JP6511604B2 - メタボリックシンドローム治療剤の製造方法 - Google Patents

Description

本発明はメタボリックシンドローム治療剤の製造方法に関する。

内臓脂肪型肥満、高血糖、高血圧、脂質異常の複数を併発すると、動脈硬化を進行させ、心臓病や脳卒中といった命にかかわる病気を引き起こすと考えられ、上記のうちいずれか２つ以上をあわせもった状態を、内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）と呼び、回避することが望まれる。
例えば、内蔵脂肪蓄積があって、脂質異常（中性脂肪値が１５０ｍｇ／ｄｌ以上あるいは、ＨＤＬコレステロール値が４０ｍｇ／ｄｌ未満）、血圧異常（１３０／８５ｍｍＨｇ以上）、高血糖（空腹時血糖が１１０ｍｇ／ｄｌ以上）の３項目のうち２項目以上があてはまれば、メタボリックシンドロームに該当する、というように基準が設けられる。
糖尿病による持続的高血糖は細小血管症や大血管症を引き起こし、健康寿命の短縮を引き起こす。空腹時血糖 １００〜１０９ｍｇ／ｄｌを正常高値、１１０〜１２５ｍｇ／ｄｌを境界型、１２６ｍｇ／ｄｌ以上を糖尿病と診断される。
脂質異常症は、動脈硬化発症にかかわり、その予防的な診断基準はＬＤＬコレステロール値が１４０ｍｇ／ｄｌ以上を高ＬＤＬコレステロール血症、１２０〜１３９ｍｇ／ｄｌを境界域高ＬＤＬコレステロール血症、ＨＤＬコレステロールが４０ｍｇ／ｄｌを低ＨＤＬコレステロール血症と設定されている。
高血圧症は、高血糖・脂質異常がなくても、脳心血管リスクを増大させる。収縮期１３０〜１３９ｍｍＨｇまたは拡張期８５〜８９ｍｍＨｇを正常高値、収縮期１４０ｍｍＨｇ以上または拡張期９０ｍｍＨｇ以上を高血圧症と診断され、治療を要する。

本発明で使用するマンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ． Ｌｎｎ）はオトギリソウ科フクギ属に含まれる。マンゴスチンは東南アジアに生息する食用果樹であり、その果皮は古くから民間伝承薬として下痢、赤痢、解熱剤や皮膚病に利用されてきた。マンゴスチンはフルーツの女王といわれ、知名度も高くイメージのよい素材である。
マンゴスチンの効能については、マンゴスチンの抽出物から精製されたα−マンゴスチン及びγ−マンゴスチンが、抗ヒスタミン効果あるいは抗セロトニン効果を有すること、また、α−マンゴスチン及びγ−マンゴスチンがヒト花粉症に対する抑制効果を示すことが知られている（特許文献１）。非特許文献１はマンゴスチン果皮抽出物がヒト結腸直腸腺癌の細胞株ＣＯＬＯ２０５に対し抗増殖効果を有することを開示する。

本発明で使用するライチ（Ｌｉｔｃｈｉ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）はムクロジ科レイシ属の植物である。
ライチはポリフェノールを多く含むことが知られており、ポリフェノールを含有するライチ抽出物の製造方法が開示されている（特許文献２）。またライチ等の果物に含まれるポリフェノールは、高分子であり生体利用性が低いことが知られており、ライチ等に含まれる高分子のポリフェノールを低分子化し、生体利用性を高める技術も開発されている（特許文献３）。

特許第３９６８４０５号公報 特許第４５７１０８１号公報 特許第４９４１９９１号公報 再公表２００６／０９０８３０号公報

ＡｐｐｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６２，Ｐ１０８０（２０１０）

メタボリックシンドロームの予防と治療。

本願発明者らは、鋭意研究の結果、マンゴスチン果皮抽出物にメタボリックシンドロームを予防または治療する効果があることを見出し、本発明を完成した。本発明のメタボリックシンドローム治療剤は脂質異常、糖尿病、高血圧症に対しても予防、治療などの効果を示す。

安全性の高い、抗メタボリックシンドローム剤を提供した。

メタボリックシンドローム治療剤の効果の確認実験の結果を示す。 メタボリックシンドローム治療剤の効果の確認実験の結果を示す。 メタボリックシンドローム治療剤の効果の確認実験の結果を示す。 メタボリックシンドローム治療剤の効果の確認実験の結果を示す。

本発明は、マンゴスチン果皮抽出物を含むことを特徴とするメタボリックシンドローム治療剤を提供する。
また、本発明のメタボリックシンドローム治療剤は、さらにライチ由来低分子ポリフェノールを含むことができる。

マンゴスチンはオトギリソウ科フクギ属に含まれる植物であり、マンゴスチンの果皮は、マンゴスチン果実（生または乾燥品）から得られるものを使用することができる。マンゴスチン果皮抽出物とは、マンゴスチン果皮から溶媒により抽出された抽出物をいう。抽出に用いられる溶媒は、特に限定されないが、好ましくは極性溶媒であり、好ましい例としてメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、酢酸エチル、および水からなる群から選択される極性溶媒あるいはそれらの混合溶媒を上げることができる。経口投与剤又は飲食品として用いることを考慮すると、抽出溶剤として、エタノール、又は水とエタノールとの組み合わせを用いることが安全性の点において好ましい。抽出の温度は特に規定はしないが、抽出効率の点で、室温から溶媒の沸点温度の範囲が好適である。抽出時間は溶媒の種類、果皮の状態（生または乾燥品、粉砕物または粉末など）および抽出温度により変化するが、０．５〜２４時間の範囲が好適である。
抽出物は必要によりエバポレーターなどにより抽出溶剤を濃縮し、あるいは除去してもよい。また、抽出物は、必要により溶媒分画やクロマトグラフィーにより精製して用いることもできる。

ライチ抽出物としては、ライチ由来ポリフェノールを好ましく用いることができる。ライチ由来ポリフェノールはライチ果皮、果肉、薄皮部などから抽出される。ライチ由来ポリフェノールの製造については、特許文献４を参照することができる。ライチ由来ポリフェノールとしては前述のように生体利用性の観点から低分子化されたものを用いることができ、一例としてオリゴノール（株式会社アミノアップ化学）をあげることが出来る。

マンゴスチン果皮抽出物の調製
マンゴスチンの未乾燥果皮１００ｇを粉砕し、１ｌの７０％エタノール中で１時間、８０℃で撹拌抽出した。これをろ過し、ろ液をエバポレーターで減圧乾燥し、２７．４ｇの抽出物を得た。これをマンゴスチン果皮抽出物とした。

α−マンゴスチン、γ−マンゴスチンの調製
マンゴスチンの未乾燥果皮１ｋｇを１０Ｌのメタノールに浸漬し、２４時間室温下抽出した。濾過後、濾液をエバポレーターで減圧乾燥し、８０ｇの抽出物を得た。得られた抽出物８０ｇを３５０ｍｌの酢酸エチルに溶解後、２００ｍｌの水で２回洗浄した。酢酸エチル画分をエバポレーターで溶媒を溜去させ２０ｇの乾燥物を得た。この乾燥物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。溶出はヘキサン−酢酸エチル系で漸次、極性をあげるグラジエント溶出を行い、３つの画分を得た。最初に得られた画分（５ｇ）を再度、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、１０：９０→３０：７０→５０：５０）で精製し、黄色結晶状の試料としてα−マンゴスチン２ｇを得た。２つめの画分（２ｇ）を再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、３０：７０→５０：５０、続いて酢酸エチルのみ、最後に酢酸エチル−メタノール、５０：５０）で精製し、黄色非結晶状の試料としてγ−マンゴスチン５００ｍｇを得た。

ライチ抽出物の調製
ライチ果実ポリフェノール末（Ｌｉｔｃｈｉ Ｐ．Ｅ．，ＬＡＹＮ社製，プロアントシアニジン含量９０％以上）５．００ｇを約１００ｍＬの水に分散・溶解後、セパビーズＳＰ８５０で調製したカラム（内径３．８ｃｍ、長さ２０ｃｍ、約２３０ｍＬ）に付して水で溶出して得た画分を濃縮、凍結乾燥してポリマー末３．０２ｇ（６０．４％）を得た。得られたライチ果実ポリフェノールポリマー末１．００ｇ及茶抽出物（ＰＦ−ＴＰ９０、株式会社ファーマフーズ研究所製、茶ポリフェノール含有量９０％以上、総カテキン含有量８０％以上うちＥＧＣＧ含量５０％以上）３００ｍｇを５００ｍｇのクエン酸とともに５０ｍＬの水に溶解して３時間湯煎（８７〜９３℃）、反応させた後、室温まで放冷した。この液をダイヤイオンＨＰ２０で調製したカラム（内径３ｃｍ、長さ１４ｃｍ、約１００ｍＬ）にチャージした後、約３００ｍＬの水で洗浄後、約２００ｍＬのメタノールで溶出して得た画分を濃縮、凍結乾燥して粉末１．８０ｇを得た。

メタボリックシンドロームに該当する５９名（男性４７名女性１２名）を以下の各群１７〜２１人の３群に分けて実験を行った。
１）プラセボ群：プラセボのみを投与された。
２）２００−２００群：マンゴスチン果皮抽出物とライチ抽出物をそれぞれ、一人当たり２００ｍｇ／日となるように投与された。両者は粉末状で、マンゴスチン果皮抽出物は、実施例１で調製したものを用いた。ライチ抽出物としては、オリゴノール（アミノアップ化学）を用いた。
３）２００−０群：粉末状のマンゴスチン果皮抽出物を一人当たり２００ｍｇ／日投与された。
それぞれ、投与は１２週間行い、体重、腹囲、体脂肪、血液パラメーターを経時的に測定した。

結果を図１に示す。また、被験者のうち、血糖値１１０以上の患者のみのデータを解析した結果を図２に、腹囲における内臓脂肪面積が１００〜２００ｃｍ^２の患者のみのデータを解析した結果を図３に、ＢＭＩが２５〜３０の患者のみのデータを解析した結果を図４に示す。

結果を以下のとおり、表１から表４に示す。

表１の結果から、全ての群で、体重には目立った変化はなく、２００−２００群では、ウエストと内臓脂肪面積について、群間で減少傾向がみられることが分かる。また、２００−２００群では、ウエストと内臓脂肪面積と総脂肪面積が摂取前と比べて有意に減少していた。２００−０群もウエストが摂取前と比べて１．６ｃｍ有意に減少していた。

表２の結果から、血圧、血糖については、群間での有意な差はみられず、血糖値はいずれの群でも摂取前と比べて有意に減少しており、２００−２００群が最も顕著であったことが分かる。次いで２００−０群の減少が大きかった。
表３より、２００−２００群では総コレステロールが摂取前と比べて最も顕著に、有意に減少したことが分かる。２００−０群では総コレステロールが有意ではないが摂取前と比べて減少していた。

また、被験者らにはアンケートをとった。アンケートでは、摂取前と比べて実感したことについて「摂取前と比べて何か実感されたことはございますか？」と問い合わせ、「１とても実感した ２やや実感 ３どちらともいえない ４あまり実感しなかった ５全く実感しなかった」として、各群の点数の平均を求めた。また、痩せた・お腹周りがすっきりした、体が軽くなった、便通改善、体がポカポカする、目覚めがよくなった、遠視が改善といったポジティブコメントに該当するかチェックをしてもらった。これらの結果は表５−１、及び５−２に示す。表５−２の結果から、２００−２００群では、ポジティブコメントを選択した人数が多いことが分かる。

全体の結果をまとめると以下のとおりである。すなわち、いずれの群においても、体重とアディポネクチンの大きな変化は見られなかった。ウエストと内臓脂肪面積は２００−２００群で減少傾向にあった（−２．３ｃｍ、−１０．９ｃｍ２）。総コレステロールは２００−２００群で有意に減少した（２３８→２２７ｍｇ／ｄＬ）。高血糖者の血糖値と内臓脂肪面積が２００−２００群で有意に減少した。アンケートにおいて２００−２００群で「ベルトの穴が１つ下がった」「身体が軽くなった気がする」など、ポジティブなコメントが多かった（１３人／２１人）。

Claims (2)

1. マンゴスチンの未乾燥果皮を粉砕し、水とエタノールの組み合わせからなる抽出溶剤によって攪拌抽出し、前記攪拌抽出したものをろ過したろ液を減圧乾燥して、マンゴスチン果皮抽出物を得る工程と、
   前記マンゴスチン果皮抽出物を酢酸エチルに溶解させ、水で洗浄して、酢酸エチル画分の溶媒を溜去させて、マンゴスチン果皮抽出物の乾燥物を得る工程と、
   前記マンゴスチン果皮抽出物の乾燥物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン−酢酸エチル系で漸次、極性を上げるグラジエント溶出を行い、複数の画分を得る工程と、
   前記複数の画分のうち最初に得られた画分を再度シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、黄色結晶状のα−マンゴスチンの試料を得る工程と、
   前記複数の画分のうち２つめの画分を再度シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、黄色非結晶状のγ−マンゴスチンの試料を得る工程と、
   黄色結晶状のα−マンゴスチン２０重量部と、黄色非結晶状のγ−マンゴスチン５重量部とを調整して粉末状のマンゴスチン果皮抽出物の調整乾燥物を得る工程と、を具備する、マンゴスチン果皮抽出物からなる、メタボリックシンドローム治療剤の製造方法。
2. 請求項１に記載の各工程によって得られた粉末状のマンゴスチン果皮抽出物の調整乾燥物と、
   ライチの果皮、果肉、及び薄皮部から抽出され、低分子化された粉末状のライチ果実抽出末とを、同重量比で調整する工程をさらに具備する、メタボリックシンドローム治療剤の製造方法であって、
   前記マンゴスチン果皮抽出物は、黄色結晶状のα−マンゴスチン２０重量部と、黄色非結晶状のγ−マンゴスチン５重量部とからなる粉末状調整末からなり、
   前記ライチ果実抽出末は、ライチ果実ポリフェノールポリマー末１０重量部と、茶抽出物３重量部とを、クエン酸５重量部と共に反応させてなる粉末状調整末からなる、メタボリックシンドローム治療剤の製造方法。