RU2678807C2 - СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТРАНСТИРЕТИНОМ (TTR) - Google Patents
СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТРАНСТИРЕТИНОМ (TTR) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2678807C2 RU2678807C2 RU2014124683A RU2014124683A RU2678807C2 RU 2678807 C2 RU2678807 C2 RU 2678807C2 RU 2014124683 A RU2014124683 A RU 2014124683A RU 2014124683 A RU2014124683 A RU 2014124683A RU 2678807 C2 RU2678807 C2 RU 2678807C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ttr
- nucleotides
- rnai agent
- rnai
- sense strand
- Prior art date
Links
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 title claims abstract description 378
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 title claims abstract description 281
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 88
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 80
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 78
- 102000009190 Transthyretin Human genes 0.000 title claims abstract 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 86
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 401
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims abstract description 378
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 326
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 279
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims abstract description 133
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 102
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 42
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims abstract description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 141
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 141
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 140
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 89
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 67
- 101150091380 TTR gene Proteins 0.000 claims description 50
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 43
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 39
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 39
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical class CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 claims description 37
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 claims description 26
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 17
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 17
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 15
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 14
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 claims description 12
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 12
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 12
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 claims description 12
- 206010036105 Polyneuropathy Diseases 0.000 claims description 11
- 230000007824 polyneuropathy Effects 0.000 claims description 11
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 9
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 208000027121 wild type ATTR amyloidosis Diseases 0.000 claims description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 7
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 6
- 201000003968 hyperthyroxinemia Diseases 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 claims description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 59
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 43
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 24
- 102100029290 Transthyretin Human genes 0.000 description 253
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 157
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 55
- 239000002585 base Substances 0.000 description 54
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 53
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 51
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 45
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 42
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 41
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 41
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 38
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 36
- -1 for example Substances 0.000 description 36
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 24
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 24
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 22
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 21
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 20
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 19
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 17
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 16
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 15
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 14
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 14
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 14
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 14
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 13
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 13
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 12
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 11
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 11
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 10
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 10
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 10
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 10
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 10
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 10
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 10
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 208000034846 Familial Amyloid Neuropathies Diseases 0.000 description 9
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 9
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 9
- 230000000021 endosomolytic effect Effects 0.000 description 9
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 9
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 9
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 210000003583 retinal pigment epithelium Anatomy 0.000 description 9
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 9
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 9
- 201000007905 transthyretin amyloidosis Diseases 0.000 description 9
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000772194 Homo sapiens Transthyretin Proteins 0.000 description 8
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 8
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 8
- 210000002987 choroid plexus Anatomy 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 8
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 8
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 8
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 8
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 8
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 8
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 8
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 7
- 206010007509 Cardiac amyloidosis Diseases 0.000 description 7
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 7
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 7
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 7
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 7
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 7
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 7
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 7
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 6
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 6
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 6
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 6
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 102200150628 rs151220873 Human genes 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 5
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 5
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 5
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 5
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010016202 Familial Amyloidosis Diseases 0.000 description 5
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 5
- 208000034700 Vitreous opacities Diseases 0.000 description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 5
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 5
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 102000056556 human TTR Human genes 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 5
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 5
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 102000029752 retinol binding Human genes 0.000 description 5
- 108091000053 retinol binding Proteins 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 229960001353 tafamidis Drugs 0.000 description 5
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 5
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 5
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 5
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 4
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010061666 Autonomic neuropathy Diseases 0.000 description 4
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 4
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000004044 Hypesthesia Diseases 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 description 4
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 4
- 206010028570 Myelopathy Diseases 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 206010031127 Orthostatic hypotension Diseases 0.000 description 4
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 4
- 206010034620 Peripheral sensory neuropathy Diseases 0.000 description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 4
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 4
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 4
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 4
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 4
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 4
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 208000034783 hypoesthesia Diseases 0.000 description 4
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 4
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 4
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 208000035824 paresthesia Diseases 0.000 description 4
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 4
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 201000005572 sensory peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 4
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 4
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- 102000001049 Amyloid Human genes 0.000 description 3
- 108010094108 Amyloid Proteins 0.000 description 3
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 3
- 101710098275 C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 3
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 3
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 3
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 3
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 3
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 3
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 3
- 239000012098 Lipofectamine RNAiMAX Substances 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 101100154776 Mus musculus Ttr gene Proteins 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical class CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 3
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 3
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 3
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 3
- 101100208299 Rattus norvegicus Ttr gene Proteins 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 208000003295 carpal tunnel syndrome Diseases 0.000 description 3
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 3
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 3
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 3
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 3
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 3
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 3
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 102000009634 interleukin-1 receptor antagonist activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040001669 interleukin-1 receptor antagonist activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 3
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 3
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 3
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 3
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- DQJDBUPLRMRBAB-WZTVWXICSA-N tafamidis meglumine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.O1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2N=C1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 DQJDBUPLRMRBAB-WZTVWXICSA-N 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 3
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 3
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 3
- LVGUZGTVOIAKKC-UHFFFAOYSA-N 1,1,1,2-tetrafluoroethane Chemical compound FCC(F)(F)F LVGUZGTVOIAKKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 2
- IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-(octadecanoyloxy)propyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 5-ethylsulfanyl-2h-tetrazole Chemical compound CCSC=1N=NNN=1 GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800002011 Amphipathic peptide Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710113962 Bombinin-like peptides Proteins 0.000 description 2
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical group C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical class OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100154772 Homo sapiens TTR gene Proteins 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 2
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 210000001742 aqueous humor Anatomy 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 210000003792 cranial nerve Anatomy 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 2
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- MMXKVMNBHPAILY-UHFFFAOYSA-N ethyl laurate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC MMXKVMNBHPAILY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 230000007160 gastrointestinal dysfunction Effects 0.000 description 2
- 230000007661 gastrointestinal function Effects 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical class CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000007433 macroscopic evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 2
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 2
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 229910052758 niobium Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N nonadecane-1,2,3-triol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)CO QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 2
- 229920000307 polymer substrate Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 2
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 2
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- TXEIIPDJKFWEEC-UHFFFAOYSA-N tafamidis Chemical compound O1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2N=C1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 TXEIIPDJKFWEEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N tert‐butyl hydroperoxide Chemical compound CC(C)(C)OO CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical compound C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N (-)-isopinocampheol Natural products C1C(O)C(C)C2C(C)(C)C1C2 REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQQOAWVKVDAJOI-UHFFFAOYSA-N (2-dodecanoyloxy-3-hydroxypropyl) dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(CO)OC(=O)CCCCCCCCCCC OQQOAWVKVDAJOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- PUDXUJRJLRLJIU-QYVSTXNMSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-3-ol Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 PUDXUJRJLRLJIU-QYVSTXNMSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N (2s)-2,5-bis(3-aminopropylamino)-n-[2-(dioctadecylamino)acetyl]pentanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CC(=O)NC(=O)[C@H](CCCNCCCN)NCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N 0.000 description 1
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIZMDHZLHJBNSQ-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydrophenazine Chemical compound C1=CC=C2N=C(C=CCC3)C3=NC2=C1 ZIZMDHZLHJBNSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEVQCHBUJFYGQO-DNRKLUKYSA-N 1-[(2r,3r,4r,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 NEVQCHBUJFYGQO-DNRKLUKYSA-N 0.000 description 1
- RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 1-oleoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(O)CO RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- PNXSUXRNBHUCSF-HSYVXBRLSA-N 107658-43-5 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)OC(=O)CC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)OC(=O)[C@H](CCC(=O)OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)N)C1C=NC=N1 PNXSUXRNBHUCSF-HSYVXBRLSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-BIIVOSGPSA-N 2'-deoxythymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid (2S,3S)-3,4-dimethyl-2-phenylmorpholine Chemical compound OC(C(O)C(O)=O)C(O)=O.C[C@H]1[C@@H](OCCN1C)c1ccccc1 VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 0.000 description 1
- GVZJRBAUSGYWJI-UHFFFAOYSA-N 2,5-bis(3-dodecylthiophen-2-yl)thiophene Chemical compound C1=CSC(C=2SC(=CC=2)C2=C(C=CS2)CCCCCCCCCCCC)=C1CCCCCCCCCCCC GVZJRBAUSGYWJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 2,6-Lutidine Substances CC1=CC=CC(C)=N1 OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZUHIVLOSAPWDM-UHFFFAOYSA-N 2-(1h-imidazol-2-yl)-1h-imidazole Chemical compound C1=CNC(C=2NC=CN=2)=N1 AZUHIVLOSAPWDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPYYTCPLQXRHQD-OAFMNPBWSA-N 2-[[(4R)-4-[(8R,9S,10S,13R,14S,17R)-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentyl]-hydroperoxyamino]-2,2-dihydroperoxyacetic acid Chemical compound C[C@H](CCCN(C(C(=O)O)(OO)OO)OO)[C@H]1CC[C@@H]2[C@@]1(CC[C@H]3[C@H]2CCC4[C@@]3(CCCC4)C)C MPYYTCPLQXRHQD-OAFMNPBWSA-N 0.000 description 1
- KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 2-aminopropane-1,3-diol Chemical group OCC(N)CO KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROUWQQRXUBECT-UHFFFAOYSA-N 2-ethylacrylic acid Chemical compound CCC(=C)C(O)=O WROUWQQRXUBECT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- ILBCSMHIEBDGJY-UHFFFAOYSA-N 3-[4-(3-aminopropylamino)butylamino]propylcarbamic acid Chemical compound NCCCNCCCCNCCCNC(O)=O ILBCSMHIEBDGJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIAJCGFYHIANNA-QIZZZRFXSA-N 3b-Hydroxy-5-cholenoic acid Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]1(C)CC2 HIAJCGFYHIANNA-QIZZZRFXSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUEIFVRYWPOXHJ-DNRKLUKYSA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4r,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidin-2-one Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C(C)=C1 GUEIFVRYWPOXHJ-DNRKLUKYSA-N 0.000 description 1
- QXYRRCOJHNZVDJ-UHFFFAOYSA-N 4-pyren-1-ylbutanoic acid Chemical compound C1=C2C(CCCC(=O)O)=CC=C(C=C3)C2=C2C3=CC=CC2=C1 QXYRRCOJHNZVDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027075 5S-rRNA precursor Proteins 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062307 AAVALLPAVLLALLAP Proteins 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003808 Amyloid Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 1
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100504320 Caenorhabditis elegans mcp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108050004290 Cecropin Proteins 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N DOSPA trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCNC(=O)C(CCCNCCCN)NCCCN)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700006830 Drosophila Antp Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 description 1
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical class OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000736355 Euthyroides Species 0.000 description 1
- 108010087294 GALA peptide Proteins 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710183768 Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 206010019889 Hereditary neuropathic amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000780643 Homo sapiens Protein argonaute-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010007013 Melanocyte-Stimulating Hormones Proteins 0.000 description 1
- 101710151321 Melanostatin Proteins 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 102400000064 Neuropeptide Y Human genes 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- KYRVNWMVYQXFEU-UHFFFAOYSA-N Nocodazole Chemical compound C1=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=CC=C1C(=O)C1=CC=CS1 KYRVNWMVYQXFEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102100022670 Nuclear receptor subfamily 6 group A member 1 Human genes 0.000 description 1
- OOEWZEXEJQEFJO-UHFFFAOYSA-N O.[I] Chemical compound O.[I] OOEWZEXEJQEFJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 102100034207 Protein argonaute-2 Human genes 0.000 description 1
- 101000781681 Protobothrops flavoviridis Disintegrin triflavin Proteins 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066717 Q beta Replicase Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101000633881 Rattus norvegicus Transthyretin Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000272534 Struthio camelus Species 0.000 description 1
- 241000251576 Styela clava Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N Sulfobutanedioic acid Chemical class OC(=O)CC(C(O)=O)S(O)(=O)=O ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical class OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108050000089 Transthyretin Proteins 0.000 description 1
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 241000269370 Xenopus <genus> Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XVIYCJDWYLJQBG-UHFFFAOYSA-N acetic acid;adamantane Chemical compound CC(O)=O.C1C(C2)CC3CC1CC2C3 XVIYCJDWYLJQBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000641 acridinyl group Chemical class C1(=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000004479 aerosol dispenser Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical group OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001337 aliphatic alkines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- KJZMZIMBDAXZCX-XNRWUJQLSA-N alpha-D-Manp-(1->3)-[alpha-D-Manp-(1->6)]-alpha-D-Manp Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](O)O1 KJZMZIMBDAXZCX-XNRWUJQLSA-N 0.000 description 1
- 102000018568 alpha-Defensin Human genes 0.000 description 1
- 108050007802 alpha-defensin Proteins 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001409 amidines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 210000002159 anterior chamber Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- ZXVOCOLRQJZVBW-UHFFFAOYSA-N azane;ethanol Chemical compound N.CCO ZXVOCOLRQJZVBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHISNKCGUDDGEG-UHFFFAOYSA-N bactenecin Chemical compound CCC(C)C1NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(N)CCCN=C(N)N)CSSCC(C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CCCN=C(N)N)NC1=O RHISNKCGUDDGEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016341 bactenecin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108050002883 beta-defensin Proteins 0.000 description 1
- 102000012265 beta-defensin Human genes 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116229 borneol Drugs 0.000 description 1
- CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N borneol Natural products C1CC2(C)C(C)CC1C2(C)C CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000001465 calcium Nutrition 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 230000003683 cardiac damage Effects 0.000 description 1
- 108060001132 cathelicidin Proteins 0.000 description 1
- 102000014509 cathelicidin Human genes 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 229940119217 chamomile extract Drugs 0.000 description 1
- 235000020221 chamomile extract Nutrition 0.000 description 1
- BHONFOAYRQZPKZ-LCLOTLQISA-N chembl269478 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BHONFOAYRQZPKZ-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 229940009025 chenodeoxycholate Drugs 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002812 cholic acid derivative Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000035850 clinical syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011970 concomitant therapy Methods 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical group OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229960005160 dimyristoylphosphatidylglycerol Drugs 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- BPHQZTVXXXJVHI-AJQTZOPKSA-N ditetradecanoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC BPHQZTVXXXJVHI-AJQTZOPKSA-N 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N dl-isoborneol Natural products C1CC2(C)C(O)CC1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229920000370 gamma-poly(glutamate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- RZRNAYUHWVFMIP-HXUWFJFHSA-N glycerol monolinoleate Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)CO RZRNAYUHWVFMIP-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229940074049 glyceryl dilaurate Drugs 0.000 description 1
- 229940074045 glyceryl distearate Drugs 0.000 description 1
- 229960004275 glycolic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017105 hereditary amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010842 high-capacity cDNA reverse transcription kit Methods 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- IKGLACJFEHSFNN-UHFFFAOYSA-N hydron;triethylazanium;trifluoride Chemical compound F.F.F.CCN(CC)CC IKGLACJFEHSFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 125000002632 imidazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002636 imidazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N indolicidin Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003965 isoxazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Chemical class 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- DDVBPZROPPMBLW-ZJBINBEQSA-N latrunculin a Chemical compound C([C@H]1[C@@]2(O)C[C@H]3C[C@H](O2)CC[C@@H](/C=C\C=C/CC\C(C)=C/C(=O)O3)C)SC(=O)N1 DDVBPZROPPMBLW-ZJBINBEQSA-N 0.000 description 1
- DDVBPZROPPMBLW-UHFFFAOYSA-N latrunculin-A Natural products O1C(=O)C=C(C)CCC=CC=CC(C)CCC(O2)CC1CC2(O)C1CSC(=O)N1 DDVBPZROPPMBLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L magnesium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Mg+2] VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000347 magnesium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229940074096 monoolein Drugs 0.000 description 1
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 229940042880 natural phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229950006344 nocodazole Drugs 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N nucleopeptide y Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229960002969 oleic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 125000000160 oxazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000649 photocoagulation Effects 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920005646 polycarboxylate Polymers 0.000 description 1
- 125000005575 polycyclic aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920001855 polyketal Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N propane-1,1-diol Chemical compound CCC(O)O ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 125000003072 pyrazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002755 pyrazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003445 sucroses Chemical class 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical class OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 229960000874 thyrotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000001748 thyrotropin Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N trans-4-Hydroxy-L-proline Natural products O[C@@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 1
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 235000016804 zinc Nutrition 0.000 description 1
- SFVVQRJOGUKCEG-OPQSFPLASA-N β-MSH Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H]2C(COC(=O)[C@@](O)([C@@H](C)O)C(C)C)=CCN21 SFVVQRJOGUKCEG-OPQSFPLASA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/343—Spatial arrangement of the modifications having patterns, e.g. ==--==--==--
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
- C12N2310/3521—Methyl
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
- C12N2310/3533—Halogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биохимии. Описано двухцепочечное средство для РНКи для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), содержащее смысловую цепь, комплементарную антисмысловой цепи, где указанная антисмысловая цепь содержит последовательность, комплементарный нуклеотидам 504-526 гена транстиретина (TTR) (SEQ ID NO:1), где смысловая цепь имеет длину 21 нуклеотид, а антисмысловая цепь имеет длину 23 нуклеотида. Так описано средство для РНКи для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), включающее смысловую цепь и антисмысловую цепь, в котором смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-UfgGfgAfuUfuCfAfUfgUfaacCfaAfgAfL96-3’ (SEQ ID NO:2), и антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-uCfuUfgGfUfUfaCfaugAfaAfuCfcCfasUfsc-3’ (SEQ ID NO:3),где a, g, c и u обозначают 2’—О-метил (2’-OMe) A, G, C и U; Af, Gf, Cf и Uf обозначают 2’-фтор A, G, C и U; s обозначает фосфоротиоатную связь; и L96 обозначает лиганд GalNAc. Описана фармацевтическая композиция, содержащая любое из указанных средств. Представлен способ ингибирования экспрессии транстиретина (TTR) в клетке, включающий приведение указанной клетки в контакт с указанным средством для РНКи. Представлен способ лечения ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму терапевтически эффективного количества указанного средства для РНКи. 6 н. и 29 з.п. ф-лы, 10 табл., 11 пр.
Description
Родственные заявки
По настоящей заявке испрашивается приоритет временной заявки на патент США №61/561710, поданной 18 ноября 2011 года, временной заявки на патент США №61/615618, поданной 26 марта 2012 года, и временной заявки на патент США №61/680098, поданной 6 августа 2012 года, полное содержание каждой из которых включено в настоящее описание посредством ссылки.
Список последовательностей
Настоящая заявка содержит список последовательностей, который был подан в формате ASCII через EFS-Web и включен, таким образом, полностью посредством ссылки. Указанная копия ASCII, созданная 13 ноября 2012 года, названа 121301WO.txt, и ее размер составляет 541508 бит.
Уровень техники, предшествующий изобретению
Транстиретин (TTR) (также известный как преальбумин) обнаруживают в сыворотке и цереброспинальной жидкости (CSF). TTR транспортирует ретинолсвязывающий белок (RBP) и тироксин (T4), а также действует как носитель ретинола (витамина A) вследствие своей ассоциации с RBP в крови и CSF. Транстиретин назван так из-за того, что он транспортирует тироксин и ретинол. TTR также функционирует как протеаза и может расщеплять белки, содержащие apoA-I (основной HDL аполипопротеин), пептид амилоид-β и нейропептид Y. См. Liz, M.A. et al., (2010) IUBMB Life, 62 (6):429-435.
TTR представляет собой тетрамер из четырех идентичных субъединиц длиной 127 аминокислот (мономеров), в которых наблюдают преобладание структуры бета-листа. Каждый мономер содержит два 4-цепочечных бета-листа и имеет форму сплющенного эллипсоида. Взаимодействия антипараллельного бета-листа связывают мономеры в димеры. Короткая петля каждого мономера образует основное взаимодействие димер-димер. Эти две пары петель разделяют противоположные выпуклые бета-листы димеров с образованием внутреннего канала.
Печень представляет собой основной участок, экспрессирующий TTR. Другие значительные участки экспрессии включают хориоидное сплетение, сетчатку (в частности пигментный эпителий сетчатки) и поджелудочную железу.
Транстиретин представляет собой один по меньшей мере из 27 отдельных типов белков, который представляет собой белок-предшественник при образовании амилоидных фибрилл. См. Guan J. et al., (Nov. 4, 2011) Current perspectives on cardiac amyloidosis. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., doi:10.1152/ajpheart.00815.2011. Внеклеточное отложение амилоидных фибрилл в органах и тканях является признаком амилоидоза. Амилоидные фибриллы состоят из неправильно свернутых белковых агрегатов, которые могут возникать в результате избыточной продукции или конкретных мутаций в белках-предшественниках. Амилоидогенный потенциал TTR может быть связан с его преобладающей структурой бета-листа, рентгено-кристаллографические исследования свидетельствуют о том что, определенные амилоидогенные мутации снижают устойчивость тетрамерной структуры белка. См., например, Saraiva M.J.M., (2002) Expert Reviews in Molecular Medicine, 4(12):1-11.
Амилоидоз представляет собой общий термин для группы заболеваний, связанных с амилоидом, которые характеризуются отложением амилоида. Связанные с амилоидом заболевания классифицируют на основе их белка-предшественника, например, названия, начинающиеся "A" для амилоида и с последующим сокращенным обозначением белка-предшественника, например, ATTR для амилоидного транстиретина, там же.
Существует целый ряд ассоциированных с TTR заболеваний, большая часть из которых представляет собой связанные с амилоидом заболевания. TTR с нормальной последовательностью ассоциирован с амилоидозом сердца у людей пожилого возраста и называется старческим системным амилоидозом (SSA) (также называемый старческим амилоидозом сердца (SCA) или амилоидозом сердца). SSA, как правило, сопровождается микроскопическими отложениями во многих других органах. TTR амилоидоз проявляется в различных формах. Когда в большей степени поражается периферическая нервная система, заболевание называется семейной амилоидотической полинейропатией (FAP). Когда поражается сердце, а нервная система не поражена, заболевание называют семейной амилоидотической кардиомиопатией (FAC). Третий основной тип TTR амилоидоза представляет собой лептоменингеальный амилоидоз, также известный как лептоменингеальный или менингоцереброваскулярный амилоидоз, амилоидоз центральной нервной системы (ЦНС) или амилоидоз VII формы. Мутации в TTR также могут вызывать амилоидотические помутнения стекловидного тела, синдром запястного канала и эутиреоидную гипертироксинемию, которая представляют собой неамилоидотическое заболевание, для которого предполагают, что оно является вторичным по отношению к повышенной ассоциации тироксина с TTR вследствие мутантной молекулы TTR с увеличенной аффинностью к тироксину. См., например, Moses et al., (1982) J. Clin. Invest., 86, 2025-2033.
Аномальные амилоидогенные белки могут быть наследственными или приобретенными в результате соматических мутаций. Guan J. et al., (Nov. 4, 2011) Current perspectives on cardiac amyloidosis, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., doi:10.1152/ajpheart.00815.2011. Ассоциированный с транстиретином ATTR является наиболее распространенной формой наследственного системного амилоидоза. Lobato L. (2003) J. Nephrol., 16:438-442. Мутации TTR ускоряют процесс образования TTR амилоида и представляют собой наиболее важный фактор риска развития ATTR. Известно, что более 85 амилоидогенных вариантов TTR вызывают системный семейный амилоидоз. Мутации TTR, как правило, ведут к образованию системных отложений амилоида, в частности с поражением периферической нервной системы, хотя некоторые мутации ассоциированы с кардиомиопатией или помутнениями стекловидного тела, там же.
Мутация V30M представляет собой наиболее распространенную мутацию TTR. См., например, Lobato L., (2003) J. Nephrol., 16:438-442. Мутацию V122I несут 3,9% афро-американской популяции, и она является наиболее общей причиной FAC. Jacobson D.R. et al., (1997) N. Engl. J. Med., 336(7):466-73. Оценивают, что SSA поражает более 25% популяции в возрасте более 80 лет. Westermark P. et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87(7):2843-5.
Таким образом, в данной области существует необходимость эффективных видов лечения ассоциированных с TTR заболеваний.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к средствам для РНКи, например, двухцепочечные средства для РНКи, направленной на ген транстиретина (TTR). Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования экспрессии TTR и к способам лечения или профилактики ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума с использованием средств для РНКи, например, двухцепочечных средств для РНКи по изобретению. Настоящее изобретение по меньшей мере частично основано на открытии, что средства для РНКи, которые содержат конкретные химические модификации, обладают прекрасной способностью ингибировать экспрессию TTR. В настоящем описании продемонстрировано, что средства, содержащие определенный паттерн химических модификаций (например, чередующийся паттерн), и лиганд являются эффективными для подавления активности гена TTR. Кроме того, средства, содержащие один или более мотивов трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах, содержащих один такой мотив на участке расщепления средств или около него, обладают неожиданно повышенной активностью подавления гена TTR. Когда один такой химический мотив содержится в средстве, предпочтительно он располагается в области расщепления или около нее для усиления активности подавления экспрессии гена. Область расщепления представляет собой область, окружающую участок расщепления, т.е. участок на мРНК-мишени, на котором происходит расщепление.
Таким образом, в одном из аспектов настоящее изобретение относится к средствам для РНКи, например, двухцепочечными средствам для РНКи, для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR). Двухцепочечное средство для РНКи содержит смысловую цепь, комплементарную антисмысловой цепи. Антисмысловая цепь содержит область, комплементарную участку мРНК, кодирующей транстиретин. Каждая цепь содержит от 14 до 30 нуклеотидов, и двухцепочечное средство для РНКи представлено формулой (III):
В формуле III i, j, k и l каждый независимо представляет собой 0 или 1; p, p', q и q' каждый независимо представляет собой 0-6; каждый Na и независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые являются модифицированными или немодифицированными, или их комбинации, где каждая последовательность содержит по меньшей мере два различным образом модифицированных нуклеотида; каждый Nb и независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 нуклеотидов, которые являются модифицированными или немодифицированными, или их комбинации; каждый np, , nq и независимо представляет собой выступающий нуклеотид; XXX, YYY, ZZZ, X'X'X', Y'Y'Y' и Z'Z'Z' каждый независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах; модификации в Nb отличаются от модификации в Y, и модификации в отличаются от модификации в Y'. В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом, например, по меньшей мере с одним лигандом, присоединенным к 3'-концу смысловой цепе. В других вариантах осуществления лиганд может быть конъюгирован с антисмысловой цепью.
В некоторых вариантах осуществления i равно 1; j равно 1; или i и j равны 1.
В некоторых вариантах осуществления k равно 1; l равно 1; или k и l равны 1.
В некоторых вариантах осуществления i равно 0; j равно 1.
В некоторых вариантах осуществления i равно 1; j равно 0.
В некоторых вариантах осуществления k равно 0; l равно 1.
В некоторых вариантах осуществления k равно 1; l равно 0.
В некоторых вариантах осуществления XXX является комплементарным X'X'X', YYY является комплементарным Y'Y'Y', и ZZZ является комплементарным Z'Z'Z'.
В некоторых вариантах осуществления мотив YYY находится на участке расщепления смысловой цепи или около него.
В некоторых вариантах осуществления мотив Y'Y'Y' находится в положениях 11, 12 и 13 антисмысловой цепи от 5'-конца.
В некоторых вариантах осуществления Y' представляет собой 2'-O-метил.
В некоторых вариантах осуществления Y' представляет собой 2'-фтор.
В некоторых вариантах осуществления формула (III) представлена в виде формулы (IIIa):
В формуле IIIa каждый Nb и независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-5 модифицированных нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления формула (III) представлена в виде формулы (IIIb):
В формуле IIIb каждый Nb и независимо представляют собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-5 модифицированных нуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления формула (III) представлена в виде формулы (IIIc):
В формуле IIIc каждый Nb и независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-5 модифицированных нуклеотидов, и каждый Na и независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-10 модифицированных нуклеотида.
Во многих вариантах осуществления длина дуплексной области составляет 15-30 пар нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления длина дуплексной области составляет 17-23 пары нуклеотидов, 17-25 пар нуклеотидов, 23-27 пар нуклеотидов, 19-21 пару нуклеотидов или 21-23 пары нуклеотидов.
В определенных вариантах осуществления каждая цепь содержит 15-30 нуклеотидов.
В некоторых вариантах осуществления модификации в нуклеотидах выбраны из группы, состоящей из LNK, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтила, 2'-O-алкила, 2'-O-аллила, 2'-C-аллила, 2'-фтора, 2'-дезокси, 2'-гидроксила и их комбинаций. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления модификации в нуклеотидах представляют собой 2'-O-метил или 2'-фтор.
В некоторых вариантах осуществления лиганд представляет собой одно или более производных N-ацетилгалактозамина (GalNAc), присоединенных посредством двухвалентного или трехвалентного разветвленного линкера. В конкретных вариантах осуществления лиганд представляет собой
В некоторых вариантах осуществления лиганд присоединен к 3-концу смысловой цепи.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи конъюгировано с лигандом, как продемонстрировано на следующем ниже схематическом чертеже
где X представляет собой O или S.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи конъюгировано с лигандом, как продемонстрировано на следующем ниже схематическом чертеже
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи дополнительно содержит по меньшей мере одну тиофосфатную или метилфосфонатную межнуклеотидная связь. В некоторых вариантах осуществления тиофосфатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится на 3'-конце одной цепи. В некоторых вариантах осуществления цепь представляет собой антисмысловую цепь. В других вариантах осуществления цепь представляет собой смысловую цепь.
В определенных вариантах осуществления пара оснований в положении 1 5'-конца дуплекса представляет собой пару оснований AU.
В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды Y содержат 2'-фтор-модификацию.
В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды Y' содержат 2'-O-метил-модификацию.
В некоторых вариантах осуществления p'>0. В некоторых таких вариантах осуществления, каждый n является комплементарным мРНК-мишени. В других таких вариантах осуществления каждый n не является комплементарным мРНК-мишени. В некоторых вариантах осуществления p, p', q и q' равны 1-6. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления p'=1 или 2. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления p'=2. В некоторых таких вариантах осуществления q'=0, p=0, q=0, и выступающие нуклеотиды p' являются комплементарными мРНК-мишени. В других таких вариантах осуществления q'=0, p=0, q=0, и выступающие нуклеотиды p' не являются комплементарными мРНК-мишени.
В некоторых вариантах осуществления смысловая цепь содержит всего 21 нуклеотид, и антисмысловая цепь содержит всего 23 нуклеотида.
В определенных вариантах осуществления связи между включают тиофосфатные связи. В некоторых таких вариантах осуществления связи между представляют собой тиофосфатные связи.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи выбрано из группы средств, перечисленных в таблице 1.
В предпочтительных вариантах осуществления средство для РНКи выбрано из группы, состоящей из AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547.
Даже в более предпочтительном варианте осуществления средство для РНКи представляет собой AD-51547 со следующей ниже структурой:
смысловая цепь: 5'-UfgGfgAfuUfuCfAfUfgUfaacCfaAfgAfL96-3' (SEQ 10 NO: 2)
антисмысловая цепь: 5'-uCfuUfgGfUfUfaCfaugAfaAfuCfcCfasUfsc-3' (SEQ 10 NO: 3),
где обозначаемые строчными буквами нуклеотиды (a, u, g, c) означают 2'-O-метил-нуклеотиды; Nf (например, Af) означает 2'-фтор-нуклеотид; s означает фосфотиоратную связь; L96 означает лиганд GalNAc3.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к клетке, содержащей средство для РНКи для ингибирования экспрессии TTR.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей средство для РНКи для ингибирования экспрессии TTR. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция представляет собой раствор, содержащий средство для РНКи. В некоторых вариантах осуществления раствор, содержащий средство для РНКи представляет собой незабуференный раствор, например, физиологический раствор или воду. В других вариантах осуществления раствор представляет собой забуференный раствор, например, раствор фосфатно-солевого буфера (PBS). В других вариантах осуществления фармацевтическая композиция представляет собой липосому или липидный состав. В некоторых вариантах осуществления липидный состав содержит XTC или MC3.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способам ингибирования экспрессии транстиретина (TTR) в клетке. Способы включают приведение клетки в контакт со средством для РНКи, например, двухцепочечным средством для РНКи, в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии TTR в клетке, таким образом, ингибируя экспрессию TTR в клетке.
В некоторых вариантах осуществления экспрессию TTR ингибируют по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80% или по меньшей мере приблизительно на 90%.
В других вариантах осуществления клетку приводят в контакт in vitro со средством для РНКи. В других вариантах осуществления клетка содержится у индивидуума. В предпочтительных вариантах осуществления индивидуум представляет собой человека.
В дополнительных вариантах осуществления индивидуум представляет собой индивидуума, страдающего ассоциированным с TTR заболеванием, и эффективное количество представляет собой терапевтически эффективное количество. В других вариантах осуществления индивидуум представляет собой индивидуума, подвергающегося риску развития ассоциированного с TTR заболевания, и эффективное количество представляет собой профилактически эффективное количество. В некоторых вариантах осуществления индивидуум, подвергающийся риску развития ассоциированного с TTR заболевания, представляет собой индивидуума, который несет мутацию гена TTR, которая ассоциирована с развитием ассоциированного с TTR заболевания.
В некоторых вариантах осуществления ассоциированное с TTR заболевание выбрано из группы, состоящей из старческого системного амилоидоза (SSA), системного семейного амилоидоза, семейной амилоидотической полинейропатии (FAP), семейной амилоидотической кардиомиопатии (FAC), лептоменингеального/амилоидоза центральной нервной системы (ЦНС) и гипертироксинемии.
В некоторых вариантах осуществления индивидуум страдает ассоциированным с TTR амилоидозом, и способ уменьшает отложение амилоидного TTR у индивидуума.
В других вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму способами введения, выбранными из группы, состоящей из подкожного, внутривенного, внутримышечного, внутрибронхиального, интраплеврального, интраперитонеального, внутриартериального, лимфатического, цереброспинального и любых их комбинаций. В определенных вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму путем подкожного или внутривенного введения. В предпочтительных вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму путем подкожного введения. В некоторых таких вариантах осуществления подкожное введение включает введение посредством подкожного насоса или подкожного депо.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму таким образом, что средство для РНКи поставляют в конкретный участок у индивидуума. В некоторых вариантах осуществления участок выбран из группы, состоящей из печени, хориоидного сплетения, сетчатки и поджелудочной железы. В предпочтительных вариантах осуществления участок представляет собой печень. В некоторых вариантах осуществления доставка средства для РНКи опосредована асиалогликопротеиновым рецептором (ASGP-R), содержащимся в гепатоцитах.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в дозе приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 50 мг/кг, например, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 0,5 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 1 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 5 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 10 мг/кг, приблизительно от 1 мг/кг приблизительно до 10 мг/кг, приблизительно от 5 мг/кг приблизительно до 15 мг/кг, приблизительно от 10 мг/кг приблизительно до 20 мг/кг, приблизительно от 15 мг/кг приблизительно до 25 мг/кг, приблизительно от 20 мг/кг приблизительно до 30 мг/кг, приблизительно от 25 мг/кг приблизительно до 35 мг/кг или приблизительно от 40 мг/кг приблизительно до 50 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в дозе приблизительно 0,25 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 11 мг/кг, приблизительно 12 мг/кг, приблизительно 13 мг/кг, приблизительно 14 мг/кг, приблизительно 15 мг/кг, приблизительно 16 мг/кг, приблизительно 17 мг/кг, приблизительно 18 мг/кг, приблизительно 19 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 21 мг/кг, приблизительно 22 мг/кг, приблизительно 23 мг/кг, приблизительно 24 мг/кг, приблизительно 25 мг/кг, приблизительно 26 мг/кг, приблизительно 27 мг/кг, приблизительно 28 мг/кг, приблизительно 29 мг/кг, 30 мг/кг, приблизительно 31 мг/кг, приблизительно 32 мг/кг, приблизительно 33 мг/кг, приблизительно 34 мг/кг, приблизительно 35 мг/кг, приблизительно 36 мг/кг, приблизительно 37 мг/кг, приблизительно 38 мг/кг, приблизительно 39 мг/кг, приблизительно 40 мг/кг, приблизительно 41 мг/кг, приблизительно 42 мг/кг, приблизительно 43 мг/кг, приблизительно 44 мг/кг, приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 46 мг/кг, приблизительно 47 мг/кг, приблизительно 48 мг/кг, приблизительно 49 мг/кг или приблизительно 50 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в двух или более дозах. В конкретных вариантах осуществления средство для РНКи вводят в интервалах, выбранных из группы, состоящей из один раз каждые приблизительно 2 часа, один раз каждые приблизительно 3 часа, один раз каждые приблизительно 4 часа, один раз каждые приблизительно 6 часов, один раз каждые приблизительно 8 часов, один раз каждые приблизительно 12 часов, один раз каждые приблизительно 24 часа, один раз каждые приблизительно 48 часов, один раз каждые приблизительно 72 часа, один раз каждые приблизительно 96 часов, один раз каждые приблизительно 120 часов, один раз каждые приблизительно 144 часа, один раз каждые приблизительно 168 часов, один раз каждые приблизительно 240 часов, один раз каждые приблизительно 336 часов, один раз каждые приблизительно 504 часа, один раз каждые приблизительно 672 часа и один раз каждые приблизительно 720 часов.
В других вариантах осуществления способ дополнительно включает оценку уровня экспрессии мРНК TTR или экспрессии белка TTR в образце, получаемом у индивидуума.
В предпочтительных вариантах осуществления введение средства для РНКи не приводит к воспалительному ответу у индивидуума, как оценивают на основании уровня цитокина или хемокина, выбранного из группы, состоящей из G-CSF, IFN-γ, IL-10, IL-12 (p70), IL1β, IL-1ra, IL-6, IL-8, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, TNFα и любых их комбинаций, в образце у индивидуума.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят с использованием фармацевтической композиции.
В предпочтительных вариантах осуществления средство для РНКи вводят в растворе. В некоторых таких вариантах осуществления миРНК вводят в незабуференном растворе. В одном из вариантов осуществления миРНК вводят в воде. В других вариантах осуществления миРНК вводят с буферным раствором, таким как ацетатный буфер, цитратный буфер, буфер на основе проламина, карбонатный буфер или фосфатный буфер или любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буфер (PBS).
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция представляет собой липосому или липидный состав, содержащий SNALP или XTC. В одном из вариантов осуществления липидный состав содержит MC3.
В другом аспекте изобретение относится к способам лечения или профилактики ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума. Способы включают введение индивидууму терапевтически эффективного количества или профилактически эффективного количества средства для РНКи, например, двухцепочечного средства для РНКи, таким образом, обеспечивая лечение или профилактику ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума.
В некоторых вариантах осуществления экспрессию TTR в образце, получаемом у индивидуума, ингибируют по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60% или по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80% или по меньшей мере приблизительно на 90%.
В некоторых вариантах осуществления индивидуум представляет собой человека.
В некоторых вариантах осуществления индивидуум представляет собой индивидуума, страдающего ассоциированным с TTR заболеванием. В других вариантах осуществления индивидуум представляет собой индивидуума, подвергающегося риску развития ассоциированного с TTR заболевания.
В некоторых вариантах осуществления индивидуум представляет собой индивидуума, который несет мутацию гена TTR, которая ассоциирована с развитием ассоциированного с TTR заболевания.
В некоторых вариантах осуществления ассоциированное с TTR заболевание выбрано из группы, состоящей из старческого системного амилоидоза (SSA), системного семейного амилоидоза, семейной амилоидотической полинейропатии (FAP), семейной амилоидотической кардиомиопатии (FAC), лептоменингеального/амилоидоза центральной нервной системы (ЦНС) и гипертироксинемии.
В некоторых вариантах осуществления индивидуум страдает ассоциированным с TTR амилоидозом, и способ уменьшает отложение амилоидного TTR у индивидуума.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму способом введения, выбранным из группы, состоящей из подкожного, внутривенного, внутримышечного, внутрибронхиального, интраплеврального, интраперитонеального, внутриартериального, лимфатического, цереброспинального и любых их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму путем подкожного или внутривенного введения. В предпочтительных вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму путем подкожного введения. В некоторых таких вариантах осуществления, подкожное введение включает введение посредством подкожного насоса или подкожного депо.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму, таким образом, что средство для РНКи доставляют в конкретный участок у индивидуума. В некоторых таких вариантах осуществления участок выбран из группы, состоящей из печени, хориоидного сплетения, сетчатки и поджелудочной железы. В предпочтительных вариантах осуществления участок представляет собой печень. В некоторых вариантах осуществления доставка средства для РНКи опосредована асиалогликопротеиновым рецептором (ASGP-R), содержащимся в гепатоцитах.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в дозе приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 50 мг/кг, например, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 0,5 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 1 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 5 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 10 мг/кг, приблизительно от 1 мг/кг приблизительно до 10 мг/кг, приблизительно от 5 мг/кг приблизительно до 15 мг/кг, приблизительно от 10 мг/кг приблизительно до 20 мг/кг, приблизительно от 15 мг/кг приблизительно до 25 мг/кг, приблизительно от 20 мг/кг приблизительно до 30 мг/кг, приблизительно от 25 мг/кг приблизительно до 35 мг/кг или приблизительно от 40 мг/кг приблизительно до 50 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в дозе приблизительно 0,25 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 11 мг/кг, приблизительно 12 мг/кг, приблизительно 13 мг/кг, приблизительно 14 мг/кг, приблизительно 15 мг/кг, приблизительно 16 мг/кг, приблизительно 17 мг/кг, приблизительно 18 мг/кг, приблизительно 19 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 21 мг/кг, приблизительно 22 мг/кг, приблизительно 23 мг/кг, приблизительно 24 мг/кг, приблизительно 25 мг/кг, приблизительно 26 мг/кг, приблизительно 27 мг/кг, приблизительно 28 мг/кг, приблизительно 29 мг/кг, 30 мг/кг, приблизительно 31 мг/кг, приблизительно 32 мг/кг, приблизительно 33 мг/кг, приблизительно 34 мг/кг, приблизительно 35 мг/кг, приблизительно 36 мг/кг, приблизительно 37 мг/кг, приблизительно 38 мг/кг, приблизительно 39 мг/кг, приблизительно 40 мг/кг, приблизительно 41 мг/кг, приблизительно 42 мг/кг, приблизительно 43 мг/кг, приблизительно 44 мг/кг, приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 46 мг/кг, приблизительно 47 мг/кг, приблизительно 48 мг/кг, приблизительно 49 мг/кг или приблизительно 50 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в двух или более дозах. В конкретных вариантах осуществления средство для РНКи вводят в интервалах, выбранных из группы, состоящей из один раз каждые приблизительно 2 часа, один раз каждые приблизительно 3 часа, один раз каждые приблизительно 4 часа, один раз каждые приблизительно 6 часов, один раз каждые приблизительно 8 часов, один раз каждые приблизительно 12 часов, один раз каждые приблизительно 24 часа, один раз каждые приблизительно 48 часов, один раз каждые приблизительно 72 часа, один раз каждые приблизительно 96 часов, один раз каждые приблизительно 120 часов, один раз каждые приблизительно 144 часа, один раз каждые приблизительно 168 часов, один раз каждые приблизительно 240 часов, один раз каждые приблизительно 336 часов, один раз каждые приблизительно 504 часа, один раз каждые приблизительно 672 часа и один раз каждые приблизительно 720 часов.
В других вариантах осуществления способ дополнительно включает оценку уровня экспрессии мРНК TTR или экспрессии белка TTR в образце, получаемом у индивидуума.
В предпочтительных вариантах осуществления введение средства для РНКи не приводит к воспалительному ответу у индивидуума, как оценивают на основании уровня цитокина или хемокина, выбранного из группы, состоящей из G-CSF, IFN-γ IL-10, IL-12 (p70), IL1β, IL-1ra, IL-6, IL-8, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, TNFα и любых их комбинаций, в образце у индивидуума.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят с использованием фармацевтической композиции, например, липосомы.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в растворе. В некоторых таких вариантах осуществления миРНК вводят в незабуференном растворе. В одном из вариантов осуществления миРНК вводят в физиологическом растворе или воде. В других вариантах осуществления миРНК вводят в буферном растворе, таком как ацетатный буфер, цитратный буфер, буфер на основе проламинов, карбонатный буфер или фосфатный буфер, или любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буфер (PBS).
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии транстиретина (TTR) в клетке, включающему приведение клетки в контакт со средством для РНКи, например, двухцепочечным средством для РНКи, в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии TTR в клетке. В одном из аспектов двухцепочечное средство для РНКи выбирают из группы средств, перечисленных в таблице 1, таким образом, ингибируя экспрессию транстиретина (TTR) в клетке.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования экспрессии транстиретина (TTR) в клетке, включающему приведение клетки в контакт со средством для РНКи, например, двухцепочечным средством для РНКи, в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии TTR в клетке. В одном из аспектов двухцепочечное средство для РНКи выбирают из группы, состоящей из AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547, таким образом, ингибируя транстиретин (TTR) в клетке.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума, включающему введение индивидууму терапевтически эффективного количество или профилактически эффективного количества средства для РНКи, например, двухцепочечного средства для РНКи. В одном из аспектов двухцепочечное средство для РНКи выбирают из группы средств, перечисленных в таблице 1, таким образом, обеспечивая лечение или профилактику ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума, включающему введение индивидууму терапевтически эффективного количества или профилактически эффективного количества средства для РНКи, например, двухцепочечного средства для РНКи. В одном из аспектов двухцепочечное средство для РНКи выбирают из группы, состоящей из AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547, таким образом, обеспечения лечение или профилактику ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума.
В дополнительных аспектах изобретение относится к наборам для проведения способов по изобретению. В одном из аспектов изобретение относится к набору для проведения способа ингибирования экспрессии транстиретина (TTR) в клетке, включающему приведение клетки в контакт со средством для РНКи, например, двухцепочечным средством для РНКи, в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии указанного TTR в указанной клетке, таким образом, ингибируя экспрессию TTR в клетке. Набор содержит средство для РНКи и инструкции по применению и необязательно средство для введения средства для РНКи индивидууму.
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующим ниже подробным описанием и чертежами.
Краткое описание чертежей
Фигура 1 представляет собой график, отображающий введение мышам однократной подкожной дозы конъюгированного с GalNAc средства для РНКи, направленного на TTR, приводящее к дозозависимому подавлению мРНК TTR.
Фигура 2 представляет собой график, отображающий введение мышам однократной подкожной дозы 7,5 мг/кг или 30 мг/кг конъюгированного с GalNAc средства для РНКи, направленного на TTR, приводящее к длительному подавлению мРНК TTR.
На фигуре 3 представлена последовательность мРНК TTR человека.
Фигура 4 представляет собой график, отображающий улучшенную подавляющую активность средств для РНКи, модифицированных относительно исходного AD-45163.
Фигура 5 представляет собой график, отображающий улучшенную подавляющую активность средств для РНКи, модифицированных относительно исходного AD-45165.
Фигура 6 представляет собой график, отображающий улучшенное подавление в результате свободного поглощения после 4 часов инкубации со средствами для РНКи, модифицированными относительно исходного AD-45163.
Фигура 7 представляет собой график, отображающий улучшенное подавление в результате свободного поглощения после 24 часов инкубации со средствами для РНКи, модифицированными относительно исходного AD-45163.
Фигура 8 представляет собой график, отображающий улучшенное подавление в результате свободного поглощения после 4 часов инкубации со средствами для РНКи, модифицированными относительно исходного AD-45165.
Фигура 9 представляет собой график, отображающий улучшенное подавление в результате свободного поглощения после 24 часов инкубации со средствами для РНКи, модифицированными относительно исходного AD-45165.
Фигура 10 представляет собой график, отображающий подавление экспрессии мРНК TTR у трансгенных мышей, которые экспрессируют V30M hTTR после введения однократной подкожной дозы средств для РНКи AD-51544, AD-51545, AD-45163, AD-51546, AD-51547 или AD-45165.
Фигура 11 представляет собой график, отображающий подавление экспрессии белка TTR у трансгенных мышей, которые экспрессируют V30M hTTR после введения однократной подкожной дозы 5 мг/кг или 1 мг/кг средств для РНКи AD-51544, AD-51545 или AD-45163.
Фигура 12 представляет собой график, отображающий подавление экспрессии белка TTR у трансгенных мышей, которые экспрессируют V30M hTTR после введения однократной подкожной дозы 5 мг/кг или 1 мг/кг средств для РНКи AD-51546, AD-51547 или AD-45165.
На фигуре 13 продемонстрирован протокол взятия крови после дозирования у обезьян, которые получали 5×5 мг/кг средства для РНКи (верхняя линия) или 1×25 мг/кг средства для РНКи (нижняя линия).
Фигура 14 представляет собой график, отображающий подавление экспрессии белка TTR у не являющихся человеком приматов после подкожного введения пяти доз 5 мг/кг (верхняя панель) или однократной дозы 25 мг/кг (нижняя панель) AD-45163, AD-51544, AD-51545, AD-51546 или AD-51547.
Фигура 15 представляет собой график, отображающий подавление экспрессии белка TTR у не являющихся человеком приматов после подкожного введения AD-51547 в дозе 2,5 мг/кг (белые квадраты), 5 мг/кг (черные квадраты) или 10 мг/кг (заштрихованные квадраты) или введения PBS в качестве отрицательного контроля (серые квадраты).
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к средствам для РНКи, например, двухцепочечным средствам для РНКи, и композициям, направленным на ген транстиретина (TTR). Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования экспрессии TTR и способам лечения или профилактики ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума с использованием средств для РНКи по изобретению, например, двухцепочечных средств для РНКи. Настоящее изобретение по меньшей мере частично основано на открытии, что средства для РНКи, которые содержат конкретные химические модификации, обладают превосходной способностью ингибировать экспрессию TTR. В настоящем описании продемонстрировано, что средства, содержащие определенный паттерн химических модификаций (например, чередующийся паттерн) и лиганд, являются эффективными для подавления активности гена TTR. Кроме того, средства, содержащие один или более мотивов трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах, содержащих один такой мотив на участке расщепления средств или около него, проявляют неожиданно повышенную активность подавления гена TTR. Когда в средстве содержится один такой химический мотив, предпочтительно он находится в области расщепления или около нее для повышения активности подавления гена. Область расщепления представляет собой область, окружающую участок расщепления, т.е. участок на мРНК-мишени, в котором происходит расщепление.
I. Определения
Как используют в настоящем описании, каждый из следующих ниже терминов имеет значение, ассоциированное со значением в этом разделе.
Термин "включая" используют в настоящем описании для обозначения и используют взаимозаменяемо с фразой "включая, но, не ограничиваясь ими".
Термин "или" используют в настоящем описании для обозначения и используют взаимозаменяемо с термином "и/или", если из контекста явное не следует иное.
Как используют в настоящем описании, "транстиретин" ("TTR") относится к хорошо известному гену и белку. TTR также известен как преальбумин, HsT2651, PALB и TBPA. TTR функционирует как транспортер ретинолсвязывающего белка (RBP), тироксина (T4) и ретинола, а также способен действовать как протеаза. Печень секретирует TTR в кровь, и хориоидное сплетение секретирует TTR в цереброспинальную жидкость. TTR также экспрессируется в поджелудочной железе и пигментном эпителии сетчатки. Наибольшее клиническое значение TTR заключается в том, что нормальный и мутантный белок TTR могут образовывать амилоидные фибриллы, которые агрегируют во внеклеточные отложения, вызывающие амилоидоз. Для обзора см., например, Saraiva M.J.M., (2002) Expert Reviews in Molecular Medicine, 4(12):1-11. Молекулярное клонирование и нуклеотидная последовательность транстиретина крысы, а также распределение экспрессии мРНК описаны Dickson P.W. et al., (1985) J. Biol. Chem., 260(13) 8214-8219. Рентгеновская кристаллическая структура TTR человека описана у Blake C.C. et al., (1974) J. Mol. Biol., 88, 1-12. Последовательность транскрипта мРНК TTR человека можно найти в National Center for Biotechnology Information (NCBI) номер доступа RefSeq NM_000371. Последовательность мРНК TTR мыши можно найти по номеру доступа RefSeq NM_013697.2, и последовательность мРНК TTR крысы можно найти по номеру доступа RefSeq NM_012681.1.
Как используют в настоящем описании, "последовательность-мишень" относится к смежному участку нуклеотидной последовательности молекулы мРНК, образуемой во время транскрипции гена TTR, включая мРНК, которая представляет собой продукт процессинга РНК продукта первичной транскрипции.
Как используют в настоящем описании, термин "цепь, содержащая последовательность" относится к олигонуклеотиду, содержащему цепь нуклеотидов, которая описана последовательностью, обозначаемой с использованием стандартной номенклатуры нуклеотидов.
"G", "C", "A" и "U", как правило, каждый обозначает нуклеотид, который содержит гуанин, цитозин, аденин и урацил в качестве основания соответственно. "T" и "dT" в настоящем описании используют взаимозаменяемо, и он означает дезоксирибонуклеотид, где нуклеиновое основание представляет собой тимин, например, дезоксириботимин, 2'-дезокситимидин или тимидин. Однако следует понимать, что термин "рибонуклеотид" или "нуклеотид", или "дезоксирибонуклеотид" также может обозначать модифицированный нуклеотид, как более подробно описано ниже, или группу заместителя-имитатора. Специалисту хорошо понятно, что гуанин, цитозин, аденин и урацил могут быть замещены другими группами по существу без изменения свойств спаривания оснований олигонуклеотида, содержащего нуклеотид, несущий такую группу заместителя. Например, без ограничения нуклеотид, содержащий инозин в качестве своего основания, может образовывать пару с нуклеотидами, содержащими аденин, цитозин или урацил. Таким образом, нуклеотиды, содержащие урацил, гуанин или аденин, могут быть заменены в нуклеотидных последовательностях по изобретению нуклеотидом, содержащим, например, инозин. Последовательности, содержащие такие группы заместителей, представляют собой варианты осуществления изобретения.
"Двухцепочечное средство для РНКи", двухцепочечная молекула РНК (дцРНК), также обозначаемая как "средство на основе дцРНК", "дцРНК", "миРНК", "средство на основе иРНК", как взаимозаменяемо используют в настоящем описании, относится к комплексу молекул рибонуклеиновой кислоты, обладающему дуплексной структурой, содержащей две антипараллельные и по существу комплементарные, как определено ниже, цепи нуклеиновой кислоты. Как правило, большая часть нуклеотидов, каждой цепи представляет собой рибонуклеотиды, но, как подробно описано в настоящем описании, каждая цепь или обе цепи также могут содержать один или более нерибонуклеотидов, например, дезоксирибонуклеотид и/или модифицированный нуклеотид. Кроме того, как используют в этом описании, "средство для РНКи" может содержать рибонуклеотиды с химическими модификациями; средство для РНКи может содержать существенные модификации во многих нуклеотидах. Такие модификации могут включать все типы модификаций, описываемых в настоящем описании или известные в данной области. Любые такие модификации, как используют в молекуле типа миРНК, входят в термин "средство для РНКи" для целей настоящего описания и формулы изобретения.
В другом варианте осуществления средство для РНКи может представлять собой одноцепочечную миРНК, которую вводят в клетку или организм для ингибирования мРНК-мишени. Одноцепочечные средства для РНКи связываются с Argonaute 2 RISC, обладающим эндонуклеазной активностью, который затем расщепляет мРНК-мишень. Одноцепочечная миРНК, как правило, содержит 15-30 нуклеотидов и является химически модифицированной. Конструирование и тестирование одноцепочечной миРНК описаны в патенте США №8101348 и у Lima et al., (2012) Cell, 150:883-894, таким образом, полное содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки. Любую из антисмысловых нуклеотидных последовательностей, описываемых в настоящем описании, можно использовать в качестве одноцепочечной миРНК, как описано в настоящем описании, или в качестве химически модифицированной способами, описанными у Lima et al., (2012) Cell, 150:883-894.
Два цепи, образующие дуплексную структуру, могут представлять собой различные участки одной более крупной молекулы РНК, или они могут представлять собой отдельные молекулы РНК. Когда две цепи представляют собой часть одной более крупной молекулы, и, таким образом, являются соединенными непрерывной цепью нуклеотидов между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, образуя дуплексную структуру, соединяющую цепь РНК обозначают как "петля шпилька". Когда две структуры ковалентно связаны средством, отличным от непрерывной цепи нуклеотидов, между 3'-концом одной цепи и 5'-концом соответствующей другой цепи, образуя дуплексную структуру, соединительную структуру обозначают как "линкер". Цепи РНК могут содержать одинаковое или различное число нуклеотидов. Максимальное число пар оснований представляет собой число нуклеотидов в наиболее короткой цепи дцРНК минус любые выступающие нуклеотиды, которые содержатся в дуплексе. В дополнение к дуплексной структуре средство для РНКи может содержать один или более выступающих нуклеотидов. Термин "миРНК" в настоящем описании также используют для обозначения средства для РНКи, как описано выше.
В другом аспекте средство представляет собой одноцепочечную антисмысловую молекулу РНК. Антисмысловая молекула РНК является комплементарной последовательности в мРНК-мишени. Антисмысловая РНК может ингибировать трансляцию стехиометрическим образом путем спаривания оснований с мРНК и физического препятствия механизму трансляции, см. Dias N. et al., (2002) Mol. Cancer Ther., 1:347-355. Антисмысловая молекула РНК может содержать приблизительно 15-30 нуклеотидов, которые являются комплементарными мРНК-мишени. Например, антисмысловая молекула РНК может содержать последовательность из по меньшей мере 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более смежных нуклеотидов из одной из антисмысловых последовательностей из таблицы 1.
Как используют в настоящем описании, "выступающий нуклеотид" относится к неспаренному нуклеотиду или нуклеотидам, которые выступают из дуплексной структуры средства для РНКи, когда 3'-конец одной цепи средства для РНКи выступают за 5'-конец другой цепи или наоборот. "Тупой" или "тупой конец" означает, что не содержится неспаренных нуклеотидов на конце двухцепочечного средства для РНКи, т.е. не содержится выступающих нуклеотидов. Средство для РНКи с "тупыми концами" представляет собой дцРНК, которая является двухцепочечной на всем протяжении длины, т.е. не содержит нуклеотидов, выступающих на любом конце молекулы. Средства для РНКи по изобретению включают средства для РНКи, где нуклеотид выступает на одном конце (т.е. средства с одним липким и одним тупым концом), или нуклеотидом выступает на обоих концах.
Термин "антисмысловая цепь" относится к цепи двухцепочечного средства для РНКи, которая содержит область, которая по существу является комплементарной последовательности-мишени (например, мРНК TTR человека). Как используют в настоящем описании, термин "область, комплементарная участку мРНК, кодирующей транстиретин" относится к области в антисмысловой цепи, которая по существу является комплементарной участку последовательности мРНК TTR. Когда область комплементарности не является полностью комплементарной последовательности-мишени, несоответствия являются наиболее допустимыми в концевых областях и при наличии, как правило, находятся в концевой области или областях, например, в 6, 5, 4, 3 или 2 нуклеотидах 5'- и/или 3'-конца.
Термин "смысловая цепь", как используют в настоящем описании, относится к стандартной дцРНК, которая содержит область, которая является по существу комплементарной области антисмысловой цепи.
Как используют в настоящем описании, термин "область расщепления" относится к области, которая располагается непосредственно вблизи участка расщепления. Участок расщепления представляет собой участок в мишени, в котором происходит расщепление. В некоторых вариантах осуществления область расщепления содержит три основания на конце и непосредственно вблизи участка расщепления. В некоторых вариантах осуществления область расщепления содержит два основания на конце и непосредственно вблизи участка расщепления. В некоторых вариантах осуществления участок расщепления конкретно располагается на участке, связанном нуклеотидами 10 и 11 антисмысловой цепи, и область расщепления содержит нуклеотиды 11, 12 и 13.
Как используют в настоящем описании, и если не указано иное, термин "комплементарный", когда используют для описания первой нуклеотидной последовательности относительно второй нуклеотидной последовательности, относится к способности олигонуклеотида или полинуклеотида, содержащего первую нуклеотидную последовательность, гибридизоваться и образовывать дуплексную структуру в определенных условиях с олигонуклеотидом или полинуклеотидом, содержащим вторую нуклеотидную последовательность, как будет понятно специалисту. Такие условия могут, например, представлять собой жесткие условия, где жесткие условия могут включать: 400 мМ NaCl, 40 мМ PIPES pH 6,4, 1 мМ EDTA, 50°C или 70°C в течение 12-16 часов с последующим промыванием. Можно применять другие условия, такие как соответствующие физиологическим условия, как могут встречаться внутри организма. Специалист может определять набор условий, наиболее подходящих для тестирования комплементарности двух последовательностей в соответствии с конечным применением гибридизуемых нуклеотидов.
Последовательности могут являться "полностью комплементарными" по отношению друг к другу, когда происходит спаривание оснований нуклеотидов первой нуклеотидной последовательности с нуклеотидами второй нуклеотидной последовательности на всем протяжении длины первой и второй нуклеотидных последовательностях. Однако в случае, когда первую последовательность обозначают как "по существу комплементарная" по отношению ко второй последовательности в настоящем описании, две последовательности могут являться полностью комплементарными, или они могут образовывать одну или более, но, как правило, не более 4, 3 или 2 несовпадающих пар оснований при гибридизации, при этом сохраняя способность гибридизоваться в условиях, наиболее соответствующих их конечному применению. Однако когда два олигонуклеотида конструируют с возможностью образовывать при гибридизации один или более одноцепочечных липких концов, такие липкие концы не следует рассматривать как несоответствия в отношении определения комплементарности. Например, дцРНК, содержащая один олигонуклеотид длиной 21 нуклеотид и другой олигонуклеотид длиной 23 нуклеотида, где наиболее длинный олигонуклеотид содержит последовательность из 21 нуклеотида, которая является полностью комплементарной более короткому олигонуклеотиду, также можно обозначать как обозначаемый как "полностью комплементарная" для целей, описываемых в настоящем описании.
"Комплементарные" последовательности, как используют в настоящем описании, также могут содержать или являться полностью образованными парами оснований, не относящихся к типу Уотсона-Крика, и/или парами оснований, образованными из неприродных и модифицированных нуклеотидов, при условии, что выполняются указанные выше требования в отношении их способности гибридизоваться. Такие пары оснований, не относящиеся к типу Уотсона-Крика, включают, но не ограничиваются ими, неоднозначное G:U или Хугстиновское спаривание оснований.
Термины "комплементарная", "полностью комплементарная" и "по существу комплементарная" в настоящем описании можно использовать в отношении совпадения пар оснований смысловой цепи и антисмысловой цепи дцРНК или антисмысловой цепи дцРНК и последовательности-мишени, как будет понятно из контекста, в котором их используют.
Как используют в настоящем описании, полинуклеотид, который является "по существу комплементарный по меньшей мере части" матричной РНК (мРНК) относится к полинуклеотиду, который является по существу комплементарным смежному участку представляющей интерес мРНК (например, мРНК, кодирующей TTR), включая 5'-UTR, открытую рамку считывания (ORF) или 3'-UTR. Например, полинуклеотид является комплементарным по меньшей мере части TTR мРНК, если последовательность является по существу комплементарный непрерывному участку мРНК, кодирующей TTR.
Термин "ингибирование", как используют в настоящем описании, используют взаимозаменяемо с "уменьшением", "подавлением", "снижением", "ослаблением" и другими аналогичными терминами, и он включает любой уровень ингибирования.
Фраза "ингибирование экспрессии TTR", как используют в настоящем описании, включает ингибирование экспрессии любого гена TTR (такого как, например, гена TTR мыши, гена TTR крысы, гена TTR обезьяны или гена TTR человека), а также вариантов или мутантов гена TTR. Таким образом, ген TTR может представлять собой ген TTR дикого типа, мутантный ген TTR (такой как, мутантный ген TTR, приводящий к образованию системного отложения амилоида) или трансгенный ген TTR по отношению к клеткам, группе клеток или организму, которых подвергали генетической манипуляции.
"Ингибирование экспрессии гена TTR" включает любой уровень ингибирования гена TTR, например, по меньшей мере частичное подавление экспрессии гена TTR, такое как ингибирование по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 91%, по меньшей мере приблизительно на 92%, по меньшей мере приблизительно на 93%, по меньшей мере приблизительно на 94%, по меньшей мере приблизительно на 95%, по меньшей мере приблизительно на 96%, по меньшей мере приблизительно на 97%, по меньшей мере приблизительно на 98% или по меньшей мере приблизительно на 99%.
Экспрессию гена TTR можно оценивать на основании уровня любой переменной, ассоциированной с экспрессией гена TTR, например, уровнем мРНК TTR, уровнем белка TTR, уровнем ретинолсвязывающего белка, уровнем витамина A или числом или степенью отложений амилоида. Ингибирование можно оценивать по снижению абсолютного или относительного уровня одной или более таких переменных по сравнению с контрольным уровнем. Контрольный уровень может представлять собой любой тип контрольного уровня, который используют в данной области, например, исходный уровень до дозирования или уровень, определяемый у такого же индивидуума, в клетке или в образце, которые не подвергали обработке или обрабатывали контролем (таким как, например, только контроль буфером или контроль неактивным средством).
Фраза "приведение клетки в контакт со средством для РНКи", как используют в настоящем описании, включает приведение клетки в контакт любым возможным способом. Приведение клетки в контакт со средством для РНКи, например, двухцепочечным средством для РНКи, включает приведение клетки в контакт in vitro со средством для РНКи или приведение клетки в контакт in vivo со средством для РНКи. Приведение в контакт можно проводить прямо или опосредованно. Таким образом, например, средство для РНКи можно приводить в физический контакт с клеткой отдельно проводимым способом или, альтернативно, для средства для РНКи можно создавать ситуацию, которая обеспечивает или вызывает в дальнейшем его контактирование с клеткой.
Приведение клетки в контакт in vitro можно проводить, например, путем инкубации клеток со средством для РНКи. Приведение клетки в контакт in vivo можно проводить, например, путем инъекционного введения средства для РНКи в ткань или около нее, где локализована клетка, или путем инъекционного введения средства для РНКи в другую область, например, кровоток или подкожное пространство, таким образом, что средство затем попадает в ткань, где локализована клетка, которую необходимо подвергать контактированию. Например, средство для РНКи может содержать и/или являться сопряженным с лигандом, например, лигандом GalNAc3, который направляет средство для РНКи в представляющий интерес участок, например, печень. Также возможными являются комбинации способов in vitro и in vivo. В отношении способов по изобретению клетку также можно приводить в контакт in vitro со средством для РНКи, а затем трансплантировать индивидууму.
"Пациент" или "индивидуум", как используют в настоящем описании, предназначен включать человека или не являющееся человеком животное, предпочтительно млекопитающее, например, обезьяну. Наиболее предпочтительно индивидуум или пациент представляет собой человека.
"Ассоциированное с TTR заболевание", как используют в настоящем описании, предназначено включать любое заболевание, ассоциированное с геном TTR или белком. Такое заболевание может быть вызвано, например, избытком продукции белка TTR, мутацией гена TTR, аномальным расщеплением белка TTR, аномальным взаимодействием между TTR и другими белками или другими эндогенными или экзогенными веществами. "Ассоциированное с TTR заболевание" включает любой тип TTR амилоидоза (ATTR), где TTR играет основою роль в образовании аномальных внеклеточных агрегатов или отложений амилоида. Ассоциированные с TTR заболевания включают старческий системный амилоидоз (SSA), системный семейный амилоидоз, семейную амилоидотическую полинейропатию (FAP), семейную амилоидотическую кардиомиопатию (FAC), лептоменингеальный/амилоидоз центральной нервной системы (ЦНС), амилоидотическое помутнения стекловидного тела, синдром запястного канала и гипертироксинемию. Симптомы TTR амилоидоза включают сенсорную нейропатия (например, парестезию, гипестезию в дистальных конечностях), вегетативную нейропатию (например, нарушение желудочно-кишечной функции, такое как язва желудка, или ортостатическую гипотензию), моторную нейропатию, судороги, деменцию, миелопатию, полинейропатию, синдром запястного канала, вегетативную недостаточность, кардиомиопатию, помутнения стекловидного тела, почечную недостаточность, нефропатию, значительно сниженный mBMI (модифицированный индекс массы тела), нарушение функции черепно-мозгового нерва и решетчатую дегенерацию роговицы.
"Терапевтически эффективное количество", как используют в настоящем описании, предназначено включать количество средства для РНКи, которое при введении пациенту для лечения ассоциированного с TTR заболевания, является достаточным для обеспечения лечения заболевания (например, путем ослабления, улучшения состояния или поддержания существующего заболевание или одного или более симптомов заболевания). "Терапевтически эффективное количество" может изменяться в зависимости от средства для РНКи, того как вводят средство, заболевания и его тяжести и истории, возраста, массы, семейного анамнеза, набора генов, стадии патологического процесса, опосредованного экспрессией TTR, типов предшествовавших или сопутствующих видов лечения при наличии и других индивидуальных характеристик подлежащего лечению пациента.
"Профилактически эффективное количество", как используют в настоящем описании, предназначено включать количество средства для РНКи, которое при введении индивидууму, который еще не испытывает, или у которого не выявляют симптомы ассоциированное с TTR заболевания, но который может быть предрасположен к заболеванию, является достаточным для профилактики или улучшения состояния заболевание или одного или более симптомов заболевания. Симптомы, которые можно улучшать, включают сенсорную нейропатию (например, парестезию, гипестезию в дистальных конечностях), вегетативную нейропатию (например, нарушение желудочно-кишечной функции, такое как язва желудка, или ортостатическую гипотензию), моторную нейропатию, судороги, деменцию, миелопатию, полинейропатию, синдром запястного канала, вегетативную недостаточность, кардиомиопатию, помутнения стекловидного тела, почечную недостаточность, нефропатию, значительное снижение mBMI (модифицированного индекса массы тела), нарушение функции черепно-мозгового нерва и решетчатую дегенерацию роговицы. Улучшение состояния заболевание включает замедление течения заболевания или снижение тяжести развивающегося позднее заболевания. "Профилактически эффективное количество" может изменяться в зависимости от средства для РНКи, того как вводят средство, степени риска заболевания и истории, возраста, массы, семейного анамнеза, набора генов, типов предшествовавших или сопутствующих видов лечения при наличии и других индивидуальных характеристик подлежащего лечению пациента.
"Терапевтически-эффективное количество" или "профилактически эффективное количество" также включает количество средства для РНКи, которое оказывает некоторое желаемое местное или системное действие при обоснованном отношении риск/польза, применимом для любого лечения. Средства для РНКи, применяемые в способах по настоящему изобретению, можно вводить в достаточном количестве для обеспечения обоснованного отношения риск/польза, применимого для такого лечения.
Термин "образец", как используют в настоящем описании, включает набор аналогичных жидкостей, клеток или тканей, получаемых у индивидуума, а также жидкости, клетки или ткани, содержащиеся у индивидуума. Примеры биологических жидкостей включают кровь, сыворотку и серозные жидкости, плазму, цереброспинальную жидкость, внутриглазные жидкости, лимфу, мочу, слюну и т.п. Ткань образцов может включать образцы из тканей, органов или локализованных областей. Например, образцы можно получать из конкретных органов, частей органов или жидкостей, или клеток в таких органах. В определенных вариантах осуществления образцы можно получать из печени (например, целой печени или определенных сегментов печени, или определенных типов клеток в печени, таких как, например, гепатоциты), сетчатки или частей сетчатки (например, пигментного эпителия сетчатки), центральной нервной системы или отделов центральной нервной системы (например, желудочков или хориоидного сплетения) или поджелудочной железы или определенных типов клеток или частей поджелудочной железы. В некоторых вариантах осуществления "образец, получаемый у индивидуума" относится к цереброспинальной жидкости, получаемой у индивидуума. В предпочтительных вариантах осуществления "образец, получаемый у индивидуума" относится к крови или плазме, получаемой у индивидуума. В дополнительных вариантах осуществления "образец, получаемый у индивидуума" относится к ткани печени (или ее подкомпонентам) или ткани сетчатки (или ее подкомпонентам), получаемым у индивидуума.
II. Средства для РНКи
Настоящее изобретение относится к средствам для РНКи с превосходной активность подавления экспрессии гена. В настоящем описании и во временной заявке на патент №61/561710 (на основании которой по настоящей заявке испрашивается приоритет) продемонстрировано, что превосходный результат можно получать посредством введения одного или более мотивов трех идентичных модификаций в три последовательных нуклеотида в смысловой цепи и/или антисмысловой цепи средства для РНКи, в частности в участок расщепления или около него. Смысловую цепь и антисмысловую цепь средства для РНКи можно иным образом полностью модифицировать. Введение таких мотивов нарушает паттерны модификации, при их наличии, смысловой и/или антисмысловой цепи. Средство для РНКи также необязательно конъюгировано с лигандом производного GalNAc, например, в смысловой цепи. Получаемые средства для РНКи обладают превосходной подавляющей экспрессию гена активностью.
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что когда смысловую цепь и антисмысловую цепь средства для РНКи полностью модифицируют, так чтобы она содержала один или более мотивов трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах в участке расщепления или около него по меньшей мере одной цепи средства для РНКи, значительно повышается активность подавления экспрессии гена средства для РНКи.
Таким образом, изобретение относится к средствам для РНКи, например, двухцепочечным средствам для РНКи, способным ингибировать экспрессию гена-мишени (т.е. гена TTR) in vivo. Средство для РНКи содержит смысловую цепь и антисмысловую цепь. Длина каждой цепи средства для РНКи может находиться в диапазоне 12-30 нуклеотидов. Например, длина каждой цепи может составлять 14-30 нуклеотидов, 17-30 нуклеотидов, 25-30 нуклеотидов, 27-30 нуклеотидов, 17-23 нуклеотида, 17-21 нуклеотид, 17-19 нуклеотидов, 19-25 нуклеотидов, 19-23 нуклеотида, 19-21 нуклеотид, 21-25 нуклеотидов или 21-23 нуклеотида.
Смысловая цепь и антисмысловая цепь, как правило, образуют дуплексную двухцепочечную РНК ("дцРНК"), также обозначаемую в настоящем описании как "средство для РНКи". Длина дуплексной области средства для РНКи может составлять 12-30 пар нуклеотидов. Например, длина дуплексной области может составлять 14-30 пар нуклеотидов, 17-30 пар нуклеотидов, 27-30 пар нуклеотидов, 17-23 пары нуклеотидов, 17-21 пару нуклеотидов, 17-19 пар нуклеотидов, 19-25 пар нуклеотидов, 19-23 пары нуклеотидов, 19-21 пару нуклеотидов, 21-25 пар нуклеотидов или 21-23 пары нуклеотидов. В другом примере дуплексная область выбрана из 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 и 27.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи может содержать одну или более областей липких концов и/или копирующих групп средства для РНКи на 3'-конце или 5'-конце, или на обоих концах цепи. Липкий конец может составлять 1-6 нуклеотидов, например, 2-6 нуклеотидов, 1-5 нуклеотидов, 2-5 нуклеотидов, 1-4 нуклеотида, 2-4 нуклеотида, 1-3 нуклеотида, 2-3 нуклеотида или 1-2 нуклеотида. Липкие концы могут являться результатом того, что одна цепь является длиннее другой, или результатом того, что две цепи одинаковой длины подвергают ступенчатому разрыву. Липкий конец может образовывать несоответствие с мРНК-мишенью, или он может являться комплементарным последовательностям гена для направленного воздействия или может представлять собой другую последовательность. Первую и вторую цепи также можно соединять, например, посредством дополнительных оснований с образованием шпильки, или посредством других не являющихся основанием линкеров.
Средства для РНКи, предоставленные настоящим изобретением, включают средства с химическими модификациями, как описано, например, во временной заявке США №61/561710, поданной 18 ноября 2011 года, международной заявке № PCT/US 2011/051597, поданной 15 сентября 2010 года, и публикации PCT WO 2009/073809, полное содержание каждой из которых включено в настоящее описание посредством ссылки.
В одном из вариантов осуществления каждый нуклеотид в выступающей области средства для РНКи может независимо представлять собой модифицированный или немодифицированный нуклеотид, включая, но, не ограничиваясь ими, модифицированный 2'-сахар, такой как, 2-F, 2'-O-метил, тимидин (T), 2'-O-метоксиэтил-5-метилуридин (Teo), 2'-O-метоксиэтиладенозин (Aeo), 2'-O-метоксиэтил-5-метилцитидин (m5Ceo) или любые их комбинации. Например, TT может представлять собой последовательность липкого конца для любого конца любой цепи. Липкий конец может образовывать несоответствие мРНК-мишени, или он может являться комплементарным последовательностям гена для направленного воздействия или может представлять собой другую последовательность.
5'- или 3'-липкие концы в смысловой цепи, антисмысловой цепи или обеих цепях средства для РНКи могут быть фосфорилированными. В некоторых вариантах осуществления область липких концов содержит два нуклеотида, содержащих тиофосфат между двумя нуклеотидами, где два нуклеотиды могут являться одинаковыми или различными. В одном из вариантов осуществления липкий конец находится на 3'-конце смысловой цепи, антисмысловой цепи или обеих цепях. В одном из вариантов осуществления такой 3'-липкий конец содержится в антисмысловой цепи. В одном из вариантов осуществления такой 3'-липкий конец содержится в смысловой цепи.
Средство для РНКи может содержать только один липкий конец, который может повышать активность интерференции РНКи, не влияя на ее общую стабильность. Например, одноцепочечный липкий конец располагается на 3'-конце смысловой цепи или, альтернативно, на 3'-конце антисмысловой цепи. РНКи может также содержать тупой конец, расположенный на 5'-конце антисмысловой цепи (или 3'-конце смысловой цепи) или наоборот. Как правило, антисмысловая цепь РНКи содержит выступающий нуклеотид на 3'-конце, и 5'-конец является тупым. Несмотря на то, что заявители не связаны теорией, теоретический механизм заключается в том, что асимметричный тупой конец на 5'-конце антисмысловой цепи и 3'-липкий конец антисмысловой цепи способствуют тому, что направляющая цепь подвергается процессу RISC.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи представляет собой олигонуклеотид с двумя тупыми концами длиной 19 нуклеотидов, где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 7, 8, 9 от 5'-конца. Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метил-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи представляет собой олигонуклеотид с двумя тупыми концами длиной 20 нуклеотидов, где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив их трех 2'-F-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 8, 9, 10 от 5'-конца. Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метил-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи представляет собой олигонуклеотид с двумя тупыми концами длиной 21 нуклеотид, где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 9, 10, 11 от 5'-конца. Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из три 2'-O-метил-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи содержит смысловую цепь длиной 21 нуклеотид (nt) и антисмысловую цепь длиной 23 нуклеотида (nt), где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 9, 10, 11 от 5'-конца; антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метил-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положениях 11, 12, 13 от 5'-конца, где один конец средства для РНКи является тупым, в то время как другой конец содержит липкий конец с 2 нуклеотидами. Предпочтительно липкий конец с 2 нуклеотидами находится на 3'-конце антисмысловой цепи. Необязательно средство для РНКи дополнительно содержит лиганд (предпочтительно GalNAC3).
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи содержит смысловую и антисмысловую цепь, где длина смысловой цепе составляет 25-30 нуклеотидных остатков, где начиная от положений от 1 до 23 5'-концевого нуклеотида (положение 1) первой цепи, содержится по меньшей мере 8 рибонуклеотидов; длина антисмысловой цепи составляет 36-66 нуклеотидных остатка и, начиная от 3'-концевого нуклеотида, содержит по меньшей мере 8 рибонуклеотидов в положениях, спаренных с положениями 1-23 смысловой цепи с образованием дуплекса; где по меньшей мере 3'-концевой нуклеотид антисмысловой цепи является неспаренным с со смысловой цепью, и до 6 последовательных 3'-концевых нуклеотида являются неспаренными со смысловой цепью, таким образом, образуя одноцепочечный 3'-липкий конец из 1-6 нуклеотидов; где 5'-конец антисмысловой цепи содержит 10-30 последовательных нуклеотидов, которые являются неспаренными со смысловой цепью, таким образом, образуя одноцепочечный 5'-липкий конец длиной 10-30 нуклеотидов; где по меньшей мере 5'-концевые и 3'-концевые нуклеотиды смысловой цепи являются спаренными с нуклеотидами антисмысловой цепи, где смысловая и антисмысловая цепи являются выровненными для максимальной комплементарности, таким образом, образуя по существу дуплексную область между смысловой и антисмысловой цепями; и антисмысловая цепь является достаточно комплементарной РНК-мишени на протяжении по меньшей мере 19 рибонуклеотидов антисмысловой цепи для снижения экспрессии гена-мишени, когда двухцепочечную нуклеиновую кислоту вводят в клетку млекопитающего; и где смысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-F-модификаций в трех последовательных нуклеотидах, где по меньшей мере один из мотивов располагается в участке расщепления или около него. Антисмысловая цепь содержит по меньшей мере один мотив из трех 2'-O-метил-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в участке расщепления или около него.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи содержит смысловую и антисмысловую цепи, где средство для РНКи содержит первую цепь, длина которой составляет по меньшей мере 25 и не более 29 нуклеотидов, и вторую цепь, длина, которой составляет не более 30 нуклеотидов, с по меньшей мере одним мотивов из трех 2'-O-метил-модификаций в трех последовательных нуклеотидах в положении 11, 12, 13 от 5'-конца; где 3'-конец первой цепи и 5'-конец второй цепи образуют тупой конец, и вторая цепь является на 1-4 нуклеотида длиннее на своем 3'-конце чем первая цепь, где дуплексная область, длина которой составляет по меньшей мере 25 нуклеотидов, и вторая цепь являются достаточно комплементарными мРНК-мишени на протяжении по меньшей мере 19 нуклеотидов второй цепи для снижения экспрессии гена-мишени, когда средство для РНКи вводят в клетку млекопитающего, и где расщепление ферментом Dicer средства для РНКи предпочтительно приводит к миРНК, содержащей 3'-конец второй цепи, таким образом, снижая экспрессию гена-мишени у млекопитающего. Необязательно средство для РНКи дополнительно содержит лиганд.
В одном из вариантов осуществления смысловая цепь средства для РНКи содержит по меньшей мере один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах, где один из мотивов располагается в участке расщепления в смысловой цепи.
В одном из вариантов осуществления антисмысловая цепь средства для РНКи также может содержать по меньшей мере один из мотив их трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах, где один из мотивов располагается в участке расщепления или около него в антисмысловой цепи.
Для средства для РНКи, содержащего дуплексную область длиной 17-23 нуклеотидов, участок расщепления антисмысловой цепи, как правило, располагается вокруг положений 10, 11 и 12 от 5'-конца. Таким образом, мотивы из трех идентичных модификаций могут располагаться в положениях 9, 10, 11; положениях 10, 11, 12; положениях 11, 12, 13; положениях 12, 13, 14 или положениях 13, 14, 15 антисмысловой цепи, где нумерация начинается от 1-го нуклеотида 5'-конца антисмысловой цепи, или нумерация начинается от 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи. Участок расщепления в антисмысловой цепи также может изменяться в зависимости от длины дуплексной области РНКи от 5'-конца.
Смысловая цепь средства для РНКи может содержать по меньшей мере один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах в участке расщепления цепи, и антисмысловая цепь может содержать по меньшей мере один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах в участке расщепления цепи или около него. Когда смысловая цепь и антисмысловая цепь образуют дуплекс дцРНК, смысловая цепь и антисмысловая цепь могут быть выровнены таким образом, что один мотив из трех нуклеотидов в смысловой цепи и один мотив из трех нуклеотидов в антисмысловой цепи содержат по меньшей мере одно перекрытие нуклеотидов, т.е. по меньшей мере один из трех нуклеотидов мотива в смысловой цепи образует комплементарную пару оснований по меньшей мере с одним из трех нуклеотидов мотива в антисмысловой цепи. Альтернативно, могут перекрываться по меньшей мере два нуклеотиды, или все три нуклеотида могут перекрываться.
В одном из вариантов осуществления смысловая цепь средства для РНКи может содержать более одного мотива из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах. Первый мотив должен располагаться в участке расщепления или около него цепи, и другие мотивы могут представлять собой крыльевые модификации. Термин "крыльевая модификация" в настоящем описании относится к мотиву, располагающемуся на другом участке цепи, который является отделенным от мотива в участке расщепления или около него той же самой цепи. Крыльевая модификация примыкает к первому мотиву или отделена от него по меньшей мере одним или более нуклеотидами. Когда мотивы являются непосредственно примыкающими друг к другу, то химическая структура мотивов отличается друг от друга, и когда мотивы разделены одним или более нуклеотидами, то химические структуры могут быть одинаковыми или различными. Могут присутствовать две или более крыльевых модификаций. Например, когда содержатся две крыльевые модификации, каждая крыльевая модификация может располагаться на одном конце относительно первого мотива, который располагается в участке расщепления или около него, или на любой стороне лидерного мотива.
Аналогично смысловой цепи антисмысловая цепь средства для РНКи может содержать по меньшей мере два мотива из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах, где по меньшей мере один из мотивов располагается в участке расщепления или около него цепи. Такая антисмысловая цепь также может содержать одну или более крыльевых модификаций в выравнивании, аналогичном крыльевым модификациям, которые содержатся в смысловой цепи.
В одном из вариантов осуществления крыльевая модификация в смысловой цепи или антисмысловой цепи средства для РНКи, как правило, не включает первый один или два концевых нуклеотида на 3'-конце, 5'-конце или обоих концах цепи.
В другом варианте осуществления крыльевая модификация в смысловой цепи или антисмысловой цепи средства для РНКи, как правило, не включает первый один или два спаренных нуклеотида в дуплексной области на 3'-конце, 5'-конце или обоих концах цепи.
Когда смысловая цепь и антисмысловая цепь средства для РНКи содержат по меньшей мере одну крыльевую модификацию, крыльевые модификации могут находиться на одном и том же конце дуплексной области и содержать перекрывание одного, двух или трех нуклеотидов.
Когда смысловая цепь и антисмысловая цепь средства для РНКи содержат по меньшей мере две крыльевые модификации, смысловая цепь и антисмысловая цепь могут являться выровненными таким образом, что две модификации, каждая из одной цепи, находятся на одном конце дуплексной области с перекрыванием одного, двух или трех нуклеотидов; две модификации, каждая из одной цепи, находятся на другом конце дуплексной области с перекрыванием одного, двух или трех нуклеотидов; две модификации одной цепи находятся на каждой стороне лидерного мотива с перекрыванием одного, двух или трех нуклеотидов в дуплексной области.
В одном из вариантов осуществления можно модифицировать каждый нуклеотид в смысловой цепи и антисмысловой цепи средства для РНКи, включая нуклеотиды, которые являются частью мотивов. Каждый нуклеотид можно модифицировать одинаковыми или различными модификациями, которые могут включать одно или более изменений одного или обоих не образующих связей кислородов фосфатов и/или одного или более образующих связи кислородов фосфатов; изменение компонента сахара рибозы, например, 2'-гидроксила в сахаре рибозы; полную замену фосфатной группы "дефосфо"-линкерами; модификацию или замену природного основания и замену или модификацию рибоза-фосфатного остова.
Вследствие того, что нуклеиновые кислоты представляют собой полимеры из субъединиц, многие модификации находятся в положении, которое повторяется в нуклеиновой кислоте, например, модификация основания или фосфатной группы, или не образующего связей O фосфатной группы. В некоторых случаях модификация находится во всех отдельных положениях в нуклеиновой кислоте, но во многих случаях этого не происходит. В качестве примера, модификация может находиться только в 3'- или 5'-концевом положении, может находиться только в концевой области, например, в положении в концевом нуклеотиде или в последних 2, 3, 4, 5 или 10 нуклеотидах цепи. Модификация может располагаться в области двойной цепи, области одной цепи или в обеих. Модификация может находиться только в области двойной цепи РНК или может находиться только в области одной цепи РНК. Например, модификация тиофосфата в положении не образующего связей O может находиться только на одном или обоих концах, может находиться только в концевой области, например, в положении в концевом нуклеотиде или в последних 2, 3, 4, 5 или 10 нуклеотидах цепи, или может находиться в областях двойной цепи и одной цепи, в частности на концах. 5'-конец или концы могут являться фосфорилированными.
Возможно, например, для повышения стабильности, вводить конкретные основания в липкие концы или вводить модифицированные нуклеотиды или имитаторы нуклеотидов в липкие концы одной цепи, например, в 5'- или 3'-липкие концы, или в обеих цепях. Например, желательным может являться введение в липкие концы пуриновых нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления можно модифицировать все или некоторые основания в 3'- или 5'-липком конце, например, модификацией, описываемой в настоящем описании. Модификации могут включать, например, использование модификаций в 2'-положении сахара рибозы с модификациями, которые известны в данной области, например, использование дезоксирибонуклеотидов, 2'-дезокси-2'-фтор- (2'-F) или 2'-O-метил-модифицированных вместо сахара рибозы нуклеинового основания, и модификации в фосфатной группе, например, модификации тиофосфатов. Липкие концы должны быть гомологичными последовательностям-мишеням.
В одном из вариантов осуществления каждый остаток смысловой цепи и антисмысловой цепи независимо модифицируют LNA, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтилом, 2'-O-метилом, 2'-O-аллилом, 2'-C-аллилом, 2'-дезокси, 2'-гидроксилом или 2'-фтором. Цепи могут содержать более одной модификации. В одном из вариантов осуществления каждый остаток смысловой цепи и антисмысловой цепи независимо модифицируют 2'-O-метилом или 2'-фтором.
По меньшей мере две различные модификации, как правило, содержатся в смысловой цепи и антисмысловой цепи. Такие две модификации могут представлять собой 2'-O-метил- или 2'-фтор-модификации, или другие.
В одном из вариантов осуществления Na и/или Nb содержат модификации чередующегося паттерна. Термин "чередующийся мотив", как используют в настоящем описании, относится к мотиву, содержащему одну или более модификаций, где каждая модификация находится в чередующихся нуклеотидах одной цепи. Чередующийся нуклеотид может относиться к одному на каждый второй нуклеотид или одному на каждые три нуклеотида или аналогичный паттерн. Например, если A, B и C каждые представляют собой один тип модификации нуклеотида, чередующийся мотив может представлять собой "АВАВАВАВАВАВ…", "ААВВААВВААВВ…", "ААВААВААВААВ…", "АААВАААВАААВ…", "АААВВВАААВВВ…" или "АВСАВСАВСАВС…" и т.д.
Тип модификаций, содержащихся в чередующемся мотиве, может являться одинаковым или различным. Например, если каждый A, B, C, D представляет собой один тип модификации в нуклеотиде, чередующийся паттерн, т.е. модификации в каждом последующем нуклеотиде могут являться одинаковыми, но каждый для смысловой цепи или антисмысловой цепь можно выбирать из нескольких возможностей модификаций в чередующемся мотиве, таком как "АВАВАВ…", "АСАСАС…", "BDBDBD…" или "CDCDCD…" и т.д.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи по изобретению содержит паттерн модификации для чередующегося мотива в смысловой цепи, который сдвинут относительно паттерна модификации чередующегося мотива в антисмысловой цепи. Сдвиг может представлять собой такой, что модифицированная группа нуклеотидов смысловой цепи соответствует различным образом модифицированной группе нуклеотидов антисмысловой цепи и наоборот. Например, смысловая цепь, когда является спаренной с антисмысловой цепью в дуплекс дцРНК, чередующийся мотив в смысловой цепи может начинаться с "АВАВАВ" от 5'-3' цепи, и чередующийся мотив в антисмысловой цепь может начинаться с "ВАВАВА" от 5'-3' цепи в дуплексной области. В качестве другого примера, чередующийся мотив в смысловой цепи может начинаться с "ААВВААВВ" от 5'-3' цепи, и чередующийся мотив в антисмысловой цепи может начинаться с "ВВААВВАА" от 5'-3' цепи в дуплексной области, таким образом, что существует полный или частичный сдвиг паттерном модификации между смысловой цепью и антисмысловой цепью.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи содержит паттерн чередующегося мотива 2'-O-метил-модификации и 2'-F-модификации в смысловой цепи, который исходно имеет сдвиг относительно паттерна чередующегося мотива 2'-O-метил-модификации и 2'-F-модификации в антисмысловой цепи, т.е. 2'-O-метил-модифицированный нуклеотид в парах оснований смысловой цепи с 2'-F-модифицированным нуклеотидом в антисмысловой цепи и наоборот. 1 положение смысловой цепи может начинаться с 2'-F-модификации, и 1 положение антисмысловой цепи может начинаться с 2'-O-метил-модификации.
Введение одного или более мотивов из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах в смысловую цепь и/или антисмысловую цепь нарушает исходный паттерн модификации, содержащийся в смысловой цепи и/или антисмысловой цепи. Такое нарушение паттерна модификации смысловой и/или антисмысловой цепи посредством введения одного или более мотивы из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах в смысловую и/или антисмысловую цепь неожиданно повышает активность подавления экспрессии гена-мишени.
В одном из вариантов осуществления, когда мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах вводят в любую из цепей, модификация нуклеотида следующего после мотива представляет собой отличную модификацию по сравнению с модификацией мотива. Например, участок последовательности, содержащий мотив, представляет собой "…NaYYYNb…", где "Y" представляет собой модификацию мотива из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах, и "Na" и "Nb" представляют собой модификацию в нуклеотиде, следующем после мотива "YYY", которая отличается от модификации Y, и где Na и Nb могут представлять собой одинаковые или различные модификации. Альтернативно, Na и/или Nb могут присутствовать или отсутствовать, когда содержится крыльевая модификация.
Средство для РНКи может дополнительно содержать по меньшей мере одну тиофосфатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь. Модификация тиофосфатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связи может находиться в любом нуклеотиде смысловой цепи или антисмысловой цепи или в обеих в любом положении цепи. Например, модификация межнуклеотидной связи может находиться в любом нуклеотиде в смысловой цепи или антисмысловой цепи; каждая модификация межнуклеотидной связи может находиться в чередующемся паттерне в смысловой цепи или антисмысловой цепи, или смысловая цепь или антисмысловая цепь могут содержать модификации межнуклеотидной связи в чередующемся паттерне. Чередующийся паттерн модификации межнуклеотидной связи в смысловой цепи может быть одинаковым или отличным от антисмысловой цепи, и чередующийся паттерн модификации межнуклеотидной связи в смысловой цепи может содержать сдвиг относительно чередующегося паттерна модификации межнуклеотидной связи, в антисмысловой цепи.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи содержит тиофосфатную или метилфосфонатную модификацию межнуклеотидной связи в области липких концов. Например, область липких концов может содержать два нуклеотида, содержащих тиофосфатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь между двумя нуклеотидами. Модификации межнуклеотидной связи также можно проводить для связывания выступающих нуклеотидов с концевыми спаренными нуклеотидами в дуплексной области. Например, по меньшей мере 2, 3, 4 или все выступающие нуклеотиды могут являться связанными тиофосфатной или метилфосфонатной межнуклеотидной связью, и необязательно могут присутствовать дополнительные тиофосфатные или метилфосфонатные межнуклеотидные связи, связывающие выступающий нуклеотид со спаренным нуклеотидом, который является следующим после выступающего нуклеотида. Например, может существовать по меньшей мере две тиофосфатные межнуклеотидные связи между концевыми тремя нуклеотидами, в которых два из трех нуклеотидов представляют собой выступающие нуклеотиды, и третий представляет собой спаренный нуклеотид, следующий после выступающего нуклеотида. Предпочтительно эти концевые три нуклеотида могут находиться на 3'-конце антисмысловой цепи.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи содержит несоответствие(я) с мишенью в дуплексе или их комбинации. Несоответствие может находиться в области липких концов или дуплексной области. Пару оснований можно классифицировать на основании ее способности способствовать диссоциации или плавлению (например, в отношении свободной энергии ассоциации или диссоциации конкретного спаривания, наиболее простой подход представляет собой такой, как на основании индивидуальных пар независимо от соседа, или также можно использовать аналогичный анализ). В отношении возможности способствовать диссоциации: A:U является предпочтительным чем G:C; G:U является предпочтительным чем G:C; и I:C является предпочтительным чем G:C (I=инозин). Несоответствия, например, неканонические или отличные от канонического спаривания (как описано где-либо в настоящем описании) являются предпочтительными по сравнению с каноническими (A:T, A:U, G:C) спариваниями; и спаривания, которые содержат универсальное основание, являются предпочтительными по сравнению с каноническим спариванием.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи содержит по меньшей мере одну из первых 1, 2, 3, 4 или 5 пар оснований в дуплексных областях от 5'-конца антисмысловой цепи, которые можно независимо выбирать из группы: A:U, G:U, I:C и несовпадающих пар, например, неканонических или отличных от канонических спариваний или спариваний, которые содержат универсальное основание, для обеспечения диссоциации антисмысловой цепи в 5'-конце дуплекса.
В одном из вариантов осуществления нуклеотид в положении 1 в дуплексной области от 5'-конца в антисмысловой цепи выбран из группы, состоящей из A, dA, dU, U и dT. Альтернативно, по меньшей мере одна из первых 1, 2 или 3 пар оснований в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи представляет собой пару оснований AU. Например, первая пара оснований в дуплексной области от 5'-конца антисмысловой цепи представляет собой пару оснований AU.
В одном из вариантов осуществления последовательность смысловой цепи можно представить формулой (I):
где:
i и j каждый независимо представляет собой 0 или 1;
p и q каждый независимо представляет 0-6;
каждый Na независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 модифицированных нуклеотидов, где каждая последовательность содержит по меньшей мере два различно модифицированных нуклеотида;
каждый Nb независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 модифицированных нуклеотидов;
каждый np и nq независимо представляет собой выступающий нуклеотид;
XXX, YYY и ZZZ каждый независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах. Предпочтительно YYY представляет собой все 2'-F-модифицированные нуклеотиды.
В одном из вариантов осуществления Na и/или Nb содержит модификации чередующегося паттерна.
В одном из вариантов осуществления мотив YYY располагается в участке расщепления смысловой цепи или около него. Например, когда средство для РНКи содержит дуплексную область из 17-23 нуклеотидов, мотив YYY может располагаться в участок расщепления или вблизи него (например, может располагаться в положениях 6, 7, 8, 7, 8, 9, 8, 9, 10, 9, 10, 11, 10, 11, 12 или 11, 12, 13) смысловой цепи, где нумерация начинается от 1-го нуклеотида от 5'-конца, или необязательно нумерация начинается с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца.
В одном из вариантов осуществления i равно 1 и j равно 0, или i равно 0 и j равно 1, или i и j равны 1. Таким образом, смысловую цепь можно представить следующими ниже формулами:
Когда смысловая цепь представлена формулой (Ia), Nb представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na независимо может представлять собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотида.
Когда смысловая цепь представлена в виде формулы (Ib), Nb представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na может независимо представлять собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотида.
Когда смысловая цепь представлена в виде формулы (Ic), каждый Nb независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Предпочтительно Nb равно 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Каждый Na может независимо представлять собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотида.
Каждый из X, Y и Z может быть одинаковым или отличным друг от друга.
В одном из вариантов осуществления последовательность антисмысловой цепи РНКи можно представить формулой (II):
где:
k и l каждый независимо представляет собой 0 или 1;
p' и q' каждый независимо представляет собой 0-6;
каждый независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 модифицированных нуклеотидов, где каждая последовательность содержит по меньшей мере два различным образом модифицированных нуклеотида;
каждый независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 модифицированных нуклеотидов;
и
X'X'X', Y'Y'Y' и Z'Z'Z' каждый независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах.
Мотив Y'Y'Y' располагается в участке расщепления антисмысловой цепи или около него. Например, когда средство для РНКи содержит дуплексную область длиной 17-23 нуклеотидов, мотив Y'Y'Y' может находиться в положениях 9, 10, 11; 10, 11, 12; 11, 12, 13; 12, 13, 14; или 13, 14, 15 антисмысловой цепи, где нумерация начинается от 1-го нуклеотида от 5'-конца; или необязательно нумерация начинается от 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца. Предпочтительно мотив Y'Y'Y' находится в положениях 11, 12, 13.
В одном из вариантов осуществления мотив Y'Y'Y' представляет собой все 2'-OMe-модифицированные нуклеотиды.
В одном из вариантов осуществления k равно 1 и l равно 0, или k равно 0 и l равно 1, или k и l равны 1.
Таким образом, антисмысловую цепь можно представить следующими ниже формулами:
Когда антисмысловая цепь представлена формулой (IIa), Nb представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотида.
Когда антисмысловая цепь представлена в виде формулы (IIb), представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотида.
Когда антисмысловая цепь представлена в виде формулы (IIc), каждый независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотида. Предпочтительно, Nb представляет собой 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
Каждый из X', Y' и Z' может являться одинаковым или отличным друг от друга.
Каждый нуклеотид смысловой цепи и антисмысловой цепи можно независимо модифицировать LNA, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтилом, 2'-O-метилом, 2'-O-аллилом, 2'-C-аллилом, 2'-гидроксилом, 2'-дезокси или 2'-фтором. Например, каждый нуклеотид смысловой цепи и антисмысловой цепи независимо модифицируют 2'-O-метилом или 2'-фтором. В частности, каждый X, Y, Z, X', Y' и Z' может представлять собой 2'-O-метил-модификацию или 2'-фтор-модификацию.
В одном из вариантов осуществления смысловая цепь средства для РНКи может содержать мотив YYY, находящийся в положениях 9, 10 и 11 цепи, когда длина дуплексной области составляет 21 нуклеотид, где нумерация начинается с 1-го нуклеотида от 5'-конца, или необязательно нумерация начинается с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца, и Y представляет собой 2'-F-модификацию. Смысловая цепь может дополнительно содержать мотив XXX или мотивы ZZZ в качестве крыльевых модификаций с противоположного конца дуплексной области, и XXX и ZZZ каждый независимо представляет собой 2'-OMe-модификацию или 2'-F модификацию.
В одном из вариантов осуществления антисмысловая цепь может содержать мотив Y'Y'Y', находящийся в положениях 11, 12, 13 цепи, где нумерация начинается с 1-го нуклеотида от 5'-конца, или необязательно нумерация начинается с 1-го спаренного нуклеотида в дуплексной области от 5'-конца, и Y' представляет собой 2'-O-метил-модификацию. Антисмысловая цепь может дополнительно содержать мотив X'X'X' или мотивы Z'Z'Z' в качестве крыльевых модификаций с противоположного конца дуплексной области, и X'X'X' и Z'Z'Z' каждый независимо представляет собой 2'-OMe-модификацию или 2'-F-модификацию.
Смысловая цепь, представленная любой из указанных выше формул (Ia), (Ib) и (Ic), образует дуплекс, где антисмысловая цепь представлена любой из указанных выше формул (IIa), (IIb) и (IIc) соответственно.
Таким образом, средства для РНКи по изобретению могут содержать смысловую цепь и антисмысловую цепь, где каждая цепь содержит от 14 до 30 нуклеотидов, дуплекс РНКи, представленный формулой (III):
где:
i, j, k и l каждый независимо представляет собой 0 или 1;
p, p' q и q' каждый независимо представляет собой 0-6;
каждый Na и Na независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 модифицированных нуклеотидов, где каждая последовательность содержит по меньшей мере два различным образом модифицированных нуклеотида;
каждый Nb и независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 модифицированных нуклеотидов,
где
XXX, YYY, ZZZ, X'X'X', Y'Y'Y' и Z'Z'Z' каждый независимо представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах.
В одном из вариантов осуществления i равно 1 и j равно 0, или i равно 0 и j равно 1, или i и j равны 1. В другом варианте осуществления k равно 1 и l равно 0, k равно 0 и l равно 1, или k и l равны 1.
Иллюстративные комбинации смысловой цепи и антисмысловой цепи, образующих дуплекс РНКи, включают указанные ниже формулы:
Где средство для РНКи представлено формулой (IIIa), каждый Nb независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 1-10, 1-7, 1-5 или 1-4 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Где средство для РНКи представлено в виде формулы (IIIb), каждый Nb, независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов.
Где средство для РНКи представлено в виде формулы (IIIc), каждый Nb, независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10, 0-7, 0-10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-2 или 0 модифицированных нуклеотидов. Каждый Na, Na независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-20, 2-15 или 2-10 модифицированных нуклеотидов. Каждый из Na, , Nb и Nb' независимо содержит модификации чередующегося паттерна.
Каждый из X, Y и Z в формулах (III), (IIIa), (IIIb) и (IIIc) может являться одинаковым или отличным друг от друга.
Когда средство для РНКи представлено формулой (III), (IIIa), (IIIb) или (IIIc), по меньшей мере один из нуклеотидов Y может образовывать пару оснований с одним из нуклеотидов Y'. Альтернативно, по меньшей мере два из нуклеотидов Y образуют пару оснований с соответствующими нуклеотидами Y', или все три нуклеотида Y все образуют пару оснований с соответствующими нуклеотидами Y'.
Когда средство для РНКи представлено формулой (IIIa) или (IIIc), по меньшей мере один из нуклеотидов Z может образовывать пару оснований с одним из нуклеотидов Z'. Альтернативно, по меньшей мере два из нуклеотидов Z образуют пару оснований с соответствующими нуклеотидами Z', или все три нуклеотида Z все образуют пару оснований с соответствующими нуклеотидами Z'.
Когда средство для РНКи представлено в виде формулы (IIIb) или (IIIc), по меньшей мере один из нуклеотидов X может образовывать пару оснований с одним из нуклеотидов X'. Альтернативно, по меньшей мере два из нуклеотидов X образуют пару оснований с соответствующими нуклеотидами X', или все три нуклеотида X все образуют пару оснований с соответствующими нуклеотидами X'.
В одном из вариантов осуществления модификация в нуклеотиде Y отличается от модификации в нуклеотиде Y', модификация в нуклеотиде Z отличается от модификации в нуклеотиде Z', и/или модификация в нуклеотиде X отличается от модификации в нуклеотиде X'.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи представляет собой мультимер, содержащий по меньшей мере два дуплекса, представленных формулой (III), (IIIa), (IIIb) или (IIIc), где дуплексы соединены линкером. Линкер может являться расщепляемым или нерасщепляемым. Необязательно мультимер дополнительно содержит лиганд. Каждый из дуплексов может воздействовать на один и тот же ген или два различных гена, или каждый из дуплексов может воздействовать на один и тот же ген в двух различных участках-мишенях.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи представляет собой мультимер, содержащий три, четыре, пять, шесть или более дуплексов, представленных формулой (III), (IIIa), (IIIb) или (IIIc), где дуплексы соединены линкером. Линкер может являться расщепляемым или нерасщепляемым. Необязательно мультимер дополнительно содержит лиганд. Каждый из дуплексов может воздействовать на один и тот же ген или два различных гена, или каждый из дуплексов может воздействовать на один и тот же ген в двух различных участках-мишенях.
В одном из вариантов осуществления два средства для РНКи, представленные формулой (III), (IIIa), (IIIb) или (IIIc), связаны друг с другом 5'-конецом, и один или оба 3'-конца необязательно являются конъюгированными с лигандом. Каждое из средств может воздействовать на один и тот же ген или на два различных гена, или каждое из средств может воздействовать на один и тот же ген в двух различных участках-мишенях.
В различных публикациях описаны мультимерные средства для РНКи. Такие публикации включают WO 2007/091269, патент США №7858769, WO 2010/141511, WO 2007/117686, WO 2009/014887 и WO 2011/031520, полное содержание которых, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки.
Средство для РНКи содержит конъюгации одной или более углеводных групп со средством для РНКи, которые могут оптимизировать одно или более свойств средства для РНКи. Во многих случаях углеводная группа является связанной с модифицированной субъединицей средства для РНКи. Например, сахар рибозы одной или более рибонуклеотидных субъединиц средства дцРНК можно замещать другими группами, например, неуглеводным (предпочтительно циклическим) носителем, к которому прикреплен углеводный лиганд. Рибонуклеотидная субъединица, в которой сахар рибозы субъединицы замещен таким образом, обозначают в настоящем описании как субъединицу модификации замены рибозы (RRMS). Циклический носитель может представлять собой карбоциклическую систему, т.е. все атомы кольца представляют собой атомы углерода, или гетероциклическую система, т.е. один или более атомов кольца могут представлять собой гетероатом, например, азот, кислород, серу. Циклический носитель может представлять собой моноциклическую систему или может содержать два или более колец, например, конденсированных колец. Циклический носитель может представлять собой полностью насыщенную циклическую систему, или он может содержать одну или более двойных связей.
Лиганд может быть связан с полинуклеотидом через носитель. Носители содержат (i) по меньшей мере одну "точку присоединения в остове", предпочтительно две "точки присоединения в остове" и (ii) по меньшей мере одну "связывающую точку присоединения". "Точка присоединения в остове", как используют в настоящем описании, относится к функциональной группе, например, гидроксильной группе, или, как правило, доступной связи, и которая является подходящей для введения носителя в остов, например, фосфат или модифицированный фосфат, например, содержащий серу остов рибонуклеиновой кислоты. "Связывающая точка присоединения" (TAP) в некоторых вариантах осуществления относится к входящему в состав кольца атому циклического носителя, например, атому углерода или гетероатому (отличному от атома, который представляет собой точку присоединения в остове), которая соединяет выбранную группу. Группа может представлять собой, например, углевод, например, моносахарид, дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид и полисахарид. Необязательно выбранная группа соединена посредством промежуточной связи с циклическим носителем. Таким образом, циклический носитель часто содержит функциональную группу, например, аминогруппу или, как правило, обеспечивает связь, которая является подходящей для введения или связывания другой химической структуры, например, лиганда с компонентом кольца.
Средства для РНКи можно быть конъюгированы с лигандрм посредством носителя, где носитель может представлять собой циклическую группу или ациклическую группу; предпочтительно циклическая группа выбрана из пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, пиперидинила, пиперазинила, [1,3]диоксолана, оксазолидинила, изоксазолидинила, морфолинил, тиазолидинила, изотиазолидинила, хиноксалинила, пиридазинонила, тетрагидрофурила и декалина; предпочтительно, ациклическая группа выбрана из остова серинола или остова диэтаноламина.
В определенных конкретных вариантах осуществления средство для РНКи по изобретению представляет собой средство, выбранное из группы средств, перечисленных в таблице 1, и состоящей из
Эти средства могут дополнительно содержать лиганд, такой как лиганд GalNAc.
Лиганды
Средства для РНКи по изобретению, например, двухцепочечные средства для РНКи, можно необязательно конъюгировать с одним или более лигандов. Лиганд можно присоединять к смысловой цепи, антисмысловой цепи или обеим цепям на 3'-конце, 5'-конце или обоих концах. Например, лиганд может быть конъюгирован со смысловой цепью. В предпочтительных вариантах осуществления лиганд конъюгирован с 3'-концом смысловой, цепи. В одном из предпочтительных вариантов осуществления лиганд представляет собой лиганд GalNAc. В особенно предпочтительных вариантах осуществления лиганд представляет собой GalNAc3:
Широкий спектр соединений можно связывать со средствами для РНКи по настоящему изобретению. Предпочтительные молекулы представляют собой лиганды, которые являются предпочтительно ковалентно связанными непосредственно или опосредованно через промежуточную связь.
В предпочтительных вариантах осуществления лиганд изменяет распределение, направленное воздействие или время жизни молекулы, в которую его вводят. В предпочтительных вариантах осуществления лиганд обеспечивает повышенную аффинность к выбранной мишени, например, молекулам, клеткам или типу клеток, компартменту, рецептору, например, компартменту клетки или органа, ткани, органу или отделу организма, например, по сравнению с отсутствием молекул, таких как лиганд. Лиганды, обеспечивающие повышенную аффинность к выбранной мишени, также называются направленными лигандами.
Некоторые лиганды могут обладать эндосомолитическими свойствами. Эндосомолитические лиганды способствуют лизису эндосом и/или транспорту композиции по изобретению или ее компонентам из эндосом в цитоплазму клетки. Эндосомолитический лиганд может представлять собой полианионный пептид или пептидомиметик, который проявляет зависимую от pH мембранную активность и способность к слиянию. В одном из вариантов осуществления эндосомолитический лиганд приобретает свою активную конформацию при эндосомальном pH. "Активная" конформация представляет собой конформацию, в которой эндосомолитический лиганд способствует лизису эндосомы и/или транспорту композиции по изобретению или ее компонентам из эндосомы в цитоплазму клетки. Иллюстративные Эндосомолитические лиганды включают пептид GALA (Subbarao et al., Biochemistry, 1987, 26:2964-2972), пептид EALA (Vogel et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118:1581-1586) и их производные (Turk et al., Biochem. Biophys. Acta, 2002, 1559:56-68). В одном из вариантов осуществления эндосомолитический компонент может содержать химическую группу (например, аминокислоту), которая также претерпевает изменение заряда или протонирование в ответ на изменение pH. Эндосомолитический компонент может быть линейным или разветвленным.
Лиганды могут улучшать транспорт, гибридизацию и конкретные свойства, а также могут улучшать устойчивость к нуклеазе получаемого природного или модифицированного олигорибонуклеотида или полимерной молекулы, содержащей любую комбинацию мономеров, описываемых в настоящем описании, и/или природные или модифицированные рибонуклеотиды.
Лиганды в основном могут включать терапевтические модификаторы, например, для повышения поглощения, диагностические соединения или репортерные группы, например, для наблюдения распределения, сшивающие средства и группы, придающие устойчивость к нуклеазе. Общие примеры включают липиды, стероиды, витамины, сахара, белки, пептиды, полиамины и миметики пептидов.
Лиганды могут включать природное вещество, такое как белок (например, сывороточный альбумин человека (HSA), липопротеин низкой плотности (LDL), липопротеин высокой плотности (HDL) или глобулин), углевод (например, декстран, пуллулан, хитин, хитозан, инулин, циклодекстрин или гиалуроновую кислоту) или липид. Лиганд также может представлять собой рекомбинантную или синтетическую молекулу, такую как синтетический полимер, например, синтетическую полиаминокислоту, олигонуклеотид (например, аптамер). Примеры полиаминокислот включают полиаминокислоту, которая представляет собой полилизин (PLL), поли-L-аспарагиновую кислоту, поли-L-глутаминовую кислоту, сополимер стирол-ангидрид малеиновой кислоты, сополимер поли(L-лактид-со-гликолида), сополимер дивиниловый эфир-малеиновый ангидрид, сополимер N-(2-гидроксипропил)метакриламида (HMPA), полиэтиленгликоль (PEG), поливиниловый спирт (PVA), полиутеран, поли(2-этилакриловую кислоту), полимеры N-изопропилакриламида, или полифосфазин. Примеры полиаминов включают полиэтиленимин, полилизин (PLL), спермин, спермидин, полиамин, псевдопептид-полиамин, пептидомиметический полиамина, дендримерный полиамин, аргинин, амидин, протамин, катионный липид, катионный форфирин, четвертичную соль полиамина или альфа-спиральный пептид.
Лиганды также могут содержать группы для направленного воздействия, например, средства направленного воздействия на клетку или ткань, например, лектин, гликопротеин, липид или белок, например, антитело, которое связывается с конкретным типом клеток, таких как клетки почка. Группа для направленного воздействия может представлять собой тиреотропин, меланотропин, лектин, гликопротеин, поверхностно-активный белок A, углевод муцина, поливалентную лактозу, поливалентную галактозу, N-ацетилгалактозамин, N-ацетилглюкозамин, поливалентную маннозу, поливалентную фукозу, гликозилированные полиаминокислоты, поливалентную галактозу, трансферрин, бисфосфонат, полиглутаминат, полиаспартат, липид, холестерин, стероид, желчную кислоту, фолат, витамин B12, биотин, пептид RGD, миметик пептида RGD или аптамер.
Другие примеры лигандов включают красители, интеркаляторы (например, акридины), перекрестносшивающие средства (например, псорален, митомицин C), порфирины (TPPC4, тексапирин, сапфирин), полициклические ароматические углеводороды (например, феназин, дигидрофеназин), искусственные эндонуклеазы или хелатор.
(например, EDTA), липофильные молекулы, например, холестерин, холевую кислоту, адамантануксусную кислоту, 1-пиренмасляную кислоту, дигидротестостерон, 1,3-бис-O(гексадецил)глицерин, геранилоксигексильную группу, гексадецилглицерин, борнеол, ментол, 1,3-пропандиол, гептадецильную группу, пальмитиновую кислоту, миристиновую кислоту, O3-(олеоил)литохолевую кислоту, O3-(олеоил)холеновую кислоту, диметокситритил или феноксазин) и конъюгаты пептидов (например, пептид antennapedia, пептид Tat), алкилирующие средства, фосфат, амино, меркапто, PEG (например, PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, полиамино, алкил, замещенный алкил, радиоактивно меченые маркеры, ферменты, гаптены (например, биотин), способствующие транспорту/всасыванию вещества (например, аспирин, витамин E, фолиевую кислоту), синтетические рибонуклеазы (например, имидазол, бисимидазол, гистамин, кластеры имидазола, конъюгаты акридин-имидазол, Eu3+ комплексы тетраазамакроциклов), динитрофенил, HRP или AP.
Лиганды могут представлять собой белки, например, гликопротеины или пептиды, например, молекулы с конкретной аффинностью к со-лиганду, или антитела например, антитело, которое связывается с конкретным типом клеток, таким как злокачественная клетка, эндотелиальная клетка или костная клетка. Лиганды также могут содержать гормоны и рецепторы гормонов. Они также могут содержать не являющиеся пептидами молекулы, такие как липиды, пектины, углеводы, витамины, кофакторы, поливалентная лактоза, поливалентная галактоза, N-ацетилгалактозамин, N-ацетилглюкозамин, поливалентная манноза, поливалентная фукоза или аптамеры. Лиганд может представлять собой, например, липополисахарид, активатор p38 MAP киназы или активатор NF-kB.
Лиганд может представлять собой вещество, например, лекарственное средство, которое может повышать поступление средства на основе иРНК в клетку, например, посредством разрушения цитоскелета клетки, например, посредством разрушения микротрубочек клетки, микрофиламентов и/или промежуточных микрофиламентов. Лекарственное средство может представлять собой, например, таксой, винкристин, винбластин, цитохалазин, нокодазол, джасплакинолид, латрункулин A, фаллоидин, свинхолид A, инданоцин или миосервин.
Лиганд может повышать поступление олигонуклеотида в клетку, например, путем активации воспалительного ответа. Иллюстративные лиганды, которые обладают таким эффектом, включают фактор некроза опухоли альфа (TNF-альфа), интерлейкин-1 бета или интерферон гамма.
В одном из аспектов лиганд представляет собой липид или молекулу на основе липида. Такой липид или молекула на основе липида предпочтительно связывается с сывороточным белком, например, сывороточным альбумином человека (HSA).
Связывание лиганда. с HSA обеспечивает распределение конъюгата в ткани-мишени, например, непочечной ткани-мишени организма. Например, ткань-мишень может представлять собой печень, включая паренхиматозные клетки печени. В качестве лигандов также можно использовать другие молекулы, которые могут связываться с HSA. Например, можно использовать напроксен или аспирин. Липид или лиганд на основе липида может (a) повышать устойчивость к деградации конъюгата, (b) повышать направленную доставку или транспорт в клетку-мишень или клеточную мембрану, и/или (c) его можно использовать для регуляции связывания с сывороточным белком, например, HSA.
Лиганд на основе липида можно использовать для модулирования, например, контроля связывания конъюгата с тканью-мишенью. Например, менее вероятно, что липид или лиганд на основе липида, который сильнее связывается с HSA, является направленным на почку, и, таким образом, менее вероятно, что он будет выводиться из организма. Липид или лиганд на основе липида, который слабее связывается с HSA, можно использовать для направленной доставки конъюгата в почку.
В предпочтительном варианте осуществления лиганд на основе липида связывается с HSA. Предпочтительно он связывается с HSA с достаточной аффинностью, таким образом, что такой конъюгат предпочтительно распределяется в непочечной ткани. Однако предпочтительно, чтобы аффинность не являлась настолько сильной, чтобы связывание HSA-лиганд было необратимым.
В другом предпочтительном варианте осуществления лиганд на основе липида слабо связывается с HSA или не связывается совсем, таким образом, что конъюгат предпочтительно распределится в почке. Также можно использовать другие группы, которые обеспечивают направленную доставку в клетки почки, вместо лиганда на основе липида или в дополнение к нему.
В другом аспекте лиганд представляет собой молекулу, например, витамин, который поглощается клеткой-мишенью, например, пролиферирующей клеткой. Такие молекулы являются особенно пригодными для лечения нарушений, характеризующихся нежелательной клеточной пролиферацией, например, злокачественного или незлокачественного типа, например, злокачественных клеток. Иллюстративные витамины включают витамин A, E и K. Другие иллюстративные витамины включают витамины B, например, фолиевую кислоту, B12, рибофлавин, биотин, пиридоксаль, или другие витамины или питательные вещества, поглощаемые злокачественными клетками. Также включают HAS, липопротеин низкой плотности (LDL) и липопротеин высокой плотности (HDL).
В другом аспекте лиганд представляет собой средство, проникающее в клетку, предпочтительно спиральное средство, проникающее в "клетку. Предпочтительно средство является амфалипатическим. Иллюстративное средство представляет собой пептид, такой как tat или antennopedia. Если средство представляет собой пептид, его можно модифицировать, включая пептидилмиметик, инвертромеры, непептидные или псевдопептидные связи и использование D-аминокислот. Спиральное средство предпочтительно представляют собой альфа-спиральное средство, которое предпочтительно содержит липофильную и липофобную фазу.
Лиганд может представлять собой пептид или пептидомиметик. Пептидомиметик (также обозначаемый в настоящем описании как олигопептидомиметик) представляет собой молекулу, способную сворачиваться в определенную трехмерную структуру, аналогичную природному пептиду. Длина молекулы пептида или пептидомиметика может составлять приблизительно 5-50 аминокислот, например, приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот. Пептид или пептидомиметик может представлять собой, например, проникающий в клетку пептид, катионный пептид, амфипатический пептид или гидрофобный пептид (например, состоящий преимущественно из Tyr, Trp или Phe). Молекула пептида может представлять собой дендримерный пептид, пептид с ограниченной конформационной свободой или сшитый пептид. В другом альтернативном варианте осуществления молекула пептида может содержать гидрофобную последовательность мембранной транслокации (MTS). Иллюстративный пептид, содержащий гидрофобную MTS, представляет собой RFGF, содержащий аминокислотную последовательность AAVALLPAVLLALLAP (SEQ ID NO: 4). Аналог RFGF (например, аминокислотная последовательность AALLPVLLAAP) (SEQ ID NO: 5), содержащий гидрофобную MTS, также может представлять собой направленную молекулу. Молекула пептида может представлять собой "транспортный" пептид, который может переносить большие полярные молекулы, включая пептиды, олигонуклеотиды, и белок через клеточные мембраны. Например, было выявлено, что последовательности из белка Tat ВИЧ (GRKKRRQRRRPPQ) (SEQ ID NO: 6) и белка Drosophila Antennapedia (RQIKIWFQNRRMKWKK) (SEQ ID NO: 7) могут функционировать как транспортные пептиды. Пептид или пептидомиметик может кодироваться случайной последовательностью ДНК, такой как пептид, идентифицируемый в библиотеке фагового дисплея или комбинаторной библиотеке одна гранула-одно соединение (OBOC) (Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991). Предпочтительно пептид или пептидомиметик, связанный со средством на основе иРНК через встроенную мономерную единицу, представляет собой направленный на клетку пептид, такой как аргининглицинаспарагиновая кислота (RGD)-пептид или имитатор RGD. Длина молекулы пептида может находиться в диапазоне приблизительно от 5 аминокислот приблизительно до 40 аминокислот. Молекулы пептида могут содержать такую структурную модификацию, чтобы повышать стабильность или непосредственно конформационные свойства. Можно использовать любую из описанных ниже структурных модификаций. Молекулу RGD-пептида можно использовать для направленной доставки в опухолевую клетку, такую как эндотелиальная опухолевая клетка или опухолевая клетка рака молочной железы (Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002). RGD-пептид может облегчать направленную доставку средства на основе иРНК в опухоли различных других тканей, включая легкое, почку, селезенку или печень (Aoki et al., Cancer Gene Therapy, 8:783-787, 2001). Предпочтительно RGD-пептид облегчает направленную доставку средства на основе иРНК в почку. RGD-пептид может быть линейным или циклическим и может быть модифицированным, например, гликозилированным или метилированным, для облегчения направленной доставки в конкретные ткани. Например, гликозилированный RGD-пептид может доставлять средство на основе иРНК в опухолевую клетку, экспрессирующую αvβ3 (Haubner et al., Jour. Nucl. Med., 42:326-336, 2001). Можно использовать пептиды, которые направлены на маркеры, содержащиеся в большом количестве в пролиферирующих клетках. Например, содержащие RGD пептиды и пептидомиметики могут быть направленными на злокачественные клетки, в частности клетки, которые содержат интегрин. Таким образом, можно использовать RGD-пептиды, циклические пептиды, содержащие RGD, RGD-пептиды, которые содержат D-аминокислоты, а также синтетические имитаторы RGD. В дополнение к RGD можно использовать другие молекулы, которые направлены на лиганд интегрина. Как правило, такие лиганды можно использовать для регуляции пролиферирующих клеток и ангиогенеза. Предпочтительные конъюгаты такого типа лиганда направлены на РЕСАМ-1, VEGF или другой ген злокачественной опухоли, например, ген злокачественной опухоли, описываемый в настоящем описании.
"Проникающий в клетку пептид" способен проникать в клетку, например, микробную клетку, такую как бактериальная или грибная клетка, или клетку млекопитающего, такую как клетка человека. Проникающий в микробную клетку пептид может представлять собой, например, α-спиральный линейный пептид (например, LL-37 или церопин P1), содержащий дисульфидную связь пептид (например, α-дефензин, β-дефензин или бактенецин) или пептид, содержащий только одну или две преобладающих аминокислоты (например, PR-39 или индолицидин). Проникающий в клетку пептид также содержит сигнал внутриядерной локализации (NLS). Например, проникающий в клетку пептид может представлять собой двухсоставной амфипатический пептид, такой как MPG, который получают из домена слитого пептида gp41 ВИЧ-1 и NLS большого T-антигена SV40 (Simeoni et al., Nucl. Acids Res., 31:2717-2724, 2003).
В одном из вариантов осуществления направленный пептид может представлять собой амфипатический α-спиральный пептид. Иллюстративные амфипатические α-спиральные пептиды включают, но не ограничиваются ими, цекропины, ликотоксины, парадаксины, буфорин, CPF, бомбинин-подобный пептид (BLP), кателицидины, цератотоксины, пептиды S. clava, противомикробные пептиды из кишечника миксины (HFIAP), магаинины, бревинины-2, дермасептины, мелиттины, плеуроцидин, пептиды H2A, пептиды Xenopus, эскулентины-1 и каерины. Предполагают, что ряд факторов предпочтительно поддерживает сохранение стабильности спирали. Например, используют максимальное число остатков, стабилизирующих спираль (например, leu, ala или lys), и минимальное число дестабилизирующих остатков (например, пролин или циклические мономерные единицы). Предполагают, что можно использовать кэпирующий остаток (например, Gly представляет собой иллюстративный N-кэпирующий остаток) и/или амидирование C-конца для обеспечения дополнительной H-связи для стабилизации спирали. Стабильность может обеспечивать образование солевых мостиков между остатками с противоположными зарядами, разделенными положениями i±3 или i±4. Например, катионные остатки, такие как лизин, аргинин, гомоаргинин, орнитин или гистидин, могут образовывать солевые мостики с анионными остатками глутамината или аспартата.
Лиганды на основе пептидов и пептидомиметиков включают лиганды, содержащие природные или модифицированные пептиды, например, D- или L-пептиды, α-, β- или γ-пептиды, N-метилпептиды, азапептиды, пептиды, содержащие один или более амидом, т.е. пептид со связями, замененными одном или более связями мочевины, тиомочевины, карбамата или сульфонилмочевины, или циклические пептиды.
Направленный лиганд может представлять собой любой лиганд, который способен обеспечивать направленное воздействие на конкретный рецептор. Примеры представляют собой фолат, GalNAc, галактозу, маннозу, маннозу-6P, кластеры сахаров, такие как кластер GalNAc, кластер маннозы, кластер галактозы или аптамер. Кластер представляет собой комбинацию двух или более звеньев сахара. Направленные лиганды также включают лиганды рецептора интегрина, лиганды рецептора хемокина, лиганды рецептора трансферрина, биотина, серотонина, лиганды PSMA, эндотелина, GCPII, соматостатина, LDL и HDL. Лиганды также могут быть основаны на нуклеиновой кислоте, например, аптамер. Аптамер может являться немодифицированным или содержать любую комбинацию модификаций, описываемых в настоящем описании.
Средства контроля эндосомального высвобождения включают имидазолы, поли- или олигоимидазолы, PEI, пептиды, способствующие слиянию пептиды, поликарбоксилаты, поликатионы, маскированные олиго или поликатионы или полианионы, ацетали, полиацетали, кетали/поликетали, ортоэфиры, полимеры с экранированными или неэкранированными катионными или анионными зарядами, дендримеры с экранированными или неэкранированными катионными или анионными зарядами.
Модулятор PK означает фармакокинетический модулятор. Модуляторы PK включают липофильные вещества, желчные кислоты, стероиды, аналоги фосфолипидов, пептиды, связывающие белок средства, PEG, витамины и т.д. Иллюстративные модуляторы PK включают, но не ограничиваются ими, холестерин, жирные кислоты, холевую кислоту, литохолевую кислоту, диалкилглицериды, диацилглицериды, фосфолипиды, сфинголипиды, напроксен, ибупрофен, витамин E, биотин и т.д. Известно, что олигонуклеотиды, которые содержат ряд тиофосфатных связей, связываются с сывороточным белком, таким образом, короткие олигонуклеотиды, например, олигонуклеотиды приблизительно из 5 оснований, 10 оснований, 15 оснований или 20 оснований, содержащие много тиофосфатных связей в остове, также являются пригодными по настоящему изобретению в качестве лигандов (например, в качестве модулирующих PK лигандов).
Кроме того, также пригодными по настоящему изобретению в качестве модулирующих PK лигандов являются аптамеры, которые связываются с компонентами сыворотки (например, сывороточными белками).
Другие конъюгаты лигандов, пригодные по изобретению, описаны в патентных заявках США USSN: 10/916185, зарегистрированной 10 августа 2004 года, USSN: 10/946873, зарегистрированной 21 сентября 2004 года, USSN: 10/833934, зарегистрированной 3 августа 2007 года, USSN: 11/115989, зарегистрированной 27 апреля 2005 года, и USSN: 11/944227, зарегистрированной 21 ноября 2007 года, полностью включенных посредством ссылки для всех целей.
Когда содержится два или более лигандов, все лиганды могут обладать одинаковыми свойствами, все могут обладать различными свойствами, или некоторые лиганды обладают одинаковыми свойствами, тогда как другие обладают различными свойствами. Например, лиганд может обладать свойствами направленной доставки, обладать эндосомолитической активностью или обладать модулирующими PK свойствами. В предпочтительном варианте осуществления все лиганды обладают различными свойствами.
Лиганды можно присоединять к олигонуклеотидам в различных местах, например, на 3'-конце, 5'-конце и/или во внутреннем участке. В предпочтительных вариантах осуществления лиганд присоединен к олигонуклеотидам через промежуточную связь, например, носитель, описываемый в настоящем описании. Лиганд или связанный лиганд может содержаться в мономере, когда мономер встраивается в растущую цепь. В некоторых вариантах осуществления лиганд можно вводить путем связывания с мономером-"предшественником", после того как мономер-"предшественник" был встроен в растущую цепь. Например, мономер, содержащий, к примеру, аминоконцевую связь (т.е. содержащий не связанный лиганд), например, TAP-(CH2)nNH2, может встраиваться в растущую олигонуклеотидную цепь. На последующей стадии, т.е. после встраивания мономера-предшественника в цепь, затем можно присоединять лиганд, содержащий электрофильную группу, например, группу сложного пентафторфенильного эфира или альдегидную группу, к мономеру-предшественнику путем присоединения электрофильной группы лиганда с концевой нуклеофильной группой связи мономера-предшественника.
В другом примере можно вводить мономер, содержащий химическую группу, подходящую для участия в реакции "клик-химии", например, заканчивающуюся азидом или алкином связь/линкер. На последующей стадии, т.е. после введения мономер-предшественника в цепь, к мономеру-предшественнику можно присоединять лиганд, содержащий комплементарную химическую группу, например, алкин или азид, путем связывания алкина и азида друг с другом.
Для двухцепочечных олигонуклеотидов лиганды можно присоединять к одной или обеим цепям. В некоторых вариантах осуществления двухцепочечное средство на основе иРНК содержит лиганд, конъюгированный со смысловой цепью. В других вариантах осуществления двухцепочечное средство на основе иРНК содержит лиганд, конъюгированный с антисмысловой цепью.
В некоторых вариантах осуществления лиганд может быть конъюгирован с нуклеиновыми основаниями, группами сахаров, или межнуклеотидными связями молекул нуклеиновой кислоты. Конъюгация с пуриновыми нуклеиновыми основаниями или их производными может происходить в любом положении, включая эндоциклические и экзоциклические атомы. В некоторых вариантах осуществления 2-, 6-, 7- или 8-положений пуринового нуклеинового основания являются связанными с группой конъюгата. Конъюгация с пиримидиновыми нуклеиновыми основаниями или их производными также может находиться в любом положении. В некоторых вариантах осуществления 2-, 5- и 6-положения пиримидинового нуклеинового основания можно заменять группой конъюгата. Конъюгация с группами сахаров нуклеозидов может находиться при любом атоме углерода. Пример атомов углерода групп сахаров, которые могут быть связаны с группой конъюгата, включают 2'-, 3'- и 5'-атомы углерода. Положение 1' также можно присоединять к группе конъюгата, такой как в остатке с удаленными азотистыми основаниями. Межнуклеозидные связи также могут нести группы конъюгата. Для содержащих фосфор связей (например, фосфодиэфиров, тиофосфата, фосфородитиоата, фосфороамидата и т.п.) группу конъюгата можно присоединять непосредственно к атому фосфора или к атому O, N или S, связанному с атомом фосфора. Для содержащих амины или амиды межнуклеозидных связей (например, PNA) группу конъюгата можно присоединять к атому азота амина или амида или к прилежащему атому углерода.
Можно использовать любой подходящий лиганд в области РНК-интерференции, хотя лиганд, как правило, представляет собой углевод, например, моносахарид (такой как GalNAc), дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, полисахарид.
Линкеры, которые конъюгируют лиганд с нуклеиновой кислотой, включают описанные выше линкеры. Например, лиганд может представлять собой одно или более производных GalNAc (N-ацетилглюкозамина), присоединенных посредством двухвалентного или трехвалентного разветвленного линкера.
В одном из вариантов осуществления дцРНК по изобретению конъюгирована с двухвалентными и трехвалентными разветвленными линкерами, содержащими структуры, представленные в любой из формул (IV)-(VII):
где:
q2A, q2B, q3A, q3B, q4A, q4B, q5A, q5B и q5C представляют собой независимо в каждом случае 0-20, и где повторяющиеся единицы могут быть одинаковыми или различными;
p2A, p2B, p3A, p3B, p4A, p4B, p5A, p5B, p5C, T2A, T2B, T3A, T3B, T4A, T4B, T5A, T5B, T5C каждый независимо в каждом случае отсутствует, представляют собой CO, NH, O, S, OC(O), NHC(O), CH2, CH2NH или CH2O;
Q2A, Q2B, Q3A, Q3B, Q4A, Q4B, Q5A, Q5B, Q5C независимо в каждом случае отсутствуют, представляют собой алкилен, замещенный алкилен, где один или более метиленов могут прерываться или оканчиваться одним или более из O, S, S(O), SO2, N(RN), C(R')=C(Rʺ), C≡C или C(O);
R2A, R2B, R3A, R3B, R4A, R4B, R5A, R5B, R5C каждый независимо для каждого случая отсутствует, представляет собой NH, O, S, CH2, C(O)O, C(O)NH, NHCH(Ra)C(O), -C(O)-CH(Ra) -, NH-, CO, CH=N-O, или гетероцикл;
L2A, L2B, L3A, L3B, L4A, L4B, L5A, L5B и L5C представляют собой лиганд, т.е. каждый независимо в каждом случае представляет собой моносахарид (такой как GalNAc), дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид или полисахарид, и Ra представляет собой H или боковую цепь аминокислоты.
Трехвалентные производные конъюгации GalNAc являются особенно пригодными для использования со средствами для РНКи для ингибирования экспрессии гена-мишени, такие как производные формулы (VII):
где L5A, L5B и L5C представляют собой моносахарид, такой как производное GalNAc.
Примеры подходящих двухвалентных и трехвалентных разветвленных линкерных групп, конъюгирующих с производными GalNAc, включают, но не ограничиваются ими, следующие соединения:
В других вариантах осуществления средство для РНКи по изобретению представляет собой средство, выбранное из группы, состоящей из AD-45163, AD-45165, AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547.
III. Фармацевтические композиции
Средства для РНКи по изобретению можно формулировать для введения любым подходящим путем для применения для человека или в ветеринарной медицине, по аналогии с другими фармацевтическими средствами. Фармацевтические композиции, содержащие средства для РНКи по изобретению могут представлять собой, например, растворы с буфером или без него, или композиции, содержащие фармацевтически приемлемые носители. Такие композиции включают, например, водные или кристаллические композиции, липосомальные составы, мицеллярные составы, эмульсии и генотерапевтические векторы.
В способах по изобретению, средство для РНКи можно вводить в растворе. Свободное средство для РНКи можно вводить в незабуференном растворе, например, в физиологическом раствор или в воде. Альтернативно, свободные миРНК также можно вводить в подходящем буферном растворе. Буферный раствор может содержать ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат, или любую их комбинацию. В предпочтительном варианте осуществления буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буфер (PBS). pH и осмолярность буферного раствора, содержащего средство для РНКи, можно регулировать таким образом, чтобы он являлся подходящим для введения индивидууму.
В некоторых вариантах осуществления буферный раствор дополнительно содержит средство для регуляции осмолярности раствора, таким образом, чтобы поддерживать осмолярность при желаемом значении, например, при физиологических значениях плазмы человека. Растворенные вещества, которые можно добавлять в буферный раствор для регуляции осмолярности включают, но не ограничиваются ими, белки, пептиды, аминокислоты, неметаболизируемые полимеры, витамины, ионы, сахара, метаболиты, органические кислоты, липиды или соли. В некоторых вариантах осуществления средство для регуляции осмолярности раствора представляет собой соль. В определенных вариантах осуществления средство для регуляции осмолярности раствора представляет собой хлорид натрия или хлорид калия.
В других вариантах осуществления средство для РНКи формулируют в виде композиции, которая содержит одно или более средств для РНКи и фармацевтически приемлемый носитель. Как используют в настоящем описании, формулировка "фармацевтически приемлемый носитель" предназначена включать любой и все растворители, диспергирующие среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и замедляющие всасывание средства и т.п., совместимые с фармацевтическим введением. Использование таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. За исключением случаев, когда любая общепринятая среда или средство является несовместимым с активным соединением, предусматривают его использование в композициях. В композиции также можно вводить дополнительные активные соединения.
В одном из вариантов осуществления препарат средства для РНКи содержит по меньшей мере второе терапевтическое средство (например, средство, отличное от РНК или ДНК). Например, композиция средства для РНКи для лечения ассоциированного с TTR заболевания, например, связанного с транстиретином наследственного амилоидоза (семейной амилоидной полинейропатии, FAP), может содержать известное лекарственное средство для улучшения состояния FAP, например, тафамидис (INN или Fx-1006A, или Vyndaqel).
Формулируемая композиция средства для РНКи может находиться в различных состояниях. В некоторых примерах композиция является по меньшей мере частично кристаллической, однородно кристаллической и/или безводной (например, она содержит менее 80, 50, 30, 20 или 10% воды). В другом примере средство для РНКи находится в водной фазе, например, в растворе, который содержит воду.
Композиции с водной фазой или кристаллические композиции можно вводить в носитель, например, липосому (в частности для водной фазы) или частицу (например, микрочастицу, как может являться подходящим для кристаллической композиции). Как правило, композицию средства для РНКи формулируют таким способом, что она является совместимой с предполагаемым способом введения, как описано в настоящем описании. Например, в конкретных вариантах осуществления композицию получают по меньшей мере одним из следующих ниже способов: сушкой распылением, лиофилизацией, вакуумной сушкой, выпариванием, сушкой в псевдоожиженном слое, или комбинацией этих техник, или обработкой ультразвуком с липидом, сушкой вымораживанием, конденсацией и другими способами самосборки.
Препарат средства для РНКи можно формулировать в комбинации с другим средством, например, другим терапевтическим средством или средством, которое стабилизирует средство для РНКи, например, белком, который образует комплекс со средством для РНКи с образованием иРНК. Еще другие средства включают хелаторы, например, EDTA (например, для удаления двухвалентных катионов, таких как Mg2+, соли, ингибиторы РНКазы (например, ингибитор РНКазы с широкой специфичностью, такой как RNAsin) и т.д.
В одном из вариантов осуществления препарат средства для РНКи содержит другое соединение миРНК, например, второе средство для РНКи, которое может опосредовать РНКи в отношении второго гена или в отношении того же самого гена. Еще один другой препарат может содержать по меньшей мере 3, 5, десять, двадцать, пятьдесят или сто или более различных видов средств для РНКи. Такие средства для РНКи могут опосредовать РНКи в отношении аналогичного числа различных генов.
Средства на основе иРНК по изобретению можно формулировать для фармацевтического применения. Фармацевтически приемлемые композиции содержат терапевтически или профилактически эффективное количество одного или более средств на основе дцРНК в любом из предшествовавших вариантов осуществления, взятых отдельно или формулируемых совместно с одним или более фармацевтически приемлемых носителей (добавок), эксципиентом и/или разбавителей.
Способы получения фармацевтических композиции по изобретению включают этап приведения средства для РНКи по настоящему изобретению в контакт с носителем и необязательно с один или более вспомогательных ингредиентов. Как правило, композиции получают путем равномерного и однородного приведения средства для РНКи по настоящему изобретению в контакт с жидкими носителями или тонкоизмельченными твердыми носителями, или обоими, а затем при необходимости придавая форму продукту.
Фармацевтические композиции можно конкретно формулировать для введения в твердой или жидкой форме, включая формы, адаптированные для следующего: (1) перорального введения, например, пропитки (водные или неводные растворы или суспензии), таблетки, например, таблетки, предназначенные для буккального, сублингвального и системного всасывания, болюсы, порошки, гранулы, пасты для нанесения на язык; (2) парентерального введения, например, посредством подкожной, внутримышечной, внутривенной или эпидуральной инъекции, например, в виде стерильного раствор или суспензии или состава с длительным высвобождением; (3) местного применения, например, в виде крема, мази или пластыря с контролируемым высвобождением или спрея, наносимого на кожу; (4) внутривлагалищно или интраректально, например, в виде пессарий, крема или пены; (5) сублингвально; (6) окулярно; (7) трансдермально или (8) назально. Доставка с использованием подкожных или внутривенных способов может являться особенно эффективной.
Фразу "фармацевтически приемлемый" применяют в настоящем описании для обозначения таких соединений, веществ, композиций и/или лекарственных форм, которые с медицинской точки зрения являются пригодными для использования при контактирование с тканями человека и животных, не вызывая повышенную токсичность, раздражение, аллергический ответ или другую проблему или осложнение, в соответствии с обоснованным отношением польза/риск.
Фраза "фармацевтически приемлемый носитель", как используют в настоящем описании, означает фармацевтически приемлемое вещество, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, вспомогательное для производства средство (например, смазочное средство, тальк, стеарат магния, кальция или цинка или стеариновую кислоту) или инкапсулирующее растворитель вещество, участвующее в переносе или транспорте рассматриваемого соединения из одного органа или отдела организма в другой орган или отдел организма. Каждый носитель должен являться "приемлемым" в том смысле, что является совместимым с другими ингредиентами композиции и не вредный для пациента. Некоторые примеры веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают: (1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетатцеллюлозы; (4) порошкообразный трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) смазки, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк; (8) эксципиенты, такие как масло какао и воски для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные средства, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновую кислоту; (16) апирогенную воду; (17) изотонический физиологический раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) pH забуференные растворы; (21) сложные полиэфиры, поликарбонаты и/или полиангидриды; (22) наполнители, такие как полипептиды и аминокислоты; (23) компонент сыворотки, такой как сывороточный альбумин, HDL и LDL, и (22) другие нетоксические совместимые вещества, применяемые в фармацевтических композициях.
Композиции можно подходящим способом предоставлять в стандартной лекарственной форме и можно получать любыми способами, хорошо известными в данной области фармацевтики. Количество средства для РНКи, которое можно комбинировать с веществом носителя для получения однократной лекарственной формы изменяется в зависимости от подлежащего лечению хозяина и конкретного способа введения. Средство для РНКи, которое можно комбинировать с веществом носителя для получения однократной лекарственной формы, как правило, представляет собой такое количество средства для РНКи, которое оказывает желаемое действие, например, терапевтическое или профилактическое действие. Как правило, из ста процентов такое количество находится в диапазоне приблизительно от 0,1 процентов приблизительно до девяноста девяти процентов средства для РНКи, предпочтительно приблизительно от 5 процентов приблизительно до 70 процентов, наиболее предпочтительно приблизительно от 10 процентов приблизительно до 30 процентов.
В определенных вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению содержит эксципиент, выбранный из группы, состоящей из циклодекстринов, целлюлоз, липосом, образующих мицеллу средств, например, желчных кислот, и полимерных носителей, например, сложных полиэфиров и полиангидридов, и средство для РНКи по настоящему изобретению. В определенных вариантах осуществления указанная выше композиция обеспечивает перорально биодоступное средство для РНКи по настоящему изобретению.
В некоторых случаях с целью продления эффекта средства для РНКи желательным является замедление всасывания средства от подкожной или внутримышечной инъекции. Это можно получать с использованием жидкой суспензии кристаллического или аморфного вещества со слабой растворимостью в воде. Скорость всасывания средства для РНКи в дальнейшем зависит от его скорости растворения, которая в свою очередь может завесить от размера кристалла и кристаллической формы. Альтернативно, замедленное всасывание парентерально вводимого средства для РНКи можно получать посредством растворения или суспендирования средства в масляном носителе.
Липосомы
Средство для РНКи по изобретению можно формулировать для доставки в мембранном молекулярном агрегате, например, липосоме или мицелле. Как используют в настоящем описании, термин "липосома" относится к везикуле, состоящей из амфифильных липидов, располагаемых по меньшей мере в один бислой, например, один бислой или ряд бислоев. Липосомы включают однослойные и многослойные везикулы, которые содержат мембрану, образованную из липофильного вещества и водного внутреннего содержимого. Водная часть содержит композицию средства для РНКи. Липофильное вещество изолирует водное внутреннее содержимое от водного внешнего содержимого, которое, как правило, не содержит композицию средства для РНКи, хотя в некоторых примерах может содержать. Липосомы пригодны для переноса и доставки активных ингредиентов в участок приложения действия. Вследствие того, что липосомальная мембрана является структурно сходной с биологической мембраной, когда липосомы наносят на ткань, липосомальный бислой сливается с бислоем клеточных мембран. По мере прогрессирования слияния липосомы и клетки происходит доставка внутреннего водного содержимого, которое содержит средство для РНКи, в клетку, где средство для РНКи может специфически связываться с РНК-мишенью и может опосредовать РНКи. В некоторых случаях липосомы также являются конкретно направленными, например, для направленной доставки средства для РНКи в конкретные типы клеток.
Липосому, содержащую средство для РНКи, можно получать различными способами. В одном из примеров липидный компонент липосомы растворяют в детергенте, таким образом, чтобы образовывались мицеллы с липидным компонентом. Например, липидный компонент может представлять собой амфипатический катионный липид или липидный конъюгат. Детергент может иметь высокую критическую концентрацию мицелл и может быть неионным. Иллюстративные детергенты включают холаты, CHAPS, октилглюкозид, дезоксихолат и лауроилсаркозин. Препарат средства для РНКи затем добавляют к мицеллам, которые содержат липидный компонент. Катионные группы в липиде взаимодействуют со средством для РНКи и конденсируются вокруг средства для РНКи с образованием липосомы. После конденсации детергент удаляют, например, посредством диализа, с получением липосомального препарата средства для РНКи.
При необходимости можно добавлять соединение носителя, которое способствует конденсации, в ходе реакции конденсации, например, путем контролируемого добавления. Например, соединение носителя может представлять собой полимер, отличный от нуклеиновой кислоты (например, спермин или спермидин). Также можно регулировать pH, чтобы способствовать конденсации.
Способы получения стабильных носителей для доставки полинуклеотида, которые содержат комплекс полинуклеотид/катионный липид в виде структурного компонента носителя для доставки, дополнительно описаны, например, в WO 96/37194, полное содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки. Получение липосом также моет включать один или более аспектов иллюстративных способов, описанных у Feigner P.L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 8:7413-7417, 1987; в патенте США №4897355; патенте США №5171678; у Bangham et al., M. Mol. Biol., 23:238, 1965; Olson et al., Biochim. Biophys. Acta, 557:9, 1979; Szok, et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 75:4194, 1978; Mayhew et al., Biochim. Biophys. Acta, 775:169, 1984. Kim et al., Biochim. Biophys. Acta, 728:339, 1983, и Fukunaga et al., Endocrinol., 115:757, 1984. Широко используемые способы получения липидных агрегатов подходящего размера для применения в качестве носителей для доставки включают обработку ультразвуком и сушку вымораживанием плюс экструзия (см., например, Mayer et al., Biochim. Biophys. Acta, 858:161, 1986). Можно использовать микрофлюидизацию, когда желательны сопоставимые небольшие (от 50 до 200 нм) и относительно однородные агрегаты (Mayhew et al., Biochim. Biophys. Acta, 775:169, 1984). Эти способы можно легко адаптировать для упаковки препаратов средства для РНКи в липосомы.
Липосомы, которые являются чувствительными к pH или отрицательно заряженными, улавливают молекулы нуклеиновой кислоты, а не комплекс с ними. Вследствие того, что молекулы нуклеиновой кислоты и липида являются одинаково заряженными, происходит отталкивание, а не образование комплекса. Однако некоторые молекулы нуклеиновой кислоты удерживаются в водном внутреннем содержимом таких липосом. Использовали чувствительные к pH липосомы для доставки ДНК, кодирующей ген тимидинкиназы, в монослои клеток в культуре. Экспрессию экзогенного гена детектировали в клетках-мишенях (Zhou et al., Journal of Controlled Release, 19, (1992) 269-274).
Один основной тип липосомальной композиции включает фосфолипиды, отличные от природного фосфатидилхолина. Композиции нейтральных липосом, например, можно получать из димиристоилфосфатидилхолина (DMPC) или дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC). Композиции анионных липосом, как правило, получают из димиристоилфосфатидилглицерина, тогда как способствующие слиянию анионные липосомы получают преимущественно из диолеоилфосфатидилэтаноламина (DOPE). Другой тип липосомальной композиции получают из фосфатидилхолина (PC), такого как, например, соевый PC и яичный PC. Другой тип получают из смеси фосфолипида и/или фосфатидилхолина, и/или холестерина.
Примеры других способов введения липосом в клетки in vitro и in vivo включают патент США №5283185, патент США №5171678, WO 94/00569, WO 93/24640, WO 91/16024, Feigner J., Biol. Chem., 269:2550, 1994, Nabel, Proc. Natl. Acad. Sci., 90:11307, 1993, Nabel, Human Gene Ther., 3:649, 1992, Gershon, Biochem., 32:7143, 1993, и Strauss, EMBO J., 11:417, 1992.
В одном из вариантов осуществления используют катионные липосомы. Катионные липосомы обладают преимуществом, заключающемся в том, что они способны сливаться с клеточной мембраной. Некатионные липосомы, хотя не способны так эффективно сливаться с плазматической мембраной, поглощаются макрофагами in vivo, и их можно использовать для доставки средства для РНКи в макрофаги.
Дополнительные преимущества липосом включают: липосомы, получаемые из природных фосфолипидов, являются биосовместимыми и биоразлагаемыми; липосомы могут содержать широкий спектр растворимых в воде и липидах лекарственных средств; липосомы могут защищать инкапсулированные средства для РНКи в своих внутренних компартментах от метаболизма и деградации (Rosoff в "Pharmaceutical Dosage Forms", Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, volume 1, p. 245). Важными рассматриваемыми факторами при получении липосомных составов является поверхностный заряд липидов, размер везикул и водный объем липосомы.
Можно использовать положительно заряженный синтетический катионный липид N-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-N,N,N-триметиламонийхлорид (DOTMA) для получения небольших липосом, которые спонтанно взаимодействуют с нуклеиновой кислотой с образованием комплексов липид-нуклеиновая кислота, которые способны сливаться с отрицательно заряженными липидами клеточных мембран клеток тканых культур, приводя к доставке средства для РНКи (для описания DOTMA и его применения с ДНК см., например, Feigner, P.L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 8:7413-7417, 1987, и патент США №4897355).
Аналог DOTMA 1,2-бис(олеоилокси)-3-(триметиламмоний)пропан (DOTAP) можно использовать в комбинации с фосфолипидом для получения везикул, образующих комплекс с ДНК. Lipofectin™ (Bethesda Research Laboratories, Gaithersburg, Md.) представляет собой эффективное средство для доставки высоко анионных нуклеиновых кислот в живые клетки тканевых культур, которые содержат положительно заряженные липосомы DOTMA, которые спонтанно взаимодействуют с отрицательно заряженными полинуклеотидами с образованием комплексов. Когда используют достаточно положительно заряженные липосомы, суммарный заряд на получаемых комплексах также является положительным. Положительно заряженные комплексы, получаемые таким образом, спонтанно присоединяются к отрицательно заряженным клеточным поверхностям, сливаются с плазматической мембраной и эффективно доставляют функциональные нуклеиновые кислоты, например, в клетки тканевой культуры. Другой коммерчески доступный катионный липид 1,2-бис(олеоилокси)-3,3-(триметиламмоний)пропан ("DOTAP") (Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana) отличается от DOTMA тем, что группы олеоила связаны сложноэфирными, а не простыми эфирными связями.
Другие репортерные соединения катионных липидов включают такие, которые конъюгированы с рядом молекул, включая, например, карбоксиспермин, который конъюгирован с одним из двух типов липидов и включает соединения, такие как 5-карбоксиспермилглициндиоктаолеоиламид ("DOGS") (Transfectam™, Promega, Madison, Wisconsin) и дипальмитоилфосфатидилэтаноламин-5-карбоксиспермиламид ("DPPES") (см., например, патент США №5171678).
Другой конъюгат катионного липида включает производное липида и холестерина ("DC-Chol"), которое формулируют в липосомы в комбинации с DOPE (см., Gao X. and Huang L., Biochim. Biophys. Res. Commun., 179:280, 1991). Опубликовано, что липополилизин, получаемый конъюгацией полилизина с DOPE, является эффективным для трансфекции в присутствии сыворотки (Zhou X. et al., Biochim. Biophys. Acta, 1065:8, 1991). Указано, что для определенных линий клеток такие липосомы, содержащие конъюгированные катионные липиды, проявляют более низкую токсичность и обеспечивают более эффективную трансфекцию по сравнению с содержащими DOTMA композициями. Другие коммерчески доступные продукты катионных липидов включают DMRIE и DMRIE-HP (Vical, La Jolla, California) и липофектамин (DOSPA) (Life Technology, Inc., Gaithersburg, Maryland). Другие катионные липиды, подходящие для доставки олигонуклеотидов, описаны в WO 98/39359 и WO 96/37194.
В частности, липосомальные составы исследуют с целью местного введения, липосомы предоставляют несколько преимуществ перед другими составами. Такие преимущества включают сниженные побочные эффекты, связанные с высоким системным всасыванием вводимого лекарственного средства, повышенным накоплением вводимого лекарственного средства в желаемой мишени и возможность введения средства для РНКи в кожу. В некоторых реализациях липосомы используют для доставки средства для РНКи в эпидермальные клетки, а также для повышения проникновения средства для РНКи в дермальные ткани, например, в кожу. Например, липосомы можно применять местно. Документально описана местная доставка лекарственных средств, формулируемых в виде липосом, в кожу (см., например, Weiner et al., Journal of Drug Targeting, 1992, vol. 2, 405-410 и du Plessis et al., Antiviral Research, 18, 1992, 259-265, Mannino R.J. and Fould-Fogerite S., Biotechniques 6:682-690, 1988, Itani T. et al., Gene, 56:267-276, 1987, Nicolau C. et al., Meth. Enz., 149:157-176, 1987, Straubinger R.M. and Papahadjopoulos D., Meth. Enz., 101:512-527, 1983, Wang C.Y. and Huang L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:7851-7855, 1987).
Также исследовали неионные липосомальные системы для определения их пригодности для доставки лекарственных средств в кожу, в частности системы, содержащие неионное поверхностно-активное вещество и холестерин. Использовали неионные липосомальные составы, содержащие новасом I (глицерилдилаурат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир) и новасом II (глицерилдистеарат/холестерин/полиоксиэтилен-10-стеариловый эфир), в отношении доставки лекарственного средства в дерму кожи мыши. Такие составы со средством для РНКи являются пригодными для лечения дерматологического нарушения.
Липосомы, которые содержат средство для РНКи, можно получать как высоко деформируемые. Такая деформируемость может способствовать тому, что липосомы проникают через пору, которая является меньше, чем средний радиус липосомы. Например, трансферсомы представляют собой тип деформируемых липосом. Трансферсомы можно получать путем добавления активаторов поверхности раздела фаз, как правило, поверхностно-активных веществ, в стандартную липосомальную композицию. Трансферсомы, которые содержат средство для РНКи, можно доставлять, например, подкожно посредством инфекции с целью доставки средства для РНКи в кератиноциты в коже. Для прохождения через интактную млекопитающих кожу липидные везикулы должны пройти через ряд мелких пор, где диаметром каждой составляет менее 50 нм, под действием подходящего трансдермального градиента. Кроме того, благодаря свойствам липидов такие трансферсомы могут самоорганизовываться (адаптируются к форме пор, например, в коже), саморепарации и могут часто достигать свои мишени без фрагментации и часто являются самонагружающимися.
Другие составы, пригодные по настоящему изобретению, описаны во временной заявки на патент США с серийным №61/018616, поданной 2 января 2008 года, 61/018611, поданной 2 января 2008 года, 61/039748, поданной 26 марта 2008 года, 61/047087, поданной 22 апреля 2008 года, и 61/051528, поданной 8 мая 2008 года. В заявке PCT № PCT/US 2007/080331, поданной 3 октября 2007 года, также описаны составы, которые являются пригодными для настоящего изобретения.
Поверхностно-активные вещества
Поверхностно-активные вещества находят широкое применение в составах, таких как эмульсии (включая микроэмульсии) и липосомы (см. выше). Композиции средства для РНКи (или предшественник, например, более крупная дц-иРНК, которая может подвергаться процессингу до миРНК, или ДНК, которая кодирует миРНК или предшественник) могут содержать поверхностно-активное вещество. В одном из вариантов осуществления миРНК формулируют в виде эмульсии, которая содержит поверхностно-активное вещество. Наиболее распространенный путь классификации и ранжирования свойств многих различных типов поверхностно-активных веществ, как природных, так и синтетических, сводится к использованию гидрофильного/липофильного баланса (HLB). Для определения категории различных поверхностно-активных веществ, используемых в составах, наиболее часто применяемым критерием является природа гидрофильной группы (Rieger, in "Pharmaceutical Dosage Forms", Marcel Dekker, Inc., New York, NY, 1988, p. 285).
Если молекула поверхностно-активного вещества не является ионизированной, его классифицируют как неионное поверхностно-активное вещество. Неионные поверхностно-активные вещества находят широкое применение в фармацевтических препаратах и являются пригодными в широком диапазоне значений pH. В основном их значения HLB находятся в диапазоне от 2 приблизительно до 18 в зависимости от их структуры. Неионные поверхностно-активные вещества включают неионные сложные эфиры, такие как сложные эфиры этиленгликоля, сложные эфиры пропиленгликоля, сложные эфиры глицерина, сложные эфиры полиглицерина, сложные эфиры сорбитана, сложные эфиры сахарозы и этоксилированные сложные эфиры. В этот класс также входят неионные алканоламиды и простые эфиры, такие как этоксилаты жирных спиртов, пропоксилированные спирты и этоксилированные/пропоксилированные блокполимеры. Поверхностно-активные вещества на основе полиоксиэтилена являются наиболее популярными представителями класса неионных поверхностно-активных веществ.
Если молекула поверхностно-активного вещества несет отрицательный заряд, когда ее растворяют или диспергируют в воде, поверхностно-активное вещество классифицируют как анионное. Анионные поверхностно-активные вещества включают карбоксилаты, такие как мыла, ациллактилаты, ациламиды аминокислот, сложные эфиры серной кислоты, такие как алкилсульфаты и этоксилированные алкилсульфаты, сульфонаты, такие как алкилбензолсульфонаты, ацилизетионаты, ацилтаураты и сульфосукцинаты и фосфаты. Наиболее важные представители класса анионных поверхностно-активных веществ представляют собой алкилсульфаты и мыла.
Если молекула поверхностно-активного вещества несет положительный заряд, когда ее растворяют или диспергируют в воде, поверхностно-активное вещество классифицируют как катионное. Катионные поверхностно-активные вещества включают четвертичные аммонийные соли и этоксилированные амины. Четвертичные аммонийные соли являются наиболее используемыми представителями этого класса.
Если молекула поверхностно-активного вещества обладает способностью нести положительный или отрицательный заряд, поверхностно-активное вещество классифицируют как амфотерное. Амфотерные поверхностно-активные вещества включают производные акриловой кислоты, замещенные алкиламиды, N-алкилбетаины и фосфолипиды.
Использование поверхностно-активных веществ в лекарственных продуктах, составах и в эмульсиях описано в литературе (Rieger, in "Pharmaceutical Dosage Forms", Marcel Dekker, Inc., New York, NY, 1988, p. 285).
Мицеллы и другие мембранные составы
Средства для РНКи по изобретению также можно предоставлять в виде мицеллярных составов. "Мицеллы" определяют в настоящем описании как конкретный тип молекулярного агрегата, в котором амфипатические молекулы располагаются в сферическую структуру, таким образом, что все гидрофобные участки молекулы являются направленными внутрь, оставляя гидрофильные участки в контакте с окружающей водной фазой. Существует обратное расположение, если окружающая среда является гидрофобной.
Смешанный мицеллярный состав, подходящий для доставки через трансдермальные мембраны можно получать смешиванием водного раствора композиции миРНК, C8-C22алкилсульфата щелочного металла и образующего мицеллы соединения. Иллюстративные образующие мицеллы соединения включают лецитин, гиалуроновую кислоту, фармацевтически приемлемые соли гиалуроновой кислоты, гликолевую кислоту, молочную кислоту, экстракт ромашки, экстракт огурца, олеиновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту, моноолеин, моноолеаты, монолаураты, масло бурачника, масло энотеры, ментол, тригидроксиоксохоланилглицин и его фармацевтически приемлемые соли, глицерин, полиглицерин, лизин, полилизин, триолеин, простые эфиры полиоксиэтилена и их аналоги, простые полидоканолалкиловые эфиры и их аналоги, хенодезоксихолат, дезоксихолат и их смеси. Образующие мицеллы соединения можно добавлять одновременно или после добавления алкилсульфата щелочного металла. Смешанные мицеллы образуются по существу при любом типе перешивания ингредиентов, но при интенсивном перемешивании для обеспечения мицелл с меньшим размером.
В одном из способом получают первую мицеллярную композицию, которая содержит композицию миРНК и по меньшей мере алкилсульфат щелочного металла. Затем первую мицеллярную композицию смешивают по меньшей мере с тремя образующими мицеллы соединениями для получения смешанной мицеллярной композиции. В другом способе мицеллярную композицию получают смешиванием композиции миРНК, алкилсульфата щелочного металла и по меньшей мере одного из образующих мицеллы соединений с последующим добавлением оставшихся образующих мицеллы соединений при интенсивном перемешивании.
К смешанной мицеллярной композиции можно добавлять фенол и/или мега-крезол для стабилизации состава и защиты от бактериального роста. Альтернативно, фенол и/или мега-крезол можно добавлять с образующими мицеллы ингредиентами. После получения смешанной мицеллярной композиции также можно добавлять средство придания изотоничности.
Для доставки мицеллярного состава в виде спрея состав можно помещать в аэрозольный распылитель и наполнять распылитель пропеллентом. Пропеллент, который находится под давлением, в распылителе находится в жидкой форме. Отношения ингредиентов регулируют таким образом, чтобы водная фаза и фаза пропеллента становились одной, т.е. присутствовала одна фаза. Если существует две фазы, необходимо встряхивать распылитель перед распылением части содержимого, например, через дозирующий клапан. Распыляемая доза фармацевтического средства дозируется из дозирующего клапана в виде тонкодисперсного спрея.
Пропелленты могут включать содержащие водород хлорфторуглероды, содержащие водород фторуглероды, простой диметиловый эфир и простой диэтиловый эфир. В определенных вариантах осуществления можно использовать HFA 134a (1,1,1,2-тетрафторэтан).
Конкретные концентрации основных ингредиентов можно определять относительно простым экспериментированием. Для всасывания через ротовую полость, как правило, желательным является повышение, например, по меньшей мере вдвое или втрое дозы посредством инъекции или введения через желудочно-кишечный тракт.
Частицы
В другом варианте осуществления средство для РНКи по изобретению можно вводить в частицу, например, микрочастицу. Микрочастицы можно получать сушкой распылением, а также можно получать другими способами, включая лиофилизацию, выпаривание, сушку в псевдоожиженном слое, вакуумную сушку или комбинацию этих техник.
IV. Способы ингибирования экспрессии TTR
Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования экспрессии транстиретина (TTR) в клетке. Способы включают приведение клетки в контакт со средством для РНКи, например, двухцепочечным средством для РНКи, в количестве эффективном для ингибирования экспрессии TTR в клетке, таким образом, ингибируя экспрессию TTR в клетке.
Приведение клетки в контакт со средством для РНКи, например, двухцепочечным средством для РНКи, можно проводить in vitro или in vivo. Приведение клетки в контакт in vivo со средством для РНКи включает приведение клетки или группы клеток у индивидуума, например, являющегося человек индивидуума, в контакт со средством для РНКи. Также возможной является комбинация способов in vitro и in vivo приведения клетки в контакт. Приведение клетки в контакт может являться прямым или опосредованным, как указано выше. Кроме того, приведение клетки в контакт можно проводить путем направления лиганда, включая любой лиганд, описываемый в настоящем описании или известный в данной области. В предпочтительных вариантах осуществления направленный лиганд представляет собой углеводную группу, например, лиганд GalNAc3 или любой другой лиганд, который направляет средство для РНКи в представляющий интерес участок, например, печень индивидуума.
Термин "ингибирование", как используют в настоящем описании, используют взаимозаменяемо с "уменьшением", "подавлением", "снижением", "ослаблением" и другими аналогичными терминами, и он включает любой уровень ингибирования.
Фраза "ингибирование экспрессии TTR" предназначено обозначать ингибирование экспрессии любого гена TTR (такого как, например, гена TTR мыши, гена TTR крысы, гена TTR обезьяны или гена TTR человека), а также вариантов или мутантов гена TTR. Таким образом, ген TTR может представлять собой ген TTR дикого типа, мутантный ген TTR (такой как мутантный ген TTR, взывающий отложение амилоида) или трансгенный ген TTR в отношении клетки, группы клеток или организма, подвергнутых генетической манипуляции.
"Ингибирование экспрессии гена TTR" включает любой уровень ингибирования гена TTR, например, по меньшей мере частичное подавление экспрессии гена TTR. Экспрессию гена TTR можно оценивать на основании уровня или изменения уровня любой переменной, ассоциированной с экспрессией гена TTR, например, уровнем мРНК TTR, уровнем белка TTR или числом или степенью отложений амилоида. Такой уровень можно оценивать в индивидуальной клетке или в группе клеток, включая, например, образец, получаемый у индивидуума.
Ингибирование можно оценивать по снижению абсолютного или относительного уровня одной или более переменных, которые ассоциированы с экспрессией TTR, по сравнению с контрольным уровнем. Контрольный уровень может представлять собой любой тип контрольного уровня, который используют в данной области, например, исходный уровень до дозирования, или уровень, определяемый у аналогичного индивидуума, в клетке или в образце, который не обрабатывали или обрабатывали контролем (таким как, например, контроль только буфером или контроль только неактивным средством).
В некоторых вариантах осуществления способов по изобретению экспрессию гена TTR ингибируют по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 91%, по меньшей мере приблизительно на 92%, по меньшей мере приблизительно на 93%, по меньшей мере приблизительно на 94%, по меньшей мере приблизительно на 95%, по меньшей мере приблизительно на 96%, по меньшей мере приблизительно на 97%, по меньшей мере приблизительно на 98% или по меньшей мере приблизительно на 99%.
Ингибирование экспрессии гена TTR может проявляться в уменьшении количества мРНК, экспрессируемой первой клеткой или группой клеток (такие клетки могут содержаться, например, в образце, получаемом у индивидуума), в которых транскрибируется ген TTR, и которые обрабатывали (например, посредством приведения клетки или клеток в контакт со средством для РНКи по изобретению, или посредством введения средства для РНКи по изобретению индивидууму, у которого присутствуют или присутствовали клетки), таким образом, что ингибируют экспрессию гена TTR по сравнению со второй клеткой или группой клеток по существу идентичных первой клетке или группе клеток, но которые так не обрабатывали (как контрольную клетку(и)). В предпочтительных вариантах осуществления ингибирование оценивают по уровню экспрессии мРНК в обрабатываемых клетках в виде процентного содержания уровня мРНК в контрольных клетках с использованием следующей ниже формулы:
Альтернативно, ингибирование экспрессии гена TTR можно оценивать в отношении уменьшения параметра, который является функционально связанным с экспрессией гена TTR, например, экспрессия белка TTR, уровень ретинолсвязывающего белка, уровень витамина A или наличие отложений амилоида, содержащих TTR. Подавление экспрессии гена TTR можно определять в любой клетке, экспрессирующей TTR, конститутивно или в результате геномной инженерии, и любым известным в данной области анализом. Печень является основным участком экспрессии TTR. Другие значительные участки экспрессии включают хориоидное сплетение, сетчатку и поджелудочную железу.
Ингибирование экспрессии белка TTR может проявляться в снижении уровня белка TTR, который экспрессируется клеткой или группой клеток (например, уровня белка, экспрессируемого в образце, получаемом у индивидуума). Как объясняется выше, для оценки подавления мРНК ингибирование уровней экспрессии белка в обрабатываемых клетках или группе клеток можно аналогичным образом выражать в виде процента от уровня белка в контрольной клетке или группе клеток. Контрольная клетка или группа клеток, которые можно использовать для оценки ингибирования экспрессии гена TTR, включают клетку или группу клеток, которые еще не контактировали со средством для РНКи по изобретению. Например, контрольную клетку или группу клеток можно получать у отдельного индивидуума (например, являющегося человеком или животным индивидуума) для лечения индивидуума средством для РНКи.
Уровень мРНК TTR, который экспрессируется клеткой или группой клеток, или уровень циркулирующей мРНК TTR можно определять любым известным в данной области способом для оценки экспрессии мРНК. В одном из вариантов осуществления уровень экспрессии TTR в образце определяют путем детекции транскрибируемого полинуклеотида или его участка, например, мРНК гена TTR. РНК можно выделять из клетки способами выделения РНК, включая, например, выделение с использованием кислого фенола/гуанидинизотиоцианата (RNAzol B, Biogenesis), наборов RNeasy RNA preparation (Qiagen) или PAXgene (PreAnalytix, Switzerland). Характерные форматы анализа, в которых используют гибридизацию рибонуклеиновой кислоты, включают анализы транскрипции на изолированных ядрах, ПЦР с обратной транскрипцией, анализ с использованием защиты от РНКазы (Melton et al., Nuc. Acids Res., 12:7035), нозерн-блоттинг, гибридизацию in situ и анализ на микропанелях. Циркулирующую мРНК TTR можно детектировать способами, описанными в PCT/US 2012/043584, полное содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки.
В одном из вариантов осуществления уровень экспрессии TTR определяют с использованием зонда нуклеиновой кислоты. Термин "зонд", как используют в настоящем описании, относится к любой молекуле, которая способна селективно связываться с конкретным TTR. Специалист в данной области может синтезировать зонды, или их получают из соответствующих биологических препаратов. Зонды можно специально конструировать, чтобы они являлись мечеными. Примеры молекул, которые можно использовать в качестве зондов включают, но не ограничиваются ими, РНК, ДНК, белки, антитела и органические молекулы.
Выделяемую мРНК можно использовать в анализах гибридизации или амплификации, которые включают, но не ограничиваются ими, саузерн- или нозерн-анализы, анализы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) и анализы с использованием зондов. Один из способов для определения уровней мРНК включает приведение выделенной мРНК в контакт с молекулой нуклеиновой кислоты (зондом), которая может гибридизоваться с мРНК TTR. В одном из вариантов осуществления мРНК иммобилизуют на твердой поверхности и приводят в контакт с зондом, например, посредством электрофореза выделенной мРНК в агарозном геле и переноса мРНК из геля на мембрану, такую как нитроцеллюлоза. В альтернативном варианте осуществления зонд(ы) иммобилизуют на твердой поверхности и приводят мРНК в контакт с зондом(ами), например, в анализе с использованием генного чипа Affymetrix. Специалист в данной области может легко адаптировать известные способы детекции мРНК для применения для определения уровня мРНК TTR.
Альтернативный способ определения уровня экспрессии TTR в образце включает процесс амплификации и/или обратной транскрипции нуклеиновой кислоты (с получением кДНК), например, мРНК в образце, например, ПЦР в реальном времени (экспериментальный вариант осуществления, указанный у Mullis, 1987, в патенте США №4683202), лигазной цепной реакцией (Barany, (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:189-193), самоподдерживающуюся репликацию последовательностей (Guatelli et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:1874-1878), транскрипционно-опосредованную амплификационную систему (Kwoh et al., (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:1173-1177), использование Q-бета репликазы (Lizardi et al., (1988) Bio/Technology, 6:1197), репликацию по типу "катящегося кольца" (Lizardi et al., патент США №5854033) или любой способ амплификации нуклеиновой кислоты с последующей детекцией амплифицируемых молекул с использованием хорошо известных специалистам в данной области техник. Такие схемы детекции являются особенно пригодными для детекции молекул нуклеиновой кислоты, в случае если такие молекулы содержатся в очень маленьких количествах. В конкретных аспектах изобретения уровень экспрессии TTR определяют количественной ПЦР в реальном времени с использованием флуорогенных зондов (т.е. системой TaqMan™).
Уровни экспрессии мРНК TTR можно наблюдать с использованием мембранного блота (такого как используют в анализе гибридизации, таком как нозерн-анализ, саузерн-анализ, дог-анализ и т.п.) или микролунок, пробирок, гелей, гранул или волокон (или любой твердой подложки, содержащей связанные нуклеиновые кислоты). См. патенты США №№5770722, 5874219, 5744305, 5677195 и 5445934, которые включены в настоящее описание посредством ссылки. Определение уровня экспрессии TTR также может включать использование зондов нуклеиновой кислоты в растворе.
В предпочтительных вариантах осуществления уровень экспрессии мРНК оценивают анализами разветвленной ДНК (pДНК) или с использованием ПЦР в реальном времени (qПЦР). Применение этих способов описано и проиллюстрировано в примерах, предоставленных в настоящем описании.
Уровень экспрессии белка TTR можно определять любым известным в данной области способом измерения уровней белка. Такие способы включают, например, электрофорез, капиллярный электрофорез, высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), тонкослойную хроматографию (TLC), гипердиффузную хроматографию, реакции преципитации в жидкости или геле, абсорбционную спектроскопию, колориметрические анализы, спектрометрические анализы, проточную цитометрию, иммунодиффузию (одиночную или двойную), иммуноэлектрофорез, вестерн-блоттинг, радиоиммунологический анализ (RIA), твердофазные иммуноферментные анализы (ELISA), иммунофлуоресцентные анализы, электрохемолюминесцентные анализы и т.п.
В некоторых вариантах осуществления мониторинг эффективности способов по изобретению можно проводить посредством детекции или мониторинга снижения отложения амилоидного TTR. Снижение отложения амилоидного TTR, как используют в настоящем описании, включает любое уменьшение размера, числа или степени выраженности отложений TTR, или относится к предотвращению или снижению образования отложений TTR в органе или отделе у индивидуума, как можно оценивать in vitro или in vivo любым известным в данной области способом. Например, некоторые способы оценки отложений амилоида описаны у Gertz M.A. & Rajukumar S.V., (Editors) (2010), Amyloidosis: Diagnosis and Treatment, New York: Humana Press. Способы оценки отложений амилоида могут включать биохимические анализы, а также визуальную или компьютеризированную оценку отложений амилоида, как можно визуализировать, например, с использованием иммуногистохимического окрашивания, флуоресцентного мечения, световой микроскопии, электронной микроскопии, флуоресцентной микроскопии или других типов микроскопии. Для оценки отложений амилоида можно применять инвазивные или неинвазивные способы получения изображения, включая, например, CT, PET или NMR/MRI визуализацию.
Способы по изобретению могут снижать отложения TTR во многих тканях или отделах организма, включая, но, не ограничиваясь ими, сердце, печень, селезенку, пищевод, желудок, кишечник (подвздошную кишку, двенадцатиперстную кишку и толстую кишку), головной мозг, седалищный нерв, ганглий заднего корешка, почку и сетчатку.
Термин "образец", как используют в настоящем описании, относится к набору аналогичных жидкостей, клеток или тканей, получаемых у индивидуума, а также жидкостям, клеткам или тканям, содержащимся у индивидуума. Примеры биологических жидкостей включают кровь, сыворотку и серозные жидкости, плазму, цереброспинальную жидкость, слюну, внутриглазные жидкости и т.п. Образцы ткани могут включать образцы из тканей, органов или локализованных участков. Например, образцы можно получать из конкретных органов, частей органов или жидкостей, или клеток в этих органах. В определенных вариантах осуществления образцы можно получать из печени (например, целой печени или определенных сегментов печени или определенных типов клеток в печени, таких как, например, гепатоциты), сетчатки или частей сетчатки (например, пигментного эпителия сетчатки), центральной нервной системы или отделов центральной нервной системы (например, желудочков или хориоидного сплетения), или поджелудочной железы или определенных клеток или частей поджелудочной железы. В предпочтительных вариантах осуществления "получаемый у индивидуума образец" относится к крови или плазме, получаемой у индивидуума. В дополнительных вариантах осуществления "получаемый у индивидуума образец" относится к ткани печени или ткани сетчатки, получаемой у индивидуума.
В некоторых вариантах осуществления способов по изобретению средство для РНКи вводят индивидууму таким образом, что средство для РНКи доставляют в конкретный участок у индивидуума. Ингибирование экспрессии TTR можно оценивать с использованием измерений уровня или изменения уровня мРНК TTR или белка TTR в образце, получаемом из жидкости или ткани из конкретного участка у индивидуума. В предпочтительных вариантах осуществления участок выбран из группы, состоящей из печени, хориоидного сплетения, сетчатки и поджелудочной железы. Участок также может представлять собой подотдел или подгруппу клеток из любого из указанных выше участков (например, гепатоцитов или пигментного эпителия сетчатки). Участок также может включать клетки, которые экспрессируют конкретный тип рецептора (например, гепатоциты, которые экспрессируют асиалогликопротеиновый рецептор).
V. Способы лечения или профилактики ассоциированного с TTR заболевания
Настоящее изобретение также относится к способам лечения или профилактики ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума. Способы включают введение индивидууму терапевтически эффективного количества или профилактически эффективного количества средства для РНКи по изобретению.
Как используют в настоящем описании, "индивидуум" включает человека или не являющееся человеком животное предпочтительно позвоночное и более предпочтительно млекопитающее. Индивидуум может включать трансгенный организм. Наиболее предпочтительно индивидуум представляет собой человека, такого как человек, страдающий или предрасположенный к развитию ассоциированного с TTR заболевания.
В некоторых вариантах осуществления индивидуум страдает от ассоциированного с TTR заболевания. В других вариантах осуществления индивидуум представляет собой индивидуума, подвергающегося риску развития ассоциированного с TTR заболевания, например, индивидуума с мутацией гена TTR, которая ассоциирована с развитием ассоциированного с TTR заболевания, индивидуума с семейным анамнезом ассоциированного с TTR заболевания или индивидуума, который проявляет признаки или симптомы, подтверждающие развитие TTR амилоидоза.
"Ассоциированное с TTR заболевание", как используют в настоящем описании, включает любое заболевание, вызываемое или ассоциированное с образованием отложений амилоида, в которых предшественники фибрилл состоят из варианта или белка TTR дикого типа. Мутантный и TTR дикого типа обуславливает различные формы отложения амилоида (амилоидоза). Амилоидоз включает образование и агрегацию неправильно свернутых белков, приводящих к внеклеточным отложениям, которые нарушают функцию органа. Клинические синдромы, ассоциированные с агрегацией TTR, включают, например, старческий системный амилоидоз (SSA), системный семейный амилоидоз, семейную амилоидотическую полинейропатию (FAP), семейную амилоидотическую кардиомиопатию (FAC) и лептоменингеальный амилоидоз, также известный как лептоменингеальный или менингоцереброваскулярный амилоидоз, амилоидоз центральной нервной системы (ЦНС) или амилоидоз VII формы.
В некоторых вариантах осуществления способов по изобретению средства для РНКи по изобретению вводят индивидуумам, страдающим семейной амилоидотической кардиомиопатией (FAC) и старческим системным амилоидозом (SSA). TTR с нормальной последовательностью вызывает амилоидоз сердца у людей пожилого возраста, и который называют старческим системным амилоидозом (SSA) (также называемый сенильным амилоидозом сердца (SCA) или амилоидозом сердца). SSA часто сопровождается микроскопическими отложениями во многих других органах. Мутации TTR ускоряют процесс образования амилоида TTR и являются наиболее важным фактором риска развития клинически значимого амилоидоза TTR (также называемого ATTR (типа амилоидоз-транстиретин)). Известно, что более 85 амилоидогенных вариантов TTR вызывают системный семейный амилоидоз.
В некоторых вариантах осуществления способов по изобретению средства для РНКи по изобретению вводят индивидуумам, страдающим связанной с транстиретином (TTR) семейной амилоидотической полинейропатией (FAP). Такие индивидуумы могут страдать офтальмологическими проявлениями, такими как помутнение стекловидного тела и глаукома. Специалисту в данной области известно, что амилоидогенный транстиретин (ATTR), синтезируемый пигментным эпителием сетчатки (RPE), играет важную роль в прогрессировании амилоидоза глаза. Проведенные ранее исследования показали, что панретинальная лазерная фотокоагуляция, которая уменьшает количество клеток RPE, предотвращает прогрессирование отложения амилоида в стекловидном теле, свидетельствуя о том, что эффективное подавление экспрессии ATTR в RPE может стать новой терапией амилоидоза глаза (см., например, Kawaji T. et al., Ophthalmology, (2010) 117:552-555). Способы по изобретению являются пригодными для лечения офтальмологических проявлений связанной с TTR FAP, например, амилоидоза глаза. Средство для РНКи можно доставлять подходящим способом для направленной доставки в конкретную ткань, такую как глаз. Модели доставки в глаз включают ретробульбарную, подкожную в веко, субконъюнктивальную, субтеноновую, в переднюю камеру или интравитреальную инъекцию (или внутреннюю инъекцию или вливание). Конкретные составы для доставки в глаз включают глазные капли или мази.
Другое ассоциированное с TTR заболевание представляет собой гипертироксинемию, также известную как "дистранстиретиновая гипертироксинемия" или "диспреальбуминовая гипертироксинемия". Этот тип гипертироксинемии может являться вторичным по отношению к повышенной ассоциации тироксина с TTR в результате мутантной молекулы TTR с повышенной аффинностью к тироксину. См., например, Moses et al., (1982) J. Clin. Invest., 86, 2025-2033.
Средства для РНКи по изобретению можно вводить индивидууму любым способом введения, известным в данной области, включая, но, не ограничиваясь ими, подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутриглазной, внутрибронхиальный, интраплевральный, интраперитонеальный, внутриартериальный, лимфатический, цереброспинальный и любыми их комбинациями. В предпочтительных вариантах осуществления средства вводят подкожно.
В некоторых вариантах осуществления введение проводят посредством депо-инъекции. Депо-инъекция может постоянно высвобождать средство для РНКи в течение длительного периода времени. Таким образом, депо-инъекция может снижать частоту дозирования, необходимую для получения желаемого действия, например, желаемого ингибирования TTR, или терапевтического или профилактического эффекта. Депо-инъекция также может обеспечивать более постоянные концентрации в сыворотке. Депо-инъекции могут включать подкожные инъекции или внутримышечные инъекции. В предпочтительных вариантах осуществления депо-инъекция представляет собой подкожную инъекцию.
В некоторых вариантах осуществления введение проводят через насос. Насос может представлять собой внешний насос или хирургически имплантированный насос. В определенных вариантах осуществления насос представляет собой подкожно имплантированный осмотический насос. В других вариантах осуществления насос представляет собой инфузионный насос. Инфузионный насос можно использовать для внутривенных, подкожных, артериальных или эпидуральных инфузий. В предпочтительных вариантах осуществления инфузионный насос представляет собой подкожный инфузионный насос. В других вариантах осуществления насос представляет собой хирургически имплантированный насос, который доставляет средство для РНКи в печень.
Другие способы введения включают эпидуральное, интарцеребральное, интрацеребровентрикулярное, назальное введение, внутриартериальную, внутрисердечную, внутрикостную инфузию, интратекальное и интравитреальное, и легочное. Способ введения можно выбирать в зависимости от того, является ли желательным местное или системное лечение, и в зависимости от подлежащей лечению области. Путь и участок введения можно выбирать, чтобы усиливать направленное воздействие.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии TTR в клетку индивидуума. Количество, эффективное для ингибирования экспрессии TTR в клетке у индивидуума, можно оценивать описанными выше способами, включая способы, которые включают оценку ингибирования мРНК TTR, белка TTR или связанных переменных, таких как отложения амилоида.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят индивидууму в терапевтически или профилактически эффективном количестве.
"Терапевтически эффективное количество", как используют в настоящем описании, предназначено включать количество средства для РНКи, которое при введении пациенту для лечения ассоциированного с TTR заболевания, является достаточным для эффективного лечения заболевания (например, путем ослабления, улучшения состояния или поддержания существующего заболевания или одного или более симптомов заболевания). "Терапевтически эффективное количество" может изменяться в зависимости от средства для РНКи, того каким образом вводят средства, заболевания и его тяжести и истории, возраста, массы, семейного анамнеза, набора генов, стадии патологических процессов, опосредованных экспрессией TTR, типов предшествовавшей или сопутствующей терапии при наличии и других индивидуальных характеристик пациента, подлежащего лечению.
"Профилактически эффективное количество", как используют в настоящем описании, предназначено включать количество средства для РНКи, которое при введении индивидууму, который еще не испытывает или не проявляет симптомов ассоциированного с TTR заболевания, но который может быть предрасположен к заболеванию, является достаточным для профилактики или улучшения состояния заболевание или одного или более симптомов заболевания. Симптомы, которые можно улучшать, включают сенсорную нейропатию (например, парестезию, гипестезию в дистальных конечностях), вегетативную нейропатию (например, нарушение желудочно-кишечной функции, такое как язва желудка, или ортостатическую гипотензию), моторную нейропатию, судороги, деменцию, миелопатию, полинейропатию, синдром запястного канала, вегетативную недостаточность, кардиомиопатию, помутнения стекловидного тела, почечную недостаточность, нефропатию, значительное снижение mBMI (модифицированного индекса массы тела), нарушение функции черепно-мозгового нерва и решетчатую дегенерацию роговицы. Улучшение состояния заболевание включает замедление течения заболевания или снижение тяжести развивающегося позднее заболевания. "Профилактически эффективное количество" может изменяться в зависимости от средства для РНКи, того как вводят средство, степени риска заболевания и истории, возраста, массы, семейного анамнеза, набора генов, типов предшествовавшего или сопутствующего лечения при наличии и других индивидуальных характеристик пациента, подлежащего лечению.
"Терапевтически-эффективное количество" или "профилактически эффективное количество" также включает количество средства для РНКи, которое обеспечивает желаемое местное или системное действие при обоснованном отношении польза/риск, применимом для любого лечения. Средства для РНКи, применяемые в способах по настоящему изобретению, можно вводить в достаточном количестве для обеспечения обоснованного отношения польза/риск, применимом для такого лечения.
Как используют в настоящем описании, фраза "терапевтически эффективное количество" и "профилактически эффективное количество" также включает количество, которое оказывает благоприятное действие на лечение, профилактику или ведение патологических процессов или симптома(ов) патологических процессов, опосредованных экспрессией TTR. Симптомы TTR амилоидоза включают сенсорную нейропатию (например, парестезию, гипестезию в дистальных конечностях), вегетативную нейропатию (например, нарушение желудочно-кишечной функции, такое как язва желудка, или ортостатическую гипотензию), моторную нейропатию, судороги, деменцию, миелопатию, полинейропатию, синдром запястного канала, вегетативную недостаточность, кардиомиопатию, помутнения стекловидного тела, почечную недостаточность, нефропатию, значительное снижение mBMI (модифицированного индекса массы тела), нарушение функции черепно-мозгового нерва и решетчатую дегенерацию роговицы.
Доза средства для РНКи, которую вводят индивидууму, можно подбирать для уравновешивания рисков и пользы от конкретной дозы, например, для получения желаемого уровня подавления гена TTR (как оценивают, например, на основании подавления мРНК TTR, экспрессии белка TTR или снижения отложения амилоида, как определено выше) или желаемого терапевтического или профилактического действия, при одновременном устранении нежелательных побочных эффектов.
В одном из вариантов осуществления средство для РНКи вводят в дозе приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 50 мг/кг, например, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 0,5 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 1 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 5 мг/кг, приблизительно от 0,25 мг/кг приблизительно до 10 мг/кг, приблизительно от 1 мг/кг приблизительно до 10 мг/кг, приблизительно от 5 мг/кг приблизительно до 15 мг/кг, приблизительно от 10 мг/кг приблизительно до 20 мг/кг, приблизительно от 15 мг/кг приблизительно до 25 мг/кг, приблизительно от 20 мг/кг приблизительно до 30 мг/кг, приблизительно от 25 мг/кг приблизительно до 35 мг/кг или приблизительно от 40 мг/кг приблизительно до 50 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в дозе приблизительно 0,25 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 11 мг/кг, приблизительно 12 мг/кг, приблизительно 13 мг/кг, приблизительно 14 мг/кг, приблизительно 15 мг/кг, приблизительно 16 мг/кг, приблизительно 17 мг/кг, приблизительно 18 мг/кг, приблизительно 19 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 21 мг/кг, приблизительно 22 мг/кг, приблизительно 23 мг/кг, приблизительно 24 мг/кг, приблизительно 25 мг/кг, приблизительно 26 мг/кг, приблизительно 27 мг/кг, приблизительно 28 мг/кг, приблизительно 29 мг/кг, 30 мг/кг, приблизительно 31 мг/кг, приблизительно 32 мг/кг, приблизительно 33 мг/кг, приблизительно 34 мг/кг, приблизительно 35 мг/кг, приблизительно 36 мг/кг, приблизительно 37 мг/кг, приблизительно 38 мг/кг, приблизительно 39 мг/кг, приблизительно 40 мг/кг, приблизительно 41 мг/кг, приблизительно 42 мг/кг, приблизительно 43 мг/кг, приблизительно 44 мг/кг, приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 46 мг/кг, приблизительно 47 мг/кг, приблизительно 48 мг/кг, приблизительно 49 мг/кг или приблизительно 50 мг/кг.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в двух или более дозах. При желании для облегчения повторных или частых инфузий можно порекомендовать имплантацию средства доставки, например, насоса, полупостоянного стента (например, внутривенного, интраперитонеального, интрацистернального или внутрикапсулярного) или резервуара. В некоторых вариантах осуществления число или количество последующих доз зависит от получения желаемого действия, например, подавления гена TTR, или получения терапевтического или профилактического действия, например, уменьшения отложения амилоида или уменьшения симптома ассоциированного с TTR заболевания. В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят в соответствии со схемой введения. Например, средство для РНКи можно вводить дважды в неделю, три раза в неделю, четыре раза в неделю или пять раза в неделю. В некоторых вариантах осуществления схема введения включает введение через равные интервалы времени, например, каждый час, каждые четыре часа, каждые шесть часов, каждые восемь часов, каждые двенадцать часов, ежесуточно, каждые 2 суток, каждые 3 суток, каждые 4 суток, каждые 5 суток, еженедельно, раз в две недели или ежемесячно. В других вариантах осуществления схема введения включает введения с небольшими интервалами времени с последующим более длительным периодом, во время которого средство не вводят. Например, схема введения может включать начальную совокупность доз, которые вводят в относительно короткий период времени (например, приблизительно каждые 6 часов, приблизительно каждые 12 часов, приблизительно каждые 24 часа, приблизительно каждые 48 часов, или приблизительно каждые 72 часа), с последующим более длительным периодом времени (например, приблизительно 1 неделя, приблизительно 2 недели, приблизительно 3 недели, приблизительно 4 недели, приблизительно 5 недель, приблизительно 6 недель, приблизительно 7 недель или приблизительно 8 недель), во время которого не вводят средство для РНКи. В одном из вариантов осуществления средство для РНКи сначала вводят каждый час, а затем вводят в более длительном интервале времени (например, ежесуточно, еженедельно, раз в две недели или ежемесячно). В другом варианте осуществления средство для РНКи сначала вводят ежесуточно, а затем вводят в более длительном интервале времени (например, еженедельно, раз в две недели или ежемесячно). В определенных вариантах осуществления более длительный интервал увеличивается со временем, или его определяют на основании получения желаемого действия. В конкретном варианте осуществления средство для РНКи вводят один раз в сутки в течение первой недели с последующим еженедельным дозированием, начиная на восьмые сутки введения. В другом конкретном варианте осуществления средство для РНКи вводят через сутки во время первой недели с последующим еженедельным дозированием, начиная на восьмые сутки введения.
Любую из этих схем можно необязательно повторять в течение одного или более циклов. Число циклов может зависеть от получения желаемого действия, например, подавления гена TTR, уровня ретинолсвязывающего белка, уровня витамина A и/или получения терапевтического или профилактического действия, например, снижения отложения амилоида или уменьшения симптома ассоциированного с TTR заболевания.
В некоторых вариантах осуществления средство для РНКи вводят совместно с другими терапевтическими средства или в соответствии с другими схемами лечения. Например, другие средства или другие схемы лечения, подходящие для лечения ассоциированного с TTR заболевания, могут включать трансплантацию печени, которая может снижать уровни мутантного TTR в организме, тафамидис (Vyndaqel), который кинетически стабилизирует тетрамер TTR, предотвращая диссоциацию, необходимую для амилоидогенеза TTR, и диуретики, которые можно применять, например, для снижения отека при TTR амилоидозе с поражением сердца.
В одном из вариантов осуществления индивидууму вводят начальную дозу и одну или более поддерживающих доз средства для РНКи. Поддерживающая доза или дозы могут являться такими же или ниже, чем начальная доза, например, половина начальной дозы. Поддерживающая схема лечения может включать лечение индивидуума дозой или дозами в диапазоне от 0,01 мкг до 15 мг/кг массы тела в сутки, например, 10 мг/кг, 1 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,01 мг/кг, 0,001 мг/кг или 0,00001 мг/кг массы тела в сутки. Поддерживающие дозы вводят, например, не более чем один раз в 2 суток, один раз в 5 суток, один раз в 7 суток, одни раз в 10 суток, один раз в 14 суток, один раз в 21 сутки или один раз в 30 суток. Кроме того, схема лечения может длиться в течение периода времени, который изменяется в зависимости от природы конкретного заболевания, его тяжести и общего состояния пациента. В определенных вариантах осуществления дозирование можно проводить не более одного раз в сутки, например, не более одного раз в 24, 36, 48 или более часов, например, не более одного раза в 5 или 8 суток. После лечения можно проводить наблюдение у пациента за изменением его/ее состояния. Дозу средства для РНКи можно повышать в случае, если пациент не отвечает в значительно степени на текущие уровни дозирования, или дозу можно снижать, если наблюдают ослабление симптомов состояния болезни, если устраняют состояние болезни, или если наблюдают нежелательные побочные эффекты.
VI. Наборы
Настоящее изобретение также относится к наборам для проведения любых способов по изобретению. Такие наборы включают одно или более средств для РНКи и инструкции по применению, например, инструкции для ингибирования экспрессии TTR в клетке посредством приведения в контакт клетки со средством(ами) для РНКи в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии TTR. Наборы могут необязательно дополнительно содержать средства для приведения клетки в контакт со средством для РНКи (например, устройство для инъекции) или средства для измерения ингибирования TTR (например, средства для измерения ингибирования мРНК TTR или белка TTR). Такие средства для измерения ингибирования TTR могут содержать средство для получения образца у индивидуума, такого как, например, образец плазмы. Наборы по изобретению могут необязательно дополнительно содержать средство для введения средства(в) для РНКи индивидууму или средство для определения терапевтически эффективного или профилактически эффективного количества.
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими ниже примерами, которые не следует интерпретировать как ограничивающие. Содержание всех ссылок и опубликованных патентов и патентных заявок, цитируемых на всем протяжении заявки, таким образом, включены в настоящее описание посредством ссылки.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Ингибирование TTR конгьюгатами TTR-GalNAc
Однократную дозу средства для РНКи AD-43527 TTR вводили подкожно мышам и определяли уровень мРНК TTR через 72 часа после введения.
Выбирали перекрестнореагирующий у мыши/крысы GalNAc-конъюгат AD-43527 для оценки in vivo подавления экспрессии мРНК TTR в печени у мышей WT C57BL/6. Последовательность каждой цепи AD-43527 представлена ниже.
Цепь: s=смысловая; as=антисмысловая
Используемый лиганд представлял собой GalNAc3:
Этот лиганд GalNAc3 конъюгировали с 3'-концом смысловой цепи с использованием линкера и связи, как показано ниже:
Структура получаемого GalNAc3, конъюгированного со смысловой цепью, показана в на следующей ниже схеме:
Синтезировали и оценивали дополнительные средства для РНКи, которые направлены на TTR и содержат следующие последовательности и модификации.
Средства для РНКи TTR, перекрестнореагирующие у мыши/крысы
Средства для РНКи TTR перекрестнореагирующие у человека/яванского макака; исходный дуплекс представляет собой AD-18328 [содержащий последовательность смысловой цепи 5'-3' GuAAccAAGAGuAuuccAudTdT (SEQ ID NO: 12) и последовательность антисмысловой цепи 5'-3' AUGGAAuACUCUUGGUuACdTdT (SEQ ID NO: 13) со следующими ниже модификациями: чередование 2'F/2'OMe w/2 PS на AS.
L96=GalNAc3; нуклеотиды строчными буквами (a, u, g, c) представляют собой 2'-O-метилнуклеотиды, Nf (т.е. Af) представляет собой 2'-фто нуклеотид; Q11 представляет собой холестерин; s представляет собой тиофосфат.
AD-43527 вводили самкам мышей C57BL/6 (6-10 недель, 5 в группе) посредством подкожной инъекции в объеме дозы 10 мкл/г в дозе 30, 15, 7,5, 3,5, 1,75 или 0,5 мг/кг AD-43527. Контрольные животные получали PBS посредством подкожной инъекции в том же объеме дозы.
Приблизительно через семьдесят два часа мышей анестезировали 200 мкл кетамина, а затем выпускали кровь посредством разреза правой хвостовой артерии. Собирали ткань печени, быстро замораживали и хранили при -80°C до обработки.
Эффективность лечения оценивали путем измерения мРНК TTR в печени через 72 часа после дозирования. Уровни мРНК TTR в печени оценивали с использованием анализов с разветвленной ДНК - QuantiGene 1.0 (Panomics). В кратком изложении, образцы печени мыши измельчали и получали лизаты ткани. Лизирующую смесь с печенью (смесь 1 объема лизирующей смеси, 2 объемов не содержащей нуклеазы воды и 10 мкл протеиназы-K/мл в конечной концентрации 20 мг/мл) инкубировали при 65°C в течение 35 минут. В планшет для захвата добавляли 5 мкл лизата печени и 95 мкл панель рабочих зондов (зонд TTR для гена-мишени и GAPDH для эндогенного контроля). Планшет для захвата инкубировали при 53°C ± 1°C (приблизительно 16-20 часов). На следующие сутки планшет для захвата промывали 3 раза 1X промывочным буфером (не содержащая нуклеаз вода, компонент 1 буфера и компонент 2 промывочного буфера), затем сушили центрифугированием в течение 1 минуты при 240 g. В планшет для захвата добавляли 100 мкл на лунку амплификационной смеси зонда, который герметично закрывали алюминиевой фольгой, и инкубировали в течение 1 часа при 46°C ± 1°C. После инкубации в течение 1 часа повторяли этап промывания, затем добавляли 100 мкл на лунку смеси меченого зонда. Планшеты для захвата инкубировали при 46°C ± 1°C в течение 1 часа. Затем планшеты промывали 1X промывочным буфером, сушили и добавляли в планшеты для захвата 100 мкл субстрата на лунку. Планшеты для захвата инкубировали в течение 30 минут при 46°C с последующей инкубацией в течение 30 минут при комнатной температуре. После инкубации планшеты считывали с использованием люминометра SpectraMax. Данные b-ДНК анализировали путем вычитания среднего фонового значения из каждого повторного образца, усредняя повторные значения GAPDH (контрольного зонда) и TTR (экспериментального зонда), а затем вычисляя отношение: (экспериментальный зонд - фоновое значение) / (контрольный зонд - фоновое значение). Для каждой группы рассчитывали средний уровень мРНК TTR и нормализовали на среднее значение группы PBS с получением относительной мРНК TTR в виде % от группы контроля PBS.
Результаты представлены на фигуре 1. Конъюгированное с GalNAc средство для РНКи, направленное на TTR, имело ED50 приблизительно 5 мг/кг для нокдауна мРНК TTR. Эти результаты демонстрируют, что конъюгированные с GalNAc средства для РНКи, направленные на TTR, являются эффективными для ингибирования экспрессии мРНК TTR.
Пример 2: Ингибирование TTR конгьюгатами TTR-GalNAc является стойким
Мышам вводили подкожную дозу (7,5 или 30,0 мг/кг) AD-43527 конъюгированного с GalNAc средства для РНКи, направленного на TTR. Способом, описанным в примере 1, оценивали уровень мРНК TTR в печени на 1, 3, 5, 7, 10, 13, 15, 19, 26, 33 и 41 сутки после дозирования.
Результаты представлены на фигуре 2. На 19 сутки введение 30,0 мг/кг конъюгированных с GalNAc средств для РНКи все еще проявляло приблизительно 50% подавление. Полное восстановление экспрессии наступало на 41 сутки.
Эти результаты демонстрировали, что ингибирование, обеспечиваемое конъюгированной с GalNAc миРНК, направленной на TTR, является стойким, длящимся до 3, 5, 7, 10, 13, 15, 19, 26 или 33 суток после обработки.
Пример 3. Синтез РНК и отжиг дуплекса
1. Синтез олигонуклеотида
Олигонуклеотиды синтезировали на синтезаторе AKTA Oligopilot или синтезаторе ABI 394. Если не указано иное для синтеза олигонуклеотидов использовали коммерчески доступную твердую подложку из стекла с контролируемым размером пор (dT-CPG, 500Å, Prime Synthesis) и фосфорамидиты РНК со стандартными защитными группами 5'-O-диметокситритил-N6-бензоил-2'-трет-бутилдиметилсилиладенозин-3'-O-N,N'-диизопропил-2-цианоэтилфосфорамидит, 5'-O-диметокситритил-N4-ацетил-2'-трет-бутилдиметилсилилцитидин-3'-O-N,N'-диизопропил-2-цианоэтилфосфорамидит, 5'-O-диметокситритил-N2-изобутрил-2'-трет-бутилдиметилсилилгуанозин-3'-O-N,N'-диизопропил-2-цианоэтилфосфорамидит и 5'-O-диметокситритил-2'-трет-бутилдиметилсилилуридин-3'-O-N,N'-диизопропил-2-цианоэтилфосфорамидит (Pierce Nucleic Acids Technologies). 2'-F-фосфорамидиты, 5'-O-диметокситритил-N4-ацетил-2'-фторцитидин-3'-O-N,N'-диизопропил-2-цианоэтилфосфорамидит и 5'-O-диметокситритил-2'-фторуридин-3'-O-N,N'-диизопропил-2-цианоэтилфосфорамидит приобретали от Promega. Все фосфорамидиты использовали в концентрации 0,2 М в ацетонитриле (CH3CN) за исключением гуанозина, который использовали в концентрации 0,2 М в 10% THF/ANC (об./об.). Использовали время связывания/рециклинга 16 минут. Активатор представлял собой 5-этилтиотетразол (0,75 М, American International Chemicals), для PO-окисления использовали йод/вода/пиридин и для PS-окисления использовали PADS (2%) в 2,б-лутидине/ACN (1:1 об./об.).
Конъюгированные с лигандом цепи синтезировали с использованием твердой подложки, содержащей соответствующий лиганд. Например, введение углеводной группы/лиганда (например, GalNAc) в 3'-конец последовательности получали посредством начала синтеза с соответствующей углеводной твердой подложкой. Аналогично молекулу холестерина в 3'-конец вводили посредством начала синтеза на подложке на основе холестерина. Как правило, молекула лиганда связывали с транс-4-гидроксипролинолом посредством связи, выбираемой, как описано в предыдущих примерах, с получением молекулы гидроксипролинол-лиганд. Затем молекулу гидроксипролинол-лиганд связывали с твердой подложкой через сукцинатный линкер или преобразовывали в фосфорамидит посредством стандартных условий фосфорилирования с получением желаемых строительных блоков углеводного конъюгата. Синтезировали меченную флуорофором миРНК из соответствующего фосфорамидита или с использованием твердой подложки, приобретаемой от Biosearch Technologies. Полимерную подложку на основе олеила и литохолиевой кислоты (GalNAc)3 изготавливали в лаборатории, в которой проводили испытание, при нагрузке 38,6 мкмоль/грамм. Полимерную подложку на основе маннозы (Man)3 также изготавливали в лаборатории, в которой проводили испытание, при нагрузке 42,0 мкмоль/грамм.
Конъюгацию лиганда выбираемого в желаемом положении, например, в 5'-конце последовательности, получали связыванием соответствующего фосфорамидита с растущей цепью в стандартных условиях связывания фосфорамидитов, если не указано иное. Длительное связывание в течение 15 минут 0,1 М раствора фосфорамидита в безводном CH3CN в присутствии активатора 5-(этилтио)-1H-тетразол со связанным с твердой подложкой олигонуклеотидом. Окисление межнуклеотидого фосфита до фосфата проводили с использованием стандарта йод-вода, как опубликовано у Beaucage S.L., (2008) Solid-phase synthesis of siRNA oligonucleotides, Curr. Opin. Drug Discov. Devel., 11, 203-216; Mueller S., Wolf J. and Ivanov S.A., (2004) Current Strategies for the Synthesis of RNA, Curr. Org. Synth., 1, 293-307; Xia J., Noronha A., Toudjarska I., Li F., Akinc A., Braich R., Frank-Kamenetsky M., Rajeev K.G., Egli M. and Manoharan M., (2006) Gene Silencing Activity of siRNAs with a Ribo-difluorotoluyl Nucleotide, ACS Chem. Biol., 1, 176-183, или обработкой трет-бутилгидропероксид/ацетонитрил/водой (10:87:3) с временем выдержки окисления конъюгируемого олигонуклеотида 10 минут. Тиофосфат вводили путем окисления фосфита до тиофосфата с использованием переносящего серу реагента, такого как DDTT (приобретаемого от AM Chemicals), PADS и/или реагента Бокажа. Амидофосфит холестерина синтезировали в лаборатории, в которой проводили испытание, и использовали в концентрации 0,1 М в дихлорметане. Время связывания для фосфорамидита холестерина составляло 16 минут.
2. Снятие защиты I (снятие защиты нуклеинового основания)
После завершения синтеза подложку переносили в 100 мл стеклянный флакон (VWR). Олигонуклеотид отщепляли от подложки с одновременным снятием защиты основания и фосфатных групп с использованием 80 мл смеси этанольного раствора аммиака [аммиак : этанол (3:1)] в течение 6,5 часов при 55°C. Флаконы быстро охлаждали на льду, а затем смесь этанольного раствора аммиака фильтровали в новый 250 мл флакон. CPG промывали частями 2×40 мл этанола/воды (1:1 об./об.). Затем уменьшали объем смеси до ~30 мл роторным вакуумным испарителем. Затем смесь замораживали на сухом льду и сушили в вакууме на концентраторе SpeedVac.
3. Снятие защиты II (удаление группы 2'-TBDMS)
Сухой остаток ресуспендировали в 26 мл триэтиламина, триэтиламинтригидрофторида (TEA.3HF) или пиридина-HF и DMSO (3:4:6) и нагревали при 60°C в течение 90 минут для удаления групп трет-бутилдиметилсилила (TBDMS) в 2'-положении. Реакцию затем гасили 50 мл 20 мМ ацетата натрия и подводили pH до 6,5, и хранили в морозильной камере до очистки.
4. Анализ
Олигонуклеотиды анализировали высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) до очистки, и выбор буфера и колонки зависит от природы последовательности и/или конъюгированного лиганда.
5. Очистка ВЭЖХ
Конъюгированные с лигандом олигонуклеотиды очищали обращено-фазовой препаративной ВЭЖХ. Неконъюгированные олигонуклеотиды очищали анионообменной ВЭЖХ на колонке с гелем TSK, наполняемой в лаборатории, в которой проводили испытание. Буферы представляли собой 20 мМ фосфат натрия (pH 8,5) в 10% CH3CN (буфер A) и 20 мМ фосфат натрия (pH 8,5) в 10% CH3CN, 1M NaBr (буфер B). Фракции, содержащие полноразмерные олигонуклеотиды, объединяли, обессоливали и лиофилизировали. Приблизительно 0,15 OD обессоленные олигонуклеотиды разбавляли в воде до 150 мкл, а затем пипетировали в специальные флаконы для анализа CGE и LC/MS. Соединения в конечном итоге анализировали LC-ESMS и CGE.
6. Получение средства для РНКи
Для получения средства для РНКи эквимолярные количества смысловой и антисмысловой цепи нагревали в 1×PBS при 95°C в течение 5 минут и медленно охлаждали до комнатной температуры. Целостность дуплекса подтверждали анализом ВЭЖХ. В таблице 1 ниже представлены средства для РНКи, которые направлены на мРНК TTR человека или грызуна.
Пример 4: Скрининг in vitro средств для РНКи
Культура клеток и трансфекции
Клетки Hep3B человека или клетки H.II.4.E крысы (ATCC, Manassas, VA) выращивали почти до конфлюэнтного состояния при 37°C в атмосфере 5% CO2 в RPMI (ATCC) с добавлением 10% FBS, стрептомицина и глутамина (ATCC) перед отделением от планшета трипсинизацией. Трансфекцию проводили посредством добавления 14,8 мкл Opti-MEM плюс 0,2 мкл липофектамина RNAiMax на лунку (Invitrogen, Carlsbad CA. каталожный №13778-150) к 5 мкл дуплексов миРНК на лунку в 96-луночнойм планшете и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем к смеси миРНК добавляли 80 мкл полной среды для выращивания без антибиотика, содержащей ~2×104 клеток Hep3B. Перед очисткой РНК клетки инкубировали в течение 24 или 120 часов. Эксперименты с однократной дозой проводили при конечной концентрации дуплекса 10 нМ и 0,1 нМ и эксперименты эффекта дозы проводили с использованием 8, 4 кратных серийных разведении с максимальной дозой конечной концентрации дуплекса 10 нМ.
Выделение тотальной РНК с использованием набора для выделения мРНК DYNABEADS (Invitrogen, № партии: 610-12)
Клетки собирали и лизировали в 150 мкл лизирующего/связывающего буфера, затем перемешивали в течение 5 минут при 850 об/мин с использованием термомиксера Eppendorf (скорость смешивания являлась одинаковой в течение всего процесса). В круглодонный планшет добавляли десять микролитров магнитных гранул и 80 мкл смеси лизирующего/связывающего буфера и перемешивали в течение 1 минуты. Магнитные гранулы улавливали с использованием магнитного держателя и удаляли супернатант, не затрагивая гранулы. После удаления супернатанта лизированные клетки добавляли к оставшимся гранулам и перемешивали в течение 5 минут. После удаления супернатанта магнитные гранулы промывали 2 раза 150 мкл промывочного буфера A и перемешивали в течение 1 минуты. Снова улавливали гранулы и удаляли супернатант. Затем промывали гранулы 150 мкл промывочного буфера B, улавливали и удаляли супернатант. Затем промывали гранулы 150 мкл элюирующего буфера, улавливали и удаляли супернатант. Гранулы оставляли высыхать в течение 2 минут. После сушки добавляли 50 мкл элюирующего буфера и перемешивали в течение 5 минут при 70°C. Гранулы улавливали магнитом в течение 5 минут. Удаляли 40 мкл супернатанта и добавляли в другой 96-луночный планшет.
Синтез кДНК с использованием набора ABI High capacity cDNA reverse transcription (Applied Biosystems, Foster City, CA, каталожный №4368813)
К 5 мкл тотальной РНК добавляли основную смесь из 1 мкл 10X буфера, 0,4 мкл 25X dNTP, 1 мкл случайных праймеров, 0,5 мкл обратной транскриптазы, 0,5 мкл ингибитора РНКазы и 1,6 мкл H2O на реакцию. кДНК получали с использованием термального циклера Bio-Rad C-1000 или S-1000 (Hercules, CA) с использованием следующих этапов: 25°C 10 минут, 37°C 120 минут, 85°C 5 секунд, хранение при 4°C.
ПЦР в реальном времени
2 мкл кДНК добавляли к основной смеси, содержащей 0,5 мкл GAPDH TaqMan Probe (Applied Biosystems каталожный №4326317E (человека), каталожный №4308313 (грызуна)), 0,5 мкл TTR TaqMan probe (Applied Biosystems каталожный № HS00174914_m1 (человека), каталожный № Rn00562124_m1 (крысы)) и 5 мкл основной смеси Lightcycler 480 probe (Roche, каталожный №04887301001) на лунку в 384-луночный планшет (Roche, каталожный №04887301001). ПЦР в реальном времени проводили в устройстве для ПЦР в реальном времени Roche LC 480 (Roche). Каждый дуплекс тестировали по меньшей мере в двух независимых трансфекциях и оценивали каждую трансфекцию в двух повторениях, если не указано иное.
Для расчета относительной кратности изменения данные в реальном времени анализировали способом ΔΔCt и нормализовали на анализы, проводимые с клетками, трансфицированными 10 нМ AD-1955, или имитационно трансфицированными клетками. IC50 рассчитывали с использованием подобранной модели с 4 параметрами с использованием XLFit и нормализовали на клетки, трансфицированные AD-1955 (смысловая последовательность: cuuAcGcuGAGuAcuucGAdTsdT (SEQ ID NO: 2202), антисмысловая последовательность: UCGAAGuCUcAGCGuAAGdTsdT (SEQ ID NO: 2203)), или нативные клетки в аналогичном диапазоне доз, или на их наименьшую дозу. IC50 рассчитывали для каждой индивидуальной трансфекции, а также в комбинации, где отдельная IC50 совпадала с данным обеих трансфекции.
Результаты подавления гена иллюстративного дуплекса миРНК с различными модификациями мотива по изобретению представлены в таблице 1 выше.
Пример 5: Активность подавления in vitro химически модифицированных средств для РНКи, направленных на TTR
Следующие ниже эксперименты демонстрировали положительное действие химических модификаций, включая введение мотивов триплетных повторов совместно с лигандом GalNAc3, на подавление активности средств для РНКи, направленных на TTR. Последовательности исследуемых средств предоставлены в таблице 2 ниже. Области комплементарности к мРНК TTR представляют собой такие, как указано ниже: область комплементарности средств для РНКи AD-45165, AD-51546 и AD-51547 представляет собой GGATGGGATTTCATGTAACCAAGA (SEQ ID NO: 2204) и область комплементарности средств для РНКи AD-45163, AD-51544 и АО-51545 представляет собой TTCATGTAACCAAGAGTATTCCAT (SEQ ID NO: 2205).
Протокол оценки IC50 в клетках Hep3B
В клетках Hep3B (линия клеток гепатомы человека) определяли IC50 для каждой модифицированной миРНК посредством стандартной временной трансфекцией с использованием Lipofectamine RNAiMax. В кратком описании, временную трансфекцию проводили посредством добавления 5 мкл Opti-MEM к 5 мкл дуплекса миРНК на лунку в 96-луночный планшет наряду с 10 мкл Opti-MEM плюс 0,5 мкл Lipofectamine RNAiMax на лунку (Invitrogen, Carlsbad CA., каталожный №13778-150) и инкубации при комнатной температуре в течение 15-20 минут. Затем после инкубации в каждую лунку добавляли 100 мкл полной среды для выращивания без антибиотика, содержащей 12000-15000 клеток Hep3B. Перед лизисом и анализом мРНК TTR и GAPDH посредством анализа с рДНК (Quantigene) клетки инкубировали в течение 24 часов при 37°C в атмосфере 5% CO2. Для определения IC50 оценивали семь различных концентраций миРНК в диапазоне от 10 нМ до 0,6 пМ и TTR/GAPDH для трансфицированных миРНК клеток нормализовали на клетки, трансфицированные 10 нМ миРНК Luc. Результаты представлены в таблице 2.
Протокол оценки IC50 свободного поглощения
После инкубации с миРНК, направленными на TTR, в течение 4 часов или 24 часов оценивали подавление при свободном поглощении в первичных гепатоцитах яванского макака. Подавление измеряли на 24 час от начальной экспозиции. В кратком изложении, за 24 часа до начала эксперимента 96-луночные культуральный планшеты покрывали 0,05%-0,1% коллагеном (Sigma C3867-1VL) при комнатной температуре. На сутки анализа миРНК разбавляли в предварительно подогретой среде для высевания, состоящей из DMEM с добавлением набора поддерживающей среды GIBCO (не содержащего сыворотки, Life Technologies CM4000), и добавляли в 96-луночные культуральные планшеты покрытые коллагеном. Криоконсервированные первичные гепатоциты яванского макака быстро размораживали на водяной бане 37°C и сразу же разбавляли в среде для посева в концентрации 360000 клеток/мл. Объем клеточной суспензии аккуратно пипетировали на верхнюю часть предварительно нанесенной миРНК, таким образом, что конечное число клеток на лунку составляло 18000 клеток/лунку. Планшет слегка вращали для перемешивания и распространения клеток даже через лунки и помещали в инкубатор при 37°C, 5% CO2 в течение 24 часов до лизиса и анализа мРНК TTR и GAPDH посредством рДНК (Quantigene, Affymetrix). В случае инкубации в течение 4 часов с миРНК среду сливали через 4 часа экспонирования клеток и заменяли свежей средой для посева в течение оставшихся 20 часов инкубации. Анализ последующих процессов мРНК TTR и GAPDH являлся таким, как описано выше. Для характерной кривой доза-ответ миРНК титровали
от 1 мкМ до 0,24 нМ посредством 4 кратного серийного разведения.
Нуклеотиды строчными буквами (a, u, g, c) означают 2'-O-метилнуклеотиды; Nf (например, Af) означают 2'-фторнуклеотид; s означает фосфотиоратную связь; L96 означает лиганд GalNAc3; нуклеотиды жирным шрифтом означают изменения относительно соответствующего исходного средства. Каждый нуклеотид жирным шрифтом располагается в центре триплетного мотива.
Результаты представлены в таблице 2 и демонстрируют, что модифицированные средства для РНКи, направленные на TTR, обеспечивают повышенную активность подавления.
Результаты: Улучшенная активность модифицированных средств для РНКи
Исходные средства для РНКи с чередующимися химическими модификациями и лигандом GalNAc3 обеспечивали IC50 в клетках Hep3B приблизительно 0,01 нМ. Как показано на фигурах 4-5 и в таблице 2 средства, модифицированные относительно исходных средств, например, путем добавления одного или более повторяющихся триплетов 2'-фтор- и 2'-O-метилмодификаций, проявляли неожиданно повышенную активность подавления, достигая значений IC50 в клетках Hep3B, которые являлись в 5-8 раз лучше, чем соответствующее исходное средство.
Результаты: IC50 при свободном поглощении в клетках Hep3B
Как показано в таблице 2 и на фигурах 6-7, средства для РНКи, модифицированные относительно исходного AD-45163, также проявляли повышенное подавление при свободном поглощении. Модифицированные средства проявляли более чем вдвое большую активность подавления исходного соединения после периода инкубации 24 часа и приблизительно в 10 раз большую активность подавления исходного соединения после периода инкубации 4 часа.
Как показано в таблице 2 и на фигурах 8-9, средства для РНКи, модифицированные относительно исходного AD-45165, также проявляли повышенное подавление при свободном поглощении. Модифицированные средства проявляли в 2-3 раза большую активность подавления исходного средства после периода инкубации 24 часа и в 5-8 раз большую активность подавления исходного соединения после периода инкубации 4 часа.
В совокупности эти результаты демонстрируют, что модифицированные средства для РНКи, предоставленные в настоящем описании, например, AD-51544, AD-51545, АО-51546 и AD-51547, все проявляют неожиданно хорошее ингибирование мРНК TTR в экспериментах подавления in vitro.
Пример 6: Подавление РНК TTR и ингибирование белка TTR у трансгенных мышей
Для оценки эффективности средств для РНКи AD-45163, AD-51544, AD-51545, AD-45165, AD-51546 и AD-51547 эти средства вводили трансгенным мышам, которые экспрессировали транстиретин человека с мутацией V30M (см. Santos SD., Fernaande, R. and Saraiva M.J., (2010) Neurobiology of Aging, 31, 280-289). Известно, что мутация V30M вызывает семейную амилоидную полинейропатию I типа у людей. См., например, Lobato L., (2003) J. Nephrol., 16(3):438-42.
Средства для РНКи (в буфере PBS) или контроль PBS вводили мышам (2 самцам и 2 самкам) в возрасте 18-24 месяцев в однократной подкожной дозе 5 мг/кг или 1 мг/кг. Приблизительно через 48 часов мышей анестезировали 200 мкл кетамина, а затем выпускали кровь путем разреза правой хвостовой артерии. Выделяли цельную кровь и выделяли плазму и хранили при -80°C до анализа. Собирали ткань печени, быстро замораживали и хранили при -80°C до обработки.
Эффективность лечения оценивали (i) измерением мРНК TTR в печени через 48 часов после дозирования и (ii) измерением белка TTR в плазме до введения средства и через 48 часов после дозирования. Анализировали уровни мРНК TTR в печени с использованием анализов разветвленной ДНК - QuantiGene 2.0 (Panomics, каталожный №: QS0011). В кратком изложении, образцы печени мышей измельчали и получали лизаты ткани. Лизирующую смесь для печени (смесь из 1 объема лизирующей смеси, 2 объемов не содержащей нуклеазы воды и 10 мкл протеиназы-K/мл до конечной концентрации 20 мг/мл) инкубировали при 65°C в течение 35 минут. Затем в планшет для захвата добавляли 20 мкл набора рабочих зондов (зонд TTR для гена-мишени и GAPDH для эндогенного контроля) и 80 мкл лизата ткани. Планшеты для захвата инкубировали при 55°C ± 1°C (приблизительно 16-20 часов). На следующие сутки планшеты для захвата промывали 3 раза 1X промывочным буфером (не содержащая нуклеаз вода, компонент 1 буфера и компонент промывочного буфера 2), затем сушили центрифугированием в течение 1 минуты при 240 g. В планшет для захвата добавляли 100 мкл предварительно амплифицированных рабочих реагентов, который герметично закрывали алюминиевой фольгой и инкубировали в течение 1 часа при 55°C ± 1°C. После инкубации в течение 1 часа повторяли этап промывания, затем добавляли 100 мкл амплифицирующего рабочего реагента. Через 1 час повторяли этапы промывания и сушки и добавляли 100 мкл меченого зонда. Планшеты для захвата инкубировали при 50° ± 1°C в течение 1 часа. Затем планшет промывали 1X промывочным буфером, сушили и добавляли 100 мкл субстрата. Планшеты для захвата считывали с использованием люминометра SpectraMax после инкубации от 5 до 15 минут. Данные рДНК анализировали путем вычитания среднего фонового значения из каждого образца в трех повторениях, усредняя получаемые значения трех повторений GAPDH (контрольного зонда) и TTR (экспериментального зонда), а затем вычисляя отношение: (экспериментальный зонд - фоновое значение) / (контрольный зонд - фоновое значение).
Уровни TTR в плазме анализировали с использованием коммерчески доступного набора "AssayMax Human Prealbumin ELISA Kit" (AssayPro, St. Charles, MO, каталожный № EP3010-1) в соответствии с инструкциями производителя. В кратком изложении, плазму мышей разбавляли 1:10000 в 1X смеси разбавителей и добавляли к предварительно покрытым планшетам наряду с набором стандартов и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре с последующим 5X промываниями промывающим буфером из набора. В каждую лунку добавляли пятьдесят микролитров биотинилированного антитела против преальбумина и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с последующими 5X промываниями промывающим буфером. К каждой лунке добавляли пятьдесят микролитров конъюгата стрептавидин-пероксидаза и инкубировали планшеты в течение 30 минут при комнатной температуре с последующим промыванием, как описано ранее. Реакцию начинали добавлением 50 мкл/лунку субстрата хромогена и инкубацию в течение 10 минут при комнатной температуре, где реакцию останавливают добавлением 50 мкл/лунку останавливающего раствора. Оптическую плотность при 450 нм регистрировали на микропланшетном спектрофотометре Versamax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) и анализировали данные с использованием пакета программного обеспечения Softmax 4.6 (Molecular Devices).
Результаты представлены на фигурах 10-12. На фигуре 10 продемонстрировано, что средства для РНКи, модифицированные относительно исходного средства AD-45163 и AD-45165, проявляли активность подавления РНК, которая являлась аналогичной или более сильной по сравнению с активностью исходных соединений. На фигуре 11 продемонстрировано, что средства AD-51544 и AD-51545 проявляли дозозависимую активность подавления, и что активность подавления этих средств в дозе 5 мг/кг являлась сходной с активностью подавления соответствующего исходного AD-45163. На фигуре 12 продемонстрировано, что средства AD-51546 и AD-51547 также проявляли дозозависимую активность подавления. Кроме того, активность подавления AD-51546 и AD-51547 в дозе 5 мг/кг являлась сходной с активностью подавления соответствующего исходного AD-45165.
Пример 7: Фармакокинетические профили средств для РНКи, направленных на TTR, в сыворотке и печени у мыши
Для оценки фармакокинетических профилей средств для РНКи AD-45163, AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547 эти средства в буфере PBS вводили мышам C57BL/6 с использованием однократного болюсного в/в или подкожного (п/к) введения. Концентрации средств в плазме и концентрации в печени оценивали в различные временные точки после введения.
Фармакокинетические параметры в плазме представлены в таблицах 3 и 4 ниже. Среднее время удержания препарата (MRT) в плазме составляло приблизительно 0,2 часа после дозирования в/в и приблизительно 1 час после дозирования п/к. В дозе 25 мг/кг средства AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547 обладали сходными фармакокинетическими свойствами в плазме. Каждое из этих средств обладало более 75% биодоступностью из подкожного пространства. Их биодоступность превосходила биодоступность исходного средства АО-45163, которое вводили в более высокой дозе 30 мг/кг. Биодоступность при подкожном введении AD-51544 и AD-51547 составляла приблизительно 100%, тогда как AD-51545 составляла 90%, и биодоступность AD-51546 составляла 76%.
Результаты также свидетельствовали, что средства для РНКи AD-45163, AD-51544, AD-51545, АО-51546 и AD-51547 обеспечивали аналогичные или более высокие концентрации в печени при подкожном введении по сравнению с введением посредством в/в болюса. Фармакокинетические параметры для печени представлены в таблицах 5 и 6 ниже. Пиковая концентрация (Cmax) и площадь под кривой (AUC0-последний) в печени являлись в два-три раза выше после подкожного введения по сравнению с в/в введением аналогичного средства в аналогичной дозе. Концентрации в печени являлись наиболее высокими для AD-51547 и самыми низкими для AD-51545. Среднее время удержания (MRT) и период полувыведения являлось больше для AD-51546 и AD-51547 по сравнению с АО-51544 и AD-51545. После подкожного введения приблизительные величины MRT составляли 40 часов для AD-51546 и 25 часов для AD-51547, тогда как MRT для AD-51544 и AD-51545 являлись меньше (приблизительно 6-9 часов). Период полувыведения AD-51546 и AD-51547 также являлся более высоким (41-53 часов), чем являлся период полувыведения AD-51544 и AD-51545 (6-10 часов).
Пример 8: Стабильность in vitro средств для РНКи в сыворотке обезьяны
Также оценивали стабильность средств для РНКи AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547 в сыворотке у обезьян. Результаты демонстрировали, что антисмысловые и смысловые цепи AD-51544, AD-51545 и AD-51547 обладают стабильностью в сыворотке в течение периода времени приблизительно 24 часа (данные не показаны).
Пример 9: Средства для РНКи обеспечивают длительное подавление белка TTR у не являющихся человеком приматов
Активность подавления РНК средствами для РНКи AD-45163, AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547 оценивали измерением подавления белка TTR в сыворотке яванских макак после подкожного введения пяти доз 5 мг/кг (одну дозу каждые сутки в течение 5 суток) или однократную дозу 25 мг/кг. Pre-dose Уровни белка TTR перед дозированием в сыворотке оценивали путем усреднения уровней за 11 суток перед первой дозой, за 7 суток перед первой дозой и 1 сутки перед первой дозой. Уровни белка TTR в сыворотке после дозирования оценивали путем определения уровня в сыворотке, начиная на 1 сутки после последней дозы (т.е. на 5 сутки исследования в группе 5×5 мг/кг и 1 сутки исследования в группе 1×25 мг/кг) до 49 суток после последней дозы (т.е. на 53 сутки исследования в группе 5×5 мг/кг и на 49 сутки в группе 1×25 мг/кг). См. фигуру 13.
Уровни белка TTR оценивали, как описано в пример 6. Результаты представлены на фигуре 14 и в таблицах 7 и 8.
Максимальное подавление белка TTR приблизительно до 50% получали в группе, которые получали 25 мг/кг AD-45163, AD-51544, AD-51546 и AD-51547 (см. таблицу 8). Наивысшее подавление белка TTR приблизительно 70% получали в группах, которые получали 5×5 мг/кг AD-45163, AD-51544, AD-51546 и AD-51547 (см. таблицу 7). Средство AD-51545 обеспечивало меньшую степень подавления в обоих протоколах введения. Значительное подавление приблизительно 20% или более сохранялось до 49 суток после последней дозы AD-51546 и AD-51547 в обоих протоколах 1×25 мг/кг и 5×5 мг/кг. Как правило, лучшее подавление получали в протоколе 5×5 мг/кг по сравнению с протоколом 1×25 мг/кг.
Пример 10: Переносимость средств РНКи, направленных на TTR
Оценка цитокинов в анализе цельной крови
Для оценки переносимости средств для РНКи, направленных на TTR, (включая AD-45163, AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547) каждое средство тестировали в анализе цельной крови с использованием крови от трех доноров, являющихся человеком. Средства представляли собой 300 нМ трансфицируемый DOTAP или 1 мкМ реагент без трансфекции (свободная миРНК). Наблюдали менее чем двукратное изменение для следующих ниже цитокинов/хемокинов: G-CSF, IFN-γ, IL-10, IL-12 (p70), IL1β, IL-1ra, IL-6, IL-8, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, TNFα. (Результаты не показаны).
Оценка in vivo
Для оценки переносимости in vivo средства для РНКи инъецировали подкожно мышам CD1 в дозе 125 мг/кг. Не наблюдали индукции цитокинов через 2, 4, 6, 24 или 48 часов после подкожной инъекции AD-45163. Не наблюдали значительной индукции цитокинов через 6 или 24 часа после подкожной инъекции AD-51544, AD-51545, AD-51546 или AD-51547.
Для полной оценки переносимости in vivo тестировали ряд средств для РНКи (включая AD-45163, AD-51544, AD-51545, AD-51546 и AD-51547) посредством подкожной инъекции 5 и 25 мг не являющимся человеком приматам (яванским макакам) с объемами дозы 1-2 мл на участок. Не наблюдали эритему или отек на участках инъекции.
Исследование переносимости однократной п/к дозы у крыс
Для оценки токсичности крыс инъецировали однократной подкожной дозой 100, 250, 500 или 750 мг/кг AD-45163 (см. таблицу 9). Проводили следующие ниже оценки: клинические признаки токсичности, массы тела, общий анализ крови, клинической биохимии и свертывания, массы органов (печени и селезенки), макроскопическую и микроскопическую оценку (почки, печени, легкого, лимфоузла, селезенки, семенников, тимуса, аорты, сердца, кишечника (тонкого и толстого).
Результаты демонстрируют отсутствие связанных с тестируемым препаратом клинических признаков токсичности, эффектов на массу тела, массу органов или клиническую биохимию. Не наблюдали гистопатологию сердца, почек, семенников, селезенки, печени, и тимуса. Наблюдали не являющееся неблагоприятным незначительное связанное с тестируемым препаратом повышение WBC (↑ 68%, преимущественно относящееся к повышению NEUT и MONO) при 750 мг/кг. Эти результаты свидетельствуют о том, что однократная доза до 750 мг/кг является хорошо переносимой крысами.
Переносимость повторных подкожных введений у крыс
Для оценки переносимости повторных подкожных введений AD-45163 проводили ежесуточные подкожные инъекции 300 мг/кг в течение 5 суток и на 6 сутки проводили вскрытие. План исследования представлен в таблице 10.
Оценивали следующие ниже выходные параметры: клинические признаки, массы тела, гематологию, клиническую биохимию и свертывание, массы органа, макроскопическую и микроскопическую оценку (печени, селезенки, почки, сердца, желудочно-кишечного тракта и первого и последнего участка инъекции). Результаты демонстрировали отсутствие связанных с тестируемым препаратом клинических признаков, эффектов на массу тела или массу органов, а также отсутствие связанных с тестируемым препаратом данных клинической гематологии или биохимии. Существовало возможное незначительное увеличение активированного частичного тромбопластинового времени (APTT) на сутки 6 (20,4 в сравнении с 17,4 секундами). Гистопатология не выявляла связанных с тестируемым препаратом данных в печени, селезенке, сердце и желудочно-кишечном тракте. В почке наблюдали от минимальной до незначительной гипертрофию канальцевого эпителия (не относящуюся к неблагоприятной). На последнем участке наблюдали минимальный многоочаговый мононуклеарный инфильтрат, не относящийся к неблагоприятным. Эти результаты свидетельствуют о том, что пять ежесуточных доз 300 мг/кг исходного средства для РНКи AD-45163 являются хорошо переносимыми у крыс.
Пример 11: Средства РНКи обеспечивают длительное подавление белка TTR у не являющихся человеком приматов
Активность подавления РНК средства для РНКи AD-51547 оценивали посредством измерения подавления белка TTR в сыворотке яванских макак после подкожного введения "интенсивной фазы" средства для РНКи: пять суточных доз 2,5 мг/кг, 5 мг/кг или 10 мг/кг (одна доза каждые сутки в течение 5 суток) с последующей "поддерживающей фазой" средства для РНКи: еженедельное дозирование 2,5 мг/кг, 5 мг/кг или 10 мг/кг в течение 4 недель. Уровни белка TTR перед дозированием в сыворотке оценивали путем усреднения уровней за 11 суток до первой дозы, 7 суток до первой дозы и 1 сутки до первой дозы. Уровни белка TTR в сыворотке после дозирования оценивали посредством определения уровня в сыворотке относительно периода пред дозированием, начиная на 1 сутки после интенсивной фазы, завершали на 40 суток после последней дозы поддерживающей фазы (т.е. 70 сутки исследования).
Уровни белка TTR оценивали, как описано в пример 6. Результаты приведены на фигуре 15.
Максимальное подавление белка TTR приблизительно до 80% получали во всех группах, которые получали 2,5 мг/кг, 5 мг/кг или 10 мг/кг AD-51547. Самый низкий уровень нокдауна получали во всех группах приблизительно на сутки 14, подавление сохранялось на уровнях самого низкого нокдауна при еженедельной поддерживающей дозе 2,5 мг/кг, 5 мг/кг или 10 мг/кг AD-51547. Уровни TTR не возвращались к исходному уровню более 40 суток после суток введения последней поддерживающей дозы при уровнях дозирования 5 и 2,5 мг/кг.
Эквиваленты
Специалистам в данной области будет понятно, или они могут устанавливать использованием только общепринятого экспериментирования многие эквиваленты конкретных вариантов осуществления и способов, описываемых в настоящем описании. Предполагают, что такие эквиваленты входят в объем следующей ниже формулы изобретения.
Claims (58)
1. Двухцепочечное средство для РНКи для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), содержащее смысловую цепь, комплементарную антисмысловой цепи, где указанная антисмысловая цепь содержит последовательность, комплементарный нуклеотидам 504-526 гена транстиретина (TTR) (SEQ ID NO:1), где смысловая цепь имеет длину 21 нуклеотид, а антисмысловая цепь имеет длину 23 нуклеотида, где указанное двухцепочечное средство для РНКи представлено формулой (IIIа):
где:
j = 1; и l означают 0 или 1;
p' = 2; p, q и q' обозначают 0;
каждый Na и Na' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 2-10 нуклеотидов, которые являются модифицированными нуклеотидами;
каждый Nb и Nb' независимо представляет собой олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-7 нуклеотидов, которые являются модифицированными нуклеотидами;
np' представляет собой выступающий нуклеотид;
YYY, ZZZ, Y'Y'Y' и Z’Z’Z’, каждый независимо, представляет собой один мотив из трех идентичных модификаций в трех последовательных нуклеотидах, причем нуклеотиды Y включают модификацию 2’-фтор, нуклеотиды Y’ включают модификацию 2’-O-метил, и нуклеотиды Z включают модификацию 2’-O-метил;
и
где смысловая цепь конъюгирована по меньшей мере с одним лигандом, причем лиганд представляет собой одно или более производных GalNAc, присоединенных через двухвалентный или трехвалентный разветвленный линкер.
2. Средство для РНКи по п.1, где мотив YYY находится в участке расщепления смысловой цепи или около него,
где мотив Y'Y'Y' находится в положениях 11, 12 и 13 антисмысловой цепи от 5'-конца.
3. Средство для РНКи по п.1, где модификации в нуклеотидах Na, Na’, Nb и Nb’ независимо выбраны из группы, состоящей из LNA, HNA, CeNA, 2'-метоксиэтила, 2'-O-алкила, 2'-O-аллила, 2'-C-аллила, 2'-фтора, 2'-дезокси, 2'-гидроксила и их комбинаций.
4. Средство для РНКи по п.3, где модификации в нуклеотидах Na, Na’, Nb и Nb’ представляют собой 2'-O-метил, 2'-фтор или обе.
5. Средство для РНКи по п.1, где лиганд представляет собой
6. Средство для РНКи по п.1, где лиганд присоединен к 3'-концу смысловой цепи.
7. Средство для РНКи по п.6, где средство для РНКи конъюгировано с лигандом, как показано на следующей ниже схеме
где X представляет собой О или S.
8. Средство для РНКи по п.7, где средство для РНКи конъюгировано с лигандом, как показано на следующей ниже схеме
9. Средство для РНКи по п.1, дополнительно содержащее по меньшей мере одну тиофосфатную или метилфосфонатную межнуклеотидную связь.
10. Средство для РНКи по п.9, где тиофосфатная или метилфосфонатная межнуклеотидная связь находится на 3'-конце одной цепи.
11. Средство для РНКи по п.10, где указанная цепь представляет собой антисмысловую цепь.
12. Средство для РНКи по п.1, где пара оснований в 1 положении 5'-конца антисмысловой цепи дуплекса представляет собой пару оснований AU.
13. Средство для РНКи по п.1, где выступающие нуклеотиды p' являются комплементарными мРНК-мишени.
14. Средство для РНКи по п.1, где по меньшей мере один np' связан с соседним нуклеотидом тиофосфатной связью.
15. Средство для РНКи по п.14, где все np' связаны с ближайшими нуклеотидами тиофосфатной связью.
16. Средство для РНКи по п.1, в котором смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-UGGGAUUUCAUGUAACCAAGA-3’ (SEQ ID NO:2211), и антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-UCUUGGUUACAUGAAAUCCCAUC-3’ (SEQ ID NO:2217) .
17. Средство для РНКи по п.1, в котором смысловая цепь состоит из нуклеотидной последовательности 5’-UfgGfgAfuUfuCfAfUfgUfaacCfaAfgAfL96-3’ (SEQ ID NO:2), и антисмысловая цепь состоит из нуклеотидной последовательности 5’-uCfuUfgGfUfUfaCfaugAfaAfuCfcCfasUfsc-3’ (SEQ ID NO:3),
где a, g, c и u обозначают 2’—О-метил (2’-OMe) A, G, C и U; Af, Gf, Cf и Uf обозначают 2’-фтор A, G, C и U; s обозначает фосфоротиоатную связь; и L96 обозначает лиганд GalNAc3.
18. Средство для РНКи по п.1, в котором смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-UGGGAUUUCAUGUAACCAAGA-3’ (SEQ ID NO:2211).
19. Средство для РНКи по п.1, в котором смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-UfgGfgAfuUfuCfAfUfgUfaacCfaAfgAfL96-3’ (SEQ ID NO:2), и антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-uCfuUfgGfUfUfaCfaugAfaAfuCfcCfasUfsc-3’ (SEQ ID NO:3),
где a, g, c и u обозначают 2’—О-метил (2’-OMe) A, G, C и U; Af, Gf, Cf и Uf обозначают 2’-фтор A, G, C и U; s обозначает фосфоротиоатную связь; и L96 обозначает лиганд GalNAc3.
20. Средство для РНКи для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), включающее смысловую цепь и антисмысловую цепь, в котором смысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-UfgGfgAfuUfuCfAfUfgUfaacCfaAfgAfL96-3’ (SEQ ID NO:2), и антисмысловая цепь содержит нуклеотидную последовательность 5’-uCfuUfgGfUfUfaCfaugAfaAfuCfcCfasUfsc-3’ (SEQ ID NO:3),
где a, g, c и u обозначают 2’—О-метил (2’-OMe) A, G, C и U; Af, Gf, Cf и Uf обозначают 2’-фтор A, G, C и U; s обозначает фосфоротиоатную связь; и L96 обозначает лиганд GalNAc3.
21. Фармацевтическая композиция для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), содержащая эффективное количество средства для РНКи по любому из пп. 1-20.
22. Фармацевтическая композиция по п.21, где средство для РНКи вводят в незабуференном растворе.
23. Фармацевтическая композиция по п.22, где указанный незабуференный раствор представляет собой физиологический раствор или воду.
24. Фармацевтическая композиция по п.21, где указанное средство для РНКи вводят с буферным раствором.
25. Фармацевтическая композиция по п.24, где указанный буферный раствор содержит ацетат, цитрат, проламин, карбонат или фосфат, или любую их комбинацию.
26. Фармацевтическая композиция по п.25, где указанный буферный раствор представляет собой фосфатно-солевой буфер (PBS).
27. Способ ингибирования экспрессии транстиретина (TTR) в клетке, включающий приведение указанной клетки в контакт со средством для РНКи по любому из пп. 1-20 или фармацевтической композицией по любому из пп. 21-26 в количестве, эффективном для ингибирования экспрессии указанного TTR в указанной клетке, таким образом, ингибируя экспрессию указанного транстиретина (TTR) в указанной клетке.
28. Способ лечения ассоциированного с TTR заболевания у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму терапевтически эффективного количества средства для РНКи по любому из пп. 1-20 или фармацевтической композиции по любому из пп. 21-26, таким образом, проводя лечение или профилактику указанного ассоциированного с TTR заболевания у указанного индивидуума.
29. Способ по п.28, в котором указанный индивидуум представляет собой человека.
30. Способ по п.28, в котором указанный индивидуум несет мутацию гена TTR, которая ассоциирована с развитием ассоциированного с TTR заболевания.
31. Способ по п.28, в котором указанное ассоциированное с TTR заболевание выбрано из группы, состоящей из старческого системного амилоидоза (SSA), системного семейного амилоидоза, семейной амилоидотической полинейропатии (FAP), семейной амилоидотической кардиомиопатии (FAC), лептоменингеального/ амилоидоза центральной нервной системы (ЦНС) и гипертироксинемии.
32. Способ по п.28, в котором указанный индивидуум страдает ассоциированным с TTR амилоидозом, и указанный способ снижает отложение амилоидного TTR у указанного индивидуума.
33. Способ по п.28, в котором указанное средство для РНКи вводят индивидууму подкожно.
34. Набор для проведения способа по п.27, содержащий:
a) указанное средство для РНКи по любому из пп. 1-20 или фармацевтическую композицию по любому из пп. 21-26, и
b) инструкции по применению.
35. Набор для поведения способа по п.28, содержащий:
a) указанное средство для РНКи по любому из пп. 1-20 или фармацевтическую композицию по любому из пп. 21-26,
b) инструкции по применению и
c) необязательно средство для введения указанного средства для РНКи указанному индивидууму.
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161561710P | 2011-11-18 | 2011-11-18 | |
US61/561,710 | 2011-11-18 | ||
US201261615618P | 2012-03-26 | 2012-03-26 | |
US61/615,618 | 2012-03-26 | ||
US201261680098P | 2012-08-06 | 2012-08-06 | |
US61/680,098 | 2012-08-06 | ||
PCT/US2012/065691 WO2013075035A1 (en) | 2011-11-18 | 2012-11-16 | Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019101617A Division RU2804776C2 (ru) | 2011-11-18 | 2012-11-16 | СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТРАНСТИРЕТИНОМ (TTR) |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014124683A RU2014124683A (ru) | 2015-12-27 |
RU2678807C2 true RU2678807C2 (ru) | 2019-02-01 |
Family
ID=48430225
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014124683A RU2678807C2 (ru) | 2011-11-18 | 2012-11-16 | СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТРАНСТИРЕТИНОМ (TTR) |
Country Status (37)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US9399775B2 (ru) |
EP (4) | EP3730618A1 (ru) |
JP (4) | JP6165158B2 (ru) |
KR (4) | KR102385013B1 (ru) |
CN (2) | CN108186667B (ru) |
AR (1) | AR088911A1 (ru) |
AU (4) | AU2012340159B2 (ru) |
BR (1) | BR112014011896B1 (ru) |
CA (1) | CA2856243A1 (ru) |
CL (3) | CL2014001291A1 (ru) |
CO (1) | CO7020872A2 (ru) |
CR (1) | CR20140232A (ru) |
CY (1) | CY1123693T1 (ru) |
DK (1) | DK3301177T3 (ru) |
DO (1) | DOP2014000107A (ru) |
EC (1) | ECSP14005606A (ru) |
ES (1) | ES2800065T3 (ru) |
GT (1) | GT201400097A (ru) |
HK (2) | HK1200171A1 (ru) |
HR (1) | HRP20200672T1 (ru) |
HU (1) | HUE048622T2 (ru) |
IL (6) | IL308752A (ru) |
IN (1) | IN2014CN03463A (ru) |
LT (1) | LT3301177T (ru) |
MX (2) | MX348575B (ru) |
MY (1) | MY167390A (ru) |
NI (1) | NI201400046A (ru) |
PE (1) | PE20142362A1 (ru) |
PH (1) | PH12014501106A1 (ru) |
PL (1) | PL3301177T3 (ru) |
PT (1) | PT3301177T (ru) |
RS (1) | RS60414B1 (ru) |
RU (1) | RU2678807C2 (ru) |
SG (2) | SG10201912170WA (ru) |
SI (1) | SI3301177T1 (ru) |
UA (1) | UA118649C2 (ru) |
WO (1) | WO2013075035A1 (ru) |
Families Citing this family (187)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9879266B2 (en) | 2002-11-14 | 2018-01-30 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US9228186B2 (en) | 2002-11-14 | 2016-01-05 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US20050244869A1 (en) * | 2004-04-05 | 2005-11-03 | Brown-Driver Vickie L | Modulation of transthyretin expression |
PT2563920T (pt) | 2010-04-29 | 2017-05-26 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulação da expressão de transtirretina |
DK2751270T3 (en) | 2011-08-29 | 2018-10-29 | Ionis Pharmaceuticals Inc | OLIGOMER-CONJUGATE COMPLEXES AND THEIR USE |
DK3301177T3 (da) * | 2011-11-18 | 2020-06-15 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Rnai-midler, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf til behandling af transthyretin (ttr)-forbundne sygdomme |
DK3366775T3 (da) * | 2011-11-18 | 2022-08-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Modificerede rnai-midler |
US10086081B2 (en) * | 2012-08-06 | 2018-10-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugated RNA agents and process for their preparation |
BR112015013105B1 (pt) | 2012-12-05 | 2022-02-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc | Agente de rnai de fita dupla capaz de inibir a expressão de pcsk9, seus usos, composição farmacêutica e método de inibição da expressão de pcsk9 em uma célula in vitro |
EA201591707A1 (ru) * | 2013-03-14 | 2016-03-31 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | КОМПОЗИЦИИ иРНК КОМПОНЕНТА КОМПЛЕМЕНТА C5 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
EP2992098B1 (en) | 2013-05-01 | 2019-03-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression |
EP3019200B1 (en) * | 2013-07-11 | 2022-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide-ligand conjugates and process for their preparation |
WO2015042564A1 (en) | 2013-09-23 | 2015-03-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating or preventing transthyretin (ttr) associated diseases |
EP3052626A1 (en) | 2013-10-02 | 2016-08-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
EP3060664B1 (en) * | 2013-10-25 | 2021-07-07 | Sanofi | Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity |
US10150965B2 (en) | 2013-12-06 | 2018-12-11 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA |
WO2015089368A2 (en) * | 2013-12-12 | 2015-06-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component irna compositions and methods of use thereof |
RS61892B1 (sr) | 2013-12-27 | 2021-06-30 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Postupci i kompozicije za specifičnu inhibiciju glikolat oksidaze (hao1) pomoću dvolančane rnk |
JP6594902B2 (ja) * | 2014-02-11 | 2019-10-23 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | ケトヘキソキナーゼ(KHK)iRNA組成物及びその使用方法 |
US9856475B2 (en) | 2014-03-25 | 2018-01-02 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Formulations for treating amyloidosis |
JP6771387B2 (ja) * | 2014-03-25 | 2020-10-21 | アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドArcturus Therapeutics,Inc. | 遺伝子サイレンシング用トランスサイレチン対立遺伝子選択的unaオリゴマー |
AU2015236215B2 (en) | 2014-03-25 | 2020-03-19 | Arcturus Therapeutics, Inc. | UNA oligomers having reduced off-target effects in gene silencing |
DK3137476T3 (da) | 2014-04-28 | 2019-11-18 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Linker-modificerede oligomerforbindelser |
DK3137091T3 (da) | 2014-05-01 | 2021-01-25 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Konjugater af modificerede antisense-oligonukleotider og anvendelse deraf til modulation af pkk-ekspression |
BR122020024443B1 (pt) | 2014-05-01 | 2022-02-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Composto e composição farmacêutica para modulação da expressão de angptl3 |
KR102369736B1 (ko) | 2014-05-01 | 2022-03-02 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 보체 인자 b 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법 |
JP6667453B2 (ja) | 2014-05-01 | 2020-03-18 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 成長ホルモン受容体発現を調節するための組成物及び方法 |
WO2015179693A1 (en) | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
AU2015264038B2 (en) * | 2014-05-22 | 2021-02-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiotensinogen (AGT) iRNA compositions and methods of use thereof |
EP3812462A1 (en) | 2014-08-20 | 2021-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified double-stranded rna agents |
KR102631505B1 (ko) | 2014-08-29 | 2024-02-01 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 트랜스타이레틴(ttr) 매개 아밀로이드증의 치료 방법 |
US10046064B2 (en) | 2014-09-07 | 2018-08-14 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuating exon skipping anti-viral transfer vector immune responses |
BR112017004056A2 (pt) | 2014-09-12 | 2017-12-05 | Biogen Ma Inc | composições e métodos para detecção da proteína smn em um indivíduo e tratamento de um indivíduo |
JOP20200115A1 (ar) | 2014-10-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات)) |
JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
JP2017535552A (ja) | 2014-11-17 | 2017-11-30 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | アポリポタンパク質C3(APOC3)iRNA組成物およびその使用方法 |
JP7105065B2 (ja) | 2014-12-15 | 2022-07-22 | ダイセルナ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | リガンド修飾二本鎖核酸 |
RU2711506C2 (ru) | 2014-12-17 | 2020-01-17 | ПРОКЬЮЭР ТЕРАПЬЮТИКС II Би.Ви. | Редактирование целевой рнк |
JP2018504380A (ja) * | 2014-12-18 | 2018-02-15 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | Reversir(商標)化合物 |
AU2016219263B2 (en) | 2015-02-13 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (PNPLA3) iRNA compositions and methods of use thereof |
MX2017011422A (es) | 2015-03-17 | 2017-11-10 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para inhibir la expresion del gen del factor xii. |
US10519447B2 (en) | 2015-04-01 | 2019-12-31 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Therapeutic UNA oligomers and uses thereof |
WO2016164746A1 (en) | 2015-04-08 | 2016-10-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
WO2016201301A1 (en) * | 2015-06-12 | 2016-12-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof |
JP6715325B2 (ja) * | 2015-06-26 | 2020-07-01 | スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッドSuzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | siRNA、siRNAを含む医薬組成物及び結合体、並びにそれらの応用 |
WO2017011286A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (igfals) and insulin-like growth factor 1 (igf-1) irna compositions and methods of use thereof |
MY192997A (en) | 2015-07-10 | 2022-09-20 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2) |
WO2017015671A1 (en) | 2015-07-23 | 2017-01-26 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Compositions for treating amyloidosis |
EP3328439B1 (en) | 2015-07-31 | 2020-04-08 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Multiligand agent for drug delivery |
JP6896703B2 (ja) * | 2015-07-31 | 2021-06-30 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | TTR関連疾患を治療または予防するためのトランスサイレチン(TTR)iRNA組成物およびその使用方法 |
CA2991639A1 (en) | 2015-08-07 | 2017-02-16 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Rnai therapy for hepatitis b virus infection |
IL293355B2 (en) | 2015-08-25 | 2024-07-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Methods and preparations for the treatment of a disorder related to the PCSK9 gene |
KR20180051550A (ko) | 2015-09-02 | 2018-05-16 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 프로그램된 세포사 1 리간드 1 (PD-L1) iRNA 조성물 및 그의 사용 방법 |
SG10201913209WA (en) | 2015-09-24 | 2020-02-27 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulators of kras expression |
JOP20210043A1 (ar) * | 2015-10-01 | 2017-06-16 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa |
BR122023026882A2 (pt) | 2015-11-06 | 2024-01-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Uso de um composto oligomérico |
WO2017079745A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds for use in therapy |
JP2018536689A (ja) | 2015-12-10 | 2018-12-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | ステロール調節エレメント結合タンパク質(SREBP)シャペロン(SCAP)iRNA組成物およびその使用方法 |
KR20180103166A (ko) | 2016-01-29 | 2018-09-18 | 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 | 핵산 복합체 |
MA45478A (fr) * | 2016-04-11 | 2019-02-20 | Arbutus Biopharma Corp | Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés |
AU2017281497B2 (en) | 2016-06-22 | 2023-04-06 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Single-stranded RNA-editing oligonucleotides |
WO2018003739A1 (ja) * | 2016-06-30 | 2018-01-04 | レナセラピューティクス株式会社 | 機能的リガンドを含む核酸複合体 |
CN109415401B (zh) | 2016-06-30 | 2023-02-03 | 协和麒麟株式会社 | 核酸复合物 |
SG11201900238UA (en) | 2016-07-15 | 2019-02-27 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compounds and methods for modulation of smn2 |
JOP20170161A1 (ar) | 2016-08-04 | 2019-01-30 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب |
WO2018067900A1 (en) | 2016-10-06 | 2018-04-12 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Method of conjugating oligomeric compounds |
JOP20170192A1 (ar) | 2016-12-01 | 2019-01-30 | Takeda Pharmaceuticals Co | داي نوكليوتيد حلقي |
KR20230166146A (ko) * | 2016-12-16 | 2023-12-06 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 트랜스티레틴(TTR) iRNA 조성물을 사용하여 TTR-관련 질병을 치료하거나 예방하는 방법 |
US11274300B2 (en) | 2017-01-19 | 2022-03-15 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Oligonucleotide complexes for use in RNA editing |
EP3589751A4 (en) | 2017-03-03 | 2021-11-17 | The Regents of The University of California | RNA TARGETING OF MUTATIONS VIA SUPPRESSOR RNA AND DEAMINASES |
JOP20190215A1 (ar) | 2017-03-24 | 2019-09-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9 |
DK3607069T3 (da) * | 2017-04-05 | 2022-11-21 | Silence Therapeutics Gmbh | Produkter og sammensætninger |
CN118460536A (zh) | 2017-04-11 | 2024-08-09 | 阿布特斯生物制药公司 | 靶向组合物 |
US11324820B2 (en) | 2017-04-18 | 2022-05-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection |
WO2019014491A1 (en) | 2017-07-13 | 2019-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | METHODS OF INHIBITING GENE EXPRESSION OF HAO1 (HYDROXYACID OXIDASE 1 (GLYCOLATE OXIDASE)) |
WO2019027015A1 (ja) * | 2017-08-02 | 2019-02-07 | 協和発酵キリン株式会社 | 核酸複合体 |
WO2019027009A1 (ja) * | 2017-08-02 | 2019-02-07 | 協和発酵キリン株式会社 | 核酸複合体 |
JP2019043857A (ja) * | 2017-08-30 | 2019-03-22 | 花王株式会社 | ApoA1又はTTR産生促進剤 |
US11471477B2 (en) | 2017-09-18 | 2022-10-18 | Chan Zuckerberg Biohub, Inc. | Methods for treating triple-negative breast cancer |
AU2018336806A1 (en) | 2017-09-19 | 2020-05-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating transthyretin (TTR) mediated amyloidosis |
WO2019067872A1 (en) | 2017-09-29 | 2019-04-04 | Intellia Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR EDITING THE TTR GENE AND TREATING AMYLOID DOSE ATTR |
BR112020007157A2 (pt) | 2017-10-13 | 2020-09-24 | Selecta Biosciences, Inc. | métodos e composições para a atenuação de respostas de igm antivetor de transferência viral |
US20200385719A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-12-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof |
US20200308588A1 (en) | 2017-12-18 | 2020-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | High mobility group box-1 (hmgb1) irna compositions and methods of use thereof |
MX2020007369A (es) | 2018-01-15 | 2020-10-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Moduladores de la expresion de dnm2. |
AU2019218987A1 (en) | 2018-02-12 | 2020-07-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modified compounds and uses thereof |
BR112020018715A2 (pt) * | 2018-03-12 | 2021-01-05 | Corino Therapeutics, Inc. | Terapia de combinação para amiloidose associada a ttr |
WO2019181946A1 (ja) | 2018-03-19 | 2019-09-26 | 国立大学法人東京医科歯科大学 | 毒性が軽減した核酸 |
MX2020011913A (es) | 2018-05-09 | 2021-01-29 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos y metodos para la reduccion de la expresion de fxi. |
FI3794122T3 (fi) | 2018-05-14 | 2023-11-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Angiotensinogeenin (AGT) IRNA-koostumuksia ja niiden käyttömenetelmä |
WO2020033748A1 (en) | 2018-08-08 | 2020-02-13 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Compositions and agents against nonalcoholic steatohepatitis |
MX2021001056A (es) | 2018-08-13 | 2021-04-12 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de agente de acido ribonucleico bicatenario (arnbc) de virus de la hepatitis b (vhb) y metodos de uso de las mismas. |
WO2020060986A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
TW202023573A (zh) | 2018-09-19 | 2020-07-01 | 美商Ionis製藥公司 | Pnpla3表現之調節劑 |
CA3114396A1 (en) * | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing ttr-associated ocular diseases |
WO2020111280A1 (ja) | 2018-11-30 | 2020-06-04 | 協和キリン株式会社 | 核酸複合体 |
GB201821269D0 (en) | 2018-12-28 | 2019-02-13 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Myostatin signal inhibitor |
CN111377985B (zh) * | 2018-12-29 | 2023-11-10 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 化合物和缀合物及其制备方法和用途 |
JP2022534741A (ja) | 2019-05-28 | 2022-08-03 | セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド | 減弱化された抗ウイルス導入ベクター免疫応答のための方法および組成物 |
US20220267778A1 (en) | 2019-07-30 | 2022-08-25 | Shionogi & Co., Ltd. | Nucleic acid drug targeting murf1 |
WO2021022108A2 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
WO2021022109A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SERPIN FAMILY F MEMBER 2 (SERPINF2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
EP4013870A1 (en) | 2019-08-13 | 2022-06-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Small ribosomal protein subunit 25 (rps25) irna agent compositions and methods of use thereof |
CN114555621A (zh) | 2019-08-15 | 2022-05-27 | Ionis制药公司 | 键修饰的寡聚化合物及其用途 |
EP4022062A1 (en) | 2019-08-30 | 2022-07-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Neurofilament light chain (nfl) as a biomarker for transthyretin amyloidosis polyneuropathy |
WO2021072330A1 (en) | 2019-10-09 | 2021-04-15 | Silverback Therapeutics, Inc. | Galnac-tgfbr1 inhibitor conjugates for the treatment of liver diseases |
EP4045062A1 (en) | 2019-10-14 | 2022-08-24 | Astrazeneca AB | Modulators of pnpla3 expression |
EP4045652A1 (en) | 2019-10-18 | 2022-08-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Solute carrier family member irna compositions and methods of use thereof |
JP2022553348A (ja) | 2019-10-22 | 2022-12-22 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 補体成分C3 iRNA組成物およびその使用方法 |
TW202132567A (zh) | 2019-11-01 | 2021-09-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 亨汀頓蛋白(HTT)iRNA劑組成物及其使用方法 |
WO2021092145A1 (en) | 2019-11-06 | 2021-05-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transthyretin (ttr) irna composition and methods of use thereof for treating or preventing ttr-associated ocular diseases |
BR112022009216A2 (pt) | 2019-11-13 | 2022-08-02 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Métodos e composições para tratar um distúrbio associado a angiotensinogênio (agt) |
EP4061945A1 (en) | 2019-11-22 | 2022-09-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof |
WO2021113270A1 (en) | 2019-12-02 | 2021-06-10 | Shape Therapeutics Inc. | Therapeutic editing |
TW202140509A (zh) | 2019-12-13 | 2021-11-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 人類染色體9開讀框72(C9ORF72)iRNA劑組成物及其使用方法 |
TW202138559A (zh) | 2019-12-16 | 2021-10-16 | 美商阿尼拉製藥公司 | 含類PATATIN磷脂酶結構域3(PNPLA3)iRNA組成物及其使用方法 |
CA3164628A1 (en) | 2019-12-16 | 2021-06-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
CN115279920A (zh) * | 2020-01-17 | 2022-11-01 | 仁慈生物分析公司 | 用于检测卵巢癌的组合物和方法 |
US20210301287A1 (en) * | 2020-01-22 | 2021-09-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Treatment Of Non-Alcoholic Fatty Liver Disease, Non-Alcoholic Steatohepatitis, And Liver Fibrosis |
CN114929729A (zh) | 2020-01-30 | 2022-08-19 | 卫材R&D管理有限公司 | 核酸复合体及包含该核酸复合体的医药组合物 |
WO2021154941A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions for use in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
MX2022009763A (es) | 2020-02-10 | 2022-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para silenciar la expresion del factor de crecimiento endotelial vascular a (vegf-a). |
WO2021167841A1 (en) | 2020-02-18 | 2021-08-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof |
AU2021225957A1 (en) | 2020-02-28 | 2022-09-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating SMN2 |
WO2021178607A1 (en) | 2020-03-05 | 2021-09-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases |
CN115461460A (zh) | 2020-03-06 | 2022-12-09 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于抑制转甲状腺素蛋白(ttr)的表达的组合物和方法 |
BR112022017822A2 (pt) | 2020-03-06 | 2022-11-08 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de irna de cetoexocinase (khk) e métodos de uso das mesmas |
WO2021188611A1 (en) | 2020-03-18 | 2021-09-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant |
JP2023519274A (ja) | 2020-03-26 | 2023-05-10 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | コロナウイルスiRNA組成物およびその使用方法 |
AR121769A1 (es) | 2020-04-06 | 2022-07-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para el silenciamiento de la expresión de myoc |
IL297130A (en) | 2020-04-07 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for silencing scn9a expression |
WO2021206922A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof |
WO2021206917A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME 2 (ACE2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
BR112022021813A2 (pt) | 2020-04-27 | 2023-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de agente de apolipoproteína e (apoe) irna e métodos de uso das mesmas |
IL297680A (en) | 2020-04-30 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | IRNA compounds complement factor b (cfb) and methods of using them |
WO2021252557A1 (en) | 2020-06-09 | 2021-12-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation |
EP4168546A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Xanthine dehydrogenase (xdh) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022066847A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof |
JP2023544413A (ja) | 2020-10-05 | 2023-10-23 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Gタンパク質共役受容体75(GPR75)iRNA組成物およびその使用方法 |
CA3198823A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating primary hyperoxaluria |
WO2022087329A1 (en) | 2020-10-23 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022103999A1 (en) | 2020-11-13 | 2022-05-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COAGULATION FACTOR V (F5) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
CA3201661A1 (en) | 2020-11-18 | 2022-05-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating angiotensinogen expression |
WO2022119873A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibition of hao1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase)) gene expression |
EP4259795A1 (en) | 2020-12-08 | 2023-10-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022150260A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLEMENT COMPONENT 9 (C9) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
KR20230146048A (ko) | 2021-02-12 | 2023-10-18 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1(sod1) irna 조성물 및 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1- (sod1-) 관련 신경퇴행성 질환을 치료하거나 예방하기 위한 이의 사용 방법 |
WO2022182864A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Prion protein (prnp) irna compositions and methods and methods of use thereof |
EP4298218A1 (en) | 2021-02-26 | 2024-01-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022187435A1 (en) | 2021-03-04 | 2022-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof |
EP4305169A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof |
MX2023011466A (es) | 2021-03-29 | 2024-02-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de agentes de ácido ribonucleico de interferencia (arni) de huntingtina (htt) y métodos de uso de estas. |
WO2022212153A1 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof |
EP4330392A1 (en) | 2021-04-26 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane protease, serine 6 (tmprss6) irna compositions and methods of use thereof |
EP4330396A1 (en) | 2021-04-29 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022235537A1 (en) | 2021-05-03 | 2022-11-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating transthyretin (ttr) mediated amyloidosis |
EP4341401A1 (en) | 2021-05-18 | 2024-03-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof |
TW202317762A (zh) | 2021-06-02 | 2023-05-01 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | 含有類PATATIN磷脂酶結構域3(PNPLA3)的iRNA組成物及其使用方法 |
KR20240017911A (ko) | 2021-06-04 | 2024-02-08 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 인간 염색체 9 개방 해독 프레임 72(C9orf72) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법 |
EP4351541A2 (en) | 2021-06-08 | 2024-04-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating or preventing stargardt's disease and/or retinal binding protein 4 (rbp4)-associated disorders |
IL309296A (en) | 2021-06-30 | 2024-02-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Methods and compositions for the treatment of angiotensinogen-related disorder (AGT-) |
WO2023279107A1 (en) * | 2021-07-01 | 2023-01-05 | Albert Einstein College Of Medicine | Compositions and methods for inhibiting the expression of tmigd2 |
JPWO2023282344A1 (ru) | 2021-07-08 | 2023-01-12 | ||
TW202317147A (zh) | 2021-07-08 | 2023-05-01 | 日商日本新藥股份有限公司 | 析出抑制劑 |
EP4368186A1 (en) | 2021-07-08 | 2024-05-15 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Nephrotoxicity reducing agent |
WO2023003805A1 (en) | 2021-07-19 | 2023-01-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating subjects having or at risk of developing a non-primary hyperoxaluria disease or disorder |
TW202325312A (zh) | 2021-07-23 | 2023-07-01 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | β-鏈蛋白(CTNNB1)iRNA組成物及其使用方法 |
EP4377458A1 (en) | 2021-07-29 | 2024-06-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase (hmgcr) irna compositions and methods of use thereof |
CN117795074A (zh) | 2021-08-03 | 2024-03-29 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 转甲状腺素蛋白(TTR)iRNA组合物和其使用方法 |
JP2024531914A (ja) | 2021-08-04 | 2024-09-03 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | アンジオテンシノーゲン(agt)をサイレンシングするためのirna組成物および方法 |
AU2022328347A1 (en) | 2021-08-13 | 2024-02-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Factor xii (f12) irna compositions and methods of use thereof |
EP4401742A2 (en) | 2021-09-17 | 2024-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3) |
CA3232420A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof |
MX2024004011A (es) | 2021-10-01 | 2024-07-01 | Adarx Pharmaceuticals Inc | Composiciones moduladoras de precalicreína y métodos de uso de estas. |
US20230141563A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-05-11 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector igm responses |
JP2023058899A (ja) * | 2021-10-14 | 2023-04-26 | 株式会社三共 | 遊技機 |
JP2023058902A (ja) * | 2021-10-14 | 2023-04-26 | 株式会社三共 | 遊技機 |
JP2023058903A (ja) * | 2021-10-14 | 2023-04-26 | 株式会社三共 | 遊技機 |
JP2023058901A (ja) * | 2021-10-14 | 2023-04-26 | 株式会社三共 | 遊技機 |
JP2023058900A (ja) * | 2021-10-14 | 2023-04-26 | 株式会社三共 | 遊技機 |
EP4423273A1 (en) | 2021-10-29 | 2024-09-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement factor b (cfb) irna compositions and methods of use thereof |
EP4423272A2 (en) | 2021-10-29 | 2024-09-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Huntingtin (htt) irna agent compositions and methods of use thereof |
WO2023141314A2 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof |
US20230357437A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-11-09 | Selecta Biosciences, Inc. | Immunosuppressants in combination with anti-igm agents and related dosing |
WO2024039776A2 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Universal non-targeting sirna compositions and methods of use thereof |
WO2024059165A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 13 (hsd17b13) irna compositions and methods of use thereof |
WO2024175062A1 (zh) * | 2023-02-23 | 2024-08-29 | 大睿生物医药科技(上海)有限公司 | 调控KHK基因活性的dsRNA分子 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009073809A2 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
WO2009082606A2 (en) * | 2007-12-04 | 2009-07-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Folate conjugates |
RU2371440C2 (ru) * | 2004-05-20 | 2009-10-27 | Дзе Скриппс Рисёч Инститьют | Стабилизация транстиретина |
WO2009142822A2 (en) * | 2008-03-26 | 2009-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 2-f modified rna interference agents |
WO2010039548A2 (en) * | 2008-09-23 | 2010-04-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition |
WO2010048228A2 (en) * | 2008-10-20 | 2010-04-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin |
WO2011056883A1 (en) * | 2009-11-03 | 2011-05-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (ttr) |
US20110237646A1 (en) * | 2008-08-07 | 2011-09-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of transthyretin expression for the treatment of cns related disorders |
WO2011123468A1 (en) * | 2010-03-29 | 2011-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis |
Family Cites Families (91)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1861608A (en) | 1929-12-21 | 1932-06-07 | Emerson Electric Mfg Co | Fan and means for directing the air current therethrough |
US1861108A (en) | 1930-01-24 | 1932-05-31 | Eugene O Brace | Integral clutch and transmission control |
US3974808A (en) | 1975-07-02 | 1976-08-17 | Ford Motor Company | Air intake duct assembly |
US4708708A (en) | 1982-12-06 | 1987-11-24 | International Paper Company | Method and apparatus for skiving and hemming |
US4897355A (en) | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
FR2645866B1 (fr) | 1989-04-17 | 1991-07-05 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi |
US5143854A (en) | 1989-06-07 | 1992-09-01 | Affymax Technologies N.V. | Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof |
US5744101A (en) | 1989-06-07 | 1998-04-28 | Affymax Technologies N.V. | Photolabile nucleoside protecting groups |
NL8901881A (nl) | 1989-07-20 | 1991-02-18 | Rockwool Grodan Bv | Drainagekoppelelement. |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
US5283185A (en) | 1991-08-28 | 1994-02-01 | University Of Tennessee Research Corporation | Method for delivering nucleic acids into cells |
US5677195A (en) | 1991-11-22 | 1997-10-14 | Affymax Technologies N.V. | Combinatorial strategies for polymer synthesis |
AU4528493A (en) | 1992-06-04 | 1994-01-04 | Regents Of The University Of California, The | In vivo gene therapy with intron-free sequence of interest |
JPH07508410A (ja) | 1992-06-18 | 1995-09-21 | ジェンファーム インターナショナル インコーポレイテッド | 酵母人工染色体を有するトランスジェニック非ヒト動物の製造方法 |
US5556752A (en) | 1994-10-24 | 1996-09-17 | Affymetrix, Inc. | Surface-bound, unimolecular, double-stranded DNA |
US20030027216A1 (en) | 2001-07-02 | 2003-02-06 | Kiernan Urban A. | Analysis of proteins from biological fluids using mass spectrometric immunoassay |
EP0833613A1 (en) | 1995-05-26 | 1998-04-08 | Somatix Therapy Corporation | Delivery vehicles comprising stable lipid/nucleic acid complexes |
US5545531A (en) | 1995-06-07 | 1996-08-13 | Affymax Technologies N.V. | Methods for making a device for concurrently processing multiple biological chip assays |
US5854033A (en) | 1995-11-21 | 1998-12-29 | Yale University | Rolling circle replication reporter systems |
WO2005121370A2 (en) | 2004-06-03 | 2005-12-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds that facilitate risc loading |
US6034135A (en) | 1997-03-06 | 2000-03-07 | Promega Biosciences, Inc. | Dimeric cationic lipids |
WO2001057064A2 (en) | 2000-02-07 | 2001-08-09 | Roche Diagnostics Corporation | Cationic amphiphiles for use in nucleic acid transfection |
WO2002081628A2 (en) | 2001-04-05 | 2002-10-17 | Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated | Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth, using nucleic acid based technologies |
US20030072794A1 (en) | 2000-06-09 | 2003-04-17 | Teni Boulikas | Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes |
WO2002044321A2 (en) | 2000-12-01 | 2002-06-06 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rna interference mediating small rna molecules |
US20020160394A1 (en) | 2001-01-24 | 2002-10-31 | Bayer Corporation | Regulation of transthyretin to treat obesity |
US7514099B2 (en) | 2005-02-14 | 2009-04-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules |
US20030170891A1 (en) | 2001-06-06 | 2003-09-11 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060217331A1 (en) * | 2001-05-18 | 2006-09-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified double stranded nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
AU2002318396A1 (en) | 2001-06-21 | 2003-01-08 | The Cleveland Clinic Foundation | Homocysteinylated transthyretin |
US9657294B2 (en) * | 2002-02-20 | 2017-05-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030191056A1 (en) | 2002-04-04 | 2003-10-09 | Kenneth Walker | Use of transthyretin peptide/protein fusions to increase the serum half-life of pharmacologically active peptides/proteins |
EP1520022B1 (en) | 2002-07-10 | 2015-07-22 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rna-interference by single-stranded rna molecules |
EP1527176B2 (en) | 2002-08-05 | 2017-03-22 | Silence Therapeutics GmbH | Further novel forms of interfering rna molecules |
US7956176B2 (en) | 2002-09-05 | 2011-06-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040119010A1 (en) | 2002-11-01 | 2004-06-24 | The Regents Of The University Of Colorado | Quantitative analysis of protein isoforms using matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry |
US9228186B2 (en) | 2002-11-14 | 2016-01-05 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US7250496B2 (en) | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
DK2284266T3 (da) | 2002-11-14 | 2014-01-13 | Thermo Fisher Scient Biosciences Inc | sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53 |
CA2518475C (en) | 2003-03-07 | 2014-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna agents comprising asymmetrical modifications |
AU2004227414A1 (en) | 2003-04-03 | 2004-10-21 | Alnylam Pharmaceuticals | iRNA conjugates |
DE602004018927D1 (de) * | 2003-06-18 | 2009-02-26 | Genelux Corp | Modifizierte rekombinante vacciniaviren, verwendungen davon |
JP4951338B2 (ja) | 2003-07-16 | 2012-06-13 | プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド | 脂質に封入された干渉rna |
US7858769B2 (en) | 2004-02-10 | 2010-12-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using multifunctional short interfering nucleic acid (multifunctional siNA) |
US20070087448A1 (en) * | 2004-02-16 | 2007-04-19 | Nelsestuen Gary L | Biological profiles and methods of use |
US20050244869A1 (en) | 2004-04-05 | 2005-11-03 | Brown-Driver Vickie L | Modulation of transthyretin expression |
JP4764426B2 (ja) | 2004-06-07 | 2011-09-07 | プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド | カチオン性脂質および使用方法 |
CA2569664C (en) | 2004-06-07 | 2013-07-16 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
US7838561B2 (en) | 2004-06-14 | 2010-11-23 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method for preventing or treating cardiac hypertrophy |
EP2289500A1 (en) | 2004-12-08 | 2011-03-02 | ReVision Therapeutics, Inc. | Retinol binding protein and transthyretin modulators for treating hypertosis, Alzheimer's disease or idiopathic intracranial hypertension |
AU2006230436B2 (en) | 2005-03-31 | 2011-11-24 | Calando Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof |
US7915230B2 (en) | 2005-05-17 | 2011-03-29 | Molecular Transfer, Inc. | Reagents for transfection of eukaryotic cells |
EP1937213B1 (en) | 2005-07-27 | 2017-10-25 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Systems and methods for manufacturing liposomes |
WO2007051303A1 (en) | 2005-11-02 | 2007-05-10 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | MODIFIED siRNA MOLECULES AND USES THEREOF |
WO2007091269A2 (en) | 2006-02-08 | 2007-08-16 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | NOVEL TANDEM siRNAS |
JP5704741B2 (ja) | 2006-03-31 | 2015-04-22 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | Eg5遺伝子発現の抑制のための組成物および方法 |
WO2007117686A2 (en) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Stabilized immune modulatory rna (simra) compounds for tlr7 and tlr8 |
US8598333B2 (en) | 2006-05-26 | 2013-12-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SiRNA silencing of genes expressed in cancer |
WO2008042973A2 (en) | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid containing formulations |
GB0704764D0 (en) | 2007-03-12 | 2007-04-18 | Electrophoretics Ltd | Isobarically labelled reagents and methods of their use |
EP2173358B1 (en) * | 2007-06-22 | 2015-10-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation |
EP2357231A2 (en) | 2007-07-09 | 2011-08-17 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Stabilized immune modulatory RNA (SIMRA) compounds |
CA2710713C (en) | 2007-12-27 | 2017-09-19 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Silencing of polo-like kinase expression using interfering rna |
EP3100718B1 (en) | 2008-01-02 | 2019-11-27 | Arbutus Biopharma Corporation | Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids |
BRPI0907008A2 (pt) | 2008-01-31 | 2015-07-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Métodos otimizados para liberação de dsrna alvejando o gene pcsk9 |
US20100323381A1 (en) | 2008-02-08 | 2010-12-23 | Bergen Iii Harold R | Classifying amyloidosis |
CA2721333C (en) | 2008-04-15 | 2020-12-01 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Novel lipid formulations for nucleic acid delivery |
TWI455944B (zh) | 2008-07-01 | 2014-10-11 | Daiichi Sankyo Co Ltd | 雙股多核苷酸 |
PL2350043T3 (pl) * | 2008-10-09 | 2014-09-30 | Tekmira Pharmaceuticals Corp | Ulepszone aminolipidy i sposoby dostarczania kwasów nukleinowych |
CA3006395C (en) | 2008-11-07 | 2022-05-31 | Massachusetts Institute Of Technology | Aminoalcohol lipidoids and uses thereof |
EP3808177A1 (en) | 2008-11-10 | 2021-04-21 | Arbutus Biopharma Corporation | Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics |
WO2010078536A1 (en) * | 2009-01-05 | 2010-07-08 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of pcsk9 through rnai |
CA3036963A1 (en) | 2009-01-29 | 2010-08-05 | Arbutus Biopharma Corporation | Lipid formulations comprising cationic lipid and a targeting lipid comprising n-acetyl galactosamine for delivery of nucleic acid |
EP2416760A4 (en) | 2009-05-05 | 2014-01-22 | Tekmira Pharmaceuticals Corp | LIPID COMPOSITIONS |
US9200276B2 (en) | 2009-06-01 | 2015-12-01 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotides for multivalent RNA interference, compositions and methods of use thereof |
PL3431076T3 (pl) | 2009-06-10 | 2022-01-31 | Arbutus Biopharma Corporation | Ulepszona formulacja lipidowa |
KR20120050429A (ko) | 2009-06-15 | 2012-05-18 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Pcsk9 유전자를 표적으로 하는 지질 제형된 dsrna |
US9051567B2 (en) | 2009-06-15 | 2015-06-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA |
HUE026020T2 (en) | 2009-08-27 | 2016-05-30 | Idera Pharmaceuticals Inc | Preparation for inhibiting gene expression and its uses |
US10913767B2 (en) * | 2010-04-22 | 2021-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs |
PT2563920T (pt) | 2010-04-29 | 2017-05-26 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulação da expressão de transtirretina |
EP2616543A1 (en) | 2010-09-15 | 2013-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | MODIFIED iRNA AGENTS |
EP3766975A1 (en) * | 2010-10-29 | 2021-01-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
CN102206645B (zh) * | 2011-04-29 | 2013-11-27 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 利用慢病毒载体介导RNAi的方法 |
WO2012177906A1 (en) * | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Assays and methods for determining activity of a therapeutic agent in a subject |
DK3366775T3 (da) * | 2011-11-18 | 2022-08-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Modificerede rnai-midler |
DK3301177T3 (da) | 2011-11-18 | 2020-06-15 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Rnai-midler, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf til behandling af transthyretin (ttr)-forbundne sygdomme |
AU2013296321B2 (en) * | 2012-08-03 | 2019-05-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified RNAi agents |
JP6896703B2 (ja) | 2015-07-31 | 2021-06-30 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | TTR関連疾患を治療または予防するためのトランスサイレチン(TTR)iRNA組成物およびその使用方法 |
KR102318555B1 (ko) | 2020-03-19 | 2021-10-29 | 한국과학기술연구원 | 광소자용 역나노콘과 그 제조방법 |
-
2012
- 2012-11-16 DK DK17184486.3T patent/DK3301177T3/da active
- 2012-11-16 AU AU2012340159A patent/AU2012340159B2/en active Active
- 2012-11-16 KR KR1020217016903A patent/KR102385013B1/ko active IP Right Grant
- 2012-11-16 IN IN3463CHN2014 patent/IN2014CN03463A/en unknown
- 2012-11-16 SG SG10201912170WA patent/SG10201912170WA/en unknown
- 2012-11-16 KR KR1020147016462A patent/KR102095699B1/ko active Application Filing
- 2012-11-16 EP EP20164459.8A patent/EP3730618A1/en not_active Withdrawn
- 2012-11-16 US US14/358,972 patent/US9399775B2/en active Active
- 2012-11-16 MX MX2014005972A patent/MX348575B/es active IP Right Grant
- 2012-11-16 EP EP21170872.2A patent/EP3913056A1/en active Pending
- 2012-11-16 PL PL17184486T patent/PL3301177T3/pl unknown
- 2012-11-16 EP EP17184486.3A patent/EP3301177B1/en active Active
- 2012-11-16 MY MYPI2014701131A patent/MY167390A/en unknown
- 2012-11-16 CA CA2856243A patent/CA2856243A1/en active Pending
- 2012-11-16 PT PT171844863T patent/PT3301177T/pt unknown
- 2012-11-16 CN CN201810144662.4A patent/CN108186667B/zh active Active
- 2012-11-16 IL IL308752A patent/IL308752A/en unknown
- 2012-11-16 RS RS20200699A patent/RS60414B1/sr unknown
- 2012-11-16 ES ES17184486T patent/ES2800065T3/es active Active
- 2012-11-16 CN CN201280066622.3A patent/CN104080794B/zh active Active
- 2012-11-16 SG SG11201402392QA patent/SG11201402392QA/en unknown
- 2012-11-16 HU HUE17184486A patent/HUE048622T2/hu unknown
- 2012-11-16 JP JP2014542525A patent/JP6165158B2/ja active Active
- 2012-11-16 PE PE2014000707A patent/PE20142362A1/es active IP Right Grant
- 2012-11-16 IL IL293434A patent/IL293434B2/en unknown
- 2012-11-16 WO PCT/US2012/065691 patent/WO2013075035A1/en active Application Filing
- 2012-11-16 IL IL284530A patent/IL284530B/en unknown
- 2012-11-16 BR BR112014011896-5A patent/BR112014011896B1/pt active IP Right Grant
- 2012-11-16 KR KR1020227011273A patent/KR20220045091A/ko active Application Filing
- 2012-11-16 SI SI201231772T patent/SI3301177T1/sl unknown
- 2012-11-16 EP EP12850255.6A patent/EP2780353B1/en active Active
- 2012-11-16 LT LTEP17184486.3T patent/LT3301177T/lt unknown
- 2012-11-16 KR KR1020207008667A patent/KR102263352B1/ko active Application Filing
- 2012-11-16 UA UAA201406837A patent/UA118649C2/uk unknown
- 2012-11-16 RU RU2014124683A patent/RU2678807C2/ru active
- 2012-11-19 AR ARP120104346A patent/AR088911A1/es active IP Right Grant
-
2014
- 2014-05-04 IL IL232435A patent/IL232435A0/en unknown
- 2014-05-15 NI NI201400046A patent/NI201400046A/es unknown
- 2014-05-15 CL CL2014001291A patent/CL2014001291A1/es unknown
- 2014-05-16 DO DO2014000107A patent/DOP2014000107A/es unknown
- 2014-05-16 MX MX2021014393A patent/MX2021014393A/es unknown
- 2014-05-16 PH PH12014501106A patent/PH12014501106A1/en unknown
- 2014-05-16 GT GT201400097A patent/GT201400097A/es unknown
- 2014-05-19 CR CR20140232A patent/CR20140232A/es unknown
- 2014-05-21 CO CO14109690A patent/CO7020872A2/es unknown
- 2014-06-18 EC ECIEPI20145606A patent/ECSP14005606A/es unknown
- 2014-10-10 CL CL2014002742A patent/CL2014002742A1/es unknown
-
2015
- 2015-01-15 HK HK15100487.3A patent/HK1200171A1/xx unknown
-
2016
- 2016-06-21 US US15/188,317 patent/US10570391B2/en active Active
-
2017
- 2017-06-20 JP JP2017120295A patent/JP6513135B2/ja active Active
- 2017-09-07 AU AU2017225076A patent/AU2017225076B2/en active Active
-
2018
- 2018-01-25 IL IL257166A patent/IL257166A/en unknown
- 2018-09-24 CL CL2018002703A patent/CL2018002703A1/es unknown
- 2018-10-04 HK HK18112708.8A patent/HK1253410A1/zh unknown
- 2018-12-03 IL IL263458A patent/IL263458B/en unknown
-
2019
- 2019-04-09 JP JP2019073911A patent/JP2019131595A/ja not_active Withdrawn
- 2019-10-03 AU AU2019240658A patent/AU2019240658B2/en active Active
-
2020
- 2020-01-09 US US16/738,014 patent/US20200318111A1/en not_active Abandoned
- 2020-04-28 HR HRP20200672TT patent/HRP20200672T1/hr unknown
- 2020-06-17 CY CY20201100553T patent/CY1123693T1/el unknown
-
2021
- 2021-07-09 US US17/371,182 patent/US20230010288A1/en not_active Abandoned
- 2021-07-12 JP JP2021114868A patent/JP2021168677A/ja active Pending
-
2022
- 2022-09-15 AU AU2022231749A patent/AU2022231749B2/en active Active
-
2023
- 2023-11-15 US US18/509,440 patent/US20240279652A1/en active Pending
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2371440C2 (ru) * | 2004-05-20 | 2009-10-27 | Дзе Скриппс Рисёч Инститьют | Стабилизация транстиретина |
WO2009073809A2 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
WO2009082606A2 (en) * | 2007-12-04 | 2009-07-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Folate conjugates |
US20090239814A1 (en) * | 2007-12-04 | 2009-09-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate Conjugates as Delivery Agents for Oligonucleotides |
WO2009142822A2 (en) * | 2008-03-26 | 2009-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 2-f modified rna interference agents |
US20110237646A1 (en) * | 2008-08-07 | 2011-09-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of transthyretin expression for the treatment of cns related disorders |
WO2010039548A2 (en) * | 2008-09-23 | 2010-04-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition |
WO2010048228A2 (en) * | 2008-10-20 | 2010-04-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin |
WO2011056883A1 (en) * | 2009-11-03 | 2011-05-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (ttr) |
WO2011123468A1 (en) * | 2010-03-29 | 2011-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
CHEN ET AL. Lipophilic siRNAs mediate efficient gene silencing in oligodendrocytes with direct CNS delivery. J. CONTROL. RELEASE. 2010. V.144. P.227 - 232. * |
GAMBARI ET AL. Targeting microRNAs involved in human diseases: A novel approach for modification of gene expression and drug development. BIOCHEM. PHARMACOL., (15. 11.2011. V.82. No.10. P.1416 - 1429. * |
KAWASAKI ET AL. Synthesis, Hybridization, and Nuclease Resistance Properties of 2'-O- Aminooxyethyl (2'-O-AOE) Modified Oligonucleotides. TETRAHEDRON LETT. 1999. V.40. No.4. P.661 - 664. * |
KAWASAKI ET AL. Synthesis, Hybridization, and Nuclease Resistance Properties of 2'-O- Aminooxyethyl (2'-O-AOE) Modified Oligonucleotides. TETRAHEDRON LETT. 1999. V.40. No.4. P.661 - 664. MANOHARAN M ET AL. RNA interference and chemically modified small interfering RNAs. CURRENT OPINION IN CHEMICAL BIOLOGY. 2004. V.8. P.570 - 579. CHEN ET AL. Lipophilic siRNAs mediate efficient gene silencing in oligodendrocytes with direct CNS delivery. J. CONTROL. RELEASE. 2010. V.144. P.227 - 232. NAKAMURA ET AL. Targeted conversion of the transthyretin gene in vitro and in vivo. GENE THERAPY. 2004. V.11. P.838 - 846. GAMBARI ET AL. Targeting microRNAs involved in human diseases: A novel approach for modification of gene expression and drug development. BIOCHEM. PHARMACOL., (15. 11.2011. V.82. No.10. P.1416 - 1429. * |
MANOHARAN M ET AL. RNA interference and chemically modified small interfering RNAs. CURRENT OPINION IN CHEMICAL BIOLOGY. 2004. V.8. P.570 - 579. * |
NAKAMURA ET AL. Targeted conversion of the transthyretin gene in vitro and in vivo. GENE THERAPY. 2004. V.11. P.838 - 846. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2678807C2 (ru) | СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТРАНСТИРЕТИНОМ (TTR) | |
JP2021075554A (ja) | Tmprss6 irna組成物及びその使用方法 | |
JP2019068848A (ja) | Serpinc1 iRNA組成物およびその使用方法 | |
TW201610151A (zh) | 治療或預防與甲狀腺素運載蛋白相關疾病之方法 | |
TW201831685A (zh) | 使用甲狀腺素運載蛋白(TTR)iRNA組成物於治療或預防TTR相關疾病之方法 | |
TW201718855A (zh) | 甲狀腺素運載蛋白(TTR)iRNA組成物及其治療或預防TTR相關疾病之使用方法 | |
TW202342749A (zh) | 用於抑制hao1(羥酸氧化酶1(乙醇酸鹽氧化酶))基因表現的組合物及方法 | |
JP2023544385A (ja) | Snca関連神経変性疾患を治療又は予防するためのsnca irna組成物及びその使用方法 | |
CN114728018A (zh) | 亨廷顿(HTT)iRNA药剂组合物及其使用方法 | |
US20230392152A1 (en) | HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF | |
KR20240067943A (ko) | 미소관 연관 단백질 타우(MAPT) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법 | |
RU2804776C2 (ru) | СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТРАНСТИРЕТИНОМ (TTR) | |
OA16815A (en) | RNAI agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (TTR) associated diseases. | |
NZ624336B2 (en) | Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases |