RU2674003C2 - Производное гиалуроновой кислоты, содержащее аминокислотную и стерильную группы, введенные в него - Google Patents
Производное гиалуроновой кислоты, содержащее аминокислотную и стерильную группы, введенные в него Download PDFInfo
- Publication number
- RU2674003C2 RU2674003C2 RU2015112219A RU2015112219A RU2674003C2 RU 2674003 C2 RU2674003 C2 RU 2674003C2 RU 2015112219 A RU2015112219 A RU 2015112219A RU 2015112219 A RU2015112219 A RU 2015112219A RU 2674003 C2 RU2674003 C2 RU 2674003C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- chol
- group
- formula
- alkyl
- Prior art date
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical class CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 521
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 title description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 174
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 166
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims abstract description 163
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 161
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 121
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 73
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 73
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 61
- 125000004916 (C1-C6) alkylcarbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 25
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims abstract description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 21
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 claims description 116
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 87
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 54
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 43
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 27
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 24
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 22
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 12
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 10
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 125000006681 (C2-C10) alkylene group Chemical group 0.000 claims description 5
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 claims description 4
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 claims description 3
- HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N Lithium ion Chemical compound [Li+] HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NCMHKCKGHRPLCM-UHFFFAOYSA-N caesium(1+) Chemical compound [Cs+] NCMHKCKGHRPLCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910001416 lithium ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910001419 rubidium ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 claims 6
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 125000003837 (C1-C20) alkyl group Chemical group 0.000 abstract 2
- 125000004400 (C1-C12) alkyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 152
- MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N N-[1-oxo-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propan-2-yl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(C(C)NC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 103
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 92
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 92
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 85
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 83
- 238000000034 method Methods 0.000 description 82
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 80
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 73
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 71
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 66
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 56
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 56
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 56
- BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholin-4-ium;chloride Chemical compound [Cl-].COC1=NC(OC)=NC([N+]2(C)CCOCC2)=N1 BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 54
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 53
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 53
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 53
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 50
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 48
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 46
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 43
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 43
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 43
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 41
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 39
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 39
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 39
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 39
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 37
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 36
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical compound CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 239000000047 product Substances 0.000 description 34
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 32
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 32
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 31
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 31
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 29
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 29
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Natural products CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 27
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 27
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 27
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 27
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 27
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 25
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 25
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 24
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 24
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 23
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 23
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 22
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 22
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 22
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 22
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 22
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 20
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 20
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical group O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 19
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 19
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 19
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 18
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 18
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 18
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 17
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 17
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 16
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 15
- JCXLZWMDXJFOOI-WCCKRBBISA-N ethyl (2s)-2-aminopropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)[C@H](C)N JCXLZWMDXJFOOI-WCCKRBBISA-N 0.000 description 15
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 15
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 14
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 13
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 12
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 12
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 12
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-Tyrosine Natural products OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 11
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 11
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 10
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 10
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 10
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 10
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- LZQCOMULTLYITH-MUWMCQJSSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C[C@@H](O)[C@H](N)C(N)=O LZQCOMULTLYITH-MUWMCQJSSA-N 0.000 description 9
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 9
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N L-Serine Natural products OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 8
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 8
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 8
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 8
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 8
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-Phenylalanine Natural products OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Natural products C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 7
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 7
- MGOGKPMIZGEGOZ-REOHCLBHSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanamide Chemical compound OC[C@H](N)C(N)=O MGOGKPMIZGEGOZ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- PZUOEYPTQJILHP-GBXIJSLDSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanamide Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(N)=O PZUOEYPTQJILHP-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 6
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N EEDQ Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OCC)C(OCC)C=CC2=C1 GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-Asparagine Natural products OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-Leucine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- JDAMFKGXSUOWBV-WHFBIAKZSA-N L-isoleucinamide Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(N)=O JDAMFKGXSUOWBV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 6
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 6
- RPKLZQLYODPWTM-KBMWBBLPSA-N cholanoic acid Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]1(C)CC2 RPKLZQLYODPWTM-KBMWBBLPSA-N 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 6
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 6
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 6
- DSLBDPPHINVUID-REOHCLBHSA-N (2s)-2-aminobutanediamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DSLBDPPHINVUID-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[5-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CC=1OC(=NN=1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DFGKGUXTPFWHIX-UHFFFAOYSA-N 6-[2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]acetyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 DFGKGUXTPFWHIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 5
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 5
- GSYTVXOARWSQSV-BYPYZUCNSA-N L-methioninamide Chemical compound CSCC[C@H](N)C(N)=O GSYTVXOARWSQSV-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- OBSIQMZKFXFYLV-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine amide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OBSIQMZKFXFYLV-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- PQFMNVGMJJMLAE-QMMMGPOBSA-N L-tyrosinamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PQFMNVGMJJMLAE-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 5
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 5
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 5
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 5
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 5
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 5
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 5
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 5
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 5
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 5
- YDIMJFKFXYQUBZ-QRPNPIFTSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanamide;hydrochloride Chemical compound Cl.NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 YDIMJFKFXYQUBZ-QRPNPIFTSA-N 0.000 description 4
- XDEHMKQLKPZERH-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanamide Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(N)=O XDEHMKQLKPZERH-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 4
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 4
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 4
- HQMLIDZJXVVKCW-REOHCLBHSA-N L-alaninamide Chemical group C[C@H](N)C(N)=O HQMLIDZJXVVKCW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- LCGISIDBXHGCDW-VKHMYHEASA-N L-glutamine amide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O LCGISIDBXHGCDW-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- FORGMRSGVSYZQR-YFKPBYRVSA-N L-leucinamide Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(N)=O FORGMRSGVSYZQR-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- JLSKPBDKNIXMBS-VIFPVBQESA-N L-tryptophanamide Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(N)=O)=CNC2=C1 JLSKPBDKNIXMBS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- 125000002707 L-tryptophyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 description 4
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 4
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 4
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 4
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical compound BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 4
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 4
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 4
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 4
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 4
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 150000005621 tetraalkylammonium salts Chemical class 0.000 description 4
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 125000006700 (C1-C6) alkylthio group Chemical group 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 1-(2H-benzotriazol-5-yl)-3-methyl-8-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carbonyl]-1,3,8-triazaspiro[4.5]decane-2,4-dione Chemical compound CN1C(=O)N(c2ccc3n[nH]nc3c2)C2(CCN(CC2)C(=O)c2cnc(NCc3cccc(OC(F)(F)F)c3)nc2)C1=O YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,2,4-oxadiazol-5-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NOC(=N1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N D-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100026849 Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 Human genes 0.000 description 3
- 238000006845 Michael addition reaction Methods 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N N-[[(5S)-2-oxo-3-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,3-oxazolidin-5-yl]methyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C1O[C@H](CN1C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000655609 Streptomyces azureus Thiostrepton Proteins 0.000 description 3
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N [3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-ylmethyl)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-en-8-yl]-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]methanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CC1=NOC2(C1)CCN(CC2)C(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004457 alkyl amino carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 3
- QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N alpha-cholestanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 3
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000006367 bivalent amino carbonyl group Chemical group [H]N([*:1])C([*:2])=O 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 3
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 3
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 125000002993 cycloalkylene group Chemical group 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 3
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 3
- SFMJNHNUOVADRW-UHFFFAOYSA-N n-[5-[9-[4-(methanesulfonamido)phenyl]-2-oxobenzo[h][1,6]naphthyridin-1-yl]-2-methylphenyl]prop-2-enamide Chemical compound C1=C(NC(=O)C=C)C(C)=CC=C1N1C(=O)C=CC2=C1C1=CC(C=3C=CC(NS(C)(=O)=O)=CC=3)=CC=C1N=C2 SFMJNHNUOVADRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000843 phenylene group Chemical group C1(=C(C=CC=C1)*)* 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 3
- 125000003258 trimethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KLHLGTPNBQXSJT-QRPNPIFTSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanamide;hydrochloride Chemical compound Cl.NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KLHLGTPNBQXSJT-QRPNPIFTSA-N 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004454 (C1-C6) alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- JUIKUQOUMZUFQT-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetamide Chemical compound NC(=O)CBr JUIKUQOUMZUFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- ARYTXMNEANMLMU-UHFFFAOYSA-N 24alpha-methylcholestanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(C)C(C)C)C1(C)CC2 ARYTXMNEANMLMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCILBWLDYPEMNA-UHFFFAOYSA-N 3-(2,5-dioxopyrrol-3-yl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC(=O)NC1=O WCILBWLDYPEMNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LLQHSBBZNDXTIV-UHFFFAOYSA-N 6-[5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-4,5-dihydro-1,2-oxazol-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC1CC(=NO1)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 LLQHSBBZNDXTIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 description 2
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 description 2
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012421 C-Type Natriuretic Peptide Human genes 0.000 description 2
- 101800000060 C-type natriuretic peptide Proteins 0.000 description 2
- TWJPKRPAWOEANM-UHFFFAOYSA-N C[ClH]C Chemical compound C[ClH]C TWJPKRPAWOEANM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical compound NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 2
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 2
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 101001076407 Homo sapiens Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 2
- 101001054921 Homo sapiens Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 229940119178 Interleukin 1 receptor antagonist Drugs 0.000 description 2
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 2
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N Lewis A pentasaccharide Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(NC(C)=O)C(OC2C(C(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)OC(CO)C2O)O)OC1CO DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NEAPKZHDYMQZCB-UHFFFAOYSA-N N-[2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethyl]-2-oxo-3H-1,3-benzoxazole-6-carboxamide Chemical compound C1CN(CCN1CCNC(=O)C2=CC3=C(C=C2)NC(=O)O3)C4=CN=C(N=C4)NC5CC6=CC=CC=C6C5 NEAPKZHDYMQZCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- UGDIICSYUVEETM-GAUYASFCSA-N NCCC1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@]4(CCCC[C@H]4CC[C@H]3[C@@H]2C1)C(=O)N)C)[C@H](C)CCC Chemical compound NCCC1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@]4(CCCC[C@H]4CC[C@H]3[C@@H]2C1)C(=O)N)C)[C@H](C)CCC UGDIICSYUVEETM-GAUYASFCSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 102000008108 Osteoprotegerin Human genes 0.000 description 2
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 description 2
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 2
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 2
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 2
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GGTBEWGOPAFTTH-GEMLJDPKSA-N [(2s,3s)-1-methoxy-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)OC GGTBEWGOPAFTTH-GEMLJDPKSA-N 0.000 description 2
- WOBDANBSEWOYKN-UHFFFAOYSA-N [1-amino-3-(1h-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(CC(N)C(N)=O)=CNC2=C1 WOBDANBSEWOYKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 125000004450 alkenylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004448 alkyl carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 125000005129 aryl carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- UNQHMFJVBBWADE-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-dithiol Chemical compound CCCC(S)S UNQHMFJVBBWADE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ARYTXMNEANMLMU-ATEDBJNTSA-N campestanol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](C)C(C)C)[C@@]2(C)CC1 ARYTXMNEANMLMU-ATEDBJNTSA-N 0.000 description 2
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- VXIVSQZSERGHQP-UHFFFAOYSA-N chloroacetamide Chemical compound NC(=O)CCl VXIVSQZSERGHQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 2
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- QYIXCDOBOSTCEI-NWKZBHTNSA-N coprostanol Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 QYIXCDOBOSTCEI-NWKZBHTNSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000004662 dithiols Chemical class 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- GKCXXDSWWDWUHS-BYPYZUCNSA-N ethyl (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)CO GKCXXDSWWDWUHS-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- JZJQCLZQSHLSFB-WCCKRBBISA-N ethyl (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)[C@@H](N)CO JZJQCLZQSHLSFB-WCCKRBBISA-N 0.000 description 2
- NTNZTEQNFHNYBC-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-aminoacetate Chemical group CCOC(=O)CN NTNZTEQNFHNYBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IYBKWXQWKPSYDT-UHFFFAOYSA-L ethylene glycol disuccinate bis(sulfo-N-succinimidyl) ester sodium salt Chemical compound [Na+].[Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCC(=O)OCCOC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)C(S([O-])(=O)=O)CC1=O IYBKWXQWKPSYDT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 2
- 239000010408 film Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 description 2
- 229940097042 glucuronate Drugs 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 2
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 2
- 125000005223 heteroarylcarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004464 hydroxyphenyl group Chemical group 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003407 interleukin 1 receptor blocking agent Substances 0.000 description 2
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002609 medium Chemical group 0.000 description 2
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N octadec-7-ynoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC#CCCCCCC(O)=O XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 2
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L sodium tetrathionate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- NSFFHOGKXHRQEW-AIHSUZKVSA-N thiostrepton Chemical compound C([C@]12C=3SC=C(N=3)C(=O)N[C@H](C(=O)NC(/C=3SC[C@@H](N=3)C(=O)N[C@H](C=3SC=C(N=3)C(=O)N[C@H](C=3SC=C(N=3)[C@H]1N=1)[C@@H](C)OC(=O)C3=CC(=C4C=C[C@H]([C@@H](C4=N3)O)N[C@H](C(N[C@@H](C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)=O)[C@@H](C)CC)[C@H](C)O)[C@](C)(O)[C@@H](C)O)=C\C)[C@@H](C)O)CC=1C1=NC(C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(N)=O)=CS1 NSFFHOGKXHRQEW-AIHSUZKVSA-N 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 238000002562 urinalysis Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N (-)-beta-Sitosterol Natural products O[C@@H]1CC=2[C@@](C)([C@@H]3[C@H]([C@H]4[C@@](C)([C@H]([C@H](CC[C@@H](C(C)C)CC)C)CC4)CC3)CC=2)CC1 KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N 0.000 description 1
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQTBINYMFPKLQD-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-(3-hydroxy-6-oxoxanthen-9-yl)benzoate Chemical compound C=12C=CC(=O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VQTBINYMFPKLQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VRDGQQTWSGDXCU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-iodoacetate Chemical compound ICC(=O)ON1C(=O)CCC1=O VRDGQQTWSGDXCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-ethyl-5alpha-cholest-22-en-3beta-ol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XFCNYSGKNAWXFL-WCCKRBBISA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanamide;hydron;chloride Chemical compound Cl.CC(C)[C@H](N)C(N)=O XFCNYSGKNAWXFL-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- VSPSRRBIXFUMOU-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-4-methylpentanamide;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)C[C@H](N)C(N)=O VSPSRRBIXFUMOU-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- SLBULRLSTNDQED-DKWTVANSSA-N (2s)-2-aminobutanediamide;hydrochloride Chemical compound Cl.NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O SLBULRLSTNDQED-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- XXIALTSAXCJAST-DFWYDOINSA-N (2s)-2-aminopentanediamide;hydrochloride Chemical compound Cl.NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O XXIALTSAXCJAST-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- HPYYIBPNNXXEAA-IRBJBBIRSA-N (2s,3s,4s,5r)-2,3,4,5-tetrahydroxy-6-oxohexanoic acid;n-[(3r,4r,5s,6r)-2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O.CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O HPYYIBPNNXXEAA-IRBJBBIRSA-N 0.000 description 1
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGVQZRDQPDLHHV-DPAQBDIFSA-N (3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3-thiol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](S)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 QGVQZRDQPDLHHV-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N (5alpha)-cholestan-3beta-ol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N 0.000 description 1
- 125000004739 (C1-C6) alkylsulfonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical compound C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinon Chemical compound CN1CCN(C)C1=O CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIPCYRKMDNWCKL-UHFFFAOYSA-N 1-[4-(2,5-dioxo-3-sulfopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid;ethane-1,2-diol Chemical compound OCCO.O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O NIPCYRKMDNWCKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001637 1-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(*)=C([H])C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 125000001462 1-pyrrolyl group Chemical group [*]N1C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 11-deoxycorticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 0.000 description 1
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- GIUTUZDGHNZVIA-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)acetic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.CCNCC(O)=O GIUTUZDGHNZVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WGGFHAVVTPGHRD-UHFFFAOYSA-N 2-(pyridin-2-yldisulfanyl)ethanamine Chemical compound NCCSSC1=CC=CC=N1 WGGFHAVVTPGHRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SEKLFMRSNLFPRB-UHFFFAOYSA-N 2-(pyridin-2-yldisulfanyl)ethanamine;hydrochloride Chemical compound Cl.NCCSSC1=CC=CC=N1 SEKLFMRSNLFPRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VURWDDZIWBGXCK-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-hydroxypropanamide;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)C(N)=O VURWDDZIWBGXCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKNMKGVLOWGGOU-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetamide;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(N)=O WKNMKGVLOWGGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KYNRQXZJAHXPSG-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetic acid;2-chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl.OC(=O)CBr KYNRQXZJAHXPSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- GPIQOFWTZXXOOV-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-4,6-dimethoxy-1,3,5-triazine Chemical compound COC1=NC(Cl)=NC(OC)=N1 GPIQOFWTZXXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006176 2-ethylbutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical compound CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004493 2-methylbut-1-yl group Chemical group CC(C*)CC 0.000 description 1
- 125000005916 2-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 24xi-n-propylcholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CCC)C(C)C)C1(C)CC2 KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHXPGWPVLFPUSM-KLRNGDHRSA-N 3,7,12-trioxo-5beta-cholanic acid Chemical compound C1CC(=O)C[C@H]2CC(=O)[C@H]3[C@@H]4CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]4(C)C(=O)C[C@@H]3[C@]21C OHXPGWPVLFPUSM-KLRNGDHRSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005917 3-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIMGHSAOLFTOBF-DPAQBDIFSA-N 3beta-Hydroxycholest-4-ene Chemical compound C1CC2=C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 UIMGHSAOLFTOBF-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- HCPBURTZSXRGBN-UHFFFAOYSA-N 4-(4-propylphenyl)benzoic acid Chemical compound C1=CC(CCC)=CC=C1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 HCPBURTZSXRGBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004203 4-hydroxyphenyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- HBBXESCZZLQWHM-UHFFFAOYSA-N 5-morpholin-4-yl-2-nitroaniline Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(N)=CC(N2CCOCC2)=C1 HBBXESCZZLQWHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTFUTSCZYYCBAY-SXBRIOAWSA-N 6-[(E)-C-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-N-hydroxycarbonimidoyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C/C(=N/O)/C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 WTFUTSCZYYCBAY-SXBRIOAWSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N Aldosterone Chemical compound C([C@@]1([C@@H](C(=O)CO)CC[C@H]1[C@@H]1CC2)C=O)[C@H](O)[C@@H]1[C@]1(C)C2=CC(=O)CC1 PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N 0.000 description 1
- PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N Aldosterone Natural products C1CC2C3CCC(C(=O)CO)C3(C=O)CC(O)C2C2(C)C1=CC(=O)CC2 PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- XWJTYEGVQBFZHI-IMPNNSMHSA-N Apocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1C2=C2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 XWJTYEGVQBFZHI-IMPNNSMHSA-N 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical class NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- WRUXLVGJBCULLU-WRPYGWGESA-N C([C@H]1CC2)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCN)C)[C@@]2(C)CC1 Chemical compound C([C@H]1CC2)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCN)C)[C@@]2(C)CC1 WRUXLVGJBCULLU-WRPYGWGESA-N 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000561734 Celosia cristata Species 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 235000010523 Cicer arietinum Nutrition 0.000 description 1
- 244000045195 Cicer arietinum Species 0.000 description 1
- LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N Citrostadienol Natural products CC=C(CC[C@@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC[C@H]4[C@H](C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)C(C)C LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N Corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N Dehydro-beta-sitosterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N Dehydrocholesterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 UCTLRSWJYQTBFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010007979 Glycocholic Acid Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000010 L-asparaginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 125000002061 L-isoleucyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 125000002435 L-phenylalanyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 101710178181 Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N Na salt-Glycocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020001621 Natriuretic Peptide Proteins 0.000 description 1
- 102000004571 Natriuretic peptide Human genes 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100006310 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) chol-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N Potassium ion Chemical compound [K+] NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N Propanolamine Chemical compound NCCCO WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- LGJMUZUPVCAVPU-JFBKYFIKSA-N Sitostanol Natural products O[C@@H]1C[C@H]2[C@@](C)([C@@H]3[C@@H]([C@H]4[C@@](C)([C@@H]([C@@H](CC[C@H](C(C)C)CC)C)CC4)CC3)CC2)CC1 LGJMUZUPVCAVPU-JFBKYFIKSA-N 0.000 description 1
- HEMHJVSKTPXQMS-DYCDLGHISA-M Sodium hydroxide-d Chemical compound [Na+].[2H][O-] HEMHJVSKTPXQMS-DYCDLGHISA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N Taurocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N UNPD88870 Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)=CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016548 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 1
- FIAINKIUSZGVGX-DKWTVANSSA-N [(2s)-1-amino-1-oxopropan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.C[C@H](N)C(N)=O FIAINKIUSZGVGX-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- BQULAXAVRFIAHN-PPHPATTJSA-N [(2s)-1-ethoxy-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BQULAXAVRFIAHN-PPHPATTJSA-N 0.000 description 1
- NOUDPBCEONUCOV-FJXQXJEOSA-N [(2s)-1-ethoxy-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)[C@@H](N)CC(C)C NOUDPBCEONUCOV-FJXQXJEOSA-N 0.000 description 1
- FHKPLLOSJHHKNU-INIZCTEOSA-N [(3S)-3-[8-(1-ethyl-5-methylpyrazol-4-yl)-9-methylpurin-6-yl]oxypyrrolidin-1-yl]-(oxan-4-yl)methanone Chemical compound C(C)N1N=CC(=C1C)C=1N(C2=NC=NC(=C2N=1)O[C@@H]1CN(CC1)C(=O)C1CCOCC1)C FHKPLLOSJHHKNU-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] carbonochloridate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(Cl)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229960002478 aldosterone Drugs 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 125000005196 alkyl carbonyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 1
- 125000006620 amino-(C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 150000007860 aryl ester derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003785 benzimidazolyl group Chemical group N1=C(NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000002047 benzodioxolyl group Chemical group O1OC(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N beta-Sistosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2C3CC=C4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000005708 carbonyloxy group Chemical group [*:2]OC([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-M chloroacetate Chemical compound [O-]C(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940089960 chloroacetate Drugs 0.000 description 1
- UCTLRSWJYQTBFZ-DDPQNLDTSA-N cholesta-5,7-dien-3beta-ol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 UCTLRSWJYQTBFZ-DDPQNLDTSA-N 0.000 description 1
- 125000000259 cinnolinyl group Chemical group N1=NC(=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N corticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N de-oxy corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002997 dehydrocholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000006704 dehydrohalogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940119740 deoxycorticosterone Drugs 0.000 description 1
- 125000004427 diamine group Chemical group 0.000 description 1
- AJOXZAAREAYBQR-RGMNGODLSA-N diethyl (2s)-2-aminobutanedioate;hydrochloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)C[C@H](N)C(=O)OCC AJOXZAAREAYBQR-RGMNGODLSA-N 0.000 description 1
- WSEQLMQNPBNMSL-FJXQXJEOSA-N diethyl (2s)-2-aminopentanedioate;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)CC[C@H](N)C(=O)OCC WSEQLMQNPBNMSL-FJXQXJEOSA-N 0.000 description 1
- GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N diglycidyl ether Chemical compound C1OC1COCC1CO1 GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- PESYCVVSLYSXAK-MERQFXBCSA-N ethyl (2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)OCC)=CNC2=C1 PESYCVVSLYSXAK-MERQFXBCSA-N 0.000 description 1
- PQGVTLQEKCJXKF-RGMNGODLSA-N ethyl (2s)-2-amino-3-methylbutanoate;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)[C@@H](N)C(C)C PQGVTLQEKCJXKF-RGMNGODLSA-N 0.000 description 1
- FPFQPLFYTKMCHN-PPHPATTJSA-N ethyl (2s)-2-amino-3-phenylpropanoate;hydron;chloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FPFQPLFYTKMCHN-PPHPATTJSA-N 0.000 description 1
- KPWCQEUBJAIORR-RGMNGODLSA-N ethyl (2s)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.CCOC(=O)[C@@H](N)CCSC KPWCQEUBJAIORR-RGMNGODLSA-N 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- IWBOPFCKHIJFMS-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl) ether Chemical compound NCCOCCOCCN IWBOPFCKHIJFMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004705 ethylthio group Chemical group C(C)S* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N glycocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N 0.000 description 1
- 229940099347 glycocholic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005368 heteroarylthio group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- FUKUFMFMCZIRNT-UHFFFAOYSA-N hydron;methanol;chloride Chemical compound Cl.OC FUKUFMFMCZIRNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOMQXHIJXUDQSS-DFWYDOINSA-N hydron;methyl (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoate;chloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O QOMQXHIJXUDQSS-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005945 imidazopyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 125000003453 indazolyl group Chemical group N1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000002249 indol-2-yl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([*])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 125000006302 indol-3-yl methyl group Chemical group [H]N1C([H])=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 125000006328 iso-butylcarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 1
- 125000000904 isoindolyl group Chemical group C=1(NC=C2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000005956 isoquinolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N levan Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@](CO)(CO[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@](O)(CO)O2)O)O1 AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001077 lymphatic endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- DNMZJIGSDQVGSA-UHFFFAOYSA-N methoxymethane;hydrochloride Chemical compound Cl.COC DNMZJIGSDQVGSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGYBXODOMJPMNO-WCCKRBBISA-N methyl (2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O HGYBXODOMJPMNO-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- SWVMLNPDTIFDDY-FVGYRXGTSA-N methyl (2s)-2-amino-3-phenylpropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SWVMLNPDTIFDDY-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 1
- XKVHMRBXIJTLBM-JEDNCBNOSA-N methyl (2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XKVHMRBXIJTLBM-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- HQEIPVHJHZTMDP-JEDNCBNOSA-N methyl (2s)-pyrrolidine-2-carboxylate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H]1CCCN1 HQEIPVHJHZTMDP-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- OZSJLLVVZFTDEY-HJXLNUONSA-N methyl (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O OZSJLLVVZFTDEY-HJXLNUONSA-N 0.000 description 1
- YHTRVWPOAJKWBV-ZXKBGTPZSA-N methyl (4r)-4-[(5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoate Chemical compound C([C@H]1CC2)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCC(=O)OC)[C@@]2(C)CC1 YHTRVWPOAJKWBV-ZXKBGTPZSA-N 0.000 description 1
- QVDXUKJJGUSGLS-LURJTMIESA-N methyl L-leucinate Chemical group COC(=O)[C@@H](N)CC(C)C QVDXUKJJGUSGLS-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- TTYMURDBXAIXQT-UHFFFAOYSA-N n'-(1,3-dichlorohexyl)methanediimine Chemical compound CCCC(Cl)CC(Cl)N=C=N TTYMURDBXAIXQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000006252 n-propylcarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000692 natriuretic peptide Substances 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002352 nonmutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005935 nucleophilic addition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N o-dicarboxybenzene Natural products OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 description 1
- 125000001715 oxadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000010525 oxidative degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 125000003538 pentan-3-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003505 polymerization initiator Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L potassium persulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002112 pyrrolidino group Chemical group [*]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- LISFMEBWQUVKPJ-UHFFFAOYSA-N quinolin-2-ol Chemical compound C1=CC=C2NC(=O)C=CC2=C1 LISFMEBWQUVKPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005493 quinolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001567 quinoxalinyl group Chemical group N1=C(C=NC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 125000003548 sec-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 description 1
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 description 1
- 235000015500 sitosterol Nutrition 0.000 description 1
- NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N sitosterol Natural products CC=C(/CCC(C)C1CC2C3=CCC4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC2(C)C1)C(C)C NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- LGJMUZUPVCAVPU-HRJGVYIJSA-N stigmastanol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]2(C)CC1 LGJMUZUPVCAVPU-HRJGVYIJSA-N 0.000 description 1
- 229940032091 stigmasterol Drugs 0.000 description 1
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 description 1
- 235000016831 stigmasterol Nutrition 0.000 description 1
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 125000006253 t-butylcarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(C(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N 0.000 description 1
- TYYRIEXBPNKCCD-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 7,7-diaminoheptanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CCCCCC(N)N TYYRIEXBPNKCCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 229940072172 tetracycline antibiotic Drugs 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000012932 thermodynamic analysis Methods 0.000 description 1
- 125000001113 thiadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036325 urinary excretion Effects 0.000 description 1
- 238000005353 urine analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
- A61K38/13—Cyclosporins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к пригодному в медицине производному гиалуроновой кислоты, содержащему единицу формулы (I):
где R1-R4 выбраны из H, С1-6алкила, формила и С1-6алкилкарбонила; R5 выбран из H, формила или С1-6алкилкарбонила; R6 выбран из H и C1-6алкила; -CHRa-CO-X1 выбран из групп:
где * означает место присоединения к -NR6-; Z1 является С2-30алкиленом или -(СН2СН2О)m-СН2СН2-, необязательно содержащим 1-5 групп -О-, -NRg- или -S-S-; m равен 1-100; Z2 выбран из -NRb-Z3 и -NRb-COO-Z3; Rb выбран из H, С1-20алкила, амино-С2-20алкила и гидрокси-С2-20алкила, необязательно содержащего 1-3 групп -О- и -NRf-; Rf выбран из Н, С1-12алкила, амино-С2-12алкила и гидрокси-С2-12алкила, необязательно содержащих 1-2 групп -О- или -NH-; Rg выбран из Н, С1-20алкила, амино-С2-20алкила или гидрокси-С2-20алкила, необязательно содержащих 1-3 групп -О- или -NH-; Z3 - холаноил или холестерил; и при X1, отличном от -NR9-Z1-Z2, указанное производное дополнительно содержит единицу формулы (II):
где R1a-R4a выбраны из Н, C1-6алкила, формила и C1-6алкилкарбонила; R5a представляет собой Н, формил или C1-6алкилкарбонил; X2 представляет собой -NH-Z1-Z2, где Z1 и Z2 определены выше; и указанное производное получено с использованием гиалуроновой кислоты, исключительно состоящей из единиц формулы (IIb):
где R5b выбран из Н, формила и С1-6алкилкарбонила; Xb выбран из OH и -O-Q+, где Q+ выбран из Li+, Na+, Rb+, Cs+, Mg2+, Ca2+, N+RjRkRlRm, где Rj, Rk, Rl и Rm выбраны из Н и С1-6алкила, имеющего молекулярную массу от 3 кДа до 1500 кДа, когда R1b-R4b все представляют собой Н, R5b представляет собой ацетил, и Xb представляет собой -O-Na+. Предложено новое соединение, эффективное для инкапсулирования лекарственных средств, и фармацевтическая композиция на его основе. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 9 пр., 22 табл., 119 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к производным гиалуроновой кислоты, которые модифицированы аминокислотами и содержат стерильные группы, введенные в них, к комплексам производных гиалуроновой кислоты и лекарственных средств, и к фармацевтическим композициям, содержащим производные гиалуроновой кислоты и лекарственные средства.
Уровень техники
Недавно были разработаны композиции, содержащие белки и пептиды в качестве активных ингредиентов, в результате достижений в области технологий генетической рекомбинации и химического синтеза, и число таких композиций ежегодно увеличивается. Однако белки и пептиды трудно всасываются в желудочно-кишечном тракте, через слизистую оболочку и т.д. Кроме того, белки и пептиды являются нестабильными в организме и имеют короткий период полураспада в крови. Следовательно, белковые и пептидные препараты требуется вводить частыми инъекциями, что является тяжелой нагрузкой для пациентов и медицинского персонала. Существует потребность в матриксе для системы доставки лекарственного средства (DDS), обладающем способностью к замедленному высвобождению или целенаправленной доставке, для инкапсулирования белка или пептида, без нарушения его фармакологической активности. Кроме того, с точки зрения эффективности введения предпочтительным является матрикс, в котором может быть инкапсулировано максимальное количество белка и/или пептида.
Известно, что фармакологическая активность белков и пептидов в большой степени зависит от их конформации и снижается в результате деградации и агрегации в результате контакта на поверхности раздела с окружающим воздухом или органическим растворителем или воздействия внешних условий, таких как температура, давление и рН. Также известно, что денатурированный или агрегированный белок повышает риски развития побочных реакций при введении в организм, например, будучи антигенным. Для препаратов с замедленным высвобождением, содержащих белок или пептид в качестве активного ингредиента, требуется обеспечивать стабильность белка или пептида в течение периода от формулирования, во время хранения препаратов до высвобождения активного ингредиента в организме после введения.
Для низкомолекулярных лекарственных средств проблемы, касающиеся стабильности лекарственных средств, не являются столь значимыми по сравнению с белками и пептидами, но в данном случае имеется большая потребность в матриксах для DDS, обладающих способностью повышать растворимость слаборастворимых препаратов или обеспечивать замедленное высвобождение или целенаправленную доставку.
Кроме того, матриксы для фармацевтического применения должны быть неантигенными, немутагенными, нетоксичными и биоразлагаемыми по причинам безопасности.
Недавно сообщалось о применении полисахаридов в качестве матриксов для фармацевтических носителей. Один из них, гиалуроновая кислота (ГК), представляет собой биологическое вещество (полисахарид), которое было выделено из стекловидного тела глаза быка K. Meyer в 1934 году, и в течение длительного периода времени известна как основной компонент внеклеточного матрикса. ГК представляет собой гликозаминогликан, состоящий из дисахаридных единиц, содержащих D-глюкуроновую кислоту и N-ацетилглюкозамин, связанные β(1→3)гликозидной связью. Структура ГК не различается между видами в химическом и физическом отношении, и у людей имеется метаболический путь для ГК. Следовательно, это одно из самых безопасных биологических веществ для медицинского применения, также в отношении иммунитета и токсичности.
Помимо ее свойств в качестве безопасного вещества, недавно стали представлять интерес свойства гиалуроновой кислоты в качестве биологически активного вещества в индукции адгезии, пролиферации и подвижности клеток. Кроме того, стало возможным использовать микроорганизмы в отношении продукции, массовой продукции высокомолекулярной гиалуроновой кислоты. По этим причинам недавно настойчиво проводились исследования по DDS с гиалуроновой кислотой. Сообщалось, что конъюгация лекарственного средства с гиалуроновой кислотой успешно использовалась для целенаправленного транспорта в раковую ткань (патентная литература 1), целенаправленного транспорта в печень (патентная литература 2) и снижения антигенности (патентная литература 3). Сообщалось, что рецепторы ГК, включая CD44, RHAMM (рецептор опосредованной гиалуроновой кислотой подвижности), LYVE-1 (рецептор-1 ГК эндотелия лимфатических сосудов), HARE (рецептор для эндоцитоза гиалуроновой кислоты) находятся в живом организме (непатентная литература 7 и непатентная литература 8). В частности, CD44 и RHAMM сверхэкспрессируются во многих раковых клетках. Следовательно, были сделаны попытки использовать ГК в качестве матрикса для носителей с целенаправленной доставкой в раковые опухоли. Примеры таких попыток включают конъюгат паклитаксел-ГК (непатентная литература 9-11 и патентная литература 12), конъюгат камтотецин-ГК (патентная литература 13), конъюгат доксорубицин-HPTM [N-(2-гидроксипропил)метакриламид]-ГК (непатентная литература 12), конъюгат масляная кислота-ГК (непатентная литература 13), наночастицу из ГК-ПЭГ-PLGA, содержащую доксорубицин (непатентная литература 14), siPHK-содержащий ГК гель (непатентная литература 15) и покрытую ГК липосому, содержащую доксорубицин (непатентная литература 16). Кроме того, в непатентной литературе 17 раскрыто производное ГК, конъюгированное с холевой кислотой, посредством этилендиаминного линкера, введенного через амидную связь. Сообщалось, что такие носители, содержащие ГК в качестве матрикса, эффективно захватываются in vitro клетками с высокой экспрессией CD44 (см., например, непатентную литературу 9). Однако известно, что введенная системно ГК in vivo, быстро выводится из крови; немедленно поглощается посредством рецепторов HARE, находящихся, например, на синусоидальных эндотелиальных клетках в печени и метаболизируется (непатентная литература 18-20). Такое короткое время удерживания гиалуроновой кислоты в крови является недостатком при ее применении для пролонгированного удерживания лекарственного средства или в качестве матрикса DDS для целенаправленной доставки. Вероятно, рецепторы распознают шесть последовательных сахарных единиц в гиалуроновой кислоте. Предпринимались попытки удлинить время удерживания в крови посредством модификации карбоксигруппы (патентная литература 4, 5 и 6).
Были разработаны производные гиалуроновой кислоты, которые имеют более длительное время удерживания, за счет высокой степени модификации карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты в гиалуроновой кислоте, и было показано, что они являются пригодными для применения (патентная литература 7). Как правило, увеличение степени модификации карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты пролонгирует время удерживания производного гиалуроновой кислоты в крови. Однако они не показали линейной корреляции, и удерживание резко изменяется в некоторой пороговой точке.
Примеры модификации карбоксигруппы в гиалуроновой кислоте аминокислотой включают модификации этиловым эфиром глицина с использованием 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин)-4-метилморфолиния (далее по тексту обозначенного как DMT-MM), в качестве конденсирующего агента, который может быть получен, например, взаимодействием 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазина в присутствии N-метилморфолина, по сообщениям, степень модификации которого достигает до 20% (непатентная литература 1). Примеры, в которых соединение на основе триазина используется в качестве конденсирующего агента, включают гиалуроновую кислоту, модифицированную аланином, которая, как сообщалось, обладает повышенной устойчивостью к деградации в результате окисления и потенциально применяется в качестве вязкой добавки (непатентная литература 2). Сообщалось о модификации другими аминокислотами аналогичными способами (непатентная литература 3, патентная литература 9). Примеры включают получение нерастворимых в воде биосовместимых пленок, в которых при использовании гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (далее по тексту обозначенного как EDC) в качестве конденсирующего агента, гиалуроновую кислоту модифицируют гидрохлоридом метилового эфира лейцина, гидрохлоридом метилового эфира валина, гидрохлоридом метилового эфира изолейцина, гидрохлоридом метилового эфира пролина, гидрохлоридом метилового эфира фенилаланина, гидрохлоридом метилового эфира аргинина и гидрохлоридом метилового эфира гистидина, и гель получают без снятия защиты; однако степень ее модификации не известна (патентная литература 8). Кроме того, в патентной литературе 15, опубликованной после даты приоритета настоящей заявки, раскрывается, что производное гиалуроновой кислоты, полученное модификацией карбоксигруппы гиалуроновой кислоты определенной аминокарбоновой кислотой или ее амидом, обладает способностью к биоразлагаемости и удерживанию в крови, и что оно оказывает положительное влияние на высвобождение лекарственного средства из эндосомы в цитоплазму.
Дополнительные примеры носителей лекарственных средств, полученных из полисахарида, включают производные пуллана, модифицированные холестерильной группой, которые, как сообщалось, образуют мелкие частицы наноразмера в водном растворе и функционируют в качестве молекул хозяина, которые образуют комплексы с гидрофобными молекулами с низкой молекулярной массой, пептидами и белками (непатентная литература 4). Результаты термодинамического анализа производных пуллана после захвата белков показывали, что захваченный белок стабилизирован водородными связями с гидроксигруппами пуллана (непатентная литература 5).
Дополнительные примеры включают карбоксиметилцеллюлозу (СМС; патентная литература 10) и хитозан, модифицированный линолевой кислотой (непатентная литература 6), о которых сообщалось, что они использовались в качестве веществ для получения комплексов с белком. Кроме того, в патентной литературе 11 раскрыта композиция, содержащая производное гиалуроновой кислоты, имеющее поперечно-сшивающую группу и гидрофильное полисахаридное производное, содержащее гидрофобную группу, где производное гиалуроновой кислоты, содержащее поперечно-сшивающую группу, получают поперечным сшиванием гиалуроновой кислоты или ее производного, содержащего группу, способную к поперечному сшиванию в присутствии гидрофильного полисахаридного производного. В патентной литературе 14 описано, что производное гиалуроновой кислоты, в которое введена холестерильная группа в качестве гидрофобной группы, образует мелкие частицы посредством ассоциации и образует комплексы с лекарственными средствами в воде.
Перечень ссылок
Патентная литература
Патентная литература 1: Международная публикация № 92/06714.
Патентная литература 2: Не прошедшая экспертизу опубликованная патентная заявка Японии № 2001-81103.
Патентная литература 3: Не прошедшая экспертизу опубликованная патентная заявка Японии № 2-273176.
Патентная литература 4: Не прошедшая экспертизу опубликованная патентная заявка Японии № 5-85942.
Патентная литература 5: Международная публикация № 01/05434.
Патентная литература 6: Международная публикация № 01/60412.
Патентная литература 7: Международная публикация № 2006/028110.
Патентная литература 8: Международная публикация № 92/20349.
Патентная литература 9: Международная публикация № 2011/148116.
Патентная литература 10: Международная публикация № 2002/022154.
Патентная литература 11: Международная публикация № 2008/136536.
Патентная литература 12: Международная публикация № 2004/035629.
Патентная литература 13: Международная публикация № 2009/074678.
Патентная литература 14: Международная публикация № 2010/053140.
Патентная литература 15: Международная публикация № 2012/118189.
Непатентная литература
Непатентная литература 1: Biomacromolecules, Vol. 8, p. 2190-2195, 2007.
Непатентная литература 2: Carbohydrates Polymers, Vol. 86, p. 747-752, 2011.
Непатентная литература 3: Carbohydrates Polymers, Vol. 87, p. 2211-2216, 2012.
Непатентная литература 4: Macromolecules, Vol. 26, p. 3062-3068, 1993.
Непатентная литература 5: Colloids and Surfaces, Vol. 112, p. 91-95, 1996.
Непатентная литература 6: Carbohydrates Polymers, Vol. 62, p. 293-298, 2005.
Непатентная литература 7: Molecular Pharmaceutics, Vol. 5, p. 474-486, 2008.
Непатентная литература 8: Journal of Drug Targeting, Vol. 16, p. 91-107, 2008.
Непатентная литература 9: Bioconjugate Chem., Vol. 10, p. 755-763, 1999.
Непатентная литература 10: Clinical Cancer Research, Vol. 14, p. 3598-3606, 2008.
Непатентная литература 11: Bioconjugate Chem., Vol. 19, p. 1319-1325, 2008.
Непатентная литература 12: Pharmaceutical Research, Vol. 19, p. 396-402, 2002.
Непатентная литература 13: Clinical Cancer Research, Vol. 10, p. 4822-4830, 2004.
Непатентная литература 14: Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine, Vol. 3, p. 246-257, 2007.
Непатентная литература 15: Journal of Controlled Release, Vol. 119, p. 245-252, 2007.
Непатентная литература 16: Neoplasia, Vol. 6, p. 343-353, 2004.
Непатентная литература 17: Journal of Materials Chemistry, Vol. 19, p. 4102-4107, 2009.
Непатентная литература 18: Cell and Tissue Research, Vol. 243, p. 505-510, 1985.
Непатентная литература 19: Journal of Biological Chemistry, Vol. 275, p. 37733-37741, 2000.
Непатентная литература 20: The Biochemical Journal, Vol. 200, p. 415-424, 1981.
Сущность изобретения
Техническая задача
Удерживание производного гиалуроновой кислоты в крови коррелирует со степенью модификации карбоксигруппы в ее фрагменте глюкуроновой кислоты. Но также было обнаружено, что изменение происходит внезапно при некотором пороговом значении. Следовательно, удерживание производного гиалуроновой кислоты в крови трудно сохранять в требуемых пределах только изменением степени модификации карбоксигруппы. Следовательно, требуется более простой и более надежный способ контроля удерживания в крови. Кроме того, снижение распознавания гиалуроновой кислоты рецепторами гиалуроновой кислоты будет делать гиалуроновую кислоту менее подверженной метаболизму в живом организме и будет снижать ее биоразлагаемость, естественного свойства гиалуроновой кислоты. Следовательно, требуется матрикс, обладающий способностью к биоразлагаемости (этим обеспечивается безопасность) и удерживанию в крови.
Задачей настоящего изобретения является обеспечение производного гиалуроновой кислоты, одновременно обладающего способностью к биоразлагаемости и удерживанию в крови. Другой задачей изобретения является обеспечение комплекса производного гиалуроновой кислоты и лекарственного средства, и фармацевтической композиции, содержащей производное гиалуроновой кислоты, в частности, комплекс производного гиалуроновой кислоты и лекарственного средства.
Решение задачи
В исследовании, направленном на решение указанных задач, авторы настоящего изобретения обнаружили, что производное гиалуроновой кислоты, полученное дополнительным введением стерильной группы в карбоксигруппу фрагмента глюкуроновой кислоты и/или карбоксигруппу фрагмента аминокислоты промежуточного соединения, полученного взаимодействием карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты или ее соли с определенной аминокислотой или амидом аминокислоты с преобразованием карбоксигруппы в амид, обладает способностью к биоразлагаемости и удерживанию в крови, и что комплекс производного гиалуроновой кислоты и лекарственного средства обладает хорошими свойствами в виде фармацевтической композиции, и тем самым осуществили настоящее изобретение. Кроме того, в исследовании авторы настоящего изобретения обнаружили, что производные с определенными амидами аминокислот (такие, в которых Ra, являющийся таким, как определено ниже, представляет собой С1-6алкил, замещенный арилом или гетероарилом, где арил замещен одной или более гидроксигруппами), такими как тирозинамид и триптофанамид, производные которых модифицированы стерильной группой, показывают лучшую диспергируемость в воде, несмотря на гидрофобность стерильной группы, по сравнению с производными без введения стерильной группы, и тем самым осуществили настоящее изобретение. Кроме того, авторы настоящего изобретения сравнили производные с фенилаланинамидом (такие, в которых Ra, являющийся таким, как определено ниже, представляет собой С1-6алкил, замещенный арилом, где арил не является замещенным), производные которого дополнительно модифицированы стерильной группой при степени введения 6% или ниже, с производными без фенилаланинамида, производные которого модифицированы стерильной группой при степени введения 6% или ниже, и обнаружили, что, несмотря на то, что они оба диспергировались в чистой воде, только первое производное диспергировалось в физиологическом растворе и последнее агрегировало с преципитацией, и что первое представляет собой превосходный матрикс для подкожных инъекций для непрерывного введения, и тем самым завершили настоящее изобретение.
Следовательно, настоящее изобретение относится к производным гиалуроновой кислоты, обладающим способностью к биодеградации и удерживанию в крови, к производным гиалуроновой кислоты, которые показывают лучшую диспергируемость в воде введением стерильной группы, и к комплексам, содержащим такие производные гиалуроновой кислоты и соединение, обладающее фармакологической активностью. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу получения производного гиалуроновой кислоты и к фармацевтической композиции, содержащей производное гиалуроновой кислоты, и способу получения композиции.
В аспекте настоящего изобретения обеспечиваются производные гиалуроновой кислоты по следующим пунктам (1)-(10).
(1) Производное гиалуроновой кислоты, содержащее повторяющуюся единицу формулы (I):
Химическая формула 1
где R1, R2, R3 и R4 независимо выбраны из атома водорода, С1-6алкила, формила и С1-6алкилкарбонила;
R5 представляет собой атом водорода, формил или С1-6алкилкарбонил;
Х1 представляет собой гидрокси, С1-6алкокси, -O-Q+, -NR7R8 или NR9-Z1-Z2;
Q+ представляет собой противокатион;
R6, R7, R8 и R9 независимо выбраны из атома водорода и С1-6алкила;
Ra представляет собой атом водорода или С1-6алкил, где алкилы могут быть независимо замещены одной или более группами, выбранными из гидрокси, карбокси, карбамоила, С1-6алкилтио, арила и гетероарила, где арил может быть замещен одной или более гидроксигруппами;
Z1 представляет собой С2-30алкилен или -(СН2СН2О)m-СН2СН2-, где в алкилен может быть введено 1-5 групп, независимо выбранных из -О-, -NRg- и -S-S-, и m является целым числом, выбранным из 1-100;
Z2 выбран из групп, представленных следующими формулами:
-NRb-Z3,
-NRb-COO-Z3,
-NRb-CO-Z3,
-NRb-CO-NRcZ3,
-COO-Z3,
-CO-NRc-Z3,
-O-CO-NRc-Z3,
-O-COO-Z3,
-S-Z3,
-CO-Za-S-Z3,
-O-CO-Zb-S-Z3,
-NRb-CO-Zb-S-Z3 и
-S-S-Z3;
Rb и Rc независимо выбраны из атома водорода, С1-20алкила, амино-С2-20алкила и гидрокси-С2-20алкила, где в алкильные группы может быть введено 1-3 группы, независимо выбранных из -О- и -NRf-;
Rf независимо выбран из атома водорода, С1-12алкила, амино-С2-12алкила и гидрокси-С2-12алкила, и в алкильные группы может быть введено 1-2 группы, независимо выбранных из -О- и -NH-;
Rg независимо выбран из атома водорода, С1-20алкила, амино-С2-20алкила и гидрокси-С2-20алкила, и в алкильные группы может быть введено 1-3 группы, независимо выбранных из -О- и -NH-;
Z3 представляет собой стерильную группу;
Za представляет собой С1-5алкилен; и
Zb представляет собой С2-8алкилен или С2-8алкенилен;
где если производное гиалуроновой кислоты не содержит повторяющихся единиц формулы (I), в которой Х1 представляет собой -NR9-Z1-Z2, тогда производное гиалуроновой кислоты дополнительно содержит повторяющуюся единицу формулы (II):
Химическая формула 2
где R1a, R2a, R3a и R4a независимо выбраны из атома водорода, С1-6алкила, формила и С1-6алкилкарбонила;
R5a представляет собой атом водорода, формил или С1-6алкилкарбонил;
Х2 представляет собой -NR9-Z1-Z2, где R9, Z1 и Z2 являются такими, как определено выше.
(2) Производное гиалуроновой кислоты по пункту (1) выше, дополнительно содержащее повторяющуюся единицу формулы (IIb):
Химическая формула 3
где R1b, R2b, R3b и R4b, каждый независимо, выбран из атома водорода, С1-6алкила, формила и С1-6алкилкарбонила;
R5b выбран из атома водорода, формила или С1-6алкилкарбонила;
Xb выбран из гидрокси и -O-Q+, где Q+ представляет собой противокатион.
(3) Производное гиалуроновой кислоты по пункту (1) или (2) выше, где Х1 представляет собой NR9-Z1-Z2 в формуле (I).
(4) Производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(3) выше, где процент дисахаридной единицы формулы (I) в имеющихся дисахаридных повторяющихся единицах составляет 70-100%.
(5) Производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(4) выше, где процент дисахаридной единицы, содержащей группу NR9-Z1-Z2 в имеющихся дисахаридных повторяющихся единицах, составляет 3-50%.
(6) Производное гиалуроновой кислоты по пункту (1) или (2) выше, не содержащее повторяющуюся единицу формулы (I), где Х1 представляет собой NR9-Z1-Z2.
(7) Производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1), (2) и (6) выше, где сумма процентов повторяющейся единицы формулы (I) и повторяющейся единицы формулы (II) в имеющихся дисахаридных повторяющихся единицах составляет 70-100%.
(8) Производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(7) выше, где производное гиалуроновой кислоты получено с использованием гиалуроновой кислоты, исключительно состоящей из дисахаридной единицы формулы (IIb) по пункту (2), и имеет среднемассовую молекулярную массу от 3 кДа до 1500 кДа, когда R1b, R2b, R3b и R4b, все представляют собой атомы водорода, R5b представляет собой ацетил, и Xb представляет собой -O-Na+.
(9) Производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(8), где Z1 представляет собой С2-10алкилен, Z2 представляет собой -NH-COO-Z3, и Z3 представляет собой холестерильную группу.
(10) Производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(9) выше, где производное гиалуроновой кислоты получено взаимодействием производного гиалуроновой кислоты, содержащего повторяющуюся единицу формулы (IIb) и повторяющуюся единицу формулы (Ia):
Химическая формула 4
где Ха выбран из гидрокси, -О-Q+, С1-6алкокси и -NR7R8, и R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, Q+ и Ra являются такими, как определено в пункте (1) выше, с соединением формулы -HNR9-Z1-Z2, где R9, Z1 и Z2 являются такими, как определено в пункте (1) выше.
В другом аспекте настоящего изобретения обеспечиваются фармацевтические композиции по следующим пунктам (11) и (12).
(11) Фармацевтическая композиция, содержащая производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(10) выше и лекарственное средство.
(12) Фармацевтическая композиция по пункту (11), где лекарственное средство удерживается посредством образования комплекса с производным гиалуроновой кислоты.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предоставлен комплекс производное гиалуроновой кислоты-лекарственное средство, где лекарственное средство удерживается в производном гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(10) выше. Предпочтительно обеспечивается комплекс производное гиалуроновой кислоты-лекарственное средство, где производное гиалуроновой кислоты образует мелкие частицы ассоциацией в воде и удерживает лекарственное средство.
Кроме того, в еще одном из аспектов настоящего изобретения предоставлен биоразлагаемый носитель лекарственного средства, содержащий производное гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(10).
Кроме того, в еще одном аспекте настоящего изобретения предоставлен способ введения лекарственного средства, включающий введение терапевтически эффективного количества лекарственного средства с производным гиалуроновой кислоты по любому из пунктов (1)-(10).
Арил (необязательно замещенный одной или более гидроксигруппами) в Ra предпочтительно является незамещенным, если Х1 представляет собой гидрокси, -O-Q+ или -NR9-Z1-Z2.
Преимущественные эффекты изобретения
При использовании производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению можно обеспечить препарат с замедленным высвобождением, содержащий большое количество лекарственного средства, в частности, низкомолекулярного соединения, или белка или пептида, обладающего эффективностью, одновременно сохраняя его биологическую активность. Кроме того, производные гиалуроновой кислоты являются превосходными в отношении безопасности и обладают особенно превосходными свойствами в качестве носителя для фармацевтических препаратов и в качестве матрикса для подкожных инъекций для непрерывного введения, в отношении одновременного удерживания лекарственного средства в крови и биоразлагаемости. Кроме того, фармакокинетика препаратов, полученных с данными производными, может контролироваться изменением степени модификации карбоксигруппы, т.е. процента введения группы -NR9-Z1-Z2 и/или аминокислоты (включая амид аминокислоты) в производные гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению.
Краткое описание фигур
На фиг. 1-1 представлен пример 1Н-ЯМР спектра гидрохлорида холестерил-6-аминогексилкарбамата (Chol-C6), полученного в примере 1-1.
На фиг. 1-2 представлен пример 1Н-ЯМР спектра (растворитель: D2O) тетрабутиламмониевой (TBA) соли гиалуроновой кислоты (ГК-TBA), полученной из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, полученного в примере 1-3.
На фиг. 1-3 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ala, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, полученного в примере 1-4.
На фиг. 1-4 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ala-Chol/FL, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, полученного в примере 1-4 (степень введения холестерильной группы: 7%).
На фиг. 1-5 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-ThrNH2-Chol/FL, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, полученного в примере 1-5 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-6 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ser-OEt/FL, полученного в примере 1-6.
На фиг. 1-7 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ser, полученного в примере 1-6.
На фиг. 1-8 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ser-Chol/FL, полученного в примере 1-6 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-9 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Gly-OEt, полученного в примере 1-7.
На фиг. 1-10 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Gly, полученного в примере 1-7.
На фиг. 1-11 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Gly-Chol/FL, полученного в примере 1-7 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-12 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Thr, полученного в примере 1-8.
На фиг. 1-13 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Thr-Chol/FL, полученного в примере 1-8 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-14 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Asn, полученного в примере 1-9.
На фиг. 1-15 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Asn-Chol/FL, полученного в примере 1-9 (степень введения холестерильной группы: 7%).
На фиг. 1-16 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Asp, полученного в примере 1-10.
На фиг. 1-17 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Asp-Chol/FL, полученного в примере 1-10 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-18 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ile, полученного в примере 1-11.
На фиг. 1-19 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ile-Chol/FL, полученного в примере 1-11 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-20 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Leu, полученного в примере 1-12.
На фиг. 1-21 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Leu-Chol/FL, полученного в примере 1-12 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-22 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Val, полученного в примере 1-13.
На фиг. 1-23 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Val-Chol/FL, полученного в примере 1-13 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-24 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Phe, полученного в примере 1-14.
На фиг. 1-25 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Phe-Chol/FL, полученного в примере 1-14 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-26 представлен пример 1Н-ЯМР спектра (растворитель: смешанный раствор 0,02Н DCl ДМСО-d6/D2O) ГК-SerNH2-Chol/FL, полученного в примере 1-15 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-27 представлен пример 1Н-ЯМР спектра (растворитель:D2O) ГК-SerNH2-Chol/FL, полученного в примере 1-15 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-28 представлен пример 1Н-ЯМР спектра (растворитель: смешанный раствор 0,02Н DCl ДМСО-d6/D2O) ГК-GlyNH2/Chol/FL, полученного в примере 1-16 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-29 представлен пример 1Н-ЯМР спектра (растворитель:D2O) ГК-GlyNH2/Chol/FL, полученного в примере 1-16 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-30 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-LeuNH2/Chol/FL, полученного в примере 1-17 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-31 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-ValNH2/Chol/FL, полученного в примере 1-18 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-32 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ala/Chol/FL, полученного в примере 1-19 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-33 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ser-OEt/Chol/FL, полученного в примере 1-20.
На фиг. 1-34 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ser/Chol/FL, полученного в примере 1-20 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-35 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Chol/FL, полученного в сравнительном примере 1-1 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 1-36 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-EDOBEA, полученного в сравнительном примере 1-2.
На фиг. 1-37 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-EDOBEA-Ac/FL, полученного в сравнительном примере 1-2.
На фиг. 1-38 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Tyr, полученного в сравнительном примере 1-3.
На фиг. 1-39 представлен пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Tyr-Chol/FL, полученного в сравнительном примере 1-3 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 2-1-1 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Ala-Chol-7%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-1) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-2 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Ala-Chol-24%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-2) и 99k ГК-Chol-24%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-2) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-3 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Ala-Chol-30%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-3) и 99k ГК-Chol-25%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-3) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-4 представлен график, показывающий изменения концентрации 50k ГК-Ala-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-4) и 50k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-4) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-5 представлен график, показывающий изменения концентрации 50k ГК-Ala-Chol-22%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-5) и 50k ГК-Chol-20%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-5) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-6 представлен график, показывающий изменения концентрации 50k ГК-Ala-Chol-26%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-6) и 50k ГК-Chol-27%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-6) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-7 представлен график, показывающий изменения концентрации 10k ГК-Ala-Chol-16%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-7) и 10k ГК-Chol-15%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-7) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-8 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-ThrNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-8) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-9 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-ThrNH2/Chol-24%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-9) и 99k ГК-Chol-24%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-2) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-10 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-ThrNH2/Chol-31%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-10) и 99k ГК-Chol-25%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-3) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-11 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Ser-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-11) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-12 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Gly-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-12) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-13 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Thr-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-13) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-14 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Asn-Chol-7%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-14) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-15 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Asp-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-15) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-16 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Ile-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-16) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-17 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Leu-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-17) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-18 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Val-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-18) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-19 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Phe-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-19) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-20 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-ValNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-20) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-21 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-SerNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-21) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-22 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-LeuNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-22) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-23 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-GlyNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-23) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-24 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Ala/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-24) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-25 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Ser/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-25) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-1-26 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Tyr-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 9: образец 2-8) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 2-2).
На фиг. 2-2-1 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Ala-Chol-7%/FL (таблица 9: образец 2-1) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-2 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Ala-Chol-24%/FL (таблица 9: образец 2-2) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-3 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Ala-Chol-30%/FL (таблица 9: образец 2-3) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-4 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 50k ГК-Ala-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-4) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-5 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 50k ГК-Ala-Chol-22%/FL (таблица 9: образец 2-5) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-6 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 50k ГК-Ala-Chol-26%/FL (таблица 9: образец 2-6) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-7 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 10k ГК-Ala-Chol-16%/FL (таблица 9: образец 2-7) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-8 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-ThrNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-8) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-9 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-ThrNH2/Chol-24%/FL (таблица 9: образец 2-9) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-10 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-ThrNH2/Chol-31%/FL (таблица 9: образец 2-10) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-11 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Ser-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-11) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-12 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Gly-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-12) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-13 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Thr-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-13) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-14 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Asn-Chol-7%/FL (таблица 9: образец 2-14) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-15 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Asp-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-15) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-16 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Ile-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-16) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-17 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Leu-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-17) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-18 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Val-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-18) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-19 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Phe-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-19) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-20 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-ValNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-20) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-21 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-SerNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-21) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-22 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-LeuNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-22) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-23 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-GlyNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-23) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-24 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Ala/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-24) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-25 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Ser/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-25) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-26 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-EDOBEA-Ac/FL (сравнительный пример 1-2) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на отсутствие метаболизма введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-2-27 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Tyr-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-8) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 2-3).
На фиг. 2-3-1 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Ala-Chol-7%/FL (таблица 9: образец 2-1), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-2 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Ala-Chol-24%/FL (таблица 9: образец 2-2), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-3 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Ala-Chol-30%/FL (таблица 9: образец 2-3), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-4 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 50k ГК-Ala-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-4), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-5 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 50k ГК-Ala-Chol-22%/FL (таблица 9: образец 2-5), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с наиболее высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-6 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 50k ГК-Ala-Chol-26%/FL (таблица 9: образец 2-6), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-7 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 10k ГК-Ala-Chol-16%/FL (таблица 9: образец 2-7), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-8 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-ThrNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-8), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-9 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-ThrNH2/Chol-24%/FL (таблица 9: образец 2-9), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-10 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-ThrNH2/Chol-31%/FL (таблица 9: образец 2-10), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-11 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Ser-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-11), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-12 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Gly-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-12), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-13 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Thr-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-13), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-14 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Asn-Chol-7%/FL (таблица 9: образец 2-14), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-15 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Asp-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-15), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-16 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Ile-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-16), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-17 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Leu-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-17), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-18 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Vak-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-18), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-19 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Phe-Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-19), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-20 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-ValNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-20), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-21 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-SerNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-21), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-22 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-LeuNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-22), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-23 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-GlyNH2/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-23), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-24 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Ala/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-24), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-25 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Ser/Chol-6%/FL (таблица 9: образец 2-25), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-26 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-EDOBEA-Ac/FL (сравнительный пример 1-2), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 2-3-27 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией проб мочи мыши, получавшей 99k ГК-Tyr-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-8), где хроматограммы во временных точках в такой же шкале показаны слева и нормализованные с самыми высокими пиками показаны справа (пример 2-4).
На фиг. 3-1 представлен пример ЯМР спектра ГК-Gln, полученного в примере 3-1.
На фиг. 3-2 представлен пример ЯМР спектра ГК-Gln-Chol/FL, полученного в примере 3-1 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-3 представлен пример ЯМР спектра ГК-Met, полученного в примере 3-2.
На фиг. 3-4 представлен пример ЯМР спектра ГК-Met-Chol/FL, полученного в примере 3-2 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-5 представлен пример ЯМР спектра ГК-AlaNH2/Chol/FL, полученного в примере 3-3 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-6 представлен пример ЯМР спектра ГК-AsnNH2/Chol/FL, полученного в примере 3-4 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-7 представлен пример ЯМР спектра ГК-AsnNH2/Chol/FL, полученного в примере 3-4 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-8 представлен пример ЯМР спектра ГК-IleNH2/Chol/FL, полученного в примере 3-5 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-9 представлен пример ЯМР спектра ГК-GlnNH2/Chol/FL, полученного в примере 3-6 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-10 представлен пример ЯМР спектра ГК-MetNH2/Chol/FL, полученного в примере 3-7 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-11 представлен пример ЯМР спектра ГК-Glu, полученного в сравнительном примере 3-1.
На фиг. 3-12 представлен пример ЯМР спектра ГК-Glu-Chol/FL, полученного в сравнительном примере 3-1 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 3-13 представлен пример ЯМР спектра ГК-Thr, полученного в сравнительном примере 3-2.
На фиг. 3-14 представлен пример ЯМР спектра ГК-Thr-Chol/FL, полученного в сравнительном примере 3-2 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 4-1-1 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Gln-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: образец 4-1) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-2 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Met-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: образец 4-2) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-3 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-AlaNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: образец 4-3) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-4 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-AsnNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: образец 4-4) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 19: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-5 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-IleNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: образец 4-5) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-6 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-GlnNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: образец 4-6) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-7 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-MetNH2/Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: образец 4-7) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-8 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Glu-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: сравнительный образец 4-1) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-9 представлен график, показывающий изменения концентрации 99k ГК-Thr-Chol-6%/FL в плазме крови (таблица 15: сравнительный образец 4-2) и 99k ГК-Chol-6%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-1) (пример 4-2).
На фиг. 4-1-10 представлен график, показывающий изменения концентрации 10k ГК-Tyr-Chol-7%/FL в плазме крови (таблица 15: сравнительный образец 4-3) и 99k ГК-Chol-15%/FL (таблица 9: сравнительный образец 2-7) (пример 4-2).
На фиг. 4-2-1 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Gln-Chol-6%/FL (таблица 15: образец 4-1) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-2 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Met-Chol-6%/FL (таблица 15: образец 4-2) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-3 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-AlaNH2/Chol-6%/FL (таблица 15: образец 4-3) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-4 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-AsnNH2/Chol-6%/FL (таблица 15: образец 4-4) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-5 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-IleNH2/Chol-6%/FL (таблица 15: образец 4-5) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-6 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-GlnNH2/Chol-6%/FL (таблица 15: образец 4-6) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-7 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-MetNH2/Chol-6%/FL (таблица 15: образец 4-7) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-8 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Glu-Chol-6%/FL (таблица 15: сравнительный образец 4-1) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-9 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 99k ГК-Trp-Chol-6%/FL (таблица 15: сравнительный образец 4-2) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 4-2-10 представлены результаты анализа эксклюзионной хроматографией 10k ГК-Tyr-Chol-7%/FL (таблица 15: сравнительный образец 4-3) и пробы печени мыши, получавшей данный образец, которые указывают на метаболизм введенного образца в мышиной печени (пример 4-3).
На фиг. 5-1 представлен пример ЯМР спектра ГК-TyrNH2/Chol/FL, полученного в примере 5-1 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 5-2 представлен пример ЯМР спектра ГК-TrpNH2/Chol/FL, полученного в примере 5-2 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 5-3 представлен пример ЯМР спектра ГК-PheNH2/Chol/FL, полученного в примере 5-3 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 6-1-1 представлен график, показывающий инкапсулирование паклитаксела, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и паклитаксела) в примере 6-1, где на оси ординат указана концентрация паклитаксела (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординат указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 6-1-2 представлен график, показывающий инкапсулирование паклитаксела, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и паклитаксела) в примере 6-1, где на оси ординат указана концентрация паклитаксела (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординат указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 6-1-3 представлен график, показывающий инкапсулирование паклитаксела, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и паклитаксела) в примере 6-1, где на оси ординат указана концентрация паклитаксела (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординат указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 6-1-4 представлен график, показывающий инкапсулирование паклитаксела, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и паклитаксела) в примере 6-1, где на оси ординат указана концентрация паклитаксела (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординате указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 6-2-1 представлен график, показывающий инкапсулирование циклоспорина, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и циклоспорина) в примере 6-2, где на оси ординат указана концентрация циклоспорина (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординат указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 6-2-2 представлен график, показывающий инкапсулирование циклоспорина, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и циклоспорина) в примере 6-2, где на оси ординат указана концентрация циклоспорина (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординат указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 6-2-3 представлен график, показывающий инкапсулирование циклоспорина, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и циклоспорина) в примере 6-2, где на оси ординат указана концентрация циклоспорина (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординат указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 6-2-4 представлен график, показывающий инкапсулирование циклоспорина, слаборастворимого лекарственного средства, производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению (образование комплекса производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и циклоспорина) в примере 6-2, где на оси ординат указана концентрация циклоспорина (растворимость) в супернатанте, которая повышается в присутствии производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Более высокое значение на оси ординат указывает на большее инкапсулирование.
На фиг. 7-1 представлен график, показывающий высвобождение паклитаксела из ГК-Ala-Chol-41% в примере 7-1, где значения на оси абсцисс и ординат соответственно представляют время (ч) и количество паклитаксела, инкапсулированного в ГК-Ala-Chol-41%, не подвергшегося высвобождению (находящегося в комплексе с ГК-Ala-Chol-41%).
На фиг. 7-2 представлен график, показывающий высвобождение циклоспорина из ГК-Ala-Chol-41% в примере 7-2, где значения на оси абсцисс и ординат соответственно представляют время (ч) и количество циклоспорина, инкапсулированного в ГК-Ala-Chol-41%, не подвергшегося высвобождению (находящегося в комплексе с ГК-Ala-Chol-41%).
На фиг. 8-1 представлен пример ЯМР спектра ГК-Ala-C2-Chol, полученного в примере 8 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 8-2 представлен пример ЯМР спектра ГК-Ala-C2-Chol, полученного в примере 8 (степень введения холестерильной группы: 7%).
На фиг. 8-3 представлен пример ЯМР спектра ГК-Ala-C12-Chol, полученного в примере 8 (степень введения холестерильной группы: 7%).
На фиг. 8-4 представлен пример ЯМР спектра ГК-Ala-C12-Chol, полученного в примере 8 (степень введения холестерильной группы: 7%).
На фиг. 8-5 представлен пример ЯМР спектра ГК-Ala-EO2-Chol, полученного в примере 8 (степень введения холестерильной группы: 5%).
На фиг. 8-6 представлен пример ЯМР спектра ГК-Ala-EO2-Chol, полученного в примере 8 (степень введения холестерильной группы: 6%).
На фиг. 8-7 представлен пример ЯМР спектра ГК-Ala-CA, полученного в примере 9-2 (степень введения холестерильной группы: 13%).
Описание вариантов осуществления
Производные гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению представляют собой производные гиалуроновой кислоты, содержащие одну или более дисахаридных единиц (также повторяющиеся единицы) формулы (I).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения производное гиалуроновой кислоты по существу состоит из повторяющихся единиц (а) вышеуказанной формулы (I), (b) вышеуказанных формул (I) и (II), (с) вышеуказанных формул (I) и (IIb) или (d) вышеуказанных формул (I) и (II), и (IIb). Производное гиалуроновой кислоты содержит дисахаридные повторяющиеся единицы D-глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина, из которых, например, 80% или более, предпочтительно 90% или более, и более предпочтительно 95% или более представляют собой повторяющиеся единицы формулы (I) и (II), и (IIb). В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения производное гиалуроновой кислоты состоит исключительно из повторяющихся единиц (а) вышеуказанной формулы (I), (b) вышеуказанных формул (I) и (II), (с) вышеуказанных формул (I) и (IIb) или (d) вышеуказанных формул (I) и (II), и (IIb).
Процент конкретной дисахаридной единицы по отношению к дисахаридным повторяющимся единицам в производном гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению указывает на процент конкретной дисахаридной единицы по отношению ко всем дисахаридным единицам, содержащимся в определенном количестве производного гиалуроновой кислоты, которое составляет полисахарид, содержащий дисахаридные единицы в виде его повторяющихся единиц.
В формуле (I), представляющей дисахаридные единицы, входящие в состав производных гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, R1, R2, R3 и R4, предпочтительно все представляют собой атомы водорода. R5 предпочтительно представляет собой атом водорода или С1-6алкилкарбонил, более предпочтительно атом водорода или ацетил, и еще более предпочтительно ацетил. В формулах (II) и (IIb), представляющих дисахаридные единицы, входящие в состав производных гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, R1a, R2a, R3a и R4a, и R1b, R2b, R3b и R4b, предпочтительно все представляют собой атомы водорода. R5a и R5b предпочтительно представляют собой атом водорода или С1-6алкилкарбонил, более предпочтительно атом водорода или ацетил, и еще более предпочтительно оба представляют собой ацетил.
Конкретные примеры Ra в формуле (I) включают атом водорода, метил, гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, карбамоилметил, карбоксиметил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, изопропил, 2-карбоксиэтил, 2-метилтиоэтил, 2-карбамоилэтил, фенилметил, (4-гидроксифенил)метил и индол-3-илметил.
Если в группе -CHRa- имеется асимметричный центр, то он включает соответствующие оптически активные формы и их смеси. В отношении H2N-CHRa-COOH (аминокислота), то предпочтительно она представляет собой L-форму (природную форму).
В формуле (I) R6, R7, R8 и R9 независимо представляют собой, например, атом водорода или метил, но предпочтительно все являются атомами водорода.
Например, группа -CHRa-COOH включена в качестве варианта осуществления группы -CHRa-CO-Х1 в формуле (I). Конкретные примеры данной группы включают следующие группы.
Химическая формула 5
* показывает положение присоединения к -NR6- (ниже относится к этому же).
Предпочтительные примеры группы -CHRa-COOH включают следующие группы.
Химическая формула 6
Предпочтительные примеры группы -CHRa-COOH включают следующие группы.
Химическая формула 7
Предпочтительные примеры группы -CHRa-COOH включают следующие группы.
Химическая формула 8
Предпочтительные примеры группы -CHRa-COOH включают следующие группы.
Химическая формула 9
Предпочтительные примеры группы -CHRa-COOH включают следующие группы.
Химическая формула 10
Любая из групп -CHRa-COOH, представленных выше, все или часть из них, могут быть преобразованы в группу -CHRa-CONH-Z1-Z2. Примеры группы -Z1-Z2 являются такими, как описано ниже.
Другие формы группы -CHRa-CO-Х1 в формуле (I) включают группу -CHRa-CONH2. Конкретные примеры данной группы включают следующие группы.
Химическая формула 11
Предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 12
Предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 13
Предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 14
Предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 15
Также данные группы являются предпочтительными группами в том отношении, что обладают способностью к биоразлагаемости и удерживанию в крови.
С точки зрения способности к биоразлагаемости и удерживанию в крови, предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 16
С точки зрения способности к биоразлагаемости и удерживанию в крови, более предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 17
С точки зрения хорошей диспергируемости в чистой воде, более предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 18
Данные две группы являются предпочтительными примерами также в отношении матрикса для подкожных инъекций для непрерывного введения.
С точки зрения матрикса для подкожных инъекций для непрерывного введения, предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH2 включают следующие группы.
Химическая формула 19
В качестве R7 атом водорода и метил являются более предпочтительными, и атом водорода является наиболее предпочтительным.
Карбоксигруппа, определенная в формуле (I), (II) и (IIb), может находиться в виде соли, представленной в формуле -COO-Q+. В формуле Q+ особым образом не ограничивается, при условии, что он представляет собой противокатион, образующий соль с карбоксигруппой в воде. Когда он является двухвалентным или более, то Q+ образует соль с множеством карбоксигрупп в зависимости от валентности. Пример противокатиона включает ионы металлов, такие как ион лития, ион натрия, ион рубидия, ион цезия, ион магния и ион кальция; и ионы аммония, представленные формулой N+RjRkRlRm, где Rj, Rk, Rl и Rm, каждый независимо, выбран из атома водорода и С1-6алкила. Предпочтительно примеры включают ион натрия, ион калия и ионы тетраалкиламмония (например, ион тетра-н-бутиламмония). Предпочтительно Rj, Rk, Rl и Rm, все являются одинаковой группой, выбранной из С1-6алкила, и предпочтительно н-бутила.
Другие формы группы -CHRa-CO-Х1 в формуле (I) включают группу -CHRa-CONH-Z1-Z2. Конкретные примеры данной группы включают следующие группы.
Химическая формула 20
Другие конкретные примеры группы включают следующие группы.
Химическая формула 21
Предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH-Z1-Z2 включают следующие группы.
Химическая формула 22
Предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH-Z1-Z2 включают следующие группы.
Химическая формула 23
Предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH-Z1-Z2 включают следующие группы.
Химическая формула 24
С точки зрения способности к биоразлагаемости и удерживанию в крови, предпочтительные примеры группы -CHRa-CONH-Z1-Z2 включают следующие группы.
Химическая формула 25
Примеры группы -Z1-Z2 включают группу -(С2-10алкилен)-NH-COO-Z3, а также группу -(С2-12алкилен)-NH-COO-Z3. Примеры С2-12алкилена предпочтительно включают -(СН2)2-, -(СН2)6-, -(СН2)8-, -(СН2)10- и -(СН2)12-, и более предпочтительно -(СН2)2- и -(СН2)6-. Примеры группы -Z1-Z2 включают группу -(СН2СН2О)m-СН2-СН2-NH-Z3. В формуле m предпочтительно равно 1-20, более предпочтительно 1-10 и более предпочтительно 1-3. Конкретные примеры предпочтительного m включают 2. Примеры группы -Z1-Z2 предпочтительно включают группу -(гексан-1,6-диил)-NH-СОО-Z3, группу -(этан-1,2-диил)-NH-СОО-Z3 и группу -(СН2СН2О)m-СН2-СН2-NH-Z3; более предпочтительно группу -(гексан-1,6-диил)-NH-СОО-холестерил, группу -(этан-1,2-диил)-NH-СОО-холестерил и -(СН2СН2О)m-СН2-СН2-NH-холаноил; и более предпочтительно группу -(гексан-1,6-диил)-NH-СОО-холестерил. Примеры -Z1, Z2 и группы -Z1-Z2 включают группы, соответствующие Y, X1 и группе -Y-X1, описанные в публикации международной заявки № 2010/053140. Примеры группы -CO-NRc-Z3 и группы -O-CO-NRc-Z3 включают соответствующие группы, где Rc представляет собой атом водорода.
Предпочтительно производные гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению представляют собой производные гиалуроновой кислоты, содержащие повторяющиеся единицы формулы (II). В более предпочтительном варианте осуществления Х2 в формуле (II) и Х1 в формуле (I) являются одинаковыми. В одном аспекте настоящего изобретения предоставлено производное гиалуроновой кислоты, содержащее повторяющуюся единицу формулы (I), где Х1 представляет собой -NR9-Z1-Z2, повторяющуюся единицу формулы (II) и повторяющуюся единицу формулы (IIb).
Как используется в данном описании, термин «стерильная группа» относится к группе, имеющей стероидную структуру без особых ограничений. Конкретные примеры стероида включают холестерол, дегидрохолестерол, копростенол, копростерол, холестанол, кампестанол, эргостанол, стигмастанол, копростанол, стигмастерол, ситостерол, ланостерол, эргостерол, симиаренол, желчные кислоты (холановая кислота, литохолевая кислота, гиодезоксихолевая кислота, хенодезоксихолевая кислота, урсодезоксихолевая кислота, дезоксихолевая кислота, апохолевая кислота, холевая кислота, дегидрохолевая кислота, гликохолевая кислота, таурохолевая кислота), тестостерон, эстрадиол, прогестерон, кортизол, кортизон, альдостерон, кортикостерон и дезоксикортикостерон. Примеры стерильной группы включают холестерил, стигмастерил, ланостерил, эргостерил, холаноил и холоил. Предпочтительные примеры включают холестерильные группы (в частности, холест-5-ен-3β-ильную группу, представленную следующей формулой) и холаноильные группы (в частности, 5β-холан-24-оильную группу, представленную следующей формулой):
Химическая формула 26
где ** показывают положение присоединения к соседней группе.
Как используется в данном описании, термин «С1-20алкил» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, содержащей 1-20 атомов углерода. Например, термин включает «С1-4алкил», такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, а также н-пентил, 3-метилбутил, 2-метилбутил, 1-метилбутил, 1-этилпропил, н-гексил, 4-метилпентил, 3-метилпентил, 2-метилпентил, 1-метилпентил, 3-этилбутил и 2-этилбутил. «С1-20алкил» включает «С1-12алкил», содержащий 1-12 атомов углерода, и «С1-6алкил», содержащий 1-6 атомов углерода.
Как используется в данном описании, термин «С1-6алкил» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, содержащей 1-6 атомов углерода. Например, термин включает «С1-4алкил», такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил.
Как используется в данном описании, термин «С1-6алкокси» относится к линейному или разветвленному алкилу, содержащему 1-6 атомов углерода. Например, термин включает «С1-4алкокси», такой как метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, изобутокси и трет-бутокси.
Как используется в данном описании, термин «С1-6алкилкарбонил» относится к алкилкарбонильной группе, в которой алкильный фрагмент представляет собой С1-6алкил, определенный выше. Например, термин включает «С1-4алкилкарбонил», такой как ацетил, пропионил, н-пропилкарбонил, изопропилкарбонил, н-бутилкарбонил, втор-бутилкарбонил, изобутилкарбонил и трет-бутилкарбонил.
Как используется в данном описании, термин «С1-6алкокси» относится к алкоксигруппе, в которой алкильный фрагмент представляет собой С1-6алкил, определенный выше. Например, термин включает метокси (Н3С-О), этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, изобутокси и трет-бутокси.
Как используется в данном описании, термин «С1-6алкилтио» относится к алкилтиогруппе, в которой алкильный фрагмент представляет собой С1-6алкил, определенный выше. Например, термин включает метилтио (H3C-S-), этилтио, н-пропилтио, изопропилтио, н-бутилтио, втор-бутилтио, изобутилтио и трет-бутилтио, но предпочтительно метилтио.
Как используется в данном описании, термин «амино-С2-20алкил» относится к линейному или разветвленному алкилу, содержащему 2-20 атомов углерода, который содержит аминогруппу в качестве заместителя. Например, аминогруппа может находиться на атоме углерода в конце алкила. Амино-С2-20алкил включает «амино-С2-12алкил», содержащий 2-12 атомов углерода.
Как используется в данном описании, термин «гидрокси-С2-20алкил» относится к линейному или разветвленному алкилу, содержащему 2-20 атомов углерода, который содержит гидроксигруппу в качестве заместителя. Например, гидроксигруппа может находиться на атоме углерода в конце алкила. Гидрокси-С2-20алкил включает «гидрокси-С2-12алкил», содержащий 2-12 атомов углерода.
Как используется в данном описании, термин «С2-30алкилен» относится к линейной или разветвленной, насыщенной двухвалентной углеводородной группе, содержащей 2-30 атомов углерода. Например, термин включает этилен и пропилен, а также С2-20алкилен, С2-8алкилен, группу -(СН2)n-, где n равно 2-30, предпочтительно 2-20 и более предпочтительно 2-15.
Как используется в данном описании, термин «С1-5алкилен» относится к линейной или разветвленной, насыщенной двухвалентной углеводородной группе, содержащей 1-5 атомов углерода. Например, термин включает этилен (этан-1,2-диил, этан-1,1-диил) и пропилен (пропан-1,1-диил, пропан-1,2-диил, пропан-1,3-диил), бутан-1,4-диил и пентан-1,5-диил.
Как используется в данном описании, термин «С2-10алкилен» относится к линейной или разветвленной, насыщенной двухвалентной углеводородной группе, содержащей 2-10 атомов углерода. Например, термин включает этилен (этан-1,2-диил, этан-1,1-диил), пропилен (пропан-1,1-диил, пропан-1,2-диил, пропан-1,3-диил), бутан-1,4-диил, пентан-1,5-диил, гексан-1,6-диил, гептан-1,7-диил и октан-1,8-диил. «С2-10алкилен» включает «С2-6алкилен», содержащий 2-6 атомов углерода, и «С2-8алкилен», содержащий 2-8 атомов углерода.
Как используется в данном описании, термин «С2-8алкилен» относится к линейной или разветвленной, насыщенной двухвалентной углеводородной группе, содержащей 2-8 атомов углерода. Например, термин включает этилен (этан-1,2-диил, этан-1,1-диил), пропилен (пропан-1,1-диил, пропан-1,2-диил, пропан-1,3-диил), бутан-1,4-диил, пентан-1,5-диил, гексан-1,6-диил, гептан-1,7-диил и октан-1,8-диил.
Как используется в данном описании, термин «С2-8алкенилен» относится к линейной или разветвленной, двухвалентной углеводородной группе, содержащей 2-8 атомов углерода, которая содержит одну или более двойных связей. Например, термин включает -СН=СН-, С(СН3)=СН-, 2-бутен-1,4-диил, гепта-2,4-диен-1,6-диил и окта-2,4,6-триен-1,8-диил. В случае геометрического изомеризма термин включает изомеры и их смеси.
Как используется в данном описании, термин «арил» относится к ароматической карбоциклической группе, например, ароматической карбоциклической группе, содержащей 6-14 атомов углерода. Примеры арила включают фенил и нафтил (1-нафтил и 2-нафтил). Примеры арила, замещенного одной или более гидроксигруппами, включают 4-гидроксифенил.
Как используется в данном описании, термин «гетероарил» относится к ароматической кольцевой группе, содержащей один или более гетероатомов, выбранных из атома азота, атома кислорода и атома серы, среди атомов, составляющих кольцо, которое может быть частично насыщенным. Кольцо может быть моноциклическим кольцом или бициклическим гетероарилом, конденсированным с бензольным кольцом или моноциклическим гетероарильным кольцом. Кольцо может состоять, например, из 4-15, предпочтительно 5-14, более предпочтительно 6-10 атомов. Примеры гетероарила включают, например, фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, триазолил, тетразолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, пиразинил, триазинил, бензофуранил, бензотиенил, бензотиадиазолил, бензотиазолил, бензоксазолил, бензоксадиазолил, бензимидазолил, индолил, изоиндолил, индазолил, хинолил, изохинолил, циннолинил, хиназолинил, хиноксалинил, бензодиоксолил, индолизинил и имидазопиридил; и индол-2-ил является предпочтительным.
Производные гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению могут использоваться в качестве носителя лекарственного средства, и носитель лекарственного средства является биоразлагаемым. «Биоразлагаемый» означает, что носитель лекарственного средства, детектированный в печени, превращается в молекулы соединений с более низкой молекулярной массой в течение 15 суток после внутривенного введения крысе и/или человеку. Преобразование «в молекулы соединений с более низкой молекулярной массой» можно детектировать определением размера носителя лекарственного средства в печени эксклюзионной колоночной хроматографией (см. пример 2-3 в данном описании). Носитель лекарственного средства определяется, как биоразлагаемый, если максимальный пик носителя лекарственного средства, извлеченного из печени, сдвигается в сторону более низкомолекулярных продуктов (т.е. время удерживания на хроматограмме колоночной хроматографии становится длиннее) по сравнению с максимальным пиком носителя лекарственного средства до введения. Биоразлагаемые носители лекарственного средства выделяются из организма с мочой, фекалиями или тому подобное. Таким образом, преобразование носителя лекарственного средства в молекулы соединений с более низкой молекулярной массой можно обнаружить при анализе мочи. Однако выделение с мочой производных гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, содержащих гидрофобную группу, может быть снижено за счет их гидрофобности. Следовательно, преобразование в молекулы соединений с более низкой молекулярной массой в печени, которая является основным органом метаболизма гиалуроновой кислоты, является более предпочтительным для непосредственного определения биоразлагаемости носителей лекарственного средства, несмотря на трудоемкость и ограничения в количестве детектирования.
Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предоставлено производное гиалуроновой кислоты, определенное в данном описании, в котором процент дисахаридной единицы, содержащей группу -NR9-Z1-Z2 (далее определяется как гидрофобная группа) формулы (I) и/или (II) по отношению к дисахаридным повторяющимся единицам, имеющимся в производном (степень введения гидрофобной группы) составляет 3-50%.
Данная степень введения гидрофобной группы рассчитывается по следующей формуле:
Формула 1
Степень введения гидрофобной группы | = | Число дисахаридных повторяющихся единиц, в которые введена гидрофобная группа | ×100 |
Число имеющихся повторяющихся дисахаридных единиц |
«Дисахаридные повторяющиеся единицы, имеющиеся в производном», включают повторяющиеся единицы формулы (I) и (II) и повторяющуюся единицу формулы (IIb). Степень введения может регулироваться реакционными условиями, например, соотношением реагентов и может быть определена, например, ЯМР анализом.
Степень введения гидрофобной группы составляет 3-50%, предпочтительно 5-40%, более предпочтительно 5-35%, более предпочтительно 5-25%, более предпочтительно 5-20% и более предпочтительно 5-10%.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предоставлено производное гиалуроновой кислоты, в котором Х1 представляет собой -NR9-Z1-Z2 в формуле (I), как показано в примере 1-4 ниже. Процент дисахаридной единицы формулы (I) по отношению к дисахаридным повторяющимся единицам, присутствующим в производном гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, составляет, например, 70% или более, предпочтительно 75% или более, более предпочтительно 90% или более. Верхняя граница может составлять 100% или ниже для того, чтобы обеспечить способность к биоразлагаемости и удерживанию в крови. Пределы процентов составляют, например, 70-100%, предпочтительно 75-100%, более предпочтительно 90-100%. Производное гиалуроновой кислоты может дополнительно содержать повторяющуюся единицу формулы (II).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предоставлено производное гиалуроновой кислоты, которое не содержит повторяющейся единицы формулы (I), где Х1 представляет собой -NR9-Z1-Z2 в формуле (I), как описано в примере 1-5, приведенном ниже. В данном случае, сумма процентов повторяющейся единицы формулы (I) и повторяющейся единицы формулы (II) по отношению к имеющимся дисахаридным повторяющимся единицам составляет 70%-100%, предпочтительно 80-100% и более предпочтительно 90-100%.
Процент повторяющейся единицы формулы (II) в имеющихся дисахаридных повторяющихся единицах предпочтительно составляет 3-50%, более предпочтительно 5-40%, более предпочтительно 5-35%, более предпочтительно 5-25%, более предпочтительно 5-20% и более предпочтительно 5-10%. Процент повторяющейся единицы формулы (I) в имеющихся повторяющихся дисахаридных единицах предпочтительно составляет 20-97%, более предпочтительно 30-95%, более предпочтительно 35-95%, более предпочтительно 45-95%, более предпочтительно 50-95% и более предпочтительно 60-95%.
Если процент повторяющейся единицы формулы (II) составляет 5-10% в имеющихся дисахаридных повторяющихся единицах, то процент повторяющейся единицы формулы (I) предпочтительно составляет 60-95%, более предпочтительно 70-95% и более предпочтительно 75-95%.
Если процент повторяющейся единицы формулы (II) в имеющихся дисахаридных повторяющихся единицах составляет 20-40% и предпочтительно 20-35%, то процент повторяющейся единицы формулы (I) предпочтительно составляет 3080%, более предпочтительно 45-80% и более предпочтительно 60-80%.
Если процент повторяющейся единицы формулы (II) в имеющихся дисахаридных повторяющихся единицах составляет 10%-20%, то процент повторяющейся единицы формулы (I) предпочтительно составляет 50-90%, более предпочтительно 60-90% и более предпочтительно 70-90%.
Гиалуроновая кислота или ее соль могут использоваться в качестве исходного соединения для получения производных гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Примеры соли гиалуроновой кислоты включают соли щелочных металлов, такие как соли натрия, соли калия и соли лития, и особенно предпочтительными солями являются соли натрия, часто используемые в фармацевтических продуктах. ГК или ее фармацевтически приемлемые соли могут быть получены известными способами, такими как способы, включающие экстракцию из тканей живых организмов, таких как петушиный гребень и подкожная ткань свиней, или ферментацией. Они также являются коммерчески доступными (например, от DENKI KAGAKU KOGYO KABUSHIKI KAISHA, Shiseido Co., Ltd., SEKAGAKU CORPORATION, R&D Systems, Inc. и т.д.).
Среднемассовая молекулярная масса гиалуроновой кислоты (включая ее соль), исключительно состоящей из дисахаридной единицы формулы (IIb), используемой в качестве исходного соединения, предпочтительно составляет от 1 кДа до 200 кДа, более предпочтительно от 3 кДа до 1500 кДа и более предпочтительно от 5 кДа до 1000 кДа; более предпочтительно от 10 кДа до 500 кДа, более предпочтительно от 10 кДа до 200 кДа, более предпочтительно от 45 кДа до 200 кДа и более предпочтительно от 50 кДа до 99 кДа. Для обеспечения меньшего размера частиц, более низкой вязкости или более высокой растворимости среднемассовая молекулярная масса предпочтительно составляет от 1 кДа до 100 кДа, более предпочтительно от 2 кДа до 70 кДа, более предпочтительно от 3 кДа до 50 кДа и более предпочтительно от 5 кДа до 30 кДа. Для обеспечения более высокой вязкости или повышенного удерживания под кожей или в полости сустава среднемассовая молекулярная масса предпочтительно составляет от 45 кДа до 2000 кДа, более предпочтительно от 50 кДа до 2000 кДа, более предпочтительно от 100 кДа до 1000 кДа и более предпочтительно от 200 кДа до 1000 кДа. В отношении матрикса для подкожных инъекций для непрерывного введения среднемассовая молекулярная масса предпочтительно составляет от 5 кДа до 200 кДа. Конкретные примеры среднемассовой молекулярной массы включают 5 кДа, 10 кДа, 50 кДа, 99 кДа, 230 кДа и 1058 кДа. «кДа» является сокращенным обозначением единиц «килодальтон».
Среднемассовая молекулярная масса гиалуроновой кислоты (включая ее соль), исключительно состоящей из дисахаридной единицы формулы (IIb), относится к среднемассовой молекулярной массе гиалуроновой кислоты, где R1b, R2b, R3b и R4b, все представляют собой атомы водорода, R5b представляет собой ацетил, и Xb представляет собой -O-Na+ в формуле (IIb), имея структуру основной цепи производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Следовательно, вариант осуществления, в котором, например, все или часть дисахаридных единиц в гиалуроновой кислоте, фактически используемой в качестве исходного вещества, представляет собой дисахаридную единицу, где Xb представляет собой -O-(ион тетра-н-бутиламмония), и среднемассовая молекулярная масса, рассчитанная, как описано выше, составляет от 45 кДа до 200 кДа, является предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения.
Молекулярная масса гиалуроновой кислоты (включая ее соль) рассчитывается как среднечисловая молекулярная масса или среднемассовая молекулярная масса, поскольку трудно получить гиалуроновую кислоту в виде отдельных молекул. В настоящем изобретении молекулярная масса рассчитывается в виде среднемассовой молекулярной массы. Среднемассовую молекулярную массу можно определить любым из различных известных методов, таким как определение светорассеяния, осмотического давления или вязкости, как описано, например, Seiichi Nakahama et al., «Essential Polymer Science» (KODANSHA LTD., ISBN4-06-153310-X). Среднемассовая молекулярная масса по измерению вязкости, используемая в данном описании, может быть определена методом, обычно используемым в области, к которой относится настоящее изобретение, например, с использованием вискозиметра Уббелоде. Следовательно, молекулярные массы гиалуроновой кислоты (включая ее соль), используемой в качестве исходного вещества, и производных гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению рассчитываются в виде среднемассовой молекулярной массы. В том случае, когда используется коммерчески доступная гиалуроновая кислота (включая ее соль), чья молекулярная масса конкретно указывается, то может использоваться конкретно указанное значение в качестве молекулярной массы гиалуроновой кислоты.
Производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению особым образом не ограничивается в отношении молекулярной массы, но предпочтительной является гиалуроновая кислота, имеющая высокую вязкость и высокую молекулярную массу, если предполагается функция обеспечения контролируемого высвобождения, основанного на замедленной диффузии при местном введении, и предпочтительной является гиалуроновая кислота, имеющая низкую вязкость и низкую молекулярную массу для ровного введения, если конечной лекарственной формой является раствор.
Производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, содержащее дисахаридную единицу формулы (I), можно получить преобразованием карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты в амид, например, преобразованием исходного соединения гиалуроновой кислоты (включая ее соль и тому подобное), предпочтительно гиалуроновой кислоты, исключительно состоящей из дисахаридной единицы формулы (IIb), в тетраалкиламмониевую соль (например, тетрабутиламмониевую соль (TBA)) посредством ионного обмена; взаимодействием соли гиалуроновой кислоты с соединением формулы HNR6-CHRa-COORz, где Rz представляет собой группу, образующую сложный эфир, для защиты карбоксигруппы, и R6 и Ra являются такими, как определено выше, или формулы HNR6-CHRa-COOR7R8, где R7 и R8 являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего конденсирующего агента в растворителе; и удаление защитной группы (снятие защиты), если она присутствует (стадия 1). Группа, образующая сложный эфир, особым образом не ограничивается, при условии, что она является группой, обычно используемой для защиты карбоксигруппы. Примеры группы, образующей сложный эфир, включают С1-6алкил, бензил, С1-6алкокси-С1-6алкил и бензилокси-С1-6алкил.
Группы -NR6-CHRa-COORz и -NR6-CHRa-COOR7R8 в формуле (I) могут быть одинаковыми или различными в каждой из множества имеющихся дисахаридных единиц. Например, соединения различных формул HNR6-CHRa-COORz и/или HNR6-CHRa-COOR7R8 могут использоваться для проведения вышеуказанной реакции.
Конденсирующие агенты, которые можно использовать в описанной выше реакции, включают, но, не ограничиваясь ими, например, 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин)-4-метилморфолиний (DMT-MM), N,N'-карбонилдиимидазол (CDI), N,N’-дициклогексилкарбодиимид (DCC), N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин (EEDQ), тетрафторборат 2-бензотриазол-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин (HODhbt), гексафторфосфат бензотриазол-1-окситриспирролидинофосфония (PyBOP), гексафторфосфат бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония (BOP), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC) или N-гидроксисукцинимид (NHS).
Без особого ограничения DMT-MM является предпочтительным в том отношении, что реакция является высокоэффективной в смешанном растворителе из воды и органического растворителя. Кроме того, использование DMT-MM в качестве конденсирующего агента позволяет проводить высоко избирательное образование амидной связи между амино и карбоксигруппами с одновременным подавлением образования эфирной связи в системе с присутствием большого количества гидроксигрупп. Использование конденсирующего агента предупреждает, например, взаимодействие между спиртовым растворителем и карбоксигруппой фрагмента гиалуроновой кислоты и образование внутримолекулярных или межмолекулярных связей между гидрокси и карбоксигруппами, совместно расположенных во фрагменте гиалуроновой кислоты, с получением нежелательного поперечного сшивания.
Примеры растворителя, используемого в реакции, описанной выше, включают воду, диметилсульфоксид (ДМСО), диметилформамид (ДМФА), диметилацетамид (DMAc), 1,3-диметил-2-имидазолидинон (DMI), сульфолан (SF), N-диметилпирролидон (NMP), диоксан (например, 1,4-диоксан), метанол, этанол, пропанол, бутанол, ацетонитрил, тетрагидрофуран, дихлорметапн, хлороформ, гексан, диэтиловый эфир, этилацетат и смеси этих растворителей. С точки зрения растворимости исходных соединений, модифицированных продуктов и продуктов, и реакционной способности конденсирующих агентов, то предпочтительно использовать один ДМСО или смешанный растворитель вода/ДМСО. В зависимости от типа аминокарбоновой кислоты, которая является модифицированным продуктом, то для реакции может использоваться метанол или диоксан.
Примеры соединения формулы HNR6-CHRa-COORz включают, например, сложный эфир аланина, сложный эфир серина, сложный эфир глицина, сложный эфир треонина, сложный эфир аспарагина, сложный эфир аспарагиновой кислоты, сложный эфир валина, сложный эфир лейцина, сложный эфир изолейцина, диэфир глутаминовой кислоты, сложный эфир метионина, сложный эфир глутамина, сложный эфир тирозина и сложный эфир триптофана. Указанные выше сложные эфиры представляют собой, например, С1-6алкиловые эфиры, ариловые эфиры, С1-6алкокси-С1-6алкиловые эфиры, арил-С1-6алкиловые эфиры и предпочтительно метиловые эфиры, этиловые эфиры, бензиловые эфиры и т.д.
Примеры соединений формулы HNR6-CHRa-CONR7R8 включают аланинамид, серинамид, глицинамид, треонинамид, аспарагинамид, диамид аспарагиновой кислоты, валинамид, лейцинамид, изолейцинамид, диамид глутаминовой кислоты, метионинамид, глутаминамид, фенилаланинамид, тирозинамид и триптофанамид.
Гидрофобная группа может быть введена преобразованием карбоксигруппы в глюкуроновой кислоте или группы -NR6-CHRa-COOH формулы (I) в амид (стадия 2). Примеры способов включают способ, включающий преобразование исходного соединения гиалуроновой кислоты или ее производного в тетраалкиламмониевую соль (например, тетрабутиламмониевую соль (ТВА)) и взаимодействие соли гиалуроновой кислоты с амином, модифицированным гидрофобной группой формулы HNR9-Z1-Z2, где R9, Z1 и Z2 являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего конденсирующего агента в растворителе.
Конденсирующие агенты, которые можно использовать в реакции, описанной выше, включают, но, не ограничиваясь ими, 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин)-4-метилморфолиний (DMT-MM), N,N’-карбонилдиимидазол (CDI), N,N’-дициклогексилкарбодиимид (DCC), N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин (EEDQ), тетрафторборат 2-бензотриазол-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин (HODhbt), гексафторфосфат бензотриазол-1-окситриспирролидинофосфония (PyBOP), гексафторфосфат бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония (BOP), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC) или N-гидроксисукцинимид (NHS).
Примеры растворителя, используемого в реакции введения гидрофобной группы, включают воду, ДМСО, метанол, этанол, пропанол, бутанол, ацетонитрил, ДМФА, ТГФ, дихлорметан, хлороформ, гексан, диэтиловый эфир, этилацетат и смеси этих растворителей.
Альтернативно, гидрофобную группу можно ввести преобразованием карбоксигруппы в глюкуроновой кислоте или карбоксигруппы в группе -NR6-CHRa-COOH в формуле (I) в тетраалкиламмониевую соль (например, тетрабутиламмониевую соль (ТВА)), взаимодействием соли гиалуроновой кислоты со спейсером в присутствии подходящего конденсирующего агента в растворителе (на данной стадии при необходимости может быть проведена защита и снятие защиты), преобразованием карбоксигруппы (-СООН) и последующим взаимодействием с подходящим реагентом. Примеры комбинаций групп, преобразованных из карбоксигрупп и реакционного реагента, представлены ниже:
-CONR9-Z1-NRbH+Hal-Z3,
-CONR9-Z1-NRbH+Hal-COOZ3,
-CONR9-Z1-NRbH+HOCO-Z3,
-CONR9-Z1-NRbH+Hal-CO-Z3,
-CONR9-Z1-COOH+HO-Z3,
-CONR9-Z1-OH+Hal-COO-Z3,
-CONR9-Z1-COOH+NRc-Z3,
-CONR9-Z1-OCO-Hal+NRc-Z3,
-CONR9-Z1-OCOOH+HO-Z3,
-CONR9-Z1-OCOOH+Hal-Z3,
-CONR9-Z1-OCO-Hal+HO-Z3,
-CONR9-Z1-SH+Hal-Z3,
-CONR9-Z1-Hal+HS-Z3,
-CONR9-Z1-CO-Ya+HS-Z3,
-CONR9-Z1-CO-Ya+Hal-Z3,
-CONR9-Z1-O-CO-CH=CH2+HS-Z3,
-CONR9-Z1-NRb-CO-C(CH3)=CH2+HS-Z3,
-CONR9-Z1-SH+HS-R,
где R9, Z1, Rb, Rc и Z3 являются такими, как определено выше, и Hal представляет собой атом галогена, выбранный из атома фтора, атома хлора, атома брома и атома йода.
Примеры типа реакции включают реакции дегидрогалогенирования, реакции конденсации, реакции дегидратации, реакции нуклеофильного присоединения, такие как присоединение по Михаэлю, реакция окислительного образования дисульфидов, которые являются хорошо известными реакциями, и могут быть соответствующим образом выбраны и проведены в предпочтительных реакционных условиях специалистами в данной области. Если преобразованный продукт или продукт реакции содержит карбоксигруппу, то его можно преобразовать в имид N-гидроксиянтарной кислоты (далее по тексту обозначаемый как «NHS»), сложный эфир для взаимодействия.
Иллюстративные способы также включают способ, включающий взаимодействие 2-аминоэтил-2-пиридилдисульфида с карбоксигруппой глюкуроновой кислоты или карбоксигруппой в группе -NR6-CHRa-COOH в формуле (I), с получением производного гиалуроновой кислоты, модифицированного спейсером, содержащим меркаптогруппу, модифицированную уходящей группой в конце, и взаимодействие продукта с тиохолестеролом в реакции нуклеофильного замещения с образованием дисульфидной связи.
Примеры способов также включают способ, включающий получение соединения, модифицированного фрагментом спейсера в карбоксигруппе глюкуроновой кислоты или карбоксигруппе в -NR6-CHRa-COOH в формуле (I), и соединения, модифицированного фрагментом спейсера в стериле, и взаимодействие этих соединений. Несмотря на то, что некоторые из конкретных примеров перечислены выше, иллюстративные способы дополнительно включают, если Y содержит -S-S-, способ, включающий получение производного гиалуроновой кислоты, модифицированного спейсером, содержащим меркаптогруппу в конце карбоксигруппы глюкуроновой кислоты или карбоксигруппы в группе -NR6-CHRa-COOH в формуле (I) и стерильную группу, модифицированную спейсером, содержащим меркаптогруппу в конце, и их взаимодействие при реакции окисления с образованием дисульфидной связи. В данном способе одну меркаптогруппу можно подвергнуть взаимодействию с 2-меркаптопиридином с образованием дисульфида, и затем ее можно подвергнуть замещению другой меркаптогруппой.
Порядок проведения стадии 1 и стадии 2 не имеет значения. Например, исходное соединение гиалуроновая кислота (включая ее соль), предпочтительно гиалуроновая кислота, исключительно состоящая из дисахаридной единицы формулы (IIb), может быть преобразована в тетраалкиламмониевую соль (например, тетрабутиламмониевую соль (ТВА)), соль гиалуроновой кислоты можно подвергнуть взаимодействию с амином, модицированным гидрофобной группой -HNR9-Z1-Z2, где R9, Z1 и Z2 являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего конденсирующего агента в растворителе, и затем продукт реакции может быть подвергнут взаимодействию с соединением формулы HNR6-CHRa-COORz, где Rz является группой, образующей сложный эфир, для защиты карбокси, и R6 и Ra являются такими, как определено выше, или формулы HNR6-CHRa-CONR7R8, где R7 и R8 являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего конденсирующего агента в растворителе.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения производное гиалуроновой кислоты получают взаимодействием производного гиалуроновой кислоты, содержащего повторяющуюся единицу формулы (IIb) и повторяющуюся единицу формулы (Ia):
Химическая формула 27
[где Ха выбран из гидрокси, -О-Q+, С1-6алкокси и -NR7R8, и R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, Q+ и Ra являются такими, как определено выше], с соединением, представленным следующей формулой: -HNR9-Z1-Z2 [где R9, Z1 и Z2 являются такими, как определено выше].
Реакцию осуществляют конденсацией карбоксигруппы (включая его соль) и аминогруппы с преобразованием карбоксигруппы в амид, и можно применять способ, аналогичный стадии 2.
Настоящее изобретение может содержать повторяющуюся единицу следующей формулы (III). Следовательно, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предоставлено производное гиалуроновой кислоты, содержащее одну или более дисахаридных единиц (а) формулы (I) и формулы (III), (b) формулы (I), формулы (II) и формулы (III), (с) формулы (I), формулы (IIb) и формулы (III) или (d) формулы (I), формулы (II), формулы (IIb) и формулы (III).
Дисахаридная единица формулы (III):
Химическая формула 28
[где R1c, R2c, R3c и R4c независимо выбраны из атома водорода, С1-6алкила, формила и С1-6алкилкарбонила;
R5c представляет собой атом водорода, формил или С1-6алкилкарбонил;
Re представляет собой атом водорода или С1-6алкил;
Rd представляет собой атом водорода, С1-6алкил, -CO-C(R10)=CH2 или -CO-G4-Xc;
R10 представляет собой атом водорода или метил;
G4 выбран из фенилена, С3-8циклоалкилена или -G5-(С1-10алкилен)-G6-, где в группу С1-10алкилена может быть введено 1-3 фенилена или С3-8циклоалкилена;
G5 и G6, каждый независимо, выбран из прямой связи, фенилена или С3-8циклоалкилена;
Хс представляет собой меркапто, атом галогена или группу формулы:
Химическая формула 29
Yb представляет собой -CH2-(CHR15)l-2-CH2-NH-, -CH2-(CHR16)p-2-CH2-O-, -(CH2)j-S- или -(CH2)a-(Y1-(CH2)b)c-G-;
l, p и j являются целыми числами, каждое из которых независимо выбрано из 2-10, R15 и R16, каждый независимо, представляет собой атом водорода или гидрокси;
а является целым числом, выбранным из 2-10;
b является целым числом, независимо выбранным из 2-10;
с является целым числом, выбранным из 1-200;
Y1 представляет собой атом кислорода или -NRn-;
G представляет собой атом кислорода, атом серы или -NH-;
Rn представляет собой атом водорода, С1-6алкил, -СО-(СН2)d-Ro, -(СН2)e-Rp или -(СН2)f-(Y2-(CH2)g)h-Rq;
q является целым числом, независимо выбранным из 2-10;
d, e, f и h являются целыми числами, независимо выбранными из 2-10;
Ro, Rp и Rq, каждый независимо, представляет собой атом водорода, гидрокси, карбокси или -NHRr;
Y2 представляет собой атом кислорода или -NH-;
Rr представляет собой атом водорода, формил или С1-6алкилкарбонил].
Иллюстративные способы получения производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, содержащего дисахаридную единицу формулы (III), включают, например, способ, включающий взаимодействие тетрабутиламмониевой соли гиалуроновой кислоты, описанной выше, с солью гиалуроновой кислоты и соединением формулы HNRe-Yb-Rw, где Rw представляет собой атом водорода, С1-6алкил, -CO-C(R10)=CH2, -CO-G4-Xc, защитную группу для гидроксигруппы, защитную группу для аминогруппы или защитную группу для меркаптогруппы, и Re, Yb, R10, G4 и Xc являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего конденсирующего агента в растворителе, и если присутствует защитная группа, удаление защитной группы (снятие защиты). В приведенной выше реакции могут использоваться конденсирующий агент и растворитель, определенные выше.
Конкретные примеры -CO-G4-Xc включают группы, представленные следующими формулами:
Химическая формула 30
Конкретные примеры защитной группы, используемой в реакции, описанной выше, описаны, например, T.W.Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, John Wiley&Sons, Inc., New York, 1999.
Примеры защитной группы для гидроксигруппы включают С1-6алкилкарбонил, арилкарбонил, гетероарилкарбонил, С1-6алкоксикарбонил, С1-6алкокси-С1-6алкил, С1-6алкиламинокарбонил, ди(С1-6алкил)аминокарбонил, арил-С1-6алкил, гетероарил-С1-6алкил, арил-С1-6алкиламинокарбонил, С1-6алкил, С1-6алкилсульфонил, ((амино-С1-6алкил)карбонилокси)С1-6алкил, ненасыщенный гетероциклический карбонилокси-С1-6алкил, арилди(С1-6алкил)силил и три(С1-6алкил)силил. Предпочтительные примеры защитной группы для гидрокси включают ацетил.
Примеры защитной группы для -NH- или аминогруппы включают С1-6алкилкарбонил, арил-С1-6алкилкарбонил, арилкарбонил, гетероарилкарбонил, С1-6алкоксикарбонил, С1-6алкиламинокарбонил, ди(С1-6алкил)аминокарбонил, арил-С1-6алкил, гетероарил-С1-6алкил и (арил-С1-6алкил)аминокарбонил. Предпочтительные примеры защитной группы для аминогруппы включают ацетил, трет-бутоксикарбонил и 9-флуоренилметоксикарбонил. При защите аминогруппа может образовать насыщенную или ненасыщенную гетероциклическую группу, такую как имид фталевой кислоты, имид янтарной кислоты, имид глутаровой кислоты и 1-пирролил.
Примеры защитной группы для меркаптогруппы включают, например, С1-6алкилтио, такой как этилтио и трет-бутилтио, замещенный фенилтио, такой как 2-нитрофенилтио и 2-карбоксифенилтио, и гетероарилтио, такой как 2-пиридилтио. Предпочтительным примером является 2-пиридилтио.
Примеры группы формулы -NRe-Yb-Rd в формуле (III), приведенной выше, включают группы, представленные формулами:
-NH-CH2-(CHR15)1-2-CH2-NH2;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-NH2;
-NH-CH2-(CHR16)p-2-CH2-OH;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-OH;
-NH-(CH2)j-SH;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-SH;
-NH-(CH2)p-O-CO-С(R10)=CH2;
-NH-(CH2)l-NHCO-C(R10)=CH2;
-NH-CH2-(CHR15)1-2-CH2-NH-CO-CH2-SH;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-NH-CO-(CH2)u-SH;
-NH-(CH2)p-O-CO-CH2-CH2-SH;
-NH-(CH2)l-NHCO-(CH2)u-SH;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-O-CO-CH2-CH2-SH;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-NHCO-CH2-CH2-SH;
-NH-CH2-(CHR15)1-2-CH2-NH-CO-CH2-Br;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-NH-CO-CH2-I;
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-NHCO-C(R10)=CH2 или
-NH-CH2-CH2-(Y1-CH2-CH2)c-O-CO-C(R10)=CH2,
[где R10, R15, R16, Y1, c, j, l и p являются такими, как определено в данном описании, и u является целым числом, равным 1-3].
Число CHR15 и CHR16, где R15 и R16 представляют собой гидроксигруппы, входящих в состав молекулы производного гиалуроновой кислоты, составляет для каждого 0-8, предпочтительно 0-3, более предпочтительно 0-1. Посредством изменения числа CHR15 и CHR16, где R15 и R16 представляют собой гидроксигруппы, можно регулировать растворимость в воде производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Если все R15 представляют собой атомы водорода, то предпочтительно l равно 2-6, и конкретные примеры l включают 2 и 6. Если один из R15 представляет собой гидроксигруппу, то конкретные примеры l включают 3. Если Y1 является атомом кислорода, то конкретные примеры с включают 2. Если Y1 является -NH-, то конкретные примеры с включают 1-3. Конкретные примеры l и р включают 3.
Конкретные примеры -(CH2)a-(Y1-(CH2)b)c-G- включают, например, -(CH2)2-(O-CH2-CH2)с-O-, -(CH2)2-(O-CH2-CH2)с-NH-, -(CH2)3-(O-CH2-CH2-CH2)с-O-, -(CH2)3-(O-CH2-CH2-CH2)с-NH-, -(CH2)2-NRn-(CH2)2-O-, -(CH2)2-NRn-(CH2)2-NH-, -(CH2)3-NRn-(CH2)4-O-, -(CH2)6-NRn-(CH2)6-O-, -(CH2)6-NRn-(CH2)6-NH-, -(CH2)3-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)3-O, -(CH2)3-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)3-NH, -(CH2)3-NRn-(CH2)4-NRn-(CH2)3-O, -(CH2)3-NRn-(CH2)4-NRn-(CH2)3-NH- (типа спермина), -(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-O-, -(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NH-, -(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-O- и -(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NRn-(CH2)2-NH-. Предпочтительно все Rn представляют собой атомы водорода.
Конкретные примеры Rd, которые связываются с данными -(CH2)a-(Y1-(CH2)b)c-G-, включают, например, атом водорода, -CO-CH=CH2, -CO-C(CH3)=CH2, -CO-CH2-Cl, -CO-CH2-Br, -CO-CH2-I, -CO-CH2-SH и -CO-CH2-CH2-SH.
Конкретные примеры группы формулы -NRe-Yb-Rd включают -NH-(CH2)3-N-(-(CH2)4-NH-(CH2)3-NHCOCH3)-(CH2)2-SH, -NH-(CH2)2-N-(-(CH2)3-NH-(CH2)4-NHCOCH3)-(CH2)3-SH и -NH-(CH2)5-N-(-(CH2)3-NH-(CH2)2-NHCOCH3)-(CH2)2-SH.
Кроме того, конкретные примеры группы формулы -NRe-Yb-Rd включают следующие группы:
-NH-(CH2)p1-O-CO-CH(R17)-CH2-S-CH2-CH(OH)-CH(OH)-CH2-SH;
-NH-(CH2)p1-NH-C(=NH)-(CH2)3-SH;
-NH-(CH2)p1-NH-CO-CH(R17)-CH2-S-CH2-CH(OH)-CH(OH)-CH2-SH;
-NH-(CH2)p1-NH-CO-CH(NH2)-CH2-SH;
-NH-(CH2)p1-NH-CO-CH(NH2)-(CH2)2-SH;
-NH-NH-CO-(CH2)4-CO-NH-NH-C(=NH)-(CH2)3-SH;
-NH-(CH2-CH2-O)q-CH2-CH2-O-CO-CH(R17)-CH2-S-CH2-CH(OH)-CH(OH)-CH2-SH;
-NH-(CH2-CH2-O)q-CH2-CH2-NH-C(=NH)-(CH2)3-SH;
-NH-(CH2-CH2-O)q-CH2-CH2-NH-CO-CH(R17)-CH2-S-CH2-CH(OH)-CH(OH)-CH2-SH;
-NH-(CH2-CH2-O)q-CH2-CH2-NH-CO-CH(NH2)-CH2-SH;
-NH-(CH2-CH2-O)q-CH2-CH2-NH-CO-CH(NH2)-(CH2)2-SH;
-NH-CH(CO2H)-CH2-SH;
-NH-CH(CO2H)-(CH2)2-SH и
-NH-CH(CO2H)-(CH2)2-CONH-CH(CONH-CH2-CO2H)-CH2-SH,
[где R17 представляет собой атом водорода или С1-6алкил, p1 является целым числом из 2-10, и q является целым числом из 1-200].
Процент повторяющейся единицы формулы (III) по отношению к имеющимся дисахаридным повторяющимся единицам составляет, например, 0,1-99,5%, и предпочтительно 1-30%.
Иллюстративные способы получения производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, содержащего дисахаридную единицу формулы (III), включают способ (стадия 3а), включающий взаимодействие карбоксигруппы (-СООН) фрагмента глюкуроновой кислоты гиалуроновой кислоты с диамином формулы H2N-CH2-(CHR15)1-2-CH2-NH2 с преобразованием в амид формулы -CONH-CH2-(CHR15)1-2-CH2-NH2 и последующую модификацию концевой аминогруппы с ее преобразованием в амид, представленный группой -CONH-CH2-(CHR15)1-2-CH2-NHRd.
Конкретные примеры диамина, описанного выше, включают, например, H2N-(CH2)2-NH2, H2N-(CH2)3-NH2, H2N-(CH2)4-NH2, H2N-(CH2)5-NH2, H2N-(CH2)6-NH2, H2N-(CH2)7-NH2, H2N-(CH2)8-NH2, H2N-(CH2)9-NH2, H2N-(CH2)10-NH2, H2N-CH2-CHOH-CH2-NH2, H2N-CH2-CHOH-(CH2)2-NH2, H2N-CH2-(CHOH)2-CH2-NH2, H2N-CH2-CHOH-(CH2)3-NH2, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)2-NH2, H2N-CH2-(CHOH)2-(CH2)2-NH2, H2N-(CH2-CHOH)2-CH2-NH2, H2N-CH2-(CHOH)3-CH2-NH2, H2N-CH2-CHOH-(CH2)4-NH2, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)3-NH2, H2N-CH2-(CHOH)2-(CH2)3-NH2, H2N-CH2-CHOH-CH2-CHOH-(CH2)2-NH2, H2N-CH2-CHOH-(CH2)2-CHOH-CH2-NH2, H2N-(CH2)2-(CHOH)2-(CH2)2-NH2, H2N-CH2-(CHOH)3-(CH2)2-NH2, H2N-CH2-(CHOH)2-CH2-CHOH-CH2-NH2, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)4-NH2, H2N-(CH2)3-CHOH-(CH2)4-NH2, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)6-NH2 и H2N-(CH2)5-CHOH-(CH2)4-NH2.
Иллюстративные способы получения производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, содержащего дисахаридную единицу формулы (III), включают способ (стадия 3b), включающий взаимодействие карбоксигруппы (-СООН) фрагмента глюкуроновой кислоты гиалуроновой кислоты с гидроксиамином формулы H2N-CH2-(CHR16)р-2-CH2-ОН с преобразованием в амид формулы -CONH-CH2-(CHR16)р-2-CH2-ОН и последующую модификацию концевой гидроксигруппы с ее преобразованием в группу -CONH-CH2-(CHR16)р-2-CH2-ORd. Объединенные стадии 3а и 3b обозначены как стадия 3.
Конкретные примеры гидроксиамина, описанного выше, включают, например, H2N-(CH2)2-ОН, H2N-(CH2)3-ОН, H2N-(CH2)4-ОН, H2N-(CH2)5-ОН, H2N-(CH2)6-ОН, H2N-(CH2)7-ОН, H2N-(CH2)8-ОН, H2N-(CH2)9-ОН, H2N-(CH2)10-ОН, H2N-CH2-CHOH-CH2-ОН, H2N-CH2-CHOH-(CH2)2-ОН, H2N-CH2-(CHOH)2-CH2-ОН, H2N-CH2-CHOH-(CH2)3-ОН, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)2-ОН, H2N-CH2-(CHOH)2-(CH2)2-ОН, H2N-(CH2-CHOH)2-CH2-ОН, H2N-CH2-(CHOH)3-CH2-ОН, H2N-CH2-CHOH-(CH2)4-ОН, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)3-ОН, H2N-CH2-(CHOH)2-(CH2)3-ОН, H2N-CH2-CHOH-CH2-CHOH-(CH2)2-ОН, H2N-CH2-CHOH-(CH2)2-CHOH-CH2-ОН, H2N-(CH2)2-(CHOH)2-(CH2)2-ОН, H2N-CH2-(CHOH)3-(CH2)2-ОН, H2N-CH2-(CHOH)2-CH2-CHOH-CH2-ОН, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)4-ОН, H2N-(CH2)3-CHOH-(CH2)4-ОН, H2N-(CH2)2-CHOH-(CH2)6-ОН и H2N-(CH2)5-CHOH-(CH2)4-ОН.
Данные соединения являются коммерчески доступными, например, от Sigma-Aldrich Co. LLC. Их можно синтезировать согласно или при обращении к способу, описанному в источниках.
Группы -NRe-Yb-Rd в формуле (III), присутствующие во множестве дисахаридных единиц, могут быть одинаковыми или различными. Например, соединение другой формулы -HNRe-Yb-Rd может использоваться для проведения приведенной выше реакции.
Если Х1 в формуле (I) представляет собой гидрокси, -O-Q+ или С1-6алкокси, то группа -NRe-Yb-Rd может присутствовать не только в указанном положении в дисахаридной единице формулы (III), часть или вся группа может быть замещена Х1 в формуле (I), где Х1 представляет собой -NRe-Yb-Rd.
Порядок проведения стадии 1, стадии 2 и стадии 3 не имеет значения. Предпочтительные порядки включают такой порядок стадия 1, стадия 2 и стадия 3, порядок стадия 2, стадия 1 и стадия 3 и порядок стадия 1, стадия 3 и стадия 2.
Производные гиалуроновой кислоты, содержащие реакционноспособную углерод-углеродную двойную связь в дисахаридной единице формулы (III), можно подвергнуть реакции поперечного сшивания с использованием сшивающего агента (например, дитиотреитола:DTT, бутандитиола, полиэтиленгликольдитиола), содержащего 2 или более меркаптогрупп. Производное гиалуроновой кислоты, содержащее меркаптогруппу в дисахаридной единице формулы (III), можно подвергнуть реакции поперечного сшивания с образованием дисульфидов с использованием сшивающего агента (например, дитиотреитола:DTT, бутандитиола, полиэтиленгликольдитиола), содержащего 2 или более меркаптогрупп, или реакции поперечного сшивания с использованием сшивающего агента (например, дивинилсульфона), содержащего 2 или более реакционноспособных углерод-углеродных двойных связей. Производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению можно преобразовать в гель поперечным сшиванием.
Другие примеры реакции поперечного сшивания включают поперечное сшивание реакцией конденсации производного гиалуроновой кислоты, модифицированного амино, с использованием сшивающего агента (например, бис[сульфосукцинимидил]суберата (BS3), этиленгликоль-бис[сульфосукцинимидил]сукцината (Sulfo-EGS), гидрохлорида диметиладипимидата (DMA) или тому подобное), содержащего сукцинимидиловые эфиры или другие имидовые эфиры на обоих концах С2-20алкилена; поперечное сшивание производного гиалуроновой кислоты, модифицированного амино, с использованием сшивающего агента (например, глутаральдегида), содержащего формил на обоих концах С2-20алкилена; поперечное сшивание окислительной реакцией в окислительных условиях (например, в присутствии тетратионата натрия (STT)) для производных гиалуроновой кислоты, модифицированных меркапто; поперечное сшивание реакцией присоединения Микаэля производного гиалуроновой кислоты, модифицированного меркапто и сшивающим агентом (например, 1,4-бис-малеимидбутаном (BMB), этилендиметилакрилатом (EDMA)), содержащим ненасыщенные связи, например, малеимидом (MAL) или метакрилоилом на обоих концах С2-20алкилена; поперечное сшивание радикальной полимеризацией производного гиалуроновой кислоты, модифицированного ненасыщенной связью, такой как акрилоил и метакрилоил, и с использованием различных инициаторов полимеризации (например, пероксодисульфат калия (KPS)/N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамин (TEMED), Irgacure 2959); поперечное сшивание с использованием конденсирующего агента (например, такого как N,N'-карбонилдиимидазол (CDI), N,N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC), N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин (EEDQ), 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин)-4-метилморфолинийхлорид (DMT-MM), тетрафторборат 2-бензотриазол-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин (HODhbt), гексафторфосфат бензотриазол-1-окси-три(пирролидино)фософония (PyBOP), гексафторфосфат бензотриазол-1-илокситри(диметиламино)фосфония (BOP), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC) или N-гидроксисукцинимид (NHS)) в присутствии производного диамина (например, EDA, 2,2’-(этилендиокси)бис(этилендиамин)). Поперечное сшивание, описанное выше, может представлять собой внутримолекулярное сшивание в производном гиалуроновой кислоты или межмолекулярное поперечное сшивание между множеством молекул производного гиалуроновой кислоты.
Условия для стадии образования геля производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению химическим поперечным сшиванием могут быть соответствующим образом выбраны. Условия для поперечного сшивания включают метод поперечного сшивания, концентрацию полимера, концентрацию сшивающего агента, растворитель, рН растворителя, концентрацию соли, температуру и время.
На стадии образования геля производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению плотность поперечных связей полученного геля может быть повышена, например, повышением концентрации полимера в химическом поперечном сшивании и степени введения поперечно сшиваемых групп среди реакционных условий поперечного сшивания.
Когда сшивающий агент, содержащий поперечно-сшиваемые группы на обоих концах, добавляется к производному гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению на стадии образования геля производного гиалуроновой кислоты, предпочтительно сшивающий агент добавляют к производному гиалуроновой кислоты в определенном соотношении сшивающего агента к производному гиалуроновой кислоты, где соотношение (например, молярное соотношение) является таким, что группы могут быстро участвовать в реакции поперечного сшивания без избытка или недостатка. Например, предпочтительно молярное соотношение группа SH:группа МА равно 3:1-1:3, и особенно предпочтительно составляет 2:1-1:2, когда полимер, содержащий метакрилоил (группа МА) поперечно сшивается посредством реакции присоединения Микаэля с использованием DDT.
Растворитель на стадии образования геля производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой растворитель, в котором могут достаточно растворяться полимеры и сшивающие агенты, и без особого ограничения, предпочтительно используется вода, диметилсульфоксид (ДМСО), диметилацетамид (DMAc), диметилформамид (ДМФА), N-метилпирролидон (NMP) и смешанные растворители, выбранные из перечисленных растворителей. Кроме того, можно смешать и использовать органический растворитель, который смешивается с данными растворителями. Органический растворитель, который смешивается, особым образом не ограничивается, и его примеры включают, в частности, метанол, этанол, пропанол, изопропанол, бутанол, ацетон и ацетонитрил.
Структура химической поперечной связи, в результате которой образуется гель производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, может включать структуру, которая подвергается разрушению в организме. Например, но без особого ограничения, группы, содержащие сложноэфирную связь и метакрилоил, могут использоваться в качестве группы, которая подвергается реакции поперечного сшивания. Кроме того, соединение, содержащее сложноэфирную связь, такое как Sulfo-EGS или EDMA, или соединение, содержащее пептидный спейсер, расщепляемый под действием ферментов в живом организме, могут использоваться в качестве сшивающего агента. Кроме того, гель, поперечно сшитый дисульфидными связями, образованными окислением меркапто, разрушается в живом организме в результате реакции дисульфидного обмена и реакции восстановления. Поскольку производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению имеет деградируемую структуру химических поперечных связей, то скорость разрушения геля производного гиалуроновой кислоты можно регулировать в живом организме и, следовательно, можно регулировать скорость высвобождения.
Производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению образует наночастицы в водном растворе и, следовательно, может преобразовываться в мелкие гелевые частицы наноразмера поперечным сшиванием в разбавленном состоянии, и такие гелевые частицы можно использовать в качестве носителя для контролируемого высвобождения в крови или носителя для целенаправленной доставки. Разбавленное состояние относится к концентрации 10 мг/мл или ниже, предпочтительно 5 мг/мл или ниже и более предпочтительно 1 мг/мл или ниже. Альтернативно, посредством поперечного сшивания в условиях высокой плотности производное гиалуроновой кислоты может преобразовываться в объемный гель, в котором мелкие частицы поперечно сшиты. Он является пригодным в качестве носителя для контролируемого высвобождения при подкожном введении. Состояние высокой плотности относится к концентрации 5 мг/мл или выше, предпочтительно 20 мг/мл или выше и более предпочтительно 40 мг/мл.
Стадия образования геля производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению может быть проведена в объеме или в прерывистой фазе, такой как эмульсия, или в диспергированных каплях. Например, для проведения стадии в эмульсии вода/масло водную фазу, в которой растворен полимер или сшивающий агент, можно эмульгировать в системе вода-несмешивающийся с водой растворитель и можно проводить реакцию гелеобразования. Примеры несмешивающегося с водой растворителя включают, но без особого ограничения, гексан, хлороформ, дихлорметан, этилацетат, среднецепочечный триглицерид (MCT), жидкий парафин и масло бобов. Можно добавить поверхностно-активное вещество для стабилизации эмульгирования. Кроме того, стадию можно проводить в растворителе, который может быть вытеснен (удаление растворителя) в суперкритическом диоксиде кремния или в ПЭГ. В данном случае, гель с более высокой плотностью поперечных связей может быть получен эмульгированием и/или диспергированием водной фазы или фазы органического растворителя, в которой растворен полимер, поперечно-сшивающий агент или тому подобное, в растворителях, перечисленных выше, поскольку полимер концентрируется в сочетании с удалением растворителя (диффузией растворителя).
На стадии гелеобразования производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и после нее можно провести операцию по остановке поперечного сшивания и операцию по деактивации или отмывке оставшейся поперечно-сшивающей функциональной группы. Поперечно-сшивающие функциональные группы, которые не участвовали в реакции, группы, которые связаны только с одним концом сшивающего агента, оставшиеся сшивающие агенты и тому подобное предпочтительно удаляются для обеспечения безопасности, стабильности во время консервации и исключения побочных реакций с инкапсулированным лекарственным средством. Например, но без особого ограничения, если остаются непрореагировавшие сшивающие агенты, то их можно удалить промыванием избыточным количеством воды. Кроме того, если на полимере остается замещенный метакрилоил, то можно добавить, например, избыток меркаптоэтанола для дезактивации метакрилоила, и затем избыток меркаптоэтанола удалить промыванием избытком воды. Кроме того, если остается меркапто, то добавляют избыток 3-малеимидпропионовой кислоты и/или йодоуксусной кислоты для дезактивации меркапто, и затем избыток 3-малеимидпропионовой кислоты и/или йодоуксусной кислоты удаляют промыванием избытком воды.
Стадию дробления можно провести после стадии гелеобразования производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Способ дробления включает дробление с использованием пестика и ступки, и измельчение в мельнице, но измельчение в мельнице является предпочтительным. Примеры дробильно-мельничного оборудования для измельчения включают роторно-дисковой измельчитель, такой как центрифужная дробилка (NISSEI Corporation) и ударная дробилка (Dalton Co., Ltd.), ситовая дробилка, такая как распылитель (Tokyo Atomizer M.F.G. Co., Ltd.), дробилка для дробления образцов (Tokyo Atomizer M.F.G. Co., Ltd.), портативная дробилка (Tokyo Atomizer M.F.G. Co., Ltd.) и дробилка SK (Tokken Inc.), струйная мельница, такая как лабораторная струйная мельница (A-O jet mill, Seishin Enterprise Co., Ltd.) и linrex мельница (Liquid Gas Co., Ltd.), которые могут измельчать при очень низкой температуре, но дробилка SK и linrex мельница являются предпочтительными.
Стадию сушки можно проводить после стадии образования геля производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Примеры методов сушки включают, например, вентиляционную сушку, сушку в термостате, вакуумную сушку и сушку с циркуляцией горячего воздуха. Скорость продувки, время сушки, температура и давление выбирают, как это подходит, при условии, что гель по настоящему изобретению не разлагается или не денатурирует.
Фармацевтическую композицию можно получить инкапсулированием лекарственного средства в геле производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. В одном аспекте настоящего изобретения производное гиалуроновой кислоты, содержащее одну или более дисахаридных единиц (а) формулы (I) и формулы (III), (b) формулы (I), формулы (II) и формулы (III), (с) формулы (I), формулы (IIb) и формулы (III) или (d) формулы (I), формулы (II), формулы (IIb) и формулы (III), можно подвергнуть поперечному сшиванию с использованием сшивающего агента, преобразовать в гель и использовать в качестве носителя для инкапсулирования лекарственного средства (низкомолекулярного соединения, белка, пептида или нуклеиновой кислоты). Примеры методов инкапсулирования лекарственного средства включают добавление раствора лекарственного средства к заранее поперечно-сшитому гелю производного гиалуроновой кислоты. В данном способе сначала лекарственное средство абсорбируется диффузией в набухший гель, и абсорбированное лекарственное средство инкапсулируется, сохраняясь в физических поперечно-сшитых областях за счет гидрофобного взаимодействия геля производного гиалуроновой кислоты. Условия, включающие, но, не ограничиваясь ими, растворитель, концентрацию соли, рН, температуру, время и добавление денатурирующего агента могут быть выбраны, соответствующим образом так, чтобы лекарственное средство стабильно инкапсулировалось с высоким выходом. Например, степень набухания и плотность геля производного гиалуроновой кислоты изменяются, а также изменяется состояние ионизации лекарственного средства и тому подобное в зависимости от концентрации соли и рН на время инкапсулирования лекарственного средства, следовательно, подходящие условия должны выбираться в их комбинации соответствующим образом. За счет электростатического отталкивания карбоксигрупп производного гиалуроновой кислоты, проведение инкапсулирования лекарственного средства при низкой концентрации соли приводит к пониженной плотности геля, что способствует инкапсулированию большого количества лекарственного средства или лекарственного средства с большей молекулярной массой. После инкапсулирования лекарственного средства повышение концентрации соли приводит к ослаблению электростатического отталкивания, повышению плотности геля и уменьшению размера отверстий геля ниже, чем размер молекул лекарственного средства, что делает возможным плотно удерживать лекарственное средство и замедлять высвобождение. В это время концентрация соли может быть физиологической концентрацией соли.
Иллюстративные способы инкапсулирования лекарственного средства также включают способ, включающий образование комплекса лекарственного средства и производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, и поперечное сшивание превращает производное гиалуроновой кислоты в гель. Условия, включающие, но, не ограничиваясь ими, соотношение растворителей для образования комплекса, концентрацию соли, рН, температуру, время, добавление денатурирующего агента, концентрацию вышеуказанного гидрофильного полисахаридного производного (ПП), концентрацию лекарственного средства, соотношение ПП и лекарственного средства, могут быть выбраны соответствующим образом так, чтобы лекарственное средство стабильно комплексовался с наногелем с высоким выходом. Свободные лекарственные средства, не вошедшие в состав комплекса, могут быть отделены и удалены диализом, эксклюзионной хроматографией (SEC) или тому подобное. Для поперечного сшивания предпочтительно использовать условия поперечного сшивания, в которых инкапсулированный препарат не денатурирует.
Лекарственное средство, инкапсулированное в геле производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, высвобождается простой диффузией лекарственного средства в геле, деградацией геля производного гиалуроновой кислоты и замещением лекарственного средства биогенным компонентом. Если лекарственное средство высвобождается диффузией лекарственного средства, то скорость высвобождения может контролироваться плотностью поперечных связей геля и количеством и гидрофобностью области поперечных связей. Примеры деградации геля включают деградацию областей химических поперечных связей и деградацию скелета производного гиалуроновой кислоты. Такая деградация вызывает снижение плотности поперечных связей (повышение степени набухания). Снижение плотности поперечных связей приводит к повышению скорости диффузии лекарственного средства в геле, и расщепление связи также способствует высвобождению. Следовательно, скорость высвобождения лекарственного средства можно изменять регуляцией деградируемости области химических поперечных связей, деградируемости полимерного скелета и деградируемости спейсера.
Замещение биогенным компонентом относится к высвобождению лекарственного средства, например, введением геля в живой организм, подкожно или в кровь, проникновению вещества, такого как белок плазмы, такого как альбумин, или липид, присутствующих в живом организме, в гель и замещению инкапсулированного средства веществом. Гель производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению может подавлять замещение лекарственного средства биогенным компонентом, связанное с проникновением компонента не только физическим поперечным сшиванием гидрофобных групп, но также химическим поперечным сшиванием, описанным выше. Скорость проникновения биогенного компонента можно контролировать плотностью поперечных связей геля и электрическими зарядами в геле. Когда лекарственное средство предназначено для инкапсулирования добавлением раствора лекарственного средства после образования геля поперечным сшиванием, описанным выше, то условия инкапсулирования могут быть выбраны соответствующим образом, чтобы облегчить абсорбцию лекарственного средства в гель во время инкапсулирования и подавить проникновение биогенных компонентов в живом организме. Например, но без ограничения, если инкапсулируется белок, то электростатическое отталкивание между производным гиалуроновой кислоты и лекарственным средством можно снизить проведением стадии инкапсулирования около изоэлектрической точки белка. Также проведением стадии инкапсулирования при рН около или ниже чем pKa (примерно 4,0) карбоновой кислоты, полученной из глюкуроновой кислоты в гиалуроновой кислоте, отрицательный заряд, который имеет гель, может быть снижен. Это снижает электростатистическое отталкивание между гелем и белками, заряженными отрицательным зарядом, и делает возможным повышение эффективности инкапсулирования. Кроме того, проведение стадии инкапсулирования, например, при концентрации соли ниже, чем имеются в живом организме, делает набухание геля со скоростью набухания выше, чем в живом организме, и облегчает инкапсулирование.
Кроме того, производное гиалуроновой кислоты, модифицированное одновременно гидрофобной группой и поперечно-сшивающей функциональной группой по настоящему изобретению, может преобразовываться в гель химическим поперечным сшиванием при совместном обеспечении гидрофильного полисахаридного производного, содержащего гидрофобную группу. В частности, смешиванием и поперечным сшиванием можно получить производное гиалуроновой кислоты, одновременно модифицированное гидрофобной группой и поперечно-сшивающей функциональной группой, содержащей ненасыщенную связь, по настоящему изобретению и гидрофильное полисахаридное производное, содержащее гидрофобную группу, гель производного гиалуроновой кислоты, в котором гидрофильное полисахаридное производное, содержащее гидрофобную группу, физически инкапсулировано.
Гидрофильное полисахаридное производное, содержащее гидрофобную группу, представляет собой гидрофильный полисахарид, который может быть получен введением гидрофобной группы в гидрофильный полисахарид или его производное, по меньшей мере, одной или более молекул на одну молекулу полисахарида. Гидрофильный полисахарид особым образом не ограничивается, но предпочтительно представляет собой пуллулан, амилопектин, амилозу, декстран, маннан, леван, инулин, хитин, хитозан, гиалуроновую кислоту или декстрин. Данные полисахариды, имеющие различные среднемассовые молекулярные массы, могут быть получены из промышленных источников или согласно способу, описанному в литературе. Особенно предпочтительными гидрофильными полисахаридами являются пуллулан, гиалуроновая кислота и декстрин. Предпочтительно декстрин представляет собой декстрин Cluster (зарегистрированная торговая марка). Декстрин Cluster (зарегистрированная торговая марка) может быть коммерчески доступным от Ezaki Glico Co., Ltd. и использован. Гидрофобная группа особенным образом не ограничивается, но предпочтительно представляет собой группу, такую как С8-50 углеводородная группа, стерильная, группа полимолочной кислоты (PLA), группа сополимера полимолочной-полигликолевой кислоты (PLGA) или группа, содержащая такую группу. Особенно предпочтительной является группа, содержащая холестерильную группу, линейный или разветвленный С8-30алкил или группу, содержащую такую группу. Гидрофобная группа может быть введена через спейсер.
Примеры гидрофильного полисахаридного производного, содержащего гидрофобную группу, включают производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Следовательно, мелкие частицы, состоящие из производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, можно инкапсулировать в подходящий гель.
Гидрофильное полисахаридное производное, содержащее гидрофобную группу, можно получить известными способами. Производное гидрофильного полисахарида (далее по тексту также обозначаемые как «пуллулан с холестерильной группой» и «СНР»), в котором N-[6-(холестерилоксикарбониламино)гексил]карбамоил в качестве гидрофобной группы введен в гидроксигруппу пуллулана, используемого в качестве гидрофильного полисахарида, является коммерчески доступным (например, от NOF Corporation). Гидрофильное полисахаридное производное, содержащее гидрофобную группу, образует мелкие частицы (наногель), имеющие структуру геля наноразмеров (1-1000 нм), спонтанной ассоциацией нескольких молекул гидрофобным взаимодействием в водном растворе и, следовательно, способно образовывать комплекс с гидрофобным лекарственным средством или белком, или полисахаридом, обладающим эффективностью.
Молекулярная масса гидрофильного полисахаридного производного, содержащего гидрофобную группу, используемого в настоящем изобретении, особым образом не ограничивается, но предпочтительно составляет от 1 кДа до 1000 кДа, и более предпочтительно от 10 кДа до 300 кДа. Указанное выше гидрофильное полисахаридное производное также может представлять собой фармацевтически приемлемую соль.
Кроме того, например, гидроксигруппа, входящая в состав производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и гидрофильного полисахаридного производного, содержащего гидрофобную группу, также доступна в качестве поперечно-сшиваемой группы. Следовательно, гидроксигруппа в производном гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и производное гидрофильного полисахарида, содержащее гидрофобную группу, могут быть поперечно сшиты посредством определенного сшивающего агента, например, дивилсульфона (DVS), карбодиимида или сшивающего агента, содержащего глицидиловый эфир на обоих концах С2-20алкилена.
Когда карбоксигруппы гиалуроновой кислоты замещены заместителями многих типов, то такие заместители могут быть введены одновременно или последовательно.
Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения, предоставлено производное гиалуроновой кислоты, определенное в данном описании, отличается тем, что производное гиалуроновой кислоты образует мелкие частицы ассоциацией в воде. Производное гиалуроновой кислоты обладает способностью к образованию мелких частиц нанопорядка спонтанной ассоциацией в воде за счет, но без ограничения, гидрофобного взаимодействия введенной группы -NR9-Z1-Z2. Для конструирования требуемой системы доставки лекарственного средства, наночастицы, образованные производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, являются одним из очень эффективных средств, и их можно использовать в качестве капсулы для доставки белка, пептида или низкомолекулярного соединения, которое является активным ингредиентом, для доставки в место-мишень, одновременно сохраняя их в гидрофобной области, образовавшейся внутри. Лекарственное средство также может быть доставлено в место-мишень конъюгацией лекарственного средства.
Мелкие частицы наноразмера можно вводить системно, и в частности, внутривенно, и их можно использовать в качестве носителей для контролируемого высвобождения лекарственного средства в кровь, посредством чего инкасулированные (входящие в состав комплекса) лекарственные средства высвобождаются в кровь контролируемым образом, или для целенаправленной доставки, посредством которой лекарственные средства доставляются избирательно в органы и клетки-мишени. При использовании в качестве носителей для целенаправленной доставки, можно добавить элементы целенаправленной доставки для направленной доставки в конкретные органы и клетки. Примеры элемента целенаправленной доставки включают специфические пептиды, антитела, фрагменты антител, аптамеры, пептиды RGD для раковых клеток, фолиевую кислоту, анизамид, трансферрин, галактозу для печени и токоферол. Для повышения времени удерживания лекарственного средства в крови производные гиалуроновой кислоты могут быть дополнительно химически поперечно сшиты.
Известно, что молекулы меньше определенного размера выделяются через почки. Например, сообщалось, что полиэтиленгликоль (ПЭГ), который представляет собой линейный полимер, как и гиалуроновая кислота, имеющий молекулярную массу 40 кДа или ниже, выделяется почками (European Journal of Cancer, Vol. 31, p. 766-770, 1995). Следовательно, гиалуроновые кислоты и производные гиалуроновой кислоты, имеющие молекулярную массу одинакового порядка, могут немедленно выводиться из крови. Однако производные ГК, модифицированные гидрофобной группой по настоящему изобретению, могут образовывать комплексы посредством ассоциации и, следовательно, могут использоваться в качестве носителей для контролируемого высвобождения лекарственного средства в крови и для целенаправленной доставки, даже если производные ГК имеют молекулярную массу ниже, чем молекулярная масса ПЭГ, которые выделяются почками.
Мелкие частицы производного гиалуроновой кислоты образуются самоассоциацией в водном растворе и, следовательно, могут быть получены растворением твердого производного гиалуроновой кислоты в воде или водном растворе соли. Альтернативно, мелкие частицы могут быть получены растворением производного гиалуроновой кислоты в другом растворителе (например, ДМСО) и последующей заменой растворителя водой или водным раствором соли. Можно провести обработку ультразвуком для получения мелких частиц одинакового размера.
Повышение степени введения гидрофобной группы в производное гиалуроновой кислоты приводит к снижению растворимости в воде. Для получения мелких частиц, которые могут диспергироваться в водном растворе, предпочтительно используют производное гиалуроновой кислоты, которое получено таким образом, что гидрофобная группа, введенная посредством ковалентной связи, составляет 80% или ниже и предпочтительно 60% или ниже.
Поскольку гиалуроновая кислота содержит карбоксигруппу, которая является диссоциируемой группой, то повышение ионной силы в системе снижает ее растворимость. Следовательно, изменяя степень введения, можно получить производное гиалуроновой кислоты, которое растворяется при низких концентрациях соли или в бессолевых условиях и агрегирует или преципитирует при физиологических концентрациях соли. Его можно использовать в качестве матрикса для композиции для контролируемого высвобождения при подкожном введении. Производные гиалуроновой кислоты, модифицированные гидрофобной группой, в такой степени, что образуются стабильные мелкие частицы при физиологических концентрациях соли, могут использоваться в качестве носителей для системного введения.
Размеры мелких частиц, которые образуются, особым образом не ограничиваются, но предпочтительно составляют 200 мкм или ниже и более предпочтительно 100 мкм или ниже, для обеспечения прохождения через иглы без закупоривания при введении в виде инъекций. Для внутривенного введения размер частиц предпочтительно составляет 500 нм или ниже и более предпочтительно 200 нм или ниже, во избежание закупорки периферических кровеносных сосудов. Кроме того, во избежание захвата ретикулоэндотелиальной системой и увеличения удерживания в крови размер частиц предпочтительно составляет 100 нм или ниже и более предпочтительно 50 нм или ниже.
Производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению может быть использовано в качестве носителя лекарственных средств в фармацевтической композиции, и может быть обеспечена фармацевтическая композиция, содержащая производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и лекарственное средство. Поскольку производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению может спонтанно образовывать комплекс с лекарственным средством в водном растворе без особых операций, возможно легко получить комплекс носитель-лекарственное средство и удерживать лекарственное средство смешением производного гиалуроновой кислоты и лекарственного средства в водном растворе и инкубацией раствора. Движущей силой образования комплекса в основном является гидрофобное взаимодействие гидрофобной группы производного гиалуроновой кислоты и лекарственного средства, но если лекарственное средство обладает основными свойствами, то свой вклад может внести электростатическое взаимодействие с карбоновой кислотой в производном гиалуроновой кислоты. При концентрации соли, которая имеет место в живом организме, электростатическое взаимодействие слабее, а гидрофобное взаимодействие сильнее, следовательно, образование комплексов в основном можно отнести за счет гидрофобного взаимодействия.
Если Z1 представляет собой алкилен в формулах (I) и (II), представленных выше, то чем длиннее углеводородная цепь алкилена, тем выше гидрофобность группы, и тем более прочные мелкие частицы могут образовываться под действием более сильного гидрофобного взаимодействия. Кроме того, более длинный алкилен образует большее межмолекулярное сцепление и обеспечивает большую вязкость. Размер мелких частиц также можно контролировать изменением длины алкилена.
Если линкер (спейсер) в гидрофобной группе представляет собой сложный эфир или карбонат (например, Х1 или Х2 содержит -COO-Z3 или -O-COO-Z3), то сложный эфир или карбонат деградирует в живом организме, и гидрофобность производного гиалуроновой кислоты снижается. Это приводит к повышению биоразлагаемости и предпочтительно с точки зрения безопасности. Кроме того, известно, что опухолевая ткань имеет низкий рН вокруг ткани. При наличии такого спейсера комплекс производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, который удерживает представляющее интерес лекарственное средство, распадается около опухоли с высвобождением лекарственного средства вокруг опухоли.
В частности, если линкер является линкером, имеющим структуру сложного эфира β-тиокарбоксилата, такого как -O-CO-CH2-CH2-S-, то разрушение индуцируется незначительным снижением рН (при рН 6 или так далее). Следовательно, он реагирует на изменение рН сильнее, чем обычный сложный эфир. Если предполагается доставить лекарственное средство в клетки, то такой линкер реагирует на снижение рН в эндосомах, и он способен высвобождать лекарственное средство только после захвата клетками лекарственного средства.
Если линкер (спейсер) содержит дисульфидную связь (например, Х1 или Х2 содержит -S-S-Z3), то линкер разлагается в редуцирующих условиях, и комплекс производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению разрушается за счет снижения гидрофобности производного гиалуроновой кислоты. Поскольку известно, что цитоплазма представляет собой редуцирующую среду, то посредством инкапсулирования лекарственного средства в производном гиалуроновой кислоты, содержащем такой линкер, и его введения, возможно высвободить лекарственное средство только в цитоплазме, но не в крови.
Условия во время образования комплекса носитель-лекарственное средство, такие как растворитель, концентрация соли, рН, температура, время и добавление денатурирующего агента, можно изменять соответствующим образом, в зависимости от используемого лекарственного средства. Например, в зависимости от концентрации соли и рН во время инкапсулирования лекарственного средства, производное гиалуроновой кислоты изменяется по плотности, а также изменяется состояние ионизации лекарственного средства. Примеры денатурирующих веществ, предназначенных для использования, включают мочевину, гидрохлорид гуанидина и додецилсульфат натрия. Если добавляется денатурирующее вещество, то избыток денатурирующего вещества можно удалить отмывкой избыточным количеством воды после образования комплекса.
Например, но без ограничения, если образуется комплекс производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и белка, то количество белка, входящего в состав комплекса, можно повысить проведением образования комплекса около изоэлектрической точки белка, поскольку это может снизить электростатическое отталкивание производного гиалуроновой кислоты и белка. Кроме того, если стадия образования комплекса проводится в условиях при рН, равном или ниже чем pKa (примерно 4,0) карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты, то тогда количество белка, входящего в состав комплекса, может повыситься, поскольку отрицательный заряд, который имеет производное гиалуроновой кислоты, может снизиться, и электростатическое отталкивание подавляется, если белок электрически заряжен отрицательным зарядом в этих условиях. Кроме того, при проведении стадии образования комплекса, например, при концентрации соли ниже, чем в живом организме, количество белка, входящего в состав комплекса, может повыситься, поскольку плотность мелких частиц производного гиалуроновой кислоты, образовавшихся в водном растворе, снижается. Кроме того, посредством повышения концентрации соли в таком состоянии плотность мелких частиц может повыситься, и белок может прочно инкапсулироваться.
На образование комплекса производного гиалуроновой кислоты и белка может оказывать влияние молекулярная масса белка. Как правило, чем ниже молекулярная масса белка, тем выше скорость переноса белка в мелкие частицы производного гиалуроновой кислоты. Кроме того, плотность мелких частиц, зависящая от степени введения гидрофобной группы, может оказывать влияние на образование комплекса с белком и количество белка, входящего в состав комплекса.
Высвобождение лекарственного средства из комплекса производного гиалуроновой кислоты и лекарственного средства в живом организме индуцируется замещением лекарственного средства компонентами в живом организме в дополнении к диффузии лекарственного средства из комплекса. Контролируемое высвобождение лекарственного средства можно регулировать повышением или снижением плотности мелких частиц для регуляции такой диффузии и замещения.
Живой организм содержит биогенные компоненты, такие как белки и липиды плазмы. Когда комплекс производного гиалуроновой кислоты и лекарственного средства вводят в живой организм, например, подкожно или в кровь, то лекарственное средство может высвобождаться замещением лекарственного средства в комплексе такими компонентами в живом организме. Полагают, что альбумин является основным биогенным белком, который вызывает замещение. Посредством снижения степени введения гидрофобной группы в производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению отрицательные заряды карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты можно повысить, и замещение альбумином (pI=4,6), который имеет отрицательный заряд, может снизиться.
Иллюстративные способы применения производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению в качестве носителя лекарственного средства включают способ спонтанного образования производным комплекса с лекарственным средством в водном растворе, как описано выше, а также способ получения конъюгата, в котором лекарственное средство сочетается с производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению.
Следовательно, в еще одном аспекте настоящего изобретения предоставлен конъюгат гиалуроновая кислота-лекарственное средство, в котором один или более лекарственных средств, описанных выше, сочетаются с производным гиалуроновой кислоты, содержащим дисахаридную единицу формулы (I). В одном из вариантов осуществления данного аспекта в качестве производного гиалуроновой кислоты можно использовать производное гиалуроновой кислоты, содержащее одну или более дисахаридных единиц (а) формулы (I) и формулы (III), (b) формулы (I), формулы (II) и формулы (III), (с) формулы (I), формулы (IIb) и формулы (III) или (d) формулы (I), формулы (II), формулы (IIb) и формулы (III). Например, посредством сочетания гидрокси, амино, меркапто, атома галогена (такого как атом брома и йода) или реакционноспособной углерод-углеродной связи (такой как метакрилоил и акрилоил), входящих в состав группы -NRe-Yb-Rd в формуле (III), и лекарственного средства, можно получить конъюгат производное гиалуроновой кислоты-лекарственное средство, описанный выше.
Кроме того, между группой -NRe-Yb-Rd и лекарственным средством может быть вставлен спейсер формулы -G1-G2-G3-J-*** [где *** показывает сайт связывания с лекарственным средством, G1 выбран из прямой связи, -C(=O)-, -NRs- и -S-, G2 выбран из -(CH2)i и (CH2)qa-(O-CH2-CH2)k-, G3 выбран из прямой связи, -C(=O)-NRt-(CH2)r и -NRu-C(=O)-(CH2)ma-, J представляет собой группу, представленную следующей формулой:
Химическая формула 31
Rs, Rt и Ru независимо выбраны из атома водорода и С1-6алкила, i является целым числом, выбранным из 1-10, qa является целым числом, выбранным из 2-10, k является целым числом, выбранным из 1-100, r и ma являются целыми числами, независимо выбранными из 1-10.
Конкретные примеры формулы -G1-G2-G3-J-*** включают, например, следующие формулы:
Химическая формула 32
Гидроксигруппы в положении 4 глюкуроновой кислоты и в положении 1 ацетилглюкозамина, имеющиеся на концах скелета производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, можно преобразовать в другую группу, и примеры такой группы включают С1-6алкокси, формилокси и С1-6алкилкарбонилокси.
Для получения конъюгата производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и лекарственного средства можно применить способ, используемый при получении конъюгата известного полимера и лекарственного средства, и например, можно использовать следующие реакции:
взаимодействие карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты производного гиалуроновой кислоты с аминогруппой, гидроксигруппой, атомом йода или брома в лекарственном средстве или аминогруппой, гидроксигруппой, атомом брома или йода, введенных в лекарственное средство;
взаимодействие гидроксигруппы в положении 6 фрагмента N-ацетилглюкозамина производного гиалуроновой кислоты с карбоксигруппой в лекарственном средстве или карбоксигруппой, введенной в лекарственное средство;
взаимодействие аминогруппы, введенной в производное гиалуроновой кислоты, с карбоксигруппой в лекарственном средстве или карбоксигруппой, введенной в лекарственное средство;
взаимодействие аминогруппы, введенной в производное гиалуроновой кислоты, с лекарственным средством с преобразованной группой, в такую как изотиоцианат, изоцианат, ацилазид, сложный эфир NHS и эпоксид, модификацией;
взаимодействие аминогруппы лекарственного средства или аминогруппы, введенной в лекарственное средство, с производным гиалуроновой кислоты с преобразованной группой, в такую как изотиоцианат, изоцианат, ацилазид, сложный эфир NHS и эпоксид, модификацией;
образование шиффова основания и проведения восстановительного аминирования аминогруппы в производном гиалуроновой кислоты и лекарственного средства (такого как альдегид и кетон), содержащего карбонил, и лекарственного средства, в которое введен карбонил;
образование шиффова основания и восстановительное аминирование аминогруппы в лекарственном средстве или аминогруппы, введенной в лекарственное средство, и производного гиалуроновой кислоты, в которое введен карбонил, модификацией;
взаимодействие меркаптогруппы, введенной в производное гиалуроновой кислоты, с лекарственным средством, которое представляет собой соединение, содержащее ненасыщенную связь (такую как малеимид, акрилатный эфир, акриламид, метакрилатный эфир, метакриламид, аллильное производное и винилсульфон), галогенид (такой как хлорацетатный эфир, бромацетатный эфир, йодацетатный эфир, хлорацетамид, бромацетамид и йодацетамид) или тиол, или с лекарственным средством, преобразованным в такое соединение модификацией; и
взаимодействие меркаптогруппы, введенной в лекарственное средство, с производным гиалуроновой кислоты, преобразованным в такое соединение, которое содержит ненасыщенную связь (такую как малеимид, акрилатный эфир, акриламид, метакрилатный эфир, метакриламид, аллильное производное и винилсульфон), галогенид (такой как хлорацетатный эфир, бромацетатный эфир, йодацетатный эфир, хлорацетамид, бромацетамид и йодацетамид) или тиол, модификацией.
Кроме того, линкер (спейсер), содержащий сложный эфир и карбонат, используемый для введения гидрофобной группы в производное ГК и описанный выше, β-тиоэфир, дисульфид или пептид, который отщепляется в определенном сайте, можно использовать в качестве линкера для конъюгации с лекарственным средством. Такие линкеры отщепляются в сайте-мишени с высвобождением лекарственного средства, как описано выше.
Реагенты, используемые для модификации производного гиалуроновой кислоты или лекарственного средства для получения конъюгата, особым образом не ограничиваются, при условии, что они не вызывают нежелательной реакции при получении конъюгата. Данные соединения являются такими, что доступны в качестве реагента или они могут быть синтезированы при обращении к публикации общеизвестного способа.
В частности, синтезом производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и взаимодействием производного с лекарственным средством, содержащим амино, или лекарственным средством, в которое введен амино, с использованием конденсирующего агента, такого как DMT-MM, можно получить конъюгат образованием амидной связи. В данной реакции к лекарственному средству может быть добавлен, например, гидрохлорид холестерил-6-аминогексилкарбамата для одновременного введения гидрофобной группы. Кроме того, такое соединение может быть добавлено после или до лекарственного средства. Кроме того, лекарственное средство можно подвергнуть взаимодействию после синтеза и выделения производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, или гидрофобную группу можно ввести после синтеза и выделения производного гиалуроновой кислоты, в которое введено лекарственное средство.
Кроме того, лекарственное средство можно конъюгировать с производным гиалуроновой кислоты через сложноэфирную связь синтезом производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению и взаимодействием лекарственного средства, содержащего гидрокси, или лекарственного средства, в которое введена гидроксигруппа, с использованием конденсирующего агента, такого как DMT-MM, 1,3-дихлоргексилкарбодиимид (DCC). В данной реакции в лекарственное средство может быть добавлен, например, гидрохлорид холестерил-6-аминогексилкарбамата для одновременного введения гидрофобной группы. Кроме того, такое соединение можно добавить после или до лекарственного средства. Однако желательно конъюгировать лекарственное средство после введения гидрофобной группы во избежание гидролиза сложноэфирной связи. Указанный выше способ можно осуществить при обращении к сообщению (Bioconjugate, Vol. 19, 1319-1325, 2008), в котором описано введение паклитаксела в ГК через сложноэфирную связь.
Кроме того, лекарственное средство можно конъюгировать синтезом производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению взаимодействием лекарственного средства, которое представляет собой бромид или йодид, или лекарственного средства, преобразованного в бромид или йодид модификацией, и преобразованием карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты в сложный эфир. Желательно конъюгировать лекарственное средство после введения гидрофобной группы во избежание гидролиза сложного эфира.
Лекарственное средство может быть конъюгировано с производным гиалуроновой кислоты через сложноэфирную связь синтезом производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению преобразованием лекарственного средства, содержащего карбоксигруппу, или лекарственного средства, в которое введена карбоксигруппа, в сложный эфир NHS и взаимодействием карбоксигруппы с гидроксигруппой в положении 6 фрагмента N-ацетилглюкозамина. В данной реакции лекарственное средство может быть добавлено после введения гидрофобной группы в ГК, например, с использованием гидрохлорида холестерил-6-аминогексилкарбамата, или лекарственное средство можно добавить до введения. Кроме того, лекарственное средство можно подвергнуть взаимодействию после синтеза и выделения производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению или гидрофобная группа может быть введена после синтеза и выделения производного гиалуроновой кислоты, в которое введено лекарственное средство. Во избежание гидролиза сложноэфирной связи желательно конъюгировать лекарственное средство после введения гидрофобной группы. Описанный выше способ можно осуществить согласно сообщению (Международная публикация № 2009/074678), в котором описано введение камптотецина в ГК через сложноэфирную связь.
В одном из вариантов осуществления аминогруппа может быть введена реакцией дегидратации карбоксигруппы фрагмента глюкуроновой кислоты и диамина, такого как этилендиамин, после синтеза производного гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению. Кроме того, производное гиалуроновой кислоты, в которое был введен йодацетил, можно синтезировать взаимодействием N-сукцинимидилйодацетата (PIERCE) или N-сукцинимидил[4-йодацетил]аминобензоата (PIERCE) с аминогруппой. Лекарственное средство, содержащее меркаптогруппу, можно конъюгировать с таким производным гиалуроновой кислоты. Данный способ является особенно эффективным для высокомолекулярных лекарственных средств, таких как белок, пептид и нуклеиновая кислота, которые имеют много реакционноспособных групп, таких как амино, поэтому конъюгация может быть избирательной для меркаптогруппы. В данной реакции введение лекарственного средства может иметь место до или после введения гидрофобной группы в ГК.
Производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, в котором Х1 представляет собой -NH2-COO-R, синтезируется, и часть карбоксигрупп фрагмента глюкуроновой кислоты подвергается взаимодействию с гидрохлоридом 2-аминоэтил-2-пиридилдисульфида. В данное производное гиалуроновой кислоты можно ввести лекарственное средство, содержащее меркаптогруппу, и лекарственное средство, в которое введена меркаптогруппа, реакцией обмена дисульфидов, т.е. реакцией замещения.
В данной реакции длину линкера между лекарственным средством и производным гиалуроновой кислоты можно довести для сохранения биологической активности эффективного конъюгата. Кроме того, может быть введен пептидный линкер, расщепляемый ферментами в специфическом сайте в живом организме. Например, это можно осуществить при обращении к сообщению (Международная заявка № 2005/095464), в котором описано введение метотрексата в ГК через линкер, содержащий пептид, и к сообщению (Международная заявка № 2002/090209), в котором описано введение доксорубицина через линкер, содержащий HPMA (N-(2-гидроксипропил)метакриламид) и пептид, или тому подобное.
Кроме того, имеется много сообщений по ADC (конъюгат антитела и лекарственного средства), в котором низкомолекулярное соединение конъюгировано с антителом (Международная заявка № 2009/026274; Expert Opinion, Vol. 15, p. 1087-1103, 2005; Bioconjugate Chem., Vol. 19, p. 1960-1963, 2008; Bioconjugate Chem., в печати, Bernhard Stump et al., Antibody-Drug Conjugates: Linking Cytotoxic Payloads to Monoclonal Antibodies), и конъюгат производного гиалуроновой кислоты и низкомолекулярного соединения можно получить при обращении к этим сообщениям.
Фармацевтическая композиция, содержащая один или более лекарственных средств и производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, и конъюгат, в котором один или более лекарственных средств конъюгированы с производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, может находиться в виде наночастиц, микрочастиц, раствора, эмульсии, суспензии, геля, мицеллы, импланта, порошка или пленки. Порошок может быть получен измельчением твердого вещества, полученного лиофилизацией или распылительной сушкой, или получением из вещества, полученного сушкой преципитата.
Фармацевтические композиции и конъюгаты по настоящему изобретению можно вводить пероральным, парентеральным, интраназальным, интравагинальным, внутриглазным, подкожным, внутривенным, внутримышечным, внутрикожным, внутрибрюшинным, внутриартикулярным, интрацеребральным или интраоральным путями.
Фармацевтические композиции и конъюгаты по настоящему изобретению, в частности, для местного контролируемого высвобождения, предпочтительно по размеру составляет 200 мкм или ниже и более предпочтительно 100 мкм или ниже, для прохождения без закупорки иглы.
Фармацевтические композиции и конъюгаты по настоящему изобретению, в частности, для целенаправленной доставки к рецептору гиалуроновой кислоты, включая CD44, предпочтительно по размеру составляют 5 мкм или ниже.
Фармацевтические композиции и конъюгаты по настоящему изобретению, в частности, для длительного удерживания в крови и накопления в опухолевой ткани или воспаленной ткани, по размеру предпочтительно составляют 500 нм или ниже и более предпочтительно 200 нм или ниже. Кроме того, предпочтительно размер составляет 100 нм или ниже во избежание захвата ретикулоэндотеливальной системой и увеличения удерживания в крови.
Фармацевтические композиции и конъюгаты по настоящему изобретению, в частности, для неагрессивного введения таковых, обладающих способностью к адгезии к слизистой оболочке, предпочтительно имеют размер 200 мкм или ниже. В отношении адгезии к слизистой мембране, степень введения гидрофобной группы в производное гиалуроновой кислоты для использования предпочтительно является низкой.
Лекарственные средства, образующие комплекс с производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, особым образом не ограничиваются, при условии, что они могут удерживаться. Кроме того, лекарственные средства, предназначенные для связывания с производным гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, особым образом не ограничиваются, при условии, что можно изготовить конъюгат. Примеры лекарственных средств включают белок и/или пептид, полисахарид, нуклеиновую кислоту, низкомолекулярные соединения, и предпочтительные примеры включают белок и/или пептид.
Примеры низкомолекулярных соединений включают, например, противораковые средства (например, такие как алкилирующие агенты, антиметаболиты, алкалоиды, такие как паклитаксел), иммуносупрессивные средства, такие как циклоспорин, противовоспалительные средства (такие как стероидные и нестероидные противовоспалительные средства), противоревматические средства и антибиотики (такие как бета-лактамные антибиотики, аминогликозидные антибиотики, макролидные антибиотики, антибиотики тетрациклинового ряда, новые хинолоновые антибиотики и сульфа-препараты).
Примеры белков и пептидов включают, например, эритропоэтин (ЕРО), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), интерферон-α, β, γ (INF-α, β, γ), тромбопоэтин (ТРО), цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), фактор некроза опухолей (TNF), белок, связывающийся с фактором некроза опухолей (TNFbp), интерлейкин-10 (IL-10), FMS-подобная тирозинкиназа (Flt-3), гормон роста (GH), инсулин, инсулин-подобный фактор роста-1 (IGF-1), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), антагонист рецептора интерлейкина-1 (IL-1ra), нейротрофический фактор роста головного мозга (BDNF), фактор роста кератиноцитов (KGF), фактор стволовых клеток (SCF), фактор роста и развития мегакариоцитов (MGDF), остеопротегерин (OPG), лептин, паратгормон (РТН), основный фактор роста фибробластов (b-FGF), костный морфогенетический белок (ВМР), атриальный натрийуретический пептид (ANP), мозговой натрийуретический пептид (BNP), натрийуретический пептид С-типа (CNP), глюкагон-подобный пептид-1 (GLP-1), антитело, диатело, минитело и фрагменты антител.
Примеры нуклеиновых кислот включают, например, ДНК, РНК, антисмысловые нуклеиновые кислоты, «ловушку», рибозим, малые интерферирующие РНК и РНК-аптамер.
Производное гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, в котором инкапсулирован лекарственное средство или конъюгат производное гиалуроновой кислоты-лекарственное средство по настоящему изобретению можно вводить в фармацевтическую композицию, содержащую один или более фармацевтически приемлемых разбавителей, смачивающих агентов, эмульгаторов, диспергирующих веществ, адъювантов, консервантов, буферов, связующих веществ и/или стабилизаторов в любой подходящей форме в зависимости от предполагаемого пути введения. Путь введения может представлять парентеральный путь или пероральный путь.
Согласно настоящему изобретению можно обеспечить пролонгированное контролируемое высвобождение лекарственных средств, таких как белки, пептиды, нуклеиновые кислоты и низкомолекулярные соединения, которое невозможно обеспечить обычным препаратом с контролируемым высвобождением, и/или безопасные композиции с контролируемым высвобождением, и фармацевтические композиции, имеющие соответствующую биоразлагаемость.
Примеры
Конкретные предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения будут описаны в примерах ниже.
Единица ГК, описанная ниже, относится к повторяющейся единице N-ацетилглюкозамин-глюкуроновая кислота (1 единица) в гиалуроновой кислоте. Снятие 1Н-ЯМР спектра проводили с использованием ЯМР-спектрометра JNM-ECA500 (JEOL Ltd.). Диализ проводили с использованием мембраны для диализа из регенерированной целлюлозы (Spectra Pore 4: порог отсечения по молекулярной массе: 12 k-14 кДа при использовании натриевой соли гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу 50 кДа и 99 кДа в качестве исходного соединения; Spectra Pore 7: порог отсечения по молекулярной массе: 1 кДа или 2 кДа при использовании натриевой соли гиалуроновой кислоты, имеющей молекулярную массу 10 кДа в качестве исходного соединения).
Пример 1. Синтез производного гиалуроновой кислоты
Пример 1-1. Получение гидрохлорида холестерил-6-аминогексилкарбамата
Триэтиламин (TEA, 1,05 мл) добавляли к раствору холестерилхлорформиата (3,37 г, 7,5 мл) в безводном дихлорметане (20 мл) в атмосфере аргона и смесь перемешивали. Добавляли по каплям на льду 6-(трет-бутоксикарбонил)амино-1-аминогексан (1,12 мл, 5 ммоль), смесь перемешивали на льду в течение 30 мин и затем нагревали до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь промывали ультрачистой водой и насыщенным раствором соли, и сушили над безводным сульфатом магния. Затем растворитель выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: этилацетат:н-гексан=1:4). Фракции, содержащие целевое соединение, объединяли, и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате (40 мл) и добавляли раствор смеси 4Н хлористоводородная кислота/этилацетат (40 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, и полученный осадок отделяли центрифугированием. Полученное твердое вещество промывали 4 раза этилацетатом и затем сушили при пониженном давлении, с получением гидрохлорида холестерил-6-аминогексилкарбамата (Chol-C6) (1,2 г). 1Н-ЯМР спектр (EtOH-d6) продукта показан на фиг. 1-1.
Пример 1-2. Получение тетрабутиламмониевой (TBA) соли катионообменной смолы
DOWEX (зарегистрированная торговая марка) 50WX-8-400 (Sigma-Aldrich) суспендировали в ультрачистой воде и смолу промывали 3 раза или больше ультрачистой водой с декантацией. Добавляли 40% масс. водного раствора гидроксида тетрабутиламмония (TBA-OH; Sigma-Aldrich) к смоле из расчета примерно 1,5 эквивалентов на катионообменную способность, и смесь перемешивали в течение 30 мин. Избыток раствора TBA-OH удаляли декантированием, затем промывали несколько раз избытком ультрачистой воды, и, наконец, раствор фильтровали через фильтр 0,45 мкм, с получением TBA соли катионообменной смолы.
Пример 1-3. Получение солей НА
Натриевые соли гиалуроновой кислоты (ГК-Na, Shiseido Co., Ltd.) с молекулярными массами 10 кДа, 55 кДа и 99 кДа, каждую растворяли в ультрачистой воде в концентрации 15 мг/мл. Суспензии ТВА соли катионообменной смолы, полученные в примере 1-2, добавляли в количестве 5 моль-эквивалентов на моль ГК единицы (молекулярная масса единицы 401,3) с учетом ионообменной способности смолы. После перемешивания в течение 15 мин, суспензии фильтровали через фильтр 0,45 мкм. Фильтрат сушили замораживанием, с получением ТВА солей гиалуроновой кислоты (ГК-ТВА) в виде белого твердого вещества.
В качестве репрезентативного примера 1Н-ЯМР спектр продукта, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа с использованием D2O в качестве растворителя, показан на фиг. 1-2. Основываясь на интегрированном значении сигналов (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) ацетила в глюкозамине в ГК и интегрированном значении сигналов (N(CH2CH2CH2CH3)4, 1,4, 1,7 м.д.; 16H) четырех этиленовых групп в ТВА, рассчитывали количественные соотношения ТВА к единицам ГК. По данным соотношениям рассчитывали среднемассовые молекулярные массы единиц ГК-TBA. Например, среднемассовая молекулярная масса единицы ГК-ТВА, полученной из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, составляла 752,6.
Пример 1-4. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-аланином (Ala) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Ala-Chol/FL)
Готовили растворы (5 мг/мл) ГК-ТВА, синтезированной из исходных соединений ГК-Na (10 кДа, 50 кДа, 99 кДа) в примере 1-3, в безводном ДМСО. Затем добавляли гидрохлорид этилового эфира L-аланина (Aldrich) в количестве 5 моль-эквивалентов на единицу ГК. Затем добавляли 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолинийхлорид (DMT-MM) в количестве 6 моль-эквивалентов на единицу ГК. Смеси перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционные растворы подвергали диализу против водного раствора 0,3М NaCl и ультрачистой воды в указанном порядке. К полученным диализатам добавляли 2Н раствор NaOH до рН 12,5 или выше, и смеси перемешивали в течение 1 ч для гидролиза этилового эфира для снятия защиты с карбоксигруппы. Затем смеси нейтрализовали 2Н HCl, затем подвергали диализу и затем лиофилизировали, с получением ГК-Ala в виде белого твердого вещества. Иллюстративный пример 1Н-ЯМР спектра ГК-Ala (продукта, полученного из исходного соединения ГК с молекулярной массой 99 кДа), снятого в таких же условиях, как описано в примере 1-3, показан на фиг. 1-3. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 1,4 м.д.; 3H) в аланине, рассчитывали степень введения аланина (степень введения Ala) в единицы ГК по формуле, представленной ниже (таблица 1).
Формула 2
Степень введения Ala (%) | = | Интегрированное значение пика метила в аланине | ×100 |
Интегрированное значение пика ацетила в ГК |
Суспензию ТВА соли катионообменной смолы, полученную в примере 1-2, добавляли к водным растворам ГК-Ala в количестве примерно 5 моль-эквивалентов. После перемешивания в течение 15 мин суспензии фильтровали через фильтр 0,45 мкм. Фильтраты лиофилизировали, с получением ТВА солей ГК-Ala (ГК-Ala-ТВА) в виде белого твердого вещества. Основываясь на 1Н-ЯМР спектрах ГК-Ala-ТВА, снятых в таких же условиях, как описано выше в примере 1-3, рассчитывали количественное соотношение ТВА к единице ГК, методом, аналогично описанному в примере 1-3, и, основываясь на интегрированном значении пика ацетила в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-Si(CH3)3, 0,0 м.д.; 9H) в натриевой соли 3-(триметилсилил)пропионата-d4 (TSP-d4), использованной в качестве внутреннего стандарта, рассчитывали массовое содержание единицы ГК.
Готовили растворы (10 мг/мл) ГК-Ala-ТВА в безводном ДМСО. Затем к соответствующим растворам добавляли гидрохлорид Chol-C6, полученный в примере 1-1, в соотношениях к единице ГК-Ala-ТВА, представленных в таблице 1 ниже. Затем к ГК-Ala-ТВА добавляли DMT-MM в соотношении, представленном в таблице 1 ниже. Добавляли гидрохлорид аминометилфлуоресцеина (FL) (Invitrogen) и DMT-MM соответственно в количестве 0,04 моль-эквивалентов и 0,07 моль-эквивалентов на единицу ГК-Ala-ТВА. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционный раствор подвергали диализу против водного раствора 0,3М ацетата аммония/ДМСО, 0,15М водного раствора NaCl и ультрачистой водой в указанном порядке. Полученные диализаты лиофилизировали, с получением целевых продуктов (ГК-Ala-Chol-FL) в виде желтого твердого вещества.
Иллюстративный пример 1Н-ЯМР спектра (продукта, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, и который имел степень введения холестерильной группы 7%) в смешанном растворе 0,02Н DCl ДМСО-d6/D2O (2Н DCl D2O:ДМСО-d6=1:99), использованном в качестве растворителя при анализе, показан на фиг. 1-4. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,6-2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 0,7 м.д.; 3H) в холестерильной группе, рассчитывали степень введения холестерильной группы в единицы ГК по формуле, показанной ниже (таблица 1). Поскольку пики около 1,6-2,0 м.д., включая пики ацетила в глюкозамине, перекрываются с пиками (5Н) холестерильной группы, значения, полученные вычитанием 5/3 интегрированного значения пика (0,7 м.д.) метила в холестерильной группе, из интегрированного значения пиков около 1,6-2,0 м.д. (т.е. интегрированное значение (1,6-2,0 м.д.)-интегрированное значение (0,7 м.д.)×5/3) использовали в качестве интегрированных значений ацетила ГК для расчета степени введения.
Формула 3
Степень введения холестерильной (%) | = | Интегрированное значение пика метила в холестерильной группе (0,7 м.д.) | ×100 |
Интегрированное значение пика ацетила в ГК (1,6-2,0 м.д., значение после коррекции) |
Таблица 1 | ||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-Ala-Chol/FL, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Степень введения Ala (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Ala-Chol-7%/FL | 99k | 101 | 100/8/12 | 7 |
99k ГК-Ala-Chol-24%/FL | 99k | 101 | 100/27/41 | 24 |
99k ГК-Ala-Chol-30%/FL | 99k | 101 | 100/35/53 | 30 |
50k ГК-Ala-Chol-6%/FL | 50k | 101 | 100/7/11 | 6 |
50k ГК-Ala-Chol-22%/FL | 50k | 101 | 100/24/36 | 22 |
50k ГК-Ala-Chol-26%/FL | 50k | 101 | 100/32/48 | 26 |
10k ГК-Ala-Chol-16%/FL | 10k | 101 | 100/16/24 | 16 |
В данном примере примеры групп, с которыми аминогруппа в гидрохлориде Chol-C6 может взаимодействовать, включают как карбоксигруппу фрагмента глюкуроновой кислоты в гиалуроновой кислоте, так и карбоксигруппу в Ala. Если гидрофобную группу можно ввести в две реакционноспособные группы, подобные этим, то сокращенное обозначение с дефисом, такое как «-Chol» используется для обозначения мишени.
Пример 1-5. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-треонином (ThrNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-ThrNH2-Chol/FL)
Готовили растворы (10 мг/мл) ГК-ТВА, синтезированной из исходного соединения ГК-Na (99 кДа) в примере 1-3, в безводном ДМСО. Затем добавляли Chol-С6, полученный в примере 1-1, к соответствующим растворам в соотношениях на единицу ГК, представленных в таблице 2 ниже. Затем добавляли DMT-MM в соотношениях на единицу ГК, представленных в таблице 2 ниже, гидрохлорид 5-аминометилфлуоресцеина (FL) (Invitrogen) и добавляли DMT-MM соответственно в количестве 0,04 моль-эквивалентов и 0,07 моль-эквивалентов на единицу ГК. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 7 ч. Затем добавляли гидрохлорид L-треонинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) в количестве 3 моль-эквивалентов на единицу ГК. Затем добавляли DMT-MM в количестве 5 моль-эквивалентов на единицу ГК. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционный раствор подвергали диализу против раствора 0,3М ацетата аммония/ДМСО, 0,15М водного раствора NaCl и ультрачистой водой в указанном порядке. Полученные диализаты лиофилизировали, с получением целевых продуктов (ГК-ThrNH2/Chol/FL) в виде желтого твердого вещества.
Иллюстративный пример 1Н-ЯМР спектра (продукта, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, и который имел степень введения холестерильной группы 6%) в смешанном растворе 0,02Н DCl ДМСО-d6/D2O (2Н DCl D2O:ДМСО-d6=1:99), используемом в качестве растворителя при анализе, показан на фиг. 1-5. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,6-2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 0,7 м.д.; 3H) в холестерильной группе, рассчитывали степень введения холестерильной группы в единицы ГК по формуле, показанной ниже (таблица 2). Поскольку пики в области 1,6-2,0 м.д., включая пики ацетила в глюкозамине, перекрываются с пиками (5Н) холестерильной группы, то значения, полученные вычитанием 5/3 интегрированного значения пика (0,7 м.д.) метила в холестерильной группе, из интегрированного значения пиков области 1,6-2,0 м.д. (т.е. интегрированное значение (1,6-2,0 м.д.)-интегрированное значение (0,7 м.д.)×5/3), использовали в качестве интегрированных значений ацетила в ГК для расчета степени введения.
Формула 4
Степень введения холестерильной группы (%) | = | Интегрированное значение пика метила в холестерильной группе (0,7 м.д.) | ×100 |
Интегрированное значение пика ацетила в ГК (0,6-2,0 м.д., значение после коррекции) |
Основываясь на интегрированном значении пика ацетила в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 1,2 м.д.; 3H) в треонинамиде, рассчитывали степень введения треонинамида в единицы ГК (таблица 2).
Формула 5
Степень введения треонинамида (%) | = | Интегрированное значение пика метила в треонинамиде | ×100 |
Интегрированное значение пика ацетила в ГК |
Таблица 2 | |||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-ThrNH2-Chol/FL, и степень введения | |||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Степень введения ThrNH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) | Суммарная степень введения ThrNH2 и Chol |
99k ThrNH2/Chol-6%/FL | 99k | 83 | 100/6/6 | 6 | 89 |
99k ThrNH2/Chol-24%/FL | 99k | 73 | 100/24/24 | 24 | 97 |
99k ThrNH2/Chol-31%/FL | 99k | 70 | 100/32/32 | 31 | 101 |
В данном примере аминогруппа в гидрохлориде Chol-C6 взаимодействует только с карбоксигруппой фрагмента глюкуроновой кислоты гиалуроновой кислоты, и гидрофобная группа дополнительно не вводится во введенный ThrNH2. Если гидрофобную группу можно ввести только в карбоксигруппу фрагмента глюкуроновой кислоты гиалуроновой кислоты, подобные этому, сокращенное обозначение с косой черточкой, такое как «/Chol» используется для обозначения мишени.
Пример 1-6. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-серином (Ser) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Ser-Chol/FL)
ГК-Ser получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-серината (Aldrich) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. Кроме того, часть диализата (ГК-Ser-OEt) до снятия защиты с карбоксигруппы карбоксигруппу собирали и лиофилизировали в качестве образца для расчета степени введения. 1Н-ЯМР спектр образца, использованного для расчета степени введения, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.1-6. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,9 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 1,2 м.д.; 3H) в этиловом эфире серина, рассчитывали степень введения серина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). Кроме того, 1Н-ЯМР спектр образца со снятой защитой, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.1-7. ТВА соль ГК-Ser (ГК-Ser-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Ser-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг.1-8. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-7. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-глицином (Gly) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Gly-Chol/FL)
ГК-Gly получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этилглицината (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. Кроме того, часть диализата (ГК-Gly-OEt) до снятия защиты с карбоксигруппы собирали и лиофилизировали в виде образца, использованного для расчета степени введения. 1Н-ЯМР спектр образца, использованного для расчета степени введения, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.1-9. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 1,3 м.д.; 3H) в этиловом эфире глицина, рассчитывали степень введения глицина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). Кроме того, 1Н-ЯМР спектр образца со снятой защитой, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-10. ТВА соль ГК-Gly (ГК-Gly-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Gly-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 1-11. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-8. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-треонином (Thr) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Thr-Chol/FL)
ГК-Thr получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид метил-L-треонината (Bachem) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-12. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 1,2 м.д.; 3H) в треонине, рассчитывали степень введения треонина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). ТВА соль ГК-Thr (ГК-Thr-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Thr-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 1-13. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-9. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-аспарагином (Asn) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Asn-Chol/FL)
ГК-Asn получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид метил-L-аспарагината (Bachem) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-14. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков метилена (-CH2CONH2, 2,7, 2,8 м.д.; 2H) в аспарагине, рассчитывали степень введения аспарагина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). ТВА соль ГК-Asn (ГК-Asn-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Asn-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 1-15. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-10. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-аспарагиновой кислотой (Asp) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Asp-Chol/FL)
ГК-Asp получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид диэтил-L-аспартата (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-16. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков метилена (-CH2COOH2, 2,7, 2,8 м.д.; 2H) в аспарагиновой кислоте, рассчитывали степень введения аспарагиновой кислоты в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). ТВА соль ГК-Asp (ГК-Asp-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Asp-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг.1-17. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-11. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-изолейцина (Ile) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Ile-Chol/FL)
ГК-Ile получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид метил-L-изолейцината (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-18. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика двух метилов (-CH(СН3)СН2СН3, 0,9 м.д.; 6H) в изолейцине, рассчитывали степень введения изолейцина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). Поскольку пик водорода в положении 3 изолейцина (-CH(СН3)СН2СН3, 1,9 м.д.; 1H) перекрывается с пиками ацетила в глюкозамине, то значение, полученное вычитанием 1/6 интегрированного значения пика при 0,9 м.д. из интегрированного значения пиков при 1,8-2,2 м.д., использовали в качестве пиков ацетила в глюкозамине для расчета степени введения. ТВА соль ГК-Ile (ГК-Ile-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Ile-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 1-19. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-12. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-лейцином (Leu) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Leu-Chol/FL)
ГК-Leu получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-лейцината (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-20. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика двух метилов (-CH(СН3)2, 0,9 м.д.; 6H) в лейцине, рассчитывали степень введения лейцина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). ТВА соль ГК-Leu (ГК-Leu-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Leu-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 1-21. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-13. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-валином (Val) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Val-Chol/FL)
ГК-Val получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-валината (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-22. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика двух метилов (-CH(СН3)2, 0,9 м.д.; 6H) в валине, рассчитывали степень введения валина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). Поскольку пик водорода в положении 3 валина (-CH(СН3)2, 2,1 м.д.; 1H) перекрывается с пиком ацетила в глюкозамине, то значение, полученное вычитанием 1/6 интегрированного значения пика при 0,9 м.д. из интегрированного значения пиков при 1,8-2,2 м.д., использовали в качестве пиков ацетила в глюкозамине для расчета степени введения. ТВА соль ГК-Val (ГК-Val-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Val-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 1-23. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Пример 1-14. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-фенилаланином (Phe) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Phe-Chol/FL)
ГК-Phe получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-фенилаланината (Aldrich) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-24. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков фенила (-C6H5, 7,2-7,4 м.д.; 5H) в фенилаланине, рассчитывали степень введения фенилаланина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). ТВА соль ГК-Phe (ГК-Phe-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Phe-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг.1-25. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 3).
Таблица 3 | ||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-АА/Chol/FL, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения АА (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Ser-Chol-6%/FL | 99k | Ser 96 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК-Gly-Chol-6%/FL | 99k | Gly 80 | 100/10/15 | 6 |
99k ГК-Thr-Chol-6%/FL | 99k | Thr 103 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК-Asn-Chol-6%/FL | 99k | Asn 85 | 100/10/15 | 7 |
99k ГК-Asp-Chol-6%/FL | 99k | Asp 102 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК- Asp -Chol-6%/FL | 99k | Asp 106 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК-Leu-Chol-6%/FL | 99k | Leu 100 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК-Val-Chol-6%/FL | 99k | Val 106 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК-Phe-Chol-6%/FL | 99k | Phe 99 | 100/7/11 | 6 |
Пример 1-15. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-серинамидом (SerNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-SerNH2/Chol/FL)
ГК-SerNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-серинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 1-26. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4). Кроме того, 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-27. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метилена (-CH2-, 3,9 м.д.; 5H) в серинамиде, рассчитывали степень введения серинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4). Поскольку пик метилена в серинамиде перекрывается с пиками (4Н) положений 2-5 глюкуроната и пиками (6Н) положений 2-6 глюкозамина, то значение, полученное вычитанием 10/3 интегрированного значения пика при 2,0 м.д. из интегрированного значения пиков при 3,2-4,2 м.д., использовали в качестве пиков метилена в серинамиде для расчета степени введения.
Пример 1-16. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-глицинамидом (GlyNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-GlyNH2/Chol/FL)
ГК-GlyNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид глицинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-треонинамида.
1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 1-28. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4). Кроме того, 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-29. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метилена (-CH2-, 3,9 м.д.; 2H) в глицинамиде, рассчитывали степень введения глицинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4). Поскольку пик метилена в глицинамиде перекрывается с пиками (4Н) положений 2-5 глюкуроната и пиками (6Н) положений 2-6 глюкозамина, то интегрированное значение пика метилена в глицинамиде рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-15.
Пример 1-17. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-лейцинамидом (LeuNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-LeuNH2/Chol/FL)
ГК-LeuNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид лейцинамида (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) вместо гидрохлорида этил-L-треонинамида.
1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 1-30. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,9 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика двух метилов (-CH(СН3)2, 0,9 м.д.; 6H) в лейцинамиде, рассчитывали степень введения лейцинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4).
Пример 1-18. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-валинамидом (ValNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-ValNH2/Chol/FL)
ГК-ValNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-валинамида (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) вместо гидрохлорида этил-L-треонинамида.
1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 1-31. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,9 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика двух метилов (-CH(СН3)2, 1,0 м.д.; 6H) в валинамиде, рассчитывали степень введения валинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 4).
Таблица 4 | |||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-AANH2/Chol/FL, и степень введения | |||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) | Суммарная степень введения AANH2 и Chol |
99k ГК-SerNH2-Chol-6%/FL | 99k | SerNH2 90 | 100/7/7 | 6 | 96 |
99k ГК-GlyNH2-Chol-6%/FL | 99k | GlyNH2 90 | 100/7/7 | 6 | 96 |
99k ГК-LeuNH2-Chol-6%/FL | 99k | LeuNH2 99 | 100/7/7 | 6 | 105 |
99k ГК-ValNH2-Chol-6%/FL | 99k | ValNH2 97 | 100/7/7 | 6 | 103 |
Пример 1-19. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-аланином (Ala) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Ala/Chol/FL)
ГК-Ala-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-аланина (Aldrich) вместо гидрохлорида этил-L-треонинамида, и диализат сразу же удаляли во время диализа против ультрачистой воды со снятием защиты с карбоксигруппы 2Н раствором NaOH. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг.1-32. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 5). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,9 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-СН3, 1,3 м.д.; 3H) в аланине, рассчитывали степень введения аланина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 5). Поскольку пик метила в аланине перекрывается с пиками (0,8-1,6 м.д., 41Н) холестерил-6-аминогексилкарбамата, то значение, полученное вычитанием 41/3 интегрированного значения пика при 0,7 м.д. из интегрированного значения пиков при 0,8-1,6 м.д., использовали в качестве пиков метила в аланине для расчета степени введения.
Пример 1-20. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-серином (Ser) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Ser/Chol/FL)
ГК-Ser/Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-серината (Aldrich) вместо гидрохлорида этил-L-треонинамида, и диализат сразу же удаляли во время диализа против ультрачистой воды со снятием защиты с карбоксигруппы 2Н раствором NaOH. Кроме того, часть диализата (ГК-Ser-OEt/Chol/FL) до снятия защиты с карбоксигруппы собирали и лиофилизировали для использования в качестве образца для расчета степени введения. 1Н-ЯМР спектр образца, использованного для расчета степени введения, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-33. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,3 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 1,6 м.д.; 3H) в этиловом эфире серина, рассчитывали степень введения серина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-6 (таблица 5). Кроме того, 1Н-ЯМР спектр образца со снятой защитой, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 1-34. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-5 (таблица 5).
Таблица 5 | |||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-АА/Chol/FL, и степень введения | |||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AA (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) | Суммарная степень введения AA и Chol |
99k ГК-Ala-Chol-6%/FL | 99k | Ala 90 | 100/7/7 | 6 | 96 |
99k ГК-Ser-Chol-6%/FL | 99k | Ser 97 | 100/7/7 | 6 | 103 |
Пример 1-21. Синтез производного гиалуроновой кислоты без флуоресцентной метки
ГК-Ala/Chol, ГК-ThrNH2/Chol, ГК-SerNH2/Chol и ГК-ValNH2/Chol получали в виде белого твердого вещества соответственно способами, описанными в примере 1-4 (Ala), примере 1-5 (ThrNH2), примере 1-15 (SerNH2) и примере 1-18 (ValNH2) за исключением того, что не добавляли 5-аминометилфлуоресцеин. Степень введения холестерильной группы и степень введения аминокислоты и амида аминокислоты рассчитывали способами, описанными в соответствующих примерах 1-5 (таблица 6).
Таблица 6-1 | ||||
Количество реагента, использованного в получении производных гиалуроновой кислоты, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Ala-Chol-3% | 99k | Ala 101 | 100/4/6 | 3 |
99k ГК-Ala-Chol-6% | 99k | Ala 101 | 100/8/12 | 6 |
99k ГК-Ala-Chol-14% | 99k | Ala 101 | 100/16/24 | 14 |
99k ГК-Ala-Chol-26% | 99k | Ala 101 | 100/32/48 | 26 |
99k ГК-Ala-Chol-39% | 99k | Ala 101 | 100/48/72 | 39 |
10k ГК-Ala-Chol-3% | 10k | Ala 101 | 100/4/6 | 3 |
10k ГК-Ala-Chol-7% | 10k | Ala 101 | 100/8/12 | 7 |
10k ГК-Ala-Chol-15% | 10k | Ala 101 | 100/16/24 | 15 |
10k ГК-Ala-Chol-27% | 10k | Ala 101 | 100/32/48 | 27 |
10k ГК-Ala-Chol-41% | 10k | Ala 101 | 100/48/72 | 41 |
Таблица 6-2 | ||||
Количество реагента, использованного в получении производных гиалуроновой кислоты, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-ThrNH2-Chol-7% | 99k | ThrNH2 95 | 100/8/8 | 7 |
99k ГК-ThrNH2-Chol-15% | 99k | ThrNH2 98 | 100/16/16 | 15 |
10k ГК-ThrNH2-Chol-8% | 10k | ThrNH2 100 | 100/8/8 | 8 |
10k ГК-ThrNH2-Chol-15% | 10k | ThrNH2 96 | 100/16/16 | 15 |
99k ГК-SerNH2-Chol-7% | 99k | SerNH2 91 | 100/8/8 | 7 |
99k ГК-SerNH2-Chol-15% | 99k | SerNH2 85 | 100/16/16 | 15 |
10k ГК-SerNH2-Chol-8% | 10k | SerNH2 87 | 100/8/8 | 8 |
10k ГК-SerNH2-Chol-16% | 10k | SerNH2 85 | 100/16/16 | 16 |
99k ГК-ValNH2-Chol-6% | 99k | ValNH2 97 | 100/8/8 | 6 |
99k ГК-ValNH2-Chol-13% | 99k | ValNH2 84 | 100/16/16 | 13 |
10k ГК-ValNH2-Chol-7% | 10k | ValNH2 93 | 100/8/8 | 7 |
10k ГК-ValNH2-Chol-14% | 10k | ValNH2 85 | 100/16/16 | 14 |
Сравнительный пример 1-1. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Chol/FL)
Готовили растворы (10 мг/мл) ГК-ТВА, синтезированной из исходного соединения ГК-Na (10 k, 50 k, 99 кДа) и полученной в примере 1-3, в безводном ДМСО. Затем к соответствующим растворам добавляли Chol-C6, полученный в примере 1-1, в соотношениях к единицам ГК, представленных в таблице 7 ниже, и добавляли гидрохлорид 5-аминометилфлуоресцеина (FL) (Invitrogen) и DMT-MM соответственно в количестве 0,04 моль-эквивалентов и 0,07 моль-эквивалентов на единицу ГК. Реакционный раствор подвергали диализу против раствора 0,3М ацетата аммония/ДМСО, 0,15М водного раствора NaCl и ультрачистой водой в указанном порядке. Полученные диализаты лиофилизировали, с получением целевых продуктов (ГК-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества.
Иллюстративный пример 1Н-ЯМР спектра (продукта, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, и который имел степень введения холестерильной группы 6%) в смешанном растворе 0,02Н DCl ДМСО-d6/D2O (2Н DCl D2O:ДМСО-d6=1:99), который использовали в качестве растворителя при анализе, показан на фиг.1-35. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 7).
Таблица 7 | |||
Количество реагента, использованного в получении ГК-Chol/FL, и степень введения | |||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
10k ГК-Chol-15%/FL | 10k | 100/17,6/16 | 15 |
50k ГК-Chol-6%/FL | 50k | 100/6/6 | 6 |
50k ГК-Chol-20%/FL | 50k | 100/26,4/24 | 20 |
50k ГК-Chol-27%/FL | 50k | 100/35,2/32 | 27 |
99k ГК-Chol-6%/FL | 99k | 100/6/6 | 6 |
99k ГК-Chol-24%/FL | 99k | 100/24/24 | 24 |
99k ГК-Chol-25%/FL | 99k | 100/35,2/32 | 25 |
Сравнительный пример 1-2. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного EDOBEA (ГК-EDOBEA-Ac /FL)
Готовили растворы (5 мг/мл) ГК-ТВА, синтезированной из исходного соединения ГК-Na (10 k, 50 k, 99 кДа) в примере 1-3, в безводном ДМСО. Затем добавляли EDOBEA и BOP в указанном порядке в эквивалентном соотношении единица НА/BOP (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)/2,2’(этилендиокси)бис(этиламин) (EDOBEA, Sigma-Aldrich)=1/2,5/50 (моль/моль/моль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционный раствор подвергали диализу против 0,3М водного раствора NaCl и ультрачистой воды в указанном порядке, и затем лиофилизировали, с получением ГК-EDOBEA, имеющего высокую степень введения.
1Н-ЯМР спектр ГК-EDOBEA, имеющего высокую степень введения, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-36. При снятии спектра NaOD добавляли до концентрации 0,0046Н, с получением раствора щелочи. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метилена (-CH2NH2, 2,8 м.д.; 2H) в конце EDOBEA, рассчитывали степень введения EDOBEA в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4, и она составила 82%.
Полученный ГК-EDOBEA, имеющий высокую степень введения, растворяли в ультрачистой воде, с получением концентрации 10 мг/мл, и затем 2 раза разводили 100 мМ фосфатным буфером (рН 7,4), с получением раствора 5 мг/мл. К данному раствору добавляли раствор NHS-флуоресцеина в ДМСО в количестве 0,04 экв на единицу ГК, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Концевую аминогруппу избытка EDOBEA ацетилировали добавлением уксусного ангидрида (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) в количестве 40 моль-эквивалентов на единицу ГК и затем перемешивали в течение 1 ч. Реакционный раствор подвергали диализу в темноте против 0,3М водного раствора NaCl и ультрачистой воды в указанном порядке, и затем лиофилизировали, с получением ГК-EDOBEA-Ac/FL в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в тех условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.1-37.
Сравнительный пример 1-3. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-тирозином (Tyr) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Tyr-Chol/FL)
ГК-Tyr получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-тирозината (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.1-38. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков гидроксифенила (-CH6H4OH, 6,8 м.д., 7,2 м.д.; 4H) в тирозине, рассчитывали степень введения тирозина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 8). ТВА соль ГК-Tyr (ГК-Tyr-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Tyr-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг.1-39. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 8).
Таблица 8 | ||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-Tyr-Chol/FL, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Степень введения Tyr (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM)ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Tyr-Chol-6%/FL | 99k | 105 | 100/7/11 | 6 |
Пример 2. Подтверждение удерживания в крови и биоразлагаемости in vivo
Пример 2-1. Отбор биологической пробы от крысы после введения производного ГК
Соединения, полученные в примерах (1-4)-(1-20) и сравнительных примерах (1-1)-(1-3), вводили крысам однократно внутривенно в дозе 10 мг/кг. Через 5 мин, 2, 7, 24, 28, 72, 168, 240 и 336 ч после введения из яремной вены отбирали кровь с использованием шприцов, обработанных натриевой солью гепарина, и плазму получали центрифугированием. Некоторые пробы крови в сравнительных примерах также отбирали через 96 ч после введения. Данные пробы плазмы криоконсервировали при -20°С или ниже до проведения анализа. Кроме того, собирали мочу с использованием метаболитных камер на 0-24 ч, 24-48 ч, 48-72 ч, 72-96 ч, 168-192 ч, 240-264 и 336-360 ч после введения и криоконсервировали при -20°С или ниже до проведения анализа. Кроме того, извлекали печень через 15 суток после введения продуктов и криоконсервировали при -20°С или ниже до проведения анализа. Соединение, полученное в сравнительном примере 1-2, вводили внутривенно однократно в дозе 20 мг/кг крысам с последующим сбором мочи и извлечением печени.
Пример 2-2. Анализ плазмы крови крысы, получавшей производное ГК
Пробы плазмы крови оттаивали и разводили в 2 раза HP-β-CD (100 мМ)/Трис буфером (500 мМ, рН 9,0), инкубировали при 37°С в течение 1 ч и затем определяли концентрацию меченного флуоресцентной меткой производного ГК с использованием ридера для 96-луночных планшетов (ARVO; нижний предел обнаружения: 0,4 мкг/мл). Динамика изменения концентрации в плазме крови меченных флуоресцентной меткой производных ГК показана на фиг. (2-1-1)-(2-1-26). Кроме того, определяли фармакокинетический параметр (экстраполяция площади под кривой концентрация в плазме крови-время (AUC∞)) с использованием программы WinNonlin версия 6.1 (Pharsight). Значения представлены в таблице 9. Кроме того, соотношения значений AUC∞ по отношению к сравнительным образцам, в которые был введен холестерол на том же уровне, рассчитанные с использованием следующей формулы, представлены в таблице 10.
Формула 6
Соотношение значений AUC∞ | = | AUC∞ образца | ×100 |
AUC∞ соответствующего сравнительного образца |
Таблица 9 | ||
Фармакокинетический параметр меченного флуоресцентной меткой производных НА | ||
Образец | Фармакокинетический параметр меченного флуоресцентной меткой производных ГК | AUC∞ (мкг/час/мл) |
Образец 2-1 | 99k ГК-Ala-Chol-7%/FL | 2460,8 |
Образец 2-2 | 99k ГК-Ala-Chol-24%/FL | 775,6 |
Образец 2-3 | 99k ГК-Ala-Chol-30%/FL | 1557,3 |
Образец 2-4 | 50k ГК-Ala-Chol-6%/FL | 2226,0 |
Образец 2-5 | 50k ГК-Ala-Chol-22%/FL | 594,3 |
Образец 2-6 | 50k ГК-Ala-Chol-26%/FL | 1393,4 |
Образец 2-7 | 10k ГК-Ala-Chol-16%/FL | 1873,0 |
Образец 2-8 | 99k ГК-ThrNH2/Chol-6%/FL | 2819,3 |
Образец 2-9 | 99k ГК-ThrNH2/Chol-24%/FL | 2268,9 |
Образец 2-10 | 99k ГК-ThrNH2/Chol-31%/FL | 3714,0 |
Образец 2-11 | 99k ГК-Ser-Chol-6%/FL | 2853,5 |
Образец 2-12 | 99k ГК-Gly-Chol-6%/FL | 2798,6 |
Образец 2-13 | 99k ГК-Thr-Chol-6%/FL | 1381,3 |
Образец 2-14 | 99k ГК-Asn-Chol-7%/FL | 2978,0 |
Образец 2-15 | 99k ГК-Asp-Chol-6%/FL | 2903,2 |
Образец 2-16 | 99k ГК-Ile-Chol-6%/FL | 2185,0 |
Образец 2-17 | 99k ГК-Leu-Chol-6%/FL | 1834,5 |
Образец 2-18 | 99k ГК-Val-Chol-6%/FL | 1814,7 |
Образец 2-19 | 99k ГК-Phe-Chol-6%/FL | 2879,6 |
Образец 2-20 | 99k ГК-ValNH2/Chol-6%/FL | 2935,3 |
Образец 2-21 | 99k ГК-SerNH2/Chol-6%/FL | 2218,2 |
Образец 2-22 | 99k ГК-LeuNH2/Chol-6%/FL | 2345,1 |
Образец 2-23 | 99k ГК-GlyNH2/Chol-6%/FL | 2011,3 |
Образец 2-24 | 99k ГК-Ala/Chol-6%/FL | 2073,6 |
Образец 2-25 | 99k ГК-Ser/Chol-6%/FL | 1709,5 |
Сравнительный образец 2-1 | 99k ГК-Chol-6%/FL | 546,9 |
Сравнительный образец 2-2 | 99k ГК-Chol-24%/FL | 161,3 |
Сравнительный образец 2-3 | 99k ГК-Chol-25%/FL | 361,4 |
Сравнительный образец 2-4 | 50k ГК-Chol-6%/FL | 533,1 |
Сравнительный образец 2-5 | 50k ГК-Chol-20%/FL | 199,5 |
Сравнительный образец 2-6 | 50k ГК-Chol-27%/FL | 308,1 |
Сравнительный образец 2-7 | 10k ГК-Chol-15%/FL | 1696,4 |
Сравнительный образец 2-8 | 99k ГК-Tyr-Chol-6%/FL | 403,6 |
Таблица 10 | |||
Соотношение значений AUC∞ | |||
Образец | Меченное флуоресцентной меткой производное ГК | Сравнительный образец для сравнения | Соотношение значений по отношению к сравнительному образцу |
Образец 2-1 | 99k ГК-Ala-Chol-7%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 4,5 |
Образец 2-2 | 99k ГК-Ala-Chol-24%/FL | Сравнительный образец 2-2 | 4,8 |
Образец 2-3 | 99k ГК-Ala-Chol-30%/FL | Сравнительный образец 2-3 | 4,3 |
Образец 2-4 | 50k ГК-Ala-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-4 | 4,2 |
Образец 2-5 | 50k ГК-Ala-Chol-22%/FL | Сравнительный образец 2-5 | 3,0 |
Образец 2-6 | 50k ГК-Ala-Chol-26%/FL | Сравнительный образец 2-6 | 4,5 |
Образец 2-7 | 10k ГК-Ala-Chol-16%/FL | Сравнительный образец 2-7 | 1,1 |
Образец 2-8 | 99k ГК-ThrNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,2 |
Образец 2-9 | 99k ГК-ThrNH2/Chol-24%/FL | Сравнительный образец 2-2 | 14,1 |
Образец 2-10 | 99k ГК-ThrNH2/Chol-31%/FL | Сравнительный образец 2-3 | 10,3 |
Образец 2-11 | 99k ГК-Ser-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,2 |
Образец 2-12 | 99k ГК-Gly-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,1 |
Образец 2-13 | 99k ГК-Thr-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 2,5 |
Образец 2-14 | 99k ГК-Asn-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,4 |
Образец 2-15 | 99k ГК-Asp-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,3 |
Образец 2-16 | 99k ГК-Ile-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 4,0 |
Образец 2-17 | 99k ГК-Leu-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 3,4 |
Образец 2-18 | 99k ГК-Val-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 3,3 |
Образец 2-19 | 99k ГК-Phe-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,3 |
Образец 2-20 | 99k ГК-ValNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,4 |
Образец 2-21 | 99k ГК-SerNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 4,1 |
Образец 2-22 | 99k ГК-LeuNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 4,3 |
Образец 2-23 | 99k ГК-GlyNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 3,7 |
Образец 2-24 | 99k ГК-Ala/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 3,8 |
Образец 2-25 | 99k ГК-Ser/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 3,1 |
Сравнительный образец 2-8 | 99k ГК-Tyr-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 0,7 |
Было обнаружено, что производные ГК (образцы (2-1)-(2-25)), в которые были введены аминокислота или амид аминокислоты и холестерильная группа в карбоксигруппе, сохраняют концентрацию в плазме крови лучше, чем производные ГК (сравнительные образцы (2-1)-(2-7)), в которые была введена только холестерильная группа в карбоксигруппе.
(Пример 2-3) Анализ печени крысы, получавшей производное ГК
Примерно к 1 г пробы печени добавляли Трис-буфер (10 мМ, рН 9,0), и пробу гомогенизировали с использованием шариков. Добавляли раствор проназы в концентрации 4 мг/мл, и смесь инкубировали при 37°С в течение ночи. После центрифугирования пробу разводили в 2 раза HP-β-CD (100 мМ)/Трис-буфер (500 мМ, рН 9,0), затем инкубировали при 37°С в течение 1 ч и затем фильтровали. Пробу анализировали эксклюзионной хроматографией в следующих условиях. Кроме того, печень от крысы без введения какого-либо образца обрабатывали аналогично, и смеси этой пробы и пробы, отобранной до введения, анализировали аналогично и использовали в качестве стандарта.
Условия анализа эксклюзионной хроматографией
Аналитическая колонка: TSKgel G5000 PWXL (Tosoh Corporation).
Температура колонки: 25°С.
Подвижная фаза: HP-β-CD (10 мМ)/Трис-буфер (500 мМ, рН 9,0).
Скорость потока: 0,5 мл/мин.
Детектирование: длина волны экстинкции 494 нм/длина волны эмиссии 515 нм.
Объем инжектирования: 50 мкл.
Результаты представлены на фиг. (2-2-1)-(2-2-27). Хроматограммы нормализовали по соответствующим самым высоким пикам. В то время как производное ГК из сравнительного примера 1-2 (ГК-EDOBEA-Ac/FL, фиг. 2-2-26) не превращалось в низкомолекулярные молекулы в печени, было обнаружено, что все введенные соединения производных ГК из примеров превращались в низкомолекулярные молекулы. Это указывает на то, что производные ГК по настоящему изобретению обладают биоразлагаемостью. Предполагается, что после деградации они выделяются с мочой или фекалиями из организма.
Пример 2-4. Анализ мочи крысы, получавшей производное ГК
Пробы мочи фильтровали через фильтр 0,22 мкм и разводили в 2 раза HP-β-CD (100 мМ)/Трис-буфер (500 мМ, рН 9,0). После инкубации при 37°С в течение 1 ч, пробы фильтровали и анализировали эксклюзионной хроматографией в условиях, описанных в примере 2-3. Кроме того, пробу мочи от крысы без введения какого-либо образца обрабатывали аналогично, и смеси этой пробы и пробы, отобранной до введения, анализировали аналогично и использовали в качестве стандарта.
Результаты представлены на фиг.(2-3-1)-(2-3-27). На фигурах хроматограммы во временных точках в той же шкале показаны слева и нормализованные по самым высоким пикам показаны справа. Пробы мочи, собранные на 0-24 ч, 24-48 ч, 48-72 ч, 72-96 ч, 168-192 ч, 240-264 и 336-360 ч после введения обозначены, соответственно, как 0-2d, 1-2d, 2-3d, 3-4d, 7-8d, 10-11d и 14-15d, и соответствующие стандарты в виде STD на фигурах. В то время как производное ГК из сравнительного примера 1-2 (ГК-EDOBEA-Ac/FL) не превращалось в молекулы соединений с низкой молекулярной массой, которые присутствовали в моче, было обнаружено, что некоторые введенные соединения производных ГК из примеров превращались в молекулы соединений с низкой молекулярной массой, которые детектировали в моче. Это указывает на то, что биоразлагаемость производных ГК по настоящему изобретению легко оценить анализом мочи.
Пример 3. Синтез производного гиалуроновой кислоты
Пример 3-1. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-глутамином (Gln) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Gln-Chol/FL)
ГК-Gln получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид метил-L-глутамината (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.3-1. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков метилена (-CH2CH2CONH2, 2,3, 2,4 м.д.; 2H) в глутамине, рассчитывали степень введения глутамина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 11). Поскольку пик ацетила в глюкозамине перекрывается с пиком другого метилена (-CH2CH2CONH2, 2,1 м.д.; 2H) в глутамине, то значение, полученное вычитанием интегрированного значения пиков при 2,3 м.д. и 2,4 м.д. из интегрированного значения пиков при 1,8-2,2 м.д. использовали в качестве пиков ацетила, для расчета степени введения. ТВА соль ГК-Gln (ГК-Gln-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Gln-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг.3-2. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 11).
Пример 3-2. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-метионином (Met) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Met-Chol/FL)
ГК-Met получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-метионата (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.3-3. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метилена (-CH2SCH3, 2,6 м.д.; 2H) в метионине, рассчитывали степень введения метионина в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 11). Поскольку пик ацетила в глюкозамине перекрывается с пиком другого метилена и метила (-CH2SCH3, 2,1 м.д.; 5H) в метионине, то значение, полученное вычитанием интегрированного значения пика при 2,6 м.д. из интегрированного значения пиков при 1,8-2,2 м.д., использовали в качестве пиков ацетила в глюкозамине для расчета степени введения.
ТВА соль ГК-Met (ГК-Met-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Met-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг.3-4. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 11).
Таблица 11 | ||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-AA-Chol/FL, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AA (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Gln-Chol-6%/FL | 99k | Gln 80 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК-Met-Chol-6%/FL | 99k | Met 99 | 100/7/11 | 6 |
Пример 3-3. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-аланинамидом (AlaNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-AlaNH2-Chol/FL)
ГК-AlaNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-аланинамида (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 3-5. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 12). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,8 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 1,3 м.д.; 3H) в аланинамиде, рассчитывали степень введения аланинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 12). Поскольку пик метила в аланинамиде перекрывается с пиками (41Н) холестерила, то значение, полученное вычитанием 41/3 интегрированного значения пика при 0,7 м.д. из интегрированного значения пиков при 0,8-1,6 м.д., использовали в качестве пиков метила в аланинамиде для расчета степени введения.
Пример 3-4. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-аспарагинамидом (AsnNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-AsnNH2-Chol/FL)
ГК-AsnNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-аспарагинамида (KOKUSAN CHEMICAL CO., Ltd.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 3-6. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 12). Кроме того, 1Н-ЯМР продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 1-7. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков метилена (-CH2CONH2, 2,7, 2,8 м.д.; 2H) в аспарагинамиде, рассчитывали степень введения аспарагинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 12).
Пример 3-5. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-изолейцинамидом (IleNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-IleNH2-Chol/FL)
ГК-IleNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-изолейцинамида (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 3-8. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 12). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,8 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метилена и двух метилов (-CH(СН3)СН2СН3, 0,9 м.д.; 8H) в изолейцинамиде, рассчитывали степень введения изолейцинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 3). Поскольку пик метила в изолейцинамиде перекрывается с пиками (41Н) холестерила, то значение, полученное вычитанием 41/3 интегрированного значения пика при 0,7 м.д. из интегрированного значения пиков при 0,8-1,6 м.д. использовали в качестве пика метилена в изолейцинамиде, для расчета степени введения. Поскольку пик ацетила в глюкозамине перекрывается с пиком водорода в положении 3 изолейцина (СН(СН3)СН2СН3, 1,9 м.д.; 1H), то значение, полученное вычитанием 1/8 интегрированного значения пиков при 0,8-1,6 м.д. из интегрированного значения пиков при 1,8-2,2 м.д., использовали в качестве пика ацетила в глюкозамине для расчета степени введения.
Пример 3-6. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-глутаминамидом (GlnNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-GlnNH2-Chol/FL)
ГК-GlnNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-глутаминамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг.3-9. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 12). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,8 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метилена (-CH2CH2CONH2, 2,1 м.д.; 2H) в глутаминамиде, рассчитывали степень введения глютаминамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 12). Поскольку пик метила в глутаминамиде перекрывается с пиками (2Н) холестерила, то значение, полученное вычитанием 2/3 интегрированного значения пика при 0,7 м.д. из интегрированного значения пика 0,7 м.д., использовали в качестве пика метилена в глутаминамиде для расчета степени введения. Поскольку пик ацетила в глюкозамине перекрывается с пиком метилена (-CH2CH2CONH2, 1,9 м.д.; 2H) в глутаминамиде, то значение, полученное вычитанием 2/2 интегрированного значения пика при 2,1 м.д. из интегрированного значения пиков при 1,8-2,0 м.д., использовали в качестве пика ацетила в глюкозамине для расчета степени введения.
Пример 3-7. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-метионинамидом (MetNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-MetNH2-Chol/FL)
ГК-MetNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-метионинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг.3-10. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 12). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,8 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-SCH3, 2,1 м.д.; 2H) в метионинамиде, рассчитывали степень введения метионинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 12). Поскольку пик ацетила в глюкозамине перекрывается с пиком метилена (-CH2SCH3, 1,9 м.д.; 2H) в метионинамиде, то значение, полученное вычитанием 2/3 интегрированного значения пика при 2,1 м.д. из интегрированного значения пика при 1,8-2,0 м.д., использовали в качестве пика ацетила в глюкозамине для расчета степени введения.
Таблица 12 | |||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-AANH2/Chol/FL, и степень введения | |||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) | Суммарная степень введения AANH2 и Chol |
99k ГК-AlaNH2-Chol-6%/FL | 99k | AlaNH2 96 | 100/7/7 | 6 | 102 |
99k ГК-AsnNH2-Chol-6%/FL | 99k | AsnNH2 85 | 100/7/7 | 6 | 91 |
99k ГК-IleNH2-Chol-6%/FL | 99k | IleNH2 93 | 100/7/7 | 6 | 99 |
10k ГК-IleNH2-Chol-7%/FL | 10k | IleNH2 93 | 100/7/7 | 7 | 100 |
99k ГК-GlnNH2-Chol-6%/FL | 99k | GlnNH2 85 | 100/7/7 | 6 | 91 |
99k ГК-MetNH2-Chol-6%/FL | 99k | MetNH2 66 | 100/7/7 | 6 | 72 |
10k ГК-MetNH2-Chol-7%/FL | 10k | MetNH2 73 | 100/7/7 | 7 | 80 |
Сравнительный пример 3-1. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-глутаминовой кислотой (Glu) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Glu-Chol/FL)
ГК-Glu получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид диэтил-L-глутамата (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг.3-11. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метилена (-СН2СН2СООН, 2,4 м.д.; 2H) в глутаминовой кислоте, рассчитывали степень введения глутаминовой кислоты в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 13). Поскольку пик ацетила в глюкозамине перекрывается с пиком другого метилена (-CH2CH2COOH, 2,1 м.д.; 2H) в глутаминовой кислоте, то значение, полученное вычитанием интегрированного значения пика при 2,4 м.д. из интегрированного значения пиков при 1,8-2,0 м.д., использовали в качестве пика ацетила в глюкозамине для расчета степени введения. ТВА соль ГК-Glu (ГК-Glu-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Glu-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 3-12. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 13).
Сравнительный пример 3-2. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-триптофаном (Trp) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Trp-Chol/FL)
ГК-Trp получали в виде белого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что использовали гидрохлорид этил-L-триптофаната (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида этил-L-аланината. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-3, представлен на фиг. 3-13. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика индольного кольца (-C8H6N, 7,8 м.д.; 1H) в триптофане, рассчитывали степень введения триптофана в единице ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 13). ТВА соль ГК-Trp (ГК-Trp-TBA) получали в виде белого твердого вещества в условиях, аналогично описанным в примере 1-4. Затем ее подвергали взаимодействию с гидрохлоридом Chol-C6 и FL способом, аналогично описанному в примере 1-4, с получением целевого соединения (ГК-Trp-Chol/FL) в виде желтого твердого вещества. 1Н-ЯМР спектр, снятый в таких же условиях, как описано в примере 1-4, представлен на фиг. 3-14. Степень введения холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-4 (таблица 13).
Сравнительный пример 3-3. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-тирозином (Tyr) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-Tyr-Chol/FL)
ГК-Tyr-Chol/FL 10k получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-3, за исключением того, что использовали ГК-TBA, полученную из исходного соединения с молекулярной массой 10 кДа ГК-Na. Степень введения тирозина и холестерильной группы рассчитывали способом, описанным в примере 1-3 (таблица 13).
Таблица 13 | ||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-AA-Chol/FL, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AA (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Glu-Chol-6%/FL | 99k | Glu 100 | 100/7/11 | 6 |
99k ГК-Trp-Chol-6%/FL | 99k | Trp 101 | 100/7/11 | 6 |
10k ГК-Tyr-Chol-7%/FL | 10k | Tyr 103 | 100/7/11 | 7 |
Пример 3-8. Синтез производного гиалуроновой кислоты без флуоресцентной метки
Производные гиалуроновой кислоты получали в виде белого твердого вещества способом, описанным в примерах (1-4)-(1-18) и в примерах (3-1)-(3-7) и в сравнительных примерах (3-1)-(3-3), за исключением того, что не добавляли 5-аминометилфлуоресцеин, и в качестве исходного соединения использовали ГК-Na с другой молекулярной массой. Степень введения холестерильной группы и степень введения аминокислоты и амида аминокислоты рассчитывали способами, описанными в соответствующих примерах (таблица 14-1, таблица 14-2). Гиалуроновую кислоту с молекулярной массой 5 кДа использовали в качестве исходного соединения производства R&D Systems, Inc., и другие гиалуроновые кислоты, использованные в качестве исходных соединений, были производства Shiseido Co., Ltd.
Таблица 14-1 | ||||
Количество реагента, использованного в получении производных гиалуроновой кислоты, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
10k ГК-Ala-Chol-30% | 10k | Ala 102 | 100/32/48 | 30 |
5k ГК-Ala-Chol-13% | 5k | Ala 108 | 100/14/21 | 13 |
230k ГК-Ala-Chol-5% | 230k | Ala 103 | 100/7/11 | 5 |
230k ГК-Ala-Chol-23% | 230k | Ala 103 | 100/32/48 | 23 |
1058k ГК-Ala-Chol-5% | 1058k | Ala 104 | 100/7/11 | 5 |
1058k ГК-Ala-Chol-21% | 1058k | Ala 104 | 100/32/48 | 21 |
10k ГК-Ser-Chol-28% | 10k | Ser 99 | 100/32/48 | 28 |
10k ГК-Gly-Chol-32% | 10k | Gly 95 | 100/32/48 | 32 |
10k ГК-Thr-Chol-32% | 10k | Thr 104 | 100/32/48 | 32 |
10k ГК-Asn-Chol-20% | 10k | Asn 91 | 100/32/48 | 20 |
10k ГК-Asp-Chol-32% | 10k | Asp 95 | 100/32/48 | 32 |
10k ГК-Phe-Chol-31% | 10k | Phe 103 | 100/32/48 | 31 |
10k ГК-Tyr-Chol-32% | 10k | Tyr 103 | 100/32/48 | 32 |
10k ГК-Ile-Chol-28% | 10k | Ile 101 | 100/32/48 | 28 |
10k ГК-Leu-Chol-31% | 10k | Leu 88 | 100/32/48 | 31 |
10k ГК-Val-Chol-32% | 10k | Val 103 | 100/32/48 | 32 |
10k ГК-Trp-Chol-24% | 10k | Trp 107 | 100/32/48 | 24 |
10k ГК-Gln-Chol-32% | 10k | Gln 81 | 100/32/48 | 32 |
10k ГК-Glu-Chol-32% | 10k | Glu 103 | 100/32/48 | 32 |
Таблица 14-2 | ||||
Количество реагента, использованного в получении производных гиалуроновой кислоты, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
10k ГК-AlaNH2/Chol-27% | 10k | AlaNH2 75 | 100/32/32 | 27 |
10k ГК-SerNH2/Chol-25% | 10k | SerNH2 68 | 100/32/32 | 25 |
10k ГК-GlyNH2/Chol-30% | 10k | GlyNH2 65 | 100/32/32 | 29 |
10k ГК-ThrNH2/Chol-25% | 10k | ThrNH2 79 | 100/32/32 | 25 |
10k ГК-AsnNH2/Chol-26% | 10k | AsnNH2 66 | 100/32/32 | 26 |
10k ГК-IleNH2/Chol-23% | 10k | IleNH2 77 | 100/32/32 | 23 |
10k ГК-LeuNH2/Chol-23% | 10k | LeuNH2 76 | 100/32/32 | 23 |
10k ГК-ValNH2/Chol-23% | 10k | ValNH2 80 | 100/32/32 | 23 |
10k ГК-GlnNH2/Chol-28% | 10k | GlnNH2 70 | 100/32/32 | 28 |
10k ГК-MetNH2/Chol-27% | 10k | MetNH2 58 | 100/32/32 | 27 |
10k ГК-AlaNH2/Chol-8% | 10k | AlaNH2 97 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-SerNH2/Chol-8% | 10k | SerNH2 85 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-GlyNH2/Chol-8% | 10k | GlyNH2 86 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-ThrNH2/Chol-8% | 10k | ThrNH2 97 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-AsnNH2/Chol-8% | 10k | AsnNH2 90 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-IleNH2/Chol-8% | 10k | IleNH2 91 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-LeuNH2/Chol-8% | 10k | LeuNH2 92 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-ValNH2/Chol-8% | 10k | ValNH2 95 | 100/8/10 | 8 |
10k ГК-GlnNH2/Chol-8% | 10k | GlnNH2 87 | 100/8/10 | 8 |
10к ГК-MetNH2/Chol-8% | 10k | MetNH2 83 | 100/8/10 | 8 |
Пример 4. Подтверждение удерживания в крови и биоразлагаемость in vivo
Пример 4-1. Отбор биологической пробы от крысы, получавшей производное ГК
Соединения, полученные в примерах (3-1)-(3-7) и сравнительных примерах (3-1)-(3-3), вводили крысам однократно внутривенно в дозе 10 мг/кг. Через 5 мин, 2, 7, 24, 28, 72 и 168 ч после введения из яремной вены отбирали кровь с использованием шприцов, обработанных натриевой солью гепарина, и плазму получали центрифугированием. Некоторые пробы крови в сравнительных примерах также отбирали через 96 ч после введения. Данные пробы плазмы криоконсервировали при -20°С или ниже до проведения анализа. Кроме того, извлекали печень через 7 суток после введения и криоконсервировали при -20°С или ниже до проведения анализа.
Пример 4-2. Анализ плазмы крови крысы, получавшей производное ГК
Пробы плазмы крови оттаивали и разводили в 2 раза HP-β-CD (100 мМ)/Трис-буфер (500 мМ, рН 9,0), инкубировали при 37°С в течение 1 ч и затем определяли концентрацию меченного флуоресцентной меткой производного ГК с использованием ридера для 96-луночных планшетов (ARVO; нижний предел обнаружения: 0,4 мкг/мл). Динамика изменения концентрации в плазме крови меченных флуоресцентной меткой производных ГК показана на фиг. (4-1-1)-(4-1-10). Кроме того, определяли фармакокинетический параметр (экстраполяция площади под кривой концентрация в плазме крови-время (AUC∞)) с использованием программы WinNonlin версия 6.1 (Pharsight). Значения представлены в таблице 15. Кроме того, соотношения значений AUC∞ по отношению к сравнительным образцам, в которые был введен холестерол на том же уровне, рассчитанные с использованием следующей формулы, представлены в таблице 16.
Формула 7
Соотношение значений AUC∞ (%) | = | AUC∞ образца | ×100 |
AUC∞ соответствующего сравнительного образца |
Таблица 15 | ||
Фармакокинетический параметр меченного флуоресцентной меткой производного ГК | ||
Образец | Меченное флуоресцентной меткой производное ГК | А∞ (мкг×ч/мл) |
Образец 4-1 | 99k ГК-Gln-Chol-6%/FL | 2083,1 |
Образец 4-2 | 99k ГК-Met-Chol-6%/FL | 2774,9 |
Образец 4-3 | 99k ГК-AlaNH2/Chol-6%/FL | 1446,8 |
Образец 4-4 | 99k ГК-AsnNH2/Chol-6%/FL | 1800,2 |
Образец 4-5 | 99k ГК-IleNH2/Chol-6%/FL | 1263,8 |
Образец 4-6 | 99k ГК-GlnNH2/Chol-6%/FL | 1094,1 |
Образец 4-7 | 99k ГК-MetNH2/Chol-6%/FL | 1555,5 |
Сравнительный образец 4-1 | 99k ГК-Glu-Chol-6%/FL | 546,8 |
Сравнительный образец 4-2 | 99k ГК-Trp-Chol-6%/FL | 284,3 |
Сравнительный образец 4-3 | 10k ГК-Tyr-Chol-7%/FL | 654,7 |
Таблица 16 | |||
Соотношение значений AUC∞ | |||
Образец | Меченное флуоресцентной меткой производное ГК | Сравнительный образец для сравнения | Соотношение значений по отношению к сравнительному образцу |
Образец 4-1 | 99k ГК-Gln-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 3,8 |
Образец 4-2 | 99k ГК-Met-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 5,1 |
Образец 4-3 | 99k ГК-AlaNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 2,6 |
Образец 4-4 | 99k ГК-AsnNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 3,3 |
Образец 4-5 | 99k ГК-IleNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 2,3 |
Образец 4-6 | 99k ГК-GlnNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 2,0 |
Образец 4-7 | 99k ГК-MetNH2/Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 2,S |
Сравнительный образец 4-1 | 90k ГК-Glu-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 1,0 |
Сравнительный образец 4-2 | 99k ГК-Trp-Chol-6%/FL | Сравнительный образец 2-1 | 0,5 |
Сравнительный образец 4-3 | 10k ГК-Tyr-Chol-7%/FL | Сравнительный образец 2-7 | 0,4 |
Было обнаружено, что производные ГК (образцы (4-1)-(4-7), в карбоксигруппу которых были введены аминокислота или амид аминокислоты и холестерильная группа, сохраняют концентрацию в плазме крови лучше, чем производное ГК (сравнительный образец 2-1), в карбоксигруппу которого была введена только холестерильная группа. 10k ГК-Tyr-Chol-7%/FL (сравнительный пример 4-3), а также 99k ГК-Tyr-Chol-6%/FL (сравнительный пример 2-8) имели пониженное время удерживания в крови по сравнению с производным ГК, в карбоксигруппу которого была введена только холестерильная группа. С другой стороны, 99k ГК-Ala-Chol-7%/FL (образец 2-1) и 10k ГК-Ala-Chol-16%/FL (образец 2-7), оба сохраняли концентрации в плазме крови в равной степени или даже лучше, чем производное РН, в карбоксигруппу которого была введена только холестерильная группа. На основании этого можно предположить, что различие во времени удерживания в крови производных ГК зависит от различия в аминокислоте, введенной в карбоксигруппу, и не подвергается влиянию (не зависит от) молекулярной массы исходного соединения гиалуроновой кислоты.
Пример 4-3. Анализ печени крысы, получавшей производное ГК
Примерно к 1 г пробы печени добавляли Трис-буфер (10 мМ, рН 9,0), и пробу гомогенизировали с использованием шариков. Добавляли раствор проназы в концентрации 4 мг/мл, и смесь инкубировали при 37°С в течение ночи. После центрифугирования пробу разводили в 2 раза HP-β-CD (100 мМ)/Трис-буфер (500 мМ, рН 9,0), затем инкубировали при 37°С в течение 1 ч, затем фильтровали и анализировали эксклюзионной хроматографией в условиях, описанных ниже. Кроме того, печень от крысы без введения какого-либо образца обрабатывали аналогично, и смеси этой пробы и пробы, отобранной до введения, анализировали аналогично и использовали в качестве стандарта.
Условия анализа эксклюзионной хроматографией
Аналитическая колонка: TSKgel G5000 PWXL (Tosoh Corporation).
Температура колонки: 25°С.
Подвижная фаза: HP-β-CD (10 мМ)/Трис-буфер (500 мМ, рН 9,0).
Скорость потока: 0,5 мл/мин.
Детектирование: длина волны экстинкции 494 нм/длина волны эмиссии 515 нм.
Объем инжектирования: 50 мкл.
Результаты представлены на фиг. (4-2-1)-(4-2-10). Хроматограммы нормализовали по соответствующим самым высоким пикам. В то время как производное ГК из сравнительного примера 1-2 (ГК-EDOBEA-Ac/FL, фиг. 2-2-26) не превращалось в молекулы соединений с низкой молекулярной массой в печени, было обнаружено, что все введенные производные ГК из примеров превращались в молекулы соединений с низкой молекулярной массой. Основываясь на этих данных, полагают, что производные ГК по настоящему изобретению обладают биоразлагаемостью и выделяются с мочой и фекалиями из организма после деградации в организме.
Пример 5. Композиция с контролируемым высвобождением, обладающая способностью к преципитации, реагирующей на концентрацию соли
Пример 5-1. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-тирозинамидом (TyrNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-TyrNH2-Chol/FL)
ГК-TyrNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-тирозинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый для лиофилизированного продукта, в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг.5-1. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 17). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,8 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков гидроксифенила (-С6Н4ОН, 6,8 м.д., 7,2 м.д.; 4H) в тирозине, рассчитывали степень введения тирозинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 17).
Пример 5-2. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-триптофанамидом (TrpNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-TrpNH2-Chol/FL)
ГК-TrpNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-триптофанамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый для лиофилизированного продукта, в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 5-2. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 17). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,8 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика индольного кольца (-C8H6N, 7,6 м.д.; 1H) в триптофанамиде, рассчитывали степень введения тирозинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 17).
Пример 5-3. Синтез меченного флуоресцентной меткой производного ГК, модифицированного L-фенилаланинамидом (PheNH2) и холестерил-6-аминогексилкарбаматом (ГК-PheNH2-Chol/FL)
ГК-PheNH2-Chol/FL получали в виде желтого твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-5, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-фенилаланинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида L-треонинамида. 1Н-ЯМР спектр продукта, снятый для лиофилизированного продукта, в таких же условиях, как описано в примере 1-5, представлен на фиг. 5-3. Степень введения холестерильной группы в единицы ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 17). Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,8 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пиков фенила (-С6Н5, 7,2-7,4 м.д.; 5H) в фенилаланине, рассчитывали степень введения фенилаланинамида в единицы ГК аналогично описанному в примере 1-4 (таблица 17).
Таблица 17 | |||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-AANH2-Chol/FL, и степень введения | |||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) | Суммарная степень введения AANH2 и Chol |
99k ГК-TyrNH2-Chol-6%/FL | 99k | TyrNH2 85 | 100/7/7 | 6 | 91 |
10k ГК-TyrNH2-Chol-5%/FL | 10k | TyrNH2 82 | 100/5/5 | 5 | 87 |
99k ГК-TrpNH2-Chol-6%/FL | 99k | TrpNH2 83 | 100/7/7 | 6 | 89 |
99k ГК-PheNH2-Chol-6%/FL | 99k | PheNH2 85 | 100/7/7 | 6 | 91 |
10k ГК-PheNH2-Chol-5%/FL | 10k | PheNH2 83 | 100/5/5 | 5 | 88 |
Сравнительный пример 5-1. Синтез производного ГК (ГК-TyrNH2), модифицированного L-тирозинамидом (TyrNH2)
Готовили раствор ГК-ТВА (99 кДа), синтезированной из исходного соединения ГК-Na в примере 1-3, в безводном ДМСО. Затем добавляли гидрохлорид L-тирозинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) в количестве 5 моль-эквивалентов на единицу ГК. Затем добавляли 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолинийхлорид (DMT-MM) в количестве 3 моль-эквивалентов на единицу ГК. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционный раствор подвергали диализу против водного раствора 0,15М NaCl и ультрачистой водой в указанном порядке. Во время диализа имела место преципитация, и целевое вещество не удалось получить в виде водного раствора.
Сравнительный пример 5-2. Синтез производного ГК (ГК-TrpNH2), модифицированного L-триптофанамидом (TrpNH2)
Синтез проводили способом, аналогично описанному в сравнительном примере 5-1, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-триптофанамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида L-тирозинамида. Во время диализа имела место преципитация, и целевое вещество не удалось получить в виде водного раствора.
Сравнительный пример 5-3. Синтез производного ГК (ГК-PheNH2), модифицированного L-фенилаланинамидом (PheNH2)
Синтез проводили способом, аналогично описанному в сравнительном примере 5-1, за исключением того, что использовали гидрохлорид L-фенилаланинамида (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.) вместо гидрохлорида L-тирозинамида. PheNH2 получали в виде белого твердого вещества.
Пример 5-4
Результаты по оценке способности к растворению производных ГК, синтезированных в примере 5-1, примере 5-2, сравнительном примере 5-1 и сравнительном примере 5-2, после диализа против воды, представлены в таблице 18.
Таблица 18 | ||
Способность к растворению в воде производных ГК | ||
Образец | Производное ГК | Способность к растворению |
Образец 5-1 | 99k ГК-TyrNH2/Chol-6%/FL | Растворяется |
Образец 5-2 | 99k ГК-TrpNH2/Chol-6%/FL | Растворяется |
Сравнительный образец 5-1 | 99k ГК-TyrNH2 | Не растворяется |
Сравнительный образец 5-2 | 99k ГК-TrpNH2 | Не растворяется |
Было обнаружено, что образец 5-1 и образец 5-2, в которые введена стерильная группа, в большей степени диспергируются в воде, чем сравнительный образец 5-1 и сравнительный образец 5-2, в которые не была введена стерильная группа, несмотря на гидрофобность, которой обладает стерильная группа.
Пример 5-5. Оценка способности к преципитации в зависимости от концентрации соли
Водные растворы (в ультрачистой воде) производных ГК (99k ГК-TyrNH2/Chol-6%/FL, 99k ГК-TrpNH2/Chol-6%/FL, 99k ГК-PheNH2/Chol-6%/FL, 99k ГК-AlaNH2/Chol-6%/FL), полученные в примере 5-1, примере 5-2, примере 5-3 и примере 3-3, добавляли в концентрированном буферном растворе таким образом, что конечный состав буферных растворов составлял 10 мМ РВ и 150 мМ NaCl, и концентрация производных ГК составляла 4,5 мг/мл. Растворы инкубировали при 37°С в течение 20 мин и центрифугировали при 2000 g в течение 1 мин. Определяли интенсивность флуоресценции супернатантов на ридере для 96-луночных планшетов (ARVO). Концентрацию меченных флуоресцентной меткой производных ГК рассчитывали с использованием стандарта для расчета процентов остаточного количества к первоначально использованным количествам (таблица 19). 99k ГК-Chol-6%/FL (сравнительный образец 5-3), полученный в примере 1-1, подвергали аналогичным операциям. Результаты по сравнительным образцам 5-1 и 5-2 являются результатами, описанными в WO2010/053140.
Таблица 19 | ||
Остаточное количество производного ГК в условиях при 150 мМ NaCl | ||
Образец | Меченное флуоресцентной меткой производное ГК | Остаточное количество при 150М NaCl |
Образец 5-1 | 99k ГК-TyrNH2/Chol-6%/FL | 1,4% |
Образец 5-2 | 99k ГК-TrpNH2/Chol-6%/FL | 3,9% |
Образец 5-3 | 99k ГК-PheNH2/Chol-6%/FL | 1% или ниже |
Образец 5-4 | 99k ГК-AlaNH2/Chol-6%/FL | 98,9% |
Сравнительный образец 5-1 | 50k ГК-Chol-6%/FL | 99,6% |
Сравнительный образец 5-2 | 50k ГК-Chol-7%/FL | 22,6% |
Сравнительный образец 5-3 | 99k ГК-Chol-6%/FL | 98,4% |
В WO2010/053140 описано, что 50k ГК-Chol-6%/FL (сравнительный образец 5-1) растворяется как при низкой концентрации соли (ультрачистой воде), так и при физиологической концентрации соли (150 мМ NaCl). Также в данном опыте было показано, что 99k ГК-Chol-6%/FL (сравнительный образец 5-3) ведет себя аналогично. Между тем, было подтверждено, что 99k ГК-PheNH2/Chol-6%/FL (образец 5-3) проявляет зависимое от концентрации соли поведение, когда он растворяется в условиях при низкой концентрации соли (ультрачистая вода) и осаждается при физиологической концентрации соли (150 мМ NaCl). На основании данного результата можно предположить возможность применения производного ГК по настоящему изобретению в качестве носителя в композициях, которые преципитируют под кожей после введения, посредством приготовления растворов с низкой концентрацией, приготовленных на изотоническом растворе с сахаром или тому подобное. Кроме того, способность к преципитации (остаточное количество: 1% или ниже) была существенно выше, чем значения, о которых сообщалось ранее по производным ГК (сравнительный пример 5-2: 50k ГК-Chol-7%/FL: 22,6%).
99k ГК-TyrNH2/Chol-6%/FL (образец 5-1) и 99k ГК-TrpNH2/Chol-6%/FL (образец 5-2) также показывали зависимую от концентрации соли преципитацию аналогично 99k ГК-TrpNH2/Chol-6%/FL (образец 5-3), и они являются пригодными для применения в композициях, имеющих способность к преципитации, зависимую от концентрации соли.
Пример 5-6. Оценка способности к преципитации под кожей у крыс
Соединения, полученные из меченных флуоресцентной меткой производных (99k ГК-TyrNH2/Chol-6%/FL, 99k ГК-TrpNH2/Chol-6%/FL, 99k ГК-PheNH2/Chol-6%/FL), полученные в примере 5-1, примере 5-2 и примере 5-3, вводили подкожно крысам однократно в дозе 10 мг/кг (в растворе сахарозы). Место введения осматривали на 7 сутки после введения. Было подтверждено, что меченные флуоресцентной меткой производные ГК преципитировали и оставались на месте.
Пример 5-6. Синтез производного гиалуроновой кислоты без флуоресцентной метки
Производные гиалуроновой кислоты получали в виде белого твердого вещества способами, описанными в примерах (5-1)-(5-3), за исключением того, что не добавляли 5-аминометилфлуоресцеин, и использовали ГК-Na, имеющую другую молекулярную массу, в качестве исходного соединения. Степень введения холестерильной группы и степень введения аминокислоты и амида аминокислоты рассчитывали способами, описанными в соответствующих примерах (таблица 20).
Таблица 20 | ||||
Количество реагента, использованного в получении производных гиалуроновой кислоты, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
10k ГК-PheNH2/Chol-25% | 10k | PheNH2 68 | 100/32/32 | 25 |
10k ГК-TyrNH2/Chol-15% | 10k | TyrNH2 79 | 100/32/32 | 15 |
10k ГК-PheNH2/Chol-4% | 10k | PheNH2 98 | 100/8/10 | 4 |
10k ГК-TyrNH2/Chol-1% | 10k | TyrNH2 100 | 100/8/10 | 1 |
Пример 6. Оценка способности к инкапсулированию лекарственного средства
Пример 6-1. Инкапсулирование паклитаксела (РТХ)
К водным растворам (в ультрачистой воде) производных ГК, полученных в примере 1-4 и примере 1-21, и примере 3-8 и примере 5-7, добавляли паклитаксел (10 мг/мл, раствор в метаноле) таким образом, чтобы конечная концентрация паклитаксела составляла 100 мкг/мл, и концентрация производных ГК составляла 1,0 мг/мл. Смеси выдерживали при 4°С в течение ночи и затем центрифугировали при 4700 g в течение 10 мин. К аликвотной порции 100 мкл супернатантов добавляли 100 мкл 50% ацетонитрила и 50 мкл 100 мМ HP-β-CD, и смеси анализировали жидкостной хроматографией с обратной фазой в следующих условиях:
Условия анализа хроматографией с обратной фазой
Аналитическая колонка: PLRP-S 1,000 Å (Agilent).
Температура колонки: 40°С.
Подвижная фаза A: 0,1% водный раствор ТФУК.
Подвижная фаза В: раствор 0,1% ТФУК/ацетонитрил.
Градиент: В 5%→В 95% (3,4 мин).
Скорость потока: 2 мл/мин.
Детектирование: УФ 254 нм.
Объем инжектирования: 30 мкл.
Концентрацию паклитаксела в супернатантах рассчитывали с использованием стандарта, как показано на фиг. (6-1-1)-(6-1-4). Несмотря на то, что растворимость паклитаксела в отсутствии производных ГК составляет 0,6 мкг/мл, отмечали существенное повышение растворимости паклитаксела в присутствии производных ГК. На основании этого можно предположить, что слаборастворимые низкомолекулярные соединения, такие как паклитаксел, инкапсулируются в производных ГК.
Пример 6-2. Инкапсулирование циклоспорина (циклоспорин А: CyA)
К водным растворам (в ультрачистой воде) производных ГК, полученных в примере 1-4 и примере 1-21, и примере 3-8 и примере 5-7, добавляли циклоспорин (10 мг/мл, раствор в метаноле) таким образом, чтобы конечная концентрация циклоспорина составляла 300 мкг/мл, и концентрация производных ГК составляла 1,0 мг/мл. Смеси выдерживали при 4°С в течение ночи и затем центрифугировали при 4700 g в течение 30 мин. К аликвотной порции 100 мкл супернатантов добавляли 100 мкл 50% ацетонитрила и 50 мкл 100 мМ HP-β-CD, и смеси анализировали хроматографией с обратной фазой, как описано в примере 6-1. Детектирование проводили в УФ-свете при 210 нм. Концентрацию циклоспорина в супернатантах рассчитывали с использованием стандарта, как показано на фиг. (6-2-1)-(6-2-4). Несмотря на то, что растворимость циклоспорина в отсутствии производных ГК составляет 28 мкг/мл, отмечали существенное повышение растворимости циклоспорина в присутствии производных ГК. На основании этого можно предположить, что слаборастворимые пептиды, такие как циклоспорин, инкапсулируются в производных ГК.
Пример 7. Тест оценки высвобождения in vivo
Пример 7-1. Тест оценки высвобождения паклитаксела
К водному раствору (в ультрачистой воде) 10k ГК-Ala-Chol-41%, полученного в примере 1-21, добавляли паклитаксел (10 мг/мл, раствор в метаноле) таким образом, чтобы конечная концентрация паклитаксела составляла 100 мкг/мл, и концентрация производных ГК составляла 1,0 мг/мл. Смесь выдерживали при 4°С в течение ночи. Свободный паклитаксел удаляли при 4°С с использованием диализной мембраны (3000 MWCO). Полученные комплексы производное ГК/паклитаксел помещали на мембрану для диализа (3000 MWCO) и инкубировали при 37°С в PBS. Концентрацию паклитаксела на мембране для диализа определяли в течение времени хроматографией с обратной фазой для подтверждения высвобождения. Количества паклитаксела, оставшиеся на мембране для диализа, показаны на фиг. 7-1. Данный результат указывает на то, что производные ГК могут использовать в качестве носителей для контролируемого высвобождения.
Пример 7-2. Тест оценки высвобождения циклоспорина
Тест проводили способом, описанным в примере 7-1, за исключением того, что использовали циклоспорин А вместо паклитаксела для подтверждения высвобождения циклоспорина. Количества циклоспорина, оставшиеся на диализной мембране, показаны на фиг. 7-2. Данный результат указывает на то, что производные ГК могут быть использованы в качестве носителей для контролируемого высвобождения.
Пример 8. Синтез ГК-AA-Chol, содержащего различные линкеры
Производные ГК-AA-Chol (таблица 21), содержащие различные линкеры, получали в виде твердого вещества способом, аналогично описанному в примере 1-4, за исключением того, что холестерил-2-аминоэтилкарбамат (Chol-C2), холестерил-12-додециламиногексилкарбамат (Chol-С12) или холестерил-8-амино-3,6-диоксаоктилкарбамат (Chol-ЕО2) использовали вместо холестерил-6-аминогексилкарбамата (Chol-C6). Холестерил-2-аминоэтилкарбамат, холестерил-12-додециламиногексилкарбамат или холестерил-8-амино-3,6-диоксаоктилкарбамат синтезировали способами, описанными в WO2010/053140. 1Н-ЯМР спектры продуктов, снятые в условиях, аналогично описанным в примере 1-5, представлены на фиг. (8-1)-(8-6). Степень введения холестерильной группы в единицах ГК рассчитывали способом, аналогично описанному в примере 1-5 (таблица 21).
Таблица 21 | ||||
Линкер в получении производного гиалуроновой кислоты и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Тип линкера | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Ala-C2-Chol-6% | 99k | Ala 91 | Chol-C2 | 6 |
10k ГК-Ala-C2-Chol-7% | 10k | Ala 95 | Chol-C2 | 7 |
99k ГК-Ala-C12-Chol-7% | 99k | Ala 91 | Chol-C12 | 7 |
10k ГК-Ala-C12-Chol-7% | 10k | Ala 95 | Chol-C12 | 7 |
99k ГК-Ala-ЕО2-Chol-5% | 99k | Ala 91 | Chol-ЕО2 | 5 |
10k ГК-Ala-ЕО2-Chol-6% | 10k | Ala 95 | Chol-ЕО2 | 6 |
Пример 9. Синтез ГК-Ala-холановой кислоты
Пример 9-1. Синтез N-(2-аминоэтил)-5β-холаноамида
Метил-5β-холанат (стералоиды, 100 мкг) растворяли в этилендиамине (6 мл), и раствор кипятили с обратным холодильником при 130°С в течение 4 ч. После отгонки при пониженном давлении остаток растворяли в дихлорметане и промывали ультрачистой водой. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, с получением аминоэтил-5β-холаноамида.
1Н-ЯМР (CDCl3): δ=0,64 (3Н, с, CH3), 0,91 (3Н, с, CH3), 0,92 (3Н, д, CH3), 2,0-2,3 (2Н, м, COCH3), 2,8 (2Н, м, CH 2 CH2NHCO), 3,3 (2Н, м, CH 2 CH2NHCO), 5,9 (1Н, ушир, NHCO).
Пример 9-2. Синтез ГК-Ala-холановой кислоты
Готовили раствор ГК-Ala-TBA (10 мг/мл), синтезированного способом, аналогично описанному в примере 1-4, в безводном ДМСО. Затем к аликвотным порциям раствора добавляли аминоэтил-5β-холанамид, полученный в примере 9-1, в соотношениях к единицам ГК-Ala-TBA, показанным в таблице 22 ниже. Затем к ГК-Ala-TBA добавляли DMT-MM в соотношениях, показанных в таблице 22 ниже. Реакционные растворы подвергали диализу против смешанного раствора метанол/вода 1/1, 0,15М водного раствора NaCl и ультрачистой воды в указанном порядке. Полученные диализаты лиофилизировали, с получением целевого соединения (ГК-Ala-СА) в виде белого твердого вещества.
Иллюстративный пример 1Н-ЯМР спектра (продукта, полученного из исходного соединения ГК-Na с молекулярной массой 99 кДа, и который имел степень введения холановой кислоты 13%) с использованием ДМСО-d6 в качестве растворителя при анализе, показан на фиг.9. Основываясь на интегрированном значении пика ацетила (-COCH3, 1,6-2,0 м.д.; 3H) в глюкозамине и интегрированном значении пика метила (-CH3, 0,6 м.д.; 3H) в холестерильной группе, рассчитывали степень введения холановой кислоты в единицы ГК по формуле, приведенной ниже (таблица 22). Поскольку пики в области 1,6-2,0 м.д., включая пик ацетила в глюкозамине, перекрываются с пиком (7Н) холановой кислоты, то значение, полученное вычитанием 7/3 интегрированного значения пика (0,6 м.д.) метила в группе холановой кислоты из интегрированного значения пиков в области 1,6-2,0 м.д. (т.е. интегрированное значение (1,6-2,0 м.д.)-интегрированное значение (0,7 м.д.)×7/3), использовали в качестве интегрированного значения ацетила в ГК, для расчета степени введения.
Формула 8
Степень введения холановой кислоты (%) | = | Интегрированное значение пика метила в холановой кислоте (0,6 м.д.) | ×100 |
Интегрированное значение пика ацетила в ГК (1,6-2,0 м.д. значение после коррекции) |
Таблица 22 | ||||
Количество реагента, использованного в получении ГК-Ala-CA, и степень введения | ||||
Сокращенное обозначение | Молекулярная масса | Вид и степень введения AANH2 (% единиц) | Молярное соотношение гидрохлорида Chol-C6 и добавленного DMT-MM (единица ГК/Chol-C6/DMT-MM) | Степень введения Chol (% единиц) |
99k ГК-Ala-CA-8% | 99k | 91 | 100/10/50 | 8 |
99k ГК-Ala-CA-13% | 99k | 91 | 100/20/100 | 13 |
Claims (45)
1. Производное гиалуроновой кислоты, содержащее единицу формулы (I):
Химическая формула 1
где R1, R2, R3 и R4 независимо выбраны из атома водорода, С1-6алкила, формила и С1-6алкилкарбонила;
R5 представляет собой атом водорода, формил или С1-6алкилкарбонил;
группа -CHRa-CO-X1 выбрана из следующих групп:
* показывает положение присоединения к -NR6-;
R6 выбран из атома водорода и C1-6алкила;
Z1 представляет собой С2-30алкилен или -(СН2СН2О)m-СН2СН2-, где в алкилен может быть введено 1-5 групп, независимо выбранных из -О-, -NRg- и -S-S-, и m является целым числом, выбранным из 1-100;
Z2 выбран из групп, представленных следующими формулами:
-NRb-Z3, и
-NRb-COO-Z3;
Rb выбран из атома водорода, С1-20алкила, амино-С2-20алкила и гидрокси-С2-20алкила, где в алкильные фрагменты данных групп может быть введено 1-3 группы, независимо выбранных из -О- и -NRf-;
Rf независимо выбран из атома водорода, С1-12алкила, амино-С2-12алкила и гидрокси-С2-12алкила, и в алкильные фрагменты данных групп может быть введено 1-2 группы, независимо выбранных из -О- и -NH-;
Rg независимо выбран из атома водорода, С1-20алкила, амино-С2-20алкила или гидрокси-С2-20алкила, и в алкильные фрагменты данных групп может быть введено 1-3 группы, независимо выбранных из -О- и -NH-;
Z3 представляет собой стерильную группу, выбранную из холаноила и холестерила;
где если производное гиалуроновой кислоты не содержит единицу формулы (I), в которой X1 представляет собой -NR9-Z1-Z2, тогда производное гиалуроновой кислоты дополнительно содержит единицу формулы (II):
Химическая формула 2
где R1a, R2a, R3a и R4a независимо выбраны из атома водорода, C1-6алкила, формила и C1-6алкилкарбонила;
R5a представляет собой атом водорода, формил или C1-6алкилкарбонил; и
X2 представляет собой -NR9-Z1-Z2, где R9 представляет собой атом водорода, Z1 и Z2 являются такими, как определено выше;
где производное гиалуроновой кислоты получено с использованием гиалуроновой кислоты, исключительно состоящей из дисахаридной единицы формулы (IIb):
Химическая формула 3
где R1b, R2b, R3b и R4b, каждый независимо, выбран из атома водорода, C1-6алкила, формила и C1-6алкилкарбонила;
R5b выбран из атома водорода, формила и С1-6алкилкарбонила; и
Xb выбран из гидрокси и -O-Q+, где Q+ представляет собой противокатион, выбранный из иона лития, иона натрия, иона рубидия, иона цезия, иона магния, иона кальция, и ионов аммония, представленных формулой N+RjRkRlRm, где Rj, Rk, Rl и Rm, каждый независимо, выбран из атома водорода и С1-6алкила, и имеет среднемассовую молекулярную массу от 3 кДа до 1500 кДа, когда R1b, R2b, R3b и R4b, все представляют собой атомы водорода, R5b представляет собой ацетил, и Xb представляет собой -O-Na+.
2. Производное гиалуроновой кислоты по п. 1, дополнительно содержащее единицу формулы (IIb).
3. Производное гиалуроновой кислоты по п. 1, где X1 представляет собой -NH-Z1-Z2 в формуле (I).
4. Производное гиалуроновой кислоты по любому из пп. 1-3, где процент дисахаридной единицы формулы (I) в имеющихся дисахаридных единицах составляет 70-100%.
5. Производное гиалуроновой кислоты по любому из пп. 1-3, где процент дисахаридной единицы, содержащей группу -NH-Z1-Z2 в имеющихся дисахаридных единицах, составляет 3-50%.
6. Производное гиалуроновой кислоты по п. 1, не содержащее единицу формулы (I), где X1 представляет собой -NH-Z1-Z2.
7. Производное гиалуроновой кислоты по любому из пп. 1, 2 и 6, где сумма процентов единицы формулы (I) и единицы формулы (II) в имеющихся дисахаридных единицах составляет 70-100%.
8. Производное гиалуроновой кислоты по любому из пп. 1, 2, 3 и 6, где Z1 представляет собой С2-10алкилен, Z2 представляет собой -NH-COO-Z3, и Z3 представляет собой холестерильную группу.
9. Производное гиалуроновой кислоты по любому из пп. 1, 2, 3 и 6, где производное гиалуроновой кислоты получено взаимодействием производного гиалуроновой кислоты, содержащего единицу формулы (IIb) и единицу формулы (Ia):
Химическая формула 4
где Ха выбран из гидрокси, -O-Q+, С1-6алкокси, и R1, R2, R3, R4, R5, R6, Q+ и Ra являются такими, как определено в п. 1, с соединением, представленным формулой ниже:
HNR9-Z1-Z2,
где R9, Z1 и Z2 являются такими, как определено в п. 1.
10. Фармацевтическая композиция для инкапсулирования лекарственного средства, содержащая производное гиалуроновой кислоты по любому из пп. 1, 2, 3 и 6, где лекарственное средство выбрано из низкомолекулярного соединения, белка, пептида и нуклеиновой кислоты.
11. Фармацевтическая композиция по п. 10, где лекарственное средство удерживается посредством образования комплекса с производным гиалуроновой кислоты.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012195528 | 2012-09-05 | ||
JP2012-195528 | 2012-09-05 | ||
PCT/JP2013/073995 WO2014038641A1 (ja) | 2012-09-05 | 2013-09-05 | アミノ酸およびステリル基が導入されたヒアルロン酸誘導体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015112219A RU2015112219A (ru) | 2016-10-27 |
RU2674003C2 true RU2674003C2 (ru) | 2018-12-04 |
Family
ID=50237247
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015112219A RU2674003C2 (ru) | 2012-09-05 | 2013-09-05 | Производное гиалуроновой кислоты, содержащее аминокислотную и стерильную группы, введенные в него |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11564971B2 (ru) |
EP (1) | EP2894173B1 (ru) |
JP (1) | JP6275044B2 (ru) |
KR (1) | KR102130864B1 (ru) |
CN (1) | CN104603156B (ru) |
BR (1) | BR112015004501B1 (ru) |
CA (1) | CA2884142C (ru) |
HK (1) | HK1205525A1 (ru) |
MX (1) | MX359884B (ru) |
RU (1) | RU2674003C2 (ru) |
WO (1) | WO2014038641A1 (ru) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3052529B1 (en) * | 2013-09-30 | 2017-10-04 | Galderma S.A. | Single-step functionalization and cross-linking of hyaluronic acid |
US20180086852A1 (en) * | 2015-03-31 | 2018-03-29 | Kewpie Corporation | Hyaluronic Acid Derivative and Manufacturing Method Therefor and Cosmetics, Food Composition, and Pharmaceutical Composition Containing Hyaluronic Acid Derivative |
US11389539B2 (en) | 2016-05-11 | 2022-07-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hyaluronic acid derivatives into which cationic and hydrophobic groups are introduced |
CN108069867A (zh) * | 2016-11-17 | 2018-05-25 | 常州百凯生物科技有限公司 | 一种l-丙氨酰胺盐酸盐的制备方法 |
IT201700122135A1 (it) * | 2017-10-26 | 2019-04-26 | Jointherapeutics S R L | Acido ialuronico funzionalizzato o suo derivato nel trattamento di stati infiammatori |
JP7221211B2 (ja) * | 2017-11-15 | 2023-02-13 | 中外製薬株式会社 | ポリエチレングリコールにより修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
IT201800003841A1 (it) * | 2018-03-21 | 2019-09-21 | Acme Drugs S R L | Coniugati di stanozololo e acido ialuronico |
JPWO2020158771A1 (ja) * | 2019-01-29 | 2021-12-02 | 国立大学法人三重大学 | がんワクチン製剤 |
EP3946297A4 (en) * | 2019-04-01 | 2023-08-02 | Emory University | HYALURONIC ACID NANOPARTICLES COMPRISING NADPH OXIDASE INHIBITORS AND THEIR USES IN THE TREATMENT OF CANCER |
JP2022529953A (ja) * | 2019-04-19 | 2022-06-27 | ジョインセラピュイティクス エッセ.エッレ.エッレ. | 官能化ヒアルロン酸の架橋ポリマーと、炎症状態の治療におけるその使用 |
WO2020247407A1 (en) * | 2019-06-03 | 2020-12-10 | Aihol Corporation | Hyaluronan conjugates and uses thereof |
JP7502861B2 (ja) | 2019-12-27 | 2024-06-19 | 旭化成株式会社 | 標的物質と両親媒性高分子との複合体の形成反応の反応温度の評価方法 |
TWI834948B (zh) * | 2020-02-05 | 2024-03-11 | 日商旭化成股份有限公司 | 玻尿酸衍生物組合物、醫藥組合物及玻尿酸衍生物-藥物結合體組合物 |
CN118027246A (zh) * | 2020-02-07 | 2024-05-14 | 旭化成株式会社 | 透明质酸衍生物、药物组合物和透明质酸衍生物-药物结合体 |
KR20210102602A (ko) | 2020-02-12 | 2021-08-20 | (주)아모레퍼시픽 | 생체 활성 물질을 안정화하는 히알루론산 하이드로겔 및 이의 제조 방법 |
AU2021310171A1 (en) * | 2020-07-15 | 2022-11-10 | Coval Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. | Drug delivery system for locally delivering therapeutic agents and uses thereof |
KR20230061346A (ko) * | 2020-08-14 | 2023-05-08 | 도꾜 다이가꾸 | 다당 유도체, 다당 유도체-약물 콘쥬게이트, 그 제조 방법 |
KR20240016309A (ko) | 2021-05-31 | 2024-02-06 | 고쿠리츠다이가쿠호진 미에다이가쿠 | 의약 조성물 |
CN114931563A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-08-23 | 吉林大学 | 一种透明质酸纳米颗粒/维替泊芬复合物的制备方法 |
CN115403681A (zh) * | 2022-05-13 | 2022-11-29 | 宁波格鲁康生物科技有限公司 | 生物安全注射用改性透明质酸、制备方法及其在美容整形注射材料上的应用 |
CN115850534B (zh) * | 2022-12-16 | 2024-03-12 | 浙江大学 | 一种透明质酸-胆酸衍生物及其合成方法和应用 |
CN116763725B (zh) * | 2023-08-16 | 2023-11-24 | 四川大学华西医院 | 一种智能响应型可注射水凝胶及其制备方法和应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5356883A (en) * | 1989-08-01 | 1994-10-18 | Research Foundation Of State University Of N.Y. | Water-insoluble derivatives of hyaluronic acid and their methods of preparation and use |
JP2002519481A (ja) * | 1998-07-06 | 2002-07-02 | フィディア・アドバンスト・バイオポリマーズ・ソシエタ・ア・レスポンサビリタ・リミタータ | ヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法 |
JP2007535607A (ja) * | 2004-04-30 | 2007-12-06 | アドヴァンスド カーディオヴァスキュラー システムズ, インコーポレイテッド | ヒアルロン酸系コポリマー |
RU2390529C2 (ru) * | 2004-01-07 | 2010-05-27 | Сейкагаку Корпорейшн | Производное гиалуроновой кислоты и содержащее его лекарственное средство |
WO2010119994A1 (ja) * | 2009-04-17 | 2010-10-21 | 帝人株式会社 | 多糖類誘導体およびそのハイドロゲル |
US20110212901A1 (en) * | 2008-11-05 | 2011-09-01 | National University Corporation Tokyo Medical And Dental Unversity | Hyaluronic acid derivative and pharmaceutical composition thereof |
JP2012504697A (ja) * | 2008-10-06 | 2012-02-23 | アドシア | 疎水性アルコール誘導体により置換されたカルボキシル官能基を含有する多糖類 |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6174999B1 (en) | 1987-09-18 | 2001-01-16 | Genzyme Corporation | Water insoluble derivatives of polyanionic polysaccharides |
JP2766303B2 (ja) | 1989-04-13 | 1998-06-18 | 生化学工業株式会社 | グリコサミノグリカンで修飾されたスーパーオキシドジスムターゼ及びその製造法 |
EP0416250A3 (en) | 1989-08-01 | 1991-08-28 | The Research Foundation Of State University Of New York | N-acylurea and o-acylisourea derivatives of hyaluronic acid |
DE69125595T2 (de) | 1990-10-18 | 1997-11-13 | Shiseido Co. Ltd., Tokio/Tokyo | Kombination von hyaluronsäure mit einem medizinischen bestandteil, und seine herstellung |
JPH0585942A (ja) | 1991-02-26 | 1993-04-06 | Denki Kagaku Kogyo Kk | インターフエロン−ヒアルロン酸及び/又はその塩の結合体 |
IT1281876B1 (it) * | 1995-05-10 | 1998-03-03 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Acido ialuronico e suoi derivati esterei per la preparazione di matrici per il rilascio controllato di farmaci. |
AU6357900A (en) | 1999-07-20 | 2001-02-05 | Amgen, Inc. | Hyaluronic acid-protein conjugates, pharmaceutical compositions and related methods |
JP2001081103A (ja) | 1999-09-13 | 2001-03-27 | Denki Kagaku Kogyo Kk | ヒアルロン酸結合薬剤 |
WO2001060412A2 (en) | 2000-02-15 | 2001-08-23 | Genzyme Corporation | Modification of biopolymers for improved drug delivery |
JP2002022154A (ja) | 2000-07-13 | 2002-01-23 | Yamaha Livingtec Corp | 液体燃料燃焼装置 |
DK1320387T3 (da) | 2000-09-13 | 2012-07-16 | Glaxosmithkline Llc | Farmaceutiske sammensætninger til vedvarende afgivelse af peptider |
NZ527353A (en) | 2001-05-07 | 2006-09-29 | Australian Postal Corp | Packaging system |
TW200303759A (en) | 2001-11-27 | 2003-09-16 | Schering Corp | Methods for treating cancer |
JP2004035629A (ja) | 2002-07-01 | 2004-02-05 | Kansai Paint Co Ltd | 水性光輝性塗料および複層塗膜形成方法 |
ITPD20020271A1 (it) | 2002-10-18 | 2004-04-19 | Fidia Farmaceutici | Composti chimico-farmaceutici costituiti da derivati dei taxani legati covalentemente all'acido ialuronico o ai suoi derivati. |
JP5001645B2 (ja) | 2004-04-02 | 2012-08-15 | 電気化学工業株式会社 | ヒアルロン酸−メトトレキサート結合体 |
JP4604583B2 (ja) | 2004-07-20 | 2011-01-05 | ダイソー株式会社 | 1−アミド−3−(2−ヒドロキシフェノキシ)−2−プロパノール誘導体、ならびに2−アミドメチル−1,4−ベンゾジオキサン誘導体の製造法 |
US8143391B2 (en) | 2004-09-07 | 2012-03-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification |
JP5068984B2 (ja) | 2006-11-30 | 2012-11-07 | 株式会社ロイヤル | 陳列棚 |
JP5443976B2 (ja) * | 2007-05-01 | 2014-03-19 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | 化学架橋ヒアルロン酸誘導体を含むハイブリッドゲルおよびそれを用いた医薬組成物 |
WO2009026274A1 (en) | 2007-08-22 | 2009-02-26 | Medarex, Inc. | Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with c-terminal extensions |
JP2009074678A (ja) | 2007-08-31 | 2009-04-09 | Nippon Densan Corp | スラストプレートの製造方法、軸受装置、軸受装置の製造方法、およびスピンドルモータ |
IE20070900A1 (en) | 2007-12-12 | 2009-06-24 | Eurand Pharmaceuticals Ltd | New anticancer conjugates |
US8426382B2 (en) | 2008-10-06 | 2013-04-23 | Adocia | Polysaccharides comprising carboxyl functional groups substituted by a hydrophobic alcohol derivative |
JP5396289B2 (ja) | 2010-01-19 | 2014-01-22 | 川上産業株式会社 | 吸湿発熱保温シート |
WO2011148116A2 (fr) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | Laboratoire Idenov | Acide hyaluronique modifie, procede de fabrication et utilisations |
JP5594093B2 (ja) | 2010-11-30 | 2014-09-24 | ブラザー工業株式会社 | 現像装置 |
PL2682409T3 (pl) | 2011-03-03 | 2017-12-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Pochodna kwasu hialuronowego zmodyfikowana kwasem aminokarboksylowym |
-
2013
- 2013-09-05 CN CN201380046295.XA patent/CN104603156B/zh active Active
- 2013-09-05 RU RU2015112219A patent/RU2674003C2/ru active
- 2013-09-05 WO PCT/JP2013/073995 patent/WO2014038641A1/ja active Application Filing
- 2013-09-05 JP JP2014534410A patent/JP6275044B2/ja active Active
- 2013-09-05 KR KR1020157008082A patent/KR102130864B1/ko active IP Right Grant
- 2013-09-05 MX MX2015002847A patent/MX359884B/es active IP Right Grant
- 2013-09-05 EP EP13836138.1A patent/EP2894173B1/en active Active
- 2013-09-05 CA CA2884142A patent/CA2884142C/en active Active
- 2013-09-05 BR BR112015004501-4A patent/BR112015004501B1/pt active IP Right Grant
- 2013-09-05 US US14/426,485 patent/US11564971B2/en active Active
-
2015
- 2015-06-29 HK HK15106154.2A patent/HK1205525A1/xx unknown
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5356883A (en) * | 1989-08-01 | 1994-10-18 | Research Foundation Of State University Of N.Y. | Water-insoluble derivatives of hyaluronic acid and their methods of preparation and use |
JP2002519481A (ja) * | 1998-07-06 | 2002-07-02 | フィディア・アドバンスト・バイオポリマーズ・ソシエタ・ア・レスポンサビリタ・リミタータ | ヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法 |
RU2390529C2 (ru) * | 2004-01-07 | 2010-05-27 | Сейкагаку Корпорейшн | Производное гиалуроновой кислоты и содержащее его лекарственное средство |
JP2007535607A (ja) * | 2004-04-30 | 2007-12-06 | アドヴァンスド カーディオヴァスキュラー システムズ, インコーポレイテッド | ヒアルロン酸系コポリマー |
JP2012504697A (ja) * | 2008-10-06 | 2012-02-23 | アドシア | 疎水性アルコール誘導体により置換されたカルボキシル官能基を含有する多糖類 |
US20110212901A1 (en) * | 2008-11-05 | 2011-09-01 | National University Corporation Tokyo Medical And Dental Unversity | Hyaluronic acid derivative and pharmaceutical composition thereof |
WO2010119994A1 (ja) * | 2009-04-17 | 2010-10-21 | 帝人株式会社 | 多糖類誘導体およびそのハイドロゲル |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2014038641A1 (ja) | 2014-03-13 |
KR102130864B1 (ko) | 2020-07-08 |
JPWO2014038641A1 (ja) | 2016-08-12 |
CA2884142C (en) | 2020-11-10 |
MX359884B (es) | 2018-10-15 |
MX2015002847A (es) | 2015-05-15 |
CN104603156B (zh) | 2016-10-26 |
HK1205525A1 (en) | 2015-12-18 |
EP2894173A1 (en) | 2015-07-15 |
EP2894173A4 (en) | 2016-05-25 |
JP6275044B2 (ja) | 2018-02-07 |
KR20150048238A (ko) | 2015-05-06 |
CN104603156A (zh) | 2015-05-06 |
US20150231268A1 (en) | 2015-08-20 |
BR112015004501B1 (pt) | 2021-04-13 |
BR112015004501A2 (pt) | 2017-07-04 |
EP2894173B1 (en) | 2017-04-19 |
CA2884142A1 (en) | 2014-03-13 |
US11564971B2 (en) | 2023-01-31 |
RU2015112219A (ru) | 2016-10-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2674003C2 (ru) | Производное гиалуроновой кислоты, содержащее аминокислотную и стерильную группы, введенные в него | |
US8759322B2 (en) | Hyaluronic acid derivative and pharmaceutical composition thereof | |
US9394379B2 (en) | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification | |
EP3184553B1 (en) | Derivative of hyaluronic acid modified with amino-carboxylic acid | |
EP3456745B1 (en) | Hyaluronic acid derivatives into which cationic groups and hydrophobic groups are introduced | |
EP3712181B1 (en) | Hyaluronic acid derivative modified with polyethylene glycol | |
TW202140073A (zh) | 玻尿酸衍生物、醫藥組合物及玻尿酸衍生物-藥物結合體 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HE9A | Changing address for correspondence with an applicant |