종으로부터 유래될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 생물학적으로 또는 약학적으로 허용가능한 담체의 예는 계면활성제, 첨가제, 결합제, 희석제, 붕해제, 활택제, 보존제, 안정화제, 완충액, 현탁제 및 약물 수송체를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 기술된 바와 같이, 첨가제, 담체, 및 희석제로부터 선택된 적어도 하나의 성분과 조합된, 적어도 하나의 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성화합물(들) 또는 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물을 포함하는 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 조성물을 제공하며, 여기에서 상기 고체 담체 또는 희석제 또는 첨가제의 바람직한 예는 글루코오즈, 프럭토오즈, 수크로오즈, 말토오즈, 황색 덱스트린, 백색 덱스트린, 에어로졸, 미결정 셀룰로오즈, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 솔비톨, 스테비오사이드, 옥수수 시럽, 락토오즈, 구연산, 타르타르산, 말산, 숙신산, 락트산, L-아스코르브산, dl-알파-토코페롤, 글리세린, 프로필렌글리콜, 글리세린 지방 에스테르, 폴리 글리세린 지방 에스테르, 수크로오즈 지방 에스테르, 솔비탄 지방 에스테르, 프로필렌글리콜 지방 에스테르, 아카시아, 카라기난, 카제인, 젤라틴, 펙틴, 한천, 비타민 B군, 니코틴아미드, 칼슘 판토테네이트, 아미노산, 칼슘 염, 염료(pigments), 향료 및 보존제를 포함하나 이에 제한되지 않고, 액체 담체 또는 희석제 또는 첨가제의 바람직한 예는 증류수, 식염수, 수성 글루코오즈 용액, 알코올(예를 들어, 에탄올), 프로필렌글리콜 및 폴리에틸렌글리콜; 및 다양한 동물성 및 식물성 오일, 백색 연질 파라핀, 파라핀 및 왁스와 같은 오일성 담체를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 언급한 바와 같이 약학적/식이 보조제(들) 또는 이들의 조성물(들)을 제공하며, 여기서 상기 성분 또는 조성물은 이를 필요로 하는 환자, 포유동물 혹은 온혈동물에게 경구로, 국소로, 혹은 비경구로, 혹은 흡입에 의해 투여된다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 언급한 바와 같이 약학적/식이 보조제(들) 또는 이들의 조성물(들)을 제공하며, 여기서 상기 성분 또는 조성물은 정제, 연질캡슐제, 경질캡슐제, 환제, 과립제, 산제, 에멀젼, 현탁액, 시럽, 펠렛, 식품, 음료 등과 같은 경구제; 주사용액제, 점적제, 좌제 등과 같은 비경구제; 및 패치, 국소용 크림 및 겔과 같은 경피제, 및 식품 첨가제 또는 음료로서 제제화될 수 있다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 기술된 바와 같이, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 약학적/식이 보조제/식품 성분 또는 이들의 조성물의 치료학적으로 유효한 양을, 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 질환 상태의 조절/예방/치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 질환 상태의 조절/예방/치료 방법을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 기술된 바와 같이, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 적어도 1종의 약학적/식이 보조제/식품 성분 또는 이들의 조성물의 치료학적으로 유효한 양을, 지질분해의 촉진 및/또는 지방생성의 억제를 필요로 하는 환자 또는 포유동물 또는 온혈동물에게 투여하는 것을 포함하는, 지질분해의 촉진 및/또는 지방생성의 억제 방법을 제공한다.
가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 하나의 성분 또는 상기 G. 망고스타나(G. mangostana)로부터 유래된 성분(들)을 포함하는 조성물의 치료학적으로 유효한 양을, 지방생성 억제 또는 알파-아밀라아제 및/또는 알파-글루코시다아제로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 소화 효소 억제를 필요로 하는 환자 또는 포유동물 또는 온혈동물에게 투여하는 것을 포함하는 지방생성 억제 또는 알파-아밀라아제 및/또는 알파-글루코시다아제로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 소화 효소 억제 방법.
다른 구현예에서, 본 발명은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 및 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 또는 이들의 조성물, 바람직하게는 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하고, 선택적으로 식물, 동물 및 미생물로부터 유래된 생물학적으로 활성인 성분들, 약학적으로 혹은 식이적으로 허용가능한 활성 성분, 비타민, 미네랄, 비이클, 담체, 및 희석제 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 조성물의 치료학적으로 유효한 양을 비만, 당뇨병, 대사성 증후군 또는 다른 대사성 장애의 치료를 필요로 하는 환자 또는 동물에게 투여하는 것을 포함하는, 비만, 당뇨병, 대사성 증후군 또는 다른 대사성 장애의 치료방법을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3), C-반응성 단백질(CRP), PPAR-γ, 지방분화관련 단백질(ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(MCP-1), 산화된 LDL, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3-AR), 아디포넥틴, 페릴리핀 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(PTP 1B)를 포함하나 이에 제한되지 않는 생물학적 마커의 발현 혹은 생성을 개선하기 위한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 성분 및 이들의 조성물의 사용방법을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 상기 구현예에서 기술된 바와 같이 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 하나의 성분 및 이들의 조성물의 치료학적으로 유효한 양을, 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3), PPAR-γ, 지방분화관련 단백질(ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(MCP-1), 산화된 LDL, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3-AR), 아디포넥틴, 페릴리핀 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(PTP 1B)를 포함하나 이에 제한되지 않는 생물학적 마커 분자의 발현 혹은 생성의 개선을 필요로 하는 환자 또는 동물에게 투여하는 것을 포함하는, 매트릭스 메탈로프로티나아제-1(MMP-1), 매트릭스 메탈로프로티나아제-3(MMP-3), PPAR-γ, 지방분화관련 단백질(ADRP), 지방세포 CD36, 대식세포 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질(MCP-1), 산화된 LDL, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2/FABP4/A-FABP), 베타-3 아드레날린 수용체(β3-AR), 아디포넥틴, 페릴리핀 및 단백질 타이로신 포스파타아제 1B(PTP 1B)를 포함하나 이에 제한되지 않는 생물학적 마커 분자의 발현 혹은 생성의 개선 방법을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 지질분해 촉진, 지방생성 활성 억제, 지방 분해, 지방 세포 재생으로부터 선택되거나 또는 이들과 연관되거나 관련된 다른 메커니즘에 의한 하나 이상의 대사 과정을 개선하기 위한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물과 같은 식물화학 성분 또는 상기 스파란터스 인디커스로부터 유래된 성분들을 포함하는 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 알파-아밀라아제 및/또는 알파-글루코시다아제와 같은 탄수화물 분해 효소를 억제하기 위한, 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물과 같은 성분 및 이들의 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 항-지방생성 활성을 통하여 비만 및 대사성 증후군의 치료를 위한, 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들) 또는 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질(들) 또는 이들의 혼합물과 같은 성분을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 비만, 당뇨병, 대사성 증후군 또는 대사성 증후군과 연관된 질환 상태의 예방 및 치료를 위하여 알파-아밀라아제 억제, 알파-글루코시다아제 억제와 같은 소화 효소 억제/탄수화물 흡수 억제를 위한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들) 또는 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 활성 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분을 포함하는 조성물을 제공한다.
다른 태양에서, 본 발명은 항-지방생성 활성, 지질분해 촉진, 지방 분해, 지방 세포 재생 혹은 이들과 연과되거나 관련된 다른 메커니즘을 위하여, 상기 구현예에서 기술된 바와 같이, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 약학적/식이 보조제/식품 첨가제 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 1종의 성분과 조합된 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기에서 기술된 바와 같은 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 성분 또는 이들의 조성물은 피퍼 니그룸(Piper nigrum) 추출물(들) 및 피퍼 롱굼(Piper longum)으로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 순수 화합물(들), 피페린(piperine)로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 생체이용율 증진제(bio-availability enhancing agents)와 선택적으로 조합될 수 있다.
본 발명의 선택적인 태양에서, 본 발명에서 특허청구되는 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 성분 또는 이들의 조성물은 나노기술, 마이크로캡슐화, 콜로이드 담체 시스템, 및 당업계에 공지된 다른 약물 수송체를 포함한 기술에 의한 방출 조절 폴리머계 코팅(controlled release polymer-based coatings)을 사용하여 방출 조절 정제(controlled release tablets)의 형태로 수송된다. 상기 제제는 매일 1회 투여 또는 1일당 복수회 투여를 위하여 설계될 수 있다.
본 발명의 다른 태양에서, 본 발명에서 특허청구되는 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 성분 또는 이들의 조성물은 또한, 비만, 체중 감소, 당뇨병, 죽상경화증, 동맥경화증, 심혈관 질환, 신경 질환, 알츠하이머 질환, 인지 장애, 산화적 스트레스, 피부 질환, 피부 노화, UV 조사에 의한 손상, 고혈압, 고콜레스테롤혈증(LDL, HDL, VLDL), 고지혈증(트리글리세라이드), 면역 결핍, 암, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애를 포함하나 이에 제한되지 않는 몇몇의 질환을 조절, 예방 및 치료하기 위하여, 기존의 혹은 새로운 식품 및 음료 형태(들) 및 건강 식품 또는 음료 또는 사료와 같은 동물 사료로 제제화되거나 혹은 첨가될 수 있다.
하나 이상의 비만, 대사성 증후군 및 다른 대사성 장애와 관련된 효소, 대사성 생물학적 마커 및 대사 과정에 대한, 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물(들), 분획물(들), 활성 화합물(들) 또는 식물화학물질 또는 이들의 혼합물과 조합된 조성물의 예치치 못한 또한 우수한 개선 효과는 하기 비-제한적인 실시예에 의해 설명된다.
실시예 1
스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01): 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 꽃머리(2.2 kg)를 파일로트 추출기에 넣고, 에틸 아세테이트(22 L)를 사용하여 환류 온도에서 2 시간 동안 추출하였다. 상기 추출물을 여과하고, 사용된 원료 물질을 유사한 조건하에서 에틸 아세테이트로 2회 재추출하였다(2 x 13 L). 추출물을 합하여 미세여과하고, 상승막형 증발기(climbing film evaporator) 상에서 농축하여 잔류물(174 g)을 얻었다. 상기 에틸 아세테이트 추출물은, HPLC 분석 방법으로, 11%의 7-히드록시-4,11(13)-유데스마디엔-12,6-올라이드(7-히드록시프룰라놀라이드)를 나타내었다.
실시예 2
스파란터스 인디커스 헥산 추출물(LI/DD-II/054A/02): 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 꽃머리(1.0 kg)를 속스렛 장치(Soxhlet apparatus)에 넣고, 헥산(6 L)을 사용하여 환류 온도에서 4 시간 동안 추출하였다. 상기 추출물을 미세여과하고, 사용된 원료 물질을 헥산으로 2회 재추출하였다(2x4 L). 추출물을 합하고, 진공하에서 농축하여 잔류물(43 g)을 얻었다. 상기 헥산 추출물은, HPLC 분석 방법으로, 21%의 7-히드록시프룰라놀라이드를 나타내었다.
실시예 3
스파란터스 인디커스 메탄올 추출물(LI/DD-II/054A/03): 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 꽃머리(1.0 kg)를 RB 플라스크에 넣고, 메탄올(8 L)을 사용하여 80℃ 온도에서 2 시간 동안 추출하였다. 상기 추출물을 여과하고, 사용된 원료 물질을 유사한 조건하에서 에틸 아세테이트로 2회 재추출하였다(2 x 6 L). 추출물을 합하여 미세여과하고, 상승막형 증발기 상에서 농축하여 잔류물(110 g)을 얻었다. 상기 메탄올 추출물(LI/DD-II/054A/03)은, HPLC 분석 방법으로, 8.3%의 7-히드록시프룰라놀라이드를 나타내었다.
실시예 4
7- 히드록시프룰라놀라이드의 정제( LI054A01 ): 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus) 꽃머리의 에틸 아세테이트 추출물(90 g)을, 헥산으로부터 아세톤으로 극성을 증가시키는 용리제를 사용하여, 실리카 컬럼 상에서 크로마토그래피하였다. 20% 아세톤/헥산으로 용리된 분획물들을 합하고, 진공하에서 증발시켜 63%의 7-히드록시프룰라놀라이드를 함유하는 잔류물(16 g)을 얻었다. 상기 잔류물을 헥산으로부터 에틸 아세테이트로 극성을 증가시키는 용매를 사용하여, 실리카 상에서 다시 크로마토그래피하였다. 20-25% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리된 분획물들을 합하여 증발시키고, 잔류물을 아세토니트릴로부터 침전시켜 반-순수한 7-히드록시프룰라놀라이드(91%)를 얻었다. 상기 잔류물을 클로로포름/헥산 혼합물을 사용하여 실리카 컬럼 상에서 최종적으로 정제하였다. 25-35% 클로로포름/헥산으로 용리된 분획물들을 합하고, 증발시켜 순수한 7-히드록시프룰라놀라이드를 얻었다(7.3 g, 99%).
실시예 5
가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물( AR 933): 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)의 그늘진 곳에서 건조시킨 과실 껍질(1 Kg)을 거친 분말로 분쇄하고, 메탄올(5L)을 사용하여 2 시간 동안 60-65 ℃에서 추출하였다. 여과에 의하여 상기 원료 물질로부터 용매를 분리하였다. 추출 과정은 메탄올을 사용하여 3회 반복하였다(2x3 L 및 1x2 L). 추출물들을 합하여 미세여과하고, 감압하에서 농축하고, 실온에서 침전시켰다. 분리된 고체를 여과하여 건조 분말((165 g, α-망고스틴: 32% 및 γ-망고스틴: 3%)을 얻었다.
실시예 6
α- 망고스틴 및 γ- 망고스틴의 정제: 32% α-망고스틴을 함유한 G. 망고스타나의 메탄올 추출물(90 g)을 클로로포름으로부터 메탄올로 극성을 증가시키는 용리제를 사용하여 실리카 컬럼 상에서 크로마토그래피하였다. 10-15% 메탄올/클로로포름으로 용리된 분획물들을 모니터하고, α-망고스틴을 함유하는 분획물을 합하여 진공하에서 증발시키고, 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 혼합물로부터 결정화하여 99%의 α-망고스틴을 함유하는 잔류물(20 g)을 얻었다. 25% 메탄올/클로로포름으로 용리된 분획물들을 모니터하고, γ-망고스틴을 함유하는 분획물을 합하여 진공하에서 증발시키고, 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 혼합물로부터 결정화하여 99%의 γ-망고스틴을 함유하는 잔류물(2.1 g)을 얻었다.
실시예 7
조성물 1A, 조성물 1B, 조성물 1C 및 조성물 1D의 제조방법:
조성물 1A는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다: 3 중량부의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01, 3 g) 및 1 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(AR933, 1g).
조성물 1B는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다: 1 중량부의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(1 g) 및 3 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(3 g).
조성물 1C는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다: 1 중량부의 스파란터스 인디커스 메탄올 추출물(1 g) 및 3 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(3g).
조성물 1D는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다: 3 중량부의 스파란터스 인디커스 메탄올 추출물(3 g) 및 1 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(1 g).
실시예 8
조성물 2A, 2B 및 2C의 제조방법:
조성물 2A: 조성물 2A는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다:
2 중량부의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(2 g) 및 1 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(1g).
조성물 2B: 조성물 2B는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다:
1 중량부의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물 (1 g) 및 2 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물 (2 g)
조성물 2C: 조성물 2C는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다:
1 중량부의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물 (1 g) 및 1 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물 (1 g)
실시예 9
조성물 2D 및 2E의 제조방법:
조성물 2D: 조성물 2D는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다:
4 중량부의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물 (4 g) 및 1 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물 (1 g).
조성물 2E: 조성물 2E는 하기 성분들의 단위 용량을 혼합하여 제조하였다:
1 중량부의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물 (1 g) 및 4 중량부의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물 (4 g).
실시예 10
고라크문디 ( Gorakhmundi ) 추출물에 의한 매트릭스 메탈로프로티나아제 -1(MMP-1)의 억제: MMP-1은 PMA로 유도시킨 인간 흑색종 세포 A2058에서 평가하였다. 즉, 상기 세포를 2 mM 글루타민, 100 U/mL 페니실린, 100 mg/mL 스트렙토마이신 및 10% 우태아혈청(Hyclone, Logan, UT)을 갖는 둘베코의 변형된 이글스 배지(Dulbecco's Modified Eagles Medium, DMEM)에서 배양하였다. 실험 하루 전에, 웰당 5000개의 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트(Corning, USA)에 접종하였다. 상기 배양 배지를 10% 우태아혈청을 함유하는 신선한 DMEM으로 교체하였다. 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)을 0.1 내지 10 ㎍/ml의 범위로 배지 중에서 차례로 희석하고, 2시간 동안 5% CO2, 37℃에서 세포와 함께 전-배양한 다음, 50 mM의 PMA로 24 시간 동안 자극하였다. 상등액을 수확하고, MMP-1 ELISA 전개 키트(R&D System, Minneapolis, MN, USA)에 의한 MMP-1 생성을 측정하는데 사용하였다. 배양 상등액 중의 MMP-1 농도는 기지 농도의 MMP-1으로부터 생성된 표준 곡선에 광학 밀도를 대입함으로써 정량적으로 측정하였다.
상이한 농도의 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)의 억제 효과를 도 1에 도시한다. MMP-1의 50% 억제를 위한 억제 농도(IC50)를 농도에 대한 퍼센트 억제를 도시하여 구축된 곡선으로부터 계산하였다. 상기 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)은 10.14 ㎍/mL의 IC50 값을 나타내었다. 유사한 방법을 사용하여, 순수한 화합물 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)의 IC50 값은 1.2 ㎍/mL인 것으로 밝혀졌다.
실시예 11
고라크문디 ( Gorakhmundi ) 추출물에 의한 매트릭스 메탈로프로티나아제 -3(MMP-3)의 억제: MMP-3는 인터루킨-1β로 유도시킨 인간 폐암 세포주 A549에서 평가하였다. 즉, 상기 세포를 2 mM 글루타민, 100 U/mL 페니실린, 100 mg/mL 스트렙토마이신 및 10% 우태아혈청(Hyclone, Logan, UT)을 갖는 DMEM에서 배양하였다. 실험 하루 전에, 웰당 5000개의 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트(Corning, USA)에 접종하였다. 상기 배양 배지를 10% 우태아혈청을 함유하는 신선한 DMEM으로 교체하였다. 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)을 0.1 내지 10 ㎍/ml의 범위로 배지 중에서 차례로 희석하고, 2시간 동안 5% CO2, 37℃에서 세포와 함께 전-배양한 다음, 10 ng/mL 인간 IL-lβ (R&D System, Minneapolis, MN)로 24 시간 동안 자극하였다. 상등액을 수확하고, ELISA 전개 키트(R&D System, Minneapolis, MN, USA)에 의한 MMP-3 생성을 측정하는데 사용하였다. 배양 상등액 중의 MMP-3 농도는 기지 농도의 MMP-3으로부터 생성된 표준 곡선에 광학 밀도를 대입함으로써 정량적으로 측정하였다. MMP-3의 50% 억제를 위한 억제 농도(IC50)를 농도에 대한 퍼센트 억제를 도시하여 구축된 곡선으로부터 계산하였다. 상기 스파란터스 인디커스의 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)은 MMP-3에 대하여 0.36 ㎍/mL의 IC50 값을 나타내었다. 상기 데이터를 도 2에 요약한다. 유사한 방법을 사용하여, 순수한 화합물 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)의 IC50 값은 0.075 ㎍/mL인 것으로 밝혀졌다.
실시예 12
스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드( LI054A01)에 의한 분화된 지방세포 중의 지질 축적의 억제 평가: 10% 우태아혈청(FBS)을 함유하는 둘베코의 변형된 이글스 배지(DMEM) 중의 100,000 개의 3T3-L1 인간 전구-지방세포를 24-웰 플레이트의 각 웰에 취하고, 48시간 동안 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다. 전구-지방세포의 분화는 10 ㎍/ml 인슐린, 1.0 μM 덱사메타손, 및 0.5 mM 이소부틸메틸산틴(IBMX)을 함유하는 분화 배지 중에서 48시간 동안 개시시켰다. 이후, 상기 배지를 lO ㎍/ml 인슐린을 함유하는 DMEM으로 교체하고, 3일 동안 배양하였다. 이후, 분화한 세포를 10 ㎍/ml의 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 0.5 ㎍/ml of 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)로 처리하고, 추가로 3-5일 동안 배지에서 유지시켰다. 0.1% DMSO와 함께 배양된 세포를 비히클 대조군으로 간주하였다. 배양 기간 후에, 세포를 인산 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척하고, 10% 완충된 포르말린을 사용하여 1시간 동안 실온에서 고정하였다. 혈구계 챔버(hemocytometer chamber)에서 세포수를 계수하기 위하여 세포 현택액 중 소량(one small aliquot)을 분리하였다. 고정된 세포는 오일 레드 O(Oil Red O) 용액으로 염색하여 세포의 중성 지질 축적을 측정하였다. 즉, 세포를 PBS로 세척하고, 10% 완충된 포르말린으로 고정하고, 오일 레드 O 용액(100 ml 이소프로판올 중 0.5 g)을 사용하여 10분 동안 염색하였다. 염색 용액을 제거한 후, 세포에 보유된 염료를 이소프로판올로 용리시키고, 550 nm에서 OD를 측정하였다. 처리된 세포 중 지방 축적의 억제를 모의-처리된(mock treated) 분화된 지방세포와 비교하였다. 처리된 세포 및 대조군 세포를 또한 분석하고, 현미경 하에서 육안적으로 지질 축적의 억제를 비교하고, 적합한 이미지 저장 시스템에서 디지털로 기록하였다. 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 LI054A01에 의해 나타난 항-지방생성 활성을 다음 표에 요약한다.
스파란터스 인디커스의 항-지방생성 활성
S. No 생성물 명칭 지질 축적의 % 억제
1 LI/DD-II/054A/01 10 ㎍/ml에서 65.9%
2 LI054A01 0.5 ㎍/ml에서 68.7%
실시예 13
분화된 지방세포에서 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7- 히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)의 전구-지질분해(pro-lipolytic) 활성의 평가: 지질분해 활성은 Chemicon International (미국)의 방법에 따라 성숙한 지방세포에서, 배양액으로 분비되는 유리 글리세롤을 측정함으로써 평가하였다. 10% 우태아혈청(FBS)을 함유하는 둘베코의 변형된 이글스 배지(DMEM) 중의 100,000 개의 3T3-L1 인간 전구-지방세포를 24-웰 플레이트의 각 웰에 취하고, 48시간 동안 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다. 전구-지방세포의 분화는 10 ㎍/ml 인슐린, 1.0 μM 덱사메타손, 및 0.5 mM 이소부틸메틸산틴(IBMX)을 함유하는 분화 배지 중에서 개시시켰다. 상기 세포를 5일 동안 분화시킨 다음, 배양 배지를 제거하였다. 단일층(monolayer)을 세척 용액(한크의 평형 염 용액(Hank's balanced salt solution))으로 2회 세척한 다음, 250 μL의 인큐베이션 용액(한크의 평형 염 용액 + 2% 우혈청 알부민)을 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)의 존재 또는 비존재하에서 3개씩(in triplicate) 상기 웰에 가하고, 상기 세포를 추가로 16시간 동안 배양하였다. 지질분해를 측정하기 위하여, 200 μL의 유리 글리세롤 분석 시약을 25 μL의 배양 상등액 및 글리세롤 표준품을 함유하는 대조군에 가하였다. 샘플 및 대조군을 15분 동안 인큐베이션하고, 540 nm에서 흡광도를 읽었다. 글리세롤로부터 부터 구축된 표준 곡선을 사용하여 배양 상등액 중의 유리 글리세롤의 농도를 계산하였다. 기지 농도의 글리세롤을 함유하는 대조군과 비교한 샘플 용액 중의 글리세롤 농도의 퍼센트 증가는 LI/DD-II/054A/01 또는 LI054A01에 의한 지질분해의 퍼센트 촉진에 대응된다. LI/DD-II/054A/01 및 LI054A01에 의해 촉진된 지질분해의 퍼센트 증가를 표 2에 요약한다.
스파란터스 인디커스의 전구-지질분해 활성
S. No 생성물 명칭 지질 분해의 % 촉진
1 LI/DD-II/054A/01 25 ㎍/ml에서 26.7%
2 LI054A01 5 ㎍/ml에서 47.8%
실시예 14
스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드( LI054A01)에 의한, 3 T3 - L1 지방세포에서 퍼옥시좀 증식제 -활성화 수용체 감마( PPAR γ), 지방분화관련 단백질( ADRP ), CD36 , 지방세포 지방산-결합 단백질( aP2 ), 베타-3 아드레날린 수용체(β3 AR ), 및 페릴리핀의 억제:
실험 프로토콜: 마우스 전구-지방세포 3T3-L1 세포를 2 mM 글루타민, 4.5g/L 글루코오즈 및 10% 우태아혈청으로 보충된 둘베코의 변형된 이글스 배지(DMEM)에서 유지시켰다. 동일한 수의 세포를 24-웰 배양 플레이트의 각 웰에 넣었다. 세포를 2.5, 5 및 10 ㎍/mL의 LI/DD-II/054A/01 또는 1 ㎍/mL 7-히드록시프룰라놀라이드로 2시간 동안 각각 전처리한 다음, 500 nM 인슐린, 1.0 μM 덱사메타손, 및 0.5 mM 이소부틸메틸산틴(IBMX)을 함유하는 분화 배지를 48시간 동안 첨가하였다. 이후, 세포를 스파란터스 인디커스 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)의 존재 또는 비존재하에서 후-분화 배지(100 nM 인슐린을 함유하는 DMEM)와 함께 추가로 인큐베이션하였다. 최종적으로, 세포를 수확하고, 차가운 인산 완충 식염수로 세척하고, 용해 완충액(lysis buffer)으로 용해시켰다. 단백질 추출물을 14,00Og로 20 분 동안 정제하였다. 단백질 함량을 코마씨 블루 염색을 사용하여 브래드포드 방법으로 측정하고, 세포 용해물을 별도 시료로(in aliquots) 추가의 사용시까지 -8O℃에서 저장하였다. 퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체 감마(PPARγ), CD36, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2)과 같은 지방세포 분화 마커의 조절; 및 세포간 지질 액적 표면과 연관된 단백질인 페릴리핀 발현을 면역블롯 분석에 의해 평가하였다.
스파란터스 인디커스 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드(LI054A01)의 존재 또는 비존재하에서 지방세포에서 바이오마커 분자의 단백질 발현의 억제를 면역블롯 분석으로 평가하였다. 즉, 동량의 세포 용해물 단백질을 7.5% SDS-PAGE에서 분리(resolve)한 후; 단백질들을 니트로셀룰로오즈 막에 전사하였다. 비-특이적 부위를 블록킹한 후, 상기 막을 항-PPARγ, 또는 항-CD36, 또는 항-aP2, 또는 항-β3AR, 또는 항-ADRP, 또는 항-페릴리핀 항체와 함께 인큐베이션하였다. 최종적으로, 특이적 면역-반응성 밴드를 West-pico 화학발광 기질(Pierce Biotechnology, IL, USA)을 사용하여 전개시키고, 면역블롯 이미지를 Kodak Image Station (Kodak, USA)에 기록하였다. 밴드 강도를 밀도분석방법으로(densitometrically) 계산하고, 각 샘플에서 액틴의 발현으로 보정하였다. 그 데이터를 도 3에 요약한다.
실시예 15
대식 세포에서 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01) 및 7-히드록시프룰라놀라이드( LI054A01 )에 의한, CD36 생성의 억제:
실험 프로토콜: 이것은 글루코오즈로 유도시킨 J774 마우스 대식세포에서 평가하였다. 즉, 세포를 2 mM 글루타민, 100 U/mL 페니실린, 100 mg/mL 스트렙토마이신 및 10% 우태아혈청(Hyclone, Logan, UT)을 갖는 DMEM에서 배양하였다. 실험 하루 전에 동수의 세포를 35 mm 페트리 디쉬(Corning, USA)에 접종하였다. 배양 배지를 10% 우태아혈청으로 보충된 신선한 무-글루코오즈 DMEM으로 교체하였다. 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)을 1 내지 10 ㎍/ml의 범위로 상기 배양 배지로 차례로 희석하고 LI054A0I을 1 ㎍으로 희석하고, 모든 배양을 2시간 동안 5% CO2, 37℃에서 전-배양한 다음, 600 mg/dL의 글루코오즈와 함께 5일 동안 인큐베이션하였다. 대조군 배양은 100 mg/dL 글루코오즈로 보충하였다. 세포를 수확하고, 용해 완충액으로 용해시켰다. 세포 용해물을 14,00Og로 정제하였다. 단백질 농도는 브래드포드 방법으로 측정하였다.
LI/DD-II/054A/01 및 LI054A01의 존재 또는 비존재하에서 고-글루코오즈로 유도시킨 J774 대식세포에서의 CD36 단백질 발현의 억제를 면역블롯 분석을 사용하여 평가하였다. 즉, 동일한 양의 세포 용해물 단백질을 7.5% SDS-PAGE에서 분리(resolve)한 후; 단백질들을 니트로셀룰로오즈 막에 전사하였다. 비-특이적 부위를 블록킹한 후, 상기 막을 CD36 항체(R&D Systems, Minneapolis, MN)와 함께 인큐베이션하였다. 최종적으로, 특이적 면역-반응성 밴드를 West-pico 화학발광 기질(Pierce Biotechnology, IL, USA)을 사용하여 전개시키고, 면역블롯 이미지를 Kodak Image Station (Kodak, USA)에 기록하였다. 밴드 강도를 밀도분석방법으로 계산하고, 각 샘플에서 액틴의 발현으로 보정하였다. 결과를 도 4에 요약한다.
실시예 16:
가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물 ( AR 933), α- 망고스틴 및 γ- 망고스 틴에 의한 분화된 지방세포에서 지질 축적의 억제 평가: 가르시니아 망고스타나 추출물(AR 933), α-망고스틴 및 γ-망고스틴의 항-지방생성 활성을 상기 실시예 12에 기술된 방법에 의해 평가하였다. 상기 추출물 AR 933, α-망고스틴 및 γ-망고스틴에 의해 나타난 항-지방생성 활성을 하기 표에 요약한다.
가르시니아 망고스타나의 항-지방생성 활성
S. No 생성물 명칭 지질 축적의 % 억제
10 ㎍/ml
1 α-망고스틴 16.06
2 γ-망고스틴 61.57
3 G. 망고스타나 (AR 933) 48.5
실시예 17:
분화된 지방세포에서 α- 망고스틴 , γ- 망고스틴 및 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물( AR 933)의 전구-지질분해 활성 평가: 상기 실시예 13에 기술한 바와 같이, 성숙한 지방세포에서 지질분해 활성을 평가하였다. 기지 농도의 글리세롤을 함유하는 대조군과 비교한 샘플 용액 중의 글리세롤 농도의 퍼센트 증가는 시험물질에 대한 지질분해의 퍼센트 촉진에 대응된다. α-망고스틴, γ-망고스틴 및 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(AR 933)에 의해 촉진된 지질분해의 퍼센트 증가를 다음 표에 요약한다.
가르시니아 망고스타나의 전구-지질분해 활성
S. No 생성물 명칭 지질 분해의 % 촉진
25 ㎍/ml
1 α-망고스틴 156.56
2 γ-망고스틴 4.52
3 G. 망고스타나 (AR 933) 55.8
실시예 18
가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물( AR 933), α- 및 γ- 망고스틴에 의한 알파- 아밀라아제의 억제: Bernfeld(Methods in Enzymology, 1955, Vol. 1, pp 149-158)에 의해 개발되고, Jamieson 등(Journal of Dental Research 1969; 48(3): 483)에 의해 개선되고, 또한 M.C.M da Silva 등(2004, Pesq. Agropec. bras., Brasilia, 2004; 39(3); pp 201-208)에 의해 채용된 디니트로살리실란(DNS) 방법을 사용하여, 기질로서 1% 가용성 전분을 사용하여, α-아밀라아제 억제 활성을 측정하였다.
100 μL의 기질 용액을 가하기 전에 시험 물질(α-망고스틴, γ-망고스틴 및 AR 933)을 α-아밀라아제 100 μL (10-25 U/mL)와 함께 실온에서 20분 동안 전-배양한 후, 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 상기 반응을 200 μL의 DNS 시약을 첨가하여 정지시키고, 시험관을 끓는 물에 5분 동안 두어 발색시켰다. 3.6 mL 증류수를 가한 후, 470 nm에서 흡광도를 읽었다. 알려진 α-아밀라아제 저해제를 양성 대조군으로 사용하였으며, 비히클을 음성 대조군으로 사용하였다. 분석은 적어도 2회 수행하였다. 퍼센트 억제를 평균 시험 OD를 평균 대조군 OD와 비교하여 계산하였다. {% 억제 = [(COD-TOD)/COD] X 100}. IC50 값을 용량 반응 곡선의 선형 회귀 분석에 의해 계산하였다. 그 결과를 다음 표에 요약한다.
화합물 α-아밀라아제에 대한 IC50 (㎍/ml)
AR 933 5.32
아카보오즈 12.7
γ-망고스틴 3.88
α-망고스틴 3.99
실시예 19
가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물( AR 933), α- 및 γ- 망고스틴에 의한 α- 글루코시다아제의 억제: D. Prasanth 등에 의해 개발된 시험관내 방법 (Fitoterapia 2001, 72, 686-688)을 사용하여 α-글루코시다아제 억제 활성을 측정하였다. 마이크로플레이트 웰에 50 μL의 α-글루코시다아제 효소(0.4 U/mL)을 취하고, 90 μL의 100 mM 인산 완충액(pH 7) 및 10 μL 시험물질(α-망고스틴, γ- 망고스틴 및 AR 933) 또는 비히클 대조군으로 처리하였다. 내용물을 잘 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 인큐베이션한 후, 기질로서 50 μL의 p-니트로페닐 α-D-글루코피라노오즈(20 mM)을 가하였다. 내용물을 잘 혼합하고, 다시 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 상기 반응을 30 μL의 탄산나트륨 용액(135 mM)을 가하여 정지시켰다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군 및 시험 블랭크(blank) ODs를 효소를 완충액으로 대체하여 얻었다. 평균 시험 OD를 평균 대조군 OD와 비교하여 퍼센트 억제를 계산하였다. {% 억제 = [(COD-TOD)/COD] x 100}. IC50 값을 용량 반응 곡선의 선형 회귀 분석에 의해 계산하였다.
화합물 α-글루코시다아제에 대한 IC50 (㎍/ml)
γ-망고스틴 0.16
α-망고스틴 0.30
AR 933 0.29
녹차 1.10
실시예 20
가르시니아 망고스타나 추출물( AR 933)에 의한 3 T3 - L1 지방세포에서 PPAR γ, ADRP, CD36 , aP2 , β3 AR 및 페릴리핀의 억제:
실험 프로토콜: 마우스의 전구-지방세포 3T3-L1 세포를 2 mM 글루타민, 4.5g/L 글루코오즈 및 10% 우태아혈청으로 보충된 둘베코의 변형된 이글스 배지(DMEM)에서 유지시켰다. 동일한 수의 세포를 24-웰 배양 플레이트의 각 웰에 넣었다. 세포를 2.5 및 5 ㎍/mL의 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(AR 933)로 2시간 동안 각각 전처리한 다음, 500 nM 인슐린, 1.0 μM 덱사메타손, 및 0.5 mM 이소부틸메틸산틴(IBMX)을 함유하는 분화 배지를 48시간 동안 첨가하였다. 이후, 세포를 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물(AR 933)의 존재 또는 비존재하에서 후-분화 배지(100 nM 인슐린을 함유하는 DMEM)와 함께 추가로 인큐베이션하였다. 최종적으로, 세포를 수확하고, 차가운 인산 완충 식염수로 세척하고, 용해 완충액(lysis buffer)으로 용해시켰다. 단백질 추출물을 14,00Og로 20 분 동안 정제하였다. 단백질 함량을 코마씨 블루 염색을 사용하여 브래드포드 방법으로 측정하고, 세포 용해물을 별도 시료로(in aliquots) 추가의 사용시까지 -8O℃에서 저장하였다. PPARγ, CD36, aP2와 같은 지방세포 분화 마커의 조절 및 세포간 지질 액적 표면과 연관된 단백질인 페릴리핀 발현을 면역블롯 분석에 의해 평가하였다.
가르시니아 망고스타나 추출물의 존재 또는 비존재하에서 지방세포에서 바이오마커 분자의 단백질 발현의 억제를 면역블롯 분석으로 평가하였다. 즉, 동량의 세포 용해물 단백질을 7.5% SDS-PAGE에서 분리(resolve)한 후; 단백질들을 니트로셀룰로오즈 막에 전사하였다. 비-특이적 부위를 블록킹한 후, 상기 막을 항-PPARγ, 또는 항-CD36, 또는 항-aP2, 또는 항-β3AR, 또는 항-ADRP, 또는 항-페릴리핀 항체와 함께 인큐베이션하였다. 최종적으로, 특이적 면역-반응성 밴드를 West-pico 화학발광 기질(Pierce Biotechnology, IL, USA)을 사용하여 전개시키고, 면역블롯 이미지를 Kodak Image Station (Kodak, USA)에 기록하였다. 밴드 강도를 밀도분석방법으로 계산하고, 각 샘플에서 액틴의 발현으로 보정하였다. 그 데이터를 도 5에 요약한다.
실시예 21 :
LI / DD - II /054A/01 및 AR 933을 포함하는 조성물 1B, 2C 및 2E에 의한 분화된 지방세포에서 지질 축적의 억제 평가: 조성물 1B, 2C 및 2E의 항-지방생성 활성을 상기 실시예 12에 기술된 방법에 의해 평가하였다. 조성물 1B, 2C 및 2E에 의해 나타난 항-지방생성 활성을 표 7에 요약한다.
조성물 1B, 2C 및 2E의 항-지방생성 활성
S. No 생성물 명칭 지질 축적의 % 억제
10 ㎍/ml
1 조성물 1B (1:3) 23.6
2 조성물 2C (1:1) 21.5
3 조성물 2E (1:4) 38.6
실시예 22
분화된 지방세포에서 LI / DD - II /054A/01 및 AR 933을 포함하는 조성물 1B, 2C 및 2E에 의한 전구-지질분해( pro - lipolytic ) 활성 평가: 조성물 1B, 2C 및 2E의 지질분해 활성을 상기 실시예 13에서 기술된 바와 같이 성숙한 지방세포에서 평가하였다. 기지 농도의 글리세롤을 함유하는 대조군과 비교한 샘플 용액 중의 글리세롤 농도의 퍼센트 증가는 조성물 1B, 2C 및 2E에 의한 지질분해의 퍼센트 촉진에 대응된다. 조성물 1B, 2C 및 2E에 의해 촉진된 지질분해의 퍼센트 증가를 다음 표에 요약한다.
조성물 1B, 2C 및 2E의 전구-지질분해 활성
S. No 생성물 명칭 지질 분해의 % 촉진
25 ㎍/ml		 지질 분해의 % 촉진
50 ㎍/ml
1 조성물 1B (1:3) 31.7 59.8
2 조성물 2C (1:1) 21.9 46.9
3 조성물 2E (1:4) 37.95 71.4
실시예 23
조성물 1B에 의한 3 T3 - L1 지방세포에서 PPAR γ. ADRP . CD36 . aP2 . β3 AR 및 페릴리핀의 억제:
실험 프로토콜: 마우스의 전구-지방세포 3T3-L1 세포를 2 mM 글루타민, 4.5g/L 글루코오즈 및 10% 우태아혈청으로 보충된 둘베코의 변형된 이글스 배지(DMEM)에서 유지시켰다. 동일한 수의 세포를 24-웰 배양 플레이트의 각 웰에 넣었다. 세포를 5 ㎍/mL의 LI/DD-II/054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B로 2시간 동안 전처리한 다음, 500 nM 인슐린, 1.0 μM 덱사메타손, 및 0.5 mM 이소부틸메틸산틴(IBMX)을 함유하는 분화 배지를 48시간 동안 첨가하였다. 이후, 세포를 조성물 1B의 존재 또는 비존재하에서 후-분화 배지(100 nM 인슐린을 함유하는 DMEM)와 함께 추가로 인큐베이션하였다. 최종적으로, 세포를 수확하고, 차가운 인산 완충 식염수로 세척하고, 용해 완충액(lysis buffer)으로 용해시켰다. 단백질 추출물을 14,00Og로 20 분 동안 정제하였다. 단백질 함량을 코마씨 블루 염색을 사용하여 브래드포드 방법으로 측정하고, 세포 용해물을 별도 시료로(in aliquots) 추가의 사용시까지 -8O℃에서 저장하였다. 퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체 감마(PPARγ), CD36, 지방세포 지방산-결합 단백질(aP2)과 같은 지방세포 분화 마커의 조절; 및 세포간 지질 액적 표면과 연관된 단백질인 페릴리핀 발현을 면역블롯 분석에 의해 평가하였다.
조성물 1B의 존재 또는 비존재하에서 지방세포에서 바이오마커 분자의 단백질 발현의 억제를 면역블롯 분석으로 평가하였다. 즉, 동량의 세포 용해물 단백질을 7.5% SDS-PAGE에서 분리(resolve)한 후; 단백질들을 니트로셀룰로오즈 막에 전사하였다. 비-특이적 부위를 블록킹한 후, 상기 막을 항-PPARγ, 또는 항-CD36, 또는 항-aP2, 또는 항-β3AR, 또는 항-ADRP, 또는 항-페릴리핀 항체와 함께 인큐베이션하였다. 최종적으로, 특이적 면역-반응성 밴드를 West-pico 화학발광 기질(Pierce Biotechnology, IL, USA)을 사용하여 전개시키고, 면역블롯 이미지를 Kodak Image Station (Kodak, USA)에 기록하였다. 밴드 강도를 밀도분석방법으로 계산하고, 각 샘플에서 액틴의 발현으로 보정하였다. 그 데이터를 도 6에 요약한다.
실시예 24
조성물 1B에 의한 죽상경화증 마커 단백질 생성의 억제-조절:
실험 프로토콜: 조성물 1B에 의한 CD36, 단핵세포 화학주성 단백질-1(MCP-1), 및 산화된 저밀도 지질단백질(Ox-LDL)과 같은 죽상경화증 마커 단백질의 생성 억제를 고-글루코오즈로 유도시킨 J774 마우스 대식세포에서 평가하였다. 즉, 세포를 2 mM 글루타민, 100 U/mL 페니실린, 100 mg/mL 스트렙토마이신 및 10% 우태아혈청(Hyclone, Logan, UT)을 갖는 DMEM에서 배양하였다. 실험 하루 전에 동수의 세포를 35 mm 페트리 디쉬(Corning, USA)에 접종하였다. 배양 배지를 10% 우태아혈청으로 보충된 신선한 무-글루코오즈 DMEM으로 교체하였다. 세포를 5 ㎍/ml의 LI/DD-II/054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B와 함께 2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 전-배양한 다음, 600 mg/dL의 글루코오즈와 함께 5일 동안 인큐베이션하였다. 대조군 배양은 100 mg/dL 글루코오즈로 보충하였다. 세포를 수확하고, 용해 완충액으로 용해시켰다. 세포 용해물을 14,00Og로 정제하였다. 단백질 농도는 브래드포드 방법으로 측정하였다.
조성물 1B의 존재 또는 비존재하에서 고-글루코오즈로 유도시킨 J774 대식세포에서의 마커 단백질 발현의 억제를 면역블롯 분석을 사용하여 평가하였다. 즉, 동일한 양의 세포 용해물 단백질을 7.5% SDS-PAGE에서 분리(resolve)한 후; 단백질들을 니트로셀룰로오즈 막에 전사하였다. 비-특이적 부위를 블록킹한 후, 상기 막을 CD36, 또는 MCP-1 또는 Ox-LDL 특이적 항체(R&D Systems, Minneapolis, MN)와 함께 인큐베이션하였다. 최종적으로, 특이적 면역-반응성 밴드를 West-pico 화학발광 기질(Pierce Biotechnology, IL, USA)을 사용하여 전개시키고, 면역블롯 이미지를 Kodak Image Station (Kodak, USA)에 기록하였다. 밴드 강도를 밀도분석방법으로 계산하고, 각 샘플에서 액틴의 발현으로 보정하였다. 결과를 도 7에 요약한다.
실시예 25
LI/DD-II/054A/01, AR 933 및 조성물 1B에 의한 아디포넥틴의 조절:
3T3-L1 지방세포에서 LI/DD-II/054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B에 의한 아디포텍틴 단백질의 조절을 웨스턴 블롯 분석으로 평가하였다. 세포 배양, 처리 프로토콜, 및 면역블롯 분석 방법은 실시예 23에서 기술된 바와 같다. 도 8은 조성물 1B 또는 LI/DD-II/054A/01 혹은 AR 933와 같은 각각의 성분에 의해 3T3-L1 성숙 지방세포에서 아디포넥틴 단백질 발현의 증가를 요약한다.
실시예 26
LI / DD - II /054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B에 의한 3 T3 - L1 전구지방세포에서 프로틴 타이로신 포스파타아제-1B( PTP -1B)의 억제 조절:
3T3-L1 전구-지방세포를 2 mM 글루타민, 4.5g/L 글루코오즈 및 10% 우태아혈청으로 보충된 둘베코의 변형된 이글스 배지(DMEM)에서 배양하였다. 동일한 수의 세포를 35 cm2 세포배양 접시에 각각 밤새 넣었다. 플레이트를 무-혈청 및 무-페놀 레드 DMEM으로 세척한 다음, 0.2% BSA 및 lg/리터 글루코오즈를 함유하는 무-혈청 및 무-페놀 레드 DMEM 중에서 5 ㎍/mL의 LI/DD-II/054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B로 배양물을 전처리하였다. 세포 용해물 단백질을 세포 용해 완충액으로 추출하고, 단백질 농도를 브래드포드 시약으로 측정하였다. 세포 용해물 중의 PTP-1B 발현의 조절을 실시예 23에 기술된 방법에 따라 항-PTP-lB 항체를 사용한 면역블롯 분석법으로 분석하였다. 도 9는 LI/DD-II/054A/01 또는 AR 933 또는 조성물 1B로 처리된 3T3-L1 전구지방세포에서 PTP-lB 단백질 발현의 억제 조절을 보여준다.
실시예 27
대사성 장애에 대한 스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물( LI / DD -II/054A/01)의 생체내 효능
스파란터스 인디커스 에틸 아세테이트 추출물(LI/DD-II/054A/01)의 효능을 고-지방, 고-콜레스테롤, 고-염 및 고-수크로오즈 식이로 유도시킨 대사성 증후군 모델에서 시험하였다.
유도: 12마리의 스프라그 도울리 랫트 뱃치를 무작위로 6마리씩 2군으로 나누었다. 시험 개시 전에, 동물들을 7일 동안 적응시켰다. 대사성 증후군은 사료 100 g 당 볶은 벵골 그람(roasted bengal gram) 32 g, 수크로오즈 27 g, 밀크 분말(milk powder) 17 g, 미네랄 염 혼합물(mineral salt mixture) 5 g, 효모 1 g, 버터 2 g, 땅콩 오일(groundnut oil) 11 g, 및 콜레스테롤 5 g을 함유하는 대사성 증후군 사료로 랫트를 8주 동안 먹임으로써 유도시켰다.
처리: 8주의 유도기간 후에, 동물을 할당된 시험물질 또는 비히클로 매일 8주 동안 (경구 급이 가비지(oral feeding gavage)를 사용하여) 경구로 처리하였다. 처리군 동물은 0.5% CMC 수용액 10 mL 중 LI/DD-II/054A/01 250 mg/kg 체중으로 추가의 8주 동안 경구로 제공하였다. 대조군 동물은 이 기간 동안 비히클(0.5% CMC 수용액 10 mL)만을 제공하였다. 처리 기간 동안, 모든 동물은 시험 마지막까지 표준 설치류 사료를 제공하였다.
체중: 전체 시험 기간 동안 각 동물의 체중을 매주 기록하였다. 처리군 및 대조군에 대한 평균 체중을 결정하였다. 체중 증가는 처리 시작 후 1번째 주, 4번째 주, 8번째 주에, 최초 체중과 비교하여 계산하였다. 대조군과 비교할 때, 250 mg/kg의 용량에서의 LI/DD-II/054A/01는 대조군에 비하여 매우 강력하고 통계적으로 유의성 있는(p<0.01) 체중 증가에 있어서의 감소(66.04%)를 나타내었다. 처리군 및 대조군에서 체중 증가의 결과를 도 10A 및 10B에 요약한다.
지방 조직 무게: 시험 종료시 복부 지방 및 부고환 지방을 분리하여 칭량하고, 그 결과를 표 9에 나타내었다. 처리군에서 복부 지방 및 부고환 지방은 대조군과 비교할 때 더 낮다. 총 지방은 LI/DD-II/054A/01를 공급한 처리군에서 유의성 있게(p<0.05) 감소되었다.
랫트의 복부 및 부고환 부분으로부터 분리된 지방 조직의 무게
처리 복부 지방(g) 부고환 지방(g) 총 지방(g)
대조군
(10 mL/kg)		 4.52 ± 1.16 4.18 ± 1.56 8.70 ± 2.52
LI/DD-II/054A/01
(250 mg/kg)		 2.28 ± 0.78 3.07 ± 0.74 5.36 ± 0.89
값은 평균 중량 ± SD로서 표시됨.
혈청 생화학: 혈액-채취는 유도 전, 처리개시 전, 및 처리종료 후에, 온화한 마취하에서 시누스 정맥총(sinus orbital plexus)을 통하여 수행하였다. 지질 프로파일을 포함한 다양한 생화학적 파라미터를 자동화 임상 화학 분석기 HumaStar300, (제조사: Human, Germany)로 Human사(Germany)로부터 제공된 생화학 시약을 사용하여 평가하였다. 생화학적 파라미터, 특히 혈청 콜레스테롤 수준 및 트리글리세라이드 수준의 평균값을 유도 전, 유도 후 처리개시 전, 및 처리 후에 평가하였다. 250 mg/kg으로 LI/DD-II/054A/01의 공급은 혈청 콜레스테롤, LDL 및 트리글리세라이드에 있어서 각각 15.3, 12.7 및 22.9 퍼센트 감소와 함께, 지방 프로파일에 있어서 개선을 나타냈다.
바이오마커 아디포넥틴의 평가: 대조군 및 처리군 동물에 대한 혈청 아디포넥틴 농도를 2중 항체에 근거한 샌드위치 랫트 아디포넥틴 ELISA 키트를 사용하여 평가하였다. 분석은 제조사(Linco Research, USA)에 의해 제공된 지침에 따라 수행하였다. 분석 민감도는 0.155 ng/ml이다. 아디포넥틴 분석은 8주 동안 250 mg/day/kg 체중의 용량으로 LI/DD-II/054A/01의 제공은 기저선과 비교할 때, 혈청 아디포넥틴 농도에 있어서 유의성 있는(p=0.00618) 개선을 야기하였음을 보여주었다. 그러나, 대조군은 혈청 아디포넥틴 농도에 있어서 개선을 나타내지 않았다. 그 결과를 도 11에 요약한다.
항상성 모델 평가(Homeostasis Model Assessment, HOMA): 다음 식을 사용하여 혈청 인슐린 및 글루코오즈 수준에 근거하여 HOMA 지표를 계산하였다:
절식시 인슐린 농도(μU/mL) x 절식시 글루코오즈 농도(mmol/L)/22.5.
8주 처리기간 동안 250 mg/kg 체중의 1일 용량으로 처리군 랫트의 공급은 대조군에 비하여 HOMA 지표의 유의성 있는 감소를 야기하였다. 그 데이터를 도 12에 나타낸다.
실시예 28
스파란터스 인디커스 메탄올 추출물( LI / DD - II /054A/03) 및 가르시니아 망고스타나 메탄올 추출물( AR 933)을 3:1의 비율로 포함하는 조성물 1D의 상승적인 항-비만 활성: LI/DD-II/054A/03, AR 933, 및 조성물 1D의 효능을 고-지방식으로 유도시킨 스프라그 도울리 랫트 비만 모델에 대하여 시험하였다.
유도: 선택된 건강한 스프라그 도울리 랫트를 무작위로 대조군 및 다양한 처리군으로 나누었다(n=7). 비만 시험에 할당된 모든 동물은 전체 8주의 유도 기간 동안 고-지방식 100 g 당 벵골 그람(bengal gram) 32 g, 소맥분(Wheat floor) 15g, 효모 1 g, 버터 2 g, 땅콩 오일(Ground nut oil) 8g, 카제인 5g, 바나스파티(Vanaspathi) 2Og, 비타민 혼합물(Vitamin mix) 05g, 밀크 분말(Milk powder) 12g 및 미네랄 염 혼합물(Mineral Salt mixture) 4.5g을 포함하는 고지방 사료를 자유롭게 먹임으로써, 식이섭취변화(dietary intervention)를 통하여 실험실적으로 비만으로 만들었다.
처리: 8주의 유도기간 후에, 동물을 할당된 시험물질 또는 비히클로 매일 8주 동안 (경구 급이 가비지(oral feeding gavage)를 사용하여) 경구로 처리하였다. 처리군 동물은 0.5% CMC 수용액 10 mL 중 LI/DD-II/054A/03 100 mg 또는 250 mg/kg 체중, 또는 AR 933 250 mg/kg 체중, 또는 조성물 1D 250 mg/kg 체중으로 추가의 8주 동안 제공하였다. 대조군 동물은 이 기간 동안 비히클(0.5% CMC 수용액 10 mL)만을 제공하였다. 처리 기간 동안, 모든 동물은 시험 마지막까지 표준 설치류 사료를 제공하였다.
체중: 전체 시험 기간 동안 각 동물의 체중을 매주 기록하였다. 처리군 및 대조군에 대한 평균 체중을 결정하였다. 체중 증가는 처리 시작 후 1번째 주, 4번째 주, 8번째 주에, 최초 체중과 비교하여 계산하였다. LI/DD-II/054A/03은 고지방식으로 유도된 비만 랫트에서 체중 증가를 용량 의존적으로 억제하였다. 100 mg/kg 체중의 LI/DD-II/054A/03을 제공한 처리군은 체중 증가에 있어서 46.3% 감소를 나타내었다. 250 mg/kg의 용량에서 AR 933 및 LI/DD-II/054A/03은 체중 증가에 있어서 각각 40% 및 80.1% 감소를 나타내었다. 그러나, 동일한 용량 수준 즉, 250 mg/kg에서 조성물 1D는 각각의 성분에 비하여, 체중 증가에 있어서 유의성 있게 우수한 감소(89%)를 나타내었다. 상기 처리군 및 대조군에 대한 체중 증가의 결과를 도 13에 요약한다.
사료 및 물 소모는 매일 기록하였으며, 절식시 혈액 샘플은 시험 개시전, 4주 후, 및 8주(종료) 후에 채취하였다.
당업자는 본 발명의 광범위한 개념을 벗어나지 않고 상기한 구현예에 변경이 가해질 수 있음을 인식할 것이다. 그러므로, 본 발명은 개시된 특정 구현예 또는 실시예에 한정되지 않는 것으로 이해되어야 하며, 본 발명은 본 명세서에 정의된 본 발명의 목적 및 범위 내에서의 변형을 포함하도록 의도된 것으로 이해되어야 한다.

Claims (44)

  1. 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물을 포함하는, 비만, 당뇨병, 또는 죽상경화증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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  9. 제1항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 상기 조성물 중 0.01 중량% 내지 99.9 중량%의 범위로 존재하고, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 상기 조성물 중 99.9 중량% 내지 0.01 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 7-히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시-4,5-에폭시-6β,7-유데스마놀라이드; 11α,13-디히드로-7α-아세톡시-3β-히드록시-6β,7-유데스므-4-에놀라이드; 3-케토-β-유데스몰; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시유데스므-4-엔-6α,12-올라이드; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-7α,13-디히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-7α-히드록시-13-메타옥시프룰라놀라이드; 2α,7α-디히드록시-4-엔-11,13-디히드로유데스므-6,12-올라이드; 2α-히드록시코스틱 산; 3-케토-7α-히드록시유데스므-4-엔-6,12-올라이드(크립토메리디올); 4-에피크립토메리디올; 스파란타놀라이드; 2α-히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시스파란톨라이드; 2α,7α-디히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시-7α-히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시-5α-히드록시이소스파란톨라이드; 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 프룰라놀라이드 혹은 유데스마노이드 세스퀴테르펜 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  11. 삭제
  12. 제10항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 상기 프룰라놀라이드 혹은 유데스마노이드 세스퀴테르펜 화합물을 0.01 중량% 내지 95 중량%의 범위로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 α-망고스틴, γ-망고스틴, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 α-망고스틴, γ-망고스틴, 또는 이들의 혼합물을 0.001 중량% 내지 99.9 중량%의 범위로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 α-망고스틴, γ-망고스틴, 또는 이들의 혼합물을 0.01 중량% 내지 95 중량%의 범위로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  16. 삭제
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  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 제1항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 꽃머리로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  23. 제1항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)의 전체 과실 혹은 과실 껍질 혹은 과실 펄프로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  24. 제1항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물 또는 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 1종 이상의 유기용매, 알코올, 히드로알코올, 물 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 용매를 사용한 추출을 통하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  25. 제1항에 있어서, 글루코오즈, 프럭토오즈, 수크로오즈, 말토오즈, 황색 덱스트린, 백색 덱스트린, 에어로졸, 미결정 셀룰로오즈, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 솔비톨, 스테비오사이드, 옥수수 시럽, 락토오즈, 구연산, 타르타르산, 말산, 숙신산, 락트산, L-아스코르브산, dl-알파-토코페롤, 글리세린, 프로필렌글리콜, 글리세린 지방 에스테르, 폴리 글리세린 지방 에스테르, 수크로오즈 지방 에스테르, 솔비탄 지방 에스테르, 프로필렌글리콜 지방 에스테르, 아카시아, 카라기난, 카제인, 젤라틴, 펙틴, 한천, 비타민 B군, 니코틴아미드, 칼슘 판토테네이트, 아미노산, 칼슘 염, 염료, 향료, 보존제, 증류수, 식염수, 수성 글루코오즈 용액, 알코올, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 동물성 및 식물성 오일, 백색 연질 파라핀, 파라핀, 및 왁스로 이루어진 군으로부터 선택된 담체 또는 희석제 또는 첨가제를 추가로 포함하는 약학 조성물.
  26. 제1항에 있어서, 상기 조성물이 이를 필요로 하는 환자, 포유동물 혹은 온혈동물에게 경구로, 국소로, 혹은 비경구로, 혹은 흡입에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  27. 제1항에 있어서, 상기 조성물이 정제, 연질캡슐제, 경질캡슐제, 환제, 과립제, 산제, 에멀젼, 현탁액, 시럽, 펠렛, 주사용액제, 점적제, 좌제, 패치, 국소용 크림 또는 겔로서 제제화되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
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  32. 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물 및 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물을 포함하는, 비만, 당뇨병, 또는 죽상경화증의 조절 또는 개선용 식이 보조제 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 상기 조성물 중 0.01 중량% 내지 99.9 중량%의 범위로 존재하고, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 상기 조성물 중 99.9 중량% 내지 0.01 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  34. 제32항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 7-히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시-4,5-에폭시-6β,7-유데스마놀라이드; 11α,13-디히드로-7α-아세톡시-3β-히드록시-6β,7-유데스므-4-에놀라이드; 3-케토-β-유데스몰; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시유데스므-4-엔-6α,12-올라이드; 11α,13-디히드로-3α,7α-디히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-7α,13-디히드록시프룰라놀라이드; 11α,13-디히드로-7α-히드록시-13-메타옥시프룰라놀라이드; 2α,7α-디히드록시-4-엔-11,13-디히드로유데스므-6,12-올라이드; 2α-히드록시코스틱 산; 3-케토-7α-히드록시유데스므-4-엔-6,12-올라이드(크립토메리디올); 4-에피크립토메리디올; 스파란타놀라이드; 2α-히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시스파란톨라이드; 2α,7α-디히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시-7α-히드록시스파란톨라이드; 2α-아세톡시-5α-히드록시이소스파란톨라이드; 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 프룰라놀라이드 혹은 유데스마노이드 세스퀴테르펜 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  35. 삭제
  36. 제34항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 상기 프룰라놀라이드 혹은 유데스마노이드 세스퀴테르펜 화합물을 0.01 중량% 내지 95 중량%의 범위로 포함하는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  37. 제32항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 α-망고스틴, γ-망고스틴, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 α-망고스틴, γ-망고스틴, 또는 이들의 혼합물을 0.001 중량% 내지 99.9 중량%의 범위로 포함하는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  39. 제38항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 α-망고스틴, γ-망고스틴, 또는 이들의 혼합물을 0.01 중량% 내지 95 중량%의 범위로 포함하는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  40. 제32항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)의 꽃머리로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  41. 제32항에 있어서, 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)의 전체 과실 혹은 과실 껍질 혹은 과실 펄프로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  42. 제32항에 있어서, 상기 스파란터스 인디커스(Sphaeranthus indicus)로부터 유래된 추출물 또는 분획물 또는 상기 가르시니아 망고스타나(Garcinia mangostana)로부터 유래된 추출물 또는 분획물이 1종 이상의 유기용매, 알코올, 히드로알코올, 물 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 용매를 사용한 추출을 통하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
  43. 제32항에 있어서, 글루코오즈, 프럭토오즈, 수크로오즈, 말토오즈, 황색 덱스트린, 백색 덱스트린, 에어로졸, 미결정 셀룰로오즈, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 솔비톨, 스테비오사이드, 옥수수 시럽, 락토오즈, 구연산, 타르타르산, 말산, 숙신산, 락트산, L-아스코르브산, dl-알파-토코페롤, 글리세린, 프로필렌글리콜, 글리세린 지방 에스테르, 폴리 글리세린 지방 에스테르, 수크로오즈 지방 에스테르, 솔비탄 지방 에스테르, 프로필렌글리콜 지방 에스테르, 아카시아, 카라기난, 카제인, 젤라틴, 펙틴, 한천, 비타민 B군, 니코틴아미드, 칼슘 판토테네이트, 아미노산, 칼슘 염, 염료, 향료, 보존제, 증류수, 식염수, 수성 글루코오즈 용액, 알코올, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 동물성 및 식물성 오일, 백색 연질 파라핀, 파라핀, 및 왁스로 이루어진 군으로부터 선택된 담체 또는 희석제 또는 첨가제를 추가로 포함하는 식이 보조제 조성물.
  44. 제32항에 있어서, 상기 조성물이 정제, 연질캡슐제, 경질캡슐제, 환제, 과립제, 산제, 에멀젼, 현탁액, 시럽, 펠렛, 식품, 또는 음료로서 제제화되는 것을 특징으로 하는 식이 보조제 조성물.
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