SK38293A3 - Copposition for the substained and controlled release of a medicinal peptidecontaining substance and preparation method thereof - Google Patents

Description

Vynález sa týka zmesí určených k. predĺženému a kontalovanému uvolňovaniu liečivej peptidovej látky vzorca J.

Ac?~D-Nal--D-pClF'he.....FP -Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NUs v ktorom R³ znamená P-F'al alebo D-Trp„

Také peptidy sú analógmi LHRH a močno ich s výhodou P o uživ a ť p r i t e r a p e u t i c k o m 1 i e č e n í h o r m o n á 1 n e závisí, ý c h P r o b 1. é m o v „ A k n i e j e u v e d e n é i n a k , o 2 n a č u j ú s a a m i n o k y s e 1 .i. n y v zhora uvedenom vzorci I zvyčajným spôsobom a majú konfiguráciu L, D-Na.l znamená D-3~ í Ξ-n a f tyl )a.l ani n a D-F’al z n a m e n á D - 3 -· í 3 - .p y r ;i. d y 1) a 1 a n í n .

Vynález sa týka tiež spôsobu pripravý zhora definovanej zmesi.

Doteraz boli navrhované rôzne roztoky pre prípravu zmesí k p r' e d í ž e n é m u a k o n t r o ]. o v a n é m u u v o 1 ň o v a n j., u 1 .i. e č i v ý c h 1 á t o k ·, pričom sa vyrábajú biodegradovatelné implantáty, mikroskopické zapúzdrenia alebo sa priprávjú pórovité biodegradovatelné matrice vyskytjúce sa napríklad vo forme m .i k. r o g u 1 i č i e k a lebo m i k r o č a s t i c r ô z n y c h v e ľ k o s t í K t ý m t o riešeniam je tu možné citovať EP A 0,052 510, zaoberajúci sa mikrozapúzdrovanim sa separáciou fáz vodorozpustných drog, a EP A 0 05S 481 alebo US A 3 976 071 pre prípravu implantátov alebo pórovitých biodegradovatelných matríc v podstate na báze poly lak t i d u alebo k o-pol y laktid-gl y kol i d u,. Pri týchto postupoch sa biodegrádováteIný polymér alebo kopolymér rozpustí vopred v organickom rozpúšťadle a použije sa potom samo t n á 1 i. e Č i v á 1 á t k a „ a k. o n o s i č , p r i p a c! ne s a r o z. p u s; t í

F’r i iných postupoch vedúcich tiež k tvorbe mik.ro k a psi í alebo mikrogul ičiek sa používa, emul gácia. Základná fáza t a k ý c h t o p o stu p o v s p o č í v a v z í s k a n í e m u 1 z .i. e t y p u o 1 e j v o - v o d e , p r i č: o m s a v y c h á d z a z o r g a n i c k é h o r o z t o k u polymérnej látky a z vodného roztoku peptidu, vi z US-A-4 384 975, 3 891 570, 4 389 330, 3 737 337, 4 652 441 alebo w o -90 /13361, V o v é e t k ý c h p r i p a d o c h j e s n a h a v y v i n ú ť k. o m p 1 e n é & ľahko uskutočniteIné postupy, aby sa zabránilo čo najviac stratám aktívnych peptidových látok, obzvlášť rozpustných vo vode, ako je tomu napríklad pri dvojitej emulgácií.

Ak sa v priebehu niektorého z takých postupov jedná o vytváranie emulzie typu olej vo vode s následným premiestnením do vodného prostredia, umožňuje postup podľa t o h t o v y ľi á 1 e z u p r o t i v š e t k ý m o č a k á v a n i a m p r e k o n a ť v ý h o d n ý m z pôsobom nedostatky doteraz známy c h tec hn ic kýc h postupov..

pQ.dÄÍ;^i.ä_Ji.yiiá.Lezu

Podstata zmesi podľa tohto vynálezu je v tom, že je vo f o r m e m i k r o s k o p i c k ý c h g u 1 i č i e k p o 1 y m é ľ n e ľ'i o b i. o 1 o g i c:: k y degradovatelného materiálu, ktorý obsahuje vo vode nerozpustnú soľ peptidu vzorca ITakáto zmes, obsahujúca n a p r í k 1 a d a s p o ň 5 7 h m o t n o s t n ý c h n e? ľ” o z p u s t n e j s o 1 i , v z a t é n a h m o t n o s ť p o 1 y m é r n e h o b i o d e g r a d o v a t. e 1 n é h o m a t e r i á 1 u, m ô ž e uvolňovať peptid vzorca I kontrolovaným zpôsom v čase trvania, niekoľko dri í po jej podaní parenterálnou cestou človeku alebo zvieraťu.

Podstata zpôsobu podľa tohto vynálezu pre; prípravu zhora definovanej zmesi spočíva v tom, že sa soľ peptidu vzorca I, ktorá je rozpustná vo vode, premení najprv na soľ peptidu, ktorá, je vo vode nerozpustná, načo sa uvedená nerozpustná soľ peptidu prevedie do suspenzie v roztoku polymérnej b i o d e g r a d o v a t e 1 n e j 1 á t k y, č í m s a u v e d e n á s u s p e n z i. a p r e m e n í v e m u 1 s. i u t y p u o I e j v o v o d e a n a k o n i e c: s a m i k r o g u 1 i č k y biodegradovatelného polyméra izolujú po prevedení emulzie o 1 e j a v o v o d e d o p r o s t r e d i a s n a d b y t k o m v o d y „

P r e d o v š e t k ý (n p r i p o s t u p e k o n v e r z i e p e p t i d o v e j vodorozpustnej soli na soľ peptidu nerozpustnú vo vode poskytuje vynález skutočne obzvlášť originálne riešenie, pri ktorom sa využíva výhod plynúcich z pomerne rozdielnych r o z p lis tn o s t í p o u S i t ý c h z 1 o 2 i e k , h 1 a v n e p o t o m p o u 2 i t ý o h r o z p ú š ť a d i e 1 a ne r o z p ú š ť a d i e 1¹'

Zpôsob podľa tohto vynálezu spočíva v tom, že sa

a) s o ľ p e p t i d u v z o r c. a I r o z p u s t n á v o v o d e .p r e m e n í n a s o ľ peptidu nerozpustnú vo vode, b ) u v e d e n á., vo v o d e n e r o z p u s t n á s o ľ p e p t i. d u s a p r e v e d i e do suspenzie v organickom prostredí obsahujúceho polymérny biodegradovatelný materiál v rozpustenom stave,

c) uvedená organická suspenzia sa disperguje vo vodnom prostredí za vzniku súvislej vrstvy výslednej emulzie a

d) uvedená emulzia sa premiestni do nadbytku vodného prostredia a nakoniec sa z vodnej vrstvy oddelia takto z í s k a n é m i k r o g u 1 i č k y .

F'rvá fáza postupu spočíva v premene, za použitia zvyčajnej techniky, soli peptidu rozpustnej vo vode na soľ peptidu, ktorá je vo vode nerozpustná, Výrazom rozpustná vo vode sa myslí peptidová soľ, ktorej rozpustnosť vo vode je väčšia alebo rovná 0,1 mg/1 pri 25°C, s výhodou väčšia alebo rovná 1,0 mg/1.

Termínom nerozpustná vo vode sa myslí peptidová soľ majúca rozpustnosť vo vode menšiu alebo rovnú 0,1 mg/1 pri 25°C, Tejto definícií vyhoujú soli peptidov tvorené pamoátom, t a n n á t o m, s t e a r á t o m a 1 e b o p a 1 m i t á t o m,

Ako polymérny biologicky degradovatelný materiál sa P o u ž í v a p o 1 y 1 a k t i d, poly g 1 y k o 1 i d a 1 e b o k o p o 1 y m é r k y s e 1. i n y mliečnej a glykólovej.

Ako polymérny materiál, ktorému sa dáva prednosť, je n u t n é u v i e <-> ť l< o r o 1 y m é r y k y s e 1 i n y m 1 i e č n e j a k y s e 1 i n y glykolovej (F'LGA), zvlášť potom kopolvrnéry kyseliny L- alebo

D, L -·- m 1 i e č n e j o b s a h u júci. 45 a J m o 1 % j e d n o t i. e k k y s e 1 i n y mliečnej, poprípade 45 až 10 mol jednotiek kyseliny glykolovej A k o r o z p ú š ť a d 1 o p r e z v o 1 e n ý p o 1 y m é r n y m a t e r i á 1 s a p o u ž í v a a k o j e n a p r í k 1 a d m e t h y 1 é n c h 1 o r i d n V o tu jedná o rozpúšťadlo, ktoré sa nechová ako nerozpúšťadlo k obsahovanej peptidovej soli.

Akonáhle sa uvedená soľ uvedie podľa vynálezu do suspenzie materiálu v o ľ“ g a n i. c k é r o z p ú š ť a d 1 o, v š e t k ý c h p r í p a d o c h s a v roztoku rozpúšťadle, množstva vhodnou polymérneho organickom vleje sa táto suspenzia do vopred stanoveného pridanej s cieľom je?

v o d n é h o p r o s t: r e d i. a, o b v y k 1 e d o v o d y P o v r c h o v o a k t í v n o u 1 á t k o u „ Z a m ý š ľ a n ý m v y t v o r i ť r ý c h 1 o h o m o g é n n u e m u 1 z i. u t y p u o lej v o v o d e, p r i č o m uvedené vodné prostredie slúži, ako plynulá fáza,, Prípravu takejto emulzie ovplyvňujú rôzne činitele, ktorých vplyvom sa upravuje? tvar alebo štruktúra mikroguličiek vznikajúcich pri tomto postupe. Jedným z týchto činiteľov, na ktorý je treba brať ohľad, je rýchlosť pridávania organického roztoku do vodného prostredia, inou závažnou okolnosťou tu môže byť teplota alebo ešte? rýchlosť miešania alebo energia disperzie? (sonifikácia), Posledne uvedený parameter má vplyv zvlášť na t v a r k o n e č n ý c h m i k r o s k c? p i c k ý c h g u 1 i. č i. e k „ J e t a z á 1 e S i t o s ť o u odborníka v tomto odbore zvoliť k sledovanému účelu vhodné postupové metódy a podmienky pre emulgáciu.

Pri uskutočňovaní uvedenej emulgácie môže byť taktiež výhodné upraviť objemový pomer existujúcich fáz, zvlášť zmenšiť počiatočný objem organickej fázy k vodnej fáze. V dannom prípade, vzhľadom k prchavosti použitých organických r o z p ú š ť a d ;i. e 1, n a p r í k 1 a d m e t h y 1 c Ιί 1 o r i d u, n a s t á v a s p o n t á n n e odparovanie v dobe, keď sa miešanie javí byť už ako dostatočné, inak sa žiadaný jav môže urýchliť tým, že sa použije čiastočného odparovania za zníženého tlaku.

A k o n á h 1 e s a o r g a n i c k o - v o d n á s t a t) i 1 j. z o v a n á e m u 1 z i. a p r i d á do nadbytočného vodného prostredia, najčastejšie do vody n a s t á v a t u h n t..i t .i. e z á r o d k o v ý c h m i k r o g u 1 i č i e k , v y t v A r a j ú c: .i. í;: h s a v e m u 1 z i í , e t r a k c i. o u. o r g a n i o k é h o r o z p ú. š ť a d I a , k t o r é j e e š t e prítomné v uvedených mikoguličkách. Touto operáciu sa tiež o d s t r á n i a s ú č a s n é s t o p y e š t e p r í t o m n é h o p o v r c h o v o a k t í v n e h o činidla, ktoré by mohli byť obsiahnuté v hmote polyméra počas konečného tuhnutia,, Poznamenáva sa, že voda je '' n e r o z p ú š ť a d 1 o m a k o p r e po 1 y en é r n y b i o d e g r a d o v a t e 1 n ý materiál, ako napríklad F'LGA, tak aj pre peptidovú soľ o b s i a h n u t ú v o v r i ú t r i u v e d e n ý c h m i k r o g u 1 i č i e k» T á t o s i t u á c i a takto uľahčuje nutnú extrakciu rozpúšťadla, napríklad CH2CI2, usadeného v plymére.

P o p r' i d a n í í..s v e d e n e j e m u 1 z i e d o n a d b y t k u v o d n é h o prostredia, oddelia sa vytvrdené mikroguličky zvyčajnými P o s t u p· m i , n a p r í k 1 a d o d s t r eďo v a n í m, f i 11 r á c i o u a 1 e b o dekantáciou, Mi krogul ičky sa tiež prepláchnu, vyčistia a usušia.

J e d n o u z v ý ho d po s tupu p od ľ a to h to v y n á 1 e z u j e, ž e umožňuje získavať mikroguličky, ktorých tvar je možné presne kontrolovať, pričom sa táto kontrola uskutočňuje hlavne v čase prípravy emulzie (napríklad voľbou rýchlosti miešania). Iná výhoda je najmä v zväčšenej dávke peptidu, ktorá môže byť v jednotlivých p r á pádoch 5, 10 a dokonca 20 7, hmotnostných.

Okrem toho sa obzvlášť zväčšuje stupeň vpravenia peptidu alebo jeho soli, toto nastáva najmä vplyvom predchádzajúcej premeny vodorozpustnej pept.i dovej soli na soľ nerozpustnú vo vode,

Mikroguličky získané zpôsobom podľa tohto vynálezu zo zhora u v e d e ný ch z I o ž i e k sa po tom mô ž u používať, po pri me ran e j sterilizácií, k príprave suspenzií určených k podávaní p a r e n t e r á 1 n y m z p ô s o b o m, n a p r í k 1 a d .1 n t r a m u s k u 1 á r n y m i a 1 e b o s u b k u t á n n y m i i n j e k c i a m i ,,

Vynález je ďalej bližšie objasňovaný na nasledujúcich príkladoch, ktoré však vynález v žiadnom prípade neobmedzujú,,

F' r i k 1 a d y p r- e v e d e n i a v v n Á1 e z u

Príklad 1 g octanu analógu LHRH vzorca Ac-D-Na 1 -D-pC 1 Phe-D-Pa 1 -Ser-Ty r-D-Ci t-Leu-Ar g-Pro-D-A 1 a~NH₂ sa premenia na zodpovedajúci pamoát známymi postupmi a spracuje sa tak, aby sa. získali častice s priemernou veľkosťou pribi ižne 10 mikrónov,,

0,317 g uvedeného pamoátu a 1,683 g F'LGA 75 s 25 (mol a) sa prevedie do suspenzie 20 ml CH2CI2. Potom sa uvedená suspenzia pridá k 20 ml methylénchloridu, ktorý obsahuje v rozpustenom stave 1,683. g k o pol y móra kyseliny .0,1....--· ml iečnej a g 1 y k o 1 o v e j ( P L G A ) 7 5 s 2 5 ( m o 1 Z, s v n ú t o r n o u v i z k o z i t o u 0,8 2 v HFIF’)» Zmiešanie sa robí pri teplote miestnosti a za miešania, aby sa získala úplne homogénna suspenzia.

Výsledná suspenzia sa potom naraz pridá do 500 ml roztoku methoxycelulózy (0,075 72 vo vode a miešanie zmesi pokračuje m i e s tn osti (rýc h1 osť miešan i a P00 ; a pravidelne sleduje, priemerne asi 90 minút pri teplote o t Z m i.n)» V ý v o j e m u 1 z i e k a ž d ý c h 3 0 m i n tú t, odoberan im vzoriek k on t r o 1 o u m i k r o g u 1 i č i e k p o d m i k r o s k o p o m,

A k o n á h 1 e s a u k o n č í m i e š a n i e ( z m e n š tí v a n i e v e ľ k o s t i m i k r o g u 1 i č i e k s a s t a b i 1 i z uje) , p r i d á s a u v e d e n á' e m u 1 z i a n a ľ a z do 2 litrov vody udržovanej približne na teplote 10 °G, načo sa zmes mieša, až sa úplne? zhomogenizuje.

7. reakčnej zmesi sa izolujú mikroguličky F'LGA, ktoré sa vyčistia nasleduúcim odstreďovaním striedajúcim sa s; premývaním vodou» Nakoniec sa mikroguličky odfiltrujú a vysušia pri zníženom tlaku» Získa sa takto 1,61 g (výťažok 80 ’Á ) m i I'·: r o g u 1 i č i. e k F' I.... G A, k t o r é o b s a h u j ú v i a c a k o 94 7. č a s t i c s P ľ i e? m e r o m m e n š í m a k o 10 0 m i k r ó n o v (m a x „ 5 5 a ž 8 5 m i. k r ó n o v ) „

Analýzou (rozpúšťaním hmoty F'LGA, ex trakciou a stanovením peptidu pomocou H F’L C - vysokotlakovej kvapalnej c h r o m a t o g i- a f i e) s a z i s t í , ž e o b s a h rn i k r o g u I i ŕ: i e k v p a m o á t e j e 9,0 5 7. h m o t n o s t n ý c h (t e o r e t i c k y 10 7„) „

Takto získané mikrogličky sa potom podrobia sterilizácií paprskami gama a prevedú sa do suspenzie vo vhodnom sterilnom nosiči» Testy in vivo (meranie hodnoty sanguinového t e s t o s t. e r ó n u u s a m c o v k ľ ý s) p o t v r d z u j ú p r a v i d e Iné u v o 1 ň o v a n i e a k t í v n e j 1 á t k y ,,

Príklad 2

Postupuje sa presne ako v príklade 1, pričom sa použije 0, 634 g p a m o á t u a n a .1 ó g u L H R H n a 1,3 6 é g P' L. G A 7 5 s .2 5,,

Z í s k a s a 1,7 0 g m i k r o g 1 i č i e k P L. G A (v ý ť a Sok 3 5 Z ) „

Obsah mikroguličiek v pamoáte je 18,3 Z (teoret. 20 Z).

Takto získané mikroguličky sa potom sterilizujú gama paprskami a prevedú sa do suspenzie vo vhodnom sterilnom nosiči» Testy in v;i.vo (meraním množstva analógu v sanquinovom s é r e s a m c o v k r ý s) s a. p o t. v r d z u j e, n a s t á v a p r a v i. d e 1 n é uvoľňovanie biologicky významného množstva aktívnej látky v

P ri e b e hu n a j m e n ej 24 n a s 1 e d u j ú c: i c h ú d a j o c: h „ d n í T i e t o v ý s 1 e d k y zhrnuté v

Doba (dni)

-i- 3 dni 1

M n o ž s t. v o p e p t i 47, 1

48,9 ((n g /1. )

14 1 ó

46, 9 50,4 40, 1 42, 1 29, S •-3, O

25,6 .:: .. . . : . „. .

-kú....\;i^;ý?Tiéts\;vý'síedkv '-sú·· potvrdené tiež sneIýzami vrobenými ne .. . s vieratách· u?5mrtenýc h tridsiateho. .dna. (D30) n strata hmotriosti testikúl najmenej SO í - straty hmotnosti semi na 1 nyo h vesikúl najmenej 90 %.

ľ“T“P'rl'kta3'P3“““’^_.“ ľ .ľ 033 t --····-- -....... Opakuje sa postup podľa príkladu 1, pričom sa použijú 3 g octanu· anál ó g u L.HRH vzorra

Ac—D—Na 1 r-D-pC I Pne.....D—T r pr-Ser—Ty r- D—C i t.....Leu--Ary.....P r o.....D—A i a-NHy

F’ o pre m e n s n í u v e d e n é h o o c: t a n u n a p ľ í s i u O n ý p a m c;: á t a nás 1 ednom--z pracovan í , ako je uvedené v príklade 1, sa získajú mikroyuličky no í y márne ho materiál n- kto-'á majú rovnaká • ’ c harak tenisti k y 'ako bolo uvedené vpredu,,

Claims (7)

1. F' ftTENTOVÉ N í P O K Y * U cr cej3.íí vom’ í „ Znie s u r č e n A k p r e cl 1 ž e n é m u a k o n t r o 1 o v a n é í n u u v o 1 ή o v a n .i. u liečivej peptide vej látky vzorca .1 7'

   A c: - D - N a 1 - D.....p C1P h e ·- R³ - S e r - T y ľ -1 j -- C i t - L. e u - A r g - P r o.....D.....A1 a - N Ha v ktorom R³ znamená D~Pal alebo D-Trp, v y 2 n a č u j ú c: i s a t ý m , že je vo forme mikroguličiek 2 polymárneho biodegraclovatelného materiálu, ktorý obsahuje soľ peptidu. vzorca I nerozpustnú, vo vode.
2. 2„ Zmes podľa nároku .t, v y s n a č u j ú c a s a t ý m , že peptidovou soľou nerozpustnou vo vode je? pamoát, t a n n á t, s t. e a r á t. a 1 e ta o p za 1 m i t á t.
3. 3» Zmes podľa nároku 1 alebo 2, v y z n a č u j ú c a s a t ý m , že polymárnym biodegrádováteľným materiálom je poly 1 aktid, poly g.1 ykolid alebo kopolymár kyseliny mliečnej s gly kolovou..
4. 4. Zmes; podľa nároku 3, v y s n a č: u j ú c a s a t ý m , že kopol y má r kyseliny mliečnej s gly kolovou, je? k o p o 1. y m á r k y s e 1 i n y L - a 1 e b o D, I.... - m 1 i e č n e j , k t o r ý o b s a h u j e 4 5 a ž 90 mol 7. jednotiek kyseliny mliečnej, respektíve 55 až 10 m o 1 Z k yse1 i n y g 1y k o1ovej.
5. 5. Zmes podľa niektorého 2 nárokov í až 4, v y 2 n a č u-

   <· j ú c: a s a t. ý m , že je vo forme m i k r o g u 1 i č i e k ! < o po 1 y - má r u k y s e 1 i n y m .1. i e č n e j s kyselinou glykolovou v mó1ovom pomere 75 s 25, ktorý obs ahuje aspoň 5 Z hmotnostnýc h pamoátu peptidu vzorca I. 6» Použitie 2mesi podľa niektorá ho 2 nárokov : L až 5 k

   Ρ r í pravé s u s p e n 2 i e u r č e n e j k. p o d á v a n i u p a r e n t. e r á 1 n o u c e s t o u,.
6. 7. Zpôsob prípravy zmesi podľa nároku 1, v y 2 n a č u™ j ú o a sa t ý m , ž e s a

   a) soľ peptidu. vzorca I rozpustná vo vode premení na soľ peptidu nerozpustnú vo vode,

   b) uvádzaný peptid, respektíve soľ peptidu nerozpustná vo . „y.oci.e.. sa.... obsahujtó stave, .prevedie .do. štiepe'j s. i e. v. organ ickom . pros..trsd í - ktoré polymérny biedegradevate 1ný materiál v rozpi, stencm

   c) uvedená or gáni c: k á suspenzia sa di.spergu.je vo vednom prostredí sa súvislej fázy výslednej emulzie.

   d 5 uvedená 'emulzia' sa prostredia, a nakoniec sa z. vznik n u t é m i k i' o g i j 1 i d .k y ,

   S„ Zpôsob podľa nároku 7, p r” i d á d o kvapalnej .

   n a d ta y t k u v o d n é h o fázv izolujú takto z n a d -í j ú c: i.

   t - ý m - , d e pred ' pridaním emulzie olej vo vode do nadbytku vodného prostredia sa organické rozpústad i o, tvoriace olejovú .'fázu, ' diastodne odparí, v, Zpôsob podľa nároku 7, v y z n a d u j ú z:' i z; a tým , d e sa ako soľ peptidu nerozpustríá vo vode používa P a m c á t, o a n n a t, s t e a r s t a i e c o p a .t r i i t Z; c«
7. 10. Zpôsob podľa niektorého z nárokizv 7 ad y, v y z n a ·S e p o 1 y m é r- y m b i o .j e g r a d o v a t s 1 n ý m

   P o 1 y g 1. y k o .1 i d a I p bu k o p o 1 y m é r č u j (j c i s a materiálom je po 1 yl ak t id , kyselín mliečnej a glykolovej, 11, Zpôsob podľa nároku 10_ľ tým, d e kopolymé'· kyseliny L-·- alebo d........mliednej obsahuje

   45 ad 90 mol Z jednotiek kyseliny mliečnej- respektíve j O ad 5 5 i n o 1 a je tí n o t i e k k y s e 1 i. n y g i y k o 1 o vej.