WO2007037060A1 - Ｉ型コラーゲン産生促進用組成物 - Google Patents

Abstract

　ヒト皮膚線維芽細胞のＩ型コラーゲンの産生を促進する組成物を提供することを目的とし、シリビンおよびコラーゲン産生を促進するペプチド（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｈｙｐ、Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｓｅｒ、またはＧｌｙ－Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ａｒｇのアミノ酸配列からなるペプチド）を含有するI型コラーゲン産生促進用組成物。

Description

明 細 書

I型コラーゲン産生促進用組成物

技術分野

[0001] 本発明は、ヒト皮膚線維芽細胞が産生する I型コラーゲンの産生促進効果を有する 組成物に関する。

背景技術

[0002] コラーゲンは、生体内蛋白質の約 1Z3を占め、血管や皮膚、骨に多く存在し、細 胞の足場としてこれら組織の形成、構築に重要な役割を果たしている。コラーゲンは 、消化酵素でほとんど分解されないため栄養価の低い蛋白質と考えられていたが、コ ラーゲンを摂取することによる新陳代謝促進 (特許文献 1)、頭髪の育毛促進 (非特許 文献 1)、関節症治療用薬剤としての利用（特許文献 2)等が報告されており、有効性 が見直されている。さらに、コラーゲンは年齢とともに減少することから血管の脆弱化 や皮膚の弾力性、柔軟性の減少によるしわやたるみ発生の一因と考えられている。

[0003] コラーゲンの熱変性体であるゼラチンは、その高 、粘性、凝固性および保水性を利 用して、食品の食感改良剤や化粧品（特許文献 3)として利用されている。しかし、未 処理のコラーゲンおよびゼラチンは粘性が高ぐ凝固しやすいため、部分加水分解 処理されたものを使用することが多い。また、タンパク質であるため抗原性を有し、ァ レルギ一体質のヒトの摂取には問題がある。そのため、コラーゲンをコラーゲナーゼ によって低分子化することにより、抗原性をなくしたアレルギー患者向けのタンパク資 源あるいは輸液製剤成分としての利用が報告されている（特許文献 4)。コラーゲナ ーゼによるコラーゲン分解物の生理活性については、フイブリン凝集阻害活性 (特許 文献 5)、麻酔作用（非特許文献 2)が知られている。また、 Clostridium histolytic um由来のコラーゲナーゼによるコラーゲンの分解産物に関しては、生成するトリぺプ チドの 36%が Gly— Pro— Hypで最も多いと報告がある（非特許文献 3)。

[0004] Gly— Pro— Hypを含むコラーゲナーゼによるコラーゲン分解物を有効成分とする 皮膚外用剤をしわなどの抗皮膚老化目的で使用する試みがなされている (特許文献 6)。 また、 Gly— Pro— Hypを含むコラーゲナーゼによるコラーゲン分解物で特に分子 量 400以下のものを含む生体コラーゲン産生促進剤が開発されている（特許文献 7) コラーゲナーゼによるコラーゲン分解物は、生体コラーゲンの原料となりコラーゲン 合成を促進すると考えられる。その他、コラーゲン産生を促進するペプチドとして α 1 コラーゲンの分解物由来のペンタペプチドである Lys—Thr—Thr—Lys— Ser (非 特許文献 4)、 a 2コラーゲンの分解物由来のトリペプチドである Gly— His— Lys (非 特許文献 5)、 immunoglobulin Gの分解物由来のペンタペプチドである Gly— G1 u-Pro -Arg (非特許文献 6)などが開発されて 、る。

[0005] 一方で、生体コラーゲンの原料として作用するのではなぐコラーゲンの産生を促 進する成分が見出されている。例えば、レチノイン酸やその誘導体であるレチノール（ 非特許文献 7)およびマリアァザミエキス由来成分シリマリン (特許文献 8)などが開発 されている。また、レチノイン酸やその誘導体であるレチノール (非特許文献 8)および マリアァザミエキス由来成分シリマリン (特許文献 9)はコラーゲン分解酵素であるコラ ーゲナーゼを抑制することも明らかになつている。

[0006] レチノイン酸やその誘導体であるレチノールは皮膚刺激性を始め、安全性面で問 題があること (非特許文献 9)や、安定性が悪いことから、一般的な実用には適さない このように生体コラーゲンを増加させるための種々の成分および組成物が開発され てきたが、安全性を兼ね備えつつ、十分に有効な作用を及ぼすには至っていない。

[0007] 本発明は、シリビンおよび各種ペプチドを併用した場合に、各々単独使用よりも相 乗的な I型コラーゲンの産生促進作用を有することを見出し、完成させたものである。

[0008] 特許文献 1 :特開平 7— 278012

特許文献 2：特開昭 63 - 39821

特許文献 3：特開昭 52— 111600

特許文献 4：特開平 7 - 82299

特許文献 5 :特開平 6—46875

特許文献 6：特許第 3504205号 特許文献 7：特開 2001— 1310844

特許文献 8:WO2004Z085429

特許文献 9:特開 2002— 173424

特許文献 10：特開平 5— 286864号公報

特許文献 11：特許第 2948818号

特許文献 12:特開 2000— 169328号公報

特許文献 13:特開 2000— 169332号公報

特許文献 14： #112002- 255448^- 特許文献 15：特公平 5 - 9406号公報

特許文献 16:特公昭 63— 41396号公報

特許文献 17：特開 2002— 255847号公報

非特許文献 1: Nutrition Reports International, 13, 579, 1976 非特許文献 2:Br. Pharmacol. , 69, 551, 1980

非特許文献 3: Biochem. , 50, 486, 1961

非特許文献 4: Biol. Chem. , 268(14), 9941-9944, 1993

非特許文献 5: Ann. NY Acad. Sci. , 580, p573

非特許文献 6:Int J Pept Protein Res. , 17(4), p430— 435. , 1981 非特許文献 7: Invest. Dermatol. , Vol.94, No.5, p717-723, 1990 非特許文献 8:Varani J. , et al. , J Invest. Dermatol. , 116, 480—

486, 2000

非特許文献 9:Zouboulis, C. C. , Retinoids： Is there a New Approach？ , IFSCC Magazine, Vol.3, No.3, 2000

非特許文献 10: Wagner, H. , etal. , Arznein. Forsch, 24, 466, 1974.

非特許文献 ll:Tittel, G. , etal. , J. Chromatogr. , 135, 499, 1977.

特許文献 12:Tittel, G. , etal. , J. Chromatogr. , 153, 227, 1978.

非特許文献 13:Quercia, V. , etal. , Chromatography in Biochemistry, Med icine and Environmental Research, Frigerio A. (Ed) . , Elsevier Scientific

Publishing Company, Amsterdam, 1983, pi. 非特許文献 14:Lowry,0. et. al. , J. Biol. Chem. , 193, 265,1951

非特許文献 15 : M. J. Barttek, etal. , J. Invest. Dermatol. , 58, 114, 1972 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0009] 本発明は、ヒト皮膚線維芽細胞の I型コラーゲンの産生を促進する組成物を提供す ることを課題とする。

課題を解決するための手段

[0010] 本発明者は、より効果的に I型コラーゲンの産生を高めるための検討を行った。その 結果、コラーゲンの原料として作用してコラーゲン産生を促進するコラーゲン由来べ プチドおよびシリビンを併用すると、 I型コラーゲンの産生が相乗的に促進されること を見出し、本発明を完成した。

[0011] すなわち、本発明は、 1 シリビンおよびコラーゲン産生を促進するペプチドを含有 することを特徴とする I型コラーゲン産生促進用組成物、 2 コラーゲン産生を促進す るペプチドが、 Gly— Pro— Hyp、 Gly— His— Lys、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 または Gly— Glu— Pro— Argのアミノ酸配列からなるペプチドから選ばれる 1種また は 2種以上である請求項 1に記載の組成物、 3 しわ、たるみ、くすみ、しみの予防お よび Zまたは改善用である請求項 1〜4いずれかに記載の組成物、 4 シリビンおよ び Gly— Pro— Hyp、 Gly— His— Lys、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、または Gly — Glu— Pro— Argのアミノ酸配列からなるペプチド力 選ばれる 1種または 2種以上 を含有することを特徴とする化粧料、 5 シリビンおよび Gly— Pro— Hyp、 Gly -His -Lys, Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、または Gly— Glu— Pro— Argのアミノ酸配 列からなるペプチド力 選ばれる 1種または 2種以上を含有することを特徴とする食品 、 6 動物用である請求項 1または 2に記載の組成物、に関する。

発明の効果

[0012] シリビンとコラーゲン産生を促進するペプチドを併用することにより、ヒト皮膚線維芽 細胞の I型コラーゲンの産生を促進する効果に優れた組成物を提供することができた 本発明の組成物を化粧料として適用する、あるいは食品として摂取することにより、皮 膚のはりや弾力性を向上させ、しわやたるみを予防、防止、改善することが期待でき る。

また、本発明の組成物は皮膚に対する安全性が高いものである。

図面の簡単な説明

[図 1]シリビン、シリジァニン、シリクリスチンの三次元皮膚モデルにおける I型コラーゲ ン産生をウェスタンブロッテイングにより検出した図である。

[図 2]図 1の結果を画像解析処理により数値ィ匕した図を示す。

[図 3]Gly— Pro— Hyp (G— P— Hypと記載する）配列のトリペプチドの三次元皮膚 モデルにおける I型コラーゲン産生をウェスタンブロッテイングにより検出した図である

[図 4]図 2の結果を画像解析処理により数値ィ匕した図を示す。 Gly— Pro— Hypを G P— Hypと記載した。

[図 5]Gly— Pro— Hyp (G— P— Hypと記載する）配列のトリペプチドおよびシリビン の三次元皮膚モデルにおける I型コラーゲン産生をウェスタンブロッテイングにより検 出した図である。

[図 6]図 3の結果を画像解析処理により数値ィ匕した図を示す。 Gly— Pro— Hypを G P— Hypと記載した。

[図 7]Lys— Thr— Thr— Lys— Ser (K— T— T— K— Sと記載する）、 Gly— His— L ys (G-H- Kと記載する）、 Gly— Glu— Pro— Arg (G— Q— P— Rと記載する）酉己 列のペプチドおよびシリビンの三次元皮膚モデルにおける I型コラーゲン産生をゥェ スタンプロッテイングにより検出した図である。

[図 8]図 7の結果を画像解析処理により数値ィ匕した図を示す。 Lys— Thr— Thr— Ly s— Serを K T T K Sと、 Gly— His— Lysを G— H— Kと、 Gly— Glu— Pro— Argを G— Q— P— Rと記載する。

[図 9]Lys— Thr— Thr— Lys— Ser (K— T— T— K— Sと記載する）、 Gly— His— L ys (G-H- Kと記載する）、 Gly— Glu— Pro— Arg (G— Q— P— Rと記載する）酉己 列のペプチドおよびシリビンを併用した場合の三次元皮膚モデルにおける I型コラー ゲン産生をウェスタンブロッテイングにより検出した図である。

[図 10]図 9の結果を画像解析処理により数値ィ匕した図を示す。 Lys-Thr-Thr-L ys— Serを K— T— T— K— Sと、 Gly— His— Lysを G— H— Kと、 Gly— Glu— Pro Argを G— Q— P— Rと記載する。

発明を実施するための最良の形態

[0014] シリマリン（Silymarin;CAS No. 65666— 07— 1)は、キク科マリアァザミ（学名シ リバム'マリアナム Silibum marianum Gaertn、別名ォオアザミ、ォォヒレアザミ、 ミルクァザミ； CAS No. 84604— 20— 6)から抽出されるフラボノリダナンの総称で あり、分子式 C H O で表されるシリビン（Silvbin;CAS No. 22888— 70— 6)、

25 22 10

シリジァニン（Silydianin;CAS No. 29782— 68— 1)、シリクリスチン（Silychristi n;CAS No. 33889— 69— 9)、イソシリビン（Isosilybin;CAS No. 72581 - 71 —6)などを含有している組成物である（非特許文献 10)。本発明においては、マリア ァザミ抽出物に含有されるこれらのフラボノリダナンを含有している組成物を従来技 術と同様、シリマリンと呼ぶ。またシリマリンは前記の通りフラボノリダナンの混合物で あり、シリマリンとしての植物抽出物や植物中の含有量は、分光光度計による測定に 基づいた方法 (非特許文献 11)、薄層クロマトグラフィーによる方法 (非特許文献 9)、 高速液体クロマトグラフィーによる方法 (非特許文献 12〜 14)により測定可能である。 これらの測定法の中でも、分光光度計による測定に基づいた方法の一つである 2,4 ージニトロヒドラジン分析は、ドイツ薬局方（Silybum marianumの果実に関するモノ グラフ）に報告されており、広く用いられている。

本発明においても、上記成分の混合組成物の定量にあたっては 2,4 ジニトロヒド ラジン分析法を用いてシリビンに換算した質量％で表記する。

[0015] シリマリンは古くからヨーロッパで肝臓疾患の予防及び治療を目的として使用されて いる。また、酸ィ匕防止剤として広く知られている。皮膚に対して有用な組成物として、 乾癬及びアトピー性皮膚炎治療製剤 (特許文献 10)、フラボノリダナンとリン脂質との 錯体を活性成分として含み、紅斑、火傷、皮膚または粘膜のジストロフィー状態、皮 膚炎等の治療、皮膚の老化防止及び放射線、風、太陽などの外部環境からの刺激 保護に有用な組成物 (特許文献 11)、表皮透過バリア強化剤 (特許文献 12)、皮脂 分泌抑制剤 (特許文献 13)、表皮の偏平化を予防、防止、改善する皮膚老化防止用 組成物 (特許文献 14)、抗酸化能に起因する皮膚老化防止用の化粧料 (特許文献 1 5)、ヒト皮膚線維芽細胞および三次元皮膚モデルにおける I型コラーゲン産生促進 用組成物 (特許文献 8)が開発されている。

[0016] シリマリンをマリアァザミの果実から高純度で単離する方法として、 70〜80%の純 度で単離する方法や 90〜96%の純度で単離する方法 (特許文献 16)が既に報告さ れている。シリマリンは通常マリアァザミの種実からエタノール、酢酸ェチル、アセトン などにより抽出し、スプレードライにより乾燥粉末として得られる抽出物原料として巿 販されている。本発明に使用するシリビンはこのようにして調製されて、市販されてい るシリビンを含有するシリマリンをそのまま用いることができる。また、マリアァザミから シリビンを濃縮した抽出物及びシリビンを単離、精製して化合物として用いることがで きる。

[0017] 本発明におけるシリビンを含む植物体は、葉、茎、芽、花、木質部、木皮部 (榭皮） などの地上部、根、塊茎などの地下部、種子、榭脂などのすべての部位が使用可能 である。

本発明におけるシリビン及びそれを含む植物体は、それら自体を乾燥させた乾燥 物及びそれらを各種溶媒を用いて溶解した溶解物として使用できる。例えば、水また はエタノール、メタノールなどのアルコール類、プロピレングリコール、 1, 3—ブチレン グリコールなどの多価アルコール、エーテル、アセトン、酢酸ェチルなどの有機溶媒 を用 ヽて溶解した溶解物として使用できる。

[0018] 本発明におけるシリビンを含む植物体は、天然乾燥、熱風乾燥、凍結乾燥させたり 、醱酵させたりしたものをそのまま使用することができる。また植物抽出物を調製する 場合は常法に従って、抽出、濃縮、粉末ィ匕などの処理を行って得られたものを使用 することができる。

[0019] 本発明のコラーゲン産生を促進するペプチドとしては、 Gly— Pro— Hyp、 Gly-H is— Lys、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、または Gly— Glu— Pro— Argのアミノ酸 配列からなるペプチドが好まし!/、。

[0020] Gly— Pro— Hypは、コラーゲン成分またはゼラチン成分をコラーゲナーゼにより特 異的に分解して得られるペプチド組成物であり、従来のコラーゲン、ゼラチンまたは その加水分解物よりも速やかに効率良く消化吸収されることが知られて 、る（特許文 献 17)。前述のように Clostridium histolyticum由来のコラーゲナーゼによるコラ 一ゲンの分解産物に関しては、生成するトリペプチドの 36%が Gly— Pro— Hypで 最も多いとの報告 (非特許文献 3)があることから、特に Gly— Pro— Hypの効率的な 製造方法である。本発明に用いる Gly—Pro— Hypは化学合成したものを用いてもよ い。

[0021] 本発明に用いる Gly— His— Lysは oc 2プロコラーゲンをコラナーゼなどのコラーゲ ン分解酵素により分解した生成物を用いることができる。また、化学合成したものを用 いてもよい。

[0022] 本発明に用いる Lys— Thr— Thr— Lys— Serは oc 1プロコラーゲンをコラナーゼな どのコラーゲン分解酵素により分解した生成物を用いることができる。また、化学合成 したものを用いてもよい。

[0023] 本発明に用いる Gly— Glu— Pro— Argは immunoglobulin Gをトリプシンなどの 分解酵素により分解した生成物を用いることができる。また、化学合成したものを用い てもよい。

[0024] 本発明の I型コラーゲン産生促進用組成物は、真皮の細胞外マトリックスを構成する 主要タンパク質である I型コラーゲンの産生を促進し、皮膚のはりや弾力性を向上さ せ、加齢や紫外線照射などにより引き起こされるしわやたるみの形成を予防、防止、 改善し、皮膚を若々しく保つことができる。

[0025] 本発明の I型コラーゲン産生促進用組成物は、化粧料などの皮膚外用剤、経口用 の食品として製造することができる。

化粧料としては、シリビン、シリビンの供給源としてシリマリン、シリビンを含む植物体ま たはその植物抽出物のいずれかと、 Gly - Pro -Hyp, Gly—His— Lys、 Lys—Th r- Thr -Lys - Ser、 Gly— Glu— Pro—Argから選択されるペプチドを直接または 小麦胚芽油あるいはォリーブ油などに添加して、化粧料成分として使用し、化粧料を 製造することができる。

[0026] 食品としては、シリビン、シリビンの供給源としてシリマリン、シリビンを含む植物体ま たはその植物抽出物のいずれかと、 Gly-Pro-Hyp, Gly—His— Lys、 Lys—Th r-Thr-Lys-Ser, Gly—Glu—Pro—Argから選択されるペプチドを直接、また は種々の栄養成分を添加して食品として使用できるし、所望の食品に配合しても良 い。例えば、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの 適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒 状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して健康補助食品、保健機能食品な どとすることができる。また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食 品、力まぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に 添加してもよぐ水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。

[0027] 本発明の I型コラーゲン産生促進用組成物におけるシリビンと各種ペプチドとの配 合比率 (モル比）は、各々の成分の調製法、製剤の形態などにより、適宜選択、決定 され、特に限定されないが、シリビンが 1に対して、各種ペプチドを 2〜6の割合で配 合するのが好ましい。

[0028] 本発明の I型コラーゲン産生促進用糸且成物、化粧料、食品へのシリビン及びコラー ゲン産生を促進するペプチドの有効配合量は、各々の成分の調製法、製剤の形態 などにより、適宜選択、決定され、特に限定されないが、皮膚外用剤として用いる場 合はシリビンおよびコラーゲン産生を促進するペプチドをそれぞれ 0. 01〜2重量％ を含有させることが好ましい。一方、錠剤やドリンクなどとして食品として用いる場合は 0. 1〜10重量％を含有させることが好ましい。

[0029] 本発明の I型コラーゲン産生促進用組成物、化粧料、食品の有効適用量は、適用 経路、適用スケジュール、製剤形態などにより、適宜決定することができる。例えば、 1日当り 0. 01g〜10gの範囲で適宜調節して、 1回または数回に分けて適用できる。

[0030] 食品としては、直接、又は種々の栄養成分を添加して使用できる。例えば、澱粉、 乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの適当な助剤を添加し た後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カブ セル、ペーストなどに成形して健康補助食品、保健機能食品などとして、食用に供し てもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ 、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使 用してもよぐ水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。その ような剤、食品は、通常採用されている製剤化技術により製造することができる。

[0031] 化粧料としては、直接又は小麦胚芽油あるいはォリーブ油などに添加して、化粧料 成分として使用し、これらを用いて化粧料を製造することができる。

非経口適用の組成物は、例えば水溶液、油剤、乳液、懸濁液等の液剤、ゲル、タリ ーム等の半固形剤、粉末、顆粒、カプセル、マイクロカプセル、固形等の固形剤の形 態で適用可能である。従来力 公知の方法でこれらの形態に調製し、ローション剤、 乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏、硬膏、ハツプ剤、エアゾール剤、坐剤、注射剤、粉 末剤等の種々の剤型とすることができる。これらを身体に塗布、貼付、噴霧等により 適用することができる。特にこれら剤型の中で、ローション剤、乳剤、クリーム剤、軟膏 剤、硬膏剤、ハツプ剤、エアゾール剤等が皮膚外用剤に適している。化粧料としては 、化粧水、乳液、クリーム、ノ ック等の皮膚ィ匕粧料、メイクアップベースローション、メイ クアップクリーム、乳液状又はクリーム状あるいは軟膏型のファンデーション、口紅、 アイカラー、チークカラーといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッダクリーム、 ボディローション等の身体用化粧料等とすることができる。

[0032] 増量剤と混合した組成物の状態としておくと便利に使用できる。増量剤としては、グ ルコース、ラタトース、マルトース、ショ糖等の糖類、ソルビトール等の糖アルコール、 デキストリン、サイクロデキストリン等の加工澱粉、小麦澱粉、コーンスターチ等の澱粉 類、カゼイン、大豆タンパク質等のタンパク質、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、 カゼインナトリウム、ゼラチン、ぺクチン、粉末セルロース、カルボキシメチルセルロー ス等の高分子安定剤、レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪 酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等の乳化剤、カルシウム粉末等が使用できる

[0033] 本発明の I型コラーゲン産生促進用組成物、化粧料、食品には、抗酸化作用を有 する化合物を含有させることができる。抗酸化作用を示す化合物は、特に限定される ものではないが、例えば各種ビタミン類、ルチン等の各種ポリフエノール類、トコトリエ ノール、補酵素 Q10およびそれらを含有する天然成分などが挙げられる。

[0034] 本発明の I型コラーゲン産生促進用組成物、化粧料、食品には、生体内の異常タン パク質の蓄積除去を促進する成分を含有させることができる。生体内の異常タンパク 質の蓄積除去を促進する成分は、特に限定されるものではないが、例えば大豆サボ ニン、ケール抽出物、シラン抽出物、アヤメ抽出物などが挙げられる。

[0035] その他、用途や剤型に応じて次のようなものを添加することができる。

油脂類としては、例えば、ツバキ油、月見草油、マカデミアナッツ油、ォリーブ油、ナ タネ油、トウモロコシ油、ゴマ油、ホホバ油、胚芽油、小麦胚芽油、トリオクタン酸ダリ セリン、等の液体油脂、カカオ脂、ヤシ油、硬化ヤシ油、パーム油、パーム核油、モク ロウ、モクロウ核油、硬化油、硬化ヒマシ油等の固体油脂、ミツロウ、キャンデリラロウ、 綿ロウ、ヌカロウ、ラノリン、酢酸ラノリン、液状ラノリン、サトウキビロウ等のロウ類が挙 げられる。

[0036] 炭化水素類としては、例えば、流動パラフィン、スクワレン、スクヮラン、マイクロクリス タリンワックス等が挙げられる。

高級脂肪酸として、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ノルミチン酸、ステアリン酸、ォ レイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサへキサェン酸（DHA)、エイコサペンタエン酸 (EPA)等が挙げられる。

高級アルコールとして、例えば、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、セチル アルコール、セトステアリルアルコール等の直鎖アルコール、モノステアリルグリセリン エーテル、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、オタチルドデカノー ル等の分枝鎖アルコール等が挙げられる。

シリコーンとして、例えば、鎖状ポリシロキサンのジメチルポリシロキサン、メチルフエ- ルポリシロキサン等、環状ポリシロキサンのデカメチルシクロペンタシロキサン等が挙 げられる。

[0037] ァ-オン界面活性剤として、例えば、ラウリン酸ナトリウム等の脂肪酸塩、ラウリル硫 酸ナトリウム等の高級アルキル硫酸エステル塩、 POEラウリル硫酸トリエタノールアミ ン等のアルキルエーテル硫酸エステル塩、 N—ァシルサルコシン酸、スルホコハク酸 塩、 N—ァシルアミノ酸塩等が挙げられる。

カチオン界面活性剤として、例えば、塩化ステアリルトリメチルアンモ -ゥム等のァ ルキルトリメチルアンモ -ゥム塩、塩化ベンザルコ-ゥム、塩化べンゼトニゥム等が挙 げられる。

両性界面活性剤として、例えば、ァノレキノレべタイン、アミドべタイン等のベタイン系 界面活性剤等が挙げられる。

非イオン界面活性剤として、例えば、ソルビタンモノォレエート等のソルビタン脂肪 酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体が挙げられる。

[0038] 防腐剤として、例えば、メチルパラベン、ェチルパラベン等を挙げることができる。

金属イオン封鎖剤として、例えばエチレンジァミン四酢酸ニナトリウム、ェデト酸、ェ デト酸ナトリウム塩等のェデト酸塩を挙げることができる。

[0039] 高分子として、例えば、アラビアゴム、トラガカントガム、ガラクタン、グァーガム、カラ ギーナン、ぺクチン、寒天、クィンスシード、デキストラン、プルラン、カルボキシメチル デンプン、コラーゲン、カゼイン、ゼラチン、メチルセルロース、メチルヒドロキシプロピ ノレセノレロース、ヒドロキシェチノレセノレロース、カノレボキシメチノレセノレロースナトリウム（C MC)、アルギン酸ナトリウム、カルボキシビュルポリマー（CARBOPOL等）等のビ- ル系高分子、等を挙げることができる。

[0040] 増粘剤として、例えば、カラギーナン、トラガカントガム、クィンスシード、カゼイン、 デキストリン、ゼラチン、 CMC、ヒドロキシェチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル ロース、カノレボキシビ-ノレポリマー、グァーガム、キサンタンガム、ベントナイト等を挙 げることができる。

[0041] 粉末成分としては、例えば、タルク、カオリン、雲母、シリカ、ゼォライト、ポリエチレン 粉末、ポリスチレン粉末、セルロース粉末、無機白色顔料、無機赤色系顔料、酸化チ タンコーテッドマイ力、酸化チタンコーテッドタルク、着色酸化チタンコーテッドマイ力 等のパール顔料、赤色 201号、赤色 202号等の有機顔料を挙げることができる。

[0042] 紫外線吸収剤としては、例えば、ノラァミノ安息香酸、サリチル酸フエニル、ノ ラメト キシケィ皮酸イソプロピル、パラメトキシケィ皮酸ォクチル、 2, 4—ジヒドロキシベンゾ フエノン、等を挙げることができる。

紫外線遮断剤として、例えば、酸化チタン、タノレク、力ノレミン、ベントナイト、カオリン、 酸ィ匕亜鉛等を挙げることができる。

[0043] 保湿剤として、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレン グリコール、 1, 3 ブチレングリコール、 1, 2 ペンタンジオール、グリセリン、ジグリ セリン、ポリグリセリン、キシリトール、マルチトール、マルトース、ソルビトール、ブドウ 糖、果糖、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、ピロ リドンカルボン酸、シクロデキストリン等が挙げられる。

[0044] 薬効成分としては、例えば、ビタミン A油、レチノール等のビタミン A類、リボフラビン 等のビタミン B類、ピリドキシン塩酸塩等の B類、 Lーァスコルビン酸、 L ァスコルビ

2 6

ン酸リン酸エステル、 L ァスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、 L ァスコルビン 酸ジパルミチン酸エステル、 Lーァスコルビン酸 2—ダルコシド等のビタミン C類、パ ントテン酸カルシウム等のパントテン酸類、ビタミン D、コレカルシフエロール等のビタ

2

ミン D類； a—トコフエロール、酢酸トコフエロール、ニコチン酸 DL— a—トコフェロー ル等のビタミン E類等のビタミン類を挙げることができる。

プラセンタエキス、ダルタチオン、ユキノシタ抽出物等の美白剤、ローヤルゼリー、ブ ナノキエキス等の皮膚賦活剤、カブサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモ ール、カフェイン、タンニン酸、 γ オリザノール等の血行促進剤、グリチルリチン酸 誘導体、グリチルレチン酸誘導体、ァズレン等の消炎剤、アルギニン、セリン、口イシ ン、トリブトファン等のアミノ酸類、常在菌コントロール剤のマルトースショ糖縮合物、 塩化リゾチーム等を挙げることができる。

さらに、力ミツレエキス、パセリエキス、ブナノキエキス、ワイン酵母エキス、グレープ フノレーツエキス、スィカズラエキス、コメエキス、ブドゥエキス、ホップエキス、コメヌカェ キス、ビヮエキス、ォゥバタエキス、ョクイ-ンエキス、センブリエキス、メリロートエキス 、パーチエキス、カンゾゥエキス、シャクャクエキス、サボンソゥエキス、へチマエキス、 トウガラシエキス、レモンエキス、ゲンチアナエキス、シソエキス、アロエエキス、ローズ マリーエキス、セージエキス、タイムエキス、茶エキス、海藻エキス、キューカンバーェ キス、チヨウジエキス、ニンジンエキス、マロニエエキス、ノヽマメリスエキス、クヮエキス 等の各種抽出物を挙げることができる。

[0045] 次に、試験例、実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明の効果はこれら 試験例、実施例に限定されるものではない。

[0046] [薬剤の調製] シリビン（Silibin；シグマ アルドリッチ）を生化学用試薬グレードのジメチルスルホ キシド (DMSO ;和光純薬）により溶解した溶液を培養液に適当量添加し、三次元皮 膚モデルに処理した。

シリマリン (シグマ アルドリッチ）を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（ DMSO ;和光純薬）により溶解した溶液を培養液に適当量添加し、三次元皮膚モデ ルに処理した。

シリジァニン、シリクリスチンは次のような方法で分画を行った。シリマリン (シグマ アルドリッチ） 2 gをエタノール 10 mlに溶解し、 ODSカラム（FUJISILYSIA CHEMICAL DM1020T) 200 mlに水対メタノールの比率が 1対 1の溶媒条件を用いて分画し、シリ ジァニン疎画分、シリクリスチン疎画分を得た。

シリジァニン疎画分、シリクリスチン疎画分はそれぞれシリカゲルクロマトグラフィー 200mlに、クロ口ホルム対メタノールの比率が 95対 5の溶媒条件下で分画し、シリクリス チン精製物を 17mg、シリジァニン精製物を 34mg得た。シリクリスチン精製物、シリジ ァニン精製物を生化学用試薬グレードのジメチルスルホキシド（DMSO；和光純薬） により溶解した溶液を培養液に適当量添加し、三次元皮膚モデルに処理した。

Gly— Pro— Hypは市販品を使用した (販売元；和光純薬，製造元； Bachem AG , Switzerland)。

Lys - Thr - Thr— Ly s— Ser、 Gly - His - Lys、 Gly - Glu - Pro - Argは、 日化 テクノサービス (株）に委託して常法に従って合成した。合成後逆相 HPLCにより精 製した。アミノ酸分析および逆相 HPLCによる純度分析により 90%以上の純度で目 的のペプチドが合成されて 、ることを確認した。これらペプチドを生化学用試薬ダレ ードのジメチルスルホキシド（DMSO；和光純薬）により溶解した溶液を培養液に適 当量添加し、三次元皮膚モデルに処理した。

[0047] [ヒト皮膚三次元モデル]

ヒト皮膚三次元モデルはヒトの皮膚の疑似モデルとして、安全性評価や有効性評価 に広く用いられている。ヒト皮膚三次元モデルは、 TESTSKIN (LSE - high) (東洋 紡績)を用いた。

[0048] [各薬剤を処理したヒト皮膚三次元モデル抽出サンプルの調製] TESTSKIN (LSE— high)の外側のゥエルに培地を添カ卩し、 24時間培養した。そ の後、培養液を交換するとともに、各薬剤をアツセィリング内の組織上に 100 1添カロ し、 ³⁶時間培養した。組織を回収し、組織抽出用溶液 OmM Tris-HCl(pH7. 5)、 0. 5% (OctylphenoxyJ polyethoxyethanol (Sigma— Aldrich) }をカロえ、フ ッ化炭素榭脂製ホモジナイザーでホモジナイズした。 10, 000 X G、 30分間遠心し て組織片を除去した後、蒸留水中で 4°C、一晩透析した。その後、凍結乾燥により水 分を除いた。 20倍濃縮になるように組織抽出用溶液を加え、三次元皮膚モデル抽出 サンプルとしてウェスタンブロッテイングに使用した。

[0049] [ウェスタンブロッテイングによる I型コラーゲン産生促進作用の評価]

ヒト皮膚三次元モデル抽出サンプルを用いて 1レーン当り 10 gのタンパク質をァ プライし、 SDS-PAGEで分離後、ニトロセルロース膜に転写した。転写後の-トロセ ルロース膜をブロッキング溶液 (スキムミルクを 5%の濃度になるように 0. 1%のポリオ キシエチレン（20)ソルビタンモノラウレートを含む PBSで溶解した溶液）に浸し、 4°C で一昼夜ブロッキングした。洗浄液 {0. 1%のポリオキシエチレン（20)ソルビタンモノ ラウレートを含む PBS}で洗浄後、一次抗体 {洗浄液で 500ngZmlに調製した I型コ ラーゲンに対するポリクローナル抗体 (ロックランド）}に浸し、室温で 1時間反応させ た。洗浄後、二次抗体 (洗浄液で 250ngZmlに調製したホースラディッシュパーォキ シダーゼ標識ィ匕抗ゥサギィムノグロブリン G)に浸し、室温で 1時間反応させた。洗浄 後、 ECLプラスウェスタンプロッティング検出試薬（アマシャムバイオサイエンス社）を 用いて検出した。また、検出されたバンドをイメージスキャナー（アマシャムノィォサイ エンス社）を用いて取り込み後、イメージマスターソフトウェア（アマシャムバイオサイ エンス社）により解析し、数値化した。

実施例 1

[0050] シリマリンに含まれる T型コラーゲン 谁に閗わる有効成 >の評

ヒト皮膚三次元モデルにシリマリンを 10 /z g/ml シリビン、シリクリスチン、シリジァ ニンをそれぞれ 10 μ Μの濃度で処理し、 I型コラーゲンの量をウェスタンブロッテイン グにより測定した。検出されたバンドを図 1に、検出されたバンドを数値ィ匕したグラフを 図 2に示す。 [0051] シリマリンを 10 μ g/mUシリマリンに含まれる成分であるシリビンを 10 μ Μで処理 した場合には、無処理対照に比べて I型コラーゲン産生がそれぞれ 2. 3倍および 3. 2倍に促進された (図 1および図 2)。一方、シリマリンに含まれる成分であるシリクリス チン、シリジァニンを 10 Μで処理した場合には、無処理対照に比べて I型コラーゲ ン産生がそれぞれ 0. 95倍および 0. 9倍であった（図 1および図 2)。よって、シリマリ ンに含まれる I型コラーゲン産生促進に関わる有効成分はシリビンであることが明らか になった。

実施例 2

[0052] Glv— Pro— HVO単独および Glv— Pro— HVO シリビンを併用した場合の I型コラー ゲン fflの ¾平

ヒト皮膚三次元モデルに Gly— Pro— Hypを 5、 10、 30 Mの濃度で処理し、 I型コ ラーゲンの量をウェスタンブロッテイングにより測定した。検出されたバンドを図 3に、 検出されたバンドを数値ィ匕したグラフを図 4に示す。同様に、 Gly— Pro— Hyp 30 M単独、シリビン 5 μ Μ単独、 Gly— Pro— Hyp30 μ Μとシリビン 5 μ Μ併用で測定 した。得られたバンドを図 5に、それを数値ィ匕したグラフを図 6に示す。

[0053] Gly— Pro— Hypを 5、 10、 30 μ Μで処理した場合には、無処理対照に比べて I型 コラーゲン産生がそれぞれ 1. 05倍、 1. 15倍および 1. 25倍であった（図 3および図 4)。よって、 Gly— Pro— Hyp単独でも I型コラーゲン産生促進作用を示すが、作用 はあまり強くないことが明らかになった。

[0054] Gly -Pro -Hyp 30 μ Μ単独、シリビン 5 μ Μ単独、 Gly—Pro— Hyp30 μ Mとシ リピン 5 Mを併用した場合には、無処理対照に比べて I型コラーゲン産生がそれぞ れ 1. 25倍、 1. 85倍および 4. 25倍であった（図 5および図 6)。よって、 Gly— Pro— Hypおよびシリビンを併用することにより、それぞれ単独よりも相乗的に I型コラーゲン 産生を促進することが明らかになった。

実施例 3

[0055] Lvs— Thr— Thr— Lvs— Ser、 Glv— His— Lvs、 Glv—Glu— Pro— Argそれぞれ 単独および Lvs— Thr— Thr— Lvs— Ser、 Glv— His— Lvs、 Glv— Glu— Pro— Ar gそれぞれ シリビンを併用した場合の I型コラーゲン 牛.促進作用の評価 ヒト皮膚三次元モデルに Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 Gly— His— Lys、 Gly— Glu— Pro— Argをそれぞれ 10および 30 μ Μの濃度で処理し、 I型コラーゲンの量 をウェスタンブロッテイングにより測定した。検出されたバンドを図 7に、検出されたバ ンドを数値化したグラフを図 8に示す。同様に、 Lys - Thr - Thr - Lys - Ser, Gly -His -Lys, Gly— Glu— Pro— Argをそれぞれ 10 μ M単独、シリビン 5 μ Μ単独、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 Gly— His— Lys、 Gly— Glu— Pro— Argそれぞれ 10 μ Mとシリビン 5 μ Μ併用でヒト皮膚三次元モデルに処理し、 I型コラーゲン産生 量を測定した。得られたバンドを図 9に、それを数値ィ匕したグラフを図 10に示す。

[0056] Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 Gly— His— Lys、 Gly— Glu— Pro— Argをそれ ぞれ 10および 30 Mで処理した場合には、無処理対照に比べて I型コラーゲン産 生が Lys— Thr— Thr— Lys— Serの 10および 30 /z M処理で 1. 80倍、 2. 45倍、 G ly— His— Lysの 10および 30 /z M処理で 1. 75倍、 2. 70倍、 Gly— Glu— Pro— A rgの 10および 30 /z M処理で 2. 15倍および 3. 55倍であった（図 7および図 8)。よつ て、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 Gly— His— Lys、 Gly— Glu— Pro— Argはそ れぞれ濃度依存的に I型コラーゲン産生を促進することが明らかになった。

[0057] そして、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 Gly— His— Lys、 Gly -Glu -Pro -Arg をそれぞれ 10 M単独およびシリビン 5 μ Μ単独で処理した場合には、無処理対照 に比べて I型コラーゲン産生がそれぞれ 1. 80倍、 1. 75倍、 2. 10倍および 1. 95倍 (図 9および図 10)であるのに対して、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 Gly— His— L ys、 Gly— Glu— Pro— Argそれぞれ 10 μ Mとシリビン 5 μ Μを併用した場合には、 無処理対照に比べて I型コラーゲン産生がそれぞれ 5. 75倍、 5. 35倍、 4. 95倍に なった（図 9および図 10)。 よって、 Lys— Thr— Thr— Lys— Ser、 Gly— His— Ly s、 Gly— Glu— Pro— Argそれぞれとシリビンを併用することにより、それぞれ単独よ りも相乗的に I型コラーゲン産生を促進することが明らかになった。

[0058] 以下に、本発明の処方例を示すが、本発明はこれら処方例に限定されるものでは ない。

処方例 1 カプセル剤の製造

下記成分を混合し、ゼラチンおよびグリセリンを混合したカプセル基剤中に充填し、 軟カプセルを得た。

(組成） （配合量; mg) マリアァザミ抽出物（ リビン 35 %含有） 25 大豆抽出物（大豆サポニン 80%含有:） 25

Gly - Pro - Hyp (コラーゲン分解精製物） 25 トコトリエノール 3〇

5ッロゥ 1〇 ぶどう種子オイル 1 1 0

[0059] 処方例 2 錠剤の製造

下記成分を混合、打錠し、錠剤を得た。

(組成） （配合量; mg) マリアァザミ抽出物 (シリビン 35%含有） 25 大豆抽出物（大豆サポニン 80%含有） 25

Gly— P「₀ - H_Vp (コラーゲン分解精製物） 25 セルロース 40 デンプン 20 ショ糖脂肪酸エステル 2

[0060] 処方例 3 錠剤の製造

下記成分を混合、打錠し、錠剤を得た。

(組成） （配合量; m g) マリアァザミ抽出物〔シリビン 35 %含有） 25 大豆抽出物（大豆サポニン 80%含有） 25 Lys— Th「― T h「― Lys— Se「（ペプチド） 25 セルロース 40 デンプン 20 ショ糖脂肪醆エステル 2

[0061] 処方例 4 錠剤の製造

下記成分を混合、打錠し、錠剤を得た。 (組成〕 (配合量； mg)

マリアァザミ抽出物 (シリビン 35%含有） 25

大豆抽出物（大豆サポニン 80%含有〕 25

Gly-His-Lvs (ペプチド） 25

セルロース 40

デンプン 20

ショ糖脂肪酸エステル 2

[0062] 処方例 5 錠剤の製造

下記成分を混合、打錠し、錠剤を得た。

(組成） (西己合: Ϊ; mg)

マリアァザミ抽出物 (シリビン 35¾含有：） 25

大豆抽出物〔大豆サポニン 80 ¾含有） 25

Gly- Glu - Pro-Arg (ペプチド) 25

セルロース 40

デンプン 20

ショ糖脂肪酸エステル 2

[0063] 処方例 6 ジュースの製造

(組成) (配合；質量 〕

果糖ブドウ糖液糖 5. 00

クェン酸 10. 40

L—ァスコルビン酸 0. 20

香料 0. 02

色素 0. 1〇

マリアァザミ抽出物〔シリビン 35¾含有） 1. 00

Gly- Pro - Hyp (コラーゲン分解精製物） 1. 00

大豆抽出物（大豆サポニン 85%含有） 1. 00

水 81. 28

[0064] 処方例 7 クリームの製造

下記成分（ 1)〜（ 12)を 80°Cに加熱溶解し油相とする。成分（ 13)〜（ 15)を 70°C に加熱溶解し水相とする。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら 40°Cまで 冷却し、さらに 30°Cまで攪拌冷却してクリームを得た。 (組成〕 〔配合；質量 ½)

(1)ステアリルアルコール 6. 〇

(2)ス脚テアリン酸 2. 〇

）水添ラノリン 4. 〇

(4)スクヮラン 9. 〇

）才クチルドデカノール 10. 〇

(6) POE (25)セチルアルコールエーテル 3. 〇

(7)モノステアリン酸グリセリン 2. 〇

(8)シラン抽出物 0. 1

(9)マリアァザミ抽出物 (シリビン 85%含有） 0. 7

(10) Gly-Pro - Hyp (コラーゲン分解精製物） 0. 1

(11 )防腐剤 適量

(12)香料 量

(13)1 , 3ブチレングリコール 6. 〇

(14) PEG 1500 4. 〇

(15)精製水 残余 処方例 8 クリームの製造

下記成分（ 1)〜（ 12)を 80°Cに加熱溶解し油相とする。成分（ 13)〜（ 15)を 70°C に加熱溶解し水相とする。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら 40°Cまで 冷却し、さらに 30°Cまで攪拌冷却してクリームを得た。

(組成） (配合；質量

0〕ステアリルアルコール 6. 〇

(2)ステアリン酸 2. 〇

(3〕水添ラ 」ン 4. 〇

(4)スクヮラン 9. 〇

(5〕才クチルドデカノール 1〇■ 〇

(6)ΡΟΕ(25)セチルアルコールエーテル 3. 〇

(フ）モノステアリン酸グリセリン 2. 〇

( シラン抽出物 〇■ 1

(9)マリアァザミ抽出物 (シリビン 85%含有） 〇■ 7

(1〇）Lys— Thr— Thr_Lys_Ser (ペプチド） 〇■ 1

(11)防腐剤 適量

03)1， 3プチレングリコール 6. 〇

(14) PEG 1500 4. 〇

(15)精製水 残余 [0066] 処方例 9 クリームの製造

下記成分（ 1)〜（ 12)を 80°Cに加熱溶解し油相とする。成分（ 13)〜（ 15)を 70°C に加熱溶解し水相とする。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら 40°Cまで 冷却し、さらに 30°Cまで攪拌冷却してクリームを得た。

(組成） 〔配合；質量 ½)

(1〕ステアリルアルコール 6. 〇

(2)ステアリン酸 2. 〇

(3)水添ラノリン 4. 0

(4〕スクヮラン 9. 0

(5〕才クチルドデカノール 1 0. 〇

(6) POE (25)セチルアルコールエーテル 3. 〇

(フ）モノステアリン酸グリセリン 2. 〇

(8〕シラン抽出物 0. 1

(9〕マリアァザミ抽出物 (シリビン 85 ¾含有） 0. 7

(1〇）G ly— H is— Lys (ペプチド） 0. 1

(1 1 )防腐剤 適量

0 2)香料 適量

(1 3〕1， 3ブチレングリコール 6. 〇

(1 4) PEG 1 500 4. 〇

(1 5)精製水 残余

[0067] 処方例 10 クリームの製造

下記成分（ 1)〜（ 12)を 80°Cに加熱溶解し油相とする。成分（ 13)〜（ 15)を 70°C に加熱溶解し水相とする。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら 40°Cまで 冷却し、さらに 30°Cまで攪拌冷却してクリームを得た。

(組成） (配合：質量 〕

(1〕ステアリルアルコール 6. 〇

(2)ステアリン酸 2. 〇

(3)水添ラノリン 4. 〇

(4〕スクヮラン 9. 〇

(5〕才クチルドデカノール 1〇■〇

(6) POE (25)セチルアルコールエーテル 3. 〇

(7)モノステアリン酸グリセリン 2. 0

(8〕シラン抽出物 〇. 1

(9〕マリアァザミ抽出物 [；シリビン 85¾含有) 〇· 7

(1〇） Gly— Glu— Pro— A「g (ペプチド:） 0. 1

(1 1 )防腐剤

(1 2)香料 適量

(1 3) 1 , 3ブチレングリコール 6. 〇

(1 4) PEG 1 500 4. 〇

(1 5)精製水 残余

Claims

請求の範囲

[1] シリビンおよびコラーゲン産生を促進するペプチドを含有することを特徴とする I型コ ラーゲン産生促進用糸且成物。

[2] コラーゲン産生を促進するペプチドが、 Gly— Pro— Hyp、 Gly— His— Lys、 Lys

-Thr-Thr - Lys - Ser、または Gly - Glu - Pro—Argのアミノ酸配列からなるぺ プチドから選ばれる 1種または 2種以上である請求項 1に記載の組成物。

[3] しわ、たるみ、くすみ、しみの予防および Zまたは改善用である請求項 1〜4いずれ かに記載の組成物。

[4] シリビンおよび Gly— Pro— Hypゝ Gly— His— Lysゝ Lys - Thr - Thr - Lys - S er

、または Gly— Glu— Pro— Argのアミノ酸配列からなるペプチドから選ばれる 1種ま たは 2種以上を含有することを特徴とする化粧料。

[5] シリビンおよび Gly— Pro— Hypゝ Gly— His— Lysゝ Lys— Thr— Thr— Lys— Ser

、または Gly— Glu— Pro— Argのアミノ酸配列からなるペプチドから選ばれる 1種ま たは 2種以上を含有することを特徴とする食品。

[6] 動物用である請求項 1または 2に記載の組成物。